[go: up one dir, main page]

RS65347B1 - Imunomodulacija i tretman čvrstih tumora antitelima koja specifično vezuju cd38 - Google Patents

Imunomodulacija i tretman čvrstih tumora antitelima koja specifično vezuju cd38

Info

Publication number
RS65347B1
RS65347B1 RS20240308A RSP20240308A RS65347B1 RS 65347 B1 RS65347 B1 RS 65347B1 RS 20240308 A RS20240308 A RS 20240308A RS P20240308 A RSP20240308 A RS P20240308A RS 65347 B1 RS65347 B1 RS 65347B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
cells
cell
specifically binds
cancer
Prior art date
Application number
RS20240308A
Other languages
English (en)
Inventor
Tahamtan Ahmadi
Tineke Casneuf
Henk M Lokhorst
Tuna Mutis
Amy Sasser
Original Assignee
Janssen Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Biotech Inc filed Critical Janssen Biotech Inc
Publication of RS65347B1 publication Critical patent/RS65347B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
POLJE PRONALASKA
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na medicinsku upotrebu imunomodulacije i tretman čvrstih tumora antitelima koja specifično vezuju CD38.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Imuni sistem je strogo kontrolisan mrežom kostimulatornih i koinhibitornih liganada i receptora. Ovi molekuli obezbeđuju sekundarne signale za T-ćelijsku aktivaciju i pružaju uravnoteženu mrežu pozitivnih i negativnih signala kako bi se maksimizirali imuni odgovori protiv infekcije i tumora, istovremeno ograničavajući imunitet nad sobom (Wang et al., (Epub Mar.7, 2011) J Exp Med 208(3):577-92; Lepenies et al., (2008) Endocr Metab Immune Disord Drug Targets 8:279-288).
[0003] Terapija imuno kontrolne tačke za tretiranje čvrstih tumora, koja cilja koinhibitorne putanje u T ćelijama kako bi promovisala antitumorske imuno odgovore, je dovela do napretka u kliničkoj nezi pacijenata sa kancerom uz odobrenje anti-CTLA-4 i anti-PD-1 antitela YERVOY® (ipilimumab), KEYTRUDA® (pembrolizumab) i OPDIVO® (nivolumab). Iako anti-PD-1/PD-L1 antitela pokazuju ohrabrujuće kliničke odgovore kod pacijenata sa višestrukim čvrstim tumorima, stope odgovora su i dalje prilično niske, približno 15% - 20% kod prethodno lečenih pacijenata (Swaika et al., (2015) Mol Immunol doi:10.1016/j.molimm.2015.02.009).
[0004] Dok su prirodne ćelije ubice (NK), dendritske ćelije (DC) i efektorske T ćelije sposobne da pokrenu snažne antitumorske odgovore, tumorske ć elije č esto indukuju imunosupresivno mikrookruženje, favorizujući razvoj imunosupresivnih populacija imunih ćelija, kao što su mijeloidno dobijene supresorske ćelije (MDSC), regulatorne T-ćelije (Treg) ili regulatorne B-ćelije (Breg), što doprinosi imunološkoj toleranciji tumora i neuspehu imunoterapijskih režima kod pacijenata sa kancerom i eksperimentalnih tumorskih modela.
[0005] Stoga, ostaje potreba za razvijanjem novih imunoterapija za kancer koje indukuju adaptivni imuno odgovor protiv tumora ili ciljaju imunosupresivne imune ćelije.
[0006] M de Weers et al. (2010) The Journal of Immunology vol. 186, no. 3, 27 December 2010, stranice 1840-1848, otkriva da daratumumab, novo terapeutsko CD38 monoklonsko antitelo, indukuje uništavanje višestrukom mijeloma i drugih hematoloških tumora.
[0007] Chillemi et al. (2013) Molecular Medicine, vol. 19, no. 1, stranice 99-108, razmatra karakteristike ciljanog molekula CD38 i terapije anti-CD38 antitela.
[0008] WO 2015/009726 A2 otkriva medicinsku upotrebu CD38 agonista.
WO 2012/092612 A1 otkriva anti-CD38 antitela i određene terapeutike i njihove dijagnostičke upotrebe.
REZIME PRONALASKA
[0009] Pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Specifično, pronalazak pruža antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu u tretiranju pacijenta koji ima čvrsti tumor, koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5, pri čemu antitelo je izotip IgG1.
[0010] Bilo koje reference u opisu na postupke tretmana se odnose na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i medikamente predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku tretmana ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu). Antitelo predmetnog pronalaska je za upotrebu u postupku tretiranja pacijenta koji ima č vrsti tumor koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela.
[0011] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku za tretiranje pacijenta koji ima regulatornu T-ćelijski (Treg) posredovanu bolest koji obuhvata primenu terapeutski efikasne količine antitela nad pacijentom sa takvom potrebom.
[0012] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku za tretiranje pacijenta koji ima bolest posredovanu mijeloidno dobijenim supresorskim ć elijama (MDSC) koji obuhvata primenu terapeutski efikasne količine antitela nad pacijentom sa takvom potrebom.
[0013] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku za tretiranje pacijenta koji ima bolest posredovanu regulatornom B-ćelijom (Breg) koji obuhvata primenu terapeutski efikasne količine antitela nad pacijentom sa takvom potrebom.
[0014] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku supresije aktivnosti regulatorne T-ćelije (Treg), koji obuhvata kontaktovanje Treg sa antitelom.
[0015] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku supresije aktivnosti mijeloidno dobijene supresorske ćelije (MDSC), koji obuhvata kontaktovanje MDSC sa antitelom.
[0016] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku supresije aktivnosti regulatorne B-ćelije (Breg), koji obuhvata kontaktovanje Breg sa antitelom.
[0017] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu antitela nad pacijentom.
[0018] Antitelo za upotrebu predmetnog pronalaska može takođe biti korisno u tretiranju pacijenta koji ima čvrsti tumor, što obuhvata redukovanje broja Treg ćelija kod pacijenta.
[0019] Antitelo za upotrebu predmetnog pronalaska može takođe biti korisno u tretiranju pacijenta koji ima čvrsti tumor, što obuhvata redukovanje broja mijeloidno dobijenih supresorskih ćelija (MDSC) kod pacijenta.
[0020] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku supresije aktivnosti imuno supresorske ćelije, što obuhvata kontaktovanje imuno supresujuće ćelije sa antitelom.
[0021] Antitelo predmetnog otkrića može takođe biti korisno u postupku tretiranja pacijenta koji ima virusnu infekciju, koji obuhvata primenu antitela nad pacijentom sa takvom potrebom.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0022]
Crtež 1 prikazuje da je medijanski broj limfocita povećan kod pacijenata koji su reagovali na DARZALEX™ (daratumumab) tretman sa 8 mg/kg (gornja linija) ili 16 mg/kg (donja linija) dozama vremenom, i da se broj limfocita vratio na početnu vrednost nakon završetka tretmana. Studija: SIRIUS. X osa označava vreme izraženo kao ciklus lečenja i dane doziranja unutar svakog ciklusa lečenja (C1D1: ciklus 1, dan 1; C1D4; ciklus 1, dan 4, itd.). SCR: početna vrednost; EOT: kraj tretmana; WK: nedelja; POST-WK: nakon tretmana u naznačenim nedeljama; nakon PD FU: praćenje nakon progresije. Istaknute oblasti u sivim nijansama ukazuju na 25-27% interkvartilnog raspona (IQR) za tačke podataka za svaku posetu za respondere.
<+>Crtež 2 prikazuje procenat (%) promene apsolutnih brojeva CD3T ćelija u odnosu na početnu vrednost uperifernoj krvi kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) za svakog pojedinačnog pacijenta (svetlo sive linije). Studija: SIRIUS (MMY2002). X osa označava vreme iskazano kao ciklus lečenja i dane doziranja unutar svakog ciklusa lečenja (C1D1: ciklus 1, dan 1; C1D4; ciklus 1, dan 4, itd.). WK: nedelja; POST-WK: nakon tretmana u naznačenim nedeljama; NAKON-PD FU: praćenje nakon progresije. Crna linija prikazuje medijansku promenu u % za sve pacijente.
<+>Crtež 3 prikazuje procenat (%) promene apsolutnih vrednosti CD4 T ćelija u odnosu na početne vrednosti u perifernoj krvi kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) za svakog pojedinačnog pacijenta (svetlo sive linije). Studija: SIRIUS. X osa označava vreme izraženo kao ciklus lečenja i dane doziranja unutar svakog ciklusa lečenja (C1D1: ciklus 1, dan 1; C1D4; ciklus 1, dan 4, itd.). WK: nedelja; NAKON-TMT: nakontretmana. Crna linija pokazuje medijansku promenu % za sve pacijente.
<+>Crtež 4 prikazuje promenu procenta (%) apsolutnih vrednosti CD8 T ćelija u odnosu na početnu vrednost u perifernoj krvi kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) za svakog pojedinačnog pacijenta (svetlo sive linije). Studija: SIRIUS. X osa označava vreme izraženo kao ciklus lečenja i dane doziranja unutar svakog ciklusa lečenja (C1D1: ciklus 1, dan 1; C1D4; ciklus 1, dan 4, itd.). WK: nedelja; Pred-PD FU: praćenje pre progresije; nakon-PD FU: praćene nakon progresije. Crna linija pokazuje medijansku promenu % za sve pacijente.
<+>Crtež 5 prikazuje da je broj CD45 CD3 ćelija (izmereno kao procenat limfocita) u aspiratima koštane srži povećan tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana tokom vremena sa dozama 8 mg/kg ili 16 mg/kg. Grafikon uključuje i respondere i nerespondere kao što je naznačeno. Studija: SIRIUS. X osa označava vreme izraženo kao ciklus lečenja i dane doziranja unutar svakog ciklusa lečenja (C2D22: ciklus 2, dan 22; itd.). SCR: početna vrednost; nakon-PD FU1: praćenje nakon progresije. Istaknute oblasti sivom nijansom ukazuju na 25-27% interkvartilnog raspona (IQR) za tačke podataka za svaku posetu za nerespondere dozirane sa 8 mg/kg, respondere dozirane sa 16 mg/kg ili nerespondere dozirane sa 16 mg/kg, respektivno. NR: neresponder; R: responder.
<+>Crtež 6 prikazuje da je broj CD45 CD3 CD8 ćelija (mereno kao procenat limfocita) u aspiratima koštane srži povećan tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana tokom vremena sa dozama 8 mg/kg ili 16 mg/kg. Grafikon uključuje i respondere i nerespondere kao što je naznačeno. Studija: SIRIUS. X osa označava vreme izraženo kao ciklus lečenja i dane doziranja unutar svakog ciklusa lečenja (C2D22: ciklus 2, dan 22; itd.). SCR: početna vrednost; nakon PD FU1: praćenje nakon progresije. Istaknute oblasti sivom nijansom ukazuju na 25-27% interkvartilnog raspona (IQR) za tačke podataka za svaku posetu za nerespondere dozirane sa 8 mg/kg, respondere dozirane sa 16 mg/kg ili nerespondere dozirane sa 16 mg/kg, respektivno. NR: neresponder; R: responder.
<+>Crtež 7A prikazuje da se odnos CD8 / Treg i CD8 /CD4 ćelija u perifernoj krvi iskazan kao medijanske vrednosti svih tretiranih pacijenata povećao vremenom tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Vremenske tačke: C1D1: ciklus 1 dan; C3D1: ciklus 3 dan 1; C4D1: ciklus 4 dan 1. Studija: SIRIUS. SRC: početna vrednost.
<+>Crtež 7B prikazuje da se odnos CD8 /Treg ćelija u aspiratima koštane srži izraženim kao medijanske vrednosti svih tretiranih pacijenata povećao vremenom tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Vremenske tačke: C1D1: ciklus 1 dan; C3D1: ciklus 3 dan 1; C4D1: ciklus 4 dan 1. Studija: SIRIUS.
<+>Crtež 8A prikazuje da su responderi imali povećanu CD8 T ćelijsku klonalnost u poređenju sa neresponderima, š to je izmereno korišćenjem promene % u abundanciji (CIA) određenih klonalnih ć elija. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<+>Crtež 8B prikazuje višestruku promenu u CD8 T-ćelijskoj klonalnosti kod pojedinačnih pacijenata pre u odnosu na posle DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Responderi su naznačeni sa zvezdicom. Klonalnost je izmerena kao višestruka promena u abundanciji (CIA) određenih klonalnih ćelija. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
Crtež 8C prikazuje da su responderi (Grupa A) imali veću ukupnu ekspanziju u TCR repertoaru, izmereno korišćenjem CIA (promena u abundanciji) u poređenju sa neresponderima (Grupa B). P=0,037. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
Crtež 8D prikazuje zbir apsolutnih promena u abundanciji (CIA) kod respondera i nerespondera za svaki prošireni T ćelijski klon. P=0,035 između respondera (Grupa A) i nerespondera (Grupa B). Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
Crtež 8E prikazuje maksimalnu CIA pojedinačnog T-ćelijskog klona kod respondera (Grupa A) i nerespondera (Grupa B). Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
Crtež 8F prikazuje da su responderi (Grupa A) imali veću maksimalnu ekspanziju pojedinačnog klona, izmereno upotrebom maksimalne CIA %, u poređenju sa neresponderima (Grupa B). P=0,0477. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<+>Crtež 9A prikazuje procenat (%) CD8 naivnih ćelija u perifernoj krvi kod nerespondera (NR, crni kvadrati) i kod pacijenata koji imaju barem minimalni odgovor (MR, beli kvadrati) na DARZALEX™ (daratumumab) na početku, ili na 2 nedelje, 4 nedelje ili 8 nedelja tretmana, ili nakon recidiva. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata. *p=1,82 x 10<-4>. ;<+>Crtež 9B prikazuje procenat CD8 ćelija centralne memorije (Tem) u perifernoj krvi kod nerespondera (NR, crni kvadrati) i kod pacijenata koji imaju barem minimalni odgovor (MR, beli kvadrati) na DARZALEX™ (daratumumab) na početku, ili na 2 nedelje, 4 nedelje ili 8 nedelja tretmana, ili nakon recidiva. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata. *p=4,88 x 10<-2>.
<+>Crtež 9C prikazuje procenat povećanja HLA Class I ograničenih CD8 T ćelija u perifernoj krvi na početku, ili 1, 4 ili 8. nedelje tretmana, ili nakon recidiva. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<+>Crtež 9D prikazuje da je CD38 izražen u niskim nivoima u CD8 naivnim T ć elijama i u CD8 ćelijama centralne memorije (Tem) u perifernoj krvi na početku ili tretmanu. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata. MFI: srednji intenzitet fluorescencije.
<+ dim>Crtež 10A prikazuje histogram FACS analiza koje pokazuju učestalost Treg (CD3 CD3 CD4 CD25 CD127 (gornji histogram, P4 ćelijska populacija) i učestalost CD38<+>Treg unutar Treg populacije (donji histogram, P5 ćelijska populacija) kod pacijenata sa višestrukim mijelomom na početku. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<+ dim>Crtež 10B prikazuje histogram FACS analiza koje pokazuju učestalost Treg (CD3 CD3 CD4 CD25 CD127 (gornji histogram, P4 ćelijska populacija) i učestalost CD38<+>Treg unutar Treg populacije (donji histogram, P5 ćelijska populacija) kod pacijenata sa višestrukim mijelomom nakon DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. DARZALEX™ (daratumumab) tretman je iscrpeo CD38<+>Treg. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<high dim>Crtež 10C prikazuje učestalost CD38 CD3 CD4 CD25 CD127 Treg kod pacijenata tretiranih DARZALEX ™ (daratumumab) na početku, ili u 1. nedelji, 4. nedelji, 8. nedelji, nakon recidiva ili na kraju tretmana na 6 meseci (EOT). Učestalost CD38<high>Treg je redukovana sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom i vraćena na početnu vrednost EOT. Y osa: % CD38<lugh>CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>Treg iz CD3<+>T-ćelija. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<+>Crtež 10D prikazuje CD8 /Treg odnos ćelija kod respondera i nerespondera na početku, 1. nedelje, 4. nedelje i 8. nedelje tretmana. CD8+/Treg odnos ćelija je bio značajno viši kod respondera u odnosu na nerespondere (p=0,00955) 8. nedelje tretmana. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
Crtež 10E prikazuje da je proliferacija efektorske ć elije efikasnije inhibirana u prisustvu CD38<+>Treg u poređenju sa CD38<->Treg ili negativnim kontrolama. Trake grešaka predstavljaju standardnu grešku. Zvezdica označava značajne promene. Uzorci su dobijeni od više zdravih donora. Ćelijska proliferacija je procenjena dilucijom karboksifluorescein sukcinimidil estra (CFSE).
Crtež 11 prikazuje da su mijeloidno dobijene supresorske ć elije (MDSC) prisutne kod pacijenata sa višestrukim mijelomom (gornji grafikon, uokvirene ćelije) i da je otprilike polovina ćelija eksprimirala CD38 (srednji grafikon, uokvirene ćelije). CD38high MDSC populacija je iscrpljena kod pacijenata tretiranih jednom infuzijom DARZALEX™ (daratumumab) (donji grafikon, uokvirene ćelije). Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
<+ - ->Crtež 12 prikazuje da je broj CD38high MDSC (CD11b HLADRCD14CD33 CD15 ) redukovan kod pacijenata nakon 1 nedelje, 4 nedelje ili 8 nedelja tretmana sa DARZALEX™ (daratumumab) u poređenju sa početnom vrednošću, i vraćen blizu početne vrednosti nakon završetka tretmana (EOT). Pacijenti sa recidivom su i dalje pokazivali redukovane CD38high MDSC. Crni kvadrati: neresponderi; beli kvadrati: pacijenti sa barem minimalnim odgovorom na tretman DARZALEX™ (daratumumab). Vertikalne linije označavaju medijanske vrednosti u svakoj grupi. Pacijenti 2, 4, 15, 16 i 17 su pokazali visoku inicijalnu CD38high MDSC populaciju. Studija: GEN501 podskup 17 pacijenata.
Crtež 13 prikazuje da su pacijenti sa najvišim CD38high MDSC (pacijenti 2, 4, 15, 16 i 17) imali najveći opstanak bez progresije (PFS). Ovi pacijenti su imali ili delimični odgovor (PR) ili minimalni odgovor (MR) na DARZALEX™ (daratumumab) tretman. SD: stabilna bolest; PD: progresivna bolest. X osa prikazuje PFS za svakog pojedinačno numerisanog pacijenta.
Crtež 14 prikazuje da su MDSC osetljive na DARZALEX™ (daratumumab)-indukovanu ADCC. Daudi ćelije su korišćene kao pozitivna kontrola za ciljane ćelije u testovima. Izmeren je % ćelijske lize.
<+>Crtež 15A prikazuje da su CD38 Breg iscrpljeni kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) 1. nedelje, 4. nedelje i 8. nedelje tretmana.
<+>Crtež 15B prikazuje da CD38 Breg luče IL-10 nakon stimulacije.
Crtež 16A prikazuje antivirusni odgovor izmeren preko CMV, EBV i specifične (CEF) IFN-y produkcije virusa gripa u PBMC od DARZALEX™ (daratumumab) tretiranog pacijenta sa VGPR na početku i na naznačenim vremenskim tačkama tokom tretmana. OD: optička gustina. Bela traka: negativna kontrola; crna traka: dodato CEF; isprekidana traka: samo alogeni PBMC. Zvezdica označava statistički značajnu promenu. Pre 4, 8, 10 = nedelja 4, 8. ili 10. tretmana.
Crtež 16B prikazuje antivirusni odgovor izmeren preko CMV, EBV i specifične (CEF) IFN-y produkcije virusa gripa u PBMC od DARZALEX™ (daratumumab) tretiranog pacijenta sa CR na početku i na naznačenim vremenskim tačkama tokom tretmana. OD: optička gustina. Bela traka: negativna kontrola; crna traka: dodato CEF; isprekidana traka: samo alogeni PBMC. Zvezdica označava statistički značajnu promenu. Pre 4, 8, 10 = nedelja 4, 8. ili 10. tretmana.
Crtež 16C prikazuje antivirusni odgovor izmeren preko CMV, EBV i specifične (CEF) IFN-y produkcije virusa gripa u PBMC od DARZALEX™ (daratumumab) tretiranog pacijenta sa PD na početku i na naznačenim vremenskim tačkama tokom tretmana. OD: optička gustina. Bela traka: negativna kontrola; crna traka: dodato CEF; isprekidana traka: samo alogeni PBMC. Ns: nije značajno. Pre 4, 8 = 4. ili 8. nedelja tretmana. Crtež 16D prikazuje antivirusni odgovor izmeren preko CMV, EBV i specifične (CEF) IFN-y produkcije virusa gripa u PBMC od DARZALEX™ (daratumumab) tretiranog pacijenta sa MR na početku i na naznačenim vremenskim tačkama tokom tretmana. OD: optička gustina. Bela traka: negativna kontrola; crna traka: dodato CEF; isprekidana traka: samo alogeni PBMC. Ns: nije značajno. Pre 4, 8 = 4. ili 8. nedelja tretmana. Crtež 16E prikazuje procenat (%) proliferirajućih virusno reaktivnih T ć elija u PBMC od DARZALEX™ (daratumumab) tretiranog pacijenta sa VGPR na početku i na naznačenim vremenskim tačkama tokom tretmana. Bela traka: negativna kontrola; crna traka: dodato CEF. Zvezdica ukazuje na statistički značajnu promenu. Pre 4, 8, 10 = 4, 8. ili 10. nedelje tretmana.
Crtež 16F prikazuje procenat (%) proliferirajućih virusno reaktivnih T ć elija u PBMC od DARZALEX™ (daratumumab) tretiranog pacijenta sa CR na početku i na naznačenim vremenskim tačkama tokom tretmana. Bela traka: negativna kontrola; crna traka: dodato CEF. Zvezdica ukazuje na statistički značajnu promenu. Pre 4, 8, 10 = 4, 8. ili 10. nedelje tretmana.
Crtež 17A prikazuje histogram FACS analiza koje prikazuju nivoe ekspresije CD38 na prirodnim ćelijama ubicama (NK), monocitima, B ćelijama i T ćelijama od zdravog donora.
Crtež 17B prikazuje histogram FACS analiza koje prikazuju nivoe ekspresije CD38 na plazma ć elijama, prirodnim ć elijama ubicama (NK), monocitima, B ć elijama i T ć elijama od pacijenta sa višestrukim mijelomom.
Crtež 17C prikazuje poređenje srednjeg intenziteta fluorescencije (MFI) CD38 u CD38<+>Treg, Breg, NK, B ćelijama i T ćelijama od recidivnih i refraktornih pacijenata sa višestrukim mijelomom. CD38 je bio izražen na nižem nivou u B ćelijama i T ćelijama u poređenju sa CD38+Treg, Breg i NK ćelijama.
Crtež 18 prikazuje da je PD-L1 protein vremenom smanjen u PBMC uzorcima od respondera (R) i povećan kod nerespondera (NR). SD: stabilna bolest. C1D1: ciklus 1 dan 1; C3D 1, ciklus 3, dan 1. Y osa prikazuje vrednosti koncentracije log2 proteina.
DETALJAN OPIS
[0023] Kao što je korišćeno u ovoj specifikaciji i priloženim patentnim zahtevima, singularne forme „a“, „an“ i „the“ uključuju pluralne reference osim ukoliko kontekst jasno ne nalaže drugačije. Stoga, na primer, referenca za „ćelija“ uključuje kombinaciju dve ili više ćelija, i slično.
[0024] „CD38“ se odnosi na humani CD38 protein (sinonimi: ADP-ribozil ciklaza 1, cADPr hidrolaza 1, ciklična ADPriboza hidrolaza 1). Humani CD38 ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u GenBank pristupnom broju NP_001766 i u SEK ID BR: 1. Dobro je poznato da je CD38 jednoprolazni membranski protein tip II sa aminokiselinskim ostacima 1-21 koji predstavljaju citosolni domen, aminokiselinskim ostacima 22-42 koji predstavljaju transmembranski domen i ostacima 43-300 koji predstavljaju ekstracelularni domen CD38. SEK ID BR: 1
[0025] „Antitela“ kao što je ovde korišćeno se podrazumevaju u širokom smislu i uključuju molekule imunoglobulina uključujući monoklonska antitela uključujući mišja, ljudska, humanizovana i himerna monoklonska antitela, fragmente antitela, bispecifična ili multispecifična antitela, dimerna, tetramerna ili multimerna antitela, jednolančana antitela, domenska antitela i bilo koja druga modifikovana konfiguracija molekula imunoglobulina koja sadrži mesto vezivanja antigena zahtevane specifičnosti.
[0026] Imunoglobulini se mogu podeliti u pet glavnih klasa, nazivima IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, u zavisnosti od konstantnog domena teškog lanca aminokiselinske sekvence. IgA i IgG su dodatno podklasifikovani kao izotipovi IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. Laki lanci antitela bilo koje vrste kičmenjaka se mogu pripisati jednom od dva jasno različita tipa, naziva kapa (κ) i lambda (λ), na osnovu aminokiselinske sekvence njihovih konstantnih domena.
[0027] „Fragmenti antitela“ se odnosi na deo molekula imunoglobulina koji zadržava mesto vezivanja antigena teškog lanca i/ili lakog lanca, kao što su regioni utvrđivanja komplementarnosti teškog lanca (HCDR) 1, 2 i 3, regioni utvrđivanja komplementarnosti lakog lanca (LCDR) 1, 2 i 3, varijabilni region teškog lanca (VH) ili varijabilni region lakog lanca (VL). Fragmenti antitela uključuju Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od VL, VH, CL i CH1 domena; F(ab)2fragment, bivalentni fragment koji obuhvata dva Fab fragmenta povezana disulfidnim mostom u zglobnom regionu; Fd fragment koji se sastoji od VH i CH1 domena; Fv fragment koji se sastoji od VL i VH domena jednog kraka antitela; fragment antitela domena (dAb) (Ward et al., Nature 341:544- 6, 1989), koji se sastoji od VH domena. VH i VL domeni se mogu projektovati i povezati zajedno preko sintetičkog povezivača da bi se formirali različiti tipovi jednolančanih dizajna antitela u kojima se VH/VL domeni uparuju intramolekularno, ili intramolekularno u onim slučajevima kada su VH i VL domeni izraženi odvojenim jednolančanim konstruktima antitela, da bi se formiralo monovalentno mesto vezivanja antigena, kao što je jednolančani Fv (scFv) ili dijatelo; opisano na primer u Int.pat.pub. br: WO1998/44001, WO1988/01649, WO1994/13804 i WO1992/01047. Ovi fragmenti antitela su dobijeni upotrebom dobro poznatih tehnika poznatih stručnjacima, a fragmenti su skenirani za upotrebljivost na isti način kao i antitela pune dužine.
[0028] „Izolovano antitelo“ se odnosi na antitelo ili fragment antitela koji je suštinski slobodan od drugih antitela koja imaju različite antigenske specifičnosti (na primer, izolovano antitelo koje specifično vezuje CD38 je suštinski slobodno od antitela koja specifično vezuju antigene koji nisu humani CD38). Izolovano antitelo koje specifično vezuje CD38, međutim, može imati unakrsnu reaktivnost sa drugim antigenima, kao što su ortolozi humanog CD38, kao š to je Macaca fascicularis (cinomolgus) CD38. U slučaju bispecifičnog antitela, bispecifično antitelo specifično vezuje dva antigena od interesa i suštinski je slobodno od antitela koja specifično vezuju antigene koji nisu dva antigena od interesa. Štaviše, izolovano antitelo može biti suštinski slobodno od drugih celularnih materijala i/ili hemikalija. „Izolovano antitelo“ obuhvata antitela koja su izolovana do veće č istoće, kao š to su antitela koja su 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% čista.
[0029] „Specifično vezivanje“ ili „specifično vezuje“ ili „vezuje“ se odnosi na antitelo koje se vezuje za antigen ili epitop unutar antigena sa većim afinitetom u odnosu na druge antigene. Obično, antitelo se vezuje za antigen ili epitop unutar antigena sa konstantom disocijacije ekvilibrijuma (KD) od približno 1 x 10<-8>M ili manje, na primer približno 1 x 10<-9>M ili manje, približno 1 x 10<-10>M ili manje, približno 1 x 10<-11>M ili manje ili približno 1 x 10<-12>M ili majne, obično sa KDkoja je barem sto puta manja u odnosu na svoju KDza vezivanje za nespecifični antigen (na primer, BSA, kazein). Kontanta disocijacije se može izmeriti korišćenjem standardnih postupaka. Antitela koja se specifično vezuju za antigen ili epitop unutar antigena mogu, ipak, imati unakrsnu reaktivnost sa drugim povezanim antigenima, na primer sa istim antigenom iz drugih vrsta (homolozi), kao što je ljudski ili majmunski, na primer Macaca fascicularis (cinomolgus, cino), Pan troglodytes (šimpanza, šimp) ili Callithrix jacchus (obični marmozet, marmozet). Dok monospecifično antitelo specifično vezuje jedan antigen ili jedan epitop, bispecifično antitelo specifično vezuje dva različita antigena ili dva različita epitopa.
[0030] Varijabilni region antitela se sastoji od „okvirnog“ regiona prekinutog sa tri „mesta vezivanja antigena“. Mesta vezivanja antigena su definisana korišćenjem različitih pojmova: Regioni utvrđivanja komplementarnosti (CDR), tri u VH (HCDR1, HCDR2, HCDR3) i tri u VL (LCDR1, LCDR2, LCDR3) se baziraju na varijabilnosti sekvence (Wu and Kabat (1970) J Exp Med 132:211-50; Kabat et al Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991); „Hipervarijabilni regioni“, „HVR“ ili „HV“, tri u VH (H1, H2, H3) i tri u VL (L1, L2, L3) se odnose na regione varijabilnih domena antitela koji su hipervarijabilni u strukturi kao što je definisano od strane Chothia i Lesk (Chothia and Lesk (1987) Mol Biol 196:901-17). Drugi pojmovi uključuju „IMGT-CDR“ (Lefranc et al., (2003) Dev Comparat Immunol 27:55-77) i "Specificity Determining Residue Usage" (SDRU) (Almagro (2004) Mol Recognit 17:132-43). Internacionalna ImMunoGeneTics (IMGT) baza podataka (http://www imgt org) pruža standardizovanu numeraciju i definiciju mesta vezivanja antigena. Korespondencija između DR, HV i IMGT delineacija je opisana u Lefranc et al., (2003) Dev Comparat -Immunol 27:55-77.
[0031] „Chotia ostaci“ kao što je ovde korišćeno su VL i VH ostaci antitela numerisani u skladu sa Al-Lazikani (Al-Lazikani et al., (1997) J Mol Biol 273:927-48).
[0032] „Okvir“ ili „okvirne sekvence“ su preostale sekvence varijabilnog regiona koje nisu one koje su definisane kao mesta vezivanja antigena. Iz razloga š to se mesta vezivanja antigena mogu definisati različitim pojmovima kao što je opisano u prethodnom tekstu, precizna aminokiselinska sekvenca okvira zavisi od toga kako je mesto vezivanja antigena definisano.
[0033] „Humanizovano antitelo“ se odnosi na antitelo kod kog su mesta vezivanja antigena dobijena od nehumanih vrsta a okviri varijabilnog regiona su dobijeni iz humanih imunoglobulinskih sekvenci. Humanizovana antitela mogu uključivati supstitucije u okvirnim regionima tako da okvir ne mora biti identična kopija eksprimiranog humanog imunoglobulina ili sekvenci gena zametne linije.
[0034] „Humano antitelo“ se odnosi na antitelo koje ima varijabilne regione teškog i lakog lanca u kojima su i okvir i mesta vezivanja antigena dobijeni iz sekvenci humanog porekla. Ukoliko antitelo sadrži konstantni region, konstantni region je takođe dobijen iz sekvenci humanog porekla.
[0035] Humano antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji su „dobijeni od“ sekvenci humanog porekla pri č emu varijabilni regioni antitela su dobijeni iz sistema koji koristi humani imunoglobulin zametne linije ili preuređene gene imunoglobulina. Takvi sistemi uključuju biblioteke gena humanog imunoglobulina prikazane na fagu, i transgene životinje kao što su miševi koji nose lokuse humanog imunoglobulina. „Humano antitelo“ može sadržati aminokiselinske razlike kada se poredi sa imunoglobulinom humane zametne linije ili preraspoređenim imunoglobulin genima usled, primera radi, somatskih mutacija koje se javljaju prirodnim putem ili namernog uvođenja supstitucija u okvir ili mesto vezivanja antigena, ili oba. Obično, „humano antitelo“ je najmanje približno 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% identično u aminokiselinskoj sekvenci sa aminokiselinskom sekvencom kodiranom imunoglobulinom humane zametne linije ili preraspoređenim imunoglobulin genima. U nekim slučajevima, „humano antitelo“ može sadržati konsenzus sekvenci okvira dobijenih iz analiza sekvence humanog okvira, na primer kao š to je opisano u Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86, ili sintetički HCDR3 inkorporiran u biblioteke humanog imunoglobulin gena prikazanog na fagu, na primer kao što je opisano u Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96 i Int.pat.publ.br. WO2009/085462.
[0036] Humana antitela dobijena iz sekvenci humanog imunoglobulina se mogu generisati korišćenjem sistema kao što je fag prikaz koji inkorporira sintetičke CDR i/ili sintetičke okvire, ili se mogu podvrgnuti in vitro mutagenezi kako bi se poboljšala svojstva antitela, što za rezultat ima antitela koja inače ne postoje prirodno unutar repertoara zametne linije humanog antitela in vivo.
[0037] Antitela u kojima su mesta vezivanja antigena dobijena iz nehumanih vrsta nisu uključena u definiciju humanog antitela.
[0038] „Rekombinantno antitelo“ uključuje sva antitela koja su pripremljena, eksprimirana, kreirana ili izolovana rekombinantnim načinima, kao što su antitela izolovana od životinja, na primer miša ili pacova koji su transgeni ili transhromozomski za gene humanog imunoglobulina ili hibridom pripremljena od njih (opisano u nastavku teksta), antitela izolovana iz ćelije domaćina transformisanih da eksprimiraju antitelo, antitela izolovana iz rekombinantne, kombinatorne biblioteke antitela, i antitela pripremljena, eksprimirana, kreirana ili izolovana na bilo koji drugi način koji uključuje spajanje sekvenci gena humanog imunoglobulina sa drugim DNK sekvencama, ili antitela koja su generisana in vitro upotrebom razmene Fab kraka kao što su bispecifična antitela.
[0039] „Monoklonsko antitelo“ se odnosi na preparaciju molekula antitela pojedinačne molekularne kompozicije. Kompozicija monoklonskog antitela prikazuje jedinstvenu specifičnost vezivanja i afinitet za određeni epitop, ili u slučaju bispecifičnog monoklonskog antitela, specifičnost dvostrukog vezivanja za dva različita epitopa. „Monoklonsko antitelo“ se iz tog razloga odnosi na populaciju antitela sa jednom aminokiselinskom kompozicijom u svakom teškom i lakom lancu, osim kod mogućih dobro poznatih promena kao š to je uklanjanje lizina C-terminala iz teškog lanca antitela. Monoklonska antitela mogu imati heterogenu glikozilaciju unutar populacije antitela. Monoklonska antitela mogu biti monospecifična ili multispecifična, ili monovalentna, bivalentna ili multivalentna. Bispecifično antitelo je uključeno u pojam monoklonsko antitelo.
[0040] „Epitop“ znači deo antigena za koji se antitelo specifično vezuje. Epitopi se obično sastoje od hemijski aktivnih (kao š to je polarno, nepolarno ili hidrofobno) površinskih grupisanja funkcionalnih grupa kao š to su aminokiseline ili polisaharidnih bočnih lanaca i mogu imati specifične trodimenzionalne strukturne karakteristike, kao i specifične karakteristike naelektrisanja. Epitop se može sastojati od susednih i/ili nesusednih aminokiselina koje formiraju konformacionu spacijalnu jedinicu. Kod nesusednog epitopa, aminokiseline iz različitih delova linearne sekvence antigena dolaze u neposrednu blizinu u trodimenzionalnom prostoru kroz savijanje proteinskog molekula.
[0041] „Varijanta“ se odnosi na polipeptid ili polinukleotid koji se razlikuje od referentnog polipeptida ili referentnog polinukleotida po jednoj ili više modifikacija, na primer, supstitucija, insercija ili delecija.
[0042] „U kombinaciji sa“ znači da su dva ili više terapeutika primenjena nad subjektom zajedno u smeši, istovremeno kao pojedinačni agensi ili sekvencijalno kao pojedinačni agensi bilo kojim redosledom. Generalno, svaki agens će biti primenjen u dozi i/ili vremenskom rasporedu utvrđenom za taj agens.
[0043] „Tretiranje“ ili „tretman“ se odnosi na terapeutski tretman pri čemu cilj je da se uspori (smanji) neželjena fiziološka promena ili bolest, kao što je razvoj ili širenje tumora ili ćelija tumora, ili da se obezbedi povoljan ili željeni klinički ishod tokom tretmana. Korisni ili željeni klinički ishodi uključuju ublažavanje simptoma, umanjenje obima bolesti, stabilizovanje (tj. nepogoršavanje) stanja bolesti, odlaganje ili usporavanje progresije bolesti, nedostatak metastaza, poboljšavanje ili ublažavanje stanja bolesti, i remisija (bilo delimična ili totalna), bez obzira da li se može ili ne može detektovati. „Tretman“ takođe može značiti produžavanje opstanka u poređenju sa očekivanim opstankom ukoliko subjekt ne bi primao tretman. Oni sa potrebom za tretmanom uključuju one subjekte koji već imaju neželjenu fiziološku promenu ili bolest, kao i one koji su skloni da imaju fiziološku promenu ili bolest.
[0044] „Terapeutski efikasna količina“ se odnosi na količinu koja je efikasna, u potrebnim dozama i vremenskom periodu, za postizanje željenog terapeutskog cilja. Terapeutski efikasna količina može varirati u skladu sa faktorima kao što su stanje bolesti, uzrast, pol i telesna težina pojedinca, i mogućnosti terapeutika ili kombinacije terapeutika da izazovu željeni odgovor kod pojedinca. Primerni indikatori efikasnog terapeutika ili kombinacije terapeutika uključuju, na primer, poboljšanje blagostanja pacijenta, smanjenje opterećenja tumorom, zaustavljen ili usporen rast tumora i/ili odsustvo metastaza ć elija raka na drugim lokacijama u telu.
[0045] „Inhibira rast“ (na primer, odnosi se na tumorske ćelije) se odnosi na merljivo smanjenje ili odlaganje rasta tumorske ćelije ili tumorskog tkiva in vitro ili in vivo kada dođu u kontakt sa terapeutikom ili kombinacijom terapeutika ili lekova, u poređenju sa smanjenjem ili odlaganjem rasta istih tumorskih ćelija ili tumorskog tkiva u odsustvu terapeutika ili kombinacije terapeutskih lekova. Inhibicija rasta tumorske ćelije ili tumorskog tkiva in vitro ili in vivo može biti najmanje približno 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 100%.
[0046] „Regulatorne T ćelije“ ili „Tregs“ ili „Treg“ se odnosi na T limfocite koji regulišu aktivnost drugih T ćelija i/ili drugih imuno ćelija, obično suzbijanjem njihove aktivnosti. Treg mogu biti CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>T ćelije. Smatra se da Treg možda nisu u potpunosti ograničene na ovaj fenotip, i mogu eksprimirati Foxp3.
[0047] „Efektorske T ćelije“ ili „Teffs“ ili „Teff“ se odnosi na T limfocite koji vrše funkciju imunog odgovora, kao š to je ubijanje tumorskih ć elija i/ili aktiviranje antitumorskog imunog odgovora š to može dovesti do uklanjanja tumorskih ćelija iz tela. Teff mogu biti CD3<+>sa CD4<+>ili CD8<+>. Teff mogu lučiti, sadržati ili izražavati markere kao što je IFN-y, granzim B i ICOS. Smatra se da Teff možda nisu u potpunosti ograničene na ove fenotipove.
[0048] „Funkcija Treg“ ili „Treg funkcija“ se odnosi na supresivnu funkciju Treg koja se odnosi na regulaciju imunih odgovora domaćina i/ili prevenciju autoimuniteta. Funkcija Treg može biti supresija anti tumorskog odgovora koji izazivaju CD8<+>T ćelije, ćelije prirodne ubice (NK), MØ ćelije, B ćelije ili dendritske ćelije (DC), ili supresija proliferacije efektorskih T ćelija.
[0049] „Inhibirati funkciju Treg“ ili „inhibirati Treg funkciju“ se odnosi na smanjivanje nivoa funkcije Treg in vitro ili in vivo kod ljudskog ili životinjskog subjekta, koje se može odrediti konvencionalnim tehnikama poznatim u struci. Nivo funkcije Treg može biti smanjen za, primera radi, najmanje približno 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ili 100%. „Inhibiranje funkcije Treg“ uključuje redukovanje broja Treg, na primer uništavanjem Treg efektorskim funkcijama antitela kao što je celularna citotoksičnost zavisna od antitela (ADCC).
[0050] „Supresorske ćelije izvedene iz mijeloida“ ili „MDSC“ se odnosi na specijalizovanu populaciju ćelija koje su hematopoetskog porekla i eksprimiraju marker makrofaga/monocita CD11b i marker granulocita Gr-1/Ly-6G. Fenotip MDSC može biti na primer CD11b<+>HLA-DR-CD14-CD33<+>CD15<+>. MDSC ispoljavaju nisku ili nedetektabilnu ekspresiju zrelog antigena koji predstavlja ć elijske markere MHC klase II i F480. MDSC su nezrele ć elije mijeloidnog porekla i mogu se dalje diferencirati u nekoliko tipova ć elija, uključujući markofage, neutrofile, dendritske ćelije, monocite ili granulocite. MDSC se mogu pronaći prirodno u normalnoj koštanoj srži odrasle osobe i životinja ili na mestima normalne hematopoeze, kao što je slezina.
[0051] „Inhibiranje funkcije MDSC“ ili „inhibiranje MDSC funkcije“ se odnosi na smanjenje nivoa funkcije MDSC in vitro ili in vivo kod ljudskog ili životinjskog subjekta, koji se može odrediti konvencionalnim tehnikama poznatim u struci. Nivo funkcije MDSC se može smanjiti za, na primer, najmanje približno 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ili 100%. „Inhibiranje funkcije MDSC“ uključuje redukovanje broja MDSC, na primer uništavanjem MDSC efektorskim funkcijama antitela, kao što je ADCC. MDSC može supresovati T ćelijske odgovore kao što je proliferacija, klonska ekspanzija ili proizvodnja citokina različitim mehanizmima kao što je produkcija reaktivnih vrsta kiseonika, peroksinitrita, povećanje metabolizma arginaze usled visokih nivoa arginaze, i povećanje sintaze azotnog oksida. MDSC može odgovoriti na IFN-γ i nekoliko citokina kao š to su IL-4 i IL-13. IFN-γ može aktivirati MDSC koji indukuju aktivnost azot-oksid sintaze 2 (NOS2). Alternativno, Th2 citokini kao što su interleukin-4 (IL-4) i IL-13 mogu aktivirati MDSC š to može dovesti do indukcije aktivnosti arginaze-1 (ARG1). Metabolizam L-arginina ili sa NOS2 ili ARG1 može dovesti do inhibicije T-ćelijske proliferacije, i aktivnost oba enzima zajedno može dovesti do T-ćelijske apoptoze kroz proizvodnju reaktivnih azot-oksid vrsta.
[0052] „Bolest povezana sa Treg“ se odnosi na bolest ili poremećaj povezan sa T regulatornim ć elijama (Treg). Bolest povezana sa Treg može biti izazvana Treg funkcijom, na primer, supresijom anti-tumorskog odgovora ili supresijom efektorske T ć elijske proliferacije. Bolest posredovana sa Treg može biti kancer. „Bolest povezana sa Treg“ i „bolest poredovana sa Treg“ se koristi naizmenično u tekstu.
[0053] „Poboljšati odgovor efektorskih T ćelija“ ili „poboljšati T ćelijske odgovore“ se odnosi na poboljšavanje ili stimulaciju efektorskih T ćelija in vitro ili in vivo kod ljudskog ili životinjskog subjekta da imaju održivu ili amplifikovanu biološku funkciju, ili obnavljanje ili reaktivaciju iscrpljenih ili neaktivnih T-ćelija. Primerni T-ćelijski odgovori su proliferacija, sekrecija γ-interferona iz CD 8<+>T-ćelija, odziv antigena iliklonska ekspanzija. Način merenja ovog poboljšanja je poznat sa uobičajenim veštinama u struci.
[0054] „Bolest povezana sa MDSC“ se odnosi na bolest ili poremećaj povezan sa supresorskim ćelijama izvedenim iz mijeloida (MDSC). Bolest povezana sa MDSC može biti izazvana MDSC funkcijom, na primer, supresija anti-tumorskog odgovora ili efektorske T ćelijske proliferacije. Bolest posredovana sa MDSC može biti rak. „Bolest povezana sa MDSC“ i „bolest posredovana sa MDSC“ se koristi naizmenično u tekstu.
[0055] „Regulatorna B ćelija“ ili „Breg“ se odnosi na B limfocite koji supresuju imune odgovore. Breg mogu biti CD19<+>CD24<+>CD38<+>ćelije, i mogu supresovati imune odgovore inhibiranjem T ć elijske proliferacije posredovano sa IL.-10 lučenim od Breg. Smatra se da postoje drugi Breg podskupovi, i opisani su u, na primer, Ding et al., (2015) Human Immunology 76: 615-621.
[0056] „Bolest povezana sa Breg“ se odnosi na bolest ili poremećaj povezan sa regulatornim B ćelijama. Bolest povezana sa Breg može biti izazvana, na primer, supresijom antitumorskog odgovora ili efektorske T ćelijske proliferacije posredovanom sa Breg. Bolest posredovana sa Breg može biti rak. „Bolest povezana sa Breg“ i „bolest posredovana Breg“ se koriste naizmenično u tekstu.
[0057] „Pacijent“ uključuje bilo koju humanu ili nehumanu životinju. „Nehumane životinje“ uključuju sve kičmenjake, na primer, sisare i nesisare, kao što su nehumani primati, ovce, psi, mačke, konji, krave, pilići, vodozemci, gmizavci, itd. „Pacijent“ i „subjekt“ se koriste naizmenično u tekstu.
[0058] Pronalazak pruža antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu u tretiranju pacijenta koji ima čvrsti tumor, koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5, pri čemu antitelo je IgG1 izotip.
[0059] Pronalazak se odnosi na medicinsku upotrebu pomenutog antitela u postupku tretiranja pacijenta koji ima čvrst tumor sa antitelom koje specifično vezuje CD38 bez obzira na to da li tumorske ćelije eksprimiraju CD38 ili ne. Otkriće se takođe odnosi na metode tretiranja pacijenta koji ima regulatornu T ćelijsku (Treg), supresorsku ć elijsku izvedenu iz mijeloida (MDSC) ili regulatornu B ć elijsku (Breg) posredovanu bolest. Otkriće se takođe odnosi na metode za modulisanje Treg, MDSC ili Breg aktivnosti za tretiranje čvrstih tumora koji su CD38 pozitivni i/ili povezani sa visokim nivoima ovih imuno supresivnih ćelija.
[0060] Pronalazak se bazira, barem delimično, na otkriću da anti-CD38 antitelo DARZALEX™ (daratumumab) ima imunomodulatornu aktivnost kod pacijenata, redukujući broj imuno supresivnih Treg, MDSC i Breg povećavajući broj CD8<+>T ćelija i odnos CD8<+>prema Treg, promovišući formaciju CD8<+>centralne memorijske ćelije i povećavajući T ćelijski klonalitet.
[0061] DARZALEX™ (daratumumab) i druga anti-CD38 antitela se procenjuju u klinici radi njihove efikasnosti u tretiranju heme maligniteta i poremećaja plazma ćelija, uključujući multipli mijelom, na osnovu sposobnosti antitela da eliminiše CD38 pozitivne ć elije pomoću efektorskih funkcija antitela, kao š to su ADCC, CDC, ACDP i apoptoza, ali njihova imunomodulatorna aktivnost u promovisanju adaptivnih imunih odgovora nije prepoznata. Druga imuno modulatorna antitela (anti-PD1, anti-CTLA4) deluju preko targetiranja komponenata imunog sistema koje supresuju antitumorske odgovore. Na primer, pokazalo se da anti-PD1 antitela povećavaju T-ćelijsku proliferaciju, stimulišu antigen-specifične memorijske odgovore, i delimično ublažavaju Treg-posredovanu supresiju efektorskih T ćelija in vitro (na primer, videti SAD pat.br: 8.779.105). Dva anti-PD-1 antitela su trenutno odobrena za tretman melanoma, OPDIVO® (nivolumab) i KEYTRUDA® (pembrolizumab) i ova antitela su u kliničkom razvoju za razne čvrste tumore, kao š to je nesitnoćelijski karcinom pluća, prostate, glave i vrata, gastrointestinalni, želuca, prostate, jajovoda, jajnika, pankreasa, dojke i mozga, bubrega, bešike, uretre, jednjaka i kolorektalni rak. Anti-CTLA-4 antitelo YERVOY® (ipilimumab) je odobreno za tretman melanoma. YERVOY® (ipilimumab) i još jedno anti-CTLA-4 antitelo, tremelimumab se takođe razvijaju za prostatu, nesitnoćelijski rak pluća, jajnika, gastrointestinalni, želuca, kolorektalni, bubrega, jednjaka i genitourinarni rak.
[0062] Bez želje za vezivanjem za bilo koju određenu teoriju, na osnovu imunomodulatornih efekata uočenih sa DARZALEX™ (daratumumab) opisanim u tekstu, DARZALEX™ (daratumumab) i druga anti-CD38 antitela mogu biti efikasna u tretmanu čvrstih tumora. Usled generalne aktivacije imunog odgovora uočenog kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab), pacijenti koji imaju CD38-negativne č vrste tumore mogu takođe odgovoriti na terapije anti-CD38 antitela.
[0063] Pronalazak pruža antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu u tretiranju pacijenta koji ima čvrst tumor, koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5, pri čemu antitelo je IgG1 izotip. Pronalazak se odnosi na medicinsku upotrebu pomenutog antitela u postupku tretiranja pacijenta koji ima č vrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 na vreme dovoljno za tretiranje čvrstog tumora.
[0064] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima regulatornu T-ćelijski (Treg) posredovanu bolest, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 tokom vremena dovoljnog za tretiranje bolesti posredovane Treg.
[0065] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima bolest posredovanu supresorskom ćelijom (MDSC) izvedenu iz mijeloida, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 tokom vremena dovoljnog za tretiranje bolesti posredovane MDSC.
[0066] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima bolest posredovanu regulatornom B ćelijom (Breg), koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 tokom vremena dovoljnog za tretiranje bolesti posredovane Breg.
[0067] Otkriće se takođe odnosi na postupak supresovanja aktivnosti regulatorne T ć elije (Treg), koji obuhvata kontaktovanje regulatorne T ćelije sa antitelom koje specifično vezuje CD38.
[0068] Otkriće se takođe odnosi na postupak supresovanja aktivnosti supresorske ćelije (MDSC) izvedene iz mijeloida, koji obuhvata kontaktovanje MDSC sa antitelom koje specifično vezuje CD38.
[0069] Otkriće se takođe odnosi na postupak supresovanja aktivnosti regulatorne B ćelije (Breg), koji obuhvata kontaktovanje Breg sa antitelom koje specifično vezuje CD38.
[0070] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata redukovanje broja regulatornih T ćelija (Treg) kod pacijenta primenom nad pacijentom antitela koje specifično vezuje CD38.
[0071] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata redukovanje broja supresorskih ćelija (MDSC) izvedenih iz mijeloida kod pacijenta primenom nad pacijentom antitela koje specifično vezuje CD38.
[0072] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima č vrsti tumor, koji obuhvata redukovanje broja regulatornih B ćelija (Breg) kod pacijenta primenom nad pacijentom antitela koje specifično vezuje CD38.
[0073] Otkriće se takođe odnosi na postupak pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom antitela koje specifično vezuje CD38 tokom vremena dovoljnog za pojačavanje imunog odgovora.
[0074] U nekim slučajevima, pacijent ima virusnu infekciju.
[0075] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja virusne infekcije kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom antitela koje specifično vezuje CD38 tokom vremena dovoljnog za tretiranje virusne infekcije.
[0076] U nekim izvedbama, imuni odgovor je odgovor efektorske T ćelije (Teff).
<+>[0077] U nekim izvedbama, Teff odgovor je posredovan CD4T ćelijama ili CD8 T ćelijama.
<+>[0078] U nekim izvedbama, Teff odgovor je posredovan CD4 T ćelijama.
<+>[0079] U nekim izvedbama, Teff odgovor je posredovan CD8 T ćelijama.
<+>[0080] U nekim izvedbama, Teff odgovor je povećanje broja CD8 T ćelija, povećana CD8 T ćelijska proliferacija, povećana T ćelijska klonska ekspanzija, povećana formacija CD8<+>memorijske ćelije, povećana proizvodnja antitela zavisna od antigena, ili povećana proizvodnja citokina, hemokina ili interleukina.
[0081] Proliferacija T ćelija može biti procenjena na primer merenjem stope DNK sinteze korišćenjem tricijanog timidina ili merenjem proizvodnje interferon-γ (IFN-γ) in vitro, ili merenjem apsolutnog broja ili procenta T ćelija u populaciji ćelija iz uzoraka pacijenta upotrebom poznatih metoda.
[0082] Klonska ekspanzija može biti procenjena na primer sekvenciranjem TCR iz grupe T ćelija upotrebom poznatih metoda.
<->[0083] Formacija memorijskih ćelija se može proceniti merenjem odnosa naivnih T ćelija (CD45R0/CD62L ) prema memorijskim T ćelijama (CD45RO<+>/CD62L<high>) upotrebom na primer FACS.
[0084] Proizvodnja citokina, hemokina ili interleukina, kao što je proizvodnja interferon-γ (IFN-γ), faktora alfa nekroze tumora (TNF-α), IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-16, IL-18 i IL-23, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, CCL4 se može proceniti upotrebom standardnih postupaka kao što su ELISA ili ELLISPOT testovi.
[0085] Antigen specifična proizvodnja antitela može biti procenjena iz uzoraka dobijenih od pacijenta upotrebom uobičajenih postupaka, kao što je ELISA ili radioimunoesej (RIA).
[0086] Značenje „povećanja“ ili „povećavanje“ raznih Teff odgovora je lako razumljivo. Povećanje može biti povećanje od najmanje približno 5%, najmanje približno 10%, 25%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57% 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 200%, 250%, 300%, 350%, 400% ili više u test uzorku ili u subjektu u poređenju sa kontrolom, na primer, kod pacijenta tretiranog sa anti-CD38 antitelom u poređenju sa istim pacijentom pre tretmana, ili kod pacijenta ili grupe pacijenata koji su responzivni na tretman anti-CD38 antitelom u poređenju sa pacijentom ili grupom pacijenata koji su neresponzivni na isti tretman. Obično, povećanje je statistički značajno.
[0087] Slično tome, značenje „redukovati“ ili „redukovanje“ ili „smanjivanje“ ili „smanjenje“ broja Treg, MDSC i/ili Breg je lako razumljivo. Smanjenje može biti najmanje približno 10%, 25%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%,110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 200%, 250%, 300%, 350%, 400% ili više u test uzorku ili u subjektu u poređenju sa kontrolom, na primer, kod pacijenta tretiranog sa anti-CD38 antitelom u poređenju sa istim pacijentom pre tretmana, ili kod pacijenta ili grupe pacijenata koji su responzivni na tretman anti-CD38 antitelom u poređenju sa pacijentom ili grupom pacijenata koji su neresponzivni na isti tretman. Obično, smanjenje je statistički značajno.
[0088] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 inhibira funkciju imuno supresorskih ćelija.
[0089] U nekim izvedbama, imuno supresorske ćelije su regulatorne T ćelije (Treg), supresorske ćelije (MDSC) izvedene iz mijeloida ili regulatorne B ćelije (Breg).
[0090] U nekim izvedbama, Treg su CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>T ćelije.
[0091] U nekim izvedbama, CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>ćelije eksprimiraju Foxp3.
[0092] U nekim izvedbama, CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>T ćelije eksprimiraju CD38.
[0093] Treg funkcija, kao što je njihova sposobnost da supresuju Teff ćelije, može biti procenjena upotrebom poznatih metoda, kao š to je procenjivanje sposobnosti Treg da supresuju proliferaciju Teff u mešovitoj limfocitnoj reakciji (MLR).
[0094] Treg funkcija može biti inhibirana na primer redukovanjem relativnog broja Treg u poređenju sa Teff (na primer, povećavanje odnosa CD8<+>/Treg ćelija) direktnim uništavanjem Treg ili podpopulacijom Treg, kao što su CD38<+>Treg.
[0095] U nekim izvedbama, Treg funkcija je inhibirana uništavanjem Treg ćelija.
[0096] U nekim izvedbama, uništavanje Treg je posredovano antitelo indukovanom i zavisnom ćelijskom citotoksičnošću (ADCC), ćelijskom fagocitozom zavisnom od antitela (ADCP), citotoksičnošću zavisnom od komplementa (CDC) ili apoptozom indukovanom od strane antitela koje specifično vezuje CD38.
[0097] U nekim izvedbama, uništavanje Treg je posredovano sa ADCC.
[0098] U nekim izvedbama, CD38<+>Treg su uništene.
[0099] U nekim izvedbama, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58% ili 60% Treg su uništene.
[0100] S obzirom na to da je CD38 eksprimiran jedino u delu Treg i MDSC, očekuje se da tretman pacijenata sa č vrstim tumorima neće rezultirati sa sistemskom deplecijom Treg i MDSC, š to ć e verovatno pružiti poboljšani bezbednosni profil.
[0101] U nekim izvedbama, MDSC su CD11b<+>HLA-DR-CD14-CD33<+>CD15<+>ćelije.
[0102] U nekim izvedbama, CD11b<+>HLA-DR-CD14-CD33<+>CD15<+>MDSC eksprimiraju CD38.
[0103] MDSC funkcija može biti inhibirana na primer redukovanjem broja MDSC direktnim uništavanjem ćelija.
[0104] U nekim izvedbama, MDSC funkcija je inhibirana uništavanjem CD38<+>MDSC.
[0105] U nekim izvedbama, MDSC uništavanje je posredovano antitelo indukovanom i zavisnom ćelijskom citotoksičnošću (ADCC), ćelijskom fagocitozom zavisnom od antitela (ADCP), citotoksičnošću zavisnom od komplementa (CDC) ili apoptozom indukovanom od strane antitela koje specifično vezuje CD38.
[0106] U nekim izvedbama, uništavanje MDSC je posredovano sa ADCC.
[0107] U nekim izvedbama, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58% ili 60% MDSC je uništeno.
[0108] U nekim izvedbama, Breg su CD19<+>CD24<+>CD38<+>ćelije.
[0109] Breg funkcija može biti inhibirana na primer redukovanjem broja Breg direktnim uništavanjem Breg.
[0110] U nekim izvedbama, Breg funkcija je inhibirana uništavanjem CD38<+>Breg.
[0111] U nekim izvedbama, uništavanje Breg je posredovano antitelo indukovanom i zavisnom ćelijskom citotoksičnošću (ADCC), ćelijskom fagocitozom zavisnom od antitela (ADCP), citotoksičnošću zavisnom od komplementa (CDC) ili apoptozom indukovanom od strane antitela koje specifično vezuje CD38.
[0112] U nekim izvedbama, uništavanje Breg je posredovano sa ADCC.
[0113] U nekim izvedbama, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58% ili 60% Breg je uništeno.
[0114] Treg imaju ključnu ulogu u održavanju periferne samotolerancije. Treg CD4<+>CD25<hi>koje se prirodno javljaju se proizvode u timusu i eksprimiraju Foxp3, transkripcioni faktor neophodan za uspostavljanje i održavanje identiteta Treg linije i supresorske funkcije. Treg se mogu akumulirati na mestu bolesti (na primer, unutar tumora), gde supresuju efektorsku funkciju T ć elija specifičnih za tumorski antigen, š to dovodi do nedovoljnih antitumorskih odgovora. Povećane gustine tumor infiltrirajućih Foxp3<+>Treg su povezane sa lošom prognozom kod različitih č vrstih tumora, uključujući karcinom pankreasa, jajnika i hepatocelularni karcinom. Deplecija Treg dovodi do pojačanog antitumorskog imuniteta i odbacivanja tumora kod mišjih modela ali može takođe dovesti do nastanka autoimunih bolesti.
[0115] Supresorske ćelije (MDSC) izvedene iz mijeloida su heterogena populacija ranih mijeloidnih progenitora, nezrelih granulocita, makrofaga i dendritskih ć elija u različitim fazama diferencijacije.
Akumuliraju se u velikom broju kod pacijenata sa kancerom i imaju snažne imunosupresivne funkcije, supresujući i citotoksične aktivnosti ć elija prirodnih ubica (NK) i T ć elija prirodnih ubica (NKT), kao i adaptivni imuni odgovor posredovan CD8<+>T ćelijama. Iako mehanizam inhibicije NK ć elija trenutno nije dobro shvaćen, višestruke putanje su odgovorne za T ć elijsku supresiju posredovanu MDSC uključujući proizvodnju arginaze 1/ARG1 povećanje regulacije sintaze 2 azotnog oksida (NOS2). ARG1 i NOS2 metabolišu L-arginin i ili zajedno ili odvojeno blokiraju translaciju T ć elijskog CD3zeta lanca, inhibiraju T ćelijsku proliferaciju i promovišu T ć elijsku apoptozu. Pored toga, MDSC luče imunosupresivne citokine i indukuju razvoj regulatorne T ćelije.
[0116] MDSC su indukovane proinflamatornim citokinima i nalaze se u povećanom broju kod infektivnih i inflamatornih patoloških stanja. Akumuliraju se u krvi, koštanoj srži i sekundarnim limfoidnim organima miševa koji nose tumor i njihovo prisustvo u tumorskom mikrookruženju navodi da imaju uzročnu ulogu u promovisanju imuno supresije povezane sa tumorom.
[0117] MDSC su opisane kod pacijenata sa karcinomom debelog creva, melanomom, hepatocelularnim karcinomom, karcinomom skvamoznih ćelija glave i vrata, nesitnoćelijskim karcinomom pluća, karcinomom bubrežnih ć elija, adenokarcinomom pankreasa i karcinomom dojke (Mandruzzato et al., (2009) J Immunol 182: 6562-6568; Liu et al., (2009) J Cancer Res Clin Oncol 136: 35-45; Ko et al., (2009) Clin Cancer Res 15: 2148-2157; Morse et al., (2009) Expert Opin Biol Ther 9: 331-339; Diaz-Montero et al., (2009) Cancer Immunol Immunother 58: 49-59; Corzo et al., (2009) J Immunol 182: 5693-5701). Kod pacijenata sa rakom, Diaz et al (Diaz-Montero et al., (2009) Cancer Immunol Immunother 58: 49-59) predlažu da je akumulacija MDSC u korelaciji sa napredovanjem bolesti i lošom prognozom.
[0118] Breg koji infiltriraju tumor su identifikovane u čvrstim tumorima, i Breg mogu doprineti rastu tumora i metastazi putem raznih mehanizama kao što je supresovanje antitumorske aktivnosti CD8<+>T ćelija i NKćelija, kao što je opisano primera radi u Ding et al., (2015) Human Immunology 76:615-62.
[0119] „Celularna citotoksičnost zavisna od antitela“, „ćelijski posredovana citotoksičnost zavisna od antitela“ ili „ADCC“ je mehanizam za indukovanje ć elijske smrti koji zavisi od interakcije ciljanih ć elija obloženih antitelom sa efektorskim ćelijama koje poseduju litičku aktivnost, kao što su ćelije prirodne ubice, monociti, makrofagi i neutrofili preko Fc gama receptora (FcyR) eksprimiranih na efektorskim ćelijama. Na primer, NK ćelije eksprimiraju FcyRIIIa, dok monociti eksprimiraju FcyRI, FcyRII i FcvRIIIa. Smrt ciljane ćelije obložene antitelom, kao što su ćelije koje eksprimiraju CD38, nastaje kao rezultat aktivnosti efektorske ćelije kroz sekreciju proteina i proteaza koje stvaraju membranske pore. Za procenu aktivnosti ADCC antitela koje specifično vezuje CD38, antitelo može biti dodato ćelijama koje eksprimiraju CD38 u kombinaciji sa imunim efektorskim ćelijama, koje se mogu aktivirati kompleksima antigenskih antitela što dovodi do citolize ciljane ćelije. Citoliza se generalno detektuje oslobađanjem oznake (na primer, radioaktivni supstrati, fluorescentne boje ili prirodni intracelularni proteini) iz liziranih ćelija. Primerne efektorske ćelije za takve testove uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) i NK ćelije. Primerne ciljane ćelije uključuju Treg ili MDSC koje eksprimiraju CD38. U primernom testu, ciljane ć elije su označene sa 20 uCi<51>Cr tokom 2 sata i isprane ekstenzivno. Ćelijska koncentracija ciljanih ćelija se može prilagoditi na 1 x 10<6>ćelija/ml, i dodaju se anti-CD38 antitela pri različitim koncentracijama. Testovi su započeti dodavanjem ciljanih ćelija u odnosu efektorska:ciljana ć elija od 40:1. Nakon inkubacije tokom 3 sata na 37°C testovi su zaustavljeni centrifugiranjem i izmereno je oslobađanje<51>Cr iz liziranih ćelija u scintilacionom brojaču. Procenat celularne citotoskičnosti može biti izračunat kao % maksimalne lize koja može biti indukovana dodavanjem 3% perhlorne kiseline ciljanim ćelijama.
[0120] „Ćelijska fagocitoza zavisna od antitela“ („ADCP“) se odnosi na mehanizam eliminacije ciljanih ćelija obloženih antitelom internalizacijom pomoću fagocitnih ć elija, kao š to su makrofagi ili dendritske ć elije. ADCP se može evaluirati korišćenjem Treg ili MDSC koje eksprimiraju CD38 kao ciljane ćelije projektovane da eksprimiraju GFP ili drugi označeni molekul. Odnos efektorska:ciljana ć elija može biti, na primer, 4:1. Efektorske ćelije se mogu inkubirati sa ciljanim ćelijama tokom 4 sata sa ili bez anti-CD38 antitela. Nakon inkubacije, ćelije se mogu otkačiti pomoću akutaze. Makrofagi se mogu identifikovati sa anti-CD11b i anti-CD 14 antitelima kuplovanim za fluorescentnu oznaku, i procenat fagocitoze se može odrediti na osnovu % GFP fluorescentno u CD11<+>CD14<+>makrofagima upotrebom standardnih metoda.
[0121] „Citotoksičnost zavisna od komplementa“, ili „CDC“, se odnosi na mehanizam za indukovanje ćelijske smrti u kom Fc efektorski domen antitela vezanog za cilj vezuje i aktivira komplementnu komponentu C1q koja zauzvrat aktivira kaskadu komplementa što dovodi do smrti ciljane ćelije. Aktivacija komplementa može takođe dovesti do depozicije komponenti komplementa na površini ciljane ćelije koje olakšavaju ADCC vezivanjem receptora komplementa (na primer, CR3) na leukocitima.
[0122] Sposobnost monoklonskih antitela da indukuju ADCC može biti poboljšana projektovanjem njihove oligosaharidne komponente. Humani IgG1 ili IgG3 su N-glikozilirani na Asn297 sa većinom glikana u dobro poznatim biantenarnim G0, G0F, G1, G1F, G2 ili G2F formama. Antitela proizvedena neprojektovanim CHO ćelijama obično imaju sadržaj glikanske fukoze od približno najmanje 85%. Uklanjanje fukoze jezgra iz biantenarnih oligosaharida kompleks tipa prikačenih za Fc regione pojačava ADCC antitela preko poboljšanog FcyRIIIa vezivanja bez promene vezivanja antigena ili CDC aktivnosti. Takvi mAb se mogu postići korišćenjem različitih metoda za koje se navodi da dovode do uspešne ekspresije relativno visoko defukozilovanih antitela koja nose biantenarne Fc oligosaharide kompleks tipa kao š to je kontrola osmolarnosti kulture (Konno et al., (2012) Cytotechnology 64:249-65), aplikacija varijante CHO linije Lec13 kao ćelijska linija domaćina (Shields et al., (2002) J Biol Chem 277:26733-26740), aplikacija varijante CHO linije EB66 kao ćelijska linija domaćina (Olivier et al., (2010) MAbs 2(4), Epub ahead of print; PMID:20562582), aplikacija ćelijske linije hibridoma pacova YB2/0 kao ćelijske linije domaćina (Shinkawa et al., (2003) J Biol Chem 278:3466-3473), uvođenje male interferirajuće RNK specifično protiv α 1,6-fukoziltrasferaza (FUT8) gena (Mori et al., (2004) Biotechnol Bioeng 88:901-908), ili koekspresija β-1,4-N-acetilglukosarniniltransferaza III i Golgi α-manozidaza II ili snažni alfamanozidaza I inhibitor, kifunenzin (Ferrara et al., (2006) J Biol Chem 281:5032-5036; Ferrara et al., (2006) Biotechnol Bioeng 93:851-861; Xhou et al., (2008) Biotechnol Bioeng 99:652-65). ADCC izazvan anti-CD38 antitelima korišćenim u pronalasku, i u nekim izvedbama svake od niže navedenih numerisanih realizacija, može takođe biti poboljšan određenim supstitucijama u Fc antitelu. Primerne supstitucije su na primer supstitucije na aminokiselinskim pozicijama 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 ili 430 (numerisanje ostataka u skladu sa EU indeksom) kao što je opisano u Pat. SAD br: 6.737.056.
[0123] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 sadrži supstituciju u antitelu Fc.
[0124] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 sadrži supstituciju u antitelu Fc na aminokiselinskim pozicijama 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 or 430 (numerisanje ostataka u skladu sa EU indeksom).
[0125] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 ima biantenarnu glikansku strukturu sa sadržajem fukoze od približno između 0% do približno 15%, na primer 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% ili 0%.
[0126] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 ima biantenarnu glikansku strukturu sa sadržajem fukoze od približno 50%, 40%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% ili 0%.
[0127] Supstitucije u Fc i redukovan sadržaj fukoze može poboljšati ADCC aktivnost antitela koje specifično vezuje CD38.
[0128] „Sadržaj fukoze“ znači količina monosaharida fukoze unutar lanca šećera na Asn297. Relativna količina fukoze je procenat struktura koje sadrže fukozu u odnosu na sve glikostrukture. One se mogu karakterisati i kvantifikovati različitim metodama, na primer: 1) korišćenjem MALDI-TOF ofN-glikozidaza F tretiranog uzorka (na primer, kompleks, hibrid i oligo- i visoko-manozne strukture) kao što je opisano u Int.pat.publ.br: WO2008/077546; 2) enzimskim oslobađanjem Asn297 glikana sa naknadnom derivatizacijom i detekcijom/kvantitacijom sa HPLC (UPLC) sa detekcijom fluoroscencije i/ili HPLC-MS (UPLC-MS); 3) analizom intaktnog proteina nativnog ili redukovanog mAb, sa ili bez tretmana Asn297 glikana sa Endo S ili drugim enzimom koji cepa između prvog i drugog GlcNAc monosaharida, ostavljajući fukozu prikačenu za prvi GlcNAc; 4) digestija mAb do konstituentnih peptida enzimskom digestijom (na primer, tripzin ili endopeptidaza Lys-C), i naknadno razdvajanje, detekcija i kvantitacija sa HPLC-MS (UPLC-MS) ili 5) odvajanje mAb oligosaharida iz mAb proteina specifičnom enzimksom deglikozilacijom sa PNGase F na Asn 297. Oslobođeni oligosaharidi mogu biti označeni fluoroforom, razdvojeni i identifikovani različitim komplementarnim tehnikama koje dozvoljavaju: finu karakterizaciju glikanskih struktura matricom potpomognutom laserskom desorpcionom jonizacijom (MALDI) u masenoj spektrometriji upoređivanjem eksperimentalnih masa sa teoretskim masama, utvrđivanje stepena sijalilacije pomoću HPLC jonske razmene (GlycoSep C), separaciju i kvantifikaciju oligosaharidnih formi u skladu sa kriterijumom hidrofilnosti normalno faznom HPLC (GlycoSep N), i separaciju i kvantifikaciju oligosaharida kapilarnom elektroforezom sa laserom indukovanom fluorescencijom visokih performansi (HPCE-LIF).
[0129] „Niska fukoza“ ili „niski sadržaj fukoze“ kao što je ovde korišćeno se odnosi na antitela sa sadržajem fukoze od približno 0% - 15%.
[0130] „Normalna fukoza“ ili „normalan sadržaj fukoze“ kao što je ovde korišćeno se odnosi na antitela sa sadržajem fukoze od približno preko 50%, obično približno preko 60%, 70%, 80% ili preko 85%.
[0131] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 može indukovati uništavanje Treg, MDSC i/ili Breg apoptozom. Metode za evaluiranje apoptoze su dobro poznate, i uključuju na primer bojenje aneksin IV upotrebom standardnih postupaka. Anti-CD38 antitela korišćena u pronalasku mogu indukovati apoptozu u približno 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% ćelija.
[0132] U nekim izvedbama, Teff ili imuno supresorske ćelije se nalaze u koštanoj srži ili u perifernoj krvi.
[0133] U nekim izvedbama, Teff ili imuno supresorske ćelije se nalaze u koštanoj srži.
[0134] U nekim izvedbama, Teff ili imuno supresorske ćelije se nalaze u perifernoj krvi.
<+>[0135] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 povećava odnos CD8 T ćelija prema Treg.
<+>[0136] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 povećava odnos CD8 centralnih memorijskih ćelija prema CD8<+>naivnim ćelijama. CD8<+>centralne memorijske ćelije se mogu identifikovati kao CD45RO<+>/CD62L<+high>ćelije. CD8<+>naivne ćelije se mogu identifikovati kao CD45RO/CD62L<+>ćelije.
[0137] Neagonističko antitelo koje specifično vezuje CD38 se odnosi na antitelo koje nakon vezivanja za CD38 ne indukuje značajnu proliferaciju uzorka mononuklearnih ćelija periferne krvi in vitro u poređenju sa proliferacijom indukovanom kontrolnim antitelom izotipa ili samim medijumom.
[0138] U nekim izvedbama, neagonističko antitelo koje specifično vezuje CD38 indukuje proliferaciju mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMC) na statistički beznačajan način. Proliferacija PBMC se može proceniti izolovanjem PBMC od zdravih donora i kultivisanjem ćelija na 1 x 10<5>ćelija/otvor na ploči sa ravnim dnom sa 96 otvora u prisustvu ili odsustvu testnog antitela u 200 ul RPMI. Nakon četiri dana inkubacije na 37° C, može se dodati 30 ul<3>H-timidina (16,7 uCi/ml), i kultivisanje se može nastaviti tokom noći. Inkorporacija<3>H-timidina se može proceniti upotrebom Packard Cobra gama brojača (Packard Instruments, Meriden, DT, USA), u skladu sa uputstvima proizvođača. Podaci se mogu izračunati kao srednja vrednost cpm (+-SEM) PBMC dobijenih od nekoliko donora. Statistička značajnost ili beznačajnost između uzoraka kultivisanih u prisustvu ili odsustvu testnog antitela je izračunata korišćenjem standardnih postupaka.
[0139] Primerno anti-CD38 antitelo koje se može koristiti u pronalasku je DARZALEX™ (daratumumab). DARZALEX ™ (daratumumab) sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca (VH) i varijabilnog regiona lakog lanca (VL) prikazane u sekv.id.br: 4 i 5, respektivno, region određivanja komplementarnosti 1 teškog lanca (HCDR1), HCDR2 i HCDR3 SEK ID BR: 6, 7 i 8, respektivno, i region određivanja komplementarnosti 1 lakog lanca (LCDR1), LCDR2 i LCDR3 SEK ID BR: 9, 10 i 11, respektivno, i jeste IgG1/κ podtipa i opisan u Pat. SAD br: 7.829.693. DARZALEX™ (daratumumab) aminokiselinska sekvenca teškog lanca je prikazana u SEK ID BR: 12 a aminokiselinska sekvenca lakog lanca je prikazana u SEK ID BR: 13.
SEK ID BR: 1
SEK ID BR: 2
SKRNIQFSCKNIYR
SEK ID BR: 3
EKVQTLEAWVIHGG
SEK ID BR: 4
SEK ID BR: 5
SEK ID BR: 6
SFAMS SEK ID BR: 7 AISGSGGGTYYADSVKG SEK ID BR: 8 DKILWFGEPVFDY SEK ID BR: 9 RASQSVSSYLA SEK ID BR: 10 DASNRAT SEK ID BR: 11 QQRSNWPPTF SEK ID BR: 12
SEK ID BR: 13
[0140] Antitela mogu biti evaluirana radi njihove kompeticije sa referentnim antitelom kao š to je DARZALEX™ (daratumumab) koje ima VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5 na vezivanje za CD38 korišćenjem dobro poznatih in vitro metoda. U primernom metodu, CHO ćelije koje rekombinantno eksprimiraju CD38 mogu biti inkubirane sa neobeleženim referentnim antitelom tokom 15 minuta na 4°C, a zatim inkubacijom sa viškom fluoroscentno označenog testnog antitela tokom 45 minuta na 4°C. Nakon ispiranja u PBS/BSA, fluoroscentnost se može izmeriti protočnom citometrijom korišćenjem standardnih postupaka. U sledećoj primernoj metodi, ekstracelularni deo humane CD38 može biti obložen na površini ELISA ploče. Višak neobeleženog referentnog antitela se može dodati tokom približno 15 minuta i naknadno se mogu dodati biotinilovana testna antitela. Nakon ispiranja u PBS/Tween, vezivanje testnog biotinilovanog antitela se može detektovati korišćenjem streptavidina konjugovanog peroksidazom rena (HRP) a signal se može detektovati upotrebom standardnih metoda. Očigledno je da u kompeticionim testovima, referentno antitelo može biti označeno a testno antitelo neoznačeno. Testno antitelo se takmiči sa referentnim antitelom kada referentno antitelo inhibira vezivanje testnog antitela, ili testno antitelo inhibira vezivanje referentnog antitela za CD38 za najmanje 80%, na primer 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100%. Epitop testnog antitela može dalje biti definisan na primer mapiranjem peptida ili testovima zaštite vodonik/deuterijum upotrebom poznatih postupaka, ili determinacijom kristalne strukture.
[0141] Antitela koja se vezuju za region SKRNIQFSCKNIYR (SEK ID BR: 2) i region EKVQTLEAWVIHGG (SEK ID BR: 3) humanog CD38 (SEK ID BR: 1) se mogu generisati na primer imunizovanjem miševa sa peptidima koji imaju aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEK ID BR: 2 i 3 upotrebom standardnih postupaka i onih opisanih u tekstu, i karakterizovanje dobijenih antitela na vezivanje za peptide upotrebom na primer ELISA ili mutageneza studija.
[0142] U tekstu otkriveno anti-CD38 antitelo se vezuje za region SKRNIQFSCKNIYR (SEK ID BR: 2) i region EKVQTLEAWVIHGG (SEK ID BR: 3) humanog CD38 (SEK ID BR: 1). Epitop antitela korišćen u pronalasku uključuje neke ili sve ostatke koji imaju sekvence prikazane u SEK ID BR: 2 ili SEK ID BR: 3. U nekim izvedbama, epitop antitela obuhvata najmanje jednu aminokiselinu u regionu SKRNIQFSCKNIYR (SEK ID BR: 2) i najmanje jednu aminokiselinu u regionu EKVQTLEAWVIHGG (SEK ID BR: 3) humanog CD38 (SEK ID BR: 1). U nekim izvedbama, epitop antitela obuhvata najmanje dve aminokiseline u regionu SKRNIQFSCKNIYR (SEK ID BR: 2) i najmanje dve aminokiseline u regionu EKVQTLEAWVIHGG (SEK ID BR: 3) humanog CD38 (SEK ID BR: 1). U nekim izvedbama, epitop antitela obuhvata najmanje tri aminokiseline u regionu SKRNIQFSCKNIYR (SEK ID BR: 2) i najmanje tri aminokiseline u regionu EKVQTLEAWVIHGG (SEK ID BR: 3) humanog CD38 (SEK ID BR: 1).
[0143] Antitelo koje specifično vezuje CD38 obuhvata HCDR1, HCDR2 i HCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BR: 6, 7 i 8, respektivno.
[0144] Antitelo koje specifično vezuje CD38 obuhvata LCDR1, LCDR2 i LCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BR: 9, 10 i 11, respektivno.
[0145] Antitelo koje specifično vezuje CD38 obuhvata HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3 aminokiselinske sekvence SEK ID BR: 6, 7, 8, 9, 10 i 11, respektivno.
[0146] Antitelo koje specifično vezuje CD38 obuhvata VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5.
[0147] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 obuhvata teški lanac SEK ID BR: 12 i laki lanac SEK ID BR: 13.
[0148] Druga primerna anti-CD38 antitela koja se mogu koristiti u skladu sa otkrićem su:
mAb003 koje sadrži VH i VL sekvence SEK ID BR: 14 i 15, respektivno i koje je opisano u Pat. SAD br: 7.829.693. VH i VL od mAb003 se mogu eksprimirati kao IgG1/κ.
SEK ID BR: 14
SEK ID BR: 15
mAb024 obuhvata VH i VL sekvence SEK ID BR: 16 i 17, respektivno, opisano u Pat. SAD br: 7.829.693. VH i VL od mAb024 mogu biti eksprimirani kao IgG1/κ.
SEK ID BR: 16
SEK ID BR: 17
MOR-202 (MOR-03087) obuhvata VH i VL sekvence SEK ID BR: 18 i 19, respektivno, opisano u Pat. SAD br: 8.088.896. VH i VL od MOR-202 mogu biti eksprimirani kao IgG1/κ.
SEK ID BR: 18
SEK ID BR: 19
Isatuksimab; obuhvata VH i VL sekvence SEK ID BR: 20 i 21, respektivno, opisano u Pat. SAD br: 8.153.765. VH i VL Isatuksimaba mogu biti eksprimirani kao IgG1/κ.
SEK ID BR: 20
SEK ID BR: 21
[0149] Druga primerna anti-CD38 antitela koja se mogu koristiti u postupcima otkrića uključuju ona opisana u Int. pat. pub. br: WO05/103083, Int. pat. pub. br: WO06/125640, Int. pat. pub. br: WO07/042309, Int. pat. pub. br: WO08/047242 ili Int. pat. pub. br: WO 14/178820.
[0150] Pronalazak obezbeđuje antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu u tretiranju pacijenta koji ima čvrsti tumor, koje obuhvata VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5, pri čemu antitelo je IgG1 izotip.
[0151] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0152] Otkriće se takođe odnosi na metodu tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koja obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 14 i VL SEK ID BR: 15 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0153] Otkriće se takođe odnosi na metodu tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koja obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 16 i VL SEK ID BR: 17 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0154] Otkriće se takođe odnosi na metodu tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koja obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 18 i VL SEK ID BR: 19 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0155] Otkriće se takođe odnosi na metodu tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koja obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 20 i VL SEK ID BR: 21 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0156] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je melanom.
[0157] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je kancer pluća.
[0158] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je skvamozni nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC).
[0159] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je neskvamozni NSCLC.
[0160] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je adenokarcinom pluća.
[0161] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je karcinom bubrežnih ćelija (RCC) (npr. bistroćelijski karcinom bubrega ili karcinom papilarnih ćelija bubrega), ili njihova metastatska lezija.
[0162] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je mezoteliom.
[0163] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je karcinom nazofarinksa (NPC).
[0164] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je kolorektalni rak.
[0165] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak prostate ili rak prostate otporan na kastraciju.
[0166] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak stomaka.
[0167] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak jajnika.
[0168] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak želuca.
[0169] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak jetre.
[0170] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak pankreasa.
[0171] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je tiroidni rak.
[0172] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata.
[0173] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je karcinom jednjaka ili gastrointestinalnog trakta.
[0174] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak dojke.
[0175] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak jajovoda.
[0176] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak mozga.
[0177] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak uretre.
[0178] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je genitourinarni rak.
[0179] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je endometrioza.
[0180] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je rak grlića materice.
[0181] U nekim izvedbama, čvrsti tumor je metastatska lezija raka.
[0182] U nekim izvedbama, čvrstom tumoru nedostaje detektabilna ekspresija CD38.
[0183] Čvrstom tumoru nedostaje detektabilna ekspresija CD38 kada je ekspresija CD38 u tkivu č vrstog tumora ili na ćelijama izolovanim iz čvrstog tumora statistički beznačajna u poređenju sa kontrolom, na primer ekspresija detektovana sa anti-CD38 antitelom u odnosu na ekspresiju detektovanu kontrolnim antitelom izotipa upotrebom dobro poznatih metoda.
[0184] Anti-CD38 antitela korišćena u postupcima otkrića se takođe mogu selektovati de novo iz, na primer, biblioteke prikaza faga, gde je fag projektovan da eksprimira humane imunoglobuline ili njihove delove kao što su Fab, jednolančana antitela (scFv), ili neupareni ili upareni varijabilni regioni antitela (Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86; Krebs et al., (2001) J Immunol Meth 254:67-84; Vaughan et al., (1996) Nature Biotechnology 14:309-314; Sheets et al., (1998) PITAS (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, (1991) J Mol Biol 227:381; Marks et al., (1991) J Mol Biol 222:581). CD38 koje vezuje varijabilne domene može biti izolovano iz, na primer, biblioteka prikaza faga koji eksprimiraju varijabilne regione teškog i lakog lanca antitela kao fuzione proteine sa bakteriofag pIX omotač proteinom kao što je opisano u Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96, i Int.. pat. publ. br. WO09/085462. Biblioteke antitela se mogu pregledati radi vezivanja za humani CD38 ekstracelularni domen, dobijeni pozitivni klonovi se dalje karakterišu, Fab izolovane iz klonskih lizata, i naknadno klonirani kao antitela pune dužine. Takve metode prikaza faga za izolovanje humanih antitela su uspostavljene u struci. Videti na primer: Pat. SAD br. 5.223.409, Pat. SAD br. 5.403.484, Pat. SAD br. 5.571.698, Pat. SAD br. 5.427.908, Pat. SAD br. 5.580.717, Pat. SAD br. 5.969.108, Pat. SAD br. 6.172.197, Pat. SAD br. 5.885.793, Pat. SAD br. 6.521.404, Pat. SAD br. 6.544.731, Pat. SAD br. 6.555.313, Pat. SAD br.
6.582.915 i Pat. SAD br.6.593.081.
[0185] Anti-CD38 antitelo je od IgG1.
[0186] Fc deo antitela može posredovati efektorske funkcije antitela kao š to je antitelno nezavisna ćelijski posredovana citotoskičnost (ADCC), celularna fagocitoza zavisna od antitela (ADCP) ili citotoskičnost zavisna od komplementa (CDC). Takva funckija može biti posredovana vezivanjem Fc efektorskog domena za Fc receptor na imunoj ćeliji sa fagocitnom ili litičkom aktivnošću ili vezivanjem Fc efektorskog domena za komponente komplementnog sistema. Obično, efekti posredovani Fc vezivanjem ć elija ili komplementnih komponenata dovode do inhibicije i/ili deplecije ciljanih ć elija, na primer ć elija koje eksprimiraju CD38. Humani IgG izotipovi IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4 pokazuju diferencijalni kapacitet za efektorske funkcije. ADCC može biti posredovana sa IgG1 i IgG3, ADCP može biti posredovana sa IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4, a CDC može biti posredovana sa IgG1 i IgG3.
[0187] Antitela koja su suštinski identična antitelu koje obuhvata VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5 se mogu koristiti u pronalasku. Pojam „suštinski identično“ kao š to je ovde korišćeno znači da su dve VH ili VL aminokiselinske sekvence antitela koje se porede identične ili imaju „nesuštinske razlike“. Nesuštinske razlike su supstitucije 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15 aminokiselina u teškom ili lakom lancu antitela koje ne utiču negativno na svojstva antitela. Procenat identičnosti se može utvrditi na primer poravnavanjem u paru upotrebom podrazumevanih podešavanja AlignX modula Vector NTI v.9.0.0 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Proteinske sekvence iz teksta se mogu koristiti kao sekvence upita za izvršavanje pretrage u javnim ili patentnim bazama podataka da bi se, primera radi, identifikovale povezane sekvence. Primerni programi korišćeni za izvršavanje takvih pretraga su XBLAST ili BLASTP paketi programa (http_/www_ncbi_nlm/nih_gov) ili GenomeQuest™ (GenomeQuest, Westborough, MA) koji koriste podrazumevana podešavanja. Primerne supstitucije koje se mogu napraviti na antitelima koja specifično vezuju CD38 su na primer konzervativne supstitucije sa aminokiselinom koja ima sličan naboj, hidrofobne ili stereohemijske karakteristike. Konzervativne supstitucije se takođe mogu izvršiti kako bi se poboljšala svojstva antitela, na primer stabilnost ili afinitet, ili da bi se poboljšale efektorske funkcije antitela. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15 aminokiselinske supstitucije se mogu izvršiti na primer na teškom ili lakom lancu anti-CD38 antitela. Štaviše, bilo koji nativni ostatak u VH ili VL takođe može biti supstituisan alaninom, kao što je prethodno opisano za alanin skenirajuću mutagenezu (MacLennan et al., Acta Physiol Scand Suppl 643:55-67, 1998; Sasaki et al., Adv Biophys 35:1-24, 1998). Željene aminokiselinske supstitucije mogu odrediti oni sa iskustvom u praksi u vreme kada su takve supstitucije poželjne. Aminokiselinske supstitucije se mogu izvršiti na primer PCR mutagenezom (Pat. SAD br: 4.683.195). Biblioteke varijanti se mogu generisati korišćenjem dobro poznatih postupaka, na primer korišćenjem nasumičnih (NNK) ili nenasumičnih kodona, koji kodiraju 11 aminokiselina (Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp) i pregledaju biblioteke za varijante sa željenim svojstvima. Generisane varijante se mogu testirati na njihovo vezivanje za CD38, njihovu mogućnost da indukuju ADCC, ADCP ili apoptozu, ili modulišu enzimsku aktivnost CD38 in vitro upotrebom u tekstu opisanih metoda.
[0188] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 može vezati humani CD38 sa nizom afiniteta<(K>D). U jednoj izvedbi prema pronalasku, i u nekim izvedbama svake od numerisanih izvedbi navedenih u nastavku teksta, antitelo koje specifično vezuje CD38 se vezuje za CD38 sa visokim afinitetom, na primer, sa KDjednakim ili manjim od približno 10<-7>M, kao što je ali bez ograničavanja na, 1-9,9 (ili bilo koji opseg ili vrednost u njemu, kao što je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ili 9) x 10<-8>M, 10<-9>M, 10<-10>M, 10<-11>M, 10<-12>M, 10<-11>M, 10<-11>M, 10<-15>M ili bilo koji opseg ili vrednost u njemu, kao što je određeno površinskom plazmonskom rezonancom ili Kineksa metodom, kao što praktikuju stručnjaci iz struke. Jedan primerni afinitet je jednak ili manji od 1 x 10<-8>M. Sledeći primerni afinitet je jednak ili manji od 1 x 10<-9>M.
[0189] U nekim izvedbama, antitelo koje specifično vezuje CD38 je bispecifično antitelo. VL i/ili VH regioni postojećih anti-CD38 antitela ili VL i VH regiona identifikovani de novo kao što je opisano u tekstu mogu biti projektovani u bispecifična antitela pune dužine. Takva bispecifična antitela se mogu napraviti modulisanjem CH3 interakcija između teških lanaca monospecifičnog antitela da bi se formirala bispecifična antitela upotrebom tehnologija kao što su one opisane u Pat. SAD br: 7.695.936; Int. pat. publ. br: WO04/111233; Pat. publ SAD br: US2010/0015133; Pat. publ. SAD br: US2007/0287170; Int. pat. publ. br: WO2008/119353; Pat. publ. SAD br: US2009/0182127; Pat. publ. SAD br: US2010/0286374; Pat. publ. SAD br: US2011/0123532; Int. pat. publ. br: WO2011/131746; Int. pat. publ. br: WO2011/143545; ili Pat. publ. SAD br: US2012/0149876. Dodatne bispecifične strukture u koje se VL i/ili VH regioni antitela pronalaska mogu inkorporirati su na primer Dualni varijabilni domen imunoglobulina (Int. pat. publ. br: WO2009/134776), ili strukture koje uključuju različite dimerizacione domene za povezivanje dva kraka antitela sa različitom specifičnošću, kao što su leucin zipper ili domeni dimerizacije kolagena (Int. pat. publ. br: WO2012/022811, Pat. SAD br: 5.932.448; Pat. SAD br: 6.833.441).
[0190] Na primer, bispecifična antitela se mogu generisati in vitro u okruženju bez ć elija uvođenjem asimetričnih mutacija u CH3 regione dva monospecifična homodimerna antitela i formirati bispecifičnog heterodimernog antitela od dva parentalna monospecifična homodimerna antitela u redukujućim uslovima kako bi se dozvolila izomerizacija disulfidne veze u skladu sa postupcima opisanim u Int. pat. publ. br: WO2011/131746. U postupcima, prvo monospecifično bivalentno antitelo (na primer, anti-CD38 antitelo) i drugo monospecifično bivalentno antitelo su projektovana da imaju određene supstitucije u CH3 domenu koji promoviše stabilnost heterodimera; antitela su inkubirana zajedno pod redukujućim uslovima dovoljnim da se dozvoli cisteinima u zglobnom regionu da se podvrgnu izomerizaciji disulfidne veze; time generišući bispecifično antitelo razmenom Fab kraka. Uslovi inkubacije se optimalno mogu vratiti na neredukujuće. Primerni agensi redukcije koji se mogu koristiti su 2- merkaptoetilamin (2-MEA), ditiotreitol (DTT), dithioeritritol (DTE), glutation, tris(2-karboksietil)fosfin (TCEP), L-cistein i beta-merkaptoetanol, preferirano agens redukcije izabran iz grupe koja se sastoji od: 2- merkaptoetilamin, ditiotreitol i tris(2-karboksietil)fosfin. Na primer, inkubacija tokom najmanje 90 minuta na temperaturi od najmanje 20°C u prisustvu barem 25 mM 2-MEA ili u prisustvu najmanje 0,5 mM ditiotreitola pri pH između 5-8, na primer pri pH 7,0 ili pH 7,4 se može koristiti.
[0191] Primerne CH3 mutacije koje se mogu koristiti u prvom teškom lancu i drugom teškom lancu bispecifičnog antitela su K409R i/ili F405L.
[0192] Antitela pronalaska se mogu koristiti za tretiranje životinjskog pacijenta koji pripada bilo kojoj klasifikaciji. Primeri takvih životinja uključuju sisare kao što su ljudi, glodari, psi, mačke i domaće životinje.
Primena/farmaceutske kompozicije
[0193] Antitela koja specifično vezuju CD38 mogu biti obezbeđena u pogodnim farmaceutskim kompozicijama koje sadrže antitelo koje specifično vezuje CD38 i farmaceutski prihvatljivom nosaču. Nosač može biti diluent, ađuvans, ekscipijent, ili vehikulum sa kojim se antitela koja specifično vezuju CD38 primenjuju. Takvi vehikulumi mogu biti tečnosti, kao što su voda i ulja, uključujući ona naftnog, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što su ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slična. Na primer, može se koristiti 0,4% fiziološkog rastvora i 0,3% glicina. Ovi rastvori su sterilni i uglavnom ne sadrže č estice. Mogu se sterilisati konvencionalnim, dobro poznatim tehnikama sterilizacije (na primer, filtracija). Kompozicije mogu sadržati farmaceutski prihvatljive pomoćne supstance koje su potrebne za aproksimaciju fizioloških uslova kao š to je prilagođavanje pH i agensi za puferovanje, stabilizovanje, zgušnjavanje, podmazivanje i bojenje, itd. Koncentracija antitela koja specifično vezuju CD38 u takvoj farmaceutskoj formulaciji može veoma varirati, tj., od manje od približno 0,5%, obično do najmanje približno 1% do čak 15 ili 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% ili 50% težine i biće primarno izabrani na osnovu zahtevane doze, zapremina tečnosti, viskoziteta, itd., u skladu sa određenim načinom primene koji je izabran. Pogodni vehikulumi i formulacije, uključujući druge humane proteine, na primer, humani serum albumin, su opisani, na primer, u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, deo 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092, videti posebno 958-989.
[0194] Način primene antitela koja specifično vezuju CD38 može biti bilo koji prikladni način kao što je parenteralna primena, na primer, intradermalna, intramuskularna, intraperitonealna, intravenozna ili subkutana, pulmonarna, transmukozalna (oralna, itranazalna, intravaginalna, rektalna) ili druge načine podrazumevane od strane stručnjaka, kao dobro poznate u struci. Antitela koja specifično vezuju CD38 mogu biti primenjena intratumoralno, na mestu drenaže limfnih čvorova za lokalnu isporuku u tumor upotrebom poznatih postupaka.
[0195] Antitela koja specifično vezuju CD38 mogu biti primenjena nad pacijentom putem bilo kog prikladnog načina, na primer, parentalno intravenoznom (i.v.) infuzijom ili bolus injekcijom, intramuskularno ili subkutano ili intraperitonealno. I.v. infuzija može biti davana tokom primera radi 15, 30, 60, 90, 120, 180 ili 240 minuta, ili od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 sati.
[0196] Doza data pacijentu je dovoljna da ublaži ili barem delimično zaustavi bolest koja se tretira („terapeutski efikasna količina“) i može biti ponekada 0,005 mg do približno 100 mg/kg, na primer približno 0,05 mg do približno 30 mg/kg ili približno 5 mg do približno 25 mg/kg, ili približno 4 mg/kg, pribilžno 8 mg/kg, približno 16 mg/kg ili približno 24 mg/kg, ili na primer približno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 mg/kg, ali može čak i viša, na primer približno 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 mg/kg.
[0197] Može se takođe dati fiksna jedinična doza, na primer, 50, 100, 200, 500 ili 1000 mg, ili doza može biti zasnovana na oblasti površine kod pacijenta, na primer, 500, 400, 300, 250, 200 ili 100 mg/m<2>. Obično semože primeniti između 1 i 8 doza, (na primer, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8), ali se može primeniti i 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ili više doza.
[0198] Primena antitela koja specifično vezuju CD38 se može ponoviti nakon jednog dana, dva dana, tri dana, četiri dana, pet dana, š est dana, nedelju dana, dve nedelje, tri nedelje, jednog meseca, pet nedelja, š est nedelja, sedam nedelja, dva meseca, tri meseca, četiri meseca, pet meseci, šest meseci ili duže. Takođe su mogući ponovljeni pravci lečenja, kao i hronična primena. Ponovljena primena može biti u istoj dozi ili u različitoj dozi. Na primer, antitela koja specifično vezuju CD38 se mogu primeniti sa 8 mg/kg ili sa 16 mg/kg u nedeljnom intervalu tokom 8 nedelja, a zatim primenom sa 8 mg/kg ili sa 16 mg/kg svake dve nedelje tokom dodatnih 16 nedelja, a zatim primenom sa 8 mg/kg ili 16 mg/kg svake četiri nedelje intravenoznom infuzijom.
[0199] Antitela koja specifično vezuju CD38 mogu biti terapijom održavanja, kao što je, na primer jednom nedeljno tokom perioda od 6 meseci ili više.
[0200] Na primer, antitela koja specifično vezuju CD38 se mogu obezbediti kao dnevna doza u količini od približno 0,1-100 mg/kg, kao što je 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 mg/kg, po danu, najmanje jednog od dana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 ili 40, ili alterantivno, najmanje jedna od nedelje 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 nakon inicijacije tretmana, ili bilo koja njihova kombinacija, upotrebom pojedinačnih ili podeljenih doza svaka 24, 12, 8, 6, 4 ili 2 sata, ili bilo koja njihova kombinacija.
[0201] Antitela koja specifično vezuju CD38 mogu takođe biti primenjena profilaktički kako bi se smanjio rizik od nastanka raka, odložio početak pojave događaja u progresiji raka, i/ili redukovao rizik od recidiva kada je rak u remisiji. Ovo može biti posebno korisno kod pacijenata kod kojih je teško locirati tumor za koji se zna da je prisutan zbog drugih bioloških faktora.
[0202] Antitela koja specifično vezuju CD38 mogu biti liofilizovana za skladištenje i rekonstituisana u pogodnom nosaču pre upotrebe. Ova tehnika se pokazala kao efikasna sa konvencionalnim proteinskim preparacijama i mogu se koristiti dobro poznate tehnike liofilizacije i rekonstitucije.
[0203] Antitela koja specifično vezuju CD38 se mogu primeniti u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom.
[0204] Antitela koja specifično vezuju se mogu primeniti zajedno sa bilo kojim ili više hemoterapeutskih lekova ili drugim anti-kancer terapeuticima poznatim iskusnim stručnjacima. Hemoterapeutski agensi su hemijska jedinjenja korisna u lečenju raka i uključuju inhibitorne agense rasta ili druge citotoksične agense i uključuju agense za alkilovanje, antimetabolite, inhibitore antimikrotubula, inhibitore topoizomeraze, inhibitore receptorske tirozin kinaze, inhibitore angiogeneze i slične. Primeri hemoterapeutskih agenasa uključuju agense alkilovanja kao š to su tiotepa i ciklosfosfamid (CYTOXAN®); alkil sulfonate kao š to su busulfan, improsulfan i piposulfan; aziridine kao š to su benzodopa, karbokvon, meturedopa i uredopa; etilenimine i metilamelamine uključujući altretamin, trietilenemelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosfaoramid i trimetilolomelamin; azotne iperite kao što su hlorambucil, hlomafazin, holofosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembicin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil iperit; nitrozoureje kao š to su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin, ranimustin; antibiotike kao što su aklacinomizini, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicini, kaktinomicin, kaliheamicin, karabicin, karminomicin, karzinofilin, hromomicini, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, doksorubicin, epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicini, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kvelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; antimetabolite kao š to su metotreksat i 5-FU; analoge folne kiseline kao š to su denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; analoge purina kao š to su fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; analoge pirimidina kao š to su ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgene kao š to su kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti-adrenale kao š to su aminoglutetimid, mitotan, trilostan; dopunjivač folne kiseline kao š to je frolinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinska kiselina; amsakrin; bestrabucil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikvon; elfomitin; eliptinijum acetat; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiureja; lentinan; jonidamin; mitoguazon; mitoksantron; mopidamol; nitrakrin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; podofilinska kiselina; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK®; razoksan; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonska kiselina; triazikvon; 2,2’,2"-trihlorotrietilamin; uretan; vindezin; dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid ("Ara-C"); ciklofosfamid; tiotepa; članovi oftaksoid ili taksan familije, kao š to su paklitaksel (TAXOL®docetaxel (TAXOTERE®) i njihovi analozi; hlorambucil; gemcitabin; 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; analozi platine kao š to su cisplatin i karboplatin; vinblastin; platina; etopozid (VP-16); ifosfamid; mitomicin C; mitoksantron; vinkristin; vinorelbin; navelbin; novantron; tenipozid; daunomicin; aminopterin; kseloda; ibandronat; CPT-11; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluorometilomitin (DMFO); retinoična kiselina; esperamicini; kapecitabin; inhibitori receptorske tirozin kinaze i/ili angiogeneze, uključujući NEXAVAR® (sorafenib), SUTENT® (sunitinib), VOTRIENT™ (pazopanib), PALLADlA™ (toceranib), ZACTIMA™ (vandetanib), RECENTIN® (cediranib), regorafenib (BAY 73-4506), aksitinib (AG013736), lestaurtinib (CEP-701), TARCEVA® (erlotinib), IRESSA™ (gefitinib), Gilotrif® (afatinib), TYKERB® (lapatinib), neratinib, i slične, i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate bilo kojih prethodno navedenih. U ovu definiciju su takođe uključeni antihormonski agensi koji deluju da regulišu ili inhibiraju hormonsko delovanje na tumorima kao što su anti-estrogeni uključujući na primer tamoksifen, raloksifen, 4(5)-imidazole koji inhibiraju aromatazu, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY 117018, onapriston i FARESTON® (toremifen); i antiandrogene kao š to su flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate bilo kojih prethodno navedenih. Druga konvencionalna citotoksična hemijska jedinjenja kao ona otkrivena u Wiemann et al., 1985, in Medical Oncology (Calabresi et aL, eds.), Chapter 10, McMillan Publishing, su takođe primenjiva.
[0205] Primerni agensi koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelom koje specifično vezuje CD38 uključuju inhibitore tirozin kinaze i ciljane anti-kancer terapije kao š to su IRESSA™ (gefitinib) i Tarceva® (erlotinib) i drugi antagonisti HER2, HER3, HER4 ili VEGF. Primerni HER2 antagonisti uključuju CP-724-714, HERCEPTIN™ (trastuzumab), OMNITARG™ (pertuzumab), TAK-165, TYKERB® (lapatinib) (inhibitor EGFR i HER2 inhibitor) i GW- 282974. Primerni HER3 antagonisti uključuju anti-Her3 antitela (videti na primer, Pat.
publ. SAD br: 2004/0197332). Primerni HER4 antagonisti uključuju anti-HER4 siRNAs (videti, na primer, Maatta et al., Mol Biol Cell 17: 67-79, 2006). Primerni VEGF antagonist je (Avastin™ (Bevacizumab).
[0206] Primerni agensi koji se mogu koristiti u kombinaciji sa antitelom koje specifično vezuje CD38 uključuju standardne lekove za negu čvrstih tumora, ili inhibitor imune kontrolne tačke.
[0207] Drugi terapeutski agens može biti inhibitor imune kontrolne tačke.
[0208] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-PD-1 antitelo, anti-PD-L1 antitelo, anti-PD-L2 antitelo, anti-LAG3 antitelo, anti-TIM3 antitelo ili anti-CTLA-4 antitelo.
[0209] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je antagonističko anti-PD-1 antitelo, antagonističko anti-PD-L1 antitelo, antagonističko anti-PD-L2 antitelo, antagonističko anti-LAG3 antitelo ili antagonističko anti-TIM3 antitelo.
[0210] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-PD-1 antitelo.
[0211] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-PD-L1 antitelo.
[0212] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-PD-L2 antitelo.
[0213] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-LAG3 antitelo.
[0214] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-TIM3 antitelo.
[0215] U nekim izvedbama, inhibitor imune kontrolne tačke je anti-CTLA-4 antitelo.
[0216] Može se koristiti bilo koji antagonist anti-PD-1 antitela. Primerna anti-PD-1 antitela koja se mogu koristiti su OPVIDO® (nivolumab) i KEYTRUDA® (pembrolizumab). OPVIDO® (nivolumab) je opisan u primera radi Pat. SAD br: 8.008.449 (antitelo 5C4) i obuhvata VH SEK ID BR: 24 i VL SEK ID BR: 25. KEYTRUDA® (pembrolizumab) je opisano u primera radi Pat. SAD br: 8.354.509 i obuhvata VH SEK ID BR: 22 i VL SEK ID BR: 23. Aminokiselinske sekvence nivolumaba i pembrolizumaba su takođe dostupne preko CAS registra. Dodatna PD-1 antitela koja se mogu koristiti su opisana u Pat. SAD br: 7.332.582, Pat. publ. SAD br: 2014/0044738, Int. pat. publ. br: WO2014/17966 i Pat. publ. SAD br: 2014/0356363.
[0217] „Antagonist“ se odnosi na molekul koji, kada se veže za ćelijski protein, supresuje najmanje jednu reakciju ili aktivnost koja je indukovana prirodnim ligandom proteina. Molekul je antagonist kada je najmanje jedna reakcija ili aktivnost supresovana za najmanje približno 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% više u odnosu na najmanje jednu reakciju ili aktivnost supresovanu u odsustvu antagonista (na primer, negativna kontrola), ili kada je supresija statistički značajna u poređenju sa supresijom u odsustvu antagonista. Antagonist može biti antitelo, rastvorljivi ligand, mali molekul, DNK ili RNK kao što je siRNK. Uobičajena reakcija ili aktivnost koja je indukovana na primer putem PD-1 vezivanja za svoj receptor PD-L1 ili PD-L2 može biti redukovana antigen-specifičnom CD4<+>ili CD8<+>ćelijskomproliferacijom ili redukovanom proizvodnjom interferon-γ (IFN-γ) od strane T ćelija, što dovodi do supresije imuno odgovora protiv primernog tumora. Uobičajena reakcija ili aktivnost koja je indukovana TIM-3 vezivanjem za svoj receptor, kao što je galektin-9, može biti redukovana antigen specifičnom CD4<+>ili CD8<+>ćelijskom proliferacijom, redukovanom proizvodnjom IFN-γ od strane T ć elija, ili redukovanom CD137 površinskom ekspresijom na CD4<+>or CD8<+>ćelije, što dovodi do supresije imuno odgovora protiv primernog tumora. Stoga, antagonističko PD-1 antitelo koje specifično vezuje PD-1, antagonističko PD-L2, antagonističko antitelo koje specifično vezuje TIM-3 indukuje imuno odgovore inhibiranjem inhibitornih putanja.
SEK ID BR: 22
SEK ID BR: 23
SEK ID BR: 24
SEK ID BR: 25
[0218] Mogu se koristiti anti-PD-L1 antitela koja pojačavaju imuno odgovor (na primer antagonistička anti-PD-L1 antitela). Primerna anti-PD-L1 antitela koja se mogu koristiti su durvalumab, atezolizumab i avelumab, i ona opisana u, primera radi, Pat. publ. SAD br: 2009/0055944, Pat. SAD br: 8.552.154, Pat. SAD br: 8.217.149 i Pat. SAD br: 8.779.108.
[0219] Durvalumab sadrži VH SEK ID BR: 26 i VL sekv. id br: 27.
[0220] Atezolizumab sadrži VH SEK ID BR: 28 i VL sekv. id br: 29.
Avelumab sadrži VH SEK ID BR: 30 i VL sekv. id br: 31.
SEK ID BR: 26
SEK ID BR: 27
SEK ID BR: 28
SEK ID BR: 29
SEK ID BR: 30
SEK ID BR: 31
[0221] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 24 i VL sekv. id br: 25 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0222] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 22 i VL sekv. id br: 23 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0223] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 26 i VL sekv. id br: 27 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0224] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 28 i VL sekv. id br: 29 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0225] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 30 i VL sekv. id br: 31 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0226] Otkriće se takođe odnosi na postupak pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 24 i VL sekv. id br: 25 tokom vremena dovoljnog za pojačavanje imunog odgovora.
[0227] Otkriće se takođe odnosi na postupak pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 22 i VL sekv. id br: 23 tokom vremena dovoljnog za pojačavanje imunog odgovora.
[0228] Otkriće se takođe odnosi na postupak pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 26 i VL sekv. id br: 27 tokom vremena dovoljnog za pojačavanje imunog odgovora.
[0229] Otkriće se takođe odnosi na postupak pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 28 i VL sekv. id br: 29 tokom vremena dovoljnog za pojačavanje imunog odgovora.
[0230] Otkriće se takođe odnosi na postupak pojačavanja imunog odgovora kod pacijenta, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-L1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 30 i VL sekv. id br: 31 tokom vremena dovoljnog za pojačavanje imunog odgovora.
[0231] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima kolorektalni rak, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-1 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje kolorektalnog raka.
[0232] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima kolorektalni rak, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-L1 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje kolorektalnog raka.
[0233] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima kolorektalni rak, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-L2 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje kolorektalnog raka.
[0234] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima rak pluća, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-1 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje raka pluća.
[0235] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima rak pluća, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-L1 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje raka pluća.
[0236] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima rak pluća, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-L2 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje raka pluća.
[0237] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima rak prostate, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-1 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje raka prostate.
[0238] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima rak prostate, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-L1 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje raka prostate.
[0239] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima rak prostate, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 u kombinaciji sa antagonističkim anti-PD-L2 antitelom tokom vremena dovoljnog za tretiranje raka prostate.
[0240] Anti-LAG-3 antitela koja pojačavaju imuno odgovor se mogu koristiti u pronalasku. Primerna anti-LAG-3 antitela koja se mogu koristiti su ona opisana u, na primer, Int. pat. publ. br: WO2010/019570.
[0241] Anti-CTLA-4 antitela koja pojačavaju imuno odgovor se mogu koristiti u pronalasku. Primerno anti-CTLA-4 antitelo koje se može koristiti je ipilimumab.
[0242] Anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-LAG3, anti-TIM3 i anti-CTLA-4 antitela koja se mogu koristiti u pronalasku se takođe mogu generisati de novo upotrebom u tekstu opisanih postupaka.
[0243] U nekim izvedbama, mogu se koristiti anti-PD1 antitela koja obuhvataju VH SEK ID BR: 32 i VL sekv. id br: 33.
[0244] U nekim izvedbama, mogu se koristiti anti-PD1 antitela koja obuhvataju VH SEK ID BR: 34 i VL sekv. id br: 35.
[0245] U nekim izvedbama, mogu se koristiti anti-TIM-3 antitela koja obuhvataju VH SEK ID BR: 36 i VL sekv. id br: 37.
[0246] U nekim izvedbama, mogu se koristiti anti-TIM-3 antitela koja obuhvataju VH SEK ID BR: 38 i VL sekv. id br: 39.
SEK ID BR: 32
SEK ID BR: 33
SEK ID BR: 34
SEK ID BR: 35
SEK ID BR: 36
SEK ID BR: 37
SEK ID BR: 38
SEK ID BR: 39
[0247] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 32 i VL sekv. id br: 33 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0248] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 34 i VL sekv. id br: 35 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0249] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-TIM-3 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 36 i VL sekv. id br: 37 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0250] Otkriće se takođe odnosi na postupak tretiranja pacijenta koji ima čvrsti tumor, koji obuhvata primenu nad pacijentom sa takvom potrebom terapeutski efikasne količine antitela koje specifično vezuje CD38 koje sadrži VH SEK ID BR: 4 i VL sekv. id br: 5 u kombinaciji sa anti-TIM-3 antitelom koje sadrži VH sekv. id br: 38 i VL sekv. id br: 39 tokom vremena dovoljnog za tretiranje čvrstog tumora.
[0251] Kombinacija antitela koje specifično vezuje CD38 i drugog terapeutskog agensa može se primenjivati u bilo kom pogodnom vremenskom okviru. Na primer, antitelo koje specifično vezuje CD38 i drugi terapeutski agens se mogu primeniti nad pacijentom istog dana, čak i istom intravenoznom infuzijom. Međutim, antitelo koje specifično vezuje CD38 i drugi terapeutski agens se takođe mogu primeniti naizmenično danima ili naizmenično nedeljama ili mesecima, itd. U nekim postupcima, antitelo koje specifično vezuje CD38 i drugi terapeutski agens se mogu primeniti sa dovoljnim vremenskim razmakom između tako da su istovremeno prisutni (na primer, u serumu) u detektabilnim nivoima kod pacijenta koji se tretira. U nekim postupcima, ceo tok tretmana antitelom koje specifično vezuje CD38 koji se sastoji od određenog broja doza tokom vremenskog perioda nakon kog se nastavlja ili kom je prethodio tok tretmana sa drugim terapeutskim agensom, koji se sastoji od određenog broja doza. Period oporavka od 1, 2 ili nekoliko dana ili nedelja se može koristiti između primene antitela koje specifično vezuje CD38 i drugog terapeutskog agensa.
[0252] Antitelo koje specifično vezuje CD38 ili kombinacija antitela koje specifično vezuje CD38 i drugog terapeutskog agensa se može primeniti zajedno sa bilo kojom formom terapije zračenjem uključujući zračenje eksternim snopom, terapiju zračenjem sa modulacijom intenziteta (IMRT), fokusirano zračenje, i bilo koji oblik radiohirurgije uključujući gama nož, sajber nož, linac i intersticijalno zračenje (na primer, implantirano radioaktivno seme, Gliasite balon), i/ili sa hirurgijom.
[0253] Metode fokusiranog zračenja koje se mogu koristiti uključuju stereotaksičnu radiohirurgiju, frakcionisanu stereotaksičnu radiohirurgiju i terapiju zračenjem sa modulacijom intenziteta (IMRT). Očigledno je da stereotaksična radiohirurgija uključuje preciznu isporuku zračenja tumorskom tkivu, na primer, tumoru mozga, izbegavajući okružujuće netumorsko, normalno tkivo. Doza zračenja primenjena tokom stereotaksične radiohirurgije može varirati, obično od 1 Gy do približno 30 Gy, i može obuhvatati srednje opsege uključujući, na primer, od 1 do 5, 10, 15, 20, 25, do 30 Gy u dozi. Zbog neinvazivnih uređaja za fiksiranje, stereotaksično zračenje ne treba biti isporučeno u jednom tretmanu. Plan lečenja se može pouzdano duplirati iz dana u dan, č ime se omogućava isporuka višestrukih frakcionisanih doza zračenja. Kada se koristi za tretiranje tumora tokom vremenskog perioda, radiohirurgija se naziva „frakcionisana stereotaksična radiohirurgija“ ili FSR. Nasuprot tome, stereotaksična radiohirurgija se odnosi na tretman u jednoj sesiji. Frakcionisana stereotaksična radiohirurgija može dovesti do visokog terapeutskog racija, tj., visoke stope uništavanja tumorskih ćelija i niskog efekta na normalno tkivo. Tumor i normalno tkivo reaguju različito na visoke pojedinačne doze zračenja u odnosu na višestruke manje doze zračenja. Pojedinačne velike doze zračenja mogu uništiti više normalnog tkiva nego nekoliko manjih doza zračenja. Shodno tome, višestruke manje doze zračenja mogu uništiti više tumorskih ćelija štedeći normalno tkivo. Doza primenjenog zračenja upotrebom frakcionisanog stereotaksičnog zračenja može varirati u opsegu od 1 Gy do približno 50 Gy, i može obuhvatati srednje opsege uključujući, na primer, od 1 do 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, do 50 Gy u hipofrakcionisanim dozama. Terapija zračenjem sa modulacijom intenziteta (IMRT) se takođe može koristiti. IMRT je napredni način visoko precizne trodimenzionalne konformalne terapije zračenjem (3DCRT), koja koristi kompjuterski kontrolisane linearne akceleratore za isporuku preciznih doza zračenja malignom tumoru ili specifičnim oblastima unutar tumora. Kod 3DCRT, profil svakog snopa zračenja je oblikovan da se uklopi sa profilom mete iz perspektive snopa (BEV) upotrebom višelisnog kolimatora (MLC), čime se proizvodi određen broj snopova. IMRT omogućava da se doza zračenja preciznije prilagodi trodimenzionalnom (3-D) obliku tumora modulisanjem intenziteta snopa zračenja u višestrukim manjim zapreminama. Shodno tome, IMRT omogućava da više doze zračenja budu fokusirane na regione unutar tumora istovremeno minimizujući dozu na okolne normalne kritične strukture. IMRT poboljšava sposobnost prilagođavanja zapremine tretmana konkavnim oblicima tumora, na primer, kada je tumor obmotan oko ranjive strukture, kao što je kičmena moždina ili bitni organ ili krivni sud.
Subkutana primena farmaceutskih kompozicija koje sadrže antitelo koje specifično vezuje CD38 i hijaluronidazu
[0254] Antitelo koje specifično vezuje CD38 se može primeniti kao farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo koje specifično vezuje CD38 i hijaluronidazu subkutano.
[0255] Koncentracija antitela koje specifično vezuje CD38 u farmaceutskoj kompoziciji primenjenoj subkutano može biti približno 20 mg/ml.
[0256] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati između približno 1.200 mg – 1.800 mg antitela koje specifično vezuje CD38.
[0257] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.200 mg antitela koje specifično vezuje CD38.
[0258] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.600 mg antitela koje specifično vezuje CD38.
[0259] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.800 mg antitela koje specifično vezuje CD38.
[0260] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati između približno 30.000 U – 45.000 U hijaluronidaze.
[0261] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.200 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 30.000 U hijaluronidaze.
[0262] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.800 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 45.000 U hijaluronidaze.
[0263] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.600 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 30.000 U hijaluronidaze.
[0264] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati približno 1.600 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 45.000 U hijaluronidaze.
[0265] Farmaceutska kompozicija primenjena subkutano može sadržati hijaluronidazu rHuPH20 koja ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 40
[0266] rHuPH20 je rekombinantna hijaluronidaza (HYLENEXOO rekombinantno) i opisana je u Int. pat. publ. br: WO2004/078140.
[0267] Hijaluronidaza je enzim koji degradira hijaluronsku kiselinu (EC 3.2.1.35) i smanjuje viskoznost hijaluronana u ekstracelularnoj matrici, time povećavajući permeabilnost tkiva.
SEK ID BR: 40
[0268] Primena farmaceutske kompozicije koja sadrži antitelo koje specifično vezuje CD38 i hijaluronidazu se moće ponavljati nakon jednog dana, dva dana, tri dana, četiri dana, pet dana, šest dana, nedelju dana, dve nedelje, tri nedelje, č etiri nedelje, pet nedelja, š est nedelja, sedam nedelja, dva meseca, tri meseca, četiri meseca, pet meseci, šest meseci ili duže. Ponavljanje tokova lečenja je takođe moguće, kao i hronična primena. Ponovljena primena može biti u istoj dozi ili u različitoj dozi. Na primer, farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo koje specifično vezuje CD38 i hijaluronidazu može biti primenjena jednom nedeljno tokom osam nedelja, a zatim jednom u dve nedelje tokom 16 nedelja, a zatim jednom u četiri nedelje. Farmaceutske kompozicije za primenu mogu sadržati približno 1.200 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 30.000 U hijaluronidaze, pri čemu koncentracija antitela koje specifično vezuje CD38 u farmaceutskoj kompoziciji je približno 20 mg/ml. Farmaceutske kompozicije za primenu mogu sadržati približno 1.800 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 45.000 U hijaluronidaze. Farmaceutske kompozicije za primenu mogu sadržati približno 1.600 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 30.000 U hijaluronidaze. Farmaceutske kompozicije za primenu mogu sadržati približno 1.600 mg antitela koje specifično vezuje CD38 i približno 45.000 U hijaluronidaze.
[0269] Farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo koje specifično vezuje CD38 i hijaluronidazu se može primeniti subkutano u abdominalni region.
[0270] Farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo koje specifično vezuje CD38 i hijaluronidazu se može primeniti u ukupnoj zapremini od približno 80 ml, 90 ml, 100 ml, 110 ml ili 120 ml.
[0271] Za primenu, 20 mg/ml antitela koje specifično vezuje CD38 u 25 mM natrijum acetata, 60 mM natrijum hlorida, 140 mM D-manitola, 0,04% polisorbata 20, pH 5,5 se može pomešati sa rHuPH20, 1,0 mg/mL (75-150 kU/mL) u 10 mM L-Histidina, 130 mM NaCl, 10 mM L-Metionina, 0,02% Polisorbata 80, pH 6,5 pre primene smeše nad subjektom.
[0272] Iako je pronalazak opisan u opštim terminima, izvedbe pronalaska će biti dodatno otkrivene u sledećim primerima koji ne treba da se tumače kao ograničavanje obima patentnih zahteva.
Primer 1. Opšti materijali i postupci
Sakupljanje i obrada uzorka
[0273] Aspirati periferne krvi i koštane srži su sakupljeni u heparinizovanim tubama na početku neposredno pre prve infuzije i u specifičnim vremenskim tačkama tokom tretmana. Većina uzoraka je evaluirana upotrebom protočne citometrije u realnom vremenu, pošto su stigli u centralnu laboratoriju, 24 – 48 sati nakon sakupljanja. Mononuklearne ć elije periferne krvi (PBMC) su dobijene iz cele krvi, izolovane centrifugiranjem sa gradijentom gustine, i skladištene zamrznute do analize. Za testove T-ćelijske aktivacije,<klonalnosti i supresije CD38+>Treg, uzorci pre i nakon tretmana su analizirani u isto vreme, korišćenjem zamrznutih PBMC uzoraka.
[0274] Protočna citometrijska analiza ovih uzoraka je sprovedena u BARC globalnoj centralnoj laboratoriji za evaluaciju NK, T, B i ć elija mijeloma (CD138<+>) i CD38 ekspresije upotrebom prethodno validiranog testa imunofenotipizacije. Ukratko, uzorci krvi i koštane srži su obojeni sledećim multifluorohromnim antitelnim panelima: panel ćelijske linije: PerCPCy5,5α-CD19 (cloneHIB19; Becton Dickinson [BD]), APCα-CD24 (SN3; eBioscience), PC7α-CD3 (UCHT-1; Beckman Coulter), V500α-CD16 (3G8; BD) i PEα-CD56 (MY; BD); panel regulatorne T ćelije (Treg): APCα-CD25 (2A3; BD), PEα-CD127 (HIL-7R-M21; BD), APC-H7α-HLA-DR (G46-6; BD), i PerCPα-CD4 (L200; BD); panel naivne/memorijske T-ćelije: APC-H7α-CD4 (RPA-T4; BD), PerCP-Cy5,5α-CD8 (RPA-T4 BD), PEα-CD62L (SK11; BD), i APCα-CD45RA (HI100; BD). Ekspresija CD38 je evaluirana upotrebom Alexa 647 označenog antitela mAb 003 opisanog u Pat. SAD br: 7.829.693 koje ima VH i VL sekvence SEK ID BR: 14 i SEK ID BR: 15. Uzorci krvi su pripremljeni upotrebom različitih postupaka Lizispiranja. Kod uzoraka aspirata koštane srži je sprovedeno ili membransko ili intracelularno bojenje sa različitim antitelima. Becton Dickinson FACSLysing rastvor je korišćen za liziranje crvenih krvnih ć elija u uzorcima periferne krvi i korišćeni su reagensi za permeabilizaciju Fix i Perm ćelija iz Invitrogen-a za intracelularno bojenje uzoraka aspirata koštane srži. Obojeni uzorci su dobijeni na FACS Canto II protočnim citometrima i podaci su analizirani upotrebom FacsDiva softvera. U svim testiranim vremenskim tačkama su određeni apsolutni brojevi populacija imuno ć elija u uzorcima krvi i kao procenat limfocita u uzorcima koštane srži.
Sekvenciranje receptora T ćelije (TCR)
[0275] T-ćelijski diverzitet je analiziran dubokim sekvenciranjem TCR rearanžmana kako bi se procenila CD8<+>T-ćelijska klonalnost upotrebom genomske DNK iz uzoraka PBMC. TCR sekvenciranje je sprovedeno upotrebmo Adaptive Biotechnologies commercial Immunoseq™ testa, i analiza je sprovedena korišćenjem prekvalifikovanih testova lančane reakcije multipleks polimeraze (PCR) (TR2015CRO-V-019), koji su bili sastavljeni od prednjih i reverznih prajmera koji su direktno ciljali familiju varijabli (V) gena (prednji prajmeri) i pridružujućih (J) gena (reverzni prajmeri). Svaki V i J genski prajmer je delovao kao prajmerski par da bi amplifikovao somatski rekombinovane TCR, i svaki prajmer je sadržao specifičnu univerzalnu DNK sekvencu. Nakon inicijalne PCR amplifikacije, svaki amplikon je amplifikovan drugi put sa prednjim i reverznim prajmerima koji sadrže univerzalnu sekvencu i adaptorsku sekvencu potrebne za DNK sekvenciranje iluminom.
Odgovori T-ćelije na virusne i aloantigene
[0276] PBMC pacijenta su posađene na ploče sa 96 otvora (2 x 10<5>ćelija/otvor) i stimulisane 5 dana koktelom 23 glavna kompleksa histokompatibilnosti (MHC) klasa I – ograničenih virusnih peptida iz humanog citomegalovirusa (CMV), Epstein-Barr virusa (EBV) i virusa influence (2 mg/ml; CEF peptidni skup; PANATecs®) ili ekvivalentnim brojem od 25-Gy ozračenih alogenskih PBMC od zdravih donora. Nestimulisane PBMC i PBMC stimulisane perle obložene sa anti-CD3/CD28 su služile kao negativne i pozitivne kontrole, respektivno. Petog dana, izmeren je interferon y (IFN-y) iz supernatanta bez ćelija sa sendvič enzimski povezanim imunosorbentnim testom (ELISA; Human IFN gamma ELISA Ready-SET-Go; eBioscience) i služio je kao surogat marker za T-ćelijsku aktivaciju.
Supresija regulatorne T-ćelije (Treg) efektorskih ć elijskih funkcija: Test dilucije karboksifluorescein sukcinimidila (CFSE)
[0277] PBMC od zdravih donora su označene sa PerCP-Cy5,5α-CD3 (SK7; BD), KOα-CD45, (J33; Beckman Coulter), V450α-CD4 (SK3; BD), PEα-CD25 (M-A251, BD), PE Cy7α-CD127 (HIL-7R-M21; BD) i APCα-CD38 (HB-7; BD) i sortirane sa FACS Aria (BD). Sortirane efektorske ć elije su označene karboksifluorescein sukcinimidil estrom (CFSE; eBioscience) i stimulisane sa perlama obloženim sa anti-CD3/CD28 u prisustvu ili<odsustvu CD38+>Treg ili CD38<->Treg (1:1 odnos Treg i efektorskih ćelija) u RPMI plus 10% fetalnog telećeg seruma. Nakon 72 sata, sprovedena je protočna citometrija i procenat dilucije CFSE je korišćen kao surogat za T-ćelijsku proliferaciju.
Fenotipizacija supresorske ćelije izvedene iz mijeloida i ADCC posredovano sa DARZALEX™ (daratumumab)
[0278] PBMC od tri normalna zdrava donora su zajedno kultivisane sa ćelijskim linijama mijeloma tumora (RPMI8226, U266, H929) tokom šest dana, i evaluirane za proizvodnju granulocitnog MDSC (G-MDSC) (CD11b<+>CD14-HLA-DR-CD15<+>CD33<+>) kao što je opisano u Gorgun et al., Blood 121:2975-87, 2013. G-MDSC nisu bile prisutne u normalnim zdravim PBMC, međutim nakon zajedničkog kultivisanja sa sve tri ćelijske linije mijeloma G-MDSC su bile prisutne kao 5-25% ukupne PBMC populacije (podaci nisu prikazani). Strategija gejtinga za protočnu citometrijsku evaluaciju G-MDSC je uključivala CD11b<+>kao prvi gejt, a zatim CD14<->i HLA-DR<->gejting, a zatim CD15<+>i CD33<+>gejting. G-MDSC su ćelijski sortirane i evaluirane na nivoe ekspresije CD38 i senzitivnost na ADCC posredovane sa DARZALEX™ (daratumumab). Kako bi se evaluiralo dejstvo DARZALEX™ (daratumumab) na ADCC/CDC MDSC, dodat je komplement koji sadrži serum ili izotip kontrola ADCC testovima.
Analiza naivne i memorijske T-ćelije
[0279] Uzorci heparinizovane periferne krvi su dobijeni od pacijenata pre svake infuzije DARZALEX™ (daratumumab). Mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) su izolovane Ficoll-Hypaque centrifugiranjem sa gradijentom gustine i skladištene u medijumu za krioprezervaciju (RPMI dopunjen sa 10% humanog seruma i 10% dimetil sulfoksida) u tečnom azotu. Za FACS analizu, PBMC su odmrznute i 2 x 10<6>ćelija/panel su resuspendovane u fosfat puferovanom fiziološkom rastvoru (PBS) sa 0,05% azida i 0,1% HAS.
Analiza podataka
[0280] Celokupna analiza podataka i generisanje relevantnih grafikona su sprovedeni ekskluzivno upotrebom R softvera (R: A Language and Environment for Statistical Computing, R Development Core Team, R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria, 2011, ISBN 3-900051-07-0 http_//_www_R-project_org/). Svi tretirani subjekti sa procenjivim odgovorom su uključeni u analizu podataka. Konzistentno u celini, responderi su definisani kao subjekti sa najboljim odgovorom po IRC od sCR, VGPR i PR, a neresponderi su definisani kao subjekti sa najboljim odgovorom po IRC od MR, SD i PD.
[0281] Različita statistička poređenja su uključivala (i) početne nivoe između respondera i nerespondera, (ii) početnu liniju u odnosu na tretman za respondere i za nerespondere, (iii) procenat promena između respondera i nerespondera, (iv) racio promena početne linije u odnosu na tretman. Svako poređenje je prvo uključivalo test za normalnost sa Shapiro-Wilk testom (Royston (1995) Remark AS R94: A remark on Algorithm AS 181: The W test for normality. Applied Statistics, 44, 547-551). Gotovo isključivo, otkriveno je da podaci nemaju normalnu distribuciju. Testiranje diferencijalnog nivoa je uključivalo sprovođenje oba, i neparametarskog Wilcox testa sume ranga (Hollander and Wolfe (1973), Nonparametric Statistical Methods. New York: John Wiley & Sons. Pages 27-33 (one-sample), 68-75 (two-sample)), i at-testa nakon transformacije Box Cox (Weisberg, S. (2014) Applied Linear Regression, Fourth Edition, Wiley Wiley, Chapter 7). Kod Box Cox transformacije, dodat je mali broj (1e-07) vrednostima jednakim nuli. U svim slučajevima, dva testa su se složila. p vrednosti Wilcox testa sume ranga su prikazane u tabelama kroz specifikaciju osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Prilikom testiranja na razlike početne linije u odnosu na tretman za respondere i nerespondere sproveden je dvogrupni upareni test po subjektu, u svim drugim slučajevima sproveden je dvogrupni neupareni test.
[0282] Pošto uzorci za analizu različitih limfocitnih populacija nisu uzeti u identičnim vremenskim tačkama za različite rasporede doziranja, sprovedeno je modeliranje populacije. Uklapanje modela je urađeno po rangu poseta. Modeliranje populacije na ukupnim i aktiviranim NK ć elijama je uključivalo postavljanje modela slomljenog štapa (Lutz et al., "Statistical model to estimate a threshold dose and its confidence limits for the analysis of sublinear dose-response relationships, exemplified for mutagenicity data." Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis 678.2 (2009): 118-122.). Linearni modeli mešovitog efekta sa nasumičnim presekom i kosinom su bili prilagođeni podacima o populaciji B-ćelija, podpopulacijama T-ćelija, i leukocita, monocita, neutrofila i limfocita pacijenta (Bates et al., (2014). "lme4: Linear mixed-effects models using Eigen and S4." ArXiv e-print; submitted to Journal of Statistical Software, http:_//_arxiv_org/abs/_1406.5823). Ovo linearno mešano modeliranje je sprovedeno relativnog dana od početka tretmana (ADY). Prilagođavanje linearnog mešovitog je urađeno na log transformisanim varijablama odgovora. U slučaju da su vrednosti varijable odgovora jednake nuli, 0,1 je dodato svim vrednostima varijabli odgovora kako bi se omogućilo modeliranje na log skali.
Primer 2. Studija dizajna 54767414MMY2002 (SIRIUS)
[0283] Ciljana populacija za studiju 54767414MMY2002 (SIRIUS) kod pacijenata sa uznapredovalim multipli mijelomom koji su primili najmanje 3 prethodne linije terapije uključujući inhibitor proteazoma (PI) i imunomodulatorni lek (IMiD) ili dvostruki refraktorni za PI i IMiD. Evaluacije odgovora za primarnu krajnju tačku/konačnu analizu su bazirane na procenama nezavisnog komiteta za reviziju (IRC) i kompjuterizovanog algoritma, upotrebom 2011 IMWG Smernica (Izveštaj o kliničkoj studiji: otvoren, multicentričan, ispitivanje faze 2 koja istražuje efikasnost i bezbednost DARZALEX<TM>(daratumumab) kod subjekata sa višestrukim mijelomom koji su primili najmanje 3 prethodne linije terapije (uključujući inhibitor proteazoma i IMiD) ili dvostruki refraktorni za inhibitor proteazoma i IMiD (EDMS-ERI-92399922; de Weers et al., (2011) J Immunol 186(3): 1840-1848).
[0284] Ove procene su uključivale: ukupnu stopu odgovora (ORR), trajanje odgovora, vreme do odgovora i najbolji odgovor, stopu kliničke koristi, vreme do progresije (TTP), opstanak bez progresije (PFS) i ukupni opstanak (OS).
[0285] Ukupno 124 subjekta je tretirano sa DARZALEX™ (daratumumab) u ovom istraživanju (de Weers et al., (2011) J Immunol 186(3): 1840-1848). 18 subjekata je tretirano sa 8 mg/kg a 106 subjekata je tretirano sa 16 mg/kg. Raspored doziranja je bio kao što sledi:
Grupa A: DARZALEX™ (daratumumab) 16 mg/kg: ciklusi 1 i 2: dani 1, 8, 15. i 22. (nedeljno), ciklusi 3 do 6: dani 1. i 15. (svake druge nedelje), ciklusi 7+: dan 1. (svake 4 nedelje). Svaki ciklus je bio 4 nedelje.
Grupa B: DARZALEX™ (daratumumab) 8 mg/kg: ciklus 1+: dan 1. (svake 4 nedelje).
[0286] Primarni cilj istraživanja je bio da se utvrdi efikasnost 2 režima tretmana DARZALEX™ (daratumumab), mereno sa ORR (CR PR), kod subjekata sa multiplim mijelomom koji su primili najmanje 3 prethodne linije terapije uključujući PI i IMiD ili čija bolest je dvostruko refraktorna za PI i za IMiD (Izveštaj o kliničkoj studiji: otvoren, multicentričan, ispitivanje faze 2 koja istražuje efikasnost i bezbednost DARZALEX™ (daratumumab) kod subjekata sa višestrukim mijelomom koji su primili najmanje 3 prethodne linije terapije (uključujući inhibitor proteazoma i IMiD) ili dvostruki refraktorni za inhibitor proteazoma i IMiD. EDMS-ERI-92399922).
[0287] Sekundarni cilj ovog istraživanja je uključivao evaluaciju bezbednosti i podnošljivosti DARZALEX™ (daratumumab) demonstraciju dodatnih mera efikasnosti (na primer, klinička korist, TTP, PFS i OS) zajedno sa procenom farmakokinetika, imunogenosti, farmakodinamike i istraživanje predviđanja odgovora biomarkera na DARZALEX™ (daratumumab). Dodatne informacije vezane za studiju su dostupne iz protokola kliničke studije (Izveštaj o kliničkoj studiji: otvoren, multicentričan, ispitivanje faze 2 koja istražuje efikasnost i bezbednost DARZALEX™ (daratumumab) kod subjekata sa višestrukim mijelomom koji su primili najmanje 3 prethodne linije terapije (uključujući inhibitor proteazoma i IMiD) ili dvostruki refraktorni za inhibitor proteazoma i IMiD. EDMS-ERI-92399922).
[0288] U 1. fazi 1. dela, 1 subjekt (6%) je odgovorio u 8 mg/kg grupi, a 5 subjekata (31%) je odgovorilo u 16 mg/kg grupi. Iz tog razloga, samo je 16 mg/kg grupa produžena u 2. fazu 1. dela i u 2. deo.
[0289] U 16 mg/kg grupi, 31 subjekat je postigao odgovor PR ili bolje baziran na IRC proceni; ORR je bilo 29% (95% CI: 21%, 39%). Tri subjekta (3%) su postigla sCR, a 13 subjekata (12%) je postiglo VGPR ili bolje.
Primer 3: Dejstvo DARZALEX™ (daratumumab) na T-ćelijsku ekspanziju i aktivnost kod pacijenata uključenih u 54767414MMY2002 studiju (SIRIUS)
[0290] CD38 je eksprimiran na različitim imuno i hematopoetskim ćelijama. Sprovedeno je široko imunsko profilisanje protočnom citometrijom kako bi se ispitalo dejstvo DARZALEX™ (daratumumab) na podskupove imuno ćelija i povezanost osnovnih nivoa ovih ćelija sa kliničkim odgovorom. Različite ćelijske populacije,<uključujući T-ćelije (CD3+>, CD4<+>, CD8<+>i regulatorne T-ćelije (Treg)), B-ćelije (CD19<+>), NK ćelije, monociti (CD14<+>), leukociti i neutrofili su evaluirane protočnom citometrijom u perifernoj krvi i aspiratima koštane srži na početnoj liniji i nakon tretmana sa DARZALEX™ (daratumumab) kako bi se posmatrale promene kod ovih ćelijskih populacija kod respondera i nerespondera.
Limfociti, leukociti, monociti i neutrofili
[0291] Broj leukocita, limfocita, monocita i neutrofila je proučavan u perifernoj krvi kod respondera i nerespondera. Otkriveno je da su ukupni limfociti povećani sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom kod respondera i sa 8 mg/kg i sa 16 mg/kg dozama (Slika 1). Modeliranje linearnog mešovitog efekta je otkrilo povećanje od 0,8 x 10<6>ćelija/mL na log skali na 100 dana (CI = 0,06, 0,11). Otkrivena su blaga povećanja kod monocita i leukocita uz značajno povećanje od 0,03 x 10<6>ćelija/mL (CI = 0,01, 0,04) i 0,03 x 10<6>ćelija/mL na log skali (CI = 0,01, 0,05) na svakih 100 dana respektivno. Medijana broja neutrofila je bila u skladu sa početnom linijom i nije značajno varirala, iako je kod nekih pacijenata zabeležena neutropenija.
[0292] Početni nivoi svake od ovih ćelijskih populacija su upoređeni između grupa odgovora. Nisu pronađeni dokazi da su početni nivoi različiti za bilo koji od ovih ćelijskih tipova među grupama odgovora upotrebom Vilkoksonovog testa označenih rangova (Tabela 1).
Tabela 1.
NK ćelije
[0293] Ukupne NK ćelije (CD16<+>CD56<+>) i aktivirane NK ćelije (CD16<+>CD56<dim>) su redukovane tretmanom DARZALEXTM (daratumumab) tokom vremenskog perioda (podaci nisu prikazani).
B-ćelije
[0294] Apsolutni brojevi B-ćelija (CD45<+>CD3-CD19<+>) su izmereni u perifernoj krvi ili aspiratima koštane srži tokom tretmana sa DARZALEX™ (daratumumab) tokom vremenskog perioda kod respondera i nerespondera. B-ćelije su se blago povećale u ukupnoj krvi i održavane su u aspiratima koštane srži. Linearno mešovito modeliranje B-ćelija u perifernoj krvi je otkrilo minimalno povećanje od 0,1 x 10<6>ćelija/ml [CI=0,04, 0,16 za svakih 100 dana na log skali tokom perioda DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Nije bilo promena u procentima B-ćelija (CD45<+>CD3<->CD19<+>/limfociti) u aspiratima koštane srži tokom daratumumab tretmana, ni kod respondera ni kod nerespondera (p = 0,1 i 0,4, respektivno). Štaviše, nisu pronađeni dokazi da je broj B-ćelija različit na početnoj liniji između respondera i nerespondera (p = 0,5).
T-ćelije
[0295] Zabeleženo je da su se limfociti povećali sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom (Slika 1) iako su B ćelije pokazale samo minimalno povećanje (videti iznad). Da bi se dalje istražilo, proučavane su različite populacije T-ćelija (CD3<+>, CD4<+>, CD8<+>T ćelije, regulatorne T ćelije) i u perifernoj krvi i u koštanoj srži.
<+>[0296] CD3 , CD4 i CD8 T-ćelije su se povećale u perifernoj krvi (apsolutni brojevi/ul i procenat limfocita) nakon DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Slika 2 pokazuje promenu procenta apsolutnih brojeva CD3<+>T-ćelija (CD45<+>CD3<+>) u odnosu na početnu liniju u perifernoj krvi tokom vremenskog perioda za svakog pacijenta. Crna linija na Slici prikazuje medijanske apsolutne brojeve x 10<6>ćelija/uL za sve pacijente. Samo posete sa više od 2 opservacije su uključene u Sliku. Slika 3 prikazuje promenu procenta apsolutnih brojeva CD4<+>T-ćelija (CD45<+>CD3<+>CD4<+>) u odnosu na početnu liniju u perifernoj krvi tokom vremenskog perioda za svakog pacijenta. Crna linija na Slici prikazuje medijanu za sve pacijente. Samo posete sa više od 2 opservacije su uključene u Sliku. Slika 4 pokazuje promenu procenta apsolutnih brojeva CD8<+>T-ćelija (CD45<+>CD3<+>CD8<+>) u odnosu na početnu liniju u perifernoj krvi tokom vremenskog perioda za svakog pacijenta. Crna linija na Slici prikazuje medijanu za sve pacijente. Samo posete sa više od 2 opservacije su uključene u Sliku. Linearno mešovito modeliranje apsolutnih brojeva u perifernoj krvi je otkrilo prosečno povećanje ukupnih T-ćelija (CD45<+>CD3<+>) od 0,13 x 10<6>ćelija/ul na log skali za svakih 100 dana (CI = 0,1, 0,15 ) nakon DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Otkriveno je da se CD8<+>T-ćelije značajno povećavaju za 0,16 x 10<6>ćelija/ul na log skali za svakih 100 dana (CI =0,13, 0,19). Otkriveno je da CD4<+>ćelije imaju umereno povećanje od 0,11 x 10<6>ćelija/ul na log skali za svakih 100 dana (CI = 0,09, 0,13).
[0297] Za svaku od podpopulacija T-ćelija, responderi su pokazali veću maksimalnu promenu procenta apsolutnih brojeva naspram početne linije u odnosu na nerespondere (CD3<+>p=3,2993e-05; CD4<+>p=3,486e-05; CD8<+>p=2,7172e-05; regulatorna T ćelija p=0,002). Tabela 2 prikazuje rezultate Vilkoksonovog testa označenih rangova za poređenje svake T-ćelijske podpopulacije u perifernoj krvi između respondera i nerespondera na procenat promene apsolutnih brojeva u odnosu na početnu liniju.
Tabela 2.
[0298] Slično u koštanoj srži, otkriveno je da se ukupne T-ćelije (CD45<+>CD3<+>kao procenat limfocita) i CD8<+>T-ćelije (CD45<+>CD3<+>CD8<+>kao procenat limfocita) značajno povećavaju tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana, i za respondere i za nerespondere (CD3<+>responderi p=3,8147e-06, neresponderi p=9,8225e-05; CD8<+>responderi p=3,8147e-06, neresponderi p=0,0003). Nije bilo promene u medijani CD4<+>T-ćelija ni u jednoj grupi kliničkog odgovora u koštanoj srži. Tabela 3 prikazuje rezultate Vilkoksonovog testa označenih rangova za različite T ćelije kao % limfocita u koštanoj srži. Slika 5 prikazuje procenat (%) CD45<+>CD3<+>ćelija tokom vremenskog perioda tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana (u grafikon su uključeni i responderi i neresponderi). Slika 6 prikazuje % CD45<+>CD3<+>CD8<+>ćelija tokom vremenskog perioda tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana (u grafikon su uključeni i responderi i neresponderi).
Tabela 3.
[0299] Dok se i kod respondera i kod nerespondera pokazalo povećanje T-ćelija u perifernoj krvi i koštanoj srži, responderi su imali najveći procenat promene u odnosu na početnu liniju. Da bi se razlikovalo da li su responderi ili neresponderi imali različite nivoe CD3<+>, CD4<+>i CD8<+>T-ćelija pre DARZALEX™ (daratumumab) tretmana, početna merenja za svaku podgrupu su upoređena u perifernoj krvi.
[0300] Nije bilo statistički značajnih razlika između respondera i nerespondera u apsolutnim brojevima T-ćelija na početnoj liniji u perifernoj krvi (Tabela 4) ili u procentu T ćelija od ukupnih limfocita u koštanoj srži (Tabela 5), Vilkoksonov test označenih rangova.
Tabela 4.
Tabela 5.
T regulatorne ćelije
[0301] Treg ćelije su identifikovane kao CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>ćelijska populacija u uzorku. Odnos CD8<+>T ćelija i Treg je procenjen u perifernoj krvi i koštanoj srži kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) tokom vremenskog perioda. Odnos se povećao i u perifernoj i u koštanoj srži. Slika 7A prikazuje medijanske vrednosti CD8<+>/Treg i CD8<+>/CD4<+>odnosa ćelija kod svih pacijenata po vremenskoj tački u perifernoj krvi. Slika 7B prikazuje medijanske vrednosti CD8<+>/Treg i CD8<+>/CD4<+>T-ćelija odnosa svih pacijenata po vremenskoj tački u koštanoj srži. Promene u odnosima apsolutnih brojeva CD8<+>Treg i CD8<+>/CD4<+>su bile značajne u perifernoj krvi tokom trajanja tretmana (Tabela 6) i u koštanoj srži (Tabela 7), Vilkoksonov test označenih rangova.
[0302] U analizama kombinovanih podataka SIRIUS i GEN501 studije (Primer 6), medijanski odnosi CD8<+>/CD4<+>i CD8<+>/Treg ćelija u perifernoj krvi su povećani 8. nedelje (p = 5,1 x 10<-5>za CD8<+>/CD4<+>i p = 1,8 x 10<-7>za CD8<+>/Treg) i 16. nedelje (p=0,00017 za CD8<+>/CD4<+>i p = 4,1 x 10<-7>za CD8<+>/Treg). Slično tome, u koštanoj srži, medijanski odnosi CD8<+>/CD4<+>i CD8<+>/Treg ćelija su povećani u tretmanu (12. nedelja - 1 ciklus) u poređenju sa početnom linijom (p = 0,00016 za CD8<+>/CD4<+>i p = 2,8 x 10<-7>za CD8<+>/Treg). Nisu uočene značajne razlike između respondera i nerespondera.
Tabela 6.
Tabela 7.
Primer 4. Dizajn studije (GEN501)
[0303] Studija GEN501 (NCT00572488) je evaluirala DARZALEX™ (daratumumab) kao monoterapiju kod dvostruko-refraktornih MM pacijenata. Izolacija uzorka, obrada i statističke analize su bile kao što je opisano u Primeru 1 i Primeru 2. Studija je opisana u Lokhorst et al., N Eng J Med 373:1207-19, 2005.
<TM>[0304] Ukratko, studija GEN501 je bila prva klinička studija kod ljudi DARZALEX (daratumumab) kod subjekata sa MM. To je Faza 1/2, doza-eskalacija, studija bezbednosti podeljena u 2 dela. Prvi deo je otvorena, doza-eskalacija studija. Drugi deo je otvorena, jednostruka studija sa više kohorti, bazirana na doznim nivoima uspostavljenim u Prvom delu.
[0305] U Prvom delu, evaluirano je 10 nivoa doza DARZALEX™ (daratumumab): 0,005, 0,05, 0,10, 0,50, 1, 2, 4, 8, 16 i 24 mg/kg. Dve najniže dozne kohorte su alocirane 1 (+3) subjekta svaka, a standardna alokacija 3 (+3) subjekta je primenjena na preostalih 8 doznih kohorti. Drugi deo je bila otvorena, pojedinačna studija koja je uključivala dva nivoa doze, 8 mg/kg i 16 mg/kg. Prvi deo je uključivao 32 subjekta a Drugi deo je uključivao 72 subjekta.
Primer 5. DARZALEX™ (daratumumab) tretman indukuje T ćelijsku klonalnost kod pacijenata
[0306] Imajući u vidu ekspanziju CD8<+>T-ćelija zabeleženu i u perifernoj i u koštanoj srži u MY2002 studiji, sprovedeno je visokopropusno sekvenciranje sledeće generacije T-ćelijskog receptora (TCR) upotrebom Immunoseq™ testa kako bi se utvrdilo da li je širenje CD8<+>T-ćelija bilo klonske prirode, što je indikativno na adaptivni imuno odgovor. Ukupno 17 uzoraka pacijenata subjekata je evaluirano koji su bili uključeni u GEN501 studiju (n=6 respondera tj., ≥ PR; n=11 nerespondera tj., MR, SD, PD).
[0307] TCR sekvenciranje je otkrilo da je DARZALEX™ (daratumumab) tretman značajno povećao klonalnost kod pacijenata. Slika 8A pokazuje korelaciju između T ć elijske klonalnosti pre u odnosu na posle DARZALEX™ (daratumumab) tretmana (p = 0,0056). Slika 8B prikazuje promenu preklapanja u klonalnosti kod pojedinačnih pacijenata. Responderi su označeni zvezdicom. Ovi podaci ukazuju da T ć elijska ekspanzija uočena sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom može biti klonske prirode.
[0308] Responderi su imali veću ukupnu ekspanziju u TCR repertoaru (mereno promenom u abundanciji; CIA) u poređenju sa neresponderima. Slika 8C prikazuje % CIA za pojedinačne pacijente. Grupa A: responderi, Grupa B: neresponderi. Uočena je statistički značajna razlika između respondera i nerespondera (p=0,037). Slika 8D prikazuje zbir apsolutnih promena u abundanciji (CIA) kod respondera i nerespondera za svaki prošireni T ćelijski klon. Slika 8E prikazuje maksimalni % CIA za svakog pojedinačnog pacijenta. Grupa A: responderi, Grupa B: neresponderi. Uočena je statistički značajna razlika između respondera i nerespondera (p=0,048). Slika 8F prikazuje maksimalno CIA pojedinačnog T ćelijskog klona kod respondera (Grupa A) i nerespondera (Grupa B).
[0309] CIA je dobijeno identifikovanjem značajnih razlika u klonskoj abundanciji između dva uzorka upotrebom Fišerovog egzaktnog testa (DeWitt et al. J. Virol. 2015) i sumiranjem apsolutne promene u abundanciji za svakog proširenog klona.
Primer 6. Imunomodulatorni efekti DARZALEX™ (daratumumab) kod pacijenata obuhvaćenih GEN501 studijom
[0310] Evaluirane su različite populacije T i B ćelija kod respondera i nerespondera obuhvaćenih u GEN501.
Limfociti
[0311] Slično SIRIUS (MMY2002) studiji, limfociti su se povećali i u perifernoj krvi i u koštanoj srži tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Ovaj porast je pripisan povećanim brojevima CD4<+>i CD8<+>ćelija.
CD8<+>centralne memorijske ćelije
[0312] CD8<+>T-ćelijski fenotip je proučavan kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) tokom vremenskog perioda u podskupu od 17 pacijenata obuhvaćenih GEN501 studijom. CD8<+>ćelije od pacijenata su identifikovane kao naivne (CD45RO-/CD62L<+>) (TN) ili centralne memorijske (TCM) (CD45RO<+>/CD62L<+high>) ćelije upotrebom standardnih protokola.
<+>[0313] Slika 9A prikazuje % CD8 naivnih ć elija (% CD8 ćelija) a Slika 9B prikazuje % CD8 centralnih memorijskih ćelija. DARZALEX™ (daratumumab) tretman je značajno smanjio kvantitet naivnih CD8<+>T ćelija (p = 1,82 x 10<-4>8. nedelje) i povećao kvantitet CD8<+>memorijskih T ćelija (p = 4,88 x 10<-2>8. nedelje). Ovo ukazuje na prelazak iz naivnih citotoksičnih T ć elija u memorijske T ć elije koje se mogu aktivirati protiv specifičnog antigena. Beli kvadrati ukazuju na pacijente koji su postigli barem minimalni odgovor (≥ MR) a crni kvadrati ukazuju na pacijente koji su imali stabilnu bolest ili progresivnu bolest. Bilo je očigledno značajno veće smanjenje CD8<+>naivnih T ć elija kod pacijenata koji su odgovorili na tretman (podaci nisu prikazani). Slika 9C prikazuje da je DARZALEX™ (daratumumab) tretman povećao procenat u T ć elijama ograničenim HLA I klasa, što delimično pokreće virus-specifične i aloreaktivne T ćelijske odgovore. Slika 9D prikazuje da je širenje efektorskih memorijskih T ćelija eksprimiralo niske nivoe CD38. Važno je naznačiti da ove T ćelije prikazuju normalnu i čak povećanu funkcionalnu aktivnost protiv virusnih peptida i aloantigena (videti Primer 8). Iz ovih funkcionalnih rezultata smo zaključili da postoji ekspanzija, ili poboljšana aktivnost, T ćelija koje su iskusile antigen protiv virusnih i aloantigena tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana. Ovi podaci ukazuju da, za razliku od podskupova regulatornih ćelija, efektorskim T ćelijama nije potrebna ekspresija CD38 da bi pravilno funkcionisale i širile se.
CD38-pozitivne regulatorne T-ćelije
[0314] Opservacija robustne ekspanzije i povećane aktivnosti citotoksičnim T-ćelijama zajedno sa skorašnjom literaturom koja ukazuje da nekoliko imuno-supresivnih ćelijskih podskupova eksprimira CD38 je podstakla ispitivanje efekata DARZALEX™ (daratumumab) na regulatorne ćelijske populacije regulatornih T-ćelija (Treg), supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC) i regulatorne B-ćelije (Breg).
[0315] Regulatorne T-ćelije (Treg) (CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>) su izolovane upotrebom standardnih protokola. Frekvencija Treg je analizirana upotrebom protočne citometrije.
[0316] Podpopulacija perifernih Treg (10% - 10%) je eksprimirala visoke nivoe CD38 pre Treg aktivacije. Slika 10A, gornji panel prikazuje frekvenciju Treg u CD3<+>CD4<+>ćelijskoj populaciji (P4 ćelijska populacija) u početnoj liniji. Slika 10A, donji panel prikazuje podskup Treg koje eksprimiraju visok CD38 (P5 ćelijska populacija). Ove CD38<+>Treg su bile visoko senzitivne na DARZALEX™ (daratumumab) tretman i ispoljile značajan i skoro trenutni pad nakon prve doze DARZALEX™ (daratumumab) (n = 17 pacijenata; P = 8,88 x 10<-16>1. nedelje u odnosu na početnu liniju). Frekvencija Treg nakon DARZALEX™ (daratumumab) tretmana je prikazana na Slici 10B, gornji panel (P4 ćelijska populacija). Slika 10B, donji panel prikazuje da je CD38<high>Treg (P5 ćelije) bila najznačajnije osiromašena Treg populacija nakon prve DARZALEX™ (daratumumab) infuzije. Ove CD38<+>Treg su ostale iscrpljene tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana (p = 8,88 x 10<-16>, 1,11 x 10<-15>i 1,50 x 10<-11>u 1, 4. i 8. nedelji, respektivno, u odnosu na početnu liniju. Slika 10C prikazuje % CD38<high>Treg iz ukupnih CD3<+>ćelija u početnoj liniji, 1. nedelje, 4. nedelje, 8. nedelje, relapsa i 6 meseci nakon završetka tretmana (EOT). CD38<high>Treg su vraćene na početnu liniju u toj vremenskoj tački. Promene u CD38<+>Treg su bile slične među pacijentima koji su i koji nisu odgovorili na tretman, ipak, odnos CD8<+>T-ćelija:Treg je bio značajno viši 8. nedelje kod pacijenata koji su pokazali odgovor na DARZALEX™ (daratumumab) (P = 0,00955; Slika 10D).
<+>[0317] Da bi se procenila moguća biološka relevantnost deplecije CD38 Treg sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom, procenjivan je supresivni kapacitet CD38<+>Treg u odnosu na CD38<->Treg na autolognim CD3<+>T ćelijama. U serijama eksperimenata sprovedenim sa uzorkom od višestrukih zdravih donora, CD38<+>Treg su snažnije supresovale T-ćelijsku proliferaciju (uočeno 9,9% ć elijske proliferacije) u odnosu na CD38<->Treg (uočeno 53,2% ćelijske proliferacije) ili negativnu kontrolu (uočeno 74,9% ćelijske proliferacije) (Slika 10E).
<+>[0318] Pošto MDSC nisu bile lako detektabilne u zamrznutim PBMC uzorcima, CD38 granulocitni MDSC (CD11b<+>CD14-HLA-DR-CD15<+>CD33<+>) su generisani in vitro iz PBMC izolovanih iz pacijenata na početnoj liniji i od pacijenata koji su primili jednu infuziju DARZALEX™ (daratumumab). Slika 11 prikazuje histogram protočne citometrije identifikovanih MDSC (Slika 11, gornji histogram, uokvirena ć elijska populacija). Približno polovina MDSC je eksprimirala CD38 (Slika 11, srednji grafikon; zaokružena P7 ćelijska populacija). CD38<high>MDSC su bile skoro depletirane kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX™ (daratumumab) (Slika 11, donji grafikon; zaokružena P7 ćelijska populacija).
<high>[0319] CD38 sojno nespecifični MDSC su bile depletirane sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom tokom vremenskog perioda i kod nerespondera i kod pacijenata koji su imali barem minimalni odgovor na tretman. Slika 12 prikazuje da je procenat CD38<high>MDSC redukovan na skoro 0% kod pacijenata 1. nedelje, 4. nedelje ili 8. nedelje tretmana. CD38<high>sojno nespecifične MDSC su se vratile na početnu liniju nakon završetka tretmana.
<+>[0320] Pacijenti sa najvećim CD38 populacijama unutar sojno nespecifičnih MDSC su prikazali najbolje i najtrajnije odgovore na DARZALEX™ (daratumumab) tretman. Slika 13 pokazuje da pacijenti 2, 4, 15, 16 i 17 imaju najveći procenat CD38<high>MDSC (kao što je prikazano na Slici 11) i klasifikovani su kao pacijenti sa PR ili MR, da su imali preživljavanje bez progresije (PFS) od najmanje 8 meseci.
<high>[0321] CD38 sojno nespecifične MDSC su takođe bile senzitivne na DARZALEX™ (daratumumab) indukovano ADCC in vitro. ADCC testovi su sprovedeni korišćenjem CD38<high>MDSC od dva donora i daudi ćelijama kao kontrolnim ciljnim ćelijama uz efektorska:ciljna ćelija odnos od 50:1. Slika 14 prikazuje rezultate ekperimenta od jednog donora. DARZALEX™ (daratumumab) je indukovao lizu MDSC ćelija.
<+ TM>[0322] CD38 Breg su izmerene kod pacijenata tretiranih sa DARZALEX (daratumumab) (n = 16) i, slično kao CD38<+>Treg, bile su depletirane nakon prve doze DARZALEX<TM>(daratumumab) (p = 0,0018 1. nedelje u poređenju sa početnom linijom; upareni Vilkoksonov test rangova) i ostale nisko dok su pacijenti bili na tretmanu (Slika 15A). FACS sortirane Breg, kada su stimulisane, proizvodile su IL-10 (Slika 15B).
<+>[0323] Kolektivno, ove opseravacije sugerišu to da je deplecija imunosupresivnih CD38 MDSC, Breg i Treg značajan doprinosni mehanizam DARZALEX™ (daratumumab) indukovanim promenama u T-ćelijskim populacijama i klonalnosti.
Primer 7. CD38<+>MDSC ćelije su prisutne kod pacijenata sa rakom
[0324] Procenat MDSC (Lin-CD14-HLADR<low/->) i njihova CD38 ekspresija je proučavana u perifernoj krvi pacijenata sa NSCLC ili rakom prostate upotrebom protočne citometrije.
[0325] Procenat MDSC je bio između približno 10% - 37% i između približno 10% - 27% PBMC u analiziranim uzorcima od NSCLC pacijenata i pacijenata sa rakom prostate, respektivno. CD38 ekspresija je identifikovana kod 80-100% Lin-CD14<+>HLADR<-/low>MDSC iz PBMC od NSCLC pacijenata i kod 70-100% MDSC iz PBMC od pacijenata sa rakom prostate.
Primer 8. DARZALEX™ (daratumumab) pojačava antivirusne T-ćelijske odgovore
[0326] Kako bi se dodatno procenio efekat DARZALEX™ (daratumumab) na T-ćelijsku aktivaciju i funkcionalnost, proizvodnja IFN-γ iz perifernih T ćelija kao odgovor na viruse i aloantigene je izmerena kod pacijenata tretiranih DARZALEX™ (daratumumab) (n = 7) sa nizom kliničkih ishoda. Pacijenti sa PR ili bolji su pokazali značajna povećanja u sekreciji IFN-γ kao odgovor na virusne i aloantigene nakon DARZALEX™ (daratumumab) tretmana, u poređenju sa početnom linijom, tokom najmanje jedne vremenske tačke tokom tretmana, što ukazuje da funkcija T ćelije nije oštećena niskom CD38 ekspresijom (videti Primer 6, Sliku 9C). Slično podacima TCR klonalnosti, ovo povećanje je bilo izraženije kod pacijenata koji su odgovorili na DARZALEX™ (daratumumab) u odnosu na one koji nisu. Slika 16A prikazuje antivirusni odgovor jednog reprezentativnog pacijenta sa VGPR. Slika 16B prikazuje antivirusni odgovor jednog reprezentativnog pacijenta sa CR. Slika 16C prikazuje antivirusni odgovor jednog reprezentativnog pacijenta sa PD. Slika 16D prikazuje antivirusni odgovor jednog reprezentativnog pacijenta sa MR. Na slikama, trake grešaka predstavljaju standardnu grešku srednje vrednosti duplikatnih kultura. Zvezdica označava statistički značajne promene između naznačenih poređenja. Prikazan je najbolji dogovor po Nezavisnom komitetu za reviziju. U skladu sa ovim rezultatima, virus-reaktivne T-ćelije kod pacijenata sa VGPR (Slika 16E) ili CR (Slika 16F) su pokazale povećanje proliferativnog kapaciteta tokom DARZALEX™ (daratumumab) tretmana.
Primer 9. Mehanizam senzitivnosti podtipova imuno ćelija koje eksprimiraju CD38 na DARZALEX™ (daratumumab)
[0327] Podaci i iz GEN501 i iz SIRIUS studije ukazuju to da su neke imuno ćelije koje eksprimiraju CD38 depletovane (NK ćelije, regulatorne T-ćelije (Treg), regulatorne B-ćelije (Breg) i supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC)), dok se druge koje eksprimiraju CD38 brojno povećavaju (citotoksične i T ćelije pomagači) sa DARZALEX™ (daratumumab) terapijom.
[0328] Da bi se rešio mehanizam senzitivnosti, nivoi ekspresije CD38 su procenjeni u različitim podpopulacijama imuno ćelija kod zdravih donora i kod pacijenata sa multiplim mijelomom obuhvaćenih ili GEN501 ili SIRIUS studijom. Slika 17A pokazuje histogram ekspresije CD38 u imuno ćelijama kod zdravog donora, a Slika 17B pokazuje histogram ekspresije CD38 u imuno ć elijama kod pacijenta sa multiplim mijelomom. Kod zdravog donora, ekspresija CD38 je bila najviša na NK ćelijama, zatim monocitima, Band T ćelijama. Kod pacijenta sa multiplim mijelomom, CD38 ekspresija je bila najviša na ćelijama plazme, zatim podskupu B ćelija, NK ćelijama, monocitima, B ćelijama i T ćelijama. Slika 17C pokazuje poređenje srednjeg intenziteta fluorescencije (MFI) CD38 preko NK ćelija, Treg, Breg, B i T ćelija ćelija iz relaps i refraktornih mijelom pacijenata, što pokazuje da su, nakon ćelija plazme, NK ćelije eksprimirale najviše nivoe CD38, a zatim regulatorne T-ćelije (Treg) i regulatorne B-ćelije (Breg).
[0329] Pored CD38 ekspresije, drugi proteini ćelijske površine kao što su komplementni inhibitorni proteini (CIP; CD46, CD55, CD59) mogu doprineti senzitivnosti ili rezistenciji na DARZALEX™ (daratumumab). In vitro evaluacija CIP preko podpopulacija imuno ćelija je otkrila da NK ćelije eksprimiraju veoma niske nivoe CD59 i CD55, dok druge T i B ćelijske populacije eksprimiraju mnogo više nivoe. Ovo bi takođe moglo doprineti varijabilnosti DARZALEX™ (daratumumab) senzitivnosti na podtipove imuno ćelija (podaci nisu prikazani).
Diskusija
[0330] Ova studija opisuje prethodno nepoznate imunomodulatorne efekte DARZALEX™ (daratumumab) kroz<redukciju CD38+>imunosupresivnih ćelijskih populacija i istovremenu indukciju ekspanzije pomagačkih i citotoksičnih T-ćelija, proizvodnju IFN-γ kao odgovora na virusne peptide, i povećanje TCR klonalnosti, što ukazuje na poboljšani adaptivni imuno odgovor.
[0331] Ova studija pokazuje da MDSC i Breg eksprimiraju CD38 i da su bile podložne DARZALEX™ (daratumumab) tretmanu. Ove ćelije su poznate da su prisutne u mikrookruženju tumora i doprinose rastu tumora, imuno evaziji, angiogenezi, metastazi i proizvodnji supresivnih citokina. Pored ovih CD38<+>supresivnih ć elijskih podskupova, identifikovana je nova podpopulacija regulatornih T ć elija (CD4<+>CD25<+>CD127<dim>) koja je takođe eksprimirala visoke nivoe CD38 i pokazala superiorne autologne T-ćelijske supresivne kapacitete. Ove ćelije su takođe bile senzitivne na DARZALEX™ (daratumumab) i bile su značajno redukovane kod pacijenata koji su primili tretman. Eliminacija ovih CD38<+>imuno-regulatornih ćelija posredovana sa DARZALEX™ (daratumumab) može redukovati lokalnu imuno supresiju unutar mikrookruženja mijeloma i dozvoliti pozitivnim imuno efektorskim ćelijama da se prošire i doprinesu antitumorskom odgovoru.
<+>[0332] Zaista, primećena su značajna povećanja š irokih populacija T-ćelija, uključujući oba CD4 i CD8 , u perifernoj krvi i unutar koštane srži (tj., tumora). Specifične CD8<+>podpopulacije su izmenjene DARZALEX™ (daratumumab) terapijom, uključujući značajna smanjenja u naivnim T-ćelijama i istovremeno značajna povećanja kod efektorskih memorijskih CD8<+>T-ćelijama, što ukazuje na pomeranje efektorskih T-ćelija prema fenotipu sa antigenskim iskustvom koji je zadržao imunološku memoriju i može biti reaktivan protiv tumorskih antigena. Odnosi CD8<+>:CD4<+>i CD8<+>:Treg su se takođe značajno povećali tretmanom, pokazujući pomak pozitivnih u odnosu na negativne imuno regulatore.
<+>[0333] Za evaluaciju da li su proširene CD4 i CD8 T-ćelije klonske prirode, ispitan je T-ćelijski repertoar kod podskupa pacijenata. T-ćelijska klonalnost je značajno povećana DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom, čak i kod pacijenata koji su imali najbolji odgovor na SD ili koji su progresirali. Stoga, povećana T-ćelijska klonalnost ne može biti posledica jednostavnog smanjenja tumorskog opterećenja. Ipak, iskrivljenost T-ćelijske klonalnosti je bila veća kod pacijenata sa dobrim kliničkim odgovorom, i bila je u korelaciji sa povećanjem CD8<+>T ćelija, što ukazuje da je uočena T-ćelijska ekspanzija sa DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom bila antigenski vođena. To je izuzetno u ovoj populaciji pacijenata koja je bila u velikoj meri prethodno lečena (medijana od 5 prethodnih linija terapije) i nije se očekivalo da će moći da izazove snažan antitumorski imuno odgovor. Pored povećane TCR klonalnosti, pacijenti sa odgovorom na DARZALEX™ (daratumumab) su pokazali povećanje T-ćelijskih odgovora na prethodno postojaće virusne i aloantigene, što ukazuje na spasavanje imunog sistema iz imunosupresivnog stanja.
[0334] Tretman sa DARZALEX™ (daratumumab) je izazvao redukciju u imunosupresivnim MDSC i regulatornim T i B ćelijama. Ove redukcije su istovremene sa ekspanzijom CD4<+>T ćelijama pomagačima i CD8<+>citotoksičnim T-ćelijama. Klonalnost T-ćelija i funkcionalni antivirusni odgovori mereni proizvodnjom IFN-γ su takođe povećani DARZALEX™ (daratumumab) tretmanom. Ove opservacije ukazuju da su T ćelije nastavile da funkcionišu pravilno, uprkos niskoj ekspresiji CD38, i ukazuju da povećani T-ćelijski odgovor može biti usled deplecije regulatornih ćelija. Dalje, ove promene u T-ćelijskoj ekspanziji, aktivnosti, i klonalnosti su bile izraženije kod pacijenata koji su odgovorili na DARZALEX™ (daratumumab) u poređenju sa onima koji nisu odgovorili. Relaps od DARZALEX™ (daratumumab) terapije je bio povezan sa preokretom mnogih od ovih promena. To ukazuje na dodatni, prethodno nekarakterisani mehanizam delovanja DARZALEX™ (daratumumab) preko imunomodulacije koji može doprineti kliničkim odgovorima i njihovoj efikasnosti.
[0335] Nedavno, antitela koja promovišu antitumorske imune odgovore, pre nego direktno ciljanje raka, su pokazala efikasnost u rasponu postavki. Antitela koja inhibiraju CTLA-4 i PD-1 promovišu ekspanziju T ćelija i pojačavaju aktivaciju T ćelija, što dovodi do produženog preživljavanja i odloženog ponovnog pojavljivanja bolesti kod pacijenata sa uznapredovalim č vrstim tumorima i hematološkim malignitetima kao što je Hočkinov limfom. Pojačavanjem imuniteta protiv raka, ova imunomodulatorna antitela mogu ne samo indukovati kliničke odgovore, već i sprečiti ponavljanje bolesti.
Primer 10. Proteomska analiza seruma kod subjekata sa multiplim mijelomom razmenjena sa jednimagensom DARZALEX™ (daratumumab) u 54767414MMY2002 (SIRIUS) 2. deo kliničkoj studiji
Sakupljanje i obrada uzorka biomarkera
[0336] Uzorci periferne krvi su sakupljeni u standardnim epruvetama za razdvajanje seruma (2,5 mL do 5 mL) i alikvoti seruma su otpremljeni zamrznuti SomaLogic, Inc (Boulder, CO) radi multianalitskog profilisanja proteina u serumu.
[0337] Profilisanje proteina u serumu je sprovedeno u SomaLogic upotrebom prethodno validovanog SOMAscan testa koji meri 1129 proteinskih analita upotrebom molekula baziranih na afinitetu SOMAmer. SOMAmer reagensi su jednolančani reagensi afiniteta proteina na bazi DNK. Test koristi male količine ulaznog uzorka (150 uL plazme) i konvertuje proteinski signal u SOMAmer signal koji se kvantifikuje pomoću prilagođenog DNK mikroniza.
Svaki SOMAmer sadrži 4 funkcionalne grupe:
1. Jedinstvena sekvenca za prepoznavanje proteina
2. Biotin za hvatanje
3. Povezivač koji se može fotocepati
4. Fluorescentni molekul za detekciju
[0338] Jedinstvena sekvenca za prepoznavanje proteina koristi DNK i inkorporira hemijski modifikovane nukleotide koji oponašaju bočne lance aminokiseline, proširujući diverzitet standardnih aptamera i povećavajući specifičnost i afinitet interakcija protein – nukleinska kiselina (Gold et al., PLoS One 5:e15004, 2010). Aptameri su izabrani od strane SELEX. SOMAmer reagensi su izabrani korišćenjem proteina u njihovim nativnim konformacijama. Kao takvi SOMAmer reagensi zahtevaju netaknute, tercijarne proteinske strukture za vezivanje. SOMAmer reagensi ne detektuju nesavijene ili denaturisane pretpostavljeno neaktivne proteine.
[0339] Glavne mešavine SOMAmer reagenasa su grupisane za tip uzorka i diluciju. Reagensi su prethodno vezani za perle streptavidina pre inkubacije uzoraka. Proteini u uzorcima su vezani za srodne SOMAmere tokom ekvilibrijuma, isprani, inkubirani sa NHS-biotinom, isprani a zatim su perle izložene UV svetlu da bi se pocepao fotocepabilni povezivač. Elucija sadrži SOMAmer reagense vezane za njihove proteine obeležene biotinom. Hvatanje streptavidina i naknadno ispiranje uklanja nevezane SOMAmer reagense. U konačnoj eluciji SOMAmer molekuli se oslobađaju iz njihovih srodnih proteina kroz uslove denaturacije. Konačni eluat se hibridizuje sa prilagođenim DNK mikronizovima i fluorofor iz SOMAmer molekula je kvantifikovan relativnim fluorescentnim jedinicama (RFU). RFU je proporcionalno količini proteina u uzorku.
[0340] Uzorci iz MMY2002 studije su testirani u dve primarne serije. Prva serija od 180 uzoraka je sadržala uparene uzorke seruma 1. ciklus 1. dan (C1D1, početna linija) i C3D1 (3. ciklus 1. dan) od 90 subjekata. 180 uzoraka je analizirano zajedno na 3 odvojene SomaScan ploče. Druga serija uzoraka uključuje 50 C1D1 uzoraka, uključujući 35 ponovljenih uzoraka iz serije 1.
Analize podataka
Ulazni skupovi podataka i definicije
[0341] U analizu podataka su uključeni tretirani subjekti sa evaluabilnim odgovorom. Dosledno u celom izveštaju, responderi su definisani kao subjekti sa ukupnim najboljim odgovorom (po IRC, za MMY2002) sCR, VGPR i PR, subjekti sa stabilnom bolešću (SD) kao subjekti sa minimalnim odgovorom (MR) ili SD, i neresponderi su definisani kao subjekti sa ukupnim najboljim odgovorom (po IRC, za MMY2002) progresivne bolesti (PD).
Predobrada somaloških podataka
Usaglašavanje serije
[0342] Serije 1 i 2 MMY2002 uzoraka su testirane na dve različite verzije SOMAscan platforme. Razlike između dve verzije su bile minimalne, i uključivale su tri SOMAmer sekvence koje su se menjale između verzija (CTSE: 3594-6_1 -> 3594-6_5, FCN1: 3613-62_1 -> 3613-62_5, BMPER: 3654-27_1 -> 3654-27_4). One su uklonjene iz analize.
[0343] Merenja tri ploče serije 1 su usaglašena u skladu sa SomaLogic standardnom kalibracijom toka rada između ploča, definisanjem faktora skaliranja kalibracije na nivou ploče za svaki SOMAmer računanjem odnosa globalne referentne vrednosti specifične za Master-mešavinu i medijane 7 merenja kontrolnog kalibratora na ploči. Faktor skaliranja specifičan za ploču za svaki SOMAmer reagens je primenjen na svakom uzorku na ploči ekvivalentno.
[0344] S obzirom na različite verzije SOMAscan platforme serije 1 i 2, sprovedena je sistemska korekcija varijabilnosti između serija sa modifikovanom implementacijom SomaLogic standardnog toka rada za kalibraciju među pločama, korišćenjem ponovljenog merenja 35 uzoraka u serijama. Za svaki SOMAmer, odnos merenja serije 1 nakon kalibracije podeljen sa merenjem serije 2 pre kalibracije je izračunat za svaki od 35 ponovljenih uzoraka (ri,j). Medijana ovih 35 odnosa je korišćena za definisanje revidiranog faktora<skaliranja kalibracije specifičnog za SOMAmer za uzorke serije 2 (r>i). Ovi faktori skaliranja kalibracije su zatimimplementirani identično standardnoj SOMAscan proceduri.
[0345] Nakon što su izračunati revidirani faktori skaliranja kalibracije, distribucije svih faktora skaliranja za svaku seriju analize su ucrtane kako bi se procenilo prisustvo odstupanja. 9 SOMAmera sa ekstremno velikim ili malim kalibratorima (> 0,25 i < 3) je uklonjeno iz analize usled loše reproduktivnosti.
[0346] Nakon što je usklađivanje serije i SOMAmer filtriranje završeno za MMY2002, log2 transformacija je primenjena nad svim vrednostima koncentracije proteina MMY2002 kako bi se podaci više uskladili sa normalnom distribucijom i kako bi se poboljšale performanse parametarskih statističkih testova.
Konfaunding ispravka varijable
[0347] Procena dela varijanse skupa podataka objašnjenog meta-varijablama (kao što su demografije, klasa odgovora i vremenska tačka uzorka) i identifikacija potencijalnih konfaunding faktora je sprovedena analizom principalne komponente na centriranom i skaliranom skupu podataka. Jednostavni linearni modeli su bili pogodni da identifikuju najviše rangirani PC koji je bio značajno povezan sa svakom od interesnih varijabli. Značaj ovih asocijacija je određen upotrebom Valdovog testa a frakcija PC varijabilnosti objašnjena modelom je procenjena pomoću R2 uklapanja. Za podatke MMY2002, otkriveno je da je ID lokacije u korelaciji sa PC1 i objašnjen je najveći deo varijabilnosti skupa podataka (≥ 7,37%, p-vrednost = 3,71 x 10-9). Kako bi se redukovao uticaj efekata povezanih sa lokacijom akvizicije uzorka unutar podataka, korišćen je ComBat28 za korekciju efekata ID lokacije.
Ponovljeno spajanje uzoraka
[0348] Podaci 35 uzoraka ponovljenih između MMY2002 serija 1 i 2 su spojeni izračunavanjem srednje vrednosti za svaki protein.
Analiza diferencijalne koncentracije proteina
Responderi u odnosu na nerespondere
[0349] Statističko poređenje distribucija koncentracije proteina kod DARZALEX<TM>(daratumumab) responderau odnosu na nerespondere je sprovedeno i u početnoj liniji i tokom tretmana upotrebom dva komplementarna metoda (i) Vilkoksonov test sume rangova (Hollander and Wolfe, Ninparametirc Statistical Methods. New York: John Wiley & Sons. 1973. 27-33 (jedan-uzorak), 68-75 (dva-uzorka) na svakom pojedinačnom SOMAmeru i (ii) Lima analiza (Ritchie, M.E., et al., Nucleic Acids Res. 2015; 20:43(7):e47) na svim SOMAmerima istovremeno. Sve p-vrednosti su prilagođene upotrebom Benjamini-Hochberg (BH) metoda za višestruku korekciju hipoteza (Benjamini and Hochberg, (1995) J. R. Statist. Soc. B.57: 289-300; R: A Language and Environment for Statistical Computing, R Development Core Team, R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria. 2011; ISBN 3-900051-07-0). Null hipoteza bez diferencijalne ekspresije je odbijena kada prilagođena p-vrednost < 0,05.
Tokom tretmana u odnosu na početnu liniju
[0350] Nivoi proteina u početnoj liniji u odnosu na tretman su upoređeni upotrebom tri alternativne statističke metode: (i) dvosmerna ANOVA6 ponovljena merenja (ii) Vilkoksonov test označenih rangova i (iii) Friedman-ov test (Johnson et al., (2007) Biostatistics 8(1):118-127). Sve p-vrednosti su prilagođene za kontrolu FDR upotrebom BH metoda za višestruku korekciju hipoteze (Benjamini and Hochberg, J.R. Statist. Soc. B.57:289-300, 1995). Kao dodatak značaju tretmana, takođe su primenjena dvosmerna ANOVA6 ponovljena merenja (Chambers et al., Analysis of variance; designed experiments: Chapter 5. Statistical Models in S, Editors J.M Chambers and T.J Hastie. Wadsworth & Brookes/Cole. 1992) kako bi se odredilo da li je došlo do značajne interakcije vremenska tačka klasa odgovora za svaki SOMAmer. Modifikovan Vilkoksonov test sume rangova je primenjen kao post-hoc test kako bi se utvrdilo specifično da li su responderi i neresponderi pokazali različite efekte tretmana, izračunavanjem razlike vrednosti koncentracije proteina između svakog subjekta na tretmanu i početne linije i sprovođenjem Vilkoksonovog testa sume rangova. Vrednosti značajnosti su prilagođene upotrebom BH metoda i null hipoteza je odbijena kada prilagođena p-vrednost < 0,05.
Učenje klasifikatora
[0351] Podaci MMY2002 nivoa proteina u početnoj liniji su korišćeni kako bi se napravio klasifikator predikcije odgovora. Nested-petlja stratifikovan desetostruki pristup unakrsne validacije ponovljen 30 puta, korišćenjem 4 različita mašinska učioca: Metoda potpornih vektora (SVM), Nasumične šume (RF), Naive Bayes (NB) i j48 stabla odlučivanja. Za svakog učioca postupak obuke je počeo sa pravljenjem 10 balansiranih preklopa skupa podataka (spoljna petlja). Jedan od ovih preklopa je održan kao testna kohorta dok su preostalih 9 prosleđeni u unutrašnju petlju kao kohorta za učenje. Unutar unutrašnje petlje, kohorta za učenje je još jednom podeljena na 10 balansiranih preklopa, stvarajući setove unutrašnjeg učenja i unutrašnjih testova. Učioci su obučavani na svakom od ovih skupova unutrašnjeg učenja i ovaj proces je ponovljen 30 puta za svaku kohortu unutar spoljne petlje. Tačnost svakog učioca unutrašnje petlje u predviđanju skupova unutrašnjeg testa je korišćena kako bi se odabrale karakteristike i optimizovali parametri modela. Kada je unutrašnja petlje 30x završena za svaku kohortu obuke, performansa spoljne petlje (korišćenjem optimizovanih parametara i karakteristika) je procenjena na svakoj odgovarajućoj testnoj kohorti. Celokupna procedura spoljne petlje je zatim ponovljena 30 puta, stvarajući 30 predikcija odgovora za svaki uzorak unutar skupa podataka. Statistika AUC, senzitivnosti i specifičnosti dobijena iz petlja pristupa je bila aproksimacija toga koliko ć e dobro konačni model, obučavan na potpunom originalnom skupu podataka, funkcionisati na novim testnim slučajevima.
Rezultati MMY2002 studije
[0352] Sprovedena su različita poređenja uključujući promene zavisne od odgovora indukovanog tretmanom u ekspresiji proteina. Jedan od proteina koji je pokazao smanjenu ekspresiju kod respondera tokom vremenskog perioda je PD-L1, pri čemu ekspresija PD-L1 proteina se povećala tokom vremenskog perioda kod nerespondera. Angažovanje PD-L1 na T ćelijama dovodi do redukovane T ćelijske funkcije i povećanog razvoja Treg. Slika 18 pokazuje profil ekspresije proteina PD-L1 kod respondera, nerespondera i kod pacijenata sa stabilnom bolešću u 1. ciklusu i 3. ciklusu.
[0353] Angažovanje PD-L1 sa svojim receptorom PD-1 supresuje antitumorske odgovore i dovodi do anergije i iscrpljenosti T ćelije. Iako ne želimo da budemo vezani bilo kojom određenom teorijom, smanjenje regulacije PD-L1 nakon CD38 tretmana može takođe dovesti do poboljšane potencijacije antitumorskih imuno odogovora kod čvrstih tumora.

Claims (15)

Patentni zahtevi
1. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu u lečenju pacijenta koji ima čvrsti tumor, koje obuhvata VH SEK ID BR: 4 i VL SEK ID BR: 5, pri čemu antitelo je IgG1 izotip.
2. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu antitelo obuhvata aminokiselinu teškog lanca SEK ID BR: 12, i aminokiselinu lakog lanca SEK ID BR: 13.
3. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 pri čemu antitelo je IgG1κ izotip.
4. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 3, pri čemu čvrsti tumor je melanom, kancer pluća, skvamozni nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC), neskvamozni NSCLC, kolorektalni kancer, kancer prostate, kancer prostate otporan na kastraciju, kancer stomaka, kancer jajnika, kancer želuca, kancer jetre, kancer pankreasa, tiroidni kancer, karcinom skvamozne ćelije glave i vrata, karcinom jednjaka ili gastrointestinalnog trakta, kancer dojke, kancer jajovoda, kancer mozga, kancer uretre, genitourinarni kancer, endometrioza, kancer grlića materice ili metastatska lezija kancera.
5. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu čvrstom tumoru nedostaje detektabilna CD38 ekspresija.
6. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, pri čemu antitelo koje specifično vezuje CD38 izaziva imuni odgovor kod pacijenta, pri čemu imuni odgovor je odgovor efektorske T ćelije (Teff), pri čemu Teff odgovor je posredovan sa CD8<+>T ćelijama, i pri čemu Teffodgovor je povećanje broja CD8<+>T ćelija.
7. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, pri čemu antitelo koje specifično vezuje CD38 inhibira funkciju imunosupresorske ćelije, pri čemu:
a. imunosupresorska ćelija je regulatorna T ćelija (Treg), pri čemu Treg je CD3<+>CD4<+>CD25<+>CD127<dim>T ćelija, pri č emu Treg eksprimira CD38, pri č emu Treg funkcija je inhibirana uništavanjem Treg, i pri č emu uništavanje Treg je posredovano ćelijskom citotoksičnošću zavisnom od antitela (ADCC); ili
b. imunosupresorska ć elija je supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (MDSC), pri čemu MDSC je CD11b<+>HLADR-CD14-CD33<+>CD15<+>ćelija, pri č emu CD11b<+>HLADR-CD14-CD33<+>CD15<+>ćelija eksprimira CD38, pri čemu MDSC funkcija je inhibirana uništavanjem MDSC, i pri čemu uništavanje MDSC je posredovano sa ADCC; ili
c. imunosupresorska ćelija je regulatorna B ćelija (Breg), pri čemu Breg je CD19<+>CD24<+>CD38<+>ćelija, pri čemu Breg funkcija je inhibirana uništavanjem Breg, i pri čemu uništavanje Breg je posredovano sa ADCC; ili d. imunosupresorska ćelija se nalazi u perifernoj krvi.
8. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 7, pri čemu antitelo koje specifično vezuje CD38 je primenjeno u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom, kao š to pri č emu je drugi terapeutski agens je hemoterapeutski agens, ciljana terapija protiv kancera, standard nege leka za lečenje čvrstog tumora, ili inhibitor imuno kontrolne tačke.
9. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, pri čemu inhibitor imuno kontrolne tačke je anti-PD-1 antitelo, anti-PD-L1 antitelo, anti-PD-L2 antitelo, anti-LAG3 antitelo, anti-TIM3 antitelo, ili anti-CTLA-4 antitelo.
10. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema patentnom zahtevu 9, pri čemu:
a. inhibitor imuno kontrolne tačke je anti-PD-1 antitelo, opciono pri čemu anti-PD-1 antitelo obuhvata:
i. VH SEK ID BR: 22 i VL SEK ID BR: 23;
ii. VH SEK ID BR: 24 i VL SEK ID BR: 25;
iii. VH SEK ID BR: 32 i VL SEK ID BR: 33; ili
iv. VH SEK ID BR: 34 i VL SEK ID BR: 35; ili
b. inhibitor imuno kontrolne tačke je anti-PD-L1 antitelo, opciono pri čemu anti-PD-L1 antitelo obuhvata: i. VH SEK ID BR: 26 i VL SEK ID BR: 27;
ii. VH SEK ID BR: 28 i VL SEK ID BR: 29; ili
iii. VH SEK ID BR: 30 i VL SEK ID BR: 31; ili
c. inhibitor imuno kontrolne tačke je anti-PD-L2 antitelo; ili
d. inhibitor imuno kontrolne tačke je anti-LAG3 antitelo; ili
e. inhibitor imuno kontrolne tačke je anti-TIM-3 antitelo; opciono pri čemu anti-TIM-3 antitelo obuhvata: i. VH SEK ID BR: 36 i VL SEK ID BR: 37; ili
ii. VH SEK ID BR: 38 i VL SEK ID BR: 39.
11. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 8 do 10, pri čemu drugi terapeutski agens je primenjen simultano, sekvencijalno ili odvojeno.
12. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 11, pri čemu antitelo koje specifično vezuje CD38 je primenjeno parentalno intravenoznom infuzijom ili bolus injekcijom, intramuskularno, subkutano ili intraperitonealno.
13. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 12, pri čemu antitelo koje specifično vezuje CD38 je primenjeno intravenozno.
14. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 12, pri čemu antitelo koje specifično vezuje CD38 je primenjeno subkutano.
15. Antitelo koje specifično vezuje CD38 za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 14, pri čemu:
a. pacijent je lečen ili je bio lečen radioterapijom; i/ili
b. pacijent je imao ili će biti podvrgnut operaciji.
RS20240308A 2015-06-24 2016-06-24 Imunomodulacija i tretman čvrstih tumora antitelima koja specifično vezuju cd38 RS65347B1 (sr)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562184018P 2015-06-24 2015-06-24
US201562249546P 2015-11-02 2015-11-02
US201562250566P 2015-11-04 2015-11-04
US201562263307P 2015-12-04 2015-12-04
US201662331489P 2016-05-04 2016-05-04
PCT/US2016/039165 WO2016210223A1 (en) 2015-06-24 2016-06-24 Immune modulation and treatment of solid tumors with antibodies that specifically bind cd38
EP16815351.8A EP3313441B1 (en) 2015-06-24 2016-06-24 Immune modulation and treatment of solid tumors with antibodies that specifically bind cd38

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65347B1 true RS65347B1 (sr) 2024-04-30

Family

ID=57586547

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240308A RS65347B1 (sr) 2015-06-24 2016-06-24 Imunomodulacija i tretman čvrstih tumora antitelima koja specifično vezuju cd38

Country Status (37)

Country Link
US (1) US20160376373A1 (sr)
EP (2) EP3313441B1 (sr)
JP (3) JP7041519B2 (sr)
KR (2) KR102713847B1 (sr)
CN (1) CN107921120A (sr)
AU (1) AU2016281717B2 (sr)
BR (1) BR112017027990A2 (sr)
CA (1) CA2990620A1 (sr)
CL (2) CL2017003275A1 (sr)
CO (1) CO2017013332A2 (sr)
DK (1) DK3313441T5 (sr)
DO (1) DOP2017000305A (sr)
EA (1) EA037548B1 (sr)
EC (1) ECSP17084878A (sr)
ES (1) ES2982292T3 (sr)
FI (1) FI3313441T3 (sr)
GT (1) GT201700286A (sr)
HR (1) HRP20240338T1 (sr)
HU (1) HUE066300T2 (sr)
IL (1) IL256248A (sr)
LT (1) LT3313441T (sr)
MA (1) MA71262A (sr)
MD (1) MD3313441T2 (sr)
MX (3) MX2018000261A (sr)
MY (1) MY193727A (sr)
NI (1) NI201700170A (sr)
PE (1) PE20181090A1 (sr)
PH (1) PH12017502311A1 (sr)
PL (1) PL3313441T3 (sr)
PT (1) PT3313441T (sr)
RS (1) RS65347B1 (sr)
SI (1) SI3313441T1 (sr)
SM (1) SMT202400127T1 (sr)
SV (1) SV2017005607A (sr)
UA (1) UA124799C2 (sr)
WO (1) WO2016210223A1 (sr)
ZA (1) ZA201800476B (sr)

Families Citing this family (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG10201912554TA (en) * 2005-03-23 2020-02-27 Genmab As Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma
EP2580243B1 (en) 2010-06-09 2019-10-16 Genmab A/S Antibodies against human cd38
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
CA2898100C (en) 2013-01-14 2023-10-10 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
US9603927B2 (en) 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
WO2015145422A1 (en) 2014-03-26 2015-10-01 Scr Engineers Ltd Livestock location system
MX385936B (es) 2014-03-28 2025-03-11 Xencor Inc Anticuerpos biespecíficos que se unen a cd38 y cd3.
US11071279B2 (en) 2014-09-05 2021-07-27 Intervet Inc. Method and system for tracking health in animal populations
US10986817B2 (en) 2014-09-05 2021-04-27 Intervet Inc. Method and system for tracking health in animal populations
EA035979B1 (ru) 2014-09-09 2020-09-08 Янссен Байотек, Инк. Варианты комбинированной терапии анти-cd38 антителами
MX2017006918A (es) 2014-11-26 2018-01-25 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a cd3 y cd38.
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
HRP20211273T1 (hr) 2014-11-26 2021-11-12 Xencor, Inc. Heterodimerna protutijela koja vežu cd3 i cd20
KR102597989B1 (ko) 2014-12-04 2023-11-02 얀센 바이오테크 인코포레이티드 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 항-cd38 항체
IL319936A (en) 2015-05-20 2025-05-01 Janssen Biotech Inc Anti-CD38 antibodies for the treatment of light chain amyloidosis and other CD38-positive hematological malignancies
WO2016209921A1 (en) 2015-06-22 2016-12-29 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies for heme malignancies with anti-cd38 antibodies and survivin inhibitors
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
MY198562A (en) * 2015-11-03 2023-09-05 Janssen Biotech Inc Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
EP4516319A3 (en) 2015-11-03 2025-05-07 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-cd38 antibodies and their uses
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
JP7058219B2 (ja) 2015-12-07 2022-04-21 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｐｓｍａに結合するヘテロ二量体抗体
TWI895621B (zh) 2016-05-27 2025-09-01 美商艾吉納斯公司 抗-tim-3抗體及其使用方法
FI3468586T3 (fi) 2016-06-14 2024-10-29 Xencor Inc Bispesifisiä immuuniaktivaatiota vapauttavia vasta-aineita
EP3475304B1 (en) 2016-06-28 2022-03-23 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
US11958913B2 (en) * 2017-01-09 2024-04-16 Biomunex Pharmaceuticals Polypeptide linker for preparing multispecific antibodies
AU2018212652B2 (en) * 2017-01-26 2024-03-28 Sangamo Therapeutics, Inc. B-cell engineering
JP7237950B2 (ja) 2017-06-08 2023-03-13 ブラック ベルト セラピューティクス リミテッド Ｃｄ３８調節抗体
CN111051344B (zh) * 2017-06-08 2023-10-27 黑带医疗有限公司 Cd38调节抗体
KR102770104B1 (ko) * 2017-06-08 2025-02-21 블랙 벨트 테라퓨틱스 리미티드 Cd38 조정 항체
EP3434692A1 (en) * 2017-07-24 2019-01-30 Encefa Compounds which specifically binds to cd38 for use in the treatment of neurodegenerative diseases
US11542338B2 (en) 2017-08-16 2023-01-03 Black Belt Therapeutics Limited CD38 modulating antibody
AU2018316521B2 (en) 2017-08-16 2025-01-30 Black Belt Therapeutics Limited CD38 modulating antibody
AU2018316522B2 (en) 2017-08-16 2025-02-20 Black Belt Therapeutics Limited CD38 antibody
MA50514A (fr) 2017-10-31 2020-09-09 Janssen Biotech Inc Méthodes de traitement du myélome multiple à haut risque
WO2019094637A1 (en) 2017-11-08 2019-05-16 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
CN112469477A (zh) 2018-04-04 2021-03-09 Xencor股份有限公司 与成纤维细胞活化蛋白结合的异源二聚体抗体
CN112292185B (zh) 2018-04-17 2025-07-29 塞德斯医疗公司 抗cd27和抗pd-l1抗体及双特异性构建体
WO2019209712A1 (en) 2018-04-22 2019-10-31 Vence, Corp. Livestock management system and method
WO2020012038A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Genmab A/S Trogocytosis-mediated therapy using cd38 antibodies
MA53122A (fr) * 2018-07-13 2021-05-19 Genmab As Variants d'anticorps cd38 et leurs utilisations
CN109265551B (zh) * 2018-09-25 2020-09-15 华东师范大学 Cd38抗体、嵌合抗原受体和药物
US20210395351A1 (en) * 2018-09-27 2021-12-23 Musc Foundation For Research Development Pharmaceutical combination for the treatment of cancer
FR3086837B1 (fr) 2018-10-03 2021-06-18 Allflex Europe Pince pour la manipulation d’un dispositif d’identification d’un animal et/ou de prelevement d’un tissu d’un animal comprenant des moyens de maintien a moyens d’actionnement deportes
BR112021006730A8 (pt) 2018-10-10 2022-09-13 Scr Eng Ltd Método e dispositivo de secagem de animais de pecuária
BR112021015541A2 (pt) 2019-02-08 2022-01-11 Allflex Australia Pty Ltd Leitor de etiqueta eletrônica de animal
CA3129163A1 (en) 2019-02-08 2020-08-13 Allflex Australia Pty Ltd Determining the location of an animal
BR112021015513A2 (pt) 2019-02-08 2021-10-19 Allflex Australia Pty Ltd Sincronização de leitor de tag de identificação eletrônica de animais
US20200308297A1 (en) * 2019-03-28 2020-10-01 Janssen Biotech, Inc. Clinically Proven Subcutaneous Pharmaceutical Compositions Comprising Anti-CD38 Antibodies and Their Uses
CN115210005B (zh) 2019-08-28 2024-04-23 Scr工程有限公司 流体分析设备
PE20230113A1 (es) 2020-01-16 2023-01-27 Genmab As Formulaciones de anticuerpos anti-cd38 y usos de las mismas
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
IL275518B (en) 2020-06-18 2021-10-31 Scr Eng Ltd Animal tag
USD990063S1 (en) 2020-06-18 2023-06-20 S.C.R. (Engineers) Limited Animal ear tag
USD990062S1 (en) 2020-06-18 2023-06-20 S.C.R. (Engineers) Limited Animal ear tag
IL275812B (en) 2020-07-01 2022-01-01 Scr Eng Ltd System and method for placing devices
WO2022040482A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
CA3200086A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Identigen Limited A system and method for tracing members of an animal population
WO2022117572A2 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv An ltbr agonist in combination therapy against cancer
TW202235435A (zh) 2021-01-14 2022-09-16 德商莫菲西斯公司 抗cd38抗體及其用途
IL280374B2 (en) 2021-01-24 2023-11-01 Scr Eng Ltd System and method for controlling animal marking
TW202302642A (zh) 2021-03-01 2023-01-16 德商莫菲西斯公司 用於治療抗體介導移植物排斥用途之抗ｃｄ３８抗體
CN117157319A (zh) 2021-03-09 2023-12-01 Xencor股份有限公司 结合cd3和cldn6的异二聚抗体
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
CA206812S (en) 2021-04-08 2023-04-11 Chevillot Sas Tag applicator for animals
CA206747S (en) 2021-04-08 2024-12-30 Chevillot Sas Tag applicator for animals
WO2023028159A1 (en) * 2021-08-25 2023-03-02 Biograph 55, Inc. Methods of treating cancers associated with immunosuppressive b cells
US20230330138A1 (en) * 2022-04-14 2023-10-19 Creative Medical Technologies, Inc. Treatment of cartilage degeneration using myeloid suppressor cells and exosomes derived thereof
US12402596B2 (en) 2022-05-03 2025-09-02 S.C.R. (Engineers) Limited Milk channel and feed inlet coupled thereto, and system and method for conserving wash fluid in a washing process for cleaning a milkmeter system
CN114805582B (zh) * 2022-06-29 2022-10-04 上海恒润达生生物科技股份有限公司 抗Trop2纳米抗体及其用途
TW202432177A (zh) 2022-10-31 2024-08-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 Ｃｄ３８抗體及其用途
WO2024126750A1 (en) * 2022-12-15 2024-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for treating cancer

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
EP0281604B1 (en) 1986-09-02 1993-03-31 Enzon Labs Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
DK0672142T3 (da) 1992-12-04 2001-06-18 Medical Res Council Multivalente og multispecifikke bindingsproteiner samt fremstilling og anvendelse af disse
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
AUPO591797A0 (en) 1997-03-27 1997-04-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation High avidity polyvalent and polyspecific reagents
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7829693B2 (en) 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
EP1283053A1 (en) 2001-08-09 2003-02-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Inhibitors of HER3 activity
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
WO2004078140A2 (en) 2003-03-05 2004-09-16 Halozyme, Inc. SOLUBLE HYALURONIDASE GLYCOPROTEIN (sHASEGP), PROCESS FOR PREPARING THE SAME, USES AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING THEREOF
JP4794301B2 (ja) 2003-06-11 2011-10-19 中外製薬株式会社 抗体の製造方法
EP1720907B1 (en) 2004-02-06 2015-04-08 MorphoSys AG Anti-cd38 human antibodies and uses therefor
SG10201912554TA (en) * 2005-03-23 2020-02-27 Genmab As Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
EP2418278A3 (en) 2005-05-09 2012-07-04 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
TW200745162A (en) 2005-05-24 2007-12-16 Morphosys Ag Generation and profiling of fully human hucal gold-derived therapeutic antibodies specific for human CD38
CN103554260A (zh) 2005-10-12 2014-02-05 莫佛塞斯公司 特异性针对人CD38的完全人HuCAL GOLD-衍生治疗抗体的生成和鉴定
CA2646965C (en) 2006-03-24 2016-06-21 Jonathan H. Davis Engineered heterodimeric protein domains
US20090182127A1 (en) 2006-06-22 2009-07-16 Novo Nordisk A/S Production of Bispecific Antibodies
WO2008073160A2 (en) * 2006-08-17 2008-06-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for converting or inducing protective immunity
PL2081595T3 (pl) * 2006-09-26 2019-11-29 Genmab As Anty-cd38 wraz z kortykosteroidami wraz ze środkiem chemioterapeutycznym niebędącym kortykosteroidem, do leczenia guzów nowotworowych
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
ES2667863T3 (es) 2007-03-29 2018-05-14 Genmab A/S Anticuerpos biespecíficos y métodos de producción de los mismos
EP2535354B1 (en) 2007-06-18 2017-01-11 Merck Sharp & Dohme B.V. Antibodies to human programmed death receptor pd-1
CN101970730A (zh) 2007-12-19 2011-02-09 森托科尔奥索生物科技公司 通过融合到pⅨ或pⅦ来设计和生成人从头pⅨ噬菌体展示文库,载体、抗体及方法
ES2563027T3 (es) 2008-01-07 2016-03-10 Amgen Inc. Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática
JP5646457B2 (ja) 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
HUE030807T2 (en) 2008-09-26 2017-05-29 Dana Farber Cancer Inst Inc Human anti-PD-1, anti-PD-L1 and anti-PD-L2 antibodies and their applications
TWI729512B (zh) 2008-12-09 2021-06-01 美商建南德克公司 抗pd-l1抗體及其於增進t細胞功能之用途
EP2424567B1 (en) 2009-04-27 2018-11-21 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
CN104961829B (zh) 2009-11-24 2018-08-21 米迪缪尼有限公司 针对b7-h1的靶向结合剂
US9150663B2 (en) 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
WO2011143545A1 (en) 2010-05-14 2011-11-17 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
EP2580243B1 (en) * 2010-06-09 2019-10-16 Genmab A/S Antibodies against human cd38
EP2420253A1 (en) 2010-08-20 2012-02-22 Leadartis, S.L. Engineering multifunctional and multivalent molecules with collagen XV trimerization domain
RU2604490C2 (ru) 2010-11-05 2016-12-10 Займворкс Инк. ДИЗАЙН УСТОЙЧИВОГО ГЕТЕРОДИМЕРНОГО АНТИТЕЛА С МУТАЦИЯМИ В Fc ДОМЕНЕ
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
DK2699264T3 (en) 2011-04-20 2018-06-25 Medimmune Llc ANTIBODIES AND OTHER MOLECULES BINDING B7-H1 AND PD-1
KR102702287B1 (ko) * 2012-05-15 2024-09-04 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Pd-1/pd-l1 신호전달을 방해하는 것에 의한 암 면역요법
EP2878166A1 (en) 2012-07-24 2015-06-03 Telefonaktiebolaget L M Ericsson (Publ) Apparatus and method for dynamically selecting a random access response window value for use with random access procedures in a network
US9682143B2 (en) * 2012-08-14 2017-06-20 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for inducing immune response to disease
ES2621377T3 (es) * 2012-11-05 2017-07-03 Morphosys Ag Anticuerpo marcado radiactivamente y usos del mismo
EP2992013B1 (en) 2013-04-29 2019-12-04 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-cd38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2b
US20140356318A1 (en) * 2013-05-28 2014-12-04 Israel Barken Adoptive cell therapy with specific regulatory lymphocytes
HK1221964A1 (zh) 2013-05-31 2017-06-16 Sorrento Therapeutics, Inc. 与pd-1结合的抗原结合蛋白
CA2919513A1 (en) * 2013-07-15 2015-01-22 Matthew J. Goldstein Medical uses of cd38 agonists
JP2016536361A (ja) * 2013-11-06 2016-11-24 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｄ３３抗体及び脱メチル剤を含む医薬配合物
US9603927B2 (en) * 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
JP7382695B2 (ja) * 2020-07-09 2023-11-17 パーカーエンジニアリング株式会社 塗料ミスト捕集装置

Also Published As

Publication number Publication date
MX2021012134A (es) 2021-11-03
MX2018000261A (es) 2018-03-08
JP2024153803A (ja) 2024-10-29
EA201890131A1 (ru) 2018-05-31
NZ777474A (en) 2025-05-02
SI3313441T1 (sl) 2024-05-31
PE20181090A1 (es) 2018-07-09
PT3313441T (pt) 2024-05-07
WO2016210223A1 (en) 2016-12-29
US20160376373A1 (en) 2016-12-29
MY193727A (en) 2022-10-27
EP3313441A4 (en) 2019-04-24
SMT202400127T1 (it) 2024-05-14
CL2019003657A1 (es) 2020-05-08
MD3313441T2 (ro) 2024-08-31
EP3313441A1 (en) 2018-05-02
NI201700170A (es) 2019-05-10
NZ738206A (en) 2025-05-02
KR20180012864A (ko) 2018-02-06
CA2990620A1 (en) 2016-12-29
SV2017005607A (es) 2019-03-28
PL3313441T3 (pl) 2024-08-19
UA124799C2 (uk) 2021-11-24
BR112017027990A2 (pt) 2018-08-28
KR20240150522A (ko) 2024-10-15
PH12017502311A1 (en) 2018-06-25
DK3313441T5 (da) 2024-10-07
EP3313441B1 (en) 2024-02-21
HRP20240338T1 (hr) 2024-05-24
ECSP17084878A (es) 2018-02-28
GT201700286A (es) 2019-08-08
DOP2017000305A (es) 2018-04-15
EA037548B1 (ru) 2021-04-12
FI3313441T3 (fi) 2024-03-28
AU2016281717B2 (en) 2022-07-28
CL2017003275A1 (es) 2018-04-20
EP4385569A2 (en) 2024-06-19
MX2021012133A (es) 2021-11-03
KR102713847B1 (ko) 2024-10-04
EP4385569A3 (en) 2024-09-25
JP2018527299A (ja) 2018-09-20
LT3313441T (lt) 2024-05-27
DK3313441T3 (da) 2024-04-15
HUE066300T2 (hu) 2024-07-28
CN107921120A (zh) 2018-04-17
CO2017013332A2 (es) 2018-05-21
MA71262A (fr) 2025-04-30
AU2016281717A1 (en) 2018-01-18
IL256248A (en) 2018-02-28
JP2022070892A (ja) 2022-05-13
ZA201800476B (en) 2021-05-26
JP7532428B2 (ja) 2024-08-13
JP7041519B2 (ja) 2022-03-24
ES2982292T3 (es) 2024-10-15
HK1254942A1 (en) 2019-08-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7532428B2 (ja) Ｃｄ３８を特異的に結合する抗体による免疫調節及び固形腫瘍の治療
US20250066501A1 (en) Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
US11820824B2 (en) Antibodies to TIGIT
CA3169451A1 (en) Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
JP2022518925A (ja) 受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ｒｏｒ１）に特異的な抗体およびキメラ抗原受容体
JP2021501606A (ja) Ｂ細胞成熟抗原（ｂｃｍａ）に特異的なキメラ抗原受容体
RS59738B1 (sr) Anti-ox40 antitela i postupci primene
US20250084178A1 (en) Anti-cd39 antibodies and use thereof
KR20220007087A (ko) 제한된 수의 nk 세포를 갖는 환자에서의 항-cd19 치료제
KR20240049794A (ko) Cxcr5, pd-1, 및 icos 발현 종양 반응성 cd4 t 세포 및 그의 용도
TWI742008B (zh) 使用特異性結合ｃｄ３８之抗體免疫調節及治療固態腫瘤
HK40111835A (en) Immune modulation and treatment of solid tumors with antibodies that specifically bind cd38
HK1254942B (en) Immune modulation and treatment of solid tumors with antibodies that specifically bind cd38
Zahavi Antibody Depdendent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC) Selection Pressure Induces Diverse and Reversible Mechanisms of Resistance
HK1254148A1 (en) Immune modulation and treatment of solid tumors with antibodies that specifically bind cd38
BR122025009440A2 (pt) Usos de um anticorpo que se liga especificamente a cd38