KR800001505B1

KR800001505B1 - 티아졸릴 페닐구아니딘류의 제조방법

Info

Publication number: KR800001505B1
Application number: KR7700040A
Authority: KR
Inventors: 부루우스 앤저어 로버어트; 리이 린지 해리
Original assignee: 죤 제이 헤이간; 아메리칸 사이아나밋드 캄파니
Priority date: 1977-01-11
Filing date: 1977-01-11
Publication date: 1980-12-19

Abstract

내용 없음.

Description

티아졸릴 페닐구아니딘류의 제조방법

본 발명은 리노비루스의 감염을 방지하거나 치료하는데 유용한 다음 일반식으로 표시된 티아졸릴 페닐구아니딘류의 제조방법에 관한 것이다.

상기식에서 R은 수소 또는 염화물이며, R′는 수소, 플루오르화물, 염화물, 저급알킬, 카르복실 또는 카르보 저급 알콕시이다. 저급알킬 및 저급알콕시기는 1-4개의 탄소원자를 함유하고 있다.

본 발명의 화합물인 치환된 티아졸릴 페닐 구아니딘과 약제학적 담체를 함유하고 있는 약제학적 조성물은 감기 비루스(리노비루스)의 성장을 억제하는데 사용된다. 구조식이 상기와 같은 화합물의 제약상 허용되는 산 부가염 역시 항 리노비루스 활성을 가지고 있다.

이들 염류에는 염산염, 황산염, 질산염, 히드로보로마이드, 말레산염, 주석산염 및 벤조산염이 있다.

이들 염류는 염기성 화합물을 산과 반응시켜 상응하는 산부가염을 생서케 하는 종래의 방법에 따라 제조된다.

본 발명의 활성성분은 아래 방법에 의해 제조된다. :

여기서 R 및 R′는 전술한 바와 같다.

N-시아노티오우레아의 디에틸아민염(I)을 환류메탄올 중에서 α-할로-아세토페논(II)과 반응시켜 4-페닐-2-티아졸릴-2-카르바모니트릴(III)을 얻고, 이것을 환류 에탄올 중에서 아닐린 또는 치환된 아닐린 유도체와 반응시켜 1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-페닐구아니딘 또는 그의 치환 유도체(IV)를 산출한다.

상기 화합물 및 그들의 제약상 허용되는 산부가염은 숙련된 제약사들에 잘 알려진 방법으로 제제화시켜 항리노비루스제로 사용할 수 있다. 이 조성물을 경구적으로 투여하고자 할 때는 정제나 캡슐제로 하는 것이 바람직하며, 이들은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 또 이 분야에서 알려진 방법에 따라 지속적으로 방출되는 제제로 제제화 시킬 수 있다.

또 다른 바람직한 투여방법은 비내(鼻內) 투여시키는 것으로서, 비(鼻)조직내로 분무할 수 있는 현탁제나 액제가 바람직하다.

그외 투여방법으로 근육 또는 피하주사가 있을 수 있다.

정제나 캡슐제는 기지의 방법으로 제조되며, 통상의 부형제(賦形劑)인 설탕, 전분, 유장, 스테아르산마그네슘 등을 함유할 수 있다. 경구조성물의 1회 용량은 50mg-400mg으로 1일 2-4회 투여하며, 따라서 1일 복용량은 약 100-1600mg이 된다.

비내 제제는 분무제 또는 점비제(點鼻劑) 형태로된 0.5-10%의 현탁제를 1일 수회 투여하는 것이 좋다. 주사제는 체중 1kg당 0.5-2.0mg의 농도로 한번 투여한다.

이 조성물은 감염을 방지하거나 경감시키기 위해 리노비루스에 감염되기 전에 투여하며, 감염을 치료하고 전신작용을 최소로 하기 위해 증상이 나타났을 때 또는 감염에 노출된 것을 안 즉시 온혈동물에 투여하는 것이 바람직하다.

에컨대 항리노 비루스 화합물인 1-(4-페닐티아졸릴-2)-3-페닐구아니딘 함유 정제의 대표적 제제 처방은 아래와 같다 :

상기 항 비루스 화합물을 함유하는 캡슐제의 대표적 제제 처방은 아래와 같다.

동일한 항리노비루스 화합물을 함유하고 있는 비내 분무 현탁제의 대표적 제제 처방은 아래와 같다.

상기 조성물은 일반시 범위내에 있는 딴 화합물로 치환시키거나 유사한 조성물로 제제화 시킬 수 있다.

본 발명의 화합물은 가미 같은 호흡기 질병을 유발하는 여러 종류의 비루스 또는 리노비루스에 대해 유효하다.

플라스틱조직 배양접시에서 배양한 HeLa, HEp-2, kB 또는 L-132 같은 연속 세포계(continuous cell-line)의 융합성 단층 세포를 예컨대 1B, 2, 5, 14 또는 23형의 리노비루스 또는 콕스삭키(coxsackie) A-11 및 A-21 같은 엔테로 비루스(enteroviruses)를 포함한 피코르나 비루스(picornavirus)군중 하나로 감염시킨다.

여과원판에 시험화합물을 흡착시키고 이것을 감염된 단층세포에 중층한 한천위에 놓는 플라크(plaque)억제 시험법 또는 상기 한천중층(agar overlay)에 혼입시키는 법으로 비루스의 세포병변 효과에 대한 조직의 보호를 확인한다. 이런 목적으로 사용되는 한천 중층배지의 제제처방은 아래와 같다 :

얼스염(Earle′s saHs)(그랜드 아일랜드 생물학협회, 그랜드 아일랜드, N. Y) 및 아래 물질을 첨가한 최소필수 배지(이글 : Eagle)

단층 세포에 감염시킨 비루스와 시험화합물을 함께 습도 조절된 33℃, 5% 이산화탄소 분위기에서 3-5일간 배야시킨다. 이들 화합물의 비루스에 의한 조직 사멸 보호 능력은 잔류 미감염세포를 20% 에탄올 중의 0.5% 크리스탈비아올렛으로 염색함으로써 명백해진다. 그 결과를 표 1에 표시했다.

[표 1]

＋=비루스에 의한 사멸로부터 보호된 조직

=부분적 보호

플라크 정량법(plaque assays)에서, 최소저지농도(MIC)를 결정하기 위해 1-(4-페닐티아졸릴-2-) 3-페닐구아니딘을 디메틸술폭시드나 또는 폴리에틸렌글리콜 400에 녹이거나 또는 배양배지에 100-250mg/ml로 균질화시킨다. 배양배지 또는 각 용매내에서 배수희석계열을 제조하고 각 희석액의 부분표본을 배양중층 배지에 혼입시켜 바라는 약물 농도로 한다. 약물을 용매에 용해시킬 때 배양 중층배지내 존재하는 디메틸 술폭시드 및 폴리에틸렌 글리콜 400의 최종일정 농도는 각기 0.04%와 0.2%이다.

MIC(비루스 플라크 형성을 50%까지 저해하는 약물농도)를 결정하기 위해 플라크 시험은 HeLa 세포상에서 행하며 HeLa 세포를 100-300플라크 형성단위의 리노 비루스, 폴리오비루스 또는 콕스삭키 비루스로 감염시킨다. 비루스를 흡착시킨 후, 각 접시에 1-(4-페닐-2-티아졸릴-3-페닐구아니딘을 함유한 한천중층 배지 10ml를 가한다. 비노비루스로 감염시킨 배양액을 33℃에서 4-5일간 배양시킨다. 폴리오비루스 및 콜스삭키비루스로 감염시킨 배양액은 37℃도에서 2-4일간 배양한다.

약물을 함유하고 있는 미감염 배양액과 디메틸술폭시드 또는 폴리에틸렌글리콜 400만을 함유하고 있는 배양액을 시험의 대조군으로 한다. 배양기간의 마지막에 배양액을 20% 에탄올 중의 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 플라크의 수를 센다. 그 결과를 표 2에 표시했다.

[표 2]

여과원판법에 의한 비루스 감수성 시험에서 1-(4-페닐티아졸릴-2)-3-페닐구아니딘 5mg을 1-2방울의 디메틸 술폭시드와 2.5ml의 식염수에 용해시킨다. 용액으로 포화되었을 때 여과원판에 화합물 약 50mcg을 흡착시킨다.

감수성 시험은 헤르만등의 방법을 수정하여 수행했다(Proc. Soc. Exp. Biol. ＆ Med., 103,625(1960)).

150mm 플라스틱 접시내의 HeLa 단층세포를, 4-5일내 세포의 80-90%를 사멸시키는 것으로 알려진 리노 비루스현탁액 1.0ml로 감염시킨다. 비루스를 흡착시킨 후 세포에, 0.5%의 노블 한천(Noble agar), 2.0%의 태아 송아지 혈청, 100mcg/ml의 디에틸 아미노에틸 덱스트란 및 3밀리몰의 염화 마그네슘을 함유한 이글(Eagle)의 최소필수배지 30ml를 중층시킨다. 1-(4-페닐티아졸릴-2)-3-페닐구아니딘 50mcg을 함유한 여과원판(1/4인치 칼 슈라이헐 및 슈엘사 No. 740E)을 고체상 표면에 놓고 이 배양평판을 33℃에서 배양시킨다. 4-5일후 중층배지를 기울여 따라 버리고 세포를 20% 에탄올중의 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 염색한다. 그 대역이 10mm 또는 그 이상일 때는 적어도 세포의 2/3가 비루스 세포 병변효과로부터 보호된 것으로 항 비루스 활성이 있음을 의미하는 것이다.

본 화합물에 의해 저해 받는 리노 비루스 혈청형 35종의 목록은 하기표 III에 기재했다.

[표 3]

[비루스 수율 감소시험]

비루스 수율을 결정하기 위한 검사에서 2.0%의 송아지 태아 혈청을 보충시킨 이글(Eagle)의 초시필수배지내에 1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-페닐구아니딘을 혼합시킨다. 60mm 접시내의 HeLa 단층 세포를 본 배지내의 약물에 6시간 동안 노출시키고, 동시에 도는 그후에 비루스 중복도 1의 리노비루스 혈청형 1B로 감염시킨다. 약물처리 배양액 및 대조 배양액을 3번 세척하고 약물을 함유사지 않은 배지를 배양 잔류기간 동안 첨가한다. 비루스 수율은, 감염시켜 24-48시간 배양한 배양액의 플라크를 검정하여 결정한다. 이 검사 결과, 0.4-0.8mcg/ml의 약물로 처리한 배양액에서 24시간 후 비루스 수율이 1-2로 그가 억제된 것으로 리노비루스형 1B가 의미있게 억제되었음을 알 수 있었으며, 그 결과를 표 IV에 표시했다.

[표 IV]

*HeLa 세포에 비루스를 중보도 1에서 0시간에서 1시간 동안 흡착시킨다. 약물을 우선 디메틸 술폭시드 또는 폴리에틸렌-글리콜 400에 용해시키고, 이것을 비루스 흡착도중 또는 흡착 1시간후에 가하며, 6시간후 제거하고 이어 단층세포를 배지로 3번 세척한다.

상술한것 외에도, 1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-페닐구아니딘은 인간세포 배양액 내에서 리노비루스와 그밖에 코크삭키 및 플리오비루스를 포함한 기타 피코르나 비루스의 광범위 스펙트럼에 대해 활성이 있다. 1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-페릴 구아니딘의 농도에 따른 비루스 성장 억제관계는 비루스 플라크 형성에 대한 억제효과와 비루스 수율에 의해 결정된다. 이 화합물은 세개의 다른 인간상피 세포계(HeLa, L-132 및 Detriot-6) 내의 리노비루스에 대해 동등한 활성을 갖는다.

본 발명의 제조방법이 하기 실시예에 상세히 설명되어 있다.

[실시예 1]

4-페닐-2-티아졸 카르바모니트의 제조

20그람(117밀리몰)의 디에틸아민 N-시아노우레아[알 엘 맥키 및 제이디 테일러, 유기화학잡지, 17, 1494(1953)], 18.2그람(117밀리몰)의 염화펜아실 및 메탄올 90ml의 혼합물을 15분동안 가열 환류하면 모두 용해되고, 새로운 고체가 분리된다.

혼합물을 냉각시키고 여과하여 융점 177°-179℃의 생성물 19.8그람을 얻는다(검은 녹색 용융물).

[실시예 2]

4-(4-클로로페닐)-2-티아졸 카르바모니트릴의 제조

염화펜아실 대신 여화 4-클로로펜아실을 사용하는 것 이외에는 실시예 1의 방법을 반복하여 융점 173°-176℃의 생성물을 얻는다(검은 녹색 용융물).

[실시예 3]

1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-페닐구아니딘의 제조

에탄올 350ml에 아닐린 10ml(10.2그람, 110밀리몰)와 4-페닐-2-티아졸 카르바모니트릴 19.8그람(100밀리몰)을 녹인 용액을 8시간동안 가열환류하고 하룻밤 냉각시켜 융점 179°-180℃의 생성물 23그람을 얻는다.

이 생성물을 에탄올 550ml로 재결정하여 융점 180°-181℃의 생성물 19.5g을 얻는다.

[실시예 4]

1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-(3-클로로페닐)-구아니딘의 제조

에탄올 30ml에 4-페닐-2-티아졸 카르바모니트릴 1.6그람(8밀리몰)과 m-클로로아닐린 0.9ml(1.1그람, 8.6밀리몰)을 녹인 용액을 30시간 가열 환류하고 하룻밤 냉각시켜 생성물 0.7그람을 얻는다. 이 생성물을 에탄올 5ml로 재결정하여 융점 134°-135℃의 생성물 0.45그람을 얻는다.

[실시예 5]

1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-(4-카르보메톡시페닐) 구아니딘의 제조

에탄올 40ml에 4-페닐-2-티아졸 카르바모니트릴 2.0그람(10밀리몰)과 메틸 4-아미노벤조에이트 1.65 그람(11밀리몰)을 녹인 용액을 30시간 가열 환류하고 하룻밤 냉각시켜 생성물 0.75그람을 얻는다. 이 생성물을 에탄올 15ml로 재결정시켜 융점 189°-191℃의 생성물 0.6그람을 얻는다.

[실시예 6]

1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-(4-플로오로페닐)-구아니딘의 제조

에탄올 25ml에 4-페닐-2-티아졸 카바모니트릴 2.0그람(10밀리몰)과 4-플로오로아닐린 1.24그람(10.5 밀리몰)을 녹인 용액을 7시간 동안 가열 환류하고 하룻밤 냉각시켜 생성물 1.4그람을 얻는다. 이 생성물을 에탄올 8ml로 재결정시켜 융점 156°-158℃의 생성물 1.0그람을 얻는다.

[실시예 7]

1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-(4-카르복시-페닐) 구아니딘의 제조

에탄올 125ml에 4-페닐-2-티아졸 카르바모니트릴 10.0그람(50밀리몰)과 P-아미노 벤조산 7.25그람(52.5밀리몰)을 녹인 용액을 30시간 가열 환류하면 고체가 생성된다. 이 혼합물을 뜨거울 때 여과하여 생성물 5.2그람을 얻는다.

이 생성물을 초산 30ml로 재결정한 후 110℃의 아브데어할덴 피스톨(Abderhaldenpistol) 내에서 하룻밤 건조시켜 융점 245°-247℃의 생성물 5.1그람을 얻는다.

[실시예 8]

1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-(P-톨릴) 구아니딘의 제조

에탄올 150ml에 4-페닐-2-티아졸카르바모니트릴 10.0그람(50밀리몰)과 P-톨루이딘 6.0그람(55밀리몰)을 녹인 용액을 7시간 동안 가열 환류하고 하룻밤 냉각시켜 생성물 11.5그람을 얻는다.

이 생성물을 에탄올 100ml로 재결정하여 융점 152°-153℃의 생성물 9.3그람을 얻는다.

[실시예 9]

1-[4-(4-클로로페닐)티아졸릴-2]-3-(P-톨릴) 구아니딘의 제조

에탄올 30ml에 4-(4-클로로페닐)-2-티아졸 카르바모니트릴 2.4그람과 P-톨루이딘 1.2그람(11밀리폴)을 녹인 용액을 8시간 동안 가열 환류하고 하룻밤 냉각시켜 생성물 2.7그람을 얻는다. 이 생성물을 에탄올 50ml로 재결정하고, 이어 톨루엔 20ml로 재결정하여 융점 175°-177℃의 생성물 1.9g을 얻는다.

Claims

구조식(I)의 N-시아노티오 우레아의 디에틸아민염을 환류 메탄올내에서 구조식(II)의 α-할로 아세토페논과 반응시켜 구조식(III)의 4-페닐-2-티아졸릴-2-카르바모니트릴을 얻고, 이어 이것을 환류 에탄올내에서 구조식(V)의 아닐린 또는 치환된 아닐린 유도체와 반응시키는 것으로 구성되는 구조식(IV)의 1-(4-페닐-2-티아졸릴)-3-페닐구아니딘 및 그의 산부가염의 제조방법.

상기식에서 R은 수소 또는 염화물이며, R′는 수소, 플루오르화물, 염화물, 1-4개의 탄소원자를 가지는 저급알킬, 카르복실 또는 카르보저급알콕시이며 X는 할로겐이다.