[go: up one dir, main page]

RU2009124454A - Варианты липолитического фермента - Google Patents

Варианты липолитического фермента Download PDF

Info

Publication number
RU2009124454A
RU2009124454A RU2009124454/10A RU2009124454A RU2009124454A RU 2009124454 A RU2009124454 A RU 2009124454A RU 2009124454/10 A RU2009124454/10 A RU 2009124454/10A RU 2009124454 A RU2009124454 A RU 2009124454A RU 2009124454 A RU2009124454 A RU 2009124454A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
seq
polypeptide
sequence
amino acid
residue
Prior art date
Application number
RU2009124454/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2474611C2 (ru
Inventor
МАРИЯ Леонардо ДЕ (DK)
МАРИЯ Леонардо ДЕ
Йеспер БРАСК (DK)
Йеспер БРАСК
Михаэль СКЬЕТ (DK)
Михаэль СКЬЕТ
Шамкант Анант ПАТКАР (DK)
Шамкант Анант ПАТКАР
Ким БОРК (DK)
Ким БОРК
Аллан СВЕНДСЕН (DK)
Аллан СВЕНДСЕН
Original Assignee
Новозимс А/С (Dk)
Новозимс А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новозимс А/С (Dk), Новозимс А/С filed Critical Новозимс А/С (Dk)
Publication of RU2009124454A publication Critical patent/RU2009124454A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2474611C2 publication Critical patent/RU2474611C2/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/16Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12N9/20Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62Carboxylic acid esters
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409Fatty acids
    • C12P7/6418Fatty acids by hydrolysis of fatty acid esters
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y301/00Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01003Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

1. Способ получения полипептида, включающий: ! а) отбор такого родительского полипептида, который обладает активностью липолитического фермента и аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 30% идентичной последовательности SEQ ID NO:1; ! b) отбор, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в последовательности, соответствующего любому из остатков 1, 13, 25, 38-51, 53-55, 58, 69-79, 91, 92, 96, 97, 99, 103, 104-110, 113, 132-168, 173, 187-193, 197-205, 215, 223-231, 242, 244, 256, 259, 261-298, 303, 305, 308-313 или 315 последовательности SEQ ID NO:1; ! c) изменение аминокислотной последовательности, где изменение включает замену или делецию выбранного остатка или вставку, по меньшей мере, одного остатка, примыкающего к выбранному остатку; !d) получение измененного полипептида с измененной аминокислотной последовательностью; ! e) определение специфической активности липолитического фермента, липолитической активности при щелочных значениях pH и/или энантиоселективности измененного пептида; и ! f) отбор измененного полипептида, обладающего более высокой специфической активностью липолитического фермента, более высокой активностью при щелочных значениях pH и/или более высокой энантиоселективностью, чем родительский полипептид. ! 2. Способ по п.1, где отобранный остаток соответствует любому из остатков: 1, 13, 25, 38, 42, 74, 140, 143, 147, 164, 168, 190, 199, 215, 223, 242, 244, 256, 265, 277, 280, 281, 283, 284, 285, 292, 303, 315, 135-160 или 267-295 последовательности SEQ ID NO:1. ! 3. Способ по п.1 или 2, где изменение включает замену отобранного остатка остатком, найденным в соответствующем положении любой из последовательностей SEQ ID NO:1-8. ! 4. Способ по п.1 или 2, где родительский полипептид выбирают из последовательностей SEQ ID NO:1-8. ! 5. Полипептид, ко

Claims (10)

1. Способ получения полипептида, включающий:
а) отбор такого родительского полипептида, который обладает активностью липолитического фермента и аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 30% идентичной последовательности SEQ ID NO:1;
b) отбор, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в последовательности, соответствующего любому из остатков 1, 13, 25, 38-51, 53-55, 58, 69-79, 91, 92, 96, 97, 99, 103, 104-110, 113, 132-168, 173, 187-193, 197-205, 215, 223-231, 242, 244, 256, 259, 261-298, 303, 305, 308-313 или 315 последовательности SEQ ID NO:1;
c) изменение аминокислотной последовательности, где изменение включает замену или делецию выбранного остатка или вставку, по меньшей мере, одного остатка, примыкающего к выбранному остатку;
d) получение измененного полипептида с измененной аминокислотной последовательностью;
e) определение специфической активности липолитического фермента, липолитической активности при щелочных значениях pH и/или энантиоселективности измененного пептида; и
f) отбор измененного полипептида, обладающего более высокой специфической активностью липолитического фермента, более высокой активностью при щелочных значениях pH и/или более высокой энантиоселективностью, чем родительский полипептид.
2. Способ по п.1, где отобранный остаток соответствует любому из остатков: 1, 13, 25, 38, 42, 74, 140, 143, 147, 164, 168, 190, 199, 215, 223, 242, 244, 256, 265, 277, 280, 281, 283, 284, 285, 292, 303, 315, 135-160 или 267-295 последовательности SEQ ID NO:1.
3. Способ по п.1 или 2, где изменение включает замену отобранного остатка остатком, найденным в соответствующем положении любой из последовательностей SEQ ID NO:1-8.
4. Способ по п.1 или 2, где родительский полипептид выбирают из последовательностей SEQ ID NO:1-8.
5. Полипептид, который:
a) обладает активностью липолитического фермента и
b) имеет аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 80% идентична последовательности SEQ ID NO:1 и, по сравнению с последовательностью SEQ ID NO:1, содержит аминокислотную замену, делецию или вставку в положении, соответствующем любому из остатков: 1, 13, 25, 38, 42, 74, 140, 143, 147, 164, 168, 190, 199, 215, 223, 242, 244, 256, 265, 277, 280, 283, 284, 285, 292, 303, 315, 135-160 или 267-295.
6. Полипептид по п.5, где отличие от SEQ ID NO:1 включает изменение, соответствующее N74Q, P143S, A281S, P38S, N292Q, L1QGPL, L1QL, I285E, L147F, L147N, N292C, L140E, P143L, A146T, P280V, A283K, A284N, T103G, A148P, W104H, V190A, L199P, T256K, T42N, R242A, V215I, T164V, L163F, D265P, P303K, R168D, A25G, V315I, T244P, K13Q, L277I, Y91S, A92S, N96S, N97*, L99V или D223G.
7. Полипептид по п.5 или 6, который содержит ряд аминокислотных изменений по сравнению с SEQ ID NO:1, представляющих собой:
а) V139I G142N P143I L144G D145G L147T A148G V149L S150IN A151T S153A W155V;
b) Y135F V139R L140M, A141V, G142P P143V D145C A146P L147S A148F V149P S150KLSC A151P W155L;
c) Y135F K136H V139M G142Y P143G D145C L147G A148N V149F S150GKVAKAGAPC A151P W155L;
d) V139I G142N P143I L144G D145G L147T A148G V149L S150IN A151T S153A W155V A281S, или
e) Y135F K136H V139M G142Y P143G D145C L147G A148N V149F S150GKVAKAGAPC A151P W155L A281S.
8. Полипептид по п.5 в иммобилизированной форме.
9. Способ проведения реакции, катализируемой липазой, который включает приведение реактантов во взаимодействие с полипептидом по любому предыдущему пункту, где реакцией является:
a) гидролиз, где реактантами являются эфир карбоновой кислоты и вода, а продуктами являются свободная карбоновая кислота и спирт;
b) синтез эфира, где реактантами являются свободная карбоновая кислота и спирт, а продуктом является эфир карбоновой кислоты;
c) алкоголиз, где реактантами являются эфир карбоновой кислоты и спирт; или
d) ацидолиз, где реактантами являются эфир карбоновой кислоты и свободная жирная кислота.
10. Способ по п.9, где реакцией является гидролиз изопропилового эфира, или синтез эфира, или алкоголиз с изопропанолом в качестве реактанта.
RU2009124454/10A 2006-11-28 2007-11-26 Варианты липолитического фермента RU2474611C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200601560 2006-11-28
DKPA200601560 2006-11-28
PCT/EP2007/062783 WO2008065060A2 (en) 2006-11-28 2007-11-26 Lipolytic enzyme variants

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2009124454A true RU2009124454A (ru) 2011-01-10
RU2474611C2 RU2474611C2 (ru) 2013-02-10

Family

ID=38024416

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2009124454/10A RU2474611C2 (ru) 2006-11-28 2007-11-26 Варианты липолитического фермента

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20100047836A1 (ru)
EP (5) EP2264157B1 (ru)
CN (1) CN101541956B (ru)
BR (1) BRPI0719072A2 (ru)
MY (1) MY152163A (ru)
RU (1) RU2474611C2 (ru)
WO (1) WO2008065060A2 (ru)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8715970B2 (en) 2009-09-16 2014-05-06 Basf Se Enzymatically catalyzed method of preparing mono-acylated polyols
WO2011067349A1 (en) * 2009-12-03 2011-06-09 Novozymes A/S Variants of a polypeptide with lipolytic activity and improved stability
EP2665825B1 (en) 2011-01-21 2016-01-13 Novozymes A/S Production of fatty acid alkyl esters
US8759044B2 (en) 2011-03-23 2014-06-24 Butamax Advanced Biofuels Llc In situ expression of lipase for enzymatic production of alcohol esters during fermentation
US8765425B2 (en) 2011-03-23 2014-07-01 Butamax Advanced Biofuels Llc In situ expression of lipase for enzymatic production of alcohol esters during fermentation
WO2013010783A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-24 Novozymes A/S Lipase variants and polynucleotides encoding same
BRPI1104122A2 (pt) * 2011-08-04 2015-08-25 Brasil Pesquisa Agropec Metodo para previsão de mutantes que aumentem o índice de hidrofobicidade da superfície de proteínas
US20140303389A1 (en) * 2011-11-22 2014-10-09 Archer Daniels Midland Company Palm oil enriched in unsaturated fatty acids
CN107988181A (zh) * 2012-04-02 2018-05-04 诺维信公司 脂肪酶变体以及编码其的多核苷酸
MX388061B (es) * 2014-12-05 2025-03-19 Novozymes As Variantes de lipasa y polinucleotidos que las codifican.
CN113913475B (zh) 2015-10-09 2025-07-08 诺维信公司 酶或非酶生物柴油精制方法
US12157822B2 (en) 2017-05-24 2024-12-03 Poet Research, Inc. Methods of producing vegetable oils with low minerals, metals, or other contaminants
CA3064549C (en) 2017-05-24 2023-06-20 Poet Research Inc. Enhanced alkyl ester containing oil compositions and methods of making and using the same
BR112019024623A2 (pt) 2017-05-24 2020-06-16 Poet Research, Inc. Uso de uma esterase para aumentar teor de éster de etila em meios de fermentação
US10851327B2 (en) 2018-06-11 2020-12-01 Poet Research, Inc. Methods of refining a grain oil composition feedstock, and related systems, compositions and uses
CN108220269B (zh) * 2017-12-29 2021-07-20 华南理工大学 一种耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体及其制备方法
CN109182298B (zh) * 2018-08-14 2021-05-11 浙江工业大学 一种重组脂肪酶突变体、工程菌及应用
CA3189121A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Poet Research, Inc. Endogenous lipase for metal reduction in distillers corn oil
CN112375751B (zh) * 2021-01-18 2021-04-06 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 脂肪酶突变体及其应用
WO2022233897A1 (en) 2021-05-04 2022-11-10 Novozymes A/S Enzymatic treatment of feedstock for hydrotreated vegetable oil (hvo) production
KR20250005200A (ko) 2022-04-20 2025-01-09 노보자임스 에이/에스 유리 지방산을 제조하는 방법
JP2025533985A (ja) 2022-10-14 2025-10-09 ノボザイムス アクティーゼルスカブ カンジダ・アンタークティカ(candida antarctica)リパーゼbを利用する油/脂肪中のジグリセリドの選択的加水分解方法
KR20250164220A (ko) * 2023-03-14 2025-11-24 바이엘 악티엔게젤샤프트 개선된 입체선택성을 갖는 리파아제 및 리파아제-기반 키랄 분리 방법
CN119876088A (zh) * 2025-01-08 2025-04-25 浙江工业大学 一种脂肪酶突变体及其在制备(s)-3-环己烯-1-甲酸中的应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2628667B2 (ja) 1986-10-17 1997-07-09 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 位置非特異性リパーゼ
SU1430888A1 (ru) * 1986-11-13 1988-10-15 Краснодарский политехнический институт Способ стереоспецифического анализа триацилглицеролов
RU1806196C (ru) * 1991-06-26 1993-03-30 Юрий Аврамович Султанович Способ получени сложных эфиров жирных кислот
DK73592D0 (da) 1992-06-03 1992-06-03 Novo Nordisk As Nyt enzym
WO1994026855A1 (en) * 1993-05-13 1994-11-24 Loders-Croklaan Human milk fat replacers from interesterified blends of triglycerides
GB9404483D0 (en) * 1994-03-08 1994-04-20 Norsk Hydro As Refining marine oil compositions
CN1247776C (zh) * 1998-02-17 2006-03-29 诺维信公司 脂肪酶变体
CN100529069C (zh) * 2001-01-10 2009-08-19 诺维信公司 脂解酶变体
KR100475133B1 (ko) * 2002-09-13 2005-03-10 한국생명공학연구원 효모 표면 발현 벡터를 이용하여 변이 리파제를스크리닝하는 방법 및 신규 변이 리파제

Also Published As

Publication number Publication date
EP2267121B1 (en) 2014-05-14
EP2099908B1 (en) 2014-05-14
EP2264159A3 (en) 2011-05-18
WO2008065060A3 (en) 2009-01-08
EP2264158A2 (en) 2010-12-22
CN101541956B (zh) 2012-04-18
EP2264157A2 (en) 2010-12-22
EP2264159A2 (en) 2010-12-22
EP2267121A3 (en) 2011-05-18
EP2264157B1 (en) 2014-05-14
EP2264158A3 (en) 2011-05-18
EP2264159B1 (en) 2014-05-14
RU2474611C2 (ru) 2013-02-10
CN101541956A (zh) 2009-09-23
EP2267121A2 (en) 2010-12-29
EP2264157A3 (en) 2011-05-18
MY152163A (en) 2014-08-15
BRPI0719072A2 (pt) 2013-12-03
EP2099908A2 (en) 2009-09-16
US20100047836A1 (en) 2010-02-25
US20130157325A1 (en) 2013-06-20
WO2008065060A2 (en) 2008-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2009124454A (ru) Варианты липолитического фермента
Jaeger et al. Lipases for biotechnology
ES2613553T3 (es) Enzimas CAR y producción mejorada de alcoholes grasos
RU2009121821A (ru) Фермент для продукции длиноцепочечной перкислоты
US20120094341A1 (en) Methods for the synthesis of olefins and derivatives
ATE467684T1 (de) Verfahren zur enzymatischen herstellung von 2- hydroxy-2-methylcarbonsäuren
ATE323152T1 (de) Biologische systeme zur herstellung von polyhydroxyalkanoate polymeren die 4-hydroxysäure enthalten
Eggert et al. Biochemical properties and three-dimensional structures of two extracellular lipolytic enzymes from Bacillus subtilis
RU2009111266A (ru) Синтез жирных кислот
Satta et al. Metabolic and enzymatic engineering strategies for polyethylene terephthalate degradation and valorization
CA3102464C (en) Process for the production of diglycerides
JP2011514805A (ja) 向上した安定性を有する脂肪分解酵素変異体、及びこれをコードするポリヌクレオチド
US8883444B2 (en) Peptide synthesis using enzymatic activation and coupling
Campillo-Alvarado et al. Recent advances and applications of the lipolytic activity of Carica papaya latex
CN120700069A (zh) 酶或非酶生物柴油精制方法
DK1775344T3 (da) Lipase, dens gen, stammen og anvendelsen af denne lipase
JP2025516626A (ja) 遊離脂肪酸を低減するプロセス
WO2023282853A3 (en) Lipases for use in production of a fatty acid ester
Jan et al. A glimpse into the specialization history of the lipases/acyltransferases family of CpLIP2
Perez et al. Hydrolases in green solvents
JP2004285182A (ja) グリセリドおよびその製造方法
RU2003108867A (ru) Бутинол i экстераза
RU2008114032A (ru) Бутинол i эстераза
US8951761B2 (en) Immobilized enzymes and methods of using thereof
RU2010121153A (ru) Новые гены атф:цитрат лиазы

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20141127