RU2002755C1 - Производное целлюлозы и госсипола, обладающее интерферониндуцирующим и противовирусным действием - Google Patents

Description

На ПК-спектрах препарата имеютс  интенсивные полосы поглощени  при 1610 , характерные карбоксилат аниону карбоксиметильной группы, при 1460 и 1385 характерные бензольному кольцу и метильной группе, соот- ветственно, полифенола - госсипола.

На УФ-спектрах препарата имеетс  интенсивна  полоса поглощени  при А 385 нм характерна  нафталиновому циклу. По изменению интенсивности данной полосы рассчитаны содержание полифенола в полимерной цепочке. Эмпирическа  формула:

- (С4оНзаСч4)а - (CeHioOsJe - (CsHnO а), где

а - 3%. б - 63%. в 34% (мае.) и п 530-532.

Испытание.предлагаемого соединени  (К-37)на цитотоксичность, интерферонинду- цирующую и противовирусную активность ин витро и ин виво..

Цитотоксичность предлагаемого препарата К 37 определ ют в 24-48 ч культурах перевиваемой линии клеток L 929. На монослой клеток, выращенных на дне 96-луноч- ных панелей при 37°С в термостате с посто нным содержанием углекислоты 3,5%. нанос т различные концентрации изучаемого препарата. Через 24 ч контакта клеток с препаратом оценивают цитотокси- ческий эффект. Как показано в табл.1, уве- личение концентрации препарата до 3000 мкг/мл не приводит к цитопатическому действию препарата на клетки, в то врем  как исходный госсипол обладает выраженной токсичностью дл  клеток уже при концент- рации 125 мкг/мл.

Изучение токсического действи  предполагаемого соединени  ин виво (на мышах).

Токсическую дозу К-37 определ ют на белых беспородных мышах массой 10-12 г при однократном внутрибрюшинном введении различных концентраций препарата а обьеме0,2 мл на мышьи вычисл ют процент выживаемости животных через 2 недели после его введени  (табл.2). Как видно из табл.2, предлагаемый препарат К-37 при введении максимально растворимых количеств (2000 мг/кг) оказалс  нетоксичным, в то врем  как исходный препарат госсипол обладает выраженной токсичностью уже при концентрации 100 мг/кг веса.

Сравнительное изучение интерферо- ниндуцирующей активности госсипола и предлагаемого препарата К-37 ин витро. К моносло м клеток L-929 добавл ют различ- ные концентрации предлагаемого препарата К-37 и госсипола в сочетании с ДЭАЭ-лекстраном. После 4- часового контакта с препаратами клетки двухкратно отмывают раствором Хэнкса и добавл ют 199

среду с 2% бычьей сыворотки. Титры интерферона в культуральной жидкости определ ют через 24 ч по подавлению цитопатического действи  (ЦПД) тест-вируса энцефаломиокардита мышей (ЕМС) микрометодом на гомологичных культурах. К-37 обладает выраженной интерферониндуци- рующей активностью при использовании его в концентрации 250 мкг/мл (табл.3). Титры интерферона (ИФН), синтезируемого в ответ на введение К-37 в культуру клеток 199, в 12-13 раз превышают уровень ИФН, образовавшегос  в ответ на введение исходного препарата госсипол.

Интерферониндуцирующа  активность предлагаемого соединени  ин виво (на мышах).

Интерферониндуцирующую активность предлагаемого соединени  К-37 и исходного госсипола на мышах определ ют при пе- роральном, ректальном и подкожном пути введени . Результаты проведенных испытаний приведены в табл.4. При пероральном пути введени  К-37 максимальна  продукци  сывороточного интерферона достигает 640 ед/мл и отмечаетс  при дозе 25 мг/кг. При ректальном введении К-37 в дозе 10 мг/кг веса титры интерферона достигают в сыворотке крови 1280-2560 ед/мл, при подкожном введении в той же дозе- 1280 ед/мл. Титры ИФН, синтезированного в ответ на введение К-37, в 16-32 раза превышают уровень ИФН, индуцированного госсиполом.

Противовирусна  активность К-37 ин виво (на мышах)..

Защитное действие К-37 изучают при инфекци х, вызванных вирусами энцефаломиокардита мышей (штамм Колумби и) гриппа ( штамм R-94 ) гепатита мышей (штамм Мищерина) на белых беспородных мышах массой 12-14 г. Препараты ввод т в эффективной дозе в объеме 0,2 мл через 4 ч после заражени  вышеуказанными вирусами . Доза заражени  вируса энцефаломио- кардита мышей составл ет 5,0-6.0 Ig ЛДю/0,2 мл и гепатита мышей 6.0 Ig ЛД50/0.2 мл. Гемагглютинирующий титр вируса гриппа составл ет 1:1024 ед/мл. Результаты суммированы в табл.5. Полученные данные дают основание считать , что предлагаемый препарат при применении по лечебной схеме обладает выраженной противовирусной активностью в отношении широкого спектра экспериментальных вирусных инфекций. (56) Садыков А.С. и др. Индукторы интерферона , Ташкент. 1978, с. 304.

Авторское свидетельство СССР № 886989, кл. В 02 С 21 /00. 1980.

Авторское свидетельство СССР №721103, кл. А 61 К 45/02. 1979.

Таблица Цитотоксическое действие госсипола и К-37 ин витро (на культуре клеток L-929)

Примечание. /+/ 25. /++/ 50%, /+++/ 75%,/++++/ Ю0% гибели клеток; /-/ - отсутствие токсического действи .

Таблица2 Изучение токсичности предлагаемого препарата К-37 ин виво (на мышах)

Примечание. На каждую дозу препаратов брали по 20 мышей. х Данные литературы.

ТаблицаЗ

Сравнительное изучение интерферониндуцирующей активности госсипола и К-37 ин витро

(на культуре клеток L-929)

Та б л и ца4

Интерферониндуцирующа  активность предлагаемого препарата К-37 и госсипола им виво (в сыворотке крови экспериментальных животных)

Табл ица5 Противовирусна  активность предлагаемого препарата К-37 ин виво (на мышах)

Вирус

Защита животных, в %

Грипп (штамм R -94) Гепатит мышей (штамм Мищерина )

Энцефаломиокардит мышей мышей (штамм Колумби )

Продолжение табл.3

Достоверность. Р

75

0,001

40

0,01

65

0,001

112002755

Формул а изобретени гдеа 3мас.%;

Производное целлюлозы и госсипола

формулы

ч сиен . N 1-

СЙ.ОСН.ССПМ

б 63 мае.; % в 34мас.%; п 530 - 532,

5 обладающее ин противовирусны

12

гдеа 3мас.%;

б 63 мае.; % в 34мас.%; п 530 - 532,

5 обладающее интерферониндуцирующим противовирусным действием.