[go: up one dir, main page]

RS60237B1 - Prolekovi jak inhibitornih jedinjenja za lečenje gastorintestinalne inflamatorne bolesti - Google Patents

Prolekovi jak inhibitornih jedinjenja za lečenje gastorintestinalne inflamatorne bolesti

Info

Publication number
RS60237B1
RS60237B1 RS20200508A RSP20200508A RS60237B1 RS 60237 B1 RS60237 B1 RS 60237B1 RS 20200508 A RS20200508 A RS 20200508A RS P20200508 A RSP20200508 A RS P20200508A RS 60237 B1 RS60237 B1 RS 60237B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
methyl
pharmaceutically acceptable
formula
tofacitinib
Prior art date
Application number
RS20200508A
Other languages
English (en)
Inventor
Ryan Hudson
Daniel D Long
Donna A A Wilton
Mandy Loo
Patrick J Brassil
Original Assignee
Theravance Biopharma R&D Ip Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Theravance Biopharma R&D Ip Llc filed Critical Theravance Biopharma R&D Ip Llc
Publication of RS60237B1 publication Critical patent/RS60237B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C12P17/165—Heterorings having nitrogen atoms as the only ring heteroatoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis pronalaska
STANJE TEHNIKE
Oblast tehnike na koju se pronalazak odnosi
[0001] Pronalazak je usmeren na jedinjenja dizajnirana za cilјanu isporuku JAK inhibitora do gastrointestinalnog trakta. Pronalazak je takođe usmeren na farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja, kao i na postupke i intermedijere korisne za pripremu takvih jedinjenja.
Poznato stanje tehnike
[0002] Inflamatorna bolest creva, koja prevashodno obuhvata ulcerozni kolitis i Kronovu bolest, podrazumeva hroničnu inflamaciju celog ili dela gastrointestinalnog trakta. Ulcerozni kolitis karakterišu inflamacija i ulceracija služokožnog sloja rektuma i debelog creva, dok Kronova bolest većinom pogađa ileum, mada se može javiti bilo gde duž crevnog trakta. Uobičajeni simptomi uključuju dijareju, krvave stolice i bol u stomaku. Klinički tok ulceroznog kolitisa nije kontinuiran i obeležen je naizmeničnim periodima pogoršanja i remisije. Deluje da je učestalost veća u razvijenim nego u zemlјama u razvoju. Procenjuje se da 1,3 miliona lјudi u glavnim industrijski razvijenim zemlјama boluje od ulceroznog kolitisa, a očekuje se i da će se njihov broj povećavati zajedno sa rastom populacije. Pacijenti sa ulceroznim kolitisom su sa povećanim rizikom razvoja kolorektalnog kancera (npr. Danese i saradnici, N Engl J Med, 2011, 365, 1713-1725). Dodatno, procenjuje se da milion lјudi u industrijski razvijenim zemlјama boluje od Kronove bolesti.
[0003] Iako postoje razne terapijske mogućnosti za pospešivanje i održavanje remisije ulceroznog kolitisa (UC) kod pacijenata, nijedna nije idealna. Tretmani srodni sulfazinu su često efektivni kod blagog UC, ali u mnogo manjem stepenu kod umerenog do teškog oboljenja. Kortikosteroidi se često koriste da bi se obezbedila brza indukcija remisije kod pacijenata sa umerenim do teškim UC. Međutim, hronična upotreba steroida za održavanje remisije nije preporučljiva zbog njihove povezanosti sa dugoročnim štetnim efektima (npr. sa osteoporozom i prelomima, infekcijama, kataraktama, sporijim zarastanjem rana i sa supresijom proizvodnje hormona nadbubrežne žlezde). Sistemske imunosupresive poput azatioprina, ciklosporina i metotreksata takođe karakteriše spor početak dejstva i umerena efikasnost kod pacijenata sa umerenim do teškim UC, a dugotrajna upotreba može biti problematična i usled posledica dugotrajne sistemske imunosupresije (npr. zbog povećanja rizika od infekcija i limfoma). Anti-TNFa anitela (npr. infliksimab i adalimumab), iako su skupa i zahtevaju subkutanu ili intravensku primenu, efikasna su kod približno 60 do 70% pacijenata sa umerenom do teškim UC. Ipak, do jedne trećine pacijenata ne reaguje adekvatno na ovu terapiju, dok trećina pacijenata koji u počeku odgovaraju na terapiju, tokom nekoliko nedelјa razvija toleranciju (Allez i saradnici, J Crohn's Colitis, 2010, 4, 355-366; Rutgeerts i saradnici, N Engl J Med, 2005, 353, 2462-2476). Najnovija odobrena terapija za UC, vedolizumab, anti-α4β7integrinsko antitelo, efikasna je kod pacijenata sa umerenim do teškim UC iako je njegov parenteralni put primene isprod optimalnog, a posledice dugotrajne imunosupresije putem ovog mehanizma tek treba da se utvrde. Uprkos postojećim terapijskim mogućnostima, kod oko 10 do 20% UC pacijenata je i dalje neophodna kolektomija u vremenskom periodu od 10 godina od dijagnoze (Targownik i saradnici, Am J Gastroenterol, 2012, 107, 1228-1235). Jasno je tako da ostaje nezadovoljena medicinska potreba za efektivnom terapijom koja bi pospešila i održala remisiju umerenog do teškog UC bez razmatranja rizika bezbednosti koji je rezultat hronične, sistemske imunosupresije.
[0004] Iako mehanizam u osnovi ulceroznog kolitisa nije u potpunosti razjašnjen, veruje se da faktori životne sredine kod genetički podložnih osoba izazivaju neprimerenu (prekomernu) reakciju imunog sistema na crevne mikrobiote, što rezultuje inflamacijom debelog creva, oštećenjem tkiva i pratećim simptomima koji su karakteristični za oboljenje.
[0005] Iako je precizna patogeneza UC nejasna, očigledno je da su proinflamatorni citokini sa ključnom ulogom u imunološkom odgovoru (Strober i saradnici, Gastroenterol, 2011, 140, 1756-1767). Mnogi od proinflamatornih citokina koji su najčešće povišeni u UC (npr. IL-4, IL-6, IL-13, IL-15, IL-23, IL-24, IFNγ i leptin) oslanjaju se na JAK familiju tirozinskih kinaza (tj. JAK1, JAK2, JAK3 i Tyk2) za prenos signala. Vezanje liganda za citokinski receptor pokreće autofosforilaciju njegovog pridruženog JAK, što zauzvrat rezultuje fosforilacijom signalnog prenosnog molekula i aktivatora transdukcije (STAT) proteina. Različiti STAT proteini obrazuju hetero- ili homodimere i pospešuju transkripciju njihovih ciljnih gena u ćelijskom jedru da bi se regulisale funkcije poput ćelijskog rasta, diferencijacije i smrti (Clark i saradnici, J Med Chem, 2014, 57, 5023-5038).
[0006] Inhibicija familije JAK enzima može inhibirati signalizaciju mnogih klјučnih proinflamatornih citokina. Tako će JAK inhibitori verovatno biti korisni u lečenju ulceroznog kolitisa i drugih inflamatornih oboljenja poput Kronove bolesti, alergijskog rinitisa, astme i hronične opstruktivne bolesti pluća (HOBP). Međutim, usled modulišućeg dejstva JAK/STAT puta na imunski sistem, sistemska izloženost JAK inhibitorima može biti sa štetnim sistemskim imunosupresivnim efektom.
[0007] Tofacitinib citrat (Xelјanz®), oralni, sistemski dostupan pan-JAK inhibitor, odobren je u Sjedinjenim Državama u novembru 2012. godine za lečenje odraslih osoba sa umereno do ozbilјno aktivnim reumatoidnim artritisom koji nisu adekvatno odgovarali na, ili koji su bili netolerantni na, metotreksat. Iako je u kliničkim studijama pokazao superiornu efikasnost u višim dozama, tofacitinib je odobren samo u dozi od 5 mg dva puta dnevno (BID), na osnovu sistemskih štetnih događaja koji su ograničavali dozu (npr. zbog povišenog holesterola, povećane stope oportunističkih infekcija, neutropenije, limfocitopenije, limfoma i solidnih tumora). Lek u Sjedinjenim Državama sadrži uokvireno upozorenje sa detalјnim objašnjenjem bezbedonosnog rizika,a odobrenje je odbijeno u Evorpi na osnovu „značajnih i nerazjašnjenih mera opreza“ oko sveukupnog profila bezbednosti. Tofacitinib je u aktivnom razvoju za UC, pošto je pokazan klinički odgovor u Fazi 2 (8 nedelja) kliničke studije za UC (Sandborn i saradnici, N Engl J Med, 2011, 365, 1713-1725), posebno u dozi od 10 mg i 15 mg BID (pogledati takođe Panes i saradnici, BMC Gastroenterol, 2015, 15, 14), dozama koje trenutno nisu odobrene za bilo kakve indikacije. Sponzor je takođe prijavio da je veći deo pacijenata koji su primali 10 mg tofacitiniba BID u poređenju sa placebom bio u remisiji, u Fazi 3 (8 nedelja) indukcione studije za UC, kao i kod pacijenata koji su primali trfacitinb u dozi od 5 mg i 10 mg BID u Fazi 3 ( 52 nedelјe) studije za održavanje UC.
[0008] Za lečenje ulceroznog kolitisa i drugih gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja, bilo bi poželјno da se obezbedi jedinjenje kojim bi se prilikom oralne primene postigla dovoljno visoka izloženost tofacitinibu u gastrointestinalnom traktu i da bi se optimizovala klinička efikasnost uz izbegavanje sistemskog izlaganja koje bi bilo ograničavajuće za dozu.
KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0009] Prema jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje nove prolekove JAK inhibitora tofacitiniba koji sadrže glukuronid. Takvi prolekovi koriste prednost prisustva mikrobioma u crevima koji sadrži ili proizvodi obilјe β-glukuronidaze koja selektivno cepa ostatak proleka koji sadrži glukuronid, da bi se iniciralo oslobađanje tofacitinaba u gastrointestinalni trakt, naročito u debelom crevu.
[0010] Iznenađujuće, prolekovi koji sadrže glukuronid predmetnog pronalaska su dovolјno stabilni da budu izolovani, formulisani u farmaceutsku kompoziciju i primenjeni pacijentu kome je lečenje potrebno. Ipak, oni su i dovoljno labilni tako da mogu biti podvrgnuti cepanju od strane βglukuronidaze i dalje razloženi da bi efikasno oslobodili tofacitinib. Nasuprot navedenom, kada je ostatak proleka koji sadrži glukuronid koji se koristi u predmetnom pronalasku, bio povezan sa određenim drugim lekovima koji su poznati ili potencijalno korisni za lečenje UC, lekovi nisu bili oslobođeni prilikom kontakta sa β-glukuronidazom (kao što je ovde detalјnije opisano u tekstu koji sledi). Shodno tome, prolekovi koji sadrže glukuronid predmetnog pronalaska su naročito korisni za isporuku i oslobađanje tofacitiniba.
[0011] Prema jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I):
gde
n je 0, 1 ili 2;
R<1>je izabran od vodonika, C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halo, cijano, hidroksi i triflurometila; svaki R<2>, kada je prisutan, nezavisno je izabran od C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halo, cijano, hidroksi i triflurometil grupe;
R<3>je vodonik, metil ili etil;
R<4>je vodonik, metil ili etil;
ili se odnosi na njegovu farmaceutski prihvaljivu so.
[0012] Prema drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (II):
gde
R<1>je izabran od vodonika, C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halo, cijano, hidroksi i triflurometil grupe;
ili na njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0013] U jednom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (II) gde je R<1>izabran od vodonika, metil, metoksi, amino, nitro i hloro grupe, ili njegovu farmaceutski prihvatlјivu so.
[0014] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule 1:
ili na njegovu farmaceutski prihvatlјivu so.
[0015] Jedinjenje formule 1 je ispoljilo nisku oralnu bioraspoloživost i robusno oslobađanje tofacitiniba (2)
in vivo nakon oralne primene u pretkliničkim vrstama, što je rezultovalo značajnim povećanjem odnosa izloženosti u debelom crevu i izloženosti u plazmi prema odnosu koji je dobijen prilikom oralne primene samo tofacitiniba.
[0016] Prijavljeno je takođe jedinjenje formule 1 koji proizvodi tofacitinib ili njegovu so, nakon kontakta sa β-glukuronidazom.
[0017] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koji sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač i jedinjenje formule (I), (II) ili 1, ili na njegovu farmaceutski prihvatlјivu so; ili na bilo koji specifičan primer izvođenja iste koji je ovde opisan.
[0018] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), (II) ili 1, ili na njegovu farmaceutski prihvatlјivu so; ili na bilo koji od njihovih specifičnih primera izvođenja koje su ovde opisani, za upotrebu u postupku lečenja gastrointestinalne inflamatorne bolesti kod sisara, pri čemu postupak obuhvata primenu sisaru farmaceutske kompozicije koja sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač i jedinjenje formule (I), (II) ili 1, ili njegovu farmaceutski prihvatlјivu so; ili na bilo koji od primera izvođenja iste koji su ovde opisani.
[0019] U jednom primeru izvođenja, gastrointestinalna inflamatorna bolest je ulcerozni kolitis. U jednom drugom primeru izvođenja, gastrointestinalna inflamatorna bolest je Kronova bolest. I u još jednom primeru izvođenja, gastrointestinalna inflamatorna bolest je kolitis povezan sa terapijom inhibitorima imunskih kontrolnih tačaka.
[0020] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na prolek tofacitiniba koji sadrži glukuronid i predstavlja prolek koji se cepa dejstvom β-glukuronidaze u gastrointestinalnom traktu da bi se oslobodio tofacitinib za upotrebu u postupku isporuke tofacitiniba u gastrointestinalni trakt sisara, naročito u debelo crevo, pri čemu postupak obuhvata oralnu primenu proleka tofacitiniba koji sadrži glukuronid sisaru, proleka koji se cepa β-glukuronidazom u gastrointestinalnom traktu da bi se oslobodio tofacitinib.
[0021] U odvojenim i jasno različitim primerima izvođenja, prolek tofacitiniba koji sadrži glukuronid je jedinjenje formule (I), (II) ili 1, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so; ili bilo koji od njihovih primera koji su ovde opisani.
[0022] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na postupak za pripremu jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli, pri čemu postupak obuhvata uklanjanje zaštitne grupe sa jedinjenja formule (I-A):
ili njegove soli; gde su R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i n kao što je ovde definisano; svaki PG<a>je nezavisno hidroksilna zaštitna grupa; i PG<b>je karboksilna zaštitna grupa; da bi se obezbedilo jedinjenja formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
[0023] U jednom primeru izvođenja ovog postupka, R<1>je nitro; R<3>i R<4>su metil; svaki PG<a>je acetil; PG<b>je metil; i n je 0.
[0024] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I-A), ili na njegovu so; ili na bilo koji od njihovih primera izvođenja koji su ovde opisani.
[0025] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na postupak za pripremu jedinjenja formule 1, ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli, pri čemu postupak obuhvata:
(a) reagovanje jedinjenja formule 12’
ili njegove soli; gde je svaki PG<a>nezavisno hidroksilna zaštitna grupa, sa jedinjenjem formule 13
da bi se dobilo jedinjenje formule 14':
i
(b) uklanjanje zaštitne grupe sa jedinjenja formule 14' da bi se obezbedilo jedinjenje formule 1 ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
[0026] U jednom primeru izvođenja ovog postupka, PG<a>je acetil.
[0027] Prema odvojenim i jasno različitim aspektima, predmetni pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje formule 13, ili njegovu so; i jedinjenje formule 14' ili njegovu so; ili na bilo koji od njihovih primera izvođenja koji su ovde opisani.
[0028] Prema odvojenim i jasno različitim aspektima, predmetni pronalazak se takođe odnosi na druge sintetičke procese i intermedijare koji su ovde opisani, a koji su korisni za pripremu jedinjenja pronalaska.
[0029] Prema odvojenim i jasno različitim aspektima, predmetni pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje formule (I), (II) ili 1, ili na njegovu farmaceutski prihvatlјivu so; ili na bilo koji od njihovih primera izvođenja koji su ovde opisani; za upotrebu u medicinskoj terapiji; ili za upotrebu u proizvodnji medikamenta ili formulacije. U jednom primeru izvođenja, medikament ili formulacija je za lečenje gastrointestinalne inflamatorne bolesti kod sisara.
[0030] Ostali aspetki i primeri izvođenja ovog pronalaska su ovde opisani.
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
[0031] Slika 1 ilustruje koncentraciju aktivnih metabolite, tofacitiniba i jedinjenja C-1M i C-2M, tim redom, u funkciji vremena, kao rezultat inkubacije jedinjenja pronalaska (jedinjenja 1) i jedinjenja za poređenje C-1 i C-2 sa sadržajem debelog creva pacova.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0032] Između ostalih aspekata, pronalazak obezbeđuje glukuronidne prolekove tofacitiniba, inhibitora JAK kinaze, njegove farmaceutski prihvatlјive soli i njegove intermedijare za pripremu.
[0033] Hemijske strukture su ovde imenovane shodno IUPAC konvencijama koje su implementirane u ChemDraw kompjuterski program (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA). Prema konvenciji, jedinjenje formule 1 može biti identifikovano kao:
(2S,3S,4S,SR,6S)-6-(4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina,
dok tofacitinib (2) može biti identifikovan kao 3-((3R,4R)-4-metil-3-(metil(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)-3-oksopropan-nitril.
[0034] Jedinjenja pronalaska sadrže više hiralnih centara. Prikaz ili imenovanje određenog stereoizomera označava da je naznačeni stereocentar sa odgovarajućom stereohemijom, a podrazumeva se da minorne količine drugih stereoizomera mogu takođe biti prisutne ukoliko nije drugačije naznačeno, pod uslovom da upotreba prikazanog ili imenovanog jedinjenja nije eliminisana prisustvom drugog stereoizomera.
Definicije
[0035] Prilikom opisivanja ovog pronalaska, uklјučujući njegove razne aspekte i primere izvođenja, termini koji slede su sa sledećim značenjima, ukoliko nije drugačije naznačeno.
[0036] Jednina termina obuhvata i odgovarajuću množinu termina, ukoliko kontekst upotrebe jasno ne uslovljava da je drugačije.
[0037] Termin "alkil" označava monovalentnu zasićenu uglјovodoničnu grupu koja može biti prava ili razgranata ili njihova kombinacija. Ukoliko nije drugačije definisano, takve alkilne grupe obično sadrže od 1 do oko 10 atoma uglјenika. Reprezentativne alkilne grupe obuhvataju, u vidu primera, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, terc-butil, n-pentil, n-heksil, 2,2-dimetilpropil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, 2-etilbutil, 2,2-dimetilpentil, 2-propilpentil grupu i slične.
[0038] Kada je za određeni termin predviđen određeni broj atoma uglјenika, broj atoma uglјenika je prikazan ispred termina. Na primer, termin alkil" označava alkil grupu koja sadrži od 1 do 3 atoma uglјenika, pri čemu su atomi uglјenika u bilo kojoj konfiguraciji koja je hemijski prihvatljiva, uklјučujući prave ili razgranate konfiguracije.
[0039] Termin "alkoksi" označava monovalentnu grupu -O-alkil, gde je alkil kao što je prethodno definisano. Reprezentativne alkoksi grupe obuhvataju, na primer, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi grupu i slične.
[0040] Termin "halo" označava fluoro, hloro, bromo ili jodo grupu.
[0041] Termin "terapijski efektivna količina" označava količinu koja je dovoljna da utiče na lečenje prilikom primene pacijentu kome je tretman potreban.
[0042] Termin "lečenje", kako se ovde upotrebljava, označava lečenje oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja (poput gastrointestinalne inflamatorne bolesti) kod pacijenta, kao što je sisar (naročito čovek), koji obuhvata jedno ili više sledećeg:
(a) prevenciju pojave oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja, tj. prevenciju ponovnog javljanja oboljenja ili medicinskog stanja ili profilaktički tretman pacijenta koji je sa predispozicijom da oboli od oboljenja ili medicinskog stanja;
(b) ublažavanje oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja, tj. elimisanje ili prouzrokovanje regresije oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja kod pacijenta, uklјučujući suzbijanje dejstva drugih terapijskih sredstava;
(c) supresiju oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja, tj. usporavanje ili zaustavlјanje razvoja oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja kod pacijenta; ili
(d) ublažavanje simptoma oboljenja, poremećaja ili medicinskog stanja kod pacijenta.
[0043] Termin "farmaceutski prihvatlјiva so" označava so koja je prihvatlјiva za primenu pacijentu ili sisaru, kao što je čovek (npr. soli karakteriše prihvaljiva bezbednosi kod sisara za dati dozni rezim). Reprezentativne farmaceutski prihvatlјive soli izvedene iz kiselina obuhvataju soli sirćetne, askorbinske, benzensulfonske, benzoeve, kamforsulfonske, limunske, etansulfonske, edisilne, fumarne, gentizične, glukonske, glukuronske, glutaminske, hipurne, bromovodonične, hlorovodonične, izetionične, mlečne, laktobionske, malonske, jabučne, bademove, metansulfonske, mucinske, naftalensulfonske, naftalen-1,5-disulfonske, naftalen-2,6-disulfonske, nikotinske, azotne, orotske, palmoinske, pantotenske, fosforne, ćilibarne, sumporne, vinske, p-toluensulfonske i ksinafoinske kiseline i sličnih.
[0044] Soli izvedene iz farmaceutski prihvatlјivih neorganskih baza obuhvataju soli amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, kalijuma, natrijuma i cinka i sličnih. Soli izvedene iz farmaceutski prihvatlјivih organskih baza obuhvataju soli arginina, holina, glukamina, lizina, benetamina, benzatina, betaina, 2-dimetilaminoetanola, 2-dietilaminoetanola, hidrabamina, morfolina, trometamina, dietanolamina, etanolamina, etilendiamina, trietanolamina, 1H-imidazola, piperazina i sličnih.
[0045] Termin "njegova so", kako se ovde upotrebljava, označava jonsko jedinjenje u kome je oblik jedinjenja formule (I) bilo anjon ili katjon jonskog jedinjenja. Na primer, anjon jonskog jedinjenja može biti karboksilatni anjon koji je deprotonovan oblik jedinjenja formule (I). Katjon može biti protonovan oblik jedinjenja formule (I), tj. oblik u kome je amino grupa bila protonovana kiselinom. So je obično farmaceutski prihvatlјiva so, iako navedeno nije neophodno za soli intermedijarnih jedinjenja za koje nije predviđena primena pacijentu.
[0046] Neutralna jedinjenja formule (I) mogu po izboru biti oblika cviterjona, pri čemu termin "cviterjon" označava neutralan molekul koji je i sa pozitivnim i sa negativnim električnim naelektrisanjima.
[0047] Termin "hidroksilna zaštitna grupa" označava zaštitnu grupu koja je pogodna za sprečavanje neželјenih reakcija na hidroksilnoj grupi. Reprezentativne hidroksilne zaštitne grupe obuhvataju, ali nisu ograničene na, alkil grupe poput metil, etil i terc-butil; alil grupe; acilne grupe, na primer alkanoilne grupe, kao što su acetil; arilmetil grupa, kao što je benzil (Bn), p-metoksibenzil (PMB), 9-fluorenilmetil (Fm) i difenilmetil (benzhidril, DPM); silil grupe, kao što su trimetilsilil (TMS) i tercbutildimetilsilil (TBS) grupe; i slične.
[0048] Termin "karboksilna zaštitna grupa" označava zaštitnu grupu koja je pogodna za sprečavanje neželјenih reakcija na karboksilnoj grupi. Reprezentativne karboksilne zaštitne grupe obuhvataju, ali nisu ograničene na, alkilne grupe, poput metil, etil, terc-butil grupe i sličnih; arilmetil grupe, kao što su benzil, 4-nitrobenzil, 4-metoksibenzil grupe i slične; tiolne grupe, kao što je -S-terc-butil grupa i slične; silil grupe, kao što su trimetilsilil, terc-butildimetilsilil grupa i slične; oksazolini; i slično.
[0049] Predviđeno je da su ostali termini koji su ovde upotrebljeni sa svojim uobičajenim značenjem koje se podrazumeva od strane prosečno iskusnih stručnjaka iz oblasti tehnike na koje se odnose.
Reprezentativne primeri izvođenja i subgenerička grupisanja
[0050] Predviđeno je da supstituenti i vrednosti koji slede obzebede reprezentativne primere raznih aspekata i primera izvođenja ovog pronalaska. Predviđeno je i da ove reprezentativne vrednosti dodatno definišu i ilustruju takve aspekte i primere izvođenja, kao i da ne isklјučuju druge primere izvođenja ili da ograničavaju obim ovog pronalaska.
[0051] U jednom primeru izvođenja, R<1>je vodonik, C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halogena, cijano, hidroksilna ili triflurometil grupa. U drugom primeru izvođenja, R<1>je vodonik, C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro ili hloro grupa. U sledećem primeru izvođenja, R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro grupa. U posebnom primeru izvođenja, R<1>je vodonik. U još jednom posebnom primeru izvođenja, R<1>je nitro.
[0052] U jednom primeru izvođenja, n je 0. U drugom primeru izvođenja, n je 1. U sledećem primeru izvođenja, n je 2.
[0053] Kada je n 1, u jednom primeru izvođenja, R<2>je C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halogena, cijano, hidroksilna ili triflurometilna grupa. U drugom primeru izvođenja, R<2>je C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro grupa. U sledećem primeru izvođenja, R<2>je metil, metoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro grupa. U posebnom primeru izvođenja, R<2>je fluoro grupa.
[0054] Kada je n 1, R<2>supstituent može biti na bilo kojoj raspoloživoj poziciji fenilnog prstena za koji je R<2>vezan. U jednom primeru izvođenja, R<2>je orto u odnosu na R<1>. U drugom primeru izvođenja, R<2>je meta u odnosu na R<1>. U drugom primeru izvođenja, R<2>je para u odnosu na R<1>.
[0055] Kada je n 2, u jednom primeru izvođenja, svaki R<2>je nezavisno C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halogena, cijano, hidroksilna ili triflurometilna grupa. U drugom primeru izvođenja, svaki R<2>je nezavisno C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro grupa. U sledećem primeru izvođenja, svaki R<2>je nezavisno metil, metoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro grupa. U posebnom primeru izvođenja, svaki R<2>je fluoro grupa.
[0056] Kada je n 2, R<2>supstituenti mogu biti na bilo kojoj raspoloživoj poziciji fenilnog prstena za koji je R<2>vezan. U jednom primeru izvođenja, R<2>supstituenti su orto i meta u odnosu na R<1>. U drugom primeru izvođenja, R<2>supstituenti su orto i para u odnosu na R<1>. U sledećem primeru izvođenja, R<2>supstituenti su meta i para u odnosu na R<1>.
[0057] U jednom primeru izvođenja, R<3>je vodonik. U drugom primeru izvođenja, R<3>je metil. U sledećem primeru izvođenja, R<3>je etil.
[0058] U jednom primeru izvođenja, R<4>je vodonik. U drugom primeru izvođenja, R<4>je metil. U sledećem primeru izvođenja, R<4>je etil.
[0059] U jednom primeru izvođenja, oba od R<3>i R<4>su metil. U drugom primeru izvođenja, jedan od R<3>i R<4>je vodonik, a drugi je metal grupa.
[0060] U jednom primeru izvođenja, n je 0; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<3>je metil; i R<4>je metil.
[0061] U drugom primeru izvođenja, n je 0; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<3>je vodonik; i R<4>je metil.
[0062] U sledećem primeru izvođenja, n je 0; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<3>je metil; i R<4>je vodonik.
[0063] U sledećem primeru izvođenja, n je 0; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<3>etil; i R<4>je etil.
[0064] U sledećem primeru izvođenja, n je 1; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<2>je metil, metoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro; R<3>je metil; i R<4>je metil.
[0065] U sledećem primeru izvođenja, n je 1; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<2>je metil, metoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro; R<3>je vodonik; i R<4>je metil.
[0066] U sledećem primeru izvođenja, n je 1; R<1>je vodonik, metil, metoksi, amino, nitro ili hloro; R<2>je metil, metoksi, amino, nitro, fluoro ili hloro; R<3>je metil; i R<4>je vodonik.
Sintetičke procedure
[0067] Jedinjenja formule (I) mogu biti pripremljena prema sintetičkom pristupu koji je detaljno opisan u priloženim primerima. Kao što je ilustrovano na Šemi 1, posebno za pripremu jedinjenja formule 1, klјučan korak sinteze je obrazovanje urea veze između tofacitiniba i zaštićenog oblika ostatka glukuronidnog proleka 12'. Na šemi 1, PG<a>predstavlјa hidroksilnu zaštitnu grupu, poželјno alil ili acetil, iako mogu biti upotrebljene i druge zaštitne grupe za hidroksilnu grupu uključujući sililnu zaštitnu grupu poput terc-butildimetilsililne.
Šema 1
[0068] Obrazovanje ove klјučne urea veze se inicijalno je bilo fokusirano na upotrebu tofacitiniba kao nukleofila; ipak, utvrđeno je da ovaj korak obrazovanja veze nije konzistentan, pošto reakcija tofacitiniba sa nizom različitih elektrofila dovodi do obrazovanja želјenog proizvoda samo sa niskim prinosima. Smatralo se stoga potrebnim da se uloge dva partnera zamene i da se derivat tofacitiniba učini elektrofilnim reaktivnim partnerom, kao i da ostatak glukuronidnog proleka bude nukleofil. Nakon ispitivanja mnogih reagensa; utvrđeno je da tofacitinib može biti derivatizovan i učinjen elektrofilnim kada se spoji sa reaktivnim para-nitrofenilnim ili pentafluorofenilnim ostatkom preko karbamatne veze. Na primer, para-nitrofenil hloroformat, bis(4-nitrofenil) karbonatni ili bis(pentafluorofenil) karbonatni reagensi su bili sposobni da postignu željenu ravnotežu i da budu dovoljno reaktivni tako da utiču na obrazovanje veze sa tofacitinibom, istovremeno obezbeđujući intermedijer koji nije bio toliko reaktivan da bi se razgradio pre reakcije sa glukuronidnom vrstom. Dobijenom zaštićenom intermedijeru 14' se u narednom koraku uklanja zaštitna grupa, na primer, kada je PG<a>acetatna grupa, sa litijum hidroksidom, da bi se obezbedilo jedinjenje formule 1.
[0069] Shodno navedenom, prema jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje postupak pripreme jedinjenja 1, postupak koji obuhvata (a) reagovanje zaštićenog ostatka glukuronidnog proleka 12' sa elektrofilnim derivatom tofacitiniba 13 da bi se obezbedilo jedinjenje 14', i (b) uklanjanje zaštitne grupe sa jedinjenja 14' da bi se obezbedilo jedinjenje formule 1. Prema sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje elektrofilno jedinjenje tofacitiniba 13.
[0070] Delovanje enzima β-glukuronidaze na prolekove pronalaska je ilustrovano za jedinjenje formule 1. Kao što je prikazano na Šemi 2, nakon delovanja enzima β-glukuronidaze na jedinjenje formule 1, tofacitinib se oslobađa procesom u više koraka:
Šema 2
[0071] U početnom koraku, enzim β-glukuronidaza cepa glikozidnu vezu jedinjenja formule 1, prouzrokujući oslobađanje glukuronske kiseline (a), kao i obrazovanje aglikonskog intermedijera (b).
Aglikon se spontano razgrađuje, pri čemu nastaje hinon metidna vrsta (c) koja može biti vezana vodom, dok tranzientna karbaminska kiselina gubi uglјen-dioksid da bi obezbedio diamin (d). Unutarmolekulska ciklizacija diamina vodi obrazovanju imidazolidinonskog derivata (e) i oslobađanju tofacitiniba.
[0072] Kao što je opisano ispod, u eksperimentalnom delu, prevođenje jedinjenja formule 1 u tofacitinib preko intermedijernih koraka ilustrovanih na Šemi 2 uočava se prilikom inkubacija sa prečišćenom β-glukuronidazom (Analiza 2) i sa sveže pripremlјenim homogenatom sadržaja debelog creva pacova (Analiza 3). U ovim drugonavedenim eksperimentima, koncentracije jedinjenja formule 1, aglikonskog intermedijera b, diaminskog intermedijera d i tofacitinib su praćene u funkciji vremena. Brz nestanak jedinjenja formule 1 je bio praćen brzim i prolaznim obrazovanjem aglikona b, kao i sporijom pojavom diamina d i konačnog aktivnog metabolite tofacitiniba koji su bitno uticali na brzinu reakcije.
[0073] Predmetni istraživači su utvrdili da je razgradnja jedinjenja glukuronidnog proleka u više koraka, koje polazi od enzimskog cepanja glikozidne veze sa bakterijskom β-glukuronidazom radi korisne isporuke željenog aktivnog ostatka direktno na mesto dejstva u debelom crevu, senzitivno zavisi od prirode veze i specifičnog aktivnog ostatka. Mezalamin, 5-aminosalicilna kiselina (5-ASA) (jedinjenje C-1M) je stariji agens koji se dugo koristi za lečenje blagog do umerenog ulceroznog kolitisa. Ipak, ne deluje da pristup sa predmetnim glukuronidnim prolekom može biti primenljiv za isporuku 5-ASA direktno u debelo crevo. Glukuronidni prolek 5-ASA (jedinjenje C-1)
je inkubiran sa homogenatom sadržaja debelog creva pacova u eksperimentu analognom onom koji je prethodno nazanačen. Iako su prolazni aglikon analogan aglikonu b na Šemi 2 i sporija pojava diamina analognog d bili uočeni na vremenskoj skali sličnoj onoj koja je uočena za jedinjenje formule 1, nisu pronađeni dokazi aktivnog metabolita 5-ASA.
[0074] Nedavna publikacija US2013/0109720 prijavljuje 2-(5-fluoro-4-metilpiridin-3-il)-5-(4-metil-6-(metilsulfonil) piridin-3-il)-1H-indol (jedinjenje C-2M) kao inhibitora oslobađanja kalcijuma/aktiviranih kanala za kalcijum (CRAC). Smatra se da su inhibitori CRAC takođe korisni za lečenje inflamatornih oboljenja. Međutim, ne deluje da pristup sa predmetnim glukuronidnim prolekom može biti primenljiv za ciljanu isporuku ovog CRAC inhibitora. Razlaganje proleka CRAC inhibitora C-2
takođe je ispitivano u homogenatu sadržaja debelog creva pacova sa rezultatima sličnim onima koji su dobijeni za jedinjenje C-1. Iako je uočano intermedijerno razlaganje proizvoda, nisu se mogli pronaći dokazi o oslobađanju aktivnog CRAC inhibitora C-2M.
[0075] Postojeći dokazi ukazuju da su prolekovi pronalaska jedinstveno pogodni za upotrebu prednosti mehanizma razlaganje iniciranog bakterijskom β-glukuronidazom rado oslobađanja tofacitiniba u debelom crevu.
Farmaceutske kompozicije
[0076] Jedinjenja pronalaska i njihove farmaceutski prihvatlјive soli se obično upotrebljavaju u obliku farmaceutske kompozicije ili formulacije. Prema tome, prema jednom od aspekata njihovih kompozicija, pronalazak je usmeren na farmaceutsku kompoziciju koji sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač ili ekscipijens i jedinjenje formule (I), (II) ili 1, ili njegovu farmaceutski prihvatlјivu so. Po izboru, takve farmaceutske kompozicije mogu sadržavati i druga terapisjka i/ili sredstva za forumisanje, ukoliko je to poželјno.
[0077] Farmaceutske kompozicije pronalaska obično sadrže terapijski efektivnu količinu jedinjenja predmetnog pronalaska. Iskusni stručnjaci će prepoznati, međutim, da farmaceutska kompozicija može sadržavati više od terapijski efektivne količine, tj. biti kompozicija sa prekomernom masom, ili da može sadržavati manje od terapijski efektivne količine, tj. da pojedinačne dozne jedinice mogu biti dizajnirane za višestruke primene da bi se postigla terapijski efektivna količina.
[0078] Takve farmaceutske kompozicije će obično sadržavati od oko 0,1 do oko 95 težinskih% jedinjenja formule (I); uklјučujući od oko 5 do oko 70 težinskih%; kao što je od oko 10 do oko 60 težinskih% jedinjenja formule (I).
[0079] U farmaceutskim kompozicijama pronalaska može biti upotrebljen bilo koji od uobičajenih nosača ili ekscipijensa. Izbor određenog nosača ili ekscipijensa, ili kombinacije nosača ili eksipijenasa, zavisiće od načina primene koji je se upotrebljava za lečenje određenog pacijenta ili od tipa medicinskog stanja ili stadijuma oboljenja. U tom pogledu, priprema odgovarajuće farmaceutske kompozicije za određeni način primene je u okvirima zananja stučnjaka sa iskustvom u oblasti farmaceutske tehnike. Dodatno, nosači ili ekscipijensi koji se upotrebljavalju u farmaceutskim kompozicijama predmetnog pronalaska su komercijalno dostupni. U svrhu dodatne ilustracije, mogu biti uzete u obzir uobičajene tehnike formulisanja koje su opisane u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20. izdanje, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); i H.C. Ansel i saradnici, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7. izdanje, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
[0080] Reprezentativni primeri materijala koji mogu poslužiti kao farmaceutski prihvatlјivi nosači obuhvataju, ali nisu ograničeni na, sledeće: šećere, kao što su laktoza, glukoza i saharoza; skrobove, kao što su kukuruzni skrob i skrob krompira; celulozu, poput mikrokristalne celuloze i njenih derivata, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celuloza acetat; tragakant u prahu; slad; želatin; talk; eksipijense, kao što su puter kakaa i voskovi za supozitorije; ulјa kao što su ulјe kikirikija, ulјe semena pamuka, ulјe šafrana, susamovo ulјe, maslinovo ulјe, kukuruzno ulјe i sojino ulјe; glikole, poput propilen glikola; poliole, kao što su glicerin, sorbitol, manitol i polietilen glikol; estre, kao što su etil oleat i etil laurat; agar; sredstva za puferisanje, kao što su magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginsku kiselinu; vodu oslobođenu pirogena; izotoničan fiziološki rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol; rastvori puferisani fosfatom; i druge netoksične kompatibilne supstance koje se koriste u farmaceutskim kompozicijama.
[0081] Farmaceutske kompozicije se obično pripremaju temelјnim i bliskim mešanjem ili blendovanjem jedinjenja pronalaska sa farmaceutski prihvatlјivim nosačem i sa jednim ili sa više izbornih sastojaka. Dobijena ravnomerno pomešana smeša može zatim biti oblikovana ili upotrebljena za ispunjavanje tableta, kapsula, pilula i sličnog, upotrebom konvencionalnih procedura ili opreme.
[0082] Poželjno je da su farmaceutske kompozicije pronalaska upakovane u vidu jediničnog doznog oblika. Termin "jedinični dozni oblik" se odnosi na fizički diskretnu jedinicu koja je pogodna za primenu doze pacijentu, tj. označava da svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu predmetnih jedinjenja koja je izračunata tako da se proizvede željeni terapijski efekat, bilo samostalno ili u kombinaciji sa jednom ili sa više dodatnih jedinica. Na primer, takvi jedinični dozni oblici mogu biti kapsule, tablete, pilule i slično, ili to mogu biti jedinična pakovanja pogodna za parenteralnu primenu.
[0083] U jednom primeru izvođenja, farmaceutske kompozicije pronalaska su pogodne za oralnu primenu. Pogodne farmaceutske kompozicije za oralnu primenu mogu biti u obliku kapsula, tableta, pilula, pastila, kašeta, dražeja, praškova, granula; ili u vidu rastvora ili suspenzije u vodenoj ili nevodenoj tečnosti; ili u vidu tečne emulzije tipa ulјe-u-vodi ili voda-u-ulјu; ili u vidu eliksira ili sirupa; i sličnog; pri čemu svaka sadrži unapred određenu količinu jedinjenja predmetnog pronalaska kao aktivan sastojak.
[0084] Kada su namenjeni za oralnu primenu u čvrstom doznom obliku (tj. u vidu kapsula, tableta, pilula i sličnog), farmaceutske kompozicije pronalaska obično sadrže jedinjenje pronalaska i jedan ili više farmaceutski prihvatlјivih nosača, poput natrijum citrata ili dikalcijum fosfata. Po izboru, ili alternativno, takvi čvrsti dozni oblici mogu takođe sadržavati: ispunjivače ili ekstendere, kao što su skrobovi, mikrokristalna celuloza, laktoza, dikalcijum fosfat, saharoza, glukoza, manitol i/ili silicijumska kiselina; sredstva za povezivanje, kao što su karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinil pirolidon, saharoza i/ili akacija; ovlaživače, poput glicerola; sredstva za dezintegraciju, kao što su natrijum kroskarmeloza, agar-agar, kalcijum karbonat, skrob krompira ili tapioke, alginska kiselina, određeni silikati i/ili natrijum karbonat; sredstva za odlaganje rastvaranja, kao što je parafin; ubrzivače apsorpcije, poput kvarternih amonijumskih jedinjenja; sredstva za vlaženje, kao što je cetil alkohol i/ili glicerol monostearat; apsorbante, kao što su kaolin i/ili bentonit glina; lubrikante poput talka, kalcijum stearata, magnezijum stearata, čvrstih polietilen glikola, natrijum lauril sulfata i/ili njihovih smeša; sredstva za boju; i puferska sredstva.
[0085] Sredstva za oslobađanje, sredstva za vlaženje, sredstva za oblaganje, zaslađivači, arome i sredstva za prijatan miris, konzervansi i antioksidansi takođe mogu biti prisutni u farmaceutskim kompozicijama pronalaska. Primeri farmaceutski prihvatlјivih antioksidanasa uklјučuju: antioksidanse rastvorlјive u vodi, kao što su askorbinska kiselina, cistein hidrohlorid, natrijum bisulfat, natrijum metabisulfat, natrijum sulfit i slični; antioksidanse rastvorlјive u ulјu, kao što su askorbil palmitat, butilisani hidroksianizol, butilisani hidroksitoluen, lecitin, propil galat, alfa-tokoferol i slični; i sredstva za helaciju metala, kao što su limunska kiselina, etilendiamin tetrasirćetna kiselina, sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina i slično. Sredstva za oblaganje tableta, kapsula, pilula i sličnog, obuhvataju ona koja se upotrebljavaju za enteričke obloge, kao što su celuloza acetat ftalat, polivinil acetat ftalat, hidroksipropil metilceluloza ftalat, metakrilna kiselina, estarski kopolimeri metakrilne kiseline, celuloza acetat trimelitat, karboksimetil etil celuloza, hidroksipropil metil celuloza acetatni sukcinat i slično.
[0086] Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu takođe biti formulisane tako da obezbede sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sredstva, upotrebom, u vidu primera, hidroksipropil metil celuloze u različitim proporcijama; ili drugih polimernih matriksa, lipozoma i/ili mikrosfera. Dodatno, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu po izboru sadržavati sredstva za opacifikaciju i mogu biti formulisane tako da oslobađaju aktivan sastojak samo, ili preferencijalno, u određenom delu gastrointestinalnog trakta, po izboru, na odložen način. Primeri obloga za kompozicije koje mogu biti upotrebljeni obuhvataju polimerne supstance i voskove. Aktivno sredstvo može takođe biti u mikroinkapsuliranom obliku, ukoliko je to pogodno, sa jednim ili sa više od prethodno opisanih ekscipijenasa.
[0087] Pogodni tečni dozni oblici za oralnu primenu obuhvataju, u vidu ilustracije, farmaceutski prihvatlјive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Tečni dozni oblici obično sadrže aktivno sredstvo i inertan razblaživač poput, na primer, vode ili drugih rastvarača, sredstava za solubilizaciju i emulgatora, kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, ulјa (naročito ulje semena pamuka, kikirikija, kukuruza, klica, maslinovo, ricinusovo i susamovo ulјe), oleinska kiselina, glicerol, tetrahidrofurilni alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina sorbitana i njihove smeše. Alternativno, određene tečne formulacije mogu biti prevedene, na primer, sušenjem u spreju, u prah, koji se može upotrebiti za pripremu čvrstih doznih oblika konvencionalnim procedurama.
[0088] Suspenzije, pored aktivnog sastojka, mogu sadržavati sredstva za resuspendovanje, kao što su, na primer, etoksilirani izostearilni alkoholi, polioksietilen sorbitol i sorbitanski estri, mikrokristalna celuloza, aluminijum metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant, kao i njihove smeše.
[0089] Neograničavajući primeri koji slede ilustruju reprezentativne farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska.
Oralni čvrsti dozni oblik u vidu tablete
[0090] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so su pomešani kao suve supstance sa mikrokristalnom celulozom, polivinil pirolidonom i natrijum kroskarmelozom u odnosu od 4:5:1:, pa su komprimovani u tablete da bi se obezbedio jednični dozni oblik sa, na primer, 4 mg, 10 mg ili 20 mg aktivnog sredstva po tableti.
Oralni čvrsti dozni oblik u vidu tablete
[0091] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so (40 g) su temeljno pomešani sa mikrokristalnom celulozom (445 g), pirogenim silikonskim dioksidom (10 g) i stearinskom kiselinom (5 g). Smeša je zatim komprimovana upotrebom prese za tablete da bi se obrazovale tablete od kojih je svaka bila težine od 100 mg. Svaka tableta obezbeđuje 8 mg aktivnog sredstva po jediničnoj dozi pogodnoj za oralnu primenu.
Oralni čvrsti dozni oblik u vidu tablete
[0092] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so (10 g) su temeljno pomešani sa kukuruznim skrobom (50 g), natrijum kroskarmelozom (25 g), laktozom (110 mg) i magnezijumstearatom (5 mg). Smeša je zatim komprimovana upotrebom prese za tablete da bi se obrazovale tablete od kojih je svake bila težine od 200 mg. Svaka tableta obezbeđuje 10 mg aktivnog sredstva po jediničnoj dozi pogodnoj za oralnu primenu.
Oralni čvrsti dozni oblik u vidu kapsule
[0093] Jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so su vlažnom granulacijom spojeni sa mikrokristalnom celulozom, polivinil pirolidonom i natrijum kroskarmelozom u odnosu 4:5:1:1, pa su smešom ispunjavane želatinske ili kapsule od hidroksipropil metilceluloze, da bi se obezbedio jedinični dozni oblik sa, na primer, 4 mg, 10 mg ili 20 mg aktivnog sredstva po kapsuli.
Prah u kapsulama
[0094] Sa jedinjenjem pronalaska ili sa njegovom farmaceutski prihvatlјivom soli (1 do 50 mg) su ispunjavane prazne hidroksipropil metilcelulozne (HPMC) kapsule namenjene za oralnu primenu.
Tečna formulacija
[0095] Jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so (50 mg), pomešani su i potpuno rastvoreni u 100 ml niskokaloričnog mešanog sportskog pića od bobica u zatvorenoj boci. Merene su razne zapremine ovog rastvora da bi se obezbedili različiti dozni nivoi.
Tečna formulacija
[0096] Tečna formulacija koja sadrži jedinjenje pronalaska (0,1%), vodu (98,9%) i askorbinsku kiselinu (1,0%) obrazovana je dodavanjem jedinjenja pronalaska smeši vode i askorbinske kiseline.
Oralni dozni oblik sa enteričnom oblogom
[0097] Jedinjenje pronalaska je rastvoreno u vodenom rastvoru koji je sadržavao polivinil pirolidon i u vidu spreja je nanet na mikrokristalnu celulozu ili zrna šećera u odnosu aktivnog sredstva i zrna od 1:5 w/w, nakon čega je primenjeno i 5 % od te dodate težine, enteričke obloge koja je sadržavala akrilni kopolimer, na primer, kombinaciju akrilnih kopolimera koji su dostupni pod komercijalnim nazivom Eudragit-L® i Eudragit-S®, ili hidroksipropil metilceluloza acetat sukcinata. Globulama sa enteričkom oblogom su ispunjene želatinske ili hidroksipropil metilcelulozne kapsule da bi se obezbedio jedinični dozni oblik od, na primer, 5 mg aktivnog sredstva po kapsuli.
Oralni dozni oblik sa enteričkim oblogom
[0098] Enterička obloka koja je sadržavala kombinaciju Eudragit-L® i Eudragit-S®, ili hidroksipropil metilcelulozni acetat sukcinat, nanošen je prethnodno opisane tablete kao oralni dozni oblik ili kapsule kao oralni dozni oblik.
Upotreba
[0099] Predmetna jedinjenja su bila dizajnirana tako da isporučuju klinički efikasno sredstvo direktno na mesto delovanja u gastrointestinalnom traktu radi lečenja gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja, naročito radi lečenja inflamatornih bolesti creva kao što su ulcerozni kolitis i Kronova bolest. Očekuje se takođe da jedinjenja budu korisna za lečenje kolitisa povezanog sa terapijama inhibitorima imunskih kontrolnih tačaka. Preciznije, glukuronidni prolekovi pronalaska su dizajnirani tako da iskoriste obilјe bakterijskog β-glukuronidnog enzima u gastrointestinalnom traktu, naročito u debelom crevu, da bi oslobodio JAK inhibitor tofacitinib i to pretežno u donjem gastrointestinalnom traktu. Dodatno, pokazalo se da se jedinjenja pronalaska za primer slabo sistemski apsorbuju, čime se rizik od imunosupresije svodi na minimum.
[0100] Predmetni prolekovi jedinjenja su dizajnirani tako da im nedostaje biološka aktivnost. Na primer, jedinjenje formule 1 nema značajan afinitet ili potenciju za familiju Janus kinaznih (JAK) enzima, enzima koji nisu JAK ili za širok opseg receptora kuplovanih sa G-proteinom, jonskih kanala i transportera koji mogu biti eksprimirani u gastrointestinalnom (GI) traktu ili sistemski. Biološka aktivnost nakon primene predmetnih jedinjenja može biti pripisana tofacitinibu koji se generiše.
[0101] Kao što je opisano ispod, u eksperimentalnom delu, predmetna jedinjenja su široko profilisana u jednom ili u više pretkliničkih ispitivanja. Pokazano je da se jedinjenja raspadaju u prisustvu βglukuronidaze koja je prisutna u fecesu debelog creva pacova. Na primer, metabolička stabilnost jedinjenja formule 1 i stvaranje tofacitiniba su ispitivani prilikom inkubacija homogenate crevnog lumena koji su izolovani iz dvanaestopalačnog creva, ileuma, jejunuma i debelog creva pacova. Jedinjenje je ispoljilo gradijent u povećanju obrta sa dokazima o obrazovanju tofacitiniba od stabilnog, u sadržaju dvanaestopalačnog creva i jejunuma (poluživot> 60 minuta), preko skromnog obta u sadržaju ileuma (poluživot 34 minuta), do brzog obrta u sadržaju debelog creva (poluživot <5 minuta). Gradijent povećanja obrta jedinjenja odražava sve veće prisustvo bakterija idući od gornjeg GI do donjeg GI.
[0102] Oslobađanje tofacitiniba iz predmetnih jedinjenja nakon oralne primene je bilo ispitivano u miševima, pacovima i cinomolgus majmunima. Kao što je opisano ispod, u Analizama 4, 5, 9 i 10, kod svih vrsta su prolekovi ispoljili značajno veću izloženost tofacitinibu u debelom crevu od izloženosti u plazmi. Preciznije, oslobađanje tofacitiniba iz jedinjenja formule 1 u specifičnim segmentima gastrointestinalnog trakta je proučavano kod pacova i majmuna i upoređivano je sa koncentracijom koja je dobijena oralnom primenom doze tofacitiniba samostalno, u ekvivalentnim dozama. Ne samo da je jedinjenje 1 ispoljilo značajno veću izloženost duž gastrointestinalnog trakta u odnosu na izloženost u plazmi (na primer, odnosi su u segmentima debelog creva bili veći od 500 kod pacova i između oko 60 i 150 kod majmuna), već je takođe pokazalo porast odnosa koncentracije u GI tkivu i koncentracije u plazmi u odnosu na onu koja je dobijena prilikom oralne primene doze samo tofacitiniba. Na primer, kod majmuna je primećen porast od pet do sedam puta u koncentraciji tofacitiniba u cekumu, proksimalnom i distalnom tkivu debelog creva tokom oralne primene proleka u poređenju sa onim dobijenim nakon oralne primene samo tofacitiniba.
[0103] Efikasnost određenih jedinjenja pronalaska je takođe ispitana u mišjem modelu kolitisa indukovanog sa oksazolonom. Jedinjenja formule 1 i 4 su pokazala aktivnost u mišjem modelu kolitisa indukovanog oksazolonom u nižim oralnim dozama od onih koje je zahtevala direktna primena tofacitiniba da bi se postigao ekvivalentan efekat. Dodatno, efikasne doze jedinjenja formule 1 su bile povezane sa smanjenom sistemskom izloženošću tofacitinibu u odnosu na sistemsku izloženost dobijenu primenom doze samog tofacitiniba u njegovoj efikasnoj dozi. U modelu imunosupresije kod miševa, jedinjenje 1 je pokazalo minimalan efekat imunosupresije u istoj dozi koja je bila potrebna za dobijanje efikasnosti koja je upotrediva sa efikasnošću u oksazolonskom modelu (terapijski indeks > 3 puta), dok je tofacitinib imunosupresivan u dozi koja je niža od njegove efikasne doze (terapijski indeks ≤ 0,3).
[0104] Shodno navedenom, očekuje se da će glukuronidni prolekovi tofacitiniba pronalasku biti korisni u lečenju inflamatorne bolesti creva, naročito ulceroznog kolitisa. Očekuje se da će i predmetna jedinjenja biti korisna u lečenju Kronove bolesti i za lečenje kolitisa povezanog sa terapijom inhibitorima imunskih kontrolnih tačaka, potencijalno ozbilјne posledice imunoterapija kancera. Terapije inhibitorima imunskih kontrolnih tačaka obuhvataju, ali nisu ograničene na, inhibitore antigena tipa 4 asociranog sa citotoksičnim T-limfocitima (CTLA-4), kao što su ipilimumab (Yervoi®) i tremelimumab; inhibitore programirane ćelijske smrti tipa 1 (PD-1), kao što su pembrolizumab (Keytruda®) i nivolumab (Opdivo®); i inhibitore liganada programirane ćelijske smrti tipa 1 (PD-L1), kao što su atezolizumab (Tecentriq®), durvalumab i avelumab. Preciznije, očekuje se da će jedinjenja biti korisna u lečenju kolitisa izazvanog CTLA-4 inhibitorom. Jedinjenja mogu takođe biti korisna u lečenju dodatnih stanja kao što su gastrointestinalni neželјeni efekti kod oboljenja "domaćin protiv kalema", celijakija, mikroskopski kolitis, pouhitis i autoimunska enteropatija.
[0105] Prema jednom aspektu, pronalazak stoga obezbeđuje jedinjenja formule (I) za upotrebu u postupku lečenja gastrointestinalne inflamatorne bolesti kod sisara (npr. čoveka), pri čemu postupak obuhvata primenu terapijski efektivne količine jedinjenja pronalaska ili farmaceutske kompozicije koja sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač i jedinjenje pronalaska sisaru.
[0106] U jednom primeru izvođenja, gastrointestinalna inflamatorna bolest je ulcerozni kolitis. U jednom drugom primeru izvođenja, gastrointestinalna inflamatorna bolest je Kronova bolest. U sledećem primeru izvođenja, gastrointestinalna inflamatorna bolest je kolitis povezan sa terapijom inhibitorima imunskih kontrolnih tačaka.
[0107] Pronalazak dalјe obezbeđuje jedinjenja formule (I) za upotrebu u postupku lečenja ulceroznog kolitisa kod sisara, pri čemu postupak obuhvata primenu terapijski efektivne količine jedinjenja pronalaska ili farmaceutske kompozicije koja sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač i jedinjenje pronalaska sisaru.
[0108] Kada se koristi za lečenje ulceroznog kolitisa, jedinjenje pronalaska će obično biti primenjivano oralno, u jednoj dnevnoj dozi ili u višestrukim dozama po danu, iako mogu biti upotrebljeni i drugi oblici primene. Količinu aktivnog sredstva koja se primenjuje po dozi ili ukupna količinu koja se primenjuje dnevno, obično će biti određena od strane lekara, shodno relevantnim okolnosrima, uključujući stanje koje se tretira, izabrani način primene, konkretno jedinjenje koje se primenjuje i njegovu relativnu aktivnost, kao i starost, težinu i odgovor konkretnog pacijenta, težinu pacijentovih simptoma i slično.
[0109] Očekuje se da će pogodne doze za lečenje ulceroznog kolitisa i drugih gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja biti opsega od oko 2 do oko 60 mg/dan jedinjenja formule (I), uklјučujući od oko 4 do oko 50 mg/dan i od oko 4 do oko 40 mg dnevno za čoveka prosečne težine od 70 kg.
Kombinovana terapija
[0110] Jedinjenja pronalaska takođe mogu biti upotrebljena u kombinaciji sa jednim ili sa više sredstava koja deluju istim mehanizmom ili različitim mehanizmima, da bi se uticalo na lečenje gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja. Korisne klase sredstava za kombinovanu terapiju uklјučuju, ali nisu ograničene na, aminosalicilate, steroide, sistemske imunosupresive, anti-TNFa antitela, anti-alfa4 (anti-VLA-4) antitela, anti-integrinska α4β7antitela, antibakterijska sredstva i lekove protiv dijareje.
[0111] Aminosalicilati koji mogu biti upotrebljeni u kombinaciji sa predmetnim jedinjenjima obuhvataju, ali nisu ograničeni na, mezalamin, olsalazin i sulfasalazin. Primeri steroida obuhvataju, ali nisu ograničeni na, prednizon, prednizolon, hidrokortizon, budezonid, beklometazon i flutikazon. Sistemski imunosupresivi korisni za lečenje inflamatornih poremećaja obuhvataju, ali nisu ograničeni na, ciklosporin, azatioprin, metotreksat, 6-merkaptopurin i takrolimus. Dalјe, u kombinovanoj terapiji mogu biti upotrebljena anti-TNFa antitela, koja obuhvataju, ali nisu ograničena na, infliksimab, adalimumab, golimumab i certolizumab. Korisna jedinjenja koja deluju drugim mehanizmima obuhvataju anti-alfa4 antitela, kao što je natalizumab, anti-integrin α4β7antitela, kao što je vedolizumab, antibakterijska sredstva poput rifaksimina i lekovi protiv dijareje, kao što je loperamid. (Mozaffari i saradnici, Expert Opin. Biol. Ther. 2014, 14, 583-600; Danese, Gut, 2012, 61, 918-932; Lam i saradnici, Immunotherapy, 2014, 6, 963-971.)
[0112] Stoga, prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje terapijsku kombinaciju za upotrebu u lečenju gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja, kombinaciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i jedno ili više drugih terapijskih sredstava korisnih za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja. Na primer, pronalazak obezbeđuje kombinaciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i jedno ili više sredstava izabranih između aminosalicilata, steroida, sistemskih imunosupresiva, anti-TNFa antitela, anti-alfa4 antitela, anti-integrin α4β7antitela, antibakterijskih sredstava i lekova protiv dijareje. Sekundarni agens(i), kada su uklјučeni, prisutni su u terapijski efektivnoj količini, tj. u bilo kojoj količini koja proizvodi terapijski povoljan efekat kada se primenjuje zajedno sa jedinjenjem pronalaska.
[0113] Dalјe, prema sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje pronalaska i jedno ili više drugih terapijskih sredstava korisnih za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja, za upotrebu u postupku lečenja gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja.
[0114] Kada se koriste u kombinovanoj terapiji, sredstva mogu biti formulisana u jednoj farmaceutskoj kompoziciji, kao što je prethodno prijavljeno, ili sredstva mogu biti obezbeđena u odvojenim kompozicijama koje se primenjuju istovremeno ili u različitim vremenima, istim ili različitim putevima primene. Kada se primenjuju odvojeno, sredstva se primenjuju u dovolјno bliskim vremenskim okvirima da bi se obezbedio želјeni terapijski efekat. Takve kompozicije mogu biti upakovane odvojeno ili mogu biti upakovane zajedno u kompletu. Dva ili više terapijskih sredstava u kompletu može biti primenjeno istim putem primene ili različitim putevima primene.
PRIMERI
[0115] Primeri sinteze i bioloških efekata koji selde su ponuđeni da bi ilustrovali pronalazak i ne treba ih smatrati na bilo koji način orgraničavajućim za obim pronalaska. U primerima koji su navedeni ispod, sledeće skraćenice imaju značenja koja slede, osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Skraćenice koje nisu definisane podrazumevaju svoja prihvaćena značenja.
Ac = acetil
ACN = acetonitril
alloc = aliloksikarbonil
d = dan(i)
DCM = dihlorometan
DIPEA = N,N-diizopropiletilamin
DMAP = 4-dimetilaminopiridin
Et3N = trietilamin
EtOAc = etil acetat
EtOH = etanol
h = sat(i)
IPA = izopropil alkohol
MeOH = metanol
min = minut(i)
ST = sobna temperatura
tBu = terc-butil
TFA = trifluorosirćetna kiselina
THF = tetrahidrofuran
[0116] Reagensi i rastvarači su nabavlјeni od komercijalnih dobavlјača (Sigma-Aldrich, Fluka, itd.) i korišćeni su bez dalјeg prečišćavanja. Progresijak reakcionih smeša je praćen tankoslojnom hromatografijom (TLC), analitičkom tečnom hromatografijom visokih performansi (anal. HPLC) i masenom spektrometrijom. Reakcione smeše su razrađene kao što je precizno opisano u svakom primeru izvođenja; obično su prečišćeavane ekstrakcijom i drugim postupcima prečišćavanja, poput kristalizacije zavisne od temperature i rastvarača, i taloženja. Dodatno, reakcione smeše su rutinski prečišćavane hromatografijom na koloni ili preparativnim HPLC postupkom, obično upotrebom napakovanih C18 ili BDS kolona i uobičajenih eluenata. Uobičajeni uslovi preparativnog HPLC postupka su opisani ispod.
[0117] Karakterizacija reakcionih proizvoda je rutinski vršena masenom spektrometrijom i analitičkim HPLC postupkom. Identifikacija jedinjenja masenom spektrometrijom je rađena postupkom jonizujućeg elektro-raspršivanja (ESMS) upotrebom API 150 EX instrumenta firme Applied Biosystems (Foster City, CA) ili 3100 instrumenta firme Waters (Milford, MA), koji su bili kuplovani sa sistemima za samoprečišćavanje.
Uslovi preparativnog HPLC postupka
[0118]
Kolona: C18, 5 µm; 21,2 x 150 mm ili C18, 5 µm 21 x 250 ili C14, 5 µm 21x150 mm
Temperatura kolone: Sobna temperatura
Brzina protoka: 20,0 mL/min
Mobilne faze: A = voda 0,05% TFA
B = ACN 0,05% TFA,
Zapremina injeciranja: (100-1500 µL)
Talasna dužina detektora: 214 nm
[0119] Sirova jedinjenja su rastvarana u smeši vode i sirćetne kiseline odnosa 1:1, do oko 50 mg/mL. Urađen je i test analitičke skale u trajanju od 4 minuta, upotrebom C18 kolone od 2,1 x 50 mm, nakon čega je sledio preparativni ciklus od 15 ili 20 minuta upotrebom zapremine injeciranja od 100 µL, sa gradijentom zasnovanom na retenciji % B koji je dobijen analizom analitičke skale. Tačni gradijenti su zavisili od tipa uzoraka. Uzorci sa nečistoćama bliskim analiziranim supstancama su provereni upotrebom 21 x 250 mm C18 kolone i/ili 21 x 150 mm C14 kolone radi najboljeg razdvajanja. Frakcije koje su sadržavale željeni proizvod su identifikovane masenom spektrometrijskom analizom.
Uslovi analitičkog HPLC postupka
[0120]
Postupak A
Instrument: Agilent 1260 HPLC
Kolona: LUNA C18 (2), 150 x 4,60 mm, 3 mikrona
Temperatura kolone: 35 °C
Brzina protoka: 1,2 mL/min
Zapremina injeciranja: 5 µL
Priprema uzorka: Rastvaranje u smeši ACN i vode od 1:1 do rastvora od ∼0,5 mg/mL Mobilne faze: A = voda:ACN:TFA (98:2:0,05)
B = Voda:ACN:TFA (30:70:0,05)
Talasna dužina detektora: 230 nm
Gradijent: ukupno 28 min (vreme (min)/% B): 0/10, 20/100, 22/100, 23/10,
28/10
Postupak B
Instrument: Agilent 1260 HPLC
Kolona: Zorbax-Bonus RP C14, 30 x 2,1 mm, 1,8 mikrona
Temperatura kolone: 60 °C
Brzina protoka: 1,2 mL/min
Zapremina injeciranja: 3µL
Priprema uzorka: Rastvaranje u u smeši ACN i vode od 1:1 do rastvora od ∼1,0 mg/mL Mobilne faze: A = voda:TFA (99,9%:0,1%)
B = ACN:TFA (99,9%:0,1%)
Talasna dužina detektora: 214 nm
Gradijent: ukupno 3,0 min (vreme (min)/% B): 0/5, 1,5/65, 1,8/95, 2,1/95, 2,5/5,
3,0/5
Priprema 1 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (10)
[0121]
(a) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-formil-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (9)
[0122] U trogrlu tikvicu od 2 L u koju je bila postavljena mehanička mešalica, dodati su (2R,3R,4S,5S,6S)-2-bromo-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (8) (51 g; 128,4 mmol), 4-hidroksi-3-nitrobenzaldehid (20,98 g; 125,5 mmol) i oksid srebra (37,7 g; 162,7 mmol), a zatim i ACN (750 mL). Reakciona smeša je mešana u mraku tokom 18 h, pa je profiltrirana kroz dijatomejsku zemlјu (Celite®). Čvrsta supstanca je zatim isprana sa ACN (3 x 100 mL) i filtrat je destilovan pod sniženim pritiskom do 100 ml. Filtratu su dalje dodati EtOAc (1750 mL) i zasićen natrijum bikarbonat (1 L), pa je reakciona smeša mešana na ST tokom 30 min, profiltrirana kroz Celite i ostavlјena da se slegne. Organski sloj je ispran sa zasćenim natrijum bikarbonatom (1 L) i koncentrovanim slanim rastvorom (1 L), osušen upotrebom natrijum sulfata (100 g) tokom 2 h, profiltriran i destilovan pod sniženim pritiskom do suva da bi se obezbedilo sirovo Jedinjenje 9 kao žuta čvrsta supstanca (55 g; prinos 90%; čistoća 97,4%) HPLC, Retenciono vreme 15,61 min.
(b) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (10)
[0123] U trogrlu tikvicu od 1 L u koju je bila postavljena mehanička mešalica, dodato je Jedinjenje 9 (32,7 g; 67,6 mmol), nakon čega su dodati i DCM (350 mL) i IPA (70 mL). Reakciona smeša je zatim mešana da bi se rastvorila čvrsta supstanca, nakon čega je ista ohlađena do 0 °C. U rastvor je potom dodat, u tri porcije, natrijum borohidrid (1,54 g; 40,6 mmol), uz održavanje temperature ispod 5 °C, nakon čega je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 1 h i polako presuta u ledenu vodu (400 mL). U rastvor je dalje dodat DCM (350 mL), pa je smeša mešana tokom 30 min i ostavlјena da se slegne tokom 30 min, nakon čega su razdvojene faze. Vodena faza je ponovo ekstrahovana sa DCM (100 mL). Organske faze su zatim spojene i isprane koncentrovanim slanim rastvorom (500 mL). Nakon 30 min, faze su razdvojene i faza u koncentrovanom slanom rastvoru je ponovo ekstrahovana sa DCM (100 mL). Organske faze su opet spojene, osušene upotrebom natrijum sulfata (50 g) tokom 2 h, profiltrirane kroz Celite, pa destilovane pod sniženim pritiskom do suva. Dobijena čvrsta supstanca je mešana sa 95% denaturisanim EtOH (130 mL) na 50 °C tokom 30 min i dalje na ST tokom 12 h da bi se obrazovala kristalna čvrsta supstanca koja je potom isprana sa EtOH (30 mL) i osušena pod vakuumom na ST tokom 16 h da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (21 g; 66% prinos 98% čistoće) HPLC, Postupak A, Retenciono vreme 13,18 min.
Priprema 2: (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-(((metil(2-(metilamino)etil)karbamoil)oksi) metil)-2-nitrofenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (12)
[0124]
[0125] U tikvicu od 100 mL, postavljenu na magnetnu mešalicu, dodati su (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (10) (4,86 g; 10 mmol) i karbonildiimidazol (2,11 g; 13 mmol), a zatim i DCM (50 mL). Reakciona smeša je mešana na ST tokom 3 h da bi se obrazovao rastvor (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((1H-imidazol-1-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (11).
[0126] U trogrlu tikvicu od 250 mL, postavljenu na magnetnu mešalica, dodat je N<1>,N<2>-dimetiletan-1,2-diamin (3,09 g; 35 mmol, 3,76 mL), nakon čega je dodat i DCM (30 mL). Reakciona smeša je zatim ohlađena do 0 °C i polako je dodata sirćetna kiselina (2,1 g; 35 mmol, 2 mL) na <5 °C, da bi se obrazovala suspenzija. U suspenziju je potom polako dodat rastvor intermedijera 11; pa je reakciona smeša mešana na 0-5 °C tokom 30 min i dalje na ST tokom 3 h. Zatim su dodati DCM (30 mL) i voda (60 mL) i reakciona smeša je mešana na ST tokom 10 min. Organska faza je isprana vodom (2 x 60 mL), osušena upotrebom natrijum sulfata tokom 2 h i profiltrirana, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (prinos ~70%), koje je čuvano na 0-4 °C i dalje upotrebljeno bez prečišćavanja. HPLC, Postupak A, Retenciono vreme 11,04 min.
Priprema 3: (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-ntetil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (14)
[0127]
[0128] U trogrlu tikvicu od 1 L, postavljenu na magnetnu mešalicu, dodati su 3-((3R,4R)-4-metil-3-(metil(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)-3-oksopropanenitril (2) (9,65 g; 31 mmol), bis(4-nitrofenil) karbonat (12,22 g; 40 mmol) i ACN (240 mL), pa je reakciona smeša ohlađena do 0 °C. Zatim je u kapima dodata DIPEA (5,59 g; 43 mmol) i reakciona smeša je mešana na ST tokom 4 h, nakon čega je ohlađena do 0 °C. Ohlađenoj reakcionoj smeši je dodat rastvor (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-(((metil(2-(metilamino)etil)-karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)tetrahidro2H-piran-3,4,5-triil triacetata (12) u DCM-u (350 mL; 30 mmol) na <10 °C, pa je reakciona smeša mešana na 15 °C tokom 1 h, nakon čega je reakcija zaustavljena sa sirćetnom kiselinom (2,5 g; 42 mmol). Dalje su dodati DCM (200 mL) i voda (300 mL), razdvojene su faze i organski sloj je ispran sa 3% natrijum karbonatom (2 x 350 mL), a zatim i sa 0,5 M HCl (2 x 200 mL) i 10% natrijum-hloridom (200 mL), nakon čega je osušen upotrebom natrijum-sulfata (50 g) tokom 5 h i dalje profiltriran i koncentrovan do ~100 ml. Koncentrovan rastvor je prečišćen hromatografijom na silika gelu (silika kolona od 600 g; brzina protoka 60 mL/min; gradijent: 40% DCM u EtOAc do 100% EtOAc tokom 5 min, 100% EtOAc tokom 60 min, 3% MeOH do 5% MeOH u EtOAc tokom 30 min, 5% MeOH u EtOAc do završetka). Čiste frakcije su spojene i destilovane do suva pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (21,2 g; čistoća 97%; prinos 73%). HPLC, Postupak A, Retenciono vreme 13,92 min.
Primer 1: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-ntetil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (1)
[0129]
[0130] U trogrlu tikvicu od 500 mL, postaljenu na magnetnu mešalicu, dodati su (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperldin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (14) (20,9 g; 22 mmol) i THF (210 mL). Reakciona smeša je zatim ohlađena do 0 °C, pa je tokom 20 minuta dodavan 1 M LiOH u vodi (46 mL; 47 mmol) i reakciona smeša je mešana tokom 20 min. Dalje je tokom 30 min dodata druga jednaka porcija rastvora LiOH i reakciona smeša je mešana tokom 2 h. Dodata je zatim i sirćetna kiselina (5,6 g; 93 mmol) i reakciona smeša je prebačena u tikvicu sa okruglim dnom od 2 L. U tikvicu je zatim dodat ACN (500 mL), pa je smeša destilovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonilo 600 mL rastvarača. Postupak je ponovljen dva puta, a treći put je destilacija nastavljena do suva. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u 2% ACN u vodi (350 mL), nakon čega je prečišćena reverzno-faznom hromatografijom u serijama od 90 mL (silika kolona C-18 od 450 g; brzina protoka 40 mL/min; Rastvarač A: 0,5% sirćetna kiselina u vodi; Rastvarač B: ACN; gradijent: ukupno 110 min (vreme (min)/% B): 0/2, 10/2, 100/28, 110/28, nakon čega je sledilo pranje sa 90% B. Frakcije proizvoda su spojene, postupak je ponovljen tri puta, a zatim su spojene frakcije koncentrovane do oko 600 mL i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta suspstanca (11,2 g; prinos 60%; čistoća 99%). HPLC, Postupak A, Retenciono vreme 7,95 min.
Primer 2 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-amino-4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil) oksi)metil)fenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (3)
[0131]
(a) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-amino-4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (15)
[0132] U rastvor (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (14) (1,55 g; 1,65 mmol) u EtOH (50 mL) je dodat paladijum hidroksid na uglјeniku (11,57 mg; 0,08 mmol). Reakcioni rastvor je mešan pod atmosferom vodonika na sobnoj temperaturi tokom 3 d, pa je profiltriran kroz sloj Celita i dalje ispran sa EtOH i koncentrovan in vacuo. Sirovi materijal je izolovan kao smeđa penasta supstaca koja je potom upotrebljena bez dodatnog prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izrač. C42H53N9O14908,37; utvrđeno 908,8.
(b) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-amino-4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (3)
[0133] Rastvoru proizvoda iz prethodnog koraka (0,95 g; 1,05 mmol) u 1:1:1 smeši MeOH (3,49 mL), THF (3,49 mL) i vode (3,49 mL) je dodat LiOH (63 mg; 2,62 mmol), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcioni rastvor je zatim koncentrovan in vacuo i sirovi materijal je prečišćen reverzno-fazom hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (96 mg; prinos 12%) kao bela čvrsta supstanca. HPLC, Postupak B, Retenciono vreme 0,85 min.
Priprema 4: 4-nitrofenil4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-7H-pirolo [2,3-d]pirimidin-7-karboksilat (13)
[0134]
[0135] U rastvor 3-((3R,4R)-4-metil-3-(metil(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)-3-oksopropan-nitrila (2) (0,75 g; 2,40 mmol) u DCM-u (12 mL), dodati su rastvor natrijum hidroksida (0,29 g; 7,20 mmol) u vodi (4,00 mL) i tetrabutilamonijum bromid (0,08 g; 0,24 mmol). Zatim je polako dodat rastvor 4-nitrofenil hloroformata (0,97 g; 4,80 mmol) u DCM-u (4 mL). Reakciona smeša je dalje mešana na ST tokom 1 h, pa je ekstrahovana sa DCM, dok je organska faza isprana sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida i koncentrovanim rastvorom soli, osušena jeupotrebom natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana in vacuo. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-100% EtOAc u heksanima) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,94 g; 82%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. (m/z): [M+H]<+>izrač. C23H23N7O5478,18; utvrđeno 478,2.
Priprema 5: (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-(((metil(2-(metilamino)etil)karbamoil)oksi) metil)fenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (18)
[0136]
(a) (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-((((4-nitrofenoksi)karbonil)oksi)metil)fenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (17)
[0137] U rastvor (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(hidroksimetil)fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (16) (27,0 g; 61,3 mmol) i Et3N (25,5 mL; 17,0 mmol) u DCMu (250 mL), polako je dodat rastvor p-nitrofenil hloroformata (18,53 g; 91,9 mmol) u DCM-u (100 mL). Rastvor je mešan na ST tokom 1 h, pa je razblažen vodom (100 mL) i ekstrahovan sa DCM (3 x 100 mL). Organske faze su spojene i koncentrovane pod sniženim pritiskom, dok je sirovi ostatak prečišćen hromatografijom na koloni (35% EtOAc u heksanima) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (37,0 g; prinos 56%).
(b) (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-(((metil(2-(metilamino)etil)karbamoil)oksi)metil) fenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (18)
[0138] U rastvor (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-((((4-nitrofenoksi)karbonil)oksi)metil)fenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (17) (0,50 g; 0,83 mmol) u DCM-u (8,26 mL) na ST je dodat N<1>,N<2>-dimetiletan-1,2-diamin (0,44 mL; 4,13 mmol). Nakon 1,5 h, reakcioni rastvor je profiltriran i ispran sa DCM. Filtrat je koncentrovan in vacuo, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% MeOH u DCM) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (354 mg; prinos 77%) kao bezbojna čvrsta supstanca. (m/z): [M+H]<+>izrač. C25H34N2O12555,21; utvrđeno 555,6.
[0139] Sledeći intermedijari su pripremljeni postupkom analognim Pripremi 5:
Primer 3: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-ntetil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil) fenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (4)
[0140]
(a) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)-(metil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (22)
[0141] U rastvor (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(4-(((metil(2-(metilamino)etil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (18) (0,35 g; 0,63 mmol) i 4-nitrofenil 4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksilata (13) (0,30 g; 0,63 mmol) u DMF-u (5,05 mL) je dodat Et3N (0,13 mL; 0,95 mmol), pa je dobijena smeša mešana na 40 °C. Nakon 1,5 h, LC/MS je ukazao na obrazovanje čistog proizvoda. Reakcioni rastvor je zatim ohlađen do sobne temperature i koncentrovan in vacuo. Sirovi proizvod je izolovan kao žuti ostatak koji je dalje upotrebljen bez dodantog prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izrač. C42H52N8O14893,36; utvrđeno 893,9.
(b) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (4)
[0142] U rastvor proizvoda iz prethodnog koraka (0,56 g; 0,63 mmol) u 1:1:1 smeši MeOH (2,10 mL), THF (2,10 mL) i vode (2,10 mL), dodat je LiOH (40 mg; 1,70 mmol), pa je rastvor mešan na ST, koncentrovan in vacuo, nakon čega je sirovi ostatak prečišćen reverzno-fazom hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,12 g; 27%) kao bela čvrsta supstanca. (m/z): [M+H]<+>izrač. Za C35H44N8O11753,31; utvrđeno 753,8. HPLC, Postupak B, Retenciono vreme 0,98 min.
Primer 4: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-metilfenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (5)
[0143]
(a) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)-(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-metilfenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (23)
[0144] U rastvor (2S,3S,4S,5R,6S)-2-(metoksikarbonil)-6-(2-metil-4-(((metil(2-(metilamino)etil)karbarnoil)oksi)metil)fenoksi)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (19) (0,46 g; 0,81 mmol) u DCM-u (8,00 mL), polako je dodat rastvor 4-nitrofenil 4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksilata (13) (0,39 g; 0,81 mmol) u DCM-u (3,00 mL), nakon čega je rastvor mešan na ST tokom 1,5 h, pa koncentrovan in vacuo - žuta čvrsta supstanca je dalje upotrebljene bez dodatnog prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izrač. C43H54N8O14907,38; utvrđeno 907,6.
(b) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-metilfenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (5)
[0145] U ledeni rastvor proizvoda iz prethodnog koraka (0,73 g; 0,81 mmol) u MeOH (29 mL), polako je dodat vodeni rastvor LiOH (4,04 mL; 4,04 mmol). Nakon mešanja na 0 °C tokom 1,5 h, reakcioni rastvor je podešen na pH 5-6, sporim dodavanjem 1 N HCl. Reakcioni rastvor je koncentrovan in vacuo, a sirovi materijal je prečišćen reverzno-faznom hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,47 g; prinos 76%) kao bela čvrsta supstanca. (m/z): [M+H]<+>izrač. C36H46N8O11767,33; utvrđeno 767,8. HPLC, Postupak B, Retenciono vreme 1,02 min.
Primer 5: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-hloro-4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi) metil)fenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (6)
[0146]
(a) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-hloro-4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino )-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (24)
[0147] U rastvor (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-hloro-4-(((metil(2-(metilamino)etil)-karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (20) (0,33 g; 0,57 mmol) i 4-nitrofenil 4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksilata (13) (0,27 g; 0,57 mmol) u DMF-u (4,52 mL), dodat je Et3N (0,12 mL; 0,85 mmol), pa je dobijeni rastvor mešan na 40 °C. Nakon 1 h, rastvor je koncentrovan in vacuo. Proizvod je izolovan kao žuti ostatak koji je dalje upotrebljen bez dodatnog prečišćavanja. (m/z):
[M+H]<+>izrač. C42H51ClN8O14927,32; utvrđeno 927,7.
(b) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-hloro-4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino) -N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)fenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (6)
[0148] U rastvor (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-hloro-4-(((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil) fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (0,52 g; 0,57 mmol) u 1:1:1 smeši MeOH (1,88 mL), THF (1,88 mL) i vode (1,88 mL), dodat je LiOH (40 mg; 1,53 mmol), pa je rastvor mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcioni rastvor je zatim koncentrovan in vacuo, nakon čega je sirovi materijal prečišćen reverzno-faznom hromatografijom na koloni, da bi se dobio konačni proizvod (0,22 g; 49%) kao bela čvrsta supstanca. (m/z): [M H]<+>izrač. C35H43ClN8O11787,27; utvrđeno 787,8. HPLC, Postupak B, Retenciono vreme 1,04 min.
Primer 6: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil) amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-metoksifenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (7)
[0149]
(a) (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-metoksifenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetat (25)
[0150] U rastvor (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-metoksi-4-(((metil(2-(metilamino)etil)karbamoil)oksi) metil)fenoksi)-6-(metoksikarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetata (21) (0,60 g; 1,02 mmol) u DCM-u (10,00 mL), polako je dodat rastvor 4-nitrofenil 4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksilata (13) (0,49 g; 1,02 mmol) u DCM-u (3,00 mL) i dobijena smeša je mešana na ST tokom 1,5 h. Reakcioni rastvor je zatim koncentrovan in vacuo i dobijena žuta čvrsta supstanca je upotrebljena bez daljeg prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izrač. C43H54N8O15923,37; utvrđeno 924,1.
(b) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-cijanoacetil)-4-metilpiperidin-3-il)(metil)amino)-N-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-karboksamido)etil)(metil)karbamoil)oksi)metil)-2-metoksifenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (7)
[0151] U ledeni rastvor proizvoda iz prethodnog koraka (0,94 g; 1,02 mmol) u MeOH (36,80 mL), polako je dodat vodeni rastvor LiOH (5,12 mL; 5,12 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 2 h, pre nego što je pH rastvora podešen na 5-6, laganim dodavanjem 1 N HCl. Smeša je potom koncentrovana in vacuo i sirovi ostatak je prečišćen reverzno-faznom hromatografijom na koloni, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,46 g; prinos 57%) kao bela čvrsta supstanca. (m/z):
[M+H]<+>izrač. C36H46N8O12783,32; utvrđeno 783,8. HPLC, Postupak B, Retenciono vreme 0,99 min.
Primer C-1
[0152]
(a) Jedinjenje C-5
[0153] U sud su dodati TFA so jedinjenja C-3 (285 mg; 0,497 mmol) i Jedinjenje C-4 (445 mg; 1,289 mmol), pa su dodati i DMF (2,485 mL) i trietilamin (0,416 mL; 2,98 mmol). Sledećeg dana, reakciona smeša je koncentrovana rotacionim uparavanjem, pa je prečišćena normalno-faznom hromatografijom na koloni (sa 0-15% MeOH u DCM-u tokom 15 min, a zatim kontinuirano sa 15% tokom 5 min) da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova (90 mg).
(b) Jedinjenje C-1
[0154] Proizvod iz prethodnog koraka (45 mg; 0,061 mmol) i kalijum karbonat (33,8 mg; 0,244 mmol) su rastvoreni u MeOH (0,8 mL) i vodi (0,4 mL) i mešani na ST. Nakon 2 h, dodat je MeOH da bi se obrazovao azeotrop sa vodom, nakon čega je dodat DCM (0,4 mL), a zatim i TFA (0,4 mL; 5,19 mmol). Reakciona smeša je potom koncentrovana rotacionim uparavanjem, rastvorena u smeši vode i ACN od 1:1, pa je profiltrirana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova (17,7 mg; čistoća 97%) kao beličasti prah. (m/z): [M+H]<+>izrač. C26H30N4O15639,17; utvrđeno 639,2.
Priprema jedinjenja C-7
[0155]
Aliloksika . ..
OAliloksikarb.OAliloksikarb.
[0156] U rastvor jedinjenja C-6 (300 mg; 0,374 mmol) rastvorenog u DCM-u (3,74 mL), u jednoj porciji je na 0 °C dodat N,N'-dimetiletilendiamin (159 µL; 1,495 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 30 min, pa je razblažena u DCM-u (15 mL) i isprana sa vodom (3 x 10 mL). Organska faza je isprana zasićenim slanim rastvorom, nakon čega je izdvojena, osušena upotrebom natrijum sulfata i profiltrirana da bi se dobio intermedijer iz naslova kao žuto ulje koje je potom upotrebljeno bez dodatnog prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izrač. C33H41N3O17752,24; utvrđeno 752,4.
Priprema jedinjenja C-8
[0157]
[0158] U rastvor natrijum hidrida (36,4 mg; 0,9105 mmol) rasvorenog u smeši THF-a (3,372 mL) i DMF-a (1,686 mL), dodat je bis(2,4-dinitrofenil)karbonat (299 mg; 0,759 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 1 h, pa je polako dodat rastvor 2-(5-fluoro-4-metilpiridin-3-il)-5-(4-metil-6-(metilsulfonil)piridin-3-il)-1H-indola (jedinjenje C-2M) (200 mg; 0,506 mmol) rastvorenog u THF-u (1,2 mL) i reakciona smeša je zagrejana do ST. Nakon 9 h, dodat je zasićeni natrijum bikarbonat, pa je reakciona smeša isprana zasićenim slanim rastvorom. Izdvojen je dalje organski sloj koji je potom osušen upotrebom natrijum sulfata, nakon čega je profiltriran i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (eluiran je sa 0-80% EtOAc u heksanima) da bi se obezbedio intermedijar iz naslova (109 mg) kao ulјe smeđe boje. (m/z): [M+H]<+>izrač. C28H20FN5O8S 606,10; utvrđeno 606,3.
Primer C-2
[0159]
(a) Jedinjenje C-9
[0160] U rastvor jedinjenja C-8 (250 mg; 0,413 mmol) u DCM-u (4,13 mL) je dodato jedinjenje C-9 (310 mg; 0,413 mmol), nakon čega je dodat 4-dimetilaminopiridin (22 mg; 0,180 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 40 °C tokom 1 h, pa je ohlađena do ST i koncentrovana da bi se obezbedio intermedijer iz naslova koji je dalje direktno upotrebljen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izrač. C55H57FN6O20S 1173,33; utvrđeno 1173,4.
(b) Jedinjenje C-2
[0161] U degasiran rastvor proizvoda iz prethodnog koraka (485 mg; 0,413 mmol) koji je bio rastvoren u THF-u (4,13 mL) dodati su tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (47,7 mg; 0,041 mmol) i morfolin (360 µL; 4,13 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na ST tokom 45 min, pa je dodata voda i faze su razdvojene. Organska faza je osušena upotrebom natrijum sulfata, nakon čega je profiltrirana i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen preparativnim HPLC postupkom, nakon čega je liofilizovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (136 mg; čistoća 99%) kao beli prah. (m/z): [M+H]<+>izrač. C40H41FN6O14S 881,24; utvrđeno 881,2.
Biološka ispitivanja
[0162] Jedinjenja pronalaska su okarakterisana u jednom ili u više od sledećih bioloških ispitivanja. U opisima analiza, jedinjenje formule 1 može alternativno biti označeno kao jedinjenje 1, a slično se podrazumeva i za dodatna jedinjenja pronalaska.
Analiza 1: Biohemijska JAK kinazna analiza
[0163] Panel od četiri JAK biohemijska testa tipa LanthaScreen (JAK1, 2, 3 i Tyk2) urađen je u uobičajenom kinaznom reakcionom puferu (50 mM HEPES, pH 7,5; 0,01% Brij-35, 10 mM MgCl2i 1 mM EGTA). Rekombinantni JAK enzimi obeleženi sa GST i peptidni supstrat za STAT1 sa tagovanim GFP-om, nabavljeni su od kompanije Life Technologies.
[0164] Serijski razblažena jedinjenja su prethodno inkubirana sa svakim od četiri JAK enzima i sa supstratom, u belim mikrotitarskim pločama sa 384 bunarića (Corning), na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Zatim je dodat ATP, da bi se inicirale kinazne reakcije, u ukupnoj zapremini od 10 µL, sa 1% DMSO. Finalne koncentracije enzima za JAK1, 2, 3 i Tyk2 su bile 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM, i 0,25 nM, tim redom; odgovarajuće Km upotrebljenih koncentracija ATP-a su iznosile 25 µM, 3 µM, 1,6 µM i 10 µM; dok je koncentracija supstrata u sve četiri analize iznostila 200 nM. Aktivnost JAK1 kinaze je takođe ispitana sa koncentracijom ATP-a od 1 mM. Kinaznim reakcijama je dopušteno da se odvijaju tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega su dodati po 10 µL preparata sa EDTA (finalne koncentracije 10 mM) i Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) antitelo (Life Technologies, finalna koncentracija 2 nM) u TR-FRET puferu za razblaživanje (Life Technologies). Ploče su zatim ostavlјene da se inkubiraju na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, pre očitavanja na EnVision čitaču (Perkin Elmer). Emisioni odnosi signala (520 nm/495 nm) su snimljeni i potom iskorišćeni za izračunavanje vrednosti inhibicije u procentima, na osnovu signala u DMSO i kontroli za signal šuma.
[0165] Za analizu zavisnosti odgovora od doze, podaci procenata inhibicije su uneti u grafik, u odnosu na koncentracije jedinjenja, pa su određene IC50vrednosti na osnovu 4-parametarskog robusnog modela uklapanja upotrebom Prism kompjuterskog programa (GraphPad Software). Rezultati su izraženi kao pICso (negativan logaritam IC50), a naknadno su prevedeni u pKi (negativni logaritam konstante disocijacije, Ki) upotrebom Cheng-Prusoff-ove jednačine. Tabela 1 sumira rezultate za jedinjenje 1 i tofacitinib (jedinjenje 2).
Tabela 1 Enzimska potencija
Analiza 2: Metabolička stabilnost Jedinjenja 1 u β-glukuronidazi iz E. Coli
[0166] Da bi se okarakterisali intermedijerni metaboliti i finalni proizvod jedinjenja 1 u prisustvu enzima β-glukuronidaze, jedinjenje 1 (30 µM u DMSO-u) je inkubirano na 37 °C u prisustvu prečišćene β-glukuronidaze iz E. coli (100 jedinica/mL u 0,1M kalijum fosfatnom puferu) tokom vremenskog perioda od 0-90 minuta. Inkubacije su zaustavljane u vremenskim tačkama od 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15, 30, 60 i 90 min, dodavanjem 100 µL ACN. Uzorci su zatim razblaživani sa smešom vode 1% mravlјe kiseline (4 x), pa su analizirani upotrebom LC-MS sistema tipa Thermo Q-Exactive™. Koncentracije Jedinjenja 1 i tofacitiniba su kvantifikovane upoređivanjem sa standardnim krivama koje su određivane upotrebom istih razblaženja koja su upotrebljavana za uzorke.
[0167] Brz nestanak jedinjenja 1 (poluživot <5 min) bio je praćen brzim i prolaznim obrazovanjem aglikonskog intermedijera (jedinjenje b na Šemi 2). Za prevođenje aglikonskog intermedijara u njegov naredni diaminski intermedijer (jedinjenje d) i krajnji aktivni metabolit (tofacitinib), uočeno je da je sporiji korak koji ograničava brzinu reakcije. Uočeno je takođe da koncentracija tofacitiniba postepeno raste tokom vremenskog perioda od 90 min eksperimenta do krajnje koncentracije od oko 20 µM.
[0168] Da bi se pokazalo da je uočena konvezija jedinjenja 1 u tofacitinib posledica interakcije sa glukuronidaznim enzimom, jedinjenje 1 (30 µM) je inkubirano sa β-glukuronidazom (45 jedinica/mL) i poznatim bakterijskim inhibitorom β-glukuronidaze, amoksapinom (100 µM). Nakon inkubacije od 60 minuta, finalna koncentracija tofacitiniba je iznosilla 1 µM u prisustvu inhibitora u poređenju sa 7 µM (bez inhibitora).
Analiza 3: Metabolička stabilnost homogenata pripremlјenih iz sadržaja gornjeg i donjeg dela creva pacova
[0169] Prevođenje jedinjenja 1 u tofacitinib je određivano i u sadržaju lumena creva pripremljenom iz raznih GI segmenata koji su izolovani iz pacova neposredno nakon žrtvovanja. Sadržaj svakog od segmenta poput dvanaestopalačnog creva, jejunuma, ileuma i debelog creva, razblaživan je u odnosu 1:10 u rastvoru Dulbekovog fosfatom puferisanog fiziološkog rastvora (DPBS). Osnovni rastvor jedinjenja 1 od 10 mM u DMSO-u, razblaživan je u DPBS-u da bi se dobila finalna koncentracija supstrata od 10 µM. Inkubacija je rađena u vodenom kupatilu na 37 °C, a vremenske tačke koje su bile uzete su bile 0, 5, 10, 20, 40 i 60 min. Ukupna zapremina za inkubacije je iznosila 400 µL, a za svaku od vremenskih tačaka su uzimani alikovoti od po 40 µL, koji su zatim razblaživani u 160 µL smeše 97% ACN 3% mravlјe kiseline internog standarda. Uzorci su dalje centrifugirani na 2200 rcf tokom 10 min, pa je po 50 µL supernatanta razblaživano u 150 µL smeše vode 1% mravlјe kiseline. Sadržaj jedinjenja 1 i tofacitiniba u uzorcima je analiziran na API 4000 masenom spektrometru. Poluživot koji je određivan shodno nestajanju jedinjenja 1 sumiran je ispod.
Tabela 2
Analiza 4: Oralna farmakokinetika Jedinjenja 1 kod pacova
[0170] Cilј ove studije je bio da se uporede farmakokinetike jedinjenja 1 i tofacitiniba u gastrointestinalnoj sluzokoži i plazmi nakon njihove istovremene oralne primene. Mužjacima pacova Sprague Dawley soja (n=3/vremenskoj tački) oralnom gavažom je primenjena doza Jedinjenja 1 od 3 mg/kg i normalizovana doza od 1,2 mg tofacitiniba obeleženog trideuterijumom (D3-tofacitinib), formulisanih u vidu rastvora u 5% DMSO 1% hidroksipropil metil celuloze u vodi. U svakoj vremenskoj tački (0,5; 1, 3, 6, 8 i 24 h), punkturom srca su uzimani uzorci plazme i prikupljena su sledeća tkiva: želudac, gornji gastrointestinalni trakt (disekovan je približno na trećine [U-1, U- 2, U-3]). cekum i donji gastrointestinalni trakt (disekovan je približno na polovine [L-1, L-2]). Svaki uzorak tkiva je ispran vodom, posušen, prebačen u istariranu posudu, izmeren, razblažen sa zapreminom zakišelјene vode koja je iznosila 3 puta od težine tkiva (w/v), nakon čega je homogenizovan na 6500 o/min (3 x 45 sec) i zamrznut. Koncentracije tofacitiniba oslobođenog iz jedinjenja 1 i D3-tofacitiniba u svakom uzorku tkiva su određivane na sledeći način. Uzorci tkiva su vorteksovani, spojeni sa alikvotima plazme pacova od 50 µl, pa su ekstrahovani sa 200 µL ACN koji je sadržavao interni standard, nakon čega su kvantifikovani u odnosu na interni standard upotrebom LC-MS postupka. Koncentracije tofaktiniba oslobođenog iz jedinjenja 1 su bile merljive u plazmi između 3 i 8 sati, u želucu i odsečcima U-1, U-2 i U-3 sve vreme tokom 8 sati, dok su u cekumu i odsečcima L-1 i L-2 bili merljivi između 3 i 24 sata. Koncentracije D3-tofacitiniba su bile merljive u plazmi između 0,5 i 8 sati, u želucu i odsečcima U-1, U-2 i U-3 do 8 sati, a u cekumu i odsečcima L-1, i L-2 između 3 i 24 sata. Rezultirajući standardni farmakokinetički parametri, Cmax(maksimalna koncentracija) i AUC (0-t) (površina ispod krive koncentracije u odnosu na vreme, u koju je bila uključena poslednja zmerena vremenska tačka) prikazani su u Tabeli 3.
Tabela 3: Koncentracija Tofacitiniba i D3-Tofacitiniba kod pacova
Analiza 5: Oralna farmakokinetika Jedinjenja 1 kod cinomolgus majmuna
[0171] Cilј ove studije bio je upoređivanje farmakokinetika jedinjenja 1 i tofacitiniba u debelom crevu i plazmi nakon njihove isovremene oralne primene. Mužjacima cinomolgus majmuna (n = 1/vremenskoj tački) oralnom gavažom su primenjene doza jedinjenja 1 od 3 mg/kg i doza od 2,1 mg/kg tofacitiniba obeleženog trideuterijumom (D3-tofacitinib), koji su bili formulisani u smeši 98,5% citratnog pufera pH 6 1% hidroksipropil metilcelulozu 0,5% Tween 20. U svakoj vremenskoj tački (0,5, 1, 3, 6, 9 i 24 sata), prikupljeni su uzorci plazme koji su uzimani iz femoralne vene, kao i sledeća tkiva: želudac, gornji gastrointestinalni trakt (disekovan je približno na trećine [U-1, U-2, U-3]). cekum, proksimalno debelo crevo, distalno debelo crevo i rektum. Svaki uzorak tkiva je ispran sa vodom, posušen, prebačen u istariranu posudu, izmeren, trenutno zamrznut, usitnjen i čuvan na -70 °C. Alikvot od približno 2 g je razblažen sa 3 zapremine po težini tkiva (w/v) kontrolne plazme pacova u vodi, pa je homogenizovan i čuvan na -70 °C. Uzorci tkiva su vorteksovani, spojeni sa alikvotima plazme pacova od 50 µl, pa su ekstrahovani sa 200 µL ACN koji je sadržavao interni standard, nakon čega su kvantifikovani u odnosu na interni standard upotrebom LC-MS postupka. Koncentracije tofaktiniba oslobođenog iz jedinjenja 1 su izmerene u plazmi i svim uzorcima tkiva između 0,5 i 24 sati. Koncentracije D3-tofacitinib je bila merljiva u plazmi i želucu između 0,5 i 9 sati, a u svim ostalim tkivnim presecima između 0,5 i 24 sata. Dobijeni standardni farmakoninetički parametric, Cmax(maksimalna koncentracija) i AUC (0-t) (površina ispod krive koncentracije u odnosu na vreme, u koju je uključena i poslednja izmerena vremenska tačka) prikazani su u Tabeli 4.
Tabela 4: Koncentracija Tofacitiniba i D3-Tofacitiniba kod majmuna
Analiza 6: Mišji model kolitisa indukovan oksazolom
[0172] Kolitis indukovan oksazolonom je eksperimentalni model koga karakteriše histološka sličnost sa ulceroznim kolitisom kod lјudi (Heller i saradnici, Immunology, 2002, 17, 629-638). U testu su uporebljeni adultni BALB/C miševi (25-28 g, starosti 9-12 nedelјa) kompanije BioNeeds (Indija). Prvog dana, životinje su blago anestezirane izofluranom i dlaka između ramena je pažljivo uklonjena, nakon čega je polako nanošen rastvor oksazolona (6 mg/mišu, 100 µL, formulacija u acetonu i maslinovom ulju u odnosu 4:1) ili nosača radi senzibilizacije kože. Šest dana nakon senzibilizacije kože, miševi su podvrgnuti gladovanju preko noći, anestezirani su ketaminom i ksilazinom koji su primenjeni IP, pa je špric od 1 mL ispunjen rastvorom oksazolona pažljivo insertovan ∼3,8 cm u debelo crevo miša. Životinje su naime držane sa glavom okrenutom na dole, a oksazolon (0,5 mg/50 µL/miš u 50% etanolu) ili 50% rastvor etanola i fiziološkog rastvora je polako injeciran u rektum tokom jednog minuta. Miševi su vertikalno držani (sa glavom na dole) tokom jos jednog minuta da bi se osiguralo da celokupan rastvor oksazolona ostane unutar debelog creva. etanol/fiziološki rastvor a otopina rektalno se polako ubacuje tokom jedne minute. Miševe su držali vertikalno (glavom dole) tokom još jednog minuta kako bi se osiguralo da ceo rastvor oksazolona ostane unutar debelog creva. Tretman lekovima (PO, BID ili TID) ili nosačem je započet veče pre intrarektalne (IR) primene oksazolona. I prvog (Dana 1) i drugog (Dana 2) dana nakon IR primene oksazolona, objektivni esperimentator koji nije znao raspored tretmana je analizirao indeks aktivnosti oboljenja (DAI) kod svakog miša, prema sledećem sistemu bodovanja: konzistencija stolice (0, normalna; 2, razmekšana; 4, dijareja), veliko krvarenje i hemokultni test (0, odsustvo; 2, zatamnjena krv; 4, značajno prisustvo krvi), i gubitak telesne težine (0, nema; 1, 1% -5%; 2, 6% -10%; 3, 11% -15%; 4, više od 15%); DAI = prosečna vrednost (vrednosti za konzistenciju stolice prisustvo krvi gubitak težine).
[0173] Računanje površine ispod krive (AUC) zasnovano na ukupnim DAI rezultatima, urađen je da bi se ispratila progresija bolesti tokom eksperimenta. AUC za svaku eksperimentalnu grupu je izračunat kao: AUC = [(Dan 1 – Dan0)<∗>Prosečan skor (DAI skor Dana 0 i Dana 1)] [(Dan 2 – Dan 1)<∗>Prosečan skor (DAI skor Dana 1 i Dana 2)]. Studentov t-test je upotrebljen za poređenje DAI AUC skorova u grupama nosač/nosač i nosač/oksazolon da bi se procenilo da li je bolest indukovana nakon tretmana sa oksazolonom. Potom je urađena jednofaktorska ANOVA, sa Dunnett-ovom post hoc testom, da bi se uporedili DAI AUC skorovi za grupe nosač/oksazolon i ispitivano jedinjenje/oksazolon. Statistička zanačajnost je definisana α nivoom podešenim na p < 0,05.
[0174] U modelu akutnog kolitisa indukovanog oksazolonom, jedinjenje formule 1 (3, 10, 30 i 60 mg/kg, PO, BID) proizvelo je značajno ublažavanja kolitisa indukovanog oksazolonom, koji je bio reda veličine sličnog onom koji je postignut tofacitinibom (30 i 60 mg/kg, PO, BID). U odvojenom eksperimentu, u oksazolonskom modelu je jedinjenje formule 4 (3, 10, i 30 mg/kg, PO, BID) proizvelo značajno smanjanje kolitisa indukovanog oksazolonom, koje je bilo reda veličine sličnog onom koji je postignut sa tofacitinibom (30 mg/kg, PO, BID)
Analiza 7: Imunosupresivni efekti u mišjim ćelijama prirodnim ubicama (NK) slezine
[0175] Deplecija mišjih ćelija slezine je eksperimentalni model imunosupresije (Kudlacz i saradnici, Am. J. of Transplantation, 2004, 4, 51-57). Jedinjenje 1 je ispitano u mišjem modelu ćelija slezine nakon iste paradigme lečenja koja je upotrebljena u modelu kolitisa indukovanog oksazolonom (Analiza 6).
[0176] Za istraživanje su upotrebljeni adultni mužjaci Balb/C miševa (stari 12-14 nedelјa) iz Harlana. Jedinjenje 1 (1, 3 i 10 mg/kg, BID) i tofacitinib (10, 30 i 60 mg/kg, BID) su primenjivani oralno, tokom tri dana, miševima koji prethodno nisu bili tretirani (naivnim miševima). Slezine su prikupljane 30 min ili 3 h nakon primene poslednje doze i odmah su izdrobljene radi bojenja podtipova ćelija. Pre fiksacije, antitela obeležena fluoroforama za CD19 (FITC; B ćelije), CD3e (PE; pan T ćelije) i DX5 (APC; NK ćelije) su inkubirana sa uzorcima splenocita iz svake životinje da bi se omogućila istovremena, višestruka analiza % potipova na protočnom citometru. Broj ukupnih ćelija slezine za svaku životinju je izmeren upotrebom Scepter ™ 2.0 Handheld Automated brojača ćelija.
[0177] Apsolutan broj populacija limfocitnih podtipova (npr. B, T i NK ćelija slezine) izračunat je kao proizvod procenta svakog podtipa sa ukupnim brojem ćelija slezine kod svake životinje. Jednofaktorska ANOVA, praćena Dunnett-ovim post hoc testom, upotrebljena je za poređenje broja limfocita slezine kod grupa tretiranih nosačem i ispitivanim jedinjenje. Nivo α je podešen na p < 0,05. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM za svaku grupu.
[0178] Tofacitinib (10, 30 i 60 mg/kg; PO, TID) je na način koji je zavisio od doze i značajno smanjio broj NK ćelija slezine. U istoj studiji, jedinjenje 1 nije uticalo na broj NK ćelija slezine prilikom PO (BID) primene doza do 10 mg/kg (maksimalna ispitivana doza). Efekat tretmana nije bio uočen za populacije B i T ćelija sa bilo kojim jedinjenjem.
[0179] Navedeni podaci, zajedno sa antikolitičkim efektom jedinjenja 1 u mišjem modelu kolitisa indukovanog oksazolonom (Analiza 6), omogućili su izračunavanje funkcionalnog terapijskog indeksa, kao što je prijavljeno ispod, u Tabeli 5
Tabela 5: Funkcionalan terapijski indeks
Analiza 8: Stabilnost u fekalnom homogenatu debelog creva pacova
[0180] Cilј ove studije je bio da se uvrdi stabilnost predmetnih jedinjenja u fekalnom homogenatu debelog creva pacova, tj. poluživot razlaganja u prisustvu β-glukuronidaze u fecesu debelog creva pacova.
[0181] Nakon žrtvovanja naivnog mužjaka pacova (∼300 g) eksansangulacijom, puncijom srca, debelo crevo je ligirano i uklonjeno, pa prebačeno u anaerobnu komoru (AS-580, Anaerobe Systems). Sadržaj fecesa je uklonjen unutar komore i razblažen je u odnosu 1:10 (na 1 gram je dodato 9 mL fosfatnog pufera), nakon čega je homogenizovan upotrebom ručnog homogenizera tipa Omni Tissue Master.
Fekalni homogenat je zatim centrifugiran na 2000 g tokom 10 min da bi se uklonilo krupan materijal, a zatim je izdvojen i supernatant koji je potom upotrebljen za inkubacije.
[0182] Ispitivana jedinjenja i pozitivna kontrola (sulfasalazin) su pripremlјeni kao osnovni rastvori u DMSO-u od 10 mM. Finalna koncentracija supstrata za svaku analizu je iznosila 10 µM (30 µM za jedinjenje 5). Reakcije su započete dodavanjem alikvota razblaženog osnovnog rastvora ispitivanog jedinjenja od 5 µL u 300 µL supernatanta fekalnog homogenata pacova. Nakon 0, 15, 30, 60, 90 i 120 minuta od inicijacije reakcije, uziman je alikvot od po 50 µL koji je prebacivan u 200 µL acetonitrila sa 3% mravlјe kiseline i sa internim standardnim molekulom. Svi uzorci su centrifugirani na 2000 g tokom 10 min, nakon čega je po 50 µL supernatanata razblaživano u 150 µL vode radi analize na LC-MS sistemu. In vitro poluživot gubitka proleka je izračunat na sledeći način: (T1⁄2 = 0,693/konstanta brzine eliminacije).
Tabela 6. In vitro stabilnost za debelo crevo
Analiza 9: Oralna farmakokinetika kod miša
[0183] Cilј ovog istraživanja je bio procena prevođenja proleka pronalaska u tofacitinib u plazmi i debelom crevu nakon oralne primene kod miševa.
[0184] Mužjaci Balb/c miševa (n=2/vremenskoj tački) primali su jednu PO dozu ispitivanih jedinjenja oralnom gavažom (5 mg/kg u smeši 5% DMSO i 1% HPMC od 1:20). Dva i 6 sati nakon primene doze, miševi su žrtvovani eksanguinacijom, zasecanjem srca, a dobijeni uzorci krvi su stavljani u Microtainer® epruvete sa NaF i zatim smeštani na led. Plazma je dobijena centrifugiranjem (centrifuga firme Eppendorf, 5804R) tokom 4 min, na približno 12.000 o/min, na 4 °C.
[0185] Debelo crevo je uklonjeno iz eksanguliranih pacova, pa je pažljivo izdvojen fekalni sadržaj debelog creva. Debela creva su brzo isprana fiziološkim rastvorom i posušena. Zatim su homogenizovana u zapremini sterilne vode od 3x njihove težine, upotrebom Precellys homogenizera na približno 4 °C. Svi uzorci su čuvani na -80 °C za kasnije bioanalize.
[0186] Koncentracije tofacitiniba oslobođenog iz proleka u svakom uzorku tkiva su određivane na sledeći način: uzorci plazme i homogenata debelog creva su vorteksovani, spojeni sa alikvotom plazme pacova od 50 µL, ekstrahovani su sa 200 µL ACN koji je sadržavao inteni standard, nakon čega su kvantifikovani u odnosu na interni standard upotrebom LC-MS postupka. Površina ispod krive koncentracije (AUC0-6 h) izračunata je za ispitivano jedinjenje i oslobođen tofacitinig u plazmi i debelom crevu. Klјučni parametar za procenu pogodnosti je bio AUC odnos tofacitiniba u debelom crevu i plazmi.
Tabela 7: Koncentracija tofacitiniba kod miša
Analiza 10: Oralna farmakokinetika kod pacova
[0187] Cilј ove studije je bio procena prevođenja proleka pronalaska u tofacinib u plazmi i debelom crevu nakon oralne primene kod pacova.
[0188] Mužjaci Sprague Dawley pacova (n=2/vremenska tačka) primali su jednu PO dozu ispitivanog jedinjenja oralnom gavažom (5 mg/kg u smeši 5% DMSO i 1% HPMC od 1:20). Nakon 0,5, 1, 3, 6 i 24 sati od primene doze, pacovi su žrtvovani eksanguinacijom, zasecanjem srca, a dobijeni uzorci krvi su stavljani u Microtainer® epruvete sa NaF i zatim smeštani na led. Plazma je dobijena centrifugiranjem (centrifuga firme Eppendorf, 5804R) tokom 4 min, na približno 12.000 o/min, na 4 °C.
[0189] Debelo crevo je uklonjeno iz eksanguliranih pacova, pa je pažljivo izdvojen fekalni sadržaj debelog creva. Debela creva su brzo isprana fiziološkim rastvorom i posušena. Zatim su homogenizovana u zapremini sterilne vode od 3x njihove težine, upotrebom Precellys homogenizera na približno 4 °C. Svi uzorci su čuvani na -80 ° za kasnije bioanalize.
[0190] Koncentracije tofacitiniba oslobođenog iz proleka u svakom uzorku tkiva su određivane na sledeći način: uzorci plazme i homogenata debelog creva su vorteksovani, spojeni sa alikvotom plazme pacova od 50 µL, ekstrahovani su sa 200 µL ACN koji je sadržavao inteni standard, pa su kvantifikovani u odnosu na interni standard upotrebom LC-MS postupka. Površina ispod krive koncentracije (AUC0-6 h) je izračunata za ispitivano jedinjenje i oslobođen tofacitinig u plazmi i debelom crevu. Klјučni parametar za procenu pogodnosti je bio odnos AUC za tofacitinib u debelom crevu i plazmi.
Tabela 8: Koncentracija tofacitiniba kod pacova
Analiza 11: Metabolička stabilnost uporednih jedinjenja u sadržaju debelog creva pacova
[0191] Fekalni saržaj debelog creva je prikupljen iz naivnih mužjaka Sprague Dawley pacova, nakon čega je razblaživan u odnosu od 1:10 (1 gram sa 9 ml fosfatnog pufera) i dalje homogenizovan upotrebom ručnog homogenizera tipa Omni Tissue Master. Ispitivana jedinjenja, jedinjenja za poređenje, C-1 i C-2, kao i jedinjenje pronalaska, jedinjenje 1, pripremlјeni su kao osnovni rastvori od 10 mM u DMSO-u, pa su razblaživani u fosfatnom puferu do finalne koncentracije supstrata od 10 µM. Alikvot od 5 µL razblaženog ispitivanog jedinjenja je ubrizgan u 300 µl homogenata sadržaja debelog creva pacova da bi započela reakcija na 37 °C. Alikvoti (50 µL) su uklonjani iz inkubacije u sledećim vremenskim tačkama (0, 15, 50, 85 i 120 min), pa su dodavani u 200 µL ACN sa 3% mravlјe kiseline i internim standardnim molekulom. Standardne krive svakog metabolita, tofacitiniba, 5-ASA (jedinjenje C-1M) i CRAC inhibitora (jedinjenje C-2M), pripremlјeni su upotrebom istog matriksa i istih postupka razblaživanja koji su korišćeni za uzorke. Svi uzorci su centrifugirani na 2000 x g tokom 10 min, nakon čega je po 50 µL supernatanta razblaživano u 150 µL vode i analizirano upotrebom Thermo Q-Exactive LC-MS sistema. GraphPad Prism i Microsoft Excel programi su upotrebljeni za pravljenje tabala i grafika podataka.
[0192] Nakon inkubacije u sadržaju debelog creva pacova sa koncentracijom supstrata od 10 µM, sva od jedinjenja za poređenje, kao i jedinjenje pronalaska, ispoljili su brz gubitak matičnog molekula tokom inkubacije (poluživot <15 min). Ipak, nakon merenja aktivnog metabolita svakog proleka, samo jedinjenje 1 je generisalo merljive nivoa svog aktivnog metabolita, tofacitiniba. Nakon inkubacije od 120 minuta, izmerena je koncentracija tofacitiniba od 8,8 µM.
[0193] Nasuprot navedenom, jedinjenja C-1 i C-2 nisu generisala bilo kakve merljive količine njihovih aktivnih metabolita (jedinjenje C-1M i C-2M, tim redom). Vremenski tok proizvodnje metabolita tokom 120 min je ilustrovan na Slici 1.
[0194] Iako je predmetni pronalazak opisan u vezi sa njegovim specifičnim aspektima ili primerima izvođenja, stručnjacima iz oblasti tehnike će svakako biti jasno da razne promene mogu biti uvedene bez odstupanja od područja pronalaska definisanog u patentnim zahtevima.

Claims (22)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):
    gde n je 0, 1 ili 2; R<1>je izabran od vodonika, C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halo, cijano, hidroksi i triflurometil grupe; svaki R<2>, kada je prisutan, nezavisno je izabran od C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halo, cijano, hidroksi i triflurometil grupe; R<3>je vodonik, metil ili etil; R<4>je vodonik, metil ili etil; ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
  2. 2. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je R<1>vodonik.
  3. 3. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je R<1>nitro grupa.
  4. 4. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je R<1>amino grupa.
  5. 5. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je n 0.
  6. 6. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je n 1.
  7. 7. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, formule (II):
    gde R<1>je izabran od vodonika, C1-4alkil, C1-3alkoksi, amino, nitro, halo, cijano, hidroksi i triflurometil grupe; ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
  8. 8. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 7, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je R<1>izabran od vodonika, metil, metoksi, amino, nitro i hloro grupe.
  9. 9. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 7, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je R<1>vodonik.
  10. 10. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 7, ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, gde je R<1>amino grupa.
  11. 11. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 1, formule 1:
    ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
  12. 12. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 11, pri čemu je jedinjenje
  13. 13. Farmaceutska kompozicija koja sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač i jedinjenje iz bilo kog od Patentnih zahteva od 1 do 12.
  14. 14. Proces za pripremu jedinjenja iz Patentnog zahteva 1, ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli, proces koji obuhvata uklanjanje zaštitnih grupa iz jedinja formule (I-A):
    ili njegove soli; pri čemu su R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i n kao što je definisano u Patentnom zahtevu 1; svaki PG<a>je nezavisno hidroksilna zaštitna grupa; i PG<b>je karboksilna zaštitna grupa; da bi se obezbedilo jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
  15. 15. Proces iz Patentnog zahteva 14, pri čemu je R<1>nitro; R<3>i R<4>su metil; svaki PG<a>je acetil; PG<b>je metil grupa; i n je 0.
  16. 16. Proces iz Patentnog zahteva 14, za pripremu jedinjenja formule 1:
    ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli, pri čemu jedinjenje formule (I-A) je jedinjenje formule 14':
    ili njegova so, proces koji dodatno obuhvata: (a) reagovanje jedinjenja formule 12':
    ili njegove soli; pri čemu je svaki PG<a>nezavisno hidroksilna zaštitna grupa, sa jedinjenjem formule 13:
    da bi se obezbedilo jedinjenje formule 14' ili njegova so.
  17. 17. Jedinjenje formule 13:
    ili njegova so.
  18. 18. Jedinjenje iz bilo kog od Patentnih zahteva od 1 do 12, za upotrebu u lečenju gastrointestinalne inflamatorne bolesti kod sisara.
  19. 19. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 18, pri čemu je gastrointestinalna inflamatorna bolest ulcerozni kolitis.
  20. 20. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 18, pri čemu je gastrointestinalna inflamatorna bolest Kronova bolest.
  21. 21. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 18, pri čemu je gastrointestinalna inflamatorna bolest kolitis udružen sa terapijom inhibitorima imunskih kontrolnih tačaka.
  22. 22. Prolek tofacitiniba koji sadrži glukuronid, prema Patentnim zahtevima od 1 do 12, za upotrebu u postupku isporuke tofacitiniba u debelo crevo sisara, pri čemu se prolek cepa dejstvom βglukuronidaze u debelom crevu da bi se oslobodio tofacitinib.
RS20200508A 2015-11-24 2016-11-22 Prolekovi jak inhibitornih jedinjenja za lečenje gastorintestinalne inflamatorne bolesti RS60237B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562259273P 2015-11-24 2015-11-24
PCT/US2016/063254 WO2017091544A1 (en) 2015-11-24 2016-11-22 Prodrugs of a jak inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease
EP16808876.3A EP3380486B1 (en) 2015-11-24 2016-11-22 Prodrugs of a jak inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60237B1 true RS60237B1 (sr) 2020-06-30

Family

ID=57518004

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20200508A RS60237B1 (sr) 2015-11-24 2016-11-22 Prolekovi jak inhibitornih jedinjenja za lečenje gastorintestinalne inflamatorne bolesti

Country Status (33)

Country Link
US (3) US10435428B2 (sr)
EP (1) EP3380486B1 (sr)
JP (2) JP6778747B2 (sr)
KR (1) KR20180080330A (sr)
CN (1) CN108290918B (sr)
AU (1) AU2016359494B2 (sr)
BR (1) BR112018010650A8 (sr)
CA (1) CA3003283A1 (sr)
CL (1) CL2018001345A1 (sr)
CO (1) CO2018005327A2 (sr)
CY (1) CY1122918T1 (sr)
DK (1) DK3380486T3 (sr)
EA (1) EA035816B1 (sr)
ES (1) ES2784523T3 (sr)
HR (1) HRP20200561T1 (sr)
HU (1) HUE049775T2 (sr)
IL (1) IL259076B (sr)
LT (1) LT3380486T (sr)
ME (1) ME03757B (sr)
MX (1) MX383107B (sr)
MY (1) MY189979A (sr)
NZ (1) NZ742574A (sr)
PH (1) PH12018501037A1 (sr)
PL (1) PL3380486T3 (sr)
PT (1) PT3380486T (sr)
RS (1) RS60237B1 (sr)
SG (1) SG11201803686UA (sr)
SI (1) SI3380486T1 (sr)
SM (1) SMT202000242T1 (sr)
TW (1) TWI703147B (sr)
UA (1) UA121270C2 (sr)
WO (1) WO2017091544A1 (sr)
ZA (1) ZA201802967B (sr)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017077288A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Topivert Pharma Limited 4,5,6,7-tetrahydro-1h-imidazo[4,5-c]pyridine and 1,4,5,6,7,8-hexahydroimidazo[4,5-d]azepine derivatives as janus kinase inhibitors
EP3712152B1 (en) 2015-11-03 2021-01-13 Topivert Pharma Limited 4,5,6,7-tetrahydro-1h-imidazo[4,5-c]pyridine and 1,4,5,6,7,8-hexahydroimidazo[4,5-d]azepine derivatives as janus kinase inhibitors
CA3003283A1 (en) 2015-11-24 2017-06-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Prodrugs of a jak inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease
FR3060567B1 (fr) * 2016-12-19 2019-05-24 Ecole Normale Superieure De Lyon Substrat de glycosidase fluorogene et procede de detection associe
CN110418796A (zh) * 2017-03-08 2019-11-05 施万生物制药研发Ip有限责任公司 托法替尼(tofacitinib)的葡萄糖苷酸前药
US10233174B2 (en) * 2017-05-23 2019-03-19 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Thiocarbamate prodrugs of tofacitinib
MX2019014054A (es) 2017-05-23 2020-02-05 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Profarmacos de glucuronida de inhibidores de la cinasa janus.
AU2018281327A1 (en) * 2017-06-05 2019-12-05 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Multibiotic agents and methods of using the same
MA51524A (fr) 2018-01-05 2020-11-11 Cybrexa 1 Inc Composés, compositions et méthodes pour le traitement de maladies impliquant des tissus malades acides ou hypoxiques
WO2019182322A1 (ko) * 2018-03-20 2019-09-26 삼진제약주식회사 신규 염, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 약학 조성물
US12171764B2 (en) 2018-06-20 2024-12-24 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a JAK or other kinase inhibitor
CN111094314B (zh) * 2018-08-15 2022-08-12 江苏豪森药业集团有限公司 含有葡糖苷酸衍生物jak抑制剂的前药及其制备方法和应用
WO2020051378A1 (en) * 2018-09-06 2020-03-12 Arena Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful in the treatment of autoimmune and inflammatory disorders
CN109134564B (zh) * 2018-09-21 2022-03-11 合肥锐思生物医药有限公司 乳果糖糖苷衍生物、其制备方法及其用途
CN113316647A (zh) * 2018-11-15 2021-08-27 詹森生物科技公司 用于预测对炎性肠病疗法的反应的方法和组合物
PH12021551455A1 (en) 2018-12-19 2022-04-18 Incyte Corp Jak1 pathway inhibitors for the treatment of gastrointestinal disease
KR20210142154A (ko) 2019-03-21 2021-11-24 옹쎄오 암 치료를 위한 키나제 억제제와 조합된 dbait 분자
US11634508B2 (en) 2019-07-10 2023-04-25 Cybrexa 2, Inc. Peptide conjugates of cytotoxins as therapeutics
CN114302744B (zh) 2019-07-10 2025-08-26 赛博克萨3公司 作为治疗剂的微管靶向剂的肽缀合物
CN114761006A (zh) 2019-11-08 2022-07-15 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对激酶抑制剂产生耐药性的癌症的治疗方法
WO2021097074A1 (en) * 2019-11-13 2021-05-20 New York University Intestinal organoid co-culture systems and methods for treating or preventing a disease or disorder associated with immune response-mediated tissue injury
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2021174024A1 (en) * 2020-02-28 2021-09-02 First Wave Bio, Inc. Methods of treating iatrogenic autoimmune colitis
TW202207918A (zh) 2020-05-14 2022-03-01 美商施萬生物製藥研發Ｉｐ有限責任公司 腸道選擇性ｊａｋ３抑制劑的投與
CN113943312A (zh) * 2020-07-17 2022-01-18 轶诺(浙江)药业有限公司 一类肠道裂解型共药及其制备和用途
EP4232146A4 (en) * 2020-10-22 2024-07-31 Biora Therapeutics, Inc. METHODS OF TREATMENT AND PREDICTION OF NON-RESPONSE TO ANTI-TNF TREATMENT IN PERSONS WITH GASTROINTESTINAL TRACT DISEASES
US20240307396A1 (en) * 2021-06-07 2024-09-19 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treating celiac disease
EP4357346A4 (en) * 2021-07-20 2025-06-11 Coval Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. EXTERNAL ANTI-INFLAMMATORY AGENT COUPLING A COMPOUND AND A DRUG, PREPARATION METHOD THEREFOR AND USE THEREOF
US20230381185A1 (en) * 2022-05-14 2023-11-30 3-D Matrix, Ltd. Novel formulations for oral administration of therapeutic agents to the gastrointestinal tract
CN115073543B (zh) * 2022-07-20 2022-11-15 北京普祺医药科技股份有限公司 一种jak抑制剂的化合物前药及其制备与应用
CN117567460A (zh) * 2022-08-08 2024-02-20 明慧医药（杭州）有限公司 一种前药化合物及其制备方法和用途
JP2025527481A (ja) 2022-08-17 2025-08-22 トランセンド セラピューティクス，インコーポレイテッド フェネチルアミンおよびカチノン前駆体

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993022334A1 (en) 1992-05-04 1993-11-11 Sri International Pharmaceutical compositions and methods for colonic delivery of corticosteroids
US5811388A (en) 1995-06-07 1998-09-22 Cibus Pharmaceutical, Inc. Delivery of drugs to the lower GI tract
UA72290C2 (uk) 1999-12-10 2005-02-15 Пфайзер Продактс Інк. СПОЛУКИ ПІРОЛО[2.3-d]ПІРИМІДИНУ, ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ (ВАРІАНТИ), СПОСІБ ІНГІБУВАННЯ ПРОТЕЇНКІНАЗ АБО JANUS КІНАЗИ 3 (ВАРІАНТИ)
KR101921850B1 (ko) 2009-10-09 2018-11-23 인사이트 홀딩스 코포레이션 3-（4-（7Ｈ-피롤로〔2,3-ｄ〕피리미딘-4-일）-1Ｈ-피라졸-1-일）-3-사이클로펜틸프로판니트릴의 하이드록실, 케토 및 글루쿠로나이드 유도체
WO2011079249A2 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Glycomyr, Inc. Use of vitamin d glycosides and sulfates for treatment of disease
WO2011082368A2 (en) 2009-12-31 2011-07-07 Enzon Pharmaceuticals, Inc Polymeric conjugates of aromatic amine containing compounds including releasable urea linker
JP2013518882A (ja) * 2010-02-05 2013-05-23 ファイザー・インク ＪＡＫ阻害剤としてのピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン尿素化合物
US20130109720A1 (en) 2011-11-01 2013-05-02 Hoffmann-La Roche Inc. Indole inhibitors of crac
WO2014194195A2 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for the therapeutic delivery
ES2742179T3 (es) * 2014-06-24 2020-02-13 Inst Nat Sante Rech Med Composiciones farmacéuticas que comprenden agonistas del receptor de orexina-1 OX1R para el tratamiento de enfermedades inflamatorias del intestino
CA3003283A1 (en) 2015-11-24 2017-06-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Prodrugs of a jak inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease
EP3394080B1 (en) 2015-12-23 2023-06-07 The University Of British Columbia Lipid-linked prodrugs
CN106496233B (zh) 2016-09-26 2018-05-15 东南大学 吡咯并嘧啶类化合物、其制备方法及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
SI3380486T1 (sl) 2020-07-31
PH12018501037A1 (en) 2019-01-28
BR112018010650A8 (pt) 2019-02-26
JP6778747B2 (ja) 2020-11-04
NZ742574A (en) 2018-11-30
CO2018005327A2 (es) 2018-05-31
KR20180080330A (ko) 2018-07-11
EA035816B1 (ru) 2020-08-14
TWI703147B (zh) 2020-09-01
BR112018010650A2 (pt) 2018-11-13
SMT202000242T1 (it) 2020-07-08
EP3380486A1 (en) 2018-10-03
CN108290918B (zh) 2021-06-08
CL2018001345A1 (es) 2018-06-22
JP2020196742A (ja) 2020-12-10
HRP20200561T1 (hr) 2020-06-26
WO2017091544A1 (en) 2017-06-01
HUE049775T2 (hu) 2020-10-28
PT3380486T (pt) 2020-05-22
AU2016359494A1 (en) 2018-06-14
AU2016359494B2 (en) 2021-01-07
CA3003283A1 (en) 2017-06-01
EP3380486B1 (en) 2020-02-19
JP2019501133A (ja) 2019-01-17
TW201720827A (zh) 2017-06-16
PL3380486T3 (pl) 2020-07-27
US20210179655A1 (en) 2021-06-17
ES2784523T3 (es) 2020-09-28
DK3380486T3 (da) 2020-05-18
MX383107B (es) 2025-03-13
ZA201802967B (en) 2019-04-24
SG11201803686UA (en) 2018-06-28
EA201891248A1 (ru) 2018-10-31
ME03757B (me) 2021-04-20
MY189979A (en) 2022-03-22
US11608354B2 (en) 2023-03-21
CY1122918T1 (el) 2021-10-29
US20170145044A1 (en) 2017-05-25
MX2018006282A (es) 2019-01-21
US10961267B2 (en) 2021-03-30
CN108290918A (zh) 2018-07-17
IL259076B (en) 2021-05-31
US10435428B2 (en) 2019-10-08
US20190389895A1 (en) 2019-12-26
LT3380486T (lt) 2020-05-11
UA121270C2 (uk) 2020-04-27
IL259076A (en) 2018-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11608354B2 (en) Prodrugs of a JAK inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease
CN110088105B (zh) Jak家族激酶的小分子抑制剂
CN109071529B (zh) 作为jak激酶抑制剂的嘧啶化合物
US10233174B2 (en) Thiocarbamate prodrugs of tofacitinib
EP3626720A1 (en) Heterocyclic compounds as lsd1 inhibitors
RS59522B1 (sr) Naftiridinska jedinjenja kao inhibitori jak kinaze
KR20200010440A (ko) 야누스 키나아제 저해제의 글루쿠로니드 프로드러그
US20230278955A1 (en) Vitamin d3 derivatives and pharmaceutical use thereof
CN114026086A (zh) 3-(5-甲基-1,3-噻唑-2-基)-n-{(1r)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}苯甲酰胺的类似物
US20250051313A1 (en) Phthalazine derivatives as pyruvate kinase modulators
US20230090053A1 (en) Inhibitors of peptidylarginine deiminases
HK1254120A1 (en) Prodrugs of a jak inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease
HK1254120B (en) Prodrugs of a jak inhibitor compound for treatment of gastrointestinal inflammatory disease