RU2096414C1 - Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда - Google Patents
Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда Download PDFInfo
- Publication number
- RU2096414C1 RU2096414C1 RU9394035758A RU94035758A RU2096414C1 RU 2096414 C1 RU2096414 C1 RU 2096414C1 RU 9394035758 A RU9394035758 A RU 9394035758A RU 94035758 A RU94035758 A RU 94035758A RU 2096414 C1 RU2096414 C1 RU 2096414C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- groups
- mono
- carbon atoms
- factor
- alkyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title abstract description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims abstract description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 29
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 24
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 24
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 24
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 16
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 16
- -1 cyano- Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 15
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 8
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 claims description 7
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000005208 trialkylammonium group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004966 cyanoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004985 dialkyl amino alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000004964 sulfoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 claims description 2
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical group [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 claims description 2
- 229940003169 factor viii / von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 6
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 5
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 5
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GQPVFBDWIUVLHG-UHFFFAOYSA-N [2,2-bis(hydroxymethyl)-3-(2-methylprop-2-enoyloxy)propyl] 2-methylprop-2-enoate Chemical class CC(=C)C(=O)OCC(CO)(CO)COC(=O)C(C)=C GQPVFBDWIUVLHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N glycidyl methacrylate Chemical class CC(=C)C(=O)OCC1CO1 VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Назначение: изобретение относится к области высокоочищенного комплекса фактора VIII/фактора Виллебранда из плазмы крови или криопреципитата. Сущность изобретения: комплекс фактора VIII/фактора Виллебранда выделяют посредством анионообменной хроматографии. В качестве анионообменного материала используют материал на основе содержащих гидроксигрупп носителей, поверхности которых покрыты ковалентно связанными полимерами. 7 з.п.ф-лы, 1 табл.
Description
Данное изобретение касается способа выделения высокоочищенного фактора VIII, в котором инактивированы вирусы, из плазмы крови или криопреципитата при помощи анионообменной хроматографии.
Европейская патентная заявка N 88108458.6 описывает способ получения высокоочищенного не содержащего вирусов антигемофилического фактора, заключающийся в том, что криопреципитат, содержащий фактор VIII, обрабатывают гидроксидом алюминия и биологически совместимыми органическими растворителями/детергентами, в предпочтительном варианте с последующей гельпроникающей хроматографией с применением ионообменного материала. Европейская патентная заявка N 88118478.2 описывает хроматографический материал на основе сополимеров олигоэтиленгликолей, глицидилметакрилатов, и пентаэритритолдиметакрилатов, которые особенно пригодны для получения высокоочищенного, не содержащего вирусов фактора VIII.
ЕП 0343275 AI касается способа получения высокоочищенного антигемофилического фактора (AHF или фактора VIII), который в процессе очистки криопреципитата становился не содержащим вирусом факторов в результате обработки биологически совместимыми органическими растворителями/детергентами. Способ заключается в том, что криопреципитат перед удалением из него вирусов оттаивали, экстрагировали водой, содержащей 1-3 E/мл гепарина при pH 6,5-7,5, смешивали затем с суспензией гидроксида алюминия и после охлаждения до 10-18oC и доведения величины pH до 6-7 центрифугировали и фильтровали и затем обрабатывали далее известным способом. Предпочтительно, в частности, подвергать пробу после удаления вирусов гельпроникающей хроматографии на ионообменных материалах. Известен способ очистки фактора VIII, получение его с высоким выходом и сохранением всех его признаков из исходного материала, содержащего фактор VIII и другие белки и факторы, описанный в Европейском патенте ЕП 0209041, включающий стадии: адсорбирования фактора VIII на гидрофобную, интерактивную матрицу, отделение нежелательных белков от фактора VIII и вымывание фактора VIII раствором, содержащим поверхностное активное вещество.
Элюирование фактора VIII осуществляют с помощью раствора, содержащего хлорид кальция и 440% этиленгликоль, а его промывку с помощью буферного раствора, содержащего хлорид натрия, глицин, хлорид кальция и гистидин.
Далее в ЕП 0209041 указывается, что использование определенных поверхностных активных агентов (см. пункт Ig) в элюирующем буфере абсолютно необходимо. Таким образом достигается эффективное восстановление AHF (антигемофилический фактор) активности из гидрофобной интерактивной матрицы. Однако данный способ не раскрывает эффективного удаления нежелательных белков.
Задачей настоящего изобретения является создание способа, способного улучшить выделение биологически активного фактора VIII из таких источников, как криопреципитат и плазма крови, и обеспечить более экономичный технологический процесс.
Поставленная задача достигается способом выделения высокоочищенного комплекса фактора VIII/фактора Виллебранда, в котором инактивированы вирусы, из плазмы крови или криопреципитата с использованием анионообменной хроматографии, при этом в качестве анионообменного материала используют материал для разделения на основе содержащих гидроксигруппы носителей, поверхности которых покрыты ковалентно связанными полимерами, содержащими повторяющиеся единицы, которые одинаковы или различны и представлены формулой I
в которой
R' обозначает H или CH3,
Y обозначает
-CN, -CHO, -OH, -CH2, -NH2 или CH2NR2R3
R' и R'' каждый обозначает H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R'' может также обозначать -OH
X обозначает -OH, -NR2R3 или -OR4,
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n-SO2 - (CH2)n-S-(CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100, и
R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
в которой
R' обозначает H или CH3,
Y обозначает
R' и R'' каждый обозначает H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R'' может также обозначать -OH
X обозначает -OH, -NR2R3 или -OR4,
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n-SO2 - (CH2)n-S-(CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100, и
R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
Предпочтительно, когда в формуле I Y обозначает
где
X OH или -OR4, причем R4 имеет значение, определенное выше.
где
X OH или -OR4, причем R4 имеет значение, определенное выше.
Далее предпочтительны соединения, когда X обозначает - NR2R3, где R2 и R3 каждый обозначает алкил, алкоксиалкил, цианоалкил, аминоалкил, моно- или диалкиламиноалкил, триалкиламмонийалкил, карбоксиалкил, сульфоалкил, имеющие до 10 атомов углерода в алкильной части, фенил, который является незамещенным или моно- или полизамещенным алкилом, алкоксигруппой, алкоксиалкилом, цианогруппой, цианоалкилом, аминоалкилом, амино-, моно- или диалкиламиногруппой, моно- или диалкиламиноалкилом, триалкиламмонием, триалкиламмонийалкилом, карбоксигруппой, карбоксиалкилом, сульфоновой кислотой, сульфоалкилом, ацетокси- или ацетаминогруппой (группами), имеющими до 10 атомов углерода в алкильной части, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, или N или NH и O,
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
Наиболее предпочтительны соединения, когда Y обозначает - CH2NH2 или -CH2NR2R3, где
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100.
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100.
Также предпочтительны повторяющиеся единицы, представленные формулой I, в которых Y обозначает -CN, -CHO или OH.
Было показано, что очистку фактора VIII в способе настоящего изобретения предпочтительно проводить путем промывания и элюирования буферами, имеющими последовательно увеличивающуюся ионную силу, которую корректируют при помощи солей четвертичного аммония, имеющих, по меньшей мере, одну углеводородную цепь из 1 6 атомов углерода и несущих гидрофильный заместитель, или при помощи таких солей в сочетании с поваренной солью.
При этом наиболее предпочтительно, когда соль четвертичного аммония представляет собой холинхлорид, а солевой градиент, получаемый с применением буферных систем, равен 0,1 1М в виде общих концентраций хлорида натрия и/или соли четвертичного аммония, определенного выше.
При помощи способа согласно изобретения достигается выделение фактора VIII с высоким выходом и высокой стабильностью продукта. Предпочтительно, чтобы в способе, проводимом в соответствии с данным изобретением, не был удален так называемый фактор фон Виллебранда, который должен оставаться во фракциях фактора VIII. Поэтому препараты фактора VIII можно применять также для больных, страдающих от недостаточности фактора фон Виллебранда. Кроме того, фактор VIII можно также применять в способах непрерывного вливания благодаря присутствию фактора фон Виллебранда, который облегчает природную стабилизацию фактора VIII.
Далее способ иллюстрируется при помощи следующих примеров.
Пример 1
Накопление фактора VIII из криопреципитата
Коммерчески доступный криопреципитат делят на кусочки размером 1 2 см и оттаивают при комнатной температуре в течение 3 4 часов. Эти кусочки суспендируют при перемешивании в приблизительно двойном объеме воды, содержащей 2 Е/мл Na-гепарина при температурах 20 25oC, pH суспензии доводят до 7,0 7,1 0,1М уксусной кислотой. Перемешивание продолжают при 20 - 25oC в течение 30 минут. На 1 кг криопреципитата добавляют 108 г 2%-ной суспензии гидроксида алюминия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут. Затем 0,1 М. уксусной кислотой доводят величину pH до 6,5 - 6,6. Пробу охлаждают до 16 14oC, центрифугируют в центрифуге Sharples AS-16 (Cepa 61) при скорости 1,0 L/минут. Супернатант фильтруют через фильтр Pall AB-1 U010ZP.
Накопление фактора VIII из криопреципитата
Коммерчески доступный криопреципитат делят на кусочки размером 1 2 см и оттаивают при комнатной температуре в течение 3 4 часов. Эти кусочки суспендируют при перемешивании в приблизительно двойном объеме воды, содержащей 2 Е/мл Na-гепарина при температурах 20 25oC, pH суспензии доводят до 7,0 7,1 0,1М уксусной кислотой. Перемешивание продолжают при 20 - 25oC в течение 30 минут. На 1 кг криопреципитата добавляют 108 г 2%-ной суспензии гидроксида алюминия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут. Затем 0,1 М. уксусной кислотой доводят величину pH до 6,5 - 6,6. Пробу охлаждают до 16 14oC, центрифугируют в центрифуге Sharples AS-16 (Cepa 61) при скорости 1,0 L/минут. Супернатант фильтруют через фильтр Pall AB-1 U010ZP.
Пример 2
Приготовление хроматографической колонки
Для разделения экстрагированного криопреципитата применяют не менее 0,5 л ионообменной смолы на 1 кг криопреципитата. Высота колонки должна быть ≅ диаметра. После наполнения колонки смолой колонку сначала промывают 5 объемами раствора 0,1 М хлорида натрия. После этого ее промывают буфером A, имеющим следующий состав:
120 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
величину pH доводят 1 М HCl до 6,5-7,0.
Приготовление хроматографической колонки
Для разделения экстрагированного криопреципитата применяют не менее 0,5 л ионообменной смолы на 1 кг криопреципитата. Высота колонки должна быть ≅ диаметра. После наполнения колонки смолой колонку сначала промывают 5 объемами раствора 0,1 М хлорида натрия. После этого ее промывают буфером A, имеющим следующий состав:
120 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
величину pH доводят 1 М HCl до 6,5-7,0.
Все буферы не должны содержать вирусов, так как последующие операции проводят с безвирусными экстрактами криопреципитата.
Пример 3
Пробу вносят в колонку и измеряют поглощение вытекающего из нее раствора при длине волны 280 нм. Фильтрат собирают и испытывают на активность фактора VIII, так как и продукт перед его внесением в колонку. Затем колонку промывают буфетом A до тех пор, пока поглощение вновь не достигнем его исходной величины. Затем колонку промывают буфером B, пока поглощение опять не вернется к базовой линии.
Пробу вносят в колонку и измеряют поглощение вытекающего из нее раствора при длине волны 280 нм. Фильтрат собирают и испытывают на активность фактора VIII, так как и продукт перед его внесением в колонку. Затем колонку промывают буфетом A до тех пор, пока поглощение вновь не достигнем его исходной величины. Затем колонку промывают буфером B, пока поглощение опять не вернется к базовой линии.
Буфер B имеет следующий состав:
180-200 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
180-200 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
Элюирование продукта проводили при помощи буфера C. Белковую фракцию, появляющуюся после добавления буфера C, собирали.
Буфер C имеет следующий состав:
400 мМ хлорида натрия,
1 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
400 мМ хлорида натрия,
1 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
После элюирования целевого продукта колонку промывали 5 объемами буфера D, который содержит 1 М раствора хлорида натрия.
Колонку регенерировали промыванием ее 0,1 N NaOH (3 объема колонки) с последующим промыванием 0,1N соляной кислоты (3 объема колонки) и промыванием колонки 5 объемами 25%-ного спирта в воде.
Пример 4
Собранные фракции разбавляли буфером E, состоящим из:
20 мМ цитрата натрия,
80 мМ глицина,
2,5 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,1, до тех пор, пока не была достигнута активность 26 или 35 E/мл. После этого доводили pH, если требовалось, до 6,9-7,1 и фильтровали через 0,45 мкм фильтр Sealklean. Впоследствии проводили стерильное фильтрование.
Собранные фракции разбавляли буфером E, состоящим из:
20 мМ цитрата натрия,
80 мМ глицина,
2,5 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,1, до тех пор, пока не была достигнута активность 26 или 35 E/мл. После этого доводили pH, если требовалось, до 6,9-7,1 и фильтровали через 0,45 мкм фильтр Sealklean. Впоследствии проводили стерильное фильтрование.
Пример 5
Если в качестве источника фактора VIII используют плазму человека, то применяют следующую процедуру:
Свежую или глубокозамороженную плазму человека доводят до температуры 20oC, иногда с использованием водяной бани. Плазму разбавляют 50% по объему воды и затем фильтруют. Фильтрат плазмы вносят в ионообменную колонку, содержащую EMD IMAE Fractogel (М) 650, уравновешенную предварительно буфером следующего состава:
50 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия,
120 мМ глицина,
1000 E/л гепарина,
pH 6,5-6,9.
Если в качестве источника фактора VIII используют плазму человека, то применяют следующую процедуру:
Свежую или глубокозамороженную плазму человека доводят до температуры 20oC, иногда с использованием водяной бани. Плазму разбавляют 50% по объему воды и затем фильтруют. Фильтрат плазмы вносят в ионообменную колонку, содержащую EMD IMAE Fractogel (М) 650, уравновешенную предварительно буфером следующего состава:
50 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия,
120 мМ глицина,
1000 E/л гепарина,
pH 6,5-6,9.
После нанесения пробы, ионообменную смолу промывают несколько раз промывным буфером. Затем концентрацию поваренной соли увеличивают, промывая колонку сначала буфером, содержащим 100 мМ хлорида натрия, затем буфером, содержащим 160 мМ хлорида натрия, и после этого буфером, содержащим 200 мМ хлорида натрия. Фракции, содержащие фактор VIII, собирают и стабилизируют добавлением 1,0 мг/мл сывороточного альбумина человека. Полученный продукт обрабатывают далее так же, как в примерах 2-4, за исключением того, что коммерчески доступный криопреципитата здесь заменен полученными при помощи колонки фракциями.
Пример 6 Сравнительный эксперимент
В каждом из двух опытом обрабатывали 0,3 кг криопреципитата, полученного из одной и той же плазмы. Одну процедуру проводили в соответствии с данным изобретением, а другую в соответствии со способом ЕП 0343275 AI. Фракции подвергали анализу и результаты, относящиеся к этим двум опытам, представлены в следующей таблице.
В каждом из двух опытом обрабатывали 0,3 кг криопреципитата, полученного из одной и той же плазмы. Одну процедуру проводили в соответствии с данным изобретением, а другую в соответствии со способом ЕП 0343275 AI. Фракции подвергали анализу и результаты, относящиеся к этим двум опытам, представлены в следующей таблице.
Работа по способу в соответствии с ЕП 03443275 AI приводит к получению только 23 фракций, каждая из которых содержит 270 М E фактора VIII, что соответствует выходу 20700 М E фактора VIII на 1 кг криопреципитата или 207 М E на 1 кг плазмы. Отсюда можно сделать вывод о преимуществе работы по способу согласно изобретению, который дает выход почти на 51% выше выхода, полученного при применении способа ЕП 0343275 AI.
Нежелательные белки, также как фибриноген и иммуноглобулин М (IgM), более эффективно удаляются в способе, соответствующем данному изобретению.
Claims (8)
1. Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора VIII/ фактора Виллебранда, в котором инактивированы вирусы, из плазмы крови или криопреципитата с использованием анионообменной хроматографии, отличающийся тем, что в качестве анионообменного материала используют материал для разделения на основе содержащих гидроксигруппы носителей, поверхности которых покрыты ковалентно связанными полимерами, содержащими повторяющиеся единицы, которые одинаковы или различны и представлены формулой I
в которой R' H или CH3;
Y
-CN, -CHO, -CH, -CH2 NH2 или CH2NR2R3;
R' и R2 каждый H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R2 может также обозначать OH
X обозначает OH, -NR2R3 или -OR4;
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбосил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2 групп замещены N или NH, N или NH и S,N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S- (CH2)nOH,
где n 2 6,
и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы либо одна из двух частей является нейтральной;
n 2 100, и R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
в которой R' H или CH3;
Y
R' и R2 каждый H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R2 может также обозначать OH
X обозначает OH, -NR2R3 или -OR4;
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбосил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2 групп замещены N или NH, N или NH и S,N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S- (CH2)nOH,
где n 2 6,
и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы либо одна из двух частей является нейтральной;
n 2 100, и R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что Y обозначает
где X -OH или -OR4, где R4 определено в п.1.
где X -OH или -OR4, где R4 определено в п.1.
3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в формуле I Y обозначает
с X -NR2R3,
где R2 и R3 каждый обозначает алкил, алкоксиалкил, цианоалкил, аминоалкил, моно- или диалкиламиноалкил, триалкиламмонийалкил, карбоксиалкил, сульфоалкил, имеющие до 10 атомов углерода в алкильной части, фенил, который является незамещенным или моно- или полизамещенным алкилом, алкоксигруппой, алкоксиалкилом, цианогруппой, цианоалкилом, аминоалкилом, амино-, моно- или диалкиламиногруппой, моно- или диалкиламиноалкилом, триалкиламмонием, триалкиламмонийалкилом, карбоксигруппой, карбоксиалкилом, сульфогруппой, сульфоалкилом, ацетокси- или ацетаминогруппой (группами), имеющими до 10 атомов углерода в алкильной части, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, или N или NH и O,
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S-(CH2)nOH,
где n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H,
причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
с X -NR2R3,
где R2 и R3 каждый обозначает алкил, алкоксиалкил, цианоалкил, аминоалкил, моно- или диалкиламиноалкил, триалкиламмонийалкил, карбоксиалкил, сульфоалкил, имеющие до 10 атомов углерода в алкильной части, фенил, который является незамещенным или моно- или полизамещенным алкилом, алкоксигруппой, алкоксиалкилом, цианогруппой, цианоалкилом, аминоалкилом, амино-, моно- или диалкиламиногруппой, моно- или диалкиламиноалкилом, триалкиламмонием, триалкиламмонийалкилом, карбоксигруппой, карбоксиалкилом, сульфогруппой, сульфоалкилом, ацетокси- или ацетаминогруппой (группами), имеющими до 10 атомов углерода в алкильной части, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, или N или NH и O,
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S-(CH2)nOH,
где n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H,
причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
4. Способ по пп.1 3, отличающийся тем, что в формуле I Y обозначает -CH2NH2 или CH2NR2R3, причем R2 и R3 имеют значения, определенные в п.1.
5. Способ по пп.1 4, отличающийся тем, что в формуле I Y обозначает -CN, -CHO или -OH.
6. Способ по пп.1 5, отличающийся тем, что очистку фактора VIII проводят путем промывания и элюирования буферами, имеющими последовательно увеличивающуюся ионную силу, характеризуется тем, что ионную силу буфера корректируют при помощи солей четвертичного аммония, имеющих по меньшей мере одну гидрокарбильную цепь из 1 6 атомов углерода и несущих гидрофильный заместитель, или при помощи таких солей в сочетании с поваренной солью.
7. Способ по пп.1 6, отличающийся тем, что соль четвертичного аммония представляет собой холинхлорид.
8. Способ по пп.1 7, отличающийся тем, что солевой градиент, получаемый с применением буферных систем, равен 0,1 1 М в виде общих концентраций хлорида натрия и/или соли четвертичного аммония.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DEP4204694.7 | 1992-02-01 | ||
| DE4204694A DE4204694C3 (de) | 1992-02-01 | 1992-02-01 | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| PCT/EP1993/000114 WO1993015105A1 (en) | 1992-02-01 | 1993-01-20 | Process for recovering a high-purity virus-inactivated factor viii by anion exchanger chromatography |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94035758A RU94035758A (ru) | 1996-01-27 |
| RU2096414C1 true RU2096414C1 (ru) | 1997-11-20 |
Family
ID=6451895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU9394035758A RU2096414C1 (ru) | 1992-02-01 | 1993-01-20 | Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5714590A (ru) |
| EP (1) | EP0625161B9 (ru) |
| JP (1) | JP3556947B2 (ru) |
| KR (1) | KR100240310B1 (ru) |
| AT (1) | ATE203249T1 (ru) |
| AU (1) | AU670776B2 (ru) |
| DE (2) | DE4204694C3 (ru) |
| DK (1) | DK0625161T4 (ru) |
| ES (1) | ES2157920T5 (ru) |
| FI (1) | FI109908B (ru) |
| GR (1) | GR3036849T3 (ru) |
| NO (1) | NO315426B1 (ru) |
| PT (1) | PT625161E (ru) |
| RU (1) | RU2096414C1 (ru) |
| TW (1) | TW362099B (ru) |
| WO (1) | WO1993015105A1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2253475C1 (ru) * | 2004-02-02 | 2005-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Гемоцентр" | Способ получения препарата фактора viii |
| RU2293570C2 (ru) * | 2005-02-01 | 2007-02-20 | Государственное учреждение Гематологический научный центр РАМН (ГУ ГНЦ РАМН) | Способ обогащения фактором viii криопреципитата плазмы донорской крови |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
| RU2579977C2 (ru) * | 2009-11-13 | 2016-04-10 | Грифольс Терапьютикс Инк. | СОДЕРЖАЩИЕ ФАКТОР ФОН ВИЛЛЕБРАНДА (vWF) ПРЕПАРАТЫ И СПОСОБЫ, НАБОРЫ И ПРИМЕНЕНИЯ, СВЯЗАННЫЕ С НИМИ |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0602173B1 (en) * | 1991-09-05 | 1999-05-26 | Baxter International Inc. | Topical fibrinogen complex |
| DE4342132C1 (de) * | 1993-12-10 | 1994-11-03 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung virusinaktivierte Vitamin K abhängige Plasmakomponenten sowie Protein C und Protein S enthaltender Mittel durch Membran-Chromatographie |
| DE4407837C1 (de) * | 1994-03-09 | 1995-08-17 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem alpha¶1¶-Antitrypsin mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR2874216B1 (fr) * | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| EP1739179A1 (en) | 2005-06-30 | 2007-01-03 | Octapharma AG | Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines |
| US9488625B2 (en) | 2010-12-15 | 2016-11-08 | Baxalta GmbH | Purification of factor VIII using a conductivity gradient |
| BRPI1105317A2 (pt) | 2011-01-24 | 2013-04-30 | Fundacco Hemoct De Ribeirco Preto | produÇço estÁvel e em larga escala de fviii humano em linhagem celular humana sk-hep-1 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4876241A (en) * | 1987-05-22 | 1989-10-24 | Armour Pharmaceutical Company | Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants |
| DE3811042A1 (de) * | 1988-03-31 | 1989-10-19 | Merck Patent Gmbh | Ionenaustauscher |
| EP0343275B1 (de) * | 1988-05-27 | 1993-02-03 | Centre Regional De Transfusion Sanguine De Lille | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen, virusfreien Antihämophiliefaktors mittels Chromatographie |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| ES2053684T3 (es) * | 1988-11-05 | 1994-08-01 | Octapharma Ag | Procedimiento para preparar un factor antihemofilico, altamente puro, no infeccioso, mediante cromatografia. |
| GB8913183D0 (en) * | 1989-06-08 | 1989-07-26 | Central Blood Lab Authority | Chemical products |
| FR2651437A1 (fr) * | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
-
1992
- 1992-02-01 DE DE4204694A patent/DE4204694C3/de not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-01-20 AT AT93902233T patent/ATE203249T1/de active
- 1993-01-20 DE DE69330458T patent/DE69330458T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 AU AU33517/93A patent/AU670776B2/en not_active Expired
- 1993-01-20 EP EP93902233A patent/EP0625161B9/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 WO PCT/EP1993/000114 patent/WO1993015105A1/en not_active Ceased
- 1993-01-20 RU RU9394035758A patent/RU2096414C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-01-20 ES ES93902233T patent/ES2157920T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 DK DK93902233T patent/DK0625161T4/da active
- 1993-01-20 KR KR1019940702645A patent/KR100240310B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 PT PT93902233T patent/PT625161E/pt unknown
- 1993-01-20 JP JP51290293A patent/JP3556947B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 US US08/284,403 patent/US5714590A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-28 TW TW082100487A patent/TW362099B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-07-28 FI FI943545A patent/FI109908B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-07-29 NO NO19942832A patent/NO315426B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-10-09 GR GR20010401713T patent/GR3036849T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| EP, заявка, 0209041, кл. C 07 K 3/18, 1987. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2253475C1 (ru) * | 2004-02-02 | 2005-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Гемоцентр" | Способ получения препарата фактора viii |
| RU2293570C2 (ru) * | 2005-02-01 | 2007-02-20 | Государственное учреждение Гематологический научный центр РАМН (ГУ ГНЦ РАМН) | Способ обогащения фактором viii криопреципитата плазмы донорской крови |
| RU2579977C2 (ru) * | 2009-11-13 | 2016-04-10 | Грифольс Терапьютикс Инк. | СОДЕРЖАЩИЕ ФАКТОР ФОН ВИЛЛЕБРАНДА (vWF) ПРЕПАРАТЫ И СПОСОБЫ, НАБОРЫ И ПРИМЕНЕНИЯ, СВЯЗАННЫЕ С НИМИ |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE4204694C3 (de) | 1995-10-12 |
| TW362099B (en) | 1999-06-21 |
| ES2157920T5 (es) | 2007-12-16 |
| FI943545A0 (fi) | 1994-07-28 |
| KR950700925A (ko) | 1995-02-20 |
| NO942832D0 (no) | 1994-07-29 |
| EP0625161B2 (en) | 2007-05-16 |
| DE4204694C2 (de) | 1994-02-10 |
| EP0625161A1 (en) | 1994-11-23 |
| DE69330458D1 (de) | 2001-08-23 |
| JP3556947B2 (ja) | 2004-08-25 |
| FI109908B (fi) | 2002-10-31 |
| EP0625161B9 (en) | 2007-09-19 |
| JPH07503241A (ja) | 1995-04-06 |
| ATE203249T1 (de) | 2001-08-15 |
| US5714590A (en) | 1998-02-03 |
| AU670776B2 (en) | 1996-08-01 |
| WO1993015105A1 (en) | 1993-08-05 |
| GR3036849T3 (en) | 2002-01-31 |
| DK0625161T4 (da) | 2007-09-03 |
| EP0625161B1 (en) | 2001-07-18 |
| NO942832L (no) | 1994-07-29 |
| FI943545L (fi) | 1994-07-28 |
| DK0625161T3 (da) | 2001-09-24 |
| NO315426B1 (no) | 2003-09-01 |
| KR100240310B1 (ko) | 2000-01-15 |
| DE69330458T2 (de) | 2002-05-29 |
| DE69330458T3 (de) | 2008-01-17 |
| PT625161E (pt) | 2001-10-31 |
| DE4204694A1 (de) | 1993-08-12 |
| AU3351793A (en) | 1993-09-01 |
| ES2157920T3 (es) | 2001-09-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2096414C1 (ru) | Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда | |
| RU1837880C (ru) | Способ разделени белков крови | |
| JP3094167B2 (ja) | 免疫血清グロブリンの精製方法 | |
| EP0083483B2 (en) | Ultrapurificated factor VIII : C preparation | |
| US6835379B2 (en) | Method of producing IgG | |
| CA2024667C (en) | Process for preparing a concentrate of blood coagulation factor viii-von willebrand factor complex from total plasma | |
| CA1083959A (en) | Process for producing intravenous immune globulin | |
| JP2002508388A (ja) | 新規なＴＧＦ−βタンパク質精製方法 | |
| Schwyzer et al. | Partial purification and biochemical characterization of a T cell suppressor factor produced by human glioblastoma cells. | |
| JPH0381290A (ja) | 精製されたアルブミン溶液の製造方法 | |
| JP4375813B2 (ja) | 高度に精製された第ｖｉｉｉ因子コンプレックス | |
| JPH03502200A (ja) | クロマトグラフィーによる高純度の非感染性抗血友病因子の生産方法 | |
| JPS6034916A (ja) | 第１ｘ因子および他のビタミンｋ依存性タンパク質の高純度精製 | |
| US6414125B1 (en) | Method of chromatographically purifying or fractionating, respectively, von Willebrand factor from a VWF-containing starting material | |
| JPS61233694A (ja) | ウシ脾臓中に含まれる成長因子及びその単離方法 | |
| EP0016208A1 (en) | Serum growth materials | |
| JPS61103895A (ja) | ＨＢｓＡｇの精製方法 | |
| JP2775093B2 (ja) | 免疫グロブリン含有組成物 | |
| JPS59167519A (ja) | 不活化トロンビンゲルにより血漿タンパク質混合液からフイブリノ−ゲンを除去する方法 | |
| DK173863B1 (da) | Immunosorbent | |
| JPH02255698A (ja) | 血液凝固第８因子の製造法 | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a | |
| JPH01258700A (ja) | 血液凝固第４因子の精製方法 | |
| JPH03176499A (ja) | 人尿トリプシンインヒビターの精製方法 | |
| JPS62201827A (ja) | 免疫グロブリンの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110121 |