RS61811B1 - Inhibitori imunoproteazoma - Google Patents

Description

Srodni zahtevi

Ova prijava se nadovezuje na U.S. privremenu prijavu ser. br. 62/447,717 koja je podneta 18. januara 2017. godine i U.S. privremenu prijavu ser. br. 62/508,771 koja je podneta 19. maja 2017. godine.

Osnovni podaci o otkriću

Kod eukariota, razgradnja proteina je posredovana pomoću puta ubikvitina u kome se proteini ciljani za uništenje ligiraju na polipeptid ubikvitin od 76 aminokiselina. Ubikvitinovani proteini zatim služe kao supstrati za 26S proteazom, multikatalitičku proteazu, koji cepa proteine u kratke peptide putem dejstva njegove tri značajne proteolitičke aktivnosti. Razgradnja posredovana proteozomom ima ključnu ulogu u mnogim procesima, kao što je prezentovanje antigena u kontekstu glavnog kompleksa histokompatibilnosti (major histocompatibility complex, MHC) klase I, apoptoza i ćelijska vijabilnost, obrada antigena, aktivacija NF-KB i transdukcija proinflamatornih signala.

20S proteazom je cilindrični multikatalitički kompleks proteaze od 700 kDa koji se sastoji od 28 podjedinica, klasifikovanih kao alfa- i beta-tip, koje su raspoređene u 4 naslagana heptamerna prstena. Kod kvasca i drugih eukariota, 7 različitih podjedinica gradi spoljne prstenove, a 7 različitih podjedinica sačinjava unutrašnje prstenove. Alfa podjedinice služe kao mesta vezivanja za regulatorne komplekse 19S i 11S, kao i kao fizička barijera za unutrašnju proteolitičku komoru koju grade dva prstena podjedinica. Stoga, smatra se da proteazom in vivo postoji kao 26S čestica. In vivo eksperimenti su pokazali da inhibtcija 20S oblika proteazoma može biti u korelaciji sa inhibicijom 26S proteazoma.

Pored konstitutivnog proteazoma, koji je sveprisutno eksprimiran, postoji i alternativni kompleks, imunoproteazom, koji se može naći u imunskim ćelijama i/ili ćelijama koje su izložene inflamatornim citokinima, kao što su IFN-Γ i TNF-α.

Imunoproteazom se razlikuje od konstitutivnog proteazoma po sastavu njegove podjedinice. Sadrži podjedinice sa proteaznom aktivnošću nalik na himotripsin ((β5i/LMP7), nalik na kaspazu (β1i/LMP2) i nalik na tripsin (β2i) koje zamenjuju svoje parnjake u konstitutivnom proteazomu (β5c, β1c, odnosno β2c). Kada su prisutne sve tri podjedinice koje mogu da se indukuju putem IFN-γ, proteazom se naziva „imunoproteazom." Stoga, eukariotske ćelije mogu da imaju dva oblika proteazoma u različitim proporcijama. Imunoproteazom ima ključnu ulogu u stvaranju repertoara antigenih peptida i oblikovanju ograničenog CD8+ T ćelijskog odgovora MHC klase I (vidite Basler et al. Immunoproteasomes down-regulate presentation of a subdominant T cell epitope from lymphocytic choriomeningitis virus. J. Immunol 173:3925-3934 (2004); Moebius, J., M. etal.2010. Immunoproteasomes are essential for survival and expansion of T cells in virus-infected mice. Eur J Immunol 40:3439-3449).

Funkcija imunoproteazoma nije ograničena samo na prezentovanje MHC klase I, već takođe ima ulogu u brojnim patološkim poremećajima, uključujući hematološke malignitete, inflamatorne i autoimunske bolesti. Izgleda da komercijalno dostupni inhibitori proteazoma bortezomib i karfilzomib, čije dejstvo je potvrđeno kod multiplog mijeloma i drugih bolesti, ciljaju bez razlike i konstitutivne i imunoproteazome. Ovaj nedostatak specifičnosti može delimično da objasni neka od neželjenih dejstava ovih agenasa. Međutim, moguće je da terapeutska efikasnost (kao što je efikasnost protiv limfoma i mijeloma) ovih imunoproteazoma ostane nepromenjena, uz istovremeno povećanje terapeutskog indeksa, selektivnim ciljanjem imunoproteazoma. Stoga su od interesa inhibitori koji selektivno inhibiraju imunoproteazom.

LMP7/β5i je osnovna podjedinica imunoproteazoma. Ona reguliše proizvodnju inflamatornog citokina i funkcije imunskih ćelija pored njene uloge u stvaranju epitopa ograničenih na MHC klasu I. Pokazalo se da inhibitor malog molekula LMP7, PR-957, potentno blokira i Ijudsku i mišju diferencijaciju Тh1/17 (vidite Muchamuel, T., et al.2009. A selective inhibitor of the immunoproteasome subunit LMP7 blocks cytokine production and attenuates progression of experimental arthritis. Nat Med 15:781-787; Kalim, K. W., et al.2012.

Immunoproteasome Subunit LMP7 Deficiency and Inhibition Suppresses Th1 and Th17 but Enhances Regulatory T Cell Differentiation. J. Immunol.189:4182-4293), i efektorske funkcije B ćelija i proizvodnju proinflamatornih citokina (IL-6, TNF-α, IL-23) (vidite Basler, M., etal.2010. Prevention of experimental colitis by a selective inhibitor of the immunoproteasome. J Immunol 185:634-641). Pored toga, pokazalo se da inhibicija LMP7 putem PR-957 daje terapeutske koristi u nekoliko pretkliničkih modela autoimunske bolesti. Na primer, pokazalo se da PR- 957 značajno inhibira aktivnost bolesti kod mišjeg artritisa indukovanog kolagenom, uključujući značajno smanjenje inflamacije i koštane erozije (vidite Muchamuel, T., et al.2009. A selective inhibitor of the immunoproteasome subunit LMP7 blocks cytokine production and attenuates progression of experimental arthritis. Nat Med 15:781-787). PR-957 takođe smanjuje broj plazma ćelija i IgG nivoe anti-dsDNK na MRL/lpr modelu lupusa, i sprečava napredovanje bolesti. (vidite lchikawa, h. T., et al.2012. Beneficial effect of novel proteasome inhibitors in murine lupus via dual inhibition of type I interferon and autoantibody-secreting cells. Artritis Rheum 64: 493-503). Pored toga, PR-957 je smanjio inflamaciju i uništavanje tkiva na mišjim modelima kolitisa indukovanog putem DSS (vidite Basler, M., et al.2010. Prevention of experimental colitis by a selective inhibitor of the immunoproteasome. J Immunol 185:634-641). Takođe se pokazalo da je PR- 957 efikasan na modelu Hašimotovog tiroiditisa pokrenutog antitelom (vidite Nagayama, Y., et al.2012. Prophylactic and therapeutic efficacies of a selective inhibitor of the immunoproteasome for Hashimoto's thyroiditis, but not for Graves’ hyperthyroidism, in mice, Clin Ехр Immunol, 168:268-273). Pored toga, LMP7 nokaut miševi su zaštićeni od bolesti u modelima IBD (vidite Basler, M., et al.2010. Prevention of experimental colitis by a selective inhibitor of the immunoproteasome. J Immunol 185:634-641; Kalim, K. W., et al.2012 Immunoproteasome Subunit LMP7 Deficiency and Inhibition Suppresses Th1 and Th17 but Enhances Regulatory T Cell Differentiation. J Immunol.189:4182-4293; Schmidt, N.. et al.2010. Targeting the proteasome: partial inhibition of the proteasome by bortezomib or deletion of the immunosubunit LMP7 attenuates experimental colitis. Gut 59:896-906). Pored toga, pokazalo se da inhibicija LMP7 sa selektivnim inhibitorom PR-924 inhibira rast ćelijskih linija multiplog mijeloma i primarnih tumorskih ćelija pacijenta, uključujući one rezistentne na konvencionalne i nove prethodne terapije (vidite Singh, A. V., et al.2011. PR-924, a Selective Inhibitor of the Immunoproteasome Subunit LMP-7, Blocks Multiple Myeloma Cell Growth both in Vitro and in Vivo. Br J Haematol.2011 Јаnuаrу; 152(2): 155-163).

Pokazalo se da dodatna podjedinica imunoproteazoma LMP2/β1i reguliše antivirusni i urođeni imunološki odgovor pored njegovog doprinosa u obradi antigena (vidite Hensley, S. Е., et al.2010. Unexpected role for the immunoproteasome subunit LMP2 in antiviral humoral and innate immune responses. J. Immunol 184:4115-4122). Inhibitor malog molekula, ISPI-001, koji prevashodno cilja LMP2/β1i, inhibirao je in vitro proliferaciju mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMC) koje su izolovane od pacijenata sa mijelomom (vidite Kuhn, D. Ј., et al.2009. Targeted inhibition of the immunoproteasome is a potent strategy against models of multiple myeloma that overcomes resistance to conventional drugs and nonspecific immunoproteasome inhibitors. Blood 113:4667-4676).

Dodatni inhibitor malog molekula, UK-101, koji selektivno cilja LMP2/β1i, indukovao je apoptozu PC-3 ćelijske linije prostate in vitro i značajno je smanjio rast tumora in vivo (Wehenkel, М., et al.2012. A selective inhibitor of the immunoproteasome subunit LMP2 induced apoptosis in PC-3 cells and suppresses tumor growth in nude mice. Br J Cancer 107:53-62).

WO 2016/050358 А1 otkriva inhibitore LMP7 koji su derivati boronske kiseline, i koji mogu da se koriste za lečenje autoimunskog poremećaja ili hematoloških maligniteta.

WO 2015/195950 А1 otkriva inhibitore LMP7 i metode za lečenje različitih bolesti korišćenjem tih inhibitora.

WO 2005/021558 A2 opisuje jedinjenja boronske kiseline, boronske estre i njihove kompozicije koje mogu da modulišu apoptozu, recimo putem inhibiranja aktivnosti proteazoma.

Sažetak otkrića

Z i Z<1>mogu nezavisno da budu kovalentna veza, -alkil-, -alkil-O-, -alkil-N(R)- ili -alkil-O-alkil-, uz uslov da je Z povezan sa prstenom A na atomu ugljenika koji je susedan atomu azota u prstenu;

prsten A sa atomom azota u prstenu koji je prikazan može da bude opciono zasićeni mono- ili multiciklični 4 do 10-člani heterociklil;

prsten J sa atomom azota u prstenu i Y<1>atomom prstena koji je prikazan može da bude zasićeni 4 do 10-člani heterociklil;

Y<1>može da bude C ili N;

Z<2>može da bude kovalentna veza ili N(R), uz uslov da, kada je Y<1>u prstenu J azot, onda je Z<2>kovalentna veza;

svaki R može nezavisno da bude vodonik ili alkil;

Q može da bude -C(=O)- ili -S(=O)2-;

R<8a>može da bude vodonik, halogen ili cijano;

R<8b>može da bude vodonik, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heteroaril ili opciono supstituisani heterociklil; ili

R<8a>i R<8b>mogu zajedno da formiraju vezu; i

R<8c>može da bude vodonik ili opciono supstituisani alkil;

R<b1>može da bude opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani cikloalkil ili opciono

supstituisani heterociklil; i

R<b2>i R<b3>mogu nezavisno da budu vodonik ili opciono supstituisani alkil; ili R<b2>i R<b3>zajedno sa atomom bora za koji je pokazano da su vezani mogu da grade ciklični boronski estar; ili

jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od:

((R)-1 -(3-(((R)-1 -(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2- il)metoksi)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline;

((1 R)-1 -(3-(1 -(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline; i

((1R)-1-(3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline;

njegov pojedinačni E ili Z izomer, i/ili

farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od prethodnih jedinjenja.

Neki ovde opisani primeri izvođenja takođe pruža farmaceutsku

kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule (I) (ili bilo kog od njegovih ovde opisanih primera izvođenja) i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

Neki ovde opisani primeri izvođenja takođe pružaju jedinjenje za

upotrebu u metodu za lečenje bolesti (kao što je autoimunska bolest, inflamatorna

bolest i/ili hematološki poremećaj), koja može da se leči inhibiranjem LMP2 i/ili LMP7 kod pacijenta, pri čemu metod obuhvata primenu na pacijentu kome je to potrebno terapeutski delotvorne količine jedinjenja Formule (I) (ili bilo kog od njegovih ovde

opisanih primera izvođenja) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Detaljan opis otkrića

Definicije:

Osim ako nije drugačije navedeno, sledeći termini koji se koriste u specifikaciji i zahtevima definisani su u svrhe ove Prijave i imaju sledeće značenje.

Svi nedefinisani tehnički i naučni termini koji se koriste u ovoj Prijavi imaju

značenje koje je uobičajeno poznato osobi sa uobičajenim znanjem u struci kojoj ovo otkriće pripada.

Kako se ovde koriste, pojmovi za jedninu se odnose na jedan ili više entiteta; na primer, jedinjenje se odnosi na jedno ili više jedinjenja ili najmanje jedno jedinjenje, osim ako nije drugačije navedeno. Kao takvi, termini „jedan ili više“ i „najmanje jedan“ mogu ovde naizmenično da se koriste.

Termin ,,oko“ se ovde koristi da znači približno, blizu, otprilike ili oko. Kada se izraz „oko“ koristi zajedno sa numeričkim rasponom, on modifikuje taj raspon tako što proširuje granice iznad i ispod numeričkih vrednosti koje su zadate. Uopšteno, termin „oko“ se ovde koristi da modifikuje numeričku vrednost iznad i ispod navedene vrednosti za 5%.

„Pacijent“ uključuje i Ijude i životinje. „Pacijent“ i „ispitanik“ se ovde koriste naizmenično.

„Sisar“ označava Ijude i druge sisare.

„Р“ u Formuli (I) se čita sleva nadesno, naznačeno time što je desna strana „Р“ vezana za „Q“

„Z“ i „Z<1“>u Formuli (I) se čitaju sleva nadesno, naznačeno time što je desna strana „Z“ vezana za „prsten A“ i naznačeno time što je desna strana

„Z<1>“ vezana za „prsten J“.

„Alkil“ označava aiifatičnu ugljovodoničnu grupu koja može biti ravna ili razgranata i sadrži 1 do 20 atoma ugljenika u lancu. Poželjne alkil grupe sadrže 1 do 12 atoma ugljenika u lancu. Poželjnije alkil grupe sadrže 1 do 6 atoma ugljenika u lancu. Razgranati znači da je jedna ili više nižih aikil grupa, kao što je metil, etil ili propil, vezana za linearni alkil lanac. „Niži alkil“ označava grupu koja ima 1 do 6 atoma ugljenika u lancu koji može da bude ravan ili razgranat. „Opciono supstituisani afkil““ označava alkil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. sa jednim, dva ili tri) supstituenata koji mogu biti isti ili različiti,

pri čemu je svaki supstituent nezavisno izabran od halo, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisanog heterociklenila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog cikloaikila, opciono supstituisanog cikloalkenila, cijano, hidroksi, alkoksi, ariloksi, -O-alkil-O-alkil, heteroariloksi, cikloalkiloksi, acil, karboksi, -SH, alkiltio, amino, oksima (npr. =N-OH), -NH(alkil), -NH(haloalkil), -NH(alkil-O-alkil), -NH(aril), -N(alkil)(aril), -NH(heteroaril), -N(alkil)(heteroaril), -N(alkil)(heterociklil), NH(cikloalkil), -N(alkil)(haloalkil), -N(alkil)(cikloalkil), -N(cikloalkil)(heterociklil), -N(alkil)2, NH-C(=O)-alkil, -N(aikil)-C(=O)-alkil, -NH-C(=O)-aril, -N(alkil)-C(=O)-aril, -NH-C(=O)-cikloalkil, -N(atkil)-C(=O)-cikloalkil, -O-C(O)-alkil, -O-C(O)-aril, -O-C(O)-cikloalkil, -SF5, karboksi i -C(O)O-alkil. Neograničavajući primeri odgovarajućih alkil grupa ukljućuju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izo-butil i t-butil.

„Alkenil" označava alifatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik i koja može biti ravna ili razgranata i sadrži 2 do 15 atoma ugljenika u lancu. Poželjne alkenil grupe imaju 2 do 12 atoma ugljenika u lancu; a poželjnije 2 do 6 atoma ugljenika u lancu. Razgranati znači da je jedna ili više nižih alkil grupa, kao što je metil, etil ili propil, vezana za linearni alkenil lanac. „Niži аlkenil“ označava grupu koja ima 2 do 6 atoma ugljenika u lancu koji može da bude ravan ili razgranat. „Opciono supstituisani alkenil“ označava alkenil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. sa jednim, dva ili tri) supstituenata koji mogu biti isti ili raziičiti, pri čemu je svaki supstituent nezavisno izabran od halo, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog cikloalkila, cijano, alkoksi i -S(alkil). Neograničavajući primeri odgovarajućih alkenil grupa ukijučuju etenil, propenil, n- butenil, 3-metilbut-2-enil, n-pentenil, oktenil i decenil.

„Alkinil“ označava alifatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik, koja može biti ravna ili razgranata i sadrži 2 do 15 atoma ugljenika u lancu. Poželjne alkinil grupe imaju 2 do 12 atoma ugljenika u lancu; a poželjnije 2 do 4 atoma ugljenika u lancu. Razgranati znači da je jedna ili više nižih alkil grupa, kao što je metil, etil ili propil, vezana za linearni alkinil lanac. „Niži alkinil“ označava grupu koja ima 2 do 6 atoma ugljenika u lancu koji može da bude ravan ili razgranat. „Opciono supstituisani

alkinil označava alkinil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. sa jednim ili dva) supstituenata koji mogu biti isti ili različiti, pri čemu je svaki supstituent nezavisno izabran od arila i cikloalkila. Neograničavajući primeri odgovarajućih alkinil grupa uključuju etinil, propinil, 2-butinil i 3-metilbutinil.

„Aril“ označava aromatični monociklični ili multiciklični (npr, biciklični, triciklični) sistem prstena koji sadrži 6 do 14 atoma ugljenika, poželjno 6 do 10 atoma ugljenika. „Opciono supstituisani аril“ označava aril grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. jednim, dva, tri ili četiri) „supstituenata sistema prstena“ koji mogu biti isti ili različiti, i oni su kao što je ovde definisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih aril grupa uključuju fenil i naftil.

„Heteroaril““ označava aromatični monociklični ili multiciklični (npr. biciklični, triciklični) sistem prstena koji sadrži 5 do 14 atoma prstena, poželjno 5 do 10 atoma prstena, u kome je jedan ili više atoma prstena neki element osim ugljenika, na primer, azot, kiseonik ili sumpor, samostalno ili u kombinaciji. Poželjni heteroarili sadrže 5 do 6 atoma prstena. „Opciono supstituisani heteroaril“ označava heteroaril grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. jednim, dva, tri ili četiri) „supstituenata sistema prstena" koji mogu biti isti ili različiti, i oni su kao što je ovde definisano. Prefiks aza, oksa ili tia рrе korena imena heteroarila znači da je najmanje atom azota, kiseonika, odnosno sumpora prisutan kao atom prstena. Atom azota heteroarila može biti opciono oksidisan do odgovarajućeg N-oksida. „Heteroaril može takođe da uključuje heteroaril kako je prethodno definisan fuzionisan sa arilom kako je prethodno definisan.

Neograničavajući primeri odgovarajućih heteroarila uključuju piridil, pirazinil, furanil, tienil, pirimidinil, piridon (uključujući N-supstituisane piridone), izoksazolil, izotiazolil, oksazolil, tiazolil, pirazolil, furazanil, pirolit, triazolil, 1,2,4- tiadiazoiil, pirazinil, piridazinil, hinoksalinil, ftalazinil, oksindolil, imidazo[1,2- a]piridinil, imidazo[2,1-b]tiazolil, benzofurazanil, indolil, azaindolil, benzimidazolil, benzotienil, hinolinil, imidazolil, tienopiridil, hinazolinil, tienopirimidil, pirolopiridil, imidazopiridil, izohinolinil, benzoazaindolil, 1,2,4-triazinil, benzotiazolil, i slično. ,,Heteroaril“ takođe uključuje heteroaril prsten kao Što je prethodno opisan,

naznačeno time što je okso (=O) grupa takođe deo prstena, pod uslovom da je

1

„Aralkil“ ili „arilalkil“ označava aril-alkil-grupu u kojoj su aril i alkil kao što je prethodno opisano. Poželjni aralkili sadrže nižu alkil grupu. Neograničavajući primeri odgovarajućih aralkil grupa uključuju benzil, 2-fenetil i naftalenilmetil. Veza sa matičnim ostatkom je preko alkila.

„Cikloalkil“ označava nearomatični mono- ili multiciklični (npr. biciklični, triciklični) sistem prstena koji sadrži 3 do 10 atoma ugljenika, poželjno 5 do 10 atoma ugljenika. Poželjni cikloalkil prstenovi sadrže 5 do 7 atoma prstena.

„Opciono supstituisani cikloalkil“ označava cikloalkil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. jednim, dva, tri ili četiri) „supstituenata sistema prstena“ koji mogu biti isti ili različiti, i oni su kao što je ovde definisano.

Neograničavajući primeri odgovarajućih monocikličnih cikloalkila uključuju ciklopropil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, i slično. Neograničavajući primeri odgovarajućih multicikličnih cikloalkila uključuju 1-dekalinil, norbornil, adamantil, i slično.

„Cikloalkenil“ označava nearomatični mono- ili multiciklični (npr. biciklični, triciklični) sistem prstena koji sadrži 3 do 10 atoma ugljenika, poželjno 5 do 10 atoma ugljenika, koji sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik. Poželjni cikloalkenil prstenovi sadrže 5 do 7 atoma prstena. „Opciono supstituisani cikloalkenil“ označava cikloaikenil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. jednim, dva, tri ili četiri) „supstituenata sistema prstena" koji mogu biti isti ili različiti, i oni su kao što je ovde definisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih monocikličnih cikloaikenila uključuju ciklopentenil, cikloheksenil, ciklohepta-1,3-dienil, i slično. Neograničavajući primer odgovarajućih multicikličnih cikloalkenila je norbornilenil.

„Halogen“ ili „halo" znači fluor, hlor, brom ili jod. Poželjni su fluor, hlor i brom.

„Haloalkil“ označava alkil radikal kao što je prethodno definisan, koji je supstituisan sa jednim ili više atoma halogena, poželjno sa jednim do pet atoma, požeijno fluora ili hlora, uključujući one koji su supstituisani različitim halogenima, npr. -CH2CI, -CF3,-CHF2,-CH2CF3,-CF2CF3,-CF(CH3)2, i slično. Kada je alkil supstituisan samo fluorom, on u ovoj Prijavi može da se naziva fluoralkil.

„Hidroksialkil" označava HO-alkil-grupu u kojoj je alkil kao što je prethodno definisano. Poželjni hidroksialkili sadrže niži alkil. Neograničavajući primeri odgovarajućih hidroksialkil grupa uključuju hidroksimetil i 2-hidroksietil.

„Асil“ označava H-C(O)-, alkil-C(O)- ili cikloalkil“C(O)- grupu u kojoj su različite grupe kao što je prethodno opisano. Veza sa matičnim ostatkom je preko karbonila. Poželjni acili sadrže niži alkil. Neograničavajući primeri odgovarajućih acil grupa uključuju formil, acetil i propanoil.

„Aroil" označava aril-C(O)- grupu u kojoj je aril grupa kao što je prethodno opisano. Veza sa matičnim ostatkom je preko karbonila. Neograničavajući primeri odgovarajućih grupa uključuju benzoil i 1-naftoil.

„Alkoksi" označava alkil-O- grupu u kojoj je alkil grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih alkoksi grupa uključuju metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi i n-butoksi. Veza sa matičnim ostatkom je preko etarskog kiseonika.

„Ariloksi" označava aril-O- grupu u kojoj je aril grupa kao što je prethodno opisana. Neograničavajući primeri odgovarajućih ariloksi grupa uključuju fenoksi i naftoksi. Veza sa matičnim ostatkom je preko etarskog kiseonika.

„Cikloalkiloksi“ označava cikloalkil-O grupu u kojoj je cikloalkil grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih cikloalkiloksi grupa uključuju ciklopentiloksi i cikloheksiloksi. Veza sa matičnim ostatkom je preko etarskog kiseonika.

„Heteroariloksi" označava heteroaril-O- grupu u kojoj je heteroaril grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih heteroariloksi grupa uključuju piridiloksi i tiofeniloksi. Veza sa matičnim ostatkom je preko etarskog kiseonika.

„Heterocikliloksi“ označava beterociklil-O grupu u kojoj je heterociklil grupa kao što je ovde opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih heterocikliloksi grupa uključuju piperaziniloksi i morfoliniloksi. Veza sa matičnim ostatkom je рrekо etarskog kiseonika.

„Aralkiloksi“ označava aralkil-O- grupu u kojoj je aralkil grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih aralkiloksi grupa uključuju beziloksi i 1- ili 2-naftalenmetoksi. Veza sa matičnim ostatkom je preko etarskog kiseonika.

„Alkiltio" označava alkil-S- grupu u kojoj je alkil grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih alkiltio grupa uključuju metiltio i etiltio. Veza sa matičnim ostatkom je рrekо sumpora.

,,Ariltio“ označava aril-S- grupu u kojoj je aril grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primeri odgovarajućih ariltio grupa uključuju feniltio i naftiltio. Veza sa matičnim ostatkom je preko sumpora.

„Aralkiltio“ označava aralkil-S- grupu u kojoj je aralkil grupa kao što je prethodno opisano. Neograničavajući primer odgovarajuće aralkiltio grupe je benziltio. Veza sa matičnim ostatkom je preko sumpora.

„Alkoksikarbonil" označava alkil-O-CO- grupu. Neograničavajući primeri odgovarajućih alkoksikarbonii grupa uključuju metoksikarbonil i etoksikarbonil. Veza sa matičnim ostatkom je preko karbonila.

1

„Ariloksikarbonil“ označava aril-O-C(O)- grupu. Neograničavajući primeri odgovarajućih ariloksikarbonil grupa uključuju fenoksikarbonil i naftoksikarbonil. Veza sa matičnim ostatkom je preko karbonila.

„Aralkoksikarbonil“ označava aralkil-O-C(O)- grupu. Neograničavajući primer odgovarajuće aralkoksikarbonil grupe je benziloksikarbonil. Veza sa matičnim ostatkom je preko karbonila.

„Alkilsulfonil“ označava alkil-S(O2)- grupu. Poželjne grupe su one u kojima je alkil grupa niži alkil. Veza sa matičnim ostatkom je preko sulfonila.

„Arilsulfonil“ označava aril-S(O2)- grupu. Veza sa matičnim ostatkom je preko sulfonila.

„Ciklični boronski estar“ (poznat i kao „ciklični boronatni estar“) kako je ovde otkriven može da nastaje, na primer, reakcijom između boronske kiseline i alkohola. Ciklični boronski estar može da ima između 2 i 20 atoma ugljenika, poželjno između 2 i 10 atoma ugljenika. Boronski estar opciono može da sadrži jedan ili dva dodatna ciklična heteroatoma izabrana od N, O i S.

„Supstituent sistema prstena" označava supstituent vezan za aromatični ili nearomatični sistem prstena (na primer, cikloalkil, ctkloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, heterociklenil) koji, na primer, zamenjuje raspoloživi vodonik u sistemu prstena. Supstituenti sistema prstena mogu biti isti ili različiti, pri čemu je svaki nezavisno odabran od alkila, alkenila, alkinela, arila, heteroarila, aralkila, alkilarila, heteroaralkila, heteroarilalkenila, heteroarilalkinila, alkilheteroarila, hidroksi, hidroksialkila, alkoksi, alkoksialkila, ariloksi, aralkoksi, acila, aroila, halo, haloalkila, nitro, cijano, karboksi, alkoksikarbonila, ariloksikarbonila, aralkoksikarbonila, alkilsulfonila, arilsulfonila, heteroarilsulfonila, alkiltio, ariltio, heteroariltio, aralkiltio, heteroaralkiltio, cikloalkila, heterociklila, -SH, -SF5, -OSF5(za aril), -O-alkil-O-alkil, -O-C(O)-alkil, -O-C(O)-aril, -O-C(O)-cikloakil, -C(=N-CN)-NH2,-C(=NH)-NH2, -C(=NH)-NH(alkil), oksima (npr. =N-OH), -NY1Y2, -alkil-NY1Y2, -C(O)NY1Y2, -SO2NY1Y2i -SO2NY1Y2, naznačeno time što Y1i Y2mogu biti isti ili različiti i nezavisno se biraju od vodonika, alkila, -alkil-O-alkil, arila, cikloalkila, heterociklila i aralkila. „Supstituent sistema prstena" može takođe da znači jedan ostatak koji istovremeno zamenjuje dva raspoloživa vodonika na dva susedna atoma ugljenika (jedan H na svakom ugljeniku, i gradi kondenzovani prsten) ili zamenjuje dva raspoloživa vodonika na jednom atomu ugljenika (tj. spiro prsten) na sistemu prstena. Primeri za prethodno, tj. ostatak koji zamenjuje dva vodonika na susednim atomima ugljenika, su metilen dioksi, etilendioksi, -С(СНз)2- i slično, koji grade ostatke kao što je, na primer:

„Heterociklil“ označava nearomatični zasićeni monociklični ili multiciklični (npr. biciklični, triciklični) sistem prstena koji sadrži 3 do 10 atoma prstena, poželjno 4 do 7 atoma prstena ili 5 do 10 atoma prstena, u kojem je jedan ili više atoma u sistemu prstena element osim ugljenika, na primer, azot, kiseonik ili sumpor, samostalno ili u kombinaciji. Nema susednih atoma kiseonika i/ili sumpora u sistemu prstena. Poželjni heterociklili sadrže 4 do 6 atoma prstena. Prefiks aza, oksa ili tia pre korena imena heterociklila znači da je najmanje atom azota, kiseonika, odnosno sumpora prisutan kao atom prstena. Bilo koji -NH u heterociklil prstenu može da postoji zaštićen poput, na primer, - N(Boc), -N(CBz), -N(Tos) grupe i slično; i predstavlja deo heterociklila. „Opciono supstituisani heterociklil" označava heterociklil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. jednim, dva, tri ili četiri) „supstituenata sistema prstena“ koji mogu biti isti ili različiti, i oni su kao što je ovde definisano. Atom azota ili sumpora heterociklila može biti opciono oksidisan do odgovarajućeg N-oksida, S-oksida ili S,S-dioksida. Neograničavajući primeri odgovarajućih monocikličnih heterociklil prstenova uključuju piperidinil, pirolidinil,

1

piperazinil, morfolinil, tiomorfolinil, tiazolidinil, 1,4-dioksanil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, laktam, lakton, i slično. „Heterociklil“ takođe uključuje heterociklil prstenove kao što su prethodno opisani, naznačeno time što =O zamenjuje dva raspoloživa vodonika na istom atomu ugljenika u prstenu.

„Heterociklenil“ označava nearomatični monociklični iii multiciklični (npr. biciklični, triciklični) sistem prstena koji sadrži 3 do 10 atoma prstena, poželjno 5 do 10 atoma prstena, u kojem je jedan ili više atoma u sistemu prstena element osim ugljenika, na primer, atom azota, kiseonika ili sumpora, samostalno ili u kombinaciji, i koji sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik ili dvostruku vezu ugljenik-azot. Nema susednih atoma kiseonika i/ili sumpora u sistemu prstena. Poželjni heterociklenil prstenovi sadrže 5 do 6 atoma prstena. Prefiks aza, oksa ili tia pre korena imena heterociklenila znači da je najmanje atom azota, kiseonika, odnosno sumpora prisutan kao atom prstena. „Opciono supstituisani heterociklenil“ označava heterociklenil grupu koja može biti opciono supstituisana sa jednim ili više (npr. jednim, dva, tri ili četiri) supstituenata sistema prstena, naznačeno time što je „supstituent sistema prstena“ prethodno definisan. Atom azota ili sumpora heterociklenila može biti opciono oksidisan do odgovarajućeg N-oksida, S-oksida ili S,S-dioksida. Neograničavajući primeri odgovarajućih heterociklenil grupa uključuju 1,2,3,4-tetrahidropiridinil, 1,2-dihidroptridinil, 1,4-dihidropiridinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, 1,4,5,6-tetrahidropinmidinil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, 2-imidazolinil, 2-pirazolsnil, dihidroimidazolil, dihidrooksazolil, dihidrooksadiazolil, dihidrotiazolil, 3,4-dihidro-2H-piranil, dihidrofuranil, fluordihidrofuranil, 7-oksabiciklo[2,2.1]heptenil, dihidrotiofenil, dihidrotiopiranil, i slično. „Heterociklenil“ takođe uključuje heterociklenil prstenove kao što su prethodno opisani, naznačeno time što =O zamenjuje dva raspoloživa vodonika na istom atomu ugljenika prstena.

Treba napomenuti da u sistemima prstenova koji sadrže heteroatom koji su ovde opisani nema hidroksil grupa na atomima ugljenika koji su susedni sa N, O ili S, kao i da nema N ili S grupa na ugljeniku koji je susedan drugom heteroatomu. Tako, na primer, u prstenu:

1

�

stabilno jedinjenje. Kombinacije supstituenta i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja. Pod „stabilnim jedinjenjem“ ili „stabilnom strukturom" se podrazumeva jedinjenje koje je dovoljno robusno da preživi izolovanje iz reakcione smeše do korisnog stepena čistoće i formulisanje u delotvorni terapeutski agens.

Termin „opciono supstituisan“ označava opcionu supstituciju (tj. nesupstituisan ili supstituisan) sa naznačenim grupama, radikalima ili ostacima. Kada spisak opcionih supstituenata nije izričito dat, treba koristiti opcione supstituente koji su dati u definicijama različitih termina (kao što su „alkil", „cikloalkil", „heterociklil“, „aril“ i „heteroaril“).

Osim ako nije drugačije naznačeno, upućivanje na broj primera izvođenja odnosi se na sve delove primera izvođenja. Na primer, upućivanje na „Primer izvođenja 12“ odnosi se na Primer izvođenja 12, kao i nа Primere izvođenja 12A- 12B. Međutim, ova konstrukcija ne važi za delove unutar primera izvođenja.

Kako se ovde koristi, termin „kompozicija" treba da obuhvati proizvod koji sadrži naznačene sastojke u naznačenim količinama, kao i bilo koji proizvod koji se dobija, neposredno ili posredno, od kombinacije naznačenih sastojaka u naznačenim količinama.

„Delotvorna količina" ili „terapeutski delotvorna količina" treba da opisuje količinu jedinjenja ili kompozicije koja je ovde opisana koja je delotvorna u inhibiranju prethodno navedenih bolesti, te tako daje željeno terapeutsko, poboljšavajuće, inhibitorsko i/ili preventivno dejstvo.

Primeri izvođenja

Primeri izvođenja predmetne prijave uključuju sledeće:

Primer izvođenja 1:

Jedinjenje formule (I):

1

Z i Z<1>su nezavisno kovalentna veza, -alkil-, -alkil-O-, -alkil-N(R)-, ili -alkil-O-alkil-, uz uslov da je Z povezan sa prstenom A na atomu ugljenika koji je susedan atomu azota u prstenu;

prsten A sa prikazanim atomom azota u prstenu je opciono supstituisani zasićeni mono- ili multiciklični 4 do 10-člani heterociklil;

prsten J sa atomom azota u prstenu i prikazanim Y<1>atomom u prstenu je zasićeni 4 do 10-člani heterociklil;

Y<1>je C ili N;

Z<2>je kovalentna veza ili N(R), uz uslov da, kada je Y<1>u prstenu J azot, onda je Z<2>kovalentna veza;

svaki R je nezavisno vodonik ili alkil;

Q je -C(=O)- ili -S(=O)2-;

R<8a>je vodonik, halogen ili cijano;

R<8b>je vodonik, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heteroaril ili opciono supstituisani heterociklil; ili

R<8a>i R<8b>zajedno grade vezu; i

R<8c>je vodonik ili opciono supstituisani alkil;

R<b1>je opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani cikloalkil ili opciono supstituisani heterociklil; i

1

R<b2>i R<b3>su nezavisno vodonik ili opciono supstituisani alkil; ili

R<b2>i R<b3>zajedno sa atomom bora za koji je pokazano da su vezani grade ciklični boronski estar; ili

jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od:

((R)-1 -(3-(((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)propanamido)-2-feniietil)boronske kiseline;

((1R)-1-(3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piroiidin-2-il)propanamido)-2-fenileti1)boronske kiseline; i

((1R)-1-(3-(1-(2-cijano-4-meti!pent-2-enoil)piperidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline;

njegov pojedinačni E ili Z izomer, i/ili

farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od prethodnih jedinjenja.

Primer izvođenja 1A:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 1, naznačeno time što:

Z je -alkil- ili -alkil-O-alkil-, uz uslov da je Z povezan sa prstenom A na atomu ugljenika koji je susedan atomu azota prstena;

prsten A sa prikazanim atomom azota u prstenu je opciono supstituisani zasićeni mono- ili multiciklični 4 do 10-člani heterociklil;

Q je -C(=O)-;

R<8a>je vodonik, halogen ili cijano;

R<8b>je vodonik; alkil koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od -N(alkil)(haloalkil), -N(alkil)2i heterociklila, naznačeno time što je heterociklil opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta odabrana od halo, alkila i -

2

C(=O)alkil; i heterociklil, koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od halo, alkila, alkoksi, haloalkila, cijano i -S(=O)2-alkil; ili

R<8a>i R<8b>zajedno grade vezu; i

R<8c>je vodonik ili aikil;

R<b1>je alkil koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od arila i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, alkila, alkoksi, haloalkila, cijano i -S(=O))2-alkil; i

R<b2>i R<b3>su vodonik.

Primer izvođenja 3:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 1, naznačeno time što W je -O-P-G-C(R<a>)=C(R<8b>)(R<8c>), tj. jedinjenje Formule (I) je jedinjenje Formule (Ib)

�

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 7, naznačeno time što:

navedeni -alkil-O-alkil iz Z je -(CH2)1-4-O-(CH2)1-4; i

navedeni -alkil- iz Z je –(СН2)1-4-.

Primer izvođenja 7B:

Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 7 ili 7A, naznačeno time što:

navedeni -alkil-O-alkil iz Z je -(СН2)2-O-(СН2)2; i

navedeni -alkil- iz Z je -(СН2)2-

Primer izvođenja 8:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 5, naznačeno time što Z je -alkil-.

Primer izvođenja 8A:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 8, naznačeno time što navedeni -alkil- iz Z je -(СН2)-.

Primer izvođenja 9:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 1, 3-8rnaznačeno time što Q je -C(=O)-.

Primer izvođenja 10:

Jedinjenje i/iii njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 1, 3-9, naznačeno time što R<8a>je vodonik ili cijano.

Primer izvođenja 10A:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 10, naznačeno time što R<8a>je cijano.

Primer izvođenja 11:

�

Primer izvođenja 12:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 1,3-11, naznačeno time što:

R<8b>je H; alkil koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od -N(alkil)(haloalkil), -N(alkil)2i opciono supstituisanog heterociklila; ili opciono supstituisani heterociklil; i

R<8c>je h.

Primer izvođenja 12A:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 12, naznačeno time što R<8b>je nesupstituisani ili supstituisani alkil odabran od izopropila, t- butil, -C(CH3)2-N(CH3)-CH2CF3,-CH2-N(CH3)2,-C(CH3)2-N(CH3)-CH2-CHF2,

2

Primer izvođenja 13:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 1, 3-12, naznačeno time što R<b1>je opciono supstituisani alkil, naznačeno time što su opcioni supstituenti 1-2 supstituenta odabrana od arila i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, alkila, alkoksi, haloalkila, cijano i -S(=O)2-alkil.

Primer izvođenja 13А:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 13, naznačeno time što navedeni R<b1>je nesupstituisani alkil ili supstituisani alkil formule –(CH2)1-2-R", naznačeno time što R" je aril ili heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, alkila, alkoksi, haloalkila, cijano i -S(=O)2-alkil.

Primer izvođenja 13B:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 13A, naznačeno time što navedeni R<b1>je odabran od -СН2СН(СНз)2, - СН2С(СНз)з, -СН2-fenil, -СН2СН2-fenil, - СН2-tolil, - СН2-metoksifenil, - СН2- hlorfenil, - СН2-fluorfenil, - СН2-trifluormetilfenil, - СН2-benzofuranil, - СН2-naftil, - СН2-cijanofenil, -СН2-difluorfenil i - СН2-fenil-S(=O)2-CH3

Primer izvođenja 14:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 1, 3-13, naznačeno time što R<b2>i R<b3>su h.

Primer izvođenja 15:

2

�

�

�

�

�

R" je fenil ili benzofuranil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1- 2 supstituenta odabrana od halo, alkil, alkoksi, haloalkil, cijano i -S(=O)2-alkil;

R<8a>je vodonik ili cijano;

R<8b>je vodonik; alkil koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od -N(alkil)(haloalkil), -N(alkil)2i heterociklil, naznačeno time što je heterociklil opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta odabrana od halo, alkil i -C(=O)-alkil; i heterociklil koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od halo, alkil, alkoksi, haloalkil, cijano i -S(=O)2-alkil; i

R<8c>je vodonik ili alkil;

Primer izvođenja 17A:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 17, naznačeno time što u Formuli (lb-(i)), prsten A sa atomom azota prstena koji je prikazan je

Primer izvođenja 17B:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz primera izvođenja 17 A tli 17B, naznačeno time što u Formuli (lb-(i)), R" je fenil ili benzofuranil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo ili alkilom.

Primer izvođenja 17C:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 17 i 17A-B, naznačeno time što u Formuli (Ib-(i)):

R<8a>je vodonik ili cijano;

R<8b>je vodonik, alkil koji je opciono supstituisan sa heterociklilom, naznačeno time što je heterociklil opciono supstituisan sa 1-2 halo supstituenta; I R<8c>je vodonik ili alkil.

Primer izvođenja 17D;

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 17 i 17A-C, naznačeno time što jedinjenje Formule (Ib-(i)) je E-izomer.

Primer izvođenja 17E:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 17 i 17A-C, naznačeno time što jedinjenje Formule (Ib-(i)) je Z-izomer.

Primer izvođenja 17F:

Jedinjenje i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od primera izvođenja 17 i 17A-F, naznačeno time što jedinjenje Formule (Ib-(i)) je odabrano od:

((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirofidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline;

((R)-(((((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(p-tolil)etil)boronske kiseline;

4

Primer izvođenja 18:

Farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1,3-17 i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

Primer izvođenja 19:

Jedinjenje za upotrebu u metodu za inhibiranje velike multifunkcionalne proteaze 2 (LMP2) i/ili velike multifunkcionalne proteaze 7 (LMP7) kod ispitanika koji obuhvata primenu na pomenutom ispitaniku kome je potrebna pomenuta inhibicija terapeutski delotvorne količine jedinjenja iz bilo kog od primera izvođenja 1,3-17 i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Primer izvođenja 19A:

Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1, 3-17 i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u inhibiranju velike multifunkcionalne proteaze 2 (LMP2) i/ili velike multifunkcionalne proteaze 7 (LMP7).

Primer izvođenja 20:

Jedinjenje za upotrebu u metodu za lečenje bolesti odabrane od autoimunskog poremećaja, inflamatornog poremećaja i hematološkog poremećaja kod pacijenta kome je takvo tečenje potrebno, koji obuhvata primenu na pacijentu terapeutski delotvorne količine jedinjenja iz bilo kog od primera izvođenja 1,3-17 i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Primer izvođenja 20A:

Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1, 3-17 i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju bolesti odabrane od autoimunskog poremećaja, inflamatornog poremećaja i hematološkog poremećaja.

Primer izvođenja 21:

Jedinjenje za upotrebu iz primera izvođenja 20, naznačeno time što je bolest odabrana od lupusa, reumatoidnog artritisa, skleroderme, ankilozirajućeg spondilitisa, Dišenove mišićne distrofije (DMD), Bekerove mišićne distrofije (BMD), idiopatskih inflamatornih miopatija (IIM), polimiozitisa, sporadičnog miozitisa sa inkluzionim telima, dermatomiozitisa, imuno-posredovanih nekrotizirajućih miopatija (IMNM), psorijaze, multiple skleroze, inflamatorne bolesti creva, Behčetove bolesti, ulceroznog kolitisa, Kronove bolesti, Šegrenovog sindroma, bronhitisa, konjuktivitisa, pankreatitisa, holecistitisa, bronhiektazije, stenoze aortnog zaliska, restenoze, fibroze, infekcije, ishemije, kardiovaskularne bolesti, hepatitisa, ciroze, steatohepatitisa, hronične inflamacije jetre, Alchajmerove bolesti (AB), amiotrofične lateralne skleroze (ALS), Hantingtonove bolesti, miozitisa sa telima, miofibrilarne miopatije, bolesti kalem protiv domaćina (GVHD) i multiplog mijeloma.

Jedinjenje za upotrebu iz primera izvođenja 20A, naznačeno time što je bolest odabrana od lupusa, reumatoidnog artritisa, sklerođerme, ankilozirajućeg spondilitisa, Dišenove mišićne distrofije (DMD), Bekerove mišićne distrofije (BMD), idiopatskih inflamatornih miopatija (IIM), polimiozitisa, sporadičnog miozitisa sa mkluzionim telima, dermatomiozitisa, imuno-posredovanih nekrotizirajućih miopatija (IMNM), psorijaze, multiple skleroze, inflamatome bolesti creva, Behčetove bolesti, ulceroznog kolitisa, Kronove bolesti, Šegrenovog sindroma, bronhitisa, konjuktivitisa, pankreatitisa, holecistitisa, bronhiektazije, stenoze aortnog zaliska, restenoze, fibroze, infekcije, ishemije, kardiovaskularne bolesti, hepatitisa, ciroze, steatohepatitisa, hronične inflamacije jetre, Alchajmerove bolesti (AB), amiotrofične lateralne skleroze (ALS), Hantingtonove bolesti, miozitisa sa telima, miofibrilarne miopatije, bolesti kalem protiv domaćina (GVHD) i multiplog mijeloma.

Jedinjenja Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)) mogu da grade soli. Jasno je da upućivanje na jedinjenje Formule (I), (I(b)) ili (l(b)-(i)) ovde uključuje upućivanje na njegove soli, osim ako nije drugačije naznačeno. Termin „so(li)“, kako se ovde koristi, označava kisele soli nastale od neorganskih i/ili organskih kiselina, kao i bazne soli nastale od neorganskih i/ili organskih baza. Pored toga, kada jedinjenje Formule (1), (l(b)) ili (l(b)-(i)) sadrži i bazni ostatak, kao što je, bez ograničenja, pridin ili imidazol, i kiseli ostatak, kao što je, bez ograničenja, karboksilna kiselina, mogu nastati cviter joni („unutrašnje soli") i uključeni su u termin „so(li)“ kako se ovde koristi. Poželjne su farmaceutski prihvatljive (tj. netoksične, fiziološki prihvatljive) soli, iako su i druge soli korisne. Soli jedinjenja Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)) mogu da se formiraju, na primer, reakcijom jedinjenja Formule (1), (l(b)) ili (l(b)-(i)) sa

4

određenom količinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna količina, u medijumu kao što je onaj u kome se so taloži ili u vodenom medijumu, a zatim liofilizacijom.

Primeri kiselih adicionih soli uključuju acetate, askorbate, benzoate, benzensulfonate, bisulfate, borate, butirate, citrate, kamforate, kamforsulfonate, fumarate, hidrohloride, hidrobromide, hidrojodide, laktate, maleate, metansulfonate, naftalensulfonate, nitrate, oksalate, fosfate, propionate, salicilate, sukcinate, sulfate, tartarate, tiocijanate, toluensulfonate (poznati i kao tozilati), i slično. Dodatni primeri za kiseline su one koje se uopšteno smatraju pogodnim za formiranje farmaceutski korisnih soli od baznih farmaceutskih jedinjenja, i razmatraju ih, na primer, P. Stahl et al., Camille G. (izd.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33201-217; Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New Yоrk; i u The Orange Book (FDA, Washington, D.C. na svojoj veb stranici).

Primeri za bazne soli uključuju amonijumove soli, soli alkalnih metala kao što su soli natrijuma, litijuma i kalijuma, soli zemnoalkalnih metafa kao što su soli kalcijuma i magnezijuma, soli sa organskim bazama (na primer, organskim aminima) kao što su dicikloheksilamini, t-butil amini, i soli sa aminokiselinama kao što su arginin, lizin, i slično. Bazne grupe koja sadrže azot mogu da se kvaternizuju sa agensima kao što su halidi nižih alkila (npr, metil, etil i butil hloridi, bromidi i jodidi), dialkil sulfati (npr. dimetil, dietil i dibutil sulfati), halidi dugog lanca (npr, decil, lauril i stearil hloridi, bromidi i jodidi), aralkil halidi (npr. benzil i fenetil bromidi), i drugi.

Sve takve kisele soli i bazne soli treba da budu farmaceutski prihvatljive soli, i sve kisele i bazne soli se smatraju ekvivalentnim sa slobodnim oblicima odgovarajućih jedinjenja (na primer, jedinjenjem Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)).

Ovde opisana jedinjenja mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre, te stoga postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Namera je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja koja ovde opisujemo (kao što su jedinjenja Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)), kao i njihove smeše, uključujući racemske smeše, čine deo opisanog jedinjenja. Pored toga, svi geometrijski i pozicioni izomeri su uključeni u ovde opisano jedinjenje. Na primer, ako jedinjenje Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)) uključuje dvostruku vezu ili kondenzovani prsten, uključeni su i cis- i transoblici, kao i smeše.

Dijastereomerne smeše mogu da se razdvoje na svoje pojedinačne dijastereomere na osnovu svojih fizičkohemijskih razlika metodama koje su dobro poznate stručnjacima, kao što su, na primer, hromatografija i/ili frakciona kristalizacija. Enantiomeri mogu da se razdvoje konvertovanjem enantiomerne smeše u dijastereomernu smešu putem reakcije sa odgovarajućim optički aktivnim jedinjenjem (npr., hiralnom pomoćnom supstancom, kao što je hiralni alkohol ili hiorid Mošerove kiseline), razdvajanjem dijastereomera i konvertovanjem (npr. hidrolizom) pojedinačnih dijastereomera u odgovarajuće čiste enantiomere.

Enantiomeri takođe mogu da se razdvoje koristeći hiralnu HPLC kolonu. Takođe, neka od jedinjenja Formule (I), (I(b)) ili (l(b)-(i)) mogu biti atropizomeri (npr. supstituisani biarili), i smatraju se delom Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)).

Takođe je moguće da ovde opisana jedinjenja (na primer, jedinjenja Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)) mogu da postoje u različitim tautomernim oblicima, i svi takvi oblici su obuhvaćeni. Takođe, na primer, uključeni su svi keto-enolni i imin-enaminski oblici jedinjenja koja su ovde opisana.

Svi stereoizomeri (na primer, geometrijski izomeri, optički izomeri, i slično) jedinjenja koja su ovde opisana (uključujući i izomere soli, solvata i estara jedinjenja, kao i soli, solvate i estre), kao što su, na primer, oni koji mogu da postoje usled asimetričnih ugljenika na različitim supstituentima, uključujući enantiomerne oblike (koji mogu da postoje čak i u odsustvu asimetričnih ugljenika), rotamerne oblike, atropizomere i dijastereomeme oblike, razmatrani su u okviru jedinjenja koja su ovde opisana, kao i pozicioni izomeri (kao što je, na primer, 4-piridil i 3-piridil). (Na primer, ako jedinjenje Formule (I), (l(b) ili (l(b)-(i)) uključuje dvostruku vezu ili kondenzovani prsten, obuhvaćeni su i cis- i trans-oblik, kao i smeše). Pojedinačni stereoizomeri jedinjenja koja su ovde opisana, na primer, mogu biti suštinski bez drugih izomera, ili mogu biti pomešani, na primer kao racemati ili sa svim drugim, ili drugim izabranim,

4

stereoizomerima. Hiralni centri mogu da imaju S iii R konfiguraciju, kao što je definisano Preporukama IUPAC1974. Korišćenje termina ,,so“, „solvat“ i „estar" i slično, treba da se podjednako odnosi na so, solvat i estar enantiomera, stereoizomera, rotamera, tautomera, pozicionih izomera ili racemata jedinjenja koja su ovde opisana.

Izotopski obeležena jedinjenja ovde opisanih jedinjenja koja su identična sa onima koja su ovde navedena, osim što je jedan ili više atoma zamenjeno atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj raziičit od atomske mase ili masenog broja koji se uobičajeno nalaze u prirodi, takođe su obuhvaćena. Primeri izotopa koji mogu da budu uključeni u ovde opisana jedinjenja uključuju izotope vodonika, ugljenika, kiseonika, fosfora, fluora i hlora i joda, kao što su<2>Н,

<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F,<36>CI, odnosno<123>l.

Određena izotopski obeležena jedinjenja Formule (l), (l(b)) ili (I(b)-(i)) (npr. ona obeležena sa<3>H i<14>C) korisna su u testovima distribucije jedinjenja i/ili supstrata u tkivu. Tritirani (tj.,<3>H) i ugljenik-14 (tj.,<14>C) izotopi su naročito poželjni zbog lakoće pripreme i mogućnosti detektovanja. Određena izotopski obeležena jedinjenja Formule (I), (I(b)) ili (l(b)-(i)) mogu da budu korisna za svrhe medicinskog snimanja, na primer, оnа obeležena izotopima koji emituju pozitrone, poput<11>C ili

<18>F, mogu da budu korisna za primenu u pozitronskoj emisionoj tomografiji (PET), a ona obeležena izotopima koji emituju gama zrake, poput<123>l, mogu da budu korisna za primenu u jednofotonskoj emisionoj kompjuterizovanoj tomografiji (SPECT). Dalje, supstitucija težim izotopima poput deuterijuma (tj.<2>H) može da pruži određene terapeutske prednosti usled veće metaboličke stabifnosti (npr. produženi poluživot in vivo ili smanjeni dozni zahtevi), i stoga može biti poželjna u nekim okolnostima. Dalje, supstitucija težim izotopima poput deuterijuma (tj.<2>H) može da pruži određene terapeutske prednosti usled veće metaboličke stabilnosti (npr., produženi poluživot in vivo ili smanjeni dozni zahtevi), i stoga može biti poželjna u nekim okolnostima. Pored toga, izotopska supstitucija ne mestu na kojem se javlja epimerizacija može da uspori ili umanji proces epimerizacije i tako zadrži aktivniji ili delotvorniji oblik jedinjenja u dužem vremenskom periodu.

Izotopski obeležena jedinjenja Formule (I), (l(b)) ili (l(b)-(i)), naročito ona koja sadrže izotope sa dužim poluživotima (T1/2 > 1 dan), uopšteno

4

mogu da se pripreme prateći procedure analogne sa onima koje su otkrivene u primerima koji su ovde dati u nastavku, supstitucijom odgovarajućeg izotopski obeleženog reagensa izotopski neobeleženim reagensom.

Korisnost

S obzirom na dokaze da su imunoproteazomi (npr. LMP-2 i/ili LMP-7) važni u regulaciji različitih imunoloških odgovora i selektivnoj ekspresiji LMP-2 i/ili LMP-7 u tkivima koja sadrže imunoproteazom, inhibitori LMP-2 i/ili LMP-7 mogu da se koriste za lečenje autoimunskih poremećaja. Autoimunski poremećaji su okarakterisani neodgovarajućom reakcijom imunskog sistema na zdrave organe i tkiva domaćina. Primeri autoimunskih poremećaja koji mogu da se leče inhibitorima LMP-2 i/ili LMP-7 uključuju, ali nisu ograničeni na lupus, reumatoidni artritis, sklerodermu, ankilozirajući spondilitis, dermatomiozitis, psorijazu, multiplu sklerozu i inflamatornu bolest creva (kao što su ulcerozni kolitis i Kronova bolest). Još jedan primer autoimunske bolesti je Šegrenov sindrom (SS), koji je okarakterisan inflitracijom i fokalnom akumulacijom limfocita u egzokrinim žlezdama. Pokazalo se da postoji značajna ushodna regulacija LMP7 u pljuvačnim žlezdama pacijenata sa šegrenovim sindromom (vidite Egerer et al.2006. Tissue-specific up-regulation of the proteasome subunit beta5i (LMP7) in Sögren's syndrome. Arthritis Rheum 54:1501-8). Shodno tome, lečenje bolesnika sa SS inhibitorom imunoproteazoma može da ublaži simptome bolesti. Pored autoimunskih bolesti, odbacivanje presađenog tkiva/organa se javlja kada imunološki sistem napada terapeutske ćelije koje se uvode u telo domaćina. Bolest kalem protiv domaćina (GVNO), nastala usled alogene transplantacije, javlja se kada imunološke ćelije iz tkiva donora napadaju tkiva domaćina. Stoga, još jedna potencijalna korist od lečenja inhibitorom imunoproteazoma je kod GVHD.

Pored autoimunskih bolesti, inhibitori imunoproteazoma mogu da se koriste u okolnostima kada hronična ili akutna inflamacija dovodi do oštećenja tkiva ili gubitka funkcije. Pokazalo se da inhibitori proteazoma imaju antiinflamatornu aktivnost (vidite Elliot et al. Proteasome inhibition: a new anti- inflammatory strategy.2003. J Mol Med.81:235-245). Primeri inflamatornih bolesti kod kojih može biti korisno lečenje inhibitorom imunoproteazoma uključuju akutna stanja (npr. bronhitis, konjuktivitis, pankreatitis) i hronična stanja (npr. hronični

4

holecistitis, hepatitis, bronhiektaziju, stenozu aortnog zaliska, restenozu, Behčetovu bolest, psorijazu i artritis), zajedno sa stanjima koja su povezana sa inflamacijom (kao što su fibroza, infekcija i ishemija). Behčetova bolest (BD) je hronična, recidivirajuća, inflamatorna višesistemska bolest nepoznate etiologije. Čirevi usne šupljine, genitalni čirevi, lezije na koži, kao i očna i artikularna zahvaćenost su najčešće karakteristike ove bolesti. U skladu sa tim, inhibitori imunoproteazoma mogu da se koriste za lečenje jednog ili više od čireva usne šupljine, genitalnih čireva, lezija na koži i očne ili artikularne zahvaćenosti.

Detektovana je ushodna regulacija imunoproteazoma kao odgovor na kardiovaskularnu inflamaciju, što potencijalno dovodi do apoptoze vaskularnih ćelija (vidite Zang et al.2009. Cardiovascular inflammation and lesion celi apoptosis: a novel connectron via the interferon-inducible immunoproteasome. Arterioscler Thromb Vase Biol.29:1213-1219), što predstavlja korist kod kardiovaskularne bolesti. Ushodna regulacija imunoproteazoma je detektovana i u biopsijama jetre pacijenata sa hroničnim aktivnim hepatitisom, cirozom i steatohepatitisom (vidite French et al. The immunoproteasome in steatohepatitis: Its role in Mallory-Denk body formation.2011, Experimental and Molecular Pathology 90: 252-256), što predstavlja korist u lečenju hronične inflamacije jetre. Još jedno hronično inflamatorno stanje koje se odlikuje oštećenjem tkiva je Alchajmerova bolest (AB), kod koje su mikroglije, rezidentni makrofagi u mozgu, stimulisane da otpuštaju različite proinflamatorne citokine. Povećana ekspresija imunoproteazoma je otkrivena u moždanom tkivu pacijenata sa Alchajmerovom bolešću u poređenju sa kontrolnom grupom starijih osoba koje ne ispofjavaju simptome demencije (vidite Mishto et al. Immunoproteasome and LMP2 polymorphism in aged and Alzheimer's disease brains.2006. Neurobiol Aging 27:54-66). Pored toga, miozitis sa inkluzionim telima i miofibrilarna miopatija su bolesti mišića koje pokazuju akumulaciju proteina i povećanu ekspresiju imunoproteazoma (vidite Ferrer et al.2004. Proteasomal expression, induction of immunoproteasome subunits and local MHC class I presentation in myofibrillar myopathy and inclusion body myositis. J Neuropathol Ехр Neurol.63:484-498). Stoga, lečenje pacijenata sa AD ili drugim neurodegenerativnim stanjima (kao što su amiotrofična lateralna skleroza (ALS) i Hantingtonova bolest usled hronične

4

inflamacije koja se javlja kao odgovor na akumulaciju proteinskih agregata) sa inhibitorom imunoproteazoma predstavlja dodatnu potencijalnu korist.

Dišenova mišićna distrofija (DMD) je nasleđena bolest, koja se odlikuje progresivnom degeneracijom mišića i slabošću. Bolest je prouzrokovana mutacijom gena DMD koja dovodi do nedostatka distrofina, proteina koji se nalazi duž citopiazmatskog lica membrane plazme u skeletnim i srčanim mišićima. Bekerova mišićna distrofija (BMD), mnogo blaži alelni oblik bolesti, uzrokovana je smanjenjem količine ili promenom veličine proteina distrofina. Ove bolesti takođe mogu da se leče ovde otkrivenim inhibitorima imunoproteazoma.

Idiopatske inflamatorne miopatije (IIM) su mišićne bolesti koje karakteriše slabost mišića i specifični inflamatorni infiltrati u mišićima. Ove bolesti mogu da se klasifikuju kao polimiozitis, sporadični miozitis sa inkluzionim telima (slBM), dermatomiozitis (DM) i imuno-posredovane nekrotizirajuće miopatije (IMNM). Ove bolesti takođe mogu da se leče ovde otkrivenim inhibitorima imunoproteazoma.

Ciljna inhibicija imunoproteazoma je takođe potentna strategija protiv modela multiplog mijeloma koja prevazilazi otpornost na uobičajene lekove i nespecifične inhibitore proteazoma. Shodno tome, multipli mijelom takođe može da se leči ovde otkrivenim inhibitorima imunoproteazoma.

Testiranje

Inhibitorska aktivnost ovde opisanih jedinjenja na imunoproteazom može da se testira koristeći in vitro testove koji su opisani u biološkim primerima u nastavku. Određivanje inhibitorske aktivnosti na imunoproteazom putem bilo kog od tih testova se smatra inhibitorskom aktivnošću na imunoproteazom u okviru ovog otkrića čak i kada bilo koji ili svi drugi testovi ne dovode do određivanja inhibitorske aktivnosti na imunoproteazom. Vreme zadržavanja vezanih kompleksa jedinjenja i imunoproteazoma može da se testira koristeći biološki primer 5 i 6 u nastavku. Sposobnost ovde opisanih jedinjenja da grade reverzibilnu kovalentnu vezu sa imunoproteazomom može da se utvrdi testovima koji su opisani u biološkim primerima 4-6 u nastavku.

4

Bez ograničavanja na bilo koju specifičnu teoriju mehanizma, kada ovde opisano jedinjenje gradi reverztbilnu kovalentnu vezu sa cisteinom imunoproteazoma, veruje se da cistein sulfhidril grupa i atom ugljenika koji gradi deo dvostruke veze ugljenik-ugljenik u Y grupi Formule (I) kada je R2 grupa formule (a) ili (b) (vidite Formulu (I)) mogu da grade reverzibilnu, tj. labilnu, kovalentnu vezu, koja je ovde definisana, naznačeno time što Cys48 LMP7 napada atom ugljenika sa nedostatkom elektrona iz dvostruke veze ugljenik- ugljenik u grupi formule (a) ili (b) u jedinjenju Formule (I) kako bi nastao tiolni adukt (npr. Majklova reakcija sa cisteinom).

Štaviše, sve podjedinice imunoproteazoma sadrže katalitički ostatak treonina koji može da interaguje sa boronskom kiselinom/boronskim estrima putem labilnog kovalentnog vezivanja (vidite, na primer, Reem Smoum et al., „Воron Containing Compounds as Protease Inhibitors'L Chemicaf Reviews, 2012, 112, 4156-4220.) U nekim primenma izvođenja, atom ugljenika olefina sa nedostajućim elektronima je distalni u odnosu na ugljenik koji je vezan za cijano grupu i za elektron koji privlači -X<1>NR<6>R<7>ili Het, ostatak u ovde opisanim jedinjenjima. Stoga, kombinacija cijano, druge grupe koja privlači eiektrone i olefinskog ostatka za koji su vezani u ovde opisanom jedinjenju (na primer, jedinjenje Formule (I)) može da poveća reaktivnost olefina da gradi tiolni adukt sa cisteinskim ostatkom aktivnog mesta u LMP7.

Ovde opisana jedinjenja mogu da se vezuju sa imunoproteazomom na nekoliko različitih načina. Pored labilnog kovalentnog vezivanja, koje je prethodno razmotreno (u pogledu -SH grupe cisteina FOH grupe treonina), takođe mogu da grade nekovalentne veze (npr. putem Van der Valsovih veza, vodoničnih veza, hidrofobnih veza, hidrofilnih veza i/ili veza putem elektrostatičkog naelektrisanja) sa imunoproteazomom, pri čemu je nekovalentna veza dovoljna da najmanje delimično inhibira aktivnost kinaze imunoproteazoma

Kao što je ovde otkriveno, u pogledu LMP7, jedna od labilnih kovalentnih veza između ovde opisanog jedinjenja i imunoproteazoma nastaje između prethodno pomenutog olefina u jedinjenju i tiolil (sulfhidril) ostatka cisteina 48 LMP7, na mestu ili blizu mesta na Kome jedinjenje ima prethodno pomenutu nekovalentnu vezu sa LMP7.

Usled toga, jedinjenje koje je ovde opisano, koje gradi reverzibilnu kovalentnu vezu sa imunoproteazomom, može da ima i cisteinom posredovanu kovalentnu vezu (u slučaju LMP7) i treoninom posredovanu kovalentnu vezu (za sve podjedinice imunoproteazoma) i nekovalentnu vezu. To je u suprotnosti sa nekovalentnim reverzibilnim inhibitorima koji inhibiraju imunoproteazom samo putem nekovalentne veze i nemaju cisteinom posredovanu i/ili treoninom posredovanu kovalentnu vezu.

Rezultat vezivanja ovde opisanog jedinjenja (na primer, jedinjenja formule (I)) sa imunoproteazomom na nekoliko različitih načina, kao što je ovde otkriveno, je reverzibilno kovalentni inhibitor sa malom brzinom disocijacije i produženim trajanjem delovanja, u nekim slučajevima uporedivim sa ireverzibilnim kovalentnim inhibitorom bez formiranja trajno ireverzibilnih proteinskih adukata. Razlika između ireverzibilnih i reverzibilnih kovalentnih inhibitora, naročito ovde otkrivenih jedinjenja, može da se utvrdi koristeći ovde otkrivene testove.

Uopšteno, vezivanje kod inhibitora koji gradi reverzibilnu kovalentnu vezu sa imunoproteazomom, tj. kod ovde otkrivenih jedinjenja, je stabilno kada je imunoproteazom/podjedinica imunoproteazoma u određenim konfiguracijama, i podložno je raskidanju kada je imunoproteazom/podjedinica imunoproteazoma u različitim konfiguracijama (u oba slučaja u fiziološkim uslovima) dok je interakcija između inhibitora koji gradi ireverzibilnu kovalentnu vezu stabilna u fiziološkim uslovima čak i kada je imunoproteazom/podjedinica imunoproteazoma u različitim konfiguracijama.

Reverzibilna kovalentna veza često daje jedinstvena svojstva povezana sa vremenom zadržavanja jedinjenja u mestu vezivanja koje sadrži cistein i/ili treonin. U tom kontekstu, vreme zadržavanja se odnosi na vremensko trajanje kompleksa jedinjenje-cilj pod različitim uslovima (vidite Copeland R A, Pompliano D L, Meek T D. Drug-target residence time and its implications for lead optimization. Nat. Rev. Drug Discov, 5(9),730-739 (2006)).

1

Prisustvo reverzibilne kovalentne veze u reverzibilnom kovalentnom inhibitoru kao što je ovde otkriveno može dovesti do produženog vremena zadržavanja u poređenju sa jedinjenjem koje ne gradi kovalentnu vezu sa imunoproteazomom/podjedinicom imunoproteazoma. U nekim ovde otkrivenim primerima izvođenja, ovde opisano jedinjenje (na primer, jedinjenje Formule (l)) koje je reverzibilni kovalentni inhibitor ima vreme zadržavanja od najmanje oko 1 h. Vreme zadržavanja može da se izmeri koristeći testove ispiranja u biohemijskom ili ćelijskom okruženju (vidite biološke primere 4-6 u nastavku.) Utvrđivanje reverzibitnosti vezivanja kovalentne veze između cisteinskog ostatka i olefinske veze (u slučaju LMP7) i između treoninskog ostatka i boronske kiseline/estra (u slučaju svih podjedinica imunoproteazoma) ovde opisanih jedinjenja putem bilo kog od bioloških primera 4-6 u nastavku se smatra reverzibilnošću vezivanja u okviru ovog otkrića, čak i kada jedan ili drugi metod ne dovodi do utvrđivanja reverzibilnosti vezivanja.

Primena i farmaceutska kompozicija

Uopšteno, ovde opisana jedinjenja će se primenjivati u terapeutski delotvornoj količini putem bilo kog od prihvaćenih metoda primene za agense koji imaju sličnu namenu. Terapeutski delotvorne količine jedinjenja koje je ovde opisano mogu biti u rasponu od oko 0,01 do oko 500 mg po kg telesne težine pacijenta na dan, i mogu da se primenjuju u jednoj ili više doza. Odgovarajući dozni nivo može biti od oko 0,1 do oko 250 mg/kg na dan, oko 0,5 do oko 100 mg/kg na dan. Odgovarajući dozni nivo može biti oko 0,01 do oko 250 mg/kg na dan, oko 0,05 do oko 100 mg/kg na dan, ili oko 0,1 do oko 50 mg/kg na dan. U ovom rasponu, doza može biti oko 0,05 do oko 0,5, oko 0,5 do oko 5 ili oko 5 do oko 50 mg/kg na dan. Za oralnu primenu, mogu da budu obezbeđene kompozicije u obliku tableta koje sadrže oko 1,0 do oko 1000 miligrama aktivnog sastojka, naročito oko 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 750, 800, 900 i 1000 miligrama aktivnog sastojka. Stvarna količina jedinjenja, tj. aktivnog sastojka, zavisiće od brojnih faktora, kao što je težina bolesti koja se leči, starost i relativno zdravlje pacijenta, potentnost jedinjenja koje se koristi, način i oblik primene, i drugi faktori.

2

Uopšteno, ovde opisana jedinjenja će se primenjivati kao farmaceutske kompozicije bilo kojim od sledećih puteva: oralnom, sistemskom (npr. transdermalno, intranazalno ili putem supozitorija), parenteralnom (npr. intramuskulamo, intravenski ili supkutano) ili topikalnom primenom (npr. nanošenje na kožu). Poželjan način primene je oralni, koristeći odgovarajući dnevni dozni režim, koji može da se prilagodi u skladu sa stepenom oboljenja. Kompozicije mogu da budu u obliku tableta, pilula, kapsula, polučvrstih supstanci, praškova, formulacija sa produženim otpuštanjem, rastvora, suspenzija, eliksira, aerosola, ili bilo kojih drugih odgovarajućih kompozicija.

Izbor formulacije zavisi od različitih faktora, kao što je način primene leka (npr., za oralnu primenu, poželjne su formulacije u obliku tableta, pilula ili kapsula, ukijučujući tablete, pilule ili kapsule koje su enterički obložene ili imaju odloženo otpuštanje) i bioraspoloživost lekovite supstance. Nedavno su razvijene farmaceutske formulacije posebno za lekove koji pokazuju lošu bioraspoloživost na osnovu principa da bioraspoloživost može da se poveća putem povećanja površine, tj. smanjenja veličine čestice. Na primer, U.S pat, br.4,107,288 opisuje farmaceutsku formulaciju koja ima čestice sa opsegom veličine od 10 do 1000 nm u kojima je aktivna supstanca naneta na unakrsno povezanu matricu makromolekula. U.S. pat. br.5,145,684 opisuje proizvodnju farmaceutske formulacije u kojoj je lekovita supstanca sprašena do nanočestica (prosečna veličina čestice od 400 nm) u prisustvu površinskog modifikatora, a zatim raspršena u tečnom medijumu radi dobijanja farmaceutske formulacije koja ispoljava izuzetno veliku bioraspoloživost.

Kompozicije se uopšteno sastoje od ovde opisanog jedinjenja) u kombinaciji sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom.

Prihvatljivi ekscipijensi su netoksični, pomažu u primeni i nemaju neželjeno dejstvo na terapeutsku korist jedinjenja. Takav ekscipijens može biti bilo koji čvrst, tečan ili polučvrst ili, u slučaju aerosolne kompozicije, gasoviti ekscipijens koji je uopšteno poznat stručnjaku.

Čvrsti farmaceutski ekscipijensi uključuju skrob, celulozu, talk, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silika gel, magnezijum stearat,

natrijum stearat, glicerol monostearat, natrijum hlorid, obrano mleko u prahu, i slično. Tečni i polučvrsti ekscipijensi mogu biti odabrani od glicerola, propilen glikola, vode, etanola i različitih ulja, uključujući ulja iz nafte, kao i životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, npr ulje kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje, itd. Poželjni tečni nosači, naročito za injektabilne rastvore, uključuju vodu, fiziološki rastvor, vodeni rastvor dekstroze, i glikole.

Komprimovani gasovi mogu da se koriste za raspršivanje ovde opisanog jedinjenja u obliku aerosola. Inertni gasovi pogodni za ovu svrhu su azot, ugljen dioksid, itd.

Drugi pogodni farmaceutski ekscipijensi i njihove formulacije su opisani u Remington’s Pharmaceutical Sciences, urednik E. W. Martin (Mack Publishing Соmpanу, 20. izd.2000).

Nivo jedinjenja u formulaciji može da varira u celom rasponu koji koriste stručnjaci. Formulacija obično sadrži, u masenim procentima (mas%), od oko 0,01-99,99 mas% oplsanog jedinjenja u odnosu na ukupnu formulaciju, dok razliku predstavlja jedan ili više odgovarajućih farmaceutskih ekscipijenasa. Poželjno, jedinjenje je prisutno na nivou od oko 1-80 mas%.

Ovde opisano jedinjenje može da se koristi u kombinaciji sa jednim ili više drugih lekova u lečenju bolesti ili stanja kod kojih su ovde opisano jedinjenje ili drugi lekovi korisni, kada je kombinacija lekova bezbednija ili delotvornija od bilo kog leka samostalno. Takvi drugi lekovi mogu da se primenjuju, putem i u količinama koje se uobičajeno za to koriste, istovremeno ili sekvencijalno sa ovde opisanim jedinjenjem. Kada se ovde opisano jedinjenje koristi istovremeno sa jednim ili više drugih lekova, poželjna je farmaceutska kompozicija u pojedinačnom doznom obliku koja sadrži te druge lekove i ovde opisano jedinjenje. Međutim, kombinovana terapija takođe može da uključuje terapije kod kojih se ovde opisano jedinjenje i jedan ili više drugih lekova primenjuju sa različitim preklapajućim rasporedima. Takođe je razmatrano da, kada se koristi u kombinaciji sa jednim ili više drugih aktivnih sastojaka, ovde opisano jedinjenje i drugi aktivni sastojci mogu biti u manjim dozama nego kada se koriste pojedinačno.

4

Shodno tome, ovde opisana farmaceutska kompozicija takođe može da uključuje one koje sadrže jedan ili više drugih aktivnih sastojaka, pored ovde opisanog jedinjenja.

Primeri sinteze

Primer 1

((R)-1-(3-(((R)-1-(2-cijano-4-metilpen-2-enoil)pirolidin-2-i!)metoksi)propanamido)-2-feniletil)boronska kiselina

Korak 1

U ohlađenu (-50 °C) suspenziju NaH (1,6 g, 60% disperzija u mineralnom ulju, 40 mmol) u THF-u (50 ml) uz mešanje je dodat (R)-terc-butil 2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (4 g, 20 mmol) u THF-u (15 ml) tokom 5 min. Nakon mešanja tokom 15 min, metil akrilat (3,96 g, 46 mmol) je dodat reakcionoj smeši na - 50 °C, i mešana je još 15 min. Smeša je zagrejana na - 40 °C i tokom 2 h, zatim zakiseljena pomoću AcOH (1 ml), razblažena ledenom vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 × 50 ml). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela, uz eluiranje sa 15% EtOAc u petrol etru radi dobijanja (R)-terc-butil 2-((3-metoksi-3-oksopropoksi)metil)pirolidin-1-karboksilata (1,5 g, 26%) kao žutog ulja.

Korak 2

Rastvor (R)-terc-butil 2-((3-metoksi-3-oksopropoksi)metH)pirolidin-1 -karboksilata (1,5 g, 5,2 mmol) i LiOH (250 mg, 10,4 mmol) u THF-u (15 ml) i vodi (5 ml) mešan je tokom 16 h na sobnoj temperaturi (rt). Smeša je koncentrovana, i dobijeni rastvor je razblažen sa EtOAc (15 ml) i vodom (15 ml). Vodeni sloj je podešen na pH = 2 sa 1 N vodenim rastvorom HCI i ekstrahovan pomoću EtOAc (3 × 15 ml). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan radi dobijanja (R)-3-((1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)propionske kiseline kao žute čvrste supstance (1,2 g, 86%), koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3

Diizopropiletilamin (1,2 g, 9,68 mmol) je uz mešanje dodat u rastvor (R)-3-((1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)propionske kiseline (1,2 g, 4,4 mmol), (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-tnmetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamina (1,5 mg, 4,4 mmol) i HATU (1,8 g, 4,8 mmol) u DMF-u (5 ml) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim ugašena vodom (10 ml) i filtrirana radi dobijanja (R)-terc-butil 2-((3-okso-3-(((S)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)amino)propoksi)metil)pirolidin-1-karboksilata kao žute čvrste supstance (900 mg) koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.

Korak 4

Rastvor (R)-terc-butil 2-((3-okso-3-(((S)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)amino)propoksi)metil)pirolidin-1-karboksilata (900 mg, sirov) i HCI (4 mi, 4 M u dioksanu) u dioksanu (4 ml) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je podešen na pH = 8 pomoću vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan pomoću EtOAc (20 ml × 3).

Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan radi dobijanja N-((S)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)-3-((R)-pirolidin-2-ilmetoksi)propanamida kao žute čvrste supstance (800 mg), koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.

Korak 5

DIPEA (500 mg, 3,87 mmol) je uz mešanje dodat u rastvor N-((S)-2-fenil-1- ((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimeliheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)-3-((R)-pirolidin-2-iimetoksi)propanamida (800 mg, 1,76 mmol), 2-cijano-4-metilpent-2-enske kiseline

(245 mg, 1,76 mmol) i BOP (858 mg, 1,94 mmol) u DMF-u (5 ml) na sobnoj

temperaturi. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 h, reakcija je

prekinuta vodom (20 ml) i razblažena sa EtOAc (40 ml), zatim isprana zasićenim

vodenim rastvorom soli ( 2 x 5 ml), osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC radi dobijanja

3-(((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2- enoil)pirolidin-2-il)metoksi-N-((S)-fenil-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)propanamida kao bele čvrste supstance

(200 mg).

Korak 6

U rastvor 3-(((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2~enoil)pirolidin-2-il)metoksi)-N-((S)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)propanamida (200 mg, 0,35 mmol) u

MeOH (5 ml) dodati su heksan (5 ml) i 1 N HC! (1 ml), zatim izobutil boronska

kiselina (106 mg, 1,04 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 h i praćenja pomoću LCMS, heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen

vodom (10 ml) i liofilizovan direktno radi dobijanja sirovog proizvoda. Ovaj sirovi proizvod je dalje prečišćen pomoću kolone sa neutralnim AI2O3 (metanol/DCM = 0-20% kao eluent) radi dobijanja naslovnog jedinjenja kao žute čvrste supstance (46

mg). LC-MS m/z: 424,2.

Primer 2

((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pipendin-2- il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor terc-butil (2R)-2-(bidroksimetil)piperidin-1-karboksilata (1 g, 4,6 mmol, 1,0 ekv.) u dihlormetanu

(10 ml), piridinu (900 mg, 11,4 mmol, 2,5 ekv.) i 4-nitrofenil hlorformatu (1,03 g,

5,11 mmol, 1,1 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi.

Reakcija je potom prekinuta dodatkom 10 ml NH4CL Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet

na kolonu silika gela i eluiran pomoću etil acetata/petrol etra (10:90). To je dalo

terc-butil (2R)-2-[((4-nitrofenoksikarbonil)oksi]metil]piperidin-1-karboksilat (1,4 g)

kao žutu čvrstu supstancu.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je rastvor terc-butil (2R)-2- [[(4-nitrofenoksikarbonil)oksi]metil]piperidin-1-karboksilata (150 mg, 0,39 mmol,

1.0 ekv.) u dihformetanu (3 ml), pa zatim DIEA (153 mg, 1,18 mmol, 3,00 ekv.) i (R)-2-feniM-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorid (133 mg, 0,40 mmol,

1.0 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan 14 h na sobnoj temperaturi i zatim

koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela i eluiran

pomoću petrol etra etil acetata (4:1), To je dalo (R)-terc-butil 2-(((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6

metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilat (40 mg) kao bezbojno ulje.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je rastvor (R)-terc-butil 2- (((((R-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1r3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)piperidin-1

karboksilata (130 mg, 0,24 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (1 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi.

Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i dala je (R)-piperidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3at5,5-trinietilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborof-2-!i)etil)karbamat (105 mg) kao smeđe ulje, koje je neposredno korišćeno u sledećem koraku.

Korak 4

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je rastvor (R)-pjperidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaboro!-2-il)etil)karbamata (105 mg, 0,24 mmol, 1,0 ekv.) u dihlormetanu (2 ml), pa zatim 2-cijano-4-metiipent-2-enska kiselina (40 mg, 0,29 mmoi, 1,20 ekv.), HATU (136 mg, 0,36 mmol, 1,50 ekv.) i DIEA (92,4 mg, 0,71 mmol, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode (2 ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom, a organski slojevi su kombinovani i isprani zasićenim vodenim rastvorom soli. Smeša je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Dobijena supstanca je prečišćena pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Ргер C18 OBD; mobilna faza, voda (0,05% NH3H2O) i ACN (76% ACN do 77% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2- enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d]I1,3,2]dioksaboro!-2-il)etil)karbamat (25 mg) kao belu čvrstu supstancu.

Korak 5

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je rastvor ((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-tnmetilheksahidro-4,6-metanobenza[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (25 mg, 0,04 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu/heksanu (1/1 ml), 1N HCI (0,9 ml, 20,00 ekv.) i (2- metilpropil)boronska kiselina (14 mg, 0,14 mmol, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen.

Metanolni sloj je razblažen vodom (6 ml), zatim zamrznut i liofilizovan radi dobijanja sirovog proizvoda (25 mg), Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (0,05% TFA) i ACN (36% ACN do 46% za 8 min); detektor, uv 254 nm. To je dalo izolovanu [(1R)-1-[([[(2R)-1-[2-cijano-2-(2-metilpropi!iden)acetil]piperidin-2-il]metokst]karbonil)amino]-2-feniletil]boronsku kiselinu (6,1 mg) kao svetložutu čvrstu supstancu. LC-MS m/z; 450 (M+Na<+>).<1>H NMR (400 MHz, CD30D) 67,29-7,27 (m, 2H), 7,26-7,20 (m, ЗН), 6,76-6,75 (m, 1H), 4,67-4,41 (m,1H), 4,23-4,00 (m, 1H), 3,29-3,25 (m, 4H), 2,92-2,87 (m, 1H), 2,83- 2,81 (m, 2H), 1,80-1,71 (m, 5H), 1,55-1,32 (m, 1H), 1,22-1,06 (m, 6H).

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su 3-[1-[(tercbutoksi)karbonil]pirolidin-2-il]propionska kiselina (500 mg, 2,06 mmol, 1,00 ekv.), (1R)-2-feniM-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (689 mg, 2,05 mmol, 1,0 ekv.), EDCI (943 mg, 4,92 mmol, 2,40 ekv.), HOBT (667 mg, 4,94 mmol, 2,40 ekv.), DIEA (637 mg, 4,93 mmol, 2,40 ekv.) i dihlormetan (50 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 5 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću dihlormetana. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću kolone C18 sa vodom/MeCN (20%-80% za 30 min). To je dalo terc-butil2-(2-[[(1R)-2-feni!-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9I9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratricikfo[6.1.1.0<ʌ>2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]etil)pirolidin-1-karboksilat (350 mg) kao žuto ulje.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil 2-(2-[[(1R)-2-fenil-1 -[(1S,2S,3R,8S)-2,9,9-trimetil-S.S-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]etil)pirolidin-1-karboksilat (350 mg, 0,67 mmol, 1,00 ekv.), trifluorsirćetna kiselina (2 ml) i dihlormetan (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću kolone C18 sa vodom/ACN (20%-80% za 30 min). To je dalo N-[(1R)-2-fenil-[(1S,2S,3R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa- 4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]-3-(pirolidin-2-il)propanamid (280 mg) kao žuto ulje.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]-3-(pirolidin-2-il)propanamid (280 mg, 0,66 mmol, 1,00 ekv.), 2-cijano-4-metilpent-2-enska kiselina (184 mg, 1,32 mmol, 2,00 ekv.), HATU (753 mg, 1,98 mmol, 3,0 ekv ), DIEA (426 mg, 3,30 mmol, 5,00 ekv.) i dihlormetan (15 ml), Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću dihlormetana (3 × 50 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (HPLC-SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (0,05% TFA) i ACN (zadržati 65,0% ACN tokom 12 min); detektor, uv 254 nm. To je dovelo do razdvajanja dva dijastereomera. Prve eluirane frakcije dale su 3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)-N-((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-H)etil)propanamid (40 mg, 11%, stereohemija nije određena) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije. Izolovanje drugog eluiranog jedinjenja dalo je 3-(1-(2-cijano-4-metifpent-2-enoil)pirolidin-2-il)-N-((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro- 4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)propanamid (30 mg, 8%, stereohemija nije određena) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije.

1

Korak 4 (primer 3)

Kasnije eluirani proizvod 3-(1-(2-cijano-4-metilpeni-2-enoil)pirolidin-2-il)-N-((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol -2-il)etil)propanarmd (30 mg, 0,05 mmol, 1.0 ekv.) je dodat u balon, a zatim (2-metilpropii)boronska kiseiina (16,8 mg, 0,16 mmol, 3,00 ekv.), hlorovodonik (1N) (0,3 ml), metanol (1,5 mi) i heksan (1,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (10 mi), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće usfove (HPLC-SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep OBD C18, 19*250 mm, 5 um; mobilna faza, voda (0,05% NH3H2O) i ACN (31% ACN do 51% za 8 min); detektor, uv 220 nm. To je dalo ((1R)-1-(3-(1-(2-cijano-4- metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronsku kiselinu (11,7 mg, 52%, kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 394 (M-17).1H NMR (300 MHz, metanold4) δ 7,31-7,11 (m, 6H), 6,98 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,06 (s, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,57 -3,34 (m, 2H), 2,96 - 2,78 (m, ЗН), 2,56 (dd, J = 15,8, 11,6 Hz, 1H), 2,42 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 2,25- 1,49 (m, 13H).

Korak 4 (primer 4)

Prvi eluirani dijastereomer 3-{1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)-N-((R}-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol -2-il)etil)propanamid (30 mg, 0,05 mmol, 1.0 ekv.) dodat je u balon sa okruglim dnom, a zatim (2-metilpropil)boronska kiselina (17 mg, 0,17 mmol, 3,00 ekv,), hlorovodonik (1N) (1,1 ml, 20,00 ekv.), metanol (2 ml) i heksan (2 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni stoj je razblažen vodom (10 ml), a zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobiina faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (30% ACN do 31% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo [(1R)-1-[3-[(2R)-1-[2-cijano-2-(2-metilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]propanamidoJ-2-feniletil]boronsku kiselinu (9,2 mg, 41%, kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 394 (M-17)<1>H NMR (400 MHz, CD30D) б 7,29-7,22 (m, 4H), 7,19-7,15 (m, 1H), 7,02-6,99

2

(m, 1Н).4,18-4,05 (m, 1Н), 3,65-3,64 (m, 2Н), 2,93-2,86 (m, ЗН), 2,59-2,52 (m, 1Н), 2,46-2,42 (m, 2Н), 2,15-1,99 (m, ЗН), 1,91-1,86 (m, 1Н), 1,76-1,68 (m, 2Н), 1,16-1,13 (m,6H).

Primeri 5 i 6

((1R)-1-(3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)propanamido)- 2-feniletil)boronska kiselina

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su 3-[1-[(tercbutoksi)karbonit]piperidin-2-il]propionska kiselina (500 mg, 1,94 mmol, 1,00 ekv.), (1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (652 mg, 1,94 mmol, 1,0 ekv.), EDCI (892 mg, 4,65 mmol, 2,40 ekv.), HOBT (630 mg, 4,66 mmol, 2,40 ekv.), DIEA (602 mg, 4,66 mmol, 2,40 ekv.) i dihlormetan (50 ml). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću dihlormetana (3 × 100 ml) i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana zasićenim natrijum hloridom (1 х 100 ml). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću kolone C18 sa vodom/ACN (20%-100% za 30 min). To je dalo terc-butil 2-(2-[[(1R)-2-fenil-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]etil)piperidin-1 -karboksitat (460 mg, 44%) kao žutu čvrstu supstancu.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil 2-(2-[[(1R)-2-fenil-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4j|]etil]karbamoil]etil)pipericlin-1-karboksilat (460 mg, 0,85 mmol, 1,00 ekv.), trifluorsirćetna kiselina (4 ml) i dihlormetan (20 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi, i dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, To je dalo N-[(1R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il)etil)-3-(piperidin-2-il)propanamid (370 mg, 99%) kao smeđe ulje, koje je korišćeno neposredno u sledećem koraku.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 50 m! dodati su N-[(1R)-2-feniM- [(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ii]etil]-2- (piperidin-2-il)propanamid (160 mg, 0,36 mmol, 1,00 ekv.), 2-cijano-4-metilpent- 2-enska kiselina (101 mg, 0,73 mmol, 2,00 ekv.), HATU (416 mg, 1,09 mmol,3,00 ekv.), DIEA (236 mg, 1,83 mmoi, 5,00 ekv.) i dihlormetan (16 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću dihlormetana (3 х 50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana zasićenim natrijum hloridom (1 × 50 ml). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Ргер C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (0,05% TFA) i ACN (ostaje 68,0% ACN za 13 min); detektor, uv 254 nm Prve eluirane frakcije su liofilizovane radi dobijanja 3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-N-((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)propanamida (10 mg, 5%) kao žute čvrste supstance. Kasnije eluirane frakcije su liofllizovane radi dobijanja 3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)-N-((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)propanamida (10 mg, 5%) kao žute čvrste supstance nakon liofilizacije.

Korak 4 (primer 51

U bočicu od 8 ml dodat je prvi eluirani dijastereomer 3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-N--((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-iS)etil)propanamida (10 mg, 0,02 mmol, 1,00 ekv.)t(2-metilpropil)boronska kiselina (5,5 mg,

0,05 mmol, 3,00 ekv,), hlorovodonik (1N) (0,1 ml), metanol (0,5 ml) i heksan

4

(0,5 mi). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (10 ml) a zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (32,0% ACN do 33,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((1 R)-1-(3-(1 -(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronsku kiselinu (2 mg) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 408 (M-17).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,25-7,12 (m, 6H), 6,76 (d, Ј=10,2 Hz, 1H), 4,60-4,50 (m, 1H), 3,80-3,60 (m, 1H), 2,90-2,82 (m, ЗН), 2,59-2,50 (m, 1H), 2,35-2,31 (m, 2H), 2,23-2,13 (m, 1H), 1,88-1,46 (m, 9H), 1,13-1,03 (m, 7H).

Korak 4 (primer 6)

U bočicu od 8 ml dodat je kasnije eluirani dijastereomer 3-(1-(2-cijano-3-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)-N-((R)-2-fenii-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-H)etil)propanamid (10 mg, 0,02 mmol, 1,00 ekv.), (2-metilpropil)boronska kiselina (5,5 mg,

0,05 mmol, 3,00 ekv.), hlorovodonik (1N) (0,1 ml), metanol (0,5 ml) i heksan (0,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (10 ml) a zatim osušen putem liofilizacije radi dobijanja sirovog proizvoda, Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (32,0% ACN do 33,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo [(1R)-1-[3-[(2S)-1-[2-cijano-2-(2-metifpropiliden)acetil]piperidin-2-il]propanamido]- 2-feni!etiJ]boronsku kiselinu (2 mg, 26%) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 408 (M-17).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) б 7,25-7,12 (m, 6H), 6,76 (d, J=10,2 Hz, 1H), 4,60-4,50 (m, 1H), 3,80-3,60 (m, 1H), 2,90-2,79 (m, ЗН), 2,61-2,51 (m, 1H), 2,37-2,12 (m, ЗН), 1,89-1,26 (m, 9H), 1,13-1,03 (m, 7H).

Primer 7

((R)-1-(((((R)-1-{2-cijano-4-metnpent-2-enoil)piroiidin-2- il)metoksi)karbonil) amino)-2-feniletil)boronska kiselina

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat(1 g, 4,97 mmol, 1,00ekv.), dihlormetan (30 ml), piridin (982 mg, 12,41 mmoi, 2,50 ekv.) i 4-nitrofenil hloroformat (1,10 g.5,45 mmol, 1,00 ekv,). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem NH4Cl (vod ). Sloj DCM je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (hromatografija na tankom sloju) sa etil acetatom/petrol etrom (1:5). To je dalo terc-butil (2R)-2-[[(4- nitrofenoksikarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksilat (1,2 g) kao žuto ulje.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodati su (1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratnciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (100 mg, 0,30 mmol, 1,00 ekv.), N,N-dimetilformamid (5 ml), DIEA (129,3 mg, 1,00 mmol, 3,36 ekv.) i terc-butil (2R)-2-[[(4-nitrofenoksikarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksilat (146,8 mg, 0,40 mmol, 1,35 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana natrijum hloridom (1 х 20 ml). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata.

Ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC sa etil acetatom/petrol etrom (1:4). To je dalo terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1 -karboksilat (0,1 g, 64%) kao žuto ulje.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1 -karboksilat (100 mg, 0.19 mmol.1,00 ekv.), a zatim dihlormetan (3 ml) i trifiuorsirćetna kiselina (1 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod

vakuumom. To je dalo (2R)-pirolidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,78S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il)etil)karbamat (0,08 g) kao žuto ulje.

Korak 4

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je (2R)-pirolidin-2-ilmetil N--[(1R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il)etil)karbamat (30 mg, 0,07 mmol, 1,00ekv.),a zatim N,N-dimetilformamid (2 mi), 2-cijano-4-meti!pent-2-enska kiseiina (14,68 mg, 0,11 mmol, 1,50 ekv.), DIEA (22,70 mg, 0,18 mmol, 2,50 ekv.) i HATU (40 mg(

0,11 mmol, 1,50 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi.

Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je tsprana natrijum hloridom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz

sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (74,0% ACN do 75,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo [(2R)-1-[2-cijano-2-(2-metilpropiliden)acetil]pirolidin-2-illmetil N-[(1R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,78S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il)etil)karbamat (6 mg, 16%) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije.

Korak 5

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2-(2-metilpropiliden)aceti!]piro!idin-2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il)etil)karbamat (10 mg,

0,02 mmol, 1,00 ekv.), metanol (1,5 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (5,6 mg, 0,05 mmoi, 3,01 ekv.), heksan (1,5 ml) i 1M hlorovodonik (0,366 ml) Dobijeni

rastvor je mešan tokom -3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen, Metanolni sloj je razblažen vodom (6 ml), izolovan liofilizacijom, a zatim prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19* 150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (33,0% ACN do 35,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo [(1R)-1-[([[(2R)-1-[2-cijano-2-(2- metilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-feniletil]boronsku kiselinu (4,6 mg, 57%) kao čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 396 (M-17).<1>H NMR (300 MHz, metanold4) δ 7,29 - 6,89 (m, 6H), 4,18 - 3,88 (d,

J = 69,8 Hz, ЗН), 3,73 - 3,41 (m, 2H), 3,27 - 3,12 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 2,98 - 2,61 (m, ЗН), 1,94 (d, J - 43,4 Hz, 4H), 1,24 - 0,96 (m, 6H).

Korak 1

U rastvor (R)-piperidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzoI[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (intermedijer iz koraka 3, primer 2, 55 mg, 0,12 mmol) i DCM-a (2 mi) dodat je akriloil hlorid (0,02 mi, 0,19 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Smeša je prečišćena direktno pomoću preparativne TLC sa 30% EtOAc/heksan tSHo i dala je ((R)-1-akriloilpiperidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzoI[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (25 mg) kao ulje.

Korak 2

U balon napunjen ((R)-1-akriIoilpiperidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaboroi-2-il)etil)karbamatom (20.mg, 0,040 mmol),

dodati su metanol (1 ml), heksan (1 ml), 1N HCI (0,5 ml, 0,0400 mmol) i

izobutilboronska kiselina (20,6 mg, 0,200 mmol). Reakciona smeša je mešana

na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Heksanski sloj je uklonjen. Preostalom rastvoru su dodati ACN i voda. Smeša je zamrznuta i liofilizovana radi dobijanja čvrste supstance koja je rastvorena u minimalnoj količini DCM-a i 3 kapi TEA. Rastvor je prečišćen pomoću preparativne TLC (8% MeOH/DCM) radi dobijanja ((R)-1- (((((R)-1-aknloilpiperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline (1,9 mg) nakon koncentrovanja i liofilizacije iz acetonitrila i vode.

Koraci 1-3

Praćenje koraka 1-3 iz sintetičkog primera 2, ali uz zamenu (R)-tercbutil 2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (S)-terc-butil 2-(hidroks(metil)pirolidin-1-karboksilatom, dalo je (S)-pipendin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-({3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat.

Korak 4

U rastvor (S)-piperidin-2-iimetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6St7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (140 mg, 0,3200 mmol) i (E)-2-cijano-4,4-dimeti!-pent-2~enske kiseline (97,39 mg,

0,6400 mmol) u DMF-u (2 ml) dodat je DIPEA (0,23 mi, 1,27 mmol). Smeša je mešana tokom 15 min, a zatim je dodat HATU (302 mg, 0,790 mmol). Nakon 4 b, dodato je još (E)-2-cijano-4,4-dimetil-pent-2-enske kiseline (1 ekv., 50 mg). Nakon 18 h, smeša je raspodeljena između DCM-a (2 × 50 ml) i vode (2 × 50 ml).

Organski sloj je osušen (MgSO4) i koncentrovan do ulja, koje je prečišćeno hromatografijom na silika gelu radi sakupljanja ((S)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (140 mg) kao pene.

Korak 5

U rastvor ((S)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)pipendin-2-il)metil ((R)--2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (133 mg, 0,23 mmol) u metanolu (1,5 ml), heksanu (1,5 ml) i 1N HCI (1,0 ml, 0,23 mmol) dodata je izobutilboronska kiselina (118 mg, 1,16 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Heksanski sloj je uklonjen, a ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (MeCN/Н2О sa 0,1% mravljom kiseiinom). Prečišćene frakcije su raspodeljene između NaHC03 i DCM-a. Organski sloj je koncentrovan i liofilizovan radi dobijanja ((R)-1-(((((S)-1-((E)-2-cijano-4,4- dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline 45 mg) kao beiog praha. LC-MS m/z: 464 (M+23).

Primer 10

((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-fenifetii)boronska kiselina

(10 ml) i DIEA (962 mgt7,44 mmol, 3,00 ekv.), a zatim je ukapan ditrihlormetil karbonat (365,2 mg, 1,23 mmol, 0,50 ekv.)/DCM (5 ml) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2-3 h na 0 °C. Ovaj dobijeni rastvor je korišćen direktno u sledećem koraku.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorid (693 mg, 2,06 mmol,

1,0 ekv.), dihlormetan (24 ml) i DIEA (899,8 mg, 6,96 mmol, 2,00 ekv.). Rastvor terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksifata (2,48 mmol,

1,2 ekv.) iz koraka 1 je polako dodat na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2- 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana vodom (1 × 30 ml) i zasićenim natrijum hloridom (1 × 30 ml). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum

sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:4). To je dalo (R)-terc-butil 2-(((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborof-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (0,5 g) kao žuto ulje.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 25 m! dodati su (R)-terc-butil 2-(((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (100 mg, 0,19 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (3 ml) i trifluorsirćetna

kiselina (1 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi.

Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo (R)-pirolidin-2-ilmetii ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat 2,2,2-trifluoracetat (0,08 mg) kao žuto ulje.

Korak 4

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su (R)-pirolidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6

1

metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat 2,2,2-trifluoracetat (480 mg, 1,13 mmol, 1,00 ekv.), N,N-dimetilformamid (10 mi), DIEA (363,15 mg, 2,81 mmol, 2,50 ekv.), 2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enska kiselina (206,85 mg, 1r35 mmol, 1,20 ekv.)i HATU (513,5 mg, 1,35mmol, 1,20 ekv.), Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode, Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću etil acetata i organski slojevi su kombinovani.

Dobijeni rastvor je ispran natrijum hloridom (2 × 30 ml). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:1). Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz siedeće usiove (HPLC- SHiMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (72,0% ACN do 82,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((R)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2- enoil)pirolidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (150 mg) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije.

Korak 5

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su ((R)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (150 mg, 0,27 mmol, 1,00 ekv ), metanol (10 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (81,84 mg, 0,80 mmol, 3,01 ekv.), 1M hlorovodonik (5,34 ml) i heksan (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom ~5 h na sobnoj temperaturi, Nakon što je metanolni sloj liofilizovan, sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (HPLC-SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobifna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (32,0% ACN do 47,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. Nakon liofilizacije, ((R)-1-(((((R)-1-(2-djano-4,4-dimetilpent-2-enoil)pirolidin-2- il)metoksi)karbonil)amino)-2-feni1etil)boronska kiselina (53,8 mg) je dobijena kao bela čvrsta supstanca. LC-MS m/z: 410 (M-17).<1>H NMR (300 M-Hz, DMSO-de) δ 7,71 (d, J - 3,3 Hz, 1H), 7,31 -6,95 (m, 5H), 6,88 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,04 (dd,

J = 42,5, 16,3 Hz, ЗН), 3,28 {s, 4H), 3,19 - 2,94 (m, 1H), 2,91 - 2,56 (m, 2H), 2,01-1,53 (m, 4H), 1,29 - 1,08 (m, 9H).

2

Korak 1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (600 mg, 2,98 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (15 mg, 0,18 mmol, 0,06 ekv.) i DIPEA(1,16g, 8,99 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat ditrihlormetil karbonat (438,8 mg, 1,48 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na 0 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja sirovog proizvoda u vidu žutog ulja koje je neposredno korišćeno u sledećem koraku,

Korak 2

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-

4

2-il)etanamin hidrohlorid (900 mg, 3,01 mmol, 0,90 ekv.) i dihlormetan (20 ml), DIPEA (693,1 mg, 5,37 mmol, 1,80 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirondin-1-karboksilat (785,1 mg, 2,98 mmol, 1,00 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 90 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen DCM-om (100 ml). Dobijena smeša je isprana natrijum hloridom (3 × 100 ml). Smešaje osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečiščen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD,19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (ostaje 65,0% ACN za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo (R)-tercbutil 2- (((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (530 mg) kao belu čvrstu supstancu.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 250 ml dodati su (R)-terc-butil 2-(((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (520 mg, 0,99 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (100 ml) i trifluorsirćetna kiselina (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja (R)-pirolidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata koji je neposredno korišćen u sledećem koraku,

Korak 4

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su (R)-pirolidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (421 mg, 0,99 mmol,

1.0 ekv.), dihlormetan (15 ml) i TEA (299,4 mg, 2,96 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat prop-2-enoil hlorid (107,3 mg, 1,19 mmol, 1,20 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU); Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/t NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (ostaje 65,0% ACN za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((R)-1-akriloi1p!rolidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzot[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (220 mg) kao belu čvrstu supstancu.

Korak 5

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su ((R)-1-akriloilpirolidin-2-il)metil(R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilhek$ahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat(220 mg, 0,46 mmoi, 1,00 ekv.), metanol (9,5 ml), heksan (9,5 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (135,6 mg, 1,33 mmol, 2,90 ekv.) i 1N HCI (9,2 ml, 20,00 ekv.). Dobijeni rastvorje mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana heksanom (3 × 10 ml). Metanolni sloj je razblažen sa H2O (100 ml), zatim liofilizovan radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (5,0% ACN do 45,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((R)-1-(((((R)-1-akriloilpirolidin-2- il)metoksi)karboni!)amino)-2-feniletil)boronsku kiselinu (48 mg) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije, LC-MS mIz: 329 (M+1),<1>H NMR (300 MHz, metanol- d4) δ 7,32-7,04 (m, 5H), 6,85-6,45 (m, 1H), 6,24 (m, 1H), 5,69 (m, 1H), 4,43-3,73 (m, ЗН), 3,67-3,39 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 2,90-2,60 (m, 2H), 1,94 (m, 4H).

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilat (16,02 g, 74,42 mmol, 1,0 ekv.), piridin (9,03 ml, 111,6 mmol, 1,5), THF (50 ml) i (4-nitrofenil) hloroformat (18,0 g, 89,3 mmol, 1,2 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 18 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem NH4CI (vod.). Sloj DCM je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom, Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/heksanom (1:5). To je dalo (R)-terc-butil 2-((((4-nitrofenoksi)karbonil)oksi)metil)piperidin-1- karboksilat (13,4 g, 47%) kao žuto ulje.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je (R)-terc-butil 2-((((4-nitrofenoksi)karbonil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilat (1646 mg, 4,33 mmoi, 1,0 ekv ). Ovo je rastvoreno u DCM-u (10 ml), nakon čega je dodat N,N-diizopropiletilamin (1,08 mi, 6,49 mmol, 1,5 ekv.) i (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorid (1743 mg, 5,19 mmol, 1,2 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću DCM-a (2 × 50 ml) i organski slojevi su kombinovani.

Dobijena smeša je isprana natrijum hloridom (20 ml). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, Higgins Analytical Inc, TARGA C1810 ul, 250x20 mm, br. art.; TS-2520-C181; mobilna faza, voda (0,01% mravlja kiselina) i ACN (0,01% mravlja kiselina za 25 min); detektor, UV 254/220 nm. Čiste frakcije su zalužene sa NaHCO3(zas.) i ekstrahovane pomoću DCM-a. Organska supstanca je osušena sa MgSO4, koncentrovana, zamrznuta i liofilizovana. To je dato (R)-tercbutil-2-(((((R)-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)- 3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilat (638 mg, 27%) kao belu čvrstu supstancu. LC-MS m/z: 541 (M+1).

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je (R)-terc-butil 2-(((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilat (170 mg, 0,31 mmol), a zatim dihlormetan (3 ml) i 4N HCI u dioksanu (1,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom dajući (R)-piperidin-2-ilmetil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (138 mg) kao žuto ulje. LC- MS m/z: 441 (M+1).

Korak 4

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je (R)-piperidin-2-ilmetil ((R)-2- fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (135 mg, 0,31 mmol, 1,0 ekv.) zatim DCM (2 ml), (E)-2-cijano-4,4-dimetil-pent-2-enska kiselina (93,9 mg,

0,61 mmol, 2,0 ekv.), DIEA (0,22 ml, 1,23 mmol, 4,00 ekv.) i HATU (233 mg, 0,613 mmol, 2,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću DCM-a i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana natrijum hloridom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, Higgins Analytical Inc, TARGA C18 10 ul, 250x20 mm, br. art.: TS-2520-C181; mobilna faza, voda (0,01% mravlja kiselina) i ACN (0,01% mravlja kiselina za 25 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((R)-1 -((E)-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1 -((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (138 mg, 78%) kao belu čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 574 (M-1).

Korak 5

U balon sa okruglim dnom od 10 ml dodati su ((R)-1-((E)-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat

(135,0 mg, 0,23 mmol, 1,00 ekv.), metanol (1,5 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (119 mg, 1,17 mmol, 5,00 ekv ), heksan (1,5 ml) i 1M hlorovodonik (1,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom -40 min na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (6 mi), izolovan liofilizacijom, a zatim prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove (SHIMADZU): Kolona, Higgin Analytical Inc, TARGA C1810 ul, 250x20 mm, br. art.: TS-2520-C181; mobilna faza, voda (0,01% mravlja kiselina) i ACN (0,01% mravlja kiselina za 25 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo ((R)-1-(((((R)-1- (2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2- feniletil)boronsku kiselinu (50 mg, 48%) kao čvrstu supstancu nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 464 (M+23).

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su 1-benzofuran-3-karbaldehid (5 g, 34,21 mmol, 1,00 ekv.) i metanol (50 ml). Zatim je dodat NaBH4(1,96 g, 51,81 mmol, 1,50 ekv.) u nekoliko šarži. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 50 ml NH4CI. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod

U trogrli balon sa okrugiim dnom od 100 ml dodati su 1-benzofuran-3-ilmetanol (1 g, 6,75 mrriol, 1,00 ekv.) i etar (10 ml). Zatim je dodat РВr3(730 mg, 2,70 mmol, 0,40 ekv.) ukapavanjem uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 0 °C. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem vode/leda. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 50 ml etra, i organski stojevi su spojeni i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 1,3 g (sirovog) 3-(brommetil)-1-benzofurana kao bezbojnog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor 2-(1-benzofuran-3-ilmetil)-4,4,5,-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (490 mg, 1,90 mmol, 1,00 ekv.) u etru (5 ml), j (1S,2S,3RJ5S)-2)6,6’-tnmetilbicik!o[3.1.1]heptan-2,3-diol (420 mg, 2,47 mmol, 1,30 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (3:97). To je dalo 200 mg (34%) (1S,2S,6R,8S)-4-(1-benzofuran-3-ilmetil)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekana kao žutog ulja.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml sipan je rastvor dihlormetana (617 mg, 7,26 mmol, 3,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (4 ml). Zatim je dodat LDA (1,6 ml, 1,30 ekv.) ukapavanjem uz mešanje na -78 °C. Smeša je mešana tokom 20 min na -78 °C. Tome je dodat rastvor (1S,2S,6R,8S)-4-(1-benzofuran-3-ilmetil)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1.1.0<ʌ>[2,6]]dekana (750 mg, 2,42 mmol, 1,0 ekv.) u tetrahidrofuranu (2 ml) ukapavanjem uz mešanje na -78 °C. Smeša je

1

mešana tokom 10 min na -78 °C. U smešu je ukapavanjem uz mešanje dodat ZnCl2(5 ml, 1,00 ekv., 0,5N) na -78 °C. Konačna reakciona smeša je mešana tokom 30 min na -78 °C. Dobijeni rastvor je ostavljen da reaguje, uz mešanje, još 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom.

Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 20 ml NH4CI, Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 20 ml etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrot etrom (3:97). To je dalo 600 mg (69%) (1S,2S,6R,8S)-4-[(1S)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-hloretil]-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]dekana kao žutog ulja.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 mi koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (1S,2S,6R,8S)-4-[(1S)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-hloretil]-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan (600 mg, 1,67 mmol, 1,00 ekv.) i tetrahidrofuran (6 ml). Zatim je ukapan LiHMDS (2 ml, 1,20 ekv.) uz mešanje na -78 °C. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u 5 ml n-heksana. Ćvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 480 mg (59%) [(1 R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-(1S,2S,6R,8S)-4-[(1S)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-hloretil]-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan -4-il]etil]bis(trimetilsilil)amina kao žutog ulja.

2

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 m! koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodat je rastvor [(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1- [(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3t5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ii]etil]bis(trimetilsi]il)amina (480 mg, 0,99 mmol, 1,00 ekv.) u n-heksanu (10 ml). Zatim je dodata 4N HCI u dioksanu (0,85 mi, 3,00 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom. To je dalo 230 mg (62%) (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)- 2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida kao beličaste čvrste supstance.

dihlormetanu (2 ml) i DIEA (193 mg, 1,49 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je u kapima dodat ditrihlormetil karbonat (74 mg, 0,25 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 0 °C. Dobijeni rastvor je neposredno korišćen u sledećem koraku.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]1-amin hidrohlorida (168 mg, 0,45 mmol, 1,00ekv.) u dihlormetanu (5 ml) i DIEA (128 mg, 0,99 mmol, 2,00 ekv,). Zatim je u kapima dodat rastvor terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirolidin-1- karboksilata (130 mg, 0,49 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (2 ml) uz mešanje na 0 °C, Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 5 ml vode. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 280 mg (sirovog) terc-butil (2R)-2-[([[(1 R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4- il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata kao smeđeg ulja.

4

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je rastvor terc-butii {2R)-2-[([[1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (150 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (0,6 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 120 mg (sirovog) (2R)- pirolidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao smeđeg ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (2R)-pirolidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamata (120 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml), DIEA (100 mg, 0,77 mmol, 3,00 ekv.), HATU (147 mg, 0,39 mmol, 1,50 ekv.) i 2-cijano-4-metilpent-2-enska kiselina (43 mg, 0,31 mmol, 1,20 ekv,). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 2 ml vode. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 5 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H20) i ACN (70% ACN do 85% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 60 mg (40%) [(2R)-1-[2-cijano-2-(2-metilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]metil N-[(1R)-2-(1-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor [(2R)-1-[2-cijano-2-(2-metilpropiliden)acetiljpirolidin-2-if]metil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata (60 mg, 0,10 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu/heksanu (1,5/1,5 ml), 1N HCI (2 ml, 20,00 ekv.) i (2-metilpropil)boronska kiselina (31 mg, 0,30 mmoi, 3,0 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (15 ml), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (38,0% ACN do 42,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 15,8 mg (34%) [(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1 -[([[(2R)-1 -[2-cijano-2-(2- metilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 436(M-17).

Primer 17

((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-metil-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)pent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (314,8 mg, 1,56 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (606,2 mg, 4,70 mmol, 3,00 ekv.) i dihlormetan (6 ml). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonat (230,3 mg, 0,78 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2,5 h na 0 °C. Rastvor reakcione smeše je neposredno korišćen u sledećem koraku.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su (1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[e.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (820 mg, 2,34 mmol, 1,50 ekv.), DIPEA (404,1 mg, 3,13 mmol, 2,00 ekv.) i dihlormetan (15 ml). Zatim je dodat terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil] pirolidin-1 -karboksilat (412 mg, 1,56 mmol, 1,00 ekv.) uz mešanje na 0 X. Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 100 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC

uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, H20:CH3CN=99:1 uz porast do H2O:CH3CN=1:99; detektor, UV 220 nm. To je dalo 380 mg (45%) tercbutil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1 -[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil- 3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]}dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata kao žute čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 25 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetrl-3,5-dioksa~4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (60 mg, 0,11 mmol, 1,00 ekv.), trifiuorsirćetna kiselina (0,2 ml) i dihtormetan (2 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (2R)-pirotidin-24lmetil N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (48,9 mg, 0,11 mmol, 1,00 ekv ), 2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enska kiselina (20,4 mg, 0,13 mmot, 1,20 ekv.), HATU (50,7 mg, 0,13 mmol, 1,20 ekv,), DIPEA (35,8 mg, 0,28 mmol, 2,50 ekv.) i dihlormetan (1,5 ml). Dobijeni rastvorje mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove:

Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (75,0% ACN do 82,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 30 mg (47%) [(2R)-1-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]metil N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetit-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ii]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]metilN-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1 -[(1S,2S,6R,8S)-2)9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamat (70 mg, 0,12 mmol, 1,00 ekv.), metanol (3 ml), heksan (3 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (36 mg, 0,35 mmol, 2,90 ekv.) i 1N HCl (2,4 ml, 20,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 25 °C, Dobijena smeša je isprana sa 3 × 5 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 50 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove; Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (42,0% ACN do 45,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. Toje dalo 32,4 mg (60%) [(1R)-1-[([[(2R)-1-[2- cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]pirolidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-(4-metilfenil)etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC- MS m/z; 442 (M+1).

Primer 19

2

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (314,8 mg, 1,56 mmol, 1,00 ekv,), DIPEA (606,2 mg, 4,70 mmol, 3,0 ekv.) i dihlormetan (6 ml). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonat (230,3 mg, 0,78 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2,5 h na 0 °C. Rastvor reakcione smeše je neposredno korišćen u sledećem koraku.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su (1 R)-2~(4-metilfenil}- 1-[(1S,2S,6R,8S}-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratricikjo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (820 mg, 2,34 mmol, 1,50 ekv.), DIPEA (404,1 mg,3,13 mmol, 2,00 ekv.) i dihlormetan (15 ml). Zatim je dodat terc-butil (2R)-2- [[(hlorkarbonil)oksi]metil] pirolidin-1-karboksi!at (412 mg, 1,56 mmol, 1,00 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 100 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, H20:CH3CN=99:1 uz porast do H2O:CH3CN=1:99; detektor, UV 220 nm. To je dalo 380 mg (45%) terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil- 3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0^[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata kao žute čvrste supstance nakon liofilizacije.

4

U balon sa okruglim dnom od 25 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su terc-butil (2R)-2-[([[{1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3)5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2!6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (60 mg, 0,11 mmol, 1,00 ekv.), trifluorsirćetna kiselina (0,2 ml) i dihlormetan (2 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (2R)-pirolidin-2-ifmetif N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamat (163 mg, 0,37 mmol, 1,00 ekv.), TEA (112,2 mg, 1,11 mmoi, 3,00 ekv.) i dihlormetan (6 ml). Zatim je ukapavanjem dodat prop-2-enoil hlorid (40,2 mg, 0,44 mmol, 1,20 ekv,) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobiina faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (67,0% ACN do 72,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je daio 70 mg (38%) [(2R)-1-(prop-1- enoil)pirolidin-2-il]metil N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetii-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-ii]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su [(2R)-1-(prop-2-enoii)pirolidin-2-il]metil N[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamat (70 mg, 0,14 mmol, 1,00 ekv.), (2- metilpropil)boronska kiselina (41,9 mg, 0,41 mmol, 2,90 ekv.), heksan (3 ml), metanol (3 ml) i 1N HCI (2,8 mi, 20,00 ekv.). Dobijent rastvor je mešan tokom 2 h na 25 °C. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 5 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 50 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (25,0% ACN do 31,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 26,3 mg (52%) [(1R}-2-(4-metilfenil)-1-[([[(2R)-1>(prop-2-enoil)pirolidin-2-il] metoksi]karbonil)amino]etil]boronske kiseiine kao bele čvrste supstance nakon iofilizacije. LC-MS m/z: 361 (M+1).

U trogrii balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-l-karboksifat (600 mg, 2,98 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (15 mg, 0,18 mmol, 0,06 ekv.) i DIPEA (1,16 g, 8,99 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je ukapan ditrihlormetil karbonat (438,8 mg, 1,48 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na 0 °C. Dobijena smeša je

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 m! dodati su (1R)-2-fenil-1- 2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]amin {900 mg, 3,01 mmoi, 0,90 ekv.), dihlormetan (20 ml) i DIPEA (693,1 mg, 5,37 mmol, 1,80 ekv.). Zatim je ukapan terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksilat (785,1 mgf2,98 mmol, 1,00 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 90 min na 25 *C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 100 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (ostaje 65,0% ACN za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 530 mg (34%) terc-butil (2R)-1- [([[(1R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4

U balon sa okrugllm dnom od 250 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-fenil 1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (520 mg, 0,99 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (100 ml) i trifluorsirćetna kiselina (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je neposredno korišćen u sledećem koraku.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koja je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (2R)-pirolidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamat (372,5 mg, 0,87 mmol, 1,00 ekv.), 2-cijanosirćetna kiselina (89,2 mg,1,5 mmol, 1,20 ekv.), HATU (398,8 mg, 1,05 mmol, 1,20 ekv.), DiPEA (282 mg, 2,19 mmol, 2,50 ekv.) i dihiormetan (15 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM, Dobijena smeša je isprana sa 3 × 100 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, Н2О:СНзСМ=99:1 uz porast doН2О:СНзСМ=1;99 u roku od 100 min; detektor, UV 220 nm. To je dalo 280 mg (65%) [(2R)-1-(2-cijanoacetii)pirolidin-2-il]metilN-[(1 R)-2-feni!-1 -[(1 S,2S,6R(8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ii]etil]karbamata kao žutog ulja.

1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 1 I dodati su 2-metilpropana! (50 g, 693,43 mmol, 1,00 ekv.), etar (500 ml) i AlCb (2,49 g, 0,03 ekv ). Zatim je ukapan dibroman (131,34 g, 821,86 mmol, 1,20 ekv.) uz mešanje na 0 °C tokom 10 min. Dobijeni rastvor je mešan preko noćt na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 100 m! vode/leda. pH vrednost rastvora je podešena na 10-12 pomoću natrijum karbonata. Dobijent rastvor je ekstrahovan sa 3 * 100 ml etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen destilacijom pod sniženim pritiskom (170 mmHg) i frakcija je sakupljena na 70-77 °C. To je dalo 20 g (19,1%) 2-brom-2-metilpropanala kao bezbojnog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodatt su 2-brom-2-metilpropanal (1,066 g,

7,6 mmol, 1,20 ekv.), etar (25 ml), TEA (1,78 g, 17,59 mmol, 3,00 ekv.) i piperidin (500 mg, 5,87 mmol, 1,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 2 × 20 m! natrijum hlorida. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 20 m! etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 1,088 g (sirovog) 2-metil-2-(piperidin-1-il)propanala kao žutog ulja.

1 1

U balon sa okruglim dnom od 25 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su [(2R)-1-(2-cijanoacetil)pirolidin-2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamat (100 mg, 0,20 mmol, 1,00 ekv.), piridin (5 ml), 2-metii-2- (piperidin-lil)propanal (50 mg, 0,32 mmol, 1,60 ekv.) i pirolidin (10 mg, 0,70 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (70% ACN do 95% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 50 mg [(2R)-1-[2-cijano-2-[2- metil-2-(piperidin-1 -il)propiliden]acetil]pirolidin-2-il]metil-N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 50 mi koja je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su [(2R)-1-(2-cijano-2-[2-metil-2- (piperidin-1-il)propiliden]acetil]pirolidin-2-il]metii N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan- 4-il]etil]karbamat (50 mg, 0,08 mmol, 1,00 ekv.), metanof (2,5 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (25 mg, 0,25 mmol, 3,00 ekv.), heksan (2,5 ml) i 1N HCI (2,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (15 ml), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda

1 2

(10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (70% ACN do 95% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 11,3 mg (29%) ((1R)-1 -[([[(2R)-1 -[2-cijano-2-[2-metil-2-(piperidin-1-il)propinden]acetiljpirolidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]' 2-feniletil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 497 (M+1).

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butii (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (600 mg, 2,98 mmli, 1,00 ekv.}, dihlormetan (15 mg, 0,18 mmoi, 0,06 ekv.) i DIPEA (1,16 g, 8,99 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je ukapan ditrihlormetil karbonat (438,8 mg, 1,48 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na

1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su (1R)-2-feniM- [(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etan-1-amin (900 mg, 3,01 mmol, 0,90 ekv.), dihlormetan (20 ml) i DIPEA (693,1 mg, 5,37 mmol, 1,80 ekv,). Zatim je ukapan terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksllat (785,1 mg, 2,98 mmol, 1,00 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 90 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 100 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep 018 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (ostaje 65,0% ACN za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 530 mg (34%) terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksida-4-

1 4

U balon sa okruglim dnom od 250 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (520 mg, 0,99 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (100 ml) i trifluorsirćetna kiseiina (10 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koja je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (2R)-pirolidin-2-ilmetif N-[(1R)-2-fenii-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (372,5 mg, 0,87 mmol, 1,00 ekv.), 2-cijanosirćetna kiselina (89,2 mg, 1,05 mmol, 1,20 ekv.), HATU (398,8 mg, 1,05 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (282 mg, 1,19 mmol, 2,50 ekv.) i dihlormetan (15 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 х 100 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, H2O:CH3CN=99:1 uz porast do H20:CH3CN=1:99 u roku od 100 min; detektor, UV 220 nm. To je dalo 280 mg (65%) [(2R)-1-(2- cijanoacetil)pirolidin-2-!l]metilN-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6Rr8S)-2,9,9-trimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja.

1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 1 I dodati su 2-metilpropanal (50 g, 693,43 mmol, 1,00 ekv.), etar (500 ml) i AlCb (2,49 g, 0,03 ekv.). Zatim je ukapan dibroman (131,34 g, 821,86 mmol, 1,20 ekv.) uz mešanje na 0 °C tokom 10 min. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 100 ml vode/leda. pH vrednost rastvora je podešena na 10-12 pomoću natrijum karbonata. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 х 100 ml etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen destilacijom pod sniženim pritiskom (170 mmHg) i frakcija je sakupljena na 70-77 °C, To je dalo 20 g (19,1%) 2-brom-2-metilpropanala kao bezbojnog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su 4,4-difluorpiperidin (500 mg, 4,13 mmol, 1,00 ekv.), etar (20 ml), TEA (1,25 g, 12,35 mmol, 3,00 ekv.) i 2-brom-2-metilpropanal (750 mg, 4,97 mmol, 1,20 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 20 ml leda/soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan pomoću 2 × 50 ml etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 0,9 g (sirovog) 2-(4,4-difluorpiperidin-1- il)-2-metilpropanala kao beličastog ulja.

1

U zaptivenu epruvetu od 8 ml dodati su [(2R)-1-(2-cijanoacetil)pirolidin~ 2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9.9-trimetil-3,5-dioksida-4-boratriciklo[6.1,1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]Karbamat (90 mg, 0,18 mmol, 1,00 ekv.), 2-(4,4-difluorpiperidin-1-il)-2-metilpropanal (38 mg, 0,20 mmol, 1,09 ekv.), pirolidin (13 mg, 0,18 mmol, 1,00 ekv.) i piridin (0,9 ml). Dobijeni rastvor je mešan ргеко noći na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove; Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobiina faza, voda (10 mmol/l NH4CO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (75,0% ACN do 83,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 18 mg (15%) [(2R)-1-[2-cijano-2-[2-(4,4-difluorpiperidin-1-il)-2-metilpropiliden]acetil]pirolidin-2-i1]metilN-[(1 R)-2-fenil-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3t5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etf!]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1

U balon sa okruglim dnom od 25 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2-[2-(4,4-difluorpiperidin-1-il)-2-metilpropiliden]acetiljpirolidin-2-il]metilN-[(1R)-2-fenil-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etli]karbamat (40 mg,

0,06 mmol, 1,00 ekv.), (2-metilpropil)boronska kiselina (17,8 mg, 0,17 mrnoi, 2,90 ekv.), 1N hlorovodonik (1,2 ml, 20,00 ekv.), heksan (1,7 ml) i metanol (1,7 ml), Dobpjeni rastvor je mešan tokom 2 h na 25 °C. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 10 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 17 ml H2O, zatim osušen iioftiizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/I NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (40,0% ACN do 51,0% za 7 min); detektor. UV 254/220 nm. To je dalo 8,4 mg (26%) [(1 R)-1 -[([[(2R)-1-[2-cijano-2-[2-(4,4-difluorpiperidin-1 -il)-2-metilpropiiiden]acetiljpirolidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-feniletil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 533 (M+1).

1

U balon sa okruglim dnom od 500 ml dodat je rastvor 3-azabiciklo[3.1.0]heksan hidrohlorida (5 g, 41,81 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu/НгО (75/75 ml), 1N NaOH (84 ml, 2,00 ekv.) i (Boc)2O (14 g, 64,15 mmol, 1,50 ekv,). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 200 ml petrol etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:50). To je dalo 6 g (70%) terc-butil 3-azabicikfo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao svetložutog ulja.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 250 ml dodat je rastvor terc-butil 2- azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (4,75 g, 25,92 mmol, 1,00 ekv.) u 3- tetrahidrofuranu (104 ml), i 3,7~dipropil-3,7-diazabiciklo[3.3.1]nonan (6,81 g, 32,37 mmol, 1,25 ekv ). Zatim je ukapavanjem dodat sek-Buli (24 ml, 1,20 ekv.) uz mešanje na -60 °C. Tome je dodat suvi led (1 g, 1,00 ekv.) na -68 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -45 °C. Reakcija je zatim prekinuta dodatkom 60 ml H2О. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 х 60 ml MTBE i vodeni slojevi su kombinovani. pH vrednost rastvora je podešena na 2-3 sa KHSO4(25% g/ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 80 ml MTBE i organski siojevi su kombinovani i osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 3,9 g (66%) rac-cis(1S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3,1.0]heksan-2- karboksilne kiseline kao bezbojnog ulja.

11

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor rac-cis- (1 S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.10]heksan-2-karboksilne kisefine (2 g, 8,80 mmoi, 1,00 ekv.) u acetonu (40 mi), BnBr (1,5 g, 8,77 mmol, 1,0 ekv.), i kalijum karbonat (1,5 g, 10,85 mmol, 1,25 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan ргеко noći na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (2:98-5:95). To je dalo 2 g (72%) rac-ds-2-benzi! 3-terc-buti! (1S,2R,5R)-3-azabicikio[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata kao žutog ulja.

detektor, UV 220/254 nm. To je dafo400 mg (40%) (R)-cis-2-benzil 3-terc-butil (1S,2R,5R)-3-azabicikio[3.1,0]heksan-2,3-dikarboksilata kao bezbojnog ulja ([α]25°C<589 nm>=103,2 (C 0,5, MeOH)). I 400 mg (40%) (S)-cis-2-benzil 3-terc-butii (1R,2S,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3~dikarboksiiata kao bezbojnog ulja ([α]25°C<589 nm>=-120,8(C 0,5, MeOH)).

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (S)-cis-2-benzii 3- tercbutil (1R,2S,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata (450 mg,

1,42 mmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (6 ml), i paladijum na ugljeniku (450 mg,

1,0 ekv ). Smeša je uvedena u Њ. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 310 mg (96%) (1 R,2S,5S)-3-[(tercbutoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan~2-karboksilne kiseline kao bezbojno ulje.

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je rastvor (S)-cis-(1R,2S,5S)-2- [(terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3,1,0]heksan-2-karboksilne kiseline (310 mg, 1,36 mmol, 1,00 ekv.) u tetrahidroluranu (7 ml). U smešu je ukapavanjem dodat Bhb'THF (1,7 ml, 1,25 ekv., 1N) na 0 stepeni C. Dobijeni rastvorje mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 10 ml NH^Ci. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 20 ml etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1×10 ml vode i 1 × 10 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 200 mg (69%) terc-butil (1R,2S,5S)-2-(hidroksimetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao bezbojno ulje.

11

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor terc-butil (1 R,2S,5S)-2-(hidroksimetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (200 mg, 0,94 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (4 ml) i DIEA (363 mg, 2,81 mmol, 2,0 ekv ). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor ditrihlormetil karbonata (139 mg, 0,47 mmol, 3,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2,5 h na 0 °C. Dobijeni rastvor smeše je korišćen neposredno u sledećem koraku.

DIEA (24 mg, 0,19 mmol, 2,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor (S)-cisterc-butil (1 R,2S,5S)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (250 mg, 0,91 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (5 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 5 ml vode. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 ml DCM-a, Dobijena smeša je isprana sa 1 × 20 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 500 mg (sirovog) (S)-cis-terc-butil (1 R,2S,5S)-2-[([[(1 R)-2-fenil -[(1(S,2S,6R,8S)2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ii]etil]karbamoil]oksi)metil]-3-azabiciklo[3.1.0.]heksan-3-karboksilata kao svetložutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (S)-cis-terc-butil (1R,2S,5S)-2-[([[(1R)-2-fenil-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksiiata (450 mg, 0,84 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (5 ml), i trifluorsirćetna kiselina (1 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je

11

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (S)-cis-(1R,2S,5S)-2- azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil N-[(1 R)-2-fenil-1 -[{1 SI2S,6Ri8S)-2l9i9-trimetil-2,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata (360 mg, 0,82 mmol, 1,0 ekv.) u dihlormetanu (5 ml), DIEA (318 mg, 2,46 mmol, 3,00 ekv,), 2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enska kiselina (151 mg, 0,99 mmol, 1,20 ekv.) i HATU (470 mg, 1,24 mmol, 1,50 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 2 ml vode. Dobijeni rastvorje razblažen sa 10 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 mJ natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom.

Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Ргер C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (75% ACN do 80% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 55 mg (12%) (S)-cis-[(1R,2S,5S)-3-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1 R)-2-feni!-1-

11

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor (S)-cis- [(1 R,2S,5S)-3-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata (60 mg, 0,10 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu/heksanu (2/2 ml), 1NHCI (2 ml, 20,00 ekv.) i (2-metilpropiJ)boronska kiselina (20 mg, 0,20 mmol, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (15 ml), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda, Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove. Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (15% ACN do 76% za 7 min); detektor, UV254/220 nm. To je dalo 21,1 mg (43%) [(1R)-1-[([[(1R,2S,5S)-3-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]-3-azabiciklo[3.1,0]heksan-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-fenijetil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 457 (M+ 18).

Primer 23

((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-metil-4-morfolinopent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-fenifetil)boronska kiselina

11

Korak 1

U rastvor 2-cijanosirćetne kiseline (9,65 g, 112,7 mmol) u metanolu (120 ml) na 0 °C uz mešanje je u porcijama dodat NaOH (9,03 g, 225,4 mmol). Zatim je polako dodat pivalaldehid (9,7 g, 112,7 mmol), Smeša je mešana na 40 °C tokom 16 h, a zatim koncentrovana do suva. Ostatak je rastvoren u vodi (200 ml) i mešan tokom 5 min, zatim ostavljen na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Talog je sakupljen i ispran vođom, osušen pod visokim vakuumom radi dobijanja čistog naslovnog jedinjenja kao svetložutog kristala (3,5 g, 20%).

11

Korak 2

U smešu 2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enske kiseline (398 mg, 2,6 mmol), (R)-piperidin-2-ilmetanola (300 mg, 2,6 mmol) i DIPEA (874 mg, 6,76 mmol) u

DCM-u (30 ml) u porcijama je dodat HATU (989 mg, 2,6 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, zatim koncentrovana do suva.

Ostatak je mešan u EtOAc (20 ml) tokom 5 min, a zatim filtriran. Filtrat je

koncentrovan pod vakuumom, Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 0%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja (R)-2-(2-(hidroksimetil)piperidin-1-karbonil)-4,4-dimetilpent-2-ennitnia kao bezbojne čvrste supstance (340 mg, 52%).

Korak 3

Bis(trihlormetil) karbonat (222 mg, 0,75 mmol) u DCM-u (1 ml) dodat je u rastvor (R)-2-{2-(hidroksimetil)piperidin-1-karbonil)-4,4-dimeti!pent-2-ennitrila (340 mg, 1,36 mmol) i DIPEA (1,05 g, 8,2 mmol) u DCM-u (5 ml) na 0 °C uz mešanje.

Smeša je mešana tokom 2 h na 0 °C. Taj dobijeni rastvor je ukapavanjem dodatu snažno mešani rastvor (R)-1-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioksaborolan-2-il)-2-ptoliletanamin hidrohlorida (225 mg, 0,75 mmol) i DIPEA (530 mg, 4,1 mmol) u DCM-u (3 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om

(25 ml), isprana vodom (10 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušena iznad Na2S04, koncentrovana pod vakuumom, Ostatak je rastvoren u MeOH (4 ml) 1N HCI vod. (0,8 ml) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim razblažen

vodom (15 ml), osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koje je

prečišćen putem preparativne HPLC radi dobijanja (R)~1~((((R)-1-(2-cijano-4,4-dimeti]pent-2-enoil)piperidin-2- il)metoksi)karbonilamino)-2-p-toliletilboronske

kiseline kao svetložute čvrste supstance (79,1 mg, 23%). LC-MS m/z: 478 (M+ 23).

Primer 25

((R)-2-(benzofuran-3-il)-1-{((((R)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2- enoil)pipendin-2-i!)metoksi)karbonil)amino)etil)boronska kiselina

11

��

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su ditrihlormetil karbonat (500 mg, 1,68 mmol, 1,00 ekv.) i dihlormetan (10 ml), DIPEA (900 mg, 3,00 ekv.). Zatim je dodat terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilat (345 mg, 1,60 mmol, 0,50 ekv.) u porcijama na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2,5 h na 0 °C. Rastvor reakcione smeše je neposredno korišćen u sledećem koraku.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (1R)-2-feniM-[{1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetii-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (500 mg, 1,49 mmol, 1,00 ekv.), ĐCM. (20 ml) i DIPEA (465 mg, 2,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]piperidin-1-karboksilat (900 mg, 3,24 mmoi, 1,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor је mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mi Н2О. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 * 20 ml dihiormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata r koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, Н2О/СНзСМ=99;1 uz porast do H2O/CH3CN=1;99<U>roku od 100 min; detektor, UV 220 nm. To je dalo 820 mg terc-butii (2R)-2-[([[(1R)-2-fenil-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoi!]oksi)metil]piperidin-1-karboksilata kao belu čvrstu supstancu.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)- 2-fenil-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetii-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-3- il]etil]karbamoil]oksi)metil]piperidin-1-karboksilat (820 mg, 1,00ekv.), dihlormetan (20 ml) i trifiuorsirćetna kiseiina (2,0 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće usiove; Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, H2О/СНзСМ=99:1 uz porast do H2О/СНзСМ=1:99 u roku od 80 min; detektor, UV 220 nm. To je dalo 525 mg (82%) (2R)-piperidin-2- ilmetil N-[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetii-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]dekan-4Hl]etil]karbamata kao bele čvrste supstance.

12

U balon sa okruglim dnom od 250 ml dodati su (2R)-piperidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-fenil-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6 1,1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (330 mg, 0,75 mmol, 1,00 ekv ), dihlormetan (50 mi), 2-cijanosirćetna kiselina (1,05 g, 12,34 mmol, 16,00 ekv ), HATU (2,25 g, 5,92 mmol, 8,00 ekv.) i DIEA (256 mg, 1,98 mmol, 2,60 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 40 ml vode/leda. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 40 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, Н2О/СНзСМ=99:1 uz porast do H20/CH3CN=99:1 u roku od 60 min; detektor, UV 220 nm. To je dalo 500 mg (82%) [(2R)-1-(2-cijanoacetil)piperidin-2- il]metil N-[(1R)-2-fenil-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6 1,1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance.

U trogrli baion sa okruglim dnom od 1 I dodati su 2-metilpropanal (50 g, 693,43 mmol, 1,00 ekv.), etar (500 ml) i AlCb (2,49 g, 0,03 ekv.). Zatlm je ukapan dibroman (131,34 g, 821,86 mmol, 1,20 ekv.) uz mešanje na 0 °C tokom 10 min. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 100 ml vode/leda. pH vrednost rastvora je podešena na 10-12 pomoću natrijum karbonata. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 100 ml etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum suifata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen destilacijom pod sniženim pritiskom (170 mmHg) i frakcija je sakupljena na 70-77 °C. To je dalo 20 g (19,1%) 2-brom-2-metilpropanala kao bezbojnog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 mi dodati su pirolidin (500 mg, 7,3 mmol, 1,00 ekv.), etar (25 ml), TEA (2,13 g, 21,05 mmol, 3,00 ekv.) i 2-brom-2- metilpropanal (1,27 g, 8,41 mmol, 1,20 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan ргеко noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 2 × 20 ml natrijum hlorida. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 х 25 ml etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom To je dalo 0,8 g (sirovog) 2-metil-2-(piro!idin-1-il)propanala kao žutog ulja.

12

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodatl su [(2R)-1-(2-cijanoacetil)piperidin-2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-illetiflkarbamat (85 mg, 0,17 mmol, 1.0 ekv.), dihlormetan (15 mt), 2-metil-2-(pirolidin-1-il)propanal (71 mg, 0,50 mmol, 3.0 ekv.), pirolidin (60 mg, 5,00 ekv.) i TMSC1 (90 mg, 0,83 mmol, 5,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 20 ml leda/soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 х 20 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm,5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (72,0% ACN do 95,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 80 mg (76%) [(2R)-1-[2- cijano-2-[2-metil-2-(pirolidin-1-il)propiliden]acetil]piperidin-2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1- [(1 S,2S,6Rt8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6, 1.10<A>[2.6)]dekan-4- if]etil]karbamata kao beličaste čvrste supstance nakon liofilizacije.

U bočicu od 40 ml dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2-[2-metiJ-2-(pirolidin-1-il)propiliden]acetil]piperidin-2“il]metil N-[(1 R)-2“fenll-1-[(1 S,2S,6R,8S)-2(9,9-trimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo(6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (80 mg, 0,13 mmol, 1,0 ekv.), metanol (3 ml)t(2-metilpropil)boronska kiselina (29 mg, 0,28 mmol, 2,30 ekv.), heksan (3 ml) i 1N hlorovodonik (1,9 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 5 ml heksana. Metanolni sloj je razbfažen sa 50 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz siedeće uslove: Kolona,

XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (30,0% ACN do 45,0% za 8 min); detektor, UV

12

254/220 nm. To dato 19,2 mg (30%) [(1R)-1-[([[(2R)-1-[2-cijano-2-[2-metil-2-(pirolidin-1-il)propiliden]acetil]piperidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-feniletil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 497 (M+1).

12

��

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil 2-(hidrokstmetil)azepan-1-karboksilat (700 mg, 3,05 mmol, 1,00 ekv ), dihlormetan (12 ml) i DIEA (1,177 g, 9,11 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonat (448 mg, 1,51 mmol, 0,50 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 0 °C. Rastvor reakcione smeše je neposredno korišćen u sledećem koraku.

12

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil 2-[[(hlorkarbonil) oksi] metil] azepan-1~karboksi!at (890,62 mg, 3,05 mmol,

1,00 ekv.), dihlormetan (10 ml) i DIEA (706 mg, 5,46 mmol, 1,80 ekv.). Zatim je dodat (1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetii-3,5-dioksa-4-boratn'ciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (905 mg, 2,59 mmof, 0,85 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 х 100 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l 1\1Н4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (82,0% ACN do 93,0% za 7 min); detektor. UV 254/220 nm. To je kao proizvod dalo 540 mg smeše izomera

1

nakon liofilizacije; proizvedena smeša izomera je prečišćena pomoću hiralne preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, (R,R)Whelk-O 1, 21,1*250 mm, 5 um; mobilna faza, heks- i IPA- {ostaje 10,0% IPA- za 29 min); detektor, UV 220/254 nm. To je dalo 245 mg (14%) terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]azepan-1-karboksilata (pretpostavlja se) kao žutog ulja. I 250 mg (14%) terc-butil (2S)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1- [(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil] karbamoil]oksi)metil]azepan-1-karboksilata (pretpostavlja se) kao žutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1Sl2Sl6Rt8S)-2I9(9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etfi]karbamoil]oksi)metil]azepan-1 -karboksilat (150 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv ), dihlormetan (5 ml) i trifluorsirćetna kiselina (0,76 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na 25 °C, Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, To je dalo 123 mg (sirovog) (2R)-azepan-2-ilmetil N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-i])etil]karbamata kao žutog ulja.

1 1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su (2R)-azepan-2-ilmetil N-[(1 R)-2-(4-metilfenil)-1 “[(S,2S,6R, 8$)-2,8,94птеА1-3,5-^1ок8а-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,63]dekan-44f]etil]karbamat (123 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (4 mg, 0,05 mmol, 0,18 ekv.), 2-ci]ano-4,4-dimetilpent-2-enska kiselina (60 mg, 0,39 mmol, 1,50 ekv.), DIEA (50,7 mg, 0,39 mmol, 1,50 ekv.) i HATU (299 mg, 0,79 mmol, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 х 100 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um: mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) j ACN (77,0% ACN do 95,0% za 8 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 60 mg (38%) [(2R)-1-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil] azepan-2-il] metil N-[(1R)-2 -(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2I9,9-trimetil-3l5-diok8a-4-boratriciklop.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il] etil] karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1 2

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden) acetil]azepan-2-il]metilN-[(1 R)-2-{4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (60 mg, 0,10 mmol, 1,00 ekv ), metanol (5 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (30,6 mg, 0,30 mmol, 3,00 ekv.), heksan (5 ml) i 1N HCI/dioksan (1,98 ml,

20,0 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 4 h na 25 °C. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 5 ml heksana Metanolni sloj je razblažen sa 5 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (45,0% ACN do 61,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 19,3 mg (41%) [(1R)-1-[([[(2R)-1-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil] azepan-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-(4-metilfenil)etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 492 (М+ 23).

1

��

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetii)pirolidin-l-karboksilat (500 mg, 2,48 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (10 ml) i DIEA (965 mg, 7,47 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonat (370 mg, 1,25 mmol, 0,50 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 0 °C. Dobijeni reakcioni rastvor je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1

U trogrii balon sa okrugiim dnom od 100 ml dodati su (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1 .0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohiorid (787,5 mg, 2,10 mmol, 0,86 ekv.), dihlormetan (20 ml) i DIEA (640 mg, 4,95 mmol, 2,00 ekv.). Zatim je dodat tercbutii (2R)-2-[[(hiorkarbonil)oksi]metii]pirolidin-1-karboksilat (656 mg,

2,49 mmol, 1,00 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smešaje razblažena sa 50 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 30 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni tznad anhtdrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 1,1 g (78%) terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il) -1-[{1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3l5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]piroIidin-1 -karboksilata kao žutog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terobutil (2R)-2-[([[(1 R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1 .0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil)oksi)metil3pirolidin-1 -karboksilat (250 mg, 0,44 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (12,5 ml) i trifluorsirćetna kiselina (2,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 206 mg (sirovog) (2R)- pirolidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su (2R)-piroiidin-2-ilmeti! N-[(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1-[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratricikio[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (206 mg, 0,44 mmoi, 1,00 ekv.), dihlormetan (3 ml), TEA (133,8 mg, 1,32 mmol, 3,00 ekv.) i prop-2-enoit hlorid (48 mg, 0,53 mmol, 1,20 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 30 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 * 20 ml dihformetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove; Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (60,0% ACN do 75,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 80 mg (35%) [(2R)-1-(prop-2- enoil)pirolidin-2-il]metil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1

U bafon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su [(2R)-1-(prop-2-enoil)piro!idin-2-il]metil N-[{1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3!5-dioksa-4-boratricikio[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (90 mg, 0,17 mmol, 1,00 ekv.), metanol (8 ml), (2-metilpropit)boronska kiselina (53,3 mg,0,52 mmol, 3,00 ekv,), heksan (8 ml) i 1N hlorovodonik (3,5 ml, 20,00 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 10 ml heksana. Metanolni slojje razblažen sa 15 ml H2О, zatim osušen iiofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Ргер C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (18,0% ACN do 35,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 61,9 mg (93%) [(1 R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[([[(2R)-1-(prop-2-enoii) pirolidin-2-il]metoksi]karbonil) amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon ponovne Iiofilizacije. LC-MS m/z: 369 (M-17).

1

U balon sa okruglim dnom od 500 ml dodat je rastvor 3-azabiciklo[3.1.0]heksan hiđrohlorida {5 g, 41,81 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu/H2O (75/75 ml), 1N NaOH (84 ml, 2,00 ekv.) i (Вос)гО (14 g, 64,15 mmol, 1,50ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 * 200 ml petrol etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:50). To je dalo 6 g (70%) terc-butil 3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao svetložutog uija.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 250 ml dodat je rastvor terc-butil 3- azabicikio[3.1.0]heksan-3-karboksilata (4,75 g, 25,92 mmol, 1,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (104 ml), i 3,7-dipropil-3,7-diazabiciklo[3.3.1]nonan (6,81 g, 32,37 mmol, 1,25 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat sek-Buli (24 mi, 1,20 ekv.) uz mešanje na -60 °C. Tome je dodat suvi led (1 g, 1,00 ekv.) na -68 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -45 °C, Reakcija je zatim prekinuta dodatkom 60 ml H2О. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 60 ml MTBE i vodeni slojevi su kombinovani. pH vrednost rastvora je podešena na 2-3 sa KHSO4(25% g/ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 80 ml MTBE i organski slojevi su kombinovani i osušeni

14

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor rac-cis- (1 S,2R,5R)-3-[{terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksiine kiseline (2 g, 8,80 mmol, 1,00 ekv.) u acetonu (40 ml), BnBr (1,5 g, 8,77 mmol, 1,0 ekv.), i kalijum karbonat (1,5 g, 10,85 mmol, 1,25 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na koionu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (2:98-5:95). To je dalo 2 g (72%) rac-cis-2-benzil 3-terc-butil (1S,2R,5R)-3-azabicikto[3.1.0]heksan-2f3- dikarboksifata kao žutog ulja.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodat je rastvor rac-cis-2-benzil 3-terc-butil (1S,2R,5R)-S-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata (800 mg, 2,52 mmol, 1,0 ekv.) u tetrahidrofuranu (13 ml). Zatim je dodat LDA (2,5 ml, 2,00 ekv,, 2N) na -32 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 min na -32 °C. Reakcija je zatim prekinuta dodatkom 20 ml natrijum bikarbonata. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 ml Н2О. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 50 ml etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 * 50 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad natrijum sulfata. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove; Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda {10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (56% ACN do 57% za 10 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 450 mg (56%) rac-trans-2-benzil 3-terc-butil (1R,2R,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata kao bezbojnog ulja.

Smeša izomera (rac)-trans-2-benzil 3-terc-butil (1R,2R,5S)-3-azabiciklo[3.10]heksan-2,3-dikarboksiiata (550 mg) prečišćena je putem hiralne preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, Chlralpak ID-2, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza, heks-HPLC i IPA-HPLC (ostaje 5% IPA-HPLC za 15 min); detektor, UV 220/254 nm. To je dalo 200 mg (36%) (R)-trans-2-benzil 3-terc-buti! (1R,2R,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata kao bezbojnog uija. ([α]17°C<589 nm>=94,2(C 0,5, CHCI3)) i 200 mg (36%) (S)-trans-2-benzil 3-terc-butil (1S,2S,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksrlata kao bezbojnog ulja. (α18,2°C<589nm>=-89(C 0,5, CHCl3))

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-trans-2-benzil 3- terc-butil (1R,2R,5S)-3-azabiciklo[3,1.0]heksan-2,3-dikarboksilata (330 mg, 1,4 mmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (5 ml) i paladijum na ugljeniku (330 mg, 3- ekv.). U smešu je uveden H2(gas). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, To je dalo 240 mg (sirove) (R)-trans-(1R,2Rs5S)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3-azabicikio[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline kao bele čvrste supstance.

14

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-trans- (1 R,2R,5S)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.1,0]heksan-2-karboksilne kiseline (240 mg, 1,06 mmlt, 1,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (5 ml). Zatim je ukapan BaHe.THF (1,3 ml, 1,25 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi, Reakcija je potom prekinuta dodatkom 5 ml NH^Cl. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 10 ml etil acetata i organski siojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 mi vode i 1 × 10 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (40:60). To je dalo 210 mg (93%) (R)-trans-terc-butil (1R,2R,5S)-2-(hidroksimetil)-3-azabiciklo[3,1.03heksan-3-karboksilata kao žutog ulja.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-transterc-butil(1R,2R,5S)-2-(hidroksimetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (190 mg, 0,89 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (4 ml) i DIEA (345 mg, 2,67 mmol, 3,0 ekv.). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonat (132 mg, 0,44 mmol, 0,50 ekv.) u nekoliko šarži na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 ћ na 0 °C. Dobijeni rastvor je bio za neposredno korišćenje u sledećem koraku.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (1 R)-2-fenil-1-[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1.1,0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (239 mg, 0,71 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (7 ml) i DIEA (230 mg, 1,78 mmol, 2,00 ekv,). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor (R)-trans-terc-butil (1 R,2R,5S)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]-3-azabiciklo[3.10]heksan-3-karboksilata (240 mg, 0,87 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (4 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 2 ml vode, Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml natrijum hlorida, Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 350 mg (75%) (R)-trans-terc-butil (1R,2R,5S)-2-[([[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao žutog ulja.

14

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-trans-terc-butil (1R,2R,5S)-2-[([[(1R)-2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (350 mg, 0,65 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (5 ml) i trifluorsirćetna kiselina (0,8 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 270 mg (sirovog) (R)-trans-(l R,2R,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetii N-[(1R)-2-fenil-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao smeđeg ulja.

14

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-trans- (1 R,2R,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil N-[(1R)-2-feniM-[{1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetii-3,5-dioksa-4-boratnciklo[6.1.1.0<ʌ>dekan-4-il]etil]karbamata (270 mg, 0,62 mmoi, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (5 ml), DIEA (240 mg, 1,86 mmol,

3,0 ekv.), 2-cijano-4r4-dimetifpent-2-enska kiseltna (113 mg, 0,74 mmoi, 1,20 ekv.) i HATU {351 mg, 0,92 mmol, 1,50 ekv.). Dobijeni rastvorje mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prekinuta dodavanjem 2 ml vode. Dobijeni rastvorje razblažen sa 10 ml DCM, Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml natrijum hlorida. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD,

19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) t ACN (70% ACN do 90% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 90 mg (25%) (R)-trans-[(1R,2R,5S)-3-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]-3-azabiciklo[3,1.0]heksan-2-il]metil N-[(1R)-2-fenil-1-[{1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

14

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor R-trans-[(1R,2R,5S)-3[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetill-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1 R)-2-fenil-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6])dekan-4-il]etil]karbamata (90 mg, 0,16 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu/heksanu (3/3 ml), 1NHC! (3 mi, 20,00 ekv.) i (2-metilpropil)boronska kiselina (48 mg, 0,47 mmoi, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (15 ml), zatim osušen liofilizacijom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (35,0% ACN do 55,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dato 46,6 mg (66%) R-trans-[(1 R)-1-[([[(1 R,2R,5S)-3-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]-3-azabicikfo[3.1.0]heksan-2-il]metoksi]karbonil)amino]-2-feniletil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 422 (M-17).

14

��

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksiiat (500 mg, 2,48 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (10 ml) i DIEA (965 mg, 7,47 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je dodat ditrihiormetil karbonat (370 mg, 1,25 mmol, 0,50 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 0 °C. Taj dobijeni reakcioni rastvor je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su (1 R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratnciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ii]etan-1-amin hidrohlorid (787,5 mg, 2,10 mmol, 0,85 ekv,), dihlormetan (20 ml) i DIEA (640 mg, 4,95 mmol, 2,00 ekv.). Zatim je dodat terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirofidin-1-karboksilat (656 mg, 2,49 mmol, 1,00 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 50 m! zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 30 ml dihlormetana i organski siojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 1,1 g (78%) terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(1-benzofuran-3-i!) -1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirofidin-1-karboksilata kao žutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)--[(1R) -2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan -4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (300 mg, 0,53 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (10 ml) i trifluorsirćetna kiselina

1 1

(2 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 247 mg (sirovog) (2R)-pirolidin-2-ilmetil N-[(1R) -2-(1-benyofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-4- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žuto ulje.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su (2R)-pirolidin-2-ilmetil N-[(1R) -2-(1-benyofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (247 mg, 0,53 mmol, 1,00 ekv,), dihiormetan (10 ml), 2-cijanosirćetna kiselina (67 mg, 0,79 mmol, 1,50 ekv.), DIEA (204 mg, 1,58 mmol, 3,00 ekv.) i HATU (300 mg, 0,79 mmol, 1,50 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 50 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 * 20 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:5). To je dalo 150 mg (53%) [(2R)-1-(2-cijanoacetil)pirolidin-2-il]metil N-[(1R) -2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja.

1 2

U baton sa okruglim dnom od 250 ml dodati su etar (50 ml), morfolin (2 g, 22,96 mmol, 1,00 ekv.), 2-brom-2-metilpropanal (4 g, 26,49 mmol, 1,20 ekv.) i TEA (4 g, 39,53 mmol, 2,00 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 3,25 g (90%) 2-metil-2-(morfoiin-4-il) propanala kao žutog ulja,

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su [(2R)-1-{2-djanoacetil)pirofidin-2-il]metil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimet!l-3,5-dioksa-4-boratnciklo[6,1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (100 mg, 0,19 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan {6,87 ml) i 2-metil-2-(morfolin-4- il)propanal (100 mg, 0,64 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat pirolidin (67 mg, 0,94 mmol, 5,00 ekv.) uz mešanje, U to je ukapan TMSCI (101 mg,

0,93 mmol, 5,00 ekv.) uz mešanje. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 15 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 10 ml dihlormetana i organski slojevi su

1

kombinovani i osušeni iznacf anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečiščen pomoću preparativne HPLC uz sledeće usiove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um, mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) I ACN (60,0% ACN do 87,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 100 mg (79%) [(2R)-1-[2-cijano-2-[2-metil-2-(morfolin-4-ii) propiliden]acetil]pirolidin-2-il] metilN-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2- [2-metil-2 -(morfolin-4-il) propilfden]aceti/]pirofidin-2-il]metilN-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimeli]-3I5-diokea-44>oratriciklo[6.1.1,0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamat (80 mg, 0,12 mmol, 1,00 ekv.), metanol (5 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (12,2 mg, 0,12 mmol, 3,00 ekv.), heksan (5 ml) i 1N hlorovodonik (2,37 ml, 20,00 ekv.), Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 5 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 8 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*250 mm, 5 um; mobilna faza, voda (0,05% NH3H20) i ACN (27,0% ACN do 40,0% za 8 min); detektor, uv 220 nm. To je dalo 16,1 mg (25%) [(1R)-2-{1-benzofuran-3-il)-1-[(|(2R)-1-[2-cijano-2-[2-metil-2-(morfolin-4-il) propiliden] acetil]pirolidin-2-il] metoksil karbonil)amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon ponovne liofilizacije. LC-MS m/z: 539 (M+ 1).

1 4

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil) piperidin-1-karboksilat (500 mg, 2,32 mmol, 1,00 ekv ), dihlormetan (8 ml) i DIEA (599 mg, 4,63 mmol, 2,00 ekv,). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonata (341 mg, 1,15 mmof, 0,50 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 0 °C. To je dalo 645 mg (sirovog) terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi] metiljpiperidin- 1-karboksilata kao žutog ulja. Reakciona smeša je neposredno korišćena u sledećem koraku.

1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 mi dodati su (1 R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (690 mg, 1,97 mmol, 0,85 ekv.), dihlormetan (10 ml) i DIEA (599 mg, 4,63 mmol, 2,00 ekv.). Zatim je dodat terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil] piperidin-1 -karboksilat (645 mg, 2,32 mmol, 1,00 ekv.) na 0<°>С. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 50 ml zasićenog vodenog rastvora soli, Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 20 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove; Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, H2O/CH3CN=99;1 uz porast do CH3CN/H2О =4:1 u roku od 2 h; detektor, UV 254 nm. To je dalo 420 mg (33%) tercbutil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]piperidin-1-karboksilata kao žutog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il3etil]karbamoil]oksi)metil]piperidin-1-karboksilat (728 mgt1,31 mmol, 1,00 ekv.), diblormetan (22,5 ml) i trifluorsirćetna kiselina (4,5 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, ЊО: ACN=1:0 uz porast do H2О: ACN=1;3,5 u roku od 100 min.; detektor, UV 254 nm. To je dalo 510 mg (85%) (2R)-piperidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.10<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su (2R)-piperidin-2-i!metii N-[(1R)-2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-ll]etil]karbamat (510 mg, 1,12 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan {20 ml), 2-cfjanosirćetna kiselina (143 mg,1,68 mmol, 1,50 ekv.), DIEA (434 mg, 3,36 mmol, 3,00 ekv.) i HATU (638,9 mg, 1,68 mmol, 1,50 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 50 ml zasićenog vodenog rastvora soii. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 30 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, H2O:ACN=1:0<UZ>porast do H2O:ACN=0;1 u roku od 100 min.; detektor, UV 254 nm. To je dalo 334 mg (57%) [(2R)-1-(2-cijanoacetil)piperidin-2-il]metilN-[(1R)- 2-(4-metilfenil)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9 -trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su 3,3-difluorpirolidin hidrohlorid (500 mg, 3,48 mmol, 1,00 ekv.), etar (25 ml), 2-brom-2-metilpropanal (703 mg, 4,66 mmol, 1,35 ekv.) i TEA (1 g, 9,88 mmol, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa dihlormetanom/metanolom (99:1). To je dalo 350 mg (57%) 2-(3,3- difluorpirolidin-1-il)-2-metilpropanala kao žutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su [(2R)-1-(2-cijanoacetil)piperidin-2-il]metil N-[(1 R)-2-(4-metilfenil)-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-tnmetil-3,5-dioksa-4-boratricfklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-i!]etil]karbamat (305 mg, 0,58 mmol, 1,00 ekv.), dihformetan (21,7 ml), 2-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-2-metilpropanal (311 mg, 1,76 mmol, 3,00 ekv.), pirolidin (206 mg, 2,90 mmo!, 5,0 ekv.) i TMSCI (315 mg, 2,90 mmol, 5,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 50 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 * 30 ml

1

dihlormetana i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (73,0% ACN do 90,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 260 mg (67%) [(2R)-1-[2-cijano-2-[2-(3,3-difIuorpirofidin-1-i[)-2-metilpropiliden]acetil] piperidin-2-il]metilN-[(1 R)-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9-dimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]-2-(4-metilfenil)etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su [(2R)-1-[2-cijano-2-[2-(3,3-difluorpirolidin-1-il) -2-metilpropiliden]acetil]piperidin-2-il]metif N-[(1 R)-2-(4-metilfenii)-1-[(1 S,2S,6R,8S)~2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<A>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamat (240 mg, 0,35 mmol, 1,00 ekv ), metanol (10 ml), (2-metilpropil)boron$ka kiselina (108,8 mg, 1,07 mmol, 3,00 ekv,), heksan (10 ml) i 1N hlorovodonik (7 ml, 20,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 6 ml heksana, Metanolni sloj je razblažen sa 12 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Ргер OBD C18, 19*250 mm, 5 um; mobilna faza, voda (0,05% NH3H2O) i ACN (43,0% ACN do 55,0% za 8 min.); detektor, uv 20 nm. To je dalo 65,8 mg (34%) [(1R)-1-[([[(2R)-1-[2-cjjano-2-[2-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-2-metilpropilidenjacetil]piperidin-2-il]metoksi]karbonil)aminoj-2-(4-

1

11

U trogrli balon sa okruglim dnom od 25 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su terc-butil (3S)-3-(hidroksimetil)morfo!in-4-karboksfiat (150 mg, 0,69 mmol, 1,00 ekv,), dihlormetan (1,5 mi) i DIPEA (267,5 mg, 2,07 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat ditrihlormetil karbonat (102,6 mg, 0,35 mmol, 0,50 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na 0 °C. Dobijeni rastvor je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1 2

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>(2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (220,3 mg, 0,59 mmol, 0,85 ekv.), dihlormetan (15 mi) i DIPEA (178,3 mg, 1,38 mmol, 2,00 ekv ). Zatim je ukapavanjem dodat terc-butil (3R)-3-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]morfolin-4-karboksilat (192,9 mg, 0,69 mmol, 1,00 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 100 ml zasićenog vodenog rastvora so(i. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je razdvojen pomoću preparativne TLC $a etil acetatom/petrol etrom (1:2). To je dalo 280 mg (70%) terc-butil (3R)-3[([[1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,1R)-2,9,9-trimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6,1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]morfolin-4- karboksilata kao žute čvrste supstance.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (3R)-3-[([[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetril-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]morfolin-4-karboksilat (280 mg, 0,48 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (20 ml) i trifluorsirćetna kiselina (2 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 231,9 mg (sirovog) proizvoda koji je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1 4

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (3R)-morfolin-3-ilmetii N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3- il)-1 -[{1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6, 1,1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4- il]etil]karbamat (231,9 mg, 0,48 mmol, 1,00 ekv.), 2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enska kiselina (80,2 mg, 0,52 mmol, 1,20 ekv.), HATU (219,4 mg, 0,58 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (155,2 mg, 1,20 mmol, 2,50 ekv.) i dihlormetan (19 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove:

Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (5,0% ACN do 77,0% za 2 min, do 80,0% za 5 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 50 mg (17%) [(3R)-4-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]morfolin-3-il]metilN-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavana pomoću inertne atmosfere azota dođati su [(3R)-4-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]morfolin-3-il]metilN-[(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1 -[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,63]dekan-4-il]etil]karbamat (50 mg, 0,08 mmol, 1,00 ekv.), metanol (2,2 ml), (2-meti!propil)boronska kiselina (24 mg, 0,24 mmol, 2,90 ekv.), heksan (2,2 ml) i 1N HCI (1,61 ml, 20,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 25 °C. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 2 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 10 ml H2О, zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/t NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (35,0% ACN do 37,0% za 10 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 19,6 mg (50%) [(1 R)-2-( 1 -benzofuran-3-il)-1 -[([[(3R)-4-[2-cijano-2-(2,2-dimetilpropiliden)acetil]morfolin-3-il]metoksi]karbonil)amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije. LC-MS m/z: 484 (M+1).

Primer 44

((R)-2-(benzofuran-3-il)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-metil-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)pent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)etil)boronska kiselina

1

�

Korak 1

U smešu 2-cijanosirćetne kiseline (1,48 g, 17,4 mmol), (R)-piperidin-2-ilmetanola (2 g, 17,4 mmol) i DIPEA (5,6 g, 43,6 mmol) u DCM-u (100 mi) u porcijama je dodat HATU (8 g, 20,8 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim koncentrovana do suva. Ostatak je mešan u EtOAc (100 ml) tokom 5 min, a zatim filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije nа silika gelu i gradijenta od 0%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja (R)-3-(2-(hidroksimetil)piperidin-1-ii)-3-oksopropannitrila kao bezbojnog ulja (1,9 g preko 90% čistoće, 63%).

Korak 2

U rastvor (R)-3-(2-(hidroksimetil)piperidin-1 -il)-3-oksopropannitriia (1,56 g, 8,6 mmol), 2-metil-2-morfo!inopropanala (1,48 g, 9,4 mmol) i pirolidina (2,4 g, 34,4 mmol) u DCM-u (30 m!) u ledenom kupatilu ukapavanjem je dodat h!or(trimetil)silan (1,87 g, 17,2 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 0,5 h, zatim je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (5 ml). Sloj DCM je osušen

1

iznad Na2SO4, koncentrovan do suva. Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije na siiika ge!u i gradijenta od 0%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja (R)-2-(2-(hidroksimetil)pipendin-1-karbonii)-4-metil-4-morfolinopent-2-ennitrila kao svetložutog ulja (400 mg) i (R)-4-metii-4-morfo!ino-2-(2-((trimetilsililoksi)metil)piperidin-1-karbonil)pent-2-ennfirita kao bezbojnog ulja (1,2 g). (R)-4-metil-4-morfolino-2-(2-((trimetilsiiiloksi)meti)piperidin-1 karbonil)pent- 2-ennitril (700 mg, 1,78 mmoi) je rastvoren u DCM-u (20 mi). Doda je TBAF•3H20 (650 mg, 2,5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, zatim koncentrovana do suva, Ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 50%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja (R)-2-(2-(hidroksimetil)piperidin-1-karbonil)-4-metil-4-morfoiinopent-2-ennitrila kao svetložutog ulja (290 mg, ukupno 690 mg, prinos 25%)

Korak 3

Bis(trihlormetil) karbonat (523 mg, 1,6 mmol) u DCM-u (1,5 ml) je ukapavanjem uz mešanje dodat u rastvor {R)-2-(2-(hidroksimetil)piperidin-1-karbonit)-4-metil-4-morfolinopent-2-ennitrila (690 mg, 2,1 mmol) i DIPEA (1,6 g, 12,6mmol) u DCM-u (10 ml) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na 0 °C. Taj dobijeni rastvor je ukapavanjem uz snažno mešanje dodat u rastvor (R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohlorida (805 mg, 2,1 mmol) i DiPEA (812 mg, 6,3 mmol) u DCM-u (10 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om (25 ml), isprana vodom (10 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušena iznad Na2S04, koncentrovana pod vakuumom, Ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 0%-25% EtOAc u heksanu radi dobijanja ((R)-1-(2- cijano-4-metfM-morfolinopent~2-enoil)piperidin“2-il)metil((R)-2--(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata kao svetložute čvrste supstance (430 mg, 31%).

Korak 4

U rastvor {(R)-1 –(2-cijano-4~metil-4-morfolinopent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-

1

metanobenzo[d][1,3,2]dioksaboroI-2-il)etil)karbamata (430 mg,0,62 mmol) u MeOH (4 mJ) dođati su heksan (4 ml) i 1 N HCI (2 ml), zatim izobutil borna kiselina (182 mg, 1,8 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 h i TLC-a koji pokazuje da je reakcija završena, heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (20 ml), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen pomoću preparativne HPLC radi dobijanja (R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((((R)-1-(2-cijano-4-metil-4-morfolinopent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonilamino)etilboronske kao bele čvrste supstance (170 mg,50%). LC-MS m/z: 553 (M+1).

1

11

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su terobutil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1 -karboksilat (200 mg, 0,99 mmol, 1,00 ekv ), dihlormetan (4 ml) i DIEA (386 mg, 2,99 mmol, 3,00 ekv.). Zatim je dodat ditrihlormetil karbonat (148 mg, 0,50 mmol, 0,50 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 0 °C u vodi/ledenom kupatilu. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja proizvoda od 262 mg (sirovog) terc-butil (2R)-2-[[{hlorkarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksilata u vidu žutog ulja koje je neposredno korišćeno u sledećem koraku.

1 2

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (1R)-2-feniM-[(1S,2S,6R,8S}-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1,1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorid (317 mg, 0,845 mmol, 0,85 ekv.), DCM (20 ml) i DIPEA (465 mg, 2,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat terc-butil (2R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]pirolidin-1-karboksilat (262 mg, 1,0 mmol, 1 ekv.) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 ml H2О. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 20 ml dihlormetana i organski slojevi su kombinovani I osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, C18 silika gel; mobiina faza, Н2О/СH3СN=99:1 uz porast do H2O/CH3CN=1:99<U>roku od 100 min.; detektor, UV 220 nm, To je dalo 300 mg (53%) terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata kao bele čvrste supstance.

1

U bočicu od 8 ml dodati su terc-butil (2R)-2-[([[(1R)-2(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1,1.0<ʌ>[2,6]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metit]pirolidin-1-karboksilat (22 mg, 0,04 mmol, 1,00 ekv.), dihlormetan (1 ml) i trifluorsirćetna ktselina (0,4 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja sirovog proizvoda (18 mg) koji je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1 4

U balon sa okruglim dnom od 50 mi koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (2R)-pirolidin-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9- trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1,1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4- il]etil]karbamat (82,3 mg, 0,18 mmol, 1,0 ekv.), dihlormetan (7 ml), DIPEA(79,8 mg, 0,62 mmol, 3,50 ekv.), HATU (80,6 mg, 0,21 mmof, 1,20 ekv.) i (2E)-4-(dimetilamino)but~2-enska kiselina hidrohlorid (35 mg, 0,21 mmol, 1,20 ekv.), Dobijeni rastvor je mešan tokom 60 min na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobiina faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.Н2O) i ACN (5,0% ACN do 77,0% za 2 min, do 80,0% za 5 min); detektor, UV 254/220 nm, To je dalo 60 mg (59%) [(2R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil}pirolidin-2-il]metilN-[(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1 -[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]jdekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su [(2R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]pirolidin-2-il]meti[N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1,1.0<ʌ>[2.6]]dekan-4-il]etil]karbamat (85 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekv,), metanol (3,7 mi), heksan {3,7 ml), {2-metiipropil)boronska kiselina (43,6 mg, 0,43 mmol, 2,90 ekv.) i 1N HCI (2,9 ml, 20,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na 25 °C. Dobijena smeša je isprana sa 3 * 4 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 20 ml H2О, zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (18,0% ACN do 40,0% za 10 min); detektor, UV 220 nm. To je dalo 28,7 mg (44%) [(1R)-2-(1-benzofuran-3- il)-1-[([[(2R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)but-2-enoil]pirolidin-2-il]metoksi]karbonil)amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon ponovne liofilizacije. LC-MS m/z: 444 (M+1).

1

Suspenzija 3-fenilpropanala (25 g, 186,5 mmol), (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (22,6 g, 186,5 mmol), CuS04(135 g, 932 mmol) u DCM-u (300 ml) mešana je na sobnoj temperaturi u atmosferi N2 preko noći. Reakcija je filtrirana kroz sloj silika gela i koncentrovana radi dobijanja 20 g (R,E)-2-metil-N-(3-fenilpropiliden)propan-2-sulfinamida. Rastvor (R,E)-2-metil-N-(3-fenilpropiliden)propan-2-sulfinamida (20 g, 84,3 mmol), bis(pinakolato)dibora (23,6 g, 93,8 mmol) i ICyCuOt-Bu (2 g) u benzenu (150 ml) mešan je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je filtrirana i koncentrovana do suva radi dobijanja ostatka koji je očvrsnuo pri hlađenju. Čvrsta supstanca je sakupljena, isprana petrol etrom radi dobijanja 22 g (R)-2-metil-N-((S)-3-fenil-1-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)propan-2-sulfinamida kao bezbojne čvrste supstance.

Rastvor jedinjenja (R)-2-metil-N-((S)-3-feniM-(4,4,5,5-tetrametiM,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)propan-2-sulfmamida (22 g, 67 mmol) u 4M HCI/MTBE (150 ml) mešan je na 60<C>C tokom 2 h. Reakcija je ohlađena radi dobijanja suspenzije i filtrirana. Filter pogača je triturirana sa MTBE i filtrirana radi dobijanja 12 g (S)-3-fenil-1-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborotan-2-il)propan-1-amin hidrohlorida kao bezbojne čvrste supstance.

Bis(trihlormetil) karbonat(306 mg, 1,03 mmol) u DCM-u (1,5 ml) dodat je uz mešanje u rastvor (R)-2-(2-(hidroksimetil)piperidin-1-karbonil)-4,4-dimetilpent-2-ennitrila (pripremljen kao u primeru 24, 370 mg, 1,47 mmol) i DIPEA (1,14 g, 8,85 mmol) u DCM-u (8 ml) na -15 °C. Smeša je mešana tokom 2 h ne temperaturi nižoj od 0 °C, a zatim je ukapavanjem dodata uz snažno mešanje u rastvor (R)-3-fenil-1-(4,4,5,5-tetrametiM,3,2-dioksaborolan-2-il)propan-1-amin hidrohlorida (330 mg, 1,1 mmol) i ĐIPEA (570 mg, 4.42 mmol) u DCM-u (5 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om (25 ml), isprana vodom (10 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u MeOH (4 ml)/1N HCI vod. (0,8 ml), mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim razblažen vodom (15 ml), i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen pomoću preparativne HPLC radi dobijanja (R)-1-((((R)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-

1

U balon sa okruglim dnom od 500 ml dodat je rastvor 3-azabiciklo[3.1.0]heksan hidrohlorida (5 g, 41,81 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu/H20 (75/75 ml) i 1N NaOH (84 ml, 2,00 ekv.), (Boc)20 (14 g, 64,15 mmol, 1,50 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 х 200 ml petrol etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:50). To je dalo 6 g (70%) terc-butil 3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao svetložutog ulja.

1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 250 ml dodat je rastvor terc-butil 3-azabiciklo[3.1.0Jheksan-3-karboksilata (4,75 g, 25,92 mmol, 1,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (104 ml), i 3,7-dipropil-3,7-diazabiciklo[3.3.1]nonan (6,81 g, 32,37 mmol, 1,25 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat sek-BuLi (24 ml, 1,20 ekv.) uz mešanje na -60 °C. Tome je dodatsuvi ied (1 g, 1,00 ekv.) na -68 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -45 °C. Reakcija je zatim prekinuta dodatkom 60 ml H2O.

Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 60 ml MTBE 1 vodeni slojevi su kombinovani. pH vrednost rastvora je podešena na 2-3 sa KHSO4(25% g/ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 80 ml MTBE i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 3,9 g (66%) rac-cis(1S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-S-azabiciklo[3.1.0]heksan-2- karboksilne kiseline kao bezbojnog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor rac-cis- (1 S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karboni1]-3-azabiciklo[3.1,0]heksan-2-karboksilne kiseline (2 g, 8,80 mmol, 1,00 ekv.) u acetonu (40 mf), BnBr (1,5 g, 8,77 mmol, 1,0 ekv.), i kalijum karbonat (1,5 g, 10,85 mmol, 1,25 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi, Čvrste supstance su odvojene

1

Proizvedeni rac-cis-2-benzil 3-terc-butii (1S,2R(5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilat {1 g) je razdvojen pomoću hiralne preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, CHIRAL ART celuloza-SB,2*25 cm, 5 um; mobiina faza,heks- i etanof- (održava se 7,0% etanoi- tokom 13 min); detektor, UV 220/254 nm. To je dalo 400 mg (40%) (R)-cfS-2-benzii 3-terc-butil (1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksiiata kao bezbojnog ulja ([α]25°c<589nm>=103,2 (C 0,5, MeOH)) i 400 mg (40%) (S)-cis-2-benzil 3-terc-butši (1R,2S,5S)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksiiata kao bezbojnog ulja ([α]25°c<589nm>=-120,8(C 0,5, MeOH)).

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-cis-2-benzil 3-terc-butil (1S,2R,5R)-3“azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksiiata (500 mg, 1,58 mmol, 1,00 ekv.) u etil acetatu (6 m!) i paladijum na ugljeniku (500 mg, 1,0 ekv.). U smešu je uveden H2. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 350 mg (98%) (R)-cis-(1St2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.1,0]heksan-2-karboksilne kiseline kao bezbojnog ulja.

1 1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodat je rastvor (R)-cis-(1S,2R,5R)-3-[(tercbutoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (350 mg, 1,54 mmol, 1,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (8 ml). Zatim je ukapavanjem dodat B2H6.THF (1,9 ml, 1,25 ekv., 1M) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 10 ml NH4CL Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 20 m! etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml zasićenog vodenog rastvora soli, Dobijena smeša je isprana sa 1<x>10 ml H2O. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na koionu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 260 mg (79%) {R)-cis-terc-butil(1S,2R,5R)-2-(hidroksimetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3- karboksilata kao bezbojnog ulja.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 mi dodat je rastvor (R)-cis-tercbutil (1S,2R,5R)-2-{hidroksimetil)-3-azabicikio[3.1.0]heksan-3-karboksilata (260 mg, 1,22 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (5 ml) i DIEA (472 mg, 3,65 mmol, 3,0 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor ditrihlormetii karbonata (180 mg, 0,61 mmol, 0,50 ekv.) u dihlormetanu (2 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor

1 2

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(S(2S,6R,8S)-2,9f9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[61.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (209 mg, 0,56 mmoi, 0,85 ekv.) u dihlormetanu (5 ml) i DIPEA (170 mg, 1,32 mmol, 2,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor (R)-cis-terc-butil (1S,2Rt5R)-2-[[(hlorkarbonil)oksi]metil]-3-azabic(klo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (180 mg, 0,65 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum suifata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika geta sa etil acetatom/petrol etrom (10:90). To je dalo 220 mg (60%) (R)-cis-terc- butil (1 S,2R,5R)-2-[([[(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1 -[(1 S,6R,8S)-9,9-dimetil-3,5- dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao žutog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-cis-terobutil (1S,2R,5R)-2K([[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-4(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3l5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]“3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (220 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (4 ml) i trifluorsirćetna kiselina (1 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 180 mg (sirovog) (R)-cis-(1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil N- [(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etii]karbamata kao žutog ulja.

1 4

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(iS,2S,6R,8S)- 2 Д 9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1,1.0<ʌ>[2,63]dekan-4-il]etil]karbamata (180 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (2 ml), DIPEA (146 mg, 1,13 mmol,

3,0 ekv ), 2-cijanosirćetna kiselina (50 mg, 0,59 mmol, 1,50 ekv.) i HATU (216 mg, 0,57 mmol, 1,50 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 х 10 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (40:60). To je dalo 140 mg (68%) [(1 S,2R,5R)-3-(2-cijanoacetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1R)-2- (1 -benzofuran-3-il)-1 -[(1 S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 mi dodat je rastvor [(1S,2R,5R}-3-(2-cijanoacetil)-3-azabiciklo[3,1.0]heksan-2-il]metil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1.1.0<A>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata (80 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (2 ml), 2-metil-2-(morfoiin-4-il)propanal (70 mg, 0,45 mmol, 3,00 ekv.), pirolidin (52 mg, 0,73 mmol, 5,0 ekv.) i TMSCI (80 mg, 0,74 mmol, 5,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml DCM. Dobfjena smeša je isprana sa 1 × 10 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove:

Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3.H2O) i ACN (62% ACN do 87% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 40 mg (40%) [(1S,2R,5R)-3-[2-cijano-2-[2-metil-2-(morfolin-4-il)propi!iden]acetii]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1 R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6,1,1r0<A>[2,6]]dekan-4-il}etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor [(1S,2R,5R)-3-[2-cijano-2-[2-metil-2-(morfolin-4-il)propiliden]acetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(R)-2-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata (50 mg, 0,07 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu/heksanu (2/2 ml), 1N HCI (1,5 ml, 20,00 ekv.) i (2-metilpropil)boronska kiselina (23 mg, 0,23 mmol, 3,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen dodatkom H2О (10 ml), zatim osušen liofilizacijom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH3НСОз+0,1% NH3.H2O) i ACN (30,0% ACN do 45,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 18,5 mg (45%) [(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1 -[{[[(1 S,2R,5R)-3-[2-cijano-2-[2-metil-2-(morfolin-4-il)propiliden]acetil]-3-azabiciklo[3,1.0]heksan-2-il]metoksi]karbonil)amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon ponovne liofilizacije. LC-MS m/z: 551 (M+ 1).

1

U balon sa okruglim dnom od 500 ml dodat je rastvor 3-azabiciklo[3.1.0]heksan hidrohlorida (5 g, 41,81 mmol, 1,00 ekv.) u dioksanu/НгО (75/75 ml), 1N NaOH (84 ml, 2,00 ekv.) i (Вос)2О (14 g, 64,15 mmol, 1,50 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 200 ml petrol etra i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na koionu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:50). To je dalo 6 g (70%) terc-butil 3-azabiciklo[3,1.0]heksan-3-karboksilata kao svetložuto ulje.

U trogrli balon sa okruglim dnom od 250 ml dodat je rastvorterc-butil 3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (4,75 g, 25,92 mmol, 1,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (104 ml), 3,7-dipropil-3,7-diazabiciklo[3.3.1]nonan (6,81 g, 32,37 mmol, 1,25 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat sek-BuLi (24 ml, 1,20 ekv.) uz mešanje na -60 °C. Tome je dodat suvi led (1 g, 1,00 ekv.) na -68 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -45 °C. Reakcija je zatim prekinuta dodatkom 60 ml ЊО. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 х 60 ml MTBE i vodeni slojevi su kombinovani. pH vrednost rastvora je podešena na 2-3 sa KHSO4 (25% g/ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 80 ml MTBE i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 3,9 g (66%) rac-cis(1S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3- azabicikio[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline kao bezbojnog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor rac-cis-(1S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3-azabiciklo[3.l0]heksan-2-karboksiine kiseline (2 g, 8,80 mmol, 1,00 ekv,) u acetonu (40 ml), BnBr (1,5 g, 8,77 mmol, 1,0 ekv.), i kalijum karbonat (1,5 g, 10,85 mmol, 1,25 ekv,). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (2:98-5:95). To je dalo 2 g (72%) rac-cis-2-benzil 3-terc-butil (1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata kao žutog ulja.

Proizvedeni rac-ds-2-benzil 3-terc-butil (1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilat (1 g) je razdvojen pomoću hiralne preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, CHIRAL ART celuloza-SB, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza, heks- i etanol- (održava se 7,0% etanol- tokom 13 min);

1

detektor, UV 220/254 nm, To je dalo 400 mg (40%) (R)-cis-2-benzil 3-terc-buti! (1S,2Rt5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksilata kao bezbojnog ulja ([α]25°c<589nm>=103,2(C 0,5, MeOH)) i 400 mg (40%) (S)-cis-2-benzit 3-terc-butil (1R,2S,5S)-3-azabicikio[3.1.0]heksan-2,3“dikarboksilata kao bezbojnog ulja ([α]25°c<589nm>=-120,8(C 0,5, MeOH)).

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-cis-2-benzil 3-terc- butil (1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2,3-dikarboksiiata (500 mg, 1,58 mmol,1,00 ekv.) u etil acetatu (6 ml) i paladijum na ugljeniku (500 mg, 1,00 ekv.). U smešu je uveden Н2. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su odvojene filtracijom, Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, To je dalo 350 mg (98%) (R)-cis -(1S,2R,5R)-3-[(terc-butoksi)karbonil]-3- azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline kao bezbojnog ulja.

1

U balon sa okruglim dnom od 50 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodatje rastvor (R)-cis-(1S,2R,5R)-3-[(tercbutoksi)karbonil]-3-azabtciklo[3.10]heksan-2-karboksilne kiseline (350 mg, 1,54 mmol, 100 ekv.) u tetrahidrofuranu (8 ml). Zatim je ukapavanjem dodat B2H6.THF (1,9 ml, 1,25 ekv., 1M) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan ргеко noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 10 mi NH4CI. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 20 ml etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 m( H2O. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 260 mg (79%) (R)-CiS-terc-butii(1S,2R,5R)-2-(hidroksimetH)-3~azabicikio[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao bezbojnog ulja.

1 1

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-cis-tercbutil (1S,2R,5R)-2-(hidroksrmetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksi(ata (260 mg, 1,22 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (5 ml) i DIEA (472 mg, 3,65 mmol, 3,0 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor ditrihlormetil karbonata (180 mg, 0,61 mmol, 0,50 ekv.) u dihlormetanu (2 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2,5 h na 0 °C, Dobijeni rastvor je neposredno korišćen u sledećem koraku.

1 2

boratriciklo[6.1.10<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1 -amin hidrohlorida (209 mgt0,56 mmol, 0,85 ekv.) u dihlormetanu (5 ml) i DIPEA (170 mg, 1,32 rnmol, 2,00 ekv.). Zatim je ukapavanjem dodat rastvor (R)-cis-terc-butil (1S,2R,5R)-2-[[(hlorkarboni!)oksi]metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (180 mg, 0,65 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 1 х 10 ml zasićenog vodenog rastvora soii. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (10:90). To je dalo 220 mg (60%) (R)-cis-terc- butii (1S,2R,5R)-2-[([[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,6R,8S)-9,9-dimetil-3,5- dioksa-4-boratriclklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamoil]oksi)metil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata kao žutog ulja.

1

azabiciklo[3.10]heksan-3-karboksi1ata (220 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (4 ml) i trifluorsirćetna kiselina (1 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 180 mg (sirovog) (R)-cis-(1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao žutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor (R)-cis-(1S,2R,5R)- 3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6Rr8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>(2,6]]dekan-4-i1]etil]karbamata (140 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekv.) u dihlormetanu (3 ml), TEA (89 mg, 0,88 mmolr

3,0 ekv.) i prop-2-enoil hlorid (32 mg, 0,35 mmol, 1,20 ekv ). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml DCM. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml zasićenog vodenog rastvora soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće

1 4

uslove: Kolona, XBridge Shietd RP 18 OBD, 5um, 19*150 mm, mobilna faza, voda

(10 mmot/l NH4HCO3+0,1% NН3.H2О) i ACN (56,0% ACN do 69,0% za 8 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 40 mg (26%) (R)-cis-[(1S,2R,5R)-3-(prop-2-enoil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-borantriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etil]karbamata kao bele čvrste supstance nakon liofilizacije.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodat je rastvor [(1S,2R,5R)-3-(prop-2-enoil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metil N-[(1 R)-2-(1 -benzofuran-3-il)-1 -[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>[2,6]]dekan-4-il]etit]karbamata (50 mg, 0,09 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu/heksanu (2/2 ml), 1N

HCI (1,8 ml, 20,00 ekv.) i (2-metilpropil)boronska kiselina (29 mg, 0,28 mmol,

3,0 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Heksanski sloj je odbačen. Metanol je razblažen vodom (10 ml), zatim osušen liofilizacijom.

Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5 um; mobilna faza, voda (10 mmol/l NH4HCO3+0,1% NH3,H2O) i ACN (22,0% ACN do 35,0% za 7 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 23,6 mg (60%) [(1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[([[(1S,2R,5R)-3-(prop-2-enoil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il]metoksi]karbonii)amino]etil]boronske kiseline kao bele čvrste supstance nakon ponovne liofilizacije. LC-MS m/z: 421 (M+23).

Primer 53

((R)-1 -(((((R)-1 -(4-{4-acetilpiperaztn-1 -il)-2-cijano-4-metilpent-2- enoii)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(benzofuran-3-il)etif)boronska kiselina

1

�

�

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 250 ml dodat je rastvor 1-terc-butil 2-etil (2R)-5-oksopirolidin-1,2-dikarboksilata {4 g, 15,55 mmol, 1,00 ekv.) u tetrahidrofuranu (100 ml). Zatim je ukapavanjem dodat trietillitijum boran (18,7 ml, 1,20 ekv., 1M) uz mešanje na -78 °C tokom 20 min. Dobijeni rastvor je ostavljen da reaguje, uz mešanje, dodatnih 30 min na -78 °C. Tome je dodat natrijum bikarbonat (40 ml, vod.) i smeša je ostavljena da se zagreje do 0 °C. Dodata je Н2О (5 ml, 30%). Dobijeni rastvor je ostavljen da reaguje, uz mešanje, dodatnih 30 min na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 100 ml etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa

1

1 х 100 ml vode i 1 × 100 ml natrijum hlorida, osušena iznad natrijum sulfata i uparena, To je dalo 4 g (sirovog) 1-terc-butil 2-etil (2R)-5-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata kao bezbojnog ulja.

Korak 2

U balon sa okruglim dnom od 250 ml dodat je rastvor 1-terc-butil 2-etii (2R)-5-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (3,4 g, 13,11 mmol, 1,00ekv.) u metanolu (40 ml) i TSOH.H2O (250 mg, 1,31 mmol, 0,10 ekv.). Dobijeni rastvorje mešan preko noći na sobnoj temperaturi. U smešu je dodat natrijum bikarbonat (9 ml, vod.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 10 min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je razbiažen sa 20 ml H2O. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 х 50 ml etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 * 50 ml natrijum hlorida (vod.).

Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (8:92). To je daio 3,2 g (89%) 1-terc-butil 2-etil (2R)-5-metoksipiroiidin-1,2-dikarboksilata kao bezbojnog ulja.

Korak 3

U trogrli balon sa okruglim dnom od 250 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodat je rastvor CuBr.(CH3)2S (3 g, 14,63 mmol, 4,0 ekv.) u etru (38 ml). Zatim je ukapavanjem dodat MeMgBr (4,9 ml, 4,00 ekv.fЗМ u etru) uz mešanje na -40 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 45 min na - 40 °C. Tome je dodat BF3.Et20 (1,84 ml, 4,00 ekv.) ukapavanjem uz mešanje na - 78 °C tokom 30 min. U smešu je ukapavanjem dodat rastvor 1-terc-butil 2-etil (2R)-5-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (1 g, 3,66 mmol, 1,00 ekv.) u etru (50 ml) uz mešanje na -78 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 30 min na -78 °C Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 100 ml NH4CI. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 × 100 ml etra i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 50 ml natrijum bikarbonata (vod.). Dobijena smeša je isprana sa 1 × 50 ml natrijum hlorida (vod.). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil

1

acetatom/petrol etrom (1:10). To je dalo 500 mg (53%) 1-terc-buti! 2-etil (2R,5S)-5-metjlpiro!idin-1,2-đikarbokslfata kao bezbojnog ulja.

Korak 4

U trogrli balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je rastvor 1-terc-butil 2-etii (2R,5S)-5-metilpirolidin-1t2-dikarboksilata {300 mg, 1,17 mmol, 1,00 ekv.) u etanolu (9 ml), Zatim je dodat СаСl2(687 mg, 6,19 mmol, 5,30 ekv.) u nekoliko šarži na 0 °C. Tome je dodat NaBH4(444 mg, 11,74 mmol, 10,00 ekv.) u nekoliko šarži na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi.

Reakcija je potom prekinuta dodatkom 5 ml 2M kalijum karbonata. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 ml H2О. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 × 20 ml etil acetata i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 10 ml NaCI (vod.). Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa etil acetatom/petrol etrom (70;30). To je dalo 230 mg (92%) terc-butil (2R,5S)-2- (hidroksimetil)-5-metiipirolidin-1-karboksilata kao žuto ulje.

2

21

22

�

��

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 51 uz zamenu (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (1R)-2-fenii-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohloridom. LC-MS m/z: 511 (M+1).

2

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 43 uz zamenu (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (1R)-2-fenii-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohloridom. LC-MS m/z: 511 (M+1).

Primer 70

((R)-(((((R)-1-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(4-metoksifenil)etil)boronska kiselina

2

Korak 1

Bis(trihlormetil) karbonat (200 mg, 0,66 mmol) u DCM-u (1,5 ml) je ukapavanjem uz mešanje dodat u rastvor (R)-4-(4,4-difluorpiperidin-1-il)-2-(2-(hidroksimetil)pipendin-1-karbonil)-4-metilpent-2-ennitrila (260 mg, 0.73 mmol) i DfPEA (565 mg, 4,38 mmol) u DCM-u (10 ml) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na 0 °C, Taj dobijeni rastvor je ukapavanjem dodat uz snažno mešanje u rastvor (R)-2-(4-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)- 3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-l-amin hidrohlorida (273 mg:

0,73 mmol) i DIPEA (283 mg, 2,19 mmol) u DCM-u (10 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om (25 ml), isprana vodom (10 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušena iznad Na2SO4koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 0%-25% EtOAc u heksanu radi dobijanja ((R)-1-(2-cijano-4,4-dimeti[pent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-2-(4-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2Jdioksaborol-2-il)etil)karbamata kao svetložute čvrste supstance (85 mg, 16%).

Korak 2

U rastvor ((R)-1 -(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metil (R)-2-(4-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)- 3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (85 mg, 0,12 mmol) u MeOH (3 ml) dodat je heksan (3 ml) i 1 N HCI (1,5 m!), zatim izobutil boma kiselina (36 mg, 0,36 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 h i TLC-a koji

2

pokazuje da je reakcija završena, heksanski sloj je odbačen. Metanolni sloj je razblažen vodom (20 ml), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen pomoću preparativne HPLC radi dobijanja ((R)-2-(benzofuran-3-il)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-(4,4-difluorpiperidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)etil)boronske kiseline kao bele čvrste supstance (26,8 mg, 38%). LC-MS m/z: 494 (M-17).

(R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohlorid je pripremljen u skladu sa sledećom sekvencom:

Korak 1

Ohlađeni (0 °C) rastvor (4-metoksifenil)metanola (5 g, 36,23 mmol) u dietil etru (180 ml) tretiran je fosfor tribromidom (2,9 g, 10,8 mmol) i smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim sipana na led t ekstrahovana pomoću etra. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata t koncentrovan. Sirova supstanca (6,3 g, 89%) korišćena je bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2

Rastvor 1-(brommetil)-4-metoksibenzena (6 g, 30 mmol) u degasiranom 1,4-dioksanu (50 ml) tretiran je bis(pinakolato)diborom (11,4 g, 45 mmol), kalijum acetatom (8,8 g,90 mmol), Pd(dppf)Cl2(1,02 g, 1,4 mmol) i smeša je zagrevana na 100 °C tokom 12 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan i sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika

2

gelaFuz eluiranje 5% etil acetatom u petrol etru radi dobijanja 2-(4-metoksibenzil)-4,4,5,5-tetrametiH ,3,2-dioksaborolana (5 g, 60%) kao bezbojnog ulja.

Korak 3

Rastvor (1 S,2S,3R,5S)-2,6,6-trimetifbicikio[3.1.1 ]heptan-2,3-diola (4,9 g, 28,8 mmol) u dietil etru (100 ml) tretiran je 2-(4-metoksibenzil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanom (5 g, 20 mmol), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Smeša je zatim koncentrovana i sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela, uz eluiranje 5% etil acetatom u petro! etru radi dobijanja (3aS,4S,6S,7aR)-2-(4-metoksibenzil)-3a,5,5-trimeti[heksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborola (4,5 g, 75%) kao bezbojnog ulja.

Korak 4

U ohlađenu (-78 °C) smešu dihlormetana (10 ml) i anhidrovanog tetrahidrofurana (20 mi) dodat je LDA (2 M u tetrahidrofuranu, 9,5 ml, 19 mmol). Nakon mešanja tokom 20 min na -78 °C, rastvor (3aS,4S,6S,7aR)-2-(4-metoksibenzil)-3,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborola (4,4 g, 14,7 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (80 ml) dodat je tokom 10 min. Zatim je dodat rastvor cink hlorida (1 M u dietil etru, 14,7 ml, 14,7 mmol) na -78 °C tokom 30 min. Smeša je ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i mešana je tokom 3 h. Smeša je zatim koncentrovana. U dobijeno ulje su dodati dietil etar i zasićeni amonijum hlorid. Vodeni sloj je tri puta ekstrahovan pomoću dietil etra i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela, uz eluiranje 5% etil acetatom u petrol etru radi dobijanja (3aS,4S,6S,7aR)-2-((R)-1-hlor-2-(4-metoksifenil)etil)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborola (4,27 g, 83%) kao bezbojnog ulja.

Korak 5

U ohlađeni (-78 °C) rastvor (3aS,4S,6S,7aR)-2-((R)-1-hlor-2-(4-metoksifenil)etil)-3a,5,5-trimetnheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborola (4,27 g, 12,27 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (50 ml) dodat je LiHMDS (1 M u tetrahidrofuranu, 14,7 ml, 14,7 mmol). Smeša je ostavljena da dostigne sobnu temperaturu, mešana tokom 3 h i koncentrovana do suva. Dobijenom ostatku je

2

dodat heksan, a zatim je nataložena čvrsta supstanca filtrirana. Filtrat je korišćen bez dodatnog prečišćavanja.

Korak 6

Ohlađeni (0 °C) rastvor N-((R)-2-(4-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)-1,1,1-trimetil-N-(trimetilsilil)silanamina u anhidrovanom heksanu (50 ml) ukapavanjem je tretiran sa 4 N HCl u dioksanu (9,2 ml, 36,8 mmol). Smeša je ostavljena da dostigne sobnu temperaturu, mešana tokom 2 h. Čvrsta supstanca je zatim filtrirana radi dobijanja (R)-2-(4-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)- 3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amina kao smeđe čvrste supstance (2 g, 45% za 2 koraka) koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.

21

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 43 uz zamenu (1R)-2-(1-benzofuran-3-il)-1-[{1S,2S,6R,8S)-2,9,9-tnmetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (1 R)-2-(4-metilfenil)-1-[(2S,6R)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0^[2,6]]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohioridom. LC-MS m/z: 480 (M+23).

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 70 uz zamenu (R)-2-(4-metoksifenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3t2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohlorida (R)-2-(3-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S(7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2рок5а6ого1-2ч1)е^ап-1-аптп hidrohloridom. LC-MS m/z: 494 (M+23).

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 28 uz zamenu (1R)-2-fenil-1[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (R)-2-(4-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4(6-metanobenzo[d3[1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohloridom. LC-MS m/z: 494 (M+23).

21

Korak 1

U smešu 2,2-difluoretil trifluormetansulfonata (1,0 g, 4,67 mmol), 2-metil-2-(metilamino)propan-1-ola (0,48 g, 4,67 mmol) u THF-u (10 ml) dodat je DIPEA (0,65 g, 4,8 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 18 h, zatim koncentrovana do suva. Ostatak je mešan u EtOAc (40 ml) tokom 5 min, zatim filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 10%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja 2-((2,2-difluoretil)(metil)amino)-2-metilpropan-1-ola kao bezbojnog ulja (0,66 g).

Korak 2

U rastvor oksalil hlorida (СОС1)г (0,6 g, 4,65 mmol) u DCM-u (15 ml) ukapavanjem je dodat rastvor DMSO (0,4 g, 4,8 mmol) u DCM-u (5 ml) na -78 °C. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 h. Smeša 2-((2,2-difluoretil)(metil)amino)-2-metilpropan-1-ola (0,66 g, 3,9 mmol) u DCM-u (10 ml) dodata je ukapavanjem na -80 °C. Dobijena smeša je mešana na -80 X tokom 1,5 h. Ukapavanjem je dodat Et3N (5 ml) na -80 °C. Dobijena smeša je mešana na -80 X tokom 0,5 h, zatim polako zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 2 h. Nakon gašenja vođenim NaНСОз (8 ml), sloj DCM je odvojen i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (8 ml), zatim osušen iznad Na2S04, koncentrovan do suva, Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 0%-20% EtOAc u heksanu radi dobijanja 2-((2,2- difiuoretil)(metil)amino)-2-metilpropanala kao bezbojnog ulja (0,29 g, 48%).

21

21

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 28 uz zamenu (1R)- 2-fenil-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratricikfo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (R)-2-fluorfenil) -((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksiаborol-2-il)etan-1-amin hidrohloridom. LC-MS m/z: 573 (M+23).

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 28 uz zamenu (1R)- 2-fenil-- [(1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioksa-4-boratriciklo[6.1.1.0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (R)-2-(4-(trifluormetil)fenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohloridom. LC-MS m/z: 601 (M+1).

21

Korak 1

U rastvor 2-(3,3-difluorpfrofidin-1 -if)-2-met*lpropanaia (2,3 g, 12,98 mmol), 2-cijanosirćetne kiseline (1,10 g, 12,98 mmol) i piroJidina (7,39 g, 103,84 mmol) u DCM-u (30 mf) u ledenom kupatilu ukapavanjem je dodat hlor(trimetil)silan (6,58 ml, 51,92 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim koncentrovana pod vakuumom. pH smeše je podešen na 5*6 pomoću NaHSCu (vod.) рге ekstrakcije pomoću DCM-a (50 ml х 3). Organski slojevi su kombinovani, zatim isprani zasićenim vodenim rastvorom soii (50 ml), osušeni iznad Na2S04i koncentrovani pod vakuumom. Sirova supstanca je prečišćena putem hromatografije na silika gelu radi dobijanja naslovnog jedinjenja kao žute čvrste supstance (800 mg, 25,24%).

21

Korak 2

U smešu 2-ciјаnо-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-еnsке kiseline (342 mg soli TFA, 1,0 mmol), (R)-(2-metilpirolidin-2-il)metanol hidrohlorida (152 mg, 1,0 mmol) i DIPEA (780 mg, 6 mmol) u DCM-u (20 ml) u porcijama je dodat BOP (442 mg, 1 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h, zatim je koncentrovana do suva. Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 0%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja (R)-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-2-(2-(hidroksimetil)-2- metilpirolidin-1-karbonil)-4-metilpent-2-ennitrila kao bezbojnog ulja (230 mg, 67%).

Korak 3

Bis(trihlormetil) karbonat (200 mg, 0,674 mmol) u DCM-u (1,0 ml) ukapavanjem je dodat uz mešanje u rastvor (R)-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-2-(2-(hidroksimetil)-2-metilpirolidin-1 -karbonil)-4-metilpent-2-ennitrila (230 mg,

0,674 mmol) i DIPEA (523 mg, 4 mmol) u DCM-u (4 ml) na -15 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na temperaturi ispod 0 °C. Taj dobijeni rastvor je ukapavanjem dodat uz snažno mešanje u rastvor (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (158 mg, 0,472 mmol) i DIPEA (262 mg, 2 mmol) u DCM-u (3 ml) na 0 °C.

Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om (15 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (5 ml), osušena iznad Na2S04, koncentrovana pod vakuumom, Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC radi dobijanja ((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)-2- metilpirolidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-({3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4.6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata kao bele čvrste supstance (72 mg, 23%).

Korak 4

U rastvor ((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)- 2-metilpirolidin-2-il)meti! ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4.6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata (72 mg, 0,108 mmol) u MeOH (2,5 ml) dodati su heksan (2,5 ml) i 1 N HCI (0,5 ml), zatim izobutil borna kiselina (33 mg, 0,324 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 h i TLC-a koji pokazuje da je reakcija završena, pH smeše je podešen na 7 sa vod.

21

NaHCO3рге nego što je heksanski sloj odbačen. Metanolni sloj je razblažen

vodom (20 ml), zatim osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je

dalje prečišćen na koloni silika gela (metanol kao eluent) radi dobijanja (R)-1-((((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)-2-metilpirolidin-2-il)metoksi)karbonilamino)-2-feniletilboronske kiseline kao bele čvrste supstance

(26,4 mg, 45%). LC-MS m/z: 555 (M+23).

Primer 86

((R)-1-(((((R)-4-(2-cijano-4-(3,3-difluoptrolidin-1-il)-4-metilpent-2- enoil)morfolin-3-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(p-tolil)etil)boronska kiselina

22

Korak 1

U balon sa okruglim dnom od 100 mi dodat je rastvor (2R,4R)-1-tercbutil 2-metil 4-fluorpirolidin-1,2-dikarboksilata (2935 mg, 11,9 mmol) i THF (10 ml) na 0 °C. LiBH4mol/l u THF-u (5,94 ml, 17.81 mmol) je polako dodavan tokom 10 min. Smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana je tokom 20 h. Smeša je ohlađena na 0 °C, dodata je razblažena sirćetna klselina u vodi, zatim je ekstrahovana pomoću EtOAc, nakon čega je ispirana zasićenim NaHCO3i zasićenim NaCI. Organski sloj je osušen sa MgS04, filtriran i koncentrovan radi dobijanja terc-butil (2R,4R)-4-fluor-2-(hidrokslmetil)pirolidin-1- karboksilata (2000 mg, 9,12 mmol) kao sirovog ulja.

Korak 2

U rastvor (2R,4R)-terc-butil 4-fluor-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1,70 g, 7,75 mmol) i trietilamina (3,23 ml, 23,3 mmol) u 70 ml DCM-a đodatje bis(trihlormetil) karbonat (2761 mg, 9,3 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, a zatim je dodata u rastvor (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (2,00 g, 5,96 mmol) i trietilamina (1,65 ml, 11,9 mmol) u DCM-u (20 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 1 h na sobnoj temperaturi, dodati su voda i DCM, slojevi su odvojeni i organska faza je osušena iznad MgS04, filtrirana i koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na koloni dalo je 544 mg (2R,4R)-terc-butil 4-fluor-2-(((((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5- trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilata.

Korak 3

U balon sa okruglim dnom od 25 ml dodat je (2R,4R)-terc-butil 4-fluor-2- (((((R)-2-fenil-((3aS,4S,6S,7aR)-3aA5-trimeti(heksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2}dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pirolidin-1-karboksilat (178 mg, 0,330 mmol) koji je rastvoren u DCM-u (2 ml). Dodata je 4 N HCI u dioksanu (0,7 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, zatim je koncentrovana do ulja i stavljena pod visoki vakuum preko noći. Ta supstanca je rastvorena u DCM-u (2 mi) i DIPEA (0,2 ml). Dodat je akriloil hlorid (0,03 ml, 0,34 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 15 min, a zatim su dodati voda i DCM t slojevi su odvojeni, Organski sloj je osušen sa MgSO4i koncentrovan do ulja koje je prečišćeno pomoću preparativne HPLC (gradijent 10- 95 voda/ACN, 20 min) radi dobijanja 39 mg ((2Р,45)-1-akriloil-4-fluorpirolidin-2- il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-s[)etil)karbamata u vidu čvrste supstance.

Korak 4

((2R,4S)-1-akriloi!-4-fluorpirolidin-2-il)metil {(R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-tnmetilheksahfdro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (39,1 mg, 0,08 mmol)je rastvoren u metanolu (2 ml) i dodati su heksan (2 ml) i 0,1 ml 1 N HCI. Zatim je dodata izobutilboronska kiselina (16,02 mg, 0,16 mmol) i smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena putem preparativne HPLC (10-95 voda/ACN, 20 min). Sakupljena frakcija je zamrznuta i liofilizovana radi dobijanja naslovnog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LC-MS m/z: 751 (2M+23).

Primer 90

((R)-1-(((((2R,4R)-1-{(E)-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)-4- fluorpirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

22

Naslovno jedinjenje je pripremljeno od ((2R,4S)-4-fluorpirolidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata kao u primeru 10. LC-MS m/z: 468 (M+ 23).

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 36 uz zamenu tercbutil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata terc-butil (2R)-4t4-difluor-2-(hidroksimetil) pirolidin-1-karboksilatom. LC-MS m/z: 445 (M+23).

Primer 92

((R)-1 -(((((1S,2R,5R)-3-(2-cijano-3-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)akriloil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(ptolil)etil)boronska kiselina

22

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 65 uz zamenu (1R)-2- (1-benzofuran-3-il)-1-[(1S,2S,6R,8S)-2,9t9-trimetil-3,5-dioksa-4- boratriciklo[6.1.1,0<ʌ>2,6]dekan-4-il]etan-1-amin hidrohlorida (R)-2-fenil-1- ({3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol- 2-il)etanamin hidrohloridom. LC-MS m/z; 557 (M+ 23).

Primer 95

((R)-1 -(((((1 Ss2R,5R)-3-akriloil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)karbonii)amino)-2-(p-tolil)etil)boronska kiselina

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodat je (1S,2R,5R)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-ilmetil ((R)-2-(p-tolil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat

hidrohiorid (325 mg, 0,72 mmol, 1,00 ekv.), pripremljen kao u primeru 37 ali uz

zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetllheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-i0etanamin hidrohlorida (R)-2-(p-tolil)-1 – ((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d3[1,3,2]dioksaborol- 2-il)etanamin hidrohloridom, dihlormetanom (6 ml), TEA (224 mg, 2,21 mmol, 3,00 ekv.) i prop-2-enoil hloridom (79 mg, 0,87

mmol, 1,20 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na 25 °C. Dobijena smeša

je isprana sa 30 ml zasićenog vodenog

22

rastvora soli. Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu radi dobijanja 160 mg (44%) ((1S,2R,5R)-3-akriloil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metil ((R)-2-(ptofil)-1-{{3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trirnetilheksabidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2Jdioksaborol-2-il)etil)karbamata u vidu žutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodati su ((1S,2R,5R)-3-akriloil-3- azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metil ((R)-2-(p-tolil)-1 -{{3aS,AS,6SJaRy3a,53-trimetilheksahidro-4t6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol~2-il)etil)karbamat (160 mg, 0,32 mmol, 1,00 ekv.), metanol (7 ml), (2-metilpropi!)boronska kiselina (97 mg, 0,95 mmol, 3,00 ekv.), heksan (7 ml) i 1 N HCI (6,3 ml, 20,0 ekv.).

Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na 25 °C. Dobijena smeša je isprana sa 3 х 7 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 10 ml vode t osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C18 OBD kolona, 5 um, 19*150 mm; mobilna faza, voda (0,05% TFA) i ACN (35,0% ACN do 40,0% za 8 min); detektor, UV 254 nm. To je dalo 36,1 mg (31%) ((R)-1-(((((1S,2R,5R)-3-akriloil-3-azabfciklo[3.1.0]heksan-2-if)metoksi)karbonil)amino)-2-(p-toliJ)etil)boronske kiseline kao beličaste čvrste supstance. LC-MS m/z: 395 (M+23),

22

Naslovno jedinjenje je pripremijeno kao u primeru 46 ali polazeći od (R)-2-(3-metoksifenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaboroi-2-il)etanamina koji je pripremljen metodom koji se koristi u primeru 16 za pripremu (R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)- 3a,5,5-trimetilheksahidro-4t6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida ali uz zamenu 1-benzofuran-3-ilmetanola (3-metoksifenil)metanolom. LC-MS m/z: 585 (M+ 23).

22

U trogrli balon sa okruglim dnom od 100 mi koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (1R)-3-fenil-1-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propan-1-amin hidrohlorid (821 mg, 2,76 mmol, 0,90 ekv.), dihlormetan (18 ml) i DIEA (1,44 ml, 3,00 ekv.), Zatim je u kapima dodat rastvor terc-butil (3R)-3-[[(hlorkarbonil)oksi)metil]morfolin-4-karboksilata (779 mg, 2,78 mmol), pripremljen kao u primeru 43, u dihlormetanu (18 ml) uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi, zatim ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na silika gelu radi dobijanja 0,65 g terc-butil(3R)-3-[([[(1R)-3-fenil-1-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]karbamoil]oksi)metil]morfolin-4-karboksilata u vidu svetložutog sirovog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 100 mi dodati su terc-butil (3R)-3-[([[(1R)-3- feniM-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]karbamoil]oksi)metH]morfolin-4-karboksilat (650 mg, 1,29 mmol), etar (10 ml) i (1S,2S,3R,5S)-2,6,6-trimetilbiciklo[3.1.1]heptan-2,3-diol (287 mg, 1,69 mmol). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 dana na sobnoj temperaturi, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC radi dobijanja 190 mg (R)-terc-butil 3-(((((R)-3-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)propil)karbamoil)oksi)metil)morfolin-4-karboksilata u vidu svetložute čvrste supstance. Dalje korišćenje ove supstance kao u primeru 28 dalo je ((R)-1-(((((R)-4- (2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)morfolin-3-il)metoksi)karbonil)amino)-3-fenilpropil)boronsku kiselinu. LC-MS m/z: 549 (M+ 1).

Primer 99

((R)-1-(((((1S,2R,5R)-3-akriloil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

22

�

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 90 ali polazeći od ((2R,4S)-4-fluorpirolidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata hidrohlorida, pripremljenog kao u primeru 89 od (2R,4S)-1-terc-butil 2-metil 4-fluorpirolidin-1,2-dikarboksilata,

Primer 103

((R)-1 -(((((R)-1 -((Z)-2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1 -il)-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

2 1

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 28 kao smeša izomera. U balon sa okruglim dnom od 250 ml dodati su ((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1 -il)-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metil ((R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamat (500 mg, 0,75 mmol), heksan (15 ml), metanol (15 ml), (2-metilpropil)boronska kiselina (230 mg, 2,26 mmol) i 1 N hlorovodonik (15 ml). Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 3 × 5 ml heksana. Metanolni sloj je razblažen sa 50 ml vode i osušen liofilizacijom radi dobijanja sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC uz sledeće uslove: Kolona, XBridge Prep C 18 OBD, 5 um, 19*150 mm; mobilna faza, voda (10 mmol/l HCOOH) i ACN (65,0% ACN do 90,0% za 10 min); detektor, uv 254 nm. To je dalo 302 mg glavnog izomera (označenog sa E) jedinjenja iz primera 28 i 27,6 mg ((R)-1- (((((R)-1-((2)-2-cijano-4-3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline kao bele čvrste supstance. LC-MS m/z: 533 (M+1).

Primer 104

((R)-1-(((((1S,2R,5R)-3-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)karbonil)amino)-3-fenilpropil)boronska kiselina

2 2

Naslovno jedinjen|e je pripremljeno kao u primeru 54 ali uz zamenu (R)-2-(benzofuran-3-il)-1 -((3aS,4S,6S,7aR)-3a ,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-terc-butil 3-(((((R)-3-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6 -metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)propil)karbamoil)oksi)metil)morfolin-4-karboksilatom kao što je pripremljen u primeru 98.

2

��

�

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 95, ali uz zamenu (R)-2-(p-tolil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-etanamin hidrohlorida (R)-2-(4-fluorfenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1 ,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom.

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 28, ali uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(2-(trifluormetil)fenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,23dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom.

Primer 111

((R)-1 -((((S)-4-akriloil-1,1 -dioksidotiomorfolin-3- il)metoksi)karbonil)amino)-2-(benzofuran-3-iI)etil)boronska kiselina

2

U balon sa okruglim dnom od 100 m! dodati su (3S)-tiomorfolin-3-karboksilna kiselina (500 mg, 3,40 mmol), DCM (15 ml), TEA (1,32 ml, 9,50 mmol) i Вос2О (0,9 g, 4,1 mmol). Dobijeni rastvor je mešan tokom 4 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 1 × 50 ml 1 M HCI i 1 * 50 mi zasićenog vodenog rastvora soli, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu radi dobijanja 0,49 g (3S)-4-[(terc-butoksi)karbonil]tiomorfolin-3-karboksilne kiseline u vidu svetložute čvrste supstance.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (3S)-4-[(tercbutoksi)karbonil]tiomorfolin-3-karboksilna kiselina (696,9 mg, 2,82 mmol), THF (25 ml) i TEA (0,47 ml, 3,38 mmol). Zatim je dodat hlor(2-metilpropoksi)metanon (0,402 ml) na -10 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -10 °C. Čvrste supstance su odvojene filtracijom. Tom filtratu je dodat rastvor NaBH4(0,427 g, 11,3 mmol) u 1,1 ml H2O. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -10 °C zatim razblažen sa 50 ml H2O. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 50 ml etil acetata i organska faza je isprana sa 1 M HCI i vodom. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu radi dobijanja 0,58 g terc-butil (3S)-3- (hidroksimetil) tiomorfolin-4-karboksilata u vidu beličaste čvrste supstance.

U balon sa okruglim dnom od 100 ml dodati su terc-butil (3S)-3-(hidroksimetil) tiomorfolin-4-karboksilat (0,58 g, 2,49 mmol) i Et20 (20 ml). Zatim je dodat m-CPBA (0,859 g) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na sobnoj temperaturi pre koncentrovanja. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika

2

gelu radi dobijanja 0,59 g (S)-terc-butil 3-(hidroksimetil)tiomorfolin-4-karboksilat 1,1-dioksida u vidu bele čvrste supstance.

Naslovno jedinjenje je zatim pripremljeno kao u primeru 36, ali uz zamenu terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksi!ata (S)-terc-butil 3-(hidroksimetil)tiomorfolin-4-karboksilat 1,1-dioksidom. LC-MS m/z: 451 (M+1).

U balon sa okruglim dnom od 250 mi dodat je rastvor 1-terc-butil 2-metil (2R)-4-oksopiperidin-1,2-dikarboksitata (2,17 g, 8,43 mmol) u dihlormetanu (100 ml). Zatim je u kapima dodat deokso-fluor (7,2 ml) uz mešanje na -78 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h na -78 °C, zatim zagrejan do sobne temperature i mešan preko noći. Reakcija je potom prekinuta dodatkom 20 ml vode/leda. Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu radi dobijanja 1,5 g 1-terc-butil 2-metil (2R)-4,4-difluorpiperidin-1,2-dikarboksilata u vidu žutog ulja.

U balon sa okruglim dnom od 50 ml dodato je 15 ml tetrahidrofurana, zatim 2 M rastvor LiBH4u THF-u (5,4 ml, 2,00 ekv.). Tome je dodat 1-terc-butil 2-metil (2R)-4,4-difIuorpiperidin-1,2-dikarboksilat(1,5g, 5,37 mmol). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi, zatim razblažen sa 50 ml EtOAc i ispran sa 20 ml vode. Smeša je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak kao što je prečišćen hromatografijom na

2

silika gelu radi dobijanja 1 g terc-butil {2R)-4a4-difluor-2-(hidroksimetil)piperidin-1 -karboksilata u vidu bele čvrste supstance.

Naslovno jedinjenje je zatim pripremljeno kao u primeru 36, ali uz

zamenu terc-butil (2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata terc-butil (2R)-4,4-difluor-2-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilatom. LC-MS m/z: 459 (M+23).

Primer 113

((R)*1-(((((R)-1-(2-crjano4-(3,3<lif!tJorpirolidin-1-il)-4-metitpent-2- enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)arnino)-2-(2,4-difluorfenil)etii)boronska kiselina

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 28, ali uz zamenu (R)-2- fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohforida (R)-2-(2,4-difluorfenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom. LC-MS m/z: 591 (M+ 23).

Primer 114

((R)-1-((((1S,2R,5R)-3-(2-cijano-4-metil-4-morfoIinopent-2-enoil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(4-(trifluormetil)fenil)etil)boronska kiselina

2

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 67, ali uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5f5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1 ,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(4- (trifluorrnetiOfenilJ-l-^aaS^S.eSJaRJ-Sa^S-trimetilheksahidro-^.e- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom. LC-MS m/z: 579 (M+1).

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 52, ali uz zamenu (R)-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(4-(trifluormetil)fenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetflheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaboroi-2-il)etanamin hidrohloridom.

24

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 54, ali uz zamenu (R)- 2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,1]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(p-tolil)-1-((3aS,4S,6Sf7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d]{1t3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom. LC-MS m/z: 545 (M+1).

U rastvor 2-{3,3-difluorpirolidin-1-il)-2-metilpropanala (2,3 g, 13 mmol), 2-cijanosirćetne kiseline (1,10 g, 13 mmol) i pirolidina (7,39 g, 104 mmol) u DCM-u (30 ml) u ledenom kupatilu u kapima je dodat hlor(trimetil)silan (6,58 ml,

51,9 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim koncentrovana pod vakuumom. pH smeše je podešen na 5-6 pomoću NaHSO4(vod.) pre ekstrakcije pomoću DCM-a (50 ml × 3). Organski slojevi su kombinovani, zatim isprani zasićenim vodenim rastvorom sofi (50 ml), osušeni iznad Na2$04i koncentrovani pod vakuumom. Sirova supstanca je prečišćena putem hromatografije na silika gelu radi dobijanja 2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1- il)-4-metilpent-2-enske kiseline u vidu žute čvrste supstance (800 mg).

U smešu 2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enske kiseline (342 mg soli TFA), (R)-2-metifpirofidin-2-il)metanol hidrohlorida (152 mg, 1,0 mmol) i DIPEA (780 mg, 6 mmol) u DCM-u (20 ml) u porcijama je dodat BOP (442 mg, 1 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h, a zatim koncentrovana do suva. Sirovi ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 0%-100% EtOAc u heksanu radi dobijanja (R)-4-(3,3-difluorpirolidin-1 -il)-2-(2-(hidroksimetil)-2-metilpirolidin-1 -karbonil)-4-metilpent-2-ennitrila kao bezbojnog ulja (230 mg).

Bis(trihlormetil) karbonat(156 mg, 0,53 mmol) u DCM-u (1,5 ml) u kapima je dodat uz mešanje u rastvor (R)-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-2-(2-(hidroksimetil)-2-metilpirolidin-1 -karbonil)-4-metilpent-2-ennitrila (200 mg, 0,59 mmol) i DIPEA (456 mg, 3,54 mmol) u DCM-u (10 ml) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na 0 °C i u kapima dodata uz snažno mešanje u rastvor (R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohlorida (221 mg,

0,59 mmol) i DIPEA (228 mg, 1,77 mmol) u DCM-u (10 ml) na 0 °C Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om (25 ml), isprana vodom (10 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušena iznad Na2SO4, koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika gelu i gradijenta od 50%-90% EtOAc u heksanu radi dobijanja ((R)-1-(2-cijano-4-{3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)-2-metilpirolidin-2-il)metil ((R)--2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata kao bele čvrste supstance (120 mg). Hidroliza boronata kao u primeru 1, korak 6, i prečišćavanje putem

��

U suspenziju DSC (351 mg, 1,37 mmol) i (R)-4-(3,3-difiuorpirolidin-1-il)-2-(2-(hidroksimetil)-2-metilpirofidin-1-karbonil)-4-metilpent-2-ennitrila (360 mg, 1,5 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (3 ml) u kapima je dodata DIPEA (407 mg, 3,15 mmol) na 25 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na 25 °C, zatim razblažena vodom (20 ml), dva puta ekstrahovana DCM-om (oba puta po 7 ml). Kombinovana organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (3 ml), osušena iznad Na2SO4, koncentrovana pod vakuumom. Tako dobijeni (R)-(1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)-2-metilpirolidin-2-il)metil (2,5-dioksopirolidin-1-il) karbonat je neposredno korišćen u sledećem koraku (220 mg).

U rastvor (R)-(1 -(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1 -il)-4-metilpent-2-enoi!)-2- metilpirolidin-2-il)metil (2,5-dioksopiroiidin-1-il) karbonata (160 mg, 0,33 mmol) u DCM-u (4 ml) u kapima je dodat rastvor (R)-2-(4-fluorfenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)- 3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d]1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohlorida (117 mg, 0,33 mmol) i DIPEA (127 mg, 0,99 mmol) u DCM-u (1 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, zatim razblažena DCM-om (20 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad Na2SO4, koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen putem hromatografije na silika

gelu radi dobijanja 100 mg ((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2- enoil)-2-metilpirotidin-2-il)metil ((R)-2-(4-fluorfenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamata u vidu bele čvrste supstance (100 mg, 44%)

Naslovno jedinjenje je pripremljeno kao u primeru 117, ali uz zamenu (R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etan-1-amin hidrohlorida (R)-2-(4-fluorfenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom. LC-MS m/z: 573 (M+23). Hidroliza boronata kao u primeru 1, korak 6, i prečišćavanje putem preparativne HPLC, dali su 43 mg naslovnog jedinjenja kao bezbojne čvrste supstance. LC-MS m/z: 573 (M+23).

U smešu litijum 2-fluorakrilata (250 mg, sirov), (R)-(2-metilpirotidin-2-iJ)metanola (300 mg, 2,6 mmol) i DIPEA (1 g, 7,8 mmol) u ACN-u (8 ml), na sobnoj temperaturi je dodat РуВОР (1,62 g, 3,12 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana i sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na silika gelu radi dobijanja (R)-2-fluoM-(2-(hidroksimetil)-2- metilpirolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (252 mg) kao bezbojnog ulja. Praćenje postupka za poslednja 2 koraka u primeru 117 dalo je 84 mg naslovnog jedinjenja kao bezbojne čvrste supstance. LC-MS m/z: 419 (M+ 23).

24

Praćenjem protokola iz primera 28, ali uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[dj[1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida 4-((R)-2-amino-2-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetiIheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)benzonitril hidrohloridom (pripremljen metodom iz primera 98), dobijeno je naslovno jedinjenje. LC-MS m/z: 580 (M+ 23).

Primer 123

((R)-1-(((((1S,2R,5R)-3-(2-cijano-4-metil-4-morfolinopent-2-enoil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(4-fluorfenil)etil)boronska kiselina

24

metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohforida (R)-2-(4-ffuorfeni!)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-iI)etanamin hidrohloridom. LC-MS m/z: 579 (M+1). LC-MS m/z: 529 (M+ 1).

Primer 124

((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1-il)-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(4- (metifsulfonil)fenii)etil)boronska kiseiina

Praćenjem protokola iz primera 28, ali uz zamenu (R)-2-fenil- 2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5,-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]-dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(4- (metilsulfonil)fenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom (pripremljen metodom iz primera 98), dobijeno je naslovno jedinjenje. LC-MS m/z: 611 (M+ 1).

Primer 125

((R)-1 -(((((R)-1 -(2-cijano-4-(4-(metoksikarbonil)piperazin-1 -il)-4- metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

24

��

Praćenjem protokola iz primera 126, ali uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-tnmetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(4-fluorfenil)-1-((3aS, 4S, 6S, 7 a R)-3a, 5,5-trimetitheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohforidom, dobijeno je naslovno jedinjenje. LC-MS m/z: 586 (M+ 1).

U rastvor terc-butil (3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (1044 mg, 4,83 mmoi) u N,N-diizopropiletilaminu (2,57 ml, 14,48 mmol) i DMF-u (7 ml) dodata je (E)-2-cijano-4,4-dimetif-pent-2-enska kiselina (1109,1 mg, 7,24 mmol) a zatim HATU (486,6 mg, 5,79 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je razblažena DCM-om i vodom i razdeljena.

Organski sloj je osušen sa MgS04 i koncentrovan. Sirova smeša je prečišćena

24

hromatografijom na koloni radi dobijanja terc-butil (3R)-4-[(E)-2-cijano-4,4-dimeti]-pent-2-enoil]-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (1340 mg) kao ulja.

U rastvor terc-butil (3R)-4-[(E)-2-cijano-4v4-dimetil-pent-2-enoil]-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (1325 mg, 3,77 mmol) i trietilamina (1,05 ml, 7,54 mmol) u DCM-u dodat je bis(2,5-dioksopirolidin-1-il) karbonat (1255 mg, 4,9 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je razblažena DCM-om i vodom i razdeljena, Organski sloj je osušen sa MgSO4i koncentrovan. Sirova smeša je prečišćena hromatografijom na koloni radi dobijanja terc-butil (3R)-4-[(E)-2-cijano-4,4-dimetil-pent-2-enoil]-3-[(2,5-dioksopirolidin-1- il)oksikarboniloksimetil]piperazin-1-karboksilata (318 mg) kao ulja.

U rastvor (R)-2-fenil-((3aS,4S,6S,7aR)-5,5,7a-trimetilheksahidro-4,6 metanobenzo[d][1,3,2]dioksaboro)-2-il)etanamin hidrohlorida (325,1 mg, 0,97 mmol) i trietilamina (0,27 ml, 1,94 mmol) u DCM-u (10 ml) dodata je smeša terc-butil (3R)-4- (R,E)-terc-butil 4-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)-3-(((((2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi)karbonil)oksi)metil)piperazin-1-karboksilata (318 mg, 0,65 mmol) u DCM-u (5 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je isprana vodom (40 ml) zatim NaCI (vod.) i organski sloj je zatim osušen sa MgSO4i koncentrovan do ulja. ulje je prečišćeno hromatografijom na silika geiu radi dobijanja (R)-terc-butil 4-((E)-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)-3- (((((R)-2-fenil-1-(3aS,4S,6S7aR)-5,5,7a-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)piperazin-1-karboksilata (134 mg) kao ulja.

U rastvor (R)-terc-butil 4-((E)-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)-3-(((((R)-2-fenil-1-(3aS,4S,6S7aR)-5,5,7a -trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)pfperazin-1-karboksiiata (135 mg, 0,20 mmol) dodat je 4 N HCI u dioksanu (1,5 ml) i DCM (5 ml). Nakon mešanja tokom 1,5 h na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana. Dodati su 1 N HCI (1,8 ml), metanol (4 ml) i heksan (4 ml), a zatim izobutilboronska kiselina (30,5 mg, 0,30 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana pod malo sniženim pritiskom i preostala supstanca je prečišćena putem preparativne HPLC kako bi se, nakon

2

U trogrli balon sa okruglim dnom od 25 ml koji je pročišćen i održavan pomoću inertne atmosfere azota dodati su (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorid (366 mg, 1,09 mmol), DCM (6 ml, 94 mmol) i Et3N (441 mg, 4,36 mmol), Reakcija je ohlađena na -60 °C. Zatim je u kapima dodat rastvor ditrihlormetil karbonata (129,4 mg, 0,44 mmol) u DCM-u (3 ml) uz mešanje na -60 °C. Dobijeni rastvor koji sadrži (3aS,4S,6S,7aR)-2-((R)-1-izocijanato-2-feniletil)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6- metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol je ohlađen -60 °C. Zatim je u kapima dodat rastvor terc-butil 2-(hidroksimetil)-2-metilpiperidin-1-karboksi[ata (303 mg, 1,32 mmol) u DCM-u (3 ml) uz mešanje na -60 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -60 °C Reakcija je zatim prekinuta dodatkom 3 ml vode. Dobijeni rastvorje ekstrahovan sa 3 × 3 ml dihlormetana. Organski slojevi su kombinovani, isprani natrijum karbonatom (vod.) i zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad Na2SO i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 609,4 mg terc-butil 2-nnetil-2-(((((R)-fenil-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etil)karbamoil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilata kao žutog ulja. Korišćenje prethodnih koraka polazeći od (R)-terc-butil

2 1

22

�

��

Koristeći metod iz primera 132 uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3(2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohiorida (R)-2-(4-fiuorfenil)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3t2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom dobijeno je

naslovno jedinjenje, LC-MS m/z: 555 (M+1).

Koristeći metod iz primera 131 uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1 ,3,2]dioksaborol~2-il)etanamin hidrohlorida R)-2-(benzofuran-3-il)-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5(5-trimetnheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborot-2-il)etanamin hidrohloridom dobijeno je

naslovno jedinjenje. LC-MS m/z: 557 (M+ 1).

Primer 137

((R)-1-(((((2R,4S)-1-(2-cijano-4-metil-4-morfolinopent-2-enoil)-4- fluorpirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-(4-fluorfenil)etil)boronska kiselina

2

Koristeći metod iz primera 131 uz zamenu (R)-2-fenil-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohlorida (R)-2-(4-fluorfenil)-1 -((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-trimetilheksahidro-4,6-metanobenzo[d][1,3,2]dioksaborol-2-il)etanamin hidrohloridom dobijeno je

naslovno jedinjenje. LC-MS m/z: 535 (M+ 1).

Koristeći metod iz primera 109 uz zamenu (1S,2R.5R)-terc-butil 2- (hidroksimetil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (2R,4S)-terc-butil 4-fluor- 2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilatom dobijeno je naslovno jedinjenje.

Primer 139

((R)-1 -(((((R)-1 -(2-cijano-4-((R)-3-fluorpirolidin-1 -il)-4-metilpent-2-enoil)- 2-metilpirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronska kiselina

2

�

�

�

�

21

22

Koristeći metod iz prva dva koraka u primeru 117 uz zamenu 2-(3,3-difiuorpirolidin-1-il)-2-metilpropanala 2-metil-2-morfolinopropanalom dobijena je 2-cijano-4-metil-4-morfolinopent-2-enska kiselina. Polazeći od ove supstance uz nastavak kao u primeru 120 dobijeno je naslovno jedinjenje.

Primer 153

((R)-1 -(((((2R,4S)-1 -(2-cijano-4-(3,3-difluorpirolidin-1 -il)-4-metilpent-2-enoil)-4-fIuor-2-metilpirolidtn-2-ii)metoksi)karbonil)amino)-2-(4-fluorfenil)etil)boronska kiselina

2

Tretiranje (2R,4R)-1-terc-butil 2-metii 4-hidroksi-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksiiata (pripremljen kao što je opisano u Org Lett, 2007, 3029-3032) pomoču DAST u DCM-u dalo je (2R,4S)-1-terc-butil 2-metil 4-fluor-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksilat. Redukcija estra kao u primeru 89 daje (2R,4S)-terc-butil 4-fluor-2-(hidroksimetil)-2-metilpirolidin-1-karboksilat a nastavak kao u primeru 120 daje naslovno jedinjenje.

Koristeći metod iz primera 153 uz zamenu 2-(3,3-difiuorpirolidin-1-il)- 2-metilpropanala (S)-2-(3-fIuorpirolidin-1-il)-2-metilpropanalom dobijeno je naslovno jedinjenje.

2 4

�

�

�

�

imunoproteazoma LMP7/B5i, podjedinice imunoproteazoma LPM2/β1i i jedinice konstitutivnog proteazoma β5c za jedinjenje Formule (I). Za LMP7 i β5c, serijska razblaženja testiranih jedinjenja su inkubirana sa humanim rekombinantnim imunoproteazomom ili konstitutivnim proteazomom (0,3 nM enzim) i peptidnim supstratom obeleženim karboksifluoresceinom (FAM), FAM-TYETFKSIMKKSPF-NHz (1 μM) na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcija je zatim prekinuta puferom koji sadrži poznati inhibitor proteazoma karfilzomib u koncentraciji od 5 um. Za LMP2, serijska razbfaženja testiranih jedinjenja su inkubirana sa humanim rekombinantnim imunoproteazomom (0,3 nМ enzim) i peptidnim supstratom obeleženim karboksifluoresceinom (FAM), FAM-GLTNIKTEEISEVNLDAEFRK-NH2(1 μM) na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je zatim prekinuta puferom koji sadrži poznati inhibitor proteazoma iksazomib u koncentraciji od 6,7 um. Reakcioni pufer je bio 20 mM Hepes pH 7,4, 0,01% albumin goveđeg seruma, 0,015% SDS, 0,5 mM EDTA, 1% DMSO. Proizvod reakcije cepanja peptida je kvantifikovan na uređaju Caliper LabChip 3000. Procenat inhibicije je izračunat za razblaženje svakog jedinjenja, i izračunata je koncentracija koja je dala 50% inhibicije. Ta vrednost je predstavljena kao IC50. U nastavku su date vrednosti IC 50 za reprezentativni broj jedinjenja.

2

�

21

22

Inhibicija ćelija sa aktivnošću proteazoma

Efekti vezani za ćeliju ovde opisanih jedinjenja na imunoproteazom određeni su merenjem inhibicije aktivnosti proteazoma u ćelijama koristeći reagens na bazi ćelija Proteasome-Glo™ (Promega, Madison Wl). Test Proteasome-Glo™ sadrži specifični luminogent supstrat proteazoma u puferu optimizovan za permeabilizaciju ćelija, aktivnost proteazoma i aktivnost luciferaze. Za aktivnost nalik na himotripsin (LMP7 i β5c), peptidni supstrat je suc-LLVY-

2

aminoluciferin (sukcinil-leucin-leucin-valin-tirozin-aminoluciferin). Cepanje supstrata putem proteazoma daje luminescentni signal koji je proporcionalan aktivnosti proteazoma. Ćelijska linija THP-1 (ćelijska linija monocitne leukemije obogaćena imunoproteazomom), ćelijska linija HT-29 (ćelijska linija kolorektalnog adenokarcinoma obogaćena konstitutivnim proteazomom) i primarne humane mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) koriste se za procenu aktivnosti proteazoma. Ćelije su zasejane na ploče sa 96 bunarčića sa 10.000 ćelija po bunarčiću u medijumu RPM! 1640 sa visokim sadržajem glukoze sa 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS). U ćelije su dodata razblaženja jedinjenja polazeći od koncentracije od 5 um i smanjujući se u trostrukim razblaženjima. Konačna koncentracija DMSO je 1%. Raspon koncentracija je prilagođen po potrebi za jedinjenja različite potentnosti. Ćelije tretirane jedinjenjima su inkubirane tokom 2 h pri 37 °C u 5% СО2. Na kraju perioda inkubacije od 2 h, ćelije su prenete na bele test ploče sa 384 bunarčića.20 ul reagensa Proteasome-Glo™ je dodato u svaki bunarčić, i inkubirano 10 min na sobnoj temperaturi. Ploča je očitana u instrumentu Analyst HT (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) koristeći luminescentni režim, Procenat inhibicije aktivnosti je predstavljen kao funkcija log koncentracije jedinjenja. IC50je zatim izračunat za svako jedinjenje koristeći softver Prism kompanije Graphpad Software inc. (San Diego, CA).

2 4

Primer 3

Proizvodnja lL-2 u anti-CD3 i anti-CD28 stimulisanim humanim PBMC Mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) izolovane iz Ijudske pune krvi su prethodno inkubirane sa test jedinjenjima ili bez njih u RPMI 1640 10% fetalnog goveđeg seruma na 37 °C tokom 30 min. PBMC su stimulisane sa

2,5 ug/ml anti-CD3 vezanog na ploču i 1 ug/ml rastvornog anti-CD28 preko noći, i prikupljen je supernatant za AlphaLISA IL2 test. Proizvodnja IL-2 je merena kao broj signala AlphaLISA (Perkin Eimer) koristeći čitač ploča Envision. Ljudska krv je dobijena od zdravog dobrovoljca preko ustanove Stanford Blood Center. Krv je prikupljena venepunkcijom u epruvete sa natrijum heparinom. Krv je raslojena preko Ficoll-Histopaque u konusnoj epruveti od 50 ml i centrifugirana na 2000 o/min tokom 20 min na sobnoj temperaturi. Mononuklearne ćelije su sakupijene u konusne epruvete od 50 ml, objedinjene i razblažene sa 1 PBS kako bi u svakoj epruveti konačna zapremina bila 50 ml. Ćelije su peietirane na 1500 o/min tokom 5 min, i ćelije su ispirane dva puta. Ćelije su prebrojane u uređaju Vi-Ceil koristeći tripan plavu, da bi se odredio broj ćelija i vijabilnost, PBMC su zatim ponovo suspendovane u RPM11640 sa 10% fetalnog goveđeg seruma u koncentraciji od 1 × 106 ćelija/ml.

Polistirenska ploča sa 96 bunarčića je premazana sa 2,5 μg/ml anti-CD3 u PBS-u preko noći na 4 °C, Bunarčići u prvoj koloni su premazani samo PBS-om kao nestimulisane kontrole. Test jedinjenja su rastvorena u koncentraciji od 10 mM u 100% DMSO t napravljena su serijska razblaženja 1:3 jedinjenja u DMSO-u. Jedinjenja su dodatno razblažena u RPMI sa 10% fetalnog goveđeg seruma kako bi konačni DMSO iznosio 0,2% na polipropilenskoj ploči sa 96 bunarčića. Da bi se PBMC tretirale jedinjenjima, 100 ul 1 × 105 ćelija je kultivisano na polipropitenskoj ploči sa 96 bunarčića. Zatim je 8 ul svakog razblaženog jedinjenja dodato u odgovarajuće bunarčiće u duplikatu, i 8 ul medijuma sa 2,5% DMSO je dodato u kontrolne bunarčiće. Ploče su inkubirane na 37 °C u inkubatoru tokom 30 min. Ploče premazane sa anti-CD3 su isprane PBS-om dva puta.92 ul medijuma koji sadrži 1 ug/ml anti-CD28 dodato je u sve bunarčiće osim nestimulisanih kontrola. U nestimulisane bunarčiće je dodato 92 ul medijuma.

Ploče su preko noći inkubirane u inkubatoru na 37 °C, 5% СО2.

2

Sledećeg dana, 150 ul supernatanta je uklonjeno iz svakog bunarčića za test AlphaLISA IL2. Prema protokolu proizvođača (Perkin Elmer), pripremijeni su 1 × pufer, standardi IL2 (10 konc.), 2,5 х akceptori smeša biotinilovanih perlica, 2 х perlice sa streptavidinskim donorom. U svaki bunarčić, dodato je 2,5 ul standarda ili uzoraka, a zatim je u svaki bunarčić dodato 10 ul 2,5 х perlica. Ploča je zatvorena aluminijumskim zaptivačem za ploče i inkubirana na sobnoj temperaturi na šejkeru tokom 1 h.12,5 ul streptavidinskih donorskih perlica je dodato svakom bunarčiću u tamnoj prostoriji. Ploča je zaptivena aluminijumskim zaptivačem za ploče i inkubirana na sobnoj temperaturi na šejkeru tokom 30 min. Ploča je očitana u čitaču ploča Envision.

IC50za svako jedinjenje je određen sa krive doznog odgovora od deset tačaka za sva jedinjenja, a svaka doza je ispitana u duplim bunarčićima . IC50predstavija koncentraciju jedinjenja koja pokazuje 50% inhibicije proizvodnje IL-2 kao odgovor na anti-CD3 i anti-CD28 stimulisane PBMC sa jedlnjenjem do 50% one u kontrolnim bunarčićima bez jedinjenja, i izračunato je pomoću softvera za prilagođavanje krive (Graphad Prism, San Diego, CA).

Primer 4

Obnavljanje enzimske aktivnosti nakon dijalize

Test dijalize je obavljen kako bi se utvrdilo da li se jedinjenje povratno ili nepovratno vezuje za imunoproteazom, što dovodi do povratne ili nepovratne inhibicije aktivnosti proteazoma. Jedinjenja koja pokazuju nepovratan način vezivanja neće pokazati značajan povratak enzimske aktivnosti nakon obimne dijalize, Parcijalno ili potpuno obnavljanje aktivnosti proteazoma u dužim periodima tokom dijalize ukazuje na sporu kinetiku povratne reakcije usled formiranja reverzibilne kovalentne veze. Za jedinjenja sa brzom reverzibilnošću, trebalo bi da se primećuje potpuno obnavljanje aktivnost proteazoma nakon dijalize.

Rastvor koji sadrži imunoproteazom je inkubiran sa ovde opisanim jedinjenjem (test jedinjenje) ili (S)-4-metil-N-((S)-1-(((S)-4-metil-1-((R)-2-metiloksiran-2-il)-1-oksopentan-2-il)amino)-1-okso-3-fenilpropan-2-il)-2-((S)-2-(2-

2

morfolino-acetamido)-4-fennbutanamido)-pentanamidom (referentno jedinjenje), ireverzibilnim kovalentnim inhibitorom imunoproteazoma koji cilja katalitički treonin podjedinica imunoproteazoma (vidi Kuhn, D. J., etal.2007. Potent activity of carfilzomib, a novel, irreversible inhibitor of the ubiquitin-proteasome pathway, against preclinical models of multiple myeloma. Blood, 110(9), 3281- 3290). Nakon predinkubacije, rastvor koji sadrži imunoproteazom i test jedinjenje ili referentno jedinjenje se dijalizira na sobnoj temperaturi u puferu od 50 mm Hepes pH 7,5, 0,1% albumina goveđeg seruma, 5 mM magnezijum hlorida, 1 mM ditiotreitola i 0,01% Triton Х-100 tokom 1 dana, 2 dana, i 3 dana, uz zamenu pufera za dijalizu dva puta dnevno. Nakon dijalize, enzimska aktivnost je merena pomoću testa za aktivnost proteazoma na bazi uređaja Caltper (Caltper Life Sciences, Hopkinton, MA). Nivo aktivnosti rastvora sa testiranim ili referentnim jedinjenjem upoređuje se sa kontrolnim uzorcima (tj. rastvorom proteazoma bez inhibitora) koji su takođe dijalizirani tokom 1 dana, 2 dana i 3 dana, uz zamenu pufera za dijalizu dva puta dnevno.

Primer 5

Trajnost vezivanja u ćelijama

Trajnost vezivanja inhibitora proteazoma je ocenjena u ćelijama pomoću testova ispiranja i kompleta reagensa Proteasome-Glo™. THP-1 ćelije, HT-29 ćelije ili PBMC su inkubirane sa serijom 8-strukih razblaženja inhibitora tokom 2 sata. Nakon 2 sata inkubacije, ćelije su isprane uz 3 navrata centrifugiranja, a zatim ponovo suspendovane u medijumu za uzgajanje. Nakon ispiranja inhibitora, ćelije su vraćene u kulturu na 30 min, 4 sata ili 18 sati. Ćelije su zatim prenete na bele ploče sa 384, i 20 ul reagensa Proteasome-Glo™ je dodato u svaki bunarčić tokom 10 min. Ploče su zatim očitane na čitaču ploča Analyst HT koristeći luminescentni režim. Procenat inhibicije aktivnosti je predstavljen kao funkcija log koncentracije jedinjenja. Zatim je izračunat IC50za svako jedinjenje koristeći softver Prism kompanije GraphPad.

2

Primer 6

Biohemijska trajnost vezivanja

Trajnost vezivanja inhibitora proteazoma je ocenjena u ćelijama koristeći prečišćeni konstitutivni i imuni proteazom i test zauzetosti aktivnog mesta na bazi ELISA testa koji se zove Pro-CISE, Ovde se popunjenost test jedinjenja u okviru aktivnog mesta meri u zavisnosti od vremena, blokiranjem vezivanja sonde velikog afiniteta prema proteazomu. Pufer od 20 mM Tris-HCI pH 8, 0,5 mM EDTA, 0,03% SDS je korišćen za početne korake, 200 nM test jedinjenja je inkubirano sa 60 nM proteazoma tokom 1 h na sobnoj temperaturi kako bi se olakšalo vezivanje jedinjenja. Smeša je zatim razblažena 50 puta, i dodata je visoka koncentracija od 5 um biotintilovane sonde za aktivno vezivanje proteazoma (PABP) (vidi Kirk et al. Meth Mol Biol 1172:114 (2014)) u terminima 1, 3, 6, i 24 h nakon razblaživanja. Sonda će se nepovratno vezivati za bilo koje mesto proteazoma koje postane dostupno nakon disocijacije test molekula, čime se osigurava očitavanje trajnosti test jedinjenja. Za korake ELISA testa u ovom postupku koristi se pufer koji sadrži fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom, 1% albumin goveđeg seruma, 0,1% Tween-20. Streptavidinom premazane ELISA ploče su prethodno blokirane ELISA puferom, pufer je uklonjen, i dodato je sledeće: 20 ul ELISA pufera, 70 ul 8 M gvanidin HCI u 20 mM Tris HCI pH 8,0 sa 0,5 mm EDTA, 110 u( uzoraka proteazoma tretiranih pomoću PABP. Smeša je inkubirana tokom 1 h na sobnoj temperaturi, Ploče su isprane, inkubirane sa imunološkim ili konstitutivnim primarnim antitelima selektivnim za podjedinice preko noći na 4 st. C, isprane, inkubirane sa sekundarnim antitelom na sobnoj temperaturi tokom 2 h, isprane i detektovane pomoću rastvora iz kompleta SuperSignal ELISA Pico a luminescencija je detektovana na uređaju Perkin Elmer Envision. % popunjenosti u svakom trenutku određen je normalizacijom na uslove bez test jedinjenja (maksimalni signal) ili bez proteazoma (minimalni signal) i poluživot za disocijaciju jedinjenja (t1/2) određen je postavljanjem toka vremena na eksponencijalno raspadanje u jednoj fazi.

2

�

�

21

Prethodna otkrića su u izvesnoj meri detaljno opisana putem ilustracija i primera, zarad jasnoće i razumevanja, Stručnjaku za ovu oblast biće očigledno da se promene i modifikacije mogu vršiti u okviru priloženih zahteva. Stoga, treba razumeti da prethodni opis predstavlja ilustraciju a ne ograničenje.

2 2

Claims (15)

1. Z i 2<1>su nezavisno kovalentna vezat–alkil-, -alkil-O-, -alkil-N(R)-, ili -alkil-O-alkil-, uz uslov da je Z povezan sa prstenom A na atomu ugljenika koji je susedan atomu azota u prstenu; prsten A sa prikazanim atomom azota u prstenu je opciono supstituisani zasićeni mono- ili multiciklični 4 do 10-člani heterociklil; prsten J sa atomom azota u prstenu i prikazanim Y<1>atomom u prstenu je zasićeni 4 do 10-člani heterociklil; Y<1>je C ili N; Z<2>je kovalentna veza ili N(R), uz uslov da, kada je Y<1>u prstenu J azot, onda je Z<2>kovalentna veza; svaki R je nezavisno vodonik ili alkil; 2 Q је –С(=O)- ili -S(=O)2-; R<8a>je vodonik, halogen ili cijano; R<8b>je vodonik, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani cikioalkil, opciono supstituisani heteroarif ili opciono supstituisani heterocikfil; ili R<8a>i R<8b>zajedno grade vezu; i R<8c>je vodonik ili opciono supstituisani alkil; R<b1>je opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani cikioatkil ili opciono supstituisani heterociklil; i R<b2>i R<b3>su nezavisno vodonik ili opciono supstituisani alkil; ili R<b2>i R<b3>zajedno sa atomom bora za koji je pokazano da su vezani grade ciklični boronski estar; ili jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od: ((R)-1-(3-(((R)-1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline; ((1R)-1 -(3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline; i ((1R)-1 -(3-(1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)propanamido)-2-feniletil)boronske kiseline; njegov pojedinačni E ili Z izomer, i/ili farmaceutski prihvatljtva so bilo kog od prethodnih jedinjenja.
2. 2. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time što: W je -O-P-Q-C(R<8a>)=C(R<8b>)(R<8c>); prsten А sa prikazanim atomom azota u prstenu je opciono supstituisani zasićeni mono- ili multiciklični 4 do 10-člani heterociklil; Q je –C(=O)-; R<8a>je vodonik, halogen ils cijano; R<8b>je vodonik; alkil koji je opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od -N(alkil)(haloalkil), -N(alkil)2, i opciono supstituisani heterociklil; i heterociklil koji je opciono supstitulsan sa 1-2 supstituenta odabrana od halo, alkil, alkoksi, haloalkil, cijano i -S(=O)2-alkil; ili R<8a>j R<8b>zajedno grade vezu; i R<8c>je vodonik ili alkil; R<b1>je alkil opciono supstituisan sa 1-2 supstituenta odabrana od arila i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, alkila, aikoksi, haloalkila, cijano i -S(=0)2-alkil; i R<b2>i R<b3>su vodonik 3. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od zahteva 1-2, naznačeno time što: navedeni -alkil-N(R)- iz P je:
3. 2
4. �
5. 5. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 4, naznačeno time što Z iz P je -alkil-O-alkil- ili -alkil-; poželjno, Z iz P je -(CH2)1-4-O-(CH2)1-4-; ili, poželjno, Z iz P je -(CH2)1-4-; ili, poželjno, Z iz P je –(CH2)2-O-(CH2)2: ili, poželjno, Z iz P je -(СH2)2-.
6. 6. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od zahteva 1-5, naznačeno time što Z iz P je -alkil-; poželjno, Z iz P je - (CH2)-.
7. 7. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od zahteva 1-6, naznačeno time što Q je -C(=O)-, 8. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od zahteva 1-7, naznačeno time što R<8a>je vodonik ili cijano; navedeni opciono supstituisani alkil iz R<8b>je izabran od: 2
8. �
9. �
10. 10. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od zahteva 1-9, naznačeno time što R<b1>je opciono supstituisani alkil, naznačeno time što opcioni supstituenti su 1-2 supstituenta odabrana od arila i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, alkila, alkoksi, haloalkil, cijano i -S(=O)2-alkil; poželjno, R<b1>je nesupstituisani alkil ili supstituisani alkil formuie -(CH2)1-2-R", naznačeno time što R" je aril ili heteroarii, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1-3 supstituenta nezavisno odabrana od hato, alkil alkoksi, haloatkil, cijano i -S(=O)2-alkil; ili poželjno R<b1>je odabran od -СН2СН(СНз)2, -СН2С(СНз)з, -СН2-fenil, -CH2CH2-fenil, -СН2-tolil, -СН2-metoksifenil, -CH2-hlorfenil, -CH2-fIuorfenil, -CH2-trifluormetilfenil, -СH2-benzofuranil, -CH2-naftil, -CH2-cijanofenil, -CH2-difluorfenil i -CH2-fenil-S(=O)2-CH3.
11. 11. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kog od zahteva 1-10, naznačeno time što R<b2>i R<b3>su H.
12. 12. Jedinjenje i/ili farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time što jedinjenje je odabrano od: ((R)-1 –(((((R)-1 -(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1 «(({(R)-1 -(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1-(((((R)-1-akriloilpiperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1-(((((S)-1-((E)-2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1-(((((R)-1-(2-cijano-4,4-dimetilpent-2-enoil)pirolidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1-(((((S)-1-akriloilpiperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1 -(((((S)-1-(2-cijano-4-metilpent-2-enoil)pirolidin-2-ii)metoksi)karbonil)amino)-2-feniletil)boronske kiseline; ((R)-1 -(((((S)-1 -{2-cijano-4-metilpent-2-enoil)piperidin-2-il)metoksi)karbonil)amino)-2-fenifetil)boronske kiseline; 2

    21

    22

    �

    ��

    �

    �

    �

    �

    �
13. 13. Farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-12 i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljivi ekscipijens.
14. 14. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-12 i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u inhibiciji velike multifunkcionalne proteaze 2 (LMP2) i/ili velike multifunkcionalne proteaze 7 (LMP7).
15. 15. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-12 i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju bolesti odabrane od autoimunskog poremećaja, inflamatornog poremećaja i hematološkog poremećaja, poželjno, bolest je odabrana od lupusa, reumatoidnog artritisa, skleroderme, ankilozirajućeg spondilitisa, Dišenove mišićne distrofije (DMD), Bekerove mišićne distrofije (BMD), idiopatskih inflamatornih miopatija (IIМ), polimiozitisa, sporadičnog miozitisa sa inkluzionim telima, dermatomiozitisa, imuno-posredovanih nekrotizirajućih miopatija (IMNM), psorijaze, multiple skleroze, inflamatorne bolesti creva, Behčetove bolesti, ulceroznog kolitisa, Kronove bolesti, Šegrenovog sindroma, bronhitisa, konjuktivitisa, pankreatitisa, holecistitisa, bronhiektazije, stenoze aortnog zaliska, restenoze, fibroze, infekcije, ishemije, kardiovaskularne bolesti, hepatitisa, ciroze, steatohepatitisa, hronične inflamacije jetre, Alchajmerove bolesti (AB), amiotrofične lateralne skleroze (ALS), Hantingtonove bolesti, miozitisa sa telima, miofibrilarne miopatije, bolesti kalem protiv domaćina (GVHD) i multiplog mijeloma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1