Claims (24)
1. Способ получения живой организации клеток подобной ткани, то есть культивирования макромассы, включающей трехмерные конструкции подобные ткани, не требующие наличия каркаса или чужеродного матрикса, предусматривающий1. A method of obtaining a living organization of cells of a similar tissue, that is, the cultivation of macromass, including three-dimensional constructions of similar tissues that do not require a frame or a foreign matrix, providing
систему культивирования, в которой клетки высевают с высокой плотностью на единицу площади сосуда для культивирования в диапазоне, охватывающем область около 106 клеток на см2, приводящей к возникновению трехмерного подобного ткани формирования или организации клеток, не требующих наличия любых других средств, которые способствуют образованию ткани и получение конструкций подобных ткани, полученных из мезодермальных клеток и возможно применимых для других типов клеток.a cultivation system in which cells are plated at a high density per unit area of the culture vessel in a range covering an area of about 10 6 cells per cm 2 , resulting in a three-dimensional tissue-like formation or organization of cells that does not require any other means that contribute to the formation tissue and the production of structures of similar tissue derived from mesoderm cells and possibly applicable to other types of cells.
2. Способ по п.1, включающий использование культивирования макромассы, предусматривающее систему культивирования для формирования ткани, которая включает получение трехмерной организации подобной ткани, макроскопической или микроскопической, из клеток при высокой плотности высевания клеток и2. The method according to claim 1, including the use of cultivation of macromass, providing a cultivation system for forming tissue, which includes obtaining a three-dimensional organization of such tissue, macroscopic or microscopic, from cells at a high cell density and
помещение клеток в непосредственной близости друг от друга в определенном благоприятном диапазоне высоких плотностей клеток в трехмерном пространстве, которое благоприятствует когезивному объединению клеток в трехмерное состояние подобное ткани, не требующее наличия любых других средств, которые способствуют образованию ткани.placing cells in close proximity to each other in a certain favorable range of high cell densities in three-dimensional space, which favors cohesive association of cells into a three-dimensional state similar to tissue, which does not require any other means that contribute to tissue formation.
3. Способ по п.1, предусматривающий образование подобного ткани пласта из клеток, включающих клетки фибробластов человека мезенхимального происхождения, и подобный ткани пласт не содержит синтетического или природного чужеродного матрикса, который может вызывать воспалительную реакцию у некоторых пациентов, и является клеточным так, что он способен продуцировать факторы роста и другие белки, и который можно получить в относительно короткое время.3. The method according to claim 1, providing for the formation of such a tissue layer from cells including human fibroblast cells of mesenchymal origin, and the tissue-like layer does not contain a synthetic or natural foreign matrix that can cause an inflammatory reaction in some patients, and is cellular so that it is capable of producing growth factors and other proteins, and which can be obtained in a relatively short time.
4. Подобные ткани организации клеток, включающие макроскопические трехмерные конструкции по п.1 для использования в качестве заменителей ткани для имплантации, для заживления ран, в качестве моделей in vitro для проверки лекарственных средств и тому подобного, полученные из клеток фибробластов мезенхимального происхождения, включающие инженерию предполагаемого эквивалента кожи, полученного из фибробластов кожи, предполагаемого заменителя с подобными кости свойствами, полученного из остеогенных клеток, полученных из жировых стромальных клеток, и предполагаемого заменителя хряща, полученного из хондроцитов, но не обязательно ограниченную данными типами клеток; и получение подобных ткани организаций клеток, которые можно получить для придания различных форм.4. Similar tissue organization cells, including macroscopic three-dimensional structures according to claim 1 for use as substitutes for tissue for implantation, for wound healing, as in vitro models for testing drugs and the like, obtained from fibroblast cells of mesenchymal origin, including engineering putative equivalent of skin derived from skin fibroblasts, putative substitute with bone-like properties, derived from osteogenic cells derived from stromal fat notches, and presumptive substitute cartilage derived from chondrocytes, but not necessarily limited data cell types; and obtaining tissue-like cell organizations that can be obtained to give various forms.
5. Подобные ткани организации клеток по п.4, которые являются трехмерными по природе и охватывают трехмерные макроскопические конструкции подобные ткани. 5. Similar tissue organization cells according to claim 4, which are three-dimensional in nature and encompass three-dimensional macroscopic structures of similar tissue.
6. Подобные ткани организации клеток по п.4, которые можно получить для придания различных форм, получаемых с целью достижения различных свойств или качеств, причем указанные различные формы включают трехмерные макроскопические подобные ткани конструкции, где термин «макроскопический» означает, что размер ткани составляет, по меньшей мере, такой размер, что его можно легко визуально различить нормальным человеческим зрением, и макроскопические подобные ткани конструкции гистологически компетентны; и6. Similar tissue organization cells according to claim 4, which can be obtained to give various forms obtained in order to achieve various properties or qualities, and these various forms include three-dimensional macroscopic tissue-like structures, where the term "macroscopic" means that the size of the tissue is at least such a size that it can be easily visually distinguished by normal human vision, and macroscopic tissue-like structures are histologically competent; and
комбинацию трехмерной подобной ткани организации с различным матриксами, такими как гели, пласты, мембраны или пористые материалы или с другими каркасами и тому подобным; и указанную подобную ткани организацию, находящуюся в форме микроскопических трехмерных структур.a combination of a three-dimensional tissue-like organization with various matrices, such as gels, formations, membranes or porous materials, or with other frameworks and the like; and said tissue-like organization in the form of microscopic three-dimensional structures.
7. Подобные ткани организации клеток по п.4, включающие подобные ткани организации, которые можно получить полностью, используя только клетки и среду культивирования.7. Similar tissue organization cells according to claim 4, including similar tissue organization, which can be obtained completely using only cells and culture medium.
8. Подобные ткани организации клеток по п.4, где подобную ткани организацию клеток можно получить без использования каких-либо средств, которые способствуют образованию ткани, включающие индуцирующие формирование ткани химические вещества, такие как аскорбиновая кислота; индуцирующие формирование ткани факторы роста и8. The tissue-like cell organization of claim 4, wherein the tissue-like cell organization can be obtained without using any means that promote tissue formation, including tissue-forming chemicals such as ascorbic acid; tissue formation-inducing growth factors and
питательную среду со специальными свойствами; чередующиеся культуры; сложный биореактор или чужеродный матрикс, или матрицу, или подложки.culture medium with special properties; alternating cultures; complex bioreactor or foreign matrix, or matrix, or substrate.
9. Подобные ткани организации клеток по п.4, включающие подобные ткани организации, которые можно получить без необходимости наличия компонентов чужеродного внеклеточного матрикса.9. Similar tissue organization cells according to claim 4, including similar tissue organization, which can be obtained without the need for components of a foreign extracellular matrix.
10. Подобные ткани организации клеток по п.4, полученные из различных типов клеток, включающих фибробласты кожи; жировые стромальные клетки; остеогенные клетки, полученные из жировых стромальных клеток; хондроциты и остеобласты.10. Similar tissue organization cells according to claim 4, obtained from various types of cells, including skin fibroblasts; fat stromal cells; osteogenic cells derived from fat stromal cells; chondrocytes and osteoblasts.
11. Подобные ткани организации клеток, полученные при культивировании макромассы, по п.4, для формирования которых существует диапазон значений плотности высевания клеток, которые благоприятствует образованию ткани, и точный диапазон высоких значений плотности высевания клеток, возможно, отличается для различных типов клеток.11. Similar tissue cell organization obtained by culturing macromass, according to claim 4, for the formation of which there is a range of cell seeding density that favors tissue formation, and the exact range of high cell seeding density may differ for different types of cells.
12. Подобные ткани организации клеток, полученные при культивировании макромассы, по п.4, в котором время формирования ткани может изменяться для различных типов клеток или различных условий среды.12. Similar tissue organization cells obtained by culturing macromass, according to claim 4, in which the time of tissue formation can vary for different types of cells or different environmental conditions.
13. Подобные ткани организации клеток, полученные при культивировании макромассы, по п.4, полученные без необходимости наличия определенных условий среды, включающих бессывороточные условия среды и определенные сложные композиции сред.13. Similar tissue cell organization obtained by culturing macromass, according to claim 4, obtained without the need for certain environmental conditions, including serum-free environmental conditions and certain complex media compositions.
14. Подобные ткани организации клеток, полученные при культивировании макромассы и различные их виды по п.4, которые являются трехмерными и которые обладают гибкостью относительно размеров, включающих различные размеры в трех измерениях; большие или меньшие подобные ткани конструкции, полученные при увеличении или уменьшении культивирования макромассы; и изменяемый размер или масштаб при изменении числа клеток, используемых для получения плотности высевания в пределах благоприятного для макромассы диапазона формирующих ткань величин плотности, при увеличении или уменьшении культивирования макромассы.14. Similar tissue organization cells obtained by culturing macromass and their various types according to claim 4, which are three-dimensional and which have flexibility with respect to sizes, including various sizes in three dimensions; larger or smaller tissue-like constructs obtained by increasing or decreasing macromass cultivation; and a variable size or scale when changing the number of cells used to obtain the seeding density within the range favorable for macromass tissue-forming density values, with an increase or decrease in the cultivation of macromass.
15. Подобные ткани организации клеток по п.4, обладающие гибкостью в отношении используемой среды культивирования, включающей формирование подобной ткани организации в присутствии различных сред культивирования, как различных сред роста, так и/или сред для формирования ткани; и15. Similar tissue organization cells according to claim 4, having flexibility in relation to the used culture medium, including the formation of a similar tissue organization in the presence of different culture media, both different growth media and / or media for tissue formation; and
модуляцию свойств подобной ткани организации посредством включения компонентов в среду роста и/или формирования ткани, при условии, что добавление данных компонентов не влияет негативно на образование ткани, или посредством изменения среды, при условии, что это изменение среды не влияет негативно на образование ткани.modulating the properties of such an organization tissue by incorporating the components into a growth and / or tissue formation environment, provided that the addition of these components does not adversely affect tissue formation, or by changing the environment, provided that this environmental change does not adversely affect tissue formation.
16. Подобные ткани организации клеток, полученные при культивировании макромассы, по п.4, включающие заменители ткани, полученные на различных подходящих поверхностях роста или каркасах.16. Similar tissue organization cells obtained by culturing macromass, according to claim 4, including tissue substitutes obtained on various suitable growth surfaces or frames.
17. Подобные ткани организации по п.4, включающие получение подобных ткани конструкций, полученных в сосудах для культивирования любой формы с плоским или закругленным дном.17. Similar tissue organizations according to claim 4, including obtaining tissue-like structures obtained in culture vessels of any shape with a flat or rounded bottom.
18. Подобные ткани организации по п.4, которые можно получить для придания различных форм, и различные формы, получаемые с целью достижения различных свойств или качеств, включающие трехмерные макроскопические подобные ткани конструкции, имеющие размер, который может быть легко визуально различим нормальным человеческим зрением;18. Similar tissue organization according to claim 4, which can be obtained to give various forms, and various forms obtained in order to achieve various properties or qualities, including three-dimensional macroscopic tissue-like structures with a size that can be easily visually distinguished by normal human vision ;
макроскопические подобные ткани конструкции, являющиеся гистологически компетентными;macroscopic tissue-like constructs that are histologically competent;
комбинации трехмерной подобной ткани организации с различными матриксами, такими как гели, пласты, мембраны или пористыми материалами, или с другими каркасами; иcombinations of three-dimensional tissue-like organization with various matrices, such as gels, formations, membranes or porous materials, or with other frameworks; and
подобная ткани организация клеток, находящихся в форме микроскопических трехмерных структур.tissue-like organization of cells in the form of microscopic three-dimensional structures.
19. Способ получения подобной ткани организации клеток, включающий производство трехмерных подобных ткани конструкций без помощи каркаса, предусматривающий использование культуры высокой плотности высевания клеток для получения подобной ткани организации клеток, не требующих использования определенных средств, которые способствуют формированию ткани, и каркасов; получение подобных ткани конструкций, полученных из мезодермальных клеток, но не обязательно ограниченные данными типами клеток; и конструирование подобной ткани организации клеток для получения различных продуктов инженерии ткани путем создания подобной ткани организации клеток и формирования живых клеточных предполагаемых заменителей ткани.19. A method of obtaining a tissue-like tissue organization of cells, including the production of three-dimensional tissue-like structures without the help of a scaffold, which involves the use of a high cell culture culture for cell-like tissue organization of cells that do not require the use of certain agents that promote tissue formation and scaffolds; obtaining tissue-like constructs derived from mesoderm cells, but not necessarily limited to these cell types; and constructing tissue-like cell organization cells to produce various tissue-engineered products by creating tissue-like cell organization and forming living cell putative tissue substitutes.
20. Способ по п.19, включающий использование высокой плотности высевания клеток на единицу площади или пространства сосуда для культивирования, не требующий наличия других средств для формирования подобной ткани организации клеток и для получения макроскопических подобных ткани конструкций.20. The method according to claim 19, including the use of a high density of seeding cells per unit area or space of the vessel for cultivation, not requiring the availability of other means for the formation of tissue-like organization of cells and for macroscopic tissue-like structures.
21. Способ по п.19, включающий формирование подобной ткани организации с использованием культивирования макромассы посредством высевания клеток при высокой плотности на единицу площади или пространства сосуда для культивирования.21. The method according to claim 19, comprising forming a tissue-like organization using macromass culture by plating cells at high density per unit area or space of the culture vessel.
22. Способ по п.21, в котором культивирование макромассы включает систему культивирования для формирования ткани, предусматривающую22. The method according to item 21, in which the cultivation of macromass includes a cultivation system for tissue formation, comprising
высевание клеток при высокой плотности на единицу площади или пространства сосуда для культивирования в диапазоне, охватывающем область около 106 клеток на см2, и не требующее наличия других средств, которые способствуют формированию ткани и культивирование макромассы, дополнительно предусматривающее получение подобной ткани организации, макроскопической или микроскопической, из клеток посредством высевания клеток с высокой плотностью, помещения клеток в непосредственной близости друг к другу при определенном благоприятном диапазоне высоких значений плотности клеток в трехмерном пространстве, не требующее наличия других средств, которые способствуют формированию ткани; достижение макромассового диапазона благоприятных высоких значений плотности высевания клеток путем помещения клеток вместе в трехмерном пространстве занятого клетками на дне сосуда для культивирования так, что они переходят в состояние непосредственной близости друг с другом, что запускает или передает им сигнал о способе формирования ткани, посредством которого они когезивно объединяются; иseeding of cells at high density per unit area or space of the culture vessel in the range covering an area of about 10 6 cells per cm 2 and not requiring other means that contribute to tissue formation and macromass cultivation, additionally providing for obtaining a similar tissue organization, macroscopic or microscopic, from cells by plating cells with high density, placing cells in close proximity to each other with a certain favorable range values not higher cell density in the three dimensional space that does not require the presence of other agents which promote the formation of the fabric; achievement of the macromass range of favorable high values of cell seeding density by placing cells together in a three-dimensional space occupied by cells at the bottom of the cultivation vessel so that they become in a state of close proximity to each other, which triggers or transmits them a signal about the method of tissue formation by which cohesively combine; and
достижение макромассового диапазона плотности высевания клеток в сосуде с плоским или закругленным дном, посредством чего использование сосуда для культивирования диаметром, по меньшей мере, приблизительно 0,75 см для культивирования макромассы приводит к формированию макроскопических подобных ткани конструкций, и макроскопический определяет размер ткани, который можно легко визуально различить нормальным человеческим зрением.achieving a macro-mass range of cell seeding density in a vessel with a flat or rounded bottom, whereby using a culture vessel with a diameter of at least about 0.75 cm for culturing macromass leads to the formation of macroscopic tissue-like structures, and macroscopic determines the size of the tissue that can be It is easy to visually distinguish between normal human vision.
23. Подобные ткани конструкции для имплантации в организм человека или млекопитающих, полученные в соответствии со способом получения макроскопических подобных ткани конструкций и целостной подобной ткани организации клеток, не требующим наличия любых определенных средств, чтобы индуцировать организацию, и которые можно увеличить до получения макроскопических подобных ткани конструкций, не требующих наличия каркасных материалов и определенных средств/сложных составов среды, исключительно посредством высокой плотности высевания клеток в культуре, то есть культура макромассы из клеток, включающих клетки мезенхимального происхождения, где полученные подобная ткани организация клеток и предполагаемые эквиваленты ткани получены из клеток мезенхимального происхождения, включающих полученный инженерией предполагаемый эквивалент кожи, полученный из фибробластов кожи, предполагаемый заменитель с подобными кости свойствами, полученный из остеогенных клеток, полученных из жировых стромальных клеток или из остеобластов, и предполагаемый заменитель для восстановления хряща, полученный из хондроцитов.23. Tissue-like constructs for implantation into a human or mammalian organism, obtained in accordance with a method for producing macroscopic tissue-like constructs and holistic tissue-like cell organization tissue that does not require any specific means to induce organization, and which can be increased to obtain macroscopic tissue-like tissue constructions that do not require the presence of frame materials and certain means / complex compositions of the medium, exclusively through a high density of seeding cells current in the culture, that is, a macromass culture from cells including cells of mesenchymal origin, where tissue-like organization of cells and alleged tissue equivalents are obtained from cells of mesenchymal origin, including an engineering-derived implied skin equivalent derived from skin fibroblasts, an assumed substitute with bone-like properties obtained from osteogenic cells derived from fat stromal cells or from osteoblasts, and a proposed substitute for restoration cartilage derived from chondrocytes.
24. Подобные ткани конструкции по п.23, где подобная ткани организация клеток и макроскопические подобные ткани конструкции получены без необходимости наличия каркаса или чужеродного матрикса или сложного биореактора для создания ткани для получения трехмерных подобных ткани конструкций для имплантации в организм человека или млекопитающих в качестве терапии болезненных состояний или состояний повреждения тканей; формирование подобных ткани конструкций не требует наличия измененной лунки, несущей поверхность, неблагоприятную для присоединения клеток; и24. The tissue-like constructs of claim 23, wherein the tissue-like cell organization and macroscopic tissue-like constructs are obtained without the need for a framework or foreign matrix or a complex bioreactor to create tissue to produce three-dimensional tissue-like constructs for implantation into a human or mammalian body as a therapy painful conditions or conditions of tissue damage; the formation of tissue-like structures does not require the presence of an altered hole bearing a surface unfavorable for cell attachment; and
подобная ткани организация клеток и макроскопических подобных ткани конструкций получены без необходимости наличия любых средств, таких как индуцирующие формирование ткани химические вещества, индуцирующие формирование ткани факторы роста, питательная среда со специальными свойствами, чередующиеся культуры.tissue-like cell organization and macroscopic tissue-like constructs are obtained without the need for any means, such as tissue-forming inducing chemicals, tissue-forming inducing growth factors, culture media with special properties, alternating cultures.