RS59522B1

RS59522B1 - Naftiridinska jedinjenja kao inhibitori jak kinaze

Info

Publication number: RS59522B1
Application number: RS20191390A
Authority: RS
Inventors: Ryan Hudson; Jennifer Kozak; Paul R Fatheree; Dante D Podesto; Gary E L Brandt; Melissa Fleury; Anne-Marie Beausoleil; Xiaojun Huang; Venkat R Thalladi
Original assignee: Theravance Biopharma R&D Ip Llc
Priority date: 2015-05-28
Filing date: 2016-05-26
Publication date: 2019-12-31
Also published as: EP3569604B1; EP3569604A1; US20240132520A1; JP6692836B2; JP2020111593A; LT3303348T; IL255358B; US20210179637A1; US11780852B2; MX378963B; SI3303348T1; SMT201900587T1; JP6942853B2; CN107667108B; BR112017025542A2; ES2924698T3; JP2018515581A; US20170305934A1; US20180354974A1; US12358931B2

Description

Opis pronalaska

STANJE TEHNIKE

Oblast tehnike na koju se pronalazak odnosi

[0001] Pronalazak je usmeren na naftiridinska jedinjenja koja su korisna kao inhibitori JAK kinaze. Pronalazak je takođe usmeren na farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, takva jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja inflamatornih oboljenja, kao i na procese i intermedijere korisne za pripremu takvih jedinjenja.

Poznato stanje tehnike

[0002] Ulcerozni kolitis je hronična inflamatorna bolest debelog creva. Bolest se karakteriše inflamacijom i ulceracijom sluzokože rektuma i debelog creva. Uobičajeni simptomi obuhvataju dijareju, krvave stolice i bol u stomaku. Klinički tok je isprekidan, naznačen naizmeničnim periodima pogoršanja i remisije. Deluje da je incidenca veća u razvijenim nego u zemlјama u razvoju. Procenjeno je da 1,2 miliona lјudi u glavnim industrijski razvijenim zemljama pati od ulceroznog kolitisa, a očekuje se da će se broj povećavati uporedo sa porastom populacije. Pacijenti sa ulceroznim kolitisom su sa povećanim rizikom razvoja kolorektalnog kancera (npr. Danese i saradnici, N Engl J Med, 2011, 365, 1713-1725).

[0003] Iako postoje razne terapijske mogućnosti za unapređivanje i održavanje remisije ulceroznog kolitisa (UC) kod pacijenata, nijedna nije idealna. Tretmani u kojima se upotrebljava sulfalazalin su često efektivni kod blagog UC, ali su isti i mnogo manje efektivni kod oboljenja umerenog ili ozbiljnijeg stepena. Kortikosteroidi se često upotrebljavaju da bi se obezbedila brza indukcija remisije kod pacijenata sa umerenim do ozbiljnim UC. Ipak, hronična upotreba steroida za održavanje remisije nije preporučljiva zbog njihove povezanosti sa dugoročnim štetnim efektima (npr. sa osteoporozom i prelomima, infekcijama, kataraktama, sporijim zarastanjem rana i supresijom proizvodnje hormona nadbubrežne žlezde). Sistemski imunosupresivni lekovi kao što su azatioprin, ciklosporin i metotreksat, su sa sporim početkom dejstva i skromnom efikasnošću kod UC pacijenata sa umerenom ili ozbiljnom kliničkom slikom, a produžena upotreba može biti problematična i usled posledica dugotrajne sistemske imunosupresije (npr. usled povećanja rizika za infekcije i limfom). Anti-TNFa antitela (npr. infliksimab i adalimumab), koja su i skupa i zahtevaju subkutanu ili intravensku primenu, efikasna su kod približno 60 do 70% UC bolesnika sa umerenom ili ozbiljnom kliničkom slikom. Međutim, do oko jedne trećine pacijenata ne reaguje adekvatno, dok druga trećina pacijenata koja u početku odgovara na terapiju, razvija toleranciju u okviru nekoliko nedelјa (Allez i saradnici, J Crohn's Colitis, 2010, 4, 355-366; Rutgeerts i saradnici, N Engl J Med, 2005, 353, 2462-2476). Najskorije odobrena terapija za UC, vedolizumab, anti-α4β7integrinsko antitelo, je efikasna kod pacijenata sa umerenim do teškim UC, ali je način primene parenteralnim putem suboptimalan i posledice dugotrajne imunosupresije ovim mehanizmom tek treba da budu utvrđene. Uprkos postojećim terapijskim mogućnostima, kod oko 10 do 20% bolesnika sa UC je i dalje potrebna kolektomija unutar 10 godina od postavljanja dijagnoze (Targownik i saradnici, Am J Gastroenterol, 2012, 107, 1228-1235). Jasno je stoga da i dalјe postoji nezadovolјna medicinska potreba za efektivnom terapijom koja bi unapredila i održala remisiju umerenog do teškog UC bez razmatranja parametara bezbednosti koji bi bili rezultat hronične, sistemske imunosupresije.

[0004] Iako mehanizam u osnovi ulceroznog kolitisa nije u potpunosti razjašnjen, veruje se da faktori životne sredine izazivaju neprimerenu (prekomernu) reakciju imunog sistema na mikrobiotu creva, kod pojedinaca koji su sa genetičkom predispozicijom, što rezultuje upalom debelog creva, oštećenjem tkiva i pratećim simptomima koji su karakteristični za oboljenje.

[0005] Dok je precizna patogeneza UC nejasna, očigledno je da proinflamatorni citokini imaju klјučnu ulogu u imunom odgovoru (Strober i saradnici, Gastroenterol, 2011, 140, 1756-1767). Mnogi od proinflamatornih citokina koji su najčešće povišeni u UC (npr. IL-4, IL-6, IL-13, IL-15, IL-23, IL-24, IFNγ i leptin), oslanjaju se na JAK familiju tirozinskih kinaza (tj. JAK1, JAK2, JAK3 i Tyk2) u cilju transdukcije signala. Vezanje liganda za citokinski receptor okida autofosforilaciju JAK koja je sa njime asocirana, što zauzvrat rezultuje fosforilacijom prenosnika signala i proteina aktivatora transdukcije (STAT). Različiti STAT proteini obrazuju hetero- ili homodimere i ubrzavaju transkripciju svojih cilјnih gena u jedru ćelije zarad regulacije funkcija kao što su ćelijski rast, diferencijacija i smrt (Clark i saradnici, J Med Chem, 2014, 57, 5023-5038).

[0006] Inhibicija enzima JAK familije može dovesti do inhibicije signalnih puteva mnogih klјučnih proinflamatornih citokina. Prema tome, JAK inhibitori će verovatno biti korisni u lečenju ulceroznog kolitisa i drugih inflamatornih oboljenja poput Kronove bolesti, alergijskog rinitisa, astme i hronične opstruktivne bolesti pluća (HOBP). Međutim, usled modulišućeg dejstva JAK/STAT puta na imuni sistem, sistemsko izlaganje JAK inhibitorima može imati štetan sistemski imunosupresivni efekat. Stoga bi bilo poželјno obezbediti nove JAK inhibitore koje karakteriše efekat na mestu delovanja i koji su bez značajnih sistemskih efekata. Preciznije, za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja poput ulceroznog kolitisa, bilo bi poželјno obezbediti nove JAK inhibitore koji bi se mogli primenjivati oralno i postizati terapijski relevantnu izloženost u gastrointestinalnom traktu uz minimalnu sistemsku izloženost.

KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0007] Prema jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja koja deluju kao inhibitori JAK kinaze.

[0008] Shodno navedenom, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I):

gde je

R<1>izabran od:

(a) C1-4alkil radikala, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -CN;-OC1-3alkil;-C(O)OC1-4alkil; fenil radikala, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH, piridinilom, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; tetrahidropiranilom; -C(O)NR<a>R, gde su R<a>i Rnezavisno vodonik ili C1-

3alkil ili je R<a>vodonik, a Rje

i grupa izabrana od

(b) grupe izabrane od

gde je m 1 ili 2;

(c) -C(O)R<6>, gde je R<6>izabran od radikala:

C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH, -CN, -OC1-4alkil, fenil radikala i -NR<e>R<f>, gde su R<e>i R<f>nezavisno vodonik ili C1-3alkil;

C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; i

gde je R<7>-CN, -CF3ili -OCH3;

(d) -C(O)OR<8>, gde je R<8>izabran od radikala

C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, C3-6cikloalkil, tetrahidrofuranil grupom ili -OR<m>, pri čemu je R<m>vodonik ili C1-3alkil; i

C1-4alkenila; i

(e) -S(O)2R<9>, gde je R<9>izabran od radikala

C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3-

6cikloalkil grupom,

C1-4alkenila,

C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom, fenila,

piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom,

heterociklina koji sadrži 4 do 6 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin po izboru supstituisan sa -CN ili C1-3alkil grupom, pri čemu je C1-3alkil po izboru supstituisan sa -CN

ili -OC1-3alkil grupom; i

R<2>je izabran od vodonika, -OC1-3alkil i -CH2-R<10>, gde je R<10>izabran od radikala -OH, morfolinila, piperidinila, pri čemu je piperidinil po izboru supstituisan sa 2 fluoro gurpe, kao i piperazinila, pri čemu je piperazinil po izboru supstituisan sa metil grupom;

R<3>je izabran od vodonika, C1-3alkil, -OC1-3alkil, -C(O)OC1-3alkil, -S(O)2C1-3alkil i -CH2S(O)2C1-3alkil radikala;

vodonik ili -OC1-3alkil;

R<5>je vodonik ili fluoro grupa; i

n je 1 ili 2;

pod uslovom da

kada je R<3>-OC1-3alkil i svaki od R<2>, R<4>i R<5>je vodonik, R<9>nije fenil;

kada je R<5>fluoro grupa, n je 1 i svaki od R<2>, R<3>i R<4>je vodonik, R<9>nije fenil; i

kada je R<5>je fluoro grupa, R<3>je metili svaki od R<2>i R<4>je vodonik, R<1>nije -C(O)OR<8>;

ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so ili stereoizomer.

[0009] Kao što ovde upotrebljava, izraz "jedinjenje formule (I)" označava jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatlјivu so; tj. ovaj izraz označava jedinjenje formule (I) u obliku slobodne baze ili u obliku farmaceutski prihvatlјive soli, ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0010] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koji sadrži jedinjenje pronalaska i farmaceutski prihvatlјiv nosač.

[0011] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje određeno jedinjenje formule (I) u vidu kristalne slobodne baze. Utvrđen je da je kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril sa temperaturom toplјenja u opsegu od oko 243 °C do oko 253 °C, obično između oko 246 °C i oko 250 °C, sa početkom rapada na oko 237°C i da ispoljava promene težine manje od oko 0,15%, prilikom izlaganja relativnoj vlažnosti u opsegu između oko 5% i oko 90% na sobnoj temperaturi. Prema još jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje kristalni solvat 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila.

[0012] Takođe je opisan postupak lečenja gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja, posebno ulceroznog kolitisa kod sisara, postupak koji obuhvata primenu terapijski efektivne količine jedinjenja ili farmaceutske kompozicije pronalaska. Prema posebnim i jasno različitim aspektima, pronalazak takođe obezbeđuje procese sinteze i međuproizvode koji su ovde opisani, a koji su korisni za pripremu jedinjenja pronalaska.

[0013] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje pronalaska, kao što je ovde opisano, za upotrebu u medicinskoj terapiji, kao i za upotrebu jedinjenja pronalaska u proizvodnji formulacije ili medikamenta za lečenje gastrointestinalnog inflamatornog oboljenja kod sisara.

KRATAK OPIS NACRTA

[0014] Razni aspekti predmetnog pronalaska su ilustrovani pozivanjem na priložene nacrte.

Slika 1 prikazuje rendgenski difraktogram praha (PXRD) kristalnog Oblika I 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila [u dalјem tekstu Oblika I].

Slika 2 prikazuje termogram diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) za kristalni Oblik I. Slika 3 prikazuje grafički prikaz rezultata termalne gravimetrijske analize (TGA) kristalnog Oblika I. Slika 4 prikazuje izotermu dinamičke sorpcije vlage (DMS) za kristalni Oblik I koja je zabeležena na temperaturi od oko 25 °C

Slika 5 prikazuje rendgenski difraktogram praha (PXRD) solvata kristalnog Oblika II 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0015] Između ostalih aspekata, pronalazak obezbeđuje inhibitore JAK kinaze formule (I), njihove farmaceutski prihvatlјive soli i međuproizvode za njihovu pripremu. Predviđeno je da supstituenti i vrednosti koji slede obezbede reprezentativne primere raznih aspekata predmetnog pronalaska. Takođe je predviđeno da ovakve reprezentativne vrednosti dodatno definišu takve aspekte i nije predviđeno da iste isljučuju druge vrednosti ili ograniče područje pronalaska.

[0016] Prema specifičnom aspektu, R<1>je C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od radikala tipa -CN; -OC1-3alkil; -C(O)OC1-4alkil; fenil, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH; piridinil, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; tetrahidropiranilom; -C(O)NR<a>R, gde su R<a>i Rnezavisno vodonik ili C1-

3alkil ili R<a>je vodonik i Rje

i grupa izabrana od

[0017] Prema drugom specifičnom aspektu, R<1>je C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od radikala tipa -CN; -OC1-3alkil; fenil, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH; radikala piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; tetrahidropiranilom; -C(O)NHCH3; i

[0018] Prema drugom specifičnom aspektu, R<1>je C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil je supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa -CN ili -C(O)NHCH3.

[0019] Prema specifičnim aspektima, R<1>je grupa izabrana od

gde je m 1 ili 2 ili gde je m 1.

[0020] Prema specifičnom aspektu, R<1>je -C(O)R<6>, gde je R<6>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH, -CN, -OC1-4alkil, fenil radikala i -NR<e>R<f>, gde su R<e>i R<f>nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa; C3-

6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; radikalom piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; i

gde je R<7>-CN, -CF3ili -OCH3.

[0021] Prema drugom specifičnom aspektu, R<1>je -C(O)R<6>, gde je R<6>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH i fenila; C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; i

gde je R<7>-CN ili -CF3.

[0022] Prema drugom specifičnom aspektu, R<1>je -C(O)R<6>, gde je R<6>C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa -CN ili -C(O)NHCH3.

[0023] Prema specifičnom aspektu, R<1>je -C(O)OR<8>, gde je R<8>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, C3-6cikloalkil, tetrahidrofuranil ili -OR<m>grupom, gde je R<m>vodonik ili C1-3alkil; i C1-4alkenil radikala.

[0024] Prema specifičnom aspektu, R<1>je -S(O)2R<9>, gde je R<9>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3-6cikloalkil grupom; C1-4alkenila; C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil; fenil; piridinil grupom, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom; heterociklina koji sadrži od 4 do 6 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin po izboru supstituisan sa -CN ili C1-

3alkil grupom, pri čemu je C1-3alkil po izboru supstituisan sa -CN ili -OC1-3alkil grupom; i

[0025] Prema drugom specifičnom aspektu, R<1>je -S(O)2R<9>, gde je R<9>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3-6cikloalkil grupom; C1-

4alkenila; C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil; piridinil grupom, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom; heterociklina koji sadrži 4 ili 5 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin vezan za sumpor preko atoma azota i heterociklin je po izboru supstituisan sa -CN ili sa -CH2OCH3; i

[0026] Prema drugom specifičnom aspektu, R<1>je -S(O)2R<9>, gde je R<9>piridinil.

[0027] Prema još jednom aspektu, R<1>je izabran od -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2C(O)NHCH3, -C(O)CHF2i -S(O)2-piridin-3-il radikala.

[0028] Prema specifičnom aspektu, R<2>je izabran od vodonika, -OC1-3alkil i -CH2-R<10>, gde je R<10>izabran od -OH, morfolinil, piperidinil radikala, pri čemu je piperidinil po izboru supstituisan sa dve fluoro grupe i piperazinilom, pri čemu je piperazinil po izboru supstituisan sa metil grupom.

[0029] Prema drugom specifičnom aspektu, R<2>izabran od vodonika, -OCH3i -CH2-R<10>, gde je R<10>izabran od -OH, morfolinil, piperidinil grupe, pri čemu je piperidinil supstituisan sa 2 fluoro grupe na poziciji 4 i piperazinilom, pri čemu je piperazinil supstituisan sa metil grupom na poziciji 4.

[0030] Prema još jednom specifičnom aspektu, R<2>je vodonik.

[0031] Prema specifičnom aspektu, R<3>izabran od vodonika, C1-3alkil, -OC1-3alkil, -C(O)OC1-3alkil, -S(O)2C1-3alkil i -CH2S(O)2C1-3alkil radikala.

[0032] Prema drugom specifičnom aspektu, R<3>izabran od vodonika, -CH3, -OCH3i -C(O)OCH3.

[0033] Prema još jednom specifičnom aspektu, R<3>je vodonik.

[0034] Prema specifičnim aspektima, R<4>je vodonik ili -OC1-3alkil; ili je R<4>vodonik ili -OCH3ili je R<4>vodonik.

[0035] Prema specifičnim aspektima, R<5>je vodonik ili fluoro grupa ili je R<5>vodonik.

[0036] Prema specifičnom aspektu, n je 1. Prema drugom specifičnom aspektu, n je 2.

[0037] Prema specifičnom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) gde:

R<1>je izabran od:

(a) C1-4alkil radikala, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -CN; -OC1-3alkil; fenil radikala, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH; radikala piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; tetrahidropiranilom; -C(O)NHCH3; i

(b) grupe izabrane od

gde je m 1;

(c) -C(O)R<6>, gde je R<6>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH i fenil grupe; C3-

6cikloalkila, pri čemu C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; i

gde je R<7>-CN ili -CF3;

(d) -C(O)OR<8>, gde je R<8>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, C3-6cikloalkil, tetrahidrofuranil radikalom ili -OR<m>, gde je R<m>vodonik ili C1-3alkil; i C1-

4alkenila; i

(e) -S(O)2R<9>, gde je R<9>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3-6cikloalkil grupom; C1-4alkenila; C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom; heterociklina koji sadrži 4 ili 5 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin vezan za sumpor preko atoma azota i heterociklin je po izboru supstituisan sa -CN ili -CH2OCH3; i

R<2>je izabran između vodonika, -OCH3i -CH2-R<10>, gde je R<10>izabran od -OH, radikala morfolinila, piperidinila, pri čemu je piperidinil supstituisan sa dve fluoro grupe na poziciji 4, i piperazinila, pri čemu je piperazinil supstituisan sa metil grupom na poziciji 4;

R<3>je izabran od vodonika, -CH3, -OCH3i -C(O)OCH3;

R<4>je vodonik ili -OCH3;

R<5>je vodonik ili fluoro grupa; i

n je 1 ili 2,

pod uslovom da, kada je R<5>fluoro grupa, R<3>je vodonik.

[0038] Prema drugom specifičnom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) gde:

R<1>je izabran od:

(a) C1-4alkil radikala, pri čemu je C1-4alkil supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa -CN ili -C(O)NHCH3;

(b) -C(O)R<6>, gde je R<6>C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil je supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe; i

(e) -S(O)2R<9>gde je R<9>piridinil;

svaki od R<2>, R<3>, R<4>i R<5>je vodonik; i

n je 1 ili 2.

[0039] Prema određenom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (II):

gde je promenlјiva R<1>kao što je ovde definisano.

[0040] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (III):

gde je promenlјiva R<1>kao što je ovde definisano.

[0041] Prema jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenja iz Primera 1-23 i Tabela 1-8 koji su navedeni u nastavku teksta.

[0042] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje izabrano od sledećih jedinjenja 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila,

N<5>-((1R,3s,5S)-8-(2-fluoroetil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,

N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-8-(piridin-3-ilsulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,

2-(dimetilamino)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il)etan-1-ona,

2,2-difluoro-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)etan-1-ona,

N<5>-((1R,3s,5S)-8-((2-metoksietil)sulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,

N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-9-(piridin-3-ilsulfonil)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina,

izobutil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata,

N-metil-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il) acetamida i njihovih farmaceutski prihvatlјivih soli.

[0043] Hemijske strukture su ovde imenovane u skladu sa IUPAC konvencijama, kao što je implementirano u kompjuterskom programu ChemDraw (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA). Na primer, jedinjenje iz Primera 1:

je označeno kao 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril. Obeležavanje sa (1R,3s,5S) ukazuje na egzo orijentaciju naftiridinilamino grupe u odnosu na 8-azabiciklo-[3.2.1]oktansku grupu. Sva jedinjenja pronalaska su u egzo orijentaciji.

[0044] Nadalјe, pirazolilni deo jedinjenja formule (I) postoji u tautomernom obliku. Na primer, jedinjenje iz Primera 1 može biti ekvivalentno predstavlјeno i kao:

[0045] Prema IUPAC konvenciji, ovakvi reprezentativni načini predstavljanja su razlog različite numeracije atoma pirazolilne strukture. Prethodno navedeni način predstavljanja je označen kao 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((3-metil-1H-pirazol-5-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril, pri čemu podvlačeni brojevi identifikuju gde se naziv razlikuje od naziva prvog načina predstavljanja. Podrazumeva se da, iako su strukture prikazane ili imenovane u određenom obliku, pronalazak uklјučuje i njihov tautomer.

[0046] Jedinjenja pronalaska sadrže jedan ili više hiralnih centara i, stoga, takva jedinjenja (i njihovi međuproizvodi) mogu postojati kao racemske smeše; čisti stereoizomeri (tj. enantiomeri ili dijastereomeri); smeše obogaćene stereoizomerima i slično. Predviđeno je da hiralna jedinjenja koja su ovde prikazana ili imenovana bez definisane stereohemije u hiralnom centru, obuhvataju bilo koji ili sve moguće stereoizomerne varijacije shodno nedefinisanom stereohemijskom centru, osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Prikaz ili imenovanje određenog stereoizomera označava da je naznačeni stereocentar sa naznačenom stereohemijom, pri čemu se podrazumeva da manje količine drugih stereoizomera takođe mogu biti prisutne, ukoliko nije drugačije naznačeno, pod uslovom da korisnost prikazanog ili imenovanog jedinjenja nije eliminisana prisustvom drugog stereoizomera.

[0047] Jedinjenja formule (I) takođe sadrže nekoliko baznih grupa (npr. amino grupa) i, stoga, takva jedinjenja mogu postojati kao slobodne baze i u vidu raznih soli, kao što su oblik monoprotonizovane soli, oblik dvo-protonizovane soli, oblik tri-protonizovane soli ili njihove smeše. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svi navedeni oblici su obuhvaćeni područjem pronalaska.

[0048] Predmetni pronalazak takođe obuhvata izotopski obeležena jedinjenja formule (I), tj. jedinjenja formule (I) u kojima je atom zamenjen ili koja su obogaćena atomom istog atomskog broja, ali atomske mase koja je različita od atomske mase koja preovladava u prirodi. Primeri izotopa koji mogu biti ugrađeni u jedinjenje formule (I) obuhvataju, ali nisu ograničeni na,<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,

<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<35>S,<36>Cl i<18>F. Od posebnog su interesa jedinjenja formule (I) koja su obogaćena tricijumom ili uglјenikom-14, a koja mogu biti upotrebljena, na primer, u ispitivanjima tkivne distribucije. Takođe su od posebnog interesa jedinjenja formule (I) koja su obogaćena deuterijumom, pre svega u svrhu utvrđivanja mesta metabolizma, a za koja se jedinjenja očekuje da su sa većom metaboličkom stabilnošću. Dodatno su od posebnog interesa jedinjenja formule (I) koja su obogaćena izotopom koji emituje pozitrone, kao što su<11>C,<18>F,<15>O i<13>N, jedinjenja koja mogu biti upotrebljena, na primer, u studijama pozitronske emisione tomografije (PET).

Definicije

[0049] Prilikom opisa predmetnog pronalaska, uključujući njegove razne aspekte i primere izvođenja, termini koji slede su sa značenjima koja su navedena u daljem tekstu, ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0050] Termin "alkil" označava monovalentnu zasićenu uglјovodoničnu grupu koja može biti prava ili razgranata ili njihova kombinacija. Ukoliko nije drugačije definisano, takve alkilne grupe obično sadrže od 1 do 10 atoma uglјenika. Reprezentativne alkilne grupe obuhvataju, na primer, metil (Me), etil (Et), n-propil (n-Pr) ili (nPr), izopropil (i-Pr) ili (iPr), n-butil (n-Bu) ili (nBu), sek-butil, izobutil, tercbutil (t-Bu) ili (tBu), n-pentil, n-heksil, 2,2-dimetilpropil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, 2- etilbutil, 2,2-dimetilpentil, 2-propilpentil grupu i slične

[0051] Kada je za određeni termin predviđen određeni broj atoma uglјenika, broj atoma uglјenika je prikazan pre termina. Na primer, termin alkil "označava alkil grupu sa od 1 do 3 atoma uglјenika, pri čemu su atomi uglјenika u bilo kojoj hemijski prihvatlјivoj konfiguraciji, uklјučujući linearne ili razgranate konfiguracije.

[0052] Termin "alkoksi" označava monovalentnu grupu -O-alkil, gde je alkil kao što je prethodno definisano. Reprezentativne alkoksi grupe obuhvataju, na primer, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi grupu i slične.

[0053] Termin "cikloalkil" označava monovalentnu zasićenu karbocikličnu grupu koja može biti monociklična ili multiciklična. Ukoliko nije drugačije definisano, takve cikloalkilne grupe obično sadrže od 3 do 10 atoma uglјenika. Reprezentativne cikloalkilne grupe uklјučuju, na primer, ciklopropil (cPr), ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, adamantil grupu i slične.

[0054] Termin "heterocikl", "heterociklični" ili "heterociklični prsten" označava monovalentnu zasićenu ili delimično nezasićenu nearomatičnu cikličnu grupu, koja ukupno sadrži od 3 do 10 atoma u prstenu, pri čemu prsten sadrži od 2 do 9 atoma uglјenika u prstenu i od 1 do 4 heteroatoma prstena koji su izabrani od azota, kiseonika i sumpora. Heterociklične grupe mogu biti monociklične ili multiciklične (tj. fuzionisane ili premošćene). Reprezentativne heterociklične grupe uklјučuju, na primer, pirolidinil, piperidinil, piperazinil, imidazolidinil, morfolinil, tiomorfolil, indolin-3-il, 2-imidazolinil, tetrahidropiranil, 1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il, kvinuklidinil, 7-azanorbomanil, nortropanil i slične, pri čemu je tačka vezivanja na bilo kom dostupnom atomu uglјenika ili azota iz prstena. Tamo gde kontekst čini tačku vezanja heterociklične grupe očiglednom, takve grupe se mogu alternativno označavati kao nevalentne vrste, tj. pirolidin, piperidin, piperazin, imidazol, tetrahidropiran itd.

[0055] Termin "terapijski efektivna količina" označava količinu koja je dovolјna za efekat lečenja prilikom primene pacijentu kome je tretman potreban.

[0056] Termin "lečenje", kao što se ovde upotrebljava, označava lečenje bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja (kao što je gastrointestinalna inflamatorna bolest) kod pacijenta, poput sisara (naročito čoveka) koji obuhvata jedno ili više od sledećeg:

(a) prevenciju pojave bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja, tj. prevenciju ponovnog pojavlјivanja bolesti ili medicinskog stanja ili profilaktički tretman pacijenta koji je pododređen za razvoj bolesti ili medicinskog stanja;

(b) ublažavanje bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja, tj. uklanjanje ili prouzrokovanje regresije bolesti, poremećaja ili zdravstvenog stanja kod pacijenta, uklјučujući suzbijanje dejstva drugih terapijskih sredstava;

(c) suprimiranje bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja, tj. usporavanje ili zaustavlјanje razvoja bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja kod pacijenta; ili

(d) ublažavanje simptoma bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja kod pacijenta.

[0057] Termin "farmaceutski prihvatlјiva so" označava so koja je prihvatlјiva za primenu pacijentu ili sisaru, kao što je čovek (npr. soli koje su sa prihvatljivom bezbednošću kod sisara prilikom navedenog doznog režima). Reprezentativne farmaceutski prihvatlјive soli obuhvataju soli sirćetne, askorbinske, benzensulfonske, benzoeve, kamforsulfonske, limunske, etansulfonske, edisilinske, fumarne, gentizinske, glukonske, glukoronske, glutaminske, hipurne, bromovodonične, hlorovodonične, izetionske, mlečne, laktobionske, maleinske, jabučne, bademove, metansulfonske, mucinske, naftalenesulfonske, naftalen-1,5-disulfonske, naftalen-2,6-disulfonske, nikotinske, azotne, orotske, pamoinske, pantotenske, fosforne, ćilibarne, sumporne, vinske, p-toluensulfonske i ksinafonske kiseline i sličnih.

[0058] Termin "njegova so" označava jedinjenje koje se obrazuju kada se vodonik iz kiseline zameni katjonom, kao što je katjon metala ili organski katjon i slično. Na primer, katjon može biti protonovani oblik jedinjenja formule (I), tj. oblik gde je jedna ili više amino grupa protonovana od strane kiseline. Uobičajeno je da je so farmaceutski prihvatlјiva so, iako navedeno nije neophodno za soli intermedijernih jedinjenja koja nisu predviđena za primenu pacijentu.

[0059] Termin "zaštitna grupa amino grupe" označava zaštitnu grupu koja je pogodna za sprečavanje neželјenih reakcija azota iz amino grupe. Reprezentativne amino-zaštitne grupe obuhvataju, ali nisu ograničene na, formil; acilne grupe, na primer alkanoilne grupe, kao što su acetil i tri-fluoroacetilna; alkoksikarbonilne grupe, kao što je terc butoksikarbonilna (Boc); arilmetoksikarbonilne grupe, kao što su benziloksikarbonil (Cbz) i 9-fluorenilmetoksikarbonilna (Fmoc); arilmetil grupe, kao što su benzil (Bn), tritil (Tr) i 1,1-di-(4'-metoksifenil)metil grupa; sililne grupe, kao što su trimetilsilil (TMS), tercbutildimetilsilil (TBDMS), [2-(trimetilsilil)etoksi]metil (SEM); i slične. Brojne zaštitne grupe, njihovo uvođenje i uklanjanje, su opisani u T. W. Greene i G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, treće izdanje, Wiley, New York

Opšte procedure sinteze

[0060] Jedinjenja predmetnog pronalaska i njihovi intermedijeri mogu biti pripremljeni prema opštim postupcima i procedurema koje slede, upotrebom komercijalno dostupnih i rutinski pripremljenih početnih materijala i reagenasa. Supstituenti i promenlјive (npr. R<1>, R<2>, R<3>, R<4>itd.) koji su upotrebljeni na šemama koje slede, sa istim su značenjima kao oni koji su definisani drugde, ukoliko nije drugačije naznačeno. Dodatno, jedinjenja koja sadrže kiseli ili bazni atom ili funkcionalnu grupu mogu biti upotrebljeni ili mogu biti proizvedeni kao soli, ukoliko nije drugačije naznačeno (u pojedinim slučajevima, upotreba soli u određenoj reakciji zahteva prevođenje soli u oblik koji nije so, npr. slobodnu bazu, upotrebom rutinskih procedura, a pre izvođenja reakcije).

[0061] Iako određeni primeri izvođenja predmetnog pronalaska mogu biti prikazani ili opisani u procedurama koje slede, stručnjaci iz oblasti će prepoznati da drugi primeri izvođenja ili aspekti predmetnog pronalaska mogu takođe biti pripremljeni upotrebom takvih procedura ili upotrebom drugih postupaka, reagenasa ili početnih materijala koji su poznati stručnjacima. Preciznije, važno je napomenuti da jedinjenja pronalaska mogu biti pripremljena raznim načinima procesa u kojima se reaktanti kombinuju u različitim redosledima, da bi se obezbedili različiti međuproizvodi tokom proizvodnje konačnih proizvoda.

[0062] Opšti postupak pripreme finalnih jedinjenja pronalaska koristi klјučni međuproizvod 1, kao što je ilustrovano na Šemi 1. Promenlјive R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<8>i R<9>su definisane kao za formulu (I), pri čemu R<A>predstavlјa po izboru supstituisan C1-4alkil, a L je odlazeća grupa. Radi jednostavnosti, šema pokazuje jedinjenja u kojima je promenlјiva n Formule (I) definisana kao 1, tj. biciklo grupa je 8-azabiciklo[3.2.1]oktil. Analogni proces se upotrebljava za pripremu jedinjenja u kojima promenljiva n iznosi 2.

Šema 1

[0063] Da bi se pripremila jedinjenja u kojima je R<1>po izboru supstituisan alkil grupom, kao što je definisano u opciji (a), u reakciji alkilacije se obično upotrebljava halo odlazeća grupu L, uglavnom bromo ili jodo, mada se mogu upotrebiti i alternativne odlazeće grupe kao što su hidroksilna ili trifluorometansulfonatna (obično triflatna) grupa. Reakcija se obično izvodi dovođenjem u kontakt intermedijera 1 sa viškom reagensa L-R<A>, u inertnom razblaživaču i u prisustvu viška baze. Reakcija se obično izvodi na temperaturi između oko 20 i oko 60 °C tokom između oko 10 i 24 sata ili dok reakcija ne bude suštinski završena.

[0064] Alternativno, za pripremu jedinjenja u kojima R<1>je cijanoetil grupa može biti upotrebljena Michael-ova adiciona reakcija. Na primer, kao što je opisano u primerima ispod, da bi se pripremilo jedinjenje u kome je R<1>-(CH2)2CN, intermedijer 1 se dovodi u kontakt sa viškom, na primer od 1,1 do 1,5 ekvivalenta, akrilonitrila u prisustvu viška baze, na primer diizopropiletilamina ili diazobicikloandekena. Reakcija se obično izvodi na sobnoj temperaturi tokom između oko 3 i oko 24 sata ili dok reakcija ne bude suštinski završena. U određenim slučajevima, korisno je pripremiti jedinjenja u kojima je R<1>po izboru supstituisan alkil grupom, reduktivnom aminacijom sa pogodno izabranim aldehidom.

[0065] Jedinjenja u kojima je R<1>definisan kao -C(O)R<6>, mogu biti pripremljena dovođenjem u kontakt intermedijera 1 sa umerenim viškom reagensa tipa karboksilne kiseline HO-C(O)-R<6>, pod uobičajenim uslovima amidnog kuplovanja. Reakcija se obično izvodi u prisustvu viška baze, upotrebom sredstva za aktivaciju poput N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (HATU). Reakcija se obično izvodi na sobnoj temperaturi tokom između oko 3 i oko 24 sata ili dok reakcija ne bude suštinski završena.

[0066] Hloroformatni reagens Cl-C(O)OR<8>može biti upotrebljen za pripremu karbamatnih jedinjenja u kojima je R<1>definisan kao -C(O)OR<8>. Intermedijer 1 se obično dovodi u kontakt sa oko 1 ekvivalentom hloroformata u prisustvu viška baze pri temperaturi reda veličine od 0 °C. Reakcija se obično izvodi tokom između oko 1 i oko 3 sata ili dok reakcija ne bude suštinski završena.

[0067] Sulfonamidna jedinjenja u kojima je R<1>definisan kao -S(O)2R<9>, obično se pripremaju dovođenjem u kontakt intermedijera 1 sa između oko 1 i oko 1,1 ekvivalenata sulfonil hlorida oblika Cl-S(O)2R<9>, u prisustvu viška baze i na temperaturi reda večine od 0 °C. Reakcija se obično izvodi tokom između oko 1 i oko 24 sata ili dok reakcija ne bude suštinski završena.

[0068] Primer reakcije za pripremu intermedijera 1-2, u kome je svaka od promenljivih R<2>, R<3>, R<4>i R<5>vodonik, ilustrovan je na Šemi 2.

Šema 2

[0069] U reakciji izmeštanja mesta amina iz koraka 1, di-hloro-naftiridin 2 reaguje sa blagim viškom amino-8-azabiciklo-[3.2.1]oktana 3 koji je zaštićen sa terc-butoksi karbonilom (Boc), u prisustvu baze, da bi se obezbedio intermedijer 4. Intermedijer amino-metil-pirazol 5 koji je zaštićen sa Boc, tada reaguje sa intermedijerom 4, pod standardnim uslovima Buchwald-ove aminacije. Na primer, intermedijer 4 se kombinuje sa između oko 1 i oko 1,5 ekvivalenata pirazolnog intermedijera 5, u prisustvu baze kao što je cezijum karbonat, i sa paladijumskim katalizatorom. Reakcija se obično izvodi na povišenoj temperaturi, između oko 85 °C i oko 110 °C tokom između 24 i oko 48 sati ili dok reakcija ne bude suštinski završena. Boc zaštitna grupa može biti uklonjena iz metilpirazola tokom Buchwald-ove reakcije, kao što je prikazano na Šemi 2, ili Boc zaštitna grupa može ostati na metilpirazolu i biti uklonjena zajedno sa zaštitnom grupom sa 8-azabicilooktil grupe u finalnom koraku. U poslednjem koraku, Boc grupa ili grupe mogu biti uklonjene standardnim tretmanom sa kiselinom, obično trifluorosirćetnom kiselinom ili hlorovodoničnom kiselinom u dioksanu.

[0070] Kao što je opisano u priloženim primerima, priprema intermedijera 1 u kome je jedan ili više od R<2>, R<3>, R<4>i R<5>različit od vodonika, može slediti redosled koraka prikazan na Šemi 2, polazeći od supstituisanog di-hloro-naftiridinskog reagensa analognog intermedijeru 2. Supstituisani intermedijer 2 može biti komercijalno dostupan ili lako pripremljen od komercijalnih reagenasa standardnim procedurama.

[0071] Potrebno je napomenuti da jedinjenja pronalaska mogu biti pripremljena raznim načinima procesa u kojima se reaktanti kombinuju po različitim redosledima, a da bi se obezbedili različiti međuproizvodi tokom proizvodnje konačnih proizvoda. Za određene supstituente, R<2>, R<3>, R<4>ili R<5>, poželјno je započeti sa naftiridinskim intermedijerom koji je supstituisan prekursorom želјenog supstituenta, a zatim izvesti reakciju izmeštanja mesta amina da bi se dodala zaštićena amino-8-azabicilooktil grupa i transformisao prekursor u želјeni supstituent ili jedinjenje koje je jedan korak dalјe od želјenog supstituenta, a pre dodavanja pirazolske grupe. Jedan specifičan primer je postupak obrazovanja intermedijera 6-3, od prekursora zaštićenog sa Boc grupom u supstituisan intermedijer 2 gde je R<2>-CH2OH, pri čemu je svaki od R<3>, R<4>i R<5>vodonik, koji i je naveden u kratkim crtama na Šemi 3 ispod i eksplicitno opisan u Pripremama 5 i 6.

Šema 3

[0072] Zaštićena amino-8-azabicilooktil grupa 3 se dodaje di-hloro-naftiridinu 2-3 supstituisanom sa hidroksilnom grupom da bi se obrazovao međuproizvod 7-3. Sa ugrađenom 8-azabicilooktilnom grupom, hidroksilni supstituent se sukcesivno transformiše u triflat, 8-3, a zatim u metil estar, 9-3, pre dodavanja zaštićenog aminopirazola 5, da bi se obrazovao međuproizvod 10-3, koji je hidrogenizovan da bi se obrazovao zaštićeni međuproizvod 6-3 koji nosi -CH2OH kao supstituent R<2>.

[0073] Dodatni sintetski procesi za pripremu jedinjenja pronalaska u kojima su supstituenti R<2>, R<3>, R<4>ili R<5>drugačiji od vodonika, kao i procesi pipreme jedinjenja u kojima promenljiva n ima vrednost 2, opisani su u primerima koji slede.

[0074] Shodno navedenom, prema aspektu postupka, pronalazak obezbeđuju postupak pripreme jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli, pri čemu postupak obuhvata reakciju jedinjenja formule (IV):

sa (i) jedinjenjem formule L-R<A>, gde je L odlazeća grupa, a R<A>je po izboru supstituisan alkil kao što je definisano za R<1>u okviru opciji (a) ili za supstituent iz opcije (b) ili je (ii) HO-C(O)R<6>ili (iii) Cl-C(O)OR<8>ili (iv) Cl-S(O)2R<9>, da bi se obrazovalo jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.

[0075] Prema odvojenim i jasno različitim aspektima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (IV) gde su promenlјive bilo kojih od vrednosti koje su prethodno opisane, kao i jedinjenje formule (IV) gde je svaki od R<2>, R<3>, R<4>i R<5>vodonik.

Kristalni oblici

[0076] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril (Primer 1) u kristalnom obliku tipa slobodne baze ili njegovog solvata.

[0077] Kristalni Oblik I pronalaska je kristalna slobodna baza jedinjenja iz Primera 1. Prema jednom aspektu, Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha (PXRD) sa značajnim pikovima difrakcije, između ostalih pikova, na vrednostima 2θ od 7,87±0,20; 12,78±0,20; 15,78±0,20 i 20,41±0,20. Oblik I može dalje biti okarakterisan PXRD obrascem sa dva ili više dodatnih difrakcionih pikova, uklјučujući tri ili više i četiri ili više dodatnih difrakcionih pikova na vrednostima 2θ izabranim od 10,80±0,20; 13,47±0,20; 13,64±0,20; 14,66±0,20; 15,11±0,20; 15,54±0,20; 17,75±0,20; 21,00±0,20; 22,22±0,20; 22,93±0,20 i 23,65±0,20. Prema drugom aspektu, Oblik I karakteriše PXRD obrazac sa difrakcionim pikovima na vrednostima 2θ od 7,87±0,20; 10,80±0,20; 12,78±0,20; 13,47±0,20; 13,64±0,20; 14,66±0,20; 15,11±0,20; 15,54±0,20; 15,78±0,20; 17,75±0,20; 20,41±0,20; 21,00±0,20; 22,22±0,20; 22,93±0,20 i 23,65±0,20.

[0078] Kao što je dobro poznato u oblasti rentgenske difrakcije praha, položaji pikova u okviru PXRD spektra su relativno manje osetlјivi na eksperimentalne detalјe, kao što su detalјi pripreme uzorka i geometrije instrumenta, nego što su to relativne visine pikova. Stoga, prema jednom aspektu, kristalni Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha u kome su položaji pikova suštinski u skladu sa onima koji su prikazani na Slici 1.

[0079] Strukturu kristalnog Oblika I je dalјe okarakterisana rendgenskom difrakcionom analizom monokristala. Kristali pripadaju monoklinalnom kristalnom sistemu i sa prostornom su grupom tipa P21/n. Dimenzije jedinične ćelije su: a = 8,8240(10) Å, b = 22,4866(3) Å, c = 10,2464(2) Å, α = 90°, β = 93,2360(10)°, γ=90°, zapremina = 2029,87(5) Å<3>. Izračunata gustina iznosi 1,317 g/cm<3>. Kristali sadrže četiri molekula po jedinićnoj ćeliji. Struktura potvrđuje da kristali ne sadrže vodu ili druge molekule rastvarača i da je molekulska struktura u skladu sa strukturom jedinjenja iz Primera 1, kao što je ovde prikazano. Pikovi difrakcije X-zraka prahom koji su predviđeni na osnovu izvedenih atomskih pozicija su se odlično slagali sa rezultatima koji su zapaženi.

[0080] Prema drugom aspektu, kristalni Oblik I karakteriše njegovo ponašanje prilikom izlaganja visokoj temperaturi. Kao što je prikazano na Slici 2, zapis diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koji je snimljen pri stopi zagrejanja od 10 °C po minuti, prikazuje maksimalnu vrednost u endotermnom protoku toplote, identifikovanom kao tranzicija topljenja, opsega od oko 243 °C do oko 253 °C, uklјučujući između oko 246 °C i oko 250 °C. Zapis termalne gravimetrijske analize (TGA) sa Slike 3 ne pokazuje značajan gubitak težine na temperaturama ispod temperature početka dekompozicije na oko 237 °C.

[0081] Pokazano je da Oblik I karakteriše reverzibilni profil sorpcije/desorpcije sa izuzetno malom sklonošću ka higroskopnosti. Oblik I je ispoljio povećanje težine manje od oko 0,14% u rasponu vlažnosti od 5% do 90% relativne vlažnosti i povećanja težine manje od oko 0,07% u rasponu vlažnosti od 5% do 90% relativne vlažnosti na sobnoj temperaturi, kao što je prikazano na Slici 4. U dva ciklusa sorpcije i desorpcije nije uočena histereza. Oblik I se stoga smatra nehigroskopnim.

[0082] Pokazano je takođe da je kristalni Oblik I stabilan nakon izlaganja povišenoj temperaturi i vlažnosti. Nakon 3 meseca skladištenja u ubrzanim uslovima, na 40 °C i pri relativnoj vlažnosti vazduha od 75%, nisu uočene statistički značajne promene hemijskog sadržaja niti u profilu nečistoća.

[0083] Kristalni Oblik II je kristalni solvat jedinjenja iz Primera 1, naznačen time što je rendgenski difraktogram praha na Slici 5 sa značajnim difrakcionim pikovima, između ostalih pikova, na vrednostima 2θ od 9,76±0,20; 15,06±0,20; 16,61±0,20, 20,40±0,20 i 21,99±0,20. Kao što je opisano u Primeru 18 koji sledi, solvat Oblika II sadrži između oko 6% i oko 7% metanola, između oko 2% i oko 2,5% N,N-dimetilformamida i između oko 1 i oko 1,5% vode.

[0084] Solvat Oblika II može biti pripremljen dodavanjem smeše metanola i vode, obično u odnosu metanola i vode od između oko 1,5:1 i oko 3:1, u proizvod reakcije N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (jedinjenje 1-2 na Šemi 2) sa akrilonitrilom ili sa bromopropionitrilom, a koja se obično odvija u dimetilformamidu. Dobijena reakciona smeša se zatim meša na temperaturi između oko 20 °C i oko 25 °C tokom oko 4 sata i oko 24 sata, a potom filtrira i ispira metanolom ili smešom metanola i vode, kao što je smeša metanola i vode od 1:1, 2:1 ili 3:1, da bi se obezbedio solvat Oblika II. Etanolni solvat može biti pripremljen obrazovanjem suspenzije solvata Oblika II u etanolu.

[0085] Nesolvatni kristalni Oblik I se konvencionalno priprema od solvatnog oblika jedinjenja iz Primera 1, poželјno solvata Oblika II. U uobičajenom procesu, solvat Oblika II se obično kombinuje sa rastvorom koji nije protonujući, da bi se obezbedila suspenzija. Korisni rastvarači obuhvataju, ali nisu ograničeni na, dioksan, toluen, butil acetat i aceton. Suspenzija se obično obrazuje u koncentraciji između oko 50 mg solvata u mililitru rastvarača i oko 85 mg/mL. Suspenzija se može grejati na temperaturi između oko 40 °C i oko 110 °C tokom oko 4 sata i oko 3 dana, i dalje filtrirati i isprati da bi se dobila kristalna čvrsta supstanca Oblika I. Kao što je opisano u Primerima 19 i 20, za aceton je utvrđeno da je naročito korisno rastvarač.

[0086] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje postupak pripreme kristalnog Oblika I, pri čemu postupak obuhvata (a) obrazovanje suspenzije kristalnog solvata 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila u rastvaraču odabranom od dioksana, toluena, butil acetata i acetona, (b) grejanje suspenzije na temperaturi između oko 40 °C i oko 110 °C tokom oko 4 sata i oko 3 dana i (c) izolovanje kristalnog Oblika I iz suspenzije.

Farmaceutske kompozicije

[0087] Jedinjenja pronalaska i njihove farmaceutski prihvatlјive soli se obično upotrebljavaju u vidu farmaceutske kompozicije ili formulacije. Takve farmaceutske kompozicije mogu biti primenjene pacijentu bilo kojim prihvatljivim načinom primene, uključujući, ali ne ograničavajući se na, oralni, rektalni, nazalni, inhalacijom, topikalni (uklјučujući transdermalni) i parenteralni način primene.

[0088] Shodno navedenom, prema jednom aspektu kompozicije, pronalazak je usmeren na farmaceutsku kompoziciju koji sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač ili ekscipijens i jedinjenje formule (I), gde, kao što je prethodno definisano, "jedinjenje formule (I)" označava jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatlјivu so. Po izboru, takve farmaceutske kompozicije mogu sadržavati i druga terapijska i/ili sredstva za formulisanje, ukoliko je to poželjno. Prilikom razmatranja kompozicija i njihove upotrebe, "jedinjenje pronalaska" se ovde može označavati i kao "aktivan agens". Kao što se ovde upotrebljava, predviđeno je da termin "jedinjenje pronalaska" uključuje sva jedinjenja obuhvaćena formulom (I), kao i vrste sadržane u formulama (II) i (III), i njihove farmaceutski prihvatlјive soli

[0089] Farmaceutske kompozicije pronalaska obično sadrže terapijski efektivnu količinu jedinjenja predmetnog pronalaska. Stručnjaci će, međutim, ispravno proceniti da farmaceutska kompozicija može sadržavati više od terapijski efektivne količine, tj. da kompozicije može biti povećane mase, ili pak biti sa količinom koja je manja od terapijski efektivne, tj. u vidu pojedinačnih jediničnih doza koje su dizajnirane tako da budu primenjene više puta da bi se postigla terapijski efektivna količina.

[0090] Uobičajeno je da takve farmaceutske kompozicije sadrže od oko 0,1 do oko 95 težinskih% aktivnog agensa; poželјno, od oko 5 do oko 70 težinskih%; i još poželјnije od oko 10 do oko 60 težinskih% aktivnog agensa.

[0091] U farmaceutskim kompozicijama pronalaska može biti upotrebljen bilo koji konvencionalni nosač ili ekscipijens. Izbor određenog nosača ili ekscipijensa ili kombinacija nosača ili eksipijenasa, zavisiće od načina primene koji se upotrebljava za lečenje određenog pacijenta ili od vrste medicinskog stanja ili bolesnog stanja. U ovom pogledu, priprema odgovarajuće farmaceutske kompozicije za određeni način primene, u potpunosti je unutar područja nadležnosti stručnjaka iz farmacetske oblasti tehnike. Dodatno, nosači ili ekscipijensi koji se upotrebljavaju u farmaceutskim kompozicijama predmetnog pronalaska su komercijalno dostupni. Radi dodatne ilustracije, opisane su i konvencionalne tehnike formulisanja, u publikaciji Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20. izdanje, Lippincott Williams & White, Baltimor, Meriland (2000); i H.C. Ansel i saradnici, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7. izdanje, Lippincott Williams & White, Baltimor, Meriland (1999).

[0092] Reprezentativni primeri materijala koji mogu poslužiti kao farmaceutski prihvatlјivi nosači uklјučuju, ali nisu ograničeni na, sledeće: šećere, kao što su laktoza, glukoza i saharoza; skrobove, kao što su kukuruzni skrob i skrob krompira; celuloza, kao što je mikrokristalna celuloza, i njeni derivate, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celuloza acetat; tragakant u prahu; slad; želatin; talk; pomoćne supstance (eksipijensi), kao što su puter kakaa i voskovi za supozitorije; ulјa kao što su ulјe kikirikija, ulјe semena pamuka, ulјe šafranike, ulje susama, maslinovo ulјe, kukuruzno ulјe i sojino ulјe; glikoli, poput propilen glikola; polioli, kao što su glicerin, sorbitol, manitol i polietilen glikol; estri, poput etil oleata i etil laurata; agar; puferski agensi kao što su magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginska kiselina; voda oslobođena pirogena; izotonični fiziološki rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol; fosfatom puferisani rastvori i druge netoksične kompatibilne supstance koje se koriste u farmaceutskim kompozicijama.

[0093] Farmaceutske kompozicije se obično pripremaju temelјnim i bliskom mešanjem ili izmešavanjem aktivnog sredstva sa farmaceutski prihvatlјivim nosačem i sa jednim ili sa više izbornih sastojaka. Dobijena uniformno izmešana smeša može zatim biti oblikovana ili upotrebljena za ispunu tableta, kapsula, pilula i sličnog, upotrebom konvencionalnih procedura i opreme.

[0094] Farmaceutske kompozicije pronalaska su pogodno upakovane u jedinični dozni oblik. Termin "jedinični dozni oblik" se odnosi na fizički diskretnu jedinicu koja je pogodna za primenu doze pacijentu, tj. svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog agensa koja je izračunata tako da se proizvede želјeni terapijski efekat bilo samostalno ili u kombinaciji sa jednom ili sa više dodatnih jedinica. Na primer, takvi jedinični dozni oblici mogu biti kapsule, tablete, pilule i slično, ili jedinična pakovanja koja su pogodna za parenteralnu primenu.

[0095] U jednom primeru izvođenja, farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska su pogodne za oralnu primenu. Pogodne farmaceutske kompozicije za oralnu primenu mogu biti u obliku kapsula, tableta, pilula, pastila, kašeta, dražeja, praškova, granula; ili kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili nevodenoj tečnosti; ili kao tečna emulzija tipa ulјe-u-vodi ili voda-u-ulјu; ili kao eliksir ili sirup; i slično; pri čemu svaka od navedenih sadrži unapred određenu količinu jedinjenja predmetnog pronalaska kao aktivan sastojak.

[0096] Kada je predviđena oralna primena, u vidu čvrstog doznog oblika (tj. u vidu kapsule, tablete, pilule i sličnog), farmaceutske kompozicije pronalaska obično sadrže aktivno sredstvo i jedan ili više farmaceutski prihvatlјivih nosača, kao što su natrijum citrat ili dikalcijum fosfat. Po izboru ili alternativno, takvi čvrsti dozni oblici takođe mogu sadržavati: ispunjivače ili ekstendere, kao što su skrobovi, mikrokristalna celuloza, laktoza, dikalcijum fosfat, saharoza, glukoza, manitol i/ili silicijumska kiselina; sredstva za povezivanje, kao što su karboksimetilceluloza, hidroksipropilmetil celuloza, alginati, želatin, polivinil pirolidon, saharoza i/ili akacija; humektanti, poput glicerola; sredstva za dezintegraciju, kao što su natrijum korskarmeloza, krospovidon, agar-agar, kalcijum karbonat, skrob krompira ili tapioke, alginska kiselina, određeni silikati i/ili natrijum karbonat; sredstva za odlaganje rastvaranja, kao što je parafin; ubrzivače apsorpcije, kao štu kvaternarna amonijumska jedinjenja; sredstva za vlaženje, kao što je cetil alkohol i/ili glicerol monostearat; apsorbansi, kao što su kaolin i/ili bentonit glina; lubrikanti, kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat i/ili njihove smeše; sredstva za boju; i puferska sredstva.

[0097] Sredstva za oslobađanje, sredstva za vlaženje, sredstva za oblaganje, zaslađivači, sredstva za ukus i prijatan miris, konzervansi i antioksidansi, takođe mogu biti prisutni u farmaceutskim kompozicijama pronalaska. Primeri farmaceutski prihvatlјivih antioksidanasa uklјučuju: antioksidanse rastvorlјive u vodi, kao što su askorbinska kiselina, cistein hidrohlorid, natrijum bisulfat, natrijum metabisulfat, natrijum sulfit i slično; antioksidanse rastvorlјive u ulјu, kao što su askorbil palmitat, butilisani hidroksianizol, butilisani hidroksitoluen, lecitin, propil galat, alfa-tokoferol i slični; i sredstva za helaciju metala, kao što su limunska kiselina, etilendiamin tetrasirćetna kiselina, sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina i slično. Sredstva za oblaganje tableta, kapsula, pilula i sličnog, uklјučuju ona koja se upotrebljavaju za enteričke premaze, kao što su celuloza acetat ftalat, polivinil acetat ftalat, hidroksipropil metilceluloza ftalat, metakrilna kiselina, estarski kopolimeri metakrilne kiseline, celuloza acetat trimelitat, karboksimetil etil celuloza, acetatni sukcinat hidroksipropil metil celuloze i slično.

[0098] Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu takođe biti formulisane tako da se obezbedi sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sredstva upotrebom, na primer, hidroksipropil metil celuloze u raznim proporcijama; ili drugih polimernih matrica, lipozoma i/ili mikrosfera. Pored navedenog, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu po izboru sadržavati sredstva za zamućivanje i mogu biti formulisane tako da oslobađaju aktivan sastojak samo, ili preferencijalno, u određenom delu gastrointestinalnog trakta, po izboru, na odložen način. Primeri kompozicija u koje se može ugraditi aktivan sastojak i koje mogu biti upotrebljene su polimerne supstance i voskovi. Aktivno sredstvo može takođe biti u mikrokapsuliranom obliku, ukoliko je to pogodno, sa jednim ili sa više prethodno opisanih ekscipijenasa.

[0099] Pogodni tečni dozni oblici za oralnu primenu uklјučuju, radi ilustracije, farmaceutski prihvatlјive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Tečni dozni oblici obično sadrže aktivno sredstvo i inertni razblaživač, poput na primer vode ili drugih rastvarača, sredstava za rastvaranje i emulgatora, kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, ulјa (naročito ulja semena pamuka, kikirikija, kukuruza, klica, masline, ricinusa i susama), oleinska kiselina, glicerol, tetrahidrofurilni alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina sorbitana i njihove smeše. Alternativno, određene tečne formulacije mogu biti prevedene, na primer, sušenjem putem raspršivanja, u prah, koji se dalje upotrebljava za pripremu čvrstih doznih oblika konvencionalnim procedurama.

[0100] Suspenzije, pored aktivnog sastojka, mogu sadržavati sredstva za resuspendovanje, kao što su, na primer, etoksilisani izostearilni alkoholi, polioksietilen sorbitol i estri sorbitana, mikrokristalna celuloza, aluminijum metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant i njihove smeše.

[0101] Jedinjenja predmetnog pronalaska se takođe mogu primeniti parenteralno (npr. intravenskim, subkutanim, intramuskularnim ili intraperitonealnim injeciranjem). Za parenteralnu primenu, aktivno sredstvo je obično pomešano sa pogodnim nosačem za parenteralnu primenu, uklјučujući, na primer, sterilne vodene rastvore, fiziološki rastvor, alkohole male molekulske težine kao što su propilen glikol, polietilen glikol, bilјna ulјa, želatin, esteri masnih kiselina kao što je etil oleat i slično. Parenteralne formulacije mogu takođe sadržavati jedan ili više antioksidanasa, rastvarača, stabilizatora, konzervanasa, sredstava za vlaženje, emulgatora, puferišućih sredstava ili sredstava za dispergovanje. Ovakve formulacije se mogu učiniti sterilnim upotrebom sterilnog medijuma za injeciranje, agenasa za sterilizaciju, kao i upotrebom filtracije, ozračivanja ili grejanja.

[0102] Alternativno, farmaceutske kompozicije pronalaska su formulisane za primenu inhalacijom. Pogodne farmaceutske kompozicije za primenu inhalacijom će obično biti u vidu aerosola ili praška. Takve kompozicije se uglavnom primenjuju upotrebom dobro poznatih uređaja za isporuku, kao što su inhalator sa metričkim sistemom doziranja, inhalator za suvi prah, nebulizator ili sličan uređaj za isporuku.

[0103] Kada se primenjuju inhalacijom upotrebom spremišta pod pritiskom, farmaceutske kompozicije pronalaska će obično sadržavati aktivni sastojak i pogodan gas za potiskivanje, kao što su dihlorodifluorometan, trihlorfluorometan, dihlortetrafluoroetan, uglјen-dioksid ili drugi pogodan gas. Pored navedenog, farmaceutska kompozicija može biti u vidu kapsule ili uloška (napravlјenog, na primer, od želatina) koji sadrži jedinjenje pronalaska i prašak pogodan za upotrebu putem inhalatora za prah. Pogodne osnove za prah uklјučuju, na primer, laktozu ili skrob.

[0104] Jedinjenja pronalaska mogu takođe biti primenjena transdermalno, upotrebom poznatih sistema i eksipijenasa za transdermalnu isporuku. Na primer, aktivan agens može biti pomešan sa pojačivačem propustljivosti, kao što je propilen glikol, polietilen glikol monolaurat, neki od azacikloalkan-2-ona i sličnih, a potom biti ugrađen u flaster ili sličan sistem za isporuku. Dodatni ekscipijensi, uklјučujući sredstva za obrazovanje gela, emulgatore i pufere, mogu biti takođe upotrebljeni u ovakvim transdermalnim kompozicijama ukoliko je to poželjno.

[0105] Alternativno, jedinjenja pronalaska mogu biti primenjena u vidu supozitorija. Uobičajna formulacija za supozitorije će se u principu sastojati od aktivnog agensa sa sredstvom za povezivanje i/ili lubrikantom, kao što su želatin ili puter kakaa ili pak drugi bilјni ili sintetski vosak ili masnoća niske temperature topljenja.

[0106] Neograničavajući primeri koji slede ilustruju reprezentativne farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska.

Čvrsti oralni dozni oblik u vidu tablete

[0107] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so su pomešani kao suve supstance sa mikrokristalnom celulozom, polivinil pirolidonom i umreženom karmelozom-natrijum u odnosu 4:5:1:1, pa su komprimovane u tablete da bi se obezbedila jedinična doza sa, na primer, 5 mg, 20 mg ili 40 mg aktivnog agensa po tableti.

Čvrsti oralni dozni oblik u vidu kapsule

[0108] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so su iskombinovani sa mikrokristalnom celulozom, polivinil pirolidonom i umreženom karmelozom-natrijum u odnosu 4:5:1:1 putem vlažne granulacije, pa je dobijeni materijal upotrebljen za ispunu želatinskih ili kapsula od hidroksipropil metilceluloze da bi se obezbedio jedinični dozni oblik sa, na primer, 5 mg, 20 mg ili 40 mg aktivnog agensa po kapsuli.

Čvrsti oralni dozni oblik u vidu tablete

[0109] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so su, upotrebom suve ili vlažne granulacije, pomešani sa mikrokristalnom celulozom, laktozom, hidroksipropilmetil celulozom, ukršenim povidonom i magnezijum stearatom. Sastav formulacije u težinskim procentima je sledeći (% wt/wt): jedinjenje pronalaska (4%), mikrokristalna celuloza (45%), laktoza (36%), hidroksipropilmetil celuloza (10%), umreženi povidon (3%) i magnezijum stearat (2%). Smeše su nakon suve ili vlažne granulacije komprimovane u tablete da bi se obezbedio jedinični dozni oblik sa 10 mg aktivnog agensa po tableti od 250 mg.

Čvrsti oralni dozni oblik u vidu tablete

[0110] Jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so su, upotrebom suve ili vlažne granulacije, pomešani sa mikrokristalnom celulozom, hidroksipropilmetil celulozom, umreženim povidonom i magnezijum stearatom. Sastav formulacije u težinskim procentima je sledeći (% wt/wt): jedinjenje pronalaska (40%), mikrokristalna celuloza (45%), hidroksipropilmetil celuloza (10%), umreženi povidon (3%) i magnezijum stearat (2%). Smeše su nakon suve ili vlažne granulacije komprimovane u tablete da bi se obezbedio jedinični dozni oblik sa 100 mg aktivnog agensa po tableti od 250 mg.

Tečna formulacija

[0111] Tečna formulacija koja sadrži jedinjenje pronalaska (0,1%), vodu (98,9%) i askorbinsku kiselinu (1,0%) obrazovana je dodavanjem jedinjenja pronalaska u smešu vode i askorbinske kiseline.

Oralni dozni oblik sa enteričkom oblogom

[0112] Jedinjenje pronalaska je rastvoreno u vodenom rastvoru koji je sadržavao polivinil pirolidon, nakon čega je rastvor raspršivanjem nanet na mikrokristalnu celulozu ili granule šećera, pri čemu je odnos težina aktivnog agensa i granula iznosio 1:5, a zatim je primenjeno i oko 5 težinskih procenata enteričkog premaza koji je sadržavao akrilni kopolimer, na primer, kombinaciju akrilnih kopolimera koji su dostupni pod komercijalnim nazivima Eudragit-L® i Eudragit-S®, ili acetatni sukcinat hidroksipropil metilceluloze. Granule sa enteričkim premazom su upotrebljene za ispunjavanje želatinskih ili kapsula od hidroksipropil metilceluloze da bi se obezbedio jedinični dozni oblik sa, na primer, 30 mg aktivnog agensa po kapsuli.

Oralni dozni oblik sa enteričkom oblogom

[0113] Enterički premaz koji sadrži kombinaciju Eudragit-L® i Eudragit-S® ili acetatni sukcinat hidroksipropil metilceluloze je nanošen na oralni dozni oblik u vidu tablete ili oralni dozni oblik u vidu kapsue koji je prethodno opisan.

Korisnost

[0114] Pokazano je da su jedinjenja pronalaska snažni inhibitori enzima iz JAK familije: JAK1, JAK2, JAK3 i TYK2. Inhibicija enzima iz JAK familije može inhibirati signalne puteve mnogih klјučnih proinflamatornih citokina. Stoga, očekuje se da JAK inhibitori pronalaska budu koristni u lečenju inflamatornih oboljenja kao što su ulcerozni kolitis, Kronova bolesti, alergijski rinitis, astma i hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP).

[0115] Jedinjenja pronalaska su dizajnirana tako da se slabo apsorbuju, a da bi se na sistemska izloženost svela na minimum. Kao što je opisano u eksperimentalnom delu pronalaska koji sledi, profili apsorpcije i distribucije uobičajenih jedinjenja su detaljno okarakterisani u pretkliničkim ispitivanjima. Odabrana jedinjenja su ispitana primenom pacovima kojima su ugrađene kanile i pokazana je njihova niska apsorpcija u plazmi nakon primene u portalnu venu. Pored navedenog, jedinjenja su dizajnirana tako da svoj efekat ispoljavaju na mestu dejstva u gastrointestinalnom traktu. Odabrana jedinjenja su kod pacova ispoljila odnos izloženosti debelog creva prema izloženosti u plazmi koji je bio veći od oko 450. Preciznije, nakon oralne primene doze u pretkliničkim vrstama, jedinjenje iz Primera 1 je karakterisala značajno veća izloženost duž gastrintestinalnog trakta nego što je iznosila izloženost u plazmi. Štaviše, jedinjenje iz Primera 1 je procenjeno i kod zdravih humanih subjekata i utvrđeno je da ga karakteriše visoka koncentracija leka u uzorcima stolice, što je ukazalo na značajnu izloženost gastrointestinalnog trakta.

[0116] Kolitis indukovan oksazolonom je eksperimentalni model koga karakteriše histološka sličnost sa ulceroznim kolitisom kod lјudi. Kao što je opisano u dalјem tekstu, jedinjenje iz Primera 1 je, između ostalih jedinjenja pronalaska, pokazalo aktivnost u modelu kolitisa izazvanog oksazolonom kod miševa. Nadalјe, kada je ispitivanje rađeno u modelu imunosupresije kod miševa, kojim se ispituje sistemska funkcionalna aktivnost, jedinjenje je ispoljilo minimalan efekat imunosupresije u istoj dozi koja je bila potrebna za postizanje efikasnosti u oksazolonskom modelu. Stoga, jedinjenje je u pretkliničkim modelima pokazalo antikolitisnu aktivnost bez ispolјavanja sistemskih efekata.

[0117] Očekuje se da će visok odnos izloženosti u debelom crevu i plazmi koji se postiže primenom navedenih jedinjenja obezbediti snažnu anti-inflamatornu aktivnost koja je usmerena na lumen creva i bez pridruženih je, sistemski usmerenih neželјenih efekata. Očekuje se da će jedinjenja biti korisna za razne indikacije udružene sa inlfamacijom u gastrointestinalnom sistemu koje obuhvataju, ali nisu ograničene na, ulcerozni kolitis (proktosigmoiditis, pankolitis, ulcerozni proktitis i levostrani kolitis), Kronovu bolest, kolageni kolitis, limfocitni kolitis, Behčetovu bolest, celijakiju, kolitis prouzrokovan ciljanim dejstvom na ključne molekule prilikom lečenja kancera (npr. kolitis izazvan inhibitorom CTLA-4), ileitis, eozinofilni ezofagitis, kolitis povezan bolešću “kalem-protiv-domaćina” i infektivni kolitis. Ulcozni kolitis (Reimund i saradnici, J Clin Immunology, 1996, 16, 144-150), Kronovu bolest (Woywodt i saradnici, Eur J Gastroenterology Hepatology, 1999, 11, 267-276), kolageni kolitis (Kumawat i saradnici, Mol Immunology, 2013, 55, 355-364), limfocitni kolitis (Kumawat i saradnici, 2013), eozinofilni ezofagitis (Weinbrand-Goichberg i saradnici, Immunol Res, 2013, 56, 249-260), kolitis povezan bolešću “kalem-protiv-domaćina” (Coghill i saradnici, Blood, 2001, 117, 3268-3276), infektivni kolitis (Stallmach i saradnici, Int J Colorectal Dis, 2004, 19, 308-315), Behčetovu bolest (Zhou i saradnici, Autoimmun Rev, 2012, 11, 699-704), celijakiju (de Nitto i saradnici, World J Gastroenterol, 2009, 15, 4609-4614), kolitis prouzrokovan ciljanim dejstvom na ključne molekule prilikom lečenja kancera (npr. kolitis izazvan inhibitorom CTLA-4; (Yano i saradnici, J Translation Med, 2014, 12, 191) i ileitis (Yamamoto i saradnici, Dig Liver Dis, 2008, 40, 253-259) karakteriše povišenje nivoa određenih proinflamatornih citokina. Kako mnogi proinflamatorni citokini deluju putem aktivacije JAK, jedinjenja opisana u predmetnoj prijavi mogu biti sposobna da ublaže inflamaciju i obezbede olakšavanje simptoma.

[0118] Preciznije, očekuje se da će jedinjenja pronalaska biti korisna za indukciju i održavanje remisije ulceroznog kolitisa i za lečenje Kronove bolesti, kolitisa izazvanog inhibitorom CTLA-4, kao i gastrointestinalnih štetnih efekata kod kolitisa povezanog sa bolešću “kalem-protiv-domaćina”.

[0119] Prema jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku lečenja gastrointestinalne inflamatorne bolesti kod sisara (npr. čoveka), pri čemu postupak obuhvata primenu terapijski efektivne količine jedinjenja pronalaska ili farmaceutske kompozicije koja sadrži farmaceutski prihvatlјiv nosač i jedinjenje pronalaska sisaru.

[0120] Pronalazak dalјe obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku lečenja ulceroznog kolitisa kod sisara, postupak koji obuhvata primenu terapijski efektivne količine jedinjenja pronalaska ili farmaceutske kompozicije koja sadrži farmaceutski prihvatlјivu nosač i jedinjenje pronalaska sisaru.

[0121] Kada se upotrebljavaju za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih obolјenja, jedinjenja pronalaska će se obično primenjivati oralno u jednoj dnevnoj dozi ili u više doza po danu, iako drugi oblici primene takođe mogu biti upotrebljeni. Količinu aktivnog sredstva koja se primenjuje po dozi ili ukupna količina koja se primenjuje po danu, obično će biti određena od strane lekara, uzimanjem u obzir relevantnih okolnosti, uključujući stanje koje se leči, izabrani način primene, aktuelno jedinjenje koje se primenjuje i njegovu relativnu aktivnost, starost, težinu i odgovor određenog pacijenta, kao i ozbiljnost simptoma kod pacijenta i slično.

[0122] Očekuje se da će pogodne doze za lečenje ulceroznog kolitisa i drugih gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja biti od oko 1 do oko 400 mg/dan aktivnog agensa, uklјučujući od oko 5 do oko 300 mg/dan i od oko 20 do oko 70 mg aktivnog sredstva dnevno, kod čoveka prosečne težine od 70 kg.

Kombinovana terapija

[0123] Jedinjenja pronalaska takođe mogu biti upotrebljena u kombinaciji sa jednim ili sa više agenasa koja deluju istim mehanizmom ili različitim mehanizmima, u cilju postizanja efekta lečenja gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja. Korisne klase agenasa za kombinovanu terapiju uklјučuju, ali nisu ograničene na, aminosalicilate, steroide, sistemske imunosupresive, anti-TNFa antitela, anti-VLA-4 antitela, anti-integrin α4β7 antitela, antibakterijska sredstva i lekove protiv dijareje.

[0124] Aminosalicilati koji mogu biti upotrebljeni u kombinaciji sa predmetnim inhibitornim jedinjenjima za JAK obuhvataju, ali nisu ograničeni na, mezalamin, osalazin i sulfasalazin. Primeri steroida obuhvataju, ali nisu ograničeni na, prednizon, prednizolon, hidrokortizon, budezonid, beklometazon i flutikazon. Sistemski imunosupresivi korisni za lečenje inflamatornih poremećaja obuhvataju, ali nisu ograničeni na, ciklosporin, azatioprin, metotreksat, 6-merkaptopurin i takrolimus. Dalјe, anti-TNFa antitela, koja obuhvataju, ali nisu ograničena na, infliksimab, adalimumab, golimumab i certolizumab, mogu biti upotrebljena u kombinovanoj terapiji. Korisna jedinjenja koja deluju drugim mehanizmima obuhvataju anti-VLA-4 antitela poput natalizumaba, anti-integrin α4β7antitela poput vedolizumaba, antibakterijska sredstva poput rifaksimina i lekove protiv dijareje poput loperamida. (Mozaffari i saradnici, Expert Opin. Biol. Ther. 2014, 14, 583-600; Danese, Gut, 2012, 61, 918-932; Lam i saradnici, Immunotherapy, 2014, 6, 963-971.)

[0125] Prema drugom aspektu, stoga, pronalazak obezbeđuje terapijsku kombinaciju za upotrebu u lečenju gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja, kombinaciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i jedno ili više od drugih terapijskih sredstava koja su korisna za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja. Na primer, pronalazak obezbeđuje kombinaciju koja sadrži jedinjenje pronalaska i jedno ili više sredstava izabranih između aminosalicilata, steroida, sistemskih imunosupresiva, anti-TNFa antitela, anti-VLA-4 antitela, anti-integrin α4β7antitela, antibakterijskih sredstava i lekova protiv dijareje. Sekundarni agens(i), kada su uklјučeni, prisutni su u terapijski efektivnoj količini, tj. u bilo kojoj količini koja proizvodi terapijski koristan efekat kada se primenjuje zajedno sa jedinjenjem pronalaska.

[0126] Takođe je, dakle, obezbeđena farmaceutska kompozicija koji sadrži jedinjenje pronalaska i jedno ili više drugih terapijskih sredstava korisnih za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja.

[0127] Pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku lečenja gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja, pri čemu postupak obuhvata primenu sisaru jedinjenja pronalaska i jednog ili više od drugih terapijskih sredstava koja su korisna za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih poremećaja.

[0128] Kada se koriste u kombinovanoj terapiji, agensi mogu biti formulisani u vidu jedne farmaceutske kompozicije, kao što je prethodno opisano, ili agensi mogu biti obezbeđeni u razdvojenim kompozicijama koje se istovremeno primenjuju ili se primenjuju u različitim vremenim, istim ili različitim načinima primene. Kada se primenjuju odvojeno, sredstva se primenjuju u dovolјno bliskom vremenskom periodu tako da se obezbedi želјeni terapijski efekat. Takve kompozicije mogu biti upakovane odvojeno ili mogu biti upakovane zajedno u komercijalnom kompletu. Dva ili više terapijskih agenasa u komercijalnom kompletu, mogu biti primenjena istim načinom primene ili različitim načinima primene.

[0129] U testovima vezivanja enzima je pokazano da su jedinjenja pronalaska snažni inhibitori enzima JAK1, JAK2, JAK3 i TYK2, kao i da su sa potentnom funkcionalnom aktivnošću bez citotoksičnosti u ćelijskim testovima, kao što je opisano u primerima koji slede.

PRIMERI

[0130] Sintetski i biološki primeri koji slede su navedeni u cilju ilustrovanja pronalaska i nisu predviđeni da ograniče područje pronalaska na bilo koji način. U primerima koji su navedeni u daljem tekstu, skraćenice su sa značenjima koja slede, ukoliko nije drugačije naznačeno. Skraćenice koje nisu definisane u daljem tekstu, imaju svoja opšte prihvaćena značenja.

ACN = acetonitril

DCM = dihlorometan

DIPEA = N,N-diizopropiletilamin

DMF = N,N-dimetilformamid

DMSO = dimetil sulfoksid

EtOAc = etil acetat

h = sat(i)

HATU = N,N,N,N'-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat min = minut(i)

NMP = N-metil-2-pirolidon

Pd(dppf)Cl2= dihloro(1,1'-bis(difenilfosfino)-ferocen)dipaladijum(II)

Pd2(dba)3= tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)

PdXPhos = hloro(2-dicikloheksilfosfmo-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)

ST = sobna temperatura

Selektfluor = 1-hlorometil-4-fluoro-1,4-diazoniabiciklo[2.2.2]oktan bis(tetrafluoroborat) TEA = trietilamin

TFA = trifluorosirćetna kiselina

THF = tetrahidrofuran

bis(pinakolato)diboron = 4,4,5,5,4',4',5',5'-oktametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioksaborolanil]

Xantphos = 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten

Xphos = dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropilbifenil

[0131] Reagensi i rastvarači su nabavlјeni od komercijalnih dobavlјača (Aldrich, Fluka, Sigma itd.) i upotrebljavani su bez dodatnog prečišćavanja. Napredak reakcionih smeša je praćen tankoslojnom hromatografijom (TLC), analitičkom tečnom hromatografijom visokih performansi (anal. HPLC) i masenom spektrometrijom. Reakcione smeše su razrađene kao što je specifično opisano za svaku reakciju; obično su iste prečišćavane ekstrakcijom i drugim postupcima prečišćavanja, kao što su kristalizacija zavisno do temperature i rastvarača, kao i precipitacija. Dodatno, reakcione smeše su rutinski prečišćavane hromatografijom na koloni ili preparativnim HPLC postupkom, obično upotrebom napakovanih C18 ili BDS kolona i konvencionalnih eluenata. Karakteristični uslovi preparativnog HPLC postupka su opisani u nastavku teksta.

[0132] Karakterizacija reakcionih proizoda je rutinski sprovođena upotrebom masene i<1>H-NMR spektrometrije. Za NMR analizu, uzorci su rastvarani u deuterizovanom rastvaraču (poput CD3OD, CDCl3ili d6-DMSO-a), dok su<1>H-NMR spektri dobijeni upotrebom Varian Gemini 2000 instrumenta (400 MHz) pod standardnim uslovima snimanja. Identifikacija jedinjenja masenom spektrometrijom je rađena postupkom jonizujućeg elektro-raspršivanja (ESMS), upotrebom instrumenta firme Applied Biosystems (Foster City, CA), modela API 150 EX, ili instrumenta 3100 firme Waters (Milford, MA), koji su bili kuplovani sa sistemima za samoprečišćavanje.

Uslovi za preparativni HPLC postupak

[0133]

Postupak 1

[0134] Sirova jedinjenja su rastvorena u smeši vode i sirćetne kiseline (odnos 1:1) u koncentraciji od oko 50 mg/mL. Zatim je urađena probna analiza u trajanju od 4 minuta, radi utvrđivanja analitičke skale, upotrebom C18 kolone dimenzija 2,1 x 50 mm, nakon čega je urađena i analiza za preparativnu skalu trajanja 15 ili 20 minuta, upotrebom zapremine injeciranja od 100 µL i sa gradijentom zasnovanim na % B retencije za ispitivanje analitičke skale probne analize. Tačni gradijenti su zavisili od uzorka. Uzorci sa bliskim nečistoćama protoka su provereni upotrebom C18 kolone dimenzija 21 x 250 mm i/ili C14 kolone dimenzije 21 x 150 mm, da bi se utvdili najbolji uslovi razdvajanja. Frakcije koje su sadržavale želјeni proizvod su identifikovane masenom spektrometrijskom analizom.

Uslovi za preparativni HPLC postupak

[0135]

Postupak 2

Uslovi za analitički HPLC postupak

[0136]

Postupak 3

Priprema 1: terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0137]

[0138] U bočicu od 20 ml su dodati 5,7-dihloro-1,6-naftiridin, (289,1 mg; 1,45 mmol), tercbutil(1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (362 mg; 1,60 mmol), DIPEA (0,76 mL; 4,36 mmol) i DMSO (7,26 mL). Bočica je zatvorena i reakciona smeša je grejana na 110 °C, pa je mešana tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Spojene organske frakcije su osušene upotrebom natrijum sulfata, proprofiltrirane i koncentrovane da bi se dobilo smeđe ulјe, koje je dalje prečišćeno hromatografijom na koloni (kolona od 24 g; 0-80% EtOAc u heksanima) da bi se dobio proizvod iz naslova u vidu bledo žute čvrste supstance (455,2 mg; prinos od 69%; čistoća 85%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C20H25ClN4O2389,17; 391,16 utvrđeno 391,5.

Priprema 2: N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0139]

(a) terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-((1-(terc-butoksikarbonil)-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0140] U bočicu od 20 ml su dodati terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (474,6 mg; 1,22 mmol), terc-butil 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-karboksilat (289 mg; 1,46 mmol), hloro[2-(dicikloheksilfosfino)-3,6-dimetoksi-2'-4'-6'-tri- (58 mg; 0,073 mmol) i cezijum karbonat (517 mg; 1,59 mmol). Bočica je zaptivena gumenim čepom i atmosfera je produvana azotom. Zatim je pomoću šprica dodat dioksan (6,10 mL), pa je gumeni čep brzo zamenjen belim poklopcem. Reakciona smeša je grejana na 110 °C i mešana tokom 26 h, nakon čega je ohlađena do ST. Suspenzija je razblažena vodom i koncentrovanim slanim rastvorom, pa je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 20 ml). Organske frakcije su spojene, osušene upotrebom natrijum sulfata, profiltrirane i koncentrovane da bi se dobila smeđa penasta čvrsta supstanca koja je direktno upotrebljena u sledećem koraku. (m/z): [M+H]<+>izračunato za C29H39N7O4550,31; utvrđeno 550,8.

(b) N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0141] Proizvodu iz prethodnog koraka (671 mg; 1,22 mmol) je dodat DCM (3,05 ml), a zatim i TFA (3,05 ml), pa je reakciona smeša mešana na ST tokom 4 h i koncentrovana da bi se dobilo gusto, crveno ulјe. Sirovo ulјe je rastvoreno u 15%-tnom rastvoru sirćetne kiseline u vodi koji je sadržavao 0,1 mL ACN (10 mL), a zatim je prečišćeno preparativnim HPLC postupkom (postupak 1), da bi se dobila di-TFA so proizvoda iz naslova u vidu crvene/narandžaste čvrste supstance (705 mg; prinos 73%; čistoća 97%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C19H23N7350,20; utvrđeno 350,5.

Priprema 3: terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-karboksilat

[0142]

[0143] U bočicu od 40 ml su dodati 5,7-dihloro-1,6-naftiridin, (510 mg; 2,56 mmol), terc-butil (1R,3s,5S)-3-amino-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-karboksilat (677 mg; 2,82 mmol), DIPEA (1,34 mL; 7,69 mmol) i DMSO (8,54 mL). Bočica je zatvorena, pa je reakciona smeša grejana na 110 °C i mešana tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom i koncentrovanim slanim rastvorom, pa je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 30 mL). Organske frakcije su spojene, osušene upotrebom natrijum sulfata, profiltrirane i koncentrovane da bi se dobio želјeni proizvod kao smeđa čvrsta supstanca koja je rastvorena u minimalnoj količini DCM i apsorbovana na Celite®, nakon čega je prečišćena hromatografijom na koloni (kolona od 40 g; 0-100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio proizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (901,6 mg; prinos 86%; čistoća 99%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C2H27ClN4O2403,18; utvrđeno 403,3.

Priprema 4: N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0144]

(a) terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-((1-(terc-butoksikarbonil)-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-karboksilat

[0145] U balon sa okruglim dnom od 100 ml su dodati proizvod iz Pripreme 3 (876,4 mg; 2,18 mmol), terc-butil 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-karboksilat (515 mg; 2,61 mmol), hloro[2-(dicikloheksilfosfino)-3,6-dimetoksi-2'-4'-6'-tri-izo-propil-1,1'-bifenil][2-(2-aminoetil)fenil]paladijum(II)metil terc-butiletarski adukt (104 mg; 0,131 mmol) i cezijum karbonat (921 mg; 2,83 mmol). Tikvica je zaptivena gumenim čepom i atmosfera je produvana azotom. Zatim je špricem dodat dioksan (21,75 mL). U balon sa okruglim dnom je zatim dodat kondenzer koji je bio povezan sa balonom sa azotom, nakon čega je reakciona smeša grejana na 110 °C i mešana tokom 20 h. Reakciona smeša je dalje ohlađena do ST, razblažena slanim rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc (4 x 30 mL). Organske frakcije su spojene, osušene upotrebom natrijum sulfata, profiltrirane i koncentrovane da bi se dobila sirova smeđa čvrsta supstanca koja je upotrebljena u sledećem koraku bez dalјeg prečišćavanja.

(b) N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0146] Proizvodu prethodnog koraka (1,226 g; 2,175 mmol) su dodati DCM (5,44 mL) i TFA (5,44 mL). Balon sa okruglim dnom je pokriven gumenim čepom koji je bio proboden iglom. Rastvor je mešan na ST tokom 4 h, pa je koncentrovan da bi se dobilo tamno, crveno ulјe. Sirovi materijal je rastvoren u rastvoru vode:sirćetne kiseline:acetonitrila (3:1:0,25; 18 mL), nakon čega je profiltriran i prečišćen u dve serije, preparativnim HPLC postupkom, da bi se dobila 2TFA so proizvoda iz naslova u vidu crvene čvrste supstance (991,1 mg; prinos 75%; čistoća 97%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C20H25N7364,22; utvrđeno 364,1.

Priprema 5: 5,7-dihloro-1,6-naftiridin-2-ol

[0147]

(a) N-(2,6-dihloropiridin-4-il)pivalamid

[0148] Smeši 2,6-dihloropiridin-4-amina (80,0 g; 491 mmol) i TEA (99,8 g; 982 mmol) u DCM-u (800 ml) je dodat pivaloil hlorid (118,0 g; 982 mmol) na 0 °C, pa je smeša mešana na 20 °C tokom 13 h, profiltrirana, ekstrahovana sa DCM, isprana slanim rastvorom, osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana, koncentrovana pod vakuumom i dalje prečišćena rekristalizacijom iz DCM, a da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu bele čvrste supstance (90 g; prinos 70%).

(b) N-(2,6-dihloro-3-formilpiridin-4-il)pivalamid

[0149] U smešu proizvoda iz prethodnog koraka (24,0 g; 97,1 mmol) u THF-u (250 mL) je dodat tercbutil litijum (224 mL; 291,3 mmol) na -78 °C, nakon čega je reakciona smeša mešana na -78 °C tokom 1,5 h. Zatim je dodat DMF (22,7 g; 291,3 mmol) i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 3 sata, pa je dodat 6M HCl. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni. Proizvodi tri identične reakcije su spojeni da bi se dobio međuproizvod iz naslova (36 g; prinos 45%).

(c) terc-butil 3-(2,6-dihloro-4-pivalamidopiridin-3-il)-3-hidroksipropanoat

[0150] Diizopropilamin (17,2 g; 170,8 mmol) je rastvoren u THF-u (100 ml) i ohlađen do -78 °C, pa je u kapima dodat n-butil litijum (68,3 mL; 170,8 mmol) na -78 °C. Smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 h, a zatim je, takođe na -78 °C, u kapima dodat terc-butil acetat (19,8 g; 170,8 mmol) rastvoren u THF-u (100 ml). Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 h, pa je u kapima dodat proizvod iz prethodnog koraka (18 g; 65,7 mmol) rastvoren u THF-u (150 ml), na -78 °C i smeša je mešana na -78 °C tokom 1,0 h. Dalje je dodat vodeni amonijum hlorid i reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 800 ml). Organski sloj je osušen i uparen, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni. Proizvodi dve identične reakcije su spojeni da bi se dobio međuproizvod iz naslova kao bela čvrsta supstanca (58 g).

(d) 5,7-dihloro-1,6-naftiridin-2-ol

[0151] Vodena HCl (400 mL) je dodata terc-butil 3-(2,6-dihloro-4-pivalamidopiridin-3-il)-3-hidroksipropanoatu (64 g; 164 mmol), rastvorenom u dioksanu (400 mL), i reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 12 h. Zatim je dodata voda, pa je reakciona smeša profiltrirana da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu bele čvrste supstance (33 g; prinos 94%).

Priprema 6: terc-butil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0152]

(a) terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-2-hidroksi-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0153] U smešu 5,7-dihloro-1,6-naftiridin-2-ola (7,0 g; 32,5 mmol) i terc-butil (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (8,1 g; 35,8 mmol) u DMSO-u (70 mL) dodat je DIPEA (8,4 g; 65,0 mmol), pa je reakciona smeša grejana na 110 °C tokom 8 h, presuta u vodu, profiltrirana i isprana sa EtOAc (200 ml) da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (10 g; prinos 75%).

(b) terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-2-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0154] Rastvoru proizvoda iz prethodnog koraka (10 g; 24 mmol) i cezijum karbonata (15,6 g; 48 mmol) u DMF-u (100 mL), u kapima je dodat rastvor N-fenil-bis(trifluorometansulfonimida) (17,0 g; 48 mmol) u DMF-u (100 mL) na 0 °C, pa je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 2 sata. Zatim je dodata voda (200 mL) i reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (400 mL), isprana slanim rastvorom (100 mL), osušena upotrebom natrijum sulfata i koncentrovana da bi se obezbedio sirovi međuproizvod iz naslova (14 g), koji je direktno upotrebljen u sledećem koraku.

(c) Metil 5-(((1R,3s,5S)-8-(terc-butoksikarbonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-hloro-1,6-naftiridin-2-karboksilat

[0155] Rastvoru proizvoda iz prethodnog koraka (14 g; 26 mmol) u MeOH (280 mL) su dodati Pd(dppf)Cl2(2,0 g; 2,6 mmol) i TEA (5,3 g; 52 mmol), nakon čega je reakciona smeša grejana na 50 °C tokom 12 h u atmosferi CO (50 psi). Reakciona smeša je zatim profiltrirana, razblažena vodom (100 mL), ekstrahovana sa EtOAc (300 mL), isprana slanim rastvorom (50 mL), osušena upotrebom natrijum sulfata, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni da bi se obezbedio međuproizvod iz naslova (8,0 g; prinos 70%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H27ClN4O4447,17; utvrđeno 447,1.

(d) Metil 7-((1-(terc-butoksikarbonil)-5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-5-(((1R,3s,5S)-8-(tercbutoksikarbonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-1,6-naftiridin-2-karboksilat

[0156] U smešu proizvoda iz prethodnog koraka (8,0 g; 17,8 mmol), terc-butil 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-karboksilata (4,5 g; 21,5 mmol) i cezijum karbonata (7,1 g; 21,5 mmol) u dioksanu (80 ml), pod azotom je dodat PdXphos (2,8 g; 3,56 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 100 °C tokom 12 h, pa je razblažena sa EtOAc (150 ml), isprana vodom (50 ml) i slanim rastvorom (30 ml), osušena upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni da bi se dobio međuproizvod iz naslova (3,0 g; prinos 72%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C31H41N7O6608,31; utvrđeno 608,3.

(e) terc-butil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0157] Rastvoru natrijum borohidrida (225 mg; 5,91 mmol) u MeOH (565 mg; 17,6 mmol) i THF (10 ml), na 0 °C je dodat rastvor proizvoda iz prethodnog koraka (500 mg; 0,98 mmol) u THF-u (40 mL), pa je reakciona smeša mešana na 50 °C tokom 2 sata. Zatim je dodata voda (15 mL), a potom i EtOAc (150 mL). Reakciona smeša je dalje isprana koncentrovanim slanim rastvorom (30 mL), osušena upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, koncentrovana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom (postupak 2) da bi se dobio proizvod iz naslova (840 mg; prinos 46%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H33N7O3480,26; utvrđeno 480,2.

Priprema 7: 2-(Bromometil)-5,7-dihloro-1,6-naftiridin

[0158]

(a) 2-(2-Etoksi-2-oksoetil)-6-metilnikotinska kiselina

[0159] U smešu kalijum terc-butoksida (90,2 g; 804 mmol) u izopropil alkoholu (600 mL), dodat je etil acetoacetat (69,8 g; 536 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na ST tokom 1 sata, pa je dodat bakar acetat (4,8 g; 26,8 mmol), a potom i 2-hloro-6-metilnikotinska kiselina (46,0 g; 268 mmol), nakon čega je reakciona smeša mešana na 80 °C tokom 5 h i dodata je razblažena HCl da bi se podesio pH na 2. Rastvor je dalje ekstrahovan sa EtOAc (3 x 500 ml). Oganski slojevi su spojeni, isprani koncentrovanim slanim rastvorom, osušeni i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod koji je rekristalisan sa smešom petrolej etra i toluene od 5:1, da bi se dobio međuproizvod iz naslova kao smeđa čvrsta supstanca (47 g; prinos 79%).

(b) 2-Metil-1,6-naftiridin-5,7(6H,8H)-dion

[0160] Rastvoru proizvoda iz prethodnog koraka (25 g; 105,5 mmol) u THF-u (250 mL) je dodat TEA (15,9 g; 158,2 mmol). Smeša je ohlađena do -10 °C i dodat je etil hloroformat (17,2 g; 158,2 mmol), pa je reakciona smeša mešana tokom 1 sata na -10-5 °C. U kapima je dalje dodat amonijum hidroksid (200 mL) na 0-5 °C i reakciona smeša je mešana 2 h na ST. Proizvodi dve identične reakcije su spojeni i pH reakcione smeše je podešen na 6,5-7,5 sa 3M HCl, pa je smeša dalje koncentrovana pod vakuumom, mešana tokom 1 sata na -10-5 °C, profiltrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobio međuproizvod iz naslova kao smeđa čvrsta supstanca (30 g sirove). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C9H8N2O2177,07; utvrđeno 177,1.

(c) 5,7-dihloro-2-metil-1,6-naftiridin

[0161] Proizvod iz prethodnog koraka (10,0 g; 56,7 mmol) je rastvoren u fosforil hloridu (40 ml) i mešan tokom 6 sati na 160 °C u zaprivenoj epruveti od 100 ml. Fosforil hlorid je uklonjen destilacijom pod sniženim pritiskom, nakon čega je reakciona smeša presuta u led/vodu (400 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 400 mL). Organski slojevi su spojeni, isprani slanim rastvorom, osušeni upotrebom Na2SO4, koncentrovani i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio međuproizvod iz naslova kao crvena čvrsta supstanca (3,4 g; prinos 28%).

(d) 2-(Bromometil)-5,7-dihloro-1,6-naftiridin

[0162] U rastvor 5,7-dihloro-2-metil-1,6-naftiridina (5,0 g; 23,4 mmol) u uglјenik tetrahloridu (100 ml), dodati su N-bromosukcinimid (4,17 g; 23,4 mmol) i benzoil peroksid (0,28 g; 1,2 mmol), pa je reakciona smeša grejana na temperaturi refluksa tokom 12 h i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu i time obezbedilo jedinjenje iz naslova kao crvena čvrsta supstanca (3,8 g; prinos 55%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C9H5BrCl2N2290,90; utvrđeno 290,9.

Priprema 8: terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-2-(morfolinometil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0163]

(a) 4-((5,7-dihloro-1,6-naftiridin-2-il)metil)morfolin

[0164] Rastvoru 2-(bromometil)-5,7-dihloro-1,6-naftiridina (1,0 g; 3,43 mmol) u ACN-u (34,3 mL), na 0 °C je dodat DIPEA (1,79 mL; 10,28 mmol), a zatim i morfolin (0,31 mL; 3,60 mmol). Smeša je zatim mešana na od 0 °C do ST preko noći, pa je profiltrirana kroz sloj Celite® koji je dalje ispran sa EtOAc. Organske frakcije su spojene i koncentrovane na rotacionom uparivaču da bi se dobio sirovi proizvod iz naslova, koji je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C13H13Cl2N3O2298,04; utvrđeno 298,0.

(b) terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-2-(morfolinometil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0165] U smešu proizvoda iz prethodnog koraka (1020 mg; 3,42 mmol) i terc-butil (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (774 mg; 3,42 mmol) u DMSO-u (34,3 ml), na ST je dodat DIPEA (1,778 ml; 10,26 mmol). Dobijena smeša je mešana na 120 °C tokom 19 h. Rastvarač je uklonjen na rotacionom uparivaču da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na koloni, a da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeđa čvrsta supstanca (513 mg; prinos 30,7%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H34ClN5O3488,24; utvrđeno 488,2.

Priprema 9: 5,7-dihloro-2-((4,4-difluoropiperidin-1-il)metil)-1,6-naftiridin

[0166]

[0167] Praćenjem opšte procedure za Pripremu 8(a), zamenom morfolina sa 4,4-difluoropiperidinom, dobijen je međuproizvod iz naslova. (m/z): [M+H]<+>izračunato za C14H13Cl2F2N3332,05; utvrđeno 332,0.

Priprema 10: 5,7-dihloro-2-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-1,6-naftiridin

[0168]

[0169] Praćenjem opšte procedure za Pripremu 8(a), zamenom morfolina sa 1-metilpiperazinom, dobijen je međuproizvod iz naslova. (m/ z): [M+H]<+>izračunato za C14H16Cl2N4311,08; utvrđeno 311,0,

Priprema 11: 5,7-dihloro-3-metoksi-1,6-naftiridin

[0170]

(a) 5,7-Dihloro-3-jodo-1,6-naftiridin

[0171] Smeša 5,7-dihloro-1,6-naftiridina (4,0 g; 20 mmol) i N-jodosukcinimida (9,0 g; 37 mmol) u sirćetnoj kiselini (100 mL) je grejana na temperaturi refluksa tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni upotrebom smeše petrolej etra i EtOAc u odnosu 20:1, da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (2,4 g; prinos 37%).

(b) (5,7-Dihloro-1,6-naftiridin-3-il)boronska kiselina

[0172] U rastvor 5,7-dihloro-3-jodo-1,6-naftiridina (6,0 g; 18,5 mmol), bis(pinakolato)diborana (5,2 g; 20,4 mmol) i kalijum acetata (3,6 g; 37,0 mmol) u dioksanu (50 mL), dodat je Pd(dppf)2Cl2(0,6 g) pod azotom. Reakciona smeša je grejana na 90 °C preko noći, pa je profiltrirana. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žutog ulјa (6 g; sirovo).

(c) 5,7-Dihloro-1,6-naftiridin-3-ol

[0173] Proizvod iz prethodnog koraka (6 g; sirov) je rastvoren u DCM-u (20 ml), pa je na 0 °C dodat vodonik peroksid (6 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, a zatim je smeši na 0 °C dodat vodeni rastvor natrijum-tiosulfata (20 mL). Smeša je dalje ekstrahovana sa DCM; organski slojevi su spojeni, isprani slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4i koncentrovani, da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (6,0 g; sirova).

(d) 5,7-Dihloro-3-metoksi-1,6-naftiridin

[0174] Smeši proizvoda iz prethodnog koraka (6,0 g; 27,9 mmol) i kalijum karbonata (30,6 g; 83,7 mmol) u DMF-u (50 ml), na ST je dodat metil jodid (14,4 g; 101 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na ST tokom 2 sata, pa je razblažena vodom (50 mL), ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL), isprana slanim rastvorom (2 x 30 mL), osušena upotrebom Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (3,0 g; prinos 46%).

Priprema 12: Metil 5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-karboksilat

[0175]

(a) terc-Butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-3-jodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0176] Rastvor 5,7-dihloro-3-jodo-1,6-naftiridina (7,0 g; 21,6 mol), DIPEA (5,6 g; 43,2 mmol) i tercbutil (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (5,8 g; 25,9 mmol) rastvorenog u NMP (70 mL), grejan je na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim prečišćena hromatografijom na koloni (elucija sa smešom EtOAc i petrolej etra od 0-20%) da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (10,2 g; prinos 91,8%).

(b) Metil 5-(((1R,3s,5S)-8-(terc-butoksikarbonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-hloro-1,6-naftiridin-3-karboksilat

[0177] Proizvod iz prethodnog koraka (10,1 g; 19,7 mmol), PdCl2(dppf) (2,87 g; 3,94 mmol) i TEA (5,97 g; 59,2 mmol) su rastvoreni u metanolu (200 mL), pa je reakciona smeša mešana na 60 °C u atmosferi CO tokom 4 h, profiltrirana i uparena. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (elucija sa smešom EtOAc i petrolej etra od 0-25%) da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (7,5 g; prinos 85,6%).

(c) Metil 5-(((1R,3s,5S)-8-(terc-butoksikarbonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-karboksilat

[0178] Proizvod iz prethodnog koraka (6,6 g; 14,8 mmol), terc-butil 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-karboksilat (3,5 g; 17,7 mmol), cezijum karbonat (9,61 g; 29,6 mmol) i Pd Xphos (2,32 g; 2,95 mmol) su rastvoreni u dioksanu (130 mL) i produvani azotom. Reakciona smeša je mešana na 110 °C tokom 12 h. Proizvod je spojen sa proizvodom iz slične reakcije, pa je ekstrahovan sa EtOAc (600 ml) i ispran slanim rastvorom (3 x 300 ml). Organski sloj je uparen. Ostatak je kristalizovan da bi se dobili međuproizvod iz naslova (5 g; prinos 58%) i 2 g sirovog proizvoda koji je prečišćen preparativnim HPLC postupkom (postupak 2).

(d) Metil 5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-karboksilat

[0179] Proizvod iz prethodnog koraka (5,5 g; 10,85 mmol) je rastvoren u HCl-metanolu (50 ml) i reakciona smeša je mešana na ST tokom 4 sata, pa je uparena pod sniženim pritiskom da bi se dobila 2HCl so jedinjenja iz naslova u vidu narandžaste čvrste supstance (5,2 g; prinos 100%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C21H25N7O2408,21; utvrđeno 408,1.

Priprema 13: 5,7-Dihloro-4-metoksi-1,6-naftiridin

[0180]

[0181] Smeša 5,7-dihloro-1,6-naftiridin-4-ola (7 g; 32,6 mmol), metal jodida (41,22 g; 290,4 mmol) i srebro karbonata (17,9 g; 65,2 mmol) u toluenu (140 mL) je mešana na 100 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim profiltrirana i koncentrovana pod vakuumom, pa je prečišćena hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu žute čvrste supstance (2,1 g; prinos 28,1%). (m/z):

[M+H]<+>izračunato za C9H6Cl2N2O 228,99; 230,98; utvrđeno 229,1; 230,0.

Priprema 14: 5,7-dihloro-8-fluoro-1,6-naftiridin

[0182]

(a) 2,6-Dihloro-3-fluoropiridin-4-amin

[0183] Smeši 2,6-dihloropiridin-4-amina (3,0 g; 18,4 mmol) u DMF-u (30 ml) i ACN-u (30 ml) je dodat reagens SelectFluor (7,8 g; 22,1 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 80 °C tokom 0,5 h, pa je koncentrovana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom (postupak 2) da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu bele čvrste supstance (1,5 g; prinos 45%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C5H3Cl2FN2180,97; utvrđeno 180,9.

(b) N-(2,6-dihloro-3-fluoropiridin-4-il)pivalamid

[0184] Smeši proizvoda iz prethodnog koraka (1,5 g; 8,29 mmol) u THF-u (50 ml) su dodati natrijum hidrid (662 mg; 16,57 mmol) i pivaloil hlorid (1,12 ml; 9,12 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim mešana na 25 °C tokom 2 h, pa je razblažena vodom, ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 ml), osušena i koncentrovana da bi se dobio međuproizvod iz naslova kao bela čvrsta supstanca (2,0 g; prinos 90%).

(c) 5,7-Dihloro-8-fluoro-1,6-naftiridin

[0185] Rastvoru proizvoda iz prethodnog koraka (2,0 g; 7,55) u THF-u (25 mL), na -70 °C je dodat rastvor n-butil litijuma (2,5 M; 7,5 mL; 18,9 mmol) i reakciona smeša je mešana 60 min na-10 °C. Zatim je tokom 15 min na -70 °C dodavan rastvor (E)-3-(dimetilamino)akrilaldehida (1,12 g; 11,3 mmol) u THF-u (5 ml), pa je reakciona smeša mešana na -65 °C tokom 20 min, a potom je dodat HCl (5 M, 12 mL) i reakciona smeša je mešana na ~65 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je dalje podešena na pH 9 sa vodenim rastvorom Na2CO3, nakon čega je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 200 ml), osušena i koncentrovana da bi se dobio ostatak u vidu smeđeg ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni (elucija sa 0-30% EtOAc u petrolej etaru) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao blago žuta čvrsta supstanca (1,0 g; prinos 99%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C8H3Cl2FN2216,97; 218,96; utvrđeno 217,0; 219,0.

Priprema 15: 5,7-dihloro-8-fluoro-3-metil-1,6-naftiridin

[0186]

[0187] Praćenjem opšte procedure za Pripremu 14(c), zamenom (E)-3-(dimetilamino)akrilaldehida sa (E)-3-(dimetilamino)-2-metilakrilaldehidom, dobijen je međuproizvod iz naslova. (m/z): [M+H]<+>izračunato za C9H5Cl2FN2230,98; 232,98; utvrđeno 231,0; 233,0.

Priprema 16: terc-Butil (1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0188]

(a) terc-Butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-3-(metiltio)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0189]Smeša terc-butil(1R,3s,5S)-3-((7-hloro-3-jodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (6,5 g; 12,6 mmol), natrijum-tiometoksida (3,0 g; 42,8 mmol), Pd2(dba)3(1,1 g; 1,26 mmol) i Xantphos-a (728 mg; 1,26 mmol) u smeši vode i toluena od 3:70 (73 mL), mešana je na 90 °C tokom 12 h, pa je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (1:3 EtOAc:petrolej etar) da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (5 g; prinos 90%).

(b) terc-Butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0190] Rastvoru proizvoda iz prethodnog koraka (4,5 g; 10 mmol) u DCM-u (1000 mL), na 0 °C je dodata meta-hloroperksoibenzoeva kiselina (5,2 g; 30 mmol) i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 3 sata, pa je isprana sa 10% NaOH (3 x 200 ml), osušena upotrebom Na2SO4i profiltrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (4,2 g; prinos 90%).

(c) terc-Butil (1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0191] Smeša proizvoda iz prethodnog koraka (4,2 g; 9,0 mmol), terc-butil 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-karboksilata (2,7 g; 13,5 mmol), PdXphos-a (1,4 g; 1,8 mmol) i cezijum karbonata (5,9 g; 18,0 mmol) u dioksanu (120 mL), mešana je pod azaotom na 110 °C tokom 12 h, pa je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (metanol:DCM, 1:50) da bi se dobio proizvod iz naslova u vidu žute čvrste supstance (4,0 g; prinos 85%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H33N7O4S 528,23; utvrđeno 528,1.

Priprema 17: terc-Butil (1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-3-(metilsulfonil)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-karboksilat

[0192]

[0193] Praćenjem opšte procedure iz Pripreme 16 i zamenom terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-3-jodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata sa terc-butil (1R,3s,5S)-3-((7-hloro-3-jodo-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-karboksilatom u koraku (a), pripremljen je međuproizvod iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. (m/z): [M+H]<+>izračunato za C26H35N7O4S 542,25; utvrđeno 542,1

Priprema 18: 5,7-dihloro-2-((metilsulfonil)metil)-1,6-naftiridin

[0194]

[0195] U bočicu od 20 ml su dodati 2-(bromometil)-5,7-dihloro-1,6-naftiridin (307 mg; 1,052 mmol), 85%-tni natrijum metansulfat (107 mg; 1,052 mmol) i DMF (5,26 ml). Bočica je zatvorena i reakciona smeša je grejana na 45 °C, pa mešana tokom 1,5 h, ohlađena do ST i koncentrovana na rotacionom uparivaču. Rastvor je razblažen vodom; obrazovao se beli talog, koji je uklonjen filtriranjem, nakon čega je talog ispran vodom i heksanima, da bi se dobio međuproizvod iz naslova u vidu žutosmeđe čvrste supstance (259 mg; prinos 85%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C10H8Cl2N2O2S 290,97; utvrđeno 290,9.

Primer 1: 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril

[0196]

[0197] U bočicu od 20 ml su dodati N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin, 2TFA (462,4 mg; 0,80 mmol), metanol (4 mL) i DIPEA (0,70 mL; 4,00 mmol)). Reakciona smeša je mešana na ST tokom 5 minuta, a zatim je polako dodat akrilonitril (0,058 mL; 0,88 mmol; 100 mL). Bočica je zatvorena i reakciona smeša je mešana na ST tokom 20 h, nakon čega je koncentrovana, rastvorena u 15%-tnom rastvoru sirćetne kiseline u vodi i prečišćena preparativnim HPLC postupkom (postupak 1). Frakcije su spojene, liofilizovane, rastvorene u 15%-tnoj sirćetnoj kiselini u vodi i prečišćene reverzno-faznim HPLC postupkom. Frakcije su spojene i liofilizovane da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova kao svetlo crvena čvrsta supstanca (505 mg; prinos 52%; čistoća 98%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H26N8403,23; utvrđeno 403,7.

Primer 2: N<5>-((1R,3s,5S)-8-(2-fluoroetil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0198]

[0199] U balon sa okruglim dnom od 250 mL su dodati N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin, 2 HCl (5,027 g; 11,90 mmol), kalijum karbonat (9,87 g; 71,4 mmol) i DMF (59,5 mL). Reakciona smeša je mešana na ST tokom 10 minuta, a zatim je dodata jedna porcija 1-bromo-2-fluoroetana (1,064 mL; 14,28 mmol). Balon sa okruglim dnom je opremlјen kondenzerom za vazduh, pa je reakciona smeša grejana na 40 °C i mešana preko noći. Dalje je dodata još jedna porcija 1-bromo-2-fluoroetana, nakon čega je reakciona smeša grejana na 60 °C i mešana tokom 24 sata. Ponovo je dodata porcija 1-bromo-2-fluoroetana i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom još 24 časa. Suspenzija je podelјena u četiri bočice i koncentrovana na rotacionom uparivaču da bi se dobio sirovi proizvod kao crvena čvrsta supstanca. Materijal u svakoj bočici je rastvoren u smeši vode i sirćetne kiseline od ~1:1, nakon čega je rastvor profiltriran i prečišćen preparativnim HPLC postupkom (postupak 1) da bi se dobio želјeni proizvod (ukupno 2,31 g; prinos 48%; čistoća 97%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C21H26FN7396,22; utvrđeno 396,2.

Primer 3: N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-8-(piridin-3-ilsulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0200]

[0201] Smeša DIPEA (0,815 mL; 4,66 mmol) i N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 1TFA (300 mg; 0,78 mmol) u DMF-u (6 mL), ohlađena je do 0 °C, a zatim je dodat piridin-3-sulfonil hlorid (0,093 mL; 0,39 mmol) i rastvor je mešan tokom 20 min. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a sirovi ostatak je rastvoren u smeši sirćetne kiseline i vode od 1:1 (1 mL), pa je prečišćen reverzno-faznim HPLC postupkom da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova u vidu narandžaste čvrste materije (156,5 mg; prinos 33%)

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C24H26N8O2S 491,19; utvrđeno 491.

Primer 4: 2-(Dimetilamino)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il)etan-1-on

[0203] U bočicu od 20 ml su dodati dimetilglicin hidrohlorid (31 mg; 0,22 mmol), HATU (85 mg; 0,22 mmol) i DMF (1 ml). Bistar rastvor je mešan na ST tokom 15 min, nakon čega je dodat N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin 2TFA (120 mg; 0,20 mmol). Reakciona smeša je mešana na ST tokom 30 minuta, a zatim je dodat DIPEA (0,18 mL; 1,01 mmol). Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 dana, pa je koncentrovana na rotacionom uparivaču da bi se obezbedilo gusto, tamno smeđe ulјe. Sirovo ulje je rastvoreno u smeši vode i sirćetne kiseline od 2:1, pa je rastvor profiltriran i prečišćen reverznofaznim HPLC postupkom. Frakcije su spojene i liofilizovane da bi se dobila 2TFA so jedinjenja iz naslova u vidu crvene čvrste supstance (23 mg; prinos 25%; čistoća 100%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C24H32N8O 449,27; utvrđeno 449,2.

Primer 5: 2,2-difluoro-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)etan-1-on

[0204]

[0205] U bočicu od 20 ml su dodati difluorosirćetna kiselina (0,026 ml; 0,42 mmol), HATU (159 mg; 0,42 mmol) i DMF (1,91 ml). Bistar rastvor je mešan na ST tokom 10 minuta, a zatim je dodata jedna porcija N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 2 TFA (220 mg; 0,38 mmol). Dobijeni crveni rastvor je mešan na ST tokom 20 minuta,pa je dodat DIPEA (0,33 mL; 1,91 mmol). Bočica je zatvorena i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pa je koncentrovana na rotacionom uparivaču da bi se dobilo gusto, crveno ulјe. Sirovo ulјe je rastvoreno u smeši vode i sirćetne kiseline od ~3:1, nakon čega je rastvor profiltriran i prečišćen preparativnim HPLC postupkom (postupak 1) da bi se dobio želјeni proizvod u vidu crvene čvrste supstance. Frakcije su spojene, rastvorene u smeši vode i sirćetne kiseline od 2:1, pa su prečišćene preparativnim HPLC postupkom (postupak 1) da bi se dobila 1TFA so proizvoda iz naslova u vidu crvene čvrste supstance (77 mg; prinos 36%; čistoća 96%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C21H23F2N7O 428,19; utvrđeno 428,1.

Primer 6: N<5>-((1R,3s,5S)-8-((2-metoksietil)sulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0206]

[0207] U bočicu od 4 mL su dodati N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin, 2TFA (30 mg; 0,052 mmol), DIPEA (0,045 mL; 0,26 mmol) i DMF (1,15 mL). Rastvor je ohlađen do 0 °C i u hladnu reakcionu smešu je polako dodat rastvor 2-metoksi-1-etansulfonil hlorida (12 mg; 0,078 mmol) u DMF-u (1,15 ml). Bočica koja je sadržavala sulfonil hlorid je isprana sa DMF-om (1,15 mL), pa je tečnost ispiranja dodata u bočicu koja je sadržavala reakcioni rastvor i zatim je ista zatvorena, nakon čega je rastvor mešan na 0 °C tokom 30 min, zagrejan do ST i dalje mešan tokom 6 h. Rastvor je koncentrovan na rotacionom uparivaču da bi se dobilo crveno ulјe koje je rastvoreno u smeši vode i sirćetne kiseline od 3:1, dalje profiltrirano i prečišćeno reverzno-faznim HPLC postupkom, da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova (12,3 mg; čistoća 100%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H29N7O3472,21; utvrđeno 472,2.

Primer 7: N<5>-((1R,3s,5S)-8-(etilsulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0208]

[0209] Praćenjem procedure iz Primera 6, upotrebom etilsulfonil hlorida (0,007 mL; 0,078 mmol) umesto 2-metoksi-1-etansulfonil hlorida, pripremlјena je 1TFA so jedinjenja iz naslova (10,1 mg; čistoća 100%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C21H27N7O2S 442,20; utvrđeno 442,2.

Primer 8: N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-9-(piridin-3-ilsulfonil)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0210]

[0211] Smeša N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin 2 HCl (43,6 mg; 0,10 mmol) i DIPEA (0,105 ml; 0,60 mmol) u DMF-u (1 ml), ohlađena je do 0 °C i dodat je piridin-3-sulfonil hlorid (17,8 mg; 0,10 mmol). Rastvor je mešan preko noći, pa je ostavlјen da se postepeno zagreje do ST, nakon čega je koncentrovan do suva pod vakuumom, rastvoren u smeši vode i sirćetne kiseline od 2:1 (1,5 mL), profiltriran upotrebom šprica (0,2 mikrona) i prečišćen revezno-faznim HPLC postupkom da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova (24 mg; čistoća 94,4%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H28N8O2S 505,21; utvrđeno 505,2.

Primer 9: N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-9-(fenilsulfonil)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0212]

[0213] Praćenjem tačne procedure iz Primera 8, upotrebom benzensulfonil hlorida (17,7 mg; 0,10 mmol) umesto piridin-3-sulfonil hlorida (17,8 mg; 0,10 mmol), dobijena je 1TFA so jedinjenja iz naslova (7 mg; čistoća 94,4%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H28N8O2S 504,21; utvrđeno 504,1.

Primer 10: N<5>-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0214]

[0215] U bočicu od 20 ml su dodati N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin 2TFA (100 mg; 0,17 mmol), DIPEA (0,148 mL; 0,85 mmol) i DMF (0,85 mL). Rastvor je ohlađen do 0 °C i u kapima je u hladnu reakcionu smešu dodat rastvor etilsulfonil hlorida (26 mg; 0,20 mmol) u DMF-u (0,85 ml). Bočica koja je saržavala sulfonil hlorid je isprana sa DMF-om (0,85 mL), tečnost ispiranja je dodata u bočicu koja je sadržavala reakcioni rastvor i rastvor je zatim mešan na 0 °C tokom 15 min, zagrejan do ST i dodatno mešan tokom 20 h. Rastvor je dalje koncentrovan na rotacionom uparivaču da bi se dobilo tamnocrveno ulјe koje je rastvoreno u smeši vode i sirćetne kiseline od 3:1 (3 mL), profiltrirano i prečišćeno preparativnim HPLC postupkom (postupak 1) da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova (13 mg; čistoća 93%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C22H29N7O2S 456,21; utvrđeno 456,1

Primer 11: 1-(((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il)sulfonil) azetidin-3-karbonitril

[0216]

[0217] Smeša N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2HCl (58 mg; 0,067 mmol) i DIPEA (0,584 mL; 0,335 mmol) u DMF-u (1 mL) je ohlađena do 0 °C i dodat je 3-cijano-1-azetidin sulfonil hlorid (24 mg; 0,067 mmol). Rastvor je mešan preko noći, pa je ostavlјen da se postepeno zagreje do ST, nakon čega je koncentrovan do suva pod vakuumom, rastvoren u smeši vode i sirćetne kiseline od 1:1 (1,5 mL), profiltriran upotrebom šprica (0,2 mikrona) i prečišćen reverzno-faznim HPLC postupkom da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova (7,8 mg; 100% čistoća).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C24H29N9O2S 508,22; utvrđeno 508,6

Primer 12: Izobutil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0218]

(a) (5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-2-il)metanol

[0219] U bočicu od 40 ml su dodati terc-butil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (146,6 mg; 0,31 mmol), 4M HCl u dioksanu (1,53 mL; 6,11 mmol) i dioksan (1,53 mL). Bočica je zatvorena, pa je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h, nakon čega je zamrznuta na -78 °C i liofilizovana da bi se dobila 2HCl so međuproizvoda iz naslova kao žutosmeđa čvrsta supstanca koja je upotrebljena u sledećoj reakciji bez prečišćavanja. (m/z): [M+H]<+>izračunato za C20H25N7O 380,21; utvrđeno 380,1.

(b) Izobutil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0220] U proizvod iz prethodnog koraka (138 mg; 0,31 mmol) su dodati DMF (1,53 mL) i DIPEA (0,32 mL; 1,83 mmol). Rastvor je ohlađen do 0 °C i zatim je u kapima dodat izobutil hloroformat (0,04 mL; 0,31 mmol). Bočica je zatvorena i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, nakon čega je zagrejana do ST, mešana tokom 1 h i koncentrovana na rotacionom uparivaču da bi se dobila crvena čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u smeši sirćetne kiseline i vode od 2:1, pa je profiltrirana i prečišćena preparativnim HPLC postupkom (postupak 1) da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova u vidu narandžasto-crvene čvrste supstance (104,2 mg; prinos 57%; čistoća 99%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H33N7O3480,26; utvrđeno 480,2.

Primer 13: 1-(((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)sulfonil)azetidin-3-karbonitril

[0221]

[0222] Smeša N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin 2TFA (77 mg; 0,067 mmol) i DIPEA (0,584 ml; 0,335 mmol) u DMF-u (1 ml) je ohlađena do 0 °C, pa je dodat 3-cijano-1-azetidin sulfonil hlorid (24 mg; 0,067 mmol). Rastvor je zatim mešan preko noći, pa je ostavlјen da se postepeno zagreje do ST, nakon čega je koncentrovan do suva pod vakuumom, rastvoren u smeši vode i sirćetne kiseline od 1:1 (1,5 mL), profiltriran upotrebom šprica (0,2 mikrona) i prečišćen reverzno-faznim HPLC postupkom da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova (5,3 mg; čistoća 100%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C23H27N9O2S 494,20; utvrđeno 494,6

Primer 14: N<5>-((1R,3s,5S)-9-((5-fluoropiridin-3-il)sulfonil)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0223]

[0224] Smeša N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina 2 HCl (30,2 mg; 0,069 mmol) i DIPEA (0,072 mL; 0,41 mmol) u DMF-u (1 mL) je ohlađena do 0 °C, pa je dodat 5-fluoropiridin-3-sulfonil hlorid (13,5 mg; 0,069 mmol). Rastvor je zatim mešan preko noći, nakon čega je ostavlјen da se postepeno zagreje do ST i dalje je koncentrovan do suva pod vakuumom, rastvoren u smeši vode i sirćetne kiseline od 2:1 (1,5 mL), profiltriran upotrebom šprica (0,2 mikrona) i prečišćen reverzno-faznim HPLC postupkom da bi se dobila 1TFA so jedinjenja iz naslova (20 mg; čistoća 100%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C25H27FN8O2S 523,20; utvrđeno 523,2.

Primer 15: N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-2-(morfolinometil)-N<5>-((1R,3s,5S)-8-(2,2,2-trifluoroetil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0225]

[0226] U rastvor N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-2-(morfolinometil)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (81 mg; 0,181 mmol) i DIPEA (0,126 mL; 0,722 mmol) u DMF-u (3,62 mL), na 20 °C je dodat 2,2,2-trifluoroetiltrifluorometan-sulfonat (0,030 mL; 0,217 mmol). Smeša je zatim mešana na 20 °C tokom 3 dana, pa je koncentrovana na rotacionom uparivaču i prečišćena preparativnim HPLC postupkom (postupak 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao crvena čvrsta supstanca (22,1 mg; prinos 19%). (m/z): [M+H]<+>izračunato za C26H33F3N8O 531,27; utvrđeno 531,2.

Primer 16: Metil 7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-5-(((1R,3s,5S)-8-(2-oksotetrahidro-2H-piran-3-il)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-karboksilat

[0227]

[0228] U rastvor metil 5-(((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)amino)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-3-karboksilata 2HCl u metanolu (4 mL) je dodat tetraalkilamonijum karbonat, vezan polimerom (0,231 mmol), pa je suspenzija mešana na ST tokom 30 min, profiltrirana i koncentrovana da bi se dobilo karboksilatno jedinjenje u obliku slobodne baze.

[0229] U bočicu od 20 ml su dodati 3-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-on (0,042 mL; 0,46 mmol) i DCM (0,46 mL). Rastvor je zatim ohlađen do -40 °C, pa je dodat DIPEA (0,161 mL; 0,92 mmol) i dalje trifluorometansulfonski anhidrid (0,080 mL; 0,47 mmol). Bočica je zatvorena i mešana na -40 °C tokom 1 sata. Nakon 1 h, u hladnu reakcionu smešu je dodat rastvor karboksilatnog jedinjenja u vidu slobodne baze (0,094 g; 0,23 mmol) koji je bio rastvoren u DMF-u (200 uL). Bočica je zatvorena i rastvor je mešan na -40 °C, nakon čega je polako zagrejan do ST tokom 2 h, mešan preko vikenda na ST i koncentrovan rotacionim isparavanjem da bi se dobilo gusto, smeđe ulјe. Sirovo ulјe je rastvoreno u smeši vode i sirćetne kiseline od 1:1, pa je rastvor profiltriran i prečišćen reverznofaznim HPLC postupkom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu svetlo crvene čvrste supstance (45 mg; prinos 27%; čistoća 100%).

(m/z): [M+H]<+>izračunato za C26H31N7O4506,24; utvrđeno 506,1.

Primer 17: N-metil-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il)acetamid

[0231] Rastvor N<5>-((1R,3s,5S)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin TFA (100 mg; 0,209 mmol), 2-bromo-n-metilacetamida (33,4 mg; 0,220 mmol) i DIPEA (146 uL) u DMF-u (2mL) je mešan preko noći, nakon čega je koncentrovan i prečišćen reverzno-faznim HPLC postupkom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg; prinos 55%). (m/z):

[M+H]<+>izračunato za C23H30N8O 435,25; utvrđeno 435,6

[0232] Upotrebom sličnih postupaka sinteze, pripremljena su jedinjenja iz Tabela 1-8.

Tabela 1

Tabela 2

Tabela 3

Tabela 4

Tabela 5

Tabela 6

Tabela 7

Tabela 8

Primer 18: Kristalni solvat 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilnog Oblika II

(a) terc-butil ((1R,3s,5S)-3-((7-hloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0233] U balon sa okruglim dnom od 2 L su dodati 5,7-dihloro-1,6-naftiridin (45,8 g; 230 mmol), tercbutil (1R,3s,5S)-3-amino-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (54,7 g; 242 mmol) i DMSO (458 mL), a zatim je dodata i DIPEA (64,3 mL; 368 mmol). Reakciona smeša je grejana na 110 °C tokom 12 h, pa je ohlađena do sobne temperature, nakon čega je polako, tokom 45 minuta, dodavana voda (458 mL). Nakon 2h, reakciona smeša je profiltrirana i isprana sa smešom DMSO-a i vode u odnosu 1:1 (60 mL), a da bi se dobio vlažan čvrsti proizvod (65 g). Čvrsta supstanca je isprana četiri puta sa MTBE (po 500 ml) da bi se dobili međuproizvod iz naslova (74 g; 190 mmol; prinos 83%) (HPLC postupak 3, retenciono vreme 20,20 min) i filtrat koji je dalje koncentrovan da bi se dobila čvrsta supstanca (19,5 g), uglavnom proizvod. Čvrstoj supstanci (19,5 g) je dodat heptan (195 ml), pa je reakciona smeša mešana tokom 2 sata, profiltrirana i isprana heptanom da bi se dobio još jedan deo međuproizvoda iz naslova (12,3 g; 31,6 mmol; prinos 13,75%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 20,20 min.

(b) terc-butil ((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0234] Smeša terc-butil ((1R,3s,5S)-3-((7-hloro-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (30 g; 77 mmol), terc-butil 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-karboksilata (19,78 g; 100 mmol), Cs2CO3(50,3 g; 154 mmol), PdXPhos (1,517 g; 1,93 mmol) i XPhos (0,919 g; 1,93 mmol) je degasirana 3 puta sa azotom, a zatim je dodat 1,4-dioksan (300 mL). Reakciona smeša je dalje degasirana 5 puta azotom, pa je zagrejana do temperature refluksa, mešana tokom 16 h i ohlađena do 75 °C. Potom je dodata voda (90 mL) i reakciona smeša je grejana na temperaturi refluksa i mešana na temperaturi refluksa tokom 48 h. Voda (210 mL) je polako dodavana još jednom, nakon čega je reakciona smeša mešana na ST tokom 1 h i profiltrirana. Isfiltriran kolač je ispran sa smešom dioksana i vode od 1:1 (50 mL), pa je sušen na 50 °C pod vakuumom, preko noći, da bi se dobio sirovi međuproizvod iz naslova (35,34 g).

[0235] Sirovi proizvod je rastvoren u DMF-u (173 mL). Zatim je dodata SiliaMetS® silika funkcionalizovana tiolom (8,65 g) i reakciona smeša je mešana tokom 45 minuta na 80 °C. Smeša je dalje ohlađena do ST, profiltrirana i isprana sa DMF-om (35 ml). Filtratu je potom u kapima dodata voda (346 mL), pa su dodate i klice kristalizacije iz prethodnog postupka pripreme istom procedurom. Reakciona smeša je zatim mešana na ST tokom 6 h, pa je profiltrirana, isprana vodom (35 mL) i sušena na 50 °C pod vakuumom, da bi se dobio međuproizvod iz naslova (33,6 g; prinos 97%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 16,89 min

(c) N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0236] U suspenziju terc-butil ((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (15,6 g; 34,7 mmol) u metanolu (78 mL), na ST je dodata 4 M HCl u dioksanu (4 M) (87 mL; 347 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana tokom 2 sata, pa je u kapima dodat diizopropil etar (156 mL). Reakciona smeša je mešana dodatnih 18 h i dalje je profiltrirana, isprana diizopropil etrom (20 mL) i osušena na 50 °C pod vakuumom u trajanju od 2 sata, da bi se dobila 3wHCl so međuproizvoda iz naslova (11,33 g; prinos 71,2%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 9,87 min.

(d) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril (sirovi)

[0237] Smeši proizvoda iz prethodnog koraka (11,24 g; 24,50 mmol) sa DMF-om (56,2 ml) i metanolom (5,75 ml), na ST je u kapima dodat DBU (15 ml; 103 mmol), a zatim i akrilonitril (2,4 ml; 36,7 mmol), takođe u kapima. Reakciona smeša je mešana na ST tokom 3 sata, pa je u kapima tokom 1h dodata i smeša metanola i vode od 2:1 (225 mL). Nakon 3 h, reakciona smeša je profiltrirana, isprana sa smešom metanola i vode u odnosu 1:1 (20 mL) i osušena na 50 °C pod vakuumom preko noći da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova (9,42 g; prinos 96%).

(e) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril

[0238] U smešu sirovog 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila (38,6 g; 96 mmol) je dodat DMF (232 mL), a zatim i SiliaMetS® slika funkcionalizovana tiolom (1,41 mmol/g; 6,8 g). Smeša je zagrejana do 75 °C i mešana tokom 45 minuta na 75 °C. Smeša je zatim ohlađena do 25 °C, profiltrirana, isprana sa DMF-om (1 mL), pa je u filtrat u kapima dodata smeša metanola i vode odnosa 2:1 (926 mL). Smeša je dalje mešana na ST preko noći i profiltrirana, pa je isprana sa MeOH:voda 1:1 (40 mL) i osušena na 50 °C pod vakuumom, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu kristalnog solvata (38 g; 94 mmol; prinos 98%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 10,23 min. Preostali rastvarači su izdvojeni gasnom hromatografijom: metanol 6,6%, N,N-dimetilformamid 2,3%, voda, Karl-Fischer-ova analiza 1,2%.

Primer 19: Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

(a) N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamin

[0239] U reaktor su dodati 3HCl so N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (3,4 kg; 1 ekviv.), a zatim i voda (34 kg; 10 ekviv.) i IN HCl (7 kg; 2,05 ekviv.) da bi se obrazovala reakciona smeša. Dalje je dodat aktivni ugalј (0,22 kg; 0,064 ekv.), a zatim i SiliaMetS® slika funkcionalizovana tiolom (1,7 kg; 0,5 ekviv.), pa je reakciona smeša mešana na 80 °C tokom 16 h, ohlađena do 25 °C i profiltrirana kroz sloj Celita u spremnik firme Nalgene. Reaktor je ispran vodom (13,6 kg; 4 ekvivalenta), koja je potom prebačena tako da se ispere i isfiltriran kolač i sve je prikupljeno u posudu firme Nalgene.

[0240] Tečnosti koja je prikupljena nakon ispiranja je dodat metanol (13,6 kg; 4 ekv.). Temperatura je podešena na 20 °C i polako je dodato 30 težinskih% NaOH (w/v; 4,4 kg; 1,29 ekv.) uz održavanje temperature ispod 30 °C. Dobijena suspenzija je mešana tokom 3 sata na 25 °C, pa je profiltrirana, isprana vodom (17 kg; 5 ekv.) i sušena na 50 °C pod vakuumom tokom 12 h da bi se dobio međuproizvod iz naslova (2,3 kg; HPLC čistoća 98,4%). HPLC postupak 3 sa gradijentom od 32 min (vreme(min)/% B): 0/2, 10/20, 24/90, 27/90, 27,1/2, 32/2, retenciono vreme 9,4 min.

(b) 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril (sirovi)

[0241] U reaktor su dodati proizvod iz prethodnog koraka (2,1 kg; 1 ekviv), DMF (19,7 kg; 9,4 ekv.), metanol (3,4 kg; 1,6 ekv.), THF (9,5 kg; 4,5 ekv.) i DBU (0,92 kg; 0,44 ekv.), pa je reakciona smeša snažno mešana na 30 °C do potpunog rastvaranja. Temperatura je podešena na 20 °C, dodat je akrilonitril (0,48 kg; 0,23 ekv.) i reakciona smeša je mešana tokom 16 h, nakon čega je dodata voda (52,5 kg; 25 ekviv.) i temperatura je podešena na 20 °C. Dobijena suspenzija je ponovo snažno mešana tokom 3 sata i dalje je profiltrirana, isprana metanolom (3.4 kg; 1,5 ekviv.) sa kojim je najpre ispran reaktor, pa je sušena na 50 °C pod vakuumom tokom 12 sati. U suvi kolač je dodat etanol (21 kg; 10 ekviv.), a potom je dobijena suspenizija mešana na temperaturi refluksa tokom 4 h, nakon čega je ista ohlađena do 25 °C, snažno mešana na 25 °C tokom 1 sata i profiltrirana. Vlažni kolač je ispran etanolom (3,2 kg; 1,5 ekviv.) i sušen na 50 °C pod vakuumom tokom 12 h da bi se dobio međuproizvod iz naslova (1,8 kg; HPLC čistoća 99,8%)

(c) Kristalni solvat 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilnog Oblika II

[0242] U reaktor su dodati proizvod iz prethodnog koraka (1,5 kg; 1 ekviv.) i DMF (8,4 kg; 5,6 ekv.), pa je reakciona smeša grejana na 25 °C i mešana tokom 5 min dok se nije potpuno rastvorila. Zatim su tokom 1 h dodavani metanol (14,3 kg; 9,5 ekv.) i voda (9,0 kg; 6 ekv.). Rezultujuća suspenzija je snažno mešana tokom 16 h na 25 °C i dalje je profiltrirana, isprana metanolom (3,0 kg; 2 ekvivalenta) kojim je najpre ispran rekator, pa je suspenzija sušena na 50 °C pod vakuumom tokom 12 h da bi se dobio međuproizvod iz naslova (1,4 kg; HPLC čistoća 99,8%).

(d) Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

[0243] [Ekvivalenti su mereni u odnosu na korak (c).] U reaktor je dodat proizvod iz prethodnog koraka (1,4 kg), i potom aceton (13,8 kg; 9,2 ekv.), pa je dobijena suspenzija mešana tokom 18 h na 45 °C i dalje ohlađena na 25 °C, nakon čega je mešana na 25 °C tokom 30 minuta, profiltrirana, isprana acetonom (3,0 kg; 2 ekviv.) kojim je najpre ispran rekator i sušena je na 50 °C pod vakuumom tokom 12 h, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,2 kg; HPLC čistoća 99,8%) u vidu žute kristalne čvrste supstance. HPLC kolona Agilent Poroshell EC C-18150 x 4,6 mm, 2,7 µm, 45 °C, 2,2 ml/min, 7 µL, detekcija 250 nm, Mobilna faza A: Voda:ACN:TFA (99:1:0,1), Mobilna faza B: Voda:ACN:TFA (10:90:0,1), Gradijent 37 min (vreme(min)/% B) 0/4, 25/27, 30/100, 33/100, 33,1/4, 37/4, retenciono vreme 11,2 min.<1>H NMR (d6-DMSO, 600 mHz) δ (ppm) 11,75 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,57 (d, J=3Hz, 1H), 8,41 (d, J=3Hz, 1H), 7,15 (d, J=5Hz, 1H), 6,96 (dd, J=3 Hz, 5 Hz, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,20 (s, 1H), 4,55 (m, 1H), 3,33 (m, 2H), 2,63 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,70-1,93 (m, 8H).

Primer 20: Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

(a) Kristalni solvat 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilnog Oblika II

[0244] U smešu N<5>-((1R,3s,5S)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina (5 g; 14,31 mmol) i DMF-a (50 ml) je dodat DBU (5,39 ml; 35,8 mmol), a zatim je u kapima dodat 3-bromopropionitril (1,78 ml; 21,5 mmol). Reakciona smeša je mešana na 20-25 °C tokom 4 h, pa je u kapima tokom 60 minuta dodavana smeša metanola i vode (3:1; 150 mL). Reakciona smeša je zatim mešana tokom 20 h na 20 °C, nakon čega je profiltrirana, isprana smešom metanola i vode (3:1; 10 ml) i sušena pod vakuumom na 50 °C tokom 2 sata da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5,07 g; 12,60 mmol; prinos 88%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 10,13 min.

[0245] U smešu proizvoda iz prethodnog koraka (1 g; 2,49 mmol) u DMF-u (6 ml), u kapima je dodata smeša metanola i vode (3:1; 18 ml). Nakon 3 h, smeša je profiltrirana, isprana metanolom (2 mL) i sušena pod vakuumom na 50 °C tokom 18 h, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,94 g; 2,33 mmol; prinos 94%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 10,17 min.

(b) Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

[0246] Smeša proizvoda iz prethodnog koraka (0,6 g; 1,49 mmol) i acetona (7,2 ml) je mešana na ST tokom 18 h, pa je profiltrirana i isprana acetonom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,5 g; 1,24 mmol; prinos 83%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 10,03 min.

Primer 21: Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

[0247] Smeša 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilnog solvata Oblika II (100 g; 248 mmol) i 1,4-dioksana (1200 mL) je zagrejana do 95 °C, mešana tokom 10 h, ohlađena do ST, mešana tokom 3 h, profiltrirana, isprana dioksanom i sušena na 50 °C tokom 6 h, a zatim i na ST tokom 5 dana, da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova (87 g; prinos 86%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 10,21 min.

Primer 22: Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

[0248] Smeša 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilnog solvata Oblika II (5 g; 12,42 mmol) i toluena (75 mL) je grejana na temperature refluksa tokom 4 h, pa je ohlađena do ST tokom 30 minuta, mešana na ST tokom 30 minuta, profiltrirana i isprana toluenom da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova (4,6 g; prinos 92%).

Primer 23: Kristalni 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrilni Oblik I

[0249] Smeša 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril etanolnog solvata (1 g; 2,49 mmol) i butil acetata (20 mL) je grejana na 110 °C tokom 8 h, pa je ohlađena do ST, mešana na ST tokom 65 h, profiltrirana i isprana vodom da bi se obezbedilo jedinjenje iz nasova (0,92 g; prinos 92%). HPLC postupak 3, retenciono vreme 10,08 min.

Primeri 24-27: Osobine čvrstih oblika pronalaska

[0250] Uzorci kristalne slobodne baze Oblika I i kristalnog solvata Oblika II za 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril iz Primera 19 i 18, tim redom, analizirani su rendgenskom difrakcijom praha (PXRD). Kristalni Oblik I iz Primera 19 je takođe analiziran diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC), termogravimetrijskom analizom (TGA), dinamičkom sorpcijom vlage (DMS) i rendgenskom difrakcijom monokristala.

Primer 24 Rendgenska difrakcija praha

[0251] Rendgenska difraktogram praha na Slikama 1 i 5 je dobijen upotrebom D8-Advance rendgenskog difraktometrom firme Bruker, upotrebom Cu-Kα zračenja (λ = 1,54051 Å) u uslovima izlaznog napona od 45 kV i struje od 40 mA. Instrument je bio u režimu rada tipa Bragg-Brentano geometrije sa incidencom, divergencijom i prorezima za rasejanja podešenim tako da se maksimalno intenzivira dejstvo na uzorak. Radi merenje, mala količina praha (5-25 mg) je nežno pritisnuta na držač uzorka da bi se obrazovala glatka površina i isti je izložen X-zracima. Uzorci su skenirani pri režimu 2θ-2θ od 2° do 40°, sa stepenom koraka 2θ od 0,02° i sa stopom skeniranja od 0,30° sekundi po koraku. Prikuplјanje podataka je kontrolisano kompjuterskim programom DiffracSuite firme Bruker, a analiza je urađena kompjuterskim programom Jade (verzija 7.5.1). Instrument je kalibrisan korundnim standardom, unutar ±0,02° od dvostrukog teta ugla. Utvrđene PXRD pozicije pikova za dva-teta i d-razmaci su prikazani u Tabelama 9 i 10, redom za kristalni Oblik I i kristalni solvat Oblika II.

Tabela 9: PXRD podaci za kristalni Oblik I

Tabela 10: PXRD podaci za kristalni solvat Oblika II

Primer 25: Termička analiza

[0252] Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) je urađena upotrebom Model Q-100 modula firme TA Instruments sa regulatorom tipa Thermal Analyst. Podaci su prikuplјeni i analizirani upotrebom kompjuterskog programa Thermal Analysis firme TA Instruments. Uzorak svakog kristalnog oblika je precizno odmeren u aluminijsku posudu sa poklopcem. Nakon perioda izotermalne ravnoteže na 5 °C od 5 minuta, uzorak je zagrejan od 0 °C do 250 °C upotrebom linearnog regulatora zagrevanja za stopu od 10 °C/min. Reprezentativan DSC termogram kristalne slobodne baze Oblika I je prikazan na Slici 2.

[0253] Merenja termogravimetrijske analize (TGA) su urađena upotrebom Model Q-50 modula firme TA Instruments sa ugrađenim dodatnim uređajem za sposobnost visoke rezolucije. Podaci su prikuplјeni upotrebom programa Thermal Analysis firme TA Instruments, pa su analizirani upotrebom kompjuterskog programa Universal Analysis firme TA Instruments. Izmereni uzroka je stavljan u posudu od platine i skeniran je pri stopi zagrevanja od 10 °C, polazeći od temperature okoline pa do 300 °C. Komore za balans i peći su tokom upotrebe produvavane azotom. Reprezentativni TGA zapis za kristalnu slobodnu bazu Oblika I je prikazan na Slici 3.

Primer 26: Utvrđivanje dinamičke sorpcije vlage

[0254] Merenje dinamičke sorpcije vlage (DMS) je rađeno upotrebom atmosferske mikro-vage, SGA-100 sistema firme VTI (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Upotrebljavan je izmeren uzorak, a na početku analize, vlažnost je bila najmanje moguće vrednosti (blizu relativne vlažnosti (RV) od 0%). DMS analiza se sastojala od početnog koraka sušenja (0% RV) tokom 120 minuta i zatim od dva ciklusa sorpcije i desorpcije, pri čemu je stopa skeniranja iznosila 5% relativne vlažnosti/koraku i opseg vlažnosti je bio od 5% RV do 90% RV. DMS analiza je izvedena izotermno na 25 °C. Reprezentativni DMS zapis za kristalnu slobodnu bazu Oblika I je prikazan na Slici 4.

Primer 27 Difrakcija rendgenskih zraka monokristalom

[0255] Podaci o intenzitetu su prikuplјeni na 293 °K, upotrebom Cu zračenja (1 = 1,54184 Å) i GeminiR Ultra difraktometra firme Oxford Diffraction kojim je upravljano preko kompjuterskog programa CrysAlis [Agilent Technologies (2012), Yarnton, Engleska] (CrisAlis CCD i CrisAlis RED, 2003). Podaci su korigovani za efekte apsorpcije, poređenjem ekvivalentnih refleksija. Struktura je rešena postupkom direktne procedure koja je bila implementirana u okviru SHELXT kompjuterskog programa, a za prečišćavanje je upotrebljena potpuna matrica najmanjih kvadraga za F<2>koja je bila u okviru SHELXL-2014. [Sheldrick, Acta Crist. C71 (2015), 3-8]. Atomi različiti od vodonika su locirani na mapama razlika i urađeno je fino podešavanje na osnovu anizotropnosti. Atomi vodonika koji su vezani za C atome su fiksirani u idealizovanim položajima. Nјihovi parametri termičkog pomaka su podešeni slobodno, osim za jednu od metil grupa. H atomi vezani za N su lokalizovani prečišćavanjem podataka i upotrebom ograničenja rastojanja, N-H = 0,86(1) Å, do su njihovi parametri termičkog pomaka utvrđeni finim podešavanjem na slobodan način.

Primer 28: Ispitivanje stabilnosti čvrstog stanja

[0256] Uzorci kristalne slobodne baze Oblika I pronalaska su uskladišteni u dvostrukim polietilenskim kesama sa zip zatvaračem, unutar HDPE boce sa poklopcem na navijanje, na 25 °C i pri relativnoj vlažnosti (RV) od 60%, kao i na 40 °C i pri relativnoj vlažnosti od 75%. U određenim intervalima, sadržaj reprezentativnog uzorka je uklonjen i analiziran HPLC postupkom da bi se odredila hemijska čistoća, dok je Karl-Fischer-ov postupak upotrebljen za određivanje sadržaja vode.

Biološka ispitivanja

[0257] Jedinjenja pronalaska su okarakterisana u jednom ili više od bioloških ispitivanja koja su navedena u tekstu koji sledi.

Analiza 1: Biohemijska ispitivanja JAK i kinaza koje nisu ciljne

[0258] Panel od četiri biohemijska testa tipa LanthaScreen za JAK (JAK1, 2, 3 i Tyk2) je urađen u uobičajenom reakcionom puferu za kinaze (50 mM HEPES, pH 7,5, 0,01% Brij-35, 10 mM MgC12 i 1 mM EGTA). Rekombinantni JAK enzimi obeleženi sa GST, kao i supstrati STAT1 petpida obeleženi sa zelenim fluorescentnim proteinom (GFP), nabavljeni su od firme Life Technologies.

[0259] Serijski razblažena jedinjenja su prethodno inkubirana sa svakim od četiri JAK enzima i supstratom u belim mikrotitarskim pločama sa 384 bunarića (Corning), na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Zatim je dodat ATP da bi se inicirale reakcije kinaza, u ukupnoj zapremini od 10 µL, sa 1% DMSO. Konačne koncentracije JAK1, 2, 3 i Tyk2 enzima su iznosile 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM i 0,25 nM, tim redom; odgovarajuće Km za koncentracije ATP-a su iznosile 25 µM, 3 µM, 1,6 µM i 10 µM; dok je koncentracija supstrata bila 200 nM u sva četiri ispitivanja. Dopušteno je da se reakcije kinaza odvijaju tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, a pre dodavanja po 10 µL EDTA (finalna koncentracija 10mM) i Tb-anti-pSTAT1 (pTir701) antitela (Life Technologies, finalna koncentracija 2nM) pripremljenih u TR-FRET puferu za razblaživanje (Life Technologies). Ploče su ostavlјene da se inkubiraju na sobnoj temperaturi tokom 1 sata pre nego što su očitane na čitaču tipa EnVision (Perkin Elmer). Signali odnosa emisije (520 nm/495 nm) su snimlјeni i upotrebljeni za izračunavanje vrednosti procenta inhibicije na osnovu podataka dobijenih za DMSO i kontrolu šuma.

[0260] Za analizu odgovora na dozu, grafički su unošeni podaci procenta inhibicije u odnosu na koncentracije jedinjenja, dok su vrednosti IC50 određene 4-parametarskim robusnim modelom ekstrapolacije upotrebom kompjuterskog programa Prism (GraphPad Software). Rezultati su izraženi kao pIC50 (negativni logaritam IC50) i naknadno su prevedeni u pKi (negativni logaritam konstante disocijacije, Ki) korišćenjem Cheng-Prusoff-ove jednačine.

[0261] U svakom od četiri JAK testa, ispitivana jedinjenja sa većom pKi vrednošću karakteriše i veća inhibicija JAK aktivnosti. Jedinjenja pronalaska koja su ispitana na ovaj način, obično karakteriše pKi vrednosti između oko 7 i oko 10,3

[0262] Paneli testova za ispitivanje tirozin kinazne aktivnosti koja nije ciljna (Flt3, RET, FGFR2, TrkA i pDGFRβ) su razvijeni primenom slične metodologije, sa rekombinantnim enzimima dobijenim iz firme Life Technologies, kao i sa biotinizovanim peptidnim supstratima sintetisanim od strane firme AnaSpec. Sva ispitivanja su urađena na sobnoj temperaturi, uz finalnu koncentraciju ATP-a od 100 µM. Reagensi za detekciju, uklјučujući Eu-anti-fosfotirozin (pY20) antitelo i APC-SA tipa SureLight, nabavlјeni su od firme Perkin Elmer. Signali odnosa emisije (665nm/615nm) su snimlјeni i upotrebljeni za analizu podataka, a krajnji rezultati su izraženi kao pIC50,

Analiza 2: Analiza ćelijske potencije JAK

[0263] Analiza ćelijske potencije tipa AlphaScreen za JAKI je urađena merenjem interleukina-13 (IL-13, R&D Systems) koji je indukovan fosforilacijom STAT6 u BEAS-2B humanim epitelnim ćelijama pluća (ATCC). Anti-STAT6 antitelo (Cell Signaling Technologies) je konjugovano sa AlphaScreen akceptorskim granulama (Perkin Elmer), dok je anti-pSTAT6 (pTyr641) antitelo (Cell Signaling Technologies) biotinizovano upotrebom EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin-a (Thermo Scientific).

[0264] BEAS-2B ćelije su gajene na 37°C, u vlažnom inkubatoru sa 5% CO2, u 50% DMEM/50% F-12 medijumu (Life Technologies) u koji su bili dodati 10% FBS (Hyclone), 100 U/mL penicilin, 100 µg/mL streptomicin (Life Technologies) i 2 mM GlutaMAX rastvor (Life Technologies). Prvog dana testa, ćelije su zasađene u gustini od 7,500 ćelija/bunariću u bele ploče sa 384 bunarića koje su bile obložene poli-D-lizinom (Corning), u po 25 µL medijuma, pa su ostavljene u inkubatoru preko noći da bi se zalepile za podlogu. Drugog dana testa, medijum je uklonjen i zamenjen je sa 12 µL pufera za analizu (Hank-ov balansirani rastvor soli/HBSS, 25mM HEPES i goveđi serumski albumin/BSA koncentracije 1 mg/ml) koji je sadržavao razne doze ispitivanog jedinjenja u cilju određivanje doznog odgovora. Jedinjenja su serijski razblažena u DMSO-u, a zatim su razblažena još 1000 puta u medijumu, da bi se postigla krajnja koncentracija DMSO-a do 0,1%. Ćelije su inkubirane 1 h sa ispitivanim jedinjenjima na 37°C, a zatim je dodato po 12 µL prethodno zagrejanog IL-13 (80 ng/ml u puferu za analizu) radi efekta stimulacije. Nakon inkubacije na 37°C tokom 30 minuta, pufer za analizu (koji je sadržavao jedinjenje i IL-13) je uklonjen, pa je dodato po 10 µL pufera za liziranje ćelija (25 mM HEPES, 0,1% SDS, 1% NP-40, 5 mM MgC12, 1,3 mM EDTA, 1 mM EGTA i dodatak u vidu proteaznih inhibitora tipa Complete Ultra mini i PhosSTOP reagensa firme Roche Diagnostics). Ploče su mućkane na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, pre dodavanja reagenasa za detekciju. Najpre je dodata smeša biotin-anti-pSTAT6 i anti-STAT6 konjugovanih zrnaca koja je inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, nakon čega su dodata donorska zrnca konjugovana sa streptavidinom (Perkin Elmer). Nakon najmanje 2h inkubacije, ploče za analizu su očitane na čitaču mikrotitar ploča tipa EnVision. Signali AlphaScreen luminiscencije su snimlјeni i upotrebljeni za izračunavanja vrednosti procenata inhibicije na osnovu DMSO-a i kontrole za signal šuma.

[0265] Za analizu odgovora na dozu, grafički su uneti podaci procenta inhibicije u odnosu na koncentracije jedinjenja, dok su vrednosti IC50 određene 4-parametarskim robusnim modelom ekstrapolacije, upotrebom kompjuterskog programa Prism. Rezultati su prikazani kao negativni logaritam IC50vrednost, pIC50.

[0266] Ispitivana jedinjenja koja je karakterisala veća pIC50vrednost u ovoj analizi, karakterisala je i veća inhibicija fosforilacije STAT6 koju indukuje IL-13. Jedinjenja pronalaska ispitivana u ovoj analizi, obično su karakterisale pIC50vrednosti između oko 6,8 i oko 8,5.

[0267] Razvijena je i analiza fosforilacije STAT6 koja se indukuje interleukinom-4 (IL-4, R&D Systems), u THP-1 humanim monocitnim ćelijama (ATCC), upotrebom identičnog formata analize i detekcionih reagenasa. Stimulacija sa IL-4 se obično vrši tokom 30 min i sa finalnom koncentracijom od 30 ng/ml. I prikuplјanje i analiza podataka su urađeni na sličan način. Jedinjenja pronalaska koja su ispitivana ovom analizom, obično su karakterisale pIC50vrednosti između oko 6,8 i oko 8,5.

Analiza 3: Analiza citotoksičnosti

[0268] Analiza ćelijske vijabilnosti/citotoksičnosti luminiscentnim CellTiter-Glo ragensom, urađena je sa BEAS-2B humanim epitelnim ćelijama pluća (ATCC), u normalnim uslovima rasta.

[0269] Ćelije su gajene na 37°C, u vlažnom inkubatoru sa 5% CO2, u 50% DMEM/50% F-12 medijumu (Life Technologies) u koji su bili dodati 10% FBS (Hyclone), penicilin (100 U/mL), streptomicin (100 µg/mL; Life Technologies) i 2 mM GlutaMAX rastvor (Life Technologies). Prvog dana testa, ćelije su zasađene u gustini od 500 ćelija/bunariću, u bele ploče sa 384 bunarića, u po 25 µL medijuma, pa su ostavljene u inkubatoru preko noći da bi se zalepile za podlogu. Drugog dana analize, dodato je po 5 µL medijuma koji je sadržavao razne doze ispitivanog jedinjenja radi određivanje doznog odgovora, pa je sve inkubirano 48 sati na 37 °C. Zatim je dodato po 30 µl rastvora za detekciju iz komercijalnog paketa CellTiter-Glo (Promega), sve je mešano na orbitalnoj mešalici tokom 5 minuta i dodatno inkubirano 10 min, pa je ploča očitana na čitaču mikroploča tipa EnVision. Luminescentni signali su snimljeni i izračunat je procenat kontrolnih vrednosti DMSO-a.

[0270] Za analizu doznog odgovora, procentualni podaci za DMSO kontrolu su grafički uneti u odnosu na koncentracije jedinjenje, da bi se izvela kriva dozne zavisnosti spajanjem svake tačke podataka u jednu liniju. Koncentracija u kojoj svaka kriva pređe praga inhibicije od 15% definisana je kao CC15. Rezultati su izraženi kao negativni logaritam CC15vrednost, pCC15.

[0271] Očekuje se da ispitivana jedinjenja koja pokazuju nižu pCC15vrednost u ovoj analizi, karakteriše veća verovatnoća izazivanja citotoksičnosti. Jedinjenja pronalaska koja su ispitivana ovom analizom obično karakterišu pCC15vrednosti između manje od 5 i oko 6.

Rezultati in vitro analize

[0272] Sva jedinjenja iz Primera od 1 do 17 i iz Tabela od 1 do 8 su ispitana u jednoj ili u više od prethodno opisanih analiza. U tabelama koje slede, u kojima su prikazani podaci analiza enzima JAK1, JAK2, JAK3 i TYK2, A predstavlјa pKivrednost ≥ 10 (Ki≤ 0,1 nM), B predstavlјa pKivrednost između 9 i 10 (Kiizmeđu 1 nM i 0,1 nM), C predstavlјa pKivrednost između 7 i 9 (Kiizmeđu 100 nM i 1 nM), dok D predstavlјa pKivrednost između 6,5 i 7Kiizmeđu 316 nM i 100 nM). U rezultatima analiza ćelijske potencije sa THP-1 i BEAS-2B, A predstavlјa pEC50vrednost ≥ 7,5 (EC50≤ 32 nM), B predstavlјa pEC50vrednost između 6,7 i 7,5 (EC50između 200 nM i 32 nM), dok C predstavlјa pEC50vrednost <6,7 (EC50> 200 nM).

Analiza 4: Određivanje apsorpcije kod pacova sa ugrađenim kanilama

[0273] Oralna bioraspoloživost (F%), frakcija apsorbovanog jedinjenja (Fa%) i frakcija koja zaobilazi klirens preko jetre (Fh%), određeni su kod pacova Sprague Dawley soja u okviru dve studije koje su opisane u nastavku:

(1) Farmakokinetika kod pacova nakon IV primene doze ispitivanog jedinjenja: Nakon IV primene doze, uzorci plazme su prikuplјeni u vremenskim tačkama 0-6 h na uobičajen način. Nivoi leka su određeni upotrebom LC-MS-MS postupka. Dobijeni nivoi leka su upotrebljeni za izračunavanje IV farmakokinetičkih parametara: AUC IV i doze IV.

(2) Pacovima kojima su ugrađene kanile u njihovu portalnu venu (PV), kao i u njihovu jungularnu venu (JV), primenjena je oralna doza ispitivanog jedinjenja. Nakon oralne primene doze, uzorci plazme su prikupljani na uobičajen način u periodu od 0-6 sati, kako iz portalne vene, tako i iz jugularne vene. Nivoi leka su određeni upotrebom LC-MS-MS postupka. Dobijeni nivoi leka su upotrebljavani za izračunavanje sledećih farmakokinetičkih parametara: AUC PO PV, AUC PO JV i doze PO.

[0274] Koristeći podatke dobijene u prethodno navedenim studijama, oralna bioraspoloživost F% i količine Fa% i Fh% su izračunati na osnovu sledećih formula:

gde je:

AUC PO JV = Površina ispod krive nakon oralne primene doze i iz plazme prikuplјene iz jugularne vene

AUC PO PV = Površina ispod krive nakon oralne primene doze i iz plazme prikuplјene iz portalne vene

AUC IV = Površina ispod krive nakon intravenske primene doze

Doza IV = Intravenska doza u mg/kg

Doza PO = Oralna doza u mg/kg

Jedinjenja pronalaska obično karakteriše oralna bioraspoloživost (F%) manja od oko 10%, kao i apsorpcija u portalnoj veni (Fa%) koja je manja od oko 20%, uklјučujući manje od oko 10%. Na primer, sva jedinjenja iz Primera 1-6, 8 i 12 su karakterisale F% vrednosti koje su bile manje od oko 5% i Fa% vrednosti koje su bile manje od oko 10%.

Analiza 5: Farmakokinetika u debelom crevu kod pacova

[0275] Ispitivana jedinjenja su pojedinačno formulisana u 0,5% metil-celulozi u vodi i primenjena su oralnom gavažom u dozi od 5 mg/kg pacovima Sprague Dawley soja. U raznim vremenskim tačkama (obično 1, 2, 4, 6, 24 sata) nakon primene doze, punkcijom srca su uzimani uzorci krvi, a intaktna debela creva su izolovana iz pacova. Uzorci krvi su centrifugirani na 1500 x g tokom 15 min radi prikuplјanja plazme. Koloni su isprani ledeno hladnim fosfatom puferisanim fiziološkim rastvorom (PBS), izmereni i homogenizovani u 10 zapremina PBS-a. Nivoi ispitivanog jedinjenja u plazmi i debelom crevu su određeni LC-MS analizom shodno analitičkim standardima koji su upotrebljeni tako da se konstruiše standardna kriva u puferu za analizu. Odnos zastupljenosti u debelom crevu i plazmi je određen kao odnos AUC za debelo crevo i AUC kod plazme, u µg hr/g. Na primer, jedinjenja iz Primera 1, 2 i 5 je karakterisao odnos zastupljenosti u debelom crevu i plazni koji je bio veći od oko 450.

Test 6: Farmakokinetika u plazmi i GI traktu pacova i pasa

[0276] Ispitivano jedinjenje je primenjeno mužjacima pacova Sprague Dawley soja (n = 3) kao što je opisano za analizu 5. U svakoj vremenskoj tački (0,5, 1, 3, 6 i 24 sata), uzorci plazme su uzeti punkcijom srca i odmah nakon toga je uklonjen GI trakt i izolovani su sledeći segmenti: dvanaestopalačno crevo, proksimalno debelo crevo i distalno debelo crevo. Nivoi u plazmi i segmentima za ispitivana jedinjenja su određeni kao što je opisano za analizu 5. U svim svremenskim tačkama, koncentracija u plazmi je bila ispod granice kvantifikacije od 0,001 µg/mL. Za jedinjenje iz Primera 1, za svaki segment, odnos tkiva i plazme je bio veći od oko 14000.

[0277] Analogni eksperiment je urađen sa psima. Mužjacima pasa rase bigl (n=2) je primenjena doza od 5 mg/kg ispitivanog jedinjenja koje je bilo formulisano kao što je prethodno opisano, putem oralne gavaže. Kod psa broj 1, uzorci plazme su uzeti nakon 0,25, 1, 2, 4, 6 i 24 sata od primene doze. Kod psa broj 2, uzorci plazme su uzimani do 6 sati. I kod psa broj 1 (nakon 24 sata) i kod psa broj 2 (nakon 6 sati), uklonjen je GI trakt i izolovani su sledeći segmenti: dvanaestopalačno crevo, ileum, cekum i kolon koji je dodatno izdeljen na tri jednaka dela (proksimalno, srednje i distalno debelo crevo). Za svaki od GI segmenata, iz sredini segmenta je izdvojen komad veličine oko 2 cm. Svaki je temelјno ispran u ledeno hladnom PBS puferu, a zatim je homogenizovan u 5 zapremina PBS pufera i analiziran kao što je prethodno navedeno. Za jedinjenje iz Primera 1, odnos koncentracije jedinjenja u GI tkivu prema jedinjenju u plazmi u kolekcijama koje su urađene 6 sati nakon primene oralne doze, iznosio je od oko 9 do oko 165, pri čemu je koncentracija u okviru debelog creva uzeta kao suma tri ispitivana segmenta. Odnos koncentracija u tkivu GI i plazni se kretao do oko 7 do oko 30 za kolekcije koje su ispitivane 24 sata nakon primene oralne doze.

Analiza 7: Mišji model kolitisa indukovanog oksazalonom

[0278] Oksazolonom indukovan kolitis je eksperimentalni model koji je histološki sličan ulceroznom kolitisu kod lјudi (Heller i saradnici, Immunology, 2002, 17, 629-638). Za analizu su upotrebljeni odrasli BALB/C miševi iz Harlana. Prvog dana, životinje su blago anestezirane izofluranom i dlaka između ramena je pažljivo uklonjena pre sporog nanošenja oksazolona (4%, 150 µL; formulacija u smeši acetone i maslinovog ulja u odnosu 4:1) ili rastvora nosača u cilju senzibilizacije kože. Sedam dana nakon senzitizacije kože, miševo su izloženi gladovanju preko noći, nakon čega su anestezirani izofluranom i ugrađen im je 3,5-F kateter koji je bio opremljen špricem od 1 ml. Špric je napunjem rastvorom oksazolona i pažljivo je ubačeno oko 4 cm ovog katetera u debelo crevo miša. Nakon ubacivanja, veoma sporo (tokom 30 sekundi, uporebom pumpe za injeciranje) u debelo crevo je ubrizgano 50 µL rastvora oksazolona (1%, formulacija etanol:voda 1:1). Kateter je uklonjen i miševi su držani vertikalno (glavom nadole) tokom 2 min kako bi se osiguralo da celokupan rastvor oksazolona ostane unutar debelog creva. Tretman lekovima (PO, BID ili TID) ili nosačem je započen dan pre intrarektalne (IR) primene oksazolona. Dva dana nakon ovakve primene oksazolona, izračunat je index aktivnosti oboljenja (DAI, od engl. Disease Activity Index) od strane objektivno eksperimentatora za svakog miša, uzimanjem u obzir sledećih kriterijuma za procenu: ocenu konzistencije stolice (0, normalna; 2, meka; 4, dijareja), ocenu veličine krvarenja (0, odsustvo; 2, manje krvi; 4, prisustvo) i ocenu gubitka telesne težine (0, bez; 1, 1% -5%; 2, 5%-10%; 3, 10% -20%; 4, više od 20%); DAI = srednja vrednost (ocene konzistencije stolice grube ocene krvarenja ocene gubitka težine).

[0279] Odabrana jedinjenja predmetnog pronalaska su ispitivana analizom. Efikasnos u modelu je bila očigledna na osnovu smanjenja DAI rezultata u poređenju sa rezultatima kojd životinja koje su tretirane nosačem. Jedinjenja iz Primera 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 i 1-38, pokazala su statistički značajno smanjenje DAI ocene u oksazalonskom modelu u poređenju sa životinjama koje su tretirane nosačem, pri primeni doze od 1,3 i/ili 10 mg/kg BID, dok jedinjenja iz Primera 7, 9, 11, 13, 2-1, 2-6, 2-16, 2-17, 2-22, 2-24, 4-3, 4-4, 4-13, 4-18, 4-19, 4-23 i 5-11 nije karakterisalo statistički značajno smanjenje doza do 10 mg/kg BID priliko ispitivanja.

Analiza 8: Efekti imunosupresije u ćelijama prirodnim ubicama (NK, od engl. natural killer) iz slezine miša

[0280] Deplecija ćelija slezine kod miša predstavlja eksperimentalni model imunosupresije (Kudlacz i saradnici, Am. J. of Transplantation, 2004, 4, 51-57). Jedinjenje iz Primera 1 je ispitano u modelu mišijih ćelija slezine nakon iste paradigme tretmana kao što je ona upotrebljena u modelu kolitisa indukovanog oksazolonom (test 7).

[0281] Za ispitivanje su upotrebljeni odrasli mužjaci Balb/C soja (stari 12-14 nedelјa) iz Harlana. Jedinjenje (1, 10 i 100 mg/kg, BID) i tofacitinib (30 mg/kg, BID) kao pozitivna kontrola, primenjeni su oralno tokom tri dana, naivnim miševima. Slezine su prikupljene 1 ili 2 sata nakon poslednje primene doze i odmah su izdrobljene radi bojenja ćelijskih podtipova. Pre fiksacije, antitela za CD19 (FITC; B ćelije), CD3e (PE; pan T ćelije) i DX5 (APC; NK ćelije) koja su bila obeležena fluoroforom, inkubirana su sa uzorcima splenocita iz svake životinje da bi se omogućila istovremena, višestruka procentualna analiza podtipova na protočnom citometru. Broj ukupnih ćelija slezine za svaku životinju je izmeren upotrebom automatizovano brojača ćelija tipa Scepter™ 2.0 Handheld.

[0282] Apsolutan broj podtipa populacije limfocita (npr. B, T i NK ćelija slezine) je izračunat na osnovu procenata svakog podtipa, množenjem sa ukupnim brojem ćelija slezine za svaku životinju. Jednofaktorska ANOVA analiza, uz Dunnett-ovom post hoc test, upotrebljena je za poređenje broja limfocita slezine kod grupa tretiranih nosačem i ispitivanim jedinjenjem. Nivoi α su iznosili p <0,05. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM za svaku grupu.

[0283] Pozitivna kontrola, tofacitinib (30 mg/kg; PO, BID), smanjo je značajno i na dozno zavisan način broj NK ćelija slezine. U istoj studiji, na broj NK ćelija slezine nije uticalo jedinjenje iz Primera 1 u dozi PO (BID) do 100 mg/kg (maksimalna ispitivana doza). Nije uočen ni efekat na populacije B i T ćelija za bilo koje od jedinjenja.

[0284] Navedeni podaci, zajedno sa minimalnom dozom od 1 mg/kg koja je izazvala značajan antikolitisni efekat u mišjem modelu kolitisa izazvanog oksazolonom (Analiza 7), omogućavaju izračunavanje funkcionalnog terapijskog indeksa od > 100 za jedinjenje iz Primera 1.

Analiza 9: Prva studija na ljudima radi procene bezbednosti, podnošljivosti i farmakokinetike kod zdravih ispitanika

[0285] Jedinjenje iz Primera 1 su ispitana i u dvostruko slepoj, randomizovanoj, placebokontrolisanoj studiji sa jednokratnim povećanjem doze (SAD) i višestrukim povećanjem doze (MAD), a u cilju procene bezbednosti, podnošljivosti i farmakokinetike kod zdravih ispitanika. Farmakokinetički uzorci su prikuplјani do 72 sata nakon finalne doze, kako u SAD (nakon prve doze) tako i u MAD studiji (nakon 14 dana svakodneven primene jednom dnevno). SAD studija je uključivala 5 kohorti, doj je u MAD studiju bilo uključeno 4 grupe sa ukupno 82 subjekta, od kojih je 71 završio period primene doze.

[0286] Farmakokinetički parametri plazme (PK) su određeni nekompartmenalizovanom analizom, upotrebom programa WinNonLin, verzije 6.4.0 (Pharsight, St Louis, MO). PK parametar plazme koji je ovde prisutan je: Cmax: maksimalna koncentracija u plazmi

[0287] Nakon primene jednokratne doze do 1000 mg; prosečna Cmaykoncentracija jedinjenja u plazmi je bila manja od 50 ng/mL, a nije bilo osobe kod koje je postignut Cmaxveći od 100 ng/mL. Nakon 14 dana primene jedinjenja do 300 mg; srednje vrednosti Cmaxkoncentracija jedinjenja u plazmi su bile manje od 15 ng/mL, a nije bilo osobe kod koje je postignut Cmaxveći od 30 ng/mL. Poređenje ovih podataka sa drugim oralno primenjenim jedinjenjima ukazuje da jedinjenje iz Primera 1 karakteriše veoma nisaka oralnu bioraspoloživost. Takođe, zabeležena je visoka koncentracija leka u uzorcima stolice, što ukazuje na zančajnu izloženost u gastrointestinalnom traktu.

[0288] Iako je predmetni pronalazak opisan pozivanjem na njegove specifične primere izvođenja, za stručnjake iz oblasti tehnike se podrazumeva da se mogu izvršiti razne promene i da se ekvivalenti mogu zameniti bez odstupanja od područja pronalaska. Pored toga, mogu se uvesti mnoge modifikacije da bi se određena situacija, materijal, sastav materije, postupak, korak ili koraci postupka prilagodili cilјu i obimu predmetnog pronalaska. Predviđeno je da sve ovakve modifikacije potpadaju u područje patentnih zahteva koji su ovde priloženi.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

gde je R<1>izabran od: (f) C1-4alkil radikala, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od: - CN, - OC1-3alkil, - C(O)OC1-4alkil, fenil radikala, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH, piridinilom, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN, tetrahidropiranilom, - C(O)NR<a>R, gde su R<a>i Rnezavisno vodonik ili C1-3alkil ili je R<a>vodonik, a Rje

i grupa izabrana od

(g) grupe izabrane od

gde je m 1 ili 2; (h) -C(O)R<6>, gde je R<6>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH, -CN, -OC1-4alkil, fenil radikala i -NR<e>R<f>, gde su R<e>i R<f>nezavisno vodonik ili C1-3alkil; C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; i

gde je R<7>-CN, -CF3ili -OCH3; (i) -C(O)OR<8>, gde je R<8>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, C3-6cikloalkil, tetrahidrofuranil grupom ili -OR<m>, pri čemu je R<m>vodonik ili C1-3alkil; i C1-4alkenila; i (j) -S(O)2R<9>, gde je R<9>izabran od radikala C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3- 6cikloalkil grupom, C1-4alkenila, C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom, fenila, piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom, heterociklina koji sadrži 4 do 6 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin po izboru supstituisan sa -CN ili C1-3alkil grupom, pri čemu je C1-3alkil po izboru supstituisan sa -CN ili -OC1-3alkil grupom; i

R<2>je izabran između vodonika, -OC1-3alkil i -CH2-R<10>, gde je R<10>izabran od radikala -OH, morfolinila, piperidinila, pri čemu je piperidinil po izboru supstituisan sa 2 fluora, kao i piperazinila, pri čemu je piperazinil po izboru supstituisan sa metil grupom; R<3>je izabran između vodonika, C1-3alkil, -OC1-3alkil, -C(O)OC1-3alkil, -S(O)2C1-3alkil i -CH2S(O)2C1- 3alkil radikala; R<4>je vodonik ili -OC1-3alkil; R<5>je vodonik ili fluoro grupa; i n je 1 ili 2; pod uslovom da kada je R<3>-OC1-3alkil i svaki od R<2>, R<4>i R<5>je vodonik, R<9>nije fenil; kada je R<5>fluoro grupa, n je 1 i svaki od R<2>, R<3>i R<4>je vodonik, R<9>nije fenil; i kada je R<5>je fluoro grupa, R<3>je metil i svaki od R<2>i R<4>je vodonik, R<1>nije -C(O)OR<8>; ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so ili stereoizomer.
2. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 1, gde: R<1>je izabran od: (a) C1-4alkil radikala, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -CN; -OC1-3alkil; fenil radikala, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH; radikala piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; tetrahidropiranilom; -C(O)NHCH3; i

(b) grupe izabrane od

gde m je 1; (c) -C(O)R<6>, gde je R<6>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH i fenil grupe; C3-6cikloalkila, pri čemu C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; i

gde R<7>je -CN ili -CF3; (d) -C(O)OR<8>, gde je R<8>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, C3-6cikloalkil, tetrahidrofuranil radikalom ili -OR<m>, gde je R<m>vodonik ili C1-3alkil; i C1-4alkenila; i (e) -S(O)2R<9>, gde je R<9>izabran od radikala: C1-4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3-6cikloalkil grupom; C1-4alkenila; C3- 6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom; heterociklina koji sadrži 4 ili 5 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin vezan za sumpor preko atoma azota i heterociklin je po izboru supstituisan sa -CN ili -CH2OCH3; i

R<2>je izabran između vodonika, -OCH3i -CH2-R<10>, gde je R<10>izabran od -OH, radikala morfolinila, piperidinila, pri čemu je piperidinil supstituisan sa dva fluora na poziciji 4, i piperazinila, pri čemu je piperazinil supstituisan sa metil grupom na poziciji 4; R<3>je izabran od vodonika, -CH3, -OCH3i -C(O)OCH3; R<4>je vodonik ili -OCH3; R<5>je vodonik ili fluoro grupa; i n je 1 ili 2, pod uslovom da, kada je R<5>fluoro grupa, R<3>je vodonik.
3. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 2, gde je R<1>C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od - CN; -OC1-3alkil; fenil radikala, pri čemu je fenil po izboru supstituisan sa -OH; radikala piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa -CN; tetrahidropiranilom, -C(O)NHCH3i
4. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 2, gde je R<1>-C(O)R<6>, pri čemu je R<6>izabran od radikala: C1- 4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa supstituentom izabranim od -OH i fenil radikala; C3-6cikloalkila, pri čemu C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; i
gde je R<7>-CN ili -CF3. 5. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 2, gde je R<1>-S(O)2R<9>, pri čemu je R<9>izabran od radikala: C1- 4alkila, pri čemu je C1-4alkil po izboru supstituisan sa -CN, -OC1-3alkil, fenil, piridinil ili C3-6cikloalkil radikalom; C1-4alkenila; C3-6cikloalkila, pri čemu je C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa C1-3alkil grupom; piridinila, pri čemu je piridinil po izboru supstituisan sa fluoro grupom; heterociklina koji sadrži 4 ili 5 atoma u prstenu, uklјučujući jedan atom azota, pri čemu je heterociklin vezan za sumpor preko atoma azota i heterociklin je po izboru supstituisan sa -CN ili sa -CH2OCH3; i
6. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 2, gde je R<1>izabran od: (a) C1-4alkil radikala, pri čemu je C1-4alkil supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe ili sa -CN ili -C(O)NHCH3; (b) -C(O)R<6>, gde R<6>je C1-4alkil, pri čemu je C1-4alkil je supstituisan sa jednom, dve ili tri fluoro grupe; i (e) -S(O)2R<9>, gde je R<9>piridinil; i svaki od R<2>, R<3>, R<4>i R<5>je vodonik.
7. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 6, gde je R<1>izabran od -(CH2)2CN, -CH2CH2F, -CH2C(O)NHCH3, -C(O)CHF2i –S(O)2-piridin-3-il radikala.
8. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 2, pri čemu je jedinjenje izabrano između: 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila, N<5>-((1R,3s,5S)-8-(2-fluoroetil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-8-(piridin-3-ilsulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, 2-(dimetilamino)-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il)etan-1-ona, 2,2-difluoro-1-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)etan-1-ona, N<5>-((1R,3s,5S)-8-((2-metoksietil)sulfonil)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, N<7>-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-N<5>-((1R,3s,5S)-9-(piridin-3-ilsulfonil)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-3-il)-1,6-naftiridin-5,7-diamina, izobutil (1R,3s,5S)-3-((2-(hidroksimetil)-7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata, N-metil-2-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-9-azabiciklo[3.3.1]nonan-9-il)acetamida i njihovih farmaceutski prihvatlјivih soli.
9. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje formule:

ili je njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
10. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje formule:
11. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje formule:

ili je njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
12. Kristalni oblik jedinjenja prema Patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril i pri čemu je kristalni oblik naznačen time, što rendgenski difraktogram praha sadrži difrakcione pikove na vrednostima 2θ od 7,87±0,20; 12,78±0,20; 15,78±0,20 i 20,41±0,20.
13. Kristalni oblik iz Patentnog zahteva 12, pri čemu je rendgenski difraktogram praha dalјe naznačen time, što sadrži dva ili više od dodatnih difrakcionih pikova na vrednostima 2θ izabranim od 10,80±0,20; 13,47±0,20; 13,64±0,20; 14,66±0,20; 15,11±0,20; 15,54±0,20; 17,75±0,20; 21,00±0,20; 22,22±0,20; 22,93±0,20 i 23,65±0,20.
14. Kristalni oblik jedinjenja prema Patentnom zahtevu 12, pri čemu je kristalni oblik naznačen time, što je rendgenski difraktogram praha sa pozicijama pikova koje su suštinski u skladu sa pozicijama pikova na difraktogramu prikazanom na Slici 1.
15. Kristalni Oblik I jedinjenja prema Patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril i pri čemu je kristalni oblik naznačen time, što zapis diferencijalne skenirajuće kalorimetrije koji je snimljen pri stopi zagrevanja od 10 °C po minuti, pokazuje maksimum u endotermnom protoku toplote na temperaturi između oko 243 °C i oko 253 °C.
16. Kristalni oblik jedinjenja prema Patentnom zahtevu 15, pri čemu je jedinjenje 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril i pri čemu je kristalni oblik naznačen time, što je zapis diferencijalne skenirajuće kalorimetrije suštinski u skladu sa onim prikazanim na Slici 2.
17. Kristalni solvat jedinjenja prema Patentnom zahtevu 1, pri čemu solvat sadrži 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitril, metanol, N,N-dimetilformamid i vodu, pri čemu je kristalni solvat naznačen time, što rendgenski difraktogram praha sadrži difrakcione pikove na vrednostima 2θ od 9,76±0,20; 15,06±0,20; 16,61±0,20; 20,40±0,20 i 21,99±0,20.
18. Kristalni solvat prema Patentnom zahtevu 17, pri čemu solvat sadrži između oko 6 % i oko 7 % metanola, između oko 2 % i oko 2,5 % N,N-dimetilformamida i između oko 1 i oko 1,5 % vode.
19. Kristalni solvat prema Patentnom zahtevu 17, pri čemu je kristalni solvat naznačen time, što su pozicije pikova rendgenskog difraktograma praha suštinski u skladu sa pozicijama pikova difraktograma prikazanog na Slici 5.
20. Jedinjenje formule (IV):

gde su R<2>, R<3>, R<4>, R<5>i n kao što je definisano u Patentnom zahtevu 1.
21. Jedinjenje iz Patentnog zahteva 20, pri čemu je svaki od R<2>, R<3>, R<4>i R<5>vodonik.
22. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od Patentnih zahteva od 1 do 19 i farmaceutski prihvatlјiv nosač.
23. Farmaceutska kompozicija prema Patentnom zahtevu 22 koja dodatno sadrži jedno ili više drugih terapijskih sredstava koja su korisna za lečenje gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja.
24. Kompozicija prema Patentnom zahtevu 23, gde je drugo terapijsko sredstvo izabrano od: mezalamina, ozalazina, sulfazalazina, prednizona, prednizolona, hidrokortizona, budezonida, beklometazona, flutikazona, ciklosporina, azatioprina, metotreksata, 6-merkaptopurina, takrolimusa, infliksimaba, adalimumaba, golimumaba, certolizumaba, natalizumaba, vedolizumaba, rifaksimina i loperamida.
25. Proces pripreme jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli koji su definisani u Patentnom zahtevu 1, pri čemu proces obuhvata reakciju jedinjenja formule (IV):

gde su R<2>, R<3>, R<4>, R<5>i n kao što je definisano u Patentnom zahtevu 1, sa: (i) jedinjenjem formule L-R<A>, pri čemu je L odlazeća grupa i R<A>je po izboru supstituisan alkil kao što je definisano u Patentnom zahtevu 1 za opciju u kojoj je R<1>(a) ili je R<A>supstituent opcije (b); ili (ii) HO-C(O)R<6>; ili (iii) Cl-C(O)OR<8>; ili (iv) Cl-S(O)2R<9>, pri čemu su R<6>, R<8>i R<9>kao što je definisano u Patentnom zahtevu 1, da bi se obrazovali jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
26. Postupak pripreme kristalnog oblika prema bilo kom od Patentnog zahteva 12 do Patentnog zahteva 16, pri čemu postupak obuhvata: (a) obrazovanje suspenzije kristalnog solvata 3-((1R,3s,5S)-3-((7-((5-metil-1H-pirazo1-3-il)amino)-1,6-naftiridin-5-il)amino)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)propan nitrila u rastvaraču izabranom između dioksana, toluena, butil acetata i acetona; (b) zagrevanje suspenzije na temperaturi između oko 40 °C i oko 110 °C, tokom između oko 4 sata i oko 3 dana; i (c) izolaciju kristalnog oblika iz suspenzije.
27. Jedinjenje prema bilo kom od Patentnih zahteva od 1 do 19 ili kompozicija prema bilo kom od Patentnih zahteva od 22 do 24, za upotrebu u lečenju gastrointestinalnog inflamatornog oboljenja kod sisara.
28. Jedinjenje za upotrebu prema Patentnom zahtevu 27, pri čemu je gastrointestinalno oboljenje ulcerozni kolitis.
29. Jedinjenje za upotrebu prema Patentnom zahtevu 28, pri čemu je ulcerozni kolitis izabran od proktosigmoiditisa, pankolitisa, ulceroznog proktitisa i levostranog kolitisa.
30. Jedinjenje za upotrebu prema Patentnom zahtevu 27, pri čemu je gastrointestinalno inflamatorno oboljenje Kronova bolest.
31. Jedinjenje za upotrebu prema Patentnom zahtevu 27, pri čemu je gastrointestinalna inflamatorna bolest izabrana iz grupe koja se sastoji od kolagenog kolitisa, limfocitnog kolitisa, Behčetove bolesti, celijakije, kolitisa koji indukovan ciljanim dejstvom na ključne molekule prilikom lečenja kancera, kolitisa koji je indukovan sa inhibitorom CTLA-4, ileitisa, eozinofilnog ezofagitisa, kolitisa povezanog sa oboljenjem “kalem protiv domaćina” i infektivnog kolitisa.