RU2053773C1

RU2053773C1 - Method of microflora inhibition

Info

Publication number: RU2053773C1
Application number: RU92014914A
Authority: RU
Inventors: С.Б. Авакимян; Ж.К. Лопунова; М.Ш. Манувахова; Е.А. Петибская
Original assignee: Авакимян Сергей Борисович
Priority date: 1992-12-25
Filing date: 1992-12-25
Publication date: 1996-02-10

Abstract

FIELD: microbiology. SUBSTANCE: method involves the treatment of antibiotic-resistant microorganisms with silver solution (2.5-5 mg/l) being successively or simultaneously with antibiotics. Silver solution is obtained by electrolytic method and brought about to isotonicity by sodium chloride addition. The following antibiotics were used: ampicillin, kanamycin, nalidixic acid (nevigramon), rifampicin, tetracycline, chloramphenicol. Invention ensures to decrease viability of cultures by 100 and 66 times at silver concentration 5 and 2.5 mg/l, respectively. EFFECT: increased sensitivity of antibiotic-resistant microbial strains to antibiotics. 2 tbl

Description

Изобретение относится к медицине и микробиологии и может быть использовано, например, при лечении гнойных хирургических инфекций и их осложнений, вызванных антибиотикоустойчивыми штаммами микроорганизмов. The invention relates to medicine and microbiology and can be used, for example, in the treatment of purulent surgical infections and their complications caused by antibiotic-resistant strains of microorganisms.

В современной антибактериальной терапии ведущее место принадлежит антибиотикам. Опыт же использования последних свидетельствует о том, что в ходе их широкого применения развивается антибиотикорезистентность микрофлоры и даже антибиотикозависимость ее, что естественно приводит к потере данного антибиотика как противомикробного препарата. При этом приспосабливаемость микрофлоры к антибиотикам настолько высока, что внедрение новых антибиотиков едва поспевает за нуждами медицины. В большинстве случаев устойчивость обусловлена наличием у микроорганизмов особых генетических детерминант-R-плазмид, способных передаваться между таксономически далекими бактериями, придавая им резистентность к отдельным антибиотика и их комбинациям. In modern antibiotic therapy, the leading place belongs to antibiotics. The experience of using the latter indicates that in the course of their widespread use, antibiotic resistance of microflora and even its antibiotic dependence develops, which naturally leads to the loss of this antibiotic as an antimicrobial drug. Moreover, the adaptability of microflora to antibiotics is so high that the introduction of new antibiotics can hardly keep up with the needs of medicine. In most cases, resistance is due to the presence of special genetic determinants of R plasmids in microorganisms that can be transmitted between taxonomically distant bacteria, giving them resistance to individual antibiotics and their combinations.

Изобретение преодолевает антибиотиковую устойчивость микрофлоры и повышает эффективность использования имеющегося арсенала антибиотиков. При совместном применении антибиотиков и препарата серебра, полученного путем электролиза в дистиллированной воде серебра 99,9 чистоты в концентрации 5-10 мг/л с добавлением к последнему перед употреблением хлористого натрия до концентрации 0,89% (до изотоничности). Электролизное серебро применяют в виде аппликаций, орошений, внутривенно, введением в полости. The invention overcomes the antibiotic resistance of microflora and increases the efficiency of using the existing arsenal of antibiotics. With the combined use of antibiotics and a silver preparation obtained by electrolysis in distilled water, 99.9 purity silver in a concentration of 5-10 mg / l with the addition of sodium chloride to the latter to a concentration of 0.89% (until isotonic). Electrolytic silver is used in the form of applications, irrigation, intravenously, by introduction into the cavity.

Для апробации способа подавления микрофлоры использованы штаммы кишечной палочки, обладающие хромосомной или плазмидной устойчивостью к антибиотикам, перечисленным в таблице 1. To test the method of suppressing microflora, Escherichia coli strains having chromosomal or plasmid resistance to antibiotics listed in Table 1 were used.

Для доказательства достоверности способ осуществлен в двух вариантах. To prove the reliability of the method is carried out in two versions.

П р и м е р 1. Использовали штаммы Е.Соli К12J 53 с плазмидой R 124, контролирующей устойчивость к тетрациклину, культуру выращивали в МБП в течение 18 ч при 37^оС, разводили свежим МПБ и культивировали 3 ч при 37^оС. В пробирки, содержащие раствор электролизного серебра в концентрациях 5 и 2,5 мг/л (разведения готовили в дистиллированной воде или в физиологическом растворе непосредственно перед употреблением), добавляли тетрациклин до конечной концентрации 50 мгк/мл и исследуемую культуру до конечной концентрации порядка 10 · 7 клеток в 1 мл. При этом объем культуры составлял не более 1/20 суммарного объема, чтобы обеспечить необходимое разведение бульона, компоненты которого способны связывать серебро. После инкубации в течение 2 ч при 37^оС высеяли по 0,1 мл смеси из каждой пробирки на МПА для подсчета выживших колоний. При необходимости готовят ряд 10-кратных разведений смеси.EXAMPLE Example 1. E. coli strains were used with the plasmid K12J 53 R 124, controlling resistance to tetracycline, the culture was grown in the IBE for 18 hours at 37 ^{° C,} diluted with fresh BCH and cultured for 3 hours at 37 ° ^C. In tubes containing a solution of electrolytic silver in concentrations of 5 and 2.5 mg / l (dilutions were prepared in distilled water or in physiological saline immediately before use), tetracycline was added to a final concentration of 50 μg / ml and the test culture to a final concentration of about 10 7 cells in 1 ml. At the same time, the culture volume was not more than 1/20 of the total volume to provide the necessary dilution of the broth, the components of which are capable of binding silver. After incubation for 2 hours at 37 ^C. 0.1 ml seeded mixture from each tube for counting on MPA surviving colonies. If necessary, prepare a series of 10-fold dilutions of the mixture.

Контрольными служат пробирки, в которых находится каждый из действующих на клетки компонентов в отдельности (т.е. либо электролизный раствор серебра, либо раствор антибиотика заменяют физиологическим раствором). Общим контролем служит культура без добавок серебра и антибиотиков. Control tubes are those in which each of the components acting on the cells is located individually (i.e., either an silver electrolysis solution or an antibiotic solution is replaced with physiological saline). A common control is a culture without the addition of silver and antibiotics.

В результате проведенной работы установлено следующее: в пробирке, где находилась культура с физиологическим раствором, концентрация клеток составила 1 · 10 7 в 1 мл. При инкубации штамма с электролизным серебром в концентрации 2,5 мг/л выжило 6 · 10 5 клеток, при концентрации 5 мг/л 1 · 10 5 клеток. Антибиотик в отдельности не повлиял на жизнеспособность клеток. При инкубировании клеток в присутствии серебра в концентрации 5 мг/л и антибиотика выжило 1 · 10 3 клеток в 1 мл; концентрации серебра 2,5 мг/л и антибиотика 9 · 10 3 клеток в 1 мл. As a result of the work carried out, the following was established: in a test tube where the culture with saline was located, the cell concentration was 1 · 10 7 in 1 ml. When the strain was incubated with electrolytic silver at a concentration of 2.5 mg / l, 6 · 10 5 cells survived, at a concentration of 5 mg / l, 1 · 10 5 cells. The antibiotic alone did not affect cell viability. When cells were incubated in the presence of silver at a concentration of 5 mg / l and an antibiotic, 1 · 10 3 cells in 1 ml survived; silver concentrations of 2.5 mg / l and antibiotic 9 · 10 3 cells in 1 ml

Таким образом, сочетаное действие антибактериальных препаратов обеспечило снижение выживаемости в 100 раз (на 2 порядка) и 66 раз для концентраций серебра 5 и 2,5 мг/л соответственно. Thus, the combined effect of antibacterial drugs ensured a 100-fold (2-fold) and 66-fold reduction in survival for silver concentrations of 5 and 2.5 mg / L, respectively.

П р и м е р 2. Использовали штамм Е.сoli К12 с плазмидой R387, контролирующей устойчивость к стрептомицину и хлорамфениколу. Культуру выращивали в МПБ при 37^оС в течение 18 ч, разводили свежим МПБ и культивировали 3 ч при 37^оС. В пробирки, содержащие раствор электролизного серебра в концентрациях 5 и 2,5 мг/л (разведения готовили в дистиллированной воде или физиологическом растворе перед употреблением) вносили культуру до конечной концентрации 10 7 клеток в 1 мл. После инкубации в течение 2 ч при 37^оС из каждой пробирки высевали по 0,1 мл смеси на МПА и МПА со стрептомицином или хлорамфениколом в концентрациях 50 и 100 мкг/мл. В контроле культуру инкубировали с физиологическим раствором. По разнице числа колоний, выросших на чашках с антибиотиками и на МПА, судили об эффективности действия антибиотика на обработанную серебром культуру, о чем можно судить по результатам, представленным в табл. 2: cнижение числа выживших клеток в 10-1000 раз, т.е. на 1-3 порядка в зависимости от концентрации антибиотика и серебра.PRI me R 2. Used the strain E. coli K12 with plasmid R387, controlling resistance to streptomycin and chloramphenicol. The culture was grown in the BCH at ³⁷ ° C for 18 h, diluted with fresh BCH and cultured for 3 hours at 37 ^C. The tubes containing the electrolytic solution of silver in concentrations of 5 and 2.5 mg / l (dilutions were prepared in distilled water or in physiological solution before use) brought the culture to a final concentration of 10 7 cells in 1 ml After incubation for 2 hours at 37 ^{° C} of each tube were plated at 0.1 ml to IPA and IPA with streptomycin or chloramphenicol at concentrations of 50 and 100 .mu.g / ml. In the control, the culture was incubated with saline. By the difference in the number of colonies grown on antibiotic plates and on MPA, we judged the effectiveness of the antibiotic on the silver-treated culture, which can be judged by the results presented in table. 2: reduction in the number of surviving cells by 10-1000 times, i.e. 1-3 orders of magnitude depending on the concentration of antibiotic and silver.

В связи с тем, что Е.соli является более устойчивым микроорганизмом к действию электролизного серебра, то эффект препарата в тех же концентрациях на других представителях семейств Энтеробактерий (Salmonella, Shigilla, Proteus) и на Гр+Флору (Staph. aureus) будет не только идентичным, но и более выраженным. Due to the fact that E. coli is a more resistant microorganism to the action of electrolytic silver, the effect of the drug in the same concentrations on other representatives of the Enterobacteriaceae family (Salmonella, Shigilla, Proteus) and on Gr + Flora (Staph. Aureus) will not only identical, but also more pronounced.

Этот же вывод позволяет сделать и общность механизма воздействия серебра на бактериальную клетку и схожесть строения внешней оболочки бактерий (особенно семейства Энтеробактерий). The same conclusion allows us to draw a common mechanism of silver exposure to a bacterial cell and the similarity of the structure of the outer shell of bacteria (especially the Enterobacteriaceae family).

Принципиальных различий в эффекте при применении электролизного серебра в описанных вариантах не было. There were no fundamental differences in the effect when using silver electrolysis in the described variants.

Для определения эффективности препаратов серебра в концентрациях 2,5-5 мг/л in vivo проводились опыты на собаках. In vivo, experiments were conducted on dogs to determine the effectiveness of silver preparations in concentrations of 2.5-5 mg / L.

П р и м е р 3. Брали три группы собак по пять особей каждая. Всем особям по методике Буянова В. М. с соавторами (Вестник хирургии, 1989 г. N 6, с. 28-31) интерперитониально в пять точек живота вводили по 0,8 мл смеси/1 мл кишечного содержимого, 5 мл желчи и 1 мл крови/и таким образом воспроизводили острый гнойный панкреатит. PRI me R 3. Three groups of dogs were taken, five individuals each. To all individuals according to the method of Buyanova V.M. et al (Herald of Surgery, 1989 N 6, pp. 28-31), 0.8 ml of the mixture / 1 ml of intestinal contents, 5 ml of bile and 1 ml of blood / and thus reproduced acute purulent pancreatitis.

Через 1 сутки группе животных вводили внутрибрюшинно антибиотик пенициллин 50 тыс. бд/кг веса 4 раза в сутки на физиологическом растворе. Второй группе животных электролизный раствор серебра на физиологическом растворе 5 мг/л из расчета 15 мл/кг веса и антибиотик в той же дозе, как и в первой группе, третья служила контролем им вводился физиологический раствор. After 1 day, a group of animals was injected intraperitoneally with the antibiotic penicillin 50 thousand bd / kg of weight 4 times a day in saline. The second group of animals was electrolyzed silver solution in physiological saline 5 mg / l at the rate of 15 ml / kg weight and an antibiotic in the same dose as in the first group, the third served as a control; they were injected with physiological saline.

В контрольной группе погибло четыре из пяти животных, в группе, где применялся один антибиотик, из пяти погибло три особи, а в группе, где совместно вводили электролизный раствор серебра 5 мг/л, погибло одно животное. In the control group, four out of five animals died, in the group where one antibiotic was used, three out of five died, and in the group where 5 mg / L silver electrolysis was administered together, one animal died.

Таким образом можно сделать вывод, что концентрация 5 мг/л электролизного серебра эффективна в применении in vivo и его раствор усиливает действие антибиотика. Thus, we can conclude that the concentration of 5 mg / l of electrolysis silver is effective in vivo and its solution enhances the effect of the antibiotic.

П р и м е р 4. Больному 62 лет по поводу опухолевого процесса произведена субтотальная проксимальная резекция желудка и резекция хвоста поджелудочной железы. Послеоперационный период осложнился формированием абсцесса брюшной полости и развитием септического состояния. Антибиотикотерапия, включая ампициллин, кефзол, пенициллин, цепорин не принесла эффекта. По жизненным показаниям назначено внутривенно введение 500 мл в сутки электролизного раствора серебра на физиологическом растворе 5 мг/л на фоне применения пенициллина 12 млн в сутки. В течение 2-х суток нормализовалась температура. Введение препарата продолжалось 9 дней. На 12-й день состояние больного стало удовлетворительным. PRI me R 4. A 62-year-old patient underwent a subtotal proximal gastric resection and pancreatic tail resection for a tumor process. The postoperative period was complicated by the formation of an abdominal abscess and the development of a septic state. Antibiotic therapy, including ampicillin, kefzol, penicillin, zeporin did not bring effect. For health reasons, an intravenous administration of 500 ml per day of silver electrolysis solution in physiological saline 5 mg / l was prescribed with the use of penicillin 12 million per day. Within 2 days, the temperature returned to normal. The introduction of the drug lasted 9 days. On the 12th day, the patient's condition became satisfactory.

Claims

METHOD FOR SUPPRESSING MICROFLORA with antibiotics and silver preparations, characterized in that antibiotics are used simultaneously or sequentially with electrolysis silver in a concentration of 2.5-5 mg / l, moreover, NaCl is added to the silver electrolysis solution until a physiological concentration of 0.89% NaCl is reached.