HK1247919B

HK1247919B - 毒蕈硷m1受体正变构调节剂

Info

Publication number: HK1247919B
Application number: HK18107344.8A
Authority: HK
Inventors: Ramakrishna Nirogi; Abdul Rasheed Mohammed; Anil Karbhari Shinde; Shankar Reddy GAGGINAPALLY; Venkateswarlu Jasti
Original assignee: Suven Life Sciences Limited
Priority date: 2015-06-08
Filing date: 2016-06-08
Publication date: 2021-09-10

Description

毒蕈碱M1受体正变构调节剂

技术领域

本发明涉及作为毒蕈碱M1受体正变构调节剂(M1 receptor positiveallosteric modulator，M1 PAM)的式(I)的化合物或其同位素形式、立体异构体或可药用盐。本发明还描述了制备这样的化合物的方法、包含这样的化合物的药物组合物及其用途。

背景技术

毒蕈碱乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor，mAChR)属于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor，GPCR)的A类家族。它们在全身广泛表达。迄今为止，已经鉴定了对内源性神经递质乙酰胆碱(ACh)有响应的五种亚型，称为MI至M5。它们在调节中枢和外周神经系统的许多重要功能(包括认知功能)的活性中发挥关键作用。M1、M3和M5与Gq偶联，而M2和M4通过Gi/o与下游信号传导途径和相关的效应子系统偶联(Critical Reviews in Neurobiology，1996，10，69-99；Pharmacology&Therapeutics，2008，117，232-243)。M2和M3在外周高度表达并且已知参与胃肠道(GI)运动和副交感神经应答(例如分泌唾液)(Life Sciences，1993，52，441-448)。M1毒蕈碱受体主要在参与认知的脑区域(例如皮质、海马和杏仁核)中表达，因此预期M1受体的选择性活化会促进认知能力(Annals of Neurology，2003，54，144-146)。

占诺美林(xanomeline)(一种对M1和M4亚型具有合理选择性的毒蕈碱乙酰胆碱受体激动剂)在临床阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)试验中对认知产生显著的作用(Alzheimer Disease and Associated Disorders，1998，12(4)，304-12)，但是胃肠道副作用导致临床试验中的高退出率(dropout rate)。毒蕈碱受体亚型之间在其正立体乙酰胆碱配体结合位点处存在高度保守性，这使得难以鉴定M1选择性激动剂。

为了避免这种选择性和安全性问题，一种替代的方法由以下组成：开发在较低保守性的变构结合位点处起作用的M1 PAM。Merck报道了M1正变构调节剂PQCA(1-{[4-氰基-4-(吡啶-2-基)哌啶-1-基]甲基}-4-氧代-4H-喹嗪-3-羧酸)的开发。该化合物较其他毒蕈碱受体亚型对M1具有高度选择性，并且发现在几种临床前认知模型中是有效的(Psychopharmacology，2013，225(1)，21-30)，其在等于或小于改善认知所需的最小有效剂量的五倍余量的剂量下没有胃肠副作用。在临床前研究中，证明M1活化提高脑中的神经递质乙酰胆碱浓度。此外，通过将APP加工转向非促淀粉样(non-amyloidogenic)α-分泌酶途径以及通过降低tau过度磷酸化二者，M1活化具有作为对AD的疾病改善治疗的潜力。M1受体的正变构调节剂已经证明在体外提高了sAPPα的产生(The Journal of Neuroscience，2009，29，14271-14286)。因此，M1PAM提供了靶向AD和精神分裂症中认知缺陷的症状性治疗和疾病改善治疗二者的方法。

PCT专利申请公开WO2015049574、WO2015028483、WO2007067489和WO2011149801已经公开了一些M1PAM化合物。尽管迄今为止文献中已经公开了几种M1PAM，但是在市场上没有推出与M1PAM作用相同的药物。因此，存在未被满足的需求和余地来发现和开发用于治疗由M1受体调节的病症之具有新的化学结构而没有任何副作用的新的M1PAM。

发明内容

在第一方面，本发明涉及式(I)化合物的M1PAM，或其同位素形式、立体异构体、互变异构体或可药用盐

其中：

A¹和A²各自独立地表示CH、CF或N；

W是O、S、S(O)或S(O)₂；

R¹是

R²是

其中：＊表示连接点；

R³是OH、F、NH₂或H；

R⁴每次出现时独立地选自：卤素、-O-CH₃、-S-CH₃、-N(CH₃)₂、-CH₃、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-OH、-CN、苯基、吡啶基和氢；其中苯基和吡啶基任选地被一个或更多个选自卤素或CH₃的取代基所取代；

X是CH₂、O或NH；

a是0或1；并且b是1或2。

在另一方面，本发明涉及制备式(I)的化合物或其立体异构体和可药用盐的方法。

在另一方面，本发明涉及含有治疗有效量的至少一种式(I)的化合物或其立体异构体和可药用盐以及可药用赋形剂或载体的药物组合物。

在另一方面，本发明涉及式(I)的化合物或其立体异构体和可药用盐，其用作M1PAM。

在另一方面，本发明涉及式(I)的化合物或其立体异构体和可药用盐，其用于治疗选自AD、精神分裂症、认知障碍、疼痛或睡眠障碍的多种病症。

在另一方面，本发明涉及治疗与毒蕈碱M1受体相关的病症的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其立体异构体和可药用盐。

在另一方面，本发明涉及式(I)的化合物或其立体异构体和可药用盐用于制备用于治疗与毒蕈碱M1受体相关的病症之药物的用途。

附图简述

图1：实施例18与多奈哌齐在时间诱导的记忆缺陷中的作用。

图2：示出实施例18与多奈哌齐在时间诱导的记忆缺陷中的作用的辨别指数(discriminative index)。

图3：实施例18对东莨菪碱诱导的记忆缺陷的作用。

图4：实施例18对雄性C57BL/6J小鼠中皮质sAPPα水平的作用。

图5：实施例18对雄性Wistar大鼠中皮质sAPPα水平的作用。

图6：实施例18对额叶皮质中脑血流量的作用。

发明详述

除非另有说明，否则说明书和权利要求书中使用的以下术语具有以下给出的含义：

术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

短语“治疗有效量”定义为以下的本发明的化合物的量，其(i)治疗特定疾病、病症或障碍(ii)消除特定疾病、病症或障碍的一种或更多种症状(iii)延迟本文中所述的特定疾病、病症或障碍的一种或更多种症状的发作。

本文使用的术语“同位素形式”是指其中式(I)的化合物的一个或更多个原子被其各自的同位素取代的式(I)的化合物。例如，氢的同位素包括²H(氘)和³H(氚)。

本文中使用的术语“立体异构体”是指其原子空间排列不同的式(I)的化合物的异构体。本文中公开的化合物可以作为单一的立体异构体、外消旋体，和/或对映体和/或非对映体的混合物存在。所有这样的单一的立体异构体、外消旋体及其混合物均在本发明的范围内。

本文中使用的术语“可药用盐”是指活性化合物(即式I的化合物)的盐，并且通过与适当的酸或酸衍生物(其取决于在本文中所述的化合物上存在的具体取代基)反应来制备。

实施方案

本发明涵盖通过式(I)的化合物(但不限于此)所描述的所有化合物，然而，本发明的优选方面和要素在本文中以下面的实施方案的形式讨论。

在一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：W是O。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：W是S或S(O)。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：A¹是CH或CF。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：A¹是N。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：A²是CH或CF。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：A²是N。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：W是O；A¹是CH或CF。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：W是O；A²是CH或CF。

在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，或其同位素形式、立体异构体或可药用盐，其中：

R¹是

其中＊表示连接点；X、R³和a如第一方面中所定义。

R¹是

其中＊表示连接点；X、R³和a如第一方面中所定义。

R¹是

其中＊表示连接点。

R²是

其中＊表示连接点；R⁴和b如第一方面中所定义。

R²是

其中＊表示连接点；R⁴和b如第一方面中所定义。

R²是

其中＊表示连接点；R⁴和b如第一方面中所定义。

R¹是

R²是

其中＊表示连接点；X是CH₂；R³、R⁴、a和b如第一方面中所定义。

R¹是

R²是

R¹是

R²是

其中＊表示连接点；X是NH；R³、R⁴、a和b如第一方面中所定义。

W是O；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

其中＊表示连接点；R³、R⁴、X、a和b如第一方面中所定义。

W是S；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

其中＊表示连接点；R³、R⁴、X、a和b如第一方面中所定义。

W是O；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

W是S；

A¹如A²是CH；

R¹是

R²是

在又一个实施方案中，本发明的代表性化合物包括但不限于：

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{2-氟苄基}-4H-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-苄基-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(4-甲氧基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(4-甲氧基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(3-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3-甲氧基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(3-甲氧基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲氧基吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(2-甲氧基吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲氧基吡啶-5-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(2-甲氧基吡啶-5-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3-三氟甲基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3，4-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基四氢吡喃-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氯吡啶-5-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(吡啶-3-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氯吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(吡啶-2-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3，4-二氯苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲基吡啶-3-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，4-二氯苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-苄基-4H-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-1-苄基-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]嗪-3-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-1-{2，3-二氟苄基}-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]嗪-3-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3-氟吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(4-氟苄基)-4H-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-1-(3-氟苄基)-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]嗪-3-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-三氟甲基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氯苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(反式-1R，2R-2-羟基环戊基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(反式-1R，2R-2-羟基环戊基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氯苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(反式-1R，2R-2-羟基环戊基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基甲基苯基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基甲基苯基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基甲基苯基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基甲基苯基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(1-羟基甲基-2-甲基丙基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-苄基-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1R，2R-2-羟基环己基)-4-{2-氟苄基}-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1R，2R-2-羟基环己基)-4-{2-氟苄基}-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{3-氟苄基}-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-苯基吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-苯基吡啶-4-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氯吡啶-4-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氟苄基)-5-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(吡啶-2-基甲基)-5-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(吡啶-4-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(6′-氟-5′-甲基-[2，3′]联吡啶基-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-[2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-吡啶-4-基甲基]-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氟苄基)-5，8-二氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3-氟吡啶-4-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲基吡啶-4-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲基吡啶-5-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲基吡啶-4-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-甲基吡啶-5-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(吡啶-4-基甲基)-5，8-二氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基四氢吡喃-4-基)-4-(3-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基四氢吡喃-4-基)-4-(4-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基四氢吡喃-4-基)-4-(3-三氟甲基苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基四氢吡喃-4-基)-4-(2-甲氧基吡啶-5-基甲基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基四氢吡喃-4-基)-4-(吡啶-4-基甲基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(3-氟苄基)-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-苄基-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{4-甲氧基苄基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{4-氟苄基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{吡啶-4-基甲基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{2-氯吡啶-5-基甲基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{吡啶-2-基甲基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-1-氧代-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-苄基-1-氧代-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{3-氟苄基}-1-氧代-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{吡啶-2-基甲基}-1-氧代-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{2-氯吡啶-5-基甲基}-1-氧代-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；以及

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

或其可药用盐。

在又一个实施方案中，本发明的可药用盐的代表性化合物包括但不限于：

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐；

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐；以及

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐。

一般方案1描述了用于制备中间体的方法，其中W是O和S；A¹、A²和R²如第一方面所定义。

一般方案1

步骤1：制备式(ii)的化合物

在选自碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠和氢氧化钾的碱的存在下，使式(i)的化合物与溴乙酸乙酯在选自乙腈、DCM、DCE、丙酮、THF、DMF和DMSO的溶剂中在80℃至100℃的温度范围下反应15至17小时，以获得式(ii)的化合物。

步骤2：制备式(iii)的化合物

在氢化钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、二异丙基氨基锂(LDA)或六甲基二硅氮烷锂(LiHMDS)的存在下，使步骤1中获得的式(ii)的化合物与甲酸甲酯在0℃至RT下反应3至5小时以获得式(iii)的化合物。

步骤3：制备式(iv)的化合物

使步骤2中获得的式(iii)的化合物与胺类R²-CH₂-NH₂在选自甲醇、乙醇和异丙醇的溶剂中在25℃至30℃的温度范围下反应10至14小时，以获得式(iv)的化合物。胺类R²-CH₂-NH₂从商业来源获得或者通过叠氮化物由其各自的卤化物/甲磺酸酯/甲苯磺酸酯或者通过还原各自的腈类来制备。在选自DMSO、DMF、DMA和NMP的溶剂中在RT至110℃的温度范围下，使用叠氮化钠以叠氮化物置换卤化物/甲磺酸酯/甲苯磺酸酯。在选自THF、MeOH、EtOH和H₂O的溶剂中在0℃至RT的温度范围下使用选自PPH₃/H₂O、Pd/C/H₂、雷尼镍(Raney nickel)和NaBH₄/NiCl₂的还原剂将叠氮化物和腈类还原成胺类。

步骤4：制备式(v)的化合物

在选自碳酸铯、碳酸钾或磷酸钾的碱的存在下，使步骤3中获得的式(iv)的化合物与碘化铜、氯化铜或溴化铜在选自DMF、NMP、DMA、DMSO、THF和DCE的溶剂中在RT至90℃的温度范围下反应5至7小时以获得式(v)的化合物。

步骤5：制备式(A)的化合物

使步骤4中获得的式(v)的化合物与氢氧化钠在1∶1的水和甲醇的混合物中在回流下反应3至5小时以获得式(A)的化合物。

一般方案2描绘了制备式(I)的化合物的方法，其中A¹、A²、W、R¹、R²、R³和R⁴如上文所定义。

一般方案2

制备式(I)的化合物

在偶联剂例如HATU、DCC、DIC、TBTU或EDC和有机碱例如DIPEA、TEA、DABCO和DBU的存在下，使式(A)的化合物与胺类R¹-NH₂在选自DCM、DMF、DMA、NMP和THF的溶剂中在25℃至30℃的温度范围下偶联15至17小时以获得式(I)的化合物。R¹-NH₂的胺类，例如(1S，2S)-2-氨基环己醇(CAS号13374-30-6)、(1R，2R)-2-氨基环己醇(CAS号931-16-8)、1-氨基-2-甲基-2-丙醇、2-氨基-3-甲基-1-丁醇、2-氨基苄醇、(1R，2R)-反式-2-氨基环戊醇(CAS号68327-11-7)和反式4-氨基四氢吡喃-3-醇(CAS号215940-92-4)从商业来源获得，而4-氨基-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯则使用如EP0076530A2中公开的方法制备，并且4-氨基-3-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯使用WO2012108490A1中公开的方法制备。

制备式(I)的化合物(其中W是S(＝O))

使式(I)的化合物(其中W是S)在选自1∶1∶2的甲醇、THF和水的混合物的溶剂中与NaIO₄在25℃至30℃的温度范围下反应14至17小时，以获得式(I)的化合物(其中W是S(＝O))。

制备式(I)的化合物的可药用盐

式(I)的化合物可以任选地通过与合适的酸或酸衍生物反应，以转化成其可药用盐。

合适的可药用盐对于本领域技术人员是明显的。盐是用无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸)或有机酸(例如草酸、琥珀酸、马来酸、乙酸、富马酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、苯甲酸、对甲苯甲酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸)形成的。

在另一方面，本发明涉及式(I)的化合物的药物组合物。为了在治疗中使用式(I)的化合物或其立体异构体和其可药用盐，通常根据标准药学实践将其配制成药物组合物。

可以使用一种或更多种可药用赋形剂以常规的方式配制本发明的药物组合物。可药用赋形剂是载体或稀释剂。因此，本发明的活性化合物可以配制成用于经口给药。这样的药物组合物及其制备方法是本领域所公知的。

活性化合物的剂量可以根据多种因素变化，例如患者的年龄和体重、待治疗的疾病的性质和严重程度以及这样的其他因素。因此，关于药理学有效量的通式(I)的化合物、其立体异构体和可药用盐的任何提及都是指上述因素。

在另一方面，本发明涉及治疗与毒蕈碱M1受体相关的病症的方法。

在另一个实施方案中，与毒蕈碱M1受体相关的病症选自AD、精神分裂症、认知障碍、疼痛或睡眠障碍。

在又一个实施方案中，本发明涉及治疗与毒蕈碱M1受体相关的病症的方法，所述方法包括式(I)的化合物与选自胆碱酯酶抑制剂(例如多奈哌齐)和NMDA受体拮抗剂(例如美金刚胺)的其他治疗剂的组合。

商业试剂无需进一步纯化而使用。RT被定义为环境温度范围，通常为25℃至35℃。除非另有说明，否则所有质谱都使用ESI条件获得。在Bruker仪器上在400MHz下记录¹H-NMR谱。氘化氯仿、甲醇或二甲基亚砜用作溶剂。TMS用作内参标准。化学位移值以百万分率(δ)值表示。对于NMR信号的多重峰，使用以下缩写：s＝单峰，bs＝宽单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，qui＝五重峰，h＝七重峰，dd＝双重双峰，dt＝双重三重峰，tt＝三重三重峰，m＝多重峰。色谱法是指使用100至200目硅胶并在氮气压力(快速色谱法)条件下进行的柱色谱法。

一般，立体异构体通常作为外消旋体获得，该外消旋体可被以本身已知的方式分离成旋光活性异构体。在通式(I)的化合物具有不对称碳原子的情况下，本发明涉及D-型、L-型和D，L-混合物，并且在通式(I)的化合物含有许多不对称碳原子的情况下，本发明的非对映异构形式延伸到这些立体异构形式中的每一种以及其混合物(包括外消旋体)。那些具有不对称碳并一般以外消旋体获得的通式(I)的化合物可通过常规方法彼此分离，或者可以通过立体特异性或不对称合成获得任何给定的异构体。然而，也可以从一开始就采用旋光活性化合物，然后获得相应的旋光活性对映体或非对映体化合物作为最终化合物。

通式(I)的化合物的立体异构体可通过以下所示的一种或更多种方式来制备：

i)可以以其旋光活性形式使用一种或更多种试剂。

ii)在还原过程中可使用旋光纯的催化剂或手性配体以及金属催化剂。金属催化剂可以是铑、钌、铟等。手性配体可优选为手性膦(Principles of Asymmetric synthesis，J.E.Baldwin编，Tetrahedron series，14，311-316)。

iii)立体异构体的混合物可通过常规方法拆分(resolve)，例如与手性酸或手性胺或手性氨基醇、手性氨基酸形成非对映体盐。然后可以通过例如分级结晶、色谱法等的方法分离所得的非对映体的混合物，接着进行通过水解衍生物分离旋光活性产物的另外步骤。

iv)立体异构体的混合物可以通过常规方法拆分，例如微生物拆分、拆分与手性酸或手性碱形成的非对映体盐。

可以使用的手性酸可以是酒石酸、扁桃酸、乳酸、樟脑磺酸、氨基酸等。可以使用的手性碱可以是金鸡纳碱(cinchona alkaloid)、马钱子碱(brucine)或碱性氨基酸，例如赖氨酸、精氨酸等。在含有几何异构体的通式(I)的化合物的情况下，本发明涉及所有这些几何异构体。

本文中使用以下缩写词：

CuI：碘化铜

Cs₂CO₃：碳酸铯

DCM：二氯甲烷

DCE：二氯乙烷

DCC：N，N′-二环己基碳二亚胺

DIC：N，N′-二异丙基碳二亚胺

DIPEA：N，N-二异丙基乙胺

DBU：1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

DABCO：1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷

DMA：二甲基乙酰胺

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

DMSO：二甲基亚砜

EDC：二氯乙烷

H₂：氢气

HATU：2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯

HCl：盐酸

IPA：异丙醇

K₃PO₄：磷酸钾

MeOH：甲醇

NaHCO₃：碳酸氢钠

NaIO₄：偏高碘酸钠

NaOH：氢氧化钠

Na₂SO₄：硫酸钠

NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮

NiCl₂：氯化镍

NaBH₄：硼氢化钠

PPH₃：三苯基膦

RT：室温(25-30℃)

TBTU：O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯

TEA：三乙胺

THF：四氢呋喃

TMS：四甲基硅烷

中间体制备：

中间体1：2，3-二氟苄胺(I-1)

步骤1：制备1-叠氮甲基-2，3-二氟苯

经15分钟的时间向在RT下的DMF(483.0mL)中的1-溴甲基-2，3-二氟苯(50.0g，241.5mmol)搅拌溶液中添加叠氮化钠(23.5g，362.3mmol)并将反应混合物在RT下搅拌16小时。将反应混合物用乙醚稀释并用水洗涤。有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下除去挥发物以获得标题化合物。

产量：43.4g。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.22-7.05(m，3H)，4.44(s，2H).

步骤2：制备2，3-二氟苄胺：

向上述步骤中获得的1-叠氮甲基-2，3-二氟苯(41.3g，244.3mmol)在0℃下的THF(490.0mL)中的搅拌溶液中添加三苯基膦(70.4g，268.8mmol)和水(13.2mL，733.0mmol)。将反应混合物在RT下搅拌16小时并用乙酸乙酯稀释。将反应物用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在减压下除去溶剂。将获得的粗物质经硅胶柱色谱纯化以获得标题化合物。

产量：23.1g；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.15-7.0(m，3H)，3.93(s，2H)；质量(m/z)：144.1(M+H)⁺.

使用上述实验方法，由各自可商购的苄基卤化物开始通过叠氮化物中间体制备以下经取代的苄基胺类。

中间体2：3-三氟甲基苄胺(I-2)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ 7.60(s，1H)，7.58-7.43(m，3H)，3.95(s，2H)；质量(m/z)：176.4(M+H)⁺.

中间体3：4-吡唑-1-基苄胺(I-3)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.92(d，J＝2.1Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.67(d，J＝8.3Hz，2H)，7，41(d，J＝8.3Hz，2H)，6.46(d，J＝2.1Hz，1H)，3.91(s，2H)；质量(m/z)：174.0(M+H)⁺.

中间体4：3，4-二氟苄胺(I-4)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.22-7.08(m，2H)，7.08-7.03(m，1H)，3.85(s，2H)；质量(m/z)：144.1(M+H)⁺.

中间体5：2，4-二氯苄胺(I-5)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.70-7.50(m，3H)，3.75(s，2H).质量(m/z)：176.2，178.1(M+H)⁺.

中间体6：4-吡啶基甲胺(I-6)

向在RT下的甲醇(4.0mL)中的4-氰基吡啶(100.0mg，0.96mmol)搅拌溶液中添加10％Pd/C(50.0mg)并在氢气气氛下搅拌3小时。将反应物通过硅藻土垫过滤并在减压下除去挥发物以获得标题化合物。

产量：63.6mg；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.52(d，J＝4.7Hz，2H)，7.23(d，J＝4.7Hz，2H)，3.88(s，2H)；质量(m/z)：109.2(M+H)⁺.

使用上述实验方法，由各自的可商购吡啶基腈类开始，制备以下经取代的吡啶基胺类。

中间体7：3-氨基甲基吡啶(I-7)

¹H-NMR·(400MHz，CDCl₃)：δ8.58(s，1H)，8.52(d，J＝4.0Hz，1H)，7.70(d，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝5.9Hz，1H)，3.92(s，2H)；质量(m/z)：109.1(M+H)⁺.

中间体8：2-氨基甲基-6-甲基吡啶(I-8)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.62-7.51(m，1H)，7.20-7.0(m，2H)，4.12-4.0(m，2H)，2.54(s，3H)；质量(m/z)：123.0(M+H)⁺.

中间体9：3-氟-4-氨基甲基吡啶(I-9)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.43-7.36(m，2H)，7.35-7.26(m，1H)，3.91(s，2H)；质量(m/z)：127.1(M+H)⁺.

中间体10：2-苯基-4-氨基甲基吡啶(I-10)

步骤1：制备2-苯基-4-氰基吡啶

向在RT下的1∶1的DMF和水的混合物(18mL)中的2-氯-4-氰基吡啶(500mg，3.61mmol)搅拌溶液中依次添加苯基硼酸(524.1mg，4.33mmol)、PPh₃(2.8mg，0.01mmol)、Pd₂(dba)₃(16.5mg，0.018mmol)。然后将反应温度升至110℃，并在该温度下将内容物搅拌1小时。将反应物质用乙醚稀释，用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在减压下除去溶剂以获得标题化合物。

产量：43.4g；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.86(d，J＝4.9Hz，1H)，8.01(d，J＝7.8Hz，2H)，7.94(s，1H)，7.58-7.48(m，3H)，7.45(d，J＝4.9Hz，1H)；质量(m/z)：181.2(M+H)⁺.

步骤2：制备2-苯基-4-氨基甲基吡啶

向在RT下的甲醇(17.0mL)中的2-苯基-4-氰基吡啶(625.0mg，3.4mmol)搅拌溶液中添加10％Pd/C(312.0mg)并在氢气气氛下搅拌3小时。将反应物质通过硅藻土垫过滤并在减压下除去挥发物以获得标题化合物。

产量：63.6mg；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.63(d，J＝5.0Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.50-7.36(m，5H)，7.15(d，J＝7.6Hz，1H)，3.97(s，2H)；质量(m/z)：185.1(M+H)⁺.

使用上述实验方法，通过一些非关键的改变制备了以下中间体。

中间体11：2-(2-氟-3-甲基吡啶-5-基)-4-氨基甲基吡啶(I-11)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.63(dd，J＝5.0，7.6Hz，1H)，8.58(d，J＝6.2Hz，1H)，8.32-8.26(m，1H)，7.74-7.70(m，1H)，7.35-7.25(m，1H)，3.99(s，2H)，2.36(s，3H)；质量(m/z)：218.1(M+H)⁺.

中间体12：2-溴苯氧基乙酯(I-12)

在RT下，经15分钟的时间向在乙腈(350mL)中的2-溴苯酚(30.2g，174.6mmol)、Cs₂CO₃(85.3g，261.8mmol)溶液中添加溴乙酸乙酯(23.2mL，209.5mmol)并将反应混合物在RT下搅拌15分钟。将反应混合物的温度逐渐升高以回流，并在回流下搅拌16小时，直到起始苯酚如TLC所示被消耗。将反应物质冷却至RT，通过硅藻土垫过滤并在真空下浓缩滤液至干燥。将残余物溶于乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在减压下蒸发溶剂以获得标题化合物。

产量：43.8g；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.57(d，J＝8.0Hz，1H)，7.24(t，J＝8.9Hz，1H)，6.88(t，J＝7.8Hz，1H)，6.82(d，J＝8.3Hz，1H)，4.69(s，2H)，4.27(q，2H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H)；质量：(m/z)：281.1，283.1(M+Na)⁺.

使用上述实验方法，制备以下中间体I-13至I-17。

中间体13：2-溴-6-氟苯氧基乙酸乙酯(I-13)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.34(d，J＝7.7Hz，1H)，7.15-7.05(m，1H)，7.0-6.91(m，1H)，4.72(s，2H)，4.28(q，2H)，1.30(t，J＝7.0Hz，3H)；质量(m/z)：299.0，301.1(M+Na)⁺.

中间体14：3-溴吡啶-2-基氧基乙酸乙酯(I-14)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.36(d，J＝1.0Hz，1H)，7.95(d，J＝6.3Hz，1H)，7.15-7.05(m，1H)，4.94(s，2H)，4.25(q，2H)，1.29(t，J＝6.9Hz，3H)；质量(m/z)：260.1，262.1(M+H)⁺.

中间体15：2-氟吡啶-3-基氧基乙酸乙酯(I-15)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.82(d，J＝3.6Hz，1H)，7.29(d，J＝10.8Hz，1H)，7.12(t，J＝2.8Hz，1H)，4.71(s，2H)，4.24(q，2H)，1.27(t，J＝7.1Hz，3H)；质量(m/z)：200.2(M+H)⁺.

中间体16：2-溴-3-氟苯氧基乙酸乙酯(I-16)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.25-7.0(m，1H)，6.81(t，J＝8.0Hz，1H)，6.60(d，J＝8.3Hz，1H)，4.71(s，2H)，4.27(q，2H)，1.30(t，J＝6.9Hz，3H)；质量(m/z)：277.0，279.0(M+H)⁺.

中间体17：2-溴-3，6-二氟苯氧基乙酸乙酯(I-17)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.10-7.0(m，1H)，6.90-6.82(m，1H)，4.78(s，2H)，4.27(q，2H)，1.30(t，J＝6.9Hz，3H)；质量(m/z)：294.0，296.0(M+H)⁺.

中间体18：2-溴苯基硫烷基乙酸乙酯(I-18)

经15分钟的时间向在RT下的乙腈(210mL)中的2-溴苯硫酚(10.0g，52.9mmol)、Cs₂CO₃(25.8g，79.4mmol)溶液中添加溴乙酸乙酯(7.0mL，63.5mmol)。将反应混合物在RT下搅拌15分钟，并将反应混合物回流(80℃至85℃)16小时，直到起始苯酚如TLC所示被消耗。将反应混合物冷却至RT，通过硅藻土垫过滤并将滤液在真空下浓缩至干燥。将残余物溶于乙酸乙酯中，用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在减压下蒸发溶剂以获得标题化合物。

产量：13.8g；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.61(d，J＝5.5Hz，1H)，7.42(d，J＝7.9Hz，1H)，7.30(t，J＝7.2Hz，1H)，7.10(t，J＝8.0Hz，1H)，4.21(q，2H)，3.70(s，2H)，1.26(t，J＝7.1Hz，3H)；质量(m/z)：275.0，277.1(M+H)⁺.

中间体19：2-(2-溴苯氧基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-19)

经0.5小时的时间向在0℃下冷却的甲酸甲酯(105.3mL)中的中间体I-12(18.02g，69.5mmol)搅拌溶液中缓慢添加氢化钠的混悬液(11.1g，278.0mmol，60％油分散体)并搅拌4小时。将反应混合物用冰水(400mL)处理并分离水层。水层用1N HCl酸化，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用水、饱和NaHCO₃溶液、最后用盐水洗涤。有机层经无水Na₂SO₄干燥并在减压下除去溶剂以获得作为具有足够纯度的异构体的混合物的粗产物(18.9g)，其用于接下来的反应而无需另外纯化。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ11.1(bs，1H)，7.64(s，1H)，7.58(d，J＝7.7Hz，1H)，7.25(t，J＝7.8Hz，1H)，6.90(t，J＝7.5Hz，1H)，6.82(d，J＝8.2Hz，1H)，3.61(s，3H)；质量(m/z)：271.2，273.1(M-H)⁺.

使用上述反应方法，使用中间体I-13至I-17制备以下中间体I-20至I-24。

中间体20：2-(2-溴-6-氟苯氧基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-20)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.45-7.32(m，2H)，7.18-6.95(m，2H)，3.68(s，3H)；质量(m/z)：313.0，315.1(M+Na)⁺.

中间体21：2-(3-溴吡啶-2-基氧基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-21)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.04(d，J＝1.2Hz，1H)，7.05(d，J＝6.5Hz，1H)，6.84(t，1H)，3.78(s，3H)；质量(m/z)：246.0，248.1(M+H)⁺.

中间体22：2-(2-氟吡啶-3-基氧基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-22)

质量(m/z)：213.2(M+H)⁺.

中间体23：2-(2-溴-3-氟苯氧基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-23)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.26-7.15(m，2H)，6.90-6.80(m，1H)，6.70-6.60(m，1H)，3.82(s，3H)；质量(m/z)：289.0，291.2(M-H)⁺.

中间体24：2-(2-溴-3，6-二氟苯氧基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-24)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.15-6.80(m，3H)，3.90(s，3H)；质量(m/z)：307.0，309.0(M-H)⁺.

中间体25：2-(2-溴苯基硫烷基)-3-羟基丙烯酸甲酯(I-25)

经0.5小时的时间向在0℃下冷却的甲酸甲酯(88.1mL)中的中间体I-18(16.0g，58.2mmol)搅拌溶液中缓慢地添加氢化钠的混悬液(9.3g，232.7mmol，60％油分散体)。将反应混合物搅拌4小时，用冰水(400mL)处理。分离两层。水层用1N HCI酸化，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，依次用水、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。有机层经无水Na₂SO₄干燥并在减压下除去溶剂以获得标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ12.49(bs，1H)，7.73(s，1H)，7.51(d，J＝7.7Hz，1H)，7.23(d，J＝7.2Hz，1H)，7.01(t，J＝7.3Hz，1H)，6.95(d，J＝7.6Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.62(bs，1H)；质量(m/z)：287.1，289.1(M+H)⁺.

中间体26：4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸甲酯(I-26)

向在MeOH(18mL)中的中间体I-19(1.2g，4.4mmol)溶液中添加2-氟苄胺(0.55g，4.4mmol)并在环境温度下搅拌12小时。将挥发物蒸发至干燥。将粗残余物(1.79g)重新溶解于DMF(4.4mL)中并添加CuI(175.6mg，0.92mmol)和Cs₂CO₃(3.1g，9.2mmol)。使反应混合物在85℃至90℃下剧烈搅拌6小时。在反应完成后，将混合物冷却至室温，并用水稀释，将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用10％的HCl溶液和盐水洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。将溶剂在减压下蒸发以获得标题化合物。

产量：1.48g；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.46(t，J＝7.7Hz，1H)，7.40-7.25(m，1H)，7.20-7.0(m，3H)，6.70-6.60(m，2H)，6.58(s，1H)，6.24(d，J＝7.3Hz，1H)，4.45(s，2H)，3.75(s，3H)；质量(m/z)：300.2(M+H)⁺.

使用上述反应方法，通过使中间体I-20至I-24与合适的苄基胺类反应制备以下中间体I-27至I-31。

中间体27：8-氟-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸甲酯(I-27)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.45(t，J＝7.3Hz，1H)，7.36-7.27(m，1H)，7.16(s，1H)，7.09(t，J＝8.9Hz，1H)，6.60-6.50(m，3H)，6.04(d，J＝7.5Hz，1H)，4.45(s，2H)，3.77(s，3H)；质量(m/z)：318.2(M+H)⁺.

中间体28：1-苄基-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]嗪-3-羧酸甲酯(I-28)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.54(d，J＝4.2Hz，1H)，7.40-7.27(m，5H)，6.73(d，J＝7.5Hz，1H)，6.60-6.50(m，2H)，4.64(s，2H)，3.72(s，3H)；质量(m/z)：283.2(M+H)⁺.

中间体29：4-(2-氟苄基)-4H-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-2-羧酸甲酯(I-29)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.54(d，J＝4.9Hz，1H)，7.47(t，J＝7.5Hz，1H)，7.38(t，J＝7.0Hz，1H)，7.35-7.20(m，1H)，7.10-7.0(m，1H)，6.72(d，J＝7.4Hz，1H)，6.61(s，1H)，6.54(dd，J＝5.1，7.5，Hz，1H)，4.68(s，2H)，3.73(s，3H)；质量(m/z)：301.1(M+H)⁺.

中间体30：5-氟-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸甲酯(I-30)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.49(t，J＝7.3Hz，1H)，7.17(t，J＝6.0Hz，1H)，7.08(t，J＝9.4Hz，1H)，6.70-6.62(m，1H)，6.55-6.40(m，3H)，4.64(s，2H)，3.77(s，3H)；质量(m/z)：318.3(M+H)⁺.

中间体31：5，8-二氟-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸甲酯(I-31)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.47(t，J＝7.2Hz，1H)，7.36-7.29(m，1H)，7.15(t，J＝7.4Hz，1H)，7.09(t，J＝9.4Hz，1H)，6.56-6.38(m，3H)，4.64(s，2H)，3.76(s，3H)；质量(m/z)：336.2(M+H)⁺.

中间体32：4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-羧酸甲酯(I-32)

向在MeOH(11mL)中的中间体I-25(0.8g，2.77mmol)溶液中添加2，3-二氟苄胺(I-1，0.4g，2.77mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌12小时。将挥发物蒸发至干燥。将粗残余物(1.21g)重新溶解于DMF(5.4mL)中并向溶液添加CuI(55.6mg，0.29mmol)和K₃PO₄(1.24g，5.86mmol)。使反应混合物在100℃至110℃下剧烈搅拌16小时。在反应完成后，将混合物冷却至室温并用水稀释，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用10％的HCl溶液和盐水洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。在减压下蒸发溶剂，并将如此获得的粗产物通过硅胶柱色谱法纯化以获得标题化合物。

产量：0.55g；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.20(t，J＝5.9Hz，1H)，7.15(s，1H)，7.14-7.08(m，2H)，6.90-6.78(m，3H)，6.35(d，J＝7.5Hz，1H)，4.70(s，2H)，3.74(s，3H)；质量(m/z)：333.0(M+H)⁺.

中间体33：4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸(I-33)

向在1∶1的甲醇和水的混合物(24mL)中的中间体I-26(1.45g，4.86mmol)搅拌溶液中添加NaOH(0.39g，9.7mmol)。将反应混合物回流(85℃至90℃)4小时。将反应物质冷却至RT后，在减压下蒸发挥发物至其体积的一半。将所获得的反应物质用乙醚洗涤一次，冷却至5℃，用1N HCl酸化并用二氯甲烷萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，在减压下蒸发溶剂以获得标题化合物。

产量：0.4g；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ 12.1(bs，1H)，7.50(t，J＝7.8Hz，1H)，7.36(dd，J＝6.7，13.8Hz，1H)，7.25(d，J＝9.7Hz，1H)，7.21(d，J＝6.8Hz，1H)，6.88(s，1H)，6.70-6.62(m，2H)，6.50-6.42(m，1H)，6.42-6.36(m，1H)，4.61(s，2H)；质量(m/z)：286.2(M+H)⁺.

使用上述反应方法，通过使用中间体I-27至I-31制备以下中间体I-34至I-38。

中间体34：8-氟-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸(I-34)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.33(bs，1H)，7.53(t，J＝7.6Hz，1H)，7.42-7.33(m，1H)，7.30-7.20(m，2H)，6.92(s，1H)，6.70-6.62(m，2H)，6.28-6.22(m，1H)，4.64(s，2H)；质量(m/z)：304.2(M+H)⁺.

中间体35：1-苄基-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]嗪-3-羧酸(I-35)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.33(bs，1H)，7.52(t，J＝4.2Hz，1H)，7.42-7.30(m，4H)，7.28(t，J＝6.7Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.78(d，J＝7.0Hz，1H)，6.64(dd，J＝5.0，7.7Hz，1H)，4.66(s，2H)；质量(m/z)：269.2(M+H)⁺.

中间体36：4-(2-氟苄基)-4H-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-2-羧酸(I-36)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.55(d，J＝5.2Hz，1H)，7.49(t，J＝7.4Hz，1H)，7.34-7.26(m，1H)，7.18-7.03(m，2H)，6.75(s，1H)，6.71(d，J＝8.2Hz，1H)，6.58(dd，J＝5.1，7.6Hz，1H)，4.70(s，2H)；质量(m/z)：287.2(M+H)⁺.

中间体37：5-氟-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸(I-37)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.42(bs，1H)，7.53(t，J＝7.4Hz，1H)，7.42-7.32(m，1H)，7.28-7.20(m，2H)，6.82(s，1H)，6.80-6.70(m，1H)，6.68-6.58(m，1H)，6.38(d，J＝7.9Hz，1H)，4.72(s，2H)；质量(m/z)：304.3(M+H)⁺.

中间体38：5，8-二氟-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸(I-38)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.45(bs，1H)，7.54(t，J＝7.2Hz，1H)，7.40-7.30(m，1H)，7.28-7.18(m，2H)，6.87(s，1H)，6.82-6.72(m，1H)，6.72-6.62(m，1H)，4.74(s，2H)；质量(m/z)：322.1(M+H)⁺.

中间体39：4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-羧酸(I-39)

向在1∶1的甲醇和水的混合物(2.8mL)中的中间体I-32(0.23g，0.69mmol)搅拌溶液中添加NaOH(55.2mg，1.4mmol)。将反应混合物回流(85℃至90℃)6小时。将反应物质冷却至RT后，在减压下蒸发挥发物至其体积的一半。将所得反应物质用乙醚洗涤，冷却至0℃至5℃，用1N HCl酸化并用二氯甲烷萃取。合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下蒸发溶剂以获得标题化合物。

产量：0.21g；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.36(bs，1H)，7.50-7.40(m，1H)，7.28(s，1H)，7.27-7.20(m，2H)，7.40-7.30(m，1H)，7.30-7.25(m，2H)，6.54(d，J＝8.0Hz，1H)，4.87(s，2H)；质量(m/z)：318.3(M-H)⁺.

制备式(I)的代表性化合物

实施例1：

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺

向在RT下的二氯甲烷(2.0mL)中的中间体I-33(100.8mg，0.35mmol)溶液中依次添加DIPEA(0.15mL，0.88mmol)、HATU(0.15g，0.39mmol)和(1S，2S)2-氨基环己醇盐酸盐(53.5mg，0.35mmol)同时剧烈搅拌。在添加完成后，将反应混合物搅拌16小时，然后用二氯甲烷稀释。将反应物质用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在真空下蒸发溶剂。将获得的粗物质在硅胶柱上纯化以获得标题化合物。

产量：106.4mg；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.46(t，J＝7.4Hz，1H)，7.29(t，J＝6.2Hz，1H)，7.17-7.05(m，2H)，6.72-6.62(m，2H)，6.57(s，1H)，6.56-6.49(m，1H)，6.30-6.23(m，1H)，5.99(d，J＝6.7Hz，1H)，4.46(s，2H)，3.83(t，J＝3.7Hz，1H)，3.76-3.65(m，1H)，3.45-3.36(m，1H)，2.15-2.06(m，1H)，2.05-1.95(m，1H)，1.82-1.70(m，2H)，1.42-1.18(m，4H)；质量(m/z)：383.4(M+H)⁺.

实施例2至72：按照以上给出的实施例1中所述的实验方法，通过一些非关键的改变使用合适的酸(例如I-33至I-38使用合适的R¹NH₂)制备实施例2至72的化合物。

实施例73：

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐

步骤1：制备N-(1-叔丁氧羰基-3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺

按照实施例1的制备中所述的方法，在HATU的存在下，用4-氨基-3-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯处理4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-羧酸(I-34)以获得标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.44(t，J＝7.2Hz，1H)，7.36-7.28(m，1H)，7.14(t，J＝7.5Hz，1H)，7.08(t，J＝8.9Hz，1H)，6.67-6.50(m，3H)，6.49(d，J＝8.2Hz，1H)，6.05(d，J＝7.9Hz、1H)，4.74(d，J＝52.0Hz，1H)，4.46(s，2H)，4，38-4.10(m，3H)，3.10-2.80(m，2H)，1.91-1.72(m，2H)，1.47(s，9H)；质量(m/z)：504.4(M+H)⁺.

步骤2：制备N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐

向上述步骤1中获得的化合物(50.0mg，0.1mmol)在0℃下冷却的IPA(1.0mL)中的搅拌溶液中添加在IPA(0.5mL)中的3N HCl的溶液。将反应混合物搅拌1小时，并在减压下除去挥发物以获得物质，将其用乙醚洗涤数次以获得标题化合物。

产量：43mg；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.22(bs，1H)，8.63(bs，1H)，7.51(t，J＝7.2Hz，1H)，7.42-7.36(m，1H)，7.32-7.18(m，2H)，7.12(d，J＝7.6Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.78-6.62(m，2H)，6.28(d，J＝7.3Hz，1H)，5.03(d，J＝47.6Hz，1H)，4.62(s，2H)，4.50-4.40(m，1H)，4.40-4.15(m，2H)，3.20-3.0(m，2H)，2.10-1.96(m，1H)，1.90-1.80(m，1H)；质量(m/z)：404.2(M+H)⁺.

实施例74：

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐

步骤1：制备N-(1-叔丁氧羰基-3-氟哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺

使用实施例73的步骤1方法制备该化合物。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.28-7.20(m，1H)，7.20-7.06(m，2H)，6.68-6.50(m，3H)，6.34(d，J＝8.3Hz，1H)，6.02(d，J＝7.9Hz，1H)，4.73(d，J＝49.8Hz，1H)，4.48(s，2H)，4.40-4.10(m，3H)，3.12-2.78(m，2H)，1.92-1.78(m，2H)，1.46(s，9H)；质量(m/z)：522.3(M+H）⁺.

步骤2：制备N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐

使用实施例73的步骤2方法制备该化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.16(bs，1H)，8.62(bs，1H)，7.50-7.10(m，3H)，6.81(s，1H)，6.80-6.70(m，2H)，6.68-6.40(m，1H)，6.29(d，J＝7.1Hz，1H)，5.03(d，J＝48.3Hz，1H)，4.71(s，2H)，4.35-4.10(m，2H)，3.20-3.0(m，2H)，2.10-1.98(m，1H)，1.90-1.80(m，1H)；质量(m/z)：422.3(M+H)⁺.

实施例75：

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1：制备N-(1-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺

使用实施例73的步骤1方法制备标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.25-7.16(m，1H)，7.16-7.05(m，2H)，6.70-6.50(m，3H)，6.12-6.02(m，2H)，4.49(s，2H)，4.40-4.10(m，3H)，3.88-3.78(m，1H)，3.50-3.38(m，1H)，2.80-2.70(m，1H)，2.70-2.55(m，1H)，1.98-1.90(m，1H)，1.60-1.50(m，1H)，1.45(s，9H)；质量(m/z)：520.2(M+H)⁺.

步骤2：制备N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐

向在0℃下冷却的DCM(0.7mL)中的在步骤1中获得的化合物(75.0mg，0.14mmol)搅拌溶液中添加三氟乙酸(0.7mL)。将反应混合物在RT下搅拌1小时，并在减压下除去挥发物以获得粗物质，将其用乙醚研磨数次以获得标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.64(bs，2H)，7.50-7.10(m，3H)，6.80-6.70(m，3H)，6，35-6.25(m，1H)，5.60-5.50(m，1H)，4.70(s，2H)，3.90-3.70(m，2H)，3.60-3.20(m，3H)，3.20-3.0(m，2H)，2.10-1.98(m，1H)，1.90-1.80(m，1H)；质量(m/z)：420.3(M+H)⁺.

实施例76：

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1：制备N-(1-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺

使用实施例73的步骤1方法制备标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7，50-7.40(m，1H)，7.20-7.20(m，1H)，7.18-7.02(m，2H)，6.72-6.62(m，2H)，6.59(s，1H)，6.55-6.48(m，1H)，6.32-6.25(m，1H)，6.02(d，J＝5.9Hz，1H)，4.46(s，2H)，4.40-4.10(m，3H)，3.83-3.75(m，1H)，3.50-3.40(m，1H)，2.80-2.70(m，1H)，2.70-2.57(m，1H)，1.98-1.90(m，1H)，1.60-1.50(m，1H)，1.45(s，9H)；质量(m/z)：484.3(M+H)⁺.

步骤2：制备N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺三氟乙酸盐

使用实施例75的步骤2方法制备标题化合物。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.61(bs，2H)，7.70-7.10(m，5H)，6.80-6.60(m，3H)，6.50-6.40(m，1H)，5.50(d，J＝3.9Hz，1H)，4.61(s，2H)，3.90-3.70(m，2H)，3.40-3.25(m，3H)，3.10-2.90(m，2H)，2.88-1.78(m，1H)，1.70-1.60(m，1H)；质量(m/z)：384.3(M+H)⁺.

实施例77至80：按照上面给出的实施例75和76中所述的实验方法制备实施例77至80的化合物，进行了一些非关键的改变。

实施例81：

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺

向在0℃下冷却的乙酸乙酯(2.0mL)中的N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺盐酸盐(实施例73，20.0mg，0.045mmol)搅拌溶液中添加NaOH溶液(1N，0.5mL)。将反应混合物搅拌5分钟并分离两层。将有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在减压除去溶剂以获得标题化合物。

产量：15.0mg；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.44(t，J＝7.3Hz，1H)，7.35-7.25(m，1H)，7.13(t，J＝7.4Hz，1H)，7.08(t，J＝9.4Hz，1H)，6.63-6.43(m，3H)，6.33(d，J＝8.6Hz，1H)，6.05(d，J＝7.9Hz，1H)，4.70(d，J＝50.1Hz，1H)，4.46(s，2H)，4.23-4.10(m，1H)，3.40-3.28(m，1H)，3.20-3.10(m，1H)，2.90-2.65(m，2H)，1.70-1.60(m，2H)；质量(m/z)：404.3(M+H)⁺.

实施例82至84：按照以上给出的实施例81中所述的实验方法制备实施例82至84的化合物，进行了一些非关键的改变。

实施例85：

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺

向在RT下的二氯甲烷(2.0mL)中的中间体I-39(200.8mg，0.63mmol)溶液中依次添加DIPEA(0.27mL，01.56mmol)、HATU(0.29g，0.75mmol)和(1S，2S)-2-氨基环己醇盐酸盐(94.5mg，0.63mmol)，同时剧烈搅拌。在添加完成后，将反应混合物搅拌16小时并用二氯甲烷稀释。将反应物质用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在真空下蒸发溶剂。使用硅胶柱色谱纯化获得的粗物质以获得标题化合物。

产量：210.0mg；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.39(s，1H)，7.18-7.03(m，3H)，7.03-6.91(m，3H)，6.55(d，J＝7.9Hz，1H)，6.0(d，J＝6.7Hz，1H)，4.83(s，2H)，3.77(d，J＝3.8Hz，1H)，3.80-3.67(m，1H)，3.45-3.35(m，1H)，2.17-2.08(m，1H)，2.05-1.98(m，1H)，1.82-1.72(m，2H)，1.43-1.22(m，4H)；质量(m/z)：417.3(M+H)⁺.

实施例86至92：按照上面给出的实施例85中所述的实验方法制备实施例86至92的化合物，进行了一些非关键的改变。

实施例93：

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-(2，3-二氟苄基)-1-氧代-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺

经15分钟的时间，向在RT下的1∶1的甲醇和THF混合物(1.4mL)中的实施例85的化合物(136.0mg，0.33mmol)搅拌溶液中添加在水(1.6mL)中的NaIO₄(76.5mg，0.36mmol)。将反应物质在RT下搅拌16小时，并通过硅藻土垫过滤。在减压下蒸发滤液。将粗物质溶于二氯甲烷中并用水和盐水溶液洗涤。有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下除去溶剂以获得标题化合物。

产量：115mg；

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.33(s，1H)，8.02(d，J＝7.7Hz，1H)，7.59(t，J＝7.7Hz，1H)，7.43(d，J＝7.4Hz，1H)，7.20-7.10(m，2H)，7.06-6.97(m，1H)，6.74(t，J＝6.9Hz，1H)，6.57(d，J＝6.4Hz，1H)，5.53(d，J＝17.2Hz，1H)，5.31(d，J＝17.2Hz，1H)，3.95-3.85(m，2H)，3.51-3.42(m，1H)，2.20-2.06(m，2H)，1.83-1.72(m，2H)，1.50-1.20(m，4H)；质量(m/z)：433.3(M+H)⁺.

实施例94至97：按照上面给出的实施例93中所述的实验方法制备实施例94至97的化合物，进行了一些非关键的改变。

实施例98至101：实施例98至101的化合物可以按照实施例81中所述的实验方法分别由实施例77至80容易地制备，同时进行了一些非关键的改变。

实施例98：N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺。

实施例99：N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺。

实施例100：N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2，3-二氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺。

实施例101：N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺。

实施例102：

毒蕈碱MI受体的变构效力EC₅₀值的测定：

使用表达重组人毒蕈碱M1受体和pCRE-Luc报道系统的稳定的CHO细胞系进行基于细胞的测定。该测定提供了测定化合物与GPCR的结合的基于非放射性的方法。在该具体测定中，测量了通过受体的活化或抑制调节的细胞内环AMP的水平。重组细胞携带在cAMP应答元件的控制下的萤光素酶报道基因。

使上述细胞在含有10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的Hams F12培养基中的96孔透明底白色平板上生长。在添加化合物或标准激动剂之前，使细胞经血清饥饿过夜。向细胞中添加增加浓度的测试化合物以及在OptiMEM培养基中的EC₂₀的乙酰胆碱。在37℃下在CO₂培养箱中继续孵育4小时。除去培养基，并用磷酸盐缓冲盐水洗涤细胞。裂解细胞并在发光计中测量萤光素酶活性。使用Graphpad软件将发光单位相对于化合物浓度作图。化合物的EC₅₀值被定义为在EC₂₀的乙酰胆碱的存在下刺激50％的萤光素酶活性所需的浓度。

实施例		实施例
				1	422	39	1553
2	134	40	1532
				3	1154	41	168
4	1431	42	686
				5	135	43	1625
6	1511	44	1275
				7	891	45	1578
8	2894	46	1084
				9	699	47	1316
10	1553	48	143
				11	498	51	420
12	1510	52	1354
				13	907	53	230
14	1356	54	88
				15	591	55	828
16	1347	56	1485
				17	149	57	179
18	331	58	1336
				19	120	59	1009
20	1251	61	219
				21	369	73	2370
22	353	74	2100
				23	323	75	160
24	514	76	412
				25	911	85	117
26	159	86	936
				27	1374	87	131
28	250	88	145
				29	140	89	460
30	955	90	599
				31	1000	91	141
33	1183	92	1470
				34	1517	93	906
35	1576	94	1395
				36	1545	95	1518
37	534	96	2162
				38	262	97	1060

实施例103：

物体识别任务模型

通过使用该模型估计本发明化合物的认知增强性质。

雄性Wistar大鼠(8至10周龄)用作实验动物。每个笼子里放置四只动物。实验前一天将动物保持20％禁食(food deprivation)。在整个实验中随意提供水。在温度和湿度控制的房间中将动物维持在12小时的光照/黑暗周期中。在由丙烯酸制成的旷场(openfield)中进行实验。在第1天没有任何物体的情况下，使大鼠适应单独的场地(arena)(旷场)1小时。

在熟悉(T₁)和选择(T₂)试验之前，一组12只大鼠接受载剂，另一组动物接受测试化合物或测试化合物和多奈哌齐。在熟悉阶段(T₁)期间，将大鼠单独放置在场地中3分钟，其中将两个相同的物体(a1和a2)放置在离墙10cm处。T₁后24小时，进行长期记忆测试的试验。将相同的大鼠放置在它们在T₁试验中所放置的同一个场地中。在选择阶段(T₂)期间，在存在熟悉的物体(a3)的复制品和一个新的物体(b)的情况下，使大鼠在场地中探索3分钟。在T₁和T₂试验期间，使用秒表记录对每个物体的探索(限定为嗅、舔、咀嚼或将鼻子朝向距离物体小于1cm时移动触须)。

T₁是探索熟悉物体(a1+a2)所花费的总时间。

T₂是探索熟悉物体和新物体(a3+b)所花费的总时间。

辨别指数(discriminative index)＝对新物体所花费的时间/(对新的和熟悉的物体所花费的时间)。

按照Behavioural Brain Research，1988，31，47-59中所述进行物体识别测试。

实施例18与多奈哌齐组合的作用

用测试化合物、实施例18和多奈哌齐的组合观察到的促认知作用比任一种处理更好。结果如图1和2中所示。

实施例104：

物体识别任务模型-东莨菪碱攻击

通过使用该模型估计本发明化合物的认知增强性质。

雄性Wistar大鼠(8至10周龄)用作实验动物。在每个笼子里放置四只动物。实验前一天将动物保持20％的禁食。在整个实验中随意提供水。在温度和湿度控制的房间中将动物维持在12小时的光照/黑暗周期中。在由丙烯酸制成的旷场中进行实验。在第1天没有任何物体的情况下，使大鼠适应单独的场地(旷场)1小时。

在熟悉(T₁)之前，大鼠接受载剂，或者载剂和东莨菪碱或式(I)的化合物和东莨菪碱二者。在熟悉阶段(T₁)期间，将大鼠单独放置在场地中3分钟，其中将两个相同的物体(a1和a2)放置在离墙10cm处。T₁后3分钟，进行记忆测试的试验。将相同的大鼠放置在它们在T₁试验中所放置的同一场地中。在选择阶段(T₂)期间，在存在熟悉物体(a3)的复制品和一个新的物体(b)的情况下，使大鼠在场地中探索3分钟。在T₁和T₂试验期间，使用秒表记录每个物体的探索(定义为嗅、舔、咀嚼或将鼻子朝向距离物体小于1cm时移动触须)。

T₁是探索熟悉物体(a1+a2)所花费的总时间。

T₂是探索熟悉的物体和新物体(a3+b)所花费的总时间。

辨别指数＝对新物体所花费的时间/(对新的和熟悉的物体所花费的时间)。

实施例105：

情境恐惧条件任务(contextual fear conditioning task)

实验进行了经两天的时间。在第1天，将大鼠置于操作行为室中并使其适应2分钟。大鼠接受不可避免的足底电击(无条件刺激(unconditioned stimulus，US)：0.5至0.7mA的电击3秒)。在1分钟的时间间隔后，重复电击以递送共计三次US。大鼠在训练后施用载剂或测试化合物。在训练后120分钟施用东莨菪碱(0.3mg/kg，s.c.)。

在第2天，将大鼠置于操作行为室中，并在5分钟的时间段内对总的僵硬时间(freezing time)进行评分。实施例18的测试化合物逆转了东莨菪碱诱导的记忆缺陷，结果示于图3中。

实施例106：

啮齿动物药代动力学研究

雄性Wistar大鼠(260±50g)用作实验动物。将动物单独放置在聚丙烯笼中。研究前两天，将雄性Wistar大鼠用异氟烷麻醉以用于颈静脉导管的手术处置。将大鼠随机分为经口(3mg/kg)和静脉内(1mg/kg)给药(n＝3/组)，在经口给药(p.o.)之前禁食过夜。然而，对分配为进行静脉内(i.v.)给药的大鼠随意提供食物和水。

在预先确定的时间点，通过颈静脉收集血液并补充等体积的生理盐水。将收集的血液转移至含有10μL肝素作为抗凝剂的经标记的eppendorf管中。通常在以下时间点收集血液样品：给药后0.08、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时。将血液在4000rpm下离心10分钟。分离血浆并在-80℃下冷冻储存直至分析。使用合适的提取技术，通过合格的LC-MS/MS方法在血浆中对测试化合物的浓度定量。在血浆中在约1ng/mL至1000ng/mL的校准范围内对测试化合物定量。使用该批次中的校准样品和分布在该批次中的质量控制样品分析研究样品。

使用Phoenix WinNonlin6.0.2或6.0.3版软件包，使用标准非隔室模型，通过非隔室模型计算药代动力学参数：C_max、T_max、AUC_t、T_1/2、清除率、Vz和生物利用度。

实施例107：

啮齿动物脑渗透研究

雄性Wistar大鼠(260±40g)用作实验动物。在每个笼子里放置三只动物。在整个实验过程中随意给予动物水和食物，并维持在12小时光照/黑暗周期中。在大鼠中以不连续的方式测定脑渗透。在给药日的前一天，使雄性Wistar大鼠适应环境并根据其重量随机分组。在每个时间点(0.50、1和2小时)，使用n＝3只动物。

将测试化合物适当地预配制并以3mg/kg(游离碱当量)经口施用。通过使用异氟烷麻醉通过心脏穿刺取出血液样品。处死动物以收集脑组织。分离血浆并将脑样品匀浆并在-20℃下冷冻储存直至分析。使用LC-MS/MS方法测定血浆和脑中测试化合物的浓度。

使用合适的提取技术通过合格的LC-MS/MS方法在血浆和脑匀浆中定量测试化合物。在血浆和脑匀浆中在1ng/mL至500ng/mL的校准范围内对测试化合物定量。使用该批次中的校准样品和分布在该批次中的质量控制样品分析研究样品。计算脑-血浆比例的程度(C_b/C_p)。

实施例108：

皮质中可溶性淀粉样前体蛋白α(soluble amyloid precursor proteinα，sAPPα)水平的调节

除了为阿尔茨海默病中的认知缺陷提供对症治疗(symptomatic treatment)之外，M1受体的活化在AD患者中还具有疾病改善的作用。已经证明M1受体的正变构调节剂在体外增加了sAPPα的产生，表明通过非淀粉样途径的淀粉样前体蛋白的加工。

实验方法：

大鼠脑中皮质sAPPα水平的估计

将雄性Wistar大鼠(250±40g)随机分成不同的处理组(n＝8组)。对照组的大鼠经腹膜内(i.p.)施用载剂(99.75％的0.25％HEC HHX+0.25％吐温80)。来自处理组的大鼠接受单次腹膜内注射测试化合物(剂量体积2mL/kg)。在施用测试化合物后60分钟，通过颈椎脱臼处死大鼠。快速分离脑并在-20℃下解剖皮质。将皮质立即保存在干冰上并称重，然后储存于-80℃直至使用酶联免疫吸附测定(ELISA)对sAPPα定量。

小鼠脑中皮质sAPPα水平的估计

将雄性C57BL/6J小鼠(25±5g)随机分成(n＝8组)5组。对照组小鼠经腹膜内(i.p.)施用载剂(99.75％的0.25％HEC HHX+0.25％吐温80)，处理组的小鼠接受单次腹膜内注射实施例18(剂量体积10mL/kg)。在施用测试化合物后60分钟，通过颈椎脱臼处死小鼠。快速分离脑并在-20℃下解剖皮质。将皮质立即保存在干冰上并称重，然后储存于-80℃直至使用酶联免疫吸附测定(ELISA)对sAPPα定量。

样品制备：

1.在使用用于组织处理的缓冲液之前，向Tris缓冲盐水(Tris Buffer Saline，TBS)中添加蛋白酶抑制剂混合物片剂(complete mini，Make-Roche；1片8mL)。

2.将皮质组织解冻并在5倍体积的TBS中匀浆，并将溶液在4℃下以15,000rpm离心90分钟。

3.弃去上清液并在5倍体积的TBS中匀浆。将样品在4℃下以15,000rpm离心30分钟。

4.弃去上清液，并用10倍体积的6M胍-HCl(在50mM Tris缓冲液中，pH：7.6)超声沉淀。超声重复四次，每次持续5秒。

5.将所得混合物在室温下孵育30分钟，并在4℃下以15,000rpm离心30分钟。上清液用EIA缓冲液稀释100倍，然后添加到预先包被的ELISA板中。

通过ELISA试剂盒测量sAPPα：

为了研究测试化合物的急性处理对sAPPα水平的作用，通过采用ELISA测定，在从经处理的和未经处理的大鼠的皮质中获得的匀浆中测量该蛋白质的表达。按照ELISA试剂盒手册(小鼠/大鼠sAPPα ELISA，目录号：JP27419，Immuno-Biological Laboratories，Hamburg，Germany)中所述进行整个过程。

统计学分析：

使用Graph Pad Prism(第4版)进行统计学分析。结果表示为以对照值(用载剂处理的大鼠)的百分比表示的sAPPα的平均值±SEM水平。使用单因素方差分析(One-WayANOVA)，随后进行Dunnett′s事后检验评估处理后的统计学显著性，并将显著性水平设定为低于0.05的p值。

参考文献：

Neurotherapeutics，2008，5，433-442

Current Alzheimer Research，2009，6，112-117

The Journal of Neuroscience，2009，29，14271-14286

Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，2003，305，864-871

结果：

处理后60分钟后，测试化合物实施例18产生了小鼠脑中皮质sAPPα水平的显著提高，在腹膜内10mg/kg剂量时观察到平均提高38％，结果示于图4中。类似地，实施例18产生了大鼠脑皮质sAPPα水平的剂量依赖性增加，在腹膜内10mg/kg剂量时观察到的平均最大增加为26％，结果示于图5中。

实施例109：

额叶皮质中脑血流量的调节：

使用大鼠估计测试化合物对调节脑血流量的作用。

使大鼠适应实验室环境至少7天。将大鼠(300g至350g)以四只一组放置在受控环境(温度＝21±3℃，湿度＝30-70％)中，并保持在12小时光照/黑暗周期中，早上07：00开始光照。随意提供食物和水。

将大鼠用12％氨基甲酸乙酯(i.p.)麻醉。通过加热垫和直肠温度探头将动物的核心体温保持在37℃。在后肢的腹侧切开一个小切口，用PE10管对股静脉插管进行药物施加。然后将动物置于立体定位框架中，并切开中线切口以暴露颅骨。在额叶皮质上方(立体定位坐标为前囟(bregma)前1mm以及前囟侧方4mm)钻一个钻孔。通过与受控气体供应器连接的立体定位装置的鼻锥以200mL/分钟的流量供应氧气。将激光多普勒探针(AD InstrumentsInc)置于孔上以监测脑血流量。激光多普勒探针与计算机化数据采集系统(PowerLab 16/30，AD Instruments Inc)连接。在脑血流稳定30分钟后，经静脉内施用载剂或测试化合物。进一步收集脑血流量90分钟。将获得的数据计算为相对于静息基础血流量水平的增加百分比。使用单因素方差分析然后通过Bonferroni事后检验将测试化合物数据与对照组进行比较。

参考文献：

Psychopharmacology(Berl).2013，225，21-30.

结果：

如图6中所示，实施例18显著增加脑血流量。

Claims

1.式(I)的化合物，或其立体异构体或可药用盐

其中：

A¹和A²各自独立地表示CH、CF或N；

W是O或S；

R¹是

R²是

其中＊表示连接点；

R³是OH、F、NH₂或H；

R⁴每次出现时独立地选自：卤素、-O-CH₃；-S-CH₃、-N(CH₃)₂、-CH₃、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-OH、-CN、苯基、吡啶基和氢；其中苯基和吡啶基任选地被一个或更多个选自卤素或CH₃的取代基所取代；

X是CH₂、O或NH；

a是0或1；并且b是1或2。

2.如权利要求1所述的式(I)的化合物，其中：

W是O；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

3.如权利要求1所述的式(I)的化合物，其中：

W是S；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

4.如权利要求1所述的式(I)的化合物，其中：

W是O；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

以及

X是CH₂。

5.如权利要求1所述的式(I)的化合物，其中：

W是S；

A¹和A²是CH；

R¹是

R²是

以及

X是CH₂。

6.一种化合物，其选自：

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(3-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基-2-甲基丙基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(2-羟基甲基苯基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-氟哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-8-氟-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(2-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{4-氟苄基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(顺式-1S，2S-2-羟基环己基)-4-{吡啶-4-基甲基}-4H-苯并[1，4]噻嗪-2-甲酰胺；

N-(3-羟基哌啶-4-基)-4-(4-氟苄基)-4H-苯并[1，4]嗪-2-甲酰胺；

或其可药用盐。

7.如权利要求6所述的化合物，其中所述可药用盐选自：

8.药物组合物，其包含可药用赋形剂或载体，以及如权利要求1至7中任一项所述的化合物。

9.如权利要求8所述的药物组合物在制备用于治疗通过毒蕈碱M1受体介导的临床病症之药物中的用途，所述病症选自：阿尔茨海默病、精神分裂症、认知障碍、疼痛或睡眠障碍。

10.如权利要求1至7中任一项所述的化合物在制备用于治疗与毒蕈碱M1受体相关的病症的药物中的用途。

11.如权利要求10所述的用途，其中所述与毒蕈碱M1受体相关的病症选自：阿尔茨海默病、精神分裂症、认知障碍、疼痛或睡眠障碍。