RU2063035C1 - Способ определения содержания этанола в биологическом материале - Google Patents
Способ определения содержания этанола в биологическом материале Download PDFInfo
- Publication number
- RU2063035C1 RU2063035C1 SU5055511A RU2063035C1 RU 2063035 C1 RU2063035 C1 RU 2063035C1 SU 5055511 A SU5055511 A SU 5055511A RU 2063035 C1 RU2063035 C1 RU 2063035C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ethanol
- ethanol content
- biological material
- determination
- content determination
- Prior art date
Links
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims description 3
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 23
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 108010025188 Alcohol oxidase Proteins 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 235000013522 vodka Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005584 Alcoholic Intoxication Diseases 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012443 analytical study Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004149 ethanol metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000006552 photochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: медицина, для определения содержания этанола в выдыхаемом воздухе. Сущность изобретения: приготавливают водную вытяжку выдыхаемого воздуха, помещают в среду инкубации, содержащую оксидазно-пероксидазную систему и люминол, и регистрируют величину светосуммы хемилюминисценции. 1 ил, 1 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к аналитической и медицинской химии, к способам определения этанола в выдыхаемом воздухе, биологических жидкостях и пищевых продуктах. По скорости выполнения анализа способ может быть квалифицирован как экспрессный, по чувствительности как высокочувствительный. Способ может иметь значения при выполнении судебно-медицинских экспертиз, при контроле состояния шофера перед выходом на линию, при контроле содержания алкоголя при спиртовом брожении и т. д. Быстрота выполнения экспертизы, количественный характер оценки и минимальные требования к лабораторной базе делают предлагаемый способ перспективным для широкого использования в медицине и пищевой промышленности.
Известны способы определения этанола в выдыхаемом воздухе, биологических жидкостях и пищевых продуктах, основанные на использовании ферментных систем
алкоголь-оксидазной и алкоголь-дегидрогеназной /1-2/. Ферментативное окисление этанола, содержащегося в исследуемом материале, приводит к окислению или восстановлению различных индикаторных веществ красителей или коферментов, регистрируемому колориметрическим или иным способом /1-6/.
алкоголь-оксидазной и алкоголь-дегидрогеназной /1-2/. Ферментативное окисление этанола, содержащегося в исследуемом материале, приводит к окислению или восстановлению различных индикаторных веществ красителей или коферментов, регистрируемому колориметрическим или иным способом /1-6/.
Известен способ колориметрического определения этанола, наиболее близкий предлагаемому изобретению по решению технической задачи и основанный на использовании оксидазно-пероксидазной системы, где роль индикаторного вещества выполняет 4-аминофеназон, окисление которого регистрируют при длине волны 600 нм /5/. По сравнению с алкоголь дегидрогеназными системами, оксидно-пероксидазная система характеризуется рядом методических преимуществ - более высокой чувствительностью, простотой экспериментального выполнения и т.д.
Недостатком известного колориметрического способа является то, что при определенных условиях (невысокое содержание этанола в образце, высокое содержание примесей, мешающих определению и т. д.) его реальная чувствительность (1х10-6 г в пробе) оказывается недостаточной для точного определения спирта. Помимо этого процедура определения этанола известным способом достаточно длительна (30 мин), чтобы использовать способ в качестве экспресс-теста.
Целью изобретения является повышение чувствительности способа и сокращение времени проведения анализа.
Поставленная цель достигается изменением состава реакционной среды и переходом к хемилюминометрическому способу регистрации продуктов реакции с использованием в качестве индикаторного вещества люминола (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фтализиндиона). В состав реакционной смеси включены следующие компоненты: алкоголь-оксидаза, пероксидаза и люминол, растворенные в трис-HCI буфере, pH 8,2.
Как следует из калибровочного графика (рис. 1), чувствительность определения этанола предложенным хемилюминометрическим способом составляет 2х10-10 г в пробе. Это позволяет разбавлять исследуемые образцы в 102 105 раз и тем самым сводить к минимуму влияние примесей, мешающих определению. Время окисления спирта и, следовательно, протекания реакции в выбранных условиях составляет 60 сек. Коэффициент вариации не превышает 5%
Способ осуществляется следующим образом. В стеклянную цилиндрическую кювету вносят 0,5 мл реакционной смеси, содержащей алкоголь-оксидазу (1 ед. активности), пероксидазу (50 мкг препарата с RZ 3,0) и люминол в конечной концентрации 5х10-5 М, растворенные в 0,05 М трис-HCI буфере, pH 8,2. Кювету переносят в термостатируемый при 25oC кюветодержатель люминометра, и реакцию окисления инициируют добавлением 100 мкл исследуемого образца. Определив светосумму фотохимической реакции, с помощью калибровочного графика находят содержание этанола в 100 мкл образца, взятого на анализ.
Способ осуществляется следующим образом. В стеклянную цилиндрическую кювету вносят 0,5 мл реакционной смеси, содержащей алкоголь-оксидазу (1 ед. активности), пероксидазу (50 мкг препарата с RZ 3,0) и люминол в конечной концентрации 5х10-5 М, растворенные в 0,05 М трис-HCI буфере, pH 8,2. Кювету переносят в термостатируемый при 25oC кюветодержатель люминометра, и реакцию окисления инициируют добавлением 100 мкл исследуемого образца. Определив светосумму фотохимической реакции, с помощью калибровочного графика находят содержание этанола в 100 мкл образца, взятого на анализ.
Пример конкретного применения: определение динамики содержания этанола в выдыхаемом воздухе испытуемого, выпившего 25 мл 40% этилового спирта. Исследовали содержание этанола в пробах, полученных путем барбатирования выдыхаемого испытуемым воздуха (0,5 л) в стандартных условиях через дистиллированную воду, налитую в стеклянный сосуд, содержащий 10 мл жидкости. Полученную таким образом водную вытяжку разбавляли в 50 раз дистиллированной водой и брали 0,1 мл на определение этанола вышеописанным способом. Результаты определения этанола в выдыхаемом воздухе в динамике приведены в таблице 1.
Данные таблицы свидетельствуют о том, что предлагаемый способ пригоден для контроля содержания алкоголя и выдыхаемом воздухе даже в случае приема испытуемым минимальных доз алкоголя. Наиболее достоверно определяется этанол через 1 час после потребления спиртных напитков. Это соответствует ранее определенной динамике метаболизма этанола в организме человека.
Технико-экономическая эффективность способа. Предлагаемое изобретение (способ определения содержания этанола в биоматериале) характеризуется высокой чувствительностью, простотой методического воплощения и экспрессностью. Его применение позволит более чем в 1000 раз увеличить чувствительность определения этанола и в 30 раз ускорить анализ по сравнению с традиционно применяемыми колориметрическими ферментными методиками. Это обеспечивает возможность широкого применения способа в судебно-медицинской экспертизе алкоголизма, в работе наркологических диспансеров, а также в пищевой промышленности (производство низкоалкогольных напитков и винно-водочных изделий). В наркологических службах ГАИ способ сможет придти на смену полуколичественным тестам, дающим качественную оценку состояния алкогольного опьянения водителей, или сложным и долгим методам газоаналитических исследований содержания этанола. В винно-водочной промышленности предлагаемый способ может быть использован в мониторинге процессов сбраживания сырья.
Таким образом, использование предлагаемого изобретения в медицине и пищевой промышленности может существенно повысить качество экспериментальных оценок и значительно ускорить и удешевить анализы. ТТТ1
Claims (1)
- Способ определения содержания этанола в биологическом материале, включающий инкубацию исследуемого образца в среде, содержащей ферментную оксидазно-пероксидазную систему и индикаторное вещество с последующей регистрацией уровня продукта реакции, отличающийся тем, что в качестве образца используют водную вытяжку выдыхаемого воздуха, в качестве индикаторного вещества люминол в трис-HCl буфере, pН 8,2, а уровень продукта реакции оценивают по величине светосуммы хемилюминисценции.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5055511 RU2063035C1 (ru) | 1992-07-21 | 1992-07-21 | Способ определения содержания этанола в биологическом материале |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5055511 RU2063035C1 (ru) | 1992-07-21 | 1992-07-21 | Способ определения содержания этанола в биологическом материале |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2063035C1 true RU2063035C1 (ru) | 1996-06-27 |
Family
ID=21609993
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5055511 RU2063035C1 (ru) | 1992-07-21 | 1992-07-21 | Способ определения содержания этанола в биологическом материале |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2063035C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2198401C1 (ru) * | 2001-06-22 | 2003-02-10 | Российская медицинская академия последипломного образования МЗ РФ | Способ определения наличия этилового алкоголя в организме человека |
| RU2253860C2 (ru) * | 2003-08-21 | 2005-06-10 | Войсковая часть 35533 | Способ обнаружения тринитрата глицерина |
| RU2271537C1 (ru) * | 2004-07-14 | 2006-03-10 | Газиз Ибрагимович Авходиев | Способ определения прижизненной концентрации этанола у трупа, подвергшегося воздействию открытого пламени |
| RU2359036C1 (ru) * | 2007-09-26 | 2009-06-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный университет" (СПбГУ) | Способ интегральной экспресс-оценки загрязнения окружающей среды |
-
1992
- 1992-07-21 RU SU5055511 patent/RU2063035C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Clin. Chem., 1987, 33(4), 486-489. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2198401C1 (ru) * | 2001-06-22 | 2003-02-10 | Российская медицинская академия последипломного образования МЗ РФ | Способ определения наличия этилового алкоголя в организме человека |
| RU2253860C2 (ru) * | 2003-08-21 | 2005-06-10 | Войсковая часть 35533 | Способ обнаружения тринитрата глицерина |
| RU2271537C1 (ru) * | 2004-07-14 | 2006-03-10 | Газиз Ибрагимович Авходиев | Способ определения прижизненной концентрации этанола у трупа, подвергшегося воздействию открытого пламени |
| RU2359036C1 (ru) * | 2007-09-26 | 2009-06-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный университет" (СПбГУ) | Способ интегральной экспресс-оценки загрязнения окружающей среды |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5989845A (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| US5776719A (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| CN114113506B (zh) | 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 | |
| Marchand et al. | A HPLC fluorescence-based method for glutathione derivatives quantification in must and wine | |
| WO1989002929A1 (en) | Luminometric assay of cellular atp | |
| RU2063035C1 (ru) | Способ определения содержания этанола в биологическом материале | |
| US9410179B2 (en) | Diagnostic method for the determination of Helicobacter pylori | |
| Mulchandani et al. | Determination of sulfite in food products by an enzyme electrode | |
| Reljic et al. | New chromogen for assay of glucose in serum | |
| Francis | The determination of urea in wine–a review | |
| Navas et al. | Chemiluminescent methods in alcoholic beverage analysis | |
| AU616915B2 (en) | Process for counting, detecting and identifying mycoplasmas in general and urogenital mycoplasmas in particular and biological medium especially adapted to this purpose | |
| RU2476598C2 (ru) | Способ количественного определения дегидрогеназной активности микроорганизмов | |
| EP0138938A1 (en) | Method and device for detecting microorganisms | |
| Clark Jr et al. | Rapid electroenzymatic measurement of lactate in microsamples of spinal fluid | |
| Krug et al. | Enzyme-based fiber-optic device for the determination of total and free cholesterol | |
| JPH10174599A (ja) | ヒスタミンの定量方法及び定量装置 | |
| US6379915B1 (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| RU2180962C1 (ru) | Способ установления индивидуальной чувствительности к алкоголю в слюне | |
| SU1666956A1 (ru) | Способ определени концентрации этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе | |
| RU2797016C1 (ru) | Способ определения малонового диальдегида | |
| RU2488120C1 (ru) | Композиция реагентов для постановки ксантиноксидазной реакции | |
| RU2061045C1 (ru) | Способ количественного определения микробной обсемененности биологического жидкого образца | |
| EP0806671B1 (en) | Automated urinalysis system for detecting blood in urine | |
| FI77941C (fi) | Reagens foer bestaemning av glukos, kolesterol, urinsyra och hemoglobin. |