RS66982B1 - Piridinil supstituisana oksoizoindolinska jedinjenja - Google Patents

Description

Napomena: Kompletan dokument koji uključuje referentne tabele i liste sekvenci, može se preuzeti sa veb stranice EPO-a.

Opis

UNAKRSNO UPUĆIVANJE

[0001] Ova prijava zahteva pravo iz indijske privremene prijave serijskog broja 202111016193, podnete 6. aprila 2021, i indijske privremene prijave serijskog broja 202111022098, podnete 17. maja 2021.

OPIS

[0002] Predetni pronalazak se uopšteno odnosi na piridinil supstituisana oksoizoindolinska jedinjenja koja inhibiraju Helios protein. Ovde su obezbeđena piridinil supstituisana oksoizoindolinska jedinjenja, kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, kao i načini njihove primene. Pronalazak se dalje odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje u skladu sa pronalaskom, koje je korisno za lečenje proliferativnih poremećaja, kao što je kancer, i virusnih infekcija.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0003] Regulatorne T ćelije (Treg ćelije) igraju ključnu ulogu u kontroli sopstvene tolerancije i imunološke homeostaze putem održavanja inhibitorne aktivnosti i anergije u uslovima snažnih imunoloških i zapaljenskih odgovora. Očuvanjem stabilnog, anergičnog i supresivnog fenotipa, Treg ćelije umanjuju prekomerne imunološke odgovore i sprečavaju ili ublažavaju autoimune reakcije. Više izveštaja je dokumentovalo prisustvo Treg ćelija u ljudskom tkivu koje je zahvaćeno tumorom. Studije su pokazale jasnu negativnu korelaciju između broja Treg ćelija i infiltracije T ćelija u tumor, kao i preživljavanja (Curiel i sarad., 2004, Nat. Med.10: 942-949; Viguier i sarad., 2004, J Immuno. 1173:1444-1453; Beyer i sarad., 2006, Blood 108: 804-811; Zou i sarad., 2006, Nat. Rev. Immunol. 6: 295-307), što implicira moguću ključnu ulogu Treg ćelija u sprečavanju razvoja efikasnog antitumorskog imuniteta. Prikupljeni dokazi ukazuju na to da Foxp3+CD25+CD4+ Treg ćelije pretežno infiltriraju tumore i očigledno ometaju imunološki odgovor na tumorske ćelije kod glodara i ljudi. Kada se jednom aktiviraju specifičnim antigenom, Treg ćelije suzbijaju responderske T ćelije na način koji nije specifičan za antigen i deluje i na okolne (bystander) ćelije in vitro. (Takahashi i sarad., 1998, Int Immunol. 10:1969-80; Thornton i sarad., 1998, J Exp. Med.188:287-96). Foxp3+CD25+CD4+Treg ćelije su, kako se čini, sposobne da suzbiju širok spektar imunoloških odgovora koji uključuju CD4+ pomoćne T ćelije, CD8+ T ćelije, prirodne ćelije ubice i prirodne T ćelije ubice (Tanaka i sarad., 2017, Cell Research 27:109-118). Intratumorska deplecija CD25+CD4+ Treg ćelija izazvala je regresiju već formiranih tumora uz promenu u citokinskom okruženju na mestima tumora (Yu i sarad., 2005, J Exp Med.201: 779-91) Pored toga, transfer CD4+ T ćelija lišenih Treg ćelija značajno je pojačao antitumorske imunološke odgovore u poređenju sa transferom T ćelija koje sadrže Treg ćelije (Antony i sarad., 2005, J Immunol 174:2591-601). Tumorske Treg ćelije koje infiltriraju tumor i koje su aktivirane bilo tumorski izvedenim sopstvenim antigenima ili antigenima povezanim sa tumorom mogu na sličan način da suzbiju specifične antitumorske imunološke odgovore. Modulacija aktivnosti ključnih faktora za kontrolu diferencijacije Treg ćelija mogla bi predstavljati potencijalnu terapijsku strategiju za lečenje određenih bolesti, uključujući kancer i virusne infekcije.

[0004] FoxP3+CD4 Treg ćelije su izuzetno stabilne. Istraživanja se još razvijaju kako bi se razumeli genetski mehanizmi koji obezbeđuju njihovu fenotipsku stabilnost nakon ekspanzije tokom inflamacije, infekcije ili autoimunosti. Transkripcioni faktori (TF) odgovorni za održavanje stabilnog imunosupresivnog fenotipa Treg ćelija verovatno doprinose ovom procesu. Gen Helios (IKZF2), član Ikaros familije TF, razlikuje se od drugih članova Ikaros familije po selektivnoj ekspresiji kod timocita koji prolaze negativnu selekciju, kao i kod regulatornih linija CD4 i CD8 T ćelija. Helios je izražen u dve regulatorne T-ćelijske linije, FoxP3+CD4+ i Ly49+CD8+ Treg ćelijama, koje su ključne za održavanje sopstvene tolerancije (Kim i sarad., 2015, Science 350:334-339; Sebastian i sarad., 2016, J Immunol 196:144-155). Zanimljivo je da nedavna istraživanja sugerišu da, iako je Helios u velikoj meri nepotreban za aktivnost Treg ćelija u stanju ravnoteže, kontrola genetskog programa FoxP3+ CD4 Treg ćelija pomoću Heliosa u kontekstu inflamacije je neophodna za održavanje stabilnog fenotipa i pojačavanje supresivne funkcije (Thornton i sarad., 2010, J Immunol. 184:3433-3441; Kim i sarad., 2015). Pokazano je da je ekspresija Heliosa u Treg ćelijama ključna za njihovu sposobnost da održavaju supresivni i anergični fenotip uprkos intenzivnim inflamatornim odgovorima. Aktivacija IL-2Rα-STAT5 puta pokazala se kao ključni faktor koji obezbeđuje preživljavanje i stabilnost Treg ćelija (Kim i sarad., 2015). Helios igra nezamenljivu ulogu u održavanju fenotipa FoxP3⁺ CD4 Treg ćelija tako što vrši dominantnu, limfoćelijsku intrinzičnu inhibiciju kako bi sprečio autoimune bolesti u prisustvu snažno aktiviranih samoreaktivnih T ćelija iz “scurfy” miševa, koji nemaju FoxP3 “fork head” domen. Himere koštane srži (BM - bone marrow) rekonstituisane sa Helios‑/‑/Scurfy BM ćelijama, ali ne i sa Helios+/+/Scurfy BM ćelijama, brzo razvijaju autoimunost (Kim i sarad., 2015). Ova zapažanja ukazuju na kritičan doprinos Heliosa selekciji, diferencijaciji i funkciji samoreaktivnih T ćelija. Imunosupresija koju vrše Treg ćelije može ometati antitumorske imunološke odgovore. Selektivni nedostatak Heliosa u FoxP3+ CD4 Treg ćelijama dovodi do povećane nestabilnosti Treg ćelija i konverzije intratumorskih CD4 Treg ćelija u efektorske T ćelije (Teff). Nestabilnost intratumorskih Treg ćelija može povećati broj Teff ćelija u tumorima kao kombinovani rezultat konverzije Treg ćelija i smanjenih supresivnih aktivnosti Treg ćelija. Pored toga, kod Heliosdeficijentnih intratumorskih Treg ćelija primećeni su defekti u odgovorima na IL-2, što rezultira smanjenim brojem aktiviranih Treg ćelija i može dodatno doprineti povećanoj aktivnosti Teff ćelija unutar tumora. Intekancercija između tumorskih ćelija i infiltrirajućih imunih ćelija dovodi do lučenja inflamatornih medijatora, uključujući TNF-α, IL-6, IL-17, IL-1 i TGF-β, kao i formiranja lokalnog inflamatornog okruženja (Kim i sarad., 2015).

[0005] Nestabilnost linije Helios-deficijentnih Treg ćelija je takođe praćena smanjenom ekspresijom FoxP3 i rezultira sticanjem efektorskog fenotipa kroz proizvodnju proinflamatornih citokina. Konverzija Helios-deficijentnih Treg ćelija u efektorske ćelije unutar mikrookruženja tumorskog tkiva povezana je sa povećanom ekspresijom gena koji kontrolišu Teff fenotip (Yates i sarad., 2018, PNAS, 115: 2162-2167). Sticanje nestabilnog fenotipa usled nedostatka Heliosa javlja se samo unutar mikrookruženja tumora (TME -tumor microenvironment), ali ne i u perifernim limfoidnim organima (Nakagawa i sarad., 2016, PNAS 113: 6248-6253). U hronično inflamatornom TME, nedostatak Heliosa u Treg ćelijama može značajno ublažiti potisnute genetske programe povezane sa diferencijacijom T pomoćnih ćelija podizanjem nivoa TF-a i efektorskih citokina povezanih sa T pomoćnim ćelijama. Ove genetske promene kod Heliosdeficijentnih Treg ćelija najizraženije su u populaciji Treg ćelija sa visokim afinitetom prema sopstvenim antigenima, što se pokazuje pojačanom ekspresijom GITR/PD-1 i povećanom osetljivošću na sopstvene antigene. Njihovi kombinovani efekti mogu podstaći konverziju fenotipa Treg ćelija u Teff ćelije unutar TME, uz povećano angažovanje T-ćelijskog receptora (TCR - Tcell receptor) i ekspresiju kostimulativnih receptora na Treg ćelijama, što sugeriše da su promene u ekspresiji gena, kao centralna osobina konverzije Treg ćelija, zavisne od imunološkog okruženja (Yates i sarad., 2018)

[0006] Smanjena ekspresija Heliosa u FoxP3+ CD4 Treg ćelijama može omogućiti konverziju memorijskih Treg ćelija u Teff ćelije koje izražavaju samo-reaktivne T-ćelijske receptore sa specifičnošću prema tumorskim antigenima. Izmenjeni Treg potpis mogao bi biti selektivno izazvan u hroničnim inflamatornim uslovima rastućeg tumora. Helios-deficijentne Treg ćelije mogu pokazivati TCR repertoar pomeren ka visokim afinitetima protiv sopstvenih peptida/MHC, što može podstaći snažnu aktivaciju u tumorskom mikrookruženju (TME) (Yates i sarad., 2018). S obzirom na povećanu samo-reaktivnost TCR u CD4 Treg ćelijama u poređenju sa konvencionalnim T ćelijama, konverzija Treg ćelija mogla bi generisati veoma potentne efektorske CD4 T ćelije, uz oslabljenje supresije posredovane Treg ćelijama unutar TME. Efikasnija strategija mogla bi zavisiti od pristupa koji selektivno pretvaraju intratumorske Treg ćelije u efektorske T ćelije, a da pri tome ne utiču na sistemsku populaciju Treg ćelija. Kao ključni faktor u održavanju veličine i funkcionalne stabilnosti Treg ćelija u odgovoru na različite imunološke poremećaje, farmakološka intervencija Heliosa mogla bi biti relevantna za strategije koje jačaju postojeću tumorsku imunoterapiju. Pošto se konverzija Treg u efektorske T ćelije može ograničiti na inflamatorno intratumorsko mikrookruženje, pristupi zasnovani na antitela ili malim molekulima koji ciljaju Helios mogli bi dovesti do poboljšane Treg-zavisne imunoterapije kancera. Važno je da se konverzija Helios-deficijentnih Treg ćelija dešava samo u lokalnom inflamatornom okruženju tumora. Ovakav pristup verovatno neće izazvati autoimune neželjene efekte povezane sa sistemskim smanjenjem Treg ćelija. Stoga, strategije koje specifično koriste Helios-zavisnu kontrolu intratumorskog fenotipa Treg ćelija predstavljaju značajnu nadu za unapređenje imunoterapije kancera. Dalje, takođe je prijavljeno da uklanjanje Foxp3+ Treg ćelija poboljšava antitumorske T-ćelijske odgovore izazvane vakcinom (Nishikawa i sarad., 2010, Int. J. Cancer 127: 759-767), što sugeriše da smanjenje nivoa Heliosa može biti korisno za povećanje efikasnosti vakcina protiv kancera.

[0007] Pored antitumorske imunoterapije, tokom virusnih infekcija, Treg ćelije mogu ograničiti imunopatologiju izazvanu prekomernom inflamacijom, ali istovremeno mogu potencijalno inhibirati efikasne antivirusne T ćelijske odgovore i doprineti perzistenciji virusa (Schmitz i sarad., 2013, PLOS Pathogens 9: e1003362). Hronična, ali ne i akutna infekcija miševa limfocitnim horiomeningitis virusom dovodi do izražene ekspanzije Foxp3+ Treg ćelija, što implicira mogući mehanizam pomoću kojeg određeni infektivni agensi mogu izbeći imunološki odgovor domaćina aktivacijom i širenjem Treg ćelija (Punkosdy i sarad., 2011, PNAS 108: 3677-3682). Koristi od lečenja mogli bi se postići smanjenjem nivoa Heliosa u aktiviranim Treg ćelijama u kontekstu relevantnom za hronične virusne infekcije. Dalje se poziva na: WO2021/194914, WO2019/191112, WO2020/165834, WO2020/165833.

[0008] Postoji potreba za jedinjenjima koja bi se koristila kao inhibitori Helios proteina.

SAŽETAK PRONALSKA

[0009] Predmetni pronalazak obezbeđuje piridinil supstituisana oksoizoindolinska jedinjenja formule (I) ili njihove soli, koja su korisna za snižavanje nivoa Helios proteina, smanjenje aktivnosti Helios proteina i/ili inhibiciju ekspresije Helios proteina u ćelijama.

[0010] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (I) i/ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, kao i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0011] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupke i intermedijere za sintezu jedinjenja formule (I) i/ili njihovih soli.

[0012] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule (I) i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za primenu u terapiji.

[0013] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje primenu jedinjenja formule (I) i/ili farmaceutski prihvatljivih soli tih jedinjenja za izradu leka koji snižava nivo Helios proteina, smanjuje njegovu aktivnost i/ili inhibira ekspresiju Helios proteina u ćelijama u cilju kontrole diferencijacije Treg ćelija, za lečenje određenih bolesti, uključujući kancer i virusne infekcije.

[0014] Jedinjenja formule (I) i kompozicije koje sadrže jedinjenja formule (I) mogu se primeniti za lečenje, prevenciju ili izlečenje virusnih infekcija i različitih proliferativnih poremećaja, kao što je kancer. Farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja korisne su u lečenju, prevenciji ili usporavanju progresije bolesti ili poremećaja u različitim terapijskim oblastima, kao što su virusne infekcije i kancer.

[0015] Ove i druge kakancerteristike pronalaska biće detaljno predstavljene kako se objava nastavlja.

DETALJAN OPIS

[0016] Podnosioci prijave su otkrili supstituisana oksoizoindolinska jedinjenja koja inhibiraju Helios protein tako što pospešuju intekancerciju Helios proteina sa odgovarajućim E3 ubikvitinligaznim kompleksom (Cullin4-Cereblon, CUL4-CRBN). Ova jedinjenja smanjuju nivo Helios proteina, smanjuju nivo aktivnosti Helios proteina i/ili inhibiraju nivoe ekspresije Helios proteina u ćelijama radi kontrole diferencijacije Treg ćelija. Ova jedinjenja su korisna za lečenje određenih bolesti, uključujući kancer i virusne infekcije. Jedinjenja su predviđena da budu korisna kao farmaceutski proizvodi sa poželjnom stabilnošću, bioraspoloživošću, terapijskim indeksom i vrednostima toksičnosti, koje su važne za njihovu podobnost za primenu kao lekovi.

[0017] Prvi aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje najmanje jedno jedinjenje formule (I):

ili njegovu so, pri čemu:

R1je -NH2ili -NH(CH3);

svaki R2je nezavisno F, Cl, -CN, C1-4alkil, -CH2F, -CHF2, -CF3, -OCH3, ili ciklopropil; svaki R4je nezavisno F, Cl, -CH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, ili -OCH3;

R6je vodonik, C1-2alkil, ili C1-2fluoroalkil;

m je nula, 1, 2, ili 3; i

n je nula, 1, 2, ili 3;

pod uslovom kada je R6vodonik, m je 1, 2, ili 3.

[0018] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH2.

[0019] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH(CH3).

[0020] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno F, Cl, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH2CH2CH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, -OCH3, ili ciklopropil.

[0021] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno F, Cl, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH2CH2CH3, -CH2F, -CHF2, ili -CF3.

[0022] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno F, Cl, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH2F, -CHF2, ili -CF3.

[0023] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno F, Cl, -CN, -CH3, ili -CF3.

[0024] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno -CN, -CH3, ili -CF3.

[0025] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno F, -CN, -CH3, ili -CF3.

[0026] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno F, -CN, ili -CH3.

[0027] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu n je nula, 1, ili 2.

[0028] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu n je nula ili 1.

[0029] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu n je 1 ili 2.

[0030] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu n je nula.

[0031] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu je n 1.

[0032] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu n je 2.

[0033] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno -CN, -CH3, ili -CF3; i n je nula,1, ili 2. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je n jednako 1 ili 2.

[0034] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno -CN, -CH3, ili -CF3; i n je nula,1 ili 2. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je n 1.

[0035] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno -CN, -CH3, ili -CF3; i n je 2.

[0036] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je nezavisno -CN ili -CH3; i n je 1 ili 2. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je n 1. Takođe, U ovo tehničko rešenje su uključena i jedinjenja kod kojih je n 2.

[0037] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R2je -CH3; i n je 1 ili 2. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je n 1. Takođe, U ovo tehničko rešenje su uključena i jedinjenja kod kojih je n 2.

[0038] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R4je nezavisno F, Cl, -CH3, -CH2F, -CHF2, ili -CF3.

[0039] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R4je nezavisno F, -CH3, -CH2F, -CHF2, ili -CF3.

[0040] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R4je nezavisno F, -CH3, -CHF2, ili -CF3.

[0041] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R4je nezavisno F ili -CH3.

[0042] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu svaki R4je F3. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je m 1. Takođe, uovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je m 2.

[0043] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegova so, pri čemu svaki R4je -CH3. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je m 1. Takođe, u ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je m jednako 2.

[0044] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu m je nula, 1, ili 2.

[0045] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu m je nula ili 1.

[0046] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu m je 1 ili 2.

[0047] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu m je 1, 2, ili 3.

[0048] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu m je 1.

[0049] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; i m je 1, 2, ili 3.

[0050] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; i m je 1 ili 2.

[0051] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; i m je 1.

[0052] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; i m je 2.

[0053] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; i m je 3.

[0054] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; m je 1; i R4je -F, Cl, -CH3, -CH2F, -CHF2, ili -CF3. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je R4-F, -CH₃, -CHF₂ ili -CF₃. Takođe, u ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je R4-F, -CH₃ ili -CF₃. Dodatno, u ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja kod kojih je R4-F ili -CH₃.

[0055] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; m je 1; i R4je F.

[0056] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; m je 1; i R4je -CH3.

[0057] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je vodonik; m je 1 ili 2; i R4je F ili -CH3.

[0058] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil ili C1-2fluoroalkil.

[0059] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil, -CH2F, -CF2H, -CF3, ili -CH2CF3.

[0060] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil, -CH2F, -CF2H, ili -CF3.

[0061] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil, ili -CF3.

[0062] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil.

[0063] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je -CH3.

[0064] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je -CH2F, -CF2H, -CF3, ili -CH2CF3.

[0065] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je -CH2F, -CF2H, ili -CF3.

[0066] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil ili C1-2fluoroalkil; and m je nula.

[0067] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil, -CH2F, -CF2H, -CF3, ili -CH2CF3; i m je nula.

[0068] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil, -CH2F, -CF2H, ili -CF3; i m je nula.

[0069] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil, ili -CF3; i m je nula.

[0070] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je C1-

2alkil; i m je nula.

[0071] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je -CH3; i m je nula.

[0072] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R6je -CH2F, -CF2H, -CF3, ili -CH2CF3; i m je nula.

[0073] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegova so, pri čemu R6je -CH2F, -CF2H, ili -CF3; i m je nula.

[0074] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH2ili -NH(CH3); svaki R2je -CN, -CH3, ili -CF3; svaki R4je nezavisno F ili -CH3; R6je vodonik ili -CH3; m je nula ili 1; i n je 1 ili 2; uz uslov da, kada je R6vodonik, m je 1.

[0075] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegova so, pri čemu R1je -NH2; svaki R2je nezavisno -CN, -CH3, ili -CF3; R4je F ili -CH3; R6je vodonik ili -CH3; m je nula ili 1; i n je 1 ili 2; uz uslov da, kada je R6vodonik, m je 1.

[0076] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH(CH3); svaki R2je nezavisno -CN ili -CH3; R4je F ili -CH3; R6je vodonik ili -CH3; m je nula ili 1; i n je 1 ili 2; uz uslov da, kada je R6vodonik, m je 1.

[0077] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH2; svaki R2je nezavisno -CN, -CH3, ili -CF3; svaki R4je nezavisno F ili -CH3; R6je -CH3; m je 1; i n je 1 ili 2. U ovom primeru su obuhvaćena jedinjenja u kojima je svaki R2-CH3.

[0078] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH2; svaki R2je nezavisno -CN ili -CH3; R4je F ili -CH3; R6je vodonik; m je 1; i n je 1, ili 2.

[0079] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu R1je -NH2ili -NH(CH3); svaki R2je nezavisno -CH3; R4je F; R6je vodonik ili -CH3; m je nula ili 1; i n je 1, ili 2; uz uslov da, kada je R6vodonik, m je 1.

[0080] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0081] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0082] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, ima strukturu:

[0083] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0084] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0085] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0086] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0087] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0088] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0089] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0090] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0091] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0092] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, koje ima strukturu:

[0093] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu navedeno jedinjenje je: 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (1); 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-6-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (2); 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (3); 3-(5-(6-amino-4-metilpyridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (4); 3-(5-(6-amino-4-(trifluoroetil) piridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (5); 3-(4-fluoro-5-(4-metil-6-(metilamino)piridin-2-il)-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (6); 3-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (7); 3-((S)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (8); 3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (9); 2-amino-6-((3S)-2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (10); 2-amino-6-((3R)-2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (11); 3-((S)-5-(4,5-dimetil-6-(metilamino) piridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (12); 3-((R)-5-(4,5-dimetil-6-(metilamino)piridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (13); 6-((3S)-2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metil-2-(metilamino) nikotinonitril (14); 6-((3R)-2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metil-2-(metilamino)nikotinonitril (15); 3-((S)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (16); 3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (17); 3-(5-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (18); 3-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dioe (19); 3-(5-(6-amino-3-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (20); 3-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (21-22); 2-amino-6-((3R)-2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (23); 3-((R)-5-(6-amino-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (24); 3-((R)-5-(6-amino-4-(trifluorometil)piridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (25); 3-((R)-5-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion(26); 3-((R)-5-(6-aminopiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (27); (R)-3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion 28); 3-((R)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (29); ili 3-((S)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion(30).

[0094] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu navedeno jedinjenje je 3-((R)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion.

[0095] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so, pri čemu navedeno jedinjenje je 3-((S)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion. Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije aspekata i/ili tehničkih rešenja pronalaska ovde stavljenih na uvid javnosti. Razume se da se bilo koje i sva tehnička rešenja predmetnog pronalaska mogu se razmatrati u kombinaciji sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili tehničkim rešenjima radi opisivanja dodatnih tehničkih rešenja. Takođe se razume da je svaka pojedinačna komponenta tehničkih rešenja namenjena da se kombinuje sa bilo kojom i svim ostalim komponentama iz bilo kog tehničkog rešenja radi opisivanja dodatnog tehničkog rešenja.

[0096] Osobine i prednosti pronalaska mogu biti lakše shvaćene od strane prosečnog poznavaoca u oblasti nakon čitanja sledećeg detaljnog opisa. Treba imati u vidu da se određene osobine pronalaska koje su, radi jasnoće, gore i dole opisane u kontekstu zasebnih tehničkih rešenja, mogu takođe kombinovati u jedno tehničko rešenje. Suprotno tome, različite osobine pronalaska koje su, radi sažetosti, opisane u kontekstu jednog tehničkog rešenja, mogu se takođe kombinovati u njegove delove. Tehnička rešenja ovde označena kao primeri ili poželjna imaju za cilj da budu ilustrativna, a ne ograničavajuća.

[0097] Osim ako ovde nije posebno drugačije navedeno, reference u jednini mogu uključivati i množinu. Na primer, engleski članovi "a" i "an" mogu se odnositi ili na jedan, ili jedan ili više.

[0098] Kako se koristi ovde, izraz „jedinjenja i/ili njihove soli” odnosi se na najmanje jedno jedinjenje, najmanje jednu so jedinjenja, ili njihovu kombinaciju. Na primer, jedinjenja formule (I) i/ili njihove soli uključuju: jedinjenje formule (I); dva jedinjenja formule (I); so jedinjenja formule (I); jedinjenje formule (I) i jednu ili više soli jedinjenja formule (I); kao i dve ili više soli jedinjenja formule (I).

[0099] Osim ako nije drugačije naznačeno, pretpostavlja se da svaki atom sa nezadovoljenim valencama ima dovoljan broj atoma vodonika da zadovolji valencu.

[0100] Definicije navedene ovde imaju prednost u odnosu na definicije iz bilo kog patenta, patentne prijave i/ili objave patentne prijave koje su ovde uključene pozivanjem.

[0101] U nastavku su date definicije različitih termina korišćenih da se opiše predmetni pronalazak. Ove definicije se primenjuju na termine kako su korišćeni kroz celu specifikaciju (osim ako nisu drugačije ograničeni u pojedinačnim slučajevima), bilo pojedinačno ili kao deo veće grupe.

[0102] Kroz celu specifikaciju, grupe i njihovi supstituenti mogu biti odabrani od strane prosečnog poznavaoca u oblasti tako da obezbede stabilne strukture jedinjenja.

[0103] U skladu sa konvencijom korišćenom u oblasti,

se koristi u strukturnim formulama za prikazivanje veze koja je tačka vezivanja strukture ili supstituenta za osnovnu ili glavnu strukturu.

[0104] Termini „halo“ i „halogen“, kako se koriste ovde, odnose se na F, Cl, Br i I.

[0105] Termin „cijano“ odnosi se na grupu -CN.

[0106] Termin „amino“ odnosi se na grupu -NH2.

[0107] Termin “okso” odnosi se na grupu =O.

[0108] Termin „alkil“, kako se koristi ovde, odnosi se na razgranate i sa ravnim lancem zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje sadrže, na primer, od 1 do 12 ugljenikovih atoma, od 1 do 6 ugljenikovih atoma, odnosno od 1 do 4 ugljenikova atoma. Primeri alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (Me), etil (Et), propil (npr. n-propil i i-propil), butil (npr. n-butil, i-butil, sekbutil i t-butil) i pentil (npr. n-pentil, izopentil, neopentil), n-heksil, 2-metilpentil, 2-etilbutil, 3-metilpentil i 4-metilpentil. Kada se brojevi pojavljuju kao indeks posle simbola „C“, indeks preciznije definiše broj ugljenikovih atoma koje određena grupa može sadržati. Na primer, „C1-4alkil“ označava alkil grupe sa ravnim i razgranatim lancem sa jednim do četiri ugljenikova atoma.

[0109] Termin „fluoroalkil“, kako se koristi ovde, obuhvata razgranate i sa ravnim lancem zasićene alifatične ugljovodonične grupe supstituisane sa jednim ili više atoma fluora. Na primer, fluoroalkil“ obuhvata C1, C2, C3i C4alkil grupe supstituisane sa jednim ili više atoma fluora. Reprezentativni primeri fluoroalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -CF3i -CH2CF3.

[0110] Jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju sve izotope atoma koji se javljaju u predmetnim jedinjenjima. Izotopi uključuju atome sa istim atomskim brojem, ali različitim masenim brojevima. Kao opšti primer, bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum (D) i tricijum (T). Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopno označena jedinjenja pronalaska mogu se obično pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim prosečnom poznavaocu u oblasti ili postupcima analognim onima opisanima ovde, koristeći odgovarajući izotopno označeni reagens umesto nereagensnog koji se inače koristi.

[0111] Izraz „farmaceutski prihvatljiv“ koristi se ovde za označavanje jedinjenja, materijala, kompozicija i/ili oblika doziranja koji su, u okviru razumne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskih reakcija ili drugih problema ili komplikacija, u skladu sa prihvatljivim odnosom koristi i rizika.

[0112] Jedinjenja formule (I) mogu formirati soli koje su takođe obuhvaćene ovim pronalaskom. Osim ako nije drugačije naznačeno, upućivanje na jedinjenje prema pronalasku podrazumeva i upućivanje na jednu ili više njegovih soli. Termin „soli“ označava kiselu i/ili baznu so formiranu sa neorganskim i/ili organskim kiselinama i bazama. Pored toga, termin „soli“ može obuhvatati cviter jone (unutrašnje soli), npr. kada jedinjenje formule (I) sadrži i baznu strukturu, kao što je aminska, pirolidinska ili imidazolska grupa, i kiselinsku strukturu, kao što je karboksilna kiselina. Poželjne su farmaceutski prihvatljive (tj. netoksične, fiziološki prihvatljive) soli, kao što su, na primer, prihvatljive metalne i aminske soli kod kojih katjon ne doprinosi značajno toksičnosti ili biološkoj aktivnosti soli. Međutim, i druge soli mogu biti korisne, npr. u postupcima izolacije ili prečišćavanja koji se mogu primeniti tokom pripreme, te su stoga obuhvaćene ovim pronalaskom. Soli jedinjenja formule (I) mogu se formirati, na primer, reakcijom jedinjenja formule (I) sa odgovarajućom količinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna količina, u medijumu kao što je onaj u kojem so precipituje ili u vodenom medijumu, nakon čega sledi liofilizacija.

[0113] Primeri dodatnih kiselinskih soli uključuju acetate (kao što su oni formirani sa sirćetnom kiselinom ili trihaloacetatnim kiselinama, na primer trifluoroacetatnom kiselinom), adipate, alginate, askorbate, aspartate, benzoate, benzensulfonate, bisulfate, borate, butirate, citrate, kamforate, kamforsulfonate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecilsulfate, etansulfonate, fumarate, glukoheptanoate, glicerofosfate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrohloride (formirane sa hlorovodoničnom kiselinom), hidrobromide (formirane sa bromovodoničnom kiselinom), hidroujodide, maleate (formirane sa maleinskom kiselinom), 2-hidroksietansulfonate, laktate, metansulfonate (formirane sa metansulfonatnom kiselinom), 2-naftalensulfonate, nikotinate, nitrate, oksalate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, pikrate, pivalate, propionate, salicilate, sukcinate, sulfate (kao što su one formirane sa sumpornom kiselinom), sulfonate (kao što su ovde pomenute), tartrate, tiocijanate, toluensulfonate kao što su tozilati, undekanoate i slično.

[0114] Primeri baznih soli uključuju amonijumove soli, soli alkalnih metala kao što su natrijumove, litijumove i kalijumove soli; soli zemnoalkalnih metala kao što su kalcijumove i magnezijumove soli; soli barijuma, cinka i aluminijuma; soli sa organskim bazama (na primer, organskim aminima), kao što su trialkilamini poput trietilamina, prokaina, dibenzilamina, N-benzil-β-feniletilamina, 1-efenamina, N,N'-dibenziletilendiamina, dehidroabietilamina, N-etilpiperidina, benzilamina, dicikloheksilamina ili sličnih farmaceutski prihvatljivih amina, kao i soli sa aminokiselinama, kao što su arginin, lizin i slično. Bazne grupe koje sadrže azot mogu se kvaternizovati reagensima kao što su halogenidi nižih alkila (npr. metil-, etil-, propil- i butilhloridi, bromidi i jodidi), dialkil-sulfati (npr. dimetil-, dietil-, dibutil- i diamil-sulfati), halogenidi dugih lanaca.

[0115] Jedinjenja formule (I) mogu se obezbediti kao amorfne ili kristalne čvrste supstance. Liofilizacija se može primeniti za dobijanje jedinjenja formule (I) u čvrstom stanju.

[0116] Takođe treba razumeti da su solvati (npr. hidrati) jedinjenja formule (I) takođe obuhvaćeni predmetnim pronalaskom. Termin „solvat“ označava fizičku asocijaciju jedinjenja formule (I) sa jednom ili više molekula rastvarača, bilo organskih ili neorganskih. Ova fizička asocijacija uključuje vodonične veze. U određenim slučajevima solvat će biti pogodan za izolaciju, na primer kada su jedna ili više molekula rastvarača inkorporisane u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. „Solvat“ obuhvata i solvate prisutne u rastvoru i one koji se mogu izolovati. Primeri solvata uključuju hidrate, etanolate, metanolate, izopropanolate, acetonitril solvate i etil-acetat solvate. Metode solvatacije su poznate prosečnom poznavaocu u oblasti.

[0117] Različiti oblici prolekova su dobro poznati u oblasti i opisani su u: Rautio, J. i sarad., Nature Review Drug Discovery, 17, 559-587 (2018).

[0118] Pored toga, jedinjenja formule (I), nakon njihove pripreme, mogu biti izolovana i prečišćena da se dobije kompozicija koja sadrži maseni udeo jednak ili veći od 99% jedinjenja formule (I) („suštinski čisto“), koje se zatim koristi ili formuliše kako je opisano ovde. Takva „suštinski čista“ jedinjenja formule (I) takođe su obuhvaćena predmetnim pronalaskom.

[0119] Izrazi „stabilno jedinjenje“ i „stabilna struktura“ označavaju jedinjenje koje je dovoljno postojano da preživi izolaciju iz reakcione smeše u korisnom stepenu čistoće, i formulisanje u delotvorni terapijski agens. Predmetni pronalazak obuhvata stabilna jedinjenja.

[0120] Termin „inhibitor Helios-a“ odnosi se na agens sposoban da smanji nivo Helios proteina, nivo njegove aktivnosti i/ili nivo njegovog eksprimiranja u ćelijama, kako bi se kontrolisala diferencijacija Treg ćelija. Inhibitor Helios-a može biti reverzibilni ili ireverzibilni inhibitor.

[0121] Kako se koristi ovde, „Helios“ protein označava protein koji je član Ikaros familije proteina cinkovog prsta (zinc fnger protein). Kod ljudi, Helios je kodiran genom IKZF2. Helios je takođe poznat kao: “cinkov prst 2 familije IKAROS, ANF1A2, ZNF1A2, ZNFN1A2, protein cinkovog prsta, podfamilija 1A, 2 i protein cinkovog prsta 2 familije Ikaros.” Članovi ove familije proteina uključuju: Ikaros, Helios, Aiolos, Eos i Pegasus. Kako se koristi ovde, Helios protein obuhvata različite izoforme, uključujući izoforme 1-5 navedene u nastavku.

Izoform 1 (UniProt Q9UKS7-1)

Izoform 4 (UniProt Q9UKS7-4)

Izoform 7 (UniProt Q9UKS7-7)

Izoforme 1, 2, 4, 6 i 7 „Helios-a“ navedene gore sadrže degron FHCNQCGASFTQKGNLLRHIKLH (SEQ ID NO (SEK ID BR): 6) (podebljano i podvučeno). Degron je deo proteina koji ima ulogu u regulaciji brzine razgradnje proteina.

[0122] Kako se koristi ovde, protein „Eos“ je kodiran genom IKZF4, i takođe je poznat kao cinkov prst 4 familije IKAROS, ZNFN1A4, protein cinkovog prsta, podfamilija 1A, 4, protein cinkovog prsta 4 familije i KIAA1782. Protein „Eos“ obuhvata izoforme kodirane sledećim ljudskim izoformama: 1 (Q9H2S9-1) i 2 (Q9H2S9-2):

Izoform 1 (UniProt Q9H2S9-1)

Izoforme 1 i 2 proteina „Eos“ navedene gore sadrže signal za razgradnju (degron) FHCNQCGASFTQKGNLLRHIKLH (SEQ ID NO: 6) (podebljano i podvučeno), koji je isti kao signal za razgradnju kod proteina „Helios“.

[0123] Kako se koristi ovde, protein „Ikaros“ je kodiran genom IKZF1. Ikaros je takođe poznat kao cinkov prst 1 familije IKAROS, ZNFN1A1, protein cinkovog prsta, podfamilija 1A, 1, protein cinkovog prsta 1 familije Ikaros 1, IK1, limfoidni transkripcioni faktor LyF-1, Hs.54452, PPP1R92, protein fosfataza 1, regulatorna podjedinica 92, PRO0758, CVID13 i antigen povezan sa hroničnom limfocitnom leukemijom KW-6. Protein Ikaros obuhvata izoforme kodirane aminokiselinskim sekvencama Q13422-1, Q13422-2, Q13422-3, Q13422-4, Q13422-7 i Q13422-8. Takođe, protein Ikaros obuhvata i izoforme kodirane sekvencama Q13422-5 i Q13422-6.

[0124] Kako se koristi ovde, "Aiolos" protein je kodiran genom IKZF3. Aiolos protein je takođe poznat kao cinkov prst 3 familije IKAROS, ZNFN1A3, protein cinkovog prsta, podfamilija 1A, 3, protein cinkovog prsta 3 familije Ikaros, i AIO. Aiolos protein takođe obuhvata izoforme kodirane aminokiselinskim sekvencama Q9UKT9-1, Q9UKT9-3, Q9UKT9-4, Q9UKT9-6, Q9UKT9-7, Q9UKT9-8, Q9UKT9-9, i Q9UKT9-14. Aiolos protein takođe obuhvata izoforme kodirane aminokiselinskim sekvencama Q9UKT9-2, Q9UKT9-5, Q9UKT9-10, Q9UKT9-11, Q9UKT9-12, and Q9UKT9-13, Q9UKT9-15, i Q9UKT9-16.

[0125] Kako se koristi ovde, protein „Pegasus“ je takođe poznat kao cinkov prst 5 familije IKAROS, ZNFN1A5, protein cinkovog prsta, podfamilija 1A, 5 i protein cinkovog prsta 5 familije Ikaros. Protein Pegasus je kodiran genom IKZF5.

[0126] Kako se koristi ovde, termin „dovođenje u kontakt“ odnosi se na dovođenje navedenih struktura u kontakt u in vitro ili in vivo sistemu. Na primer, „dovođenje Helios proteina u kontakt sa jedinjenjem formule (I)“ uključuje primenu jedinjenja predmetnog pronalaska na jedinku ili pacijenta, kao što je čovek, koji poseduje Helios protein, kao i, na primer, unošenje jedinjenja formule (I) u uzokancer koji sadrži ćelijsku ili prečišćenu pripremu koja sadrži Helios protein.

[0127] Termini „lečenje“, „leči“ i „lečiti“, kako se koriste ovde, odnose se na bilo koji vid intervencije ili procesa koji se primenjuje na subjekta, ili na primenu aktivnog agensa subjektu, sa ciljem da se preokrene, ublaži, umanji, inhibira, uspori ili spreči napredovanje, razvoj, težina ili ponovna pojava simptoma, komplikacije, stanja ili biohemijskog pokazatelja povezanog sa oboljenjem. Nasuprot tome, termini „profilaksa“ ili „prevencija“ odnose se na primenu kod subjekta koji nema bolest, u cilju sprečavanja njenog nastanka. „Lečenje“, „leči“ i „lečiti“ ne obuhvataju profilaksu niti prevenciju.

[0128] Termin „terapijski delotvorna količina“ odnosi se na količinu jedinjenja predmetnog pronalaska samu po sebi ili na količinu kombinacije potraživanih jedinjenja, ili na količinu jedinjenja predmetnog pronalaska u kombinaciji sa drugim aktivnim sastojcima, koja je delotvorna za smanjenje nivoa Helios proteina, smanjenje nivoa aktivnosti Helios proteina i/ili inhibiciju nivoa eksprimiranja Helios proteina u ćelijama, ili delotvorna za lečenje ili prevenciju virusnih infekcija i proliferativnih poremećaja, kao što je kancer.

[0129] Kako se koristi ovde, termin „ćelija“ označava ćeliju u in vitro, ex vivo ili in vivo uslovima. U nekim tehničkim rešenjima, ex vivo ćelija može biti deo uzorka tkiva izvađenog iz organizma, kao što je sisar. U drugim rešenjima, in vitro ćelija može biti ćelija u ćelijskoj kulturi. U drugim rešenjima, in vivo ćelija je ćelija koja živi u organizmu, kao što je sisar.

[0130] Termin „pacijent“ obuhvata ljudske i druge subjekte sisare koji primaju terapijski ili profilaktički tretman.

[0131] Termin „subjekt“ obuhvata svakog čoveka ili životinju. Na primer, postupci i kompozicije opisani ovde mogu se koristiti za lečenje subjekta koji ima kancer. Životinje obuhvataju sve kičmenjake, npr. sisare i one koji nisu sisari, uključujući ne-ljudske primate, ovce, pse, krave, kokoške, vodozemce, gmizavce itd. U jednom tehničkom rešenju, subjekt je ljudski subjekt.

[0132] Izraz „farmaceutski prihvatljiv nosač“, kako se koristi ovde, označava farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili sredstvo, kao što su tečni ili čvrsti punilac, razblaživač, ekscipijens, pomoćno sredstvo u proizvodnji (npr. lubrikant, talk, stearat magnezijuma, kalcijuma ili cinka, ili stearinska kiselina) ili materijal za inkapsulaciju rastvarača, koji služi za prenos predmetnog jedinjenja iz jednog organa ili dela tela u drugi organ ili deo tela. Svaki nosač mora biti „prihvatljiv“ u smislu kompatibilnosti sa ostalim sastojcima formulacije, uključujući, tj. adjuvans, ekscipijens ili vehikulum, kao što su razblaživači, konzervansi, punila, sredstva za regulisanje protoka, sredstva za raspadanje, sredstva za kvašenje, sredstva za emulziju, sredstva za suspendovanje, zaslađivači, sredstva za aromatizaciju, mirisi, antibakterijska sredstva, antigljivična sredstva, lubrikanti i sredstva za doziranje, u zavisnosti od načina primene i farmaceutskog oblika; i ne smeju biti štetni po pacijenta.

[0133] Termin „farmaceutska kompozicija“ označava kompoziciju koja sadrži jedinjenje prema pronalasku u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim farmaceutski prihvatljivim nosačem.

KORISNOST

[0134] Jedinjenja formule (I) su korisna za lečenje kancera.

[0135] U jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovanu preparaciju jedinjenja formule (I), i/ili farmaceutski prihvatljive soli istog, stereoizomera ili tautomerne forme, kao i dodatnih terapijskih agenasa za simultanu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u lečenju i/ili profilaksi više bolesti ili poremećaja povezanih sa aktivnošću Helios proteina. Kombinovana preparacija može biti korišćena za smanjenje nivoa Helios proteina, nivoa aktivnosti Helios proteina i/ili nivoa eksprimiranja Helios proteina u ćelijama radi kontrole diferencijacije Treg ćelija.

[0136] Jedinjenja formule (I) i farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) su korisna za lečenje ili prevenciju bilo kojih bolesti ili stanja povezanih sa aktivnošću Helios proteina. Ovo uključuje virusne i druge infekcije (npr. infekcije kože, gastrointestinalne infekcije, infekcije mokraćnih puteva, genito-urinarne infekcije, sistemske infekcije), kao i proliferativne bolesti (npr. kancer). Jedinjenja formule (I) i farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) mogu se administrirati životinjama, po mogućstvu sisarima (npr. domaće životinje, mačke, pse, miševe, pacove), a još poželjnije na ljude. Bilo koji način primene može se koristiti za administriranje jedinjenja ili farmaceutske kompozicije pacijentu. U određenim tehničkim rešenjima, jedinjenje formule (I) ili farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I) se administrira oralno. U drugim tehničkim rešenjima, jedinjenje formule (I) ili farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I) se administrira parenteralno.

[0137] Jedinjenja formule (I) mogu selektivno smanjiti nivo Helios proteina, smanjiti nivo aktivnosti Helios proteina i/ili inhibirati nivo eksprimiranja Helios proteina u ćelijama radi kontrole diferencijacije Treg ćelija. Na primer, jedinjenja formule (I) mogu se koristiti za selektivno smanjenje nivoa aktivnosti Helios proteina i/ili inhibiciju nivoa eksprimiranja Helios proteina u ćelijama radi kontrole diferencijacije Treg ćelija u ćeliji ili kod pojedinca kome je potrebno smanjenje nivoa Helios proteina, smanjenje nivoa aktivnosti Helios proteina i/ili inhibicija nivoa eksprimiranja Helios proteina, primenom inhibirajuće količine jedinjenja formule (I) ili njegove soli.

[0138] U jednom aspektu, jedinjenja formule (I) se sekvencijalno administriraju pre administriranja imuno-onkološkog agensa. U drugom aspektu, jedinjenja formule (I) se administrira istovremeno sa imunoonkološkim agensom. U još jednom aspektu, jedinjenja formule (I) se sekvencijalno administriraju nakon administriranja imuno-onkološkog agensa.

[0139] U drugom aspektu, jedinjenja formule (I) mogu biti koformulisana sa imunoonkološkim agensom.

[0140] Imunoonkološki agensi uključuju, na primer, male molekule lekova, antitela ili druge biološke ili male molekulske supstance. Primeri bioloških imunoonkoloških agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, vakcine protiv kancera, antitela i citokine. U jednom aspektu, antitelo je monoklonsko antitelo. U drugom aspektu, monoklonsko antitelo je humanizovano ili humano.

[0141] U jednom aspektu, imunoonkološki agens je (i) agonist stimulativnog (uključujući i kostimulativni) receptora ili (ii) antagonist inhibitornog (uključujući i ko-inhibitorni) signala na T ćelijama, pri čemu oba dovode do pojačavanja antigen-specifičnih T ćelijskih odgovora (često nazivanih imunim kontrolnim regulatorima).

[0142] Neki od stimulativnih i inhibitornih molekula su članovi imunoglobulinske superfamilije (IgSF). Jedna važna familija membranskih liganada koji se vezuju za ko-stimulativne ili koinhibitorne receptore je B7 familija, koja uključuje B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) i B7-H6. Druga familija membranskih liganada koji se vezuju za ko-stimulativne ili ko-inhibitorne receptore je TNF porodica molekula koji se vezuju za odgovarajuće članove familije TNF receptora, uključujući CD40 i CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Limfotoksin α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, Limfotoksin α 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY i NGFR.

[0143] U jednom aspektu, T ćelijski odgovori mogu biti stimulisani kombinacijom jedinjenja formule (I) i jednog ili više (i) antagonista proteina koji inhibiraju aktivaciju T ćelija (npr. inhibitori imunih kontrolnih tačaka) kao što su CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galektin 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galektin-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 i TIM-4, i (ii) agonista proteina koji stimulišu aktivaciju T ćelija kao što su B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 i CD28H.

[0144] Drugi agensi koji se mogu kombinovati sa jedinjenjima formule (I) za lečenje kancera uključuju antagoniste inhibitornih receptora na NK ćelijama ili agoniste aktivacionih receptora na NK ćelijama. Na primer, jedinjenja formule (I) mogu biti kombinovana sa antagonistima KIR, kao što je lirilumab.

[0145] Još neki agensi za kombinovane terapije uključuju agense koji inhibiraju ili redukuju makrofage ili monocite, uključujući ali ne ograničavajući se na CSF-1R antagoniste, kao što su CSF-1R antitela uključujući RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) ili FPA-008 (WO11/140249; WO13169264;

WO14/036357).

[0146] U drugom aspektu, jedinjenja formule (I) se mogu koristiti sa jednim ili više agonističkih agenasa koji vežu pozitivne ko-stimulativne receptore, blokatorskim agensima koji smanjuju signalizaciju kroz inhibitorne receptore, antagonistima, kao i sa jednim ili više agenasa koji sistemski povećavaju frekvenciju anti-tumorskih T ćelija, agensima koji savladavaju različite imunosupresivne puteve u tumorskom mikrookruženju (npr. blokiraju intekancerciju inhibitornih receptora kao što je PD-L1/PD-1, redukuju ili inhibiraju Treg ćelije (npr. korišćenjem monoklonskog antitela protiv CD25 (npr. daklizumab) ili ex vivo deplecijom anti-CD25 perli), inhibiraju metaboličke enzime poput IDO, ili poništavaju/preventiraju anergiju ili iscrpljenost T ćelija) i agensima koji pokreću aktivaciju urođenog imunog sistema i/ili inflamaciju na mestima tumora.

[0147] U jednom aspektu, imunoonkološki agens je CTLA-4 antagonist, kao što je antitelo koje antagonizira CTLA-4. Primeri prikladnih CTLA-4 antitela uključuju YERVOY (ipilimumab) ili tremelimumab.

[0148] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je PD-1 antagonist, kao što je antagonističko antitelo koje antagonizira PD-1. Primeri prikladnih PD-1 antitela uključuju OPDIVO™ (nivolumab), KEYTRUDA™ (pembrolizumab) ili MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493). Imunoonkološki agens takođe može uključivati pidilizumab (CT-011), iako je postojala rasprava oko njegove specifičnosti vezivanja za PD-1. Drugi pristup za ciljanje PD-1 receptora je rekombinantni protein koji se sastoji od ekstracelularnog domena PD-L2 (B7-DC) povezanog sa Fc delom IgG1, nazvan AMP-224.

[0149] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je PD-L1 antagonist, kao što je antitelo koje inhibira PD-L1. Primeri prikladnih PD-L1 antitela uključuju MPDL3280A (RG7446; WO2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (WO207/005874) i MSB0010718C (WO2013/79174).

[0150] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je LAG-3 antagonist, kao što je antitelo koje inhibira LAG-3. Primeri prikladnih LAG-3 antitela uključuju BMS-986016 (WO10/19570, WO14/08218), ili IMP-731 ili IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273).

[0151] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je agonista CD137 (4-1BB), kao što je agonističko CD137 antitelo. Pogodna CD137 antitela uključuju, na primer, urelumab i PF-05082566 (WO12/32433).

[0152] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je agonist GITR-a, kao što je agonističko GITR antitelo. Pogodna GITR antitela uključuju, na primer, BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (WO06/105021, WO09/009116) and MK-4166 (WO11/028683).

[0153] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je IDO inhibitor. Pogodni IDO inhibitori uključuju, na primer, INCB-024360 (WO206/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO 08/36642), indoksimod, ili NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO 12/142237).

[0154] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je agonista OX40, kao što je agonističko OX40 antitelo. Pogodna OX40 antitela uključuju, na primer, MEDI-6383 ili MEDI-6469.

[0155] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je OX40L blokator, kao što je blokatorsko OX40 antitelo. Pogodni OX40L blokatori uključuju, na primer, RG-7888 (WO06/029879).

[0156] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je agonist CD40, kao što je agonističko CD40 antitelo. U još jednom obliku, imunoonkološki agens je CD40 blokator, kao što je blokatorsko CD40 antitelo. Pogodna CD40 antitela uključuju, na primer, lukatumumab ili dacetuzumab.

[0157] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je agonist CD27, kao što je agonističko CD27 antitelo. Pogodna CD27 antitela uključuju, na primer, varlilumab.

[0158] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je MGA271 (koji cilja B7H3) (WO11/109400).

[0159] Kombinovana terapija je namenjena uključivanju primene ovih terapijskih agenasa na sekvencijalni način, pri čemu se svaki terapijski agens primenjuje u različito vreme, kao i primeni ovih terapijskih agenasa, ili barem dva od njih, u suštinski istovremenoj primeni. Suštinski istovremeno administriranje može se ostvariti, na primer, administriranjem subjektu jedne doze sa fiksnim odnosom svakog terapijskog agensa ili u više pojedinačnih doza za svaki od terapijskih agenasa. Sekvencijalno ili suštinski istovremeno administriranje svakog terapijskog agensa može se sprovesti bilo kojim odgovarajućim putem, uključujući, ali ne ograničavajući se na, oralni put, intravenski put, intramuskularni put i direktnu apsorpciju kroz sluzokožu. Terapijski agensi mogu biti administrirani istim putem ili različitim putem. Na primer, prvi izabrani terapijski agens može biti administriran intravenskom injekcijom, dok se ostali terapijski agensi mogu administrirati oralno. Alternativno, na primer, svi terapijski agensi mogu biti administrirani oralno ili svi intravenskom injekcijom. Kombinovana terapija takođe može obuhvatiti primenu terapijskih agenasa, kao što je gore opisano, u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima i neterapijskim metodama (npr. hirurški zahvati ili zračenje). Kada kombinovana terapija dodatno obuhvata neterapijski tretman, neterapijski tretman može biti sproveden u bilo koje odgovarajuće vreme sve dok se postiže korisni efekat zajedničkog delovanja kombinacije terapijskih agenasa i neterapijskog tretmana. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, korisni efekat se postiže i kada je neterapijski tretman vremenski udaljen od primene terapijskih agenasa, možda za dane ili čak nedelje.

[0160] Vrste kancera koje se mogu tretirati jedinjenjem formule (I) uključuju, ali nisu ograničene na, kancere mozga, kancere kože, kancere bešike, kancere jajnika, kancere dojke, kancere želuca, kancere pankreasa, kancere prostate, kancere kolone, kancere krvi, kancere pluća i kancere kostiju. Primeri ovih tipova kancera uključuju neuroblastom, karcinom creva kao što su rektalni karcinom, karcinom kolone, porodičnu adenomatoznu polipozu i nasledni nepolipozni kolorektalni karcinom, ezofagealni karcinom, karcinom usana, karcinom grkljana, hipofarinks karcinom, karcinom jezika, karcinom pljuvačnih žlezda, karcinom želuca, adenokarcinom, medularni tireoidni karcinom, papilarni tireoidni karcinom, renalni karcinom, parenhimatski karcinom bubrega, karcinom jajnika, karcinom grlića materice, karcinom tela materice, karcinom endometrijuma, horionski karcinom, pankreasni karcinom, karcinom prostate, karcinom testisa, karcinom dojke, urinarni karcinom, melanom, tumore mozga kao što su glioblastom, astrocitom, meningiom, meduloblastom i periferni neuroektodermalni tumori, Hodžkinov limfom, ne-Hodžkinov limfom, Burkitov limfom, akutna limfatična leukemija (ALL), hronična limfatična leukemija (CLL), akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijeloidna leukemija (CML), T-ćelijska leukemija limfom kod odraslih, difuzni B-krupnoćelijski limfom (DLBCL), hepatocelularni karcinom, karcinom žučne kese, bronhijalni karcinom, sitnoćelijski karcinom pluća, nesitnoćelijski karcinom pluća, multipli mijelom, bazalioom, teratom, retinoblastom, horoidni melanom, seminom, rabdomiosarkom, kraniofaringiom, osteosarkom, hondrosarkom, mijosarkom, liposarkom, fibrosarkom, Ewingov sarkom i plazmocitom.

[0161] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa ili postupaka lečenja, kao što su, na primer, antivirusni agensi, hemoterapije ili drugi antikancerogeni agensi, imunostimulansi, imunosupresivi, zračenje, antitumorske i antivirusne vakcine, citokinska terapija (npr. IL2 i GM-CSF) i/ili inhibitori tirozin kinaze, mogu se opciono koristiti u kombinaciji sa jedinjenjima formule (I) za lečenje bolesti, poremećaja ili stanja povezanih sa Helios proteinom. Agensi se mogu kombinovati sa predmetnim jedinjenjima, ili se mogu administrirati istovremeno ili sekvencijalno kao odvojene doze.

[0162] Pogodni hemoterapijski ili drugi antikancerogeni agensi uključuju, na primer, alkilirajuće agense (uključujući, ali ne ograničavajući se na, azotne iperit, derivate etilenimina, alkil sulfonate, nitrozouree i triazene), kao što su uracil iperit, hlormetin, ciklofosfamid (CYTOXAN™), ifosfamid, melfalan, hlorambucil, pipobroman, trietilen-melamin, trietilenetiofosforamin, busulfan, karmustin, lomustin, streptozocin, dakarbazin i temozolomid.

[0163] U lečenju melanoma, odgovarajući agensi za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima formule (I) uključuju: dakarbazin (DTIC), opciono, zajedno sa drugim lekovima za hemoterapiju kao što su karmustin (BCNU) i cisplatin; "Dartmutski režim", koji se sastoji od DTIC, BCNU, cisplatina i tamoksifena; kombinaciju cisplatina, vinblastina i DTIC-a, temozolomida ili YERVOY™. Jedinjenja formule (I) mogu se takođe kombinovati sa lekovima za imunoterapiju, uključujući citokine kao što su interferon alfa, interleukin 2 i tumor nekroza faktor (TNF) u lečenju melanoma.

[0164] Jedinjenja formule (I) mogu se koristiti i u kombinaciji sa terapijom vakcinama u lečenju melanoma. Antimelanomske vakcine su, na neki način, slične antivirusnim vakcinama koje se koriste za prevenciju bolesti izazvanih virusima kao što su poliomijelitis, male boginje i zauške. Oslabljene melanomske ćelije ili delovi melanomskih ćelija, nazvani antigeni, mogu se ubrizgati pacijentu kako bi stimulisali imuni sistem tela da uništi melanomske ćelije.

[0165] Melanomi koji su ograničeni na ruke ili noge mogu se takođe tretirati kombinacijom agenasa koji uključuju jedno ili više jedinjenja formule (I), korišćenjem tehnike hipertermne izolovane perfuzije ekstremiteta. Ovaj terapijski protokol privremeno odvaja cirkulaciju zahvaćenog ekstremiteta od ostatka tela i ubrizgava visoke doze hemoterapije u arteriju koja opskrbljuje ekstremitet, čime se obezbeđuju visoke doze leka u području tumora bez izlaganja unutrašnjih organa ovim dozama koje bi inače mogle izazvati ozbiljne neželjene efekte. Obično je tečnost zagrejana na 38,9 °C do 40 °C. Melphalan je lek koji se najčešće koristi u ovom postupku hemoterapije. On se može administrirati zajedno sa drugim agensom nazvanim faktor nekroze tumora (TNF).

[0166] Pogodni hemoterapijski ili drugi antikancerogeni agensi uključuju, na primer, antimetabolite (uključujući, ali ne ograničavajući se na antagoniste folne kiseline, pirimidinske analoge, purinske analoge i inhibitore adenozin deaminaze) kao što su metotreksat, 5-fluorouracil, floksirudin, citarabin, 6-merkaptopurin, 6-tiogvanin, fludarabin fosfat, pentostatin i gemcitabin.

[0167] Pogodni hemoterapijski ili drugi antikancerogeni agensi dalje uključuju, na primer, određene prirodne proizvode i njihove derivate (na primer, vinca alkaloide, antitumorske antibiotike, enzime, limfokine i epipodofilotoksine) kao što su vinblastin, vinkristin, vindesin, bleomicin, daktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, idarubicin, ara-C, paklitaksel (Taxol), mitramicin, deoksiko-formicin, mitomicin-C, L-asparaginaza, interferoni (posebno IFN-a), etopozid i tenipozid.

[0168] Drugi citotoksični agensi uključuju navelben, CPT-11, anastrozol, letrozol, kapecitabin, reloksafin i droleksafin.

[0169] Takođe su pogodni citotoksični agensi kao što su epipodofilotoksin; antineoplastični enzimi; inhibitori topoizomeraze; prokarbazin; mitoksantron; platinski koordinacioni kompleksi kao što su cisplatin i karboplatin; biološki modifikatori odgovora; inhibitori rasta; antihormonski terapijski agensi; leukovorin; tegafur; i hematopoetski faktori rasta.

[0170] Drugi antikancerogeni agensi uključuju i terapijske antitela kao što je trastuzumab (HERCEPTIN<®>), antitela usmerena protiv kostimulatornih molekula kao što su CTLA-4, 4-1BB i PD-1, ili antitela usmerena protiv citokina (IL-1O ili TGF-β).

[0171] Drugi antikancerogeni agensi takođe uključuju one koji blokiraju migraciju imunskih ćelija, kao što su antagonisti hemokinskih receptora, uključujući CCR2 i CCR4.

[0172] Drugi antikancerogeni agensi uključuju i one koji pojačavaju imuni sistem, kao što su adjuvansi ili adoptivni transfer T-ćelija.

[0173] Antikancerogene vakcine uključuju dendritične ćelije, sintetičke peptide, DNK vakcine i rekombinantne viruse.

[0174] Farmaceutska kompozicija pronalaska može opciono uključivati najmanje jedan inhibitor signalne transdukcije (STI). „Inhibitor signalne transdukcije“ je agens koji selektivno inhibira jedan ili više ključnih kokancera u signalnim putevima, u normalnoj funkciji ćelija kancera, što dovodi do apoptoze. Pogodni STI uključuju, ali nisu ograničeni na: (i) inhibitore bcr/abl kinaze, kao što je, na primer, STI 571 (GLEEVEC<™>); (ii) inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGF), kao što su, na primer, inhibitori kinaze (IRESSA™, SSI-774) i antitela (Imclone: C225, 5 [Goldstein i sarad., Clin. Cancer Res., 1:1311-1318 (1995)], i Abgenix: ABX-EGF); (iii) inhibitore receptora her-2/neu kao što su inhibitori farnesil transferaze (FTI) kao što su, na primer L-744,832 (Kohl i sarad., Nat. Med., 1(8):792-797 (1995)); (iv) inhibitore kinaze Akt familije ili Akt puta, kao što je, na primer, rapamicin (videti, na primer, Sekulic i sarad., Cancer Res., 60:3504-3513 (200)); (v) inhibitore kinaza ćelijskih ciklusa, kao što su, na primer, flavopiridol i UCN-01 (videti, na primer, Sausville, Curr. Med. Chem. Anti-Canc.Agents, 3:47-56 (203)); i (vi) inhibitore fosfatidilinozitol kinaze, kao što je, na primer, LY294002 (videti, na primer, Vlahos i sarad., J.Biol. Chem., 269:5241-5248 (1994)). Alternativno, bar jedan STI i bar jedno jedinjenje formule (I) mogu biti u odvojenim farmaceutskim kompozicijama. U posebnom obliku predmetnog pronalaska, bar jedno jedinjenje formule (I) i bar jedan STI mogu se administrirati pacijentu istovremeno ili sekvencijalno. Drugim rečima, bar jedno jedinjenje formule (I) može se administrirati prvo, bar jedan STI može se administrirati prvo, ili se jedinjenje formule (I) i STI mogu administrirati u isto vreme. Takođe, kada se koristi više jedinjenja formule (I) i/ili STI, oni mogu biti administrirani u bilo kom redosledu.

[0175] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za lečenje hronične virusne infekcije kod pacijenta koja sadrži bar jedno jedinjenje formule (I), opciono bar jedan hemoterapijski lek, i opciono bar jedan antivirusni agens, u farmaceutski prihvatljivom nosaču.

[0176] U posebnom obliku predmetnog pronalaska, bar jedno jedinjenje formule (I) i bar jedan hemoterapijski agens se administraju pacijentu istovremeno ili sekvencijalno. Drugim rečima, bar jedno jedinjenje formule (I) može se administrirati prvo, bar jedan hemoterapijski agens može se administrirati prvo, ili se jedinjenje formule (I) i hemoterapijski agens mogu se administrirati u isto vreme. Takođe, kada se koristi više jedinjenja formule (I) i/ili hemoterapijskih agenasa, oni se mogu administrirati u bilo kom redosledu. Slično tome, bilo koji antivirusni agens ili STI može se administrirati u bilo kom trenutku u odnosu na administranje jedinjenja formule (I).

[0177] Hronične virusne infekcije koje se mogu lečiti pomoću ove kombinovane terapije uključuju, ali nisu ograničene na, bolesti izazvane virusima: hepatitisa C (HCV), humanog papiloma virusa (HPV), citomegalovirusa (CMV), herpesa simpleksa (HSV), Epstein-Barr-ovog virusa (EBV), varičela zoster virusa, koksaki virusa, virusa humane imunodeficijencije (HIV).

[0178] Primeri pogodnih NRTI uključuju zidovudin (AZT); didanozin (ddl); zalcitabin (ddC); stavudin (d4T); lamivudin (3TC); abakavir (1592U89); adefovir dipivoksil [bis(POM)-PMEA]; lobukavir (BMS-180194); BCH-I0652; emitricitabin [(-)-FTC]; beta-L-FD4 (takođe nazvan beta-L-D4C i imenovan kao beta-L-2',3'-dikleoksi-5-fluoro-citidin); DAPD ((-)-beta-D-2,6-diaminopurin dioksolan); i lodenozin (FddA). Tipični pogodni NNRTI uključuju nevirapin (BI-RG-587); delavirdin (BHAP, U-90152); efavirenz (DMP-266); PNU-142721; AG-1549; MKC-442 (1-(etoksimetil)-5-(1-metiletil)-6-(fenilmetil)-(2,4(1H,3H)-pirimidindion); i (+)-kalanolid A (NSC675451) i B. Tipični pogodni inhibitori proteaze uključuju sakvinavir (Ro 31-8959); ritonavir (ABT-538); indinavir (MK-639); nelfinavir (AG-1343); amprenavir (141W94); lasinavir (BMS-234475); DMP-450; BMS-2322623; ABT-378; i AG-1549. Drugi antivirusni agensi uključuju hidroksiureu, ribavirin, IL-2, IL-12, pentafuzid i Yissum projekat br.11607.

[0180] Kombinovana terapija je namenjena da obuhvati administriranje ovih terapijskih agenasa na sekvencijalan način, tj. pri čemu se svaki terapijski agens administrira u različito vreme, kao i administriranje ovih terapijskih agenasa, ili barem dva od njih, u suštinski istovremenom načinu. Suštinski istovremeno administriranje može se ostvariti, na primer, administriranjem pacijentu jedne doze koja sadrži fiksni odnos svakog terapijskog agensa ili u više pojedinačnih doza za svaki terapijski agens. Sekvencijalno ili suštinski istovremeno administriranja svakog terapijskog agensa može se vršiti bilo kojim odgovarajućim putem uključujući, ali ne ograničavajući se na, oralne, intravenske, intramuskularne i direktnu apsorpciju kroz sluzokožu. Terapijski agensi mogu se administrirati istim putem ili različitim putem. Na primer, prvi izabrani terapijski agens iz kombinacije može se administrirati intravenskom injekcijom, dok se ostali terapijski agensi mogu administrirati oralno. Alternativno, na primer, svi terapijski agensi mogu se administrirati oralno ili svi mogu biti dati intravenskom injekcijom. Kombinovana terapija može takođe uključivati administriranje terapijskih agenasa kao što je gore opisano u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima i terapijama bez lekova (npr. hirurgija ili zračenje). Kada kombinovana terapija uključuje i neku terapiju bez lekova, ta terapija može se sprovesti u bilo koje odgovarajuće vreme sve dok se postiže korisni efekat usled zajedničkog delovanja kombinacije terapijskih agenasa i terapije bez lekova. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, korisni efekat se postiže čak i ako je terapija bez lekova vremenski odvojena od administriranja terapijskih agenasa, možda za nekoliko dana ili čak nedelja.

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE

[0181] Pronalazak takođe obuhvata farmaceutske formulacije koje sadrže terapijski efikasnu količinu jedne ili više jedinjenja formuli (I), formulisane zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (aditiva) i/ili razređivača, i opciono, sa jednim ili više dodatnih terapijski aktivnih supstanci opisanih gore.

[0182] Jedinjenja formule (I) mogu se administrirati bilo kojim odgovarajućim putem, po mogućstvu u obliku farmaceutske kompozicije prilagođene datom načinu primene i u efikasnoj dozi za predviđeni tretman. Jedinjenja i kompozicije jedinjenja formule (I) mogu se administrirati za bilo koju od navedenih primena na odgovarajući način, na primer oralno, u obliku tableta, kapsula (od kojih svaka može da sadrži formulacije sa produženim ili kontrolisanim oslobađanjem), pilula, prahova, granulata, eliksira, tinktura, suspenzija (uključujući nano- i mikrosuspenzije, sprejom sušene disperzije), sirupa i emulzija; sublingvalno; bukalno; parenteralno, na primer putem potkožne, intravenske, intramuskularne ili intrasternalne injekcije ili infuzione tehnike (npr. sterilne injektabilne vodenaste ili nevodenaste rastvore ili suspenzije); nazalno, uključujući primenu na nosne membrane, na primer inhalacionim sprejem; topikalno, u obliku kreme ili masti; ili rektalno, u obliku supozitorija. Mogu se davati samostalno, ali se generalno primenjuju zajedno sa farmaceutskim nosačem izabranim prema odabranom putu primene i standardnoj farmaceutskoj praksi.

[0183] Za oralno administriranje, farmaceutska kompozicija može biti u obliku, na primer, tablete, kapsule, tečne kapsule ili suspenzije. Farmaceutska kompozicija se poželjno pravi u obliku dozne jedinice koja sadrži određenu količinu aktivne supstance. Na primer, farmaceutska kompozicija može biti u obliku tablete ili kapsule koja sadrži aktivnu supstancu u opsegu od oko 0,1 do 1000 mg, poželjno od oko 0,25 do 250 mg, a još poželjnije od oko 0,5 do 100 mg. Prikladna dnevna doza za čoveka ili drugog sisara može značajno varirati u zavisnosti od stanja pacijenta i drugih faktora, ali se može odrediti uobičajenim metodama.

[0184] Bilo koja farmaceutska kompozicija obuhvaćena ovde može se, na primer, isporučiti oralno putem bilo kojih prihvatljivih i odgovarajućih oralnih preparata. Primeri oralnih preparata uključuju, ali nisu ograničeni na, tablete, pastile (troches), lozenge, vodene i uljane suspenzije, disperzibilne prahove ili granulare, emulzije, tvrde i mekane kapsule, tečne kapsule, sirupe i eliksire. Farmaceutske kompozicije namenjene za oralno administriranje mogu se pripremiti poznatim postupcima u farmaceutskoj industriji za proizvodnju oralnih farmaceutskih proizvoda. Da bi se obezbedili farmaceutski prihvatljivi preparati, farmaceutska kompozicija prema pronalasku može sadržati bar jedan aditiv iz grupe zaslađivača, aroma, boja, umirujućih sredstava, antioksidanata i konzervansa.

[0185] Tableta može, na primer, biti pripremljena mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli iste sa najmanje jednim netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju tableta. Primeri ekscipijenasa uključuju, ali nisu ograničeni na inertne razređivače, kao što su kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat i natrijum fosfat; sredstva za granulaciju i razlaganje, kao što su mikrokristalna celuloza, natrijum kroskarmeloza, kukuruzni skrob i alginska kiselina; veziva, kao što su skrob, želatin, polivinil-pirrolidon i akacija; i sredstva za podmazivanje, kao što su magnezijum stearat, stearinska kiselina i talk. Takođe, tableta može biti bez obloge ili obložena poznatim tehnikama, bilo da se maskira neprijatan ukus leka, ili da se odloži raspadanje i apsorpcija aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu, čime se produžava efekat aktivnog sastojka. Primeri rastvorljivih materijala za maskiranje ukusa uključuju hidroksipropilmetilcelulozu i hidroksipropilcelulozu. Primeri materijala za odloženo oslobađanje uključuju etil celulozu i celuloza acetat butirat.

[0186] Čvrste želatinske kapsule mogu, na primer, biti pripremljene mešanjem najmanje jedneg jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne soli istog sa najmanje jednim inertnim čvrstim razređivačem, kao što su kalcijum karbonat, kalcijum fosfat i kaolin.

[0187] Meke želatinske kapsule mogu, na primer, biti pripremljene mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli istog sa najmanje jednim rastvorljivim nosačem, kao što je polietilen glikol, i najmanje jednim uljnim medijumom, kao što su kikiriki ulje, tečni parafin i maslinovo ulje.

[0188] Vodena suspenzija može, na primer, biti pripremljena mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli istog sa najmanje jednim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju vodene suspenzije. Primeri ekscipijenasa uključuju sredstva za suspendovanje, kao što su natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropil-metilceluloza, natrijum alginat, alginska kiselina, polivinil-pirolidon, guma tragakanta i guma akacija; sredstva za disperziju ili vlaženje, kao što su prirodni fosfatid, npr. lecitin; kondenzati alkilen oksida sa masnim kiselinama, kao što je polioksietilen stearat; kondenzati etilen oksida sa dugolančanim alifatičnim alkoholima, kao što je heptadekaetilen oksicetanol; kondenzati etilen oksida sa parcijalnim esterima masnih kiselina i hekzitola, kao što je polioksietilen sorbitol monooleat; i kondenzati etilen oksida sa parcijalnim esterima masnih kiselina i hekzitol anhidridima, kao što je polietilen sorbitan monooleat. Vodena suspenzija može takođe sadržati najmanje jedan konzervans, kao što su etil i n-propil p-hidroksibenzoat; najmanje jedan boju; najmanje jedan aromu; i/ili najmanje jedan zaslađivač, uključujući, ali ne ograničavajući se na, saharozu, saharin i aspartam.

[0189] Uljane suspenzije mogu, na primer, biti pripremljene suspendovanjem najmanje jedne supstance formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli iste u biljno ulje, kao što su, na primer, kikiriki ulje, maslinovo ulje, susamovo ulje i kokosovo ulje; ili u mineralno ulje, kao što je tečni parafin. Uljana suspenzija može takođe sadržati najmanje jedan zgušnjivač, kao što su pčelinji vosak, čvrsti parafin i cetil alkohol. Radi dobijanja prijatne masne suspenzije, može se dodati najmanje jedan od prethodno navedenih zaslađivača i/ili najmanje jedan aroma. Uljana suspenzija može dodatno sadržati najmanje jedan konzervans, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, antioksidans, kao što su butilirani hidroksianizol i alfa-tokoferol.

[0190] Praškovi i granulati rastvorljivi u vodi mogu, na primer, biti pripremljeni mešanjem najmanje jedng jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli istog sa najmanje jednim agensom za dispergovanje i/ili vlaženje; najmanje jednim agensom za suspendovanje; i/ili najmanje jednim konzervansom. Pogodni agensi za dispergovanje, agensi za vlaženje i agensi za suspendovanje su kao što je gore već opisano. Primeri konzervansa uključuju, ali nisu ograničeni na antioksidanse, na primer, askorbinsku kiselinu. Dodatno, praškovi i granulati mogu sadržati najmanje jedan ekscipijens, uključujući zaslađivače, aroma i boje.

[0191] Emulzija najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli istog može, na primer, biti pripremljena kao ulje-u-vodi emulzija. Uljana faza emulzije koja sadrži jedinjenja formule (I) može biti sastavljena od poznatih sastojaka na poznat način. Uljana faza može biti, ali nije ograničena na, na primer, biljno ulje kao što su maslinovo ulje i kikiriki ulje; mineralno ulje kao što je tečni parafin; ili njihove mešavine. Fazna komponenta može sadržati samo emulgator ili smešu najmanje jednog emulgatora sa mašću ili uljem, ili sa oba, mašću i uljem. Pogodni emulgatori uključuju, ali nisu ograničeni na prirodne fosfatide, npr. sojin lecitin; estere ili parcijalne estere izvedene iz masnih kiselina i hekzitol anhidrida, kao što je sorbitan monooleat; i kondenzate parcijalnih estera sa etilen oksidom, kao što je polioksietilen sorbitan monooleat. Poželjno, hidrofilski emulgator je ukjučen zajedno sa lipofilnim emulgatorom koji deluje kao stabilizator. Takođe je poželjno uključiti i ulje i mast. Zajedno, emulgatori sa ili bez stabilizatora čine tzv. emulzioni vosak, a vosak zajedno sa uljem i mašću čine tzv. emulzioni masni osnov koji čini masno dispergovanu fazu krem formi. Emulzija može takođe sadržati zaslađivač, aromu, konzervans i/ili antioksidans. Emulgatori i stabilizatori emulzije pogodni za upotrebu u formulisanju predmetnog pronalaska uključuju Tween 60, Span 80, cetostearil alkohol, miristil alkohol, gliceril monostearat, natrijum lauril sulfat, gliceril distearat samostalno ili sa voskom, ili druge materijale dobro poznate u oblasti.

[0192] Jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedna farmaceutski prihvatljiva so istog mogu, na primer, biti isporučene intravenozno, potkožno i/ili intramuskularno putem bilo koje farmaceutski prihvatljive i pogodne injektibilne oblike. Primeri injektibilnih oblika uključuju, ali nisu ograničeni na sterilne vodene rastvore koji sadrže prihvatljive nosače i rastvarače, kao što su voda, Ringerov rastvor i izotonični natrijum hloridni rastvor; sterilne ulje-u-vodi mikroemulzije; i vodene ili uljane suspenzije.

[0193] Formulacije za parenteralno administriranje mogu biti u obliku vodenih ili nevodenih izotoničnih sterilnih injekcionih rastvora ili suspenzija. Ovi rastvori i suspenzije mogu biti pripremljeni od sterilnih prahova ili granulata korišćenjem jednog ili više nosača ili razređivača pomenutih za formulacije za oralno administriranje ili korišćenjem drugih pogodnih agenasa za dispergovanje ili agenasa za vlaženje i agenasa za suspendovanje. Jedinjenja mogu biti rastvorena u vodi, polietilen glikolu, propilen glikolu, etanolu, kukuruznom ulju, ulju semena pamuka, kikiriki ulju, susamovom ulju, benzil alkoholu, natrijum hloridu, gumi tragakanta i/ili raznim puferima. Drugi adjuvansi i načini administriranja su dobro i široko poznati u farmaceutskoj oblasti. Aktivni sastojak se takođe može primeniti injekcijom kao kompozicija sa odgovarajućim nosačima uključujući fiziološki rastvor, dekstrozu ili vodu, ili sa ciklodekstrinom (npr. Captisol), solubilizaciju korastvaračem (npr. propilen glikol) ili micelarnom solubilizacijom (npr. Tween 80).

[0194] Sterilni injektibilni preparati mogu biti takođe sterilni injektibilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razređivaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butanediolu. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima mogu biti voda, Ringerov rastvor i izotonični natrijum hloridni rastvor. Takođe, sterilna, fiksna ulja se uobičajeno koriste kao rastvarači ili suspenzioni mediji. Za ovu namenu može se koristiti bilo koje blago fiksno ulje, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Takođe, masne kiseline kao što je oleinska kiselina se koriste u pripremi injektabilnih formulacija.

[0195] Sterilna injekciona ulje-u-vodi mikroemulzija može se, na primer, pripremiti: 1) rastvaranjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) u uljanoj fazi, kao što je, na primer, smeša sojinog ulja i lecitina; 2) kombinovanjem uljane faze koja sadrži jedinjenje formule (I) sa mešavinom vode i glicerola; i 3) obradom te kombinacije radi formiranja mikroemulzije.

[0196] Sterilna vodena ili oleaginogena suspenzija može se pripremiti u skladu sa metodama koje su već poznate u oblasti tehnike. Na primer, sterilna vodena rastvor ili suspenzija može se pripremiti upotrebom netoksičnog rastvarača ili razređivača pogodnog za parenteralnu primenu, kao što je, na primer, 1,3-butandiol; a sterilna oleaginogena suspenzija može se pripremiti upotrebom sterilnog, netoksičnog i prihvatljivog rastvarača ili sredstva za suspendovanje, kao što su, na primer, sterilna fiksna ulja, npr. sintetski mono- ili digliceridi, i masne kiseline, kao što je, na primer, oleinska kiselina.

[0197] Farmaceutski prihvatljivi nosači se formulišu u skladu sa brojnim faktorima koji su dobro poznati prosečnom poznavaocu oblasti. Ti faktori uključuju, bez ograničenja: vrstu i prirodu aktivne supstance koja se formuliše; subjekat kome se kompozicija koji sadrži agens administrira; predviđeni put administriranja kompozicijea; i ciljanu terapijsku indikaciju. Farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju i vodene i nevodene tečne medijume, kao i različite čvrste i polučvrste oblike doziranja. Takvi nosači mogu uključivati niz različitih sastojaka i dodataka osim aktivnog agensa, pri čemu su ti dodatni sastojci uključeni u formulaciju iz različitih razloga, npr. radi stabilizacije aktivnog agensa, kao veziva itd., što je dobro poznato prosečnom stručnjaku u oblasti. Opisi odgovarajućih farmaceutski prihvatljivih nosača, kao i faktora koji utiču na njihov izbor, nalaze se u brojnim lako dostupnim izvorima, kao što je, na primer: Allen, L. V. Jr. i sar. Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 toma), 22. izdanje (2012), Pharmaceutical Press.

[0198] Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi i vehikulumi koji se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, jonske izmenjivače, aluminijum-oksid, aluminijum stearat, lecitin, samomikroemulgujuće sisteme za dostavu lekova (SEDDS), kao što je d-alfa-tokoferol polietilenglikol 1000 sukcinat, surfaktante koji se koriste u farmaceutskim oblicima doziranja, kao što su Tweens, polioksietilnisani ricinusov uljni surfaktanti, kao što je CREMOPHOR™ surfaktant (BASF), ili druge slične polimerne matrikse za dostavu, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum-sorbat, smeše parcijalnih glicerida zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti, kao što su protamin-sulfat, dinatrijum-hidrogenfosfat, kalijum-hidrogen-fosfat, natrijum-hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum-dioksid, magnezijum-trisilikat, polivinil-pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilenglikol, natrijumkarboksimetil-celulozu, poliakrilate, voskove, polietilen-polipropilen-blok kopolimere, polietilenglikol i lanolin. Ciklodekstrini, kao što su alfa-, beta- i gama-ciklodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati, kao što su hidroksi-alkil-ciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropilciklodekstrine, ili drugi rastvorljivi derivati, takođe se mogu povoljno koristiti za poboljšanje isporuke jedinjenja formula opisnih ovde.

[0199] Farmaceutski aktivna jedinjenja ovog pronalaska mogu se obrađivati u skladu sa uobičajenim metodama farmacije radi dobijanja medicinskih agenasa za administriranje pacijenatima, uključujući ljude i druge sisare. Farmaceutske kompozicije mogu se podvrgnuti uobičajenim farmaceutskim postupcima kao što su sterilizacija i/ili mogu sadržati konvencionalne adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za kvašenje, emulgatori, puferi itd. Tablete i pilule mogu se dodatno pripremati sa enteričkim omotačem. Takve kompozicije mogu takođe sadržati adjuvanse, kao što su agensi za kvašenje, zaslađivači, arome i mirisi.

[0200] U terapijske svrhe, aktivna jedinjenja ovog pronalaska se obično kombinuju sa jednim ili više adjuvanasa prikladnih za predviđeni put administriranja. Ako se administriraju oralno, jedinjenja se mogu pomešati sa laktozom, saharozom, skrobnim prahom, estarskim derivatima celuloze sa alkanoičnim kiselinama, alkil esterima celuloze, talkom, stearinskom kiselinom, magnezijum stearatom, magnezijum oksidom, natrijumovim i kalcijumovim solima fosforne i sumporne kiseline, želatinom, akacijinim gumom, natrijum-alginatom, polivinilpirolidonom i/ili polivinil-alkoholom, a zatim tabletirati ili enkapsulirati radi lakšeg davanja. Takve kapsule ili tablete mogu sadržati formulaciju sa kontrolisanim oslobađanjem, kao što je disperzija aktivnog jedinjenja u hidroksipropilmetil-celulozi.

[0201] Količine jedinjenja koje se administriraju i režim doziranja za lečenje bolesti pomoću jedinjenja i/ili kompozicije ovog pronalaska zavise od različitih faktora, uključujući starost, telesnu masu, pol, zdravstveno stanje subjekta, vrstu bolesti, težinu bolesti, put i učestalost primene, kao i konkretno korišćeno jedinjenje. Dakle, režim doziranja može značajno varirati, ali se može rutinski odrediti korišćenjem standardnih metoda. Dnevna doza od oko 0,001 do 100 mg/kg telesne mase, poželjno između oko 0,0025 i oko 50 mg/kg telesne mase, a najpoželjnije između oko 0,005 do 10 mg/kg telesne mase može biti odgovarajuća. Dnevna doza može se primenjivati u jednoj do četiri doze dnevno. Drugi režimi doziranja uključuju jednu dozu nedeljno ili jednu dozu na svaka dva dana.

[0202] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) i/ili najmanje jednu farmaceutski prihvatljivu so istog, i opciono dodatni agens izabran iz grupe koja obuhvata bilo koji farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum. Alternativne kompozicije ovog pronalaska sadrže jedinjenje formule (I), opisano ovde stavljeno na uvid javnosti, ili njegov prolеk, i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum.

[0203] Predmetni pronalazak takođe obuhvata farmaceutske setove koji su korisni, na primer, u terapijskoj primeni ili prevenciji bolesti ili poremećaja povezanih sa Helios proteinom, kao i drugih bolesti navedenih ovde, koji uključuju jednu ili više posuda koje sadrže farmaceutsku kompoziciju sa terapijski efektivnom količinom jedinjenja formule (I). Takvi setovi mogu dodatno sadržati, ukoliko je poželjno, jednu ili više različitih uobičajenih komponenti farmaceutskog seta, kao što su, na primer, posude sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, dodatne posude, što će biti odmah jasno prosečnom poznavaocu u oblasti. Uputstva, bilo kao priloženi listići ili etikete, koja navode količine komponenti koje se administriraju, smernice za administriranje i/ili smernice za mešanje komponenti, takođe mogu biti uključena u set.

[0204] Režim doziranja jedinjenja predmetnog pronalaska, naravno, može varirati u zavisnosti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamske kakancerteristike konkretnog agensa i njegov način i put administriranja; vrsta, starost, pol, zdravstveno stanje, medicinsko stanje i telesna težina primaoca; priroda i intenzitet simptoma; vrsta paralelne terapije; učestalost primene; put administriranja; bubrežna i jetrena funkcija pacijenta, kao i željeni efekat.

[0205] Kao opšte smernice, dnevna oralna doza svakog aktivnog sastojka, kada se koristi za navedene efekte, kretaće se u rasponu od približno 0,001 do oko 5000 mg dnevno, poželjnije od oko 0,01 do oko 1000 mg dnevno, a najpoželjnije od oko 0,1 do oko 250 mg dnevno. Intravenozno, najpoželjnije doze kretaće se od oko 0,01 do oko 10 mg/kg/minut tokom infuzije konstantnom brzinom. Jedinjenja formule (I) mogu se administrirati kao jedna dnevna doza, ili ukupna dnevna doza može biti podeljena na dve, tri ili četiri doze dnevno.

[0206] Jedinjenja se obično administriraju u smeši sa odgovarajućim farmaceutskim razređivačima, pomoćnim supstancama ili nosačima (zajednički nazivani ovde kao farmaceutski nosači), koji su prikladno izabrani u skladu sa predviđenim oblikom administriranja, na primer, oralne tablete, kapsule, eliksiri i sirupi, i u skladu sa uobičajenom farmaceutskom praksom.

[0207] Oblici doziranja (farmaceutske kompozicije) pogodni za administriranje mogu sadržati od približno 1 miligrama do približno 200 miligrama aktivne supstance po jedinici doze. U ovim farmaceutskim kompozicijama, aktivna supstanca će uobičajeno biti prisutna u količini od oko 0,1 do 95 mas% u odnosu na ukupnu masu kompozicije.

[0208] Tipična kapsula za oralnu administriranje sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I) (250 mg), laktozu (75 mg) i magnezijum-stearat (15 mg). Smeša se prosejava kroz sito od 60 mesh i puni u želatinsku kapsulu br.1.

[0209] Tipična injekcioni preparat se proizvodi tako što se aseptički unese najmanje jedno jedinjenje formule (I) (250 mg) u bočicu, zatim se bočica aseptički liofilizuje i zapečati. Za primenu, sadržaj bočice se pomeša sa 2 mL fiziološkog rastvora kako bi se dobio injekcioni preparat.

[0210] Predmetni pronalazak obuhvata u okviru svog obima farmaceutske kompozicije koje kao aktivni sastojak sadrže terapijski efektivnu količinu najmanje jednog jedinjenja formule (I), samostalno ili u kombinaciji sa farmaceutskim nosačem. Opciono, jedinjenja formule (I) mogu se koristiti samostalno, u kombinaciji sa drugim jedinjenjima formule (I), ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapijskih agenasa, na primer, antikancer agensom ili drugim farmaceutski aktivnim materijama.

[0211] Bez obzira na izabrani put administriranja, jedinjenja formule (I), koja se mogu koristiti u odgovarajućem, i/ili farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku, formulišu se u farmaceutski prihvatljive oblike doziranja pomoću uobičajenih metoda poznatih prosečnom poznavaocu u oblasti.

[0212] Stvarni nivoi doziranja aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska mogu se menjati tako da se obezbedi količina aktivne supstance koja je efektivna za postizanje terapijskog odgovora kod određenog pacijenta, kompozicije i načina administriranja, a da pri tome ne izazove toksične efekte kod pacijenta.

[0213] Izabrani nivo doziranja zavisiće od niza faktora, uključujući aktivnost konkretnog jedinjenja formule (I) koje se administrira, ili njegovog estara, soli ili amida, puta administriranja, vremena administriranjae, brzine izlučivanja ili metabolizma konkretnog jedinjenja koje se koristi, brzine i stepena apsorpcije, trajanja terapije, drugih lekova, jedinjenja i/ili materija koje se koriste u kombinaciji sa konkretnim jedinjenjem, starosti, pola, telesne težine, zdravstvenog stanja i prethodne medicinske anamneze pacijenta, kao i drugih faktora dobro poznatih u medicinskoj praksi.

[0214] Lekar ili veterinar sa prosečnim znanjem u oblasti može lako da odredi i propiše efektivnu količinu farmaceutske kompozicije koja je potrebna. Na primer, lekar ili veterinar može započeti primenu jedinjenja formule (I), koje se koristi u farmaceutskoj kompoziciji, u dozama manjim od onih potrebnih za postizanje terapijskog efekta, i postepeno povećavati dozu dok se efekat ne postigne.

[0215] Uopšteno, odgovarajuća dnevna doza jedinjenja formule (I) biće ona količina jedinjenja koja predstavlja najnižu dozu efektivnu za postizanje terapijskog efekta. Takva efektivna doza će uopšteno zavisiti od faktora opisanih gore. Uobičajeno, oralne, intravenske, intracereroventrikularne i supkutane doze jedinjenja formule (I) za pacijenta kreću se u rasponu od približno 0,01 do približno 50 mg po kilogramu telesne mase dnevno.

[0216] Po potrebi, efektivna dnevna doza aktivnog jedinjenja može se administrirati kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više pojedinačnih doza, koje se administriraju odvojeno u odgovarajućim vremenskim intervalima tokom dana, opciono u obliku jediničnih doza. U određenim aspektima pronalaska, doziranje se sastoji od jedne primene dnevno.

[0217] Iako je moguće da se jedinjenje formule (I) primenjuje samostalno, poželjno je da se jedinjenje primenjuje kao farmaceutska formulacija (kompozicija).

[0218] Gore navedeni drugi terapijski agensi, kada se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima formule (I), mogu se administrirati, na primer, u količinama navedenim u elektronskoj bazi podataka ili kako drugačije odredi prosečan stručnjak u oblasti. U postupcima prema predmetnom pronalasku, takvi drugi terapijski agensi mogu se administrirati pre, istovremeno sa ili nakon administranja inventivnih jedinjenja.

POSTUPCI PRIPREME

[0219] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se pripremiti na više načina koji su dobro poznati prosečnom stručnjaku u oblasti organskih sinteza. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se sintetisati korišćenjem postupaka opisanih u nastavku, zajedno sa postupcima sinteze poznatim u oblasti sintetske organske hemije, ili njihovim varijacijama koje će biti razumljive prosečnom stručnjaku u oblasti. Poželjni postupci uključuju, ali nisu ograničeni na, one opisane u nastavku.

[0220] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se pripremiti primenom reakcija i tehnika opisanih u ovom odeljku. Reakcije se izvode u rastvaračima koji su odgovarajući za primenjene reagense i supstance, i koji su pogodni za predviđene transformacije. Takođe, u opisu sintetskih postupaka koje slede, podrazumeva se da su svi predloženi uslovi reakcije – uključujući izbor rastvarača, atmosferu reakcije, temperaturu reakcije, trajanje eksperimenta i procedure rada – standardni uslovi za datu reakciju, koji bi trebalo da budu odmah prepoznatljivi prosečnom poznavaocu u oblasti. Prosečnom poznavaocu u oblasti organske sinteze jasno je da funkcionalne grupe prisutne na različitim delovima molekula moraju biti kompatibilne sa predloženim reagensima i reakcijama. Takva ograničenja u vezi sa supstituentima koji su kompatibilni sa uslovima reakcije biće odmah očigledna prosečnom stručnjaku, te je tada neophodno primeniti alternativne postupke. Ovo će ponekad zahtevati procenu u pogledu modifikovanja redosleda sintetskih koraka ili izbora jednog postupka u odnosu na drugi kako bi se dobilo jedinjenje prema ovom pronalasku. Takođe, biće jasno da je još jedan važan faktor u planiranju bilo koje sintezne sheme u ovoj oblasti promišljen izbor zaštitne grupe za zaštitu reaktivnih funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima opisanim u ovom pronalasku. Autoritativni prikaz mnogobrojnih alternativa koje su dostupne obučenom stručnjaku može se naći u delu Greene i Wuts: Protective Groups in Organic Synthesis, četvrto izdanje, Wiley & Sons, 2007.

[0221] Jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti prema postupcima prikazanim u sledećim shemama. Kao što je prikazano, krajnji proizvod je jedinjenje koje ima istu strukturnu formulu kao formula (I). Podrazumeva se da se bilo koje jedinjenje formule (I) može dobiti ovim shemama uz odgovarajući izbor reagensa sa odgovarajućim supstituentima. Rastvarači, temperature, pritisci i drugi uslovi reakcije mogu se lako odrediti od strane prosečnog stručnjaka u oblasti. Polazni materijali su komercijalno dostupni ili ih prosečan stručnjak može lako pripremiti. Supstituenti jedinjenja su definisani ovde ili na drugom mestu u specifikaciji.

[0222] Opšti putevi za sintezu jedinjenja opisanih u ovom pronalasku prikazani su u shemama 1– 2, pri čemu su R1, R2, R4i R6definisani ranije u tekstu ili predstavljaju funkcionalne grupe koje se mogu konvertovati u konačne supstituente. Supstituent X je odlazeća grupa, kao što je halogen (poželjno I, Br ili Cl) ili triflat. Supstituent M je odgovarajući partner za spajanje, kao što su borna kiselina, borni ester ili stanan. Supstituent R je zaštitna grupa za karboksilnu kiselinu, kao što su terc-butil, metil, etil ili benzil. Kao što je prikazano u shemi 1, opšti postupak za pripremu jedinjenja prema ovom pronalasku uključuje upotrebu odgovarajuće supstituisanog aril-fluorida.

1. Njegovom reakcijom sa odgovarajućim nukleofilom, kao što je intermedijer 2 gde M može biti MgBr ili Li, mogu se dobiti supstituisani aril-halogenidi kao što je 3. Halogenovanje, poželjno bromovanje, može se izvršiti tretiranjem jedinjenja 3 reagensima kao što je N-bromosukcinimid, čime se dobija bromid 4. Tretman jedinjenja 4 aminom 5 u baznim uslovima, kao što je kalijumkarbonat, dovodi do početnog izmeštanja sekundarnog bromida, praćenog ciklizacijom kojom se dobija laktam 6.

[0223] Kada je M stanan, 6 se može spojiti sa odgovarajuće supstituisanim heterociklusom 7 u Stilovoj reakciji kuplovanja uz upotrebu odgovarajućeg sistema katalizatora (npr. Pd(PPh₃)₄ ili bis(trifenilfosfin)dihloropalatinat(II)/CuI), čime se dobija 8. Alternativno, 6 se može konvertovati u bornu kiselinu ili borni estar 9, primenom uslova koji su dobro poznati prosečnom stručnjaku u oblasti. Borna kiselina ili borni estar, 9, mogu se spojiti sa odgovarajuće supstituisanim heterociklusom 10 u Suzuki-Miyaura reakciji kuplovanja, primenom odgovarajućeg paladijumskog katalizatora (npr. Pd(PPh₃)₄ ili [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropalatinat(II)) u prisustvu odgovarajuće baze (npr. cezijum-karbonat, kalijum-fosfat ili natrijum-bikarbonat), čime se dobija 8.

[0224] U zavisnosti od konkretno izabrane zaštitne grupe karboksilne kiseline R u intermedijeru 8, mogu biti potrebni različiti uslovi za konverziju u jedinjenje 11 (shema 2). Na primer, kada je R = metil, etil ili benzil, može biti poželjnija bazom-indukovana ciklizacija 8 radi direktne konverzije 8 u 11, uz upotrebu odgovarajuće baze (npr. LiHMDS) u odgovarajućem rastvaraču (npr. tetrahidrofuran). Kada je R = terc-butil, može biti poželjnija kiselinom-indukovana ciklizacija 12 radi direktne konverzije 8 u 11, uz upotrebu odgovarajuće kiseline (npr. benzensulfonska kiselina) u odgovarajućem rastvaraču (npr. acetonitril). U nekim slučajevima može biti poželjan postupak u dva koraka, u kojem se najpre oslobađa slobodna karboksilna kiselina koja odgovara 8, uz upotrebu uslova pogodnih za konkretnu zaštitnu grupu R. Takvi postupci su dobro poznati prosečnom stručnjaku u oblasti organskih sinteza. Na primer, kada je R =terc-butil, poželjna može biti kiselinska hidroliza uz primenu odgovarajuće kiseline (npr. trifluorsirćetna kiselina ili hlorovodonična kiselina). Kada je R = metil, etil ili benzil, poželjna može biti bazna hidroliza uz upotrebu odgovarajuće baze (npr. LiOH). U drugim slučajevima, kada je R = benzil, može biti korisno uklanjanje zaštitne grupe putem vodoničneolize katalizovane paladijumom. Nakon uklanjanja zaštitne grupe, karboksilna kiselina se može aktivirati za intramolekulski napad od strane primarnog amida vezanog kao bočna grupa (pendant amide), dejstvom tionil-hlorida/dimetilformamida ili karbonildiimidazola/dimetilaminopiridina, čime se dobija 11.

PRIMERI

[0225] Sledeći primeri ilustruju pojedina tehnička rešenja predmetnog pronalaska i ne ograničavaju obim predmetnog pronalaska. Hemijske skraćenice i simboli, kao i naučne skraćenice i simboli, imaju svoja uobičajena i prihvaćena značenja, osim ako nije drugačije naznačeno. Dodatne skraćenice korišćene u primerima i drugde u ovoj prijavi definisane su ranije. Zajednički intermedijeri generalno su korisni za pripremu više od jednog primera. Jedinjenja iz primera identifikuju se na osnovu broja primera i koraka u kojem su pripremljena (npr. „1-A“ označava primer 1, korak A), ili samo brojem primera ako se radi o naslovnom jedinjenju primera (na primer, „1“ označava naslovno jedinjenje primera 1). U pojedinim slučajevima opisane su alternativne pripreme intermedijera ili primera. Često će hemičari, stručnjaci u oblasti sinteze, osmisliti alternativne postupke pripreme koji mogu biti poželjniji iz jednog ili više razloga, kao što su kraće vreme reakcije, jeftiniji polazni materijali, jednostavnija procedura rada ili izolacije, veći prinos, pogodnost za katalizu, izbegavanje toksičnih reagenasa, dostupnost specijalizovane opreme i manji broj linearnih kokancera, itd. Svrha opisivanja alternativnih postupaka jeste dodatno omogućavanje pripreme primera ovog pronalaska. U nekim slučajevima, određene funkcionalne grupe u prikazanim primerima i patentnim zahtevima mogu biti zamenjene poznatim bioizosternim grupama poznatim u oblasti, na primer, zamenom karboksilne grupe tetrazolnom ili fosfatnom grupom.

SKRAĆENICE

[0226]

CAN acetonitril

AIBN 2,2-azobisiosbutironitril

n-BuLi n-butil litijium

DCE dihloroetan

DCM dihlorometan

DIPEA N,N-diizopropiletilamin

DMF dimetilformamid

DMSO dimetil sulfoksid

dppf bis(difenilfosfino)ferocen

EtOH etanol

EtOAc etil acetat

Hex heksan

H-Glu(OtBu)-NH2HCl terc-butil (4S)-4,5-diamino-5-oksopentanoat hidrohlorid

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

Hunig-ova baza N,N-diizopropiletilamin

LiHMDS litijum bis(trimetilsilil)amid

MeCN acetonitril

min minut(i)

mL mililitar(i)

NBS n-bromsukcinimid

Pd(dppf)2Cl2[1,1'-bis(difenilfosfin)ferocen]dihloropaladijum(II)

Pd(dtbpf)Cl2[1,1'-Bis(di-terc-butilfosfin)ferocen]dihloropaladijum(II) Pd(PPh3)4tetrakis(trifenilfosfin)paladijum

PhSO3H benzenesulfonska kiselina

PTSOH para-toluensulfonska kiselina

TEA trietilamin

THF tetrahidrofuran

XPhos Pd G2 hloro(2-dicikloheksilfosfin-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)

Preparativna HPLC metoda 1: kolona XBridge C18, dimenzija 200 mm x 19 mm, čestice veličine 5 µm; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM acetatom amonijuma; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM acetatom amonijuma; Gradijent: zadržavanje na 15% faze B 0 minuta, zatim porast sa 15% na 50% faze B tokom 25 minuta, potom zadržavanje na 100% faze B tokom 6 minuta; Protok: 20 mL/min;Temperatura kolone: 25 °C. Skupljanje frakcija pokretano je MS signalima.

PRIMER 1 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril

[0227]

Priprema 1A: terc-butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-4-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat.

[0228] Suspenziji terc-butil (S)-4,5-diamino-5-oksopentanot hidrohlorida (2,162 g, 6,06 mmol) u acetonitrilu (30 ml) na 0 °C je dodat DIPEA (3,018 ml, 17,28 mmol). Nakon mešanja 20 minuta, reakciona smeša je tretirana rastvorom metil 4-bromo-2-(bromometil)-3-metilbenzoata (2,650 g, 8,22 mmol) u MeCN (10 ml). Smeša je mešana na 0 °C 5 minuta. Ledeno kupatilo je uklonjeno, a smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 60 °C i održavana na toj temperaturi preko noći. Reakcioni rastvor je koncentrisan, rastvoren u EtOAc, dvaput je pran vodom, zatim rastvorom K₂HPO₄ (1,5 M), potom koncentrovanim rastvorom soli, a zatim sušen preko MgSO₄, filtriran i koncentrisan. Materijal je pročišćen na silika gelu eluisanjem sa 30-100% EtOAc/heksan. Dobijeni proizvod je tretiran sa 8 ml etra da bi se dobio prinos od 33,7% jedinjenja iz naslova.<.1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.70 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.56 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.23 (br s, 1H), 5.31 (br s, 1H), 4.92 (dd, J=8.6, 6.4 Hz, 1H), 4.55-4.47 (m, 1H), 4.45-4.36 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.41-2.14 (m, 4H), 1.45 (s, 9H).

Priprema 1B: terc-butil (S)-5-amino-4-(4-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0229] U suv erlenmajer je stavljen terc-butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-4-metil-1-oksisoindolin-2-il)-5-oksopentanot (300 mg, 0,730 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (278 mg, 1,094 mmol) i acetat kalijuma (214 mg, 2,188 mmol), nakon čega je smeša ispražnjena azotom. Čvrste supstance su suspendovane u dioksanu (10 ml) i degasirane protokom azota 5 minuta uz mešanje. Reakcioni rastvor je tretiran Pd(dppf)Cl₂ (16,02 mg, 21,88 µmol). Erlenmajer je dodatno degasiran 5 minuta, zatvoren i zagrejan na 60 °C tokom 18 h pod azotnom atmosferom. Reakcioni rastvor je razblažen EtOAc, opran koncentrovanim rastvorom soli i osušen preko MgSO₄. Nakon koncentracije, proizvod je pročišćen na koloni sa 40 g silika gela pomoću ISCO sistema, eluisanjem sa 0-40% B/DCM (gde B= 15% EtOH/EtOAc 0,1% TEA), čime je dobijen proizvod sa prinosom od 99%. MS (ES): m/z = 459.3 [M+H]<+>.

Primer 1:

[0230] U mikrotalasnu bočicu od 2 mL stavljen je 2-amino-6-bromo-4-metilnikotinonitril (12 mg, 0,057 mmol), terc-butil (S)-5-amino-4-(4-metil-1-oks0-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanot (28,5 mg, 0,062 mmol), Pd(dtbpf)Cl₂ (1,106 mg, 1,698 µmol), dioksan (1,5 mL) i vodeni rastvor K₃PO₄ (0,075 mL, 0,226 mmol). Bočica je zatvorena, a vazduh je zamenjen azotom. Smeša je tretirana mikrotalasima 15 minuta na 120 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcioni rastvor je razblažen EtOAc, opran koncentrovanim rastvorom soli, a organski sloj je odvojen i koncentrisan. Dobijeni ostatak rastvoren je u 1 mL rastvora benzensulfonske kiseline u acetonitrilu (1,44 g/40 mL) i tretiran mikrotalasima 10 minuta na 120 °C. Materijal je koncentrisan do suvog stanja, ostatak rastvoren u 1,9 mL DMSO, i pročišćen preparativnom HPLC metodom 1, čime je dobijen naslovno jedinjenje sa prinosom od 49%. MS (ES): m/z = 390.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.03 (s, 1 H) 7.66 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.53 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 6.91 (s, 2 H) 6.78 (s, 1 H) 5.18 (br dd, J=13.43, 5.19 Hz, 1 H) 4.52 (br d, J=17.09 Hz, 1 H) 4.35 (br d, J=17.40 Hz, 1 H) 2.91-3.01 (m, 1 H) 2.65 (br d, J=16.78 Hz, 1 H) 2.47 (br dd, J=13.12, 4.27 Hz, 1 H) 2.43 (s, 3 H) 2.33 (s, 3 H) 2.03-2.10 (m, 1 H).

PRIMER 2 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-6-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril

[0231]

Priprema 2A: Metil 4-bromo-2-(bromometil)-5-metilbenzoat.

[0232] U rastvor 4-bromo-2,5-dimetilbenzoeve kiseline (5,0 g, 21,82 mmol) na sobnoj temperaturi dodato je SOCl₂ (31,66 mL, 436 mmol) i mešano 2 h. Formiranje acil-hlorida je potvrđeno LCMS analizom, nakon čega je smeša koncentrovana do suvog stanja. Dodat metanol (30 mL) na sobnoj temperaturi i mešano je 0,5 h, zatim je ponovo koncentrisano do suvog stanja. U dobijeni metil estar je dodat (180 mL), zatim 1-bromopirrolidin-2,5-dion (4,08 g, 22,92 mmol), a potom AIBN (0,108 g, 0,654 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 80 °C uz mešanje preko noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je koncentrovana, rastvorena u EtOAc, oprana koncentrovanim rastvorom soli, i osušena preko MgSO₄. LCMS analiza je pokazala dva glavna pik-a. Dobijena smeša regioizomera (5,4 g) korišćena je u narednom koraku.

Priprema 2B: terc-butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-6-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0233] U suspenziju metil 4-bromo-2-(bromometil)-5-metilbenzoata (5,4 g, 16,76 mmol) u acetonitrilu (100 mL) dodat je terc-butil (S)-4,5-diamino-5-oksopentanoat, HCl (4,00 g, 16,76 mmol), nakon čega je dodata i Hunigova baza (5,84 mL, 33,52 mmol). Nakon mešanja 1 h na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je stavljen u kupatilo na 40 °C i mešan na toj temperaturi 6 dana. Reakciona smeša je zatim ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena EtOAc, oprana koncentrovanim rastvorom soli, osušenom preko MgSO₄, filtrirana i koncentrovana. Dobijeni ostatak je pročišćen na ISCO koloni (120 g), eluisanjem sa EtOAc/DCM u opsegu od 0 do 100%, čime je dobijeno 2,80 g željenog jedinjenja. Pored toga, izolovana su dva sporedna proizvoda: metil (S)-5-(((1-amino-5-(tert-butoksi)-1,5-dioksopentan-2-il) amino)metil)-4-bromo-2-metilbenzoat i terc-butil (S)-5-amino-4-(((2-((R)-1-amino-5-(tert-butoksi)-1,5-dioksopentan-2-il)-6-bromo-3-oksizoindolin-5-il)metil) amino)-5-oksopentanoat. MS (ES): m/z = 411.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 7.70 (d, J=6.44 Hz, 2 H) 6.31 (br s, 1 H) 5.36 (br s, 1 H) 4.90 (dd, J=8.68, 6.34 Hz, 1 H) 4.51 (d, J=16.98 Hz, 1 H) 4.41 (d, J=16.98 Hz, 1 H) 2.51 (s, 3 H) 2.21-2.43 (m, 3 H) 2.12-2.19 (m, 1 H) 1.44 (s, 9 H).

Priprema 2C: terc-butil (S)-5-amino-4-(6-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0234] U bočici pod pritiskom od 40 mL stavljen je terc-butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-6-metil-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (600 mg, 1,458 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (556 mg, 2,188 mmol) i acetat kalijuma (430 mg, 4,376 mmol), nakon čega je smeša ispražnjena azotom. Čvrste supstance su suspendovane u dioksanu (20 mL) i degasirane protokom azota 5 minuta uz mešanje. Reakcioni rastvor je tretiran Pd(dppf)Cl₂ (32,02 mg, 0,044 mmol) i dodatno degasiran 5 minuta. Bočica je zatvorena i zagrevana na 95 °C 3 h pod azotnom atmosferom. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, rastvor je razblažen EtOAc, opran koncentrovanim rastvorom soli i osušen preko MgSO₄. Filtrat je koncentrisan i pročišćen na koloni sa 40 g silika gela pomoću ISCO sistema, eluisanjem sa 0-40% (B/DCM, gde B= 15% EtOH/EtOAc 0,1% TEA), čime je dobijeno naslovno jedinjenje sa prinosom od 95%. MS (ES): m/z = 459.3 [M+H]<+>.

Primer 2:

[0235] U mikrotalasnu bočicu od 2 mL stavljen je 2-amino-6-bromo-4-metilnikotinonitril (12 mg, 0,057 mmol), terc-butil (S)-5-amino-4-(6-metil-1-oks0-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (28,5 mg, 0,062 mmol), Pd(dtbpf)Cl₂ (1,106 mg, 1,698 µmol), dioksan (1,5 mL) i vodeni rastvor K₃PO₄ (0,075 mL, 0,226 mmol). Bočica je zatvorena, a vazduh je zamenjen azotom. Smeša je tretirana mikrotalasima 15 minuta na 120 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcioni rastvor je razblažen EtOAc, opran koncentrovanim rastvorom soli, organski sloj je odvojen i koncentrisan. Dobijeni ostatak rastvoren je u 1 mL rastvora benzensulfonske kiseline u acetonitrilu (1,44 g/40 mL) i tretiran mikrotalasima 10 minuta na 120 °C. Smeša je koncentrovana do suvog stanja, ostatak rastvoren u 1,7 mL DMSO, i pročišćen preparativnom HPLC metodom 1, čime je dobijen naslovno jedinjenje sa prinosom od 35%. MS (ES): m/z = 390.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.97-11.02 (m, 1 H) 7.65 (s, 1 H) 7.55 (s, 1 H) 6.76 (s, 1 H) 5.13 (dd, J=13.31, 5.18 Hz, 1 H) 4.39-4.51 (m, 1 H) 4.28-4.39 (m, 1 H) 2.87-2.98 (m, 1 H) 2.58-2.65 (m, 1 H) 2.51 (d, J=1.74 Hz, 3 H) 2.42-2.46 (m, 1 H) 2.41 (br s, 3 H) 2.39-2.40 (m, 1 H) 1.99-2.06 (m, 1 H).

PRIMER 3 2-Amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril

[0236]

Intermedijer 3A: 5-Bromo-4-fluoro-3-hidroksiizobenzofuran-1(3H)-on

[0237] U rastvor 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (7,07 mL, 41,6 mmol) u THF-u (150 mL), koji je mešan, dodat je rastvor n-BuLi u heksanu (2,5 M, 16 mL, 40,0 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana 30 minuta na 0 °C. U ovo, dodat je rastvor 4-bromo-3-fluorbenzoeve kiseline (3,5 g, 15,98 mmol) u anhidrovanom THF-u (100 mL) u kapima i na -50 °C. Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi 3 h. Na -50 °C dodat je anhidrovani DMF (2,48 mL, 32,0 mmol), a zatim je reakciona smeša vraćen na sobnu temperaturu i mešana 16 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 1,5 N HCl (100 mL). reakciona smeša je ekstrahovana sa etil-acetatom (3 x 30 mL). Kombinovani organski sloj je opran koncentrovanim rastvorom soli, osušen preko anhidrovanog Na₂SO₄, filtriran i koncentrisan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak pročišćen je flash hromatografijom (SiO₂, kolona 120 g, 0-50% EtOAc/pet-etar), da bi se dobio 5-bromo-4-fluoro-3-hidroksiizobenzofuran-1(3H)-on (1,0 g, prinos 23%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (metoda A): vreme zadržavanja 0,48 min, [M+H]<+>245.1, 247.1;<1>H NMR (400 MHz, Acetonitril-d3) δ 7.93 (dd, J = 8.0, 5.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.74 (br s, 1H), 5.94 (br s, 1H).

Intermedijer 3B: terc-Butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0238] U mešanu smešu 5-bromo-4-fluoro-3-hidroksiizobenzofuran-1(3H)-ona (1,7 g, 6,88 mmol) i terc-butil (S)-4,5-diamino-5-oksopentanoata HCl (1,67 g, 8,26 mmol) u DMF-u (30 mL), dodat je natrijum triactetoksiborohidrid (3,65 g, 17,21 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim vraćen na sobnu temperaturu i mešana 48 h. Reakciona smeša je razblažena ledenom vodom (50 mL), a nastali beli talog je filtriran i osušen pod smanjenim pritiskom da bi se dobio terc-butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-4-fluoro-1-oksisoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (1,6 g, prinos 50%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,39 min., [M+H]<+>413.9, 415.3;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (dd, J = 8.0, 6.0 Hz, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (br s, 1H), 4.77-4.59 (m, 3H), 2.26-2.13 (m, 3H), 2.08-1.96 (m, 1H), 1.34 (s, 9H).

Intermedijer 3C: terc-Butil (S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-cijano-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0239] U mešanu smešu 2-amino-6-hlor-4-metilnikotinonitrila (50 mg, 0,30 mmol) i heksametilditina (0,093 mL, 0,45 mmol) u toluenu (2 mL) pušten je argon pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (9,72 mg, 0,015 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata na 100 °C, ohlađen na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi proizvod. [M+H]+ iznosi 298,2.U rastvor sirovog proizvoda u dioksanu (2 mL) dodat je terc-butil (S)-5-amino-4-(5-bromo-4-fluoro-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (98 mg, 0,24 mmol). Smeša je pročišćena argonom pet minuta, zatim je dodat bis(trifenilfosfin)palladijum(II) hlorid (16,60 mg, 0,024 mmol) i reakcioni smeša je zagrevan na 100 °C tokom 16 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je filtrirana, a filtrat koncentrisan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji je očišćen flash hromatografijom (SiO2, kolona od 80 g, 0-100% B (B = 15% EtOH u EtOAc, 0,5% TEA)/hloroform) da bi se dobio terc-butil (S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-ciano-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (60 mg, prinos 40,7%). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,35 min, [M+H]+ 468,3.

Primer 3:

[0240] U mešani rastvor indermedijera 3C (60 mg, 0,13 mmol) u sirćetnoj kiselini (2 mL) dodat je benzensulfonat (20,30 mg, 0,13 mmol). Reakcions smeša je zagrejana na 150 °C pod mikrotalasnim zračenjem 10 minuta. Isparljivi sastojci su uklonjeni pod smanjenim pritiskom, a dobijeni sirovi proizvod je pročišćen pripremnom LC-MS hromatografijom (kolona: Waters XBridge C18, 19 x 150 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 0,1% trifluoroetanska kiselina u vodi; mobilna faza B: acetonitril; gradijent: od 10 do 40% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje 5 minuta na 100% B; protok: 15 mL/min). Dobijeni željeni frakcioni su liofilizovani do suvog stanja da bi se dobio 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-fluoro-1-oksisoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (15 mg, prinos 29%). LCMS (Metoda G): retenciono vreme 1.62 min, [M+H]<+>394.2;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (br s, 1H), 8.01 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.70 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.06 (d, J=1.5 Hz, 1H), 6.99 (s, 2H), 5.14 (dd, J=13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.74-4.38 (m, 2H), 3.05-2.85 (m, 1H), 2.75-2.57 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.13-1.95 (m, 1H).

[0241] Opšta procedura 2: Mešani rastvor intermedijera 3B (1 ekvivalent) i aril stananog reagensa (1 ekvivalent) u dioksanu (5 mL po mmol) je pročišćena argonom tokom pet minuta. Dodat je bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorid (0,1 ekvivalent), a reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana kroz sloj celita, a filtrat koncentrisan pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je prenet u mikrotalasnu bočicu, dodati su PhSO3H (2 ekvivalenta) i sirćetna kiselina (5 mL po mmol), a smeša je zagrejana na 150 °C u mikrotalasnom reaktoru tokom 10 minuta. Smeša je koncentrovana, a ostatak je pročišćen preparativnom HPLC.

PRIMER 43-(5-(6-Amino-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0242]

Intermedijer 4A: 4-Metil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin

[0243] Mešani rastvor 6-bromo-4-metilpiridin-2-amina (75 mg, 0,382 mmol) i heksametilditina (0,119 mL, 0,57 mmol) u toluenu (5 mL) pročišćena je argonom tokom pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II) (12,4 mg, 0,02 mmol). Reakcioni sistem je mešan 2 h na 100 °C, zatim ohlađen na sobnu temperaturu i filtriran. Filtrat je koncentrisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio 4-metil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin (130 mg, prinos 89 %). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,62 min. [M+H]<+>273.1.

Primer 4:

[0244] Stilovo kuplovanje i ciklizacija su izvedeni prateći opštu proceduru 2 koristeći preparat 4A i preparat 3B. MS (ES): m/z = [M+H]<+>369.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.02 (s, 1H), 8.02 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.15 (dd, J = 5.0, 13.3 Hz, 1H), 4.66-4.57 (m, 1H), 4.49-4.38 (m, 1H), 3.02-2.85 (m, 1H), 2.62 (br d, J = 17.4 Hz, 1H), 2.49-2.40 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 1H).

PRIMER 53-(5-(6-Amino-4-(trifluoroetil) piridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion

[0245]

Intermedijer 5A:

[0246] Mešani rastvor 6-hlor-4-(trifluorometil)piridin-2-amina (75 mg, 0,382 mmol) i heksametilditina (0,119 mL, 0,57 mmol) u toluenu (5 mL) je pročišćen argonom tokom pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen]dikloropalladijum(II) (12,4 mg, 0,02 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 h na 100 °C, zatim ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio 4-(trifluorometil)-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin (130 mg, 89 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,92 min. [M+H]<+>327.1.

Primer 5:

[0247] Stilovo kuplovanje i ciklizacija su izvedeni prateći opštu proceduru 1 sa intermedijerom 5A i intermedijerom 3B. MS (ES): m/z = [M+H]<+>423.3;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.02 (s, 1H), 8.05 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.78 (d, J = 11.8 Hz, 3H), 5.15 (dd, J = 5.0, 13.3 Hz, 1H), 4.68-4.57 (m, 1H), 4.52-4.39 (m, 1H), 2.99-2.82 (m, 1H), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.12-1.93 (m, 1H).

PRIMER 63-(4-Fluoro-5-(4-metil-6-(metilamino)piridin-2-il)-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion

[0248]

Intermedijer 6A: N,4-Dimetil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin

[0249] Mešana smeša rastvora 6-hlor-N,4-dimetilpiridin-2-amina (100 mg, 0,64 mmol) i heksametilditina (0,199 mL, 0,96 mmol) u toluenu (10 mL) je pročišćena argonom tokom pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (20,8 mg, 0,032 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 hna 100 °C, zatim ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio N,4-dimetil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin (250 mg, 55,0 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,29 min. [M+H]<+>287.1.

Primer 6:

[0250] Stilovo kuplovanje i ciklizacija su izvedeni prateći opštu proceduru 2 sa intermedijerom 6A i intermedijerom 3B. MS (ES): m/z = [M+H]<+>383.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.03 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.72 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.58 (br s, 1H), 5.16 (dd, J = 13.1, 5.0 Hz, 1H), 4.82-4.40 (m, 3H), 2.89 (s, 3H), 2.75-2.63 (m, 1H), 2.64-2.57 (m, 1H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.36-2.28 (m, 3H), 2.06-2.00 (m, 1H).19/19

PRIMER 7 3-(5-(6-Amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0251]

Intermedijer 7A: 3,4-Dimetil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin

[0252] Mešana smeša rastvora 6-hloro-3,4-dimetilpiridin-2-amina (75 mg, 0,48 mmol) i heksametilditina (0,149 mL, 0,72 mmol) u toluenu (3 mL) je pročišćena argonom tokom pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (15,6 mg, 0,024 mmol). Smeša je mešana tokom 2 h na 100 °C, zatim ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio 3,4-dimetil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin (150 mg, 55,0 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,16 min., [M+H]<+>287.2.

Primer 7:

[0253] Stilovo kuplovanje i ciklizacija su izvedeni prateći opštu proceduru 1 sa intermedijerom 7A i intermedijerom 3B. MS (ES): m/z = [M+H]<+>383.0;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (br s, 1H), 8.05 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.81 (s, 2H), 5.14 (dd, J = 13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.71-4.34 (m, 2H), 3.01-2.88 (m, 1H), 2.67-2.58 (m, 2H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.04 (s, 3H).

PRIMERI 8 I 9 3-((S)-5-(6-Amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion i 3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

Intermedijer 8A: 4-Bromo-2-etilbenzoeva kiselina

[0255] U rastvor 4-bromo-2-fluorobenzoeve kiseline (5 g, 22,83 mmol) u anhidrovanom THF-u (100 mL) dodata je 1 M rastvor etilmagnezijum bromida u THF-u (22,83 mL, 68,5 mmol) na -78 °C u trajanju od 15 minuta. Reakciona smeša je polako zagrevana do sobne temperature i mešana pod azotnom atmosferom 12 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C. Reakcija je zaustavljena dodavanjem metanola (15 mL) kap po kap. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni talog je rastvoren između EtOAc i 2 M vodene HCl. Slojevi su odvojeni, a vodena faza ekstrahovana je dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran sa koncentrovanim rastvorom soli, osušen nad bezvodnim Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen flash hromatografijom (SiO2, kolona od 80 g, 0-30% EtOAc/pet-etar) da se dobije 4-bromo-2-etilbenzoeva kiselina (4 g, 76 % prinos). LCMS (Metoda D): vreme zadržavanja 2,49 min , [M+H]<+>228.8, 230.0;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.04 (br s, 1H), 7.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 2.92 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.5 Hz, 3H).

Intermedijer 8B: Metil 4-bromo-2-etilbenzoat

[0256] U mešanu smešu 4-bromo-2-etilbenzoeve kiseline (4,0 g, 17,46 mmol) i Cs2CO3(11,38 g, 34,9 mmol) u DMF-u (40 mL) dodat je jodometan (2,18 mL, 34,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 h, zatim filtrirana preko sloja celita i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Preostali proizvod je prečišćen flash hromatografijom (SiO2, kolona 80 g, 0-50% EtOAc/pet-etar) da se dobije metil 4-bromo-2-etilbenzoat (3,3 g, 78 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.99 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.5 Hz, 3H).

Intermedijer 8C: Metil 4-bromo-2-(1-bromoetil)benzoat

[0257] U mešani rastvor metil 4-bromo-2-etilbenzoata (3,0 g, 12,34 mmol) u benzenu (40 mL) dodat je NBS (3,29 g, 18,51 mmol), a potom AIBN (0,405 g, 2,47 mmol). Smeša je grejana na 85 °C tokom 15 h. Reakcioni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, razblažen sa EtOAc, ispirana zasićenom 10% rastvorom natrijum tiosulfata i koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Preostali proizvod je prečišćen flash hromatografijom (SiO2, kolona 40 g, 0-30% EtOAc/pet- etar) da se dobije metil 4-bromo-2-(1-bromoetil)benzoat (2,1 g, 53% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.49 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 6.28 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H).

Intermedijer 8D: terc-Butil (4S)-5-amino-4-(5-bromo-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0258] U mešani rastvor metil 4-bromo-2-(1-bromoetil) benzoata (1,0 g, 3,11 mmol) i H-Glu(OtBu)-NH2HCl (0,754 g, 3,73 mmol) u acetonitrilu (30 mL) dodat je DIPEA (2,71 mL, 15,53 mmol). Nastala reakciona smeša je grejana na 85 °C tokom 15 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen flash hromatografijom (SiO2, kolona 40 g, 0-10% MeOH/DCM) da bi se dobio terc-butil (4S)-5-amino-4-(5-bromo-3-metil-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanоat (650 mg, 51 % prinos) kao polučvrsta supstanca. LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,45 min, [M+H]<+>411.3, 413.3.

Intermedijer 8E: terc-butil 5-amino-4-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0259] U mešanu smešu 6-hloro-3,4-dimetilpiridin-2-amina (200 mg, 1,28 mmol) i heksametilditina (544 mg, 1,66 mmol) u toluenu (6 mL) uveden je argon tokom pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II) (83 mg, 0,13 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 h na 100 °C, zatim ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. [M+H]<+>287,0. U rastvor sirovog proizvoda u dioksanu (4 mL) dodat je terc-butil 5-amino-4-(5-bromo-3-metil-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanоat (0,289 g, 0,70 mmol). Reakciona smeša je ponovo pročišćena argonom tokom pet minuta. Dodat je bis(1,2-bis(difenilfosfino)etan)paladijum(0) (0,063 g, 0,07 mmol) i reakcija je grejana na 100 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana, a filtrat koncentrovan pod redukovanim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen flash hromatografijom (SiO2, kolona 80 g, 0-100% B (B = 15% EtOH u EtOAc 0,5% TEA)/hloroform) da bi se dobio terc-butil 5-amino-4-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanоat (110 mg, 34,6 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,40 min., [M+H]<+>453.3.

Intermedijer 8F: 3-(5-(6-Amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0260] U mešani rastvor terc-butil 5-amino-4-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksizoindolin-2-il)-5-oksopentanоata (110 mg, 0,243 mmol, prinos 34,6 %) u acetonitrilu (5 mL) dodata je p-toluensulfonska kiselina (84 mg, 0,442 mmol). Reakciona smeša je grejana na 120 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 30 minuta. Isparljive komponente su uklonjene pod redukovanim pritiskom, a sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC-om (kolona: Hypersil gold c18 (19 x 250 mm), 5 µm; mobilna faza A: 10 mM amonijum acetat u vodi; mobilna faza B: acetonitril; protok: 20 mL/min; gradient B/A: 0/20%, 18/80%, 19/100%, 21/100%, 22/20%, 24/20%). Željene frakcije su liofilizovane do suvog stanja da bi se dobio 3-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksisoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion. LCMS (Metoda D): vreme zadržavanja 2,15 min., [M+H]<+>379.0.

Primeri 8 i 9:

[0261] 3-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (100 mg) je podvrgnut SFC separaciji, (Kolona Welk-01(R,R) (250*4,6 mm), 5 µm; % CO2: 45%;

[0281] Metoda G: Kolona-Kinetex XB-C18 (75 x 3 mm, 2,6 µm); Mobilna faza A: 5 mM NH₄CO₂H u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: od 20 %B do 100 %B tokom 4 minuta, protok 1,0 mL/min; zadržavanje do 4,6 minuta, protok 1,5 mL/min; zadržavanje do 4,7 minuta; od 4,7 do 5,0 minuta 20 %B, protok 1,0 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

PRIMER 18 3-(5-(6-Amino-3-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0282]

[0283] Primer 18 je sintetisan iz 6-hlorpiridin-2-amina i intermedijera 3B korišćenjem opšteg postupka 2. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (Kolona: Waters XBridge C18, 150 mm × 19 mm, čestice 5 µm; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, prelaz sa 10% na 30% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje 5 minuta na 100% B; Protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 0,98 min, [M+H]<+>369.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.04 (s, 1H), 7.77 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.74-7.68 (m, 1H), 6.93-6.87 (m, 1H), 5.17 (dd, J = 13.3, 5.1 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.55-4.47 (m, 1H), 3.01-2.89 (m, 2H), 2.67-2.61 (m, 1H), 2.47-2.39 (m, 1H), 2.04 (s, 3H).

Opšta procedura 4:

[0284] Smeša aril halida (1 ekv.), pinakol estra aril boronske kiseline (1,0 ekv.), kalijum-karbonata (1,5 eq.), dioksana (4 mL/mmol) i vode (0,4 mL/mmol) je prečišćena argonom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je kompleks [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum(II) dihlorida u dihlorometanu (0,05 ekv.) i reakciona smeša je zagrevana na 110 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena EtOAc i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je ispran koncentrovanim rastvorom soli, osušen anhidrovanim Na₂SO₄, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen flash hromatografijom. Izolovani proizvod je rastvoren u acetonitrilu, dodat je p-toluensulfonat monohidrat (pTSA•H₂O, 2 ekv.), a smeša je zagrevana na 120 °C u mikrotalasnom reaktoru 1,5 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobio željeni proizvod.

PRIMER 19 3-(5-(6-Amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0285]

Intermedijeri 19A i 19B: 6-Bromo-3-fluoro-4-metilpiridin-2-amin i 6-bromo-5-fluoro-4-metilpiridin-2-amin

[0286] U rastvor 6-bromo-4-metilpiridin-2-amina (2,6 g, 13,90 mmol) u hloroforumu (100 mL) i vodi (100 mL) dodat je Selectfluor (2,462 g, 6,95 mmol). Reakcioni smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 48 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM-om (200 mL), ispirana koncentrovanim rastvorom soli, osušena preko bezvodnog Na₂SO₄, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću flash hromatografije (SiO₂, kolona od 80 g, 0–30% EtOAc/petroletar), čime je dobijen intermedijer 19A: 6-bromo-3-fluoro-4-metilpiridin-2-amin (600 mg, 19,6% prinos); LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,21 min, [M+H]<+>207,1.¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 6,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 6,55 (s, 2H), 2,13 (d, J = 1,9 Hz, 3H); i intermedijer 19B: 6-bromo-5-fluoro-4-metilpiridin-2-amin (500 mg, 4,4% prinos); LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,14 min., [M+H]<+>207.1;<1>H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δ 6.25 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.52-4.22 (m, 2H), 2.23 (d, J = 1.1 Hz, 3H).

Primer 19:

[0287] Primer 19 je sintetisan korišćenjem opšteg postupka 4 sa 6-bromo‑3-fluoro‑4-metilpiridin‑2-aminom i terc-butil (S)-5-amino-4-(4-fuoro-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoatom (sintetisan postupcima prikazanim u primeru 2 počevši od 4-bromo‑3-fluoro‑2-metilbenzoeve kiseline). Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (Kolona: YMC EXRS 250 mm x 21 mm, Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda 0,1% trifuorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, 10-30% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje 5 minuta na 100% B; Brzina protoka: 20 mL/min LCMS (Metoda D): vreme zadržavanja 1.56 min, [M+H]+ 387.15; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.02 (s, 1H), 8.09-7.92 (m, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32-6.78 (m, 1H), 5.14(dd, J = 13.8, 5.8 Hz,1H), 4.74-4.33 (m, 2H), 2.98-2.86 (m, 1H), 2.68-2.56 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 22.09-2.05(m, 1H).

PRIMER 20 3-(5-(6-Amino-3-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0288]

[0289] Primer 20 je sintetisan korišćenjem opštog postupka 4 sa 6-bromo-5-fluoro-4-metilpiridin-2-aminom i terc-butilom (S)-5-amino-4-(4-fluoro-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoatom (sintetisano postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline). Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (Kolona: Waters XBridge C18, 150 mm × 19 mm, čestice 5 µm; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1 % trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10 % B, prelaz sa 10 % na 30 % B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje 5 minuta na 100 % B; Protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,03 minuta, [M+H]<+>387.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 11.04 (s, 1H), 7.74-7.57 (m, 2H), 6.46 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.16 (dd, J = 5.0, 13.3 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 17.5Hz, 1H), 4.52-4.42 (m, 1H), 3.03-2.86 (m, 1H), 2.68-2.59 (m, 1H), 2.49-2.41 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.12-1.99 (m, 1H).

PRIMERI 21 I 223-(5-(6-Amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion

[0290]

Intermedijer 21A: terc-Butil (4S)-5-amino-4-(3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0291] Smeša intermedijera 8D (1,0 g, 2,43 mmol), kalijum acetata (0,239 g, 2,43 mmol) i bispina (0,617 g, 2,43 mmol) u bezvodnom DME (15 mL) je prečišćena argonom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂ adukt (0,159 g, 0,195 mmol) pod atmosferom argona. Bočica je zatvorena i smeša je zagrevana na 90 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana kroz sloj celita, a filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je rastvoren u dietil etru i filtriran kroz sloj celita. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio tert-butil (4S)-5-amino-4-(3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (1,0 g, 90 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,70 min., [M+H]<+>459.1.

Priprema 21B i 22B: terc-butil (4S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat

[0292] U rastvor terc-butil (4S)-5-amino-4-(3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (0,241 g, 0,527 mmol) u dioksanu (10 mL) dodat je 6-bromo-3-fluoro-4-metilpiridin-2-amin (0,09 g, 0,44 mmol), a zatim natrijum bikarbonat (0,5 M rastvor, 2,195 mL, 1,097 mmol). Reakciona smeša je prečišćena azotom tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi, zatim je dodat bis(trifenilfosfino)paladijum(II) hlorid (0,031 g, 0,044 mmol) pod azotnom atmosferom i zagrevana na 100 °C tokom 12 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je filtrirana kroz sloj celita i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen flash hromatografijom (SiO₂, kolona 24 g, 50-100 % EtOAc/DCM) da bi se dobio terc-butil (4S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (150 mg) kao smeša diastereomera. Diastereomeri su razdvojeni sa SFC (kolona Chiral Pak IG (250 × 4.6) mm, 5 µm; % CO₂: 45 %; % korastvarača: 5 mM amonijum acetat u metanolu i acetonitrilu (1:1); protok: 4 g/min; temperatura: 30 °C; UV detekcija: 237 nm), frakcije prvih eluiranih izomera na vremenu zadržavanja 3,4 min su koncentrisane do suva s i daju terc-butil (4S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (40 mg, 20 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,41 min, [M+H]<+>457,1 a frakcije sa drugim pikom eluirane na vremenu zadržavanja 4,6 min, koncentrisane su do suva stanja da se dobije tert-butil (4S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoat (50 mg, 25 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,40 min., [M+H]<+>457.4.

Primer 21:

[0293] U mešani rastvor (4S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (0,04 g, 0,088 mmol) u acetonitrilu (10 mL) dodata je benzensulfonska kiselina (0,028 g, 0,175 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 120 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 30 minuta. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, koncentrovana pod redukovanim pritiskom i prečišćena preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, čestice 5 µm; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1 % trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: zadržavanje na 10 % B 0 minuta, zatim od 10 % do 30 % B u toku 20 minuta, pa 5 minuta zadržavanje na 100 % B; Protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,19 min , [M+H]<+>383.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.95 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.07 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 4.4 Hz, 1H),4.82-4.67 (m, 2H), 2.93-2.79 (m, 1H), 2.71-2.59 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.05-1.96 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.6 Hz, 3H).

Primer 22:

[0294] U mešani rastvor (4S)-5-amino-4-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (0,04 g, 0,088 mmol) u acetonitrilu (10 mL) dodata je benzensulfonska kiselina (0,028 g, 0,175 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 120 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 30 minuta. Reakciona smeša je ohlađena sobnu temperaturu, koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a ostatak je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, čestice 5 µm; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1 % trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 0 minuta zadržavanja na 10 % B, zatim od 10 % do 30 % B u toku 20 minuta, pa 5 minuta zadržavanja na 100 % B; protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,19 min, [M+H]<+>383.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.92 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.07 (dd, J = 1.1, 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 4.3 Hz, 1H),6.26 (br s, 2H), 4.83 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.74 (br dd, J = 4.3, 11.3 Hz, 1H), 2.83-2.71 (m, 1H), 2.64-2.55 (m, 2H), 2.25 (d, J= 1.5 Hz, 3H), 2.09 -1.96 (m, 1H), 1.50 (d, J = 6.6 Hz, 3H).

PRIMER 232-Amino-6-((3R)-2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril

[0295]

[0296] Primer 23 je sintetisan iz 2-amino-6-hloro-4-metilnikotinonitrila i terc-butil (S)-5-amino-4-((R)-4-fluoro-3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (sintetisanog postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro2-metilbenzoeve kiseline) korišćenjem opšteg postupka 4. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, čestice 5 µm; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, zatim od 10% do 30% B tokom 20 minuta, i na kraju 5 minuta zadržavanja na 100% B; protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,19 min., [M+H]<+>408.0;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.00 (s, 1H), 8.17-7.85 (m, 1H), 7.73-7.52 (m, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.99 (s, 2H), 5.08-4.89 (m, 1H), 4.86-4.72 (m, 1H), 2.90-2.75 (m, 1H), 2.74-2.58 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.12-2.00 (m, 1H), 1.57-1.47 (m, 3H).

PRIMER 24 3-((R)-5-(6-Amino-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion

[0297]

[0298] Primer 24 je sintetisan iz 6-hloro-4-metilpiridin-2-amina i terc-butil (S)-5-amino-4-((R)-4-fluoro-3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (sintetisanog postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline), korišćenjem opšteg postupka 4. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, 5 µm čestice; mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, zatim od 10% do 30% B tokom 20 minuta, i na kraju 5 minuta zadržavanja na 100% B; protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,20 min. , [M+H]<+>383.2;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.00 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.01-7.84 (m, 1H), 7.71 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.96 (br d, J = 1.0 Hz, 1H), 6.71-6.54 (m, 1H), 4.99-4.91 (m, 1H), 4.87-4.78 (m, 1H), 2.86 (br dd, J = 4.4, 3.4 Hz, 1H), 2.75-2.62 (m, 2H), 2.47-2.44 (m, 1H), 2.34 (s, 4H), 1.94 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

PRIMER 253-((R)-5-(6-Amino-4-(trifluorometil)piridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0299]

[0300] Primer 25 je sintetisan iz 6-hloro-4-(trifluorometil)piridin-2-amina i terc-butil (S)-5-amino-4-((R)-4-fluoro-3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (sintetisanog postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline) korišćenjem opšteg postupka 4. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, 5 µm čestice; mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, zatim od 10% do 30% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja na 100% B; protok: 20 mL/min).LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,39 min , [M+H]<+>438.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.99 (s, 1H), 8.13-7.95 (m, 1H), 7.65 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.79 (s, 2H), 4.98-4.88 (m, 1H), 4.86-4.77 (m, 1H), 2.85 (br s, 1H), 2.93-2.78 (m, 1H), 2.72-2.59 (m, 2H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

PRIMER 26 3-((R)-5-(6-Amino-3-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion

[0301]

[0302] Primer 26 je sintetisan iz 6-hloro-5-metilpiridin-2-amina i terc-butil (S)-5-amino-4-((R)-4-fluoro-3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (sintetisanog postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline) korišćenjem opšteg postupka 4. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, 5 µm čestice; mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, zatim od 10% do 30% B tokom 20 minuta, i zatim 5 minuta zadržavanja na 100% B; protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,07 min [M+H]<+>383.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.01 (s, 1H), 7.90-7.77 (m, 1H), 7.74-7.61 (m, 2H), 6.86 (br dd, J = 5.5, 3.9 Hz, 1H), 4.96 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.84 (dd, J = 12.6, 5.1 Hz, 1H), 3.01-2.82 (m, 2H), 2.71-2.60 (m, 2H), 2.12-2.01 (m, 5H), 1.51 (d, J= 6.6 Hz, 3H).

PRIMER 27 3-((R)-5-(6-Aminopiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion

[0303]

[0304] Primer 27 je sintetisan iz 6-hlorpiridin-2-amina i terc-butil (S)-5-amino-4-((R)-4-fluoro-3-metil-1-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (dobijenog postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline) korišćenjem opšteg postupka 4. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, 5 µm čestice; mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; gradijent: zadržavanje 0 minuta na 10% B, zatim od 10% do 30% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta na 100% B; protok: 20 mL/min).LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1,01 min., [M+H]<+>369.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.81-7.62 (m, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.04 (br d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.78-6.72 (m, 1H), 4.93 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 12.4, 5.3 Hz, 1H), 2.91-2.83 (m, 1H), 2.75-2.60 (m, 2H), 2.36-2.32 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

PRIMER 28 (R)-3-((R)-5-(6-Amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0305]

[0306] U mešani rastvor iz primera 17 (250 mg, 0.531 mmol) u acetonitrilu (4 mL) je dodat TFA (1 mL, 13.81 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 90 °C tokom 2 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, a sirovi proizvod je prečišćen preparativnom SFC (Chiral Pak IC (250 x 50) mm, 5 µm; %CO2: 50%; % korastvarač: 50% rastvora 5 mM amonijum acetata u ACN:MEOH (50:50); protok: 300.0 g/min; temperatura: 40 °C; UV detekcija: 240 nm), frakcije izomera koje su prvo eluirane pri zadržavanju od 6.9 minuta su koncentrisane do suva i liofilizovane da bi se dobio (R)-3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (15 mg, 7 % prinos). LCMS (Metoda D): vreme zadržavanja 1.28 min., [M+H]<+>397.1;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.97-10.89 (m, 1H), 7.99 (br d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.80 (s, 2H), 5.00 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.76-4.67 (m, 1H), 2.82-2.70 (m, 1H), 2.67-2.55 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.03 (s, 4H), 1.53 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

PRIMER 293-((R)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0307]

[0308] Primer 29 je sintetisan iz 6-hloro-3-fluoro-4-metilpiridin-2-amina i terc-butil (S)-5-amino-4-((R)-4-fluoro-3-metil-1-oksо-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)izoindolin-2-il)-5-oksopentanoata (sintetisanog prema postupcima prikazanim u primeru 2, počevši od 4-bromo-3-fluoro-2-metilbenzoeve kiseline) korišćenjem opšte procedure 4. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom LCMS (kolona: Waters XBridge C18, 150 mm x 19 mm, čestice 5 µm; mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline; gradijent: početna zadržavanja na 10 % B 0 minuta, zatim od 10 do 30 % B tokom 20 minuta, potom zadržavanje na 100 % B 5 minuta; protok: 20 mL/min). LCMS (Metoda B): vreme zadržavanja 1.18 min., [M+H]<+>401.3;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.98 (s, 1H), 7.95 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.90 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.80 (dd, J = 4.9, 12.9 Hz, 1H), 2.89-2.78 (m, 1H), 2.70-2.60 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.51 (d, J = 6.5 Hz, 3H).

PRIMER 30 3-((S)-5-(6-Amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion

[0309]

Priprema 30A: 3-Fluoro-4-metil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin

[0310] Mešani rastvor 6-bromo-3-fluoro-4-metilpiridin-2-amina (0,05 g, 0,24 mmol) i heksametilditina (0,076 mL, 0,366 mmol) u toluenu (3 mL) je prečišćen argonom pet minuta, nakon čega je dodat [1,1'-bis(di-terc-butilfosfino) ferocen]dihloropaladijum(II) (0,016 g, 0,024 mmol). Reakciona smeša je mešana 15 h na 100 °C, ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-fluoro-4-metil-6-(trimetilstanil)piridin-2-amin (69 mg, 82 % prinos). LCMS (Metoda A): vreme zadržavanja 1,68 min, [M+H]+ 289,2.

Primer 30:

[0311] Stilovo kuplovanje i ciklizacija su izvedeni prateći opštu proceduru 2 sa intermedijerom 30A i intermedijerom 16D. LCMS (Metoda D): vreme zadržavanja 1,17 min, [M+H]<+>401.3;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.94 (s, 1H), 7.94 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.31 (br s, 2H), 5.01 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.72 (dd, J = 4.9, 11.9 Hz, 1H), 2.79-2.67 (m, 1H), 2.64-2.55 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.53 (d, J =6.8 Hz, 3H).

BIOLOŠKI TESTOVI

[0312] Farmakološka svojstva jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se potvrditi brojnim biološkim testovima. Sledeći prikazani biološki testovi izvedeni su na jedinjenjima iz pronalaska.

Test ćelijske degradacije Helios-a

[0313] Jurkat ćelije su zasejane po 80.000 ćelija po bunariću u 40 µL RPMI medijuma sa 10% FBS u ploči sa 384 bunarića pre dodavanja jedinjenja od interesa pomoću akustične tehnologije doziranja. Ćelijske kulture su inkubirane 72 h na 37 °C u atmosferi sa 5% CO2. Radi lakše analize, ćelijske kulture su centrifugirane na 200 obrtaja/minuti tokom 5 minuta i supernatant je odbačen. Nakon protresanja ploče da se otpusti pelet ćelija, ćelije su resuspendovane u 50 µL fiksirajućeg pufera (eBioScience FoxP3 puferski komplet, kataloški broj 00-5523-00) na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Nakon centrifugiranja i odbacivanja supernatanta, ćelije su permeabilizovane sa 50 µL pufera za permeabilizaciju (eBioScience FoxP3 puferski komplet, kataloški broj 00-552300) na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Nakon permeabilizacije, ćelije su centrifugirane, supernatant je zamenjen sa 20 µL fluorescentno označenih antitela protiv Helios-a, Ikaros-a i Aiolos-a ili odgovarajućih izotipskih kontrola u 1x puferu za permeabilizaciju (Ikaros-Alexa488 [Biolegend, kat. br. 368408, 1:50], Helios-PE [CST, kat. br. 29360, 1:50], Aiolos-Alexa647 [Biolegend, kat. br. 371106, 1:25]) i reakcije bojenja su inkubirane 1 hna sobnoj temperaturi; zaštićene od svetlosti. Nakon toga, dodato je 30 µL 1x pufera za permeabilizaciju pre nego što su ćelije centrifugirane i supernatant je odbačen. Obojene ćelije su resuspendovane u 25 µL pufera za bojenje za protočnu citometriju (PBS 0,2% BSA) i analizirane na Intellicyt Ique Plus protočnom citometru.

TABELA 4

Claims (22)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

   ili njegova so, pri čemu: R1je -NH2ili -NH(CH3); svaki R2je nezavisno F, Cl, -CN, C1-4alkil, -CH2F, -CHF2, -CF3, -OCH3, ili ciklopropil; svaki R4je nezavisno F, Cl, -CH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, ili -OCH3; R6je vodonik, C1-2alkil, ili C1-2fluoroalkil; m je nula, 1, 2, ili 3; i n je nula, 1, 2, ili 3; uz uslov da, kada je R6vodonik, m je 1, 2 ili 3.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu je R1-NH2.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu je R1-NH(CH3).
4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑3 ili njegova so, pri čemu je svaki R2nezavisano F, -CN, -CH3ili -CF3.
5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑4 ili njegova so, pri čemu je R6C1–2alkil, -CH2F, -CF2H, -CF3, ili -CH2CF3.
6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑5 ili njegova so, pri čemu R6je -CH3.
7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑5 ili njegova so, pri čemu: R6je C1–2alkil, -CH2F, -CF2H, -CF3ili -CH2CF3; i m je nula.
8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑5 ili njegova so, pri čemu: R6je -CH3; i m je nula.
9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑5 ili njegova so, pri čemu svaki R4je nezavisano -F, -CH3, -CHF2, ili -CF3.
10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑4 ili njegova so, pri čemu: svaki R4je F, -CH3, -CHF2, ili -CF3; R6je vodonik; i m je 1 ili 2.
11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑4 ili njegova so, pri čemu: svaki R4je F ili -CH3; R6je vodonik; i m je 1 ili 2.
12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑4 ili njegova so, pri čemu: R4je F ili -CH3; R6je vodonik; i m je 1.
13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu je navedeno jedinjenje: 2-amino-6-(2-(2,6-dioksopiperidin-3-il)-4-metil-1-oksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (1); 2-amino-6-(2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-6-metil-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (2); 2-amino-6-(2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (3); 3-(5-(6-amino-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (4); 3-(5-(6-amino-4-(trifluoroetil) piridin-2-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (5); 3-(4-fluoro-5-(4-metil-6-(metilamino)piridin-2-il)-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (6); 3-(5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-2-il) -2,6-dion (7); 3-((S)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (8); 3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (9); 2-amino-6-((3S)-2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (10); 2-amino-6-((3R)-2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (11); 3-((S)-5-(4,5-dimetil-6-(metilamino)piridin-2-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (12); 3-((R)-5-(4,5-dimetil-6-(metilamino)piridin-2-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (13); 6-((3S)-2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metil-2-(metilamino) nikotinonitril (14); 6-((3R)-2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-3-metil-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metil-2-(metilamino)nikotinonitril (15); 3-((S)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (16); 3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (17); 3-(5-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (18); 3-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (19); 3-(5-(6-amino-3-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (20); 3-(5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (21-22); 2-amino-6-((3R)-2-(2,6-dioksooksopiperidin-3-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-5-il)-4-metilnikotinonitril (23); 3-((R)-5-(6-amino-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (24); 3-((R)-5-(6-amino-4-(trifluorometil)piridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (25); 3-((R)-5-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (26); 3-((R)-5-(6-aminopiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il) piperidin-2,6-dion (27); (R)-3-((R)-5-(6-amino-4,5-dimetilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion 28); 3-((R)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (29); ili 3-((S)-5-(6-amino-5-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-4-fluoro-3-metil-1-oksooksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion (30).
14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu:

    ili njegova so.
15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu:

    ili njegova so.
16. 16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu:

    ili njegova so.
17. 17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu:

    ili njegova so.
18. 18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu:

    ili njegova so.
19. 19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu:

    ili njegova so.
20. 20. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑19 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i farmaceutski prihvatljiv nosač.
21. 21. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1‑19 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za primenu u lečenju kancera.
22. 22. Jedinjenje za primenu prema patentnom zahtevu 21, pri čemu je navedeni kancer izabran od kancera kolone, želuca, kancera pankreasa, kancera dojke, kancera prostate, kancera pluća, kancera jajnika, kancera grlića materice, kancera bubrega, kancera glave i vrata, limfoma, leukemije i melanoma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd