RS64307B1 - Upotreba inhibitora acetilholinesteraze i idalopirdina za smanjenje padova kod pacijenata sa parkinsonovom bolešću - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu inhibitora acetilholinesteraze kao što je definisano u priloženim patentnim zahtevima i idalopirdina za smanjenje padova kod starijih pacijenata sa Parkinsonovom bolešću. Ovaj pronalazak se dodatno odnosi na kombinaciju inhibitora acetilholinesteraze kao što je definisano u priloženim patentnim zahtevima i idalopirdina za smanjenje padova kod pacijenata sa Parkinsonovom bolešću.

Pozadina pronalaska

[0002] Padovi su vodeći uzrok smrti kod starijih a, kod većine pacijenata sa Parkinsonovom bolešću (PD) koji ne reaguju na levodopu, vodeći uzrok hospitalizacije i dugoročne nege. Padanje kod PD se pripisuje degenerativnosti kolinergičkih neurona prednjeg mozga koji, u interakciji sa gubicima dopamina u stiratiumu, oštećuje kognitivnu kontrolu ravnoteže, hoda i kretanja

[0003] Pored bolesti koju karakterišu motorički simptomi koji prvenstveno odražavaju gubitke dopamina u tkivu stratiuma, izražene autonomne, bihevioralne i kognitivne simptome, uključujući sklonost ka padovima, znače da je Parkinsonova bolest (PD) bazirana na rasprostranjenijim, višesistemskim neurodegenerativnim procesima'. Padovi kod PD pacijenata<2,3>i takođe kod zdravih starih ljudi<4>često predstavljaju invalidne događaje<5,6>. Programi bazirani na vežbanju<7-9>kao i lečenje inhibitorima acetilholinesteraze<10,11>smanjuju stope padova kod starih i PD pacijenata, mada ostaje neispunjena potreba da se dodatno smanji sklonost ka padovima.

[0004] Iako se padovi kod pacijenata povezuju s brojnim faktorima rizika<12-14>faktor koji njima najviše doprinosi jesu oštećenja u pažljivom nadgledanju kretanja, posebno kada nepoznate površine i prepreke ili sekundarni zadaci predstavljaju izazov za hodanje, ravnotežu, i kontrolu kretanja<15-22>. Greške prilikom hodanja, u ravnoteži i tokom kretanja normalno izazivaju kontrolu pažnje. Međutim, kako proces bolesti takođe utiče na moždane sisteme pažnje, tako je kompenzatorsko angažovanje izvora pažnje sve više nedostupno za spašavanje kretanja i sprečavanje padova. U skladu sa ovim gledištem, i degenerativnost holinergičkih projekcija bazalnog prednjeg mozga (BF) u regije velikog mozga i talamusa – glavnog sistema pažnje u mozgu<23,24>– i holinergičkih projekcija moždanog stabla u talamusu i bazalnim ganglijama, su u korelaciji sa malom brzinom hodanja, zamrzavanja hodanja i padova kod PD pacijenta<25-29>.

[0005] Takođe kod drugih CNS bolesti kao što je demencija sa Levijevim telima (LBD), progresivna supranuklearna paraliza (PSP) i multisistemska atropija (MSA), oštećeni su ravnoteža, hod i kretanje usled degenerativnosti holinergičkih neurona<30>.

[0006] Iz gore navedenog jasno je da ostaje neispunjena potreba za terapijom koja bi se koristila za smanjenje padova kod pacijenata sa Parkinsonovom bolešću kao i kod pacijenata sa drugim bolestima CNS-a gde degenerativnost holinergičkih neurona dovodi do oštećenja ravnoteže, hoda i kretanja. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin, INN naziva "idalopirdin" (prikazan u nastavku) je prvi put otkriven u WO 02/078693 i predstavlja potentan i selektivan antagonist 5-HT6receptora koji je u kliničkom razvoju za lečenje oštećenja kognitivnosti povezanih sa šizofrenijom i kao lečenje za AD.

[0007] 2012. godine, prijavljeno je kliničko ispitivanja sa idalopirdinom koji je korišćen u lečenju Alchajmerove bolesti (AD). Podaci su pokazali da je idalopirding plus 10 mg/dnevno donepezila značajno poboljšao kognitivnu funkciju kod 278 pacijenata sa AD u odnosu na placebo plus donepezil, kada je mereno AD skalom za procenu Alchajmerove bolesti (ADAS-cog). Idalopirdin je pokazao pozitivne rezultate u sekundarnim krajnjim tačkama uključujući merenja globalnog utiska i svakodnevnih aktivnosti u odnosu na pacijente lečene donepezilom. Sledeća faza III ispitivanja nije mogla da potvrdi te rezultate.

[0008] Rezultati koji su uključeni u ovu patentnu prijavu su delimično otkriveni u elektronskoj publikaciji (doi: 10.111/ejn.13354, objavljenoj 29. jula 2016.)<31>. Pored toga, Mičigenski kompleksni motorni kontrolni zadatak (MCMCT) koji se koristi za procenu uticaja lečenja na padove, hod i zaustavljanja prilikom kretanja je opisan u članku koji su napisali Kucinski et al.<32>

Kratak sadržaj pronalaska

[0009] Ovaj pronalazak se odnosi na idalopirdin i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti, pri čemu se lečenje Parkinsonove bolesti sastoji od smanjenja padova kod pacijenta sa Parkinsonovom bolešću. Pronalazači ovog pronalaska su iznenađujuće pronašli da zajedničko lečenje sa donepezilom i idalopirdinom ili rivastigminom i idalopirdinom smanjuje padove kod pacova sa dvostrukim strijatalno-dopaminergičkim lezijama (DL) kod pacova. Ovi rezultati pokazuju da zajedničko lečenje sa AChEl i antagonistom 5HT6receptora može da smanji sklonost ka padovima kod pacijenata sa PD, određenije pacijenata sa PD koji takođe ispoljavaju sklonost ka relativno kratkim zaustavljanjima kretanja koje izazivaju distraktori ili se javljaju spontano.

Kratak opis crteža

[0010]

Fig.1.

Padovi tokom obilaska šipke (N=70, n=14 po grupi i 7/pol). U svim stanjima tokom ispitivanja, DL pacovi padaju ćešće od SH/VEH pacova. Dodatno, u poređenju sa DL/VEH pacovima, lečenje sa DON+IDL je značajno smanjilo stope padanja (A). Pregled pojedinačnih uslova ispitivanja (B-E) je pokazao da je smanjenje padova povezanih sa obilaskom šipke obrtanjem u nepoznatom smeru kretanja kazaljke na satu (cw) i naizmeničnim obrtanjem u cw smeru i smeru suprotnom od kretanja kazaljke na satu (cc) doprinosilo prvenstveno celokupnom efektu DON+IDL kod DL pacova. Ovaj i sledeći crteži pokazuju da rezultati post hoc višestrukih poređenja koja su bazirana na značajnim rezultatima iz ANOVA koji su opisani u rezultatima (*,**,***, P<0.05, 0.01, 0.001; skraćenice koje se koriste u ovom i drugim crtežima: SH, lažno-operisan; DL, dvostruke bazalne holinergičke lezije prednjeg mozga i strijatalne dopaminergijske lezije; DON, donepezil, IDL, idalopirdin, Riva, rivastigmin).

Fig.2.

Efekti distraktora u vidu okvira vrata (N=70, n=14 po grupi i 7/pol). Svi DL pacovi, osim DL/DON+IDL pacova, su padali mnogo češće od SH/VEH pacova kada su izlagani pasivnom distraktoru (A,B). Kako bi se stekao uvid u potencijalne bihevioralne mehanizme koji posreduju u efektima DON+IDL, ponašanje povezano sa okvirom vrata DL/VEH i DL/DON+IDL pacova je dodatno analizirano. Padovi povezani sa okvirom vrata su povezani zaustavljanjem kretanja ili zamrzavanjem hoda, kako pacovi prilaze ili dolaze do okvira. Generalno, duža zamrzavanja su povezana sa više padova (C) i kod DL/VEH i DL/DON+IDL pacova. Zapravo padovi povezani sa dužim zamrzavanjima se nisu razlikovali među grupama (D). Međutim, pacovi lečeni sa DON+IDL su padali značajno ređe kada su zamrzavanja bila relativno kratka (<2 s). Sama proporcija kratkih zamrzavanja se nije razlikovala među grupama. Kao što je ilustrovano pod E, nakon kratkih zamrzavanja, i čak ako nisu padali, DL/VEH pacovi su nastavljali da se kreću napred relativno sporo, generalno sa repom u relativno niskom položaju i pognuti (trebalo bi da se ima u vidu da se ovaj pacov oklizne nakon prolaska kroz vrata). Nasuprot tome, kad su DL/DON+IDL pacovi nastavili kretanje napred, ponekad počevši i sa skokom (kao što je ovde prikazano), brzo su vraćali redovnu brzinu obilaska i tečnog kretanja napred, sa visokim i krutim položajem repa i sa uspravnim držanjem.

Fig.3.

Uspešnost zadatka aktivnog distraktora (N=70, n=14 po grupi i 7/pol). Kako bi se simulirao uticaj sekundarnog zadatka, voda je nuđena kako su pacovi obilazili šipku koja se obrće (videti gornju fotografiju; pacovima nije nuđena voda zbog paralelnog, dnevnog SAT ispitivanja). Za DL pacove je generalno bilo manje verovatno da će biti uključeni u ovu kompetetivnu aktivnost kako je naznačeno manjim brojem pokušaja da dođu do vode (A). Za DL pacove je takođe manje verovatno da su uzimali vodu a da nije došlo do pada (B). Nijedna od terapija lekom (donepezilom (DON) ili samim idalopirdinom (IDL) ili u kombinaciji) nije značajno poboljšala uspešnost DL pacova u prisustvu ovog aktivnog distraktora.

Fig.4

Ukupan broj padova kombinovan od 2. do 5. dana. Prikazan je ukupan broj padova prijavljen (y-osa) ili u dvostrukoj leziji (DL) ili kod lažno operisanih pacova nakon lečenja vehikulumom, 1 mg/kg rivastigmina, 10 mg/kg idalopirdina ili kombinovanog lečenje tokom deset dana. Stupci predstavljaju srednju vrednost ± sem, *** P<0.001 cf. DL vehikulum. N brojevi su naznačeni u zagradi.

Fig.5

Ukupan broj padova sa naizmenične šipke (5. dan). Prikazan je ukupan broj padova prijavljen (y-osa) ili u dvostrukoj leziji (DL) ili kod lažno operisanih pacova nakon lečenja vehikulumom, 1 mg/kg rivastigmina, 10 mg/kg idalopirdina ili kombinovanog lečenja tokom deset dana. Stupci predstavljaju srednju vrednost ± sem, *** P<0.001, ** P<0.01 cf. DL vehikulum. N brojevi su naznačeni u zagradi.

Fig.6

Ukupan broj padova sa šipke koja se obrće u smeru suprotnom od kretanja kazaljke na satu (4. dana). Prikazan je ukupan broj padova prijavljen (y-osa) ili u dvostrukoj leziji (DL) ili kod lažno operisanih pacova nakon lečenja vehikulumom, 1 mg/kg rivastigminom, 10 mg/kg idalopirdinom ili kombinovanog lečenje tokom deset dana. Stupci predstavljaju srednju vrednost ± sem, *** P<0.001 cf. DL vehikulum. N brojevi su naznačeni u zagradi.

Fig.7

Ukupan broj padova sa šipke koja stoji u mestu. Prikazan je ukupan broj padova prijavljen (y-osa) ili u dvostrukoj leziji (DL) ili kod lažno operisanih pacova nakon lečenja vehikulumom, 1 mg/kg rivastigmina, 10 mg/kg idalopirdina ili kombinovanog lečenje tokom deset dana. Stupci predstavljaju srednju vrednost ± sem, *** P<0.001 cf. DL vehikulum. N brojevi su naznačeni u zagradi.

Definicije

[0011] Kroz specifikaciju, pojam "idalopirdin" (ponekad skraćeno IDL) je predviđen da uključuje bilo koji oblik jedinjenja, kao što je slobodna baza i farmaceutski prihvatljive soli. Slobodna baza i farmaceutski prihvatljive soli uključuju bezvodne oblike i solvatisane oblike kao što su hidrati. Bezvodni oblici uključuju amorfne i kristalne oblike, a solvati uključuju kristalne oblike. Slično tome, pojam "donepezil" (ponekad skraćeno DON) je predviđen da uključuje bilo koji oblik jedinjenja, kao što su slobodna baza i farmaceutski prihvatljive soli itd.

[0012] Inhibitor acetilholinesteraze (u ovom kontekstu skraćeno "AChE!") predstavlja hemikaliju ili lek koji inhibira enzim acetilholinesteraze od razbijanja na acetilholin, čime se povećava i nivo i trajanje dejstva neurotransmiterskog acetilholina. U ovom kontekstu, primeri inhibitora acetilholinesteraze uključuju donepezil, rivastigmin i galantamin. Inhibitor acetilholinesteraze prema ovom pronalasku je izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin.

[0013] Kroz specifikaciju, pojam "stariji pacijent" se odnosi na osobu koja ima najmanje 60 godina, kao što je najmanje 65 godina, kao što je najmanje 70, 75, 80, 85 ili 90 godina.

[0014] U ovom kontekstu, kada se idalopirdin koristi u kombinaciji sa AChEl, ovo znači da u jednom načinu ostvarivanja pomenuta dva jedinjenja mogu da se primenjuju istovremeno na primer u farmaceutskoj kompoziciji koja obuhvata oba jedinjenja. U drugom načinu ostvarivanja, kada se idalopirdin upotrebljava u kombinaciji sa AChEl, ovo znači da se pomenuta dva jedinjenja daju odvojeno u pogodnim pojedinačnim kompozicijama. Ove pojedinačne kompozicije mogu da se daju istovremeno, npr. u redovnim intervalima jednom dnevno ili ujutru ili uveče, ili mogu da se daju nezavisno npr. jedno jedinjenje sa redovnim intervalima jednom dnevno ujutru i drugo jedinjenje sa redovnim intervalima jednom dnevno uveče.

[0015] U ovom kontekstu, "farmaceutska kompozicija" se odnosi na dozni oblik na primer na oralni dozni oblik, kao što je čvrsti oralni dozni oblik, obično tablete ili kapsule. "Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska" se odnose na sve farmaceutske kompozicije koje su uključene u patentne zahteve i opis.

[0016] U ovom kontekstu, "farmaceutski ekscipijensi" uključuju npr. inertne čvrste razblaživače ili punioce, sterilne vodene rastvore i razne organske rastvarače koji se upotrebljavaju u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska.

[0017] U ovom kontekstu, "jedinični dozni oblik" se odnosi na jedinicu formulacije farmaceutske kompozicije npr. jednu tabletu ili jednu kapsulu.

[0018] U ovom kontekstu, "terapijski efektivne količine" jedinjenja označavaju količinu koja je dovoljna da leči, olakša ili delimično zaustavi kliničke manifestacije date bolesti i njenih komplikacija u terapijskoj intervenciji koja obuhvata primenu pomenutog jedinjenja. Količina koja je adekvatna da se ovo postigne je definisana kao "terapijski efektivna količina". Efektivne količine za svaku svrhu će zavisiti od ozbiljnosti bolesti ili povrede kao i od mase i opšteg stanja subjekta. Trebalo bi da se razume da određivanje odgovarajuće doze može da se postigne rutinskim eksperimentisanjem, konstruisanjem matrice vrednosti i ispitivanjem različitih tačaka u matrici, a to je sve poznato obučenom lekaru iz oblasti.

[0019] Pojam "funkcionalno oštećenje holinergičkih neurona" predstavlja zdravstveno stanje u kojem je normalna funkcija holinergičkih neurona manja od punog kapaciteta.

[0020] Pojam "degenerativnost holinergičkih neurona" je zdravstveno stanje progresivnog propadanja holinergičkih neurona u mozgu.

[0021] U ovom kontekstu, "lečenje" ili "koji se leči" je predviđeno da označava upravljanje i brigu o pacijentu u svrhu olakšavanja, zaustavljanja, delimičnog zaustavljanja ili odlaganja napredovanja kliničke manifestacije bolesti, ili lečenja bolesti. U jednom aspektu ovog pronalaska, "lečenje" i "koji se leči" se odnosi na profilaktičko (preventivno) lečenje. U drugom aspektu, "lečenje" i "koji se leči" se odnosi na (kurativno) lečenje. Pacijent koji bi trebalo da se leči je poželjno sisar, određenije čovek.

[0022] "DL pacovi" su pacovi koji su bili podvrgnuti dvostrukim strijatalno-dopaminergičkog i kortikalholinergičkog lezijama sistema.

Detaljan opis pronalaska

[0023] Pronalazači ovog pronalaska su iznenađujuće identifikovali da kombinacija idalopirdina i donepezila ili idalopirdina i rivastigmina može da smanji padove kod životinjskog modela što ukazuje na potencijal kombinacije ove dve supstance za terapeutsko lečenje kod smanjenja padova kod pacijenata sa PD i kod odraslih pacijenata. Ukratko, efekti donepezila (DON) i idalopirdina (IDL) su ispitivani kod pacova sa kortikalnim holinergičnim i strijatalnim dopaminergijskim gubicima (DL pacovi) koji su obilazili šipke i izvodili zadatak kontinuirane pažnje (SAT). Glavni nalazi ukazuju da je lečenje sa DON+IDL smanjilo padove na obrtnoj šipki kao i padove koje uzrokuje distraktor kod okvira vrata. DON+IDL su sprečavali padove prvenstveno pojačavanjem efikasnosti i snage ponovnog pokretanja prelaska obrtnog nakon relativno kratkih zaustavljanja kretanja. DL pacovi tretirani sa DON+IDL su ispoljili manje padova prilikom obilaska obrtne šipke u odnosu na druge DL grupe, i padali su ređe u vezi sa relativno kratkim zaustavljanjima uzrokovanim okvirom vrata. Dalje, lečenje DL pacova sa Riva+IDL je takođe pokazalo smanjen broj padova kod DL pacova u poređenju sa DL pacovima koji su tretirani samo sa vehikulumom. Videti odeljak sa eksperimentima za dodatne detalje.

[0024] Kod ljudi koji padaju, kao i kod DL pacova, sporo hodanje i zaustavljanja kretanja, uzrokovano distraktorima ili se javlja bez očiglednih uzroka, destabilizuju kretanje napred i povećavaju rizik od padova. Zaustavljanja ili zamrzavanje hoda uključuje i nestabilnost držanja i kontrolu hoda kao i poremećaj odabira pokreta, i samim tim zastoji mogu da odražavaju prekid kortiko-strijatalne komunikacije, isključivo za razliku od gubitaka strijatalnog dopamina.

[0025] Samim tim, ovaj pronalazak se odnosi na idalopirdin i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti, pri čemu se lečenje Parkinsonove bolesti sastoji od smanjenja padova kod pacijenta sa Parkinsonovom bolešću.

[0026] Prema ovom pronalasku, idalopirdin i AChEl ili farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od ova dva jedinjenja može da se daje na bilo koji pogodan način, npr. oralno, transmukozalno ili parenteralno, a idalopirdin i/ili AChE! mogu biti u bilo kom obliku pogodnom za takvu primenu. U jednom načinu ostvarivanja, i prema svrsi ovog pronalaska, idalopirdin i AChEI se oba primenjuju u obliku čvrstih farmaceutskih oblika, pogodno u obliku tableta ili kapsula ili u obliku suspenzija, rastvora ili disperzija za injekciju.

[0027] Farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku mogu biti formulisane sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili razblaživačima kao i bilo kojim drugim poznatim adjuvansima prema konvencionalnim tehnikama kao što su one otkrivene kod: The Science and Practice of Pharmacy, 22 Edition, Hauber, Ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2013. Tablete samim tim mogu biti pripremljene mešanjem aktivnih sastojaka sa uobičajenim nosačem, kao što je adjuvans i/ili razblaživač, i naknadno kompresovanjem mešavine u mašini za tabletiranje.

[0028] Pogodni farmaceutski nosači i ekscipijensi uključuju inertne čvrste razblaživače ili punioce, sterilan vodeni rastvor i razne orgnaske rastvarače. Neograničavajući primeri čvrstih nosača su kukuruzni skrob,laktoza, gips, saharoza, ciklodekstrin, talk, želatin, agar, pektin, akacija, magnezijumstearat, stearinska kiselina i niži alkil etri celuloze. Neograničavajući primeri tečnih nosača su sirup, ulje od kikirikija, maslinovo ulje, fosfolipidi, masne kiseline, amini masne kiseline, polioksietilen i voda.

[0029] Bilo koji adjuvans ili aditiv kao što su boje, arome, i konzervansi takođe može da se koristi pod uslovom da su kompatibilni sa aktivnim sastojcima. Farmaceutske kompozicije pronalaska samim tim obično obuhvataju efektivnu količinu idalopirdina i/ili AChEl i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.

[0030] Farmaceutske kompozicije obrazovane kombinovanjem jedinjenja koje se koristi u ovom pronalasku i farmaceutski prihvatljivih nosača se zatim brzo primenjuju u raznim doznim oblicima pogodnim za otkrivene puteve primene.

[0031] Aktivni farmaceutski sastojci koji se koriste u ovom pronalasku, tj. idalopirdin i AChEl, mogu da se primenjuju sami u obliku čistih jedinjenja ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili ekscipijensima, ili u pojedinačnoj ili višestrukim dozama.

[0032] Farmaceutske kompozicije mogu biti specifično formulisane za primenu pogodnu za bilo koji put kao što je oralni, rektalni, nazalni, pulmonarni, topikalni (uključujući bukalni i sublingvalni), transdermalni i parenteralni (uključujući supkutani, intramuskularni i intravenski) put, pri čemu je oralni put poželjan. Trebalo bi da se razume da put primene može da zavisi od opšteg stanja i uzrasta subjekta koji se leči, prirode stanja koje se leči i izabranog aktivnog sastojka.

[0033] Farmaceutske kompozicije za oralnu primenu uključuje čvrste oralne dozne oblike kao što su tablete, kapsule, praškovi i granule; i tečni oralni dozni oblici kao što su rastvori, emulzije, suspenzije i sirupi kao i praškovi i granule koje se rastvaraju ili suspenduju u odgovarajućoj tečnosti.

[0034] Čvrsti oralni dozni oblici mogu biti u obliku pojedinačnih jedinica (npr. tableta ili tvrdih ili mekih kapsula), pri čemu svaka sadrži prethodno određenu količinu aktivnog sastojka, i poželjno jedan ili više ekscipijenasa. Tamo gde je pogodno, čvrsti dozni oblici mogu da se pripreme sa omotačima kao što su enterični omotači ili mogu biti formulisani tako da obezbede modifikovano oslobađanje aktivnog sastojka kao što su odloženo ili produženo oslobađanje prema postupcima dobro poznatim u tehnici. Tamo gde je pogodno, čvrst dozni oblika može biti dozni oblik koji se raspada u pljuvačci, kao što je na primer orodisperzibilna tableta. Primeri ekscipijenasa pogodnih za čvrstu oralnu formulaciju uključuju, ali bez ograničenja na, mikrokristalnu celulozu, kukuruzni skrob, laktozu, manitol, povidon, kroskarmelozu natrijum, saharozu, ciklodekstrin, talk, želatin, pektin, magnezijumstearat, stearinsku kiselinu i niže alkil etre celuloze. Slično tome, čvrsta formulacija može da uključuje ekscipijense za formulacije sa odloženim ili produženim oslobađanjem poznatim u tehnici, kao što su gliceril monostearat ili hipromeloza. Ako se za oralnu primenu upotrebljava čvrst materijal, formulacija može na primer biti pripremljena mešanjem aktivnog sastojka sa čvrstim ekscipijensima i naknadno kompresovanjem mešavine u konvencionalnoj mašini za tabletiranje; ili formulacija može na primer biti stavljena npr. u čvrstu kapsulu, npr. u obliku praška, kuglice ili mini tablete količina čvrstog ekscipijensa će varirati ali će obično biti u opsegu od oko 25 mg do oko 1 g po doznoj jedinici.

[0035] Tečni oralni dozni oblici mogu biti na primer u obliku eliksira, sirupa, oralnih kapi ili kapsule napunjene tečnošću. Tečni oralni dozni oblici mogu biti u obliku praškova za rastvor ili suspenziju u vodenoj ili nevodenoj tečnosti. Primeri ekscipijenasa pogodni za tečnu oralnu formulaciju uključuju, ali bez ograničenja na, etanol, propilen glikol, glicerol, polietilenglikole, poloksamere, sorbitol, poli-sorbat, mono i di-gliceride, ciklodekstrin, ulje kokosa, ulje palme, i vodu. Tečni oralni dozni oblici mogu na primer biti pripremljeni rastvaranjem ili suspendovanjem aktivnog sastojka u vodenoj ili nevodenoj tečnosti, ili inkorporiranjem aktivnog sastojka u emulziju ulje-u-vodi ili voda-u-ulju. Dodatni ekscipijensi mogu da se koriste u čvrstim i tečnim oralnim formulacijama, kao što su boje, arome i konzervansi itd.

[0036] Farmaceutske kompozicije za parenteralnu primenu uključuju sterilne vodene i nevodene rastvore, disperzije, suspenzije ili emulzije za injekciju ili infuziju, koncentrate za injekcije ili infuziju kao i sterilne praškove koji bi trebalo da se rekonstituišu u sterilnim rastvorima ili disperzijama za injekciju ili infuziju pre upotrebe. Primeri ekscipijenasa pogodni za parenteralnu formulaciju uključuju, ali bez ograničenja vodu, kokosovo ulje, palmino ulje i rastvore ciklodekstrina. Vodene formulacije bi trebalo da budu pogodno puferisane ukoliko je potrebno i trebalo bi ih učiniti izotoničnim sa dovoljnom količinom slanog rastvora ili glukoze.

[0037] Druge vrste farmaceutskih kompozicija uključuju supozitorije, sredstva za udisanje, kremove, gelove, dermalne flastere, implante i formulacije za bukalnu ili sublingvalnu primenu.

[0038] Kada je predviđena istovremena primena aidalopirdina i AChE!, kompozicija koja sadrži i idalopirdin i AChEI može biti naročito pogodna. Alternativno, idalopirdin i AChEI mogu biti primenjeni odvojeno u obliku pogodnih kompozicija. Kompozicije mogu biti pripremljene kako je ovde prethodno opisano. U jednom načinu ostvarivanja pronalaska, odvojeni jedinični oblici idalopirdina i AChEI se primenjuju istovremeno npr. oba jedinjenja se primenjuju sa regularnim intervalima jednom dnevno ili ujutru ili uveče. U drugom načinu ostvarivanja, odvojeni jedinični oblici idalopirdina i AChEI se primenjuju nezavisno npr. idalopirdin se primenjuje sa regularnim intervalima jednom dnevno ujutru i AChEI sa regularnim intervalima jednom dnevno uveče ili obrnuto. Ovo otkrivanje takođe obuhvata komplet koji obuhvata pojedinačne jedinične dozne oblike koji sadrže idalopirdin i pojedinačne dozne oblike koji sadrže AChEl, pri čemu su svi spakovani u istoj ambalaži ili pakovanju, npr. blister pakovanju.

[0039] Farmaceutske kompozicije i kompleti prema ovom pronalasku poželjno obuhvataju idalopirdin i AChEI u terapijski efektivnim količinama. Dnevna doza idalopirdina je poželjno od 10 do 200 mg, kao što je od 10 mg do 120 mg, kao što je od 10 mg do 100 mg, kao što je od 30 mg do 90 mg, kao što je od 30 mg do 60 mg. Dnevna doza donepezila je poželjno od 1 mg do 30 mg, kao što je od 5 mg do 23 mg, kao što je 10 mg. Dnevna doza rivastigmina je poželjno od 1 mg do 20 mg. Dnevna doza galantamina je poželjno od 4 mg do 24 mg, kao što je od 8 mg do 24 mg, kao što je 8 mg, 12 mg, 16 mg, 20 mg ili 24 mg.

Načini ostvarivanja prema ovom pronalasku

[0040] U nastavku su otkriveni načini ostvarivanja pronalaska. Prvi način ostvarivanja je označen sa E1, drugi način ostvarivanja je označen sa E2 i tako dalje.

[0041] E1. Idalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabrani iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti, pri čemu se lečenje Parkinsonove bolesti sastoji od smanjenja padova kod pacijenta sa Parkinsonovom bolešću.

[0042] E2. Idalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine

donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema načinu ostvarivanja 1, pri čemu je dnevna doza idalopirdin od 10 mg do 100 mg.

[0043] E3. Idalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine

donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema načinu ostvarivanja 1, pri čemu je dnevna doza idalopirdin od 30 mg do 60 mg.

[0044] E4. Ldalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine

donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema bilo kom od načina ostvarivanja 1-3, pri čemu inhibitor acetilholinesteraze je donepezil.

[0045] E5. Ldalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine

donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema bilo kom od načina ostvarivanja 1-3, pri čemu inhibitor acetilholinesteraze is rivastigmin.

[0046] E6. Idalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i donepezil za upotrebu u lečenju prema načinu ostvarivanja 4, pri čemu je doza donepezila od 1 do 30 mg.

[0047] E7. Idalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i donepezil za upotrebu u lečenju prema načinu ostvarivanja 4, pri čemu je doza donepezila od 5 do 23 mg.

[0048] E8. Idalopirdin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema načinu ostvarivanja 5, pri čemu je doza rivastigmina od 1 do 20 mg.

[0049] Upotreba pojmova "neki" i "jedan" i "taj" i slične reference u kontekstu opisa pronalaska bi trebalo da se tumače tako da obuhvataju i jedninu i množinu, osim ukoliko ovde nije drugačije naznačeno ili jasno kontraindikovano kontekstom. Na primer, fraza "jedinjenje" bi trebalo da se odnosi na razna "jedinjenja" pronalaska ili naročito opisanog aspekta, osim ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0050] Ovde dat opis bilo kog aspekta ili aspekta pronalaska upotrebom pojmova kao što su "koji obuhvata", "koji ima," "koji uključuje," ili "koji sadrži" uz pozivanje na element ili elemente je predviđen da obezbedi potporu za sličan aspekt ili aspekt pronalaska koji se "sastoji od", "suštinski se sastoji od", ili "suštinski obuhvata" taj određeni element ili elemente, osim ukoliko nije drugačije navedeno ili jasno kontraindikovano kontekstom (npr., ovde opisana kompozicija koja obuhvata određeni element bi trebalo da se shvata takođe kao opis kompozicije koja se sastoji od tog elementa, osim ukoliko nije naznačeno drugačije ili jasno kontraindikovano kontekstom).

Reference

[0051]

1. Langston JW. The Parkinson's complex: Parkinsonism is just the tip of the iceberg. Ann Neurol 2006;59(4):591-596.

2. Balash Y, Peretz C, Leibovich G, Herman T, Hausdorff JM, Giladi N. Falls in outpatients with Parkinson's disease: frequency, impact and identifying factors. J Neurol 2005;252(11):1310-1315. 3. Wood BH. Incidence and prediction of falls in Parkinson's disease: a prospective multidisciplinary study. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry 2002;72(6):721-725.

4. Tinetti ME, Speechley M, Ginter SF. Risk factors for falls among elderly persons living in the community. N Engl J Med 1988;319(26):1701-1707.

5. Baker SP, Harvey AH. Fall injuries in the elderly. Clin Geriatr Med 1985;1(3):501-512.

6. Dellinger AM, Stevens JA. The injury problem among older adults: mortality, morbidity and costs. J Safety Res 2006;37(5):519-522.

7. Cameron ID, Gillespie LD, Robertson MC, et al. Interventions for preventing falls in older people in care facilities and hospitals. Cochrane Database Syst Rev 2012;12:CD005465.

8. Gillespie LD, Robertson MC, Gillespie WJ, et al. Interventions for preventing falls in older people living in the community. Cochrane Database Syst Rev 2012;9:CD007146.

9. Shen X, Wong-Yu IS, Mak MK. Effects of exercise on falls, balance, and gait ability in Parkinson's disease: A aeta-analysis. Neurorehabil Neural Repair 2015.

10. Chung KA, Lobb BM, Nutt JG, Horak FB. Effects of a central cholinesterase inhibitor on reducing falls in Parkinson disease. Neurology 2010;75(14):1263-1269.

11. Henderson EJ, Lord SR, Brodie MA, et al. Rivastigmine for gait stability in patients with Parkinson's disease (ReSPonD): a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 2 trial. Lancet Neurol 2016 [Epub ahrad of print].

12. van der Marck MA, Klok MP, Okun MS, et al. Consensus-based clinical practice recommendations for the examination and management of falls in patients with Parkinson's disease. Parkinsonism Relat Disord 2014;20(4):360-369.

13. Montero-Odasso M, Verghese J, Beauchet O, Hausdorff JM. Gait and cognition: a complementary approach to understanding brain function and the risk of falling. J Am Geriatr Soc 2012;60(11):2127-2136.

14. Ensrud KE, Blackwell TL, Mangione CM, et al. Central nervous system-active medications and risk for falls in older women. J Am Geriatr Soc 2002;50(10):1629-1637.

15. Allcock LM, Rowan EN, Steen IN, Wesnes K, Kenny RA, Burn DJ. Impaired attention predicts falling in Parkinson's disease. Parkinsonism Relat Disord 2009;15(2):110-115.

16. LaPointe LL, Stierwalt JAG, Maitland CG. Talking while walking: Cognitive loading and injurious falls in Parkinson's disease. International Journal of Speech-Language Pathology 2010;12(5):455-459.

17. Theill N, Martin M, Schumacher V, Bridenbaugh SA, Kressig RW. Istovremeneously measuring gait and cognitive performance in cognitively healthy and cognitively impaired older adults: the Basel motor-cognition dual-task paradigm. J Am Geriatr Soc 2011;59(6):1012-1018.

18. Brown LA, Shumway-Cook A, Woollacott MH. Attentional demands and postural recovery: the effects of aging. J Gerontol A Biol Sci Med Sci 1999;54(4):M165-171.

19. Woollacott M, Shumway-Cook A. Attention and the control of posture and gait: a review of an emerging area of research. Gait Posture 2002;16(1):1-14.

20. Hausdorff JM, Doniger GM, Springer S, Yogev G, Simon ES, Giladi N. A common cognitive profile in elderly fallers and in patients with Parkinson's disease: the prominence of impaired executive function and attention. Exp Aging Res 2006;32(4):411-429.

21. Yogev-Seligmann G, Hausdorff JM, Giladi N. The role of executive function and attention in gait. Mov Disord 2008;23(3):329-342.

22. Amboni M, Barone P, Hausdorff JM. Cognitive contributions to gait and falls: evidence and implications. Mov Disord 2013;28(11):1520-1533.

23. Hasselmo ME, Sarter M. Modes and models of forebrain cholinergic neuromodulation of cognition. Neuropsychopharmacology 2011;36(1):52-73.

24. Gritton HJ, Howe WM, Mallory CS, Hetrick VL, Berke JD, Sarter M. Cortical cholinergic signaling controls the detection of cues. Proc Natl Acad Sci USA 2016;113(8):E1089-1097.

25. Bohnen Nl, Frey KA, Studenski S, et al. Gait speed in Parkinson disease correlates with cholinergic degeneration. Neurology 2013;81(18):1611-1616.

26. Bohnen Nl, Albin RL. Cholinergic denervation occurs early in Parkinson disease. Neurology 2009;73(4):256-257.

27. Bohnen Nl, Frey KA, Studenski S, et al. Extra-nigral pathological conditions are common in Parkinson's disease with freezing of gait: an in vivo positron emission tomography study. Mov Disord 2014;29(9):1118-1124.

28. Bohnen Nl, Müller MLTM, Koeppe RA, et al. History of falls in Parkinson disease is associated with reduced cholinergic activity. Neurology 2009;73(20):1670-1676.

29. Yarnall A, Rochester L, Burn DJ. The interplay of cholinergic function, attention, and falls in Parkinson's disease. Mov Disord 2011;26(14):2496-2503.

30. Bohnen Nl, Albin RL. The Cholinergic System and Parkinson Disease. Behav Brain Res.

2011;221(2):564-573.

31. Kucinski A, de Jong I, Sarter M. Reduing falls in Parkinson's disease: Interactions between donepezil and the 5-HT6 receptor antagonist idalopirdine on falls in a rat model of impaired cognitive control of complex movements. doi:10.1111/ejn.13354

32. Kucinski, A. et al. Modelling fall propensity in Parkinson's disease: Deficits in the attentional control of complex movements in rats with cortical-cholinergic and striatal-dopaminergic deafferentation. J Neurosci, 2013; 33, 16522-16539

Primeri

Primer 1 Smanjenje padova kod DL pacova tretiranih donepezilom i idalopirdinom

Materijali i postupci

Subjekti

[0052] Odrasli mužjaci i ženke Sprague Dawley pacova (Harlan; N=70; 35 mužjaka i 35 ženki) starosti između 3 i 6 meseci su pojedinačno čuvani u providnim standardnim kavezima (27.70 cm × 20.30 cm) u okruženju kontrolisane temperature i vlažnosti (23°C, 45%). Kroz ovaj eksperiment mužjaci pacova su bili teži od ženki (F(1,69)=460.29, P<0.001; mužjaci: 359.86+4.27 g ženke: 249.24+2.48 g), ali se mase nisu razlikovale po eksperimentalnim grupama (glavni efekat grupe i pola x grupa: oba F<0.29, oba P>0.88). Životinje su održavane po rasporedu 12:12 sati svetlo/mrak (svetla u 8:00 AM). Hrana (Rodent Chow; Harlan Teklad) im bila dostupna ad libitum. Pristup vodi je postepeno ograničavana tokom perioda od 7 dana (12, 8, 5, 3, 1, 0.5, 0.25 sati pristupa vodi dnevno) u nedelji ispitivanja ponašanja pre i posle hirurške intervencije. Tokom ispitivanja, voda je bila obezbeđena kao nagrada za tačne reakcije tokom izvođenja SAT-a i nakon obilaska snopa na MCMCT (videti u nastavku). Pacovima je takođe obezbeđena voda ad libitum tokom 15 min nakon izvođenja SAT-a svakog dana.

Vremenski okvir eksperimenata

[0053] Životinje su u početku bile obučavane na SAT (-2 meseca dnevne obuke; -9:00-11:00 AM). Po dostizanju finalne faze obuke životinje su ostale u ovoj fazi tokom 14 uzastopnih dana. Tokom finalnih 6 dana obuke, pacovi su takođe obučavani na MCMCT tokom popodneva (-2:00-4:00 PM). Prethodni eksperimenti su pokazali da na izvođenje na bilo kom zadatku nije uticalo kada su pacovi obučavani na oba zadatka istog dana. Dodatno, pošto se prethodno pokazalo da svakodnevni ritam pacova uključuje svakodnevnu SAT praksu, čime se obezbeđuje robustan svakodnevni fenotip, sva ispitivanja ponašanja su se verovatno javila tokom aktivne faze životinja tokom dana.

[0054] Nakon obuke pre hirurške intervencije, životinje su bile podvrgnute hirurškim intervencijama sterotaksične lezije nakon čega je usledio oporavak od 4 nedelje. Tokom finalne nedelje oporavka životinjama je postepeno ograničavana voda. Efekti leka su zatim ocenjeni tokom 12 uzastopnih dana SAT i MCMT ciklusa (videti tabelu 1 za skup MCMCT uslova ispitivanja):

[0055] Injekcije leka ili vehikuluma se primenjuju 30 minuta pre izvođenja SAT-a (-9:30 injekcije, ispitivanje SAT, 10:00-10:45 prepodne) i popodne pre MCMCT ispitivanja (-3:30-6:00, posle podne). Za cikluse MCMCT, pacovi su pojedinačno ubrizgavani tako da su ispitivanja počela tačno nakon 30 minuta posle injekcije za svaku životinju.

Lezije

[0056] Od 70 pacova, 56 (28 ženki i 28 mužjaka) su primali dvostruke strijatalno-dopaminergičke, kortikalholinergičke sistemske lezije (DL) i nasumično su raspoređeni u 4 stanja lečenja posle hirurških intervencija (n=14/grupa, 7/pol).14 pacova (7/pol) su primali lažne lezije.6-OHDA je isporučen bilaterlano u dopaminske terminal u dorzalnom striatiumu (Sigma-Aldrich; 6.0 µg/2 µL/infuzija, bolus; rastvoreno u 0.9% NaCl sa 0.1% askorbinskom kiselinom; dva infuziona mesta po hemisferi: AP 1.2 i 0.2 mm; ML ±2.5 i ±3.0 mm u odnosu na temu; DV -4.8 i -5.0 mm sa lobanje). Desipramin hidrohlorid (10 mg/kg; i.p.; Sigma-Aldrich) je primenjen kod pacova koji su primali 6-OHDA infuzije 30 min pre hirurških intervencija radi zaštite noradrenergičkih neurona<4>. Bazalni holinergički neuroni koji se nalaze u bazalnom jezgru i bezimenoj supstanci su ciljani imunotoksinom 192 IgG-saporinom (Advanced Targeting Systems) kod CSF infuziranih bilateralno (120 ng/µL; 0.5 µL/hemisfera; AP -0.8; ML ± 2.9; DV -7.8). Lažni pacovi su primali jednake zapremine od 0.9% NaCl sa 0.1% askorbinske kiseline (striatum) i aCSF (bazalni prednji mozak) bez neurotoksina.

Mičigenski kompleksni motorni kontrolni zadatak (MCMCT)

[0057] Mere izvođenja kompleksnih merenja uključujući sklonost ka padu su ocenjene pomoću MCMCT (za detalje i ilustracije videti Kucinski, A. et al (2013) Modelling fall propensity in Parkinson’s disease: Deficits in the attentional control of complex movements in rats with cortical-cholinergic and striataldopaminergic deafferentation. J Neurosci, 33, 16522-16539). Ovaj uređaj za obilazak snopa je napravljen da procenjuje mogućnost pacova da izvedu pokrete koji zahtevaju pažnju i da ispravlja greške prilikom prelaženja uske površine šipke u obliku kvadrata (2.54 cm2). Krajevi snopa (dužine 2.0 m) su držani u šupljinama koje su omogućavale šipki da ga obrće zupčasti motor (10 O/M) spojen sa jednim krajem elementa snopa. Obilazak šipke, naročito kada se obrće, je pouzdano generisao padove i druga oštećenja pokreta kod pacova sa dvostrukim lezijama strijatalnog dopaminergičkih i kortikalnih holinergičkih ulaza. Površina ravne daske (širine 13.3 cm) je takođe korišćena za ocenu kapaciteta osnovnog motora i za privikavanje na uređaj. Dve identične platforme (oblast od 23.0 × 31.5 cm) koje se nalaze na suprotnim krajevima snopa su okružene zidovima koji mogu da se uvlače (visine 27.0 cm) kako bi se obrazovale strukture krajnje kutije. Zidovi se podižu i spuštaju ručno i pričvršćuju se u položaju stegom koja se kreće u vertikalnom prorezu u nosećoj strukturi ispod platforme. Zidovi naspram snopa su imali otvore (širine 9.0 cm) kako bi pacovima bilo omogućeno da ulaze i napuštaju krajnje kutije. Bakarne šolje za vodu (prečnika 2.7 cm, dubine 3 cm) su bile ugrađene u podovima krajnjih kutija i pacovima je obezbeđeno -150 µL vode nakon svakog obilaska. Ove nagrade su bile predviđene kao podsticaj za samostalno započete obilaske a samim tim i ograničeno rukovanje od strane eksperimentatora tokom ispitivanja.

[0058] Na početku ispitivanja, pacovi su bili smešteni na šipku ili dasku -10 cm od krajnje kutije i omogućene su im nagrade da uđu u kutiju i piju vodu. Kada su bili unutar kutije tokom prvog ispitivanja, i tokom naknadnih ispitivanja, pacovima je dato ~45 s da piju vodu i da istražuju. Pacovi su mogli da napuste krajnje kutije i da obiđu na suprotnu stranu snopa u bilo koje vreme. Ukoliko posle 45 s pacovi nisu inicirali obilazak, zidovi su se spuštali kao znak da krenu sa obilaskom. Većina pacova je samostalno započela obilazak kada su zidovi spušteni, međutim, ukoliko nisu, pacove su eksperimentatori pomerali na dasku ili šipku. Kada su se dešavali padova, životinje su padale u deo bezbednosne mreže (0.7 × 0.2 m) badmintona (generičke) koja se nalazi 20 cm ispod elementa snopa. Okvir mreže je takođe služio kao tačka za montiranje raznih kamera, ogledala, i elemenata distraktora.

[0059] Padovi, proklizavanja, i vreme obilaska su ocenjeni kao što je opisano u Kucinski, A. et al (2013) Modelling fall propensity in Parkinson’s disease: Deficits in the attentional control of complex movements in rats with cortical-cholinergic and striatal-dopaminergic deafferentation. J Neurosci, 33, 16522-16539). Pad je ocenjivan u sledećim slučajevima: kada je proklizavanje/pogrešni koraci uzrokovali da se pacov zaustavi prilikom kretanja napred i izgubio uspravno držanje što je dovelo do udaranja životinje sa donje strane o površinu šipke, kada je pacov u potpunosti pao sa šipke na mrežu ispod šipke ili visio sa šipke držeći se šapama, kada je pacov prestao sa kretanjem napred i okačio se o šipku dok se obrtala (samim tim se obrtala sa njim naopačke), ili kada je pacov prestao da se kreće napred i seo upravno na šipku duže od 2 s pri čemu je pokušavao ali nije uspevao da nastavi kretanje napred.

Proklizavanje je ocenjeno kada je bilo koja od pacovskih šapa izgubila kontakt sa površinom šipke i nastavila se ispod donje horizontalne granice šipke. Vreme obilaska je definisano kao kašnjenje u obilasku čitavog rastojanja od snopa. Tokom ispitivanja u kojima je došlo do pada, proklizavanja i vreme obilaska proporcionalno su procenjeni množenjem odnosa rastojanja punog obilaska i rastojanja gde su zadnje noge izgubile kontakt sa šipkom tokom pada.

[0060] Dva distraktora su predstavljena tokom obilazaka. Prvi, pasivni distraktor okvira vrata, koji obuhvata površinu 46.0 × 39.4 cm sa izrezom u obliku vrata od 20 cm × 10 cm napravljenim od jezgra pene, je inkorporisan u raspored MCMCT ispitivanja. Distraktor je postavljen u srednju tačku duž snopa (oznaka 100 cm) sa bočnim stupcima od 3.5 cm od površine šipke na obe strane i gornje granice izreza okvira vrata od 11 cm iznad površine ravnog šipke. Prethodno se došlo do zaključka da je ovaj distraktor uzrokovao prekide kretanja kao što su zamrzavanje pokreta i padove, samim tim oblikovanje efekata takvog distraktora kod pacijenata sa PD. Drugo, životinje su ispitivane sa zadatkom aktivnog distraktora u kojem je nagrada u vidu vode (3 kapi vode; -150 µL) postavljena na platformi (prečnika 4.9 cm) tokom obilazaka. Platforma je takođe postavljena kod oznake 100 cm, sa 2-3 cm koji razdvajaju šipku i platformu.

[0061] Pacovi su prvo bili aklimatizovani na zadatak u 4 ispitivanja oblikovanja (dani ispitivanja 8 i 9). U ovim ispitivanjima pacovi su smešteni direktno na šipku u mestu (koja se ne obrće) blizu platforme (približno na sredini snopa) i omogućeno im je da piju vodu sa platforme. Nakon ispitivanja oblikovanja, pacovi su podvrgnuti 4 probna ispitivanja u kojima su pacovi izvodili obilaske oko šipke koja se obrće bez pomoći (naizmenično) sa postavljenom vodom u vidu nagrada. Druga dva dana (10 i 12), pacovi su izvodili 10 test ciklusa dnevno. Pored padova, računat je broj osvojenih nagrada u vidu vode, definisanih kao lizanje/pijanje vode sa platforme tokom ≥1 sec. Sva ispitivanja su snimljena pomoću sistema 4 bulet kamere (KT&C; model KPCS190SH crno/bela bulet kamera sa 1/3" SONY Super HAD CCD) sa rotabilnim bazama koje su ručnim stegama pričvršćene na spoljašnji noseći okvir spoljašnje strane uređaja. Mere izvođenja su analizirane pomoću reprodukcije video snimka eksperimentatora koji nisu znali za status lezije ni za režim lečenja pacova.

Zadatak kontinuirane pažnje (SAT)

Uređaj.

[0062] Obuka i ispitivanje su izvedeni pomoću 12 operantnih komora (MED Associates Inc.) smeštenih unutar pojedinačnih kabina za prigušivanje zvuka. Svaka komora je bila opremljena sa dve poluge koje mogu da se uvlače, belim svetlom centralne ploče (2.8 W), i dispenzerom za vodu koji se nalazi na istom zidu kao i svetla sa ploče. Dispenzer za vodu je sposoban da daje 45 µL vode po isporuci. Predstavljanje signala, rad poluge, isporuka pojačanja, i sakupljanje podataka se kontrolišu Pentium PC i Med-PC za Windows softver (verzija 4.1.3; MED Associates).

Sticanje.

[0063] Pacovi koji su bili lišeni vode su u početku obučavani da pritisnu polugu za nagradu u vidu vode prema modifikovanom rasporedu fiksnog odnosa -1 (FR1) za pojačavanje vode. Tokom ove faze obuke, pritisak na bilo koju polugu je dovodio do isporuke vode. Obično, životinje ne ispoljavaju bočnu pristrasnost u smislu koja je poluga pritisnuta; međutim, ako je jedna pologa pritisnuta 5 puta za redom, FR1 raspored je modifikovan kako bi se od životinje zahtevalo pritiskanje suprotne poluge pre mogućnosti dobijanja sledeće nagrade. Posle 3 uzastopna dana sa 120 svakodnevnih pojačanih pritiskanja poluge, pacovi su počeli sa obukom kako bi se napravila razlika između signalnog (1 s osvetljenja svetla sa centralne ploče) i nesignalnog (bez osvetljenja) događaja. Dve sekunde posle signalnog ili nesignalnog događaja, obe poluge su produžene u operantnu komoru i ostale su još 4 s do pritiska na polugu. Ukoliko nije bilo pritiskanja posle 4 s, poluge su se povlačile i došlo je do propusta. Neposredno nakon reakcija (tačnih ili netačnih), obe poluge su povučene, a varijabilni interval tokom ispitivanja (ITI; 12±3 s) je ponovo podešen. Tokom signalnih ispitivanja, pritiskanje leve poluge je pojačano i označeno sa "pogodak," dok pritiskanje desne poluge nije pojačano i označeno je sa "promašaj." Tokom nesignalnih ispitivanja, pritiskanje desne poluge je pojačana i označeno sa "ispravno odbijanje," dok pritiskanje leve poluge nije pojačano i označeno je sa "lažni alarm."

[0064] Životinje su primale nagrade u vidu vode samo za tačne reakcije (45 µL za svaki pogodak i ispravno odbijanje), dok netačne reakcije (promašaji i lažni alarmi) nisu nagrađivane. Da bi se eliminisala mogućnost pristrasnosti prilikom izbora, polovina životinja je obučavana po suprotnom modelu. Signalni i nesignalni događaji su predstavljeni po lažno nasumičnom redosledu, 81 ispitivanje za svaki od njih (ukupno 162 ispitivanja) po ciklusu. Tokom ove faze obuke, netačne reakcije su praćene korekcionim ispitivanjima u kojima je prethodno ispitivanje ponovljeno. Posle tri uzastopne netačne reakcije tokom korekcionih ispitivanja, životinja je bila podvrgnuta prinudnom ispitivanju u kojem je poluga produžena za 90 s ili dok životinja ne da neku reakciju. Ako prinudno ispitivanje izbora predstavlja signalno ispitivanje, signalno svetlo je ostalo osvetljeno sve dok je poluga produžena. Kućno svetlo nije osvetljavalo tokom faze obuke. Životinje su napredovale do naknadne faze oblikovanja ukoliko su tačno reagovale na ≥70% i signalnog i nesignalnog ispitivanja tokom 3 uzastopna dana.

[0065] Tokom treće faze oblikovanja, trajanja višestrukih signala (500, 50, i 25 ms) su uvedena, a ITI je smanjen na 9±3 s. Korekcija i ispitivanja prinudnog izbora su takođe eliminisana. Vrsta ispitivanja i trajanje signala su lažno nasumično određena za svako ispitivanje. Dužina trajanja ciklusa je podešena na 40 minuta. Nakon najmanje 3 d stabilnog učinka, definisanog sa najmanje 70% pogodaka do 500 ms signala, 70% ispravnih odbijanja, i ≤30% propusta, životinje su počele sa obukom u konačnoj verziji zadatka. Finalan verzija je bila identična sa prethodnom fazom obuke osim što je svetlo u zatvorenom radilo sve vreme trajanja ciklusa. Dodavanje osvetljenog svetla u zatvorenom predstavlja ključni element ispitivanja kontinuirane pažnje budući da se od životinje zahteva da obuzda svoje ponašanje i da se fokusira na svetlo centralnog panela tokom izvođenja zadatka. Nakon postizanja finalne faze obuke pre hirurških intervencija lezija, životinje su ostale u ovoj fazi tokom 14 uzastopnih dana, i rezultati od 5 uzastopnih dana učinka su bili prosečni da bi se odredili rezultati pre hirurških intervencija za svaku životinju. Tokom ispitivanja efekata leka nakon hirurških intervencija, pacovi su ispitivani samo u finalnoj fazi tokom 12 uzastopnih dana, a rezultati od 5 finalnih dana su još jednom bili u proseku za finalne analize.

Merenja izvođenja SAT-a.

[0066] Sledeće mere u ponašanju su prijavljene tokom svakog SAT ciklusa: pogoci, promašaji, lažni alarmi, korektna odbijanja, i propusti. Promašaji i lažni alarmi predstavljaju suprotno od pogodaka i tačnih odbijanja, tim redom. Izračunat je relativan broj pogodaka (pogoci/pogoci+promašaji) za svaku dužinu signala kao i relativan broj tačnih odbijanja (tačna odbijanja/tačna odbijanja+lažni alarmi). Pored toga, celokupna mera sposobnosti pažnje, SAT rezultat, koji integriše i relativan broj pogodaka (h) i relativan broj lažnih alarma (f), je takođe određen pri svakom trajanju signala. SAT rezultat je izračunat pomoću sledeće formule: (h-f)/[2(h+f)-(h+f)<2>]. Samim tim, SAT rezultati se ne mešaju greškama propusta. SAT rezultati su bili u opsegu od 1.0 do -1.0, pri čemu 1.0 znači da su svi odgovori bili pogoci i tačna odbijanja, 0 znači nemogućnost pravljenja razlike između signalnih i nesignalnih događaja, a -1.0 znači da su svi odgovori bili promašaji i lažni alarmi. Greške izostanka su prijavljene odvojeno.

Histologija i ocene lezija

[0067] Nakon završetka ispitivanja lekova posle hirurške intervencije, pacovi su bili duboko anestezirani i transkardijalno perfuzirani pri brzini od 50 mL/min sa 0.1M fosfatom puferisanim rastvorom (PBS) tokom 2 minuta nakon čega je usledio 4% paraformaldehid u 0.4M Na-fosfatnom rastvoru i 15% pikrinska kiselina (pH 7.4) tokom 9 minuta. Mozgovi su brzo uklonjeni i naknadno fiksirani tokom 2-6 h na 4°C a zatim isprani u 0.1M PBS i čuvani u 30% rastvoru saharoze i ostavljeni da potonu. Koronalne sekcije (debljine 40 µM) su slajsovane pomoću mikrotoma za zamrzavanje (CM 2000R; Leica) i čuvane u antifriz rastvoru. Tirozin hidroksilaza (TH) i ChAT imunološke mrlje su izvedene kao što je opisano u literaturi.

[0068] TH-imunološki umrljani delovi su slikani na 4x uvećanju pomoću Leica DM400B digitalnog mikroskopa. SPOT 5.1 softver (Spot Imaging Solutions) je upotrebljen da bi se uzele slike. Dva dela (AP 1.2 i 0.2 mm) su korišćena za stvaranje pojedinačnog rezultata koji prikazuje veličinu i stepen bilateralnih lezija.6-OHDA infuzije su bile usmerena na dorzalni striatum centriran između medijalnih i lateralnih granica. Veličina lezije je ocenjena na osnovu veličine oblasti TH gubitka primećenog u dorzalnom striatiumu, uz rezultat od 10 koji je odgovarao 100% dorzalnom striatiumu koji je ispoljavao TH gubitak, rezultat od 5 do 50%, i rezultat od 1 do 10%. Opseg TH klirensa (stepen TH gubitka) unutar oblasti veličine lezije je takođe određen na osnovu skale od 1-10, sa ocenom 10 koja odgovara potpunoj depleciji TH unutar prostora lezije, i nižim vrednostima koje odgovaraju preostalom procentu TH (primer: 5 je 50% TH gubitka, 2 je 20% TH gubitka). Rezultati za veličinu lezije i opseg su, iz oba dela i hemisfera, bili u proseku da bi se dobio rezultat pojedinačne lezije za svakog pacova.

[0069] Da bi se ocenio opseg gubitaka holinergičkih ćelija, polukvantitativne procene broja holinergičkih neurona su generisane kako je to prethodno urađeno. Fotografije ChAT-umrljanog bazalnog prednjeg mozga te dve hemisfere su uzete pri uvećanju od 5x pomoću Leica DM400B digitalnog mikroskopa. Procene broja ćelija su uzete iz oblasti bazalnog jezgra Meynert-a (nbM) i substantia innominata (SI) unutar regiona od 680 µm × 680 µm, i iz horizontalnog nukleusa dijagonalne trake/preoptičke oblasti unutar regiona 1000 µm × 1300 µm. Funkcija "brojanja" Photoshop CS6 je iskorišćena da bi se kvantifikovao broj ACh ćelija. Ova karakteristika takođe označava svaki neuron koji je već prebrojan za sprečavanje dvostrukih brojanja i omogućava pregled drugim brojačem. Ove polukvantitativne procene iz te dve hemisfere u proseku daju jednu procenu po pacovu. Da bi se odredili odnosi između stepena lezija i mera izvođenja i kako bi se potvrdile slične lezije među DL grupama lezija, pojedinačno kompozitno jezgro, koje pokazuje ozbiljnost te dve sistemske lezije, je napravljeno za svakog pacova. Za ovu svrhu, gubitak holinergičkih ćelija dve bazalne prednje moždane oblasti po hemisferi je ocenjen od 5 do 1 (5: >90% gubitak ćelija u odnosu na kontrolu; 4: >80%; 3: >70%; 2: >60%; 1: >30-50% gubitka). Ovaj rezultat pomnožen sa 2 je bio u proseku sa rezultatom TH lezije prethodno opisane za pravljenje pojedinačnog kompozitnog rezultata (od 10) po DL pacovu.

Primena leka i gubici

[0070] Donepezil i idalopirdin su rastvoreni u rastvoru vehikuluma 5% 2-hidroksipropil-betaciklodekstrina. Pacovi su podeljeni u sledeće grupe za primenu leka (14 po grupi, 7 po polu): sa lažnim lezijama i kojima se daje vehikulum (SH/VEH), DL i vehikulum (DL/VEH), DL i donepezil (DL/DON), DL i idalopirdin (DL/IDL), i DL i idalopirdin plus donepezil (DL/DON+IDL). Rastvori su pripremljeni veče pre primene i menjani su svakih 6 dana. DON i IDL su rastvoreni u istom rastvoru zbog kombinovanog lečenja. Pacovima je ubrizgano s.c. (2.0 mL/kg) na četiri naizmenična injekciona mesta (levi vrat, desni bok, desni vrat, levi bok; ponovljen redosled). Pacovima je ubrizgavano 30 minuta pre izvođenja SAT ujutru i 30 minuta pre izvođenja popodnevnog MCMCT.

[0071] Doze lekova su izabrane na osnovu podataka iz pilot eksperimenta koji je ocenjivao, kod 4 pojedinačna DL pacova, efekte samog DON-a, u dozi od 0.1, 0.3, i 1.0 mg/kg, ili koji se davao u kombinaciji sa IDL-om (5.0 mg/kg). Rezultati su ukazivali da učinak MCMCT kod DL pacova može da ima koristi najjasnije od kombinacije lečenja koja uključuje srednju dozu DON-a.

Statistička analiza

[0072] Mere učinka SAT i MCMCT su poređene među pet grupa, a prvenstveno pomoću ANOVA ponovljenih merenja unutar subjekata kao i pomoću dvosmerne ANOVA-e kada je to bilo primenjivo. Pol je predstavljao faktor u svim analizama. Analiza SAT rezultata i pogodaka je takođe uključivala trajanje signala faktora unutar subjekta (500, 50, i 25 ms). Za MCMCT cikluse na šipci (dani ispitivanja 2-5), vreme obilaska, proklizavanja i padovi su bili ocenjeni pomoću stanja (u mestu, obrtanje suprotno od kretanja kazaljke na satu (cc) ili u smeru kretanja kazaljke na satu (cw),ili obrtanje u naizmeničnim smerovima) kao što je faktor unutar subjekta. Za svako stanje (ili dan), mere učinka su bile prosečne za svaki od 6 ciklusa sa pacovima tog dana i te prosečne vrednosti su korišćene za statističke analize. Tokom dana ispitivanja sa okvirom vrata (6, 7, i 11), padovi uzrokovani distraktorom okvira vrata su poređeni među grupama i polovima. Padovi i nagrade dobijeni tokom stanja aktivnog distraktora su poređeni pomoću dvosmernih ANOVA. Poređenja ponašanja uzrokovanih zamrzavanjem kod okvira vrata i mera drugih učinaka između DL/VEH i DL/DON+IDL pacova su izvedena pomoću dvosmerne ANOVA-e. Dvosmerne ANOVA-e su takođe upotrebljene kako bise uporedili TH/ChAT rezultati kompozitnih lezija između grupa koje su primale lek i polova. Posle značajnih glavnih efekata, post hoc višestruka poređenja su izvedena pomoću ispitivanja najmanje značajne razlike (LSD). Značajne interakcije su usledile posle jednosmernih ANOVA između efekata grupe i drugih faktora na efekte grupe i LSD ispitivanja višestrukih poređenja.

Statističke analize su izvedena pomoću SPSS za Windows (verzija 17.0: SPSS). U slučajevima kršenja pretpostavke sferičnosti, date su Huyhn-Feldt-korigovane F- vrednosti, zajedno sa nekorigovanim stepenima slobode. Alfa je podešena na 0.05. Tačne P vrednosti su prijavljene po prethodnoj preporuci. Varijanse su prijavljene i ilustrovane kao standardna greška srednje vrednosti (SEM). Veličine efekta za izabrane efekte su prijavljene pomoću Koenovog d.

Rezultati

SAT pre hirurške intervencije i izvođenje MCMCT

[0073] Pre hirurške intervencije pacovi su bili podvrgnuti obuci za SAT do postizanja učinka stabilnog kriterijuma i takođe su bili upoznati sa MCMCT.

Smanjena stopa padova DON+IDL kod DL pacova

[0074] Prvog dana MCMCT ispitivanja posle hirurške intervencije (tabela 1) pacovi su obilazili površinu daske. Ova površina retko uzrokuje proklizavanja ili padove i samim tim samo je ocenjeno vreme obilaska. Vreme obilaska se nije razlikovalo među grupama i polovima (glavni efekti i interakcije: svi F<1.46, svi P>0.23; 4.02±0.16 s po obilasku).

[0075] 2., 3., 4., i 5. dana pacovi su obilazili površinu šipke i procenjeno im je vreme obilaska kao i proklizavanja i padovi (6 obilazaka dnevno, ukupno 24 ciklusa).2. dana šipka je stajala u mestu (nije se obrtala) nakon čega je usledilo obrtanje šipke (10 O/M) u poznatom smeru suprotnom od kretanja kazaljke na satu (cc) 3. dana.4. dana, smer šipke je bio obrnut u nepoznatom smeru kretanja kazaljke na satu (cw), a 5. dana smer obrtanja je bio naizmeničan između uzastopnih ispitivanja (cc-cw-cc-cw-cc-cw). Mere učinka su analizirane zbog efekata grupe, pola, i ispitivanog stanja (u mestu šipka, cc, cw, naizmenično) kao što je faktor unutar subjekata.

Padovi.

[0076] Obilazak obrtne šipke je generalno povećalo broj padova kod svih životinja (glavni efekat ispitivanog stanja: F(3,180)=6.48, P<0.001; padovi sa šipke u mestu: 21.67±1.90%, obrtno suprotno od kretanja kazaljke na satu (cc): 32.62±1.90%, u smeru kretanja kazaljke na satu (cw): 30.00±2.34%, naizmenično: 30.00±2.00%; manje padova sa šipke u mestu od nego kod svih drugih stanja; svi P<0.001). U ovim ispitivanjima, glavni efekat grupe na učestalost padova (F(4,60)=2.62, P=0.04) je pokazao da su, u poređenju sa učestalošću padova kod DL/VEH pacova, SH/VEH i DL/DON+IDL pacovi su padali značajno ređe (Koenov d=0.96; za višestruka poređenja videti Fig.1A). Dalje, i nasuprot DL/DON+IDL pacova, sa učestalošću padova koja je statistički slična onoj koja može da se vidi kod SH-VEH pacova, pacovi tretirani samo sa IDL su padali podjednako često kao i netretirani DL pacovi (DL/VEH). Učestalost padova kod DL/DON pacova je imala tendenciju da bude niža nego kod DL/VEH pacova ali efekat nije postizao značaj (P=0.17). Efekti grupe i ispitivano stanje nisu bili u interakciji (F(12,180)=1.00, P=0.45) što znači da je učinak po svim stanjima sa šipkom doprinosio efektu DON+IDL (Fig.1B-D). Efekat pola nije bio prisutan i nije bilo interakcija koje uključuju pol (svi F<1.69, svi P>0.17).

Brzina obilazaka.

Slično efektima na padove, brzina obilaska se razlikovala po grupama

[0077] (F(4,60)=3.31, P=0.02), sa terapijskom grupom koja je padala onoliko često koliko i DL pacovi tretirani vehikulumom, DL/IDL, koji su pokazali najsporije obilaske (SH/VEH: 3.96±0.19 s; DL/VEH:

4.62±0.25 s; DL/DON: 4.48±0.36 s; DL/IDL: 5.48±0.45 s, DL/DON+IDL: 4.58±0.32 s; DL/IDL značajno sporija od svih drugih grupa). Štaviše, mužjaci su generalno sporiji od ženki F(1,60)=13.54, P=0.001; mužjaci: 5.12±0.23 s, ženke: 4.13±0.17 s. Kod bilo kog pola, telesne mase nisu bile u korelaciji sa brzinama obilazaka (oba R2<0.06). Na brzinu obilaska nije uticalo stanje tokom ispitivanja i nije bilo 2- ili 3-smernih interakcija između 3 faktora (svi (F<0.91, p>0.33).

Proklizavanja.

[0078] Obilazak obrtnih šipki generalno je uzrokovalo više proklizavanja u odnosu na šipku u mestu (F(3,180)=37.53, P<0.001; u mestu: 1.02±0.67 proklizavanja; cc: 2.31±0.16; cw: 2.39±0.15; naizmenično: 2.35±0.13). Broj proklizavanja se nije razlikovao među grupama (F(4,60)=2.37, P=0.06), sa trendom koji pokazuje da se za DL/IDL pacove pokazalo da proklizavaju češće od drugih DL pacova (SH/VEH:

1.60+0.11; DL/VEH: 2.04+0.16; DL/DON: 2.04+0.14; DL/IDL: 2.51+0.38, DL/DON+IDL: 1.92+0.16). Mužjaci su proklizavali češće od ženki (F(1,60)=5.64, P=0.02; mužjaci: 2.24±0.17; ženke: 1.79±0.10) ali opet nije bilo interakcija između ta tri faktora (svi F<1.01, p>0.44). Proklizavanja kod mužjaka, ali ne i kod ženki su bila u pozitivnoj korelaciji sa njihovim telesnim masama (mužjaci: R2=0.14, P=0.03; ženke: R2=0.08, P=0.10).

Smanjeni padovi povezani sa okvirom vrata kod pacova tretiranih sa DON+IDL

[0079] Kod PD pacijenata koji su već imali sklonost ka zamrzavanju hoda, uska vrata su izuzetno efektna za uzrokovanje zamrzavanja, a samim tim povećanja rizika od padova. Za ovaj efekat se pretpostavlja da predstavlja skretanje ograničenih izvora pažnje od podržavanja kretanja napred do obrade pasivnog distraktora. Distraktor okvira vrata (Fig.2A) je smešten duž šipke 6., 7. i 11. dana.

[0080] Sveukupno, distraktor vrata je više nego utrostručio procenat ispitivanja u kojima su se javljali padovi (F(1,60)=117.10, P<0.001; padovi kroz vrata: 38.34±2.89%, padovi koji nisu kroz vrata:

11.30±1.34%). Glavni efekat grupe (F(4,60)=3.24, P=0.018) i značajna interakcija između vrata x grupe (F(4,60)=3.15, P=0.02) je pokazala da su se padovi uzrokovani okvirom vrata računali za razlike u grupama (Fig.2B). DL pacovi tretirani ili sa VEH, DON ili IDL su iskusili više padova povezanih sa okvirom vrata od SH/VEH pacova. Nasuprot tome, u prisustvu okvira vrata, stope padova kod DL/DON+IDL pacova se nisu razlikovale od onih kod SH/VEH pacova i bile su značajno niže nego stope padova kod DL/IDL pacova (Koenov d=0.74; Fig.2B). Kod svih pacova, stopa padova povezana sa okvirom vrata se smanjivala tokom tri dana ispitivanja (glavni efekat dana: F(1,120)=48.31, P<0.001; dan 1: 64.76±4.42% padovi, 2: 38.10±4.14%, 3: 12.14±2.14; sve interakcije sa drugim faktorima: F<1.34, P>0.23).

[0081] Okvir vrata je uzrokovao gotovo dva puta više padova kod mužjaka nego kod ženki, međutim mužjaci nisu padali više od ženki u odsustvu okvira vrata (pol x stanje: F(1,60)=34.24, P<0.001; procenat padova kroz vrata tokom ispitivanja; ženke: 25.69±3.76%, mužjaci: 50.99±3.22%, t(69)=26.09, P<0.001; padovi koji nisu kroz vrata kod ženki: 13.27±1.81%, mužjaci: 9.32±1.95%, t(69)=2.20, P=0.14). Padovi povezani sa okvirom vrata kod mužjaka nisu bili u korelaciji sa njihovim telesnim masama ili brzinama obilazaka (oba R2<0.03). Međutim, sporije ženke su imale više padova u ovom stanju (R2=0.21, P=0.005). Nije bilo značajnih interakcija između 3 faktora (svi F<1.31, svi P>0.25).

Uzajamne veze u mikro ponašanju

[0082] Da bi se odredile potencijalne uzajamne veze efekta DON+IDL lečenja kod padova povezanih sa okvirom vrata, urađena je analiza mikro ponašanja životinja bazirana na video zapisu tokom obilaska okvira vrata. Izabrani su ciklusi sa okvirom vrata od DL/VEH i DL/DON+IDL mužjaka i ženki pacova iz dana kada su njihove stope padova predstavljale srednju vrednost njihove grupe (6. i 7. dan za ženke, i 11. za mužjake). Generalno je primećeno da su pacovi obe grupe zaustavljali kretanje napred prilikom prilaska okviru vrata (efekti grupa tokom trajanja zamrzavanja: F(1,27)=1.22, P=0.28; DL/VEH: 1.25±0.22 s/zamrzavanje; DL/DON+IDL: 0.93±0.21 s). Dalje, periodi trajanja zamrzavanja pojedinačnih pacova su bili u korelaciji sa njihovim stopama padova (Fig.2C). Zbog toga što su duža zamrzavanja gotovo konzistentno bila povezana sa padovima kod svih pacova, zamrzavanja uzrokovana okvirom vrata su grupisana u duga (≥2 s) nasuprot kratkih zamrzavanja (<2s). Procenat ispitivanja u kojima se javilo dugo zamrzavanje se nije razlikovao među grupama (6 ispitivanja po životinji; F(1,27)=2.59, P=0.12;

26.79±4.95% ispitivanja uključenih u duga zamrzavanja). Pored toga, stope padova povezanih sa dugim zamrzavanjima – kod životinja koje su pokazivale najmanje jedno takvo zamrzavanje (10 DL/VEH i 9 DL/DON+IDL) – se nisu razlikovale među dvema grupama (F(1,18)=0.004, P=0.95; DL/VEH: 62.67±12.62% padova u ciklusima koji su uključivali duga zamrzavanja povezana sa okvirom vrata; DL/DON+IDL:

63.89±13.89%). Međutim, stope padova povezanih sa kratkim zamrzavanjima su bile više kod DL/VEH nego kod DL/DON+IDL pacova (14 pacova po grupi; F(1,27)=5.27, P=0.03, Fig.2D). Samim tim, ove primedbe su značile da lečenje DL pacova sa DON+IDL nije povećalo proporciju ciklusa sa okvirom vrata povezanih sa relativno kratkim zamrzavanjima, ali su DON+IDL-tretirani pacovi bili sposobniji da nastave obilaske nakon kratkih zamrzavanja.

[0083] Kako bi se detaljno opisali potencijalni efekti kombinovanog lečenja sa DON+IDL, izabrani su reprezentativni ciklusi (prva dva ispitivanja o okviru vrata 2. dana kod ženki i 3. dana za mužjake po pacovu) stopa sledećih ponašanja je prebrojana za period od 1 s počevši brzo nakon i tokom kratkih zamrzavanja (0.5-1.5 s perioda zamrzavanja): (1) iznenadni porasti brzine obilaska nakon zamrzavanja; (2) visok i krut položaj repa pri prolasku ispod okvira vrata povezan sa kontrolisanim, uspravnim držanjem i fokusom na napred nasuprot niskog repa koji se vuče i pogrbljenog držanja i fokusom na dole koji je uobičajen za DL pacove; 31 (3) ljuljanje repa radi održavanja ravnoteže nakon proklizavanja povezanih sa okvirom vrata; (4) upotreba prednjih udova da se “pogura” gornji deo tela nazad na šipku posle proklizavanja; (5) aktivna kretanja zadnjih nogu ('hodanje u mestu') tokom zamrzavanja radi održavanja ravnoteže na šipci; i (6) mali 'skokovi' nakon zamrzavanja kako bi se ponovo uspostavio zamah napred kroz okvir vrata. Rezultati znače da je, prvo, rezultat brojanja kompozita koji su u padu svih 6 ponašanja u negativnoj korelaciji sa stopama padova u obe grupe (oba R<2>>0.42, oba P<0.02), što znači da pokreti aktivnog oporavka nakon kratkih zamrzavanja predstavljaju jake prediktore uspešnih ciklusa kroz okvir vrata. Drugo, DL/DON+IDL pacovi su pokazali više primera kategorije ponašanja #2 (iznad) od DL/VEH pacova (X<2>=7.22, P=0.03, DL/VEH: 0.18±0.10 brojanja/ispitivanja, DL/DON+IDL:

0.54±0.11; sve druge kategorije ponašanja: P>0.30; Fig.2E).

Nedostatak efekata lečenja kod padova povezanih sa distraktorom

[0084] Padovi kod starih ljudi i PD pacijenata su u korelaciji sa slabim izvođenjem dvostrukog zadatka. Kako bi se oblikovao uticaj realokacije izvora pažnje za sekundarni zadatak na kontrolu kompleksnog kretanja, pacovima bez vode je ponuđena voda za pristupanje pri obilasku obrtne šipke.

[0085] Sveukupno, 54 od 70 (77.14%) životinja su uzimale vodu (definisano kao lizanje vode tokom najmanje 1 s, bez obzira na padove) u najmanje jednom ispitivanju (13 SH/VEH, 9 DL/VEH, 10 DL/DON, 11 DL/IDL, i 11 DL/DON+IDL; 26 mužjaka i 28 ženki). Glavni efekat grupe je značio da su svi DL pacovi uzimali vodu ređe od SH/VEH pacova (F(4,60)=3.32, P=0.016) iako su višestruka poređenja značila da računanje DL/DON pristupa pacova nije bilo značajno manje od DL/VEH (Fig.3A). Ženke su češće imale pristup vodi od mužjaka (F(1,60)=10.56, P=0.002; ženke: 49.78±6.32%, mužjaci: 26.69±4.36%], međutim efekti pola nisu stupali u interakciju sa grupom (F(4,60)=1.50, P=0.22). U ovom ispitivanju, pristupi vodi i padovi predstavljaju zbunjujuće mere jer kretanje napred kako bi se pristupilo vodi predstavlja veliki rizik od padova. SD/VEH pacovi su uspevali češće da pristupaju vodi bez padanja od DL pacova (F(4,60)=5.84, P<0.001; Fig.3B). Dalje, ženke su uspešno češće pristupale vodi bez padanja u odnosu na mužjake (F(1,60)=10.81, P=0.002; ženke 33.98+5.02% ispitivanja; mužjaci: 16.73+3.36%) ali ovaj efekat nije stupao u interakciju sa grupom (F(1,69)=1.56, P=0.19). Ni kod jednog pola ova mera nije bila u korelaciji sa telesnim masama, brzinom perioda obilaska ili padovima povezanim sa okvirom vrata svi R2<0.1). Samim tim, DL lezije su smanjile uključivanje aktivnog distraktora i povećale su povezane brzine padova, ali terapije lekom nisu imale koristi u učinku kod obilaska šipke u prisustvu aktivnog distraktora.

Nedostatak efekata lečenja na izvođenje SAT-a

[0086] Nakon završetka perioda oporavka nakon hirurške intervencije od četiri nedelje, životinje su vraćene na jutarnji SAT i popodnevno MCMCT ispitivanje, a lečenja lekom su primenjivana 30 minuta pre jutarnjeg kao i popodnevnog ciklusa ispitivanja. DL lezije su oštetile SAT učinak. Međutim, nijedna terapija nije poboljšala učinak.

Primer 2: Smanjenje padova kod DL pacova tretiranih rivastigminom i idalopirdinom

Nacrt studije:

[0087] Dvostruka lezija (DL) ili lažno operisani pacovi su tretirani supkutano (s.c.) ili vehikulumom (10% 2-hidroksipropil-β-ciklodekstranom; 2-HPBCD, u slanom rastvoru), 1 mg/kg rivastigminom, 10 mg/kg idalopirdinom ili kombinacijom te dve terapije tokom 10 uzastopnih dana u zapremini od 5 ml/kg.

Statistička poređenja su urađena sa jednosmernom ANOVA i post hoc Dunnetovim višestrukim testom poređenja sa životinjama tretiranim DL vehikulumom kao kontrolom.

MCMCT: Odstupanja od uređaja iz primera 1:

[0088] Uređaj je bio sličan onom koji je prethodno korišćen (Kucinski et al., 2013). Sastojao se od 3 metra dugačkog (2.54 cm2) šipke kvadratnog oblika ili cik-cak šipke sa dve savijene površine duž šipke, koji nose dva, jedan metar duga,stuba koja nose početne i krajnje platforme. Ove identične platforme su bile 30 cm × 25 cm i svaka se sastojaka od bakarnih šolja za vodu prečnika 3 cm ugrađenih u podu. Platforme su okružene strukturama zidova koji se savijaju koje su visoke 23 cm kada su u potpuno uspravnim položajima. Ovi zidovi bi mogli da se podižu i spuštaju mehanički pomoću 12 VDC električnog motora kojim se daljinski upravlja pregibnom sklopkom, i samim tim je omogućena konverzija iz otvorene platforme u početnu i strukture kutije u krajnju. Na zidu koji je okrenut ka snopu, nalazio se otvor širine 9 cm kako bi pacovima bio omogućen pristup do i od snopa. Šipka je bila napravljena od aluminijumskih cevi omotanih sivom trakom koja se koristila za vuču. Za uslove daske, daska širine 13.3 cm je postavljena direktno na gornji deo šipke i uklopljena je unutar ivica nosećih stubova.12VDC električni motor je upotrebljen za obrtanje šipke, koju kontroliše puls modulatorom.20 cm ispod šipke, bezbednosna mreža je suspendovana za hvatanje pacova tokom padova. Zapisi MCMCT-a su uzeti pomoću 4 kamere bulet Marshall 1080-HD-DI modela CV500 Series (B-30/25P brzina okvira/59.94i) montirane na okvir paralelan sa jednom stranom šipke. Videi su konvertovani na ramu paralelnom sa jednom stranom šipke. Ti video zapisi su konvertovani u pojedinačan uvod pomoću četvorke SDI do HDMI multiviewer (Matrox MicroQuad) i gledani su direktno na PC pomoću Elgato Game Capture HD softvera.

Tabela 2: MCMCT redosled (cc: suprotno od kretanja kazaljke na satu, cw: u smeru kretanja kazaljke na satu, alt: naizmenično cc/cw)

Claims (8)

1. Rezultati: [0089] Rezultati su prikazani na crtežima 4-7, i može se primetiti da je kombinovano lečenje DL pacova idalopirdinom i rivastigminom (DL/Riva+IDL) smanjilo broj padova u poređenju sa netretiranim DL pacovima (DL/Veh). Patentni zahtevi 1. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti, pri čemu se lečenje Parkinsonove bolesti sastoji od smanjenja padova kod pacijenta sa Parkinsonovom bolešću.
2. 2. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema zahtevu 1, pri čemu je dnevna doza idalopirdina od 10 mg do 100 mg
3. 3. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema zahtevu 1, pri čemu je dnevna doza idalopirdina od 30 mg do 60 mg.
4. 4. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema bilo kom od zahteva 1-3, pri čemu inhibitor acetilholinesteraze predstavlja donepezil.
5. 5. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i inhibitor acetilholinesteraze izabran iz grupe koju čine donepezil i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema bilo kom od zahteva 1-3, pri čemu inhibitor acetilholinesteraze predstavlja rivastigmin.
6. 6. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i donepezil za upotrebu u lečenju prema zahtevu 4, pri čemu je doza donepezila od 1 do 30 mg.
7. 7. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i donepezil za upotrebu u lečenju prema zahtevu 4, pri čemu je doza donepezila od 5 do 23 mg.
8. 8. N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoksi) benzilamin (idalopirdin) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i rivastigmin za upotrebu u lečenju prema zahtevu 5, pri čemu je doza rivastigmina od 1 do 20 mg.