[go: up one dir, main page]

RU2070921C1 - Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes - Google Patents

Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes Download PDF

Info

Publication number
RU2070921C1
RU2070921C1 RU93050097A RU93050097A RU2070921C1 RU 2070921 C1 RU2070921 C1 RU 2070921C1 RU 93050097 A RU93050097 A RU 93050097A RU 93050097 A RU93050097 A RU 93050097A RU 2070921 C1 RU2070921 C1 RU 2070921C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
aspergillus oryzae
acid
amylolytic
enzymes
Prior art date
Application number
RU93050097A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU93050097A (en
Inventor
Любовь Вячеславовна Римарева
Татьяна Борисовна Милюкова
Марина Борисовна Оверченко
Валентина Васильевна Трифонова
Борис Алексеевич Устинников
Original Assignee
Любовь Вячеславовна Римарева
Татьяна Борисовна Милюкова
Марина Борисовна Оверченко
Валентина Васильевна Трифонова
Борис Алексеевич Устинников
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Любовь Вячеславовна Римарева, Татьяна Борисовна Милюкова, Марина Борисовна Оверченко, Валентина Васильевна Трифонова, Борис Алексеевич Устинников filed Critical Любовь Вячеславовна Римарева
Priority to RU93050097A priority Critical patent/RU2070921C1/en
Publication of RU93050097A publication Critical patent/RU93050097A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2070921C1 publication Critical patent/RU2070921C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: strain A. oryzae 387 "ВКПМ" F-683 showing high productivity and rate growth is obtained from the known strain Aspergillus oryzae 251-90 by selection. After 42 h growth of A. oryzae-387 in submerged culture proteolytic activity is 11.5 U/ml and amylolytic activity - 12.0 U/ml. EFFECT: high activity of enzymes. 3 tbl

Description

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к получению штамма - продуцента комплекса гидролитических ферментов, в состав которого входят кислые и слабокислые протеазы, α- амилаза, а также сопутствующие ферменты, такие как экзо -β- глюканаза, цитаза, ксиланаза, и может быть применено в микробиологической промышленности при получении ферментных препаратов для гидролиза растительных, животных и микробных субстратов в пищевой промышленности, бродильных производствах, сельском хозяйстве, при получении аминокислотных смесей, ферментолизатов дрожжей и других биологически активных веществ. The invention relates to biotechnology, in particular, to obtaining a strain producing a complex of hydrolytic enzymes, which includes acidic and slightly acidic proteases, α-amylase, as well as related enzymes, such as exo-β-glucanase, cytase, xylanase, and can be used in the microbiological industry in the production of enzyme preparations for the hydrolysis of plant, animal and microbial substrates in the food industry, fermentation, agriculture, in the production of amino acid mixtures, an enzyme yeast olysates and other biologically active substances.

Известны штаммы продуценты протеаз и α- амилаз из рода Aspergillus oryzae: 3-9-15, 251-90 (1,2), при глубинном культивировании которых синтезируются протеаза и α- амилаза. Недостатком этих продуцентов является их низкая продуктивность и отсутствие сопутствующих гидролитических ферментов, а также длительный период роста продуцентов, уровень активности по протеазе составляет 1,5 6,0 ед ПС/мл, по α- амилазе 2,0 10,0 ед АС/мл. Known strains producing proteases and α-amylases from the genus Aspergillus oryzae: 3-9-15, 251-90 (1,2), during the deep cultivation of which protease and α-amylase are synthesized. The disadvantage of these producers is their low productivity and the absence of concomitant hydrolytic enzymes, as well as a long growth period of the producers, the level of protease activity is 1.5 6.0 units PS / ml, for α-amylase 2.0 10.0 units AC / ml .

Из известных продуцентов, синтезирующих протеазу и α- амилазу, наиболее близким по техническому решению является штамм Aspergillus oryzae 824-32 (ВКПМ F-369). Однако, основным недостатком этого штамма является отсутствие синтеза сопутствующих гидролаз, а также длительный период роста и развития микромицета; штамм интенсивно продуцирует α- -амилазу и протеазу на жидких средах лишь на 4 5 сутки. Of the known producers synthesizing protease and α-amylase, the closest in technical solution is the strain Aspergillus oryzae 824-32 (VKPM F-369). However, the main disadvantage of this strain is the lack of synthesis of concomitant hydrolases, as well as a long period of growth and development of micromycetes; the strain intensively produces α-amylase and protease in liquid media only at 4-5 days.

Задачей, поставленной настоящим изобретением, является получение штамма гриба Aspergillus oryzae, обладающего высокой способностью к образованию комплекса протеаз, проявляющих максимальную активность в кислой и слабокислой зоне рН, α- амилазы, а также сопутствующих ферментов: экзо -β- глюканазы, ксиланазы, цитазы. The objective of the present invention is to obtain a strain of the fungus Aspergillus oryzae, which has a high ability to form a complex of proteases that exhibit maximum activity in the acidic and weakly acidic zones of pH, α-amylase, as well as concomitant enzymes: exo-β-glucanase, xylanase, cytase.

Штамм Aspergillus oryzae 387 (ВКПМ F-683) получен селекционным путем от уже известного штамма Aspergillus oryzae 251-90 (депонирован во ВНИИ биотехника, N 123) по признаку повышенного биосинтеза целевого продукта комплекса кислых и слабокислых протеолитических ферментов, α- амилазы и сопутствующих ксиланазы, экзо -β- глюканазы и цитазы. При культивировании на питательной среде, содержащей, ячменная мука 3,0; отруби 3,0; KH2PO4 1,5; водопроводная вода, рН естественный, в аэробных условиях при 28 30oC в течение 42 48 ч, гриб образует высокоактивный комплекс кислых и слабокислых протеаз с общей протеолитической активностью 11,5 ед ПС/мл, а также сопутствующие ферменты: α- амилазу (12 ед/мл), ксиланазу (62 ед/мл), экзо β глюканазу (0,3 ед/мл), цитазу (6,0 ед/мл).The strain Aspergillus oryzae 387 (VKPM F-683) was obtained by breeding from the already known strain Aspergillus oryzae 251-90 (deposited at the All-Russian Research Institute of Biotechnology, No. 123) on the basis of increased biosynthesis of the target product of a complex of acidic and weakly acidic proteolytic enzymes, α-amylase and associated xylans , exo-β-glucanases and cytases. When cultivated on a nutrient medium containing barley flour 3.0; bran 3.0; KH 2 PO 4 1.5; tap water, natural pH, under aerobic conditions at 28 30 o C for 42 48 h, the fungus forms a highly active complex of acidic and slightly acidic proteases with a total proteolytic activity of 11.5 units PS / ml, as well as concomitant enzymes: α-amylase (12 u / ml), xylanase (62 u / ml), exo β glucanase (0.3 u / ml), cytase (6.0 u / ml).

Таким образом, предлагаемый штамм по скорости роста и биосинтезу комплекса протеаз и a- амилазы более чем в 2 раза превосходит известный Aspergillus oryzae 824-32 c одновременным синтезом других гидролитических ферментов, а именно: ксиланазы, экзо -β- глюканазы и цитазы, что является основным отличительным признаком от известного. Кроме того, предлагаемый штамм имеет на 2-ые сутки роста более высокую продуктивность по протеазам и α- амилазе, а также высокую рН-стабильность протеаз при кислых значениях рН, чем известный штамм. Thus, the proposed strain in the growth rate and biosynthesis of the complex of proteases and a-amylase is more than 2 times higher than the known Aspergillus oryzae 824-32 with the simultaneous synthesis of other hydrolytic enzymes, namely: xylanase, exo-β-glucanase and cytase, which is The main distinguishing feature of the famous. In addition, the proposed strain on the 2nd day of growth has a higher productivity for proteases and α-amylase, as well as high pH stability of proteases at acidic pH values than the known strain.

Вместе с тем, предлагаемый штамм отличается от известного и по культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим характеристикам. However, the proposed strain differs from the known and cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics.

Культурально-морфологическая характеристика штамма. Cultural and morphological characteristics of the strain.

Культуральные признаки. На агаризованной среде Чапека через 3 суток роста при 30oC образуются колонии диаметром 6 7 мм. Форма колоний округлая, профиль немного выпуклый, край ровный, поверхность бархатистая, легкая радиальная складчатость. Цвет в центре оливково-желтый, к периферии - грязно-зеленый, с возрастом темнеет. Цвет с обратной стороны темно-песочный.Cultural signs. Colonies with a diameter of 6 to 7 mm are formed on agarized Chapek’s medium after 3 days of growth at 30 ° C. The shape of the colonies is rounded, the profile is slightly convex, the edge is even, the surface is velvety, light radial folding. The color in the center is olive yellow, to the periphery it is dirty green, and darkens with age. The color on the back is dark sand.

При росте на агаризованном сусле (7 8% сухих веществ, 30oC, 3-ое суток) диаметр колоний 8,5 10 мм; форма колоний и цвет такие же, как при росте на среде Чапека.When growing on agarized wort (7 8% dry matter, 30 o C, 3 days), the diameter of the colonies is 8.5 to 10 mm; the shape of the colonies and the color are the same as when growing on Chapek's medium.

При культивировании на картофельном агаре (30oC, 3-oе суток) диаметр колоний 24 30 мм, форма колоний округлая, профиль выпуклый, край ровный, вдоль края зона гидролизованного крахмала шириной 3 мм, сильная радиальная и сегментная складчатость; цвет поверхности в центре грязно-зеленый, на периферии темно-оливковый, с возрастом темнеет.When cultivated on potato agar (30 ° C, 3 days), the diameter of the colonies is 24–30 mm, the shape of the colonies is round, the profile is convex, the edge is even, along the edge the zone of hydrolyzed starch is 3 mm wide, strong radial and segment folding; the color of the surface in the center is dirty green, on the periphery it is dark olive, and darkens with age.

На морковном агаре (30oC, 3-oe суток) образуются колонии диаметром 7,5 8,0 мм, сильная складчатость, цвет темно-песочный.On carrot agar (30 o C, 3 oe days) colonies with a diameter of 7.5 to 8.0 mm are formed, strong folding, the color is dark sand.

На всех средах наблюдается обильное спорообразование, пигменты в среду не выделяются, эксудата нет, слабый запах плесени. Abundant spore formation is observed on all media, pigments are not released into the medium, there is no exudate, and a slight smell of mold.

Морфология штамма. Мицелий сильно разветвленный, со вздутиями, септированный, диаметр гиф 10 12 мк. Конидии формируются экзогенно; поверхность конидий гладкая, форма округлая цилиндрическая или неправильная; диаметр 4,4 6,4 мк; расположение на конидиеносце цепочкой; цвет от оливково-желтого до темно-оливкового. Конидиеносцы без перегородок. The morphology of the strain. Mycelium is highly branched, with swellings, septate, hyphae diameter 10 12 microns. Conidia are formed exogenously; the conidia surface is smooth, the shape is round cylindrical or irregular; diameter 4.4 6.4 microns; location on the conidiophore with a chain; color from olive yellow to dark olive. Conidiophores without partitions.

Физиолого-биохимическая характеристика. Тип катаболизма дыхание. Симбиотрофных отношений не обнаружено. Отношение к кислороду аэроб. Оптимальная температура роста 28 30oC, максимальная 52oC, минимальная 18oC. Оптимальное значение рН для роста гриба и биосинтеза ферментов 5,7; рост продуцента отмечается в зоне рН от 2,5 до 10,0. Продуцент растет на средах с содержанием сухих веществ от 0,5 до 18%
В качестве источника углерода гриб используется крахмал, глюкозу, сахарозу, ксилозу, мальтозу, маннит, глицерин, галактозу. Продуцент ассимилирует нитраты, аммонийный и аминный азот, белки. Штамм не патогенный.
Physiological and biochemical characteristics. Type of catabolism is respiration. No symbiotrophic relationships were found. Attitude to oxygen aerob. The optimum growth temperature is 28-30 o C, the maximum is 52 o C, the minimum is 18 o C. The optimal pH value for fungal growth and enzyme biosynthesis is 5.7; producer growth is observed in the pH zone from 2.5 to 10.0. The producer grows on media with a solids content of 0.5 to 18%
As a carbon source, the fungus uses starch, glucose, sucrose, xylose, maltose, mannitol, glycerin, galactose. The producer assimilates nitrates, ammonium and amine nitrogen, proteins. The strain is not pathogenic.

Продуцент на вторые сутки синтезирует высокоактивный протеолитический комплекс, имеющий оптимум действия при рН 4,5 5,5, в состав которого входят: карбоксильная, металлозависимая и сериновая протеиназы, лейцинаминопептидаза, карбоксипептидаза; а также α- амилазу, экзо -β- глюканазу, ксиланазу и цитазу в различных соотношениях в зависимости от условий культивирования. On the second day, the producer synthesizes a highly active proteolytic complex that has an optimum effect at pH 4.5-5.5, which includes: carboxyl, metal-dependent and serine proteinases, leucine aminopeptidase, carboxypeptidase; as well as α-amylase, exo-β-glucanase, xylanase and cytase in various proportions depending on the cultivation conditions.

Таким образом, по культурально-морфологическим признакам предлагаемый штамм отличается от известного формой конидий, которые являются более вытянутыми, цилиндрическими или неправильными, цветом, конидиеносцы без перегородок; длительностью роста, размерами и цветом колоний, образующихся на агаризованных средах; более высокой скоростью роста и биосинтеза ферментов на жидких средах; а также составом синтезируемых ферментов. Thus, according to cultural and morphological characteristics, the proposed strain differs from the known one in the form of conidia, which are more elongated, cylindrical or irregular, in color, conidiophores without partitions; the growth duration, size and color of the colonies formed on agar media; higher growth and biosynthesis of enzymes in liquid media; as well as the composition of the synthesized enzymes.

В результате этих особенностей предлагаемый штамм позволяет получать широкий комплекс гидролитических ферментов, в состав которого входят кислые и слабокислые протеазы, α- амилаза, экзо -β- глюканаза, ксиланаза, цитаза, что является существенным отличием от известного. Состав ферментативного комплекса и соотношение в нем ферментов регулируется изменениями условий культивирования продуцента. Наличие такого богатого комплекса гидролитических ферментов расширяет области применения ферментных препаратов, получаемых на основе предлагаемого штамма. Так, наличие протеолитических, амилолитических и целлюлолитических ферментов позволяет использовать его при гидролизе растительного сырья, содержащего белок, крахмал и другие некрахмалистые полисахариды, применяемого в бродильных производствах. Наличие протеолитических, амилолитических и цитолитических ферментов позволяет использовать его при гидролизе клеточных стенок, полисахаридов и белковых веществ хлебопекарных, пивных, кормовых дрожжей и БВК, с целью получения ферментолизатов и аминокислотных смесей пищевого, кормового и медицинского назначения. Наличие протеолитического комплекса, проявляющего активность в кислой и слабокислой зонах рН, позволяет использовать его для гидролиза животного и молочного белка в мясо-молочной и сыроваренной промышленностях. As a result of these features, the proposed strain allows to obtain a wide complex of hydrolytic enzymes, which include acidic and weakly acidic proteases, α-amylase, exo-β-glucanase, xylanase, cytase, which is a significant difference from the known. The composition of the enzymatic complex and the ratio of enzymes in it is regulated by changes in the conditions of cultivation of the producer. The presence of such a rich complex of hydrolytic enzymes expands the scope of application of enzyme preparations obtained on the basis of the proposed strain. Thus, the presence of proteolytic, amylolytic and cellulolytic enzymes allows its use in the hydrolysis of plant materials containing protein, starch and other non-starch polysaccharides used in fermentation plants. The presence of proteolytic, amylolytic and cytolytic enzymes allows its use in the hydrolysis of cell walls, polysaccharides and protein substances of baker's, brewer's, fodder yeast and BVK, with the aim of obtaining fermentolizates and amino acid mixtures of food, feed and medical purposes. The presence of a proteolytic complex that is active in acidic and slightly acidic pH zones allows it to be used for hydrolysis of animal and milk protein in the meat, dairy and cheese industries.

Пример 1. Штамм Aspergillus oryzae 387 культивируют на питательной среде, состоящей из ячменной муки 3% отрубей 3% KH2PO4 1,5% водопроводной воды, рН естественный. Выращивание осуществляют в колбах Эрленмейера объемом 750 мл на круговой качалке (220 240 об/мин) при температуре 28 30oC в течение 42 часов.Example 1. The strain Aspergillus oryzae 387 is cultivated on a nutrient medium consisting of barley flour 3% bran 3% KH 2 PO 4 1.5% tap water, natural pH. The cultivation is carried out in Erlenmeyer flasks with a volume of 750 ml on a circular shaker (220 240 rpm) at a temperature of 28 30 o C for 42 hours.

Активность внеклеточных ферментов составляет: протеолитическая 11,5 ед/мл, амилолитическая 12,0 ед/мл, ксиланазная 62,0 ед/мл, экзо -β- глюканазная 0,3 ед/мл, цитолитическая 6,0 ед/мл. The activity of extracellular enzymes is: proteolytic 11.5 u / ml, amylolytic 12.0 u / ml, xylanase 62.0 u / ml, exo-β-glucanase 0.3 u / ml, cytolytic 6.0 u / ml.

Пример 2. Штамм Asp. oryzae 387 культивируют на питательной среде, включающей ячменную муку 4% пшеничные отруби 1,5% БВК 0,5% KH2PO4 1,5% водопроводную воду, рН естественный, в аналогичных условиях. Через 42 часа протеолитическая активность составляет - 13,5 ед/мл, амилолитическая 19,2 ед/мл, ксиланазная 64,8 ед/мл, экзо -β- глюканазная 0,45 ед/мл, цитолитическая 7,1 ед/мл.Example 2. The strain Asp. oryzae 387 is cultivated on a nutrient medium, including barley flour 4% wheat bran 1.5% BVK 0.5% KH 2 PO 4 1.5% tap water, natural pH, under similar conditions. After 42 hours, the proteolytic activity is 13.5 u / ml, amylolytic 19.2 u / ml, xylanase 64.8 u / ml, exo-β-glucanase 0.45 u / ml, cytolytic 7.1 u / ml.

Пример 3. Штамм Asp. oryzae 387 культивируют на питательной среде, содержащей пшеничную муку 2% кукурузную муку 2% пшеничные отруби 1,0% БВК 0,5% KH2PO4 1,5% проксанол 0,02% водопроводную воду, рН естественный, в аналогичных примеру 1 условиях. На 42 часа роста протеолитическая активность составила 16,9 ед/мл, амилолитическая 13,0 ед/мл, ксиланазная 50,3 ед/мл, экзо -β- глюканазная 0,25 ед/мл, цитолитическая 5,1 ед/мл.Example 3. The strain Asp. oryzae 387 is cultivated on a nutrient medium containing wheat flour 2% corn flour 2% wheat bran 1.0% BVK 0.5% KH 2 PO 4 1.5% proxanol 0.02% tap water, natural pH, similar to Example 1 conditions. At 42 hours of growth, the proteolytic activity was 16.9 units / ml, amylolytic 13.0 units / ml, xylanase 50.3 units / ml, exo-β-glucanase 0.25 units / ml, cytolytic 5.1 units / ml.

В табл. 1 приведены сравнительные данные, характеризующие физиологическую активность грибов Aspergillus oryzae шт. 387 и шт. 824-32 продуцентов протеолитических и амилолитических ферментов, культивируемых в одинаковых условиях биосинтеза на среде, содержащей 7,5% сухих веществ, являющейся наиболее технологичной и применяемой в производстве. In the table. 1 shows comparative data characterizing the physiological activity of Aspergillus oryzae pcs. 387 and pcs. 824-32 producers of proteolytic and amylolytic enzymes cultivated under the same biosynthesis conditions on a medium containing 7.5% solids, which is the most technologically advanced and used in production.

Как видно из табл. 1, протеолитические ферменты, синтезируемые предлагаемым штаммом, проявляют высокий уровень активности в более широком диапазоне рН (4,5 5,5). В сравниваемом аналоге уровень протеолитической активности при снижении рН до 4,5 падает на 39% и более чем в 2 раза ниже уровня активности в предлагаемой культуре. As can be seen from the table. 1, proteolytic enzymes synthesized by the proposed strain exhibit a high level of activity in a wider pH range (4.5 to 5.5). In the compared analogue, the level of proteolytic activity with a decrease in pH to 4.5 drops by 39% and more than 2 times lower than the level of activity in the proposed culture.

Амилолитическая активность практически на одном уровне, в то время как скорость роста у предлагаемого штамма в 2 раза выше, чем у известного. Кроме того, штамм Aspergillus oryzae 824-32 не продуцирует другие гидролитические ферменты, синтезируемые штаммом 387. Amylolytic activity is almost at the same level, while the growth rate of the proposed strain is 2 times higher than that of the known one. In addition, strain Aspergillus oryzae 824-32 does not produce other hydrolytic enzymes synthesized by strain 387.

В табл. 2 приведены сравнительные данные по продуктивности грибов Aspergillus oryzae штамм 387 и 824-32, культивируемых в одинаковых условиях в течение 2 и 5 суток на концентрированных питательных средах (18% сухих веществ). In the table. 2 shows comparative data on the productivity of Aspergillus oryzae strain 387 and 824-32, cultivated under the same conditions for 2 and 5 days on concentrated nutrient media (18% solids).

Из табл. 2 видно, что использование предлагаемого штамма позволяет уже на вторые сутки в 2 3 раза повысить выход протеолитических ферментов и в 2,7 раза амилолитических ферментов. При увеличении длительности культивирования в 2,9 раза протеолитическая активность известного штамма возрастает, однако ее величина при рН 4,5 только к 5 суткам достигает того же значения активности, которое имеет место на 42 часа роста в случае использования предлагаемого штамма. Причем рН-стабильность протеаз это очень важный фактор в пищевой промышленности, особенно в бродильных производствах, где процесс спиртового брожения проходит при рН не выше 4,5. И хотя у известного штамма уровень протеолитической активности при рН 5,5 на концентрированной среде на 5 сутки роста превосходит в 1,3 раза величину активности при этом же рН у предлагаемого штамма, однако скорость роста и биосинтеза у известного штамма значительно ниже. Кроме того, потребность известного штамма в концентрированных средах является также достаточно негативным показателем, ввиду низкой технологичности этих сред. From the table. 2 shows that the use of the proposed strain allows already on the second day in 2 3 times to increase the yield of proteolytic enzymes and 2.7 times the amylolytic enzymes. With an increase in the cultivation duration by 2.9 times, the proteolytic activity of the known strain increases, however, its value at pH 4.5 reaches the same activity value at pH 4.5 only that occurs at 42 hours of growth in the case of using the proposed strain. Moreover, the pH stability of proteases is a very important factor in the food industry, especially in fermentation plants, where the process of alcoholic fermentation takes place at a pH of not higher than 4.5. Although the level of proteolytic activity in a known strain at pH 5.5 on a concentrated medium on the 5th day of growth exceeds 1.3 times the value of activity at the same pH for the proposed strain, the growth and biosynthesis rates of the known strain are much lower. In addition, the need for a known strain in concentrated media is also quite a negative indicator, due to the low adaptability of these media.

В табл. 3 приведены данные по составу ферментативного комплекса, синтезируемого грибом Aspergillus oryzae 387 на различных средах. In the table. 3 shows data on the composition of the enzymatic complex synthesized by Aspergillus oryzae 387 fungus on various media.

Пример 4. Штамм Aspergillus oryzae 387 выращивали на Вышневолоцком заводе ферментных препаратов в промышленном ферментаторе объемом 20 м3. Состав питательной среды: кукурузная мука 2% пшеничная мука 2% отруби пшеничные 1,5% БВК 0,5% KH2PO4 1,5% вода водопроводная, рН естественный. Режим культивирования: температура 30 ± 1oC, аэрация 150 500 м3/час, продолжительность 48 ч. Протеолитическая активность составила 10,5 ед/мл, амилолитическая 11,3 ед/мл.Example 4. The strain Aspergillus oryzae 387 was grown at the Vyshnevolotsk plant of enzyme preparations in an industrial fermenter with a volume of 20 m 3 . The composition of the nutrient medium: corn flour 2% wheat flour 2% wheat bran 1.5% BVK 0.5% KH 2 PO 4 1.5% tap water, natural pH. Cultivation mode: temperature 30 ± 1 o C, aeration 150 500 m 3 / h, duration 48 hours. Proteolytic activity was 10.5 u / ml, amylolytic 11.3 u / ml.

Пример 5. Глубинную культуру Aspergillus oryzae 387 амилопротооризин Гх, выращенную на ВЗФП (по примеру 4), применяют для ферментолиза пекарских дрожжей. Амилопротооризин Гх дозируют на протеолитической активности из расчета 15 ед ПС/г сухих дрожжей. Режим протеолиза: 50oC, длительность 3,0 3,5 ч. По окончании процесса прирост аминного азота составил 240 мг% Высушенный на распылительной сушилке ферментолизат дрожжей применяют в животноводстве в качестве белково-кормовой добавки или как пищевую добавку с высоким содержанием аминокислот для нуждающихся в усиленном белковом питании и спортсменам.Example 5. The deep culture of Aspergillus oryzae 387 amyloprotorizin Gx grown on WZFP (according to example 4), is used for fermentolysis of baker's yeast. Amyloprotorizin Gx is dosed on proteolytic activity at the rate of 15 units PS / g dry yeast. Proteolysis mode: 50 o C, duration 3.0 3.5 hours. At the end of the process, the increase in amine nitrogen was 240 mg%. The yeast fermentolysate dried on a spray dryer is used in animal husbandry as a protein-feed additive or as a food supplement with a high amino acid content in need of enhanced protein nutrition and athletes.

Пример 6. Глубинную культуру Aspergillus oryzae 387 амилопротооризин Гх, выращенную на ВЗФП (по примеру 4), применяют для ферментативного гидролиза пекарских дрожжей с целью получения очищенной аминокислотной смеси для медицины и пищевой промышленности. Example 6. The deep culture of Aspergillus oryzae 387 amyloprotorizin Gx grown on WZFP (according to example 4) is used for enzymatic hydrolysis of baker's yeast in order to obtain a purified amino acid mixture for medicine and the food industry.

Пример 7. Ферментный препарат амилопротооризин Г10х, полученный при глубинном культивировании Aspergillus oryzae 387, применяют в пивоварении на стадии проращивания ячменного солода, добавляя его в замочную воду. При этом улучшается качество солода; увеличивается белковое растворение на 5% повышается степень растворения эндоспермы зерна на 2,1% снижается длительность осахаривания пивного сусла в 2 раза. Example 7. The enzyme preparation amyloprotorizin G10x, obtained by deep cultivation of Aspergillus oryzae 387, is used in brewing at the stage of germination of barley malt, adding it to the key water. This improves the quality of the malt; protein dissolution increases by 5%; the degree of dissolution of grain endosperm increases by 2.1%; the duration of saccharification of beer wort decreases by 2 times.

Пример 8. Ферментные препараты амилопроторизин Г10х и Г20х, полученные из глубинной культуры A. oryzae 387, применяют в пивоваренном производстве на стадии приготовления пивного сусла и стабилизация готового продукта. При этом сокращается расход высококачественного солодового зерна на 30 40% увеличивается выход экстракта на 4 5% улучшается качество пива, и его стойкость возрастает с 7 до 1,5 месяцев. Example 8. Enzyme preparations amyloprotorizin G10x and G20x, obtained from the deep culture of A. oryzae 387, are used in the brewing industry at the stage of preparation of beer wort and stabilization of the finished product. At the same time, the consumption of high-quality malt grain is reduced by 30–40%; the extract yield is increased; the quality of beer is improved by 4–5%, and its durability increases from 7 to 1.5 months.

Пример 9. Амилопроторизин Гх, полученный при глубинном культивировании A. oryzae 387, применяют в спиртовом производстве на стадии приготовления солодового молока. При этом активность амилаз солода возрастает на 50 80% сокращается длительность проращивания солода на 2 суток и на 30 40% сокращается расход высококачественного зерна. Example 9. Amyloprotorizin Gx, obtained by deep cultivation of A. oryzae 387, is used in alcohol production at the stage of preparation of malt milk. At the same time, the activity of malt amylases increases by 50–80%, the duration of malt germination is reduced by 2 days, and the consumption of high-quality grain is reduced by 30–40%.

Пример 10. Амилопроторизин Гх, полученный из глубинной культуры A. oryzae 387, применяют в спиртовом производстве на стадии приготовления сусла для выращивания дрожжей. При этом количество дрожжевых клеток в 2 раза превышало контрольный уровень, а их бродильная активность возрастала на 25%
Пример 11. Амилопротооризин Гх, полученный при глубинном культивировании A. oryzae 387, применяют в спиртовом производстве на стадии осахаривания сусла. При этом срок брожения сокращается на 1 сутки, экономится 0,2 т зерна, увеличивается выход спирта на 1 2% и улучшается его качество за счет снижения количества побочных продуктов.
Example 10. Amyloprotorizin Gx, obtained from a deep culture of A. oryzae 387, is used in alcohol production at the stage of preparation of wort for growing yeast. Moreover, the number of yeast cells was 2 times higher than the control level, and their fermentation activity increased by 25%
Example 11. Amyloprotorizin Gx, obtained by deep cultivation of A. oryzae 387, is used in alcohol production at the stage of saccharification of wort. At the same time, the fermentation time is reduced by 1 day, 0.2 tons of grain is saved, the yield of alcohol is increased by 1 2% and its quality is improved by reducing the number of by-products.

Пример 12. Амилопротооризин Г10х, полученный при глубинном культивировании A. oryzae 387, применяют в молочной промышленности для приготовления диетического и детского питания и сыроделии при получении молочно-белковой основы для сыров. Example 12. Amyloprotorizin G10x obtained by deep cultivation of A. oryzae 387, used in the dairy industry for the preparation of diet and baby food and cheese making to obtain a milk-protein base for cheeses.

Пример 13. Амилопротооризин Г10х, полученный из глубинной культуры Aspergillus oryzae 387, применяют в мясной промышленности для мягчения мяса и повышения его сортности. Example 13. Amyloprotorizin G10x, obtained from the deep culture of Aspergillus oryzae 387, is used in the meat industry to soften meat and increase its grade.

Claims (1)

Штамм гриба Aspergillus oryzae ВКПМ F-683 продуцент комплекса кислых и слабокислых протеаз, амило- и цитолитических ферментов. The strain of the fungus Aspergillus oryzae VKPM F-683 is a producer of a complex of acidic and weakly acidic proteases, amylo- and cytolytic enzymes.
RU93050097A 1993-10-19 1993-10-19 Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes RU2070921C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU93050097A RU2070921C1 (en) 1993-10-19 1993-10-19 Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU93050097A RU2070921C1 (en) 1993-10-19 1993-10-19 Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU93050097A RU93050097A (en) 1996-02-20
RU2070921C1 true RU2070921C1 (en) 1996-12-27

Family

ID=20148780

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU93050097A RU2070921C1 (en) 1993-10-19 1993-10-19 Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2070921C1 (en)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2186850C2 (en) * 2000-04-19 2002-08-10 Государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых ароматизаторов, кислот и красителей РАСХН Method of citric acid producing
RU2315095C1 (en) * 2006-07-04 2008-01-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук FUNGUS STRAIN ASPERGILLUS ORYZAE AS PRODUCER OF ACID α-AMYLASE
RU2315098C1 (en) * 2006-07-04 2008-01-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук Fungus strain aspergillus oryzae as producer of acid and subacid proteases
RU2315096C1 (en) * 2006-07-04 2008-01-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук FUNGUS STRAIN ASPERGILLUS ORYZAE AS PRODUCER OF COMPLEX OF PEPTIDASES, β-GLUCANASE, α-AMYLASE AND XYLANASE
RU2321635C2 (en) * 2000-03-20 2008-04-10 Басф Акциенгезелльшафт Talaromyces emersonii beta-glucanases
RU2354689C1 (en) * 2008-03-06 2009-05-10 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания "Заповедный край" Method of "strizhament" bitters production
RU2370526C2 (en) * 2007-09-11 2009-10-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской сельскохозяйственной академии Method of yeast cell enzymolysate obtainment
RU2412242C2 (en) * 2009-03-30 2011-02-20 Государственное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук" Method of obtaining nutritional medium for carrying out microbial lysine synthesis
RU2499039C1 (en) * 2012-10-19 2013-11-20 Общество с ограниченной ответственностью "СОСТРА" Strain of micromycete aspergillus oryzae-producer of proteolytic and amylolytic ferments to be used in food industry
RU2557300C1 (en) * 2014-04-11 2015-07-20 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии" (ФГБНУ ВНИИПБТ) FUNGAL STRAIN Aspergillus oryzae - PRODUCER OF COMPLEX OF PROTEINASES AND PEPTIDASES, NUCLEASES, CHITINASE, BETA-GLUCANASE, MANNANASE AND ALPHA-AMYLASE
CN109988717A (en) * 2019-05-05 2019-07-09 广西壮族自治区畜牧研究所 A strain of Aspergillus oryzae and its application

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD4285C1 (en) * 2013-02-28 2014-12-31 Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы Strain of Trichoderma koningii Oudemans fungi - producer of acid, neutral and alkaline proteases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов.- М.: Пищевая промышленность, 1975. 2. Зуева Р.В. Физиолого-биохимические исследования экспериментально полученного мутанта Aspergillus oryzal - активного продуцента кислой протеиназы. Автореферат кандидатской диссертации.- М.: 1971. 3. Авторское свидетельство СССР N 1440922, кл. C 12 N 1/14, 1988. *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2321635C2 (en) * 2000-03-20 2008-04-10 Басф Акциенгезелльшафт Talaromyces emersonii beta-glucanases
RU2186850C2 (en) * 2000-04-19 2002-08-10 Государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых ароматизаторов, кислот и красителей РАСХН Method of citric acid producing
RU2315095C1 (en) * 2006-07-04 2008-01-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук FUNGUS STRAIN ASPERGILLUS ORYZAE AS PRODUCER OF ACID α-AMYLASE
RU2315098C1 (en) * 2006-07-04 2008-01-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук Fungus strain aspergillus oryzae as producer of acid and subacid proteases
RU2315096C1 (en) * 2006-07-04 2008-01-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук FUNGUS STRAIN ASPERGILLUS ORYZAE AS PRODUCER OF COMPLEX OF PEPTIDASES, β-GLUCANASE, α-AMYLASE AND XYLANASE
RU2370526C2 (en) * 2007-09-11 2009-10-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской сельскохозяйственной академии Method of yeast cell enzymolysate obtainment
RU2354689C1 (en) * 2008-03-06 2009-05-10 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания "Заповедный край" Method of "strizhament" bitters production
RU2412242C2 (en) * 2009-03-30 2011-02-20 Государственное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук" Method of obtaining nutritional medium for carrying out microbial lysine synthesis
RU2499039C1 (en) * 2012-10-19 2013-11-20 Общество с ограниченной ответственностью "СОСТРА" Strain of micromycete aspergillus oryzae-producer of proteolytic and amylolytic ferments to be used in food industry
RU2557300C1 (en) * 2014-04-11 2015-07-20 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии" (ФГБНУ ВНИИПБТ) FUNGAL STRAIN Aspergillus oryzae - PRODUCER OF COMPLEX OF PROTEINASES AND PEPTIDASES, NUCLEASES, CHITINASE, BETA-GLUCANASE, MANNANASE AND ALPHA-AMYLASE
CN109988717A (en) * 2019-05-05 2019-07-09 广西壮族自治区畜牧研究所 A strain of Aspergillus oryzae and its application
CN109988717B (en) * 2019-05-05 2021-09-21 广西壮族自治区畜牧研究所 Aspergillus oryzae strain and application thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4472504A (en) Hyperproducing cellulase microorganism
RU2070921C1 (en) Strain of fungus aspergillus oryzae - a producer of acid and weak-acid proteases, amylolytic and cytolytic enzymes
KR20150001096A (en) Complex wheat nuruk and process for preparing the same
US3988207A (en) Preparation of a milk-coagulating enzyme
RU2396007C1 (en) Method of complex processing grain raw material for alcohol and feed products enriched in lysine
RU2315097C1 (en) Fungus strain aspergillus oryzae as producer of acid proteases and xylanase
KR101394009B1 (en) Process for production of liquid koji
RU2315096C1 (en) FUNGUS STRAIN ASPERGILLUS ORYZAE AS PRODUCER OF COMPLEX OF PEPTIDASES, β-GLUCANASE, α-AMYLASE AND XYLANASE
Hmood et al. Optimum conditions for fibrinolytic enzyme (Nattokinase) production by Bacillus sp. B24 using solid state fermentation
RU2354697C2 (en) STRAIN OF MYCELIAL FUNGUS ASPERGILLUS ORYZAE - ACIDIC α-AMYLASE PRODUCER
RU2111253C1 (en) Method of preparing biomass
JP3761236B2 (en) Novel β-glucosidase, production method and use thereof
RU2557300C1 (en) FUNGAL STRAIN Aspergillus oryzae - PRODUCER OF COMPLEX OF PROTEINASES AND PEPTIDASES, NUCLEASES, CHITINASE, BETA-GLUCANASE, MANNANASE AND ALPHA-AMYLASE
RU2514224C1 (en) Strain of filamentous fungus aspergillus oryzae - producer of maltogenic alpha-amylase
RU2315098C1 (en) Fungus strain aspergillus oryzae as producer of acid and subacid proteases
RU2315095C1 (en) FUNGUS STRAIN ASPERGILLUS ORYZAE AS PRODUCER OF ACID α-AMYLASE
KR102285740B1 (en) Manufacturing method of wheat pellet nuruk and wheat pellet nuruk using the same
SU1641887A1 (en) Strain of fungus aspergillus oryzae (ahlburg) cohn producing xylanase
RU2061035C1 (en) Nutrient medium for micromycetes aspergillus oryzae cultivation - a producer of hydrolytic enzymes
RU2077587C1 (en) Strain of aspergillus fresenius 4238 - a producer of fumagillin
SU1509402A1 (en) Mushroom strain penicillium canescens - producer of beta-galactosidase
SU1094346A1 (en) Ashergillus awamori vud t-2 no.f 203 strain as producer of amylolytic ferments used for saccharification starch-containing raw material in producing of alcohol and method of obtaining amylolytic ferments for saccharification
SU1440922A1 (en) Strain of aspergillus oryzae fungi as producer of amylolytic and proteolytic enzymes
RU2499039C1 (en) Strain of micromycete aspergillus oryzae-producer of proteolytic and amylolytic ferments to be used in food industry
RU2196821C2 (en) Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20081020