FI77941C - Reagens foer bestaemning av glukos, kolesterol, urinsyra och hemoglobin. - Google Patents
Reagens foer bestaemning av glukos, kolesterol, urinsyra och hemoglobin. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77941C FI77941C FI843428A FI843428A FI77941C FI 77941 C FI77941 C FI 77941C FI 843428 A FI843428 A FI 843428A FI 843428 A FI843428 A FI 843428A FI 77941 C FI77941 C FI 77941C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mmol
- glucose
- reagent
- cholesterol
- hemoglobin
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 25
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims description 8
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims description 8
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 24
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 23
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 23
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 claims description 15
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 claims description 15
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 12
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 9
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 7
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 2
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 claims description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 claims 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 claims 1
- 229910001380 potassium hypophosphite Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710171232 Peroxidase 18 Proteins 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- -1 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 2
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YFTNYASYRGXQAA-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1,5-dimethyl-2-phenylpyrazolidin-3-one Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1N(C(CC1=O)(N)C)C YFTNYASYRGXQAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229960005222 phenazone Drugs 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 229940058287 salicylic acid derivative anticestodals Drugs 0.000 description 1
- 150000003872 salicylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGUDRSADMCSYHV-UHFFFAOYSA-N trisodium borate hydrochloride Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].Cl.[O-]B([O-])[O-] PGUDRSADMCSYHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/50—Phenols; Naphthols; Catechols
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/96—4-Amino-antipyrine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
77941
Reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksi
Keksinnön kohteena on uusi reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksi, etenkin biologisissa kokeissa.
Glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin osoittamiseksi ja määrittämiseksi kvantitatiivisesti tunnetaan useita menetelmiä. Yksinkertaisen suoritettavuuden ja halpuuden johdosta ja mittausteknisistä syistä käytetään laajimmin kemialliseen värireaktioon perustuvia menetelmiä.
Yllä olevien aineiden mittaamiseksi käytetään yleensä niiden värireaktiota 1-fenyyli-2,3-dimetyyli-3-amino-pyratsolin-5-onin (edelleen: 4-aminofenatsoniksi nimitetty), fenolin, fenoli johdannaisten ja salisyylihappojohdannaisten kanssa. Fenoli-4-aminofenatsonin kanssa tapahtuvaa reaktiota käytti P. Trinder (Ann. Clin. Biochem. 6, 24 (1969)) ensimmäisen kerran verensokerin määrittämiseksi. Tämän menetelmän lääketieteellinen tärkeys on niin suuri, että tähän tarkoitukseen on suunniteltu lukuisia samankaltaisia menetelmiä.
Näiden menetelmien yleisenä haittana on se, että mittausomi-naiskäyrä ei ole lineaarinen ja muodostunut väri ei ole riittävän stabiili tai vastaavasti se on valonherkkä (ks. siteeratun artikkelin taulukko 1 ja esillä olevan patentti-.. hakemuksen taulukko 3)·
Keksinnön tehtävänä on saada aikaan uusi, tunnettujen menetelmien haitat eliminoiva järjestelmä.
Keksintö perustuu siihen yllättävään tietoon, että mikäli värillisen tuotteen muodostamiseen käytetään 4-aminofenat-sonia ja tymolia tapahtuu optimaalisissa olosuhteissa erinomainen, erittäin hyvin käyttökelpoinen (stabiili, ei-valon-herkkä, lineaarinen ominaiskäyrä) ja erittäin hyvän herkkyyden omaava fotometrinen reaktio.
2 77941
Keksinnön kohteena on reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksi, edullisesti biologisissa kokeissa, joka reagenssi sisältää 4-aminofenat-sonia, sinänsä tunnettua puskuriliuosta, stabilointiainetta, detergenttiä ja mahdollisesti entsyymikatalysaattoria, jolle reagenssille on tunnusomaista se, että se sisältää reagens-sina tyraolia (para-isopropyyli-meta-kresolia).
Keksinnön mukaisten reagenssien erään edullisen suoritusmuodon mukaisesti tymoli liuotetaan alempaan alkoholiin - mieluummin etanoliin; muut kemialliset aineet liuotetaan tislattuun veteen ja alkoholinen ja vesipitoinen liuos sekoitetaan keskenään 1:4-suhteessa. Näin valmistettu reagenssi sisältää tymolia 2,5±0,2 moolia/l:n konsentraatiossa.
Muiden kemiallisten aineiden konsentraatio on reagenssissa seuraava:
Fosfaattipuskuria 0,08 ± 0,02 moolia/1 4-aminofenatsonia 0,8 ± 0,2 mmoolia/1
Natriumatsidia 9(Ö5 t 0,1 mmoolia/1
Etanolia 330,0 ± 20 mmoolia/1
Keksinnön mukaista reagenssia käytetään seuraavasti: tymoli ja 4-aminofenatsoni saatetaan määritettävien aineiden (glukoosi, kolesteroli, virtsahappo) kanssa kosketuksiin sopivissa konsentraatioissa puskuroidussa väliaineessa. Siten muodostuu spesifisten entsymaattisten reaktioiden johdosta vetyperoksidia. Muodostuneesta vetyperoksidista vapautetaan peroksidaasin avulla kehittyvää happea, joka saa aikaan 4-(2'isopropyyli-5'-metyyli-11,4'-bentsokinoni-monoimino)-fenatsonin (so. värillisen tuotteen). Niiden aineiden kohdalla, jotka pystyvät katalysoimaan vetyperoksidin hajaantumista (esim. hemoglobiini), ei tarvita mitään täydentävää entsymaattista reaktiota ja reaktioseokseen lisätään vain vetyperoksidia, värinmuodostavaa 4-aminofenatsonia ja tymolia.
Keksinnön mukaisella uudella reagenssilla on useita etuja, jotka voidaan esittää seuraavasti tiivistettyinä: 3 77941 a) Värireaktio tapahtuu hyvin määritellyllä pH-alueella (pH = 7,0 - 8,0 - mieluummin 7,5).
b) Muodostuneen värillisen tuotteen valon absorption maksimi on 465 - 480 nm:n aallonpituusalueella; tästä syystä on tarkoituksenmukaista suorittaa fotometriset mittaukset tällä alueella - etenkin 475 nm:ssä.
c) On erittäin tärkeää, että fotometrisesti osoitettava väri muodostuu suhteellisen nopeasti. Todettiin, että stabiili väri muodostuu huoneenlämpötilassa 25 minuutin kuluessa ja 37°C:ssa 15 minuutin kuluessa.
d) Optimaalisen pH-arvon säätämiseksi tulevat kysymykseen erilaiset puskuriaineet (kuten tris-fosfaatti, Na2HP0ij - KHgPOlj, K2HP0jj - KHgPOjj ja natriumboraatti - suolahappo ).
e) On onnistuttu määrittämään suotuisa tymolikonsentraa- . . tio tai vastaavasti sen liuotin. On tarkoituksenmu kaista liuottaa tymoli metanoliin, etanoliin tai isop-ropanoliin - etenkin etanoliin. Tymolikonsentraation optimointi on esitetty taulukossa 1; optimaalinen arvo V on 2,5 mmoolia/1. Mittaukset suoritetaan esitetyt kon- sentraatiot (11,10 ja 27,75 mmoolia) omaavissa glukoosi liuoksessa.
* 77941
Taulukko 1
Tymoli mmoolia/1 1,330 2,000 2,500 3,000 4,000 5,000
Ekstinktio 11.1 mmoolia/1 0,330 0,365 0,370 0,370 0,370 0,370
Ekstinktio 27.75 mmoolia/1 0,750 0,860 0,870 0,870 0,870 0,870 Nähdään, että molempien glukoosiliuosten tapauksessa korkein, ei enää kasvava ekstinktio (värinvoimakkuus) saadaan 2,5 mmoolia/l:n tymolikonsentraatiossa.
f) 4-aminofenatsonin konsentraation optimointi on esitetty taulukossa 2. Mittaukset suoritetaan myös tässä tapauksessa glukoosiliuoksella ja tymoliliuoksella, jonka konsentraatio on 2,5 mmoolia/1.
Taulukko 2 4-aminofenatsoni mmoolia/1 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000
Ekstinktio 11.1 mmoolia/1 0,350 0,370 0,370 0,370 0,370
Ekstinktio 27.75 mmoolia/1 0,800 0,860 0,870 0,870 0,871 Tämän taulukon mukaisesti saadaan maksimaalinen, ei enää muuttuva ekstinktio 0,600 mmoolia/l:n konsentraa-tiossa. Varmuuden vuoksi pidetään 0,800 mmoolia/l:n konsentraatiota optimaalisena.
5 77941 g) Glukoosin, kolesterolin ja virtsahapon mittaamiseksi tarvittava peroksidikonsentraatlo optimoidaan samoin (ks. taulukko 3). Optimaaliseksi konsentraatioksi on osoittautunut 15 E/ml:n konsentraatio. (1 E = 1 kansainvälinen yksikkö; määrä, joka katalysoi 1 mmoolia substraattia 1 minuutin kuluessa). Käytetty peroksi-daasi ei saa sisältää muita entsyymiepäpuhtauksia häiritsevissä konsentraatioissa.
Taulukko 3
Peroksidaasi- aktiviteetti 8E/ml 10E/ml 12E/ml UE/ml 15E/ml 17E/ml
Ekstinktio 27,75 mmoolia/1 0,820 0,850 0,865 0,870 0,870 0,870
Yllä olevasta taulukosta nähdään, että optimaalinen glukoosin kanssa muodostuneen värin voimakkuus (ekstinktio) saavutetaan jo 14 E/ml:n entsyymiaktivi-teetissä; varmuuden vuoksi käytetään 15 E/ml:n aktiviteettiä.
h) Kolesterolin määrityksessä käytetään detergenttiä liu-kenevuuden parantamiseksi. Tätä tarkoitusta varten voidaan käyttää 9-lauryylieetteri-polydekanolia (Sigma, USA), Triton X-100:a (oktyylifenolipolyeteeni-glykolieetteri, LOBA, Itävalta) tai Brij 35:ä (polyok-sietyleenilauryylieetteri, BDH, Englanti).
Yllä olevien aineiden optimaalinen konsentraatioalue on 0,4 - 1,2$.
Keksinnön mukaisten reagenssien käytännön soveltuvuutta havainnollistetaan seuraavilla menetelmillä.
6 77941 1. Kalibroinneilla saadut kokemukset
Glukoosin osoitettavuus ja kvantitatiivinen mitattavuus määritetään 2,775 - 33,300 mmoolia/l:n konsentraatioalueella.
Tiedot on koottu yhteen osittain taulukossa 4 ja osittain kuvassa 1 (matemaattisen tulkinnan mukaan). Yllä olevista tiedoista nähdään, että mittausominaiskäyrä - määrätyllä alueella - on lineaarinen. Värireaktio tapahtuu täydellisesti ja glukoosi voidaan mitata erinomaisesti.
Taulukko 4
mmoolia/1 2,775 5,550 8,525 11,100 13,675 16,650 22,200 27,750 33,5X
n 335 3 3 3333- y 0,0950 0,1833 0,2733 0,3685 0,4616 0,5500 0,7300 0,9135 10210· ϊ 0,0951 0,18600,27690,3679 0,4588 0,5497 0,7316 0,9135 1£953 a% -0,10 -1,45 +0,50 +0,10 +0,61 +0,05 -0,22 -0,02 +2,32 ?R = 246 695, Fl = 1,20746} /P.G.: 6; 16/ ?~ 0,10 ~~
Taulukossa 4 käytetään seuraavia lyhennyksiä: x = punnitun glukoosin konsentraatio n = rinnakkaisten mittausten määrä y = mitattujen ekstinktioiden keskimääräinen arvo 7 = kalibrointisuoran yhtälöstä lasketut ekstinktiot di = mitattujen ja .laskettujen ekstinktioiden välinen pro sentuaalinen erotus (laskettu = 100¾)
Fr s regression koe = lineaarisuuden MF"-koe F.G. = lineaarisuuden vapausaste P = lineaarisuuden todennäköisyys; koska tämä arvo on suurempi kuin 10i, käyrä ei poikkea suorasta merkittävästi.
7 77941 2. Vertailumenetelmän kanssa suoritetulla vertai lulla saadut kokemukset
Vertailumenetelmänä toimii kansainvälisesti tunnustettu Bo-ehringer Hexokinase UV-testi. Sokeripitoisena liuoksena käytetään tässä tapauksessa 45 verikoetta (ihmisiltä, ilman valintaa). Kuvasta 2 nähdään, että näiden kahden menetelmän mukaisesti saatujen tulosten välillä ei ole eroja, koska korrealaatiokerroin (r = +0,9971) tulee aivan lähelle teoreettista arvoa 1,000 ja regressiosuoran jyrkkyys poikkeaa teoreettisesti arvosta 1,000 vain 0,4¾.
3. Menetelmän herkkyys, toistettavuus ja vääristymä määritetään saatujen mittaustulosten perusteella. Nämä staattiset laskelmat 4vK>ttavat seuraav-at tulokse-t: herkkyys: ± 0,17 mmoolia/1 (glukoosin suhteen) tarkkuus: ± 0,09 mmoolia/1 (glukoosin suhteen) vääristymä: ± 0,35¾ (glukoosin suhteen).
Keksinnön mukaisella reagenssilla on yllä mainittujen lisäksi myös muita olennaisia etuja: reagenssi sopii toisaalta ihmisten ja eläinten biologisissa kokeissa (esim. veri, virtsa, neste) esiintyvän glukoosin, kolesterolin, virtsaha-pon tai vastaavasti hemoglobiinin (verenpuna) määrittämiseksi kvantitatiivisesti ja toisaalta glukoosipitoisuuden määrittämiseksi ihmisille tarkoitetuissa juomissa (esim. alko-holijuomat, mehut, virkistys juomat) tai vastaavasti muiden, glukoosi-, kolesteroli- tai virtsahappopitoisten liuosten mittaamiseksi.
On korostettava, että keksinnön mukainen reagenssi on selvästi parempi kuin tunnetut testit. Lukumääräisestä vertailusta nähdään, että keksinnön mukaisen testimenetelmän mukaisesti väri pysyy 240 minuuttia täysin muuttumattomana, sitä vastoin tunnettujen menetelmien mukaisesti voidaan lyhyen maksimivaiheen jälkeen (45 minuuttia) todeta yhtäjaksoisesti vähenevä värinvoimakkuus (kuvio 3)· 8 77941
Keksinnön mukainen reagenssi ja sen käyttö esitetään seuraa-vissa esimerkeissä rajoittamatta suojan laajuutta näihin esimerkkeihin.
Esimerkki 1
Glukoosin määritys veren seerumissa A-liuos: 0,1 moolia/l:n fosfaattipuskuri-liuokseen (pH = 7,5; Na2HP0ij*2H20 ja KHgPOjj) liuotetaan seuraavat aineet: glukoosidaasia: 12,5U/ml peroksidaasia: 18 U/ml 4-aminofenatsonia: 1,0 ramoolia/1 natriumatsidia 12,3 mmoolia/1 B-liuos: 12,5 mmoolia/1 tymolia 9öt:sessa etanolissa (tislatun veden kanssa).
Reagenssia valmistetaan niin, että A- ja B-liuos sekoitetaan keskenään 4:1-suhteessa.
Standardisointi suoritetaan 11,1 mmoolia/l:n glukoosiliuok-sella (liuotettuna kylmänä kyllästettyyn bentsoehappoon).
Määritys: Koeputkiin punnitaan kulloinkin 3,0 ml reagenssia, 0,02 ml standardia tai vastaavasti muihin koeputkiin 0,02 ml verenseerumia.
Aineet sekoitetaan ja niiden annetaan seistä (huoneenlämpö-tilassa 30 minuuttia tai 37°C:ssa 15 minuuttia). Viimeksi mainitussa tapauksessa verrataan 10-minuuttisen jäähdytyksen jälkeen muodostunutta väriä sokkokokeen kanssa fotometrises-ti (kyvettipaksuus 1 cm; aallonpituus 475 nm).
Veren seerumikonsentraatio (glukoosissa mmoolia/1) lasketaan seuraavan yhtälön mukaisesti = kokeen ekstinktio vakio ekstinktio x
Menetelmä on 0 - 30 mmoolia/l:n alueella lineaarinen.
9 77941
Esimerkki 2
Kolesterolin kokonaispitoisuuden määritys veren seerumissa A-liuos: Fosfaattipuskuriin (0,1 moolia/1; pH 7,5) liuotetaan seuraavat aineet: peroksidaasia 18 U/ml kolesteroliesteraasia 12,5 u'/ml kolesterolioksidaasia 6 u/ml 4-aminofenatsonia 1,0 mmoolia/1 natriumatsidia 12,3 mmoolia/1 9-lauryylieetteriä 5,0 g/1 tai
Triton X-100:a 5 g/1 tai
Brij-35:ä 5 g/1 B-liuos: 12,5 mmoolia/1 tymolia (96t:sessa etanolissa).
Reagenssi valmistetaan niin, että liuokset A ja B sekoitetaan keskenään ennen käyttöä 4:1-suhteessa. Standardisointi suoritetaan etanoliin liuotetulla kolesterolistandardilla (5,2 mmoolia/1).
Määritys: Kulloinkin reagenssin 2,0 ml:aa kohden lisätään 0,02 ml standardiliuosta tai vastaavasti seerumia. Seosta sekoitetaan ja sen annetaan seistä huoneenlämpötilassa 30 minuuttia tai 37°C:ssa 15 minuuttia. 10-minuuttisen jäähdytyksen jälkeen muodostunutta väriä verrataan fotometrisesti sokkokokeen kanssa (kyvettipaksuus 1 cm; aallonpituus 575 nm).
Laskeminen;: Veren seerumin kolesterolikonsentraatio (mmoo-lia/l)= kokeen ekstinktio vakio ekstinktio X ’
Menetelmä on 0 - 13 mmoolia/l:n alueella lineaarinen.
10 77941
Esimerkki 3
Virtsahapon määritys veren seerumissa A-liuos: Fosfaattipuskurissa (0,1 moolia/1; pH 7,5) liuotetaan seuraavat aineet: peroksidaasia 18 U/ml urikaasia 6 U/ml 4-aminofenatsonia 1,0 mmoolia/1 natriumatsidia 12,3 mmoolia/1 B-liuos: 12,5 mmoolia/1 tymolia (96t:sessa etanolissa).
Reagenssi valmistetaan niin, että liuokset A ja B sekoitetaan keskenään 4:1-suhteessa.
Standardisointi suoritetaan virtsahappostandardilla (595 moolia/1).
Määritys: Kulloinkin reagenssin 0,2 ml:aa kohden lisätään 0,2 ml standardia tai vastaavasti seeruminäytettä. Seosta sekoitetaan ja sen annetaan seistä joko 60 minuuttia huoneenlämpötilassa tai 30 minuuttia 37°C:ssa. Muodostunutta väriä verrataan sokkokokeeseen fotometrisesti (kyvettipak-suus 1 cm; aallonpituus 475 nm).
Laskeminen: veren seerumin virtsahappokonsentraatio (ymoo-lia/1)= kokeen ekstinktio vakio ekstinktio x
Menetelmä on 0 - 900 ymoolia/l:n alueella lineaarinen.
Claims (3)
1. Reagenssi glukoosin, kolesterolin, virtsahapon ja hemoglobiinin määrittämiseksi, edullisesti biologisissa kokeissa, joka reagenssi sisältää 4-aminofenatsonia ja sinänsä tunnettua puskuriliuosta, sinänsä tunnettua stabiloint-ainetta, sinänsä tunnettua detergenttiä ja mahdollisesti entsyymikatalysaattoria, tunnettu siitä, että se sisältää rea^enssina tymolia 1para-isopropyyli-meta-kresolia).
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen reagenssi, tun nettu siitä, että se sisältää tymolia, joka on liuotettu alempaan alkanoliin - edullisesti etanoliin, - 2,30 - 2,70 mmoolia/l:n - edullisesti 2,5 mmoolia/l:n konsentraati-ossa.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 0,6 - 1,0 mmoolia/1 - edullisesti 0,8 mmoolia/1 - 4-aminofenatsonia, 0,06 - 0,1 moolia/1 puskuriliuosta, edullisesti 0,08 moo-lia/1 Na2HP0jj-KH2P0ij:ä, 9,75 - 9,95 mmoolia/1 - edullisesti 9,85 mmoolia/1 natrium-atsidia stabilisaattorina, 310 - 350 mmoolia/1 - edullisesti 330 mmoolia/1 - etanolia, 0,2 - 1,0 $ - edullisesti 0,4 % polyoksietyleenieetteri-tyyppistä detergenttiä, 8-12 u/ml - edullisesti 10 U/ml - glukoosioksidaasia ja 13 - 17 U/ml - edullisesti 15 U/ml peroksidaasia tai 8-12 U/ml - edullisesti 10 U/ml - kolesteroliesteraasia ja 4-6 U/ml - edullisesti 5 U/ml - kolesterolioksidaasia ja 13 - 17 1ί/®1 - edullisesti 15 U/ml - peroksidaasia tai 4-6 U/ml - edullisesti 5 U/ml - urikaasia ja 13 - 17 U/ml - edullisesti 15 U/ml - peroksidaasia.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU305983 | 1983-09-02 | ||
| HU833059A HU188953B (en) | 1983-09-02 | 1983-09-02 | Reagent for determination of glucose, colestherin and carbamide |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI843428A0 FI843428A0 (fi) | 1984-08-31 |
| FI843428L FI843428L (fi) | 1985-03-03 |
| FI77941B FI77941B (fi) | 1989-01-31 |
| FI77941C true FI77941C (fi) | 1989-05-10 |
Family
ID=10962331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI843428A FI77941C (fi) | 1983-09-02 | 1984-08-31 | Reagens foer bestaemning av glukos, kolesterol, urinsyra och hemoglobin. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| CH (1) | CH669673A5 (fi) |
| CS (1) | CS254978B2 (fi) |
| DD (1) | DD232558A5 (fi) |
| DE (1) | DE3432348A1 (fi) |
| FI (1) | FI77941C (fi) |
| HU (1) | HU188953B (fi) |
| IN (1) | IN163164B (fi) |
| PL (1) | PL141984B1 (fi) |
| SU (1) | SU1505444A3 (fi) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0218083A1 (en) * | 1985-09-03 | 1987-04-15 | Abbott Laboratories | Stabilized cholesterol reagent and method for determining total cholesterol using the reagent |
-
1983
- 1983-09-02 HU HU833059A patent/HU188953B/hu not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-31 PL PL1984249428A patent/PL141984B1/pl unknown
- 1984-08-31 DD DD84266856A patent/DD232558A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 FI FI843428A patent/FI77941C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 SU SU843786908A patent/SU1505444A3/ru active
- 1984-08-31 CS CS846580A patent/CS254978B2/cs unknown
- 1984-09-03 DE DE19843432348 patent/DE3432348A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-02-18 IN IN134/DEL/85A patent/IN163164B/en unknown
- 1985-05-08 CH CH1983/85A patent/CH669673A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL249428A1 (en) | 1985-05-21 |
| FI843428A0 (fi) | 1984-08-31 |
| PL141984B1 (en) | 1987-09-30 |
| CH669673A5 (fi) | 1989-03-31 |
| DE3432348A1 (de) | 1985-03-21 |
| FI843428L (fi) | 1985-03-03 |
| IN163164B (fi) | 1988-08-20 |
| SU1505444A3 (ru) | 1989-08-30 |
| DD232558A5 (de) | 1986-01-29 |
| CS658084A2 (en) | 1987-07-16 |
| CS254978B2 (en) | 1988-02-15 |
| HU188953B (en) | 1986-05-28 |
| FI77941B (fi) | 1989-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6242207B1 (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| US5776719A (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| Martinez-Pérez et al. | A reagent less fluorescent sol–gel biosensor for uric acid detection in biological fluids | |
| US5824491A (en) | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound | |
| CA1157749A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| US8883439B2 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| US5516700A (en) | Automated urinalysis method | |
| George et al. | Improved Ellman procedure for erythrocyte cholinesterase. | |
| JPS5948099A (ja) | アスコルビン酸塩耐性広濃度域用グルコ−ス試験組成物、試験具および試験方法 | |
| EP0036563B1 (en) | Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device | |
| CA2559908A1 (en) | Method of stabilizing oxidizable color-assuming reagent | |
| Trivedi et al. | New ultraviolet (340 nm) method for assay of uric acid in serum or plasma. | |
| Reljic et al. | New chromogen for assay of glucose in serum | |
| FI77941C (fi) | Reagens foer bestaemning av glukos, kolesterol, urinsyra och hemoglobin. | |
| US5776780A (en) | Method for quantitatively measuring white blood cells esterase activity in urine | |
| GB2049180A (en) | Bilirubin-resistant determination of uric acid | |
| US6379915B1 (en) | Diagnostic compositions and devices utilizing same | |
| Kayamori et al. | Enzymatic method for assaying uric acid in serum with a new tetrazolium salt produces water-soluble formazan dye | |
| US4894472A (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| US6030802A (en) | Liquid reagent set for L-lactate determination | |
| JPH0687798B2 (ja) | 体液中のカルシウム測定方法 | |
| EP0240964B1 (en) | Reagent for the enzymatic determination of primary c1-c4 alcohols and related method | |
| AU595993B2 (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| Felton et al. | Design of glucose analysis suitable for incorporation into a microprocessor controlled regulator of blood glucose in the newborn | |
| JPS6339599A (ja) | 過酸化物量又はペルオキシダ−ゼ様作用を示す関与物の活性の測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: REANAL FINOMVEGYSZERGYAR |