RS64182B1

RS64182B1 - Inhibitori kras g12c

Info

Publication number: RS64182B1
Application number: RS20230345A
Authority: RS
Inventors: James F Blake; Laurence E Burgess; Mark Joseph Chicarelli; James Gail Christensen; Adam Cook; Jay Bradford Fell; John P Fischer; Matthew Arnold Marx; Macedonio J Mejia; Pavel Savechenkov; Guy P A Vigers; Christopher Ronald Smith; Martha E Rodriguez; Tony Pisal Tang
Original assignee: Mirati Therapeutics Inc; Array Biopharma Inc
Priority date: 2017-11-15
Filing date: 2018-11-14
Publication date: 2023-05-31
Also published as: WO2020101736A1; TW201938555A; US20230373999A1; PL3710439T3; WO2019099524A1; EP3880208A4; JP2021502993A; US20190144444A1; EP3710439A4; LTC3710439I2; CL2020001271A1; AU2018369759A1; AU2018369759B2; FR24C1026I2; TWI809005B; HRP20230377T1; FI3710439T3; EA202091186A1; CO2020007244A2; KR102861303B1

Description

Oblast pronalaska

Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja inhibiraju KRas G12C. Posebno, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja ireverzibilno inhibiraju aktivnost KRas G12C, farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja i metode za njihovu upotrebu.

Osnova pronalaska

Kirsten Rat Sarcoma 2 virusni onkogenski homolog („KRas“) je mala GTPaza i član Ras porodice onkogena. KRas služi kao molekularni prekidač koji se kreće između neaktivnog (vezanog za GDP) i aktivnog (vezanog za GTP) stanja kako bi uzvodne ćelijske signale primljene od više tirozin kinaza pretvorio u nizvodne efektore kako bi regulisao širok spektar procesa, uključujući ćelijsku proliferaciju (npr. videti Alamgeer et al., (2013) Current Opin Pharmcol.13:394-401).

Uloga aktiviranih KRas u malignitetu primećena je pre više od trideset godina (npr. videti Santos et al., (1984) Science 223:661-664). Aberantna ekspresija KRas čini do 20 % svih karcinoma, dok su onkogene KRas mutacije koje stabilizuju vezivanje GTP i dovode do konstitutivne aktivacije KRas i nizvodne signalizacije prijavljene u 25-30 % adenokarcinoma pluća. (npr. videti Samatar i Poulikakos (2014) Nat Rev Drug Disc 13(12): 928-942 doi: 10,1038/nrd428). Supstitucije pojedinačnih nukleotida koje dovode do misens mutacija na kodonima 12 i 13 primarne aminokiselinske sekvence KRas čine približno 40 % ovih pokretačkih mutacija KRas u adenokarcinomu pluća, pri čemu je transverzija G12C najčešća aktivirajuća mutacija (npr. videti Dogan et al., (2012) Clin Cancer Res 18(22):6169-6177, objavljeno na mreži 26. septembra 2012. doi: 10,1158/1078-0432.CCR-11-3265).

Dobro poznata uloga KRAs u malignitetima i otkriće ovih čestih mutacija u KRas u različitim tipovima tumora učinilo je KRas veoma privlačnom metom farmaceutske industrije za lečenje raka. Bez obzira na tridesetogodišnje napore uložene u otkrića velikih razmera kako bi se razvili inhibitori KRas za lečenje raka, nijedan inhibitor KRas nije pokazao dovoljnu bezbednost i/ili efikasnost za dobijanje regulatornog odobrenja (npr. videti McCormick (2015) Clin Cancer Res.21(8):1797-1801).

Uprkos mnogim neuspelim naporima da se cilja KRas, jedinjenja koja inhibiraju aktivnost KRas su i dalje veoma poželjna i istražuju se, uključujući i ona koja ometaju efektore kao što su faktori razmene guanin nukleotida (npr. videti Sun et al., (2012) Agnew Chem Int Ed Engl. 51(25):6140-6143 doi: 10,1002/anie201201358) kao i na KRas G12C (npr. videti Ostrem et al., (2013) Nature 503:548-551). Jasno je da postoji stalno interesovanje i napor da se razviju inhibitori KRas, posebno inhibitori aktivirajućih KRas mutacija, uključujući KRas G12C.

US 2003/191143 se odnosi na fuzionisana heterociklična jedinjenja koja su korisna u lečenju poremećaja povezanih sa aktivacijom leukocita.

WO 2015/054572 i WO 2018/140600 se odnose na jedinjenja koja imaju aktivnost kao inhibitori G12C mutiranog KRAS proteina. Oni se takođe odnose na metode povezane sa pripremanjem i upotrebom takvih jedinjenja, farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja i metode za modulaciju aktivnosti G12C mutiranog KRAS proteina za lečenje poremećaja, kao što je rak.

US 2016/166571 se odnosi na kombinovane terapije za lečenje karcinoma povezanih sa mutacijama u KRAS genu. Takođe se odnosi na kompozicije koje sadrže terapeutske agense za lečenje karcinoma povezanih sa mutacijama u KRAS genu.

WO 2017/201161 se odnosi na jedinjenja koja inhibiraju KRas G12C, posebno na jedinjenja koja ireverzibilno inhibiraju aktivnost KRas G12C, farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja i metode za njihovu upotrebu.

Stoga, postoji potreba da se razviju novi KRas G12C inhibitori koji pokazuju dovoljnu efikasnost, stabilnost i/ili sigurnost za lečenje raka posredovanog KRas G12C. Jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska povoljno prevazilaze jedan ili više prethodnih nedostataka obezbeđivanjem selektivnih inhibitora KRas G12C.

Sažetak pronalaska

U jednom aspektu pronalaska, obezbeđena su jedinjenja koja inhibiraju aktivnost KRas G12C.

U određenim otelotvorenjima, jedinjenja su predstavljena Formulom (II):

ili njenom farmaceutski prihvatljivom soli:

naznačena time što je:

R<1>-X je

naznačena time što je piperazinilni prsten opciono supstituisan sa R<8>; Y je veza, O, S ili NR<5>;

R<1>je -C(O)C(R<A>)

C(R)p', naznačen time što je

dvostruka veza, p je dva, svaki Rje vodonik, a R<A>je halogen;

R<2>je vodonik, alkil, hidroksialkil, dihidroksialkil, alkilaminilalkil, dialkilaminilalkil, -Z-NR<5>R<10>, heterociklil, heterociklilalkil, aril, heteroaril ili heteroarilalkil, naznačen time što svaki od Z, heterociklil, heterociklilalkil, aril, heteroaril i heteroarilakil opciono može biti supstituisan sa jednim ili više R<9>;

svako Z je C1-C4 alkilen;

svako R<3>je nezavisno C1-C3 alkil, okso, haloalkil, hidroksil ili halogen;

L je veza, -C(O)- ili C1-C3 alkilen;

R<4>je vodonik, cikloalkil, heterociklil, aril, aralkil ili heteroaril, naznačen time što svaki od cikloalkila, heterociklila, arila, aralkila i heteroarila može biti opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>;

svako R<5>je nezavisno vodonik ili C1-C3 alkil;

R<6>je cikloalkil, heterociklil, heterociklilalkil, aril ili heteroaril, naznačen time što svaki od cikloalkila, heterociklila, arila ili heteroarila može biti opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>;

svaki R<7>je nezavisno halogen, hidroksil, C1-C6 alkil, cikloalkil, alkoksi, haloalkil, amino, cijano, heteroalkil, hidroksialkil ili Q-haloalkil, naznačen time što je Q O ili S;

R<8>je okso, C1-C3 alkil, C2-C4 alkinil, heteroalkil, cijano, -C(O)OR<5>, -C(O)N(R<5>)2, - N(R<5>)2, naznačen time što C1-C3 alkil može biti opciono supstituisan sa cijano, halogenom, -OR<5>, - N(R<5>)2 ili heteroarilom;

svaki R<9>je nezavisno vodonik, okso, acil, hidroksil, hidroksialkil, cijano, halogen, C1-C6 alkil, aralkil, haloalkil, heteroalkil, cikloalkil, heterociklil, heterociklilalkil, alkoksi, dialkilaminil, dialkilamidoalkil, naznačen time što C1-C6 alkil može biti opciono supstituisan sa cikloalkilom;

svaki R<10>je nezavisno vodonik acil, C1-C3 alkil, heteroalkil ili hidroksialkil;

R<11>je haloalkil; i

m je nula ili ceo broj između 1 i 2.

Takođe su uključena jedinjenja Formule II koja imaju Formulu II-A:

naznačena time što su R<1>, R<3>, R<4>, R<5>, R<10>, L i m kao što je definisano za Formulu II, R<11>je vodonik, C1-C3 alkil ili hidroksialkil, a piperazinilni prsten je opciono supstituisan sa R<8>time što je R<8>kao što je definisano za Formulu II.

Takođe su uključena jedinjenja Formule II koja imaju Formulu II-B:

gde su R<1>, R<3>, R<4>, R<8>, L i m kao što je definisano za Formulu II, R<2>je heterociklilalkil opciono supstituisan sa jednim ili više R<9>, a piperazinilni prsten je opciono supstituisan sa R<8>, gde je R<8>kao što je definisano za Formulu II.

U drugom aspektu pronalaska, obezbeđene su farmaceutske kompozicije koje sadrže terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

U još jednom aspektu pronalaska, postupci za inhibiciju aktivnosti KRas G12C u ćeliji, koji obuhvataju dovođenje u kontakt ćelije sa jedinjenjem pronalaska. U ovom aspektu, kontakt je in vitro.

Ovde je takođe obezbeđeno jedinjenje za upotrebu u metodi za lečenje karcinoma povezanog sa KRas G12C, metoda koja obuhvata davanje pacijentu koji boluje od raka terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, samog ili kombinovanog sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijentom ili razblaživačima, naznačeno time što je kancer izabran iz grupe koju čine Srčani: sarkom izabran između angiosarkoma, fibrosarkoma, rabdomiosarkoma i liposarkoma, miksoma, rabdomioma, fibroma, lipoma i teratoma; Plućni: bronhogeni karcinom izabran između skvamoznih ćelija, nediferenciranih malih ćelija, nediferenciranih velikih ćelija i adenokarcinoma, alveolarnog bronhiolarnog karcinoma, bronhijalnog adenoma, sarkoma, limfoma, hondromatnog hamartoma, mezotelioma; Gastrointestinalni: karcinom jednjaka izabran od karcinoma skvamoznih ćelija, adenokarcinoma, lejomiosarkoma i limfoma, karcinom želudca izabran od karcinoma, limfoma i lejomiosarkoma, karcinom pankreasa izabran između duktalnog adenokarcinoma, insulinoma, glukagonoma, gastrinoma, karcionidnih tumora i vipoma, karcinom tankog creva odabran od adenokarcinoma, limfoma, karcinoidnih tumora, Kaposijevog sarkoma, lejomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma i fibroma, karcinom debelog creva odabran od adenokarcinoma, tubularnog adenoma, viloznog adenoma, hamartoma i lejomioma; Genitourinarni trakt: karcinom bubrega odabran od adenokarcinoma, Vilmovog tumora/nefroblastoma, limfoma i leukemije, kancer bešike i uretre odabran od karcinoma skvamoznih ćelija, karcinoma prelaznih ćelija i adenokarcinoma, kancer prostate odabran od adenokarcinoma i sarkoma, kancer testista odabran od seminoma, teratoma embrionalnih karcinoma, teratokarcinoma, horiokarcinoma, sarkoma, karcinoma intersticijskih ćelija, fibroma, fibroadenoma, adenomatoidni tumora i lipoma; Jetra: hepatom/hepatocelularni karcinom, holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom; Bilijarni trakt: karcinom žučne kese, ampularni karcinom, holangiokarcinom; Kosti: osteogeni sarkom/osteosarkom, fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Evingov sarkom, maligni limfomski retikulum ćelijski sarkom, multipli mijelom, maligni tumor gigantskih ćelija, hordom, osteohronfroma/osteohrskavične egzostoze, benigna hondroma, hondroblast, hondromiksofibroma, osteoidni osteom i tumori gigantske ćelije; Nervni sistem: karcinom lobanje odabran od osteoma, hemangioma, granuloma, ksantoma i deformacije osteitisa, mening izabran od meningioma, meningiosarkoma i gliomatoze, karcinom mozga izabran od astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma pinealoma i gliomastoma multiforme, oligodendroglioma, švanoma, retinoblastoma i kongenitalnih tumora, kičmena moždina odabrana od neurofibroma, meningioma, glioma i sarkoma); Ginekološki: karcinom materice izabran od karcinoma endometrijuma izabranog od seroznog cistadenokarcinoma, mucinoznog cistadenokarcinoma i neklasifikovanog karcinoma, tumora granuloza-tekalnih ćelija, tumora Sertoli-Leidigovih ćelija, disgerminoma i malignog teratoma, karcinom vulve odabran od karcinoma skvamoznih ćelija, intraepitelijalnog karcinoma, adenokarcinoma, fibrosarkoma i melanoma), karcinom vagine izabran između karcinoma bistrih ćelija, karcinoma skvamoznih ćelija, botrioidnog sarkoma/embrionalnog rabdomiosarkoma karcinoma jajovoda; Hematološki: karcinom krvi odabran od akutne mijeloične leukemije, hronične mijeloične leukemije, akutne limfoblastne leukemije, hronične limfocitne leukemije, mijeloproliferativnih bolesti, multiplog mijeloma i mijelodisplastičnog sindroma, Hodgkinove bolesti, malignog limfoma, non-Hodgkinovog limfoma; Koža: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Kaposijev sarkom, mladeži displastični nevusi, lipomi, angiomi, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; i Nadbubrežne žlezde: neuroblastom.

Metoda za lečenje karcinoma povezanog sa KRas G12C može takođe da obuhvata (a) utvrđivanje da je kancer povezan sa mutacijom KRas G12C (npr. rak povezan sa KRas G12C); i (b) davanje pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili njegove farmaceutske kompozicije.

Detaljan opis pronalaska

Predmetni pronalazak se odnosi na inhibitore KRas G12C. Posebno, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja ireverzibilno inhibiraju aktivnost KRas G12C, farmaceutske kompozicije koje sadrže terapeutski efikasnu količinu jedinjenja i metode njihove upotrebe.

Definicije

Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje koje obično razume stručnjak u predmetnoj oblasti kojoj ovaj pronalazak pripada. Svi patenti, prijave patenta i publikacije na koje se ovde poziva su uključeni kao referenca.

Kako se ovde koristi, „KRas G12C“ se odnosi na mutirani oblik KRas proteina sisara koji sadrži amino kiselinsku supstituciju cisteina za glicin na amino kiselinskom položaju 12. Dodeljivanje kodona aminokiselina i pozicija taloga za ljudski KRas zasniva se na sekvenci aminokiselina koju je identifikovao UniProtKB/Swiss-Prot P01116: Variant p.Gly12Cys.

Kako se ovde koristi, „KRas G12C inhibitor“ se odnosi na jedinjenja predmetnog pronalaska koja su predstavljena formulama (I) kako je ovde opisano. Ova jedinjenja su sposobna da negativno modulišu ili inhibiraju celu ili deo enzimske aktivnosti KRas G12C. Inhibitori KRas G12C ovog pronalaska interaguju i nepovratno se vezuju za KRas G12C formiranjem kovalentnog adukta sa sulfhidrilnim bočnim lancem taloga cisteina na poziciji 12 što dovodi do inhibicije enzimske aktivnosti KRas G12C.

Kako se ovde koristi, „Bolest ili poremećaj povezan sa KRas G12C“, odnosi se na bolesti ili poremećaje povezane sa ili posredovane mutacijom KRas G12C ili sadrže mutaciju KRas G12C. Neograničavajući primer bolesti ili poremećaja povezanih sa Kras G12C je rak povezan sa Kras G12C.

Kako što se ovde koristi, termin „subjekt“, „pojedinac“ ili „pacijent“ koji se koristi naizmenično, odnosi se na bilo koju životinju, uključujući sisare kao što su miševi, pacovi, drugi glodari, zečevi, psi, mačke, svinje, goveda, ovce, konji, primati i ljudi. U nekim situacijama, pacijent je čovek. U nekim otelotvorenjima, pacijent je čovek. U nekim otelotvorenjima, subjekt je iskusio i/ili pokazao najmanje jedan simptom bolesti ili poremećaja koji treba lečiti i/ili sprečiti. U nekim otelotvorenjima, subjekt je identifikovan ili dijagnostikovan kao da ima rak koji ima mutaciju KRas G12C (npr. kako je utvrđeno pomoću regulatorne agencije, npr. odobrene od strane FDA, testa ili seta). U nekim otelotvorenjima, subjekt ima tumor koji je pozitivan na mutaciju KRas G12C (npr. kako je utvrđeno korišćenjem testa ili seta odobrenog od strane regulatorne agencije). Subjekt može biti subjekt čiji tumori imaju mutaciju KRas G12C (npr. gde je tumor identifikovan kao takav pomoću regulatorne agencije, npr. odobrene od strane FDA, seta ili testa). Subjekt može biti subjekt čiji tumori imaju mutaciju KRas G12C (npr. gde je tumor identifikovan kao takav pomoću regulatorne agencije, npr. odobrene od strane FDA, seta ili testa). U nekim otelotvorenjima, sumnja se da subjekt ima rak povezan sa genom KRas G12C. U nekim otelotvorenjima, subjekt ima klinički zapis koji ukazuje na to da ima tumor koji ima mutaciju KRas G12C (i opciono klinički zapis ukazuje na to da subjekt treba tretirati bilo kojim od ovde navedenih sastava).

U nekim otelotvorenjima, bilo koje od ovde opisanih metoda ili upotreba, test se koristi da bi se utvrdilo da li pacijent ima mutaciju KRas G12C koristeći uzorak (npr. Biološki uzorak ili uzorak biopsije (npr. Uzorak biopsije unutar parafina) od pacijenta (npr. Pacijent za kojeg se sumnja da ima rak povezan sa KRas G12C, pacijent koji ima jedan ili više simptoma raka povezanog sa KRas G12C i/ili pacijent

1

koji ima povećan rizik od razvoja raka povezanog sa KRas G12C) može uključivati, na primer, sekvenciranje sledeće generacije, imunohistokemiju, fluorescentnu mikroskopiju, rastavljenu FISH (fluorescentna in situ hibridizacija) analizu, južnu blotaciju, zapadno blotiranje, FACS analizu, severnu blotaciju i amplifikaciju zasnovanu na PCR (npr. RT-PCR i kvantitativni RT-PCR u stvarnom vremenu). Kao što je poznato u predmetnoj oblasti, testovi se obično izvode, npr. sa najmanje jednom označenom sondom nukleinske kiseline ili sa najmanje jednim označenim antitelima ili njihovim fragmentom koji se vezuje za antigen.

Termin „regulatorna agencija“ označava državnu agenciju za odobravanje medicinske upotrebe farmaceutskih agenata u državi. Na primer, neograničavajući primer regulatorne agencije je Uprava za hranu i lekove SAD (FDA).

Termin „amino“ se odnosi na -NH2;

Termin „acil“ se odnosi na -C(O)CH3

Kako se ovde koristi, termin „alkil“ se odnosi na ravne i razgranate lančane alifatske grupe koje imaju od 1 do 12 atoma ugljenika, 1-8 atoma ugljenika, 1-6 atoma ugljenika, ili 1-3 atoma ugljenika koji je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituenta. Primeri alkilnih grupa uključuju, bez ograničenja, metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil i heksil.

Termin „haloalkil“ se odnosi na alkilni lanac u kojem je jedan ili više vodonika supstituisan halogenom Primeri haloalkila su trifluorometil, difluorometil i fluorometil.

Termin „haloalkiloksi“ se odnosi na -O-haloalkil.

Kako se ovde koristi, „alkilen“ grupa je alkilna grupa koja je pozicionirana između i služi za povezivanje dve druge hemijske grupe Primeri alkilen grupa uključuju, bez ograničenja, metilen, etilen, propilen i butilen.

Termin „alkoksi“ se odnosi na -OC1 - C6 alkil.

Kako se ovde koristi, termin „cikloalkil“ uključuje zasićene i delimično nezasićene grupe cikličnih ugljovodonika koje imaju 3 do 12 ugljenika, na Primer 3 do 8 ugljenika, i kao dodatni Primer 3 do 6 ugljenika, pri čemu je cikloalkilna grupa dodatno opciono supstituisana. Primeri cikloalkilnih grupa uključuju, bez ograničenja, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheksenil, cikloheptil i ciklooktil.

Kako se ovde koristi, termin „heteroalkil“ se odnosi na alkilnu grupu pri čemu su jedan ili više atoma ugljenika u lancu supstituisani heteroatomom izabranim iz grupe koja se sastoji od O, S i N.

Kako što se ovde koristi, termin „hidroksialkil“ se odnosi na -alkil-OH.

Kako se ovde koristi, termin „dihidroksialkil“ se odnosi na alkilnu grupu pri čemu su svaki od dva atoma ugljenika supstituisani hidroksilnom grupom.

Termin „alkilaminil“ se odnosi na -NR<x>-alkil, pri čemu je R<x>vodonik. U jednom otelotvorenju, R<x>je vodonik.

Termin „dialkilaminil“ se odnosi na N(R<y>)2, pri čemu svaki R<y>je C1 - C3 alkil.

Termin „alkilaminilalkil“ se odnosi na -NR<x>-alkil, pri čemu je R<x>vodonik. U jednom otelotvorenju, R<x>je vodonik.

Termin „dialkilaminilalkil“ se odnosi na -alkil-N(R<y>)2, naznačem time što svaki R<y>je C1 - C4 alkil, naznačem time što alkil od -alkil-N(R<y>)2 može biti po izboru supstituisan sa hidroksi ili hidroksialkilom.

„Aril“ grupa je C6-C14 aromatični deo koji sadrži jedan do tri aromatična prstena, koji je po izboru supstituisan. Kao jedno utelotvorenje, aril grupa je C6-C10 aril grupa Primeri aril grupa uključuju, bez ograničenja, fenil, naftil, antracenil, fluorenil i dihidrobenzofuranil.

„Aralkil“ ili „arilalkil“ grupa obuhvata aril grupu kovalentno vezanu za alkil grupu, od kojih bilo koja može nezavisno biti opciono supstituisana ili nesupstituisana. Primer aralkil grupe je (C1- C6)alkil(C6-C10)aril, uključujući, bez ograničenja, benzil, fenetil i naftilmetil Primer supstituisanog aralkila je naznačem time što je alkil grupa supstituisana hidroksialkilom.

„Heterociklil“ ili „heterociklična“ grupa je prstenasta struktura koja ima od oko 3 do oko 12 atoma, na Primer 4 do 8 atoma, naznačena time što se jedan ili više atoma bira iz grupe koja se sastoji od N, O i S, pri čemu je ostatak atoma prstena ugljenik. Heterociklil može biti monocikličan, bicikličan, spirocikličan ili premošćen sistem prstenova. Heterociklična grupa je opciono supstituisana sa R<7>na ugljeniku ili azotu na jednoj ili više pozicija, naznačen time što je R<7>definisan za Formulu I. Heterociklična grupa je takođe nezavisno opciono supstituisana na azotu sa alkilom, arilom, aralkilom, alkilkarbonilom, alkilsulfonilom, arilkarbonilom, arilsulfonilom, alkoksikarbonilom, aralkoksikarbonilom, ili na sumporu sa oksom ili nižim alkilom. Primeri heterocikličnih grupa uključuju, bez ograničenja, epoksi, azetidinil, aziridinil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperazinil, imidazolidinil, tiazolidinil, ditianil, tritianil, dioksolanil, oksazolidinil, oksazolidinil, oksazolidinonil, dekahidrokinolinil, piperidonil, 4-piperidinonil, tiomorfolinil, tiomorfolinil 1,1 dioksid, morfolinil, oksazanil, azabicikloheksani, azabicikloheptani i oksa azabiciklociklocikloheptani Posebno isključena iz obima ovog termina su jedinjenja koja imaju susedne prstenaste O i/ili S atome.

Termin „heterociklilalkil“ se odnosi na heterociklil grupu kako je ovde definisano vezanu za preostali deo molekula preko alkil linkera, naznačeno time što alkil linker heterociklilalkila može biti opciono supstituisan sa hidroksi ili hidroksialkilom.

Kako se ovde koristi, termin „heteroaril“ se odnosi na grupe koje imaju 5 do 14 atoma prstena, poželjno 5, 6, 9 ili 10 atoma prstena; imaju 6, 10 ili 14 π elektrona koji se dele u cikličkom nizu; i imaju, pored atoma ugljenika, od jednog do tri heteroatoma po prstenu izabranom iz grupe koja se sastoji od N, O i S. Primeri heteroarilnih grupa uključuju akridinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benziazolil, benztriazolil, benzetrazolil, benzisoksazolil, benzizotiazolil, benzimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, furanil, furazanil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, isobenzofuranil,

1

izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izokinolinil, izotiazolil, izoksazolil, metilendioksifenil, naftiridinil, oktahidroizokinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolidinil, pirimidinil, fenantridinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksatiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridoksazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolinil, 2H-pirolil, pirolil, kinazolinil, kinolinil, 4H-kinolizinil, kvinoksalinil, kinuklidinil, tetrahidroizokinolinil, tetrahidrokinolinil, tetrazolil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, i ksantenil.

„Heteroarilalkil“ grupa obuhvata heteroaril grupu kovalentno vezanu za alkil grupu, naznačenu time što je radikal na alkil grupi, od kojih je bilo koja nezavisno opciono supstituisana ili nesupstituisana. Primeri heteroarilalkilnih grupa uključuju heteroarilnu grupu koja ima 5, 6, 9 ili 10 atoma prstena vezanih za C1-C6 alkilnu grupu. Primeri heteroaralkilnih grupa uključuju piridilmetil, piridilmetil, pirolilmetil, piroliletil, imidazolilmetil, imidazoliletil, tiazolilmetil, tiazoliletil, benzimidazolilmetil, benzimidazolilmetil, kinolinilmetil, kinolinilmetil, benzofuranilmetil, indoliniletil izokinolinilmetil, izoinodilmetil, cinoliniletilmetil i benzotiofeniletil. Posebno isključena iz obima ovog termina su jedinjenja koja imaju susedne prstenaste O i/ili S atome.

Kako se ovde koristi, „efektivna količina“ jedinjenja je količina koja je dovoljna da negativno modulira ili inhibira aktivnost KRas G12C. Takva količina se može primeniti kao jedna doza ili se može primeniti u skladu sa režimom, pri čemu je efikasna.

Kako se ovde koristi, lečenje označava bilo koji način na koji su simptomi ili patologija stanja, poremećaja ili bolesti ublaženi ili na drugi način korisno izmenjeni. Lečenje takođe obuhvata bilo kakvu farmaceutsku upotrebu sastava ovde.

Kako se ovde koristi, ublažavanje simptoma određenog poremećaja primenom određenog farmaceutskog sastava odnosi se na svako smanjenje, bilo trajno ili privremeno, trajno ili prolazno koje se može pripisati ili povezati sa primenom sastava.

Jedinjenja

U jednom aspektu pronalaska, jedinjenja su predstavljena formulom (II):

ili njenom farmaceutski prihvatljivom soli:

naznačena time što je:

R<1>-X je

naznačena time što je piperazinilni prsten opciono supstituisan sa R<8>;

1

Y je veza, O, S ili NR<5>;

R<1>je -C(o)C(R<A>)

C(R)p, naznačeno time što je

dvostruka veza, p je dva, svaki Rje vodik, a R<A>je halogen;

svako Z je C1-C4 alkilen;

svako R<3>je nezavisno C1-C3 alkil, okso, haloalkil, hidroksil ili halogen;

L je veza, -C(O)- ili C1-C3 alkilen;

R<4>je vodonik, cikloalkil, heterociklil, aril, aralkil ili heteroaril, naznačen time što svaki od cikloalkila, heterociklila, arila, aralkila i heteroarila može biti opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>or R<8>;

svako R<5>je nezavisno vodonik ili C1-C3 alkil;

R<6>je cikloalkil, heterociklil, heterociklilalkil, aril ili heteroaril, pri čemu svaki od cikloalkila, heterociklila, arila ili heteroarila može biti opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>;

svaki R<7>je nezavisno halogen, hidroksil, C1-C6 alkil, cikloalkil, alkoksi, haloalkil, amino, cijano, heteroalkil, hidroksialkil ili Q-haloalkil, naznačena time što je Q O ili S;

1

R<8>je okso, C1-C3 alkil, C2-C4 alkinil, heteroalkil, cijano, -C(O)OR<5>, -C(O)N(R<5>)2, - N(R<5>)2, naznačena time što C1-C3 alkil može biti opciono supstituisan sa cijano, halogenom, -OR<5>, - N(R<5>)2, ili heteroarilom;

svaki R<9>je nezavisno vodonik, okso, acil, hidroksil, hidroksialkil, cijano, halogen, C1-C6 alkil, aralkil, haloalkil, heteroalkil, cikloalkil, heterociklil, heterociklilalkil, alkoksi, dialkilaminil, dialkilamidoalkil, a time što C1-C6 alkil, može biti opciono supstituisan sa cikloalkilom;

svako R<10>je nezavisno vodonik acil, C1-C3 alkil, heteroalkil ili hidroksialkil;

R<11>je haloalkil; i

m je nula ili ceo broj između 1 i 2.

U ovom aspektu pronalaska R<1>-X je:

pri čemu R<1>je definisan za Formulu II, a piperazinilni prsten je opciono supstituisan sa R<8>pri čemu R<8>je definisan za Formulu II. U određenim otelotvorenjima, R<8>je C1 - C3 alkil pri čemu je alkil opciono supstituisan sa cijano ili OR<5>, ili -C(O)N(R<5>)2, pri čemu je svaki R<5>nezavisno vodonik ili C1 - C3 alkil.

U ovom aspektu pronalaska R<1>je -C(o)C(R<A>)

C(R)p, naznačena time što je

1

dvostruka veza, p je dva, svaki Rje vodik, a R<A>je halogen. U jednom otelotvorenju, dvostruka veza je u E konfiguraciji. U jednom otelotvorenju, dvostruka veza je u Z konfiguraciji.

U ovom aspektu pronalaska, R<A>je halogen. U jednom otelotvorenju, halogen je fluor ili hlor.

U jednom otelotvorenju, Y je O ili NR<5>, a R<2>je heterociklil ili heterociklilalkil opciono supstituisan sa jednim ili više R<9>Neograničeni primeri jednog ili više R<9>kada je R<2>heterociklil ili heterociklilalkil uključuju C1 - C3 alkil, acil, okso, cijano, alkoksi, cikloalkil, cikloalkilmetil, halogen i hidroksil.

Neograničavajući primeri R<2>heterociklila opciono supstituisanih sa jednim ili više R<9>obuhvataju azetidinil, C1-C3 alkil-supstituisani azetidinil (npr. metilazetidinil), halo-supstituisani azetidinil (npr. difluoroazetidinil), tetrahidropiran, pirolidinil, C1-C3 alkil-supstituisani pirolidinil (npr. metilpirolidinil, dimetilpirolidinil i izopropilpirolidinil), cikloalkilalkilpirolidinil, hidroksipirolidinil, halo-supstituisani pirolidinil (npr. fluoropirolidinil i difluoropirolidinil), halo-supstituisani N-metil pirolidinil (npr. N-metilfluoropirolidinil i N-metildifluoropirolidinil), metoksietilpirolidinil, alkoksi-supstituisani N-metilpirolidinil (npr., (N-metil)metoksipirolidinil), piperazinil, dimetilaminilpirolidinil, morfolinil, metilmorfolinil, 1,4-oksazepanil, piperdinil, C1-C3 alkil-supstituisan piperidinil (npr., metilaminilpiperidinil, metilakilpiperidinil, metilakiliperidinil, metilpiperidinil, metilpiperidinil (npr., fluoropiperdinil), dihalopiperdinil (npr., difluoropiperdinil), alkoksipiperdinil, pirolidonil, piperidonil, tiomorfolinil-1,1-dioksid, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil, oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il, i azabiciklo[2.2.1]heptan-2-il.

U jednom otelotvorenju, heterociklični deo heterociklilalkila je N-metilpirolidinil. U jednom otelotvorenju, heterociklični deo heterociklilalkila je 3,3-difluoro-1-metilpirolidinil.

U nekim drugim otelotvorenjima, R<4>je aril. U jednom otelotvorenju, R<4>je izabran iz grupe koju čine fenil i naftil i opciono je supstituisan sa jednim ili više R<6>ili R<7>. Primeri R<7>supstituenata uključuju halogen, hidroksil, C1-C6 alkil (npr. C1-C3 alkil), cikloalkil, haloalkil, Q-haloalkil, amino, cijano, hidroksialkil i alkoksi. U

1

jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je fenilsupstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, haloalkila, metila, izopropila, metoksi, Q-haloalkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od metila, trifluorometila, hidroksila, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od metila, hidroksila, trifluorometila, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa hidroksilom i C1-C3 alkilom ili dva C1-C3 alkila. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa trifluorometilom i C1-C3 alkilom ili dva C1-C3 alkila.

U jednom otelotvorenju, R<4>je aril naznačen time što je aril naftil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, haloalkila, metila, izopropila, metoksi, Q-haloalkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, R<4>je naftil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>supstituenata nezavisno odabranih od hidroksila, halogena, C1-C3 alkila, amino i haloalkila. U jednom otelotvorenju, R<4>je naftil opciono supstituisan sa jednim do tri R<7>supstituenta nezavisno odabranih između difluorometila, metila, hidroksila, amino, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, supstituisani naftil je 8-hloronaftil ili 8-metilnaftil.

U jednom otelotvorenju, aril je naftil opciono supstituisan sa jednim ili više halogena. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa hidroksilom i trifluorometilom ili C1-C3 alkil. U jednom otelotvorenju, aril je naftil opciono supstituisan sa hidroksilom.

U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>ili R<8>nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila, alkoksi i amino. U jednom otelotvorenju, R<4>je indoil, indazolil, hinolinil, izohinolinil, piridinil ili benzo[d]tiazolil opciono supstituisan sa

1

jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>je indoil, indazolil, hinolinil, izohinolinil, piridinil ili benzo[d]tiazolil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>ili R<8>nezavisno odabranih od okso, halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila alkoksi i amino.

U drugim otelotvorenjima, R<4>je heteroaril, opciono indoil ili indazolil, od kojih svaki može biti supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>ili R<8>supstituenata nezavisno odabranih iz grupe koju čine halogen, hidroksil, C1-C3 alkil, haloalkil, Q-haloalkil i alkoksi. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indazolil opciono supstituisan sa jednim ili dva R<7>ili R<8>nezavisno odabranih od okso, trifluorometila, alkoksi, haloalkila i C1-C6 alkila. U drugim otelotvorenjima, R<4>heteroaril je hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>nezavisno odabranih od amino, hidroksila, C1-C3 alkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa R<7>odabranih od hidroksila i amino. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je piridinil opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je piridinil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>nezavisno odabranih od C1-C3 alkila, halogena i haloalkila. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indolil opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indolil opciono supstituisan sa jednim ili dva R<7>nezavisno odabranih od hidroksila, trifluorometila i C1-C3 alkila.

U jednom otelotvorenju, L je veza.

U jednom otelotvorenju, m je nula.

U jednom otelotvorenju, R<8>je heteroalkil, C2-C4 alkinil ili C1-C3 alkil opciono supstituisan sa -OR<5>, cijano ili heteroarilom. U jednom otelotvorenju, R<8>je metil, cijanmetil, metoksimetil, hidroksimetil. U jednom otelotvorenju, R<8>je metil. U jednom otelotvorenju, R<8>je cijanometil. U jednom otelotvorenju, R<8>je hidroksimetil.

U jednom otelotvorenju, Formula II uključuje jedinjenja koja imaju Formulu II-A:

2

naznačena time što su R<1>, R<3>, R<4>, R<5>, R<10>, L i m kao što je definisano za Formulu II, R<11>je vodonik, metil ili hidroksialkil, a piperazinilni prsten je opciono supstituisan sa R<8>naznačen time što su R<8>kao što je definisano za Formulu II.

U ovom otelotvorenju, R<1>je -C(O)C(R<A>)

C(R)p gde su R<A>, Ri p kao što je definisano za Formulu II.

U ovom otelotvorenju, R<A>je halogen. U jednom otelotvorenju, halogen je fluor ili hlor.

U jednom otelotvorenju, L je veza. U jednom otelotvorenju, R<4>je aril ili heteroaril, od kojih je svaki opcionosupstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>je aril ili heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. U jednom otelotvorenju, svaki R<7>ili R<8>je nezavisno odabranih između okso, hidroksila, amino, halogena, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila, cikloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, R<5>i R<10>su svaki C1-C3 alkil. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, haloalkila, metila, izopropila, metoksi, Q-haloalkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od metil, trifluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, hidroksil, trifluorometoksi, hidroksil, fluoro, hloro, izopropil, ciklopropil i trifluorometiltio. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom do tri R<7>grupe nezavisno odabranih od metila, hidroksila, trifluorometila, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa hidroksilom i C1-C3 alkilom ili dva C1-C3 alkila. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa Q-haloalkilom i hidroksilom ili fluorom. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, haloalkila, metila, izopropila, metoksi, Q-haloalkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, R<4>je naftil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>supstituenata nezavisno odabranih od hidroksila, halogena, C1-C3 alkila, amino i haloalkila. U jednom otelotvorenju, R<4>je naftil opciono supstituisan sa jednim do tri supstituenta R<7>ili R<8>nezavisno odabranih od difluorometila, metila, hidroksila, amino, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, aril je naftil opciono supstituisan sa jednim ili više halogena. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa hidroksilom i trifluorometilom ili C1-C3 alkil. U jednom otelotvorenju, aril je naftil opciono supstituisan sa hidroksilom. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril, naznačen time što je heteroaril indazolil opciono supstituisan sa jednim ili dva R<7>ili R<8>nezavisno odabranih od okso, alkoksi, haloalkil i C1-C6 alkil. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril, naznačen time što je heteroaril hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril, gde je heteroaril hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>nezavisno odabranih od amino, hidroksila, C1-C3 alkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je piridinil opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je piridinil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>nezavisno odabranih od C1-C3 alkila, halogena i haloalkila. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indolil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indolil opciono supstituisan sa jednim ili dva R<7>nezavisno odabranih između hidroksila i C1-C3 alkila. U jednom otelotvorenju, R<11>je metil. U jednom otelotvorenju, piperazinilni prsten je nesupstituisan. U jednom otelotvorenju, piperazinilni prsten je supstituisan sa R<8>. U jednom otelotvorenju, R<8>je C1-C3 alkil opciono supstituisan sa cijano ili hidroksil. U jednom otelotvorenju, R<8>je metil, cijanometil ili hidroksimetil. U jednom otelotvorenju, R<8>je metil. U jednom otelotvorenju, R<8>je cijanometil. U jednom otelotvorenju, R<8>je hidroksimetil. U drugom otelotvorenju, R<5>i R<10>su svaki C1-C3 alkil, R<11>je metil, R<8>je metil, cijanometil ili hidroksimetil, L je veza, i R<4>je aril ili heteroaril, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>ili R<7>.

U jednom otelotvorenju, Formula II uključuje jedinjenja koja imaju Formulu II-B:

gde su R<1>, R<3>, R<4>, L i m kao što je definisano za Formulu II, R<2>je heterociklilalkil opciono supstituisan sa jednim ili više R<9>naznačen time što je R<9>kao što je definisano za Formulu II, a piperazinilni prsten je opciono supstituisan sa R<8>, gde je R<8>kako je definisano za Formulu II.

U ovom otelotvorenju, R<1>je -C(O)C(R<A>)

C(R)p gde su R<A>, Ri p kao što je definisano za Formulu II.

U jednom otelotvorenju, heterociklilni deo R<2>heterociklilalkila je monociklični, biciklični ili premošteni sistem prstena koji ima jedan ili dva heteroatoma u prstenu nezavisno izabrana između N i O. U jednom otelotvorenju, R<2>heterociklil je azetidinil, metilazetidinil, etilazetidinil, izopropilazeotidinil, difluoroazetidinil, ciklopropilazetidinil, tetrahidropiranilazetidinil, tetrahidropiran, pirolidinil, metilpirolidinil, dimetilpirolidinil, izopropilpirolidinil, cikloalkilalkilpirolidinil,

2

hidroksipirolidinilpirolidinil, difluorolidinil, difluorolidinil, (N-metil)fluoropirolidinil, (N-metil)difluoropirolidinil, metoksietilpirolidinil, alkoksi-supstituisani N-metilpirolidinil (npr. (N-metil)metoksipirolidinil), piperazinil, dimetilaminilpirolidinil, pirolidinon, metilpirolidinon, morfolinil, metilmorfolinil, etilmorfolinil, izopropilmorfolinil, oksetanil, 1,4-oksazepanil, piperdinil, metilpiperidinil, acilpiperdinil, cijanopiperdinil, cikloalkilpiperdinil, halopiperdinil, dihalopiperdinil, fluoropiperdinil, difluoropiperdinil, alkoksipiperdinil, pirolidonil, piperidinonil, tetrahidropirolizinil, tiomorfolinil-1,1-dioksid, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil, oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il, ili azabiciklo[2.2.1]heptan-2-il, opciono supstituisan sa jednim ili više R<9.>U jednom otelotvorenju, svaki R<9>je odabran između acila, okso, halogena, cijano, C1-C3 alkila, alkoksi, hidroksialkila, heteroalkila, cikloalkila, aralkila, heterociklila i dialkilamidoalkila. U jednom otelotvorenju, L je veza. U jednom otelotvorenju, heterociklilni deo R<2>heterociklilalkila je (N-metil)difluoropirolidinil, uključujući 3,3-difluoro-1-metilpirolidinil. U jednom otelotvorenju, heterociklilni deo R<2>heterociklilalkila je N-metilpirolidinil.

U jednom otelotvorenju, R<4>je aril ili heteroaril, od kojih je svaki opcionosupstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>je aril ili heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. U jednom otelotvorenju, svaki R<7>je nezavisno odabran od hidroksila, amino, halogena, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila, cikloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, haloalkila, metila, izopropila, metoksi, Q-haloalkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od metil, trifluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, hidroksil, trifluorometoksi, hidroksil, fluoro, hloro, izopropil, ciklopropil i trifluorometiltio. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa jednom do tri R<7>grupe nezavisno odabranih od metila, hidroksila, trifluorometila, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa hidroksilom i C1-C3 alkilom ili dva C1-C3 alkila. U jednom otelotvorenju, aril je fenil supstituisan sa Q-haloalkilom i hidroksilom ili fluorom. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, hidroksila, C1-C3 alkila, haloalkila, Q-haloalkila i alkoksi. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa jednom ili više R<7>grupa nezavisno odabranih od halogena, haloalkila, metila, izopropila, metoksi, Q-haloalkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, R<4>je naftil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>supstituenata nezavisno odabranih od hidroksila, halogena, C1-C3 alkila, amino i haloalkila. U jednom otelotvorenju, R<4>je naftil opciono supstituisan sa jednim do tri R<7>supstituenta nezavisno odabranih između difluorometila, metila, hidroksila, amino, fluora i hlora. U jednom otelotvorenju, aril je naftil opciono supstituisan sa jednim ili više halogena. U jednom otelotvorenju, aril je naftil supstituisan sa hidroksilom i trifluorometilom ili C1-C3 alkil. U jednom otelotvorenju, aril je naftil opciono supstituisan sa hidroksilom. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril, naznačen time što je heteroaril indazolil opciono supstituisan sa jednim ili dva R<7>nezavisno odabranih od alkoksi, haloalkila i C1-C6 alkila.

U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril, pri čemu je heteroaril hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>je heteroaril, pri čemu je heteroaril hinolinil ili izohinolinil, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>nezavisno odabranih od okso, amino, hidroksila, C1-C3 alkila i hidroksila. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je piridinil opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je piridinil opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>nezavisno odabranih od C1-C3 alkila, halogena i haloalkila. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indolil opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>. U jednom otelotvorenju, R<4>heteroaril je indolil opciono supstituisan sa jednim ili dva R<7>nezavisno odabranih između hidroksila i C1-C3 alkila. U jednom otelotvorenju, R<11>je metil. U jednom otelotvorenju, piperazinilni prsten je nesupstituisan. U jednom otelotvorenju, piperazinilni prsten Formule II-B je supstituisan sa R<8>. U jednom otelotvorenju, R<8>je C1-C3 alkil opciono supstituisan sa cijano, hidroksil ili metoksi. U jednom otelotvorenju, R<8>je metil, cijanometil, hidroksimetil ili metoksimetil.

Neograničavajući primeri jedinjenja Formule (II), Formule II-A i Formule II-B su izabrani iz grupe koju čine:

2

�

ili njene farmaceutski prihvatljive soli.

Jedinjenja Formule (II), Formule II-A ili Formule II-B mogu se formulisati u farmaceutske kompozicije.

Farmaceutske kompozicije

U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže inhibitor KRas G12C prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijent ili razblaživač. Jedinjenja pronalaska mogu biti formulisana bilo kojim metodom dobro poznatim u predmetnoj oblasti i mogu se pripremiti za primenu na bilo koji način, uključujući, bez ograničenja, parenteralni, oralni, sublingvalni, transdermalni, lokalni, intranazalni, intratrahealni ili intrarektalni. U određenim otelotvorenjima, jedinjenja pronalaska se primenjuju intravenozno u bolničkom okruženju. U jednom otelotvorenju, primena može biti oralnim putem.

Karakteristike nosača će zavisiti od načina primene. Kako se ovde koristi, izraz „farmaceutski prihvatljiv“ označava netoksičan materijal koji je kompatibilan sa biološkim sistemom kao što je ćelija, ćelijska kultura, tkivo ili organizam, i koji ne ometa efikasnost biološke aktivnosti aktivnih sastojaka).

Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu da sadrže, pored inhibitora, razblaživače, punila, soli, pufere, stabilizatore, solubilizatore i druge materijale dobro poznate u predmetnoj oblasti. Priprema farmaceutski prihvatljivih formulacija je opisana u, npr., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Izdanje, ed. A.

Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990.

Kako se ovde koristi, termin farmaceutski prihvatljiva so se odnosi na soli koje zadržavaju željenu biološku aktivnost gore identifikovanih jedinjenja i pokazuju minimalne ili nikakve neželjene toksikološke efekte. Primeri takvih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, kisele adicione soli formirane sa neorganskim kiselinama (na primer, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, azotna kiselina i slično), i soli formirane sa organskim kiselinama kao što je sirćetna kiselina, oksalna kiselina, vinska kiselina, jantarna kiselina, jabučna kiselina, askorbinska kiselina, benzojeva kiselina, taninska kiselina, pamoična kiselina, alginska kiselina, poliglutaminska kiselina, naftalensulfonska kiselina, naftalendisulfonska kiselina i poligalakturonska kiselina. Jedinjenja se takođe mogu davati kao farmaceutski prihvatljive kvaternarne soli poznate stručnjacima, a koje posebno uključuju kvaternarnu amonijumovu so formule -NR+Z-, naznačenu time što je R vodonik, alkil ili benzil, a Z je protivjon, uključujući hlorid, bromid, jodid, -O-alkil, toluensulfonat, metilsulfonat, sulfonat, fosfat ili karboksilat (kao što je benzoat, sukcinat, acetat, glikolat, maleat, malat, citrat, tartarat, askorbat, benzoat, cinamoat, mandeloat, benziloat i difenilacetat).

4

Aktivno jedinjenje je uključeno u farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač u količini dovoljnoj da pacijentu isporuči terapeutski efikasnu količinu bez izazivanja ozbiljnih toksičnih efekata kod pacijenta koji se leči. U jednom otelotvorenju, doza aktivnog jedinjenja za sva gore navedena stanja je u opsegu od oko 0,01 do 300 mg/kg, na Primer 0,1 do 100 mg/kg dnevno, i kao dalji Primer 0,5 do oko 25 mg po kilogramu telesne težine primaoca dnevno. Tipična lokalna doza će se kretati od 0,01-3 % m/m u odgovarajućem nosaču. Opseg efektivne doze farmaceutski prihvatljivih derivata može se izračunati na osnovu težine matičnog jedinjenja koje treba da se isporuči. Ako derivat ispoljava aktivnost sam po sebi, efektivna doza se može proceniti kao što je gore navedeno korišćenjem težine derivata, ili drugim sredstvima poznatim stručnjacima u predmetnoj oblasti.

Farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se koristiti u metodama upotrebe koje su ovde opisane.

Metode upotrebe

U još jednom aspektu, obelodanjivanje pruža metode za inhibiciju aktivnosti KRas G12C u ćeliji, koje obuhvataju dovođenje u kontakt ćelije u kojoj se želi inhibicija aktivnosti KRas G12C sa efikasnom količinom jedinjenja pronalaska, njegovih farmaceutski prihvatljivih soli ili farmaceutskih kompozicija koji sadrže jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. U ovom aspektu, kontakt je in vitro.

Kako se ovde koristi, termin „dovođenje u kontakt“ se odnosi na spajanje naznačenih grupa u in vitro sistemu. Na primer, „kontaktiranje“ KRas G12C sa jedinjenjem datim ovde uključuje uvođenje jedinjenja datog ovde u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni preparat koji sadrži KRas G12C.

U jednom otelotvorenju, ćelija u kojoj je poželjna inhibicija aktivnosti KRas G12C dovodi se u kontakt sa efikasnom količinom jedinjenja pronalaska da bi se negativno modulisala aktivnost KRas G12C. U drugim otelotvorenjima, može se koristiti terapeutski efikasna količina farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedinjenje pronalaska.

4

Negativnim modulisanjem aktivnosti KRas G12C, metode opisane ovde su dizajnirane da inhibiraju neželjenu ćelijsku proliferaciju koja je rezultat pojačane aktivnosti KRas G12C unutar ćelije. Ćelije se mogu kontaktirati u jednoj dozi ili višestrukim dozama u skladu sa određenim režimom lečenja da bi se izvršila željena negativna modulacija KRas G12C. Stepen kovalentne modifikacije KRas G12C može se pratiti in vitro korišćenjem dobro poznatih metoda, uključujući one opisane u Primeru A u nastavku. Pored toga, inhibitorna aktivnost primernih jedinjenja u ćelijama može se pratiti, na primer, merenjem inhibicije KRas G12C, aktivnosti količine fosfilisanog ERK, uključujući one opisane u Primeru B ispod, da bi se procenila efikasnost lečenja i doze se mogu, u skladu sa tim, prilagoditi od strane lekara zaduženog za lečenje.

U drugom aspektu, jedinjenje prema ovom obelodanjenju ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u postupku za lečenje KRas G12C-karcinoma, postupak koji obuhvata davanje pacijentu koji boluje od raka terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska ili farmaceutski prihvatljive soli, same ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijensom ili razblaživačima, pri čemu je kancer izabran iz grupe koju čine Srčani: sarkom izabran između angiosarkoma, fibrosarkoma, rabdomiosarkoma i liposarkoma, miksoma, rabdomioma i lipoa teratoma; Plućni: bronhogeni karcinom izabran između skvamoznih ćelija, nediferenciranih malih ćelija, nediferenciranih velikih ćelija i adenokarcinoma, alveolarnog bronhiolarnog karcinoma, bronhijalnog adenoma, sarkoma, limfoma, hondromatnog hamartoma, mezotelioma;

Gastrointestinalni: karcinom jednjaka izabran od karcinoma skvamoznih ćelija, adenokarcinoma, lejomiosarkoma i limfoma, karcinom želudca izabran od karcinoma, limfoma i lejomiosarkoma, karcinom pankreasa izabran između duktalnog adenokarcinoma, insulinoma, glukagonoma, gastrinoma, karcionidnih tumora i vipoma, karcinom tankog creva odabran od adenokarcinoma, limfoma, karcinoidnih tumora, Kaposijevog sarkoma, lejomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma i fibroma, karcinom debelog creva odabran od adenokarcinoma, tubularnog adenoma, viloznog adenoma, hamartoma i lejomioma; Genitourinarni trakt: karcinom bubrega odabran od adenokarcinoma, Vilmovog tumora/nefroblastoma, limfoma i leukemije, kancer bešike i uretre odabran od karcinoma skvamoznih ćelija, karcinoma prelaznih ćelija i adenokarcinoma, kancer

4

prostate odabran od adenokarcinoma i sarkoma, kancer testista odabran od seminoma, teratoma embrionalnih karcinoma, teratokarcinoma, horiokarcinoma, sarkoma, karcinoma intersticijskih ćelija, fibroma, fibroadenoma, adenomatoidni tumora i lipoma; Jetra: hepatom/hepatocelularni karcinom, holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom; Bilijarni trakt: karcinom žučne kese, ampularni karcinom, holangiokarcinom; Kosti: osteogeni sarkom/osteosarkom, fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Evingov sarkom, maligni limfomski retikulum ćelijski sarkom, multipli mijelom, maligni tumor gigantskih ćelija, hordom, osteohronfroma/osteohrskavične egzostoze, benigna hondroma, hondroblast, hondromiksofibroma, osteoidni osteom i tumori gigantske ćelije; Nervni sistem: karcinom lobanje odabran od osteoma, hemangioma, granuloma, ksantoma i deformacije osteitisa, mening izabran od meningioma, meningiosarkoma i gliomatoze, karcinom mozga izabran od astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma pinealoma i gliomastoma multiforme, oligodendroglioma, švanoma, retinoblastoma i kongenitalnih tumora, kičmena moždina odabrana od neurofibroma, meningioma, glioma i sarkoma); Ginekološki: karcinom materice izabran od karcinoma endometrijuma izabranog od seroznog cistadenokarcinoma, mucinoznog cistadenokarcinoma i neklasifikovanog karcinoma, tumora granuloza-tekalnih ćelija, tumora Sertoli-Leidigovih ćelija, disgerminoma i malignog teratoma, karcinom vulve odabran od karcinoma skvamoznih ćelija, intraepitelijalnog karcinoma, adenokarcinoma, fibrosarkoma i melanoma), karcinom vagine izabran između karcinoma bistrih ćelija, karcinoma skvamoznih ćelija, botrioidnog sarkoma/embrionalnog rabdomiosarkoma karcinoma jajovoda; Hematološki: karcinom krvi odabran od akutne mijeloične leukemije, hronične mijeloične leukemije, akutne limfoblastne leukemije, hronične limfocitne leukemije, mijeloproliferativnih bolesti, multiplog mijeloma i mijelodisplastičnog sindroma, Hodgkinove bolesti, malignog limfoma, non-Hodgkinovog limfoma; Koža: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Kaposijev sarkom, mladeži displastični nevusi, lipomi, angiomi, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; i Nadbubrežne žlezde: neuroblastom.

U jednom otelotvorenju, rak povezan sa KRas G12C je rak pluća.

4

Kompozicije koje su ovde date su za upotrebu za lečenje širokog spektra karcinoma uključujući tumore kao što su tumor pluća, prostate, dojke, mozga, kože, karcinom grlića materice, karcinom testisa, itd. Tačnije, kanceri koji se mogu lečiti kompozicijama i metode obelodanjivanja obuhvataju, ali nisu ograničene na tipove tumora kao što su astrocitni, karcinomi dojke, grlića materice, kolorektalni, endometrijalni, ezofagealni, želučani, karcinomi glave i vrata, hepatocelularni, laringealni, plućni, oralni, karcinomi jajnika, prostate i tiroidne žlezde i sarkomi. Tačnije, ova jedinjenja se mogu koristiti za lečenje:

Srčani: sarkom (angiosarkom, fibrosarkom, rabdomiosarkom, liposarkom), miksom, rabdomiom, fibrom, lipom i teratom; Plućni: bronhogeni karcinom (skvamozne ćelije, nediferencirane male ćelije, nediferencirane velike ćelije, adenokarcinom), alveolarni (bronhiolarni) karcinom, bronhijalni adenom, sarkom, limfom, hondromatski hamartom, mezoteliom; Gastrointestinalni: jednjak (karcinom skvamoznih ćelija, adenokarcinom, lejomiosarkom, limfom), želudac (karcinom, limfom, lejomiosarkom), pankreas (duktalni adenokarcinom, insulinom, glukagonom, gastrinom, karcinoidni tumori, vipoma) tanko crevo (adenokarcinom, limfom, karcinoidni tumori, Kaposijev sarkom, lejomiom, hemangiom, lipom, neurofibrom, fibrom), debelo crevo (adenokarcinom, tubularni adenom, vilozni adenom, hamartom, lejomiom); Genitourinarni trakt: bubrezi (adenokarcinom, Vilmov tumor (nefroblastom), limfom, leukemija), mokraćna bešika i uretra (karcinom skvamoznih ćelija, karcinom prelaznih ćelija, adenokarcinom), prostata (adenokarcinom, sarkoma) testis (seminom, teratom, embrionalni karcinom, teratokarcinom, horiokarcinom, sarkom, karcinom intersticijskih ćelija, fibrom, fibroadenom, adenomatoidni tumori, lipom); Jetra: hepatom (hepatocelularni karcinom), holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom; Bilijarni trakt: karcinom žučne kese, ampularni karcinom, holangiokarcinom; Kosti: osteogeni sarkom (osteosarkom), fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Evingov sarkom, maligni limfom (retikulum ćelijski sarkom), multipli mijelom, maligni tumor gigantskih ćelija, hordom, osteohronfroma (osteohrskavične egzostoze) benigna hondroma, hondroblast, hondromiksofibroma, osteoidni osteom i tumori gigantske ćelije; Nervni sistem: lobanja (osteom, hemangiom, granulom, ksantom, osteitis deformans), moždane ovojnice (meningiom, meningiosarkom, gliomatoza), mozak (astrocitom, meduloblastom, gliom, ependimom, germinom (pinealom) multiformni glioblastom,

4

oligodendrogliom, švanom, retinoblastom, urođeni tumori), neurofibrom kičmene moždine, meningiom, gliom, sarkom); Ginekološki: materica (karcinom endometrijuma), grlić materice (karcinom grlića materice, pre-tumorska displazija grlića materice), jajnici (karcinom jajnika (serozni cistadenokarcinom, mucinozni cistadenokarcinom, neklasifikovani karcinom), granuloza-tumor tekalnih ćelija, tumori Sertoli-Leydigovih ćelija, disgerminom, maligni teratom) vulva (karcinom skvamoznih ćelija, intraepitelni karcinom, adenokarcinom, fibrosarkom, melanom), vagina (karcinom bistrih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, botrioidni sarkom (embrionalni rabdomiosarkom), jajovodi (karcinom); Hematološki: krv (mijeloidna leukemija (akutna i hronična), akutna limfoblastna leukemija, hronična limfocitna leukemija, mijeloproliferativne bolesti, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom), Hodgkinova bolest, ne-Hodgkinov limfom (maligni limfom); Koža: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Kaposijev sarkom, mladeži displastični nevusi, lipomi, angiomi, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; i Nadbubrežne žlezde: neuroblastom. U određenim otelotvorenjima, rak je karcinom pluća nemalih ćelija.

Koncentracija i način davanja pacijentu će varirati u zavisnosti od raka koji se leči. Jedinjenja, njihove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja i soli takođe se mogu primenjivati zajedno sa drugim anti-neoplastičnim jedinjenjima, na primer, hemoterapijom, ili koristiti u kombinaciji sa drugim tretmanima, kao što je zračenje ili hirurška intervencija, bilo kao adjuvans pre operacije ili posle operacije.

Jedinjenja koja se koriste za lečenje raka povezanog sa KRas G12C mogu takođe obuhvatati (a) utvrđivanje da je kancer povezan sa mutacijom KRas G12C (npr. rak povezan sa KRas G12C) (npr. kako je utvrđeno korišćenjem odobrenja regulatorne agencije, npr. FDA odobrenje, test ili komplet); i (b) davanje pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili njegove farmaceutske kompozicije.

Stručnjak u predmetnoj oblasti će prepoznati da, i in vivo i in vitro ispitivanja korišćenjem pogodnih, poznatih i opšte prihvaćenih modela ćelija i/ili životinja predviđaju sposobnost testnog jedinjenja da leči ili sprečava navedeni poremećaj.

Stručnjak u predmetnoj oblasti će dalje prepoznati da klinička ispitivanja na ljudima, uključujući primarna ispitivanja na ljudima, ispitivanja u rasponu doza i efikasnosti, na zdravim pacijentima i/ili onima koji pate od datog poremećaja, mogu biti obavljena prema metodama dobro poznatim u kliničkim i medicinskim oblastima.

Šeme i Primeri reakcije

Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu pripremiti iz komercijalno dostupnih reagenasa korišćenjem sintetičkih metoda i reakcionih šema opisanih ovde, ili korišćenjem drugih reagenasa i konvencionalnih metoda koje su dobro poznate stručnjacima u predmetnoj oblasti.

Na primer, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena prema Opštim šemama reakcije I i II.

Opšte šeme reakcije

U koraku A, odgovarajuće funkcionalizovani dihidropiridopirimidin (1) je povezan na heterocikl koji sadrži jednu nukleofilnu vrstu amina, dok je druga vezana za zaštitnu grupu da bi se dobilo jedinjenje (2). Ovo povezivanje se odvija u rastvaraču poput dihlorometana u prisustvu baze kao što je trietilamin ili Hunigova baza. U koraku B, Boc grupa jedinjenja (2) se uklanja korišćenjem uslova poznatih u predmetnoj oblasti, na primer sa trifluorosirćetnom kiselinom u rastvaraču kao što je dihlorometan, da bi se dobilo jedinjenje (3). U koraku C,

1

supstituent R<4>se uvodi sa paladijumskim povezivanjem, koristeći pogodan funkcionalizovan arilni ili heteroarilni sistem, na primer aril triflat, u prisustvu paladijumskog katalizatora kao što je Pd2DBA3/Ksantfos u rastvaraču kao što je toluen sa bazom kao što je natrijum terc-butoksid da bi se dobilo jedinjenje (4). U koraku D, zaštitna grupa prstena X jedinjenja (4) se uklanja, na primer hidrogenolizom pomoću Pd/C u prisustvu H2 u polarnom rastvaraču kao što je EtOH/THF da bi se dobilo jedinjenje (5). U poslednjem koraku, E, R<1>se uvodi, na primer tretiranjem hloridom kiseline formule Cl-C(O)C(R<A>)

C(R)p, ili anhidridom formule C(R)p

C(R<A>)C(O)OC(O)C(R<A>)

C(R)p, gde su R<A>, Ri p kao što je gore definisano. U nekim slučajevima, vrsta

R<4>će takođe sadržati zaštitnu grupu, koja se može ukloniti u sledećem koraku u sintetičkoj sekvenci.

Jedinjenja (1), (2), (3), (4) i (5) kako je prikazano i opisano gore za Šemu I, korisna su kao intermedijarni produkt za dobijanje jedinjenja pronalaska.

2

U koraku A, odgovarajuće funkcionalizovani dihidropiridopirimidin (6) je povezan na heterocikl koji sadrži jednu nukleofilnu vrstu amina, dok je druga vezana za zaštitnu grupu da bi se dobilo jedinjenje (7). Ovo povezivanje se odvija u rastvaraču poput dihlorometana u prisustvu baze kao što je trietilamin ili Hunigova baza. U koraku B, supstituent -Y-R<2>se uvodi supstitucijom hlora sa nukleofilom, na primer (S)-1-(dimetilamino-propan-2-ol u polarnom rastvaraču kao što je dioksan da bi se dobilo jedinjenje (8). U koraku C, Boc grupa se uklanja korišćenjem uslova poznatih u predmetnoj oblasti, na primer sa trifluorosirćetnom kiselinom u rastvaraču kao što je dihlorometan da bi se dobilo jedinjenje (9). U koraku D, supstituent R<4>se uvodi sa paladijumskim povezivanjem, koristeći pogodan funkcionalizovan arilni ili heteroarilni sistem, na primer aril triflat, u prisustvu paladijumskog katalizatora kao što je Pd2DBA3/BINAP u rastvaraču kao što je toluen sa bazom kao što je natrijum terc-butoksid da bi se dobilo jedinjenje (10). U koraku E, zaštitna grupa prstena X se uklanja, na primer hidrogenolizom pomoću Pd/C u prisustvu H2 u polarnom rastvaraču kao što je EtOH/THF da bi se dobilo jedinjenje (11). U koraku F, R<1>se uvodi da bi se dobilo jedinjenje pronalaska, na primer tretiranjem hloridom kiseline formule Cl-C(o)C(R<A>)

C(R)p ili anhidrid koji ima formulu C(R)p

C(R<A>) C(o)oC(o)C(R<A>)

C(R)p, gde su R<A>, Ri p kako je definisano gore. U nekim slučajevima, vrste R<4>i R<2>mogu takođe da sadrže zaštitne grupe, koje se mogu ukloniti u sledećem koraku u sintetičkoj sekvenci.

Jedinjenja (6), (7), (8), (9) (10), i (11) kako je prikazano i opisano gore za Šemu 2 korisna su kao intermedijarni produtza dobijanje jedinjenja pronalaska.

Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu imati jedan ili više hiralnih centara i mogu se sintetizovati kao stereoizomerne smeše, izomeri identične konstitucije koji se razlikuju po rasporedu svojih atoma u prostoru. Jedinjenja se mogu koristiti kao smeše ili se pojedinačne komponente/izomeri mogu razdvojiti korišćenjem komercijalno dostupnih reagenasa i konvencionalnih metoda za izolovanje stereoizomera i enantiomera dobro poznatih stručnjacima u predmetnoj oblasti, npr. korišćenjem CHIRALPAK® (Sigma-Aldrich) ili CHIRALCEL® (Diacel Corp) hiralne hromatografske HPLC kolone prema uputstvima proizvođača.

Alternativno, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se sintetišu korišćenjem optički čistih, hiralnih reagenasa i intermedijarnih produkta da bi se pripremili pojedinačni izomeri ili enantiomeri. Osim ako nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i dijastereomerni) i racemični oblici su u okviru pronalaska. Osim ako nije drugačije naznačeno, kad god se specifikacija, uključujući patentne zahteve, odnosi na jedinjenja pronalaska, termin „jedinjenje“ treba razumeti kao termin koji obuhvata sve hiralne (enantiomerne i dijastereomerne) i racemične oblike.

Sledeći primeri su namenjeni da ilustruju dalje određene realizacije pronalaska i nemaju nameru da ograniče obim pronalaska. Jedinjenja koja spadaju u obim Formule (II) su jedinjenja pronalaska. Sva ostala jedinjenja su referentna jedinjenja.

4

Intermedijarni produkt 1

3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonat

3-hidroksinaftalen-1-il trifluorometansulfonat (13,101 g, 44,831 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (100 ml) i mešan na 0 °C. Ovom rastvoru je dodat hloro(metoksi)metan (3,7456 ml, 49,315 mmol) i Hunigova baza (11,745 ml, 67,247 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 4 sata. Reakcija je podeljena sa 1M HCl i isprana zasićenim natrijum bikarbonatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni pomoću magnezijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom.

Koncentrovani materijal je dodat na 120 g RediSep® gold kolone silika gela sa dihlorometanom i prečišćen hromatografijom normalne faze (CombiFlash®, 0 %-20 % etil acetat/heksan kao eluent) da bi se dobio 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonat (11,785 g, 35,045 mmol, 78,171 % prinos).

Intermedijarni produkt 2

2-bromo-7-(metoksimetoksi)naftalen

U rastvor 7-bromonaftalen-2-ola (2,0 g, 9,0 mmol) u dimetil acetamidu (40 ml) dodat je hloro(metoksi)metan (1,4 g, 18 mmol) i cezijum karbonat (5,8 g, 18 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi.

Reakcija je razblažena vodom i vodeni sloj je ispran etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni pomoću magnezijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi materijal je prečišćen normalnom faznom hromatografijom korišćenjem 5-50 % etil acetata/heksana kao eluenta da bi se dobio 2-bromo-7-(metoksimetoksi)naftalen (1,0 g, 3,7 mmol, 42 % prinos).

Intermedijarni produkt 3

2-bromo-1-fluoro-3-(metoksimetil)benzen

U mešani rastvor 2-bromo-3-fluorfenola (1422 mg, 7,445 mmol) u 22 ml tetrahidrofurana na sobnoj temperaturi pomoću azota je dodat NaH (327,6 mg, 8,190 mmol) u čistom obliku u obliku čvrste supstance. Posle 15 minuta, rastvor se formira. Špricom je dodat hloro(metoksi)metan (678,6 µL, 8,934 mmol). Nakon 2 sata mešanja, reakcija je ugašena zasićenim rastvorom amonijum hlorida i zatim podeljena između etil acetata (30 ml) i vode (30 ml). Kombinovani organski slojevi su izolovani, isprani slanim rastvorom, osušeni pomoću MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je dodat u minimum dihlorometana na RediSep® kolonu od 40 grama prethodno navlaženu heksanom i eluiranu gradijentom etil acetat/heksana (0 % do 20 % etil acetata). Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio proizvod u vidu bistrog ulja (1,45 g, 83 %).

Intermedijarni produkt 4

2-bromo-1-fluoro-4-(metoksimetil)benzen

U mešani rastvor 3-bromo-4-fluorfenola (327 mg, 1,71 mmol) u 5,1 ml tetrahidrofurana na sobnoj temperaturi pomoću azota je dodat NaH (75,3 mg, 1,88 mmol) u čistom obliku u obliku čvrste supstance. Posle 15 minuta, rastvor se formira. Špricom je dodat hloro(metoksi)metan (156 µL, 2,05 mmol). Nakon 2 sata mešanja, reakcija je ugašena zasićenim rastvorom amonijum hlorida i podeljena između etil acetata i vode. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni pomoću MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je dodat u minimum dihlorometana na RediSep® kolonu od 24 grama prethodno navlaženu heksanom i eluiranu gradijentom etil acetat/heksana (0 % do 20 % etil acetata). Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio proizvod u vidu bistrog ulja (120 mg, 29,8 %)

Intermedijarni produkt 5

4-bromo-5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol

U rastvor 4-bromo-5-metil-1H-indazola (0,7 g, 3,3 mmol) u dimetil acetamidu (30 ml) ohlađenom na 0 °C dodat je NaH (0,19 g, 4,6 mmol) u porcijama i reakciona smeša je pročišćena azotom. Reakcija je mešana 20 minuta, a zatim je dodat (2-(hlorometoksi)etil)trimetilsilan (0,83 g, 5,0 mmol) i reakcija je mešana 2 sata uz zagrevanje do sobne temperature. Reakcija je razblažena vodom i vodeni sloj je ispran etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni pomoću MgS04 i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom korišćenjem 10-50 % etil acetata/heksana kao eluenta da bi se dobio 4-bromo-5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol (0,87 g, 79 %).

Intermedijarni produkt 6

(R)-1-(pirolidin-1-il)propan-2-ol

U zatvorenoj epruveti, R-(+)-propilen oksid (3,69 ml, 52,7 mmol) je ohlađen na -78 °C i zatim prskan anhidrovanim dimetil aminom nekoliko minuta. Reakciona smeša je zagrevana na 70 °C tokom 16 sati. Reakcija je hlađena i koncentrovana u vakuumu 20 minuta da bi se dobio (R)-1-(pirolidin-1-il)propan-2-ol (5,35 g, 41,4 mmol, 98,2 % prinos).

Intermedijarni produkt 7

(R)-1-morfolinopropan-2-ol

U zatvorenoj epruveti, R-(+)-propilen oksid (2,111 ml, 30,13 mmol) i morfolin (1,490 ml, 17,22 mmol) su zagrevani na 70 °C tokom 20 sati. Reakcija je hlađena i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio (R)-1-morfolinopropan-2-ol (2,47 g, 17,01 mmol, prinos 98,80 %).

Intermedijarni produkt 8

(R)-1-(dimetilamino)butan-2-ol

U zatvorenoj epruveti, R-(+)-propilen oksid (4,00 g, 55,5 mmol) i dimetilamin (1,00 g, 22,2 mmol), zagrevani su na 65 °C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i koncentrovana u vakuumu. Dobijeni talog je prečišćen silika gelom (0-12 % MeOH u DCM) da bi se dobio (R)-1-(dimetilamino)butan-2-ol (1,38 g, 11,8 mmol, 53,1 % prinos).

Intermedijarni produkt 9

(R)-1-((R)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-ol

U zatvorenoj epruveti, (R)-3-metoksipirolidin hidrohlorid (1,00 g, 7,27 mmol), TEA (2,03 ml, 14,5 mmol) i R-(+)-propilen oksid (1,27 ml, 18,2 mmol) su zagrejani do 65 °C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i koncentrovana u vakuumu. Dobijeni talog je prečišćen silika gelom (0-12 % MeOH u DCM) da bi se dobio (R)-1-((R)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-ol (775 mg, 4,87 mmol, 67,0 % prinosa).

Intermedijarni produkt 10

(R)-1-((S)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-ol

U zatvorenoj epruveti, (S)-3-metoksipirolidin hidrohlorid (1,00 g, 7,27 mmol), TEA (2,03 ml, 14,5 mmol) i R-(+)-propilen oksid (1,27 ml, 18,2 mmol) su zagrejani do 65 °C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i koncentrovana u vakuumu. Dobijeni talog je prečišćen silika gelom (0-12 % MeOH u DCM) da bi se dobio (R)-1-((S)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-ol (781 mg, 4,90 mmol, 67,5 % prinosa)

Intermedijarni produkt 11

(R)-1-((S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-il)propan-2-ol

U zatvorenoj epruveti, R-(+)-propilen oksid (0,609 ml, 8,69 mmol) i (S)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin (1,00 g, 4,97 mmol) su zagrevani na 70 °C tokom 20 sati. Reakcija je ohlađena i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio (R)-1-((S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-il)propan-2-ol (1,29 g, 4,20 mmol, 84,6 % prinosa).

Intermedijarni produkt 12

terc-butil 2-(hidroksimetil)-4-metilpiperazin-1-karboksilat

U suspenziju litijum hlorida (246 mg, 5,81 mmol) i litijum borohidrida (126 mg, 5,81 mmol) u etanolu (9 ml), na 0 °C pod azotom, rastvor 1-(terc-butil) 2-metil u kapima je dodat 4-metilpiperazin-1,2-dikarboksilat (750 mg, 2,90 mmol) u suvom THF (6 ml). Reakcija je mešana tokom noći formirajući beli talog. Talog je filtriran i opran etanolom. Kombinovani filtrat i organski ekstrakti su koncentrovani da bi se dobio beli talog koji je ekstrahovan etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni pomoću natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom sa izokratskim 10 % MeOH u DCM sa 0,2 % NH4OH da bi se dobio terc-butil 2-(hidroksimetil)-4-metilpiperazin-1-karboksilat (104 mg, 0,452 mmol,15,6 % prinosa).

Intermedijarni produkt 13

(S)-2-(2-metilpiperidin-1-il)etan-1-ol

Smeša (S)-2-metilpiperidina (100 mg, 1,01 mmol), 2-bromoetanola (78 µL, 139 mg, 1,11 mmol, 1,1 ekv.), natrijum jodida (151 mg, 1 ekv.), kalijum karbonata (418 mg, 3 ekv.) i acetonitrila (1 ml) u bočici od 4 ml pročišćeni su azotom, zatvoreni i mešani na sobnoj temperaturi 2 dana. Reakciona smeša je podeljena između dietil etra (15 ml) i vode (2 ml). Sloj etera je ispran slanim rastvorom (2 ml), zakiseljen sa TFA (trifluorosirćetna kiselina) i sušen pomoću visokog vakuuma 2 dana. Talog je ispran etrom (3 ml), razblažen vodom (0,5 ml) i bazifikovan sa 10 M NaOH (0,2 ml). Slojevi su razdvojeni i gornji sloj je pažljivo osušen pomoću NaOH. Rastvor etra je isparen pomoću azota da bi se dobio sirovi (S)-2-(2-metilpiperidin-1-il)etan-1-ol (100 mg, 0,698 mmol, 69,24 % prinosa) kao bezbojno ulje.

Intermedijarni produkt 14

(R)-2-(2-metilpiperidin-1-il)etan-1-ol

Sintetizovan u skladu sa metodom Intermedijarnog produkta13, korišćenjem (R)-2-metilpiperidina (99 mg, 1 mmol) umesto (S)-2-metilpiperidina.

Intermedijarni produkt 15

1

(S)-2-(3-metoksipiperidin-1-il)etan-1-ol

Sintetizovano u skladu sa metodom intermedijarnog produkta 13, korišćenjem (S)-3-metoksipiperidina (173 mg, 1,50 mmol) umesto (S)-2-metilpiperidina.

Intermedijarni produkt 16

(R)-2-(3-metoksipiperidin-1-il)etan-1-ol

Sintetizovano u skladu sa metodom intermedijarnog produkta 13, korišćenjem R-3-metoksipiperidina (173 mg, 1,50 mmol) umesto (S)-2-metilpiperidina.

Intermedijarni produkt 17

3-(1,4-oksazepan-4-il)propan-1-ol

U bočicu je dodat homomorfolin (0,250 g, 2,472 mmol), acetonitril (4,943 ml, 2,472 mmol) i 3-bromo-1-propanol (0,2459 ml, 2,719 mmol). Dodat je kalijum karbonat (0,6832 g, 4,943 mmol) i smeša je zagrejana do 50 °C i mešana 6 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa DCM

2

(dihlorometan), filtrirana i sakupljene čvrste supstance su isprane sa DCM. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i sirovo ulje je prečišćeno hromatografijom pomoću kolone (Biotage Isolera, 12 g Isco RediSep Gold, 10-20 % MeOH/DCM sa 0,2 % NH4OH) da bi se dobio 3-(1,4-oksazepan-4-il).)propan-1-ol (0,272 g, 1,708 mmol) kao bezbojno ulje.

Intermedijarni produkt 18

3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1-ol

Sintetizovano prema metodi Intermedijarnog produkta 17, korišćenjem (1S,4S)-2-Oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptana (0,250 g, 2,522 mmol) umesto homomorfolina.

Intermedijarni produkt 19

2-(4-metoksipiperidin-1-il)etan-1-ol

Sintetizovano prema metodi Intermedijarnog produkta 13, korišćenjem 4-metoksipiperidina (173 mg, 1,50 mmol) umesto (S)-2-metilpiperidina.

Intermedijarni produkt 20

2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)etan-1-ol

Sintetizovano prema metodi Intermedijarnog produkta 13, korišćenjem 4,4-difluoropiperidin hidrohlorida (173 mg, 1,50 mmol) umesto (S)-2-metilpiperidina.

Intermedijarni produkt 21

(S)-2-(3-fluoropiperidin-1-il)etan-1-ol

Sintetizovano u skladu sa metodom Intermedijarnog produkta 13, korišćenjem S-3-fluoropiperidin hidrohlorida (209 mg, 1,50 mmol) umesto (S)-2-metilpiperidina.

Intermedijarni produkt 22

benzil 4-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(metilsulfinil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1 -karboksilat

Korak A: terc-butil 4-hidroksi-2-(metiltio)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U mešani rastvor 1-terc-butil 4-etil 3-oksopiperidin-1,4-dikarboksilata (50,0 g, 184 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (1,00 L) na 25 °C pomoću azota je dodat NaOMe (49,8 g)., 921 mmol, 5,00 ekv.), zatim 2-metilizotiourea (62,4 g, 331 mmol, 1,80 ekv., H2SO4) kao čvrsta supstanca.

Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je

4

podešena na pH 5 sa HCl (2 M), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio MeOH. Talog je suspendovan u 300 ml etil acetata i 300 ml vode i mešan brzo. Suspenzija je filtrirana i bela čvrsta supstanca je sakupljena. Filtrat je odvojen i organski sloj je ispran vodom (1 × 300 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su izolovani, sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (51,0 g, 138 mmol, 75,4 % prinosa, 81,0 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 298,2 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešanu suspenziju terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-577-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (51,0 g, 171 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (500 ml) na 0 °C je dodat DIEA (44,3 g, 343 mmol, 59,9 ml, 2,00 ekv.), a zatim trifluorometansulfonski anhidrid (72,6 g, 257 mmol, 42,4 ml, 1,50 ekv.) pomoću azota. Odmah se formira smeđi rastvor. Posle mešanja na 25 °C tokom 16 sati, reakcija je koncentrovana da bi se dobilo smeđe ulje. Smeđe ulje je prečišćeno hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter-etil acetat = 1:0 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (46,0 g, 107 mmol, 62,4 % prinosa) kao žuta čvrsta supstanca ESI MS mz 430,2 [M+H]+.

Korak C: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešani rastvor terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (46,0 g, 107 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (500 ml) je dodat DIEA (27,7 g, 214 mmol, 37,4 ml, 2,00 ekv.), a zatim benzil piperazin-1-karboksilat (25,9 g, 117 mmol, 22,7 ml, 1,10 ekv.). Reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 1 sata u atmosferi azota. Reakciona smeša je sipana u etil acetat (300 ml), isprana sa H2O (300 ml × 3) i slanim rastvorom (200 ml), osušena pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1:0 do 5:1) da bi se dobio tercbutil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4d]pirimidin-7-karboksilat (51,0 g, 96,9 mmol, 90,5 % prinosa, 92,0 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca ESI MS m/z 500,3 [M+H]+.

Korak D: Benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (25,0 g, 50,0 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (50,0 ml) je dodat TFA (85,6 g, 750 mmol, 55,6 ml, 15,0 ekv.). Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Talog je rastvoren u 300 ml etil acetata i 300 ml vode i brzo mešan. Smeša je podešena na pH 8 sa Na2CO3. Organski sloj je ispran vodom (1 × 300 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml), osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat (19,0 g, 46,6 mmol, 93,2 % prinosa, 98,0 % čistoće) kao žuto ulje. ESI MS m/z 400,2 [M+H]+.

Korak E: Benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat: Smeša 3-benziloksi-1-bromonaftalena (16,3 g, 52,1 mmol, 1,30 ekv.), benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)piperazin-1-karboksilat (16,0 g, 40,1 mmol, 1,00 ekv.), Cs2CO3 (32,6 g, 100 mmol, 2,50 ekv.), Pd2(dba)3 (5,50 g, 6,01 mmol, 0,15 ekv.) i 2-fioksiodi -2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (3,74 g, 8,01 mmol, 0,20 ekv.) u dioksanu (300 ml) je degasirana i pročišćena azotom 3 puta. Smeša je mešana na 85 °C tokom 5 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (200 ml) na 0 °C i ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 150 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 10/1 do 5/1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (16,0 g, 22,8 mmol, 56,9 % prinosa, 90,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 632,5 [M+H]<+>.

Korak F: Benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U mešani rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4il]piperazin-1 -karboksilat (8,00 g, 12,7 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (200 ml) je dodat m-CPBA (2,73 g, 12,7 mmol, 80,0 % čistoće, 1,00 ekv.) na 0 °C pomoću azota. Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata u atmosferi azota, reakciona smeša je ugašena dodavanjem Na2S2O3 (10,0 ml) na 0 °C, razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana sa DCM (200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni omoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 1/0 do 10/1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (3,50 g, 4,92 mmol, 38,8 % prinosa, 91,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

ESI MS m/z 648,5 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 23

(R)-1-(4-(2-hidroksipropil)piperazin-1-il)etan-1-on

Korak A: 1-[4-[(2R)-2-hidroksipropil]piperazin-1-il]etanon: (2R)-2-metiloksiran (1,00 g, 17,2 mmol, 1,20 ml, 1,00 ekv.) i 1-piperazin-1-iletanon (8,00 g, 62,4 mmol, 3,62 ekv.) su stavljeni u mikrotalasnu epruvetu. Zapečaćena epruveta je zagrevana na 150 °C 1 sat pomoću mikrotalasne pećnice. Smeša je rastvorena u DCM (80,0 ml), dodat (Boc)2O (3,62 ek, 13,6 g) i mešana na 20 °C tokom 1 sata. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (DCM/MeOH 100/1 do 10/1) da bi se dobio 1-[4-[(2R)-2-hidroksipropil]piperazin-1-il]etanon (3,80 g, 13,5 mmol, 78,2 % prinosa, 66,0 % čistoće) kao žuto ulje.

Intermedijarni produkt 24

1-(benziloksi)-3-bromo-5-ciklopropilbenzen

Korak A: 1-benziloksi-3,5-dibromo-benzen: U smešu 3,5-dibromofenola (1,50 g, 5,95 mmol, 1,00 ekv.) i K2CO3 (2,47 g, 17,9 mmol, 3,00 ekv.) u MeCN (30,0 ml) dodat je benzil bromid (1,07 g, 6,25 mmol, 6,00 ekv.),742 µL, 1,05 ekv.), reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1:1 da bi se dobio 1-benziloksi-3,5-dibromobenzen (1,60 g, 4,68 mmol, 78,6 % prinosa) kao bezbojno ulje.

Korak B: 1-benziloksi-3-bromo-5-ciklopropilbenzen: Smeši 1-benziloksi-3,5-dibromobenzena (1,20 g, 3,51 mmol, 1,00 ekv.) i ciklopropilborne kiseline (392 mg, 4,56 mmol, 1,30 ekv.) u H2O (4,00 ml) i dodat je dioksan (20,0 ml).

Pd(dppf)Cl2 (513 mg, 702 µmol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (2,29 g, 7,02 mmol, 2,00 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati pod N2. Reakciona smeša je dodata u vodu (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 ml).

Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1:1 da bi se dobio 1-benziloksi-3-bromo-5-ciklopropil-benzen (270 mg, 890 umol, 25,4 % prinosa) kao bezbojno ulje.

Intermedijarni produkt 25

benzil 4-(2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Korak A: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-piridorJ,4-d)pirimidin-7-karboksilat: U smešu 3-morfolinopropan-1-ola (5,46 g, 37,6 mmol, 2,00 ekv.) u THF (100 ml) dodat je NaH (2,26 g, 56,4 mmol, 60,0 % čistoće, 3,00 ekv.) u porcijama na 0 °C. Nakon što je smeša mešana na 0 °C tokom 30 minuta, rastvor terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfonil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ] pirimidin-7-karboksilat (10,0 g, 18,8 mmol, 1,00 ekv.) u THF (100 ml) je dodat i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1,5 sat pod N2. Smeša je sipana u vodeni rastvor NH4Cl (300 ml) i ekstrahovana sa DCM (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=50:1 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (7,70 g, 12,8 mmol, 67,8 % prinosa, 98,8 % čistoće) kao žuto ulje. ESI MS m/z 597,4 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (7,70 g, 12,9 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (80,0 ml) je dodat TFA (119 g, 1,04 mol, 76,9 ml, 80,6 ekv.), i reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana, zatim razblažena sa DCM (100 ml) i podešena na pH 8 sa vodenim NaOH. Organski sloj je odvojen, osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio benzil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat (6,00 g, 11,2 mmol, 86,9 % prinosa, 92,8 % čistoće) kao žuto ulje. ESI MS m/z 497,4 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 26

4-(benziloksi)-2-bromo-1-fluorobenzen

U rastvor 3-bromo-4-fluorofenola (4,00 g, 20,9 mmol, 1,00 ekv.) i K2CO3 (8,68 g, 62,8 mmol, 3,00 ekv.) u ACN (80,0 ml) dodat je benzil bromid (3,65 g, 21,4 mmol, 2,54 ml, 1,02 ekv.) i reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleteretil acetat; gradijent od 1:0 do 10:1) da bi se dobio 4-benziloksi-2-bromo-1-fluoro-benzen (5,02 g, 17,0 mmol, 81,0 % prinosa, 95 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca.

Intermedijarni produkt 27

2-(3-fluoropirolidin-1-il)etan-1-ol

Korak A: terc-butil 3-fluoropirolidin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 3-hidroksipirolidin-1-karboksilata (10,0 g, 53,4 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (150,00 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (DAST) (12,9 g, 80,1 mmol, 10,6 ekv.) na -40 °C u atmosferi azota. Posle mešanja na -40 °C tokom 2 sata, smeša je zagrejana na 20 °C i mešana tokom 16 sati. Smeša je sipana u 5 % vodeni rastvor natrijum bikarbonata (200 ml) i ekstrahovana dihlorometanom (2 × 100 ml).

Organski sloj je osušen pomoću natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100:1 do 5:1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 3-fluoropirolidin-1-karboksilat (4,30 g, 22,7 mmol, 42,6 % prinosa) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 5,27 (t, J = 3,6 Hz, 0,5 H), 5,13 (t, J = 3,6 Hz, 0,5 H), 3,77 - 3,38 (m, 4H), 2,26 - 2,15 (m, IH), 2,08-1,85 (m, IH), 1,46 (s, 9H).

Korak B: 3-fluoropirolidin: U rastvor terc-butil 3-fluoropirolidin-1-karboksilata (4,30 g, 22,7 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (50,00 ml) dodat je HCl/dioksan (4 M, 35,0 ml, 6,16 ekv.) u kapima na 0 °C. Smeša je zagrejana do 20 °C i mešana 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je triturisan sa dizopropil etrom (20 ml) i talog je filtriran i osušen pod vakuumom da bi se dobio 3-fluoropirolidin (2,70 g, 21,5 mmol, 94,6 % prinosa, HCl) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ = 5,51 (t, J = 3,6 Hz, 0,5 H), 5,38 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 3,66 - 3,27 (m, 5H), 2,45 - 2,12 (m, 2H).

Korak C: metil 2-(3-fluoropirolidin-1-il)acetat: Suspenzija 3-fluoropirolidina (2,70 g, 21,5 mmol, 1,00 ekv., HCl) u DCM (27,00 ml) je ohlađena na 0 °C. Dodati su trietilamin (5,44 g, 53,8 mmol, 7,45 ml, 2,50 ekv.) i metil 2-bromoacetat (3,62 g, 23,7 mmol, 2,23 ml, 1,10 ekv.) i reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa CH2Cl2 (100 ml) i vodom (50 ml). Organski sloj je ispran sa 5 % vodenim rastvorom limunske kiseline (1 × 50 ml). Vodeni sloj je bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (20 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni pomoću natrijum sulfata i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio metil 2-(3-fluoropirolidin-1-il)acetat (2,20 g, 13,7 mmol, 63,5 % prinosa).<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 5,22 - 5,02 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,35 (s, 2H), 3,07 - 2,93 (m, 1H), 2,91 - 2,77 (m, 2H), 2,67 (dt, J = 5,2, 8,4 Hz, 1H), 2,21 - 1,93 (m, 2H).

Korak D: 2-(3-fluoropirolidin-1-il)etanol: U rastvor LiAlH4 (706 mg, 18,6 mmol, 1,50 ekv.) u THF (20 ml) dodat je rastvor metil 2-(3-fluoropirolidin-1-il)acetata (2,00 g, 12,4 mmol, 1,00 ekv.) u THF (10 ml) u kapima na 0 °C. Smeša je zagrejana do 20 °C i mešana 3 sata. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum sulfata (1 ml). Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Proizvod je prečišćen hromatografijom silika gela korišćenjem 5 % MeOH u DMC. Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 2-(3-fluoropirolidin-1-il)etanol (1,20 g, 9,01 mmol, 72,6 % prinosa) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 5,28 - 5,05 (m, 1H), 3,68 - 3,61 (m, 2H), 2,99 - 2,73 (m, 4H), 2,72 - 2,67 (m, 2H -2), 2,45 (m, IH), 2,28 - 1,97 (m, 2H).

Intermedijarni produkt 28

1-(terc-butil) 3-metil piperazin-1,3-dikarboksilat

1

Korak A: metil piperazin-2-karboksilat: U smešu 1-terc-butil 2-metil piperazin-1,2-dikarboksilata (5,0 g, 22,6 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (50,0 ml) je dodat HCl/dioksan (4,0 M, 134 ml). Reakciona smeša je degazirana i pročišćena azotom 3 puta, i smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati u atmosferi azota.

Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće da bi se dobio metil piperazin-2-karboksilat (4,89 g, 2HCl, sirov) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: 1-(terc-butil) 3-metil piperazin-1,3-dikarboksilat: U rastvor metil piperazin-2-karboksilata (4,30 g, sirov) i TEA (8,02 g, 79,2 mmol, 11,0 ml) u MeOH (50,0 ml) dodat je di-terc-butil dikarbonat (4,32 g, 19,8 mmol, 14,5 ml). Posle mešanja na 25 °C tokom 12 sati, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 1:0 do 20:1) da bi se dobio 1-(terc-butil) 3-metil piperazin-1,3-dikarboksilat (4,80 g, 19,7 mmol, dva koraka, 99,0 % prinosa) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 4,10-3,85 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,71-3,65 (m, 1H), 3,47-3,38. (m, 1H), 3,10-2,98 (m, 2H), 2,78-2,66 (m, IH), 2,17 (s, 1H), 1,46 (s, 9H).

Intermedijarni produkt 29

4-bromonaftalen-2-ol

Korak A: 2,4-dibromonaftalen-1-amin: U rastvor Br2 (246 g, 1,54 mol, 79,3 ml, 2,18 ekv.) u AcOH (750 ml) dodat je rastvor naftalen-1-amina (101 g, 705 mmol, 99,0 ml, 1,00 ekv.) u AcOH 500 ml) na sobnoj temperaturi, i reakcija je mešana na 70 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i filtrirana. Filterski kolač je opran sa AcOH (300 ml), a zatim dodan u 20 % vodenog NaOH (1,2 l). Smeša je mešana 20 min i filtrirana. Izolovana čvrsta supstanca je isprana vodom (1 l) i osušena pod vakuumom da bi se dobio 2,4-

2

dibromonaftalen-1-amin (200 g, 664 mmol, 94,2 % prinosa) kao siva čvrsta supstanca. ESI MS m/z 301,9 [M+H]<+>.

Korak B: 4-bromo-1-diazonio-naftalen-2-olat: U rastvor 2,4-dibromonaftalen-1-amina (60,0 g, 199 mmol, 1,00 ekv.) u AcOH (900 ml) i propionske kiseline (150 ml) dodat je NaNO2 (16,5 g, 239 mmol, 13,0 ml, 13,0 ml, 1,20 ekv.) u porcijama na 5-8 °C tokom 30 min, a zatim je reakciona smeša mešana na 5-8 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu (4000 ml), a rezultujuća čvrsta supstanca je sakupljena i isprana vodom (2 × 50 ml) da bi se dobio 4-bromo-1-diazonio-naftalen-2-olat (150 g, vlažan sirov) kao siva čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,12 - 8,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,62 – 7,58 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,41 - 7,37 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,31 - 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H).

Korak C: 4-bromonaftalen-2-ol: U rastvor 4-bromo-1-diazonio-naftalen-2-olata (100 g, 402 mmol, 1,00 ekv.) u EtOH (2,00 l) dodat je u porcijama NaBH4 (30,4 g, 803 mmol, 2,00 ekv.) na 13-15 °C tokom 1 sata, i reakciona smeša je mešana na 15-18 °C tokom 3 sata. Reakcija je filtrirana i koncentrovana do suvoće. Talog je rastvoren u DCM (1000 ml) i ispran vodom (500 ml × 2).

Organska faza je osušena pomoću Na2SO4 i koncentrovana do suvoće. Talog je prečišćen hromatografom pomoću kolona silika gela, eluiranjem sa dietil etar/etil acetatom (60:1 do 10:1). Izolovani proizvod je dalje prečišćen pomoću HPLC reverzne faze da bi se dobio 4-bromonaftalen-2-ol (40,0 g, 139 mmol, 17,3 % prinosa, 77,4 % čistoće) kao siva čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,07 - 8,05 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60 - 7,58 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,41 - 7,36 (m, 3H), 7,07 (s, 1H).

Korak D: 3-benziloksi-1-bromo-naftalen: Smeša 4-bromonaftalen-2-ola (30,0 g, 134 mmol, 1,00 ekv.), benzil bromida (25,3 g, 148 mmol, 17,6 ml, 1,10 ekv.) i K2CO3 (55,7 g, 403 mmol, 3,00 ekv.) (500 ml) je zagrevana na 80 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone silika gela, eluiranjem dietil etar/etil acetatom (100:1 do 60:1) da bi se dobio 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (40,0 g, 128 mmol, 95 % prinosa) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,19 - 8,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,75 - 7,32 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,64 - 7,63 (d, J= 2,4 Hz,1H), 7,52 – 7,37 (m, 7H), 7,23 – 7,21 (d, J= 2,0 Hz,1H), 5,2 (s, 2H).

Intermedijarni produkt 30

3-metoksinaftalen-1-il trifluorometansulfonat

Korak A: 3-metoksinaftalin-1-ol: Rastvoru naftalen-1,3-diola (3,00 g, 18,7 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (60,0 ml) dodata je HCl/MeOH (4 M, 60,0 ml, 12,8 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 60 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat=10:1 do 5:1) da bi se dobio 3-metoksinaftalen-1-ol (2,10 g, 12,1 mmol, 64,4 % prinosa) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3-d6) δ = 8,10 - 8,08 (d, J= 8,4 Hz, 1H).7,73 - 7,71 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,47 - 7,45(m, 1H), 7,38 - 7,35(m, 1H), 6,80 - 6,79 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 6,56 - 6,55 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H).

Korak B: (3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat: U rastvor 3-metoksinaftalen-1-ola (2,10 g, 12,0 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (40,0 ml) dodat je DIEA (7,79 g, 60,3 mmol, 10,5 ml, 5,00 ekv.) i anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (5,10 g, 18,1 mmol, 2,98 ml, 1,50 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Smeša je razblažena sa DCM (30 ml) i vodom (10 ml) i ekstrahovana sa DCM (20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat=20:1 do 10:1) da bi se dobio (3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (3,00 g, 8,52 mmol, 70,7 % prinosa, 87,0 % čistoće) kao smeđe ulje. ESI MS m/z 307,1 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 31

4

7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin

Korak A: 77-benzil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol: U EtOH (600 ml) je dodat Na (5,56 g, 241 mmol, 5,73 ml, 2,40 ekv.) u porcijama.

Reakciona smeša je mešana 1 sat. U smešu je dodat etil 1-benzil-3-oksopiperidin-4-karboksilat (30,0 g, 100 mmol, 1,00 ekv., HCl) i urea (14,5 g,

242 mmol, 13,0 ml, 2,40 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 75 °C tokom 36 sati, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Talog je rastvoren u vodi (50 ml) i zakiseljen sa HCl (120 ml, 2M). Bela čvrsta supstanca je istaložena iz rastvora i sakupljena je filtracijom. Filterski kolač je osušen pod vakuumom da bi se dobio 7-benzil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol (22,0 g, 83,8 mmol, 83,2 % prinosa, 98 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,97 (br s, 1H), 10,66 (br s, 1H), 7,55 - 6,95 (m, 5H), 3,81 - 3,50 (m, 2H), 3,26 - 2,91 (m, 2H), 2,77 - 2,58 (m, 2H), 2,34 - 2,09 (m, 2H).

Korak B: 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin: U rastvor DIEA (30,1 g, 233 mmol, 40,7 ml, 3,00 ekv.) u POCl3 (330 g, 2,15 mol, 200 ml) dodat je 7-benzil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-2,4-diol (20,0 g, 77,7 mmol, 1,00 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 5 sati.

Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je rastvoren u DCM (400 ml) i sipa se u zasićeni NaHCO3 (200 ml). Smeša je ekstrahovana sa DCM (2 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar: 10:1 do 0:1) da bi se dobio 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (7,70 g, 26,2 mmol, 33,7 % prinosa) kao smeđe ulje.<1>HNMR (300 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,28 (m, 5H), 3,73 (s, 2H), 3,66 (br s, 2H), 2,84 (br s, 4H)

Intermedijarni produkt 32

terc-butil4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-(metilsulfonil)-5,6-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(8H)-karboksilat

Korak A: terc-butil4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešani rastvor 1-terc-butil 4-etil-3-oksopiperidin-1,4-dikarboksilata (44,0 g, 162 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (1,00 ml) na 25 °C pod azotom je dodat rastvor NaOMe (35,0 g, 649 mmol, 4,00 ekv.) u MeOH (600 ml) špricem što je praćeno 2-metilizotioureom (61,1 g, 324 mmol, 2,00 ekv., H2SO4). Posle mešanja na 25 °C tokom 16 sati, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio MeOH. Talog je suspendovan u 500 ml etil acetata i 500 ml vode i mešan brzo. Reakciona smeša je podešena na pH 5 sa HCl (2 M). Talog je filtriran i bela čvrsta supstanca je isprana etil acetatom i osušena pod vakuumom da bi se dobio terc-butil4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (33,0 g, 103 mmol, 63,8 % prinosa, 93,2 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 4,19 (s, 2 H), 3,49 (br s, 2 H), 2,46 (s, 3 H), 2,35 (br t, J = 5,2 Hz, 2 H), 1,42 (s, 9 H).

Korak B: dobiti terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešanu suspenziju terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (15,0 g, 50,4 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (200 ml) je dodat DIEA (26,1 g, 202 mmol, 35,2 ml, 4,00 ekv.) na 0 °C pod azotom, a zatim trifluorometansulfonski anhidrid (28,5 g, 101 mmol, 16,6 ml, 2,00 ekv.) putem šprice. Odmah se formira smeđi rastvor. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je prečišćena hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1:0 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (16,7 g, 35,7 mmol, 70,9 % prinosa, 91,9 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 374,0 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešani rastvor terc-butil2-metilsulfanil-4-(trifluorometil sulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (16,7 g, 38,9 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (100 ml) je dodat DIEA (10,0 g, 77,9 mmol, 2,00 ekv.) i benzil piperazin-1-karboksilat (9,41 g, 42,8 mmol, 1,10 ekv.). Reakcija je zagrejana do 100 °C i mešana 1 sat u atmosferi azota.

Reakciona smeša je razblažena vodom (150 ml) i pH vrednost reakcione smeše je podešena na 5 sa HCl (2 M) i ekstrahovana sa DCM (3 x 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim NaHCO3 (3 × 150 ml), slanim rastvorom (3 × 150 ml) i H2O (3 × 150 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (18,1 g, 36,2 mmol, 93,0 % prinosa, 94,1 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 500,1 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfonil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešani rastvor terc-butil4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (14,4 g, 28,9 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (150 ml) na 0 °C pod azotom je dodata meta-hlorperoksibenzojeva kiselina (17,4 g, 101 mmol, 3,50 ekv.) kao čvrsta supstanca. Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata u atmosferi azota, reakciona smeša je razblažena vodom (300 ml) i pH reakcione smeše je podešen na 8 zasićenim vodenim NaHCO3 i ekstrahovan sa DCM (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 200 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 10:1 do 1:2) da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfonil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (11,0 g, 19,7 mmol, 68,6 % prinosa, 95,4 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 532,1 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 33

terc-butil (1-bromoizohinolin-3-il)karbamat

Korak A: Smeša 1-bromoizohinolin-3-amina (400 mg, 1,79 mmol, 1,00 ekv.) i terc-butoksikarbonil terc-butil karbonata (3,91 g, 17,9 mmol, 4,12 ml, 10,0 ekv.) je mešana na 70 °C tokom 16 sati. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, dietil etar/etil acetat = 5:1) da bi se dobio terc-butil N-(1-bromo-3-izohinolil) karbamat (400 mg, 1,24 mmol, 69,2 %prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 322,1, 324,1 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 34

3-metoksi-6-metilnaftalen-1-il trifluorometansulfonat

Korak A: 3-metoksinaftalen-1-ol: U rastvor naftalen-1,3-diola (40,0 g, 250 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (800 ml) je dodat HCl (4 M, 750 ml, 12,0 ekv., 4 M u MeOH) na 0 °C. Smeša je zagrejana do 18 °C i mešana 30 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 1/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 3-metoksinaftalen-1-ol (17,7 g, 96,5 mmol, 38,6 % prinosa, 95 % čistoće) kao crveno ulje.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 8,17 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50 (ddd, J = 1,2, 6,8, 8,0 Hz, 1H), 7,38 (ddd, J = 1,2, 6,8, 8,0 Hz, IH), 6,81 (d, J = 2,0 Hz, IH), 6,76 (br s, IH), 6,62 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 3,91 (s, 3H).

Korak B: terc-butil-[(3-metoksi-1-naftil)oksi]-dimetil-silan: U rastvor 3-metoksinaftalen-1-ola (20,0 g, 115 mmol, 1,00 ekv.) i imidazola (23,5 g, 344 mmol, 3,00 ekv.) u THF (400 ml) dodat je TBSCl (26,0 g, 172 mmol, 21,1 ml,1,50 ekv.) u kapima na 0 °C. Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana tokom 16 sati. Smeša je razblažena petrolejskim eterom (600 ml) i etil acetatom (200 ml), a zatim isprana vodom (1 × 200 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 10/1). terc-butil-[(3-metoksi-1-naftil)oksi]-dimetil-silan (28,0 g, 97,1 mmol, 84,6 % prinosa) je dobijen kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,01 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,35 (dt, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 7,24 (dt, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 2,0 Hz, IH), 6,48 (d, J = 2,4 Hz, IH), 3,82 (s, 3H), 1,02 (s, 9H), 0,23 (s, 6H).

Korak C: terc-butil-[[3-metoksi-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-naftil]oksi]-dimetil-silan i terc-butil ((3-metoksi-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)naftalen-1-il)oksi)dimetilsilan: Smeša terc-butil-[(3-metoksi-1-naftil)oksi]-dimetil-silana (26,0 g, 90,1 mmol, 1,00 ekv.), 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolan (45,8 g,

180 mmol, 2,00 ekv.), (1Z,5Z)-ciklookta-1,5- dien; 2,4-dimetil-BLAHbiciklo[1.1.0]butan (2,39 g, 3,61 mmol, 0,04 ekv.) i 4-terc-butil-2-(4-terc-butil-2-piridil)piridin (1,45 g, 5,41 mmol, 0,06 ekv.) u heksanu (500 ml) je mešano na 100 °C u atmosferi azota tokom 16 sati. Smeša je razblažena vodom (500 ml) i etil acetatom (1000 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 500 ml), osušen pomoću natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petroleum etar/etil acetat 100/1 do 10/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobila smeša terc-butil-[[3-metoksi-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-naftil]oksi]-dimetil-silan i terc-butil((3-metoksi-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)naftalen-1-il))oksi)dimetilsilan (38,0 g,

85,3 mmol, 94,6 % prinosa, 93 % čistoće) kao svetlo žuto ulje. ESI MS m/z 415,5 [M+H]<+>

Korak D: 8-(terc-butil(dimetil)silil]oksi-6-metoksi-naftalen-2-ol: U rastvor smeše (36,0 g, 86,9 mmol, 1,00 ekv.) terc-butil-[[3-metoksi-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il))-1-naftil]oksi]-dimetil-silan i terc-butil((3-metoksi-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)naftalen-1 -il)oksi)dimetilsilanein u acetonu (400 ml) je dodat rastvor oksona (58,7 g, 95,6 mmol, 1,10 ekv.) u H20 (400 ml) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Smeša je ugašena sa 5 % vodenog rastvora natrijum tiosulfata (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 300 ml). Ekstrakti su kombinovani i isprani vodom (1 × 200 ml), slanim rastvorom (1 × 200 ml), osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 200/1 do 20/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 8-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-6-metoksi-naftalen-2-ol (9,00 g, 28,4 mmol, 32,7 % prinosa, 96 % čistoće) kao bezbojno ulje i 5-[/er/-butil(dimetil)silil]oksi-7-metoksi-naftalen-2-ol (9,00 g, 29,0 mmol, 33,4 % prinosa, 98 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 305,2 [M+H]<+>

Korak E: [5-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-metoksi-2-naftil] trifluorometansulfonat: U rastvor 5-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-metoksinaftalen-2-ola (11,0 g, 36,1 mmol, 1,00 ekv.) i DIEA (14,0 g, 108 mmol, 18,9 ml, 3,00 ekv.) u DCM (150 ml) je dodat Tf2O (12,2 g, 43,4 mmol, 7,15 ml, 1,20 ekv.) u kapima na -40 °C. Smeša je mešana 1 sat. Smeša je razblažena dihlorometanom (200 ml) i isprana vodom (1 × 200 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 10/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio [5-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-metoksi-2-naftil] trifluorometansulfonat (13,0 g, 29,8 mmol, 82,4 % prinosa, 100 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 436,9 [M+H]<+>

Korak F: terc-butil-[(3-metoksi-6-metil-1-naftil)oksil-dimetil-silan: U rastvor [5-[terc-butil(dimetil)silil]oksi-7-metoksi-2-naftil]trifluorometansulfonata (12,5 g, 28,6 mmol, 1,00 ekv.) i K2CO3 (11,9 g, 85,9 mmol, 3,00 ekv.) u dioksan (160 ml) je dodat Pd(PPh3)4 (3,31 g, 2,86 mmol, 0,10 ekv.) i trimetilboroksin (14,4 g, 57,3 mmol, 16,0 ml, 2,00 ekv.) u atmosferi azota. Reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 16 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (200 ml), a zatim isprana vodom (1 × 200 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 5/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobilo terc-butil-[(3-metoksi-6-metil-1-naftil)oksi]-dimetil-silan (8,00 g, 24,6 mmol, 85,9 % prinosa, 93 % čistoće) kao bezbojno ulje kao crvena čvrsta supstanca. ESI MS m/z 303,2 [M+H]<+>

Korak G: 3-metoksi-6-metil-naftalen-1-ol: U rastvor terc-butil-[(3-metoksi-6-metil-1-naftil)oksi]-dimetil-silana (8,00 g, 26,5 mmol, 1,00 ekv.) u THF (100 ml) dodat je TBAF (10,4 g, 39,7 mmol, 1,50 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 3 sati. Smeša je razblažena vodom (100 ml) i etil acetatom (200 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 100 ml), osušen pomoću natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 50/1 do 5/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 3-metoksi-6-metil-naftalen-1-ol (4,70 g, 25,0 mmol, 94,4 % prinosa) kao crvena čvrsta supstanca. ESI MS m/z 188,4 [M+H]<+>

Korak H: 3-metoksi-6-metil-1-naftil trifluorometansulfonat: U rastvor 3-metoksi-6-metil-naftalen-1-ola (4,70 g, 25,0 mmol, 1,00 ekv.) i DIEA (9,68 g, 74,9 mmol, 13,1 ml, 3,00 ekv.) u DCM (3,00 ekv.) dodat je Tf2O (8,45 g,

30,0 mmol, 4,94 ml, 1,20 ekv.) u kapima na -40 °C. Smeša je mešana 1 sat.

Smeša je razblažena dihlorometanom (200 ml) i isprana vodom (1 × 200 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 10/1).3-metoksi-6-metil-1-naftil trifluorometansulfonat (7,70 g, 24,0 mmol, 96,2 % prinosa, 99,9 % čistoće) je dobijen kao bezbojno ulje. ESI MS m/z 320,7 [M+H]<+>.

Sledeći intermedijarni produkti su pripremljeni u skladu sa pripremom za Intermedijarno 3, zamenom odgovarajućeg fenola za 2-bromo-3-fluorofenol.

1

Intermedijarni produkt 44

2

2-bromo-3-fluoro-1-(metoksimetoksi)-4-metilbenzen

Korak 1: 3-fluoro-4-metilfenol (1,016 g, 8,055 mmol) je stavljen u Cs2(3,9 ml, 64,44 mmol) i ohlađen je na 0 °C. Br2 (0,4150 ml, 8,055 mmol) je dodan i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata.10 % Na2S2O2 je dodano, a smeša je izdvojena sa DCM. Organski slojevi su kombinovani, sušeni i filtrirani da bi se obezbedio 2-bromo-3-fluoro-4-metilfenol (1,389 g, 6,775 mmol, 84,10 % prinosa) koji je korišćen direktno u sledećem koraku.

Korak 2: 2-bromo-3-fluoro-1-(metoksimetoksi)-4-metilbenzen pripremljen je u skladu sa postupkom Intermedijarnog produkta 8 koristeći 2-bromo-3-fluoro-4-metilfenol umesto 2-bromo-3-fenol.

Intermedijarni produkt 45

2-bromo-1 -izopropoksi-4-(metoksimetoksi)benzen

Korak 1: 4-izopropoksifenol (1,00 g, 6,57 mmol) i TEA (1,83 ml, 13,1 mmol) stavljeni su u DCM (25 ml). Acetil hlorid (7,56 ml, 7,56 mmol) je dodat u kapima i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Voda je dodata, a smeša je izdvojena sa DCM. Organski sloj je osušen, filtriran i koncentrovan da bi se obezbedio 4-izopropoksifenil acetat (1,24 g, 6,38 mmol, 97,2 % prinosa) koji je direktno u sledećem koraku.

Korak 2: 4-Isopropoksifenil acetat (1,24 g, 6,585 mmol) je stavljen u ACN (20 ml) i dodan je N-bromoklomcinimid (1,173 g, 6,590 mmol). Smeša je mešana tokom 18 sati. Voda je dodata, a smeša je ekstrahirana eterom. Organski slojevi su kombinovani, sušeni i koncentrovani da bi se obezbedio 3-bromo-4-propoksifenil acetat (1,584 g, 5,800 mmol, 88,00 % prinosa) koji je direktno u sledećem koraku.

Korak 3: 3-bromo-4-izopropoksifenil acetat (500 mg, 1,83 mmol) stavljen je u MeOH (7 ml). U smešu je dodat rastvor KOH (111 mg, 1,98 mmol) u vodi (2 ml) i mešan je 1 sat na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podešena na pH 3 dodavanjem 1N HCl. Smeša je izdvojena sa DCM. Ekstrakti su kombinovani, osušeni, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi 3-bromo-4-izopropoksifenol koji je direktno korišćen u sledećoj reakciji.

Korak 4: 2-bromo-1-izopropoksi-4-(metoksimetoksi)benzen pripremljen je po proceduri za Intermedijarni produkt 8 koristeći 3-bromo-4-izopropoksifenol umesto 2-bromo-3-fluorofenol

Intermedijarni produkt 46

1-bromo-3-hloro-2-izopropil-5-(metoksimetoksi)benzen

Korak 1: 1-bromo-3-hloro-2-izopropilni-5-metoksibenzen (952 mg, 3,61 mmol) je stavljen u DCM (3 ml) i ohlađen je na 0 °C. BBr3 (9030 µL, 9,03 mmol) je dodan i reakcija je mešana na 0 °C tokom 2 sata. Voda je dodata, a smeša je izdvojena sa DCM. Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni talog je prečišćen silika gelom (0-20 % EtOAc u heksanu) da bi se dobio 3-bromo-5-hloro-4-izopropilfenol (575 mg, 2,30 mmol, 63,8 % prinosa)

Korak 2: 1-bromo-3-hlor-2-izopropil-5-(metoksimetoksi)benzen pripremljen je u skladu sa postupkom Intermedijarno 8 koristeći 3-bromo-5-hloro-4-izopropilfenol umesto 2-

Intermedijarni produkt 47

4

1-jodo-3-(metoksimetoksi)naftalin

U rastvor 4-jodonaftalen-2-ola (0,80 g, 3,0 mmol) u DCM (20 ml) dodat je N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (1,1 ml, 5,9 mmol) i hloro(metoksi)metan (0,29 g, 3,6 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, sa dodatnim hloro(metoksi)metanom (0,15 g) koji je dodat posle 2 sata. Rastvor je opran sa slanim rastvorom i koncentrisan in vacuo. Materijal je pročišćen kromatografijom koristeći gradijent od 0 do 10 % EtOAc/heksianes kao eluent koji daje 1-jodo-3-(metoksimetoksi)naftalin (0,80 g, 2,5 mmol, 86 % prinosa).

Intermedijarni produkt 48

3-benziloksi-1-bromo-naftalin

Korak A: 2,4-dibromonaftalen-1-amin: U rastvor Br2 (246 g, 1,54 mol, 79,3 ml) u AcOH (750 ml) dodat je rastvor naftalen-1-amina (101 g, 705 mmol, 99,0 ml) u AcOH (500 ml) na sobnoj temperaturi i reakcija je mešana na 70 °C 1 sat. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filterski kolač je opran sa AcOH (300 ml). Čvrsta supstanca je zatim suspendovana u 20 % vodenim NaOH (1,2 l). Smeša je mešana 20 minuta i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana vodom (1 l) i osušena pod vakuumom da bi se dobio 2,4-dibromonaftalen-1-amin (200 g, 664 mmol, 94,2 % prinosa) kao siva čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 301,9 [M+H]<+>.

Korak B: 4-bromo-1-diazonio-naftalen-2-olat: U rastvor 2,4-dibromonaftalen-1-amina (60,0 g, 199 mmol) u AcOH (900 ml) i propionske kiseline (150 ml) dodat je NaNO2 (16,5 g, 239 mmol, 13,0 ml) u porcijama na 5-8 °C tokom 30 minuta, a reakciona smeša je mešana na 5-8 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu (4000 ml), suspenzija je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana vodom (2 × 50 ml) da bi se dobio 4-bromo-1-diazonionaftalen-2-olat (150 g, vlažni sirovi) koji je odmah upotrebljen sirov u sledećem koraku. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,12 - 8,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,62 - 7,58 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,41 - 7,37 (t, J = 7,6 Hz, IH), 7,31 - 7,29 (d, J = 8,0 Hz, IH), 7,20 (s, IH).

Korak C: 4-bromonaftalen-2-ol: Rastvor 4-bromo-1-diazonio-2-olat (100 g, 402 mmol) u EtOH (2,00 l) je dodan u porcijama NaBH4 (30,4 g, 803 mmol) na 13-15 °C preko 1 sat, a reakcija mešana na 15-18 °C tokom 3 sata. Reakcija je filtrirana i koncentrovana do suvoće. Talog je rastvoren u DCM (1000 ml) i ispran vodom (500 ml × 2). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani do suvoće. Talog je prečišćen hromtografijom eluiranjem sa petrolejskim eterom/EtOAc (60/1 → 10/1) i materijal je ponovo prečišćen HPLC sa reverznom fazom da bi se dobio 4-bromonaftalen-2-ol (40,0 g, 139 mmol, 17,3 % prinosa, 77,4 % čistoće) kao siva čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,07 -8,05 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60 - 7,58 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,41 - 7,36 (m, 3H), 7,07 (s, 1H).

Korak D: 3-benziloksi-1-bromo-naftalin: Smeša 4-bromeftalan-2-ol (30,0 g, 134 mmol), BnBr (25,3 g, 148 mmol, 17,6 ml) i K2CO3 (55,7 g, 403 mmol) u MeCN (500 ml) je grejana na 80 °C 1 sat. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana do suvoće. Talog je prečišćen kolonom silika gela eluiranjem sa PE/EA (100/1 do 60/1) da bi se dobio 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (40,0 g, 128 mmol, 95 % prinosa).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,19 - 8,17 (d, J

= .7=8,0 Hz, 1H), 7,75 - 7,32 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,64 - 7,63 (d, J = 2,4 Hz,1H), 7,52 - 7,37 (M, 7H), 7,23 - 7,21 (d, J = 2,0 Hz,1H), 5,2 (s, 2H).

Intermedijarni produkt 49

benzil 4-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(metilsulfinil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Korak A: terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulkaza-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U rastvor 1-terc-butil 4-etil 3-oksapiperidin-1,4-dikarboksilata (50,0 g, 184 mmol) u MeOH (1,00 l) pod azotom je dodat NaOMe (49,8 g, 921 mmol) i 2-metilizotiourea (62,4 g, 331 mmol, H2SO4). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati. HCl (2 M) je dodat u reakcionu smešu do postizanja pH~5, a zatim je smeša koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Talog je suspendovan u 300 ml etilacetata i 300 ml vode. Suspenzija je filtrirana.

Organska faza je oprana vodom (1 × 300 ml), slanim rastvorom (1 × 200 ml), sušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobio terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulkanil-6,8-dihidro-5H-piridin[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (51,0 g, 138 mmol, 75,4 % prinosa, 81,0 % čistoće) koji je korišćen direktno u sledećoj reakciji. ES+APCI MS m/z 298,2 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 2-metilsulkalizac-4-(trifluorometil-sulfonodoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulkail-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (51,0 g, 171 mmol) u DCM (500 ml) dodaju se DIEA (44,3 g, 343 mmol, 59,9 ml) i Tf2o (72,6 g,

257 mmol, 42,4 mmol, 0 ml) u sekvenci na °C pod azotom. Reakciona smeša je grejana do 25 °C i mešana tokom 16 sati. Reakciona smeša je koncentrovana, a talog je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa EtOAc/Petroleum 0 → 10 % da bi se dobio terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-577-pirido[3,4- d]pirimidin-7-karboksilat (46,0 g, 107 mmol, 62,4 % prinosa). ES+APCI MS m/z 430,2 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-(4-benzyloksikarbonil piperazin-1-il)-2-metilsultans-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-metilsulkalization-4-(trifluorometil-sulfonodoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (46,0 g, 107 mmelin DMF (500 ml) dodaje se DIEA (27,7 g, 214 mmol, 37,4117 ml) i benzil piperazin-1-karboksilat (25,9 g, 117 mmol, 22,7 ml). Reakcija je grejana na 100 °C jedan sat pod atmosferom N2. Reakciona smeša je sipana u etil acetat (300 ml). Smeša je oprana sa H2O (300 ml × 3).

Organska faza je oprana slanim rastvorom (200 ml), osušena pomoću bezvodnim Na2SO4, koncentrovana in vacuo. Talog je pročišćen hromatografijom na koloni koristeći 0→20 % EtOAc/Petroleum kao eluent da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulkalizanata -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (51,0 g, 96,9 mmol, 90,5 % prinosa, 92,0 % čistoće) ES+APCI MS m/z 500,3 [M+H]<+>.

Korak D: Benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperizin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(4-benziloksikarbonil-piperiazin-1-il)-2-metilsulkalizin-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (25,0 g, 50 mmol) u DCM (50 ml) je dodan TFA (85,6 g, 750 mmol, 55,6 ml). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, a talog je otopljen u 300 ml etilacetata i 300 ml vode i Na2CO3 dodat do postizanja pH~8. Organski sloj je opran vodom (1 × 300 ml), slanim rastvorom (1 × 200 ml) i sušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Proizvod je korišćen direktno na sledeći korak bez daljeg pročišćavanja. ES+APCI MS m/z 400,2 [M+H]<+>.

Korak E: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša 3-benziloksi-1-bromonaftalena (16,3 g, 52,1 mmol), benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (16,0 g, 40,1 mmol), Cs2CO3 (32,6 g, 100 mmol), Pd2(dba)3 (5,50 g, 6,01 mmol) i RuPhos (3,74 g, 8,01 mmol) u dioksanu (300 ml) je degazirana sa N23 puta, a smeša mešana na 85 °C tokom 5 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (200 ml) na 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 150 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Talog jeprečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa 10→20 % MeOH/DCM da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benzodiloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (16,0 g, 22,8 mmol, 56,9 % prinosa, 90,0 % čistoće ES+APCI MS m/z 632,5 [M│II]<+>.

Korak F: benzil 4-[7-(3-benzodiloksi-1-naftil)-2-metilsulfinal-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (8,00 g, 12,7 mmol) u DCM (200 ml) je dodat m-CPBA (2,73 g, 12,7 mmol, 80,0 % čistoće) na 0 °C u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana dva sata na 0 °C. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem Na2S2O3 (10 ml) na 0 °C, a zatim razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana sa DCM (200 ml). Kombinovani organski slojevi oprani su slanim rastvorom (200 ml), sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa 0→10 % MeoH/DCM do benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (3,50 g, 4,92 mmol, 38,8 % prinosa, 91,0 % čistoće) ES+APCI MS m/z 648,5 [M+H]+.

Intermedijarni produkt 50

terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfonil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat

Korak A: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfonil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U mešani rastvor terc-butil4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (14,4 g, 28,9 mmol)) u DCM (150 ml) je dodata m-CPBA čvrsta supstanca (17,4 g, 101 mmol) na 0 °C pod azotom. Nakon mešanja na 0 °C tokom 2 sata, reakciona smeša je razblažena vodom (300 ml) i bazifikovana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 do postizanja pH ~ 8, a zatim ekstrahovana sa DCM (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi oprani su slanim rastvorom (3 × 200 ml), sušeni preko pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat 10/1 do 1/2) da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-metilsulfonil-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (11,0 g, 19,7 mmol, 68,6 % prinosa, 95,4 % čistoće). ES+APCI MS m/z 532,1 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 51

4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol

1

Korak A: 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol: U smešu 4-bromo-5-metil-1H-indazol (3 g, 14,2 mmol) i 3,4-dihidro-2H-piran (2,39 g, 28,4 mmol, 2,60 ml) u DCM (30 ml) je dodat TsOH<∗>H2O (270 mg, 1,42 mmol) i smeša mešana na 15 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, a talog je prečišćen hromatografijom na koloni koristeći 5→20& EtOAc/petroleum eter kao eluent da bi se dobio 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (4 g, 13,6 mmol, 95,3 % prinosa) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,01 (s, 1H), 7,47 (d, J = 0,7=8,4 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,70 (dd, 2,8, 9,2 Hz, 1H), 4,05 - 3,96 (m, 1H), 3,79 - 3,70 (m, 1H), 2,66 - 2,44 (m, 4H), 2,25 - 2,2H (m, 1H)), 1,84-1,56 (m, 3H).

Intermedijarni produkt 52

4-bromo-5-metoksi-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol

4-bromo-5-metoksi-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol je pripremljen nakon što je Intermedijarni produkt 51 zamenio 4-bromo-5-metoksi-1H-indazol 4-bromo-5-metil -1H-indazol u koraku A.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,00 (s, 1H), 7,53 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,70 (dd, J = 2,8, 9,2 Hz, 1H), 4,04-3,98 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,55-2,49 (m, 1H), 2,23-2,05 (m, 2H-), 1,83 1,69 (m, 3H).

Intermedijarni produkt 53

3-(benziloksi)-1-bromo-2-metilinaftalin

2

Korak A: etil 2-metil-3-okso-4-fenil-butanoat. U osušenu bocu od 250 ml sa tri nekce dodat je etil3-okso-4-fenil-butanoat (4,00 g, 19,4 mmol.), THF (50,0 ml), natrijum hidrid (931 mg, 23,3 mmol) i reakcija se meša 30 minuta na 0 °C. Zatim je u kapima dodat rastvor metil jodida (3,03 g, 21,3). Nakon što je dodavanje završeno, reakciona smeša je grejana do 20 °C i mešana dva sata na 20 °C. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (10,0 ml) na 20 °C, a zatim razblažena etil acetatom (20,0 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je zatim ekstrahiran etilacetatom (20,0 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30,0 ml), osušeni pomoću anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etil acetat 20:1 do 10:1) dajući etil 2-metil-3-okso-4-fenil-butanoat (3,60 g, 16,3 mmol, 84,3 % prinosa) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7,38 - 7,28 (m, 3H), 7,25 - 7,19 (m, 2H), 4,22 - 4,15 (m, 2H), 3,87 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 3,65 (k, J = 7,2 Hz, 1H), 1,34 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,30 - 1,26 (m, 3H).

Korak B: 2-metilnaftalin-1,3-diol. Rastvor etil 2-metil-3-okso-4-fenilbutanoata (3,60 g, 16,3 mmol) u koncentrovanoj sumpornoj kiselini (19,9 g, 203 mmol) je mešan na 15 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu (30,0 ml) i dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod vakuumom da bi se dobio 2-metilnaftalen-1,3-diol (1,80 g, 10,3 mmol, 63,2 % prinosa) kao crvena čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,65 - 7,54 (m, 1H), 7,41 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,36 - 7,31 (m, 1H), 6,80 (s, IH), 4,29 - 4,20 (s, 2H), 2,41 - 2,24 (s, 3H).

Korak C: 3-metoksi-2-metil-naftalin-1-ol.2-metilnaftalin-1,3-diol (1,70 g, 9,76 mmol) je dodan HCl/MeOH (2 M, 35,0 ml), a smeša rezultata mešana je na 30 °C tokom 3 dana. Reakcija je koncentrovana u vakuumu, a talog pročišćen od Prep-TLC (petrolejski eter: Etil acetat 1:1) da bi se dobio 3-metoksi-2-metilnaftalen-1-ol (800 mg, 4,25 mmol, 43,5 % prinosa) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,44 - 7,38 (m, 1H), 7,37 - 7,31 (m, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,14 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).

Korak D: (3-metoksi-2-metil-1-naftil)trifluorometansulfonat. U smešu 3-metoksi-2-metil-naftalen-1-ola (800 mg, 4,25 mmol) i piridina (504 mg, 6,38 mmol) u DCM (10,0 ml) dodat je anhidrid trifluorosirćetne kiseline (1,44 g, 5,10 mmol) u kapima na 0 °C u atmosferi N2. Smeša je grejana do 20 °C i mešana dodatnih 5 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a talog je prečišćen pomoću Prep-TLC (petrolejski eter: Etil acetat 1:1) da bi se dobio (3-metoksi-2-metil-1-naftil)trifluorometansulfonat (1,30 g, 4,06 mmol, 95,5 % prinosa) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7,97 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,79 - 7,74 (m, 1H), 7,52 - 7,43 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 3,99 (s, 3H), 2,42 (s, 3H)

Korak E: 1-bromo-3-metoksi-2-metil-naftalin: U zatvorenu epruvetu je dodat (3-metoksi-2-metil-1-naftil)trifluorometansulfonat (466 mg, 1,45 mmol), t-Bu-Brettfos (154 mg, 290 umol), kalijum bromid (259 mg, 2,17 mmol), PEG-200 (175 mg), 2-butanon (157 mg, 2,17 mmol) i Pd2(dba)3 (133 mg, 145 umol) u toluenu (10,0 ml) i smeša je degazirana pomoću N2 tokom 5 minuta. Zatim je u kapima dodat triizobutilaluminijum (431 mg, 2,17 mmol) na 20 °C. Smeša je grejana na 100 °C tokom 24 sata. Reakciona smeša je sipana u vodu (30,0 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (20,0 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30,0 ml), osušeni pomoću anhidrovanog

4

natrijum sulfata i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio talog koji je prethodno prečišćen hromatografijom na koloni (Petrolejski eter:Etil acetat 10:1), a zatim pomoću Prep-TLC(Petrolejski eter : Etilacetat 10:1) da bi se dobio 1-bromo-3-metoksi-2-metil-naftalin (700 mg, 2,79 mmol, 64,1 % prinosa) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,26 - 8,17 (m, 1H), 7,73 - 7,69 (m, 1H), 7,47 - 7,40 (m, 2H), 7,09 (s, 1H), 3,98 - 3,95 (m, 3H), 2,56 (s, 3H).

Korak F: 4-bromo-3-metil-naftalin-2-ol: U rastvor 1-bromo-3-metoksi-2-metil-naftalena (580 mg, 2,31 mmol) i tetrabutilamonijum jodida (2,13 g,

5,78 mmol) u DCM (11,0 ml) ohlađen na -78 °C dodat je rastvor BCl3 (1 M, 5,78 ml) u kapima tokom perioda od 10 minuta pod N2. Reakciona smeša je zagrejana do 0 °C i mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom, a talog je prečišćen Prep-TLC (petrolejski eter: Etilacetat 5:1) da bi se dobio 4-bromo-3-metil-naftalin-2-ol (500 mg, 2,11 mmol, 91,3 % prinosa) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,26 - 8,15 (m, 1H), 7,63 (dd, J = 3,6, 6,0 Hz, 1H), 7,45 - 7,38 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 5,09 (s, 1H), 1H), 2,60 (s, 3H), 1,56 (s, 3H).

Korak G: 3-benziloksi-1-bromo-2-metil-naftalin. U smešu 4-bromo-3-metil-naftalen-2-ola (265 mg, 1,12 mmol) i benzil bromida (201 mg, 1,18 mmol) u acetonitrilu (3,00 ml) dodat je kalijum karbonat (310 mg, 2,24 mmol) u jednoj porciji na 20 °C pod N2. Smeša je zatim mešana na 60 °C dva sata. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a talog je prečišćen pomoću Prep-TLC (petrolejski eter: Etilacetat 5:1) da bi se dobio 3-benziloksi-1-bromo-2-metil-naftalin (250 mg, 695 umol, 31,0 % prinosa, 91,0 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 327,0, 329,0 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 54

-Butil-2-(cijanmetil)-4-[2-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Korak A: (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat. U rastvor 4-bromonaftalen-2-ola (10 g, 44,8 mmol) i TEA (9,07 g, 89,7 mmol) u DCM (200 ml) dodat je 2,2-dimetilpropanoil hlorid (8,11 g, 67,2 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C 10 min. T reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (50 ml) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je pročišćen na silika gelu (PE: EA =1:0 do 100:1) da bi se dobio (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat (9 g, 29,3 mmol, 65,4 % prinosa) kao crveno ulje.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,83 - 7,77 (m, 1H), 7,63 - 7,49 (m, 4H), 1,41 (s, 9H).

Intermedijarni produkt 55

butil 4-(2-(3-morfolinpropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat.

Korak A: 7-benzil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol. U EtOH (600 ml) je dodat Na (5,56 g, 241 mmol) u porcijama i smeša je mešana 1 sat. Ovom rastvoru je dodat etil 1-benzil-3-okso-piperidin-4-karboksilat (30,0 g, 100 mmol) i urea (14,5 g, 242 mmol) i reakciona smeša je mešana na 75 °C tokom 36 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a talog rastvoren u vodi (50 ml) i zakišeljen dodavanjem HCl (120 ml, 2M) pri čemu je taložena čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana, a filterski kolač osušen pod vakuumom da bi se dobio 7-benzil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol (22,0 g,

83,8 mmol).<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,97 (br, 1H), 10,66 (br, 1H), 7,55 -6,95 (m, 5H), 3,81 - 3,50 (m, 2H), 3,26 - 2,91 (m, 2H), 2,77 - 2,58 (m, 2H), 2,34 -2,09 (m, 2H), - (m, 2H).

Korak B: 7-benzil-2,4-dihlor-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor DIEA (30,1 g, 233 mmol) u POCl3 (330 g, 2,15 mol) dodat je 7-benzil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol (20,0 g, 77,7 mmol) i reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 5 sati. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je otopljen u DCM (400 ml) i sipan u zas. NaHCO3 (200 ml) i slojevi odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahiran sa DCM (2 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/DCM = 10/1 do 0/1) da bi se dobio 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (7,70 g, 26,2 mmol).<1>HNMR (300 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,28 (m, 5H), 3,73 (s, 2H), 3,66 (br, 2H), 2,84 (br, 4H).

Korak C: terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat. U rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (17,3 g, 58,8 mmol) u DMSO (200 ml) dodat je DIEA (19,0 g), 147 mmol) i terc-butil piperazin-1-karboksilat (11,5 g, 61,7 mmol), a smeša je mešana na 55 °C tokom 10 sati. Reakciona smeša je sipana u etil acetat (200 ml) i isprana vodom (3x200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen trituracijom iz MTBE (200 ml) da bi se dobio terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat (24 g, 52,9 mmol). ES+APCI MS m/z 444,2 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 4-[7-benzil-2-(3-morfolinpropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat. Smeša 3-morfolinopropan-1-ola (11,8 g, 81,1 mmol), terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-karboksilat (18 g, 40,5 mmol), BINAP (5,05 g, 8,11 mmol), t-BuONa (9,74 g, 101 mmol) i Pd2(dba)3 (3,71 g, 4,05 mmol) u toluen (300 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a smeša je mešana na 110 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je sipana u H20 (200 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3x300 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 100/1 do 5/1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (14 g, 22,5 mmol). ES+APCI MS m/z 553,4 [M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 4-[2-(3-morfolinpropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-di.pimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (14 g, 25,3 mmol) u MeOH (1 L) je dodat suvi Pd/C (3 g, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 10 sati. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio talog. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 TFA)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 4-[2-(3morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il] piperazin-1-karboksilat (6,5 g, 13,9 mmol). ES+APCI MS m/z 463,4 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 56

Naftalen-1-il trifluorometansulfonat. alfa-naftol (4 g, 27,74 mmol) je rastvoren u DCM (200 ml) u boci sa 3 grla. Reakcija je hlađena na 10 °C u vodenoj kupelji. N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (4,846 ml, 27,74 mmol) i anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (4,668 ml, 27,74 mmol) su dodavani u kapima u rastvor. Reakcija je 2 sata mešana na 10 °C. TLC (25 % EtOAc, UV vis) je pokazao potpunu reakciju. Organski slojevi sa vodom (2X) i slanim rastvorom (2X). Organski slojevi su sušeni pomoću MgSO4 i koncentrovani in vacuo.

Koncentrat je prečišćen korišćenjem normalne faze hromatografije na CombiFlash (0 %-12 % EtOAc:heksani). Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio naftalen-1-il trifluorometansulfonat (6,77 g, 24,51 mmol, 88,34 % prinosa).

Intermedijarni produkt 57

4-butil (s)-2-(hidroksimetil)--metilpiperizin-1-karboksilat

U rastvor (S)-1-Boc-2-hidroksimetilpiperazina (1,0 g, 4,62 mmol) u DCE (92,47 ml, 4,624 mmol) dodat je formaldehid (3,474 ml, 46,24 mmol) (37 % u vodi), a zatim natrijum triacetoksiborohidrid (4,9 g, 23,12 mmol). Smeša je snažno mešana na sobnoj temperaturi 2,5 sata. Smeša je tretirana zasićenim natrijum bikarbonatom (30 ml), mešana 10 min, a zatim ekstrahovana sa DCM (3 × 10 ml). Kombinovane organske faze su osušene preko natrijum sulfata, filtrirane i koncentrovane. ES+APCI MS m/z 231,1 [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 58

4-butil (R)-2-(hidroksimetil)--metilpiperizin-1-karboksilat

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Intermedijarnom produktu 57, zamenom terc-butil (R)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata za (S)-1-Boc-2-hidroksimetilpiperazin. ES+APCI MS m/z 231,1 [M+H]<+>

Intermedijarni produkt 59

1-bromo-3-hloro-2-fluoro-5-(metoksimetoksi)benzen

U boci sa okruglim dnom je dodat THF (8,87 ml, 4,44 mmol), a zatim natrijum hidrid, 60 % disperzija u mineralnom ulju (0,213 g, 5,32 mmol). Smeša je ohlađena na 0 °C, a zatim je dodat 3-bromo-5-hloro-4-fluorofenol (1,0 g, 4,44 mmol) u porcijama. Nakon bubrenja, dobijena tamna smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. Zatim je dodat hlorometil metil eter (0,421 ml, 5,54 mmol) i

1

smeša je grejana do sobne temperature gde je mešana 2 sata. Dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je hromatografisan (0-15 % EtOAc u heksanu) da bi se dobio proizvod u vidu bistrog ulja.

Intermedijarni produkt 60

4-bromo-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol

Korak A: 4-bromo-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol: U rastvor 4-bromo-5-(trifluorometil)-1H-indazola (500 mg, 1,89 mmol, 1 ekv.) u DCM (10 ml) dodat je 3,4-dihidro-2H-piran (476 mg, 5,66 mmol), 517 uL, 3 ekv.) i TsOH·H2O (35,9 mg, 188 umol, 0,1 ekv.). Smeša je mešana na 15 °C 1 sat.

Smeša je koncentrovana Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE:10:1 do 1:1) da bi se dobio 4-bromo-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol (480 mg, 1,37 mmol, 72,9 % prinosa) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,20 (s, 1H), 7,69 - 7,63 (m, 2H), 5,70 (dd, J = 2,8, 8,8 Hz, 1H), 4,05 - 3,96 (m, 1H), 3,79 - 3,70 (m, 1H), 2,562,50 (m, 1H), 2,27-2,04 (m, 2H), 1,80-1,74 (m, 2H), 1,60-1,54 (m, 1H).

Intermedijarni produkt 61

1 1

8-bromo-6-(metoksimetoksi)kinolin: Mešana suspenzija 8-bromohinolin-6-ola (1,00 g, 4,46 mmol) u DCM (20 ml) je ohlađena do 0 °C i dodat je diizopropiletilamin (1,2 ml, 6,7 mmol, 1,5 ekv.), a zatim hloro(metoksi))metana (0,41 ml, 5,4 mmol, 1,2 ekv.) u kapima i reakciona smeša je grejana do sobne temperature preko noći. Zatim je dodat koncentrovani vodeni rastvor amonijaka (0,5 ml, ~5 mmol) i dobijena smeša je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Smeša je uparena in vacuo i hromatografisana na silika gelu, Redisep 40 g, koristeći 20 % EtOAc/heksan kao eluent da bi se dobio bezbojni prah (0,52 g, 44 %). ES+APCI MS m/z 268,0, [M+H]<+>.

Intermedijarni produkt 62

U rastvor but-3-enenitrila (80,0 g, 1,19 mol, 96,4 ml, 1,00 ekv.) u tercbutanolu (130 ml) i petrolejski eter (480 ml) dodat je rastvor Br2 (191 g, 1,19 mol, 61,5 ml, 1,00 ekv.) u terc-butanolu (130 ml). Smeša je mešana na 10 °C tokom 4 sata. Smeša je korišćena u sledećem koraku bez ikakve obrade.

U gore navedenu smešu (274 ml) dodat je rastvor N,N'-dibenziletan-1,2-diamina (160 g, 445 mmol, 157 ml, 2 HOAc) i Et3N (178 g, 1,76 mol, 245 ml) u toluenu (300 ml). Nakon mešanja na 110 °C tokom 2 sata, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 3/1) da bi se dobio 2-(1,4-dibenzilpiperazin-2-il)acetonitril (75,0 g, 246 mmol, dva koraka 55,7 % prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 306.

1 2

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,37 - 7,23 (m, 10H), 3,80 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,60 - 3,42 (m, 3H), 3,06 - 2,96 (m, 1H), 2,95 - 2,83 (m, 1H -2), 2,53 (m, 4H), 2,52-2,35 (m, 3H).

U rastvor 2-(1,4-dibenzilpiperazin-2-il)acetonitrila (160 g, 524 mmol, 1,00 ekv.) u dihloretanu (1,50 l) dodat je 1-hloretil karbonohlorid (300 g, 2,10 mol, 4,00 mol, 4,00 ekv.) u dihloretanu (1,50 l) na 15 °C. Posle mešanja na 85 °C tokom 48 sati, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je zatim stavljen u metanol (1,50 j) i grejan do refluksa 1 sat. Smeša je koncentrovana Čvrsta supstanca je tretirana metil terc-butil etrom (1,00 l), 2-piperazin-2-ilacetonitril (Intermedijarni produkt 62, 90,0 g, 454 mmol, 86,7 % prinosa, 2HCl) je dobijen kao bela čvrsta supstanca i korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400MIIz, DMSO-d6) δ = 10,19 (br s, 2H), 4,01-3,73 (m, 1H), 3,69-3,41 (m, 4H), 3,32 (dt, J = 2,8, 13,2 Hz, 1H), 3,27-3,10 (m, 3H).

Intermedijarni produkt 63

U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (80,0 g, 370 mmol, 1,0 ekv.) u etil acetatu (1400 ml) dodat je NaHCO3 (93,2 g, 1,11 mol, 43,2 ml), 3,0 ekv.), H2O (700 ml) i benzil karbonohloridat (82,0 g, 481 mmol, 68,4 ml, 1,30 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, organska faza je odvojena, isprana vodom (500 ml × 2), osušena pomoću Na2SO4 i filtrirana. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=40/1 do 1/1). Proizvod 1-benzil 4-terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)piperazin-

1

1,4-dikarboksilat (85,0 g, 235 mmol, 64 % prinosa, 96 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M-99]: 251.

U rastvor 1-benzil 4-terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilata (20,0 g, 57,1 mmol, 1,0 ekv.) u 2-metiltetrahidrofuranu (240 ml) dodat je TEA (17,3 g, 171,23 mmol, 23,8 ml, 3,0 ekv.) i metansulfonil hlorid (7,74 g, 67,6 mmol, 5,23 ml, 1,18 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 1 sat.

Reakciona smeša je ugašena dodavanjem H2O 150 ml na 20 °C. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (300 ml × 2). Organski slojevi su isprani sa H2O (100 ml), osušeni preko Na2SO4 i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. 1-benzil 4-terc-butil (2R)-2-(metilsulfoniloksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilat (22,0 g, sirov) je dobijen kao žuto ulje. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

U rastvor 1-benzil 4-terc-butil (2R)-2-(metilsulfoniloksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilata (22,0 g, 51,3 mmol) u DMA (150 ml) dodat je NaCN (10,4 g, 211 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 12 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio uljani ostatak. Talog je razblažen sa H2O (40,0 ml) i ekstrahovan sa etil acetatom (50,0 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (80,0 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=40/1 do 5:1) Proizvod 1-benzil 4-terc-butil (2S)-2-(cijanometil)piperazin-1,4-dikarboksilat (18,5 g, 46,4 mmol, 72 % prinosa u dva koraka) je dobijeno kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 360.

U rastvor 1-benzil 4-terc-butil (2S)-2-(cijanometil)piperazin-1,4-dikarboksilata (18,5 g, 43,3 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu (40,0 ml) dodat je HCl•dioksan (4 M, 54,1 ml, 5,0 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Zatim je reakcionoj smeši dodat NaHCO3 do postizanja pH>7 i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio dioksan. Talog je razblažen sa H2O (50,0 ml) i ekstrahovan sa etil acetatom (50,0 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O (20,0 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Proizvod benzil (2S)-2-

1 4

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijarno 63, 11,5 g, 91,8 % čistoće, 95 % prinosa) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 260.

<1>H NMR (400 MHz, KLOROFORM-d) δ = 7,37 - 7,31 (m, 5H), 5,14 (s, 2H), 4,49 (br, s, 1H), 3,93 (br, s, 1H), 3,07 - 2,81 (m, 5H), 2,78 - 2,54 (m, 2H).

Intermedijarni produkt 64

Smeša terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (3,81 g, 8,87 mmol, 1,0 ekv.), benzil(2S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijarni produkt 63, 2,30 g, 8,87 mmol, 1,0 ekv.), DIEA (3,44 g, 26,6 mmol, 4,63 ml, 3,0 ekv.) u DMF (20,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 100 °C 1 sat u atmosferi N2. Nakon završetka, rastvarač je uklonjen pod vakuumom Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=3/1 do 1:1) da bi se dobio terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il ]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (3,6 g, 6,16 mmol, 69 % prinosa, 92,2 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 539.

Smeša terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5Hpirido[3,4-d]pirimidin-7 -karboksilat (6,0 g, 11,1 mmol, 1,0 ekv.), TFA (30,8 g, 270 mmol, 20,0 ml, 24,3 ekv.) u DCM

(20,0 mla) je degaziran i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 20 °C

1

tokom 1 sata u atmosferi N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (500 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 ml) i organski sloj je osušen pomoću Na2SO4 i filtriran. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (4,8 g, sirov) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (4,8 g), 1-bromonaftalen (3,8 g, 18,35 mmol, 2,55 ml), Pd2(dba)3 (1,0 g, 1,09 mmol), RuPhos (1,02 g, 2,19 mmol) i Cs2CO3 (12,0 g, 36,8 mmol) u toluenu (30,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 100 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio uljani talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=5/1 do 3:1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil))-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,2 g, 3,31 mmol, 85,3 % čistoće, 30 % prinosa u dva koraka) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 565.

Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat (2,8 g, 3,97 mmol, 1,0 ekv.), m-CPBA (1,05 g, 5,16 mmol, 1,3 ekv.) u DCM (4,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 0 °C tokom 1 sata u atmosferi N2. Nakon završetka, reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog rastvora Na2SO3 (50 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski sloj je osušen sa Na2SO4 i filtriran. Rastvarač je uklonjen da bi se dobio talog ulja. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Meteanol/Etil acetat=1/20 do 1:10) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijarni produkt 64, 1,5 g, 2,35 mmol, 59 % prinosa, 90,8 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 581.

Intermedijarni produkt 65

1

U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (24,3 g, 45,0 mmol, 1,0 ekv.) u etil acetatu (480 ml) je dodat m-CPBA (8,69 g, 42,8 mmol, 85 % čistoće, 0,95 ekv.) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (50,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 300 ml). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Smeša je neutralizovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovana etil acetatom (3 × 1000 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (22,8 g, 39,3 mmol, 87 % prinosa, 95,8 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,37 - 7,23 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,75 - 4,41 (m, 3H), 4,17 - 4,05 (m, 2H), 3,86 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,82 - 3. m, 1H), 3,46 - 3,18 (m, 3H), 3,10 (d, J = 3,6, 12,0 Hz, 1H), 2,81 (d, J = 3,2 Hz, 3H), 2,77 -2,56 (m, 4H), 1,42 (s, 9H).

U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (5,0 g, 9,01 mmol, 1,0 ekv.) i [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (1,82 g, 15,8 mmol,

1

1,88 ml, 1,75 ekv.) u toluenu (50,0 ml) dodat je t-BuONa (1,73 g, 18,0 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeši je dodata hladna voda (50,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (5 × 50,0 ml).

Kombinovani organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE: EA = 10:1 -EA : MeOH = 5:1) da bi se dobio terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2,80 g, 4,62 mmol, 51,0 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,44 - 7,35 (m, 5H), 5,21 (s, 2H), 4,73 - 4,54 (m, 2H), 4,44 - 4,33 (m, 2H), 4,22 - 4,10 (m, 2H), 3,41 - 3,93 (m, 2H)), 3,82 (br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,39 - 3,22 (m, 3H), 3,11 (br t, J = 7,8 Hz, 1H), 2,99 (d, J = 3,6, 12,8 Hz, 1H), 2,90 - 2,56 (m, 5H), 2,49 (s, 3H), 2,35 - 2,25 (m, 1H), 2,07 - 2,02 (m, 1H), 1,91 - 1,76 (m, 3H), 1,50 (s, 9H).

U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2,40 g, 3,96 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (8,0 ml) je dodat TFA (13,9 g, 122 mmol, 9,0 ml, 30,7 ekv.). Smeša je mešana na 15 °C tokom 2 sata Nakon završetka, smeša je koncentrovana. Talogu je dodat zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (20,0 ml) i ekstrahovan je sa DCM (5 × 10,0 ml). Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Proizvod benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijarni produkt 65, 1,40 g, 2,77 mmol, 70 % prinosa) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 506.

Intermedijarni produkt 66

1

Korak A: U rastvor 7-benzil-4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (20,0 g, 65,4 mmol, 1 ekv.) u DCE (200 ml) dodat je 1-hloretil karbonohloridat (28,1 g, 196 mmol, 3 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i na 70 °C tokom 15 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je rastvoren u MeOH (200 ml) i mešan na 70 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je triturisan sa metil terc-butil etrom (60 ml). Talog je sakupljen filtracijom, ispran metil tercbutil etrom (20 ml) i osušen pod vakuumom da bi se dobio 4-hloro-2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin (17,2 g, sirovo, HCl) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno upotrebljena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 4,35 (s, 2H), 3,60 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,05 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,55 (s, 3H).

Korak B: U rastvor 4-hloro-2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidina (16,5 g, sirov, HCl) i TEA (20,0 g, 196 mmol, 27,3 ml) u THF (400 ml) je dodat benzil karbonohloridat (16,7 g, 98,1 mmol, 13,9 ml) u kapima na 0 °C.

1

Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (80 ml) i organski sloj je odvojen. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (200 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 80/1 do 5/1) da bi se dobio benzil 4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7 -karboksilat (19,6 g, 50,4 mmol, 86 % prinosa u dva koraka, 90 % čistoće) kao žuto ulje.

f<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ = 7,37 (s, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 3,877 (d, J = 8,0, 2H), 2,80 (br s, 2H), 2,54 (s, 3H).

Korak C: U rastvor benzil 4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (21,5 g, 55,3 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (400 ml) dodat je DIEA (35,7 g, 277 mmol, 48,2 ml, 5,00 ekv.) i 2-[(2S)-piperazin-2-il]acetonitril (6,92 g, 55,3 mmol, 1,00 ekv.). Posle mešanja na 80 °C tokom 2 sata, (Boc)20 (60,4 g, 277 mmol, 63,5 ml, 5,00 ekv.) je dodat u gornju smešu i mešan na 80 °C još 2 sata. Po završetku, smeša je razblažena vodom (800 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 400 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (300 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 10/1 do 1/1) da bi se dobio benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil) piperazin-1-il]-2- metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (24,3 g, 43,0 mmol, 78 % prinosa, 95 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,29 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,76 - 4,54 (m, 2H), 4,46 (br d, J = 18,4 Hz, 1H), 4,08 - 3,69 (m, 4H), 3,35 - 3,53 -(m, 1H), 3,34-3,03 (m, 2H), 3,03-2,89 (m, 1H), 2,81-2,55 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 1,51 (s, 9H).

Korak D: U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (24,3 g, 45,1 mmol, 1 ekv.) u EtOAc (480 ml) je dodat m-CPBA (8,70 g, 42,9 mmol, 85 % čistoće, 0,95 ekv.) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (800 ml). pH je podešen na 8 sa NaHCO3 i organski sloj je odvojen. Vodena faza je ekstrahovana

11

sa EtOAc (2 × 400 ml). Organski slojevi su osušeni pomo'u Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc/MeOH 100/1 do 10/1) da bi se dobio benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2- metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (20,9 g, 36,4 mmol, 81 % prinosa, 96 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+11: 555.

Korak E: U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (20,9 g, 37,6 mmol, 1 ekv.) i [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (8,67 g, 75,3 mmol, 8,94 ml, 2 ekv.) u toluenu (400 ml) dodat je t-BuONa (7,23 g,

75,3 mmol, 2 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 10 minuta, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen vodom (200 ml) i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 400 ml). Organski slojevi su osušeni pomo'u Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Smeša je neutralizovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 1000 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (13,5 g, 20,5 mmol, 54 % prinosa, 92 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 606.

Korak F: U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (3,50 g, 5,78 mmol, 1 ekv.) u MeOH (60,0 ml) je dodat NH3/MeOH (60,0 ml), Pd/C (1,00 g, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 4 sata. Po završetku, katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi ]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat Intermedijarno 66, 2,33 g, 4,55 mmol, 79 % prinosa, 92 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4,58 (br s, 1H), 4,34 (dd, J = 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,11 (dd, J = 6,8, 10,8 Hz, 1H), 4,08 - 3,88 (m, 4H), 3,84 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,25 - 3,03 (m, 4H), 3,01 - 2,88 (m, 2H), 2,82 - 2,51 (m, 5H), 2,47 (s, 3H), 2,27 (dt, J = 7,2, 9,2 Hz, IH), 2,11-1,97 (m, IH), 1,92-1,75 (m, 3H), 1,50 (s, 9H).

Intermedijarni produkt 67

terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat

Korak A: terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U mešani rastvor 1-terc-butil 4-etil 3-oksopiperidin-1,4-dikarboksilata (50,0 g, 184 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (1,00 L) na 25 °C pod azotom je dodat NaOMe (49,8 g), 921 mmol, 5,00 ekv.), zatim 2-metilizotiourea (62,4 g, 331 mmol, 1,80 ekv., H2SO4) kao čvrsta supstanca. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je zakiseljena sa HCl (2 M) do pH~5, a zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio MeOH. Talog je suspendovan u 300 ml etil acetata i 300 ml vode i brzo mešan.

Suspenzija je filtrirana i bela čvrsta supstanca je sakupljena. Filtrat je odvojen i organski slojevi su isprani vodom (1 × 300 ml) i slanim rastvorom (1 × 200 ml). Organski slojevi su izolovani, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani do bele čvrste supstance. terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (51,0 g, 138 mmol, 75,4 % prinosa, 81 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca i direktno se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [M+1]: 298.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4,33 (s, 2H), 3,61 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,68-2,49 (m, 5H), 1,50 (s, 9H).

Korak B: terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U mešanu suspenziju terc-butil 4-hidroksi-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (51,0 g, 171 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (500 ml) na 0 °C je dodat DIEA (44,3 g, 343 mmol, 59,9 ml, 2,00 ekv.), a zatim Tf2O (72,6 g, 257 mmol, 42,4 ml, 1,50 ekv.) pod azotom. Odmah se formira smeđi rastvor. Posle mešanja na 25 °C tokom 16 sati, reakcija je koncentrovana da bi se dobilo smeđe ulje. Smeđe ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1/0 do 10/1).

Jedinjenje iz naslova terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (46,0 g, 107 mmol, 62 % prinosa) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [M+1]: 430.

Intermedijarni produkt 68

Butil 4-[(3s)-4-benzyloksikarbonil-3-(cijanmetil)pirazin-1-il]-2-metilsulprid-6,8-dihidro-5H-piridin[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat

Korak A: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- karboksilat Smeša tercbutil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (3,81 g, 8,87 mmol, 1,0 ekv.), benzil(2S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijarni produkt 63, 2,30 g, 8,87 mmol, 1,0 ekv.), DIEA (3,44 g, 26,6 mmol, 4,63 ml, 3,0 ekv.) u DMF (20,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 100 °C 1 sat u atmosferi N2. Nakon završetka, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=3/1 do 1:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1 -il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (3,6 g, 6,16 mmol, 69 % prinosa, 92,2 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

11

Intermedijarni produkt 69

1 -bromo-8-metilen-naftalin

Korak A: 1-bromo-8-metilnaftalen. U rastvor 1,8-dibromonaftalena (1 g, 3,50 mmol, 1 ekv.) u THF (20 ml) dodat je MeLi (1,6 M u dietil etru, 2,62 ml, 1,2 ekv.) na 0 °C u kapima. Posle mešanja tokom 30 minuta na 0 °C, u kapima je dodat jodometan (3,38 g, 23,8 mmol, 1,48 ml, 6,81 ekv.). Smeša je grejana do 25 °C i mešana još 3 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini C18250<∗>50 mm<∗>10 mm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 45 % - 70 %, 28 MIN; 40 % min). Jedinjenje iz naslova 1-bromo-8-metil-naftalen (340 mg, 1,49 mmol, 43 % prinosa, 97 % čistoće) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca posle liofilizacije.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 (dd, J = 0,8, 7,2 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 0,8, 8,0 Hz, 1H), 7,66 - 7,59 (m, 1H), 7,30 - 7,22 (m, 2H), 7,13 (t, J = 8,0 Hz, IH), 3,05 (s, 3H).

Intermedijarni produkt 70

1-bromo-8-hloronaftalen

Korak A: 1H-Nafto[1,8-de][1,2,3]triazin. U rastvor naftalen-1,8-diamina (100 g, 632 mmol, 1 ekv.) u AcOH (200 ml) i EtOH (1000 ml) dodat je izoamil nitrit (72,6 g, 619 mmol, 83,4 ml, 0,98 ml) u kapima tokom perioda od 2 sata sa kontrolisanom temperaturom između 18 i 21 °C u kupki sa hladnom vodom. Posle dodavanja, dobijena crvena suspenzija je mešana na 25 °C tokom 16 sati. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana etanolom (2 × 500 ml) i osušena pod vakuumom. Jedinjenje 1H-nafto[1,8-de][1,2,3]triazin (84 g, 496 mmol, 79 % prinosa) je dobijeno kao crvena kristalna čvrsta supstanca i direktno korišćeno u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 170.

Korak B: 8-hloronaftalen-1-amin. U rastvor 1H-nafto[1,8-de][1,2,3]triazina (84 g, 496 mmol, 1 ekv.) u HCl (1,5 l) dodat je Cu (2,10 g, 33,1 mmol, 234 ul), 0,0665 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati.

Dobijena smeša je razblažena vodom (500 ml) i grejana na 85 °C tokom 30 minuta. Dobijeni skoro bistar vodeni rastvor je filtriran, hlađen, zabazivljen vodenim rastvorom amonijaka (do plave boje do lakmus papira) i ekstrahovan etar acetatom (2 × 1000 ml). Kombinovani ekstrakti su osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrolejski eter/etil acetat = 200/1 do 5/1). Jedinjenje 8-hloronaftalen-1-amin (57 g, 259 mmol, 52 % prinosa, 81 % čistoće) je dobijeno kao crvena čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 178.

Korak C: 1-bromo-8-hloro-naftalen. U rastvor 8-hloronaftalen-1-amina (57 g, 320 mmol, 1 ekv.) i TsOH•H2O (219 g, 1,16 mol, 3,6 ekv.) u MeCN (1000 m) dodat je rastvor NaNO2 (39,8 g), 577 mmol, 1,8 ekv.) i CuBr (138 g, 963 mmol, 29,3 ml, 3 ekv.) u H20 (120 ml) na -5 °C, zatim je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 12 sati. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni rastvor Na2SO3 (100 ml) i mešana 15 minuta, a zatim ekstrahovana etil acetatom (1000 ml×3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (500 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter). Jedinjenje iz naslova 1-bromo-8-hloro-naftalen (56 g, 229 mmol, 72 % prinosa, 99 % čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,93 (dd, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 1,2, 8,4, 1H), 7,79 (dd, J = 1,2, 8,4, 1H), 7,67 (dd, J = 1,2, 7,6 Hz)., IH), 7,37 (t, J = 8,0 Hz, IH), 7,28 (t, J = 8,0 Hz, IH).

11

Intermedijarni produkt 71

2-[(2s)-4-[7-(8-hlor-1-naftil)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]azazil-2-piperitonitro]piperitonitro

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,5 g, 791 umol, 1 ekv.) u dioksanu (5 ml) je dodat HCl•dioksan (4 M, 5,00 ml, 25,3 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio nečist proizvod (500 mg, sirov, HCl) kao braon čvrsta supstanca. 60 mg nečistog proizvoda je prečišćeno prep-HPLC (kolona: Fenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 um; mobilna faza: [voda(0,04 % NH3•H2O 10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 50 % - 80 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (19,3 mg, 36,1 umol, 34 % prinosa prečišćavanja, 99,2 % čistoće) kao čisto bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:532.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 1,6, 8,0 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 0,8, 7,2 Hz, 1H), 7,44 (dt, J = 3,6, 7,6 Hz)., 1H), 7,36 - 7,29 (m, 1H), 7,22 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,46 - 4,34 (m, 2H), 4,15 (td, J = 6,4, 10,6 Hz, 1H), 4,04 (br d, J = 12,4 Hz, 0,5 H), 3,95 - 3,79 (m, 2H), 3,74 (br d, J = 12,8 Hz, 0,5 H), 3,63 - 3,48 (m, 1H), 3,40 - 2,99 (m, 7H), 2,98 - 2,80 (m, 2H), 2,73 - 2,61 (m, 1H), 2,60 - 2,49 (m, 3H), 2,47 (d, J = 2,4 Hz, 3H), 2,32 - 2,23 (m, 1H) 2,10-1,99 (m, IH), 1,82-1,68 (m, 3H).

11

Intermedijarni produkt 72

2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril

Korak A: (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,22 g, 1,98 mmol, 1,0 ekv.), 1-bromo-2,3-dimetil-benzen (1,10 g, 5,93 mmol, 802 ul, 3,0 ekv.), Cs2CO3 (1,93 g, 5,93 mmol, 3 ekv.), RuPhos (185 mg, 396 umol, 0,2 ekv.) i Pd2(dba)3 (181 mg, 198 umol, 0,1 ekv.) u toluenu (8 ml) je degaziran, a zatim grejan na 90 °C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen vodom (20 ml) i ekstrahovan sa EtOAc (3 × 30 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Sakupljene željene frakcije su neutralizovane zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN, a zatim ekstrahovane sa EtOAc (3 × 50 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (380 mg, 623 umol, 32 % prinosa, 100 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 610.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitrit. NH3 je pušten da peni u MeOH (20 ml) na -70 °C tokom 30 minuta. Rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

11

dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (380 mg, 623 umol, 1,0 ekv.) je dodat gornji rastvor, a zatim Pd/C (200 mg, 10 % čistoće) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta.

Reakcija je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, 459 umol, 74 % prinosa, 95 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,11 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,39 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,14 (dd, J = 7,2, 9,6 Hz, 1H), 4,02 -3,95 (m, 3H), 3,84 - 3,78 (m, 1H), 3,31 - 3,19 (m, 1H), 3,17 - 3,04 (m, 5H), 3,04 -2,95 (m, 1H), 2,89, J = 9,2, 11,6 Hz, 1H), 2,76 - 2,62 (m, 3H), 2,58 - 2,50 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,29 - 2,23 (m, 4H)), 2,12-2,00 (m, IH), 1,89-1,76 (m, 3H).

Intermedijarni produkt 73

terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat.

Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (1,60 g, 3,96 mmol, 1,0 ekv.), 1-bromo-2,3-dimetil-benzen (1,61 g, 8,70 mmol, 1,18 ml, 2,20 ekv.), Pd2(dba)3 (362 mg, 395 umol, ekv.), RuPhos (369 mg, 791 umol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (3,87 g, 11,9 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (8,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je

11

mešana na 90 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Organski rastvarač je ispran vodom (20,0 ml). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 ml).

Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (80,0 ml), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etilacetat=3: 1 za etilacetat: Metanol = 10: 1). Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (900 mg, 1,59 mmol, 40 % prinosa, 90 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 509.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,11 (t, J = 15,6 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,63 (br s, 1H), 4,10 - 3,93 (m, 4H), 3,89 (br d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,27 (dd, J = 3,6 Hz, J = 13,6 Hz, 1H), 3,24 - 3,05 (m, 3H), 3,05 - 2,95 (m, 1H), 2,89 -2,67 (m, 4H), 2,52 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat.

Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 983 umol, 1,0 ekv.), 3-hlorobenzenkarboperoksoična kiselina (200 mg, 983 umol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 ml) je degazirana i pročišćena 3 puta sa N2, a zatim je mešana na 0 °C tokom 30 minuta u atmosferi N2. Organski rastvarač je ispran vodom (10,0 ml). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 ml), osušeni sa Na2SO4, a rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etilacetat=3: 1 za etilacetat: Metanol=10: 1). Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (450 mg, 793 umol, 81 % prinosa, 93 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:525.

Korak C: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (800 mg, 1,52 mmol, 1,0 ekv.), [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (369 mg,

11

3,20 mmol, 380 ul, 2,10 ekv.), t-BuONa (293 mg, 3,05 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (10,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 0 °C tokom 30 minuta u atmosferi N2. Reakcija je ugašena vodom (20,0 ml).

Sirova smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (80,0 ml), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etilacetat=5: 1 za dihlorometan: Metanol=10:1). Jedinjenje iz naslova terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (740 mg, 1,22 mmol, 80 % prinosa, 95 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 576.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,10 (t, J = 15,2 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,61 (br s, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8 Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 4,13 - 4,00 (m, 4H), 3,89 (br d, J = 12,4 Hz IH), 3,27 - 3,13 (m, 3H), 3,13 - 2,95 (m, 3H), 2,87 -2,65 (m, 5H), 2,49 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,09 - 2,06 (m, 1H), 2,06 -2,04 (m, 1H), 1,93 - 1,62 (m, 4H), 1,51 (s, 9H).

Primer 1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2- en-1-one

12

Korak A: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U 2 ml dimetil acetamida pomešani su terc-butil 4-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (1,0 g, 3,7 mmol), trietilamin (1,0 ml, 7,4 mmol), i benzil 1-piperazinkarboksilat (0,86 ml, 4,4 mmol). Reakciona posuda je zatvorena i reakciona smeša je zagrejana na 90 °C uz mešanje. Posle 5 sati, reakcija je razblažena slanim rastvorom i ekstrahovana sa metil t-butil etrom. Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa zasićenim amonijum hloridom i slanim rastvorom, osušeni pomoću MgSO4 i koncentrovani pod sniženim pritiskom do gustog ulja. Ulje je podvrgnuto hromatografiji (RediSep®, 24 g) eluiranjem sa 1:1 etil acetat/heksanom da bi se dobio terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3, 4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (1,3 g, 2,9 mmol, 77 % prinosa). ES+APCI MS m/z 454,2 [M+H]<+>.

Korak B: Benzil 4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilata (1,58 g, 3,484 mmol) u dihlorometanu (11,61 ml, 3,484 mmol) dodata je trifluorosirćetna kiselina (2,668 ml, 34,84 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata.

Reakcija je koncentrovana pod vakuumom i talog je stavljen u dihlorometan.

Rastvor je ispran uzastopno sa 1M NaOH i slanim rastvorom, osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 24G Isco RediSep® Gold, 10 do 20 % metanol/dihlorometan) da bi se dobio proizvod (1,1 g, 89 %) u vidu čisto bele pene. ES+APCI MS m/z 354,2 [M+H]<+>.

Korak C: benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) (0,0069 g, 0,0075 mmol), racemski-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil (0,0096 g, 0,015 mmol) i toluen (0,62 ml, 0,19 mmol). Argon je propuštan kroz smešu 5 minuta, a zatim je bočica zatvorena poklopcem i grejana na 100 °C tokom 15 minuta. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim je dodat natrijum terc-butoksid (0,036 g, 0,37 mmol), a zatim 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalen (0,050 g, 0,19 mmol) i benzil 4-(5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,13 g, 0,37 mmol). Bočica je zatvorena i smeša je grejana na 100 °C tokom 20 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena dihlorometanom i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 10-50 % etil acetat/dihlorometan) da bi se dobio proizvod (0,062 g, 61 %) kao čisto bela pena. ES+APCI MS m/z 540,3 [M+H]<+>.

Korak D: 7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin: U rastvor benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (0,061 g, 0,11 mmol) u etanolu (1,1 ml, 0,11 mmol) i tetrahidrofuranu (1,1 ml, 0,11 mmol) dodat je paladijum (0,024 g, 0,011 mmol) (Degussa tip, 10 % tež., 50 % H2O). Atmosfera H2 je uvedena u reakcionu posudu pomoću vakuuma, a zatim je reakciona smeša održavana u atmosferi H2. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2,5 sata, zatim razblažena metanolom i filtrirana kroz GF/F papir.

Bezbojni filtrat je koncentrovan pod vakuumom sa toluenom da bi se dobila prljavo bela pena (0,048 g, 105 %) koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

ES+APCI MS m/z 406,2 [M+H]<+>.

Korak E: 1-(4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop -2-en-1-one: U suspenziju 7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina (0,046 g, 0,11 mmol) u dihlorometanu (1,1 ml, 0,11 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat akriloil hlorid (1,2 ml, 0,12 mmol) (sveže pripremljen 0,1 M rastvor u dihlorometanu), a zatim trietilamin (0,032 ml, 23 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Smeša je koncentrovana i proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, etil acetat) da bi se dobio proizvod (0,042 g, 79 %) kao čisto bela čvrsta pena.

ES+APCI MS m/z 460,2 [M+H]<+>.

Korak F: 1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2- en-1-on: U rastvor 1-(4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1 -il)prop-2-en-1-on (0,034 g, 0,074 mmol) u etil acetatu (0,74 ml, 0,074 mmol) dodata je hlorovodonična kiselina (5 do 6 N rastvor u 2-propanolu (0,44 ml, 2,2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (10 ml), filtrirana kroz polipropilenski filter i sakupljena čvrsta supstanca je isprana etil acetatom i heksanom da bi se dobio proizvod kao HCl so. Nečist materijal je tretiran sa 1 ml amonijum hidroksida/metanola da bi se ugasila kiselina i smeša je koncentrovana. Talog je rastvoren u 10 % metanol/dihlorometanu i prečišćen hromatografijom na koloni (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 2 do 5 % metanol/etil acetat) da bi se dobio proizvod (0,008 g, 25 %) kao sivobela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 416,2 [M+H]<+>.

1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8,49 (s, 1H), 8,07 (app d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,61 (app d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 6,80 (m, 3H), 6,23 (dd, J = 16,8, 1,6 Hz, 1H), 5,77 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,22 (br s, 2H), 3,80 (app t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,63 (br s, 4H), 3,35 (br s, 2H), 3,03 (br s, 2H).

Primer 2

12

1-(4-(7-(7-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2- en-1-one

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, korišćenjem 2-bromo-7-(metoksimetoksi)naftalena umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u koraku C. ES+APCI MS m/z 416,1 [M+H]<+>.

Primer 3

1-(4-(7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, korišćenjem 1-jodonaftalena umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u koraku C. ES+APCI MS m/z 400,2 [M+H]<+>.

Primer 4

1-(4-(7-(2-fluoro-6-hidroksifenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2- en-1-one

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, korišćenjem 2-bromo-1-fluoro-3-(metoksimetil)benzena umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u koraku C. ES+APCI MS m/z 384,2 [M+H]<+>.

Primer 5

1-(4-(7-(2-fluoro-5-hidroksifenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2- en-1-one

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, korišćenjem 2-bromo-1-fluoro-4-(metoksimetoksi)benzena umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u koraku C. ES+APCI MS m/z 384,2 [M+H]<+>.

Primer 6

12

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il) prop-2-en-1-one

Koraci A-C: benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, Koraci A-C, korišćenjem terc-butil 4-hloro-6-metil-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilata umesto 4-hloro -5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat u koraku A. ES+APCI MS m/z 430,2 [M+H]<+>.

Korak D1: benzil 4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina -1-karboksilat (0,05 g, 0,09 mmol) u izopropanolu (10 ml) je dodat hlorovodonik (5-6M u izopropanolu) (0,02 ml, 0,09 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana pod vakuumom i koncentrat je podeljen između etil acetata i vode da bi se materijal pretvorio u slobodnu bazu. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgS04 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,005 g, 0,010 mmol, 11 % prinosa). ES+APCI MS m/z 510,3 [M+H]<+>.

Korak D2: 4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-ol: Pripremljeno u skladu sa metodom iz Primera 1, Korak D.

12

Korak E: 1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il) prop-2-en-1-on: Pripremljen u skladu sa metodom iz Primera 1, Korak E.

PRIMER 7

11-(4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il) prop-2-en-1-on

Koraci A-D: benzil 4-(7-(5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Sintetizovano prema opštoj šemi 1, koraci A-C, korišćenjem 4-bromo-5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazola umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u Korak C

Korak D1: benzil 4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat : U rastvor benzil 4-(7-(5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilatu (0,16 g, 0,26 mmol) u dihlorometanu (10 ml) dodata je 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina (0,89 g, 7,8 mmol), a zatim anisol (0,028) g, 0,26 mmol), i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcija je koncentrovana pod vakuumom i koncentrovani materijal je stavljen u etil acetat i ispran baznim rastvorom soli. Kombinovani organski slojevi su osušeni pomoću MgSO4 i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi materijal je hromatografisan korišćenjem 0 do 10% metanola/dihlorometana kao eluenta da bi se dobio benzil 4-(7-(5-metil-lH-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,05 g, 38%). ES+APCI MS m/z 484,2 [M+H]<+>.

12

Korak D2: 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(pirazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin: Pripremljeno prema metodu iz Primera 1, korak D.

Korak E: 11-(4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il) prop-2-en-1-on: Pripremljeno prema metodu iz Primera 1, korak E.

PRIMER 8

(S)-1-(4-(2-(1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-1-il)prop-2-en-1

12

Korak A: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Benzil 1-piperazinkarboksilat (1,268 mL, 6,575 mmol) i terc-butil 2,4-dihloro-5,6-dihidropirido[34-d]pirimidin-7(8H)-karboksilat (2 g, 6,575 mmol) su rastvoreni u dimetil acetamidu (10 ml) i tretirani sa N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (3,445 ml, 19,73 mmol). Reakciona smeša je mešana na 85°C tokom 2 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena etil acetatom, isprana vodom i slanim rastvorom, osušena pomoću MgSO4, filtrirana i koncentrovana. Koncentrat je prečišćen hromatografijom (CombiFlash®, 0%-50% etil acetat:heksan kao eluent da bi se dobio proizvod (2,69 g, 83 %)). ES+APCI MS m/z 488,2, 490,2 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,8- dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (235 mg, 0,482 mmol) i (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ol (497 mg, 4,82 mmol) su dodati dioksanu (0,5 ml) i zagrevani na 100°C tokom 3 dana. Reakcija je koncentrovana i dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom

12

(Biotage Isolera, 0-12% metanol u dihlorometanu) da bi se dobio terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (200 mg, 0,361 mmol, prinos 74,9%)). ES+APCI MS m/z 555,3 [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,8 -dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (200 mg, 0,3606 mmol) u dihlorometanu (1202 µl, 0,3606 mmol) dodata je trifluorosirćetna kiselina (828,3 µl, 10,82 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcija je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je stavljen u dihlorometan. Rastvor je ispran sa 1M NaOH, zatim slanim rastvorom, a zatim osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (Biotage Isolera, 24G Isco RediSep®Gold, 10 do 20% metanol/dihlorometan) da bi se dobio proizvod kao beličasta pena (0,135 g, 83%). ES+APCI MS m/z 455,2 [M+H]<+>.

Korak D: benzil (S)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) (21,8 mg, 0,0238 mmol), racemski-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil (30,4 mg, 0,0488 mmol) i toluen (99). µl, 0,297 mmol). Argon je propušten kroz smešu 5 minuta, a zatim je bočica zatvorena poklopcem i smeša je zagrevana na 100°C tokom 15 minuta. Smeša je ohlađena do sobne temperature i dodat je natrijum terc-butoksid (57,2 mg, 0,595 mmol), a zatim 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonat (100 mg, 0,297 mmol) i benzil (S)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (135 mg, 0,297 mmol). Bočica je zatvorena i smeša je zagrevana na 100°C tokom 18 sati. Smeša je ohlađena i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen silika gelom (Biotage Isolera, 0-11% metanol/dihlorometan da bi se dobio benzil (S)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (68 mg, 0,106 mmol, 35,7% prinos). ES+APCI MS m/z 641,3 [M+H]<+>.

1

Korak E: (S)-2-((7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -2-il)oksi)-N,N-dimetilpropan-1-amin: U rastvor benzil (S)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (68 mg, 0,11 mmol) u etanolu (1061 µl, 0,11 mmol) i dodat je tetrahidrofuran (1061 µl, 0,11 mmol) Paladijum. (113 mg, 0,053 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O). Atmosfera H2 je uvedena vakuumom, a zatim je reakciona posuda održavana u atmosferi H2. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Smeša je razblažena metanolom i filtrirana kroz GF/F papir. Bezbojni filtrat je koncentrovan da bi se dobio (S)-2-((7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropan-1-amin (54 mg, 100% prinos) koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 507,3 [M+H]<+>.

Korak F: (S)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: Za suspenziju (S)-2-((7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropan-1-amin (54 mg, 0,11 mmol) u dihlorometanu (1066 µl, 0,11 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat akriloil hlorid (1279 µl, 0,13 mmol)) (sveže pripremljen 0,1 M rastvor u DCM), a zatim trietilamin (30 µl, 0,21 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 20 minuta. Smeša je koncentrovana i proizvod je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 0-15% metanol/dihlorometan) da bi se dobio (S)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)) propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (51 mg, 0,091 mmol, 85% prinos). ES+APCI MS m/z 561,3 [M+H]<+>.

Korak G: 1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: (S)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (51 mg,

0,091 mmol) je dodat u bočicu koja sadrži 350 µl metanola i nekoliko kapi tetrahidrofurana i reakciona bočica je zatvorena. HCl (379 ul, 2,3 mmol) (6M vodeni) je dodat uz mešanje, i smeša je zagrevana na 55°C tokom 3 sata.

1 1

Reakcija je ohlađena i koncentrovana pod vakuumom. Dodat je zasićeni rastvor bikarbonata i reakcija je ekstrahovana sa 10% metanola u dihlorometanu.

Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (Biotage Isolera, 4-20 % metanol u dihlorometanu sa 1% koncentrovanog amonijum hlorida) da bi se dobio naslovni proizvod (25,3 mg, 54 %). ES+APCI MS m/z 517,2 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,90 (d, 1H, J = 8,314 Hz), 7,54 (d, 1H, J = 8,021), 7,34 (m, 1H), 7,24 (m, 1H).6,72 (m, 1H), 6,56-6,48 (m, 2H), 6,32 (dd, mm, 1H, J = 16,726, 1,858), 5,73 (DD, 1H, J = 10,368, 1,858), 5,45 (m, 1H), 4,09-3,94 (m, 2H), 3,63 (bps, 2H), 3,47 (bps, 2H), 3,31 (m, 4H), 3,16 (bps, 2H), 2,84 (m, 1H), 2,60 (b, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,43 (s, 6H), 1,31 (d, 3H, J = 6,162 Hz)

PRIMER 9

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaflen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 2-(dimetilamino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 503,2 [M+H]+.

PRIMER 10

1 2

1-(4-(2-(3-(dimetilamino)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-(dimetilamino)propan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]+.

PRIMER 11

1-(4-(2-(1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 1-(dimetilamino)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]+.

PRIMER 12

1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 1-metilpiperazina umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 514,3 [M+H]+.

PRIMER 13

1-(4-(2-(3-(dimetilamino)pirolidin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem N,N-dimetilpirolidin-3-amina umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 528,3 [M H]+.

PRIMER 14

1 4

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-metilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem benzil (S)-2-metilpiperazin-1-karboksilata umesto benzil piperazin-1-karboksilata u koraku A i korišćenjem 2-(dimetilamino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ol u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]+.

PRIMER 15

(R)-1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, zamena benzil (R)-2-metilpiperazin-1-karboksilata za benzil piperazin-1-karboksilat u koraku A i 2-(dimetilamino)etan-1-ola za (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ol u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]+.

PRIMER 16

1

1-(6-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem benzil 2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-karboksilata umesto benzil piperazin-1-karboksilata u koraku A i zamenom 2-(dimetilamino)etan-1-ol umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 515,3 [M+H]+.

PRIMER 17

1-(4-(2-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem N,N-dimetilpiperidin-4-amina umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 580,3 [M H]+.

PRIMER 18

1

1-(6-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem benzil 2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-karboksilata umesto benzil piperazin-1-karboksilata u koraku A i zamenom 1-(dimetilamino)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]+.

PRIMER 19

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (R) -1-(dimetilamino)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]+.

PRIMER 20

1

1-(6-(2-(3-(dimetilamino)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem benzil 2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-karboksilata umesto benzil piperazin-1-karboksilata u koraku A i zamenom 3-(dimetilamino)propan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]+.

PRIMER 21

1-(4-(2-((4-(dimetilamino)butan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 4-(dimetilamino)butan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 531,3 [M+H]+.

PRIMER 22

1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 1-metilpiperidin-4-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H ]+.

PRIMER 23

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 1-metilpirolidin-3-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 515,3 [M+H ]+.

PRIMER 24

1

1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 1-(dimetilamino)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B, korišćenjem 1-brom naftalena umesto 3- (metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonat u koraku D, i eliminisanje koraka G. ES+APCI MS m/z 501,3 [M+H]+.

PRIMER 25

1-(4-(2-(3-(dimetilamino)propoksi)-7-(1-feniletil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 3-(dimetilamino)propan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B, korišćenjem (1-bromoetil)benzena umesto 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u koraku D, i eliminisanje koraka G. ES+APCI MS m/z 559,3 [M+H]+.

14

PRIMER 26

1-(4-(2-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-(piperazin-1-il)etil acetata umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. Posle koraka D, sledeća reakcija saponifikacije je izvedena: Benzil 4-(2-(4-(2-acetoksietil)piperazin-1-il)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat je stavljen u THF (5 ml) i dodat je 2 M LiOH (1 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 24 h. Dodat je zasićeni NH4Cl i reakcija je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani i rezultujući ostatak je prečišćen silika gelom (Biotage Isolera Gold, eluiranjem sa 0-10% MeOH u DCM) da bi se dobio benzil 4-(2-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1- il)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Ostatak sinteze je nastavljen kao u Primeru 8, korak E. ES+APCI MS m/z 544,3 [M+H]+.

PRIMER 27

1-((S)-4-(2-(((R)-1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem benzil (S)-2-metilpiperazin-1-karboksilata umesto benzil piperazin-1-karboksilata u koraku A i korišćenjem (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 531,3 [M+H]+.

PRIMER 28

(S)-1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem benzil (S)-3-metilpiperazina-1-karboksilata umesto benzil piperazin-1-karboksilata u koraku A i korišćenjem 2-(dimetilamino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,2 [M+H]+.

PRIMER 29

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-morfolinoetoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-morfolinoetan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 545,2 [M+H ]+.

PRIMER 30

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-morfolino-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il) prop-2-en-1-one

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem morfolina umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 501,3 [M+H]+.

PRIMER 31

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(pirolidin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

14

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem pirolidina umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 485,2 [M+H]+.

PRIMER 32

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(pirolidin-1-il)propan-2-il)oksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-1-(pirolidin-1-il)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES APCI MS m/z 543,4 [M+H]+.

PRIMER 33

1-(4-(2-(2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat

Korak A: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Na smešu benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 463,12 µmol, 1,00 ekv.) i 2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etanol (166 mg, 926 µmol, 2,00 ekv.) u toluenu (10,0 ml) dodati su NaOBu-t (133 mg, 1,39 mmol, 3,00 ekv.), BINAP (57,7 mg, 92,6 µmol, 0,20 ekv.), Pd2(dba)3 (42,4 mg, 46,3 µmol, 0,10 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 12 sati pod N2. Reakciona smeša je filtrirana i filter kolač je ispran sa DCM (3 × 10 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen reverznom fleš hromatografijom (40% MeCN u vodi (0,1% TFA) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 301 µmol, 65,1 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca. ESI MS m/z 763,5 [M+H]<+>.

Korak B: 4-[2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol: U rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (190 mg, 249 umol, 1,00 ekv.) u MeOH (10,0 ml) je dodat Pd/C (100 mg) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pod vodonikom (15 psi) na 40°C tokom 4 sata. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 4-[2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-4-piperazin-1-il- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (90,0 mg, 167 umol, 67,1% prinos) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 539,4 [M+H]<+>.

Korak C: 1-[4-[2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 4-[2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (90,0 mg, 167 µmol, 1,00 ekv.) i DIEA (64,8 mg, 501 µmol, 87,5 µl, 3,00 ekv.) je dodat 0 µmol (3,00 ekv.) u DCM (20 ekv.) prop-2-enoil prop-2-enoat (19,0 mg, 150 µmol, 0,90 ekv.) na -40°C.

Reakciona smeša je mešana na -40°C 0,5 h. Reakciona smeša je ugašena sa 1 ml MeOH i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen preparativnom HPLC kolonom: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,1% TFA) -ACN]; B%: 12%-42%,11 min da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-

14

il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on trifluoroacetat (32,6 mg, 50,2 µmol, 30,0% prinos, 91,3% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 593,5 [M+H]<+>.

PRIMER 34

1-(4-(2-(3-(1,1-dioksidotiomorfolino)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat

Sintetizovano prema metodi iz Primera 33, korišćenjem 3-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)propan-1-ola umesto 2-(1,1-diokso-1,4- tiazinan-4-il)etanol u koraku A. ESI MS m/z 607,5 [M+H]+.

PRIMER 35

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(4-morfolinobutoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 33, korišćenjem 4-morfolinobutan-1-ola umesto 2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4-il)etanola u koraku A. ESI MS m/z 573,4 [M+H]+.

14

PRIMER 36

(R)-1-(4-(2-((1-(4-acetilpiperazin-1-il)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 33, korišćenjem 1-[4-[(2R)-2-hidroksipropil]piperazin-1-il]etanona umesto 2-(1,1-diokso-1,4-tiazinan-4 -il)etanol u koraku A. ESI MS m/z 600,6 [M+H]+.

PRIMER 37

1-(4-(2-(2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: benzil 4-[2-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoksi]-7-(3-benziloksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor 1-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanona (277 mg, 1,61 mmol, 2,60 ekv.) u THF (8,00 ml) dodat je NaH (49,4 mg, 1,23 mmol, 60% čistoće 2,00 ekv.) na 0°C.

Reakciona smeša je mešana na 0°C 15 minuta. U smešu je dodat benzil-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 618 umol, 1,00 ekv.) u THF (2,00 ml). Reakciona smeša je

14

mešana na 0°C tokom 20 minuta. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NH4Cl (6 ml) i vodom (6 ml). Reakciona smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-[2-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoksi]-7-(3-benziloksi- 1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (450 mg, 534 µmol, 86,5% prinos, 89,7% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 756,3 [M+H]<+>.

Korak B: 1-[4-[2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2- il]oksi]etil]piperazin-1-il]etanon: U rastvor benzil 4-[2-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoksi]-7-(3-benziloksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 264 umol, 1,00 ekv.) u THF (10,0 ml) je dodat Pd/C (100 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pod vodonikom (15 psi) na 40°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filter kolač je ispran sa THF (3 × 5 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 1-[4-[2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-pipenazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-2-il]oksi]etil]piperazin-1-il]etanon (80,0 mg, 150 umol, 56,9% prinos) kao braon čvrsta supstanca.

Korak C: 1-[4-[2-[2-(4-acetilpiperazin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 1-[4-[2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-2-il]oksi]etil]piperazin-1-il]etanon (80,0 mg, 150 µmol, 1,00 ekv.) i DIEA (58,3 mg, 451 µmol, 78,8 µl, 3,00 ekv.) u 0 CM (DCM) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (14,2 mg, 113 µmol, 0,75 ekv.) na -40°C tokom pola sata. Reakciona smeša je ugašena sa MeOH (1 ml) i razblažena sa DCM (20 ml), zatim isprana vodom (5 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>, 10 µ; mobilna faza:

[voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 30%-55%, 10 min da se dobije 1-[4-[2-[2-(4-aktilpiperazin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (13,8 mg, 23,3 µmol, 15,5% prinos, 98,7% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 586,3 [M+H]<+>.

14

PRIMER 38

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-(piperidin-1-il)propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 37, korišćenjem 3-(1-piperidil)propan-1-ola umesto 1-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanona u koraku A. ESI MS m/ z 557,5 [M+H]+.

PRIMER 39

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-(pirolidin-1-il)propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 37, korišćenjem 3-pirolidin-1-ilpropan-1-ola umesto 1-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanona u koraku A. ESI MS m/z 543,3 [M+H]+.

PRIMER 40

14

1-(4-(2-(4-(dimetilamino)butoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1 -il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 37, korišćenjem 4-(dimetilamino)butan-1-ola umesto 1-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanona u koraku A. ESI MS m/z 531,4 [M+H]+.

PRIMER 41

1-(4-(7-(3-ciklopropil-5-hidroksifenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat

Korak A: 4-[7-(3-benziloksi-5-ciklopropil-fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1 -karboksilat: U smešu benzil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (400 mg, 805 µmol, 1,00 ekv.) i 1-benziloksi-3-bromo-5-ciklopropilbenzen (268 mg, 886 µmol, 1,10 ekv.) u toluenu (10,0 mL) je dodat 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (75,2 mg, 161 µmol, 0,20 ekv.), Pd2(dba)3 (111 mg, 121 µmol, 0,15 ekv) i Cs2CO3656 mg, 2,01 mmol, 2,50 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 12 sati pod N2. Smeša je

1

dodata u vodu (15 ml) i ekstrahovana sa DCM (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Talog je prečišćen hromatografijom (SiO2, petrol etar/etil acetat = 3:1 do dihlorometana: Metanol = 10:1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-5-ciklopropil-fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 230 umol, 28,5% prinos, 97,2% čistoća) kao smeđe ulje. ESI MS m/z 719,6 [M+H]<+>.

Korak B: 3-ciklopropil-5-[2-(3-morfolinopropoksi)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]fenol U smešu benzil 4-[7-(3-benziloksi-5-ciklopropil-fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-karboksilat (150 mg, 209 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (10,0 mL) je dodat Pd/C (150 mg, 10 % čistoće) i CH3COOH (25,1 mg, 417,3 µmol,

23,9 µl0 µL). Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (15 Psi) na 40 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je filtrirana kroz Celite® i filtrat je koncentrovan. Proizvod 3-ciklopropil-5-[2-(3-morfolinopropoksi)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]fenol diacetat (80,0 mg, 130 umol, 62,4 % prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 495,2 [M+H]<+>.

Korak C: 1-[4-[7-(3-ciklopropil-5-hidroksi-fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-il]prop-2-en-1-on U smešu 3-ciklopropil-5-[2-(3-morfolinopropoksi)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]fenol diacetat (80,0 mg, 130 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (2,00 mL) je dodat DIEA (168 mg, 1,30 mmol, 227 µl, 1,00 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (13,1 mg, 104 umol, 0,80 ekv.) na -78°C, reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je ugašena sa MeOH (2 ekv., 10 mg), zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (instrument: GX-K; Kolona: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>, 10 µ; Uslovi: voda (0,1% TFA)-ACN; Početak B: 8; Kraj B: 38; Vreme gradijenta (min): 11; 100 % B vreme zadržavanja (min): 2; Brzina protoka (ml/min): 25). Izolovani proizvod je koncentrovan liofilizacijom. Proizvod 1-[4-[7-(3-ciklopropil-5-hidroksi-fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-il]prop-2-

1 1

en-1-on trifluoroacetat (21,5 mg, 31,1 umol, 23,9 % prinos, 95,8 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 549,5 [M+H]<+>.

PRIMER 42

1-(4-(7-(2-fluoro-5-hidroksifenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 41, korišćenjem 4-(benziloksi)-2-bromo-1-fluorobenzena umesto 1-benziloksi-3-bromo-5-ciklopropilbenzena u koraku A. ESI MS m/z 527,4 [M+H]+.

PRIMER 43

1-(4-(7-(3-hidroksi-6-metilnaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: benzil 4-[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500 mg, 1,01 mmol, 1,00 ekv.), (3-metoksi-6-metil-1-

1 2

naftil)trifluorometansulfonat (483 mg, 1,51 mmol, 1,50 ekv.), Cs2CO3 (820 mg, 2,52 mmol, 2,50 ekv.), 2-dicikloheksilfosfino 2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (93,9 mg, 201,3 µmol, 0,20 ekv.) i Pd2(dba)3 (92,2 mg, 100 µmol, 0,10 ekv.) u toluenu (3,00 ml) je mešan na 90°C 10 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (50,0 ml). Talog je uklonjen filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze pomoću kolone preko silika gela (0,1 % TFA voda/acetonitril). Željene frakcije su kombinovane i bazifikovane sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2,00 ml), zatim koncentrovane pod vakuumom. Ostatak je ekstrahovan etil acetatom (2 × 100 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušeni pomoću natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-2-(3 -morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400, mg, 599 µmol, 59,4% prinos, 100% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 667,6 [M+H]<+>.

Korak B: 4-[3-[[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2 -il]oksi]propil]morfolin: U rastvor benzil 4-[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat (370 mg, 554 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (10,0 ml) je dodat Pd-C (100 mg, 10% čistoće) i AcOH (66,6 mg, 1,11 mmol, 2,00 ekv.) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (15 psi) na 40°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 4-[3-[[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H pirido [3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin (295 mg, 553 umol, 99,8% prinos) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. ESI MS m/z 533,6 [M+H]<+>

Korak C: 1-[4-[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U smešu prop-2-enoil prop-2-enoata (56,8 mg, 450 µmol, 0,80 ek) i DIEA (727 mg, 5,63 mmol, 983 µl, 10,0 ekv.) u DCM (2,00 mL) dodat je rastvor 4-[3-[[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2 -il]oksi]propil]morfolin (300 mg, 563 umol, 1,00 ekv.) DCM (1,00 ml) na -40°C u atmosferi azota. Smeša je mešana 1 sat. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (50 µl) na -

1

40 °C, razblažena vodom (10,0 ml), ekstrahovana sa DCM (10,0 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 1-[4-[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-il]prop-2-en-1-on (270 mg, 460 umol, 81,7% prinos) ESI MS m/z 587,6 [M+H]+.

Korak D: 1-[4-[7-(3-hidroksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 1-[4-[7-(3-metoksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (100 mg, 170 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (3,00 mL) je dodat BBr3 (213 mg, 852 µmol, 82,1 µl, 5,00 ekv.) na -78°C. Smeša je mešana na 0°C 1 sat. Smeša je ohlađena na -78°C i razblažena sa DCM

(20,0 ml), ugašena dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (5,00 ml) i mešana na -78°C tokom 10 minuta, zatim zagrejana do 0°C. Smeša je ekstrahovana sa DCM (2 × 15,0 ml), isprana slanim rastvorom (1 × 20,0 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Gemini C18250*50 mm*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 27%-57%, 12 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-hidroksi-6-metil-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (11,0 mg, 18,6 umol, 10,9% prinos, 97,0% čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 573,6 [M+H]<+>.

PRIMER 44

1-(4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1 4

Korak A: benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500 mg, 1,01 mmol, 1,00 ekv.), 2-[(4-bromo-5-metil-indazol-1-il)metoksi] etil-trimetilsilan (448 mg, 1,31 mmol, 1,30 ekv.), Cs2CO3 (822 mg, 2,53 mmol, 2,50 ekv.), Pd2 (dba)3 (138 mg, 151 µmol, 0,15 ekv.) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (94,3 mg,

202 µmol, 0,20 ekv.) u toluenu (20,0 ml) je degazirano i pročišćeno azotom 3 puta, i mešano na 90°C u trajanju od 10 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 50,0 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (0,1% TFA voda/acetonitril) da bi se dobio benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (420 mg, 554 µmol, 54,9% prinos) kao žuto ulje. ESI MS m/z 757,6 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil) indazol-4-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (370 mg, 488 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (10,0 ml) je dodat trietilamin (98,9 mg, 977 µmol, 135 µl, 2,00 ekv.) Pd/C (100 mg, 10% čistoće) i tercbutoksikarbonil terc-butil karbonat (213 mg, 977 µmol, 224 µl, 2,00 ekv.) pomoću N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (15 psi) na 40°C tokom 2 sata.

Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 1:0 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il] -2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (340 mg, 470 µmol, 96,2% prinos) kao braon ulje. ESI MS m/z 723,5 [M+H]<+>.

Korak C: 4-[3-[[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin trifluoroacetat: U rastvor terc-butil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-

1

dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 207 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (500 µl) je dodat TFA (354 mg, 3,11 mmol, 230 µl, 15,0 ekv.). Smeša je mešana na 25°C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 4-[3-[[7-(5-metil-lH-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin trifluoroacetat (125 mg, 206 µmol, 99,3% prinos) kao smeđe ulje i korišćen direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja. ESI MS m/z 493,4 [M+H]<+>.

Korak D 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: Na smešu 4-[3-[[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin trifluoroacetat (120 mg, 197 µmol, 1,00 ekv, TFA) i DIEA (255 mg, 1,98 mmol, 345 µl, 10,0 ekv.) u u dihlorometanu (2,00 ml) je dodat rastvor prop-2-enoil prop-2-enoata (19,9 mg, 158 µmol, 0,80 ekv.) dihlorometana (1,00 ml) na -40°C u atmosferi azota. Smeša je mešana 1 sat. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (50,0 µl) na -40°C, razblažena vodom (10,0 ml), ekstrahovana dihlorometanom (10,0 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150∗25 mm*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 30 %-60 %, 10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (19,0 mg, 34,4 umol, 17,4% prinos, 99,0 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 547,5 [M+H]<+>.

PRIMER 45

1

1-((1R,5S)-3-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil 3-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H U smešu 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (920 mg, 3,13 mmol, 1,00 ekv.) i terc-butil 3,8-diazabiciklo [3.2.1]oktan-8-karboksilat (677 mg, 3,19 mmol, 1,02 ekv.) u DMSO (18,0 ml) je dodat DIEA (1,21 g, 9,39 mmol, 1,64 ml, 3,00 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 1 sata. Smeša je razblažena ekstrahovanjem sa EtOAc (3 × 20 ml), isprana vodom (10 ml), 1N HCl (5 ml), NaHCO3 (15 ml) i slanim rastvorom (15 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 3-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (1,30 g, 2,41 mmol, 76,9% prinos, 87,0% čistoća) kao smeđe ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 470,2 [M+H]<+.>

Korak B: terc-butil 3-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat: U rastvor 1-(dimetilamino)propan-2-ola (857 mg, 8,31 mmol, 942 µL, 3,00 ekv.) u THF (40,0 ml) dodat je NaH (222 mg, 5,54 mmol, 60,0% čistoće, 2,00 ekv.) na 15°C pod N2. Posle mešanja na 15°C tokom pola sata, terc-butil 3-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,8 dodat je diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (1,30 g, 2,77 mmol, 1,00 ekv.). Smeša je mešana na 100°C tokom 12 sati u zatvorenoj cevi. Reakcija je polako ugašena vodom (3 ml) i zatim koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (DCM/MeOH 60:1 do 10:1) da bi se dobio tercbutil 3-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (700 mg, 1,07 mmol, 38,8 % prinos, 82,4% čistoće) kao žuto ulje.

Korak C: terc-butil 3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3, 8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat: U rastvor terc-butil 3-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (700 mg,

1

1,30 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (30,0 ml) je dodat Pd/C (200 mg) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom 4 puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (50 psi) na 40°C tokom 12 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (DCM/MeOH 50:1 do 5:1) da bi se dobio terc-butil 3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (500 mg, 952 µmol, 73,2% prinos, 85,0% čistoće) kao žuto ulje.

Korak D: terc-butil 3-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat: Pd2(dba)3 (84,1 mg, 91,8 µmol, 0,10 ekv.) je dodat u rastvor tercbutil 3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (410 mg, 918 µmol, 1,00 ekv.), 3-benziloksi-1-bromonaftalen (293 mg, 936 µmol, 1,02 ekv.), 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (85,7 mg, 184 µmol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3, (897 mg.2,75 mmol, 3,00 ekv.) u dioksanu (9,00 ml). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 7 sati pod N2 i zatim koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen vodom (5 ml) i ekstrahovan sa DCM (2 × 20 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (DCM/MeOH 100:1 do 20:1) da bi se dobio terc-butil 3-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (317 mg, 441 µmol, 48,1% prinos, 94,5% čistoća) kao žuto ulje. ESI MS m/z 679,2 [M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat: U rastvor terc-butil 3-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (340 mg, 501 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (6,80 ml) je dodat Pd/C (120 mg). Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom 4 puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (15 psi) na 40°C tokom 1,5 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-

1

diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (210 mg, 316 µmol, 63,1% prinos, 88,6% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 589,3 [M+H]<+>.

Korak F: 4-[4-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol trifluoroacetat: U rastvor terc-butil 3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (180 mg, 306 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (230 µl) je dodat TFA (349 mg, 3,06) mmol, 226 ul, 10,0 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 18°C tokom pola sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-[4-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8 -dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol trifluoroacetat (528 mg, sirovo) kao crveno ulje koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 489,2 [M+H]<+.>

Korak G: 1-[3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 4-[4-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol trifluoroacetat (149 mg, 306 µmol, 1,00 ekv.) i DIEA (1,36 g, 10,5 mmol, 1,84 ml, 34,5 ekv.) u DCM (1,50 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (30,9 mg, 245 umol, 0,80 ekv.) u kapima na -50°C. Smeša je mešana na -40, a zatim -20°C tokom 30 minuta. Reakcija je ugašena sa MeOH (19,6 mg) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen preparativnom TLC (DCM/MeOH 7:1) da bi se dobio 1-[3-[2-[2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-il]prop-2-en-1-on (18,9 mg, 32,8 µmol, 10,7 % prinos, 94,3 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 46

1

1-((1R,5S)-8-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 4, korišćenjem terc-butil (1R,5S)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-karboksilata umesto terc-butil 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktana -8-karboksilat u Koraku A. ESI MS m/z 543,4 [M+H]+.

PRIMER 47

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-8-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: etil 2-(benzilamino)propanoat: Rastvoru etil 2-bromopropanoata (30,0 g, 165 mmol, 21,6 ml, 1,00 ekv.), dodat je BnNH2 (23,1 g, 215 mmol, 23,6 ml, 1,30 ekv.) u MeCN (600 ml) dodat je K2CO3 (45,8 g,

331 mmol, 2,00 ekv.). Smeša je mešana na 80°C 2 sata. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa DCM (300 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil

1

acetat=10:1 do 4:1) da bi se dobio etil 2-(benzilamino)propanoat (34,0 g,

163 mmol, 98,4% prinos, 99,4% čistoća) bezbojno ulje.

Korak B: etil 4-[benzil-(2-etoksi-1-metil-2-okso-etil)amino]butanoat: U rastvor etil 2-(benzilamino)propanoata (31,0 g, 150 mmol, 1,00 ekv.) i etil 4-bromobutanoata (87,5 g, 449 mmol, 64,4 ml, 3,00 ekv.) u MeCN (600 ml) i vodu (60 ml) je dodat Cs2CO3 (97,5 g, 299,12 mmol, 2,00 ekv.) i KI (4,97 g, 29,9 mmol, 0,20 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 80- 90°C tokom 40 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filter kolač je ispran sa DCM (2 × 100 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je rastvoren u DCM (300 ml) i ispran sa slanim rastvorom (80 ml), osušen pomoću Na2SO4 i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat = 1:0 do 20:1) da bi se dobio etil 4-[benzil-(2-etoksi-1-metil-2-oksoetil)amino]butanoat (28,0). g, 87,1 mmol, 58,3% prinos) kao žuto ulje.

Korak C: etil 1-benzil-2-metil-3-okso-piperidin-4-karboksilat: U rastvor etil 4-(benzil-(2-etoksi-1-metil-2-okso-etil)amino]butanoata (28,0 g, 87,1 mmol, 1,00 ekv.) u THF (600 ml) dodat je tBuOK (19,6 g), 174 mmol, 2,00 ekv.).

Reakciona smeša je mešana na 18°C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena vodom (100 ml) i ekstrahovana sa MTBE (3 × 300 ml) i DCM (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat=100:1 do 20:1) da bi se dobio etil 1-benzil-2-metil-3-okso-piperidin-4-karboksilat (20,0 g, 58,8 mmol, 67,5% prinos, 81,0% čistoća) kao žuto ulje. ESI MS m/z 276,0 [M+H]<+>.

Korak D: 7-benzil-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol: U EtOH (400 ml) je dodat Na (3,76 g, 163 mmol, 3,88 ml, 2,50 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 20°C tokom pola sata. U smešu je dodat etil 1-benzil-2-metil-3-okso-piperidin-4-karboksilat (18,0 g, 65,4 mmol, 1,00 ekv.) i UREA (9,82 g, 163 mmol, 8,77 ml, 2,50 ekv.) i reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 80 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Talog je rastvoren u vodi (100 ml) i ispran sa MTBE (3 × 50 ml). Vodena faza je podešena na pH 6-7 sa HCl (15 ml, 12 M). Smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran vodom (30 ml) i osušen u vakuumu da bi se dobio 7-benzil-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2, 4-

1 1

diol (12,0 g, 44,2 mmol, 67,7% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 272,0 [M+H]<+>.

Korak E: benzil-2,4-dihloro-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin: Smeša 7-benzil-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diola (5,00 g, 18,4 mmol, 1,00 ekv.) u POCl3 (305 g, 1,99 mol, 185 ml, 108 ekv.) je zagrevana na 110°C tokom 12 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u DCM (500 ml) i sipan u zasićeni NaHCO3 (200 ml) uz održavanje pH većeg od 7. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 ml), osušen pomoću Na2SO4. Rastvor je filtriran kroz jastučić od silika gela i filterski kolač je ispran sa DCM (3 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 7-benzil-2,4-dihloro-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (4,50 g, 14,6 mmol, 79,2 % prinos) kao smeđe ulje.

Korak F: 4-(7-benzil-2-hloro-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (3,00 g, 9,73 mmol, 1,00 ekv.) i DIEA (2,52 g, 19,5 mmol, 3,40 ml, 2,00 ekv.) u dioksanu (60,0 ml) je dodat terc-butil piperazin-1-karboksilat (1,90 g, 10,2 mmol, 1,05 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 60 °C tokom 12 sati. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat = 2:1) da bi se dobio terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3],4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (3,30 g, 7,15 mmol, 73,5 % prinos, 99,3 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 458,1 [M+H]<+>.

Korak G: terc-butil-4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat: U rastvor 2-(dimetilamino)etanola (583 mg, 6,54 mmol, 655 µL, 3,00 ekv.) u toluenu (20,0 ml) dodat je Pd(OAc)2 (48,9 mg, 218 µmol, 0,10 ekv.), terc-butil-4-(7-benzil-2-hloro-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (1,00 g, 2,18 mmol, 1,00 ekv.), Cs2CO3 (2,13 g, 6,54 mmol, 3,00 ekv.) i BINAP (272 mg, 436 µmol, 0,20 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 110°C tokom 3 sati pod N2. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je rastvoren u vodi (10 ml) i ekstrahovan sa DCM (3 × 40 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog

1 2

je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat = 5:1 do 2:1 zatim DCM:MeOH = 50:1 do 5:1) da bi se dobio terc-butil-4-[7-benzil-2- [2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (900 mg, 1,76 mmol, prinos 80,8 %)) kao smeđa čvrsta supstanca. ESI MS m/z 511,2 [M+H]<+.>

Korak H: terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-5,6,7,8-tetrahidropriido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksat: U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]pipeuazin-1-karboksilat (800 mg, 1,57 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (20,0 ml) je dodat Pd/C (100 mg) pomoću N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (50 psi) na 40°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa MeOH (3 × 200 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio tercbutil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (450 mg, 1,07 mmol, 68,2% prinos) kao smeđe ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 421,3 [M+H]<+>.

Korak I: terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1 -karboksilat (380 mg, 904 µmol, 1,00 ekv.) i 3-benziloksi-1-bromonaftalen (311 mg, 994 µmol, 1,10 ekv.) u dioksanu (8,00 ml), Cs2CO32 (883,3 ekv.) mmol Dodati su -dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (84,3 mg, 181 µmol, 0,20 ekv.) i Pd2(dba)3 (82,7 mg, 90,4 µmol, 0,10 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 12 sati pomoću N2. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je podeljen između DCM (50 ml) i vode (20 ml. Reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM (50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dietil etar:etil acetat = 5:1 zatim DCM:MeOH =100:1 do 5:1), nakon čega je usledilo prečišćavanje izolovanog proizvoda preparativnom TLC (DCM: Me10:1) dajući terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-

1

1-karboksilat (200 mg, 306 umol, 33,9% prinos) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 653,4 [M+H]<+>.

Korak J: 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)naftalen- 2-ol bis-trifluoroacetat: U rastvor terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 177 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (130,00 µl) je dodat TFA (202 mg, 1,78 mmol, 132 µl) 10,00 ekv.).

Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-il]naftalen-2-ol bis-trifluoroacetat (175,00 mg) kao smeđe ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak K: 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-8-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-8-metil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- il]naftalen-2-ol bis-trifluoroacetat (97,4 mg, 141 µmol, 1,00 ekv) u DCM (500,00 µL) je dodat DIEA (222 mg, 1,72 mmol, 300 µl, 12,2 ekv) i prop-2-enoil prop-2-enoat (14,2 mg, 113 µmol, 0,80 ekv.) na -40 °C. Reakciona smeša je mešana na -40°C pola sata. Reakciona smeša je ugašena sa kapima MeOH i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen preparativnom TLC (DCM:MeOH =10:1), a zatim preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18 150∗25*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,1 %TFA)-ACN]; B%: 15 %-45 %, 13 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-8-metil-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (10,7 mg, 20,7 umol, tri koraka 6,8 % prinos) kao smeđe ulje. ESI MS m/z 517,2 [M+H]<+>.

PRIMER 48

1 4

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat

Korak A: etil 4-[benzil-(2-etoksi-2-okso-etil)amino]pentanoat: Rastvor etil 4-oksopentanoata (47,0 g, 326 mmol, 46,5 ml, 1,50 ekv.), etil 2-(benzilamino)acetata (42,0 g, 217,3 mmol, 1,00 ekv.) i AcOH (13,0 g, 217 ekv.) 1,00 ek) u DCM (800 ml) je mešano na 12-18°C tokom 30 minuta, zatim ohlađeno na 0-5°C, NaBH(OAc)3 (138 g, 652 mmol, 3,00 ekv.) je dodat u porcijama. Smeša je zagrejana na 10-18°C i mešana 16 sati. Reakciona smeša je ugašena vodom (1000 ml) i ekstrahovana sa DCM (2 × 500 ml). Kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane do suvoće. Talog je prečišćen kolonom silika gela eluiranjem dietil etara/etil acetatom (60:1 do 40:1) da bi se dobio etil 4-[benzil-(2-etoksi-2-okso-etil)amino]pentanoat (42,0 g, 91,5 mmol, 42,1% prinos, 70% čistoća) kao bezbojno ulje. ESI MS m/z 322,2 [M+H]<+>.

Korak B: etil 1-benzil-2-metil-5-okso-piperidin-4-karboksilat: Rastvor etil 4-[benzil-(2-etoksi-2-okso-etil)amino]pentanoata (37,00 g, 115,12 mmol, 1,00 ekv.) i t-BuOK (16,8 g, 150 mmol, 1,30 ekv.) u toluenu (30,0 ml) je mešan na 25 °C tokom 5 sati. Reakcija je ugašena vodom (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 30 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni i koncentrovani do suvoće da bi se dobio etil 1-benzil-2-metil-5-okso-piperidin-4-karboksilat (14,6 g, 53,0 mmol, 46 % prinos) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku.

Korak C: 7-benzil-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol: Na (3,05 g, 133 mmol, 3,14 ml, 2,50 ekv) je rastvoren u EtOH (280 ml), a zatim etil 1-benzil-2-metil-5-okso-piperidin-4-karboksilat (14,6 g, 53,0 mmol, 1,00 ekv) i urea (7,96 g, 133 mmol, 7,11 ml, 2,50 ekv). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa

1

(78 °C) 16 sati pomoću N2. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće. Talog je rastvoren u vodi (100 ml) i ispran sa MTBE (100 ml). pH vodene faze je podešen na pH 6-7 sa 6N HCl (2 ml). Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod vakuumom na 60°C da bi se dobio 7-benzil-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol (5,00 g, 17,1 mmol, 32,3% prinos, 93% čistoća) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.

Korak D: 7-benzil-2,4-dihloro-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin: POCl3 (49,5 g, 323 mmol, 30,0 ml, 58,4 ekv.) i 7-benzil-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2,4-diol (1,50 g, 5,53 mmol, 1,00 ekv.) zagrevano je na 100 °C pod refluksom 12 sati. Reakcija je koncentrovana do suvoće da bi se uklonio POCl3. Talog je rastvoren u DCM (40 ml) i ispran sa zasićenim NaHCO3 vodenim/zasićenim vodenim Na2CO3 (1-1, 60 ml). Smeša je filtrirana i organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 7-benzil-2,4-dihloro-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin (2,08 g, sirov) kao smeđa čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 307,9, 309,9 [M+H]<+>.

Korak E: 4-(7-benzil-2-hloro-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U smešu 7-benzil-2,4-dihloro-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (2,50 g, 8,11 mmol, 1,00 ekv.) i terc-butil piperazin-1-karboksilat (1,54 g, 8,27 mmol, 1,02 ekv.) u dioksanu (50,0 ml) je dodat DIEA (3,14 g, 24,3 mmol, 4,25 ml, 3,00 ekv.). Smeša je mešana na 60°C tokom 20 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen vodom (20 ml) i ekstrahovan sa DCM (2 × 80 ml). Organski slojevi su osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen automatskim sistemom fleš hromatografije (dietil etar/etil acetat 50:1 do 2:1) da bi se dobio tercbutil 4-(7-benzil-2-hloro-6-metil-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (2,59 g, 5,29 mmol, 65,2% prinos, 93,5% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.

Korak F: terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat: U rastvor 2-(dimetilamino)etanola (701 mg, 7,86 mmol, 788 µl, 3,00 ekv.) u THF (45,0 ml) dodat je NaH (210 mg, 5,24 mmol, 60,0 % čistoće, 2,00 ekv.) na 15°C pomoću N2.

1

Posle mešanja na 15°C tokom pola sata, terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat (1,20 g, 2,62 mmol, 1,00 ekv.) je dodat. Smeša je mešana na 110 °C tokom 18 sati u zatvorenoj cevi. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko Al2O3 (DCM/MeOH 100:1 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,38 g, 2,36 mmol, 90,3% prinos, 87,5% čistoća) kao žuto ulje.

ESI MS m/z 511,3 [M+H]<+>.

Korak G: terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksil-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat (1,50 g, 2,94 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (80,0 ml) je dodat Pd/C (450 mg) pomoću N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom 4 puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (50 psi) na 40 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (DCM/MeOH 40-1 do 10/1) da bi se dobio terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,15 g, 2,46 mmol, 83,7 % prinos, 90,0 % čistoća) kao žuto ulje.

Korak H: terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Pd2(dba)3 (109 mg, 119 µmol, 0,10 ekv.) je dodat u rastvor terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 1,19 mmol, 1,00 ekv.), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (410 mg, 1,31 mmol, 1,10 ekv.), 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (111 mg, 238 µmol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (1,16 g, 3,57 mmol, 3,00 ekv.) u dioksanu (10,0 ml). Reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 12 sati pod N2. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen vodom (5 ml) i ekstrahovan sa DCM (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen

1

hromatografijom pomoću kolone preko Al2O3 (DCM-MeOH 100/1 do 10/1) i preparativnom TLC (DCM-MeOH 5:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-). naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (309 mg, 453 µmol, 38,1 % prinos, 95,8 % čistoća) kao žuto ulje.

Korak I: terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (340 mg, 521 umol, 1,00 ekv.) u MeOH (6,80 ml) je dodat Pd/C (120 mg) pomoću N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom 4 puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (15 psi) na 40°C tokom 1,5 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 312 umol, 59,8 % prinos, 83,5 % čistoća) kao ružičasta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 563,3 [M+H]<+>.

Korak J: 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen- 2-ol trifluoroacetat: U rastvor tercbutil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 320 umol, 1,00 ekv.) u DCM (240 µl) je dodat TFA (365 mg, 3,20 mmol, 237 µl, 10,0 ekv). Smeša je mešana na 18°C pola sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin -7-il]naftalen-2-ol trifluoroacetat (273 mg) kao žuto ulje koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak K: 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6-metil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-metil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- il]naftalen-2-ol trifluoroacetat (148 mg, 320 µmol, 1,00 ekv.) i DIEA (494 mg, 3,83 mmol, 668 µl, 12,0 ekv.) u DCM (500 µl) je dodat prop-2- enoat (32,3 mg, 256 µmol, 0,80 ekv.) kap po kap na -50°C. Smeša je mešana na -40 do

1

-20°C tokom 30 minuta. Reakcija je ugašena sa MeOH (20,5 mg) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150∗25*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,1 % TFA) -ACN]; B%: 8 %-38 %,13 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6-metil-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on trifluoroacetat (73,7 mg, 113 µmol, 35,2 % prinos, 96,3 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 517,3 [M+H]<+>.

PRIMER 49

1-(4-(2-(2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-7-karboksilat: smeša 2-(3-fluoropirolidin-1-il)etanola (401 mg, 3,01 mmol, 1,60 ekv.), terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2- metilsulfonil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1,00 g, 1,88 mmol, 1,00 ekv.), Cs2CO3 (1,84 g, 5,64 mmol, 3,00 ekv.), Pd(O ekv.)2 (42,2 mg, 188 umol, 0,10 ekv.) i BINAP (234 mg, 376 µmol, 0,20 ekv.) u toluenu (50,00 ml) su mešani na 110 °C tokom 3 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 10:1 do 100:1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1,20 g, 1,07 mmol,

1

56,8 % prinos, 52 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 585,3 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-karboksilat (1,20 g, 2,05 mmol, 1,00 ekv) u DCM (10,00 ml) je dodat TFA (3,51 g, 30,8 mmol, 2,28 ml, 15,00 ekv.) na 0 °C. Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana 16 sati. Smeša je razblažena vodom (100 ml) i rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 100 ml). Vodeni sloj je bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (50 ml), a zatim ekstrahovan etil acetatom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 100 ml), osušeni pomoću natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat (800 mg, 1,65 mmol, 80,4 % prinos) kao žuta guma. ESI MS m/z 485,3 [M+H]<+>.

Korak C: benzil 4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (750 mg, 1,55 mmol, 1,00 ekv.), (3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (949 mg, 3,10 mmol, 2,00 ekv.), 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (144,66 mg, 310,00 µmol, 0,20 ekv.), Pd2(dba)3 (141,94 mg, 155,00 µmol, 0,10 ekv.) i Cs2CO3 (1,52 g, 4,65 mmol, 3,00 ekv.) u toluenu (70,00 ml) je mešan na 110 °C tokom 16 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i zatim razblažena etil acetatom (100 ml) i vodom (100 ml).

Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 10:1 do etil acetat-metanol 10:1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (700 mg, 961 µmol, 62,0 % prinos, 88 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 641,3 [M+H]<+>.

1

Korak D: 2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin: Smeša benzil 4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (700,00 mg, 1,09 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH je hidrogenizovana(15 psi) na 40°C sa suvim Pd/C (140 mg) kao katalizatorom 4 sata. Katalizator je filtriran kroz Celite® pelt i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin -1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (500 mg, 987 µmol, 90,6 % prinos) kao braon čvrsta supstanca.

Korak E: 1-[4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U smešu 2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin (500 mg, 987 µmol, 1,00 ekv.) i DIEA (255 mg,

1,97 µmol, 345 µL, 2,00 ekv.) u dihlorometanu (8 ml) je dodat rastvor prop-2-enoil prop-2-enoat (124 mg, 987 µmol, 1,00 ekv.) u dihlorometanu (2 ml) na -40°C u atmosferi azota. Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana 1 sat. Smeša je razblažena vodom (20 ml) i dihlorometanom (30 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 30 ml), osušen pomoću magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (dihlorometan/metanol 100/1 do 10/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (450 mg, 714 µmol, 72,4 % prinos, 89 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 561,2 [M+H]<+>.

Korak F: 1-[4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 1-[4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (400 mg, 713 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (2,00 ml) je dodat BBr3 (1,30 g, 5,19 mmol, 500 µl, 7,27 ekv.) na -70°C u atmosferi azota. Smeša je zagrejana do 0 °C i mešana 1 sat. Smeša je razblažena dihlorometanom (20 ml), a zatim ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (20 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 10 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je

1 1

prečišćen preparativnom HPLC (Phenomenex Synergi C18150*25*, 10 µ; mobilna faza: [voda. (0,1 %TFA)-ACN]; B%: 18%-48%,12 min.) Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(3-fluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (40,0 mg, 63,7 µmol, 8,92 % prinos, 87 % čistoće) je bila žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 547,3 [M+H]<+>.

PRIMER 50

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: 1-terc-butil 2-metil4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,2-dikarboksilat: U rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (2,00 g, 6,80 mmol, 1,00 ekv.) u DMSO (40,0 ml) dodat je DIEA (1,76). g, 13,6 mmol, 2,38 ml, 2,00 ekv.) i 1-terc-butil 2-metilpiperazin-1,2-dikarboksilat (1,74 g, 7,14 mmol, 1,05 ekv.). Smeša je mešana na 55 °C tokom 16 sati. Smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 100 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (Si02, dietil etar/etil acetat = 1:0 do 3:1) da bi se dobio 1-terc-butil 2-metil-4-(7-benzil-2-hloro-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,2-dikarboksilat (3,10 g, 5,70 mmol, 83,8 % prinos, 92,3 % čistoća) kao žuta polučvrsta materija.

ESI MS m/z 502,2 [M+H]<+>.

1 2

Korak B: 1-terc-butil 2-metil4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat: Smeša 1-terc-butil 2-metil-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,2 -dikarboksilat (3,00 g, 5,98 mmol, 1,00 ekv.), 2-(dimetilamino)etanol (1,07 g, 12,0 mmol, 1,20 ml, 2,00 ekv.), Cs2CO3 (4,87 g, 15,0 mmol 2,50 ekv.) Pd(OAc)2 (201 mg, 897 µmol, 0,15 ekv.) i BINAP (744 mg, 1,20 mmol, 0,20 ekv.) u toluenu (60,0 ml) je degazirana i pročišćena azotom 3 puta, a zatim je smeša mešana na 110°C tokom 3 sata u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 50 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 1:0 do 5:1) da bi se dobio 1-terc-butil 2-metil-4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (3,10 g, 4,45 mmol, 80,4 % prinos, 86,0 % čistoća) kao crno ulje. ESI MS m/z 555,3 [M+H]<+>.

Korak C: 1-terc-butil 2-metil4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat: U rastvor 1-terc-butil 2-metil-4-[7-benzil-2-[2-(dimetil amino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (2,33 g, 4,20 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (50,0 ml) je dodat Pd/C (233 mg) pomoću N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (50 psi) na 40 °C tokom 36 sati. Reakciona smeša je filtrirana i organska faza je koncentrovana do suvoće da bi se dobio 1-terc-butil-2-metil4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (1,50 g, sirovo) kao bezbojno ulje, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak D: 1-terc-butil2-metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat: Smeša 1-terc-butil-2-metil4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (1,50 g, sirov), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (1,49 g, 4,76 mmol, 1,30 ekv.), Cs2CO3 (2,98 g, 9,15 mmol, 2,50 ekv.), Pd2(dba)3 (503 mg, 549 µmol, 0,15 ekv.) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (342 mg, 732 µmol, 0,20

1

ekv.) u dioksanu (100 ml) je degazirana i pročišćena azotom 3 puta, i smeša je mešana na 85 °C tokom 5 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (50 ml) na 0 °C i ekstrahovana sa DCM (3 × 100 ml).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 150 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 10:1 do 5:1) da bi se dobio 1-terc-butil2-metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (1,72 g, 2,25 mmol, 53,5% prinos, 91% čistoća) kao žuta supstanca. ESI MS m/z 697,3 [M+H]<+>.

Korak E: metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-di hidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-2-karboksilat: U rastvor 1-terc-butil 2-metil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1,2-dikarboksilat (1,32 g, 1,89 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (20,0 ml) je dodat TFA (4,31 g, 37,8 mmol, 2,80 mL, 20,0 ekv) na 0 °C i reakciona smeša je mešana 2 sata na 25 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je rastvoren u DCM (50 ml) i H20 (20 ml) i pH reakcione smeše je podešen na 8 sa zasićenim NaHCO3. Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-di hidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-karboksilat (1,12 g, 1,87 mmol, 69,6 % prinosa, 70 % čistoće) kao smeđe ulje, koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 597,4 [M+H]<+>.

Korak F: [4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 2-il]metanol: Smeša metil-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-karboksilat (400 mg, 0,670 mmol) u THF (5,00 ml) je dodat LiAlH4 (102 mg, 2,68 mmol, 4,00 ekv.) na 0 °C. Reakciona smeša je degazirana i pročišćena azotom 3 puta, i mešana na 0 °C tokom 2 sata u atmosferi azota.

Reakciona smeša je ugašena dodavanjem Na2SO4·10 H2O (0,5 g) na 0 °C, a zatim razblažena sa DCM (50 ml). Kombinovani organski slojevi su filtrirani, sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio [4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-

1 4

4-il]piperazin-2-il]metanol (280 mg, 0,493 mmol, 73,6 % prinos) kao žuta polučvrsta materija, koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 569,3 [M+H]<+>.

Korak G: 2-[[7-(3-benziloksi-1-naftil)-4-[3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil] piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin: U mešani rastvor [4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-2-il]metanol (250 mg, 440 µmol, 1,00 ekv.) i NaH (176 mg, 4,40 mmol, 60,0 % čistoće, 10,0 ekv.) u THF (10,0 ml) je dodat terc-butil hlorid (232 mg, 1,54 mmol, 189 µL, 3,50 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (25 ml) na 0 °C i ekstrahovana sa DCM (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 30 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen preparativnom TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1) da bi se dobio 2-[[7-(3-benziloksi-1-naftil)-4-[3-[[tercbutil(dimetil)silil ]oksimetil] piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (128 mg, 180 µmol, 40,9 % prinosa, 96,0 % čistoće) kao bezbojna polučvrsta materija. ESI MS m/z 683,3 [M+H]<+>.

Korak H: 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on; U rastvor 2-[[7-(3-benziloksi-1-naftil)-4-[3-[[terc-butil (dimetil)silil]oksimetil]piperazin-1-il]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (128 mg, 187 µmol, 1,00 ekv.) i trietilamin (47,4 mg, 469 µmol, 65,0 µL, 2,50 ekv.) u DCM (5,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (35,5 mg, 281 µmol, 1,50 ekv) u kapima na -40 °C i mešan 30 minuta. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen preparativnom TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (92,0 mg, 101 µmol, 54,0 % prinos, 81,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 737,3 [M+H]<+>.

1

Korak I: 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: Smeša 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)-2-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (92,0 mg, 125 µmol, 1,00 ekv.) u DCM (8,00 ml) je dodat BBr3 (17,0 mg, 67,8 µmol, 6,53 µl, 10,0 ekv.). Smeša je mešana na -40 °C tokom 30 minuta u atmosferi azota i zatim koncentrovana na 25°C pod sniženim pritiskom do suvoće. U talog je dodat zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (0,5 ml). Rastvor je podešen na pH 7 na 0°C i zatim je dodat MeOH (2,0 ml). Rastvor je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150∗25*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,1% TFA) -ACN]; B%: 15% - 45%, 11 min). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se uklonio MeCN i liofilizovane da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (6,30 mg, 11,2 µmol, 9,00 % prinos, 95,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 533,2 [M+H]<+>.

PRIMER 51

1-akriloil-4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-N,N-dimetilpiperazin-2-karboksamid

Korak A: 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1 -terc-butoksikarbonil-piperazin-2-karboksilna kiselina: U rastvor 1-terc-butil 2-metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (300 mg, 431 µmol, 1,00 ekv.) u THF (4,00 ml) i H2O (1,00 ml) je

1

dodat NaOH (68,9 mg, 1,72 mmol ekv). Smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i pH reakcione smeše je podešen na 6 sa HCl (6 M) i zatim ekstrahovan sa DCM (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće da bi se dobio 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido(3,4-d]pirimidin-4-il]-1-tercbutoksikarbonil-piperazin-2-karboksilna kiselina (310 mg, sirova) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

ESI MS m/z 683,3 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]-2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1-karboksilat Smeša 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-terc-butoksikarbonil-piperazin-2-karboksilna kiselina (310 mg, sirova) i DIEA (352 mg, 2,72 mmol, 476 µL) u DCM (10,0 ml) je u porcijama dodat HATU (259 mg, 681 umol) na 0 °C. Posle mešanja 30 minuta, u jednoj porciji je dodat N-metilmetanamin (130 mg, 1,59 mmol, 146 µL, HCl). Reakciona smeša je degazirana i pročišćena azotom 3 puta. Posle mešanja na 25 °C tokom 12 sati u atmosferi azota, reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) na 0 °C i ekstrahovana sa DCM (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su podešeni na pH 6 sa HCl (1 M), isprani slanim rastvorom (3 × 50 ml) i vodom (3 × 50 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće da bi se dobio teut- butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2 -(dimetilkarbamoil)piperazin-1-karboksilat (345 mg, 428 µmol, dva koraka 94,2 % prinos, 88,0 % čistoća) kao žuta polučvrsta materija. ESI MS m/z 710,3 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1-karboksilat (345 mg, 486 umol, 1,00 ekv.) u MeOH (5,00 ml) je dodat Pd/C (80,0 mg) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (15 psi) na 25 °C tokom 8 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je

1

koncentrovan pod sniženim pritiskom do suvoće da bi se dobio terc-butil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1-karboksilat (197 mg, sirov) kao braon čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

ESI MS m/z 620,3 [M+H]<+>.

Korak D: 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-N,N-dimetil-piperazin-2-karboksamid: Smeša tercbutil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1-karboksilat (197 mg, sirov) u DCM (5,00 ml) je dodat HCl/dioksan (4 M, 1,61 ml) na 0 °C. Reakciona smeša je degazirana i pročišćena azotom 3 puta i mešana na 25 °C tokom 2 sata u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18 150∗25*, 10 µ; mobilna faza: [vda (0,05 % HCl) - ACN]; B%: 10 % - 30 %, 7,8 min). Sakupljena vodena faza je liofilizovana do suvoće da bi se dobio 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]-N,N-dimetil-piperazin-2-karboksamid (90,0 mg, 171 umol, 53,1 % prinos, 99,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 520,2 [M+H]<+>.

Korak E: 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-N,N-dimetil-1-prop-2-enoil-piperazin-2-karboksamid: U rastvor 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-N,N-dimetil-piperazin-2-karboksamid (70,0 mg,

135 µmol, 1,00 ekv.) u DMAC (500 µL) je dodat trietilamin (40,9 mg, 404 µmol, 56,0 µL, 3,00 ekv.) na 0 °C a zatim je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (2,55 mg, 20,2 µmol, 0,15 ekv.) je dodat. Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata u atmosferi azota. Reakciona smeša je filtrirana i sakupljena organska faza je prečišćena preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,1 % TFA)-ACN]; B%: 15 % - 45 %, 12 min). Sakupljena vodena faza je liofilizovana da bi se dobio 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]-N,N-dimetil-1-prop-2-enoil-piperazin-2-karboksamid (10,0 mg, 16,5 umol, 12,2 % prinos, 94,6 % čistoća) kao žuta polučvrsta materija. ESI MS m/z 574,2 [M+H]<+>.

1

PRIMER 52

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(1-piperidil)etoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1 -karboksilat: U rastvor 2-(1-piperidil)etanola (872 mg, 6,75 mmol, 899 µL, 3,00 ekv.) u toluenu (40,0 ml) dodat je Pd(OAc)2 (50,5 mg, 225 µmol, 0,10 ekv.), Cs2CO3 (2,20 g, 6,75 mmol, 3,00 ekv.), BINAP (280 mg, 450 µmol, 0,20 ekv.) i terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (1,00 g, 2,25 mmol, 1,00 ekv.). Smeša je mešana na 110 °C tokom 12 sati pod N2 i zatim koncentrovana pod vakuumom. Smeša je razblažen vodom (10,0 ml), ekstrahovan etil acetatom (3 × 20 ml), ispran slanim rastvorom (1 × 50 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,30 mmol, 58,0 % prinos) kao crvena čvrsta supstanca. ESI MS m/z 537,3 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-[2-[2-(1-piperidil)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina -1-karboksilat (600 mg, 1,12 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (50,0 ml) je dodat Pd/C (67,2 mg, 10 %). Smeša je mešana na 40 °C tokom 24 sata na 50 psi pod H2. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[2-[2-(1-piperidil)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il ] piperazin-1-karboksilat (500 mg,

1

sirovo) kao smeđe ulje i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

ESI MS m/z 447,3 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[2-[2-(1-piperidil)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (250 mg) i (3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (343 mg, 1,12 mmol) u toluenu (6,00 ml) je dodat 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (52,3 mg, 112 µmol), Pd2(dba)3 (32,19 mg, 55,98 µmol) i Cs2CO3 (548 mg, 1,68 mmol). Posle mešanja na 110 °C tokom 72 sata pod N2, smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena vodom

(20,0 ml), ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 ml), isprana slanim rastvorom (1 × 50,0 ml), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 232 µmoL, dva koraka, 41,5 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 603,3 [M+H]<+>.

Korak D: 7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-2-[2-(1-piperidil)etoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin: Smeša terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil) etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 199 µmol, 1,00 ekv.) i TFA (340 mg, 2,99 mmol, 221 µL, 15,0 ekv.) u DCM (1,00 ml) mešana je jedan sat na 25 °C. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin bis-trifluoroacetat (145 mg, sirov) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 503,3 [M+H]<+>.

Korak E: 1-[4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin bis-trifluoroacetat (145 mg, sirov) i Et3N (221 mg, 2,18 mmol, 303 µL) u DCM (2,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (25,0 mg, 198 µmol) na -78 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom pola sata, smeša je ugašena sa MeOH i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću

1

kolone (SiO2, DCM/MeOH = 10:1) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-metoksi-1-naplitil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (90,0 mg, 162 µmol, dva koraka 81,5 % prinos) žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 557,3 [M+H]<+>.

Korak F: 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 1-[4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil) etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (90,0 mg, 162 µmol, 1,00 ek) u DCM (2,00 ml) je dodat BBr3 (405 mg, 1,62 mmol, 156 µL), 10,0 ekv.) na -78 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata na -78 °C i mešana na 0 °C tokom pola sata. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml), isprana slanim rastvorom (1 × 40,0 ml), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen preparativnom HPLC (Phenomenex Gemini 150*25 mm*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 55 %-85 %,10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (6,19 mg, 10,8 umol, 6,71 % prinos, 95 % čistoća) kao žuto ulje. ESI MS m/z 543,2 [M+H]<+>.

PRIMER 53

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: 1-terc-butil 3-metil 4-(7-benzil-2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat: Smeša 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (3,00 g, 10,2 mmol, 1,00 ekv.), 1-terc-

1 1

butil-3-metil piperazina -1,3-dikarboksilat (2,62 g, 10,7 mmol, 1,05 ekv.), DIEA (3,30 g, 25,5 mmol, 4,45 ml, 2,50 ekv.) u DMSO (50,0 ml) je degasirana i pročišćena azotom 3 puta. Smeša je mešana na 100 °C tokom 12 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (200 ml), isprana slanim rastvorom (3 × 50 ml), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski etar/etil acetat = 10:1 do 3:1) da bi se dobio 1-terc-butil 3-metil 4-(7-benzil-2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat (2,10 g, 3,81 mmol, 37,4 % prinos, 91,0 % čistoća) kao žuto ulje. ESI MS m/z 502,1 [M+H]<+>.

Korak B: 1-terc-butil 3-metil4-(7-benzil-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat: Mešavina 1-terc-butil 3-metil 4-(7-benzil-2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina -1,3-dikarboksilat (2,10 g, 4,17 mmol, 1,00 ekv.), 2-(dimetilamino)etanol (929 mg, 10,4 mmol, 1,04 ml, 2,50 ekv.), Pd(OAc)2 (140 mg, 625 µmol, 0,15 ekv.) BINAP (519 mg, 833 µmol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (3,39 g, 10,4 mmol, 2,50 ekv.) u toluenu (60,0 ml) je degazirana i pročišćena azotom 3 puta. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 sata u atmosferi azota. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 30:1 do 10:1) da bi se dobio 1-terc-butil 3-metil4-(7-benzil-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat (1,30 g, 1,67 mmol, 40,0 % prinos, 71,4 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 555,3 [M+H]<+>.

Korak C: 1-terc-butil 3-metil 4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1,3- dikarboksilat : U rastvor 1-tercbutil 3-metil 4-(7-benzil-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat (1,30 g, 2,34 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (15,0 ml) je dodat Pd/C (300 mg) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena vodonikom nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću vodonika (50 psi) na 45 °C tokom 48 sati. Katalizator je odfiltriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1-terc-butil 3-metil 4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il) piperazin-1,3-

1 2

dikarboksilat (780 mg, sirovo) kao bezbojno ulje, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak D: 1-terc-butil 3-metil 4-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat: Smeša 1-terc-butil 3-metil 4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat (780 mg, sirov), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (684 mg, 2,18 mmol), Pd2(dba)3 (231 mg, 252 µmol), Cs2CO3 (1,37 g, 4,20 mmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil (RuPhos) (157 mg, 336 µmol) u dioksanu (20,0 ml) je degaziran i pročišćen azotom 3 puta. Smeša je mešana na 85 °C tokom 5 sati u atmosferi azota.

Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 10:1 do 5:1) da bi se dobio 1-terc-butil 3-metil 4-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)- 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat (750 mg, 1,02 mmol, dva koraka 43,6 % prinosa, 95,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,10 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,58 - 7,31 (m, 8H), 7,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,18 (s, 2H), 4,75 (br s, 1H), 4,45 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,42 -4,34 (m, 1H), 4,34 - 4,28 (m, 1H), 4,15 (br s., 2H), 4,13 - 3,91 (m, 1H), 3,85 - 3,70 (m, 5H), 3,49 - 3,33 (m, 2H), 3,31 - 3,07 (m, 2H), 2,99 (br s, 1H), 2,83 - 2,68 (m, 3H), 2,35 (s, 6H), 1,48 (s, 9H).

Korak E: metil 1-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-2-karboksilat: U rastvor 1-terc-butil 3-metil 4-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,3-dikarboksilat (200 mg, 287 µmol, 1,00 ekv) u DCM (5,00 ml) je dodat TFA

(770 mg, 6,75 mmol, 500 µL, 23,5 ekv) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Talog je rastvoren u DCM (100 ml) i vodi (50 ml) i pH rastvora je podešen na 8 sa zasićenim Na2CO3 vodenim rastvorom i zatim ekstrahovan sa DCM (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 50 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio metil 1-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2 -

1

(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-karboksilat (171 mg, 263 µmol, 91,6 % prinos, 91,7 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 597,2 [M+H]<+>.

Korak F: (1-(7-(3-(benziloksi) naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-2-il)metanol: U smešu metil 1-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-2-karboksilat (171 mg, 287 umol, 1,00 ekv) u THF (5,00 ml) je dodat LiAlH4 (65,3 mg, 1,72 mmol, 6,00 ekv) na 0 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na 25 °C, reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (30 ml) na 0 °C i ekstrahovana sa DCM (3 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 30 ml). Sakupljena organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio (1-(7-(3-(benziloksi) naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)metanol (160 mg, 281 µmol, 98,2 % prinos, 100 % čistoća) kao bezbojna polučvrsta materija. ESI MS m/z 569,2 [M+H]<+>.

Korak G: 2-((7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-4-(2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetiletanamin: U smešu (1-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2-(dimetil amino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)metanol (160 mg, 281 µmol, 1,00 ekv) u THF (5,00 ml) je dodat NaH (94,0 mg, 2,35 mmol, 60,0 % čistoće, 8,00 ekv) na 0 °C. Posle mešanja 30 minuta, u kapima je dodat terc-butildimetilsilil hlorid (133 mg, 881 µmol, 108 µL, 3,00 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 6 sati u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-((7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-4-(2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il))-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetiletanamin (133 mg, 165 µmol, 56,1 % prinos, 84,6 % čistoća) kao blago žuta čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 683,2 [M+H]<+>.

Korak H: 1-(4-(7-(3-(benziloksi) naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)-3-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: 1 U rastvor 2-((7-(3-

1 4

(benziloksi)naftalen-1-il)-4-(2-(((terc-butil dimetilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetiletanamin (133 mg, 165 µmol, 1,00 ekv.) i TEA (39,4 mg, 389 µmol, 54,0 µL, 2,00 ekv.) u DCM (3,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (31,9 mg, 253 µmol, 1,30 ekv) na -40 °C. Posle mešanja na -40 °C tokom 2 sata, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (1 M) i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1-(4-(7-(3-(benziloksi) naftalen-1-il)- 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)piperazin-1 -il)prop-2-en-1-on (140 mg, sirov) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 737,2 [M+H]<+>.

Korak I: 1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: U rastvor 1-(4-(7-(3-(benziloksi)naftalen-1-il)-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)-3-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (140 mg, sirov) u DCM (5,00 ml) je dodat BBr3 (476 mg, 1,90 mmol, 183 µL) na -40 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na -40 °C u atmosferi azota, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Dodati su voda (0,5 ml) i MeOH (2,5 ml) i dobijeni rastvor je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza:

[voda (10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 27 % - 57 %, 11 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (4,32 mg, 7,94 µmol, 4,18 % prinosa, 97,9 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 533,4 [M+H]<+>.

PRIMER 54

1

1-[4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2- en-1-one

Korak A: terc-butil 4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat: U rastvor Na (4,24 g, 184 mmol, 4,37 ml, 2,50 ekv.) u EtOH (400 ml) dodat je 1-terc-butil 4-etil 3-oksopiperidin-1,4-dikarboksilat (20,0 g, 73,7 mmol). 1,00 ekv.) i metanimidamid sirćetne kiseline (11,5 g, 111 mmol, 1,50 ekv.) pod N2. Smeša je mešana na 70 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je podešena na pH 7 sa HCl (1N), ekstrahovana sa DCM (3 × 200 ml), isprana slanim rastvorom (1 × 400 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4- hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (16,0 g, 63,7 mmol, 86,4 % prinos) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 274,0 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dlpirimidin-7-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (16,0 g, 63,7 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (4,00 ml) dodat je DBU (29,1 g, 191 mmol, 28,8 ml, 3,00 ekv.) i benzotriazol-1-iloksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat (PIBOP) (39,8 g, 76,4 mmol, 1,20 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C jedan sat. Dodan je benzil piperazin-1-karboksilat (21,0 g, 95,5 mmol, 18,5 ml, 1,50 ekv) i reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (500 ml) i isprana vodom (3 × 400 ml), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, dietil etar/etil acetat = 1:1) da bi se dobio terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-7-karboksilat (2,00 g, 4,41 mmol, 6,93 % prinos) kao žuto ulje. ESI MS m/z 454,3 [M+H]<+>.

Korak C: Smeša terc-butil 4-(4-benziloksikarbonilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (1,20 g, 2,65 mmol, 1,00 ekv.) i TFA (4,53 g, 39,7 mmol, 2,94 mL, 15,0 ekv) u DCM (2,00 ml) je mešana na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Koncentrovani materijal je podešen na pH 8 sa zasićenim vodenim rastvorom. NaHCO3, je zatim ekstrahovan etil acetatom (3 × 30,0 ml), ispran slanim rastvorom (1 × 100 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-(5,6,7,8-

1

tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (800 mg, 2,26 mmol, 85,4 % prinos) kao žuto ulje.

ESI MS m/z 354,3 [M+H]<+>.

Korak D: benzil 4-[7-[3-(terc-butoksikarbonilamino)-1-izohinolil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Mešavina terc-butil N-(1-bromo-3-izohinolil)karbamata (330 mg, 1,02 mmol, 1,00 ekv.), DIEA (264 mg, 2,04 mmol, 357 µL, 2,00 ekv.) i benzil 4-(5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (541 mg, 1,53 mmol, 1,50 ekv.) u DMSO (3,00 ml) je mešan na 80 °C tokom 10 sati. Smeša je razblažena vodom (5,00 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani ekstrakti su osušeni pomoću natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen kolonom reverzne faze (TFA, 0,1 %) da bi se dobio benzil 4-[7-[3-(tercbutoksikarbonilamino)-1-izohinolil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 665 µmol, 65,2 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 596,3 [M+H]<+>.

Korak E: terc-butil N-[1-(4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-3-izokinolil]karbamat: Smeša benzil 4-[7-[3-(tercbutoksikarbonilamino)-1-izohinolil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (240 mg, 403 µmol, 1,00 ekv.), KOH (36,2 mg, 645 µmol, 1,60 ekv.) u H2O (2,40 ml) i n-butil alkohol (2,40 ml) su mešani na 100 °C tokom 12 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (3 × 5,00 ml), isprana slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil N-[1-(4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-3-izohinolil]karbamat (150 mg, 325 µmol, 80,7 % prinosa) kao žuto ulje. ESI MS m/z 462,3 [M+H]<+>.

Korak F: 1-(4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)izohinolin-3-amin trifluoroacetat: Rastvor terc-butil N-[1-(4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)-3-izohinolil]karbamata (150 mg, 325 µmol, 1,00 ekv) i TFA (556 mg, 4,87 mmol, 361 µL, 15,0 ekv.) u DCM (360 µL) su mešani na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se

1

dobio 1-(4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)izohinolin-3-amin trifluoroacetat (154,52 mg sirovo) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak G: 1-[4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2- en-1-on: U rastvor 1-(4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il)izohinolin-3-amin trifluoroacetata (150 mg, sirov) i Et3N (319 mg, 3,15 mmol, 437 µL) u DCM (2,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (31,8 mg, 252 µmol) na -40 °C, zatim je mešan na -40 °C tokom pola sata. Smeša je ugašena dodavanjem MeOH (20,22 mg, 630,96 µmol) i koncentrovana pod vakuumom.1Talog je prečišćen preparativnom HPLC (Phenomenex Gemini 150*25 mm*, 10 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 26 %-56 %,10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (35,4 mg, 82,5 µmol, 26,2 % prinos, 96,8 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.

ESI MS m/z 416,3 [M+H]<+>.

PRIMER 55

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)-3-hidroksipropoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 2-(dimetilamino)propan-1,3-diola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 533,3 [M+H]+.

PRIMER 56

1

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-morfolinopropan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (R)-1-morfolinopropan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 559,3 [M+H]+.

PRIMER 57

(S)-5-(((4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin) -2-il)oksi)metil)pirolidin-2-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-2-ona umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]+.

PRIMER 58

1

(R)-5-(((4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin) -2-il)oksi)metil)pirolidin-2-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-5-(hidroksimetil)pirolidin-2-ona umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 529,2 [M+H]+.

PRIMER 59

N-(2-((4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-2) -il)oksi)etil)acetamid

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem N-(2-hidroksietil)acetamida umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]+.

PRIMER 60

1

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)butan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (R) -1-(dimetilamino)butan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 545,3 [M+H]+.

PRIMER 61

(S)-6-(((4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin -2-il)oksi)metil)piperidin-2-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 6-(hidroksimetil)piperidin-2-ona umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B i proizvod je odvojen hiralnom hromatografijom. Peak-u 2 je data (S) stereohemija i to nije potvrđeno. ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 62

1 1

(S)-6-(((4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -2-il)oksi)metil)piperidin-2-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 6-(hidroksimetil)piperidin-2-ona umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B i razdvojeno hiralnom hromatografijom. Peak-u 1 je dodeljena (R) stereohemija, ali ova stereohemija nije potvrđena. ES+APCI MS m/z 543,2 [M+H]<+>.

PRIMER 63

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((R)-1-((R)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-il)oksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-1-((R)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2- ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]+.

PRIMER 64

1 2

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((R)-1-((S)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-il)oksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-1-((S)-3-metoksipirolidin-1-il)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2- ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]+.

PRIMER 65

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((R)-1-((S)-3-hidroksipirolidin-1-il)propan-2-il)oksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (R)-1-((S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-il)propan-2-ola umesto (S)-1 -(dimetilamino)propan-2-ol u koraku B. ES+APCI MS m/z 559,3 [M+H]+.

PRIMER 66

1

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (S) -1-metilpiperidin-3-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H ]+.

PRIMER 67

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R) -1-metilpiperidin-3-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H ]+.

PRIMER 68

1 4

(R) 1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 1-jodonaftalena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 501,3 [M+H]+.

PRIMER 69

1-(4-(7-(izohinolin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en- 1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, korišćenjem 4-bromoizohinolina umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u Koraku C. ES+APCI MS m/z 401,2 [M+H]<+>.

PRIMER 70

1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(metilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 1-(metilamino)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u KAPCIoraku B. ES+APCI MS m/z 503,3 [M+H]<+>.

PRIMER 71

1-(4-(7-(2-hidroksi-1-feniletil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2- en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 1, korišćenjem 2-((tercbutildimetilsilil)oksi)-1-feniletil metansulfonata umesto 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalena u Koraku C. ES+APCI MS m/z 394,2 [M+H]<+>.

PRIMER 72

1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (1-metilpiperidin-3-il)metanola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]+.

PRIMER 73

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-(dimetilamino)propan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 517,2 [M+H]+.

PRIMER 74

1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B.

ES+APCI MS m/z 559,3 [M+H]+.

PRIMER 75

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(piperidin-1-il)propan-2-il)oksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-1-(piperidin-1-il)propan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES APCI MS m/z 557,3 [M+H]+.

PRIMER 76

1

(R)-1-(4-(7-(3-hloro-5-hidroksi-2-izopropilfenil)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 1-bromo-3-hloro-2-izopropil-5-(metoksimetoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 545,3 [M+H ]+.

PRIMER 77

1-(4-(2-(2-((1S,4R)-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 2-((1S,4R)-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino) propan-2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 555,2 [M+H]+.

PRIMER 78

1

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(5-hidroksi-2-(trifluorometoksi)fenil)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-bromo-4-(metoksimetoksi)-1-(trifluorometoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m /z 551,2 [M+H]+.

PRIMER 79

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(5-hidroksi-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-bromo-4-(metoksimetoksi)-1-(trifluorometoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 535,2 [M+H]<+>.

PRIMER 80

2

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((4-metilpiperazin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (4-metilpiperazin-2-il)metanola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 544,3 [M+H]+.

PRIMER 81

1-(2-((4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2) -il)oksi)etil)piperidin-4-karbonitril

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 1-(2-hidroksietil)piperidin-4-karbonitrila umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 568,2 [M+H]+.

PRIMER 82

2 1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propan-1-ol umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 572,4 [M+H]+.

PRIMER 83

1-(4-(2-(2-((2-hidroksietil)(metil)amino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 2-((2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)(metil)amino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan- 2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 533,3 [M+H]+.

PRIMER 84

2 2

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(2-fluoro-6-hidroksi-3-metilfenil)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-bromo-3-fluoro-1-(metoksimetoksi)-4-metilbenzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 499,3 [M+H]+.

PRIMER 85

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(pirolidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-(pirolidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m /z 529,2 [M+H]+.

PRIMER 86

2

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-bromo-1-(metoksimetoksi)-4-(trifluorometoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m /z 551,2 [M+H]+.

PRIMER 87

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-fluoro-2-hidroksi-6-metilfenil)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-bromo-4-fluoro-3-(metoksimetoksi)-1-metilbenzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 499,2 [M+H]+.

PRIMER 88

2 4

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(2-metilpiperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (S)-2-(2-metilpiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B ES+APCI MS m/z 557,2 [M+H]+.

PRIMER 89

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (1-metilpirolidin-3-il)metanola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]+.

PRIMER 90

2

1-(4-(7-(5-hidroksi-2-(trifluorometoksi)fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B, i korišćenjem 2-bromo-4-(metoksimetoksi)- 1-(trifluorometoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 593,2 [M+H]+.

PRIMER 91

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-bromo-1-(metoksimetoksi)-5-(trifluorometoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 551,2 [M+H]<+>.

PRIMER 92

2

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(4-metilpiperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-(4-metilpiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 557,2 [M+H]+.

PRIMER 93

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((4-morfolinobutan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 4-morfolinobutan-2-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B.

ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H ]+.

PRIMER 94

2

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(5-hidroksi-2-metoksifenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-bromo-1-(metoksimetoksi)-4-metoksibenzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 497,2 [M+H]+.

PRIMER 95

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(2-hidroksi-6-metilfenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-bromo-1-(metoksimetoksi)-3-metilbenzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 481,2 [M+H]+.

PRIMER 96

2

1-(4-(7-(5-hidroksi-2-izopropoksifenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B, i korišćenjem 2-bromo-4-(metoksimetoksi)- 1-(izopropoksi)benzen umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 567,2 [M+H]+.

PRIMER 97

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(2-metilpiperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-2-(2-metilpiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B ES+APCI MS m/z 557,3

PRIMER 98

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(3-metoksipiperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (S)-2-(3-metoksipiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B ES+APCI MS m/z 557,3 [M+H]+.

PRIMER 99

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(3-metoksipiperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (R)-2-(3-metoksipiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B ES+APCI MS m/z 557,3 [M+H]<+>.

PRIMER 100

1-(4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (1-ciklopropilpiperidin-4-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 555,3 [M+ H]<+>.

PRIMER 101

21

1-(4-(2-(3-(1,4-oksazepan-4-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (3-(1,4-oksazepan-4-il)propan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]+.

PRIMER 102

Sintetizovano prema metodi, korišćenjem 2-(dietilamino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 531,3 [M+ H]+.

PRIMER 103

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(2-metoksietil)pirolidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, (1-(2-metoksietil)pirolidin-3-il)metanol umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m /z 573,3 [M+H]+.

PRIMER 104

1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem 3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1-ola umesto (S)-1 -(dimetilamino)propan-2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 571,3 [M+H]+.

PRIMER 105

1-(4-(7-(5-hidroksi-2-metilfenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-monfolinopropan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B, i korišćenjem 2-bromo-4-(metoksimetoksi)- 1-metilbenzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 523,3 [M+H]+.

PRIMER 106

1-(4-(7-(4-hidroksi-2-(trifluorometoksi)fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B, i korišćenjem 2-bromo-5-(metoksimetoksi)- 1-(trifluorometoksi)benzena umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 593,2 [M+H]<+>.

PRIMER 107

21

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-((2-metoksietil)(metil)amino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-((2-metoksietil)(metil)amino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES APCI MS m/z 547,3 [M+H]+.

PRIMER 108

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(4-metoksipiperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-(4-metoksipiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]+.

PRIMER 109

1-(4-(2-(2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES APCI MS m/z 579,2 [M+H]+.

PRIMER 110

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem (R)-(1-metilpirolidin-3-il)metanola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]+.

PRIMER 111

21

(S)-1-(4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem (S)-2-(3-fluoropiperidin-1-il)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B ES+APCI MS m/z 561,3 [M+H]+.

PRIMER 112

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B, i korišćenjem 1-bromo-3-(difluorometil)naftalena (0,129 g, 0,503 mmol) umesto (3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u Koraku D. ES+APCI MS m/z 593,2 [M+H]+.

PRIMER 113

21

4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on

Korak A: terc-butil 4-(6-fluoropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor 4-hloro-6-fluoropirido[3,4-d]pirimidina (1,07 g, 5,83 mmol) u DCM (20 ml) dodat je N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (2,09 ml, 11,7). mmol), a zatim terc-butil piperazin-1-karboksilat (1,19 g, 6,41 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakciona smeša je isprana slanim rastvorom, osušena pomoću MgS04i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio terc-butil 4-(6-fluoropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat, koji je direktno korišćen u sledećem koraku (1,8 g, 92,6 %) ES+APCI MS m/z 334,1 [M+H]+.

Korak B: terc-butil 4-(6-(benziloksi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor fenilmetanola (0,65 g, 6,0 mmol) u DMA (10 ml) dodat je natrijum hidrid (0,24 g, 6,0 mmol) u porcijama uz degazaciju azotom i reakciona smeša je mešana 30 minuta na sobnoj temperaturi. U reakciju je dodat terc-butil 4-(6-fluoropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (1,0 g, 3,0 mmol) kao čvrsta supstanca i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakcija je sipana u vodu (300 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen pomoću MgS04 i koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal je hromatografisan korišćenjem gradijenta od 0 do 100 % etil acetata/DCM kao eluenta da bi se dobio terc-butil 4-(6-(benziloksi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1 -karboksilat (0,4 g, 0,95 mmol, 32 % prinos). ES+APCI MS m/z 422,2 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(6-(benziloksi)pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (0,40 g, 0,95 mmol) u 95 % etanolu (30 ml) prečišćen

21

sa azotom je dodat Pd/C (0,10 g, 0,95 mmol). Reakcija je evakuisana vakuumom i dopunjena vodonikom tri puta. Posle trećeg dopunjavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata Reakcija je ponovo degazirana azotom, suspenzija je filtrirana kroz Celite<®>i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobio terc-butil 4-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat (0,4 g, 126 %). ES+APCI MS m/z 334,4 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-6-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (0,28 g, 0,84 mmol) u dioksanima (4 ml) u zatvorenu epruvetu dodat je kalijum fosfat (0,36 g, 1,7 mmol), N1,N2-dimetiletan-1,2-diamin (0,074 g, 0,84 mmol) i 1-jodo-3-(metoksimetoksi)naftalen (0,53 g, 1,7 mmol). Reakcija je prskana argonom tokom 20 minuta, nakon čega je usledilo dodavanje bakar(I) jodida (0,16 g, 0,84 mmol). Reakciona posuda je zatvorena i zagrejana na 100 °C, tokom noći. Reakcija je razblažena vodom i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 150 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni pomoću MgSO4 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je hromatografisan korišćenjem gradijenta od 0 do 100 % etil acetat/DCM kao eluenta da bi se dobio terc-butil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-6-okso-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,30 g, 0,58 mmol, 69 % prinos) ES+APCI MS mz 520,2 [M+H]<+>.

Korak E: 7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on: U rastvor terc-butil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-6-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (0,30 g, 0,58 mmol) u metanolu (10 ml) je dodat vodeni rastvor hlorovodonika (0,38 ml, 2,3 mmol) i reakcija je mešana tokom noći na 50 °C. Reakcija je koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on kao bis HCl so (0,26 g, 100 %). ES+APCI MS m/z 376,1 [M+H]<+>.

Korak F: 4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on: U smešu 7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on dihidrohlorida (0,26 g, 0,58 mmol) u 1:1 rastvor DCM/acetonitrila (10 ml) dodat je N-etil-N-

21

izopropilpropan-2-amin (0,45 g, 3,5 mmol) i akriloil hlorid (0,052 g, 0,58 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana in vacuo i materijal je prečišćen reverznom preparativnom HPLC (koristeći gradijent od 5 do 95 % ACN/voda) da bi se dobio 4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-). il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on (0,038 g, 0,088 mmol, 15 % prinos). ES+APCI MS m/z 430,2 [M+H]<+>.

PRIMER 114

4-(6-akriloil-2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-6(5H)-on

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem terc-butil 2,6-diazaspiro[3,3]heptan-2-karboksilat hidrohlorida (305 mg, 1,54 mmol) umesto tercbutil piperazin-1-karboksilata (1,19 g, 6,41). mmol) u Koraku B. ES+APCI MS m/z 442,2 [M+H]<+>

PRIMER 115

21

Sintetizovano prema metodi iz Primera 8, korišćenjem benzil (S)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,155 g, 4,931 mmol) umesto benzil 1-piperazinkarboksilata u Koraku A. ES+APCI MS m/z 531,3 [M H]<+>.

PRIMER 116

(S)-1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)-3-metilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem benzil (S)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,155 g, 4,931 mmol) umesto benzil 1-piperazinkarboksilata u Koraku A. Takođe, korišćenjem 2-(dimetilamino)etan-1-ola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 517,3 [M+H]<+>.

PRIMER 117

22

ES+APCI MS m/z 545,2 [M+H ]+.

PRIMER 118

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-morfolino-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il) prop-2-en-1-on

PRIMER 119

PRIMER 120

PRIMER 121

4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,7-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-8(5H)-on

Korak A: Terc-butil 2,4-dihloro-8-okso-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat. U balon sa okruglim dnom dodat je terc-butil 2,4-dihloro-5,6-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(8H)-karboksilat (1,0 g, 3,29 mmol) i EtOAc (16,4 ml). Dodat je rastvor natrijum perjodata (2,11 g, 9,86 mmol) u vodu (16,4 ml).

Rutenijum (III) hlorid (0,102 g, 0,493 mmol) je dodat, a smeša je mešana lagano a zatim snažno 6 sati na sobnoj temperaturi. Smeša je podeljena između vode i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa EtOAc (2 × 20 ml) i kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom i osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (10-30 % EtOAc/heksani, punjenje sa CH2Cl2) da bi se dobilo 0,864 g (82 %) proizvoda u vidu beličaste čvrste supstance.

Korak B: Terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-8-okso-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat. U rastvor terc-butil 2,4-dihloro-8-okso-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilata (0,400 g, 1,26 mmol) u CH2Cl2 (5,0 ml) dodat je N,N-diizopropiletilamin (0,325 g,

2,51 mmol), a zatim benzil 1-piperazinkarboksilat (0,255 ml, 1,32 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1,5 h. Reakciona smeša je razblažena sa CH2Cl2 (10 ml) i isprana sa 0,5 M rastvora KHS04 (5 ml), a zatim sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je ultrazvučno obrađen u 10 ml MTBE i rezultujuća čvrsta supstanca je izolovana vakuumskom filtracijom. Čvrsta supstanca je osušena in vacuo da bi se dobilo 0,507 g (80 %) željenog proizvoda u vidu sivobele čvrste supstance koja je direktno korišćena u sledećem koraku. ES+APCI MS m/z 502,1[M+H]<+>.

Korak C: Benzil 4-(2-hloro-8-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Rastvor terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-8-okso-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H) -karboksilat (0,255 g, 0,5080 mmol) u CH2Cl2 (1,0 ml) je ohlađen na 0 °C. Dodata je trifluorosirćetna kiselina (0,3890 ml, 5,080 mmol) i smeša je zagrejana do sobne temperature. Posle 1 sata smeša je razblažena sa CH2Cl2 i dodata u smešu slanog rastvora (10 ml) i 3,0 M vodenog NaOH (1,7 ml, 5,080 mmol).

Slojevi su kombinovani i podešeni na pH 8 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa 2×10 ml CH2Cl2. Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Jedinjenje iz naslova (0,223 g, kvant.) je dobijeno kao žuta/narandžasta pena. ES+APCI MS m/z 402,1[M+H]<+>.

Korak D: Benzil 4-(2-(3-morfolinopropoksi)-8-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U bočicu je dodat N-hidroksipropanilmorfolin (0,687 g, 4,73 mmol) i benzil 4-(2-hloro-8-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat (0,190 g, 0,473 mmol) a zatim dioksan (1,6 ml). Dodat je cezijum karbonat (0,462 g, 1,42 mmol) i smeša je

22

mešana na 65°C tokom 15 sati. Smeša je razblažena sa CHCl3 i filtrirana, a čvrsta supstanca je isprana sa dodatnim CHCl3. Filtrat je koncentrovan in vacuo i prečišćen hromatografijom pomoću kolone (2-10 % MeOH/DCM sa 1 % NH4OH) da bi se dobilo 0,061 g (25%) željenog proizvoda kao gusto, bezbojno ulje.

ES+APCI MS m/z 511,2[M+H]<+>.

Korak E: Benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-8-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)piperazin-1-karboksilat. U bočicu je dodat benzil 4-(2-(3-morfolinopropoksi)-8-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,060 g, 0,12 mmol), N,N'-dimetiletilendiamin (0,010 g, 0,12 mmol) i 1-jodo-3-(metoksimetoksi)naftalen (0,074 g, 0,24 mmol), zatim dioksan (0,78 ml) i kalijum fosfat trobazni (0,050 g, 0,24 mmol). Reakcija je pročišćena mehurićima Ar tokom 10 min, zatim je dodat bakar (I) jodid (0,022 g, 0,12 mmol) i bočica je zatvorena. Smeša je zagrejana na 110 °C i mešana 16 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 10 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Smeša je prečišćena hromatografijom pomoću kolone (2-8 % MeOH/DCM) da bi se dobilo 0,062 g (76 %) proizvoda u obliku smeđe pene. ES+APCI MS m/z 697,3 [M+H]<+>.

Korak F: 7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-4-(piperazin-1-il)-6,7-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-8(5H)-on. U rastvor benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-8-okso-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,062 g, 0,089 mmol) u EtOH (0,44 ml) i THF (0,44 ml) je dodat paladijum na ugljeniku (0,038 g, 0,018 mmol) (Degussa tip, 10 tež.%, 50 % H2O), a zatim je uvedena atmosfera vodonika putem vakuuma praćena pritiskom balona. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1,5 h, zatim zagrejana na 45 °C i mešana 1 sat. Smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana kroz najlonski filter. Filtrat je koncentrovan in vacuo dajući svetlosmeđu penu (0,052 g) koja je sušena tokom noći i ponovo podvrgnuta istim reakcionim uslovima opisanim gore. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 h dodato je još Pd/C (0,050 g) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi još 2 h. Smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana kroz najlonski filter. Čvrsta supstanca je isprana sa EtOAc i MeOH i filtrat je koncentrovan in vacuo dajući 0,029 g (58 %) željenog proizvoda u vidu svetlosmeđe pene. ES+APCI MS m/z 563,3[M+H]<+>.

Korak G: 4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,7-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-8 (5H)-on. U rastvor 7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-4-(piperazin-1-il)-6,7-dihidropirido[3,4-d]pirimidina -8(5H)-on (0,028 g, 0,050 mmol) u CH2Cl2 (0,50 ml) na -78 °C je dodat trietilamin (0,014 ml, 0,100 mmol). Akriloil hlorid (0,55 ml, 0,055 mmol, sveže pripremljen 0,1 M CH2Cl2) je dodat i reakcija je zatim mešana pola sata. Smeša je razblažena sa CHCl3 i dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4CI. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa CHCl3 (2 × 10 ml).

Kombinovani ekstrakti su osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (4-6 % MeOH/DCM) da bi se dobilo 0,018 g (59 %) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku čvrste sivobele pene. ES+APCI MS m/z 617,3[M+H]<+>.

Korak H: 4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,7-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-8(5H)-on. U rastvor 4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,7-dihidropirido[3,4-d ]pirimidin-8(5H)-on (0,018 g, 0,0292 mmol) u 1/1 MeOH/THF (0,6 ml) je dodat HCl (0,0486 ml, 0,292 mmol, 6N Vodeni rastvor). Smeša je mešana na 35 °C tokom 7 sati. Smeša je razblažena slanim rastvorom i podešena na pH vrednost 8 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Smeša je ekstrahovana sa 10 % IPA/CHCl3 (2 × 10 ml) i CHCl3 (10 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (6-10 % MeOH/DCM) da bi se dobilo 0,012 g (71 %) proizvoda kao sivobele čvrste supstance. ES+APCI MS m/z 573,3[M+H]<+>.

PRIMER 122

22

(R,E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d)pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-on bis-trifluoroacetat

Korak A-E: (R)-2-((7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -2-il)oksi)-N,N-dimetilpropan-1-amin je sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, Korak A do Koraka E, koristeći (R)-1-(dimetilamino)propan-2-ol na mestu (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B.

Korak F: (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-il)naftalen-2-ol dihidrohlorid: U rastvor (R)-2-((7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4

22

-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropan-1-amin (75 mg, 0,15 mmol) u DCM (2,9 ml) je dodat 6N HCl u iPrOH (247 µl, 1,5 mmol) i smeša. je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće da bi se dobio (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)naftalen-2-ol dihidrohlorid koji je direktno korišćen u sledećem koraku. ES+APCI MS m/z 463,2 [M+H]<+>.

Korak G: (R,E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-on bis-trifluoroacetat: Rastvor (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d] pirimidin-7(6H)-il)naftalen-2-ol dihidrohlorid (7 mg, 0,01 mmol), HATU (6,2 mg, 0,02 mmol), (2E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (2,1 mg, 0,02 mmol), DIEA (6,9 µl, 0,04 mmol) u DCM (131 µl) je mešan na sobnoj temperaturi 1 h. Talog je filtriran i filtrat je dodat direktno na Gilson C18 prep HPLC eluiranjem sa 5-95 % acetonitrila/vode sa 0,1 % TFA aditiva. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane da bi se dobio (R,E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3? -hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-on bis-trifluoroacetat. ES+APCI MS m/z 574,2 [M+H]<+>.

PRIMER 123

1-(4-(2-(2-hidroksi-3-morfolinopropoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1,2-diola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u Koraku B. ES+APCI MS m/z 575,2 [M+H]<+>.

22

PRIMER 124

(R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(4-fluoro-3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: Benzil (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (221 mg, 0,345 mmol) je stavljen u ACN (2 ml) i smeša je ohlađena na 0 °C. Dodat je SelectFluor (183 mg, 0,517 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni talog je prečišćen hromatografijom reverzne faze (5-95 % ACN:voda sa 0,1 % TFA) da bi se dobio benzil (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)- 7-(4-fluoro-3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat trifluoroacetat (48 mg, 0,0729 mmol, 21,1 % prinos).

Korak B: (R)-1-(4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(4-fluoro-3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 33, Koraci D-F supstitucijom (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(4-fluoro-3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat trifluoroacetat za benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-karboksilat. ES+APCI MS m/z 535,2 [M+H]<+>.

PRIMER 125

22

(R)-1-(4-(7-(4-hloro-3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: Benzil (R)-4-(2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (83 mg, 0,130 mmol) i NCS (21,6 mg, 0,162 mmol) su stavljeni u ACN (2 ml) i mešani na sobnoj temperaturi 3 sata. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x15 ml). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni talog je prečišćen hromatografijom reverzne faze (5-95 % ACN:voda sa 0,1 % TFA) da bi se dobio benzil (R)-4-(7-(4-hloro-3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il) -2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat trifluoroacetat (17 mg, 0,0252 mmol, 19,4 % prinos).

Korak B: (R)-1-(4-(7-(4-hloro-3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 33, Koraci D-F supstitucijom (R)-4-(7-(4-hloro-3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat trifluoroacetat za benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-karboksilat i korišćenjem THF kao rastvarača u Koraku D. ES+APCI MS m/z 551,2 [M+H]<+>.

PRIMER 126

22

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat

Korak A: benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U smešu benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina -1-karboksilat (0,20 g, 0,35 mmol) u dioksanu u mikrotalasnoj pećnici je dodat N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,45 g, 3,5 mmol), Cs2CO3 (0,34 g, 1,0 mmol) i 2-(piridin-2-il)etan-1-ol (0,43 g, 3,5 mmol) i reakcija je zagrevana na 15 °C tokom 1 sata u mikrotalasnoj pećnici. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana vodom, slanim rastvorom, osušena pomoću MgS04 i koncentrovana in vacuo. Materijal je hromatografisan korišćenjem gradijenta od 0 do 100 % EtOAc/DCM kao eluenta da bi se dobio benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(2-(piridin-2-il))etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,16 g, 0,24 mmol, 70 % prinos).

Korak B: 4-(4-(piperazin-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-il)naftalen -2-ol: Čvrsti benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,12 g, 0,18 mmol) je dodat MeOH (20 ml). Rastvor je degaziran azotom 5 minuta, nakon čega je usledilo dodavanje Pd/C (0,058 g, 0,54 mmol). Reakciona posuda je evakuisana vakuumom i napunjena H2. Ova procedura je izvedena tri puta, a nakon trećeg dopunjavanja, smeša je ostavljena da odstoji u atmosferi vodonika 1 sat. Reakcija je ponovo degazirana azotom tokom 5 minuta. Suspenzija je zatim filtrirana kroz Celite<®>i Celite<®>je ispran sa MeOH (100 ml). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani i tretirani sa 10 ml 1:1 TFA/DCM tokom 2 sata. Reakcija je ponovo koncentrovana

2

in vacuo da bi se dobio 4-(4-(piperazin-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin -7(6H)-il)naftalen-2-ol (0,096 g, 0,20 mmol, 110 % prinos).

Korak C: 1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: U rastvor 4-(4-(piperazin-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H) -il)naftalen-2-ol (0,096 g, 0,20 mmol) u DCM je dodata Hunigova baza (0,17 ml, 0,99 mmol) i akriloil hlorid (0,018 g, 0,20 mmol) i reakcija je mešana 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija je koncentrovana in vacuo i sirovi materijal je prečišćen reverznom preparativnom HPLC da bi se dobio 1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(2-(piridin-2-il)etoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on trifluoroacetat (0,0057 g, 0,011 mmol, 5,3 % prinos). ES+APCI MS m/z 537,2 [M+H]<+>.

PRIMER 127

(S)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin

2 1

Korak A: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U rastvor terc-butil 2,4-dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilata (8 g, 26,30 mmol) u DMA (263,0 ml, 26,30 mmol) je dodati benzil piperazin-1-karboksilat (5,793 g, 26,30 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (4,721 ml, 26,30 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. TLC (20 % EtOAc/DCM), UV vizualizacija, je pokazala završetak reakcije. Reakcija je zatim sipana u vodu i ekstrahovana u DCM. Organski slojevi su zatim isprani vodom (2x), slanim rastvorom, osušeni pomoću MgS04 i koncentrovani in vacuo. Koncentrat je dodat na kolonu RegiSep od 220 g i hromatografisan na CombiFlash (0 %-10 %, EtOAc:DCM). Sve frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio tercbutil 4-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (9,768 g, 20,02 mmol, 76,11 % prinos) kao bela pena. ES+APCI MS m/z 488,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: terc-butil 4-(4-((benziloksi))karbonil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (9,768 g, 20,02 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (200,2 ml, 20,02). mmol) i tretiran sa 2,2,2-trifluorosirćetnom kiselinom (15,33 ml, 200,2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Nakon završetka, reakcija je zatim koncentrovana in vacuo i stavljena u EtOAc, a organski deo je ispran sa 1M NaOH (2X), slanim rastvorom, osušen pomoću MgS04 i koncentrovan u vakuumu. benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (7,406 g, 19,09 mmol, 95,39 % prinos) je korišćen sirov u sledećoj reakciji. ES+APCI MS m/z 388,2 [M+H]<+>.

2 2

Korak C: benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat: U benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat, BINAP (0,275 g, 0,442 mmol) i Pd2(dba)3 (0,203 g, 0,221 mmol) pomoću argona je dodat toluen (221 ml, 11,1 mmol) i reakciona smeša je propuštala Ar tokom 10 minuta nakon čega je usledilo zagrevanje na 100 °C tokom 10 minuta. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (4,29 g, 11,1 mmol) i natrijum terc-butoksid (2,13 g, 22,1 mmol) su dodati u tamni rastvor kao čvrste materije. Konačno, dodat je 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonat (7,44 g, 22,1 mmol) (kao ulje) i reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 1 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana in vacuo. Koncentrat je rastvoren sa EtOAc i ispran vodom i slanim rastvorom. Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani in vacuo. Ostatak je zatim stavljen na CombiFlash i hromatografisan korišćenjem 0 %-->50 % Heksan:EtOAc kao eluent. Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi se dobio benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (2,6 g, 4,53 mmol, 40,9 % prinos).

ES+APCI MS m/z 574,2 [M+H]<+>.

2

Korak D: benzil (S)-4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U mikrotalasnoj epruveti benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin -1-karboksilat (300 mg, 0,523 mmol) je rastvoren u dioksanu (6532 µl,

0,523 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (511 mg, 1,57 mmol), Hunigovom bazom (913 µl, 5,23 mmol) i N-metil--prolinolom (421 mg, 3,66 mmol). Epruveta je zatim zatvorena poklopcem i obrađena u mikrovalnoj pećnici na 170 °C tokom 3 sata. Reakcija je filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je koncentrovan in vacuo, a talog je stavljen na RegiSep kolonu zlata od 12 g i hromatografisan na CombiFlash (0 %-15 %, DCM:MeOH). Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi se dobio benzil (S)-4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (220 mg, 0,337 mmol, 64,5 % prinos). ES+APCI MS m/z 653,3 [M+H]<+>.

Korak E: (S)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin: Rastvor benzil (S)-4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-

2 4

tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (220 mg, 0,337 mmol) u EtOH (3370 µl, 0,337 mmol) i THF (3370 µl, 0,337 mmol) je pročišćen sa N2 tokom 5 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum na ugljeniku (179 mg, 0,0843 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50 % H2O), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 min. Rastvor je zatim mešan pomoću H2 uvedenom kroz vakuum, praćen pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom noći.

LC/MS je pokazao završetak reakcije. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo i (S)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin (91 mg, 0,175 mmol, 52,1 % prinos) je preuzet kao sirov. ES+APCI MS m/z 519,3 [M+H]<+>.

Korak F: (S)-1-(4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: U suspenziju (S)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin (92 mg, 0,18 mmol) u dihlorometanu (1774 µl, 0,18 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat akriloil hlorid (1774 µl, 0,18 mmol) a zatim Hunigova baza (62 µl,

0,35 mmol). Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Smeša je zatim koncentrovana i stavljena na 4g RegiSep zlatnu kolonu i hromatografisana na CombiFlash (0 %-15 %, DCM:MeOH). Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobilo (S)-1-(4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (74 mg,

0,13 mmol, 73 % prinos). ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]<+>.

2

Korak G: (S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: (S)-1-(4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (74 mg, 0,13 mmol) rastvoren je u metanolu (4307 µl, 0,13 mmol) i tretiran hlorovodonikom (1077 ul, 6,5 mmol) (ak). Reakcija je mešana na 55 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i resuspendovana u 1,5 ml MeOH. Suspenzija je stavljena na Gilson (prep HPLC), koji je eluiran sa 5-->95 % ACN/0,1 % TFA u vodi/0,1 % TFA. Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i liofilizovane tokom noći da bi se dobilo (S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5),6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (26 mg, 0,049 mmol, 38 % prinos). ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]<+>.

PRIMER 128

1-(4-(2-(3-(dimetilamino)azelidin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Korak A: benzil 4-(2-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazina -1-karboksilat (0,20 g, 0,35 mmol) u dioksanima je dodat N,N-dimetilazetidin-3-amin hidrohlorid (0,24 g, 1,7 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,45 g, 3,5 mmol) i reakcija je zagrevana na 80 °C tokom 72 sata. Reakcija je koncentrovana in vacuo, a talog je hromatografisan korišćenjem 0-->20 % MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio benzil 4-(2-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)-7-(3-(metoksimetoksi))naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,25 g, 105 %). ES+APCI MS m/z 638,3 [M+H]<+>.

1-(4-(2-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je napravljen prema Primeru 127 zamenom benzil 4-(2-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)-7-(3). -(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata za benzil (S)-4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin -1-karboksilat u koraku E. ES+APCI MS m/z 514,2 [M+H]<+>.

2

PRIMER 129

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil (2R)-2-[(1R)-1-hidroksietil]pirolidin-1-karboksilat: Mešavina BH3-Me2S (10 M, 549 ul) i (3aS)-1-metil-3,3-difenil-3a,4,5,6-tetrahidropirolo[1,2-c][1,3,2 ]oksazaborol (1,00 M, 844 ul) u THF (10 ml) je mešana na 15 °C tokom 1 sata. U smešu je dodat rastvor terc-butil (2R)-2-acetilpirolidin-1-karboksilata (0,90 g, 4,22 mmol) u THF (10 ml) i smeša je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Smeša je ugašena dodavanjem metanola (2,00 ml) i reakcija je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolej etar/etar acetat = 50-1 - 5-1) da bi se dobio terc-butil (2R)-2-[(1R)-1-hidroksietil]pirolidin-1-karboksilat (0,60 g, 2,79 mmol, 66,0 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 5,18 (br s, 1H), 3,73 (dt, J = 4,8, 8,0 Hz, 1H), 3,70 - 3,43 (m, 2H), 3,28 (td, J = 6,64, 10,8 Hz, 1H), 1,96 (kd, J = 7,2, 12,8 Hz, 1H), 1,89-1,68 (m, 2H), 1,62 (br s, J = 6,4 Hz, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,15 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

2

Korak B: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-tercbutoksikarbonilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8- dihidro-577-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (0,70 g,

1,08 mmol) i terc-butil (2R)-2-[(1R)-1-hidroksietil]pirolidin-1-karboksilat (349 mg, 1,62 mmol) u THF (10 ml) je dodat t-BuONa (312 mg, 3,24 mmol) i smeša je mešana na 10 °C tokom 1 sata. Smeša je razblažena vodom (10 ml) i vodeni sloj ekstrahovan etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolej etar/etar acetat = 3/1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R))-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,35 g, 412 umol, 38,1 % prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 799,4 [M+H]<+>.

Korak C: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-pirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,30 g, 375 umol) i TFA (642 mg, 5,63 mmol, 417 uL) u dihlorometanu (0,42 ml) je mešana na 10 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se

2

dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-pirolidin-2-il]etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (305 mg) LCMS [M+1]: ES+APCI MS m/z 699,2 [M+H]<+>.

Korak D: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-pirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,30 g, sirov), formaldehid (210 mg, 1,85 mmol, 192 uL, 37 % vode) i AcOH (22,16 mg, 369 umol, 21,1 ul) u metanolu (3,00 ml) je mešano na 15 °C tokom pola sata. U smešu je dodat NaBH3CN (58,0 mg, 923 umol) i smeša je mešana na 15 °C tokom 48 sati. Smeša je ugašena dodavanjem H2O (5 ml) na 0 °C, a vodeni sloj je ekstrahovan etar acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,10 % mravlja kiselina)/acetonitril] da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R) -1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,10 g, 126 umol) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 713,4 [M+H]<+>.

Korak E: 4-[2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol: Amonijak je propušten u

24

metanol (3 ml) na -78 °C tokom 30 minuta. benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,09 g, 126 umol) i suvi 10 % Pd/C (0,10 g) su zatim dodati a smeša je mešana na 10 °C tokom 1 sata pomoću H2 (15 psi). Reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 4-[2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (0,04 g, sirov) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 489,2 [M+H]<+>.

Korak F: 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 4-[2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (0,04 g) i Et3N (124 mg, 1,23 mmol, 171 ul) u DCM (2,00 ml) na -40 °C je dodat prop-2- enoil prop-2-enoat (7,23 mg, 57,3 umol) i reakcija je mešana na -40 °C tokom pola sata. Smeša je ugašena dodavanjem metanola (0,10 ml) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25* 10um;mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN]; B%: 10 %-37 % tokom 10 minuta) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il ]etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (9,13 mg, 15,5 umol) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 543,4 [M+H]<+>.

PRIMER 130

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((S)-1-((S)-1-metilpirolidin-2-yl)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((S)-1-((S)-1-metilpirolidin-2-il)etoksi)-5,6,7,8) -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 129 zamenom (3aR)-1-metil-3,3-difenil- 3a,4,5,6-tetrahidro pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborol za (3aS)-1-metil-3,3-difenil-3a,4,5,6-tetrahidropirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborola u koraku A, uz istovremeno zamenu terc-butil (2S)-2-acetilpirolidin-1-karboksilata za terc-butil (2R)-2-acetilpirolidin-1-karboksilat u Koraku A. ES+APCI MS m/z 543,4 [M+H]<+>.

PRIMER 131

1-[4-[2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak A: (2R)-1-[etil(metil)amino)propan-2-ol: (2R)-2-metiloksiran (540 mg, 9,31 mmol, 651 ul) je dodat u N-metiletanamin (500 mg, 8,46 mmol, 725 ul) u MeOH (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan na 80 °C tokom 3 sata u zatvorenoj epruveti. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio (2R)-[etil(metil)amino]propan-2-ol (260 mg, sirovo) kao svetlo žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor (2R)-1-[etil(metil)amino]propan-2-ola (217 mg, 1,85 mmol) u toluenu (20 ml) dodat je benzil 4-[7-(3-benziloksi-1- naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 617 umol), Pd2(dba)3 (56,6 mg, 61,8 umol), BINAP (76,9 mg, 124 umol) i NaOtBu (178 mg, 1,85 mmol,) i smeša je degazirana sa N2 tokom 15 minuta, a zatim zagrevana na 90 °C tokom 16 sati pod N2. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom obrnute faze da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (110 mg, 153 umol, 24,8 % prinos, 97,5 % čistoća). ES+APCI MS m/z 701,4 [M+H]<+>.

Korak C: 4-[2-[(1R)-2-[etil(metil)aminol-1-metil-etoksil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -7-il]naftalen-2-ol: U rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 143 umol) u MeOH (3,00 ml) je dodat HCl/MeOH (4 M, 143 ul), a zatim Pd (OH)2/C (50 mg) pod N2.

24

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pomoću H2 (15 psi) na 40 °C tokom 4 sata. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 4-[2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (76,0 mg, 125 umol, 87,5 % prinos, 90,3 % čistoća, 2 HCl) koji je direktno korišćen u sledećiem koraku bez daljeg prečišćavanja.

ES+APCI MS m/z 477,2 [M+H]<+>.

Korak D: 1-[4-[2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor 4-[2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (70 mg, 127 umol, 2 HCl) i DIEA (98,8 mg, 764 umol, 133 ul) u DCM (1,50 ml) je dodat prop-2- enoil prop-2-enoat (12,9 mg, 102 umol) u kapima na -50 °C. Smeša je mešana na -40 do -20 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je ugašena dodavanjem MeOH (17,0 mg) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen vodom (1 ml) i ekstrahovan sa DCM (3 × 6 ml). Organski slojevi su osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) -ACN];B%: 48 %-78 %,10 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (9,23 mg, 17,2 umol, 13,5 % prinos, 98,7 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 531,3 [M+H]<+>.

PRIMER 132

1-[4-[2-[(1-cikloheksilpirolidin-3-il)metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak A: 1-cikloheksilpirolidin-3-karboksilat: U rastvor metil pirolidin-3-karboksilata (1,00 g, 6,04 mmol, HCl) i DIEA (780 mg, 6,04 mmol, 1,05 ml) dodat je cikloheksanon (652 mg, 6,64 mmol, 686 ul) i HOAc (725 mg, 12,1 mmol, 691 ul) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom pola sata. U reakcionu smešu je dodat NaBH(OAc)3 (3,84 g, 18,12 mmol) u porcijama na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 do 15 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (5 ml) i organske materije su koncentrovane pod vakuumom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (10 ml × 2) i pH je podešen sa zasićenim NaHCO3 (10 ml) i Na2CO3 (2 ml) na pH>8. Organski slojevi su kombinovani, sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je triturisan sa MTBE/petroleum etrom (1:3, 20 ml) i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio metil 1-cikloheksilpirolidin-3-karboksilat (1,00 g, 4,73 mmol, 78,4 % prinos) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 212,2 [M+H]<+>.

Korak B: (1-cikloheksilpirolidin-3-il)metanol: U rastvor metil 1-cikloheksilpirolidin-3-karboksilata (1,00 g, 4,73 mmol) u THF (20 ml) dodat je LiAlH4 (413 mg, 10,9 mmol) na -10 °C. Reakciona smeša je mešana na -10 °C tokom pola sata. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog Na2SO4 (2 ml) i smeša je filtrirana, a filterski kolač je ispran sa THF (3 × 50 ml).

Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo: (1-

24

cikloheksilpirolidin-3-il)metanol (800 mg, 4,36 mmol, 92,3 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 3,71 (dd, J = 4,1, 10,0 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 4,4, 10,0 Hz, 1H), 2,90 (dt, J = 4,4, 8,8 Hz, 1H), 2,74 (dd, J = 3,2, 8,8 Hz, 1H), 2,53 (dd, J = 6,8, 8,8 Hz, 1H), 2,36 - 2,24 (m, 2H), 2,04 - 1,93 (m, 2H), 1,90 (br s, 2H), 1,78 - 1,64 (m, 3H), 1,61 - 1,52 (m, 1H), 1,33 - 1,12 (m, 5H)

1-[4-[2-[(1-cikloheksilpirolidin-3-il)metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 131 zamenom (1-cikloheksilpirolidin-3-il)metanola za (2R)-1-[etil(metil)amino] propan-2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 597,4 [M+H]<+>.

PRIMER 133

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropilamino)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-il]prop-2-en-1-on

Korak A: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropilamino)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat: Rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (400 mg, 617 umol) i 3-morfolinopropan-1-amina (534 mg, 3,70 mmol, 540 ul) u DMSO (4,00 ml) je zagrevan na 100 °C tokom 12 sati. Po završetku, smeša je razblažena vodom (4 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3

24

× 20 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko Al2O3 eluiranjem sa etil acetatom/petrolej etrom (20→100 %) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropilamino)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (245 mg, 320 umol, 51,8 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 728,6 [M+H]<+>.

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropilamino)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 131 i zamenio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropilamino)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat za benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil))amino]-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat u Koraku C. ES+APCI MS m/z 558,6 [M+H]<+>.

PRIMER 134

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-yl)-2-(piperidin-3-ilmetoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-yl)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperidin-1-carboksilat: TEA (1,76 g, 17,4 mmol, 2,42 ml) je dodat u rastvor [(3R)-3-piperidil]metanola (1,0 g,

24

8,68 mmol) u THF (25,0 ml), a zatim je dodat rastvor Boc2O (1,89 g, 8,68 mmol, 1,99 ml) u THF (5 ml) na 15 °C. Smeša je mešana na 15 °C tokom 12 sati.

Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a talog rastvoren u etil acetatu (50 ml) i H2O (30 ml). Rastvor je zakiseljen sa HCl (6 M) do pH~6 i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 50 ml), a kombinovani organski slojevi su koncentrovani do suvoće da bi se dobio terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilat (1,68 g, 7,80 mmol, prinos 89,9 %, 100 % čistoće) kao bezbojni kristali.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,73 (br s, 2H), 3,51 (br d, J = 6,8 Hz, 2H), 3,05 (br s, 2H), 1,83 - 1,71 (m, 2H), 1,62 (br s, IH), 1,46 (s, 9H), 1,44 - 1,37 (m, IH), 1,35 - 1,22 (m, 1 H).

Korak B: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-tercbutoksikarbonil-3-piperidil]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata (332 mg, 1,54 mmol) u THF (5 ml) dodat je t-BuONa (223 mg, 2,32 mmol). Rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metil sulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- Zatim je dodat karboksilat (500 mg, 772 umol) u THF (5 ml) i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom, a talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone eluiranjem sa petrolej etarom/etil acetatom (10-1 do 3-1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil) -2-[[(3R)-1-tercbutoksikarbonil-3-piperidil]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (510 mg, 628 umol, 81,4 % prinos, 98,4 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 799,4 [M+H]<+>.

24

Korak C: terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-2-il]oksimetil]piperidin-1-karboksilat: Rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-terc-butoksikarbonil-3-piperidil]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (250 mg, 313 umol) u MeOH (5 ml) je pročišćen sa NH3 (10 %, w/w), a zatim 10 % Pd/C (50 mg) je dodato. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće da bi se dobio terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]piperidin-1-karboksilat (126 mg, 211 umol, 67,4 % prinosa, 96,2 % čistoće) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 575,5 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil(3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoil piperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]piperidin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksimetil]piperidin-1-karboksilat (126 mg, 219 umol) i TEA (33,3 mg, 329 umol, 45,8 ul) u DCM (5,0 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2- enoat (24,9 mg, 197 umol) u kapima na -40 °C i reakcija je mešana 30 minuta na -40 °C. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (0,5 ml) i koncentrovana do suvoće. Ostatak je rastvoren u EtOAc (50 ml) i H20 (20 ml).

24

Dobijeni rastvor je zakiseljen sa HCl (1 M) do pH~6 i slojevi su razdvojeni.

Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil(3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoil piperazin -1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]piperidin-1-karboksilat (120 mg, 172 umol, 78,5 % prinos, 90,2 % čistoće) kao žuto ulje, koje je korišćeno direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 629,6 [M+H]<+>.

Korak E: 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-3-piperidil] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on: U rastvor tercbutil(3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]piperidin-1-karboksilat (120 mg, 191 umol) u DCM (3,0 ml) je dodata TFA (326 mg, 2,86 mmol, 212 ul) na 0 °C. Smeša je mešana na 15 °C tokom 2 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je bazifikovana sa NH3 (30 % u vodi, tri kapi) i koncentrovana do suvoće. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN]; B%: 5 % - 35 %,10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-3-piperidil] metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (24,5 mg, 38,9 umol, 20,4 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 529,4 [M+H]<+>.

PRIMER 135

1-[4-[2-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoksi] -7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-yl]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

2

Korak A: 1-[4-(3-hidroksipropil)piperazin-1-il]etanon: U rastvor 1-piperazin-1-iletanona (2,00 g, 15,6 mmol) i K2CO3 (4,31 g, 31,2 mmol) u CH3CN (50,0 ml) dodat je 3-bromopropan-1-ol (3,25 g, 23,4 mmol). Smeša je mešana na 80 °C tokom 5 sati. Čvrsta supstanca je filtrirana i filtrat je podvrgnut isparavanju da bi se dobio 1-[4-(3-hidroksipropil)piperazin-1-il]etanon (2,00 g, 10,7 mmol, 68,8 % prinos) kao bezbojno ulje.

1-[4-[2-[3-(4-acetilpiperazin-1-il)propoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 131 zamenom 1-[4-(3-hidroksipropil)piperazin-1-il]etanona za benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat u Koraku C. ES+APCI MS m/z 600,3 [M+H]<+>.

PRIMER 136

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[2-(3-metoksipirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-yl]piperazin-1-yi]prop-2-en-1-on

2 1

Korak A: 2-(3-metoksipirolidin-1-il)etanol: U rastvor 3-metoksipirolidina (450 mg, 3,27 mmol, HCl) i 2-bromoetanola (408 mg, 3,27 mmol) u CH3CN (10 ml) dodat je K2CO3 (1,36 g, 9,81 mmol). Smeša je mešana na 80 °C tokom 3 sata. Čvrsta supstanca je filtrirana i filtrat je podvrgnut isparavanju da bi se dobio 2-(3-metoksipirolidin-1-il)etanol (450 mg, 3,10 mmol, 94,8 % prinos) kao bezbojno ulje.

Korak B: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(3-metoksipirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500 mg, 771 umol), 2-(3-metoksipirolidin-1-il)etanol (224 mg, 1,54 mmol) i t-BuONa (222 mg, 2,32 mmol) u toluenu (10 ml) je mešana na 20° C tokom 1 sata u atmosferi N2. Smeša je ohlađena na 0 °C i dodata je HCl (2M) do pH~7. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone korišćenjem 0→10 % MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(3-metoksipirolidin-1-il)etoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (110 mg, 147,9 umol, 19,1 % prinos) ES+APCI MS m/z 729,2 [M+H<]+>.

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[2-(3-metoksipirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 131 zamenom benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(3-metoksipirolidin-1-il)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat za benzil 4-[7-(3-benziloksi- 1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metiletoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat u Koraku C. ES+APCI MS m/z 559,3 [M+H]<+>.

PRIMER 137

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[3-(3-metoksipirolidin-1-il)propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-yl]piperazin-1 -il]prop-2-en-1 -on

2 2

Korak A: (3-metoksipirolidin-1-il)propan-1-ol: U rastvor 3-metoksipirolidina (500 mg, 3,63 mmol, HCl) i 3-bromopropan-1-ola (505 mg, 3,63 mmol) u CH3CN (10 ml) dodat je K2CO3 (1,51 g, 10,9 mmol). Smeša je mešana na 20 °C tokom 5 sati. Čvrsta supstanca je filtrirana i filtrat je podvrgnut isparavanju da bi se dobio 3-(3-metoksipirolidin-1-il)propan-1-ol (540 mg, 3,39 mmol, 93,3 % prinos).

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[3-(3-metoksipirolidin-1-il)propoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 131 zamenom (3-metlzoksipirolidin-1-il)propan-1-ola za (2R)-1-[etil(metil)amino]propan-2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]<+>.

PRIMER 138

1-[4-[2-[2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

2

Korak A: 2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)etanol: U rastvor 3,3-difluoroazetidina (500 mg, 3,86 mmol, HCl) i 2-bromoetanola (482 mg, 3,86 mmol, 274 ul) u CH3CN (10 ml) dodat je K2CO3 (1,60 g, 11,5 mmol) i reakcija je mešana na 80 °C tokom 16 sati. Reakcija je filtrirana i filtrat je podvrgnut isparavanju da bi se dobio 2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)etanol (300 mg, 2,19 mmol, 56,7 % prinos).

1-[4-[2-[2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen u skladu sa Primerom 131, supstituisanjem 2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)etanola za (2R)- 1-[etil(metil)amino]propan-2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 551,4 [M+H]<+>.

PRIMER 139

1-[4-[2-[2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-yl]piperazin-1-il]prop-2-en-1 -on

Korak A: Metil 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)acetat: U suspenziju metil 2-bromoacetata (1,17 g, 7,67 mmol, 723 ul) u DCM (10 ml) ohlađenu na 0 °C dodat je TEA (1,76 g, 17,4 mmol, 2,42 ml) i 3,3-difluoropirolidin g, 6,97 mmol, HCl) i reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 16 sati. Reakcija je filtrirana i filtrat je podvrgnut isparavanju. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone sa

2 4

0,5 %->20 % MeOH/DCM kao eluent da bi se dobio metil 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)acetat (580 mg, 3,24 mmol, 46,4 % prinosa).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,73 (s, 3H), 3,38 (s, 2H), 3,11 (t, J = 13,6 Hz, 2H), 2,92 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,36 -2,26 (m, 2H).

Korak B: 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etanol: U rastvor LiAlH4 (184 mg, 4,86 mmol ekv.) u THF (5,0 ml) dodat je rastvor metil 2-(3,3-fluoropirolidin-1-il)acetata (580 mg, 3,24 mmol) u THF (5,0 ml) u kapima na 0 °C. Smeša je zagrejana do 20 °C i mešana 3 sata. Smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum sulfata (1,20 ml). Reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etanol (330 mg, 2,18 mmol, 67,4 % prinosa) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform- d) δ = 3,64 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,97 (t, J = 13,2 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,68 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,49 (br. s, 1H), 2,34 - 2,24 (m, 2H).

1-[4-[2-[2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 131 zamenom 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etanola za (2R)-1 -[etil(metil)amino]propan-2-ol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 565,3 [M+H]<+>.

PRIMER 140

2-[3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-il]-N,N-dimetil-acetamid

2

Korak A: metil 1-[2-(dimetilamino)-2-okso-etil]pirolidin-3-karboksilat: Rastvor metil pirolidin-3-karboksilata (1,00 g, 6,04 mmol, HCl) i NaHCO3 (1,01 g, 12,1 mmol, 470 ul) u ACN (200,0 ml) je mešan na 10 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat rastvor 2-bromo-N,N-dimetil-acetamida (1,00 g, 6,04 mmol) u ACN (5,00 ml) na 10 °C i reakcija je mešana na 10 °C tokom 6 sati, a zatim na 50 °C tokom 2 sata. Smeša je filtrirana i čvrste sustance su isprane sa DCM (3 × 15 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone koristeći 0→10 % MeOH/DCM kao eluent da bi se dobio metil 1-[2-(dimetilamino)-2-okso-etil]pirolidin-3-karboksilat (480 mg, 2,02 mmol, 33,4 % prinosa).

Korak B: 2-[3-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-N,N-dimetil-acetamid: U rastvor metil 1-[2-(dimetilamino)-2-okso-etil]pirolidin-3-karboksilata (500 mg, 2,33 mmol) u THF (10 ml) dodat je LiAlH4 (203 mg, 5,36 mmol) na - 60 °C i reakciona smeša je mešana na -60 °C tokom 10 minuta. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog Na2SO4 (0,4 ml) i suspenzija je filtrirana. Filterski kolač je ispran sa THF (3 × 50 ml) i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[3-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-N,N-dimetil-acetamid (400 mg, 2,15 mmol, 92,2 % prinosa) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 187,1 [M+H]<+>.

2

Korak C: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[1-[2-(dimetilamino)-2-oksoetil]pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500 mg, 772 umol), 2-[3-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-N,N-dimetil-acetamid (216 mg, 1,16 mmol) i NaOBu-t (148 mg, 1,54 mmol) u toluenu (10 ml) je mešana na 15 °C tokom 15 minuta. Reakciona smeša je prečišćena direktno hromatografijom pomoću silika gelu korišćenjem 20→100 % EtOAc/Petrolejski eter da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[1-[2-(dimetilamino)-2-oksoetil]pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (310 mg, 395 umol, 51,1 % prinosa 98 % čistoće) kao smeđa čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 770,4 [M+H]<+>.

2-[3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-il]-N,N-dimetil-acetamid je pripremljen prema Primeru 131 supstitucijom benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[1 -[2-(dimetilamino)-2-okso-etil]pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d)pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat za benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-2-[etil(metil)amino]-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat u Koraku C. ES+APCI MS m/z 600,3 [M+H]<+>.

PRIMER 141

1-[4-[2-[[1-(2-hidroksietil)pirolidin-3-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-SH-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

2

Korak A: metil pirolidin-3-karboksilat: U rastvor 1-(terc-butil) 3-metil pirolidin-1,3-dikarboksilata (10,0 g, 43,6 mmol) u DCM (50 ml) je dodat HCl/dioksan (4 M, 109 ml) na 0 °C i mešano na 0 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio metil pirolidin-3-karboksilat (7,00 g, sirov, HCl) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 3,77 (s, 3H), 3,56 - 3,53 (m, 2H), 3,41-3,37 (m, 3H), 2,40 - 2,24 (m, 2H).

Korak B: metil 1-(2-benziloksietil)pirolidin-3-karboksilat: Rastvor metil pirolidin-3-karboksilata (3,0 g, 18,1 mmol, HCl), Cs2CO3 (17,7 g, 54,3 mmol) i KI (301 mg, 1,81 mmol) u MeCN (60 ml) je mešan na 15 °C tokom 5 min. Zatim je u smešu dodat rastvor 2-bromoetoksimetilbenzena (4,67 g, 21,7 mmol, 3,43 ml) u ACN (15 ml) na 15 °C i mešan na 15 °C 1 sat. Smeša je zatim zagrejana na 50 °C i mešana na 50 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa DCM (3 × 30 ml) i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex luna C18250∗50 mm∗10 um;mobilna faza: [voda (0,1 % TFA)-ACN];B%: 10ACN%-40ACN%,30min40 %min) da bi se dobio metil 1-(2-benziloksietil)pirolidin-3-karboksilat (1,48 g, 5,06 mmol, 27,9 % prinosa, 90,0 % čistoće) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform -d) δ = 7,36 - 7,28 (m, 5H), 4,56 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,61 - 3,58 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,02 -3,00 (m, 2H), 2,78 - 2,67 (m, 4H), 2,58 - 2,49 (m, 1H), 2,11 - 2,08 (m, 2H)

Korak C: (1-(2-(benziloksi)etil)pirolidin-3-il)metanol: U rastvor metil 1-(2-benziloksietil)pirolidin-3-karboksilata (1,38 g, 5,24 mmol) u THF (27 ml) dodat je

2

LiAlH4 (457 mg, 12 mmol) na -10 °C i mešan na -10 °C tokom 30 minuta.

Reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2SO4 (1 ml) i filtrirana, filterski kolač je ispran sa THF (5 × 30 ml), filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio (1-(2-(benziloksi)etil)pirolidin- 3-il)metanol (1,30 g, 3,31 mmol, 63,3 % prinosa, 60,0 % čistoće) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 236,1 [M+H]<+>.

1-[4-[2-[[1-(2-hidroksietil)pirolidin-3-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 136 zamenom (1-(2-(benziloksi)etil)pirolidin-3-il)metanola za 2-(3-metoksipirolidin-1-il)etanol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 559,3 [M+H]<+>.

PRIMER 142

1-[4-[2-(2-hidroksietoksi)-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

1-[4-[2-(2-hidroksietoksi)-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 136 zamenom 2-[terc-butil(dimetil)silil)oksietanola za 2-(3-metoksipirolidin-1-il)etanol u Koraku B. ES+ APCI MS m/z 476,2 [M+H]<+>.

PRIMER 143

1-[4-[2-(2,3-dihidroksipropoksi)-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

2

1-[4-[2-(2,3-dihidroksipropoksi)-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 136 zamenom (2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)metanola za 2-(3-metoksipirolidin-1-il).)etanol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 506,3 [M+H]<+>.

PRIMER 144

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: terc-butil (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilat: U suspenziju NaH (2,38 g, 59,6 mmol, 60 % čistoće) u THF (50 ml) dodat je rastvor terc-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (10 g, 49,69 mmol) u THF (50 ml) na 0 °C i smeša je mešana na 10 °C tokom 1 sata. Dodat bromometilbenzen u kapima (12,8 g, 74,5 mmol, 8,85 ml) na 0 °C i smeša je mešana na 10 °C tokom 16 sati. Smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijak hlorida (20 ml), a zatim razblažena etil acetatom

2

(200 ml) i vodom (100 ml). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (100 ml) i slanim rastvorom (100 ml), osušen pomoću natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 5/1) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilat (8,2 g, 28,06 mmol, 56,5 % prinosa, 99,7 % čistoće) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 192,1 [M+H-Boc]<+>.

Korak B: (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin: U rastvor terc-butil (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilata (8,2 g, 28,14 mmol) u CH2Cl2 (28 ml) dodata je TFA (43,1 g, 378 mmol, 28,0 ml) u kapima na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 15°C 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je razblažen dihlorometanom (100 ml), a zatim ispran sa 1M vodenim rastvorom natrijum hidroksida (10 ml) sve dok vodeni sloj nije dostigao pH ~ 10. Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (2 × 20 ml), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin (4 g, 20,9 mmol, 74,3 % prinosa LCMS ES+APCI MS m/z 192,2 [M+H]<+>.

Korak C: (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin: Smeša 1-bromo-2-metoksietana (0,9 g, 6,48 mmol, 608 uL), (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidina (1,24 g, 6,48 mmol) i K2CO3 (2,68 g, 19,4 mmol) u CH3CN (20 ml) je mešana na 15 °C tokom 1 sata, a zatim na 78 °C tokom 12 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (50 ml) i vodom (50 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 100 ml), osušen pomoću natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone silika gela (etil acetat/dihlorometan/metanol 1/1/0 do 10/10/2) da bi se dobio (2S)-2-(benziloksimetil)-1-(2-metoksietil)pirolidin (900 mg, 3,61 mmol, 55,7 % prinosa) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 250,2 [M+H]<+>.

2 1

Korak D: (S)-(1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metanol: U rastvor (2S)-2-(benziloksimetil)-1-(2-metoksietil)pirolidina (900 mg, 3,61 mmol) u MeOH (20 ml) je dodat 10% Pd/C (721,88 umol) i suspenzija je mešana pod H2 (50 psi) na 10°C tokom 16 sati. Reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio (S)-(1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metanol (450 mg, 2,83 mmol, 78,30% prinosa).

Korak E: Benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša [(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metanola (245 mg, 1,54 mmol), benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 772 umol) i t-BuONa (223 mg, 2,32 mmol) u THF (5 ml) je mešan na 20 °C tokom 30 minuta u atmosferi N2. Reakciona smeša je sipana u H2O (200 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3x30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, DCM/MeOH = 300/1 do 10:1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1- (2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (260 mg, 349 umol, 45,3 % prinosa). ES+APCI MS m/z 743,4 [M+H]<+>.

2 2

Korak F: terc-butil 4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 323 umol) i (Boc)2O (141 mg, 646 umol, 148 ul) u MeOH (150 ml) je dodat 10 % Pd/C (100 mg) u atmosferi N2. Suspenzija je degazirana i pročišćena sa H23 puta. Smeša je mešana pod H2 (15 PSI) na 40 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (215 mg, sirov). ES+APCI MS m/z 619,1 [M+H]<+>.

Korak G: 4-[2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol: U rastvor terc-butil 4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (215 mg, 347 umol) u DCM (500 ul) je dodat TFA (594 mg, 5,21 mmol, 385 ul) i smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-[2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (219 mg, 346 umol). ES+APCI MS m/z 519,4 [M+H]<+>.

2

Korak H: 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 4-[2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (219 mg, 346 umol) i DIEA (447 mg, 3,46 mmol, 603 ul) u dihlorometanu (4,00 ml) ohlađen na -40 °C dodat je rastvor prop-2-enoil prop-2-enoata (34,9 mg, 276,92 umol) u dihlorometanu (1,00 ml) u atmosferi azota. Smeša je mešana na -40 °C 1 sat. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog NaHCO3 (2,00 ml) i smeša je sipana u ledenu vodu (20 ml) i ekstrahovana dihlorometanom (20 ml×2). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 32 % - 62 %, 12 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (27 mg, 46,7 umol).

ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]<+>.

PRIMER 145

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

2 4

Korak A: Benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-tercbutoksikarbonilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1,24 g, 6,17 mmol) i benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2 g, 3,09 mmol) u THF (50 ml) je dodat t-BuONa (890 mg, 9,26 mmol)) i reakcija je mešana na 15 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je sipana u H20 (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3X100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 100/1 do 1:1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)- 1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,62 g, 2,02 mmol, 65,5 % prinosa). ES+APCI MS m/z 785,6 [M+H]<+>.

2

Korak B: (2S)-2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il] oksimetil]pirolidin-1-karboksilat: NH3 je pušten da peni u MeOH (50 ml) na 15 °C tokom 30 minuta. Ovom rastvoru je dodat benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-terc-butoksikarbonil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,6 g, 2,04 mmol), a zatim suvi 10 % Pd/C (500 mg) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 1 sat. Smeša je zatim filtrirana i filtrat koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2S)-2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (1,00 g, 1,78 mmol). ES+APCI MS m/z 561,5 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil (2S)-2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-[4-(2,2,2-trifluoroacetil)piperazin-1-il]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (2S)-2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (800 mg, 1,43 mmol) u DCM (5,00 ml) na 0 °C je dodat TFAA (599 mg, 2,85 mmol) i DIEA (737 mg, 5,71 mmol)) i reakcija je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je sipana u H2O (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (50 ml×3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2S)-2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-[4-(2,2,2-trifluoroacetil)piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (1,5 g, sirov). ES+APCI MS m/z 657,5 [M+H]<+>.

2

Korak D: 2,2,2-trifluoro-1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]etanon: U rastvor terc-butil (2S)-2-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-[4-(2,2,2-trifluoroacetil)piperazin-1-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (300 mg, sirov) u DCM (500 ul) je dodat TFA (521 mg, 4,57 mmol, 338 ul) i smeša je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2,2,2-trifluoro-1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]etanon (306 mg). ES+APCI MS m/z 557,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2,2,2-trifluoro-1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]etanon: U rastvor acetona (132 mg, 2,28 mmol, 167 ul) i 2,2,2-trifluoro-1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S) -pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]etanon (306 mg, sirov, TFA) u MeOH (5,00 ml) je dodat AcOH (54,8 mg, 912 umol, 52,2 ul) i NaBH3CN (115 mg, 1,83 mmol) i smeša je mešana na 15 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2,2,2-trifluoro-1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2 -

2

[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]etanon (300 mg, sirov). ES+APCI MS m/z 599,5 [M+H]<+>.

Korak F: 4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-piridor[3,4-d]pirimidin-7- il]naftalen-2-ol: U rastvor 2,2,2-trifluoro-1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]etanon (300 mg, sirov) u MeOH (10 mL) je dodat K2CO3 (346 mg, 2,51 mmol) i smeša je mešana na 15°C 1 sat. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (250 mg). ES+APCI MS m/z 503,3 [M+H]<+>.

Korak G: 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (250 mg, sirov) i DIEA (643 mg, 4,97 mmol, 866 ul) u DCM (5,00 ml) ohlađen na -40 °C dodat je rastvor prop-2-enoil prop-2-enoat (50,2 mg, 398 umol) u DCM (1 ml) u atmosferi azota. Smeša je mešana na -40 °C 1 sat. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog NaHCO3 (2,00 ml). Smeša je sipana u ledenu vodu (20 ml) i ekstrahovana sa DCM

(20 ml×2). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex

2

Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) -ACN]; B%: 52 % - 78 %, 12 min).1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan (10 mg, 17,6 umol). ES+APCI MS m/z 557,3 [M+H]<+>.

PRIMER 146

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

Korak A: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-tercbutoksikarbonilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (0,50 g, 772 umol), terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (311 mg, 1,54 mmol) i t-BuONa (223 mg, 2,32 mmol) u THF (10 ml) je mešana na 20°C tokom 1 sata. Smeša je razblažena vodom (10 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etar acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim natrijum hloridom (1 × 30 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (SiO2, petrolejski eter/etar acetat = 3/1) da bi se dobio benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-tertbutoksikarbonilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,40 g, 499 umol). ES+APCI MS m/z 785,2 [M+H]<+>.

2

Korak B: terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat: NH3 je pušten da peni u metanol (10 ml) na -78°C tokom 30 minuta. benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-3-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,25 g, 319 umol) i 10% Pd/C (0,10 g) su dodati u smešu i mešani na 10°C 1 sat pod H2 (15 psi). Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (0,17 g, 303 umol). ES+APCI MS m/z 561,3 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (0,17 g, 303 umol) i Et3N (153 mg, 1,52 mmol, 211 ul) u dihlorometanu (4,00 ml) ohlađen na -40°C je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (26,8 mg, 212 umol) i smeša je mešana na -40°C tokom 30 minuta. Smeša je ugašena dodavanjem metanola (0,10 ml) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone (Al2O3, dihlorometan/metan = 10/1) da bi se dobio terc-butil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop- 2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-

2

d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (0,12 g, 189 umol). ES+APCI MS m/z 615,5 [M+H]<+>.

Korak D: 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: Smeša tercbutil (3R)-3-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (0,10 g, 163 umol) i TFA (278 mg, 2,44 mmol, 181 ul) u dihlorometanu (0,20 ml) su mešani na 10°C 1 sat. Smeša je ugašena dodavanjem NH3•H2O i pH je podešen do pH = 7. Smeša je prečišćena prep-HPLC (kolona: Venusil XBP C8150*25*10 um; mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN]; B%: 15%-45%, 10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (22,8 mg, 42,9 umol). ES+APCI MS m/z 515,4 [M+H]<+>.

PRIMER 147

2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

2 1

Korak A: (Z) i (E)-n-bromobut-2-enenitril: U rastvor but-3-enenitrila (98 g, 1,46 mol, 118 ml) u terc-butanolu (150 ml) i petrolejskom eteru (575 ml) dodat je rastvor Br2 (233 g, 1,46 mol, 75,3 ml) u terc-butanolu (150 ml) na 15°C i reakcija je mešana 30 minuta. U reakciju je zatim dodat etanol rastvor natrijum etoksida (100 g, 0,6 mol, 850 ml). Reakciona smeša je mešana 2 sata na 15°C. Reakcija je zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone koristeći 2→20 % etil acetat/petrolejski eter kao eluent da bi se dobila smeša (Z) i (E)-4-bromobut-2-enenitrila (141 g, E/Z = 2,5/1, sirovo) kao blago žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d,) (E), δ = 6,79 (td, J = 7,2, 16,0 Hz, 1H), 5,63 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,00 (dd, J = 1,2, 6,8 Hz, 2H); (Z), δ = 6,66 (td, J = 8,0, 10,8 Hz, 1H), 5,44 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 0,8, 8,0 Hz, 2H).

Korak B: 2-(1,4-dibenzilpiperazin-2-il)acetonitril: U smešu N,N'-dibenziletan-1,2-diamina (115 g, 480 mmol, 113 ml) i TEA (97,0 g, 959 mmol, 133 ml) u toluenu (1 l) dodat je 4-bromobut- 2-enenitril (70 g, sirov) u kapima na 0 °C i reakcija je mešana na 15 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen hromatografijom pomoću kolone koristeći 5→50 % EtOAc/petrolejski eter kao eluent da bi se dobio 2-(1,4-dibenzilpiperazin-2-il)acetonitril (82 g, 240 mmol, dva koraka 37% prinosa, 89,3% čistoće) kao slabo žuta polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 306,3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 - 7,23 (m, 10H), 3,85 - 3,76 (m, 1H), 3,54 - 3,44 (m, 3H), 3,07 - 2,96 (m, 1H), 2,94 - 2,84 (m, 1H), 2,68 - 2,35 (m, 7H).

2 2

Korak C: 2-piperazin-2-ilacetonitril: U rastvor 2-(1,4-dibenzilpiperazin-2-il)acetonitrila (164 g, 536 mmol) u DCE (1500 m) dodat je 1-hloretil karbonohlorid (306 g, 2,14 mol) u kapima na 0°C. Posle dodavanja, reakciona smeša je zagrevana na 85°C tokom približno 48 sati. Dihloretan je isparen, a ostatak je stavljen u MeOH (1500 ml) i zagrevan na 70°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i čvrsta supstanca je triturirana sa MTBE (3X3 l) i čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-piperazin-2-ilacetonitril. Sirovi proizvod je prečišćen rekristalizacijom sa etanolom i vodom (8:1, v:v) da bi se dobio 2-piperazin-2-ilacetonitril kao beličasta čvrsta supstanca (53 g, 428 mmol, 40,0% prinosa, 96,4% čistoće, 2 HCl). ES+APCI MS m/z 126,2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, D2o) δ = 4,01 - 3,96 (m, 1H), 3,81 - 3,67 (m, 3H), 3,46 - 3,27 (m, 3H), 3,09 (d, J = 6,0 HZ, 2H).

Korak D: 2-[4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril: U smešu 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (1,2 g, 4,08 mmol) i 2-piperazin-2-ilacetonitrila (808 mg, 4,08 mmol, 2HCl) u dioksanu (24 ml) je dodat DIEA (2,64 g, 20,4 mmol, 3,55 ml). Reakciona smeša je mešana na 50°C tokom 3 sata. Po završetku, reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i vodeni sloj ekstrahovan sa EtOAc (3 × 80 ml).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril (1,56 g, 4,07 mmol, 100 % prinosa) kao braon čvrsta supstanca.

2

Korak E: terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U 2-[4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril (1,56 g, 4,07 mmol) je dodat (Boc)20 (9,50 g, 43,5 mmol, 10 ml) i smeša je zagrevana na 50°C tokom 2 sata. Po završetku, reakciona smeša je prečišćena hromatografijom pomoću silika gelu koristeći 10→50 % EtOAc/Petrolejski eter kao eluent da bi se dobio terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)-2/(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,2 g, 2,44 mmol, 59,9% prinosa, 98,3% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 483,3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,39 - 7,27 (m, 5H), 4,59 (br, 1H), 4,06 (br d,J = 13,6 Hz, 2H), 3,90 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,74 - 3,49 (m, 4H), 3,29 (dd, J = 4,0, 13,6 Hz, 1H), 3,18 (br, 1H), 3,10 - 3,00 (m, 1H), 2,85 - 2,55 (m, 6H), 1,53 - 1,45 (m, 9H).

Korak F: terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (655,74 mg, 5,69 mmol, 676 ulin THF (25 ml) dodat je NaH (182 mg, 4,55 mmol, 60% čistoće) na 0°C i reakciona smeša je mešana na 0 °C 30 minuta. U smešu je dodat terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat (1,1 g, 2,28 mmol) i reakciona smeša je mešana na 70°C tokom 12 sati u zatvorenoj cevi pod N2. Po završetku, reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog NH4Cl (20 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,1 g, 1,86 mmol, 81,7% prinosa, 95% čistoće) kao smeđa čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 562,4 [M+H]<+>.

2 4

Korak G: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Amonijak je pušten da peni u MeOH (30 ml) tokom 5 minuta. Ovom rastvoru je dodat terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (950 mg, 1,69 mmol) i 10 % Pd/C (200 mg). Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta, a smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40°C tokom 9 sati. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi MakroRP 250*50 mm*10 um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN];B%: 15%-40%,30; 58%min) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 830 umol, 49,1% prinosa, 97,8% čistoće) je dobijen kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 472,4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 4,59 (br s, 1H), 4,43 - 4,28 (m, 1H), 4,18 - 4,09 (m, 1H), 4,07 - 3,90 (m, 4H), 3,88 - 3,78 (m, 1H), 3,21 (br dd, J = 3,2, 13,6 Hz, 2H), 3,16 - 3,05 (m, 2H), 3,03 - 2,90 (m, 2H), 3,03 - 2,90 (m, 2H), 4,07 - 3,90 (m, 4H), 3,21 (br dd, J = 3,2, 13,6 Hz, 2H).2H), 2,82 - 2,55 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 2,33 - 2,22 (m, 1H), 2,11 - 2,00 (m, 1H), 1,91 - 1,62 (m, 4H), 1,51 (s, 9H).

2

Korak H: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 318 umol), 1-bromonaftalen (98,8 mg, 477 umol, 66,3 ul), Cs2CO3 (311 mg, 954 umol) i RuPhos, 29,7 umol) u toluenu (3 ml) je dodat Pd2(dba)3 (29,1 mg, 31,8 umol) i suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 3 puta. Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 12 sati. Smeša je podeljena između vode (10 ml) i EtOAc (20 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa EtOAc (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen reverznim flešom da bi se dobio tercbutil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (70 mg, 111 umol, 35,0% prinosa, 95,0% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 598,6 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,21 - 8,20 (m, 1H), 7,87 - 7,85 (m, 1H), 7,61 - 7,59 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,51 - 7,49 (m, 2H), 7,45 - 7,41 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,15 - 7,13 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,46 (br s, 1H), 4,33 - 4,28 (m, 4H), 4,10 - 4,07 (m, 2H), 3,97 - 3,94 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,46 (br s, 1H), 3,31 -3,27 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 3,07 - 3,01 (m, 2H), 2,77 (br s, 3H), 2,55 (br s, 3H), 2,35 (br s, 1H), 1,82 (br s, 7H), 1,52 (s, 9H).

Korak I: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (60 mg, 100 umol) u DCM (0,1 ml) je dodat TFA (154 mg, 1,35 mmol, 0,1 ml) na 15°C i mešano na 15°C tokom 1

2

sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (50 mg) kao smeđe ulje.

Korak J: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (50 mg, 81,8 umol, TFA) i DIEA (106 mg, 817 umol, 142 ul) u DCM (0,2 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (11,3 mg, 89,9 umol) na 0°C i reakcija je mešana na 0-15°C tokom 1,5 sata.

Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*30 mm*4um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN];B%: 15%-45%,10,5 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (9,16 mg, 15,1 umol, 18,5 % prinosa, 98,7 % čistoće, Format) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 552,5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,45 (br s, 1H), 8,22 - 8,19 (m, 1H), 7,87 - 7,85 (m, 1H), 7,62 - 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,51 - 7,49 (m, 2H), 7,45 - 7,43 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,15 - 7,13 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,60 (br s, IH), 6,42 - 6,38 (m, 1H), 5,84 - 5,82 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,78 - 4,53 (br dd, J = 6,8, 11,6 Hz, 2H), 4,42 - 4,40 (m, 1H), 4,27 (br s, 2H), 4,21 - 4,18 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 4,12-3,78 (br d, J = 12,8 Hz, 2H), 3,68 - 3,07 (m, 7H), 3,05 - 2,84 (m, 3H), 2,77 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 2,71 - 2,64 (m, 1H), 2,26 - 2 (m, IH), 2,11-2,03 (m, IH), 2,02-1,88 (m, 2H).

PRIMER 148

2

2-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol -4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 424 umol), 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (188 mg, 636 umol), RuPhos (39,6 mg, 84,8 umol) i Cs2CO3 (414 mg, 1,27 mmol) u toluenu (6 ml) je dodat Pd2(dba)3 (38,8 mg, 42,4 umol) i reakcija je mešana na 100°C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, smeša je prečišćena direktno hromatografijom pomoću silika gelu (PE: EtOAc=3:1 do 0:1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-metil- 1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 149 umol, 35,1% prinosa, 85,0% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 686,6 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,04 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 - 7,29 (m, 2H), 5,70 (dd, J = 2,4, 9,2 Hz, 1H), 4,62 (br s, 1H), 4,39 (br s, 1H), 4,34 - 4,28 (m, 2H), 4,20 - 4,14 (m, 1H), 4,05 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,91 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,81 - 3,72 (m, 1H), 3,53 (br t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,27 (br d, J = 10,8 Hz, 2H), 3,10 (br d, J = 6,8 Hz, 1H), 3,06 - 2,96 (m, 1H), 2,90 - 2,65 (m, 5H), 2,59 (br d, J = 10,2 Hz, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,43 (s,

2

3H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,23 - 2,15 (m, 1H), 2,11 (br s, 2H), 1,90 - 1,65 (m, 7H), 1,54 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il- indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 219 umol) u DCM (0,2 ml) je dodat TFA (616 mg, 5,40 mmol, 0,4 ml) i reakciona smeša je mešana na 15°C tokom 12 sati. Po završetku, rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(5-metillH-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (159 mg, 218 umol, 99,6 % prinosa, 2TFA) kao crveno ulje.

Korak C: 2-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (159 mg, 218 umol, 2TFA) i DIEA (366 mg, 2,83 mmol, 493 ul) u DCM (4 ml)) na -40°C dodat je prop-2-enoil prop-2-enoat (24,7 mg, 196 umol,) i reakciona smeša je mešana na -20°C tokom 1 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (2 mLl i vodeni sloj je odvojen i ponovo ekstrahovan sa DCM (2 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom, a

2

ostatak je prečišćen hromatografijom pomoću silika gelu (DCM: MeOH=50:1 do 5:1) nakon čega sledi prečišćavanje reverznim prep HPCL (kolona Phenomenex Synergi C18150*25* 10 um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN];B%: 4%-34% tokom 10 minuta) da bi se dobio 2-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (1,77 mg, 3,10 umol). ES+APCI MS m/z 556,5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,00 (s, 1H), 7,18 (br s, 1H), 7,16 - 7,11 (m, 1H), 6,52 (br s, 1H), 6,37 - 6,21 (m, 1H), 5,75 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,99 (br s, 1H), 4,67 (br dd, J = 6,4, 11,6 Hz, 1H), 4,34 (br dd, J = 3,9, 11,6 Hz, 1H), 4,24 (s, 2H), 4,11 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,94 (br s, 1H), 3,57 -3,40 (m, 4H), 3,29 (br d, J = 13,8 Hz, 1H), 3,19 (br s, 1H), 3,02 (br dd, J = 12,4, 19,7 Hz, 2H), 2,87 (br dd, J = 8,4, 16,4 Hz, 2H), 2,76 - 2,58 (m, 6H), 2,35 (s, 3H), 2,22 - 2,10 (m, 1H), 2,01 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 1,89 (br s, 2H).

PRIMER 149

2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil) indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-

2

il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 276 umol), 2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetil-silan (120 mg, 303 umol), Pd2(dba)3 (50,5 mg, 55,1 umol), RuPhos (51,5 mg, 110 umol), Cs2CO3 (225 mg, 689 umol) u toluenu (3,00 ml) je degaziran sa N2 i zatim zagrevan na 90°C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Talog je prečišćen prep-TLC (EtOAc/MeOH 8/1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 169 umol, 61,4% prinosa, 95,0% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 786,3 [M+H]<+>.

Korak B: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil) dodat je)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 178 umol) u DCM (3,00 ml) 2,6-dimetilpiridin (229 mg, 2,14 mmol) i TMSOTf (238 mg, 1,07 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 15°C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je ugašena dodavanjem MeOH (0,5 ml) i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-[5 -(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 686,6 [M+H]<+>.

2 1

Korak C: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (122 mg, 178 umol) i DIEA (138 mg, 1,07 mmol, 186 ul) u DCM (3,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (18,0 mg, 143 umol) u kapima na 0°C. Smeša je mešana na 20°C tokom 1,5 sata. Po završetku, smeša je razblažena vodom (0,5 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 5 ml). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-TLC (EA/MeOH 10/1) i prep-HPLC (kolona: Boston pH-lex 150*25 10 um;mobilna faza: [voda(0,1 %TFA)-ACN];B%: 39%-69%,10 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsiiletoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (54,0 mg, 43,8 umol). ES+APCI MS m/z 740,6 [M+H]<+>.

Korak D: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (20 mg, 27,0 umol) u DCM

2 2

(60 ul) je dodata TFA (30,8 mg, 270 umol). Smeša je mešana na 20°C 1 sat.

Reakcija nije završena pa je dodata dodatna TFA (30,8 mg) i reakcija je mešana na 20°C dodatnih 30 minuta. Po završetku, pH ili smeša je podešena na 8 dodavanjem zasićenog vodenog NaHCO3 (1 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 × 5 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 ml), osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je razblažen sa MeOH (0,5 ml) i dodat je NH3·H2O (0,5 ml) i smeša je mešana na 20°C tokom 30 minuta. Smeša je prečišćena prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18 150*30 mm*4um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN];B%: 15%-45%,10,5 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (2,68 mg, 3,99 umol) kao bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 610,5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,22 (s, 1H), 7,68 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,45 - 6,35 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,09 (br s, 1H), 4,71 - 4,60 (m, 1H), 4,42 - 4,27 (m, 3H), 4,17 (br d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,01 (br d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,78 - 3,31 (m, 5H), 3,23 - 3,03 (m, 2H), 3,02 - 2,75 (m, 4H), 2,71 (s, 3H), 2,66 - 2,57 (m, 1H), 2,27 - 2,12 (m, 1H), 2,10 - 2,03 (m, 3H). ES+APCI MS m/z 610,1 [M+H]<+>.

PRIMER 150

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak A: terc-butil 4-[7-benzil-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (500 mg, 1,04 mmol), (2R)-1/(dimetilamino)propan-2-ol (214 mg, 2,07 mmol natrijum terc-butoksid (298 mg, 3,11 mmol) u toluenu (20 ml) je dodat BINAP (129 mg, 207 umol) i Pd2(dba)3 (94,8 mg, 104 umol) i smeša je prskana azotom, a zatim mešana na 90°C tokom 5 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (100 ml) i vodom (100 ml), a organski sloj je odvojen i osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš hromatografijom obrnute faze [voda (0,1% voda mravlje kiseline)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (5 ml) i ekstrahovane sa 10% MeOH/DCM (2 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (300 mg, 480 umol) ES+APCI MS m/z 550,4 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metiletoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,1 g, 2,00 mmol)

2 4

u MeOH (10 ml) je dodat rastvor NH3 (792 mg, 46,5 mmol) u MeOH (3,96 g, 123,56 mmol, 5 ml), a zatim 10% Pd/C (500 mg). Smeša je mešana na 40°C tokom 12 sati pod H2 (15 psi). Reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do suva da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (756 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 460,3 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metiletoksi]-7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoata (304 mg, 990 umol), terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metiletoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 761 umol), [2-(2-aminoetil) fenil]-hloro-paladijum, dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfan (84,4 mg, 114 umol) i Cs2CO3 (620 mg, 1,90 mmolin toluen (10 ml) su pročišćeni sa N23 puta i smeša je mešana na 70°C tokom 16 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je sipana u H2O (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (50 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen flešom obrnute faze [voda (0,1% mravlje kiseline)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 303 umol). ES+APCI MS m/z 686,4 [M+H]<+>.

2

Korak D: [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 306 umol) u dihlorometanu (300 ul) je dodat TFA (523 mg, 4,59 mmol, 340 ul) i smeša je mešana na 15°C tokom 2 sata.

Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio [4-[4-[3/(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (214 mg, 305 umol). ES+APCI MS m/z 586,4 [M+H]<+>.

Korak E: [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: U smešu [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (214 mg, 305 umol, TFA) i DIEA (395 mg, 3,06 mmol, 532 ul) u dihlorometanu (5,00 ml) ohlađen na -40°C dodat je rastvor prop-2-enoil prop-2-enoata (38,6 mg, 305 umol) u dihlorometanu (1,00 ml) u atmosferi azota. Smeša je zagrejana do 0°C i mešana 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1%

2

trifluorosirćetna kiselina)\acetonitril] da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2- dimetilpropanoat (100 mg, 156 umol).

ES+APCI MS m/z 640,7 [M+H]<+>.

Korak F: 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (90 mg, 141 umol) u THF (500 ul) ohlađen na 0°C je dodat NaOH (2 M, 281,34 ul) i smeša je mešana na 15°C tokom 16 sati. pH smeše je podešen na 7 dodavanjem 20% rastvora mravlje kiseline. Vodeni rastvor je zatim ekstrahovan dihlorometanom (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN]; B%: 7%-37%, 10 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (5 mg, 8,82 umol, 6,27% prinos, 98% čistoća) ES+APCI MS m/z 556,3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ = 8,54 (br s, 0,6 H), 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,30 - 7,21 (m, 1H), 6,91 - 6,72 (m, 3H), 6,29 (br d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,48 (br s, 1H), 5,26 - 4,96 (m, 1H), 4,57 (br s, 1H), 4,24 - 4,09 (m, 4H), 3,74 - 3,54 (m, 1H), 3,48 (m, 2H), 3,22 (m, 2H), 3,10 - 2,86 (m, 5H), 2,78 (br d, J = 14,4 Hz, 1H), 2,53 (br s, 6H), 1,37 (dd, J = 2,0, 6,4 Hz, 3H).

PRIMER 151

2

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

(2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8? -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril je pripremljen prema Primeru 150 zamenom 1-bromonaftalena za (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat u koraku C i izostavljajući korak F. ES+APCI MS m/z 540,3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 8,51 (s, 1H), 8,26 - 8,19 (m, 1H), 7,90 -7,84 (m, 1H), 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53 - 7,47 (m, 2H), 7,46 - 7,39 (m, 1H), 7,25 - 7,18 (m, 1H), 6,82 (br s, 1H), 6,30 (br d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,62-5,53 (m, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,70 - 4,39 (m, 1H), 4,26 - 4,11 (m, 4H), 3,94 - 3,59 (m, 1H), 3,48 - 3,34 (m, 2H), 3,28-3,18 (m, 3H), 3,13 - 2,92 (s, 5H), 2,79 - 2,61 (s, 6H), 1,48 (dd, J = 2,0, 6,0 Hz, 3H).

PRIMER 152

2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

2

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metiletoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il- indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,50 g, 1,09 mmol), 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (482 mg, 1,63 mmol), t-BuONa (314 mg, 3,26 mmol) i [2-(2-aminoetil)fenil]-hloro-paladijum;dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfan (80,4 mg, 109 umol) u toluenu (30 ml) je mešan na 70°C tokom 10 sati. Smeša je razblažena vodom (10 ml) i vodeni sloj ekstrahovan etil acetatom (3 × 20 ml). Organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom natrijum hlorida (30 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (mravlja kiselina, 0,1%)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat (0,40 g, 522 umol, 48,0% prinosa) kao žuta čvrsta supstanca.

ES+APCI MS m/z 674,3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,03 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,31 - 7,27 (m, 2H), 5,68 (dd, J = 2,4, 9,6 Hz, 1H), 5,31 (br s, 1H), 4,61 (br s, 1H), 4,28 (s, 2H), 4,08 - 3,94 (m, 3H), 3,86 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,79 - 3,71 (m, 1H), 3,52 (br t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,24 (br d, J = 12,8 Hz, 2H), 3,04 - 2,91 (m, 1H), 2,87 - 2,67 (m, 5H), 2,65 - 2,47 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,32 (br s, 6H), 2,17 (br d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,09 (br s, 1H), 1,77 (br t, J = 10,8 Hz, 3H), 1,52 (s, 9H), 1,36 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

2

Korak B: 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il dodat je -indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,38 g, 564 umol) u dihlorometanu (10 ml) TMSOTf (752 mg, 3,38 mmol) i 2,6-dimetilpiridin (725 mg, 6,77 mmol) na 0°C i smeša je mešana na 10°C tokom 1 sata. Smeša je ugašena dodavanjem metanola (0,10 ml) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom reverzne faze [voda (mravlja kiselina,

0,1 %)/acetonitril]. Sakupljene frakcije su kombinovane i pH je podešen na pH > 7 dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i vodeni sloj ekstrahovan sa dihlorometanom/metanolom (10/1) (3 × 10 ml). Ekstrakti su isprani zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi] -7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il ]acetonitril (0,30 g, sirov) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 574,1 [M+H]<+>.

Korak C: 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-

2

etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il))-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,20 g, sirov) i TEA (176 mg, 1,74 mmol, 243 uL) u dihlorometanu (1,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (44,0 mg, 349 umol) na 0°C i reakcija je mešana na 0°C tokom 0,5 h. Smeša je ugašena dodavanjem metanola (0,10 ml) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (mravlja kiselina, 0,1%)/acetonitril].

Sakupljene frakcije su kombinovane i pH je podešen na pH > 7 dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom/metanolom (10/1) (3 × 5,00 ml). Ekstrakti su isprani zasićenim rastvorom natrijum hlorida (1 × 10 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil- etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (0,10 g, 127 umol, dva koraka 36,6% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 628,6 [M+H]<+>.

Korak D: 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: Smeša 2-[4-(2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (40 mg, 63,7 umol) i TsOH (1,10 mg, 6,37 umol) u acetonitrilu (3 ml) je mešano na 90°C tokom 1 sata. Smeša je ugašena dodavanjem zasićenog natrijum bikarbonata (2 ml) na 0°C i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, dihlorometan/metanol = 5/1). Sakupljene željene frakcije su koncentrovane pod vakuumom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; mobilna faza: [voda (10 mm NH4HCO3)-ACN]; B%: 35%-65%, 3 min) i (kolona: Boston Green ODS 150*305u;

2 1

mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN]; B%: 15% - 45%, 10 min). Željene frakcije su spojene i liofilizovane da bi se dobio 2-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (2,99 mg, 5,50 umol).

ES+APCI MS m/z 544,5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,36 (br s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,29 (br s, 1H), 7,24 - 7,20 (m, 1H), 6,62 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 6,47 - 6,24 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,50 (br s, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,60 (br s, 1H), 4,31 (s, 2H), 4,12 (br d, J = 14,4 Hz, 1H), 3,99 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,55 (br t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,42 - 3,29 (m, 1H), 3,10 (br s, 1H), 3,00 - 2,68 (m, 7H), 2,49 (s, 6H), 2,43 (s, 3H), 1,39 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

PRIMER 153

2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-

2 2

(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 773 umol) i 3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il] propan-1-ol (219 mg, 1,39 mmol) u toluenu (10 ml) je dodat tBuONa (111 mg, 1,16 mmol) pod N2. Reakciona smeša je mešana na 18°C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc= 3:1 do 0:1 zatim EA: MeOH=50:1 do 10:1) nakon čega sledi reverzna fleš hromatografija (50% do 90% MeCN u vodi, bazno stanje) da se dobije terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2/dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 156 umol, 20,5% prinos, 97,9% čistoće) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,19 - 8,12 (m, 1H), 7,83 - 7,77 (m, 1H), 7,55 - 7,43 (m, 2H), 7,29 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,64 (br s, 1H), 4,42 - 4,35 (m, 3H), 4,26 (br d, J = 5,2 Hz, 2H), 4,12 - 4,03 (m, 3H), 3,96 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 1,6, 7,6 Hz, 1H), 3,50 (br s, 2H), 3,31 (br d, J = 13,6 Hz, 3H), 3,11 - 2,97 (m, 2H), 2,94 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 2,89 - 2,69 (m, 5H), 2,54 (br d, J = 9,8 Hz, 1H), 2,00 - 1,92 (m, 2H), 1,90 - 1,83 (m, 1H), 1,73 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 1,53 (s, 9H), 1,41 (s, 9H)

Korak B: 4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: Rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 162 umol) u TFA (370 mg, 3,24 mmol, 240 ul) je mešana na 18°C tokom 1 sata. Po završetku, rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-

2

il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (140 mg, 161 umol, 99,5% prinos, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak C: [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,1S)-2-oksa-5-azabiciklo[2,2. 1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5 -il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (140 mg, 161 umol) i DIEA (167 mg 1,29 mmol, 225 ul) u DCM (2 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (30,5 mg, 242 umol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 18°C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (5 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen obrnutim flešom (osnovno stanje, MeCN/NH3•H2O u vodi: 50% do 80%) da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2- oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (60 mg, 86,5 umol, prinos 53,6%).<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,22 - 8,13 (m, 1H), 7,84 - 7,78 (m, 1H), 7,56 - 7,45 (m, 2H), 7,31 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,62 (br s, 1H), 6,47 - 6,37 (m, 1H), 5,92 - 5,79 (m, 1H), 5,24 - 4,88 (m, 1H), 4,75 (br s, 1H), 4,45 - 4,36 (m, 3H), 4,31 - 4,20 (m, 2H), 4,15 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,10 - 4,01 (m, 2H), 3,64 (dd, J = 1,6, 7,6 Hz, 2H), 3,51 (br s, 2H), 3,38 (br s, 2H), 3,14 (br s, 1H), 3,08 - 2,73 (m, 7H), 2,56 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 2,03 - 1,93 (m, 2H), 1,88 (br d, J = 9,6 Hz, 1H), 1,78 - 1,70 (m, 1H), 1,61 (s, 9H), 1,43 (s, 9H).

2 4

Korak D: 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (60 mg, 86,5 umol) u THF (0,5 ml) je dodat NaOH (2 M, 600 ul). Reakciona smeša je mešana na 18°C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je zakiseljena dodavanjem 4 kapi HCOOH (20% u vodi) i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (5 × 8 ml).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN];B%: 0%-40%,10 min) da bi se dobio 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2,2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (19,8 mg, 28,3 umol, 32,8% prinosa, 93,8% čistoće, so mravlje kiseline) je dobijeno kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 610,5 [M+H]<+>.

PRIMER 154

2-[4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

2

Korak A: terc-butil2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3 g, 7,42 mmol), 1-bromonaftalen (3,07 g, 14,8 mmol, 2,06 ml) i Cs2CO3 (7,25 g, 22,2 mmol) u toluenu (60 ml) je dodat XPhos palladacicle 3. gen. (628 mg, 742 umol) pod N2 i suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je zagrejana do 70°C i mešana na 70°C tokom 10 sati. Dobijena smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa EtOAc (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 50:1 do 3:1) dajući terc-butil2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (3,55 g, 6,02 mmol, prinos 81,2%, čistoća 90,0%) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 531,4 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (2,95 g, 5,56 mmol) u DCM (60 ml) je dodat m-CPBA (1,13 g, 5,56 mmol, 85,0% čistoće) na 0°C i mešan na 0°C tokom 1 sata.

Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog Na2S2O3 (20 ml) na 0°C i slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je razblažen vodom (20 ml) i ekstrahovan sa

2

EtOAc (60 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1% mravlja kiselina) = 100 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,7 g, 2,80 mmol, 50,3% prinos, 90,0% čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 574,4 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (300 mg, 549 umol) i 3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propan-1-ol (160 mg, 1,02 mmol) u toluenu (6 ml) je dodat tBuONa (79,1 mg, 823 umol). Reakciona smeša je mešana na 18°C tokom 30 minuta. Po završetku, reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (PE:EA=3:1 do 0:1, zatim EA:MeOH=50:1 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4- [7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 249 umol, 45,3% prinos, 79,6% čistoće) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 640,5 [M+H]<+>.

2

Korak D: 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril: Reakciona smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 313 umol) u TFA (770 mg, 6,75 mmol, 500 ul) je mešano na 18°C tokom 1 sata. Po završetku, rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (271 mg, sirovo) kao smeđe ulje.

Korak E: 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (271 mg, 502 umol) i DIEA (323 mg, 2,50 mmol, 0,435 ml) u DCM (6 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (60 mg, 476 umol) na 0°C i reakciona smeša je mešana na 18°C tokom 1 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena dodavanjem kapi vode i prečišćena hromatografijom pomoću silika gelu (PE: EtOAc=3:1 do 0:1) zatim prep HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 33%-63%,12min)

2

da bi se dobio 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (23,8 mg, 40,0 umol, 7,97% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

ES+APCI MS m/z 594,5 [M+H]<+>.

PRIMER 155

(S)-1-(4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U smešu [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (4,15 g, 36,0 mmol, 4,28 ml) u THF (100 ml) dodat je NaH (2,16 g, 54,06 mmol, 60% čistoće) u porcijama na 0°C. Nakon što je smeša mešana na 0°C tokom 1 sata, rastvor terc-butil4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il Dodan je)piperazin-1-karboksilat (8,0 g, 18,02 mmol) u THF (60 mL) i smeša je mešana na 70°C tokom 11 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je sipana u vodeni rastvor NH4Cl (160 ml), a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat/metanol=10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-

2

pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (4,9 g, 8,70 mmol, 48,3% prinos, 92,8% čistoća) kao siva čvrsta materija. ES+APCI MS m/z 523,2 [M+H]<+>

Korak B: terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi] -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat: Na smešu terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (2,20 g, 4,21 mmol) u MeOH (30 ml) je dodat Pd(OH)2/C (700 mg, 10% čistoće) i smeša je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta i reakcija je mešana na 40°C tokom 12 sati pod H2 (15 Psi). Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan da bi se dobio terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,80 g, 4,02 mmol, 95,6% prinos, 96,7% čistoća) kao crna čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 433,1 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Na smešu terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 462 umol) i 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (204 mg, 694 umol) u toluenu (4 ml) je dodat Pd2(dba)3 (63,5 mg, 69,4 umol), RuPhos (43,2 mg, 92,5 umol) i Cs2CO3 (301 mg, 925 umol) i smeša je mešana na 110°C tokom 12 sati pod N2. Nakon završetka, reakciona smeša je podeljena između vode (10 ml) i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa EtOAc (2 × 10 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=5/1 do etil acetat/MeOH=10/1) da bi se dobio terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi] -7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (240 mg, 310 umol, prinos 67,1%, čistoća 83,6%) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 647,6 [M+H]<+>.

Korak D: 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin: U smešu terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 371 umol) u DCM (1 ml) je dodat TFA (1,54 g, 13,5 mmol, 1 ml) i smeša je mešana na 15°C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1 -il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (250 mg, 309 umol, 83,4% prinos, 85,5% čistoća, 2TFA) kao braon čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 463,4 [M+H]<+>.

Korak E: 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-

1

jedan: U smešu 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (250 mg, 362 umol, 2TFA) u DCM (2 ml) je dodat DIEA (702 mg, 5,43 mmol, 946 ul) i smeša je ohlađena na -50°C. Prop-2-enoil prop-2-enoat (36,5 mg, 289 umol) je dodat u porcijama u reakciju na -50°C i smeša je mešana na -50°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (1 ml) i smeša je koncentrovana. Ostatak je stavljen u DCM (10 ml) i organski deo je ispran sa H2O (2 × 8 ml).

Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen prep-HPLC ((Instrument: gx-1; Kolona: Phenomenex Gemini C18 250*50 mm*10 mm; uslovi: voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN; Početak B: 32; Kraj B: 62; Vreme gradijenta (min): 12; 100%B Vreme zadržavanja (min): 2; Brzina protoka (ml/min): 25) da bi se dobio 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpiroildin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (48,6 mg, 92,9 umol, 25,7% prinos, 98,7% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 517,5 [M+H]<+>.

PRIMER 156

(S)-1-(4-(2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 155 zamenom 4-bromo-1-tetrahidropirana-2-il-5-(trifluorometil)indazol (Intermedijer 60) za 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-ilindazol u Koraku C. ES+APCI MS m/z 571,4 [M+H]<+>.

PRIMER 157

2

S)-1-(4-(7-(5-metoksi-1H-indazol-4-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(7-(5-metoksi-1H-indazol-4-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 155 zamenom 4-bromo-5-metoksi-1-tetrahidropiran-2-il- indazol za 4-bromo-5-metil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol u Koraku C. ES+APCI MS m/z 533,4 [M+H]<+>.

PRIMER 158

1-[4-[7-(2-izopropilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

Korak A: terc-butil 4-[7-(2-izopropilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: tercbutil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 462 umol), 1-bromo-2-izopropil-benzen (120 mg, 601 umol), Cs2CO3 (452 mg, 1,39 mmol) i XPHOS PALLADACICLE 3. GEN. (78,3 mg, 92,5 umol) u toluenu (4,00 ml) je degaziran sa N2 i zatim zagrevan na 100°C tokom 10 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiran sa EtOAc/MeOH= 50/1 do 5/1 da bi se dobio terc-butil 4-[7-(2-izopropilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (84,6 mg, 134 umol, 28,9% prinos, 87,0% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 551,2 [M+H]<+>.

1-[4-[7-(2-izopropilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 155 zamenom terc-butil 4-[7-(2-izopropilfenil)-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat za tercbutil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-metil-1-tetrahidropiran-2-ilindazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat u koraku D. ES+APCI MS m/z 505,6 [M+H]<+>.

PRIMER 159

(S)-1-(4-(2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 155 zamenom 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena za 4-

4

bromo-5-metil-1- tetrahidropiran-2-il-indazol u Koraku C. ES+APCI MS m/z 531,5 [M+H]<+>.

PRIMER 160

1-(4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-(3-(piperidin-1-il)propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: benzil 4-[2-metilsulfanil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3,15 g, 7,88 mmol), 2-[(4-bromo-5-metil-indazol-1-il)metoksi]etil-trimetil-silan (3,50 g, 10,2 mmol), Cs2CO3 (6,42 g, 19,70 mmol), Pd2(dba)3 (1,08 g, 1,18 mmol) i RuPhos (735 mg, 1,58 mmol) u toluenu (50 ml) je degazirana i sa N23 puta i smeša je mešana na 90°C tokom 10 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (100 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem 1→33% EtOAc/petroleum etra da bi se dobio benzil 4-[2-metilsulfanil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,30 g, 2,93 mmol, 37,1% prinos). ES+APCI MS m/z 660,3 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsilil etoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U mešani rastvor benzil 4-[2-metilsulfanil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,30 g, 3,49 mmol) u DCM (20 ml) je dodat m-CPBA (601 mg, 3,49 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C 1 sat u atmosferi N2. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem Na2S2O3 (10 ml) na 0°C, a zatim razblažena vodom (100 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem 1→10 % MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsilil etoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,00 g, 2,84 mmol, 81,4% prinos). ES+APCI MS m/z 676,3 [M+H]<+>.

Korak C: benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-2-[3-(1-piperidil)propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U smešu benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 739 umol) i 3-(1-piperidil)propan-1-ol (211 mg, 1,48 mmol) u THF (10 mL) je dodat t-BuONa (213 mg, 2,22 mmol) u porcijama i smeša je mešana na 20°C tokom 1 sata u atmosferi N2. Smeša je ohlađena na 0°C i dodat je HCl (2M) do pH~7. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen flešom obrnute faze koristeći vodu 5→95% 0,5% TFA/voda/acetonitril kao eluent da bi se dobio benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-2-[3-(1-piperidil)propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 385 umol, 52,1% prinos). ES+APCI MS m/z 755,4 [M+H]<+>.

Korak D: 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)-2-(3-(piperidin-1-il)propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin: U rastvor benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil) indazol-4-il]-2-[3-(1-piperidil)propoksi]-6,8-dihidro-5H pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 397 umol) u MeOH (20 ml) je dodat HCl/MeOH (4 M, 1,99 ml) i Pd(OH)2 (200 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 7-(5-metil-lH-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)-2-(3-(piperidin-1-il) propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin (250 mg, 360 umol, 90,7% prinos).

Korak E: 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[3-(1-piperidil)propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)-2-(3-(piperidin-1-il)propoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin (250 mg, 360 umol, 2HCl) i DIEA (465 mg, 3,60 mmol, 629 ul) u DCM (8,00 ml) je dodat rastvor prop-2-enoil prop-2-enoat (36,3 mg, 288 umol) u DCM (2,00 mL) na -40°C u atmosferi azota i reakcija je mešana 1 sat. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem NaHCO3 (500 ul) na -40°C, a zatim razblažena vodom (10 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (10 ml). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 1/0 do 5/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10 um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN]; B%: 8%-28%, 10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[3-(1-piperidil)propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (16,0 mg, 29,1 umol, 8,07% prinos). ES+APCI MS m/z 545,3 [M+H]<+>.

PRIMER 161

1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[(1-metilpirolidin-3-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[(1-metilpirolidin-3-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 160 zamenom (1-metilpirolidin-3-il)metanola za 3-(1-piperidil)propan-1-ol u Koraku C. ES+APCI MS m/z 517,4 [M+H]<+>.

PRIMER 162

1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

Korak A: benzil 4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša (2R)-1-(dimetilamino)propan-2-ola (183 mg, 1,78 mmol) (8,00 mL), benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 592 umol) i NaOtBu (114 mg, 1,18 mmol) u toluenu su mešani na 15°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko Al2O3 (petroleum etar/etil acetat 10/1 do 0/1) da bi se dobio benzil 4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 352 umol).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,08 (s, 1H), 7,46 - 7,39 (m, 5H), 7,38 -7,33 (m, 2H), 5,76 (s, 2H), 5,43 - 5,33 (m, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 3,72 -3,67 (m, 4H), 3,64 - 3,56 (m, 4H), 3,55 - 3,47 (m, 4H), 2,87 - 2,80 (m, 2H), 2,74 (dd, J = 6,8, 12,8 Hz, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,47 - 2,40 (m, 1H), 2,36 (s, 6H), 1,42 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,98 - 0,92 (m, 2H), 0,00 (s, 9H).

Korak B: terc-butil 4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metiletoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 280 umol) i (Boc)2O (122 mg, 559 umol, 129 ul) u MeOH (6,00 ml) je dodat 10% Pd/C (80 mg) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25°C tokom 1 sata i na 35°C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat koncentrovan pod vakuumom da bi se dobila smeša tercbutil 4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat i (2R)-N,N-dimetil-2-[[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksi]propan-1-amin kao smeša (110 mg). ES+APCI MS m/z 681,3 [M+H]<+>.

Korak C: (2R)-N,N-dimetil-2-[[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propan-1-amin: (2R)-N,N-dimetil-2-[[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propan-1-amin (TFA) i [4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-5-metil-indazol-1-il]metanol. Rastvor od 110 mg smeše terc-butil 4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-

1

[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat i (2R)-N,N-dimetil-2-[[7-[5]-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propan-1-amin u TFA (3,08 g, 27,0 mmol) je mešan na 30°C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 260 mg smeše (2R)-N,N-dimetil-2-[[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1 -il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propan-1-amin i [4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-5-metil-indazol-1-il]metanol. ES+APCI MS m/z 451,3 [M+H]<+>.

Korak D: 1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor od 260 mg smeše (2R)-N,N-dimetil-2-[[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propan-1-amin i [4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]- 4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-5-metil-indazol-1-il]metanol u DCM (1,00 ml) ohlađen do -50°C je dodat DIEA (594 mg, 4,59 mmol), a zatim prop-2-enoil prop-2-enoat (18,0 mg, 143 umol) u kapima i smeša je mešana na između -50°C do -40°C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 100 mg smeše 1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H- indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on i 1-[4[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[1-(hidroksimetil)-5-metil-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. ES+APCI MS m/z 505,4 [M+H]<+>.

11

Korak E: 1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: Smeša od 100 mg 1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on i 1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-[1-(hidroksimetil)-5-metilindazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on u THF (22 ml) i vodi (550 ul) je dodat NaOH (44,8 mg, 1,12 mmol) i smeša je mešana na 10°C tokom 3 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen vodom (1 ml) i ekstrahovan sa DCM (3 × 5 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18 150*25* 10 um; mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN];B%: 10 %-40 %,12 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (16,2 mg, 29,2 umol, 99,0% čistoće, Mravlja kiselina) kao prljavo bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 505,2 [M+H]<+>.

PRIMER 163

1-(4-(2-(2-(dietilamino)etoksi)-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

12

Korak A: benzil 4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U smešu benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 739 umol) i 2-(dietilamino)etanol (173 mg, 1,48 mmol, 197 uL) u THF (10 mL) je dodat t-BuONa (213 mg, 2,22 mmol), i smeša je mešana na 20°C tokom 1 sata u atmosferi N2. Smeša je ohlađena na 0°C i dodata je HCl (2 M) do pH~7. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem 0 → 10 % MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio nečist materijal koji je dalje prečišćen hromatografijom reverzne faze da bi se dobio benzil 4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[5- metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (220 mg, 295 umol, 39,9 % prinos).

ES+APCI MS m/z 729,3 [M+H]<+>.

Korak B: N,N-dietil-2-[[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]etanamin: U rastvor

1

benzil 4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 164 umol) u MeOH (10 ml) je dodat Pd(OH)2 (99,4 mg, 10% čistoće) i HCl/MeOH (4 M, 823,05 ul) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana in vacuo da bi se dobio N,N-dietil-2-[[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]etanamin (105 mg, 157,24 umol). ES+APCI MS m/z 595,4 [M+H]<+>.

Korak C: 1-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu N,N-dietil-2-[[7-[5-metil-1-(2-trimetilsilil etoksimetil)indazol-4-il]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]etanamin (105 mg, 158 umol, 2 HCl) i DIEA (204 mg, 1,58 mmol, 276 ul) u DCM (8 ml) na -40°C je dodat rastvor prop-2-enoil prop-2-enoata (15,9 mg, 126,4 umol) u DCM (2 ml) u atmosferi azota i reakcija je mešana 1 sat. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem NaHCO3 (500 uL) na -40°C, a zatim razblažena vodom (10 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (10 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem 0→20 % MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol- 4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (60,0 mg, 71,2 umol, 45,0 % prinosa). ES+APCI MS m/z 649,3 [M+H]<+>.

14

Korak D: 1-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 1-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (50 mg, 77,0 umol) u DCM (500 uL) je dodat TFA (175 mg, 1,54 mmol, 114 ul). Smeša je mešana na 15 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini C18 250*50 mm*10 um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 32 %-62 %, 12 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (16,0 mg, 30,2 umol, 39,2% prinos). ES+APCI MS m/z 519,3 [M+H]<+>.

PRIMER 164

1-(4-(7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-(2-(piperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)etanon

1

Korak A: benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksi metil)indazol-4-il]-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 739 umol) i 2-(1-piperidil)etanol (191 mg, 1,48 mmol, 197 ul) u toluenu (20 ml) je dodat t-BuONa (213 m, 2,22 mmol).

Smeša je mešana na 20 °C 1 sat u atmosferi N2. Smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je HCl (2 M) do pH~7. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem 0→10 % MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksi metil)indazol-4-il]-2-[2- (1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 404 umol, 54,7 % prinos). ES+APCI MS m/z 741,4 [M+H]<+>.

Korak B: 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-2-r2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin: Rastvor benzil 4-[7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil) indazol-4-il]-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (250 mg, 337 umol) u TFA (10 mL) je mešan na 80°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 7-(5-metil-lH-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (200 mg, 283 umol, 84,1% prinos). ES+APCI MS m/z 477,3 [M+H]<+>.

1

Korak C: 1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-piperazin-1-il-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin (200 mg, 283 umol, 2TFA) i DIEA (366 mg, 2,84 mmol, 495 ul) u DCM (8 ml) na -40°C je dodat rastvor prop-2-enoila prop-2-enoat (28,6 mg, 227 umol) DCM (2 ml) u atmosferi azota i reakcija je mešana 1 sat. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem NaHCO3 (500 ul) na -40°C, a zatim razblažena vodom (10 ml) i DCM (10 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini C18250*50 mm*10 mm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 30% - 60%, 12 min).1-[4-[7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (6,00 mg, 11,1 umol, 3,94% prinos, 99,0% čistoća). ES+APCI MS m/z 531,4 [M+H]<+>.

PRIMER 165

1-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

1

Korak A: 3-metoksinaftalen-1-ol: U rastvor naftalen-1,3-diola (20 g, 125 mmol) u MeOH (150 mL) dodata je HCl/MeOH (4 M, 250 mL) na 0°C.

Mešavina je zagrejana do 18 °C i mešana 36 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom pomoću kolone preko silika gela (petrolejski eter/etil acetat 100/1 do 1/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 3-metoksinaftalen-1-ol (11 g, 62,5 mmol, 50,1% prinos, 99% čistoća) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.

ES+APCI MS m/z 175,1 [M+H]<+>.

Korak B: 4-bromo-3-metoksi-naftalen-1-ol: U rastvor 3-metoksinaftalen-1-ola (0,50 g, 2,87 mmol) u THF (10 mL) dodat je rastvor NBS (562 mg,

3,16 mmol) u THF (3,00 mL) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena sa H2O (5 mL), ekstrahovana dihlorometanom (3 × 10 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim natrijum hloridom (1 × 20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etar

1

acetat = 3/1) da bi se dobio 4-bromo-3-metoksi-naftalen-1-ol (0,43 g, 1,43 mmol, 49,7 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 253 [M+H]<+>.

Korak C: 4-bromo-2-fluoro-3-metoksi-naftalen-1-ol: U rastvor 4-bromo-3-metoksi-naftalen-1-ola (4,00 g, 15,8 mmol) u acetonitrilu (20 mL) dodat je rastvor 1-(hlorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo [2.2.2] oktan;ditetrafluoroborat (6,72 g, 19,0 mmol) u acetonitrilu (20 mL) na -40°C. Posle mešanja na -40°C tokom 1 sata i 10°C tokom 3 sata, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etar acetat = 3/1) da bi se dobio 4-bromo-2-fluoro-3-metoksi-naftalen-1-ol (4,00 g, 10,6 mmol, 67,2 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 271,0 [M+H]<+>.

Korak D: 2-fluoro-3-metoksi-naftalen-1-ol: Smeša 4-bromo-2-fluoro-3-metoksi-naftalen-1-ola (2,00 g, 7,38 mmol) i 10 % Pd/C (0,01 g) u etil acetatu (20 mL) je mešana na 10°C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-fluoro-3-metoksi-naftalen-1-ol (1,60 g, sirovo) kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 193,0 [M+H]<+>.

Korak E: (2-fluoro-3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat: U rastvor 2-fluoro-3-metoksi-naftalen-1-ola (1,60 g, sirovo) i TEA (1,85 g, 18,3 mmol, 2,55 mL) u dihlorometanu (30 mL) dodat je trifluorometilsulfonil trifluorometan 2,35 g, 8,33 mmol, 1,37 ml) na -78 °C tokom 1 sata. Smeša je ugašena zasićenim amonijum hloridom (30 ml), ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 ml), isprana zasićenim natrijum hloridom (1 x 50 ml), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etar acetat = 3/1) da bi se dobio (2-fluoro-3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,10 g, 2,07 mmol, dva koraka 24,9% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 324,9 [M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (0,40 g, 865 umol), (2-fluoro-3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (561 mg, 1,73 mmol), RuPhos

1

(80,7 mg, 173 umol), Pd2(dba)3 (79,2 mg, 86,5 umol) i t-BuONa (249 mg, 2,59 mmol) u toluenu (10 ml) je mešana na 110 °C tokom 5 sati pod N2. Smeša je razblažena vodom (10 ml), ekstrahovana etar acetatom (3 × 10 ml). Ekstrakti su isprani zasićenim natrijum hloridom (1 × 20 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,35 g, 495 umol, 57,2 % prinos) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 637,1 [M+H]<+>.

Korak G: 4-[3-[[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2 -il]oksi]propil]morfolin: Smeša terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,40 g, 628 umol) i TFA (1,07 g,

9,42 mmol, 698 uL) u dihlorometanu (0,70 mL) su mešani na 10 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-[3-[[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi]propil]morfolin (0,41 g, sirov, TFA) kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 537,5 [M+H]<+>.

Korak H: 1-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 4-[3-[[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin (0,41 g, sirov, TFA so) i TEA (635 mg, 6,27 mmol, 873 uL) u dihlorometanu (5,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (79,1 mg, 627 umol) na -40 °C. Posle mešanja na -40 °C tokom 0,5 h, smeša je ugašena metanolom (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, dihlorometan/metanol = 10/1) da bi se dobio 1-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (0,25 g, 411 umol, dva koraka 65,5 % prinos) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 591,0 [M+H]<+>.

Korak I: 1-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 1-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-

2

d] pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (0,20 g, 339 umol) u dihlorometanu (4,00 mL) je dodat BBr3 (424 mg, 1,69 mmol, 163 uL) na -78 °C tokom 0,5 sata i mešano na 0°C tokom 2 sata. Smeša je ugašena zasićenim natrijum bikarbonatom (5 mL) na -78°C i mešana na 0°C tokom 0,5 h. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 × 10 ml) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10 um; mobilna faza: [voda (0,225% mravlja kiselina)-ACN];B%: 13%-45%,7min) da bi se dobio 1-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (35,2 mg, 60,8 umol, 17,9% prinos, 99,4% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 577,0[M+H]<+>.

PRIMER 166

1-[4-[7-(6-hidroksi-2-metil-1,3-benzotiazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

21

Korak A: 4-triizopropilsililoksianilin: U rastvor 4-aminofenola (5,00 g, 45,8 mmol, 7,14 mL) u DCM (50,0 mL) dodat je imidazol (4,06 g, 59,6 mmol). TIPSCl (13,3 g, 68,7 mmol, 14,7 mL) je dodat u kapima u smešu. Smeša je mešana na 15 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen automatizovanim sistemom fleš hromatografije (PE/EA 100/1 do 3/1) da bi se dobio 4-triizopropilsililoksianilin (9,46 g, 33,9 mmol, 73,9 % prinos, 95,0 % čistoća) kao crno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,74 - 6,71 (m, 1H), 6,71 - 6,69 (m, 1H), 6,60 - 6,58 (m, 1H), 6,58 - 6,55 (m, 1H), 3,66 - 2,98 (m, 2H), 1,28 - 1,16 (m, 3H), 1,11 - 1,06 (m, 18H)

22

Korak B: 2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-anilin: U rastvor 4-triizopropilsililoksianilina (7,30 g, 27,5 mmol) u DCM (73,0 mL) i MeOH (73,0 mL) dodat je Br2 (11,0 g, 68,8 mmol, 3,55 mL) u DCM (5 mL) u kapima na 0°C. Smeša je mešana na 15°C tokom 5 sati. Po završetku, smeša je razblažena rastvorom natrijum sulfita (60 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 × 200 mL). Organski slojevi su osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA 50/1 do 1/1) da bi se dobio 2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-anilin (10,8 g, 23,2 mmol, 84,4% prinos, 90,8% čistoća) kao braon ulje. ES+APCI MS m/z 423,9[M+H]<+>.

Korak C: N-(2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-fenil)acetamid: U rastvor 2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-anilina (10,4 g, 24,6 mmol) i CH3COOH (52 mL) dodat je anhidrid sirćetne kiseline (10,9 g, 107 mmol, 10 mL). Reakciona smeša je mešana na 90°C 1 sat. Po završetku, dodata je voda (100 mL) i DCM (200 mL) i slojevi su razdvojeni. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (100 mL × 2).

Kombinovani ekstrakti su isprani sa 5% Na2CO3 (80 mL), isprani slanim rastvorom (100 mL), osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA 50/1 do 1:1) da bi se dobio N-(2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-fenil)acetamid (7,32 g, 14,2 mmol, 57,6% prinos, 90,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,16 (s, 1H), 7,11 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,28 - 1,24 (m, 3H), 1,12 - 1,09 (m, 18H).

Korak D: N-(2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-fenil)tioacetamid: U rastvor N-(2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-fenil)acetamida (7,22 g, 15,5 mmol) u toluenu (116 mL) dodat je LAVESSONOV REAGENS (3,14 g, 7,76 mmol). Smeša je zagrevana na 110°C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA 100/1 do 1/1) N-(2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksi-fenil)tioacetamid (5,41 g, 8,40 mmol, 54,1% prinos, 74,7% čistoća) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 481,9[M+H]<+>.

Korak E: 4-bromo-2-metil-1,3-benzotiazol-6-ol: CuI (94,2 mg, 494 mmol) je dodat u rastvor N-(2,6-dibromo-4-triizopropilsililoksifenil)tioacetamida (2,38 g, 4,94 mmol), 1,10-fenantrolina (134 mg, 741 mmol) i

2

Cs2CO3 (4,83 g, 14,8 mmol) u DME (48,0 mL). Zatim je reakciona smeša mešana na 80°C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA 50/1 do 0/1) da bi se dobio 4-bromo-2-metil-1,3-benzotiazol-6-ol (1,33 g, 3,54 mmol, 71,7% prinos, 65,0% čistoće) kao smeđe ulje.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,33 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,40 - 3,33 (m, 1H), 2,72 (s, 3H).

Korak F: 6-benziloksi-4-bromo-2-metil-1,3-benzotiazol: U smešu 4-bromo-2-metil-1,3-benzotiazol-6-ola (1,28 g, 5,24 mmol) i K2CO3 (2,17 g, 15,72 mmol) u ACN (26,0 mL) dodat je BnBr (988 mg, 5,76 mmol, 685 uL).

Reakciona smeša je mešana na 45°C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA 200/1 do 10/1) da bi se dobio 6-benziloksi-4-bromo-2-metil-1,3-benzotiazol (1,10 g, 3,13 mmol, 59,7% prinos, 95,0% čistoće) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 336,2 [M+H]<+>.

Korak G: benzil 4-[7-(6-benziloksi-2-metil-1,3-benzotiazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Benzil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 805 umol), 6-benziloksi-4-bromo-2-metil-1,3-benzotiazol (323 mg, 967 umol), RuPhos (75,2 mg, 161 umol), Cs2CO3 (787 mg, 2,42 mmol) i Pd2(dba)3 (73,8 mg, 80,6 umol) u toluenu (16 mL) je mešano na 85°C tokom 16 sati pod N2. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko Al2O3 (PE/EA 10/1 do 0/1) da bi se dobio benzil 4-[7-(6-benziloksi-2-metil-1,3-benzotiazol-4-il)-2 -(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (340 mg, 408 umol, 50,7% prinos, 90,0% čistoće) kao žuto ulje.

ES+APCI MS m/z 750,5[M+H]<+>.

Korak H: 2-metil-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-1,3- benzotiazol-6-ol: U rastvor benzil 4-[7-(6-benziloksi-2-metil-1,3-benzotiazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (160 mg, 213 umol) u MeOH

24

(4 mL) je dodat HCl/MeOH (4 M, 533 uL), a zatim Pd(OH)2/C (80 mg, 533 umol) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40°C tokom 8 sati. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 2-metil-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-1,3-benzotiazol-6-ol (110 mg, 126 umol, 59,2% prinos, 68,7% čistoća, 2 HCl) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 526,2[M+H]<+>.

Korak I: 1-[4-[7-(6-hidroksi-2-metil-1,3-benzotiazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 2-metil-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]- 1,3-benzotiazol-6-ol (110 mg, 184 umol, 2 HCl) i DIEA (143 mg, 1,10 mmol, 193 uL) u DCM (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (18,5 mg, 147 umol) kap po kap na -50°C. Smeša je mešana na -40 - -20 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je ugašena sa MeOH (0,5 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen vodom (2 mL) i ekstrahovan sa DCM (3 × 6 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko Al2O3 (DCM/MeOH 20/1 do 10/1), prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza:

[voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 21 %-51 %,12min) da bi se dobio 1-[4-[7-(6-hidroksi-2-metil-1,3-benzotiazol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (32,4 mg, 55,4 umol, 30,2 % prinos, 99,1 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 580,4[M+H]<+>.

PRIMER 167

1-(4-(7-(5-hidroksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

2

Korak A: 2-bromo-4-metoksianilin: Na -10 °C, u rastvor 4-metoksianilina (100 g, 812 mmol) u THF (3 l) dodat je N-bromosukcinimid (152 g, 853 mmol) u tri porcije i smeša je mešana na istoj temperaturi za 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom pomoću kolone. (petrolejski eter/etil acetat 15/1) da bi se dobio 2-bromo-4-metoksianilin kao

2

crveno ulje (30,58 g, 18,6% prinos).1H NMR (400 MHz, CDCl3) d = 7,01 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,74-6,70 (m, 2H), 3,85-3,74 (m, 2H), 3,73 (s, 3H).

Korak B: 1-(2-amino-3-bromo-5-metoksifenil)-2-hloropropan-1-jedan: U rastvor 2-bromo-4-metoksi-anilina (15,0 g, 74,2 mmol) u 1,1-dihloretanu (220 mL) na 0 °C dodat je bor trihlorid (1,00 M, 89,1 mL), 2-hloropropannitril (9,97). g, 111 mmol) i titanijum tetrahlorid (16,9 g, 89,1 mmol). Smeša je zagrevana na 85 °C tokom 24 sata. Smeša je sipana u led i hlorovodoničnu kiselinu (20 %, 300 mL) na 0 °C, koncentrovana i ostatak je refluksovan 0,5 sata. Ova smeša je bazifikovana na 0 °C sa natrijum hidroksidom (zasićeni vodeni rastvor, 120 mL) dok se ne postigne pH 4, a zatim ekstrahovana etil acetatom (300 mL × 2).

Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (200 mL), osušeni anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (petrol etar/etil acetat/dihlorometan 50/1/1), da bi se dobio 1-(2-amino-3-bromo-5-metoksifenil)-2-hloropropan-1-on kao žuta čvrsta supstanca (18,7 g, 86,3 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) d = 7,37 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,60 (brs, 2H), 5,25 (k, J = 6,4 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 1,74 (d, J = 6,4 Hz, 3H).

Korak C: 7-bromo-5-metoksi-2-metil-1H-indol: U rastvor 1-(2-amino-3-bromo-5-metoksi-fenil)-2-hloro-propan-1-ona (18,7 g, 64,1 mmol) u dioksanu (500 mL) i H2O (50 mL) je dodat NaBH4 (2,67 g, 70,5 mmol) i ova smeša je mešana na 100 °C tokom 15 sati. Smeša je ohlađena, razblažena hlorovodoničnom kiselinom (vod., 0,10 M, 100 ml) i ekstrahovana dihlorometanom (300 ml × 2). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni sa anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (petrol etar/etil acetat 25/1) da bi se dobio 7-bromo-5-metoksi-2-metil-lH-indol kao žuta čvrsta supstanca (7,01 g, 45,6 % prinos). 1H NMR (400 MHz, CDC13) 5 = 7,91 (brs, 1H), 7,03-6,91 (m, 2H), 6,23 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H), 2,46 (s, 3H).

Korak D: terc-butil 4-(7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilata (275 mg, 594 umol) i 7-

2

bromo-5-metoksi-2-metil-lH-indol (130 mg, 540 umol) u 2-metil-2-butanolu (15,0 mL) je dodat tBuONa (104 mg, 1,08 mmol) i hloro(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetilfenil)] paladijum(II) metil-t-butil etar adukt (44,1 mg, 54,0 umol). Ova smeša je mešana na 90°C tokom 8 sati u atmosferi N2. Smeša je filtrirana, koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (dihlorometan/metanol 10/1), da bi se dobio terc-butil 4-(7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat kao žuto ulje (131 mg, 36,8 % prinos). ES+APCI MS m/z 622,4[M+H]<+>.

Korak E: 4-[3-((7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin: U rastvor na 0°C terc-butil 4-[7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (131 mg, 211 umol) u dihlorometanu (10 mL) je u kapima dodata trifluorosirćetna kiselina (2,00 mL) i reakcija je mešana na 15 °C tokom 3 sati. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. (126 mg sirovog proizvoda). ES+APCI MS m/z 522,4[M+H]<+>.

Korak F: 1-(4-(7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: U rastvor na -60°C 4-[3-[[7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin (74 mg, 116 umol, so trifluorosirćetne kiseline) u dihlorometanu (5 mL) dodat je diizopropiletilamin (45,1 mg, 349 umol, 60,8 ul) i smeša je mešana na istoj temperaturi 10 min. Smeša je ugašena limunskom kiselinom (vod., 1,00 mL), ekstrahovana dihlorometanom (10 mL × 2), isprana slanim rastvorom (15 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC da bi se dobio 1-(4-(7-(5-metoksi-2-metil-lH-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on kao žuta čvrsta supstanca (31 mg, 39,2 % prinos). ES+APCI MS m/z 576,4[M+H]<+>.

Korak G: 1-(4-(7-(5-hidroksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-

2

2-en-1-jedan: Na -78 °C rastvor 1-[4-[7-(5-metoksi-2-metil-1H-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (26 mg, 45,2 umol) u dihlorometanu (5 mL) dodat je bor tribromid (56,6 mg, 226 umol, 21,8 uL). Reakcija je ostavljena da se zagreje na 0 °C i mešana je 12 sati. Smeša je neutralizovana sa NaHCO3 (vod., 3 ml) i ekstrahovana dihlorometanom (5 ml × 2), isprana slanim rastvorom (10 ml), osušena anhidrovanim natrijum sulfatom, koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC da bi se dobio 1-(4-(7-(5-hidroksi-2-metil-lH-indol-7-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on kao žuta čvrsta supstanca (8,16 mg, 29,1 % prinos, 90,3 % čistoća). ES+APCI MS m/z 562,5[M+H]<+>.

PRIMER 168

1-(3-(hidroksimetil)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

2

Korak A: terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (3,50 g, 16,2 mmol) u THF (30 mL) dodat je NaH (3,24 g, 80,9 mmol, 60,0 % čistoće) na 0 °C. Posle mešanja od 30 minuta, TBDPSCl (6,67 g, 24,3 mmol, 6,23 mL) je dodat u jednoj porciji. Smeša je zagrejana do 10 °C i mešana 12 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa DCM (200 mL). Organski sloj je osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar/etil acetat 1/0 do 1/2) da bi se dobio terc-butil 3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (6,34 g, 12,1 mmol, 74,8 % prinos, 86,8 % čistoća) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z455,3[M+H]<+>.

Korak B: terc-butil4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil] piperazin-1-karboksilata (7,25 g, 13,9 mmol), 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin (3,89 g, 13,2 mmol) i DIEA (4,27 g, 33,0 mmol, 5,77 mL) u DMSO (60 mL) su mešani na 55 °C tokom 24 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (300 mL) i isprana slanim rastvorom (3 × 150 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar/etil acetat 1/0 do 3/1) da bi se dobio terc-butil4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (4,50 g, 5,91 mmol, 44,7 % prinos, 93,5 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 721,3[M+H]<+>.

Korak C: terc-butil4-[7-benzil-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[terc-butil (difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksitat: Smeša terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-[[terc-butil(difenil) silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (2,00 g, 2,81 mmol), 3-morfolinopropan-1-ol (815 mg, 5,62 mmol), Pd(OAc)2 (94,6 mg, 422 umol), BINAP (350 mg, 562 umol) i t-BuONa (674 mg, 7,03 mmol) u toluenu (30 ml) je degazirana i isprana sa N23 puta, a zatim je smeša zagrevana do 110 °C i mešana 3 sata u atmosferi N2. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 70/1 do 20/1) da bi se dobio terc-butil4-[7-benzil-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (1,50 g, 1,69 mmol, 60,0 % prinos, 92,3 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 821,4[M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]pipenazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[tert-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (1,50 g, 1,83 mmol) u MeOH (20 mL) je dodat Pd-C (10 %, 1,5 g) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (50 psi) na 50 °C tokom 24 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (988 mg, 1,21 mmol, 66,1 % prinos, 89,5 %

1

čistoća) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 731,5[M+H]<+>.

Korak E: terc-butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-(3-moifolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] -3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat (731 mg, 1,00 mmol), 3-benziloksi-1-bromonaftalen (783 mg, 2,50 mmol), [2-(2-aminofenil)fenil]paladijum(1+);dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfan;metansulfonat (169 mg, 200 umol), Cs2CO3 (815 mg, 2,50 mmol) u toluenu (15 mL) je degaziran i pročišćen sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 60 °C tokom 24 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva i prečišćena hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH = 70/1 do 30/1) da bi se dobio tercbutil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil) -2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1- karboksilat (250 mg, 188 umol, 18,8 % prinos, 72,3 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 963,4[M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (250 mg, 188 umol) u MeOH (3 mL) je dodat 10 % Pd/C (0,25 g) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 50 °C tokom 3 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva da bi se dobio terc-butil 3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)- 2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 128 umol, 68,1 % prinos, 62,0 % čistoće) kao tamno žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z

873,4[M+H]<+>.

2

Korak G: 4-[4-[2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol: Smeša terc-butil 3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 149 umol), piridin hidrofluorid (123 mg, 744 umol, 112 uL, 60,0 % čistoće) u THF (1,5 mL)) je mešana na 25 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (TFA stanje; MeCN u H2O; 0 ~ 30 %, brzina protoka;

40 ml/min). Željene frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio 4-[4-[2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (84 mg, 104 umol, prinos 69,6 %, čistoća 94,1 %, 2TFA) kao žuta polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 535,3 [M+H]<+>.

Korak H: 1-[3-(hidroksimetil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 4-[4-[2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- il]naftalen-2-ol (84,0 mg, 114 umol, 2TFA), DIEA (36,9 mg, 285 umol, 49,8 uL) u DCM (3 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (8,63 mg, 68,44 umol) kap po kap na -40 °C, a zatim mešano na -40°C tokom 0,5 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (0,5 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Venusil XBP K8150*25*10 um; mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN]; B%: 10 % - 40 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane do suva da bi se dobio 1-[3-(hidroksimetil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (9,75 mg, 14,5 umol, 12,7 % prinos, 94,4 % čistoća, so mravlja kiselina) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 589,3[M+H]<+>.

PRIMER 169

1-[3-(hidroksimetil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

Korak A: terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-[[terc-butil(difenil))silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (495 mg, 694 umol), [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (160 mg, 1,39 mmol, 165 uL) i natrijum terc-butoksid (200 mg, 2,08 mmol) u toluenu (25 mL) je dodat BINAP (86,5 mg, 139 umol) i Pd2(dba)3 (63,6 mg, 69,5 umol). Smeša je propuštena sa atmosferom azota i mešana na 80 °C tokom 6 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 15 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 × 30 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 30/1 do 1:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (207 mg, 262 umol, 37,7 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz,

4

chloroform-d) δ =7,62 - 7,53 (m, 4H), 7,43 - 7,28 (m, 11H), 4,42 - 4,29 (m, 1H), 4,26 - 3,87 (m, 4H), 3,81 (br d, J = 13,2 Hz, 2H), 3,75 - 3,60 (m, 4H), 3,44 (dd, J = 1,6, 17,2 Hz, 1H), 3,24 - 3,04 (m, 3H), 2,96 (br s, 1H), 2,75 (br s, 3H), 2,49 (s, 3H), 2,43 - 2,28 (m, 2H), 2,10 - 1,96 (m, 2H), 1,91 - 1,80 (m, 1H), 1,80 - 1,67 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,02 - 0,89 (m, 9H).

Korak B: terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil] oksimetil]-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: NH3 je pušten u mehuriće u metanolu (30 mL) na -40 °C tokom 30 minuta. U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (530 mg, 670 umol) u gornju smešu je dodat suvi 10 % Pd/C (0,30 g) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana na 40 °C tokom 10 sati pod 15 psi H2. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil] oksimetil]-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (394 mg, 427 umol, 63,8 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ = 7,57 (br t, J = 6,0 Hz, 4H), 7,43 - 7,33 (m, 6H), 4,43 (br dd, J = 5,2, 10,4 Hz, 1H), 4,32 - 4,00 (m, 4H), 3,99 - 3,89 (m, 2H), 3,88 - 3,65 (m, 4H), 3,27 - 2,89 (m, 6H), 2,81 (br d, J = 8,4 Hz, 2H), 2,56 - 2,50 (m, 3H), 2,42 (br d, J = 16,8 Hz, 2H), 2,13 -2,03 (m, 1H), 1,88 (br d, J = 6,8 Hz, 1H), 1,79 (br d, J = 5,2 Hz, 2H), 1,43 (s, 9H), 0,95 (br s, 9H).

Korak C: terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[terc-butil(difenil) silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8 tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,16 g, 228 umol), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (143 mg, 457 umol), [2-(2 -aminoetil)fenil]-hloropaladijum;dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfan (16,9 mg, 22,8 umol) i t-BuONa (43,9 mg, 457 umol) u toluenu (4 mL) je mešan na 70 °C tokom 12 sati pod N2. Smeša je razblažena vodom (5,00 mL) i ekstrahovana etar acetatom (3 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim natrijum hloridom (10 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (mravlja kiselina, 0,1 %)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1- karboksilat (0,15 g, 157 umol, 68,9 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 933,1 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: NII3 je propušten u metanol (10 mL) na -78 °C tokom 30 minuta. terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-3-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]piperazin-1-karboksilat (0,10 g, 107 umol) i suvi 10 % Pd/C (0,01 g) su dodati i smeša je mešana na 10 °C tokom 1 sata pod 15 psi H2. Suspenzija je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)- 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,09 g, sirovo) kao žuto ulje i koristi se u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 843,0 [M+H]<+>.

Korak E: 4-[4-[2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol: Smeša terc-butil 3-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,04 g, sirov) i piridin;hidrofluorid (118 mg, 712 umol, 106 uL) u dihlorometanu (2 mL) je mešan na 0 °C tokom 1 sata i mešan na 10 °C tokom 12 sati. pH smeše je podešen na pH>7 dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (3,00 mL) i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, dihlorometan/metanol = 5/1) da bi se dobio 4-[4-[2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (0,04 g, sirov) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 505,2 [M+H]<+>.

Korak F: 1-[3-(hidroksimetil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 4-[4-[2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (0,02 g, sirov) i TEA (40,1 mg, 396 umol, 55,17 uL) u dihlorometanu (2 mL) je dodat prop-2-enoil prop -2-enoat (999 ug, 7,93 umol) na -40 °C, zatim je smeša mešana na -40 °C tokom 0,5 h. Smeša je ugašena dodavanjem metanola (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, dihlorometan/metanol = 5/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (10 mm NH4HCO3)-ACN]; B%: 38 %-68 %, 3 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 1-[3-(hidroksimetil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (1,08 mg, 1,73 umol). ES+APCI MS m/z 559,5 [M+H]<+>.

PRIMER 170

2-(1-akriloil-4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 1-(terc-butil)2-metil4-(7-benzil-2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1,2-dikarboksilat: U rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (5,00 g, 17,0 mmol) i 1-terc-butil 2-metilpiperazina-1, 2-dikarboksilat (4,24 g, 17,3 mmol) u DMSO (80 mL) je dodat DIEA (5,49 g, 42,5 mmol, 7,42 mL). Posle mešanja na 55 °C tokom 12 sati, smeša je razblažena etil acetatom (100 mL), isprana slanim rastvorom (3 × 150 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE/EA = 3/1) da bi se dobio 1-terc-butil 2-metil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3],4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1,2-dikarboksilat (8,00 g, 15,9 mmol, 93,8 % prinos) kao žuto ulje.), ispran slanim rastvorom (3 × 150 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. ES+APCI MS m/z 502,1[M+H]<+>.

Korak B: 1-(terc-butil) 2-metil 4-(7-benzil-2-(2-(dimetilamino)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1,2-dikarboksilat: Smeša 1-terc-butil 2-metil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1,2-dikarboksilat (8,00 g, 15,9 mmol), 2-(dimetilamino)etanol (2,84 g, 31,9 mmol, 3,19 mL), Cs2CO3 (13,0 g, 39,8 mmol), Pd(OAc)2 (537 mg, 2,39 mmol) i BINAP (2,39 mmol) 1,98 g, 3,19 mmol) u toluenu (30 mL) je mešano na 110 °C tokom 3 sata pod azotom. Smeša je razblažena vodom (30 mL) i zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 mL). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (TFA, 0,1 %) da bi se dobio 1-terc-butil 2-metil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (6,00 g, 10,8 mmol, 67,9 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 555,3[M+H]<+>.

Korak C: 1-terc-butil 2-metil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat: Smeša 1-terc-butil 2-metil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1,2-dikarboksilat (6,00 g, 10,8 mmol) i 10 % Pd/C (600 mg, 10,8 mmol) u MeOH (100 mL) je mešan na 40 °C tokom 12 sati pod H2 na 50 psi. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 1-tercbutil 2-metil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (4,50 g, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 465,3[M+H]<+>.

Korak D: 1-terc-butil 2-metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat: Smeša 1-terc-butil 2-metil 4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (2,90 g, 6,24 mmol), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (2,54 g, 8,12 mmol), Pd2(dba)3 (857 mg, 936 umol), RuPhos (728 mg, 1,56 mmol) i Cs2CO3 (5,08 g, 15,6 mmol) u 1,4-dioksanu (150 mL) je mešan na 85 °C tokom 5 sati pod N2. Smeša je razblažena vodom (100 mL), ekstrahovana sa DCM (1 × 200 mL). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 300 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (TFA, 0,1 %) da bi se dobio 1-terc-butil 2-metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-

4

6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (3,50 g, 5,02 mmol, dva koraka 72,5 % prinos) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 697,3 [M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-2-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor 1-terc-butil 2-metil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1,2-dikarboksilat (1,00 g, 1,44 mmol) u THF (10 mL) je dodat LiAlH4 (219 mg, 5,76 mmol) u porcijama na -60 °C. Posle mešanja tokom 2 sata, smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum sulfata (0,3 mL), filtrirana i filterski kolač je ispran sa DCM (100 mL).

Kombinovani filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d] pirimidin-4-il]-2-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat (750 mg, 1,12 mmol, 77,8 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 669,3 [M+H]<+>.

Korak F: 2-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-2-il]acetonitril: Smeša terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-2-(hidroksimetil) piperazin-1-karboksilat (100 mg, 149 umol), TBAI (11,1 mg, 29,9 umol), 1-(p-tolilsulfonil)imidazol (79,9 mg, 359 umol), NaCN (0,12 g, 2,45 mmol) i TEA (37,8 mg, 374 umol, 51,8 uL) u DMF se meša na 155 °C tokom 6 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena vodom (1 × 5 mL) i zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 mL). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom Ostatak je prečišćen prep-HPLC kolonom: Phenomenex Gemini C18 250*50 mm*10 mm;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 50 %-70 %, 28 MIN) da bi se dobio 2-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (160 mg, 277 umol, 37,1 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

ES+APCI MS m/z 578,5[M+H]<+>.

Korak G: 2-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-

41

pirido[3,4-d]pirimidina-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (60 mg, 104 umol) i DIEA (67,1 mg, 519 umol, 90,7 uL) u DCM (2 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (13,1 mg, 104 umol) na 0 °C. Posle mešanja na 10 °C tokom 4 sata, smeša je ugašena sa MeOH (0,1 mL), zatim koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 10/1) da bi se dobio 2-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi] - 6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (40,0 mg, 63,3 umol, 61,0 % prinos) kao žuti ulje. ES+APCI MS m/z 632,3[M+H]<+>.

Korak H: 2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] -1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (30 mg, 47,5 umol) u DCM (2 mL) je dodat BBr3 (35,7 mg, 142 umol, 13,7 uL) na -78 °C ispod 0,5 h. Smeša je zagrejana do 0 °C i mešana 2 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i zatim ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata na -78 -0 °C. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni (Al2O3, DCM/MeOH = 5/1), zatim dalje prečišćena prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 30 %-60 %,12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo 2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (810 ug, 1,46 umol, 3,07 % prinosa, 97,5 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 542,5 [M+H]<+>.

PRIMER 171

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

42

Korak A: Etil 2-(3-oksopiperazin-2-il)acetat: U rastvor dietil (E)-but-2-enedioata (30,2 g, 175 mmol, 28,8 mL) u i-PrOH (300 mL) dodat je etan-1,2-diamin (11,0 g, 183 mmol, 12,2 mL). Posle mešanja na 25 °C tokom 12 sati, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Sirova bela čvrsta supstanca je isprana sa MTBE (500 mL) i osušena pod vakuumom da bi se dobio etil 2-(3-oksopiperazin-2-il)acetat (26,0 g, 140 mmol, 79,6 % prinos, 100 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 6,55 (br s,

4

1H), 4,15 (q, J = 6,8 Hz, 2H), 3,80 - 3,72 (m, 1H), 3,47 (dt, J = 4,8, 11,2 Hz, 1H), 3,36 - 3,22 (m, 1H), 3,18 - 3,08 (m, 1H), 3,07 - 2,95 (m, 2H), 2,76 - 2,70 (m, 1H), 1,25 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Korak B: Etil 2-[1-[(4-metoksifenil)metil]-3-okso-piperazin-2-il]acetat: U smešu etil 2-(3-oksopiperazin-2-il)acetata (23,6 g, 127 mmol) u metanolu (400 mL) dodat je 4-metoksibenzaldehid (18,9 g, 139 mmol, 16,9 mL) i CH3gCOOH (15,2 g, 253 mmol, 14,5 mL) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je ohlađena na -10 °C. NaBH3CN (23,9 g, 380 mmol) je dodat u smešu u porcijama i reakciona smeša je zagrejana do 15 °C i mešana još 11 sati. Reakcija je ugašena dodavanjem vode (400 ML) i ekstrahovana sa DCM (2 × 300 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je ponovo rastvoren u etil acetatu (300 mL), zatim ispran sa 0,5 M rastvorom HCl (2 × 200 mL). Vodena faza je podešena na pH 7 ∼ 8 sa Na2CO3 čvrstom supstancom, a zatim izdvojena sa DCM (2 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio etil 2-[1-[(4-metoksifenil)metil]-3-okso-piperazin-2-il]acetat (27,2 g, 87,6 mmol, prinos 69,0 %).98,5 % čistoće) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 307,1 [M+H]<+>.

Korak C: 2-[1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2-il]etanol: U smešu etil 2-[1-[(4-metoksifenil)metil]-3-okso-piperazin-2-il]acetata (27,2 g, 88,8 mmol) u THF (500 mL) dodat je LiAlH4 (10,1 g, 266 mmol) u porcijama na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana 11 sati. Nakon završetka, reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (40 mL), filtrirana i zatim koncentrovana. Proizvod 2-[1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2-il]etanol (20 g, sirov) je dobijen kao žuto ulje.

ES+APCI MS m/z 251,1 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil-[2-[1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2-il]etoksi]-difenil-silan: U smešu 2-[1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2-il]etanola (20 g, sirov) u THF (300 mL) dodat je NaH (15,9 g, 399 mmol, 60 % čistoće) na 0 °C u porcijama, zatim je dodat rastvor TBDPSCl (65,9 g, 239 mmol, 61,6 mL) u THF (100 mL). Smeša je zagrejana do 15 °C i mešana još 12 sati. Nakon završetka, reakcija je sipana u rastvor NH4Cl (300 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 × 300 mL).

44

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etil acetat 3/1 u dihlorometan/metanol 10/1) dajući terc-butil-[2-[1-[(4-metoksifenil)metil] piperazin-2-il]etoksi]-difenil-silan (29,5 g, 59,9 mmol, dva koraka 35 %, 99,2 % čistoće) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 489,4[M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[(4-metoksifenil)metil] piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil-[2-[1-[(4-metoksifenil)metil] piperazin-2-il]etoksi]-difenil-silana (11,0 g, 22,5 mmol) u MeOH (200 mL) je dodat TEA (6,83 g, 67,5 mmol, 9,36 mL) i (Boc)2O (9,82 g, 45,0 mmol, 10,3 mL). Posle mešanja na 15 °C tokom 3 sata, reakcija je koncentrovana.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etil acetat 1/0 do 5/1) dajući terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[(4-metoksifenil)metil] piperazin-1-karboksilat (11,0 g, 18,7 mmol, 82,9 % prinos, 100 % čistoća) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 589,4 [M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil) silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-1-karboksilata (9,00 g, 15,3 mmol) u MeOH (150 mL) je dodat 10 % Pd/C (849 umol). Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (50 Psi) na 40 °C tokom 18 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit čep i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar/etil acetat 10/1 do 3:1) da bi se dobio terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil) silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (5,80 g, 12,2 mmol, 79,5 % prinos, 98,2 % čistoća) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 469,4 [M+H]<+>.

Korak G: 2-[4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2 -il]etoksi-terc-butil-difenil-silan: Smeša 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (4,00 g, 13,6 mmol), tercbutil-[2-[1-[(4-metoksifenil)metil] piperazin-2-il]etoksi]-difenil-silan (6,98 g, 14,3 mmol) i DIEA (4,39 g, 34,0 mmol, 5,93 mL) u DMSO (80 mL) su degazirani i pročišćeni N23 puta, i smeša je zagrevana na 55 °C i mešana 12 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (300 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 ×

4

200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat 1/0 do 3/1) da bi se dobio 2-[4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3],4-d]pirimidin-4-il)-1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2-il]etoksi-terc-butil-difenil-silan (9,00 g, 11,7 mmol, 86,0 % prinos, 97,0 % čistoća) kao žuto ulje. ES+APCI MS m/z 746,4[M+H]<+>.

Korak H: 2-[[7-benzil-4-[3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin: Smeša 2-(dimetilamino)etanola (2,39 g, 26,8 mmol, 2,69 mL), 2-[4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-1-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-2-il]etoksi-terc-butil-difenil-silan (8,00 g, 10,7 mmol), Pd(OAc)2 (361 mg, 1,61) mmol), BINAP (1,34 g, 2,14 mmol) i Cs2CO3 (8,73 g, 26,8 mmol) u toluenu (100 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta. Smeša je zagrejana na 110 °C i mešana 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do suvoće. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 50/1 do 10/1) da bi se dobio 2-[[7-benzil-4-[3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil] -4-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (6,50 g, sirovo) kao žuta polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 799,4 [M+H]<+>.

Korak I: 2-[4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] etanol: 2-[4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] etanol: Rastvor 2-[[7-benzil-4-[3-[2-[terc-butil (difenil)silil]oksietil]-4-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (6,50 g, sirov) u TFA (80 mL) je mešan na 80 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva, a ostatak je ponovo rastvoren u DCM (300 mL) i ispran vodom (200 mL). Faza vode je sakupljena i bazifikovana zasićenim vodenim ratsvorom NaHCO3 do pH ∼ 8 i zatim ekstrahovana sa DCM (3 × 200 ml). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-[4-[7-benzil-2-[2-(dimetil amino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-

4

il]piperazin-2-il]etanol (3,00 g, sirov) kao žuta polučvrsta materija, koja je korišćena direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak J: 2-[[7-benzil-4-[3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin: Rastvor 2-[4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2- il]etanol (3,0 g, sirov) u THF (40 mL) je dodat NaH (1,36 g, 34,1 mmol, 60,0 % čistoće) na 0 °C. Posle mešanja tokom 30 minuta, u porcijama je dodat TBDPSCl (2,81 g, 10,2 mmol, 2,63 mL). Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana još 2 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (30 mL) na 0 °C i ekstrahovana u etil acetat (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 100 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suva da bi se dobio 2-[[7-benzil-4-[3-[2-[tert-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (6,00 g, sirov) kao žuto ulje, koje je korišćeno direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 679,4 [M+H]<+>.

Korak K: terc-butil4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-[2-[tert. -butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat: Smeša 2-[[7-benzil-4-[3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil] piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (6,0 g, sirov), Boc2O (18,5 g, 84,8 mmol, 19,5 mL) u MeOH (3 mL) je degasiran i pročišćen sa N2 za 3 puta. Smeša je zagrejana do 80 °C i mešana 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 1/0 do 10/1) da bi se dobio tercbutil4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (3,10 g, 3,28 mmol, četiri koraka 30,7 % prinosa, 82,2 % čistoće) kao polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 779,4 [M+H]<+>.

Korak L: terc-butil2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-

4

karboksilat (3,10 g, 3,28 mmol, 82,2 % čistoće) u MeOH (60 mL) je dodat Pd-C (10 %, 2 g) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (50 psi) na 50 °C tokom 36 sati. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva da bi se dobio tercbutil2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,20 g, 2,75 mmol, 83,8 % prinos, 86,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena za sledeće korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 689,4 [M+H]<+>.

Korak M: terc-butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]-2-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil2-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,85 g, 2,69 mmol), 3-benziloksi-1-bromonaftalen (1,09 g, 3,49 mmol), Cs2CO3 (2,19 g, 6,71 mmol), [2- (2-aminofenil)fenil]paladijum(1+); dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfan;metansulfonat (341 mg, 403 umol) u toluenu (40 mL) je degaziran i pročišćen sa N23 puta, a smeša je mešana na 65 °C tokom 10 sati u atmosferi N2. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 1/0 do 10/1) da bi se dobio terc-butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (1,85 g, 1,69 mmol, 63,2 % prinos, 84,3 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 922,5 [M+H]<+>.

Korak N: 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor terc-butil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2- [2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 543 umol), 2,6-lutidin (700 mg, 6,51 mmol, 759 uL) u DCM (10 mL) je dodat TMSOTf (724 mg,

3,26 mmol, 588 uL). Posle mešanja na 40 °C tokom 2 sata u atmosferi N2, reakciona smeša je ohlađena na -40 °C i prop-2-enoil prop-2-enoat (137 mg, 1,09 mmol) je dodat u porcijama. eakciona smeša je zagrejana do 25 °C i mešana

4

još 12 sati u atmosferi N2. Nakon završetka, reakciona smeša je prečišćena direktno hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH 30/1 do 10/1) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2 -(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1- il]prop-2-en-1-on (256 mg, 226 umol, 41,6 % prinos, 77,2 % čistoća) kao polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 875,5 [M+H]<+>.

Korak O: 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (133 mg, 152 umol) u DCM (5,00 mL) je dodat BBr3 (571 mg, 2,28 mmol, 220 uL) u kapima na -40 °C. Reakciona smeša je zagrejana do 0 °C i mešana 3 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Sirovi materijal je ispran sa MTBE (25 mL) i čvrsta supstanca je sakupljena. Čvrsta supstanca je isprana zasićenim rastvorom NaHCO3 rešenjem (0,5 ml) do pH ∼ 8 pri 0 °C, a zatim je rastvorena u MeOH (3 ml). Smeša je direktno prečišćena prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u;mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN]; B%: 15 % - 39 %, 10 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (16,7 mg, 28,2 umol, 18,5 % prinos, 99,9 % čistoća, Mravlja kiselina) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 547,3 [M+H]<+>.

PRIMER 172

1-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

4

Korak A: terc-butil4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-[2-[terc-butil(difenil)silil] oksietil]piperazin-1-karboksilat: Smeša 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (3,04 g, 10,3 mmol), tercbutil3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil] piperazin-1-karboksilat (5,08 g, 10,8 mmol), DIEA (3,34 g, 25,8 mmol, 4,51 mL) u DMSO (60 mL) je degazirana i pročišćena sa N23 puta∘ Smeša je zagrevana do 55 °C i mešana 16 sati u atmosferi N2. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 100 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do suvoće. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar/etil acetat 1/0 do 3/1) da bi se dobio terc-butil4-(7-benzil-2hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)-3-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (3,50 g, 4,53 mmol, 43,9 % prinos, 94,0 % čistoće) kao žuti polučvrsta. ES+APCI MS m/z 726,4 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat: Smeša 2-(dimetilamino)etanola (1,07 g, 12,1 mmol, 1,21 mL), terc-butil4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il)-3-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (3,50 g, 4,82 mmol), Pd(OAc)2 (162 mg, 723 umol,), BINAP (600 mg, 964 umol) i Cs2CO3 (3,92 g, 12,1 mmol) u toluenu (40 mL) su degazirani i pročišćeni sa N23 puta. Smeša je zagrevana na 110 °C uz mešanje tokom 3 sata u atmosferi N2. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH = 1/0 do 10/1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (2,30 g, 2,57 mmol, prinos 53,3 %, 87,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 779,5 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3- [2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (2,30 g, 2,95 mmol) u MeOH (40 mL) je dodat Pd-C (10 %, 1,5 g) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Posle mešanja pod H2 (50 psi) na 50 °C tokom 36 sati, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 3-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]-4- [2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,58 g, 1,83 mmol, prinos 61,9 %, 79,6 % čistoće) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 689,4 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]-3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil] piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]-4-[2-[2-

1

(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (1,48 g, 2,15 mmol), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (875 mg,

2,80 mmol), Cs2CO3 (1,75 g, 5,38 mmol), [2 -(2-aminofenil)fenil]paladijum(1+); dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfan;metansulfonat (273 mg, 323 umol) u toluenu (30 mL) je degaziran i pročišćen sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 65 °C tokom 24 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, DCM/MeOH = 1/0 do 20/1) da bi se dobio tercbutil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (1,20 g, 1,07 mmol, 49,7 % prinos, 82,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 921,4 [M+H]<+>.

Korak E: 2-[[7-(3-benziloksi-1-naftil)-4-[2-[2-[terc-butil (difenil)silil]oksietil]piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin: Smeša terc-butil4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetil amino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-3-[2-[tercbutil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 326 umol) i 2,6-lutidin (419 mg, 3,91 mmol, 455 uL) u DCM (10 mL) je dodat TMSOTf (434 mg,

1,95 mmol, 353 uL) u porcijama na 0 °C. Smeša je zagrejana do 10 °C i mešana 12 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je prečišćena direktno hromatografijom na koloni (Al2O3, DCM/MeOH 1/0 do 50/1) da bi se dobio 2-[[7-(3-benziloksi-1-naftil)-4-[2-[2-[terc-butil (difenil)silil]oksietil] piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (210 mg, 229 umol, 70,3 % prinos, 89,5 % čistoća) kao žuta polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 821,5 [M+H]<+>.

Korak F: 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-(2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-3-[2-[terc-butil(difenil)silil] oksietil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 2-[[7-(3-benziloksi-1-naftil)-4-[2-[2-[terc-butil (difenil)silil] oksietil]piperazin-1-il]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (210 mg, 256 umol) i DIEA (49,6 mg, 384 umol, 67,0 uL) u DCM (10 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (33,9 mg, 269 umol) u porcijama na -40 °C u atmosferi azota. Posle mešanja tokom 30 minuta na istoj temperaturi, reakciona smeša je prečišćena direktno hromatografijom na koloni (Al2O3, DCM/MeOH 1/0 do 50/1) da bi se dobio 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-). naftil)-2-[2-

2

(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-[2-[tercbutil(difenil)silil ]oksietil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (221 mg, 214 umola, 83,6 % prinosa, 84,7 % čistoće) kao blago žuta polučvrsta materija. ES+APCI MS m/z 875,4 [M+H]<+>.

Korak G: 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-3-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: Smeša 1-[4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-3-[2-[terc-butil(difenil)silil]oksietil]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (221 mg, 253 umol) u DCM (10 mL) je dodat BBr3 (949 mg, 3,79 mmol, 365 uL) na -40 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 3 sata u atmosferi N2.

Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Sirovi pdt je opran sa MTBE (25 ml), zasićenim rastvorom NaHCO3 (0,5 ml) do pH ∼ 8 pri 0 °C i rastvoren u MeOH (3 ml). Dobijeni rastvor je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Boston Green ODS 150*305u; mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina) -ACN]; B%: 11 % - 41 %, 10 min) da bi se dobio 1-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (26,7 mg, 44,0 umol, 17,4 % prinos, 97,8 % čistoća, Mravlja kiselina) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 547,3 [M+H]<+>.

PRIMER 173

1-(4-(7-(3-hidroksi-2-metilnaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-(4-(7-(3-hidroksi-2-metilnaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen prema proceduri za Primer 1651-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2- (3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on koji zamenjuje (3-metoksi-2 -metil-1-naftil) trifluorometansulfonat za (2-fluoro-3-metoksi-1-naftil) trifluoromelhansulfonat u koraku F da bi se dobio željeni proizvod 1-(4-(7-(3-hidroksi-2-metilnaftalen-1-) il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on kao žuti čvrsta supstanca (10,4 mg, prinos 13,1 %, čistoća 98,1 %). ES+APCI MS m/z 573,5 [M+H]<+>.

PRIMER 174

(R)-1-(4-(2-((5,5-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

4

Korak A: terc-butil (5R)-5-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat: U rastvor (2R)-1-terc-butoksikarbonil-5,5-dimetil-pirolidin-2-karboksilne kiseline (500 mg, 2,06 mmol) u anhidrovanom THF (4 mL) dodat je BH3-Me2S (2 M, 1,23). mL) kap po kap na 15 °C. Reakcija je zagrevana na 50 °C tokom 5 minuta. Posle hlađenja u ledenom kupatilu, u smešu je dodat metanol (20 mL). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom na 25 °C. terc-butil (5R)-5-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat (400 mg, 1,74 mmol, 84,9 % prinos) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 3,97 - 3,81 (m, 1H), 3,62 (dd, J = 3,6, 10,8 Hz, 1H), 3,45 - 3,33 (m, 1H), 2,02 - 1,79 (m, 3H), 1,79 - 1,67 (m, 1H), 1,49 - 1,41 (M, 12H), 1,32 (s, 3H).

Korak B: benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-tercbutoksikarbonil-5,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (5R)-5-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilata (212 mg, 926 umol) i benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)) -2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 463 umol,) u THF (10 mL) je dodat t -BuONa (133 mg, 1,39 mmol). Posle mešanja na 15 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je sipana u H20 (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Organska faza je isprana slanim rastvorom (20 mL), osušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom. Jedinjenje benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-tercbutoksikarbonil-5,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (110 mg, 129 umol, 28,1 % prinos, 96 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 813,5 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil (5R)-5-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2 -il]oksimetil]-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat: NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (30 mL) na -40 °C tokom 30 minuta. U rastvor benzil 4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-terc-butoksikarbonil-5,5-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 246 umol) u gornju smešu (NH3/MeOH) je dodat suvi Pd-C (10 %, 100 mg) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata.

Katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan da bi se dobio proizvod terc-butil (5R)-5-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro -5H pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat (150 mg, 244 umol, 99,4 % prinos, 96 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca i direktno se koristi u sledećem koraku bez prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 589,3 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil (5R)-5-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]-2,2-dimetilpirolidin-1-karboksilat: U smešu terc-butil (5R)-5-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-2-il]oksimetil]-2,2-dimetilpirolidin-1-karboksilat (130 mg, 221 umol) i DIEA (285 mg, 2,21 mmol, 385 uL) u dihlorometanu (3 mL) je dodat rastvor prop-2-enoil prop-2-enoata (22,3 mg, 176 umol) u dihlorometanu (1 mL) na -40 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na -40 °C 1 sat. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 (2 mL). Zatim je smeša sipana u vodu (20 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (20 mL × 2). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, dihlorometan/metanol = 1/0 do 10/1). terc-butil (5R)-5-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat (140 mg, 217 umol, 98,6 % prinos) je dobijen kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 643,6 [M+H]<+>.

Korak E: 1-[4-[2-[[(2R)-5,5-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor terc-butil (5R)-5-[[7-(3-hidroksi-1-naftil)-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat (120 mg, 187 umol) u dihlorometanu (200 uL) je dodat TFA (212 mg, 1,87) mmol, 138 uL). Smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, zatim razblažena dihlorometanom (5 mL) i podešena pH=7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (10 mL × 3). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 45 % - 75 %, 12 min).1-[4-[2-[[(2R)-5,5-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (30 mg, 53,6 umol, 28,7 % prinos, 97 % čistoća) je dobijen u obliku žute čvrste supstance liofilizacijom. ES+APCI MS m/z 543,5 [M+H]<+>.

PRIMER 175

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksi-2-metilnaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksi-2-metilnaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je sintetizovan u skladu sa procedurom za Primer 165 zamenom terc-butil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat za terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-(3-morfolinopropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat i (2-fluoro-3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat za (3-metoksi-2-metil-1-naftil) trifluorometansulfonat u koraku F. dajući 1-[4-[7-(3-hidroksi-2-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1- jedan (10,2 mg, 17,3 umol, 21,4 % prinos, 100 % čistoća, so mravlje kiseline) kao bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 543,4 [M+H]<+>.

PRIMER 176

2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (3aR)-1-okso-3a,4,6,7-tetrahidro-3H-oksatiazolo[3,4-a]pirazin-5-karboksilat: U rastvor imidazola (15,7 g, 231 mmol) u DCM (100 mL) dodat je SOCl2 (8,25 g, 69,4 mmol, 5,03 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 15 °C 1 sat. U smešu je dodat terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat (5 g, 23,1 mmol) u DCM (100 mL) na -70 °C. Reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena zasićenim NH4Cl (100 mL) i odvojena, vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (3aR)-1-okso-3a,4,6,7-tetrahidro-3H-oksatiazolo[3,4-a]pirazin-5-karboksilat (5,8 g, 22,1 mmol, prinos 95,6 %)) kao smeđa čvrsta supstanca.

Korak B: terc-butil (3aR)-1,1-diokso-3a,4,6,7-tetrahidro-3H-oksatiazolo[3,4-a]pirazin-5-karboksilat: U rastvor terc-butil (3aR)-1-okso-3a,4,6,7-tetrahidro-3H-oksatiazolo[3,4-a)pirazin-5-karboksilata (7,5 g, 28,6 mmol) u MeCN (225 mL) je dodat NaIO4 (7,95 g, 37,2 mmol, 2,06 mL) u vodi (75 mL), a zatim RuCl3. H2O (129 mg, 572 umol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 30 minuta. Po završetku, reakciona smeša je ugašena zasićenim NH4Cl (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (10 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc=3:1 do 1:1) dajući terc-butil (3aR)-1,1-diokso-3a,4,6,7-tetrahidro-3H-oksatiazolo[3,4-a]pirazin-5-karboksilat (7 g, 25,2 mmol, 88,0 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ = 4,64 (dd, J = 6,4, 8,0 Hz, 1H), 4,36 - 3,94 (m, 3H), 3,64 (ddt, J = 3,6, 6,0, 9,2 Hz, 1H), 3,46 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,13 (br s, 1H), 2,96 (dt, J = 3,2, 11,2 Hz, 2H), 1,48 (s, 9H)

Korak C: terc-butil (3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (3aR)-1,1-diokso-3a,4,6,7-tetrahidro-3H-oksatiazolo[3,4-a]pirazin-5-karboksilata (5 g, 18,0 mmol) u DMF (100 mL) je dodat KCN (1,04 g, 16,0 mmol, 684,94 uL). Reakciona smeša je zagrevana na 50 °C tokom 16 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena HCl (2 M, 50 mL) i mešana na 15 °C tokom 1 sata. Smeša je bazifikovana sa NaOH (40 %, 10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 100 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4 i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc=3:1 do 0:1 zatim EtOAc: Me 100:1 do 10:1) da se dobije terc-butil (3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,1 g, 4,88 mmol, 27,2 % prinos) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM -d) δ = 4,05 - 3,71 (m, 2H), 3,08 - 2,88 (m, 3H), 2,84 - 2,62 (m, 2H), 2,56 - 2,37 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).

Korak D: 2-[(2S)-piperazin-2-il)acetonitril: Reakciona smeša terc-butil (3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (850 mg, 3,77 mmol) i HCl/dioksana (4 M, 20 mL) je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Po završetku, rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-piperazin-2-il]acetonitril (740 mg,

3,74 mmol, 99,0 % prinos, 2HCl) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ = 4,04 - 3,90 (m, 1H), 3,81 - 3,70 (m, 2H), 3,69 - 3,61 (m, 2H), 3,53 - 3,36 (m, 2H), 3,13 (d, J = 6,4 Hz, 2H).

Korak E: 2-[(2S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril: U smešu 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (1,3 g, 4,42 mmol) i 2-[(2S)-piperazin-2- il]acetonitril (1,17 g, 5,91 mmol, 2HCl) u dioksanu (25 mL) je dodat DIEA (2,86 g, 22,1 mmol, 3,85 mL). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je razblažena vodom (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 80 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL), osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril (1,69 g, 4,41 mmol, 100 % prinos) kao braon čvrsta supstanca.

Korak F: terc-butil (2S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1- karboksilat: Reakciona smeša 2-[(2S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il] acetonitril (1,69 g, 4,41 mmol) i (Boc)20 (10,3 g, 47,2 mmol, 10,8 mL) su zagrevani na 50 °C tokom 2 sata. Po završetku, reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc=10:1 do 1:1) dajući terc-butil (2S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,1 g, 2,12 mmol, 48,0 % prinos, 93 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 483,4 [M+H]<+>.

Korak G: terc-butil (2S)-4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor 2-(dimetilamino)etanola (415 mg, 4,66 mmol, 468 uL) u THF (20 mL) dodat je NaH (149 mg, 3,73 mmol, 60 % čistoće) 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 h. U smešu je dodat terc-butil (2S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (900 mg, 1,86 mmol). Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 12 sati u zatvorenoj cevi pod N2. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (10 mL) i ekstrahovana

1

sa EtOAc (3 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su tretirani aktivnim ugljem i filtrirani. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,12 mmol, 60,1 % prinos) kao braon čvrsta supstanca.

Korak H: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: NH3 je pušten da peni u MeOH (20 mL) tokom 5 min. U rastvor je dodat terc-butil (2S)-4-[7-benzil-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,12 mmol) i 10% Pd/C (200 mg) Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 16 sati. Po završetku, smeša je filtrirana i filter kolač je ispran sa MeOH (3 × 30 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex luna(2) C18 250*50 10 u; mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN];B%: %-%,30MIN; 60 %min) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (167 mg, 331 umol, 29,6 % prinos, 88,3 % čistoće) kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 446,3 [M+H]<+>.

Korak I: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 404 umol), (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat (248 mg, 808 umol) i Cs2CO3 (395 mg, 1,21 mmol) u toluenu (6 mL) je dodat KSPHOS Palladacicle Gen 3 (34,20 mg, 40,4 umol). Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 4 sata pod N2. Po završetku, reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (PE: 5:1 do 0:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)- 1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 272 umol, 67,3 % prinos, 91,3 % čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 672,0 [M+H]<+>.

2

Korak J: 4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 298 umol) u DCM (0,3 mL) je dodat TFA (420 mg, 3,68 mmol, 273 uL).-d]piridin-4-il (1-diazil), 298 3,68-karboksilna kiselina (273-karboksilna kiselina) Reakciona smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat (238 mg, 298 umol, 99,9 % prinos, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak K: [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: U rastvor [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (238 mg, 298 umol, 2TFA) i DIEA (308 mg, 2,38 mmol, 415 uL) u DCM (5 mL) je dodat prop. -2-enoil prop-2-enoat (56,3 mg, 446 umol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je ugašena sa kap vode. Smeša (je prečišćena hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc= 1:1 do 0:1 zatim EtOAc: MeOH= 50:1 do 3:1) da bi se dobio [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (300 mg, sirovo) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 626,4 [M+H]<+>.

Korak L: 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[2-(dimetilamino)etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (300 mg, 479 umol) u THF (3 mL) je dodat NaOH (2 M, 3 mL) u vodi. Reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 8 sati. Po završetku, reakciona smeša je zakiseljena sa 0,5 mL mravlje kiseline (20 % u vodi) do PH=7 i ekstrahovana sa DCM (5 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom.

Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*30 5u;mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN];B%: 25 %-49 %,10 min) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (18,3 mg, 30,2 umol, dva koraka 10,1 % prinosa, 96,7 % čistoće, mravlja kiselina Sol) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 542,5 [M+H]<+>.

PRIMER 177

2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (300 mg, 549 umol) i

4

[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (126 mg, 1,10 mmol) u toluenu (6 mL) je dodat t-BuONa (79,1 mg, 823). umol) na 18 °C i reakciona smeša je mešana na 18 °C tokom 30 minuta. U smešu je zatim dodat EtOAc (20 mL) i voda (15 mL), a zatim ekstrahovan sa EtOAc (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % mravlja kiselina) = 42 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3 -il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 331 umol, 60,4 % prinos, 99,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 598,3[M+H]<+>.

Korak B: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dilzidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril: Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 334 umol) i TFA (763 mg, 6,69 mmol, 495 uL) su mešani na 18 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (250 mg, sirov, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak C: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (250 mg, 344 umol, 2TFA) i DIEA (356 mg, 2,76 mmol, 480 uL) u DCM (5 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (65,2 mg, 517 umol) na 0 °C i smeša je mešana na 18 °C tokom 1,5 sata.ihidro-356-5 65,2-pirido-2-517-piridola (-prop) Na 0 °C i mešavina je miješana na 18 °C 1,5 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (3 mL) i zatim ekstrahovana sa DCM (3 × 6 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um;mobilna faza:

[voda(10 mm NH4HCO3)-ACN];B%: 30 %-60 %,3 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (9,98 mg, 17,0 umol, 4,94 % prinos, 94,1 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 552,5[M+H]<+>.

PRIMER 178

2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol: Suspenzija MeOH (1000 mL) i Na (22,0 g, 957 mmol, 22,7 mL) je mešana 30 min. Ovoj smeši je dodat etil 1-benzil-3-okso-piperidin-4-karboksilat (50 g, 191 mmol i 2-metilizotiourea (47,9 g, 344 mmol, 0,5 H2SO4) na 15 °C. Reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 30 sati. Reakciona smeša je zakiseljena sa HCl (2 M) (300 mL) do pH=6 i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je suspendovan u 200 mL vode i brzo mešan. Suspenzija je filtrirana i bela čvrsta supstanca je sakupljena i isprana etil acetatom.7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (68 g, 151 mmol, 79,1 % prinos, 64,0 % čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

Korak B: 7-benzil-4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin: U rastvor 7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ola (50 g, 174 mmol) u CHCl3 (1000 mL) dodat je POCl3 (166 g, 1,08 mol, 100 mL) i smeša je mešana na 80 °C tokom 13 sati. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen sa EtOAc (500 mL) i bazifikovan korišćenjem zasićenog Na2CO3 (800 mL) do pH=7. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 400 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EA od 100:1 do 80: 1) da se dobije 7-benzil-4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (21,7 g, 67,4 mmol, 38,7 % prinos, 95,0 % čistoće) kao braon ulje. ES+APCI MS m/z 306,1[M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-(7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor 7-benzil-4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (2,6 g, 8,50 mmol) i 2-piperazin-2-ilacetonitrila (1,68 g, 8,50 mmol, 2HCl) u DMSO (52 mL) je dodat DIEA (5,49 g, 42,5 mmol, 7,40 mL). Smeša je zagrejana na 80 °C i mešana na 80 °C tokom 6 sati. U smešu je dodat (Boc)2O (18,5 g, 85,0 mmol, 19,5 mL) i smeša je mešana na 80 °C tokom 1 sata. Dodata je voda (150 mL) i smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 mL). Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom (200 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EA od 10:1 do 0:1) dajući terc-butil 4-(7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,74 g, 5,26 mmol, 61,9 % prinos, 95,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 495,4[M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido(3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1- karboksilat (2,51 g, 5,07 mmol) i DIEA (1,97 g,

15,2 mmol, 2,65 mL) u DCE (50 mL) je dodat 1-hloroetil karbonohloridat (1,81 g, 12,7 mmol) na 0 °C, i smeša je mešana na 15 °C. °C tokom 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u MeOH (50 mL) i reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 1,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50 mm*10 um;mobilna faza: [voda(0,225 %FA)-ACN];B%: 23 %-48 %,30;50 %min) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat (1,13 g, 2,51 mmol, 49,5 % prinos, 90,0 % čistoća) kao ružičasta čvrsta supstanca.

ES+APCI MS m/z 405,3[M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (730 mg, 1,80 mmol), (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat (832 mg, 2,71 mmol) i Cs2CO3 (1,76 g, 5,41 mmol) u toluenu (18 mL) je dodat [2-(2-aminofenil))fenil]paladijum(1+);dicikloheksil-[2-(2,4,6-triizopropilfenil)fenil]fosfanmetansulfonat (153 mg, 180 umol), suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 4 sata. Po završetku, u smešu je dodata voda (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (4 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (40 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 30:1 do 0:1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfanil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (740 mg, 1,15 mmol, 63,7 % prinos, 98,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 631,5[M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 158 umol) u DCM (2 mL) je dodat m-CPBA (32,2 mg, 158 umol, 85,0 % čistoće) na 0 °C i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata.

Reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2S203 (4 mL) na 0 °C i odvojena, zatim razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EA od 10:1 do 0:1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfinil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (90 mg, 125 umol, 79,0 % prinos, 90,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 647,5[M+H]<+>.

Korak G: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (560 mg, 866 umol), [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (199 mg, 1,73 mmol) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (125 mg, 1,30 mmol) na 0 °C i smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Smeša je podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (15 mL) i odvojena. Zatim je vodeni sloj ekstrahovan sa EtOAc (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom reverzne faze da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2R)-1 -metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (340 mg, 481 umol, 55,5 % prinos, 98,7 % čistoća) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 698,4[M+H]<+>.

Korak H: [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 201 umol) u DCM (0,2 mL) je dodata TFA (229 mg, 2,01 mmol, 148 uL) na 15 °C i smeša je mešana na 15 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (170 mg, sirov, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak I: [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (170 mg, 206 umol, 2TFA) i DIEA (213 mg, 1,65 mmol, 287 uL) u DCM (0,3 mL)) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (38,9 mg, 309 umol) na 0 °C i ova smeša je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (0,5 mL), zatim koncentrovana pod vakuumom. Talog (DCM: MeOH=10:1) je prečišćen hromatografijom na silika gelu (iz PE: EtOAc=2:1 do EtOAc:

MeOH=0:1) da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat (170 mg, 182 umol, 88,7 % prinos, 70,0 % čistoća) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 652,6[M+H]<+>.

Korak J: 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat (170 mg, 261 umol) u THF (1,5 mL) je dodat NaOH (2 M, 1,5 mL) i reakcija je mešana na 15 °C tokom 6 sati. Reakciona smeša je neutralizovana sa HCOOH (20 %, 0,1 mL) do pH=7. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 5 mL), kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u;mobilna faza: [voda (0,225 % mravlja kiselina)-ACN];B%:12 %-39 %,10min) da bi se dobio 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (6,88 mg, 11,6 umol, 4,44 % prinos, 95,6 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 568,5[M+H]<+>.

PRIMER 179

2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol: U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1 g, 4,97 mmol) u THF (40 mL) dodat je LiAlH4 (377 mg, 9,94 mmol) na 0 °C, zatim smeša je zagrejana do 70 °C i mešana na 70 °C tokom 4 sata. Reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2SO4 (3 mL) i filtrirana, filterski kolač je ispran sa THF (5 × 20 mL). Kombinovana organska faza je koncentrovana pod vakuumom da se dobije [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (820 mg, sirovo) kao žuto ulje.1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 3,66 - 3,62 (dd, J = 4,8, 10,0 Hz, 1H), 3,53 - 3,49 (dd, J = 5,6, 10,0 Hz, 1H), 3,35 - 3,18 (m,

1

1H), 2,77 - 2,68 (m, 1H), 2,59 (m, 1H), 2,59 - m, 1H), 2,52-2,45 (m, 1H), 2,40-2,33 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,31-2,26 (m, 1H), 2,04-1,93 (m, 1H), 1,69- 1,59 (m, 1 H)

Korak B: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 773 umol) i [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (178 mg, 1,55 mmol) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (111 mg, 1,16 mmol) i ova smeša je mešana na 15 °C tokom 30 minuta. U smešu je dodat etil acetat (20 mL) i voda (15 mL), a zatim ekstrahovan etil acetatom (3 × 20 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % mravlja kiselina) = 42 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)- 1-naftil]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (180 mg, 245 umol, 31,7 % prinos, 95,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 698,6[M+H]<+>.

Korak C: [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 258 umol) i TFA (588 mg, 5,16 mmol, 382 uL) su mešani na 20 °C tokom 1,5 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (200 mg, sirov, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak D: [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (200 mg, 242 umol, 2TFA) i DIEA (470 mg, 3,63 mmol, 633 uL) u

2

DCM (0,6 mL)) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (30,5 mg, 242 umol) na 0 °C i reakcija je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EA= 2:1∼0:1 do DCM: MeOH=50:1~1:1) da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1- metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (630 mg, sirovo) kao smeđe ulje. ES+APCI MS m/z 652,6[M+H]<+>.

Korak E: 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (630 mg, 966 umol) u THF (3 mL) je dodat NaOH (2 M, 3 mL) na 18 °C i smeša je mešana na 18 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je neutralizovana sa HCOOH (20 %, 0,5 mL) do pH=7. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 5 mL), kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um;mobilna faza: [voda(10 mm NH4HCO3)-ACN];B%: 35 %-65 %,3 min) da bi se dobio 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (9,4 mg, 15,8 umol, 1,64 % prinos, 95,5 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 568,5[M+H]<+>.

PRIMER 180

4-(3-(4-(piperazin-1-il)-7-(5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-2-iloksi)propil)morfolin

Korak A.2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksiletil-trimetilsilan: U rastvor 4-bromo-5-(trifluorometil)-1H-indazola (650 mg, 2,45 mmol, 1 ekv.) u DMF (30 mL) dodat je NaH (117,71 mg, 2,94 mmol, 60 % čistoće, 1,2 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, u kapima je dodat rastvor 2-(hlorometoksi)etiltrimetil-silana (531,56 mg, 3,19 mmol, 564,29 uL, 1,3 ekv.) u DMF (10 mL). Smeša je zagrejana na 15 °C i mešana 2 sata. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50,0 mL), razblažena vodom (100,0 mL) i zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 100,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil

4

acetat = 10:1).2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetil-silan (680 mg, 1,70 mmol, 69,44 % prinos, 99,0 % čistoća) je dobijen kao bezbojno ulje. ES+APCI MS m/z 395,0[M+H]<+>.

Korak B. terc-butil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša 2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetil-silana (444,35 mg, 1,12 mmol, 1,3 ekv.), terc-butil 4-[2-(3 -morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 864,71 umol, 1 ekv.), RuPhos (80,70 mg, 172,94 umol) 0,2 ek), Pd2(dba)3 (118,77 mg, 129,71 umol, 0,15 ek) i Cs2CO3 (845,21 mg,

2,59 mmol, 3 ek) u toluenu (40 mL) je degazirana i pročišćena sa N23 puta. je mešana na 90 °C tokom 12 sati pod azotom. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio toluen. Ostatak je razblažen sa 100 mL vode i ekstrahovan sa Etil acetatom 300 mL (100 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 300 mL vode (100 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM: CH3OH = 30:1 do 20:1). terc-butil 4-[2-(3-morfolinopropoksi)-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 446,87 umol, 51,68 % prinosa, 86,8 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 773,3[M+H]<+>.

Korak C.4-[3-[[4-piperazin-1-il-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -2-il]oksi]propil]morfolin: U rastvor terc-butil-4-[2-(3-morfolinopropoksi)-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5Hpirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 111,72 umol, 1 ekv.) u DCM (2 mL) je dodat TFA (254,77 mg, 2,23 mmol, 165,43 uL, 20 ekv.) na 23 °C. Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu.4-[3-[[4-piperazin-1-il-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -2-il]oksi]propil]morfolin (200 mg, sirov, TFA) je dobijen kao ulje braon boje. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 547,5[M+H]<+>.

Korak D.1-[4-[2-(3-morfolinopropoksi)-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 4-[3-[[4-piperazin-1-il-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-2-il]oksi]propil]morfolin (200 mg, TFA) i DIEA (600 mg, 4,64 mmol, 808,63 uL) u DCM (2 mL) dodaju se u kapima prop-2-enoil prop-2-enoat (13 mg, 103,08 umol) na -50 °C. Smeša je mešana na -50 °C 30 min.

Smeša je ugašena vodom i ekstrahovana etil acetatom (50 mL), organski sloj je ispran vodom (1 × 20 mL) i slanim rastvorom (1 × 20 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (FA stanje) kolona: Luna C18150*25 5u;mobilna faza: [voda(0,225 %FA)-ACN];B%: 15 %-36 %,10 min].1-[4-[2-(3-morfolinopropoksi)-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (18,26 mg, 28,12 mmol, dva koraka 23 %, 99,6 % čistoće, FA) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 601,4[M+H]<+>.

PRIMER 181

1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1H-indazol- 4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A. benzil 4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor 3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il)propan-1-ola (107 mg, 681 umol) u THF (2 mL) dodat t-BuONa (98,1 mg, 1,02 mmol) a zatim benzil 4-[2-metilsulfinil-7-[5-metil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 340 umol). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Smeša je sipana u vodu (10 mL) i ekstrahovana sa DCM (2x10 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,1 %TFA) - ACN]; B%: 25 %-55 %, 12 min) da bi se dobio benzil 4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo [2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin -1-karboksilat (110 mg, 143 umol, 42,0 % prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,08 - 8,01 (m, 1H), 7,45 -7,43 (m, 4H), 7,37 - 7,31 (m, 3H), 5,76 (s, 2H), 5,24 (s, 2H), 4,76 - 4,63 (m, 1H), 4,60 - 4,45 (m, 3H), 4,42 (s, 2H), 4,36 - 4,24 (m, 1H), 3,96 - 3,83 (m, 2H), 3,79 -3,65 (m, 8H), 3,64 - 3,53 (m, 6H), 3,12 - 2,92 (m, 1H), 2,90 - 2,77 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,44 - 2,41 (m, 1H), 2,36 - 2,12 (m, 3H), 0,98 - 0,93 (m, 2H), 0,01 - -0,03 (m, 9H)

Korak B. terc-butil 4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1 -((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo [2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1- ((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (90 mg, 117 umol) i BOC2O (51,1 mg, 234,1 umol, 53,8 uL) u MeOH (2 mL) je dodat Pd/C (10 %, 50 mg) u atmosferi N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 12 sati. Smeša je filtrirana i koncentrovana.

Ostatak je prečišćen prep-TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10: 1) da se dobije terc-butil 4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil- 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (30 mg, 40,8 umol). ES+APCI MS m/z 735,6[M+H]<+>.

Korak C. (1S,4S)-5-(3-((7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3),4-d]pirimidin-2-il)oksi)propil)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan: U rastvor terc-butil 4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo [2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil- 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (30 mg, 40,8 umol) u DCM (0,5 mL) je dodat TFA (770 mg, 6,75 mmol) u kapima. Smeša je mešana na 15 °C tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio (1S,4S)-5-(3-((7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6),7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)propil)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan (30 mg, sirov). ES+APCI MS m/z 505,5[M+H]<+>.

Korak D.1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1H) -indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: U rastvor (1S,4S)-5-(3-((7-(5-metil-1H-indazol-4-il)-4-(piperazin-1-il)-5,6,7,8) -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)propil)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan (20 mg, 39,6 umol, 1 ekv.) i DIEA (30,7 mg, 238) umol, 41,4 uL, 6 ek) u DCM (2 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (4,00 mg, 31,7 umol, 0,8 ek) na -50 °C. Smeša je mešana na -40 - -20 °C tokom 30 minuta. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 35 %-65 %,12 min). Proizvod 1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(5-metil-1H-) indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (6,48 mg, 11,2 umol, dva koraka 28,3 % prinosa, 96,8 % čistoće) je dobijena kao bela čvrsta supstanca. ES+APCI MS m/z 559,5[M+H]<+>.

PRIMER 182

2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (190 mg, 403 umol), (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat (248 mg, 806 umol) i Cs2CO3 (394 mg, 1,21 mmol) u toluenu (5 mL) je dodat KSPHOS Palladacicle Gen 3 (34,1 mg, 40,29 umol) reakciona smeša je mešana na 70 °C 4 sata pod N2. Po završetku, reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (PE: EA= 3:1 do 0:1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-[3(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (95 mg, 118 umol). ES+APCI MS m/z 698,4 [M+H]<+>.

Korak B: [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat.[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-propandiol] 2,2-propandiot]. U rastvor tercbutil 2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (40 mg, 57,3 umol) u DCM (0,1 mL) je dodata TFA (154 mg,

1,35 mmol) na 15 °C.ropanoat. Reakciona smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Po završetku, rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (47 mg, 56,9 umol).

Korak C: [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat. U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (47 mg, 56,9 umol) i DIEA (58,9 mg, 455 umol) u DCM (1 mL) je dodat prop- 2-enoil prop-2-enoat (10,8 mg, 85,4 umol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je ugašena dodavanjem kapi vode. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc=3:1 do EtOAc: MeOH =3:1) da bi se dobio [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (130 mg, sirov). ES+APCI MS m/z 652,5 [M+H]<+>.

Korak D: 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor [4-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (250 mg, 384 umol) u THF (1,5 mL) je dodat NaOH (2 M, 1,5 mL) u vodi. Reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 9 sati. Po završetku, reakciona smeša je zakiseljena dodavanjem dve kapi mravlje kiseline (20 % u vodi) da bi se postigla PH=7 i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (5 × 10 mL).

Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*30 5u;mobilna faza: [voda(0,225 %FA)-ACN];B%: 20 %-47 %,10 min) da bi se dobio 2-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (13,1 mg, 21,2 umol). ES+APCI MS m/z 568,5 [M+H]<+>.

PRIMER 183

2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-

1

karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (300 mg, 549 umol) i [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (126 mg, 1,10 mmol, 130 uL) u toluenu (6,00 mL) je dodat t-BuONa (105). mg, 1,10 mmol). Smeša je mešana na 20 °C 15 minuta. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EA/MeOH 50/1 do 10/1) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 427 umol). ES+APCI MS m/z 598,6 [M+H]<+>.

Korak B: 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (270 mg, 452 umol) u DCM (330 uL) je dodat TFA (515 mg, 4,52 mmol). Smeša je mešana na 20 °C 30 minuta i koncentrovana pod vakuumom. Zatim je dodat TFA (334 uL). Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, sirov). ES+APCI MS m/z 498,4 [M+H]<+>.

Korak C: 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (276 mg, 451 umol) i DIEA (1,46 g, 11,3 mmol) u DCM (4,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (51,2 mg, 406 umol) kap po kap na 0 °C. Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Po završetku, smeša je razblažena vodom (0,5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 10 mL).

Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 55 %-85 %,12 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (37,1 mg, 66,3 umol). ES+APCI MS m/z 552,4 [M+H]<+>.

2

PRIMER 184

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-hidroksipropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

1-[4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-(3-hidroksipropoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-il]prop-2-en-1-on je pripremljen prema Primeru 136 zamenom 3-[terc-butil(dimetil)silil]oksipropan-1-ola za 2-(3-metoksipirolidin-1-il)etanol u Koraku B. ES+APCI MS m/z 490,3 [M+H]<+>.

PRIMER 185

1-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: 3-((1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1-ol: U bočicu je dodata (1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan HCl so (0,250 g, 2,522 mmol), CH3CN (5,04 mL) i 3-bromo-1-propanol (0,274 mL 3,026 mmol). Zatim je dodat K2CO3 (1,05 g, 7,57 mmol) i smeša je zagrejana na 50 °C gde je mešana 16 sati. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena sa CH2CI2 i filtrirana, a čvrsta supstanca je isprana sa CH2Cl2. Filtrat je zatim koncentrovan i sirovo ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (5 % MeOH/DCM sa 0,2 % NH4OH) da bi se dobio proizvod kao bezbojno ulje.

Korak B: 1-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera_127 korišćenjem sledeće procedure umesto onog opisanog u koraku D. U bočicu je dodat 3-((1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il)propan-1-ol (0,171 g, 1,09 mmol) i benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,125 g, 0,218 mmol) a zatim dioksan (0,435 mL). Zatim je dodat Cs2CO3 (0,213 g, 0,653 mmol) i smeša je zagrevana na 100 °C tokom 15 sati. Reakcija je razblažena sa CH2Cl2, filtrirana i zaostala čvrsta supstanca je isprana sa CH2Cl2. Filtrat je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (4 % MeOH/DCM sa 0,2 % NH4OH) da bi se dobio proizvod kao žuta pena. ES+APCI MS m/z 571,2 [M+H]<+>.

PRIMER 186

benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-(morfolinometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat

benzil 4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-(morfolinometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Sintetizovano u

4

skladu sa metodom iz Primera 127 korišćenjem sledeće procedure umesto onog opisanog u koraku D. U rastvor benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,150 g, 0,261 mmol) i pinakol estar 3-(4-morfolinometil)-fenilborne kiseline hidrohlorid (0,266 g, 0,784 mmol) u dioksanu (2,61 mL) je dodat Na2C03 (0,523 mL, 1,0452 mmol, 2,0 M Aq). Smeša je degazirana mehurićenjem argona tokom 5 min. Zatim je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (0,030 g, 0,026 mmol) i smeša je zagrejana do 95 °C gde je mešana 7 sati. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, a zatim razblažena sa CH2CI2 i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa CH2CI2. Filtrat je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (30-50 % EtOAc/DCM) da bi se dobio proizvod kao žuta pena. ES+APCI MS m/z 591,3 [M+H]<+>.

PRIMER 187

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom N-metil-D-prolinola za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 529,3 [M+H]<+>.

PRIMER 188

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (3S)-(1-metil-pirolidin-3-il)-metanola za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 529,2 [M+H]<+>.

PRIMER 189

1-(4-(2-((1-benzilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-(4-(2-((1-benzilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (1-benzilpirolidin-3-il)metanola za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 605,3 [M+H]<+>.

PRIMER 190

1-(4-(2-((1-ciklopropilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-(4-(2-((1-ciklopropilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (1-ciklopropil-3-pirolidinil)metanola za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 555,3 [M+H]<+>.

PRIMER 191

1-((2S,6R)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: Benzil 4-((3S,5R)-4-(terc-butoksikarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Suspenzija benzil 2,4-dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilata (500 mg,

1,48 mmol), terc-butil cis-2,6-dimetilpiperazin-1-karboksilat (349 mg, 1,63 mmol) i DIEA (0,26 mL) u N,N-dimetilacetamidu (1 mL) je mešan na s.t. preko noći.

Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (15 mL) i 1M NaHCO3 (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa 2M Na2CO3 i slanim rastvorom (2 mL svaki), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na koloni silika gela Redisep 24g korišćenjem 20 do 50 % EtOAc u heksanu kao eluenta da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (0,440 g, 58 %). ES+APCI MS m/z 516,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-((3S,5R)-4-(terc-butoksikarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin -7(6H)-karboksilat: Smeša benzil 4-((3S,5R)-4-(terc-butoksikarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin- 7(6H)-karboksilat (400 mg, 0,775 mmol), 3-morfolinopropan-1-ol (400 mg, 2,33 mmol, 5 ekv.), cezijum karbonat (1,26 g, 3,88 mmol, 5 ekv.) i dioksan (3 ekv.) mL) u bočici od 4 mL je pročišćena azotom. Bočica je zatvorena i smeša je mešana na 110 °C tokom 20 sati, zatim na 120 °C preko noći. Reakcija je ohlađena, razblažena sa EtOAc (10 mL), filtrirana kroz celit i uparena u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu, Redisep 40 g, koristeći 2 do 10 % MeOH/DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila svetlo žuta amorfna čvrsta supstanca (272 mg, 56 %).

Korak C: terc-butil (2S,6R)-2,6-dimetil-4-(2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat: Smeša benzil 4-((3S,5R)-4-(terc-butoksikarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-2-(3morfolinopropoksi)-5,8-dihidropirido[3,4- d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (272 mg, 0,095 mmol), paladijum na ugljeniku (50 mg, tip Degussa, 10 tež.%, 50 % H2O), EtOH (5 mL) i THF (5 mL) su pročišćeni sa vodonikom i mešana u atmosferi H2 (gumeni balon) 3 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOH (3 mL), filtrirana kroz Celite i celit je ispran sa EtOH (2 × 2 mL). Kombinovani organski slojevi su upareni u vakuumu i sušeni pod visokim vakuumom tokom 2 dana da bi se dobila prljavo bela pena (205 mg, 96 %). ES+APCI MS m/z 491,3 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil (2S,6R)-4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-karboksilat: U mešanu suspenziju tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (0) (19 mg, 0,020 mmol) u suvom degaziranom toluenu (0,5 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom je dodat (+/-)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil (24 mg, 0,038 mmol). Smeša je zatim zagrevana na 100 °C tokom 15 minuta. Dobijena tamna smeša je ohlađena do sobne temperature i dodat je čvrsti natrijum-t-butoksid (39 mg, 0,41 mmol), a zatim rastvor 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata (82 mg, 0,25 mmol) i terc-butil (2S,6R)-2,6-dimetil-4-(2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (100 mg, 0,20 mmol) u degaziranom suvom toluenu (0,5 mL). Boca je zatvorena i zagrevana uz mešanje do 100 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL). Organski sloj je odvojen i ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu, Redisep 40 g, koristeći 4 % MeOH 0,1 % NH4OH u DCM kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (87 mg, 63 %). ES+APCI MS m/z 684,3 [M+H]<+>.

Korak E: 1-((2S,6R)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: terc-butil (2S,6R)-4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-karboksilat (87 mg, 0,129 mmol) je rastvoren u 1M TFA/DCM. Reakciona smeša je postala crveno-braon, a zatim tamnocrvena. LCMS je pokazao neselektivnu deprotekciju Boc i MOM. Posle mešanja 30 min na sobnoj temperaturi, dodato je 0,2 mL dodatne TFA i reakciona smeša je ostavljena na sobnoj temperaturi još 30 min. Dobijena dvofazna smeša je uparena u vakuumu, podeljena između vode (5 mL) i DCM (10 mL) Net3 (0,5 mL) i organski sloj je odvojen. Organski sloj je osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu, Redisep 40 g, koristeći 6 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobio drugi ostatak koji je ponovo prečišćen na reverznoj fazi, C18, 5-95 % MeCN- H2O 0,1 % TFA da bi se dobilo proizvod za koji se pretpostavlja da je bis-sol sa TFA (1,35 mg, 1,3 %). ES+APCI MS m/z 587,3 [M+H]<+>.

PRIMER 192

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom 3-piperidinmetanola,1-metil-,(3R)- za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 193

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (4-metil-2-morfolinil)metanola za N-metil-L-prolinol u koraku D. ES+APCI MS m/z 545,3 [M+H]<+>.

PRIMER 194

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1

1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom 4-metil-3-(hidroksimetil)morfolina za N-metil-L-prolinol u koraku D. ES+APCI MS m/z 545,2 [M+H]<+>.

PRIMER 195

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(R)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (R)-(1-metilpiperidin-2-il)metanola za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 196

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

2

(S)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (S)-(1-metilpiperidin-2-il)metanola za N-metil-L-prolinol u koraku D. ES+APCI MS m/z 543,2 [M+H]<+>.

PRIMER 197

(S)-1-(4-(2-((1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(2-((1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom [(2S)-1-etil-2-pirolidinil]metanola za N-metil-L-prolinol u koraku D. ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 198

(S,E)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-jedan

(S,E)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom trans-krotonil hlorida za akriloil hlorid u Koraku F. ES+APCI MS m/z 543,2[M+H]<+>.

PRIMER 199

(S,E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-jedan

(S,E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom sledeće procedure za korak F.7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4 -(piperazin-1-il)-4a,5,6,7,8,8a-heksahidropirido[3,4-d]pirimidin (150 mg, 0,288 mmol) je rastvoren u DCM (5 mL) i tretiran sa (2E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (74,4 mg, 0,576 mmol) i Hunigova baza (252 ul,

4

1,44 mmol). Ovoj smeši su dodani EDC (55,2 mg, 0,288 mmol) i HOBT (38,9 mg, 0,288 mmol) čisti u obliku praha. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat i zagrevana na 35 °C još 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i prečišćena na CombiFlash (0 %-15 % DCM/MeOH v/1 % NH4OH modifikator). Sve frakcije koje sadrže čist željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobilo (E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4a,5,6,7,8,8a-heksahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2- en-1-on (105 mg, 0,166 mmol, 57,7 % prinos). Proizvod je usledio nakon ostatka Primera 127 dajući (S,E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-((1-metilpirolidin-2) -il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)but-2-en-1-on (14,8 mg, 0,025 mmol, 15,2 % prinosa). ES+APCI MS m/z 586,3[M+H]<+>.

PRIMER 200

(S)-1-(4-(2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

(S)-1-(4-(2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom naftalen-1-il trifluorometansulfonata za 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il trifluorometansulfonata u koraku C i bez izvođenja koraka F. ES+APCI MS m/z 513,3 [M+H]<+>.

PRIMER 201

1-((R)-2-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-((R)-2-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom (R)-benzil 2-metilpiperazin-1-karboksilata za benzil piperazin-1-karboksilat u koraku A i zamenom naftalen-1-il trifluorometansulfonata za 3-(metoksimetoksi)naftalen-1-ilsulfonat trifluorom u koraku C i ne izvodi Korak F. ES+APCI MS m/z 527,3 [M+H]<+>.

PRIMER 202

1-((S)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-((S)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom benzil (S)-3-metilpiperazin-1-karboksilata za benzil piperazin-1-karboksilat u Koraku A.

ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 203

1-((S)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

1-((S)-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 127 zamenom benzil (S)-3-metilpiperazin-1-karboksilata za benzil piperazin-1-karboksilat u koraku A i zamenom N-metil-D-prolinola za N-metil-L-prolinol u Koraku D. ES+APCI MS m/z 543,3 [M+H]<+>.

PRIMER 204

1-(4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)amino)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: benzil 4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)amino)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (75 mg, 0,13 mmol), 1-ciklopropilpiperidin-4-amin (55 mg, 0,39 mmol) i dioksan (0,5 mL) su zagrevani na 120 °C tokom 36 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (10 mL) i vode (3 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu, a ostatak je hromatografisan na silicijum dioksidu, Redisep 24 g, koristeći 6 do 10 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (43 mg, 49 %). ES+APCI MS m/z 678,3 [M+H]<+>.

Korak B: 1-(4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)amino)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Smeša benzil 4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)amino)-7-(3-(metoksimetoksi)-naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (43 mg, 0,063 mmol), paladijum na ugljeniku (20 mg, Degussa tip, 10 tež%, 50 % H2O), EtOH (1,5 mL) i THF (1,5 mL) je pročišćeno vodonikom i mešano u atmosferi H2 (gumeni balon) 3 sata. Smeša je razblažena sa EtOH (3 mL), filtrirana kroz Celite i celit je ispran sa EtOH (2 × 2 mL). Kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (5 mL) i ohlađen na kupatilu sa ledom i soli uz mešanje. Zatim je odmah dodat trietilamin (0,03 mL), a zatim akriloil hlorid (10 µL). Posle 1 min na -5 °C reakcija je ugašena sa NH4OH (0,05 mL) i uparena u vakuumu. Ostatak je mešan 5 min sa DCM (5 mL), filtriran i hromatografisan na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 6 do 20 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (22 mg, 48 %). ES+APCI MS m/z 598,3 [M+H]<+>.

Korak C: 1-(4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)amino)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: U mešani rastvor 1-(4-(2-((1-ciklopropilpiperidin-4-il)amino)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (22 mg, 0,037 mmol) u smeši MeOH i THF 1:1 (3 mL) je doda se 6M vodeni rastvor HCl (0,3 mL, 34 ekv.) odjednom i dobijeni rastvor je zagrevan uz mešanje na 50 °C tokom 1,5 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (15 mL) i 0,5 M Na2CO3 (10 mL) i organski sloj je odvojen. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 mL), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu.

Ostatak je hromatografisan na silicijum dioksidu, Redisep 12 g, koristeći 8 do 10 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (15 mg, 74 %). ES+APCI MS m/z 554,3 [M+H]<+>.

PRIMER 205

1-(4-(7-(6-hidroksihinolin-8-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: benzil 4-(7-(6-(metoksimetoksi)hinolin-8-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin -1-karboksilat: U mešanu suspenziju tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (0) (17 mg, 0,019 mmol) u degaziranom suvom toluenu (0,5 mL) pod azotom na sobnoj temperaturi dodat je (+/-)-2,2'-bis(difenilfosfino) -1,1'-binaftil (24 mg, 0,038 mmol) i smeša je zagrevana na 100 °C tokom 15 minuta.difenilfosfino)-1,1'-binafinil (24 mg, 0,038 mmol) i 100 minuta je bila zagrijana za 15 °C. Tamna smeša je ohlađena do sobne temperature i zatim je dodat čvrsti natrijum-t-butoksid (36 mg, 0,38 mmol), a zatim rastvor 8-bromo-6-(metoksimetoksi)hinolina (61 mg, 0,23 mmol) i benzila 4-(2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (94 mg, 0,19 mmol) u degaziranom suvom toluenu (0,5 mL).8-tetrahidropirido[3,4-tetrahidropirid-diazin] (4-1-0,19-394-dien-0,5-dien) Balon je zatvoren i zagrevan na 100 °C 1 sat na 100 °C 1 sat. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (15 mL) i vode (5 mL) i organski slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu, Redisep 24 g, koristeći 4 do 10 % MeOH u dihlorometanu (+0,2 % NH4OH) kao eluent da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (28 mg, 22 %).

ES+APCI MS m/z 684,3 [M+H]<+>.

4

Korak B: 1-(4-(7-(6-(metoksimetoksi)hinolin-8-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Smeša benzil 4-(7-(6-(metoksimetoksi)hinolin-8-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat (28 mg, 0,095 mmol), Pd/C (15 mg, Degussa tip, 10 tež%, 50 % H2O), EtOH (2 mL) i THF (2 mL) su pročišćeni vodonikom i mešano u atmosferi H2 (gumeni balon) 2 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOH (3 mL), filtrirana kroz Celite i celit je ispran sa EtOH (2 × 2 mL) i kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (5 mL) i ohlađena u kupatilu sa ledom i soli uz mešanje. Zatim je odmah dodat trietilamin (0,04 mL, 3 ekv.), a zatim akriloil hlorid (16 µL, 2 ekv.). Posle 1 min na -5 °C reakcija je ugašena sa NH4OH (0,05 mL) i uparena u vakuumu. Smeša je filtrirana kroz pamučni čep, hromatografisana na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 6 do 10 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobio drugi ostatak koji je ponovo prečišćen na reverznoj fazi, C18, 5 do 95 % MeCN, 0,1 % HCO2H da bi se dobio proizvod za koji se pretpostavljalo da je bis-formatna so kao žuta čvrsta supstanca (12 mg, 42 %). ES+APCI MS m/z 604,2 [M+H]<+>.

Korak C: 1-(4-(7-(6-hidroksihinolin-8-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)prop-2-en-1-jedan: U mešani

4 1

rastvor 1-(4-(7-(6-(metoksimetoksi)hinolin-8-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (12 mg, 0,017 mmol) u smeši MeOH i THF 1:1 (1 mL) je dodat 6M vodeni rastvor HCl (0,1 mL)., 35 ekv.) odjednom i rastvor je zagrevan uz mešanje na 50 °C tokom 1,5 sat. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (15 mL) i 0,5 M Na-fosfatnog pufera sa pH 8 (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 mL), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu, Redisep 12 g, koristeći 7 do 10 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobio ostatak koji je ponovo prečišćen hromatografijom reverzne faze, C18, 5 do 95 % MeOH 0,1 % TFA,) da bi se dobio proizvod kao tris TFA so kao bezbojna čvrsta supstanca (4,87 mg, 31 %). ES+APCI MS m/z 560,3 [M+H]<+>.

PRIMER 206

1-(4-(2-(3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: 3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propan-1-ol. Smeša 3-azabiciklo[3.1.0]heksan hidrohlorida (200 mg, 1,67 mmol), 3-bromopropan-1-ola (166 µL, 1,84 mmol, 1,1 ekv.), K2CO3 (0,69 g, 5,02 mmol, 3 ekv.).), NaI (251 mg, 1,67 mmol, 1 ekv.) i acetonitril (2 mL) u bočici od 4 mL su isprani sa N2. Bočica je zatvorena i mešana na sobnoj temperaturi 2 dana. Smeša je razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana etrom (15 mL). Etarski rastvor je ispran slanim rastvorom,

4 2

osušen preko Na2SO4 i dekantovan u tikvicu u obliku kruške i dodata je trifluorosirćetna kiselina (128 µL, 1 ekv.) i smeša je koncentrovana do ~5 mL. Gornji etarski sloj je dekantovan i odbačen, a zaostala uljasta tečnost je osušena pod vakuumom preko noći. Uljasta tečnost je razblažena sa vodom (0,5 mL), zatim je dodat etar (10 mL) uz mešanje, a zatim 50 % NaOH (0,2 mL, 2,5 mmol, 2 ekv.). Slojevi su razdvojeni, organski rastvor je osušen preko KOH i pažljivo koncentrovan pod azotom da bi se dobio sirovi 3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propan-1-ol kao bezbojno ulje. Koristi se u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: Benzil 4-(2-(3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)-naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (75 mg, 0,13 mmol), sirovi 3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propan-1-ol (55 mg,

0,39 mmol, 3 ekv.), Cs2CO3 (213 mg, 0,65 mmol, 5 ekv.) i dioksan (0,5 mL) u bočici od 1,7 mL je pročišćen azotom. Bočica je zatvorena i mešana na 120 °C tokom vikenda. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (15 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, uparen u vakuumu i ostatak je hromatografisan na silika gelu, Redisep 24 g, koristeći 4 do 10 % MeOH 1 % NH4OH kao eluent da bi se dobio proizvod. ES+APCI MS m/z 679,3 [M+H]<+>.

4

Korak C: 1-(4-(2-(3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Smeša benzil 4-(2-(3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)-naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (49 mg, 0,072 mmol), paladijum na ugljeniku (12 mg, tip Degussa, 10 tež.%, 50 % H2O), EtOH (1,5 mL) i THF (1,5 mL) su pročišćeni vodonikom i mešani u atmosferi H2 (gumeni balon) 3 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOH (3 mL), filtrirana kroz Celite i celit je ispran sa EtOH (2 × 2 mL). Kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Dobijena bezbojna čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (5 mL), ohlađena u kupatilu sa ledom i soli uz mešanje i odmah je dodat trietilamin (0,04 mL, 3 ekv.), a zatim je dodat akriloil hlorid (16 µL, 2 ekv.). Posle 1 min na -5 °C reakcija je ugašena sa NH4OH (0,05 mL) i uparena u vakuumu. Sirovi proizvod je rastvoren u DCM (5 mL), filtriran kroz pamučni čep i hromatografisan na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 6 do 10 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (30 mg, 69 %). ES+APCI MS m/z 599,3 [M+H]<+>.

Korak D: 1-(4-(2-(3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: U mešani rastvor 1-(4-(2-(3-(3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-

4 4

il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (30 mg, 0,050 mmol) u smeši MeOH i THF 1:1 (3 mL) je dodat 6M vodeni rastvor HCl (0,3 mL, 36 ekv.) i rastvor je zagrevan uz mešanje na 50 °C tokom 1,5 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (20 mL) i 0,5 M Na2CO3 (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silicijum dioksidu, Redisep 12 g, koristeći 6 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (20,62 mg, 74 %). ES+APCI MS m/z 555,4 [M+H]<+>.

PRIMER 207

(R)-1-(4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: (R)-2-(3-fluoropiperidin-1-il)etan-1-ol. Smeša R-3-fluoropiperidin hidrohlorida (209 mg, 1,50 mmol), 2-bromoetan-1-ola (117 µl, 1,65 mmol, 1,1 ekv.), K2CO3 (0,62 g, 4,5 mmol, 3 ekv.), natrijum jodid (225 mg, 1,5 mmol, 1 ekv.) i acetonitril (2 ml) u bočici od 4 ml su isprani sa N2. Bočica je zatvorena i mešana na sobnoj temperaturi 2 dana. Dobijena suspenzija je razblažena vodom (2 ml) i ekstrahovana etrom (15 ml). Etarski rastvor je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i dekantovan u tikvicu u obliku kruške i dodata je trifluorosirćetna kiselina (115 µl, 1 ekv.) i smeša je koncentrovana do ~5 ml. Gornji etarski sloj je dekantovan, zaostala uljasta tečnost je osušena pod

4

vakuumom preko noći. Uljasta tečnost je razblažena vodom (0,5 ml) i etrom (10 ml) uz mešanje, nakon čega je usledilo dodavanje 50 % NaOH (0,2 ml, 2,5 mmol, 2 ekv.). Slojevi su razdvojeni, organski rastvor je osušen preko KOH, filtriran i pažljivo koncentrovan pod azotom da bi se dobio sirovi amino alkohol kao bezbojno ulje (120 mg, 54 %).

Korak B: benzil (R)-4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (75 mg, 0,13 mmol), sirovi (R)-2-(3-fluoropiperidin-1-il)etan-1-ol (58 mg, 0,39 mmol), Cs2CO3 (213 mg, 0,65 mmol) i dioksan (0,5 ml) u bočici od 1,7 ml je pročišćen azotom. Bočica je zatvorena i mešana na 110 °C tokom 48 sati. Reakciona smeša je ohlađena, razblažena sa EtOAc (1 ml), filtrirana kroz Celite i celit je ispran sa EtOAc (2 × 2 ml) i kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Talog je hromatografisan na silicijum dioksidu, Redisep 24 g, koristeći 6 %MeOH u DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (30 mg, 34 %). ES+APCI MS m/z 685,4 [M+H]<+>.

Korak C: (R)-1-(4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-

4

il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Smeša benzil (R)-4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)-naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (30 mg, 0,044 mmol), paladijum na ugljeniku (10 mg, Degussa tip, 10 tež.%, 50 % H2O), EtOH (1,5 ml) i THF (1,5 ml) su pročišćeni vodonikom i mešani u atmosferi H2 (gumeni balon) 2 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOH (3 ml), filtrirana kroz Celite i celit je ispran sa EtOH (2 × 2 ml). Kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Talogje rastvoren u DCM (3 ml) i ohlađen u vodi sa ledom i soli uz mešanje. Zatim je odmah dodat trietilamin (0,02 ml, 3 ekv.), a zatim je usledilo dodavanje akriloil hlorida (7 ul, 2 ekv.). Posle 1 min na -10 °C reakcija je ugašena sa NH4OH (0,03 ml) i uparena u vakuumu. Talog je rastvoren u DCM (5 ml), filtriran i hromatografisan na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 6 do 10 % MeOH u DCM 0,2 % NH4OH u DCM kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (22 mg, 83 %). ES+APCI MS m/z 605,3 [M+H]<+>.

Korak D: (R)-1-(4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: U mešani rastvor (R)-1-(4-(2-(2-(3-fluoropiperidin-1-il)etoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (22 mg, 0,036 mmol) u smeši MeOH i THF 1: 1 (3 ml) je dodat 6M vodeni rastvor HCl (0,3 ml) i rastvor je zagrevan uz mešanje na 50 °C tokom 1,5 sat. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (20 ml) i 0,5 M Na2CO3 (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 ml), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Talog je hromatografisan na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 6 % MeOH u DCM 0,2 %

4

NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (16,86 mg, 83 %). ES+APCI MS m/z 561,2 [M+H]<+>.

PRIMER 208

1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: 3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propan-1-ol. Smeša (3R,4S)-3,4-difluoropirolidin hidrohlorida (200 mg, 1,39 mmol), 3-bromopropan-1-ola (126 µl, 1,39 mmol, 1,0 ekv.), kalijum karbonata (577 mg, 4,18 mmol, 3 ekv.), natrijum jodida (209 mg, 1,39 mmol, 1 ekv.) i acetonitrila (2 ml) u bočici od 7 ml su isprani sa N2. Bočica je zatvorena poklopcem i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 dana. Smeša je razblažena vodom (2 ml) i ekstrahovana etrom (15 ml). Etarski rastvor je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4 i dekantovan u balon u obliku kruške. Zatim je dodata trifluorosirćetna kiselina (107 ul, 1 ekv.) i smeša je uparena i osušena in vacuo. Talog je razblažen vodom (0,5 ml) i ispran etrom (5 mLl. U vodeni sloj je dodat dietil etar (15 ml), a zatim 10 M NaOH (0,2 ml, 5 mmol) i smeša je mešana 1 sat. Organski sloj je odvojen i osušen preko čvrstog KOH, filtriran kroz pamučni čep i uparen pod N2 da bi se dobilo bezbojno ulje (80 mg, 35 %) koje je korišćeno sirovo u sledećoj reakciji

4

Korak B: benzil 4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-(2-hloro-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (75 mg, 0,13 mmol), sirovi 2-(4,4-difluoropiperidin-1-il)etan-1-ol (65 mg, 0,39 mmol), cezijum karbonat (213 mg, 0,65 mmol, 5 ekv.) i dioksan (0,5 ml) u bočici od 1,7 ml je pročišćen azotom. Bočica je zatvorena i mešana na 110 °C tokom vikenda. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena između EtOAc (15 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu, Redisep 24 g, koristeći 3 % MeOH u DCM kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (46 mg, 50 %). ES+APCI MS m/z 703,3 [M+H]<+>.

Korak C: 1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Smeša benzil 4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (46 mg, 0,065 mmol), paladijum na ugljeniku (15 mg, tip Degussa, 10 tež.%, 50 % H2O), EtOH (1 ml) i THF (1 ml) su pročišćeni vodonikom i mešani u atmosferi H2 (gumeni balon) 3 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOH (3 ml), filtrirana kroz Celite i celit je

4

ispran sa EtOH (2 × 2 ml). Kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Talogje rastvoren u DCM (3 ml) i ohlađen u vodi sa ledom i soli uz mešanje. Zatim je dodat trietilamin (0,02 ml), a zatim je dodat akriloil hlorid (7 µl, 2 ekv.). Posle 1 min na -10 °C reakcija je ugašena sa NH4OH (0,03 ml) i uparena u vakuumu. Talogje rastvoren u DCM (3 ml), filtriran i prečišćen hromatografijom na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 5 % MeOH u DCM kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (29 mg, 71 %). ES+APCI MS m/z 623,3 [M+H]<+>.

Korak D: 1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: U mešani rastvor 1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-difluoropirolidin-1-il)propoksi)-7-(3-(metoksimetoksi)naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (29 mg, 0,047 mmol) u smeši MeOH i THF 1:1 (2 mL) je dodat 6M vodeni rastvor HCl (0,2 mL) i rastvor je zagrevan uz mešanje na 50 °C tokom 1,5 sat. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (15 mL) i 0,5 M Na2CO3 (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (3 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Talog je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu, Redisep 12 g, koristeći 5 % MeOH u DCM kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (12,87 mg, 48 %). ES+APCI MS m/z 579,2 [M+H]<+>.

PRIMER 209

1-(4-(7-(5-metil-1H-indol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

41

Korak A: 4-bromo-5-metil-1-(triizopropilsilil)-1H-indol: Rastvor 4-bromo-5-metil-lH-indola (100 mg, 0,476 mmol) u suvom THF (2 mL) pod azotom je ohlađen uz mešanje u vodi sa ledom i soli. Dodan je natrijum hidrid (23 mg 60 % u ulju, 0,57 mg, 1,2 ekv.) i smeša je mešana 30 min na -5 °C, zatim 1 sat na sobnoj temperaturi (prestalo je razvijanje gasa). Zatim je dodat hlorotriizopropilsilan (0,10 ml, 0,48 mmol, 1 ekv.) i reakciona smeša je mešana na s.t.2 sata. Reakcija je podeljena između EtOAc (15 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni.

Organski sloj je ispran vodom (5 mL), slanim rastvorom (5 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Ostatak je prečišćen na silika gelu korišćenjem heksana kao eluenta da bi se dobio proizvod. (107 mg, 63 %).

Korak B: benzil 4-(7-(5-metil-1-(triizopropilsilil)-1H-indol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Mešana smeša tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (0) (17 mg, 0,019 mmol) i (+/-)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftila (24 mg, 0,038 mmol) u suvi degazirani toluen (0,5 ml) pod azotom je zagrevan na 100 °C tokom 15 minuta. Smeša je ohlađena do sobne temperature i dodat je čvrsti natrijum-t-butoksid (37 mg, 0,38 mmol), a zatim je dodat rastvor 4-bromo-5-metil-1-(triizopropilsilil)1H-indola (90 mg, 0,25 mmol) i benzil 4-(2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (94 mg, 0,19 mmol) u suvom degaziranom toluenu (0,5 mL). Reakciona boca je zatvorena i zagrevana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, podeljena između EtOAc (15 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu.

Proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, Redisep 24 g, koristeći 3 do 5 % MeOH u dihlorometanu kao eluent da bi se dobila svetlo žuta čvrsta supstanca (28 mg, 19 %). ES+APCI MS m/z 782,3 [M]<+>.

Korak C: 1-(4-(7-(5-metil-1H-indol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Smeša benzil 4-(7-(5-metil-1-(triizopropilsilil)-1H-indol-4-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (46 mg, 0,065 mmol), paladijum na ugljeniku (35 mg, Degussa tip, 10 tež.%, 50 % H2O) u EtOH (1 mL) i THF (1 mL) je pročišćen vodonikom i mešan u atmosferi H2 (gumeni balon) preko noći. Reakciona smeša je razblažena dioksanom (3 mL), filtrirana kroz celit i celit je ispran dioksanom (2 × 2 mL). Kombinovani organski slojevi su upareni u vakuumu i osušeni pod visokim vakuumom. Talog je rastvoren u THF (1 mL) pod N2, zatim je dodat 1M tetra-n-butilamonijum fluorid u THF (0,07 mL, 2 ekv.) uz mešanje i rastvor je mešan na 0 °C tokom 15 minuta. Reakciona smeša je podeljena između etra (15 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom (3 mL), slanim rastvorom (3 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen pod azotom. Sirovi proizvod je rastvoren u DCM (3 mL) i ohlađen u kupatilu ledaso-suvog leda (-20 °C) uz mešanje. Zatim je dodat trietilamin (10 uL, 2 ekv.), a zatim akriloil hlorid (2 uL, 0,75 ekv.). Posle 10 min na -20 °C reakcija je ugašena sa NH4OH (0,03 mL) i uparen u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5 % MeOH/DCM 0,1 % NH4OH kao eluenta da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (3,69 mg, 19 %). ES+APCI MS m/z 546,3 [M+H]<+>.

PRIMER 210

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: terc-butil 2,4-dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (8,00 g, 26,3 mmol), Hunigova baza (22,9 ml, 132 mmol) i 2-(piperazin-2- il)acetonitril dihidrohlorid (5,21 g, 26,3 mmol) je stavljen u DMA (75 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 20 minuta. U reakciju je dodata voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3x100 mL). Ekstrakti su kombinovani i isprani vodom (3x50 mL), osušeni natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste. ES+APCI MS m/z 393,3 [M+H]<+>.

41

Korak B: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (10,5 g, 26,7 mmol) i TEA (5,6 ml, 40,1 mmol) su stavljeni u THF (100 mL) i ohlađeni na 0 °C. Dodan je benzil karbonohlorid (5,7 ml, 40,1 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C 30 minuta. U reakciju je dodata voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x50 mL) i ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen silika gelom (0-60 % EtOAc u heksanu kao eluent) da bi se dobio terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro -5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (12,9 g, 24,5 mmol, 92 % prinos). ES+APCI MS m/z 527,1 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8- dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U zatvorenoj epruveti terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (1,50 g, 2,85 mmol) je rastvoren u dioksanu (1,42 ml, 2,85 mmol) i tretiran mlevenim cezijum karbonatom (1,85 g, 5,69 mmol) i (2S)-1-etil-2-pirolidinil]metanolom (1,64 g, 14,2 mmol). Epruveta je zatim zatvorena i zagrevana na 90 °C tokom 24 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i dodata je voda. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3x25 mL), a kombinovani organski slojevi su koncentrovani u vakuumu. Talog je prečišćen silika gelom (0-12 % MeOH u DCM v/0,2 % NH4OH kao eluent) da bi se dobio terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (831 mg, 1,37 mmol, 48 % prinos). ES+APCI MS m/z 606,2 [M+H]<+>.

Korak D: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (831 mg, 1,37 mmol) je stavljen u DCM (15 mL) i dodat je TFA (2114 µL, 27,4 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana. Dodat je zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x25 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (665 mg, 1,32 mmol, 96 % prinos) koji je korišćen kakav jeste. ES+APCI MS m/z 506,2 [M+H]<+>.

41

Korak E: benzyl 2-(cyanomethyl)-4-(2-(((S)-1-methylpyrrolidin-2-yl)methoxy)-7-(2-(trifluoromethyl)phenyl)-5,6,7,8-tetrahyropyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate: U bočicu je dodat cezijum karbonat (103 mg, 0,316 mmol), benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (80 mg, 0,158 mmol), Rhuphos Pd G3 (13,2 mg, 0,016 mmol), 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen (53,4 mg, 0,237 mmol) i 1,4-dioksan (1582 uL, 0,158 mmol) i bočica je degazirana sa Ar, zatvorena i zagrevana na 70 °C tokom 24 sata. U reakciju su dodati voda i zasićeni NH4CI i smeša je ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je koncentrovan in vacuo. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-12 % MeOH u DCM v/0,2 % NH4OH kao eluent) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-((S)-1-metilpirolidin-2- il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (20,5 mg, 0,032 mmol, 20 % prinos). ES+APCI MS m/z 650,3 [M+H]<+>.

Korak F: 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-

41

il)acetonitril: U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (20,5 mg, 0,032 mmol) u EtOH (316 µL, 0,0316 mmol) i THF (316 µL, 0,032 mmol) je dodat paladijum 16,8 mg, 0,008 mmol) (Degussa tip, 10 tež.%, 50 % H20), a zatim je atmosfera H2 uvedena kroz vakuum, praćena balonskim pritiskom i mešana je 2 sata. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je zatim koncentrovan da bi se dobio željeni proizvod koji je korišćen kakav jeste. ES+APCI MS m/z 516,2 [M+H]<+>.

Korak G: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (16,3 mg, 0,032 mmol) i trietilamin (13,2 µL, 0,095 mmol) su stavljeni u CH2Cl2 (316 µL, 0,032 mmol) i ohlađeni do t. Dodat je akriloil hlorid (632 uL, 0,063 mmol) (sveže pripremljen 0,1 M rastvor u DCM) i reakcija je mešana 1 sat na 0 °C. Smeša je koncentrovana i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze (0-50 % ACN:voda v/0,1 %TFA) da bi se dobio željeni proizvod (18,9 mg,

0,027 mmol, 87 % prinos). ES+APCI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

PRIMER 211

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometoksi)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

41

Sintetizovano prema Primeru 210, Koraci E-G korišćenjem 1-bromo-2-(trifluorometoksi)benzena umesto 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena u koraku E. ES+APCI MS m/z 586,3 [M+H]<+>.

PRIMER 212

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano prema Primeru 210, Koraci E-G korišćenjem 3-bromo-4-(trifluorometil)piridina umesto 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena u koraku E.

ES+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 213

1-(4-(7-(5-hidroksi-2,3-dimetilfenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

41

Korak A: 3-bromo-4,5-dimetilfenol: U zatvorenoj epruveti DPPE (0,431 g, 1,08 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (1,73 g, 13,5 mmol), (1,5-ciklooktadien)-eta5-indenil) iridijum(I) (0,449 g, 1,08 mmol) i 1-bromo-2,3-dimetilbenzen (1,00 g, 5,40 mmol) su stavljeni u cikloheksan (6 mL) i zagrevani na 100 °C tokom 50 sati. Reakcija je koncentrisana i dodata u aceton (5 mL) i dodat je okzon (3,32 g, 5,40 mmol) i mešan 10 min. Reakcija je ugašena zasićenim NaHSO3 i ekstrahovana sa DCM (3x20 ml). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom, vodom i koncentrovani. Talog je propušten kroz čep od silicijum dioksida eluiranjem sa DCM da bi se dobio 3-bromo-4,5-dimetilfenol (238 mg, 1,18 mmol, 22 % prinos).

Korak B: 1-bromo-5-(metoksimetoksi)-2,3-dimetilbenzen: Pripremljen je u skladu sa preparatom za Intermedijer 3 zamenom 3-bromo-4,5-dimetilfenola za 2-bromo-3-fluorofenol.

Korak C: 1-(4-(7-(5-hidroksi-2,3-dimetilfenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-il)prop-2-en-1-on 2,2,2-trifluoroacetat: pripremljen je prema Primeru 1 Koraci C-F zamenom intermedijera 25 za benzil 4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat i 1-bromo-5-(metoksimetoksi)-2,3-dimetilbenzen za 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalen u koraku C. ES+APCI MS m/z 537,3 [M+H]<+>.

PRIMER 214

41

1-(4-(7-(5-hidroksi-2-((trifluorometil)tio)fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: 3-bromo-4-((trifluorometil)tio)fenol: U zatvorenu epruvetu 3-bromofenol (575 mg, 3,32 mmol) i N,4-dimetil-N-(trifluorometil)benzensulfonamid (1010 mg, 3,99 mmol) stavljeni su u suvi DCE (6 mL). Polako je dodavana triflična kiselina (295 µL, 3,32 mmol) i reakcija je zatim zagrevana na 80 °C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a rezultujući ostatak je prečišćen silika gelom (0-20 % EtOAc u heksanima) da bi se dobio 3-bromo-4-((trifluorometil)tio)fenol (650 mg, 2,38 mmol, 72 % prinos)

Korak B: (2-bromo-4-(metoksimetoksi)fenil)(trifluorometil)sulfan:

Pripremljen je u skladu sa preparatom za Intermedijer 3 zamenom 3-bromo-4-((trifluorometil)tio)fenola za 2-bromo-3-fluorofenol.

Korak C: 1-(4-(7-(5-hidroksi-2-((trifluorometil)tio)fenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan: Sintetizovan prema Primeru 1 Korak C-F zamenom intermedijera 25 za benzil 4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat i (2-bromo-4- (metoksimetoksi)fenil)(trifluorometil)sulfan za 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalen u koraku C. ES+APCI MS m/z 609,2 [M+H]<+>.

PRIMER 215

42

(R)-1-(4-(2-(2-hidroksi-3-morfolinopropoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Jedinjenje iz naslova je dobijeno SFC hiralnom rezolucijom Primera 123 korišćenjem Phenomenex OZ-H kolone (4,6 mm k 250 mm, 5u) i eluiranjem sa 40-60 % MeOH:IPA:DEA (80:20:1) pri 4 mL/min. Sakupljanje prvog eluiranog pika dalo je željeno jedinjenje gde je stereohemija arbitrarno dodeljena. ES+APCI MS m/z 575,2 [M+H]<+>.

PRIMER 216

(S)-1-(4-(2-(2-hidroksi-3-morfolinopropoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je dobijeno SFC hiralnom rezolucijom Primera 123 korišćenjem Phenomenex OZ-H kolone (4,6 mm k 250 mm, 5u) i eluiranjem sa 40-60 % MeOH:IPA:DEA (80:20:1) pri 4 mL/min. Sakupljanje drugog eluiranog pika dalo je željeno jedinjenje gde je stereohemija bila proizvoljno dodeljena. ES+APCI MS m/z 575,2 [M+H]<+>.

PRIMER 217

1-(4-(2-((1-hidroksi-3-morfolinopropan-2-il)oksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Sintetizovan u skladu sa metodom iz Primera 8, korišćenjem 3-morfolinopropan-1,2-diola umesto (S)-1-(dimetilamino)propan-2-ola u koraku B. ES+APCI MS m/z 575,2 [M H]<+>.

PRIMER 218

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 4-(2-(((2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U zatvorenoj bočici, rastvor benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,27 mmol) u dioksanu (2712 µL, 0,27 mmol) je poprskan argonom i (2S,4R)-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi} -2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (270 mg, 0,81 mmol), Cs2CO3 (265 mg, 0,81 mmol), Rhuphos Pd G3 (22,7 mg, 0,027 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani još 5 minuta. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100 °C tokom 2 sata. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x15 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani, a rezultujući ostatak je prečišćen silika gelom (0-40 % EtOAc u heksanu) da bi se dobio benzil 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-butoksikarbonil)-4- ((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)- 2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (113 mg, 0,13 mmol, 49 % prinos).

Korak B: terc-butil (2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-(2-(((2S,4R)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)pipenazin-1-karboksilat (113 mg, 0,133 mmol) u EtOH (1,3 mL, 0,133 mmol) i THF (1,3 mL, 0,133 mmol) dodat je paladijum (70,9 mg, 0,033 mmol) (Degussa tip, 10 tež.%, 50 % H2O) i zatim je atmosfera H2 uvedena putem vakuuma praćena pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je zatim razblažena sa 1:1 MeOH i THF i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je zatim koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod koji je korišćen kakav jeste.

Korak C: terc-butil (2S,4R)-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-karboksilat: terc-butil (2S,4R)-4- ((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3),4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (95 mg, 0,13 mmol) i trietilamin (56 µL, 0,40 mmol) su stavljeni u CH2Cl2 (1331 µL, 0,13 mmol) i ohlađeni na 0 °C. Dodat je akriloil hlorid (2661 uL, 0,27 mmol) (sveže pripremljen 0,1 M rastvor u DCM) i reakcija je mešana 30 min na 0 °C. U reakciju je dodata voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x15 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak D: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5?,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. terc-butil (2S,4R)-2-

42

(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8) -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-karboksilat (92 mg, 0,12 mmol) je stavljen u DCM (3 mL) i dodat je TFA (92 uL, 1,2 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Zasićeni bikarbonat je dodat u reakciju i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x15 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak E: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il))-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5?,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (80 mg, 0,12 mmol), formaldehid (45,0 µL, 0,60 mmol) i Na(OAc)3BH (50,8 mg, 0,24 mmol) su stavljeni u THF (2 mL) i mešani 2 sata. Dodat je zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa 10 % MeOH u DCM (3x15 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni sa natrijum sulfatom i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak F: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril 2,2,2-trifluoroacetat: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il))-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (81 mg, 0,119 mmol) je stavljen u DCM (5 mL) i HCl (594). µL, 2,38 mmol) je dodat i reakcija je mešana 1 sat. Reakcija je koncentrovana i materijal je prečišćen hromatografijom reverzne faze (0-50 % ACN:voda sa 0,1 % TFA) da bi se dobio 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4- hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (38,9 mg, 0,057 mmol, 48 % prinos). ES+APCI MS m/z 568,3 [M+H]<+>.

PRIMER 219

1-(4-(2-((1,4-dimetilpiperazin-2-il)metoksi)-7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno isto kao Primer 127, zamenom (1,4-dimetil-2-piperazinil)metanola umesto N-metil-L-prolinola u koraku D.

ES+APCI MS m/z 558,3 [M+H]<+>.

PRIMER 220

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (4,00 g, 7,59 mmol) u DCM (25,3 ml, 7,59 mmol) je dodata trifluorosirćetna kiselina (17,4 ml, 227,7 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcija je koncentrovana do gustog ulja. Polako je dodat zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa 10 % MeOH u DCM (3×50 mL).

42

Ekstrakti su kombinovani, osušeni sa natrijum sulfatom i koncentrovani da bi se dobio željeni proizvod (3,24 g, 7,6 mmol, 100 % prinos) koji je korišćen takav kakav jeste. ES+APCI MS m/z 506,2 [M]<+>.

Korak B: benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1- karboksilat: U balon sa okruglim dnom dodat je cezijum karbonat (8,01 g, 24,6 mmol), benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat (3,5 g, 8,2 mmol), 1-bromonaftalen (4,6 ml, 32,8 mmol) i RuPhos Pd G3 (1,0 g, 1,23 mmol). Posle evakuacije balona, 1,4-dioksan (82,0 ml, 8,20 mmol) je dodat kroz septum pod protokom argona. Argon je propuštan kroz smešu 5 minuta, a zatim je smeša zagrevana na 70 °C preko noći. Reakcija je ohlađena i dodata je voda i ekstrahovana etil acetatom i organski delovi su koncentrovani in vacuo. Žute čvrste supstance su rastvorene u minimalnoj količini DCM i prečišćene hromatografijom na silicijum dioksidu (25-60 % EtOAc u heksanima) da bi se dobio benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,0 g, 3,6 mmol, 44,1 % prinos).

ES+APCI MS m/z 553,2 [M]<+>.

42

Korak C: benzil 4-(2-(((2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-fluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U bočici benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin -1-karboksilat (120 mg, 0,22 mmol) je rastvoren u dioksanu (108 µL, 0,217 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (141 mg, 0,434 mmol) i (2S,4R)-1-(tert-butoksikarbonil)- 4-fluoro-2-hidroksimetilpirolidin (47,6 mg, 0,217 mmol). Epruveta je zatim zatvorena i zagrevana na 90 °C tokom 12 sati. Reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu (0-6 % MeOH u DCM). ES+APCI MS m/z 736,3 [M+H]<+>.

Korak D: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 4-(2-(((2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-fluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (125 mg, 0,170 mmol) u DCM (170 µL, 0,170 mmol) je dodata trifluorosirćetna kiselina (195 uL, 2,55 mmol) i reakcija je mešana na ST tokom 2 sata. Organski slojevi su isprani natrijum bikarbonatom i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani i korišćeni bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 636,3 [M+H]<+>.

42

Korak E: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (105 mg, 0,1652 mmol) u DCE (3303 µL, 0,1652 mmol) je dodat formaldehid (124,1 µL, 1 mmol) (37 % u vodi), a zatim natrijum triacetoksiborohidrid (175,0 mg, 0,8258 mmol). Smeša je snažno mešana na ST tokom 2,5 sata. Smeša je tretirana zasićenim natrijum bikarbonatom (30 mL), mešana 10 min, a zatim ekstrahovana sa DCM (3 × 10 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko natrijum sulfata, filtrirane i koncentrovane i korišćene kao što jesu u sledećoj reakciji. ES+APCI MS m/z 650,3 [M+H]<+>.

Korak F: 2-(4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-vl)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (85 mg, 0,13 mmol) u EtOH (1308 µL, 0,13 mmol) i THF (1308 µL, 0,13 mmol)) je dodat paladijum (70 mg, 0,033 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50 % H20) i zatim je atmosfera H2 uvedena putem vakuuma praćena pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je zatim koncentrovan da bi se dobio 2-(4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. ES+APCI MS m/z 516,3 [M+H]<+>.

42

Korak G: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U suspenziju 2-(4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (65 mg, 0,126 mmol) u DCM (1261 µL, 0,126 mmol) na 0 °C je dodat akriloil hlorid (252). µL, 0,252 mmol) (sveže pripremljen 0,1 M rastvor u DCM), a zatim trietilamin (35,1 µE, 0,252 mmol). Reakcija je zatim mešana na 0 °C tokom 45 minuta. Reakcija je koncentrovana i prečišćena hromatografijom reverzne faze (0-50 % CAN:voda sa 0,1 % TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. ES+APCI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

PRIMER 221

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4S)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano u skladu sa metodom iz Primera 220, Korak C-G, korišćenjem terc-butil (2S,4S)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata umesto terc-butil (2S,4R)-4- fluoro-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat u koraku C. ES+APCI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

42

PRIMER 222

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4S)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa Primerom 220 (Koraci C-G), zamenom terc-butil (2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metoksipirolidin-1-karboksilata za (2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)- 4-fluoro-2-hidroksimetilpirolidin u koraku C. ES+APCI MS m/z 582,3 [M+H]<+>.

PRIMER 223

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilpiperazin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Koraci A-F: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilpiperazin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa Primerom 220 (Koraci C-G), zamenom terc-butil (S)-2-(hidroksimetil)-4-metilpiperazin-1-karboksilata za (2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4- fluoro-2-hidroksimetilpirolidin u koraku C.

ES+APCI MS m/z 567,3 [M+H]<+>.

PRIMER 224

4

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metilpiperazin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 220 (Koraci C-G), zamena terc-butil (R)-2-(hidroksimetil)-4-metilpiperazin-1-karboksilata za terc-butil (S)-2-(hidroksimetil)-4-metilpiperazin -1-karboksilat u koraku C. ES+APCI MS m/z 567,3 [M+H]<+>.

PRIMER 225

2-(1-akriloil-4-(7-(5-fluoro-2-(trifluorometoksi)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 2-bromo-4-fluoro-1-(trifluorometoksi)benzena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E. ES+APCI MS m/z 604,3 [M+H]<+>.

PRIMER 226

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4 1

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 3-bromo-2-(trifluorometil)piridina za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E. ES+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 227

2-(1-akriloil-4-(7-(2-fluorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-2-fluorobenzena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E. ES+APCI MS m/z 520,3 [M+H]<+>.

PRIMER 228

2-(1-akriloil-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4 2

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-2,3-dimetilbenzena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E. ES+APCI MS m/z 530,3 [M+H]+.

PRIMER 229

2-(1-akriloil-4-(7-(2-hlorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-2-hlorobenzena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E. ES+APCI MS m/z 536,2 [M]+.

PRIMER 230

2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E. ES+APCI MS m/z 588,3 [M+H]+.

PRIMER 231

2-(1-akriloil-4-(2-(3-hidroksipropoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(3-hidroksipropoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 220 Korak C, zamenom propan-1,3-diola za

4 4

(2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-fluoro-2-hidroksimetilpirolidin. ES+APCI MS m/z 593,3 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-(2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)propoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(3-hidroksipropoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat (77,6 mg, 0,131 mmol), koji je rastvoren u DCM (655 uL, 0,131 mmol). Smeša je ohlađena na 0 °C i zatim je dodat trietilamin (36,5 uL, 0,262 mmol), a zatim 4-(dimetilamino)-piridin (4,80 mg, 0,04 mmol). Zatim je dodat terc-butildimetilsilil hlorid (29,6 mg, 0,196 mmol) i smeša je mešana preko noći uz zagrevanje do sobne temperature. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor soli (5 ml) i smeša je ekstrahovana dva puta sa EtOAc (10 mL). Organske faze su osušene preko natrijum sulfata, filtrirane i koncentrovane. Sirovi proizvod reakcije je korišćen takav kakav jeste. ES+APCI MS m/z 707,4 [M+H]+.

Korak C: 2-(4-(2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)propoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil 4-(2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)propoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (106 mg,

4

0,150 mmol) u EtOH (1499 µL, 0,150 mmol) i THF (1499 µL, 0,150 mmol) je dodat paladijum (8,80 mmol) (5,80 mg, 5,7). mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50 % H2O), a zatim je uvedena atmosfera H2 putem vakuuma praćena pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je zatim koncentrovan do bezbojne čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. ES+APCI MS m/z 573,3 [M+H]+.

Korak D: 2-(1-akriloil-4-(2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)proroks)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U suspenziju 2-(4-(2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)propoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (75 mg, 0,131 mmol) u DCM (1309 µL, 0,131 mmol) na -78 °C dodat je akriloil hlorid (2619 µL, 0,262 mmol) 0,1 M rastvor u DCM), a zatim trietilamin (36,5 uL, 0,262 mmol). Reakcija je zatim mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Reakcija je koncentrovana i korišćena sirova u sledećoj reakciji. ES+APCI MS m/z 627,4 [M+H]+.

Korak E: 2-(1-akriloil-4-(2-(3-hidroksipropoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-2-il)acetonitril U rastvor 2-(1-akriloil-

4

4-(2-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)propoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (90 mg, 0,14 mmol) u DCM (1436 µL, 0,14 mmol) dodata je hlorovodonična kiselina (4,0 M u 1,4-dioksanu) (359 µL, 1,4 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana 30 min, nakon čega je ugašena zasićenim natrijum bikarbonatom i ekstrahovana u 10 % IPA u CHCl3 (3x15 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani i ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze (0-95 % ACN: H2O sa 0,1 TFA). ES+APCI MS m/z 513,2 [M+H]+.

PRIMER 232

1-(4-(7-(3-hloro-2-fluoro-5-hidroksifenil)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa Primerom 1 Korak C-F zamenom intermedijera 25 za benzil 4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat i 1-bromo -3-hloro-2-fluoro-5-(metoksimetoksi)benzen za 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalen u koraku C. ES+APCI MS m/z 561,2 [M]+.

PRIMER 233

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Ovo jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 147 zamenom (S)-(1-etilpirolidin-2-il)metanola za N-metil-L-prolinol za [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol u koraku F. ES+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

PRIMER 234

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Korak A: 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(hidroksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilat: U mešani dvofazni rastvor (R)-1-Boc-3-hidroksimetilpiperazina (5,00 g, 23,1 mmol) i NaHCO3 (5,83 g, 69,4 mmol) u etil acetatu (46,2 ml) i vodi (46,2 ml) na 0 °C je dodat benzil hloroformat (4,95 ml, 34,7 mmol) u kapima.

Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. The reaction mixture was diluted with EtOAc (50,0 ml) and the organic layer was separated, dried (Na2SO4) and concentrated. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10-50 % EtOAc/heksan gradijentom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7,62 g, 21,7 mmol, 94,1 %). ESI MS m/z 251,1 [M-Boc+H]+.

Korak B.1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilat: U rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(hidroksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilata (1,69 g, 4,83 mmol) i trietilamina (1,01 ml, 7,25 mmol) u CH2Cl2 (32,2 ml) na 0 °C ukapavanjem je dodat čist MsCl (0,561 ml, 7,25 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 min. Reakciona smeša je sipana u levak za odvajanje, razblažena etil acetatom, zatim isprana uzastopno sa 1N HCl, vodom, NaHCO3 (zas.) i slanim rastvorom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova

4

(1,9 g, ~100 %, korišćeno kao sirovi materijal u sledeći korak). ESI MS m/z 329,1 [M-Boc+H]+.

Korak C.1-benzil 4-(terc-butil) (S)-2-(cijanometil)piperazin-1,4-dikarboksilat: Rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilata (2,10 g, 4,90 mmol), natrijum cijanida (0,480 g, 9,80) mmol) u DMA (49,0 ml) je zagrevan na 55 °C tokom 1 dana. Reakcija je praćena HPLC (metod od 15 min). Smeša je podeljena između EtOAc/fiziološki rastvor, a organski sloj je ispran slanim rastvorom (3x), osušen preko MgSO4 i koncentrovan. Talog je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100 % EtOAc/heksan gradijentom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,40 g, 3,90 mmol, 79,5 %). Vodeni slojevi su bazifikovani i odloženi u otpadni tok cijanida. ESI MS m/z 260,1 [M-Boc+H]+.

Korak D. Benzil (S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid: 1-benzil 4-(terc-butil) (S)-2-(cijanometil)piperazin-1,4-dikarboksilat (5,32 g,

14,8 mmol) je stavljen u CH2Cl2 (25 mL) i HCl (4,0 N u dioksanu, 18,5 ml, 74,0 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 dana. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,3 g, 99 %). ESI MS m/z 260,1 [M+H]<+>.

Korak E. terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat: Rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (1,01 g, 3,89 mmol), terc-butil 2,4-dihloro-5,6-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (8H)-karboksilat (1,18 g, 3,89 mmol) i DIEA (1,36 ml, 7,79 mmol) u DMSO (19,5 ml) su zagrevani na 50 °C tokom 1 dana. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata i slanog rastvora i organski sloj je odvojen. Organska faza je isprana slanim rastvorom (3x), osušena preko MgSO4 i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,63 g, 3,09 mmol, 79,4 %). ESI MS m/z 527,2 [M+H]+.

Korak F. terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U balon sa okruglim dnom od 250 mL sa PTFE poklopcem dodat je rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-

44

(cijanometil)piperazin-1-il)- 2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (1,64 g, 3,11 mmol) u dioksanu (31,1 ml) i smeša je prskana argonom. U smešu su uzastopno dodavani (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (1,08 g, 9,34 mmol), Cs2CO3 (3,04 g, 9,34 mmol) i Ruphos-Pd Gen3 katalizator (0,260 g, 0,311 mmol) ispod. argona i prskati dodatnih 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100 °C tokom 1 dana. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom i organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2x). Organski sloj je osušen preko MgS04 i koncentrovan da bi se dobio ostatak koji je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-20 % (MeOH 2 % NH4OH) u DCM da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,42 g, 2,34 mmol, 75,3 %). ESI MS m/z 606,3 [M+H]+.

Korak G. Benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat bistrifluoroacetatna so: Rastvor terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (38 mg, 0,063 mmol) u CH2Cl2 (627 µl) i TFA (242 µl, 3,1 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi za 1 dan.

Reakciona smeša je koncentrovana i korišćena kao bis-TFA so u sledećoj reakciji (46 mg, 0,063 mmol, 100 %). ESI MS m/z 506,3 [M+H]+.

Korak H. Benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Suspenzija benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat bistrifluoroacetatna so (46 mg, 0,063 mmol), 1-bromonaftalen (39,3 mg, 0,190 mmol) i Cs2CO3 (61,9 mg, 0,190 mmol) je u 3 sµl dioksana (63) sa argonom 5 min. Ovoj smeši je dodat Ruphos Pd Gen 3 (5,29 mg, 0,006 mmol) i dobijena suspenzija je prskana argonom još 1 minut. Bočica je zatvorena i zagrevana na 100 °C tokom 2 sata Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i vode i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4 i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 5 % MeOH/1 % NH4OH/CH2Cl2 izokratom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (31,9 mg, 0,050 mmol, 79,8 %). ESI MS m/z 632,3 [M+H]+.

Korak I.2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (31 mg, 0,049 mmol) u metanolu (981 µl) i THF (981 µl) prskanog azotom je dodat Pd/ C (10,4 mg, 0,00491 mmol) i smeša je mešana pod atmosferom balonskog pritiska od H2 tokom 1 dana. Reakciona smeša je filtrirana kroz PTFE špric filter (25 mm) i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (23,4 mg, 0,047 mmol, 95,8 %). ESI MS m/z 498,3 [M+H]+.

Korak J.2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (23,4 mg, 0,047 mmol) u CH2Cl2 (470 µl) je dodat DIEA (41,1 µl, 0,235 mmol) a zatim akriloil hlorid (12 µl, 0,141 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 15 minuta.

Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i 2N K2CO3 i slanog rastvora.

Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4 i koncentrovani. Talog je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 5 % MeOH / 1 % NH4OH u CH2Cl2 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19,2 mg, 0,035 mmol, 74,0 %). ESI MS m/z 552,3 [M+H]+.

PRIMER 235

2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A.2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (25 mg, 0,0502 mmol) iz Primera 234 Korak I, (2E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (13,0 mg, 0,100 mmol), DIEA (43,9 ul, 0,251 mmol) u CH2Cl2 (502 µl) je dodat HATU (28,7 mg, 0,0754 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i rastvora soli. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x).

Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4 i koncentrovani. Talog je prečišćen preparativnom-C18 eluiranjem sa 5-95 % ACN/H2O 0,1 % TFA.

Željene frakcije su podeljene između EA/2M K2CO3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4 i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19,0 mg, 0,031 mmol, 62,1 %).

ESI MS m/z 609,4 [M+H]+.

PRIMER 236

2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(E-4-(piperidin-1-il)but-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A.2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(E-4-(piperidin-1-il)but-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril je pripremljen prema Primeru 235, zamenom (2E) -4-(1-piperidinil)-2-butenska kiselina HCl so, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 0,046 mmol, 92,0 %). ESI MS m/z 649,3 [M+H]+.

PRIMER 237

44

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril 2,2,2-trifluoroacetat

Sintetizovano prema Primeru 234 zamenom 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena za 1-bromonaftalen. ES+APCI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

PRIMER 238

2-(1-akriloil-4-(7-(6-metil-1H-indazol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 7-bromo-6-metil-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-2H-indazol. Rastvor 7-bromo-6-metil-lH-indazola (200 mg, 0,948 mmol) u tetrahidrofuranu (2 ml, 0,948 mmol) je ohlađen uz mešanje u ledenoj vodi. Natrijum hidrid (45,5 mg, 1,14 mmol) je dodat u porcije smeši i reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat (2-(hlorometoksi)etil)trimetilsilan (0,201 ml, 1,14 mmol) i reakcija je mešana 2 sata uz zagrevanje do sobne temperature. Smeša je podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom (2 × 10 mL), slanim rastvorom (10 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem 20 do 40 % EtOAc/heksana kao eluenta da bi se dobio 7-bromo-6-metil-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-2H-indazol (46 mg, 14 %) zajedno sa izomerom 7-bromo-6-metil-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazola (214 mg, 66 %). ES+APCI MS m/z 341,1 [M]<+>.

Korak B: benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(6-metil-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-2H-indazol-7-il)-2-(((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-karboksilat (50 mg, 0,099 mmol), 7-bromo-6-metil-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-2H-indazol (46 mg, 0,13 mmol), Cs2CO3 (97 mg, 0,30 mmol), Ruphos Pd G3 (83 mg, 0,099 mmol) i dioksan (1 mL) su pročišćeni azotom i mešani na 70 °C tokom 6 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom (5 mL), slanim rastvorom (5 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, Redisep 24 g, koristeći 2 do 20 % MeOH/DCM kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (50 mg, 66 %). ES+APCI MS m/z 766,4 [M]<+>.

Korak C: Benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(6-metil-1H-indazol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-

44

karboksilat: Čisti benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(6-metil-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-2H-indazol-7-il)-2-((S)-1 -metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (10 mg, 0,0131 mmol) (10 mg,

0,0131 mmol) rastvoren je u trifluorosirćetnoj kiselini (1 ml, 13,1 mmol) i rastvor žute boje je mešan na sobnoj temperaturi 1,5 sat. Reakciona smeša je sipana u etil acetat (20 mL) i organski deo je pažljivo ispran sa 2M Na2CO3 (10 mL, 20 mmol), vodom (2 × 3 mL), slanim rastvorom (5 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu do daje žućkastu čvrstu supstancu (8 mg, 96 %). ES+APCI MS m/z 636,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-(1-akriloil-4-(7-(6-metil-1H-indazol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Mešana smeša benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(6-metil-1H-indazol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (16 mg, 0,02517 mmol), metanol (1,5 ml, 0,02517 mmol), tetrahidrofuran (1,815 mg, 0,02 mmol).) i paladijum na ugljeniku (10 mg, 5 %, Degussa tip E101 NO/V) je degasiran i mešan u atmosferi vodonika 1 sat. Smeša je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa THF (3 × 3 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo do ~0,5 mL, rastvoreni u DCM (5 mL), ohlađeni na -30 °C uz mešanje u EtOH-H2O-CO2 vodi. Zatim je dodat trietilamin (0,02 mL, 5 ekv.), a zatim akriloil hlorid (0,006134 ml, 0,07550 mmol) i reakciona smeša je mešana 1 min na -30 °C. Reakcija je ugašena sa NH4OH (0,03 mL) i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je podeljen između 1M NaHCO3 (3 mL) i EtOAc (15 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom (3 mL), slanim rastvorom (3 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, Redisep 12 g, koristeći 10 do 20 %

44

MeOH/DCM 0,2 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (5,96 mg, 43 %). ES+APCI MS m/z 556,3 [M+H]<+>.

PRIMER 239

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano prema Primeru 210, Koraci E-G korišćenjem 4-bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromida umesto 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena u koraku E. ES+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 240

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(2,2,2-trifluoroetil)fenil)-5,6,

7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano prema Primeru 210, Koraci E-G korišćenjem 1-bromo-2-(2,2,2-trifluoroetil)benzena umesto 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena u koraku E. ES+APCI MS m/z 584,3 [M+H]<+>.

PRIMER 241

44

benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-2-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Korak A: U bočici, benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 0,198 mmol) je rastvoren u dioksanu (98,9 ul, 0,198 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (129 mg, 0,396 mmol) i 2-fluoro-3-(trifluorometil)piridin (163 mg, 0,989 mmol) Epruveta je zatim zatvorena i zagrevana na 90 °C tokom 12 sati. Reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu (0-12 % MeOH u DCM).

Korak B: Sintetizovano prema Primeru 210, Koraci F-G korišćenjem benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-2- il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat umesto benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat u koraku F. ES+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 242

2-(1-(but-2-inoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

44

Na 0 °C, u RBF od 25 mL koji sadrži N,N-dimetilformamid (603 µL, 0,06 mmol) dodat je 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,06 mmol) i trietilamin (12,2) mg, 0,12 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je 2-butinska kiselina (6,08 mg, 0,07 mmol) dodata u jednoj porciji. Zatim je ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (26,9 ul, 0,09 mmol) dodat u mešavinu. Reakcija je ostavljena da se meša 2 sata na 0 °C. Water was added and the reaction extracted with EtOAc (2x 25 mL). Organski slojevi su isprani sa zasićenim LiCl, NaCl i vodom (10 mL za svako pranje). Osušena i koncentrovana do čvrste supstance koja je prečišćena prep HPLC reverzne faze (5-95 % ACN: H2O, sa 0,1 % TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

PRIMER 243

2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

44

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (1,05 g, 2,60 mmol), 2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetil-silan (1,13 g, 2,86 mmol), RuPhos (484 mg, 1,04 mmol) i Cs2CO3 (2,11 g, 6,49 mmol) u toluenu (20 mL) je dodat Pd2(dba)3 (475 mg, 519 umol) pod N2, suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je zagrejana na 90 °C i mešana na 90 °C tokom 7 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa EtOAc (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EA od 30:1 do 4:1), a zatim pomoću kolone obrnute faze (ACN: 100 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (850 mg, 1,12 mmol, 43,3 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 719,5 [M+H]<+>.

4

Korak B: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (850 mg, 1,18 mmol) u DCM (17 mL) je dodat m-CPBA (240 mg, 1,18 mmol, 85,0 % čistoće) na 0 °C i mešano na 0 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2S2O3 (15 mL) na 0 °C i odvojena, zatim razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 80 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[5-(trifluorometil)-1 -(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (730 mg, 944 umol, prinos 79,8 %) 95,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 735,5 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-(((2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4 -il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsitiletoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 408 umol) i [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (94,0 mg, 816 umol) u toluen (6 mL) je dodat t-BuONa (58,8 mg, 612 umol) na 15 °C i mešan na 15 °C tokom 30 minuta. U smešu je dodat EtOAc (15 mL) i voda (5 mL), a zatim ekstrahovan sa EtOAc (3 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) =54 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (216 mg, 261 umol, prinos 64,0 %, čistoća 95,0 %) kao braon čvrsta supstanca ESI MS m/z 786,6[M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-[2-([(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil))indazol-4-

4 1

il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (190 mg, 242 umol) i 2,6-dimetilpiridin (311 mg, 2,90 mmol, 338 uL) u DCM (4 mL) je dodat TMSOTf (645 mg, 2,90 mmol, 524 uL) na 0 °C i mešan na 20 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena sa MeOH (1 mL), zatim koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) =40 %).2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (85 mg, 123 umol, 50,8 % prinos, 99,0 % čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 686,5 [M+H]<+>.

Korak E: 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril U rastvor 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (85,0 mg, 124 umol), DIEA (96,1 mg, 744 umol, 130 uL) u DCM (2 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (23,4 mg, 186 umol) na 0 °C i smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata.

Reakciona smeša je ugašena vodom (2 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom Talog je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) =48 %) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7 -[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2 -enoil-piperazin-2-il]acetonitril (45 mg, 54,7 umol, 44,2 % prinos, 90,0 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,16 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,45 - 6,36 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,76 (s, 2H), 5,12 (s, 1H), 4,44 - 4,28 (m, 3H), 4,21 - 4,08 (m, 2H), 3,98 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,63 - 3,54 (m, 2H), 3,48 - 3,39 (m, 2H), 3,32 (br s, 1H), 3,10 (br s, 2H), 2,99 - 2,86 (m, 2H), 2,80 (br s, 2H), 2,73 - 2,58 (m, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,28 (br s, 1H), 2,05 (br s, 1H), 1,77 (br s, 4H), 0,94 - 0,88 (m, 2H), - 0,04 (s, 9H).

Korak F: 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril U rastvor 2-[4-[2-[[(2R)-1 -metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-

4 2

d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (45 mg, 60,8 umol) u DCM (0,15 mL) je dodat TFA (208 mg, 1,82 mmol, 135 uL) i smeša mešano na 20 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je bazifikovana zasićenim NaHCO3 (2 mL) do pH=8. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM: MeOH (10:1) (3 × 5 ml).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Synergi C18150*30 mm*4um;mobilna faza:

[voda(0,225 %FA)-];B%: 10 %-40 %,10,5 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4 -il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (8,2 mg, 12,0 umol, 19,8 % prinosa, 96,2 % čistoće, FA) kao žuto ulje. ESI MS m/z 610,4 [M+H]<+>.

PRIMER 244

2-[4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2[[(2S-1 metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 445 umol), 8-bromoizohinolin (185 mg, 891 umol), RuPhos (41,6 mg, 89,1 umol) i Cs2CO3 (435 mg, 1,34 mmol.) u toluenu (L) je dodat Pd2(dba)3 (40,8 mg, 44,5 umol) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 90 °C tokom 12 sati. Smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa EtOAc (3 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) =20 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (160 mg, 240 umol, 54,0 % prinos 90,0 % čistoće) kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 599,4 [M+H]<+>.

Korak B: 2-[4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril: Rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (190 mg, 317 umol) i TFA (724 mg, 6,35 mmol, 470 uL) su mešani na 20 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-

4 4

metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, sirov, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak C: 2-[4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[7-(8-izohinolil)-2-[2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, 316 umol, 2TFA) i DIEA (409 mg, 3,17 mmol, 551 uL) u DCM (5 mL) je dodat prop-2-enoil prop- 2-enoat (47,9 mg, 380 umol) na 0 °C, zatim je smeša mešana na 20 °C tokom 1 sata. U smešu je dodata voda (5 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10 um; mobilna faza: [voda(0,225 %FA)-];B%: 1 %-20 %,10 min) da bi se dobio 2-[4-[7-(8-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (12,5 mg, 19,7 umol, 6,23 % prinos, 94,5 % čistoća, FA) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 553,2 [M+H]<+>.

PRIMER 245

2-[4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Korak A: (7-metil-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat: U rastvor 7-metiltetralin-1-ona (2,00 g, 12,5 mmol) i DIPEA (4,84 g, 37,5 mmol, 6,52 mL) u DCM (30 mL) dodat je u kapima Tf2O (5,28 g, 18,7 mmol, L) 3,09 mL. na -5 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 3 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EA 1/0 do 100/1) da bi se dobio (7-metil-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat (1,53 g, 4,45 mmol, 35,6 % prinos, 85,0 %). % čistoće) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,17 (s, 1H), 7,11 - 7,05 (m, 2H), 6,01 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 2,83 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,50 (dt, J = 4,8, 8,0 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H).

Korak B: (7-metil-1-naftil) trifluorometansulfonat: Smeša (7-metil-3,4-dihidronaftalen-1-il)trifluoro metansulfonata (1,40 g, 4,79 mmol) i DDQ (2,17 g, 9,58 mmol) u dioksanu (28 mL) je mešana na 105 °C tokom 12 sati. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EA 1/0 do 100/1) da bi se dobio (7-metil-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,10 g, 3,41 mmol, 71,2 % prinos, 90,0 % čistoća) kao žuti

4

ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,87 - 7,79 (m, 3H), 7,49 - 7,38 (m, 3H), 2,59 (s, 3H).

Korak C: terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: Smeša 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (10 g, 34,0 mmol), 2-piperazin-2-ilacetonitrila (10,1 g, 51,0) mmol, 2 HCl) i DIEA (17,6 g, 136 mmol, 23,7 mL) u dioksanu (100 mL) je mešana na 50 °C tokom 2 sata. Boc20 (14,8 g, 68,0 mmol, 15,6 mL) je dodat i smeša je mešana na 50 °C tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je razblažen etil acetatom (500 ml). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (1 × 300 mL), slanim rastvorom (1 × 200 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je triturisan sa etil acetatom (100 ml). Precipitat je filtriran i filtrirani kolač je ispran etil acetatom (50 mL) i osušen pod vakuumom da bi se dobila siva čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni preko silika gela (petroleum etar/etil acetat 100/1 do 1/2). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobila čvrsta supstanca, a zatim kombinovana sa gornjom čvrstom materijom da bi se dobio terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin -4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (15 g, 29,10 mmol, 85,6 % prinos, 93,7 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 483,1 [M+H]<+>.

Korak D: 4-[7-benzil-2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat: U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (1,19 g, 10,4 mmol, 1,23 mL, 2,5 ek) u THF (30,0 mL) dodat je NaH (331 mg, 8,28 mmol, 60 % čistoće u mineralnom ulju, 2,00 ekv.) na 0 °C i smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 h. terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,00 g, 4,14 mmol, 1,00 ekv.) je dodato u smešu i smeša je mešana na 80 °C tokom 4 sata. Smeša je sipana u ledenu vodu (100 mL) i ekstrahovana etar acetatom (3 × 150 mL). Organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom natrijum hlorida (1 × 200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[(1-metilpirolidin-2-il) metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,86 g, sirovo) kao

4

crno ulje koje je korišćeno u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 562,3 [M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-karboksilat: NH3 je propušten u metanol (70,0 ml) na -78 °C tokom 30 minuta. terc-butil 4-[7-benzil-2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,00 g, sirov) i Pd/C (0,20 g, 10 % čistoće) su dodati u smešu. Smeša je mešana na 40 °C tokom 24 sata pod H2 na 15 psi. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,1 %)/ancetonitril]. Željene frakcije su podešene na pH >7 zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (5,00 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etar acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il) metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,40 g, 845 umol, dva koraka 29,4 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 472,2 [M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat: Rastvor tercbutil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (185 mg, 392 umol), (7-metil-1-naftil) trifluorometansulfonat (159 mg, 549 umol), Pd2(dba)3 (35,9 mg, 39,2 umol), RuPhos (36,6 mg, 78,5 umol) i Cs2CO3 (320 mg, 981 umol) u toluenu (30 mL) je degaziran sa N2 i zatim zagrevan na 90 °C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % NH3•H2O)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 283 umol, 72,1 % prinos, 96,1 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 612,6 [M+H]<+>.

Korak G: 2-[4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril: Rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

4

dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 294 umol) u TFA (671 mg, 5,88 mmol, 436 uL) je mešan na 20 °C tokom 1 sat. Po završetku smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,37 g, sirovo, TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak H: 2-[4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor 2-[4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (189 mg, sirov, TFA) i DIEA (976 mg, 7,55 mmol, 1,32 mL) u DCM (4 mL) je dodat prop. -2-enoil prop-2-enoat (38,1 mg, 302 umol) kap po kap na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, reakcija je ugašena sa MeOH (0,5 ml), razblažena vodom (1 ml) i ekstrahovana sa DCM (3 × 5 ml). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Synergi C18150*30 mm*4um; mobilna faza: [voda(0,225 %FA) -ACN]; B%: 15 % - 45 %, 10,5 min) da bi se dobio 2-[4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (13,2 mg, 21,3 umol, dva koraka 14,2 % prinos, 98,4 % čistoće, FA) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 566,5 [M+H]<+>.

PRIMER 246

2-[4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril.

4

Sintetizovano u skladu sa metodom za Primer 147 zamenom 1-bromo-4-fluoronaftalena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI MS m/z 570,5 [M+H]<+>.

PRIMER 247

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(hinolin-8-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano u skladu sa metodom za Primer 147 zamenom 8-bromohinolina za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI MS m/z 553,2 [M+H]<+>.

PRIMER 248

(S)-1-(4-(7-(5-izopropil-1H-indazol-4-il)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

4

Korak A: 2-(2-bromo-4-fluoro-fenil)propan-2-ol: U rastvor 1-(2-bromo-4-fluoro-fenil)etanona (10 g, 46,1 mmol) u THF (100 mL) dodat je MeMgBr (u etru) (3 M, 46,08 mL) na -50 °C. Smeša je zagrejana do 0 °C i mešana 3 sata. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (10 mL) na -50 °C. Smeša je zagrejana do 15 °C i zatim razblažena etil acetatom (500 mL). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (1 × 500 mL) i slanim rastvorom (1 × 500 mL), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-(2-bromo-4-fluoro-fenil)propan- 2-ol (10 g, 36,5 mmol, prinos 79,2 %, čistoća 85 %) kao bezbojno ulje.

Korak B: 2-bromo-4-fluoro-1-izopropil-benzen: U rastvor 2-(2-bromo-4-fluoro-fenil)propan-2-ola (9 g, 38,6 mmol) u dihlorometanu (100 mL) dodat je Et3SiH (8,98 g, 77,2 mmol, 12,3 mL) i TFA (65,1 g, 571 mmol, 42,3 mL). Smeša je mešana na 15 °C tokom 1 sata i zatim zagrevana na 50 °C tokom 1 sata.

Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom i zatim razblažena etil acetatom (100 mL). pH vodenog sloja je podešen na pH = 7 dodavanjem

4 1

zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom (30 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleter/etil acetat = 1/0 do 100/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom.2-bromo-4-fluoro-1-izopropil-benzen (7 g, 32,2 mmol, 83,5 % prinos) je dobijen kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,36-7,27 (m, 2H), 7,09 - 7,02 (m, 1H), 3,46-3,31 (m, 1H), 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 6H).

Korak C: 2-bromo-6-fluoro-3-izopropil-benzaldehid: U smešu 2-bromo-4-fluoro-1-izopropil-benzena (7 g, 32,2 mmol u THF-u (100 mL) dodat je LDA (2 M u toluenu, 24,2 mL) na -70 °C u atmosferi azota). Smeša je mešana 30 minuta, a zatim je dodat DMF (7,07 g, 96,7 mmol, 7,44 mL). Smeša je mešana na -70 °C tokom 2 sata. Reakcija je ugašena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE\EA = 1\0 do 10\1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 2-bromo-6-fluoro-3-izopropil-benzaldehid (2,4 g, 9,79 mmol, 30,4 % prinos) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10,41 (s, 1H), 7,48 (dd, J = 5,6, 8,8 Hz, 1H), 7,13(t, J = 9,2, 1H), 3,57 - 3,46 (m, 1H), 1,26 (d, J = 7,2 Hz, 6H).

Korak D: 4-bromo-5-izopropil-1H-indazol: 2-bromo-6-fluoro-3-izopropilbenzaldehid (2,4 g, 9,79 mmol) u DMSO (3 mL) je dodat N2H4•H2O (15,4 g, 302 mmol, 15 mL, 98 % čistoće) i smeša je zagrevana na 110 °C i mešano 16 sati. Reakciona smeša je sipana u H20 (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Organska faza je isprana slanim rastvorom (10 mL), osušena preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 1/0 do 5/1) da bi se dobio 4-bromo-5-izopropil-1H-indazol (650 mg, 2,72 mmol, 27,8 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10,24 (br s, 1H), 8,08 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,56 (td, J = 6,8, 13,6 Hz, 1H), 1,29 (d, J = 6,8 Hz, 6H).

4 2

Korak E: 4-bromo-5-izopropil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol: U rastvor 3,4-dihidro-2H-pirana (457 mg, 5,44 mmol, 497 uL, 2 ekv.) u dihlorometanu (15 mL) dodat je TsOH•H2O (51,7 mg, 271 umol) i 4-bromo-5 -izopropil-lH-indazol (650 mg, 2,72 mmol). Smeša je mešana na 20 °C tokom 3 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 2).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 1/0 do 5/1) i dalje prečišćen flešom obrnute faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril] da se dobije 4-bromo-5- izopropil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (170 mg, 494 umol, 18,2 % prinos, 94 % čistoća) kao žuto ulje. ESI MS m/z 323,0 [M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 4-[7-(5-izopropil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša 4-bromo-5-izopropil-1-tetrahidropiran-2-ilindazola (136 mg, 420 umol), terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 323 umol), RuPhos (15,1 mg, 32,4 umol), RuPhos-Pd -G2 (25,1 mg, 32,4 umol) i t-BuONa (77,7 mg, 809 umol) u toluenu (3 mL) su degazirani i pročišćeni sa N23 puta i smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Smeša je razblažena etil acetatom (20 mL) i isprana vodom (20 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH = 100/1 do 10/1) i željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[7-(5-izopropil-1-tetrahidropiran -2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (70 mg, 96,5 umol, 29,8 % prinos, 93 % čistoća) je bio kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 675,3 [M+H]<+>.

Korak G: 7-(5-izopropil-1H-indazol-4-il)-2-(((2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin: U rastvor terc-butil 4-[7-(5-izopropil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (40 mg,

4

59,3 umol) u dihlorometanu (100 uL) je dodat TFA (101 mg, 889 umol), 65,8 uL). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 7-(5-izopropil-lH-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (42 mg, 58,4 umol, 98,6 % prinos, 2 TFA) kao smeđe ulje koje je korišćeno u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. ESI MS m/z 491,4 [M+H]<+>.

Korak H: 1-[4-[7-(5-izopropil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U smešu 7-(5-izopropil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (42 mg, 58,4 umol) i DIEA (75,5 mg, 584 umol, 102 uL) u dihlorometanu (2 mL) je dodat rastvor prop-2-enoil prop -2-enoat (7,37 mg, 58,4 umol, 1 ekv.) u dihlorometanu (1 mL) na -40 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na -40 °C 1 sat. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog NaHCO3 (2 mL) vodenog rastvora. Zatim je smeša sipana u vodu (20 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (20 mL × 2). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225 %FA) - ACN]; B%: 5 % - 38 %, 10 min) da bi se dobio 1-[4-[7-(5-izopropil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (4,5 mg, 7,93 umol, 13,6 % prinos, 96 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 545,2 [M+H]<+>.

PRIMER 249

1-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

4 4

Korak A: terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (0,50 g, 1,16 mmol), (2-fluoro-3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (562 mg, 1,73 mmol), RuPhos (108 mg, 231 umol), Pd2(dba)3 (106 mg, 116 umol) i t-BuONa (333 mg,

3,47 mmol) u toluenu (7 mL) je mešano na 110 °C tokom 3 sata u atmosferi azota. Smeša je ohlađena i pH vodenog sloja je podešen na 7 dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i vodeni sloj je ekstrahovan etar acetatom (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, dihlorometan/metanol = 10/1) i smeša je koncentrovana da bi se dobio terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 274 umol, 11,8 % prinos,) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 607,0 [M+H]<+>.

Korak B: 7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin: Smeša terc-butil 4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 330 umol) i TFA

(564 mg, 4,94 mmol, 366 uL) u dihlorometanu (0,4 mL) su mešani na 10 °C 1 sat.

4

Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-4-piperazin-1-il -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (205 mg, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 507,0 [M+H]<+>.

Korak C: 1-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (0,20 g, sirov) i TEA (399 mg, 3,95 mmol, 549 uL) u dihlorometanu (5 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (49,8 mg, 394 umol) na -40 °C, zatim mešano na -40 °C tokom 30 minuta. Smeša je ugašena metanolom (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % TFA)/acetonitril]. pH vodenog sloja je bio na 7 dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom/metanolom (10/1) (3 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim natrijum hloridom (1 × 5 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 1-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2 -[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2- en-1-on (0,10 g, 174 umol, 44,1 % prinos) kao žuto ulje. ESI MS m/z 561,5 [M+H]<+>.

Korak D: 1-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 1-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (0,10 g, 174 umol) u dihlorometanu (3 mL) je dodat BBr3 (223 mg, 892 umol, 85,9 uL) na -78 °C. Smeša je mešana na -78 °C tokom 30 minuta i 0 °C tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena dihlorometanom (3 mL) i vodom i pH vodenog sloja je podešen na > 7 dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata na -78 - 0 °C. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan dihlorometanom (3 × 5,00 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al203, dihlorometan/metanol = 10/1) i smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna

4

faza: [voda (10 mm NH4HCO3) - ACN]; B%: 30 % - 60 %, 3 min) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) -ACN]; B%: 20 % - 50 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 1-[4-[7-(2-fluoro-3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan (1,59 mg, 2,91 umol, 1,63 % prinos, 100 % čistoća, FA) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 547,2[M+H]<+>.

PRIMER 250

1-[4-[7-(5-hloro-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

4

Korak A: 4-bromo-5-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-indazol: U rastvor 4-bromo-5-hloro-1H-indazola (100 mg, 432,0 umol) u DCM (3 mL) dodat je TsOH·H2O (8,22 mg, 43,2 umol) i 3,4-dihidro-2H-piran (72,7 mg, 864 umol, 79,0 ul). Smeša je mešana na 20 °C tokom 2 sata. Reakcija je isprana vodom (20 ml) i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (20 ml × 2). Kombinovani organski slojevi su osušeni sa Na2SO4 i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 10:1) da bi se dobio 4-bromo-5-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (270 mg, 810 umol, 93,8 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 547,2[M+H]<+>.

Korak B: terc-butil-4-[7-(5-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (123 mg, 284,4 umol), 4-bromo-5-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (135 mg, 427 umol), Pd2(dba)3 (26,0 mg, 28,4 umol), RuPhos (20,0 mg, 42,9 umol) i Cs2CO3 (278 mg, 853 umol) u dioksanu (10 mL) je degasirana i pročišćena sa N2, a zatim je mešana na 100 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Reakcija je ugašena dodavanjem vode (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su sušeni sa Na2SO4 i rastvarač je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/MeOH=10/1) da bi se dobio terc-butil-4-[7-(5-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)- 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130,0 mg, 188,4 umol, 66,3 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. ESI MS m/z 668,2[M+H]<+>.

Korak C: 7-(5-hloro-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin: U rastvor terc-butil 4-[7-(5-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (50,0 mg, 74,9 umol) u DCM (2 ml) je dodat TFA (1,95 mL). smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 7-(5-hloro-lH-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1- il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (40,0 mg, sirov, 2TFA) kao žuto ulje koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. ESI MS m/z 483,4[M+H]<+>.

4

Korak D: 1-[4-[7-(5-hloro-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan: U rastvor 7-(5-hloro-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (40,0 mg, 2TFA) i DIEA (50 mg, 387 umol, 67,4 uL) u DCM (3 mL) dodaju se u kapima anhidrid akrila (9,0 mg, 71,4 umol) pod Atmosfera N2. Smeša je mešana na -70 °C 15 min. Reakcija je ugašena dodavanjem vode (10 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (10 ml × 3).

Organski sloj je osušen sa Na2SO4 i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225 %FA)-];B%: 10 %-37 %, 10 minuta) i liofilizovan da bi se dobio 1-[4-[7-(5-hloro-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan (11,9 mg, 20,8 umol, dva koraka 27,3 %, 100 % e.e.) kao žuta čvrsta supstanca. ESI MS m/z 537,2 [M+H]<+>.

PRIMER 251

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-2-

4

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U mikrotalasnoj epruveti benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,362 mmol) je rastvoren u dioksanu (181 µl, 0,362 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (236 mg, 0,723 mmol) i (S)-terc-butil 2-(hidroksimetil)-2 -metilpirolidin-1-karboksilat (389 mg, 1,81 mmol). Epruveta je zatim zatvorena i zagrevana na 90 °C tokom 2 sata. LC/MS je pokazao završetak reakcije. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je koncentrovan in vacuo i hromatografisan na CombiFlash (0 %-10 % DCM:MeOH). Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il))-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (264 mg, 0,361 mmol, 99,7 % prinos). ES+APCI MS m/z 732,4 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (264 mg, 0,361 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (3607 µl, 0,361 mmol) i tretiran sa TFA (556 µl, 7,21 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. LC/MS je pokazao završetak reakcije. Reakcija je koncentrovana in vacuo i tretirana zasićenim bikarbom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2Ks) i kombinovani organski slojevi osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-((S)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (210 mg, 0,332 mmol, 92,2 % prinos). ES+APCI MS m/z 632,3 [M+H]<+>.

4

Korak C: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (105 mg, 0,1662 mmol) je rastvoren u mravljoj kiselini (94,05 ul, 2,493 mmol) i tretiran sa formaldehidom (1868 ul, 24,93 mmol). Reakciona smeša je mešana na 85 °C 1 sat. LC/MS je pokazao završetak reakcije. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i tretirana zasićenim bikarbom i smeša je ekstrahovana sa DCM (2Ks) i organski slojevi su kombinovani i sušeni preko Na2SO4. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i hromatografisani na CombiFlash (0 %-10 % DCM:MeOH). Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1 -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (75 mg, 0,1161 mmol, 69,88 % prinos). ES+APCI MS m/z 646,4 [M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-(2-((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7, 8-

4 1

tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (117 mg, 0,181 mmol) u EtOH (1812 µl, 0,181 mmol) i THF (1812 µl, 0,181 mmol) je prečišćen sa N2 za 5 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum (96,4 mg, 0,0453 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50 % H20), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 min. Rastvor je zatim mešan u atmosferi H21 sat. LC/MS je pokazao čist željeni proizvod.

Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio 2-(4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (88 mg, 0,172 mmol, 94,9 % prinos). ES+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. U suspenziju 2-(4-(2-((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (88 mg, 0,17 mmol) u dihlorometanu (1720 µl, 0,17 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat aciloil hlorid (14 µl, 0,17 mmol) zatim Hunigova baza (60 µl, 0,34 mmol). Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. LC/MS je pokazao završetak reakcije. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Koncentrat je resuspendovan u 60:40 smeši ACN: H20 i prečišćen na Gilson-u (prep HPLC) korišćenjem 5-->95 % ACN/0,1 % TFA u vodi/0,1 % TFA kao eluenta. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i oslobođene sa zasićenim bikarbom i organske materije ekstrahovane sa DCM. Organski slojevi su sušeni preko MgSO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-). il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (14 mg, 0,025 mmol, 14 % prinos). ES+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

PRIMER 252

terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-([(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat

4 2

Korak A: (S)-pirolidin-2-ilmetanol U rastvor (S)-terc-butil 2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (2 g, 9,94 mmol) u CH2Cl2 (40 ml) je dodat HCl (4 M u dioksanu, 49,69 ml) na 0 °C pod atmosferom azota. Posle mešanja na 15 °C tokom 30 min, smeša je koncentrovana pod vakuumom. (S)-pirolidin-2-ilmetanol (1,37 g, 9,96 mmol, 100 % prinos, HCl) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

Korak B: [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il] metanol: Smeša [(2S)-pirolidin-2-il]metanola (750 mg, 7,41 mmol, 724 uL) i acetona (4,31 g, 74,2 mmol, 5,46 ml) u MeOH (20 ml) je hidrogenizovana pod H2 (30 psi) sa Pd/C (100 mg, 7,41 mmol, 10 % čistoće) na 15 °C tokom 3 sata. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metanol (0,821 g, 5,73 mmol, 77,3 % prinos) je dobijen kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 3,54 (dd, J = 4,0, 10,8 Hz, 1H), 3,40 - 3,35 (m, 1H), 2,99 - 2,86 (m, 3H), 2,60 - 2,50 (m, 1H),

4

1,94 - 1,82 (m, 1H), 1,82 - 1,66 (m, 3H), 1,15 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,08 (d, J = 6,4 Hz, 3H).

Korak C: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat: U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (300 mg, 549 umol) i [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metanol (157 mg, 1,10 mmol) u THF (5 ml) je dodat t-BuONa (158 mg, 1,65 mmol). Posle mešanja na 20 °C tokom 0,5 sata, reakciona smeša je neutralizovana sa HCl (1 M) do pH = 7 uz održavanje temperature rastvora na 0 °C, a zatim je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % TFA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (174 mg, 278 umol, 50,7 % prinosa, 100 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. ESI MS m/z 626,2 [M+H]<+>.

Korak D: 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril: U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropil pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (174 mg, 278 umol) u CH2Cl2 (5 ml) je dodata TFA (7,70 g, 67,5 mmol, 5,00 mL) na 0 °C u atmosferi azota. Posle mešanja na 15 °C tokom 30 minuta, smeša je koncentrovana pod vakuumom. 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril (178 mg, sirov, TFA) je dobijen kao žuto ulje. ESI MS m/z 526,1 [M+H]<+>.

Korak E: 2-[4-[2-[[(2S)-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-1-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril: U smešu 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (178 mg, sirov, TFA so) i DIEA (360 mg, 2,78 mmol, 485 uL) u CH2Cl2 (5 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (28,1 mg, 223 umol) na 0 °C. Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Reakciona smeša

4 4

je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*30 5u; mobilna faza: [voda (0,225 %FA) - ACN]; B%: 27 % - 54 %, 10 min).2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (11,7 mg, 18,3 umol, dva koraka 6,58 % prinosa, 97,9 % čistoće, FA) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. ESI MS m/z 580,2 [M+H]<+>.

PRIMER 253

2-(1-akriloil-4-(7-(7-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: (7-hloro-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat: U smešu 7-hlorotetralin-1-ona (2 g, 11,1 mmol, 1 ekv.) i DIEA (4,29 g, 33,2 mmol, 5,79 mL) u DCM (35 mL) dodat je Tf2O (4,69 g, 16,6 mmol, 2,7 mL) u jednoj porciji na 0 °C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 200/1 do 50/1). (7-hloro-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat (2,25 g, 7,02 mmol, 63,4 % prinosa, 97,6 % čistoće) je dobijen kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,32 (d, J = 2,0 Hz,

4

1H), 7,24 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,10 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 2,88 - 2,80 (m, 2H), 2,53 (dt, J = 4,8, 8,0 Hz, 2H).

Korak B: (7-hloro-1-naftil) trifluorometansulfonat: U smešu (7-hloro-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonata (1,57 g, 5,02 mmol) u dioksanu

(35 mL) dodat je DDK (2,28 g, 10,0 mmol) u jednom delu pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min, zatim zagrevana na 105 °C i mešana 5 sati.

Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio 1,4-dioksan. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 200/1 do 50/1). (7-hloro-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,24 g, 3,94 mmol, 78,5 % prinos, 98,7 % čistoća) je dobijen kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ = 8,05 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,87 - 7,83 (m, 2H), 7,57 - 7,47 (m, 3H).

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom (7-hloro-1-naftil) trifluorometansulfonata za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 586,1 [M+H]<+>.

PRIMER 254

2-[4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il] acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-5-fluoronaftalena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u korak G. ESI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

4

PRIMER 255

2-[4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: (7-metoksi-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat: U rastvor 7-metoksitetralin-1-ona (1 g, 5,67 mmol) i DIEA (2,20 g, 17,0 mmol, 2,97 mL) u DCM (15 mL) dodat je Tf2O (2,40 g, 8,51 mmol, 1,40 mL) u kapima, zatim je smeša mešana na 20 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 100:1) da bi se dobio (7-metoksi-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat (1,7 g, 5,24 mmol, 92,3 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,75 (dd, J = 2,4, 8,4 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,04 - 2,96 (m, 2H), 2,68 (t, J = 8,4 Hz, 2H).

Korak 2: (7-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat: Smeša (7-metoksi-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonata (1,7 g, 5,51 mmol) i DDK (2,50 g, 11,0 mmol) u dioksanu (30 mL) je mešana na 105 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 50:1) da bi se dobio (7-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,41 g, 4,14 mmol, 75,1 % prinos, 90,0 % čistoća) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,84 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,78

4

(d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,24 - 7,21 (m, 2H), 7,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H).

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom (7-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonata za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 582,4 [M+H]<+>.

PRIMER 256

1-(2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan

Korak A: benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Rastvor terc-butil 2-(metoksimetil)piperazin-1-karboksilata (0,715 g, 3,10 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (3 ml) je ohlađen na ledenom kupatilu uz mešanje i čvrsti benzil 2,4-dihloro- U malim porcijama je dodat 5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (1,00 g, 2,96 mmol), a zatim DIPEA (0,57 mL, 3,25 mmol, 1,1 ekv.). Dobijeni rastvor je ostavljen da se zagreje do s.t. tokom 1 sata, a zatim podeljen između vode (15 mL) i MTBE (50 mL). Organski sloj je ispran vodom (2 × 10 mL), slanim rastvorom (10 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen in vacuo da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (1,54 g, 98 %). ES+APCI MS m/z 532,3, [M+H]<+>.

4

Korak B: benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Smeša sirovog benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H) -karboksilat (500 mg, 0,940 mmol), (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (216 mg, 1,88 mmol), Cs2CO3 (612 mg, 1,88 mmol) i dioksan (0,5 ml) su isprani azotom. Bočica je zatvorena i mešana na 120 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 ml) i vode (10 ml), organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 ml svaki), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na silika gelu, Redisep 40 g, eluiranjem sa 4 do 10 % MeOH/DCM 0,2 % NH4OH da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (197 mg, 34 %). ES+APCI MS m/z 611,4 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)piperazin-1-karboksalat: Smeša benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8- dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (197 mg, 0,323 mmol), metanol (10 mL) i paladijum na ugljeniku (10 mg, 5 %, Degussa tip E101 NO/V) je degaziran i mešano u atmosferi vodonika (balon) 1 sat. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit (2 mL), isprana sa MeOH (3 × 3 mL), uparena u vakuumu i osušena uparavanjem sa toluenom u vakuumu i pod visokim

4

vakuumom da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (150 mg, 98 %). ES+APCI MS m/z 477,2 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido-[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,315 mmol), Cs2CO3 (308 mg, 0,944 mmol), dioksan (1 ml), 1-jodonaftalen (0,0689 ml, 0,472 mmol) i metan (2,472 mmol) dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (26,3 mg, 0,0315 mmol) (RuPhos-Pd-G3) je pročišćen azotom, balon je zatvoren i mešan na 70 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (15 ml) i vode (5 ml), organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 ml svaki), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na silika gelu, Redisep 40 g, koristeći 4 do 10 % MeOH 0,5 % NH4OH kao eluent da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca, 131 mg. ES+APCI MS m/z 603,3 [M+H]<+>.

Korak E: 1-(2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-jedan. terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat

4

(130 mg, 0,2157 mmol) rastvoren je u 1M trifluorosirćetnoj kiselini u DCM, i dobijeni rastvor je ostavljen da ostane na sobnoj temperaturi za 1h. Reakciona smeša je podeljena između 2M Na2CO3 (5 ml) i DCM (15 ml), a organski sloj je uparen in vacuo. Čvrsti talog je rastvoren u DCM (5 mL), ohlađen u kupatilu led-EtOH-CO2 uz mešanje do -30 °C i dodat je trietilamin (0,09 ml, 0,64 mmol), a zatim akriloil hlorid (0,035 ml, 0,43 mmol). Posle 1 min na -30 °C, reakciona smeša je ugašena sa NH4OH (0,05 ml) i uparena u vakuumu i osušena pod visokim vakuumom. Talog je rastvoren u DCM (5 ml), filtriran kroz pamučni čep i prečišćen hromatografijom na silika gelu, Redisep 40 g, eluiranjem sa 5 do 10 % MeOH/DCM 0,25 % NH4OH da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca (19,6 mg, 16 %). ES+APCI MS m/z 557,3, [M+H]<+>.

PRIMER 257

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-

4 1

karboksilat: U bočici sa konusnim dnom, rastvor benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)- 2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,362 mmol) u dioksanu (3616 ul, 0,362 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta. (S)-(1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metanol (168 mg, 1,08 mmol), Cs2CO3 (353 mg, 1,08 mmol), Rhuphos Pd G3 (30,2 mg, 0,0362 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskati dodatnih 5 minuta. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100 °C 1 sat. LC/MS je pokazao završetak reakcije. EtOAc je dodat i ispran slanim rastvorom (2x). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu. Koncentrat je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-20 % DCM/MeOH 2 % NH4OH. Sve frakcije koje sadrže čist željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1 -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (90 mg, 0,134 mmol, 37,0 % prinos). ES+APCI MS m/z 672,4 [M+H]<+>.

Korak B: 2-(4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 Prečišćen je,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (90 mg, 0,13 mmol) u EtOH (1340 µl, 0,13 mmol) i THF (1340 µl, 0,13 mmol) N25 min. Ovom rastvoru je dodat paladijum (36 mg, 0,033 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50 % H20), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 min. Rastvor je zatim mešan pod H2 uvedenom u vakuumu, praćen pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. LC/MS je pokazao željeni proizvod. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio 2-(4-(2-(((S)-1-

4 2

(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6),7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (71 mg, 0,13 mmol, 99 % prinos). ES+APCI MS m/z 538,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U suspenziju 2-(4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (71 mg, 0,132 mmol) u dihlorometanu (1320 µl, 0,132 mmol) na temperaturi okoline je dodat akriloil hlorid (10,3 µl, 70 mmol) a zatim Hunigova baza (46,1 µl, 0,264 mmol). Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. LC/MS je pokazao završetak reakcije. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo.

Koncentrat je resuspendovan u 60:40 smeši ACN: H20 i prečišćen na Gilson-u (prep HPLC) eluiranjem sa 5-->95 % ACN/0,1 % TFA u vodi/0,1 % TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i oslobođene sa zasićenim bikarbom i organske materije ekstrahovane sa DCM. Organski slojevi su sušeni preko MgSO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1) -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (15,7 mg, 0,0265 mmol, 20,1 % prinos). ES+APCI MS m/z 592,4[M+H]<+>.

PRIMER 258

2-[4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-izohinolina za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 553,3 [M+H]<+>.

PRIMER 259

2-[4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: (6-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat: U rastvor 6-fluoronaftalen-1-ola (0,10 g, 617 umol) i DIEA (159 mg, 1,23 mmol, 215 uL) u dihlorometanu (3 mL) dodat je trifluorometilsulfonil trifluorometansulfonat (191 umol,1 678 umol, 112 ul) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, smeša je razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 × 5 mL). Organski

4 4

slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 5 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 3/1) da bi se dobio (6-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (0,17 g, 543 umol, 88,1 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,10 (dd, J = 5,2, 8,8 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,58 - 7,50 (m, 2H), 7,48 - 7,40 (m, 2H).

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1(6-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonata za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

PRIMER 260

2-[4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 4-bromoizohinolina za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 553,1 [M+H]<+>.

PRIMER 261

2-[1-(2-metilprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromonaftalena za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom 2-metilprop-2-enoil hlorida za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m /z 566,4 [M+H]<+>.

PRIMER 262

2-[4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 5-bromoizohinolina za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 553,4 [M+H]<+>.

PRIMER 263

2-[1-[(E)-but-2-enoil]-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 1-bromonaftalenom za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i (E)-but-2-enoil hloridom za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m /z 566,4 [M+H]<+>.

PRIMER 264

2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 5-bromohinolina za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G. ESI MS m/z 553,4 [M+H]<+>.

PRIMER 265

2-(1-akriloil-4-(7-(3-metil-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 210, koraci E-G korišćenjem 1-bromo-3-metil-2-(trifluorometil)benzena za 1-bromonaftalen u koraku E ES+APCI MS m/z 584,3 [M+H]<+>.

PRIMER 266

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,

8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 147, Koraci F-J, korišćenjem (S)-(1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metanola umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u Korak F. ES+APCI MS m/z 596,3 [M+H]<+>.

PRIMER 267

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 234 korišćenjem (R)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F. ES+APCI MS m/ z 552,3 [M+H]<+>.

PRIMER 268

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 234 korišćenjem (R)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F. ES+APCI MS m/ z 552,3 [M+H]<+>. ES+APCI MS m/z 582,3 [M+H]<+>.

PRIMER 269

2-(1-akriloil-4-(2-(2-(dimetilamino)-2-metilpropoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)plperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 147 zamenom 2-dimetilamino-2-metil-1-propanola za (S)-(1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metanol u koraku F. ES+APCI MS m/z 554,4 [M+H]<+>.

PRIMER 270

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano prema Primeru 147, Koraci F-J, korišćenjem (R)-N-Boc-2-hidroksimetilmorfolina umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F. ES+APCI MS m /z 568,3 [M+H]<+>.

PRIMER 271

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 147, Koraci F-J, korišćenjem (S)-N-Boc-2-hidroksimetilmorfolina umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F. ES+APCI MS m /z 568,3 [M+H]<+>.

PRIMER 272

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 147, koraci F-J, korišćenjem terc-butil (R)-3-(hidroksimetil)morfolin-4-karboksilata umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F ES+APCI MS m/z 568,3 [M+H]<+>.

PRIMER 273

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4 1

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 147, Koraci F-J, korišćenjem terc-butil (S)-3-(hidroksimetil)morfolin-4-karboksilata umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F ES+APCI MS m/z 568,3 [M+H]<+>.

PRIMER 274

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 234, Koraci G-J korišćenjem (R)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola umesto (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F i 1-bromo -3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen za 1-bromonaftalen u koraku H ES+APCI MS m/z 588,3 [M+H]<+>.

PRIMER 275

2-(1-akriloil-4-(7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4 2

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 210, koraci E-G korišćenjem 2-bromo-1-fluoro-3-(trifluorometil)benzena za 1-bromonaftalen u koraku E. ES+APCI MS m/z 588,3 [M+H]<+>.

PRIMER 276

2-(1-akriloil-4-(7-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 210, koraci E-G korišćenjem 1-bromo-4-fluoro-2-(trifluorometil)benzena za 1-bromonaftalen u koraku E. ES+APCI MS m/z 588,3 [M+H]<+>.

PRIMER 277

2-(1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je sintetizovano u skladu sa Primerom 210, koraci E-G korišćenjem 1-bromo-3-hloro-2-(trifluorometil)benzena za 1-bromonaftalen u koraku E i THF umesto EtOH/THF u koraku F. ES+APCI MS m/ z 604,3 [M+H]<+>.

PRIMER 278

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(hinolin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210 Koraci E-G, zamenom 4-bromohinolina za 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen u koraku E i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G.

PRIMER 279

2-(1-akriloil-4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4 4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210, zamenom N, N-dimetil-etanolamina za (2S)-1-etil-2-pirolidinil]metanol u koraku C i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G.

PRIMER 280

2-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-akriloilpiperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210, zamenom 3-((1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1-ola umesto (2S)-1-etil -2-pirolidinil]metanol u koraku C i takođe zamena prop-2-enoil prop-2-enoata za akriloil hlorid u koraku G.

PRIMER 281

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210, zamenom (R)-(1-metilpirolidin-3-il)metanola za (2S)-1-etil-2-pirolidinil]metanol u koraku C i takođe zamenom prop-2-enoil prop -2-enoat za akriloil hlorid u koraku G.

PRIMER 282

2-(1-(3-metilbut-2-enoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210, zamenom 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena u koraku E i 3-metilbut-2-enoil hloridom za akriloil hlorid u koraku G.

PRIMER 283

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210, zamenom (2R)-1-etil-2-pirolidinil]metanola za (2S)-1-etil-2-pirolidinil]metanol u koraku C i takođe zamenom prop-2-enoil prop- 2-enoat za akriloil hlorid u koraku G.

PRIMER 284

2-(1-akriloil-4-(2-(2-(dietilamino)etoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao u Primeru 210, zamenom N,N-dietil-etanolamina za (2S)-1-etil-2-pirolidinil]metanol u koraku C i takođe zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata akriloil hloridom u koraku G.

PRIMER 285

4

terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Korak 1: (S)-pirolidin-2-ilmetanol. U rastvor (S)-terc-butil 2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (2 g, 9,94 mmol, 1 ekv.) u CH2Cl2 (40 ml) dodat je HCl (4 M u dioksanu, 49,69 ml, 20 ekv.) na 0 °C u atmosferi azota. Posle mešanja na 15 °C tokom 30 min, smeša je koncentrovana pod vakuumom.

Jedinjenje (S)-pirolidin-2-ilmetanol (1,37 g, 9,96 mmol, 100 % prinos, HCl) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.

Korak 2: [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il)metanol. Mešavina [(2S)-pirolidin-2-il]metanola (750 mg, 7,41 mmol, 724 uL, 1 ekv.) i acetona (4,31 g, 74,2 mmol, 5,46 mL, 10 ekv.) u MeOH (20 mL) je hidrogenizovan pod H2 (30 psi) sa Pd/C (100 mg, 7,41 mmol, 10 % čistoće, 1 ekv.) kao katalizatorom na 15 °C tokom 3 sata. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metanol (0,821 g, 5,73 mmol, 77,3 % prinos) je dobijeno kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 3,54 (dd, J = 4,0, 10,8 Hz, 1H), 3,40 - 3,35 (m, 1H), 2,99 - 2,86 (m, 3H), 2,60 - 2,50 (m, 1H), 1,94 - 1,82 (m, 1H), 1,82 -1,66 (m, 3H), 1,15 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,08 (d, J = 6,4 Hz, 3H).

4

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (300 mg, 549 umol, 1 ekv.) i [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metanol (157 mg, 1,10 mmol, 2 ekv.) u THF (5 ml) su dodani t-BuONa (158 mg, 1,65 mmol, 3 ekv.). Posle mešanja na 20 °C tokom 30 minuta, reakciona smeša je neutralizovana sa HCl (1 mol/L) do pH = 7 na 0 °C, a zatim je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % TFA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (174 mg, 278 umol, 50,7 % prinosa, 100 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 626.

Korak B: 2-(4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropil pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (174 mg, 278 umol, 1 ekv.) u CH2Cl2 (5 ml) je dodat TFA (7,70 g, 67,5 mmol, 5,00 mL, 243 ekv.) na 0 °C u atmosferi azota. Posle mešanja na 15 °C tokom 30 minuta, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (178 mg, sirov, TFA) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 526.

Korak C: 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (178 mg, sirov, TFA) i DIEA (360 mg, 2,78 mmol, 485 uL) u CII2Cl2 (5 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (28,1 mg, 223 umol) na 0 °C. Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 ml) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 25 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom.

4

Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u; mobilna faza: [voda (0,225 %FA) - ACN]; B%: 27 % - 54 %, 10 min). Jedinjenje iz naslova 2-[4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (11,7 mg, 18,3 umol, dva koraka 6,58 % prinosa, 97,9 % čistoće, FA) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 580.

<1>H NMR (400 MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ = 8,28 - 8,19 (m, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,91 - 7,83 (m, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,56 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,94 - 6,71 (m, 1H), 6,38 (br d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,87 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,15 (br s, 1H), 4,92 - 4,54 (m, 4H), 4,42 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,34 (br s, 2H), 4,13 (br s, 2H), 3,95 (br s, 1H), 3,85 - 3,21 (m, 7H), 3,20 - 2,84 (m, 3H), 2,42 - 2,25 (m, 1H), 2,24 - 2,07 (m, 3H), 1,43 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,39 (d, J = 6,4 Hz, 3H).

PRIMER 286

Korak 1: (7-hloro-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat. U smešu 7-hlorotetralin-1-ona (2 g, 11,1 mmol, 1 ekv.) i DIEA (4,29 g, 33,2 mmol, 5,79 ml, 3 ekv.) u DCM (35 ml) dodat je Tf2O (4,69 g, 16,6). mmol, 2,74 ml, 1,5 ekv.) u jednoj porciji na 0 °C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 200/1 do 50/1). Jedinjenje (7-hloro-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat (2,25 g, 7,02 mmol, 63,4 % prinosa, 97,6 % čistoće) je dobijeno kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,32 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,10 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 2,88 - 2,80 (m, 2H), 2,53 (dt, J = 4,8, 8,0 Hz, 2H).

Korak 2: (7-hloro-1-naftil) trifluorometansulfonat. U smešu (7-hloro-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonata (1,57 g, 5,02 mmol, 1 ekv.) u dioksanu (35 ml) dodat je DDK (2,28 g, 10,0 mmol, 2 ekv.) u jedna porcija pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min, zatim zagrevana na 105 °C i mešana 5 sati.

Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio 1,4-dioksan. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 200/1 do 50/1). Jedinjenje (7-hloro-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,24 g, 3,94 mmol, 78,5 % prinos, 98,7 % čistoća) je dobijeno kao bezbojno ulje.

1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,05 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,87 -7,83 (m, 2H), 7,57 - 7,47 (m, 3H).

Korak A: terc-butil 4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 424 umol, 1 ekv.) i (7-hloro-1-naftil) trifluorometansulfonat (264 mg, 848 umol, 2 ekv.) u toluenu (20 ml) je dodat Pd2(dba)3 (38,8 mg, 42,4 umol, 0,1 ekv.), RuPhos (39,6 mg, 84,8 umol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (414 mg, 1,27 mmol, 3 ekv.) pod N2.

Smeša je zagrejana na 110 °C i mešana 5 sati. Smeša je razblažena vodom (10,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15,0 ml). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 20,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % TFA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (1 × 30 mL). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje terc-butil 4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 316 umol, 74,6 % prinosa, 100 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1: 632.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,20 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,48 - 7,38 (m, 2H), 7,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,43 (br dd, J = 4,8, 10,3 Hz, 1H), 4,29 - 4,16 (m, 3H), 4,09 -3,89 (m, 2H), 3,42 (br s, 1H), 3,35 - 3,20 (m, 3H), 3,17 - 2,65 (m, 7H), 2,52 (s, 3H), 2,33 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 2,14 - 2,06 (m, 1H), 1,88 - 1,71 (m, 4H).

Korak B: 2-[4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu tercbutil 4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 316 umol, 1 ekv.) u DCM (2,5 mL) je dodat TFA (541 mg, 4,75 mmol, 351 uL, 15 ekv.) u jednoj porciji na 0 °C pod N2. Zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Jedinjenje 2-[4-[7-(7-

2

hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (204 mg, 316 umol, 99,8 % prinos, TFA) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 532.

Korak C: 2-[4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (204 mg, 316 umol, 1 ekv., TFA) i TEA (160 mg, 1,58 mmol, 220 uL, 5 ekv.) u DCM (1,5 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (39,8 mg, 316 umol, 1 ekv.) u jednoj porciji na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) na 0 °C, zatim razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa DCM (5 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (5 mL × 1), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150 × 305u; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 30 % - 54 %, 10 min). Jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(7-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (36,0 mg, 56,1 umol, 17,8 % prinos, 98,7 % čistoće, FA) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 586.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,42 (br s, 1H), 8,19 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,47 - 7,41 (m, 2H), 7,19 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,61 (br s, 1H), 6,40 (br d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J =10,8 Hz, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,91 - 4,75 (m, 2H), 4,48 (td, J = 4,4, 12,0 Hz, 1H), 4,23 (br s, 3H), 4,07 (br d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,82 - 3,58 (m, 2H), 3,56 - 3,08 (m, 6H), 3,08 - 2,92 (m, 2H), 2,89 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 2,85 - 2,70 (m, 2H), 2,28 (qd, J = 8,4, 12,5 Hz, 1H), 2,22 - 2,11 (m, 1H), 2,11 - 1,94 (m, 2H).

PRIMER 287

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 424 umol, 1,30 ekv.) i 1-bromo-5-fluoro-naftalen (73,4 mg, 326 umol, 1,0 ekv.) u toluenu (5,0 mL) je dodat (31 mg Cs2CO3), 979 umol, 3,0 ekv.), Pd2(dba)3 (29,9 mg, 32,6 umol, 0,10 ekv.) i RuPhos (22,8 mg, 48,9 umol, 0,15 ekv.). Smeša je mešana na 110 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio toluen. Talog je razblažen sa H20 (10,0 mL) i

4

ekstrahovan sa etil acetatom (10,0 mL kx3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa H20 (10,0 mL) i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,100 % mravlja kiselina)/acetonitril]. Jedinjenje terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 211 umol, 64,5 % prinos) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

Korak B: 2-[4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,9-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor tercbutil 2-(cijanometil)-4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (130 mg, 211 umol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodat TFA (3,08 g, 27,0 mmol, 2,00 mL, 128 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat u atmosferi N2. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Jedinjenje 2-[4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 517.

Korak C: 2-[4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, TFA) u DCM (3,0 mL) je dodat Et3N (200 mg, 1,98 mmol, 275 uL) i prop-2- enoil prop-2-enoat (40,0 mg, 317 umol) na 0 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 2 sata. Reakcija je isprana vodom (10,0 mL). Sirova smeša je ekstrahovana etila cetatom

(20,0 ml*3). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u;mobilna faza:

[voda(0,225 %FA)-];B%: 26 % - 53 %,10 min) i liofilizacija. Jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(5-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (48,4 mg, 82,6 umol, dva koraka 40,0 % prinosa, FA) je dobijen kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,41 (s, 1H), 7,91 (d, J = 7,6 Hz, 1H), ,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,38-7,32 (m, 1H), 7,13-7,07 (m, H), 6,54-6,52 (m, 1H), 6,33 (m, 1H), 5,76 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,10-4,98 (br, 4H), ,74-4,69 (m, 1H), 4,41-4,36 (m, 1H), 4,16 (m, 3H), 3,99 (d, J = 12,0 Hz, 1H), ,61-3,60 (m, 1H), 3,14-3,29 (m, 4H), 3,11 (br, 2H), 2,92-2,85 (m, 1H), 2,78 (s, H), 2,74-2,67 (m, 2H), 2,21-2,16 (m, 1H), 2,09-2,04 (m, 1H), 1,98-1,91 (m, 2H).

PRIMER 288

Korak 1: (7-metoksi-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat. U rastvor 7-metoksitetralin-1-ona (1 g, 5,67 mmol, 1 ekv.), DIEA (2,20 g, 17,0 mmol, 2,97 mL, 3 ekv.) u DCM (15 mL) dodat je Tf2O (2,40 g, 8,51). mmol, 1,40 mL, 1,5 ekv.) kap po kap, zatim je smeša mešana na 20 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 100:1) da bi se dobio (7-metoksi-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat (1,7 g, 5,24 mmol, 92,3 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,75 (dd, J = 2,4, 8,4 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,04 - 2,96 (m, 2H), 2,68 (t, J = 8,4 Hz, 2H).

Korak 2: (7-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat. Mešavina (7-metoksi-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonata (1,7 g, 5,51 mmol, 1 ekv.) i DDK (2,50 g, 11,0 mmol, 2 ekv.) u dioksanu (30 mL) je mešana na 105 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 50:1) da bi se dobio (7-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,41 g, 4,14 mmol, 75,1 % prinos, 90,0 % čistoća) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,84 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,24 - 7,21 (m, 2H), 7,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H).

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 66, 200 mg, 424 umol, 1 ekv.), (7-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (260 mg, 848 umol, 2 ekv.), RuPhos (38,6 umol, 1 ekv.), 0,2 ek), Cs2CO3 (414 mg, 1,27 mmol, 3 ekv.) u toluenu (6 mL) je dodat Pd2(dba)3 (38,8 mg, 42,4 umol, 0,1 ek) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 90 °C tokom 12 sati. U smešu je dodata voda (5 mL).

Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 10 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 34 %) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2- [[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 151 umol, 35,7 % prinos, 95,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 628.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,69 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 2,4, 9,2 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,96 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 4,61 (br s, 1H), 4,52 - 4,30 (m, 3H), 4,20 (ddd, J = 3,2, 6,8, 10,4 Hz, 1H), 4,02 (br d, J = 13,6 Hz, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,87 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,76 - 3,68 (m, 1H), 3,55 - 3,43 (m, 1H), 3,25 (br dd, J = 3,6, 13,6 Hz, 2H), 3,12 (br t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,05 - 2,94 (m, 1H), 2,92 - 2,77 (m, 3H), 2,76 - 2,65 (m, 2H), 2,51 (s, 3H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,14 - 2,06 (m, 1H), 1,92 - 1,74 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril.

Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 159 umol, 1 ekv.) i TFA (363 mg, 3,19 mmol, 236 uL, 20 ekv.) su mešani na 18 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, sirov, 2TFA) kao smeđe ulje.

Korak C: 2-[4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, 159 umol, 1 ekv., 2TFA), DIEA (205 mg, 1,59 mmol, 276 uL, 10 ekv.) u DCM (2,5 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (24,0 mg, 190 umol, 1,2 ek) na 0 °C i mešan na 18 °C tokom 1 sata. U smešu je dodata voda (5 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom.

Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 45 %-75 %,10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(7-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (10,6 mg, 17,8 umol, dva koraka 11,2 % prinos, 97,6 % čistoće) kao sivobela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 582.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,70 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 6,57 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,43 - 6,36 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,09 (br s, 1H), 4,52 - 4,31 (m, 3H), 4,25 -4,15 (m, 1H), 4,08 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,96 (br s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,72 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,54 (br d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,30 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,22 -2,95 (m, 3H), 2,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 2,86 (br d, J = 4,8 Hz, 2H), 2,79 - 2,65 (m, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,16 - 2,02 (m, 1H), 1,91 - 1,67 (m, 4H).

PRIMER 289

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-izokinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 424 umol, 1,00 ekv.), 1-bromoizohinolin (132 mg, 636 umol, 1,50 ekv.) i DIEA (109 mg, 848 umol, 0 ekv.) u DMSO (4,00 mL) je mešana na 110 °C tokom 3 sata. Smeša je razblažena vodom (5,00 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,10 %)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i podešeni pH > 7 zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (6,00 ml) i ekstrahovani etil acetatom (3 × 20,0 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)) -1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,15 g, 233 umol, prinos 54,9 %) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 599.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,17 - 8,11 (m, 2H), 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 1H), 7,28 (s, 1H), 4,69 - 4,55 (m, 3H), 4,42 - 4,35 (m, 1H), 4,15 - 4,01 (m, 3H), 3,96 - 3,81 (m, 2H), 3,57 (ddd, J = 4,0, 8,0, 16,8 Hz, 1H), 3,27 (dd, J = 4,0, 13,6 Hz, 1H), 3,18 - 3,16 (m, 1H), 3,16 -

1

2,95 (m, 3H), 2,91 - 2,73 (m, 3H), 2,70 - 2,62 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,07 - 2,01 (m, 1H), 1,91 - 1,73 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,15 g, 250,53 umol, 1,00 ekv.) i TFA (428 mg, 3,76 mmol, 278 uL, 15,0 ekv.) u dihlorometanu. je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(1-izokinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (153 mg, sirovi, TFA) kao crno ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 499.

Korak C: 2-[4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (153 mg, sirov, TFA) i TEA (253 mg, 2,50 mmol, 348 ul) u dihlorometanu (4,00 ml) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (31,5 mg, 250 umol) na 0 °C, zatim mešano na 15 °C 1 sat. Smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (1,00 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC kolonom: (Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 %, FA) - ACN]; B%: 10 % - 24 %, 7 min) i (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 %, FA) - ACN]; B%: 10 % - 24 %, 7 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(1-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (31,2 mg, 52,1 umol, dva koraka 20,9 % prinos, FA) kao žuti čvrst. LCMS [ESI, M+1]: 553.

<1>H NMR (400 MHz, sirćetna) δ = 8,44 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,04 - 7,95 (m, 2H), 7,89 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,82 (br t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,91 - 6,69 (m, 1H), 6,37 (br d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,87 (br d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,10 (br s, 2H), 4,78 (br s, 3H), 4,53 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,32 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,13 (br s, 3H), 3,90 (br s, 2H), 3,79 - 3,40 (m, 3H), 3,26 (br s, 3H), 3,12 (br s, 3H), 3,07 - 2,84 (m, 2H), 2,45 - 2,34 (m, 1H), 2,23 - 2,09 (m, 3H).

11

PRIMER 290

Umetanje: (6-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat. U rastvor 6-fluoronaftalen-1-ola (0,10 g, 617 umol, 1,00 ekv.) i DIEA (159 mg, 1,23 mmol, 215 uL, 2,00 ekv.) u dihlorometanu (3,00 mL) dodat je trifluorometilsulfonil trifluoromethanesulfonate (191 mg, 678 umol, 112 ul, 1,10 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, smeša je razblažena vodom (5,00 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 × 5,00 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 5,00 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil

12

acetat = 3/1) da bi se dobio (6-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (0,17 g, 543 umol, 88,1 % prinos) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,10 (dd, J = 5,2, 8,8 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,58 - 7,50 (m, 2H), 7,48 - 7,40 (m, 2H).

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 424 umol, 1,00 ekv.), (6-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (150 mg, 509 umol, 1,20 ekv.), RuPhos (39,6 mg, kmol, 84 ekv.), Pd2(dba)3 (38,8 mg, 42,4 umol, 0,10 ekv.) i Cs2CO3 (415 mg, 1,27 mmol, 3,00 ekv.) u toluenu (2,00 mL) je mešan na 110 °C tokom 3 sata pod N2. Smeša je razblažena vodom (5,00 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,10 %)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i podešeno pH > 7 zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (5,00 mL), a zatim ekstrahovane etil acetatom (3 × 20,0 mL), organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 322 umol, 75,8 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,22 (dd, J = 5,6, 9,2 Hz, 1H), 7,57 - 7,52 (m, 1H), 7,48 - 7,42 (m, 2H), 7,29 - 7,24 (m, 1H) 7,10 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,62 (br s, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,31 - 4,22 (m, 2H), 4,14 - 4,00 (m, 3H), 3,95 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,44 (br s, 1H), 3,35 - 3,25 (m, 2H), 3,23 - 2,90 (m, 4H), 2,86 - 2,63 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,33 - 2,24 (m, 1H), 2,13 - 2,00 (m, 1H) 1,89 - 1,74 (m, 3H), 1,53 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

1

dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 322 umol, 1,00 ekv.) i TFA (556 mg, 4,87 mmol, 361 uL, 15,0 ekv.) u dihlorom (0,40 mL) je mešano na 15 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (205 mg, sirovi, TFA) kao crno ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak C: 2-[4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (205 mg, sirov, TFA) i TEA (328 mg, 3,24 mmol, 451 uL) u dihlorometanu (4,00 mL) je dodat prop- 2-enoil prop-2-enoat (40,9 mg, 324 umol) na 0 °C, zatim mešan na 15 °C tokom 1 sata. Smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (1,00 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Synergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 %, FA) -ACN]; B%: 17 % - 44 %, 9 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(6-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (85,6 mg, 139 umol, 42,8 % prinos, FA) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, sirćetna) δ = 8,28 (dd, J = 5,6, 9,2 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,55 - 7,45 (m, 2H), 7,31 (dt, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,94 - 6,68 (m, 1H), 6,38 (br d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,87 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,16 (br s, 1H), 4,84 (br s, 2H), 4,74 - 4,54 (m, 1H), 4,42 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,33 (br s, 2H), 4,25 - 4,08 (m, 1H), 3,92 (br s, 2H), 3,81 - 3,47 (m, 3H), 3,46 - 3,16 (m, 4H), 3,11 (br s, 3H), 3,08 - 2,87 (m, 3H), 2,46 - 2,32 (m, 1H), 2,25 - 2,11 (m, 3H).

PRIMER 291

14

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,15 g, 318 umol, 1,00 ekv.), 4-bromoizohinolin (99,3 mg, 477 umol, 1,50 ekv.), RuPhos (29,7 mg, 63,06 umol, 63,0 umol, 20 ekv. dba)3 (29,1 mg, 31,8 umol, 0,10 ekv.) i Cs2CO3 (311 mg, 954 umol, 3,00 ekv.) u toluenu (5,00 mL) je mešan na 110 °C tokom 3 sata pod N2. Smeša je razblažena vodom (6,00 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 mL). Organski slojevi su isprani slanim

1

rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA,

0,1 %)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i podešeni pH > 7 zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (5,00 mL) i ekstrahovani etil acetatom (3 × 20,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,17 g, 273 umol, 85,9 % prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 599.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,03 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,14 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,73 (dt, J = 1,2, 7,2 Hz, 1H), 7,67 - 7,60 (m, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,44 - 4,31 (m, 3H), 4,15 - 4,03 (m, 2H), 3,95 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,59 - 3,49 (m, 1H), 3,40 (br d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,34 - 3,19 (m, 2H), 3,18 - 2,93 (m, 4H), 2,90 - 2,79 (m, 2H), 2,77 - 2,66 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,35 -2,24 (m, 1H), 2,10 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,79 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,15 g, 251 umol, 1,00 ekv.) i TFA (428 mg, 3,76 mmol, 278 uL, 15,0 ekv.) u dihlorometanu (0L)30 m je mešana na 15 °C tokom 0,5 h. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (153 mg, sirovi, TFA) kao crno ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 499.

Korak C: 2-[4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (153 mg, sirov, TFA) i Et3N (254 mg, 2.51 mmol, 349 uL) u dihlorometanu (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (31,6 mg, 251 umol) na -40 °C. Posle mešanja na 15 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni

1

(Al2O3, metanol/etil acetat = 1/1) i prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*30 5u; mobilna faza: [voda (0,225 %, FA) - ACN]; B%: 12 % - 36 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitrit (28,3 g, 43,4 umol, dva koraka 17,3 % prinos, FA) kao žuti čvrst. LCMS [ESI, M+1]: 553.

<1>H NMR (400 MHz, sirćetna) δ = 9,45 (s, 1H), 8,51 - 8,36 (m, 3H), 8,17 (br t, J = 8,0 Hz, 1H), 8,03 - 7,97 (m, 1H), 6,92 - 6,67 (m, 1H), 6,37 (br d, J = 16,0 Hz, 1H), 5,87 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,14 (br s, 1H), 4,82 (br s, 2H), 4,66 -4,48 (m, 3H), 4,40 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,22 - 3,80 (m, 3H), 3,79 - 3,49 (m, 4H), 3,32 - 3,09 (m, 7H), 3,07 - 2,88 (m, 2H), 2,47 - 2,36 (m, 1H), 2,24 - 2,11 (m, 3H).

PRIMER 292

1

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(5-izokinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat (200 mg, 424 umol, 1,00 ekv.), 5-bromoizohinolin (115 mg, 551 umol, 1,30 ekv.), RuPhos (39,6 mg, 84,8 umol, 0,20 ekv.), Cs17 mg.O3 (14 mg, mmol, 14) ek) i Pd2(dba)3 (38,8 mg, 42,4 umol, 0,10 ekv.) u toluenu (6,00 mL) je degasiran i zatim zagrevan na 90 °C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1 -metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (217 mg, 344 umol, 81,0 % prinos, 94,8 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 599.

Korak B: 2-[4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (217 mg, 362 umol, 1,00 ekv.) u TFA (620 mg, 5,44 mmol, 403 uL, 15,0 ekv.) je mešan na 25 °C za 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-

1

[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (222 mg, sirovo, TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 499.

Korak C: 2-[4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (222 mg, 362 umol, TFA) i TEA (367 mg, 3,62 mmol, 504 uL) u DCM (4,50 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (45,7 mg, 362 umol) kap po kap na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, reakcija je ugašena sa MeOH (0,5 mL), razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 5 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Synergi C18150*25*10um;mobilna faza: [voda (0,225 %FA) - ACN]; B%: 4 % - 20 %, 8 min) i liofilizovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[7-(5-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (73,0 mg, 117 umol, dva koraka 32,2 % prinos, 95,6 % čistoće, FA) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:553.

<1>H NMR (400 MHz, Sirćetna) δ = 9,71 (s, 1H), 8,69 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,91 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,97 - 6,68 (m, 1H), 6,38 (br d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,87 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,15 (br s, 1H), 4,81 (br d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,67 - 4,51 (m, 1H), 4,49 - 4,31 (m, 3H), 4,28 - 4,04 (m, 1H), 3,91 (br s, 2H), 3,78 - 3,64 (m, 1H), 3,63 - 3,37 (m, 4H), 3,36 - 3,20 (m, 1H), 3,11 (br s, 5H), 3,08 - 2,86 (m, 2H), 2,46 - 2,33 (m, 1H), 2,24 - 2,10 (m, 3H).

PRIMER 293

1

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 212 umol, 1,0 ekv.), Pd2(dba)3 (19,4 mg, 21,2 umol, 0,10 ekv.), RuPhos (14,8 mg, 31,8 umol) i 15 ekv. Cs2CO3 (207 mg, 636 umol, 3,0 ekv.) u toluenu (3,0 mL) je u kapima dodat 1-bromonaftalen (65,9 mg, 318 umol, 44,2 uL, 1,5 ekv.). Reakciona smeša je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a smeša je mešana na 110 °C tokom 4 sata u atmosferi N2. Reakcija je isprana vodom (20,0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze (C18,

2

0,1 % FA u vodi, 0-80 % MeCN). Jedinjenje terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (80,0 mg, 116 umol, 54,6 % prinosa) je dobijen kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 598.

Korak B: 2-[4-[2-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (80,0 mg, 134 umol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodat TFA (3,08 g, 27,0 mmol, 2,0 mL, 202 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C tokom 30 min u atmosferi N2. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Sirovi proizvod 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (110 mg, sirov, 2TFA) je dobijen kao žuto ulje i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]:498.

Korak C: 2-[1-[(E)-but-2-enoil]-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (110 mg, 152 umol, 2TFA) u DCM (2,00 mL) je dodat DIEA (100 mg, 774 umol, 135 uL) i (E)-ali -2-enoil hlorid (35,0 mg, 335 umol, 32,1 uL) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Reakcija je ugašena vodom (10,0 mL). Sirova smeša je ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u;mobilna faza:

[voda(0,225 %FA)-];B%: 20 % - 50 %,10 min) i liofilizacija. Naslovljeno jedinjenje 2-[1-[(E)-but-2-enoil]-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (13,3 mg, 23,4 umol, 99,7 % čistoće, FA) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 8,37 (s, 1H), 8,14-8,13 (m, 1H), 7,80-7,78 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,46-7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,95-6,90 (m, 1H), 6,22 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 5,05-4,91 (br, 1H), 4,67-4,63 (m, 1H), 4,37-4,32(m, 1H), 4,24-4,20 (m, 2H), 4,12 (d, J = 14,8 Hz,

21

1H), 3,96 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,51-3,49 (m, 1H), 3,39-3,29 (m, 2H), 3,18-3,12 (m, 7H), 2,90-2,76 (m, 2H), 2,71 (s, 3H), 2,65-2,58 (m, 1H), 2,18-2,12 (m, 1H), 2,00-1,95 (m, 1H), 1,90-1,86 (m, 5H).

PRIMER 294

2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirotidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6,7,8-

22

tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat (200 mg, 424 umol, 1,00 ekv.), 5-bromohinolin (115 mg, 551 umol, 1,30 ekv.), RuPhos (39,6 mg, 84,8 umol, 0,20 ekv.), Cs2CO3, 14 mmol, 14 mmol. ek) i Pd2(dba)3 (38,8 mg, 42,4 umol, 0,10 ekv.) u toluenu (6,00 mL) je degasiran i zatim zagrevan na 90 °C tokom 12 sati pod N2. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril] da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 315 umol, 74,4 % prinos, 94,4 % čistoća) kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]: 599.

Korak B: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 334 umol, 1,00 ekv.) u TFA (571 mg, 5,01 mmol, 371 uL, 15,0 ekv.) je mešan na 25 °C za 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (204 mg, sirovo, TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 499.

Korak C: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (204 mg, 333 umol, 1,00 ek, TFA) i TEA (337 mg, 3,33 mmol, 463 uL) u DCM (4,00 mL) je dodat prop- 2-enoil prop-2-enoat (42,0 mg, 333 umol) kap po kap na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, reakcija je ugašena sa MeOH (0,5 mL), razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 5 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (DCM/MeOH 8/1) i prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u;mobilna faza: [voda(0,225 %FA)-];B%: 7 % - 34 %,10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5-hinolil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-

2

piperazin-2-il]acetonitril (49,1 mg, 79,5 umol, dva koraka 23,9 % prinosa, 96,9 % čistoće, FA) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:553.

<1>H NMR (400 MHz, Sirćetna) δ = 9,22 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 9,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,96 - 7,90 (m, 1H), 7,50 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,98 - 6,71 (m, 1H), 6,37 (br d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,88 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,15 (br s, 1H), 4,81 (br s, 2H), 4,77 - 4,52 (m, 1H), 4,50 - 4,33 (m, 3H), 4,14 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,91 (br s, 2H), 3,79 - 3,66 (m, 1H), 3,65 -3,32 (m, 4H), 3,12 (br s, 6H), 3,05 (br d, J = 16,8 Hz, 2H), 2,46 - 2,34 (m, 1H), 2,23 - 2,09 (m, 3H).

PRIMER 295

2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

24

Korak A: [2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 0,15 g, 318 umol, 1,00 ekv.), 4-bromohinolin (99,3 mg, 477 umol, 1,50 ekv.), RuPhos (29,7 umol, 2 ek.), Pd2(dba)3 (29,1 mg, 31,8 umol, 0,10 ekv.) i Cs2CO3 (311 mg, 954 umol, 3,00 ekv.) u toluenu (5 mL) je mešan na 100 °C tokom 3 sata pod N2. Smeša je razblažena vodom (5,00 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,1 %)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i podešeno pH > 7 sa zasićenim natrijum bikarbonatom (5,00 mL) i ekstrahovane etil acetatom (3 × 20,0 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,17 g, 269 umol, 84,8 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 599.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,77 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 8,0, 16,0 Hz, 2H), 7,70 (dt, J = 1,2, 7,2 Hz, 1H), 7,56 - 7,50 (m, 1H), 6,92 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,62 (br s, 1H), 4,44 - 4,33 (m, 3H), 4,15 - 4,04 (m, 2H), 3,95 (br d,

2

J = 12,0 Hz, 1H), 3,74 - 3,64 (m, 1H), 3,46 (br d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,37 - 3,21 (m, 2H), 3,18 - 2,93 (m, 4H), 2,93 - 2,79 (m, 2H), 2,72 (br dd, J = 6,0, 16,8 Hz, 2H), 2,51 (s, 3H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 1,93 - 1,79 (m, 3H), 1,53 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Smeša terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (165 mg, 276 umol, 1,00 ekv.) i TFA (471 mg, 4,13 mmol, 306 uL, 15,0 ekv.) u dihlorometanu (0). je mešana na 15 °C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (168 mg, sirovo, TFA) kao crno ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 499.

Korak C: 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (168 mg, sirov, TFA) i Et3N (277 mg, 2,74 mmol, 382 uL) u dihlorometanu (3,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop -2-enoat (34,6 mg, 274,22 umol) na -40 °C. Posle mešanja na 15 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena zasićenim natrijum bikarbonatom (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/1) i prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 %, FA) - ACN]; B%: 1 % - 21 %, 7 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-hinolil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 295, 23,4 mg, 39,6 umol, dva koraka 13,4 % prinos, 93,6 % čistoće, FA) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 553.

SFC stanje: OD-3S_3_40_3 ML Kolona: Chiralcel OD-3100 × 4,6 mm I.d., 3 mm, mobilna faza: 40 % metanol (0,05 % DEA) U CO2, brzina protoka: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

2

<1>H NMR (400 MHz, sirćetna) δ = 8,65 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,99 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,77 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,74 (dd, J = 10,8, 16,8 Hz, 1H), 6,32 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,85 (dd, J = 1,2, 10,8 Hz, 1H), 5,01 (br s, 1H), 4,85 - 4,74 (m, 2H), 4,42 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 4,35 - 4,19 (m, 3H), 4,16 - 3,76 (m, 4H), 3,66 (br d, J = 14,0 Hz, 2H), 3,51 - 3,40 (m, 1H), 3,39 - 3,16 (m, 4H), 3,13 (s, 3H), 3,07 - 2,90 (m, 2H), 2,49 -2,39 (m, 1H), 2,26 - 2,17 (m, 3H).

PRIMER 296

2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] -1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-

2

karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 266 umol, 1,0 ekv.) i 2-(dimetilamino)etanol (47,4 mg, 531 umol, 53,3 uL, 2,0 ekv.) u toluenu (1,0 mL) je dodat t-Bu 51,1 mg, 531 umol, 2,0 ekv.). Mešavina je miješana na 0 °C 0,5 sat. Po završetku mešavina je dodana voda (10,0 ml) i ekstrahirana sa EA (10 ml × 3). Organski sloj je sušen Na2SO4, filtriran i koncentriran. Proizvod je pročišćen obranom faznom kolonom blica (C18, 0,1 % FA u vodi, 0 - 40 % MeCN). Željena frakcija je prikupljena i podešena sa zasićenim NaHCO3 vodenim na pH ~ 7, a zatim koncentrisana pod vakuumom. Preostala tečnost je ekstrahovana sa EA (10 mL × 3).

Organski sloj je sušen Na2SO4, filtriran i koncentriran. Proizvod -butil 2-(cijanmetil)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-piridin[3,4-dpirimidin-4-il]piperazin-1 95,8-karboksilat (150 mg, 254 uprinos) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 590.

Korak B: 2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5 H-pirido[3,4-dpirimidin-4-il]pirazen-2-il]acetonitril. 4-[3,4-[2-(cijanometil)fenil]-1,0-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5 H-pirimidin]-4-il]piperazin-1-karboksilat (1501,0 18,8 mg, 254) bio je dodan u 29,01,0-254. Mešavina je miješana na 0 °C 0,5 sat. Nakon završetka mešavina je bila koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je dodan zasićeni NaHCO3 vodeni (5 ml) i ekstrahiran sa DCM-om (10 ml × 3). Organski sloj je osušen na Na2SO4, filtriran i koncentriran da bi se dao 2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dpirimidin-4-azul]azulil-2-200-piperitonitro (sirovo ulje). LCMS [ESI, M+1]: 490.

Korak C: U rastvor 2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-2-il]acetonitril (125 mg, 255 umol, 1,0 ekv.) i DIEA (198 mg, 1,53 mmol, 267 uL, 6,0 ekv.) u DCM (1,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop -2-enoat (32,2 mg, 255 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C. Mešavina je miješana na 0 °C 0,5 sat. Nakon završetka mešavina je bila koncentrisana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je pročišćen PRIP-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*30 mm*4um; mobilna faza:

2

[voda (0,225 %FA)-]; B%: 10 % - 40 %, 10 min). Zatim koncentrisani i liofilizirani. Proizvod 2-[4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dpirimidin-4-il]-1-propenil-piperiazol-2-il]acetonitril, 2 %, 29620,3 %

[30,7 99,5-izomeri, 51,8-proprinos, FA) je dobijena kao belo solidno. LCMS [ESI, M+1]: 544.

<1>H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8,45 (br s, 1H), 7,67 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,71 - 6,49 (m, 1H), 6,47 - 6,29 (m, 1H), 5,82 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,07 -4,97 (m, 1H), 4,54 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 4,12 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,07 (s, 2H), 3,98 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,40 - 3,30 (m, 2H), 3,22 - 3,09 (m, 4H), 3,05 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,92 (dd, J = 8,0, 16,8 Hz, 1H), 2,86 - 2,81 (m, 1H), 2,79 - 2,70 (m, 2H), 2,56 (s, 6H).

PRIMER 297

2-(1-akrilol-4-(2-((R)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperidin-2-il)acetonitril)acetonitril

2

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7-[2- (trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 354 umol, 1,0 ekv.) i 3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propan-1- ol (Intermedijer 18, 111 mg, 708 umol, 2,0 ekv.) u toluenu (3,0 mL) je dodat t-BuONa (68,1 mg, 708 umol, 2,0 ekv.) na 0 °C, reakcija je mešana na 05 °C tokom 0. sat. Po završetku, reakcijska smjesa je dodata voda (10 ml), zatim ekstrahirana sa EA (2 × 10 ml), kombinovani organski sloj je osušen Na2SO4, filtriran i koncentriran. Ostatak je pročišćen obrnutom faznom blicom (C18, 60 % MeCN u vodi), dobiveno je podešeno sa zasićenim NaHCO3 vodenim na pH~8, zatim koncentriranim, izdvojenim sa EA (2 × 10,0 ml), Kombinovani organski sloj osušen je Na2SO4, filtriran i koncentriran da bi se dalo tert-butil 2-(cijanmetil)-4-[2-[3-[(1R,2 R)-oksa-5-azkarboksiklo[2.2.1]heptan-5 6,84197-il]-7 5 1-[2 3,4 130-piridiil]pirazon 55,7 % prinosa, 99,8 % čistoće) kao belo solidno. LCMS [ESI, M+1]: 658.

Korak B: 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7 -[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (70,0 mg, 106 umol, 1,0 ekv.) u DCM (0,5 mL) je dodat TFA (770 mg, 6,75 mmol, 0,5 mL, 63,5 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 0,5 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7 -[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (83,0 mg, sirov, 2TFA) kao žuto ulje koji je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 558.

Korak C: 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7-[2-(trifluorometil )fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (83,0 mg, 106 umol, 1,0 ek, 2TFA) u DCM (1,0 mL ) je dodat DIEA (81,9 mg, 634 umol, 110 uL, 6,0 ek) i prop-2-enoil prop-2-enoat (13,3 mg, 106 umol, 1,0 ek) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C. °C 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (0,5 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen prep-HPLC ((Instrument: ACSWH-GX-G; Kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; Uslov: voda (0,225%FA)-ACN; Početak B:12; Kraj B:42; Vreme gradijenta (min): 10,5; 100%B vreme zadržavanja (min): 2; Brzina protoka (ml/min): 2), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom. Proizvod 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 297, 17,6 mg, 26,3 umol, dva koraka prinos 24,9% prinos, 98,1% čistoća, FA) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 612.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,69 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,59 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,72 - 6,52 (m 1H), 6,40 (d, J = 16,4 Hz,1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,16 - 5,02 (m, 1H), 4,58 -4,51 (m, 1H), 4,38 (br t, J = 5,8 Hz, 2H), 4,21 (br d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,18 - 4,06 (m, 4H), 3,99 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,74 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,42 - 3,29 (m, 2H), 3,27 - 3,04 (m, 6H), 3,04 - 2,61 (m, 6H), 2,28 - 2,07 (m, 3H), 2,04 - 1,92 (m, 1H).

PRIMER 298

1

Korak A: [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol. U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (2,0 g, 9,94 mmol, 1,0 ekv.) u THF (30,0 mL) dodat je LiAlH4 (754 mg, 19,9 mmol, 2,0 ekv.) u porcijama na 0 °C. Posle dodavanja, reakcija je mešana na 70 °C tokom 3 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim Na2S04 (2,4 mL), zatim ekstrahovana etil acetatom (100 mL). Organski sloj je osušen sa Na2SO4 i filtriran.

2

Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (1,0 g, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 3,64 (dd, J = 4,8, 10,0 Hz, 1H), 3,52 (dd, J = 5,6, 10,0 Hz, 1H), 2,78 - 2,67 (m, 1H), 2,60 - 2,45 (m, 2H), 2,42 - 2,23 (m, 5H), 2,08 - 1,91 (M, 1H), 1,72 - 1,57 (m, 1H).

Korak B: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 177 umol, 1,0 ekv.) i [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (61,2 mg, 531 umol, 3,0 ekv.) u toluenu (1,0 mL) je dodat t-BuONa (34,0 mg, 354 umol, 2,0 ekv.) na 0 °C, reakcija je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Po završetku, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 mL), zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan.

Ostatak je prečišćen flešom obrnute faze (C18, 50% MeCN u vodi). terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (40,0 mg, 63,4 umol, 35,8% prinosa, 97,6% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

Korak C: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (40,0 mg, 64,9 umol, 1,0 ekv.) u DCM (0,5 mL) je dodat TFA (770 mg, 6,75 mmol, 500). uL, 104 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 0,5 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (48,0 mg, sirovo, 2TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak D: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. Na smešu 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (48,0 mg, 64,6 umol, 1,0 ek, 2TFA) u DCM (1,0 mL) je dodat DIEA (25,0 mg, 194 umol, 33,7 u 3,0 ek) i prop-2-enoil prop-2-enoata (8,14 mg, 64,6 umol, 1,0 ek) na 0°C, reakciona smeša je mešana na 20°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena metanolom (0,5 mL) i koncentrovana ((instrument: ACSWH-GX-M; Kolona: Gemini 150*255u; Uslov: voda (0,04 % NH3H2O)-ACN; Početak B: 60; Kraj B: 81; Vreme gradijenta (min): 10; 100 %B vreme zadržavanja (min):3; Brzina protoka (ml/min): 25), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (5,48 mg, 9,26 umol, 14,4% prinos, 96,3% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,54 - 6,44 (m, 1H), 6,32 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,75 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,12 - 4,92 (m, 1H), 4,13 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 4,07 - 3,97 (m, 3H), 3,92 - 3,84 (M, 1H), 3,62 - 3,42 (m, 1H), 3,31 - 3,22 (m, 1H), 3,16 - 2,95 (m, 3H), 2,89 - 2,49 (m, 7H), 2,47 - 2,35 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,05 - 1,92 (m, 1H), 1,57 - 1,46 (m, 1H).

PRIMER 299

2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-di hidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3,70 g, 9,15 mmol, 1,0 ekv.), Pd2(dba)3 (1,26 g, 1,37 mmol, 0,15 ekv.), RuPhos (854 mg, 1,83 mmol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (7,45 g, 22,9 mmol do 22,9 mmol) 74,0 mL) je dodat 1-bromo-2-(trifluorometil)benzen (4,12 g, 18,3 mmol, 2,49 mL, 2,0 ekv.). Mešavina je miješana na 100 °C 12 sata. Po završetku mešavina je dodana voda (100 ml) i ekstrahirana etilacetatom (100 ml × 3). Organski sloj je sušen Na2SO4, filtriran i koncentriran. Ostatak je pročišćen obranom faznom kolonom blica (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-90 % MeCN). Proizvod -butil 2-(cijanmetil)-4-[2-metilsulkalizin-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-di hidro-5H-pirido[3,4-d1,90-d pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (g, 3,46 mmol, 37,8 % prinosa) je dobiveno kao žuto.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,46 - 7,37 (m, 2H), 7,22 - 7,11 (m, 1H), 4,67 - 4,55 (m, 1H), 4,03 (br d, (br, 1H),J = 13,6 Hz, 2H), 3,88 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,68 - 3,47 (m, 1H), 3,30 - 3,08 (m, 4H), 3,02 (d, J = 3,2, 12,4 Hz, 1H), 2,94 - 2,69 (m, 4H), 2,51 (s, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (1.50 g, 2.46 mmol, 1.0 ek) u DCM (15.0 mL) je dodat m-CPBA (593 mg, 2.75 mmol, 1.12 ek, 80% čistoće) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sati. Nakon završetka, smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor Na2S203 (30,0 mL) i ekstrahovan etil acetatom (30,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1% FA u vodi, 0-90% MeCN) da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil) fenil] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,16 g, 2,05 mmol, 83,6% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:565.

Korak C: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-([(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 354 umol, 1,0 ekv.) u toluenu (3,0 mL) je dodat [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (81,6 mg, 708,4 umol), 2,0 ek) i t-BuONa (68,1 mg, 708 umol, 2,0 ek) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 20 min. Nakon završetka, reakcija je ugašena vodom (10,0 mL). Sirova smeša je ekstrahovana etil acetatom (15 mL × 3). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (50,0 mL), osušen sa Na2SO4 i filtriran. Rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-80 % MeCN). Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8 -dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 275 umol, 77,7 % prinos) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:616.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) 8,08 (s, 1H), 7,61 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,25 - 7,19 (m, 1H), 5,02 -4,78 (m, 1H), 4,58 - 4,43 (m, 2H), 4,17 (br t, J = 12,5 Hz, 1H), 4,08 - 3,86 (m, 5H), 3,64 - 3,51 (m, 1H), 3,23 (br dd, J = 3,8, 13,8 Hz, 1H), 3,11 - 3,01 (m, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,84 - 2,58 (m, 4H), 2,31 - 2,03 (m, 2H), 2,02 - 1,94 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 1H).

Korak D: 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-2il]acetonitril. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 276 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,50 mL) je dodat TFA (2,31 g, 20,3 mmol, 1,50) mL, 73,4 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C tokom 15 min u atmosferi N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Sirovi proizvod 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (240 mg, sirov, 2TFA) je dobijen kao žuto ulje i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak E: 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (240 mg, 2TFA) u DCM (3,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (40,0 mg, 317 umol) i DIEA (130 mg, 1,01 mmol, 175 uL) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C 30 min. Reakcija je ugašena vodom (20,0 mL). Sirova smeša je ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4 i filtrirani. Rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150 × 25 mm × 10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 55 % - 85 %,3 min). Jedinjenje 2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (Primer 299, 10,2 mg, 16,8 umol, 94,3 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,68 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,40 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,83 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,07 (br s, 1H), 4,85 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,66 - 4,39 (m, 1H), 4,20 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,13 - 3,95 (m, 4H), 3,70 - 3,55 (m, 2H), 3,45-3,20 (m, 2H), 3,16 - 2,99 (m, 3H), 2,98 - 2,91 (m, 4H),2,85 - 2,70 (m, 4H), 2,33 - 2,14 (m, 2H), 2,10 - 2,01 (m, 2H).

PRIMER 300

2-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] -1-prop-2-enoil-pipenazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 354 umol, 1,0 ekv.) i 2-(dietilamino)etanol (83,0 mg, 708 umol, 93,9 uL, 2,0 ekv.) u toluenu (3,0 mL) je dodat (t-BuONa) 68,1 mg, 708 umol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Talog je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0 - 40 % MeCN). Proizvod terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (180 mg, 291 umol, 82,3 % prinos) je dobijen kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 618.

Korak B: 2-(4-(2-(2-(dietilamino)etoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-(2-(dietilamino)etoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (180 mg, 291 umol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodat TFA (33,2 mg, 291 umol, 21,6 uL, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodat etil acetat (10,0 mL) i podešen je zasićenim rastvorom NaHCO3 na pH > 7. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (30 ml × 3) i organski sloj je osušen sa Na2SO4 i filtriran. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Proizvod 2-(4-(2-(2-(dietilamino)etoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-2-il)acetonitril (150 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 518.

Korak C: 2-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov) u DCM (3,0 mL) je dodat DIEA (129 mg, 1,0 mmol, 174 uL) i prop-2-enoil prop-2-enoat (44,1 mg 0,35 mmol). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem metanola (10,0 mL) na 20 °C. U reakcionu smešu je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa DCM (10,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,04 %NH3H2O)-ACN]; B%: 65 % - 83 %,10 min). Proizvod 2-[4-[2-[2-(dietilamino)etoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 300, 41,6 mg, 72,7 umol, 100 % čistoće, prinos u dva koraka 25,0 %) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 572.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,68 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,32 - 7,28 (m, 1H), 6,70 - 6,49 (m, 1H), 6,39 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,82 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,08 (br, s, 1H), ,39 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 4,14 - 4,00 (m, 3H), 4,02 - 3,84 (m, 1H), 3,32 (br d, J = 2,0 Hz, 1H), 3,24 - 3,16 (m, 1H), 3,15 - 3,04 (m, 2H), 2,96 - 2,88 (m, 4H), 2,87 -,70 (m, 1H), 2,68 - 2,61 (m, 4H), 1,89 (br s, 3H), 1,07 (t, J = 7,0 Hz, 6H).

PRIMER 301

2-[4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Korak A: terc-butil (5S)-5-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat. U rastvor (2S)-1-terc-butoksikarbonil-5,5-dimetil-pirolidin-2-karboksilne kiseline (400 mg, 1,64 mmol, 1,00 ekv.) u anhidrovanom THF (7,00 mL) dodat je BH3•Me2S (10 M, 493 uL, 3,00 ekv.) kap po kap na 25 °C. Reakcija je zagrevana na 50 °C tokom 5 minuta. Po završetku, nakon hlađenja u ledenom kupatilu, smeša je ugašena metanolom (10 mL). Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil (5S)-5-(hidroksimetil)-2,2-dimetilpirolidin-1-karboksilat (360 mg, 1,57 mmol, 95,9 %) kao bezbojno ulje koje je koristi se direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: terc-butil 4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U mešani rastvor terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-

41

karboksilata (20 g, 46,5 mmol, 1,00 ekv.) u Dodat je DMF (300 mL) DIEA (18,1 g, 139 mmol, 24,3 mL, 3 ekv.) i 2-piperazin-2-ilacetonitril (10,2 g, 51,2 mmol, 495 uL, 1,10 ekv., 2 HCl). Reakcija je zagrevana do 100 °C i mešana 1 sat u atmosferi N2. terc-butil 4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (18,8 g, sirov) je dobijeni i direktno korišćeni u sledećem koraku bez dorade i prečišćavanja.

Korak C: terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor tercbutil 4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (18,8 g, sirovo) u DMF (200 mL) je dodat DIEA (12,0 g, 92,9 mmol, 16,2 mL) i benzil karbonohloridat (11,9 g, 69,7 mmol, 9,91 mL). Smeša je mešana na 50 °C 1 sat. Reakciona smeša je razblažena vodom (300 mL) i ekstrahovana etil acetatom (200 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 30/1 do 3/1). terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (20 g 31,6 mmol, dva koraka 68,0 % prinosa, 85 % čistoće) je dobijeno kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]:539.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 - 7,36 (m, 5H), 5,21 - 5,15 (m, 2H), 4,73 - 4,55 (m, 2H), 4,39 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,90 - 3,69 (m, 2H), 3,41 - 3,16 (m, 3H), 3,00 (dt, J = 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,86 - 2,53 (m, 5H), 2,51 (s, 3H), 1,49 (s, 9H).

Korak D: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- karboksilat (11 g, 20,4 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu (100 mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 102 mL, 20 ekv.). Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je rastvoren u 300 mL etil acetata i 300 mL vode i brzo mešan. Zatim je dodat zasićeni vodeni rastvor Na2C03 do pH~9. Organski slojevi su isprani vodom (1 × 300 mL) i slanim rastvorom (1 × 200 mL), osušeni preko

42

Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. benzil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (8,2 g, 15,2 mmol, 74,2 % prinos, 81 % čistoće) se dobija kao žuto ulje i koristi se u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]:439.

Korak E: Benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (5,07 g, 11,6 mmol, 1,1 ekv.), 1-bromonaftalen (2,83 g, 13,7 mmol, 1,90 mL, 1,3 ekv.), Cs2CO3 (8,57 g, 26,3 mmol, 2,50 ekv.), Pd2(dba)3 (1,45 g, 0,1 mmol, 1,45 g, 1,5 ekv. RuPhos (982 mg, 2,11 mmol, 0,20 ekv.) u dioksanu (100 mL) je degaziran i pročišćen sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 85 °C tokom 5 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (200 mL) i ekstrahovana etil acetatom (200 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 100/1 do 2/1). benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (3,6 g, 4,65 mmol, 40,1 % prinos, 73 % čistoće) je dobijeno kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]:565.

Korak F: benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U mešani rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfanil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazina -1-karboksilat (3,1 g, 5,49 mmol, 1 ekv.) u metiltetrahidrofuranu (50 mL) na 0 °C pod azotom je dodat m-CPBA (1,18 g, 5,49 mmol, 80 % čistoće, 1 ekv.) čist kao čvrsta supstanca. Posle mešanja na 0 °C 1 sat u atmosferi N2, reakciona smeša je ugašena dodavanjem 10 % vodenog rastvora Na2S2O3 (100 mL) na 0 °C, a zatim razblažena vodom (200 mL) i ekstrahovana etil acetatom (200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Željene frakcije su podešene na pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (100 mL × 3). Željene frakcije su podešene na pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (100 mL × 3). Kombinovani organski slojevi

4

su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,3 g, 2,19 mmol, 39,9 % prinosa, 98 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:581.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,22 - 8,13 (m, 1H), 7,92 - 7,83 (m, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,48 (m, 2H), 7,45 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,41 -7,32 (m, 5H), 7,15 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,70 (br s, 1H), 4,54 - 4,36 (m, 2H), 4,34 - 4,17 (m, 2H), 4,12 - 4,04 (m, 1H), 3,58 - 3,17 (m, 5H), 3,01 (m, 2H), 2,93 (d, J = 2,8 Hz, 3H), 2,90 - 2,79 (m, 1H), 2,77 - 2,65 (m, 1H).

Korak G: U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-karboksilat (430 mg, 741 umol, 1,00 ekv.) i terc-butil (5S)-5-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-pirolidin-1-karboksilat (340 mg, 1,48 mmol, 2,00 ekv.) u tolu (8,00 mL) je dodat t-BuONa (142 mg, 1,48 mmol, 2,00 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 15 minuta. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril] da bi se dobio benzil 4-[2-[[(2S)-1-tercbutoksikarbonil-5,5-dimetil-pirolidin-2-il ]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 318 umol, 43,0 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 746.

Korak H: benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-5,5-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 4-[2-[[(2S)-1-terc-butoksikarbonil-5,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 268 umol, 1,00 ekv.) u dioksanu (4,00 mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 4,00 mL, 59,7 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-5,5-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 251 umol, 93,5 % prinos, 95,0 % čistoća, HCl) kao žuto ulje koje je koristi se direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

44

Korak I: benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-5,5-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 264 umol, 1,00 ekv., HCl) i formaldehid (107 mg, 1,32 mmol, 98,2 uL, 5,00 % in, 37 ekv. vode) u MeOH (3,00 mL) doda se CH3COOH

(31,7 mg, 528 umol, 30,2 uL, 2,00 ekv.) i NaBH3CN (66,3 mg, 1,06 mmol, 4,00 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, smeša je ugašena sa 1 M HCl (0,2 mL), razblažena vodom (1 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 6 mL).

Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril] da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (96,0 mg, 131 umol, prinos 49,6 %, 90,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,23 - 8,17 (m, 1H), 7,89 - 7,83 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53 - 7,47 (m, 2H), 7,46 - 7,42 (m, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 5H), 7,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,27 - 5,16 (m, 2H), 4,70 (br s, 1H), 4,41 (dd, J = 4,4, 10,4 Hz, 1H), 4,34 - 4,22 (m, 2H), 4,20 - 4,01 (m, 3H), 3,95 (br d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,40 - 3,21 (m, 3H), 3,13 - 2,91 (m, 2H), 2,91 - 2,69 (m, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,13 - 1,96 (m, 1H), 1,75 - 1,54 (m, 5H), 1,15 (s, 3H), 0,92 (s, 3H).

Korak J: 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten da peni u MeOH (6,00 mL) tokom 3 minuta na -40 °C. Rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,10 g, 152 umol, 1,00 ekv.) u MeOH (6,00 mL) je dodat u rastvor NH3 i Pd/C (0,05 g, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Reakcija je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (63,0 mg, 103 umol, 68,0 % prinos, 86,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 526.

4

Korak K: 2-[4-[7-(1-naftil)-2-(((2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (75,0 mg, 143 umol, 1,00 ekv.) i TEA (72,2 mg, 713 umol, 99,3 uL, 5,00 ekv.) u DCM mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (18,0 mg, 143 umol, 1,00 ek) u kapima na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, reakcija je ugašena sa MeOH (0,5 mL), razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 5 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (EtOAc/MeOH 9/1) i prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini

150*25 mm*10um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 60 % - 90 %, 12 min) i liofilizovan da bi se dobio 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[[(2S)-1,5,5-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 301, 14,7 mg, 25,3 umol, 17,8 % prinos, 100 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:580.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,25 - 8,17 (m, 1H), 7,90 - 7,83 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,55 - 7,48 (m, 2H), 7,44 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,45 - 6,36 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,10 (br s, 1H), 4,44 (br s, 1H), 4,34 - 4,19 (m, 2H), 4,17 - 3,80 (m, 4H), 3,79 - 3,21 (m,4H), 3,19 - 2,63(m, 6H), 2,34 (br s, 3H), 2,15 - 2,03 (m, 1H), 1,69 (br s, 3H), 1,16 (br s, 3H), 0,94 (s, 3H).

PRIMER 302

2-[4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-2-piperidil]acetonitril

4

Umetanje: (7-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat. U rastvor 7-fluoronaftalen-1-ola (250 mg, 1,54 mmol, 1 ekv.) i DIEA (598 mg, 4,63 mmol, 806 uL, 3 ekv.) u DCM (10 mL) dodat je Tf2O (652 mg, 2,31). mmol, 382 uL, 1,5 ekv.) kap po kap na -5 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 3 sata. Nakon toga, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleter/etil acetat = 100/1 do 10/1). (7-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (450 mg, 1,53 mmol, 99,2 % prinos) je dobijen kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 8,08 (dd, J = 5,6, 9,2 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,73 - 7,39 (m, 4H).

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-(2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (182 mg, 386 umol, 1 ekv.), (7-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (227 mg, 772 umol, 2 ekv.), Pd2(dba)3 (35,3 mg, 38,6 umol, 0,1 ekv.), RuPhos (36,0 mg, 77,2 umol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (377 mg, 1,16 mmol, 3 ekv.) u toluenu (20 mL) je

4

degazirano N2 i pročišćeno 3 puta zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. Smeša je ugašena sa H20 (30 mL), a zatim je smeša razblažena etil acetatom (20 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralisane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (1 × 100 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. tercbutil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (158 mg, 257 umol, 66,5 % prinosa, 100 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 616.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,92 - 7,79 (m, 2H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,30 - 7,25 (m, 1H), 7,19 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,63 (br d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,40 (br dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,24 (br s, 2H), 4,20 - 4,00 (m, 4H), 3,95 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,52 - 3,37 (m, 1H), 3,36 - 3,16 (m, 3H), 3,15 - 2,63 (m, 6H), 2,50 (s, 3H), 2,36 - 2,22 (m, 1H), 2,12 - 2,05 (m, 1H), 1,92 - 1,70 (m, 3H), 1,53 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor tercbutil 2-(cijanometil)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 162 umol, 1 ekv.) u dioksanu (10 mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 1,62 mL, 40 ekv.) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Nakon toga, smeša je koncentrovana pod vakuumom.2-[4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, sirov, HCl) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak C: 2-[4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-2-piperidil]acetonitril. Na smešu 2-[4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, sirov, HCl) i DIEA (234 mg, 1,81 mmol, 315 uL) u DMF (5 mL) je dodat prop- 2-enoil prop-2-enoat (18,3 mg, 145 umol) na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 h, reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 mL), a zatim ekstrahovana etil

4

acetatom (2 × 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat/MeOH = 50/1 do 1/1). Sakupljena tečnost je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 12 % - 42 %, 10 min) i (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 55 % - 85 %,12 min) 2-[4-[7-(7-fluoro-l-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-2-piperidil]acetonitril (PRIMER 302, 4,23 mg, 7,19 umol, dva koraka 4,29 % prinos, 96,7 % čistoće) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,93 - 7,77 (m, 2H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,32 - 7,25 (m, 1H), 7,19 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,59 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 6,41 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,23 - 4,52 (m, 1H), 4,40 (dd, J = 4,8, 10,6 Hz, 1H), 4,24 (br s, 2H), 4,21 - 4,11 (m, 2H), 4,03 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,86 - 3,04 (m, 6H), 3,03 - 2,58 (m, 5H), 2,49 (s, 3H), 2,37 - 2,23 (m, 1H), 2,16 - 1,98 (m, 1H), 1,91 - 1,69 (m, 3H).

PRIMER 303

2-[4-[7-(1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-(2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor 2-(1-piperidil)etanola (89,0 mg, 689 mol, 91,5 uL, 2,0 ekv.) u toluenu (2,0 mL) dodat je t-BuONa (66,2 mg, 689 mol, 2,0 ekv.) na 0 °C. Zatim je smeši dodat benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 344 umol, 1,0 ekv.), smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon završetka, smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa EA (10 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE:EA=10:1 - EA:MeOH=20:1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil) -2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 296 umol, 86 % prinos, 95,7 % čistoće) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten da peni u MeOH (10,0 mL) na -78 °C tokom 30 minuta. Zatim benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 279 umol, 1,0 ekv.) i Pd/C (100 mg, 10,0 % čistoće) su dodati u gornju tečnost u atmosferi N2. Suspenzija je degazirana i pročišćena sa H23 puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je filtrirana sa celitom i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-40 % MeCN) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[2- (1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90,0 mg, 176 umol, 63 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[4-1-7-(1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[2-(1-piperidil) etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-2-il]acetonitril (90,0 mg, 176 umol, 1,0 ekv.) i DIEA (136 mg,

1,06 mmol, 184 uL, 6,0 ekv.) u DCM (1,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop- 2-enoat (22,2 mg, 176 umol, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (20,0 mg) i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 60 % - 90 %, 12 min) da bi se dobio 2-[4-[7-(1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 303, 11,2 mg, 19,7 umol, 11 % prinos, 99,5 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 8,24 - 8,19 (m, 1H), 7,89 - 7,84 (m, 1H), 7,62 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,70 - 6,53 (m, 1H), 6,41 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,19 - 5,01 (m, 1H), 4,47 (br t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,33 - 4,21 (m, 2H), 4,12 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 4,06 - 3,98 (m, 1H), 3,55 - 3,45 (m, 1H), 3,43 - 3,24 (m, 2H), 3,22 - 3,09 (m, 1H), 3,04 - 2,72 (m, 6H), 2,68 - 2,42 (m, 4H), 1,61 - 1,56 (m, 6H), 1,50 - 1,40 (m, 2H).

PRIMER 304

1

2-[4-[2-[[(2R)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-il] metanol. Smeša [(2R)-pirolidin-2-il]metanola (0,70 g, 6,92 mmol, 673 uL, 1,00 ek), 2-bromoetoksiterc-butil-dimetil-silana (1,66 g, 6,92 mmol, 1,00 ek) ek. i K2CO3 (4,78 g, 34,6 mmol, 5,00 ek) u acetonitrilu (70,0 mL) je refluksovan na 83 °C tokom 12 sati. Zatim je smeša filtrirana i filter kolač je ispran metanolom. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat/metanol = 50/1 do 1/1). Jedinjenje [(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-il] metanol (1,40 g, 5,40 mmol, 78,0 % prinos, 100 % čistoća) je dobijeno kao bezbojno ulje.

2

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,68 (dd, J = 5,2, 6,4 Hz, 2H), 3,57 (dd, J = 3,6, 10,8 Hz, 1H), 3,42 - 3,25 (m, 1H), 3,23 - 2,96 (m, 2H), 2,95 - 2,82 (m, 1H), 2,72 - 2,61 (m, 1H), 2,48 (td, J = 5,2, 12,8 Hz, 1H), 2,40 - 2,27 (m, 114), 1,90 - 1,77 (m, 1H), 1,77 - 1,62 (m, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).

Korak A: benzil 4-(2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-karboksilat (500 mg, 861 umol, 1 ekv.) i [(2R)-1-[2-[tercbutil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metanol (447 mg, 1,72 mmol, 2 ek) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (248 mg, 2,58 mmol, 3 ek) u jednom delu na 25 °C i smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Smeša je zakiseljena sa 1 M rastvorom HCl do pH = 8 i smeša je razblažena etil acetatom (100 mL) i vodom (10 mL). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 50 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko silika gela (etil acetat/metanol 100/1 do 10/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio benzil 4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (480 mg, 582 umol, 68 % prinos, 94,1 % čistoće) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 776.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,28 - 8,11 (m, 1H), 7,95 - 7,77 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,55 - 7,29 (m, 8H), 7,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,29 -5,15 (m, 2H), 4,70 (br s, 1H), 4,41 - 3,88 (m, 7H), 3,83 - 3,68 (m, 2H), 3,57 - 2,69 (m, 12H), 2,67 - 2,49 (m, 1H), 2,37 (q, J = 8,4 Hz, 1H), 2,03 - 1,93 (m, 1H), 1,83 -1,74 (m, 3H), 1,00 - 0,79 (m, 9H), 0,13 -0,01 (m, 6H).

Korak B: 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten da peni u metanolu (60,0 mL) na -78 °C tokom 30 minuta. benzil 4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 258 umol, 1,00 ekv.) i Pd/C (0,10 g, 10,0 % čistoće) je dodat u smešu. Smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi. Zatim je smeša filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]- 7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,15 g, sirov) kao žuto ulje i koristi se u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 642.

Korak C: 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,15 g, sirov) i Et3N (236 mg, 2,34 mmol, 325 uL) u dihlorometanu (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (29,5 mg, 234 umol) na 0 °C. Posle mešanja na 20 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (0,50 mL) i koncentrovana pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil ]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (0,10 g, 135 umol, dva koraka 52,3 % prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 696.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,25 - 8,18 (m, 1H), 7,90 - 7,82 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,43 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,59 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 6,40 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,22 - 4,94 (m, 1H), 4,36 (td, J = 3,6, 10,4 Hz, 1H), 4,31 -4,20 (m, 2H), 4,15 - 4,05 (m, 2H), 4,04 - 3,97 (m, 1H), 3,75 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,63 (br s, 1H), 3,46 (br s, 1H), 3,35 (br d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,21 - 3,15 (m, 1H), 3,08 -2,99 (m, 2H), 2,99 - 2,92 (m, 2H), 2,63 - 2,54 (m, 1H), 2,42 - 2,33 (m, 1H), 2,04 -1,95 (m, 1H), 1,84 - 1,73 (m, 3H), 1,66 (br s, 4H), 0,88 (s, 9H), 0,05 (s, 6H).

Korak D: 2-[4-[2-[[(2R)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. Smeša 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (0,09 g, 129 umol, 1 ekv.) i TBAF (1,00 M u THF, 1,29 mL, 10 ekv.) u THF (0,10 mL) je mešan na 10 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod

4

vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,1 %)/acetonitril], hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/3) i prep-HPLC (kolona: Boston pH-lex 150*2510um; mobilna faza: [voda (0,10 % TFA) - ACN]; B%: 22 % - 52 %, 10 min i kolona: Phenomenex Gemini

150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 47 % - 77 %, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[2-[[(2R)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (23,9 mg, 41,0 umol, 31,7 % prinos, 99,7 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 582.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,25 - 8,18 (m, 1H), 7,89 - 7,83 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,43 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,44 - 6,35 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,10 - 4,50 (m, 1H), 4,38 - 4,24 (m, 3H), 4,22 - 4,09 (m, 2H), 4,00 (br d, J = 11,5 Hz, 2H), 3,73 - 3,57 (m, 2H), 3,45 (br s, 1H), 3,36 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,23 - 2,77 (m, 9H), 2,62 (td, J = 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,38 - 2,26 (m, 1H), 2,05 - 1,99 (m, 1H), 1,90 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 305

3-(4-((S)-4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6-dihidropirido [3,4-d]pirimidin-7(8H)-il)izonikotinonitril

Korak A: benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-cijano-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 791 umol, 1,0 ekv.) i 3-bromopiridin-4-karbonitril (289 mg, 1,58 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (10,0 mL) je dodat (5 mg Cs2CO3, 1,58 mmol, 2,0 ek), Pd2(dba)3 (72,4 mg, 79,1 umol, 0,1 ek) i RuPhos (73,8 mg, 158 umol, 0,2 ek), reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 3 sata pod N2. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (15 mL), zatim ekstrahovana sa EA (2 × 15,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petrol etar/etil acetat=5/1 do petroleum etar/etil acetat/metanol=5/1/0,1) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-cijano-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (200 mg, 266 umol, 34 % prinos, 80,9 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 608.

Korak B: 3-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]piridin-4-karbonitril. U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-cijano-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 226 umol, 1,0 ekv.) u MeOH (5,0 mL) je dodat NH3•MeOH (49,4 ug, 49,4 umol, 5,0 mL) i Pd/C (150 mg, 10 % čistoće), suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakcija je filtrirana kroz celit, a filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom obrnute faze (C18, 30 % MeCN u vodi), dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim NaHCO3 u vodi na pH~8, zatim koncentrovan sve dok nije ostao rastvarač, čvrsta supstanca je zatim dodat DCM (10,0 mL) i mešana na 20 °C tokom 0,5 h, čvrsta supstanca je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 3-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metil pirolidin -2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]piridin-4-karbonitril (35,0 mg, 73,9 umol, 33 % prinos, 100 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 474.

Korak C: 3-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]piridin-4-karbonitril. U smešu 3-[4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]piridin-4-karbonitril (35,0 mg, 73,9 umol, 1,0 ek) u DCM (1,0 mL) je dodat DIEA (28,7 mg, 222 umol, 38,6 uL, 3,0 ek) i prop-2-enoil prop-2-enoat (9,32 mg, 73,9 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (0,5 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen prep-HPLC ((Instrument: ACSWH-GX-M; Kolona: Gemini 150*255u; Stanje: voda

(0,04 %NH3•H2O)-ACN; Početak B:32; Kraj B:56; Vreme gradijenta(min): 10;

100 %B vreme zadržavanja (min):3; Brzina protoka (ml/min): 100), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom. Proizvod 3-[4-[3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]piridin-4-karbonitril (Primer 305, 13,0 mg, 24,5 umol, 33 % prinos, 99,3 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 528.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,52 (s, 1H), 8,33 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,69 - 6,53 (m, 1H), 6,42 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,85 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,19 - 5,01 (m, 1H), 4,48 - 4,36 (m, 3H), 4,27 - 4,08 (m, 2H), 4,07 - 3,81 (m, 3H), 3,78 - 3,33 (m, 3H), 3,23 - 2,99 (m, 3H), 2,97 - 2,83 (m, 2H), 2,81 - 2,61 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,40 - 2,27 (m, 1H), 2,16 - 1,99 (m, 1H), 1,95 - 1,76 (m, 3H).

PRIMER 306

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metanol. U rastvor 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilata (5,0 g, 20,2 mmol, 1,0 ekv.) u THF (100 mL) dodat je LiAlH4 (1,53 g, 40,4 mmol, 2,0 ekv.) u porcijama na 0 °C. Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C 1 sat pod N2, reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana na 70 °C tokom 2 sata pod N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (4,5 mL), zatim filtrirana, filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petrol etar/etil acetat=5/1 do petroleum etar/etil acetat/metanol=3/1/0,1) da bi se dobio [(2S,4R)-4-fluoro-1- metil-pirolidin-2-il] metanol (1,5 g, 11,3 mmol, 56 % prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5,24 - 4,97 (m, 1H), 3,73 (dd, J = 3,2, 11,2 Hz, 1H), 3,61 - 3,40 (m, 2H), 2,86 - 2,74 (m, 1H), 2,69 (ddd, J = 0,8, 2,8, 12,0 Hz, 1H), 2,61 (dd, J = 2,4, 12,0 Hz, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,18 - 1,98 (m, 2H).

Korak B: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64,800 mg, 1,38 mmol, 1,0 ekv.) i [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (367 mg, 2,76 mmol, 2,0 ek) u toluenu (15,0 mL) je dodat t-BuONa (265 mg, 2,76 mmol, 2,0 ekv.) na 0 °C, reakcija je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (30 mL), zatim ekstrahovana sa EA (2 × 15 mL), kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 30 mL), zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar/etil acetat=5/1 do petroleum etar/etil acetat/metanol=3/1/0,1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (720 mg, 997 umol, 72 % prinos, 90,0 % čistoća) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 650.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (670 mg, 1,03 mmol, 1,0 ekv.) u MeOH (15,0 mL) je dodat NH3• MeOH (1,03 mmol, 15,0 mL, 1,0 ekv.) i Pd/C (400 mg, 10 % čistoće), suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakcija je filtrirana kroz celit, a filtrat je koncentrovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4il]piperazin-2-il]acetonitril (260 mg, 478 umol, 46 % prinosa, 94,9 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (260 mg, 504 umol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) je dodat DIEA (196 mg, 1,51 mmol, 263 uL, 3,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (63,6 mg, 504 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (5 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen prep-HPLC ((Instrument: ACSWH-GX-H; Kolona: Gemini 150*255u; Stanje: voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN; Početak B:42; Kraj B:72; Vreme gradijenta(min): 12; 100 %B vreme zadržavanja (min):1,8; Brzina protoka (ml/min): 25), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom.

Proizvod 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 306, 65,6 mg, 115 umol, 23 % prinos, 99,8 % čistoće) dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,27 - 8,17 (m, 1H), 7,92 - 7,84 (m, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 2H), 7,45 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,68 - 6,56 (m, 1H), 6,42 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,86 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,30 - 4,99 (m, 2H), 4,45 (dd, J = 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,35 - 4,21 (m, 3H), 4,15 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,03 (br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,70 - 2,72 (m, 11H), 2,68 - 2,56 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,41 - 2,27 (m, 1H), 2,10 - 1,90 (m, 1H).

PRIMER 307

2-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-((2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 66, 300 mg, 636 umol, 1,00 ekv.), 1-bromo-2-fluoro-3-metoksibenzen (261 mg, 1,27 mmol, 2,00 ekv.), Pd2(dba)3 (117 mg, 127 umol, 0,20 ekv.), RuPhos (89,1 mg, 191 umol, 0,30 ekv.) i Cs2CO3 (622 mg, 1,91 mmol, 3,00 ekv.) u toluenu i prečišćen je sa 30 mL N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. Reakcionoj smeši je dodata H20 (200 mL) i etil acetat (250 mL). Odvojena organska faza je isprana slanim rastvorom (1 × 200 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (100 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-

1

karboksilat (210 mg, 353 umola, 55,4 % prinosa, 100 % čistoće) je dobijen u vidu bledo žute čvrste supstance. LCMS [ESI, M+1]: 596.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,00 (dt, J = 1,6, 8,4 Hz, 1H), 6,74 - 6,56 (m, 2H), 4,61 (br s, 1H), 4,44 - 4,34 (m, 1H), 4,28 - 4,10 (m, 3H), 4,01 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,90 (s, 4H), 3,56 - 3,40 (m, 1H), 3,25 (br dd, J = 3,6, 13,6 Hz, 2H), 3,12 (br t, J = 7,6 Hz, 1H), 2,98 (dt, J = 2,8, 12,4 Hz, 1H), 2,89 - 2,63 (m, 5H), 2,50 (s, 3H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,21 - 2,06 (m, 3H), 1,90 - 1,68 (m, 3H), 1,60 -1,42 (m, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 168 umol, 1,00 ekv.) u DCM (1 mL) je dodat TFA (1,63 g, 14,3) mmol, 1,06 mL, 85,0 ekv.) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h, a zatim je smeša koncentrovana pod vakuumom.2-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (210 mg, sirov, TFA) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 496.

Korak C: 2-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (102 mg, sirova TFA) i DIEA (216 mg, 1,67 mmol, 291 uL) u DCM (3 mL) je dodat prop. -2-enoil prop-2-enoat (16,9 mg, 134 umol) na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 38 % - 68 %, 12 min).2-[4-[7-(2-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 307,

2

7,47 mg, 13,6 umol, dva koraka 17 % prinos, 100 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 550.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,07 - 6,95 (m, 1H), 6,74 - 6,51 (m, 3H), 6,45 - 6,34 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,6 Hz, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,38 (dd, J = 4,8, 10,5 Hz, 1H), 4,31 - 4,12 (m, 3H), 4,07 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,03 - 3,82 (m, 5H), 3,68 - 3,44 (m, 2H), 3,39 - 3,21 (m, 2H), 3,10 (br t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,95 -2,61 (m, 5H), 2,48 (s, 3H), 2,33 - 2,23 (m, 1H), 2,13 - 1,99 (m, 1H), 1,92 - 1,62 (m, 3H).

PRIMER 308

2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-metoksifenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Na smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 66, 300 mg, 636 umol, 1 ekv.), 1-bromo-3-fluoro-2-metoksi-benzen (261 mg, 1,27 mmol, 2 ekv.), Pd2(dba)3 (117 mg, 127 umol, 0,2 ek), RuPhos (89,1 mg, 191 umol, 0,3 ek) i Cs2CO3 (622 mg, 1,91 mmol, 3 ek) u toluenu (30 mL) je degasiran. N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. U reakcionu smešu su dodati H20 (200 mL) i etil acetat (250 mL). Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (200 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene, neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (1 × 100 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 277 umol, 43,6 % prinosa, 97,1 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 596.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,96 (dt, J = 6,0, 8,0 Hz, 1H), 6,83 - 6,69 (m, 1H), 6,83 - 6,68 (m, 1H), 4,60 (br s, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,31 - 4,14 (m, 3H), 4,04 (br d, J = 13,6 Hz, 2H), 3,94 (d, J = 0,8 Hz, 4H), 3,62 -3,47 (m, 1H), 3,26 (br dd, J = 4,0, 13,6 Hz, 2H), 3,12 (br t, J = 7,6 Hz, 1H), 2,99 (dt, J = 2,8, 12,0 Hz, 1H), 2,88 - 2,64 (m, 5H), 2,50 (s, 3H), 2,36 - 2,24 (m, 1H), 2,22 - 2,07 (m, 2H), 1,94 - 1,64 (m, 3H), 1,56 - 1,46 (m, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Na smešu terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 285 umol, 1 ekv.) u DCM (2,50 mL) je dodat TFA (651 mg, 5,71) mmol, 423 uL, 20 ekv.) u jednoj porciji na 0 °C pod N2. Posle mešanja na 25 °C tokom 2 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez

4

daljeg prečišćavanja. Jedinjenje 2-[4-[7-(3-fluoro-2-metoksifenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (173 mg, 284 umol, 99,4 % prinos, TFA) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 496.

Korak C: 2-[4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (173 mg, 284 umol, 1 ekv., TFA) i prop-2-enoil prop-2-enoat (35,8 mg, 284 umol, 1 ek) u DCM (3 mL) je dodat TEA (144 mg, 1,42 mmol, 198 uL, 5 ek) u porcijama na 0 °C pod N2. Posle mešanja na 25 °C tokom 0,5 sata, reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog NaHCO3 (1,5 mL) na 0 °C, a zatim razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa DCM (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (15 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 100/1 do MeOH/EA = 1/2). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Zatim je ostatak prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150 × 25 mm × 10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) -ACN]; B%: 48 % - 78 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[4-[7-(3-fluoro-2-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 308, 28,2 mg, 50,4 umol, 17,8 % prinos, 98,1 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 550.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,97 (dt, J = 6,0, 8,4 Hz, 1H), 6,83 - 6,76 (m, 1H), 6,72 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,57 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 6,40 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,07 (br s, 1H), 4,56 (br s, 1H), 4,39 (br dd, J = 5,2, 10,4 Hz, 1H), 4,30 - 4,18 (m, 2H), 4,18 - 4,06 (m, 2H), 4,04 - 3,96 (m, 1H), 3,95 (d, J = 0,8 Hz, 3H), 3,73 - 3,46 (m, 2H), 3,38 - 3,22 (m, 2H), 3,16 -2,99 (m, 2H), 2,96 - 2,59 (m, 5H), 2,50 (s, 3H), 2,36 - 2,22 (m, 1H), 2,16 - 1,98 (m, 1H), 1,94 - 1,68 (m, 3H).

PRIMER 309

2-(1-akriloil-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Umetanje: 1-bromo-8-metil-naftalin. U rastvor 1,8-dibromonaftalena (1 g, 3,50 mmol, 1 ekv.) u THF (20 mL) dodat je MeLi (1,6 M u dietil etru, 2,62 mL, 1,2 ekv.) na 0 °C u kapima. Posle mešanja tokom 30 minuta na 0 °C, u kapima je dodat jodometan (3,38 g, 23,8 mmol, 1,48 mL, 6,81 ekv.). Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana još 3 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomen Gemini C18250*50 mm*10 nm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 45 % - 70 %, 28 MIN; 40 % min).1-bromo-8-metil-naftalen (340 mg, 1,49 mmol, 43 % prinos, 97 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca posle liofilizacije.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,75 (dd, J = 0,8, 7,2 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 0,8, 8,0 Hz, 1H), 7,66 - 7,59 (m, 1H -), 7,307,22 (m, 2H), 7,13 (t, J = 8,0 Hz, IH), 3,05 (s, 3H).

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša 1-bromo-8-metil-naftalena (122 mg, 551 umol, 1,3 ekv.), tercbutil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 200 mg, 424 umol, 1 ekv.), Cs2CO3 (345 mg, 1,06 mmol, 2,5 ek), RuPhos (39,6 mg, 84,8 umol, 0,2 ek) i Pd2(dba)3 (77,7 mg, 84,8 umol, 0,2 ek) u toluenu (10 mL) je degazirana i pročišćena 3 puta pod N2 a zatim je mešana na 110 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. Smeši je podešen pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2 -[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 224 umol, 53 % prinos, 98 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 612.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) 5 = 7,73 - 7,60 (m, 2H), 7,42 (dd, J = 8,0, 16,0 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7. m, 2H), 4,61 (br s, 1H), 4,40 (br s, 1H), 4,30-4,16 (m, 2H), 4,10-3,71 (m, 4H), 3,58-3,45 (m, 1H), 3,43- 3,25 (m, 1H), 3,23 - 3,04 (m, 4H), 3,03 - 2,85 (m, 5H), 2,83 - 2,55 (m, 4H), 2,49 (br s, 3H), 2,40 - 2,20 (m, 1H), 2,14-2,06 (m, IH), 1,92-1,71 (m, 2H), 1,55-1,44 (m, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor tercbutil 2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (110 mg, 179 umol, 1 ekv.) u DCM (200 uL) je dodat TFA (307 mg, 2,70 mmol, 199. uL, 15 ekv.). Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, smeša je koncentrovana pod vakuumom.2-[4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (112 mg, 179 umol, 100 % prinos, TFA) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (112 mg, 179 umol, 1 ek, TFA) u DCM (2 mL) je dodat TEA (181 mg, 1,79 mmol, 249 uL, 10 ekv.) na 0 °C. Zatim je prop-2-enoil prop-2-enoat (18,1 mg, 143 umol, 0,8 ek) u DCM (1 mL) dodat kap po kap na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL), razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petroleum etar/etil acetat = 10/1 do 1/3) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 55 % - 85 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 309, 16,2 mg, 28,4 umol, 16 % prinos, 99 % čistoće) je dobijen kao beli čvrst nakon liofilizacije. LCMS [ESI, M+1]: 566.

SFC stanje: „OJ-3S_5_5_40_3ML Kolona: Chiralcel OJ-3100 × 4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: etanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,70 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,46 - 7,38 (m, 1H), 7,34 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 6,68-6,52 (m J = 9,9 Hz, 1H), 6,46 - 6,35 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,59 (br s, 1H), 4,41 - 4,33 (m, 1H), 4,32 - 4,21 (m, 1H), 4,20 - 4,04 (m, 3H), 4,03 - 3,82 (m, 2H), 3,85-3,67 (m, 1H), 3,61-3,33 (m, 2H), 3,24-2,99 (m, 4H), 2,92 (s, 3H), 2,87-2,77 (m, 1H), 2,71-2,51 m, 2H), 2,47 (d, J = 4,0 Hz, 3H), 2,34 - 2,20 (m, IH), 2,13 - 1,98 (m, IH), 1,85 - 1,74 (m, 3H).

PRIMER 310

2-(1-akriloil-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitri

Umetanje: 1-bromo-8-hloronaftalen. U rastvor perhloretana (1,66 g, 6,99 mmol, 792 uL, 1 ekv.) u THF (30 mL) dodat je n-BuLi (2,5 M u heksanu, 4,20 mL, 1,5 ek) na -78 °C kap po kap. Posle mešanja dodatnih 10 minuta na -78 °C, dodat je 1,8-dibromonaftalen (2 g, 6,99 mmol, 1 ekv.) u THF (10 mL).

Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana 3 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Sinergi Mak-RP 250*50 mm*10 um; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 41 ACN%-71 ACN%, 30 min; 50 % min). Mešavina je podešena na pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3) Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1-bromo-8-hloronaftalen (850 mg,

3,52 mmol, 50 % prinos, 100 % čistoća) kao žuti čvrst.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,92 (dd, J = 1,2, 7,2 Hz, 1H), 7,80 (ddd, J = 0,8, 8,0, 12,4 Hz, 2H), 7,67 (dd, J = 1,6, 7,67 (dd, J = 1,6, 1H), 1H NMR (400 MHz, hloroform-d) Hz, IH), 7,38 (t, J = 8,0 Hz, IH), 7,32 - 7,25 (t, J = 8,0 Hz, IH).

Korak A: terc-butil 4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Smeša 1-bromo-8-hloro-naftalena (133 mg, 551 umol, 1,3 ekv.), tercbutil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi] -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 424 umol, 1 ekv.), Cs2CO3 (345 mg, 1,06 mmol, 2,5 ek), RuPhos (39,6 mg, 84,8 umol, 0,2 ek) i Pd2(dba)3 (77,7 mg, 84,8 umol, 0,2 ek) u toluenu (10 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta, a zatim smeša je mešana na 110 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. Smeši je podešen pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. jedinjenje terc-butil 4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 237 umol, 56 % prinos, 100 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 632.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,76 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,61 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 1H), 4,61 (br s, 1H), 4,51 - 4,33 (m, 2H), 4,22 - 4,15 (m, 1H), 4,10-3,77 (m, 4H), 3,57 (br s, 1H), 3,41-3,01 (m, 6H), 3,01-2,86 (m, 1H), 2,85-2,63 (m, 3H), 2,62-2. (m, 4H), 2,31 (br s, IH), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 1,78 (br s, 2H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor tercbutil 4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 237 umol, 1 ekv.) u DCM (200 uL) je dodat TFA (405 mg, 3,56 mmol, 263 uL, 15 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (153 mg, 236 umol, 100 % prinos, TFA) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 532.

Korak C: 2-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (153 mg, 237 umol, 1 ek, TFA) u DCM (2 mL) je dodat TEA (239 mg, 2,37 mmol, 329 uL, 10 ekv.) na 0 °C. Posle dodavanja, prop-2-enoil prop-2-enoat (23,9 mg, 189 umol, 0,8 ek) u DCM (1 mL) je dodat u kapima na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) i razblažena vodom (20 mL), ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC

1

(kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 52 % - 82 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 310, 37 mg, 61,2 umol, 26 % prinos, 97 % čistoće) je dobijen posle lojfilizacije kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 586.

SFC stanje: „AD-3S_4_40_3ML Kolona: Chiralpak AD-3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: 40 % izo-propanola (0,05 % DEA) u CO2 Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,39 (m, IH), 7,34 (t, J = 8,0 Hz, IH), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,45 - 6,35 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,84-4,25 (m, 3H), 4,22-3,72 (m, 5H), 3,71-3,53 (m, 1H), 3,50-3,34 (m, 1H), 3,32 - 2,96 (m, 5H), 2,91 - 2,76 (m, 1H), 2,70 - 2,52 (m, 21H), 2,48 (d, J = 2,8 Hz, 3H), 2,33 - 2,20 (m, 1H-), 2.1,96 (m, IH), 1,86 - 1,72 (m, 3H).

PRIMER 311

2-(1-akriloil-4-(7-(2-fluoronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak 1: 2-fluoronaftalen-1-ol. U rastvor naftalen-1-ola (2 g, 13,9 mmol, 5,00 mL, 1 ekv.) u CH3CN (50 mL) dodat je Select-F (4,91 g, 13,9 mmol, 1 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C tokom 3 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE/EA = 3/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Sinergi C18150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 40 % - 70 %, 10 min). pH smeše je podešeno na PH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Jedinjenje 2-fluoronaftalen-1-ol (400 mg, 2,44 mmol, 18 % prinos, 99 % čistoća) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 8,21 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 7,6 Hz, IH), 7,39 (dd, J = 5,2, 8,8 Hz, IH), 7,31 (d, J = 9,6 Hz, IH), 5,58 (br s, 1 H).

Korak 2: (2-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat. U rastvor 2-fluoronaftalen-1-ol (400 mg, 2,47 mmol, 1 ekv.) u DCM (10 mL) dodat je Tf2O (765 mg, 2,71 mmol, 448 uL, 1,1 ekv) i DIEA (637 mg, 4,9). mmol, 859 uL, 2 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (20 mL) i isprana vodom (20 mL × 3). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (20 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 50/1 do 3/1). Jedinjenje (2-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (500 mg, 1,65 mmol, 67 % prinos, 97 % čistoća) je dobijeno kao bezbojno ulje.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 -7,85 (m, 2H), 7,70 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,62 - 7,54 (m, IH), 7,41 (t, J = 9,2 Hz, IH).

Korak A: terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša (2-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonata (243 mg, 827 umol, 1,3 ekv.), terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2 -il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 636 umol, 1 ekv.), Cs2CO3 (518 mg, 1,59 mmol, 2,5 ek), RuPhos (59,4 mg, 127 umol, 0,2 ek) i Pd2(dba)3 (116 mg, 127 umol, 0,2 ek) u toluenu (10 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta, i zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. Smeši je podešen pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. jedinjenje terc-butil 2-(cijanometil)-4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 155 umol, 25 % prinosa, 96 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 8,33 (br s, 1H), 7,84 (d, J = 7,76 Hz, 1H), 7,75-7,64 (m, 1H), 7,57 - 7,41 (m, 2H), 7,25 -7,21 (m, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,47-4,16 (m, 4H), 4,13-3,82 (m, 4H), 3,61-3,25 (m, 3H), 3,20-2,90 (m, 4H), 3,61-3,25 (m, 4H),), 2,81-2,56 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,38-2,19 (m, 1H), 2,14-2,06 (m, 1H), 1,88-1,69 (m, 2H), 1,53 (s, 9H)).

4

Korak B: 2-[4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor tercbutil 2-(cijanometil)-4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d)pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 162 umol, 1 ekv.) u DCM (200 uL) je dodat TFA (278 mg, 2,44 mmol, 180 uL, 15 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (102 mg, 162 umol, 100 % prinos, TFA) je dobijen kao žuto ulje i direktno bez prečišćavanja korišćen u sledećem koraku. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak C: 2-[4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (102 mg, 197 umol, 1 ek, TFA) u DCM (2 mL) je dodat TEA (200 mg, 1,98 mmol, 275 uL, 10 ekv.) na 0 °C. Posle dodavanja, prop-2-enoil prop-2-enoat (19,9 mg, 158 umol, 0,8 ek) u DCM (1 mL) je dodat u kapima na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) i razblažena vodom (20 mL), ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 52 % - 82 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[4-[7-(2-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 311, 11 mg, 18,9 umol, 9,6 % prinos, 98 % čistoće) je dobijen posle liofilizacije kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

SFC stanje: „OD-3S_3_40_3MI, Kolona: Chiralcel OD-3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: 40 % metanola (0,05 % DEA) u CO2 Brzina protoka:

3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 8,34 (br s, 1H), 7,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 4,4, 8,8 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 7,29-7,25 (m, 1H), 6,65-6,50 (m, J = 10,5 Hz, 1H), 6,40 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,11 (br s, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,43 - 3,85 (m, 7H), 3,81 - 3,30 (m, 3H), 4,43 - 3,85 (m, 3H),), 3,24 - 2,95 (m, 3H), 2,94 - 2,56 (m, 4H), 2,47 (s, 3H), 2,36 - 2,20 (m, 1H), 2,13 - 1,97 (m, 1H), 1,93 - 1,75, 3H).

PRIMER 312

2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: metil (2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksipirolidin-2-karboksilat. U rastvor metil (2S,4R)-4-hidroksipirolidin-2-karboksilata (10 g, 55,1 mmol, 1 ekv., HCl) u etil acetatu (10 mL) dodat je imidazol (7,50 g, 110 mmol, 2 ekv.) i TBDPSCl (16,7 g, 60,6 mmol, 15,6 mL, 1,1 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati. Talog je filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren sa etil acetatom (200 mL) i vodom (100 mL).

Organska faza je isprana slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. The residue was purified by column chromatography over silica gel (petroleum ether/ethyl acetate 10/1 to 1/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio metil (2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksipirolidin-2-karboksilat (2,9 g, 7,41 mmol, 13 % prinos, 98 % čistoća) kao bezbojno ulje.

LCMS [ESI, M+1]: 384.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,64 (dt, J = 1,2, 7,2 Hz, 4H), 7,47 - 7,35 (m, 6H), 4,40 (td, J = 2,4, 4,8 Hz, 1H), 4. t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,03 - 2,96 (m, 1H), 2,96 - 2,89 (m, 1H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 1,84 - 1,77 (m, 1H), 1,07 (s, 9H).

Korak B: metil (2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilat. U rastvor metil (2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksipirolidin-2-karboksilata (2,7 g, 7,04 mmol, 1 ekv.) i formaldehida (37 % vodeni rastvor, 2,86 g, 35,2 mmol, Dodato je 2,62 mL, 5 ek) u MeOH (20 mL) CH3COOH (423 mg, 7,04 mmol, 403 uL, 1 ekv.) i NaBH3CN (1,77 g, 28,2 mmol, 4 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena etil acetatom (200 mL) i isprana vodom (2 × 100 mL) i slanim rastvorom (1 × 100 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko silika gela (petroleum etar/etil acetat 20/1 do 3/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio metil (2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilat (2,4 g, 5,71 mmol, prinos 81 %) 94,6 % čistoće) kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 398.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,63 (ddd, J = 1,2, 4,0, 7,6 Hz, 4H), 7,46 - 7,32 (m, 6H), 4,47 - 4,39 (m, 1H), 3,71 (s), 3,32 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 3,24 (dd, J = 6,0, 9,6 Hz, 1H), 2,43 - 2,40 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,23 - 2,00 (m, 2H), 1,07 (s, 9H).

Korak C: [(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor metil (2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilata (2,20 g, 5,53 mmol, 1,00 ekv.) u THF (40 mL) je dodato dodat LiAlH4 (840 mg, 22,1 mmol, 4,00 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Smeša je ugašena vodom (1,00 mL), rastvorom natrijum hidroksida (15,0 %, 2,00 mL) i vodom (3,00 mL). Talog je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10) da bi se dobio [(2S, 4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il ]metanol (1,70 g, 4,55 mmol, 82 % prinos) kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 370.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,68 - 7,61 (m, 4H), 7,46 - 7,35 (m, 6H), 4,35 - 4,26 (m, 1H), 3,62 (dd, J = 3,2, 10,8 Hz), 1H NMR (400 MHz, hloroform-d)), 3,34 (dd, J = 2,0, 10,8 Hz, 1H), 3,14 (dd, J = 5,6, 10,0 Hz, 1H), 2,78 - 2,70 (m, 1H), 2,43 (dd, J = 6,0, 9,6 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,02-1,93 (m, IH), 1,92-1,84 (m, IH), 1,06 (s, 9H).

Korak D: terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil (difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (0,30 g, 531 umol, 1,00 ekv.) i [(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (295 mg, 797 umol, 1.50 ek) u THF (5 mL) je dodat t-BuONa (102 mg, 1.06 mmol, 2.00 ek) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, smeša je podešena na pH = 7 rastvorom HCl (1,00 M, 0,40 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 1/3) da bi se dobio terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil (difenil)silil]oksi -1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,22 g, 238 umol, 45 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 870.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) d = 7,68 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,66 -7,61 (m, 4H), 7,57 (br t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,44 - 7,34 (m, 7H), 7,33 - 7,28 (m, 1H), 4,61 (br s, 1H), 4,45 - 4,28 (m, 2H), 4,09 - 3,95 (m, 4H), 3,87 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,28 - 3,15 (m, 4H), 3,10 (ddd, J = 3,6, 7,2, 12,0 Hz, 2H), 3,02 - 2,93 (m, 1H), 2,88 - 2,67 (m, 4H), 2,48 (s, 2,48).3H), 2,45-2,34 (m, 2H), 2,14-2,07 (m, IH), 1,94-1,80 (m, IH), 1,52 (s, 9H), 1,06 (s, 9H).

Korak E: 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil) fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Smeša terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil) silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2- (trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,08 g, 91,9 umol, 1,00 ekv.) i TFA (157 mg, 1,38 mmol, 102 uL, 15,0 ekv.) u dihlorometanu (150 uL) je mešana na 10 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (81,3 mg, sirov, TFA) kao žuto ulje i korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 770.

Korak F: 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil) fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[((2S,4R)-4-[tercbutil(difenil)silil] oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2 -(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,08 g, sirov, TFA) i Et3N (91,6 mg, 905 umol, 125,96 uL) u dihlorometanu (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (11,4 mg, 90,5 umol) na -40 °C. Posle mešanja na 20 °C tokom 0,5 h, smeša je ugašena vodom (0,20 mL) i koncentrovana pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobilo 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il ]acetonitril (0,06 g, 65,5 umol, dva koraka 72 % prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M/2+1]: 412.

Korak G: 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. Smeša 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2- (trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (0,05 g, 60,7 umol, 1,00 ek) i TBAF (1,00 M, 607 uL, 10,0 ek) u THF (0,50 mL) je mešan na 20 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, etil acetat/metanol = 3/1) i flešom obrnute faze [voda (FA, 0,10 %)/acetonitril], a zatim dalje prečišćen prep-HPLC kolonom:

Boston pH-lex 150*2510um; mobilna faza: [voda(0,10 %, TFA) - ACN]; B%: 31 %-61 %, 10 min i kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [Voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)- ACN]; B%: 42 % - 72 %, 12 min. Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil) fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 312, 3,70 mg, 6,30 umol, 10 % prinos, 99,7 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 586.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,57 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 6,39 (dd, J = 1,6, 16,4 Hz, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,06 (br s, 1H), 4,49 - 4,42 (m, 1H), 4,37 (d, J = 3,2, 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,25 - 4,17 (m, 1H), 4,15 - 4,06 (m, 3H), 3,97 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,60 (br s, 1H), 3,43 (DD,)J = 6,0, 10,0 Hz, 1H), 3,33 (br, 1H), 3,23 - 3,16 (m, 1H), 3,15 - 3,06 (m, 2H), 3,04 - 2,89 (m, 3H), 2,88 - 2,66 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 2,33 (dd,)J = 6,0, 10,0 Hz, 1H), 2,13 -1,93 (m, 2H).

PRIMER 313

2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetilsilan. U rastvor 4-bromo-5-(trifluorometil)-1H-indazola (1 g, 3,77 mmol, 1 ekv.) u DMF (45 mL) dodat je NaH (181 mg, 4,53 mmol, 60,0 % čistoće, 1,2 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, u kapima je dodat rastvor SEM-Cl (818 mg, 4,91 mmol, 868 uL, 1,3 ek) u DMF (15 mL). Smeša je zagrejana do 20 °C i mešana 1 sat. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL), razblažena vodom (100 mL) i zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 100:1) da bi se dobio 2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetil-silan (430 mg, 1,03 mmol, 27,4 % prinos, 95,0 % čistoće) kao bezbojno ulje.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) 5 = 8,18 (s, 1H), 7,74 - 7,66 (m, 1H), 7,63 - 7,56 (m, 1H), 5,76 (s, 2H), 3,59 - 3,49 (m, 2H), 0,93 - 0,86 (m, 2H), -0,01 - -0,08 (m, 9H).

1

Korak B: terc-butil 4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (3,59 g, 8,36 mmol, 1 ekv.), 2 -piperazin-2-ilacetonitril (Intermedijer 62, 1,99 g, 10,0 mmol, 1,2 ek, 2HCl) u DMF (30 mL) je dodat DIEA (2,16 g, 16,7 mmol, 2,91 mL, 2 ekv.), zatim je smeša zagrevana do 80 °C i mešana na 80 °C tokom 2 sata. U smešu je dodata voda (80 mL). Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (5 × 60 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (80 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 40 %) da bi se dobio terc-butil 4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2,37 g, 5,27 mmol, 63,1 % prinos, 90,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 405.

Korak C: terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor tercbutil 4-[3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (2,37 g, 5,86 mmol, 1 ekv.), NaHCO3 (1,48 g,

17,6 mmol, 684 uL, 3 ekv.) u EtOAc (30 mL) i vodi (15 mL) je dodat CbzCl (2,00 g, 11,7 mmol, 1,67 mmol), 1,67 mL, 1 ekv. kap po kap, zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 13 sati. Smeša je razblažena sa EtOAc (15 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 15 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc=20:1~0:1) da bi se dobio terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-karboksilat (2,91 g, 5,13 mmol, 87,6 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 539.

Korak D: terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- karboksilat (2,91 g, 5,40 mmol, 1 ekv.) u EtOAc (60 mL) i ACN (20 mL) je dodat m-CPBA (1,10 g, 5,40 mmol, 85,0 % čistoće, 1 ekv.) na

2

0 °C, a zatim smeša je mešan na 0 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2S203 (30 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa EtOAc (50 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % NH3•H2O) = 62 %) da bi se dobio terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2- metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2,65 g, 4,73 mmol, 87,6 % prinos, 99,0 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+11: 555.

Korak E: terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- karboksilat (2,2 g, 3,97 mmol, 1 ekv.), [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (914 mg, 7,93 mmol, 2 ekv.) u toluenu (44 mL) je dodat t-BuONa (572 mg, 5,95 mmol, 1,5 ekv.) na 0 °C, zatim je smeša mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. U smešu je dodata voda (15 mL) Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 45 %) da bi se dobio terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1,64 g, 2,52 mmol, 63,5 % prinos, 93,0 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 605.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,44 - 7,31 (m, 5H), 5,19 (s, 2H), 4,71 - 4,54 (m, 2H), 4,35 (br d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 4,11 - 3,92 (m, 2H), 3,79 (br, D, 1H)J = 12,4 Hz, 2H), 3,28 (br d, J = 12,8 Hz, 3H), 2,98 (dt, J =3,2, 12,4 Hz, 1H), 2,87 - 2,44 (m, 8H), 2,36 (s, 3H), 2,12 - 2,06 (m, 1H), 1,87 (br, 2H), 1,49 (s, 9H).

Korak F: benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor tercbutil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1,64 g, 2,71 mmol, 1 ekv.) u dioksanu (30 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 30 mL, 44,32 ek) na 0° C, zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 35,5 %) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,95 g, 1,78 mmol, 65,9 % prinos, 95,0 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 506.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,32 (m, 5H), 5,19 (s, 2H), 4,66 (br, 1H), 4,25 - 4,07 (m, 3H), 4,01 - 3,91 (m, 3H), 3,83 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,38 - 3,18 (m, 2H), 3,16 - 3,07 (m, 1H), 3,03 - 2,92 (m, 2H), 2,81 (br, 1H), 2,75 -2,65 (m, 2,60 (b, 1H)J = 5,6 Hz, 3H), 2,55 - 2,45 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,14 - 1,97 (m, 1H), 1,68 - 1,54 (m, 2H).

Korak G: benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il]piperazin-1-karboksilat (510 mg, 1,01 mmol, 1 ekv.), 2-[[4-bromo-5-(trifluorometil)indazol-1-il]metoksi]etil-trimetil-silan (399 mg, 1,01 mmol, 1 ekv.), RuPhos (188 mg, 403 umol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (986 mg, 3,03 mmol, 3 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat Pd2(dba)3 (185 umo, 2 ekv.), 0,2 ekv.) pod N2, suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je zagrejana na 90 °C i mešana na 90 °C tokom 14 sati. Reakciona smeša je filtrirana, filterski kolač je ispran sa EtOAc (2 × 15 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 55 %) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-karboksilat (365 mg, 423 umol, 41,9 % prinos, 95,0 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 820.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,15 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 5H), 5,76 (s, 2H), 5,24 - 5,16 (m, 2H), 4,70 (br, 1H), 4,42 - 4,27 (m, 2H), 4,21 (br d, J = 6,8 Hz, 2H), 4,06 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,90 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,61 - 3,54 (m, 2H), 3,50 - 3,38 (m, 2H),

4

3,31 (Br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,10 - 2,99 (m, 1H), 2,86 (br s, 2H), 2,81 - 2,66 (m, 4H), 2,65 - 2,57 (m, 1H), 2,56 - 2,44 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,12 - 2,06 (m, 1H), 2,04 - 1,96 - 1,69 (m, 1H), 1,56 - (1H, 1H (M, 1H), 0,95 - 0,87 (m, 2H), -0,03 - -0,10 (m, 9H).

Korak H: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (6 mL) tokom 5 minuta. U rastvor je dodat benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil) indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (310 mg, 378 umol, 1 ekv.), Pd/C (150 mg, 10,0 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 28 °C tokom 1 sata. Smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (165 mg, 240 umol, 63,6 % prinos, 100 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 686.

Korak I: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil))indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (190 mg, 277 umol, 1 ekv.), DIEA (107 mg, 831 umol, 145 uL, 3 ek) u DCM (4 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (41,9 mg, 332 umol, 1,2 ek) na 0 °C, zatim je smeša mešana na 28 °C tokom 1 sat. Reakciona smeša je ugašena vodom (1 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 × 4 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, 233 umol, 84,2 % prinos, 75,0 % čistoće) dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 740.

Korak J: 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indazol-4-il ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (220 mg, 297 umol, 1 ekv.) u DCM (1 mL) je dodata TFA (1,70 g, 14,9 mmol, 1,10 mL, 50 ekv.), smeša je mešana na 28 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je bazifikovana zasićenim NaHCO3 (12 mL) do pH=8. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM: MeOH (10:1) (3 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc: MeOH=100:1~10:1), zatim je ostatak prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 44 %-74 %,12 min) da bi se dobio 2-[4-[2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-7-[5-(trifluorometil)-1H-indazol-4- il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 313, 1,23 mg, 2,01 umol 6,74e-1 % prinos, 99,4 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 610.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 8,38 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,84 (br s, 1H), 6,31 (br d, 1H),J = 16,8 Hz, 1H), 5,86 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,13 (br s, 1H), 4,62 (br s, 1H), 4,37 - 4,20 (m, 5H), 4,14 (br d, 11,6 Hz, 1H), 3,64 (br s, 1H), 3,50 (br d, J =4,8 Hz, 2H), 3,41 - 3,34 (m, 1H), 3,29 - 3,16 (m, 2H), 3,03 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 2,94 (br s, 2H), 2,88 - 2,80 (m, 1H), 2,80 - 2,72 (m, 1H, 1H, 1H), 2,69 (m, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H (Br t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,58 - 2,51 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,17 - 2,06 (m, 1H), 1,75 - 1,64 (m, 1H).

PRIMER 314

2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 900 mg, 1,78 mmol, 1,0 ekv.), Pd2(dba)3 (245 mg, 267 umol, 0,15 ekv.), RuPhos (166 mg, 35 ekv. umol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (1,16 g, 3,56 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (10,0 mL) je dodat (3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (Intermedijer 30, 1,09 mmol, 1,09 g, 1,09 mmol). Smeša je mešana na 100 °C tokom 5 sati. Nakon završetka, smeši je dodata voda (20,0 mL) i ekstrahovana sa EA (20 mL) Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan.

Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE: EA = 10:1 EA : MeOH = 10:1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,0 g, 1,42 mmol, 79 % prinos, 93,8 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,48 - 7,32 (m, 7H), 6,91 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,80 (D, J = 2,0 Hz, 1H), 5,27 - 5,15 (m, 2H), 4,70 (br s, 1H), 4,51 - 4,33 (m, 1H), 4,30 - 4,03 (m, 5H), 3,94 -3,87 (m, 3H), 3,53 - 3,40 (m, 1H), 3,32 (br d, J = 12,4 Hz, 3H), 3,16 (br, (br d, Hz, 3H,), (b)J = 7,6 Hz, 1H), 3,06 (d, J = 3,6, 12,6 Hz, 1H), 2,97 - 2,72 (m, 6H), 2,52 (s, 3H), 2,39 - 2,28 (m, 1H), 2,15 - 2,06 (m, 1H), 1,93 - 1,74 (m, 3H).

Korak B: 2-((2S)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-([(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (50,0 mL) na -60 °C tokom 30 minuta Zatim benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,0 g, 1,51 mmol, 1,0 ekv.) i Pd/C (1,0 g, 10 % čistoće) je dodat u gore navedeno tečnost u atmosferi N2. Suspenzija je degazirana i pročišćena sa H23 puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je filtrirana sa celitom i koncentrovana pod vakuumom. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (600 mg, sirovo) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 528.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (600 mg, 1,14 mmol, 1,0 ekv.) i DIEA (882 mg, 6,82 mmol, 1,19 mL, 6,0 ekv.) u DCM (6,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (143 mg, 1,14 mmol, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (100 mg) i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 52 %-80 %, 12 min). da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 314, 90,5 mg, 155 umol, 14,0 % prinos, 99,5 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 582.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,36 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,91 (D, J = 2,0 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,68 - 6,53 (m, 1H), 6,41 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,19 - 4,50 (M, 1H), 4,40 (d, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,31 - 4,08 (m, 4H), 4,07 - 3,85 (m, 5H), 3,79 - 3,41 (m, 2H), 3,41 - 3,22 (m, 2H), 3,20 - 3,04 (m, 2H), 3,02 - 2,75 (m, 4H), 2,72 (1H), 2,65 - 2,49 (1H) (S, 3H), 2,33 -2,24 (m, 1H), 2,11 - 2,01 (m, 1H), 1,90 - 1,71 (m, 3H).

PRIMER 315

2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 0,90 g, 1,55 mmol, 1,00 ekv.) i [(2S,4R)-4-[tercbutil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il ]metanol (687 mg, 1,86 mmol, 1,20 ekv.) u THF (20,0 mL) je dodat t-BuONa (298 mg, 3,10 mmol, 2,00 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, smeša je razblažena etil acetatom (50,0 mL), isprana vodom (30,0 mL) i slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10) da bi se dobio benzil (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil] oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,90 g, 873 umol, 56 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M/2+1]: 443.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,24 - 8,18 (m, 1H), 7,90 - 7,83 (m, 1H), 7,71 - 7,57 (m, 5H), 7,53 - 7,47 (m, 2H), 7,45 - 7,35 (m, 12H), 7,14 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,68 (br, 1H), 4,43 - 4,36 (m, 1H), 4,33 (br dd, J = 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,26 (br, 2H), 4,16 - 4,03 (m, 3H), 3,93 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,47 (br, 1H), 3,30 (br d,J = 10,4 Hz, 3H), 3,17 (br dd, J = 6,0, 10,0 Hz, 1H), 3,11 - 2,96 (m, 3H), 2,84 (br, 2H), 2,78 - 2,70 (m, 1H), 2,48 - 2,37 (m, 4H), 2,11 (ddd, J = 4,8, 8,4, 12,8 Hz, 1H), 1,96 - 1,82 (m, 1H), 1,06 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u metanolu (50 mL) na -60 °C tokom 0,5 h. U smešu je dodat benzil (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tercbutil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7 -(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,90 g, 1,02 mmol, 1,00 ekv.) i Pd/C (0,10 g, 10,0 % čistoće). Posle mešanja na 20 °C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi, smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert- butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-2-il]acetonitril (763 mg, sirovo) kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 752.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)sililoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil) silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]- 7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,76 g, sirov) i Et3N (511 mg, 5,05) mmol, 703 uL) u dihlorometanu (5,00 mL) dodat je prop-2-enoil prop-2-enoat (127 mg, 1,01 mmol) na -40 °C. Posle mešanja na 20 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena zasićenim natrijum bikarbonatom (0,20 mL) i koncentrovana pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil) silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1- prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (0,50 g, 552 umol, dva koraka 55 % prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 806.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,25 - 8,17 (m, 1H), 7,90 - 7,82 (m, 1H), 7,68 - 7,58 (m, 5H), 7,50 (td, J = 2,4, 5,2 Hz, 2H), 7,46 - 7,35 (m, 7H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,67 - 6,51 (m, 1H), 6,46 - 6,31 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,43 - 4,31 (m, 2H), 4,27 (br s, 2H), 4,16 - 4,00 (m, 4H), 3,67 -3,55 (m, 1H), 3,46 (3,31 (b, 1H), 1H) (br.,J = 8,4, 14,4 Hz, 2H), 3,17 (br dd, J =

1

6,0, 9,6 Hz, 1H), 3,11 - 2,73 (m, 6H), 2,47 (s, 3H), 2,42 (br dd,J = 6,0, 9,6 Hz, 1H), 2,11 (tt, J = 4,0, 8,4 Hz, 1H), 1,96 - 1,84 (m, 1H), 1,06 (s, 9H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[2S,4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-ilacetonitril. Smeša 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (0,40 g, 496 umol, 1,00 ekv.), KF (57,7 mg, 992 umol, 23,3 uL, 2,00 ekv.) i 18-kraun-6 (262 mg, 992 umol, 2,00 ekv.) u THF (10,0 mL) mešani su 24 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10 %)/acetonitril]. Željene frakcije su podešene na pH > 7 zasićenim natrijum-bikarbonatom (2,00 mL) i ekstrahovane etil acetatom (3 × 30,0 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 37 % - 67 %). The desired fractions were concentrated and lyophilized to give title compound 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-hydroxy-1-methylpyrrolidin-2-yl]methoxy]-7-(1-naphthyl)-6,8-dihydro-5H-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile (EXAMPLE 315, 51,5 mg, 90,7 umol, 18 % yield, 96,3 % purity) as a white solid. LCMS [ESI, M+1]: 568.

SFC: „AS-3S_3_5_40_3ML Kolona: Chiralpak AS - 3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05 %, DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,26 - 8,17 (m, 1H), 7,91 - 7,83 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,55 - 7,48 (m, 2H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (D, J = 7,2 Hz, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,47 - 6,36 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,11 (br s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8, 4,4310,8 Hz, 1H), 4,34 - 4,20 (m, 3H), 4,15 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 4,02 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,61 (br, 1H), 3,53 -3,41 (m, 2H), 3,34 (br, 2H), 3,12 (br,), 1H), 3,05 - 2,89 (m, 3H), 2,88 - 2,66 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,34 (dd,J = 5,6, 10,0 Hz, 1H), 2,16 - 1,94 (m, 2H).

PRIMER 316

2

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(4-fluoronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 1,0 g, 1,98 mmol, 1,0 ekv.) i 1-bromo-4-fluoro-naftalen (2,23 g, 9,89 mmol, 5,0 ekv.) u tolu 20,0 mL) je dodato Cs2CO3 (1,93 g, 5,93 mmol, 3,0 ek), KSPhos-Pd-G3 (335 mg, 396 umol, 0,2 ek), reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 24 sata pod N2. Nakon završetka, u reakciju je dodata voda (20,0 mL), ekstrahovana sa EA (2 × 20,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetata: metanol=20:1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (680 mg, 957 umol, 48 % prinos, 91,4 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 650.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (650 mg, 1,0 mmol, 1,0 ekv.) u MeOH (15 mL) je dodat NH3•MeOH (1,0 mmol, 15,0 mL, 1,0 ekv.) i Pd/C (500 mg, 10 % čistoće), suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcija je filtrirana kroz celit, a filtrat je koncentrovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (460 mg, 824 umol, 82 % prinos, 92,4 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (460 mg, 892 umol, 1,0 ekv.) u DCM (10 mL) je dodat DIEA (461 mg, 3,57 mmol, 622 uL, 4,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoata (113 mg, 892 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (5,0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen prep-HPLC ((Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 53 % - 83 %, 12 min), dobijeni proizvod je koncentrovan i zatim podvrgnut liofilizaciji. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 316, 100 mg, 175 umol, 20 % prinos, 100 % čistoća) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

4

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,28 - 8,22 (m, 1H), 8,17 - 8,10 (m, H), 7,63 - 7,55 (m, 2H), 7,14 - 7,05 (m, 2H), 6,70 - 6,55 (m, 1H), 6,42 (dd, J = 1,6, 6,8 Hz, 1H), 5,86 (br d, 1H)J = 10,4 Hz, 1H), 5,20 - 4,48 (m, 1H), 4,41 (dd, J = ,8, 10,4 Hz, 1H), 4,33 - 4,10 (m, 4H), 4,09 - 3,92 (m, 2H), 3,78 - 3,20 (m, 4H), ,19 - 3,07 (m, 2H), 3,05 - 2,64 (m, 2,50 - (m, 5H) (S, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 1H), ,13 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 317

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)--naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 880 mg, 1,87 mmol, 1,0 ekv.) i (4-bromo-2-naftil)2,2-dimetilpropanoat (Intermedijer 54, 745 mg, 2,43 mmol, 1,3 ekv.) u toluenu (20,0 mL) je dodat Cs2CO3 (1,22 g, 3,73 mmol, 2,0 ekv.), RuPhos (174 mg, 373 umol, 0,2 ekv.) i Pd2(dba 1 mg,187 umol)3, 0,1 ekv.), smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati pod N2. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (30 mL), zatim ekstrahovana sa EA (2 × 20 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetata: Metanol=20/1) da bi se dobio tercbutil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (750 mg, 774 umol, 41 % prinos, 72,9 % čistoće) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 698.

Korak B: [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il-1-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (750 mg, 774 umol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) dodata je TFA (7,70 g, 67,5 mmol, 5,0 mL, 87,3 ek), reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakcija je koncentrovana da bi se dobio [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (550 mg, sirovo, TFA) kao smeđe ulje koje je korišćeno za sledeće korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 598.

Korak C: [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat. U smešu [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil] 2,2-dimetilpropanoat (550 mg, 773 umol, 1,0 ek, TFA) u DCM (5 mL) je dodat TEA (469 mg, 4,64 mmol, 645 uL, 6,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (97,5 mg, 773 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (5,0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat/metanol=10/1) da bi se dobio [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4- prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat (270 mg, 323 umol, 42 % prinos, 78,2 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 652.

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu [4-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]2,2-dimetilpropanoat (270 mg, 323 umol, 1,0 ekv.) u THF (2,0 mL) je dodat rastvor NaOH (38,8 mg, 969 umol, 3,0 ek) u H20 (2,0 mL), reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 4 sata. Po završetku, reakcijska smjesa je bila dodata voda (10 ml), zatim ekstrahirana sa EA (2 × 10 ml), kombinovani organski sloj je osušen na2, PA4, filtriran i koncentriran. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Luna Phenil-Hekil 150_30_5um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 35 % - 62 %, 3min), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-([(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 317, 26,6 mg, 46,3 umol, 14 % prinos, 98,8 % čistoće) dobija se kao ružičasta čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 568.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,01 - 7,93 (m, 1H), 7,64 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,41 (br, J = 7,2 Hz, 1H), 7,33 - 7,29 (m, 2H), 6,88 (s, 1H), 6,66 - 6,50 (m, 2H), 6,39 (br d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,04 - 4,89 (br s, 1H), 4,64 - 4,49 (m, 1H), 4,32 - 4,21 (m, 1H), 4,11 (br s, 2H), 4,00 (br,),J = 14,0 Hz, 1H), 3,94 - 3,71 (m, 2H), 3,47 - 3,08 (m, 4H), 2,93 - 2,61 (m, 10H), 2,47 -2,33 (m, 1H), 2,25 - 2,06 (m, 1H), 2,00 - 1,89 (m, 3H).

PRIMER 318

2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (Intermedijer 64, 500 mg, 901 umol, 1,00 ekv.) i [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (208 mg, 1,80 mmol, 2,00 ekv.) u 0 toluenu (L10). dodat t-BuONa (173 mg, 1,80 mmol, 2,00 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C 10 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 30 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. pH je podešen na 7 zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 30 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (340 mg, 505 umol, 56 % prinos, 90,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,45 - 7,32 (m, 5H), 5,28 - 5,12 (m, 2H), 4,70 - 4,55 (m, 2H), 4,42 - 4,29 (m, 2H), 4,15 - 3,93 (m, 3H), 3,90 - 3,75 (m, 2H), 3,43 - 3,16 (m, 3,09 - (m, 3H), 3H, 3H, (g, 3H)J = 7,6 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,89 - 2,54 (m, 5H), 2,47 (s, 3H), 2,33 - 2,22 (m, 1H), 2,05 - 1,96 (m, 1H), 1,90 - 1,74 (m, 3H), 1,49 (s, 9H).

Korak B: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (340 mg, 561 umol, 1,00 ekv.) u dioksanu (4,00 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 4,00 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. pH je podešen na 8 zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana mešanim rastvaračem (DCM/i-PrOH 2/1, 2 × 9 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (255 mg, 444 umol, 79 % prinos, 88,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 506.

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 366 umol, 1,00 ekv.), 1-bromo-4-fluoro-naftalen (247 mg, 1,10 mmol, 3,00 ekv.), RuPhos (68,2 mg, 140,40 umol, ek), t-BuONa (87,8 mg, 914 umol, 2,50 ekv.) i Pd2(dba)3 (66,9 mg, 73,1 umol, 0,20 ekv.) u toluenu (2,00 mL) je degaziran i zatim zagrejan na 90 °C tokom 15 sati pod N2. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena vodom (3 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 10 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Smeša je neutralizovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL).

Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 175 umol, 48 % prinos, 95,0 % čistoće) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,23 (dd, J = 2,0, 4,4 Hz, 1H), 8,16 - 8,08 (m, 1H), 7,60 - 7,52 (m, 2H), 7,44 - 7,33 (m, 5H), 7,14 - 7,02 (m, 2H), 5,28 -5,16 (m, 2H), 4,69 (br, (br,), (r, (r) 1H), 4,39 (dd,J = 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,29 - 4,14 (m, 4H), 4,07 (br, 1H), 3,95 (br d,J = 12,4 Hz, 1H), 3,54 - 3,15 (m, 4H), 3,14 - 3,03 (m, 2H), 3,00 - 2,61 (m, 5H), 2,48 (s, 3H), 2,35 - 2,23 (m, 1H), 1,97 - 2,05 (m, 1H), 1,92 - 1,83 (m, 3H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (5,00 mL) tokom 3 minuta na -40 °C. U rastvor je dodat rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 185 umol, 1,00 ekv.) u MeOH (5,00 mL) i Pd/C (60,0 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Reakcija je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80,0 mg, 147 umol, 79 % prinos, 94,6 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80,0 mg, 155 umol, 1,00 ekv.) i TEA (78,5 mg, 776 umol, 108 uL, 5,00 ekv.) u DCM (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (19,6 mg, 155 umol, 1,00 ek) u kapima na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, reakcija je ugašena sa MeOH (0,5 mL), razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 5 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (EtOAc/MeOH 7/1) i prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 52 % - 82 %, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 318, 21,0 mg, 36,7 umol, 24 % prinosa, 99,8 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

SFC stanje: OD-3S_3_40_3ML Kolona: Chiralcel OD-3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: 40 % metanola (0,05 % DEA) u CO2, brzina protoka:

3 mL/min, talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,33 - 8,22 (m, 1H), 8,16 - 8,08 (m, 1H), 7,62 - 7,52 (m, 2H), 7,14 - 7,02 (m, 2H), 6,59 (br s, 1H), 6,46 - 6,36 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,10 (br, 1H), 4,87 - 4,33 (m, 2H), 4,30 - 4,10 (m, 4H), 4,09 - 3,78 (m, 2H), 3,77 - 3,23 (m, 2H), 3,22 - 2,53 (m, 8H), 2,48 (s, 3H), 2,34 -2,23 (m, 1H), 2,13 - 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,76 (1H, - - - (1H) (1H) (1H).

PRIMER 319

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1

Korak A: benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (1,31 g, 11,4 mmol, 3 ekv.) u THF (10 mL) dodat je NaH (304 mg, 7,59 mmol, 60 % čistoće u mineralnom ulju)., 2 ekv.) na 0 °C, smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- karboksilat (2 g, 3,79 mmol, 1 ekv.) je dodat u smešu i smeša je mešana na 80 °C tokom 3 sata. Reakciona smeša je ugašena ledenom vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. Željene frakcije su sakupljene i podešeno je pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovano etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1 g, 1,60 mmol, 42 % prinos, 97 % čistoća) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 606.

2

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,31 (m, 5H), 5,19 (s, 2H), 4,75 - 4,64 (m, 1H), 4,59 (br, 1H), 4,44 (d,J = 18,8 Hz, 1H), 4,35 (br, 1H), 4,21 -4,11 (m, 1H), 4,07 - 3,64 (m, 4H), 3,43 (br, 1H), 3,30-3,15 (m, 1H), 2H), 3,10 (br, J = 7,6 Hz, 1H), 3,03 - 2,91 (m, 1H), 2,83 - 2,55 (m, 5H), 2,53 - 2,42 (m, 3H), 2,35 -2,22 (m, 1H), 2,11 - 2,01 (m, 1H), 1,88 - 1,74 (m, 3H), 1,51 (s, 9H).

Korak B: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (100 mL) na -60 °C tokom 30 minuta. U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (900 mg, 1,49 mmol, 1 ekv.) u gornju smešu je dodat suvi Pd/C (500 mg, 10 % čistoće) pod N2 Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (650 mg, 1,24 mmol, 84 % prinos, 90 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 472.

Korak C: terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Smeša 1-bromo-3-hloro-2-(trifluorometil)benzena (1,32 g, 5,09 mmol, 4 ekv.), terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R))-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,27 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3 (1,04 g, 3,18 mmol, 2,5 ek), Pd2(dba)3 (233 mg, 254 umol, 0,2 ek) i RuPhos (118 mg, 254 umol, 0,2 ek) u toluenu (10 mL je degaziran i prečišćen) sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/MeOH = 100/1 do 10:1) i dalje prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešeno na PH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (370 mg, 569 umol, 45 % prinos, 100 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 650

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 - 7,24 (m, 1H), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,61 (br, 1H), 4,40 (br, 1H), 1H), 4,24 - 4,14 (m, 1H), 4,13 - 3,98 (m, 4H), 3,95 - 3,80 (m, 1H), 3,39 - 2,95 (m, 6H), 2,93 - 2,62 (m, 5H), 2,52 (br s, 3H), 2,32 (br s, 1H), 1H), 2,14 - 2,05 (m, 1H), 1,85-1,71 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (370 mg, 569 umol, 1 ekv.) u DCM (700 uL) je dodat TFA (973 mg, 8,54 mmol, 632 uL, 15 ekv. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (377 mg, 567 umol, 99 % prinos, TFA) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanje. LCMS [ESI, M+1]: 550.

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (377 mg, 567 umol, 1 ek, TFA) u DCM (5 mL) je dodat

4

TEA (574 mg, 5,68 mmol, 790 uL, 10 ekv.) na 0 °C. Posle dodavanja, prop-2-enoil prop-2-enoat (57,3 mg, 454 umol, 0,8 ek) u DCM (1 mL) je dodat u kapima na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL). Zatim se razblaži vodom (20 mL) i ekstrahuje etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, EA/MeOH = 100/1 do 10:1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 50 % - 80 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 319, 95 mg, 154 umol, 27 % prinos, 98 % čistoća) je dobijena kao bela čvrsta supstanca nakon liofilizacije. LCMS [ESI, M+1]: 604.

SFC stanje: „OD-3S_3_5_40_3ML Kolona: Chiralcel OD - 3100 × 4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29-7,25 (m, 1H), 7,19 (d,J = 8,0 Hz, 1H), 6,71 - 6,51 (m, 1H), 6,45 - 6,34 (m, 1H), 5,83 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,25-4,52 (m, 1H), 4,38 (DD,)J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,22 - 4,04 (m, 4H), 3,96 (br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,74 - 3,02 (m, 5H), 2,99 - 2,61 (m, 6H), 2,48 (s, 3H), 2,35 - 2,23 (m, 1H), 2,14 - 1,97 (m, 1H), (m, 1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H 1,92 - 1,79 (m, 3H).

PRIMER 320

2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 300 mg, 517 umol, 1,0 ekv.), [(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metanol (148 mg, 1,03 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (15 ekv.)) je dodat t-BuONa (99,3 mg, 1,03 mmol, 2,0 ekv.) u porcijama na 0 °C, reakciona smeša je degazirana i pročišćena sa N2 3 puta, a zatim je smeša mešana na 0 °C tokom 30 minuta pod Atmosfera N2. Nakon završetka, organski rastvarač je ispran vodom (10,0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN). The obtained product was adjusted with saturated NaHCO3 aqueous to pH~8 and then concentrated, the aqueous was extracted with ethyl acetate (3 × 20,0 mL) and the combined organic layer was dried over Na2SO4, filtered and concentrated. Jedinjenje benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1karboksilat (180 mg, 272 umol, 53 % prinos, 99,7 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 660.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je propušten u metanol (20,0 mL) na -60 °C tokom 30 minuta. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 197 umol, 1,0 ekv.) i Pd/C (80,0 mg, 197 umol, 10 % čistoće, 1,0 ekv.) je dodat u iznad smeše, zatim je smeša degazirana i pročišćena sa H23 puta, a zatim je smeša mešana na 25 °C 1 sat u atmosferi H2. Nakon završetka, sirova smeša je filtrirana kroz sloj celita.

Kolač je ispran metanolom (30,0 mL) i filtrat je osušen pod visokim vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (75,0 mg, 132 umol, 67 % prinos, 92,6 % čistoće) je dobijen kao siva čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 526.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 190 umol, 1,0 ekv.) u DCM (5,00 mL) je dodat DIEA (73,8 mg, 571 umol, 99,4 uL, 30). ek) i kap po kap dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (36,0 mg, 285 umol, 1,50 ek) na 0 °C u atmosferi N2. Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon završetka, reakcija je ugašena vodom (10,0 mL). Sirova smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 15,0 mL) Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (30,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Luna Phenil-Hekil 150_30_5um; mobilna faza: [Voda (10 mm NH4HCO3)-ACN]; B%: 52 % - 82 %, 3 min) i liofilizacija. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-izopropilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 320, 21,3 mg, 36,1 umol, 19 % prinos, 98,1 % čistoće) je dobijen kao žuti čvrst. LCMS [ESI, M+1]: 580.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,24 - 8,21 (m, 1H), 7,89 - 7,87 (m, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,50 (m, 2H), 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,16 (D, J = 7,2 Hz, 1H), 6,65 - 6,57 (m, 1H), 6,42 (dd, J = 1,8, 16,8 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,16 - 4,51 (m, 1H), 4,35 - 4,22 (m, 3H), 4,15 - 3,95 (m, 4H), 3,68 -3,47 (m, 1H), 3,42 - 2,77 (m, 11H), 2,58 - 2,52 (m, 1H), 1,90- 1,75 (m, 3H), 1,17 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,10 (d, J = 6,4 Hz, 3H).

PRIMER 321

1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-hidroksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil (3S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metil-piperazin-1-karboksilat. Rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (2 g, 6,80 mmol, 1 ekv.), terc-butil (3S)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,50 g, 7,48 mmol, 1,1 ekv.), DIEA (1,76 g,

13,6 mmol, 2,37 mL, 2 ekv.) u NMP (40 mL) je mešan na 100 °C tokom 7 sati. U smešu je dodata voda (80 mL). Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 80 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (40 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Smeša je filtrirana i filter kolač je ispran sa EtOAc (3 × 5 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je trituriran sa (PE: tOAc=3:1, 20 mL) i filtriran i filter kolač je ispran sa (PE: EtOAc=3:1, 40 ml). Jedinjenje terc-butil (3S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metil-piperazin-1- karboksilat (1,44 g, 3,14 mmol, 46,2 % prinos) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 458.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,39 - 7,28 (m, 5H), 4,29 - 4,20 (m, 1H), 4,16 - 3,81 (m, 2H), 3,76 (br, 1H), 3,73 (br, 1H), 3,68 (s, 2H), 3,61 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 3,37 - 3,28 (m, 1H), 3,11 (br, 2H), 2,73 - 2,58 (m, 4H), 1,48 (s, 9H), 1,23 (d,J = 6,8 Hz, 3H).

Korak B: terc-butil (3S)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (830 mg, 7,21 mmol, 855 uL, 2,5 ek) u THF (25 mL) dodat je NaH (230 mg, 5,76 mmol, 60 % čistoće, 2 ekv.) na 0 °C i mešano na 0 °C tokom 0,5 sata. Zatim terc-butil (3S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metil-piperazin-1- karboksilat (1,32 g, 2,88 mmol, 1 ekv.) je dodat u smešu. Reakciona smeša je zagrevana do 70 °C tokom 12 sati u cevi pod N2. Reakciona smeša je ugašena vodom (10 mL). Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 40 %) da bi se dobio terc-butil (3S)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (1,35 g, 2,39 mmol, prinos 82,9 %, 95 % čistoće) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 537.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 - 7,27 (m, 5H), 4,37 (br dd, J = 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,22 - 4,14 (m, 2H), 4,07 - 3,73 (m, 2H), 3,71 - 3,64 (m, 3H), 3,63 - 3,49 (m, 2H), - (m, 2H), - (m, 2H 3,34 - 3,24 (m, 1H), 3,21 - 2,92 (m, 3H), 2,79 - 2,64 (m, 2H), 2,63 - 2,56 (m, 3H), 2,51 (s, 3H), 2,33 (br d,J = 7,6 Hz, 1H), 2,12 - 2,05 (m, 1H), 1,92 - 1,69 (m, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,20 (d,J = 6,8 Hz, 3H).

Korak C: terc-butil (3S)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor tercbutil (3S)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (1,43 g, 2,66 mmol, 1 ekv.) u MeOH (28 mL) je dodat Pd(OH)2/C (500 mg, 10 % čistoća) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 4 sata. Reakciona smeša je filtrirana, filterski kolač je ispran sa MeOH (3 × 20 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 40 %) da bi se dobio terc-butil (3S)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (810 mg, 1,72 mmol, 64,7 % prinos, 95,0 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 447.

Korak D: terc-butil (3S)-4-[7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (3S)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 1,12 mmol, 1 ekv.), 2-bromo-1-fluoro-3-metoksi-benzen (459 mg, 2,24 mmol, 2 ekv.) i t -BuONa (323 mg, 3,36 mmol, 3 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat BrettPhos-Pd-G3 (304 mg, 336 umol, 0,3 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 90 °C tokom 16 sati. U smešu je dodata voda (10 mL). Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 20 mL).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (iz PE: EtOAc 2:1~0:1 do EtOAc: MeOH 1:0~5:1), zatim ostatak prečišćen prep-

1

HPLC (kolona: Phenomenex Sinergi Mak-RP 250*50 mm*10 um; mobilna faza: [coda(0,225 %FA)-];B%: 32 %-57 %,30;80 %min) da bi se dobio terc-butil (3S)-4-[7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (180 mg, 300 umol, 26,8 % prinos, 95,0 % čistoće) kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]: 571.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,02 (dt, J = δ.4, 8,4 Hz, 1H), 6,75 - 6,65 (m, 2H), 4,36 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,27 (s, 2H), 4,24 - 4,17 (m, 1H), 4,12 - 4,09 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,74 - 3,65 (m, 1H), 3,38 - 3,27 (m, 3H), 3,24 -2,94 (m, 3H), 2,67 (br d, J = 4,4 Hz, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,32 - 2,23 (m, 1H), 2,08 (br d, J = 3,2 Hz, 1H), 2,04 - 1,98 (m, 1H), 1,87 - 1,69 (m, 4H), 1,49 (s, 9H), 1,25 -1,21 (m, 3H).

Korak E: 7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. Rastvor terc-butil (3S)-4-[7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (210 mg, 368 umol, 1 ekv.) i TFA (839 mg, 7,36 mmol, 545 uL, 20 ekv.) je mešano na 25 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (260 mg, sirov, 2TFA) je dobijen kao žuto ulje.

Korak F: 1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (260 mg, sirov, 2TFA), DIEA (481 mg, 3,72 mmol, 648 uL) u DCM (5 mL) je dodat prop. -2-enoil prop-2-enoat (46,9 mg, 372 umol) na 0 °C, zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (1 mL). Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 33 %) da bi se dobio 1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-metoksifenil)-2- [[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il] prop-2-en-1-on (130 mg, 235 umol, 63,2 % prinos, 95,0 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 525.

11

Korak G: 3-bromo-1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-hidroksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metilpiperazin-1-il]propan-1-jedan. U rastvor 1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-metoksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (80 mg, 152 umol, 1 ekv.) u PhBr (2 mL) je dodat BBr3 (764 mg, 3,05 mmol, 294 uL, 20 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je ugašen zasićenim NaHCO3 (2 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 20 mL).3-bromo-1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-hidroksi-fenil)- 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metilpiperazin-1- il]propan-1-on (90 mg, sirov) je dobijen kao smeđe ulje. Sirovi proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak H: 1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-hidroksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 3-bromo-1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-hidroksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metilpiperazin-1-il]propan-1-on (90 mg, 152 umol, 1 ekv.) u THF (2 mL) je dodat TEA (154 mg, 1,52 mmol, 212 uL, 10 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 12 sati. Ostatak je prečišćen prep-TLC (DCM: MeOH= 10:1) zatim prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 48 %-78 %,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[(3S)-4-[7-(2-fluoro-6-hidroksi-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (PRIMER 321 10,6 mg, 20,1 umol, 13 % prinos, 96,9 % čistoće) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 511.

<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ = 7,17 - 6,97 (m, 1H), 6,93 - 6,76 (m, 1H), 6,71 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,61 (dd, J = 8,8, 11,2 Hz, 1H), 6,29 (br dd, J = 4,8, 16,4 Hz, 1H), 5,82 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,58 - 4,27 (m, 4H), 4,20 - 4,04 (m, 3H), 4,03 - 3,87 (m, 1H), 3,68 - 3,39 (m, 2H), 3,30 (br s, 2H), 3,25 - 3,05 (m, 2H), 2,82 (br s, 2H), 2,75 (td, J = 6,8, 13,6 Hz, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,36 (q, J = 9,2 Hz, 1H), 2,13 - 2,08 (m, 1H), 1,89 - 1,78 (m, 2H), 1,77 - 1,67 (m, 1H), 1,28 (br d, J = 5,2 Hz, 3H).

12

PRIMER 322

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4-fluoronaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat. benzil 2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (2,00 g, 4,56 mmol, 1,00 ekv.), 1-bromo-4-fluoro-naftalen (1,54 g, 6,84 mmol, 1,50 ekv.), Pd2(dba)3 (418 mg, 456 mmol, 0,100 ekv.), RuPhos (426 mg, 912 mmol, 0,20 ekv.) i cezijum karbonat (4,46 g, 13,7 mmol, 3,00 ekv.) u toluenu (40,0 mL) je degaziran i zatim zagrevan na 110 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona

1

smeša je ugašena dodavanjem vode (20,0 mL) na 20 °C, zatim razblažena etil acetatom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=1/1 do 0/1) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2- metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,00 g, 3,43 mmol, 75,2 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,24 (dt, J = 1,6, 4,8 Hz, 1H), 8,16 - 8,08 (m, 1H), 7,64 - 7,53 (m, 2H), 7,47 - 7,34 (m, 5H), 7,15 - 7,03 (m, 2H), 5,22 (s, 2H), 4,72 (br s, 1H), 4,29 - 4,17 (m, 2H), 4,12 - 4,04 (m, 1H), 3,95 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,51 - 3,19 (m, 3H), 3,14 - 2,68 (m, 5H), 2,54 (s, 3H).

Korak B: benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (1,06 g, 1,82 mmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (33,0 mL) je dodat m-CPBA (332 mg, 1,64 mmol, 85,0 % čistoće, 0,90 ekv.) u jednoj porciji °C pod atmosferom N2 Smeša je mešana na 20 °C tokom 5 sati. Reakcija je ugašena zasićenim natrijum tiosulfatom (20,0 mL), a zatim ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL×3), kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom (30,0 mL), koncentrovana da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,00 g, 1,67 mmol, 91,8 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [M+1]: 599,1.

Korak C: benzil-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil 2-(cijanometil)-4-[7-(4-fluoro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 835,16 umol, 1,00 ekv.) i [(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metanol (216 mg, 1,67 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (10,0) je dodat natrijum terc-butoksid (120 mg, 1,25 mmol, 1,50 ekv.) u jednoj porciji na 0 °C u atmosferi N2. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. Reakciona smeša

14

je ugašena dodavanjem vode (10,0 mL) na 0 °C, a zatim razblažena etil acetatom (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20,0 mL), osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak koji je prečišćen pomoću Prep-HPLC (TFA uslov) da bi se dobio benzil-2-(cijanometil)-4 -[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 292 umol, 35,0 % prinos, 97,0 % čistoća) kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS [M+1]: 664,5.

Korak D: 2-[4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 (g) je propušten u metanol (2 mL) tokom 5 minuta na 0 °C, zatim je dodat u rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2- il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 301 umol, 1,00 ekv.) u metanolu (2,00 mL), zatim je dodat Pd/C (100 mg, 10 % čistoće) u atmosferi N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 20 °C tokom 1 sata. Filtriran i koncentrovan da bi se dobio 2-[4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, sirov) kao crna čvrsta supstanca koja se koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [M+1]: 530,5.

Korak E: 2-[4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 189 umol, 1,00 ekv.) i DIEA (73,2 mg, 566 umol, 98,7 uL, 3,00 ekv.) u DCM (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (47,6 mg, 378 umol, 2,00 ekv.) u DCM (1,00 mL) u kapima na 0 °C u atmosferi N2. Smeša je mešana na 20 °C tokom 30 min, metanol (1,00 mL) je dodat u reakcionu smešu i zatim je rastvarač uklonjen da bi se dobio ostatak koji je prečišćen pomoću Prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1, dodata je jedna kap NH4OH) da bi se dobio sirovi proizvod. Zatim prep-HPLC (bazni uslovi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[4-[2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(4-fluoro-1-naftil)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-

1

il]acetonitril (14,9 mg, 25,0 umol, 13,2 % prinos, 97,9 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+1]: 584,5.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8,25 (dd, J = 2,4, 4,8 Hz, 1H), 8,19 -8,08 (m, 1H), 7,63 - 7,54 (m, 2H), 7,15 - 7,03 (m, 2H), 6,61 (br s, 1H), 6,47 - 6,38 (m, 1H), 5,86 (br d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,12 (br s, 1H), 4,38 (dd, J = 4,4, 10,6 Hz, 1H), 4,24 (br s, 2H), 4,20 - 4,10 (m, 2H), 4,04 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,76 - 2,67 (m, 12H), 2,52 - 2,37 (m, 1H), 2,32 - 2,21 (m, 1H), 2,09 - 1,97 (m, 1H), 1,90 - 1,74 (m, 3H), 1,16 (t, J =7,2 Hz, 3H).

PRIMER 323

2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

1

Korak A: metil (2R,4S)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilat. U rastvor metil (2R,4S)-4-hidroksipirolidin-2-karboksilata (3 g, 20,7 mmol, 1 ekv., HCl) i formaldehida (8,39 g, 103 mmol, 7,69 mL, 37 % čistoće, 5 ekv.) u MeOH (30 mL) je dodat AcOH (1,24 g, 20,7 mmol, 1,18 mL, 1 ekv.) na 15 °C. Posle mešanja tokom 30 minuta, dodat je NaBH3CN (3,25 g, 51,7 mmol, 2,5 ekv.). Smeša je mešana 16 sati. U smešu je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum karbonata (50 mL), a zatim ekstrahovan sa dihlorometanom/metanolom 10/1 (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Metil (2R,4S-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilat (2 g, 12,6 mmol, 61 % prinos)) je dobijen kao žuto ulje.

Korak B: metil (2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksil-metil-pirolidin-2-karboksilat. U rastvor metil (2R,4S)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilata (1,70 g, 10,7 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (10,0 mL) dodat je imidazol (1,67 g, 24,6 mmol, 2,30 ekv.) i terc-butilhlorodifenilsilan (3,52 g, 12,8 mmol, 3,29 mL, 1,20 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C tokom 10 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (20,0 mL), isprana slanim rastvorom (3 × 30,0 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10) da bi se dobio metil

1

(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilat (3,00 g, 7,24 mmol, 68 % prinos) kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 398.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,63 (ddd, J = 1,6, 3,6, 7,6 Hz, 4H), 7,46 - 7,35 (m, 6H), 4,47 - 4,40 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,32 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 3,25 (dd, J = 6,0, 10,0 Hz, 1H), 2,42 (br d, J = 5,2 Hz, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,18 - 2,01 (m, 2H), 1,07 (s, 9H).

Korak C: [(2R,4S)-4-terc-butil (difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor metil (2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-karboksilata (1,50 g, 3,77 mmol, 1,00 ekv.) u THF (10,0 mL) dodat LiAlH4

(573 mg, 15,1 mmol, 4,00 ekv.) na -40 °C. Posle mešanja na -40 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena vodom (0,50 mL), rastvorom NaOH (15,0 %, 1,00 mL), vodom (1,50 mL). Formirani precipitat je odfiltriran i filter kolač je ispran etil acetatom (40,0 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat 1/10) da bi se dobio [(2R,4S)-4-[terc-butil (difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il] metanol (1,20 g, 3,18 mmol, 84 % prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 370.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,67 - 7,62 (m, 4H), 7,46 - 7,36 (m, 6H), 4,37 - 4,24 (m, 1H), 3,63 (dd, J = 3,2, 11,2 Hz, 1H), 3,35 (dd, J = 2,0, 10,8 Hz, 1H), 3,15 (dd, J = 6,0, 9,6 Hz, 1H), 2,76 (br t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,44 (dd, J = 6,0, 9,6 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,04 - 1,85 (m, 2H), 1,06 (s, 9H).

Korak D: benzil (2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)- 6,8-dihidro-5H-pirido(3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (305 mg, 827 umol, 1,20 ekv.) u THF (5,00 mL)) je dodat t-BuONa (132 mg, 1,38 mmol, 2,00 ekv.) na 0 °C, a zatim benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 0,40 g, 689 umol, 1,00 ekv.). Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, smeša je razblažena etil acetatom (30,0 mL), isprana vodom (1 × 20,0 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 1/3) da bi se dobio benzil (2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-

1

butil(difenil)silil ]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,35 g, 328 umol, 48 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M/2+1]: 444.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,24 - 8,18 (m, 1H), 7,90 - 7,84 (m, 1H), 7,69 - 7,59 (m, 5H), 7,52 - 7,48 (m, 2H), 7,44 - 7,36 (m, 12H), 7,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,68 (br s, 1H), 4,42 - 4,36 (m, 1H), 4,32 (br dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,26 (br d, J = 6,8 Hz, 2H), 4,17 - 4,06 (m, 3H), 3,98 - 3,88 (m, 1H), 3,47 (br s, 1H), 3,29 (br d, J = 10,8 Hz, 3H), 3,16 (br dd, J = 6,0, 9,6 Hz, 1H), 3,11 - 2,95 (m, 3H), 2,91 - 2,73 (m, 3H), 2,47 - 2,36 (m, 4H), 2,11 (ddd, J = 4,8, 8,4, 13,2 Hz, 1H), 1,95 - 1,82 (m, 1H), 1,06 (s, 9H).

Korak E: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u metanolu (40,0 mL) na -78 °C tokom 0,5 h. benzil (2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,32 g, 361 umol, 1,00 ekv.) i Pd/C (U smešu je dodato 0,10 g, 10,0 % čistoće). Posle mešanja na 25 °C pod H2 na 15 psi tokom 1 sata, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,27 g, sirovo) kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

LCMS [ESI, M/2+1]: 377.

Korak F: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tercbutil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]- 7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,27 g, sirov) i TEA (182 mg, 1,80) mmol, 250 uL) u dihlorometanu (2,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (45,3 mg, 359 umol) na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 0,5 h, smeša je ugašena metanolom (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 1/3) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil))silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-

1

il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1 -prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (0,16 g, 171 umol, dva koraka 48 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 806.

Korak G: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. Smeša 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (0,16 g, 198 umol, 1,00 ekv.), KF (46,1 mg, 794 umol, 18,6 uL, 4,00 ekv.) i 18-kraun-6 (210 mg, 794 umol, 4,00 ekv.) u THF (2,00 mL) mešani su na 40 °C. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10 %)/acetonitril]. Željena frakcija je sakupljena i podešena pH vrednost > 7 zasićenim natrijum bikarbonatom (2,00 mL), a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (Phenomenek Gemini 150 * 25 mm * 10 um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 38 %-66 %, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7- (1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 323, 36,3 mg, 63,9 umol, 32 % prinos, 98,1 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 568.

SFC: „OJ-3S_3_5_40_3ML Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,25 - 8,18 (m, 1H), 7,91 - 7,83 (m, 1H), 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,55 - 7,48 (m, 2H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,46 - 6,35 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,20 - 4,53 (m, 1H), 4,47 (quin, J = 5,6 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,34 - 4,19 (m, 3H), 4,14 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,02 (br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,63 (br s, 1H), 3,46 (br dd, J = 6,0, 9,6 Hz, 2H), 3,36 (br s, 2H), 3,12 (br s, 1H), 3,07 -2,90 (m, 3H), 2,90 - 2,67 (m, 2H), 2,51 (s, 3H), 2,35 (dd, J = 5,2, 9,6 Hz, 1H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 2,04 - 1,96 (m, 1H).

2

PRIMER 324

2-[(2S)-4-[7-(3-methoxy-2-methyl-phenyl)-2-[[(2S)-1-methylpyrrolidin-2-yl]methoxy]-6,8-dihydro-5H-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl]-1-prop-2-enoyl-piperazin-2-yl]acetonitrile

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metoksi-2-metil-fenil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 300 mg, 593 umol, 1,00 ekv.), 1-bromo-3-metoksi-2-metilbenzen (239 mg, 1,19 mmol, 2 ekv.), Cs2CO3 (580 mg, 1,78 mmol, 3 ek), Pd2(dba)3 (109 mg, 119 umol, 0,2 ek) i RuPhos (83,1 mg, 178 umol, 0,3 ek) u

21

toluenu (30 mL je degaziran i prečišćen) sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. U reakcionu smešu je dodata H20 (1 × 200 mL) i etil acetat (1 × 250 mL). Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (1 × 200 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane na pH = 7 zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovale etil acetatom (100 mL). Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metoksi-2-metilfenil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg, 270 umol, 45 % prinos, 99,2 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 626.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,33 (m, 5H), 7,16 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,80 (br dd, J = 6,8, 11,6 Hz, 1H), 4,68 (br s, 1H), 4,45 (br dd, J = 4,4, 12,0 Hz, 1H), 4,21 - 4,08 (m, 3H), 4,05 (s, 2H), 3,94 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,67 -3,56 (m, 1H), 3,32 (br d, J = 11,2 Hz, 3H), 3,24 - 3,01 (m, 3H), 2,95 - 2,67 (m, 8H), 2,32 - 2,10 (m, 5H), 2,00 (br s, 1H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-2-metil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Na smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metoksi-2-metil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (260 mg, 416 umol, 1,00 ekv.), Pd/C (130 mg, 10 % čistoće) i NH3 u MeOH (50 mL) je degazirana i pročišćena sa H23 puta, a zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 1 sata u atmosferi H2 pri pritisku od 15 psi. Nakon toga, katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-2-metil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 376 umol, 91 % prinos, 92,4 % čistoća) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 492.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-2-metil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-2-metil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-

22

2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 407 umol, 1,00 ekv.) i TEA (206 mg, 2,03 mmol, 283 uL, 5,00 ekv.) u DCM (10 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (41,0 mg, 325 umol, 0,800 ek) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat/metanol = 20/1 do 3/1). Ostatak je dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 48 % - 78 %, 12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-metoksi-2-metilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 324, 35,2 mg, 63,6 umol, 16 % prinos, 98,7 % čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 546.

SFC stanje: „OD-3S_3_40_3ML Kolona: Chiralcel OD-3100×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: 40 % metanola (0,05 % DEA) u CO2 Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,17 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,0, 1H) 6,68 (d, J = 8,4, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,46 - 6,34 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,10 (br s, 1H), 4,39 (dd, J = 5,2, 10,4 Hz, 1H), 4,20 - 4,09 (m, 2H), 4,06 (s, 2H), 4,02 - 3,92 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,59 (br s, 1H), 3,31 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,22 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,17 - 3,02 (m, 3H), 3,02 - 2,62 (m, 6H), 2,49 (s, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,13 - 1,99 (m, 1H), 1,91 - 1,70 (m, 2H).

PRIMER 325

2

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2-cijanofenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Na smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 65, 320 mg, 633 umol, 1 ekv.) i 2-bromobenzonitril (230 mg, 1,27 mmol, 2 ekv.) u toluenu (30 mL) dodat je Cs (619 mg, 1,90 mmol, 3 ekv.), RuPhos (59,1 mg, 127 umol, 0,2 ekv.), Pd2(dba)3 (58,0 mg, 63,3 umol, 0,1 ekv.) u jednoj porciji. Smeša je degazirana i pročišćena sa N23 puta, zatim zagrevana na 90 °C i mešana 5 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (30 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod

24

sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) i ekstrahovane etil acetatom (100 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2-cijanofenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (139 mg, 210 umol, 33 % prinos, 91,5 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 607.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,62 (dd, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 5H), 7,09 - 7,00 (m, 2H), 5,21 (s, 2H), 4,68 (br s, 1H), 4,38 (br dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,26 (s, 2H), 4,19 - 4,01 (m, 3H), 3,92 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,78 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,44 - 3,21 (m, 3H), 3,15 - 2,95 (m, 3H), 2,85 - 2,61 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,34 - 2,23 (m, 1H), 2,12 - 2,00 (m, 1H), 1,92 - 1,72 (m, 3H).

Korak B: 2-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-il]benzonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2-cijanofenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (160 mg, 264 umol, 1 ekv.) u MeOH (12 mL) je dodat NH3•MeOH (20 mL) i Pd/ C (20 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak.

Sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.

Jedinjenje 2-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]benzonitril (119 mg, sirov) je dobijen kao zelena čvrsta supstanca.119-il (sirovi) LCMS [ESI, M+1]: 473,

Korak C: 2-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi-1 -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]benzonitril. U smešu 2-[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro Dodati su -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]benzonitril (119 mg, sirov) i prop-2-enoil prop-2-enoat (31,8 mg, 252 umol) u DCM (5 mL) TEA (127 mg, 1,26 mmol, 175 uL) u porcijama na 0 °C pod N2.

2

Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana 30 minuta. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog NaHCO3 (5 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa DCM (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (15 mL × 1), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 43 % - 73 %, 12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-prop-2-enoil-piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]benzonitril (Primer 325, 35,1 mg, 65,1 umol, dva koraka 25 % prinos, 97,5 % čistoće) je dobijen kao bezbojni ulje. LCMS [ESI, M+1]: 527.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,10 - 7,00 (m, 2H), 6,59 (br s, 1H), 6,45 - 6,34 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,09 (br s, 1H), 4,38 (dd, J = 5,2, 10,4 Hz, 1H), 4,27 (s, 2H), 4,21 - 4,08 (m, 2H), 3,99 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,86 - 3,52 (m, 2H), 3,39 (br s, 2H), 3,18 - 2,99 (m, 3H), 2,97 - 2,59 (m, 5H), 2,49 (s, 3H), 2,37 - 2,21 (m, 1H), 2,17 -1,98 (m, 1H), 1,94 - 1,79 (m, 2H).

PRIMER 326

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(7-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak A: metil-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat. U rastvor 7-metiltetralin-1-ona (2,5 g, 15,6 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (40 mL) dodat je DIEA (6,05 g, 46,8 mmol, 8,15 mL, 3,0 ekv.) i Tf2O (6,60 g, 6,60 g mmol, 3,86 mL, 1,5 ekv.) u porcijama na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 0 - 20 °C tokom 3 sata pod N2. Nakon završetka, u reakciju je polako dodavana ledena voda (40 mL); organski sloj je odvojen, a zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=1:0) da bi se dobio (7-metil-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonat (4,0 g, 13,7 mmol, 88 % prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,18 (s, 1H), 7,12 - 7,06 (m, 2H), 6,02 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 2,85 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 2,54 - 2,45 (m, 2H), 2,37 (s, 3H).

Korak B: (7-metil-1-naftil) trifluorometansulfonat. U rastvor (7-metil-3,4-dihidronaftalen-1-il) trifluorometansulfonata (4,0 g, 13,7 mmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (80,0 mL) dodat je DDK (6,21 g, 27,4 mmol, 2,0 ekv.). reakciona smeša je mešana na 105 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=1:0). Proizvod (7-

2

metil-1-naftil) trifluorometansulfonat (3,4 g, 11,7 mmol, 86 % prinos) je dobijen kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,89 - 7,81 (m, 3H), 7,49 - 7,40 (m, 3H), 2,60 (s, 3H).

Korak C: benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 1,20 g, 2,37 mmol, 1,0 ekv.) i (7-metil-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,03 g, 3,56 mmol do 1,50 mmol, k) (20,0 mL) je dodat Cs2CO3 (1,55 g, 4,75 mmol, 2,0 ek) i Ksphos-Pd-G3 (301 mg, 356 umol, 0,15 ek), smeša je mešana na 70 °C tokom 12 sati pod N2. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (20,0 mL), zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 15,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetata: Metanol=20:1). Proizvod benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (820 mg, 1,22 mmol, 51 % prinos, 95,9 % čistoće) je dobijen kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (790 mg, 1,22 mmol, 1,0 ekv.) u MeOH (15,0 mL) je dodat NH3•MeOH

(1,22 mmol, 15,0 mL, 1,0 ekv.) i Pd/C (500 mg, 10 % čistoće), suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 30 minuta. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić od celita, a filter kolač je ispran sa DCM (2 × 20 mL), filtrat je koncentrovan. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (490 mg, 934 umol, 76 % prinos, 97,5 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta

2

supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez dalje prečišćavanje. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (490 mg, 958 umol, 1,0 ekv.) u DCM (8,0 mL) je dodat DIEA (495 mg, 3,83 mmol, 667 uL, 4,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoata (121 mg, 958 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (5,0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, etil acetat/metanol=20/1), dobijeni sirovi proizvod je koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC ((kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 57 %-87 %, 12min), dobijeni proizvod je koncentrovan. a zatim pod liofilizacijom. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(7-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 326, 133 mg, 235 umol, 25 % prinos, 99,6 % čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,00 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,43 - 7,32 (m, 2H), 7,13 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,69 - 6,49 (m, 1H), 6,42 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,85 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,20 - 4,52 (m, 1H), 4,42 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,36 - 4,24 (m, 2H), 4,22 - 4,10 (m, 2H), 4,06 - 3,95 (m, 2H), 3,76 - 3,22 (m, 4H), 3,21 - 3,07 (m, 2H), 3,04 - 2,63 (m, 5H), 2,56 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,14 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,75 (m, 3H).

PRIMER 327

2

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5?,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak 1: 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat. U rastvor 1-terc-butil 2-metil(2S,4R)-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (9 g, 36,7 mmol, 1 ekv.) u CH3CN (150 mL) je dodat Ag2O (25,5 g, 110 mmol, 3 ekv.) i CH3I (54,3 g, 383 mmol, 23,8 mL, 10,4 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filter je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=20/1 do 3:1). Jedinjenje 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat (9 g, 34,7 mmol, 95 % prinos) je dobijeno kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,94 - 3,79 (m, 1H), 3,66 (dd, J = 3,2, 11,2 Hz, 1H), 3,44 - 3,34 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 2,92 - 2,53 (m, 2H), 2,40 - 2,25 (m, 4H), 2,12 - 1,99 (m, 1H), 1,89 - 1,79 (m, 1H).

Korak 2: [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (5 g, 19,28 mmol, 1 ekv.) u THF (100 mL) dodat je LiAlH4 (2,20 g, 57,8 mmol, 3 ekv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (6 mL). Zatim je smeša filtrirana i filter je koncentrovan.

Jedinjenje [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (1,8 g, 12,4 mmol, 64 % prinos) je dobijeno kao bezbojno ulje i korišćeno u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4,43 - 4,23 (m, 1H), 3,45 - 3,90 (m, 1H), 3,78 - 3,69 (m, 3H), 3,68 - 3,43 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,43 - 2,24 (m, 1H), 2,12-1,95 (m, 1H), 1,52 - 1,33 (m, 9H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metboksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (600 mg, 4,13 mmol, 3 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)-4- [2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (800 mg, 1,38 mmol, 1 ekv.) u THF (10 mL) je dodat t-BuONa (397 mg, 4,13 mmol, 3 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (30 mL) i isprana vodom (20 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, Etil acetat/Me200/1 do 20:1). Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (910 mg, 1,28 mmol, 93 % prinos, 93 % čistoća) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 662.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (80 mL) na -60 °C tokom 10 minuta. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (850 mg, 1,28 mmol, 1 ekv.) u MeOH (30 mL) je dodat iznad NH3 •MeOH (20 mL) i suvi Pd/C (500 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom

1

1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i filter je koncentrovan. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (620 mg, 1,18 mmol, 91 % prinos) je dobijen kao bezbojno ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 528.

Korak C: 2-[(2S)4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (620 mg, 1,18 mmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (10 mL) je dodat TEA (1,19 g), 11,7 mmol, 1,64 mL, 10 ekv.) na 0 °C. Posle dodavanja, prop-2-enoil prop-2-enoat (118 mg, 940 umol, 0,8 ek) u dihlorometanu (1 mL) je dodat u kapima na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL). Zatim se razblaži vodom (20 mL) i ekstrahuje dihlorometanom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, EA/MeOH=100/1 do 10:1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 45 % - 75 %, 12min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (101 mg, 167 umol, 14 % prinos, 96,6 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca liofilizacijom. LCMS [ESI, M+1]: 582.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 %, Brzina protoka: 3 mL/min, talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,26 - 8,17 (m, 1H), 7,91 - 7,82 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,41 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,21 - 4,53 (m, 1H), 4,42 (dd, J = 4,4, 10,4 Hz, 1H), 4,34 - 4,17 (m, 3H), 4,13 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,04 - 3,93 (m, 2H), 3,70 - 3,42 (m, 3H), 3,31 (s, 5H), 3,22

2

- 2,69 (m, 7H), 2,48 (s, 3H), 2,33 (dd, J = 5,6, 9,6 Hz, 1H), 2,14 - 2,04 (m, 111), 2,02 - 1,91 (m, 1H).

PRIMER 328

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,0 g, 1,98 mmol, 1,0 ekv.) i 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen (2,88 g, 11,9 mmol, 6,0 ekv.) u dodat je toluen (20,0 mL) Cs2CO3 (1,29 g, 3,96 mmol, 2,0 ek), RuPhos (185 mg, 396 umol, 0,2 ek) i Pd2(dba)3 (272 mg, 297 umol, 0,15 ek), smeša je bila ek. mešano na 100 °C tokom 18 sati pod N2. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (30,0 mL), zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 20,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetata: Metanol=20:1). Dobijeni proizvod je zatim ponovo prečišćen flešom obrnute faze (C18, 0,1 % FA u MeCN), dobijeni proizvod je podešen sa čvrstim NaHCO3 na pH~7, smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 15,0 mL) i organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan.

Proizvod benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (160 mg, 236 umol, 12 % prinos, 98 % čistoća) je dobijen kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]: 668.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (460 mg, 689 umol, 1,0 ekv.) u MeOH (10 mL) je dodat Pd/C (300 mg, 10 % čistoće) i NH3•MeOH (10 mL), suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 10 minuta. Nakon završetka, reakcija je filtrirana kroz sloj celita, a filtrat je koncentrovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (320 mg, 591 umol, 86 % prinosa, 98 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 534.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (320 mg, 599 umol, 1,0 ekv.) u DCM (8,0 mL) je dodat DIEA (310 mg, 2,40 mmol, 418 uL, 4,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (75,6 mg, 599 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (5,0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, etil

4

acetat/metanol=20/1), zatim je dobijeni proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 51 %-81 %, 12min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (86,8 mg, 145 umol, 24 % prinos, 98 % čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 588.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,55 - 7,45 (m, 1H), 7,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,02 - 6,91 (m, 1H), 6,68 - 6,53 (m, 1H), 6,41 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,85 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,11 - 4,52 (m, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 6,8, 10,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,07 (m, 3H), 3,98 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,72 - 3,52 (m, 1H), 3,42 - 3,25 (m, 2H), 3,23 - 2,58 (m, 9H), 2,49 (s, 3H), 2,35 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,01 (m, 1H), 1,91 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 329

2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: [(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metanol. Smeša [(2R)-pirolidin-2-il]metanola (0,50 g, 4,94 mmol, 481 uL, 1,00 ek), 2-bromoetoksi-terc-butil-dimetil-silana (1,18 g, 4,94 mmol, 1,00 ek) ek. i K2CO3 (3,42 g, 24,7 mmol, 5,00 ekv.) u acetonitrilu (30,0 mL) je mešan na 83 °C tokom 12 sati. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, etil acetat/metanol = 10/1) da bi se dobio [(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metanol (0,50 g, 1,93 mmol, 39 % prinos) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,70 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,60 (dd, J = 3,6, 10,8 Hz, 1H), 3,36 (dd, J = 3,6, 10,8 Hz, 1H), 3,20 (td, J = 4,4, 9,2 Hz, 1H), 2,89 (td, J = 6,4, 12,8 Hz, 1H), 2,74 - 2,65 (m, 1H), 2,50 (td, J = 5,2, 12,8 Hz, 1H), 2,42 - 2,32 (m, 1H), 1,92 - 1,81 (m, 1H), 1,78 - 1,66 (m, 3H), 0,90 (d, J = 0,8 Hz, 9H), 0,07 (d, J = 0,4 Hz, 6H).

Korak A: benzil (2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2R)-1-[2-[tercbutil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metanola (344 mg, 1,33 mmol, 1,10 ekv.) u THF (10,0 mL) je dodat t-BuONa (232 mg, 2,41 mmol, 2,00 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 0,70 g, 1,21 mmol, 1,00 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, smeša je razblažena etil acetatom (10,0 mL), isprana vodom (1 × 10,0 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, etil acetat/petrolej etil = 3/1) da bi se dobio benzil (2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tercbutil(dimetil) silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin -1-karboksilat (0,60 g, 704 umol, 58 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 776.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,23 - 8,18 (m, 1H), 7,90 - 7,83 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,46 - 7,34 (m, 6H), 7,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,70 (br s, 1H), 4,34 (br dd, J = 4,2, 10,6 Hz, 1H), 4,30 -4,20 (m, 2H), 4,17 - 3,89 (m, 4H), 3,75 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,49 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,38 - 3,13 (m, 4H), 3,10 - 2,90 (m, 4H), 2,89 - 2,70 (m, 3H), 2,63 - 2,52 (m, 1H), 2,41 - 2,31 (m, 1H), 2,04 - 1,94 (m, 1H), 1,87 - 1,73 (m, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,05 (d, J = 1,2 Hz, 6H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi|-7-(1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten da peni u metanolu (50,0 mL) na -78 °C tokom 10 minuta. Benzil (2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,60 g, 773 umol, 1,00 ekv.) i Pd/C (0,1 g, 10 % čistoće) dodato je u gornji rastvor. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi, katalizator je odfiltriran i filterski kolač je ispran sa THF (10,0 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tercbutil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi] - 7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,50 g, sirov) kao žuto ulje i korišćen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M/2+1]: 321.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,50 g, sirov) i TEA (394 mg, 3,89 mmol, 542) uL) u dihlorometanu (5,00 mL) dodat je prop-2-enoil prop-2-enoat (98,2 mg, 779 umol,) na -40 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, smeša je ugašena zasićenim natrijum bikarbonatom (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 10/1) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil))silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2 -enoil-piperazin-2-il]acetonitril (0,35 g, 427 umol, dva koraka 55 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 696.

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. Smeša 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1 -naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (0,35 g, 503 umol, 1,00 ek), KF (146 mg, 2,51 mmol, 58,9 uL, 5,00 ek) i 18-CROVN-6 (665 mg, 2,51 mmol, 5,00 ek) u THF (5,00 mL) je mešan na 40 °C tokom 12 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10 %)/acetonitril] i prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150 * 25 mm * 10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 45 % - 75 %, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizirane da bi se dala naslovna smjesa 2-[(2s)-4-[2-[(2R)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5-piridiil[3,4-d]piridinil]proprinos[2 146 97,7-4-2-1-245--329 49--prop] LCMS [ESI, M+1]:582.

SFC stanje: „Kolona: Chiralcel OJ-3100 × 4,6 mm I.D., 3 um, Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 %, Brzina protoka: 3 mL/min, talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ =8,29 - 8,18 (m, 1H), 7,95 - 7,82 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,46 - 6,31 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,19 - 4,47 (m, 1H), 4,38 - 4,22 (m, 3H), 4,21 - 4,09 (m, 2H), 4,02 (br d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,71 - 3,57 (m, 2H), 3,53 - 3,27 (m, 3H), 3,22 - 2,76 (m, 9H), 2,62 (td, J = 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,41 - 2,28 (m, 1H), 2,11 - 1,95 (m, 1H), 1,89 - 1,77 (m, 3H).

PRIMER 330

2-[(2S)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: 1-bromo-3-metoksi-2-(trifluorometil)benzen. U rastvor MeOH (264 mg, 8,23 mmol, 333 uL, 2,00 ekv.) u DMF (25,0 mL) dodat je NaH (329 mg, 8,23 mmol, 60 % čistoće u mineralnom ulju, 2,00 ekv.). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 30 minuta nakon čega je dodat 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen (1,00 g, 4,12 mmol, 1,00 ekv.). Rastvor je zatim mešan na 25 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 50 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL), osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 1/0 do 100/1) da bi se dobio 1-bromo-3-metoksi-2-(trifluorometil)benzen (880 mg, 3,11 mmol, 75 % prinos, 90,0 % čistoća) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,34 - 7,27 (m, 2H), 6,99 (br d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H).

Korak A: (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 65, 550 mg, 1,09 mmol, 1,00 ekv.), 1-bromo-3-metoksi-2-(trifluorometil)benzen (416 mg, 1,63 mmol, 1,50 ekv.), RuPhos (152 mg, 326 umol, 0,30 ekv.), Cs2CO3 (1,06 g, 3,26 mmol, 3,00 ekv.) i Pd2(dba)3 (149 mg, 163 umol, 0,15 ekv.) u toluenu (30,0 mL) zagrevan na 90 °C 12 sati pod N2. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen vodom (10 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 40 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Sakupljene željene frakcije su neutralisane zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovani sa EtOAc (2 × 100 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 321 umol, 30 % prinos, 94,9 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 680.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 338 umol, 1,00 ekv.) u MeOH (4,00 mL) je dodat NH3/MeOH (7 M, 4,00 mL), Pd/C (70,0 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil) fenil]-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 242 umol, 72 % prinos, 88,1 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 546.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 242 umol, 1,00 ekv.) i TEA (122 mg,

1,21 mmol, 168 uL, 5,00 ek) u DCM (3,00 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (30,5 mg, 242 umol, 1,00 ek) kap po kap na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Po završetku, smeša je ugašena sa MeOH (0,1 mL) i vodom (2 mL). Slojevi su odvojeni. Vodena faza je izdvojena sa EtOAc (2 × 8 ml). Kombinovani organski

4

slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (EtOAc/MeOH 7/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Gemini 150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 50 % - 80 %, 12 min) i liofilizovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-[3-metoksi-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metil pirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 330, 28,2 mg, 45,6 umol, 19 % prinos, 96,8 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 600.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OD-3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,42 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,46 - 6,34 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,09 (br s, 1H), 4,37 (dd, J = 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,21 - 4,02 (m, 4H), 4,01 - 3,77 (m, 5H), 3,75 - 3,21 (m, 3H), 3,20 - 2,98 (m, 3H), 2,97 - 2,56 (m, 5H), 2,48 (s, 3H), 2,35 - 2,23 (m, 1H), 2,12 - 1,98 (m, 1H), 1,91 - 1,72 (m, 3H).

PRIMER 331

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

41

Korak A: 2-[(2S)-4-(7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (700 mg, 1,16 mmol, 1,00 ekv., 2 HCl) i TEA (1,76 g, 17,4 mmol, 2,42 mL, 15. ek) u anhidrovanom DCM (17,0 mL) dodat je prop-2-enoil prop-2-enoat (146 mg, 1,16 mmol, 1,00 ek) na 0 °C. Smeša je mešana 1 sat na 25 °C. Po završetku, smeša je ugašena sa MeOH (1 mL) i vodom (10 mL). Odvojena vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petrol etar/etil acetat 2/1 do 0/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 52 %-82 %, 12min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 331, 122 mg, 205 umol, 18 % prinosa, 98,5 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:586.

SFC stanje: Kolona: Chiralpak AD-3100 × 4,6 mm I.D., 3 um, Mobilna faza: 40 % izo-propanola (0,05 % DEA) u CO2 Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,76 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,45 (td, J = 7,6, 13,2 Hz, 1H), 7,37 -7,31 (m, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,45 - 6,33 (m, 1H), 5,83 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,08 (br s, 1H), 4,49 - 4,30 (m, 2H), 4,22 - 3,66 (m, 5H), 3,63 -

42

3,32 (m, 2H), 3,32 - 2,97 (m, 5H), 2,91 - 2,52 (m, 4H), 2,48 (d, J = 2,4 Hz, 3H), 2,36 - 2,21 (m, 1H), 2,12 - 1,96 (m, 1H), 1,86 - 1,70 (m, 3H).

PRIMER 332

2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (450 mg, 751 umol, 1,0 ekv.) i [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (218 mg, 1,50 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (20,0 mL) je dodat t-BuONa (144 mg, 1,50 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C 10 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem H20 (10,0 mL) na 20 °C, a

4

reakciona smeša je ekstrahovana sa EA (20,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 1/1 do EA/MeOH = 10/1). Proizvod terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,30 g, 413 umol, 55 % prinos, 93,7 % čistoća) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 680.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (270 mg, 397 umol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodat TFA (3,08 g, 27,0 mmol, 2,0 mL, 68,1 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 10 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov, 2TFA) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 580.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, 371 umol, 1,0 ekv., 2TFA) u DCM (3,0 mL) je dodat DIEA (480 mg, 3,71 mmol, 647 uL, 10,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (10,0 mL) na 20 °C, i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 50 %-80 %, 12 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizacija. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (27,6 mg, 43,5

44

umol, dva koraci 10 % prinosa, 100 % čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1J: 634.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 7,44 - 7,37 (m, 1H), 7,32 - 7,40 (m, 1H) 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,57 (br, d, J = 14,1 Hz, 1H), 6,44 - 6,37 (m, 1H), 5,84 (br, d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,1 (br, s, 1H), 4,45 - 4,35 (m, 1H), 4,19 (br, dd, J = 5,9, 10,9 Hz, 1H), 4,10 (s, 3H), 4,00 - 3,90 (m, 2H), 3,75 - 3,4 (m, 2H), 3,40- 3,00 (m, 8H), 3,00 - 2,65 (m, 5H), 2,45 (s, 3H), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,15 - 2,00 (m, 1H), 2,00 - 1,90 (m, 1H).

PRIMER 333

2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il)acetonitril

4

Umetanje: (7-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat. U rastvor 7-fluoronaftalen-1-ola (980 mg, 6,04 mmol, 1 ekv.) i DIEA (2,34 g, 18,1 mmol, 3,16 mL, 3 ekv.) u DCM (40 mL) dodat je Tf2O (2,56 g, 9,07 mmol, 1,50 mL, 1,5 ekv.) u kapima na -5 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 3 sata. Zatim je smeša koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleter/etil acetat = 100/1 do 10/1). Jedinjenje (7-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (1,63 g, 5,54 mmol, 92 % prinos) je dobijeno kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,92 (dd, J = 5,6, 9,0 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 2,4, 9,9 Hz, 1H), 7,56 - 7,50 (m, 1H), 7,49 - 7,43 (m, 1H), 7,42 - 7,34 (m, 1H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 330 mg, 463 umol, 1 ekv.), (7-fluoro-1-naftil) trifluorometansulfonat (273 mg, 927 umol, 2 ekv.), Pd2 (dba)3 (84,9 mg, 92,7 umol, 0,2 ek), RuPhos (64,9 mg, 139 umol, 0,3 ekv.) i Cs2CO3 (453 mg,

1,39 mmol, 3 ek) u toluenu (30 mL) je degasiran sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 6 sati u atmosferi N2. Reakcionoj smeši je dodata H20 (1 × 200 mL) i etil acetat (1 × 250 mL). Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (1 × 200 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane na pH = 7 zasićenim rastvorom NaHCO3, a zatim ekstrahovani etil acetatom (1 × 200 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 308 umol, 100 % čistoće, 67 % prinos) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 650.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,80 - 7,70 (m, 2H), 7,53 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,36 - 7,24 (m, 6H), 7,24 - 7,16 (m, 1H), 7,10 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,19

4

- 5,09 (m, 2H), 4,62 (br s, 1H), 4,51 (dd, J = 6,0, 11,2 Hz, 1H), 4,26 (dd, J = 5,6, 11,3 Hz, 1H), 4,15 (s, 2H), 4,11 - 3,99 (m, 2H), 3,90 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,38 -3,11 (m, 5H), 3,08 - 2,95 (m, 2H), 2,93 - 2,71 (m, 3H), 2,70 - 2,62 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,53 - 2,42 (m, 1H), 2,15 - 2,02 (m, 1H), 1,96 - 1,75 (m, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril.

Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (810 mg, 1,25 mmol, 1 ekv.), Pd/C (400 mg, 10 % čistoće) i NH3 u MeOH (7 M, 150 mL) je degaziran i pročišćen sa H23 puta, a zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 0,5 h u atmosferi H2 pri pritisku od 15 psi. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom.2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (600 mg, 1,16 mmol, 93 % prinos, 99,4 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 516.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,89 - 7,79 (m, 2H), 7,61 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,40 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,32 - 7,24 (m, 1H), 7,19 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 5,6, 10,9 Hz, 1H), 4,30 - 4,19 (m, 3H), 4,05 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,88 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,37 - 3,21 (m, 4H), 3,19 - 3,09 (m, 2H), 3,06 -2,84 (m, 5H), 2,61 - 2,53 (m, 5H), 2,47 - 2,36 (m, 1H), 2,19 - 2,08 (m, 1H), 1,97 -1,76 (m, 3H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (600 mg, 1,16 mmol, 1 ekv.) i TEA (589 mg, 5,82 mmol, 810 uL, 5 ekv.) u DCM (30 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (117 mg, 931 umol, 0,8 ek) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (10 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, Etil acetat/Metanol

4

= 20/1 do 3/1). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: voda k most 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 50 % - 80 %, 10 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 333, 139 mg, 244 umol, 21 % prinos, 100 % čistoća) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

SFC stanje: „Kolona: Chiralpak AD-3100 × 4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 %, Brzina protoka: 3 mL/min, talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,92 - 7,80 (m, 2H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,33 - 7,25 (m, 1H), 7,20 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,62 (br s, 1H), 6,47 - 6,37 (m, 1H), 5,85 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,27 - 4,52 (m, 1H), 4,41 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,25 (br s, 2H), 4,22 - 4,10 (m, 2H), 4,09 -3,87 (m, 2H), 3,77 - 3,25 (m, 2H), 3,24 - 3,06 (m, 3H), 3,05 - 2,59 (m, 6H), 2,50 (s, 3H), 2,38 - 2,23 (m, 1H), 2,15 - 2,00 (m, 1H), 1,99 - 1,81 (m, 3H).

PRIMER 334

4

Korak A: terc-butil (2R)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilat. U rastvor NaH (1,11 g, 27,8 mmol, 60 % čistoće, 1,2 ekv.) u THF (80 mL) dodat je rastvor terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (4,67 g, 23,2 mmol, 1 ekv.) u THF (20 mL) na 0 °C i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata. BnBr (5,95 g, 34,8 mmol, 4,13 mL, 1,5 ekv.) je dodat u kapima na 0 °C i smeša je mešana na 25 °C tokom 4 sata. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom amonijum hlorida (20 mL) na 0 °C, a zatim razblažena etil acetatom (2 × 100 mL). Organski slojevi su isprani vodom (1 × 150 mL) i slanim rastvorom (1 × 150 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 100/1 do 2/1). Jedinjenje terc-butil (2R)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilat (5,03 g, 17,3 mmol, 74 % prinos) je dobijeno kao bezbojno ulje.

4

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,37 - 7,14 (m, 5H), 4,47 (br s, 2H), 4,07 - 3,77 (m, 1H), 3,67 - 3,07 (m, 4H), 2,08 - 1,68 (m, 4H), 1,38 (s, 9H).

Korak B: (2R)-2-(benziloksimetil)pirolidin. U smešu terc-butil (2R)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilata (4 g, 13,7 mmol, 1 ekv.) u dioksanu

(80 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 120 mL, 35 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje (2R)-2-(benziloksimetil)pirolidin (3,13 g, sirovo, HCl) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9,76 (br s, 1H), 9,11 (br s, 1H), 7,43 -7,23 (m, 5H), 4,55 (s, 2H), 3,75 - 3,61 (m, 3H), 3,13 (br d, J = 4,4 Hz, 2H), 2,07 -1,76 (m, 3H), 1,66 - 1,56 (m, 1H).

Korak C: (2R)-2-(benziloksimetil)-1-etil-pirolidin. U smešu (2R)-2-(benziloksimetil)pirolidina (3 g, sirov, HCl) i jodoetana (2,05 g, 13,2 mmol, 1,05 mL) u CH3CN (65 mL) dodat je K2CO3 (1,82 g, 13,2 mmol) u porcijama na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h, zatim zagrevana do 78 °C i mešana 11 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (30 mL × 2), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 100/1 do etil acetat/metanol = 5/1). Jedinjenje (2R)-2-(benziloksimetil)-1-etil-pirolidin (2,41 g, 10,4 mmol, dva koraka 79 % prinosa, 95 % čistoće) je dobijeno kao smeđe ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,30 - 7,18 (m, 5H), 4,47 (s, 2H), 3,46 (dd, J = 4,8, 9,2 Hz, 1H), 3,30 (dd, J = 6,4, 9,2 Hz, 1H), 3,10 (ddd, J = 2,4, 6,8, 8,8 Hz, 1H), 2,88 (qd, J = 7,6, 12,4 Hz, 1H), 2,62 - 2,49 (m, 1H), 2,24 (qd, J = 7,2, 12,4 Hz, 1H), 2,14 - 2,03 (m, 1H), 1,92 - 1,80 (m, 1H), 1,78 - 1,51 (m, 3H), 1,04 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Korak D: [(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metanol. U rastvor (2R)-2-(benziloksimetil)-1-etil-pirolidina (2 g, 9,12 mmol, 1 ekv.) u MeOH (60 mL) dodat je HCl/MeOH (4 M, 30 mL, 13,2 ek) do podešavanja pH na 3 ~ 4, a zatim je dodat Pd(OH)2/C (300 mg, 20 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (50 psi) na 25 °C tokom 12 sati. Katalizator je filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje [(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metanol (1,68 g, sirovo, HCl) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 3,88 (dd, J = 3,6, 12,4 Hz, 1H), 3,75 - 3,45 (m, 4H), 3,21 - 3,08 (m, 2H), 2,30 - 1,82 (m, 4H), 1,37 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Korak E: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. [(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metanol (334 mg, 2,01 mmol, 1,95 ek, HCl) je rastvoren u zasićenom rastvoru natrijum karbonata (5 mL) i zatim ekstrahovan etil acetatom (2 × 10 mL). Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Na smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 600 mg, 1,03 mmol, 1 ekv.) i gornji ostatak u toluenu (35 mL) je dodat t-BuONa (298 mg, 3,10 mmol, 3 ek) u porcijama na 0° C pod N2. Smeša je zagrejana na 25 °C i mešana 10 min. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (20 mL) i podešena pH na 8-9 sa 2M HCl na 0 °C, zatim ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 2). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (15 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3 (3 ml) i ekstrahovane etil acetatom (100 mL × 2). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 526 umol, 51 % prinos, 97,1 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak F: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-

1

pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (305 mg, 472 umol, 1 ekv.) u MeOH (40 mL) i NH3•MeOH (20 mL) je dodat Pd/ C (300 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (240 mg, sirov) je dobijen kao zelena čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak G: 2-[(2S)-4-[2-[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (240 mg, sirov) u DCM (10 mL) je dodat TEA (237 mg, 2,35 mmol, 326 uL), zatim prop-2 -enoil prop-2-enoat (59,2 mg, 469 umol) je dodat u porcijama na 0 °C pod N2. Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana 30 minuta. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3 (2 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa DCM mL (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 50/1 do etil acetat/metanol = 5/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 59 % - 89 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 334, 44,2 mg, 75,2 umol, dva koraka 16 % prinos, 96,4 % čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

<1>H NMR (400MIIz, hloroform-d) δ = 8,24 - 8,18 (m, 1H), 7,90 - 7,83 (m, 1H), 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,48 (m, 2H), 7,44 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,47 - 6,35 (m, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,11 (br s, 1H), 4,39 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,35 - 4,21 (m, 2H), 4,19 - 4,09 (m, 2H), 4,02 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,47 (br s, 2H), 3,34 (br s, 2H), 3,26 - 3,07 (m,

2

3H), 3,05 - 2,63 (m, 5H), 2,44 (br dd, J = 6,8, 12,0 Hz, 1H), 2,26 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 2,12 - 1,94 (m, 1H), 1,80 (br d, J = 4,0 Hz, 4H), 1,15 (br t, J = 7,2 Hz, 3H).

PRIMER 335

2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-2-karboksilat. U rastvor O1-terc-butil-O2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (5,00 g,

19,3 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) dodata je TFA (7,70 g)., 67,5 mmol, 5,0 mL, 3,50 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Nakon završetka, smeša je koncentrovana. Proizvod metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-2-karboksilat (3,0 g, sirov, TFA) je dobijen kao žuto ulje.

Korak 2: metil (2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-karboksilat. U rastvor metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-2-karboksilata (3,0 g, 11,0 mmol, 1,0 ekv., TFA) i K2CO3 (4,55 g, 32,9 mmol, 3,0 ekv.) u MeCN (30,0 mL) je dodat jodoetan (1,71 g, 11,0 mmol, 878 uL, 1,0 ekv.) u porcijama. Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 sata i zagrevana do 78 °C, zatim je mešana na 78 °C tokom 11 sati. Nakon završetka, smeša je filtrirana i koncentrovana. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE:EA=10:1 - EA:MeOH=10:1) da bi se dobio metil (2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-karboksilat (1,20 g, 6,41 mmol, dva koraka 33 % prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 4,04 - 3,95 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,55 - 3,33 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 2,83 - 2,70 (m, 1H), 2,53 - 2,35 (m, 2H), 2,14 (dd, J = 5,6, 8,0 Hz, 2H), 1,09 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Korak 3: [(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor metil (2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-karboksilata (1,20 g, 6,41 mmol, 1,0 ekv.) u THF (15,0 mL) dodat je LiAlH4 (730 mg, 19,2 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na -78 °C 1 sat. Nakon završetka, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (0,30 mL) i filtrirana, isprana sa THF (10,0 mL). Matična tečnost je bila koncentrisana. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, PE:EA=10:1 - EA;MeOH=5:1) da bi se dobio [(2S,4R)-1-etil-4-metoksipirolidin-2-il]metanol (600 mg, 3,77 mmol, 59 % prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 3,92 - 3,83 (m, 1H), 3,66 (dd, J = 3,2, 10,8 Hz, 1H), 3,49 - 3,35 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 2,89 - 2,76 (m, 2H), 2,40 - 2,27 (m, 2H), 2,07 - 1,97 (m, 1H), 1,93 - 1,82 (m, 1H), 1,08 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metanola (266 mg, 1,67 mmol, 2,00 ekv.) u THF (5,0 mL) dodat je t-BuONa (241 mg)., 2,50 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta.

Zatim terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-

4

5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (500 mg, 835 umol, 1,0 ekv.) je dodat u gornju tečnost. Posle dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE:EA=20:1 - EA:MeOH=10:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (440 mg, 513 umol, 62 % prinos, 81 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 694.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,41 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,42 (br dd, J = 4,4, 10,8 Hz, 1H), 4,18 - 4,06 (m, 4H), 4,06 - 3,96 (m, 2H), 4,06 - 3,96 (m, 1H), 3,92 - 3,86 (m, 1H), 3,36 - 3,20 (m, 6H), 3,18 - 2,96 (m, 4H), 2,94 - 2,66 (m, 4H), 2,58 - 2,39 (m, 1H), 2,37 - 2,30 (m, 1H), 2,14 - 2,07 (m, 1H), 2,02 - 1,91 (m, 1H), 1,53 (s, 9H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (390 mg, 455 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,00 mL) je dodat TFA (1,54 g, 13,5 mmol, 1,0 mL, 29,7 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 10 minuta. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, sirov, 2 TFA) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 594.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4-metoksi-pirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, 487 umol, 1,0 ekv., 2 TFA) u DCM (2,0 mL) je dodat DIEA (629 mg, 4,87 mmol, 847 uL, 10,0 ek) na -30 °C. Zatim je prop-2-enoil prop-2-enoat (92,0 mg, 730 umol, 1,50 ekv.) dodat u gornju tečnost na -30 °C i smeša je mešana na -30 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (0,50 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje iz naslova je prečišćeno prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini

150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 50 %-80 %, 12 min) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S,4R)-1-etil-4 -metoksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 335, 120 mg, 182 umol, dva koraka 28 % prinosa, 99 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 648.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,42 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,68 - 6,55 (m, 1H), 6,42 (dd, J = 1,6, 16,4 Hz 1H), 5,85 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,20 - 4,51 (m, 1H), 4,42 (dd, J = 4,4, 10,8 Hz, 1H), 4,19 - 4,04 (m, 4H), 4,04 - 3,72 (m, 3H), 3,70 - 3,41 (m, 2H), 3,39 -3,22 (m, 5H), 3,20 - 2,79 (m, 7H), 2,76 (br s, 1H), 2,50 - 2,40 (m, 1H), 2,33 (dd, J = 5,2, 10,0 Hz, 1H), 2,15 - 2,05 (m, 1H), 2,03 - 1,90 (m, 1H), 1,13 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

PRIMER 336

1-[(2R,5S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

Korak A: terc-butil (2R,5S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2,5-dimetil-piperazin -1-karboksilat. Rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (2,70 g, 9,18 mmol, 1,00 ekv.), terc-butil (2R,5S)- 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat (1,77 g, 8,26 mmol, 0,90 ekv.) i DIEA (2,37 g, 18,4 mmol, 3,20 mL, 2,00 ekv.) u NMP (30,0 mL) mešani su na 70 °C. Smeša je razblažena etil acetatom (50,0 mL), isprana slanim rastvorom (3 × 100 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 3/1) da bi se dobio terc-butil (2R, 5S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (2,80 g, 5,69 mmol, 62 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 472.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 - 7,29 (m, 5H), 4,45 - 4,19 (m, 2H), 3,71 - 3,61 (m, 4H), 3,54 - 3,43 (m, 3H), 3,41 - 3,36 (m, 1H), 2,81 - 2,67 (m, 2H), 2,64 - 2,49 (m, 2H), 1,48 (s, 9H), 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,17 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

Korak B: terc-butil (2R,5S)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (854 mg, 7,41 mmol, 880 uL, 2,50 ekv.) u THF (20,0 mL) dodat je NaH (237 mg, 5,93 mmol, 60,0 % čistoće, 2,00 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, terc-butil (2R, 5S)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (1,40 g, 2,97 mmol, 1,00 ekv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 4 sata. Smeša je razblažena vodom (20,0 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 mL), organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 40,0 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 1/10) da bi se dobio tercbutil (2R,5S)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (1,55 g, 2,56 mmol, 86 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 551.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ =7,39 - 7,28 (m, 5H), 4,31 (br dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 2H), 4,16 - 4,08 (m, 1H), 3,72 - 3,62 (m, 4H), 3,61 - 3,56 (m, 1H), 3,52 - 3,43 (m, 2H), 3,38 (br s, 1H), 3,08 (br t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,81 - 2,48 (m, 6H), 2,45 (s, 3H), 2,33 - 2,20 (m, 1H), 2,04 - 1,95 (m, 1H), 1,78 - 1,65 (m, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,17 (br d, J = 6,4 Hz, 6H).

Korak C: terc-butil (2R,5S)-2,5-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. NH3 je pušten u mehuriće u metanolu (150 mL) na -78 °C tokom 15 minuta. terc-butil (2R,5S)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d U smešu su dodati ]pirimidin-4-il]-2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat (2,80 g, 5,08 mmol, 1,00 ekv.) i Pd/C (0,50 g, 10,0 % čistoće). Posle mešanja na 40 °C tokom 5 sati pod H2 na 15 psi, smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2R,5S)-2,5-dimetil-4-[2-[[(2S) -1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,20 g, sirov) kao žuto ulje i koristi se u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 461.

Korak D: terc-butil (2R,5S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5dimetilpiperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2R,5S)-2,5-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,00 g, sirov), 3-benziloksi-1-bromo-naftalen (1,02 g, 3,26 mmol, 1,50 ekv.), RuPhos (203 mg, 434 umol), Pd2(dba)3 (199 mg, 217 umol) i Cs2CO3 (2,12 g, 6,51 mmol) u toluenu (30,0 mL) je mešan na 110 °C tokom 5 sati pod N2. Smeša je razblažena vodom (20,0 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 40,0 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 50,0 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10 %)/acetonitril]. Željena frakcija je sakupljena i podešena pH vrednost > 7 zasićenim natrijum bikarbonatom (5,00 mL), a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio tercbutil (2R,5S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2 -[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1 -karboksilat (1,06 g, 1,47 mmol, dva koraka 68 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M/2+1]: 347.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,77 -7,71 (m, 1H), 7,52 - 7,40 (m, 5H), 7,39 - 7,33 (m, 2H), 6,99 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,18 (s, 2H), 4,48 - 4,42 (m, 1H), 4,38 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,32 - 4,25 (m, 1H), 4,20 (br d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,16 - 4,09 (m, 1H), 3,76 (br s, 1H), 3,70 - 3,61 (m, 1H), 3,60 - 3,52 (m, 1H), 3,45 (br s, 2H), 3,24 (br s, 1H), 3,10 (br t, J = 7,6 Hz, 1H), 2,93 (br s, 1H), 2,80 - 2,61 (m, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,33 - 2,25 (m, 1H), 2,12 - 2,03 (m, 1H), 1,91 - 1,76 (m, 4H), 1,50 (s, 9H), 1,27 -1,22 (m, 6H).

Korak E: terc-butil (2R,5S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2R,5S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (0,90 g, 1,30 mmol, 1,00 ekv.) i Pd/C (0,10 g, 10,0 % čistoće) u metanolu (40,0 mL) je mešano na 25 °C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2R,5S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (0,72 g, sirov) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 603.

Korak F: 4-[4-[(2S,5R)-2,5-dimetilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol. Smeša tercbutil (2R,5S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (0,70 g, sirov) i TFA (1,99 g, 17,42 mmol, 1,29 mL) u dihlorometanu (1,20 mL) je mešano na 25 °C tokom 0,5 h. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-[4-[(2S,5R)-2,5-dimetilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (849 mg, sirov, 2TFA) kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 503.

Korak G: 1-[(2R,5S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 4-[4-[(2S,5R)-2,5-dimetilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]naftalen-2-ol (0,84 g, sirov, 2TFA) i TEA (1,16 g, 11,5 mmol, 1,60 mL) u dihlorometanu (3,00 mL) je bio. dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (102 mg, 805 umol) na -40 °C. Posle mešanja na -40 °C tokom 0,5 h, smeša je ugašena vodom (0,10 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % TFA)-acetonitril] i pripremnom HPLC (kolona: Phenomenek Luna Phenil-Hekil 150_30_5um; mobilna faza: [voda (10 mm NH4HCO3) - ACN]; B%: 45 % -75 %, 3 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[(2R,5S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (PRIMER 336, 55,8 mg, 94,1 umol, tri koraka 8,2 % prinosa, 93,9 % čistoće) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:557.

SFC: „Kolona: Chiralpak AS-350×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 %, Protok: 3 mL/min, talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,97 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 - 7,34 (m, 1H), 7,26 (dt, J = 1,6, 8,4 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,65 (br s, 1H), 6,61 - 6,43 (m, 1H), 6,39 - 6,26 (m, 1H), 5,73 (br t, J = 8,8 Hz, 1H), 4,83 (br s, 1H), 4,55 (br d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,43 - 4,04 (m, 4H), 3,91 (br d, J = 17,2 Hz, 1H), 3,77 - 3,26 (m, 5H), 3,19 (br t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,06 - 2,68 (m, 3H), 2,63 (br s, 3H), 2,57 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 2,41 - 2,33 (m, 1H), 2,15 -1,83 (m, 4H), 1,11 - 0,96 (m, 6H).

PRIMER 337

2-[(2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

1

Korak 1: 1-(2-bromo-6-hloro-fenil) etanol. U plamenom osušeni balon sa okruglim dnom od 100 mL opremljen magnetnom mešalicom i pod N2 dodat je 2-bromo-6-hloro-benzaldehid (10,0 g, 45,6 mmol, 1 ekv.) i THF (100 mL). Smeša je ohlađena na 0 °C, a zatim je dodat MeMgBr (3 M u Et2O, 22,8 mL, 1,5 ek) ukapavanjem tokom 20 min. Dobijena suspenzija je mešana na 0 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem u kapima zasićenog vodenog rastvora NH4CI (10 mL). Smeša je ohlađena, sipana u levak za odvajanje od 100 mL koji sadrži vodu (150 mL) i smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 150 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleter/etil acetat = 100/1 do 10/1). Jedinjenje 1-(2-bromo-6-hloro-fenil) etanol (8,00 g, 32,6 mmol, 72 % prinos, 96 % čistoća) je dobijeno kao žuto ulje. LCMS [ESI, M-17]: 219.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,46 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,31 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,07 - 6,96 (m, 1H), 5,68 - 5,44 (m, 1H), 3,24 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 1,61 (d, J = 4,4 Hz, 3H).

Korak 2: 1-bromo-3-hloro-2-etil-benzen. U smešu 1-(2-bromo-6-hlorofenil)etanola (8,00 g, 34,0 mmol, 1 ekv.) u DCE (150 mL) dodat je BF3.Et2O (14,5 g, 102 mmol, 12,6 mL, 3 ekv.) i Et3SiH (19,8 g, 170 mmol, 27,1 mL, 5 ekv.) u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na 50 °C tokom 6 sati. Reakciona smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (2 × 75 mL) i zasićenim rastvorom soli (1 × 75 mL), zatim osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je pročišćen kromatografijom silika gela (petrolejski eter). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Sinergi Mak-RP 250*50 mm*10 um;mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 65ACN% -95ACN%, 30 min; 60 % min). Jedinjenje 1-bromo-3-hloro-2-etil-benzen (1,50 g, 6,83 mmol, 20 % prinos, 100 % čistoća) je dobijeno kao žuto ulje.

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pinimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 300 mg, 636 umol, 1 ekv.), 1-bromo-3-hloro-2-etil-benzen

2

(279 mg, 1,27 mmol, 2 ekv.), Pd2(dba)3 (117 mg, 127 umol, 0,2 ek), RuPhos (89,1 mg, 191 umol, 0,3 ekv.) i Cs2CO3 (622 mg, 1,91 mmol, 3 ek) u toluenu (30 ekv.) degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 6 sati u atmosferi N2. Reakcionoj smeši je dodata H2O (1 × 200 mL) i etil acetat (1 × 250 mL). Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (1 × 200 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane na pH = 7 zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovale etil acetatom (1 × 200 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. terc-butil (2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (155 mg, 0,254 mmol, 100 % čistoće, 40 % prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 610.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,20 - 7,16 (m, 1H), 7,13 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,07 - 7,03 (m, 1H), 4,61 (br s, 1H), 4,39 (dd, J = 5,2, 10,6 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 6,8, 10,4 Hz, 1H), 4,09 - 3,95 (m, 4H), 3,91 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 3,6, 13,7 Hz, 1H), 3,22 - 2,96 (m, 5H), 2,90 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,84 -2,63 (m, 5H), 2,48 (s, 3H), 2,35 - 2,23 (m, 1H), 2,13 - 2,00 (m, 1H), 1,83 - 1,70 (m, 3H), 1,52 (s, 9H), 1,22 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (310 mg, 508 umol, 1 ekv.) u DCM (600 uL) je dodat TFA (869 mg, 7,62 mmol, 564 uL, 15 ekv.) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. Nakon toga, smeša je koncentrovana pod vakuumom.2-[(2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (850 mg, sirov, 2 TFA) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 510.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (850 mg, sirov, 2 TFA) i prop-2-enoil hlorid (59,8 mg, 660 umol, 53,8 uL) u DCM (8 mL) dodat je TEA (514 mg, 5,08 mmol, 707 uL) u porcijama. Smeša je mešana na -40 °C 30 min. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (2 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3; Etil acetat/metanol = 20/1 do 3/1). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,04 % NH3•H2O) - ACN]; B%: 65 % - 95 %, 10 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-hloro-2-etil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 337, 142 mg, 252 umol, dva koraka 50 % prinos, 100 % čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 564.

SFC stanje: „Kolona: Chiralpak AD-3100×4,6 mm I.D., 3 um, Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 %, Protok: 3 mL/min, talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ = 7,21 (s, 3H), 6,78 (dd, J = 10,4, 16,8 Hz, 1H), 6,15 (dd, J = 2,0, 16,8 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,0, 10,6 Hz, 1H), 4,84 (br s, 1H), 4,28 (dd, J = 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,23 - 4,07 (m, 2H), 4,05 - 3,90 (m, 4H), 3,39 (br s, 1H), 3,27 (br dd, J = 3,6, 13,6 Hz, 1H), 3,20 - 3,05 (m, 3H), 2,99 - 2,93 (m, 2H), 2,93 - 2,76 (m, 4H), 2,61 - 2,52 (m, 2H), 2,40 - 2,31 (m, 3H), 2,22 (q, J = 8,4 Hz, 1H), 2,00 - 1,87 (m, 1H), 1,77 - 1,54 (m, 3H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

PRIMER 338

4

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(8-fluoronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Umetanje: 1-bromo-8-fluoro-naftalen. U rastvor 1,8-dibromonaftalena (2 g, 6,99 mmol, 1 ekv.) u THF (50 mL) dodat je n-BuLi (2,5 M u heksanu, 4,20 mL, 1,5 ekv.) na -78 °C u kapima. Posle mešanja tokom 10 minuta na -78 °C, u kapima je dodat rastvor N-(benzensulfonil)-N-fluoro-benzensulfonamida (4,41 g, 13,9 mmol, 2 ekv.) u THF (10 mL). Smeša je zagrejana do 25 °C i mešana 3 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Sinergi Mak-RP 250*50 mm*10 um; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 50 % - 75 %, 25 min). Smeši je podešen pH = 7 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom.1-bromo-8-fluoro-naftalen (560 mg, 2,46 mmol, 35 % prinos, 99 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,81 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,31 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,23 (td, J = 0,8, 5,2 Hz, 1H).

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil]pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša 1-bromo-8-fluoro-naftalena (310 mg, 1,38 mmol, 1,3 ekv.), terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi] -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 500 mg, 1,06 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3 (863 mg, 2,65 mmol, 2,5 ek), RuPhos (98,9 mg, 212 umol, 0,2 ek) i Pd2(dba)3 (194 mg, 212 umol, 0,2 ek) u toluenu (10 mL) je degazirano sa N2 i prečišćeno 3 puta, a zatim je smeša mešana na 100 °C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. Željene frakcije su podešene na pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (370 mg, 570 umol, 54 % prinos, 95 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,64 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,56 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47 - 7,42 (m, 1H), 7,20 - 7,08 (m, 3H), 4,64 (br s, 1H), 4,47 -4,27 (m, 2H), 4,23 - 4,14 (m, 2H), 4,11 - 3,82 (m, 3H), 3,81 - 3,65 (m, 1H), 3,44 -3,23 (m, 2H), 3,19 - 3,07 (m, 2H), 3,02 - 2,79 (m, 3H), 2,77 - 2,66 (m, 2H), 2,56 (br s, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,34-2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 1,82 - 1,72 (m, 3H), 1,53 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (370 mg, 600 umol, 1 ekv.) u DCM (600 uL) je dodat TFA (1,03 g, 9,01 mmol, 667 uL, 15 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (378 mg, 600 umol, 99 % prinos, TFA) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (261 mg, 506 umol, 1 ek, TFA) u DCM (5 mL) je dodat TEA (512 mg, 5,07 mmol, 705 uL, 10 ekv.) na 0 °C. Posle dodavanja, prop-2-enoil prop-2-enoat (51,1 mg, 405 umol, 0,8 ek) u DCM (1 mL) je dodat u kapima na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 mm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 48 % - 78 %, 12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-fluoro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 338, 93,5 mg, 163 umol, 32 % prinos, 99,4 % čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

SFC stanje: „OD-3_MeOH (DEA)_40_3 ml-35T Kolona: Chiralcel OD-3 50 × 4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: 40 % metanol (0,05 % DEA) u CO2 Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,47 - 7,35 (m, 2H), 7,19-7,09 (m, 2H), 6,60 (br s, 1H), 6,40 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,83 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,30 - 4,48 (m, 1H), 4,46 - 4,28 (m, 2H), 4,27 - 3,85 (m, 5H), 3,73 (br s, 1H), 3,56 - 2,54 (m, 10H), 2,49 (s, 3H), 2,37 -2,21 (m, 1H), 2,12 - 1,97 (m, 1H), 1,95 - 1,79 (m, 3H).

PRIMER 339

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilat. U rastvor NaH (1,19 g, 49,6 mmol, 2,0 ekv.) u THF (50,0 mL) dodat je rastvor tercbutil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (5,00 g, 24,8 mmol, 1,0 ek) u THF (50,0 mL) na 0 °C i smeša je mešana na 10 °C tokom 1 sata.

Bromometilbenzen (6,38 g, 37,3 mmol, 4,43 mL, 1,50 ek) je dodat u kapima u gornju smešu na 0 °C i smeša je mešana na 10 °C tokom 16 sati. Nakon završetka, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (20,0 mL) i razblažena etil acetatom (50,0 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 30,0 mL) i osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar:etil acetat =10:1 - 3:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilat (6,60 g, 10,4 mmol, 42 % prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,44 - 7,26 (m, 5H), 4,53 (s, 2H), 4,00 - 3,85 (m, 1H), 3,61 - 3,39 (m, 2H), 3,38 - 3,33 (m, 2H), 2,04 - 1,77 (m, 4H), 1,50 -1,36 (m, 9H).

Korak B: (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin. U rastvor terc-butil (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin-1-karboksilata (6,60 g, 22,7 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (23,0 mL) dodata je TFA (34,7 g, 304 mmol, 22,5 mL, 13,4 ek) kap po kap na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidin (10,0 g, sirov, TFA) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 192.

Korak C: (2s)-2-(benzyloksimetil)-1-etilpirolidin. U rastvor (2S)-2-(benziloksimetil)pirolidina (2,0 g, 6,55 mmol, 1,0 ekv., TFA) i acetaldehida (1,44 g, 32,8 mmol, 1,84 mL, 5,0 ekv.) u MeOH (30,0 mL) dodat je (787 mg, 13,1 mmol, 749 uL, 2,0 ekv.) i NaBH3CN (1,65 g, 26,2 mmol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, pH je podešen na 3 sa 1 M vodenim rastvorom HCl (15,0 mL) i koncentrovan pod vakuumom da bi se uklonio MeOH. Smeša je ekstrahovana mešanim rastvaračem (PE/EA = 10:1, 2 × 60,0 mL).

Vodena faza je podešena na pH ~ 9 sa zasićenim vodenim rastvorom Na2C03 (10,0 mL) i ekstrahovana sa mešanim rastvaračem (EA/MeOH = 10:1, 4 × 60,0 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen flešom reverzne faze (0,1 % TFA stanje) da bi se dobio (2S)-2-(benziloksimetil)-1-etilpirolidin (707 mg, 3,18 mmol, 49 % prinos, 99,0 % čistoća) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,36 - 7,31 (m, 4H), 7,31 - 7,26 (m, 1H), 4,58 - 4,54 (s, 2H), 3,52 (dd, J = 4,8, 9,2 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 6,4, 9,2 Hz, 1H), 3,20 - 3,12 (m, 1H), 3,01 - 2,89 (m, 1H), 2,66 - 2,58 (m, 1H), 2,35 - 2,25 (m, 1H), 2,21 - 2,05 (m, 1H), 2,03 - 1,87 (m, 1H), 1,83 - 1,62 (m, 3H), 1,11 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Korak D: [(2s)-1-etilpirolidin-2-il]metanol. U rastvor (2S)-2-(benziloksimetil)-1-etil-pirolidina (860 mg, 3,92 mmol, 1,00 ek) u MeOH (3,00 mL) dodat je HCl•MeOH (4 M, 0,80 mL) i Pd(OH)2/C (300 mg, 20 % čistoće).

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta.

Smeša je mešana pod H2 (50 Psi) na 25 °C tokom 16 sati. Nakon završetka, smeša je filtrirana i koncentrovana. Proizvod [(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metanol (460 mg, 3,56 mmol, 91 % prinos) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 130.

Korak E: terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (400 mg, 668 umol, 1,0 ekv.) i [(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metanol (173 mg, 1,34 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (8,0 mL) je dodat t-BuONa (128 mg, 1,34 mmol, 2,0 ekv.) na 0 °C, reakcija je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (30,0 mL), zatim ekstrahovana sa EA (2 × 20,0 mL), kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 30,0 mL), zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=5/1 do etil acetat/metanol=20/1) da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2- (cijanometil)pipenazin-1-karboksilat (240 mg, 353 umol, 53 % prinos, 97,6 % čistoća) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 664.

Korak F: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etliilpinrolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (240 mg, 361 umol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodata TFA (3,08 g, 27,0 mmol, 2,0 mL, 74,8 ekv.), smeša je mešana na 20 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (280 mg, sirov, 2TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeće korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 564.

Korak G: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etil]pirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (280 mg, 496 umol, 1,0 ek, 2TFA) u DCM (5,0 mL) je dodat DIEA (642 mg, 4,96 mmol, 865 uL, 10,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (62,6 mg, 496 umol, 1,0 ekv.) na 0 °C, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (5,0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, etil acetat/metanol=20/1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC ((kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 55 %-85 %, 12 min), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-etilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 339, 31,9 mg, 50,2 umol, 10 % prinos, 97,2 % čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 618.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,37 - 7,29 (m, 1H), 7,23 - 7,18 (m, 1H), 7,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,58 - 6,46 (m, 1H), 6,32 (dd, J = 0,8, 16,4 Hz, 1H), 5,76 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,11 - 4,37 (m, 1H), 4,28 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,09 - 3,96 (m, 4H), 3,89 (br d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,69 - 3,41 (m, 1H), 3,33 - 2,51

1

(m, 12H), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,20 - 2,11 (m, 1H), 2,00 - 1,80 (m, 3H), 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

PRIMER 340

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(4-metoksipiridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (580 mg, 1,23 mmol, 1,0 ekv.), 3-bromo-4-metoksi-piridin (694 mg, 3,69 mmol, 3,0 ekv.), Pd2(dba) 3 (113 mg, 123 umol, 0,1 ekv.), RuPhos (115 mg, 246 umol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (1,20 g, 3,69 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (25,0 mL) je degazirano sa N2 puta., a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 6 sati u atmosferi N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom i ispran vodom

2

(20,0 mL). Vodena faza je ekstrahirana etil acetatom (2 × 30,0 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (100 mL), osušeni preko Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom [C18, 0,1 % FA u vodi, 0-70 % MeCN]. Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim vodenim NaHCO3 na pH~8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 50,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 397 umol, 32 % prinos, 100 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 579.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 605 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (3,0 mL) je dodat 4M HCl/dioksan (5,0 mL), smeša je mešana na 20 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana, zatim ekstrahovana sa DCM (10,0 mL), organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (2 × 10,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo 2-[(2S)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (260 mg, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 479.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (260 mg, 543 umol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) je dodat TEA (220 mg, 2,17 mmol, 302 uL, 4,0 ekv.) i prop-2-enoil hlorida (63,9 mg, 706 umol, 57,6 uL, 1,3 ekv.) na -60 °C, reakciona smeša je mešana na -60 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (2,0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petroleum eter: Etil acetat=3:1 do Etil acetat/Metanol=20/1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda

(0,04 %NH3H2O)-ACN]; B%: 30 %-54 %,10 min), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(4-metoksi-3-piridil)-2-[[(2S))-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il] acetonitril (Primer 340, 83,6 mg, 155 umol, 29 % prinos, 98,8 % čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 533.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 8,25 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,17 (s, 1H), 6,82 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 1,2, 16,8 Hz, 1H), 6,44 - 6,33 (m, 1H), 5,82 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,21 - 4,52 (m, 1H), 4,37 (dd, J = 4,8 Hz, 10,4 Hz, 1H), 4,33 - 4,26 (m, 1H), 4,24 - 4,13 (m, 2H), 4,06 (br d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,02 -3,88 (m, 5H), 3,72 - 3,37 (m, 2H), 3,36 - 3,23 (m, 2H), 3,16 - 3,02 (m, 2H), 2,98 -2,88 (m, 1H), 2,87 - 2,72 (m, 3H), 2,70 - 2,60 (m, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,33 - 2,27 (m, 1H), 2,10 - 1,99 (m, 1H), 1,91 - 1,69 (m, 3H).

PRIMER 341

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,

6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metanol. U smešu [(2S)-pirolidin-2-il]metanola (500 mg, 4,94 mmol, 481 uL, 1 ekv.) i 2-bromoetoksiterc-butil-dimetil-silana (1,30 g, 5,44 mmol, 1,1 ekv.) u MeCN (30 mL) dodat je K2CO3 (3,42 g, 24,7 mmol, 5 ekv.) u porcijama pod N2. Mešavina je mešana na 50 °C 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, Etil acetat/Metanol = 100/1 do 5/1). Jedinjenje [(2S)-1-[2-[tercbutil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metanol (437 mg, 1,68 mmol, 34,0 % prinos) je dobijeno kao smeđe ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,71 (dd, J = 5,2, 6,4 Hz, 2H), 3,63 - 3,58 (m, 1H), 3,37 (dd, J = 3,2, 10,8 Hz, 1H), 3,21 (td, J = 4,8, 10,0 Hz, 1H), 2,90 (td, J = 6,4, 12,8 Hz, 1H), 2,74 - 2,67 (m, 1H), 2,52 (td, J = 5,2, 10,4 Hz, 1H), 2,41 - 2,31 (m, 1H), 1,97 - 1,80 (m, 1H), 1,79 - 1,55 (m, 3H), 0,92 - 0,87 (m, 9H), 0,11 -0,00 (m, 6H).

Korak A: benzil (2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[tercbutil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu [(2S)-1-[2-[tercbutil(dimetil)silil]oksietil] pirolidin-2-il]metanola (447 mg, 1,72 mmol, 2 ekv.) u toluenu (35 mL) je dodat t-BuONa (248 mg, 2,58 mmol, 3 ekv.) u porcijama, zatim je u rastvor dodat benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 500 mg, 861 umol, 1 ekv.) na 0 °C. Smeša je zagrejana na 25 °C i mešana 1 sat. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom 20 mL i podešena pH na 8-9 sa 2M HCl na 0 °C, zatim ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (15 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 100/1 do 1/2). Jedinjenje benzil (2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)- Dobijen je 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (400 mg, 494 umola, prinos 57,4 %, čistoća 95,8 %). kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 776.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril.

U rastvor benzil (2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil (dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (380 mg, 490 umol, 1 ekv.) u MeOH (30 mL) je dodat Pd/C (230 mg, 490 umol, 10 % čistoće, 1,00 ek) i NH3•MeOH (25 mL). Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (314 mg, 489 umol, 99,9 % prinos) je dobijen kao žuto ulje i korišćen direktno u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 642.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (314 mg, 489 umol, 1 ekv.) u DCM (15 mL) je dodat TEA (148 mg, 1,47 mmol, 204 uL, 3 ekv.) i prop-2-enoil hlorid (57,6 mg, 636 umol, 51,9 uL, 1,3 ek) u porcijama na -40 °C pod N2. Smeša je mešana na -40 °C 30 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO33 mL na -40 °C, a zatim ekstrahovana sa DCM (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 100/1 do 1/3). Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil)silil] oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (210 mg, 300 umol, 61,4 % prinos 99,5 % čistoće) je dobijeno kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 696.

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[terc-butil(dimetil) silil]oksietil]pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (205 mg, 295 umol, 1 ekv.) u THF (3 mL) je dodat KF (171 mg, 2,95 mmol, 69,0 uL, 10 ekv.) i 18-kraun-6 (779 mg,

2,95 mmol, 10 ekv.) u porcijama. Smeša je mešana na 40 °C tokom 2 sata.

Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 45 % - 75 %, 12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 341, 43,4 mg, 71,6 umol, 24,3 % prinos, 95,9 % čistoće) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 582.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,24 - 8,18 (m, 1H), 7,89 - 7,83 (m, 1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,60 (br s, 1H), 6,40 (dd, J = 1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,84 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,11 (br s, 1H), 4,36 - 4,22 (m, 3H), 4,16 (dd, J = 6,8, 10,4 Hz, 2H), 4,01 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,72 - 3,55 (m, 3H), 3,53 - 3,26 (m, 3H), 3,24 - 2,68 (m, 10H), 2,62 (td, J = 4,0, 12,5 Hz, 1H), 2,39 - 2,28 (m, 1H), 2,07 - 1,96 (m, 1H), 1,90 - 1,75 (m, 3H).

PRIMER 342

2-[(2S)-1-[(E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S),4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -7-karboksilat (3,00 g, 5,57 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu (30,0 mL) je dodat HCl/dioksan (4,00 M, 30,0 mL, 21,6 ek) na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen vodom (4,00 mL), podešen pH > 8 zasićenim natrijum bikarbonatom (10,0 mL) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 30,0 mL). Ekstrakti su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, metanol/etil acetat = 10/1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (2,10 g, 4,02 mmol, 72 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 439.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,46 - 7,30 (m, 5H), 5,25 - 5,14 (m, 2H), 4,66 (br s, 1H), 4,14 - 4,05 (m, 1H), 4,04 - 3,90 (m, 3H), 3,84 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,26 (br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,12 (td, J = 5,2, 12,4 Hz, 1H), 3,05 -2,91 (m, 2H), 2,79 (br s, 1H), 2,74 - 2,56 (m, 3H), 2,49 (s, 3H).

Korak B: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (2,00 g, 4,56 mmol, 1,00 ekv.), 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen (1,66 g, 6,84 mmol, 1,50 ekv.), Pd2(dba)3 (418 mg, 456 umol, 0,10 ekv.), RuPhos (426 mg, 912 umol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (2,97 g, 9,12 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (30,0 mL) su mešani na 90 °C tokom 5 sati.

Smeša je razblažena vodom (20,0 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 30,0 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 40,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10 %)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i podešen pH > 7 zasićenim natrijum bikarbonatom (5,00 mL), ekstrahovan etil acetatom (3 × 30,0 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (2,00 g,

2,90 mmol, 64 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 601.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,53 - 7,44 (m, 1H), 7,43 - 7,29 (m, 5H), 7,07 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,00 - 6,91 (m, 1H), 5,26 - 5,13 (m, 2H), 4,69 (br s, 1H), 4,16 - 4,10 (m, 3H), 4,04 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,87 (br d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,39 - 3,22 (m, 3H), 3,19 - 3,09 (m, 1H), 3,04 (dt, J = 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,83 (br s, 2H), 2,76 - 2,67 (m, 2H), 2,51 (s, 3H).

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,90 g, 3,16 mmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (50,0 mL) je dodat m-CPBA (610 mg, 3,01 mmol, 85 % čistoće, 0,95 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, smeša je razblažena vodom (30,0 mL), podešen pH > 7 zasićenim natrijum bikarbonatom (10,0 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (3 × 20,0 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 40,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 1/3) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil] -2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,20 g, 1,73 mmol, 55 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 617.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,55 - 7,47 (m, 1H), 7,44 - 7,33 (m, 5H), 7,08 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,03 - 6,94 (m, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,68 (br s, 1H), 4,31 - 4,09 (m, 4H), 4,02 (br d, 12,0 Hz, 1H), 3,46 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,40 -3,09 (m, 4H), 2,90 (br d, J = 2,8 Hz, 6H), 2,74 - 2,64 (m, 1H).

Korak D: benzil (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro-2 -(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido(3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (145 mg, 392 umol, 1,10 ekv.) u THF (5,00 mL)) je dodat t-BuONa (68,6 mg, 714 umol, 2,00 ekv.) na 0 °C. Zatim benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,22 g, 357 umol, 1,00 ekv.) je dodat u smešu. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, smeša je razblažena etil acetatom (10,0 mL) i vodom (10,0 mL), a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 20,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat = 1/3) da bi se dobio benzil (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil ]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,18 g, 185 umol, 52 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M/2+1]: 462.

Korak E: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro -2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u metanolu (30,0 mL) na -78 °C tokom 15 minuta. benzil (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tercbutil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro -2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,18 g, 195 umol, 1,00 ek) i Pd/C (0,10 g, 10 % čistoće) je dodat u smešu. Posle

1

mešanja na 40 °C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi, katalizator je filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tertbutil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,13 g, sirov) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M/2+1]: 395.

Korak F: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro -2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil] piperazin-2-il]acetonitril. Smeša (E)-4-brombut-2-enske kiseline (0,50 g, 3,03 mmol, 1,00 ekv.) i oksalil dihlorida (3,85 g, 30,31 mmol, 2,65 mL, 10,0 ekv.) u dihlorometanu je mešana na 5 mm 0 °C tokom 0,5 h i 40 °C tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Gore navedeni talog (93,0 mg, sirov) je dodat u smešu 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1- metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2 -il]acetonitril (80,0 mg, sirov) i Pi (80,3 mg, 1,02 mmol, 82,0 uL) u dihlorometanu (0,50 mL) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, dodat je N-metilmetanamin (69,4 mg, 508 umol, 77,9 uL) i smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata. Zatim je smeša koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom obrnute faze [voda (TFA, 0,10 %)]. Željene frakcije su podešene na pH > 7 zasićenim natrijum bikarbonatom (1 × 5,00 mL) i ekstrahovale sa etil acetatom (3 × 10,0 mL). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-butil (difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (0,06 g, 48,05 umol, dva koraka 65 % prinos) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 899.

Korak G: 2-[(2S)-1-[(E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S),4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. Smeša 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[terc-butil(difenil)silil]oksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7 -[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(dimetilamino) ali -2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (0,06 g, 66,7 umol, 1,00 ekv.), KF (38,8 mg, 667 umol, 15,6 uL, 10,0 ekv.) i 18-kraun-6 (176 umol, 610,0 ek) u THF (0,10 mL)

2

je mešano na 40 °C tokom 12 sati. Smeša je koncentrovana pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10 %/acetonitril)] i prep-HPLC kolonom: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 30 % - 60 %, 12 min. Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]-4-[7-[3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil] -2-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 342, 4,60 mg, 6,91 umol, 10 % prinos, 99,2 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:661.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,52 - 7,44 (m, 1H), 7,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,00 - 6,90 (m, 2H), 6,46 (br d, J = 15,2 Hz, 1H), 5,07 (br s, 1H), 4,50 - 4,42 (m, 1H), 4,36 (dd, J = 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 5,6, 10,8 Hz, 1H), 4,16 - 4,06 (m, 3H), 3,96 (br d, J = 11,6 Hz, 2H), 3,60 (br s, 1H), 3,43 (dd, J = 6,0, 10,0 Hz, 1H), 3,39 - 3,23 (m, 2H), 3,20 - 3,05 (m, 4H), 3,05 - 2,79 (m, 4H), 2,78 -2,62 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,35 - 2,26 (m, 7H), 2,12 - 1,92 (m, 2H).

PRIMER 343

(S)-7-(2,3-dimetilfenil)-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(4-(vinilsulfonil)piperazin-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin

Korak A: 7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor terc-butil 4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 652 umol, 1,0 ek) u dioksanu (3,0 mL) je dodat 4M HCl/dioksan (5,0 mL), smeša je mešana na 20° C 0,5 sata. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana, zatim je dodat DCM (10,0 mL), organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (2 × 10,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo 7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (280 mg, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 437.

Korak B: 7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-vinilsulfonilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U smešu 7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin (280 mg, 641 umol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) je dodat TEA (195 mg, 1,92 mmol, 268 uL, 3,0 ek) i etensulfonil hlorid (122 umol, 966) 1,5 ek) na -60 °C, reakciona smeša je mešana na -60 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (1,0 mL) i koncentrovana.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petroleum eter: Etil acetat=3:1~Etil acetat/Metanol=20/1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 62 %-92 %,12min), dobijeni proizvod je koncentrovan, a zatim pod liofilizacijom.

Naslovljeno jedinjenje 7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-vinilsulfonilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin (PRIMER 343, 98,2 mg, 185 umol, 29 % prinos, 99,3 % čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 527.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,00 - 6,94 (m, 2H), 6,47 (dd, J = 10,0 Hz, 16,8 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 6,8, 10,4 Hz, 111), 4,03 (s, 2II), 3,62 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,30 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,19 - 3,05 (m, 3H), 2,80 -2,62 (m, 3H), 2,49 (s, 3H), 2,32 - 2,25 (m, 7H), 2,13 - 2,00 (m, 1H), 1,92 - 1,72 (m, 3H).

4

PRIMER 344

2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor ((2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (101 mg, 874 umol, 1,2 ekv.) u toluenu (15 mL) dodat je t-BuONa (140 mg, 1,46 mmol, 2 ekv.) na 0 °C ispod 10 minuta. Zatim je u smešu dodat rastvor benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 500 mg, 728 umol, 1 ekv.) u toluenu (10 mL) kap po kap na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, reakciona smeša je razblažena sa H20 (1 × 7 mL) i etil acetatom (1 × 25 mL). Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3; Petroleum eter/etil acetat = 10/1 do 0/1). Jedinjenje benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (390 mg, 489 umol, 67 % prinos, 92,6 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 738.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,46 - 7,34 (m, 10H), 7,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,24 - 5,15 (m, 4H), 4,70 (br s, 1H), 4,39 (dd, J = 4,8, 10,7 Hz, 1H), 4,33 - 4,22 (m, 2H), 4,20 - 4,11 (m, 3H), 3,93 (br d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,56 - 3,19 (m, 4H), 3,14 - 2,61 (m, 7H), 2,48 (s, 3H), 2,34 - 2,23 (m, 1H), 2,11 -2,06 (m, 1H), 1,84 - 1,69 (m, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten da peni u MeOH (100 mL) na -60 °C tokom 20 minuta. U rastvor benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (360 mg, 488 umol, 1 ekv.) u MeOH (25 mL) je dodat Pd/C (300 mg, 10 % čistoće) i gornji rastvor (NH3•MeOH, 25 mL) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C 1 sat. Katalizator je filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 514.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro Dodat je -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, sirov) i TEA (453 mg, 4,48 mmol, 623 uL) u DCM (8 mL) prop-2-enoil hlorid (40,5 mg, 448 umol, 36,5 uL) u porcijama na -40 °C. Smeša je mešana na -40 °C 30 min. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (2 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 30 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3; Etil acetat/metanol = 20/1 do 3/1). Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 38 % - 68 %, 12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 344, 25,6 mg, 44,8 umol, dva koraka 9,2 % prinos, 99,5 % čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 568.

SFC stanje: „AS-3_MeOH (DEA) _5_40_3 mL-35T Kolona: Chiralpak AS-3 50×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, sirćetna) δ = 8,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,29 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,90 -6,68 (m, 2H), 6,38 (br d, J = 17,6 Hz, 1H), 5,87 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,17 (br s, 1H), 4,82 (br s, 2H), 4,59 (br s, 1H), 4,45 - 4,25 (m, 3H), 4,21 - 3,61 (m, 4H), 3,60 -3,19 (m, 5H), 3,17 - 2,83 (m, 7H), 2,45 - 2,31 (m, 1H), 2,23 - 2,10 (m, 3H).

PRIMER 345

2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,48 mmol, 1,0 ekv.), 4-hloro-3-metil-piridin (379 mg, 2,97 mmol, 2,0 ekv.), Pd2(dba) 3 (204 mg, 223 umol, 0,15 ekv.), RuPhos (139 mg, 297 umol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (1,45 g, 4,45 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (10,0 mL) je degazirano sa N2 i prečišćeno je puta., a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom, i ispran vodom (15,0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 25,0 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (60,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom [C18, 0,1 % FA u vodi, 0-45 % MeCN]. Dobijeni proizvod je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 na pH~8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etilacetatom (3 × 50,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (270 mg, 475 umol, 32 % prinos, 99,0 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:563.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 355 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (3,0 mL) je dodat HCl·dioksan (4 M, 3,0 mL, 33,8 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min u atmosferi N2.

Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim vodenim NaHCO3 na pH~8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 15,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (125 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]:463.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (125 mg, sirov) u DCM (3,0 mL) je dodat TEA (137 mg, 1,35 mmol, 188 uL) i prop-2-enoil hlorid (36,7 mg, 405 umol, 33,1 uL) na -60 °C. Smeša je mešana na -60 °C 30 min. Reakcija je ugašena metanolom (10,0 mL) i smeša je uklonjena pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 32 %-62 %,12min) i liofilizacija. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 345, 25,3 mg, 48,4 umol, 18 % prinos, 99 % čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:517.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,33 - 8,29 (m, 2H), 6,83 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,65 - 6,50 (m, 1H), 6,38 (dd, J = 1,6 Hz, J = 16,8 Hz,1H), 5,82 (d, J = 10,8 Hz 1H), 5,41 (br s, 1H), 4,36 (dd, J = 4,8 Hz, J = 10,4 Hz,1H), 4,20 - 4,06 (m, 4H), 4,97 (br d, J = 11,6 Hz 2H),3,68 -- 3,45 (m, 1H), 3,40 - 3,31 (m, 2H),3,26 -3,15 (m, 1H),3,15 - 3,03 (m, 2H), 2,97 - 2,60 (m, 5H), 2,31 (s, 3H), 2,29 -2,21 (m, 3H) 2,15 - 2,10 (m, 1H), 2,09 - 2,00 (m, 1H) 1,88 - 1,70 (m, 3H).

PRIMER 346

2-[4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: U rastvor (E)-4-bromobut-2-enske kiseline (1,0 g, 6,06 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) dodat je (COCl)2 (8,70 g, 68,5 mmol, 6 mL, 11,3 ekv.). Smeša je mešana na 60 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Sirovi proizvod (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (1,3 g, sirov) je dobijen kao žuta tečnost i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,30 g, 2,17 mmol, 1,0 ekv.) i [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (500 mg, 4,34 mmol, 515 uL, 2,0 ekv.) u toluenu (20,0 mL) je dodat t-BuONa (417 mg, 4,34 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C 10 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog rastvora soli (30 mL) na 20 °C i ekstrahovana sa EA (3 × 30,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (30,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=3/1 do EA/MeOH = 10/1). Proizvod terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,10 g, 1,62 mmol, 75 % prinosa, 96 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 650.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-([(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 308 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (2,0 mL) je dodat HCl /dioksan (4 M, 2,0 mL, 26,0 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min u atmosferi N2. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim vodenim NaHCO3 na pH~8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 20,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (130 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]:551.

1

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 1812 umol, 1,0 ekv.) i PIRIDIN (115 mg, 1,45 mmol, 117 uL, 8. ek) u DCM (3,0 mL) je dodat (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (133 mg, 727 umol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon što je početni materijal utrošen, morfolin (79,2 mg, 909 umol, 80,0 uL, 5,0 ekv.) je dodat u gornju smešu i mešan na 0 °C tokom 3,5 sata. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim vodenim NaHCO3 na pH~8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 15,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 346, 21,7 mg, 30,6 umol, 16,9 % prinosa, 99 % čistoće) je dobijena kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 703.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,40 (t, J = 8,0 Hz, J = 8,0 Hz 1H), 7,28 (s, 1H), 7,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,00 - 6,93(m, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,57 - 6,40 (m, 1H), 5,18 - 5,03 (m, 1H), 4,38 (dd, J = 4,8 Hz, J = 10,4 Hz,1H), 4,16 (d d, J = 6,8 Hz, J = 10,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,04 (m, 3H), 4.04 - 3,88 (m, 2H), 3,74 (t, J = 4,4 Hz, J = 4,8 Hz, 4H), 3,52 (br s, 1H), 3,41 - 3,23 (m, 2H), 3,18 (d, J = 5,6 Hz, 3H), 3,12 - 3,08 (m, 2H),2,95 - 2,85 (m, 2H), 2,30 - 2,15 (m, 3H), 2,55 - 2,45 (m, 7H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,13 - 2,00 (m, 1H), 1,90 - 1,75 (m, 3H).

PRIMER 347

2

2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-pirolidin-1-ilbut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: (E)-4-bromono-2-enoil hlorid. Rastvor (E)-4-brombut-2-enske kiseline (1,00 g, 6,06 mmol, 1,00 ekv.) u (COCl)2 (14,5 g, 114 mmol, 10,0 mL, 18,9 ekv.) i DCM (10,0 mL) je mešano na 70 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (1,00 g, sirov) je dobijen kao žuto ulje. Sirovo jedinjenje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,08 mmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (5,0 mL) je dodat HCl • dioksan (4 M, 7,0 mL, 26,0 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana i podešena sa zasićenim NaHCO3 u vodi na pH~7, zatim ekstrahovana sa EA (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, 669 umol, 62 % prinos, 92 % čistoća) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 550.

Korak B: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1 -metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 364 umol, 1,00 ekv.) i piridin (230 mg, 2,91 mmol, 235 uL, 80. ek) u DCM (2,0 mL) je dodat (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (267 mg, 1,45 mmol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa DCM (10,0 mL × 2). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S) -1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov) je dobijen kao smeđe ulje.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-pirolidin-1-ilbut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor pirolidina (306 mg, 4,30 mmol, 359 uL, 10,0 ekv.), dodat je K2CO3 (297 mg, 2,15 mmol, 5,0 ekv.) i KI (21,4 mg, 129 umol, 0,30 ekv.) u THF (0,30 ekv.) 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-

4

enoil]-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1 -metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, 430 umol, 1,0 ekv.) u porcije na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, u smešu je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa DCM (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini C1825*50 mm*10 um; mobilna faza: [voda(10 mm NH4HCO3)-ACN]; B%: 70 %-100 %,3 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-pirolidin-1-ilbut-2-enoil]piperazin- 2-il]acetonitril (PRIMER 347, 17,1 mg, 24,5 umol, dva koraka 7 % prinosa, 99 % čistoće) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 687.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,41 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,06 - 6,95 (m, 1H), 6,47 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 5,20 - 4,60 (m, 1H), 4,39 (dd, J = 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,22 - 4,07 (m, 4H), 3,97 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,42 - 3,23 (m, 3H), 3,21 - 3,04 (m, 3H), 2,96 - 2,86 (m, 2H), 2,79 - 2,64 (m, 5H), 2,62 - 2,54 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,35 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,01 (m, 1H), 1,83 - 1,70 (m, 7H).

PRIMER 348

2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Umetak: terc-butil (2R)-2-[(1R)-1-hidroksietil]pirolidin-1-karboksilat. Smeša BH3•Me2S (10 M u DMS, 610 uL, 1,3 ekv.) i (3aS)-1-metil-3,3-difenil-3a,4,5,6-tetrahidropirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborol (1 M u toluenu, 938 uL, 0,2 ekv.) u THF (10 mL) je mešan na 25 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat rastvor terc-butil (2R)-2-acetilpirolidin-1-karboksilata (1,00 g, 4,69 mmol, 1 ekv.) u THF (10 mL) i smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Smeša je ugašena sa MeOH (4 mL), koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, PE/EtOAC = 50/1 do 5/1). terc-butil (2R)-2-((1R)-1-hidroksietil]pirolidin-1-karboksilat (690 mg, 3,21 mmol, 68 % prinos) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 5,19 (br s, 1H), 3,79 - 3,59 (m, 2H), 3,49 (br s, 1H), 3,35 - 3,18 (m, 1H), 2,04 - 1,90 (m, 1H), 1,88 - 1,68 (m, 3H), 1,47 (d, J = 0,8 Hz, 9H), 1,20 - 1,11 (m, 3H).

Korak A: benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-1[(1R)-1-[(2R)-1-tercbutoksikarbonilpirolidin-2-il]etoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2R)-2-[(1R)-1-hidroksietil]pirolidin-1-karboksilata (263 mg, 1,22 mmol, 1,2 ek) u toluenu (15 mL) dodat je t-BuONa (196). mg, 2,04 mmol, 2 ekv.) na 0 °C tokom 10 minuta. U smešu je dodat benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,02 mmol, 1 ekv.) u toluenu (15 mL) kap po kap na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 h, reakcionoj smeši je dodata H20 (1×7 mL) i etil acetat (1×35 mL).

Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane na pH = 7 zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (1 × 100 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-tercbutoksikarbonilpirolidin-2-il]etoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (470 mg, 536 umol, 53 % prinos, 95,6 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 838.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53 - 7,48 (m, 2H), 7,46 - 7,31 (m, 10H), 7,00 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,78 - 5,44 (m, 1H), 5,30 - 5,08 (m, 4H), 4,70 (br s, 1H), 4,35 - 4,20 (m, 3H), 4,08 - 3,79 (m, 2H), 3,72 - 3,13 (m, 7H), 3,12 - 2,64 (m, 4H), 2,01 - 1,71 (m, 5H), 1,46 (s, 9H), 1,26 - 1,23 (m, 3H).

Korak B: benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-pirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (450 mg, 537 umol, 1 ekv.) u DCM (600 uL) dodata je TFA (918 mg, 8,05 mmol, 596 uL, 15 ekv.) na 0 °C u atmosferi azota. Smeša je mešana na 25 °C 1 sat. Zatim je smeša koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-pirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (700 mg, sirov, TFA) je dobijen kao žuto ulje.

Korak C: benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-pirolidin-2-il]etoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (650 mg, 763 umol, 1 ekv., TFA), formaldehid (310 mg, 3,81 mmol, 284 uL, 5 ekv., 37 % u vodi) i AcOH (45,8 mg, 763 umol, 43,6 uL, 1 ek) u MeOH (15 mL) je mešano na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat NaBH3CN (120 mg, 1,91 mmol, 2,5 ekv.) i smeša je mešana na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je ugašena sa H20 (10 mL) na 0 °C, zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 15 mL), isprana slanim rastvorom (1 × 15 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane do pH = 7 zasićenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovale etil acetatom (2 × 50 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (260 mg, 339 umol, dva koraka 68 % prinosa, 97,9 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

Korak D: 2-1(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je pušten u mehuriće u MeOH (100 mL) na -60 °C tokom 20 minuta. U rastvor benzil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6 Dodan je,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (260 mg, 346 umol, 1 ekv.) u MeOH (15 mL) Pd/C (200 mg, 10 % čistoće) i gornja smeša (NH3•MeOH, 15 mL) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 300 umola, 87 % prinosa, 88,0 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 528.

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. Na smešu 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 341 umol, 1 ekv.) i TEA (345 mg, 3,41 mmol, 475 uL, 10 ek) u DCM (8 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (30,9 mg, 341 umol, 27,8 uL, 1 ek) u porcijama na -40 °C i smeša je mešana na -40 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (2 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3; Etil acetat/metanol = 20/1 do 3/1). Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 42 % - 72 %, 12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (Primer 348, 23,5 mg, 39,9 umol, 12 % prinos 99,0 % čistoće) je dobijena kao bela čvrsta supstanca.2 39,9-348-propan (prop-2 23,5 99,0-12) LCMS [ESI, M+1]: 582.

SFC stanje: „OJ-3S 3_540 3ML Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 % Brzina protoka: 3 mL/min Talasna dužina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,32 - 7,23 (m, 1H), 6,98 - 6,74 (m, 3H), 6,31 (br d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,85 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,27 - 5,15 (m, 1H), 5,11 (br s, 1H), 4,62 (br s, 1H), 4,33 - 4,00 (m, 5H), 3,75 - 3,38 (m, 2H), 3,27 - 2,81 (m, 7H), 2,75 - 2,62 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,47 - 2,31 (m, 1H), 2,11 - 1,96 (m, 1H), 1,86 - 1,69 (m, 3H), 1,34 (d, J = 6,4 Hz, 3H).

PRIMER 349

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2,6-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak 1: 2-bromo-6-fluoro-3-metil-benzaldehid. U rastvor 2-bromo-4-fluoro-1-metil-benzena (10 g, 52,9 mmol, 1 ekv.) u THF (200 mL) je dodat LDA (2 M u toluenu, 31,7 mL, 1,2 ekv.) na - 78 °C u atmosferi azota. Posle mešanja na -78 °C tokom 2 sata, dodat je rastvor DMF (4,64 g, 63,5 mmol, 4,88 mL, 1,2 ek) na -78 °C Smeša je pažljivo zagrejana do 25 °C i mešana 30 minuta. Smeša je ugašena vodom (5 mL) i smeša je razblažena sa petrol etar/etil acetatom

(50 mL/5 mL) i vodom (50 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje 2-bromo-6-fluoro-3metil-benzaldehid (11,5 g, 52,9 mmol, 100 % prinos) je dobijeno kao bezbojno ulje.

Korak 2: (2-bromo-6-fluoro-3-metil-fenil)metanol. U rastvor 2-bromo-6-fluoro-3-metil-benzaldehida (11,5 g, 52,9 mmol, 1 ekv.) u MeOH (100 mL) dodat je NaBH4 (2,20 g, 58,2 mmol, 1,1 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Smeša je ugašena vodom na 0 °C i smeša je koncentrovana pod vakuumom. Остатак је пречишћен хроматографијом на колони преко силика гела (петролеум етар/етил ацетат 50/1 до 3/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom. Jedinjenje (2-bromo-6-fluoro-3-metil-fenil)metanol (8,5 g, 38,4 mmol, 73 % prinos, 99 % čistoća) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M-17]: 201.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,20 (dd, J = 6,4, 8,4 Hz, 1H), 6,98 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 4,88 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,35 - 2,11 (m, 1H).

Korak 3: 3-bromo-2-(bromometil)-1-fluoro-4-metil-benzen. U smešu (2-bromo-6-fluoro-3-metil-fenil)metanola (5 g, 22,8 mmol, 1 ekv.) u THF (100 mL) dodat je PBr3 (12,4 g, 45,6 mmol, 2 ekv.) u porcije na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen etil acetatom (100 mL) i ispran ledenom vodom (1 × 50 mL), 10 % vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 × 50 mL) i slanim rastvorom (1 × 20 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 1/0 do 10/1). Jedinjenje 3-bromo-2-(bromometil)-1-fluoro-4-metil-benzen (5,6 g, 19,9 mmol, 87 % prinos) je dobijeno kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,20 (dd, J = 6,4, 8,0 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 2,41 (s, 3H).

Korak 4: 3-bromo-1-fluoro-2,4-dimetil-benzen. U rastvor 3-bromo-2-(bromometil)-1-fluoro-4-metil-benzena (5,6 g, 19,9 mmol, 1 ekv.) u DMF (50 mL) dodat je NaBH4 (1,50 g, 39,7 mmol, 2 ek) i AgNO3 (6,75 g, 39,7 mmol, 6,68 mL, 2 ekv.) na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani

1

organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Jedinjenje 3-bromo-1-fluoro-2,4-dimetilbenzen (2,1 g, 9,93 mmol, 50 % prinos, 96 % čistoća) je dobijeno kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,05 (dd, J = 6,0, 8,4 Hz, 1H), 6,91 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,35 (d, J = 2,4 Hz, 3H).

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 1,06 mmol, 1 ekv.), 3-bromo-1-fluoro-2,4-dimetil-benzen (430 mg, 2,12 mmol, 2 ekv.), RuPhos-Pd-G3 (177 mg, 212 umol, 0,2 ekv.), Cs2CO3 (863 mg, 2,65 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (10 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta, a zatim je smeša očišćena. mešano na 70 °C tokom 12 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, etil acetat/metanol = 100/1 do 10/1) i dalje prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (20 mg, 28,6 umol, 3 % prinos, 85 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 594.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-

2

karboksilat (20 mg, 33,7 umol, 1 ekv.) u DCM (100 uL) je dodat TFA (57,6 mg, 505 umol, 37,4 uL, 15 ekv.). Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (20,5 mg, 33,7 umol, 100 % prinos, TFA) je dobijen kao žuto ulje.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril.ocil-4-il]-1-prop-piperinol-piperinol-2-piperinol-2. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (20,5 mg, 33,7 umol, 1 ek, TFA) u DCM (1 mL) je dodat TEA (34,1 mg, 337 umol, 46,9 uL, 10 ekv.) na -40 °C. Zatim je u kapima dodat prop-2-enoil hlorid (3,05 mg, 33,7 umol, 2,75 uL, 1 ek) u DCM (1 mL) i smeša je mešana na -40 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (0,1 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (SiO2, dihlorometan/metanol = 10/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 16 % - 43 %, 9 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-fluoro-2,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 349, 0,39 mg, 0,693 umol, 2 % prinos, 97,3 % čistoće) se dobija kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 548.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,06 - 6,92 (m, 1H), 6,84 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 6,70 - 6,49 (m, 1H), 6,42 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 5,85 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,09 (br s, 1H), 4,60 (br s, 1H), 4,39 - 4,27 (m, 1H), 4,25 - 3,83 (m, 5H), 3,75 -3,22 (m, 5H), 3,19 - 2,47 (m, 10H), 2,34 - 2,21 (m, 6H), 2,21 - 1,89 (m, 4H).

PRIMER 350

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hidroksinaftalen-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-(7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Smeša 3-benziloksi-1-bromo-naftalena (intermedijer 29, 1,01 g, 3,21 mmol, 1,3 ekv.), tercbutil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (intermedijer 66, 1 g, 2,47 mmol, 1 ekv.),

Cs2CO3 (2,01 g, 6,18 mmol, 2,5 ekv.), RuPho (230 mg, 494 umol, 0,2 ekv.) i Pd2(dba)3 (452 mg, 494 umol, 0,2 ekv.) u toluenu (50 mL) su degazirani i

4

pročišćeni sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C. °C tokom 5 sati pod atmosferom N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (50 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 100/1 do 3/1). jedinjenje terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]- 2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,2 g, 1,71 mmol, 69 % prinos, 91 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 637.

Korak B: terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-577-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,2 g, 1,88 mmol, 1 ekv.) u etil acetatu (50 mL) je dodat m-CPBA (382 mg, 1,88 mmol, 85 % čistoće, 1 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 0,5 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2S2O3 (20 mL), a zatim ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, Etil acetat/MeOH = 100/1 do 10/1). Jedinjenje terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]- 2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (900 mg, 1,30 mmol, 69 % prinos, 94 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 653.

Korak C: terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metil pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (793 mg, 1,22 mmol, 1 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (350 mg, 3,65 mmol, 3 ekv.) i [(3R)- 1-metilpirolidin-3-il]metanol (420 mg, 3,65 mmol, 3 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je razblažena vodom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 10/1 do 0/1). Jedinjenje terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metil pirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (700 mg, 944 umol, 78 % prinos, 95 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 704.

Korak D: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. NH3 je upuštan u MeOH (100 mL) na -60 °C tokom 10 minuta. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(3-benziloksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (700 mg, 994 umol, 1 ekv.) u MeOH (20 mL) je dodat suvi Pd/C (300 mg, 10 % čistoće) i gornji rastvor NH3•MeOH (20 mL) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 619 umol, 62 % prinosa, 95 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 614.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,02 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,62 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,38 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 7,29 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 6,88 (D,J= 2,0 Hz, 1H), 6,70 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 4,57 (br s, 1H), 4,36 - 4,22 (m, 2H), 4,17 - 4,14 (m, 1H), 4,02 (br d,J= 13,6 Hz, 2H), 3,85 (Br d,J= 12,8 Hz, 1H), 3,47 - 3,08 (m, 3H), 3,07 -2,64 (m, 12H), 2,56 (s, 3H), 2,27 - 2,14 (m, 1H), 1,89 - 1,75 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1karboksilat (400 mg, 651 umol, 1 ekv.) u DCM (500 uL) je dodat TFA (743 mg, 6,52 mmol, 482 uL, 10 ekv.). Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (409 mg, sirov, TFA) je dobijen kao smeđe ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 514.

Korak F: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (409 mg, 651 umol, 1 ek, TFA) u DCM (10 mL) je dodat TEA (659 mg, 6,52 mmol, 907 uL, 10 ekv.) na 0 °C. Posle dodavanja, prop-2-enoil hlorid (53,1 mg, 586 umol, 47,8 uL, 0,9 ekv.) u DCM (1 mL) je dodat u kapima na -40 °C. Dobijena smeša je mešana na -40 °C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/MeOH = 100/1 do 5/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u; mobilna faza: [voda (0,225 %FA) - ACN]; B%: 11 % - 41 %, 10 min). Smeši je podešen pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan dihlorometanom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (Primer 350, 25,5 mg, 39,9 umol, 6 % prinos, 89 % čistoće) je dobija se kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 568.

<1>H NMR (400 MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ = 8,07 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,66 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,39 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 7,29 (T,J= 7,2 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 6,87 (d,J= 1,6 Hz, 1H), 6,75 (br s, 1H), 6,38 (d,J= 16,8 Hz, 1H), 5,87 (d,J= 10,0 Hz, 1H), 5,23 - 5,01 (m, 1H), 4,98 - 4,49 (m, 4H), 4,43 (s, 1H), 4,33 (s, 2H), 4,23 - 4,00 (m, 1H), 3,99 - 3,51 (m, 5H), 3,50 - 3,23 (m, 4H), 3,17 - 2,91 (m, 8H), 2,63 - 2,24 (m, 1H).

PRIMER 351

2-[(2S)-4-[2-(1H-imidazol-2-ilmetoksi)-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: etil 1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-karboksilat. Smeša etil 1H-imidazol-2-karboksilata (5 g, 35,7 mmol, 1 ekv.), DHP (33,0 g, 392 mmol, 35,9 mL, 11,0 ekv.) i PTSA•H2O (400 mg, 2,32 mmol, 1 ekvival.2 ek) u THF (100 mL) je mešano na 60 °C (temperatura uljne vode) tokom 16 sati. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom i zatim razblažena etil acetatom (100 mL) i vodom (100 mL). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko silika gela (petrol etar/etil acetat 20/1 do 1/1) da bi se dobio etil 1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-karboksilat (6,2 g, 26,0 mmol, 73 % prinos, 94). % čistoće) kao svetlo žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 (d,J= 0,8 Hz, 1H), 7,16 (d,J=0,8 Hz, 1H), 6,21 (dd,J=2,0, 10,0 Hz, 1H), 4,39 (dq,J=0,8, 7,2 Hz, 2H), 4,20 -4,10 (m, 1H), 3,71 (dt,J= 2,8, 11,6 Hz, 1H), 2,13 - 2,03 (m, 1H), 2,03 - 1,88 (m, 1H), 1,80 - 1,55 (m, 4H), 1,42 (t,J= 7,2 Hz, 3H).

Korak 2: (1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metanol. Rastvoru etil 1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-karboksilata (2 g, 8,92 mmol, 1 ekv.) u THF (40 mL) je dodat LiAlH4 (758 mg, 20,0 mmol, 2,24 ekv.) u 3 porcije na 0° C. Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim Na2SO4 (2,89 mL), filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 do 10/1) da bi se dobio (1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metanol (1,57 g, 7,75 mmol, 87 % prinos, 90 % čistoća) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 7,27 (d,J=1,6 Hz, 1H), 6,89 (d,J=1,2 Hz, 1H), 5,54 (dd,J=2,4, 10,0 Hz, 1H), 4,74 - 4,61 (m, 2H), 4,15 - 3,99 (m, 1H), 3,76 - 3,68 (m, 1H), 2,06 - 1,88 (m, 3H), 1,84 - 1,60 (m, 3H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-metilsulfinil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 64, 380 mg, 654 umol, 1 ekv.) i (1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metanol (238 mg, 1,31 mmol, 2 ekv.) 4 toluen (0.) je dodat t-BuONa (126 mg, 1,31 mmol, 2 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 20 minuta. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen vodom (10 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 20 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (SiO2, PE/EtOAc 3/1 do 1/3) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-) tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (270 mg, 363,19 umol, 56 % prinos 94 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 699.

Korak B: 2-((2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. NH3 je upuštan u MeOH (3 mL) na -40 °C tokom 10 minuta. Rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (260 mg, 372 umol, 1 ekv.) u MeOH (3 mL) je dodat iznad rastvora, zatim Pd/C (100 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H26 puta.

Reakcija je mešana pod H2 (15 psi) na 28 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il) metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (160 mg, 275 umol, 74 % prinos, 97 % čistoće) kao žuti čvrsta materija koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 565.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (160 mg, 283 umol, 1,00 ekv.) i DIEA (73,2 mg, 567 umol, 98,7 uL, 2,00 ekv.) u L DCM (3,4-d]pirimidin-4-il]) je dodat prop-2-enoil hlorid (38,5 mg, 425 umol, 34,7 uL, 1,50 ekv.) kapanjem na -40 °C. Smeša je mešana na -40 °C 10 minuta. Po završetku, u smešu je dodat zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (1 mL) i voda (3 mL). Slojevi su razdvojeni. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 5 mL).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, EtOAc/MeOH 50/1 do 10/1) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2). -ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (80 mg, 101 umol, 36 % prinos, 78 % čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 619.

Korak D: 2-((2S)-4-[2-(1H-imidazol-2-ilmetoksi)-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. Rastvor 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-2-[(1-tetrahidropiran-2-ilimidazol-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (67 mg, 84,5 umol, 1 ekv.) i TsOH•H2O (48,2 mg, 253 umol, 3 ek) u MeCN (1,5 mL) je mešan

1

na 60 °C tokom 3 sata. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) na 0 °C. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % NH3•H2O)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. Sirovi proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: PhenomenexSynergi C18 150*30 mm*4um; mobilna faza: [voda (0,225 %FA) - ACN]; B%: 20 % - 50 %, 10,5 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-(1H-imidazol-2-ilmetoksi)-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 351, 2,55 mg, 4,22 umol, 5,4 % prinos, 96 % čistoća, FA) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 535.

SFC stanje: Kolona: Chiralpak AS-350×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 od 5 % do 40 %, Brzina protoka: 3 mL/min, talasna dužina: 220 nm

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,26 - 8,20 (m, 1H), 7,92 - 7,82 (m, 1H), 7,63 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,56 - 7,48 (m, 2H), 7,45 (t,J=8,0 Hz, 1H), 7,17 (D,J=7,2 Hz, 1H), 7,08 - 6,99 (m, 2H), 6,69 - 6,52 (m, 1H), 6,46 - 6,32 (m, 1H), 5,84 (br d,J=11,2 Hz, 1H), 5,56 - 5,44 (m, 2H), 5,24 - 4,90 (m, 1H), 4,88 - 4,14 (m, 1H, 4H), 4,14 - 3,79 (m, 2H), 3,79 - 3,37 (m, 3H), 3,35 - 2,64 (m, 4H), 2,61 - 2,49 (m, 1H).

PRIMER 352

2-[(2S)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

11

3-bromo-4-ciklopropil-piridin. Smeša 3,4-dibromopiridina (3,0 g, 12,7 mmol, 1,0 ekv.), ciklopropilborne kiseline (1,09 g, 12,7 mmol, 1,0 ekv.), Pd(dppf)Cl2 (927 mg, 1,27 mmol 4, k0), 0.8,06 g, 38,0 mmol, 3,0 ekv. u DMF-u (15,0 mL) i H2O (3,0 mL) je degazirano i pročišćeno sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 60 °C tokom 6 sati pod atmosferom N2. Organski rastvarač je ispran vodom (80,0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (300 mL), osušeni sa Na2SO4, rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar: Etil acetat=30: 1 do 20: 1). Jedinjenje 3-bromo-4-ciklopropil-piridin (630 mg, 3,17 mmol, 25 % prinos, 99,6 % čistoća) je dobijeno kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 198.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,69 - 8,61 (m, 1H), 8,39 -8,32 (m, 1H), 6,75 - 6,71 (m, 1H), 2,29 - 2,18 (m, 1H), 1,20 - 1,12 (m, 2H), 0,84 -0,77 (m, 2H).

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 500 mg, 1,06 mmol, 1,0 ekv.), 3-bromo-4-ciklopropilpiridin (315 mg, 1,59 mmol, 1,50 ekv.), Pd (dba)3 (97,09 mg, 106 umol,

12

0,10 ekv.), RuPhos (99,0 mg, 212 umol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (1,04 g, 3,18 mmol, 3,0 ekv.) je razmućen u 0 gasa N2 (L) i prečišćen u toluenu (L) 3 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 12 sati pod atmosferom N2. Organski rastvarač je ispran vodom (15,0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen brzom HPLC sa reverznom fazom [C18, 0,1 % NH3•H2O u vodi, 0-60 % MeCN]. Dobijeni proizvod je zatim koncentrovan, vodeni je ekstrahovan sa EA (3 × 50 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 260 umol, 24,5 % prinosa, 85 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:589.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (30,0 mg, 43,3 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (1,0 mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 1,0 mL, 92,4 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta pod atmosferom N2. Organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom.

Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim NaHCO3 vodenim na pH-8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (30,0 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 489.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (30,0 mg, 61,4 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,50 mL) je dodat TEA (31,1 mg, 307 umol, 42,7 uL, 5,0 ekv) i prop-2-enoil hlorid (8,34 mg, 92,1 umol, 7,51 uL, 1,50 ekv.) na -

1

60 °C. Smeša je mešana na -60 °C tokom 30 minuta pod atmosferom N2. Reakcija je ugašena metanolom (6,0 mL) i uklonjena pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 33 %-63 %,12 min) i liofilizacija. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(4-ciklopropil-3-piridil)-2-[[(2H)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (Primer 352, 2,71 mg, 4,97 umol, 8,1 % prinos, 99,5 % čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 543.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,29 (s 1H), 8,26 (d,J=5,2 Hz, 1H), 6,68 (d,J=5,2 Hz, 1H), 6,64 - 6,53 (m, 1H), 6,40 (d,J=0,8 Hz,J=16,8 Hz, 1H), 5,52 (d, .7=10,4 Hz, 1H), 5,07 (br s, 1H), 4,39 (d,J=4,8 Hz,J=10,4 Hz, 1H), 4,29 -4,23 (m, 1H), 4,21 - 4,15 (m, 2H), 4,13 - 4,07 (m, 1H), 4,00 - 3,95 (m, 1H), 3,57 (br s, 1H), 3,44 - 3,24 (m, 1H), 3,17 - 3,03 (m, 2H), 2,94 (dd,J=8,8 Hz,J=16,8 Hz, 1H), 2,87 - 2,80 (m, 2H), 2,73 - 2,64 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,35 - 2,22 (m, 3H), 2,11 -2,00 (m, 1H), 1,89 - 1,76 (m, 3H), 1,17 - 1,11 (m, 2H), 0,90 - 0,77 (m, 3H).

PRIMER 353

1-[(3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

14

Korak A: terc-butil (3R)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metil-piperazin-1-karboksilat. Rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (1,5 g, 5,10 mmol, 1 ekv.), terc-butil (3R)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,12 g, 5,61 mmol, 1,1 ekv.), DIEA (1,32 g,

10,2 mmol, 1,78 mL, 2 ekv.) u NMP (30 mL) je mešan na 100 °C tokom 7 sati. U smešu je dodata voda (90 mL). Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (40 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je razmućen sa (PE: EtOAc = 3:1, 20 ml) i filtriran i filterski kolač je opran sa (PE: EtOAc = 3:1, 40 mL) da bi se dobio terc-butil (3R)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metil-piperazin-1-karboksilat (0,9 g, 1,73 mmol, 34 % prinos, 88,0 % čistoća) kao siva čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 458.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,38 - 7,27 (m, 5H), 4,28 - 4,18 (m, 1H), 4,16 - 3,80 (m, 2H), 3,74 (br d,J= 13,6 Hz, 1H), 3,68 (s, 2H), 3,65 - 3,52 (m, 2H), 3,41 - 3,27 (m, 1H), 3,21 - 2,89 (m, 2H), 2,74 - 2,58 (m, 4H), 1,48 (s, 9H), 1,23 (d,J= 6,8 Hz, 3H).

Korak B: terc-butil (3R)-4-[7-benzil-2-[[2S)-1-metilpirolidin-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidi-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (566 mg, 4,91 mmol, 583 uL, 2,5 ekv.) u THF (20 mL) dodat je NaH (157 mg, 3,93 mmol, 60,0 % čistoće, 2 ekv.) na 0 °C i

1

mešano na 0 °C tokom 30 minuta. Zatim terc-butil (3R)-4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3-metil-piperazin-1- karboksilat (900 mg, 1,97 mmol, 1 ekv.) je dodat u smešu. Reakciona smeša je zagrevana do 70 °C tokom 12 sati u cevi pod N2. Smeša je ugašena vodom (15 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (40 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 35 %) da bi se dobio terc-butil (3R)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (680 mg, 1,14 mmol, 58 % prinos, 90,0 % čistoće) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 537.

Korak C: terc-butil (3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor tercbutil (3R)-4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (680 mg, 1,27 mmol, 1 ekv.) u MeOH (14 mL) je dodat Pd(OH)2/C (340 mg, 10 % čistoća) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 4 sata. Reakciona smeša je filtrirana, filter kolač je ispran sa MeOH (3 × 10 mL), a titrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (540 mg, 1,09 mmol, 86 % prinos, 90,0 % čistoće) kao smeđa čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak D: terc-butil (3R)-3-metil-4-(2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dih-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (520 mg, 1,16 mmol, 1 ekv.), 1-bromonaftalen (482 mg, 2,33 mmol, 324 uL, 2 ekv.), RuPhos (109 mg, 233 umol) 0,2 ekv) i Cs2CO3 (1,14 g, 3,49 mmol, 3 ekv.) u toluenu (11 mL) je dodat Pd2(dba)3 (107 mg, 116 umol, 0,1 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 105 °C tokom 7 sati. U smešu je dodata voda (10 mL). Smeša je razblažena sa

1

EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 5:1 do 0:1). Zatim je ostatak prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 61 %). Jedinjenje terc-butil (3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (330 mg, 547 umol, 47 % prinos, 95,0 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 573.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 8,26 - 8,18 (m, 1H), 7,89 - 7,84 (m, 1H), 7,60 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,43 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,14 (D,J= 7,2 Hz, 1H), 4,41 (dd,J=5,2, 10,4 Hz, 1H), 4,26 (s, 3H), 4,18 - 4,14 (m, 1H), 4,03 -3,68 (m, 2H), 3,45 - 3,00 (m, 6H), 2,84 (br s, 2H), 2,69 (br d,J=6,4 Hz, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,12 - 2,06 (m, 1H), 1,91 - 1,70 (m, 4H), 1,50 (s, 9H), 1,32 - 1,27 (m, 3H).

Korak E: 4-[(2R)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d)pirimidin. Smeša terc-butil (3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (330 mg, 576 umol, 1 ekv.) i TFA (657 mg, 5,76 mmol, 427 uL, 10 ekv.) su mešani na 30 °C 40 min. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-[(2R)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (340 mg, sirovo, TFA) kao smeđe ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak F: 1-((3R)-3-metil-4-[2-[[2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 4-[(2R)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (340 mg, sirov, TFA), TEA (586 mg, 5,80 mmol, 807 uL) u DCM (6 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (78,7 mg, 869 umol, 70,9 uL) na -40 °C, smeša je mešana na -40 °C tokom 30 minuta. Smeša je ugašena zasićenim NaHCO3 (2 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC

1

(kolona: Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 55 %-85 %,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[(3R)-3-metil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (PRIMER 353, 85,5 mg, 162 umol, dva koraka 28 % prinosa, 99,8 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 527.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,23 (br d,J= 9,2 Hz, 1H), 7,90 -7,84 (m, 1H), 7,61 (d,J =8,4 Hz, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,15 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 6,70 - 6,52 (m, 1H), 6,37 (dd,J=1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,77 (br d,J=10,0 Hz, 1H), 4,66 - 4,31 (m, 3H), 4,27 (s, 2H), 4,14 (DD,J= 6,8, 10,4 Hz, 1H), 4,02 - 3,73 (m, 2H), 3,64 - 3,25 (m, 4H), 3,24 - 2,99 (m, 2H), 2,86 (br, 2,74 - 2,63 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,13 - 2,00 - 1,90 (m, 1H), 1,74 - (1H) (M, 3H), 1,28 (br d,J= 4,4 Hz, 3H).

PRIMER 354

1-[3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

1

Korak A: terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat. Rastvor 7-benzil-2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (1,5 g, 5,10 mmol, 1 ekv.) i terc-butil 3,3-dimetilpiperazin- 1-karboksilat (4,37 g, 20,4 mmol, 4 ekv.) je mešan na 130 °C tokom 22 sata. Ostatak je korišćen direktno za prečišćavanje. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 10:1). Zatim je ostatak prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi Max-RP

250<∗>80 mm<∗>10 mm;mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 30 %-60 %, 35 min, 60 % min) da bi se dobio terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat (1 g, 2,12 mmol, 42 % prinos, 100 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 472.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 7,39 - 7,28 (m, 5H), 4,01 (t,J=5,6 Hz, 2H), 3,69 (s, 2H), 3,55 - 3,44 (m, 6H), 2,78 - 2,66 (m, 4H), 1,51 (s, 6H), 1,48 (s, (s, 6H), 9H).

Korak B: terc-butil 4-(7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (610 mg, 5,30 mmol, 629 uL, 2,5 ekv.) u THF (20 mL) dodat je NaH (169 mg, 4,24 mmol, 60 % čistoće, 2 ekv.) na 0 °C i mešano na 0 °C tokom 30 minuta. Zatim terc-butil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat je dodat u smešu (1 g, 2,12 mmol, 1 ekv.). Reakciona smeša je zagrevana do 70 °C tokom 12 sati u cevi pod N2. Reakciona smeša je ugašena vodom (10 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex luna C18

1

250<∗>50 mm<∗>10 mm;mobilna faza: [Voda(0,225 %FA)-];B%: 5 %-50 %,30;79 % min) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat (980 mg, 1,69 mmol, 80 % prinos, 95,0 % čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 551.

Korak C: terc-butil 3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor tercbutil 4-[7-benzil-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat (980 mg, 1,78 mmol, 1 ekv.) u MeOH (20 mL) je dodat Pd(OH)2/C (500 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 4 sata. Smeša je filtrirana, filterski kolač je ispran sa MeOH (3 × 10 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio tercbutil 3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (780 mg, 1,69 mmol, 95 % prinos, 100 % čistoća) kao bezbojno ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 461.

Korak D: terc-butil 3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (400 mg, 868 umol, 1 ekv.), 1-bromnaftalen (360 mg, 1,74 mmol, 241 uL, 2 ekv.), Cs2CO3 (849 mg, 2,31 ek) i RuPhos (81,0 mg, 174 umol, 0,2 ekv.) u toluenu (8 mL) je dodat Pd2(dba)3 (79,5 mg, 86,8 umol, 0,1 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 95 °C tokom 8 sati. U smešu je dodata voda (10 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc = 10:1 ~ 0:1). Zatim je ostatak prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 52 %) da bi se dobio terc-butil 3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat

2

(210 mg, 340 umol, 39 % prinos, 95,0 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 587.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 8,22 (dd,J= 3,2, 6,4 Hz, 1H), 7,87 -7,82 (m, 1H), 7,58 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,51 - 7,45 (m, 2H), 7,42 (T,J= 7,6 Hz, 1H), 7,15 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 4,39 - 4,27 (m, 2H), 4,12 - 4,05 (m, 3H), 3,60 - 3,26 (m, 6H), 3,14 (br,J=7,6 Hz, 1H), 2,79 (br s, 2H), 2,74 - 2,65 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,39 - 2,28 (m, 1H), 2,05 - 2,00 (m, 1H), 1,92 - 1,70 (m, 4H), 1,58 (br d,J= 4,0 Hz, 6H), 1,49 (s, 9H).

Korak E: 4-(2,2-dimetilpiperazin-1-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. Rastvor terc-butil 3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 358 umol, 1 ekv.) i TFA (408 mg, 3,58 mmol, 265 uL, 10 ekv.) su mešani na 30 °C za 30 minuta. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 4-(2,2-dimetilpiperazin-1-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (210 mg, sirovo, TFA) kao smeđe ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak F: 1-[3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 4-(2,2-dimetilpiperazin-1-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin (210 mg, sirov, TFA) i TEA (531 mg, 5,24 mmol, 730 uL) u DCM (4 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (47,5 mg, 524 umol, 42,8 uL) na -40 °C, smeša je mešana na -40 °C tokom 30 minuta. Smeša je ugašena vodom (2 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*25 5u;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 73 %-100 %, 12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[3,3-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (Primer 354, 104 mg, 189 umol, 53 % prinos, 98,6 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 541.

21

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,26 - 8,18 (m, 1H), 7,85 (dd,J= 3,2, 6,4 Hz, 1H), 7,58 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,48 (dd,J=3,2, 6,4 Hz, 2H), 7,42 (T,J=7,6 Hz, 1H), 7,15 (br d,J=7,2 Hz, 1H), 6,65 - 6,52 (m, 1H), 6,48 - 6,33 (m, 1H), 5,79 - 5,70 (m, 1H), 4,37 - 4,26 (m, 2H), 4,21 (br,J= 5,6 Hz, 1H), 4,17 - 4,06 (m, 3H), 3,80 (s, 1H), 3,78 - 3,69 (m, 2H), 3,61 (s, 1H), 3,39 (br, 2H), 3,13 (br,J=7,6 Hz, 1H), 2,80 (br, 2H), 2,73 - 2,65 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,37 - 2,28 (m, 1H), 2,09 - 1,99 (m, 1H), 1,94 - 1,68 (m, 3H), 1,62 (br, 6H).

PRIMER 355

1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

22

Korak A: terc-butil 4-(7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat. U rastvor 7-benzil-4-hloro-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (5,0 g, 16,4 mmol, 1,0 ekv.) i terc-butil piperazina-1 -karboksilat (4,57 g, 24,5 mmol, 1,50 ekv.) u DMSO (20,0 mL) je dodat DIEA (6,34 g, 49,1 mmol, 8,54 mL, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 60 °C tokom 5 sati. Nakon završetka, smeši je dodata voda (200 mL) i ekstrahovana sa EA (200 mL × 3). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (500 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE: EA = 50:1 - 5:1) da bi se dobio terc-butil 4-(7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin- 1-karboksilat (7,0 g, 15,4 mmol, 93 % prinos). kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 456.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ 7,40 - 7,27 (m, 5H), 3,68 (s, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,54 - 3,48 (m, 4H), 3,47 - 3,38 (m, 4H), 2,65 (s, 4H), 1,48 (s, 9H).

Korak B: terc-butil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-(7-benzil-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (7,0 g, 15,4 mmol, 1,0 ekv.) i DIEA (5,96 g, 46,1 mmol, 8,03 mL, 3,0 ekv.) u DCE (100 mL) je dodat 1-hloretil karbonohlorid (5,49 g, 38,4 mmol, 2,50 °C). Smeša je mešana na 15 °C tokom 2 sata. Zatim je smeša koncentrovana. Ostatak je rastvoren sa MeOH (100 mL) i zagrevan do 70 °C, reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-50 % MeCN) da bi se dobio terc-butil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (4,6 g, 12,6 mmol, 82 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 366.

Korak C: U rastvor terc-butil 4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3,60 g, 9,85 mmol, 1,0 ekv.), (3-metoksi-1-naftil) trifluorometansulfonat (Intermedijer 30, 7,54 g, 24,6 mmol, 2,50 ekvival.), RuPhos (919 mg, 1,97 mmol, 0,20 ekv.) i

Cs2CO3 (9,9 m) g, dodat je toluen (30,0 mL) Pd2(dba)3 (1,35 g, 1,48 mmol, 0,15 ekv.). Smeša je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N23 puta. Zatim

2

je smeša mešana na 90 °C tokom 8 sati. Nakon završetka, smeši je dodata voda (50,0 mL) i ekstrahovana sa EA (50,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE:EA = 20:1 - EA:MeOH = 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-metilsulfanil -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (4,60 g, 8,82 mmol, 89 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 522.

Korak D: terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (3,80 g, 7,28 mmol, 1,0 ekv.) u EA (40,0 mL) je dodat m-CPBA (1,41 g, 6,56 mmol, 0,90 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHS03 (30,0 mL) i ekstrahovana sa EA (50,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,70 g, 5,02 mmol, 69 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,07 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,76 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,52 - 7,42 (m, 1H), 7,39 - 7,33 (m, 1H), 6,92 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 6,81 (D,J= 2,0 Hz, 1H), 4,42 (br, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,61 (br d, J=4,0 Hz, 8H), 3,52 -3,34 (m, 2H), 3,08 - 2,81 (m, 5H), 1,50 (s, 9H).

Korak E: terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- Dodat je 1-karboksilat (800 mg, 1,49 mmol, 1,0 ekv.) i t-BuONa (286 mg, 2,98 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (8,0 mL) [(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin- 2-il]metanol (396 mg, 2,98 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa EA (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18,

24

0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN) da bi se dobio terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil -pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (670 mg, 1,10 mmol, 74 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,09 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,75 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,48 - 7,41 (m, 1H), 7,38 - 7,31 (m, 1H), 6,90 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 6,81 (D,J= 2,4 Hz, 1H), 5,29 - 5,06 (m, 1H), 4,44 (dd,J= 4,4, 10,8 Hz, 1H), 4,27 - 4,20 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,66 - 3,43 (m, 9H), 3,36 (br, 2H), 3,11 - 2,99 (m, 1H), 2,85 (1H) (Br s, 2H), 2,70 - 2,55 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,40 - 2,26 (m, 1H), 2,05 - 1,91 (m, 1H), 1,50 (s, 9H).

Korak F: 2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (650 mg, 1,07 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (1,50 mL) je dodat TFA (2,39 g, 21,0) mmol, 1,55 mL,

19,6 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod 2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (780 mg, sirov, 2 TFA) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 507.

Korak G: 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (780 mg, 1,06 mmol, 1,0 ekv., 2 TFA) i DIEA (1,65 g, 12,7 mmol, 2,22 mL, 12,0 ekv.) u DCM (8. mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (201 mg, 1,59 mmol, 1,50 ekv.) na -50 °C. Smeša je mešana na -50 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (1 mL), zatim koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 46 %-76 %, 12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3- metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

2

(Primer 355, 300 mg, 528 umol, dva koraka 49 % prinosa, 98 % čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 561.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ 8,10 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,75 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,49 - 7,42 (m, 1H), 7,40 - 7,32 (m, 1H), 6,91 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 6,81 (D,J= 2,4 Hz, 1H), 6,61 (dd,J= 10,8, 16,8 Hz, 1H), 6,36 (dd,J= 2,0, 16,8 Hz, 1H), 5,77 (dd,J=1,6, 10,4 Hz, 1H), 5,28 - 5,07 (m, 1H), 4,44 (DD,J= 4,8, 11,2 Hz, 1H), 4,30 - 4,19 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,84 (br, 2H), 3,72 (br, 2H), 3,65 - 3,50 (m, 5H), 3,37 (br s, 2H), 3,10 - 3,01 (m, 1H), 2,87 (br s, 2H), 2,70 - 2,55 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,42 - 2,26 (m, 1H), 2,07 - 1,90 (m, 1H), - (1H).

PRIMER 356

1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

2

Korak A: [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il)metanol. U rastvor O1-terc-butil O2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (1,8 g, 6,94 mmol, 1,0 ekv.) u THF (30,0 mL) dodat je LiAlH4 (790 mg, 20,8 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na -40 °C 1 sat. Zatim je smeša mešana na 80 °C tokom 2 sata pod atmosferom N2. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (6,0 mL). Zatim je smeša filtrirana i filter je koncentrovan. Jedinjenje [(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metanol (1,1 g, 6,82 mmol, 98 % prinos, 90 % čistoće) je dobijeno kao bezbojno ulje i korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ 3,90 - 3,82 (m, 1H), 3,66 (dd,J=3,2 Hz, 10,8 Hz, 1H), 3,46 - 3,37 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 2,77 - 2,65 (m, 1H), 2,64 - 2,57 (m, 1H), 2,35 - 2,30 (m, 1H) 2,11 - 2,01 (m, 1H), 1,90 - 1,79 (m, 1H).

Korak B: terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil 4-[7-(3-metoksi-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (800 mg,

1,49 mmol, 1,0 ekv.), [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (454 mg, 3,12 mmol, 2,1 ekv.), t-BuONa (286 mg, 2,98 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (5,0 mL) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 0 °C tokom 30 minuta pod N2 atmosferom. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (15,0 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom [C18, 0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN]. Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim NaHCO3 vodenim na pH~8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan sa

2

EA (3 × 50,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 808 umol, 54 % prinos, 100 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 619.

Korak C: 2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (450 mg, 727 umol, 1,0 ekv.) u DCM (6,0 mL) je dodat TFA (6,93 g, 60,8) mmol, 4,50 mL, 83,6 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio 2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil) -4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (540 mg, sirov, 2TFA) kao žuto ulje. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 519.

Korak D: 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan. U rastvor 2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-4-piperazin-1-il -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (540 mg, 2TFA) u DCM (6,0 mL) je u kapima dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (130 mg, 1,03 mmol) i DIEA (800 mg, 6,19 mmol, 1,08 mL) u atmosferi N2. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. Nakon završetka, reakcija je ugašena metanolom (10,0 mL) i smeša je uklonjena pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 48 % - 78 %, 12 min) i pod liofilizacijom.

Jedinjenje iz naslova 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(3-metoksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan (PRIMER 356, 112 mg, 196 umol, 99 % čistoće, 18 % prinos) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 573.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ 8,09 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,75 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,48 - 7,44 (m, 1H), 7,38 - 7,34 (m, 1H), 6,91 (d,J= 2,4 Hz, 1H),

2

6,81 (D,J=2,4 Hz, 1H), 6,61 (dd,J= 10,4 Hz, 16,8 Hz, 1H), 6,35 (dd,J= 2,0 Hz, 16,8 Hz, 1H), 5,76 (dd,J=1,6 Hz, 9,6 Hz, 1H), 4,41 (DD,J= 4,8 Hz, 10,8 Hz, 1H), 4,24 (s, 2H), 4,22 - 4,16 (m, 1H), 4,00 - 3,94 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,83 - 3,67 (m, 4H), 3,62 - 3,48 (m, 4H), 3,47 - 3,42 (m, 1H), 3,40 - 3,33 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 2,94 - 2,82 (m, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,33 - (dd, J= 6,0 Hz, 10,0 Hz, 1H), 2,12 - 2,04 (m, 1H), 2,01 - 1,93 (m,<1>H).

PRIMER 357

1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

2

Korak A: terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (631 mg, 4,74 mmol, 3,76 ekv.) u THF (7,0 mL) dodat je NaH (126 mg, 3,16). mmol, 60 % čistoće, 2,51 ekv.) na 0 °C. Zatim je smeša mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Zatim tercbutil 4-(7-benzil-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,26 mmol, 1,0 ek) je dodat u gornju smešu. Posle dodavanja, smeša je mešana na 70 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (15,0 mL) i ekstrahovana sa EA (3 × 20,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, dihlorometan: Metanol = 20:1 do 10:1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-benzil-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (530 mg, 980 umol, 78 % prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 541.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform- d) δ 7,24 - 7,13 (m, 5H), 5,08 - 4,91 (m, 1H), 4,23 (dd,J= 4,4 Hz, 10,8 Hz, 1H), 4,04 (dd,J= 6,0 Hz, 10,8 Hz, 1H), 3,53 (S, 2H), 3,45 - 3,42 (m, 2H), 3,38 - 3,33 (m, 5H), 3,31 - 3,27 (m, 4H), 2,90 - 2,84 (m, 1H), 2,52 - 2,46 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,21 - 2,09 (m, 1H), 1,87 - 1,73 (m, 3 H), 1,34 (s, 9H).

Korak B: terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor tercbutil 4-[7-benzil-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (480 mg, 887 umol, 1 ekv.) u MeOH (6,0 mL) je dodat Pd(OH)2/C (270 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 Psi) na 20 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, EA/MeOH = 20:1 do 10:1). Proizvod terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 706 umol, 79 % prinos, 91 % čistoća) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]:451.

Korak C: U smešu terc-butil 4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 621 umol, 1,0 ekv.), Pd2(dba)3 (85,3 mg, 93,2 umol, 0,15 ekv.), RuPhos (58,0 mg, 124 umol, 124. ek) i Cs2CO3 (404 mg, 1,24 mmol, 2,0 ek) u toluenu (10,0 mL) je dodat (4-bromo-2-naftil) 2,2-dimetilpropanoat (Intermedijer 54, 572 mg, 1,86 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 110 °C tokom 5 sati pod N2. Smeša je ugašena vodom (15,0 mL) i ekstrahovana sa EA (3 × 20,0 mL).

Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom (18C, 0,1 % FA u vodi, 0-70 % MeCN). Dobijeni proizvod je podešen sa zasićenim NaHCO3 vodenim na pH-8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan sa EA (3 × 40,0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje terc-butil 4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (190 mg, 272 umol, 44 % prinos, 97 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 677.

Korak D: [4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]-2,2-dimetilpropanoat. U smešu terc-butil 4-[7-[3-(2,2-dimetilpropanoiloksi)-1-naftil]-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (110 mg, 162 umol, 1,0 ekv.) u DCM

(1,5 mL) je dodat. TFA (2,31 g, 20,2 mmol, 1,5 mL, 124 ekv.) u porcijama na 25 °C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio [4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]-2,2-

1

dimetilpropanoat (200 mg, sirov, 2TFA) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez dalje prečišćavanje. LCMS [ESI, M+1]: 577.

Korak E: [4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]-2,2-dimetilpropanoat. U smešu [4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]-2,2-dimetilpropanoat (200 mg, 2TFA) i TEA (493 mg, 4,87 mmol, 678 uL) u DCM (2,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (40,9 mg, 324 umol) u porcijama na 0 °C pod N2. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (3,0 mL) na 0 °C, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, EA/MeOH = 20:1 do 10:1). Jedinjenje [4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]-2,2-dimetilpropanoat (100 mg, 153 umol, 97 % čistoće) je dobijen kao žuto ulje.iperipirazen-1-il)-6,8-dihidro-5 H-pirido[3,497-d pirimidin-7 100-il-2 153] LCMS [ESI, M+1]:631.

Korak F: 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on. Smeša [4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-2-naftil]-2,2-dimetilpropanoat (39,0 mg, 61,8 umol, 1,0 ekv.) i NaOH (61,8 mg, 1,55) mmol, 25,0 ekv. u THF (1,5 mL) i H2O (1,5 mL) je mešan na 25 °C tokom 14 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena vodom (10,0 mL), a zatim ekstrahovana sa EA (3 × 15,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 mm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B: 38 % - 68 %, 12 min) i liofilizacija.

Jedinjenje iz naslova 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(3-hidroksi-1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (Primer 357, 10,1 mg, 18,4 umol, 30 % prinos, 99 % čistoće) dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 547.

SFC uslovi: 100 % ee.

2

<1>H NMR (400 MHz, hloroform- d) δ 8,04 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,65 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,42 (t,J= 7,2 Hz, 1 H), 7,30 - 7,34 (m, 1H), 6,88 (d,J= 1,6 Hz, 1H), 6,72 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 6,60 (dd,J=10,4 Hz, 16,8 Hz, 1H), 6,37 (dd,J=1,6 Hz, 16,8 Hz, 1H), 5,79 (dd,J= 2,0 Hz, 10,2 Hz, 1H), 5,28 - 5,14 (m, 1H), 4,46 (dd,J=4,8 Hz, 11,2 Hz, 1H), 4,32 (dd,J=5,2 Hz, 11,2 Hz, 1H), 4,18 (s, 2H), 3,82 -3,68 (m, 2H), 3,66 - 3,55 (m, 4H), 3,52 - 3,42 (m 4H), 3,35 - 3,21 (m, 2H), 3,17 -3,10 (m, 1H), 2,82 - 2,68 (m, 2H), 2,63 - 2,74 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,40 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 1,94 (m, 1H).

PRIMER 358

1-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4

-d]pirimidin-4-il]-2-prop-2-inil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-jedan

Korak A: (2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-inoična kiselina. U suspenziju (2S)-2-aminopent-4-inoične kiseline (5 g, 44,2 mmol, 1 ekv.) u THF (15 mL) dodata je H2O (15 mL), K2CO3 (18,3 g, 133 mmol, 3 ekv.) i Boc20 (11,1 g, 50,8 mmol, 11,7 mL, 1,15 ekv.). Dodata je voda da bi se dobio rastvor koji je mešan 12 sati na 25 °C. Organski rastvarač je zatim uparen i vodeni rastvor je ispran t-butil metil etrom, zatim zakiseljen do pH = 3 sa 1N HCl kiselinom. Rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 100 mL). Rastvarač je uparen da bi se dobila (2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-inoična kiselina (8 g, 37,5 mmol, 85 % prinos) kao bezbojno ulje korišćeno bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]:589.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 7,76 (br d,J=8,4 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,45 (td,J= 8,0, 13,2 Hz, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,18 (m, 1H), 5,10 (br s, 1H), 4,49 - 4,33 (m, 2H), 4,21 - 4,01 (m, 3H), 3,96 - 3,79 (m, 2H), 3,60 (br d,J= 6,8 Hz, 1H), 3,44 (br d,J= 13,6 Hz, 1H), 3,32 - 2,97 (m, 5H), 2,88 - 2,53 (m, 4H), 2,48 (d,J= 2,8 Hz, 3H), 2,29 (br d,J= 8,8 Hz, 1H), 2,11 - 2,00 (m, 1H), 1,87 - 1,71 (m, 3H).

Korak B: etil 2-[benzil-[(2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-inoil]amino]acetat. U rastvor (2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-inoične kiseline (7,75 g, 36,4 mmol, 1 ekv.), etil 2-(benzilamino)acetata (7,02 g,

4

36,4 mmol, 1 ekv.) i HATU (16,6 g, 43,5 mmol, 1,20 ek) u DMF (50 mL) je dodat TEA (7,35 g, 72,7 mmol, 10,1 mL, 2,00 ekv.) na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 h. Smeša je razblažena etil acetatom (150 mL) i isprana vodom (3 × 200 mL) i slanim rastvorom (1 × 100 mL). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (1 × 100 mL) i slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje etil 2-[benzil-[(2S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)pent-4-inoil]amino]acetat (13,7 g, 32,1 mmol, 88,3 % prinosa, 91 % čistoće) dobija se kao crveno ulje koje postaje u crvenu čvrstu supstancu kao stajanje na 25 °C tokom 16 sati. LCMS [ESI, M-99]: 289.

Korak C: (3S)-1-benzil-3-prop-2-inil-piperazin-2,5-dion. U rastvor etil 2-[benzil-[(2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino) pent-4-inoil]amino]acetata (11,7 g, 30,1 mmol, 1 ekv.) u DCM (40 mL) dodata je TFA (46,2 g, 405 mmol, 30 mL, 13,5 ekv.) na 0 °C i smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i dodat je toluen (30 mL). Posle mešanja na 100 °C tokom 1 sata, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u etil acetatu (200 mL) i zalužen zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata do pH = 8. Odvojeni organski sloj je ispran vodom (1 × 200 mL) i slanim rastvorom (1 × 100 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je triturisan sa (etil acetat/petroleum etar 1/5, 100 mL) i talog je filtriran. Filterski kolač je osušen pod vakuumom. Jedinjenje (3S)-1-benzil-3-prop-2-inilpiperazin-2,5-dion (5 g, 20,5 mmol, 68 % prinos, 99,5 % čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 243.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 7,46 - 7,20 (m, 5H), 6,59 (br, 1H), 4,76 (d,J= 14,4 Hz, 1H), 4,50 (d,J=14,4 Hz, 1H), 4,20 (br,J= 4,4 Hz, 1H), 4,04 -3,90 (m, 1H), 3,89 - 3,76 (m, 1H), 2,95 - 2,69 (m, 2H), 2,05 (t,J= 2,8 Hz, 1H).

Korak D: (3S)-1-benzil-3-prop-2-inil-piperazin. U smešu (3S)-1-benzil-3-prop-2-inil-piperazin-2,5-diona (5,00 g, 20,6 mmol, 1,00 ekv.) u THF (50,0 mL) dodat je LiAlH4 (3,13 g, 82,6 mmol, 4,00 ekv.) na 25 °C. Posle mešanja na 65 °C tokom 12 sati, smeša je filtrirana i filter kolač je ispran etil acetatom (100 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio (3S)-1-benzil-3-prop-2-inilpiperazin (4,10 g, 19,1 mmol, 93 % prinos) kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 7,37 - 7,24 (m, 5H), 3,55 - 3,47 (m, 2H), 3,03 - 2,86 (m, 3H), 2,85 - 2,78 (m, 1H), 2,73 (br d,J= 11,2 Hz, 1H), 2,33 -2,20 (m, 2H), 2,13 - 2,04 (M, 1H), 2,02 (t,J= 2,8 Hz, 1H), 1,90 - 1,83 (m, 1H).

Korak E: terc-butil (2S)-4-benzil-2-prop-2-inil-piperazin-1-karboksilat. Smeša (3S)-1-benzil-3-prop-2-inil-piperazina (2,00 g, 9,33 mmol, 1,00 ekv.), TEA (2,83 g, 28,0 mmol, 3,90 mL, 3,00 ekv.) i (Boc)2O (10,2 g, 46,7 mmol, 10,7 mL, 5,00 ekv.) u THF (20,0 mL) je mešan na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je razblažena vodom (1 × 20,0 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 5/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobilo terc-butil (2S)-4-benzil-2-prop-2-inilpiperazin-1-karboksilat (1,50 g, 4,20 mmol, 45 % prinos, 88 % čistoće) kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 315.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,38 - 7,27 (m, 5H), 4,26 (br s, 1H), 3,99 - 3,74 (m, 1H), 3,59 - 3,45 (m, 2H), 3,08 - 2,89 (m, 2H), 2,79 - 2,68 (m, 2H), 2,62 - 2,53 (m, 1H), 2,11 (dd, J = 3,6, 11,2 Hz, 1H), 2,06 - 1,98 (m, 1H), 1,89 (t, J = 2,8 Hz, 1H), 1,48 - 1,45 (m, 9H).

Korak F: (2S)-2-prop-2-inilpiperazin. Smeša terc-butil (2S)-4-benzil-2-prop-2-inil-piperazin-1-karboksilata (1,40 g, 4,45 mmol, 1,00 ekv.), 1-hloro-1-(1-hloroviniloksi)etana (2,51 g, 17,8 mmol, 4,00 ekv.) u DCE (20,0 ml) je mešana na 85°C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Talog je otopljen u metanolu (20,0 ml) i mešan na 65°C 1 sat. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i triturirana sa petrolejskim etrom (10,0 ml) da bi se dobio (2S)-2-prop-2-inilpiperazin (0,80 g, sirov, 2 HCl) kao žuta čvrsta supstanca i korišćena je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ = 4,56 - 4,44 (m, 1H), 3,88 - 3,80 (m, 1H), 3,79 - 3,73 (m, 1H), 3,62 - 3,34 (m, 4H), 2,87 - 2,76 (m, 3H).

Korak G: 4-benziloksi-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. Smeša 4-benziloksi-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina (2,00 g, 5,64 mmol, 1,00 ekv.), 1-bromonaftalen (1,75 g, 8,46 mmol, 1,18 ml, 1,50 ekv.), Pd2(dba)3 (517 mg, 564 umol, 0,10 ekv.), RuPhos (5213 mg, mmol, 20 ekv.), RuPhos (5213 mg, 20 ekv.) (3,68 g, 11,3 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (20,0 ml) je mešana na 110°C tokom 3 sata pod N2. Smeša je razblažena vodom (5,00 ml), ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 m). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (TFA, 0,10%)/acetonitril]. Željena frakcija je sakupljena i podešena pH vrednost > 7 zasićenim natrijum bikarbonatom (5,00 ml), a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 4-benziloksi-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (1,34 g, 2,78 mmol, 49% prinosa, 99,6% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 481.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,22 - 8,16 (m, 1H), 7,89 - 7,82 (m, 1H), 7,59 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,51 - 7,45 (m, 4H), 7,45 - 7,33 (m, 4H), 7,14 (d,J=0,8, 7,2 Hz, 1H), 5,49 (S, 2H), 4,45 (dd,J= 5,6, 10,4 Hz, 1H), 4,27 - 4,18 (m, 3H), 3,55 -3,24 (m, 2H), 3,12 (br t,J=7,6 Hz, 1H), 2,89 (br s, 2H), 2,76 - 2,65 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 1H, 1H 2,14 - 2,06 (m, 1H), 1,91 - 1,78 (m, 3H).

Korak H: 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol. Smeša 4-benziloksi-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin (1,30 g, 2,70 mmol, 1,00 ekv.) i Pd/C (0,20 g, 10% čistoće) u metanolu (200 ml) su mešani na 25°C tokom 1 sata pod H2 na 15 psi. Katalizator je odfiltriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-ol (1,00 g, 1,90 mmol, 70% prinosa, 74% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 391.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,24 - 8,16 (m, 1H), 7,90 - 7,81 (m, 1H), 7,59 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,42 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,43 - 4,31 (m, 2H), 4,05 (s, 2H), 3,38 (br s, 2H), 3,18 - 3,10 (m, 1H), 2,79 (br s, 2H), 2,70 - 2,54 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,32 (dt, J = 7,2, 9,6 Hz, 1H), 2,02 - 1,96 (m, 1H), 1,91 - 1,75 (m, 3H).

Korak I: [2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometansulfonat. U rastvor 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol (0,40 g,

1,02 mmol, 1,00 ekv.) i TEA (207 mg, 2,05 mmol, 285 ul, 2,00 ekv.) u dihlorometanu (10,0 ml) je dodat TfzO (318 mg, 1,13 mmol, 186 ul, 1,10 ekv.) na -40°C. Posle mešanja na -40 °C tokom 15 minuta, smeša je razblažena vodom (3,00 ml), a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 ml). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 5,00 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, etil acetat/metanol = 10/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio [2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometansulfonat (0,40 g, 528 umol, 52% prinosa, 69% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 523.

Korak J: 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-4-[(3S)-3-prop-2-inilpiperazin-1-il]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. Smeša [2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometansulfonat (0,38 g, 727 umol, 1,00 ekv.), (2S)-2-prop-2-inilpiperazin (350 mg, sirov, 2 HCl) i DIEA (939 mg, 7,27 mmol, 1,27 ml, ekv.) u DMF (4,00 ml) je mešana na 100°C tokom 15 minuta. Smeša je razblažena vodom (5,00 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 ml). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,1%)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-4-[(3S)-3-prop-2-inilpiperazin -1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (0,20 g, 336 umol, 46% prinosa, 99% čistoće, 2 FA) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 497.

Korak K: 1-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-prop-2-inil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on. U rastvor 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-4-[(3S)-3-prop-2inilpiperazin-1-il] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (145 mg, 246 umol, 1,00 ekv., 2 FA) i TEA (374 mg, 3,69 mmol, 514 ul, 15,0 ekv.) u dihlorometanu (4,00 ml) je dodat prop-2-enoil hlorid (22,3 mg, 246 umol, 20,1 ul, 1,00 ekv.) na -40°C. Posle mešanja na 25°C tokom 15 minuta, smeša je razblažena vodom (3,00 ml), a zatim ekstrahovana dihlorometanom (3 × 3,00 ml). Ekstrakti su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je pročišćen PRIP-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 um; mobilna faza: [voda (10 mm NH4HCO3) - ACN]; B%: 57% - 87%, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-prop-2-inilpiperazin-1-il]prop-2-en-1-on (PRIMER 358, 25,6 mg, 46,3 umol, 19% prinosa, 99,5% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 551.

SFC uslovi: „OD-3S_3_40_3ML Kolona: Chiralcel OD-3100×4,6 mm I.d., 3 um, mobilna faza: 40% metanol (0,05% DEA) u CO2, brzina protoka:

3 ml/min, valna duljina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,21 (m, 1H), 7,91 - 7,81 (m, 1H), 7,60 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,47 (m, 2H), 7,46 - 7,39 (m, 1H), 7,14 (d,J=7,2 Hz, 1H), 6,65 (Br s, 1H), 6,36 (br d,J= 16,8 Hz, 1 H), 5,77 (dd,J= 2,0, 10,8 Hz, 1H), 5,00 - 4,52 (m, 1H), 4,46 - 4,36 (m, 1H), 4,34 - 3,81 (m, 6H), 3,47 (m, 1H), 3,38 - 3,21 (m, 2H), 3,19 - 2,90 (m, 4H), 2,84 (br, 1H), 2,73 - 2,52 (m, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,10 - 2,03 (m, 1H), 1,90 - 1,70 (m, 4H).

PRIMER 359

2-(s)-1-akriloillil-4-(7-(8-metilofenol-1-il)-2-(s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril)

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša 1-bromo-8-metil-naftalena (intermedijer 69, 507 mg,

1,65 mmol, 1,3 ekv.), terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 600 mg, 1,27 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3 (1,04 g, 3,18 mmol, 2,5 ekv.), RuPhos (118 mg, 254 umol, 0,2 ekv.) i Pd2(dba)3 (233 mg, 254 umol, 0,2 ekv.) i toluenu (10 ml) je degasiran i pročišćen pod N23 puta, a zatim je smeša mešana na 100°C tokom 2 sata pod N2 atmosferom. Reakciona smeša je razređena vodom (30 ml) i ekstrahirana etilacetatom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom da bi se dao talog. Talog je pročišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% mravlje kiseline)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na ~ 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etila cetatom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su oprani slanim ratsvorom (20 ml), sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom da bi se dobio proizvod. Jedinjenje terc-butil (2S-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (310 mg, 501 umol, 39% prinosa, 99% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 612.

4

<1>HNMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,74 - 7,60 (m, 2H), 7,46 - 7,37 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,16 (m, 2H), 4,61 (br, 1H), 4,43 - 4,33 (m, 1H), 4,30 - 4,14 (m, 1H), (m, 1H, - (m, 1H, 1H) 4,10 - 3,72 (m, 4H), 3,60 - 3,44 (m, 1H), 3,38 (br dd,J= 3,6, 13,6 Hz, 1H), 3,24 - 3,04 (m, 4H), 3,03 - 2,84 (m, 5H), 2,82 -2,53 (m, 4H), 2,52 - 2,42 (m, 3H), 2,29 (br, 1H), 2,05 - 1,95 (M, 1H), 1,91 - 1,69 (m, 2H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (310 mg, 506 umol, 1 ekv.) u DCM (500 ul) je dodat TFA (866 mg, 7,60 mmol, 562 ul, 15 ekv.). Smeša je mešana na 25°C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (317 mg, 506 umol, 99% prinosa, TFA) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (317 mg, 506 umol, 1 ek, TFA) u DCM (5 mL) je dodat TEA (512 mg, 5,07 mmol, 705 uL, 10 ekv.) na 0°C. Posle dodavanja, prop-2-enoil prop-2-enoat (51,1 mg, 405 umol, 0,8 ekv.) u DCM (1 mL) je dodat u kapima na 0°C. Dobijena smeša je mešana na 25°C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 um; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-

41

il]acetonitril (PRIMER 359, 60,2 mg, 105 umol, 21% prinosa, 99,5% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

SFC stanje: „OJ-3S_5_5_40_3ML Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.d., 3 um Mobilna faza: etanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40% protoka:

3 ml/min valna duljina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 - 7,60 (m, 2H), 7,46 - 7,38 (m, 1H), 7,34 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,46 - 6,33 (m, 1H), 5,83 (Br d,J=10,4 Hz, 1H), 5,07 (br s, 1H), 4,64 (br, 1H), 4,44 - 4,32 (m, 1H), 4,31 -4,21 (m, 1H), 4,20 - 4,03 (m, 3H), 3,98 - 3,83 (m, 1H), 3,78 - 3,62 (m, 1H), 3,60 -3,36 (m, 2H), 3,23 - 2,96 (m, 5H), 2,922,73 (s, 3H), 2,88 - 2,742,47 - 2,55 (h) (D,J= 4,4 Hz, 3H), 2,35 - 2,21 (m, 1H), 2,13 - 1,97 (m, 1H), 1,90 - 1,74 (m, 3H).

Alternativno, PRIMER 359 može biti pripremljen na sledeći način:

Korak A: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor terc-butil

42

2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (18,8 g, 61,7 mmol, 1 ekv.) u DMF (200 ml) dodat je DIEA (15,9 g, 123 mmol, 21,5 ml, 2 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 63, 16,0 g, 61,7 mmol, 1 ekv.). Posle mešanja na 80°C tokom 1,5 sata, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (200 ml) i isprana vodom (200 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 50/1 do 2/1).

Jedinjenje terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7 -karboksilat (26 g, 48.8 mmol, 79% prinosa, 99% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 527.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,34 (m, 5H), 5,20 (s, 2H), 4,73 - 4,60 (m, 2H), 4,45 (d,J=19,2 Hz, 1H), 4,13 - 4,02 (m, 2H), 3,94 - 3,75 (m, 2H), 3,45 - 3,25 (h, 3,11 - - (h, 3H), (td,J= 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,88 - 2,59 (m, 4H), 1,60 (s, 9H).

Korak B: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. Smeša [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (10,5 g, 91,1 mmol, 10,8 ml, 2 ekv.), terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil) piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (24 g, 45,6 mmol, 1 ekv.), Pd2(dba)3 (6,18 g, 6,84 mmol, 0,15 ekv.), RuPhos (4,26 g, 9,12 mmol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (37,1 g, 114 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (450 ml) je degasiran i zatim pročišćen 3 puta sa N2, a smeša je mešana na 90°C tokom 5 sati pod atmosferom N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (200 ml) i ekstrahovana etil acetatom (500 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, etil acetat/metanol = 1/0 do 10/1). Jedinjenje terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (25 g, 35,9 mmol, 79% prinosa, 87% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 606.

4

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (16 g, 26,4 mmol, 1 ekv.) u dioksanu (100 ml) je dodat HCl/dioksan (4 M, 99,1 ml, 15 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 1 sat. Dioksan je dekantiran i čvrsta supstanca je sakupljena. Čvrsti talog je razblažen vodom (50 ml) i dihlorometanom (200 ml), zatim podešen pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3 i ekstrahovan etil acetatom (200 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 13,5 g, 24,5 mmol, 93% prinosa, 91,6% čistoće) kao žuto ulje i korišćeno u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 506.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,45 - 7,31 (m, 5H), 5,19 (s, 2H), 4,65 (br, 1H), 4,40 - 4,31 (m, 1H), 4,14 - 4,04 (m, 2H), 4,03 - 3,91 (m, 3H), 3,91 -3,77 (m, 1H), 3,24 (d,J= 13,2 Hz, 2H), 3,16 - 3,05 (m, 2H), 3,04 - 2,89 (m, 2H), 2,81 (br, 2,75 - 2,51), (b, 1H, 1H, (1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 2,47 (s, 3H), 2,35 - 2,22 (m, 1H), 2,08 - 2,00 (m, 1H), 1,92 - 1,76 (m, 3H).

Korak D: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (10 g, 19,8 mmol, 1 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen (Intermedijer 69, 5,68 g, 25,7 mmol, 1,3 ekv.), 77 RuPhos (2,77 g, 5,93 mmol, 0,3 ekv.), Cs2CO3 (16,1 g, 49,5 mmol, 2,5 ekv.) i Pd2(dba)3 (3,62 g, 3,96 mmol, 0,2 ekv.) u toluenu (100 ml) je degasiran sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90°C tokom 6 sati pod atmosferom N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (200 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% mravlja kiselina)/acetonitril)]. Smeši je podešen pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (500 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su

44

isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil) -2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (9 g, 12,9 mmol, 33% prinosa, 93% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

<1>H NMR (400 MHz, C2D2Cl4) δ = 7,32 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,26 (t,J=8,0 Hz, 1H), 7,08 - 6,93 (m, 7H), 6,91 - 6,78 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 4,30 (s, 1H), 4,13 - 3,95 (m, 1H), 3,88 - 3,33 (m, 6H), 3,22 - 2,87 (m, 2H), 2,86 - 2,65 (m, 4H), 2,65 - 2,42 (m, 5H), 2,41 - 2,32 (m, 1H), 2,30 - 2,13 (m, 2H), 2,07 (d,J= 7,2 (h), 1,92 (h), 1H), 1H (1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, (1,72 - 1,45 (m, 4H).

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (8 g, 12,4 mmol, 1 ekv.) u MeOH (100 mL) je dodat Pd/C (2 g , 10% čistoće) i NH3•MeOH (50 mL, 15%) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (5,7 g, 10,0 mmol, 81% prinos, 90% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 512.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,69 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,64 (dd,J= 3,2, 7,6 Hz, 1H), 7,40 (td,J= 4,4, 7,6 Hz, 1H), 7,34 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 2H), 4,46 - 4,34 (m, 1H), 4,25 - 4,03 (m, 2H), 3,97 - 3,69 (m, 3H), 3,49 - 3,44 (m, 1H), 3,39 - 3,07 (m, 5H), 3,06 - 2,83 (m, 6H), 2,76 - 2,63 (m, 1H), 2,62 (2,51 - 2,48 (1H), (1H), - (1H) (D,J=3,2 Hz, 3H), 2,35 - 2,22 (m, 1H), 2,13 - 1,98 (m, 1H), 1,83 -1,69 (m, 3H).

Korak F: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (6,4 g,

4

12,5 mmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (120 mL) je dodat TEA (19 g, 187 mmol, 26 mL, 15 ekv.) na -40 °C. Posle dodavanja, u kapima je dodat rastvor prop-2-enoil hlorida (1,70 g, 18,8 mmol, 1,53 mL, 1,5 ekv.) u dihlorometanu (2 mL) na -40 °C. Posle mešanja na -40 °C tokom 0,5 sata, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10 mL), zatim razblažena vodom (50 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM/MeOH = 100/1 do 10/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Kromasil 250*50mm*10um; mobilna faza: [voda (0,225%FA)-ACN]; B%: 20% - 50%, 28 min). Smeši je podešen pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan dihlorometanom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2 -[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin -2-il]acetonitril (PRIMER 359, 2,3 g, 4,03 mmol, 32% prinosa, 99% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform -d) δ = 7,74 - 7,59 (m, 2H), 7,46 - 7,36 (m, 1H), 7,33 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,15 (m, 2H), 6,70 - 6,47 (s, 1H), 6,39 (d,J= 16,4 Hz, 1H), 1H 5,82 (D,J= 10,4 Hz, 1H), 5,16 - 4,47 (m, 1H), 4,44 - 4,32 (m, 1H), 4,30 - 3,62 (m, 6H), 3,58 - 3,26 (m, 2H), 3,25 - 2,95 (m, 5H), 2,91 (s, 3H), 2,86 -2,55 (m, 4H), 2,48 (D,J=5,2 Hz, 3H), 2,36 - 2,21 (m, 1H), 2,13 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,67 (m, 3H).

PRIMER 360

4

2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: 1-bromo-8-etil-naftalen. U rastvor 1,8-dibromonaftalena (2,0 g, 6,99 mmol, 1,0 ekv.) i Pd(dppf)Cl2 (367 mg, 501 umol, 7,16 e<-2>ekv.) u THF (15,0 mL) dodat je dietil cink (1,0 M u toluenu, 3,50 mL, 0,50 ekv.) na -78°C.

Smeša je mešana na -78 - 20°C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (30,0 mL) i ekstrahovana je sa EA (30,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je triturisan sa PE (60.0 mL) i filtriran. Filterski kolač je ispran PE (10,0 mL × 2), matična tečnost je koncentrovana. Dobijeni proizvod je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1% FA u vodi, 0 - 100% MeCN) da bi se dobio 1-bromo-8-etil-naftalen (600 mg, 2,45 mmol, 35% prinosa, 96% čistoće) kao žuto ulje.

4

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,72 - 7,63 (m, 2H), 7,58 (dd,J=2,4, 7,2 Hz, 1H), 7,30 - 7,23 (m, 2H), 7,13 - 7,04 (m, 1H), 3,43 (q,J= 7,6 Hz, 2H), 1,22 (T,J= 7,6 Hz, 3H).

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,9 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 66, 300 mg, 636 umol, 1,0 ekv.), t-BuONa (183 mg, 1,91 mmol, 3,0 ekv.), RuPhos (59,4 mg, 1 ekv.). umol, 0,2 ekv) i RuPhos-Pd-G3 (106 mg, 127 umol, 0,20 ekv.) u toluenu (5,0 mL) je dodat 1-bromo-8-etil-naftalen (299 mg, 1,27 mmol, 2,0 e). Smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa EA (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-etil- 1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (140 mg, 221 umol, 34% prinos, 98% čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 626.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 208 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,0 mL) je dodat TFA (1,54 g , 13,5 mmol, 1,0 mL, 65,0 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C 10 min. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov, 2TFA) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 526.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 199 umol, 1,0 ek, 2TFA) i DIEA (309 mg, 2,39 mmol, 416 uL, 12,0 e ) u DCM

4

(2,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (37,7 mg, 299 umol, 1,50 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (1.0 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 53% - 83%, 12min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 360, 20,0 mg, 33,8 umol , 17% prinos, 98% čistoća) kao ružičasta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 580.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,74 - 7,64 (m, 2H), 7,46 - 7,35 (m, 2H), 7,27 - 7,20 (m, 2H), 6,64 - 6,60 (m, 1H), 6,46 - 6,36 (m, 1H), 5,83 (br d,J=10,4 Hz, 1H), 5,20 - 4,50 (m, 1H) 4,45 - 4,33 (m, 1H), 4,31 - 4,19 (m, 1H), 4,17 - 3,96 (m, 3H), 3,93 - 3,84 (m, 1H), 3,74 (br d,J= 18,0 Hz, 1H), 3,65 - 3,39 (m, 3H), 3,37 - 2,92 (m, 7H), 2,88 - 2,76 (m, 1H), 2,71 - 2,57 (m, 1H), 1H (M, 2H), 2,47 (br d,J=4,8 Hz, 3H), 2,34 - 2,23 (m, 1H), 2,11 - 1,98 (m, 1H), 1,80 - 1,72 (m, 3H), 1,17 (t,J= 7,4 Hz, 3H).

PRIMER 361

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il] acetonitril

4

Umetanje: [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol. U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil) pirolidin-1-karboksilata (1,0 g, 4,97 mmol, 1,0 ekv.) u THF (20,0 mL) dodat je LiAlH4 (377 mg, 9,94 mmol, k) 2.. Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata, zatim zagrevana na 70 °C i mešana na 70 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (1,0 mL) i filtrirana. Filterski kolač je ispran sa THF (10.0 mL). Zatim je matična tečnost koncentrovana da bi se dobio [(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metanol (500 mg, 4,34 mmol, 87% prinos) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 3,65 (dd,J= 4,8, 10,0 Hz, 1H), 3,52 (dd,J= 5,6, 10,0 Hz, 1H), 3,05 - 2,69 (m, 2H), 2,63 - 2,53 (m, 1H), 2,51 - 2,44 (m, 1H), 2,40 - 2,25 (M, 5H), 2,04 - 1,94 (m, 1H), 1,72 - 1,59 (m, 1H).

Korak A: terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metanola (178 mg, 1,55 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (3,0 mL) dodat je t-BuONa (124 mg, 1,29 mmol, 2,50 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Zatim terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]- 2(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (300 mg, 516 umol, 1,0 ekv.) je dodat u gornju smešu. Posle dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 ml) i ekstrahovana sa EA (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen flešom obrnute faze (C18, 0,1% FA u vodi, 0-60% MeCN) da bi se dobio terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2- [[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (220 mg, 342 umola, 66% prinosa, 98% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 632.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (360 mg, 569 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,50 mL) je dodat TFA (2,31 g , 20,3 mmol, 1,50 mL, 35,6 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (450 mg, sirov, 2TFA) kao žuto ulje.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (450 mg, 592 umol, 1,0 ekv, 2TFA) i DIEA (918 mg, 7,10 mmol, 1,24 mL ek 12. ) u DCM (4,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (112 mg, 888 umol, 1,50 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (1.0 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Blizanci 150*255u; mobilna faza: [voda (0,04 % NH3•H2O)-ACN]; B%: 70%-82% da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 361, 32,6 mg, 53,8 umol, 9% prinosa, 97% čistoće) kao siva čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 586.

1

<1>H NMR (400 MHz, kHoroform-d) δ 7,68 (br d,J=8,0 Hz, 1H), 7,54 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,45 (d,J=7,2 Hz, 1H), 7,41-7,32 (m, 1H), 7,26 (T,J= 8,0 Hz, 1H), 7,18 - 7,11 (m, 1H), 6,60 - 6,43 (m, 1H), 6,32 (br d,J=16,4 Hz, 1H), 5,75 (br d,J=10,8 Hz, 1H), 5,15 - 4,50 (m, 1H), 4,41 - 4,28 (m, 1H), 4,18 - 4,10 (m, 2H), 4,09 - 3,88 (m, 2H), 3,87 - 3,68 (m, 2H), 3,57 - 3,45 (m, 1H), 3,42 - 3,26 (m, 1H), 3,25 - 2,87 (m, 5H), 2,86 - 2,74 (m, 1H), 2,73 - 2,57 (m, 3H), 2,56 - 2,47 - 2,46 (m, - 2,37 - (h) 2,28 (s, 3H), 2,07 - 1,90 (m, 1H). LCMS [ESI, M+1]: 586.

PRIMER 362

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor 2-(1-piperidil) etanola (133 mg, 1,03 mmol, 137 uL, 3,0 ekv.) u toluenu (2,0

2

mL) dodat je t-BuONa (66,2 mg, 688 umol, 2,0 ekv.) na 0 °C . Smeša je mešana na 20°C tokom 0,5 sata. Zatim terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]- 2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 344 umol, 1,0 ekv.) je dodat u gornju tečnost na 0 °C. Posle dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (5,0 mL) i ekstrahovana sa EA (5,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE:EA = 3:1 - EA:MeOH = 10:1) da bi se dobio terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil) -2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg , 221 umol, 64% prinos, 95% čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 646.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,76 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,61 (t, J= 7,8 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,49 – 7,40 (m, 1H), 7,33 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,27 – 7,17 (m, 1H), 4,64 – 4,61 (m, 1H), 4,48 – 4,36 (m, 3H), 4,14 – 3,92 (m, 3H), 3,90 – 3,76 (m, 1H), 3,63 – 3,54 (m, 1H), 3,36 (br dd, J= 3,6, 13,6 Hz, 1H), 3,26 – 3,06 (m, 3H), 3,01 – 2,86 (m, 1H), 2,82 – 2,76 (m, 2H), 2,71 (br d, J= 6,8 Hz, 1H), 2,64 – 2,58 (m, 1H), 2,58 – 2,50 (m, 4H), 2,48 – 2,42 (m, 1H), 2,06 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 1,64 – 1,57 (m, 5H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 387 umol,

1,0 ekv.) u DCM (1,0 mL) je dodat TFA (1,54 g, 13,5 mmol, 1,0 mL) , 34,9 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov, 2TFA) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 546.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, 388 umol,

1,0 ekv.2TFA) i DIEA (601 mg, 4,65 mmol, 810 uL, 12,0 ekv.) 0 u DCM (2) ) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (73,3 mg, 581 umol, 1,5 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (1.0 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 55%-85%,12min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(1-piperidil)etoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 362, 54,0 mg, 88,1 umol, 23% prinos, 98 % čistoće) kao bezbojno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 600.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,76 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 6,58 - 6,62 (m, 1H), 6,44 - 6,36 (m, 1H), 5,83 (br d,J= 10,8 Hz, 1H), 5,15 - 4,55 (m, 1H), 4,51 - 4,36 (m, 3H), 4,20 - 3,97 (m, 2H), 3,95 -3,75 (m, 2H), 3,66 - 3,54 (m, 1H), 3,51 - 3,37 (m, 1H), 3,34 - 2,97 (m, 4H), 2,94 -2,67 (m, 4H), 2,65 - 2,57 (m, 1H), 2,55 - 2,48 (m, 4H), 1,65 - 1,60 (m, 4H), 1,49 -1,39.

PRIMER 363

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-dJpirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il] acetonitril

4

Umetanje: [(2R)-4-metilmorfolin-2-il] metanol. U rastvor terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil) morfolin-4-karboksilata (1,50 g, 6,90 mmol, 1,0 ekv.) u THF (20,0 mL) dodat je LiAlH4 (524 mg, 13,8 mmol, k) 2,0 u porcijama na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sati, zatim zagrevana na 60 °C i mešana na 60 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (1,50 mL) i filtrirana. Kolač je ispran sa THF (20,0 mL × 2). Zatim je matična tečnost koncentrovana da bi se dobio [(2R)-4-metilmorfolin-2-il] metanol (800 mg, 6,10 mmol, 88% prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 3,92 - 3,86 (m, 1H), 3,73 - 3,52 (m, 4H), 2,84 - 2,56 (m, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (dt,J= 3,6, 11,6 Hz, 1H), 1,93 (t,J= 10,8 Hz, 1H).

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metanola (203 mg, 1,55 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (4,0 mL) dodat je t-BuONa (99,2 mg, 1,03 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Zatim terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]- 2(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (300 mg, 516 umol, 1,0 ekv.) je dodat u gornju smešu. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 ml) i ekstrahovana sa EA (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, PE: EA=3:1 - EA: MeOH=10:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 366 umol, 71% prinos, 95% čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 648.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,75 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,61 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,33 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 1H), 4,68 - 4,53 (m, 1H), 4,48 - 4,31 (m, 2H), 4,29 - 4,19 (m, 1H), 4,16 - 4,01 (m, 3H), 4,00 - 3,82 (m, 4H), 3,79 - 3,69 (m, 1H), 3,63 - 3,53 (1H), -3,36 (1H), 1H (Br. D,J=3,6, 13,6 Hz, 1H), 3,29 - 3,06 (m, 3H), 3,01 - 2,86 (m, 2H), 2,83 - 2,64 (m, 3H), 2,63 - 2,45 (m, 1H), 2,36 - 2,28 (m, 3H), 2,19 (dt,J= 3,6, 11,6 Hz, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (240 mg, 370 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,0 mL) je dodat TFA (1,54 g, 13,5 mmol, 1,0 mL, 36,5 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov, 2TFA) kao svetlo crveno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 548.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, 387 umol, 1,0 ekv., 2TFA) i DIEA (599 mg, 4,64 mmol, 808 uL, 12,0 e ) u DCM (2,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (73,1 mg, 580 umola, 1,50 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je ugašena sa MeOH (1.0 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,04% NH3•H2O)-ACN]; B%: 45%-75%,10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-4-metilmorfolin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 363, 42,7 mg, 70,4 umol, 18% prinos, 99% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 602.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 7,55 - 7,50 (m, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 -7,18 (m, 1H), 6,65 - 6,52 (m, 1H), 6,39 (br d,J= 16,8 Hz, 1H), 5,83 (br d,J= 10,8 Hz, 1H), 5,25 - 4,53 (m, 1H), 4,48 - 4,32 (m, 2H), 4,30 - 4,21 (m, 1H), 4,19 -4,00 (M, 2H), 3,99 - 3,89 (m, 3H), 3,88 - 3,76 (m, 1H), 3,75 - 3,68 (m, 1H), 3,64 -3,55 (m, 1H), 3,52 - 3,35 (m, 1H), 3,31 - 2,98 (m, 4H), 2,92 - 2,55 (m, 5H), 2,31 (s, 3H), 2,18(h, 3,2 - 11,4 (h) 1H), 2,02 (d,J= 1,6, 10,8 Hz, 1H).

PRIMER 364

2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: 1-bromo-3-metoksi-2-(trifluorometil)benzen. U rastvor MeOH (1,32 g, 41,2 mmol, 1,67 mL, 2 ekv.) u DMF (125 mL) dodat je NaH (1,65 g, 41,2 mmol, 60,0 % čistoće, 2 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Zatim je u smešu dodat 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen (5 g, 20,6 mmol, 1 ekv.) i mešan na 25 °C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je ugašena ledenom vodom (20 mL). U smešu je dodata voda (300 mL) i ekstrahovana sa MTBE (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE) da bi se dobio 1-bromo-3-metoksi-2-(trifluorometil)benzen (5,28 g, 18,6 mmol, 91,0 % prinos, 90,0 % čistoća) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 7,34 - 7,28 (m, 2H), 7,01 - 6,97 (m, 1H), 3,91 (s, 3H).

Korak 2: 1-metoksi-3-metil-2-(trifluorometil)benzen. U rastvor 1-bromo-3-metoksi-2-(trifluorometil)benzena (5,28 g, 20,7 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3 (20,2 g, 62,1 mmol, 3 ekv.), metilborne kiseline (6,20 g, 104 mmol, 5 ek) u dioksanu (105 mL) i Vodi (21 mL) je dodat Pd(dppf)Cl2 (2,27 g, 3,11 mmol, 0,15 ek) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 100 °C tokom 6 sati. U smešu je dodata voda (50 mL).

Smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL).

Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE) da bi se dobio 1-metoksi-3-metil-2-(trifluorometil)benzen (3,2 g, 15,1 mmol, 73,1 % prinos, 90,0 % čistoća) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,33 (t,J=8,0 Hz, 1H), 6,87 (br d,J=8,4 Hz, 1H), 6,83 (d,J=7,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H), 2,49 (q,J=3,6 Hz, 3H).

Korak 3: 3-metil-2-(trifluorometil)fenol. U rastvor 1-metoksi-3-metil-2-(trifluorometil)benzena (3,2 g, 16,8 mmol, 1 ekv.) u DCE (65 mL) dodat je BBr3 (21,1 g, 84,1 mmol, 8,11 mL, 5 ekv.) na -40 °C, smeša je mešana na -40 - -10 °C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (100 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 50:1) da bi se dobio 3-metil-2-(trifluorometil)fenol (740 mg, 4,08 mmol, 24,2 % prinos, 97,0 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,29 - 7,24 (m, 1H), 6,87 - 6,77 (m, 2H), 5,95 (q,J=6,4 Hz, 1H), 2,46 (q,J=2,8 Hz, 3H).

Korak 4: [3-metil-2-(trifluorometil)fenil] trifluorometansulfonat. U rastvor 3-metil-2-(trifluorometil)fenola (600 mg, 3,41 mmol, 1 ekv.), TEA (1,38 g, 13,6 mmol, 1,90 mL, 4 ekv.) u EtOAc (12 mL) dodat je Tf2O (1,44 g, 5,11 mmol, 843 uL, 1,5 ekv.) na -40 °C, smeša je mešana na -40 °C tokom 0,5 sata. Smeša je ugašena vodom (10 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (20 mL), osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc od 1:0 do 100:1) da bi se dobio [3-metil-2-(trifluorometil)fenil] trifluorometansulfonat (590 mg, 1,82 mmol, 53,0 % prinos, 95,0 % čistoća) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,53 - 7,47 (m, 1H), 7,33 (d,J=7,6 Hz, 1H), 7,29 (d,J=8,4 Hz, 1H), 2,57 (q,J=2,8 Hz, 3H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil)fenil]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 600 mg, 973 umol, 1 ekv.), [3-metil-2-(trifluorometil)fenil] trifluorometansulfonat (450 mg, 1,46 mmol, 1,5 ekv.), Cs2CO3 (951 mg, 2,92 mmol, 3 ekv.) i RuPhos (90,8 mg, 195 umol, 0,2 ekv.) u toluenu (12 mL) je dodat Pd2(dba)3 (89,1 mg, 97,3 umol, 0,1 ekv.) pod N2.

Organski sloj je ispran slanim rastvorom (20 mL), osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (iz PE: EtOAc = 5:1 - 1:1 prema EtOAc: MeOH = 1:0 - 20:1). Zatim je ostatak prečišćen fleš kolonom obrnute faze (ACN/voda (0,1% FA) = 50,0%) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 354 umol, 36 % prinos, 98,0 % čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 664.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,41 - 7,35 (m, 6H), 7,18 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,07 (d,J=7,6 Hz, 1H), 7,10 - 7,04 (m, 1H), 5,20 (s, 2 H), 4,69 (br s, 1H), 4,38 (dd,J=5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,16 (t,J=3,2 Hz, 1H), 4,05 (s, 2H), 3,89 (br d,J=12,0 Hz, 1H), 3,30 (br, 2H), 3,21 - 2,95 (m, 5H), 2,92 - 2,62 (m, 6H), 2,52 (q,J=3,6 Hz, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,33 - 2,24 (m, 1H), 2,05 - 2,00 (m, 1H), 1,90 - 1,79 (m, 3H).

Korak B: NH3 je upuštan u MeOH (5 mL) tokom 5 minuta. U rastvor je dodat benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil) fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 362 umol, 1 ekv.), Pd/C (50 mg, 10,0 % čistoća) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta.

Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 30 °C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil- 2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5Hpirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 336 umol, 93,0 % prinos, 99,0 % čistoća) kao smeđe ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 530.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil)fenil]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (170 mg, 321 umol, 1 ekv.) i TEA (97,4 mg, 963 umol, 134 uL, 3 ek) u DCM (3,5 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (43,6 mg, 482 umol, 39,3 uL, 1,5 ek) na -40 °C, smeša je mešana na -40 - 30 °C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je ugašena vodom (2 mL) i odvojena. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%: 55%-85%,12min) 55%-85%,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[3-metil-2-(trifluorometil)fenil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 364, 110 mg , 188 umol, 58,0 % prinos, 100 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 584.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,35 (m, 1H), 7,19 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,08 (d,J=7,6 Hz, 1H), 6,59 (br s, 1H), 6,40 (dd,J=1,6, 16,8 Hz, 1H), 5,83 (ioni,J=10,4 Hz, 1H), 5,09 (br, 1H), 4,64 (br, 1H), 4,37 (dd,J=4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,18 - 4,08 (m, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,96 (br d,J=12,4 Hz, 1H), 3,60 (br, 1H), 3,30 (br, 1H), 3,22 - 3,01 (m, 4H), 2,98 - 2,62 (m, 5H), 2,52 (q,J=3,2 Hz, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,33 - 2,23 (m, 1H), 2,11 - 1,99 (m, 1H), 1,90 - 1,68 (m, 3H).

PRIMER 365

1

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: 3-[(1s,1 s)-2-oksa-5-azabiciklo[2,2.]heptan-5-il]propan-1-ol. U rastvor (1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptana (500 mg, 3,69 mmol, 1,0 ek, HCl), 3-bromopropan-1-ola (513 mg, 3,69 mmol, 333 uL, 1,0 ekv.) u CH3CN (6,0 mL) je dodat K2CO3 (1,53 g, 11,1 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 50 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je uparen. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, etil acetat: MeOH = 50:1 do 20:1) da bi se dobio 3-[(16',45)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propan-1-ol (195 mg, 1,12 mmol, 30% prinos, 90% čistoće) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ 4,42 (s, 1H), 3,99 (d,J=8,0 Hz, 1H), 3,82 (t,J=5,6 Hz, 2H), 3,65 - 3,61 (m, 1H), 3,53 - 3,45 (m, 2H), 2,99 - 2,92 (m, 2H), 2,84 - 2,77 (M, 1H), 2,67 - 2,61 (m, 1H), 1,86 - 1,80 (m, 1H), 1,79 - 1,58 (m, 3H).

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu 3-[(1S,4S)-2-oksa-5-

2

azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propan-1-ola (325 mg, 2,06 mmol, 3,0 ekv.), t-BuONa (198 mg, 2,06 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (2,0 mL) je dodat rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 71, korak A, 400 mg, 688 umol, 1,0 ekv.) u toluenu (2,0) mL) u porcijama, smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta pod atmosferom N2. Nakon završetka, organskom rastvaraču je dodata voda (10.0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 mL).

Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20,0 mL), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Petrolejski eter : Etil acetat=3 : 1 za etil acetat : MeOH =20 : 1) da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (320 mg, 432 umol, prinos 62%) 91% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 674.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (340 mg, 504 umol, 1,0 ek) u dioksanu (3,0 mL) je dodat HCl•dioksan (4,0 M, 3,0 mL, 23,8 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 15 minuta pod atmosferom N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen zasićenim rastvorom NaHCO3 u vodi (10 mL), ekstrahovan etil acetatom (3 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan -5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (270 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 574.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo r2.2.I1heptan-5-il1propoksi 1-6,8-dihidro-5H-piridor3,4-d]pirimidin-4-il-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (270 mg, 470 umol, 1,0 ekv.) u DCM (4,0 mL) je dodat TEA (143 mg, 1,41 mmol, 196 uL, 3,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (178 mg, 1,41 mmol, 3,0 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta pod atmosferom N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petroleum etar: Etil acetat = 3: 1 do 1: 1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 12 min) i pod liofilizacijom. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 365, 43.1 mg, 67,7 umol, 14% prinosa, 98% čistoće) je dobijena kao sivobela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 628.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 9,6 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,50 (d,J= 6,4 Hz, 1H), 7,47 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 8,0 Hz, 1H), 7,26 - 7,16 (m, 1H), 6,67 - 6,54 (m, 1H), 6,40 (d,J= 16,8 Hz, 114), 5,82 (d,J= 10,8 Hz, 1H), 5,16 - 5,03 (m, 1H), 4,48 - 4,40 (M, 1H), 4,38 - 4,34 (m, 3H), 4,22 -4,08 (m, 1H), 4,07 - 3,99 (m, 2H), 3,97 - 3,74 (m, 2H), 3,64 - 3,55 (m, 2H), 3,54 -3,35 (m, 2H), 3,31 - 3,20 (m, 1H), 3,19 - 3,14 (m, 1H), 1H 3,13 - 2,99 (m, 2H), 2,92 (d,J= 10,4 Hz, 1H), 2,89 - 2,81 (m, 1H), 2,80 - 2,76 (m, 1H), 2,75 - 2,68 (m, 1H), 2,64 - 2,57 (m, 1H), 2,52 (D,J10,0 Hz, 1H), 1,98 - 1,89 (m, 2H), 1,85 (D,J= 9,2 Hz, 1H), 1,74 - 1,70 (m, 2H).

PRIMER 366

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

4

Umetanje: U rastvor 01-terc-butil O2-metil (2S)-4,4-difluoropirolidin-1,2-dikarboksilata (300 mg, 1,13 mmol, 1,0 ekv.) u THF (8,0 mL) dodat je LiAlH4 (129 mg , 3,39 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na -40 °C 1 sat. Zatim je smeša mešana na 80 °C tokom 2 sata pod atmosferom N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (6,0 mL), osušena sa Na2SO4. Zatim je smeša filtrirana i filtrat je koncentrovan. [(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metanol (165 mg, sirov) je dobijen kao bezbojno ulje i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (156 mg, 1,03 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (2,0 mL) je dodat t-BuONa (99,2 mg , 1,03 mmol, 3,0 ekv) na 0 °C i rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 344 umol, 1,0 ekv.) u toluenu (1,0 mL) kap po kap na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana na 0 °C 30 min.

Nakon završetka, organskom rastvaraču je dodata voda (10,0 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20.0 mL), osušeni sa Na2SO4, filtrirani i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar: Etil acetat = 5: 1 do 1:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (160 mg, 230 umol, prinos 67%) 96% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 668.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (137 mg, 205 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (1,0) mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 1,0 mL, 19,5 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 15 minuta pod atmosferom N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen zasićenim

NaHCO3 vodenim rastvorom (10 mL), ekstrahovan etil acetatom (3 × 10 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (110 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanje. LCMS [ESI, M+1]: 568.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (110 mg, 194 umol, 1,0 ekv.) u DCM (3,0 mL) je dodat. TEA (196 mg, 1,94 mmol, 270 uL, 10,0 ekv.) i prop-2-enoil prop-2-enoat (73,3 mg, 581 umol, 3,0 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta pod atmosferom N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena metanolom (6.0 mL) i smeša je uklonjena pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Gemini 150×25mm×10um; Mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 55% - 85%, 12 min) i pod liofilizacijom.

Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 366, 34,1 mg, 54,5 umol, 28 % prinosa, 99% čistoće) je dobijena kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 622.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,63 (t,J=7,2 Hz, 1H), 7,50 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,42 (m, 1H), 7,34 (T,J= 8,0 Hz, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 1H), 6,63 - 6,57 (m, 1H), 6,40 (d,J=16,8 Hz, 1H), 5,84 (d,J= 10,4 Hz, 1H), 5,02 - 4,98 (m, 1H), 4,49 - 4,37 (m, 2H), 4,31 - 4,22 (m, 1H), 4,19 -3,97 (m, 2H), 3,96 - 3,89 (m, 1H), 3,88 - 3,77 (m, 1H), 3,76 - 3,65 (m, 1H), 3,64 -3,55 (m, 1H), 3,52 - 3,37 (m, 2H), 3,36 - 3,10 (m, 3H), 3,07 - 2,95 (m, 2,94 - - 2,80 - (M, 1H), 2,79 - 2,48 (m, 4H), 2,47 - 2,45 (m, 3H), 2,36 - 2,24 (m, 1H).

PRIMER 367

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 71, korak A, 200 mg, 316 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (1,5 mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 1,5 mL, 19,0 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata pod atmosferom N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10 mL), ekstrahovan etil acetatom (3 × 10 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i filtrat je koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (130 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 532.

Korak B: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 282 umol, 1,0 ekv.) u DCM (3,0 mL) je dodat piridin (446 mg, 5,64 mmol, 455 uL, 20,0 ekv. i (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (155 mg, 846 umol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana. Sirovi proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1 -metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (190 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i koristi se u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 680.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (190 mg, 280 umol, 1,0 ekv.) , KI (9,29 mg, 56,0 umol, 0,20 ekv.) i K2CO3 (387 mg, 2,80 mmol, 10,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) dodat je morfolin (146 mg, 1,68 mmol, 148 uL, 6,0 ke). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena metanolom (10.0 mL) i smeša je uklonjena pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 60%-90%, 12 min), a zatim pod liofilizacijom. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 367, 31,6 mg, 45,2 umol, 16 % prinosa, 98% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 685.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ 7,78 - 7,73 (m, 1H), 7,62 (t, .7= 7,6 Hz, 1H), 7,55 - 7,51 (m, 1H), 7,48 - 7,41 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 -7,18 (m, 1H), 7,02 - 6,91 (m, 1H), 6,55 - 6,42 (m, 1H), 5,15 - 5,01 (m, 1H), 4,47 -4,34 (m, 2H), 4,20 - 4,13 (m, 114) 4,12 - 4,04 (m, 1H), 3,95 - 3,79 (m, 2H), 3,78 -3,65 (m, 5H), 3,62 - 3,63 (m, 1H), 3,52 - 3,36 (m, 1H), 3,30 - 3,14 (m, 4H), 3,13 -2,97 (m, 3H), 2,88 - 2,77 (m, 1H), 2,73 - 2,53 - 2,52 (m, 1H), 2,46 - (h, - - (h) 2,34 -2,22 (m, 1H), 2,11 - 1,99 (m, 1H), 1,88 - 1,70 (m, 3H).

PRIMER 368

2-((2S,5S)-1-akriloil-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: ((2R,5S)-5-metilpiperazin-2-il)metanol: Ciclo(L-Ala-L-Ser) (400 mg, 2,53 mmol) je razblažen kompleksom boran-tetrahidrofuran (18716 ul, 18,7 mmol), stavljen pod azot i zagrejan do 70°C. Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je ostavljena da se ohladi. Reakcija je ohlađena do 0°C u ledenom kupatilu, nakon čega je usledilo lagano dodavanje MeOH (5116 ul, 126 mmol), a zatim dodavanje HCl (1096 ul, 6,58 mmol). Posle mešanja tokom jednog sata, reakcija je koncentrovana da bi se dobio ((2R,5S)-5-metilpiperazin-2-il)metanol (328 mg, 2,52 mmol, prinos 99,6%).

Korak B: terc-butil (6S,8aR)-6-metil-3-oksotetrahidro-3H-oksazolo[3,4-a]pirazin-7(1H)-karboksilat: ((2R,SS)-5-metilpiperazin-2-il)metanol (500 mg, 3.84 mmol) je razblažen metanolom (5 mL), stavljen pod azot i ohlađen na 0°C. Dodat je TEA (2141 ul, 15,4 mmol), a zatim BOC-anhidrid (2675 ul, 11,5 mmol) (u metanolu 5 mL, tokom 15 minuta). Reakcija je držana <10°C 1 sat, a zatim je ledeno kupatilo uklonjeno. Posle 1 dodatnog sata, reakcija je zagrejana do 50°C. Posle mešanja na 50°C tokom 12 sati, reakcija je koncentrovana da bi se dobio terc-butil (6S,8aR)-6-metil-3-oksotetrahidro-3H-oksazolo[3,4-a]pirazin-7(1H)-karboksilat (980 mg, 3,82 mmol, prinos 99,6 %).

Korak C: terc-butil (2S,5R)-5-(hidroksimetil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat: Terc-butil (6S,8aR)-6-metil-3-oksotetrahidro-3H-oksazolo[3,4-a]pirazin-7(1H)-karboksilat (980 mg, 3,82 mmol) je razblažen etanolom (10047 µl, 172 mmol) nakon čega je usledilo dodavanje NaOH (9559 ul, 19,1 mmol).

Reakcija je stavljena pod azot, zagrejana na 95°C i mešana 4 sata. TLC (metanol/DCM/NH4OH, 10/89/1) bojenje sa KMNO4 ukazuje na nestanak nešto veće rf tačke. Reakcija je ostavljena da se ohladi, a zatim stavljena u ledeno kupatilo. pH je podešen na ~9 sa 2N HCl i zatim ekstrahovan dva puta sa DCM. DCM je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan da bi se dobio terc-butil (2S,5R)-5-(hidroksimetil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat (850 mg, 3,69 mmol, 96,5 % prinos).

Korak D: 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5S)-2-(hidroksimetil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat: Terc-butil (2S,5R)-5-(hidroksimetil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat (350 mg, 1,52 mmol) je razblažen sa THF (4 mL), stavljen pod azot i ohlađen na 0°C. Dodat je NaOH (1672 ul, 1,67 mmol), a zatim je dodat benzil hloroformat (228 ul, 1,52 mmol). Posle mešanja tokom 2 sata, reakcija je razblažena etil acetatom i vodom. Voda je ekstrahovana još dva puta i etil acetat je kombinovan, osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-80% etil acetat/heksanom da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5S)-2-(hidroksimetil)-5-metilpiperazin-1,4-

1

dikarboksilat (300 mg, 0,823 mmol, 54,2 % prinos). ESI+APCI MS m/z 265,1 [M+H]<+>(minus boc).

Korak E: 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5S)-5-metil-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilat: 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5S)-2-(hidroksimetil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat (300 mg, 0,823 mmol) je razblažen sa DCM (4 mL), stavljen pod azot i ohlađen na 0°C. Dodat je DIEA (216 ul, 1,23 mmol), a zatim je dodat metansulfonil hlorid (70,1 ul, 0,905 mmol). Posle mešanja tokom 2 sata na 0°C, reakcija je razblažena sa DCM i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-50% etil acetat/heksanom da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,SS)-5-metil-2-(((metilsulfonil)oksi)metil) piperazin-1,4-dikarboksilat (290 mg, 0,655 mmol, 79,6 % prinos).

Korak F: 1-benzil 4-(terc-butil) (2S,5S)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat: 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5S)-5-metil-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilat (290 mg, 0,655 mmol) je razblažen sa DMA ( 4 mL) nakon čega je usledilo dodavanje NaCN (64,2 mg, 1,31 mmol). Reakcija je zagrejana do 55°C i mešana 12 sati. Reakcija je ostavljena da se ohladi, razblažena sa MTBE i isprana zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom i slanim rastvorom. MTBE je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan.

Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-50% etil acetat/heksanom da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (2S,5S)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat (200 mg, 0,536 mmol, 81,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 274,2 [M+H]<+>(minus boc).

Korak G: benzil (2S,SS)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat: 1-benzil 4-(terc-butil) (2S,SS)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat (200 mg, 0,536 mmol) je razblažen sa DCM (2 mL) nakon čega je usledilo dodavanje HCl (669 ul, 2,68 mmol). Posle mešanja tokom 3 sata, reakcija je koncentrovana da bi se dobio benzil (2S,5S)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat (146 mg, 0,534 mmol, 99,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 274,1

[M+H]<+>.

2

Korak H: terc-butil 4-((2S,5S)-4-((benziloksi)karbonil)-5-(cijanometil)-2-metilpiperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4- dlpirimidin-7(6H)-karboksilat: tercbutil 2,4-dihloro-5,6-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(8H)-karboksilat (211 mg, 0,695 mmol) je razblažen sa DMA ( 4 mL) nakon čega je usledilo dodavanje benzil (2S,5S)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilata (190 mg, 0,695 mmol) i DIEA (364 ul, 2,09 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 12 sati. Otkriveno je vrlo malo proizvoda, pa je reakcija zagrevana na 75°C dodatnih 12 sati. Reakcija je ostavljena da se ohladi, razblažena etil acetatom i vodom. Etil acetat je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-50% etil acetat/heksana da bi se dobio terc-butil 4-((2S,5S)-4-((benziloksi)karbonil)-5-(cijanometil)-2-metilpiperazin- 1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (53 mg, 0,0980 mmol, 14,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 541,2 [M+H]<+>.

Korak I: benzil (2S,5S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat: terc-butil 4-((2S,5S)-4-((benziloksi)karbonil)-5-(cijanometil)-2-metilpiperazin-l-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4- d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (53 mg, 0,098 mmol) je razblažen sa DCM, a zatim je dodat HCl (122 ul, 0,49 mmol). Posle mešanja tokom 4 sata, reakcija je koncentrovana da bi se dobio benzil (2S,5S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2 -(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat (43 mg, 0,098 mmol, 100 % prinos). ESI+APCI MS m/z 441,1 [M+H]<+>.

Korak J: benzil (2S,SS)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-( cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat: benzil (2S,5S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat (43 mg, 0,0975 mmol), 1-jodonaftalen (124 mg, 0,488 mmol), Cs2CO3 (95,3 mg, 0,293 mmol) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-1,1'propoksi- -bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (12,5 mg, 0,0146 mmol) su razblaženi sa DMA (600 uL), pročišćeni argonom, zatvoreni i zagrejani do 92° C. Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je ostavljena da se ohladi, razblažena etil acetatom i vodom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je ispran slanim rastvorom, osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-50% etil acetat/heksanom da bi se dobio benzil (2S,SS)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat (26,5 mg, 0,0467 mmol, 47,9 % prinos). ESI+APCI MS m/z 567,2 [M+H]<+>.

Korak K: 2-((2S,5S)-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftaten-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: benzil (2S,SS)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat (26,5 mg, 0,0467 mmol), (s)-(dicikloheksil( 2',6'-diizopropoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)-15-fosfanil)(2'-(metilamino)-[1,1'-bifenil]-2-il)paladijum(III ) metansulfonat (7,96 mg, 0,00935 mmol) i Cs2CO3 (76,1 mg, 0,234 mmol) su razblaženi sa DMA (300 uL) nakon čega je usledilo dodavanje N-metil-1-prolinola (21,5 mg, 0,187 mmol). Reakcija je pročišćena argonom, zatvorena i zagrejana na 90°C. Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je ostavljena da se ohladi, razblažena etil acetatom i vodom. Etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio benzil (2S,5S)-2-(cijanometil)-5-metil-4-(2-((S)-1 -metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (8 mg , 0,0124 mmol, 26,5 % prinos) i 2-((2S,SS)-5-metil-4-(2-((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1 -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (10 mg, 0,0195 mmol, 41,8 % prinos). ESI+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak L: 2-((2S,5S)-1-akriloil-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((2S,SS)-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (10 mg, 0,020 mmol) je razblažen sa DCM (200 uL) nakon čega je dodat DIEA (6,8 µl, 0,039). mmol). Reakcija je stavljena pod azot i ohlađena na 0°C. dodat je akriloil hlorid (1,8 ul, 0,021 mmol) i reakcija je mešana 2 sata. Reakcija je sipana u 10% rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM. DCM je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((2S,SS)-1-akriloil-5-metil-4-(2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-

4

tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il) acetonitril (PRIMER 368, 6 mg, 0,011 mmol, 54 % prinos). ESI+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

PRIMER 369

2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-akriloilpiperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat: Benzil (S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (10 g, 34 mmol) je rastvoren u DMA (68 ml, 34 mmol). U rastvor je zatim dodat terc-butil 2,4-dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (9,3 g, 30 mmol), a zatim Hunigova baza (24 ml, 135 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je zatim sipana u bazičnu vodu i ekstrahovana sa MTBE. Organski slojevi su isprani dodatnom vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je hromatografisan korišćenjem 10% do 70% EtOAc:heksana kao eluenta da bi se dobio terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro -5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (12 g, 23 mmol, 67 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 527,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (1 g, 2 mmol) je rastvoren u DCM (19 ml, 2 mmol) i tretiran hlorovodoničnom kiselinom (4,0 M rastvor u 1,4-dioksanu) (2 ml, 9 mmol).

Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana in vacuo i resuspendovana u DCM. Suspenzija je isprana sa 1M NaOH. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2Ks). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, koncentrovani u vakuumu i preneti dalje kao sirovi benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) -2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,8 g, 2 mmol, 99 % prinos). ESI+APCI MS m/z 427,1 [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-( cijanometil)piperazin-1-karboksilat:

Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (343 mg, 0,375 mmol) i 2-(dicikloheksilfosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'-bifenil (357 mg, 0,750 mmol) rastvoreni u 1,4-dioksanu (18740 ul, 1,87 mmol) i pročišćeni pod argonom 5 minuta. Reakcija je mešana na 100°C pod argonom dodatnih 15 min. U reakciju je dodat benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (800 mg, 1,87 mmol), 1-bromo-8-metilnaftalen (1243 mg, 5,62 mmol) i cezijum karbonat (1832 mg, 5,62 mmol) pod argonom. Reakcija je zatvorena pod argonom i mešana na 100°C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom normalne faze na CombiFlash-u eluiranjem sa 0%-15% DCM:MeOH (+2% NH4OH modifikatorom) da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8). -metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (378 mg, 0,667 mmol, 35,6 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 567,2 [M+H]<+>.

Korak D: benzil (S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalen-1- il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U bočici sa okruglim dnom, rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,3 g, 0,529 mmol) u dioksanu (5,29 ml, 0,529 mmol) je prskan argonom.3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1-ol (0,250 g, 1,59 mmol), Cs2CO3 (0,517 g, 1,59 mmol), Tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (0,0969 g, 0,106 mmol) i 9,9-dimetil-4,5-bis(difeil-fosfino)ksanten (0,122 g, 0,212 mmol) su dodavani uzastopno za dodavanje argona i još par. minuta. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 2 sata. Reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana u vakuumu. Koncentrat je prečišćen silika gelom eluiranjem sa 0-12% MeOH u DCM sa 2% NH4OH da bi se dobio benzil (S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[ 2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,155 g, 0,225 mmol, 42,6 % prinos). ESI+APCI MS m/z 688,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil (S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalena -1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (155 mg, 0,225 mmol) u EtOH (2253 µl, 0,225 mmol) i THF (2253 µl, 0,225 mmol) i EtOH (2253 µl, 0,225 mmol) su pročišćeni sa N2 u toku 5 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum (60,0 mg, 0,0563 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 minuta. Rastvor je zatim mešan u atmosferi H2. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi) )-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (98 mg, 0,177 mmol, 78,5 % prinos). Ovo je predstavljeno kao sirova supstanca. ESI+APCI MS m/z 554,3 [M+H]<+>.

Korak F: 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-akriloilpiperazin-2-il) acetonitril: Na suspenziju 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-( 8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (98 mg, 0,177 mmol) u dihlorometanu (1770 µl , 0,177 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat aciloil hlorid (14,4 ul, 0,177 mmol), a zatim Hunigova baza (61,8 ul, 0,354 mmol). Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Koncentrat je resuspendovan u 60:40 smeši ACN: H2O i prečišćen na Gilsonu (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5-->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenog bikarba i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM još dva puta.

Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1) ]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-akriloilpiperazin-2 -il)acetonitril (PRIMER 369, 63,5 mg, 0,104 mmol, 59,0%. ESI+APCI MS m/z 608,3 [M+H]+.

PRIMER 370

(S)-2-(1-akriloil-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

(S)-2-(1-akriloil-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(3-morfolinopropoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema PRIMERU 369 zamenom N-hidroksipropanilmorfolina za 3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1-ol i takođe zamenom metansulfonato( 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) za tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) i 9,9-dimetil-4,5-bis(difenil-fosfino)ksanten u koraku D. ESI+APCI MS m/z 596,3 [M+H]+.

PRIMER 371

(S)-3-((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid

(S)-3-((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid:

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema PRIMERU 369 zamenom 3-hidroksi-N,N-dimetilpropanamida za 3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propan-1- ol i takođe zamenjujući metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) za tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) i 9,9-dimetil-4,5-bis(difenil-fosfino)ksanten u koraku D. ESI+APCI MS m/z 568,3 [M+H]+.

PRIMER 372

2-((S)-1-((E)-but-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-1-((E)-but-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2- il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,05863 mmol) i 3-(E)-but-2-enska kiselina (6,562 mg, 0,07622 mmol) su razblaženi sa DMF (400 uL) praćeno dodavanjem DIEA (20,48 ul, 0,1173 mmol) i cikličnog anhidrida 1-propanfosfonske kiseline (52,35 ul, 0,08795 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-((E)-but-2-enoil)-4-(7-( 8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 372, 10 mg, 0,01725 mmol, 29,42 % prinos). ESI+APCI MS m/z 580,3 [M+H]<+>.

PRIMER 373

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-2-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-2-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U mikrotalasnoj cevi benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 0,198 mmol) je rastvoren u dioksanu (98,9 µl, 0,198 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (129 mg, 0,396 mmol) i 2-fluoro-3-(trifluorometil )piridin (163 mg, 0,989 mmol). Epruveta je zatim zatvorena i zagrevana na 90°C tokom 12 sati. Reakcija je ohlađena i filtrirana kroz GF/F papir i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silicijum dioksidu (0-12% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -7-(3-(trifluorometil)piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (70 mg, 0,11 mmol, 54%).

Korak B: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-2-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema PRIMERU 375, Koraci F-G supstitucijom benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridina -2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat za benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S) )-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat u PRIMERU 375 Korak F. ESI+APCI MS m/z 571,3 [M+H]+.

PRIMER 374

1

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(2,2,2-trifluoroetil)fenil)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(2,2,2-trifluoroetil)fenil)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 375, koraci E-G, zamena 1-bromo-2-(2,2,2-trifluoroetil)benzena za 4-bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E. ESI+APCI MS m/z 584,3 [M+H]<+>.

PRIMER 375

Korak A: terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: terc-butil 2,4- dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (8,0 g, 26,3 mmol), Hunigova baza (22,9 ml, 132 mmol) i 2-(piperazin-2-il)acetonitril dihidrohlorid (5.21 g, 26.3 mmol) je stavljen u DMA (75 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 20 min. Dodata je voda i

2

smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3k100 mL). Ekstrakti su kombinovani i isprani vodom (3 k 50 mL), a zatim osušeni natrijum sulfatom. Čvrste materije su filtrirane i filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7( 6H)-karboksilat.

ESI+APCI MS m/z 337,1 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)- karboksilat: terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (10,50 g, 26,725 mmol ) i TEA (5,5876 ml, 40,088 mmol) su stavljeni u THF (100 mL) i ohlađeni na 0°C. Dodat je benzil karbonohlorid (5,6518 ml, 40,088 mmol) i reakcija je mešana na 0°C 30 min. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3k 50 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-60% EtOAc u heksu) da bi se dobio terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro- 5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (12,939 g, 24,551 mmol, 91,865 % prinos). ESI+APCI MS m/z 527,2 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U bočici sa konusnim dnom, rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido [ 3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (3,28 g, 6,22 mmol) u dioksanu (62,2 ml, 6,22 mmol) je poprskan argonom i (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanolom ( 2,15 g, 18,7 mmol), Cs2CO3 (6,08 g, 18,7 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1 '-bifenil)(2'-metilamino-1,1 '-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,795 g, 0,934 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani dodatnih 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i dodata je voda. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3k15 mL) i ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-12% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1 -il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (2,65 g, 4,37 mmol, 70,3 % prinos). ESI+APCI MS m/z 606,3 [M+H]<+>.

Korak D: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )piperazin-1-karboksilat: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (0,6 g, 1,0 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (10 ml, 1,0 mmol) i tretiran hlorovodoničnom kiselinom (4,0 M rastvor u 1,4-dioksanu (1 ml, 5 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je zatim koncentrovana u vakuumu i materijal je podeljen između EtOAc i bazne vode i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su zatim isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,4 g, 0,8 mmol, 80 % prinos). ESI+APCI MS m/z 506,2 [M+H]<+>.

Korak E: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat cezijum karbonat (193 mg, 0,593 mmol), benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (60 mg, 0,119 mmol) i Rhuphos Pd G3 (9,92 mg, 0,0119 mmol) i 4-bromo-3-(trifluorometil) piridin hidrobromid (93,4 mg, 0,356 mmol). bočica je zapečaćena i 1,4-dioksan (1187 ul, 0,119 mmol) je dodat kroz septum. Ar je propuštan kroz smešu 5 minuta, a zatim je smeša zagrevana na 70°C tokom 7 h. reakcija je ohlađena, filtrirana kroz kvalitativni papir i koncentrovana. Žute čvrste materije su rastvorene u minimalnom DCM-u i prečišćene hromatografijom na silicijum dioksidu (0-12% MeOH u DCM) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (35 mg, 0,0541 mmol, 45,6%). ESI+APCI MS m/z 551,3 [M+H]<+>.

Korak F: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Cezijum karbonat (193 mg, 0,593 mmol), benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 je dodat u bočica -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (60 mg, 0,119 mmol) i Rhuphos Pd G3 (9,92 mg, 0,0119 mmol) i 4-bromo-3-(trifluorometil) piridin hidrobromid (93,4 mg, 0,356 mmol). bočica je zapečaćena i 1,4-dioksan (1187 ul, 0,119 mmol) je dodat kroz

4

septum. Ar je propuštan kroz smešu 5 min, a zatim je smeša zagrevana na 70°C tokom 7 h. reakcija je ohlađena, filtrirana kroz kvalitativni papir i koncentrovana. Žute čvrste materije su rastvorene u minimalnom DCM i prečišćene hromatografijom na silicijum dioksidu (0-12% MeOH u DCM) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi )-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (35 mg, 0,0541 mmol , 45,6%).

Korak G: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U suspenziju 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (26,4 mg, 0,0511 mmol) u CH2Cl2 (511 µl, 0,0511 mmol) na -78°C dodat je akriloil, 102 hlorid 0,102 mmol) (sveže pripremljen 0,1 M rastvor u DCM), a zatim trietilamin (14,2 ul, 0,102 mmol). Reakcija je zatim mešana na 0°C tokom 45 minuta. LC-MS je pokazao formiranje proizvoda. Reakcija je koncentrovana i prečišćena preparativnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin- 4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 375, 3 mg, 0,00526 mmol, 10,3 % prinos). ESI+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 376

2-(1-(but-2-inoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril 2,2,2-trifluoroacetat

Korak A: terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: terc-butil 2,4- dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (8,0 g, 26,3 mmol), Hunigova baza (22,9 ml, 132 mmol) i 2-(piperazin-2-il)acetonitril dihidrohlorid (5.21 g, 26.3 mmol) je stavljen u DMA (75 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 20 min. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3k100 mL). Ekstrakti su kombinovani i isprani vodom (3 k 50 mL), a zatim osušeni natrijum sulfatom. Čvrste materije su filtrirane i filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7( 6H)-karboksilat. ESI+APCI MS m/z 337,1 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)- karboksilat: terc-butil 2-hloro-4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (10,50 g, 26,73 mmol ) i TEA (5,59 ml, 40,0 mmol) su stavljeni u THF (100 mL) i ohlađeni na 0°C. Dodan je benzil karbonohlorid (5,65 ml, 40,0 mmol) i reakcija je mešana na 0°C 30 min. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3k 50 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-60% EtOAc u heksu) da bi se dobio terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro- 5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (12,94 g, 24,6 mmol, 92 % prinos). ESI+APCI MS m/z 527,2 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,8dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U bočici sa konusnim dnom, rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[ 3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (3,28 g, 6,22 mmol) u dioksanu (62,2 ml, 6,22 mmol) je poprskan argonom i (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanolom ( 2,15 g, 18,7 mmol), Cs2CO3 (6,08 g, 18,7 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1 '-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,795 g, 0,934 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani dodatnih 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i dodata je voda. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3×15 mL) i ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-12% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1 -il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (2,65 g, 4,37 mmol, 70 % prinos). ESI+APCI MS m/z 606,3 [M+H]<+>.

Korak D: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropriido[3,4-d]pirimidin-4-il )piperazin-1-karboksilat: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (0,6 g, 1,0 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (10 ml, 1,0 mmol) i tretiran hlorovodoničnom kiselinom (4,0 M rastvor u 1,4-dioksanu (1 ml, 5 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana in vacuo i materijal je podeljen između EtOAc i bazne vode i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,4 g, 0,8 mmol, 80 % prinos). ESI+APCI MS m/z 506,2 [M+H]<+>.

Korak E: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat cezijum karbonat (193 mg, 0,59 mmol), benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (60 mg, 0,12 mmol) i Rhuphos Pd G3 (9,92 mg, 0,012 mmol) i 1-bromonaftalen (49,8 µl, 60 mmol, 49,8 µl, mmol) ). Bočica je zatvorena i 1,4-dioksan (1187 ul, 0,12 mmol) je dodat kroz septum. Ar je propuštan kroz smešu 5 minuta, a zatim je smeša zagrevana na 70°C tokom 7 h. Reakcija je ohlađena, filtrirana kroz kvalitativni papir i koncentrovana. Žute čvrste materije su rastvorene u minimalnom DCM-u i prečišćene hromatografijom na silika (0-12% MeOH u DCM) da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (28 mg, 0,044 mmol, 37% prinos ). ESI+APCI MS m/z 632,4 [M+H]<+>.

Korak F: 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (45 mg, 0,071 mmol) u EtOH (712 µl, 0,071 mmol) i THF (712 µl, 0,071 mmol) dodat je 38 mg, 0,018 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), a zatim je uvedena atmosfera H2 putem vakuuma praćena pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je zatim koncentrovan da bi se dobio 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,060 mmol, 85 % prinos). ESI+APCI MS m/z 498,3 [M+H]<+>.

Korak G: 2-(1-(but-2-inoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril 2,2,2-trifluoroacetat: Na 0°C, u 25 mL RBF koji sadrži N,N-dimetilformamid (603 µl, 0,060 mmol) dodat je 2-(4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,060 mmol) i trietilamin (12.2 mg, 0,12 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je 2-butinska kiselina (6,08 mg, 0,072 mmol) dodata u jednom obroku.1-propanfosfonska kiselina ciklični anhidrid (26,9 ul, 0,090 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je ostavljena da se meša 2 sata na 0°C. Dodata je voda i reakcija je ekstrahovana sa EtOAc (2k 25 mL). Organski slojevi su isprani sa zasićenim LiCl, NaCl i vodom (10 mL za svako pranje). Osušena i koncentrovana do čvrste supstance koja je prečišćena preparativnom HPLC (5-95% ACN:H2O, TFA) čime se dobija jedinjenje iz naslova 2-(1-(but-2-inoil)-4-(2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il) acetonitril 2,2,2-trifluoroacetat (PRIMER 376, 11,2 mg, 0,02 mmol, 33% prinos). ESI+APCI MS m/z 564,3 [M+H]<+>.

PRIMER 377

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,30 g, 0,54 mmol) u dioksanima je dodat (S)-(1-metilpiperidin-2-il)metanol (0,49 g, 3,8 mmol) i Cs2CO3 (0,53 g, 1,6 mmol) i reakcija je degazirana argonom tokom 15 minuta, nakon čega je usledilo dodavanje Rhuphos Pd G3 (0,068 g, 0,081 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je ohlađena i filtrirana kroz GFF papir i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je zatim hromatografisan korišćenjem 1→15% MeOH/DCM sa 2% amonijum hidroksida kao eluenta da bi se dobio 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi) -7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,23 g, 0,45 mmol, 83 % prinos ).

ESI+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,23 g, 0,45 mmol) u DCM (20 mL) ohlađen na 0°C dodat je N-etil-N-izopropilpropan- 2-amin (0,16 ml, 0,90 mmol) nakon čega je dodat rastvor akriloil hlorida (0,037 ml, 0,45 mmol) (u 10 mL DCM) i reakcija je mešana na 0°C tokom 10 minuta. U reakciju je zatim dodat 1 mL metanola i reakcija je koncentrovana u vakuumu. Materijal je zatim hromatografisan 2Ks korišćenjem 1--> 10% MeOH/DCM sa 2% NH4OH kao eluenta da bi se dobila čvrsta supstanca koja je dalje prečišćena reverznom pripremnom HPLC korišćenjem 5→95% ACN/vode sa 0,1% TFA kao modifikatora da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 377, 0,030 g, 0,053 mmol, 12 % prinos). ESI+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

PRIMER 378

2-((2S,5R)-1-akriloil-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5? ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5R)-2-(hidroksimetil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat: Terc-butil (2R,5R)-5-(hidroksimetil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat (1,0 g, 4,34 mmol) je rastvoren u vodi (50 mL), a zatim je dodat EtOAc (6,68 ml, 4,34 mmol) i natrijum hidrogen karbonat (1,09 g, 13,0 mmol) i reakcija je mešana 3 minuta. U reakciju je dodat benzil karbonohlorid (0,648 ml, 4,56 mmol) u 1 bolusu (unutrašnja temperatura od 19 --> 25°C) i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Slojevi su zatim razdvojeni i organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je hromatografisan korišćenjem 10→70% EtOAc/Hek kao eluenta da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5R)-2-(hidroksimetil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat (1,2 g , 3,29 mmol, 75,8 % prinos). ESI+APCI MS m/z 265,2 [M+H-boc]<+>.

Korak B: 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5R)-5-metil-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilat: U rastvor 1-benzil 4-(tercbutil) (2R,5R)-2-(hidroksimetil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilata (1,2 g, 3,3 mmol) u DCM ohlađenom na 0°C dodat je N. -etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,64 g, 4,9 mmol) i metansulfonil hlorid (0,30 ml, 3,6 mmol) i reakcija je mešana na 0°C tokom 2 sata. Organski slojevi su zatim isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je zatim podvrgnut hromatografiji korišćenjem 10→70% EtOAc/heks kao eluenta da bi se dobio 1-benzil 4-(tercbutil) (2R,SR)-5-metil-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin- 1,4-dikarboksilat (1,3 g, 2,9 mmol, 89 % prinos). ESI+APCI MS m/z 343,1 [M+H-boc]<+>.

Korak C: 1-benzil 4-(terc-butil) (2S,SR)-2-(cijanometil)-S-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat: U rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (2R,5R)-5-metil-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilata (1,3 g, 2,9 mmol) u DMA (20 mL) je dodat cijanonatijum (0,29 g, 5,9 mmol) i reakcija je mešana 48 sati na 55°C. Reakcija je zatim razblažena sa baznom vodom (220 mL) i vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE. Organski slojevi su zatim isprani vodom (2k50 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko MgSO4 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je zatim podvrgnut hromatografiji korišćenjem 10→50% EtOAc/heks kao eluenta da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (2S,5R)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilat (0,90). g, 2,4 mmol, 82 % prinos). ESI+APCI MS m/z 274,1 [M+H-boc]<+>.

1

Korak D: benzil (2S,5R)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat hidrohlorid: U rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (2S,5R)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1,4-dikarboksilata (0,90 g, 2,4 mmol) u DCM dodat je hlorovodonik (3,0). ml, 12 mmol) i reakcija je mešana 2 h na sobnoj temperaturi (dodato je još 5 ekv. HCl na 1 h). Reakcija je zatim koncentrovana in vacuo i materijal je korišćen sirov u sledećoj reakciji. ESI+APCI MS m/z 274,2 [M+H]<+>.

Korak E: terc-butil 4-((2R,5S)-4-((benziloksi)karbonil)-5-(cijanometil)-2-metilpiperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido-3,4-dlpirimidin-7(6H)-karboksilat:

Čvrsti benzil (2S,5R)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat hidrohlorid (0,75 g, 2,4 mmol) i terc-butil 2,4-dihloro-5,8-dihidropirido[3,4 -d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (0.74 g, 2.4 mmol) je dodat DMA (10 mL), a zatim Hunig's Base (1.3 ml, 7.3 mmol) i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim sipana u vodu i vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE. MTBE sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko MgSO4 i koncentrovan u vakuumu.

Materijal je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem 10→70% etoac/heks kao eluenta da bi se dobio terc-butil 4-((2R,5S)-4-((benziloksi)karbonil)-5-(cijanometil)-2-metilpiperazin- 1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (0,72 g, 1,3 mmol, 55 % prinos). ESI+APCI MS m/z 541,3 [M+H]<+>.

Korak F: benzil (2S,5R)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-((2R,5S)-4-((benziloksi)karbonil)-5-(cijanometil)-2-metilpiperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[ 3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilatu (0,72 g, 1,3 mmol) u DCM (20 mL) je dodat hlorovodonik (1,7 ml, 6,7 mmol) (4 M u dioksanima) i reakcija je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim koncentrovana u vakuumu i ostatak je podeljen između EtOAc i bazne vode. Organski slojevi su odvojeni i isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je korišćen sirov u sledećoj reakciji. ESI+APCI MS m/z 441,2 [M+H]<+>.

Korak G: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil (2S,5R)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazina -1-karboksilat (0,48 g, 1,1 mmol) u dioksanima (40 mL) je dodat 1-jodonaftalen (1,4 g, 5,4 mmol) i Cs2CO3 (1,1 g, 3,3 mmol) i reakcija

2

je degazirana Ar tokom 15 minuta, a zatim dodavanje metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,14 g, 0,16 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C tokom 5 sati. Reakcija je zatim ohlađena i filtrirana kroz GFF papir i koncentrovana u vakuumu. Materijal je zatim hromatografisan korišćenjem 10→70 etoac/heks kao eluenta da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,8 g, 5,1 mmol, 64 % prinos). ESI+APCI MS m/z 567,2 [M+H]<+>.

Korak H: 2-((2S,5R)-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil (2S,5R)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-) il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)-5-metilpiperazin-1-karboksilat (0,48 g, 0,85 mmol) u dioksanima (40 mL) je dodat (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (0,39 g, 3,4 mmol) i Cs2CO3 (1,4 g, 4,2 mmol) i reakcija je degazirana sa Ar tokom 15 minuta nakon čega je usledilo dodavanje metansulfonata (2 -dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,11 g, 0,13 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je zatim ohlađena i filtrirana kroz GFF papir i koncentrovana u vakuumu. Materijal je zatim hromatografisan upotrebom 1-> 15% (MeOH 2% NH4OH)/DCM sa da bi se dobio benzil (2S,SR)-2-(cijanometil)-5-metil-4-(2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat ( 0,20 g, 0,31 mmol, 37 % prinos) i 2-((2S,5R)-5-metil-4-(2-((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen -1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,14 g, 0,27 mmol, 32 % prinos). ESI+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak I: 2-((2S,5R)-1-akriloil-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((2S,5R)-5-metil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5? ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,14 g, 0,274 mmol) ohlađen na 0°C dodat je N-etil-N-izopropilpropan- 2-amin (0,0982 ml, 0,547 mmol), a zatim akriloil hlorid (0,0225 ml, 0,274 mmol) i reakcija je mešana na 0°C tokom 10 minuta.1 mL metanola je dodat u reakciju i reakcija je koncentrovana in vacuo. Materijal je zatim prečišćen pomoću Gilson reverse prep 2 HPLC 2 puta eluiranjem sa 5→95% ACN/voda sa 0,1% TFA kao modifikatorom.

Kombinovane frakcije su podeljene između EtOAc i bazne vode i slojevi su razdvojeni. Organske materije su zatim isprane slanim rastvorom, osušene iznad MgSO 4 i koncentrovane u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((2S,5R)-1-akriloil-5-metil-4-(2-((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 378, 0,0118 g, 0,0209 mmol, 7,62 % prinos). ESI+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

PRIMER 379

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, koraci H-J, zamena 1-bromo-2-(trifluorometil)benzena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

PRIMER 380

8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-vl)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 375, Koraci C-G, zamenom (S)-(1-(2-metoksietil)pirolidin-2- il)metanol za (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol u koraku C i 1-bromonaftalen za 4-bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E.

ESI+APCI MS m/z 596,3 [ M+H]<+>.

PRIMER 381

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S,4R)-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-metoksipirolidin-1-karboksilat: pripremljen prema Primeru 375, Koraci C-F, zamenom terc-butil (2S,4R)- 2-(hidroksimetil)-4-metoksipirolidin-1-karboksilat za (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol u koraku C i 1-bromonaftalen za 4-bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E

Korak B: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: benzil 4-(2-(((2S,4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4- metoksipirolidin-2il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1 -karboksilat (27,0 mg, 0,04 mmol, formaldehid (15,7 µl, 0,2 mmol), Na(OAc)3BH (17,7 mg, 0,08 mmol) su stavljeni u THF (2 mL) i mešani 2 sata. Dodan je zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (3k15 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni sa natrijum sulfatom i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak C: 2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril je pripremljen prema Primeru 375 Korak F i G, zamenom benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((( 2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat za benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat u koraku F.

ESI+APCI MS m/z 582,3 [M+H]+.

PRIMER 382

2-(s)-1-akriloill-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperidin-il)2-pirazol-pirazolil)-piperidiil)

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, Koraci F-J, zamenom (R)-(1-metilpirolidin-2-il) ) )metanol za (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol u koraku F i 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/ z 588,3 [M+H]<+>.

PRIMER 383

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, Koraci H-J, zamenom 3-bromo-5-fluoro- 4-(trifluorometil)piridin za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 589.3 [M+H]+.

PRIMER 384

-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil) )piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: Benzil (s)-4-(2-klor-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanmetil)piperazin-1-karboksilat: (S)-butil (s)-4-(4-(benzyloksi)karbonil)-3-(cijanmetil)pirazin-1-il)-2-kloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5,37 0 g, 10,2 mmol) stavljen je u DCM (75 ml) i ohlađen C. HCl (12,7 ml, 50,9 mmol) je dodan i reakcija je bila zagrijana na rt i miješana je 2 sata. Reakcija je bila koncentrisana i doneta je u DCM-u. Dodana je zasićena bikarbonata i mešavina je izdvojena sa DCM (3x 50 ml). Organski slojevi su bili kombinovani, sušeni i koncentrirani da bi se obezbedio benzil (s)-4-(2-klor-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanmetil)piperazin-1-karboksilat (4,33 g, 10,1 mmol, 99 % prinosa) koji je upotrebljen kao takav.

Korak B: Benzil (s)-4-(2-klor-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)pijadin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanmetil)piperazin-1-karboksilat: 4-klor-2-klor-7,0-tetrahidropirido[2,29-d]pirimidin-4-il-3,4-il-2-metil-7,8-metil-1,1-pirimidin-2-il)pirimidin-2-il-2-dimetil-5,6-dimetil-6-dimetil-1-karboksilat (1,00 g, 2,3 1,1 0,35 4 mmol), metanesulfo-pirimidomin (23 1,29-0,30 5-pirimidin) 5,3 mmol) i 1,4-dioksan (15,6 ml, 2,3 mmol) bočica je deplisana sa Ar, a zatim je bila zagrijana na 90 °C za 24 sata Reakcija je bila hlađena, voda i zasićena NH4Cl je dodavana, a mešavina je izdvojena sa DCM-om. Organski slojevi su bili kombinovani i koncentrisani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (5-75% EtOAc u heksanu) da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (634 mg, 1,1 mmol, 46 % prinos).

Korak C: terc-butil (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-fluoropirolidin-1-karboksilat: U bočici sa konusnim dnom, rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (634 mg, 1,07 mmol) u dioksanu (10746 ul, 1,07 mmol) je poprskan argonom. terc-butil (2S,4R)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (942 mg, 4,30 mmol), Cs2CO3 (1050 mg, 3,22 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2', '-di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (137 mg, 0,161 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani za dodatnih 5 min.

Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 18 sati. Reakcija je ohlađena i dodata je voda. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3k20 mL) i ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-10% MeOH) da bi se dobio terc-butil (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)- 7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-fluoropirolidin- 1-karboksilat (579 mg, 0,907 mmol, 84 % prinos).

Korak D: terc-butil (2S,4R)-2-(((4-((S)-4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin) -3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-fluoropirolidin-1-karboksilat: terc-butil (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-fluoropirolidin-1-karboksilat (579 mg, 0,907 mmol), trietilamin (379 µl, 2,72) mmol) su stavljeni u CH2Cl2 (9066 ul, 0,907 mmol) i ohlađeni na 0°C. Dodat je akriloil hlorid (6044 ul, 1,81 mmol) (sveže pripremljen 0,3 M rastvor u DCM) i reakcija je mešana 45 min na 0°C. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (3k 15 mL). Slojevi su kombinovani i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak E: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoropirolidin-2-il) )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U zatvorenoj posudi terc-butil (2S,4R)-2-(((4-((S)-4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(5-fluoro-4-)) (trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-fluoropirolidin-1-karboksilat (628 mg, 0,91 mmol ) je stavljen u MeOH (2 mL). Dodat je HCl (756 ul, 4.53 mmol) (6M vodeni) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 sati. Zasićeni bikarbonat je polako dodat da bi se doveo pH ~9. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3k20 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak F: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil )piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoropirolidin-2-il) )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (175 mg, 0,30 mmol), formaldehid (111 µl, 1,48 mmol), Na(OAc)3BH (125 mg, 0,59 mmol) i stavljeni su u THF (2 mL) i mešani 2 sata. Dodat je zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (3k15 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni natrijum sulfatom i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (4-13% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)piperazin-2-il)acetonitril (69,7 mg, 0,115 mmol, 39 % prinos). ESI+APCI MS m/z 607,2 [M+H]<+>.

PRIMER 385

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-hloro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-hloro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen prema Primeru 234, Koraci H-J, zamenom 3-bromo-5-hloro- 4-(trifluorometil)piridin za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I. ESI+APCI MS m/z 605,3 [M+H]<+>.

PRIMER 386

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-izopropilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil) )piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-izopropilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil) )piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril, pripremljen je nakon pripreme prema Primeru 384, korak F, zamena propan-2-ona za formaldehid u koraku F. ESI+APCI MS m/z 635.3 [M+H]+.

1

PRIMER 387

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-hloro-4-metilpiridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5-hloro-4-metilpiridin-3-il-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, Koraci H-J, zamenom 3-bromo-5-hloro-4-metilpiridina za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 551.2 [M+H]<+>

PRIMER 388

2-(s)-1-akriloillil-4-(7-(3-fluoro-2-metilfenil)-2-((s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)azumin-2-piperitonitro)piperitonitro)piperidinil)piperitoacetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, Koraci H-J, zamena 1-bromo-3-fluoro-2-metilbenzena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 534.3 [M+H]+.

PRIMER 389

2

2-((S)-1-(but-2-ynoyl)-4-(7-(2,3-dimethylphenyl)-2-(((S)-1-methylpyrrolidin-2-yl)methoxy)-5,6,7,8-tetrahydropyrido [3,4-d]pyrimidin-4-yl)piperazin-2-yl)acetonitrile

Korak A: 1-benzil 4-(tert-butil) (R)-2-(hidroksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilat: U terc-butil (R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat (76.0 g, 351 mmol) u 3L balon je dodata voda (500 mL) i suspenzija je mešana dok se materijal potpuno ne rastvori. Ovoj smeši je dodat EtOAc (541 ml, 351 mmol), a zatim NaHC03 (88,6 g, 1,05 mol) i dobijena smeša je mešana 3 min (unutrašnja temperatura = 20°C). Ovoj smeši je dodat Cbz-Cl (52.5 ml, 369 mmol) tokom 3 minuta (unutrašnja temperatura od 20°C do 25°C, u ovom trenutku se vidi izlazni gas) i reakcija je mešana 1 d na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je prebačena u levak za odvajanje i organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen (MgS04) i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10-70% EtOAc/heks da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2(hidroksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilat (114,6 g, 327,0 mmol , 93% prinos).. ESI+APCI MS m/z 251,1 [M-Boc+H]<+>.

Korak B: 1-benzil 4-(tert-butil)(R)-2-((metilil)oksi)oksi)piperazin-1,4-dikarboksilat: U rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(hidroksimetil)piperazin-1,4-dikarboksilata (32 g, 91,3 mmol) u CH2Cl2 (457 mL, 0,2 M) ohlađen na 0° Dodat je C DIEA (24,6 ml, 137 mmol), a zatim metansulfonil hlorid (7,77 ml, 100 mmol) tokom 1 minuta i smeša je mešana na 0°C tokom 1 h. Reakciona smeša je prebačena u levak za odvajanje i isprana sa 1:1 voda/fiziološki rastvor (500 mL). Organski sloj je sakupljen, osušen (MgS04) i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10-60% EtOAc/heks da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilat (33 g, 77.0 mmol, 84.3 % prinos). ESI+APCI MS m/z 329,1 [M-Boc+H]<+>.

Korak C: 1-benzil 4-(tert-butil) (s)-2-(cijanmetil)piperazin-1,4-dikarboksilat: U rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (R)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1,4-dikarboksilata (12,6 g, 29,4 mmol) u DMA (368 ml, 73,5) mmol) prskan je argonom. U rastvor je dodat natrijum cijanid (3,60 g, 73,5 mmol) i reakcija je mešana na 55°C tokom 1 d, praćena HPLC (duga metoda) da bi se odredio završetak reakcije. Reakciona smeša je prebačena u levak za odvajanje, razblažena sa 0,5M NaOH (800 mL), zatim ekstrahovana sa MTBE (2x). Kombinovani organski slojevi su zatim isprani baznom vodom (2k 200 mL), slanim rastvorom (100 mL), osušeni (MgS04) i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10->60% EtOAc/heks kao eluentom da bi se dobio 1-benzil 4-(terc-butil) (S)-2-(cijanometil)piperazin-1,4-dikarboksilat (7.9 g, 22,0 mmol, 75 % prinos). ESI+APCI MS m/z 260,1 [M-Boc+H]<+>.

Korak D: Benzil (S)-2-(cijanmetil)piperazin-1-karboksilat klorid: U rastvor 1-benzil 4-(terc-butil) (S)-2-(cijanometil)piperazin-1,4-dikarboksilata (20,4 g, 56,8 mmol) u DCM (50 mL) dodat je hlorovodonik (99,3 mL), 397 mmol) (4,0 M rastvor u dioksanu) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1,5 h. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i osušena pod vakuumom da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (16,8 g, 56,8 mmol, 100 % prinos) u vidu pene). ESI+APCI MS m/z 260,1 [M+H]<+>.

4

Korak E: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d] pirimidin-7(6H)-karboksilat: U rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorida (16,8 g, 56,8 mmol) u DMA (114 ml, 56,8 mmol) dodat je terc-butil 2,4-dihloro-5,8 -dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (15,5 g, 51,1 mmol), a zatim DIEA (39,7 ml, 227 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je razblažena sa 1 l vode i ekstrahovana sa MTBE (2x).

Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2k200 mL), slanim rastvorom, osušeni preko MgS04 i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10-60% EtOAc/heks kao eluentom da bi se dobio terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il) -2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (22,8 g, 43,3 mmol, 76 % prinos). ESI+APCI MS m/z 527,2 [M+H]<+>.

Korak F: terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U RBF-u od 250 mL teškog zida sa PTFE poklopcem na navoj, rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro -5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5,55 g, 10,5 mmol) u dioksanu (60,2 ml, 10,5 mmol) je poprskan argonom i (S)-(1-metilpirolidinom) ) -2-il)metanol (3,64 g, 31,6 mmol), Cs2CO3 (10,3 g, 31,6 mmol), Ruphos Pd G3 (0,881 g, 1,05 mmol) su uzastopno dodavani i dobijena smeša je prskana argonom dodatnih 5 min.. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 1 dana. Nakon konzumiranja polaznog materijala, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i dodat je Cbz-Cl po potrebi da se Cbz-hidrolizovani proizvod pretvori u jedinjenje iz naslova.

Reakciona smeša je zatim podeljena između EtOAc/10% rastvora soli. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni (MgSO4) i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom od 1,5% MeOH/0,15% NH4OH/DCM do 11,25% MeOH/1,125% NH4OH/DCM (premiks 15% MeOH/1,5% NH4OH u DCM i povećanje od 10-75% ovu smešu u DCM) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,51 g, 7,45 mmol, 71%). ESI MS m/z 606,3 [M+H]<+>.

Korak G: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) )metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (7,2 g, 12 mmol) u DCM (1,0 g, 12 mmol) je dodat HCl (4M u dioksanu, 15 ml , 59 mmol). Smeša je mešana na ST tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana do bis HCl soli. Ostatak je podeljen između DCM/NaHCO3 (zas.) i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3k). Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 4,72 g (0,009 mmol, 79%). ESI MS m/z 506,3 [M+H]<+>.

Korak H: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat cezijum karbonat (967 mg, 2,97 mmol), benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (500 mg, 0,989 mmol), Rhuphos Pd G3 (124 mg, 0,148 mmol), 1-bromo-2, 3-dimetilbenzen (915 mg, 4,94 mmol) i 1,4-dioksan (9889 ul, 0,989 mmol) bočica je degazirana sa Ar i zatvorena, a zatim zagrevana na 75°C tokom 24 sata. Dodati su voda i zasićeni NH4CI i smeša je ekstrahovana sa DCM. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-12% MeOH u DCM v/0,25% NH4OH) da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2- (((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (505 mg, 0,828 mmol, 83,7 % prinos). ESI MS m/z 610,4 [M+H]<+>.

Korak I: 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (505 mg, 0,828 mmol) u EtOH (8282 µl, 0,828 mmol) i THF (8282 µl, 0,82 mmol) je bio . je dodat paladijum (441 mg, 0,207 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H20) i zatim je atmosfera H2 uvedena putem vakuuma praćena pritiskom balona. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i THF 1:1 i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je zatim koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod koji je korišćen kakav jeste. ESI MS m/z 476,3 [M+H]<+>.

Korak J: 2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5? ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Na 0°C, u 25 mL RBF koji sadrži N,N-dimetilformamid (4415 µl, 0,4415 mmol) dodat je 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-((( S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (210 mg, 0,44 mmol) i trietilamin (122,7 ul, 0,88 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je but-2-inoična kiselina (44,54 mg, 0,53 mmol) dodata u jednom obroku. 1-propanfosfonska kiselina ciklični anhidrid (197,1 ul, 0,66 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je ostavljena da se meša 2 h na 0°C. Dodata je voda i čvrste materije su filtrirane. Čvrste materije su prečišćene silika gelom (5-18% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(2,3) -dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il )acetonitril (PRIMER 389, 144 mg, 0,27 mmol, 60%). ESI+APCI MS m/z 542,3 [M+H]<+>.

PRIMER 390

2-(s)-1-akriloillol-4-(2-(2R,3S)-3-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazol-2-il)pirazacetonitril--azul)pirazol

Korak A: benzil (S)-4-(2-(((2R,3S)-1-(terc-butoksikarbonil)-3-((tertbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1- il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: pripremljen je prema Primeru 400, Korak C-E zamenom terc-butila (2R,3S)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat za (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol u koraku C.

Korak B: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2R,3S)-3-hidroksipirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril terc-butil (2R,3S)-2-(((4-((S)-4-akriloil-3) -(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-karboksilat (363 mg, 0,473 mmol) je stavljen u MeOH (10 mL). Dodat je 6M vodeni rastvor HCl i mešan je na sobnoj temperaturi 6 sati. Reakcija je ohlađena do 0°C i polako je dodat zasićeni bikarbonat. Smeša je ekstrahovana sa DCM (3k20 ml). Ekstrakti su kombinovani, osušeni, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen kakav jeste.

Korak C: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2R,3S)-3-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema PRIMERU 384, Korak F zamenom 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2R,3S)-3-hidroksipirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril za 2-((S)-1-akriloil-4-(7) -(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoropirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. ESI+APCI MS m/z 568,3 [M+H]<+>.

PRIMER 391

2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen prema Primeru 389, korak H-J, zamenom 1-bromo-8-hloronaftalena za 1-bromo-2,3-dimetilbenzen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 598,2 [M+H]<+>.

PRIMER 392

2-((S)-1-(ciklobut-1-en-1-karbonil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-(ciklobut-1-en-1-karbonil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 389 Korak J, zamenom ciklobut-1-en-1-karboksilne kiseline za but-2-inoičnu kiselinu. ESI+APCI MS m/z 556,3 [M+H]<+>.

PRIMER 393

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-metil-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(3-metil-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. benzil (S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,22 mmol), K2CO3 (329 µl, 0,66 mmol), 2,4,6-trimetil- 1,3,5,2,4,6-trioksatriborinan (82,6 mg, 0,658 mmol) i Tetrakis (25,3 mg, 0,022 mmol) su stavljeni u dioksan (731 ul, 0,22 mmol) i zagrevani na 90°C tokom 18 sati. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (3k15 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (2-80% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(3-metil-2-(trifluorometil)fenil )-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d)pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (75 mg, 0,11 mmol, 52 % prinos).

Korak B: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-metil-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 234, Korak I i J zamenom benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(3-metil-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat za benzil (S)-2-(cijanometil)-4- (2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat u koraku I. ESI+APCI MS m/z 584,3 [M+H]<+>.

PRIMER 394

1

2-(s)-1-akriloillidin-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-((s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperidin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8? -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, Koraci H-J, zamenom 1-bromo-2,3-dimetilbenzena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 530,3 [M+H]+.

PRIMER 395

2-(1-akrilol-4-(2-(s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3,4-naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril

11

Korak A: benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U mikrotalasnoj cevi benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,362 mmol) je rastvoren u dioksanu (181 µl, 0,362 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (236 mg, 0,723 mmol) i (S)-terc-butil 2-(hidroksimetil)-2 -metilpirolidin-1-karboksilat (389 mg, 1.81 mmol). Epruveta je zatim zatvorena i zagrevana na 90°C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je koncentrovan in vacuo i hromatografisan na CombiFlash-u eluiranjem sa 0%-10% DCM:MeOH. Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (264 mg, 0,361 mmol, 99,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 732,4 [M+H]<+>.

Korak B: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Benzil 4-(2-((s)-1-(tert-butoksikarbonil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)2-(cijandiil)1-oksi) bio je razradiopropan (264-3607-µl 0,361,µl 7,21-tetrahidropiridin), dioktanon,0,361-tetrahidropirido 556-tetrahidropiridioktanon, Reakcija je 1 sata izazvala sobnu temperaturu. Reakcija je bila koncentrisana u vakuolu i tretirana zasićenim bikarbonom. Vodena je ekstrahirana sa DCM (2X) i kombinovana organska sredstva osušena preko Na2SO4. Organski organski su bili koncentrirani u vakuoli da daju benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperidon, 1 92,2-karboksilna kiselina (210-0,332-karboksilna). ESI+APCI MS m/z 632,3 [M+H]<+>.

Korak C: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-(s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilna: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (105 µl µl), razradio je 94,05 mmol (0,16621868 mmol), 24,93 mmol (2,493). Mješavina za reakciju se 1 sata mešarila na 85 °C. Reakcija je bila hlađena na sobnu

12

temperaturu i tretirana zasićenim bikarbonom. Vodena je ekstrahirana sa DCM (2X). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, koncentrovani in vacuo i hromatografisani na CombiFlash eluiranju sa 0%-10% DCM:MeOH. Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1 -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (75 mg, 0,1161 mmol, 69,88 % prinos). ESI+APCI MS m/z 646,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-(2-(s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(2-naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen--il)acetonitril: Rešenje benzilnog 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1 1812 µl 0,181-karboksilna (117-0,181 mmola) µl, odnosno 0,181 mmola(1812 mmola), 5 mmola (,2 mmola). U ovo rešenje je dodano paladij (96,4 mg, 0,0453 mmol) (Degussa Type, 10 wt%, 50 % H2o), i odmah je bio ogranićen i očišćen sa N2 za dodatnih 5 min Rešenje je zatim promiješano u atmosferi H2. Mešavina je potom razrijeđena MeOH-om i filtrirana kroz pakovane celite.88-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4-2-il)-0,172-2-1,2-dimetilpirolidin-4-il)-94,9-(2-naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin--il)azulin---il (piperitonijev), ESI+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-akrilol-4-(2-((s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4-naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin--il)pirazen-2-il)acetonitril: U suspenziju od 2-(4-(2-(s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2 1720 0,17-il (88-0,17 mmol) acetonitrila (0,1760 µl), praćena je 14 mmol (0,34 µl µl) pirimidin-il). Reakcija je zatim bila miješana na ambijentalnoj temperaturi 30 minuta. Zatim je mješavina za reakciju bila koncentrirana u vakuolu. Koncentrat je suspendovan u mješavini ACN-a u 60:40: H2o i pročišćen na Gilsonu (obrnuti PAP HPLC), izmiče sa

5->95 % ACN/0,1 % TFA u vodi/0,1 % TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenih bikarbonata i DCM-a. Vodeni sloj je ekstrahiran sa DCM-om još dva puta. Organski slojevi bili su kombinovani, osušeni na na2I4, a koncentrirani u vakuolu da bi dali 2-(1-akrilol-4-(2-((s)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(1-akriloil)-5,6,7,8 2 14-tetrahidropiridinil[3,4 14-piridinilin-4-pirazon)0,025-pirazol; ESI+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

1

PRIMER 396

2-(1-akrilol-4-(2-(s)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)piperitonitro)acetonitril)acetonitril

Korak A: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočici sa konusnim dnom, rastvor benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)- 2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,362 mmol) u dioksanu (3616 µl, 0,362 mmol) je poprskan argonom i (S)-(1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metanolom (168 mg, 1,08 mmol), Cs2CO3 (353 mg, 1,08 mmol), Rhuphos Pd G3 (30,2 mg, 0,0362 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani još 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C 1 sat. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature. EtOAc je dodan i opran sa salamurom (2x). Kombinovana organska organska su osušena u odnosu na na Na2SO4 i koncentrirana u vakuu. Koncentrat je pročišćen blic kromatografijom sa 0-20 % DCM/MeOH 2 % NH4OH. Sve frakcije koje sadrže čisti željeni proizvod kombinovane su i koncentrirane da daju benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(1-il)-5,6,7,8 1 37,0-tetrahidropirido[3,4 90-d]piridin-4 0,134-il). ESI+APCI MS m/z 672,4 [M+H]<+>.

14

Korak B: 2-(4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 Prečišćen je ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (90 mg, 0,13 mmol) u EtOH (1340 µl, 0,13 mmol) i THF (1340 µl, 0,13 mmol) N25 min. Ovom rastvoru je dodat paladijum (36 mg, 0,033 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 min. Rastvor je zatim mešan u atmosferi H2. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi 2-(4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6) ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (71 mg, 0,13 mmol, 99 % prinos). ESI+APCI MS m/z 538,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U suspenziju 2-(4-(2-(((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (71 mg, 0,132 mmol) u dihlorometanu (1320 µl, 0,132 mmol) na temperaturi okoline je dodat akriloil hlorid (10,3 µl, 70 mmol). ) a zatim Hunigova baza (46,1 µl, 0,264 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Koncentrat je suspendovan u 60:40 smeši ACN: H20 i prečišćen na Gilsonu (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5-->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenog bikarba i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM još dva puta. Organski slojevi su kombinovani, sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(2-((S)-1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7 -(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 396, 15,7 mg, 0,0265 mmol, 20,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 592,4 [M+H]<+>.

PRIMER 397

1

2-(1-akrilol-4-(2-(2-dimetilamino)-2-metilpropoksi)-7-(3,4-akriloen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril

2-(1-akriloil-4-(2-(2-(dimetilamino)-2-metilpropoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 396 zamenom (S)-(1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metanola 2-dimetilamino-2-metil-1-propanolom u koraku A.. ESI+APCI MS m/z 554,4 [M+H]<+>.

PRIMER 398

2-((2S)-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido) [3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid

1

Korak A: 2-benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U mikrotalasnoj cevi benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,362 mmol) je rastvoren u dioksanu (181 µl, 0,362 mmol) i tretiran sa cezijum karbonatom (236 mg, 0,723 mmol) i N-terc-butoksikarbonil-L-prolinolom (3,81 mg mmol). Epruveta je zatim zatvorena i zagrejana na 90°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana u vakuumu. Koncentrat je hromatografisan na CombiFlash eluiranju sa 0%-10% DCM:MeOH. Sve frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil 4-(2-(((S)-1-(tercbutoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (225 mg, 0,313 mmol, 86,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 718,4 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: benzil 4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (225 mg, 0,313 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (3134 µl, 0,313 mmol) i tretiran sa TFA (483 µl, 6.2 mmol) . Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana in vacuo i organski delovi su isprani zasićenim

1

bikarbom. Organski slojevi su ekstrahovani sa DCM (3x). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (111 mg, 0,180 mmol, 57,3 % prinos). ESI+APCI MS m/z 618,3 [M+H]<+>.

Korak C: benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-(s)-1-(2-(dimetilamino)-2-oksoetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(1-naftalin-1-il)-5,6 4,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]piridin-diil-karboksilat-karboksilat: benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (111 mg, 0,1797 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (1797 ul, 0,1797 mmol) i tretiran sa N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (156,9.0,8984 mmol) i hloroacetildimetilamin (46,20 ul, 0,4492 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Dodata su još 2 ekvivalenta baze i reakcija je mešana dodatna 3 sata. Reakcija je koncentrovana u vakuumu i hromatografisana na CombiFlash eluiranju sa 0%-15% DCM/MeOH 0,5% NH4OH modifikatorom. Sve frakcije koje sadrže čist željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(2-(dimetilamino)-2-oksoetil)pirolidin-2-il)metoksi )-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (73 mg, 0,1039 mmol, 57,80 % prinos). ESI+APCI MS m/z 703,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((2S)-2-(((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4) -d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid: Rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-(2-(dimetilamino)-2-oksoetil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1- il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (73 mg, 0,10 mmol) u EtOH (1039 µl, 0,10 mmol) i THF (1039 µl, 0,10 mmol) je pročišćen sa N25 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum (28 mg, 0,026 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 minuta. Rastvor je zatim mešan u atmosferi H2. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio 2-((2S)-2-(((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid (43 mg, 0,076 mmol, 73 % prinos). ESI+APCI MS m/z 569,3 [M+H]<+>.

1

Korak E: 2-((2S)-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido) [3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid: Za suspenziju 2-((2S)-2-(((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido Dodan je [3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid (43 mg, 0,0756 mmol) u dihlorometanu (756 µl, 0,0756 mmol) na sobnoj temperaturi Akriloil hlorid (6,14 µl, 0,0756 mmol), a zatim Hunigova baza (26,4 µl, 0,151 mmol). Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, resuspendovana u 60:40 smeši ACN: H2O i prečišćen na Gilsonu (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5-->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenog bikarba i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM još dva puta. Organski slojevi su kombinovani, sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio 2-((2S)-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen) -1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid (14,9 mg, 0,0239 mmol , 31,6% prinos). ESI+APCI MS m/z 623,3 [M+H]<+>.

PRIMER 399

2-(1-akrilol-4-(2-(s)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(3,4-naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril

2-(1-akrilol-4-(2-(s)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(3,4-naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 396 zamenom (3R)-(1-metil-pirolidin-3-il)-metanola za (S)-(1-(ciklopropilmetil)pirolidin-2-il)metanol u koraku A. ESI+APCI MS m/z 552,3 [M+H]<+>.

PRIMER 400

1

2-(s)-1-akriloill-4-(2-(s)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril)acetonitril

Korak A:Benzil (s)-4-(2-klor-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanmetil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d ]pirimidin-7(6H)-karboksilatu (5.0 g, 9.5 mmol) u DCM (50 mL) je dodat hlorovodonik (12 ml, 47 mmol, 4 M rastvor u dioksanima) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je zatim koncentrovana do guste suspenzije i dodata je smeša EtOAc/voda. Vodeni sloj je bazifikovan sa 1M NaOH i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (4,0 g, 9,4 mmol, 99 % prinos). ESI+APCI MS m/z 427,1 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido(3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilati: U rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata ( 3,4 g, 8,0 mmol) u dioksanima (40 mL) je

2

dodat 1-jodonaftalen (6,0 ml, 40 mmol) i cezijum karbonat (5,2 g, 16 mmol) i reakcija je degazirana argonom tokom 15 minuta nakon čega je dodat Rhuphos Pd G3 (1,00 g, 1,2 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je zatim filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana u vakuumu. Materijal je zatim podvrgnut hromatografiji korišćenjem 10->70 EtOAc/heksana kao eluenta da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,8 g, 5,1 mmol, 64 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 553,2 [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U bočici sa konusnim dnom rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 0,452 mmol) u dioksanu (4520 ul, 0,452 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta. (3R)-(1-etil-pirolidin-3-il)-metanol (175 mg, 1,36 mmol), Cs2CO3 (442 mg, 1,36 mmol), Rhuphos Pd G3 (37,8 mg, 0,0452 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskati dodatnih 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C 1 sat. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i dodat je etil acetat. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2k), osušeni preko Na2SO4 i koncentrovati u vakuumu. Koncentrat je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-20% (MeOH 2% NH4OH)/DCM. Sve frakcije koje sadrže čist željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (118 mg, 0,183 mmol, 40,4 % prinos). ESI+APCI MS m/z 646,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6, Prečišćen je 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (237 mg, 0,367 mmol) u EtOH (3670 µl, 0,367 mmol) i THF (3670 µl, 0,367 mmol) sa N2 5 min. Paladijum (97,6 mg, 0,0917 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H20) je dodat u ovaj rastvor, i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 min.

Rastvor je zatim mešan u atmosferi H2. Smeša je zatim razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio 2-

21

((S)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (155 mg, 0,303 mmol, 82,5 % prinos). ESI+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-1-acryloyl-4-(2-(((S)-1-ethylpyrrolidin-2-yl)methoxy)-7-(naphthalen-1-yl)-5,6,7,8-tetrahydropyrido[3,4-d]pyrimidin-4-yl)piperazin-2-yl)acetonitrile: U suspenziju 2-((S)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (226 mg, 0,442 mmol) u dihlorometanu (4417 µl, 0,442 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat aciloil hlorid.42 µl. mmol), a zatim Hunigova baza (154 µl, 0,883 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i stavljena na kolonu RediSep Gold od 12 g i hromatografisana na CombiFlash (0%-15% DCM:MeOH 1% NH4OH modifikator). Sve frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane u vakuumu. Koncentrat je suspendovan u 60:40 smeši ACN:H20 i prečišćen na Gilson (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenog bikarba i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM još dva puta. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi) -7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 400, 136 mg, 0,240 mmol, 54,4 % prinos). ESI+APCI MS m/z 566,2 [M+H]<+>.

PRIMER 401

2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

22

Korak A: 2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S)-4-(2-(((S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (150 mg, 0,293 mmol), (2E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (75,7 mg, 0,586 mmol), DIEA (256 ul, 1,47 mmol) u DCM (2932 ul, 0,293 mmol) je dodat HATU (167 mg, 0,440 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 sati. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i slane vode. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2k). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu. Koncentrat je razblažen u 60:40 ACN:H20 i prečišćen na Gilson-u (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenog bikarba i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM još dva puta.

Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(2-(( (S)-1-etilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2 -il)acetonitril (PRIMER 401, 27,6 mg, 0,0443 mmol, 15,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 623,4 [M+H]<+>.

PRIMER 402

2

2-(s)-2-((4-(s)-4-akrilol-3-(cijanmetil)piperin-1-il)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-acetil)metil)metil)piridin-1-piridin

2-((S)-2-(((4-((S)-4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7) ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-il)-N,N-dimetilacetamid: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 398 zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat za benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat u koraku A. ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]+.

PRIMER 403

benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((S)-3-(dimetilamino)pirolidin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat

benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((S)-3-(dimetilamino)pirolidin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 400 zamenom (3S)-(-)-3-(dimetilamino)pirolidina za (3R)-(1-etil-pirolidin-3-il)-metanol u koraku C. ESI+APCI MS m/z 551,3 [M+H]<+>.

PRIMER 404

24

2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin) -2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: U bočici sa okruglim dnom, rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)- 3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5 g, 9,487 mmol) u dioksanu (94,87 ml, 9,487) mmol) je poprskan argonom i (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanolom (3,278 g, 28,46 mmol), Cs2CO3 (9,273 g, 28,46 mmol), metansulfonatom (2-dicikloheksilfosfino-2',6' di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,8078 g, 0,9487 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i ispražnjeni do dodatnih 5 minuta. Mešavina za reakciju je bila navlažna i grijana na 100 °C preko noći. Reakcija je filtrirana kroz papir GF/F i koncentrisana u vakuolu. Koncentrat je pročišćen na Combi Flash (0-12 % MeOH u DCM-u sa 2 % NH4OH) kako bi se obezbedio tert-butil 4-(s)-4-(benzyloksi)karbonil)-3-(cijanmetil)pirazin-1-il(s)-2 5,8 5,425-1-pirimidin(2-piridinil)-3,4 8,508-7 89,68-pirimidin(disidin). ESI+APCI MS m/z 606,4 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat: tercbutil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)- 1-

2

metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5,4 g, 8,915 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (89,15 ml, 8,915 mmol) i tretiran hlorovodoničnom kiselinom (4,0 M rastvor u 1,4-dioksanu) (11,14 ml, 44,57 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je zatim razblažena sa još DCM i 1M NaOH i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su zatim isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2S04 i koncentrovani in vacuo da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (4,364 g, 8,631 mmol, 96,82 % prinos). ESI+APCI MS m/z 506,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U bočici sa okruglim dnom, rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (4,364 g, 8,631 mmol) u dioksanu (43,15 ml, 8,631 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta.1-bromo-2,3-dimetilbenzen (5,851 ml, 43,15 mmol), Cs2CO3 (14,06 g, 43,15 mmol) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'- bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,7348 g, 0,8631 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani dodatnih 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrejana na 100°C ON. Reakcija je ohlađena do sobne temperature. Dodat je etil acetat i reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana u vakuumu. Koncentrat je prečišćen dva puta hromatografijom normalne faze na CombiFlash-u korišćenjem 0-15% MeOH u DCM sa 2% NH4OH kao eluenta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene i koncentrovane in vacuo da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,411 g, 0,8641 mmol, 100,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 476,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin) -2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (95 mg, 0,200 mmol), (2E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (51,6 mg, 0,399 mmol), DIEA (174 ul, 0,999 mmol) u DCM (1997 ul, 0,200 mmol) je dodat HATU (114 mg, 0,300 mmol) i dobijena smeša je mešana na

2

sobnoj temperaturi 5 sati. Reakciona smeša je isprana slanim rastvorom i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2k). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, koncentrovani, razblaženi u 60:40 ACN:H20 i prečišćeni na Gilson-u (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5%-95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i oslobođene sa zasićenim bikarbom i organske materije ekstrahovane sa DCM. Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio 2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil) -2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril ( 38 mg, 0,0648 mmol, 32,4 % prinos). ESI+APCI MS m/z 587,4 [M+H]<+>.

PRIMER 405

2-((2S)-1-akriloil-4-(2-(3-(dimetilamino)piperidin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((2S)-1-akriloil-4-(2-(3-(dimetilamino)piperidin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 400 zamenom N,N-dimetilpiperidin-3-amina za (3R)-(1-etil-pirolidin-3-il)-metanol u koraku C. ESI+APCI MS m/z 565,4 [M+H]<+>.

PRIMER 406

2

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2-hloro-3-fluorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2-hloro-3-fluorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 234 zamenom 1-bromo-2-hloro-3-fluorobenzena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 554,2 [M+H]<+>.

PRIMER 407

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-difluorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-difluorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 234 zamenom 1-bromo-2,3-difluorobenzena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 538,2 [M+H]<+>.

PRIMER 408

2-((S)-1-akriloil-4-(2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)amino)-7-(naftalen-1-il)-5,6,

7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak A: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)amino)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil) piperazin-1-karboksilat (300 mg, 0.542 mmol) je rastvoren u dioksanu i tretiran sa (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanaminom (356 ul, 2.71 mmol). Reakcija je mešana na 80°C tokom 3 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i podeljena između vode i EtOAc. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2Ks). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, zatim osušeni preko Na2SO4 i filtrirani. Filtrat je koncentrovan in vacuo i hromatografisan na CombiFlash-u eluiranjem sa 0%-15% DCM:MeOH 2% NH4OH da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((((S)-)- 1-metilpirolidin-2-il)metil)amino)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat acetonitril (146 mg, 0,231 mmol, 42,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 551,3 [M+H]<+>. Ostatak sinteze za jedinjenje iz naslova obavljen je sledeći Primer 396 Koraci B do C. ESI+APCI MS m/z 551,3 [M+H]<+>.

PRIMER 409

(S)-2-(1-akriloil-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(2-(piperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

(S)-2-(1-akriloil-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(2-(piperidin-1-il)etoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 400 zamenom (3R)-(1-etil-pirolidin-3-il)-metanola 1-piperidinetanolom u koraku C. ESI+APCI MS m/z 556,3 [M+H]<+>.

PRIMER 410

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 400 zamenom (R)-3-(hidroksimetil)-1-metilpirolidina za (3R)-(1-Etil-pirolidin-3-il)-metanol u koraku C. ESI+APCI MS m/z 552,3 [M+H]<+>.

PRIMER 411

2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 375, Koraci E-G, zamenom 1-bromo-3-fluoro-2metilbenzena za 4-bromo-3-( trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E.

ESI+APCI MS m/z 534,3 [M+H]<+>.

PRIMER 412

2-(1-akriloil-4-(7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 375 Koraci E-G, zamenom 2-bromo-1-fluoro-3-(trifluorometil)benzena za 4- bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E. ESI+APCI MS m/z 588,3 [M+H]+.

PRIMER 413

2-(1-akriloil-4-(7-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidi'opirido[3,4-d]pirimidin-4-il')piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 375 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-4-fluoro-2-(trifluorometil)benzena za 4-bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E. ESI+APCI MS m/z 588,3 [M+H]<+>.

1

PRIMER 414

2-(1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 375 Koraci E-G, zamenom 1-bromo-3-hloro-2-(trifluorometil)benzena za 4-bromo-3-(trifluorometil)piridin hidrobromid u koraku E i THF za MeOH u koraku F. ESI+APCI MS m/z 604.2 [M+H]+.

PRIMER 415

2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((2R,4S)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak A: benzil 4-(2-hloro-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil ) )piperazin-1-karboksilat: U bočicu je dodat cezijum karbonat (4,01 g, 12,3 mmol), benzil 4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil )piperazin-1-karboksilat (1,75 g, 4,10 mmol) i Rhuphos Pd G3 (0,343 g, 0,410 mmol), i 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen (4,98 g, 20,5 mmol). Bočica je zatvorena i 1,4-dioksan (41,0 ml, 4,10 mmol) je dodat kroz septum. Ar je propuštan kroz smešu 5 minuta, a zatim je smeša zagrevana na 70°C tokom 7 h. Reakcija je ohlađena, filtrirana kroz kvalitativni papir i koncentrovana. Žute čvrste materije su rastvorene u minimalnom DCM-u i prečišćene hromatografijom na silicijum dioksidu (0-12% MeOH u DCM) čime se dobija benzil 4-(2-hloro-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,3 g, 2,21 mmol, 54% prinos.

Korak B: benzil 4-(2-(((2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil) )fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: Rastvor benzil 4-(2-hloro-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,255 mmol) u dioksanu (2547 µl, 0,255 mmol) je poprskan argonom i (2S,4R)-4-{[tert-butil(dimetil)silil]oksi} -2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (211 mg, 0,637 mmol), Cs2CO3 (249 mg, 0,76 mmol), Rhuphos Pd G3 (21,3 mg, 0,026 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani još 5 min.. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 4 h. Smeša je filtrirana kroz GF/F papir, koncentrovana i ostatak je rastvoren u DCM i ispran vodom, vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3k15 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani, a rezultujući ostatak je prečišćen silika gelom (0-50 %EtOAc/heks 20CV, 50% EA/heks 2CV, 50-100% EA/heks 10CV) da bi se dobio benzil 4-(2-( ((2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (95 mg, 0,107 mmol, 42 % prinos).

Korak C: terc-butil (2R,4S)-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-karboksilat: pripremljen je po pripremi za PRIMER 375, Korak F i G, zamenom benzil 4-(2-(((2R,4S)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat za benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-(trifluorometil)piridin-4-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat u koraku F.

Korak D: 2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((2R,4S)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen prema PRIMERU 390, Korak B i C, zamenom terc-butil (2R,4S) )-2-(((4-(4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-karboksilat za terc-butil (2R,3S)-2-(((4-(( S)-4-akriloil-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il )oksi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)pirolidin-1-karboksilat u koraku B. ESI+APCI MS m/z 604,3 [M+H]<+>.

PRIMER 416

2-(1-akrilol-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-((2R,4R)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]piridin-4-il)piperidiilpiperidinil)2-piperidinil-pirazol-piperidiil)-piperidien-pirazol-piperi

4

2-(1-akriloil-4-(7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((2R,4R)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen prema Primeru 415, Koraci B-D zamenom terc-butil (2R,4R)-4- ((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat za (2S,4R)-4-{[tert-butil(dimetil)silil]oksi}-2-(hidroksimetil)pirolidin-1- karboksilat u koraku B. ESI+APCI MS m/z 604.3 [M+H]+.

PRIMER 417

2-(1-akriloil-4-(2-(((2R,4S)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-(1-akriloil-4-(2-(((2R,4S)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 415, Koraci B-D zamenom terc-butil (2R,4S)-4- fluoro-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat za (2S,4R)-4-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat u koraku B. ESI+ APCI MS m/z 606.2 [M+H]<+>.

PRIMER 418

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-(1-akriloil-4-(2-(((R)-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 415, Koraci B-D zamenom terc-butil (R)-2-(hidroksimetil)-2- metilpirolidin-1-karboksilat za (2S,4R)-4- {[tercbutil(dimetil)silil]oksi}-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat u koraku B. ESI+APCI MS m/z 602.3 [ M+H]+.

PRIMER 419

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4S)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-(1-akriloil-4-(2-(((2S,4S)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 415, Koraci A-D zamenom 1-bromonaftalena za 1-bromo-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzen u koraku A terc-butil (2S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat za (2S,4R)-4-{[tertbutil( dimetil)silil]oksi}-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat u koraku B. ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]<+>.

PRIMER 420

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7? ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7? ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 234, Korak H-J, zamena 1-bromo-3-hloro-2-metilbenzena za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I.

ESI+APCI MS m/z 550,3 [M+H]<+>.

PRIMER 421

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dihlorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dihlorofenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 234, Korak H-J, zamena 1-bromo-2,3-dihlorobenzena za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I.

ESI+APCI MS m/z 570,2 [M+H]<+>.

PRIMER 422

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-metoksifenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-metoksifenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 234, Korak H-J, zamena 1-bromo-3-hloro-2-metoksibenzena za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I. ESI+APCI MS m/z 566,2 [M+H]<+>.

PRIMER 423

2-((S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Primer 234, Korak F-I zamena (R)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola za (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola u koraku F, 1-bromo-3-hloro-2-(trifluorometil)benzen za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I.

Korak B: 2-((S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor trans-4-dimetilaminokrotonske kiseline (6,42 mg, 0,05 mmol) i 2-((S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1)-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril 2,2,2-trifluoroacetat (22 mg, 0,033 mmol) u dihlorometanu (331 ul, 0,033 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 18 h. Smeša je isprana slanim rastvorom, ekstrahovana sa 30% iPrOH/CHCl3 (3k), kombinovani ekstrakti i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze (5-95% ACN/H2O sa 0,1% TFA), a zatim oslobođen korišćenjem DCM i vodenog bikarba da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(7-(3-hloro). -2-(trifluorometil)fenil)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) -1-((E)-4-(dimetilamino)but2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 423, 10 mg, 0,015 mmol, 46 % prinos). ESI+APCI MS m/z 661,3 [M+H]<+>.

PRIMER 424

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(4-fluoro-2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(4-fluoro-2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 234, Korak H-J, zamena 1-bromo-4-fluoro-2,3-dimetilbenzena za 1-bromonaftalen u koraku H. ESI+APCI MS m/z 548,3 [M+H]<+>.

PRIMER 425

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2-hloro-3-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2-hloro-3-metilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 234, Korak H-J, zamena 1-bromo-2-hloro-3-metilbenzena za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I.

ESI+APCI MS m/z 550,2 [M+H]<+>.

PRIMER 426

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((2S,4R)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il? )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(metiltio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(metiltio)-5,8-dihidropirido[3,4- d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (741 mg, 1,38 mmol) u dihlorometanu (9171 µl, 1,38 mmol) je tretiran hlorovodoničnom kiselinom (1720 µl, 6,88 mmol) na 0°C i mešan do 1 r posle zagrevanja . Smeša je ugašena zasićenim NaHC03, vodena faza je odvojena i ekstrahovana sa DCM (3x).

Kombinovani ekstrakti su osušeni, filtrirani i koncentrovani dajući benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(metiltio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat (608 mg, 1,39 mmol, 100 % prinos). ESI+APCI MS m/z 439,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(metiltio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat:

4

U bočicu je dodat cezijum karbonat (1,65 g, 5,06 mmol), benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(metiltio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,74 g, 1,69 mmol) i 1-bromo-3-hloro-2-(trifluorometil)benzen (0,876 g, 3,37 mmol) i 1,4-dioksan (11,2 ml, 1,69 mmol). Smeša je pročišćena Ar tokom 10 minuta i tretirana sa metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil- 2-il)paladijum(II) RuPhos Pd G4 (0,215 g, 0,253 mmol). Smeša je pročišćena Ar tokom 10 min, dobijena smeša je zagrevana na 100°C tokom 4 sata. Reakcija je koncentrovana, tretirana vodom, ekstrahovana sa 30% iPrOH/CHCl3 (3k), osušena, filtrirana i koncentrovana, a rezultujući ostatak je prečišćen silika gelom (2-16% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio benzil (S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(metiltio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) -2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (388 mg, 0,63 mmol, 37 % prinos). ESI+APCI MS m/z 617,2 [M+H]<+>.

Korak C: benzil (2S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(metilsulfinil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil (S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(metiltio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (388 mg, 0,566 mmol) u dihlorometanu (5659 ul, 0,566 mmol) je dodata mhloroperbenzojeva kiselina (117,6 mg, 0,680 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na ovoj temperaturi 90 min. Smeša je ugašena zasićenim Na2S203, vodeni slojevi su odvojeni i ekstrahovani sa EtOAc (3x). Ekstrakti su kombinovani, osušeni, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-100% EA/heks) da bi se dobio benzil (2S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(metilsulfinil)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (282 mg, 0,445 mmol, 79 % prinos).

Korak D: (2S,4R)-4-(tert-butildilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metanol: U suspenziju metil (2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-karboksilata (3,65 g, 13,3 mmol) u tetrahidrofuranu (66,7 ml, 13,3 mmol), na 0°C pod azotom litijum borohidrid (13,3 ml, 26,7 mmol) je polako dodat. Reakcija je ostavljena da se zagreje do RT i smeša je mešana na ST tokom 18 h. Reakciona smeša je polako ugašena zasićenim NH4CI, razblažena vodom i ekstrahovana dva puta sa EtOAc (20 mL). Kombinovane organske faze su osušene, filtrirane i koncentrovane i prečišćene silika gelom (0-80% EA/heks) da bi se dobilo

41

((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2- il)metanol (1,8 g, 5,87 mmol, 44 % prinos).

Korak E: benzil (S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hloro-2-( trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor (2S,4R)-1-boc-4-(terc-butildimetilsililoksi)-2-(hidroksimetil)pirolidina (144 mg, 0,587 mmol) i benzil (2S)-4-(7-(3-hloro) -2-(trifluorometil)fenil)-2-(metilsulfinil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat 2, 2,2-trifluoroacetatu (258 mg, 0,294 mmol) u toluenu (2935 ul, 0,294 mmol) je dodat natrijum-t-butoksid (42,3 mg, 0,440 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Smeša je isprana vodom, ekstrahovana sa 30% iPrOH/CHCl3 (3k), kombinovani ekstrakti, osušeni, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gelom (0-100% EA/heks 20 CV) da bi se dobio benzil (S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)- 1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (57 mg, 0,070 mmol, 23 % prinos).

Korak F: 2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hloro-2) -(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil (S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hloro -2-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (56 mg, 0,069 mmol) u THF (688 µl, 0,069 mmol) je dodat paladijum (29 mg, 0,028 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), a zatim je atmosfera H2 uvedena kroz vakuum, praćena pritiskom balona i mešana je 6 sati.

Korak G: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((2S,4R)-4-hidroksi-1-metilpirolidin-2-il? )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema PRIMERU 384 Korak D i E supstitucijom 2-((S) )-4-(2-(((2S,4R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril za terc-butil (2S,4R)-2-(((4-(( S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(5-fluoro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-

42

5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-2-il)oksi)metil)-4-fluoropirolidin-1-karboksilat u koraku D. ESI+APCI MS m/z 620.2 [M+H]+.

PRIMER 427

2-((S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, zamena (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola za (R)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol u koraku A.

ESI+APCI MS m/z 661.3[M+H]+.

PRIMER 428

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(3-hloro-2-(trifluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 234, Korak H-J supstitucijom 1-bromo-3-hloro-2-(trifluorometil )benzen za 1-bromonaftalen u koraku H i THF za MeOH u koraku I. ESI+APCI MS m/z 604,2 [M+H]<+>.

4

PRIMER 429

1-(2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Mešani rastvor tercbutil 2-(metoksimetil)piperazin-1-karboksilata (0,715 g, 3,10 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (3 ml, 2,96 mmol) je ohlađen na ledenom kupatilu, a zatim čvrsti benzil 2,4 -dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (1,00 g, 2,96 mmol) je dodat u malim porcijama, a zatim je dodat DIPEA (0,57 mL, 3,25 mmol). Dobijeni rastvor je zagrejan do sobne temperature. i mešano 1 sat. Reakciona smeša je podeljena između vode (15 mL) i MTBE (50 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom (2∗10 mL), slanim rastvorom (10 mL), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu i upotrebljen sirov u sledećoj reakciji..

Korak B: benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3 ,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Smeša sirovog benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H) -

44

karboksilat (500 mg, 0,940 mmol), (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (216 mg, 1,88 mmol), Cs2CO3 (612 mg, 1,88 mmol) i dioksan (0,5 mL) su isprani azotom , bočica je zatvorena i mešana na 100°C tokom 2 sata, a zatim na 120°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL). Organski sloj je odvojen i ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i uparen in vacuo. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4 do 10% MeOH/DCM 0,2% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (197 mg, 34%). ESI+APCI MS m/z 611,4 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil 4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(metoksimetil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (197 mg, 0,323 mmol), metanol (10 mL) i paladijum na ugljeniku (10 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/W) je degaziran i mešano u atmosferi vodonika 1 sat. Smeša je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL). Kombinovani filtrati su upareni u vakuumu, azeotropirani uparavanjem sa toluenom i osušeni pod visokim vakuumom da bi se dobio proizvod (150 mg, 98%). ESI+APCI MS m/z 477,2 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,315 mmol), Cs2CO3 (308 mg, 0,944 mmol), dioksan (1 mL), 1-jodonaftalen (0,0689 mL, 0,472 mmol-ciklohetoksi) i -2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G3, 0,1 ekv.26,3 mg, 0,0315 mmol) je pročišćeno azotom, boca je zatvorena i reakcija je mešana na 70°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (15 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2SO4 i uparen in vacuo. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4 do 10% MeOH 0,5% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (131 mg, 69%). ESI+APCI MS m/z 603,3 [M+H]<+>.

4

Korak E: 11-(2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: terc-butil 2-(metoksimetil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (130 mg, 0,2157 mmol) je rastvoren u 1M TFA/DCM i rastvor je mešan na s.t. za 1 sat. Rastvor je podeljen između 2M Na2CO3 (5 mL) i DCM (15 mL) i slojevi su razdvojeni, a organski sloj koncentrovan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (5 mL) i ohlađen na -30°C uz mešanje i dodat je trietilamin (0,09018 ml, 0,6470 mmol), praćen dodavanjem akriloil hlorida (0,03504 ml, 0,4313 mmol). Posle 1 min na -30°C, reakciona smeša je ugašena sa NH4OH (0,05 mL) i uparena u vakuumu i osušena pod visokim vakuumom. Ostatak je rastvoren u DCM (5 mL), filtriran kroz pamučni čep i hromatografisan na silika gelu koristeći 5 do 10% MeOH/DCM 0,25% NH4OH kao eluent da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 429, 19,55 mg, 16%). ESI+APCI MS m/z 557,3 [M+H]<+>.

PRIMER 430

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(izohinolin-8-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(izohinolin-8-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-

4

il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (125 mg, 0,247 mmol), Cs2CO3 (242 mg, 0,742 mmol), 8-bromoizohinolin (77,2 mg, 0,371 mmol) i metansulfonoheksil-2-diciklos 6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G3, 0,1 ekv., 20,7 mg, 0,0247 mmol) u 2 mL dioksana je pročišćeno azotom, boca je zatvorena i mešana na 80°C tokom 2,5 sata. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2SO4 i uparen u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (100 mg, 64%). ESI+APCI MS m/z 633,3 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(izohinolin-8-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(izohinolin-8-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 0,1580 mmol) u MeOH-THF (1:1; 3 mL) je dodat paladijum na ugljeniku (30 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V) i smeša je degazirana pod vakuumom i ponovo napunjena vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi vodonika 2 sata. Reakcija je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa EtOH (3 k 2 mL). Kombinovani organski slojevi su upareni u vakuumu Ostatak je rastvoren u DCM (10 mL) i rastvor je ohlađen uz mešanje do -30°C. U rastvor je dodat NEt3 (0,14 mL), a zatim akriloil hlorid (0,02568 mL, 0,3161 mmol) i reakciona smeša je mešana na -30°C 1 minut. Reakcija je ugašena dodatkom NH4OH (0,05 mL) i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (5 mL), filtriran kroz pamučni čep i hromatografisan na silika gelu koristeći 6 do 10% MeOH/DCM 0,6% NH4OH kao eluent da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 430, 22,19 mg, 25%).

ESI+APCI MS m/z 553,3 [M+H]<+>.

PRIMER 431

4

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(ftalazin-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(ftalazin-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (101 mg, 0,200 mmol), 1-hloroftalazin (65,8 mg, 0,400 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,0696 ml, 0,400 mmol) u 1,4-dioksanu (0,5 ml, 0,200 mmol) je pročišćena azotom, reakcija zatvorena i mešana na 80°C tokom 16 sati.

Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2SO4 i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 6% MeOH/DCM 0,6% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (53 mg, 42%). ESI+APCI MS m/z 634,3 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(ftalazin-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(ftalazin-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (60 mg, 0,09467 mmol), metanol (2 ml) i paladijum na ugljeniku (20 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V) je degazirano pod vakuumom i ponovo napunjeno vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi vodonika 4 sata. Reakcija je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL). Kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (5 mL) i ohlađen na -30°C uz mešanje. U rastvor je zatim dodat trietilamin (0,06598 ml, 0,4734 mmol), a zatim akriloil hlorid (0,02308 ml, 0,2840 mmol) i reakcija je mešana 5 minuta na -30°C. Reakcija je ugašena dodatkom zas. NaHCO3 (1 mL). Smeša je zagrejana do sobne

4

temperature, dodata je voda (2 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski su se osušili na Na2SO4 i isparili u vakuolu i na kromatografiji na silikagelu sa 4 do 10 % MeOH 0,4 % NH4OH kao eluent za nečist proizvod, Koji je bio pročišćen na Gilson Prep HPCL-u za prepripremu prekurseva sa 5 do 95 % acetonitril u vodi 0,1 % TFA. Razlomci koji sadrže proizvod podeljeni su između DCM-a i sat-a. Na2KO3i slojevi odvojeni. Organski su zatim oprani sa salamurom, osušeni na Na2SO4 i koncentrirani u vakuou da bi se dao naslov (NA Primer 431, 1,1 mg, 2 %).

ESI+APCI MS m/z 554,2 [M+H]<+>.

PRIMER 432

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-4-(2-(((R)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Smeša benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 0,452 mmol), (R)-(1-metilpiperidin-2-il)metanol (175 mg, 1,36 mmol) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'- di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (19,2 mg, 0,0226 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL ) je pročišćen azotom i mešan na 80°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između MTBE (20 mL) i vode (5 mL) i

4

slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i koncentrovan in vacuo. Ostatak je rastvoren u MeOH (5 mL), a zatim je dodat paladijum na ugljenik (70 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/W). Reakciona smeša je degazirana pod vakuumom i ponovo napunjena vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi H2 tokom 1,5 sata. Reakcija je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL) i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio proizvod, koji je upotrebljen sirov u sledećoj reakciji.. ESI+APCI MS m/z 512,3 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Sirovi 2-((S)-4-(2-(((R)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (292 mg, 0,57068 mmol) rastvoren je u DCM (10 mL), praćeno dodavanjem trietilamina (238,63 µl, 1,7120 mmol) i rastvor ohlađen. je -30°C. U reakciju je zatim dodat akriloil hlorid (92,728 ul, 1,1414 mmol) u kapima i smeša je mešana na -30°C tokom 10 minuta. Zatim je dodat EtOH (0.1 mL) i reakcija je zagrejana na 0°C. Smeša je hromatografisana direktno na silicijum dioksidu korišćenjem 5% MeOH 0,5% NH4OH/DCM kao eluenta, nakon čega je usledilo ponovno prečišćavanje materijala korišćenjem istih uslova za eluiranje da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 432, 107,47 mg, 33%). ESI+APCI MS m/z 566,3 [M+H]<+>.

PRIMER 433

1-((S)-2-(2-metoksietil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak A: 4-benzil 1-(terc-butil) (S)-2-(2-hidroksietil)piperazin-1,4-dikarboksilat: Čvrsti (S)-terc-butil-2-(2-hidroksietil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (500 mg, 1,874 mmol) i NaHC03 (629,8 mg, 7,497 mmol) su dodati EtOAc i voda (10 mL svaki) i smeša je ohlađena na 0°C, a zatim je u kapima dodavan benzil karbonohloridat (0,4013 ml, 2,811 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći uz zagrevanje do sobne temperature. Slojevi su zatim razdvojeni i organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i koncentrovan u vakuumu. Materijal je zatim hromatografisan na silika gelu korišćenjem 20% do 40% EtOAc/heksana kao eluenta da bi se dobio proizvod (578 mg, 85%). ESI+APCI MS m/z 256,2 [M-Boc+H]<+>.

Korak B: 4-benzil 1-(terc-butil) (S)-2-(2-metoksietil)piperazin-1,4-dikarboksilat: Mešani rastvor 4-benzil 1-(terc-butil) (S)-2-(2-hidroksietil)piperazin-1,4-dikarboksilata (270 mg, 0,741 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml, 0,741) mmol) pod N2 je ohlađen na -20°C, nakon čega je usledilo dodavanje natrijum hidrida (44,4 mg, 1,11 mmol) u jednom bolusu. Reakcionoj smeši je zatim dodat jodometan (0,138 ml, 2,22 mmol) i reakciona smeša je zagrejana do s.t. preko 1 sata i nastavljeno mešanje 1 sat na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodavanjem leda (~5 g) i smeša je podeljena između MTBE (20 mL) i vode (10

1

mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio proizvod koji je korišćen sirov u sledećoj reakciji (252 mg, 90%). ESI+APCI MS m/z 279,1 [M-Boc+H]<+>.

Korak C: terc-butil (S)-2-(2-metoksietil)piperazin-1-karboksilat: U smešu 4-benzil 1-(terc-butil) (S)-2-(2-metoksietil)piperazin-1,4-dikarboksilata (252 mg, 0,666 mmol) u metanolu (5 ml) dodat je paladijum na ugljeniku. (50 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V) i reakcija je degazirana pod vakuumom i dopunjena vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi vodonika 3 sata. Suspenzija je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i sušeni pod visokim vakuumom da bi se dobio proizvod (140 mg, 86%). ESI+APCI MS m/z 245,2 [M+H]<+>.

Korak D: benzil (S)-4-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-(2-metoksietil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7( 6H)-karboksilati: Rastvor sirovog terc-butil (S)-2-(2-metoksietil)piperazin-1-karboksilata (140 mg, 0,573 mmol) i N,N-dimetilacetamida (0,5 ml, 0,573 mmol) je ohlađen na 0°C i benzil 2,4-dihloro-5,6-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(8H)-karboksilat (194 mg, 0,573 mmol) je dodat u jednom bolusu. Reakciona smeša je mešana preko noći, a zatim je dodat N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,150 ml, 0,859 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je podeljena između MTBE (20 mL) i zas. NaHCO3 (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2SO4 i koncentrovan in vacuo. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 2% MeOH/DCM kao eluenta da bi se dobio proizvod (190 mg, 61%).).

Korak E: benzil 4-((S)-4-(terc-butoksikarbonil)-3-(2-metoksietil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Smeša benzil (S)-4-(4-(tercbutoksikarbonil)-3-(2-metoksietil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidina -7(6H)-karboksilat (190 mg, 0,348 mmol), (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (120 mg, 1,04 mmol), Cs2CO3 (340 mg, 1,04 mmol) i 1,4- dioksan (0,5 ml) pod atmosferom N2 je zagrevan na 120°C tokom 20 sati. Reakcija je ohlađena, razblažena sa EtOAc (3 mL), filtrirana kroz celit i koncentrovana in vacuo. Ostatak

2

je hromatografisan na silika gelu koristeći 4 do 8% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluent da bi se dobio proizvod (77 mg, 35%). ESI+APCI MS m/z 625,3 [M+H]<+>.

Korak F: terc-butil (S)-2-(2-metoksietil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: U smešu benzil 4-((S)-4-(terc-butoksikarbonil)-3-(2-metoksietil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (77 mg, 0,12 mmol) u metanolu (5 ml) dodat je paladijum na ugljeniku (20 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/W) i suspenzija je degazirana pod vakuumom i ponovo napunjena vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi vodonika preko noći.

Suspenzija je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL).

Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i azeotropirani sa toluenom (2*2 mL) da bi se dobio proizvod koji je korišćen sirov u sledećoj reakciji.. ESI+APCI MS m/z 491,3 [M+H]<+>.

Korak G: terc-butil (S)-2-(2-metoksietil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša sirovog terc-butil (S)-2-(2-metoksietil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (60 mg, 0,122 mmol), Cs2CO3 (120 mg, 0,367 mmol), dioksan (2 mL), 1-jodonaftalen (0,0268 mL, 0,183 mmol). ) (1,5 ekv.) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum( II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 ekv., 10.2 mg, 0.0122 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 80°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i uparen in vacuo. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 5% MeOH/DCM 0,5% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (56 mg, 74%). ESI+APCI MS m/z 617,4 [M+H]<+>.

Korak H: 4-((S)-3-(2-metoksietil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin: Čvrsti terc-butil (S)-2-(2-metoksietil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (56 mg, 0,091 mmol) je dodat hlorovodonik (0,5 ml, 2,0 mmol) i reakcija je mešana na 0°C praćeno zagrevanjem na sobnu temperaturu tokom 15 minuta, u kom trenutku se formira čvrsta supstanca. Organske materije su dekantirane i čvrste materije su podeljene između DCM (12 mL) i 2M Na2CO3 (1 mL) i slojevi su razdvojeni.

Organski sloj je osušen preko K2CO3 i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. ESI+APCI MS m/z 517,3 [M+H]<+>.

Korak I: 1-((S)-2-(2-metoksietil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on. Sirovi 4-((S)-3-(2-metoksietil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin (39 mg, 0,07548 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL), a zatim je dodat trietilamin (31,56 µl, 0,2264 mmol) i rastvor je ohlađen do -40°C i mešano 5 minuta, a zatim je u kapima dodavan akriloil hlorid (12,26 ul, 0,1510 mmol). Reakciona smeša je mešana na -30°C 10 minuta, a zatim je dodat MeOH (0.05 mL). Smeša je zagrejana do 0°C i organski delovi su isprani sa 0.5M Na2C03. Organski sloj je uparen in vacuo i hromatografisan na silika gelu korišćenjem 5% MeOH 0,5% NH4OH u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 433, 25,45 mg, 59%).

ESI+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 434

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Korak A: 8-(trifluorometil)naftalin-1-il trifluorometansulfonat: U mešani rastvor 8-(trifluorometil)naftalen-1-ola (500 mg, 2,36 mmol) u DCM (10 mL) na 0°C dodat je N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (616 µl, 3,53). mmol), a zatim kap po kap dodavanja anhidrida trifluorometansulfonske kiseline (475 ul, 2,83 mmol) i reakciona smeša je mešana 1 sat dok se zagreva do sobne temperature. Reakcija je sledeća razrijeđena heksinom (20 ml) i MTBE (5 ml), a orghike oprane sa sat. NaHCO3, voda i sol (5 ml svaki), osušeni na Na2SO4 i koncentrirani u vakuu. Talog je otopljen u 10 % EtOAc/10 % DCM u heksanu, a materijal profiltriran kroz čep od silikagela. Organski organci su bili koncentrisani i kromatografski na silikagelu koji su koristili 5 do 10 % EtOAc/hexane kao eluent da bi dali nečisti materijal. Čvrsto je konačno kristalizirano iz heksana, a kruto oprano sa malom količinom hladnog heksana za davanje proizvoda (482 mg, 59 %).

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša sirovog benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,38 mmol), Cs2CO3 (1353 mg, 4,15 mmol), toluen (7 ml), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di -i-propoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G4, 0,1 ekv., 116 mg, 0,138 mmol) i 8-(trifluorometil)naftalen-1-il trifluorometansulfonat (715 mg, 2.08 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 90°C tokom 5 sati. Reakcijska smjesa je hlađena, podeljena između EtOAc (50 ml) i vode (20 ml) i slojevi su odvojeni. Organski sloj je opran vodom i slanom vodom (svaka po 10 ml), osušen preko Na2SO4 i ispario u vakuolu. Talog je kromatografija na silikatnom gelu sa 4 % MeOH/DCM 0,4 % NH4OH kao eluent za davanje proizvoda (86 mg, 9 %).

ESI+APCI MS m/z 700,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (86 mg, 0,123 mmol), metanol (3 ml, 74,2 mmol) i paladijum na ugljeniku (30 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V) je degazirano pod vakuumom i ponovo napunjeno vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi H2 tokom 1 sata. Reakcija je zatim filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo da bi se dobio sirovi proizvod (60 mg, 86%).

Korak D: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg, 0,08839 mmol) rastvoren je u DCM (10 mL) nakon čega je usledilo dodavanje trietilamina (36,96 µl, 0,2652 mmol) i rastvor je ohlađen na -40°C i mešan 5 minuta, nakon čega je ukapavanjem dodavan akriloil hlorid (14,36 ul, 0,1768 mmol). Reakcijska smjesa je miješana na -30 °C 10 minuta, nakon čega je uslijedilo dodavanje 0,01 ml akriloilklorida. MeOH (0,05 ml) je zatim dodan reakciji, a mešavina zagrijana na 0 °C. Reakcija je sledeća, PRALA SA 0,5 NA2CO3, a organski su se razdvojili. Organski organski su isparavali u vakuolu i kromatografiji na silikagelu koristeći 5 %MeOH 0,5 % NH4OH u DCM-u kao eluent da bi se dala naslovna smjesa (NA Primer 434, 39 mg, 71 %).

PRIMER 435

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dihidrobenzofuran-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(2,3-dihidrobenzofuran-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,396 mmol), Cs2CO3 (387 mg, 1,19 mmol), dioksan (0,5 mL), 7-bromo-2,3-dihidrobenzofuran (118 mg, 0,593 mmol, 1,5 ekv.) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum (II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 ekv., 33.7 mg, 0.0396 mmol) je pročišćen azotom, reakcija je zatvorena i mešana na 80°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL), a zatim su slojevi razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i uparen in vacuo. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (97 mg, 39%). ESI+APCI MS m/z 624,3 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-4-(7-(2,3-dihidrobenzofuran-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(2,3-dihidrobenzofuran-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (97 mg, 0,16 mmol), metanol (4 ml), THF (4 mL) i paladijum na ugljeniku (30 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V) je degazirano pod vakuumom i ponovo napunjeno vodonikom, a reakcija je mešana u atmosferi vodonika preko noći. Ostatak je filtriran kroz elitu (1 ml), a celit je opran sa MeOH (3x2 ml).

Kombinovani organski proizvodi su isparili u vakuou da bi dali sirov proizvod. ESI+APCI MS m/z 490,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dihidrobenzofuran-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Trietilamin (58,93 µl, 0,4228 mmol) je dodan nakon čega je usledio dodatak akriloilklorida (22,90 µl, 0,2818 mmol), a reakcija je bila 5 minuta mešana na -30 °C. Reakcija je sledeća ugurana dodavanjem MeOH (0,05 ml) i reakcijom zagrijanom na sobnu temperaturu. Organski proizvodi su oprani SA 0,5 NA2CO3(4 ml), osušeni na oko K2CO3i isparili u vakuolu. Talog je kromatografija na silikatnom gelu u upotrebi 5 % MeOH 0,5 % NH4OH kao eluent da bi se dala naslovna smjesa (NA PRIMER 435, 45,85 mg, 60 %). ESI+APCI MS m/z 544,3 [M+H]<+>.

PRIMER 436

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(1-metil-1H-indol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 7-jodo-1-metil-1H-indol: Mešani rastvor 7-jodo-1H-indola (4,11 ml, 2,06 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 ml, 51,9 mmol) je ohlađen na -20°C i dodat je natrijum hidrid (123 mg, 3,09 mmol), koji se mešao. u malim porcijama, praćeno dodavanjem jodometana (0,256 ml, 4,11 mmol) i smeša je zagrejana do sobne temperature tokom perioda od 2 sata. Smeša je podeljena između MTBE (40 mL) i smeše ledene vode (20 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom (2Ks20 mL), slanim rastvorom (10 mL), osušen preko Na2S04 i uparen in vacuo. Čvrsta supstanca je isprana sa MTBE (1 mL). Čvrsta supstanca je rekristalizovana iz MTBE da bi se dobio proizvod (0,31 g, 59%).

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(1-metil-1H-indol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,396 mmol), Cs2CO3 (387 mg, 1,19 mmol), dioksan (0,5 mL), 7-jodo-1-metil-1H-indol (153 mg , 0,593 mmol) (1,5 ekv.) i metansulfonato (2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2- il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 ekv., 33.7 mg, 0.0396 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 90°C tokom 5 sati, a zatim preko noći na 80°C. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2SO4 i uparen in vacuo. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (65 mg, 26%). ESI+APCI MS m/z 635,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(7-(1-metil-1H-indol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(1-metil-1H-indol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (65 mg, 0,10 mmol), metanol (6 ml) i paladijum na ugljeniku (30 mg , 5%, Degussa tip E101 NO/V) je degazirano pod vakuumom i ponovo napunjeno vodonikom i smeša je mešana u atmosferi vodonika preko noći. Suspenzija je filtrirana kroz celit (1 mL) i celit je ispran sa MeOH (3 Ks 2 mL). Kombinovani organski slojevi su upareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. ESI+APCI MS m/z 501,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(1-metil-1H-indol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor 2-((S)-4-(7-(1-metil-1H-indol-7-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (51 mg, 0,1019 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen na -30°C uz mešanje i zatim dodavanjem trietilamina (42,60 ul, 0,3056 mmol) i akriloil hlorida (16,55 ul, 0,2037 mmol). Posle mešanja tokom 5 minuta na -30°C, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (0,05 mL) i zagrejana do sobne temperature. Organski slojevi su isprani sa 0,5 M Na2C03 (4 mL), osušeni preko K2CO3 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 5% MeOH 0,5% NH4OH kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 436, 36 mg, 64%). ESI+APCI MS m/z 555,3 [M+H]<+>.

PRIMER 437

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5? ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg, 0,1013 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen na -30°C, a zatim dodavanjem trietilamina (42,35 ul, 0,3039 mmol) i akriloil hlorida (16,46 ul, 0,2026 mmol). Posle mešanja tokom 5 minuta na -30°C, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (0,05 mL) i zagrejana do sobne temperature. Organski slojevi su isprani sa 0,5 M Na2CO3 (4 mL), osušeni preko K2CO3 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 437, 34 mg, 61%). ESI+APCI MS m/z 548,3 [M+H]<+>.

PRIMER 438

2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((2S,4R)-4) -fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1

Korak A: 2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((2S,4R)-4) -fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U mešani rastvor 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg, 0,1013 mmol) u DCM (1 mL) je dodat (2E)-4- (Dimetilamino)but-2-enska kiselina (26,17 mg, 0,2026 mmol), N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,03529 ml, 0,2026 mmol) i O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (57,77 mg, 0,1519 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Zatim je dodata voda (1 mL) i reakciona smeša je mešana 5 minuta. Smeša je podeljena između EtOAc (10 mL) i zas. NaHCO3 (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa NaHCO3, slanim rastvorom, osušen preko K2CO3 i uparen u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 5% MeOH 0,5% NH4OH kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 438, 45 mg, 74%). ESI+APCI MS m/z 605,3 [M+H]<+>.

PRIMER 439

2-(4-akriloil-1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak A: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-2-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)- karboksilati: Mešani rastvor 2-(piperazin-2-il)acetonitrila (0,2 g, 1,278 mmol) u smeši DCM (20 mL) i iPrOH (10 mL) je ohlađen na -30°C i benzil karbonohloridata (0,2190 ml, 1,534 mmol) je dodato u kapima i reakcija je mešana 1 sat uz zagrevanje do sobne temperature. Organske materije su isparene pod sporim protokom N2. Ostatak je rastvoren u N,N-dimetilacetamidu (1 ml, 1,278 mmol) nakon čega je dodat N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,3340 ml, 1,917 mmol) i terc-butil 2,4-dihloro-5 ,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (0,3888 g, 1,278 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 70°C tokom 2 sata, nakon čega je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 dana. Reakcija je podeljena između vode (5 mL) i MTBE (20 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2S04 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu koristeći 40 do 100% EtOAc/heksan kao eluent da bi se dobio proizvod (134 mg, 20%). ESI+APCI MS m/z 527,2 [M+H]<+>.

Korak B: terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-2-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8- dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Smeša terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-2-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7( 6H)-karboksilat (134 mg, 0,254 mmol), Cs2CO3 (249 mg, 0,763 mmol), metansulfonato (2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'- metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (21,6 mg, 0,0254 mmol), (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (146 mg, 1,27 mmol) i 1,4 -dioksan (2 ml, 0,254 mmol) je pročišćen sa N2, reakcija je zatvorena i mešana na 80°C tokom 3 sata. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5 mL), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu koristeći 4% MeOH 0,4% NH4OH/DCM kao eluent da bi se dobio proizvod (60 mg, 39%). ESI+APCI MS m/z 606,3 [M+H]<+>.

Korak C: benzil 3-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )piperazin-1-karboksilat: Čist (terc-butil 4-(4-((benziloksi)karbonil)-2-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (60 mg, 0,09905 mmol)) je razblažen sa DCM (0,2 mL). Reakcija je ohlađena na 0°C i 4M HCl u dioksanu (0,50 mL, 20 ekv.) je dodato uz mešanje.Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i ostavljena u frižideru preko noći, pri čemu je taložena čvrsta supstanca. Tečna faza je dekantirana, a čvrsta supstanca podeljena između DCM (10 mL) i 2M Na2CO3 (0,5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su sušeni preko K2CO3 i ispareni u toku N2. Proizvod je korišćen sirov u sledećoj reakciji..

Korak D: benzil 3-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša sirovog benzil 3-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il)piperazin-1-karboksilat (50 mg, 0,0989 mmol), Cs2CO3 (96,7 mg, 0,297 mmol), dioksan (0,5 mL), 1-jodonaftalen (37,7 mg, 0,148 mmol, 1,5 metansulfona ekv.2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G40,1 ekv., 8,42 mg, 0,00989 mmol) je pročišćena azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 80°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2S04 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silicijum dioksidu koristeći 4% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluent da bi se dobio nečist proizvod, koji je prečišćen reverznom pripremnom HPLC hromatografijom eluiranjem sa 5 do 95% MeCN/voda 0,1% TFA (prvo eluirano jedinjenje). Ciljne frakcije su razblažene sa 2M Na2CO3 i vodena je

4

kasnije ekstrahovana sa DCM (3Ks20 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (15 mL), osušeni preko K2CO3 i upareni u vakuumu da bi se dobio proizvod (26 mg, 42%). ESI+APCI MS m/z 632,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d) ]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Smeša benzil 3-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (26 mg, 0,041 mmol), metanol (2 ml) i paladijum na ugljeniku (10 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V ) je degazirana pod vakuumom i ponovo napunjena vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi vodonika 1,5 sata. Reakcija je filtrirana kroz celit (2 mL) i celit je ispran sa MeOH (3Ks3 mL). Kombinovani organski slojevi su upareni u vakuumu da bi se dobio proizvod koji je upotrebljen sirov u sledećoj reakciji. ESI+APCI MS m/z 498,3 [M+H]<+>.

Korak F: 2-(4-akriloil-1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor 2-(1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (15 mg, 0,03014 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen na -30°C uz mešanje praćeno dodavanjem trietilamina (12,60 µl, 0,09043 mmol) i akriloil hlorid (4,898 µl, 0,06028 mmol). Posle mešanja tokom 5 minuta na -30°C, reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (0,05 mL) i zagrejana do sobne temperature. Organski slojevi su isprani sa 0,5 M Na2CO3 (4 mL), osušeni preko Na2CO3 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 439, 8,43 mg, 51%). ESI+APCI MS m/z 552,2 [M+H]<+>.

PRIMER 440

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5? ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: (2R,3R)-3-fluoropirolidin-2-karboksilna kiselina: U čvrstu supstancu (2R, 3R)-1-Boc-3-fluoropirolidin-karboksilna kiselina (400 mg, 1,71 mmol) dodat je u kapima 4M hlorovodonik (2144 µl, 8,57 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1,5 sati . Reakciona smeša je uparena u vakuumu, a zatim je dodat čvrsti NaHC03 (173 mg, 2,06 mmol) i metanol (1715 ul, 1,71 mmol) i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodatni deo MeOH (10 mL) je dodat u smešu i reakciona smeša je mešana 30 minuta i obrađena sonikacijom dok nije postignuta potpuna disperzija polučvrstih materija. Ova suspenzija je korišćena sirova u sledećoj reakciji..

Korak B: (2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-karboksilna kiselina: U mešanu suspenziju sirove (2R,3R)-3-fluoropirolidin-2-karboksilne kiseline (228 mg, 1,71 mmol) u MeOH (12 mL) dodat je paladijum na ugljeniku (30 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/W) praćeno dodavanjem vodenog formaldehida (159 ul, 2.14 mmol) i reakciona smeša je degazirana vodonikom i mešana pod vodonikom preko noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i celit je ispran sa MeOH (3k2 mL). Kombinovani organski delovi su upareni u vakuumu. Polučvrsta materija je stavljena u dioksan i uparena pod N2 tokom vikenda. Proizvod je korišćen sirov u sledećoj reakciji..

Korak C: ((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metanol: Mešana suspenzija sirove 1-Boc-2-(S)-pirolidindikarboksilne kiseline, 3-(R)-fluoro-(252 mg, 1,71 mmol) u THF pod azotom je ohlađena na 0°C, a zatim je ukapavanjem dodato 2,4 M litijum aluminijum hidrida (0,999 ml, 2,40 mmol) i reakcija je mešana 30 minuta uz zagrevanje do sobne temperature. Reakcija je obrađena sonikacijom, a zatim je dodat još jedan deo litijum aluminijum hidrida u THF (0,999 ml, 2,40 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Suspenzija je ohlađena do 0°C i ugašena uzastopnim dodavanjem vode (0,18 mL), 15% NaOH (0,18 mL) i vode (0,54 mL). Suspenzija je razblažena etrom (20 mL) i talog je odvojen. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i celit je ispran etrom (3Ks3 mL). Kombinovanim organskim slojevima je dodat 4M HCl/dioksan (0.45 mL, 1.1 ekv.). Smeša se iz bezbojne suspenzije pretvorila u crvenkasti talog. Supernatantni rastvor je uparen u vakuumu. Preostala crvena čvrsta supstanca je ekstrahovana sa minimalnom količinom vode, filtrirana kroz pamučni čep i pamučni čep je ispran sa malom količinom vode. Kombinovani vodeni rastvor je zasićen sa KOH i ekstrahovan etrom (3Ks7 mL). Kombinovani ekstrakti su osušeni preko NaOH i upareni delimično pod azotom da bi se dobio proizvod kao rastvor u etru (340 mg kao 40% rastvor u etru, 60%).

Korak D: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,2712 mmol), Cs2CO3 (265,1 mg, 0,8137 mmol), 1,4-dioksan (1 ml), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di- propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (23,09 mg, 0,02712 mmol) i RuPhos (9,492 mg, 0,02034 mmol) su degazirani azotom i mešana na 70°C tokom 1,5 sata.

Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2S04 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 3% MeOH 0,3% NH4OH u DCM kao eluenta da bi se dobio proizvod (108 mg, 61%). ESI+APCI MS m/z 650,3 [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-4-(2-(((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Smeša benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (108 mg, 0,166 mmol), metanol (5 ml) i paladijum na ugljeniku (35 mg , 5%, Degussa tip E101 NO/V) je degazirano pod vakuumom i ponovo napunjeno vodonikom, a reakcija je mešana u atmosferi vodonika 1,5 sata. Reakcijska smjesa je filtrirana kroz elitnu (2 ml), a celit je opran sa MeOH (3X3 ml).

Kombinovani organski proizvodi su isparili u vakuolu kako bi se dao sirovi proizvod koji je upotrebljen u sledećoj reakciji.

Korak F: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor 2-((S)-4-(2-(((2R,3R)-3-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (78 mg, 0,1513 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen na -30°C, a zatim dodavanjem trietilamina (63,25 ul, 0,4538 mmol) i akriloil hlorida (24,58 ul, 0,3025 mmol). Posle mešanja tokom 5 minuta na -30°C, reakciona smeša je ugašena sa MeOH (0,05 mL) i zagrejana do sobne temperature. Smeša je isprana sa 0,5 M Na2CO3 (4 mL), osušena preko Na2CO3 i uparena u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% do 10% MeOH eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 440, 63 mg, 73%). ESI+APCI MS m/z 570,3 [M+H]<+>.

PRIMER 441

Korak A: terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat. Smeša terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d] pirimidin-7(6H)-karboksilat (500 mg, 0,949 mmol), (D)-(R)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (328 mg, 2,85 mmol) (3 ekv.), Cs2CO3 (927 mg, 2,85 mmol), dioksan (1 mL) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2 -il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 ekv., 79.3 mg, 0.0949 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 70°C tokom 5 sati.

Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2S04 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4 do 10% MeOH 0,5% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (150 mg, 26%). ESI+APCI MS m/z 606,3 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat: Rastvor terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (296 mg, 0,489 mmol) u DCM (2,5 mL) je ohlađen na suvom ledu, a zatim dodavanjem 4M HCl u dioksanu ( 1,2 mL) i reakcija je mešana 3 sata dok se zagreva na sobnu temperaturu, pri čemu se formira talog. Tečni sloj je dekantovan i talog je ispran sa DCM (2 mL). Čvrsta supstanca je zatim mešana sa smešom DCM (20 mL) i 2M Na2CO3 (3 mL) tokom 1 sata. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je osušen preko Na2C03, filtriran i uparen u vakuumu. Materijal je korišćen sirov u sledećoj reakciji. ESI+APCI MS m/z 506,3 [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša sirovog benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (247 mg, 0,489 mmol), Cs2CO3 (477 mg, 1,47 mmol), dioksan (2 mL), 1-jodonaftalen (107 µl, 0,735 mmol, 1.1. ) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos- Pd-G3, 0,1 ekv., 40,9 mg, 0,0489 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 80°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu.

Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 5% MeOH/DCM 0,25% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (216 mg, 70%). ESI+APCI MS m/z 632,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U mešani rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (216 mg, 0,3419 mmol) u MeOH-THF (1:1, 3 mL) je dodat paladijum na ugljeniku ( 50 mg, 5%, Degussa tip E101 NO/V) i smeša je degazirana pod vakuumom, dopunjena vodonikom i reakcija je mešana u atmosferi vodonika 4 sata. Rešenje je isparilo u vakuolu. Talog je otopljen u DCM (10 ml), filtriran kroz čepu za pamuk i kromatografiran na silikagelu, koristeći 5 do 10 % MeOH 0,25 %4OH u DCM kao eluent da bi se dala naslovna smjesa (NA Primer 441, 109 mg, 58 %). ESI+APCI MS m/z 552,3 [M+H]<+>.

PRIMER 442

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(indolizin-5-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 5-jododolizin: U mešani rastvor indolizina (5,69 ml, 1,71 mmol) i N1,N1,N2,N2-tetrametiletan-1,2-diamina (0,282 ml, 1,88 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (5,7 ml, 1,71 mmol) ohlađen do - °C je dodat rastvor butillitijuma (120 mg, 1.88 mmol) u kapima. Reakciona smeša je zagrejana do -20°C i držana na -20°C 2 sata. Smeša je ohlađena na -80°C i dodat je rastvor joda (433 mg, 1,71 mmol) u suvom THF (3 mL). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i tretirana zasićenim rastvorom amonijum hlorida. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan heksanom. Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04 i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu koristeći heksan kao eluent da bi se dobio proizvod (216 mg).

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(indolizin-5-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša sirovog benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-

1

il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 0,198 mmol), Cs2CO3 (193 mg, 0,593 mmol), dioksan (0,5 mL), 5-jodoindolizin (72,1 mg, 0,297 mmol) (1..) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) ( RuPhos-Pd-G4, 0,1 ekv., 16,8 mg, 0,0198 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 80°C tokom 4 sata. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (74 mg, 60%). ESI+APCI MS m/z 621,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-(s)-4-(7-(indolizin-5-il)-2-((s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril: Smeša sirovog benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 0,198 mmol), Cs2CO3 (193 mg, 0,593 mmol), dioksan (0,5 mL), 5-jodoindolizin (72,1 mg, 0,297 mmol) ( 0,297 mmol)..) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G4, 0,1 ekv., 16,8 mg, 0,0198 mmol) je pročišćen azotom i reakcija je zatvorena i mešana na 80°C tokom 4 sata. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu.

Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH/DCM 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobio proizvod (74 mg, 60%). ESI+APCI MS m/z 487,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(indolizin-5-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor 2-((S)-4-(7-(indolizin-5-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg, 0,1027 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen na -30°C, a zatim dodavanjem trietilamina (42,96 µl, 0,3082 mmol) i akriloil hlorid (16,70 ul, 0,2055 mmol). Posle mešanja tokom 5 minuta na -30°C, reakciona smeša je ugašena zas. NaHCO3 (1 mL) i zagrejan na sobnu temperaturu, a zatim dodavanje vode (2 mL). Slojevi su razdvojeni i

2

organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i ispareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 442, 33 mg, 59%). ESI+APCI MS m/z 571,3 [M+H]<+>.

PRIMER 443

2-(1-Akuiloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2R)-2-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat: Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak C, zamenom benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (65 mg, 0,118 mmol) i (R)-N-Boc-2-hidroksimetilmorfolin (76,6 mg, 0,353 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (2R)-2-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (49 mg, 0,0668 mmol, 56,8 % prinos). ESI+ MS m/z 734,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid: Pripremljen prema proceduri iz Primera 375 Korak D, zamenom tercbutil (2R)-2-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (49 mg, 0,067 mmol) da bi se dobio benzil 2 -(cijanometil)-4-(2-((((R)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (45 mg, 0,067 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 634,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 2-(cijanometil)-4-(2-((((R)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (45 mg, 0,067 mmol), formaldehid (54 mg, 0,67 mmol) (37 tež% u MeOH/voda) u DCM (671 µl , 0,067 mmol) i THF (671 ul, 0,067 mmol) je dodat NaBH(OAc)3 (142 mg, 0,67 mmol) i dobijena smeša je mešana na ST tokom 15 m. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata i 1N NaOH. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (1k). Kombinovani organski slojevi su osušeni (MgS04) i koncentrovani da bi se dobio ostatak koji je prečišćen brzim eluiranjem sa gradijentom od 25-50% smeše 10%MeOH/1%NH4OH/DCM u DCM. Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (22 mg, 0,034 mmol, 51%). ESI+ MS m/z 648,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-(2-((R)-4-Metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (22 mg, 0,034 mmol) dajući 2-(4-(2-(((R)) -4-

4

metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il) acetonitril (15,9 mg, 0,031 mmol, 91%). ESI+ MS m/z 514,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: -2-(1-Akrilol-4-(2-((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak G, zamenom 2-(4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6) ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (16 mg, 0,031 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(2-( ((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 2-il)acetonitril (PRIMER 443, 8,0 mg, 0,014 mmol, 46%). ESI+ MS m/z 568,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 444

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetil)morfolin-4-karboksilat: Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak C, zamenom benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (65 mg, 0,118 mmol) i terc-butil (S)-2-(hidroksimetil)morfolin-4-karboksilat (76,6 mg, 0,353 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (43 mg, 0,059 mmol, 49,9 % prinos). ESI+ MS m/z 734,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-(s)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidroklorid: Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak D, zamenom terc-butil (2S)-2-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (43 mg, 0,059 mmol) da bi se dobio benzil 2 -(cijanometil)-4-(2-(((S)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (39 mg, 0,058 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 634,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen prema proceduri iz Primera 443 korak C, zamenom benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (39 mg, 0,067 mmol), da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-( ((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (17 mg, 0,026 mmol, 45%). ESI+ MS m/z 648,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-(2-(((S)-4-Metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetralakdropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (17 mg, 0,026 mmol) dajući 2-(4-(2-(((S)) -4metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il) acetonitril (13,5 mg, 0,026 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 514,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril.

Pripremljeno prema proceduri Primera 375 Korak G, zamenom 2-(4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6) ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (13,5 mg, 0,026 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(2-( ((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 2-il)acetonitril (PRIMER 444, 9,5 mg, 0,017 mmol, 65%). ESI+ MS m/z 568,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 445

2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (3S)-3-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak C, zamenom benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (65 mg, 0,118 mmol) i terc-butil (R)-3-(hidroksimetil)morfolin-4-karboksilat (76,6 mg, 0,353 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (3S)-3-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (80 mg, 0,109 mmol, 92,8 % prinos). ESI+ MS m/z 734,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-(s)-morfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidroklorid. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak D, zamena terc-butil (3S)-3-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (80 mg, 0,11 mmol) da bi se dobio benzil 2 -(cijanometil)-4-(2-(((S)-morfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (73 mg, 0,11 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 634,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((s)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen prema proceduri iz Primera 443 korak C, zamenom benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-morfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (73 mg, 0,109 mmol), da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-( ((S)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (27,6 mg, 0,042 mmol, 39%). ESI+ MS m/z 648,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-(2-(((S)-4-Metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak F, zamena benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (27,6 mg, 0,042 mmol) dajući 2-(4-(2-(((S))-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il) acetonitril (20,2 mg, 0,039 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 514,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-akriloil-4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril.

Pripremljeno prema proceduri Primera 375 Korak G, zamenom 2-(4-(2-(((S)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6) ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (20,2 mg, 0,0393 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(2-( ((S)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 2-il)acetonitril (PRIMER 445, 15 mg, 0,026 mmol, 67%). ESI+ MS m/z 568,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 446

2-(1-Akriloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (3R)-3-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak C, zamenom benzil 4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (65 mg, 0,118 mmol) i terc-butil (S)-3-(hidroksimetil)morfolin-4-karboksilat (76,6 mg, 0,353 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (3R)-3-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (50 mg, 0,068 mmol, 58,0 % prinos). ESI+ MS m/z 734,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-(R)-morfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidroklorid. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak D, zamenom tercbutil (3R)-3-(((4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (50 mg, 0,068 mmol) da bi se dobio benzil 2 -(cijanometil)-4-(2-(((R)-morfolin-3il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (46 mg, 0,068 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 634,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: Benzil 2-(cijanmetil)-4-(2-((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen prema proceduri iz Primera 443 korak C, zamenom benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-morfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (73 mg, 0,109 mmol), da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(2-( ((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-karboksilat (23,0 mg, 0,036 mmol, 52%). ESI+ MS m/z 648,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-(4-(2-((R)-4-Metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak F, zamena benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (23,0 mg, 0,036 mmol) dajući 2-(4-(2-(((R)) -4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il) acetonitril (18,2 mg, 0,036 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 514,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-Akristalol-4-(2-((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak G, zamenom 2-(4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6) ,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (18,2 mg, 0,036 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(2-( ((R)-4-metilmorfolin-3-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 2-il)acetonitril (PRIMER 446, 14 mg, 0,025 mmol, 69%). ESI+ MS m/z 568,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 447

1

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4,4-difluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom iz Primera 375 Korak C, zamenom benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (50 mg, 0,090 mmol) i terc-butil (S)-4,4-difluoro-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (64.3 mg, 0,271 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4,4-difluoropirolidin) -2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1- karboksilat (15 mg, 0,020 mmol, 22,0 % prinos). ESI+ MS m/z 754,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4,4-difluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-

2

karboksilat hidrohlorid. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak D, zamena benzil (S)-4-(2-(((S)-1 -(terc-butoksikarbonil)-4,4-difluoropirolidin-2-il)metoksi)-7 -(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (18 mg, 0,024 mmol) do daju benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4,4-difluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (16 mg, 0,023 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 654,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom iz Primera 443 korak C, zamenom benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4,4-difluoropirolidin-2-il)metoksi)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (16 mg, 0,023 mmol), da bi se dobio benzil (S)-2 -(cijanometil)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (16,0 mg, 0,024 mmol, 52%). ESI+ MS m/z 668,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (16,0 mg, 0,024 mmol) da bi se dobilo 2-( (S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8,0 mg, 0,015 mmol, 63%). ESI+ MS m/z 534,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak G, zamenom 2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8,0 mg, 0,015 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 447, 4 mg, 0,007 mmol, 45%). ESI+ MS m/z 588,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 448

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (R)-6-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-4-karboksalat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak C, zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (25 mg, 0,045 mmol) i terc-butil (R)-6-(hidroksimetil)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-4-karboksilat (33,0 mg, 0,136 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (R)-6-(((4-((S)-4-((benziloksi) )karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi) metil)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-4-

4

karboksilat (35 mg, 0,0461 mmol, 100 % prinos). ESI+ MS m/z 760,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: Benzil (S)-4-(2-(((R)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak D, zamena terc-butil (R)-6-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il) )-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan -4-karboksilat (35 mg, 0,046 mmol) da bi se dobio benzil (S)-4-(2-(((R)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (32 mg, 0,046 mmol, 100 %). ESI+ MS m/z 660,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: Benzil (s)-2-(cijanmetil)-4-(2-(R)-4-metil-7-oksa-4-azspirio[2,5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8 1-tetrahidropirido[3,4-d]piridin-4-pirazol-karboksilat-karboksilat Pripremljen prema proceduri iz Primera 443 korak C, zamenom benzil (S)-4-(2-(((R)-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (32 mg, 0,046 mmol), do dati benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen -1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (31 mg, 0,046 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 674,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan- 6-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (31,0 mg, 0,046 mmol ) da bi se dobio 2-((S)-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen-1) -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (18,0 mg, 0,033 mmol, 72%). ESI+ MS m/z 540,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljeno u skladu sa procedurom Primera 375 Korak G, zamenom 2-((S)-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)) metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (18,0 mg, 0,033 mmol) do dati naslovljeno jedinjenje 2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7- (naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 448, 5,8 mg, 0,010 mmol, 29%). ESI+ MS m/z 594,3 (100%) [M+H]<+>.

PRIMER 449

2-(1-akriloil-4-(7-(2-(difluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A.benzil 2-(cijanmetil)-4-(7-(2-(difluorometil)fenil)-2-((s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-piperidin-1-il karboksilat. Smeša benzil 2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-karboksilat (30 mg, 0,0593 mmol), 1-bromo-2-difluorometilbenzen (36,8 mg, 0,178 mmol), BINAP Palladacicle Gen. 3 (5,9 mg, 0,006 mmol), Cs2CO3 (77,3 mg, 0,237 mmol) u dioksanu (593 ul, 0,0593 mmol) je prskano sa Ar tokom 5 m, a zatim je zatvoren i zagrevan na 100°C tokom 1 dana. Reakciona smeša je stavljena na uzorak silika gela i prečišćena fleš hromatografijom eluiranjem sa 1-10% MeOH/DCM (1% NH4OH) gradijentom da bi se dobio benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(2-(difluorometil) )fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (12 mg, 0,019 mmol, 32%). ESI+ MS m/z 632,3 (100 %) [M+H]+.

Korak B: 2-((S)-4-(2-(((R)-4-metil-7-oksa-4-azaspiro[2.5]oktan-6-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak F, zamena benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(2-(difluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (12,0 mg, 0,019 mmol) da bi se dobilo 2-(4-(7-(2-( difluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2- il)acetonitril (9,5 mg, 0,019 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 498,3 (100 %) [M+H]+.

Korak C: 2-(1-Akristalol-4-(7-(2-(difluorometil)fenil)-2-((s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperidin-2-il)acetonitril)acetonitril)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak G, zamenom 2-(4-(7-(2-(difluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (9,5 mg, 0,019 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(1-akriloil-4-(7-) (2-(difluorometil)fenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 449, 4,2 mg, 0,008 mmol, 40%). ESI+ MS m/z 552,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 450

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-) 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 443 Korak A, zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (95 mg, 0,172 mmol) i (R)-N-Boc-2-hidroksimetilmorfolin (112 mg, 0,515 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7) -(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4karboksilat (126 mg, 0,172 mmol, 100% prinosa). ESI+ MS m/z 734,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: Benzil (s)-2-(cijanmetil)-4-(2-(R)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahdropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidroklorid: Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak D, zamena terc-butil (R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il) )-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)morfolin-4-karboksilat (126 mg, 0,172 mmol) da se dobije benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-morfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (109 mg, 0,172 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 634,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 443 Korak C, zamenom benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (109 mg, 0,172 mmol) da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil )-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (76 mg, 0,117 mmol, 68%). ESI+ MS m/z 648,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (76 mg, 0,117 mmol) dajući 2-((S)-4- (2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-2-il)acetonitril (57,1 mg, 0,111 mmol, 95%). ESI+ MS m/z 514,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-(1-Akriloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril.

Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak G, zamenom 2-((S)-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (56 mg, 0,11 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1- akriloil-4-(2-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 450, 50 mg, 0,088 mmol, 81%). ESI+ MS m/z 568,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 451

2-((S)-1-Akriloil-4-(2-(((2R,SR)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-5-metilmorfolin-4-karboksilat. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak C, zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (95 mg, 0,172 mmol) i terc-butil (2R,5R)-2-(hidroksimetil)-5-metilmorfolin-4-karboksilat (119 mg , 0,515 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-)) 3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-5-metilmorfolin-4-karboksilat (128 mg, 0,171 mmol, 100 % prinos). ESI+ MS m/z 748,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((2R,5R)-5-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak D, zamena terc-butil (2R,SR)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1) -il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-5-metilmorfolin-4-karboksilat (128 mg, 0,171 mmol) da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((2R,5R)-5-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (111 mg, 0,171 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 648,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: Benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom iz Primera 443 korak C, zamenom benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((2R,SR)-5-metilmorfolin-2-il)metoksi)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (111 mg, 0,171 mmol), da bi se dobio benzil (S)-2 -(cijanometil)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (56 mg, 0,085 mmol, 49%). ESI+ MS m/z 662,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-(s)-4-(2-(2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)pirazen-2-il)acetonitril. Pripremljeno u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7 -(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (56 mg, 0,085 mmol) da bi se dobilo 2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-

1

5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (44,3 mg, 0,084 mmol, 99%). ESI+ MS m/z 528,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-1-Akriloil-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak G, zamenom 2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (43 mg, 0,081 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S) )-1-akriloil-4-(2-(((2R,5R)-4,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 451, 32 mg, 0,055 mmol, 68%). ESI+ MS m/z 582,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 452

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2

Korak A: terc-butil (R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(ejanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-)) il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-5,5-dimetilmorfolin-4-karboksilat. Pripremljen prema proceduri Primera 375 Korak C, zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (95 mg, 0,172 mmol) i terc-butil (R)-2-(hidroksimetil)-5,5-dimetilmorfolin-4-karboksilat (126 mg , 0,515 mmol), prečišćavanje fleš hromatografijom eluiranjem sa 25-100% heks/EtOAc da bi se dobio terc-butil (R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3- (cijanometil)piperazin-1-il)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-5,5 -dimetilmorfolin-4-karboksilat (131 mg, 0,172 mmol, 100 % prinos). ESI+ MS m/z 762,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak B: Benzil (s)-2-(cijanmetil)-4-(2-(R)-5,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalin-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak D, zamena terc-butil (R)-2-(((4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il) )-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)-5,5-dimetilmorfolin-4-karboksilat (131 mg, 0,172 mmol) da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((R)-5,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (114 mg, 0,172 mmol, 100%). ESI+ MS m/z 662,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Pripremljen prema proceduri iz Primera 443 korak C, zamenom benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((R)-5,5-dimetilmorfolin-2-il)metoksi)-7-( naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (114 mg, 0,172 mmol), da bi se dobio benzil (S)-2 -(cijanometil)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (77 mg, 0,114 mmol, 66%). ESI+ MS m/z 676,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen u skladu sa procedurom Primera 375 Korak F, zamena benzil (S)-2(cijanometil)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5- trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (77 mg, 0,114 mmol) dajući 2-((S) )-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (47 mg, 0,087 mmol, 77%). ESI+ MS m/z 542,3 (100 %) [M+H]<+>.

Korak E: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Pripremljen prema proceduri Primera 1 Korak G, zamenom 2-((S)-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2- il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (46 mg, 0,085 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S) )-1-akriloil-4-(7-(naftalen-1-il)-2-(((R)-4,5,5-trimetilmorfolin-2-il)metoksi)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 452, 36 mg, 0,060 mmol, 71%). ESI+ MS m/z 582,3 (100 %) [M+H]<+>.

PRIMER 453

1-[4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

4

Korak 1: 3-bromo-1,2,4-trimetil-5-nitro-benzen. U rastvor 1,2,4-trimetil-5-nitro-benzena (10 g, 60 mmol, 1 ekv.) u DCE (200 mL) dodat je FeBr3 (358 mg, 1,21 mmol, 0,02 ekv.), Fe (879 mg, 15,7 mmol, 0,26 ekv.), a zatim Br2 (11,6 g, 72,6 mmol, 3,74 mL, 1,2 ekv.) kap po kap. Posle mešanja na 25 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je suspendovan u vodi i sakupljen filtracijom.3-bromo-1,2,4-trimetil-5-nitro-benzen (8,6 g, 34,9 mmol, 58% prinos, 99% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

Korak 2: 3-bromo-2,4,5-trimetil-anilin. U rastvor 3-bromo-1,2,4-trimetil-5-nitro-benzena (5,2 g, 21,3 mmol, 1 ekv.) u EtOH (100 mL) dodat je Fe (5,95 g, 107 mmol, 5 ekv.) i AcOH (12,8 g, 213 mmol, 12,2 mL, 10 ekv.). Smeša je mešana na 60 °C tokom 3 sata. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% mravlja kiselina)/acetonitril)]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, a zatim koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovane sa EtOAc (2 × 100 mL).

Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 3-bromo-2,4,5-trimetil-anilin (3,4 g, 14,3 mmol, 67% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca..

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,51 (s, 1H), 3,56 (br, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H).

Korak 3: 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indazol.3-bromo-2,4,5-trimetil-anilin (200 mg, 934,14 umol, 1 ekv.) je rastopljeno u trifluoroobroku; hidrofluorid (1,69 g, 7,71 mmol, 1,20 mL, 8,25 ekv., 40% u vodi) kap po kap na 0 °C. Ohlađeni vodeni rastvor NaNO2 (96,7 mg, 1,40 mmol, 1,5 ekv.) (u minimumu vode do zasićenog vodenog rastvora). Posle dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata i na 25 °C tokom 0,5 sata. NaNO2 (64 mg, u minimumu vode u zasićeni vodeni rastvor) je dodat na 0 °C i smeša je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Zatim je dobijeni talog filtriran, ispran sa (i-Pr)2O (40 mL) i koncentrovan pod vakuumom koji je direktno dodat u jednom delu pod N2 u mešanu smešu KOAc (183 mg, 1,87 mmol, 2 ekv.) i 18-CROVN-6 (12,4 mg, 46,7 umol, 0,05 ekv.) u CHCl3 (8 mL). Smeša je mešana na 35 °C tokom 0,5 sati. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 100/1 do 5/1) da bi se dobio 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indazol (70 mg, 280 umol, 30% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.

Korak 4: 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol. U rastvor 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indazola (290 mg, 1,29 mmol, 1 ekv.) u DCM (6 mL) dodat je TsOH•H2O (24,5 mg, 129 umol, 0,1 ekv.), a zatim pomoću DHP (217 mg, 2.58 mmol, 236 uL, 2 ekv.) i MeCN (1 mL). Smeša je mešana na 25°C tokom 5 sati. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (5 mL), razblažena vodom (20 mL). slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 100/1 do 25/1) da bi se dobio 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (320 mg, 828 umol, 64% prinos, 80% čistoće) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 309.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,94 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 5,66 (d,J= 2,8, 9,2 Hz, 1H), 4,06 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 3,972,47 (s, 3H), 2,44 (s, 3,67 (s, 1H), 3H), 2,16 (qd,J= 4,4, 7,6 Hz, 1H), 2,06 (qd,J= 3,2, 13,2 Hz, 1H), 1,83 -1,64 (m, 4H).

Korak A: terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1 -karboksilat (385 mg, 890 umol, 1 ekv.), 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (303 mg, 979 umol, 1,10 ekv.), Pd2(dba)3 (163 mg, 178 umol, 0,2 ekv.), RuPhos (166 mg, 356 umol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (725 mg, 2,23 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (30 mL) je degaziran 9, a zatim zagrejan na 0 °C do 8 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc/MeOH 100/1 do 5/1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il )-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 275 umol, 31% prinos, 91% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 661.

Korak B: 7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-pirazin-1-il-6,8-dihdro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (190 mg, 288 umol, 1 ekv.) u DCM (0,4 mL) je dodat TFA ( 924 mg, 8,10 mmol, 0,6 mL, 28,2 ekv.). Smeša je mešana na 25°C 1 sat. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio 7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4- piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (220 mg, sirovo, 2TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak C: 1-[4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on. U rastvor 7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (200 mg, 284 umol, 1 ekv., 2 TFA) i TEA (574 mg, 5,68 mmol, 790 uL, 20 ekv.) u DCM (4 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (35,8 mg, 284 umol, 1 ekv.) u kapima na -40 °C. Smeša je mešana na -40 °C 30 minuta. Po završetku, smeša je ugašena sa MeOH (0,5 mL), razblažena vodom (5 mL) i zatim ekstrahovana sa DCM (2 × 10 mL). Ekstrakti su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 100/1 do 10/1) i prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-[4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (PRIMER 453, 45,3 mg, 85,2 umol , dva koraka 30% prinosa, 99,7% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:531.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.d., 3um, mobilna faza: metanol (0,05 % DEA) u CO2 sa 5 % na 40 %, protok: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10,84 (br, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 1H), 6,59 (dd,J= 10,4, 16,8 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 1,2, 16,8 Hz, 1H), 5,79 -5,68 (m, 1H), 4,40 (dd,J= 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,26 (s, 2H), 4,17 (dd,J= 6,8, 10,4 Hz, 1H), 3,90 - 3,39 (m, 10H), 3,09 (br t,J= 7,6 Hz, 1H), 2,89 - 2,62 (m, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,39 (s, 1H), 3H), 2,33 (s, 3H), 2,30 - 2,23 (m, 1H), 2,09 - 1,97 (m, 1H), 1,91 -1,69 (m, 3H).

PRIMER 454

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: 4,4-difluopiperidin. U rastvor terc-butil 4,4-difluoropiperidin-1-karboksilata (2,0 g, 9,04 mmol, 1,0 ek) u DCM (0,50 mL) dodata je TFA (770 mg, 6,75 mmol, 0,50 mL, 7,47 ek. ). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio proizvod 4,4-difluoropiperidin (1,50 g, sirov, TFA) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2: 1-(2-benziloksietil)-4,4-difluoro-piperidin. U rastvor 4,4-difluoropiperidina (1,50 g, 6,38 mmol, 1,0 ekv., TFA) u MeCN (20,0 mL) dodat je NaOH (765 mg, 19,1 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Zatim su 2-bromoetoksimetilbenzen (1,65 g, 7,65 mmol, 1,21 mL, 1,20 ekv.) i KI (212 mg, 1,28 mmol, 0,20 ekv.) dodati u gornju tečnost, smeša je mešana na 920 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (20,0 mL), a zatim ekstrahovana sa EA (3 × 20,0 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petroleum etar: Etil acetat = 10:1 do 0:1) da bi se dobio 1-(2-benziloksietil)-4,4-difluoro-piperidin (600 mg, 2,35 mmol, dva koraka 37% prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,41 - 7,29 (m, 5H), 4,54 (s, 2H), 3,82 - 3,72 (m, 2H), 3,33 - 2,94 (m, 6H), 2,37 - 2,15 (m, 4H).

Korak 3: 2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etanol. Rastvor 1-(2-benziloksietil)-4,4-difluoro-piperidina (400 mg, 1,57 mmol, 1,0 ekv.) i Pd/C (200 mg, 10% čistoće) u EtOH (5,0 mL) je mešan pod H2 (15 Psi) atmosfere na 25 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz Celite, filterski kolač je ispran sa THF (10.0 mL). Filtrat je sakupljen i koncentrovan da bi se dobio proizvod 2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etanol (170 mg, 1,03 mmol, 66% prinos) kao bezbojno ulje. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 3,84 - 3,70 (m, 2H), 2,98 - 2,89 (m, 4H), 2,86 - 2,80 (m, 3H), 2,24 - 2,11 (m, 4H).

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor 2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etanola (102 mg, 619 umol, 3,0 ekv.) u toluenu (3,0 mL) i terc-butil (2S)-4-[7-(8- hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (120 mg, 206 umol , 1,0 ekv.) je dodat t-BuONa (39,7 mg, 413 umol,

2,0 ekv.), mešavina je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana sa EA (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom obrnute faze (C18, 0,1% NH3•H2O, 0-60% MeCN) da bi se dobio proizvod terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2 -[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (90,0 mg, 132 umol, 64% prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 682.

Korak B: 2-[(2S)-4-r7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (30,0 mg, 44,0 umol, 1,0 ekv.) u DCM (0,5 mL) je dodat TFA (770 mg , 6,75 mmol, 0,50 mL, 154 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana. Ostatak je podešen sa zasićenim NaHCO3 vodenim na pH ~ 7, a zatim ekstrahovan sa EA (3 × 5,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1 -piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (26,0 mg, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeće korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 582.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(4,4-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (26,0 mg, 44,7 umol, 1,0 ekv.) i DIEA (69,3 mg, 536 umol, 93,4 uL, 12,0 e) e. DCM (1,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (8,45 mg, 67,0 umol, 1,50 ekv.).

Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je ugašena dodavanjem MeOH (1.0 mL), a zatim koncentrovana da bi se dobio ostatak. Zatim je ostatak prečišćen prep-HPLC (kolona: LCMS [ESI, M+1]: 636.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J=8,0 Hz, 1H), 7,63 (t,J=7,2 Hz, 1H), 7,53 (d,J=7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 1H), 6,67 - 6,54 (m, 1H), 6,40 (br d,J= 16,4 Hz, 1H), 5,83 (br d,J= 11,2 Hz, 1H), 5,20 - 4,56 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (M, 3H), 4,22 - 4,01 (m, 2H), 3,98 - 3,75 (m, 2H), 3,66 - 3,57 (m, 1H), 3,53 - 3,36 (m, 1H), 3,31 - 2,98 (m, 4H), 2,91 - 2,80 (m, 3H), 2,79 - 2,49 (m, 6H), 2,09 - 1,94 (m, 6H).

PRIMER 455

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

1

Korak 1: 1-(2-benziloksietil)-3,3-difluoro-piperidin. U rastvor 3,3-difluoropiperidina (1,0 g, 6,35 mmol, 1,0 ekv., HCl) u MeCN (6,0 ml) dodat je NaOH (761 mg, 19,0 mmol, 3,0 ekv.) u jednoj porciji na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 5 minuta, zatim je dodat 2-bromoetoksimetilbenzen (1,64 g, 7,61 mmol, 1,20 ml, 1,20 ekv.) i KI (211 mg, 1,27 mmol, 0,20 ekv.). Smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata H20 (15,0 ml), a zatim ekstrahovana sa EA (3 × 20,0 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=10:1 do 5:1) da bi se dobio 1-(2-benziloksietil)-3,3-difluoro-piperidin (1,40 g, 5,48 mmol, 86 % prinos) kao bezbojno ulje.

2

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,38 - 7,31 (m, 5H), 4,56 (s, 2H), 3,64 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,79 - 2,73 (m, 4H), 2,55 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 1,85 - 1,85 (m, 2H), 1,82 - 1,76 (m, 2H).

Korak 2: 2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etanol. U rastvor 1-(2-benziloksietil)-3,3-difluoro-piperidina (400 mg, 1,57 mmol, 1,0 ekv.) u MeOH (5,0 ml) je dodat Pd/C (200 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana da bi se dobio 2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etanol (240 mg, 1,45 mmol, 93 % prinos) kao bezbojno ulje. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 3,64 (t, J= 5,4 Hz, 2H), 2,73 (t, J= 11,2 Hz, 2H), 2,63 (t, J= 5,4 Hz, 2H), 2,54 (t, J= 5,2 Hz, 2H), 1,97 - 1,87 (m, 2H), 1,82 - 1,76 (m, 2H).

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-(2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (230 mg, 396 umol, 1,0 ekv.), 2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etanol (196 mg,

1,19 mmol, 3,0 ekv.), t- BuONa (114 mg, 1,19 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (5,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 0 °C tokom 0,5 sata pod atmosferom N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa H20 (5,0 ml) i ekstrahovana sa EA (3 × 10,0 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaCl (20,0 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio ostatak. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3:1 do 0:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2- [2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 344 umol, 87 % prinos, 94 % čistoća) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,77 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,63 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,50 - 7,42 (m, 1H), 7,37 - 7,33 (m, 1H), 7,27 - 7,20 (m, 1H), 4,67 - 4,64 (m, 1H), 4,48 - 4,39 (m, 3H), 4,06 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,01 - 3,80 (m, 3H), 3,60 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,37 (dd, J= 3,6, 13,6 Hz, 1H), 3,27 - 3,10 (m, 3H), 2,97 - 2,90 (m, 3H), 2,84 - 2,78 (m, 3H), 2,61 -2,57 (m, 2H), 1,89 - 1,85 (m, 3H), 1,72 - 1,54 (m, 3H), 1,53 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 293 umol, 1,0 ekv.) u DCM (1,50 ml) je dodat TFA (2,31 g, 20,3 mmol, 1,50 ml, 69,0 ekv.) u jednoj porciji na 25 °C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, sirov, 2TFA) kao žuta čvrsta supstanca. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 582.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro-1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, 494 umol, sirov, 2TFA) i TEA (727 mg, 7,18 mmol, 1,0 mL) u DCM (2,0 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (100 mg, 793 umol) u jednoj porciji na 0 °C pod N2. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je ugašena dodavanjem MeOH (3,0 mL) na 0 °C, a zatim koncentrovana da bi se dobio ostatak. Zatim je talog prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm<∗>10 um; mobilna faza: [voda (10,0 mm NH4HCO3)-ACN]; B%: 57 % - 87 %, 10 min.) i liofilizovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[2-(3,3-difluoro- 1-piperidil)etoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 455, 48,4 mg, 75,8 umol, 26 % prinos, 99 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca.

SFC stanje: 100 %.e.e.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,50 - 7,43 (m, 1H), 7,36 (t, J = 7,8 Hz, 1H),

4

,27 - 7,21 (m, 1H), 6,60 - 6,58 (m, 1H), 6,44 - 6,39 (m, 1H), 5,85 (d, J = 10,4 Hz, H), 5,10 - 4,66 (m, 1H), 4,49 - \4,40 (m, 3H), 4,18 - 4,08 (m, 2H), 3,94 - 3,89 (m, H), 3,85 - 3,73 (m, 1H), 3,63 - 3,60 (m, 1H), 3,50 - 3,41 (m, 1H), 3,33 - 3,02 (m, H), 2,94 - 2,76 (m, 6 H), 2,64 - 2,61 (m, 3H), 1,95 - 1,85 (m, 2H), 1,80 - 1,78 (m, H). LCMS [ESI, M+1]: 636.

PRIMER 456

,6-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-1,3-dihidrobenzimidazol-2-on

Umetanje Korak 1: 2-bromo-3,4-dimetil-6-nitro-anilin. U rastvor 4,5-dimetil-2-nitro-anilina (5 g, 30,1 mmol, 1 ekv.) u CHCl3 (100 ml) dodat je Br2 (7,21 g, 45,1 mmol, 2,33 ml, 1,5 ekv.) u kapima na 10 °C. Reakciona smeša je mešana na 10 °C tokom 30 minuta i na 25 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je isprana zasićenim rastvorom NaHCO3 u vodi (80 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa CHCl3 (30 ml). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana kroz sloj silika gela, a zatim koncentrovana do suva.2-bromo-3,4-dimetil-6-nitro-anilin (7 g, 28,5 mmol, 95 % prinos, 99,7 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+3]: 247

Korak 2: 3-bromo-1,2-dimetil-4,5-dinitro-benzen. U rastvor 2-bromo-3,4-dimetil-6-nitro-anilina (7 g, 28,6 mmol, 1 ekv.) u TFA (50 mL) dodat je vodonik peroksid (25,9 g, 229 mmol, 22,0 mL, 30 mL). % čistoće, 8,0 ekv.) kap po kap na 10 °C. Reakciona smeša je mešana na 10 °C tokom 30 minuta i na 25 °C tokom 30 minuta, a zatim na 40 °C tokom još 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena na 5 - 10 °C i zatim filtrirana. Filterski kolač je ispran sa PE (3 × 20 mL). Čvrsta supstanca je zatim osušena pod sniženim pritiskom na 50 °C.3-bromo-1,2-dimetil-4,5-dinitro-benzen (5 g, 18,2 mmol, 64% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

Korak A: terc-butil 4-[7-(2,3-dimetil-5,6-dinitro-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-1-karboksilat (250 mg, 578 umol, 1 ekv.), 3-bromo-1,2-dimetil-4,5-dinitro-benzen (318 mg, 1,16 mmol, 2 ekv.), Pd2(dba)3 (52,9 mg, 57,8 umol, 0,1 ekv.), RuPhos (40,5 mg, 86,7 umol, 0,15 ekv.) i Cs2CO3 (377 mg, 1,16 mmol, 2 ekv.) u toluenu (25 mL) je degaziran N2 i prečišćen je puta. a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 8 sati u atmosferi N2. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (100 mL × 1) i etil acetatom (100 mL × 2). Odvojena organska faza je isprana slanim rastvorom (100 mL × 1), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (SiOz, Etil acetat/MeOH = 50/1 do 3/1) i obrnuta faza lažna [voda (0,1% FA)/acetonitril].

Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHC03 i ekstrahovane etil acetatom (1 × 100 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. terc-butil 4-[7-(2,3-dimetil-5,6-dinitro-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (22,0 mg, 140 umol, 6% prinos, 99,7% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 627.

Korak B: terc-butil 4-[7-(2,3-diamino-5,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[7-(2,3-dimetil-5,6-dinitro-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg, 191 umol, 1 ekv.) u MeOH (10 mL) je dodat Pd/C (24,0 mg, 10) % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata.

Katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. terc-butil 4-[7-(2,3-diamino-5,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 567.

Korak C: terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-2-okso-1,3-dihidrobenzimidazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[7-(2,3-diamino-5,6-dimetil-fenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 176 umol, 1 ekv.) u THF (10 mL) je dodat CDI (57,2 mg, 353 umol, 2 ekv.). Posle mešanja na 50 °C tokom 1 h, dodat je CDI (171 mg) i smeša je mešana na 70 °C još 3 sata. Reakciona smeša je ugašena sa H20 (3 mL × 1), a zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 17 % -47 %, 10 min). Željene frakcije su prikupljene i neutralizirane sa zasićenim NaHCO3rešenjem i ekstrahirane etilacetatom (1 × 30 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijevog sulfata, filtriran i koncentriran pod vakuumom.4-[7-(5,6-dimetil-2-okso-1,3-dihidrobenzizol-4-il)-2-[(2s-1-metilpirrolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dpirimidin-4-il]bio je 33,7-119 % dobiven u zraku, kao sipiperidon, 20,0100 %. LCMS [ESI, M+1]: 593.

Korak D: 5,6-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]-1,3-dihidrobenzimidazol-2-on. U rastvor terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-2-okso-1,3-dihidrobenzimidazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (16,0 mg, 27,0 umol, 1 ekv.) u dioksanu (2 mL) je dodat HCl/ dioksan (4 M, 101 uL, 15 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 25 °C tokom 0,5 h, smeša je koncentrovana pod vakuumom.5,6-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-il]-1,3-dihidrobenzimidazol-2-on (20,0 mg, sirov, HCl) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 493.

Korak E: 5,6-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-1,3-dihidrobenzimidazol-2-on. U smešu 5,6-dimetil-4-(2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-7-il]-1,3-dihidrobenzimidazol-2-on (20,0 mg, 37,8 umol, 1 ekv. HCl) i TEA (38,3 mg, 378 umol, 52,6 uL, 10 ekv.) in DCM (2 mL) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (4,77 mg, 37,8 umol, 1 ekv.) u porcijama na -40 °C. Posle mešanja na -40°C tokom 30 minuta, reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3 (0,5 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa CH2Cl2 (2 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Sinergi C18150 * 25 * 10um; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 10% - 37%, 9 min). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 5,6-dimetil-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-(4-prop-2-enoilpiperazin-1-il)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-1,3-dihidrobenzimidazol-2-on (PRIMER 456, 3,15 mg, 5,25 umol, dva koraka 14% prinos, 98,8% čistoće, HCOOH) dobija se kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 547.

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) 6,90 - 6,81 (m, 1H), 6,80 - 6,72 (m, 1H), 6,28 (br d,J= 16,8 Hz, 1H), 5,82 (br d,J=10,4 Hz, 1H), 4,72 - 4,46 (m, 2H), 4,32 -4,01 (m, 2H), 3,93 - 3,53 (m, 10H), 3,53 - 3,38 (m, 1H), 3,21 - 3,02 (m, 2H), 2,98 (s, 3H), 2,95 - 2,58 (m, 2H), 2,48 - 2,32 (m, 1H), 2,31 (br, 3H), 2,29 (br,), 3H), 2,19 - 1,94 (m, 3H).

PRIMER 457

1-[4-[7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: (E)-2-(2-bromo-3,4-dimetil-6-nitro-fenil)-N,N-dimetil-etamin. Za rešenje 3-bromo-1,2,4-trimetil-5-nitro-benzen (2 g, 8,19 mmol, 1eq)u DMF-u (20 ml) je dodano DMFDMA (5,86 g, 49,2 mmol, 6,53 ml, 6eq). Mešavina je miješana na 130 °C 10 sata. Po završetku mešavina je bila koncentrisana pod vakuumom da se (E)-2-(2-bromo-3,4-dimetil-6-nitro-fenil)-N,N-dimetil-etamin (2,5 g, sirovo) kao smeðe ulje koje je direktno upotrebljeno u sledeæi korak bez daljeg pročišćavanja.

Korak 2: 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indol. Rešenje (E)-2-(2-bromo-3,4-dimetil-6-nitro-fenil)-N,N-dimetil-etamina (2,5 g, 8,36 mmol, 1eq)u EtOH (50 ml) je dodano Fe (2,33 g, 41,8 mmol, 5eq)i AcOH (5,02 g, 83,6 mmol, 4,78 ml, mmol, ml 10eq). Mešavina je miješana na 60 °C 2 sata. Po završetku mešavina je filtrirana, a filtrat je koncentriran. Mešavina je podešena pH = 7 sa zasićenim NaHCO3vodenim otopinom i ekstrahirana etilacetatom (50 ml × 2). Kombinovani organski slojevi bili su oprani sa salamurom (50 ml), sušeni na na Na2SO4 i koncentrirani pod vakuumom. Ostatak je pročišćen kromatografijom silikagela

1

(PE/EtOAc 1/0 do 50/1) kako bi se 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indol (380 mg, 1,46 mmol, dva koraka daju 18 %, 86 % čistoće) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,12 (br s, 1H), 7,20 - 7,10 (m, 2H), 6,59 - 6,52 (m, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,43 (s, 3H).

Korak 3: 2-[(4-bromo-5,6-dimetil-indol-1-il)metoksi]etiltrimetil-silan.

Rešenje 4-bromo-5,6-dimetil-1H-indol (450 mg, 2,01 mmol, 1eq)u THF (9 ml) je dodano nah (161 mg, 4,02 mmol, 60 % čistoće, 2 ekv.) pri 0°C. Reagovanje je bilo pokrenuto na 0 °C 15 minuta pod N2. Reakcija je dopustena da se zagrije do 25 °C i da se 0,5 sat mesi. Reakcija je ponovo bila ohlađena na 0° C. I SEM-Cl (502 mg, 3,01 mmol, 533 ul, 1,5eq)u THF (100 ul) je dodan u opadanju pri 0° C. Nakon miješanja 5 minuta, mešavina je bila dozvoljena da se zagrije do sobne temperature (25 °C) i da se meša meša meša 5 sata. Po završetku mešavina je bila ugurana zasićenom otopinom amonijevog klorida (20 ml), razrijeđenom vodom (10 ml), a zatim ekstrahirana etilacetatom (2 × 30 ml). Ekstrakti su osušeni u odnosu na na Na2SO4, filtrirani i koncentrirani pod vakuumom. Ostatak je pročišćen kromatografijom silikagela (PE/EtOAc 1/0 do 50/1) kako bi se 2-[(4-bromo-5,6-dimetil-indol-1-il)metoksi]etiltrimetil-silan (440 mg, 1,18 mmol, 59 % prinosa, 95 % čistoće) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,25 (s, 1H), 7,11 (d,J= 3,2 Hz, 1H), 6,51 (d,J= 2,8 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H), 3,52 - 3,40 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 0,92 - 0,87 (m, 2H), -0,01 - -0,08 (m, 9H).

Korak A: terc-butil 4-[7-[5,6-dimetil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indol-4-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1 -karboksilat (Intermedijer 66, 450 mg, 1,04 mmol, 1 ekv.), 2-[(4-bromo-5,6-dimetil-indol-1-il)metoksi]etil-trimetil-silan (406 mg, 1,14 mmol, 1,1 ek), Pd2(dba)3 (191 mg, 208 umol, 0,2 ek), RuPhos (194 mg, 416 umol, 0,4 ek) i Cs2CO3 (847 mg, 2,60 mmol, 2,5 do luen) (0 in. degasiran i zatim zagrevan na 90 °C tokom 8 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc/MeOH 50/1 do 10/1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-[5,6-dimetil-1-

11

(2-trimetilsililetoksimetil)indol-4-il] -2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (106 mg , 135 umol, 13% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 706.

Korak B: terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[7-[5,6-dimetil-1-(2-trimetilsililetoksimetil)indol-4-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (70 mg, 99,2 umol, 1 ekv.) u DMF (0,35 mL) je dodat TBAF (1 M u THF, 496 uL, 5 ekv.) za kojim sledi etan-1,2-diamin (8,94 mg, 149 umol, 9,95 uL, 1,5 ekv.). Smeša je mešana na 85 °C tokom 3 sata. Po završetku, smeša je razblažena sa EtOAc (3 mL) i vodom (2 mL). Odvojeni organski sloj je osušen preko Na2SO4 i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (DCM/MeOH 10/1) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (50 mg, 60,8 umol, 61% prinos, 70 % čistoće) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 576.

Korak C: 7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-pirazin-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. Rešenje terc-butil 4-[7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2- [[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dpirimidin-4-1-il]il (Dzul-78,2) bio je dodan u karboksilu (Dzul-1) (4570-89,1-), 782 umol, 57,9 ul, 10eq). Mešavina je miješana na 25 °C 0,5 sat. Po završetku mešavina je bila koncentrirana pod vakuumom da bi se dalo 7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-4-pirazen-1-il-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-pirimidin-2-pirimidin], koji je bio direktno upotrebljen kao sirov korak a (60-pimidin).

Korak D: 1-[4-[7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on. U rastvor 7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (55 mg, 78,2 umol, 1 ekv, 2 TFA) i TEA (158 mg, 1,56 mmol, 218 uL, 20 ekv.) u DCM (1 mL) ) je dodat prop-2-enoil prop-2-enoat (9,86 mg, 78,2 umol, 1 ekv.) kapanjem na -40 °C. Smeša je mešana na -40°C 30 minuta. Po završetku, smeša je ugašena sa MeOH (0,5 mL),

12

razblažena vodom (5 mL) i zatim ekstrahovana sa DCM (2 × 10 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 100/1 do 10/1) i prep-HPLC (kolona:: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,1 % TFA)-ACN]; B%: 16 %-43 %, 12 min). Željene frakcije su prikupljene i neutralizirane sa zasićenim očne vodice NaHCO3, izdvojene sa DCM (2 × 15 ml). Organski slojevi sušeni su u smislu Na2SO4 i koncentrirani pod vakuumom da bi se dala naslovna supstanca 1-[4-[7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]-6,8-dihidro-5-pirido[3,4 2 9,81-pirido[4 1 18,3-1 457 23] 98,8 % čistoće) kao smeđeg čvrstog. LCMS [ESI, M+1]: 530.

SFC stanje: OJ-3S_3_5_40_3ML Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.d., 3um Mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u CO2 sa 5 % na 40 % protoka: 3 ml/min valna duljina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,22 (br s, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,07 -7,03 (m, 1H), 6,60 (dd,J= 10,8, 16,8 Hz, 1H), 6,53 - 6,48 (m, 1H), 6,34 (dd,J= 2,0, 16,9 Hz, 1H), 1H 5,76 (dd,J= 2,0, 10,4 Hz, 1H), 4,49 - 4,10 (m, 4H), 3,81 (br, 2H), 3,76 - 3,38 (m, 8H), 3,13 (br t,J= 7,2 Hz, 1H), 3,02 - 2,56 (m, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,39 (s, (s,), 3H), 2,36 (s, 3H), 2,34 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 1,84 - 1,71 (m, 3H).

PRIMER 458

2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1

Korak A: 1-bromo-8-metilnaftalen: Za rešenje 1,8-dibroftalane (33,8 g, 118 mmol) u THF (200 ml) hlađen do -78 °C dodan je butilithium (49,6 ml, 124 mmol) po takvoj stopi da unutrašnja temperatura nije viša od -69 °C. Nakon kompletnog dodatka, reakcija je bila hlađena na -78 °C, a metilni jodid (14,8 ml, 236 mmol) je dodan u bolus tako da se unutrašnja temperatura povećala na -40 °C. Nakon dodavanja metil jodida, uklonjena je suha ledena/aceton kupka i reakcija se zagrijala na sobnu temperaturu. Reakcija je sledeća ulila u slanu vodu i vodeni sloj koji je bio ekstriran sa EtOAc (300 ml) i organski se odvojio. Organska su zatim osušena na MgSO4 i koncentrirana u vakuolu i kromatografija za talog je koriščena heksinima kao eluentnom za belu (24 g). Kruta je bila sledeća srrka u IPA-i (CA.60 ml) i srrr zagrijan na 60 °C u tom trenutku krute tvari su se rastopili. Rešenje je bilo izomljeno od grejanja i ohlađeno do sobne temperature preko 2 sati. Iz toga je isfiltrirano srrstvo, a krute čestice sušene u vakuoli da bi se dalo 1-bromo-8-metilinaftalin (16 g, 72,4 mmol, 61 % prinosa) > 95 % čistoće.

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Rastvor ksanfosa (4,5 g, 7,8 mmol) i Pd2(dba)3 (3,5 g, 3,9 mmol) u dioksanu (100 mL) je degaziran argonom 15 minuta, nakon čega je rastvor zagrevan 20 minuta na 100°C. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (9,8 g, 19 mmol), 1-bromo-8-metilnaftalen (13 g, 58 mmol) i Cs2CO3 (32 g, 97 mmol), U rastvor je dodat Pd2(dba)3 (3,5 g, 3,9 mmol) i smeša je degazirana dodatnih 20 minuta sa argonom i reakcija je zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz OFF papir i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je zatim hromatografisan 3 puta korišćenjem 1-->10% (MeOH+2% NH4OH)/DCM da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-

14

metilnaftalen-1-il) -2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (7,8 g , 12 mmol, 62 % prinos). ESI+APCI MS m/z 646,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (7,8 g, 12 mmol) u 1:1 EtOH/THF (100 mL) je degaziran sa N2 tokom 5 minuta praćeno dodavanjem Pd/C (2,6 g, 2,4 mmol). Suspenzija je zatim degazirana pod vakuumom i napunjena sa H2 (3Ks). Na trećem zadnjem punjenju smeša je mešana pod balonom vodonika preko noći. Suspenzija je ponovo degazirana sa N2 i suspenzija je filtrirana kroz celit. Kombinovani filtrat je koncentrovan in vacuo i čvrsta supstanca je hromatografisana korišćenjem 1->10% (MeOH+2% NH4OH)/DCM kao eluenta da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il). )-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (5.0 g, 9.8 mmol, 81 % prinos).

Korak D: 2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Na 0°C, u RBF od 25 mL koji sadrži N,N-dimetilformamid (1954 µl, 0,391 mmol) dodat je 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (200 mg, 0,391 mmol) i trietilamin (136 ul, 0,977 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je but-2-inoična kiselina (49,3 mg, 0,586 mmol) dodata u jednom obroku. U mešavinu se polako dodaje ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (175 ul, 0,293 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 18 sati. Dodata je voda i čvrste materije su filtrirane. Čvrste materije su prečišćene silika gelom (5-18% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-(but-2-inoil)-4-(7-(8-metilnaftalen). -1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2 -il)acetonitril (PRIMER 458, 110 mg, 0,190 mmol, 49 % prinos). ESI+APCI MS m/z 578,3 [M+H]<+>.

PRIMER 459

1

2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((S)-1 -metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-1-((E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((S)-1 -metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Mešana mešavina 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (100 mg, 0,1954 mmol), (E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (37,86 mg , 0,2932 mmol) i N,N-dimetilformamid (2 mL, 25,58 mmol) ohlađeni su u kupatilu sa ledom i soli i odjednom je dodat trietilamin (0,02724 mL, 0,1954 mmol), a zatim 2,4,6-tripropil-1, 3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid, 50% u EtOAc (0,1745 mL, 0,2932 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. tokom 5 min, zatim mešano na s.t. za 3 h.

Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (50 mL) i 0,5 M Na2CO3 (20 mL), organski sloj je odvojen, organski sloj je ispran vodom i rastvorom soli (10 mL svaki), osušen preko Na2S04 i uparen u vakuumu. Hromatografija na silika gelu u 5 do 10% MeOH 0,5% NH4OH u DCM dala je sirovi proizvod koji je prečišćen na reverznoj fazi, Gilson, 5 do 95% MeCN 0,1% TFA u vodi. Ciljne frakcije su kombinovane, bazifikovane sa 2M Na2CO3 i ekstrahovane sa DCM (3 k 20 mL).

1

Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2S04 i upareni u vakuumu. Čvrsti ostatak je rastvoren u DCM (3 mL), filtriran i uparen da bi se dobilo željeno jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (PRIMER 459, 40 mg, 33%). ESI+APCI MS m/z 623,3 [M+H]<+>.

PRIMER 460

2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-

1

karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 65, 500 mg, 989 umol, 1,0 ekv.), Pd2(dba)3 (181 mg, 198 umol, 0,20 ekv.), ksantfos (1972 mg umol, 0,30 ekv) i Cs2CO3 (967 mg, 2,97 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (5,0 mL) je dodat 1-bromo-8-metil-naftalen (Intermedijer 69, 284 mg, 1,29 mmol, k). Smeša je mešana na 90 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10,0 mL × 4). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom obrnute faze (C18, 0,1 % u mravlja kiselina, 0-70 % acetonitril) da bi se dobio proizvod benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1 -naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 619 umol, 63% prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak B: 2-[(2s)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d/4-d pirimidin--il]azazil-2-dihidroacetonitril]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (700 mg, 1,08 mmol, 1,0 ekv.) i NH3•MeOH (20,0 mL, 30% čistoće) u metanolu (20.0 mL) je dodat Pd/C (200 mg, 10% čistoće). Smeša je pročišćena azotom 3 puta. Zatim je smeša mešana u atmosferi vodonika (15 Psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz celit, filterski kolač je ispran tetrahidrofuranom (20.0 mL). Matična tečnost je sakupljena i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (500 mg, 977 umol, 90% prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,70 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,64 (dd,J= 3,2, 7,2 Hz, 1H), 7,43 - 7,37 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,19 (M, 2H), 4,43 - 4,33 (m, 1H), 4,22 (dd,J= 6,8, 18,0 Hz, 1H), 4,17 - 4,08 (m, 1H), 4,07 - 3,89 (m, 1H), 3,89 - 3,70 (m, 2H), 3,52 - 3,45 (m, 2H), 3,38 - 3,20 (m, 1H), 3,19 - 3,04 (m, 1H), - - (m, 1H 3,03 - 2,94 (m, 2H), 2,93 - 2,82 (m, 4H), 2,70 - 2,60 (m, 1H), 2,60 - 2,49 (m, 3H), 2,47 (d,J= 2,4 Hz, 3H), 2,31 - 2,22 (m, 1H), 2,11 - 2,00 (m, 1H), 1,88 - 1,76 (m, 3H).

1

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (250 mg, 489 umol, 1,0 ekv.) i piridin (309 mg, 3,91 mmol, 316 uL, 8,0 ekv.) in dodat je dihlorometan (4,0 mL) (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (359 mg, 1,95 mmol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)- 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (330 mg, sirovo) kao žuto ulje. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 658.

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov) i K2CO3 (630 mg, 4,55 mmol, 10,0 ekv.) u dihlorometanu (2,0 mL) dodat je morfolin (238 mg, 2,73 mmol, 241 uL, 6,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; Mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-morfolinobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril ( PRIMER 460, 48,2 mg, 72,5 umol, 16% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 665.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,70 (br d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,65 (t,J= 8,4 Hz, 1H), 7,41 (dd,J= 7,6, 15,2 Hz 1H), 7,35 (T,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 7,02 - 6,91 (m, 1H), 6,55 - 6,39 (m, 1H), 5,23 - 4,47 (m, 1H), 4,40 - 4,33 (m, 1H), 4,31 - 4,19 (m, 1H), 4,19 - 4,09 (m, 2H), 4,07 - 3,83 (m, 2H), - (m, 2H), - (h, 2H 3,81 - 3,64 (m, 5H), 3,59 - 3,40 (m, 2H), 3,24 - 3,13 (m, 4H), 3,12 - 2,94 (m,

1

H), 2,92 (s, 3H), 2,86 - 2,76 (m, 1H), 2,75 - 2,54 (m, 3H), 2,50 (br s, 4H), 2,48 -,45 (2,332,00), 2,22 - 2,10 (1H) (M, 1H), 1,87 - 1,71 (m, 3H).

PRIMER 461

2-[(2R)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

2

Korak A: terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor terc-butil 2,4-dihloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilata (3 g, 9,86 mmol, 1 ekv.) u DMAc (60 mL) je dodat DIEA (3,82 g, 29,6 mmol, 5,15 mL, 3 ekv.) i 2-piperazin-2-ilacetonitril (Intermedijer 62, 2,15 g, 10,9 mmol, 1,1 ek, 2HCl) na 0 °C. Smeša je mešana na 25°C 1,5 h. Zatim je u rastvor dodat DIEA (2,55 g, 19,7 mmol, 3,43 mL, 2 ekv.) i benzil hloroformat (2,52 g, 14,8 mmol, 2,10 mL,

1,5 ekv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 25°C još 2,5 sata. U reakcionu smešu je dodata H20 (40 mL) i etil acetat (100 mL). Odvojena organska faza je isprana sa 5% vodenog rastvora limunske kiseline (40 mL × 1), zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3 (40 mL × 1) i slanim rastvorom (40 mL × 1), osušena preko natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je triturisan sa metil terc-butil etrom (25 mL) da bi se dobio čist proizvod. terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (4,10 g 7,62 mmol, 79% prinos, 98% čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 527.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,43 - 7,29 (m, 5H), 5,17 (s, 2H), 4,71 - 4,55 (m, 2H), 4,48 - 4,37 (m, 1H), 4,21 - 3,97 (m, 2H), 3,92 - 3,67 (m, 2H), 3,40 - 3,20 (m, 3H), 3,09 (dt,J= 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,88 - 2,57 (m, 4H), 1,47 (s, 9H).

SFC stanje (40935): Kolona: Chiralcel OD - 350 × 4,6 mm I.d.3 um Mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u CO2, sa 5 % na 40 %, protok: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

Korak B:Tert-butil 4-[(3R)-4-benzyloksikarbonil-3-(cijanmetil) pirazin-1-il]-2-klor-6,8-dihidro-5H-pirimidin[3,4-dpirimidin-7-karboksilat. terc-butil 4-[4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (2,20 g , 4,17 mmol, 1 ekv) je razdvojen SFC (kolona: OD (250 mm * 30 mm, 10 mm); mobilna faza: [0,1 % NH3H2O MeOH]; B%: 40 % -40 %, 3,1 min: 180 min). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-[(3R)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil) piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (940 mg, 1.78 mmol, 43% prinos, 99.7% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 527.

21

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OD - 350 × 4,6 mm i d.D., 3 um, mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u CO2, sa 5 % na 40 %, protok: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

Korak C: terc-butil 4-[(3R)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. Na smešu terc-butil 4-[(3R)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (290 mg, 550 umol, 1 ekv.), [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (127 mg, 1,10 mmol, 131 uL, 2 ekv.), Pd2(dba)3 ( 60,5 mg, 66,0 umol, 0,12 ekv.), RuPhos (51,4 mg, 110 umol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (448 mg, 1,38 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (20 mL i prečišćeni N3 puta) je degaziran i prečišćen 3 zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 7 sati pod atmosferom N2. U reakcionu smešu je dodata H20 (25 mL × 1) i etil acetat (25 mL × 2). Odvojena organska faza je isprana slanim rastvorom (100 mL × 1), osušena preko natrijum sulfata i zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen etil acetatom (50 mL) i zakiseljen vodenim rastvorom HCl (1 mol/L) do pH = 3 ~ 4. U odvojeni vodeni sloj dodat je etil acetat (60 mL) i zalužen zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3 do pH = 8 ~ 9. Organska faza je odvojena, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. terc-butil 4-[(3R)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (225 mg, 0,36 mmol, 66% prinos, 97,7% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 606.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,47 - 7,30 (m, 5H), 5,19 (s, 2H), 4,73 - 4,52 (m, 2H), 4,44 - 4,26 (m, 2H), 4,22 - 4,14 (m, 1H), 4,03 - 3,74 (m, 3H), 3,41 - 3,21 (m, 3H), 3,08 (Br t,J= 7,6 Hz, 1H), 2,97 (dt,J= 3,6, 12,4 Hz, 1H), 2,89 -2,53 (m, 5H), 2,46 (s, 3H), 2,38 - 2,10 (m, 2H), 2,08 - 2,03 (m, 1H), 1,89 - 1,65 (m, 3H), 1,48 (s, 9H).

SFC stanje: Kolona: Chiralpak AD - 350 × 4,6 mm I.d., 3um, mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u CO2, sa 5 % na 40 %, protok: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

22

Korak D: benzil (2R)-2-(cijanmetil)-4-[2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-dpirimidin-4-il]piperizin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[(3R)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (620 mg, 1,02 mmol, 1 ekv.) u dioksanu (12 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 12,4 mL, 48,5 ekv. ) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 h. Tečnost je dekantirana i ostatak je koncentrovan pod vakuumom. benzil (2R)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat (470 mg, sirov, HCl) je dobijen kao žuto ulje koje je rastvoreno u DCM (10 mL). Smeša je zalužena zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata do pH = 9. Organska faza je odvojena, isprana slanim rastvorom (5 mL × 1), filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak koji je bio dovoljno čist bez daljeg prečišćavanja. benzil (2R)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 718 umol, 77% prinos, 90,8% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 506.

Korak E: benzil (2R)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Na smešu benzil (2R)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 415 umol, 1 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen (intermedijer 69, 119 mg, 540 umol, 1,3 ekv.) Pd2(dba )3 (76,1 mg, 83,1 umol, 0,2 ekv.), Cs2CO3 (406 mg, 1,25 mmol, 3 ekv.) i ksanfos (72,1 mg, 125 umol, 0,3 ekv.) u toluenu (7 mL za gas i pročišćeni N3) je degaziran sa puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C tokom 8 sati pod atmosferom N2. Reakcionoj smeši je dodata H20 (20 mL × 1) i smeša je ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 2). Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen etil acetatom (50 mL) i zakišeljen do pH = 3 ~ 4 sa vodenim rastvorom HCl (1 mol/L). Vodenom sloju je dodat etil acetat (60 mL) i zalužen do pH = 8 ~ 9 zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3. Organska faza je odvojena, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/metanol 50/1 do 5/1). benzil (2R)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

2

dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (86 mg, 0,128 mmol, 31% prinos, 96,0 čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak E: 2-[(2R)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2R)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 201 umol, 1 ekv.) u MeOH (15 mL) je dodat Pd/C (25 mg) , 15,5 umol, 10% čistoće) i NH3•MeOH (15,5 umol, 15 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran kroz jastučić od celita. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom.2-[(2R)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 0,183 mmol, 91% prinos, 93,5% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak F: 2-[(2R)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2R)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 195 umol, 1 ekv.) i TEA (198 mg, 1,95 mmol, 272 uL, 10 ekv.) in DCM (10 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (17,7 mg, 195 umol, 15,9 uL, 1 ekv.) u porcijama.

Posle mešanja na -40 °C tokom 30 min, smeša je ugašena sa MeOH (2 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, dihlorometan/metanol = 10/1 do 10/1). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150 * 255u; Mobilna faza: [voda (0,225% FA) - ACN]; B%: 25% - 45%, 7,8 min) i (kolona: Luna C18150 * 255u; mobilna faza: [Voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 25 % - 45 %, 7,8 min) i (kolona: Gemini 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 57 % - 87 %, 12 min). Željene frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se uklonio acetonitril, a zatim liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2R)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 461, 17,6 mg, 31,0 umol, 16%

24

prinos, 100% čistoća) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 566.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-350 × 4,6 mm I.d., 3um, mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u odnosu na 5 % do 40 %, protok: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

<1>H NMR (400M Hz, hloroform-d) δ = 7,77 - 7,63 (m, 2H), 7,48 - 7,32 (m, 2H), 7,31 - 7,18 (m, 2H), 6,61 (br s, 1H), 6,48 - 6,37 (m, 1H), 5,85 (br d,J=10,0 Hz, 1H), 5,27 - 4,49 (m, 1H) 4,45 - 4,33 (m, 1H), 4,33 - 4,06 (m, 4H), 4,05 - 3,62 (m, 3H), 3,61 - 3,34 (m, 2H), 3,33 - 2,99 (m, 5H), 2,94 (s, 3H), 2,88 - 2,77 (m, 1H), 2,75 - 2,57 (m, 2H), 2,54 - 2,44 - 2,30 (m, 2H), - (Br d,J= 7,2 Hz, 1H), 2,15 - 1,95 (m, 1H), 1,95 - 1,79 (m, 3H).

PRIMER 462

2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperazin-2-il]acetonitril

2

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Mešavina terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,27 mmol, 1 ekv.), 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (511 mg, 1,65 mmol, 1,3 ekv.), RuPhos (237 mg, 509 umol, 0,4 ekv.), Cs2CO3 (1,04 g, 3,18 mmol, 2,5 ekv.) i Pd2(dba)3 (233 mg, 254 umol, ken)20 2 0. ) je degasiran i zatim zagrevan na 90 °C tokom 8 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralisane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3.

Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 50 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1- tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat (365 mg, 469 umol, 37% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 700.

2

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 7,99 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,66 (dd,J= 2,8, 9,6 Hz, 1H), 4,61 (br, 1H), 4,40 (br dd,J= 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,26 (br s, 2H), 4,09 - 3,97 (m, 3H), 3,90 (br d,J= 11,6 Hz, 1H), 3,80 - 3,71 (m, 1H), 3,50 (br,J= 4,8 Hz, 2H), 3,25 (br, 2H), 3,09 (br,J= 7,6 Hz, 1H), 2,99 (Br t,J= 11,2 Hz, 1H), 2,83 - 2,51 (m, 6H), 2,48 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,31 - 2,24 (m, 1H), 2,21 - 2,13 (m, 1H), 2,11 - 2,06 (m, 1H), 1,90 - 1,69 (m, 8H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pvrimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S) )-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (720 mg, 1,03 mmol, 1 ekv.) u DCM (1 mL) je dodat TFA (4,62 g, 40,5 mmol, 3 mL, 39,4 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C tokom 4 sata. Po završetku, smeša je razblažena sa DCM (10 mL) i neutralizovana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Zatim je vodena faza ekstrahovana sa EtOAc (2 × 30 mL). Organski slojevi su kombinovani, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[( 2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (880 mg, sirov) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 516.

Korak C: (2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov) i TEA (177 mg, 1,75 mmol, 243 uL) u DCM (4 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (13,2 mg, 145 umol, 11,9 uL) u kapima na -40 °C. Posle mešanja na -40 °C tokom 30 minuta, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (1 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 × 10 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 do 10/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Gemini 200*3010µ; Mobilna faza: [voda (10 mm NH4HCO3) -ACN]; B%: 40 %-70 %, 6,0 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-

2

metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-prop-2-enoilpiperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 462 , 15,6 mg, 27,2 umol, dva koraka 15% prinos, 99,6% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:570.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-3100×4,6 mm I.d., 3um, mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u odnosu na 5 % do 40 %, protok: 3 ml/min, valna duljina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 10,26 (br, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 1H), 6,57 (br d,J= 9,6 Hz, 1H), 6,39 (dd,J= 1,2, 16,4 Hz, 1H), 5,83 (br d,J= 10,4 Hz, 1H), 5,12 - 4,38 (m, 2H), 4,28 (s, 2H), 4,23 - 3,84 (m, 4H), 3,73 - 3,40 (M, 3H), 3,32 (br, 1H), 3,10 (br, .7= 7,6 Hz, 2H), 2,98 - 2,61 (m, 5H), 2,48 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,32 - 2,24 (m, 1H), 2,11 - 1,99 (m, 1H), 1,91 - 1,78 (m, 3H).

PRIMER 463

(S,E)-3-((4-(3-(cijanometil)-4-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il? )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid

2

Korak A: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilati: Benzil (S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid (10 g, 34 mmol) je rastvoren u DMA (68 ml, 34 mmol). U rastvor je zatim dodat terc-butil 2,4-dihloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (9,3 g, 30 mmol), a zatim Hunigova baza (24 ml, 135 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je zatim sipana u bazičnu vodu i ekstrahovana sa MTBE. Organski slojevi su isprani dodatnom vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2 SO4 i koncentrovani u vakuumu. Koncentrat je zatim hromatografisan korišćenjem 10→70% EtOAc/heksana kao eluenta da bi se dobio terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2- hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (12 g, 67 % prinos). ESI+APCI MS m/z 580,3 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (1.5 g, 2.8 mmol) je rastvoren u DCM (28 ml, 2.8 mmol) i tretiran rastvorom hlorovodonične kiseline (4.0 M u 1,4-dioksanu) (3.6 ml, 14 mmol).

Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Organski slojevi su isprani sa 1M NaOH. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2Ks). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2 SO4, koncentrovani u vakuumu i preneti dalje kao sirovi benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,2 g, 99 % prinos). ESI+APCI MS m/z 427,2 [M+H]<+>.

Korak C: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-( cijanometil)piperazin-1-karboksilat: Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0,51 g, 0,56 mmol) i ksantfos (0,54 g, 1,1 mmol) rastvoreni su u 1,4-dioksanu (28 ml, 2,8 mmol) i pročišćeni pod argonom 5 minuta, a zatim mešanje na 100°C pod argonom 15 minuta. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature. U reakciju je dodat benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,2 g, 2,8 mmol), 1-bromo-8-metilnaftalen (1,9 g, 8,4 mmol) i cezijum karbonat (2,7 g, 8,4 mmol) pod argonom. Reakcija je zatvorena pod argonom i mešana na 100°C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz GF/F papir. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom

2

normalne faze na CombiFlash koristeći 0% →75% heksani/EtOAc kao eluent da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-). il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,45 g, 28 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 567,2 [M+H]<+>.

Korak D: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(3-(dimetilamino)-3-oksopropoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)-3,4-dihidropirazin-1(2H)-karboksilat: U mikrotalasnoj cevi rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 0,441 mmol) u dioksanu (4408 ul, 0,441 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta.3-hidroksi-N,N-dimetilpropanamid (155 mg, 1,32 mmol), cezijum karbonat (431 mg, 1,32 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'- bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (37,5 mg, 0,0441 mmol) je uzastopno dodat pod argonom i reakcija je prskana dodatnih 5 minuta sa argonom. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C 1 sat. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i dodat je etil acetat. Reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i filtrirana je koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0 →20% MeOH 2% NH4OH/DCM. Sve frakcije koje sadrže čist željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(3-(dimetilamino)-3-oksopropoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-3,4-dihidropirazin-1(2H)-karboksilat (140 mg, 49,2 % prinos). ESI+APCI MS m/z 648,3 [M+H]<+>.

Korak E: (S)-3-((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid: Rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(3-(dimetilamino)-3-oksopropoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (140 mg, 0,216 mmol) u EtOH (2161 µl, 0,216 mmol) i THF (2161 µl, 0,216 mmol) je prečišćen sa N25 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum (57,5 mg, 0,0540 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O) i reakcija je zatvorena i isprana sa N2 dodatnih 5 minuta. Rastvor je mešan u jednoj atmosferi H2 preko noći. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi (S)-3-((4-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid (111 mg, 100,0 % prinos). ESI+APCI MS m/z 514,3 [M+H]<+>.

Korak F: (S,E)-3-((4-(3-(cijanometil)-4-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il? )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid: U balon sa okruglim dnom od 25 mL koji sadrži dihlorometan (2161 µl, 0,216 mmol) ohlađen na 0°C dodat je (S)-3-((4-(3-(3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(8) -metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid (111 mg, 0,216 mmol) i Hunigova baza (226 µl, 1,30 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je (E)-4-(dimetilamino)but-2-enska kiselina (167 mg, 1.30 mmol) dodata u jednom delu. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (772 ul, 1,30 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je mešana 2 sata na 0°C. Reakcija je tretirana baznom vodom i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3Ks). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćeni na Gilson-u (prep HPLC) eluiranjem sa 5 →95% ACN 0,1% TFA/voda+0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane, razblažene sa 1M NaOH i vodeni sloj ekstrahovan sa DCM. Organski slojevi su sušeni preko Na2 SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (S,E)-3-((4-(3-(cijanometil)-4-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)piperazin- 1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetilpropanamid (17,6 mg , 13,0 % prinos). ESI+APCI MS m/z 625,4 [M+H]<+>.

PRIMER 464

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1

Korak A: Benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,396 mmol), Cs2CO3 (644 mg, 1,98 mmol), 1,8-dibromonaftalen (339 mg, 1,19 mmol), Pd2(dba)3 (72,4 mg, 10. mmol) i KSANTPHOS (91,6 mg, 0,158 mmol) su razblaženi toluenom (1582 ul, 0,396 mmol). Reakcija je pročišćena argonom, zatvorena i zagrejana na 100°C. Posle mešanja tokom 23 sata, reakcija je ohlađena i razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 1-10% metanol/DCM (1% NH4OH kao aditiv) da bi se dobio benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-((( S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (68 mg , 24,2 % prinos). ESI+APCI MS m/z 712,2 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (25 mg, 0,035 mmol) je razblažen sa TFA (2 mL), stavljen pod azot i zagrejan do 90°C. Posle mešanja tokom 2 sata, reakcija je ohlađena i koncentrovana. Materijal je razblažen sa DCM i ispran zasićenim natrijum

2

bikarbonatom. DCM je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH kao aditiv) da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-((( S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8 mg, 39 % prinos ). ESI-APCI MS m/z 578,2 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8 mg, 0,014 mmol) je razblažen sa DCM (200 uL), a zatim je dodat akriloil hlorid (1,4 mg, 0,015 mmol) i DIEA (4,8 ul, 0,028 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena zasićenim natrijum karbonatom i ekstrahovana dva puta sa DCM. DCM je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH kao aditiv) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-akriloil-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)) -2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril ( PRIMER 464, 6 mg, 69 % prinos). ESI+APCI MS m/z 632,2 [M+H]<+>.

PRIMER 465

(R)-4-akriloil-1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-karbonitril

Korak A: benzil (R)-4-(4-(terc-butoksikarbonil)-2-cijanopiperazin-1il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Smeša benzil 2,4-dihloro-5,6-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(8H)-karboksilata (700 mg, 2,07 mmol), R-1-N-Boc-3-cijanopiperazina ( 656 mg, 3,10 mmol), N,N-dimetilacetamida (1 ml) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (0,433 ml, 2,48 mmol) je mešano na 60°C u atmosferi azota tokom 48 sati. Reakciona smeša je ohlađena, podeljena između MTBE (50 mL) i 0,2 M Na2CO3 (15 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (10 mL svaki), osušen preko Na2S04 i uparen u vakuumu. Materijal je kristalisao nakon razblaživanja sa MTBE (5 mL). Matična tečnost je dekantirana i čvrsta supstanca je isprana sa MTBE (2 k 1 mL) nakon čega je usledilo prečišćavanje na silika gelu korišćenjem 40 do 60% EtOAc/heksana kao eluenta da bi se dobio proizvod (308 mg, 29%). ESI+APCI MS m/z 513,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil 4-((R)-4-(terc-butoksikarbonil)-2-cijanopiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[ 3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Smeša benzil (R)-4-(4-(terc-butoksikarbonil)-2-cijanopiperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H) -karboksilat (308 mg, 0,600 mmol), Cs2CO3 (587 mg, 1,80 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino- 1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G4, 51,1 mg, 0,0600 mmol), (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanol (346 mg, 3,00 mmol) i 1,4-dioksan (4 ml) je pročišćen sa N2 i bočica je zatvorena poklopcem i reakcija je mešana na 70°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je podeljena između vode (5 mL) i EtOAc (20 mL) i organski sloj je odvojen. Organski slojevi su isprani vodom i

4

slanim rastvorom (3 mL svaki), osušeni preko Na2SO4 i upareni u vakuumu.

Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH 0,4% NH4OH/DCM kao eluenta da bi se dobio proizvod kao smeša izomera (214 mg ~60% čistoće, 36%). ESI+APCI MS m/z 592,3 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil(R)-3-cijano-4-(2-(s)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperizin-1-karboksilat: Smeša sirovog benzil 4-((R)-4-(terc-butoksikarbonil)-2-cijanopiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (214 mg, 0,362 mmol), metanol (7 ml, 0,362 mmol) i paladijum na ugljeniku (20 mg, 5%, Degussa tip E101 NO /V) je degazirano i mešano u atmosferi vodonika tokom 1,5 sata. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit (2 mL), celit je ispran sa MeOH (3 k 3 mL) i kombinovani organski slojevi su upareni u vakuumu da bi se dobio proizvod koji je upotrebljen sirov u sledećoj reakciji. ESI+APCI MS m/z 458,3 [M+H]<+>.

Korak D: terc-butil (R)-3-cijano-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Smeša terc-butil (R)-3-cijano-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (165 mg, 0,361 mmol), Cs2CO3 (352 mg, 1,08 mmol), dioksan (0,5 mL), 1-jodonaftalen (0,0790 ml, 0,541 mmol) i metansulfon -dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1 '-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (RuPhos-Pd-G4, 0,1 ekv., 30,7 mg, 0,0361 mmol) je pročišćeno azotom, boca je zatvorena i mešana na 70°C tokom 1,5 sata. Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (20 mL) i vode (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom (5 mL svaki), osušen preko Na2S04 i uparen u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH+0,4% NH4OH/DCM kao eluenta da bi se dobio proizvod (120 mg, 57%). ESI+APCI MS m/z 584,3 [M+H]<+>.

Korak E: (R)-1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-karbonitril: (terc-butil (R)-3-cijano-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7) ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (120 mg, 0,206 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (0,5 ml) i ohlađen na 0°C, a zatim dodavanjem 4M hlorovodonika (1,03 ml, 4,11 mmol) i reakcija je mešana tokom 1 h uz zagrevanje do sobne temperature. Smeša je uparena u vakuumu, a ostatak je podeljen između DCM (10 mL) i 2M Na2CO3 (0,5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su sušeni preko Na2C03, filtrirani i upareni u vakuumu. Materijal je korišćen sirov u sledećoj reakciji. ESI+APCI MS m/z 484,2 [M+H]<+>.

Korak F: (R)-4-akriloil-1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-karbonitril: Rastvor (R)-1-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-karbonitril (79 mg, 0,1634 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen na -30°C uz mešanje praćeno dodavanjem trietilamina (68,31 µl, 0,4901 mmol) i akriloil hlorid (26,54 ul, 0,3267 mmol). Posle 5 minuta na -30°C, reakcija je ugašena dodavanjem MeOH (0,05 mL) i reakcija je zagrejana do sobne temperature. Organski slojevi su zatim odvojeni i isprani sa 0,5 M Na2CO3 (4 mL), osušeni preko Na2CO3 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 4% MeOH 0,4% NH4OH/DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 465, 17 mg, 19%).

ESI+APCI MS m/z 538,3 [M+H]<+>.

PRIMER 466

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 454 zamenivši međuproizvod 66 terc-butil 4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat u koraku A.

PRIMER 467

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 447 zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat u Primeru 447, Korak A za benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat u Primeru 447, Korak A.

PRIMER 468

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 447 zamena benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-hloronaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina -4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat u Primeru 447, Korak A za benzil (S)-4-(2-hloro-7-(naftalen-1-il)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat u Primeru 447, Korak A.

PRIMER 469

(S)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

(S)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema PRIMERU 457 zamenom PRIMERA 139, Korak B, proizvod 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etanola za [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol u pripremi intermedijara 66, Korak E, a zatim sledeći PRIMER 457 Koraci B - D.

PRIMER 470

(S)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

(S)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 453 zamenivši Primer 139, Korak B proizvod 2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etanola za [(2S)-1-metilpirolidin-il]metanol u pripremi intermedijera 66, Korak E, a zatim sledeći Primer

53 Koraci B – C.

PRIMER 471

-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3,3-difluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

(E)-4-bromobut-2-enoil hlorid. U rastvor (E)-4-bromobut-2-enske kiseline (500 mg, 3,03 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) dodat je (COCl)2 (4,35 g, 34,3 mmol, 3,0 mL, 11,3 ekv. Smeša je mešana na 60 °C tokom 12 sati.

Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (500 mg, sirov) je dobijen kao smeđe ulje.

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,30 g, 2,17 mmol, 1,0 ekv.) i [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (500 mg, 4,34 mmol, 515 uL , 2,0 ekv.) u toluenu (20,0 mL) je dodat t-BuONa (417 mg, 4,34 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog rastvora soli (30,0 mL) na 20 °C i ekstrahovana sa EA (3 × 30,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (30,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=3/1 do EA/MeOH = 10/1). Proizvod terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,1 g, 1,62 mmol, 75% prinos, 96% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 650.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 154 umol, 1,00 ekv.) u dioksanu (0,5 mL) je dodat HCl •dioksan (4 M, 1,00 mL, 26,0 ekv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio dioksan. Ostatak je razblažen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10,0 mL) i ekstrahovan sa EA (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (20.0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod 2-

4

[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90,0 mg, sirov) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:550.

Korak C: 2-((2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3,3-difluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80,0 mg, 145 umol, 1,0 ekv.) u DCM (3,0 mL) je dodat Pi (115 mg, 1,45 mmol, 117 uL, 10,0 ekv.) i (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (107 mg, 582 umol, 4,0 ekv.) u DCM (3,0 mL). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon što je početni materijal utrošen, zatim je u rastvor 3,3-difluoropirolidina (156 mg, 1,45 mmol, 10,0 ekv.) u DCM (6,0 mL) dodata reakciona smeša. Smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%: 62 %-92 %,12 min). I ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da se ukloni ACN, a zatim liofilizacija. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-[3-hloro-2-(trifluorometil)fenil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3,3-difluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il ]acetonitril (PRIMER 471, 15,4 mg, 20,8 umol, 14 % prinos, 97,7 % čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 723.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,40 (t,J=8,2 Hz, 1H), 7,30 -7,26 (m, 1H), 7,19 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,05 - 6,90 (m, 1H), 6,60 - 6,40 (m, 1H), 5,08 (br, 1H), 4,39 (Br dd,J= 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,17 (br dd,J=6,8, 10,8 Hz, 1H), 4,1 (br, 2H), 4,12 - 4,05 (m, 1H), 3,97 (br d,J=10,8 Hz, 2H), 3,70 - 3,53 (m, 1H), 3,35 -3,25 (m, 3H), 3,17 - 3,07 (m, 2H), 2,96 (br,J=13,2 Hz, 3H), 2,90 - 2,85 (m, 1H), 2,81 (Br,J=6,8 Hz, 3H), 2,75 - 2,65 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,40 - 2,27 (m, 3H), 2,15 - 1,95 (m, 1H), 1,95 - 1,72 (m, 5H).

PRIMER 472

41

2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

2-hloroprop-2-enoil hlorid. U rastvor 2-fluoroprop-2-enske kiseline (400 mg, 4,44 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (1,50 mL) dodat je (COCl)2 (846 mg, 6,66 mmol, 583 uL, 1,50 ekv.) i DMF ( 32,5 mg, 444 umol, 34,2 uL, 0,10 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata.2-hloroprop-2-enoil hlorid (400 mg, sirov) je direktno korišćen za sledeći korak.

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 347 umol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodat TFA (3,08 g, 27,0) mmol, 2,0 mL, 77,8 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 10 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, sirov, TFA) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

42

Korak B: 2-[(2S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 339 umol, 1,0 ekv., TFA) u DCM (2,0 mL) je dodat DIEA (1,11 g, 8,61 mmol, 1,50 mL, 25,4 ekv. i 2-fluoroprop-2-enoil hlorida (200 mg, 1,84 mmol, 5,43 ekv.) u DCM-u (2,0 mL). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 55 %-83 %, 12min).

Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 472, 120 mg, 217 umol, dva koraka 62% prinos, 98,9% čistoće) dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 548.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,11 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,01 -6,91 (m, 2H), 5,52 - 5,32 (m, 1H), 5,26 (dd, J=3,2, 16,8 Hz, 1H), 5,08 - 4,70 (br, 1H), 4,39 (d,J = 5,2, 10,4 Hz, 1H), 4,25 - 4,02 (m, 5H), 3,97 (d, J= 12,8 Hz, 1H), 3,43 - 3,73 (br, 1H) 3,32 (d,J= 13,2 Hz, 1H), 3,25 - 3,16 (m, 1H), 3,15 - 3,02 (m, 3H), 3,01 - 2,91 (m, 1H), 2,90 - 2,80 (m, 2H) 2,79 - 2,60 (m, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,31-2,28 (m, 2H) 7H), 2,13 - 1,97 (m, 1H), 1,90 - 1,70 (m, 3H).

PRIMER 473

2-[(2S)-1-(2-hloroprop-2-enoil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido-[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

4

2-hloroakriloil hlorid. Rastvor 2-hloroprop-2-enske kiseline (400 mg, 3,76 mmol, 1,0 ekv.) i (COCl)2 (715 mg, 5,63 mmol, 493 uL, 1,50 ekv.) u DCM (1,0 mL) je mešan na 25 ° C 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša nije obrađena, već je direktno korišćena za sledeći korak.

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (intermedijer 73, 400 mg, 695 umol, 1,0 ekv.) u DCM (0,50 mL) je dodat TFA (3,08 g, 27,0 mmol, 2,0 mL, 38,9 ekv.). Smeša je mešana na 20°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana i podešena sa zasićenim

NaHCO3 vodenim na pH-7, a zatim ekstrahovana sa DCM (5,0 mL × 3). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (400 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: 2-[(2S)-1-(2-hloroprop-2-enoil)-4-[7-(2,3-dimetilplenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, 631 umol, 1,0 ekv.) i DIEA (245 mg, 1,89 mmol, 330 uL, 3,0 ekv.) u DCM ( 1,0 mL) je dodat 2-hloroprop-2-enoil hlorid (236 mg, 1,89 mmol, 3,0 ekv.) na -78 °C.

44

Smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (2,0 mL) i ekstrahovan sa EA (10,0 mL × 3).

Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 53 %-83 %,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-hloroprop-2-enoil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S) )-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 473, 4,72 mg, 8,35 umol, dva koraka 1% prinosa, 99,8% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 564.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,11 (t,J=7,8 Hz, 1H), 6,98 - 6,94 (m, 2H), 5,86 - 5,78 (m, 1H), 5,77 - 5,72 (m, 1H), 5,15 - 4,78 (m, 1H), 4,45 - 4,30 (m, 1H), 4,21 - 4,12 (m, 1H, 1H), 1H 4,10 - 4,03 (m, 3H), 3,96 (br d,J= 12,4 Hz, 2H), 3,30 (br dd,J= 3,2, 13,6 Hz, 1H), 3,23 - 3,04 (m, 4H), 3,04 - 2,54 (m, 6H), 2,50 (br s, 3H), 2,34 - 2,23 (m, 7H), 2,12 - 2,02 (M, 1H), 1,91 - 1,66 (m, 3H).

PRIMER 474

2-((S)-1-(4-hidroksibut-2-inoil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 65, 1 g, 1,58 mmol, 1 ekv.) i 1-bromonaftalen (655 mg, 3,16 mmol, 440 uL, 2 ekv.) u toluenu (20 m dodat je Pd2(dba)3 (145 mg, 158 umol, 0,1 ekv.), RuPhos (148 mg, 316 umol, 0,2 ekv.), Cs2CO3 (1,55 g, 4,75 mmol, 3 ekv.) u jednoj porciji. Smeša je degazirana i pročišćena sa N23 puta, zatim zagrejana na 90 °C i mešana 2 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (15 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 mL × 1), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% TFA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane zasićenim rastvorom NaHCO3 (6 mL) i ekstrahovale etil acetatom (100 mL × 2). Odvojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (515 mg, 726 umol, 45,9% prinosa, 89,1% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 632.

4

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1 g, 1,58 mmol, 1 ekv.) u MeOH (60 mL) je dodat Pd/C (500 mg, 10% čistoće ) i NH3•MeOH (20%, 50 mL) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril (680 mg, 1,26 mmol, 80% prinos, 92,3% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 498.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,26 - 8,19 (m, 1H), 7,89 - 7,83 (m, 1H), 7,60 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,53 - 7,47 (m, 2H), 7,43 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,16 - 7,12 (m, 1H), 4,41(dd, J= 5,2,10,8 Hz, 1H), 4,26 (s, 2H), 4,16 (dd,J=7,2, 10,8 Hz, 1H), 4,01 (br d,J= 12,4 Hz, 1H), 3,95 - 3,82 (m, 1H), 3,44 - 3,21 (m, 3H), 3,18 - 2,97 (m, 4H), 2,95 - 2,76 (m, 3H), 2,74 - 2,63 (m, 1H), 2,55 (DD,J=1,2, 5,6 Hz, 2H), 2,51 -2,46 (m, 3H), 2,33 - 2,22 (m, 1H), 2,12 - 1,99 (m, 1H), 1,88 - 1,80 (m, 3H).

Korak C: 2-((2S)-1-(4-hidroksibut-2-inoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-7-(1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inoične kiseline (172 mg, 803 umol, 2 ekv.) i DIEA (155 mg, 1,21 mmol, 210 uL, 3 ekv.) u MeCN (5 mL) je dodat MsCl (92,1 mg, 803 umol, 62,2 uL, 2 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 20 minuta, u smešu je dodat 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil )-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 402 umol, 1 ekv.) i smeša je mešana na 25 °C 2 sata. Zatim je reakciona smeša zagrejana na 80 °C i mešana 10 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston Green ODS 150*305u; mobilna faza: [voda (0,225 % FA)-ACN]; B%: 25 % - 45 %, 10 min) i dalje pročišćeno PRIP-HPLC (kolona:

4

Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 45 % - 75 %, 12 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-(4-hidroksibut-2-inoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil) Dobijen je -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 474, 1,43 mg, 2,39 umol, 1% prinos, 96,7% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 580.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,22 (d,J= 6,8 Hz, 1H), 7,90 - 7,82 (m, 1H), 7,61 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 7,44 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,15 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 5,26 - 4,89 (m, 1H), 4,60 - 4,34 (m, 4H), 4,33 - 4,16 (m, 3H), 4,14 - 3,96 (m, 1H), 3,95 - 3,80 (m, 1H), 3,78 - 3,50 (m, 2H), 3,50 - 3,28 (m, 2H, 2H), 3,27 - 3,07 (m, 2H) (M, 3H), 3,06 - 2,82 (m, 3H), 2,80 - 2,64 (m, 2H), 2,51 (d,J= 12,4 Hz, 3H), 2,38 - 2,24 (m, 1H), 2,14 - 2,00 (m, 1H), 1,97 - 1,85 (m, 2H).

PRIMER 475

2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]-1-(2,3,3-trideuterioprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2,3,3-trideuterioprop-2-enoil)piperazin-2-

4

ilacetonitril. U rastvor deuterio 2,3,3-trideuterioprop-2-enoata (68,8 mg, 904 umol, 3 ekv.) i DIEA (234 mg, 1,81 mmol, 315 uL, 6 ekv.) u MeCN (3 mL) dodat je MsCl (69,1 mg, 603 umol, 46,7 uL, 2 ekv.) na 5 °C tokom 0,5 sata. U rezultujuću reakciju je dodat 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 301 umol, 1 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 5°C 1 sat. Zatim je reakciona smeša zagrevana na 80 °C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (0,5 mL). Smeša ostatka je prečišćena prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%: 50 %-80 %,12min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2,3,3-trideuterioprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 475, 34,2 mg , 60,2 umol, 20% prinos, 97,7% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 555.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 8,28 - 8,16 (m, 1H), 7,91 -7,83 (m, 1H), 7,63 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,48 (m, 2H), 7,45 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,16 (D,J=7,2 Hz, 1H), 5,28 - 4,94 (m, 1H), 4,41 (dd,J=5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,36 -4,24 (m, 2H), 4,23 - 4,11 (m, 2H), 4,04 (br d,J=11,6 Hz, 2H), 3,73 - 3,25 (m, 3H), 3,22 - 2,74 (m, 7H), 2,69 (td,J=6,4, 13,2 Hz, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,36 - 2,24 (m, 1H), 2,15 - 2,02 (m, 1H), 1,83 - 1,77 (m, 3H).

PRIMER 476

2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

4

Umetanje: (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid. Rastvor (E)-4-bromobut-2-enske kiseline (1,0 g, 6,06 mmol, 1,0 ekv.) u (COCl)2 (14,5 g, 114 mmol, 10,0 mL, 18,9 ekv.) i DCM (10,0 mL) mešano na 70 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (1,0 g, sirov) je dobijen kao žuto ulje. Sirovo jedinjenje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 73, 200 mg, 347 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (2,0 mL) je dodat HCl•dioksan ( 4,0 M, 2,0 mL, 23,0 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatku je podešen pH=7 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan sa EA (5,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (160 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (160 mg, 336 umol, 1,0 ekv.) u DCM (6,0 mL) je dodat Pi (532 mg, 6,73 mmol, 543 uL , 20,0 ekv) i (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (246 mg, 1,35 mmol, 4,0 ekv.) u DCM (2,0 mL). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH (5.0 mL) na 0 °C, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, sirov) dobija se kao žuto ulje i koristi se u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 622.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 321 umol, 1,0 ekv.) u DCM (3,0 mL) je dodat K2CO3 (88,8 mg, 642 umol, 2,0 ekv.), KI (2,67 mg, 16,1 umol, 0,05 ekv.) i 3-fluoropirolidin (403 mg, 3,21 mmol, HCl e). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatku je podešen pH=7 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan sa EA (10,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda(0,04 %NHH2O)-

1

ACN];B%: 60 %-84 %,10 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom i zatim liofilizacijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(2,3-dimetilfenil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoropirolidin-1-il)but-2-enoil] piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 476, 123 mg, 193 umol, 56% prinosa u tri koraka, 99,2% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 631.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,16 - 7,07 (m, 1H), 7,02 - 6,92 (m, 3H), 6,59 - 6,41 (m, 1H), 5,31 - 5,10 (m, 1H), 5,09 - 4,46 (m, 1H), 4,38 (dd,J= 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,26 - 3,83 (m, 6H) 3,80 - 3,45 (m, 1H), 3,42 - 3,24 (m, 3H), 3,23 -3,15 (m, 1H), 3,14 - 3,03 (m, 3H), 3,02 - 2,83 (m, 4H), 2,82 - 2,62 (m, 4H), 2,54 -2,49 (m, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,32 - 2,26 (2,17 - 2,25 (h), - (h, (h) 2,16 - 2,09 (m, 1H), 2,08 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,78 (m, 4H).

PRIMER 477

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2,3,3-trideuterioprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

2

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2,3,3-trideuterioprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor deuterio 2,3,3-trideuterioprop-2-enoata (56,6 mg, 744 umol, 3 ekv.) i DIEA (481 mg, 3,72 mmol, 648 uL, 15 ekv.) u ACN (3 mL) dodat je MsCl (56,8 mg, 496 umol, 38,4 uL, 2 ekv.) na 5 °C, smeša je mešana na 5 °C tokom 0,5 sata. Zatim je u smešu dodat 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (Intermedijer 71, 150 mg, 248 umol, 1 ekv, 2 HCl), dobijena smeša je mešana na 5 °C 1 sat. Zatim je smeša zagrejana na 80 °C i mešana na 80 °C tokom 12 sati. Smeša je ugašena vodom (0,5 mL). Reakciona smeša je prečišćena prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 50 % - 80 %, 10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2,3,3-trideuterioprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 477, 13,0 mg, 21,6 umol, 9 % prinosa, 98,2 % čistoće) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 589.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,76 (br d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,45 (td,J= 8,0, 13,2 Hz, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,18 (m, 1H), 5,10 (br s, 1H), 4,49 - 4,33 (m, 2H), 4,21 - 4,01 (m, 3H), 3,96 - 3,79 (m, 2H), 3,60 (br d,J= 6,8 Hz, HI), 3,44 (Br d,J= 13,6 Hz, 1H), 3,32 - 2,97 (m, 5H), 2,88 - 2,53 (m, 4H), 2,48 (d,J= 2,8 Hz, 3H), 2,29 (br d,J= 8,8 Hz, 1H), 2,11 - 2,00 (m, 1H), 1,87 - 1,71 (M, 3H).

PRIMER 478

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

2-fluoroprop-2-enoil hlorid. U rastvor 2-fluoroprop-2-enske kiseline (400 mg, 4,44 mmol, 1 ekv.) u DCM (4 mL) dodat je (COCl)2 (846 mg, 6,66 mmol, 583 uL, 1,5 ekv.) i DMF ( 32,5 mg, 444 umola, 34,2 uL, 0,1 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se ukloni deo rastvarača i dobije ostatak u DCM. Jedinjenje 2-fluoroprop-2-enoil hlorid (400 mg, sirovo) je dobijeno kao žuta tečnost i korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, 528 umol, 1 ek, HCl) u DCM (5 mL) je dodat DIEA (1,73 g, 13,4 mmol, 2,33 mL, 25,4 ekv) i 2-fluoroprop-2-enoil hlorid (286 mg, 2,64 mmol, 5 ekv.) u DCM (5 mL). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, dihlorometan/metanol = 10/1 do 10/1). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 20 % - 50 %, 10,5 min). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Sinergi C18150 * 30 mm * 4um; mobilna faza: [voda (0,225% FA) - ACN]; B%: 20% - 50%, 10,5 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizacija. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

4

dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 478, 24,1 mg, 36,7 umol, 7% prinos, 99,1% čistoća, FA) je dobijena kao smeđa čvrsta supstanca.

SFC stanje: „AD - 3S_3_5_40_3ML Kolona: Chiralpak AD - 3100 × 4,6 mm i I.d., 3um Mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u odnosu na 5 % do 40 % protoka: 3 ml/min valna duljina: 220 nm“.

<1>H NMR (400 MHz, octena) δ = 7,82 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,69 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,56 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,41 - 7,30 (m, 2H), 5,58 - 5,25 (m, 2H), 5,17 - 4,59 (m, 4H), 4,57 - 4,28 (m, 3H), 4,24 - 3,78 (m, 4H), 3,67 - 3,13 (m, 7H), 3,08 (br d,J= 2,4 Hz, 3H), 2,98 (Br d,J= 6,4 Hz, 1H), 2,83 -2,61 (m, 1H), 2,45 - 2,29 (m, 1H), 2,24 - 2,08 (m, 3H).

PRIMER 479

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: etil (E)-4-fluorobut-2-enoat. Smeša etil (E)-4-bromobut-2-enoata (2,00 g, 10,4 mmol, 1,43 mL, 1,00 ekv.) i AgF (3,94 g, 31,1 mmol, 674 uL, 3,00 ekv.) u acetonitrilu (20). mešano na 25°C tokom 12 sati. Smeša je filtrirana i isprana sa THF (10.0 mL), zatim koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio etil (E)-4-fluorobut-2-enoat (2.50 g, sirovo) kao žuto ulje i korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ =7,04 - 6,89 (m, 1H), 6,12 (qd,J= 2,0, 16,0 Hz, 1H), 5,14, 4,94 (m, 2H), 4,22 (q,J= 6,8 Hz, 2H), 1,30 (t,J= 6,8 Hz, 3H).

Korak B: (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina. Smeša etil (E)-4-fluorobut-2-enoata (0,10 g, sirov) i NaOH (121 mg, 3,03 mmol) u THF (1,00 mL) i H2O (1,00 mL) je mešana na 25 °C tokom 2 sati. pH vrednost je podešena na 1-3 pomoću HCl (1N, 5,00 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio (E)-4- fluorobut-2-enska kiselina (0,02 g, 192 mmol, dva koraka 46%) kao žuto ulje i korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,37 - 7,31 (m, 1H), 7,15 - 7,01 (m, 1H), 6,15 (dd, J=1,6, 16,0 Hz, 1H), 5,22 - 4,96 (m, 2H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoilpiperazin-2-ilacetonitril. U rastvor (E)-4-fluorobut-2-enske kiseline (7,32 mg, 70,4 umol, 2 ekv.) i Pi (8,35 mg, 106 umol, 8,52 uL, 3,00 ekv.) u acetonitrilu (1,00 mL) dodat je MsCl (8,06 mg, 70,4 umol, 5,45 uL, 2,00 ekv.) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1metilpirolidin-2-il]metoksi] U smešu je dodat -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,02 g, 35,2 umol, 1,00 ekv. HCl). Smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h. Smeša je razblažena vodom (5,00 mL), ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,00 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 50 % - 80 %, 12min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 479 , 3,01 mg, 4,82 umol, 14 % prinos, 98,9 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 618.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ = 7,76 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,45 (td,J =7,6, 12,8 Hz, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 1H), 7,09 - 6,91 (m, 1H), 6,59 (br d,J= 15,6 Hz, 1H), 5,19 - 5,05 (m, 2H), 4,49 - 4,36 (m, 2H), 4,22 - 3,79 (m, 5H), 3,76 - 2,96 (m, 8H), 2,92 - 2,55 (m, 4H), 2,48 (d,J= 2,4 Hz, 3H), 2,29 (br d,J= 9,6 Hz, 1H), 2,06 (br d,J= 10,0 Hz, 1H), 1,83 - 1,71 (m, 3H).

PRIMER 480

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid. U rastvor (E)-4-bromobut-2-enske kiseline (930 mg, 5,64 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) dodat je (COCl)2 (2,90 g, 22,9 mmol, 2,0 mL, 4,05 ekv. ). Smeša je mešana na 60 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom.

Proizvod (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (650 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje i korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (Intermedijer 71, 150 mg, 282 umol, 1,0 ekv.) u DCM (3,0 mL) je dodat Pi (446 mg, 5,64 mmol, 455 uL, 20,0 ekv.) i (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (207 mg, 1,13 mmol, 4,0 ekv.) u DCM (1,0 mL). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov) je dobijen kao smeđe ulje i koristi se u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 680.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 221 umol, 1,0 ekv.) u DCM (10,0 mL) je dodat K2CO3 (366 mg, 2,65 mmol, 12,0 ekv.), KI (1,83 mg, 11,0 umol, 0,05 ekv.) i 3-fluoropirolidin (277 mg, 2,21 mmol, ek 10). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatku je podešen pH ~7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan sa EA (3 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda

(0,04 %NH3•H2O)-ACN]; B%: 60 %-84 %, 10 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom i zatim liofilizovan. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoropirolidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 480 9,67 mg, 14,0 umol, 6% prinos, 99,2% čistoće) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 687.

<1>H NMR (400MHz, Hloroform-d) δ 7,76 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,26 (br d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,49 – 7,40 (m, 1H), 7,34 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,27 – 7,17 (m, 1H), 7,05 – 6,92 (m, 1H), 6,57 – 6,42 (m, 1H), 5,32 – 5,11 (m, 1H), 5,10 – 4,50 (m, 1H), 4,47 – 4,35 (m, 2H), 4,19 – 4,00 (m, 2H), 3,95 – 3,75 (m, 2H), 3,65 – 3,55 (m, 1H), 3,47 – 3,28 (m, 3H), 3,24 – 3,05 (m, 4H), 3,04 – 2,86 (m, 4H), 2,85 – 2,71 (m, 2H), 2,70 – 2,50 (m, 3H), 2,47 – 2,45 (m, 3H), 2,32 – 2,15 (m, 2H), 2,14 – 2,02 (m, 2H), 1,87 – 1,67 (m, 4H).

PRIMER 481

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid. U rastvor (E)-4-bromobut-2-enske kiseline (1 g, 6,06 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (5,0 mL) dodat je oksalil dihlorid (7,25 g, 57,1 mmol, 5,0 mL, 9,4 ekv.). Smeša je mešana na 60 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (850 mg, sirovo) kao žuto ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: Intermedijer 71, 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (310 mg, 414 umol, 1,0 ekv.) u dioksanu (4,0 mL) je dodat HCl/dioksan (4,0 M, 4,0 mL, 39,0 ekv.) na 25 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (20,0 mL), a zatim ekstrahovana sa EA (3 × 40,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom NaCl (100,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio ostatak 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2 -[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin4-il]piperazin-2-il]acetonitril (250 mg , sirovo) kao žuta čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 532.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3.4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (intermedijer 71, 150 mg, 282 umol, 1,0 ekv., sirov) u DCM (6,0 mL) je dodat Pi (446 mg, 5,6 mmol, 455 uL, 20,0 ekv.) i (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (207 mg, 1,2 mmol, 4,0 ekv., sirov) u DCM (1,0 mL). Smeša je mešana na 0 °C 1 sat. Zatim su dodani K2CO3 (779 mg, 5,6 mmol, 20,0 ekv.), KI (4,6 mg, 28,2 umol, 0,1 ekv.) i 3-fluoroazetidin (472 mg, 4,2 mmol, 15,0 ekv, HCl) na 0 °C. Zatim je smeša mešana na 25 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm<∗>10 um; mobilna faza: [voda (10,0 mm NH4HCO3)-ACN]; B%: 55 %-85 %, 10 min) i liofilizacija da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2-il] acetonitril (PRIMER 481, 10.8 mg, 15.7 umol, 6% prinos, 98% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 673.

SFC uslovi: 100 % e.e.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,77 (d,J= 8,0 Hz, 1 H), 7,63 (t,J= 7,8 Hz, 1 H), 7,54(d, J=7,2 Hz, 1 H), 7,50-7,43 (m, 1 H), 7,35 (T,J= 7,8 Hz, 1 H), 7,26 - 7,21 (m, 1 H), 6,89 (d,J= 15,2 Hz, 1 H), 6,42 (d,J= 14,8 Hz, 1 H), 5,26-4,62 (m, 1 H), 5,11 (T,J= 5,2 Hz, 1 H), 4,80 - 4,37 (m, 2 H), 4,20 - 4,08 (m, 2 H), 3,92 (br d,J= 17,6 Hz, 1 H), 3,86 - 3,71 (m, 3 H), 3,60 (s, 1 H), 3,52 - 3,47 (m, 1 H), 3,45 - 3,33 (m, 1 H), 3,28 - 3,21 (m, 3 H), 3,16 - 3,11 (m, 3 H), 3,03 (dd,J= 8,4, 16,8 Hz, 1 H), 2,82 - 2,60 (m, 4 H), 2,49 (d,J= 2,8 Hz, 3 H), 2,37 - 2,25 (M, 1 H), 2,09 - 2,03 (m, 1 H), 1,86 - 1,83 (m, 1 H), 1,78 - 1,76 (m, 3 H).

PRIMER 482

1

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-[metil(2,2,2-trifluoroetil)amino]but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Umetanje: (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid. Rastvor (E)-4-bromobut-2-enske kiseline (600 mg, 3,64 mmol, 1,0 ekv.) u (COCl)2 (10,2 g, 80,0 mmol, 7,0 mL, 22,0 ekv.) i DCM (7,0 mL) je bio mešano na 70 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (500 mg, sirov) kao žuto ulje. Sirovi proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 188 umol, 1,0 ekv.) i piridin (119 mg, 1,50 mmol, 121 uL, 8,0 ekv.) u DCM (2,0 mL) je dodat (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (138 mg, 752

2

umol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2- [[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (130 mg, sirovo) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 678, 680.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-[metil(2,2,2-trifluoroetil)amino]but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (128 mg, 189 umol, 1,0 ekv.) , K2CO3 (130 mg, 943 umol, 5,0 ekv.) i KI (9,39 mg, 56,6 umol, 0,30 ekv.) u DCM (3,0 mL) je dodat 2,2,2-trifluoro-N-metil-etanamin (218 mg, mmol, 10,0 ekv.) u porcijama. Smeša je mešana na 0-25 °C tokom 12 sati. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni proizvod je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,04 % NH3•H2O)-ACN]; B%: 70 %-100 %, 10 min) 70%-100%, 10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-[metil(2,2,2-trifluoroetil)amino] ali -2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 482, 2.87 mg, 3.84 umol, 2% prinos, 95% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 711.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 6,95 - 3,77 (m, 1H), 6,54 - 6,38 (m, 1H), 5,12 - 4,50 (m, 1H), 4,48 - 4,35 (m, 2H), 4,24 - 3,99 (m, 3H), 3,96 - 3,78 (m, 2H), - 3,64 - (m, 2H), (1H), - 1H 3,61 - 3,53 (m, 1H), 3,52 - 3,34 (m, 3H), 3,33 - 2,97 (m, 7H), 2,92 - 2,76 (m, 1H), 2,75 - 2,63 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,49 (br d,J= 3,2 Hz, 3H), 2,35 (2,25 -) 2,13 - 1,99 (m, 1H), 1,89 - 1,67 (m, 3H).

PRIMER 483

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(4-hidroksibut-2-inoil)piperazin-2-il] acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(4-hidroksibut-2-inoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inoične kiseline (129 mg, 564 umol, 1,50 ekv.) i DIEA (194 mg, 1,50 mmol, 262 uL, 4,00 ekv.) u DMF (2.0). mL) je dodat HATU (214 mg, 564 umol, 1.50 ek) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 10 minuta, 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] U smešu je dodat -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,20 g, 376 umol, 1,00 ekv.). Posle mešanja na 25 °C tokom 12 sati, smeša je razblažena etil acetatom (10,0 mL), isprana slanim rastvorom (3 × 10,0 mL), osušena preko Na2S04, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA,

0,10 %)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene, neutralizovane sa zasićenim natrijum bikarbonatom (5,00 mL) do pH > 7 i ekstrahovane etil acetatom (3 × 20,0 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 30,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC kolonom: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,225 %,

4

FA) - ACN]; B%: 10 % - 40 %, 10 min. Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(4-hidroksibut-2-inoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 483, 10,1 mg, 15,3 umol, 4,1 % prinos, 99,6 % čistoća, FA) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 614.

<1>H 1H NMR (400MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ = 7.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 -7.31 (m, 2H), 5.14 - 4.73 (m, 4H), 4.70 - 4.23 (m, 5H), 4.01 - 3.81 (m, 3H), 3.80 -3.51 (m, 3H), 3.49 - 3.17 (m, 4H), 3.09 (m, 5H), 2.81 - 2.63 (m, 1H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.22 - 2.08 (m, 3H)

PRIMER 484

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4,4-difluorobut-2-enoil]plperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: 4,4-difluoro-3-hidroksi-butanoat. Rešenje etilnog 4,4-difluoro-3-okso-butanoata (5,00 g, 30,1 mmol, 1,00 eq) u toluenu (150 ml) je dodano NaBH4(1,20 g, 31,7 mmol, 1,05 eq) na 0 °C. Nakon miješanja na 25 °C 4 sata, mešavina je bila razrijeđena vodom (50,0 ml) na 0 °C i ekstrahirana etilacetatom (3 × 100 ml). Ekstrakti su oprani sa salamurom (1 × 100 ml), osušeni na Na2SO4, filtrirani i koncentrirani pod vakuumom kako bi se etil4,4-difluoro-3-hidroksibutanoat (4,30 g, sirovog) upotrebili u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6,05 - 5,87 (m, 1H), 5,86 - 5,72 (m, 1H), 4,11 - 4,01 (m, 2H), 2,57 (dd,J= 4,0, 15,6 Hz, 1H), 2,38 (dd,J= 9,2, 15,6 Hz, 1H), 1,21 - 1,17 (M, 3H).

Korak 2: Etil (E)-4,4-difluoroali-2-enoat. Za rešenje etilnog 4,4-difluoro-3-hidroksi-butanoat (3,00 g, sirovo) u diklorometan (20,0 ml) je dodan TEA (1,81 g, 17,8 mmol, 2,48 ml,) i MsCl (3,68 g, 32,1 mmol, 2,49 ml) na 0 °C. Nakon miješanja 4 sata, u mesu JE zakimljen TEA (3,61 g, 35,68 mmol, 4,97 ml, 2 eq) 0 °C. Nakon što je zagrijan do 25 °C i miješan 12 sata, mešavina je bila razrijeđena vodom (10,0 ml), oprana sa HCl (1N, 1 × 20,0 ml) i slanom vodom (1 × 20,0 ml), osušena Na2SO4, Filtrirano i koncentrirano pod vakuumom za davanje etilnog (E)-4,4-difluorno-2-enoat (1,40 g, 9,33 mmol, dva koraka 44 % prinosa) kao bezbojnog ulja i upotrebljeno u sledećem koraku sa datim pročišćavanjem.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,81 (m, 1H), 6,29 (t,J= 2,8, 1,6 Hz, 1H), 6,23 (dd,J= 4,0, 55,2 Hz, 1H), 4,25 (q,J= 7,2 Hz, 2H), 1,31 (T,J= 7,2 Hz, 3H).

Korak 3: (E)-4,4-difluorno-2-enoična kiselina. Mešavina etila (E)-4,4-difluorali-2-enoata (1,30 g, 8,66 mmol, 1,00 eq) i NaOH (1,39 g, 34,6 mmol, 4,00 eq) u THF (5,00 ml) i H2o (5,00 ml) mešana je na 25 °C u trajanju od 2 sata.

Mešavina je kiseljena sa HCl (2N, 20,0 ml) na pH = 1 ~ 3 i ekstrahirana etilacetatom (3 × 20,0 ml). Organski slojevi sušeni su Na2SO4, filtrirani i koncentrirani pod vakuumom da daju (E)-4,4-difluorno-2-enoična kiselina (0,35 g, 2,87 mmol, 33 % prinosa) kao žuti čvrsti i korišćen u sledeći korak bez daljeg pročišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 6,92 (m, 1H), 6,32 (dtd,J= 0,8, 2,8, 16,8 Hz, 1H), 6,27 (dtd,J= 1,2, 54,8 Hz, 4,0, 1H).

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4,4-difluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. Mešavina (E)-4,4-difluorobut-2-enoične kiseline (68,8 mg, 564 umol, 1,50 eq), EDCI (108 mg, 564 umol, 1,50 eq) i HOBt (50,8 mg, 376 umol, 1,00 eq) u Pej (3 ml) je bio mešan na 0 °C u trajanju od 15 min, Zatim 2-[(2s)-4-[7-(8-klor-1-naftil)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dpirimidin-4-il]azumin-71 1,00-0,20-2,-piperij je dodan u-376, Nakon miješanja 0 °C 1 sat i 25 °C 1 sat, mešavina je bila razrijeđena vodom (10,0 ml), ekstrahirana etilacetatom (1 × 10,0 ml). Ekstrakti su oprani sa salamurom (1 × 10,0 ml), sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrirani pod vakuumom. Ostatak je pročišćen obrnutim faznim bljeskovom [vodom (FA, 0,10 %)/acetonitrilom]. Željene frakcije su sakupljene, a mešavina neutralizirana zasićenim sodium bikarbonatom (5,00 ml), ekstrahirana etilacetatom (3 × 20,0 ml). Organski slojevi bili su oprani sa salamurom (1 × 30,0 ml), sušeni preko na Na2SO4, filtrirani i koncentrirani pod vakuumom. Ostatak je pročišćen PRIP-HPLC (kolona: Gemini 150 * 255u; mobilna faza: [Voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 55 % - 85 %, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizirane da bi se dala naslovna smjesa 2-[(2s)-4-[7-(8-klor-1-naftil)-2-[(2s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5-pirido[3,4-d[4-piril]-1 2 104-4,4 484 28-2-66,9 98,7-difluoro] kao žuto kruto. LCMS [ESI, M+1]: 636.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,76 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,45 (td,J= 7,6, 12,8 Hz, 1H), 7,37 - 7,31 (m, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 6,88 - 6,71 (m, 2H), 6,45 - 6,12 (m, 1H), 5,17 - 4,59 (m, 1H), 4,55 - 4,41 (m, 1H), 4,40 - 4,33 (m, 1H), 4,21 - 3,693,31 (m, 5H), 3,642,97 -3,32 (M, 5H), 2,96 - 2,52 (m, 4H), 2,47 (d,J= 1,6 Hz, 3H), 2,33 - 2,23 (m, 1H), 2,11 - 2,00 (m, 1H), 1,90 - 1,77 (m, 3H).

PRIMER 485

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[2-(metoksimetil)prop-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: 1-(2-(etooksikarbonil)alyl)-1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan-1-ij bromid. Etil 2-(brommetil)prop-2-enoat (15 g, 77,7 mmol, 1eq)u THF (5 ml) je dodan DABCO (10,5 g, 93,6 mmol, 10,3 ml, 1,20eq) i nastala mešavina je miješana na 25 °C u trajanju od 2 sata. Talog je formiran i filtriran u atmosferi azota. Filterski kolač je sakupljen da bi se dobio 1-(2-(etoksikarbonil)alil)-1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan-1-ijum bromid (15 g, 49,6 mmol, 64% prinos) kao svetlo žuta čvrsta supstanca koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2: etil 2-(metoksimetil)prop-2-enoat. Mešavina 1-(2-(etooksikarbonil)alyl)-1,4-diazabiciklo[2.2.2] oktan-1-ij bromida (15 g, 49,6 mmol, 1eq) i TEA (10,5 g, 104 mmol, 14,5 ml, 2,09eq)u MeOH (150 ml) miješana je na 25 °C 16 sata. Otapalo je isparilo pod vakuumom (25 °C). Talog je otopljen u DCM (40 ml) i zatim opran sa 5 % vodene otopine limunske kiseline (1 × 40 ml) i zasićenim sodom bikarbonatnim vodenim otopinom (1 × 40 ml). Organski sloj je osušen preko natrijevog sulfata, filtriran i koncentriran pod vakuumom na 25 °C da bi etil 2-(metoksimetil)prop-2-enoat (5,3 g, 36,8 mmol, 74 % prinosa) dao žutoj tečnosti koja je direktno koriščena u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.

Korak 3: 2-(metoksimetil)prop-2-enoična kiselina. Rešenje etilnog 2-(metoksimetil)prop-2-enoat (5,1 g, 35,4 mmol, 1eq) u THF (71 ml) je dodano rešenje NaOH (5,66 g, 142 mmol, 4eq) u H2o (71 ml) na 5 °C. Mešavina je miješana na 25 °C 2 sata. Po završetku, THF je ispario pod vakuumom. PH mešavine je podešena na 3 sa 1 M HCl i ekstrahirana sa EtOAc (3 × 70 ml).

Organski slojevi sušeni su Na2SO4 i koncentrirani pod vakuumom kako bi se dalo 2-(metoksimetil)prop-2-enoična kiselina (3,4 g, 26,4 mmol, 75 % prinosa, 90 % čistoće) kao laka žuta tečnost koja se direktno koristila u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,45 (d,J= 1,2 Hz, 1H), 5,98 (q,J= 1,6 Hz, 1H), 4,16 (t,J= 1,2 Hz, 2H), 3,42 (s, 3H).

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[2-(metoksimetil)prop-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. Rešenje 2-(metoksimetil)prop-2-enoične kiseline (175 mg, 1,50 mmol, 2eq)i DIEA (389 mg, 3,01 mmol, 524 ul, 4eq)u DCM (8 ml) je dodano HATU (429 mg, 1,13 mmol, 1,5eq)na -40 °C.2-2-klor-10-naftil-7-[(4 s)-4-[71-(8-klor-1-naftil)-2-[(2 s)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5-pirido[3,4d]pirimiju-400-pirazmeri, u-2-1-752--pirinilu, Mešavina je miješana na -40 °C 20 minuta, 0 °C 0,5 sat i 25 °C 1 sat. Po završetku mešavine je dodana voda (10 ml) i ekstrahirana DCM-om (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi sušeni su u odnosu na na Na2SO4, filtrirani i koncentrirani pod vakuumom. Ostatak je očišćen kromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 100/1 do 40/1) i pročišćen PRIP-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [Voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) -ACN]; B%: 50 % - 80 %, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[2-(metoksimetil)prop-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 485, 73,0 mg, 116 umol, 15% prinos, 98,9% čistoće) kao sivobela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:630.

SFC stanje: Kolona: Chiralpak AS-3100×4,6 mm I.d., 3um Mobilna faza: Metanol (0,05 % DEA) u CO2 sa 5 % na 40 % protoka: 3 ml/min valna duljina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,76 (br d,J= 8 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,45 (td,J= 7,6, 13,2 Hz, 1H), 7,37 - 7,30 (m, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,32 (br, 1H), 5,19 - 4,58 (m, 1H), 4,48 -4,34 (m, 2H), 4,23 - 4,07 (m, 4H), 4,06 - 3,78 (m, 3H), 3,64 - 3,55 (m, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,36 - 2,72 (m, 8H), 2,71 - 2,53 (m, 2H), 2,47 (2,14 - 2,351,98 - 2,22 (h) (M, 1H), 1,90 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 486

2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi )-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat. U tikvici sa okruglim dnom, rastvor terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[ 3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5 g, 9,487 mmol) u dioksanu (94,87 ml, 9,487 mmol) je poprskan argonom i (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanolom ( 3,278 g, 28,46 mmol), Cs2CO3 (9,273 g, 28,46 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1 '-bifenil-2-il)paladijum(II) (0.8078 g, 0.9487 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani dodatnih 5 minuta. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana u vakuumu.

Koncentrat je prečišćen na Combi Flash (0-12% MeOH u DCM sa 2% NH4OH) da bi se dobio terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1 -il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5,425 g, 8,508 mmol, 89,68 % prinos). ESI+APCI MS m/z 606,4 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: tercbutil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-((( S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (5,4 g, 8,915 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (89,15 ml, 8,915). mmol) i tretirana hlorovodoničnom kiselinom (4,0 M rastvor u 1,4-dioksanu) (11,14 ml, 44,57 mmol). Reakcija je 1 sata izazvala sobnu temperaturu. Reakcija je mešana na sobnoj

1

temperaturi 1 sat. Reakcija je razblažena sa još DCM i 1M NaOH i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su zatim isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani u vakuumu da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (4,364 g, 8,631 mmol, 96,82 % prinos). ESI+APCI MS m/z 506,3 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U tikvici sa okruglim dnom, rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (4,364 g, 8,631 mmol) u dioksanu (43,15 ml, 8,631 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta.1-bromo-2,3-dimetilbenzen (5,851 ml, 43,15 mmol), Cs2CO3 (14,06 g, 43,15 mmol) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-ipropoksi-1,1'- bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (0,7348 g, 0,8631 mmol) su uzastopno dodavani pod argonom i prskani dodatnih 5 min. Reakciona smeša je zatvorena i zagrejana na 100°C ON. Reakcija je ohlađena do sobne temperature. Dodat je etil acetat i reakcija je filtrirana kroz GF/F papir i koncentrovana u vakuumu. Koncentrat je prečišćen dva puta hromatografijom normalne faze na CombiFlash-u korišćenjem 0-15% MeOH u DCM sa 2% NH4OH kao eluenta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene i koncentrovane in vacuo da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,411 g, 0,8641 mmol, 100,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 476,3 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (200 mg, 0,420 mmol), 4,4,4-trifluorokrotonska kiselina (118 mg, 0,841 mmol), DIEA (367 µl , 2,10 mmol) u DCM (4205 µl, 0,420 mmol) je dodat HATU (240 mg, 0,631 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Reakciona smeša je isprana slanim rastvorom i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2S04, koncentrovani, razblaženi u 60:40 ACN:H20 i prečišćeni na Gilson-u (reverzna prep HPLC),

2

eluiranjem sa 5-->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i oslobođene sa zasićenim bikarbom i organske materije ekstrahovane sa DCM. Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il )acetonitril (PRIMER 486, 28 mg, 0,0468 mmol, 11,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 598,3 [M+H]<+>.

PRIMER 487

2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-(trifluorometil)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-(trifluorometil)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 486 zamena 2-(trifluorometil)propenske kiseline za 4,4,4-trifluorokrotonsku kiselinu u koraku D.. ESI+APCI MS m/z 598,3 [M+H]<+>.

PRIMER 488

2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-(hidroksimetil)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-(hidroksimetil)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 486 zamena 2-(hidroksimetil)prop-2-enske kiseline za 4,4,4-trifluorokrotonsku kiselinu u koraku D. ESI+APCI MS m/z 560,3 [M+H]<+>.

PRIMER 489

2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril U rastvor 2-((S)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg, 0,1051 mmol) u DCM (1 mL) je dodat (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina ( 24,41 mg, 0,2102 mmol), N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,03662 ml, 0,2102 mmol) i O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-

4

tetrametiluronijum PF6 (59,96 mg, 0,1577 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Zatim je dodata voda (1 mL) i reakciona smeša je mešana 5 minuta. Smeša je podeljena između EtOAc (10 mL) i 0,5 M NaHCO3 (5 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 mL), osušeni preko Na2S04 i upareni u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu korišćenjem 3% MeOH 0,3% NH4OH do 4% MeOH 0,4% NH4OH kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (PRIMER 489, 26 mg, 43%).

ESI+APCI MS m/z 574,4 [M+H]<+>.

PRIMER 490

2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,6 g, 1,2 mmol) u dioksanima (10 mL) je dodat 1-bromo-8-hloronaftalen (0,37 g, 1,5 mmol) i reakcija je degazirana Ar tokom 15 minuta nakon čega sledi dodavanje Cs2CO3 (1,2 g, 3,6 mmol), Pd2(dba)3 (0,22 g, 0,24 mmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi-1,1'-bifenil ( 0,11 g, 0,24 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C preko noći. Reakcija je zatim filtrirana kroz OFF papir i filtrirana je koncentrovana in vacuo. Ostatak je zatim hromatografisan upotrebom 1→10% (MeOH+2% NH4OH)/DCM da bi se dobio benzil (S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1) -metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,20 g, 0,30 mmol, 25 % prinos). ESI+APCI MS m/z 666,2 [M+H]<+>.

Korak B: 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil (S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (0,17 g, 0,255 mmol) u THF (30 mL) je pročišćen sa N2, a zatim dodavanjem Pd/C ( 0,0272 g, 0,255 mmol). Reakcija je evakuisana vakuumom i ponovo napunjena H23x i smeša je mešana 3 dana na sobnoj temperaturi.

Reakcija je ponovo pročišćena sa N2, nakon čega je usledilo filtriranje kroz celit i filtrat je koncentrovan in vacuo. Materijal korišćen sirov u sledećoj reakciji.

ESI+APCI MS m/z 532,2 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril: U rastvor 2-((S) )-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,055 g, 0,10 mmol) u DCM (20 mL) je dodat N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,040 g, 0,31 mmol), ( E)-4,4,4-trifluorobut-2-enska kiselina (0,017 g, 0,12 mmol) i ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (0,033 g, 0,10 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Sledeći dodatni TEP3 i kiselina (0,24 mmol) su dodati i reakcija je dodata 1 sat. Organski slojevi su zatim isprani sa 1 N NaOH, slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je hromatografisan 2k na normalnoj fazi silicijum dioksida (1 → 10% (MeOH+2% NH4OH)/DCM) nakon čega je usledilo prečišćavanje pomoću Gilson reverzne prep HPLC korišćenjem 5 --> 95% ACN/vode sa 0,1% TFA kao aditiva. PURE frakcije se sipaju u baznu vodu i ekstrahuju u EtOAc. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil )piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 490, 0,0094 g, 0,014 mmol, 14 % prinos). ESI+APCI MS m/z 654,2 [M+H]<+>.

PRIMER 491

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril: Na 0°C, u RBF od 25 mL koji sadrži N,N-dimetilformamid (2932 µl, 0,293 mmol) dodat je 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (150 mg, 0,293 mmol) i Hunigova baza (102 ul, 0,586 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je u jednom obroku dodata (E)-4,4,4-trifluorobut-2-enska kiselina (49,3 mg, 0,352 mmol). Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (262 ul, 0,440 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je mešana 2 sata na 0°C. Reakcija je tretirana baznom vodom i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3Ks). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i resuspendovani u 60:40 smeši ACN: H20 i prečišćen na Gilsonu (reverzna prep HPLC), eluiranjem sa 5-->95% ACN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između zasićenog bikarba i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM još dva puta.

Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin) -2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4,4,4-trifluorobut-2-enoil) piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 491, 74,5 mg, 0,118 mmol, 40,1 % prinos). ESI+APCI MS m/z 634,3 [M+H]<+>.

PRIMER 492

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-(trifluorometil)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-(trifluorometil)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 491 zamena 2-(trifluorometil)akrilne kiseline za (E)-4,4,4-trifluorobut-2-ensku kiselinu u koraku A. ESI+APCI MS m/z 634,2 [M+H]<+>.

PRIMER 493

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-3-(piridin-2-il)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-3-(piridin-2-il)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 491 zamena 3-(piridin-2-il)akrilne kiseline za (E)-4,4,4-trifluorobut-2-ensku kiselinu u koraku A. ESI+APCI MS m/z 643,3 [M+H]<+>.

PRIMER 494

2-((S)-1-((E)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)akriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-((E)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)akriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 491 zamena (2E)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)akrilne kiseline za (E)-4,4,4-trifluorobut-2-ensku kiselinu u koraku A. ESI+AMS m/z 646,4 [M+H]<+>.

PRIMER 495

2-((S)-1 -((E)-4,4-difluorobut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1 -((E)-4,4-difluorobut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno prema Primeru 491 zamena 4,4-difluorobut-2-enske kiseline za (E)-4,4,4-trifluorobut-2-ensku kiselinu u koraku A. ESI+APCI MS m/z 616,3 [M+H]<+>.

PRIMER 496

2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpiperidin-2-il)metoksi)-7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-3-(piridin-3-il)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: U rastvor 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (0,12 g, 0,23 mmol) u DCM (10 mL) N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,13 ml, 0,70 mmol), (E)-3-(piridin-3-il)akrilna kiselina (0,070 g, 0,47 mmol) i 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (0,30 g, 0,47 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcija je zatim sipana u 1N NaOH i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su zatim isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgS04 i koncentrovani u vakuumu. Materijal je zatim prečišćen pomoću Gilson reverzne prep HPLC eluiranjem sa 5→95 ACN/voda sa 0,1% TFA kao modifikatorom. Frakcije koje sadrže proizvod se sipaju u 1N NaOH i vodeni sloj ekstrahuje sa EtOAc (3Ks). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1) -metilpirnolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-3-(piridin-3-il)akriloil )piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 496, 0,040 g, 0,062 mmol, 27 % prinos). ESI+APCI MS m/z 643,3 [M+H]<+>.

PRIMER 497

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(3-oksociklopent-1-en-1-karbonil)piperazin-2-il)acetonitril

1

Korak A: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(3-oksociklopent-1-en-1-karbonil)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,05863 mmol) i 3-oksociklopent-1-enkarboksilna kiselina (9,612 mg, 0,07622 mmol) su razblaženi sa DLMF (400 u ) nakon čega je usledilo dodavanje DIEA (20,48 ul, 0,1173 mmol) i cikličnog anhidrida 1-propanfosfonske kiseline (52,35 ul, 0,08795 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((( S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(3-oksociklopent-1-en-1-karbonil)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 497, 2,3 mg, 0,003711 mmol, 6,329 % prinos). ESI+APCI MS m/z 620,3 [M+H]<+>.

PRIMER 498

2-((S)-1-((E)-4-hlorobut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-1-((E)-4-hlorobut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-

2

2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,05863 mmol) i gama-hlorokrotonska kiselina (10,60 mg, 0,08795 mmol) su razblaženi sa DMF (400 uL), a zatim dodavanje DIEA (20,48 ul, 0,1173 mmol) i cikličnog anhidrida 1-propanfosfonske kiseline (55,84 ul, 0,09381 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-((E)-4-hlorobut-2-enoil)-4-(7). -(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 498, 4,5 mg, 0,007327 mmol, 12,50 % prinos). ESI+APCI MS m/z 614,3 [M+H]<+>.

PRIMER 499

(E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-N,N-dimetil-4-oksobut-2-enamid

Korak A: Etil (E)-4-(dimetilamino)-4-oksobut-2-enoat: Monoetil estar fumarne kiseline (442 mg, 3,07 mmol) je razblažen sa DCM (5 ml), a zatim je dodat oksalil hlorid (1533 µl, 3,07 mmol) i 1 kap DMF-a. Posle mešanja tokom 15 minuta, dodat je dimetilamin (4600 µl, 9,20 mmol) i reakcija je mešana 3 sata. Reakcija je razblažena etil acetatom i vodom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-70% etil acetat/heksanom da bi se dobio etil (E)-4-(dimetilamino)-4-oksobut-2-enoat (382 mg, 2,23 mmol, 72,8% prinosa). ESI+APCI MS m/z 172,1 [M+H]+.

Korak B: (E)-4-(dimetilamino)-4-oksobut-2-enska kiselina: Etil (E)-4-(dimetilamino)-4-oksobut-2-enoat (382 mg, 2,23 mmol) je razblažen metanolom (8 ml), a zatim je dodat NaOH (4463 µl, 8,93 mmol). Posle mešanja tokom 4 sata, reakcija je razblažena sa 2N HCl (4,5 ml) i ekstrahovana etil acetatom. Etil acetat je osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobila (E)-4-(dimetilamino)-4-oksobut-2-enska kiselina.

Korak C: (E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-N,N-dimetil-4-oksobut-2-enamid: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,05863 mmol) je razblažen sa DMF, a zatim je dodat (E)-4-(dimetilamino)-4-oksobut- 2-enska kiselina (10,07 mg, 0,07036 mmol), DIEA (20,48 ul, 0,1173 mmol) i ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (52,35 µl, 0,08795 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen- 1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)-N,N-dimetil-4-oksobut-2-enamid (PRIMER 499, 3,7 mg, 0,005810 mmol, 9,910% prinosa). ESI+APCI MS m/z 637,3 [M+H]+.

PRIMER 500

4

(E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-enamid

Korak A: Etil (E)-3-cijanoakrilat: Etil cis-(beta-cijano)akrilat (1,0 g, 7,99 mmol) je razblažen sa ACN (30 ml), stavljen pod azot i zagrevan do refluksa 3 dana. Reakcija je ostavljena da se ohladi i zatim koncentrovana. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa heksanima da bi se dobio etil (E)-3-cijanoakrilat (300 mg, 2,40 mmol, 30,0% prinosa).

Korak B: (E)-4-amino-4-oksobut-2-enska kiselina: Etil (E)-3-cijanoakrilat (300 mg, 2,40 mmol) je razblažen sa HCl (3996 µl, 24,0 mmol). Reakcija je stavljena pod azot i zagrevana na 100°C tokom 4 sata. Reakcija je ostavljena da se ohladi i zatim koncentrovana da bi se dobio (E)-4-amino-4-oksobut-2-enska kiselina (214 mg, 1,86 mmol, 77,6% prinosa).

Korak C: (E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-enamid: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (20 mg, 0,039 mmol), HATU (30 mg, 0,078 mmol) i (E)-4-amino-4-oksobut-2 -enska kiselina (9,0 mg, 0,078 mmol) je razblažen sa DMF (400 ul), a zatim je dodat DIEA (14 µl, 0,078 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen- 1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)-4-oksobut-2-enamid (PRIMER 500, 2,9 mg, 0,0048 mmol, 12% prinosa). ESI+APCI MS m/z 609,3 [M+H]+.

PRIMER 501

(E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-enenitril

Korak B: (E)-3-cijanoakrilna kiselina: Etil (E)-3-cijanoakrilat (10 mg, 0,080 mmol) je razblažen sa HCl (133 µl, 0,80 mmol), stavljen pod azot i zagrejan na 100°C. Posle mešanja od 15 minuta, reakcija je koncentrovana da bi se dobila (E)-3-cijanoakrilna kiselina (7,5 mg, 0,077 mmol, 97% prinosa).

Korak C: (E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-enenitril: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (20 mg, 0,03909 mmol) i (E)-3-cijanoakrilna kiselina (5,312 mg, 0,05472 mmol) su razblaženi sa DMF (400 ul) nakon čega je usledilo dodavanje DIEA (13,65 µl, 0,07817 mmol) i cikličnog anhidrida 1-propanfosfonske kiseline (34,90 µl, 0,05863 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen- 1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)-4-oksobut-2-enenitril (PRIMER 501, 3,5 mg, 0,005925 mmol, 15,16% prinosa). ESI+APCI MS m/z 591,3 [M+H]+.

PRIMER 502

(Z)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-enenitril

Korak A: (Z)-3-cijanoakrilna kiselina: Etil cis-(beta-cijano)akrilat (50 mg, 0,40 mmol) je razblažen sa HCl (200 µl, 1,2 mmol), stavljen pod azot i zagrejan na 100°C. Posle mešanja u trajanju od 1 minuta, reakcija je ohlađena i koncentrovana da bi se dobio (Z)-3-cijanoakrilna kiselina (35 mg, 0,36 mmol, 90% prinosa).

Korak B: (Z)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-enenitril: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (20 mg, 0,03909 mmol) i (Z)-3-cijanoakrilna kiselina (6,071 mg, 0,06254 mmol) su razblaženi sa DMF (400 ul) nakon čega je usledilo dodavanje DIEA (13,65 µl, 0,07817 mmol) i cikličnog anhidrida 1-propanfosfonske kiseline (39,56 µl, 0,06645 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen- 1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)-4-oksobut-2-enenitril (PRIMER 502, 2,1 mg, 0,003555 mmol, 9,095% prinosa). ESI+APCI MS m/z 591,3 [M+H]+.

PRIMER 503

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(dimetilamino)-2-fluoro-but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: (E)-4-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]-2-fluoro-but-2-enska kiselina. U rastvor etil 2-dietoksifosforil-2-fluoro-acetata (2 g, 8,26 mmol, 1,68 ml, 1 ekv.) i terc-butil N-metil-N-(2-oksoetil)karbamata (2,15 g, 12,4 mmol, 1,5 ekv.) u THF (40 ml) je dodat NaH (661 mg, 16,5 mmol, 60% čistoće, 2 ekv.). Smeša je mešana na 25°C tokom 1,5 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena zasićenim NH4CI (8 mL) i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um;mobilna faza: [voda(0,225%FA)-ACN];B%: 20ACN% - 50ACN%, 30 min; 50% min) da bi se dobila (E)-4-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]-2-fluoro-but-2-enska kiselina (820 mg, 3,16 mmol, 38,3% prinosa, 90% čistoće) kao braon ulje.

Korak A: terc-butil N-[(E)-4-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-il]-3-fluoro-4-okso-but-2 -enil]-N-metil-karbamat. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (Intermedijer 71, 300 mg, 564 umol, 1 ekv.), (E)-4-[terc-butoksikarbonil(metil )amino]-2-fluoro-but-2-enska kiselina (600 mg, 2,57 mmol, 4,56 ekv.) i DIEA (729 mg, 5,64 mmol, 982 ul, 10 ekv.) u DCM (10 ml) je dodat HATU (643 mg, 1,69 mmol, 3 ekv.) na 0°C.

Reakciona smeša je mešana na 25°C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (3 ml) i ekstrahovana pomoću DCM (3 × 8 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen reverznom fleš hromatografijom (FA stanje: 60% MeCN u vodi (0,1% FA)) da bi se dobio terc-butil N-[(E)-4-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[( 2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-il]-3 -fluoro-4-okso-but-2-enil]-N-metil-karbamat (330 mg, 404 umol, 72% prinosa, 91,5% čistoće) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 747.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-2-fluoro-4-(metilamino)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil N-[(E)-4-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-il]-3-fluoro-4-okso-but- 2-enil]-N-metil-karbamat (300 mg, 401 umol, 1 ekv.) u DCM (1 ml) je dodat TFA (915 mg, 8.03 mmol, 594 ul, 20 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 25°C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je razblažena sa DCM (10 ml) i bazifikovana zasićenim NaHCO3 (8 ml). Smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 10 ml).

Kombinovani organski sloj je osušen pomoću Na2SO4 i koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-2-fluoro-4-(metilamino)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (240 mg, 356 umol, 89% prinosa, 95,9% čistoće) kao braon čvrstu supstancu koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 647.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(dimetilamino)-2-fluoro-but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-2-fluoro-4-(metilamino)but-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg , 185 umol, 1 ekv.) i paraformaldehid (83,5 mg, 927 umol, 5 ekv.), HCOOH (26,7 mg, 556 umol, 3 ekv.) u MeOH (5 ml) je dodat NaBH3CN (35,0 mg, 556 umol, 3 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (0,5 ml) i filtrirana. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EA:MeOH:NH3•H2O=50:1:0 do 10:1:0,1), zatim prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Gemini 150∗25mm∗10um;mobilna faza: [voda(10mm NH4HCO3)-ACN];B%:50%-100%,10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(dimetilamino)-2-fluoro-but-2- enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 503, 26,7 mg, 40,2 umol, 22% prinosa, 99,5% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 661.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.68 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.54 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.37 (td, J=7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.26 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.19 - 7.08 (m, 1H), 5.81 - 5.60 (m, 1H), 5.04 - 4.41 (m, 1H), 4.40 - 4.25 (m, 2H), 4.16 - 3.91 (m, 3H), 3.88 - 3.71 (m, 2H), 3.66 - 3.46 (m, 2H), 3.36 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 3.27 - 2.69 (m, 9H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.55 - 2.46 (m, 1H), 2.40 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 7H), 2.06 - 1.90 (m, 1H), 1.85 - 1.72 (m, 3H).

PRIMER 504

1

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[2-(trifluorometil)prop-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[2-(trifluorometil)prop-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-(trifluorometil)prop-2-enske kiseline (39,5 mg, 282 umol, 1,50 ekv.), 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2- [[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (Intermedijer 71, 0,10 g, 188 umol, 1,00 ekv.) i DIEA (48,6 mg, 376 umol, 65,5 ul, 2,00 ekv.) u dihlorometanu (0,20 ml) je dodat HATU (107 mg, 282 umol, 0 ekv.) Posle mešanja na 0°C tokom 30 min, smeša je razblažena vodom i sloj je odvojen. Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,1%)/acetonitril] i preparativnom HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza:

[voda (0,05% amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 56% - 86%, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[2-(trifluorometil)prop-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 504, 13,1 mg, 19,6 umol, 10,5% prinosa, 97,9% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 654.

2

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-350×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40% Brzina protoka: 3ml/min, Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.76 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 10.0 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 6.18 (br s, 1H), 5.86 (br s, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.57 -4.36 (m, 2H), 4.33 - 4.10 (m, 2H), 4.04 (br d, J= 12.8 Hz, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 2H), 3.66 - 3.54 (m, 1H), 3.50 - 3.33 (m, 1H), 3.29 - 3.07 (m, 4H), 3.04 - 2.72 (m, 4H), 2.63 - 2.50 (m, 4H), 2.45 - 2.32 (m, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 1H), 1.90 (br s, 3H).

PRIMER 505

2-((S)-1-((Z)-3-hloroakriloil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-((Z)-3-hloroakriloil)-4-(7-(2,3-dimetilfenil)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Pripremljen je prema Primeru 389 Korak J, zamenom (Z)-3-hloroakrilne kiseline za but-2-inoičnu kiselinu. ESI+APCI MS m/z 564,3 [M+H]+.

PRIMER 506

2-((S)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-((S)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Na 0°C, u 25 ml RBF koji sadrži N,N-dimetilformamid (3909 µl, 0,39 mmol) dodat je 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (200 mg, 0,391 mmol) i trietilamin (136 µl, 0,98 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (61,0 mg, 0,59 mmol) dodata u jednom delu. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (175 µl, 0,59 mmol) je polako dodat u smešu. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3x15 ml). Ekstrakti su kombinovani i isprani vodom (1×10 ml) i koncentrovani. Talog je prečišćen silika gelom (5-18% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)-4-( 7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 506, 89,3 mg, 0,15 mmol, 38% prinosa).

ESI+APCI MS m/z 598,3 [M+H]<+>.

PRIMER 507

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

4

Korak A: 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8 g, 15,63 mmol) je razblažen sa DMF (78,17 ml, 15,63 mmol), stavljen pod azot i ohlađen na 0°C. Dodat je DIEA (6,827 ml, 39,09 mmol), a zatim su dodati 2-fluoroakrilna kiselina (2,112 g, 23,45 mmol) i ciklični anhidrid u kapima 1-propanfosfonske kiseline (9,307 ml, 15,63 mmol). Reakcija je mešana na 0°C tokom 6 sati i ostavljena da se meša dodatnih 10 sati zagrevajući na sobnu temperaturu.

Reakcija je sipana u 5% rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovana dva puta etil acetatom. Etil acetat je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen pomoću MgSO4, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 1-10% metanol/DCM (1% NH4OH kao aditiv) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-). metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin- 2-il)acetonitril (PRIMER 507, 6,6 g, 11,31 mmol, 72,32% prinosa). ESI+APCI MS m/z 584,3 [M+H]<+>.

PRIMER 508

2-((S)-1-(4-hidroksibut-2-inoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-(4-hidroksibut-2-inoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: pripremljen je prema Primeru 458, Korak D, zamenom 4-((tercbutildimetilsilil) oksi)but-2-inoične kiseline za but-2-inoičnu kiselinu.

ESI+APCI MS m/z 594,3 [M+H]<+>.

PRIMER 509

2-((S)-1-((E)-4-(lH-pirazol-1-il)but-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: (E)-4-(1H-pirazol-1-il)but-2-enska kiselina. Rastvor 4-bromokrotonske kiseline (100 mg, 0,606 mmol) i pirazola (37,1 mg, 0,546 mmol) u acetonitrilu (1 ml, 19,1 mmol) je zagrevan u zatvorenoj bočici 48 sati do 60°C uz mešanje. Dobijeni svetlozeleni rastvor je podeljen između vode (5 ml) i EtOAc (15 ml), organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom, osušen pomoću Na2SO4 i isparen in vacuo. Materijal je hromatografisan na silika gelu u 2 do 5% MeOH/DCM 0,2% TFA. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u minimalnoj količini 6M HCl i isparena pod sporim protokom N2. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: 2-((S)-1-((E)-4-(lH-pirazol-1-il)but-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]lpirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Mešana smeša 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (42,37 mg, 0,08281 mmol), (E)-4-(1H-pirazol-1-il)but-2 -enska kiselina (12,6 mg, 0,08281 mmol) i N,N-dimetilformamid (1 ml, 12,79 mmol) su ohlađeni u kupku sa ledom i soli uz mešanje, a trietilamin (0,03463 ml, 0,2484 mmol) je dodat u jednom delu, a zatim je dodat 2 ,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid, 50% u EtOAc (0,07395 ml, 0,1242 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do s.t. tokom 5 min i mešana je na s.t. preko noći. Reakciona smeša je podeljena između 0,5M Na2CO3 (5 ml) i EtOAc (10 ml), organski sloj je odvojen, ispran vodom i slanim rastvorom (5 ml svaki), osušen pomoću Na2SO4 i isparen in vacuo. Proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijum gelu korišćenjem 5% MeOH 0,5% NH4OH u DCM da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (PRIMER 509, 11,46 mg, 23%). ESI+APCI MS m/z 646,3 [M+H]<+>.

PRIMER 510

2-((S)-1-((E)-4-hidroksibut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: (E)-4-hidroksibut-2-enska kiselina. U mešanu suspenziju 4-bromokrotonske kiseline (4824 mg, 29,24 mmol) u vodi (48 ml) dodat je u kapima 2M rastvor kalijum hidroksida (4,921 g, 87,72 mmol) i dobijeni rastvor je zagrevan do refluksa 5 min. Reakciona smeša je ostavljena pod mlazom N2 da se ohladi i koncentruje. Talog je hlađen u ledenoj kupki, acidiran sa 4M H2SO4 do postizanja pH 1-2, dobijena suspenzija je isparena in vacuo do polovine i zatim ekstrahovana sa EtOAc (3* 60 ml). Kombinovani ekstrakti su sušeni pomoću Na2SO4 i ispareni in vacuo. Materijal je prečišćen hromatografijom korišćenjem 2 do 5% MeOH 0,2% TFA da bi se dobila ciljna kiselina kao bezbojni kristali (2,165 g, 73%).

Korak B: 2-((S)-1-((E)-4-hidroksibut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. U mešani rastvor 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (100 mg, 0,1954 mmol), (2E)-4-hidroksibut-2-enska kiselina (39,90 mg, 0,3909 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,06809 ml, 0,3909 mmol) u DCM (5 ml), O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum odmah je dodat heksafluorofosfat (111,5 mg, 0,2932 mmol) i reakciona smeša je mešana na s.t tokom 4 sata. Dodata je voda (1 ml), reakciona smeša je mešana 5 min i podeljena između EtOAc (10 mL) i zas. NaHCO3 (5 ml). Organski sloj je odvojen, ispran sa NaHCO3, slanim rastvorom (5 ml svaki), osušen pomoću K2CO3 i isparen in vacuo. Talog je hromatografisan na silika gelu sa 5% MeOH 0,5% NH4OH. Jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (PRIMER 510, 29 mg, 25%). ESI+APCI MS m/z 596,3 [M+H]<+>.

PRIMER 511

2-((S)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-(S)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2) -il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Mešana smeša 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (250 mg, 0,4886 mmol), (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina (85,10 mg, 0,7329 mmol) ) i N,N-dimetilformamid (2 ml, 25,58 mmol) je ohlađen u kupki sa ledom i soli i odjednom je dodat trietilamin (0,2043 ml, 1,466 mmol), a zatim 2,4,6-tripropil-1,3, 5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid, 50% u EtOAc (0,4363 ml, 0,7329 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 5 min, i mešana je na s.t. tokom 2 sata. Dobijeni rastvor je podeljen između 0,5 M Na2CO3 (10 ml) i EtOAc (30 ml), organski sloj je odvojen, ispran vodom i slanim rastvorom (10 ml svaki), osušen pomoću Na2SO4 i isparen in vacuo. Materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem 5% MeOH 0,5% NH4OH u DCM. Materijal je dalje prečišćen hromatografijom reverzne faze, Gilson, 25 do 75% MeCN/H2O 0,1% TFA. Ciljne frakcije su bazifikovane sa viškom od 2M Na2CO3 i ekstrahovane sa DCM (3* 50 ml).

Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4 i ispareni in vacuo. Jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca (PRIMER 511, 123 mg, 41%). ESI+APCI MS m/z 610,3 [M+H]<+>.

PRIMER 512

2-[(2S)-1-(2-metoksiprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: metil 2,2-dimetoksipropanoat. U rastvor etil 2-oksopropanoata (4,00 g, 34,5 mmol, 3,81 ml, 1,00 ekv.) i trimetoksimetana (4,75 g, 44,8 mmol, 4,91 ml, 1,30 ekv.) u metanolu dodat je H2SO4 (33,8 mg, 344 umol, 18.4 ul, 0,01 ekv.). Posle mešanja na 65°C tokom 4 sata, pH vrednost je podešena > 7 pomoću KOH (120 mg u 20,0 ml vode) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 30,0 ml), osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je destilovan na 60°C pod uljnom pumpom da bi se dobio metil 2,2-dimetoksipropanoat (4,00 g, 27,0 mmol, 78% prinosa) kao bezbojno ulje i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3.81 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 1.52 (s, 3H).

Korak B: metil 2-metoksiprop-2-enoat. U rastvor metil 2,2-dimetoksipropanoata (2,00 g, 13,5 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (20,0 ml) dodat je P2O5 (1,05 g, 7,42 mmol, 458 ul, 0,55 ekv.) u porcijama. Nakon zagrevanja na

1

100°C tokom 1 sata, smeša je razblažena zasićenim natrijum bikarbonatom (20,0 ml), ekstrahovana sa izopropil etrom (3 × 30,0 ml), isprana slanim rastvorom (3 × 40,0 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je destilovan pod uljnom pumpom da bi se dobio metil 2-metoksiprop-2-enoat (0,65 g, 5,60 mmol, 41% prinosa) kao bezbojno ulje i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak C: 2-metoksiprop-2-enska kiselina. Mešana je smeša metil 2-metoksiprop-2-enoata (0,60 g, 5,17 mmol, 1,00 ekv.) i NaOH (827 mg, 20,7 mmol, 4,00 ekv.) u H2O (5,00 ml) i THF (5,00 ml na 60°C 1 sat. Smeša je podešena na pH < 3 koncentrovanom HCl (10,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobila 2-metoksiprop-2-enska kiselina (0,40 g, 1,96 mmol, 38% prinosa, 50% čistoće) kao ružičasto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8.63 (br s, 1H), 5.52 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H).

Korak D: 2-[(2S)-1-(2-metoksiprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,14 g, 274 umol, 1,00 ekv.), 2-metoksiprop-2-enska kiselina (112 mg, 1,09 mmol, 4,00 ek) i DIEA (141 mg, 1,09 mmol, 191 ul, 4,00 ekv.) u dihlorometanu (5,00 ml) je dodat HATU (208 mg, 547 umol, 2,00 ekv.) na 0°C. Posle mešanja na 0°C tokom 30 min, smeša je razblažena vodom (3,00 ml).

Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (FA, 0,10%)/acetonitril] i prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 60% - 90%, 12 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-metoksiprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[( 2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 512, 10,27 mg, 17,22 umola, 6,3% prinosa, 99,9% čistoće) kao sivkasto bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 596.

1 1

SFC stanje: „IC-3S_3_40_3ML Kolona: Chiralpak IC-3100 × 4,6 mm I.D., 3 um, Mobilna faza: 40% metanol (0,05% DEA) u CO2, Brzina protoka:

3ml/min, Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.05 - 4.61 (m, 1H), 4.48 (br s, 1H), 4.37 (td, J= 4.4, 10.0 Hz, 1H), 4.30 - 3.98 (m, 4H), 3.96 - 3.74 (m, 2H), 3.69 (br s, 3H), 3.59 - 3.28 (m, 2H), 3.27 - 2.93 (m, 6H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.51 (m, 4H), 2.47 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.89 - 1.74 (m, 3H).

PRIMER 513

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

1 2

Korak 1: etil (E)-4-hidroksibut-2-enoat. U rastvor (E)-4-etoksi-4-oksobut-2-enske kiseline (1,0 g, 7,29 mmol, 1,0 ekv.) u THF (6,0 ml) dodat je rastvor BH3-Me2S (10,0 M, 692 ul, 0,95 ekv.) u THF-u (8,0 ml) u kapima tokom 1 sata na -10°C. Reakciona smeša je postepeno zagrejana do 25°C i mešana 17 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (30,0 ml) i ekstrahovana sa etil acetatom (30,0 ml×3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30,0 ml×2), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Jedinjenje etil (E)-4-hidroksibut-2-enoat (900 mg, sirova supstanca) je dobijeno kao bezbojno ulje. Sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2: (E)-4-tritiloksibut-2-enoat. Smeša etil (E)-4-hidroksibut-2-enoata (900 mg, sirova supstanca), [hloro(difenil)metil]benzena (2,89 g, 10,4 mmol), DMAP (84,5 mg, 692 umol), TEA (1,4 g, 13,8 mmol, 1,9 ml) u DCM (5,0 mL) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 25°C 1 sat u atmosferi N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem H2O (10,0 ml) i ekstrahovana sa etil acetatom (10,0 ml×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=20:1 do 15:1). Jedinjenje etil (E)-4-tritiloksibut-2-enoat (340 mg, 913 umol, 13% prinosa) je dobijeno kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.38 - 7.35 (m, 6 H), 7.26 - 7.22 (m, 6 H), 7.18 - 7.15 (m, 3 H), 6.88 (dt, J = 15.6, 3.6 Hz, 1 H), 6.29 (dt, J = 15.6, 2.2 Hz, 1 H), 4.16 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.72 (dd, J = 2.4, 2.0 Hz, 2 H), 1.25 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).

Korak 3: (E)-4-tritiloksibut-2-enska kiselina. U rastvor etil (E)-4-tritiloksibut-2-enoata (170 mg, 456 umol, 1,0 ekv.) u MeOH (1,0 ml) dodat je rastvor NaOH (54,5 mg, 1,37 mmol, 3,0 ekv.) u H2O (0,5 ml), a zatim je smeša mešana na 40°C 1 sat pod atmosferom N2. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem 1M HCl na 0°C do postizanja pH = 5, a zatim ekstrahovana sa etil acetatom (8,0 ml×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog.

1

Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=3:1 do 1:1). Jedinjenje (E)-4-tritiloksibut-2-enska kiselina (113 mg, 328 umol, 72% prinosa) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.38 - 7.36 (m, 6 H), 7.26 - 7.24 (m, 5 H), 7.20 - 7.16 (m, 4 H), 7.0 (dt, J = 15.6, 3.6 Hz, 1 H), 6.32 (dt, J = 15.6, 2.0 Hz, 1 H), 3.76 (dd, J = 3.2, 2.4 Hz, 2 H).

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (intermedijarni produkt 71, 60,0 mg, 113 umol, 1,0 ekv.), (E)-4-tritiloksibut-2-enska kiselina (77,8 mg, 226 umol, 2,0 ekv.) i DIEA (73,0 mg, 564 umol, 98 ul, 5,0 ekv.) u DCM (2,0 ml) je dodat HATU (64 mg, 169 umol, 1,5 ekv.) u jednoj porciji na 0°C pod atmosferom N2. Smeša je mešana na 25°C tokom 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem H2O (10,0 ml) i ekstrahovana sa etil acetatom (10,0 ml×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca, a sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 858.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirova supstanca) u DCM (1,0 ml) je dodat TFA (1,0 ml, 13,5 mmol). Smeša je mešana na 25°C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem vodenog rastvora NaHCO3 na 0°C do postizanja pH = 8, a zatim ekstrahovana sa etil acetatom (10,0 ml×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen prep-HPLC

1 4

(kolona: Phenomenex Gemini 150*25 mm<∗>10 um; mobilna faza: [voda(0,04% NH3H2O 10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 48% - 72%, 10 min.) i liofilizacija.

Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 513, 8,21 mg, 13,3 umol, 7,6% prinosa, 99,8% čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

SFC stanje: 100% e.e.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.68 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.70-7.33 (m, 1 H), 7.49 (dd, J= 6.8, 0.8 Hz, 1 H), 7.37 (dt, J= 11.98, 7.82 Hz, 1 H), 7.26 (t, J = 11.8 Hz, 1 H), 7.19 - 7.11 (m, 1 H), 6.99 (dt, J = 14.8, 3.4 Hz, 1 H), 6.56 (br s, 1 H), 5.02-4.57 (m, 1 H), 4.39-4.29 (m, 4 H), 4.12-4.06 (m, 1 H), 4.03-3.99 (m, 2 H), 3.85-3.72 (m, 2 H), 3.67-3.36 (m, 3 H), 3.24-3.09 (m, 2 H), 3.03-2.89 (m, 3 H), 2.73 (br s, 1 H), 2.63-2.61 (m, 1 H), 2.50 (br s, 1 H), 2.41 (s, 3 H), 2.25-2.19 (m, 1 H), 2.03-1.92 (m, 1 H), 1.70-1.60 (m, 3 H).

PRIMER 514

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-metoksiprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

1

Korak 1: metil 2,2-dimetoksipropanoat. U rastvor etil 2-oksopropanoata (4,00 g, 34,5 mmol, 3,81 ml, 1,00 ekv.) i trimetoksimetana (4,75 g, 44,8 mmol, 4,91 ml, 1,30 ekv.) u metanolu dodat je H2SO4 (33,8 mg, 344 umol, 18,4 ul, 0,01 ekv.). Posle mešanja na 65°C tokom 4 sata, reakciona smeša je podešena na pH vrednost > 7 pomoću vodenog KOH (120 mg u 20,0 ml vode) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10,0 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je destilovan na 60°C pod vakuumom da bi se dobio metil 2,2-dimetoksipropanoat (4,00 g, 27,0 mmol, 78% prinosa) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3.81 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 1.52 (s, 3H).

Korak 2: metil 2-metoksiprop-2-enoat. U rastvor metil 2,2-dimetoksipropanoata (2,00 g, 13,5 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (20,0 ml) dodat je P2O5 (1,05 g, 7,42 mmol, 458 ul, 0,55 ekv.) u porcijama. Posle mešanja na 100°C tokom 1 sata, smeša je razblažena zasićenim natrijum bikarbonatom (20,0 ml), ekstrahovana sa izopropil etrom (3 × 30,0 ml). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (3 × 40,0 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je destilovan pod vakuumom da bi se dobio metil 2-metoksiprop-2-enoat (0,65 g, 5,60 mmol, 41% prinosa) kao bezbojno ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 5.36 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.63 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.66 (s, 3H).

Korak 3: 2-metoksiprop-2-enska kiselina. Mešana je smeša metil 2-metoksiprop-2-enoata (0,60 g, 5,17 mmol, 1,00 ekv.) i NaOH (827 mg, 20,7 mmol, 4,00 ekv.) u H2O (5,00 ml) i THF (5,00 ml na 60°C 1 sat. Smeša je podešena na pH < 3 koncentrovanom HCl (10,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobila 2-metoksiprop-2-enska kiselina (0,40 g, 1,96 mmol, 38% prinosa, 50% čistoće) kao ružičasto ulje i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-metoksiprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (0,20 g, 376 umol, 1,00 ekv.), 2-metoksiprop-2-enska kiselina (153 mg, 1,50 mmol, 4,00 ekv.) i DIEA (194 mg, 1,50 mmol, 262 ul, 4,00 ekv.) u dihlorometanu (5,00 ml) je dodat HATU (286 mg, 752 umol, 2,00 ekv.) na 0°C. Posle mešanja na 0°C tokom 30 min, reakcija je prečišćena flešom reverzne faze [voda (FA, 0,1%)/acetonitril], prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u;mobilna faza: [voda (0,225% FA) - ACN]; B%: 25% - 45%, 7,8 min) i naknadno prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 55% - 79%, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-metoksiprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 514, 30,1 mg , 48,9 umol, 13% prinosa, 100% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

SFC stanje: „AS-3_MeOH (DEA) _5_40_3ml-35T Kolona: Chiralpak AS-3 50×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40%, Brzina protoka: 3ml/min, Talasna dužina: 220nm“.

1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.44 (td, J= 7.6, 13.6 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.07 - 4.63 (m, 1H), 4.57 - 4.29 (m, 4H), 4.21 - 3.96 (m, 3H), 3.95 - 3.77 (m, 2H), 3.69 (br s, 3H), 3.59 (br d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.51 - 3.32 (m, 1H), 3.30 - 3.02 (m, 5H), 2.89 - 2.50 (m, 4H), 2.47 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.89 - 1.72 (m, 3H).

PRIMER 515

2-[(2S)-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[ [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naplitil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 293 umol, 1,0 ekv.) i piridin (186 mg, 2,35 mmol, 189 ul,

1

8,0 ekv.) u dihlorometanu (4,0 ml) je dodat (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (215 mg, 1,17 mmol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)- 2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, sirova supstanca) kao žuto ulje. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg pročišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 658.

Korak B: 2-[(2S)-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[ [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 228 umol, 1,0 ekv.) i K2CO3 (315 mg, 2,28 mmol, 10,0 ekv.) u acetonitrilu (2,0 ml) je dodat 3-fluoroazetidin (152 mg, 1,37 mmol, 6,0 ekv., HCl). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (5,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (5,0 ml × 4). Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 60%-90%,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il ]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 515, 45,0 mg, 66 umol, 29% prinosa, 96% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 653.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.70 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 7.6, 15.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 -7.18 (m, 2H), 6.92 -6.82 (m, 1H), 6.52 - 6.31 (m, 1H), 5.28 - 5.08 (m, 1H), 5.07 -4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.32 - 4.01 (m, 4H), 4.01 - 3.79 (m, 2H), 3.79 -3.56 (m, 3H), 3.55 - 3.37 (m, 2H), 3.36 - 3.31 (m, 2H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.23 -3.18 (m, 2H), 3.17 - 3.15 (m, 1H), 3.14 - 3.06 (m, 2H), 3.05 - 2.95 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.75 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (d, J= 4.0 Hz, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.67 (m, 3H).

PRIMER 516

1

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5? ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. Smeša terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -7-karboksilat (5,5 g, 10,4 mmol, 1 ekv.), [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanol (2,40 g, 20,9 mmol, 2,25 ml, 2 ekv.), Pd2(dba)3 (1,91 g, 2,09 mmol, 0,2 ekv.), RuPhos (1,95 g, 4,17 mmol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (8,50 g, 26,1 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (100 ml) je degazirana

i pročišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 90°C tokom 5 sati pod atmosferom N2. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je razblažen etil acetatom (100 ml) i vodom (50 ml). Zatim je smeša acidirana do postizanja pH ~4 sa 1 M vodenim rastvorom HCl. Vodena faza je odvojena i bazifikovana do postizanja PH ~ 8 zasićenim vodenim rastvorom

1 1

Na2CO3, zatim je smeša ekstrahovana etil acetatom (50 ml × 2). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (4 g, 5,55 mmol, 53% prinosa, 84% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.46 - 7.31 (m, 5H), 5.23 (s, 2H), 4.74 - 4.49 (m, 2H), 4.43 - 4.27 (m, 2H), 4.21 - 3.70 (m, 5H), 3.42 - 3.17 (m, 3H), 3.09 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (td, J= 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.74 -2.54 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.49 (s, 9H).

Korak B: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (3,7 g, 6,11 mmol, 1 ekv.) u dioksanu (20 ml) je dodat HCl/dioksan (4 M, 22,9 ml, 15 ekv. ). Smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Tečnost je dekantirana, a čvrsta supstanca je sakupljena. Čvrsti talog je razblažen vodom (50 ml) i dihlorometanom (100 ml), zatim je smeša bazifikovana do pH ~ 8 zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3 i ekstrahovana dihlorometanom (100 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat (2,6 g, 4,89 mmol, 80% prinos, 95% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 506.

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-r7-(8-metil-1-naftil)-2-[r(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,3 g, 4,55 mmol, 1 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen (intermedijarni produkt 69,1,31 g,

1 11

5,91 mmol, 1,3 ekv.), Cs2CO3 (3,71 g, 11,4 mmol, 2.5 ekv.), Pd2(dba)3 (833 mg, 909 umol, 0,2 ekv) i Ksantfos (1,05 g, 1,82 mmol, 0,4 ekv.) u toluenu (50 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim mešana na 90°C tokom 6 sati pod N2 atmosferom. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (200 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, etil acetat/metanol = 100/1 do 10/1). benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,6 g, 2,48 mmol, 54% prinosa) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril.

Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,60 g, 2,48 mmol, 1,00 ekv.) u MeOH (20,0 ml) i NH3 (20% v/v u MeOH, 7 ml) je hidrogenizovana sa Pd/C (100 mg, 2,48 mmol, 10% čistoće, 1,00 ekv.) kao katalizator pod H2 (4,99 mg, 2,48 mmol, 1,00 ekv., 15 psi) na 25°C tokom 3 sata. Katalizator je filtriran kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (1,20 g, 2,35 mmol, 95% prinos) je dobijen kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak E: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (140 mg, 274 umol, 1,00 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (73,9 mg, 821 umol, 3,00 ekv.) u dihlorometanu (3,00 ml) dodato je DIEA (212 mg, 1,64 mmol, 286 ul, 6,00 ekv.), HATU (312 mg, 821 umol, 3,00 ekv.) u jednoj porciji na 0°C pod N2. Posle mešanja na 0°C tokom 30 min, reakciona smeša je razblažena vodom (10,0 ml) i ekstrahovana dihlorometanom (2 × 10,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (1 × 10,0 ml), osušeni pomoću natrijum sulfata, filtrirani i

1 12

koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,04% NH3H2O 10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 55% - 85%, 10 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidno-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 516, 48,7 mg, 82,1 umol, 30% prinosa, 98,4% čistoće) dobija se kao bela čvrsta supstanca.

SFC stanje: „Kolona: Chiralcel OJ-350×4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40% Brzina protoka: 3 ml/min, Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.22 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 4.10 - 4.02 (m, 1H), 3.89 (br d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.27 - 3.15 (m, 2H), 3.14 - 3.04 (m, 2H), 3.03 - 2.90 (m, 4H), 2.90 - 2.73 (m, 2H), 2.72 - 2.56 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H).

PRIMER 517

2-((S)-1-((E)-4-hidroksibut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1 1

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]inetoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, 234 umol, 1 ekv.), TEA (142 mg, 1,41 mmol, 195 uL, 6 ekv.) i (E)-4-tritiloksibut-2-enska kiselina (96,9 mg, 281 umol, 1,2 ekv.) u etil acetatu (2 ml) je dodat T3P (448 mg, 703 umol, 418 ul, 50% čistoće u EtOAc, 3 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je razblažena vodom (5 ml) i ekstrahovana etil acetatom (10 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, etil acetat/metanol = 200/1 do 10/1).2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (90 mg, 103 umol, 44% prinosa, 96% čistoće) dobija se kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 838.

Korak B: 2-[(2S)-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (80 mg, 95,5 umol, 1 ekv.) u dihlorometanu (200 ul) je dodat TFA (218 mg, 1,91 mmol, 141 ul, 20 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je razblažena sa vodom (5 ml) i bazifikovana do pH ~ 8 vodenim rastvorom NaHCO3 (2 ml). Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (5 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani

1 14

slanim rastvorom (3 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12 min). Smeša je sakupljena i lioflizovana. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 517, 10,2 mg, 16,8 umol, 18% prinosa, 98,5% čistoće) je dobijena kao sivkasto bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 596.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OD-350 × 4,6 mm I.D., 3um, Mobilna faza: 40% metanol (0,05% DEA) u CO2, Brzina protoka: 3ml/min, Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.06 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 5.25 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 3H), 4.30 - 3.95 (m, 4H), 3.93 - 3.82 (m, 1H), 3.81 - 3.61 (m, 1H), 3.59 - 3.39 (m, 2H), 3.30 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 -2.53 (m, 4H), 2.47 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.34 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.82 (m, 3H).

PRIMER 518

2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

1 1

Korak 1: O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilat. U rastvor (2R,4R)-1-terc-butoksikarbonil-4-fluoro-pirolidin-2-karboksilne kiseline (300 mg, 1,29 mmol, 1,0 ekv.) i K2CO3 (533 mg, 3,86 mmol, 3,0 ekv.) u DMF (2,0 ml) je dodat MeI (4,80 g, 33,8 mmol, 2,11 ml, 26,3 ekv.). Smeša je mešana na 20°C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (5,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (10,0 ml × 2). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter: Etil acetat=10:1-1:1) da bi se dobio proizvod O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilat (300 mg, 1,21 mmol, 94% prinosa) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 5.30 - 5.10 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 3.94 - 3.76 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.72 - 3.55 (m, 1H), 2.54 - 2.23 (m, 2H), 1.52 - 1.40 (m, 9H).

1 1

Korak 2: [(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol U rastvor O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilata. (300 mg, 1,21 mmol, 1,0 ekv.) u THF (3,0 ml) je dodat LiAlH4 (138 mg, 3,64 mmol, 3,0 ekv.) na -40°C. Smeša je mešana na ovoj temperaturi 1 sat, zatim zagrevana na 70°C i mešana na 70°C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2SO4 (0,30 ml), a zatim filtrirana. Matična tečnost je sakupljena i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio proizvod [(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (130 mg, 976 umol, 80% prinosa) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 5.18 - 4.98 (m, 1H), 3.76 - 3.70 (m, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.38 - 3.28 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.42 - 2.37 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.34 - 2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 1H).

Korak A: benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1 -naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metanola (103 mg, 773 umol, 2,0 ekv.) i t-BuONa (55,8 mg, 580 umol, 1,50 ekv.) u toluen (2,0 ml) je dodat benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 387 umol, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (5,0 ml) i ekstrahovana je etil acetatom (10,0 ml × 3). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan.

Ostatak je prečišćen fleš HPLC reverznom fazom (C18, 0,1% FA u vodi, 0 - 60% MeCN) da bi se dobio proizvod benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R) )-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (210 mg, 316 umol, 82% prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:664.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 7H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 5.24 - 5.02 (m, 3H), 4.73 - 4.61 (m, 1H), 4.53 - 4.42 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.11 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.81 (m, 1H), 3.81 - 3.67 (m, 1H), 3.58 - 3.47 (m, 1H), 3.46 - 3.29 (m, 2H), 3.24 - 3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.96 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.82 - 2.71 (m, 2H), 2.70 -2.51 (m, 2H), 2.50 - 2.47 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H).

1 1

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 301 umol, 1,0 ekv.) i NH3•MeOH (2,0 ml, 20% čistoće) u metanolu (4,0 ml) je dodat Pd/C (80 mg, 10% čistoće). Smeša je pročišćena pomoću N23 puta, a zatim mešana pod H2 atmosferom (15 Psi) na 25°C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Matična tečnost je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio proizvod 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7- (8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (140 mg, 264 umol, 88% prinosa) kao žuto ulje. Proizvod je korišćen za sledeći korak direktno bez daljeg prečišćavanja.

LCMS [ESI, M+1]:664.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, 226 umol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina ( 61,2 mg, 680 umol, 3,0 ekv.) i DIEA (176 mg, 1,36 mmol, 238 ul, 6,0 ekv.) u DCM (3,0 ml) je dodat HATU (258,44 mg, 679,69 umol, 3 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata voda (5,0 ml) i ekstrahovana je etil acetatom (5,0 ml × 3). Organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 50%-80%,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]- 7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 518, 37,9 mg, 60,1 umol, 27% prinosa, 96% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 602.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.30 - 5.22 (m, 1H), 5.21 - 5.03 (m, 1H), 4.97 - 4.68 (m, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.29 - 4.20 (m, 2H), 4.18 - 4.03 (m, 2H), 3.95 - 3.68 (m,

1 1

2H), 3.60 - 3.41 (m, 2H), 3.39 - 3.30 (m, 1H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 3.15 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.54 (m, 4H), 2.53 - 2.46 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H).

PRIMER 519

2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7 -(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat. U rastvor O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (2,1 g, 8,56 mmol, 1 ekv.) u MeCN (42 ml) dodat je Ag2O (5,95 g, 25,7 mmol, 3 ekv.) i CH3I (7,75 g, 54,6 mmol, 3,40 ml, 6,38 ekv.). Reakciona

1 1

smeša je mešana na 33°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 8/1 do 5/1) da bi se dobio O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat (1,88 g, 6,89 mmol, 80% prinosa, 95,0% čistoće) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4.45 - 4.26 (m, 1H), 3.96 - 3.89 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.68 - 3.55 (m, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.38 - 2.17 (m, 2H), 1.51 - 1.37 (m, 9H).

Korak 2: [(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor O1-terc-butil O2-metil (2R,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (2,98 g, 11,5 mmol, 1 ekv.) u THF (60 ml) dodat je LiAlH4 (872 mg, 23,0 mmol, 2 ekv) na 0°C, smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Zatim je reakciona smeša zagrejana do 80°C i mešana 2 sata. Smeša je ugašena zasićenim Na2SO4 vodenim rastvorom (3 ml), zatim filtrirana i filterski kolač je ispran sa THF (3 × 20 ml). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio [(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (1,53 g, 10,0 mmol, 87% prinosa, 95,0% čistoće) kao smeđe ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja..

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3.82 - 3.76 (m, 1H), 3.69 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 1.6, 10.8 Hz, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.18 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.62 (br s, 1H), 2.42 (tdd, J = 2.8, 6.4, 9.2 Hz, 1H), 2.38 - 2.33 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (ddd, J = 6.8, 8.8, 14.0 Hz, 1H), 1.92 (tdd, J = 1.6, 6.8, 14.0 Hz, 1H).

Korak A: (benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil )-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (1,37 g, 9,42 mmol, 2,8 ekv.) u toluenu (40 ml) je dodat t-BuONa (970 mg, 10,1 mmol, 3 ekv.) na 0°C, zatim benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2 g, 3,36 mmol, 1 ekv.) je dodat na 0°C, a reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. U smešu je dodata voda (20 ml). Smeša je razblažena sa EtOAc (10 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 20 ml). Kombinovani organski

1 2

slojevi su isprani slanim rastvorom (20 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš kolonom reverzne faze (ACN/voda (0,1% FA) = 57%) kako bi se dobio (benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4 -metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-1-karboksilat (1,8 g, 2,53 mmol, 75% prinosa, 95,0% čistoće)) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:676.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.67 (br s, 1H), 4.45 (br dd, J= 4.4, 10.0 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.96 - 3.65 (m, 3H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.29 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 3.25 - 3.06 (m, 4H), 3.00 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.81 - 2.55 (m, 4H), 2.45 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.88 - 1.68 (m, 2H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2 g, 2,96 mmol, 1 ekv.) i NH3•MeOH (20 ml, 20% čistoće) u MeOH (40 ml) je dodat Pd/C (1 g, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 20°C tokom 30 min. Reakciona smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi] -7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-577-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (1,29 g, 2,26 mmol, 76% prinosa, 95% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]:542.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-( 8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5/7-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 277 umol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (74,8 mg, 831 umol, 3 ekv.) i TEA (336 mg, 1,66 mmol, 462 ul, 50%

1 21

čistoće, 6 ekv.) u EtOAc (3 ml) je dodat T3P (264 mg, 831 umol, 247 ul, 3 ekv.) na 0°C, a smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. U smešu je dodata voda (4 ml) Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 8 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom reverzne faze (ACN/voda (0,1% FA) = 32%). Zatim je talog prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 55%-85%,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1- metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il ]acetonitril (PRIMER 519, 59,5 mg, 97,0 umol, 35% prinosa, 100% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 614.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.70 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.50 - 4.41 (m, 1H), 4.30 - 3.99 (m, 4H), 3.96 - 3.71 (m, 3H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.25 - 3.15 (m, 3H), 3.14 - 2.94 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.73 -2.55 (m, 2H), 2.45 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.81 (br dd, J = 7.2, 14.4 Hz, 1H).

PRIMER 520

2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2- il]acetonitril

1 22

Korak A: benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1 -naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (609,98 mg, 4,04 mmol, 3,0 ekv.) i t-BuONa (388 mg, 4,04 mmol, 3,0 ekv.) u toluen (2,0 ml) je u kapima dodat rastvor benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (800 mg, 1,35 mmol, 1,0 ekv.) u toluenu (4,0 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 min. Nakon završetka, reakciona smeša je isprana vodom (15,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50,0 mL), osušeni sa Na2SO4, filtrirani i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš HPLC reverznom fazom [C18, 0,1% FA u vodi, 0-80% MeCN]. Dobijeni proizvod je zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3 × 50,0 ml), kombinovani organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Jedinjenje benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1 -naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (750 mg, 1,08 mmol, 80,1% prinosa, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 682.

1 2

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. benzil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (650 mg, 953 umol, 1,0 ekv.) i Pd/C (200 mg, 10% čistoće) je dodat u MeOH (8,0 ml) i NH3·MeOH (8,0 ml, 20% čistoće), zatim je smeša degazirana i pročišćena sa H23 puta, a onda mešana na 20°C 30 minuta pod H2 (15 psi) atmosferom. Nakon završetka, sirova smeša je filtrirana kroz sloj celita. Filterski kolač je ispran sa MeOH (50,0 ml) i filtrat je osušen pod visokim vakuumom. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (420 mg, 736 umol, 77,2% prinosa, 96% čistoće) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 548.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (420 mg, 822 umol, 1,0 ekv.) i piridin (520 mg, 6,57 mmol, 531 ul, 8,0 ekv.) u DCM (6,0 ml) je dodat (E)-4-bromobut-2-enoil hlorid (603 mg, 3,29 mmol, 4,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Proizvod 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil]-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2- il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (500 mg, sirovo) dobija se kao žuto ulje. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 695.

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]piperazin-2- il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-[(E)-4-bromobut-2-enoil] - 4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin- 2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (500 mg, 720 umol, 1,0 ekv. i K2CO3 (995 mg, 7,20 mmol, 10,0 ekv.) u MeCN (12,0 ml) dodat je 3-fluoroazetidin (482 mg, 4,32 mmol, 6,0 ekv., HCl) na 0 °C. Smeša je mešana na 20°C tokom 1 sata. Nakon završetka, organski rastvarač je ispran

1 24

vodom (10,0 ml). Vodena faza je ekstrahirana etilacetatom (3 × 10 ml).

Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20,0 ml), osušeni sa Na2SO4, a rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petrolejski eter: Etil acetat = 3:1 prema Etil acetatu: Metanol = 100:1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150×255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 55%-79%,10 min];B%: 45%-75%,12min) i liofilizacija. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil]piperazin- 2-il]acetonitril (PRIMER 520, 45.8 mg, 66.5 umol, 9,24% prinosa, 100% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 689.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 6.88 (br d, J = 15.3Hz, 1H), 6.42 (br d, J = 15.4 Hz, 1H), 5.27 - 5.05 (m, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.18 (m, 2H), 4.16 -3.95 (m, 2H), 3.94 - 3.84 (m, 1H), 3.82 - 3.66 (m, 3H), 3.54 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.50 - 3.36 (m, 2H), 3.34 (br d, J = 3.8 Hz, 2H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.24 - 3.08 (m, 4H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.76 - 2.57 (m, 3H), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.46 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H).

PRIMER 521

2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

1 2

Korak A: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8- dihidro-5H-piridor[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S) )-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (720 mg, 1,03 mmol, 1 ekv.) u DCM (1 ml) je dodat TFA (4,62 g, 40,5 mmol, 3 ml, 39,4 ekv.). Smeša je mešana na 20°C tokom 4 sata. Po završetku, smeša je razblažena sa DCM (10 ml) i neutralizovana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Zatim je vodena faza ekstrahovana sa EtOAc (2 × 30 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)- 1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (880 mg, sirova supstanca) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (500 mg, sirova supstanca), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (61,1 mg, 679 umol) i TEA (294 mg, 2,91 mmol, 405 ul) u DMF (10

1 2

ml) je dodat T3P (926 mg, 1,45 mmol, 865 ul, 50% čistoće u EtOAc) na -40°C. Zatim je smeša mešana na -40°C tokom 30 minuta i na 0°C tokom još 30 min. Po završetku, smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 40 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovane sa EtOAc (2 × 70 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150*30mm*4um; mobilna faza: [voda (0.225%FA)-]; B%: 10% - 40%, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 521, 52,5 mg, 79,8 umol, 15% prinosa u dva koraka, 96,4% čistoće, FA) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:588.

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-3100×4.6mm I.D., 3 um, Mobilna faza: Metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40%, Brzina protoka: 3ml/min, Talasna dužina: 220 nm.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8.03 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.53 -5.34 (m, 1H), 5.25 (br dd, J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.02 - 4.61 (m, 3H), 4.43 (dd, J = 4.8, 11.6 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.19 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.01 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.68 - 3.56 (m, 1H), 3.55 - 3.50 (m, 2H), 3.49 - 3.21 (m, 3H), 3.14 (br s, 1H), 2.98 (br s, 1H), 2.91 - 2.61 (m, 7H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (qd, J = 8.4, 12.4 Hz, 1H), 2.14 - 1.95 (m, 3H).

PRIMER 522

1 2

2-((S)-4-(2-(((2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-hidroksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoilpiperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-) naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 378 umol, 1,0 ekv.), (E)-4-tritiloksibut -2-enska kiselina (169 mg, 491 umol, 1,3 ekv.) i DIEA (293 mg, 2,27 mmol, 395 ul,

6,0 ekv.) u DCM (3,0 ml) je dodat HATU (431 mg, 1,13 mmol, 3,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, smeši je dodata voda (10 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 10,0 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=3/1 do etil acetata: Metanol=20:1). Proizvod 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (290 mg, 339 umol, 90% prinosa) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-7-(8-metil-1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (290 mg, 339 umol, 1,0 ekv.) u dihlorometanu (1,5 ml) je dodat TFA (2,31 g, 20,3 mmol, 1,5 ml, 59,8 ekv.), smeša je mešana na 20°C tokom 30 min. Nakon završetka, reakciona smeša je

1 2

koncentrovana, zatim je dodat dihlorometan (10,0 ml), organski sloj je ispran zasićenim NaHCO3 vodenim rastvorom (2 × 10,0 ml), organski sloj je osušen pomoću Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petrolejski eter/etil acetat=3/1 do etil acetat: Metanol=20:1). Sirovi proizvod je zatim ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 45%-75%,12 min), dobijeni proizvod je koncentrovan i pod liofilizacijom. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 522, 61,3 mg, 99,9 umol, 29% prinosa, 99% čistoćw) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 614.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.06 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.27 - 4.97 (m, 1H), 4.74 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.34 (m, 3H), 4.31 - 4.16 (m, 2H), 4.15 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.58 (m, 3H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 1H), 3.36 - 3.29 (m, 1H), 3.26 - 3.07 (m, 3H), 3.04 - 2.97 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.85 -2.57 (m, 4H), 2.49 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.29 - 1.91 (m, 2H).

PRIMER 523

2-[(2S)-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

1 2

Korak A: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 369 umol, 1 ekv.), (E)-4-tritiloksibut -2-enska kiselina (254 mg, 738 umol, 2 ekv.) i TEA (374 mg, 3,69 mmol, 514 ul, 10 ekv.) u EtOAc (4 ml) je dodat T3P (705 mg, 1,11 mmol, 659 ul, 50% čistoće, 3 ekv.) na 0°C, a smeša je mešana na 0°C tokom 30 min. U smešu je dodata voda (10 ml) Smeša je razblažena sa EtOAc (5 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (15 ml). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (10 ml), osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš kolonom reverzne faze (ACN/voda (0,1% FA) = 70%) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1- metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[( E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg, 262 umol, 71% prinosa, 99% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

Korak B: 2-[(2S)-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil -7-(8-metil-1-naftil)-6,9-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-) naftil)-6,8-dihidro-SH pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-tritiloksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (230 mg , 265 umol, 1 ekv. u DCM (2,3 ml) dodat je TFA (3,54 g, 31,1 mmol, 2,3 ml, 117 ekv.), a smeša je mešana na 15°C 1 sat. Reakciona smeša je bazifikovana sa zasićenim NaHCO3 (30 ml) do postizanja PH=7-8, a zatim ekstrahovana sa DCM (2 × 15 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i

1

koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom reverzne faze (ACN/voda (0,1% FA) = 32%). Zatim je talog prečišćen prep-HPLC (kolona:

Gemini 150*255u;mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN];B%: 37%-67%,12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-hidroksibut-2-enoil]-4-[2-[[(2R,4R)-4- metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -2-il]acetonitril (PRIMER 523, 41,7 mg, 66,6 umol, 25% prinosa, 100% čistoće) kao bela čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 626..

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.07 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.85 -4.55 (m, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 3H), 4.30 - 3.97 (m, 4H), 3.94 - 3.65 (m, 2H), 3.58 -3.40 (m, 2H), 3.29 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.54 (m, 4H), 2.45 (d, J= 4.8 Hz, 3H), 2.42 - 2.28 (m, 2H), 1.81 (br dd, J = 8.9, 13.6 Hz, 1H).

PRIMER 524

2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

1 1

Korak A: 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril: Mešana smeša 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (100 mg, 0,1879 mmol), (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina (32,73 mg, 0,2819 mmol) ) i N,N-dimetilformamid (1 ml, 12,79 mmol) je ohlađen na 0°C, nakon čega je dodat trietilamin (0,07859 ml, 0,5638 mmol) i 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4 ,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid, 50% u EtOAc (0,1678 ml, 0,2819 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata uz zagrevanje do sobne temperature. Smeša je podeljena između 0,5 M Na2CO3 (5 ml) i EtOAc (15 ml) i organski slojevi su odvojeni. Organski slojevi su zatim isprani vodom i slanim rastvorom (5 ml svaki), osušeni pomoću Na2SO4 i ispareni in vacuo. Talog je zatim podvrgnut hromatografiji na silika gelu koristeći 4% MeOH 0,4% NH4OH/DCM kao eluent da bi se dobio nečist materijal koji je dalje prečišćen Gilsonovom reverznom prip. HPLC eluiranjem sa 5 do 75% ACN+0,1% TFA/H2O 0,1% TFA. Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i podeljene između DCM i zasićenog rastvora Na2CO3 i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su zatim isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo čisto jedinjenje iz naslova (PRIMER 524, 33 mg, 28%). ESI+APCI MS m/z 630,3 [M<+>].

PRIMER 525

1 2

N-(3-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oksoprop-1-en-2-il)acetamid

Korak A: N-(3-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oksoprop-1-en-2-il)acetamid: U bočici sa okruglim dnom od 25 ml koja sadrži dihlorometan (2932 µl, 0,2932 mmol) ohlađena na 0°C dodat je 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((( S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (150 mg, 0,2932 mmol) i Hunigova baza (307,2 µl, 1,759 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je 2-acetamidoakrilna kiselina (227,1 mg, 1,759 mmol) dodata u jednoj porciji. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (1047 µl, 1,759 mmol) je polako dodat u smešu. Reakcija je mešana 2 sata na 0°C. Reakcija je tretirana baznom vodom i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3X). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćeni na Gilsonovu (prip. HPLC) eluiranjem sa 5 →95% ACN 0,1% TFA/voda+0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i bazifikovane sa 1M NaOH i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2X). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova N-(3-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-

1

(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oksoprop-1-en -2-il)acetamid (PRIMER 525, 124,2 mg, 68,03% prinosa). ESI+APCI MS m/z 623,3 [M+H]<+>.

PRIMER 526

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-3-(piridin-4-il)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-3-(piridin-4-il)akriloil)piperazin-2-il)acetonitril: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 525 zamenom trans-3-(4-piridil) akrilne kiseline za 2-acetamidoakrilnu kiselinu u Koraku A.

ESI+APCI MS m/z 643,3 [M+H]<+>.

PRIMER 527

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1 4

1-bromo-5-fluoro-3-metil-2-(trifluorometil)benzen. U rastvor 1-bromo-5-fluoro-2-jodo-3-metil-benzena (2 g, 6,35 mmol, 1 ekv.) u DMF (40 ml) dodat je CuI (7,26 g, 38,1 mmol, 6 ekv.) i metil 2,2-difluoro-2-fluorosulfonil-acetat (7,32 g, 38,1 mmol, 4,85 ml, 6 ekv.). Smeša je mešana na 60°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (20 ml) i isprana vodom (20 ml × 3). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1/0 do 10/1).1-bromo-5-fluoro-3-metil-2-(trifluorometil)benzen (1.3 g, 3.74 mmol, 59% prinosa, 74% čistoće) je dobijen kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.33 (dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 2.54 (q, J = 3.6 Hz, 3H).

2-bromo-6-fluoro-4-metil-3-(trifluorometil)benzaldehid. U smešu 1-bromo-5-fluoro-3-metil-2-(trifluorometil)benzena (900 mg, 3,50 mmol, 1 ekv.) u THF (20 ml) je dodat LDA (2 M u THF, 3,50 ml, 2 ekv.) na -60°C u atmosferi azota.

1

Posle mešanja tokom 30 minuta, u smešu je dodat DMF (768 mg, 10,5 mmol, 808 ul, 3 ekv.). Smeša je mešana na -60°C 1 sat. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (10 ml), a zatim ekstrahovana etil acetatom (50 ml × 3). Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom (10 ml), osušena pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 200/1 do 5/1). 2-bromo-6-fluoro-4-metil-3-(trifluorometil)benzaldehid (700 mg, 2,46 mmol, 70% prinosa) je dobijen kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10.35 (s, 1H), 7.08 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 3H).

4-bromo-6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol. Rastvor 2-bromo-6-fluoro-4-metil-3-(trifluorometil)benzaldehida (600 mg, 2,11 mmol, 1 ekv.) i hidrazin monohidrata (2,11 g, 42,1 mmol, 2,05 ml, 20 ekv.) u DMSO (8 ml) je mešan na 60°C tokom 2 sata. Smeša je razblažena etil acetatom (50 ml) i isprana vodom (3 × 50 ml) i slanim rastvorom (1 × 50 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. 4-bromo-6-metil-5-(trifluorometil)-lH-indazol (550 mg, 1,97 mmol, 94% prinosa) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

4-bromo-6-metil-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol. U rastvor 4-bromo-6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazola (500 mg, 1,79 mmol, 1 ekv.) u DCM (10 ml) dodat je hidrat 4-metilbenzensulfonske kiseline (34,1 mg, 1791 umol). , 0,1 ekv.) 1, a zatim rastvor DHP (603 mg, 7,17 mmol, 655 ul, 4 ekv.) u CH3CN (2 ml). Smeša je mešana na 25°C tokom 16 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (100 ml) i isprana vodom (2 × 100 ml) i slanim rastvorom (1 × 100 ml). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni pomoću silika gela (petrolejski eter/etil acetat 20/1 do 3/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 4-bromo-6-metil-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol (600 mg, 1,54 mmol, 86% prinosa, 93% čistoće) kao svetlo žuta guma. LCMS [ESI, M+1]: 363.

1

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-1-tetrahidropiran-2 -il-5-(trifluorometil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]pipenazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 848 umol, 1 ekv.), 4-bromo-6-metil-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol ( 431 mg, 1,19 mmol, 1,4 ekv.) Pd2(dba)3 (155 mg, 170 umol, 0,2 ekv.), RuPhos (158 mg, 339 umol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (691 mg, 2,12 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (20 ml) je degazirano i pročišćeno pomoću N23 puta, a zatim je smeša mešana na 100°C tokom 16 sati pod N2 atmosferom. U smešu je dodata H2O (20 ml × 1) i etil acetat (20 ml × 1). Organska faza je odvojena, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat/metanol = 50/1 do 2/1). terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-1-tetrahidropiran-2-il- 5-(trifluorometil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 535 umol, 32% prinosa, 80,7% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 754.

Korak B: 2-[(2S)-4-r2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-1-tetrahidropirana- 2-il-5-(trifluorometil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (470 mg, 503 umol, 1 ekv.) u DCM (1 ml) je dodat TFA (2,29 g, 20,1 mmol, 1,49 ml, 40 ekv.). Smeša je mešana na 25°C tokom 1 sata. U smešu je dodat dihlorometan (5 ml) i bazifikovana je sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 do postizanja pH = 8 ~ 9. Organska faza je odvojena, osušena pomoću natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7- [6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (420 mg, 453 umol, 90% prinosa, 61,4% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca, a korišćen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 570.

Korak C: 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il)-2-((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-

1

d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-[6-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indazol- 4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (380 mg, 410 umol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2 -enska kiselina (18,4 mg, 205 umol, 0,5 ekv.) i TEA (124 mg, 1,23 mmol, 171 ul, 3 ekv.) u DMF (8 ml) je dodat T3P (391 mg, 614 umol, 365 ul, 50% čistoće u DMF, 1,5 ekv.) na -40°C. Zatim je smeša mešana na -40°C tokom 30 minuta i na 0°C tokom još 30 min. Dodati su 2-fluoroprop-2-enska kiselina (11 mg) i T3P (100 ul) i smeša je mešana na -40°C još 30 min. Smeša je razblažena vodom (15 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 40 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225% FA) - ACN]; B%: 22% - 42%, 7,8 min) i (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25mm<∗>10um; mobilna faza: [voda (0,04% NH3H2O 10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 50% - 68%, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il) -2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (PRIMER 527) kao bela čvrsta supstanca.

PRIMER 528

2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-(3-fluoroazetidin-1-il)but-2-enoil)piperazin-2-il) acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru

520 modifikovanjem intermedijarnog produkta 66 zamenom (S)-(4,4-difluoro-1-

1

metilpirolidin-2-il)metanola za (1-metilpirolidin-2-il)metanol u intermedijarnom produktu 66, Korak E, a modifikovanom intermedijarnom produktu 66 je uklonjena zaštita pomoću stanja u intermedijarnom produktu 71, Korak A; zatim se zamenjuje intermedijarnom produktu 66 u Primeru 520, Korak A.

PRIMER 529

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 467 zamenom (E)-4-fluorobut-2-enske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera

479, Korak C. LCMS [ESI, M+1]:634.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.32 - 4.93 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.45 (td, J = 5.2, 11.2 Hz, 1H), 4.32 - 3.63 (m, 6H), 3.58 - 3.36 (m, 3H), 3.25 -2.96 (m, 5H), 2.93 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.50 (m, 3H), 2.46 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.15 (m, 1H).

SFC stanje: Kolona: Chiralcel OJ-350×4.6mm I.D., 3 um, Mobilna faza: Metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40%, Brzina protoka: 3ml/min, Talasna dužina: 220 nm.

PRIMER 530

1

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 467 zamenom akriloilhlorida 2-fluoroprop-2-enoil hloridom koristeći stanja Primera 478, Korak A. LCMS [ESI, M+1]:620.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.73 - 7.63 (m, 2H), 7.46 - 7.33 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.54 - 5.33 (d, J = 47.6 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.05 - 4.62 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 4.31 - 4.13 (m, 3H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 3.97 - 3.73 (m, 1H), 3.59 - 3.36 (m, 3H), 3.27 - 2.95 (m, 6H), 2.92 (s, 3H), 2.89 - 2.49 (m, 5H), 2.46 (d, J= 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H).

SFC: „Kolona: Chiralcel OJ - 350 × 4,6 mm I.D., 3 um , Mobilna faza: metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40%, Brzina protoka: 3ml/min Talasna dužina: 220nm".

PRIMER 531

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluono-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

1 4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 467 zamenom (metoksimetil)prop-2-enske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera 489, Korak A.

PRIMER 532

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-hidroksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 467 zamenom 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera 483, Korak A.

PRIMER 533

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-fluorobut-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 469 zamenom (E)-4-fluorobut-2-enske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 479, Korak C.

PRIMER 534

1 41

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-metoksibut-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 469 zamenom 2-(metoksimetil)prop-2-enske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 489, Korak A..

PRIMER 535

(S)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 469 zamenom prop-2-enoil prop-2-enoat 2-fluoroakrilnom kiselinom u Primeru 478, Korak A.

PRIMER 536

1 42

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-hidroksibut-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 469 zamenom 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inojske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 469, Korak D, i prateći procedure Primera 483, Korak A.

PRIMER 537

(S)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 470 zamenom (E)-4-fluorobut-2-enske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 478, Korak A..

PRIMER 538

1 4

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-fluorobut-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 470 zamenom (E)-4-fluorobut-2-enske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 479, Korak C.

PRIMER 539

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 470 zamenom prop-2-enoil prop-2-enoat 2-fluoroakrilnom kiselinom u Primeru 478, Korak A.

PRIMER 540

1 44

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidm-4-il)piperazin-1-il)-4-metoksibut-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 470 zamenom 2-(metoksimetil)prop-2-enske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 489, Korak A.

PRIMER 541

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-hidroksibut-2-en-1-on

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 470 zamenom 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inojske kiseline za prop-2-enoil prop-2-enoat u Primeru 470, Korak C i prateći procedure Primera 483, Korak A.

PRIMER 542

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluono-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

1 4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 468 zamenom akriloilhlorida 2-fluoroprop-2-enoil hloridom koristeći stanja Primera 479, Korak C. LCMS [ESI, M+1]:655.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.60 (br d, J= 14.8 Hz, 1H), 5.26 - 5.03 (m, 2H), 4.90 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 2H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 3.98 (m, 2H), 3.97 - 3.72 (m, 2H), 3.66 - 7.56 (m, 1H), 3.53 - 3.37 (m, 2H), 3.34 - 3.11 (m, 3H), 3.07 - 2.92 (m, 2H), 2.89 - 2.79 (m, 1H), 2.77 - 2.48 (m, 4H), 2.47 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.18 (m, 1H).

PRIMER 543

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 468 zamenom akriloilhlorida 2-fluoroprop-2-enoil hloridom koristeći stanja Primera 478, Korak A. LCMS [ESI, M+1]:640.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 5.54 - 5.33 (dd, J = 2.8, 47.6 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.51 - 4.38 (m, 2H), 4.31 - 3.77 (m, 4H), 3.69 - 3.54 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 3.35 - 2.48 (m, 11H), 2.47 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.16 (m, 1H).

1 4

SFC: „Kolona: Cellucoat 50 × 4,6 mm I.D., 3um Mobilna faza: metanol (0,05% DEA) u CO2 od 5% do 40% Brzina protoka: 3ml/min Talasna dužina:

220nm".

PRIMER 544

2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 468 zamenom (metoksimetil)prop-2-enske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera 489, Korak A.

PRIMER 545

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-hloronaftalen-1-il)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-hidroksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

1 4

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 468 zamenom 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera 483, Korak A.

PRIMER 546

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 527 zamenom akriloilhlorida 2-fluoroprop-2-enoil hloridom koristeći stanja Primera 479, Korak C.

PRIMER 547

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 527 zamenom akriloilhlorida 2-fluoroprop-2-enoil hloridom koristeći stanja Primera 478, Korak A.

PRIMER 548

1 4

2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-&-((E)-4-metoksibut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 527 zamenom (metoksimetil)prop-2-enske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera 489, Korak A.

PRIMER 549

Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 527 zamenom 4-[terc-butil(dimetil)silil]oksibut-2-inske kiseline za akriloil hlorid korišćenjem stanja Primera 483, Korak A.

PRIMER 550

1 4

2-((S)-4-(7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1 -(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-1-akriloil-4-(7-(5,6-dimetil-1H-indol-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema Primeru 466 zamenom prop-2-enoil prop-2-enoata 2-fluoroakrilnom kiselinom kao što je opisano u Primeru 478, Korak A.

PRIMER 551

2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

1

Korak A: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 378 umol, 1,0 ekv.), (E)-4-metoksibut-2 -enska kiselina (110 mg, 944 umol, 2,5 ekv.) u DMF (3,0 m) je dodat TEA (382 mg, 3,78 mmol, 526 ul, 10,0 ekv.) i T3P (721 mg, 1,13 mmol, 6504% čistoće,

3,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Nakon završetka, organski rastvarač je ispran vodom (10,0 ml). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20,0 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i filtrirani. Rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (baza Al2O3, petrolejski eter: Etil acetat = 10:1 do 1:1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150×25mm×10um; mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-ACN]; B%: 48%-78%,9-10min) i liofilizacijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-metoksibut-2 -enoil]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 551, 50 mg, 79,6 umol, 21% prinosa, 99,9% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 628.

<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.05 - 6.94 (m, 1H), 6.55 (br d, J = 15.0 Hz, 1H), 5.23 -5.03 (m, 1H), 4.66 (br s, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.18 - 3.94 (m, 4H), 3.93 - 3.84 (m, 1H), 3.83 - 3.65 (m, 1H), 3.54 (br d, J= 6.7 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.42 - 3.26 (m, 2H), 3.25 - 3.15 (m, 2H), 3.05 (br dd, J= 8.5, 16.4 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.58 (m, 4H), 2.57 -2.35 (m, 5H), 2.14 - 1.96 (m, 1H).

PRIMER 552

1 1

2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil-1-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il ]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 277 umol, 1 ekv.), (E)-4-metoksibut -2-enska kiselina (64,3 mg, 554 umol, 2 ekv.) i TEA (280 mg, 2,77 mmol, 385 ul, 10 ekv.) u DMF (3 ml) je dodat T3P (529 mg, 831 umol, 494 ul, 5% čistoće, 3 ekv.) na 0 °C, a smeša je mešana na 0°C tokom 30 min. U smešu je dodata voda (10 ml) Smeša je razblažena sa EtOAc (5 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 ml), osušeni pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen fleš kolonom reverzne faze (ACN/voda (0,1% FA) = 35%). Zatim je talog prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u;

1 2

mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v) - ACN]; B%: 50% - 74%, 10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[2-[[(2R,4R)-4- metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 552, 37,1 mg, 57,2 umol, 21% prinosa, 98,7% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 640.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.55 (br d, J= 15.2 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.31 - 4.04 (m, 5H), 3.95 - 3.68 (m, 3H), 3.63 -3.47 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.30 (d, J= 1.2 Hz, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.76 (br dd, J = 8.0, 16.8 Hz, 1H), 2.72 - 2.52 (m, 3H), 2.45 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 2.41 - 2.27 (m, 2H), 1.81 (br dd, J = 7.2, 14.0 Hz, 1H).

PRIMER 553

2-((S)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((R)-1-metilpirolidin- 2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

1

Korak A: metil 3-hidroksi-4-metoksi-butanoat. U rastvor metil 4-metoksi-3-okso-butanoata (20 g, 137 mmol, 1,0 ekv.) u toluenu (300 ml) dodat je NaBH4 (5,44 g, 144 mmol, 1,05 ekv.) na 0°C. Zatim je smeša mešana na 20°C tokom 4 sata. Nakon završetka, smeša je razblažena vodom (100 ml) na 0°C i ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Ekstrakti su isprani slanim rastvorom (200 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio metil 3-hidroksi-4-metoksi-butanoat (7,5 g, sirovo) kao žuto ulje, a koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4.23 - 4.15 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.44 - 3.38 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.04 (br s, 1H), 2.51 (d, J = 6.4 Hz, 2H).

Korak B: metil (E)-4-metoksibut-2-enoat. U rastvor metil 3-hidroksi-4-metoksi-butanoata (7,5 g, sirova supstanca) u DCM (50,0 ml) dodat je TEA (5,12 g, 50,6 mmol, 7,05 ml) i MsCl (8,70 g, 75,9 mmol, 5 ml) na 0°C. Posle mešanja tokom 4 sata, u smešu je dodat TEA (10,2 g, 101 mmol, 14,1 ml) na 0 °C. Smeša je zagrejana do 20°C i mešana 12 sati. Nakon završetka, smeša je razblažena vodom (50,0 ml), isprana HCl (1N, 15,0 ml) i slanim rastvorom (20,0 ml), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 1/0 do 50:1) da bi se dobio metil (E)-4-metoksibut-2-enoat (1,7 g, 11,8 mmol, 8,6% prinosa u dva koraka, 90% čistoće) kao žuto ulje.

1 4

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6.93 (td, J = 4.3, 15.8 Hz, 1H), 6.04 (td, J = 2.0, 15.8 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 2.0, 4.3 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.36 (s, 3H).

Korak C: (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina. Smeša metil (E)-4-metoksibut-2-enoata (300 mg, 2,31 mmol, 1,0 ekv.) i KOH (517 mg, 9,22 mmol, 4,0 ekv.) u MeOH (2,0 ml) i H2O (2,0 ml) je mešana na 20°C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je acidirana sa HCl (2N, 5,0 ml) do postizanja pH = 1-3 i ekstrahovana etil acetatom (2×20 ml). Organski slojevi su osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobila (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina (200 mg, 1,55 mmol, 67,3% prinosa, 90% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 11.13 (br s, 1H),7.06 (td, J= 4.1, 15.7 Hz, 1H), 6.08 (td, J = 2.0, 15.7 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 2.0, 4.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 3H).

Korak D: 2-[(2S)-1-((E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 391 umol, 1 ekv.), (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina (113 mg , 977 umol, 2,5 ekv.), TEA (395 mg, 3,91 mmol, 544 ul, 10 ekv.) u DMF (4 ml) je dodat T3P (746 mg, 1,17 mmol, 697 ul, 50% čistoće, 3 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (20 ml) i isprana vodom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/MeOH = 100/1 do 10:1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Boston pH-lex 150* 2525 10 um; mobilna faza: [voda (0,1%TFA) - ACN]; B%: 35% - 59%, 8 min). Smeša je sakupljena i liofilizovana. Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (PRIMER 553, 37,5 mg, 60,4 umol, 15% prinosa, 98,2% čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 610.

1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.77 - 7.57 (m, 2H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d, J = 14.4 Hz, 1H), 6.55 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.24 - 4.49 (m, 1H), 4.46 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 3.74 (m, 7H), 3.73 - 3.25 (m, 6H), 3.25 - 2.94 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.54 (m, 4H), 2.49 (d, J= 5.6 Hz, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.93 - 1.65 (m, 3H).

PRIMER 554

2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril

1

Korak A: terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[((2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (850 mg, 1,80 mmol, 1,0 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen (1,20 g, 5,41 mmol, 3,0 ekv.), Pd2(dba)3 (330 mg, 360 µmol, 0,20 ekv.), ksantfos (417 mg, 721 µmol, 0,40 ekv.) i Cs2CO3 (1,76 g, 5,41 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (10,0 ml) je degazirana i prečišćena sa N23 puta, a zatim je mešana na 90°C tokom 8 sati pod N2. Nakon završetka, reakcija je isprana sa 2 N HCl (2 × 15,0 ml). Vodena faza je bazifikovana čvrstim NaHCO3 do postizanja pH ~ 7 i ekstrahovana etil acetatom (2 × 50,0 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen flešom HPLC reverzne faze [C18, 0,1% FA u vodi, 0 - 65% MeCN] i podešen je čvrstim NaHCO3 na pH ~ 7 i ekstrahovan etil acetatom (2 × 150 ml). Organski slojevi su sušeni pomoću Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (650 mg, 1,03 mmol, 57% prinosa, 97% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 612.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 4.63 - 4.52 (m, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.09 - 3.95 (m, 2H), 3.93 - 3.73 (m, 2H), 3.57 - 3.47 (m, 1H), 3.42 - 3.27 (m, 1H), 3.22 - 3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.94 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.81 - 2.54 (m, 4H), 2.53 - 2.47 (m, 3H), 2.40 - 2.26 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (600 mg, 981 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (3,0 ml) je dodat HCl/dioksan (4 M, 3,0 ml, 12,2 ekv.) na 25°C, i smeša je mešana na 25°C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (8,0 ml) na 0°C, a zatim razblažena sa H2O (5,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15,0 ml). Kombinovani organski slojevi su sušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i

1

koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (410 mg, sirova supstanca) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 293 µmol, 1,0 ekv.), (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina (102 mg , 880 µmol, 3,0 ekv.) u etil acetatu (3,0 ml) dodat je TEA (237 mg, 2,35 mmol, 326 ml, 8,0 ekv.) i T3P (560 mg, 880 µmol, 523 µl, 50% čistoće, 3,0 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 20°C tokom 1 sata. Nakon završetka, dodata je voda (5,0 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20,0 ml), osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (bazni Al2O3, petrolejski eter : etil acetat = 3 : 1 do etil acetat : metanol = 50 : 1), zatim sirovi proizvod je ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150<∗>255u;mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-MeCN];B%: 50%-77%,10min) i liofilizacija. Jedinjenje 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril (38,6 mg, 62,4 µmol, 21% prinosa, 98% čistoće) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak D: 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ilpiperazin-2-il] acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpiroildin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 293 µmol, 1,0 ekv.), (E)-4-metoksibut-2-enska kiselina (102 mg , 880 µmol, 3,0 ekv.) u etil acetatu (3,0 ml) je dodat TEA (237 mg, 2,35 mmol, 326 µl, 8,0 ekv.) i T3P (560 mg, 880 µmol, 523 µl, 50% čistoće, 3,0 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 20°C tokom 1 sata. Nakon završetka, dodata je voda (5,0 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10

1

ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20,0 ml), osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (bazni Al2O3, petrolejski eter : etil acetat = 3 : 1 do etil acetat : metanol = 50 : 1), zatim sirovi proizvod je ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150<∗>255u;mobilna faza: [voda (0,05% amonijak hidroksida v/v)-MeCN];B%: 50%-77%,10min) i liofilizacija. Jedinjenje 2-[(2S)-1-[(E)-4-metoksibut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril (38,6 mg, 62,4 µmol, 21% prinosa, 98% čistoće) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 610.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d, J= 15.2 Hz, 1H), 6.55 (br d, J= 15.6 Hz, 1H), 5.20 - 4.50 (m, 1H) 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.29 - 3.96 (m, 6H), 3.94 - 3.83 (m, 1H), 3.81 - 3.63 (m, 1H), 3.58 - 3.37 (m, 5H), 3.23 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 -2.54 (m, 4H), 2.52 - 2.43 (m, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.87 -1.72 (m, 3H).

PRIMER 555

1

2-bromo-6-fluoro-4-metil-3-(trifluorometil)benzaldehid. U smešu 1-bromo-5-fluoro-3-metil-2-(trifluorometil)benzena (900 mg, 3,50 mmol, 1 ekv.) u THF (20 ml) je dodat LDA (2 M u THF, 3,50 ml, 2 ekv.) na -60°C u atmosferi azota. Posle mešanja tokom 30 minuta, u smešu je dodat DMF (768 mg, 10,5 mmol, 808 ul, 3 ekv.). Smeša je mešana na -60°C 1 sat. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (10 ml), a zatim ekstrahovana etil acetatom (50 ml × 3). Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom (10 ml), osušena pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat = 200/1 do 5/1). 2-bromo-6-fluoro-4-metil-3-(trifluorometil)benzaldehid (700 mg, 2,46 mmol, 70% prinosa) je dobijen kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10.35 (s, 1H), 7.08 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 3H).

4-bromo-6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol. Rastvor 2-bromo-6-fluoro-4-metil-3-(trifluorometil)benzaldehida (600 mg, 2,11 mmol, 1 ekv.) i hidrazin monohidrata (2,11 g, 42,1 mmol, 2,05 ml, 20 ekv.) u DMSO (8 ml) je mešan na 60°C tokom 2 sata. Smeša je razblažena etil acetatom (50 ml) i isprana vodom (3 × 50 ml) i slanim rastvorom (1 × 50 ml). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. 4-bromo-6-metil-5-(trifluorometil)-lH-indazol (550 mg, 1,97 mmol, 94% prinosa) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

4-bromo-6-metil-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol. U rastvor 4-bromo-6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazola (500 mg, 1,79 mmol, 1 ekv.) u DCM (10 ml) dodat je hidrat 4-metilbenzensulfonske kiseline (34,1 mg, 1791 µmol , 0,1 ekv.), a zatim rastvor DHP (603 mg, 7,17 mmol, 655 ul, 4 ekv.) u CH3CN (2 ml). Smeša je mešana na 25°C tokom 16 sati. Smeša je razblažena etil acetatom (100 ml) i isprana vodom (2 × 100 ml) i slanim rastvorom (1 × 100 ml). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni pomoću silika gela (petrolejski eter/etil acetat 20/1 do 3/1). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobio 4-bromo-6-metil-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol (600 mg,

1 1

1,54 mmol, 86% prinosa, 93% čistoće) kao svetlo žuta guma. LCMS [ESI, M+1]: 363.

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-1-tetrahidropiran-2 -il-5-(trifluorometil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 848 µmol, 1 ekv.), 4-bromo-6-metil-1-tetrahidropiran-2-il-5-(trifluorometil)indazol (431 mg, 1,19 mmol, 1,4 ekv.) Pd2(dba)3 (155 mg, 170 µmol, 0,2 ekv.), RuPhos (158 mg, 339 µmol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (691 mg, 2,12 mmol, 2,5 ekv.) u toluen (20 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, i mešana na 100°C tokom 16 sati pod N2. U smešu je dodata H2O (20 ml × 1) i etil acetat (20 ml × 1). Organska faza je odvojena, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je prečišćen hromatografijom na silika gelu (etil acetat/metanol = 50/1 do 2/1). terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-1-tetrahidropiran-2-il- 5-(trifluorometil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 535 µmol, 32% prinosa, 80,7% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 754.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[6-metil-1-tetrahidropirana-2-il-5-(trifluorometil)indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (470 mg, 503 µmol, 1 ekv.) u DCM (1 ml) je dodat TFA (2,29 g, 20,1 mmol, 1,49 ml, 40 ekv.) Smeša je mešana na 25°C tokom 1 sata. Smeši je dodat dihlorometan (5 ml) i bazifikovan sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 do pH = 8 ~ 9. Organska faza je odvojena, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7- [6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (420 mg, 453 µmol, 90% prinosa, 61,4% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 570.

1 2

Korak C: 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il)-2-(((S)-1- metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-7-[6-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indazol- 4-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (380 mg, 410 µmol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2 -enska kiselina (18,4 mg, 205 µmol, 0,5 ekv.) i TEA (124 mg, 1,23 mmol, 171 µL, 3 ekv.) u DMF (8 ml) je dodat T3P (391 mg, 614 µmol, 365 µl, 50% čistoće u DMF, 1,5 ekv.) na -40°C. Zatim je smeša mešana na -40°C tokom 30 minuta i na 0°C tokom još 30 min. Dodati su 2-fluoroprop-2-enska kiselina (11 mg) i T3P (100 ul) i smeša je mešana na -40°C još 30 min. Smeša je razblažena vodom (15 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 40 ml). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni pomoću Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Talog je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225% FA) - ACN]; B%: 22% - 42%, 7,8 min) i (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25mm<∗>10µm; mobilna faza: [voda (0,04% NH3H2O 10 mM NH4 HCO

3) - MeCN]; B%: 50% - 68%, 12 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(6-metil-5-(trifluorometil)-1H-indazol-4-il) -2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 642.

PRIMER 556

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

1

3-bromo-1-(metoksimetoksi)naftalen. U rastvor 4-bromonaftalen-2-ol (3,50 g, 15,7 mmol, 1,0 ekv.) u DMF (35,0 ml) dodat je NaH (941 mg, 23,5 mmol, 60 % čistoće, 1,50 ekv.). Posle dodavanja, smeša je mešana na ovoj temperaturi 30 minuta, a zatim je dodat hloro(metoksi)metan (5,90 g, 73,3 mmol, 5,57 mL, 4,67 ekv.) kap po kap na 0 °C. Smeša je zagrejana do 30 °C i mešana još 1 sat. Nakon završetka, kombinovana reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 50,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (200 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrolejski eter/etil acetat=1/0 do 100/1). Jedinjenje 3-bromo-1-(metoksimetoksi)naftalen (3,50 g, 13,1 mmol, 84 % prinos) je dobijeno kao crveno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,19 - 8,12 (m, 1H), 7,78 - 7,71 (m, 1H), 7,61 - 7,57 (m, 1H), 7,52 - 7,44 (m, 2H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,29 (s, 2H), 3,53 (s, 3H).

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-(metoksimetoksi)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-

1 4

karboksilat (800 mg, 1,70 mmol, 1,0 ekv.) i 1-bromo-3-(metoksimetoksi)naftalen (680 mg, 2,54 mmol, 1,50 ekv.) in u 10,0 ml) je dodato Cs2CO3 (2,21 g,

6,79 mmol, 4,00 ekv.), RuPhos (158 mg, 339 µmol, 0,20 ekv.) i Pd2(dba)3 (233 mg, 254 mmol, 0,15 mol). Smeša je mešana na 90 °C tokom 6 sati. Reakciona smeša je razblažena sa H2O 100 ml i ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml).

Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talog je dalje prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na 7 vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (3 × 50,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (100 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-(metoksimetoksi)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 426 umol, 25 % prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 658.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,75 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,40 - 7,34 (m, 1H), 7,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,63 (br s, 1H), 4,40 (dd, J = 4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,33 - 4,22 (m, 2H), 4,21 - 4,16 (m, 1H), 4,09 - 3,86 (m, 3H), 3,54 (s, 3H), 3,51 - 3,40 (m, 1H), 3,37 - 3,17 (m, 3H), 3,15 - 2,96 (m, 3H), 2,89 - 2,73 (m, 3H), 2,72 - 2,64 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,33 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,05 (m, 1H), 1,91 -1,78 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-[3-(metoksimetoksi)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (260 mg, 395 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (2,0 ml) je dodat HCl• dioksan (4 M, 98,8 µl, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio talog. Talogu je podešen pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (3 × 20,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (30,0 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-

1

il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 373 umol, 94 % prinos, 96 % čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 514.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg, 389 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (105 mg, 1,17 mmol, 3,0 ek) u DMF (4,00 mL) je dodat TEA (158 mg, 1,56 mmol, 217 µl, 4,0 ek) i T3P (743 mg, 1,17 mmol, 695 µl, 50 % čistoće, 3,0 ekv.) Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa H20 (10,0 ml) i ekstrahovana sa DCM (3 × 10,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (20,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Talog je prečišćen hromatografijom na koloni (Al2O3, petrol etar/etil acetat=10/1 do DCM/MeOH = 5/1), a ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini

150<∗>25 mm<∗>10pm;mobilna faza: [voda(0,04 %NHH2O+10 mm NH4HCO3)-MeCN];B%: 45 % - 75 %,12 min). Jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(3-hidroksi-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (50,0 mg, 85,0 µmol, 22 % prinos, 99,6 % čistoće) je dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 586.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,94 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,62 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,40 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,31 - 7,26 (m, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,52 (br s, 1H), 5,51 - 5,29 (m, 1H), 5,25 (dd, J = 3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,95 - 4,35 (m, 2H), 4,24 (dd, J = 4,4, 11,2 Hz, 1H), 4,15 - 3,93 (m, 3H), 3,85 - 3,69 (m, 1H), 3,45 -3,26 (m, 1H), 3,25 - 3,18 (m, 2H), 3,17 - 2,95 (m, 2H), 2,94 - 2,73 (m, 3H), 2,72 -2,62 (m, 5H), 2,60 - 2,50 (m, 1H), 2,45 - 2,35 (m, 1H), 2,15 - 2,06 (m, 1H), 2,01 -1,93 (m, 1H), 1,88 - 1,74 (m, 3H).

PRIMER 557

1

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il] acetonitril

Korak A: benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (934 mg, 8,11 mmol, 3,0 ekv.) i t-BuONa (780 mg, 8,11 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu (15,0 ml) je dodat rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -7-karboksilat (1,5 g, 2,70 mmol, 1,0 ekv.) u toluenu (10,0 ml) u kapima na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C još 30 minuta. Nakon završetka, reakcija je ugašena vodom (30,0 ml). Sirova smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 50,0 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani slanim rastvorom (100 ml), osušeni sa Na2SO4, a zatim je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Talkog je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom [C18, 0,1 % FA u vodi, 0 - 65 % MeCN] i zakišeljen sa NaHCO3 do pH = 8 i ekstrahovan etil

1

acetatom (2 × 150 ml). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Jedinjenje benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (820 mg, 1,26 mmol, 47 % prinos, 93 % čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 606.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,42 - 7,29 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,69 (br d, J = 18,6 Hz, 1H), 4,59 (br s, 1H), 4,44 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 4,34 (br s, 1H), 4,05 - 3,69 (m, 4H), 3,42 (br s, 1H), 3,24 (br d, J = 13,0 Hz, 2H), 3,09 (br t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,02 - 2,90 (m, 1H), 2,81 - 2,56 (m, 5H), 2,47 (s, 3H), 2,28 (dt, J = 7,2, 9,4 Hz, 1H), 2,05 - 1,99 (m, 1H), 1,89 - 1,67 (m, 4H), 1,51 (s, 9H).

Korak B: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat.

NH3 je upuštan u MeOH (10,0 ml) na -70 °C tokom 0,5 h. benzil 4-[(3S)-4-tercbutoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (820 mg, 1,35 mmol, 1,0 ekv.) i Pd/C (250 mg, 10% čistoće) su dodati u gornju smešu i MeOH (10,0 mL) , zatim je smeša degazirana i pročišćena sa H23 puta, a zatim je smeša mešana na 20°C 0,5 h pod H2 (15 psi). Nakon završetka, sirova smeša je filtrirana kroz sloj celita. Kolač je ispran sa MeOH (50.0 mL) i filtrat je osušen pod visokim vakuumom. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,27 mmol, 94% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 472.

Korak C: terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (550 mg, 1,17 mmol, 1,0 ekv.), 1-bromo-8-hloro-naftalen (845 mg, 3,50 mmol, 3,0 ekv.), Pd2(dba) 3 (160 mg, 175 µmol, 0,15 ekv.), Ksanfos (135 mg, 233 µmol, 0,20 ekv.) i Cs2CO3 (1,14 g, 3,50 mmol, 3,0 ekv.) u toluenu i pročišćeni (10,0 ekv.) u toluenu i pročišćeni (10,0) puta su degasovani sa N2, 0,0 ekv. a zatim je smeša mešana na 90°C tokom 8 sati pod N2. Nakon završetka, reakcija je isprana sa HCl (2N 2 × 15

1

mL) vodenim rastvorom. Vodena faza je bazifikovana sa NaHCO3 do pH 8 i ekstrahovana etil acetatom (2 × 50 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen brzom HPLC reverzne faze [C18, 0,1% FA u vodi, 0 - 65% MeCN] i zakišeljen sa NaHCO3 do pH = 8 i ekstrahovan etil acetatom (2 × 150 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. jedinjenje terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (600 mg, 930 umol, 80% prinos, 98% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 632.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,75 (br d,J= 8,2 Hz, 1H), 7,61 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,5 Hz, 1H), 7,44 (td,J= 7,8, 15,2 Hz, 1H), 7,33 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 1H), 4,61 (br, 1H), 4,48 - 4,34 (m, 2H), 4,10 - 3,91 (m, 3H), 3,90 - 3,78 (m, 1H), 3,63 - 3,53 (m, 1H), 3,34 (br,J, J3,6, 13,8, (d), 1H), 3,30 -3,01 (m, 5H), 2,95 (d,J= 3,5, 12,3 Hz, 1H), 2,89 - 2,75 (m, 1H), 2,70 (br s, 2H), 2,57 (br d,J= 14,2 Hz, 1H), 2,53 - 2,46 (m, 3H), 2,35 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,06 (M, 1H), 1,93 - 1,66 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 316 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (2,0 mL) je dodat HCl/dioksan ( 4 M, 2,0 mL, 25,3 ekv.). Smeša je mešana na 20°C tokom 0,5 sata pod N2. Nakon završetka, organski rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Dobijeni proizvod je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 na Ph = 8, a zatim koncentrovan. Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10.0 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (145 mg, 259 µmol, 82% prinosa, 95% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen u sledećem koraku bez dalje prečišćavanje. LCMS [ESI, M+1]: 532

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-

1

enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (125 mg, 235 µmol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (42,3 mg, 470 µmol, 2.0 ek) u etil acetatu (2.0 mL) je dodat TEA (190 mg, 1.88 mmol, 262 µL, 8.0 ek) i T3P (449 mg, 705 µmol, 419 µL, 50% čistoće, 3,0 °C) na 0 °C. Smeša je mešana na 20°C 1 sat. Nakon završetka, organski rastvarač je ispran vodom (5.0 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 mL). Teombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20,0 mL), osušeni sa Na2SO4, rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (bazni Al2O3, petrol etar : etil acetat = 3 : 1 do etil acetat : metanol = 50 : 1), zatim je sirovi proizvod koncentrovan i ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Gemini 150 × 25 mm × 10 µm; Mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-MeCN];B%: 55 % - 85 %,11,5 min) i liofilizacija.

Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (22,5 mg, 37,1 µmol, 16% prinos, 99% čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 605.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.51 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (br dd, J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 4.90 (br s, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 2H), 4.24 - 4.01 (m, 3H), 3.97 - 3.78 (m, 2H), 3.64 -3.55 (m, 1H), 3.44 (br s, 1H), 3.32 - 2.95 (m, 5H), 2.94 - 2.43 (m, 7H), 2.38 - 2.20 (m, 1H), 2.14 - 1.99 (m, 1H) 1.91 - 1.71 (m, 3H).

PRIMER 558

1

2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-(((2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor [(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (169 mg, 1,27 mmol, 1,5 ekv.) u toluenu (4,0 mL) je dodat t-BuONa (163 mg , 1,69 mmol, 2,0 ek) na 0°C, nakon što je reakciona smeša mešana na 0°C tokom 0,5 sati, benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]- 2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (470 mg, 847 µmol, 1,0 ekv.) je dodat u smešu, reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je dodata u vodu (10 mL), zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 10,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat/metanol=20/1) da bi se dobio benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil) piperazin-1-il]-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (330 mg, 484 umol, 57% prinos, 92% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 624.

1 1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,40 - 7,30 (m, 5H), 5,24 - 5,03 (m, 3H), 4,69 (d,J= 18,8 Hz, 1H), 4,61 - 4,53 (m, 1H), 4,51 - 4,38 (m, 2H), 4,23 (dd,J= 7,6, 10,4 Hz, 1H), 4,08 - 3,73 (m, 4H), 3,52 - 3,11 (m, 4H), 3,04 - 2,91 (m, 1H), 2,81 - 2,57 (m, 5H), 2,55 - 2,36 (m, 5H), 2,11 - 1,99 (m, 1H), 1,51 (s, 9H).

Korak B: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (330 mg, 529 µmol, 1,0 ekv.) u metanolu (3,0 mL) i NH3.MeOH (529 pmol, 3 mL, 20% čistoće, 1,0 ekv.) je dodat Pd/C (50 mg, 529 µmol, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 3 sata. Nakon završetka, smeša je filtrirana, a filter kolač je ispran sa THF (2 × 3,0 mL), filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverzne faze (0,1% FA u MeCN). Smeša je podešena sa NaHCO3 čvrstim na pH-8, a zatim koncentrovana. Vodeni sloj (20,0 mL) je ekstrahovan etil acetatom (2 × 15,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan da bi se dobio tercbutil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2- [[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 299 umol, 58% prinos, 98% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 490.

Korak C: terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 306 µmol, 1,0 ekv.) i 1-bromo-8-hloronaftalen (148 mg, 618 µmol, µmol, ek) u toluenu (3,0 mL) je dodat KsantPhos (35,5 mg, 61,3 µmol, 0,2 ekv.), Pd2(dba)3 (42,1 mg, 45,9 µmol, 0,15 ekv.), i Cs2CO3, reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 12 sati pod N2. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit, a filtrat je ispran sa 1N vodenim rastvorom HCl (2 × 10,0 mL), vodeni sloj je podešen na pH~8 sa čvrstim Na2CO3, zatim ekstrahovan etil acetatom (2 × 15,0 mL). ), organski sloj je osušen preko

1 2

Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverzne faze (0,1% FA u MeCN). Dobijeni proizvod je podešen sa čvrstim NaHCO3 na pH~8 i koncentrovan. Vodeni sloj (20 mL) je ekstrahovan etil acetatom (2 × 15,0 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (85 mg, 129 µmol, 43% prinos, 98% čistoće) je dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1, M+23]: 650, 672.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 1H), 5,24 - 5,03 (m, 1H), 4,67 - 4,55 (m, 1H), 4,52 - 4,36 (m, 2H), 4,23 (DD,J= 7,6, 10,4 Hz, 1H), 4,13 - 3,77 (m, 4H), 3,65 - 3,52 (m, 1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 13,43 - 2,86 (m, 7H), 2,84 - 2,64 (m, 3H), 2,62 - 2,38 (m, 5H), 2,16 - 1,98 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (85,0 mg, 131 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (1,0) mL) je dodato 4 M HCl/dioksan (1,0 mL), reakciona smeša je mešana na 20°C tokom 4 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana, smeši je dodat dihlorometan (10 mL), zatim podešen pH-8 sa zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3, organski sloj je odvojen, zatim osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90 mg, sirov) je dobijen kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 550.

Korak E: 2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-(((2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90,0 mg, 120 µmol, 73% čistoće, 1,0 ekv.) i

1

2-fluoroprop-2-enska kiselina (21,7 mg, 241 µmol, 2,0 ekv.) u etil acetatu (2,0 mL) je dodat T3P (230 mg, 361 µmol, 215 µL, 50% čistoće, 3,0 ekv.) i 6 mg TEA, 97 µl (97). , 134 µL, 8,0 ekv.), reakciona smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Nakon završetka, dodata je voda (10,0 mL), zatim je organski sloj odvojen, vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 10,0 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat: metanol=10:1). Sirovi proizvod je ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 µm; mobilna faza: [voda (0,04 % NH3H2O 10 mm NH4HCO3)-MeCN]; B%: 48 %-78 %, 12 min), dobijeni proizvod je koncentrisan, a zatim liofiliziran. Jedinjenje iz naslova proizvoda 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((2R,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi) -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (10,9 mg, 17,3 µmol, 14% prinos, 99 % čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 622.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,63 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 5,50 - 5,34 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,22 - 5,04 (m, 1H), 4,98 - 4,72 (m, 1H), 4,54 - 4,37 (m, 2H), 4,30 - 4,02 (m, 3H), 3,96 - 3,75 (m, 2H), 3,66 - 3,54 (m, 1H), 3,51 - 2,99 (m, 6H), 2,98 - 2,67 (m, 3H), 2,64 - 2,36 (m, 6H), 2,14 - 1,97 (m, 1H).

PRIMER 559

2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

1 4

Korak A: 2-[(7-benzil-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi]-N,N-dimetil-etanamin. U rastvor 7-benzil-2-hloro-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina (5 g, 17,3 mmol, 1 ekv.), 2-(dimetilamino)etanol (3,08 g, 34,5 mmol, 3,46 mL, 2 ekv.), Cs2CO3 (5,62 g, 17,3 mmol, 1 ekv.) i BINAP (2,15 g, 3,45 mmol, 0,2 ekv.) u toluenu (A) je dodat (A) (100 Pm) (387 mg, 1,73 mmol, 0,1 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 100°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana. Filtratu je dodat HCl (2 M, 200 mL), a zatim odvojen. Vodena faza je bazifikovana sa NaHCO3 i K2CO3 do PH = 8~9, a zatim ekstrahovana sa EtOAc (5 × 80 mL). Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom (100 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 2-[(7-benzil-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4] -d]pirimidin-2-il)oksi]-N,N-dimetil-etanamin (4,8 g, 12,6 mmol, 73 % prinos, 90 % čistoća) kao smeđe ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,40 - 7,28 (m, 5H), 4,40 (t,J= 6,0 Hz, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 3,50 (s, 2H), 2,76 - 2,69 (m, 4H), 2,62 -2,56 (m, 2H), 2,32 (s, 6H).

Korak B: 2-[(4-Metoksi-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi]-N,N-dimetil-etanamin. U rastvor 2-[(7-benzil-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi]-N,N-dimetil-etanamina (4.8 g, 14,0 mmol, 1 ekv. u MeOH (100 mL) je dodat Pd(OH)2/C (2 g, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod

1

vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40°C tokom 18 sati. U smešu je dodat HCl/MeOH (4 M, 7,01 mL, 2 ekv.).

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 40°C tokom 2 sata. Smeša je filtrirana, filterski kolač je ispran sa NH3•MeOH (10%, 3 × 30 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren sa vodom (10 mL) i EtOAc (10 mL), zatim je smeša bazifikovana sa K2CO3 do pH = 11. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (8 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(4-metoksi-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi]- N,N-dimetil-etanamin (2,58 g, 8,69 mmol, 62 % prinos, 85 % čistoća) kao smeđe ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 253.

Korak C: 2-[[4-metoksi-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N-dimetil -etanamin. U rastvor 2-[(4-metoksi-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi]-N,N-dimetil-etanamina (2,28 g, 7,68 mmol, 1 ekv), 1-bromo-8-metil-naftalen (2,55 g, 11,5 mmol, 1,5 ekv.), Cs2CO3 (7,51 g, 23,0 mmol, 3 ekv.) i Ksantfos (889 mg, 1,54 mmola do mmola, k) 0. (70 mL) je dodat Pd2(dba)3 (703 mg, 768 µmol, 0,1 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 100°C tokom 16 sati. Reakciona smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc = 10:1 ~ 0:1 prema EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 10:1) da bi se dobio 2-[[4-metoksi-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 2-il]oksi]-N,N-dimetil-etanamin (3,2 g, 7,34 mmol, 95 % prinos, 90 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 393.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,69 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,64 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,40 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,33 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 2H), 4,44 (t,J= 6,4 Hz, 2H), 4,17 - 4,05 (m, 1H), 4,03 (s, 3H), 3,81 (d,J= 17,6 Hz, 1H), 3,57 - 3,48 (m, 1H), 3,20 (dt,J= 4,0, 11,2 Hz, 1H), 1H 2,94 - 2,82 (m, 4H), 2,75 (t,J= 6,4 Hz, 2H), 2,67 (br d,J= 16,4 Hz, 1H), 2,34 (s, 6H).

Korak D: 2-[2-(dimetilamino)etoksil-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ol. U rastvor EtSH (1,96 g, 31,5 mmol, 2,33 mL,

1

3,64 ekv.) u DMF (60 mL) dodat je NaH (693 mg, 17,3 mmol, 60 % čistoće, 2 ekv.), smeša je mešana na 10 °C tokom 0,5 sat. Zatim 2-[[4-metoksi-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksi]-N,N- dodat je dimetil-etanamin (3,4 g, 8,66 mmol, 1 ekv.) u DMF (10 mL), smeša je zagrejana na 60°C i mešana 1 sat. Smeša je sipana u ledenu vodu (200 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Vodena faza je zakiseljena sa HCl (2 M) do PH = 7-8, a zatim ekstrahovana sa EtOAc (6 × 80 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je trituriran sa PE:

EtOAc = 5:1 da bi se dobio 2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- ol (2,4 g, 6,28 mmol, 72 % prinos, 99 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 379.

Korak E: [2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometanµLfonat. U rastvor 2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidno-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ola (1 g, 2,64 mmol, 1 ek) i TEA (668 mg, 6,61 mmol, 919 µL, 2,5 ekv.) u DCM (20 mL) je dodat Tf2O (1,12 g, 3,96 mmol, 654 µL, 2,5 ek) at 4 -4 smeša je mešana na -40°C 10 min. U smešu je dodata voda (10 mL), a zatim odvojena. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc = 5:1~0:1) dajući [2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-4-il] trifluorometan µLfonat (650 mg, 1,15 mmol, 43% prinos, 90% čistoća) kao smeđe ulje.

Korak F: 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksil-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor [2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometanµLfonat (350 mg, 685 µmol, 1 ekv.) i 2-[(2S)-piperazin-2-il]acetonitril (111 mg, 754 µmol, 1,1 ekv.) u DMAC (4 EA mL) 17 mg je dodat (4 EA mL)17. mmol, 239 µL, 2 ekv.), mešavina je mešana na 10 °C 10 min. Smeša je prečišćena fleš kolonom obrnute faze (MeCN/voda (0,1% FA) = 40 %) da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-

1

d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (60 mg, 121 µmol, 18 % prinos, 98 % čistoća ) kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]: 486.

Korak F: 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin -4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (60 mg, 123 µmol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (22,2 mg, 247 µmol, 2 ekv.) i TEA (100 mg , 988 µmol, 138 µL, 8 ekv.) u EtOAc (1,2 mL) je dodat T3P (236 mg, 370 µmol, 220 µL, 50 % čistoće, 3 ekv.) na 0°C, smeša je mešana na 10,5 sata . U smešu je dodata voda (5 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 8 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen Al2O3 hromatografijom (EtOAc: MeOH = 1:0 ∼ 20:1). Zatim je ostatak pročišćen prep-HPLC (kolona: Gemini 150*25

5 µ;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-MeCN];B%: 53 % - 83 %, 12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[2-(dimetilamino)etoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (39,5 mg, 70,4 µmol, 57 % prinos, 99,4 % čistoća) kao siva čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 558.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,70 (br d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,65 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,46 - 7,38 (m, 1H), 7,35 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,18 (M, 2H), 5,52 - 5,33 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,88 (br, 1H), 4,47 - 4,37 (m, 2H), 4,31 - 4,18 (m, 1H), 4,17 - 4,01 (m, 2H), 3,94 - 3,84 (m, 1H), 3,77 (d, J= 18,0 Hz, 1H), 3,58 - 3,41 (m, 2H), 3,25 - 2,95 (m, 4H), 2,92 (s, 3H), 2,90 - 2,77 (m, 2H), 2,77 - 2,70 (m, 2H), 2,68 - 2,56 (m, 1H), 2,34 (d,J= 3,6 Hz, 6H).

PRIMER 560

1

1-terc-butil-2-metil (2S,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilat. U rastvor (2S,4R)-1-terc-butoksikarbonil-4-fluoro-pirolidin-2-karboksilne kiseline (2,0 g, 8,58 mmol, 1,0 ekv.) i Ag2O (3,97 g, 17,2 mmol, 2,0 ekv.) u CH3CN (20,0 mL) je dodat MeI (2,43 g, 17,2 mmol, 1,07 mL, 2,0 ekv.) na 0°C u porcijama, reakciona smeša je mešana na 15°C tokom 12 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je dodata u vodu (30,0 mL), zatim je organski sloj odvojen, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (30,0 mL×2), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar:etil acetat=3:1 do etil acetat:metanol=10:1). Proizvod 1-terc-butil-2-metil (2S,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilat (1,98 g, 8,01 mmol, 93% prinos) je dobijen kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5,29-5,15 (m, 1H), 4,49-4,38 (m, 1H), 3,92-3,74 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,60-3,56 (m, 1H), 2,63-2,54 (m, 1H), 2,17-2,05 (m, 1H), 1,44 (d, J=18,0 Hz, 9H).

[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor 1-terc-butil-2-metil (2S,4R)-4-fluoropirolidin-1,2-dikarboksilata (1,98 g, 8,0 mmol, 1,0 ekv.) u

1

THF (20,0 mL) dodat je LiAlH4 (912 mg , 24,0 mmol, 3,0 ekv.) polako na -40°C, nakon završetka smeša je mešana na -40°C tokom 0,5 sata, zatim je smeša zagrejana na 70°C i mešana na ovoj temperaturi 3 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem rastvora Na2SO4 (6,0 mL) na 0°C, a zatim razblažena sa THF (10,0 mL), zatim filtrirana i čvrsta supstanca je isprana etil acetatom (30,0 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio [(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metanol (800 mg, 6,01 mmol, 75% prinos) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5,13-4,97 (m, 1H), 3,67-3,63 (m, 1H), 3,51-3,37 (m, 2H), 2,95 (s, 1H), 2,74-2,68 (m, 1H), 2,63-2,51 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,07-2,02 (m, 1H), 1,99-1,95 (m, 1H).

Korak A: benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. Smeša [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (480 mg, 3,6 mmol, 2,0 ekv.) i t-BuONa (295 mg, 3,1 mmol, 1,7 ekv.) u toluen (8,0 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta i smeša je mešana na 0°C, zatim benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1 g, 1,8 mmol, 1,0 ekv.) je dodan u toluenu (8,0 mL). Smeša je mešana na 0°C 0,5 h pod N2. Nakon završetka, smeša je ugašena dodavanjem H2O (25,0 mL), a zatim ekstrahovana etil acetatom (30,0 mL×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom (18C, 0,1% FA u vodi, 0-60% MeCN). Dobijeni proizvod je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 na pH-8, zatim koncentrovan, vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (100,0 mL×3), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio benzil 4-[ (3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (860 mg, 1,38 mmol, 76% prinos, 100% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 624.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,31-7,25 (m, 5H), 5,15-5,02 (m, 3H), 4,63-4,58 (m, 1H), 4,51 (br, 1H), 4,39-4,31 (m, 2H), 4,16-4,12 (m, 1H), 3,99-3,88

1

(m, 3H), 3,71 (br d,J=11,2 Hz, 1H), 3,52-3,41 (m, 1H), 3,36 (br, 1H), 3,19-3,16 (m, 2H), 2,99-2,86 (m, 2H), 2,71-2,48 (m, 5 H), 2,43 (s, 3H), 2,76-2,17 (m, 1H), 1,96-1,80 (m, 1H), 1,74 (br, 1H), 1,43 (s, 9H).

Korak B: terc-butil-(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (860 mg, 1,4 mmol, 1,0 ekv.) u MeOH (20,0 mL) i NH3•MeOH (10,0 mL, 50% v/v) je dodat Pd/C (200 mg, 10% čistoće, 1,0 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25°C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil-(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil- pirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (620 mg, sirov) kao bela čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 490.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5,16-5,02 (m, 1H), 4,51 (br s, 1H), 4,31 (dd,J= 4,8, 11,2 Hz, 1H), 4,13 (dd,J= 6,0, 11,2 Hz, 1H), 3,87 (s, 2H), 3,76 (D,J= 12,4 Hz, 1H), 3,52-3,41 (m, 1H), 3,14 (dd,J=3,6, 13,6 Hz, 2H), 3,06-3,03 (m, 1H), 2,99-2,88 (m, 3H), 2,74-2,48 (m, 6H), 2,43 (s, 3H), 2,29-2,18 (m, 1H), 1,96-1,80 (m, 1H), 1,68-1,59 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).

Korak C: terc-butil-(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1 -naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil-(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,2 mol, 1,0 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen (812 mg, 3,7 mmol , 3,0 ekv.), Pd2(dba)3 (168 mg, 184 µmol, 0,15 ekv.), Cs2CO3 (1,2 g, 3,7 mmol, 3,0 ekv.) i Ksantfos (142 mg, 246 µmol, 0,2 ekv.) u toluen (5,0 ml) je degazirana i pročišćena sa N23 puta, a zatim mešana na 90°C 12 sati pod N2. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, a zatim je ostatak rastvoren sa 15,0 mL EA, zatim je podešen sa 0,5 M HCl na pH~2. Organski sloj je ispran sa H2O

1 1

(15,0 mL×3), zatim je čvrsti NaHCO3 dodat u kombinovanu vodenu fazu dok pH nije dostignut na 8, nakon toga, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (50,0 mL×3), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom (18C, 0,1% TFA u vodi, 0-50% MeCN). Dobijeni proizvod je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 na pH-8, zatim koncentrovan, vodeni sloj je ekstrahovan sa EA (100,0 mL×3), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio terc-butil-( 2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 467 µmol, 35% prinos, 99% čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 630.

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-7-(8-metil-1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil-(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7- (8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 318 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu ( 1,5 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 2,0 mL, 25,0 ekv.) na 25°C. Smeša je mešana na 25°C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog NaHCO3 (6,0 mL) na 0°C, a zatim razblažena sa H2O 10,0 mL i ekstrahovana sa EA (15,0 mL×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il ]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov ) kao žuto ulje. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 530.

Korak E: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 283 µmol, 1,0 ekv.) u etil acetatu (1,0 mL) je dodat rastvor 2-fluoroprop-2-enske kiseline (42,9 mg, 476 µmol, 1,68 ekv.) u etil acetatu (0,5 mL), zatim je dodat TEA (1,93 g, 19 mmol, 2,65 mL, 67,0 ekv.) 5 i T3P (4 , 715 µmol, 425 µL, 50% čistoće, 2,5 ekv.) i smeša je mešana na 0°C, nakon toga je reakciona smeša zagrejana na 20°C i mešana 1 sat. Nakon

1 2

završetka, reakciona smeša je ugašena dodavanjem H2O 10,0 mL, a zatim ekstrahovana etil acetatom (15,0 mL×3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-MeCN]; B%: 58 %-88 %, 11,5 min) i liofilizacija da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi ]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin- 2-il]acetonitril (50,1 mg, 82,9 umol, dva koraka 26% prinos, 99,5% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 602.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,72 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,67 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,46-7,43 (m, 2H), 7,26-7,21 (m, 2H), 5,50-5,38 (m, 1H), 5,30-5,11 (m, 2H), 4,89 (br, 1H), 4,45-4,40 (m, 1H), 4,30-4,20 (m, 2H), 4,19-4,13 (m, 1H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3,82-3,77 (m, 1H), 3,62-3,46 (m, 3H), 3,25-3,18 (m, 2H), 3,15-3,09 (m, 1H), 3,08-2,98 (m, 2H), 2,94 (s, 3H), 2,90-2,77 (m, 2H), 2,67-2,56 (m, 2H), 2,51 (d,J= 4,8 Hz, 3H), 2,38-2,27 (m, 1H), 2,07-1,89 (m, 1H).

PRIMER 561

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7 -(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-SH pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

1

1-terc-butil-2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat. U rastvor (2S,4R)-1-terc-butoksikarbonil-4-hidroksi-pirolidin-2-karboksilne kiseline (2 g, 8,65 mmol, 1 ekv.) i Ag2O (6,01 g, 26,0 mmol, 3 ekv.) u MeCN (40 mL) je dodat CH3I (10,0 g, 70,8 mmol, 4,41 mL, 8,19 ekv.), mešavina je mešana na 30°C tokom 14 sati. U smešu je dodat CH3I (13,2 g, 93,1 mmol, 5,80 mL, 10,8 ekv.), mešavina je mešana na 30°C tokom 6 sati. Reakciona smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE: EtOAc = 20:1~10:1) da bi se dobio 1-terc-butil-2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat (1,85 g, 6,99 mmol, 81 % prinos, 98 % čistoća ) kao žuto ulje.

[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol. U rastvor O1-tercbutil O2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (1,85 g, 7,13 mmol, 1 ekv.) u THF (50 mL) dodat je LiAlH4 (542 mg, 14,3 mmol, 2 ekv) na 0°C, smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Zatim je smeša zagrejana na 70°C i mešana 3 sata. Zatim je dodat LiAlH4 (542 mg, 14,27 mmol, 2 ekv.) na 10°C, smeša je zagrejana na 80°C i mešana 6 sati. Reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2SO4 (5 mL), a zatim filtrirana. Filterski kolač je ispran sa THF (3 × 30 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio [(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metanol (840 mg, 5,21 mmol, 73 % prinos, 90 % čistoća) kao žuto ulje koje je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

1 4

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,93 - 3,83 (m, 1H), 3,68 (dd,J= 3,2, 11,2 Hz, 1H), 3,48 - 3,36 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 2,67 - 2,58 (m, 1H), 2,40 - 2,30 (m, 4H), 2,08 (td, J = 8,0, J,) 13,2 Hz, 1H), 1,90 - 1,79 (m, 1H).

Korak A: benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-1-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor [(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (367 mg, 2,52 mmol, 2 ekv.) u toluenu (18 mL) je dodat t-BuONa (364 mg , 3,79 mmol, 3 ek) na 0°C, zatim benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (700 mg, 1,26 mmol, 1 ekv.) je dodat na 0°C, reakciona smeša je mešana na 8 °C tokom 1 sata. U smešu je dodata voda (30 mL). Smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš kolonom reverzne faze (MeCN/voda (0,1 % FA) = 30 %) da bi se dobio benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]- 2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (450 mg, 694 µmol, 55 % prinos, 98 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 636.

Korak B: terc-butil-(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (490 mg, 771 µmol, 1 ekv.) i NH3•MeOH (5 mL, 25% čistoće) u MeOH (5 mL) je dodat Pd/C (100 mg, 10 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana, filterski kolač je ispran sa MeOH (3 × 5 mL). Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi] -5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (360 mg, 682 µmol, 88 % prinos, 95 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

1

Korak C: terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (360 mg, 718 µmol, 1 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen (238 mg, 1,08 mmol , 1,5 ekv), Cs2CO3 (701 mg, 2,15 mmol, 3 ekv.) i Ksanfos (83,0 mg, 143 µmol, 0,2 ekv.) u toluenu (8 mL) je dodat Pd2(dba)3 (75,7 mol, 1 m 0 mg) ) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 90°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (od PE: EtOAc = 5:1~1:1 do EtOAc: MeOH = 1:0~20:1). Zatim je ostatak prečišćen fleš kolonom reverzne faze (ACN/voda (0,1 % FA) = 45 %) da bi se dobio terc-butil(2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R) -4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 414 umol, 58 % prinos, 95 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 642.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,74 - 7,60 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 4,61 (br, 1H), 4,39 (ddd,J= 4,8, 6,8, 11,2 Hz, 1H), 4,30 - 4,20 (m, 1H), 4,16 - 4,11 (m, 1H), 4,11 - 3,89 (m, 4H), 3,88 - 3,68 (m, 1H), 3,56 - 3,47 (m, 1H), 3,46 - 3,32 (m, 2H), 3,30 (d,J =2,4 Hz, 3H), 3,21 - 3,05 (h) 3,01 - 2,85 (m, 5H), 2,81 - 2,67 (m, 2H), 2,65 - 2,54 (m, 1H), 2,46 (d,J= 4,0 Hz, 3H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,11 - 2,05 (m, 1H), 2,00 - 1,88 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 436 µmol, 1 ekv.) u dioksanu (1 mL) dodat je HCl/dioksan (4 M, 1,64 mL, 15 ekv.) mešan je na 10 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Smeša je bazifikovana zasićenim NaHCO3 do pH = 8~9 i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 15 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi

1

se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il ]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (210 mg, 349 µmol, 80 % prinos, 90 % čistoća) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 542.

Korak E: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-( 8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 185 µmol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina ( 33,2 mg, 369 µmol, 2 ekv.) i TEA (149 mg, 1,48 mmol, 206 µL, 8 ek) u EtOAc (2 mL) je dodat T3P (352 mg, 554 µmol, 329 µL, 325 µL, čistoća 325 µl) na 0°C, smeša je mešana na 10°C tokom 0,5 sata. U smešu je dodata voda (3 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 3 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150<∗>25 mm<∗>5 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN];B%: 52 % - 82 %, 12 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (28,1 mg, 45,5 umol, 25 % prinos, 99,4 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 614.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,65 - 7,54 (m, 2H), 7,38 - 7,30 (m, 1H), 7,27 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,19 - 7,10 (m, 2H), 5,46 - 5,26 (m, 1H), 5,18 (br,J= 3,6, J), 16,8 Hz, 1H), 4,83 (br, 1H), 4,37 - 4,27 (m, 1H), 4,23 - 3,94 (m, 4H), 3,92 -3,85 (m, 1H), 3,84 - 3,76 (m, 1H), 3,70 (br d,J= 18,0 Hz, 1H), 3,46 (br d,J= 8,8 Hz, 1H), 3,42 - 3,31 (m, 2H), 3,22 (D,J= 2,0 Hz, 3H), 3,18 - 3,07 (m, 2H), 3,06 - 2,87 (m, 2H), 2,87 - 2,64 (m, 6H), 2,59 - 2,49 (m, 1H), 2,38 (d,J=4,4 Hz, 3H), 2,24 (ddd,J=3,2, 6,0, 9,6 Hz, 1H), 1H), 1H 2,04 - 1,94 (m, 1H), 1,93 - 1,81 (m, 1H).

PRIMER 562

1

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol. U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (0,5 g, 2,48 mmol, 1 ekv.) u THF (20 mL) dodat je LiAlH4 (189 mg, 4,97 mmol, 2 ekv.) na 0°C, zatim je smeša zagrejana na 70°C i mešana na 70°C 0,5 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2SO4 (1 mL). Talog je odfiltriran i filter kolač je ispran sa THF (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (220 mg, 1,72 mmol, 69% prinos, 90% čistoća) kao bezbojno ulje koje je korišćeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

1

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 3,67 - 3,57 (m, 1H), 3,50 (dd, J = 6,0, 10,0 Hz, 1H), 3,45 - 3,18 (m, 1H), 2,70 (dt,J= 4,8, 8,8 Hz, 1H), 2,56 - 2,44 (m, 2H), 2,42 - 2,24 (m, 5H), 2,04 - 1,90 (m, 1H), 1,68 - 1,54 (m, 1H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 µmol, 1 ekv.) i [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (194 mg, 1,68 mmol, 2 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (162 mg, 1,68 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 10 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 40 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc/MeOH 50/1 do 3/1) da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2- [[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (290 mg, 427 µmol , 51% prinos, 95% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,72 - 7,61 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 5H), 7,37 - 7,30 (m, 2H), 7,27 - 7,16 (m, 2H), 5,28 - 5,15 (m, 2H), 4,68 (br, 1H), 4,30 - 4,01 (m, 4,00 - 3,73 - (m, 6H), (h) 3,56 - 3,31 (m, 2H), 3,26 - 3,06 (m, 3H), 3,05 - 2,94 (m, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,82 - 2,70 (m, 4H), 2,70 - 2,57 (m, 2H), 2,47 (d,J=4,4 Hz, 3H), 2,20 - 2,07 (m, 1H), 1,80 - 1,67 (1H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (290 mg, 449 µmol, 1 ekv.) u MeOH (4 mL) je dodat NH3•MeOH (2 mL , 15% čistoće), Pd/C (100 mg, 449 µmol, 10% čistoće, 1 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin- 3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 279 µmol, 62% prinos, 95% čistoće ) kao žuta čvrsta

1

supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, 235 µmol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (42,2 mg, 469 µmol, 2 ek) i TEA (71,2 mg, 704 µmol, 97,9 µL, 3 ekv.) u DMF-u (2 mL) je dodat T3P (224 mg, 352 pmol, 209 µL, 50% čistoće u EtOAc, 0°C, 1). Zatim je smeša mešana na -40°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa mešanim rastvaračem (EtOAc/MeOH 10/1, 5 × 5 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 50/1 do 20/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Phenomenex Gemini 150<∗>25 mm<∗>10 µm; mobilna faza: [voda (10 mm NH4HCO3) -ACN]; B%: 50 %-100 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[( 3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (16,0 mg, 26,5 µmol, 11% prinosa, 96,5% čistoće) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 584.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.74 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.35 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.33 - 4.02 (m, 5H), 4.01 - 3.65 (m, 2H), 3.61 -3.36 (m, 2H), 3.27 - 2.97 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.74 - 2.56 (m, 4H), 2.55 - 2.42 (m, 2H), 2.36 (d, J= 2.4 Hz, 3H), 2.14 - 1.99 (m, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 1H).

PRIMER 563

1

2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (260 mg, 508 µmol, 1,0 ekv.) u etil acetatu (1,5 mL) je dodat rastvor (E)- 4-fluorobut-2-enska kiselina (106 mg, 1,02 mmol, 2,0 ekv.) u etil acetatu (0,5 mL), TEA (206 mg, 2,03 mmol, 283 µL, 4,0 ekv.) i T3P (647 mg, 1,02 mmol) µL, 50% čistoće, 2,0 ekv.), i smeša je mešana na -40°C i mešana 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa H2O (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 15,0 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225 %FA)-]; B%: 25 %-45 %, 7,8 min). Dobijeni proizvod je podešen na pH~8 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, zatim koncentrovan, vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3 × 20,0

1 1

mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2- [(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (132 mg, 220 µmol, 43% prinos, 99% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 598.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,70 - 7,62 (m, 2H), 7,43 - 7,38 (m, 1H), 7,36 - 7,31 (m, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 2H), 7,04 - 6,94 (m, 1H), 6,59 (d,J= 14,4 Hz, 1H), 5,17-4,60 (m, 3H) 4,41 - 4,35 (m, 1H), 4,28 - 3,44 (m, 9H), 3,20 -3,08 (m, 4H), 3,05 - 2,99 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,83 - 2,77 (m, 1H), 2,72 - 2,62 (m, 2H), 2,47 (d,J= 4,8 Hz, 3H), 2,32 - 2,25 (1H), (1H), 1H 2,09 - 2,01 (m, 1H), 1,88 -1,70 (m, 3H).

PRIMER 564

2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

1 2

Korak A: benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (800 mg, 1,44 mmol, 1 ekv.) u toluenu (20 mL) je dodat t-BuONa (277 mg, 2,88 mmol, 2 ekv.) i 3-[(1S,4S)-2-oksa- 5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propan-1-ol (340 mg, 2,16 mmol, 1,5 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1 % mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. benzil 4-[(3S)-4-tercbutoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (500 mg, 725 µmol, 50 % prinos, 94 % čistoća) je dobijen kao žuti čvrst. LCMS [ESI, M+1]: 648.

<1>H NMR (400MHz, hloroform-d) δ = 7.44 - 7.30 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.79-4.53 (m, 2H), 4.51 - 4.30 (m, 4H), 4.09 - 3.71 (m, 5H), 3.67 - 3.58 (m, 1H),

1

3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.32 - 3.12 (m, 2H), 3.04 - 2.87 (m, 2H), 2.85 - 2.46 (m, 7H), 2.00 - 1.89 (m, 2H), 1.85 ( d, J=9.2 Hz, 1H), 1.72 (d, J=9.2 Hz, 1H), 1.51 (s, 9H)..

Korak B: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil 4-[(3S)-4-terc-butoksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[ 2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (900 mg, 1,39 mmol, 1 ekv.) u MeOH (30 mL) je dodat Pd/C (100 mg, 10 % čistoće) i NH3•MeOH (20 mL, 25 % čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 20°C 1 sat. Katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (650 mg, 1,06 mmol, 77 % prinos, 84 % čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 514.

Korak C: terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il] propoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 350 µmol, 1 ekv.), 1-bromo-8-hloro-naftalen (127 mg, 526 µmol, 1,5 ekv.), Cs2CO3 (342 mg, 1,05 mmol, 3 ekv.) i RuPhos (65,4 mg, 140 mmol, 0,4 ekv.) u toluenu (6 mL) je dodat Pd2(6dba) 3 mg (6dba), 70,1 µmol, 0,2 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 90°C tokom 10 sati. Reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (iz PE: EtOAc = 5:1 ~ 1:1 prema EtOAc: MeOH = 1:0~20:1) da bi se dobio tercbutil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (130 mg, 173 umol, 50 % prinos, 90 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 674.

1 4

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 222 µmol, 1 ek) u dioksanu (0,6 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 556 µL, 10 ekv.), smeša je mešana na 10 °C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren sa vodom (15 mL) i EtOAc (10 mL), a zatim odvojen. Vodena faza je bazifikovana čvrstim NaHCO3 do PH = 8~9 i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 15 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S) -2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril (100 mg, 162 µmol, 73 % prinos, 93 % čistoća) kao braon čvrsta supstanca koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 574.

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)pipenazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 174 µmol, 1 ekv.), 2 -fluoroprop-2-enska kiselina (31,4 mg, 348 µmol, 2 ek) i TEA (141 mg, 1,39 mmol, 194 µL, 8 ek) u EtOAc (2 mL) je dodat T3P (332 mg, 522 µL31 µl) , 50% čistoće, 3 ekv.) na 0°C, smeša je mešana na 10°C 0,5 sata. U smešu je dodata voda (3 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 3 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C1810 µ 250 mm<∗>50 mm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN];B%: 45 %-75 %,12min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa- 5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil )piperazin-2-il]acetonitril (26,5 mg, 41 umol, 24 % prinos, 99,9 % čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26-7.18 (m, 1H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.12 - 4.64 (m, 1H), 4.49-4.31 (m, 4H), 4.21 - 3.98 (m, 3H), 3.95 - 3.76 (m, 2H), 3.68 - 3.55 (m, 2H), 3.52 - 3.36 (m, 2H), 3.33 - 2.97 (m, 4H), 2.95 - 2.66 (m, 5H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.84 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.71 (br d, J = 10.0 Hz, 1H).

PRIMER 565

2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)- 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

1

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 ]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 681 µmol, 1 ekv.), 1-bromo-8-metil-naftalen ( 226 mg, 1,02 mmol, 1,5 ekv.), ksantfos (78,9 mg, 136 µmol, 0,2 ekv.), Pd2(dba)3 (62,4 mg, 68,1 µmol, 0,1 ekv.) i

Cs2CO3, (55 mg, ek) (55 mg) toluen (10 mL) je degaziran i pročišćen sa N23 puta, a zatim je smeša mešana na 90 °C 12 sati pod N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/metanol = 300/1 do 10/1). terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2. 1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (270 mg, 379 µmol, 56% prinos, 92 % čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 654.

1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 - 7,61 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 1H), 7,34 (t,J=7,2 Hz, 1H), 7,26 - 7,15 (m, 2H), 4,62 (br, 1H), 4,45 - 4,31 (m, 3H), 4,30 - 4,16 (m, 1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H 4,10 - 3,70 (m, 5H), 3,61 (br d,J=7,6 Hz, 1H), 3,57 - 3,44 (m, 2H), 3,43 - 3,25 (m, 1H), 3,24 - 3,05 (m, 3H), 3,03 - 2,86 (m, 5H), 2,84 - 2,67 (m, 4H), 2,66 - 2,48 (m, 2H, 2H), 2,00 (1,88 - - - (m, 2H) 1,84 (D,J= 9,6 Hz, 1H), 1,72 (d,J= 9,6 Hz, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5- azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (250 mg, 382 µmol, 1 ekv.) u dioksanu (2 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 1,91 mL, 1,00 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom.

Ostatak je razblažen vodom (20 mL), a zatim je pH smeše podešen na pH = 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod.

2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (260 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje i korišćen je za sledeće korak bez očišćenja. LCMS [ESI, M+1]: 554.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)- 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, 216 µmol, 1 ekv.), TEA (87,7 mg, 866 µmol, 121 µL, 4 ekv.) i (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (45,1 mg, 433 µmol, 2 ek) u etil acetatu (2 mL) je dodat T3P (276 mg, 433 µmol, 258 µL, 50% čistoće, 2 ekv.) na -70 °C. Smeša je mešana na -70°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je ugašena razblaženom sa HCl (1N, 1 mL) i zatim razblažena vodom (20 mL).

Smeša je ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani

1

pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 40 %-70 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S) )-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il ]acetonitril (14,5 mg, 22,5 umol, 10% prinos, 99,3% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 640.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,70 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,65 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,45 - 7,30 (m, 2H), 7,27 - 7,16 (m, 2H), 7,09 - 6,91 (m, 1H), 6,59 (D,J= 15,2 Hz, 1H), 5,29 - 4,48 (m, 3H), 4,44 - 4,31 (m, 3H), 4,29 - 3,72 (m, 6H), 3,71 - 3,40 (m, 4H), 3,28-2,96 (m, 4H), 2,95 - 2,88 (m, 4H), 2,87 - 2,56 (m, 5H), 2,52 (D,J= 10,0 Hz, 1H), 1,99 - 1,87 (m, 2H), 1,84 (d,J= 9,6 Hz, 1H), 1,71 (d,J= 9,6 Hz, 1H).

PRIMER 566

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa- 5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

1

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa- 5-azabiciklo[2.2,1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 181 µmol, 1 ekv.) i 2 -fluoroprop-2-enska kiselina (32,5 mg, 361 µmol, 2 ekv.) u DCM (1 mL) je dodat HATU (137 mg, 361 µmol, 2 ek) i DIEA (93,4 mg, 722 µmol, 126 ek ). Posle mešanja na 0°C tokom 0,5 sata, reakciona smeša je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen pomoću TLC (DCM/MeOH = 10/1) i dalje prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C1810 µ 250 mm<∗>50 mm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 45 %-75 %, 12min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2- oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (12 mg, 19,1 umol, 11% prinos, 99,6% čistoće) je dobijena kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 626.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,63 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,58 (t,J= 8,4 Hz, 1H),7,39 - 7,23 (m, 2H), 7,19 - 7,09 (m, 2H), 5,35 (d,J= 48,8 Hz, 1H), 5,18 (DD,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,04 - 4,40 (m, 1H), 4,37 - 3,89 (m, 7H), 3,86 - 3,61 (m, 2H), 3,59 - 3,32 (m, 4H), 3,20 - 2,40 (m, 14H), 1,95 - 1,81 (m, 2H), 1,78 (d,J= 9,6, 1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H 1,65 (D,J= 9,6 Hz, 1H).

PRIMER 567

11

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-[8-(hidroksimetil)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

8-bromonaftalen-1-karbaldehid. U rastvor 1,8-dibromonaftalena (5 g, 17,5 mmol, 1 ekv.) u THF (100 mL) dodat je n-BµLi (2,5 M, 9,09 mL, 1,3 ekv.) na -70 °C u kapima. Posle mešanja tokom 30 minuta na -70 °C, DMF (12,8 g, 175 mmol, 13,5 mL, 10 ekv.) je dodat u kapima. Smeša je zagrejana do 12°C i mešana još 0,5 h. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (20 mL). Odvojena vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 50 mL).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 8-bromonaftalen-1-karbaldehid (4,5 g, sirov) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

11 1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 11,4 (s, 1H), 8,04 - 7,92 (m, 2H), 7,90 (d,J= 8,0 Hz, 2H), 7,60 - 7,55 (m, 1H), 7,39 (t,J= 8,0 Hz, 1H).

(8-bromo-1-naftil)metanol). Smeši 8-bromonaftalen-1-karbaldehida (4,5 g, 19,1 mmol) u MeOH (80 mL) dodat je NaBH4 (2,90 g, 76,6 mmol) u jednoj porciji na 0°C. Smeša je mešana na 0°C 30 minuta. Po završetku, u smešu je dodata voda (1 mL) i smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razblažen vodom (10 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 40 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 30/1 do 3/1) da bi se dobio (8-bromo-1-naftil)metanol (3,3 g, 12,5 mmol, dva koraka 72% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,92 - 7,82 (m, 3H), 7,71 (d,J= 6,8 Hz, 1H), 7,49 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,32 - 7,27 (m, 1H), 5,48 (br, 2H).

2-[(8-bromo-1-naftil)metoksi]tetrahidropiran. U rastvor (8-bromo-1-naftil)metanola (0,5 g, 2,11 mmol, 1 ekv.) u DCM (10 mL) dodat je DHP (355 mg, 4,22 mmol, 386 mL, 2 ekv.), a zatim TsOH •H2O (40,1 mg, 211 µmol, 0,1 ekv.) na 12 °C. Smeša je mešana na 12°C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (2 mL) i razblažena vodom (5 mL).

Odvojena vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (10 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 500/1 do 100/1) da bi se dobio 2-[(8-bromo-1-naftil)metoksi]tetrahidropiran (560 mg, 1,57 mmol, 74% prinos, 90% čistoća) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,94 - 7,88 (m, 2H), 7,85 (t,J= 8,4 Hz, 2H), 7,56 - 7,50 (m, 1H), 7,36 - 7,28 (m, 1H), 5,63 (s, 2H), 4,92 (t,J= 3,6 Hz, 1H), 4,07 - 3,97 (m, 1H), 3,69 - 3,61 (m, 1H), 2,08 - 1,76 (m, 4H), 1,75 -1,65 (m, 2H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]pipenazin-1-karboksilat. 2-[(8-bromo-1-naftil)metoksi]tetrahidropiran (476 mg, 1,48 mmol, 1,5 ekv.), benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-

11 2

metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 989 µmol, 1 ekv.), Cs2CO3 (806 mg, 2,47 mmol, 2,5 ekv.), (5-difenilfosfanil-9,9-dimetil-ksanten-4-il)-difenil-fosfan (229 mg, 396 µmol, 0,4 ekv.) i Pd2(dba)3 (181 mg, 198 µmol, 0,2 ek) u toluenu (20 mL) je degazirano i zatim zagrevano na 90 °C tokom 10 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene, neutralizovane sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovane sa EtOAc (2 × 30 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8 -(tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 338 µmol, 34% prinos, 90% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 746.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)- Dodan je 1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 375 µmol, 1 ekv.) u MeOH (6 mL) NH3/MeOH (4 mL, 20% čistoće), Pd/C (120 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa

H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 7-[8-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (200 mg , 294 µmol, 78% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 612.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8-(tetrahidropiran-2 -iloksimetil)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-ilpiperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-

11

d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 294 µmol, 1 ekv.), T3P (562 mg, 883 µmol, 525 µL, 50% čistoće u EtOAc, 3 ekv.) i TEA (238 mg, 2,35 mmol, 328 mL, 8 ekv.) u EtOAc (4 mL) dodata je 2-fluoroprop-2-enska kiselina (53,0 mg, 588 mmo). ek) na 0°C. Smeša je mešana na 15°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je razblažena vodom (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 10 mL).

Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovane sa EtOAc (2 × 100 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-7-[8-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril (160 mg, 227 umol, 77% prinos, 97% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 684.

Korak D: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-[8-(hidroksimetil)-1-naftil]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-[8- (tetrahidropiran-2-iloksimetil)-1-naftil]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 219 µmol, 1 ek) u DCM (160 µL) dodata je TFA (250 mg, 2,19 mmol, 162 µL, 10 ekv.). Smeša je mešana na 15 °C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je razblažena dihlorometanom (3 mL) i podešen pH = 9 zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3. Odvojena vodena faza je ekstrahovana sa DCM (5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona:: Xtimate C18150<∗>25 mm<∗>5 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 42 %-72 %, 8 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-[8-(hidroksimetil)-1-naftil]-2-[ [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (62,0 mg, 103 µmol, 47% prinos, 100% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 600.

11 4

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,84 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,79 (dd,J= 3,2, 7,2 Hz, 1H), 7,55 - 7,44 (m, 3H), 7,44 - 7,38 (m, 1H), 5,55 - 5,32 (m, 1H), 5,26 (DD,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,21 - 4,94 (m, 2H), 4,89 (br t,J= 13,2 Hz, 1H), 4,41 -3,90 (m, 7H), 3,66 - 3,39 (m, 2H), 3,37 - 3,00 (m, 5H), 3,00 - 2,58 (m, 4H), 2,50 -2,43 (M, 3H), 2,33 - 2,22 (m, 1H), 2,11-1,98 (m, 1H), 1,90 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 568

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-pirolidin-2-il]metoksi]

-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U

11

smešu terc-butil 2-metilsulfanil-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilata (20,0 g, 46,6 mmol, 1,00 ekv.) i benzila (2S)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (13,3 g, 51,2 mmol, 1,10 ekv.) u DMAc (250 mL) je dodat DIEA (18,1 g, 140 mmol, 24,3 mL, 3 ekv.) u porcijama na °C ispod N2. Smeša je zagrejana na 50 °C i mešana 1 sat. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 300 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (3 × 500 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 50/1 do 1/1).

Jedinjenje terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7 -karboksilat (23.0 g, 42.7 mmol, 92% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 539.

Korak B: Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-karboksilat (23,0 g, 42,7 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu (200 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 192 mL, 18,0 ekv.). Posle mešanja na 20°C i tokom 0,5 sata, reakciona smeša je filtrirana i filter kolač je rastvoren u etil acetatu (200 mL). pH je podešen na 8-9 zasićenim rastvorom Na2CO3, a zatim razblažen vodom (20,0 mL). Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (16,1 g, 34,5 mmol, 81% prinos, 94% čistoća) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca..

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,42 - 7,33 (m, 5H), 5,25 - 5,12 (m, 2H), 4,66 (br s, 1H), 4,11 - 4,04 (m, 1H), 4,03 - 3,90 (m, 3H), 3,84 (br d,J= 13,6 Hz, 1H), 3,34-3,17 (m, 2H, 3,11) (td,J= 5,2, 10,4 Hz, 1H), 3,04 - 2,93 (m, 2H), 2,88 - 2,76 (m, 1H), 2,75-2,56 (m, 3H), 2,50 (s, 3H).

11

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata ( 16,1 g, 36,7 mmol, 1,00 ekv.) i 1-bromo-8-metilnaftalen (10,6 g, 47,7 mmol, 1,30 ekv.) u toluenu (350 mL) je dodat Pd2(dba)3 (6,74 g, 7,32 g, 7). ekv.), Ksanfos (8,50 g, 14,7 mmol, 0,40 ekv.) i Cs2CO3 (35,9 g, 110 mmol, 3,00 ekv.). Smeša je degazirana i pročišćena sa N23 puta. Posle mešanja na 90°C tokom 8 sati, reakciona smeša je razblažena vodom (1 × 100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (1 × 300 mL) i slanim rastvorom (1 × 300 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 100/1 do 2/1) i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-1-karboksilat (15,3 g, 26,5 mmol, 72% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,68 - 7,55 (m, 2H), 7,40 - 7,28 (m, 7H), 7,22 (s, 2H), 5,22 - 5,09 (m, 2H), 4,64 (br s, 1H), 4,27 - 4,14 (m, 1H), 4,05 -3,84 (m, 2H), 3,83 - 3,68 (1H), 3,55 (1H, (1H), 3,30 - (1H) (M, 2H), 3,18 - 3,03 (m, 3H), 3,01 - 2,79 (m, 5H), 2,78 - 2,50 (m, 3H), 2,45 (d,J= 4,8 Hz, 3H).

Korak D: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (13,3 g, 23,0 mmol, 1,00 ekv.) u EtOAc (200 mL) je dodat m-CPBA (4,67 g, 23,0 mmol, 85% čistoće, 1,00 ekv.) N2. Posle mešanja na 0°C tokom 30 minuta, reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2S2O3 (100 mL) na 0°C. Odvojeni organski sloj je razblažen vodom (1 × 100 mL) i ekstrahovan etil acetatom (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 50/1 do 0/1). Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-

11

il]piperazin-1-karboksilat (9,60 g, 15,3 mmol, 67% prinos, 95% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 595.

<1>H NMR (400MHz, hloroform-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.25 - 5.17 (m, 2H), 4.67 (br s, 1H), 4.48 - 4.21 (m, 2H), 4.10 - 3.88 (m, 2H), 3.66 - 3.46 (m, 2H), 3.42 - 3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.83 (m, 6H), 2.81 - 2.60 (m, 1H), 2.81-2.60 (m, 3H).

Korak E: terc-butil (2S)-4-[2-[[(2S)-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 µmol, 1,00 ekv.) i terc-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (338 mg, 1,68 mmol, 2,00 ekv.) toluen (10,0 mL) je dodat t-BuONa (242 mg, 2,52 mmol, 3,00 ekv.) u porcijama na 0°C pod N2. Posle mešanja na 0°C tokom 30 min, reakciona smeša je ugašena dodavanjem hlorovodonične kiseline (1 M) 2 mL na 0°C i vode (10 mL). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (30 mL × 1) i slanim rastvorom (30 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 50/1 do 0/1). Jedinjenje terc-butil (2S)-4-[2-[[(2S)-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (330 mg, 473 umol, 56% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400MHz, hloroform-d) δ = 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 5.27 - 5.14 (m, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.42 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 3.73 (m, 3H), 3.58 - 3.29 (m, 5H), 3.25 - 2.88 (m, 8H), 2.86 - 2.51 (m, 3H), 2.03 - 1.76 (m, 4H), 1.44 (d, J = 4.8 Hz, 9H).

Korak F: terc-butil (2S)-2-[(4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat. U smešu terc-butil (2S)-4-[2-[[(2S)-1-terc-butoksikarbonilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (330 mg, 473 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (15

11

mL) je dodat NH3• MeOH (15 mL, 20% čistoće), Pd(OH)2/C (80 mg, 20% čistoće) u jednoj porciji pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 20°C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (200 mg, 335 umol, 71% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 598.

Korak G: terc-butil (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-1-il]-7-(8-metil-1 -naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetilpirolidin-1-karboksilat. U smešu terc-butil (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (190 mg, 318 µmol, 1,00 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (42,9 mg, 477 µmol , 1,50 ek) u DCM (15,0 mL) je dodat DIEA (123 mg, 954 µmol, 166 uL, 3,00 ek) i HATU (181 mg, 477 µmol, 1,50 ek) u jednom obroku na 20°C Posle mešanja na 0°C tokom 30 min, reakciona smeša je razblažena vodom (10 mL). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, DCM: MeOH = 50:1 do 5:1).

Jedinjenje terc-butil (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-1-il]-7-(8-metil- 1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (210 mg, 292 µmol, 92% prinos, 93% čistoće) je dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 670.

Korak H: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu terc-butil (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-1-il]-7-(8 -metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (210 mg, 314 µmol, 1,00 ekv.) u DCM ( 5,00 mL) je dodata TFA (1,07 g, 9,41 mmol, 696 uL, 30,0 ek) u jednoj porciji na 20°C pod N2. Posle mešanja na 20°C tokom 30 min, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenek Sinergi C18150 × 30 mm × 4 µm; Mobilna faza:

11

[voda(0,225 %FA)-];B%: 20 %-50 %, 5 min). glavno jedinjenje 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (75,5 mg, 122 µmol, 39% prinos, 99,8% čistoće, FA) je dobija se kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 570.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,72 - 7,61 (m, 2H), 7,44 - 7,30 (m, 2H), 7,27 - 7,14 (m, 2H), 6,49 - 5,98 (m, 1H), 5,55 - 5,32 (m, 1H), 5,25 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,58 - 4,42 (M, 2H), 4,36 - 3,87 (m, 5H), 3,86 - 3,67 (m, 1H), 3,64 -3,37 (m, 2H), 3,35 - 3,26 (m, 2H), 3,25 - 2,94 (m, 4H), 2,92 - 2,70 (m, 5H), 2,66 -2,51 (m, 1H), 2,18 - 1,81 (m, 4H).

PRIMER 569

2-[(2S)-2-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-oksopirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

111

(5S)-5-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)pirolidin-2-on. U smešu (5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-2-on (5,00 g, 43,4 mmol, 1,00 ekv.) i DHP (3,65 g, 43,4 mmol, 3,97 mL, 1,00 ekv.) u DCM (80,0 mL) je dodat TsOH.H2O (826 mg, 4.34 mmol, 0.10 ekv.). Smeša je mešana na 15°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je isprana slanim rastvorom (30,0 mL × 1), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 20/1 do 0:1). Jedinjenje (5S)-5-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)pirolidin-2-on (5,70 g, 28,6 mmol, 66% prinos) je dobijeno kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 6,36 - 6,01 (m, 1H), 4,66 - 4,47 (m, 1H), 3,92 - 3,71 (m, 2,5H), 3,64 - 3,43 (m, 2H), 3,24 (dd,J= 8,0, 9,6 Hz, 2,42 - 2,10 (m, 3H), 1,86 - 1,64 (M, 3H), 1,62 - 1,48 (m, 4H).

(5S)-1-metil-5-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)pirolidin-2-on. U smešu (5S)-5-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)pirolidin-2-ona (5,60 g, 28,1 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (60,0 mL) dodat je NaH (1,35 g, 33,7 mmol, 60% čistoća, 1,20 ekv.) u porcijama na -40 °C pod N2. Smeša je mešana na -40°C tokom 30 min, zatim je dodat CH3I (6,58 g, 46,4 mmol, 2,89 mL, 1,65 ek) i mešan na 0°C tokom 2,5 sata.

Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHS03 (30,0 mL) i ekstrahovana sa EA (3 × 50,0 mL). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2SO4 i koncentrovana do suva. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 10/1 do 0/1). Jedinjenje (5S)-1-metil-5-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)pirolidin-2-on (4,40 g, 20,6 mmol, 73% prinos) je dobijeno kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4,59 (td,J= 3,2, 13,6 Hz, 1H), 3,93 - 3,73 (m, 2H), 3,63 - 371 (m, 1H), 3,57 - 3,44 (m, 2H), 2,88 (d,J= 4,4 Hz, 3H), 2,54 - 2,40 (M, 1H), 2,38 - 2,24 (m, 1H), 2,07 - 2,20 (m, 1H), 1,93 - 1,53 (m, 7H).

(5S)-5-(Hidroksimetil)-1-metil-pirolidin-2-on. U smešu (5S)-1-metil-5-(tetrahidropiran-2-iloksimetil)pirolidin-2-ona (2,20 g, 10,3 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (20,0 mL) dodata je TFA (23,5 g, 206). mmol, 15,3 mL, 20,0 ekv.). Smeša je mešana na 15 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje (5S)-5-(hidroksimetil)-1-metilpirolidin-2-on (2,60 g, sirovo) je dobijeno kao crveno ulje.

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-1[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu (5S)-5-(hidroksimetil)-1-metil-pirolidin-2-ona (543 mg, 4,20 mmol, 5,00 ekv.) u THF (30,0 mL) je dodat t-BuONa (808 mg, 8,41 mmol) , 10,0 ekv.) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 0°C 30 min, zatim benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 umol, 1,00 ekv.) je dodat i zagrejan na 15 °C i mešan 0,5 sat. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% TFA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane zasićenim rastvorom NaHCO3 (10,0 mL) i ekstrahovale etil acetatom (50,0 mL × 2). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5Hpirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (162 mg, 243 µmol, 29% prinosa, 99% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca . LCMS [ESI, M+1]: 660.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-oksopirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 197 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (2,00 mL) je dodat NH3•MeOH (1,00 mL, 20% čistoće) i Pd/C (35,0 mg, 10% čistoće). Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (70,0 mg, sirov) je dobijen kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 526.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso- pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (60,0 mg, 114 µmol, 1,00 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina ( 20,6 mg, 228 µmol, 2,00 ekv.) u EA (1,00 mL) je dodat TEA (92,4 mg, 913 µmol, 127 uL, 8,00 ekv.), T3P (218 mg, 342 µmol, 25 µmol, 03 ek.) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 0°C 30 min. Reakciona smeša je razblažena vodom (5,00 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (10,0 mL × 1) i slanim rastvorom (10,0 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Kstimate C18150 × 25 mm × 5 um; Mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN];B%: 42 %-72 %). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5- okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (26,8 mg, 43,9 µmol, dva koraka 26 % prinosa, 98% čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 598.

111

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,73 - 7,62 (m, 2H), 7,46 - 7,38 (m, 1H), 7,38 - 7,32 (m, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 5,55 - 5,32 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,08 - 4,63 (M, 1H), 4,53 - 4,39 (m, 1H), 4,37 - 4,26 (m, 1H), 4,25 -4,00 (m, 3H), 3,97 - 3,71 (m, 3H), 3,59 - 3,35 (m, 2H), 3,29 - 2,98 (m, 4H), 2,91 (d,J= 5,62,57 Hz, 8H), 2,692,45 - 2,58 (1H), 1H (M, 1H), 2,42 - 2,29 (m, 1H), 2,28 - 2,14 (m, 1H), 2,06 - 1,91 (m, 1H).

PRIMER 570

2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

(2R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[terc-butil(difenil)silil]oksipropanska kiselina. U rastvor (2R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-hidroksipropanoične kiseline (27 g, 132 mmol, 1 ekv.) u DMF (270 mL) dodat je imidazol (45,4 g, 667 mmol, 5,07 ekv. ) na 0°C pod azotom. Nakon što je rastvor postao bistar, dodat je TBDPSCl (90,4 g, 329 mmol, 84,5 mL, 2,5 ekv.). Reakcija je zagrejana na 15 °C. Posle mešanja na 15 °C tokom 24 h, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena etrom (250 ml) i sipana u zasićeni NaCl (100 mL). Odvojeni organski sloj je ispran smešom 10% HCl (25 mL) i zasićenog NaCl (50 mL), osušen preko Na2SO4 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen acetonitrilom i tada je formiran beli talog. Precipitat je filtriran i filter kolač je osušen pod vakuumom da bi se dobila (2R)-2-(tercbutoksikarbonilamino)-3-[terc-butil(difenil)silil]oksi-propanoična kiselina (45 g, 90 mmol, 69% prinos, 89% čistoće) kao bela čvrsta supstanca.

terc-butil N-[1R)-1-[[terc-butil(difenil)silil] oksimetil-2-(2,2-dimetil-4,6-diokso-1,3-dioksan-5-il)-2 -okso-etil]karbamat. U mešani rastvor (2R)-2-(tercbutoksikarbonilamino)-3-[terc-butil (difenil)silil]oksi-propanske kiseline (24 g, 54,1 mmol, 1 ekv.) u DCM (400 mL) na 0 °C je dodat 2,2-dimetil-1,3-dioksan-4,6-dion (8,19 g, 56,8 mmol, 1,05 ekv.) i DMAP (16,0 g, 131 mmol, 2,42 ekv.), a zatim BOP (25,1 g, 56,8 mmol, 1,05 ekv.) u malim porcijama. Smeša je mešana 1 sat na 0°C. Po završetku, smeša je isprana sa 1N KHSO4 (2 × 360 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom na sobnoj temperaturi da bi

111

se dobio terc-butil N-[(1R)-1-[[terc-butil(difenil)silil] oksimetil]-2-(2,2-dimetil- 4,6-diokso-1,3-dioksan-5-il)-2-okso-etil]karbamat (35 g, sirovo) kao žuto ulje koje se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

terc-butil (2R)-2-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3,5-diokso-pirolidin-1-karboksilat. terc-butil N-[(1R)-1-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2-(2,2-dimetil-4,6-diokso-1,3-dioksan-5-il) -2-okso-etil]karbamat (35 g, 61,43 mmol, 1 ekv.) je refluksovan u EtOAc (600 mL) na 77 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2R)-2-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-3,5-diokso-pirolidin-1-karboksilat (30 g, sirov) kao žuto ulje koje se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

terc-butil (2R,3R)-2-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-hidroksi-5-oksopirolidin-1-karboksilat. terc-butil (2R)-2-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3,5-dioksopirolidin-1-karboksilat (30 g, 64,2 mmol, 1 ekv.) rastvoren je u DCM (480 mL ) na 0°C, a zatim NaBH4 (3,78 g, 99,9 mmol, 1,56 ekv.) u malim porcijama. Suspenzija je mešana na 18 °C tokom 16 sati. Po završetku, reakciona smeša je sipana u vodu (300 ml) i mešana dok nije ostala čvrsta supstanca. Odvojeni organski sloj je ispran vodom (150 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 10/1 do 2/1), a zatim flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN, a zatim ekstrahovane sa DCM (2 × 50 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2R,3R)-2-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-hidroksi-5-okso-pirolidin-1-karboksilat (2,13 g, 3,99 mmol, tri koraka 7,6% prinosa, 88% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,72 (dd,J= 1,6, 8,0 Hz, 2H), 7,59 (dd,J= 1,2, 8,0 Hz, 2H), 7,47 - 7,39 (m, 6H), 5,67 (D,J= 4,0 Hz, 1H), 4,57 - 4,46 (m, 1H), 4,09 - 3,97 (m, 2H), 3,83 (dd,J= 2,8, 10,0 Hz, 1H), 2,75 - 2,65 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 0,93 (s, 2,53 (s, 9H).

terc-butil (2R,3R)-2-[[terc-butil (difenil)silil]oksimetil]-5-okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2R,3R)-2-[[terc-

111

butil(difenil)silil] oksimetil]-3-hidroksi-5-okso-pirolidin-1-karboksilata (2,55 g, 5,43 mmol, 1 ekv. ) u DCM (50 mL) je dodat DHP (913 mg, 10,9 mmol, 993 µL, 2 ekv.), a zatim TsOH•H2O (103 mg, 543 µmol, 0,1 ekv.) na 20 °C. Smeša je mešana na 20°C tokom 16 sati. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10 mL), razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (PE/EtOAc 15/1 do 7/1) da bi se dobio terc-butil (2R,3R)-2-[[terc-butil (difenil)silil]oksimetil]-5-okso- 3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-1-karboksilat (2,62 g, 4,64 mmol, 85% prinos, 98% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 (td,J= 1,2, 7,6 Hz, 2H), 7,66 (td,J= 1,6, 8,0 Hz, 2H), 7,47 - 7,34 (m, 6H), 4,75 - 4,68 (m, 1H), 4,63 - 4,51 (m, 1H), 4,20 - 4,17 (m, 1H), 3,99 - 3,88 (m, 2H), 3,87 - 3,74 (m, 1H), 3,60 - 3,50 (m, 1H), 3,23 - 3,01 (m, 1H), 2,76 (ddd,J= 8,8, 10,4, 16,8 Hz, 1H), 2,01 - 1,80 (m, 2H), 1,79 - 1,62 (m, 1,45 (h, 4H) 1,02 (D,J= 8,0 Hz, 9H).

(4R,5R)-5-[[terc-butil(difenil) silil]oksimetil]-4-tetrahidropiran-2-iloksipirolidin-2-on. U rastvor terc-butil (2R,3R)-2-[[terc-butil(difenil)silil] oksimetil]-5-okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-1-karboksilat (2,62 g, 4,73 mmol, 1 ekv.) u MeCN (50 mL) dodat je Mg(ClO4)2 (211 mg, 946 mmol, 95,6 mL, 0,2 ekv.).

Reakciona smeša je mešana na 70°C tokom 12 sati. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobilo (4R,5R)-5-[[terc-butil(difenil) silil]oksimetil]-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-on (1,14 g, 2,29 mmol, 48% prinos, 91% čistoća) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 454.

(4R,5R)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-on. U rastvor (4R,5R)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-ona (0,95 g, 2,09 mmol, 1 ekv.) u THF (20 mL) je dodat NaH (168 mg, 4,19 mmol, 60% čistoće u mineralnom ulju, 2 ekv.) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, zatim je dodat CH3I (594 mg, 4,19 mmol, 261 uL, 2 ekv.). Posle mešanja na 0 °C još 0,5 sata, smeša je ugašena vodom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 30 mL).

111

Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobilo (4R,5R)-5-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-on ( 820 mg, 1,67 mmol, 80% prinos, 95% čistoće) kao smeđe ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 - 7,70 (m, 2H), 7,70 - 7,65 (m, 2H), 7,48 - 7,36 (m, 6H), 4,68 - 4,60 (m, 1H), 4,59 - 4,48 (m, 1H), 4,07 - 3,77 (m, 2H), 3,77 - 3,66 (m, 1H, 1H), 3,65 (1H, 3,56 - (m, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1 (M, 1H), 3,55 - 3,40 (m, 1H), 2,89 - 2,79 (m, 3H), 2,79 - 2,53 (m, 2H), 1,90 - 1,69 (m, 2H), 1,68 - 1,53 (m, 4H), 1,09 - 1,03 (m, 9H).

(4R,5R)-5-(Hidroksimetil)-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-on. U smešu (4R,5R)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-on (1,07 g, 2,29 mmol, 1 ek) u DMSO (10 mL) dodat je CsF (1,04 g, 6,86 mmol, 253 µL, 3 ekv.). Smeša je mešana na 65°C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 50/1 do 5/1) da bi se dobio (4R,5R)-5-(hidroksimetil)-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2- jedan (380 mg, 1.49 mmol, 65% prinos, 90% čistoća) kao žuto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 4,80 - 4,52 (m, 2H), 3,98 - 3,81 (m, 3H), 3,72 - 3,61 (m, 1H), 3,60 - 3,48 (m, 1H), 2,87 (d,J= 9,6 Hz, 3H), 2,67 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 2,60 - 2,46 (m, 1H), 1,86 - 1,74 (m, 2H), 1,67 - 1,51 (m, 4H).

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2- iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 471 µmol, 1 ekv.) i (4R,5R)-5-(hidroksimetil)-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2- jedan (140 mg, 612 µmol, 1,3 ekv.) u toluenu (6 mL) je dodat t-BuONa (90,5 mg, 942 mmol, 2 ekv.) na 0°C. Posle mešanja na 0°C tokom 10 minuta, smeša je razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 10 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda

111

(0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovane sa EtOAc (2 × 20 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1 -metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1- karboksilat (200 mg, 258 umol, 55% prinos, 98% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 760.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,74 - 7,63 (m, 2H), 7,47 - 7,31 (m, 7H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 5,21 (s, 2H), 4,84 - 4,43 (m, 5H), 4,30 - 3,70 (m, 8H), 3,59 - 3,34 (m, 3H), 3,25 - 2,98 (m, 3H,), 4H (), - - (m, 4H) 2,96 - 2,90 (m, 6H), 2,81 - 2,56 (m, 4H), 1,83 - 1,63 (m, 2H), 1,60 - 1,47 (m, 4H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5-okso-3- tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 197 µmol, 1 ek) u MeOH (3 mL) je dodat NH3/MeOH (3 mL, 20% čistoće), Pd/C (75 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa

H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 20°C 1 sat. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1- metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il ]acetonitril (100 mg, 144 umol, 73% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 626.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2- iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 160 µmol, 1 ekv.) u DCM (100 µL) je dodata TFA (273 mg, 2,40 mmol, 177 µL, 15 ekv.). Smeša je mešana na 20°C 1 sat. Po završetku, smeša je razblažena sa DCM (5 mL) i bazifikovana zasićenim vodenim

111

rastvorom natrijum bikarbonata do pH = 8. Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2 -il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80 mg , 126 µmol, 79% prinos, 85% čistoće) kao žuto ulje koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak D: 2-[(2S)-1-(2-Fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80 mg, 148 µmol, 1 ekv.), TEA (44,8 mg, 443 µmol, 61,7 µL, 3 ek) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (26,6 mg, 295 µmol, 2 ek) u EA (3 mL) je dodat T3P (141 mg, 222 µmol, 130 µmol, 150 % čistoće u EtOAc, 1,5 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 10 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 do 10/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150<∗>25 mm<∗>5um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 34 %-64 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil -5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 2-il]acetonitril (11,8 mg, 19,1 umol, 13% prinos, 99,3% čistoća) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 614.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,71 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,69 - 7,63 (m, 1H), 7,41 (q,J= 7,6 Hz, 1H), 7,35 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,19 (M, 2H), 5,55 -5,33 (m, 1H), 5,27 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,86 (dd,J= 5,6, 12,0 Hz, 1H), 4,79 (dd,J= 5,6, 12,0 Hz, 1H), 4,63 - 4,49 (m, 2H), 4,39 - 3,94 (m, 3H), 3,89 - 3,77 (m, 2H), 3,76 - 3,63 (m, 1H), 3,61 - 3,44 (m, 2H), 3,38 - 2,99 (m, 4H), 2,91 (d,J= 7,2 Hz, 6H), 2,89 - 2,70 (m, 2H), 2,70 - 2,55 (m, 2H), 2,46 (dt,J= 5,2, 16,0 Hz, 1H).

PRIMER 571

112

2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-((S)-pirolidin-2-ilmetoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-[(7-benzil-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetil]pirolidin-1-karboksilat. Do rešenja 7-benzil-2-klor-4-metoksi-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin (4,00 g, 13,8 mmol, 1,00eq) itert-butil (2s)-2- (hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (5,56 g, 27,6 mmol, 2,00eq) u toluenu (80,0 ml) Je dodan BINAP (1,72 g, 2,76 mmol, 0,20eq), PD(OAc)2(310 mg, 1,38 mmol, 0,10eq) i C2CO3 (13,5 g, 41 mmol, 3,00eq). Mešavina je miješana u 110 °C 8 sata. Nakon završetka, mješavina za reakciju je filtrirana i koncentrirana pod smanjenim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je razrijeđen sa H2o (200 ml) i etilacetatom (200 ml). Mešavina je kiseljena do pH~3 sa vodenim HCl (2N). Vodena faza je odvojena i ekstrahirana etilacetatom (3 × 200 ml).

Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=20/1 do 1/1) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-[(7-benzil-4-metoksi-6,8-dihidro)-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (3,80 g, 8,26 mmol, 60% prinos, 99% čistoće) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 455.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,37 - 7,27 (m, 5H), 4,50 - 4,35 (m, 1H), 4,25 - 4,16 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,43 - 3,33 (m, 2H), 2,76 - 2,72 (m, 2H), 2,62 - 2,57 (m, 2H), 2,04 - 1,90 (m, 3H), 1,85 - 1,76 (m, 1H), 1,61 - 1,54 (m, 1H), 1,45 (s, 9H).

Korak B: terc-butil (2s)-2-[(4-metoksi-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d] pirimidin-2-il)oksimetil]pirolidin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-[(7-benzil-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetil]pirolidin-1 -karboksilat (3,80 g, 8,36 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu (100 mL) je dodat Pd(OH)2/C (1,00 g, 10,3 mmol, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (45 psi) na 40°C tokom 24 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Jedinjenje terc-butil (2S)-2-[(4-metoksi-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (2,70 g, 7,17 mmol, 86% prinos, 97% čistoća) je dobijeno kao žuto ulje i korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 365.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 4,54 - 4,35 (m, 1H), 4,25 - 4,10 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,86 (s, 2H), 3,48 (s, 1H), 3,43 - 3,33 (m, 2H), 3,13 - 3,04 (m, 2H), 2,56 - 2,46 (m, 2H), 2,10 - 1,93 (m, 3H), 1,87 - 1,82 (m, 1H), 1,45 (s, 9H).

Korak C: terc-butil (2S)-2-[7-(8-hloro-1-naftil)-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil] pirolidin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-[(4-metoksi-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetil]pirolidin-1-karboksilata (2.5 g, 6,86 mmol, 1,0 ekv.) i 1-bromo-8-hloro-naftalen (3,31 g, 13,7 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (50 mL) dodat je Pd2(dba)3 (1,26 g, 1,37 mmol, 0 ekv.), Cs2CO3 (5,59 g, 17,2 mmol, 2,5 ekv.) i RuPhos (1,28 g, 2,74 mmol,

0,4 ekv.), reakciona smeša je mešana na 90 °C 12 sati pod N2. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit, a filtrat je ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 80 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan.

Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=10/1 do 3/1). Proizvod terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il ]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (1.3 g, 2.46 mmol, 36% prinos, 99% čistoća) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 525.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,74 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,60 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,51 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,43 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,33 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,23 (br d,J= 7,6 Hz, 1H), 4,60 - 4,37 (m, 1H), 4,34 - 4,16 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 3,87 (br d,J= 17,2 Hz, 1H), 3,63 - 3,57 (M, 1H), 3,45 - 3,30 (m, 2H), 3,21 - 3,10 (m, 1H), 2,99 (br, 1H), 2,62 (br d,J= 16,8 Hz, 1H), 2,07 - 1,79 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

Korak D: terc-butil (2s)-2-[[7-(8-klor-1-naftil)-4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirimidin[3,4-dipirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat. U rastvor NaH (168 mg, 4,19 mmol, 60% čistoće, 2,0 ekv.) u DMF (15 mL) dodat je EtSH (391 mg, 6,29 mmol, 465 µL, 3,0 ekv.) u porcijama na 15 °C Posle mešanja tokom 0,5 sati, rastvor terc-butil(2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-metoksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina U smešu je dodat -2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (1,1 g, 2,10 mmol, 1,0 ekv.) u DMF (7,0 mL), a zatim je reakciona smeša mešana na 60 °C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je sipana u ledenu vodu (10 mL), zatim je smeša podešena sa 1N HCl u vodi na pH 7-8, smeša je filtrirana, filter kolač je rastvoren dihlorometanom (10 mL), ispran sa zasićeni rastvor soli (2 × 15 mL), osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetata: metanol=10:1) da bi se dobio terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (670 mg, 1,28 mmol, 61% prinos, 98% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.. LCMS [ESI, M+1]: 511.

Korak E: terc-butil(2s)-2-[[7-(8-klor-1-naftil)-4-(trifluorometilsulfonodroksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dipirimidin-2-il)oksimetilpirolidin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2 -il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (640 mg, 1,25 mmol, 1,0 ekv.) u DCM (10 mL) je dodat TEA (380 mg, 3,76 mmol, 523 µL, 3,0 ekv.),4A molekulska sita (500 mg) i Tf2O (530 mg, 1,88 mmol, 310 µL, 1,5 ekv.) na -40°C, i reakciona smeša je mešana na -40 °C 10 minuta. Nakon završetka, dodata je voda

112

(10 mL) u porcijama na -40 °C, zatim je reakciona smeša zagrejana na 15 ° C i organski sloj je odvojen i ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 10 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=10/1 do 3/1). Proizvod tercbutil(2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2 -il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (400 mg, 616 umol, 49% prinos, 99% čistoća) je dobijen kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 643.

Korak F: terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetilpirolidin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-(trifluorometilsulfoniloksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidina -2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (400 mg, 622 µmol, 1,0 ekv.) u DMAC (4,0 mL) je dodat 2-[(2S)-piperazin-2-il]acetonitril (86,5 mg, 622 µl) , 1,0 ekv.) i DIEA (161 mg, 1,24 mmol, 217 µL, 2,0 ekv.), reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 10 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je sipana u ledenu vodu (10 mL), istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, rastvorena u etil acetatu (15 mL), organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (2 × 15 mL), osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (0,1% FA stanje, 20%-30% MeCN u vodi), dobijeni proizvod je podešen sa NaHCO3 čvrstim na pH-8, zatim koncentrovan, vodeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (2 × 15 mL), organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 20 mL), osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (300 mg, 480 umol, 77% prinos, 99% čistoća) je dobijen kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 618.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,75 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,61 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 6,8 Hz, 1H), 7,47 - 7,42 (m, 1H), 7,33 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,23 (br t,J= 6,2 Hz, 1H), 4,71 - 4,31 (m, 2H), 4,29 - 4,06 (m, 3H), 3,95 - 3,69 (m, 2H), 3,63 - 3,28 (m, 4H), 3,26 - 2,82 (m, 7H), 2,72 - 2,46 (m, 3H), 3H 2,02 - 1,79 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).

Korak G: terc-butil(2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-1 -il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksimetilpirolidin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(3S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (100 mg, 162 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (29,1 mg, 324 µmol , 2,0 ekv.) u etil acetatu (1,5 mL) je dodat TEA (131 mg, 1,29 mmol, 180 µL, 8,0 ekv.) i T3P (309 mg, 485 µmol, 289 µL, 50% portova čistoće, k0). °C, reakciona smeša je mešana na 0°C 1 sat. Nakon završetka, dodata je voda (10 ml), zatim je organski sloj odvojen, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (bazni Al2O3, petrol etar/etil acetat=3/1 do 1/1). Proizvod terc-butil(2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin -1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (110 mg, sirov) je dobijen kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 690.

Korak H: 2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-((S)-pirolidin-2-ilmetoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4- d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-[[7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(3S)-3-(cijanometil)-4-(2-fluoroprop-2-enoil )piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il]oksimetil]pirolidin-1-karboksilat (90,0 mg, 130,40 µmol, 1,0 ekv.) u dihlorometanu ( 0,5 mL) je dodata TFA (770 mg, 6,75 mmol, 0,5 mL, 51,8 ekv.), a reakciona smeša je mešana na 20 °C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana, zatim rastvorena etil acetatom (10 mL), isprana zasićenim vodenim Na2CO3 (1 × 10 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat:metanol=10:1), zatim prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>10 µm; mobilna faza: [voda

(0,225 %FA)-]; B%: 20 %-50 %, 10 min), dobijeni proizvod je koncentrisan i liofilizovan. Naslovljeno jedinjenje 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-((S)-pirolidin-2-ilmetoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (24,7 mg, 38,1 umol, 29% prinos, 98% čistoća, FA) je dobijen kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 590.

112

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 1H), 7,54 - 7,50 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 -7,17 (m, 1H), 5,53-5,32 (m, 1H), 5,25 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,89 - 4,52 (m, 1H), 4,64 - 4,45 (m, 2H), 4,42-4,23 (m, 2H), 4,17 - 3,92 (m, 4H), 3,89 - 3,78 (m, 2H, 3,51 3,05 - 3,42 - 3,35 (m, 2H) (M, 5H), 2,95 - 2,73 (m, 2H), 2,62 - 2,51 (m, 1H), 2,21 - 1,84 (m, 4H).

PRIMER 572

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-oksopirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-

112

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu (5S)-5-(hidroksimetil)-1-metilpirolidin-2-on (556 mg, 4,30 mmol, 5,00 ekv.) u THF (20,0 mL) je dodat t-BuONa (827 mg, 8,60 mmol) , 10,0 ekv.) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 0°C 30 minuta, a zatim je dodat terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (500 mg, 860 umol, 1,00 ekv.). Smeša je zagrejana na 15°C i mešana 0,5 h.

Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (50,0 mL) i isprana vodom (30 mL × 2), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% TFA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralisane zasićenim rastvorom NaHCO3 (10,0 mL) i ekstrahovale etil acetatom (50,0 mL ×3). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. jedinjenje terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-oksopirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (125 mg, 193 umol, 22% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,75 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,61 (dd,J= 4,8, 8,0 Hz, 1H), 7,52 (dd,J= 0,8, 7,2 Hz, 1H), 7,45 (q,J= 8,0 Hz, 1H), 7,37 - 7,28 (m, 1H), 7,23 (br d,J= 7,6 Hz, 1H), 4,70 - 4,31 (m, 3H), 4,10 - 3,82 (m, 4H), 3,65 -3,51 (m, 1H), 3,46 - 2,99 (m, 5H), 2,98 - 2,82 (m, 3H), 2,79 - 2,37 (m, 5H), 2,22 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 1,93 - 1,59 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 155 µmol, 1,00 ekv.) u dioksanu (1,50 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 967 uL, 25.0 ekv.). Smeša je mešana na 20°C 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je rastvoren u etil acetatu (10,0 mL) i bazifikovan do pH = 8 zasićenim rastvorom NaHCO3 (3,00 mL) i ekstrahovan etil acetatom (5,00 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10,0 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak.

112

Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80,0 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 546.

Korak C: 2-((2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (60,0 mg, 110 µmol, 1,00 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina ( 19,8 mg, 220 µmol, 2,00 ek) u EA (1 mL) je dodat TEA (89,0 mg, 879 µmol, 122 µL, 8,00 ek), T3P (210 mg, 330 µmol, 196 µmol, 196 µmol, 196 µmol, etil acetat 3,00 ekv.) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 0°C 30 min. Reakciona smeša je razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (10 mL × 1) i slanim rastvorom (10 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Kstimate C18150 × 25 mm × 5 µm; Mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 35 %-65 %, 10 min). Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (11,3 mg, 18,2 umol, 17% prinos 99% čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 618.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,77 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,63 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 6,8 Hz, 1H), 7,46 (td,J= 8,0, 10,4 Hz, 1H), 7,35 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27-7,20 (m, 1H), 5,52-5,34 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,92 (br, 1H), 4,52 - 4,31 (m, 3H), 4,27 - 3,77 (m, 5H), 3,61 (br d,J= 10,8 Hz, 1H), 3,46 (br d,J= 12,0 Hz, 1H), 3,36-2,94 (m, 5H), 2,92 (s, 1H), 3H), 2,90 - 2,79 (m, 1H), 2,64 - 2,48 (m, 2H), 2,41 - 2,31 (m, 1H), 2,28-2,17 (m, 1H), 2,05 - 1,95 (m, 1H).

PRIMER 573

112

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (280 mg, 482 µmol, 1 ekv.) i (4R,5R)-5-(hidroksimetil)-1-metil-4-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin- 2-on (144 mg, 626 µmol, 1,3 ekv.) u toluenu (6 mL) je dodat t-BuONa (92,6 mg, 964 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 10 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 10 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5 -okso-3-tetrahidropiran-2-iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

112

dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (280 mg, 345 umol, 72% prinos, 92% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 746.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,76 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,66 -7,57 (m, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,50 - 7,41 (m, 1H), 7,37 - 7,31 (m, 1H), 7,27 - 7,18 (M, 1H), 4,88 - 4,69 (m, 1H), 4,68 - 4,47 (m, 4H), 4,46 - 4,35 (m, 1H), 4,11 -3,74 (m, 6H), 3,65 - 3,48 (m, 2H), 3,44 - 2,99 (m, 5H), 2,96 (d,J= 2,8, 8,4 Hz, 3H), 2,91 (2,51 -) 1,81 - 1,64 (m, 2H), 1,52 (s, 13H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihvdro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-1-metil-5-okso-3-tetrahidropiran-2- iloksi-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 268 µmol , 1 ekv.) u DCM (0,15 mL) je dodat TFA (458 mg, 4,02 mmol, 298 µL, 15 ekv.). Smeša je mešana na 20°C 1 sat. Po završetku, smeša je razblažena sa DCM (5 mL) i bazifikovana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do pH = 8.

Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (5 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-3-hidroksi -1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg , 230 umol, 86% prinos, 86% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 562.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil-5-okso-pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 267 umol, 1 ekv.), TEA (81,0 mg, 801 umol, 111 uL, 3 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (48,1 mg, 534 umol, 2 ekv.) u EtOAc (4 mL) dodat je T3P (255 mg, 400 umol, 238 uL, 5 % čistoće u EtOAc, 1,5 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) i

11

ekstrahovana sa EtOAc (2 × 10 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 do 20/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Xtimate C18

150<∗>25 mm<∗>5 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 33 %-63 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,3R)-3-hidroksi-1-metil -5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-SH pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2 -il]acetonitril (22,0 mg, 34,5 umol, 13% prinos, 99,6% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 634.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,77 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,64 (dd,J= 4,4, 8,0 Hz, 1H), 7,54 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,46 (dt,J= 6,0, 8,0 Hz, 1H), 7,35 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,21 (m, 1H), 5,54 - 5,33 (m, 1H), 5,27 (dd,J= 2,8, 17,2 Hz, 1H), 4,88 (dd,J= 1,6, 12,0 Hz, 1H), 4,80 (DD,J= 6,0, 12,0 Hz, 1H), 4,64 - 4,48 (m, 2H), 4,47 - 3,94 (m, 4H), 3,91 - 3,65 (m, 3H), 3,64 - 3,43 (m, 2H), 3,37 - 2,98 (m, 4H), 2,91 (d,J= 7,6 Hz, 3H), 2,89 - 2,76 (1H), 1H, 1H 2,70 - 2,53 (m, 2H), 2,46 (t,J= 5,2, 16,4 Hz, 1H).

PRIMER 574

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

11 1

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (275 mg, 2,06 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (12,0 mL) je dodat t-BuONa (198 mg , 2,06 mmol, 2,0 ekv) u porcijama na 0°C, nakon mešanja na 0°C tokom 0,5 sata, terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6, Dodat je 8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,03 mmol, 1,0 ekv.) i mešan na 0°C tokom 0,5 sat. Nakon završetka, dodata je voda (15,0 mL), dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan.

Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1% TFA u vodi, 30%-50% MeCN), dobijeni proizvod je podešen sa NaHCO3 čvrstim na pH=8, zatim koncentrovan, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom ( 2 × 15 mL), organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (20,0 mL), zatim osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (510 mg, 769 µmol, 75% prinos, 98% čistoće) je dobija se kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 650.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.80 - 7.72 (m, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.29 - 5.07 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 2H), 4.30 - 4.17 (m, 1H), 4.06 - 3.76 (m, 3H), 3.65 - 3.47 (m, 2H), 3.41 - 2.86 (m, 7H), 2.84 - 2.45 (m, 7H), 2.40 - 2.24 (m, 1H), 2.04 - 1.86 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-

11 2

il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (500 mg, 769 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (5,0) mL) je dodat 4N HCl•dioksan (5.0 mL), reakciona smeša je mešana na 15 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana, a čvrsta supstanca je rastvorena sa dihlorometanom (15,0 mL), organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 15 mL), osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo 2-[(2S )-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro- 5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (360 mg, 635 umol, 85% prinos, 97% čistoća) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 550.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (120 mg, 218 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (39,3 mg, 436 µmol, 2,0 ekv.) u etil acetatu (1,2 mL) je dodat TEA (177 mg, 1,75 mmol, 243 µL, 8,0 ekv.) i T3P (416 mg, 654 µmol, 38 µmol, čistoća 38) 3,0 ekv.) na 0°C, reakciona smeša je mešana na 0°C 1 sat. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodat zasićeni rastvor soli (10,0 mL), zatim ekstrahovan etil acetatom (2 × 10 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (bazni Al2O3, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat/metanol=20/1), sirovi proizvod je ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150<∗>255 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 45 %-75 %, 10 min]; B%: 45 %-75 %, 10 min), dobijeni proizvod je koncentrovan i liofilizovan. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (50,9 mg, 81,0 µmol, 37 % prinosa, 99% čistoće) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 622.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H),

11

7,26 - 7,18 (m, 1H), 5,55 - 5,33 (m, 1H), 5,30 - 5,07 (m, 2H), 5,01 - 4,66 (m, 1H), 4,53 - 4,35 (m, 2H), 4,29 - 3,98 (m, 3H), 3,96 - 3,78 (m, 2H), 3,73 - 3,33 - - (h) 3,32 - 2,98 (m, 5H), 2,94 - 2,71 (m, 2H), 2,68 - 2,53 (m, 2H), 2,51 (d,J= 2,8 Hz, 3H), 2,39 - 2,23 (m, 1H), 2,08 - 1,87 (m, 1H).

PRIMER 575

2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (275 mg, 2,06 mmol, 2,0 ekv.) u toluenu (12,0 mL) dodat je t-BuONa (198 mg, 2,06 mmol, 2,0 ekv.) u porcijama na 0°C, nakon mešanja na 0°C tokom 0,5 sata, terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-

11 4

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,03 mmol, 1,0 ekv.) je ddoat i mešan na 0°C tokom 0,5 sati. Nakon završetka, dodata je voda (15,0 mL), dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1% TFA u vodi, 30%-50% MeCN), dobijeni proizvod je podešen sa čvrstim NaHC03 na pH=8, zatim koncentrovan, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom ( 2 × 15 mL), organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (20,0 mL), zatim osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (510 mg, 769 µmol, 75% prinos, 98% čistoće) je dobija se kao svetlo žuta čvrsta supstanca.. LCMS [ESI, M+1]: 632.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,75 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,61 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,48 - 7,39 (m, 1H), 7,33 (T,J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,15 (m, 1H), 4,67 - 4,55 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 2H), 4,08 - 3,75 (m, 4H), 3,65 - 3,50 (m, 1H), 3,39 - 3,02 (m, 5H), 3,00 - 2,86 (1H), 1H 2,81 - 2,64 (m, 4H), 2,62 - 2,46 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,15 - 2,05 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (400 mg, 632 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (2,0 mL) je dodat HCl•dioksan ( 4,0 M, 2,0 mL, 12,6 ekv.). Smeša je mešana na 15°C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10,0 mL) na pH~7, a zatim ekstrahovan etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (240 mg, 451 µmol, 71% prinos) kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 532.

11

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80,0 mg, 150 µmol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (27,1 mg, 301 µmol, 2,0 ekv) i TEA (122 mg, 1,20 mmol, 167 µL, 8,0 ekv.) u etil acetatu (2,0 mL) je dodat T3P (287 mg, 451 umol, 268 µL, 50% čistoće u etil acetatu, 3).

Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa HCl (12,0 M, 60,0 uL u 2,0 mL vode). Smeša je podešena na pH ~ 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150<∗>25<∗>10 µm; mobilna faza: [voda (0,225 %FA)-]; B%: 25 %-45 %, 8 min), zatim koncentrovano. Vodeni sloj je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 na pH ~ 8 i ekstrahovan etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1 -metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il] acetonitril (35,9 mg, 57,5 umol, 38% prinos, 96,8% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 604.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,78 - 7,73 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 8,0 Hz, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 5,54 - 5,32 (m, 1H), 5,30 - 5,21 (m, 1H), 5,04 - 4,75 (m, 1H), 4,48 - 4,36 (m, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 2H), 4,16 - 3,96 (m, 2H), 3,89 - 3,75 (1H), 1H, 1H (1H), 1H, 1H, 1H, 1H), 1H, 3,64 - 3,55 (m, 1H), 3,51 - 3,32 (m, 1H), 3,30 -2,98 (m, 4H), 2,96 - 2,67 (m, 4H), 2,66 - 2,46 (m, 4H), 2,37 (d,J= 2,0 Hz, 2,14 -2,06 (m, 1H), 1,70 - 1,57 (m, 1H).

PRIMER 576

11

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (300 mg, 516 µmol, 1 ekv.) u toluenu (5,00 mL) je dodat t-BuONa (124 mg, 1,29 mmol, 2,5 ekv.) i [(2R,4R )-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (149 mg, 1,03 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 1 sat. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je

11

prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/metanol = 100/1 do 10:1). terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 265 µmol, 51% prinos, 88% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 662.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 302 µmol, 1 ekv.) u dioksanu (1,00 mL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 1,13 mL, 1,00 ekv.). Smeša je mešana na 20°C 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom i razblažena vodom (20 mL). Smeša je podešena na pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak.2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (110 mg, 154,60 µmol, 70% prinos, 79% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i koristi se sledeći korak bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 562.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (110 mg, 195 µmol, 1 ekv.) u etil acetatu (1,00 mL) je dodata 2-fluoroprop-2-enska kiselina (35,3 mg, 391 µmol, 2 ekv.), T3P (374 mg, 587 µmol, 349 µL, 50% čistoće, 3 ekv.) i TEA (158 mg, 1,57 µmol, 2 ekv.) 8 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, etil acetat/metanol = 100/1 do 10/1) i

11

dalje prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150<∗>255 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 45 % - 75 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (17 mg, 26,7 µmol, 14 % prinosa, 99,8% čistoće) se dobija kao bela guma. LCMS [ESI, M+1]: 634.

<1>H NMR (400MHz, hloroform-d) δ = 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.42 (d, J = 49.2 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.54 - 4.34 (m, 2H), 4.27 - 4.00 (m, 3H), 3.96 - 3.77 (m, 2H), 3.67 - 3.54 (m, 1H), 3.51 - 3.37 (m, 1H), 3.37 - 2.96 (m, 9H), 2.95 - 2.64 (m, 3H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.52 - 2.27 (m, 5H), 1.91 - 1.74 (m, 1H).

PRIMER 577

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-

11

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metanola (300 mg, 2,06 mmol, 2,0 ekv.) i t-BuONa (149 mg, 1,55 mmol, 1,50 ekv.) u toluenu (7,0 mL) je dodat terc-butil(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]-2-(cijanometil-l)piperazin-1-karboksilat (600 mg, 1,03 mmol, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, dodata je voda (20,0 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN) da bi se dobilo jedinjenje terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2 -[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2 -(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (450 mg, 652 umol, 63% prinos, 96% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 662.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,61 (t,J= 7,8 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,48 - 7,40 (m, 1H), 7,35 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,27 - 7,16 (m, 1H), 4,63 - 4,56 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H), 4,23 - 4,15 (m, 1H), 4,12 - 3,91 (m, 4H), 3,90 - 3,75 (m, 1H), 3,65 - 3,53 (m, 1H), 3,50 - 3,39 (m, 1H), 1H (1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H 3,38 - 3,32 (m, 1H), 3,30 (d,J= 2,0 Hz, 3H), 3,28 - 3,06 (m, 3H), 3,02 - 2,85 (m, 2H), 2,83 - 2,64 (m, 2H), 2,62 - 2,52 (m, 1H), 2,47 (d,J= 2,8 Hz, 3H), 2,35 - 2,29 (m, 1H), 1H 2,11 - 2,06 (m, 1H), 2,03 - 1,91 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-Hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (450 mg, 680 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (4,0) mL) je dodat HCl•dioksan (4 M, 4,0 mL, 23,6 ekv.). Smeša je mešana na 15°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10,0 mL) na pH~7, a zatim ekstrahovan etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1 -metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-

114

il]piperazin-2-il]acetonitril (300 mg, sirov) kao žuta čvrsta supstanca koji je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 562.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90,0 mg, 160 µmol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (28,8 mg, 320 µmol, 2,0 ekv.) i TEA (130 mg, 1,28 mmol, 178 µL, 8,0 ek) u EA (3,0 mL) je dodat T3P (306 mg, 480 µmol, 286 µmol, 286 µml). ek). Smeša je mešana na 0°C 1 sat. Nakon završetka, dodata je voda (10,0 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150<∗>255 µ;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-ACN]; B%: 50 %-80 %, 10 min) 50%-80%,10 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1 -metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2- il]acetonitril (32,0 mg, 50,3 umol, 31% prinos, 99% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 635.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 1H), 5,54 - 5,32 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,10 - 4,70 (m, 1H), 4,52 - 4,34 (m, 2H), 4,27 - 3,80 (m, 6H), 3,69 - 3,54 (m, 1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H 3,50 - 3,37 (m, 2H), 3,30 (d,J= 1,6 Hz, 3H), 3,28 - 3,02 (m, 4H), 2,98 - 2,68 (m, 3H), 2,65 - 2,53 (m, 1H), 2,47 (d,J= 2,4 Hz, 2,37 - 2,28 (m, 1H), 2,13 - 2,03 (m, 1H), 1H 2,02 - 1,90 (m, 1H).

PRIMER 578

2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 840 µmol, 1,00 ekv) u toluenu (10,0 mL) je dodat t-BuONa (202 mg, 2,10 mmol, 2,50 ekv.) i [-2S, 4R 4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (224 mg, 1,68 mmol, 2,00 ekv.). Posle mešanja na 0°C tokom 1 sata, reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/metanol = 100/1 do 10/1). benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (340 mg, 502 µmol, 60% prinos, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 664.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 301 µmol, 1,00 ekv.) u MeOH (15,0 mL) je dodat Pd/C (30,0 mg, 10% čistoće) i NH3/MeOH (5,00 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 0,5 sata. Katalizator je filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom.2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (159 mg, 294 µmol, 98% prinos, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i koristi se sledeći korak direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 530.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (140 mg, 264 µmol, 1,00 ekv.) i (E)-4-fluorobut-2 -enska kiselina (82,5 mg, 793 µmol, 3,00 ekv.) u etil acetatu (2,00 mL) je dodat TEA (160 mg, 1,59 mmol, 220 µL, 6,00 ekv.) i T3P (505 mg, 793 µL, 793 µL, 47 µl% čistoća, 3,00 ekv.) na -70 °C. Smeša je mešana na -70°C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena sa HCl (12 N, 130 µL u 2 mL vode) na -70 °C. Smeša je zagrejana do 0°C i bazifikovana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 do pH = 8 i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC

114

(kolona: Waters Xbridge 150<∗>255 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v) - ACN]; B%: 45 % - 75 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2- il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (34,5 mg, 55,8 umol, 21% prinos, 99,7% čistoća) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 616.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,74 - 7,62 (m, 2H), 7,46 - 7,31 (m, 2H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 7,09 - 6,93 (m, 1H), 6,59 (d,J= 15,2 Hz, 1H), 5,30 - 4,51 (m, 4H), 4,48 - 4,35 (m, 1H), 1H 4,30 - 3,66 (m, 6H), 3,63 - 3,34 (m, 3H), 3,24 -2,96 (m, 5H), 2,92 (s, 3H), 2,87 - 2,53 (m, 4H), 2,50 (d,J= 4,4 Hz, 3H), 2,40 - 2,22 (m, 1H), 2,10 - 1,86 (m, 1H) (h, 3H).

PRIMER 579

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d],pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 µmol, 1 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (242 mg, 2,52 mmol, 3 ekv.) i [(2R)-1- metilpirolidin-2-il]metanol (194 mg, 1,68 mmol, 2 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, Etil acetat/MeOH = 100/1 do 10/1). benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 338 umol, 40% prinos, 91% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240

114

mg, 372 µmol, 1 ekv.) u MeOH (15 mL) je dodat Pd/C (30 mg) , 10% čistoće) i NH3•MeOH (5 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom.2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 352 umol, 95% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 195 umol, 1 ekv.) i (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (40,7 mg , 391 umol, 2 ek) u EtOAc (2 mL) dodat je TEA (79,1 mg, 782 umol, 109 uL, 4 ek) i T3P (249 mg, 391 umol, 232 uL, 50% čistoće u Et2eAc) na -70°C. Smeša je mešana na -70°C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena sa HCl (60 uL (12 M) u 2 mL vode). Smeši je podešen pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 25 % - 45 %, 7,8 min) i dalje pročišćeno prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*25 5u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 52 %-79 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (16,6 mg, 27,7 umol, 14% prinos, 99,6 % čistoće) dobija se kao žuta guma. LCMS [ESI, M+1]: 598.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,72 - 7,62 (m, 2H), 7,45 - 7,32 (m, 2H), 7,27 - 7,16 (m, 2H), 7,07 - 6,93 (m, 1H), 6,60 (d,J= 15,6 Hz, 1H), 5,26 - 4,51 (m, 3H), 4,39 (s, 1H), 1H), 1H 4,31 - 3,33 (m, 9H), 3,27 - 2,97 (m, 5H), 2,92 (s,

114

3H), 2,87 - 2,76 (m, 1H), 2,65 (m, 2H), 2,49 (br d,J=4,6 Hz, 3H), 2,29 (m, 1H), 2,15 - 1,96 (m, 1H), 1,92 - 1,67 (m, 1H).

PRIMER 580

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1 metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 µmol, 1 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (242 mg, 2,52 mmol, 3 ekv.) i [(2R)-1- metilpirolidin-2-il]metanol (194 mg, 1,68 mmol, 2 ekv.) na 0°C.

114

Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/MeOH = 100/1 do 10/1). benzil (2s)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 338 umol, 40% prinos, 91% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 646.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 372 µmol, 1 ekv.) u MeOH (15 mL) je dodat Pd/C (30 mg) , 10% čistoće) i NH3•MeOH (5 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Katalizator je filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom.2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 352 umol, 95% prinos) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 195 µmol, 1 ekv.) i (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (40,7 mg , 391 umol, 2 ekv.) u EtOAc (2 mL) dodat je TEA (79,1 mg, 782 µmol, 109 µL, 4 ekv.) i T3P (249 mg, 391 µmol, 232 µL, 50 µL, 50% čistoće) na -70°C. Smeša je mešana na -70°C 1 sat. Reakciona smeša je ugašena sa HCl (60 uL (12 M) u 2 mL vode). Smeši je podešen pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod

114

sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Luna C18150 25 5 µ; mobilna faza: [voda (0,225% FA) - MeCN]; B%: 25% - 45%, 7,8 min) i dalje proćišćeno prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150<∗>255 µ; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v) - MeCN]; B%: 52 %-79 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane. Naslovljeno jedinjenje 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (16,6 mg, 27,7 µmol, 14% prinos, 99,6 % čistoće) dobija se kao žuta guma. LCMS [ESI, M+1]: 628.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,73 - 7,62 (m, 2H), 7,45 - 7,32 (m, 2H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 7,08 - 6,93 (m, 1H), 6,60 (br d,J= 16,0 Hz, 1H), 5,26 -4,54 (m, 3H), 4,40 (m, 1H), 1H 4,31 - 3,69 (m, 7H), 3,61 - 3,36 (m, 3H), 3,30 (d,J= 2,0 Hz, 3H), 3,24 - 2,96 (m, 4H), 2,92 (s, 3H), 2,91 - 2,55 (m, 4H), 2,47 (d,J= 4,8 Hz, 3H), 2,37 - 2,26 (m, 1H), 1H 2,13 - 2,03 (m, 1H), 2,01 - 1,89 (m, 1H).

PRIMER 581

2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin- 3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

114

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il] metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (450 mg, 757 umol, 1 ekv.) i [(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metanol (131 mg, 1,13 mmol, 1,5 ekv.) u toluenu (9 mL) je dodat t-BuONa (145 mg, 1,51 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 10 minuta. Po završetku, dodata je voda (15 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (30 mL × 2). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin -3-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 455 µmol, 60% prinos, 98% čistoće) kao ružičasta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,73 - 7,60 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 5H), 7,37 - 7,30 (m, 2H), 7,26 - 7,16 (m, 2H), 5,21 (s, 2H), 4,68 (br, (s, 2H), 1H), 4,30 - 3,78 (m, 7H), 3,59 - 3,29 (m, 2H), 3,25 - 2,94 (m, 4H), 2,91 (s, 3H), 2,82 -2,62 (m, 4H), 2,62 - 2,53 (m, 2H), 2,53 - 2,42 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (s, - (s) 1H), 1,66 - 1,51 (m, 1H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U

11

rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 465 µmol, 1 ekv.) u MeOH (4 mL) je dodat Pd/C (150 mg) , 10% čistoće), NH3/MeOH (4 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metil pirolidin -3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (210 mg, 369 µmol, 80% prinos, 90% čistoća) kao ružičasta čvrsta supstanca koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 512.

Korak C: 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin- 3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (70 mg, 137 µmol, 1 ekv.), TEA (41,5 mg, 410 mmol, 57,1 mL, 3 ekv.) i (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (28,5 mg, 274 µmol, 2 ekv.) u EtOAc (2 mL) je dodat T3P (131 mg, 205 µmol, 122 µL, 50% čistoće u EtOAc k, 1. na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena sa 1 M HCl (0,4 mL) na -40 °C i mešana dok ne ostane led. Odvojeni vodeni sloj je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona:

Phenomenex Synergi C18150<∗>30 mm<∗>4 µm; mobilna faza: [voda (0,225 %FA)-MeCN]; B%: 20 %-50 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2 -[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (13,7 mg , 20,8 umol, 15% prinos, 97,7% čistoća, FA) kao siva čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 598.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,66 - 7,59 (m, 1H), 7,59 - 7,51 (m, 1H), 7,32 (td,J= 7,6, 11,6 Hz, 1H), 7,26 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,19 - 7,07 (m, 2H), 7,00 - 6,83 (M, 1H), 6,52 (br d,J= 14,8 Hz, 1H), 5,21 - 4,31 (m, 3H), 4,29 - 3,96 (m, 3H), 3,94 - 3,53 (m, 7H), 3,45 (br d,J= 6,8 Hz, 3,15 - 2,88 (m, 7H), 2,84 (s, 3H), 2,81 -2,74 (M, 1H), 2,61 - 2,47 (m, 2H), 2,18 (br, 1H), 1,85 (br, 1H).

11 1

PRIMER 582

2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 327 µmol, 1,0 ekv.) i (E)-4-fluorobut -2-enska kiselina (102 mg, 982 µmol, 3,0 ekv.) je dodat TEA (265 mg, 2,62 mmol, 364 µL, 8,0 ekv.) i T3P (833 mg, 1,31 mmol, 778 µL, k) čistoća 50%. , reakciona smeša je mešana na -65 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa 2 N HCl do pH~7 na -65 °C, zatim je organski sloj odvojen, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom (bazni Al2O3, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil

11 2

acetat/metanol=20/1), sirovi proizvod je ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150<∗>25 mm<∗>5 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-MeCN]; B%: 50 %-80 %, 8 min), dobijeni proizvod je koncentrovan i liofilizovan. Naslovljeno jedinjenje 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril (72,2 mg, 113 µmol, 34% prinos, 99% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 637.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,79 - 7,73 (m, 1H), 7,62 (t,J= 7,0 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 7,08 - 6,93 (m, 1H), 6,59 (br d,J= 14,8 Hz, 1H), 5,29 - 5,03 (m, 3H), 4,54 - 4,52 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H), 4,30 - 3,78 (m, 5H), 3,76 - 3,35 (m, 3H), 3,32 - 2,96 (M, 5H), 2,91 - 2,54 (m, 4H), 2,51 (d,J= 3,2 Hz, 3H), 2,39 - 2,23 (m, 1H), 2,08 - 1,86 (m, 1H).

PRIMER 583

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

11

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 267 µmol, 1,0 ekv.), (E)-4-fluorobut -2-enska kiselina (55,6 mg, 534 µmol, 2,0 ekv.) i TEA (108 mg, 1,07 mmol, 149 µL,

4,0 ekv.) u etil acetatu (4,0 mL) je dodat T3P (340 mg, 534 µL, 534 µL, 534 µL 50% čistoće, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na -70°C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa HCl (12 M, 60,0 µL u 2,0 mL vode). Smeša je podešena na pH-8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (3 × 20,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom soli (60,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150*25 mm*5um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-MeCN]; B%: 50 %-80 %, 8 min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S,4R)-4-metoksi-1 -metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil] piperazin-2-il]acetonitril (39,6 mg, 60,9 umol, 23% prinos, 99% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 619.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,49 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 8,0 Hz, 1H), 7,27 - 7,17 (m, 1H), 7,08 - 6,94 (m, 1H), 6,67 - 6,54 (m, 1H), 5,25 - 5,03 (m, 2H), 4,80 - 4,60 (m, 1H), 4,48 - 4,34 (m, 2H), 4,21 - 3,77 (m, 5H), 3,65 - 3,55 (1H), -(1H), 1H 3,51 - 3,37 (m, 1H), 3,31 - 2,97 (m, 5H), 2,88 - 2,54 (m, 4H), 2,48 (d,J= 3,6 Hz, 3H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,11 - 2,01 (m, 1H), 1,90 - 1,69 (m, 3H).

11 4

PRIMER 584

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 188 µmol, 1,0 ekv.), (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (39,1 mg , 376 µmol, 2,0 ekv.) i TEA (95,1 mg, 940 µmol, 131 µL, 5,0 ekv.) u etil acetatu (3,0 mL) je dodat T3P (179 mg, 282 µmol, 168 µmol, 168 µL % 0,01). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa HCl (12 M, 5,0 ekv.) na -40°C. Smeša je podešena na pH~8 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18 150<∗>25<∗>10 µm; mobilna faza: [voda (0,225 %FA)-MeCN]; B%: 30 %-50 %, 8

11

min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(3R)-1-metilpirolidin-3- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (15,7 mg, 24,9 µmol, 13% prinos, 98% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 619.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,65 - 7,59 (m, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 1H), 7,48 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,26 -7,18 (m, 1H), 7,08 - 6,92 (m, 1H), 6,74 - 6,46 (m, 1H), 5,25 - 4,95 (m, 3H), 4,75 -4,55 (m, 1H), 4,47 - 4,36 (m, 1H), 4,35 - 4,26 (m, 2H), 4,14 - 3,92 (m, 2H), 3,91 -3,76 3,53 (m, 1H), 3,643,35 - 3,55 (1H) (1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 3,33 - 3,04 (m, 7H), 3,03 - 2,72 (m, 4H), 2,67 (d,J= 4,0 Hz, 3H), 2,64 -2,51 (m, 1H), 2,31 - 2,19 (m, 1H), 1,98 - 1,85 (m, 1H).

PRIMER 585

2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-hloronaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

11

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu 3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il]propan-1-ola (150 mg, 954 µmol, 1,85 ekv.) u toluenu (3,0 mL) je dodat t-BuONa (99,2 mg, 1,03 mmol, 2,0 ekv.) u porcijama na 0°C, nakon mešanja na 0°C tokom 0,5 sata, terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1 -naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (300 mg, 516 µmol, 1,0 ekv. ) je dodat u smešu, i mešan na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, dodata je voda (15 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1% TFA u vodi, 30%-50% MeCN), dobijeni proizvod je podešen sa NaHCO3 čvrstim na pH-8, zatim koncentrovan, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom ( 2 × 15 mL), organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (1 × 20 mL), osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (180 mg, 267 µmol, 52% prinos, 100% čistoće) se dobija kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 674.

11

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,61 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,48 - 7,40 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 1H), 4,66 - 4,54 (m, 1H), 4,50 - 4,29 (m, 4H), 4,08 - 3,77 (m, 5H), 3,65 - 3,54 (m, 2H), 3,51 - 3,44 (m, 1H), 3,39 - 3,31 (m, 1H), 3,29 - 3,02 (m, 1H), -- (h, 1H 3,00 - 2,87 (m, 2H), 2,84 - 2,46 (m, 6H), 1,99 - 1,82 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5- il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 222 µmol, 1,0 ek) u dioksanu (1,0 mL) je dodat 4 N HCl•dioksan (1,0 mL), reakciona smeša je mešana na 15 °C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana, dodat dihlorometan (10 mL), zatim isprana zasićenim vodenim Na2CO3 (1 × 10 mL), organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Proizvod 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 172 µmol, 77% prinos, 98% čistoća ) dobija se kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]: 574.

Korak C: 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-hloronaftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[3-[(1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1] heptan-5-il]propoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90,0 mg, 157 µmol, 1,0 ekv.) i ( E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (48,9 mg, 470 µmol, 3,0 ek) u etil acetatu (1,0 mL) je dodat TEA (127 mg, 1,25 mmol, 175 µL, 8,0 ek) i T3P (399 mg, 627 µmol, 373 µL, 50% čistoće, 4,0 ekv.) u porcijama na -65 °C, reakciona smeša je mešana na -65 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa 2 N HCl do pH~7 na -65 °C, zatim je organski sloj odvojen, vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL), kombinovani organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom (bazni Al2O3, petrol etar/etil acetat=3/1 do etil acetat/metanol=20/1), sirovi proizvod je ponovo prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150<∗>25 mm<∗>5 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid

11

v/v)-MeCN]; B%: 44 %-74 %, 8 min), dobijeni proizvod je koncentrovan i liofilizovan. Naslovljeno jedinjenje 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)propoksi)-7-(8-) hloronaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il )acetonitril (10,6 mg, 16,0 umol, 10% prinos, 99% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 660.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,76 (br d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,62 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 1H), 7,34 (T,J= 7,8 Hz, 1H), 7,26 - 7,18 (m, 1H), 7,09 - 6,93 (m, 1H), 6,60 (br d,J= 14,0 Hz, 1H), 5,26 - 5,01 (m, 2H), 4,76 - 7,54 (m, 1H), 4,52 - 4,29 (m, 4H), 4,19 - 3,97 (m, 3H) 3,95 - 3,69 (m, 2H), 3,66 - 3,37 (m, 4H), 3,33 - 2,99 (m, 4H), 2,97 - 2,67 (m, 5H), 2,65 - 2,48 (m, 2H), 2,01 - 1,90 (m, 2H), 1,90 - 1,82 (m, 1H), 1,76 - 1,69 (m, 1H).

PRIMER 586

2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

11

Korak A: terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (99,1 mg, 860 µmol, 2,50 ekv.) u toluenu (5,0 mL) je dodat t-BuONa (66,2 mg, 688 µmol, 2,0 ek tercbutil (2,S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] -2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 344 µmol, 1,0 ekv.) u porcijama. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, dodata je voda (20,0 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-60 % MeCN) da bi se dobilo jedinjenje terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2 -[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 313 umol, 91% prinos, 99% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca.. LCMS [ESI, M+1]: 632.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7,77 - 7,73 (m, 1H), 7,61 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,54 - 7,50 (m, 1H), 7,49 - 7,39 (m, 1H), 7,33 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,27 -7,16 (m, 1H), 4,67 - 4,56 (m, 1H), 4,47 - 4,35 (m, 2H), 4,23 - 4,15 (m, 1H), 4,09 -3,89 (m, 3H), 3,88 - 3,77 (m, 1H), 3,63 - 3,53 (m, 1H), 3,41 - 3,30 (m, 1H), 3,22 -3,03 (m, 4H), 3,01 - 2,85 (1H), 2,74 (1H), 2,67 - (1H) (1H), 1H 2,63 - 2,51 (m, 2H),

11

2,49 (d,J= 4,4 Hz, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 1H), 2,11 - 2,05 (m, 1H), 1,90 - 1,74 (m, 3H), 1,52 (s, 9H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 316 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (3,0 mL) je dodat HCl•dioksan ( 4,0 M, 3,0 mL, 37,9 ekv.). Smeša je mešana na 15°C tokom 0,5 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je podešen zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (10,0 mL) na pH-7, a zatim ekstrahovan etil acetatom (3 × 10,0 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2 -il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, sirov) kao žuta čvrsta supstanca. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.. LCMS [ESI, M+1]: 532.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 188 µmol, 1,0 ekv.) i (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (39,1 mg , 376 µmol, 2,0 ekv.) u etil acetatu (2,0 mL) dodat je TEA (76,1 mg, 752 µmol, 105 µL, 4,0 ekv.) i T3P (239 mg, 376 µmol, 224 µmol, 224 µL, 224 µL, 224 µL). -70°C. Smeša je mešana na -70°C 1 sat. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa HCl (12,0 M, 60,0 uL u 2,0 mL vode). Smeša je podešena na pH = 8 sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovana etil acetatom (3 × 10,0 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30,0 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150<∗>25 mm<∗>5 µm; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijev hidroksid v/v)-MeCN]; B%: 598 %-89 %, 8min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-[(2S)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-

11 1

fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril ( 13,97 mg, 22,2 umol, 12% prinos, 98,4% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 619.

PRIMER 587

N-((E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-en-1-il)-N-metilacetamid

Korak A: Etil (E)-4-(N-metilacetamido)but-2-enoat: Etil (E)-4-acetamidobut-2-enoat (140 mg, 0,818 mmol) je razblažen sa DMF (4 mL), a zatim je dodat NaH (21,6 mg, 0,900 mmol) i MeI (56,2 ul, 0,900 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum

11 2

bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10-70% etil acetat/heksanom da bi se dobio etil (E)-4-(N-metilacetamido)but-2-enoat (120 mg, 0,648 mmol, 79,2 % prinos).

Korak B: (E)-4-(N-metilacetamido)but-2-enska kiselina: Etil (E)-4-(N-metilacetamido)but-2-enoat (20 mg, 0,11 mmol) je razblažen metanolom (1 mL), a zatim je dodat NaOH (270 ul, 0,54 mmol). Posle mešanja tokom 4 sata, reakcija je razblažena sa 2N HCl do pH ~4 i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom. Etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo (E)-4-(N-metilacetamido)but-2-enska kiselina (15 mg, 0,095 mmol, 88 % prinos).

Korak C: N-((E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il) )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oksobut-2-en-1-il)-N-metilacetamid: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (20 mg, 0,039 mmol) je razblažen sa DMF, a zatim je dodat DIEA (13,65 ul, 0,07817 mmol). Dodata je (E)-4-(N-metilacetamido)but-2-enska kiselina (9,83 mg, 0,0625 mmol), a zatim je dodat ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (39,6 ul, 0,0664 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio N-((E)-4-((S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen). -1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1 -il)-4-oksobut-2-en-1-il)-N-metilacetamid (2,1 mg, 0,0032 mmol, 8,2 % prinos). ESI+APCI MS m/z 651,4 [M+H]<+>.

PRIMER 588

11

2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: Benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pinmidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il)piperazin-1-karboksilat (140 mg, 0,277 mmol), 1,8-dibromonaftalen (238 mg, 0,831 mmol), Pd2(dba)3 (25,4 mg, 0,0277 mmol), Cs2CO3 (451 mg, 451 mg mmol) i KSANTPHOS (32,0 mg, 0,0554 mmol) su razblaženi toluenom (111 ul, 0,277 mmol). Reakcija je pročišćena argonom, zatvorena i zagrevana na 110°C uz mešanje tokom 12 sati. Reakcija je ostavljena da se ohladi i razblažena etil acetatom i vodom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 1-10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (80 mg, 0,113 mmol, 40,7 % prinos).

Korak B: 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (80 mg, 0,11 mmol) je razblažen sa TFA (2 mL), stavljen pod azot i

11 4

zagrejan do 90°C. Posle mešanja tokom 2 sata, reakcija je ohlađena i koncentrovana. Materijal je razblažen sa DCM i ispran zasićenim natrijum bikarbonatom. DCM je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (23 mg, 0,040 mmol, 35 % prinos)..

Korak C: 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (23 mg, 0,040 mmol) je razblažen sa DMF (350 µL) nakon čega je dodat DIEA (22 µl, 0,13 mmol) i 2 -fluoroakrilna kiselina (5,4 mg, 0,060 mmol). Dodan je 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (25 mg, 0,040 mmol) i reakcija je mešana 12 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril ( 9 mg, 0,014 mmol, 35 % prinos). ESI+APCI MS m/z 650,2 [M+H]<+>.

PRIMER 589

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

11

Korak A: 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropiridor[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (24 mg, 0,042 mmol) je razblažen sa DMF (400 µL), a zatim je dodat DIEA (19 µl, 0,11 mmol) dodatkom 2-fluoroakrilne kiseline (6,1 mg, 0,068 mmol) i dodatkom 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksida (30 µl 0,047 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 10 sati. Reakcija je sipana u 5% rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovana dva puta etil acetatom. Etil acetat je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 1-10% metanola/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(2-(((S)-1) -metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-(trifluorometil)naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2 -il)acetonitril (5 mg, 0,0078 mmol, 18 % prinos). ESI+APCI MS m/z 638,3 [M+H]<+>.

PRIMER 590

2-((S)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

11

Korak A: Benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: Benzil (S)-4-(7-(8-bromonaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (30 mg, 0,042 mmol) i dihloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen] paladijum (II) dihlorometan adukt ( 14 mg, 0,017 mmol) je razblaženo ciklopropilcink bromidom (253 ul, 0,13 mmol). Reakcija je pročišćena argonom, zatvorena i zagrejana na 90°C. Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je ostavljena da se ohladi i razblažena etil acetatom i vodom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-( ((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (7 mg, 0,010 mmol, 25 % prinos).

Korak B: 2-((S)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahdropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-vl)acetonitril: Benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7 ,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (9 mg, 0,01 mmol) je razblažen metanolom (1 mL), a zatim je dodat Pd-C (1 mg, 0,01). mmol). Reakcija je opremljena balonom vodonika i pročišćena tri puta, a zatim mešana u atmosferi vodonika tokom 4 sata. Čvrste materije su sakupljene filtracijom, isprane metanolom i kombinovana organska faza je koncentrovana da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1) -

11

metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (7 mg, 0,01 mmol, 97 % prinos).

Korak C: 2-((S)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (10 mg, 0,019 mmol) je razblažen sa DMF (500 µL) nakon čega je dodat DIEA (11 µl, 0,065 mmol), 2 -fluoroakrilna kiselina (2,5 mg, 0,028 mmol) i 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (13 µl, 0,020 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati, reakcija je razblažena etil acetatom i zasićenim natrijum bikarbonatom. Slojevi su razdvojeni i etil acetat je osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan. Materijal je prečišćen na silika gelu eluiranjem sa 10% metanol/DCM (1% NH4OH) da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-ciklopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)) -1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril ( 0,9 mg, 0,0015 mmol, 7,9 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 610,3 [M+H]<+>.

PRIMER 591

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-izopropilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano na isti način kao Primer 590 zamenom izopropil cink bromida za ciklopropil cink bromid u koraku A. ESI+APCI MS m/z 612,3 [M+H]<+>.

PRIMER 592

11

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(1-metilizohinolin-8-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano na isti način kao Primer 588 zamena 8-bromo-1-metilizohinolina za 1,8-dibromonaftalen u koraku A. ESI+APCI MS m/z 585,3 [M+H]<+>.

PRIMER 593

2-((S)-4-(7-(5-hloroizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano na isti način kao Primer 588 zamena 4-bromo-5-hloroizohinolina za 1,8-dibromonaftalen u koraku A. ESI+APCI MS m/z 605,2 [M+H]<+>.

PRIMER 594

11

2-((S)-4-(7-(8-bromoizohinolin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano na isti način kao Primer 588 zamena 8-bromo-1-hloroizohinolina za 1,8-dibromonaftalen u koraku A. ESI+APCI MS m/z 651,2 [M+H]<+>.

PRIMER 595

2-((S)-4-(7-(1-hloroizohinolin-8-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Sintetizovano na isti način kao Primer 589 zamenom 8-bromo-1-hloroizohinolina za 1,8-dibromonaftalen u koraku A. ESI+APCI MS m/z 605,3 [M+H]<+>.

PRIMER 596

2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

11

Korak A: Benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahdropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (3 g, 5,7 mmol) je rastvoren u DCM (57 ml, 5,7 mmol) i tretiran rastvorom hlorovodonične kiseline (4,0 M u 1,4-dioksanu) (7,1 ml, 28 mmol).

Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je isprana sa 1M NaOH. Vodena faza je ekstrahovana sa dodatnim DCM (2x), kombinovana organska faza je osušena preko MgSO4 i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,4 g, 5,6 mmol, 99 % prinos). ESI+APCI MS m/z 427,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-( cijanometil)piperazin-1-karboksilat: Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (1,030 g, 1,124 mmol) i 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (1,301 g, 2,249 mmol) rastvoreni su u 1,56,22 ml (1,56,22 ml).5,622 mmol) i pročišćena pod argonom 5 minuta. Reakcija je mešana na 100°C pod argonom 15 minuta i reakcija je ohlađena do sobne temperature. U reakciju je dodat benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,4 g, 5,622 mmol), 1-bromo-8-metilnaftalen (3,729 g, 16,87 mmol) i cezijum karbonat (5,495 g, 16,87 mmol) pod argonom. Reakcija je zatvorena pod argonom i mešana na 100°C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i čvrste materije su uklonjene filtracijom. Filtrat je koncentrovan in vacuo i prečišćen hromatografijom normalne faze (2x) na CombiFlash koristeći 0→75% heksani/EtOAc kao eluent da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen- 1-il)-5,6,7,8-

11 1

tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,532 g, 4,465 mmol, 79,42 % prinos). ESI+APCI MS m/z 567,2 [M+H]<+>.

Korak C: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U mikrotalasnoj cevi rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4 -il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 0,441 mmol) u dioksanu (2204 ul, 0,441 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta. (S)-(-)-1-benzil-2-pirolidinmetanol (169 mg, 0,882 mmol), Cs2CO3 (431 mg, 1,32 mmol), metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-i-propoksi- 1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (37,5 mg, 0,0441 mmol) je uzastopno dodat pod argonom i reakcija je prskana sa Ar još 5 minuta. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 2 sata.

Reakcija je ohlađena do sobne temperature i dodat je etil acetat. Čvrste materije su uklonjene filtracijom, a filtrat je koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0->20% DCM/MeOH 2% NH4OH. Sve frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il) ))-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (120 mg, 0,204 mmol, 77,2 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 722,4 [M+H]<+>.

Korak D: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil (S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,277 mmol) u EtOH (2770 µl, 0,277 mmol) i THF (2770 µl, mmol.) je pročišćen sa N2 u trajanju od 5 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum (73,7 mg, 0,0693 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 minuta. Rastvor je zatim mešan pod jednom atmosferom H21 sat. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il))-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (160 mg, 0,272 mmol, 98,3% prinos). ESI+APCI MS m/z 588,4 [M+H]<+>.

11 2

Korak E: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril: U 25 mL RBF koji sadrži dihlorometan (2722 µl, 0,272 mmol) na 0°C dodat je 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7 -(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (160 mg, 0,272 mmol) i Hunigova baza (95,1 ul, 0,544 mmol).

Reakciona smeša je snažno mešana dok je 2-fluoroakrilna kiselina (98,1 mg, 1,09 mmol) dodata u jednoj porciji. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (243 ul, 0,408 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je mešana 2 sata na 0°C. Reakcija je tretirana baznom vodom i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3x). Kombinovana organska faza je koncentrovana in vacuo i ostatak resuspendovan u 60:40 smeši MeCN:H2O i prečišćen (prep HPLC), eluiranjem sa 5→95% MeCN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA da bi se dobio proizvod. Čiste frakcije su spojene i razblažene sa EtOAc i 1N NaOH i slojevi su razdvojeni. Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom, osušena preko MgSO4 i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 2-((S)-4-(2-(((S)-1-benzilpirolidin-2-il)metoksi)-7-( 8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (8 mg, 0,0121 mmol, 4,45% prinos).

ESI+APCI MS m/z 660,4 [M+H]<+>.

PRIMER 597

2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-(2-fluoroetil)pirolidin-2-il)metoksi)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

11

Korak A: Benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahdropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (2 g, 3,795 mmol) je rastvoren u DCM (37,95 ml, 3,795 mmol) i tretiran rastvorom hlorovodonične kiseline (4,0 M u 1,4-dioksanu) (4,744 ml, 18,97 mmol).

11 4

Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je isprana sa 1M NaOH i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Organska faza je kombinovana, osušena preko Na2SO4 i koncentrovana da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,619 g, 3,792 mmol, 99,93 % prinos). ESI+APCI MS m/z 427,2 [M+H]<+>.

Korak B: benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-( cijanometil)piperazin-1-karboksilat: Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0,6946 g, 0,7585 mmol) i 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (0,8778 g, 1,517 mmol) rastvoreni su u 1,37-ml2 (1,37-ml) 3,792 mmol), prečišćava se pod argonom 5 minuta i meša na 100°C pod argonom 15 minuta i reakcija se ohladi na sobnu temperaturu. U smešu je dodat benzil (S)-4-(2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1,619 g, 3,792 mmol), 1-bromo-8-metilnaftalen (2,515 g, 11,38 mmol) i cezijum karbonat (3,707 g, 11,38 mmol) pod argonom. Reakcija je zatvorena pod argonom i mešana na 100°C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i čvrste materije su uklonjene filtracijom. Filtrat je koncentrovan in vacuo i prečišćen hromatografijom normalne faze (2Ks) korišćenjem 0→75% heksana/EtOAc kao eluenta da bi se dobio benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-1-il). )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (958 mg, 1.689 mmol, 44.54 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 567,2 [M+H]<+>.

Korak C: terc-butil (S)-2-(((4-((S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8) -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat: U mikrotalasnoj cevi, rastvor benzil (S)-4-(2-hloro-7-(8-metilnaftalen-lil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin- 4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (250 mg, 0,441 mmol) u dioksanu (2204 ul, 0,441 mmol) je prskan argonom tokom 5 minuta. (S)-(-)-1-(terc-butoksikarbonil)-2-pirolidinmetanol (222 mg, 1,10 mmol), Cs2CO3 (431 mg, 1,32 mmol) i metansulfonato(2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di- i-propoksi-1,1'-bifenil)(2'-metilamino-1,1'-bifenil-2-il)paladijum(II) (37,5 mg, 0,0441 mmol) je uzastopno dodat pod argonom i reakcija je ispražnjena Ar za dodatnih 5 minuta. Reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 100°C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i dodat je etil acetat. Čvrste materije su uklonjene filtracijom, filtrat je koncentrovan i

11

prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0->20% DCM/MeOH 2% NH4OH. Sve frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen- 1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (306 mg, 0,418 mmol, 94,8 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 598,3 [M+H]<+>.

Korak D: benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: terc-butil (S)-2-(((4-((S)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-7-(8-metilnaftalen-l-il)-5,6,7,8) -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-2-il)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (93 mg, 0,1556 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (1556 µl, 0,1556 mmol) i tretiran sa bazom (13 µl.9). , 0,7779 mmol) i benzil karbonohloridat (33,31 ul, 0,2334 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Reakcija je podeljena između DCM i vode i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2Ks). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2S04, koncentrovana in vacuo i ostatak je prečišćen hromatografijom korišćenjem 0→15% DCM/MeOH 2% NH4OH kao eluenta. Sve frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1 -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (367 mg, 0,5014 mmol, 322,3% prinos).

ESI+APCI MS m/z 732,4 [M+H]<+>.

Korak E: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7, 8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (367 mg, 0,501 mmol) je rastvoren u DCM (5014 µl, 0,501 mmol) i tretiran sa TFA ( 193 ul, 2,51 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija nije primećena. Smeša je koncentrovana in vacuo i resuspendovana u DCM. Ovome je dodat HCl (4M u dioksanu, 500 uL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je koncentrovana in vacuo i ostatak je podeljen između 1M NaOH i DCM. Kombinovana organska faza je koncentrovana in vacuo da bi se dobio sirovi benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-

11

metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il) )metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (192 mg, 0,304 mmol, 60,6 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 632,3 [M+H]<+>.

Korak F: benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il? )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat: U mešani rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0,23742 mmol) u 2,5 mL DMF je dodat natrijum hidrid (60 % disperzija u mineralnom ulju (8,5465). mg, 0,35614 mmol)). Posle 15 minuta je dodat (2-bromoetoksi)(terc-butil)dimetilsilan (142,00 mg, 0,59356 mmol) i reakcija je zagrevana na 75°C tokom 3,5 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i podeljena između vode i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc i kombinovana organska faza je isprana sa još vode i rastvora soli, osušena preko Na2SO4 i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio sirovi benzil (S)-4-(2-((S)-1-(2-).

((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (187 mg, 0,237 mmol, 99,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 790,4 [M+H]<+>.

Korak G: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1? -il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: Rastvor benzil (S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tertbutildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (187 mg, 0,237 mmol) u EtOH (2367 µl, 0,237 mmol) i THF (2367 µl, 0,237 mmol) je pročišćen sa N25 minuta. Ovom rastvoru je dodat paladijum (63,0 mg, 0,0592 mmol) (Degussa tip, 10 tež%, 50% H2O), i odmah je zatvoren i pročišćen sa N2 dodatnih 5 minuta. Rastvor je zatim mešan u jednoj atmosferi H2 preko noći. Smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana kroz nabijeni celit. Filtrat je zatim koncentrovan in vacuo da bi se dobio sirovi 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi )-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (134 mg, 0,204 mmol, 86,3 % prinos). ESI+APCI MS m/z 656,4 [M+H]<+>.

11

Korak H: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril: Na 0°C, u RBF od 25 mL koji sadrži N,N-dimetilformamid (2043 µl, 0,204 mmol) je dodat 2-((S)-4-(2-((S)-1-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il )piperazin-2-il)acetonitril (134 mg, 0,204 mmol) i Hunigova baza (71,4 ul, 0,409 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je 2-fluoroakrilna kiselina (22,1 mg, 0,245 mmol) dodata u jednoj porciji. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (182 ul, 0,306 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je mešana 1 sat na 0°C. Reakcija je tretirana vodenim NaOH i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3Ks). Kombinovana organska faza je koncentrovana in vacuo da bi se dobio sirovi 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il) metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il )acetonitril (120 mg, 0,165 mmol, 80,7 % prinos). ESI+APCI MS m/z 728,4 [M+H]<+>.

Korak I: 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(2-(((S)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tertbutildimetilsilil)oksi)etil)pirolidin-2-il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il) )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg, 0,069 mmol) rastvoren je u dihlorometanu (687 ul, 0,069 mmol) i tretiran sa hlorovodonikom (52 ul, 0,21 mmol) (4M u dioksanu). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija je zatim koncentrovana in vacuo i resuspendovana u 60:40 smeši MeCN:H20 i prečišćena (prep HPLC) eluiranjem sa 5—>95% MeCN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i podeljene između 1M NaOH i DCM i slojevi su razdvojeni i vodeni sloj ekstrahovan sa dodatnim DCM. Kombinovana organska faza je osušena preko Na2SO4 i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(2-(((S)-1-(2-hidroksietil)pirolidin-2) -il)metoksi)-7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (2,7 mg , 0,0044 mmol, 6,4 % prinos). ESI+APCI MS m/z 614,3 [M+H]<+>.

PRIMER 598

11

Korak A: 2-((S)-4-(7-(8-Hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-(2-fluoroetil)pirolidin-2-il)metoksi)-5,6, 7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril: 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (30 mg, 0,0508 mmol) rastvoren je u acetonitrilu (508 µl, 0,0508 mmol) i cezijum karbonatu (19,9 mg, 0,0610 mmol) je dodato u jednom obroku. Ovoj smeši je zatim dodat 1-fluoro-2-jodoetan (3,72 ul, 0,0458 mmol) i reakcija je mešana na 60°C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, čvrste materije su uklonjene filtracijom, a filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je resuspendovan u 60:40 MeCN:voda i prečišćen (prep HPLC), eluiranjem sa 5->95% MeCN/0,1% TFA u vodi/0,1% TFA. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i podeljene između EtOAc i 1M NaOH i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dodatnim EtOAc (2Ks). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2SO4 i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-hloronaftalen-1-il)-2-(((S)-1-(2-fluoroetil) )pirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-

11

fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (4,8 mg, 0,00755 mmol, 14,8 % prinos).

ESI+APCI MS m/z 636,3 [M+H]<+>.

PRIMER 599

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (S)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat: U rastvor terc-butil (S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (3,0 g, 14,91 mmol) u DCM (74,53 ml, 14,91 mmol) ohlađenom na 0°C dodat je N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (4,01 ml, 22,36 mmol) nakon čega je usledilo dodavanje metansulfonil hlorida (1,38 ml, 17,89 mmol) tokom 1 minuta i reakcija je mešana na 0°C tokom 1 sata. Reakcija je zatim isprana sa 1:1 voda/fiziološki rastvor (10 mL) i slojevi su razdvojeni. Kombinovana organska faza je zatim osušena preko MgS04, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Materijal je zatim prečišćen hromatografijom korišćenjem 0-10% MeOH u DCM kao eluenta da bi se dobio terc-butil (S)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (3,786 g, 13,55 mmol, 90,9). % prinosa).

Korak B: terc-butil (S)-2-(((3-metoksi-3-oksopropil)tio)metil)pirolidin-1-karboksilat: terc-butil (S)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (2,00 g, 7,16 mmol) i Cs2CO3 (4,665 g, 14,32 mmol) su stavljeni u dioksan (10 mL) i

11

mešani tokom 3 sata na sobnoj temperaturi. Dodat je NaOH (0.5M) i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovana organska faza je koncentrovana, a ostatak prečišćen silika gelom (0-12% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio terc-butil (S)-2-(((3-metoksi-3-oksopropil)tio) metil)pirolidin-1-karboksilat (2,172 g, 7,16 mmol, 99 % prinos).

Korak C: Metil (S)-3-(((1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)propanoat: U bočicu je dodat terc-butil (S)-2-(((3-metoksi-3-oksopropil)tio)metil)pirolidin-1-karboksilat (2,172 g, 7,16 mmol) u mravlja kiselina (6,751 ml, 179,0 mmol ) nakon čega je usledilo dodavanje formaldehida (10,76 ml, 143,2 mmol) (37% vodeni rastvor). Smeša je zatim zagrejana na 65°C i mešana 18 sati. Reakcija je ohlađena i zasićeni bikarbonat je dodat polako i smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (3k20 mL). Ekstrakti su kombinovani, sušeni preko MgSO4 i koncentrovani. Ostatak je prečišćen silika gelom (5-20% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio metil (S)-3-(((1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)propanoat (186 mg, 0,86). mmol, 12 % prinos).

Korak D: terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil) tio)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat: Metil (S)-3-(((1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)propanoat (186 mg, 0,854 mmol) je stavljen u dioksan (5 mL). Dodat je KOtBu (1708 ul, 1,71 mmol) i smeša je mešana 30 minuta. terc-butil (S)-4-(4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-hloro-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7 (6H)-karboksilat (300 mg, 0,569 mmol) je dodat i smeša je zagrevana

11 1

na 80°C tokom 24 sata. Smeša je ohlađena, razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM (3×15 mL). Ekstrakti su kombinovani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen silika gelom (0-15% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio terc-butil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1- il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (72 mg, 0,116 mmol, 20,3 % prinos).

Korak E: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat: tercbutil 4-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-3-(cijanometil)piperazin-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil) tio)-5,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-7(6H)-karboksilat (72 mg, 0,12 mmol) je stavljen u DCM (5 mL) i ohlađen na 0°C. Dodat je HCl (145 ul, 0,58 mmol) i reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana 18 sati.

Reakcija je koncentrovana i dovedena u DCM. Dodat je zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa DCM (3x 20 mL). Organski slojevi su kombinovani, sušeni preko MgSO4 i koncentrovani da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (61 mg, 0,12 mmol).

Korak F: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-

11 2

karboksilat: U rastvor benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (61 mg, 0,12 mmol) u toluenu (2 mL) je dodat 1-bromo-8-metilnaftalen (78 mg, 0,35 mmol) i reakcija je degazirana. sa argonom tokom 15 minuta, a zatim dodavanjem Cs2CO3 (190 mg, 0,58 mmol), Pd2(dba)3 (21 mg, 0,023 mmol) i ksantfosa (27 mg, 0,047 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C tokom 18 sati . Čvrste materije su uklonjene filtracijom, a filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je zatim prečišćen hromatografijom korišćenjem 1→12% MeOH/DCM sa 2% NH4OH kao aditiva da bi se dobio benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2 -(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (54 mg, 0,082 mmol, 70 % prinos).

Korak G: 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: benzil (S)-2-(cijanometil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (54 mg, 0,082 mmol) je stavljen u DCM (10 mL) i reakcija je ohlađena na 0°C. Dodati su AcOH (14,01 ul, 0,244 mmol) i TMS-I (69,67 ul, 0,490 mmol) i reakcija je polako zagrejana do sobne temperature i mešana 1 sat. Dodat je zasićeni bikarbonat i smeša je ekstrahovana sa DCM. Ekstrakti su koncentrovani, a ostatak prečišćen hromatografijom reverzne faze (5-95% MeCN u vodi sa 0,1% TFA). Izolovani proizvod je zatim oslobođen na bazi dodavanja u DCM i dodavanja zasićenog bikarbonata. Organski sloj je odvojen, osušen preko MgSO4 i koncentrisan da bi se dobio 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2- il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8 mg, 0,15 mmol, 19%).

11

Korak H: 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio )-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril: U 0°C rastvor N,N-dimetilformamida (152 µl, 0,015 mmol) dodat je 2-((S)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-2-((((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (8,0 mg, 0,015 mmol ) i trietilamin (7,37 ul, 0,053 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana dok je 2-fluoroakrilna kiselina (4,10 mg, 0,046 mmol) dodata u jednoj porciji. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (13,5 ul, 0,023 mmol) je polako dodat u mešavinu. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 20 minuta. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM i ekstrakti su koncentrovani. Ostatak je prečišćen silika gelom (0-12% MeOH u DCM sa 0,25% NH4OH) da bi se dobio 2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il) )-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metil)tio)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2- il)acetonitril (2,3 mg, 0,0038 mmol, 25,3 % prinos). ES+APCI MS m/z 600,3 [M+H]<+>.

PRIMER 600

2-((S)-4-(7-(5-hloro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

2-((S)-4-(7-(5-hloro-4-(trifluorometil)piridin-3-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5, 6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril, pripremljen je prema Primeru 359 zamenom 3,5-dihloro-4 -(trifluorometil)piridin za 1-bromo-8-metilnaftalen u koraku A.

PRIMER 601

11 4

2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 µmol, 1 ekv.) i [(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (191 mg, 1,26 mmol , 1,5 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (162 mg, 1,68 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 30 minuta. Po završetku, smeša

11

je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 × 40 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane sa NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovane sa EtOAc (2 × 100 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il ]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 418 µmol, 50% prinosa, 95% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 682.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-piperolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8- metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (260 mg, 381 µmol, 1 ekv.) u MeOH (4 mL) je dodat Pd/C (120 mg, 10% čistoće), NH3/MeOH (3 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 15 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 296 µmol , 78% prinos, 90% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 548.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil) -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (150 mg, 274 umol, 1 ekv.), TEA (222 mg, 2,19 mmol, 305 uL, 8 ek) i (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (57,0 mg, 548 µmol, 2 ekv.) u EA (3 mL) je dodat T3P (523 mg, 822 µmol, 489 µL, 50% čistoće u EA, 3 ekv.) na -70°C. Smeša je mešana na -70°C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je ugašena sa 1 M HCl (2,2 mL) na -70 °C, mešana dok nije ostao led. Slojevi su bili

11

razdvojeni. Organski sloj je bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 do pH = 8 i ekstrahovan etil acetatom (15 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 do 20/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 55 %-85 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il] metoksi]-7-(8 -metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2- il]acetonitril (50,6 mg, 78 umol, 29% prinos, 98% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 634.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,70 (br d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,66 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,45 - 7,38 (m, 1H), 7,38 - 7,32 (m, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 2H), 7,09 - 6,93 (M, 1H), 6,60 (br d,J= 14,8 Hz, 1H), 5,32 - 4,93 (m, 3H), 4,64 (br s, 1H), 4,45 (td,J= 5,2, 11,2 Hz, 1H), 4,32 - 3,63 (m, 6H), 3,58 - 3,36 (m, 3H), 3,25 -2,96 (m, 2,93 (m, H, 5H) (S, 3H), 2,88 - 2,77 (m, 1H), 2,75 - 2,50 (m, 3H), 2,46 (d,J= 4,4 Hz, 3H), 2,34 - 2,15 (m, 1H).

PRIMER 602

2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

11

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 593 umol, 1,0 ekv.), 1-bromonaftalen (184 mg, 890 mmol, 124 mL, 1,5 ekv.), Pd2(dba.)3 3 , 59,3 µmol, 0,1 ekv.), Cs2CO3 (483 mg, 1,48 mmol, 2,5 ekv.) i RuPhos (55,4 mg, 119 umol, 0,2 ekv.) u toluenu (10 mL) je degasiran sa N2 i zatim pročišćen 3 puta smeša je mešana na 90°C tokom 3 sata u atmosferi N2. Po završetku, smeša je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (1 × 50 mL), a organski sloj je odvojen, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (0.1% FA stanje). Ostatak je bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 do pH ~ 8, a zatim ekstrahovan etil acetatom (2 × 25 mL). Organska faza je odvojena, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]jpirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (200 mg, 317 umol, 53% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 632.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 158 µmol, 1,0 ekv.) u

11

MeOH (10 mL) je dodat Pd/C (20 mg, 10% čistoće ) i NH3•MeOH (8 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa

H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom.2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (70 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 498.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (60 mg, 121 umol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (21,7 mg, 241 µmol, 2,0 ekv.) i Et3N (97,6 mg, 965 umol, 134 uL, 8,0 ekv.) u etil acetatu (6 mL) je dodat T3P (230 mg, 362 µmol, 215 µL, 50% čistoće, 3,0 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0 - 25 °C 1 sat. Po završetku, smeša je razblažena vodom (6 mL). Organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/metanol = 20/1 do 5/1). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) -ACN]; B%: 60 % - 78 %, 10 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizovan.2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (7,23 mg, 12,7 umol, 11% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 571.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,27 - 8,16 (m, 1H), 7,91 - 7,81 (m, 1H), 7,61 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 7,43 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,15 (D,J= 7,2 Hz, 1H), 5,56 - 5,33 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,2, 16,8 Hz, 1H), 4,85 (br, 1H), 4,41 (dd,J= 5,2, 10,8 Hz, 1H), 4,34 - 4,24 (m, 2H), 4,22 - 3,96 (m, 4H), 3,75 - 3,21 (m, 4H), 3,12 (br,J= 6,8 Hz, 2H), 3,04 - 2,92 (m, 2H), 2,87 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,38 - 2,23 (m, 1H), 2,15 - 1,99 (m, 1H), 1,94 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 603

11

2-[(2S)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor ciklopentilmetanola (50,5 mg, 504 µmol, 54,6 µL, 3,0 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 168 µmol, 1,0 ekv.) u toluenu (5 mL) je dodat t-BuONa (48,5 mg , 504 umol, 3,0 ekv.) na -10 °C. Smeša je mešana na -10°C tokom 0,5 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (5 mL) na -10 °C, a zatim ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat = 50/1 do 3/1). Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-

11

d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (58 mg, 91,6 umol, 54% prinos, 99,6% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 631.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,72 - 7,61 (m, 2H), 7,46 - 7,30 (m, 7H), 7,26 - 7,16 (m, 2H), 5,27 - 5,15 (m, 2H), 4,69 (br s, 1H), 4,32 - 3,72 (m, 7H), 3,59 - 3,30 (m, 2H, 3,24 - 2,87), (), - (m, 2H,) 2,87 - 2,30 (m, 4H), 1,90 - 1,76 (m, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,57 - 1,51 (m, 1H), 1,42 - 1,21 (m, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (58 mg, 92,0 µmol, 1,0 ek) u MeOH (3 mL) je dodat Pd/C (20 mg, 10% čistoće) i NH3•MeOH (2 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta.

Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom.2-[(2S)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] piperazin-2-il]acetonitril (34 mg, sirov) je dobijen kao žuto ulje i korišćen u narednim koracima bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 497.

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dipirimidin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piazamin-2-il]acetonitril.

Rešenje 2-[(2s)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftenil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d 4-il]pirazezolil-2-il (30 mg, 60,4 µmol,efluoro-2181), efluorodična kiselina (23,0-1,0 16,3) I et3N (55,0 mg, 544 µmol, 75,7 µL, 9,0eq) u EA (2,0 ml) je dodan T3P (154 mg, 242 umol, 144 ul, 50 % čistoće, 4,0eq) na 0 °C. Smeša je miješana na 25 °C 1 sat. Po završetku mešavina je razrijeđena vodom (6 ml). Organski sloj je bio odvojen, opran sa salamurom (1 × 10 ml), osušen preko natrijeva sulfata, filtriran i koncentriran pod vakuumom. Mešavina je pročišćena kolonskom kromatografijom (SiO2, petroleter/etilacetat = 20/1 do 1/1). Ostatak je pročišćen PRIP-HPLC (kolona:Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 65 %-95 %, 10 min). Talog je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se ukloni ACN, a zatim liofilizovan. 2-[(2S)-4-[2-(ciklopentilmetoksi)-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (8,85 mg, 15,3

11 1

umol, dva koraka 17% prinos, 98,2% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 569.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.67 -7.61 (m, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.56 -5.32 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.89 (br s, 1H), 4.33 - 3.98 (m, 5H), 3.95 - 3.72 (m, 2H), 3.60 - 3.39 (m, 2H), 3.30 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.91 -2.73 (m, 2H), 2.69 - 2.54 (m, 1H), 2.45 - 2.29 (m, 1H), 1.93 - 1.74 (m, 2H), 1.69 -1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.53 (m, 2H), 1.45 - 1.25 (m, 2H).

PRIMER 604

11 2

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-|[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metil pirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1 g, 1,98 mmol, 1 ekv.), 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (795 mg, 2,57 mmol , 1,3 ekv.), RuPhos (369 mg, 791 umol, 0,4 ekv.), Cs2CO3 (1,61 g, 4,94 mmol, 2,5 ekv.) i Pd2(dba)3 (362 mg, 396 umol, 0,2 l ekvival.) 0 in 0,2 L ek je degasiran i zatim zagrevan na 90 °C tokom 8 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane čvrstim NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovani sa EtOAc (2 × 40 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il) -2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (900 mg , 1,23 mmol, 62% prinos, 100% čistoća) kao braon čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,98 (s, 1H), 7,43 - 7,33 (m, 5H), 7,22 (s, 1H), 5,66 (DD,J= 2,8, 9,6 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,68 (br, 1H), 4,39 (dd,J= 4,8, 10,0 Hz, 1H), 4,25 (s, 2H), 4,18 - 4,14 (m, 1H), 4,04 (br d,J= 12,0 Hz, 2H), 3,95 - 3,84 (m, 1H), 3,75 (t,J= 2,8, 10,8 Hz, 1H), 3,50 (br t,J= 5,2 Hz, 2H), 3,30 (br, 2H), 3,13 - 2,98 (M, 2H), 2,95 - 2,52 (m, 6H), 2,47 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,30 - 2,23 (m, 1H), 2,22 - 2,11 (m, 1H), 2,07 (br d,J= 3,2 Hz, 1H), 1,89 - 1,63 (m, 8H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (0,9 g, 1,23 mmol, 1 ekv.) u MeOH (20 mL) je dodat NH3•MeOH (20 mL, 20% čistoće), Pd/C (0,45 g, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa

H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po

11

završetku, katalizator je uklonjen filtriranjem kroz čep celita. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom.2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (620 mg, 1,03 mmol, 84% prinos, 100% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 600.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)1-metilpirolidin-2-il]metoksi ]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (600 mg, 1,00 mmol, 1 ekv.) u DMF (8 mL) je dodata 2-fluoroprop-2-enska kiselina (180 mg, 2,00 mmol, 2 ekv.) u EA (4 mL) i TEA (304 mg, 3,00 mmol, 414 mL, 3 ekv.), a zatim T3P (955 mg, 1,50 mmol, 892 µL, 50% čistoće u EtOAc, 1,5 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 20 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-ilindazol-4-il)-2-[ [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil) piperazin-2-il]acetonitril (380 mg, 554 umol, 55% prinos, 98% čistoća) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 672.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,98 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,66 (dd,J= 2,4, 9,2 Hz, 1H), 5,51 - 5,32 (m, 1H), 5,25 (br dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,09 - 4,59 (m, 1H), 4,44 - 4,33 (m, 1H), 4,26 (br, 2H), 4,19 - 4,14 (m, 1H), 4,05 (br d,J= 14,4 Hz, 2H), 4,00 - 3,91 (m, 1H), 3,76 (dt,J= 2,4, 11,2 Hz, 1H), 3,59 - 3,39 (m, 3H), 3,37 - 3,21 (M, 1H), 3,14 - 3,02 (m, 2H), 2,90 - 2,52 (m, 6H), 2,48 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,29 - 2,23 (m, 1H), 2,22 - 2,08 (m, 2H), 1,90 - 1,69 (m, 8H).

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropirana-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (360

11 4

mg, 536 µmol, 1 ekv.) u DCM (0,4 mL) dodata je TFA (1,22 g, 10,7 mmol, 794 mL, 20 ekv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Po završetku, smeša je razblažena sa DCM (10 mL) i neutralizovana zasićenim rastvorom NaHCO3.

Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralisane čvrstim NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovani sa EtOAc (2 × 15 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150*25 mm*5um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 40 %-70 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S)-1-metil pirolidin- 2-il]metoksi]-6,8-dihidro-577-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (73.3 mg, 120 umol, 22% prinos, 96,6% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 588.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,97 (br, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 1H), 5,55 - 5,31 (m, 1H), 5,26 (dd,J= 3,6, 16,8 Hz, 1H), 5,08 - 4,50 (m, 1H), 4,39 (dd,J= 4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,29 (s, 2H), 4,20 - 3,68 (m, 4H), 3,65 - 3,27 (m, 4H), 3,10 (br t,J= 7,8 Hz, 2H), 3,02 - 2,72 (m, 4H), 2,71 - 2,60 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,42 (s,), 3H), 2,34 (s, 3H), 2,31 - 2,24 (m, 1H), 2,12 - 2,01 (m, 1H), 1,93 -1,73 (m, 3H).

PRIMER 605

2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

11

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-piridor3,4-d]pirimidin- 4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor 2-piridilmetanola (55,1 mg, 504 µmol, 48,7 µL, 3,0 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 168 µmol, 1,0 ekv.) u toluenu (5,00 mL) je dodat t-BuONa ( 48,5 mg, 504 µmol, 3,0 ekv.) na -10 °C. Smeša je mešana na -10°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je ugašena vodom (5,00 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat = 50/1 do 1/1). Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (64,0 mg, 98,8 umol, 59% prinos, 98,8% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 641.

Korak B: 2-[(2s)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-dpirimidin-4-il]pirazen-2-il]acetonitril. 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (64,0 mg, 100 µmol, 1,0 ekv.) u MeOH (3,00 mL) je dodat Pd/C (20,0 mg, 10% čistoće) i NH3•MeOH

11

(2,00 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Po završetku, smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, dihlorometan/metanol = 100/1 do 8/1).

2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-(2-piridilmetoksi)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-2-il]acetonitril (15,0 mg, 19,3 umol, 19% prinos, 64,9% čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 506.

Korak C: 22-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1- metil-pirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R) )-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 306 umol, 1,0 ekv.) u metanolu (2,0 mL) je dodat suvi Pd/C (50,0 mg, 10% čistoće) i NH3/metanol (1,00 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 285 µmol, 93% prinos 98% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca i koristi se u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 579.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,61 - 8,55 (m, 1H), 7,74 - 7,62 (m, 3H), 7,55 - 7,48 (m, 1H), 7,45 - 7,32 (m, 2H), 7,26 - 7,17 (m, 3H), 5,52 - 5,48 (m, 2H), 5,47 - 5,33 (m, 1H, 1H), 5,25 (1H, 1H) (DD,J= 3,6, 17,2 Hz, 1H), 4,79 (br, 1H), 4,38 - 3,73 (m, 6H), 3,61 - 3,41 (m, 2H), 3,26 - 3,12 (m, 2H), 3,09 - 2,95 (m, 2H), 2,92 (s, 3H), 2,85 - 2,56 (m, 2II).

PRIMER 606

11

2-((S)-4-(7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-(((2S,4R)-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il) metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (5.0 g, 11,4 mmol, 1,0 ekv.), 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (7,05 g, 22,8 mmol, 2,0 ekv.), Pd2(dba)3 (2,09 g, 2,28 mmol , 0,2 ekv.), RuPhos (2,13 g, 4,56 mmol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (9,29 g, 28,5 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (100 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta, a zatim je mešavina mešana 90°C tokom 8 sati u atmosferi

11

N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-ilindazol-4-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (4,90 g, 7,20 mmol, 63% prinos, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 667.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,98 (s, 1H), 7,50 - 7,31 (m, 5H), 7,22 (s, 1H), 5,66 (dd,J=2,4, 9,6 Hz, 1H), 5,27 - 5,13 (m, 2H), 4,69 (br s, 1H), 4,27 (s, 2H), 4,13 - 3,97 (m, 3H), 3,89 (d,J= 11,6 Hz, 1H), 3,81 - 3,68 (m, 1H), 3,51 (t,J=5,2 Hz, 2H), 3,30 (br s, 2H), 3,04 (t,J= 11,6 Hz, 1H), 2,93 - 2,66 (m, 4H), 2,62 - 2,48 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,23 - 2,12 (m, 1H), 2,11 - 2,05 (m, 1H), 1,85 - 1,67 (m, 3H).

Korak B: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfanil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 749 µmol, 1,0 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat m-CPBA (152 mg, 749 µmol) , 85% čistoće, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 1 sat.

Smeša je razblažena vodom (10 mL) i podešen pH ~ 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Zatim je smeša ekstrahovana etil acetatom (3 × 20 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 539 umol, 72% prinos, 92% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i korišćen u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 683.

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4- fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350 mg, 512 µmol,

11

1,0 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat t-BuONa (148 mg, 1,54 mmol) , 3,0 ekv.) i [(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (136 mg, 1,03 mmol, 2,0 ekv.).

Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4- fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg, 372 µmol, 73 % prinosa, 100% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 752.

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1- metil-pirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R) )-4-fluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 306 umol, 1,0 ek) u metanolu (2,0 mL) je dodat suvi Pd/C (50,0 mg, 10% čistoće) i NH3/metanol (1,00 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1- metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (180 mg, 285 µmol, 93% prinos 98% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca i koristi se u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 618.

Korak D: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2- il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4- fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (30 mg, 48,6 µmol , 1,0 ekv.) u dihlorometanu (300 uL) dodata je TFA (221 mg, 1,94 mmol, 144 µL, 40 ekv.).

Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i razblažena vodom (10 mL). pH smeše je podešen na ~ 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan dihlorometanom (3 × 20 mL).

12

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150 * 25 mm * suma; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 26 % - 56 %, 1 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana.2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (7,08 mg, 13,1 µmol, 27% prinos, 98,5% čistoće) dobija se kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 534.

<1>H NMR (400 MHz, kloroform-d) δ = 10,14 (br s, 1H), 8,04 (d,J=0,8 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,32 - 5,03 (m, 1H), 4,44 (dd,J=4,4, 11,2 Hz, 1H), 4,33 - 4,19 (m, 3H), 4,00 (Br d,J=12,8 Hz, 1H), 3,82 (br d,J=12,0 Hz, 1H), 3,65 - 3,41 (m, 3H), 3,27 (br d,J=6,4 Hz, 1H), 3,17 - 2,95 (m, 4H), 2,90 (br,J=10,0, 12,4 Hz, 1H), 2,83 -2,47 (m, 8H), 2,41 (s, 3H), 2,38 - 2,23 (m, 4H), 2,09 - 1,90 (m, 1H).

Korak E: 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2- il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil- pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 187 µmol, 1,0 ekv.) i 2 -fluoroprop-2-enska kiselina (25,3 mg, 281 µmol, 1,5 ek) u etil acetatu (2,0 mL) je dodat T3P (477 mg, 749 µmol, 446 µL, 50% čistoće u etil acetatu, 4,0 T ek 114 mg, 1,12 mmol, 156 µL, 6,0 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona:

Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) -ACN]; B%: 38 % - 68 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4-il)-2-[[(2S,4R)-4-fluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (8 mg, 12,8 umola, 7% prinosa, 96,9% čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 606.

12 1

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10,03 (br, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 1H), 5,42 (dd,J=6,4 Hz,J=47,2 Hz 1H), 5,31 - 5,05 (m, 2H), 5,04 - 3,76 (m, 9H), 3,65 - 3,47 (m, 3H), 3,42 - 3,25 (m, 1H), 3,20 - 2,70 (m, 6H) 2,702,42 - 2,55 (m, 1H), 2,51 (s, 3H) (s, 3H), 2,38 - 2,25 (m, 4H), 2,10 - 1,87 (m, 1H).

PRIMER 607

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(6-metilizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3, 4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (250 mg, 530 µmol, 1,0 ekv.), 4-bromo-6-metil-izohinolin (235 mg, 1,06 mmol, 2,0 ekv.),

12 2

RuPhos (98,9 mg , 212 µmol, 0,4 ekv.), Pd2(dba)3 (97,1 mg, 106 umol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (432 mg, 1,33 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (5 mL), degazirano sa N2 i pročišćeno je puta a zatim je smeša mešana na 90°C tokom 8 sati pod atmosferom N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na ~ 7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (230 mg, 349 umol, 66% prinos, 93% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 613.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (50 mg, 81,6 µmol, 1,0 ekv.) u dioksanu (400 µL) je dodat HCl/dioksan (4 M, 408 uL). Smeša je mešana na 25°C 0,3 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i razblažena vodom (10 mL). pH smeše je podešen na ~ 8 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan dihlorometanom (3 × 20 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150 * 25 mm * suma; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 28 % - 58 %, 1 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana.2-[(2S)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (19 mg, 37 umol, 45% prinos, 99,9% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 513.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,94 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,92 -7,83 (m, 2H), 7,45 (dd,J=1,2, 8,4 Hz, 1H), 4,40 (dd,J=4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,29 (s,

12

2H), 4,17 (dd,J=6,8, 10,8 Hz, 1H), 4,03 (br d,J=12,8 Hz, 1H), 3,86 (br d,J=12,4 Hz, 1H), 3,42 (br t,J=5,2 Hz, 2H), 3,33 - 3,22 (m, 1H), 3,17 - 2,80 (m, 7H), 2,72 - 2,63 (m, 1H), 2,61 - 2,52 (m, 5H), 2,47 (s, 3H), 2,33 - 2,23 (m, 1H), 2,11 - 2,06 (m, 1H), 1,89 - 1,68 (m, 3H).

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 195 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (35,1 mg, 390 umol, 2,0 ek) u etil acetatu (2 mL) je dodat T3P (372 mg, 585 µmol, 348 µL, 50% čistoće u etil acetatu, 3,0 ekv.) i TEA (158 mg, 1,56 mmol, 217 µL, 0 ek, 8). °C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 38 % - 62 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(6-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (11 mg, 18,6 µmol, 9% prinos, 98,9% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 585.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,96 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,93 -7,85 (m, 2H), 7,46 (dd,J=1,2, 8,4 Hz, 1H), 5,49 - 5,36 (m, 1H), 5,26 (d,J=3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,88 (br, 1H), 1H 4,50 - 4,29 (m, 3H), 4,27 - 3,96 (m, 4H), 3,61 - 3,30 (m, 4H), 3,22 - 3,06 (m, 2H), 3,04 - 2,77 (m, 4H), 2,75 - 2,65 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 2,49 (s,) 3H), 2,31 - 2,29 (m, 1H), 2,15 - 1,97 (m, 1H), 1,80 - 1,77 (m, 3H).

PRIMER 608

12 4

2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il] acetonitril

Korak A: terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8 -dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3 ,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (240 mg, 508,91 µmol, 1 ekv.), t-BuONa (146,72 mg, 1,53 mmol, 3 ekv.), RuPhos (47,50 mol, 70 ekv.) ek) i RuPhos Pd G3 (85,13 mg, 101,78 µmol, 0,2 ekv.) u toluenu (5 mL) je dodat 1-bromo-8-etil-naftalen (239,31 mg, 1,02 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 90°C tokom 12 sati. Smeši je dodata voda (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL × 3). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš HPLC sa reverznom fazom (C18, 0,1 % FA u vodi, 0-45 % MeCN). Proizvod terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (113 mg, 180,57 umol, 35,48% prinosa, 100% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:626.

12

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor terc-butil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (103 mg, 164,59 µmol, 1 ekv.) u DCM (2 mL) je dodat TFA (2 mL) ) na 25 °C.

Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 h. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3 (20 mL) na 25 °C do pH = 8, a zatim ekstrahovana etil acetatom (3 × 10 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom.2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (81 mg, sirov) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 526.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,66 - 7,55 (m, 2H), 7,37 - 7,25 (m, 2H), 7,25 - 7,20 (m, 1H), 7,19 - 7,14 (m, 1H), 4,36 - 4,26 (m, 1H), 4,21 - 4,02 (m, 2H), 4,00 - 3,622,65 (m, 3H, 3,56 - 2,73 - 2,34) (M, 7H), 2,26 - 2,14 (m, 1H), 2,02 - 1,88 (m, 1H), 1,82 - 1,62 (m, 4H), 1,13 - 1,02 (m, 3H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (61 mg, 116,04 µmol, 1 ekv) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (20,90 mg, 232,08 µmol, 2 ek) u DMF (10 mL) dodani su TEA (281,81 mg, 2,78 mmol, 387,63 µL, 24 ek) i T3P (332,29 mg, 1,04 mmol, 310,55 uL, 9 ek.) na -40 °C. Posle dodavanja, smeša je mešana na 0°C tokom 2 sata. Smeša je razblažena vodom (3×20 mL) i razblažena etil acetatom (3×20 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 55 %-85 %, 10 min). Smeša je razblažena vodom (3×20 mL) i razblažena etil acetatom (3×20 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušen iznad Na2S04, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 2-[(2S)-4-[7-(8-etil-1-naftil)-2-[ [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-

12

fluoroprop-2-enoil) piperazin-2-il]acetonitril (7 mg, 11.63 umol, 10.02% prinos, 99.3% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:598.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,67 - 7,54 (m, 2H), 7,39 - 7,26 (m, 2H), 7,25 - 7,20 (m, 1H), 7,15 (s, 1H), 5,45 - 5,24 (m, 1H), 5,23 - 5,12 (m, 1H), 4,95 - 4,58 (m, 1H), 4,333,63 - 4,25 - 4,25 (m, 1H, 1H, 1H (1H), 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 1H, 3,57 - 3,33 (m, 3H), 3,21 - 2,49 (m, 10H), 2,44 - 2,35 (m, 3H), 2,27 -2,15 (m, 1H), 2,03 - 1,90 (m, 1H), 1,82 - 1,66 (m, 3H), 1,13 - 1,04 (m, 3H).

PRIMER 609

2-[(2S)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

12

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (25)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 791 µmol, 1,0 ekv.), 4-bromo-6-fluoro-izohinolin (215 mg, 949 µmol, 1,2 ekv.), Cs2CO3, (773 mg 2,37 mmol, 3,0 ekv.) i RuPhos (148 mg, 316 µmol, 0,4 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat Pd2(dba)3 (145 mg, 158 µmol, 0,2 ekv.) pod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa N2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod N2 na 90°C tokom 10 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i bazifikovane čvrstim NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovane etil acetatom (2 × 40 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin -2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (140 mg, 204 µmol, 26% prinos, 95% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (30 mg, 46,1 µmol, 1,0 ekv.) i NH3•MeOH (0,3 mL, 20% čistoće) u MeOH (0,3 mL) je dodat Pd/C (10 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1,5 sata. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18 150*25 mm*5um;mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%: 30 %-60 %,1 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo 2-[(2S)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (9,78 mg, 18,9 umol, 41% prinos, 99,9% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 517.

12

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,00 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,02 (dd,J=5,6, 9,2 Hz, 1H), 7,74 (dd,J=2,4, 10,4 Hz, 1H), 7,39 (dt,J=2,4, 8,8 Hz, 1H), 4,41 (DD,J=4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,28 (s, 2H), 4,18 (dd,J=6,8, 10,4 Hz, 1H), 4,02 (br d,J=12,4 Hz, 1H), 3,91 - 3,82 (m, 1H), 3,47 - 3,35 (m, 2H), 3,33 - 3,24 (m, 1H), 3,18 - 3,07 (m, 3H), 3,07 - 2,97 (m, 1H), 2,93 (DD,J=9,6, 12,8 Hz, 1H), 2,85 (br, 2H), 2,73 - 2,64 (m, 1II), 2,56 (dd,J=2,4, 6,4 Hz, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,13 - 2,00 (m, 1H), 1,91 - 1,76 (m, 3H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80 mg, 155 µmol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (41,8 mg, 464 µmol, 3,0 ek) i TEA (235 mg, 2,32 mmol, 323 uL, 15 ek) u etil acetatu (1,5 mL) i DMF (1 mL) je dodat T3P (493 mg, 774 mmol, 460 uL, 50% čistoće ) na 0°C, smeša je mešana na 25 °C tokom 1 sata. U smešu je dodata voda (10 mL).

Smeša je razblažena etil acetatom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Xtimate C18 150*25 mm*5um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 40 % - 70 %,1 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo 2-[(2S)-4-[7-(6-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (17,4 mg, 29,3 µmol, 19% prinos, 99,2% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 589.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,01 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,03 (dd,J=5,6, 8,8 Hz, 1H), 7,73 (dd,J=2,4, 10,4 Hz, 1H), 7,40 (dt,J=2,4, 8,8 Hz, 1H), 5,52 - 5,35 (M, 1H), 5,27 (dd,J=3,6, 17,2 Hz, 1H), 5,02 - 4,62 (m, 1H), 4,46 - 4,38 (m, 1H), 4,36 - 4,25 (m, 2H), 4,24 - 4,07 (m, 3H), 4,02 (br d,J=13,2 Hz, 1H), 3,62 -3,29 (m, 4H), 3,13 (br d, (b, 1H) 2H), 3,03 - 2,93 (m, 2H), 2,91 - 2,77 (m, 2H), 2,72 (br, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,32 (br d,J=8,4 Hz, 1H), 2,13 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,70 (m, 3H).

PRIMER 610

12

(S)-2-(1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(naftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: terc-butil 4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. U smešu O1-terc-butil O4-etil 3-oksopiperidin-1,4-dikarboksilata (5,00 g, 18,4 mmol, 1,00 ekv.) u n-BuOH (30,0 mL) dodata je sirćetna kiselina; metanimidamid (9,59 g, 92,2 mmol, 5,00 ekv.) u porcijama. Smeša je mešana na 120°C tokom 12 sati. Smeša je koncentrovana da bi se uklonio rastvarač. Ostatku je dodata voda (30.0 mL) i filtrirana. Talog je ispran vodom (30.0 mL) i koncentrovan. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje terc-butil 4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (4,10 g, 16,1 mmol, 87% prinosa, 98,4% čistoće) je dobijeno kao braon čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 196.

Korak B: terc-butil 4-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-karboksilat. U smešu terc-butil 4-hidroksi-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-

121

karboksilata (3,30 g, 13,1 mmol, 1,00 ekv.) u DCE (60,0 mL) je dodat PPh3 (6,89 g, 26,3 mmol, 2,00 ekv.), CCl4 (6,06 g, 39,4 mmol, 3,79 mL, 3,00 ekv.) u porcijama ispod N2. Smeša je mešana na 70°C tokom 3 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petrol etar/etil acetat=20/1 do 1/1). Jedinjenje terc-butil 4-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-J]pirimidin-7-karboksilat (2,54 g, 9,42 mmol, 72% prinosa, 100% čistoće) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca .. LCMS [ESI, M+1]: 214.

Korak C: terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat. Na smešu terc-butil 4-hloro-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4- d]pirimidin-7-karboksilata (1,30 g, 4,82 mmol, 1,00 ekv.) i benzil (2S)-2- (cijanometil)piperazin-1-karboksilat (1.00 g, 3.86 mmol, 0.80 ek) u DMAc (30.0 mL) je dodat DIEA (3.11 g, 24.1 mmol, 4.20 mL, 5.00 ek) pod N2. Smeša je mešana na 100°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (100 mL). Organski slojevi su isprani vodom (30 mL × 2) i slanim rastvorom (30 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, petrol etar/etil acetat=20/1 do 0/1). Jedinjenje terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-karboksilat (1.18 g, 2,30 mmol, 48% prinosa, 96% čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 493.

Korak D: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat. U smešu terc-butil 4-[(3S)-4-benziloksikarbonil-3-(cijanometil)piperazin-1-il]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-7- karboksilat (1.20 g, 2.44 mmol, 1.00 ek) u acetonitrilu (10.0 mL) je dodat HCl/dioksan (4.00 M, 12.2 mL, 20.0 ek) u porcijama na 25 °C pod N2.

Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja. Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il) piperazin-1-karboksilat (883 mg, 2,16 mmol, 89) % prinosa, 96% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 393.

Korak E: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (300 mg, 764 µmol, 1,00 ekv.) i 1-bromonaftalen (317 mg, 1,53 mmol, 212 uL, 2,00 ekv.) u toluenu (15,0 mL) je dodat Pd2(dba)3 (140 mg, 153 µmol, 153 µmol, 153 µmol, ekv., 306 µmol, 0,40 ekv.) Cs2CO3 (747 mg, 2,29 mmol, 3,00 ekv.) u jednoj porciji pod N2. Smeša je mešana na 90°C tokom 5 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20,0 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralisane zasićenim rastvorom NaHCO3 (5,00 mL) i ekstrahovale etil acetatom (50,0 mL × 2). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom.

Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150 mg, 289 umol, 38% prinos) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.

Korak F: 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 1-karboksilat (50,0 mg, 96,4 umol, 1,00 ek) u MeOH (3,00 mL) je dodat Pd/C (30,0 mg, 10% čistoće), NH3•MeOH (0,50 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 × 25 5 u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 35 % -59 %, 10 min). Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (8.63 mg, 22,4 umol, 23% prinos, 99,8% čistoće) je dobijena kao sivobela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 385.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,63 (s, 1H), 8,26 - 8,19 (m, 1H), 7,91 - 7,84 (m, 1H), 7,62 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,48 (m, 2H), 7,45 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,17 (D,J=7,2 Hz, 1H), 4,35 (s, 2H), 3,99 (br d,J=12,8 Hz, 1H), 3,83 (br d,J=12,8 Hz, 1H), 3,53 - 3,23 (m, 3H), 3,20 - 3,07 (m, 2H), 3,07 - 2,90 (m, 4H), 2,63 - 2,49 (M, 2H).

Korak G: U smešu 2-[(2S)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-irido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril (60,0 mg, 156 µmol, 1,00 ek) u etil acetatu (0,60 mL) je dodat 2-fluoroprop-2-enska kiselina (56,2 mg, 624 µmol, 4,00 ek), TEA (253 mg, 2,34 mmol, 2,50 mmol, 348 ul,16,0 ekv.) i T3P (596 mg, 936 µmol, 557 uL, 50% čistoće, 6,00 ekv.) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (1,00 mL) na 0°C, a zatim ekstrahovana etil acetatom (10,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5.00 mL × 1), sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 × 255 u;mobilna faza: [Voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 40 %-70 %, 10 min). Jedinjenje 2-[(2S)-1-(2-luoroprop-2-enoil)-4-[7-(1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il]piperazin-2-il]acetonitril (15,2 mg, 32,8 umol, 21% prinos, 98,9% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 457.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,67 (s, 1H), 8,26 - 8,18 (m, 1H), 7,91 - 7,84 (m, 1H), 7,63 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,49 (m, 2H), 7,45 (t,J=7,6 Hz, 1H), 7,18 (D,J=6,8 Hz, 1H), 5,54 - 5,34 (m, 1H), 5,27 (dd,J=4,0, 17,2 Hz, 1H), 4,91 (br, 1H), 4,46 - 4,29 (m, 2H), 4,14 (br d,J=13,6 Hz, 1H), 3,99 (br d,J=13,2 Hz, 1H), 3,63 - 3,32 (m, 4H), 3,16 (br t,J=11,2 Hz, 2H), 2,99 (br d,J=8,0, 16,4 Hz, 3H), 2,90 - 2,77 (m, 1H).

PRIMER 611

121

(S)-2-(1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(8-metilnaftalen-1-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4- il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (25)-2-(cijanometil)-4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (100 mg, 255 µmol, 1,00 ek) i 1-bromo-8-metil-naftalen (113 mg, 510 µmol, 10,6 uL, 2,00 ek) u toluenu (8,00 mL) je dodat Pd2(dba)3 (46,7 µmol, 0µl) ), RuPhos (47,6 mg, 102 µmol, 0,40 ekv.) Cs2CO3 (249 mg, 764 µmol, 3,00 ekv.) u jednoj porciji pod N2. Smeša je mešana na 90°C tokom 5 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3).

Jedinjenje benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin -1-karboksilat (150 mg, sirov) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4- il]piperazin-1-karboksilat (50,0 mg, 93,9 µmol, 1,00 ekv.) u metanolu (1,00 mL) je dodat NH3•MeOH (93,9 µmol, 0,2 mL, 20% čistoće, 1,00 mg/C1 ekv.), Pd0 ekv.10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%: 38 %-62 %, 10 min). Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il ]acetonitril (6,13 mg, 15,3 umol, 16% prinos, 99,5% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 399.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,61 (d,J=4,8 Hz, 1H), 7,74 - 7,63 (m, 2H), 7,41 (t,J=2,8, 7,6 Hz, 1H), 7,37 - 7,31 (m, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 2H), 4,32 (Br d,J=18,0 Hz, 1H), 4,07 - 3,92 (m, 1H), 3,92 - 3,86 (m, 1H), 3,86 - 3,67 (m, 1H), 3,56 - 3,48 (m, 1H), 3,30 - 3,24 (m, 1H), 3,24 - 3,18 (m, 1H), 3,18 - 2,96 (m, 4H), 2,94 (D,J=2,4 Hz, 3H), 2,92 (br s, 1H), 2,92 - 2,83 (m, 1H), 2,69 - 2,59 (m, 1H), 2,57 - 2,53 (m, 2H).

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d] pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 2-il]acetonitril (60,0 mg, 151 µmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (1,00 mL) je dodata 2-fluoroprop-2-enska kiselina (54,2 mg, 602 µmol, 4,00 ekv.), TEA (244 mg, 241 mmol , 335 uL, 16,0 ek) i T3P (575 mg, 903 µmol, 537 uL, 50% čistoće, 6,00 ek) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (1,00 mL) na 0°C, a zatim ekstrahovana etil acetatom (10 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 × 255 u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 40 %-70 %, 10 min). Jedinjenje 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (8,97 mg, 18,7 umol, 12% prinos, 98,2% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 492.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,64 (d,J=7,2 Hz, 1H), 7,74 - 7,64 (m, 2H), 7,47 - 7,39 (m, 1H), 7,39 - 7,32 (m, 1H), 7,29 (br d,J=1,2 Hz, 1H), 7,26 -7,19 (m, 1H), 5,53 - 5,33 (m, 1H), 5,26 (dd,J=3,6, 17,2 Hz, 1H), 4,87 (br s, 1H),

121

4,33 (br dd,J=14,8, 18,0 Hz, 1H), 4,19 (br d,J=13,6 Hz, 1H), 4,12 - 3,97 (m, 2H), 3,95 - 3,84 (m, 1H), 3,61 - 3,42 (m, 2H), 3,27 - 3,04 (m, 4H), 2,92 (d,J=2,4 Hz, 3H), 2,89 - 2,62 (m, 3H).

PRIMER 612

(S)-2-(4-(7-(5-hloroizohinolin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. U smešu benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (300 mg, 764 µmol, 1,00 ekv.) i 4-bromo-5-hloro-izohinolin (371 mg, 1,53 mmol, 10,6 µL, 2,00 ekv.) u toluenu (15,0 mL) je dodat Pd2(dba)3 (140 µk.2mol). ), RuPhos (143 mg, 306 µmol, 0,40 ekv.), Cs2CO3 (747 mg, 2,29 mmol, 3,00 ekv.) u jednoj porciji pod N2. Smeša je degazirana i pročišćena sa N23 puta i mešana na 90°C 5 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (10,0 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20,0 mL × 1), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen flešom reverzne

121

faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralizovane zasićenim rastvorom NaHCO3 (5 mL) i ekstrahovale etil acetatom (50 mL × 2). Odvojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje benzil (2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin -1-karboksilat (130 mg, 223 umol, 29% prinos, 95% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 554.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido(3,4-d)pirimidin-4-il]piperazin-2-il] acetonitril. U rastvor benzil (2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-( cijanometil)piperazin-1-karboksilat (30,0 mg, 54,2 µmol, 1,00 ek) u metanolu (3,00 mL) je dodat NH3•MeOH (0,50 mL, 20% čistoće), Pd/C (35,0 mg, 10% čistoće) ispod N2.

Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta.

Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 × 255 u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 22 %-46 %, 10 min). Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il ]acetonitril (8,51 mg, 20,1 umol, 37% prinos, 99,4% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 420.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,02 (s, 1H), 8,60 (d, J=4,4 Hz, 1H), 8,35 (D,J=1,6 Hz, 1H), 7,91 (d,J=1,2, 8,4 Hz, 1H), 7,75 (d,J=1,2, 7,2 Hz, 1H), 7,50 (t,J=7,6 Hz, 1H), 4,54 (br d,J=17,2 Hz, 1H), 4,06 - 3,61 (m, 4H), 3,41 - 3,08 (m, 5H), 3,07 - 2,85 (m, 2H), 2,72 - 2,59 (m, 1H), 2,58 - 2,49 (m, 2H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-piridor3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U smešu 2-[(2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin- 2-il]acetonitril (60,0 mg, 143 µmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (0,80 mL) je dodata 2-fluoroprop-2-enska kiselina (25,7 mg, 286 µmol, 2,00 ek), TEA, 86,7 µl , 119 uL, 6,00 ek) i T3P (273 mg, 429 µmol, 255 uL, 50% čistoće, 3,00 ek) u porcijama na 0°C pod N2. Smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode (1,00 mL) na 0°C, a zatim ekstrahovana etil acetatom

121

(10,0 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5.00 mL × 1), sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 × 255 u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%:

22 %-52 %, 10 min). Jedinjenje 2-[(2S)-4-[7-(5-hloro-4-izohinolil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2 -fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (7.88 mg, 16.0 umol, 11% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 492.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,04 (d,J=3,6 Hz, 1H), 8,65 (d,J=6,4 Hz, 1H), 8,35 (d,J=11,6 Hz, 1H), 7,96 (m, 1H), 7,76 (d,J=1,2, J =7,88, 7,2 Hz, 1H), 7,56 - 7,47 (m, 1H), 5,55 - 5,33 (m, 1H), 5,26 (dd,J=3,2, 16,8 Hz, 1H), 5,03 - 4,70 (m, 1H), 4,55 (br d,J=6,4, 18,0 Hz, 1H), 4,23 - 3,84 (m, 4H), 3,69 (Br d,J=6,4 Hz, 1H), 3,50 (br d,J=13,6 Hz, 1H), 3,35 - 3,19 (m, 3H), 3,16 - 3,00 (m, 1H), 2,97 - 2,61 (m, 3H).

PRIMER 613

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4- il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-(2-fluoroakriloil)piperazin-2-il)acetonitril

121

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-(2-metilsulfanil-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (5.0 g, 11,4 mmol, 1,0 ekv.), 4-bromo-5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (7,05 g, 22,8 mmol, 2,0 ekv.), Pd2(dba)3 (2,09 g, 2,28 mmol , 0,2 ekv.), RuPhos (2,13 g, 4,56 mmol, 0,4 ekv.) i Cs2CO3 (9,29 g, 28,5 mmol, 2,5 ekv.) u toluenu (100 mL) je degazirana i ispuhana sa N2, zatim je mešana 3 puta, a zatim isprana na 90°C tokom 8 sati pod atmosferom N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni

121

(Si02, petrol etar/etil acetat = 20/1 do 2/1) i dalje prečišćen flešom reverzne faze [voda (0,1% mravlja kiselina)/acetonitril)]. pH smeše je podešen na ~7 zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i ekstrahovan etil acetatom (3 × 100 mL).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfanil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (4,90 g, 7,20 mmol, 63% prinos, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 667.

Korak B: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H- pirido[3,4-c]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfanil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 749 µmol, 1,0 ekv.) u toluenu (10 mL) je dodat m-CPBA (152 mg, 749 µmol) , 85% čistoće, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C 1 sat.

Korak C: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1- tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-

122

2-(cijanometil)-4-[7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-2-metilsulfinil-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (900 mg, 1,32 mmol, 1,0 ekv.) u toluenu (20 mL) je dodat t-BuONa (379 mg, 3,95 mmol) , 3,0 ekv.) i [(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metanol (398 mg, 2,64 mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1). Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil- 1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (630 mg, 793 µmol, 60 % prinosa, 97% čistoće) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 770.

Korak D: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran- 2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-ilacetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5, 6-dimetil-1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (400 mg, 519 µmol, 1.0 ek) u metanolu (2 mL) je dodat suvi Pd/C (50 mg, 10% čistoće) i NH3/metanol (1 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25°C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom.2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1-tetrahidropiran- 2-ilindazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (330 mg, 519 µmol, 99% prinos ) se dobija kao žuta čvrsta supstanca i koristi se u sledećem koraku direktno bez prečišćavanja. LCMS [ESI, M+1]: 636.

Korak E: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1H-indazol- 4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil- 1-tetrahidropiran-2-il-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (50 mg, 78,6 µmol , 1,0 ekv.) u dihlorometanu (50 uL) dodata je TFA (359 mg, 3,15 mmol, 233 µL, 40 ekv.).

Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 30 % - 60 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana.2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1H-indazol- 4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (7,29 mg, 13,2 µmol, 17% prinos, 99,7% čistoće) dobija se kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 552.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,95 (br, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 1H), 4,48 (dd,J=4,4, 10,8 Hz, 1H), 4,33 - 4,19 (m, 3H), 4,00 (br d, .7=11,6 Hz, 1H), 3,83 (br d, .7=11,6 Hz, 1H), 3,51 (t,J=5,2 Hz, 2H), 3,42 (d,J=5,6, 11,7 Hz, 1H), 3,26 (br, 1H), 3,17 - 2,95 (m, 4H), 2,94 - 2,85 (m, 1H), 2,84 - 2,62 (m, 3H), 2,61 - 2,49 (m, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,32 - 2,18 (m, 1H).

Korak F: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1H-indazol- 4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]lacetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1H- indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 181 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (24,5 mg, 272 µmol, 1,5 ekv) u DMF (2 mL) je dodat T3P (461 mg, 725 µmol, 431 µL, 50% čistoće u etil acetatu, 4,0 ek) i TEA (14) 1,45 mmol, 202 uL, 8,0 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata.

Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona:

Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) -ACN]; B%: 38 % - 68 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1H-indazol- 4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2enoil)piperazin-2-il]acetonitril (11 mg, 17,5 umol, 10% prinos, 99,2% čistoća, 100% ee) je dobijeno kao sivobela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 624.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10,27 - 9,49 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 1H), 5,55 - 5,34 (m, 1H), 5,26 (dd,J=3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,86 (br, 1H), 4,46 (dd,J=4,8, 10,8 Hz, 1H), 4,34 - 3,88 (m, 6H), 3,66 - 3,25 (m, 5H), 3,19 - 2,62 (m, 7H), 2,60 - 2,45 (m, 4H), 2,42 (s, 3H), 2,35 (s, 7H), 3H), 2,32 - 2,19 (m, 1H).

PRIMER 614

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-difluoro-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4- il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)-1-((E)-4-fluorobut-2-enoil)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksil-7-(5,6-dimetil-1H-indazol-4 -il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-

122

fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil- 1H-indazol-4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 181 µmol, 1,0 ekv.) i ( E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (28,3 mg, 272 µmol, 1,5 ekv.) u DMF (2 mL) je dodat T3P (461 mg, 725 µmol, 431 uL, 50% čistoće u etil acetatu, 4,0 ekv.) i TEA (147 mg, 1,45 mmol, 202 uL, 8,0 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona:: XIntia C18 150 * 25 mm * suma; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) -ACN]; B%: 40 % - 70 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-difluoro-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-7-(5,6-dimetil-1H-indazol- 4-il)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-[(E)-4-fluorobut-2-enoil]piperazin-2-il]acetonitril (12 mg, 18,3 umol, 10% prinos, 97,3% čistoća, 95% ee) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 638.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 10,06 (br, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 1H), 7,07 - 6,97 (m, 1H), 6,61 (br d,J=14,8 Hz, 1H), 5,20 - 5,07 (m, 3H), 4,48 (dd,J=4,8, 11,2 Hz, 1H), 4,31 - 4,27 (m, 3H), 4,20 - 3,80 (m, 3H), 3,55 (br,J=5,2 Hz, 3H), 3,49 - 3,27 (m, 2H), 3,13 (br s, 1H), 3,05 - 2,63 (m, 6H), 2,62 -2,46 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 3H), 2,33 - 2,21 (m, 1H).

PRIMER 615

2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metoksil-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metanola (217 mg, 1,51 mmol, 68,2 µL, 3 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[ 7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 504 µmol, 1 ekv.) u toluenu (15 mL) je dodat t-BuONa (145 mg, 1,51 mmol, 3 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je ugašena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 50 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-7]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (180 mg, 267 umol, 53% prinos, 99,8% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 675.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,73 - 7,60 (m, 2H), 7,27 (s, 9H), 5,21 (s, 2H), 4,68 (br, 1H), 4,47 - 4,34 (m, 1H), 4,30 - 4,15 (m, 2H), 4,13 - 4,04 (m, 1H), 3,95 - 3,69 (m, 2H), 3,56 - 3,34 (m, 2H), 3,28 - 2,48 (m, 13H), 2,47 - 2,331,88

122

(m, 3H), 2,22 - 2,11 (1H) (Br dd,J=8,4, 12,6 Hz, 1H), 1,56 (ddd,J=4,6, 7,8, 12,6 Hz, 1H), 1,16 (d,J=4,0 Hz, 3H), 1,10 - 0,98 (m, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (130 mg, 193 µmol, 1 ekv.) u MeOH (4 mL) je dodat NH3• MeOH (2 mL, 15% čistoće) i Pd/C (26 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom.2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetil pirolidin-2-il]metoksi]-6,8- dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 159 µmol, 85,9% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanje. LCMS [ESI, M+1]: 540.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (90 mg, 143 µmol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (38,7 mg , 430 µmol, 3 ek) i Et3N (130 mg, 1,29 mmol, 179 uL, 9 ek) u etil acetatu (15 mL) je dodat T3P (365 mg, 573 mmol, 341 uL, 4 etil acetata, čistoće 50% ek) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C 1 sat. Po završetku, smeša je razblažena vodom (3 mL). Organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom (1 × 10 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni (Si02, etil acetat/metanol = 20/1 do 10/1). Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 62 % - 89 %, 10 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizacija. 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-[[(2S)-1,4,4-trimetilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (12,7

122

mg, 20,6 µmol, 99,7% čistoće) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 612.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,79 - 7,56 (m, 2H), 7,51 - 7,31 (m, 2H), 7,27 - 7,08 (m, 2H), 5,65 - 5,08 (m, 2H), 4,85 (br, 1H), 4,49 - 4,32 (m, 1H), 4,30 - 3,96 (m, 1H), 3,95 (1H, 1H, 1H), 3,71 - (1H, 1H), 1H 3,59 - 3,35 (m, 2H), 3,28 - 2,54 (m, 13H), 2,42 (br, 3H), 2,16 (br d,J=8,8 Hz, 1H), 1,96 - 1,81 (m, 1H), 1,63 - 1,45 (m, 1H), 1,15 (br s, 3H), 1,06 (br s, 3H).

PRIMER 616

2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak A: benzil (2S)2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il)metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6, 8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. U rastvor [(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metanola (326 mg, 2,52

122

mmol, 68,2 ul, 3 ekv.) i benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(8-metil-1-naftil)-2-metilsulfinil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg, 841 µmol, 1 ekv) u toluenu (20 ml) je dodat t-BuONa (242 mg, 2,52 mmol, 3 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je ugašena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 ml). Organska faza je odvojena, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (328 mg, 461 umol, 55% prinos, 92,7% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 661.

Korak B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil-6,8-dihidro- 5H-dirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1- naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (100 mg, 151 µmol, 1 ekv.) u MeOH (4 mL) je dodat NH3•MeOH (2 mL, 20% čistoće) i Pd/C (20 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 0,5 sata. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (kolona: Phenomenex Synergi C18150 * 30 * 4 mm; mobilna faza: [voda (0,225 % FA) - ACN]; B%: 13 % - 43 %, 10 min). Nakon toga, talog je pročišćen prep - HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 55 % - 85 %, 10 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizacija.2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (13,9 mg, 26,4 umol, 17% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 526.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,69 (d,J=8,2 Hz, 1H), 7,64 (dd,J=2,6, 7,6 Hz, 1H), 7,40 (dt,J=4,0, 7,8 Hz, 1H), 7,36 - 7,31 (m, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 2H), 4,43 (dt,J=4,8, 10,2 Hz, 1H), 4,28 - 4,11 (m, 2H), 4,07 - 3,70 (m, 3H), 3,48 (br d,J=11,8 Hz, 1H), 3,38 - 2,82 (m, 11H), 2,80 - 2,64 (m, 2H), 2,61 - 2,53 (m,

122

3H), 2,49 (T,J=8,6 Hz, 1H), 2,42 (d,J=2,4 Hz, 3H), 2,35 - 2,15 (m, 2H), 1,39 - 1,25 (m, 1H), 1,08 (d,J=6,8 Hz, 3H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il] metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (100 mg, 190 µmol, 1 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (51,4 mg , 571 µmol, 3 ek) i Et3N (173 mg, 1,71 mmol, 238 uL, 9 ekv.) u DMF (10 mL) je dodat T3P (484 mg, 761 mmol, 452 uL, 50 % čistoće, 4 ekv.), na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Po završetku, ostatak je razblažen vodom (10 mL) i ekstrahovan etil acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1 × 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni (SiO2, dihlorometan/metanol = 10/1). Nakon toga, ostatak je prečišćen prep -HPLC (kolona: Xtimate C18150 * 25 mm * suma; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 60 % - 90 %, 10 min). Ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio ACN, a zatim liofilizacija. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-dimetilpirolidin-2-il]metoksi]-7-(8-metil-1-naftil)-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (22,2 mg, 37,1 µmol, 19% prinos, 99,8% čistoće ) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 598.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,72 - 7,61 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 1H), 7,37 - 7,31 (m, 1H), 7,26 - 7,17 (m, 2H), 5,53 - 5,32 (m, 1H), 5,26 (dd,J=3,6,16,8 Hz, 1H), 4,86 (), 1H 4,48 - 4,35 (m, 1H), 4,30 - 3,99 (m, 4H), 3,95 -3,73 (m, 1H), 3,60 - 3,39 (m, 2H), 3,29 - 2,94 (m, 5H), 2,93 - 2,67 (m, 7H), 2,66 -2,56 (m, 1H), 2,55 - 2,47 (m, 1H), 2,43 (d,4,6 (J, 3H) 2,35 - 2,13 (m, 2H), 1,36 -1,25 (m, 1H), 1,09 (dd,J=3,0, 6,8 Hz, 3H).

PRIMER 617

122

2-((S)-1-(2-fluoroakriloil)-4-(7-(3-metilizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Korak A: benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat. Smeša benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 593 µmol, 1,0 ekv.), 4-bromo-3-metil-izohinolin (198 mg, 890 µmol, 1,5 ekv.), Cs2CO3, (483 mg mmol, 2,5 ekv.), BINAP-Pd-G3 (118 mg, 119 µmol, 0,2 ekv.) u dioksanu (6 mL) je degasiran i pročišćen sa N23 puta. Smeša je zagrevana na 110 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom

12

na koloni (Si02, Etil acetat/Metanol = 100/1 do 10:1). benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]pipenazin-1-karboksilat (200 mg, 303 umol, 51% prinos, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 647.

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6 ,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (50 mg, 77,3 µmol, 1,0 ekv.) u metanolu (2 mL) je dodat suvi Pd/C (10 mg, 10% čistoće) i NH3/MeOH (1 mL, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 0,5 sata. Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 30 % - 60 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana.2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (7,81 mg, 14,9 umol, 19% prinos, 98,3% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 513.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,07 (s, 1H), 8,14 (d,J=8,4 Hz, 1H), 7,97 (d,J=8,0 Hz, 1H), 7,65 (dt,J=1,2,7,6 Hz, 1H), 7,58 - 7,47 (m, 1H), 4,41 (br dd,J=4,8, 10,4 Hz, 1H), 4,3 (s, 2H), 4,16 (dd,J=6,8, 10,8 Hz, 1H), 4,10 - 3,93 (m, 1H), 3,91 - 3,77 (m, 1H), 3,57 - 3,37 (m, 2H), 3,36 - 3,21 (m, 1H), 3,18 - 2,85 (m, 6H), 2,75 - 2,61 (m, 5H), 2,56 (br d,J, 6,8), 2H, (h,) 2,48 (s, 3H), 2,33 - 2,22 (m, 1H), 2,12 - 1,98 (m, 1H), 1,94 - 1,80 (m, 3H).

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro -5H-pirido[3,4-7]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (80 mg, 156 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (28,1 mg, 312 µmol, 2,0 ek) u DMF-u (2 mL) je dodat T3P (297 mg, 468 µmol, 278 µL, 50% čistoće u etil acetatu, 3,0 ek) i TEA (126 mg, 1,25 mmol, 173 µL, 0°k) C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (20

12 1

mL) i isprana vodom (3 × 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150 * 255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 35 % - 65 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(3-metil-4-izohinolil)-2-([(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (12 mg, 19,9 µmol, 13% prinos, 97,4% čistoće, 100% e.e. ) se dobija kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 585.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,08 (s, 1H), 8,26 - 8,04 (m, 1H), 7,97 (br d,J=7,6 Hz, 1H), 7,73 - 7,60 (m, 1H), 7,58 - 7,49 (m, 1H), 5,42 (d,J=47,6 Hz, 1H), 5,27 (DD,J=3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,85 (br s, 1H), 4,45 - 3,92 (m, 7H), 3,83 - 3,25 (m, 4H), 3,22 - 2,59 (m, 10H), 2,49 (s, 3H), 2,36 - 2,24 (m, 1H), 2,13 - 1,99 (m, 1H), 1,92 - 1,76 (m, 3H).

PRIMER 618

S)-benzil-2-(cijanometil)-4-(7-(7-fluorolzohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat

12 2

Korak A: (S)-benzil-2-(cijanometil)-4-(7-(7-fluoroizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6 ,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat. U rastvor benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4 -d]pirimidin-4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 0,59 mmol, 1,0 ekv.) u toluenu (10,0 mL) je dodat 4-bromo-7-fluoro-izohinolin (268 mg, 1,19 mmol, 2,0 ekv.), RuPhos (111 mg, 237 µmol, 0,40 ekv.), Cs2CO3 (483 mg, 1,48 mmol, 2,5 ekv.) i Pd2(dba)3 (109 mg, 118 µmol, 0,20 ekv.), smeša je mešana na 2°C, crvena na 25°C na 90 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom (5,0 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 5,0 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3 × 5,0 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Si02, petroleum etar/etil acetat = 1/1 do petroleum etar/etil acetat/EtOH (2% NH3H2O) = 4/3/1). Zatim je sirovi proizvod prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (0,1% FA stanje). Željene frakcije su sakupljene i koncentrovane pod vakuumom da bi se dobilo (S)-benzil-2-(cijanometil)-4-(7-(7-fluoroizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin). -2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (105 mg, 160 µmol, 27% prinos, 99% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [M+1]: 651.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform -d) δ = 2,04 - 2,08 (m, 4 H), 2,69 (d,J=5,64 Hz, 1 H), 2,73 (d,J=5,52 Hz, 1 H), 2,81 - 2,85 (m, 3 H), 2,87 - 3,02 (m, 3 H), 3,09 - 3,19 (m, 1 H), 3,32 - 3,45 (m, 3 H), 3,45 - 3,55 (m, 1 H), 3,57 - 3,68 (m, 1 H), 3,99 (br d,J=12,52 Hz, 1 H), 4,09 - 4,17 (m, 1 H), 4,28 - 4,34 (M, 1 H), 4,31

12

(m, 1 H), 4,46 (dd,J=11,84, 4,31 Hz, 1 H), 4,63 - 4,74 (m, 1 H), 4,80 (br dd,J=11,32, 6,82 Hz, 1 H), 5,20 - 5,23 (m, 2H), 5,30 - 5,32 (m, 2 H), 7,35 - 7,42 (M, 5 H), 7,47 - 7,53 (m, 1 H), 7,60 (dd,J=8,68, 2,56 Hz, 1 H), 8,16 (dd,J=9,24, 5,25 Hz, 1 H), 8,22 - 8,25 (m, 1 H), 8,95 - 9,00 (m, 1 H).

Korak B: 2-((S)-4-(7-(7-fluoroizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril. U rastvor (S)-benzil 2-(cijanometil)-4-(7-(7-fluoroizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5 ,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (30,0 mg, 46,1 µmol, 1,0 ek) u MeOH (1,0 mL) je dodat NH3/MeOH (46,1 µmol) , 1,5 mL, 15% čistoće, 1,0 ekv.) i Pd/C (20,0 mg, 46,1 µmol, 10% čistoće, 1,0 ekv.) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 (93,1 ug, 46,1 µmol, 1,0 ekv.) nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (15 psi) na 25 °C tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i isprana sa MeOH (20 ml). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom na 45°C da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (osnovno stanje) (kolona: XIntia C18 150*25 mm*5 um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 43 %-73 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana. 2-((S)-4-(7-(7-fluoroizohinolin-4-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-5,6,7,8-tetrahidropirido [3,4-d]pirimidin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (7 mg, 13,3 umol, 28,8% prinosa, 98% čistoće) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [M+1]: 517.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 1,75 - 1,90 (m, 3 H), 1,99 - 2,13 (m, 1 H), 2,24 - 2,34 (m, 1 H), 2,45 - 2,51 (m, 3 H), 2,53 - 2,58 (m, 2 H), 2,64 -2,74 (m, 1 H), 2,80 - 2,88 (m, H), - (M, 2 H), 2,89 - 2,96 (m, 1 H), 2,97 - 3,06 (m, 1 H), 3,07 - 3,18 (m, 3 H), 3,22 - 3,33 (m, 1 H), 3,38 - 3,48 (m, 2 H), 3,82 - 3,89 (m, 1 H), 4,03 (br d,J=12,36 Hz, 1 H), H, (br d, Hz, H) 4,18 (dd,J=10,56, 6,69 Hz, 1 H), 4,30 (s, 2 H), 4,40 (dd,J= 10,64, 4,75 Hz, 1 H), 7,49 (ddd,J=9,16, 8,35, 2,63 Hz, 1 H), 7,60 (dd,J=8,76, 2,50 Hz, 1 H), 8,17 (dd,J= 9,24, 5,38 Hz, 1 H), 8,24 (S, 1 H), 8,96 (s, 1 H).

Korak C: 2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[ 3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-[(2S)-4-[7-(7-fjoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-

12 4

il]acetonitril (90,7 mg, 175 µmol, 1,0 ekv.) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (31,6 mg, 351 µmol, 2,0 ek) u DMF (2 mL) je dodat T3P (335 mg, 526 µmol, 313 µL, 50% čistoće u etil acetatu, 3,0 ek) i TEA (142 mg, 1,40 mmol, 195 µL, 8,0 ekv.) na °C. Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (20 mL) i isprana vodom (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (SiO2, Etil acetat/Metanol=100/1 do 10/1) i daljim prečišćavanjem prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*25 mm*5 um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v) - ACN]; B%: 32 % - 59 %, 10 min). Željena frakcija je sakupljena i liofilizovana.2-[(2S)-4-[7-(7-fluoro-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-1-(2-fluoroprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (8 mg, 13,4 µmol, 7,6% prinos, 98,3% čistoće, 100% e.e. ) se dobija kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+1]: 589.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,97 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,16 (dd,J=5,2, 9,2 Hz, 1H), 7,60 (dd,J=2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,54 (m, 1H), 5,55 - 5,33 (m, 1H), 7,405,27 (DD,J=3,6, 16,8 Hz, 1H), 4,87 (br s, 1H), 4,44 - 3,94 (m, 7H), 3,72 -3,28 (m, 4H), 3,22 - 3,06 (m, 2H), 3,04 - 2,93 (m, 2H), 2,93 - 2,74 (m, 2H), 2,72 -2,66 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,36-2,24 (m, 2H), 1H), 2,13 - 2,03 (m, 1H), 1,92 - 1,76 (m, 3H).

PRIMER 619

2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

12

Korak A: benzil (2S)-4-[7-(1-hloro-5-metil-4-izohinolil)-2-[((2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H -pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Benzil (2S)-2-(cijanometil)-4-[2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-d]pirimidin -4-il]piperazin-1-karboksilat (300 mg, 593 µmol, 1,0 ekv.), 4-bromo-1-hloro-5-metil-izohinolin (198 mg, 771 µmol, 1,3 ekv.), Pd2(dba)3 (109 mg, 119 µmol, 0,2 ekv.) i Cs2CO3 (483 mg, 1,48 mmol, 2,5 ekv.), KsantPhos (137 mg, 237 mmol, 0,4 ekv.) u toluenu (10 mL) i zatim zagrejan do 9 °C C tokom 10 sati pod N2. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, petrol etar/etil acetat 2/1 do 0/1) nakon čega je usledio fleš reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Željene frakcije su sakupljene i neutralisane čvrstim NaHCO3, koncentrovane pod vakuumom da bi se uklonio MeCN i ekstrahovani etil acetatom (2 × 15 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio benzil (2S)-4-[7-(1-hloro-5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 209 µmol, 35% prinos, 95% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 681.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 8,27 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 8,08 - 7,99 (m, 1H), 7,60 - 7,51 (m, 2H), 7,44 - 7,36 (m, 5H), 5,25 - 5,17 (m, 2H), 4,74 - 4,60 (m, 1H), 4,414,14 - 4,32 (m, 1H, 1H, 1H), 4,28 (1H, 1H, 1H, 1H, 1H) (M, 2H), 4,08

12

- 3,88 (m, 2H), 3,83 (br d,J= 17,6 Hz, 1H), 3,61 - 3,51 (m, 1H), 3,50 - 3,36 (m, 1H), 3,31 - 2,94 (m, 6H), 2,91 (d,J= 2,4 Hz, 3H), 2,81 - 2,59 (m, 4H), 2,46 (D,J= 4,0 Hz, 3H), 2,33 - 2,21 (m, 1H), 2,06 - 1,97 (m, 1H), 1,92 - 1,72 (m, 3H).

Korak B: 2-[(2S)-4-[7-(5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor benzil (2S)-4-[7-(1-hloro-5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (130 mg, 191 µmol, 1 ekv.) u MeOH (3 mL) je dodat NH3•MeOH (2 mL, 20% čistoće), Pd/C (65 mg, 10% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana na 25°C tokom 2 sata. Po završetku, katalizator je uklonjen filtriranjem kroz čep celita. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 80 mg sirovog proizvoda.

Uzimanje 20 mg sirovog proizvoda je prečišćeno prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 28 %-58 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobilo 2-[(2S)-4-[7-(5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (10,8 mg, 21,0 umol, 44% prinos, 99,9% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 513.

Korak C: 2-[(2S)-1-(2-fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(5-metil-4-izohinolil)-2-[((2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril. U rastvor 2-fluoroprop-2-enske kiseline (24,6 mg, 273 µmol, 2,0 ekv.) i DIEA (70,6 mg, 546 µmol, 95,1 µL, 4,0 ekv.) u DCM (1,4 mL, 77) dodato je 9 mg HATU. 205 µmol, 1,5 ekv.) na 0°C. Posle mešanja na 0°C tokom 20 minuta, 2-[(2S)-4-[7-(5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- U smešu je dodat 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (70 mg, 137 µmol, 1,0 ekv.). Smeša je mešana na 25°C 40 minuta. Po završetku, smeša je razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (6 × 5 mL). Organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Al2O3, petrol etar/etil acetat 1/1 do etil acetat/metanol 10/1), a zatim prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 35 %-65 %, 10 min). Željene frakcije su sakupljene i liofilizovane da bi se dobio 2-[(2S)-1-(2-

12

fluoroprop-2-enoil)-4-[7-(5-metil-4-izohinolil)-2-[[(2S) -1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (20,6 mg, 34,3 µmol, 25% prinos, 97,3% čistoće) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 585.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 9,03 (d,J= 6,0 Hz, 1H), 8,30 (d,J= 16,8 Hz, 1H), 7,83 (br d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,55 - 7,44 (m, 2H), 5,54 - 5,32 (M, 1H), 5,31 - 5,18 (m, 1H), 5,09 - 4,48 (m, 1H), 4,43 - 4,34 (m, 1H), 4,32 - 4,07 (m, 4H), 4,06 - 3,81 (m, 2H), 3,64 - 3,42 (m, 2H), 3,35 - 3,26 (m, 1H), 3,25 - 2,96 (m, 1H), 2,92 (m, 1H, - (m, 4H) (D,J= 2,8 Hz, 3H), 2,90 - 2,73 (m, 2H), 2,72 - 2,61 (m, 2H), 2,51 - 2,42 (m, 3H), 2,34 - 2,23 (m, 1H), 2,13 - 1,99 (m, 1H), 1,92 - 1,73 (m, 3H).

PRIMER 620

1-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-6-fluoro-1,4-diazepan-1-il]-2-fluoro-prop-2-en-1-on

12

Korak A: terc-butil 4-benzil-6-fluoro-1,4 - diazepan-1-karboksilat, tercbutil 4-benzil-6-fluoro-1,4 - diazepan-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (3R)-4-benzil-3-(hidroksimetil) piperazin-1-karboksilata (1,5 g, 4,90 mmol, 1 ekv.) u DCM (40 ml) dodat je DAST (3,95 g, 24,48 mmol) , 3,23 ml, 5 ekv.) u kapima na 0°C, i smeša je mešana na 20°C tokom 5 sati. Smeši je dodat zasićeni NaHCO3 (30 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (30 mL×2). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (PE: EA=20~5:1) da bi se dobio terc-butil 4-benzil-6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat (980 mg, 3,18 mmol, 64,91% prinos) kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]: 309.

Korak B: terc-butil 6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat. U rastvor tercbutil 4-benzil-6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilata (900,00 mg, 2,92 mmol, 1 ekv.)

12

i Pd/C (200 mg, 2,92 mmol, 10% čistoće, 1 ek) i Pd(OH)2 (179,92 mg, 1,28 mmol, 4,39e-1 ek) u MeOH (20 mL) i smeša je mešana na 40°C 12 sati pod H2 (50 psi). Smeša je filtrirana, koncentrovana da bi se dobio terc-butil 6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat (630 mg, 2,89 mmol, 98,90% prinos) kao bezbojno ulje.

Korak C: [7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-ilmetoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]trifluorometansulfonat. U rastvor 7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d Dodati su ]pirimidin-4-ol (700 mg, 1,65 mmol, 1 ekv.) i TEA (500,09 mg, 4,94 mmol, 687,88 µL, 3 ekv.), 4A molekulska sita (500 mg) u DCM (7 mL) (69 Tf21). mg, 2,47 mmol, 407,71 µL, 1,5 ekv.) na -40°C, i mešano na 0°C 30 min. Smeši je dodata voda (2 mL) i ekstrahovana sa DCM (5 mL). Organski sloj je osušen preko Na2S04, filtriran, koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (PE:EA=10-1:1) da bi se dobio [7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometansulfonat (470 mg, 843,83 umol, 51,22% prinos) kao crveno ulje. LCMS [ESI, M+1]: 557.

Korak D: terc-butil 4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4 -d]pirimidin-4-ir]-6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat. U rastvor [7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il], trifluorometansulfonat (440 mg, 789,97 µmol, 1 ekv.) i terc-butil-6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat (258,64 mg, 1,18 mmol, 1,5 ekv.) u DMAC (5 ml) je dodato DIEA (306,29 mg, 2,37 mmol, 412,79 µL, 3 ekv.), i smeša je mešana na 25°C tokom 30 minuta. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni reverzne silika gela (0,001 FA) da bi se dobio terc-butil 4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat (260 mg, 415,88 µmol, 52,65% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 625.

Korak E: 7-(8-hloro-1-naftil)-4-(6-fluoro-1,4-diazepan-1-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor terc-butil 4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-6-fluoro-1,4-diazepan-1-karboksilat (240,00 mg, 383,89 µmol, 1 ekv.) u DCM (3 mL) je dodat TFA (12,32 g, 108,05 mmol, 8,00 mL,

124

281,45 ekv.), i smeša je mešana na 20°C 30 min. Smeša je koncentrovana i dodat je DCM (10 mL), ispran sa zasićenim Na2CO3 (5 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, koncentrovan da bi se dobio 7-(8-hloro-1-naftil)-4-(6-fluoro-1,4-diazepan-1-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5Hpirido[3,4-d]pirimidin (200 mg, sirov) kao žuta čvrsta supstanca. Nešto od ovog materijala (160 mg, 304,73 µmol) je direktno korišćeno u sledećem koraku.40 mg sirovog proizvoda je prečišćeno prep-HPLC (prečišćeno prep-HPLC (kolona: Shim-pack C18 150*25*10um; mobilna faza: [voda (0,225 %FA)-];B%: 4 %-34 %,10 min), zatim je talog bio prep-HPLC (kolona: Xtimate C18150*25 mm*5um; mobilna faza: [voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN];B%: 60 %-90 %,10min) da bi se dobio 7-(8-hloro-1-naftil)-4-(6-fluoro-1,4-diazepan-1-il)-2-[[(2S)-1- metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (9 mg, 16,99 µmol). LCMS [ESI, M+1]: 523.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ =7,76 (d,J=8,07 Hz, 1 H) 7,61 (t,J=8,38 Hz, 1 H) 7,52 (br d,J=7,46 Hz, 1 H) 7,44 (dt,J=15,86,7,90 Hz, 1 H) 7,34 (t,J=7,76 Hz, 1 H) 7,25-7,18 (dd,J=7,46 Hz, 1 H) 4,80 - 5,24 (m, 1 H) 4,31 - 4,46 (m, 2 H) 4,08 - 4,30 (m, 2 H) 3,71 - 4,04 (m, 3 H) - (m, H) 3,50 - 3,68 (m, 2 H) 2,81 - 3,37 (m, 7 H) 2,46 - 2,73 (m, 5 H) 2,25 - 2,35 (m, 1 H) 2,01 - 2,14 (m, 1 H) 1,82 -1,91 (m, 3 H).

Korak F: 1-[4-(7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-piridor3,4-d ]pirimidin-4-il]-6-fluoro-1,4-diazepan-1-il]-2-fluoroprop-2-en-1-on. U rastvor 7-(8-hloro-1-naftil)-4-(6-fluoro-1,4-diazepan-1-il)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d] pirimidin (150,00 mg, 285,68 µmol, 1 ekv) i 2-fluoroprop-2-enska kiselina (51,45 mg, 571,36 µmol) EA (2 mL) je dodat T3P (50 M, 17,14 µL, 3 ekv.) i TEA (231,27 mg, 2,29 mmol, 318,11 µL, 8 ek) na -40°C, i smeša je mešana na -30°C . Smeša je razblažena vodom (2 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 mL×2). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, koncentrovan. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Shim-pack C18 150<∗>25<∗>10um; mobilna faza: [voda(0,225 %FA)-];B%: 18 %-48 %, 10min) da bi se dobio 1-[4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il] metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-6-fluoro-1,4-diazepan-1-il]-2-fluoro-prop-2-en-l-on (90 mg, 140,78 umol, 49,28% prinos, 93,4% čistoće) kao žuta čvrsta supstanca.

LCMS [ESI, M+1]: 597.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,76 (d,J=8,19 Hz, 1 H) 7,58 - 7,66 (m, 1 H) 7,50 - 7,56 (m, 1 H) 7,38 - 7,50 (m, 1 H) 7,31 - 7,37 (m, 1 H) 7,24 - 7,16 (m, 1 H) - (m, H) 4,90 - 5,55 (m, 3 H) 4,32 - 4,48 (m, 2 H) 3,48 - 4,27 (m, 11 H) 3,21 - 3,43 (m, 1 H) 2,80 - 3,16 (m, 2 H) 2,44 - 2,73 (m, 5 H) 2,25 - 2,36 (m, 1 H) 2,00 - 2,14 (m, 1 H) - (m, H) 1,77 - 1,91 (m, 3 H).

PRIMER 621

1-[(3R)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dilidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-3-(difluorometil)piperazin-1-il]-2-fluoro-prop-2-en-1-on

Korak A: terc-butil (3R)-4-benzil-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat. Reakciona smeša terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (10 g, 46,2 mmol, 1 ekv.), BnBr (8,70 g, 50,9 mmol, 6,04 mL, 1,1 ekv.) i TEA (7,02) g, 69,36 mmol, 9,65 mL, 1,5 ek) u MeCN (100 mL) je zagrevan na 80°C tokom 12 sati. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u vodi (30 mL) i etil acetatu (50 mL). Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL), osušeni preko Na2SO4, i koncentrisan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petrol etar: etil acetat=5:1 do 3:1). tercbutil (3R)-4-benzil-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat (9 g, 29,4 mmol, 64% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 307.

<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,28 - 7,20 (m, 5H), 3,95 (br d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 5,6, 11,6 Hz, 1H), 3,61 (br., J = 3,2, 13,6 Hz, 1H), 3,52 (br dd, J = 4,0, 11,2 Hz, 2H), 3,35 (br d, J = 13,3 Hz, 2H), 3,09 (br, 1H), 2,77 - 2,65 (m, 1H), 2,51 (br, 1H), 2,20 (ddd, J = 3,2, 8,4, 12,0 Hz, 1H), 1,38 (s, 9H).

124

Korak B: terc-butil (3R)-4-benzil-3-formil-piperazin-1-karboksilat. DMSO (13,8 g, 176 mmol, 13,8 mL, 6,0 ekv.) je dodat na -65 °C rastvora (COCl)2 (11,2 g, 88,1 mmol, 7,71 mL, 3,0 ekv.) u dihlorometanu (90 mL). Posle 10 minuta, rastvor terc-butil (3R)-4-benzil-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (9 g, 29,4 mmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (40 mL) je polako uveden tokom 15 minuta . Posle mešanja na -65 °C tokom 1 sata, dodat je TEA (29,7 g, 294 mmol, 40,9 mL, 10,0 ekv.). Smeša je zagrejana na 28 °C tokom 30 min i zatim mešana još 30 min na toj temperaturi. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (5 mL) i odvojena. Organski sloj je osušen preko Na2SO4 i koncentrovan pod vakuumom. terc-butil (3R)-4-benzil-3-formil-piperazin-1-karboksilat (8,9 g, 29 mmol) je dobijen kao žuto ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak C: terc-butil (3R)-4-benzil-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (3R)-4-benzil-3-formil-piperazin-1-karboksilata (8,9 g, 29,2 mmol, 1,0 ekv.) u dihlorometanu (180 mL) dodat je DAST (9,43 g, 58,5 mmol, 7,73 mL, 2 ekv.) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 2 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena zasićenim NaHCO3 (150 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (60 mL) i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak (petroleum etar: Etil acetat=5:1) je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Petroleum etar: Etil acetat = 1:0 do 10:1). terc-butil (3R)-4-benzil-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat (1,5 g, 4,48 mmol, dva koraka 15% prinos, 97,5% čistoće) je dobijen kao žuto ulje. LCMS [ESI, M+1]:327.

Korak D: terc-butil (3R)-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat. U rastvor terc-butil (3R)-4-benzil-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilata (1,5 g, 4,60 mmol, 1,0 ekv.) u MeOH (10 mL) dodat je Pd/C (150 mg, 10% čistoće), Pd(OH)2/C (150 mg, 20% čistoće) pod N2. Suspenzija je degazirana pod vakuumom i pročišćena sa H2 nekoliko puta. Smeša je mešana pod H2 (50 psi) na 40°C tokom 12 sati. Po završetku, smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. terc-butil (3R)-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat (1,0 g, 4,23 mmol, 92% prinos) je dobijen kao žuto ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 5,91 - 5,43 (m, 1H), 4,17 - 3,78 (m, 2H), 3,13 - 2,66 (m, 5H), 1,48 (s, 9H).

Korak E: [7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksil-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4 -il] trifluorometansulfonat. U rastvor 7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d ]pirimidin-4-ol (1,0 g, 2,35 mmol, 1 ekv.), 4A molekulsko sito (1,0 g) i TEA (953 mg, 9,41 mmol, 1,31 mL, 4,0 ekv.) u dihlorometanu (20 mL) je dodat (99 Tf62 mg, 3,53 mmol, 582 uL, 1,5 ekv.) na -40°C i mešano 0,5 sati. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (15 mL). Smeša je filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je odvojen i vodeni slojevi su ekstrahovani dihlorometanom (30 mL). Organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (SiO2, petroleum etar: Etil acetat = 5:1 do 0:1) dajući [7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometansulfonat (1,0 g, 1,63 mmol, 69 % prinos, 91 % čistoća) kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]:557.

Korak F: terc-butil (3R)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-piridor3 ,4-d]pirimidin-4-il]-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat. Reakciona smeša [7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il] trifluorometansulfonat (1,0 g, 1,80 mmol, 1,0 ekv.) i terc-butil (3R)-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat (780 mg, 3,30 mmol, 1,84 ekv.) je mešan 90°C tokom 5 sati. Po završetku, reakciona smeša je rastvorena u MeCN (5 mL). Reakciona smeša je prečišćena flešom reverzne faze [voda (0,1% FA)/acetonitril]. Frakcije su bazifikovane čvrstim NaHCO3 do pH >7 i koncentrovane pod vakuumom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (3 × 20 mL) i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (dihlorometan :MeOH=7:1) da bi se dobio terc-butil (3R)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat (80 mg, 122 µmol, 7 % prinosa, 98 % čistoće) kao smeđe ulje. LCMS [ESI, M+1]: 643.

Korak G: 7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(2R)-2-(difluorometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin. U rastvor terc-butil (3R)-4-[7-(8-hlono-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-

124

dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-il]-3-(difluorometil)piperazin-1-karboksilat (20 mg, 31,1 µmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (0,05 mL) je dodata TFA (70,9 mg, 622 µmol, 46,0 µL, 20 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 25°C 1 sat. Po završetku, reakciona smeša je ugašena zasićenim Na2CO3 (4 mL) i ekstrahovana dihlorometanom: MeOH(10: 1, 3 × 8 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen Prep-HPLC (kolona: Waters Xbridge 150*255u; mobilna faza: [voda(10 mm NH4HCO3)-ACN];B%: 43 %-73 %,10 min). Frakcije su koncentrovane i liofilizovane. 7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(2R)-2-(difluorometil)piperazin-1-il]-2-[[(2R)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]- 6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (4,22 mg, 7,77 umol, 25% prinos, 100% čistoća) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]:543.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7.81 - 7.74 (m, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.16 (m, 1H), 6.69 - 6.09 (m, 1H), 4.68 - 4.54 (m, 1H), 4.51 - 4.34 (m, 2H), 4.30 - 4.11 (m, 1H), 4.07 - 3.68 (m, 2H), 3.63 - 3.46 (m, 2H), 3.44 - 3.31 (m, 2H), 3.30 - 3.21 (m, 1H), 3.20 - 2.97 (m, 4H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.78 - 2.67 (m, 1H), 2.58 - 2.49 (m, 3H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.94 - 1.73 (m, 3H).

Korak H: 1-[(3R)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido [3,4-d]pirimidin-4-il]-3-(difluorometil)piperazin-1-il]-2-fluoro-prop-2-en-1-on. U rastvor 7-(8-hloro-1-naftil)-4-[(2R)-2-(difluorometil)piperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il ]metoksi]-6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin (45 mg, 82,9 µmol, 1,0 ekv.), 2-fluoroprop-2-enska kiselina (22,4 mg, 249 µmol, 3,0 ekv.) u etil acetat (1 mL) je dodato 4A molekulsko sito (100 mg). Posle mešanja na 25 °C tokom 0,5 sata, dodaju se TEA (126 mg, 1,24 mmol, 173 µL, 15 ekv.) i T3P (211 mg, 331 µmol, 197 µL, 50% čistoće, 4 ekv.) na 0°C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 0,5 sata. Po završetku, reakciona smeša je ugašena vodom (1 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (3 × 5 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen kolonom (Al2O3, petrol etar : etil acetat= 3:1 do 0:1), a zatim prep-HPLC (kolona:: Vode Xbridge 150*255u;mobilna faza: [Voda (0,05 % amonijak hidroksid v/v)-ACN]; B%: 55 %-85 %,10min) da bi se dobio 1-[(3R)-4-[7-(8-hloro-1-naftil)-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi] -6,8-dihidro-5H-pirido[3,4-d]pirimidin-4-

124

il]-3-(difluorometil)piperazin-1-il]-2-fluoro-prop-2-en-1-on ( 5,98 mg, 9,72 umol, 11% prinos, 99,4% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [ESI, M+1]: 615.

1H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ = 7,81 - 7,75 (m, 1H), 7,67 - 7,61 (m, 1H), 7,55 (td, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 7,51 - 7,41 (m, 1H), 7,36 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,28 - 7,17 (m, 1H), 6,48 - 5,83 (m, 1H), 5,47 - 5,31 (m, 1H), 5,27 - 5,19 (m, 1H), 4,88 - 4,65 (m, 1H), 4,59 - 4,31 (m, 1H), 4,21 (1H), 4,10 (1H, 1H) 4,04 - 3,76 (m, 2H), 3,69 - 3,44 (m, 3H), 3,33 - 2,92 (m, 4H), 2,75 - 2,64 (m, 1H), 2,61 - 2,52 (m, 1H), 2,49 - 2,48 (m, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 1H), 2,13 - 2,02 (m, 1H), 1,88 - 1,72 (m, 1H).

PRIMERI 622 - 678 navedeni u tabeli 1 su pripremljeni uz upotrebu komercijalno dostupnih posredovanja i/ili posredovanja koji su ovde objavljeni na način opisan u opštim programima reakcije i učenjima primera.

Tabela 1

124

12

121

122

12

PRIMER A

KRAS G12C test modifikacije

Ovaj primer ilustruje da se primerni spojevi ovog izuma kovalentno vezuju za KRAS G12C pomoću LCMS testa koji detektira kovalentni addul uzornog spoja i KRAS G12C.

Koncentracija proteina K-Ras (1-169) G12C, C51S, C80L, C118S i K-Ras sa GTP (1-169) G12C, C51S, C80L, C118S, K61H podešena je na 2 µM u K-Ras test pufer (25 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM MgClz i 10 mM oktil b-

12 4

glukopiranozid na pH 7,5). Alikvot od 10 µL svakog rastvora proteina je zatim prebačen na mikrotitarsku ploču sa 384 bunarčića. Početne zalihe jedinjenja su generisane na pedeset puta većoj od željene konačne koncentracije u DMSO.

Primerni referentni spojevi su razrijeđeni 25 puta u K-Ras pufer za test do finalne koncentracije dva puta više.10 µL alikvot svake razrijeđene otopine je potom dodan svakoj od proteinskih otopina u mikrotitar taloti da bi se pokrenula reakcija. Tipične koncentracije konačnih kompleksa bile su 3,0, 5,0 i 25,0 µm. U svakom trenutku, reakcije su bile ugašene sa 20 µL 25 mm rešenja octene kiseline. Uobičajene ishode testova bile su 15, 180 i 1440 minuta. Nakon što su sve reakcije bile ugašene, ploče su bile zapečaćene toplinom i uzorci su ubrizgani u LC/MS sistem za prikupljanje podataka.

Prikupljanje podataka se dogodilo na Agilent 6520 Q-TOF točnom spektrometru. Uzorci su ubrizgana u njihovoj tekućoj fazi u kolonu C-3 obrnute faze za uklanjanje pufera za analizu i pripremu uzoraka za maseni spektrometar. Proteini su izbili iz kolone koristeći acetonitril gradijent i direktno se umetnuli u masovni analizator. Početna analiza neobrađenih podataka je izvršena u softveru Agilent MasHunter odmah nakon preuzimanja podataka.

Analiza neobrađenih podataka netaknutog proteina bila je isključivo dekonvolucija višestrukih naboja svakog proteina u rešenju uz maksimalnu entropiju dekonvoluciju koja se nalazi u Mass Hunteru. Kako bi se smanjila složenost, razmatrani su samo podaci u ograničenoj masi za analizu, sa najmanje jednim intervalom Dalton masivnog koraka. Visina svih masa identifikovanih tokom analize neobrađenih podataka izvezena je da bi se dalje analizirala u softveru za analizu podataka Spotfire<®>.

Završna analiza podataka je bio višestepeni proces u softverskompaketu Spotfire ® za analizu podataka. Ukratko, svaka proteinska masa je izračunata kao procenat ukupnog signala tog uzorka, a taj procenat se normalizovao na procenat signala proteina u odsustvu reaktivnih spojeva. Ti normalizovali signali su prijavljeni kao normalizirani postotak kontrole (POC). Povećana POC vrijednost označava spoj koji pokazuje viši stepen modifikacije u određenom stanju u odnosu na druge spojeve pod istim uslovima. Rezultati

12

primerenih referentnih spojeva i spojeva izuma testiranih na koncentraciji od 5 µm 3 sata prikazani su u tabeli 2. Kljuc: „A“ ≤ 25 % POC; „B“ > 25 % POC - ≤ 50 % POC; „C“ > 50 % POC i ND = nije određeno.

Tabela 2

12

121

122

12

124

12

PRIMER B

Inhibicija rasta stanica zavisne od KRAS-a.

12

Ovaj primer ilustruje da primereni spojevi ovog izuma sprečavaju rast tumorskih stanica koje izražavaju KRAS G12C.

Ćelijska inhibicija KRAs G12C pomoću primernih jedinjenja ovog pronalaska je određena merenjem količine nizvodnog markera aktivnosti KRas, fosforilisanog ERK („Phospho-ERK“).

Ćelije NCI-H358 (ATCC CRL-5807) eksprimiraju KRas G12C i uzgajane su u medijumu RPMI sa dodatkom 10 % fetalnog goveđeg seruma, penicilina/streptomicina i 10 mM HEPES. Ćelije su postavljene na ploče sa 96 bunarčića obložene poli-D-lizinom u koncentraciji od 50,000 ćelija/bunariću i ostavljene da se vežu 8-12 sati. Razblažena jedinjenja su zatim dodata u konačnoj koncentraciji od 0,5 % DMSO. Posle 3 sata, medijum je uklonjen, dodato je 150 uL 4 % formaldehida i ploče su inkubirane 20 minuta. Ploče su isprane sa PBS, i permeabilizovane korišćenjem 150 µL ledeno hladnog 100 % metanola tokom 10 minuta. Vezivanje nespecifičnog antitela za ploče je blokirano korišćenjem 100 µL Licor pufera za blokiranje (Li-Cor Biotechnologi, Lincoln NE) tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Uzorci pozitivne kontrole i uzorci bez ćelija su paralelno obrađeni sa test uzorcima kao standardima.

Količina Phospho-ERK je određena korišćenjem antitela specifičnog za fosforilovani oblik ERK i upoređena sa količinom GAPDH. Primarna antitela koja se koriste za detekciju dodata su na sledeći način: Phospho-ERK (Signalizacija ćelija cs9101) razblažen 1:500 i GAPDH (Millipore MAB374) razblažen 1:5000 u bloku Licor 0,05 % Tween 20. Ploče su inkubirane 2 sata na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS 0,05 % Tween 20.

Sekundarna antitela koja se koriste za vizuelizaciju primarnih antitela dodata su na sledeći način: Anti-zec-680 razblažen 1: 1000 i Anti-miš-800 razblažen 1: 1000 u Licor bloku 0,05 % Tween 20 i inkubirano 1 sat na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS 0,05 % Tween 20. Alikvot od 100 µl PBS je dodat u svaki bunar i ploče su očitane na LICOR AERIUS čitaču ploča.

Signal pERK(Thr202/Tir204) je normalizovan sa GAPDH signalom i izračunat je procenat DMSO kontrolnih vrednosti. IC50 vrednosti su generisane korišćenjem 4 parametra uklapanja krive odgovora na dozu. Rezultati za primera

12

referentnih jedinjenja i jedinjenja pronalaska prikazani su u tabeli 3. Ključ: „A“ ≥ 0,0001 - ≤ 1 µM; „B“ > 1 µm i ND = nije određeno.

Tabela 3

12

121

122

12

124

12

PRIMER C

Poboljšana in vitro stabilnost jedinjenja koja imaju supstituciju u R<A>ili Ru punoj krvi

Ovaj primer ilustruje da primerna jedinjenja iz ovog pronalaska koja sadrže supstitucije na R<A>ili najmanje jednom Rpokazuju poboljšanu stabilnost cele krvi u poređenju sa jedinjenjima u kojima su R<A>i oba Rsupstituenta vodonik.

Materijali: Sledeći reagensi su korišćeni kako su primljeni: acetonitril (HPLC grade, Burdick & Jackson, Madison, VI), fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom (PBS), pH 7,4 (Sigma-Aldrich, Co., St. Louis, MO), voda (HPLC grade, JT Baker, Phillipsburg, NJ), DMSO (EM Science, Merck KGaA, Darmstadt, Nemačka) i izopropanol (IPA, kvaliteta reagensa, EMD Chemicals, Gibbstovn, NJ).

Propantelin i esmolol (Sigma-Aldrich) su korišćeni kao pozitivna kontrolna jedinjenja u testu. Diazepam (Sigma-Aldrich) je korišćen kao interni standard za kvantifikaciju. Ljudska puna krv je dobijena od BioIVT-a (Vestberi, Njujork) i bila je muškog pola. Svi ostali reagensi i rastvarači bili su najvišeg analitičkog kvaliteta koje je isporučila Sigma (Sent Luis, MO) i korišćeni su kako su primljeni.

Inkubacije krvi: In vitro stabilnost reprezentativnih jedinjenja inhibitora KRas G12C ovog pronalaska u prisustvu pune krvi je sprovedena na sledeći način. Esmolol ili propantelin, za koje je poznato da podležu hidrolizi estara

12

esterazama u krvi i plazmi, korišćeni su kao pozitivne kontrole u testovima.10 mM osnovni rastvor propantelina, esmolola ili jedinjenja iz ovog pronalaska u DMSO je razblažen do 500 uM sa DMSO. Alikvoti pune krvi (600 µL), u tri primerka, stavljeni su u odgovarajuća ležišta ploče od polipropilena sa 96 dubokih bunara (Akigen Scientific, Union Citi, CA). Krv je razblažena do 50 % korišćenjem PBS, pH 7,4 (600 µL). Razblažena krv je prethodno inkubirana 15 minuta na 37 °C. Svaki izvor je doziran sa 12 µL 500 µM DMSO zaliha istovremeno za konačnu test koncentraciju od 5 µM. Ploče su mešane na 600 rpm tokom 10 sekundi na šejkeru za ploče (IKA MTS 2/4 Digitalni mikrotitarski šejker, VWR). Alikvoti od 100 µL iz svakog bazenčića pune krvi su prebačeni u tri odvojene ploče sa 96 dubokih bunarčića označene sa 0, 60 ili 240 minuta. Na kraju svake određene vremenske tačke, crvena krvna zrnca su lizirana sa 100 µL vode, mešana na 600 rpm tokom jednog minuta i zaustavljena sa 800 µL acetonitrila koji sadrži IS (0,625 µM diazepam). Ploče su mešane na šejkeru za ploče na 600 o/min tokom jednog minuta i centrifugirane u centrifugi na 2095 k g 7 minuta na sobnoj temperaturi koristeći Allegra stočnu centrifugu (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Supernatant (100 µL) je prebačen u plitku ploču sa 96 jažica (Costar) korišćenjem sistema za rukovanje tečnim uzorcima (Apricot, Perkin-Elmer, Boston, MA). Dodatak od 100 µL vode je dodat svakom uzorku supernatanta za konačnu zapreminu od 200 µL. Ploče su zapečaćene i sadržaj svakog bazena je analiziran pomoću LC-MS/MS.

Analitička kvantifikacija: LC-MS/MS sistem se sastojao od HTS-PAL autosamplera (Leap Technologies, Carrboro, NC), HP1200 HPLC (Agilent, Palo Alto, CA) i API4000 trostrukog kvadrupolnog masenog spektrometra (PE Sciek, divizija Applied Biosistems, Foster Citi, CA). Hromatografsko razdvajanje analita i unutrašnjeg standarda je postignuto na sobnoj temperaturi korišćenjem C18 kolone (Kinetek®, 30 × 3,0 mm, veličina čestica 2,6 µm, Phenomenek, Torrance, CA) u vezi sa uslovima gradijenta korišćenjem mobilnih faza A (vodeni 0,1 % mravlja kiselina sa 1 % izopropil alkohola) i B (0,1 % mravlja kiselina u acetonitrilu). Ukupno vreme rada, uključujući ponovnu ekvilibraciju, za jednu injekciju je 2 minuta. Masena spektrometrijska detekcija analita je obavljena korišćenjem ESI+ jonizacionog režima. Jonska struja je optimizovana tokom infuzije osnovnog rastvora propantelina, esmolola ili reprezentativnog test

12

jedinjenja. Odgovori analita, uključujući IS, mereni su praćenjem višestrukih reakcija (MRM) prelaza koji su jedinstveni za svako jedinjenje.

Kalkulacije: Podaci su dobijeni i površine pikova su izračunate za testna jedinjenja i interni standard korišćenjem softvera Analist 1,6.2 (Sciex). Srednji odnosi površine pika su izračunati usrednjavanjem odnosa površine pikova (n=3) svakog testiranog jedinjenja i IS za svaki uzorak.

Tabele sa vršnim površinama su izvezene u BioAssai Enterprise (CambridgeSoft, Cambridge, MA), gde su prosečni odnosi analita i unutrašnjeg standardnog pikova korišćeni za izračunavanje procenta preostalog (%REM) i poluživota (t1/2). Procenat preostalog (f) je izračunat određivanjem odnosa površine vrha u svakoj vremenskoj tački i odnosa površine vrha uzoraka nula vremena. T1/2 je određen deljenjem ln(2) sa km. Brzina gubitka test jedinjenja (km) određena je linearnom regresijom -ln(f(t)) u odnosu na vreme. Regresija je koristila oblik „i=mk“, stoga je model forsirao presek od 100 % preostalih i pretpostavio da je metabolizam pratio kinetiku prvog reda.

Pozitivna kontrolna jedinjenja, propantelin ili esmolol, i reprezentativna jedinjenja inhibitora KRas G 12C ovog pronalaska su inkubirana u prisustvu ljudske cele krvi na 37 °C tokom perioda inkubacije od 240 minuta. Poluživot propantelina, esmolola i svakog testiranog jedinjenja nakon 240 minuta inkubacije na 37 °C prikazan je u tabeli 4. Ključ: A ≤ 200 min; B > 200 min - ≤ 1000 min; C > 1000 min - ≤ 2000 min;i D > 2000 min

Tabela 4

12 1

122

Rezultati: Kao što se i očekivalo, propantelin pozitivne kontrole pokazao je kratak poluživot od 98 min. Poređenja radi, poluživot primera jedinjenja inhibitora KRas G12C koja se sastoje od supstitucija na RA ili RB u celoj ljudskoj krvi je, u nekim slučajevima, povećana za više od 3 puta ili više od 4 puta u poređenju sa nesupstituisanim jedinjenjima, npr., Primeri 331 i 359, što dovodi do značajno poboljšanih farmakodinamičkih i farmakokinetičkih svojstava ovih jedinjenja što rezultira većom stabilnošću in vivo i povećanom biodostupnošću.

Iako je pronalazak opisan u vezi sa njegovim specifičnim realizacijama, biće razumljivo da je sposoban za dalje modifikacije i da je ova aplikacija namenjena da pokrije sve varijacije, upotrebe ili adaptacije pronalaska sledeći, uopšteno, principe pronalazak i uključujući takva odstupanja od ovog otkrića koja su u okviru poznate ili uobičajene prakse u oblasti tehnike na koju se pronalazak odnosi i koja se mogu primeniti na suštinske karakteristike ovde prethodno izložene, i kako sledi u okviru priloženih patentnih zahteva.

______________________

12

Claims

PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (II):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so: naznačena time što: R<1>-X je

naznačen time što je piperazinilni prsten opciono supstituisan sa R8; Y je veza, O, S ili NR<5>; R<1>je -C(O)C(R<A>)

C(R)p, naznačen time što

je dvostruka veza, p je dva, svaki Rje vodonik, a R<A>je halogen; R<2>je vodonik, alkil, hidroksialkil, dihidroksialkil, alkilaminilalkil, dialkilaminilalkil, -Z-NR<5>R<10>, heterociklil, heterociklilalkil, aril, heteroaril ili heteroarilalkil, naznačen time što je svaki od Z, heterociklil, heterociklil, heterociklilalkil, opciono može biti heterociklil, heterociklilalkil, heterociklil, heterociklil, aril, sa jednim ili više R<9>; svaki Z je C1 - C4 alkilen; svaki R3 je nezavisno C1 - C3 alkil, okso, haloalkil, hidroksil ili halogen; L je veza, -C(O) ili C1 - C3 alkil; R<4>je vodonik, cikloalkil, heterociklil, aril, aralkil ili heteroaril, naznačen time što svaki od cikloalkila, heterociklila, arila, aralkila i heteroarila može biti opciono supstituisan sa jednim ili više R<6>, R<7>ili R<8>; svaki R<5>je nezavisno vodonik ili C1 - C3 alkil; R<6>je cikloalkil, heterociklil, heterociklil, heterociklilalkil, aril ili heteroaril, naznačen time što svaki cikloalkil, heterociklil, aril ili heteroaril može biti opciono supstituisan sa jednim ili više više R<7>; svaki R<7>je nezavisno halogen, hidroksil, C1 - C6 alkil, cikloalkil, alkoksis, haloalkil, amino, cijano, heteroalkil, hidroksialkil ili Q-haloalkil, naznačen time što Q je O ili S; R<8>je okso, C 1 - C3 alkil, C2 - C4 alkynil, heteroalkil, cijano, -C(O)OR<5>, -C(O)N(R<5>) 2, -N(R<5>)2, naznačen time što C1 - C3 alkil može biti opciono supstituisan sa cianom, halogenom, -OR<5>, -N(R<5>)2ili heteroaril; svaki R<9>je nezavisno vodonik, okso, acil, hidroksil, hidroksialkil, cijano, halogen, C1-C6 alkil, aralkil, haloalkil, heteroalkil, cikloalkil, heterociklil, heterociklilalkil, alkoksi, dialkilaminil, dialkilamidoalkil, C1-C6 alkil, C1-C6 alkil, C1-C6-alkil, naznačen time što može biti opciono supstituisan sa cikloalkilom; svaki R<10>je nezavisno vodonik, acil, C1 - C3 alkil, heteroalkil ili hidroksialkil; R<11>je haloalkil; i m je nula ili celi broj između 1 i 2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što Y je O. 3.
2. Jedinjenje prema oatentnom zahtevu 1, naznačen time što R<2>je izabran iz grupe koju čine hidroksialkil, alkilaminilalkil, dialkilaminilalkil, -ZNR<5>R<10>, heterociklil i heterociklilalkil, naznačen time što su svaki od Z, heterociklil ili heterociklilalkil nezavisno opciono supstituisani sa R<9>. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3, naznačen time što je heterociklil heterociklilalkila nezavisno azetidinil, metilazetidinil, etilazetidinil, izopropilazetidinil, difluoroazetidinil, ciklopropilazetidinil, tetrahidropiranilazetidinil, tetrahidropiranil, pirolidinil, metilpirolidinil, dimetilpirolidinil, dimetilpirolidinil, dimetilpirolidinil, dimetilpirolidinil, dimetilpirolidinil, izopropirolidinil, izopropirolidinil, izopropirolidinil, izopropirolidinil (N-metil)fluoropirolidinil, (N-metil)difluoropirolidinil, metoksietilpirolidinil, (N -metil)metoksipirolidinil, piperazinil, dimetilaminilpirolidinil, morfolinil, metilmorfolinil, etilmorfolinil, izopropilmorfolinil, oksetanil, 1,4-oksazepanil, piperdinil, metilpiperidinil, metilpiperidinil, ciklopiperidinil, ciklopiperidinil, ciklopiperidinil, dihalopiperidinil, dihalopiperidinil, dihalopiperidinil, dihalopidinil, dihalopidinil perdinil, alkoksipiperdinil, pirolidonil, tiomorfolinil-1, 1-dioksid, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil, oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il ili azabiciklo[2.2.1]heptan-2-il. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačen time što (N-metil)difluoropirolidinil je 3,3-difluoro-1-metilpirolidinil. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, naznačen time što heterociklil je N-metilpirolidinil. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3, naznačen time što R<2>je dialkilaminilalkil opciono supstituisan sa jednim ili više R<9>. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što R<4>je aril opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. 12 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 8, naznačen time što aril je izabran iz grupe koja se sastoji od fenila i naftila opciono supstituisan sa jednim ili više R<7>. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 9, naznačen time što fenil i naftil su svaki opciono supstituisani sa jednim ili više R<7>izabranih iz grupe koja se sastoji od cijana, halogena, hidroksila, C1-C6 alkila, hidroksialkila, Q-haloalkila, cikloalkila i alkoksija. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 10, naznačen time što R<7>je izabran iz grupe koja se sastoji od hlora, fluora, broma, hidroksimetila, metila, etila, izopropila, metoksija, trifluorometila, hidroksila, ciklopropila i cijana. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što m je nula. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što L je veza. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što R<8>je heteroalkil, C2-C4 alkinil, ili C1-C3alkil opciono supstituisan sa halogenom, -OR<5>, cijanom ili heteroarilom. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što R<8>je C1-C3 alkil opciono supstituisan sa cijanom, poželjno naznačen time što R<8>je cijanometil. 16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što jedinjenje je:

12

��

��

��

121

ı22

��

��

��

��

��

��

�

1 1

� �

�

17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što jedinjenje Formule II-B je:

gde je piperazinilni prsten opciono supstituisan sa R<8>, a R<1>, R<3>, R<4>, R<8>, L i m su kao što je definisano u patentnom zahtevu 1. 1 4 18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1,naznačen time što jedinjenje ima sledeću strukturu:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 18, naznačen time što jedinjenje ima sledeću strukturu:

20. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 18, naznačen time što jedinjenje je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja sledeće strukture:

1 21. Jedinjenje prema patentnim zahtevima 18-20 za upotrebu u postupku za lečenje karcinoma pluća ne-malih ćelija, pri čemu postupak sadrži davanje pacijentu koji ima karcinom pluća ne-malih ćelija terapeutski efikasne količine jedinjenja prema zahtevima 18-20 ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, samu ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijensom ili razblaživačima. 22. Jedinjenje prema patentnim zahtevima 18-20 za upotrebu u postupku za lečenje raka, pri čemu postupak sadrži davanje pacijentu koji boluje od raka terapeutski efikasne količine jedinjenja prema zahtevima 18-20 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, samu ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijensom ili razblaživačima, naznačen time što kancer je tip tumora izabran između astrocitnih karcinoma, karcinoma dojke, grlića materice, kolorektuma, endometrijuma, jednjaka, želuca, glave i vrata, hepatocelularnih, laringealnih, pluća, oralnih, jajnika, prostate i karcinoma štitne žlezde i sarkoma. 23. Farmaceutska kompozicija, koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 20, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. 24. In vitro postupak za inhibiciju aktivnosti KRas G12C u ćeliji, koji sadrži dovođenje u kontakt ćelije u kojoj se želi inhibicija aktivnosti KRas G12C sa efikasnom količinom jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 20, njegovih farmaceutski prihvatljivih soli ili farmaceutskih kompozicija koji sadrže jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 20, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. 25. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 20 za upotrebu u postupku za lečenje kancera povezanog sa KRas G12C, pri čemu postupak sadrži davanje pacijentu koji boluje od raka terapeutski efikasne količine jedinjenja ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 20, sama ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijensom ili razblaživačima, naznačen time što kancer je izabran iz grupe koju čine Srčani: sarkom izabran između angiosarkoma, fibrosarkoma, rabdomiosarkoma i liposarkoma, miksoma, 1 rabdomioma, fibroma, lipoma i teratoma; Pluća: bronhogeni karcinom izabran između skvamoznih ćelija, nediferenciranih malih ćelija, nediferenciranih velikih ćelija i adenokarcinoma, alveolarnog bronhiolarnog karcinoma, bronhijalnog adenoma, sarkoma, limfoma, hondromatnog hamartoma, mezotelioma; Gastrointestinalni trakt: jednjak izabran od karcinoma skvamoznih ćelija, adenokarcinoma, leiomiosarkoma i limfoma, želudac izabran od karcinoma, limfoma i lejomiosarkoma, pankreas izabran od duktalnog adenokarcinoma, insulinoma, glukanoma, gastrinoma, karcinoidnih tumora i vipoma, tanko crevo izabrano od adenokarcinoma, limfoma, karcinoidnih tumora, Kaposijevog sarkoma, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma i fibroma, debelo crevo izabrano od adenokarcinoma, tubularnog adenoma, viloznog adenoma, hamartoma i leiomioma; Genitourinarni trakt: bubreg izabran od adenokarcinoma, Vilmovog tumora/nefroblastoma, limfoma i leukemije, bešika i uretra izabrane od karcinoma skvamoznih ćelija, karcinoma prelaznih ćelija i adenokarcinoma, prostata izabrana od adenokarcinoma i sarkoma, testisa izabran između seminoma, teratoma, embrionalnog karcinoma, teratokarcinoma, horiokarcinoma, sarkoma, karcinoma intersticijskih ćelija, fibroma, fibroadenoma, adenomatoidnih tumora i lipoma; Jetra: hepatom/hepatocelularni karcinom, holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom; Bilijarni trakt: karcinom žučne kese, ampularni karcinom, holangiokarcinom; Kosti: osteogeni sarkom/osteosarkom, fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Juingov sarkom, maligni limfomski retikulum ćelijski sarkom, multipli mijelom, hordom malignog tumora džinovskih ćelija, osteohronfroma/osteohrskavične egzostoze, benigni hondrom, hondroblastom, hondromiksofibrom, osteoidni osteom i tumori džinovskih ćelija; Nervni sistem: lobanja izabrana od osteoma, hemangioma, granuloma, ksantoma i deformisanog osteitisa, moždane opne izabrane od meningioma, meningiosarkoma i gliomatoze, mozak izabran između astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma pinealoma i multiplasnog blastoma, multiformnog glioblastoma, oligodendroglioma, švanoma, retinoblastoma i kongenitalnih tumora, kičmene moždine izabrane od neurofibroma, meningioma, glioma i sarkoma); Ginekološki: materica izabrana od karcinoma endometrijuma izabranog od seroznog cistadenokarcinoma, mucinoznog cistadenokarcinoma i neklasifikovanog karcinoma, tumori granulozatekalnih ćelija, tumori Sertoli-Leidigovih ćelija, disgerminoma i malignog teratoma, 1 vulva izabrana od karcinoma skvamoznih ćelija, intraepitelijalnog karcinoma, adenokarcinoma, fibrosarkoma i melanoma), vagina izabrana od karcinoma bistrih ćelija, karcinoma skvamoznih ćelija, botrioidnog sarkoma/embrionalnog rabdomiosarkoma, karcinoma jajovoda; Hematološki: krv odabrana od akutne mijeloične leukemije, hronične mijeloične leukemije, akutne limfoblastne leukemije, hronične limfocitne leukemije, mijeloproliferativnih bolesti, multiplog mijeloma i mijelodisplastičnog sindroma, Hodgkinove bolesti, maligni limfom ne-Hodgkinov limfom; Koža: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Kaposijev sarkom, mladeži displastični nevusi, lipomi, angiomi, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; i Nadbubrežne žlezde: neuroblastom. 26. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu prema patentnom zahtevu 25, naznačen time što je terapeutski efikasna količina jedinjenja između 0,01 do 100 mg/kg dnevno. 27. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu prema patentnom zahtevu 25 ili 26, naznačeno time što je kancer rak pluća ne-malih ćelija. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1