RS58665B1

RS58665B1 - Pozitivni alosterni modulatori muskarinskog m1 receptora

Info

Publication number: RS58665B1
Application number: RS20190440A
Authority: RS
Inventors: Ramakrishna Nirogi; Abdul Rasheed Mohammed; Anil Karbhari Shinde; Shankar Reddy Gagginapally; Venkateswarlu Jasti
Original assignee: Suven Life Sciences Ltd
Priority date: 2015-06-08
Filing date: 2016-06-08
Publication date: 2019-06-28
Also published as: KR20180016528A; IL255994B; HK1247919A1; MX2017015961A; JP6466602B2; US20180155302A1; NZ737892A; CA2987843A1; SI3303331T1; ES2719626T3; EP3303331B1; PT3303331T; EP3303331A1; SMT201900213T1; TR201904639T4; US10308620B2; EA032602B1; PL3303331T3; MD3303331T2; ME03379B

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), ili njihove izotopske oblike, stereoizomere, ili farmaceutski prihvatljive soli kao pozitivne alosterne modulatore muskarinskog M1 receptora (M1 PAMs). Predmetni pronalazak takođe opisuje postupak za dobijanje takvih jedinjenja, farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, kao i njihovu primenu.

STANJE TEHNIKE

[0002] Muskarinski acetilholinski receptori (mAChRs) pripadaju klasi A familije sa G proteinom-kuplovanih receptora (GPCRs). Oni su izraženi svuda u telu. Do danas je bilo identifikovano pet podtipova koji su označeni kao M1 do M5 koji reaguju na endogeni neurotransmiter acetilholin (ACh). Oni igraju ključnu ulogu u regulaciji aktivnosti mnogih važnih funkcija centralnog i perifernog nervnog sistema, uključujući kognitivnu funkciju. M1, M3 i M5 se kupluju sa Gq, dok se M2 i M4 kupluju preko Gi/o sa nizvodnim signalnim putanjama i sa njima povezanim efektorskim sistemima (Critical Reviews in Neurobiology, 1996, 10, 69-99; Pharmacology & Therapeutics. 2008,117,232-243). M2 i M3 su veoma izraženi u periferiji i poznato je da su uključeni u gastrointestinalni (GI) motilitet i parasimpatičke reakcije, kao što je lučenje pljuvačke (Life Sciences, 1993, 52, 441-448). M1 muskarinski receptor je pretežno izražen u regionima mozga kao što su korteks, hipokampus i amigdala koji su uključeni u kogniciju, i zato bi se moglo očekivati da selektivna aktivacija M1 receptora poboljša kognitivne performanse (Annals of Neurology, 2003, 54, 144 -146).

[0003] Ksanomelin, agonist muskarinskog acetilholinskog receptora prihvatljive selektivnosti za M1 i M4 podtipove, proizveo je značajne efekte na kogniciju u kliničkim ispitivanjima Alchajmerove bolesti (AD) (Alzheimer Disease and Associated Disorders, 1998, 12(4), 304-12) mada su gastrointestinalna neželjena dejstva dovela do visoke stope ispadanja u kliničkim ispitivanjima. Postoji visok stepen konzervacije između podtipova muskarinskog receptora na njihovim mestima vezivanja ortosternog acetilholinskog liganda, što otežava identifikaciju M1 selektivnog agonista.

[0004] Da bi se izbegao ovaj problem selektivnosti i bezbednosti, alternativni pristup se sastoji u razvijanju M1 PAMs koji deluju na manje konzervirano alosterno mesto vezivanja. Merck je izvestio o razvoju M1 pozitivnog alosternog modulatora, PQCA (1-{[4-cijano-4-(piridin-2-il)piperidin-1-il]metil}-4-okso-4H-hinolizin-3-karboksilna kiselina). Ovo jedinjenje je veoma selektivno za M1 u odnosu na druge podtipove muskarinskih receptora i utvrđeno je da je efikasno u nekoliko pretkliničkih modela kognicije (Psychopharmacology, 2013, 225(1), 21-30) bez gastrointestinalnih neželjenih efekata u dozama jednakim ili manjim od petostruke margine za minimalnu efektivnu dozu potrebnu za poboljšanje kognicije. U pretkliničkim studijama je bilo pokazano da M1 aktivacija povećava koncentraciju neurotransmitera acetilholina u mozgu. Pored toga, M1 aktivacija ima potencijal kao terapija za modifikaciju bolesti za AD pomeranjem prerade APP prema neamiloidogenoj putanji α-sekretaze i smanjenjem tau hiper-fosforilacije. Pokazano je da pozitivni alosterni modulatori na M1 receptoru povećavaju generaciju sAPPα in-vitro (The Journal of Neuroscience, 2009, 29, 14271-14286). Zbog toga, M1 PAMs obezbeđuju pristup i simptomatskom lečenju i lečenju koje modifikuje bolest za kognitivne deficite kod AD i šizofrenije.

[0005] Objavljene PCT prijave patenata, WO2015080904, WO2015049574, WO2015028483, WO2007067489 i WO2011149801 opisuju neka M1 PAM jedinjenja. Mada je do danas nekoliko M1 PAMs bilo opisano u literaturi, nijedan lek koji deluje kao M1 PAM nije bio lansiran na tržištu. Zbog toga postoji nezadovoljena potreba za otkrivanjem i razvojem novih M1 PAMs sa novim hemijskim strukturama bez bilo kakvih neželjenih dejstava za lečenje poremećaja, koji su regulisani M1 receptorima.

SUŠTINA PRONALASKA

[0006] Prema prvom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na M1 PAMs jedinjenje formule (I),

pri čemu:

A<1>i A<2>svaki nezavisno predstavlja CH, CF ili N; W je O, S, S(O) ili S(O)2;

R’ je

pri čemu: * predstavlja tačku vezivanja;

R<3>je OH, F, NH2ili H;

R<4>je pri svakoj pojavi nezavisno izabran između halogena, -O-CH3; -S-CH3, -N(CH2)2, -CH3, -CF3, -CHF2, -CH2F, -OH, -CN, fenila, piridila i vodonika; pri čemu su fenil i piridil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena ili CH3;

X je CH2, O ili NH;

a je 0 ili 1; i b je 1 ili 2;

ili njegov izotopski oblik, stereoizomer, tautomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0007] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na procese za dobijanje jedinjenja formule (I), ili njegovog stereoizomera i farmaceutski prihvatljive soli.

[0008] Prema jednom drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski efektivnu količinu najmanje jednog jedinjenja formule (I), ili njegovog stereoizomera i farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljive ekscipijense ili nosače.

[0009] Prema jednom drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), ili njegov stereoizomer i farmaceutski prihvatljivu so, za primenu kao M1 PAM.

[0010] Prema jednom drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), ili njegov stereoizomer i farmaceutski prihvatljivu so, za primenu u lečenju različitih poremećaja izabranih između AD, šizofrenije, kognitivnih poremećaja, bola ili poremećaja spavanja.

[0011] Prema jednom drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na primenu jedinjenja formule (I), ili njegovih stereoizomera i farmaceutski prihvatljivih soli, za proizvodnju leka za lečenje poremećaja povezanih sa muskarinskim M1 receptorom.

KRATKI OPIS SLIKA NACRTA

[0012]

Slika 1: Efekat primera 18 sa donepezilom u vreme indukovanog deficita memorije

Slika 2: Diskriminativni indeks koji pokazuje efekat primera 18 sa donepezilom u vreme indukovanog deficita memorije

Slika 3: Efekat primera 18 na deficit memorije indukovan skopolaminom

Slika 4: Efekat primera 18 na kortikalne sAPPα nivoe kod mužjaka C57BL/6J miševa

Slika 5: Efekat primera 18 na kortikalne sAPPα nivoe kod mužjaka Wistar pacova Slika 6: Efekat primera 18 na cerebralni protok krvi u frontalnom korteksu

DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0013] Ukoliko nije drugačije navedeno, sledeći izrazi koji se koriste u opisu i patentnim zahtevima imaju dole navedena značenja: izraz "halogen" označava fluor, hlor, brom ili jod.

[0014] Fraza, "terapeutski efektivna količina" je definisana kao količina jedinjenja prema predmetnom pronalasku koja (i) leči specifičnu bolest, stanje ili poremećaj (ii) eliminiše jedan ili više simptoma specifične bolesti, stanja ili poremećaja (iii) odlaže pojavu jednog ili više simptoma ovde opisane specifične bolesti, stanja ili poremećaja.

[0015] Izraz, "izotopski oblik" kada se ovde koristi se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu su jedan ili više atoma jedinjenja formule (I) supstituisani svojim odgovarajućim izotopima. Na primer, izotopi vodonika obuhvataju<2>H (deuterijum) i<3>H (tricijum).

[0016] Izraz, "stereoizomeri" kada se ovde koristi se odnosi na izomere jedinjenja formule (I) koji se razlikuju po prostornom rasporedu svojih atoma. Ovde opisana jedinjenja mogu postojati kao pojedinačni stereoizomeri, racemati i/ili smeše enantiomera i/ili dijastereomera. Svi takvi pojedinačni stereoizomeri, racemati i njihove smeše treba da budu u okviru predmetnog pronalaska.

[0017] Izraz, "farmaceutski prihvatljiva so" kada se ovde koristi se odnosi na soli aktivnog jedinjenja tj. jedinjenja formule I, koje se dobijaju reakcijom sa podesnom kiselinom ili derivatom kiseline, u zavisnosti od specifičnih supstituenata koji se nalaze na ovde opisanim jedinjenjima.

Primeri izvođenja

[0018] Predmetni pronalazak obuhvata sva jedinjenja opisana kao jedinjenje formule (I) bez ograničenja, međutim, poželjni aspekti i elementi pronalaska su ovde razmotreni u obliku sledećih primera izvođenja.

[0019] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: W je O; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0020] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: W je S ili S(O); ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0021] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: A<1>je CH ili CF; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0022] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: A<1>je N; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0023] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: A<2>je CH ili CF; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0024] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: A<2>je N; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0025] U jednom drugom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: W je O; A<1>je CH ili CF; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0026] U jednom drugom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu: W je O; A<2>je CH ili CF; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0027] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<1>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; X, R<3>i a su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0028] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<1>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; X, R3i a su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0029] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<1>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0030] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<2>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; R<4>i b su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0031] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<2>je

[0032] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<2>je

[0033] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<1>je

R<2>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; X je CH2; R<3>, R<4>, a i b su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0034] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<1>je

R<2>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; X je CH2; R<3>, R<4>, a i b su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu, ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0035] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

R<1>je

R<2>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; X je NH; R<3>, R<4>, a i b su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu, ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0036] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

W je O;

A<1>i A<2>su CH;

R<1>je

R<2>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; R<3>, R<4>, X, a i b su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu; ili njegov izotopski oblik, stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so.

[0037] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

W je S;

A<1>i A<2>su CH;

R<1>je

R<2>je

[0038] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

W je O;

A<1>i A<2>su CH;

R<1>je

R<2>je

[0039] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I), pri čemu:

W je S;

A<1>i A<2>su CH;

R<1>je

R<2>je

[0040] U jednom drugom primeru izvođenja reprezentativna jedinjenja prema predmetnom pronalasku obuhvataju, ali nisu ograničena na,

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-fluorobenzil}-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(4-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(4-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(3-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metoksipiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(2-metoksipiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metoksipiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(2-metoksipiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-trifluorometilbenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3,4-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hloropiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-3-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hloropiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-2-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3,4-dihlorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-3-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,4-dihlorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-1-benzil-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-1-{2,3-difluorobenzil}-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluoropiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(4-fluorobenzil)-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-1-(3-fluorobenzil)-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-trifluorometilbenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hlorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(trans-1R, 2R-2-hidroksiciklopentil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(trans-1R, 2R-2-hidroksiciklopentil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hlorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(trans-1R, 2R-2-hidroksiciklopentil)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(1-hidroksimetil-2-metilpropil)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin -2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1R,2R-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-fluorobenzil}-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1R, 2R-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-fluorobenzil}-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{3-fluorobenzil}-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fenilpiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fenilpiridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hloropiridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-5-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-2-ilmetil)-5-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(6’-fluoro-5’-metil-[2,3’]bipiridinil-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-[2-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-piridin-4-ilmetil]-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(1-metil-1H-pirazol-3-ilmetil)-4H-benzol[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-5,8-difluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluoropiridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-5-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-4-ilmetil)-5,8-difluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(3-trifluorometilbenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(2-metoksipiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(piridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{4-metoksibenzil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{4-fluorobenzil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{piridin-4-ilmetil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-hloropiridin-5-ilmetil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{piridin-2-ilmetil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{3-fluorobenzil}-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{piridin-2-ilmetil}-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-hloropiridin-5-ilmetil}-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; i

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.

[0041] U jednom drugom primeru izvođenja reprezentativna jedinjenja farmaceutski prihvatljive soli prema predmetnom pronalasku obuhvataju, ali nisu ograničena na,

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorid;

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorid;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat;

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat; i

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat.

[0042] Opšta šema - 1 prikazuje procese za dobijanje međuproizvoda, pri čemu W je O i S; A<1>, A<2>i R<2>su onakvi kao što je definisano prema prvom aspektu.

Korak 1: Dobijanje jedinjenja formule (ii)

[0043] Jedinjenje formule (i) reaguje sa etil bromoacetatom u prisustvu baze izabrane između cezijum karbonata, kalijum karbonata, natrijum karbonata, natrijum bikarbonata, natrijum hidroksida i kalijum hidroksida, u rastvaraču izabranom između acetonitrila, DCM, DCE, acetona, THF, DMF i DMSO u temperaturskom opsegu od 80-100 °C tokom 15-17 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (ii).

Korak 2: Dobijanje jedinjenja formule (iii)

[0044] Jedinjenje formule (ii) dobijeno u koraku 1 reaguje sa metil formatom u prisustvu natrijum hidrida, natrijum terc-butoksida, kalijum terc-butoksida, litijum diizopropilamida (LDA) ili litijum heksametildisilazida (LiHMDS) na 0 °C do ST tokom 3-5 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (iii).

Korak 3: Dobijanje jedinjenja formule (iv)

[0045] Jedinjenje formule (iii) dobijeno u koraku 2 reaguje sa aminom, R<2>-CH2-NH2u rastvaraču izabranom između metanola, etanola i izopropanola u temperaturskom opsegu od 25-30 °C, tokom 10-14 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (iv). Amini, R<2>-CH2-NH2su nabavljeni iz komercijalnih izvora ili su pripremljeni od svojih odgovarajućih halida/mezilata/tozilata preko azida ili redukcijom odgovarajućih nitrila. Halidi/mezilati/tozilati su bili zamenjeni azidom uz korišćenje natrijum azida, u rastvaračima izabranim između DMSO, DMF, DMA i NMP u temperaturskom opsegu od ST do 110 °C. Azidi i nitrili su bili redukovani u amine korišćenjem sredstava za redukciju izabranih između PPh3/H2O, Pd/C/H2, Rejni nikla i NaBH4NiCl2u rastvaračima izabranim između THF, MeOH, EtOH i H2O u temperaturskom opsegu od 0 °C to ST.

Korak 4: Dobijanje jedinjenja formule (v)

[0046] Jedinjenje formule (iv) dobijeno u koraku 3 reaguje sa bakar jodidom, bakar hloridom ili bakar bromidom u prisustvu baze izabrane između cezijum karbonata, kalijum karbonata ili kalijum fosfata u rastvaraču izabranom između DMF, NMP, DMA, DMSO, THF i DCE u temperaturskom opsegu od ST do 90 °C tokom 5-7 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (v).

Korak 5: Dobijanje jedinjenja formule (A)

[0047] Jedinjenje formule (v) dobijeno u koraku 4 reaguje sa natrijum hidroksidom u 1:1 smeši vode i metanola pod refluksom tokom 3-5 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (A).

[0048] Opšta šema - 2 prikazuje procese za dobijanje jedinjenja formule (I), pri čemu su A<1>, A<2>, W, R<1>, R<2>, R<3>i R<4>onakvi kao što je definisano gore.

Dobijanje jedinjenja formule (I)

[0049] Jedinjenje formule (A) se kupluje sa aminom, R<1>-NH2u prisustvu kuplujućeg reagensa, kao što je HATU, DCC, DIC, TBTU ili EDC, i organske baze, kao što je DIPEA, TEA, DABCO i DBU, u rastvaraču izabranom između DCM, DMF, DMA, NMP i THF u temperaturskom opsegu od 25-30 °C tokom 15-17 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (I). Amini R<1>-NH2, kao što su (1S,2S)-2-aminocikloheksanol (CAS br. 13374-30-6), (1R,2R)-2-aminocikloheksanol (CAS br.931-16-8), 1-amino-2-metil-2-propanol, 2-amino-3-metil-1-butanol, 2-aminobenzil alkohol, (1R,2R)-trans-2-aminociklopentanol (CAS br.68327-11-7) i trans 4-amino tetrahidropiran-3-ol (CAS br. 215940-92-4), bili su nabavljeni iz komercijalnih izvora, dok je terc-butil 4-amino-3-hidroksi piperidin-1-karboksilat bio pripremljen korišćenjem procedura koje su opisane u EP0076530A2, a terc-butil 4-amino-3-fluoro piperidin-1-karboksilat je bio pripremljen korišćenjem procedura opisanih u WO2012108490A1.

Dobijanje jedinjenja formule (I) (pri čemu W je S(=O))

[0050] Jedinjenje formule (I) (pri čemu W je S) reaguje sa NaIO4u rastvaraču izabranom između 1:1:2 smeše metanola, THF i vode, u temperaturskom opsegu od 25-30 °C tokom 14-17 sati da bi se dobilo jedinjenje formule (I) (pri čemu W je S(=O)).

Dobijanje farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I)

[0051] Jedinjenje formule (I) se može opciono prevesti u svoju farmaceutski prihvatljivu so reakcijom sa podesnom kiselinom ili derivatom kiseline.

[0052] Podesne farmaceutski prihvatljive soli će biti očigledne stručnjacima iz odgovarajuće oblasti. Soli se formiraju sa neorganskim kiselinama kao što su npr. hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, azotna & fosforna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su npr. oksalna, ćilibarna, maleinska, sirćetna, fumarna, limunska, jabučna, vinska, benzojeva, p-toluenska, p-toluensulfonska, benzensulfonska kiselina, metansulfonska ili naftalensulfonska kiselina.

[0053] Prema jednom drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju jedinjenja formule (I). Da bi se upotrebilo jedinjenje formule (I), ili njihovi stereoizomeri i farmaceutski prihvatljive soli u terapiji, oni će normalno biti formulisani u farmaceutsku kompoziciju u skladu sa standardnom farmaceutskom praksom.

[0054] Farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku mogu biti formulisane na uobičajeni način korišćenjem jednog ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijens je nosač ili razređivač. Shodno tome, aktivna jedinjenja prema pronalasku mogu biti formulisana za oralno doziranje. Takve farmaceutske kompozicije i procesi za dobijanje istih su dobro poznati u odgovarajućoj oblasti.

[0055] Doza aktivnih jedinjenja može varirati u zavisnosti od faktora kao što su starost i težina pacijenta, priroda i ozbiljnost bolesti koja treba da bude lečene i drugih takvih faktora. Zbog toga se bilo koje pozivanje koje se odnosi na farmakološki efektivnu količinu jedinjenja opšte formule (I), njihove stereoizomere i farmaceutski prihvatljive soli odnosi na gore navedene faktore.

[0056] U sledećem primeru izvođenja, poremećaji koji su povezani sa muskarinskim M1 receptorima su izabrani iz grupe koja se sastoji od AD, šizofrenije, kognitivnih poremećaja, bola ili poremećaja spavanja.

[0057] U jednom drugom primeru izvođenja, predmetnim pronalaskom je otkriven metod lečenja poremećaja povezanih sa muskarinskim M1 receptorima koji sadrži jedinjenje formule (I) u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensima izabranim između inhibitora holinesteraze, kao što je npr. donepezil, i antagonista NMDA receptora, kao što je npr. memantin.

[0058] Komercijalni reagensi su bili korišćeni bez daljeg prečišćavanja. ST je definisana kao opseg ambijentalnih temperatura, obično od 25 °C do 35 °C. Svi maseni spektri su bili dobijeni korišćenjem ESI uslova, osim kako nije drugačije naveden.<1>H-NMR spektri su bili snimljeni na 400 MHz na Brukerovom instrumentu. Deuterizovani hloroform, metanol ili dimetil sulfoksid je bio korišćen kao rastvarač. TMS je bio korišćen kao interni referentni standard. Vrednosti hemijskog pomaka su izražene u vrednostima delovi na milion (δ). Sledeće skraćenice se koriste za mnoštvo NMR signala: s=singlet, bs=široki singlet, d=dublet, t=triplet, q=kvartet, qui=kvintet, h=heptet, dd=dvostruki dublet, dt=dvostruki triplet, tt=triplet tripleta, m=multiplet. Hromatografija se odnosi na kolonsku hromatografiju izvedenu uz korišćenje silika gela od 100 - 200 meša i bila je izvedena pod uslovima pritiska azota (fleš hromatografija).

[0059] Stereoizomeri se po pravilu generalno dobijaju kao racemati koji se mogu razdvojiti na optički aktivne izomere na način koji je poznat kao takav. U slučaju jedinjenja opšte formule (I) koja imaju asimetrični atom ugljenika, predmetni pronalazak se odnosi na D-oblik, L-oblik i D, L - smeše, a u slučaju jedinjenja opšte formule (I) koje sadrži više asimetričnih atoma ugljenika, na dijastereomerne oblike i pronalazak obuhvata svaki od ovih stereoizomernih oblika i njihove smeše, uključujući i racemate. Ona jedinjenja opšte formule (I) koja imaju asimetrični ugljenik i po pravilu se dobijaju kao racemati se mogu razdvojiti jedno od drugog uobičajenim metodima, ili se bilo koji dati izomer može dobiti stereo specifičnom ili asimetričnom sintezom. Međutim, takođe je moguće upotrebiti optički aktivno jedinjenje od početka, tako da se onda dobije odgovarajuće optički aktivno enantiomerno ili dijastereomerno jedinjenje kao finalno jedinjenje.

[0060] Stereoizomeri jedinjenja opšte formule (I) se mogu dobiti na jedan ili više načina prezentovanih u nastavku:

i) Jedan ili više reagenasa se mogu koristiti u svom optički aktivnom obliku. ii) Optički čist katalizator ili hiralni ligandi zajedno sa metalnim katalizatorom se mogu koristiti u procesu redukcije. Metalni katalizator može biti rodijum, rutenijum, indijum i slično. Hiralni ligandi prvenstveno mogu biti hiralni fosfini. (Principles of Asymmetric synthesis, J. E. Baldwin Ed., Tetrahedron series, 14, 311-316). iii) Smeša stereoizomera se može razložiti uobičajenim metodama, kao što su formiranje dijastereomernih soli sa hiralnim kiselinama ili hiralnim aminima ili hiralnim amino alkoholima, hiralnim aminokiselinama. Rezultujuća smeša dijastereomera onda može biti izdvojena metodama kao što su frakciona

kristalizacija, hromatografija i slično, koja je praćena dodatnim korakom izolacije optički aktivnog proizvoda hidrolizom derivata.

iv) Smeša stereoizomera se može razložiti uobičajenim metodama, kao što su mikrobno razlaganje, razlaganje dijastereomernih soli formiranih sa hiralnim kiselinama ili hiralnim bazama.

[0061] Hiralne kiseline koje se mogu primeniti mogu biti vinska kiselina, bademova kiselina, mlečna kiselina, kamforsulfonska kiselina, aminokiseline i slično. Hiralne baze koje se mogu primeniti mogu biti alkaloidi cinhonin, brucin ili bazna aminokiselina, kao što su lizin, arginin i slično. U slučaju da jedinjenja opšte formule (I) sadrže geometrijski izomerizam, predmetni pronalazak se odnosi na sve ove geometrijske izomere.

Ovde se koriste sledeće skraćenice:

CuI : Bakar jodid

CS2CO3: Cezijum karbonat

DCM : Dihlorometan

DCE : Dihloroetan

DCC : N,N’-dicikloheksilkarbodiimid

DIC : N,N’-diizopropilkarbodiimid

DIPEA : N,N-diizopropiletilamin

DBU : 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en

DABCO : 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan

DMA : Dimetilacetamid

DMF : N,N-dimetilformamid

DMSO : Dimetil sulfoksid

EDC : Etilen dihlorid

H2: Vodonik gas

HATU : 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

HCl : Hlorovodonična kiselina

IPA : Izopropil alkohol

K3PO4: Kalijum fosfat

MeOH : Metanol

NaHCO3: Natrijum bikarbonat

NaIO4: Natrijum metaperjodat

NaOH : Natrijum hidroksid

Na2SO4: Natrijum sulfat

NMP : N-metil-2-pirolidinon

NiCl2: Nikl hlorid

NaBH4: Natrijum borohidrid

PPh3: Trifenilfosfin

ST : Sobna temperatura (25-30 °C)

TBTU : O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum tetrafluoroborat

TEA : Trietilamin

THF : Tetrahidrofuran

TMS : Tetrametilsilan

Dobijanje međuproizvoda:

Međuproizvod 1: 2,3-difluorobenzilamin (I-1)

Korak 1: Dobijanje 1-azidometil-2,3-difluorobenzena

[0062] Mešanom rastvoru 1-bromometil-2,3-difluorobenzena (50.0 g, 241.5 mmol) u DMF (483.0 mL) na ST, bio je dodavan natrijum azid (23.5 g, 362.3 mmol) tokom perioda od 15 minuta, pa je reakciona smeša bila mešana na ST tokom 16 sati. Reakciona smeša je bila razređena etrom, pa je isprana vodom. Organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4a isparljive materije su bile odstranjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 43.4 g.<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.22-7.05 (m, 3H), 4.44 (s, 2H).

Korak 2: Dobijanje 2,3-difluorobenzilamina:

[0063] Mešanom rastvoru 1-azidometil-2,3-difluorobenzena (41.3 g, 244.3 mmol) dobijenom u gornjem koraku u THF (490.0 mL) na 0 °C su bili dodati trifenilfosfin (70.4 g, 268.8 mmol) i voda (13.2 mL, 733.0 mmol). Reakciona smeša je bila mešana na ST tokom 16 sati, pa je razređena etil acetatom. Reakciona masa je bila isprana vodom i slanim rastvorom, a zatim je osušena preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio odstranjen pod sniženim pritiskom. Dobijena sirova masa je bila prečišćena hromatografijom na koloni sa silika gelom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 23.1 g;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.15-7.0 (m, 3H), 3.93 (s, 2H); masa (m/z): 144.1 (M+H)<+>.

[0064] Korišćenjem gornje eksperimentalne procedure bili su dobijeni sledeći supstituisani benzil amini polazeći od odgovarajućih komercijalno raspoloživih benzil halida preko azidnih međuproizvoda.

Međuproizvod 2: 3-trifluorometilbenzilamin (I-2)

[0065]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.60 (s, 1H), 7.58-7.43 (m, 3H), 3.95 (s, 2H); masa (m/z): 176.4 (M+H)<+>.

Međuproizvod 3: 4-pirazol-1-il benzilamin (I-3)

[0066]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.92 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.3Hz, 2H), 6.46 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.91 (s, 2H); masa (m/z): 174.0 (M+H)<+>.

Međuproizvod 4: 3,4-difluorobenzilamin (I-4)

[0067]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.22-7.08 (m, 2H), 7.08-7.03 (m, 1H), 3.85 (s, 2H); masa (m/z): 144.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 5: 2,4-dihlorobenzilamin (I-5)

[0068]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.70-7.50 (m, 3H), 3.75 (s, 2H). masa (m/z): 176.2, 178.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 6: 4-piridilmetilamin (I-6)

[0069] Mešanom rastvoru 4-cijanopiridina (100.0 mg, 0.96 mmol) u metanolu (4.0 mL) na ST, bilo je dodato 10 % Pd/C (50.0 mg), pa je mešano 3 sata pod atmosferom vodonika. Reakciona masa je bila isfiltrirana kroz podlogu od celita, a isparljive materije su bile odstranjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 63.6 mg;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.52 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 3.88 (s, 2H); masa (m/z): 109.2 (M+H)<+>.

[0070] Korišćenjem gornje eksperimentalne procedure bili su dobijeni sledeći supstituisani piridil amini polazeći od odgovarajućih komercijalno raspoloživih piridil nitrila.

Međuproizvod 7: 3-aminometilpiridin (I-7)

[0071]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.58 (s, 1H), 8.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 2H); masa (m/z): 109.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 8: 2-aminometil-6-metilpiridin (1-8)

[0072]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.62-7.51 (m, 1H), 7.20-7.0 (m, 2H), 4.12-4.0 (m, 2H), 2.54 (s, 3H); masa (m/z): 123.0 (M+H)<+>.

Međuproizvod 9: 3-fluoro-4-aminometilpiridin (I-9)

[0073]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.43-7.36 (m, 2H), 7.35-7.26 (m, 1H), 3.91 (s, 2H); masa (m/z): 127.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 10: 2-fenil-4-aminometilpiridin (1-10)

Korak 1: Dobijanje 2-fenil-4-cijanopiridina

[0074] Mešanom rastvoru 2-hloro-4-cijanopiridina (500 mg, 3.61 mmol) u 1:1 smeši DMF i vode (18 mL) na ST bili su sukcesivno dodati fenilborna kiselina (524.1 mg, 4.33 mmol), PPh3(2.8 mg, 0.01 mmol), Pd2(dba)3(16.5 mg, 0.018 mmol). Reakciona temperatura je onda bila podignuta na 110 °C, pa je sadržaj mešan na ovoj temperaturi 1 sat. Reakciona masa je bila razređena etrom, pa je isprana vodom, slanim rastvorom, te je osušena preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio odstranjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 43.4 g;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.86 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.58-7.48 (m, 3H), 7.45 (d, J = 4.9 Hz, 1H); masa (m/z): 181.2 (M+H)<+>.

Korak 2: Dobijanje 2-fenil-4-aminometilpiridina

[0075] Mešanom rastvoru 2-fenil-4-cijanopiridina (625.0 mg, 3.4mmol) u metanolu (17.0 mL) na ST je bilo dodato 10 % Pd/C (312.0 mg), pa je mešan 3 sata pod atmosferom vodonika. Reakciona masa je bila isfiltrirana kroz podlogu od celita, a isparljive materije su bile odstranjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 63.6 mg;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.63 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.50-7.36 (m, 5H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.97 (s, 2H); masa (m/z): 185.1 (M+H)<+>.

[0076] Korišćenjem gornje eksperimentalne procedure bio je dobijen sledeći međuproizvod sa nekim nekritičnim varijacijama.

Međuproizvod 11: 2-(2-fluoro-3-metilpiridin-5-il)-4-aminometilpiridin (I-11)

[0077]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.63 (dd, J = 5.0, 7.6 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 8.32-8.26 (m, 1H), 7.74-7.70 (m, 1H), 7.35-7.25 (m, 1H), 3.99 (s, 2H), 2.36 (s, 3H); masa (m/z): 218.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 12: Etil 2-bromofenoksi acetat (I-12)

[0078]

[0079] Rastvoru 2-bromofenola (30.2 g, 174.6 mmol), Cs2CO2(85.3 g, 261.8 mmol) u acetonitrilu (350 mL) je bio dodavan etil bromoacetat (23.2 mL, 209.5 mmol) tokom perioda od 15 minuta na ST, pa je reakciona smeša bila mešana na ST tokom 15 minuta. Temperatura reakcione smeše je postepeno podignuta do refluksa, te je mešana 16 sati pod refluksom sve dok polazni fenol nije bio potrošen, što je pokazala TLC. Reakciona masa je bila ohlađena na ST, a zatim je isfiltrirana kroz podlogu od celita i filtrat je bio koncentrisan pod vakuumom do suvog. Ostatak je bio rastvoren u etil acetatu, pa je ispran vodom i slanim rastvorom, te je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 43.8 g;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.88 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.27 (q, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H); masa (m/z): 281.1, 283.1 (M+Na)<+>.

[0080] Korišćenjem gornje eksperimentalne procedure bili su dobijeni sledeći međuproizvodi, I-13 do I-17.

Međuproizvod 13: Etil 2-bromo-6-fluoro fenoksi acetat (1-13)

[0081]

[0082]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.15-7.05 (m, 1H), 7.0-6.91 (m, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.28 (q, 2H), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H); masa (m/z): 299.0, 301.1 (M+Na)<+>.

Međuproizvod 14: Etil 3-bromo piridin-2-iloksi acetat (I-14)

[0083]

[0084]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.36 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.15-7.05 (m, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.25 (q, 2H), 1.29 (t, J = 6.9 Hz, 3H); masa (m/z): 260.1, 262.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 15: Etil 2-fluoro piridin-3-iloksi acetat (I-15)

[0085]

[0086]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.82 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.24 (q, 2H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H); masa (m/z): 200.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 16: Etil 2-bromo-3-fluoro fenoksi acetat (I-16)

[0087]

[0088]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.25-7.0 (m, 1H), 6.81 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.27 (q, 2H), 1.30 (t, J = 6.9 Hz, 3H); masa (m/z): 277.0, 279.0 (M+H)<+>.

Međuproizvod 17: Etil 2-bromo-3,6-difluoro fenoksi acetat (I-17)

[0089]

[0090]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.10-7.0 (m, 1H), 6.90-6.82 (m, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.27 (q, 2H), 1.30 (t, J = 6.9 Hz, 3H); masa (m/z): 294.0,296.0 (M+H)<+>.

Međuproizvod 18: Etil 2-bromofenilsulfanil acetat (I-18)

[0091]

[0092] Rastvoru 2-bromotiofenola (10.0 g, 52.9 mmol), Cs2CO3(25.8 g, 79.4 mmol) u acetonitrilu (210 mL) na ST je bio dodavan etil bromoacetat (7.0 mL, 63.5 mmol) tokom perioda od 15 minuta. Reakciona smeša je bila mešana na ST tokom 15 minuta, pa je onda reakciona smeša refluksovala (80-85 °C) 16 sati sve dok polazni fenol nije bio potrošen, što je pokazala TLC. Reakciona smeša je bila ohlađena na ST, te je isfiltrirana kroz podlogu od celita, a filtrat je bio koncentrisan pod vakuumom do suvog. Ostatak je bio rastvoren u etil acetatu, pa je ispran vodom, slanim rastvorom, te je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos:13.8 g;<1>H - NMR(400 MHz, CDCl3): δ 7.61 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.21 (q, 2H), 3.70 (s, 2H), 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H); masa (m/z): 275.0, 277.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 19: Metil 2-(2-bromofenoksi)-3-hidroksi akrilat (I-19)

[0093]

[0094] Mešanom rastvoru međuproizvoda, 1-12 (18.02 g, 69.5 mmol) u metil formatu (105.3 mL) ohlađenom na 0 °C bila je polako dodavana suspenzija natrijum hidrida (11.1 g, 278.0 mmol, 60 % uljana disperzija) tokom 0.5 sati, pa je mešan 4 sata. Reakciona smeša je bila tretirana ledeno hladnom vodom (400 mL), a zatim je izdvojen vodeni sloj. Vodeni sloj je bio zakišeljen sa IN HCl, a onda je ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su bili sjedinjeni, pa su isprani vodom, zasićenim rastvorom NaHCO3i konačno slanim rastvorom. Organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio odstranjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (18.9 g) kao smeša izomera dovoljne čistoće za upotrebu u sledećim reakcijama bez dodatnog prečišćavanja.<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.1 (bs, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.58 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H); masa (m/z): 271.2, 273.1 (M-H)<+>.

[0095] Korišćenjem gornje reakcione procedure bili su dobijeni sledeći međuproizvodi, I-20 do 1-24 uz korišćenje međuproizvoda I-13 do 1-17.

Međuproizvod 20: Metil 2-(2-bromo-6-fluorofenoksi)-3-hidroksi akrilat (I-20)

[0096]

[0097]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45-7.32 (m, 2H), 7.18-6.95 (m, 2H), 3.68 (s, 3H); masa (m/z): 313.0, 315.1 (M+Na)<+>.

Međuproizvod 21: Metil 2-(3-bromopiridin-2-iloksi)-3-hidroksi akrilat (I-21)

[0098]

[0099]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.04 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 6.84 (t, 1H), 3.78 (s, 3H); masa (m/z): 246.0, 248.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 22: Metil 2-(2-fluoro piridin-3-iloksi)-3-hidroksi akrilat (1-22)

[0100]

[0101] Masa (m/z): 213.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 23: Metil 2-(2-bromo-3-fluorofenoksi)-3-hidroksi akrilat (I-23)

[0102]

[0103]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.26-7.15 (m, 2H), 6.90-6.80 (m, 1H), 6.70-6.60 (m, 1H), 3.82 (s, 3H); masa (m/z): 289.0, 291.2 (M-H)<+>.

Međuproizvod 24: Metil 2-(2-bromo-3,6-difluorofenoksi)-3-hidroksi akrilat (1-24)

[0104]

[0105]<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.15-6.80 (m, 3H), 3.90 (s, 3H); masa (m/z): 307.0, 309.0 (M-H)<+>.

Međuproizvod 25: Metil 2-(2-bromofenilsulfanil)-3-hidroksi akrilat (I-25)

[0106]

[0107] Mešanom rastvoru međuproizvoda, 1-18 (16.0 g, 58.2 mmol) u metil formatu (88.1 mL) ohlađenom na 0 °C bila je polako dodavana suspenzija natrijum hidrida (9.3 g 232.7 mmol, 60 % uljana disperzija) tokom 0.5 h. Reakciona smeša je bila mešana 4 sata, a zatim je tretirana ledeno hladnom vodom (400 mL). Dva sloja su bila razdvojena. Vodeni sloj je bio zakišeljen sa IN HCl, a onda je ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su bili sjedinjeni, pa su sukcesivno isprani vodom, zasićenim rastvorom NaHCO3i slanim rastvorom. Organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4; rastvarač je bio odstranjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.49 (bs, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 7.6 Hz, 1H),

3.79 (s, 3H), 2.62 (bs, 1H); masa (m/z): 287.1, 289.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 26: Metil 4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilat (I-26)

[0108]

[0109] Rastvoru međuproizvoda, 1-19 (1.2 g, 4.4 mmol) u MeOH (18 mL) je bio dodat 2-fluorobenzilamin (0.55 g, 4.4 mmol), pa je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Isparljive materije su bile uparene do suvog. Sirovi ostatak (1.79 g) je bio ponovo rastvoren u DMF (4.4 mL), pa su bili dodati CuI (175.6 mg, 0.92 mmol) i CS2CO3(3.1 g, 9.2 mmol). Bilo je ostavljeno da se reakciona smeša energično meša 6 sati na 85-90 °C. Posle završetka reakcije, smeša je bila ohlađena do sobne temperature, pa je bila razređena vodom, a zatim je smeša bila ekstrahovana etil acetatom. Sjedinjeni organski ekstrakti su bili isprani 10 % rastvorom HCl, pa slanim rastvorom i osušeni su preko anhidrovanog Na2SO4. Rastvarač je bio uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Prinos: 1.48 g;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.46 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.40-7.25 (m, 1H), 7.20-7.0 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 2H), 6.58 (s, 1H), 6.24 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.75 (s, 3H); masa (m/z): 300.2 (M+H)<+>.

[0110] Korišćenjem gornje reakcione procedure bili su dobijeni sledeći međuproizvodi, I-27 do 1-31 reakcijom međuproizvoda I-20 do I-24 sa podesnim benzil aminima.

Međuproizvod 27: Metil 8-fluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilat (1-27)

[0111]

[0112]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.36-7.27 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.09 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.60-6.50 (m, 3H), 6.04 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.77 (s, 3H); masa (m/z): 318.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 28: Metil 1-benzil-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksilat (I-28)

[0113]

[0114]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.54 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.40-7.27 (m, 5H), 6.73 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.60-6.50 (m, 2H), 4.64 (s, 2H), 3.72 (s, 3H); masa (m/z): 283.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 29: Metil 4-(2-fluorobenzil)-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksilat (I-29)

[0115]

[0116]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.54 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.35-7.20 (m, 1H), 7.10-7.0 (m, 1H), 6.72 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.54 (dd, J = 5.1, 7.5, Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.73 (s, 3H); masa (m/z): 301.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 30: Metil 5-fluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilat (I-30)

[0117]

[0118]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.49 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.70-6.62 (m, 1H), 6.55-6.40 (m, 3H), 4.64 (s, 2H), 3.77 (s, 3H); masa (m/z): 318.3 (M+H)<+>.

Međuproizvod 31: Metil 5,8-difluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilat (I-31)

[0119]

[0120]<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.47 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36-7.29 (m, 1H), 7.15 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.56-6.38 (m, 3H), 4.64 (s, 2H), 3.76 (s, 3H); masa (m/z): 336.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 32: Metil 4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksilat (I-32)

[0121]

[0122] Rastvoru međuproizvoda, I-25 (0.8 g, 2.77 mmol) u MeOH (11 mL) je bio dodat 2,3-difluorobenzilamin, (I-1, 0.4 g, 2.77 mmol). Reakciona smeša je bila mešana 12 sati na ambijentalnoj temperaturi. Isparljive materije su bile uparene do suvog. Sirovi ostatak (1.21 g) je bio ponovo rastvoren u DMF (5.4 mL), te su rastvoru bili dodati CuI (55.6 mg, 0.29 mmol) i K3PO4(1.24 g, 5.86 mmol). Ostavljeno je da se reakciona smeša energično meša 16 sati na 100-110 °C. Posle završetka reakcije, smeša je bila ohlađena do sobne temperature, pa je bila razređena vodom i onda je smeša bila ekstrahovana etil acetatom. Sjedinjeni organski ekstrakti su bili isprani sa 10 % rastvorom HCl, pa sa slanim rastvorom i osušeni su preko anhidrovanog Na2SO4. Rastvarač je bio uparen pod sniženim pritiskom, a tako dobijena sirova materija je bila prečišćena hromatografijom na koloni sa silika gelom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 0.55 g;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.20 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.14-7.08 (m, 2H), 6.90-6.78 (m, 3H), 6.35 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.74 (s, 3H); masa (m/z): 333.0 (M+H)<+>.

Međuproizvod 33: 4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilna kiselina (I-33)

[0123]

[0124] Mešanom rastvoru međuproizvoda, 1-26 (1.45 g, 4.86 mmol) u 1:1 smeši metanola i vode (24 mL) bio je dodat NaOH (0.39 g, 9.7 mmol). Reakciona smeša je refluksovala (85-90 °C) 4 sata. Posle hlađenja reakcione mase na ST isparljive materije su bile uparene na polovinu svoje zapremine pod sniženim pritiskom.

Dobijena reakciona masa je bila jednom isprana etrom, pa je ohlađena na 5 °C, te je zakišeljena sa IN HCl i ekstrahovana je dihlorometanom. Sjedinjeni organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4, pa je rastvarač bio uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 0.4 g;<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.1 (bs, 1H), 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 6.7, 13.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.70-6.62 (m, 2H), 6.50-6.42 (m, 1H), 6.42-6.36 (m, 1H), 4.61 (s, 2H); masa (m/z): 286.2 (M+H)<+>.

[0125] Korišćenjem gornje reakcione procedure bili su dobijeni sledeći međuproizvodi, I-34 do I-38 uz korišćenje međuproizvoda, I-27 do I-31.

Međuproizvod 34: 8-fluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilna kiselina (I-34)

[0126]

[0127]<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.33 (bs, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.33(m, 1H), 7.30-7.20 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 6.70-6.62 (m, 2H), 6.28-6.22 (m, 1H), 4.64 (s, 2H); masa (m/z): 304.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 35: 1-benzil-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksilna kiselina (I-35)

[0128]

[0129]<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.33 (bs, 1H), 7.52 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 7.42-7.30 (m, 4H), 7.28 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.78 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.64 (dd, J = 5.0, 7.7 Hz, 1H), 4.66 (s, 2H); masa (m/z): 269.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 36: 4-(2-fluorobenzil)-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksilna kiselina (I-36)

[0130]

[0131]<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.34-7.26 (m, 1H), 7.18-7.03 (m, 2H), 6.75 (s, 1H), 6.71 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 5.1, 7.6 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H); masa (m/z): 287.2 (M+H)<+>.

Međuproizvod 37: 5-fluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilna kiselina (I-37)

[0132]

[0133]<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.42 (bs, 1H), 7.53 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.42-7.32 (m, 1H), 7.28-7.20 (m, 2H), 6.82 (s, 1H), 6.80-6.70 (m, 1H), 6.68-6.58 (m, 1H), 6.38 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.72 (s, 2H); masa (m/z): 304.3 (M+H)<+>.

Međuproizvod 38: 5,8-difluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilna kiselina (I-38)

[0134]

[0135]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.45 (bs, 1H), 7.54 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.40-7.30 (m, 1H), 7.28-7.18 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 6.82-6.72 (m, 1H), 6.72-6.62 (m, 1H), 4.74 (s, 2H); masa (m/z): 322.1 (M+H)<+>.

Međuproizvod 39: 4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksilna kiselina (I-39)

[0136]

[0137] Mešanom rastvoru međuproizvoda, 1-32 (0.23 g, 0.69 mmol) u 1:1 smeši metanola i vode (2.8 mL) je bio dodat NaOH (55.2 mg, 1.4 mmol). Reakciona smeša je refluksovala (85-90 °C) pod sniženim pritiskom 6 sati. Posle hlađenja reakcione mase na ST, isparljive materije su bile uparene na polovinu svoje zapremine pod sniženim pritiskom. Dobijena reakciona masa je bila isprana etrom, pa je ohlađena na 0-5 °C, te je zakišeljena sa IN HCl i zatim je ekstrahovana dihlorometanom.

Sjedinjeni organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 0.21 g;<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.36 (bs, 1H), 7.50-7.40 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 7.40-7.30 (m, 1H), 7.30-7.25 (m, 2H), 6.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.87 (s, 2H); masa (m/z): 318.3 (M-H)<+>.

Dobijanje reprezentativnih jedinjenja formule (I).

Primer 1:

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid

[0138]

[0139] Rastvoru međuproizvoda, I-33 (100.8 mg, 0.35 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL) na ST su bili sukcesivno dodati DIPEA (0.15 mL, 0.88 mmol), HATU (0.15 g, 0.39 mmol) i (1S,2S) 2-aminocikloheksanol hidrohlorid (53.5 mg, 0.35 mmol) uz energično mešanje. Posle završetka dodavanja, reakciona smeša je bila mešana 16 sati pre razređivanja dihlorometanom. Reakciona masa je bila isprana vodom, pa slanim rastvorom, te je osušena preko anhidrovanog Na2SO4i onda je rastvarač bio uparen pod vakuumom. Dobijena sirova masa je bila prečišćena na koloni sa silika gelom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Prinos: 106.4 mg;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.46 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 7.17-7.05 (m, 2H), 6.72-6.62 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 6.56-6.49 (m, 1H), 6.30-6.23 (m, 1H), 5.99 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.83 (t, J = 3.7 Hz, 1H), 3.76-3.65 (m, 1H), 3.45-3.36 (m.1H), 2.15-2.06 (m, 1H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.82-1.70 (m, 2H), 1.42-1.18 (m, 4H); masa (m/z): 383.4 (M+H)<+>.

Primeri 2 do 72: Jedinjenja iz Primera 2 do 72 su bila dobijena praćenjem eksperimentalnih procedura kao što je opisano u gore datom Primeru 1, sa nekim nekritičnim varijacijama uz korišćenje podesnih kiselina, na primer, I-33 do 1-38 sa podesnim R<1>NH2.

[0140]

Primer 73:

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorid

[0141]

Korak 1: Dobijanje N-(1-terc butoksikarbonil-3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluoro benzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamida

[0142] 4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksilna kiselina (I-34) je bila tretirana sa terc-butil 4-amino-3-fluoropiperidin-1-karboksilatom u prisustvu HATU praćenjem procedure opisane u dobijanju primera 1 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.44 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36-7.28 (m, 1H), 7.14 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.67-6.50 (m, 3H), 6.49 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 52.0 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.38-4.10 (m, 3H), 3.10-2.80 (m, 2H), 1.91-1.72 (m, 2H), 1.47 (s, 9H); masa (m/z): 504.4 (M+H)<+>.

Korak 2: Dobijanje N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorida

[0143] Mešanom rastvoru jedinjenja dobijenog u gornjem koraku 1 (50.0 mg, 0.1 mmol) u IPA (1.0 mL) ohlađenom na 0 °C bio je dodat rastvor 3N HCl u IPA (0.5 mL). Reakciona smeša je bila mešana 1 sat, pa su isparljive materije bile odstranjene pod sniženim pritiskom da bi se dobila masa koja je bila isprana etrom nekoliko puta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 43 mg;<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.22 (bs, 1H), 8.63 (bs, 1H),7.51 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.42-7.36 (m, 1H), 7.32-7.18 (m, 2H), 7.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.78-6.62 (m, 2H), 6.28 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 47.6 Hz, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.50-4.40 (m, 1H), 4.40-4.15 (m, 2H), 3.20-3.0 (m, 2H), 2.10-1.96 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H); masa (m/z): 404.2 (M+H)<+>.

Primer 74:

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorid

[0144]

Korak 1: Dobijanje N-(1-terc butoksikarbonil-3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2,3-difluoro benzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamida

[0145] Ovo jedinjenje je bilo dobijeno korišćenjem koraka 1 procedure za primer 73.

<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.28-7.20 (m, 1H), 7.20-7.06 (m, 2H), 6.68-6.50 (m, 3H), 6.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.02 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 49.8 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.40-4.10 (m, 3H), 3.12-2.78 (m, 2H), 1.92-1.78 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); masa (m/z): 522.3 (M+H)<+>.

Korak 2: Dobijanje N-(3-fluoro piperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorida

[0146] Ovo jedinjenje je bilo dobijeno korišćenjem koraka 2 procedure za primer 73.

<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.16 (bs, 1H), 8.62 (bs, 1H), 7.50-7.10 (m, 3H), 6.81 (s, 1H), 6.80-6.70 (m, 2H), 6.68-6.40 (m, 1H), 6.29 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 48.3 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.35-4.10 (m, 2H), 3.20-3.0 (m, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H); masa (m/z): 422.3 (M+H)<+>.

Primer 75:

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat

[0147]

Korak 1: Dobijanje N-(1-terc butoksikarbonil-3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluoro benzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamida

[0148] Jedinjenje iz naslova je bilo dobijeno korišćenjem koraka 1 procedure za primer 73.

<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.25-7.16 (m, 1H), 7.16-7.05 (m, 2H), 6.70-6.50 (m, 3H), 6.12-6.02 (m, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.40-4.10 (m, 3H), 3.88-3.78 (m, 1H), 3.50-3.38 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.70-2.55 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.60-1.50 (m, 1H), 1.45 (s, 9H); masa (m/z): 520.2 (M+H)<+>.

Korak 2: Dobijanje N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluoro benzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetata

[0149] Mešanom rastvoru jedinjenja dobijenog u koraku 1 (75.0 mg, 0.14 mmol) u DCM (0.7 mL) ohlađenom na 0 °C je bila dodata trifluorosirćetna kiselina (0.7 mL). Reakciona smeša je bila mešana na ST tokom jednog sata, pa su isparljive materije bile odstranjene pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova masa koja je bila rastrljana etrom nekoliko puta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.64 (bs, 2H), 7.50-7.10 (m, 3H), 6.80-6.70 (m, 3H), 6.35-6.25 (m, 1H), 5.60-5.50 (m, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.90-3.70 (m, 2H), 3.60-3.20 (m, 3H), 3.20-3.0 (m, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H); masa (m/z): 420.3 (M+H)<+>.

Primer 76:

N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzol[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat

[0150]

Korak 1: Dobijanje N-(1-terc butoksikarbonil-3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluoro benzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamida

[0151] Jedinjenje iz naslova je bilo dobijeno korišćenjem koraka 1 procedure za primer 73.

<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.50-7.40 (m, 1H), 7.20-7.20 (m, 1H), 7.18-7.02 (m, 2H), 6.72-6.62 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 6.55-6.48 (m, 1H), 6.32-6.25 (m, 1H), 6.02 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.40-4.10 (m, 3H), 3.83-3.75 (m, 1H), 3.50-3.40 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.70-2.57 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.60-1.50 (m, 1H), 1.45 (s, 9H); masa (m/z): 484.3 (M+H)<+>.

Korak 2: Dobijanje N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetata

[0152] Jedinjenje iz naslova je bilo dobijeno korišćenjem koraka 2 procedure za primer 75.

<1>H - NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.61 (bs, 2H), 7.70-7.10 (m, 5H), 6.80-6.60 (m, 3H), 6.50-6.40 (m, 1H), 5.50 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.90-3.70 (m, 2H), 3.40-3.25 (m, 3H), 3.10-2.90 (m, 2H), 2.88-1.78 (m, 1H), 1.70-1.60 (m, 1H); masa (m/z): 384.3 (M+H)<+>.

Primeri 77 do 80: Jedinjenja iz Primera 77 do 80 su bila dobijena praćenjem eksperimentalnih procedura koje su opisane u gore datim Primerima 75 i 76, sa nekim nekritičnim varijacijama.

[0153]

Primer 81:

N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid

[0154]

[0155] Mešanom rastvoru N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorida (primer 73, 20.0 mg, 0.045 mmol) u etil acetatu (2.0 mL), ohlađenom na 0 °C bio je dodat rastvor NaOH (1N, 0.5 mL). Reakciona smeša je bila mešana 5 minuta, pa su dva sloja bila razdvojena. Organski sloj je bio ispran slanim rastvorom, a zatim je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i rastvarač je bio odstranjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 15.0 mg;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.44 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.35-7.25 (m, 1H), 7.13 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.63-6.43 (m, 3H), 6.33 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 50.1 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.23-4.10 (m, 1H), 3.40-3.28 (m, 1H), 3.20-3.10 (m, 1H), 2.90-2.65 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 2H); masa (m/z): 404.3 (M+H)<+>.

Primeri 82 do 84: Jedinjenja iz Primera 82 do 84 su bila dobijena praćenjem eksperimentalnih procedura opisanih u gore datom Primeru 81, sa nekim nekritičnim varijacijama.

[0156]

Primer 85:

N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid

[0157]

[0158] Rastvoru međuproizvoda, I-39 (200.8 mg, 0.63 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL) na ST su sukcesivno bili dodati DIPEA (0.27 mL, 01.56 mmol), HATU (0.29 g, 0.75 mmol) i (1S,2S) 2-amino cikloheksanol hidrohlorid (94.5 mg, 0.63 mmol) uz energično mešanje. Posle završetka dodavanja, reakciona smeša je bila mešana 16 sati, pa je razređena dihlorometanom. Reakciona masa je bila isprana vodom, pa slanim rastvorom, te je osušena preko anhidrovanog Na2SO4i onda je rastvarač bio uparen pod vakuumom. Dobijena sirova masa je bila prečišćena korišćenjem hromatografija na koloni sa silika gelom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

Prinos: 210.0 mg;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.39 (s, 1H), 7.18-7.03 (m, 3H), 7.03-6.91 (m, 3H), 6.55 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.0 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H), 3.77 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 3.80-3.67 (m, 1H), 3.45-3.35 (m, 1H), 2.17-2.08 (m, 1H), 2.05-1.98 (m, 1H), 1.82-1.72 (m, 2H), 1.43-1.22 (m, 4H); masa (m/z): 417.3 (M+H)<+>.

Primeri 86 do 92: Jedinjenja iz Primera 86 do 92 su bila dobijena praćenjem eksperimentalnih procedura opisanih u gore datom Primeru 85, sa nekim nekritičnim varijacijama.

[0159]

Primer 93:

N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-1-okso-4H-benzo[1,4] tiazin-2-karboksamid

[0160]

[0161] Mešanom rastvoru jedinjenja iz primera 85 (136.0 mg, 0.33 mmol) u 1:1 smeši metanola i THF (1.4 mL) na ST bio je dodavan rastvor NaIO4(76.5 mg, 0.36 mmol) u vodi (1.6 mL) tokom perioda od 15 minuta. Reakciona masa bila mešana 16 sati na ST, pa je isfiltrirana kroz podlogu od celita. Filtrat je bio uparen pod sniženim pritiskom. Sirova masa je bila rastvorena u dihlorometanu, te je isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SO4i onda je rastvarač bio odstranjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Prinos: 115 mg;<1>H - NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.33 (s, 1H), 8.02 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.20-7.10 (m, 2H), 7.06-6.97 (m, 1H), 6.74 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.53 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.31 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.95-3.85 (m, 2H), 3.51-3.42 (m, 1H), 2.20-2.06 (m, 2H), 1.83-1.72 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 4H); masa (m/z): 433.3 (M+H)<+>.

Primeri 94 do 97: Jedinjenja iz Primera 94 do 97 su bila dobijena praćenjem eksperimentalnih procedura opisanih u gore datom Primeru 93, sa nekim nekritičnim varijacijama.

[0162]

Primeri 98 do 101: Jedinjenja iz Primera 98 do 101 se mogu lako dobiti od Primera 77 do 80 respektivno praćenjem eksperimentalnih procedura opisanih u Primeru 81, sa nekim nekritičnim varijacijama.

Primer 98: N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid.

Primer 99: N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid.

Primer 100: N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid.

Primer 101: N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid.

Primer 102:

Određivanje alosterne potencije EC50 vrednosti za muskarinski M1 receptor:

[0163] Stabilna CHO ćelijska linija koja izražava rekombinantni humani muskarinski M1 receptor i pCRE-Luc reporterski sistem je bila upotrebljena za test baziran na ćelijama. Ovaj test omogućava pristup koji nije baziran na radioaktivnosti za određivanje vezivanja jedinjenja za GPCRs. U ovom specifičnom testu je meren nivo intracelularnog cikličnog AMP koji je modulisan aktivacijom ili inhibicijom receptora. Rekombinantne ćelije imaju reporter gen luciferaze pod kontrolom elementa koji reaguje na cAMP.

[0164] Gornje ćelije su gajene u belim pločama sa 96 bunarčića sa providnim dnom u Hams F12 medijumu koji je sadržao 10 % fetusnog goveđeg seruma (FBS). Pre dodavanja jedinjenja ili standardnog agonista, ćelije su bile bez seruma preko noći. Ćelijama su bile dodate rastuće koncentracije testiranog jedinjenja zajedno sa EC20acetilholina u OptiMEM medijumu. Inkubacija je bila nastavljena na 37 °C u CO2inkubatoru tokom 4 sata. Medijum je bio odstranjen, pa su ćelije bile isprane fosfatnim puferovanim slanim rastvorom. Ćelije su bile lizirane, a onda je izmerena aktivnost luciferaze u Luminometru. Jedinice luminescencije su bile grafički prikazane prema koncentracijama jedinjenja uz korišćenje Graphpad softvera. EC50vrednosti jedinjenja su bile definisane kao koncentracija potrebna za stimulaciju aktivnosti luciferaze za 50 % u prisustvu EC20acetilholina.

Primer 103:

Model zadatka prepoznavanja objekta

[0165] Svojstva poboljšanja kognicije jedinjenja prema ovom pronalasku su bila ocenjena korišćenjem ovog modela.

[0166] Mužjaci Wistar pacova (8-10 nedelja starosti) su bili korišćeni kao eksperimentalne životinje. U svakom kavezu su bile smeštene četiri životinje.

Životinje su bile držane uz smanjenje hrane od 20 % od dana pre eksperimenta. Voda je bila obezbeđena ad libitum u toku eksperimenta. Životinje su bile držane pod ciklusom od 12 sati svetlost/tama u prostoriji sa kontrolisanom temperaturom i vlažnosti. Eksperiment je bio izveden na otvorenom polju napravljenom od akrila. Pacovi su bili navikavani na pojedinačne arene (otvorena polja) 1 sat u odsustvu bilo kakvih objekata na dan 1.

[0167] Jedna grupa od 12 pacova je dobila nosač, a druga grupa životinja je primila testirana jedinjenja ili testirana jedinjenja i donepezil, pre opita upoznavanja (T1) i izbora (T2). U toku faze upoznavanja, (T1), pacovi su bili individualno stavljeni u arenu tokom 3 minuta, u kojoj su dva identična objekta (a1i a2) bila postavljena 10 cm od zida. 24 sata posle T1, bio je izvršen opit za test dugotrajne memorije. Isti pacovi su bili postavljeni u istu arenu u koju su bili stavljeni u T1opitu. U toku faze izbora (T2) pacovima je bilo dozvoljeno da istražuju arenu tokom 3 minuta u prisustvu kopije poznatog objekta (a3) i jednog novog objekta (b). Tokom T1i T2opita, bila su zabeležena istraživanja svakog objekta (definisana kao njuškanje, lizanje, žvakanje ili mrdanje brkova uz usmeravanje nosa prema objektu na rastojanju manjem od 1 cm) korišćenjem štoperice.

T1je ukupno vreme koje je provedeno u istraživanju poznatih objekata (a1 a2). T2je ukupno vreme provedeno u istraživanju poznatog objekta i novog objekta (a3 b). Diskriminativni indeks = vreme provedeno sa novim objektom / (vreme provedeno sa novim i poznatim objektom).

[0168] Test prepoznavanja objekta je bio izveden kao što je opisano u Behavioural Brain Research, 1988, 31, 47-59.

Efekat primera 18 u kombinaciji sa donepezilom

[0169] Prokognitivni efekti uočeni za kombinaciju testiranog jedinjenja, primera 18 i donepezila su bili bolji nego u posebnim tretmanima. Rezultati su prikazani na slikama 1 i 2.

Primer 104:

Model zadatka prepoznavanja objekta uz opterećenje skopolaminom

[0170] Svojstva poboljšanja kognicije jedinjenja prema ovom pronalasku su bila procenjena korišćenjem ovog modela.

[0171] Mužjaci Wistar pacova (8-10 nedelja starosti) su bili korišćeni kao eksperimentalne životinje. U svakom kavezu su bile smeštene četiri životinje.

[0172] Pacovi su dobili nosač ili nosač i skopolamin ili jedinjenje formule (I) i skopolamin, pre opita upoznavanja (T1). U toku faze upoznavanja, (T1), pacovi su bili individualno stavljeni u arenu tokom 3 minuta, u kojoj su dva identična objekta (a1i a2) bila postavljena 10 cm od zida.3 minuta posle T1, bio je izvršen opis memorije. Isti pacovi su bili postavljeni u istu arenu u koju su bili stavljeni u T1opitu. U toku faze izbora (T2) pacovima je bilo dozvoljeno da istražuju arenu tokom 3 minuta u prisustvu kopije poznatog objekta (a3) i jednog novog objekta (b). Tokom T1i T2opita, bila su zabeležena istraživanja svakog objekta (definisana kao njuškanje, lizanje, žvakanje ili mrdanje brkova uz usmeravanje nosa prema objektu na rastojanju manjem od 1 cm) korišćenjem štoperice.

T1je ukupno vreme koje je provedeno u istraživanju poznatih objekata (a1 a2). T2je ukupno vreme provedeno u istraživanju poznatog objekta i novog objekta (a3 b).

Diskriminativni indeks = vreme provedeno sa novim objektom / (vreme provedeno sa novim i poznatim objektom).

Primer 105:

Zadatak uslovljavanja kontekstualnog straha

[0173] Eksperiment je bio izveden u toku perioda od dva dana. Na dan 1, pacovi su bili stavljeni u komoru sa operantnim uslovljavanjem i dopušteno im je da se aklimatizuju tokom 2 minuta. Pacovi su dobili neizbežni šok u stopalo (bezuslovni stimulans (US): električni šok od 0.5 - 0.7 mA tokom 3 sek). Posle intervala od 1 minuta, šokovi su bili ponavljani da bi bila data ukupno tri US. Pacovima je bio dat nosač ili testirano jedinjenje posle treninga. Skopolamin (0.3 mg/kg, s.c.) je bio dat 120 minuta posle treninga.

[0174] Na dan 2, pacovi su bili stavljeni u komoru sa operantnim uslovljavanjem i ukupno vreme kočenja je bilo mereno tokom perioda od 5 minuta. Testirano jedinjenje, primer 18, preokrenulo je deficit memorije indukovan skopolaminom, a rezultat je prikazan na slici 3.

Primer 106:

Glodarska farmakokinetička studija

[0175] Mužjaci Wistar pacova (260 ± 50 grama) su bili korišćeni kao eksperimentalne životinje. Životinje su bile smeštene individualno u polipropilenske kaveze. Dva dana pre studije, mužjaci Wistar pacova su bili anestezirani izofluranom radi hirurškog postavljanja jugularnog venskog katetera. Pacovi su bili na slučajan način određeni za oralno (3 mg/kg) i intravensko (1 mg/kg) doziranje (n = 3/grupi) i gladovali su preko noći pre oralnog doziranja (p.o.). Međutim, pacovima koji su bili određeni za intravensko (i.v.) doziranje hrana i voda su bili obezbeđeni ad libitum.

[0176] U prethodno određenom trenutku, krv je bila uzeta kroz jugularnu venu i bila je zamenjena ekvivalentnom zapreminom normalnog slanog rastvora. Sakupljena krv je bila preneta u obeleženu ependorf epruvetu koja je sadržala 10 μL heparina kao antikoagulanta. Tipični uzorci krvi su bili uzeti u sledećim vremenskim trenucima: 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, i 24 sata posle doze. Krv je bila centrifugirana na 4000 rpm tokom 10 minuta. Plazma je bila izdvojena i čuvana je zamrznuta na -80 °C sve do analize. Koncentracije testiranog jedinjenja su bile kvantifikovane u plazmi pomoću kvalifikovanog LC-MS/MS metoda uz korišćenje podesne tehnike ekstrakcije. Testirana jedinjenja su bila kvantifikovana u kalibracionom opsegu od oko 1-1000 ng/mL u plazmi. Uzorci iz studije su bili analizirani korišćenjem uzoraka za kalibraciju u šaržama, a uzorci za kontrolu kvaliteta su bili prošireni po šarži.

[0177] Farmakokinetički parametri Cmax, Tmax, AUCt, T1/2, klirens, Vz i bioraspoloživost su bili izračunati korišćenjem nekompartmentalnog modela uz korišćenje standardnog nekompartmentalnog modela primenom Phoenix WinNonlin 6.0.2 ili 6.0.3 verzije softverskog paketa.

Primer 107:

Studija penetracije u mozak glodara

[0178] Mužjaci Wistar pacova (260 ± 40 grama) su bili korišćeni kao eksperimentalne životinje. U svakom kavezu su bile smeštene tri životinje. Životinjama su bili dati voda i hrana ad libitum tokom eksperimenta i držane su pod ciklusom od 12 sati svetlost/tama.

Penetracija u mozak je bila određena na diskretan način kod pacova. Jedan dan pre dana doziranja, mužjaci Wistar pacova su bili aklimatizovani i na slučajan način su grupisani na osnovu svojih težina. U svakom vremenskom trenutku (0.50, 1 i 2 sata) bile su korišćene n = 3 životinje.

[0179] Testirana jedinjenja su bila prethodno formulisana na podesan način i davana su oralno u dozi od (ekvivalent slobodne baze) 3 mg/kg. Uzorci krvi su bili izvađeni preko kardijačne punkture uz korišćenje anestezije izofluranom. Životinje su bile usmrćene da bi se uzelo moždano tkivo. Plazma je bila izdvojena, pa su uzorci mozga bili homogenizovani i čuvani su zamrznuti na -20 °C sve do analize.

Koncentracije testiranog jedinjenja u plazmi i mozgu su bile određene korišćenjem LC-MS/MS metoda.

[0180] Testirana jedinjenja su bila kvantifikovana u plazmi i homogenatu mozga pomoću kvalifikovanog LC-MS/MS metoda uz korišćenje podesne tehnike ekstrakcije. Testirana jedinjenja su bila kvantifikovana u kalibracionom opsegu od oko 1-500 ng/mL u plazmi i homogenatu mozga. Uzorci iz studije su bili analizirani korišćenjem uzoraka za kalibraciju u šaržama, a uzorci za kontrolu kvaliteta su bili prošireni po šarži. Bila je izračunata vrednost odnosa mozak-plazma (Cb/Cp).

Primer 108:

Modulacija nivoa rastvorljivog amiloidnog prekursorskog proteina α (sAPPα) u korteksu

[0181] Pored obezbeđivanja simptomatskog tretmana za kognitivne deficite u Alchajmerovoj bolesti, aktivacija M1 receptora takođe ima efekte modifikacije bolesti kod AD pacijenata. Pozitivni alosterni modulatori za M1 receptor su ispoljili povećanje generisanja sAPPα in-vitro kao indikaciju prerade amiloidnog prekursorskog proteina neamiloidogenom putanjom.

Eksperimentalna procedura:

Određivanje kortikalnih sAPPα nivoa u pacovskom mozgu

[0182] Mužjaci Wistar pacova (250 ± 40 grama) su bili podeljeni na slučajan način (n=8 grupa) na različite grupe za tretiranje. Kontrolnoj grupi pacova je bio intraperitonealno (i.p.) dat nosač (99.75 % 0.25 % HEC HHX 0.25 % tween 80). Pacovi iz grupa za tretiranje su dobili samo jednu intraperitonealnu injekciju testiranog jedinjenja (zapremina doze 2 mL/kg). Pacovi su bili usmrćeni cervikalnom dislokacijom 60 minuta posle davanja testiranog jedinjenja. Mozgovi su bili brzo izolovani, pa je korteks bio disektovan na -20 °C. Korteks je bio odmah stavljen na suvi led i izmeren je pre skladištenja na -80 °C sve do kvantifikacije sAPPa uz korišćenje enzimski vezanog imunosorbentnog testa (ELISA).

Određivanje kortikalnih sAPPα nivoa u mišijem mozgu

[0183] Mužjaci C57BL/6J miševa (25 ± 5 grama) su bili podeljeni na slučajan način (n=8 grupa) na pet grupa. Kontrolnoj grupi miševa je bio intraperitonealno (i.p.) dat nosač (99.75 % 0.25 % HEC HHX 0.25 % tween 80), a tretiranoj grupi miševa je data samo jedna intraperitonealna injekcija primera 18 (zapremina doze 10 mL/kg). Miševi su bili usmrćeni cervikalnom dislokacijom 60 minuta posle davanja testiranog jedinjenja. Mozgovi su bili brzo izolovani, pa je korteks bio disektovan na -20 °C. Korteks je bio odmah stavljen na suvi led i izmeren je pre skladištenja na -80 °C sve do kvantifikacije sAPPa uz korišćenje enzimski vezanog imunosorbentnog testa (ELISA).

Priprema uzoraka:

[0184]

1. Tablete sa koktelom inhibitora proteaze (komplet mini, Make-Roche; 1 tableta za 8 mL) su bile dodate u Tris puferovani slani rastvor (TBS) pre korišćenja pufera za preradu tkiva.

2. Kortikalna tkiva su bila rastopljena i homogenizovana u pet zapremina TBS, pa je rastvor bio centrifugiran sa 15,000 rpm na 4 °C tokom 90 minuta.

3. Supernatant je bio odliven i homogenizovan je u pet zapremina TBS. Uzorci su bili centrifugirani sa 15,000 rpm na 4 °C tokom 30 minuta.

4. Supernatant je bio odliven, a talog je bio podvrgnut dejstvu ultrazvuka u deset zapremina 6 M gvanidina-HCl (u 50 mM Tris pufera, pH: 7.6). Dejstvo ultrazvuka je bilo ponovljeno četiri puta uz trajanje od pet sekundi svaki put.

5. Rezultujuća smeša je bila inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, pa je centrifugirana sa 15,000 rpm na 4 °C tokom 30 minuta. Supernatant je bio razređen 100-struko sa EIA puferom pre dodavanja u prethodno obložene ELISA ploče.

Merenje sAPPα pomoću ELISA kita:

[0185] Da bi se ispitala uloga akutnog tretmana testiranog jedinjenja na sAPPα nivoe, bila je izmerena ekspresija ovog proteina u homogenatima dobijenim iz korteksa tretiranih i netretiranih pacova korišćenjem ELISA testa. Cela procedura je bila praćena kao što je opisano u instrukcijama za ELISA kit (mišija/pacovska sAPPa ELISA, kataloški broj: JP27419, Immuno-Biological Laboratories, Hamburg, Nemačka).

Statističke analize:

[0186] Statističke analize su bile izvršene uz korišćenje Graph Pad Prism (Verzija 4). Rezultati su izraženi kao srednji ± SEM nivoi sAPPa izraženi kao procenat od kontrolnih vrednosti (pacovi tretirani nosačem). Statistička značajnost posle tretmana je bila određena korišćenjem Jednosmernog ANOVA praćenog Danetovim post testom, a nivo značajnosti je bio postavljen ispod p vrednosti manje od 0.05.

Reference:

[0187]

Neurotherapeutics, 2008, 5, 433- 442

Current Alzheimer Research, 2009, 6, 112-117

The Journal of Neuroscience, 2009, 29, 14271-14286

Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2003, 305, 864 - 871

Rezultat:

[0188] Posle šezdeset minuta posle tretmana, testirano jedinjenje, primer 18, dovelo je do značajnih povećanja kortikalnih sAPPa nivoa u mišijem mozgu sa srednjim povećanjem od 38 % uočenim za dozu od 10 mg/kg, i.p., a rezultati su prikazani na slici 4. Slično tome, Primer 18 je proizveo povećanje zavisno od doze u mozgu pacova kortikalnih sAPPa nivoa sa srednjim maksimalnim povećanjem od 26 % uočenim za dozu od 10 mg/kg, i.p., a rezultat je prikazan na slici 5.

Primer 109:

Modulacija cerebralnog protoka krvi u frontalnom korteksu:

[0189] Efekat testiranog jedinjenja na modulaciju cerebralnog protoka krvi je bio određen korišćenjem pacova.

[0190] Pacovi su bili aklimatizovani na laboratorijsko okruženje najmanje 7 dana. Pacovi (300 - 350 grama) su bili smešteni u grupama od po četiri u kontrolisanom okruženju (temp = 21 ± 3 °C; vlažnost = 30-70 %) i bili su držani pod ciklusom od 12 sati svetlost/tama, sa svetlosti od 07:00 ujutru. Hrana i voda su bile obezbeđene ad libitum.

[0191] Pacovi su bili anestezirani sa 12% uretana (i.p.). Unutrašnja telesna temperatura životinje je bila održavana na 37 °C pomoću grejne ploče i rektalne temperaturske probe. Mala incizija je bila napravljena na jednoj od ventralnih strana zadnjeg uda i femoralna vena je bila kanulisana sa PE10 cevčicom za davanje leka. Onda je životinja bila stavljena u stereotaksični ram, pa je napravljena središna incizija da bi se izložila lobanja. Otvor neravnih ivica je bio izbušen iznad frontalnog korteksa (stereotaksične koordinate 1 mm anteriorno i 4 mm lateralno u odnosu na bregmu). Kiseonik je bio dovođen kroz nosni konus stereotaksičnog aparata koji je bio povezan sa kontrolisanim dopremačem gasa sa protokom od 200 mL/minutu. Laser-Dopler proba (AD Instruments Inc) je bila stavljena preko otvora da bi se pratio cerebralni protok krvi. Laser-Dopler proba je bila povezana sa kompjuterizovanim sistemom za akviziciju podataka (PowerLab 16/30, AD Instruments Inc). Nosač ili testirano jedinjenje su bili davani intravenski pošto je cerebralni protok krvi bio stabilan tokom 30 minuta. Cerebralni protok krvi je bio meren sledećih 90 minuta. Dobijeni podaci su bili izračunati kao procenat povećanja u odnosu na nivo protoka krvi pri mirovanju. Podaci za testirano jedinjenje su bili upoređeni sa kontrolnom grupom uz korišćenje jednosmernog ANOVA praćenog Bonferonijevim post testom.

Reference:

[0192] Psychopharmacology (Berl).2013, 225, 21 - 30.

Rezultat:

[0193] Primer 18 je značajno povećao cerebralni protok krvi kao što je prikazano na slici 6.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I),

pri čemu: A<1>i A<2>svaki nezavisno predstavlja CH, CF ili N; W je O, S, S(O) ili S(O)2; R<1>je

R<2>je

pri čemu * predstavlja tačku vezivanja; R<3>je OH, F, NH2ili H; R<4>je pri svakoj pojavi nezavisno izabran između halogena, -O-CH3; -S-CH3, -N(CH3)2, -CH3, -CF3, -CHF2, -CH2F, -OH, -CN, fenila, piridila i vodonika; pri čemu su fenil i piridil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena ili CH3; X je CH2, O ili NH; a je 0 ili 1; i b je 1 ili 2; ili izotopski oblik, stereoizomer, tautomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, pri čemu: W je O; A<1>i A2su CH; R<1>je

R<2>je
3. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, pri čemu: W je S; A<1>i A<2>su CH; R<1>je
4. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, pri čemu: W je O; A<1>i A<2>su CH; R<1>je

R<2>je

i X je CH2.
5. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, pri čemu: W je S; A<1>i A<2>su CH; R<1>je

R<2>je

X je CH2.
6. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5, pri čemu je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od sledećih: N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-8-fluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-fluorobenzil}-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(4-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(4-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(3-metoksibenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metoksipiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(2-metoksipiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metoksipiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksi-2-metilpropil)-4-(2-metoksipiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-trifluorometilbenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluoro benzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3,4-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hloropiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-3-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hloropiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-2-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3,4-dihloro benzil)-4H-benzo [1,4] oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-3-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,4-dihlorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-8-fluoro-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-1-benzil-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-1-{2,3-difluorobenzil}-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluoropiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(4-fluorobenzil)-4H-pirido[3,2-b][1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-1-(3-fluorobenzil)-1H-pirido[2,3-b][1,4]oksazin-3-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-trifluorometilbenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hlorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(trans-1R,2R-2-hidroksiciklopentil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(trans-1R,2R-2-hidroksiciklopentil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hlorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(trans-1R,2R-2-hidroksiciklopentil)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(2-hidroksimetilfenil)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(1-hidroksimetil-2-metilpropil)-8-fluoro-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1R,2R-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-fluorobenzil}-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1R,2R-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-fluorobenzil}-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{3-fluorobenzil}-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fenilpiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-8-fluoro-4-(2-fenilpiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-hloropiridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-5-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-2-ilmetil)-5-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(piridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(6’-fluoro-5’-metil-[2,3’]bipiridinil-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-[2-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-piridin-4-ilmetil]-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(1-metil-1H-pirazol-3-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-fluorobenzil)-5,8-difluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-8-fluoro-4-(3-fluoropiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-8-fluoro-4-(2-metilpiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-8-fluoro-4-(2-metilpiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2-metilpiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-5,8-difluoro-4-(piridin-4-ilmetil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(3-trifluorometilbenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(2-metoksipiridin-5-ilmetil)-4H-benzo[l,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksitetrahidropiran-4-il)-4-(piridin-4-ilmetil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S, 2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(3-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{4-metoksibenzil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{4-fluorobenzil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{piridin-4-il-metil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-hloropiridin-5-il-metil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{piridin-2-il-metil}-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-(2,3-difluorobenzil)-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-benzil-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{3-fluorobenzil}-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{piridin-2-il-metil}-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(cis-1S,2S-2-hidroksicikloheksil)-4-{2-hloropiridin-5-il-metil}-1-okso-4H-benzo[1,4]tiazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid; i N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4] oksazin-2-karboksamid; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6, pri čemu je farmaceutski prihvatljiva so izabrana iz grupe koja se sastoji od sledećih: N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorid; N-(3-fluoropiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid hidrohlorid; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(4-fluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat; N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2,3-difluorobenzil)-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat; i N-(3-hidroksipiperidin-4-il)-4-(2-fluorobenzil)-8-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-2-karboksamid trifluoroacetat.
8. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, i farmaceutski prihvatljive ekscipijense ili nosače.
9. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 8, za primenu u lečenju kliničkih stanja posredovanih muskarinskim M1 receptorom izabranih iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti, šizofrenije, kognitivnih poremećaja, bola ili poremećaja spavanja.
10. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, za primenu u lečenju poremećaja povezanog sa muskarinskim M1 receptorom izabranog iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti, šizofrenije, kognitivnih poremećaja, bola ili poremećaja spavanja.
11. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, za primenu u lečenju poremećaja povezanog sa muskarinskim M1 receptorom.
12. Jedinjenje za primenu prema zahtevu 11, pri čemu je poremećaj povezan sa muskarinskim M1 receptorom izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti, šizofrenije, kognitivnih poremećaja, bola ili poremećaja spavanja.