RU2196821C2 - Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase - Google Patents
Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase Download PDFInfo
- Publication number
- RU2196821C2 RU2196821C2 RU2000116928A RU2000116928A RU2196821C2 RU 2196821 C2 RU2196821 C2 RU 2196821C2 RU 2000116928 A RU2000116928 A RU 2000116928A RU 2000116928 A RU2000116928 A RU 2000116928A RU 2196821 C2 RU2196821 C2 RU 2196821C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- glucoamylase
- activity
- starch
- aspergillus awamori
- Prior art date
Links
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 title claims abstract description 38
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title description 5
- 101000765306 Aspergillus awamori N-(5'-phosphoribosyl)anthranilate isomerase Proteins 0.000 title 1
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 claims abstract description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 abstract description 29
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 abstract description 29
- 239000008107 starch Substances 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 17
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 12
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 abstract description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000012248 genetic selection Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 230000002226 simultaneous effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 9
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 9
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 9
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000020054 awamori Nutrition 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 108050008938 Glucoamylases Proteins 0.000 description 5
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 4
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005696 Diammonium phosphate Substances 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 2
- 235000019534 high fructose corn syrup Nutrition 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000178951 Endomyces Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009916 joint effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологической промышленности, различным областям пищевой биотехнологии и может быть использовано для получения глюкоамилазы с целью ее дальнейшего применения для ферментативной обработки крахмалсодержащего сырья в спиртовой, крахмалопаточной, хлебопекарной и пивоваренной промышленности. The invention relates to the microbiological industry, various fields of food biotechnology and can be used to obtain glucoamylase for the purpose of its further use for the enzymatic processing of starch-containing raw materials in the alcohol, starch, bakery and brewing industries.
В качестве продуцентов амилолитических ферментов наиболее часто используют плесневые грибы рода Aspergillus видов oryzae, usamii, awamori, batatae; рода Rhizopus видов delemar, fonkinsis, neveus, tonnensis, japonicum, topnineusis, а также отдельные представители Neurospora crassa и Mucor. Дрожжи и дрожжеподобные микроорганизмы родов Candida, Saccharomyces, Endomycopsis и Endomyces также способны синтезировать ферменты амилолитического действия. As producers of amylolytic enzymes, mold fungi of the genus Aspergillus of the species oryzae, usamii, awamori, batatae are most often used; the genus Rhizopus of the species delemar, fonkinsis, neveus, tonnensis, japonicum, topnineusis, as well as individual representatives of Neurospora crassa and Mucor. Yeast and yeast-like microorganisms of the genera Candida, Saccharomyces, Endomycopsis and Endomyces are also able to synthesize amylolytic enzymes.
Как правило, природные микроорганизмы образуют комплекс амилолитических ферментов, способных гидролизовать растительные субстраты на основе крахмалистых углеводов. В этот комплекс входят α-амилазы и глюкоамилазы, гидролизующие молекулы крахмала до α-амилазы и глюкоамилазы, гидролизующие молекулы крахмала до глюкозы и декстринов различной молекулярной массы; протеазы, разрушающие белок сырья до аминокислот, являющихся ценным азотистым питанием для дрожжей; глюканазы, которые интенсифицируют процесс ферментативной обработки сырья за счет гидролиза некрахмалистых полисахаридов; пектиназы, разрушающие пектин, другие ферменты литического действия. As a rule, natural microorganisms form a complex of amylolytic enzymes capable of hydrolyzing plant substrates based on starchy carbohydrates. This complex includes α-amylases and glucoamylases, hydrolyzing starch molecules to α-amylases and glucoamylases, hydrolyzing starch molecules to glucose and dextrins of various molecular weights; proteases that break down the protein of raw materials to amino acids, which are valuable nitrogenous nutrition for yeast; glucanases, which intensify the process of enzymatic processing of raw materials due to the hydrolysis of non-starchy polysaccharides; pectinases that destroy pectin, other enzymes of lytic action.
Получаемые в настоящее время полиферментные препараты имеют различный ферментный состав и различаются по уровню активности отдельных ферментов. В целом известные полиферментные препараты с амилолитической активностью нуждаются в улучшении их функциональных характеристик, что повысит эффективность их промышленного применения. Currently obtained multienzyme preparations have different enzyme composition and differ in the level of activity of individual enzymes. In general, well-known polyenzyme preparations with amylolytic activity need to improve their functional characteristics, which will increase the efficiency of their industrial use.
Особый интерес представляют ферментные препараты с повышенной активностью глюкоамилазы. Of particular interest are enzyme preparations with increased glucoamylase activity.
Глюкоамилаза - (α-1,4-глюкан-глюканогидролаза, 3.2.1.3.) -глюкозообразующая амилаза, экзофермент, атакует крахмал с нередуцирующего конца полисахаридной цепочки, последовательно отщепляя глюкозные остатки и полностью превращая крахмал в глюкозу. У большинства выделенных глюкоамилаз микробного происхождения проявляются некоторые общие свойства. Как правило, это кислотостабильные ферменты с оптимумом рН 4,5-5,0, оптимумом температуры 55-60oС. Кроме специфичных α-1,4- глюкановых связей глюкоамилазы гидролизуют α-1,6 связи как в полисахаридах, так и в низкомолекулярных олигосахаридах. Под их действием крахмал полностью гидролизуется до глюкозы.Glucoamylase - (α-1,4-glucan-glucanohydrolase, 3.2.1.3.) -Glucose-forming amylase, an exoenzyme, attacks starch from the non-reducing end of the polysaccharide chain, sequentially cleaving glucose residues and completely converting starch into glucose. Most isolated glucoamylases of microbial origin show some common properties. As a rule, these are acid-stable enzymes with an optimum pH of 4.5-5.0, an optimum temperature of 55-60 o C. In addition to specific α-1,4-glucan bonds, glucoamylases hydrolyze α-1,6 bonds both in polysaccharides and in low molecular weight oligosaccharides. Under their action, starch is completely hydrolyzed to glucose.
Способность глюкоамилазы гидролизовать как α-1,4, так и α-1,6 связи с отщеплением глюкозы ставит этот фермент на первое место по эффективности гидролиза крахмала с целью дальнейшего сбраживания образовавшегося сахара. The ability of glucoamylase to hydrolyze both α-1,4 and α-1,6 bonds with glucose cleavage puts this enzyme in first place in the efficiency of starch hydrolysis with the aim of further fermentation of the formed sugar.
В спиртовой, крахмало-паточной, хлебопекарной промышленности необходим глубокий гидролиз крахмала. Обычно гидролиз осуществляют в две стадии: на первой стадии проводят обработку α-амилазой (стадия разжижения крахмала), затем оклейстеризованную и разжиженную суспензию при температуре не выше 60oС и рН 5,0-5,5 обрабатывают глюкоамилазой (стадия осахаривания крахмала). В результате совместного действия ферментов степень гидролиза крахмала достигает 98-99%.In the alcohol, starch and syrup, baking industry requires a deep hydrolysis of starch. Hydrolysis is usually carried out in two stages: in the first stage, α-amylase is treated (starch liquefaction stage), then the gelatinized and liquefied suspension is treated at a temperature not exceeding 60 ° C and pH 5.0-5.5 is treated with glucoamylase (starch saccharification stage). As a result of the joint action of enzymes, the degree of hydrolysis of starch reaches 98-99%.
Однако несмотря на высокую рентабельность данной технологии, эффективность процесса ферментативной обработки крахмала может быть повышена за счет применения высокоактивных ферментных препаратов. При этом достигается значительное снижение стоимости ферментативной обработки сырья за счет сокращения дозировки ферментов и продолжительности процесса гидролиза, обеспечивается высокая степень деструкции крахмала и как следствие этого увеличение выхода конечного продукта. However, despite the high profitability of this technology, the efficiency of the enzymatic processing of starch can be increased through the use of highly active enzyme preparations. At the same time, a significant reduction in the cost of enzymatic processing of raw materials is achieved by reducing the dosage of enzymes and the duration of the hydrolysis process, a high degree of degradation of starch and, as a result, an increase in the yield of the final product are ensured.
В настоящее время при промышленном получении продуктов гидролиза крахмала - декстрозы, глюкозофруктозных сиропов, на стадии осахаривания главным образом используют глюкоамилазы продуцентов, относящихся к роду Aspergilllus: Asp. niger. Asp. awamori, Asp. oryzae (1-5), оптимальные условия действия которых рН 5,0, 55oС.Currently, in the industrial production of starch hydrolysis products - dextrose, glucose-fructose syrups, glucoamylases of producers belonging to the genus Aspergilllus: Asp are mainly used in the saccharification stage. niger. Asp. awamori, Asp. oryzae (1-5), the optimal conditions of action of which are pH 5.0, 55 o C.
Известны рекомбинантные и мутантные штаммы продуцентов глюкоамилазы гриба Aspergillus niger. Описаны штаммы: Asp. niger, синтезирующий 150 ед/мл глюкоамилазы (1); Asp. niger В1-Д, проведены исследования по влиянию условий аэрации на рост микроорганизма и биосинтез фермента (2); Asp. niger N 402 В 1, полученный на основе природного штамма, содержит 20 копий гена глюкоамилазы (3); Asp. niger B0 -1 (4). Asp. oryzae - мутант, синтезирует как глюкоамилазу, так и амилазу (5). Recombinant and mutant strains of Aspergillus niger fungus glucoamylase producers are known. The strains described are: Asp. niger synthesizing 150 u / ml glucoamylase (1); Asp. niger V1-D, studies have been conducted on the effect of aeration conditions on microorganism growth and enzyme biosynthesis (2); Asp. niger N 402 In 1, obtained on the basis of a natural strain, contains 20 copies of the glucoamylase gene (3); Asp. niger B0 -1 (4). Asp. oryzae is a mutant that synthesizes both glucoamylase and amylase (5).
Использование рекомбинантных штаммов связано с необходимостью проведения постоянных исследований по поддержанию штаммов в стабильном и активном состоянии, созданием специальных условий культивирования, которые не всегда доступны при промышленном ведении процесса. The use of recombinant strains is associated with the need for ongoing research to maintain the strains in a stable and active state, the creation of special cultivation conditions that are not always available in industrial process control.
Известны и широко используются для осахаривания крахмалсодержащего сырья при промышленном получении декстрозы, глюкозофруктозных сиропов, этанола плесневые грибы вида Asp. awamori. Mold fungi of the Asp type are known and widely used for saccharification of starch-containing raw materials in the industrial production of dextrose, glucose-fructose syrups, ethanol. awamori.
Достаточно активными в отношении синтеза глюкоамилазы из известных грибов Asp. awamori являются Asp. awamori 466, синтезирующий при выращивании на среде с кукурузной мукой при использовании осахаривания солодовым молоком и солодового сусла с диаммонийфосфатом на 184 ч роста 183 ед/мл фермента (6), и Asp. awamori ВУД Т-2 F 203, при культивировании которого на среде с кукурузной мукой при осахаривании солодовым молоком или бактериальной амилазой при специальной подготовке посевного материала и многостадийности процесса удается на 130 ч культивирования получить активность глюкоамилазы равной 200 ед/мл (7). Active enough in relation to the synthesis of glucoamylase from known Asp. awamori are Asp. awamori 466, synthesizing when grown on a medium with corn flour using saccharification with malt milk and malt wort with diammonium phosphate for 184 h of growth of 183 u / ml of the enzyme (6), and Asp. awamori VUD T-2 F 203, when cultivated on a medium with corn flour during saccharification with malt milk or bacterial amylase, with special preparation of seed and a multi-stage process, it is possible to obtain glucoamylase activity of 200 units / ml for 130 hours of cultivation (7).
Наиболее близким аналогом по совокупности существенных признаков и достигаемому результату является штамм Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 ЦМПМ F-166 (8). Штамм, выращенный на агаризованной среде с кукурузным экстрактом, для получения посевного материала культивируют на среде, содержащей крахмал, солодовые ростки и минеральные соли. Ферментационная среда содержит кукурузную муку, кукурузный экстракт, бактериальную амилазу. Культивирование осуществляют при 28oС в течение 120 ч. Уровень активности глюкоамилазы составляет 240 ед/мл. Для повышения синтетической активности штамма используют 2-стадийную подготовку посевного материала, включающую сначала получение спорового материала на среде с пшеничными отрубями, затем проращивание его на жидкой среде ферментационного состава и последующее культивирование на среде, содержащей кукурузную муку, крахмал, БВК, амилосубтилин и диаммонийфосфат, при 34oС. Активность глюкоамилазы на 120 ч культивирования составляет 340 ед/мл.The closest analogue in terms of the combination of essential features and the achieved result is the strain Aspergillus awamori VNIIgenetics 120/177 CMPM F-166 (8). The strain grown on an agar medium with corn extract to cultivate the seed is cultivated on a medium containing starch, malt sprouts and mineral salts. The fermentation medium contains corn flour, corn extract, bacterial amylase. The cultivation is carried out at 28 ° C. for 120 hours. The glucoamylase activity level is 240 units / ml. To increase the synthetic activity of the strain, a 2-stage preparation of seed is used, including first obtaining spore material on a medium with wheat bran, then germinating it on a liquid medium of a fermentation composition and subsequent cultivation on a medium containing corn flour, starch, IAC, amylosubtilin and diammonium phosphate, at 34 o C. The activity of glucoamylase for 120 hours of cultivation is 340 u / ml
Недостатком описанного штамма является необходимость для получения достаточно высокой активности культуральной жидкости использования многостадийной подготовки посевного материала и для основного процесса ферментации обогащенной питательной среды. The disadvantage of the described strain is the need to obtain a sufficiently high activity of the culture fluid using multi-stage preparation of seed material and for the main fermentation process of the enriched nutrient medium.
Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, расширение арсенала штаммов-продуцентов глюкоамилазы. The problem to which the invention is directed, is the expansion of the arsenal of glucoamylase producing strains.
Технический результат заключается в получении нового высокопродуктивного штамма-продуцента, не требующего для синтеза продукта сложных высоконцентрированных сред и сложных приемов культивирования штамма. The technical result consists in obtaining a new highly productive producer strain that does not require complex highly concentrated media and complex cultivation techniques for the synthesis of the product.
Сущность объекта изобретения - новый специально селекционированный штамм Aspergillus awamori N 400 - продуцент глюкоамилазы. The essence of the object of the invention is a new specially selected strain of Aspergillus awamori N 400 - producer of glucoamylase.
Штамм Aspergillus awamori депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН под N ВКМ F- 3689 D. The strain Aspergillus awamori is deposited in the All-Russian collection of microorganisms at the Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms named after G.K. Scriabin RAS under N VKM F- 3689 D.
Штамм получают с помощью многоступенчатой генетической селекции исходного штамма Aspergillus awamori BKM F-758 с использованием методов мутагенеза - ультрафиолетового облучения с одновременным воздействием химических мутагенов. The strain is obtained using multistage genetic selection of the original strain Aspergillus awamori BKM F-758 using mutagenesis methods - ultraviolet radiation with simultaneous exposure to chemical mutagens.
Суспензию спор исходного штамма (титр разведения - 10-4-10-6) облучают ультрафиолетом в 20%-ном глицерине в течение 4-5 мин. Облученные споры высевают на чашки Петри с селективными средами, выживаемость при этом составляет 1-2%. Засеянные чашки инкубируют в течение 7 сут при 35oС и дополнительно выдерживают 7 сут при 22-23oС. Каждую выросшую колонию пересевают на чашки, содержащие агаризованные среды с добавлением в качестве единственного источника углерода крахмал.The spore suspension of the initial strain (dilution titer of 10 -4 -10 -6 ) is irradiated with ultraviolet light in 20% glycerol for 4-5 minutes. Irradiated spores are plated on Petri dishes with selective media, with a survival rate of 1-2%. Inoculated plates are incubated for 7 days at 35 ° C. and further incubated for 7 days at 22-23 ° C. Each grown colony is subcultured into plates containing agarized media with the addition of starch as the sole carbon source.
Интенсивность синтеза глюкоамилазы мутантных клонов тестируют по величине отношения диаметра просветления крахмала к диаметру колонии (D=Dзпк/Dк). Клоны, имеющие значение D в 2- 4 раза выше, чем в контроле, тестируют на эффективность синтеза глюкоамилазы при периодическом культивировании на жидких средах в колбах. Наиболее продуктивный вариант снова подвергают УФ-облучению и селекции, как описано выше. The intensity of the synthesis of glucoamylase mutant clones is tested by the ratio of the diameter of the starch bleach to the diameter of the colony (D = Dzpk / Dk). Clones with a D value of 2-4 times higher than in the control are tested for the effectiveness of the synthesis of glucoamylase during periodic cultivation on liquid media in flasks. The most productive option is again subjected to UV irradiation and selection, as described above.
Условия хранения: штамм может храниться в лиофилизированном состоянии в течение нескольких лет или на косяках с агаризованной средой Чапека или Мальц-агаре при +4oС с обязательным пересевом не реже одного раза в 3 месяца.Storage conditions: the strain can be stored in a lyophilized state for several years or on jambs with agarized Chapek or Maltz-agar medium at + 4 o C with mandatory reseeding at least once every 3 months.
Культурально-морфологические признаки штамма
Макроскопические характеристики: колонии на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом (CYA), 25oС, имеют диаметр 70-71 мм/7сут, радиально-бороздчатые, поверхность бархатистая, край тонкий, конидиальная область - темно-коричневая; эксудат отсутствует, обратная сторона тускло-желтая.Cultural and morphological characteristics of the strain
Macroscopic characteristics: colonies on agar Chapek with yeast extract (CYA), 25 o C, have a diameter of 70-71 mm / 7 days, radially grooved, the surface is velvety, the edge is thin, the conidial region is dark brown; exudate is absent, the reverse side is dull yellow.
Колонии на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом (CYA), 37oС, имеют диаметр 70-71 мм/7сут., культуральные характеристики схожи с таковыми на CYA, 25oС.Colonies on Chapek’s agar with yeast extract (CYA), 37 o С, have a diameter of 70-71 mm / 7 days. Cultural characteristics are similar to those at CYA, 25 o С.
Колонии на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом и 20% сахарозы (CY20S), 25oС, имеют диаметр колонии 68 - 70 мм/7сут., слабо радиально-бороздчатые, поверхность порошистая, край тонкий, конидиальная область темно-коричневая; эксудат отсутствует, обратная сторона тускло-желтая.Colonies on Chapek agar with yeast extract and 20% sucrose (CY20S), 25 o C, have a colony diameter of 68 - 70 mm / 7 days, slightly radially grooved, the surface is powdery, the edge is thin, the conidial region is dark brown; exudate is absent, the reverse side is dull yellow.
Микроскопические характеристики: конидиальные головки шаровидные, затем рыхлорадиальные, распадающиеся на отдельные колонки, конидиеносцы слабоокрашенные в терминальной части, гладкостенные 250-1200 х 6 -12 мкм, аптикальные расширения шаровидные 20-45 мкм в диаметре, покрыто стеригмами по всей поверхности. Стеригмы преимущественно двухъярусные, метулы 6-16 х 3,5 -7 мкм, фиалиды 5-8 х 2 - 4 мкм. Конидии шаровидные, 3,5-6 мкм, гладкие. Microscopic characteristics: conidial heads are spherical, then lohradial, decaying into separate columns, conidiophores are slightly colored in the terminal part, smooth-walled 250-1200 x 6 -12 microns, apical extensions are spherical 20-45 microns in diameter, covered with sterigma over the entire surface. Sterigma is predominantly two-tier, with formulas 6-16 x 3.5 -7 microns, phialids 5-8 x 2 - 4 microns. Conidia are spherical, 3.5-6 microns, smooth.
Физиолого-биохимические свойства штамма
Отношение к сахарам
Культура штамма хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, арабинозу, рафинозу, и слабо - мальтозу, лактозу, галактозу и рамнозу.Physiological and biochemical properties of the strain
Sugar attitude
The strain culture assimilates glucose, sucrose, arabinose, raffinose, and weakly maltose, lactose, galactose, and rhamnose.
Крахмал гидролизует до глюкозы. Starch hydrolyzes to glucose.
Хорошо ассимилирует аммонийные соли неорганических кислот. Потребляет пептон, казеин, аминокислоты. Пептонизирует молоко. It assimilates ammonium salts of inorganic acids well. Consumes peptone, casein, amino acids. Peptonizes milk.
Температурный оптимум роста 34-35oС, рН 4,5-6,0. Аэроб.The temperature optimum of growth is 34-35 o C, pH 4.5-6.0. Aerobe.
Данный вид мицелиального гриба не числится в качестве патогенного в "Положении о порядке учета, хранение обращения, отпуска и пересылки культур бактерии, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактериальных токсинов, ядов биологического происхождения". This type of mycelial fungus is not listed as pathogenic in the "Regulation on the procedure for recording, storing handling, dispensing and sending cultures of bacteria, viruses, rickettsia, fungi, protozoa, mycoplasmas, bacterial toxins, poisons of biological origin."
Полученный мутант по своим морфологическим свойствам отличается от исходного интенсивностью спороношения, цветом пигмента спор, окраской колонии с обратной стороны при выращивании на агаризованных средах, более коротким циклом роста, образованием более обильной биомассы, повышенной способностью к биосинтезу глюкоамилазы при глубинном культивировании на жидких средах. The morphological properties of the obtained mutant differ from the initial one by the intensity of sporulation, the color of spore pigment, colony coloration on the reverse side when grown on agarized media, a shorter growth cycle, the formation of more abundant biomass, and increased ability to glucoamylase biosynthesis during deep cultivation on liquid media.
При рассеве штамма на селективные среды наблюдается выщепление 3-6% нетипичных колоний, что свидетельствует о высокой морфологической стабильности штамма, а следовательно, о его стабильности к продукции глюкоамилазы при длительном культивировании. When the strain is screened on selective media, 3–6% of atypical colonies are cleaved, which indicates a high morphological stability of the strain and, therefore, its stability to glucoamylase production during prolonged cultivation.
Культивирование штамма осуществляют в аэробных условиях при температуре 35oС в течение 120-144 ч, рН среды 5,2-5,5. Для роста культуры и биосинтеза глюкоамилазы источником углерода и азота могут служить крахмал, гидролизованный крахмал, экструдат муки злаковых культур (кукурузы, пшеницы, ячменя, ржи), аммонийный азот, кукурузный экстракт.The cultivation of the strain is carried out under aerobic conditions at a temperature of 35 o C for 120-144 hours, the pH of the medium is 5.2-5.5. For the growth of culture and biosynthesis of glucoamylase, starch, hydrolyzed starch, extrudate of cereal flour (corn, wheat, barley, rye), ammonium nitrogen, and corn extract can serve as a source of carbon and nitrogen.
Штамм обладает повышенной способностью к синтезу глюкоамилазы, а также продуцирует незначительные количества α-амилазы, протеазы и β-глюканазы. The strain has an increased ability for the synthesis of glucoamylase, and also produces small amounts of α-amylase, protease and β-glucanase.
Для ферментативной обработки крахмалосодержащего сырья при производстве спирта ферментный препарат может быть использован в виде культуральной жидкости или в виде концентрированных препаратов, получаемых известными биохимическими методами, например осаждением этанолом из ультрафильтрата культуральной жидкости. For the enzymatic treatment of starch-containing raw materials in the production of alcohol, the enzyme preparation can be used in the form of a culture fluid or in the form of concentrated preparations obtained by known biochemical methods, for example, ethanol precipitation from ultrafiltrate of a culture fluid.
Глюкоамилаза активна в широком диапазоне рН - от 3,5 до 7,5 с оптимумом при рН 4,5-5,0; в диапазоне температуры от 30 до 65oС с оптимумом при 60 - 62oС. Глюкоамилаза стабильна в течение 2 ч при 45oС. Инкубирование при температуре 55oС в течение 2 ч приводило к снижению активности на 50%.Glucoamylase is active in a wide pH range - from 3.5 to 7.5 with an optimum at pH 4.5-5.0; in the temperature range from 30 to 65 o C with optimum at 60 - 62 o C. Glucoamylase is stable for 2 hours at 45 o C. Incubation at 55 o C for 2 hours led to a decrease in activity by 50%.
Возможность использования изобретения иллюстрируется примерами, которые не ограничивают объем и сущность притязаний, связанных с ними. The possibility of using the invention is illustrated by examples that do not limit the scope and essence of the claims associated with them.
Пример 1. Посевной материал (инокулюм) получают выращиванием штамма Aspergillus awamori BKM F-3689 D на твердой питательной среде, состоящей из 50% пшеничных отрубей и 50% солодовых ростков, увлажненных водопроводной водой до 60%, рН среды - 5,2-5,5. Выращиваие спорового посевного материала осуществляют в колбах, содержащих 20-30 г твердого субстрата, в стационарных условиях при температуре 35oС в течение 5-6 сут и при 22-23oС в течение 7 сут.Example 1. Sowing material (inoculum) is obtained by growing the strain Aspergillus awamori BKM F-3689 D on a solid nutrient medium consisting of 50% wheat bran and 50% malt sprouts, moistened with tap water to 60%, the pH of the medium is 5.2-5 ,5. Spore seeds are grown in flasks containing 20-30 g of solid substrate under stationary conditions at a temperature of 35 o C for 5-6 days and at 22-23 o C for 7 days.
Полученный посевной материал в количестве 0,08-0,1% к объему среды вносят в качалочные колбы объемом 750 мл, содержащие 100 мл среды состава, г/л: кукурузная мука - 240,0; водопроводная вода - остальное, рН среды 5,2-5,5. The resulting seed in an amount of 0.08-0.1% by volume of the medium is introduced into rocking flasks with a volume of 750 ml, containing 100 ml of medium composition, g / l: corn flour - 240.0; tap water - the rest, the pH of the medium is 5.2-5.5.
Культивирование штамма осуществляют в аэробных условиях при температуре 35oС на качалке с 240 об/мин в течение 120-144 ч. Каждые 24 ч, начиная с 72 ч роста, отбирают пробы, в которых определяют способность культуральной жидкости гидролизовать крахмал.The cultivation of the strain is carried out under aerobic conditions at a temperature of 35 o C on a shaker with 240 rpm for 120-144 hours. Every 24 hours, starting from 72 hours of growth, samples are taken in which the ability of the culture fluid to hydrolyze starch is determined.
Метод определения активности глюкоамилазы основан на определении глюкозы, образовавшейся при гидролизе растворимого крахмала ферментом (9). The method for determining the activity of glucoamylase is based on the determination of glucose formed during hydrolysis of soluble starch by an enzyme (9).
За единицу глюкоамилазной активности принимают такое количество фермента, которое, действуя на растворимый крахмал при 30oС и рН 4,7 в течение 1 мин, освобождает 1 мкмоль глюкозы.For a unit of glucoamylase activity, an amount of the enzyme is taken which, acting on soluble starch at 30 ° C. and a pH of 4.7 for 1 minute, releases 1 μmol of glucose.
Максимальная глюкоамилазная активность в культуральной жидкости на 120 ч роста составляет 400 ед/мл, на 144 ч роста - 450 ед/мл. Удельная глюкоамилазная активность в культуральной жидкости равна 15,5 ед/мг белка. The maximum glucoamylase activity in the culture fluid for 400 h of growth is 400 units / ml, for 144 h of growth - 450 units / ml. The specific glucoamylase activity in the culture fluid is 15.5 u / mg protein.
Пример 2. Способ осуществляют по примеру 1, но в ферментационной среде вместо кукурузной муки используют экструдат кукурузной муки в количестве 250 г/л. Example 2. The method is carried out as in example 1, but in a fermentation medium instead of cornmeal, an extrudate of cornmeal in an amount of 250 g / l is used.
Максимальная глюкоамилазная активность в культуральной жидкости на 144 ч роста 500 ед/мл. The maximum glucoamylase activity in the culture fluid for 144 h of growth is 500 units / ml.
Пример 3. Способ осуществляют по примеру 1, но ферментационная среда вместо кукурузной муки содержит пшеничную муку в количестве 180 г/л. Example 3. The method is carried out as in example 1, but the fermentation medium instead of cornmeal contains wheat flour in an amount of 180 g / L.
Максимальная глюкоамилазная активность в культуральной жидкости на 144 ч роста 380 ед/мл. The maximum glucoamylase activity in the culture fluid for 144 h of growth is 380 u / ml.
Таким образом, предлагаемый штамм Aspergillus awamori BKM F- 3689 D позволяет значительно повысить глюкоамилазную активность в культуральной жидкости и, следовательно, увеличить эффективность использования ферментных препаратов на основе этого штамма в различных областях биотехнологии. Thus, the proposed strain Aspergillus awamori BKM F-3689 D can significantly increase glucoamylase activity in the culture fluid and, therefore, increase the efficiency of the use of enzyme preparations based on this strain in various fields of biotechnology.
Кроме того, для получения высокой продуктивности штамма не требуется применения сложных питательных сред и сложных приемов культивирования продуцента. Для культивирования могут использоваться питательные среды, традиционно применяемые в промышленных технологиях получения такого рода ферментных препаратов. In addition, to obtain high productivity of the strain does not require the use of complex nutrient media and complex methods of cultivation of the producer. For cultivation, nutrient media traditionally used in industrial technologies for producing such enzyme preparations can be used.
ЛИТЕРАТУРА
1. Патент США N 4335208, кл.195-5, опубл. 1982 г.LITERATURE
1. US patent N 4335208, CL 195-5, publ. 1982 g.
2. Wongwicham A et. al.: Biotechnol. Bioeng, Nov 20; 65(4), 1999. 2. Wongwicham A et. al .: Biotechnol. Bioeng, Nov 20; 65 (4), 1999.
3. Withersy M et. al.: Biotechnol. Bioeng., 1998, Aug 20; 59(4), 407-418. 3. Withersy M et. al .: Biotechnol. Bioeng., 1998, Aug 20; 59 (4), 407-418.
4. Pederson et. al. : Appl. Microbiol. Biotechnol., 2000, Mar 53(3), 272-276. 4. Pederson et. al. : Appl. Microbiol. Biotechnol., 2000, Mar 53 (3), 272-276.
5. Bocring Sp.: Biotechnol. Bioeng, 1999, Dec 20; 65(6), 638-648. 5. Bocring Sp .: Biotechnol. Bioeng, 1999, Dec 20; 65 (6), 638-648.
6. Авторское свидетельство СССР N 800185, кл.С 12 D 13/10, опубл. 1981 г. 6. USSR author's certificate N 800185, class C 12 D 13/10, publ. 1981
7. Авторское свидетельство СССР N 1094346, кл.С 12 N 9/34, опубл. 1985 г. 7. Copyright certificate of the USSR N 1094346, class C 12 N 9/34, publ. 1985
8. Авторское свидетельство СССР N 1271068, кл.С 12 N 9/34, опубл. 1994 г. 8. Copyright certificate of the USSR N 1271068, class C 12 N 9/34, publ. 1994
9. ГОСТ 20264-4.89. 9. GOST 20264-4.89.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000116928A RU2196821C2 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000116928A RU2196821C2 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000116928A RU2000116928A (en) | 2002-05-27 |
| RU2196821C2 true RU2196821C2 (en) | 2003-01-20 |
Family
ID=20236956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000116928A RU2196821C2 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2196821C2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2245364C2 (en) * | 2002-12-24 | 2005-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная компания "Фермтек" | Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU753897A1 (en) * | 1978-07-26 | 1980-08-07 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения | Aspergillus awamou t-1 no. 464 strain as glucoamilase producent employed for saccharification of starch raw material |
| SU990811A1 (en) * | 1981-08-18 | 1983-01-23 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения | Method for producing deep cultures of microorganisms for saccharination of starch-containing raw material in alcohol production |
| SU1271068A1 (en) * | 1982-01-25 | 1994-01-30 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Strain aspergillus awamory-glucoamylaze producer |
-
2000
- 2000-06-30 RU RU2000116928A patent/RU2196821C2/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU753897A1 (en) * | 1978-07-26 | 1980-08-07 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения | Aspergillus awamou t-1 no. 464 strain as glucoamilase producent employed for saccharification of starch raw material |
| SU990811A1 (en) * | 1981-08-18 | 1983-01-23 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения | Method for producing deep cultures of microorganisms for saccharination of starch-containing raw material in alcohol production |
| SU1271068A1 (en) * | 1982-01-25 | 1994-01-30 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Strain aspergillus awamory-glucoamylaze producer |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4284722A (en) | Heat and acid-stable alpha-amylase enzymes and processes for producing the same | |
| US4247637A (en) | Highly thermostable glucoamylase and process for its production | |
| CA1247032A (en) | Method for direct saccharification of raw starch using enzyme produced by a basidiomycete belonging to the genus corticium | |
| RU2001949C1 (en) | Strain of fungus trichoderma reesei - a producer of cellulolytic enzymes | |
| RU2195490C2 (en) | Strain of mycelioid fungus trichoderma longibrachiatum as producer of carbohydrases complex containing cellulase, beta-glucanase, xylanase, pectinase and mannanase | |
| IL22367A (en) | Production of amyloglucosidase | |
| RU2354697C2 (en) | STRAIN OF MYCELIAL FUNGUS ASPERGILLUS ORYZAE - ACIDIC α-AMYLASE PRODUCER | |
| RU2001103C1 (en) | Bacterial strain m-bacillus licheniformis as a producer of thermostable amlolytic enzymes | |
| RU2245364C2 (en) | Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase | |
| RU2196821C2 (en) | Strain of mycelial fungus aspergillus awamori as producer of glucoamylase | |
| US3988204A (en) | Production of glucoamylase for conversion of grain mashes in the production of grain spirits | |
| RU2177995C2 (en) | Strain of bacterium bacillus licheniformis as producer of thermostable amylolytic and proteolytic enzymes | |
| RU2514224C1 (en) | Strain of filamentous fungus aspergillus oryzae - producer of maltogenic alpha-amylase | |
| KR102125358B1 (en) | Novel Aspergillus oryzae IF18-2 with high saccharogenic power and high liquerying activity and drying method thereof | |
| RU2457247C1 (en) | Recombinant mycelial strain aspergillus awamori producer of glucoamylase | |
| Varbanets et al. | Marine actinobacteria–producers of enzymes with Α-l-rhamnosidase activity | |
| Pranamuda et al. | Ethanol production from raw sago starch under unsterile condition | |
| US4593005A (en) | Strains of Aspergillus and use thereof to produce amylolytic enzymes | |
| SU1726513A1 (en) | Strain of fungus rhiropus cohnii berl ef de toni - a producer of lipase with catalase activity | |
| SU1094346A1 (en) | Ashergillus awamori vud t-2 no.f 203 strain as producer of amylolytic ferments used for saccharification starch-containing raw material in producing of alcohol and method of obtaining amylolytic ferments for saccharification | |
| RU2323973C1 (en) | STAM OF MITSELIAL MUSHROOM Aspergillus foetidus BKM F 3890D - PRODUCER OF ACID PROTEASE AND COMPEX OF CARBOHYDRASE, CONTAINS PECTINASE (POLYGALACTURONASE), CELANESE, β-GLUCANESE, ARABINASE, GALACTANSE, CELOGLUKANASE, SACCHARASE, α-L-ARABINEOFURANOZIDASE, β-GLUKOZIDASE AND AMPILASE | |
| RU2287571C2 (en) | STRAIN OF MYCELIAL FUNGUS TRICHODERMA LONGIBRACHIATUM AS PRODUCER OF CARBOHYDRASES COMPLEX COMPRISING CELLULASES, β-GLUCANASES, XYLANASES, MANNANASES AND PECTINASES | |
| US5604128A (en) | Isolated cultures of Pestalotiopsis funerea IFO 5427 and Pestalotiopsis negleta FERM BP-3501 | |
| JPS6083595A (en) | Direct enzymatic saccharification of starch | |
| CA1131142A (en) | Glucoamylase from stachybotrys subsimplex |