[go: up one dir, main page]

RS55113B1 - Aril-ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja - Google Patents

Aril-ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja

Info

Publication number
RS55113B1
RS55113B1 RS20160706A RSP20160706A RS55113B1 RS 55113 B1 RS55113 B1 RS 55113B1 RS 20160706 A RS20160706 A RS 20160706A RS P20160706 A RSP20160706 A RS P20160706A RS 55113 B1 RS55113 B1 RS 55113B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
alkyl
optionally substituted
compound
membered heterocycloalkyl
alkylamino
Prior art date
Application number
RS20160706A
Other languages
English (en)
Inventor
Kevin Wayne Kuntz
Richard Chesworth
Kenneth William Duncan
Heike Keilhack
Natalie Warholic
Christine Klaus
Masashi Seki
Syuji Shirotori
Satoshi Kawano
Timothy James Nelson Wigle
Sarah Kathleen Knutson
Original Assignee
Epizyme Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46045109&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS55113(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Epizyme Inc filed Critical Epizyme Inc
Publication of RS55113B1 publication Critical patent/RS55113B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/443—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4433—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/52—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C229/54—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81—Amides; Imides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D309/08—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/08—Bridged systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

SLIČNE PREDMETNE PRIJAVE
Ova predmetna prijava zahteva prioritet nad, i korist od, U.S. provizorne prijave br. 61/474,821. podnesene 13. aprila 2011., i 61/499, 595, podnesene 21 juna 20i 1.
POZADINA PRONALASKA
U eukariotskim ćelijama. DNA je spakovana uz pomoć histona kako bi nastao hromatin. Promene u sređenoj strukturi hromatina mogu da uzrokuju promene u transkripciji odgovarajućih gena. Promena hromatinske strukture (pa tako i transkripcije) je posredovana kovalentnim modifikacijama histona, najčešće na njihovim N-terminalnim repovima. Ove modifikacije se Često ponašaju kao epigenetičke promene zbog toga šta mogu da uzrokuju nasledne promene u genskoj ekspresiji, ali ne zahvataju sekvencu same DNA. Kovalentne modifikacije (na primer, metilacija, acetilacija, fosforilacija. i ubikvttacija) bočnih lanaca amino-kiselina su encimski posredovane. Selektivna adicija metilnih grupa specifičnim amino-kiselinama u histonimaje kontrolisana detovanjem jedinstvene porodice encima koji su poznati kao histonske metiltransferaze (HMT).
Usklađeno delovanje biohemijskih sistema koji su odgovorni za transkripcijsku regulaciju mora da bude tesno kontrolisana kako bi se ćelijski rast i diferencijacija odvijali optimalno. Bolesno stanje nastupa kada se pomenuta kontrola naruši zbog aberantne ekspresije i/ili aktivnosti encima koji su odgovorni za DNA i histonsku modifikaciju. Kod ljudskih tumora, na primer, sve više podataka ukazuje na to da pogrešno regulisana epigenetička encimska aktivnost doprinosi nekontrolisanoj proliteraciji ćelija koja je povezana sa rakom kao i sa drugim fenotipima koji su povezani sa rakom poput pojačane migracije ćelija i njihove invazije. Osim raka, sve više podataka ukazuje na ulogu epigeneličkih encima u brojnim drugim ljudskim bolestima, uključujući metaboličke bolesti (poput dijabetesa), upalne bolesti (poput Crohn-ove bolesti), neurodegenerativne bolesti (poput Alzheimer-ove bolesti) i kardiovaskularne bolesti. Prema tome, selektivna modulacija aberantnog đelovanja epigenetičkih encima može da bude potencijalno korisno u tretmanu niza bolesti.
Belančevine iz polikomb grupe (PcG) i tritoraks grupe (trxG) su deo sistema ćelijske memorije. Vidi. na primer, Francis et al. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2:409-21 i Simon et al. (2002) Curr Opin Genet Dev 12:210-8. Uopšteno. PcG belančevine su transkripcijski represori koji održavaju "isključeno stanje", a trxG belančevine su transkripcijski aktivatori koji održavaju "uključeno stanje". Zbog toga šta članovi PcG i trxG grupa poseduju sopstvenu aktivnost histonske metiltransteraze (HMTaza). PcG i trxG belančevine mogu da učestvuju u ćelijskoj memoriji preko metilacije osnovnih histona. Vidi. na primer. Beisel et al. (2002) Nature 419:857-62; Cao et al. (2002) Science 298:1039-43: Czermin et al. (2002) Cell 111:185-96: Kuzmichev et al. (2002) Genes Dev 16:2893-905; Milne et al. (2002) Mol Cell 10:1107-17: Muller et al. (2002) Cell 111:197-208; i Nakamura et al. (2002) Mol Cell 10:1119-28.
Biohemijska i genetička istraživanja su pokazala da PcG belančevine izDrosophiludeluju u najmanje dva različita proteinska kompleksa, polikomb represivni kompleks 1 (PRC 1) i ESC-E(Z) kompleks (takođe poznat kao polikomb represivni kompleks 2 (PRC2)). Otte et al. (2003) Curr Opin Genet Dev 13:448-54. Istraživanja naDrosophilusu pokazala da ESC-E(Z)/EED-EZH2 (tj., PRC2) kompleksi poseduju sopstvenu aktivnost histonske metiltransteraze. Mada su kompozicije komplekasa izolovanih iz različitih grupa blago različite, uopšteno pomenuti sadrže EED. EZH2, SUZI2, i RbAp48 ili njihove homologe izDrosophilu.Međutim, rekonstituisani kompleks koji sadrži samo EED, EZH2, i SUZI2 zadržava aktivnost histonske metiltransteraze za lizin 27 iz histona H3. US patent 7,563.589.
Od različitih belančevina koje čine PRC2 komplekse. EZH2 (skraćenica od engleskog naziva:Enhancer of Žeste Hornolog 2)je katalitička podjeđinica. Katalitičko mesto u EZ112 se nalazi u SET domenu, visoko konzervisan motiv (nazvan poSu( vur) 3- 9, Enhancer of Žeste, Tritoraks)koji se nalazi u nekoliko belančevina povezanih sa hromatinom, uključujući i članove tritoraks grupe i polikomb grupe. SET domen je karakteristika svih poznatih histonskih lizinskih metiltransferaza osim H3-K79 metiltransteraze DOTI.
Osim utišavanja Hox gena, PRC2-posredovana histonska H3-K27 metilacija takode je uključena i u X-inaktivisanju. Plath et al. (2003) Science 300:131-5: Silva et al. (2003) Dev
Cell 4:481-95. Nakupljanje PRC2 kompleksa na Xi i naknadna trimetilacija histona H3-K27 nastupa tokom inicijalne faze X-inaktivisanja i zavisi o Xist RNA. Nadalje. EZH2 i njena aktivnost histon H3-K27 metiltransteraze diferencijalno označavaju pluripotentne epiblast-ćelije i diferencirani trofektoderm. a u skladu sa ulogom EZI12 u održavanju epigenetičkih modifikacijskih obrazaca pluripotentnih epiblast-ćelija. Cre-posredovana delacija EZH2 dovodi do gubitka metilacije histona H3-K27 u pomenutim ćelijama. Erhardt et al. (2003)Developmer. l130:4235-48). Dodatno, istraživanja na tkivima tumorskih ćelijskih linija prostate i dojke su otkrila snažnu korelaciju između nivoa EZH2 i SUZI2 i invazivnosti pomenutih tumora, koje pokazuje da poremećeno đelovanje PRC2 kompleksa može da doprinosi razvoju raka. Bracken et al. (2003) EMBO J22:5323-35. Kirmizis et al. (2003) Mol CancerTher2:113-21;Kleeretal.(2003) ProcNatl Acad Sci USA 100:11606-11: Varambally et al. (2002) Nature 419:624-9.
Nedavno, somatske mutacije tirozina 641 (T641C. Y641F. Y641N. Y641S i Y641H. ponekad označene kao Y646C. Y646F, Y646N. Y646S i Y646H) iz EZH2 su povezane sa folikularnim limfomom (FL) i podtipom difuznog B-velikoćelijskog limfoma tj. limfomom B-ćelija iz germinalnog centra (GCB). Morin et al. (2010) Nat Genet 42:181-5. U svim slučajevima, mutirani EZH2 gen je bio heterozigotan, a ekspresija alela divljeg tipa i mutiranog alela je detektovana u mutiranim primercima uz pomoć sekvenciranja transkriptoma. Takođe je bilo pokazano da sve mutirane forme EZH2 mogu da se ugrade u multi-proteinski PRC2 kompleks, pri čemu nastalim kompleksima nedostaje sposobnost da kataiizuju metilaciju H3-K.27 ekvivalentnog ostatka u peptidnom supstratu. Tako. zaključeno je da su promene u Tyr641 iz EZH2, koje su povezane se bolešću, nastupile kao posledica gubitka funkcije koja se tiče EZH2-katalizovane H3-K27 metilacije.
SAŽETAK PRONALASKA
U jednom aspektu, ovaj pronalazak se tiče aril- ili heteroaril-supstituisanog benzenskog jedinjenja sa Formulom (I) ispod ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli ili estera.
U ovoj formuli,
X, je N ili CRu;
X2je N ili CR,3;
Zje NR7Rs. OR7, S(0)nR7. ili CRtRsRu, pri čemu nje 0, 1, ili 2;
svaki Ri. R5, R<g>, i Rio, nezavisno, je H ili G-Gs alkil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil. COOH. C(0)0-Ci-C<> alkil. cijano, G-G alkoksil, amino, mono-G-G alkilamino. di-Ci-C<, alkilamino. G-G cikloalkil. C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril:
svaki R2, Ri, i R4. nezavisno, je -Qi-Ti, gde Qi je veza ili G-G alkilni linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksilom ili G-G alkoksi, a Ti je H, halo, hidroksil. COOH. cijano, ili Rsi, pri čemu Rsi je C1-C3alkil, G-G alkenil. C2-G, alkinil, Ci-C(, alkoksil. C(0)0-Ci-Cć alkil, C3-C8cikloalkil, CVGo aril, amino, mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino. 4 do 12-Člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril. a Rsi je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, okso, COOH. C(0)0-G-G, alkil, cijano, G-G, alkoksil, amino. mono-Ct-Cf, alkilamino. di-G-G, alkilamino. Ci-Gx cikloalkil. G^-Go aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
R6je C6-G0aril ili 5- ili 6-člani heteroaril. pri čemu je svaki od njih opciono supstituisan sa jednim ili više -O2-T2, gde Qi je veza ili G-G alkilni linker opciono supstituisan sa halo. cijano. hidroksilom ili G-G> alkoksi. a 12je H. halo, cijano. -ORa. -NRaRh. -
(NRaRbRcfA". -C(0)Rfc-C(0)ORa. -C(0)NRaRb. -NRhC(0)Ra. -NRbC(0)ORa, -S(0)2Ra, - S(0)2NRaRb, ili Rs2, u kojima svaki Ra, Rb, i Rt, nezavisno je H ili RS3, A" je neki farmaceutski prihvatljivi anjon, svaki Rs2i Rs3, nezavisno, je G-C(, alkil. G-Cx cikloalkil, CVCio aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril. ili R;, i Rb, zajedno sa atomom NI. na kojeg su spojeni, fonniraju 4 do 12-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni
heteroatom. a svaki Rs2, Rs3, i 4 do 12-člani heterocikloalkilni prsten formiran od R:1 i Rb. je opciono supstituisan sa jednim ili više -Q3-T3, pri čemu Q.i je veza ili C1-C3 alkilni linker od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo. cijano. hidroksilom ili G-G, alkoksi. a T; je izabran iz grupe koja obuhvata halo, cijano. G-G, alkil. CVC« cikloalkil. CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. 5- ili 6-člani heteroaril. ORd. COORd. -S{0)2Rd, -NRdRc. i -C(0)NRdRc, a svaki Rdi Rcnezavisno su H ili G-G, alkil. ili -CJ3-T3je okso; ili bilo koja dva susedna -Oj-Tj. zajedno sa atomima na koje su spojeni, formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma izabrana iz N. O i S i opciono je supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil. COOH. C(0)0-G-G, alkil, cij ano. L |-L<> alkoksil, amino, mono-G-Cć alkilamino. di-G-G* alkilamino, C3-G cikloalkil. CVGo aril, 4 do 12-Člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
R7 je -CJ4-T4. pri čemu Q4 je veza. G-G alkilni linker, ili G-Gt alkenilni linker. od koji je svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksilom ili G-G, alkoksi. a T4 je H. halo, cijano, NR,Rg, -ORr. -C(0)Rr, -C(0)ORt, -C(0)NRfRg. -C(0)NRiOR», -NR|C(0)RS. -S(0)2Rf. ili Rs4, u kojem slučaju svaki od Rti Rg.nezavisno, jc H ili Rs>. svaki Rm i Rss-nezavisno, je Ci-G, alkil. C2-G, alkenil, G-G, alkinil. Cj-Cs cikloalkil, CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril, a svaki Rs4i Rs5 je opciono supstituisan sa jednim ili više -Qs-T5, pri čemu Q5 je veza, C(O). C(0)NRk. NRkC(O). S(0)2. ili C1-C3alkilni linker. Rk je H ili G-G, alkil, a T>je H. halo. G-C(, alkil, hidroksil, cijano. G-G, alkoksil. amino, mono-G-G alkilamino. di-G-G, alkilamino, G-Cxcikloalkil, CVCm aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil. 5- ili 6-Člani heteroaril. ili S(0)t|Rq u kojem q je 0, 1, ili 2, a Rq je Ci-Ce, alkil, C2-C6alkenil, C'2-G, alkinil. C3-C8cikloalkil. CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5-ili 6-člani heteroaril, a T5je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, G-G, alkil. hidroksil, cijano. G-G>alkoksil, amino. mono-Ct-G, alkilamino, đi-G-G, alkilamino. G-Cs cikloalkil. G,-Go aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada T5 je H, halo. hidroksil, ili cijano; ili -Q?-T5 je okso;
svaki Rk. Rii, Rt2, i R13, nezavisno, je H. halo. hidroksil, COOH. cijano. Rsč>. ORs<,. ili COORs6, u kojima RS(,je G-Ct, alkil, C2-G, alkenil. O-G, alkinil, C3-C8cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, amino, mono-G-Cv, alkilamino. ili đi-G-G, alkilamino. a Rsr, je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil. COOH, C(0)0-G-Cf, alkil. cijano. G-G, alkoksil. amino. mono-G-G, alkilamino. i di-G-G, alkilamino; ili R7i Rx, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 do 2 dodatna heteroatoma. ili R?i Rk. zajedno sa atomom
C na kojeg spojeni, formiraju G-G cikloalkil ili 4 do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 1 do 3 heteroatoma, a svaki od 4 do 11-članih heterocikloalkilnih prstena ili CVCst cikloalkila, formiranih sa R7i Rg, je opciono supstituisan sa jednim ili više -G>-T<„ pri čemuQb jeveza, C(O), C(0)NRm. NRmC(0), S(0)2, ili C1-C3alkilni linker, Rn, je H ili G-G, alkil. a Th je H, halo, G-G, alkil, hidroksil, cijano, G-G, alkoksil. amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino, Gi-Cscikloalkil, G,-G<> aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-Člani heteroaril. ili S(0)pRp u kojem p je 0. 1. ili 2, a Rp je G-G, alkil, G-G, alkenil. C2-G, alkinil. C3-G cikloalkil, CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, a T<> je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. G-G, alkil, hidroksil, cijano, G-G, alkoksil, amino, mono-G-C(, alkilamino. di-G-G alkilamino, C3-C8cikloalkil, CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada T(, je H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q6-T6 je okso; a
Ruje odsutan, H, ili G-Q> alkil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, COOH. C(0)0-G-G, alkil. cijano. G-G, alkoksil, amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino. Gv-Cs cikloalkil, G,-Go aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-Člani heteroaril.
Jedna podgrupa jedinjenja sa Formulom (I) uključuje ona jedinjenja koja imaju Formulu (la):
Druga podgrupa jedinjenja sa Formulom (I) uključuje ona jedinjenja koja imaju Formulu (lb).
(Ic), ili (Id):
Još jedna podgrupa jedinjenja sa formulom (I) uključuje ona jedinjenja koja imaju Formulu (le), (Ig), (II), ili (Ha):
Jedinjenja sa Formulom (I), (Ia), (lb), (Ic). (Id), (le), (Ig), (II) ili (Ha) mogu da pokazuju jednu ili više od sledećih karakteristika:
Xi je CRi i. a Xi je CRn.
Xi jeCRn,aX2jeN.
Xi jeN.aX2jeCRi3.
X, jeN, aX2jeN.
ZjeNR7Rs.
ZjeCR7RsRi4.
ZjeOR7.
Zje S(0)„R7, gde nje 0. Lili 2
R(, je nesupstituisani Cć-Goaril ili nesupstituisani 5- ili 6-člani heteroaril.
R6 je G,-Go aril supstituisan sa jednim ili više more -O2-T2ili 5- ili 6-Člani heteroaril supstituisan sa jednim ili više -CJ2-T2.
Rf, je fenil supstituisan sa jednim ili više -CJ2-T:.
Rf, je 5- ili 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma izabrana iz N. O. i S. a opciono je supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2.
R&je hinolinil, tetrazolil, oksazolil. izoksazolil. tiazolil, izotiazolil, turi I, ili tienil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -O2-T2.
T2 jeG-G alkil, G,-G<> aril. halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRe)!A\ -C(0)R;„ -C(0)OR>.
-C(0)NRaRb, -NRbC(0)Ra, -NRbC(0)ORa. -S(0)2Ra, ili -S(0)2NRaRb.
T2 je -NRaRb, u kojem slučaju Ri i Rbnezavisno su H ili G-G, alkil, ili Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatan heteroatom, G-G, alkil i 4 do 12-člani (na primer, 4 do 7-člani) heterocikloalkilni prsten koji je opciono supstituisan sa jednim ili više -O3-T3.
Qi je G-G alkilni linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksilom.
Q2 je veza ili metilni ili etilni linker. a T2 je H. halo. -ORa. -NRaRb. -(NRilRbRc)<+>A". ili
-S(0)2NRaRb.
R?nije H.
R7je G-G, alkil, G-Cs cikloalkil ili 4 do 12-člani (na primer. 4 do 7-člani) heterocikloalkil, a svaki je opciono supstituisan sa jednim ili više -O5-T5.
R7 je 4 do 7-člani heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili više -O5-T5.
R7je piperidinil, tetrahidropiran. ciklopentil, ili cikloheksil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim -Qs-Ts.
T5je H, halo. G-C6 alkil, G-G, alkoksil, G-G cikloalkil. G,-Goarii. ili 4 do 12-člani (na primer, 4 do 7-člani) heterocikloalkil.
Qs je veza, a T5 je G-G, alkil, Gi-Gs cikloalkil. ili 4 do 12-člani (na primer. 4 do 7-člani) heterocikloalkil.
Q5 je CO, S(0)2. ili NHC(O); a T? je G-G, alkil. G-G alkoksil, G-G cikloalkil. ili 4 do 12-člani (na primer, 4 do 7-člani) heterocikloalkil.
Q? je G-G alkilni linker, a T, je H ili G,-Go aril.
Qs je G-G; alkilni linker, a Ts je G-G cikloalkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili S(0)qRq.
Ruje H.
R7 je ciklopentil ili cikloheksil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim -Q>-T5.
Q5je NHC(O). a T5 je G-Cf, alkil ili G-G, alkoksi.
R7 je izopropil.
Svaki od R2i R4nezavisno je H ili G-G, alkil opciono supstituisan sa amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino, ili G,-Go arilom.
Svaki od R2i R4 je metil.
Ri jeH.
R12je H, metil, etil. etenil, ili halo.
R12 je metil.
R12 je etil.
Ri2 je etenil.
Rs je H, metil, ili etil.
Rs je metil.
Rg je etil.
Rs je 4 do 7-heterocikloalkil. na primer, tetrahidropiran.
Z je NR7R8ili CR7R8R14gde R7i Rs, zajedno sa atomom na kojeg su spojeni, formiraju prsten koji je izabran iz grupe koja obuhvata piperidinil. morfolinil, piperazinil. i cikloheksenil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim -Qf,-Tf,.
Ri.? je H ili metil.
R13 jeH.
Rije H.
A-je Br ili Cl".
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosioca ijedno ili više jedinjenja izabranih iz onih jedinjenja koja su opisana sa bilo kojom ovde opisanom Formulom.
Drugi aspekt ovoga pronalaska uključuje terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja izabranih iz onih jedinjenja koja su opisana sa bilo kojom Formulom koja je ovde opisana pri čemu se pomenuta jedinjenja koriste u postupku za tretman ili sprečavanje raka.
Osim ako je drugačije navedeno, bilo koji opis postupka za tretman uključuje primenu pomenutih jedinjenja sa ciljem da se obezbedi pomenuti tretman ili profilaksa kao šta je opisano u ovoj predmetnoj prijavi, kao i upotrebu pomenutih jedinjenja sa ciljem da se pripremi lek za tretman ili prevenciju takvog stanja. Pomenuti tretman uključuje tretman čoveka ili ne-ljudskih životinja uključujući glodare i druge životinje koje služe kao modeli za bolesti.
Na primer. pomenuti postupak obuhvata korak ađministriranja subjektu, koji ima rak sa aberantnom H3-K.27 metilacijom, efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja sa bilo kojom Formulom koja je ovde opisana, pri čemu pomenuto/pomenuta j ed i nj enje/jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2, čime se tretira rak. Primeri za aberantnu H3-K27 metilaciju mogu da uključuju globalni porast i/ili promenjenu distribuciju H3-K27 di- ili trimetilacije u hromatinu tumorskih ćelija.
Na primer, pomenuti rak je izabran iz grupe koja obuhvata tumore koji prekomerno eksprimiraju EZH2 ili druge PRC2 podjedinice, sadrže mutacije koje dovode do gubitka funkcije H3-K27 demetilaza poput UTX, ili prekomerno eksprimiraju pomoćne belančevine poput PHF19/PCL3 koje su sposobne da povećavaju i/ili pogrešno lokalizuju delovanje EZl12 (reference vidi u Sneeringer et al. Proc Natl Acad Sci USA 107(49):20980-5.2010).
Na primer, ovaj postupak obuhvata korak ađministriranja subjektu, koji pati od raka koji prekomerno eksprimira EZH2, terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja sa bilo kojom od Formula koje su ovde opisane, pri čemu pomenuto/pomenuta jedinjenje/jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2 i time omogućavaju tretman raka.
Na primer. ovaj postupak obuhvata korak ađministriranja subjektu, koji pati od raka koji sadrži mutaciju u H3-K27 demetilazi UTX koja dovodi do gubitka funkcije, terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja sa bilo kojom Formulom koja je ovde opisana, pri čemu pomenuto/pomenuta jedinjenje/jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2 i time omogućavaju tretman raka.
Na primer, ovaj postupak obuhvata korak ađministriranja subjektu koji pati od raka, koji prekomerno eksprimira pomoćnu/pomoćne komponentu/komponente PRC2 poput PHF19/PCL3, terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja sa bilo kojom Formulom koja je ovde opisana, pri čemu pomenuto/pomenuta jedinjenje/jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2 i time omogućavaju tretman raka.
U još jednom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na postupak za moduliranje aktivnosti EZH2 divljeg tipa, katalitičku podjedinicu PRC2 kompleksa koji katalizuje mono- do tri-metilaciju lizina 27 u histonu H3 (H3-K27). Na primer, ovaj pronalazak se odnosi na postupak inhibiranja aktivnosti EZH2 u ćeliji. Ovaj postupak može da se provedem vitroiliin vivo.
U još jednom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na postupak inhibiranja konverzije 113-K27 u tri-metilovani FI3-K27 u nekom subjektu. Ovaj postupak obuhvata administriranje nekom subjektu terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja bilo koje Formule koja je ovde opisana sa ciljem da se inhibira histon-metiltransferazna aktivnost EZH2 i tome inhibira konverzija H3-K27 u tri-metilovani H3-K27 u nekom subjektu.
Na primer, ovaj postupak obuhvata korak ađministriranja nekom subjektu koji pati od raka, koji eksprimira Y641 mutant EZH2. terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja bilo koje Formule koja je ovde opisana, pri čemu pomenuto/pomenuta jedinjenje/jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2 i time omogućavaju tretiranje raka.
Na primer, pomenuti rak je izabran iz grupe koja obuhvata folikularni limfom i difuzni B-velikoćelijski limfom (DLBCL) tj. podtipu limfoma ćelija koje sliće B-ćelijama iz germinalnog centra (GCB). Na primer, pomenuti rak je limfom. leukemija ili melanom. Preferirano, pomenuti limfom je ne-Etodgkin-ov limfom. folikularni limfom ili difuzni B-velikoćelijski limfom. Alternativno, pomenuta leukemija je hronična mijelogena leukemija (CML). akutna mijeloidna leukemija, akutna limfocitna leukemija ili mešovita leukemija.
Pre-kancerogeno staje se odnosi na sindrome mijelođisplazije (MDS. ranije poznati kao pre-leukemija).
Na primer, pomenuti rak je hematološki rak.
Na primer, ovaj postupak obuhvata korak ađministriranja subjektu koji ima rak. koji eksprimira Y641 mutant EZH2, terapeutski efektivnu količinujednog ili više jedinjenja bilo koje Formule koja je ovde opisana, pri čemu pomenuto/pomenuta jedinjenje/jedinjenja selektivno inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost Y641 mutanta EZH2 i time omogućavaju tretiranje raka.
Na primer, ovaj postupak dodatno obuhvata korake izvođenja testa sa ciljem detektovanja Y641 mutanta EZH2 u nekom primerku koji sadrži tumorske ćelije od subjekta koji ima rak.
U još jednom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na postupak za moduliranje aktivnosti histonske metiltransteraze EZH2 divljeg tipa ili mutirane. katalitičke podjedinice PRC2 kompleksa koji katalizuje mono- do tri-metilaciju lizina 27 u histonu H3 (H3-K27). Na primer, ovaj pronalazak se odnosi na postupak inhibiranja aktivnosti nekih mutiranih forma EZH2 u ćeliji. Pomenute mutirane forme EZH2 uključuju zamenu nekog amino-kiselinskog ostatka sa tirozinom 641 (Y641, takođe Tyr641) u EZH2 divljem tipu. Ovaj postupak uključuje kontaktiranje ćelije sa efektivnom količinom jednog ili više jedinjenje sa bilo kojom ovde opisanom Formulom. Ovaj postupak može da se provedein vitroiliin vivo.
U još jednom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na postupak za inhibiranje konverzije H3-K27 u tri-metilovani H3-K27 u nekom subjektu. Ovaj postupak obuhvata administriranje nekom subjektu, koji eksprimira Y641 mutant EZH2, terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja bilo koje Formule koja je ovde opisana sa ciljem da se inhibira histon-metiltransferazna aktivnost EZH2, čime se inhibira konverzija H3-K.27 u tri-metilovani H3-K27 u pomenutom subjektu. Na primer, pomenuta inhibirana histon-metiltransferazna je ona koja potiče od Y641 mutanta EZH2. Na primer. pomenuto jedinjenje iz ovoga pronalaska selektivno inhibira histon-metiltransferaznu aktivnost pomenutog Y641 mutanta EZ1I2. Na primer. pomenuti Y641 mutant EZH2 je izabran iz grupe koja obuhvata Y641C, Y641F. Y641H, Y641N.i Y641S.
Ovaj postupak inhibiranja, u nekom subjektu, konverzije H3-K27 u tri-metilovani H3-K27 može takođe da obuhvata izvođenje ogleda sa ciljem detektovanja Y641 mutanta EZH2 u primerku uzetog od subjekta pre ađministriranja pomenutom subjektu, koji eksprimira Y641 mutant EZH2, terapeutski efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja bilo koje ovde pomenute Formule. Na primer, provođenje pomenutog ogleda za detektovanje Y641 mutanta EZH2 uključuje ponovno sekvenciranje celog genoma ili ponovno sekvenciranje ciljnog regiona iz genoma sa ciljem detektovanja nukleinske kiseline koja kodira pomenuti Y641 mutant EZH2. Na primer, provođenje pomenutog ogleda sa ciljem detektovanja pomenutog Y641 mutanta EZI12 uključuje kontaktiranje pomenutog primerka sa antitelom koje se specifično veže na polipeptid ili fragment koji je karakterističan za Y641 mutanta EZH2. Na primer. provođenje pomenutog ogleda za detektovanje Y641 mutanta FIZH2 uključuje kontaktiranje pomenutog primerka, u veoma specifičnim uslovima, sa probom od nukleinske kiseline koja može da hibridizuje sa nukleinskom kiselinom koja kodira polipeptid ili fragment koji je karakterističan sa pomenuti Y641 mutant EZH2.
Dodatno, ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak idenlifikovanja inhibitora Y641 mutanta EZH2. Pomenuti postupak obuhvata korake spajanja izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom meti Ine grupa, i testiranim jedinjenjem, pri čemu histonski supstrat ima formu H3-K27 koja je izabrana iz grupe koja obuhvata nemetilovani H3-K27. monometilovani H3-K27. dimetilovani H3-K27. i sve njihove moguće kombinacije; i provođenje ogleda za detektovanje metilacije H3-K27 (na primer. formiranje trimetilovanog H3-K27) u pomenutom histonskom supstratu, pri čemu se identifikuje testirano jedinjenje kao inhibitor Y641 mutanta EZH2 kadaje metilacija H3-K27 (na primer, formiranje trimetilovanog H3-K27), u prisutnosti testiranog jedinjenja, manja od metilacije H3-K27 (na primer. formiranje trimetilovanog H3-K27) u odsustvu pomenutog testiranog jedinjenja.
U jednoj izvedbi, provođenje ogleda za detektovanje metilacije H3-K27 u histonskom supstratu obuhvata inkorporaciju označenih metilnih grupa.
U jednoj izvedbi, pomenute označene meti ine grupe su meti Ine grupe koje su označene izotopima.
U jednoj izvedbi, provođenje ogleda za detektovanje metilacije H3-K27 u histonskom supstratu obuhvata kontaktiranje histonskog supstrata sa antitelom koje se specifično veže na trimetilovani H3-K27.
Takođe u okvirima ovoga pronalaska se nalazi i postupak za identi likovanje selektivnog inhibitora Y641 mutanta EZH2. Ovaj postupak obuhvata korake spajanja izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metilne grupe, i testiranim jedinjenjem, pri čemu pomenuti histonski supstrat sadrži formu H3-K27 koja je izabrana iz grupa koja obuhvata monometilovani H3-K27. dimetilovani H3-K27. i kombinaciju monometilovanog H3-K27 i dimetilovanog H3-K27, a pri čemu nastaje ogledna smeša; spajanje izolovanog EZH2 divljeg tipa sa histonskim supstratom, donorom metilne grupe, i testiranim jedinjenjem, pri čemu pomenuti histonski supstrat sadrži formu H3-K27 koja je izabrana iz grupe koja obuhvata monometilovani H3-K27. dimetilovani H3-K27, i kombinaciju monometilovanog H3-K27 i dimetilovanog H3-K27, a pri Čemu nastaje kontrolna smeša; provođenje ogleda za detektovanje trimetilacije histonskog supstrata u svakoj oglednoj smeši i kontrolnoj smeši; izračunavanja omera (a) trimetilacije sa Y641 mutantom EZH2 i testiranim jedinjenjem (M+) i (b) trimetilacije sa Y641 mutantom EZH2 bez testiranog jedinjenja (M-); izračunavanja omera (c) trimetilacije sa EZH2 divljeg tipa sa testiranim jedinjenjem (WT+) i (d) trimetilacije EZH2 divljeg tipa bez testiranog jedinjenja (WT-); uporedbe omera (a)/(b) sa omerom (c)/(d); identifikovanja testiranog jedinjenja kao selektivni inhibitor Y641 mutanta EZH2 kada je omer (a)/(b) manji od omera (c)/(d).
Ovaj pronalazak dodatno obezbeđuje postupak identifikovanja subjekta kao kandidata za tretman sa jednim ili više jedinjenja iz ovoga pronalaska. Ovaj postupak obuhvata korake izvođenja ogleda za detektovanje Y641 mutanta EZH2 u nekom primerku uzetog iz nekog subjekta; i identifikovanja subjekta koji eksprimira Y641 mutant EZH2 kao kandidata za tretman sa jednim ili više jedinjenja iz ovoga pronalaska, pri čemu pomenuto/pomenuta jedinjenja/jedinjenje inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2.
Još jedan aspekt ovoga pronalaska je postupak za inhibiranje konverzije H3-K27 u trimetilovani H3-K27. Ovaj postupak obuhvata korak kontaktiranja Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom koji sadrži H3-K27 i sa efektivnom količinom jedinjenja iz ovoga pronalaska, pri čemu pomenuto jedinjenje inhibira histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2. i time inhibira konverziju H3-K27 u trimetilovani H3-K27.
Dodatno, pomenuta jedinjenja ili postupci koji su ovde opisani mogu da se koriste za istraživanje (na primer, istraživanje encima koji deluju epigenetski) i za druge ne-terapeutske svrhe.
Osim ako je drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini, koji se ovde koriste, imaju svoja uobičajena značenja koje stručnjak iz tehničke oblasti kojoj pripada ovaj pronalazak dobro razume. U ovoj predmetnoj prijavi, jednine takođe uključuju i množine osim ako kontekst jasno ukazuje na suprotno. Mada u praktikovanju ili testiranju ovoga pronalaska mogu da se koriste postupci i materijali koji su slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani, prikladni postupci i materijali su opisani ispod.
Reference koje su ovde citirane se ne uzimaju kao prethodno stanje tehnike u odnosu na zahteve iz ovoga pronalaska. U slučaju konflikta, ova predmetna prijava, uključujući definicije, će poslužiti kao kontrola. Osim toga, materijali, postupci i primeri su samo ilustrativni i ne ograničavaju pronalazak.
KRATAK OPIS SLIKA
Slika 1(A) je idealizovani grafički prikaz ćelijskog rasta (tj, promena broja ćelija) kao funkciju vremena koji prikazuje eksponencijalnu proliferaciju tokom log-faze ćelijskog rasta.
Slika l(B) je idealizovani grafički prikaz in(broja ćelija) kao funkciju vremena za podatke iz panela (A).
Slika 2 je grafikon koji pokazuje krive bifaznog ćelijskog rasta u prisutnosti anti-proliferativnog jedinjenja pri čemu je primetljivo kašnjenje pre pojave uticaja jedinjenja na ćelijski rast. Jedinjenje počinje da deluje na ćelijski rast u vremenskoj tačci koja je označena kao "početak uticaja". Ispunjeni krugovi pokazuju idealizovane podatke za prenosnik (ili rastvarač) u kontrolnom primerku koji nije tretiran sa jedinjenjem. Ostali simboli označavaju krive bifaznog rasta ćelija koje su tretirane sa jedinjenjem (tj., lekom) u različitim koncentracijama.
Slika 3 je grafički prikaz kPkao funkcije koncentracije (A) citostatičkog i (B) citotoksičnog jedinjenja. koji ilustruje grafičko određivanje LCC citotoksičnog agensa. Važno je da se primeti da kod citostatičkog jedinjenja (panel A) vrednost kp nikad ne pada ispod nule.
Slika 4 je dijagram koji pokazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima iz miševa koji su tretirani sa Jedinjenjem 87 tokom 7 dana.
Slika 5 je dijagram koji pokazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima iz miševa koji sui bili tretirani sa Jedinjenjem 141 tokom 7 dana.
Slika 6 je dijagram koji pokazuje rast tumora kod miševa koji nose WSU-DLCL2 ksenokalem tokom tretmana koji traje 28 dana i uključuje primenu prenosnika ili Jedinjenja 141.
Slika 7 je dijagram koji pokazuje rast tumora kod miševa koji nose WSU-DLCL2 ksenokalem i koji su tretirani sa Jedinjenjem 44.
Slika 8 je dijagram koji pokazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima iz miševa koji su bili tretirani sa Jedinjenjem 44 tokom 28 i 7 dana.
Slika 9 je dijagram koji pokazuje rast tumora kod miševa koji nose WSU-DLCL2 ksenokalem i koji su tretirani sa Jedinjenjem 44 koje je primenjivano kroz različite dozne režime.
Slika lOje dijagram koji pokazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima iz miševa koji su tretirani sa Jedinjenjem 44 koje je primenjivano kroz različite dozne režime tokom 28 dana.
Slika 11 je dijagram koji pokazuje efekt Jedinjenja 44 na telesnu težinu miša. Podaci predstavljaju srednje vrednosti ±SD (n=9). Doze koje su uzrokovale smrtnost nisu prikazane. Slika 12 je dijagram koji pokazuje anti-tumorske efekte oralnog ađministriranja Jedinjenja 44 na difuzni B-velikoćelijski limfom iz KARPAS-422 ksenokalema kod miševa. Podaci predstavljaju srednju vrednost ±SD (n=9).<*>P<0.05 u odnosu na kontrolu sa prenosnikom tokom dana 29 (ponovljena merenja ANOVA nakon testa multiple uporedbe po Dunnett-u). Doze koje su uzrokovale smrtnost nisu prikazane.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Ovaj pronalazak obezbeđuje nova aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja. postupke za sintezu pomenutih jedinjenja. farmaceutske kompozicije koji ih sadrže i brojne primene pomenutih jedinjenja.
1-Aril- ili heteroaril- supstituisana benzenska jedinjenja
Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (I):
ili neku njihovu farmaceutski prihvatljivu so ili ester. U ovoj formuli:
X, jeN ili CRu:
X2jeN ili CRu;
X2 je N ili CR13:
Zje NR7Rs, OR7, S(0)nR7. ili CR7RxRi4. gde nje 0. 1. ili 2; svaki Ru R5. R9. i Rio, nezavisno, je H ili Ci-0> alkil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil. COOH, C(0)0-G-G, alkil, cijano, G-G, alkoksil, amino, mono-G-G alkilamino, đi-G-G, alkilamino, CVG cikloalkil. G,-Go aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril: svaki R2, R3. i R4, nezavisno, je -Qi-Ti, pri čemu Qj je veza ili C1-C3alkilni linker opciono supstituisan sa halo. cijano, hidroksilom ili G-C& alkoksi, a Ti je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, ili Rsi, gde Rsi je G-G alkil, C2-G, alkenil, G-G, alkinil. G-G, alkoksil. C(0)0-G-G, alkil, C3-Cx cikloalkil, G,-Go aril. amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, a Rsi je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil. okso, COOH, C(0)0-G-Cf, alkil. cijano, G-G, alkoksil. amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino, G-Gscikloalkil. G,-Goaril, 4 do 12-člani heterocikloalkil.i 5- ili 6-člani heteroaril;
Rr, je CVGo aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -O2-T2. pri čemu Q2 je veza ili G-G alkilni linker opciono supstituisan sa halo. cijano, hidroksilom ili Ci-Cć alkoksi, a T2 je H, halo, cijano, -ORa. -NRaRt>, -(NRaRbRc)+A~, - C(0)Ra, -C(0)ORa, -C(0)NRaRh, -NR„GO)R:i. -NRbC(0)ORa. -S(0)2Ra. -S(0)2NRaRb, ili Rs2, gde svaki Ra, Rb. i Rc. nezavisno, je H ili Rs3, A" je farmaceutski prihvatljivi anjon, svaki Rs2 i Rs3 , nezavisno, je G-G, alkil, Gi-Cs cikloalkil. CVGo aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril, ili Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4 do 12-Člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom, a svaki Rs2. Rs?- i 4-do 12-člani heterocikloalkilni prsten, koji je nastao od Ra i Rb, je opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ3-T3, gdeQj jeveza ili C1-C3alkilni linker od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksilom ili G-G, alkoksi. a T3je izabran iz grupe koja obuhvata halo. cijano. G-G, alkil, C3-G cikloalkil, C6-Goaril. 4-do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril. ORu, COORd, -S(0)2Rd, -NRdRc. i -C(0)NRdRc, svaki Rdi R*nezavisno, je H ili G-G, alkil. ili -O3-T3je okso: ili bilo koja dva susedna -Q2-T2. zajedno sa atomima na koje su vezani, formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1 -4 heteroatoma izabrana iz N. O i S i koji je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, COOH, C(0)0-G-G, alkil. cijano, G-G, alkoksil, amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino, Gi-Cs cikloalkil, G-Goaril, 4- do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-čiani heteroaril;
R7je -Q4-T4, gde Qi je veza. G-C4alkilni linker. ili G-G alkenilni linker. a svaki linker je opciono supstituisan sa halo. cijano. hidroksilom ili G-G alkoksi, a T4je H. halo. cijano, NRiRg, -0Rf, -C(0)Rr, -C(0)ORf, -C(0)NR,Ro. -C(0)NRiORg, -NRiC(0)R.. -S(0)2Rr. ili Rs4, gde svaki Rri Rg, nezavisno, je H ili Rs.s, svaki Rs4i Rs>, nezavisno, je Ci-G. alkil, G-Cbalkenil, C2-G, alkinil, C3-G cikloalkil, G,-Go aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-Člani heteroaril, a svaki Rs4i Rss je opciono supstituisan sa jednim ili više -CM-T5. gde Q>je veza, C(O), C(0)NRk, NRkC(0). S(0)2, ili G-G alkilni linker. Rk je H ili G-G, alkil. a T> je H, halo, G-G alkil, hidroksil. cijano. G-G alkoksil. amino. mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino. GrCg cikloalkil, CVGo aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(0)qRq gde q je 0, 1, ili 2, a Rq je G-G, alkil. CVG, alkenil. G-G alkinil, G-Cg cikloalkil, G,-Goaril.4- do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril.a T5 je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. G-G, alkil, hidroksil, cijano, G-C6 alkoksil, amino. mono-G-G, alkilamino. đi-G-G, alkilamino. CVG cikloalkil. G,-Go aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada Tj je H, halo, hidroksil, ili cijano; ili- Qs- T>je okso: svaki Rs, R11, R12, i R13, nezavisno, je H. halo. hidroksil. COOH, cijano, Rst,. ORs6. ili COORs6, gde Rs6 je G-C6 alkil. C2-C6alkenil, C2-C0alkinil, CVC8 cikloalkil, 4- do 12-člani heterocikloalkil. amino. mono-G-G, alkilamino. ili di-G-G, alkilamino, a Rso je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil. COOH, C(0)0-G-G, alkil. cijano, G-Gs alkoksil. amino. mono-G-G, alkilamino, i di-G-G, alkilamino; ili R7i Rs. zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 do 2 dodatna heteroatoma. ili R7i Rs, zajedno sa atomom C na kojeg su spojeni, formiraju C3-G cikloalkil ili 4- do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 1 do 3 heteroatoma, a svaki od 4- do 11-članih heterocikloalkilnih prstena ili OCs cikloalkila formiranih od R7i Rs je opciono supstituisan sa jednim ili više-Qo-Tr,.gde Q(, je veza, C(O), C(0)NRm, NRmC(0). S(0)2. ili G-G alkilni linker, R™ je H ili G-G, alkil, a T«, je H, halo, G-G alkil, hidroksil, cijano, G-G, alkoksil. amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino, Gi-Cs cikloalkil, G,-Go aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(0)pRp u kojem p je 0, 1. ili 2, a Rp je G-G, alkil. G-G, alkenil, C2-G, alkinil. G-s-Cs cikloalkil, CVGo aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril. a Tr, je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. G-G,alkil, hidroksil, cijano, G-C&alkoksil. amino. mono-G-Cf,alkilamino. di-G-G, alkilamino. Gi-G cikloalkil. CVGo aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada T(, je H. halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q{,-T(, je okso; a
R14 je odsutan, H, ili G-G alkil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, COOH. C(0)0-CValkil, cijano, G-G> alkoksil, amino, mono-G-G, alkilamino, đi-G-G, alkilamino. G-G cikloalkil. CVGo aril. 4-do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril.
Na primer, Xi je CRu, aX2je CR13.
Na primer, Xi je CRu, a X2 je N.
Na primer. Xi je N. a X2 je CR13.
Na primer, Xi je N. a X2 je N.
Na primer, 7. je NR?Rx.
Na primer, Z je CR7R.SR14.
Na primer, Z je OR7.
Na primer, Z je S(0)nR7. u kojem n je 0. 1. ili 2.
Na primer, Zje SR7.
Na primer, Rr,je nesupstituisani Gs-Goaril ili nesupstituisani 5- ili 6-člani heteroaril.
Na primer, Rc, je G>-Go aril supstituisan sa jednim ili više -Q2-Ti ili 5- ili 6-člani heteroaril koji je supstituisan sa jednim ili više -Ch-T?.
Na primer. Rr, je nesupstituisani fenil.
Na primer. R6 je fenil supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2.
Na primer, R6 je 5 do 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma izabrana iz N, O. i S. a opciono je supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2.
Na primer. Rt, je piridinil, pirazolil, pirimidinil, hinolinil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil. izotiazolil, furil, ili tienil, od koji je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -O2-T2.
Na primer,Qi jeveza.
Na primer, Qj> je nesupstituisani C1-C3alkilni linker.
Na primer, T2 je C1-C6alkil ili C6-C10aril, od koji je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ3-T3.
Na primer, T2je nesupstituisani ili supstituisani ravno-lančani G-G, ili razgranati C<i>-Ct, alkil, uključujući ali bez ograničenja, metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, s-butil. t-butil. n-pentil, s-pentil i n-heksil.
Na primer, T2je fenil.
Na primer, T2je halo (na primer, fluor, hlor, brom. i jod).
Na primer, T?je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer, azetidinil. oksetanil, tietanil. pirolidinil. imidazolidinil. pirazolidinil. oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil. tetrahidrofuranil, piperidinil. 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3.6-dihidro-2H-piranil,tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2. ljheptanil. 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično) opciono supstituisan sa jednim ili više -O3-T3.
Na primer. T2je -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-.-C(0)Ra. -QO)ORa. -C(0)NRaRb, - NRbC(0)Ra, -NRbC(0)ORa, -S(0)2Ra, ili -S(0)2NRaRh.
Na primer, T2 je -NRaRbili -C(0)NRaRb. gde svaki, Rai Rb. nezavisno, je H ili G-G, alkil. ili Rai Rb. zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom. G-G, alkil i 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji je opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ3-T3.
Na primer, Q2 je C1-C3alkilni linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksilom.
Na primer. Q2je veza ili metilni linker, a T2je H. halo, -ORa. -NRaRb. -{NRaRbRcV A", ili - S(0)2NRaRt.
Na primer, svaki Ra, Rb, i Rc, nezavisno, je H ili G-G alkil opciono supstituisan sa jednim ili više -Q3-T3.
Na primer, jedan od Ra, Rb, i Rc je H.
Na primer, Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom osim atoma N (na primer, azetidinil, pirolidinil. imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil. izoksazolidinil, triazolidinil. piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil. morfolinil, 1,4-diazepanil. 1.4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 Jheptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1 jheptanil. 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil. i slično), a pomenuti prsten je opciono supstituisan sa jednim ili više -O3-T3.
Na primer, -O3-T3je okso.
Na primer, T2je 4- do 7-člani heterocikloalkil ili CVCs cikloalkil. a jedan ili više <?3-1'3su okso.
Na primer. Qt je veza ili nesupstituisani ili supstituisani C1-C3alkilni linker.
Na primer, T3je H, halo. 4- do 7-člani heterocikloalkil. C1-C3alkil, ORd, COORj, -S(0)2Ra. ili
-NRdRc
Na primer, jedan od Rdi Re je H.
Na primer, R7nije H.
Na primer, R7je-C(0)R|.
Na primer, R7je -C{0)Rr, u kojem Ri je C3-C8cikloalkil.
Na primer, R7je Ca-Go aril supstituisan sa jednom ili više -OVn.
Na primer, R7je fenil opciono supstituisan sa jednim ili više -Qj-T?.
Na primer. R7 je G-CV, alkil opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ5-T5.
Na primer, R7 je C3-C8cikloalkil opciono supstituisan sa jednim il i više -Ojs-T,.
Na primer, R7je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer, azetidinil. oksetanil. tietanil. pirolidinil. imidazolidinil, pirazolidinil. oksazolidinil. izoksazolidinil, triazolidinil. tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil, tetrahidro-2H-piranil. 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran. i morfolinil, i slično) opciono supstituisan sa jednim ili više -Q5-Ts.
Na primer, R7 je 5- do 6-člani heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili više -G5-T5.
Na primer, R7je izopropil.
Na primer. R7 je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran. ciklopentil, cikloheksil, ili cikloheptil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim -Cjs-Tj.
Na primer, R7 je ciklopentil ili cikloheksil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim - Qs-T5.
Na primer, R7je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran.letrahiđro-2H-tiopiranil, ciklopentil. cikloheksil, ili cikloheptil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -Cjj-Ts.
Na primer, R7 je ciklopentil, cikloheksil ili tetrahidro-2H-tiopiranil, od koji je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -Os-Tj.
Na primer, jedan ili više -Q>-T5 su okso.
Na primer, R7je l-oksid-tetrahidro-2H-tiopiranil ili l.l-dioksid-tetrahidro-2H-tiopiranil.
Na primer, Q_> je veza, a T?je amino, mono-G-G, alkilamino. ili di-G-G, alkilamino.
Na primer. Qj je NHC(O), a T> je G-G, alkil ili G-G, alkoksi.
Na primer, - Qs- Ts je okso.
Na primer,T4je 4- do 7-člani heterocikloalkil ili Gi-Cs cikloalkil. a jedan ili više -Q>-T?su okso.
Na primer. Ts je H, halo, G-G. alkil, G-G> alkoksil, Gi-Cs cikloalkil. CVC10aril. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Q5 je veza. a T5 je G-G alkil, G-Cs cikloalkil. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Q5 je CO, S(0)2, ili NHC(O); a T> je G-G, alkil. G-G, alkoksil. G-C8cikloalkil. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, T5 je G-G, alkil ili G-Ca alkoksil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo, hidroksilom, cijano, G-G, alkoksil, amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-G alkilamino. ili G-G cikloalkilom.
Na primer. Q> je G-G alkilni linker, aT> je H ili G-Go aril.
Na primer, Qs je G-G3 alkilni linker, a T5 je C3-C8cikloalkil, 4- do 7-člani heterocikloalkil, ili S(0)qRq.
Na primer, Rn je H.
Na primer, svaki od R2i R4, nezavisno, je H ili G-G, alkil opciono supstituisan sa amino. mono-G-Gs alkilamino, di-G-G alkilamino, ili CVGo arilom.
Na primer. svaki od R2i R4. nezavisno, je G-G; alkil opciono supstituisan sa G-G, alkoksilom.
Na primer, svaki od R2i R4 je metil.
Na primer, Ri je H.
Na primer, R12 je H, metil, etil, etenil. ili halo.
Na primer, R12 je metil.
Na primer, R12 je etil.
Na primer, R12 je etenil.
Na primer, RKje H, metil, etil, ili etenil.
Na primer, Rs je metil.
Na primer, Rs je etil.
Na primer, Rs je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer, azetidinil, oksetanil. tietanil. pirolidinil. imidazolidinil. pirazolidinil. oksazolidinil. izoksazolidinil. triazolidinil. tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil. 3.6-dihidro-2H-piranil,tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil, 1,4-diazepanil. 1.4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 Jheptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1 jheptanil, 2-oksa-6-azaspirof3.3 jheptanil. 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično).
Na primer. Rsje tetrahidropiran.
Na primer, Rs je tetrahidropiran. a R? je -CJ4-T4. u kojem Q4 je veza ili C1-C4alkilni linker, a T4 je H, C1-C6alkil, Cj-Cs cikloalkil ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Z je NR7R8ili CR7R8R14gde R7i Rs, zajedno sa atomom na kojeg su vezani, formiraju 4- do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 1 do 3 heteroatoma (na primer. azetidinil, oksetanil, tietanil. pirolidinil, imidazolidinil. pirazolidinil, oksazolidinil. izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil. piperidinil. 1.2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil. tetrahidro-2H-piranil. 3.6-dihidro-2H-piranil. tetrahidro-2H-tiopiran. i morfolinil. l,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil, i slično) ili Cj-Cscikloalkil. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -O^-TV,.
Na primer. prsten kojeg formiraju R7i Rs je izabran iz grupe koja obuhvata azetidinil. pirolidinil, piperidinil, morfolinil, piperazinil, 1.4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil, i cikloheksenil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim -Q(,-T(,.
Na primer, -Qft-Tfi je okso.
Na primer, T6 je H, halo, G-G, alkil, G-G, alkoksil. C3-G cikloalkil, Ce-Go aril. ili 4- do 7-Člani heterocikloalkil.
Na primer, Q{, je veza, a TV, je G-G, alkil, G-G cikloalkil, ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Q6 je CO, S(0)2. ili NHC(O); a Ta je G-G> alkil. G-G alkoksil. Ci-Gt cikloalkil ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer. T6 je G-G, alkil ili G-G alkoksil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo. hidroksilom, cijano. G-G, alkoksilom. amino, mono-G-G, alkilamino. đi-G-G alkilamino. ili G-Cs cikloalkilom.
Na primer, Q6 je G-G; alkilni linker, a Te, je H ili G,-Go aril.
Na primer, Obje G-G alkilni linker, aTf, je G-Cs cikloalkil, 4- do 7-člani heterocikloalkil. ili S(0)pRP.
Na primer. svaki od Rp i Rq, nezavisno, je G-G alkil.
Na primer, Ru je H ili metil.
Na primer, Ru je H.
Na primer, R3je H.
Na primer, A" je Br" ili Cl".
Na primer, svaki od R5. R9, i Rio je H.
Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (Ia)
ili neku njihovu farmaceutski prihvatljivu so ili ester. pri čemu:
Xi jeN ili CRu;
X2 je N ili CRu:
Zje NR7R8, OR7. S(0)nR7, ili CR7RhRh, gde nje 0. L ili 2;
od kojih svaki od Rii R5, nezavisno, je H ili G-G, alkil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, COOH. C(()}()-('-G, alkil, cijano, G-G, alkoksil, amino. mono-G-C«, alkilamino. di-G-G, alkilamino. Cj-Gt cikloalkil. CVCio aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril;
svaki od R2, R3, i R4. nezavisno, je -Qi-Ti, gde Qi je veza ili G-G alkilni linker opciono supstituisan sa halo, cijano. hidroksilom ili G-G, alkoksi, a Ti je H. halo. hidroksil. COOH. cijano, ili Rsi, u kojem Rsi je G-G alkil, C2-G, alkenil, G-G, alkinil, G-G, alkoksil, C(0)0-G-G, alkil, G-Cscikloalkil. G,-Go aril, amino. mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino. 4- do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, a Rsi je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil, okso. COOH. C(0)0-G-G alkil. cijano, G-C6 alkoksil, amino, mono-G-G alkilamino, di-G-G, alkilamino, G-Cg cikloalkil, G,-Go aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril;
R<r, je G,-Go aril ili 5- ili 6-člani heteroaril. od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2, gde Q2 je veza ili C1-C3alkilni linker opciono supstituisan sa halo. cijano, hidroksilom ili G-G> alkoksi. a T2je H, halo. cijano. -ORa, -NRaRb. -(NRaRhRc)' A'. - C(0)Ra, -C(0)ORa, -C(0)NRaRb, -NRbC(0)Ra, -NRbC(0)ORa. -S(0)2Ra. -S<0)2NR;,Rh. ili Rs2, gde svaki od Ra, Rb. i Rc, nezavisno, je H ili Rs3. A" je fannaceutski prihvatljivi anjon. svaki od Rs2i Rs3-nezavisno, je G-G, alkil. G-G cikloalkil, G,-Go aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril. ili R, i Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 12-Člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom. a svaki od Rs2. Rs3, i 4- do 12-člani heterocikloalkilni prsten koji je formiran od Rai Rb. je opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ3-T3. gde Ch je veza ili G-G; alkilni linker od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksilom ili Ci-C<> alkoksi, a T; je izabran iz grupe koja obuhvata halo, cijano, CVG, alkil. C;-Cs cikloalkil. CVGo aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. 5- ili 6-člani heteroaril, ORd. COORd, -S(0)2Rd, -NRdRc i -C(0)NRdR,.. svaki od Rdi Rc nezavisno, je H ili G-G, alkil, ili -Q3-T? je okso: ili bilo koja dva susedna -Q2-T2. zajedno sa atomima na koja su spojeni, formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1 -4 heteroatoma izabrana iz N, O i S i je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, COOH, C(0)0-G-G, aikil. cijano. G-G alkoksil. amino. mono-G-C6 alkilamino. di-G-G, alkilamino, CVCs cikloalkil. CVG u aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
R7je -Q4-T4, gdeQaje veza, G-Gt alkilni linker. ili G-G alkenilni linker. a svaki linker je opciono supstituisan sa halo, cijano. hidroksilom ili G-G, alkoksi. a T4je H, halo. cijano. NRrRg, -ORr, -C(0)Rr. -C(0)ORf, -GOlNRiR,. -C<0)NR(OR*. -NRiC(0)Rg. -S(0)2Rr. ili Rs4, gde svaki od Ri i Rg, nezavisno, je H ili Rs>, svaki od Rs4i Rs5. nezavisno, je G-G alkil, C2-C6alkenil, C2-G, alkinil. CVG cikloalkil, CVGo aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril. a svaki od Rs4i R.S5 je opciono supstituisan sa jednim ili više- Qa-Ts, gde Qs je veza, C(O), C(0)NRk. NRkC(O), S(0)2, ili G-G alkilni linker. Rkje H ili G-G, alkil, a T5je H, halo. C1-C6alkil, hidroksil, cijano, G-G, alkoksil. amino. mono-G-G, alkilamino, đi-G-G alkilamino, CVCs cikloalkil. G,-Ch> aril. 4- đo 12-člani heterocikloalkil. 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(0)qRq gde q je 0. 1. ili 2. a Rt) je G-G, alkil. C2-C(, alkenil. C2-G, alkinil, G-Cs cikloalkil, G,-Go aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril, a T5 je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, G-G, alkil, hidroksil, cijano. G-G, alkoksil. amino, mono-G-G, alkilamino. di-G-G, alkilamino, C3-C8cikloalkil, G,-Go aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada T5 je H, halo, hidroksil. ili cijano: ili -O5-T5je okso: svaki od Rs. R11, Ri2, i R13. nezavisno, je H. halo. hidroksil. COOH, cijano. Rso, ORsf,, ili COORsf,. gde R$ft je G-G, alkil, CVG, alkenil. G-G alkinil. G-Cs cikloalkil, 4- do 12-člani heterocikloalkil. amino, mono-G-G, alkilamino. ili di-G-G, alkilamino, a Rso je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil. COOH, C(0)0-G-G, alkil. cijano. G-G, alkoksil. amino. mono-G-G, alkiiamino. i di-G-G, alkilamino; ili R7i Rs, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži od 0 do 2 dodatna heteroatoma. ili R7i Rx, zajedno sa atom C na kojeg su vezani, formiraju CVCs cikloalkil ili 4- do 1 1-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži od 1 do 3 heteroatoma. a svaki od 4- do 11-Članih heterocikloalkilnih prstena ili CVG cikloalkil koji nastaje od R7i Rs je opciono supstituisan sa jednim ili više -CVTf,. pri čemu Qf, je veza, C(O). C(0)NRm, NRmC(0), S(0)2, ili C1-C3alkilni linker, Rm je H ili G-G, alkil. a T(, je H, halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, G-G, alkoksil. amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino, Gi-Cs cikloalkil. CVGo aril, 4- do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(0)pRp u kojem p je 0. 1, ili 2, a RPje G-G, alkil. G-G, alkenil, CVG, alkinil. CVCs cikloalkil. G,-Go aril. 4- do 7-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril. a Taje opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. G-G, alkil, hidroksil, cijano. G-G, alkoksil, amino, mono-G-G alkilamino, di-G-G, alkilamino. CVCs cikloalkil, CVGo aril. 4- do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada T(, je H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -CVTV, je okso; a
Ruje odsutan, H, ili G-G, alkil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil, COOH, C(0)0-G-G, alkil, cijano. G-G, alkoksil, amino, mono-G-G; alkilamino. di-G-G, alkilamino, G-Cs cikloalkil. CVGo aril. 4-do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril.
Na primer. X2 je CR13.
Na primer. X2 je N.
Na primer, Zje NRtRs.
Na primer, Z je CR7RxRu.
Na primer, Zje OR7.
Na primer, Zje S(0)nR7, gde nje 0, 1, ili 2.
Na primer. Z je SR7.
Na primer. Roje nesupstituisani CvGo aril ili nesupstituisani 5- ili 6-ćlani heteroaril.
Na primer, R.6 je CVGo aril supstituisan sa jednim ili više -O2-T2ili 5- ili 6-člani heteroaril supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2.
Na primer. R.6 je nesupstituisani fenil.
Na primer, Khje fenil supstituisan sa jednim ili više -CVTi.
Na primer, Rf, je 5- do 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma izabrana iz N. 0. i S. a opciono je supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2.
Na primer. R(>je piridinil, pirazolil. pirimidinil, hinolinil. tetrazolil. oksazolil. izoksazolil. tiazolil, izotiazolil, furil, ili tienil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -Q2-T2.
Na primer, Q2 je veza.
Na primer, Q2 je nesupstituisani G-G alkilni linker.
Na primer, T2 je G-Ce alkil ili Ch-Go aril, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više -O3-T3.
Na primer, T2 je nesupstituisani ili supstituisani ravno-lancani G-G> ili razgranati CVG>alkil. uključujući, ali bez ograničenja, metil, etil, n-propil, i-propil, n-butii, s-butii. t-butil. n-pentil, s-pentil i n-heksil.
Na primer, T2 je fenil.
Na primer. T2 je halo (na primer, fluor. hlor, brom, i jod).
Na primer, T2je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer. azetidinil. oksetanil. tietanil. pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil. tetrahidrofuranil, piperidinil. 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil. tetrahidro-2H-piranil. 3.6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil. 1.4-diazepanil. 1.4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 Jheptanil, 2.5-diazabicik!o[2.2.1 jheptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil. i slično) opciono supstituisan sa jednim ili više -Q;,-T3.
Na primer, T2je -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A'. -QO)Ra, -C(0)CRa. -C(0)NRaRb. - NRbC(0)Ra. -NRbC(0)ORa, -S(0)2Ra. ili -S(0)2NRaRb.
Na primer. T2je -NRaRbili -C(0)NRaRb. gde svaki od Rai Rh, nezavisno, je H ili G-G, alkil. ili Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatan heteroatom, aG-G, alkil i 4- do 7-Člani heterocikloalkilni prsten su opciono supstituisani sa jednim ili više -Q;-T3.
Na primer, Q2 je G-G* alkilni linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksilom.
Na primer, Q2je veza ili metilni linker, a T2je H, halo, -0Ra. -NRaRh. -(NR;iRbRc)+A'. ili - S(0)2NRaRb.
Na primer, svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno, je H ili G-G, alkil opciono supstituisan sa jednim ili više -Q.3-T3.
Na primer, jedan od Ra. Rb, i Rc je H.
Na primer, Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom osim N atoma (na primer. azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil. izoksazolidinil. triazolidinil. piperidinil, 1.2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, morfolinil. 1,4-diazepanil, 1.4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 jheptanil, 2.5-diazabiciklol2.2.1 jheptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil. i slično), a pomenuti prsten je opciono supstituisan sa jednim ili više -Q3-T3.
Na primer, -Q:,- l 3 je okso.
Na primer, T2 je 4- do 7-člani heterocikloalkil ili Gi-G cikloalkil, a jedan ili više -OJS-T3 su okso.
Na primer, Cb je veza ili nesupstituisani ili supstituisani G-G alkilni linker.
Na primer, Tj je H, halo, 4- do 7-člani heterocikloalkil, G-G alkil, ORd, COORd. -S(0)2Rd, ili
-NRdRc.
Na primer, jedan od Rdi Reje H.
Na primer, R7nije H.
Na primer, R7je-C(0)Rr.
Na primer. R7 je -C(0)Rr, gde Rrje Gi-Gs cikloalkil.
Na primer. R7 je Cg-Go aril supstituisan sa jednim ili više -Q5-T>.
Na primer, R7 je fenil opciono supstituisan sa jednim ili više -CM-T5.
Na primer, R7 je G-G, alkil opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ5-T5.
Na primer, R7 je G;-Gs cikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili više -Q5-Tj.
Na primer, R7je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer, azetidinil. oksetanil. tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil. triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil. 1.2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil, tetrahidro-2H-piranil. 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil. i slično) opciono supstituisan sa jednim ili više -Qs-T5.
Na primer, R7 je 5- do 6-člani heterocikloalkil opciono supstituisan sajednim ili više -Q;-T5.
Na primer. R7 je izopropil.
Na primer, R? je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran. ciklopentil. cikloheksil. ili cikloheptil. a svaki od njih je opciono supstituisan sa jednim -Qs-T?.
Na primer. R7je ciklopentil ili cikloheksil, a svaki od njih je opciono supstituisan sa jednim - Qs-T5.
Na primer, R7je pirolidinil. piperidinil. tetrahidropiran. tetrahidro-2H-tiopiranil. ciklopentil. cikloheksil, ili cikloheptil, a svaki od njihje opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ5-T5.
Na primer, R7 je ciklopentil, cikloheksil ili tetrahidro-2H-tiopiranil. a svaki od njihje opciono supstituisan sajednim ili više -CM-T5.
Na primer, jedan ili više -CJs-T?su okso.
Na primer. R?je l-oksid-tetrahidro-2H-tiopiranil ili l.l-dioksid-tetrahidro-2H-tiopiranil.
Na primer, Qs je veza, a T5 je amino, mono-CVCf> alkilamino, ili di-G-Ch alkilamino.
Na primer, Qs je NHC(O), a T5 je G-G, alkil ili G-G, alkoksi.
Na primer, -Qs-T? je okso.
Na primer, T4 je 4- do 7-člani heterocikloalkil ili G^-Cg cikloalkil. a jedan ili više - CJj-Ts su okso.
Na primer, T5 je H, halo, G-G>alkil, G-G> alkoksil, G-Cs cikloalkil, CVGo aril, ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Q$ je veza, a T5 je G-G alkil, CVCs cikloaikil. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Q> je CO. S(0)2. ili NHC(O); a Ts je G-G, alkil. G-G, alkoksil, G-Cs cikloalkil, ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, T5je G-G, alkil iliG-G,alkoksil, a svaki od njih je opciono supstituisan sa halo. hidroksilom, cijano, G-G, alkoksilom, amino, mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino. ili Cj-Cr cikloalkilom.
Na primer,Qsje G-G, alkilni linker, a T? je H ili G,-Go aril.
Na primer, Qsje G-G? alkilni linker, aTs je CVCs cikloalkil, 4- do 7-člani heterocikloalkil. ili S(0)qRq.
Na primer, Rn je H.
Na primer, svaki od R2i R4, nezavisno, je H ili G-G, alkil opciono supstituisan sa amino. mono-G-G alkilamino. di-G-Cs alkilamino. ili G,-Cm arilom.
Na primer, svaki od R2i R4. nezavisno, je G-G alkil opciono supstituisan sa G-G, alkoksilom.
Na primer, svaki od R2i R4 je metil.
Na primer, Ri je H.
Na primer, Rs je H.
Na primer, R12 je H, metil, etil, etenil, ili halo.
Na primer, R12 je metil.
Na primer, R12 je etil.
Na primer. Ruje etenil.
Na primer, Rs je H, metil, etil, ili etenil.
Na primer. Rs je metil.
Na primer, Rs je etil.
Na primer, Rs je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer, azetidinil, oksetanil. tietanil. pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil. oksazolidinil. izoksazolidinil. triazolidinil. tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil. tetrahidro-2H-piranil. 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil. 1,4-diazepanil. 1.4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 Jheptanil. 2,5-diazabiciklo[2.2.1 Jheptanil. 2-oksa-6-azaspiro[3.3Jheptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil. i slično).
Na primer, Rs je tetrahidropiran.
Na primer, Rs je tetrahidropiran, a R? je -Q4-T4. u kojem Oj je veza ili C1-C4alkilni linker. a T4 je H, G-G alkil, CVCscikloalkil ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Z je NR7Rx ili CR7R8R14gde R7i Rs, zajedno sa atomom na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 11-Člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 1 do 3 heteroatoma (na primer, azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil. imidazolidinil, pirazolidinil. oksazolidinil. izoksazolidinil, triazolidinil. tetrahidrofuranil. piperidinil. 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran. i morfolinil. l,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil. i slično) ili G-Gs cikloalkil, a svaki je opciono supstituisan sa jednim ili više -Q6-T&.
Na primer, prsten koji nastaje od R7i Rs je izabran iz grupe koja obuhvata azetidinil. pirolidinil, piperidinil, morfolinil, piperazinil, l,4-dioksa-8-azaspiro[4.5jdekanil. i cikloheksenil. a svaki je opciono supstituisan sa jednim -CVTh.
Na primer, -Qf,-T(, je okso.
Na primer, Tf, je H, halo, G-G alkil. G-G, alkoksil, G-Cs cikloalkil. CVGo aril. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer. Q6 je veza. a T(, je G-G, alkil. G-Cs cikloalkil. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Qf, je CO, S(0)2, ili NHC(O); a T6 je G-G alkil, G-G alkoksil, G-G cikloalkil. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, T(, je G-G alkil ili G-G alkoksil, a svaki je opciono supstituisan sa halo. hidroksilom, cijano. G-G alkoksilom, amino, mono-G-G alkilamino, di-G-G alkilamino. ili G-G cikloalkilom.
Na primer, Oj, je G-G alkilni linker, a T6 je H ili G-Go aril.
Na primer, Q& je C1-C3alkilni linker, a To je G-G cikloalkil, 4- do 7-člani heterocikloalkil. ili S(0)pRp.
Na primer, svaki od Rp i Rq, nezavisno, je G-G alkil.
Na primer, R13 je H ili metil.
Na primer, R13je H.
Na primer, R3 je H.
Na primer. A"je Br" ili Cl".
Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (lb), (Ic). ili (1 d):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estere. pri čemu su Z, X2. Ri, R2, R>. R4. R5, R(„ Ri 1, i R12definisani u ovom dokumentu.
Još jedna podgrupa jedinjenja sa formulom (I) uključuje ona jedinjenja koja imaju Formulu (le), ili (Ig):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estere, pri čemu su Z, X2. R2. R3. R4. Rf>. i R12definišani u ovom tekstu.
Na primer, R2, R4i Ri2 su svaki, nezavisno, G-d alkil.
Na primer, Rf,je CVC10aril ili 5- ili 6-Člani heteroaril, a svaki od njih je opciono i nezavisno supstituisan sajednim ili više -Q2-T2, gde Q2je veza ili C1-C3alkilni linker. a T2je H. halo. cijano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)<+>A\ -C(0)NRaRb. -NRbC(0)Ra. -S(0)2Ra, ili Rs2. u kojem svaki od Rai Rb, nezavisno, je H ili Rs3, svaki od Rs2 i Rs3. nezavisno, je G-C(, alkil, ili Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom, a svaki od Rs2. Rs3. i pomenuti 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten nastao od Rai Rb, je opciono i nezavisno supstituisan sa jednim ili više -Q?-T3, gde Oj je veza ili C1-C3alkilni linker. a T3je izabran iz grupe koja obuhvata halo. Ci-Cftalkil, 4- do 7-člani heterocikloalkil, ORd, -S(0)?Rd, i -NRjRc. svaki od Rdi Rcnezavisno je H ili Ci-C(, alkil, ili -Q3-T3je okso; ili bilo koja dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima preko kojih su spojeni, formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma izabrana iz N, 0 i S.
Druga podgrupa jedinjenja sa Formulom (I) uključuje ona jedinjenja koja imaju Formulu (II):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estere.
pri čemu
Qije veza ili metilni linker;
T2 je H, halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc/<A>". jj, _S(0)2NRaRb; a
R7je piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil. ili cikloheksil. a svaki je opciono supstituisan sajednim -Oj-Ts;
Rs je etil; a
Ra, Rb, i Rcsu ovde definisani.
Na primer, Q2 je veza.
Na primer, Q2 je metilni linker.
Na primer, T2 je -NRaRbili -(NRaRbRc)<+>A~.
Još jedna podgrupa jedinjenja sa Formulom (I) uključuje ona koja imaju Formulu (Ha):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estere, pri Čemu R7, Rs, Ra, Rb, i Rcsu ovde definisani.
Jedinjenja sa Formulom (II) ili (Ha) mogu da imaju jednu ili više od sledećih karakteristika: Na primer, svaki od Rai Rb, nezavisno, je H ili Cj-Gs alkil opciono supstituisan sa jednim ili više -Os-Tv
Na primer, jedan od R;, i Rb je H.
Na primer, Rai Rb. zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom osim N atoma (na primer. azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil. oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil. piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil, morfolinil, 1,4-diazepanil. 1.4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 jheptanil. 2.5-diazabiciklo[2.2.1 jheptanil, i slično), a pomenuti prstenje opciono supstituisan sajednim ili više -CJ3-T3.
Na primer, Rai Rb, zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju azetidinil. pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil. tetrahidrofuranil. piperidinil, 1,2,3.6-tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, a prsten je opciono supstituisan sajednim ili više -O3-T3.
Na primer, jedan ili više -OJ-T3su okso.
Na primer, Q3 je veza ili nesupstituisani ili supstituisani G-G alkilni linker.
Na primer, T3 je H, halo, 4- do 7-člani heterocikloalkil. G-C3 alkil, ORd. COORj, -S(0)2Rd. ili NRdRe.
Na primer, jedan od Rci i Re je H.
Na primer, R7je G-G cikloalkil ili 4- do 7-člani heterocikloalkil, a svaki je opciono supstituisan sajednim ili više -O^-Tj.
Na primer, R? je piperidinil, tetrahidropiran, tetrahidro-2H-tiopiranil. ciklopentil. cikloheksil. pirolidinil, ili cikloheptil, a svaki je opciono supstituisan sajednim ili više -O5-T5.
Na primer, R7je ciklopentil. cikloheksil ili tetrahidro-2H-tiopiranil, a svaki je opciono supstituisan sa jednim ili više -Oj-Tj.
Na primer, Q5 je NHC(O), a T5 je G-G, alkil ili G-G, alkoksi.
Na primer, jedan ili više -Qj-Tj su okso.
Na primer. R7je l-oksid-tetrahidro-2H-tiopiranil ili l,l-dioksid-tetrahidro-2H-tiopiranil.
Na primer, Qs je veza, a T? je amino, mono-G-G, alkilamino. đi-G-G, alkilamino.
Na primer, Q5je CO. S(0)2. ili NHC(O); a T5je G-G alkil. G-G, alkoksil, C>CScikloalkil. ili 4- do 7-člani heterocikloalkil.
Na primer, Rs je H ili G-G, alkil koji je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil. COOH. C(0)0-G-G, alkil, cijano. G-G, alkoksil, amino, mono-G-Cć alkilamino, i di-G-G, alkilamino.
Na primer, Rg je H, metil, ili etil.
Još jedna podgrupa jedinjenja sa Formulom (I) uključuje ona sa Formulom (III)
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estere,
pri čemu
R.3 je vodonik, C1-C3 alkil ili halo;
R4 je C1-C3 alkil,
R? je Ci-Cf, alkil. Cs-Cs cikloalkil ili 4- do 7-člani heterocikloalkil. opciono supstituisan sajednim ili više Rs
Rsje G-G, alkil;
Rh je-Qh-Th. gde Qhje veza. a C1-C3 alkilni linker ili N(Rn): Ti, je ORhi ili -NRi,]R|l2, u kojem Rhi i Rh2su nezavisno vodonik ili G-G, alkil. ili jedan od Rhi i Rh2 je metil, a drugi je 6-člani heterocikloalkil koji sadrži N i koji je opciono supstituisan sa jednim ili dva metila, ili zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni. Rhi i Rh2formira 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom koji je izabran iz kiseonika i azota. pri čemu pomenuti heterocikloalkilni prsten je opciono supstituisan sa jednim ili više Ri: R, je G-C3 alkil. -NRniRn2ili Gi-Cg cikloalkil ili 5- ili 6-člani heterocikl. a svaki cikloalkil ili heterocikl je nezavisno opciono supstituisan sa R,;
Rn je vodonik. G-G, alkil ili G-Cs cikloalkil:
Rj je G-G alkil, -NRNiRN2, ili -NC(0)RN;
Rni i Rn2su svaki nezavisno vodonik. G-G, alkil, CVCs cikloalkil, 5- ili 6-člani heterocikl. a svaki cikloalkil ili heterocikl je nezavisno opciono supstituisan sa Rj.
Na primer, R3 je vodonik.
Na primer, R3 je halogen, poput, na primer. fluoro ili hloro. Na primer. R3 je fluoro.
Na primer R4je metil, etil, propil, ili izopropil. Na primer. R4je metil. Na primer. R4je izopropil.
Na primer, R7je 4- do 7-člani heterocikloalkil (na primer. azetidinil, oksetanil, tietanil. pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil. izoksazolidinil. triazolidinil. tetrahidrofuranil. piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil. piperazinil. tetrahidro-2H-piranil. 3.6-dihidro-2H-piranil. tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil. i slično).
Na primer. R7 je 5- ili 6-člani cikloalkil ili heterocikloalkil.
Na primer, R7 je 6-člani cikloalkil ili heterocikloalkil.
U nekim izvedbama, R7 je piperidinil, tetrahidropiranil, ciklopentil, ili cikloheksil.
U nekim izvedbama, Rj je metil. U nekim izvedbama, Rj je NH2.
Na primer. Rs je Ci, C2ili Cj alkil. Na primer. Rsje metil. Na primer. Rsje etil.
U nekim izvedbama. Qh je veza. U drugim. Qh je metilen.
U nekim izvedbama. Ti, je N(CH3)2.
U nekim izvedbama, jedan od Rhi i R|12 je metil, a drugi je 6-člani heterocikloalkil koji sadrži N i koji je opciono supstituisan sa jednim ili dva metila. Na primer. pomenuti 6-člani heterocikloalkil koji sadrži N ne sadrži dodatne heteroatome u prstenu. Na primer, pomenuti 6-člani heterocikloalkil koji sadrži N nije dodatno supstituisan osim sa jednom ili dve metilne grupe.
U nekim izvedbama, Rhi i Rb2. zajedno sa atomom N na kojeg su spojeni, formiraju 6-Člani prsten. Na primer. Th je izabran iz piperidina, morfolina, piperazina. i N-metil piperazina.
Na primer. Ti, je morfolin.
U nekim izvedbama. Rije metil ili N(CH3)2. U nekim izvedbama. Rije CVCs cikloalkil ili 5-ili 6-Člani heterocikl. Na primer. Ri je 6-člani cikloalkil ili heterocikl. koji je supstituisan sa nula ili jednim Rj.
U nekim izvedbama. Rn je H ili metil.
U nekim jedinjenjima sa Formulom (III), jedinjenjima sa formulom lila. R3je vodonik, R4je CH3. a Qhje metilen.
U nekim jedinjenjima sa Formulom III, jedinjenjima sa Formulom Illb. R3je fluoro, R4je izopropil, a Qi, je veza.
U nekim jedinjenjima sa Formulom III, jedinjenjima sa Formulom IIIc. R3 je vodonik. R4 je propil ili izopropil, a Qh je metilen.
U nekim jedinjenjima sa Formulom III, jedinjenjima sa Formulom IHd. R3je vodonik, R4je propil ili izopropil, a Qh je veza.
U nekim jedinjenjima sa Formulom III. jedinjenjima sa Formulom (lile).
gde
R3 je H ili F
R4 je metil, i-propil, ili n-propil.
Rhje
gde Ri je H, metil, ili
Reprezentativna jedinjenja iz ovoga pronalaska uključuju jedinjenja koja se nalaze u Tabeli 1. U tabeli ispod, svako pojavljivanje
se treba tumačiti kao
Kao šta se ovde koristi, "alkil", "G. G, G, C4, G ili G alkil" ili "G-G alkil" je namenjen da uključuje G, C2, G, C4, G ili G ravno-lančane (linearne) zasićene alifatske ugljovodonične grupe i G, G, G ili G>razgranate zasićene alifatske ugljovodonične grupe. Na primer, G-G alkil je namenjen da uključuje G, G, G;. G. G i G alkilne grupe. Primeri za alkil uključuju ostatke koji sadrže od jednog do šest atoma karbona, poput, ali bez ograničenja, metila, etila, n-propila, i-propila. n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila ili n-heksila.
U nekim izvedbama, ravno-Iančani ili razgranati alkil sadrži šest ili manje atoma karbona (na primer, G-G za ravni lanac, G-G za razgranati lanac), a u drugoj izvedbi, ravno-lančani ili razgranati alkil sadrži četiri ili manje atoma karbona.
Kao šta se ovde koristi, termin "cikloalkil" se odnosi na zasićeni ili nezasićeni ne-aromatski ugljovodonični mono- ili multi-prstenski (na primer, fuzionisani, premošćeni, ili spiro-prsteni) sistem koji sadrži 3 do 30 atoma karbona (na primer, G-Gii). Primeri za cikloalkil uključuju, ali bez ograničenja, ciklopropil. ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, ciklopentenil. cikloheksenil. cikloheptenil. i adamantil. Termin "heterocikloalkil" se odnosi na zasićeni ili nezasićeni ne-aromatski 3-8 člani monociklični. 7-12-člani biciklični (fuzionisani. premošćeni, ili spiro-prsteni), ili 11-14-člani triciklični prstenski sistem (fuzionisani, premošćeni, ili spiro-prsteni) koji sadrže jedan ili više heteroatoma (poput O. N. S, ili Se), osim ako je drugačije navedeno. Primeri za heterocikloalkilne grupe uključuju, ali bez ograničenja, piperidinil, piperazinil, pirolidinil, dioksanil, tetrahidrofuranil, izoindolinil. indolinil. imidazolidinil. pirazolidinil, oksazolidinil. izoksazolidinil. triazolidinil. tetrahidrofuranil. oksiranil. azetidinil, oksetanil, tietanil, 1.2,3,6-tetrahidropiridinil. tetrahidropiranil. dihidropiranil. piranil, morfolinil, 1.4-diazepanil, 1,4-oksazepanil. 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1 jheptanil. 2,5-diazabiciklo[2.2.1 jheptanil. 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil. 2.6-diazaspiro[3.3jheptanil. 1.4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil i slično.
Termin "opciono supstituisani alkil" se odnosi na nesupstituisani alkil ili alkil koji sadrži označene supstituente koji menjanu jedan ili više atoma vodonika na jednom ili više karbona u ugljovodoničnoj okosnici. Takvi supstituenti mogu da uključuju, na primer. alkil. alkenil. alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi. arilkarboniloksi. alkoksikarboniloksi. ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil. alkoksikarbonil. aminokarbonil. alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, fosfat, fosfonato. fosfinato, amino (uključujući alkilamino. dialkilamino. arilamino. diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino. arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio. tiokarboksilat. sulfate, alkilsulfinil. sulfonato. sulfamoil, sulfonamido, nitro. trifluorometil. cijano. azido. heterociklil, alkilaril. ili aromatski ili heteroaromatski ostatak.
"Arilalkilni" ili "aralkilni" ostatak je alkil koji je supstituisan sa arilom( na primer.fenilmetil (benzil)). "Alkilarilni" ostatak je aril supstituisan sa alkilom( na primer.metilfenil).
Kao šta se ovde koristi, "alkilni linker" je namenjen da uključuje Ci.G.G, G. G ili G, ravno-lančane (linearne) zasićene divalentne alifatske ugljovodonične grupe i C.s. C4. G ili G, razgranate zasićene alifatske ugljovodonične grupe. Na primer, G-G, alkilni linker je namenjen da uključuje G. G, G, G. G i G alkilne linkere. Primeri za alkilni linker uključuju ostatke koji sadrže od jednog do šest atoma ugljenika. poput, ali bez ograničenja, metila (-CH2-), etila (-CH2CH2-), n-propila (-CH2CH2CH2-). i-propila (-CHCH3CH2-). n-butila (-CH2CH2CH2CH2-), s-butila (-CHCH3CH2CH2-). i-butila (-C(CH3 2CH2-). n-pentila (-CH2CH2CH2CH2CH2-), s-pentila (-CHCH3CH2CH2CH2-) ili n-heksila (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
"Alkenil" uključuje nezasićene alifatske grupe koje su analogne u dužini i mogućim supstitucijama sa alkilima koji su ovde opisani, ali koji sadrže najmanje jednu dvostruku vezu. Na primer. termin "alkenil" uključuje ravno-lančane alkenilne grupe (na primer. etenil. propenil, butenil, pentenil, heksenil, heptenil. oktenil. nonenil, decenil). i razgranate alkenilne grupe. U nekim izvedbama, ravno-lančana ili razgranata alkenilna grupa sadrži šest ili manje atoma ugljenika u svojoj okosnici (na primer. CVCo za ravni lanac. CVG, za razgranati lanac). Termin "G-G," uključuje alkenilne grupe koje sadrže dva do šest atoma ugljenika. Termin "C3-C6" uključuje alkenilne grupe koje sadrže tri do šest atoma ugljenika.
Termin "opciono supstituisani alkenil" se odnosi na nesupstituisani alkenii iii na alkenil koji sadrži označene supstituente koji menjaju jedan ili više atoma vodonika na jednom ili više atoma ugljenika iz ugljovodonične okosnice. Takvi supstituenti mogu da uključuju, na primer. alkil. alkenil, alkinil. halogen. hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi. alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi. karboksilat. atkilkarbonil. arilkarbonil. alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil. alkiltiokarbonil. alkoksil. fosfat, fosfonato, fosfinato. amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino. diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino. arilkarbonilamino. karbamoil i ureido), amidino, imino. sulfhidril, alkiltio. ariltio. tiokarboksilat. sulfate, alkilsulfinil, sulfonato. sulfamoil, sulfonamido. nitro, trifluorometil. cijano. heterociklil. alkilaril, ili aromatski ili heteroaromatski ostatak.
"Alkinil" uključuju nezasićene alifatske grupe koje su analogne u dužini i mogućim supstitucijama sa alkilima koji su ovde opisani, ali koji sadrže najmanje jednu trostruku vezu. Na primer, "alkinil" uključuje ravno-lančane alkinilne grupe (na primer. etinil, propinil. butinil. pentinil. heksinil. heptinil. oktinil. noninil. decinil). i razgranate alkinilne grupe. U nekim izvedbama, ravno-lančana ili razgranata alkinilna grupa sadrži šest ili manje atoma ugljenika u svojoj okosnici (na primer. G-G, za ravan lanac, CVG za razgranat ianac). Termin "C2-C(,"
uključuje alkinilne grupe koje sadrže dva do šest atoma ugljenika. Termin "G-G," uključuje alkinilne grupe koje sadrže tri do šest atoma ugljenika.
Termin "opciono supstituisani alkinil" se odnosi na nesupstituisani alkinil ili alkinil koji ima označene supstituente koji menjanju jedan ili više atoma vodonika na jednom ili više atoma ugljenika iz ugljovodonične okosnice. Takvi supstituenti mogu da uključuju, na primer, alkil. alkenil. alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil. aminokarbonil. alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil. fosfat, fosfonato. fosfinato, amino (uključujući alkilamino. dialkilamino. arilamino. diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino. arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril. alkiltio, ariltio, tiokarboksilat. sulfate, alkilsulfinil. sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido. heterociklil. alkilaril. ili aromatski ili heteroaromatski ostatak.
Drugi opciono supstituisani ostaci (poput opciono supstituisanog cikloalkila, heterocikloalkila. arila, ili heteroarila) uključuju nesupstituisane ostatke i ostatke koji sadrže jedan ili više označenih supstituenata. Na primer. supstituisani heterocikloalkil uključuje one koji su supstituisani sa jednom ili više alkilnih grupa, poput 2.2.6,6-tetrametil-piperidinila i 2.2.6.6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridinila.
"Aril" uključuje grupe koje poseduju aromatičnost, uključujući "konjugirane". ili multiciklične sisteme sa najmanje jednim aromatskim prstenom koji ne sadrže heteroatome u strukturi prstena. Primeri uključuju fenil, benzil, 1.2,3,4-tetrahidronaftalenil, itd.
"Heteroarilne" grupe su arilne grupe, kao sta je definisano iznad, osim šta sadrže od jednog do četiri heteroatoma u strukturi prstena, a takođe se nazivaju "aril heterocikli" ili "heteroaromatici". Kao šta se ovde koristi, termin "heteroaril" je namenjen da uključuje stabilni 5-, 6-, ili 7-člani monociklični ili 7-. 8-. 9-, 10-. 11- ili 12-člani biciklični aromatski heterociklični prsten koji se sastoji od atoma ugljenika i jednog ili više heteroatoma. na primer.
1 ili 1-2 ili 1-3 ili 1-4 ili 1-5 ili 1-6 heteroatoma, ilina primer,1, 2, 3. 4, 5, ili 6 heteroatoma. nezavisno izabranih iz grupe koja obuhvata azot, kiseonik i sumpor. Azotni atom može da bude supstituisan ili nesupstituisan(//.,N ili NR pri čemu R je H ili neki drugi supstituent. kao šta je definisano). Azot i sumpor (heteroatomi) mogu opciono da budu oksidirani(//.,N—»-0 i S(0)p, gde p = 1 ili 2). Treba da se primeti da ukupan broj S i 0 atoma u aromatskom heterociklu nije veći od 1.
Primeri za heteroarilne grupe uključuju pirol, furan. tiofen. tiazol, izotiazol, imidazol, triazol. tetrazol, pirazol, oksazol. izoksazol, piridin, pirazin, piridazin, pirimidin. i slično.
Nadalje, termini "aril" i "heteroaril" uključuju multicikliČne arilne i heteroarilne grupe,na primer.triciklične, biciklične.na<p>rimer,naftalen. benzoksazol, benzod i oksazol, benzotiazol, benzoimidazol, benzotiofen, metilendioksifenil. hinolin, izohinolin, naftiridin. indol, benzofuran, purin, benzofuran, deazapurin. indolizin.
U slučaju multicikličnih aromatskih prstena, samo jedan od prstena treba da bude aromatski(//.,2,3-dihidroindol), mada svi ovi prsteni mogu da budu aromatski(//'.,hinolin). Drugi prsten takođe može da bude fuzionisan ili premošćen.
Cikloalkilni, heterocikloalkilni. arilni, ili heteroarilni prsten može da bude supstituisan na jednoj ili više pozicija u prstenu (na primer. ugljenik koji učestvuje u formiranju prstena ili heteroatom poput N) sa supstituentima koji su ovde opisani, na primer. alkil, alkenil. alkinil. halogen, hidroksil, alkoksi. alkilkarboniloksi. arilkarboniloksi. alkoksikarboniloksi. ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil. alkilaminokarbonil. aralkilaminokarbonil, alkenilaminokarbonil, alkilkarbonil. arilkarbonil, aralkilkarbonil. alkenilkarbonii, alkoksikarbonil. aminokarbonil. alkiltiokarbonil. fosfat, fosfonato. fosfinato. amino (uključujući alkilamino, dialkilamino. arilamino. diarilamino i alki lari lami no), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino. karbamoil i ureido), amidino. imino. sullhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfati, alkilsulfinil. sulfonato. sulfamoil. sulfonamido. nitro, trifluorometil. cijano. azido, heterociklil. alkilaril. ili aromatski ili heteroaromatski ostatak. Arilne i heteroarilne grupe mogu takođe da budu fuzionisane ili premošćene sa alicikličnim ili heterocikličnim prstenima, koji nisu aromatski tako da formiraju multiciklični sistem{ naprimer,tetralin. metilendioksifenil).
Kao šta se ovde koristi, "karbocikl" ili "karbociklični prsten" je namenjen da uključuje bilo koji stabilni monociklični, biciklični ili triciklični prsten koji ima specifikovani broj ugljenika. od kojih svi mogu da budu zasićeni, nezasićeni, ili aromatski. Karbocikl uključuje cikloalkil i aril. Na primer, C3-G4 karbocikl je namenjen da uključuje neki monociklični, biciklični ili triciklični prsten koji sadrži 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9. 10, 11, 12. 13 ili 14 atoma ugljenika. Primeri za karbocikle uključuju, ali bez ograničenja, cikiopropil, ciklobutil. ciklobutenil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil. cikloheptenil, cikloheptil, cikloheptenil. adamantil, ciklooktil. ciklooktenil, ciklooktadienil, fluorenil, fenil, nafti 1. indanil. adamantil i tetrahidronaftil. Premošćeni prsteni su takođe uključeni u definiciji karbocikla. uključujući, na primer.
[3.3.0]bicikboktan. [4.3.0]biciklononan. [4.4.0jbiciklodekan i [2.2.2]bicikIooktan. Premošćeni prsten se javlja kada jedan ili više atoma ugljenika povezuju dva ne-susedna atoma ugljenika. U jednoj izvedbi, premošćeni prsteni su jedan ili dva atoma ugljenika. Treba da se primeti da most uvek konvertuje monociklični prsten u triciklični prsten. Kada je prsten premošćen, supstituenti koji su navedeni za sam prsten mogu takođe da budu prisutni i u samom mostu. Fuzionisani (na primer. naftil. tetrahidronaftil) i spiro-prsteni su takođe uključeni.
Kao šta se ovde koristi, "heterocikl" ili "heterociklična grupa" uključuje bilo koju prstensku strukturu (zasićenu, nezasićenu, ili aromatsku) koja sadrži najmanje jedan heteroatom u prstenu (na primer, N. 0 ili S). Heterocikl uključuje heterocikloalkil i heteroaril. Primeri za heterocikle uključuju, ali bez ograničenja, morfolin, pirolidin, tetrahidrotiofen, piperidin. piperazin. oksetan, piran, tetrahidropiran, azetidin. i tetrahidrofuran.
Primeri za heterociklične grupe uključuju, ali bez ograničenja, akridinil, azocinil. benzimidazolil, benzofuranil. benzotiofuranil. benzotiofenil. benzoksazolil. benzoksazolinii, benztiazolil, benztriazolil. benztetrazolil, benzizoksazolil. benzizotiazolil, benzimiđazolinil, karbazolil. 4a//-karbazolil. karbolinil, hromanil. hromenil, cinolinil. dekahidrohinolinil. 2//.6//-1.5,2-ditiazinil. dihidrofuro[2,3-A]tetrahidrofuran, turani 1, furazanil, imidazolidinil. imidazolinil, imidazolil, l//~indazolil. indolnil. indolinil. inđolizinil. indolil. 3H-indolil, izatinoil. izobcnzoturani 1, izohromanil, izoindazolil. izoindolinil. izoindolil, izohinolinil. izotiazolil, izoksazolil, metilendioksifenil. morfolinil. naftiridinil. oktahidroizohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2.4-oksadiazolil. 1.2.5-oksadiazolil. 1,3.4-oksadiazolil. 1.2.4-oksadiazol5(4H)-on. oksazolidinil. oksazolil. oksindolil. pirimidinil. fenantridinil. fenantrolinil. fenazinil, fenotiazinil, fenoksatinil. fenoksazinil, ftalazinil. piperazinil. piperidinil, piperidonil. 4-piperidonil. piperonil. pteridinil, purinih piranil, pirazinil. pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil. piridooksazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2H-pirolil. pirolil. hinazolinil, hinolinil.4H-hinolizinil, hinoksalinil. hinuklidinil.letrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil. tetrahidrohinolinil, tetrazoiil, 6//-1.2,5-tiadiaziniI. 1,2,3-tiadiazolil. 1,2.4-tiadiazolil. 1.2.5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil. tienil. tienotiazolil, tienooksazolil. tienoimidazolil. tiofenil, triazinil. 1.2,3-triazolil. 1.2,4-triazoiil. 1.2.5-triazolil, 1.3.4-triazolil i ksantenil.
Termin "supstituisano", kao šta se ovde koristi, označava daje bilo koji ili više atoma vodonika na označenom atomu zamenjeno sa nekom od navedenih grupa, pod uslovom da normalna valencija označenog atoma nije prevaziđena, i da pomenuta supstitucija daje stabilno jedinjenje. Kada je neki supstituent okso ili keto (//., =-0), tada su 2 atoma vodonika na pomenutom atomu zamenjena. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatskim ostacima. Dvostruke veze iz prstena, kao šta se ovde koriste, su dvostruke veze koje nastaju između dva susedna atoma u prstenu( tj,,C=C, C=N ili N=N). "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" su namenjeni da označavaju jedinjenje koje je dovoljno robusno da preživi proces izolovanja do korisnog stepena prečišćavanja iz reakcione smeše. i naknadno formulisanje u neki efikasni terapeutski agens.
Kada je veza prema nekom supstituentu prikazana tako da ukršta vezu koja spaja dva atoma u prstenu, tada takav supstituent može da bude spojen na bilo koji atom u prstenu. Kada je neki supstituent naveden bez ukazivanja preko kojeg je atoma takav supstituent vezan za ostatak jedinjenje sa određenom formulom, tada takav supstituent može da bude spojen preko bilo kojeg atoma u pomenutoj formuli. Kombinovanje supstituenata i/ili prenosnika je dozvoljeno, ali samo ako takva kombinovanja daju stabilna jedinjenja.
Kada se neka varijabla( na primer,Ri ) javlja više od jednom u bilo kojem konstituentu ili formuli nekog jedinjenja. njena definicija je uvek nezavisna o njenoj definiciji u svim ostalim slučajevima. Tako. na primer, ako je neka grupa prikazana kao da je supstituisana sa 0-2 Riostataka, tada pomenuta grupa može opciono da bude supstituisan sa najviše dva Ri ostatka, a Ri je uvek nezavisno izabran iz definicije za Ri. Takođe. kombinovanja supstituenata i/ili varijabla su dozvoljena, ali samo ako takva kombinovanja daju stabilna jedinjenja.
Termin "hidroksi" ili "hidroksil" uključuje grupe sa -0H ili -O".
Kao šta se ovde koristi, "halo" ili "halogen" se odnosi na fluoro. hloro. bromo i jođo. Termin "perhaiogenovan" generalno se odnosi na ostatak u kojem su svi atomi vodonika zamenjeni sa halogenim atomima. Termin "haloalkil" ili "haloalkoksil" se odnosi na alkil ili alkoksil koji je supstituisan sa jednim ili više halogenih atoma.
Termin "karbonil" uključuje jedinjenja i ostatke koje sadrže ugljenik koji je spojen na atom kiseonika uz pomoć dvostruke veze. Primeri ostataka koji sadrže karbonil uključuju, ali bez ograničenja, aldehide, ketone, karboksilne kiseline, amide. estere, anhidride. itd.
Termin "karboksil" se odnosi na -COOH ili na njegov G-G, alkil ester.
"Acil" uključuje ostatke koji sadrže acil radikal (R-C(O)-) ili karbonilnu grupu. "Supstituisani acil" uključuje acilne grupe u kojima je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno sa. na primer. alkilnim grupama, alkinilnim grupama, halogenom, hidroksilom, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi. ariloksikarboniloksi. karboksilatom, alkilkarbonilom, arilkarbonilom, alkoksikarbonilom. aminokarbonilom. alkilaminokarbonilom. dialkilaminokarbonilom, alkiltiokarbonilom. alkoksilom, fosfatom, fosfonato. fosfinato. amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino). acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino. karbamoil i ureido), amidino, imino. sulfhidrilom, alkiltio, ariltio, tiokarboksilatom, sulfatima, alkilsulfmilom, sulfonato, sulfamoilom, sulfonamido. nitro. trifluoro metilom, cijano. azido. heterociklilom. alkilarilom. ili nekim aromatskim ili heteroaromatskim ostatkom.
"Aroil" uključuje ostatke sa nekim arilnim ili heteroaromatskim ostatkom koji je vezan na karbonilnu grupu. Primeri za aroilne grupe uključuju fenilkarboksi. naftil karboksi. itd.
"Alkoksialkil", "alkilaminoalkil", i "tioalkoksialkil" uključuju alkilne grupe, kao šta je opisano iznad, gde atomi kiseonika, azota. ili sumpora menjaju jedan ili više atoma ugljenika iz ugljovodonične okosnice.
Termin "alkoksi" ili "alkoksil" uključuje supstituisane i nesupstituisane alkilne, alkenilne i alkinilne grupe koje su kovalentno spojene na atom kiseonika. Primeri alkoksi grupa ili alkoksi! radikala uključuju, ali bez ograničenja, metoksi. etoksi, izopropiloksi, propoksi, butoksi i pentoksi grupe. Primeri za supstituisane alkoksi grupe uključuju halogenovane alkoksi grupe. Ove alkoksi grupe mogu da budu supstituisane sa grupama poput alkenila, alkinila, halogena. hidroksila, alkilkarboniloksi, aril karboni I oksi, alkoksikarboniloksi. ariloksikarboniloksi, karboksilata. alkilkarbonila. aril karboni la. alkoksikarbonila, aminokarbonila. alkilaminokarbonila. dialkilaminokarbonila. alkiltiokarbonila, alkoksila. fosfata, fosfonalo. fosfinato, amino (uključujući alkilamino. diaikilamino. arilamino, diarilamino. i alkilarilamino). acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino. karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidrila, alkiltio, ariltio. tiokarboksilata, raznih sulfata, alkilsulfinila. sulfonato, sulfamoila. sulfonamido. nitro. trifluorometila. cijano. azido. heterocikl i I a, alkilarila. ili aromatskih ili heteroaromatskih ostataka. Primeri za halogen koji je supstituisan sa alkoksi grupama uključuju, ali bez ograničenja, fiuorometoksi. đifluorometoksi. trifluorometoksi. hlorometoksi, dihlorometoksi i trihlorometoksi.
Termin "etar" ili "alkoksi" uključuje jedinjenja ili ostatke koji sadrže kiseonik koji je spojen na dva atoma ugljenika ili heteroatoma. Na primer. termin uključuje "alkoksialkil". koji odnosi na alkilnu, alkenilnu, ili alkinilnu grupu koja je kovalentno vezana na atom kiseonika koji je kovalentno vezan na neku alkilnu grupu.
Termin "ester" uključuje jedinjenja ili ostatke koji sadrže ugljenik ili heteroatom koji je spojen na atom kiseonika koji je spojen na ugljenik iz karbonilne grupe. Termin "ester" uključuje alkoksikarboksi grupe poput metoksikarbonila, etoksikarbonila. propoksikarbonila. butoksikarbonila, pentoksi karboni la, itd.
Termin "tioalkil" uključuje jedinjenja ili ostatke koji sadrže alkilnu grupu koja je spojena sa atomom sumpora. Tioalkilne grupe mogu da budu supstituisane sa grupama poput alkila. alkenila, alkinila, halogena, hidroksila. alkilkarboniloksi. arilkarboniloksi. alkoksikarboniloksi. ariloksikarboniloksi. karboksilata, karboksikiseline, alkilkarbonila. arilkarbonila, alkoksikarbonila, aminokarbonila, alkilaminokarbonila, dialkilaminokarbonila. alkiltiokarbonila, alkoksila. amino (uključujući alkilamino. diaikilamino. arilamino. diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino. arilkarbonilamino. karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidrila. alkiltio, ariltio. tiokarboksilata. raznih sulfata, alkilsulfinila, sulfonato. sulfamoila, sulfonamido, nitro. trifluorometila, cijano, azido, heterociklila, alkilarila, ili aromatskih ili heteroaromatskih ostataka.
Termin "tiokarbonil" ili "tiokarboksi" uključuje jedinjenja i ostatke koji sadrže ugljenik koji je spojen na atom sumpora preko dvostruke veze.
Termin "tioetar" uključuje ostatke koji sadrže atom sumpora koji je vezan na dva atoma ugljenika ili na heteroatome. Primeri za tioetare uključuju, ali bez ograničenja, alktioalkile. alktioalkenile, i alktioalkinile. Termin "alktioalkili" uključuje ostatke sa alkilnom. alkenilnom. ili alkinilnom grupom koja je vezana na atom sumpora koji je vezan na alkilnu grupu. Slično, termini "alktioalkenili" se odnosi na ostatke u kojima je alkilna. alkenilna ili alkinilna grupa vezana na atom sumpora koji je kovalentno vezan na alkenilnu grupu; a "alktioalkinili" se odnosi na ostatke u kojima je alkilna. alkenilna ili alkinilna grupa vezana na atom sumpora koji je kovalentno vezan na alkinilnu grupu.
Kao šta se ovde koristi, "amin" ili "amino" se odnosi na nesupstituisani ili supstituisani -NHz. "Alkilamino" uključuje grupe jedinjenja u kojima je azot iz -NH: vezan na najmanje jednu alkilnu grupu. Primeri za alkilamino grupe uključuju benzilamino. metilamino. etilamino. fenetilamino, itd. "Diaikilamino" uključuje grupe u kojima je azot iz -NH2vezan na najmanje dve dodatne alkilne grupe. Primeri za diaikilamino grupe uključuju, ali bez ograničenja, dimetilamino i đietilamino. "Arilamino" i "diarilamino" uključuje grupe u kojimaje azot vezan na najmanje jednu i li dve arilne grupe. "Aminoaril" i "aminoariloksi" se odnosi na aril i ariloksi koji je supstituisan sa amino. "Alkilarilamino", "alkilaminoaril" ili "arilaminoalkil" se odnosi na amino grupu koja je vezana na najmanje jednu alkilnu grupa i najmanje na jednu arilnu grupu. "Alkaminoalkil" se odnosi na alkilnu. alkenilnu. ili alkinilnu grupu koja je vezana na atom azota koji je takođe vezan na alkilnu grupu. "Acilamino" uključuje grupe u kojima je azot vezan na acilnu grupu. Primeri za acilamino uključuju, ali bez ograničenja, alkilkarbonilamino. arilkarbonilamino, karbamoilnu i ureido grupu.
Termin "amid" ili "aminokarboksi" uključuje jedinjenja ili ostatke koji sadrže atom azota koji je vezan na ugljenik iz karbonilne ili tiokarbonilne grupe. Termin uključuje "alkaminokarboksi" grupe koje uključuju alkilne. alkenilne ili alkinilne grupe koje su spojene na amino grupu koja je spojena na ugijenik iz karboniine ili tiokarbonilne grupe. Takođe uključuje "arilaminokarboksi" grupe koje uključuju arilne ili heteroarilne ostatke vezane na amino grupu koja je spojena na ugljenik iz karboniine ili tiokarbonilne grupe. Termini "alkilaminokarboksi", "alkenilaminokarboksi". "alkinilaminokarboksi" i "arilaminokarboksi" uključuju ostatke u kojima su alkilni, alkenilni, alkinilni i arilni ostaci vezani na atom azota koji je sa svoje strane vezan na ugljenik iz karboniine grupe. Amidi mogu da budu supstituisani sa supstituentima poput ravno-lančanog alkila. razgranatog alkila. cikloalkila. arila, heteroarila ili heterocikla. Supstituenti na amidnim grupama mogu da budu dodatno supstituisani.
Jedinjenja iz ovoga pronalaska koja sadrže azote mogu da se konvertuju u N-okside uz pomoć tretmana sa agensima za oksidiranje (na primer, 3-hloroperoksibenzojeva kiselina (mCPBA) i/ili vodonik peroksidi) sa ciljem da se dobiju druga jedinjenja iz ovoga pronalaska. Tako, za sva prikazana jedinjenja koja sadrže azot, za koja se ovde zahteva patentna zaštita, se smatra da, kada je moguće po valanciji i strukturi, uključuju jedinjenje kao staje prikazano i njegove N-oksidne derivate (koji mogu da budu označeni kao N—>0 ili N<+->0"). Nadalje, u drugim instancama, pomenuti azoti ujedinjenjima iz ovoga pronalaska mogu da se konvertuju u N-hidroksi ili N-alkoksi jedinjenja. Na primer. N-hidroksi jedinjenja mogu da se pripreme uz pomoć oksidiranja parentnog amina sa agensima za oksidaciju poput m-CPBA. Za sva prikazana jedinjenja koja sadrže azot. za koja se zahteva patentna zaštita, se smatra da obuhvataju jedinjenje kao šta je prikazano i njegove N-hidroksi(//..N-OH) i N-alkoksi(//".,N-OR, gde R je supstituisan ili nesupstituisan Ci-C & alkil, G-G, alkenil. G-G>alkinil, 3-14-člani karbocikl ili 3-14-člani heterocikl) derivate.
U ovoj predmetnoj prijavi, strukturna formula pomenutog jedinjenja radi prikladnosti u nekim slučajevima predstavlja određeni izomer. ali ovaj pronalazak uključuje sve izomere. poput geometrijske izomere, optičke izomere na bazi asimetričnog ugljenika. stereoizomere, tautomere, i slično, pri čemu treba da se razume da svi izomeri ne moraju da imaju isti novo aktivnosti. Osim toga, kristalni polimorfizam može da bude prisutan kod jedinjenja koja su predstavljena sa pomenutom formulom. Treba da se razume da su sve kristalne forme, smeše kristalnih forma, ili njihov anhidrid ili hidrat uključene u okvire ovoga pronalaska. Nadalje, u okvire ovoga pronalaska je uključen i tako-zvani metabolit koji nastajein vivodegradacijom pomenutog jedinjenja.
"Izomerizam" označava jedinjenja koja imaju identične molekularne formule, ali drugačiji redosled ili prostorni aranžman njihovih atoma. Izomeri koji se razlikuju u prostornom rasporedu njihovih atoma se nazivaju "stereoizomeri". Stereoizomeri koji nisu međusobne ogledalne slike se nazivaju "diastereoizomeri". a stereoizomeri koji nisu međusobne preklapajuće ogledalne slike se nazivaju "enantiomeri" ili ponekad i optički izomeri. Smeša koja sadrži podjednake količine pojedinačnih enantiomernih forma suprotne hiralnosti se naziva "racemična smeša".
Atom ugljenika koji je vezan na četiri ne-identična supstituenta se naziva "hiralni centar".
"Hiralni izomer" označava jedinjenje sa najmanje jednim hiralnim centrom. Jedinjenja sa više od jednog hiralnog centra mogu da postoje kao pojedinačni điastereomer ili kao smeša diastereomera, koja je nazvana "diastereomerna smeša". Kada je prisutan jedan hiralni centar, stereoizomer može da se karakterizuje uz pomoć apsolutne konfiguracije (R ili S) pomenutog hiralnog centra. Apsolutna konfiguracija se odnosi na prostorni raspored supstituenata koji su vezani na pomenuti hiralni centar. Supstituenti koji su spojeni na hiralni centar koji se razmatra se rangiraju u skladusa SekvencnimpravilomCahn-a. Ingold-a i Prelog-a. (Cahn et al.. Angevv. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385;errala511: Cahn et al.. Angevv. Chem. 1966. 78. 413; Cahn & Ingold. J. Chem. Soc. 1951 (London). 612; Cahn et al.. Experientia 1956, 12, 81: Cahn, .1. Chem. Educ. 1964. 41. 116).
"Geometrijski izomer" označava diastereomere koji postoje zbog otežane rotacije oko dvostruke veze ili nekog cikloalkilnog linkera (na primer, 1.3-cilklobutil). Ove konfiguracije se razlikuju u imenima zahvaljujući prefiksima cis i trans, ili Z i E. koji označavaju da se grupe nalaze na istoj ili različitoj strani pomenute dvostruke veze u molekulu u skladu sa Cahn-Ingold-Prelog-ovim pravilima.
Treba da se razume da jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da budu prikazana u formi različitih hiralnih izomera ili geometrijskih izomera. Takođe treba đa se razume da kada jedinjenja imaju hiralne izomerne ili geometrijske izomeme forme, sve izomerne forme su uključene u okvire ovoga pronalaska, a imenovanje samih jedinjenja ne isključuje niti jednu izomernu formu, pri Čemu se podrazumeva da svi izomeri ne moraju da imaju isti nivo aktivnosti.
Nadalje, strukture i druga jedinjenja koja su ovde takođe opisana uključuju sve njihove atropoizomere, pri čemu se podrazumeva da svi atropoizomeri ne moraju da imaju isti novo aktivnosti. "Atropoizomeri" su tip stereoizomera u kojima su atomi dva izomera različito raspoređeni u prostoru. Atropoizomeri postoje zbog ograničene rotacije koja je uzrokovana otežanom rotacijom velikih grupa oko neke centralne veze. Takvi atropoizomeri tipično postoje kao smeša, međutim zahvaljujući napretku hromatografskih tehnika, sada je moguće da se razdvoje smeše dva atropoizomera u određenim slučajevima.
"Tautomer" predstavlja jedan ili više strukturnih izomera koji postoje u ravnoteži i lako mogu da se konvertuju iz jedne u drugu izomernu formu. Ova konverzija rezultuje u formalnu migraciju atoma vodonika koju prati izmena susednih konjugiranih dvostrukih veza. Tautomcri postoje kao smeša tautomernog seta u rastvoru. U rastvorima gde je tautomerizacija moguća, obično se postiže hemijska ravnoteža između tautomera. Tačan omer tautomera zavisi o nekoliko faktora, uključujući temperaturu, rastvarač i pH. Koncept tautomera koji su međusobno konvertibilni preko tautomerizacije se naziva tautomerizam.
Između različitih mogućih tipova tautomerizma, dva se obično primećuju. Kod keto-enolnog tautomerizma nastupa simultana izmena elektrona i atoma vodonika. Prsten-lanac tautomerizam nastaje kao rezultat aldehidne grupe (-CHO) u šećernom lancu molekula koja reaguje sa jednom od hidroksi grupa (-OH) u ustom molekulu kako bi nastala ciklična (u formi prstena) forma kao šta se vidi kod glikoze.
Uobičajeni tautomerni parovi su: keton-enolni. amid-nitrilni, laktam-laktimski, amidno-imidno kiselinski tautomerizam kod heterocikličnih prstena( na primer.kod nukleobaza poput gvanina, timina i citozina), imin-enamin i enamin-enamin. Primer za keto-enoinu ravnotežu je između piridin-2(lH)-on i odgovarajućih piridin-2-ol. kao šta je prikazano ispod.
Treba da se razume da jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se prikažu u formi različitih tautomera. Takođe treba da se razume da kada jedinjenja mogu da zauzmu tautomeme forme. sve takve tautomerne forme su uključene u okvir ovoga pronalaska, a imenovanje pojedinih jedinjenja ne isključuje niti jednu tautomernu formu. Treba da se razume da određeni tautomeri mogu da imaju veće nivoe aktivnosti od drugih.
Termin "kristalni polimorfi", "polimorfi" ili "kristalne forme" označava kristalne strukture kroz koje neko jedinjenje (ili neka njegova so ili solvat) može da kristalizuje u različite kristalne aranžmane, pri čemu svi imaju istu elementarnu kompoziciju. Različite kristalne forme uobičajeno imaju različite obrasce prelamanja X-traka. različite infra-crvene spektare. tačke topljenja, gustine, tvrdoće, kristalni oblik, optičke i električne karakteristike, stabilnost i rastvorljivost. Rastvarač za ponovno kristalizovanje, rata kristalizovanja, temperatura skladištenja, i drugi faktori mogu da uzrokuju da jedna kristalna forma dominira. Kristalni polimorfi pomenutih jedinjenja mogu da se pripreme uz pomoć kristal izovanja u različitim uslovima.
Jedinjenja sa bilo kojom od ovde opisanih Formula uključuju sama jedinjenja, kao i njihove soli, njihove estere i njihove solvate, ako je primenijivo. So, na primer. može da se formira između nekog anjona i neke pozitivno nabijene grupe (na primer. amino) nekoga aril- ili heteroaril-supstituisanog benzenskog jedinjenja. Prikladni anjoni uključuju hlorid. bromid. jodid. sulfat, bisulfat. sulfamat, nitrat, fosfat, citrat, metansulfonat, trifluoroacetat, glutamat. glukuronat. glutarat, malat. maleat. sukcinat. fumarat, tartrat. tosilat. šalicilat. laktat. naftalensulfonat, i acetat (na primer. trifluoroacetat). Termin "farmaceutski prihvatljiv anjon" se odnosi na neki anjon koji je prikladan za formiranje neke farmaceutski prihvatljive soli. Slično, so može takođe da se formira između nekog katjona i neke negativno nabijene grupe (na promer, karboksilat) iz nekog aril- ili heteroaril-supstituisanog benzenskog jedinjenja. Prikladni katjoni uključuju jon natrijuma. jon kalijuma, jon magnezij uma, jon kalcijuma. i amonijumski katjon poput jona tetrametilamonijuma. Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja takođe uključuju one soli koje sadrže atome kvaternarnog azota. Primeri za prolekove uključuju estere i druge farmaceutski prihvatljive derivate, koji su. nakon ađministriranja subjektu, sposobni đa se pretvore u aktivna aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja.
Dodatno, jedinjenja iz ovoga pronalaska, na primer. soli pomenutih jedinjenja. mogu da postoje u hidratizovanoj ili ne-hidratizovanoj (bezvodnoj) formi ili kao solvati sa molekulima drugih rastvarača. Ne-ograničavajući primeri za hidrate uključuju monohidrate, dihidrate, itd. Ne-ograničavajući primeri za solvate uključuju solvate etanola. solvate acetona, itd.
"Solvat" označava adicione forme rastvarača koje sadrže stehiometrijske ili ne-stehiometrijske količine rastvarača. Kada se govori o čvrstom kristalnom stanju, neka jedinjenja imaju tendenciju da ulove molekule rastvarača u fiksnom molarnom omeru, pri čemu formiraju solvat. Ako je pomenuti rastvarač voda. nastao solvat je hidrat; a ako je pomenuti rastvarač alkohol, nastao solvat je neki alkoholat. Hidrati nastaju uz pomoć kombinovanja jednog ili više molekula vode sa jednim molekulom supstancije pri čemu voda zadržava svoje molekularno stanje kao H2O.
Kao šta se ovde koristi, termin "analog" se odnosi na hemijsko jedinjenje koje je strukturno slično sa drugim, ali se blago razlikuje u kompoziciji (na primer, zamenom nekog atoma sa atomom nekog drugog elementa ili u prisutnosti neke određene funkcionalne grupe, ili zamenom jedne funkcionalne gaipe sa drugom funkcionalnom grupom). Tako, analog je neko jedinjenje koje je slično ili uporedivo u delovanju i pojavnosti, ali ne i u strukturi ili poteklu u odnosu na referentno jedinjenje.
Kao šta je ovde definisano, termin "derivat" se odnosi na jedinjenja koja imaju zajedničku središnju strukturu, ali su supstituisani sa različitim grupama kao šta je ovde opisano. Na primer, sva jedinjenja predstavljena sa Formulom (I) su aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja, ali poseduju Formulu (I) kao zajedničko jezgro.
Termin "bioizoster" se odnosi na jedinjenje koje nastaje kao rezultat izmene atoma ili grupe atoma sa drugim, generalno sličnim, atomom ili grupom atoma. Svrha bioizosterične izmene je proizvodnja novog jedinjenja sa sličnim biološkim karakteristikama kao i parentno jedinjenje. Bioizosteriča izmena može da bude fizičko-hemijska ili topološka. Primeri za bioizostere karboksilne kiseline uključuju, ali bez ograničenja, acil sulfonimide, tetrazole. sulfonate i fostbnate. Vidi,na primer,Patani & LaVoie. Chem. Rev . 96. 3147-3176. 1996.
Ovaj pronalazak uključuje sve izotope atoma koji se javljaju u pomenutim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Uz pomoć opšteg primera i bez ograničavanja, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum, a izotopi ugljenika uključuju<L>,C i<l4>C.
2.Sinteza aril- ili heteroaril- supstituisanih benzenskih jedinjenja
Ovaj pronalazak obezbeđuje postupke za sintezu jedinjenja sa bilo kojom Formulom, koja je ovde opisana. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje detaljne postupke za sintezu raznih opisanih jedinjenja u ovom pronalasku u skladu sa sledećim shema kao šta je prikazano u Primerima.
Kroz celi opis, tamo gde su kompozicije opisane kao da imaju, uključuju, ili obuhvataju specifične komponente, smatra se da se kompozicije takođe generalno sastoje od. ili sadrže, navedene komponente. Slično, kada su postupci ili procesi opisani kao da sadrže, uključuju, ili obuhvataju specifične procesne korake, pomenuti procesi takođe generalno sadrže, ili se sastoje od navedenih procesnih koraka. Dodatno, treba da se razume da je redosled koraka ili redosled sprovođenja određenih postupaka nevažan sve dok pronalazak ostaje primenjiv. Štaviše, dva ili više koraka ili postupaka mogu da se sprovedu istovremeno.
Procesi za sinteze iz ovoga pronalaska takođe mogu da tolerišu veliko variranje funkcionalnih grupa, pa prema tome mogu da se koriste različito supstituisani početni materijali. Na kraju ili blizu kraja celokupnog procesa, pomenuti procesi generalno obezbeđuju željeno finalno jedinjenje, mada može da bude poželjno, u nekim određenim slučajevima, da se jedinjenje dodatno konvertuje u neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ester, ili prolek.
Jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se pripreme na različite načine uz korišćenje komercijalno dostupnih početnih materijala, jedinjenja koja su poznata iz literature, ili mogu da se dobiju iz lako dostupnih intermedijara primenom standardnih postupaka sinteze koji su poznati stručnjacima, ili koji su stručnjaku razumljivi na osnovu poučavanja iz ove predmetne prijave. Standardni postupci za sintezu, koji se koriste za pripremu organskih molekula i transformaciju funkcionalnih grupa, i manipulacije mogu da se prouče iz relevantne naučne literature ili iz standardnih udžbenika iz ove tehničke oblasti. Kada se koriste bez ograničenja, klasični tekstovi (bilo koji od nekoliko izvora podataka) od Smith, M. B., March. J., March's Advanced Organic Chemistrv: Reactions, Mechanisms. and Structure. 5. izdanje, John Wiley & Sons: New York, 2001; Greene, T.W.. Wuts, P.G. M.. Protective Groups in Organic Svnthesis, 3. izdanje, John Wiley & Sons: New York. 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser & M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents tor Organic Svnthesis, John Wiley and Sons (1994): i L. Paquette, ur., Encyclopedia of Reagents for Organic Svnthesis. John Wiley and Sons {1995), su korisni i priznati referentni udžbenici iz organske sinteze koji su poznati stručnjaku. Sledeći opisi postupaka za sintezu su namenjeni da ilustruju. ali bez da ograničavaju, opšte procedure za pripremu jedinjenja iz ovoga pronalaska.
Jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se prikladno pripreme primenom brojnih postupaka koji su poznati stručnjacima. Jedinjenja iz ovoga pronalaska sa bilo kojom Formulom, koja je ovde opisana, mogu da se pripreme u skladu sa procedurama koje su ilustrovane u Shemama 1-10 ispod iz komercijalno dostupnih početnih materijala ili početnih materijala koji mogu da se pripreme primenom procedura iz literature. Z i R grupe (poput R2. Rj. R4. Ra, R7. Rs. i R12) u Shemama 1-10 su kao sta je definisano u bilo kojoj Formuli, koja je ovde opisana, osim ako je navedeno drugačije.
Stručnjak iz ove tehničke oblasti će primetiti da se redosled izvođenja reakcije i samih sintetičkih shema, koji su ovde opisani, i raspored nekih koraka može promeniti (poput uvođenja i odstranjivanja zaštitnih grupa).
Stručnjak iz ove tehničke oblasti će primetiti da određene grupe mogu da zahtevaju zaštitu od reakcionih uslova primenom zaštitnih grupa. Zaštitne grupe mogu takođe da se koriste za razlikovanje sličnih funkcionalnih grupa u molekulima. Lista zaštitnih grupa i načine za njihovo uvođenje i odstranjivanje mogu da se pronađu u Greene, T.W.. Wuts. P.G. M.. Protective Groups in Organic Synthesis. 3. izdanje. John Wiley & Sons: Nevv York. 1999.
Preferirane zaštitne grupe uključuju, ali bez ograničenja:
Za hidroksilni ostatak: TBS, benzil, THP. Ac
Za karboksilne kiseline: benzil ester. metil ester, etil ester, alil ester
Za amine: Cbz, BOC, DMB
Za diole: Ac (x2) TBS (x2), ili uzeti zajedno acetonidi
Za tiole: Ac
Za benzimidazole: SEM, benzil, PMB. DMB
Za aldehide: di-alkil acetali poput dimetoksi acetala ili dietil acetila.
U reakcionim shemama koje su ovde opisane, mogu da se proizvedu višestruki stereoizomeri. Kada nije naveden tačno određeni stereoizomer. namera je da se pojam odnosi na sve moguće stereoizomere koji mogu da se dobiju u reakciji. Stručnjak će prepoznati da reakcije mogu da se optimizuju kako bi se dobio samo jedan izomer, ili mogu da se razrade nove sheme za proizvodnju samo jednog izomera. Ako se proizvode smeše. za razdvajanje izomera mogu đa se koriste tehnike poput preparativne tanko-siojne hromatografije, preparativne HPLC. preparativne hiralne HPLC, ili preparativne SFC.
Sledeće skraćenice se koriste u ovoj predmetnoj prijavi, a njihove definicije su kako sledi ispod:
Shema 1 prikazuje sintezu modifikovanih arilnih analoga preko opšte rute koja koristi dobro poznatu herniju. Supstituisane nitrobenzojeve kiseline, od kojih su mnoge komercijalno dostupne ili mogu da se pripreme preko nitracije odgovarajuće supstituisanih benzojevih kiselina ili uz pomoć drugačije hernije koja je dostupna stručnjacima, mogu da se konvertuju u njihove metilne estere uz pomoć tretmana sa metiljodidom u nekom polarnom rastvaraču poput DMF u prisutnosti neke odgovarajuće baze poput natrij um karbonata na odgovarajućoj temperaturi poput 60° C (Korak 1). Nitro grupa može da se redukuje do amina uz pomoć odgovarajućih agenasa za redukciju poput gvožđa u prisutnosti neke kiseline poput amonijum hlorida u nekom protičnom rastvaraču poput etanola na odgovarajućoj temperaturi poput 80° C (Korak 2). Uvođenje R?može da se provede uz pomoć reduktivne aminacije sa nekim odgovarajućim ketonom ili aldehidom u prisutnosti odgovarajućeg agensa za redukciju poput natrijum cijanoborohidrida i katalitičke kiseline poput sirćetne kiseline u odgovarajućem rastvaraču poput metanola. Brojne Rsgrupe mogu da se uvedu uz pomoć alkilovanja primenom Rs-LG, pri čemu LG je izlazna grupa poput joda, u prisutnosti blage baze poput cezijum karbonata u odgovarajućem polarnom rastvaraču poput acetonitrila na odgovarajućoj temperaturi poput 80° C (Korak 4). Alternativno. Rsgrupe mogu da se uvedu uz pomoć reduktivne aminacije sa Rs-ketonom ili Rs-aldehidom u prisutnosti odgovarajućeg agensa za redukciju poput natrijum cijanoborohidrida i katalitičke kiseline poput sirćetne kiseline u nekom odgovarajućem rastvaraču poput metanola. Esterski ostatak može da se konvertuje u amid primenom standardnog protokola od dva koraka. Pomenuti ester može da se hidrolizuje do odgovarajuće kiseline primenom neke prikladne baze poput natrijum hidroksida u nekom polarnom rastvaraču poput etanola (Korak 5). Kiselina se tada podvrgava standardnoj reakciji kuplovanja sa amidom nakon čega se dodaje odgovarajući amin zajedno sa nekim prikladnim agensom za amidno kuplovanje poput PYBOP u nekom prikladnom rastvaraču poput DMSO koje daje željeni amid (Korak 6).
U zavisnosti o prirodi Rt, supstituenta, može da se primeni dodatna hemijska modifikacija sa ciljem da se konvertuje Rr, supstituent u alternativni Rc supstituent. Takva modifikacija može da uključuje hiđrogenaciju, odstranjivanje zaštitne grupe nakon čega slede dodatne reakcije amidnog kuplovanja, reakcije kuplovanja koje su katalizovane sa paladijumom. reakcije reduktivne aminacije ili reakcije alkilovanja. Na primer. kao staje predstavljeno na Shemi 2. ako Rf, je bromid, alternativni R(, supstituenti mogu da se uvedu uz pomoć standardnih protokola sa prelaznim metalima koji zavise o izlaznoj grupi poput bromida koja služi kao tačka spajanja. Bromid se kombinuje sa odgovarajućim derivatom boronskog estera, u prisutnosti blage baze i katalizatora od paladijuma u nekom polarnom rastvaraču poput smeše dioksaiVvoda, na povišenoj temperaturi koje daje željeni novi R6supstituent (tj. Suzuki-eva reakcija). Na primer, kao šta je prikazano u Shemi 3. ako se Suzuki-eva reakcija provodi sa derivatom boronskog estera koji sadrži formilnu grupu, dodatna modifikacija uz pomoć reakcije reduktivne aminacije sa primarnim i sekundarnim aminima (na primer. morfolin. dimetilamin) može da se provede sa ciljem uvođenja aminkih grupa.
U zavisnosti o prirodi R7supstituenata. dodatna hemijska modifikacija nakon Koraka 6 iz Sheme 1 može da se primeni sa ciljem da se konvertuje R7supstituent u alternativni R7supstituent. Na primer, zaštićena amino-grupa koja se nalazi u R7. može da se podvrgne reakciji otklanjanja zaštite (na primer, cepanje Boe grupe) kako bi nastale slobodne amino-grupe. Takve slobodne amino-grupe mogu da se podvrgnu reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilovanja sa ciljem da se dobiju supstituisani amini.
Shema 4 prikazuje opštu sintezu 2,6-disupstituisanih izonikotinamidnih jedinjenja. Suzuki-eva reakcija u Koraku 1 aril boronske kiseline sa metil 2.6-dihloroizonikotinatom (početni materijal) može da se koristi za uvođenje arilne grupe koja može da bude supstituisana sa funkcionalnom grupom X koja je prikladna za dodatnu transformaciju. Takve X grupe uključuju formi 1 ili hidroksimetil koji lako mogu da se transformiraju (u Koraku 2) u različite grupe Y. Takve Y grupe uključuju aminometilne. monoalkilaminometilne i dialkilaminometilne grupe. Pomenute mogu da se pripreme uz pomoć reduktivne aminacije u slučaju kada X je formil ili uz pomoć konvertovanja X~hidroksimetila u bromometil nakon alkilovanja sa aminom. Hidroliza estera je sledeći korak koji daje kiseli intermedijar koji može da se kupluje sa odgovarajućim 3-(aminometil)-piridin-2(lH)-on kako bi nastao penultimat 2-hloro-6-aril-izonikotin amid (intermedijar). Suzuki-eva reakcija ili reakcija aminacije tada daju jedinjenja koja su supstituisana na položaju 2 u Z grupi. U slučaju reakcije aminacije. primeri za Z mogu da budu monoalkilamin ili diaikilamino. U slučaju Suzuki-eve reakcije. Z može da bude aril. dihidroaril ili tetrahidroaril poput cikloheksenila.
Shema 5 prikazuje opštu sintezu 6-aril-3-metil-pikolinamida koji sadrže monoalkilamino ili diaikilamino grupe na poziciji 4. Započinjući sa oksidacijom metil 3-bromo-6-h!oropikolinata u N-oksid nakon hlorinacije sa fosfornim oksihloridom daje metil 3-bromo-4.6-dihloropikolinat. 4-hloro grupa može da bude selektivno supstituisana sa raznim mono i dialkil aminima koji takođe mogu da sadrže funkcionalne ili zaštićene funkcionalne grupe koje mogu da se oslobode u kasnijim fazama. Metilacija sa tetrametil-kalajem. koja je katalizovana paladijumom, praćena hidrolizom estera i amidnim kuplovanjem sa odgovarajućim 3-(aminometil)-piridin-2(lH)-on daje penultimat 2-hloro piridin (intermedijari). Reakcija kuplovanja po Suzuki-ju pomenutih intermedijara sa aril boronskim kiselinama dovodi do zamene 2-hloro grupe sa arilnom grupom. Tako, ovo daje 6-aril-3-metil-pikolinamide koji sadrže monoalkilamino ili diaikilamino grupe na poziciji 4. Arilna grupa koja može da bude supstituisana sa nekom funkcionalnom grupom X koja preostaje u finalnom produktu ili se konvertuje u neku drugu grupu otklanjanjem ili konverzijom funkcionalne grupe, na primer. uz pomoć reduktivne aminacije.
Opšte sinteze 3-(aminometil)-piridin-2(l H)-on (intermedijari) kod reakcije amidnog kuplovanja iz Sheme 1 su prikazane u Shemi 6 ispod. U jednom postupku, dikcton može đa sc kondenzuje sa 2-cijanoacetamidom u prisutnosti odgovarajućeg reagensa poput piperidin acetata u nekom polarnom rastvaraču poput etanola sa ciljem da se dobije cijanopiridon (K.orak 9). U drugom postupku, kada R3je H. odgovarajuće supstituisani alkinilni keton može da se kondenzuje sa 2-cijanoacetamidom u prisutnosti nekog odgovarajućeg reagensa poput piperidin acetata u nekom polarnom rastvaraču poput etanola kako bi se dobio cijanopiridon
(Korak 11). Cijano grupa može da se redukuje u odgovarajućim uslovima poput hidrogenacije u prisutnosti katalitiČkog Raney-evog nikla u polarnom rastvaraču poput amonijuma u metanolu kako bi se dobio amin (Korak 10).
Dodatno, u zavisnosti o prirodi R2, R3, ili R4grupe, dodatna hemijska modifikacija može da se primeni kako bi se svaka od njih nezavisno konvertovala u neki alternativni supstituent. Takve modifikacije mogu da uključuju hidrogenaciju, odstranjivanje zaštitne grupe nakon dodatnih reakcija amidnog kuplovanja, reakcije kuplovanja koje su katalizovane sa paladijumom, reakcije reduktivne aminacije, i reakcije alkilovanja.
Shema 4 prikazuje varijantu opšte sinteze iz Sheme 1 na bazi 2-supstituisanih (supstituent je R12grupa) metil 3-amino-5-bromo-benzoata (početni materijali). Ovi početni materijali mogu. sa svoje strane, da se pripreme iz 2-supstituisanih 3-nitro-benzojevih kiselina koje su komercijalno dostupne ili mogu da se pripreme uz pomoć nitracije 2-supstituisanih benzojevih kiselina. Tako, brominacija 2-supstituisanih 3-nitro-benzojevih kiselina sa prikladnim reagensima poput l,3-dibromo-5,5-dimetil-2.4-imidazolidindiona daje odgovarajuće 2-supstituisane 3-nitro-5-bromobenzojeve kiseline. Razni postupci esterifikovanja praćeni redukcijom nitro grupa tada mogu da se naknadno implementiraju kako bi se pripremio2-supstituisani metil 3-amino-5-bromo-benzoat (početni materijali) iz 2-supstituisanih 3-nitro-5-bromo-benzojevih kiselina.
Kao staje prikazano u Shemi 7. R7grupa može da se uvede iz 2-supstituisanih metil 3-amino-5-bromo-benzoata u Koraku 1 primenom reduktivne aminacije sa nekim odgovarajućim R7-ketonom ili R7-aldehidom u prisutnosti odgovarajućeg agensa za redukciju poput natrijum cijanoborohidrida i katalitičke kiseline poput sirćetne kiseline u nekom odgovarajućem rastvaraču poput metanola. Slično. Rs grupe mogu da se uvedu u Koraku 2 uz pomoć reduktivne aminacije sa Rg-ketonom ili Rg-aldehidom u prisutnosti odgovarajućeg agensa za redukciju poput natrijum cijanoborohidrida i katalitičke kiseline poput sirćetne kiselina u nekom odgovarajućem rastvaraču poput metanola. Alternativno, brojne R« grupe mogu da se uvedu uz pomoć alkilovanja primenom R<g->LG. gde LG je izlazna grupa poput joda. u prisutnosti blage baze poput cezijum karbonata u nekom odgovarajućem polarnom rastvaraču poput acetonitrila na odgovarajućoj temperaturi poput 80° C. U Koraku 3, arilne grupe koje odgovaraju Rt mogu da se uvedu uz pomoć Suzuki-eve reakcije intermedijamog bromida uz pomoć odgovarajuće aril boronske kiseline ili esterskog derivata, na primer. X-Ar-B(OH)2. u prisutnosti blage baze i katalizatora od paladijuma u nekom polarnom rastvaraču poput smeše đioksan/voda na povišenoj temperaturi. X grupa u X-Ar-B(OH)2može da bude potpuno uređeni supstituent u arilnom prstenu ili može da bude funkcionalna grupa koja može da sc konvertuje u drugu grupu uz pomoć modifikovanja pomenute funkcionalne grupe. Takve modifikacije mogu da uključuju hidrogenaciju. otklanjanje zaštitnih grupa nakon dodatnih reakcija amidnog kuplovanja, reakcija kuplovanja koje su katalizovane sa paladijumom. reakcije reduktivne aminacije ili reakcije alkilovanja. Na primer. ako se Suzuki-eva reakcija provodi sa derivatom boronske kiseline koji sadrži formilnu grupu, dodatna modifikacija uz pomoć reduktivne aminacije sa primarnim i sekundarnim aminima (na primer, morfolin. dimetilamin) može da se provede sa ciljem da se uvedu aminske grupe. U Koraku 4. esterski ostatak može da se hidrolizuje u odgovarajuću kiselinu uz pomoć neke prikladne baze poput natrijum hidroksida u polarnom rastvaraču poput etanola. U Koraku 5. kiselina može da se podvrgne standardnoj reakciji amidnog kuplovanja nakon čega se dodaje odgovarajući amin zajedno sa nekim prikladnim reagensom za amidno kuplovanje poput PYBOP u nekom prikladnom rastvaraču poput DMSO koje daje željeni amid. U zavisnosti o prirode R?supstituenta. dodatna hemijska modifikacija nakon Koraka 5 iz Sheme 4 može da se provede sa ciljem da se konvertuje Ry supstituent u neki alternativni R?supstituent. Na primer. zaštićena amino grupa koja se nalazi u R?može da se podvrgne reakciji otklanjanja zaštite (na primer. cepanje Boe grupe) koje daje slobodne amino grupe. Takve slobodne amino grupe mogu da se podvrgnu reduktivnoj aminaciji ili alkilovanju kako bi se dobili supstituisani amini.
Shema 8 ispod prikazuje opštu sintezu 2-monoalkilamino i 2-dialkilmino-3-supstituisanih-6-aril-izonikotinamida u kojima 3-supstituent je R12. a 6-arilna grupa je Rt, iz Formule I. U Koraku 1. 3-supstituent može da se uvede uz pomoć postupka koji je opisan od strane autora Epsztain J. et al. Tetrahedron, 1991, v. 47. 1697-16708, tj. metalacijom 2-hloro-izonikotinanilida sa n-butillitijumom nakon čega sledi zarobljavanje sa alkiljodidom poput metiljodidaili aldehida ili druge elektroftlne grupe.
U slučajevima kada reagens za zarobljavanje proizvede supstituent sa funkcionalnom grupom, ova grupa može da se maskira ili konvertuje u neku drugu funkcionalnu grupu koja je kompatibilna sa sledećim hemijskim koracima. U Koraku 2 može da se provede hidroliza anilid amida u standardnim kiselim uslovima nakon čega sledi sinteza metil estera u standardnim uslovima. na primer. kao šta je prikazano sa metil jodidom i bazom koje daje odgovarajuće metil 2-hloro-3-supstituisane izonikotinate. U Koraku 4. alkilamino grupa može da se uvede uz pomoć reakcije kuplovanja (po Buchwald-u) R7NH2 monoalkilamina sa metil 2-hloro-3-supstituisanim izonikotinatima. Ova reakcija je poznata po različitim 2-hloropiridinskim sistemima iz hemijske literature. U opcionom Koraku 5 za diaikilamino jedinjenja. R,s grupe mogu da se uvedu uz pomoć reduktivne aminacije sa Rs-ketonom ili Rs-aldehidom u prisutnosti odgovarajućeg agensa za redukovanje poput natrijum cijanoborohidrida i katalitičke kiseline poput sirćetne kiseline u nekom odgovarajućem rastvaraču poput metanola. Alternativno, brojne R« grupe mogu da se uvedu uz pomoć alkilovanja primenom Rx-LG. gde LG je izlazna grupa poput joda u prisutnosti blage baze poput cezijum karbonata u odgovarajućem polarnom rastvaraču poput acetonitrila na odgovaraj ućoj temperaturi poput 80° C. U Koraku 6, oksidacija sa N-oksidom nakon hlorinacije sa fosfornim oksihloridom daje metil 6-hloro-2-mono ili dialkilamino-3-supstituisane izonikotinate. U Koraku 7. esterski ostatak može da se hidrolizuje u odgovarajuću kiselinu uz pomoć neke prikladne baze poput natrijum hidroksida u polarnom rastvaraču poput etanola. U Koraku 8, kiselina može da se podvrgne standardnoj reakciji amidnog kuplovanja nakon čega se dodaje odgovarajući amin ili supstituisani 3-faminometil)-piridin-2(l H)-on zajedno sa nekim prikladnim reagensom za amidno kuplovanje poput PYBOP u nekom prikladnom rastvaraču poput DMSO koje daje željeni amid. U Koraku 9. arilne grupe koje odgovaraju R.6mogu da se uvedu uz pomoć Suzuki-eve reakcije intermedijarnog bromida sa odgovarajućom aril boronskom kiselinom ili esterskim derivatom, na primer. X-Ar-B(OH)2. u prisutnosti blage baze i katalizatora od paladijuma u nekom polarnom rastvaraču poput smeše dioksan/voda na povećanoj temperaturi. X grupa u X-Ar-B(OH)2može da bude potpuno razrađen supstituent u arilnom prstenu ili može da bude funkcionalna grupa koja može da se konvertuje u drugu grupu uz pomoć modifikacije pomenute funkcionalne grupe. Takve modifikacije mogu da uključuju hidrogenaciju, odstranjivanje zaštitne grupe praćeno dodatnim reakcijama amidnog kuplovanja, reakcijama kuplovanja katalizovanog sa paladijumom. reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilovanja. Na primer. ako se Suzuki-eva reakcija provodi sa derivatom boronske kiseline koji sadrži formilnu grupu, dodatna modifikacija uz pomoć reduktivne aminacije sa primarnim i sekundarnim aminima {na primer. morfolin, dimetilamin) može da se provede sa ciljem da se uvedu aminske grupe. U zavisnosti o prirodi R?supstituenta, dodatni koraci hemijske modifikacije mogu da se primene sa ciljem da se R7supstituent konvertuje u neki alternativni R7supstituent. Na primer. zaštićena amino grupa koja se nalazi u R7može da se podvrgne reakciji otklanjanja zaštite (na primer. cepanje Boe grupe) koje daje slobodne amino grupe. Takve slobodne amino grupe mogu da se podvrgnu reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilovanja kako bi se dobili supstituisani amini.
Shema 9 prikazuje sintezu modifikovanih arilnih analoga prateći opštu rutu koja primenjuje ustaljenu herniju. Započinjući sa supstituisanom benzojevom kiselinom poput 5-hloro-2-metilbenzojeve kiseline, nitracija uz standardne uslove poput tretmana sa konc. H2SO4i konc. HNO3može da obezbedi nitro analog. Esterifikacija kiselina može da se postigne uz pomoć agenasa za alkilovanje poput metil jođida u prisutnosti baze poput natrijum karbonata u polarnom rastvaraču poput DMF. Nitro grupa može da se reducira u uslovima poput prisutnosti gvožđa i amonijum hlorida i protičnom rastvaraču poput etanola uz grejanje na temperaturi poput 80° C. Nastao anilin može da se konvertuje u bromid uz pomoć reakcije po Sandmever-u uz pomoć tretmana sa CuBr2i t-butil nitrita u rastvaraču poput acetonitrila. Kuplovanjc tiola sa bromidom, koje je katalizovano sa paladijumom. može da se postigne uz pomoć izvora paladijuma poput Pd(OAc)2 sa ligandom poput ksantfosa u prisutnosti baze poput N.N-diizopropil etilamina u rastvaraču poput 1,4-dioksana uz opciono grejanje na temperaturi poput 100° C. Ester može da se hidrolizuje sa vodenom bazom poput NaOH u vodi. Nastala kiselina može da se kupluje sa 3-(amino metil)-4. 6-dimetilpiridin-2(1H)-on uz primenu standardnog kuplovanja amino kiselina poput PyBOP u DMSO. Nastao tioetar može da se oksidirana u odgovarajući sulfoksid ili sulfon primenom odgovarajućih ekvivalenata oksidansa poput m-CPBA u rastvaraču poput DCM. Arilni supstituenti mogu da se ugrade uz pomoć primene kuplovanja sa paladijumom poput Suzuki-eve reakcije kao staje opisano iznad.
Shema 10 prikazuje sintezu modifikovanih arilnih analoga prateći opštu rutu koja primenjuje poznatu herniju. Započinjući sa supstituisanim anilinom poput metil 3-amino-5-hloro-2-metilbenzoata. anilin može da se konvertuje u fenol primenom Sandmever-ove reakcije poput tretmana sa vodenim rastvorom NaNChu vodenoj kiselini poput 50% H2SO4. Fenol može da se alkiluje primenom agenasa za alkilovanje poput tetrahidro-2H-piran-4-il 4-metilbenzensulfonata u prisutnosti odgovarajuće baze poput cezijum karbonata u nekom polarom rastvaraču poput DMF uz opciono grejanje na temperaturi poput 80° C. Ester može da se hidrolizuje sa vodenom bazom poput NaOH u vodi. Nastala kiselina može da se spoji sa 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on primenom standardnih uslova kuplovanja amino kiselina poput PyBOP u DMSO. Arilni supstituenti mogu da se ugrade uz pomoć reakcije kuplovanja sa paladijumom poput Suzuki-eve reakcije kao šta je opisano iznad.
3.Upotreba u postupcima za tretman
Jedinjenja iz ovoga pronalaska inhibiraju aktivnost EZH2 ili nekog njenog mutanta kao histonske metiltransteraze i. prema tome, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja koja su namenjena za upotrebu u postupcima za tretman stanja i bolesti na čije napredovanje može da se utiče preko modulacije statusa metilacije histona ili drugih belančevina, pri čemu se pomenuti metilacijski status održava, barem delomično, delovanjem EZH2. Određena jedinjenja. koja su ovde opisana, su kandidati za tretman, ili prevenciju nekih stanja i bolesti. Modulacija metilacijskog statusa histona može, sa svoje strane, da utiče na nivo ekspresije ciljanih gena koji se aktivišu upravo metilacijom, i/ili ciljnih gena koji su suprimirani preko metilacije. Ovaj postupak uključuje administriranje nekom subjektu u potrebi terapeutski efektivnu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa, solvata. ili stereoizomera.
Poremećaj u kojem EZH2-posredovana proteinska metilacija igra ulogu može da bude rak ili pre-kancerozno stanje. Ovaj pronalazak dodatno obezbeđuje jedinjenje, ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ester, polimorf ili solvat namenjen za upotrebu u postupku za tretman raka ili pre-kanceroznog stanja na čije napredovanje može da se utiče preko modulacije EZH2-posredovane proteinske metilacija ili je namenjen za pripremu leka koji je koristan u tretmanu pomenutog raka ili pre-kanceroznog stanja. Primeri za tumore koji mogu da se tretiraju uključuju limfome, uključujući ne-EIodgkin-ov limfom, folikularni limfom (FL) i difuzni B-velikoćelijski limfom (DLBCL); melanom; i leukemiju, uključujući CML. Primeri za pre-kancerozno stanje uključuju mijelodisplastični sindrom (MDS; ranije poznat kao pre-leukemija).
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupke za zaštitu od poremećaja u kojem EZH2-posredovana proteinska metilacija igra ulogu pri čemu se nekom subjektu u potrebi administrira terapeutski efektivna količina jedinjenja iz ovog pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa ili solvata. Ovaj poremećaj može da bude rak, na primer, rak u kojem EZH2-posredovana proteinska metilacija igra ulogu. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. estera, polimorfa, solvata, ili stereoizomera. za pripremu leka koji je koristan za prevenciju ćelijskog proliferativnog poremećaja koji je povezan, barem delomično. sa EZH2-posredovanom proteinskom metilacijom.
Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se koriste sa ciljem da se modulira proteinska (na primer. histonska) metilacija, na primer, da se modulira aktivnost histonske metiltransteraze ili histonske demetilaze. Barem neka jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se koristein vivoiliin vitroza moduliranje proteinske metilacije. Histonska metilacija je uključena u aberantnoj ekspresiji nekih gena u tumorima, i u utišavanju neuronskih gena u ćelijama koje nisu neuroni. Barem neka od jedinjenja. koja su ovde opisana, su prikladni kandidati za tretiranje ovih bolesti, tj., za smanjivanje metilacije ili vraćanje metilacija na približno onaj nivo koji je prisutan u normalnim ćelijama.
Jedinjenja koja su modulatori metilacije mogu da se koriste za moduliranje ćelijske proliferacije. Na primer, u nekim slučajevima izražena proliferacija može da se ograniči uz. pomoć agenasa koji smanjuju metilaciju, dok nedovoljna proliferacija može da se stimuliše sa agensima koji povećavaju metilaciju. Prema tome. bolesti koji mogu da se tretiraju sa jedinjenjima iz ovoga pronalaska mogu da uključuju hiperproliferativne bolesti, poput benignog ćelijskog rasta i malignog ćelijskog rasta.
Kao šta se ovde koristi, "subjekt u potrebi" je subjekt koji pati od poremećaja u kojem EZH2-posredovana proteinska metilacija igra ulogu, ili subjekt koji pokazuje povećani rizik razvi janja takvog poremećaja u odnosu na celu populaciju. Subjekt u potrebi može da pati od pre-kanceroznog stanja. Preferirano, subjekt u potrebi pati od raka. "Subjekt" uključuje nekog sisara. Ovaj sisar može da bude,na primer,čovek ili odgovarajući ne-humani sisar. poput primata, miša, pacova, psa, mačke, krave, konja, koze. kamile, ovce i svinje. Subjekt takođe može da bude ptica ili perad. U jednoj izvedbi, pomenuti sisar je čovek.
Kao šta se ovde koristi, termin "ćelijski proliferativni poremećaj" se odnosi na stanja u kojima neregulisan ili abnormaln rast, ili oba, ćelija može da dovede do razvoja neželjenog stanja ili bolesti, koja može da bude, ali i ne mora, kancerozna. Primeri za ćelijske proliferativne poremećaje koji mogu da se tretiraju sa jedinjenjima iz ovoga pronalaska obuhvataju brojna stanja u kojima je ćelijska deoba pogrešno regulisana. Primeri za ćelijski proliferativni poremećaj uključuju, ali bez ograničenja, neoplazme. benigne tumore, maligne tumore, pre-kancerozna stanja,in situtumore, enkapsulirane tumore, tumore koji metastazi raj u. tečne tumore, Čvrste tumore, imunološke tumore, hematološke tumore, razni tipovi raka. karcinome. leukemije, limfome. sarkome, i stanje u kojem se ćelije brzo dele. Termin "ćelije koje se brzo delc". kao šta se ovde koristi, označava bilo koju ćeliju koja se deli stopom koja prevazilazi ili je veća od očekivane ili primećene stope susednih ili jukstaponiranih ćelija u istom tkivu. Ćelijski proliferativni poremećaj uključuje pre-tumor ili pre-kancerozno stanje. Ćelijski proliferativni poremećaj uključuje rak. Postupci i upotrebe, koje su ovde obezbeđene, mogu da se koriste za tretman ili ublažavanje simptom raka ili za identifikovanje prikladnih kandidata za takve svrhe. Termin "rak" uključuje čvrste tumore, kao i hematološke tumore i/ili maligna stanja. "Pre-tumorska ćelija" ili "pre-kancerozna ćeiija" je ćelija koja manifestira ćelijski proliferativni poremećaj koji je pre-tumor ili pre-kancerozno stanje. "Ćelija raka" ili "kancerozna ćelija" je ćelija koja manifestira ćelijski proliferativni poremećaj koji je rak. Sva ponovljiva sredstva i merenja mogu da se koriste za identifikovanje ćelija raka ili pre-kanceroznih ćelija. Ćelije raka ili pre-kancerozne ćelije mogu da se identifikuju uz pomoć histološkog tipiziranja ili ocenjivanja tkivnog uzorka( na primer.primerka biopsije). Ćelije raka ili pre-kancerozne ćelije mogu da se identifikuju uz pomoć upotrebe odgovarajućih molekularnih markera.
Primeri za ne-kancerozna stanja ili poremećaje koji mogu da se tretiraju uz pomoć jednog ili više jedinjenja iz ovoga pronalaska uključuju, ali bez ograničenja, reumatoidni artritis; zapaljenje (upala); autoimunu bolest; Iimfoproliterativna stanja; akromegaliju; reumatoidni spondilitis; osteoartritis; giht. druga artritička stanja; sepsu: septički šok; endotoksični šok; gram-negativu sepsu; sindrom toksičnog šoka; astmu: respiratorni distres sindrom odraslih; hroničnu opstruktivnu plućnu bolest; hroničnu plućnu upalu; bolest zapaljenja creva; Crohn-ovu bolest; psorijazu; ekcem; ulcerativni kolitis; fibrozu pankreasa; fibrozu jetra; akutnu i hroničnu bolest bubrega; sindrom iritabilnih creva; gorušicu: restenozu; cerebralnu malariju; kap i ishemičnu ozledu: neuralnu traumu; Alzheimer-ovu bolest; Huntington-ovu bolest: Parkinson-ovu bolest; akutnu i hroničnu bol; alergijski rinitis; alergijski konjunktivitis; hronično otkazivanje srca; akutni koronarni sindrom; kaheskiju; malariju; lepru: lišmanijazu: lajmsku bolest; Reiter-ov sindrom; akutni sinovitis; degeneraciju mišića, bursitis; tendinitis: tenosinovitis; diskus herniju, prsnuća (rupture), ili sindrom hernijacije intervertebralnog diska; osteopetroza; trombozu; restenozu; silikozu; plućnu sarkozu; bolesti resorpcije kostiju, poput osteoporoze: reakciju transplant-naspram-domaćina; multiplu sklerozu; lupus; fibromijalgiju: AIDS i druge viralne bolesti poput herpes zostera. herpes simpleks I ili II. virusne influence i citomegalovirus; idiabetes meli i t us.
Primeri za tumore koji mogu da se tretiraju primenom jednog ili više jedinjenja iz ovoga pronalaska uključuju, ali bez ograničenja, adrenokortikalni karcinom, tumore povezane sa AIDS-om. limfom povezan sa AIDS-om, analni rak, anorektalni rak, rak analnog kanala, rak slepog creva. mladenački cerebelarni astrocitom. mladenački cerebralni astrocitom. karcinom bazalnih ćelija, rak kože (ne-melanom), rak žuči, rak ekstrahepatičnih žučnih vodova, rak intrahepatičnih žučnih vodova, rak bešike. rak kostiju i zglobova, osteosarkom i maligni fibrozni histiocitom. rak mozga, tumor mozga, rak moždanog debla, cerebelarni astrocitom. cerebralni astrocitom/maligni gliom. ependimom, meduloblastom.supratentorijalne primitivne neuroektodermalne tumore, gliom vizualnih puteva i hipotalamični gliom. rak dojke, bronhijalni adenomi/karcinoidi, karcinoidni tumor, gastrointestinalni. rak nervnog sistema, limfom nervnog sistema, rak centralnog nervnog sistema, limfom centralnog nervnog sistema, rak vrata materice, mladenačke tumore, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, hronične mijeloproliferativne poremećaje, rak debelog creva. kolorektalni rak. limfom kožnih T-ćelija. limfoid neoplazma.mycosis fungoides,Seziary-ev sindrom, rak endometrijuma, rak jednjaka, ekstrakranijalni tumor polnih ćelija, tumor ekstragonadalnih polnih ćelija, rak ekstrahepatičnih žučnih vodova, rak oka. intraokulanir melanom. retinoblastom, rak žučne kese. rak želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST). tumor germinativnih ćelija, tumor germinativnih ćelija jajnika, gestacijski trofoblastni tumor gliom. rak glave i vrata, hepatocelularni (jetrini ) rak, Hodgkin-ov limfom. hipofaringealni rak, intraokularni melanom, rak očiju, tumore ćelija Langerhansovih ostrvca (endokrin pankreas), Kaposi-ev sarom, rak bubrega, renalni rak, rak larinksa, akutnu limfoblastičnu leukemiju, akutnu mijeloidnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, leukemiju vlasastih ćelija, rak usana i usne šupljine, rak jetra, rak pluća, ne-sitnoćelijski rak pluća, sitnoćelijski rak pluća, limfom povezan sa AIDS-om, ne-Hodgkin-ov limfom, primarni limfom centralnog nervnog sistema. Waldenstram-ova makroglobulinemija, meduloblastom. melanom. intraokularni (očni) melanom, karcinom Merkel-ovih ćelija, maligni mezoteliom. mezoteliom. rak skvamoznih ćelija vrata koji metastazira, rak usta, rak jezika, sindrom multiple endokrine neoplazije.mycosis fungoides,mijelodisplastične sindrome, mijelodisplastične/mijeloproliferativne bolesti, hroničnu mijelogenu leukemiju, akutnu mijeloidnu leukemiju, multipli mijelom, hronične mijeloproliferativne poremećaje, nazofaringealni rak. neuroblastom. rak usna. rak usne šupljine, orofaringealni rak. rak jajnika, rak epitela jajnika, tumor jajnika sa malim malignim potencijalom, rak pankreasa, rak ćelija Langerhansovih ostrvca iz pankreasa, rak paranazalnog sinusa i nazalne šupljine, rak penisa, faringealni rak. feohromocitom, pineoblastom i supratentorijalne primitivne neuroektodermalne tumore, rak hipofize, neoplazma plazma-ćelija/multipli mijelom, pleuropulmonarni blastom. rak prostate, rak rektuma. rak bubrežnog pelvisa i uretera. karcinom prelaznog epitela. retinoblastom. rabdomiosarkom, rak pljuvačnih žlezda. Juing-ov sarkom. Kaposi-ev sarkom, sarkom mekog tkiva, rak materice, sarkom materice, rak kože (ne-melanom), rak kože (melanom). karcinom Merkel-ovih ćelija iz kože, rak tankog creva, sarkom mekog tkiva, karcinom skvamoznih ćelija, rak želuca, supratentorijalne primitivne neuroektodermalne tumore, rak testisa, rak grla, timom, timom i karcinom timusa, rak štitaste žlezde, karcinom prelaznog epitela bubrežnog pelvisa i uretera i drugih organa mokraćnog sistema, gestacijski trofoblastni tumor, rak uretre. rak endometrijuma materice, sarkom materice, rak tela materice, rak vagine, rak vulve. i Wilm-ov tumor.
"Ćelijski proliferativni poremećaj hematološkog sistema" je ćelijski proliferativni poremećaj koji uključuje ćelije hematološkog sistema. Ćelijski proliferativni poremećaj hematološkog sistema može da uključuje limfom. leukemiju, mijeloidne neoplazme, neoplazme mastocita, mijelodisplaziju, benignu monoklonalnu gamopatiju. limfomtoidnu granulomatozu, limfomtoidnu papulozu. policitemiju veru, hroničnu mijelocitnu leukemiju, agnogeničnu mijeloidnu metaplaziju, i osnovnu trombocitemiju. Ćelijski proliferativni poremećaj hematološkog sistema može da uključuje hiperplaziju, displaziju, i metaplaziju ćelija hematološkog sistema. U jednom aspektu, kompozicije iz ovoga pronalaska mogu da se koriste za tretiranje tumora koji je izabran iz grupe koja obuhvata hematološki rak iz ovoga pronalaska ili hematološki ćelijski proliferativni poremećaj iz ovoga pronalaska, ili mogu da se koriste za identilikovanje prikladnih kandidata za takve svrhe. Hematološki rak iz ovoga pronalaska može da uključuje multipli mijelom, limfom (uključujući Hodgkin-ov limfom. ne-Hodgkin-ov limfom, mladenačke timfome, i limfome limfocitnog i kožnog porekla), leukemiju (uključujući mladenačku leukemiju, leukemiju vlasastih ćelija, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu mijelocitnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, i leukemiju mastocita). mijeloidne neoplazme i neoplazme mastocita.
"Ćelijski proliferativni poremećaj pluća" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na ćelije pluća. Ćelijski proliferativni poremećaj pluća može da uključuje sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu da uključuju rak pluća, pre-tumor ili pre-kancerozno stanje pluća, benigni rast ili lezije u plućima, malignani rast ili lezije u plućima, i metastatske lezije u tkivu i drugim telesnim organima. U jednom aspektu, kompozicije iz ovoga pronalaska mogu da se koriste za tretman raka pluća ili ćelijskih proliferativnih poremećaja pluća, ili mogu da se koriste za identifikovanje prikladnih kandidata za takve svrhe. Rak pluća može da uključuje sve forme raka pluća. Rak pluća može da uključuje maligne plućne neoplazme. karcinomin . silu,tipične karcinoidne tumore, i atipične karcinoidne tumore. Rak pluća može da uključuje sitno-ćelijski karcinom pluća ("SCLC"), ne-sitno-ćelijski karcinom pluća ("NSCLC"). karcinom skvamoznih ćelija, adenokarcinom. karcinom malih ćelija, karcinom velikih ćelija, karcinom adenoskvamoznih ćelija, i mezoteliom. Rak pluća može da uključuju "karcinom ožiljka", bronhioalveolarni karcinom, karcinom gigantskih ćelija, karcinom vretenastih ćelija, neuroendokrini karcinom velikih ćelija. Rak pluća može da uključuju plućne neoplazme koje su histološki i ultrastrukturno heterogene( na primer,ćelije više tipova).
Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu da uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu da uključuju rak pluća, pre-kancerozna stanja pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu da uključuju hiperplaziju, metaplaziju, i displaziju pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu da uključuju hiperplaziju koja je indukovana azbestom, skvamoznu metaplaziju. i benignu reaktivnu mezotelijalnu metaplaziju. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu da uključuju zamenu jednoslojnog cilindričnog epitela sa stratifikovanim skvamoznim epitelom, i mukoznu displaziju. Osobe izložene udisanju štetnih agenasa iz okoline poput dima cigareta i azbesta pokazuju povećani rizik razvijanja ćelijskih proliferativnih poremećaja pluća. Prethodne bolesti pluća, koje mogu da predisponiraju osobe prema razvijanju ćelijskih proliferativnih poremećaja pluća, mogu da uključuju hroničnu intersticijalnu bolest pluća, nekrotizirajuću plućnu bolest, sklerodermu, reumatoidnu bolest, sarkoidozu, intersticijalni pneumonitis, tuberkulozu, ponovljene pneumonije. idiopatsku plućnu fibrozu. granulome. azbestozu. fibrozni alveolitis, i Hodgkin-ovu bolest.
"Ćelijski proliferativni poremećaj debelog creva" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na ćelije debelog creva. Preferirano, ćelijski proliferativni poremećaj debelog creva je rak debelog creva. U jednom aspektu, kompozicije iz ovoga pronalaska mogu da se koriste za tretman raka debelog creva ili ćelijskih proliferativnih poremećaja debelog creva. ili mogu da se koriste za identifikovanje prikladnih kandidata za takve svrhe. Rak debelog creva može da uključuje sve forme raka debelog creva. Rak debelog creva može da uključuje sporadične ili nasledne karcinome debelog creva. Rak debelog creva može da uključuje maligne neoplazme debelog creva, karcinomin situ,tipične karcinoidne tumore, i atipične karcinoidne tumore. Rak debelog creva može da uključuje adenokarcinom. karcinom skvamoznih ćelija, i karcinom adenoskvamoznih ćelija. Rak debelog creva može da bude povezan sa nekim naslednim sindromom koji je izabran iz grupe koja obuhvata nasledni ne-polipozni kolorektalni rak. familijarnu adenomatoznu polipozu. Gardner-ov sindrom, Peutz-Jeghers-ov sindrom, Turcot-ov sindrom i mladenačku polipozu. Rak debelog creva može da bude uzrokovan uz pomoć naslednog sindroma koji je izabran iz grupe koja obuhvata nasledni ne-polipozni kolorektalni rak, familijarnu adenomatoznu polipozu. Gardner-ov sindrom, Peutz-Jeghers-ov sindrom, Turcot-ov sindrom i mladenačku polipozu.
Ćelijski proliferativni poremećaji debelog creva mogu da uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije debelog creva. Ćelijski proliferativni poremećaji debelog creva mogu da uključuju rak debelog creva. pre-kancerozna stanja debelog creva, adenomatozne polipe debelog creva i metahrone lezije debelog creva. Ćelijski proliferativni poremećaji debelog creva mogu da uključuju adenom. Ćelijski proliferativni poremećaji debelog creva mogu da se karakterizuju sa hiperplazijom, metaplazijom. i displazijom debelog creva. Prethodne bolesti debelog creva koje mogu da predisponiraju osobe na razvijanje ćelijskih proliferativnih poremećaja debelog creva mogu da uključuju prethodni rak debelog creva. Postojeće bolesti koje mogu da predisponiraju osobe na razvijanje ćelijskih proliferativnih poremećaja debelog creva uključuju Crohn-ovu bolest i ulcerativni kolitis. Ćelijski proliferativni poremećaj debelog creva može da bude povezan sa mutacijom gena koji je izabran iz grupe koja obuhvata p53,rav, FAPiDCC.Osoba može da pokazuje povećani rizik za razvijanje ćelijskog proliterativnog poremećaja debelog creva zbog prisutnosti mutacije nekog gena koji je izabran iz grupe koja obuhvata p53.reis, FAPiDCC.
"Ćelijski proliferativni poremećaj pankreasa" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na ćelije pankreasa. Ćelijski proliferativni poremećaji pankreasa uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije pankreasa. Ćelijski proliferativni poremećaji pankreasa uključuju rak pankreasa, pre-tumor ili pre-kancerozno stanje pankreasa, hiperplaziju pankreasa, i disaplaziju pankreasa, benigni rast ili lezije pankreasa, i maligni rast ili lezije pankreasa, i metastatske lezije tkiva i drugih telesnih organa. Rak pankreasa uključuje sve forme raka pankreasa. Rak pankreasa uključuje adenokarcinom duktusa, adenoskvamozni karcinom, pleomorfni karcinom gigantskih ćelija, adenokarcinom sluzokože. karcinom gigantskih ćelija koje sliče osteoklastima. cistadenokarcinom sluzokože. acinarni karcinom, karcinom neklasi fikovanih velikih ćelija, karcinom malih ćelija, pankreatoblastom, papi lamu neoplazmu, cistadenom sluzokože. papilarnu cističnu neoplazmu, i serozni cistadenom. Rak pankreasa takođe uključuje neoplazme pankreasa koje su histološki i ultrastrukturno heterogene (na primer, mešani tipovi ćelija).
"Ćelijski proliferativni poremećaj prostate" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na ćelije prostate. Ćelijski proliferativni poremećaji prostate uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije prostate. Ćelijski proliferativni poremećaji prostate uključuju rak prostate, pre-tumor ili pre-kancerozno stanje prostate, benigni rast ili lezije prostate, i maligni rast ili lezije prostate, i metastatske lezije tkiva i drugih organa. Ćelijski proliferativni poremećaji prostate uključuju hiperplaziju. metaplaziju, i displaziju prostate.
"Ćelijski proliferativni poremećaj kože" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na ćelije kože. Ćelijski proliferativni poremećaji kože uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije kože. Ćelijski proliferativni poremećaji kože uključuju pre-tumor ili pre-kancerozno stanje kože, benigni rast ili lezije kože. melanom. maligni melanom i druge tipove malignog rasta ili malignih lezija kože, i metastatske lezije drugih tkiva i organa. Ćelijski proliferativni poremećaji kože uključuju hiperplaziju. metaplaziju. i displaziju kože.
"Ćelijski proliferativni poremećaj jajnika" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na jajnik. Ćelijski proliferativni poremećaji jajnika uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije jajnika. Ćelijski proliferativni poremećaji jajnika uključuju pre-tumor ili pre-kancerozno stanje jajnika, benigni rast ili lezije jajnika, rak jajnika, maligni
rast ili lezije jajnika, i metastatske lezije drugih tkiva i organa. Ćelijski proliferativni poremećaji kože uključuju hiperplaziju, metaplaziju, i displaziju ćelija jajnika.
"Ćelijski proliferativni poremećaj dojke" je ćelijski proliferativni poremećaj koji se odnosi na ćelije dojke. Ćelijski proliferativni poremećaji dojke uključuju sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije dojke. Ćelijski proliferativni poremećaji dojke uključuju rak dojke, pre-tumor ili pre-kancerozno stanje dojke, benigni rast ili lezije dojke, i maligni rast ili lezije dojke, i metastatske lezije u drugim tkivima i organima u telu. Ćelijski proliferativni poremećaji dojke uključuju hiperplaziju. metaplaziju. i displaziju dojke.
Ćelijski proliferativni poremećaj dojke može da bude pre-kancerozno stanje dojke. Kompozicije iz ovoga pronalaska mogu da se koriste za tretman pre-kanceroznog stanja dojke. Pre-kancerozno stanje dojke uključuje atipičnu hiperplaziju dojke, karcinom duktusain silu(DCIS), intraduktalni karcinom, lobularni karcinominsitu(LCIS). lobularnuneoplaziju. i rast ili leziju (u fazi 0 ili razredu 0) dojke{ na primer,faza 0 ili razred 0 raka dojke, ili karcinomain situ).Pre-kancerozno stanje dojke može da se podeli u faze u skladu sa TNM shemom za klasifikovanjem koja je prihvaćena od straneAmerican Joint Committee on Cancer(AJCC). pri čemu se primarni tumor (T) dogovorno nalazi u fazama TO ili Tis; regionalni limfni čvorovi (N) dogovorno su u fazi NO; a udaljena metastaza (M) je u fazi M0.
Ćelijski proliferativni poremećaj dojke može da bude rak dojke. U jednom aspektu, kompozicije iz ovoga pronalaska mogu da se koriste za tretman raka dojke, ili mogu da se koriste sa ciljem da se identifikuju prikladni kandidati za tu svrhu. Rak dojke uključuje sve forme raka dojke. Rak dojke uključuje tumore primarnog epitela dojke. Rak dojke uključuje tumore kod kojih je dojka uključena preko drugih tumora poput limfoma. sarkoma ili melanoma. Rak dojke uključuje karcinom dojke, intraduktalni karcinom dojke, lobularni karcinom dojke, nediferencirani karcinom dojke, filoidni tumor dojke, angiosarkom dojke, i primarni limfom dojke. Rak dojke uključuje tumore dojke u fazi I. II. 1IIA. II1B. 1IIC i IV. Intraduktalni karcinom dojke uključuje invazivni karcinom, invazivni karcinomin situsa predominantnom intraduktalnom komponentom, upalni rak dojke, i intraduktalni karcinom dojke čiji je histološki tip izabran iz grupe koja obuhvata mitesera, mucinozni (koloidni). medularni, medularni sa limfocitnim infiltratom, papilarni, skirozni. i tubularni tip. Lobularni karcinom dojke uključuje invazivni lobularnmi karcinom sa predominantnomin situ
komponentom, invazivni lobularni karcinom, i lobularni karcinom koji se infiltrira. Rak dojke uključuje Paget-ovu bolest, Paget-ovu bolest sa intraduktalnim karcinomom, i Paget-ovu bolest sa invazivnim dukalnim karcinomom. Rak dojke uključuje neoplazme dojke koje su histološki i ultrastrukturno heterogene (na primer, više tipova ćelija).
Jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so. polimorf. ili solvat. može da se koristi za tretman raka dojke, ili da se koristi za identi ti kovanje prikladnih kandidata za tu svrhu. Rak dojke koji može da se tretira uključuje familijarni rak dojke. Rak dojke koji može da se tretira uključuje sporadični rak dojke. Rak dojke koji može da se tretira se pojavljuje kod muškarca. Rak dojke koji može da se tretira se pojavljuje kod žena. Rak dojke koji može da se tretira se pojavljuje pre početka menopauze kod žena ili nakon menopauze kod žena. Rak dojke koji može da se tretira se pojavljuje u nekom subjektu koji ima ili je stariji od 30 godina, ili u subjektu koji je mlađi od 30 godina. Rak dojke koji može da se tretira se pojavljuje u subjektu koji ima ili je stariji od 50 godina, ili u subjektu koji je mlađi od 50 godina. Rak dojke koji može da se tretira se pojavljuje u subjektu koji ima ili je stariji od 70 godina, ili u subjektu koji je mlađi od 70 godina.
Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao takav koji sadrži familijarnu ili spontanu mutaciju u BRCA1, BRCA2. ili p53. Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao takav koji ima amplifikaciju HER2/neu gena. koji prekomerno eksprimira HER2/neu, ili ekspresija HER2/neu je niska, intermedijarna ili viša. Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao takav može da bude marker koj i je izabran iz grupe koja obuhvata estrogenski receptor (ER), progesteronski receptor (PR). humani epidermalni faktor rasla (receptor-2. Ki-67, CA15-3, CA 27-29, i c-Met). Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira tako ER-nepoznato, ER-bogato ili ER-siromašno. Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao ER-negativni ili ER-pozitivni. ER-tipiziranja raka dojke mogu da se provede uz pomoć bilo kojeg pristupa koji može da se ponovi. ER-tipiziranje raka dojke može da se provede kao staje opisano u Onkologie 27: 175-179 (2004). Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao PR-nepoznato, PR-bogato. ili PR-siromašno. Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao PR-negativan ili PR-pozitivan. Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao receptor pozitivan ili receptor negativan. Rak dojke koji može da se tretira može da se tipizira kao da je povezan sa nivoima CA 15-3. ili CA 27-29. ili oba u krvi.
Rak dojke koji može da se tretira uključuje lokalizovani tumor dojke. Rak dojke koji može da se tretira uključuje tumor dojke koji je povezan sa negativnom biopsijom sentine!-\\ m\ nog čvora (SLN). Rak dojke koji može da se tretira uključuje tumor dojke koji se povezuje sa pozitivnom biopsijomsentinel- liminogčvora (SLN). Rak dojke koji može da se tretira uključuje tumor dojke koji se povezuje sa jednim ili više pozitivnih pomoćnih limfnih čvorova, pri čemu su pomoćni limfni čvorovi procenjeni uz pomoć bilo kojeg dostupnog postupka. Rak dojke koji može da se tretira uključuje tumor dojke koji je tipiziran kao takav koji ima nodalni negativni status( na primer,čvor-negativan) ili nodalni pozitivni status( na primer,čvor-pozitivan). Rak dojke koji može da se tretira uključuje tumor dojke koji je metastazirao na drugim lokacijama u telu. Rak dojke koji može da se tretira može da se klasifikuje kao da je metastazirao na lokaciju koja je izabrana iz grupe koja obuhvata kosti, pluća, jetra, ili mozak. Rak dojke koji može da se tretira može da se klasifikuje u skladu sa karakteristikama koje su izabrane iz grupe koja obuhvata metastazirani, lokalizovani. regionalni, lokalno-regionalni. lokalno rašireni, udaljeni, multicentričan, bilateralan, ipsilateralan. kontralateralan, novo dijagnosticiran, koji se ponovo pojavio, i neoperativan.
Jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so. ester. polimorf ili solvat, može da se koristi za tretman ili prevenciju ćelijskog proliterativnog poremećaja dojke, ili za tretman ili prevenciju raka dojke, u nekom subjektu koji pokazuje povećani rizik od razvijanja raka dojke u odnosu na celu populaciju, ili da se koristi za identifikovanje prikladnih kandidata za tu svrhu. Subjekt sa povećanim rizikom od razvijanja raka dojke u odnosu na celu populaciju je žena sa familijarnom historijom ili ličnom historijom pojavljivanja raka dojke. Subjekt sa povećanim rizikom od razvijanja raka dojke u odnosu na celu populaciju je žena koja ima naslednu ili spontanu mutaciju u BRCA1 ili BRCA2. ili u oba. Subjekt sa povećanim rizikom od razvijanja raka dojke u odnosu na celu populaciju je žena sa familijarnom historijom pojavljivanja taka dojke i naslednom ili spontanom mutacijom u BRCA1 ili BRCA2. ili u oba. Subjekt sa povećanim rizikom od razvijanja raka dojke u odnosu na celu populaciju je žena koja je starija od 30 godina, starija od 40 godina, starija od 50 godina, starija od 60 godina, starija od 70 godina, starija od 80 godina, ili starija od 90 godina. Subjekt sa povećanim rizikom od razvijanja raka dojke u odnosu na celu populaciju je subjekt sa atipičnom hiperplazijom dojke, duktalnim karcinomomin situ(DCTS). intraduktalnim karcinom, lobularnim karcinomin situ(I.C'IS). lobularnom neoplazijom, ili rastom ili lezijom u dojci koja je u fazi 0( na primer,faza 0 ili razred 0 raka dojke, ilikarcinom in situ).
Rak dojke koji može da se tretira može histološki da se tipizira preko Scarff-Bloom-Richardson sistema, pri čemu raku dojke je pripisan mitotski indeks od 1, 2. ili 3: indeks nuklearnog pleomorfizma od 1.2. ili 3: indeks formiranja tubula od 1.2. ili 3; a ukupni Scarff-Bloom-Richardson-ov rezultat od između 3 i 9. Raku dojke koji može da se tretira može da se pripiše tumorska faza u skladu saInternational Consensus Panel uvezi sa tretmanom raka dojke koji je izabran iz grupe koja obuhvata fazu 1, fazu 1 -2, fazu 2, fazu 2-3. ili fazu 3.
Rak koji može da se tretira može da se rasporedi u skladu sa TNM-klasifikacionim sistemomAmerican Joinl Committee on Cancer(AJCC). pri čemu tumor (T) može da se označi kao da pripada fazi TX. TI, Tlmic, Tla, Tlb. Tle, T2, 13. T4, T4a, T4b. T4c, ili T4d; i pri čemu su regionalni limfni čvorovi (N) označeni kao da pripadaju fazi NX. NO. NI. N2. N2a. N2b, N3. N3a. N3b. ili N3c; a udaljene metastaze (M) mogu da pripadaju fazama MX. MO, ili Ml. Rak koji može da se tretira može da se razvrsta u skladu sa klasifikacijom odAmerican Joinl Committee on Cancer(AJCC) koja obuhvata Fazu I, Fazu 11A, Fazu I1B. Fazu III A, Fazu II1B, Fazu IIIC. ili Fazu IV. Rak koji može da se tretira može da se razvrsta prema AJCC-klasifikaciji kao Razred GX( na primer,razred ne može da se pripiše). Razred 1. Razred 2. Razred 3 ili Razred 4. Rak koji može da se tretira može da se razvrsta u skladu sa AJCC-patološkom klasifikacijom (pN) koja obuhvata pNX. pNO. PNO (I-), PNO (!+). PNO (mol-). PNO (mol+). PN1, PNl(mi), PNla. PNlb, PNlc, pN2, pN2a, pN2b. pN3. pN3a, pN3b. ili pN3c.
Rak koji može da se tretira uključuje tumor za koji je određeno da je velik približno 2 santimetra u dijametru. Rak koji može da se tretira uključuje tumor za kojeg je određeno da je velik od oko 2 do oko 5 santimetara u dijametru. Rak koji može da se tretira uključuje tumor za kojeg je određeno daje veći ili jednak 3 santimetra u dijametru. Rak koji može da se tretira uključuje tumor za kojeg je određeno da je veći od 5 santimetara u dijametru. Rak koji može da se tretira može da se klasifikuje uz pomoć mikroskopskog izgleda kao diferencirani, umereno diferencirani, slabo diferencirani, ili nediferencirani. Rak koji može da se tretira može da se klasifikuje uz pomoć mikroskopskog izgleda u odnosu na mitotski indeks( na primer,količina ćelija koje se dele) ili nuklearnog pleomorfizma( naprimer,promene u ćelijama). Rak koji može da se tretira može da se klasifikuje uz pomoć mikroskopskog izgleda se povezuje sa delovima nekroze( naprimer.delovi koji odumiru ili koji sadrže degenerirane ćelije). Rak koji može da se tretira može da se klasifikuje kao da ima abnormalni kariotip. abnormalni broj hromosoma. ili jedan ili više hromosoma koji imaju abnormalan izgled. Rak koji može da se tretira može da se klasifikuje kao da je aneuploid, triploid. tetraploid, ili da ima promenjenu ploidiju. Rak koji može da se tretira može da se klasifikuje kao da ima hromosomsku translokaciju, ili deleciju ili duplikaciju celog hromosoma. ili deletirani region. duplikaciju ili amplifikaciju nekog dela hromosoma.
Rak koji može da se tretira može da se proceni uz pomoću DNA citometrije. protočne citometrije, ili w?age-citometrije. Rak koji može da se tretira može da se tipizira kao da ima 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90% ćelija koje se nalaze u sintetskoj fazi ćelijske deobe( na primer,u S fazi ćelijske deobe). Rak koji može da se tretira može da se tipizira kao da ima nisku frakciju u S-fazi ili visoku frakciju u S-fazi.
Kao šta ovde koristi, "normalna ćelija" je ćelija koja ne može da se klasifikuje kao deo "ćelijskog proliferativnog poremećaja". Normalna ćelija ne pokazuje neregulisani ili abnormalni rast. ili oba, koje može da dovede do razvoja neželjenog stanja ili bolesti. Preferirano, normalna ćelija ima mehanizme kontrole ćelijske deobe koji omogućavaju normalno funkcioniranje ćelijskog ciklusa.
Kao šta se ovde koristi, "kontaktiranje ćelije" se odnosi na slučaj kada se neko jedinjenje ili kompozicija materije nalazi u direktnom kontaktu sa nekom ćelijom, ili je dovoljno blizu da uspostavi željeni biološki efekt u pomenutoj ćeliji.
Kao šta se ovde koristi, "jedinjenje kandidat" se odnosi na jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili na neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ester. polimorf ili solvat, koje je bilo ili će biti testirano u jednom ili višein vitroiliin vivobioloških ogleda, a sa ciljem da se odredi da li je pomenuto jedinjenje sposobno da potakne željeni biološki ih medicinski odgovor u pomenutoj ćeliji, tkivu, sistemu, životinji ili čoveku koji je bio predviđen od strane istraživača ili kliničara. Jedinjenje kandidat je jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljivu so, ester, polimorf ili solvat. Pomenuti biološki ili medicinski odgovor može da bude tretman za rak. Pomenuti biološki ili medicinski odgovor može da bude tretman ili prevencija ćelijskog proliferativnog poremećaja. Pomenuti biološki odgovor ili efekt takođe može da uključuje promenu u ćelijskoj proliferaciji ili rastu koji nastupain vilroili u nekom životinjskom modelu, kao i druge biološke promene koji mogu da se primetein vilro. In vitroiliin vivobiološki ogledi mogu da uključuju, ali bez ograničenja, oglede encimske aktivnosti, oglede pomaka elektroforetske mobilnosti, oglede sa reporter genom,in vitrooglede ćelijske vijabilnosti, i oglede koji su ovde opisani.
Kao šta se ovde koristi, "monoterapija" se odnosi na administriranje pojedinačnog aktivnog ili terapeutskog jedinjenja nekom subjektu u potrebi. Preferirano, monoterapija podrazumeva administriranje terapeutski efektivne količine nekog aktivnog jedinjenja. Na primer, to je monoterapija raka sa jednim od jedinjenja iz ove predmetne prijave, ili sa nekom njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, analogu ili derivatu, kod nekog subjekta u potrebi. Monoterapija je suprotna od kombinovane terapije, gde se administrira kombinacija više jedinjenja. preferirano tako daje svaka komponenta iz pomenute kombinacije prisutna u nekoj terapeutski efektivnoj količini. Monoterapija sa jedinjenjem iz ove predmetne prijave, ili sa nekom njegovom farmaceutski prihvatljivom soli. polimorfom ili solvatom, može da bude efektivnija od kombinovane terapije kada je reč o indukovanju željenog biološkog efekta.
Kao šta se ovde koristi, "tretiranje" ili "tretman" opisuje upravljanje i brigu za pacijenta sa ciljem suprotstavljanja nekoj bolesti, stanju, ili poremećaju koje uključuje administriranje nekog jedinjenja iz ove predmetne prijave, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata, a sa ciljem da se ublaže simptomi ili komplikacije pomenute bolesti, stanja ili poremećaja, ili da se bolest, stanje ili poremećaj uklone. Termin "tretman" takođe može da uključuje tretman neke ćelijein vitroili tretman nekog životinjskog modela.
Jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so. polimorf ili solvat. može takođe da se koristi sa ciljem da se spreći neka relevantna bolest, stanje ili poremećaj, ili može da se koristi sa ciljem da se identifikuju prikladni kandidati za tu svrhu. Kao šta se ovde koristi, "sprečavanje" ili "prevencija" opisuje smanjivanje ili eliminiranje izbijanja simptoma ili komplikacija takve bolesti, stanja ili poremećaja.
Kao šta se ovde koristi, termin "ublaži" je namenjen da opiše proces uz pomoć kojeg se snaga obeležja ili simptoma nekog poremećaja smanjuje. Važno, pomenuto obeležje (znak) ili simptom mogu da se ublaže bez da se eliminišu. Administriranje farmaceutskih kompozicija iz ovoga pronalaska može đa dovede do eliminisanja obeležja ili simptoma, međutim, eliminisanje nije obavezno. Očekivano je da efektivne doze smanjuju snagu znaka ili simptoma. Na primer. znak ili simptom nekog poremećaja poput raka. koji može da se pojavi na više lokacija, je ublažen ako se snaga raka smanji u barem jednoj od više njegovih lokacija.
Kao šta se ovde koristi, termin "snaga" je namenjen da opisuje potencijal raka da se transformiše od pre-kanceroznog. ili benignog stanja u neko maligno stanje. Alternativno, ili dodatno, snaga opisuje fazu raka, na primer, u skladu sa TNM sistemom (prihvaćen od straneInternational Union Against Cancer(UICC) iAmerican Joint Committee on Cancer(AJCC)) ili uz pomoć drugih priznatih postupaka. Faza raka se odnosi na opseg ili snagu samog raka. na bazi faktora poput lokacije primarnog tumora, veličine tumora, broja odvojenih tumora, i uključenosti limfnih Čvorova (prelazak raka na limfne Čvorove). Alternativno, ili dodatno, snaga opisuje tumorski razred uz pomoć priznatih postupaka (vidiNational Cancer Institute.www. rak. tiov). Tumorski razred je sistem koji se koristi da se klasifikuje rak ćelija uz pomoć termina koji opisuju njihovu abnormalnost pod mikroskopom i kako brzo će tumor rasti i raširiti se. Mnogi faktori se uzimaju u obzir kada se određuje tumorski razred, uključujući strukturu i obrazac rasta ćelija. Specifični faktori koji se koriste da se odredi tumorski razred variraju kod svakog tipa raka. Snaga takođe opisuje histološki razred, koji je takođe poznat kao diferencijacija, koji se odnosi na to koliko tumorske ćelije sliče normalnim ćelijama iz istog tipa tkiva (vidiNational Cancer Institute.www. rak. iio\). Nadalje, snaga opisuje nuklearni razred, koji se odnosi na veličinu i oblik nukleusa (jedra) u tumorskim ćelijama i na procenat tumorskih ćelija koje se dele (vidiNational Cancer Institute.www. rak. uov).
Snaga takođe može da opisuje stepen do kojeg tumor izlučuje faktore rasta, degradira ekstraćelijsku matricu, postaje vaskulizovan. gubi sposobnost adhezije prema susednom tkivu, ili metastazira. Štaviše, snaga može da opiše broj lokacija do kojih je primarni tumor metastazirao. Konačno, snaga uključuje složenost (mogućnost) da se tumori varirajućih tipova i lokacija tretiraju. Na primer, najteži tumori su oni koji su neoperabilni, oni koji mogu da prodru u brojne telesne sisteme (hematološki i imunološki tumori), i oni koji su veoma otporni na tradicionalne tretmane. U ovim situacijama, produžavanje života nekom subjektu i/ili smanjivanje boli, smanjivanje količine kanceroznih ćelija ili ograničavanje ćelija na samo jedan sistem, i poboljšavanje faze tumora/razreda tumora/histološke faze/nuklearnog razreda se smatra ublažavanje obeležja ili simptoma raka.
Kao šta se ovde koristi, termin "simptom" se deflniše kao indikacija neke bolesti, bolesnog stanja, ozlede, ili da nešto nije u redu sa telom. Simptomi se osećaju ili primećuju od strane osobe koja iz pokazuje, ali ne moraju da budu vidljivi i drugima. Drugi su ovde definisani kao ne-zdravstveni profesionalci.
Kao šta se ovde koristi, termin "obeležje" se takođe definiše kao indikacija koja uručuje na to na nešto nije u redu sa telom. No. obeležja su definisana kao detalji koji su vidljivi lekaru. medicinskoj sestri, ili drugom zdravstvenom profesionalcu.
Rak je grupa bolesti koje mogu da uzrokuju gotovo bilo koji znak ili simptom. Znakovi i simptomi zavise o tome gde se rak nalazi, o njegovoj veličini, i koliko utiče na susedne organe ili strukture. Ako se rak proširi (metastazira), tada se simptomi mogu pojaviti na različitim delovima tela.
Kako rak raste, tada počinje da gura susedne organe, krvne sudove, i nerve. Ovaj pritisak uzrokuje neke znakove i simptome raka. Ako se rak nalazi u kritičnom području, poput određenih delova mozga, čak i najmanji tumor može da uzrokuje rane simptome.
No, ponekad tumori započinju na mestima gde ne uzrokuju bilo kakve simptome sve dok rak ne postane veoma velik. Tumori pankreasa, na primer. uobičajeno ne rastu dovoljno veliki kako bi mogli da se osete sa spoljne strane tela. Neki tumori pankreasa ne uzrokuju simptome sve dok ne počnu da rastu oko susednih nerava (ovo uzrokuje bol u leđima). Drugi rastu oko kanala, koje blokira protok žuči i dovodi do pojave kožnog žutila koje je poznato kao žuticu. Do momenta kada rak pankreasa počne da uzrokuje pomenute znakove ili simptome, obično je tada već u naprednoj fazi.
Rak takođe može da uzrokuje simptome poput groznice, umora, ili gubitka težine. To je zbog toga šta ćelija raka koriste veliku količinu telesne energije da opskrbe ili oslobode supstancije koje menjaju telesni metabolizam. Takođe, rak može da uzrokuje da imuno-sistem reaguje na način koji dovodi do pojave pomenutih simptoma.
Ponekad, ćelije raka oslobađaju supstancije u krvotok koje uzrokuju simptome za koje se uobičajeno ne smatra da su rezultat postojanja raka. Na primer. neki tumori pankreasa mogu da oslobode supstancije koje uzrokuju pojavu krvnih ugrušaka u venama nogu. Neki tumori pluća proizvode supstancije koje sliče hormonu i koje utiču na nivoe kalcijuma u krvi. koje utiče na nerve i mišiće uzrokujući slabost i mučninu.
Rak ima nekoliko opštih znakova ili simptoma koji se javljaju kada su prisutni brojni pod-tipovi ćelija raka. Većina ljudi sa rakom gubi težinu tokom nekog razdoblja bolesti. Neočekivani (koji nije voljan) gubitak 10 funti (1 funta je 0.45 kg) ili više može da bude prvi znak raka, posebno raka pankreasa, želuca, jednjaka, ili pluća.
Groznica je veoma uobičajena kod raka. ali češće nastupa u naprednijoj fazi bolesti. Gotovo svi pacijenti sa rakom prolaze kroz groznicu tokom svoje bolesti, posebno ako rak ili njegov tretman utiče na imuno-sistem otežavajući telu da se bori s infekcijom. Rede, groznica može da bude znak raka, poput leukemije ili limfoma.
Umor može da bude važan simptom napredovanja raka. Međutim, može da se dogodi i rano. kao kod tumora poput leukemije, ili kada tumor uzrokuje postojan gubitak krvi. kao kod tumora debelog creva ili želuca.
Bol može da bude rani simptom nekih tumora poput raka kostiju ili testisa. No, najčešće, bol je simptom napredne bolesti.
Zajedno sa tumorima kože (vidi sledeći paragraf), neki unutrašnji tumori mogu da uzrokuju znakove koji mogu da se vide na koži. Ove promene uključuju kožu koja izgleda tamnije (hiper-pigmentacija). žuto (žutica), ili crveno (eritem); svrab; ili prekomerni rast kose.
Alternativno, ili dodatno, pod-tipovi raka imaju specifične znakove ili simptome. Promene u navikama pražnjenja creva ili funkcioniranju bešike mogu da upućuju na rak. Dugotrajna konstipacija, proljev, ili promena veličine stolice mogu da ukazuju na rak debelog creva. Bol tokom mokrenja, krv u urinu, ili promene u funkcioniranju bešike (poput češće ili rede mokrenje) mogu da budu povezani sa rakom bešike ili prostate.
Promene stanja kože ili pojava novog stanja kože mogu da upućuju na rak. Tumori kože mogu da krvare ili da izgledaju kao ranice koje ne mogu da se zaleče. Dugotrajna ranica u ustima može da upućuje na rak usta, posebno kod pacijenata koji puše, žvaću duvan, ili često piju alkohol. Ranice na penisu ili vagini mogu da budu znakovi infekcije ili ranog tumora.
Neuobičajeno krvarenje ili povremeno curenje mogu da upućuju na rak. Neuobičajeno krvarenje može da se dogodi kod ranog, ali i naprednog raka. Krv u ispljuvku (sluzi) može da bude znak raka pluća. Krv u stolici (ili tamna ili crna stolica) može da bude znak raka debelog creva ili raka rektuma. Rak vrata materice ili endometrijuma materice može da uzrokuje vaginalno krvarenje. Krv u mokraći može da bude znak raka bešike ili bubrega. Povremeno curenje krvi iz bradavice može da bude znak raka dojke.
Zadebljanje ili izbočina u dojci ili drugim delovima tela može da upućuje na prisutnost tumora. Mnogi tipovi raka mogu da se osete preko kože, uglavnom rak dojke, testisa, limfnih čvorova (žlezda). i mekog tkiva u telu. Izbočina ili zadebljanje može da bude rani ili kasni znak raka. Svaka izbočina ili zadebljanje potencijalno može da upućuje na rak, a posebno ako se radi o novoj formaciji ili ako se ista povećava.
Dispepsija ili problematično gutanje može da upućuje na rak. Dok ovi simptom uobičajeno imaju druge uzroke, dispepsija ili problemi gutanja mogu da budu obeležje raka jednjaka, želuca, ili farinksa (grla).
Nove promene u bradavici ili mladežu mogu da upućuju na rak. Svaka bradavica, mladež, ili pegica koja menja boju, veličinu, ili oblik, ili gubi svoje definisane granice upućuje na potencijalni razvoj raka. Na primer, kožna lezija može da bude melanom.
Uporni kašalj ili promuklost mogu da upućuju na rak. Kašalj koji ne prestaje može da bude znak raka pluća. Promuklost može da bude znak raka grkljana ili štitasle žlezde.
Dok su obeležja (znakovi) i simptomi, koji su izlistani iznad, oni koji su češći kod tumora, postoje i mnogu drugi koji nisu tako česti i koji nisu ovde navedeni.
Tretman raka može da rezultuje smanjivanjem veličine tumora. Smanjivanje veličine tumora može takođe da se nazove "povlačenje tumora". Preferirano, nakon tretmana, veličina tumora će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na njegovu veličinu pre tretmana: bolje, veličina tumora će se smanjiti za 10% ili više; još bolje, za 20% ili više; još bolje, za 30% ili više; još bolje, za 40% ili više; još bolje, za 50% ili više; a najbolje, za više od 75% ili više. Veličina tumora može da se meri uz pomoć bilo kojeg načina merenja koje može da se ponovi. Veličina tumora može da se određuje preko đijametra tumora.
Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja volumena tumora. Preferirano, nakon tretmana, volumen tumora će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na njegov volumen pre tretmana; bolje, volumen tumora će se smanjiti za 10% ili više; još bolje, za 20% ili više: još bolje, za 30% ili više; još bolje, za 40% ili više; čak još bolje, za 50% ili više; a najbolje, za više od 75% ili više. Volumen tumora može da se meri uz pomoć bilo kojeg načina merenja koji može da se ponavlja.
Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja broja pojedinačnih tumora. Preferirano, nakon tretmana, broj tumora će biti smanjen za 5% ili više u odnosu na njihov broj pre tretmana; bolje, broj tumora će biti smanjen za 10% ili više; bolje, za 20% ili vise; još bolje, za 30% ili više: još bolje, za 40% ili više; čak još bolje, za 50% ili više: i najbolje, za više od 75%. Broj pojedinačnih tumora može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina merenja koji može da se ponovi. Broj tumora može da se izmeri brojanjem pojedinačnih tumora koji su vidljivi golim okom ili pod specifičnim povećanjem. Preferirano, pomenuto specifično povećanje je 2x. 3x. 4x, 5x, 10x. ili 50x.
Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja broja metastatskih lezija u drugim tkivima ili organima koji su udaljeni od mesta primarnog tumora. Preferirano, nakon tretmana, broj metastatskih lezija će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na njihov broj pre tretmana: bolje, broj metastatskih lezija će se smanjiti za 10% ili više; bolje, za 20% ili više; još bolje, za 30% ili više; još bolje, za 40% ili više; čak još bolje, za 50% ili više: a najbolje, za više od 75%. Broj metastatskih lezija može da se odredi uz pomoć bilo kojeg načina merenja koji može da se ponovi. Broj metastatskih lezija može da se odredi brojanjem metastatskih lezija koje su vidljive golom oku ili pod specifičnim povećanjem. Preferirano, pomenuto specifično povećanje je 2x, 3x, 4x. 5x. 10x. ili 50x.
Tretiranje raka može da dovede do povećanog proseČnog vremena preživljenja populacije tretiranih subjekata u odnosu na populaciju koja je primila samo prenosnik. Preferirano, prosečno vreme preživljenja će se povećati za više od 30 dana; još bolje, za više od 60 dana; još bolje, za više od 90 dana; i najbolje, za više od 120 dana. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Povećano prosečno vreme preživljenja populacije može da se izmeri. na primer. računanjem prosečne dužine preživljenja nakon početka tretmana sa aktivnim jedinjenjem. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije takođe može da se izmeri, na primer. računanjem prosečne dužine preživljenja nakon kompletovanja prve runde tretmana sa aktivnim jedinjenjem.
Tretiranje raka može da dovede do povećanja prosečnog vremena preživljenja populacije tretiranih subjekata u odnosu na populaciju netretiranih subjekata. Preferirano, prosečno vreme preživljenja će se povećati za više od 30 dana; još bolje, za više od 60 dana; još bolje, za više od 90 dana; i najbolje, za više od 120 dana. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije može da se izmeri. na primer. računanjem prosečne dužine preživljenja nakon početka tretmana sa aktivnim jedinjenjem. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije takođe može da se izmeri. na primer. računanjem prosečne dužine preživljenja nakon kompletovanja prve runde tretmana sa aktivnim jedinjenjem.
Tretiranje raka može da dovede do povećanja prosečnog vremena preživljenja populacije tretiranih subjekata u odnosu na populaciju koja prima monoterapiju sa lekom koji nije neko od jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, analog ili derivat. Preferirano, prosečno vreme preživljenja će narasti za više od 30 dana; još bolje, za više od 60 dana; još bolje, za više od 90 dana; a najbolje, za više od 120 dana. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije može da se izmeri. na primer, računanjem prosečne dužine preživljenja nakon početka tretmana sa aktivnim jedinjenjem. Povećanje prosečnog vremena preživljenja populacije takođe može da se izmeri. na primer. računanjem prosečne dužine preživljenja nakon kompletovanja prve runde tretmana sa aktivnim jedinjenjem.
Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja stope mortaliteta u populaciji tretiranih subjekata u odnosu na populaciju koja prima samo prenosnik. Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja stope mortaliteta u populaciji tretiranih subjekata u odnosu na netretiranu populaciju. Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja stope mortaliteta u populaciji tretiranih subjekata u odnosu na populaciju koja prima monoterapiju sa lekom koji nije neko od jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so. analog ili derivat. Preferirano, stopa mortaliteta će se smanjiti za više od 2%; još bolje, za više od 5%: još bolje, za više od 10%; a najbolje, za više od 25%. Smanjivanje stope mortaliteta u populaciji tretiranih subjekata može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Smanjivanje stope mortaliteta u populaciji može da se izmeri, na primer. računanjem prosečnog broja smrtnih slučajeva koji su povezani sa pomenutom bolesti po jedinici vremena nakon početka tretmana sa aktivnim jedinjenjem. Smanjivanje stope mortaliteta u populaciji takođe može da se izmeri. na primer, računanjem prosečnog broja smrtnih slučajeva povezanih sa pomenutom bolesti po jedinici vremena nakon kompletovanja prve runde tretmana sa aktivnim jedinjenjem,
Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja stope rasta tumora. Preferirano, nakon tretmana, stopa rasta tumora će se smanjiti za najmanje 5% u odnosu na stopu rasta pre tretmana; još bolje, stopa rasta tumora će se smanjiti za najmanje 10%; još bolje, za najmanje 20%; još bolje, za najmanje 30%; još bolje, za najmanje 40%; još bolje, za najmanje 50%; čak još bolje, za najmanje 50%; a najbolje, za najmanje 75%. Stopa rasla tumora može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Stopa rasta tumora može da se izmeri u skladu sa promenom dijametra tumora po jedinici vremena.
Tretiranje raka može da dovede do smanjivanja ponovnog rasta tumora. Preferirano nakon tretmana, ponovni rast tumora će biti manji od 5%: još bolje, ponovni rast tumora će biti manji od 10%; još bolje, manji od 20%; još bolje, manji od 30%; još bolje, manji od 40%; još bolje, manji od 50%; čak još bolje, manji od 50%; a najbolje, manji od 75%. Ponovni rast tumora može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Ponovni rast tumora se meri. na primer. određivanjem porasta dijametra tumora nakon prvobitnog smanjivanja tumora koje je usledilo nakon tretmana. Opadanje ponovnog rasta tumora pokazuje da tumor ne uspeva da se povrati nakon zaustavljanja tretmana.
Tretiranje ili sprečavanje ćelijskog proliferativnog poremećaja može da dovede do smanjivanja stope ćelijske proliferacije. Preferirano, nakon tretmana, stopa ćelijske proliferacije će se smanjiti za najmanje 5%; još bolje, za najmanje 10%; još bolje, za najmanje 20%; još bolje, za najmanje 30%; još bolje, za najmanje 40%; još bolje, za najmanje 50%; čak još bolje, za najmanje 50%; a najbolje, za najmanje 75%. Stopa ćelijske proliferacije može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Stopa ćelijske proliferacije se meri. na primer, uz pomoć određivanja broja ćelija koje se dele u tkivnom primerku po jedinici vremena.
Tretiranje ili sprečavanje ćelijskog proliferativnog poremećaja može da dovede do smanjivanja udela ćelija koje proliferiraju. Preferirano, nakon tretmana, udeo ćelija koje proliferiraju će biti smanjen za najmanje 5%; još bolje, za najmanje 10%; još bolje, za najmanje 20%: još bolje, za najmanje 30%: još bolje, za najmanje 40%; još bolje, za najmanje 50%; čak još bolje, za najmanje 50%: a najbolje, za najmanje 75%. Udeo ćelija koje proliferiraju može da se odredi uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Preferirano, udeo ćelija koje proliferiraju se meri, na primer, uz pomoć kvantiftkovanja broja ćelija koje se dele u odnosu na ćelije koje se ne dele u tkivnom primerku. Udeo ćelija koje proliferiraju je podjednak sa mitotskim indeksom.
Tretiranje ili sprečavanje ćelijskog proliferativnog poremećaja može da dovede do smanjivanja veličine područja ili zone ćelijske proliferacije. Preferirano, nakon tretmana, veličina ili zona ćelijske proliferacije će se smanjiti za najmanje 5% u odnosu na veličinu pre tretmana; još bolje, smanjiti će se za najmanje 10%; još bolje, za najmanje 20%; još bolje, za najmanje 30%; još bolje, za najmanje 40%; još bolje, za najmanje 50%; Čak još bolje, za najmanje 50%; a najbolje, za najmanje 75%. Veličina područja ili zone ćelijske proliferacije može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Veličina područja ili zone ćelijske proliferacije može da se odredi preko dijametra ili širine pomenutog područja ili zone ćelijske proliferacije.
Tretiranje ili sprečavanje ćelijskog proliferativnog poremećaja može da dovede do smanjivanja broja ili udela ćelija koje su abnormalne ili imaju abnormalnu morfologiju. Preferirano, nakon tretmana, broj ćelija koje su morfološki abnormalne će se smanjiti za najmanje 5% u odnosu na stanje pre tretmana; još bolje, za najmanje 10%: još bolje, za najmanje 20%; još bolje, za najmanje 30%; još bolje, za najmanje 40%: još bolje, za najmanje 50%; čak još bolje, za najmanje 50%; a najbolje, za najmanje 75%. Abnormalni izgled ili morfologija ćelija može da se odredi uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Abnormalna morfologija ćelija može da se odredi, na primer uz pomoć invertnog mikroskopa za kulturu tkiva. Abnormalna morfologija ćelija može da se očituje u formi nuklearnog pleiomorfizma.
Kao šta se ovde koristi, termin "selektivno" znači da nešto ima tendenciju da se pojavljuje u visokoj frekvenciji u nekoj populaciji, ali ne i u nekoj drugoj. Populacije koje se upoređuju mogu da budu populacije ćelija. Jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat, može da deluje selektivno prema tumorskoj ili pre-kanceroznoj ćeliji, ali ne i prema normalnoj ćeliji. Jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat. može da deluje selektivno tako da modulira samo jednu molekularnu metu( na primer,ciljna protein metiltransferaza). ali značajno ne modulira druge molekularne mete( na primer,ne-ciljna protein metiltransferaza). Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak za selektivno inhibiranje aktivnosti nekog encima, poput protein metiltransteraze. Preferirano, neki događaj se pojavljuje selektivno u populaciji A u odnosu na populaciju B ukoliko se javlja više od dva puta Češće u populaciji A u odnosu na populaciju B. Neki događaj se pojavljuje selektivno ako se javlja više ođ pet pura češće u populaciji A. Neki događaj se pojavljuje selektivno ako se javlja više ođ deset puta češće u populaciji A; još bolje, više od pedeset puta; Čaj još bolje, više od 100 puta; a najbolje, više od 1000 puta češće u populaciji A u odnosu na populaciju B. Na primer, ćelijska smrtnost nastupa selektivno u ćelijama raka ako se javlja više od dva puta češće u odnosu na normalne ćelije.
Jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat, mogu da moduliraju delovanje neke molekularne mete( na primer,ciljnu protein metiltransferazu). Moduliranje se odnosi na stimuliranje ili inhibiranje delovanja neke molekularne mete. Preferirano, jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so. polimorf ili solvat. modulira delovanje neke molekularne mete ako stimuliše ili inhibira delovanje pomenute molekularne mete za najmanje 2-puta u odnosu na aktivnost pomenute molekularne mete u istim uslovima. ali bez prisustva pomenutog jedinjenja. Još bolje, jedinjenje iz ovoga pronalaska, njegova farmaceutski prihvatljiva so. polimorf ili solvat. modulira delovanje neke molekularne mete ako stimuliše ili inhibira aktivnost pomenute molekularne mete za najmanje 5-puta, najmanje 10-puta. najmanje 20-puta, najmanje 50-puta. najmanje 100-puta u odnosu na aktivnost pomenute molekularne mete u istim uslovima. ali bez prisustva pomenutog jedinjenja. Aktivnost molekularne mete može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Aktivnost molekularne mete može da se izmeriin vilroiliin vivo.Na primer, aktivnost molekularne mete može da se izmeriin vilroprimenom ogleda encimske aktivnosti ili ogleda vezanja DNA, ili aktivnost molekularne mete može da se izmeriin vivotestiranjem ekspresije reporter-gena.
Jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so. polimorf ili solvat, ne modulira značajno aktivnost neke molekularne mete ako dodavanje pomenutog jedinjenja ne stimuliše ili inhibira delovanje pomenute molekularne mete za više od 10% u odnosu na aktivnost pomenute molekularne mete u istim uslovima, ali bez prisustva pomenutog jedinjenja.
Kao šta se ovde koristi, termin "selektivni izozim" označava preferencijalnu inhibiciju ili stimulaciju prve izoforme nekog encima u odnosu na njegovu drugu izoformu (na primer. preferencijalna inhibicija ili stimulacija izozima alfa protein metiltransferaze u odnosu na izozim beta protein metiltransferaze). Preferirano, jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat. pokazuje razliku delovanja od minimalno četiri-puta, preferirano deset-puta. još bolje pedeset-puta. kod doze koja je potrebna da se postigne neki biološki efekt. Preferirano, jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat. pokazuje ovu razliku preko celog raspona inhibicije, a pomenuta razlika se izražava kod IC50,//.. 50% inhibicija. za ciljanu molekularnu metu.
Administriranje nekog jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata, nekoj ćeliji ili subjektu u potrebi može da dovede do modulacije( tj.,stimulacije ili inhibicije) delovanja ciljane protein metiltransferaze.
Ova predmetna prijava obezbeđuje postupke za procenu biološke aktivnosti nekog jedinjenja iz ove predmetne prijave, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa ili solvata ili postupke za identifikovanje testiranog jedinjenja kao inhibitora Y641 mutanta EZH2. U jednom primeru, ovaj postupak uključuje kombinovanje izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donora metilne grupe (poput S-ađenozilmetionin (SAM)), i testiranog jedinjenja, pri čemu pomenuti histonski supstrat sadrži formu H3-K27 koja je izabrana iz grupe koja obuhvata ne-metilovani H3-K27. mono-metilovani H3-K27. di-metilovani H3-K27. i sve njihove kombinacije; i izvođenje ogleda sa ciljem detektiranja metilacije H3-K27 u histonskom supstratu, pri čemu se testirano jedinjenje identifikovanje kao inhibitor Y641 mutanta EZH2 kada je metilacija H3-K27, u prisutnosti testiranog jedinjenja, manja od metilacije H3-K27 u odsutnosti testiranog jedinjenja. Ogled za detektovanje metilacije H3-K27 može da se izabere trako da meri stopu metilacije, opseg metilacije, ili oba parametra zajedno.
Y641 mutant EZH2 je izolovan kao PRC2 kompleks ili njegov funkcionalni ekvivalent. Kao šta se ovde koristi, termin "izolovan" označava supstancijalno odvojen od drugih komponenata sa kojima pomenuti kompleks može da se pojavljuje u prirodi. Jedinjenje može da se izoluje bez daje prečišćeno. U jednoj izvedbi, mutant EZH2 je izolovan kao kompleks Y641 mutanta EZH2 zajedno sa EED i SUZ12. U drugoj izvedbi, mutant EZH2 je izolovan kao kompleks Y64l mutanta EZH2 zajedno sa EED, SUZI2. i RbAp48. U odgovarajućim uslovima. PRC2 kompleks ili njegov funkcionalni ekvivalent pokazuje aktivnost histonske metiltransferaze prema H3-K27. U drugoj izvedbi, kompleks se sastoji od rekombinantno eksprimiranih polipeptida (komponenata), na primer. EZH2, EED. SUZI2. sa ili bez RbAp48.
Izolovani Y641 mutant EZH2 se spaja sa histonskim supstratom. Histonski supstrat uključuje bilo koji prikladni izvor histonskih polipeptida ili njihovih fragmenata koji mogu da posluže kao supstrat za EZH2. U jednoj izvedbi, histonski supstrat uključuje histone izolovane iz nekog subjekta. Histoni mogu da se izoluju iz ćelija nekog subjekta primenom bilo kojeg prikladnog postupka; takvi postupci su dobro poznati stručnjacima pa ne zahtevaju dodatna objašnjenja. Vidi, na primer, Fang et al. (2004) Methods Enzvmol 377:213-26. U skladu sa Primerima ispod, histonski supstrat je obezbeđen u formi nukleosoma. U skladu sa Primerima ispod, histonski supstrat je obezbeđen u formi nukleosoma iz ptiči jih (kokošijih) eritrocita.
Obezbeđeni histonski supstrat može da uključuje smešu histona sa različitim modifikacijama, uključujući razna stanja H3-K27 metilacije na osnovu rezultata Westem-blota sa antitelima protiv različitih H3-K27 koji su specifično metilovani. U jednom primeru. pomenuti histonski supstrat može da se koristi u formi prečišćenog histona H3 pune dužine. Takav prečišćeni histon H3 pune dužine može da se obezbedi u formi homogenog preparata kada se govori o metilacijskim stanjima H3-K27. ili kao smeša H3-K27 u različitim metilacijskim stanjima. Homogeni preparati izolovanog histona H3, kada se govori o različitim stanjima metilacije H3-K27, može da se pripremi, barem delom, propuštanjem kroz imuno-afinitetnu kolonu sa prikladnim antitelima protiv metilacijskih stanja H3-K27 ili uz pomoć imuno-precipitacije primenom magnetnih kuglica koje su prekrivene sa prikladnim antitelima protiv različitih stanja metilacije H3-K27. Alternativno ili dodatno, metilacijsko stanje H3-K27 može da se karakterizuje primenom nekog ogleda. Na primer, početni histonski supstrat može da se karakterizuje kao da sadrži 50 procenata ne-metilovanog H3-K27. 40 procenata mono-metilovanog H3-K27. 10 procenata di-metilovanog H3-K27. i 0 procenata tri-meti lovanog H3-K27.
Pomenuti histonski supstrat uključuje peptidnu biblioteku ili neki prikladni peptid koji sadrži jednu ili više amino-kiselinskih sekvenca koje su povezane sa histonom H3, uključujući, koje je posebno važno, sekvencu koja obuhvata H3-K27. Na primer. histonski supstrat je neki peptidni fragment koji odgovara amino-kiselinskim ostacima 21-44 iz histona H3. Peptidna biblioteka ili peptid mogu da se pripreme uz pomoć sinteze peptida u skladu sa tehnikama koje su dobro poznate stanju tehnike i uz pomoć opcione modifikacije sa ciljem da se uvede bilo koji željeni stepen metilacije lizina u odnosu na H3-K27. Kao sta je opisano u Primerima ispod, takvi peptidi takođe mogu da budu modifikovan tako da sadrže oznaku, poput biotina, koja je korisna kod izvođenja ogleda koji su opisani ispod. U jednom primeru, pomenuta oznaka se dodaje na amino (N)-terminus peptida. U jednom primeru, pomenuta oznaka se dodaje na karboksi (C)-terminus peptida.
Detektovanje metilacije H3-K27 može da se postigne uz pomoć bilo kojeg prikladnog postupka. U jednoj izvedbi, izvor donora metilnih grupa uključuje metilne grupe koje su označene sa oznakom koja može da se detektuje. Detektabilna oznaka u jednoj izvedbi je izotopna oznaka, tj., tricijum. Drugi tipovi oznaka mogu da uključuju, na primer. fluorescentne oznake.
Detektovanje formiranja tri-metilovanog H3-K27 može da se postigne uz pomoć bilo kojeg prikladnog postupka. Na primer, detektovanje formiranja tri-metilovanog H3-K27 može da se postigne uz pomoć ogleda koji otkriva ugradnju označenih metilnih grupa, kao šta je ovde opisano, opciono zajedno sa hromatografskim ili nekim drugim postupkom koji odvajaju označene produkte po veličini, na primer. elektroforeza na poliakrilamidnom gelu (PAGE). kapilarna elektroforeza (CE), ili tečna hromatografija visoke performanse (HPLC). Alternativno ili dodatno, detektovanje formiranja tri-metilovanog H3-K27 može da se postigne uz pomoć antitela koja su specifična za tri-metilovani H3-K27.
Detektovanje konverzije mono-metilovanog H3-K27 u di-metilovani H3-K27 može da se postigne primenom bilo kojeg prikladnog postupka. U jednoj izvedbi, konverzija se određuje uz pomoć antitela koja su specifična za mono-metilovani H3-K.27 i di-metilovani H3-K27. Na primer, početna količina ili koncentracija mono-metilovanog H3-K27 i di-metilovanog 113-K27 mogu da se odrede primenom odgovarajućeg antitela koje je specifično za mono-metilovani H3-K27 i di-metilovani H3-K27. Nakon mešanja encima. supstrata, donira metilne grupe, i testiranog jedinjenja, određuju se nastale količine ili koncentracije mono-metilovanog H3-K27 i di-metilovanog H3-K27. Nakon spajanja encima, supstrata, donora metilne grupe, i testiranog jedinjenja, nastale količine ili koncentracije mono-metilovanog H3-K27 i di-metilovanog H3-K27 mogu da se odrede primenom odgovarajućih antitela koja su specifična za mono-metilovani H3-K27 i di-metilovani H3-K27. Početne i nove količine ili koncentracije mono-metilovanih H3-K27 i di-metilovanih H3-K27 mogu tada da se uporede. Alternativno ili dodatno, početne i nove količine ili koncentracije mono-metilovanog H3-K27 i di-metilovanog H3-K27 tada mogu da se uporede sa odgovarajućim količinama ili koncentracijama kod negativne kontrole. Negativna kontrolna reakcija, u kojoj nije dodan testirani agens i koja je takođe deo ogleda, može da se provede paralelno ili kao historijska kontrola. Rezultat takve kontrolne reakcije može da se opciono oduzme iz odgovarajućih rezultata eksperimentalne reakcije pre ili tokom uporedbe koja je malopre pomenuta.
Zbog toga šta di-metilovana forma H3-K27 može da bude dodatno metilovana u istom ogledu, smanjivanje količine ili koncentracije mono-metilovanog H3-K.27 ne mora da se očituje kao da direktno odgovara povećanju di-metilovanog H3-K27. U tom pogledu, može da se pretpostavi, međutim, daje smanjivanje količine ili koncentracije mono-metilovanog H3-K27, sama za sebe, odraz konverzije mono-metilovanog H3-K27 u di-metilovani H3-K27.
Detektovanje konverzije di-metilovanog H3-K27 u tri-metilovani H3-K27 može da se postigne primenom bilo kojeg prikladnog postupka. U jednoj izvedbi, konverzija se određuje primenom antitela koja su specifična za di-metilovani H3-K27 i tri-metilovani H3-K27. Na primer. početne količine ili koncentracije di-metilovanog H3-K27 i tri-metilovanog H3-K27 mogu da se odrede primenom odgovarajućih antitela koja su specifična za di-metilovani H3-K.27 i tri-metilovani H3-K.27. Nakon spajanja encima. supstrata, i testiranog jedinjenja, nastale količine ili koncentracije di-metilovanog H3-K27 i tri-metilovanog H3-K27 mogu da se odrede primenom odgovarajućih antitela specifičnih za di-metilovani H3-K27 i tri-metilovani H3-K27. Početne i nove količine ili koncentracije di-metilovanog H3-K27 i tri-metilovanog H3-K27 tada mogu da se uporede. Alternativno ili dodatno, početne i nove količine ili koncentracije di-metilovanog H3-K27 i tri-metilovanog H3-K27 tada mogu da se uporede sa odgovarajućim količinama ili koncentracijama kod negativne kontrole. Negativna kontrolna reakcija, u kojoj nije dodan testirani agens i koja je uključena u ogledu, može da se izvede paralelno ili kao historijska kontrola. Rezultat takve kontrolne reakcije može opciono da se oduzme iz odgovarajućih rezultata eksperimentalne reakcije pre ili tokom uporedhe koja je malopre pomenuta.
Testirani agens se identifikuje kao inhibitor Y641 mutanta EZH2 kada je metilacija H3-K27 sa pomenutim testiranim jedinjenjem manja od metilacije 113-K27 bez primene testiranog jedinjenja. U jednoj izvedbi, testirani agens se identifikuje kao inhibitor Y641 mutanta EZH2 kadaje formiranje tri-metilovanog H3-K27 u prisutnosti pomenutog testiranog jedinjenja manji od formiranja tri-metilovanog H3-K27 u odsutnosti pomenutog testiranog jedinjenja.
Ova predmetna prijava takođe obezbeđuje postupak za identifikovanje selekti vnog inhibitora Y641 mutanta EZH2. Ovaj postupak uključuje spajanje izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metilne grupe (na primer. SAM), i testiranog jedinjenja, pri čemu histonski supstrat sadrži formu H3-K27 koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od mono-metilovanog H3-K27, di-metilovanog H3-K27, i kombinacije mono-metilovanog H3-K27 i di-metilovanog H3-K27, pri čemu nastaje smeša za test; kombinovanje izolovanog EZH2 divljeg tipa sa histonskim supstratom, donorom metilne grupe (na primer. SAM), i testiranim jedinjenjem, pri čemu pomenuti histonski supstrat sadrži formu H3-K27 koja je izabrana iz grupe koja obuhvata mono-metilovani H3-K27. di-metilovani H3-K27, i kombinaciju mono-metilovanog H3-K27 i di-metilovanog H3-K27, pri čemu se dobija kontrolna smeša; izvođenje ogleda sa ciljem detektovanja trimetilacije histonskog supstrata u svakoj od smeša za test i u kontrolnoj smeši; izračunavanje omera (a) trimetilacije Y64l mutanta EZH2 sa testiranim jedinjenjem (M+) i (b) trimetilacije Y641 mutanta EZH2 bez testiranog jedinjenja (M-): izračunavanje omera (c) trimetilacije FZI12 divljeg tipa sa testiranim jedinjenjem (WT+) i (d) trimetilacije EZH2 divljeg tipa bez testiranog jedinjenja (WT-); uporedbu omera (a)/(b) sa omerom (c)/(d); i identifikovanje testiranog jedinjenja kao selektivnog inhibitora Y641 mutanta EZH2 kada je omer (a)/(b) manji od omera (c)/(d). U jednom primeru. ovaj postupak dodatno uključuje i negativnu kontrolu bez testiranog jedinjenja kod obe ili bilo koje od smeša, ona za test i ona kontrolna.
U nekim ogledima se koriste imunološki reagensi.na primer,antitela i antigeni. U nekim ogledima može da se koristi fluorescencija kod merenja encimske aktivnost. Kao šta se ovde koristi, "fluorescencija" se odnosi na proces preko kojeg neki molekul emituje foton nakon apsorbovanja dolazećeg fotona više energije. Specifični postupci za procenu biološke aktivnosti ovde opisanih jedinjenja su opisani u primerima.
Administriranje nekog jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata, nekoj ćeliji ili subjektu u potrebi može da dovede do modulacije((/',stimulacije ili inhibicije) aktivnosti neke intra-ćelijske mete( na primer,supstrata). Nekoliko intra-ćelijskih meta može da bude modulirano uz pomoć jedinjenja iz ovoga pronalaska, uključujući, ali bez ograničenja, protein metiltrasferazu.
Aktivisanje se odnosi na proces dovođenja kompozicije( na primer,kompozicija belančevine ili nukleinske kiseline) u stanju u kojem pomenuta kompozicija može da ostvari neku željenu funkciju. Kompozicija materije koja može da se aktiviše takođe poseduje stanje u kojem je neaktivna. Aktivisana kompozicija materije može da uspostavi inhibitornu ili stimulatornu biološku funkciju, ili obe funkcije.
Podizanje se odnosi na povećanje neke poželjne biološke aktivnosti neke kompozicije materije( naprimer,belančevine ili nukleinske kiselina). Podizanje može da se ostvari preko povećanja koncentracije kompozicije materije.
Kao šta se ovde koristi, "put kontrolne tačke ćelijskog ciklusa" se odnosi na biohemijski put koji je uključen u modulaciji kontrolne tačke ćelijskog ciklusa. Put kontrolne tačke ćelijskog ciklusa može da ima stimulatorne ili inhibitorne efekte, ili oba, prema jednoj ili više funkcija koje se odnose na kontrolnu tačku ćelijskog ciklusa. Put kontrolne tačke ćelijskog ciklusa obuhvata najmanje dve kompozicije materije, preferirano belančevina, pri Čemu svaka doprinosi modulaciji kontrolne tačke ćelijskog ciklusa. Put kontrolne tačke ćelijskog ciklusa može da se aktiviše preko akti vi sanja jednog ili više članova puta kontrolne tačke ćelijskog ciklusa. Preferirano, put kontrolne tačke ćelijskog ciklusa je neki biohemijski signalni put.
Kao šta se ovde koristi, "regulator kontrolne tačke ćelijskog ciklusa" se odnosi na kompoziciju materije koja može da deluje, barem delomično. tokom modulacije kontrolne tačke ćelijskog ciklusa. Regulator kontrolne tačke ćelijskog ciklusa može da uspostavlja stimulatorne ili inhibitorne efekte, ili oba, prema jednoj ili više funkcija kontrolne tačke ćelijskog ciklusa. Regulator kontrolne tačke ćelijskog ciklusa može da bude neka belančevina ili supstancija koja nije belančevina.
Tretiranje raka ili ćelijskog proliferativnog poremećaja može da dovede do smrti ćelije, a preferirano, takva ćelijska smrtnost će dovesti do smanjivanja broja ćelija u populaciji za najmanje 10%. Još boljeo, ćelijska smrtnost znači smanjivanje za najmanje 20%: još bolje, za najmanje 30%; još bolje, za najmanje 40%; još bolje, za najmanje 50%; a najbolje, za najmanje 75%. Broj ćelija u populaciji može da se izmeri uz pomoć bilo kojeg načina koji može da se ponovi. Broj ćelija u populaciji može da se izmeri uz pomoć specijalne protočne citometrije( fluorescence activated cell sorting - FACS),imunofluorescencijske mikroskopije i svetlosne mikroskopije. Postupci za merenje ćelijske smrtnosti su opisani od autora Li et al.. Proc Natl Acad Sci USA. 100(5): 2674-8, 2003. U jednom aspektu, ćelijska smrtnost nastupa preko apoptoze.
Preferirano, efektivna količina jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata, neće biti značajno citotoksična za normalne ćelije. Terapeutski efektivna količina jedinjenja nije značajno citotoksična za normalne ćelije ako administriranje jedinjenja u terapeutski efektivnoj količini ne potiče ćelijsku smrtnost koja je u populaciji normalnih ćelija veća od 10%. Terapeutski efektivna količina jedinjenje ne utiče značajno na vijabilnost normalnih ćelija ako administriranje pomenutog jedinjenje u terapeutski efektivnoj količini ne potiče ćelijsku smrtnost koja je u populaciji normalnih ćeli ja veća od 10%. U jednom aspektu, ćelijska smrtnost nastupa preko apoptoze.
Kontaktiranje ćelije sa nekim jedinjenjem iz ovoga pronalaska, ili sa nekom njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, polimorfa ili solvata. može da potakne ili aktiviše ćelijsku smrt i to selektivno u ćelijama raka. Administriranje nekom subjektu u potrebi nekog jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata, može da potakne ili aktiviše ćelijsku smrt i to selektivno u ćelijama raka. Kontaktiranje neke ćelije sa nekim jedinjenjem iz ovoga pronalaska, ili sa nekom njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, polimorfa ili solvata, može da potakne ćelijsku smrt selektivno u jednoj ili više ćelija koje su zahvaćene ćelijskim proliferativnim poremećajem. Preferirano, administriranje nekom subjektu u potrebi nekog jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa ili solvata, će potaknuti ćelijsku smrt selektivno u jednoj ili više ćelija koje su zahvaćene sa ćelijskim proliferativnim poremećajem.
Jedan aspekt ove predmetne prijave se odnosi na postupak za tretiranje ili sprečavanje raka (na primer, raka na čije se napredovanje može uticati preko moduliranja EZH2-posredovane metilacija belančevina) uz pomoć ađministriranja nekog jedinjenja iz ove predmetne prijave, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata. nekom subjektu u potrebi, pri čemu pomenuto administriranje jedinjenja iz ove predmetne prijave, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa ili solvata, dovodi do jednog ili više od sledećih: sprečavanje proliferacije tumorskih ćelija uz pomoć nakupljanja ćelija u jednoj ili više faza ćelijskog ciklusa (na primer, Gl. Gl/S, G2/M), ili poticanje ćelijskog starenja, ili poticanje diferencijacije tumorskih ćelija; poticanje smrti ćelija raka preko citotoksičnosti. nekroze ili apoptoze, bez značajnog povećavanja smrti normalnih ćelija, antitumorskog delovanja u životinjama sa terapeutskim indeksom od najmanje 2. Kao šta se ovde koristi, "terapeutski indeks" je maksimalna tolerisana doza podeljena sa efikasnom dozom. Ova predmetna prijava takođe se odnosi na postupak koji se koristi za identifikovanje prikladnih kandidata za tretiranje ili sprečavanje raka.
Stručnjak može da se posluži sa opštom literaturom za detaljan opis poznatih tehnika, koje su ovde opisane, ili ekvivalentnih tehnika. Pomenuta literatura uključuje Ausubel et al.. Current Protocols in Molecular Biologv, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook et a!.. Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3. izdanje), Colđ Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor. New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in lmmunology, John Wiley & Sons, N. Y.: Enna et al., Current Protocols in Pharmacology. John Wiley & Sons. N.Y.; Fingl et al.. The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975). Remington's Phannaceutical Sciences. Mack Publishing Co., Rastom PA. 18. izdanje (1990). Pomenute reference, naravno, mogu da se pomenu kao korisne za pripremu ili upotrebu ovoga pronalaska (kao jedan poseban aspekt).
Kao šta se ovde koristi, "kombinovana terapija" ili "ko-terapija" uključuje administriranje nekog jedinjenja iz ovoga pronalaska, ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli. polimorfa ili solvata. zajedno sa barem jednim sekundarnim agensom kao deo specifičnog režima za tretman koji ima za cilj da obezbedi koristan efekt zbog ko-delovanja pomenutih terapeutskih agenasa. Koristan efekt takvog kombinovanja može da uključuje, ali bez ograničenja, farmakokinetičko ili farmakodinamičko ko-delovanje koje proizlazi iz kombinovanja različitih terapeutskih agenasa. Zajedničko administriranje pomenutih terapeutskih agenasa tipično se provodi tokom definiranog vremenskog perioda (uobičajeno meren minutima. časovima, danima ili sedmicama u zavisnosti o izabranoj kombinaciji). "Kombinovana terapija" može da bude, ali obično nije, namenjena da obuhvata administriranje dva ili više pomenutih terapeutskih agenasa kao deo odvojenih mono-terapijskih režima koje slučajno i proizvoljno rezultuje kombinovanjem koje je opisano u ovoj predmetnoj prijavi.
"Kombinovana terapija" je namenjena da obuhvata administriranje pomenutih terapeutskih agenasa u nekom redosledu (uzastopno, sekvencijalno), pri čemu se svaki terapeutski agens administrira u različitoj vremenskoj tačci. ali i simultano administriranje pomenutih terapeutskih agenasa. ili barem dva od njih. Simultano administriranje može da se postigne, na primer, davanjem subjektu pojedinačne kapsule koja poseduje fiksni omer svakog terapeutskog agensa ili davanjem više pojedinačnih kapsula, pri čemu svaka kapsula sadrži samo jedan terapeutski agens. Uzastopno ili simultano administriranje svakog terapeutskog agensa može da se ostvari uz pomoć bilo koje odgovarajuće rute. ali bez ograničenja, oralne rute. intravenzne rute. intramišićne rute. i direktne apsorpcije preko tkiva sluzokože. Terapeutski agensi mogu da se administriraju preko iste rute ili preko različitih ruta. Na primer, prvi terapeutski agens iz izabrane kombinacije može da se administrira uz pomoć intravenozne injekcije dok se drugi terapeutski agens iz pomenute kombinacije administrira oralno. Alternativno, na primer. svi terapeutski agensi mogu da se administriraju oralno ili svi terapeutski agensi mogu da se administriraju uz pomoć intravenzne injekcije. Redosled kojim se pomenuti terapeutski agensi administriraju nije presudan.
"Kombinovana terapija" takođe podrazumeva administriranje pomenutih terapeutskih agenasa, kao šta je opisano iznad, uz pomoć kombinovanja sa drugim biološki aktivnim sastojcima i terapijama koje ne primenjuju lekovite supstancije (na primer, hirurška operacija ili tretman zračenjem). Dok pomenuta kombinacija dodatno obuhvata tretman bez primene lckovitih supstancija, takav tretman može da se provede tokom bilo kojeg prikladnog razdoblja sve dok se ostvaruje koristan efekt koji proizlazi iz ko-delovanja pomenute kombinacije terapeutskih agenasa i tretmana bez lekovitih supstancija. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, koristan efekt još uvek može da se postigne kada se tretman bez lekovitih supstancija privremeno odstranjuje od ađministriranja terapeutskih agenasa, tj. odgađa se za nekoliko dana ili čak sedmica.
Jedinjenje iz ovoga pronalaska, ili neka njegova farmaceutski prihvatlji va so. analog ili derivat, može da se administrira zajedno sa nekim drugim hemoterapeutskim agensom. Ovaj drugi hemoterapeutski agens (takođe označen kao anti-neoplastični agens ili anti-proliferativni agens) može da bude neki agens za alkilovanje; antibiotik; anti-metabolit; agens za detoksifikaciju; interferon; poliklonalno ili monoklonalno antitelo; EGFR inhibitor; HER2 inhibitor; inhibitor histonske deacetilaze: hormon; inhibitor mitoze; inhibitor MTOR; inhibitor više kinaza; inhibitor serin/treoninske kinaze; razni inhibitori tirozinske kinaze; inhibitor VEGF/VEGFR; taksan ili derivat taksana, inhibitor aromataze, antraciklin, lek koji cilja mikrotubule, lek protiv topoizomeraze. inhibitor neke molekularne mete ili encima (na primer, neka kinaza ili protein metiltransferaza), analog cistidina ili bilo koji drugi hemoterapeutski, anti-neoplastični ili anti-proliferativni agens koji je naveden u
vv vv \ v. can cer, ori;/ d oc root/ cd g/ cd u 0. asp.
Primeri za agense za alkilovanje uključuju, ali bez ograničenja, ciklofosfamid (Citoksan; Neosar); hlorambucil (Leukeran); melfalan (Alkeran); karmustin (BiCNU); busulfan (Busulfeks); lomustin (CeeNU); dakarbazin (DTIC-Dome); oksaliplatinu (Eloksatin); karmustin (Gliadel); ifosfamid (Ifeks); mehloretamin (Mustargen); busulfan (Mileran): karboplatinu (Paraplatinu); cisplatinu (CDDP; Platinol); temozolomid (Temodar); tiotepa (Tiopleks); bendamustin (Treanda): ili streptozocin (Zanosar).
Primeri za antibiotike uključuju, ali bez ograničenja, doksorubicin (Adriamicin); doksorubicin liposomal (Doksil); mitoksantron (Novantron); bleomicin (Blenoksan): daunorubicin
(Cerubidin): daunorubicin liposomal (Daunoksom); daktinomicin (Kosmegen); epirubicin (Elence); idarubicin (Idamicin); plicamicin (Mitracin); mitomicin (Mutamicin); pentostatin (Nipent); ili valrubicin (Valstar).
Primeri za anti-metabolitike uključuju, ali bez ograničenja, fluorouracil (Adrucil); kapecitabin (Kaseloda); hidroksiureu (Hidrea); merkaptopurin (Purintol); pemetreksed (Alimta): fludarabin (Fludara); nelarabin (Aranon); kladribin (Kladribin Novaplus); klofarabin (Klolar): citarabin (Citosar-U); decitabin (Dakogen); citarabin liposomal (DepoCit): hidroksiureu (Droksia); pralatreksat (Folotin); floksuridin (FUDR); gemcitabin (Gemzar); kladribin (Leustatin); fludarabin (Oforta); metotreksat (MTX; Reumatreks): metotreksat (Treksal); tiogvanin (Tabloid); TS-1 ili citarabin (Tarabin PFS).
Primeri za agense za detoksifikaciju uključuju, ali bez ograničenja, amifostin (Etiol) ili mesna (Mesneks).
Primeri za interferone uključuju, ali bez ograničenja, interferon alfa-2b (Intron A) ili interferon alfa-2a (Roferon-A).
Primeri za poliklonalna ili monoklonalna antitela uključuju, ali bez ograničenja, trastuzumab (Herceptin); ofatumumab (Arzera); bevacizumab (Avastin); rituksimab (Rituksan); cetuksimab (Erbituks); panitumumab (Vektibiks); tositumomab/jodl3t tositumomab (Beksksar); alemtuzumab (Kampat): ibritumomab (Zevalin; ln-111: Y-90 Zevalin); gemtuzumab (Milotarg); eculizumab (Soliris) ordenosumab.
Primeri za EGFR inhibitore uključuju, ali bez ograničenja, gefitinib (Iresa); lapatinib (Tikerb): cetuksimab (Erbituks); erlotinib (Tarceva); panitumumab (Vektibiks); PKI-166; canertinib (CM 033); matuzumab (Emd7200) ili EKB-569.
Primeri za HER2 inhibitore uključuju, ali bez ograničenja, trastuzumab (Herceptin); lapatinib (Tikerb) ili AC-480.
Inhibitori histonske deacetilaze uključuju, ali bez ograničenja, vorinostat (Zolinza).
Primeri za hormone uključuju, ali bez ograničenja, tamoksifen (Soltamoks; Nolvadeks); raloksifen (Evista); megestrol (Megace); leuprolid (Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); fulvestrant (Faslodeks); letrozol (Femara); triptorelin (Trelstar LA: Trelstar Depot); eksemestan(Aromasin); goserelin (Zoladeks); bikalutamid (Kasodeks); anastrozol (Arimidks): fluoksimesteron (Androksi; Halotestin); medroksiprogesteron (Provera; Depo-Provera); estramustin (Emcit); flutamid (Euleksin); toremifen (Fareston): degareliks (Firmagon); nilutamid (Nilandron): abareliks (Plenaksis); ili testolakton (Teslak).
Primeri za inhibitore mitoze uključuju, ali bez ograničenja, paklitaksel (Taksol; Onksol: Abraksan); doketaksel (Taksotere); vinkristin (Onkovin: Vinkasar PFS); vinblastin (Velban): etopozid (Toposar; Etopofos; VePesid); tenipozid (Vumon); iksabepilon (Iksempra); nokodazol; epotilon; vinorelbin (Navelbin); kamptotecin (CPT): irinotekan (Kamptosar); topotekan (Hikamtin): amsakrin ili lamelarin D (LAM-D).
Primeri za MTOR inhibitore uključuju, ali bez ograničenja, everolimus (Afinitor) ili temsirolimus (Torisel); rapamun, ridaforolimus; ili AP23573.
Primeri za inhibitore više kinaza uključuju, ali bez ograničenja, sorafenib (Neksavar); sunitinib (Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; motesanib: ili AP24534.
Primeri za inhibitore serin/treoninske kinaze uključuju, ali bez ograničenja, ruboksistaurin: eril/easudil hidrohlorid; flavopiridol; seliciklib (CYC2()2; Roskovitrin); SNS-032 (BMS-387032); Pkc412; briostatin; KAI-9803; SF1126; VX-680; Azdl 15 Ari-142886 (AZD-6244): SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 ili PD 332991.
Primeri za inhibitore tirozinske kinaze uključuju, ali bez ograničenja, erlotinib (Tarceva); gefitinib (Iresa); imatinib (Glivek); sorafenib (Neksavar); sunitinib (Sutent): trastuzumab (Herceptin); bevacizumab (Avastin); rituksimab (Rituksan); lapatinib (Tikerb): cetuksimab (Erbituks); panitumumab (Vektibiks); everolimus (Afinitor); alemtuzumab (Kampat); gemtuzumab (Milotarg): temsirolimus (Torisel); pazopanib (Votrient); dasatinib (Spricel); nilotinib (Tasigna); vatalanib (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd053O: BMS-354825; SKI-606 CP-690: AG-490; WHI-P154; VVHI-P131: AC-220; ili AMG888.
Primeri za VEGF/VEGFR inhibitore uključuju, ali bez ograničenja, bevacizumab (Avastin): sorafenib (Neksavar); sunitinib (Sutent): ranibizumab; pegaptanib; ili vandetinib.
Primeri za lekove koji ciljaju mikrotubule uključuju, ali bez ograničenja, paklitaksel. docetaksel, vinkristin, vinblastin, nokodazol. epotiloni i navelbin.
Primeri za lekove protiv topoizomeraze uključuju, ali bez ograničenja, tenipozid. etopozid, adriamicin, kamptotecin, daunorubicin, daktinomicin. mitoksantron. amsakrin. epirubicin i idarubicin.
Primeri za taksane ili derivate taksana uključuju, ali bez ograničenja, paklitaksel i docetaksol.
Primeri za opšte hemoterapeutske, anti-neoplasticne, anti-proliferativne agense uključuju, ali bez ograničenja, altretamin (Heksalen): izotretinoin (Akutan; Amnestim; Klaravis: Sotret): tretinoin (Vesanoid); azacitidin (Vidaza); bortezomib (Velkad) asparaginazu (Elspar): levamizol (Ergamizol); mitotan (Lisodren); prokarbazin (Matulan): pegaspargazu (Onkaspar); denileukin diftitoks (Ontak); porfimer (Fotofrin): aldesleukin (Proleukin); lenalidomid (Revlimid); beksaroten (Targretin); talidomid (Talomid); temsirolimus (Torisel); arsen trioksid (Trisenoks); verteporfin (Visudin); mimosin (Leucenol): (IM tegafur - 0.4 M 5-hloro-2.4-dihidroksipirimidin - IM kalijum oksonat) ili lovastatin.
U drugom aspektu, drugi hemoterapeutski agens može da bude citokin poput G-CSF (faktor koji stimuliše granulocitne kolonije). U drugim aspektu, jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, analog ili derivat, mogu da se administriraju zajedno sa terapijom zračenja. Terapija zračenja može takođe da se primeni zajedno sa nekim jedinjenjem iz ove predmetne prijave i drugim hemoterapeutskim agensom koji je opisan kao deo terapije sa više agenasa. U drugom aspektu, jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, analog ili derivat, može da se administrira zajedno sa standardnim kombinacijama hemoterapije poput, ali bez ograničenja. CMF (ciklofosfamid. metotreksat i 5-fluorouracil), CAF (ciklofosfamid. adriamicin i 5-fluorouracil), AC (adriamicin i ciklofosfamid), FEC (5-fluorouracil, epirubicin. i ciklofosfamid), ACT ili ATC (adriamicin. ciklofosfamid, i paklitaksel), rituksimaba, kseloda (kapecitabin), cisplatine (CDDP). karboplatine, TS-1 (tegafur, gimestat i otastat kalijum u molarnom omeru od 1:0.4:1). Kamptotecin-11 (CPT-11, Irinotekan ili Kamptosar™). CHOP (ciklofosfamid. hidroksidaunorubicin. onkovin. i prednizon ili prednizolon), R-CHOP (rituksiinab. ciklofosfamid. hidroksidaunorubicin, onkovin, prednizon ili prednizolon). ili CMFP (ciklofosfamid, metotreksat, 5-fluorouracil i prednizon).
U preferiranim primerima. neko jedinjenje iz ove predmetne prijave, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat, može da se administrira zajedno sa nekim inhibitorom nekog encima, poput receptorske ili ne-receptorske kinaze. Receptorskc i nc-receptorske kinaze su, na primer, tirozinske kinaze ili serin/treoninske kinaze. Inhibitori kinaze. koji su ovde opisani, su male molekule, polinukleinske kiseline, polipeptidi. ili antitela.
Primeri za inhibitore kinaze uključuju, ali bez ograničenja. Bevacizumab (cilja VEGF). BIBW 2992 (cilja EGFR i Erb2), Cetuksimab/Erbituks (cilja Erbl). Imatinib/Glivek (cilja Bcr-Abl). Trastuzumab (cilja Erb2). Gefitinib/Iresa (cilja EGFR). Ranibizumab (cilja VEGF), Pegaptanib (cilja VEGF), Erlotinib/Tarceva (cilja Erbl). Nilotinib (cilja Bcr-Abl). Lapatinib (cilja Erbl i Erb2/Her2), GW-572016/lapatinib ditosilat (cilja HER2/Erb2). Panitumumab/Vektibiks (cilja EGFR), Vandetinib (cilja RET/VEGFR), E7080 (multiple mete uključujući RET i VEGFR). Herceptin (cilja HER2/Erb2), PKI-166 (cilja EGFR). Kanertinib/CI-1033 (cilja EGFR). Sunitinib/SU-11464/Sutent (cilja EGFR i FLT3). Matuzumab/Emd7200 (cilja EGFR). EKB-569 (cilja EGFR), Zd6474 (cilja EGFR i VEGFR). PKC-412 (cilja VEGR i FLT3). Vatalanib/Ptk787/ZK222584 (cilja VEGR). CEP-701 (cilja FLT3). SU5614 {cilja FLT3). MLN518 (cilja FLT3). XL999 (cilja FLT3), VX-322 (cilja FLT3), Azd0530 (cilja SRC), BMS-354825 (cilja SRC), SKI-606 (cilja SRC), CP-690 (cilja JAK). AG-490 (cilja JAK). WHI-P154 (cilja JAK), VVHI-P131 (cilja JAK), sorafenib/Neksavar (cilja RAF kinazu. VEGFR-1. VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-B, KIT, FLT-3, i RET), Dasatinib/Spricel (BCR/ABL i Src). AC-220 (cilja Flt3), AC-480 (cilja sve HER belančevine, "panHER"). Motesanib difosfat (cilja VEGF1-3. PDGFR, i c-kit), Denosumab (cilja RANKL, inhibira SRC), AMG888 (cilja HER3), i AP24534 (multiple mete uključujući Flt3).
Primeri za inhibitore serin/treoninske kinaze uključuju, ali bez ograničenja. Rapamun (cilja mTOR/FRAPl), Deforolimus (cilja mTOR). Certikan/Everolimus (cilja mTOR/FRAP 1), AP23573 (cilja mTOR/FRAP I), Eril/Fasudil hidrohlorid (cilja RHO). Flavopiridol (cilja CDK). Seliciklib/CYC202/Roskovitrin (cilja CDK). SNS-032/BMS-387032 (cilja CDK). Ruboksistaurin (cilja PKC), Pkc412 (cilja PKC), Briostatin (cilja PKC). KA1-9803 (cilja PKC). SF1126 (cilja PI3K), VX-680 (cilja Aurora kinazu), Azdll52 (cilja Aurora kinazu). Ari-142886/AZD-6244 (cilja MAP/MEK). SCIO-469 (cilja MAP/MEK). GW681323 (cilja MAP/MEK), CC-401 (cilja JNK), CEP-1347 (cilja JNK), i PD 332991 (cilja CDK).
Poremećaj u kojem EZH2-posredovana proteinska metilacija igra ulogu može da bude i neka neurološka bolest. Jedinjenja iz ove predmetne prijave mogu takođe da se koriste za tretiranje ili istraživanje neuroloških bolesti poput epilepsije, shizofrenije, bipolarnog poremećaja ili drugih psiholoških i/ili psihijatrijskih poremećaja, neuropatije, atrofije skeletnih mišića, i neurodegenerativnih bolesti, na primer. neka neurodegenerativna bolest. Primeri za neurodegenerative bolesti uključuju: Alzheimer-ovu, amiotrofnu lateralnu sklerozu (ALS). i Parkinson-ovu bolest. Druga klasa neurodegenerativnih bolesti uključuje bolesti koje su uzrokovane delomično sa nakupljanjem poli-glutamina. Bolesti iz ove klase uključuju: Huntington-ove bolesti, spinalnu i bulbarnu mišićnu atrofiju (SBMA ili Kennedy-eva bolest), dentatorubralna-Pallidoluisieva atrofija (DRPLA), spinocerebelarnu ataksiju 1 (SCA1). spinocerebelarnu ataksiju 2 (SCA2). Machado-Joseph-ovu bolest (MJD; SCA3). spinocerebelarnu ataksiju 6 (SCA6), spinocerebelarnu ataksiju 7 (SCA7). i spinocerebelarnu ataksiju 12 (SCA 12).
Bilo koja druga bolest u kojoj epigenetička metilacija. koja je pomognuta sa EZH2. igra ulogu mogla bi da se tretira ili spreči uz pomoć jedinjenja i postupaka koji su ovde opisani, ili takve bolesti i njihovi potencijalni tretmani mogu da se istražuju sa jedinjenjima koja su ovde opisana.
4.Farmaceutske kompozicije
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje sa bilo kojim Formulom koja je vode opisana zajedno sa najmanje jednim farmaceutski prihvatlji vim ekscipijentom ili nosiocem.
"Farmaceutska kompozicija" je formulacija koja sadrži jedinjenja iz ovoga pronalaska u formi ko ja je prikladna za administriranje nekom subjektu. U jednoj izvedbi, pomenuta farmaceutska kompozici ja je u formi velikog volumena ili kao pojedinačna doza. Pojedinačna doza može da
zauzme brojne forme, uključujući, na primer. formu kapsule, IV vrećice, tablete, pojedinačne pumpe za inhaler sa aerosolom ili za posudu. Količina aktivnog sastojka( na primer,formulacija ovde opisanog jedinjenja ili njegove soli, hidrata, solvata ili izomera) u pojedinačnoj dozi kompozicije je neka efektivna količina koja može da varira u skladu sa primenjivanim tretmanom. Stručnjak razume daje ponekad neophodno da se pripreme rutinske varijacije doze u zavisnosti o starosti i stanju pacijenta. Doza takođe zavisi i o ruti ađministriranja. Brojne rute su predviđene, uključujući oralnu, pulmonalnu. rektalnu, parenteralnu. transdermalnu, supkutanu. intravenoznu, intramišićnu, intraperitonealnu, rutu za inhaliranje, bukalnu. podjezičnu. intrapleuralnu, intratekalnu. intranazalnu, i slično. Dozne forme za topikalnu ili transdermalnu administraciju jedinjenja iz ovoga pronalaska uključuju prahove, sprejove. masti, paste, kreme, losione, gelove, rastvore, nalepnice i inhalante. U jednoj izvedbi, aktivno jedinjenje se mesa, u sterilnim uslovima. sa nekim farmaceutski prihvatljivim nosiocem, i sa svim konzervansima, puferima, ili propelantima koji su potrebni.
Kao šta se ovde koristi, fraza "farmaceutski prihvatljiv" se odnosi na ona jedinjenja. anjone. katjone, materijale, kompozicije, nosioce, i/ili dozne forme koje su, u skladu sa opravdanom medicinskom procenom, prikladne za upotrebu kada dolaze u kontakt sa tkivima ljudskih bića i životinja bez da uzrokuju prekomernu toksičnost, iritaciju, alergijski odgovor, ili druge probleme ili komplikacije, srazmerno sa opravdanim omerom korist/rizik.
"Farmaceutski prihvatljivi ekscipijent" označava ekscipijent koji je koristan kod pripremanja farmaceutske kompozicije, pri čemu je pomenuti ekscipijent generalno bezbcdan, nc-loksičan i nije biološki ili bilo kako nepoželjan, a takođe uključujući i ekscipijente koji su prihvatljivi za veterinarsku upotrebu kao i za farmaceutsku upotrebu na ljudima. "Farmaceutski prihvatljivi ekscipijent". kao šta se koristi u ovoj predmetnoj prijavi i u zahtevima. uključuje jedan ili više takvih ekscipijenata.
Farmaceutska kompozicija iz ovoga pronalaska je formulisana tako da je kompatibilna sa predviđenom rutom za administriranje. Primeri za rute za administriranje uključuju parenteralnu,na primer,intravenoznu, intradermalnu. supkutanu. oralnu( na primer,inhalacija), transdermalnu (topikalnu), i transmukoznu administraciju. Rastvori ili suspenzije koje su potrebne za parenteralnu. intradermalnu. ili supkutanu primenu mogu da uključuju sledeće komponente: sterilni razređivač poput vode za injekciju, slani rastvor, ulja koja nisu štetna, polietilen glikole, glicerin, propilen glikol ili druge sintetičke rastvarače; antibakterijske agense poput benzil alkohola ili metil parabena; antioksidanse poput askorbinske kiseline ili natrijum bisulfita; agense za heliranje poput etilendiamintetrasirćetne kiseline; pufere poput acetata, citrata ili fosfata, i agense za podešavanje toniciteta poput natrijum hlorida ili dekstroze. pH može da se podesi sa kiselinama ili bazama, poput hlorovodonične kiseline ili natrijum hidroksida. Parenteralni preparat može da bude priložen u ampulama. jednokratnim špricevima i posudama za višestruke doze od stakla ili plastike.
Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija iz ovoga pronalaska može da se administrira nekom subjektu uz pomoć mnogih poznatih postupaka koji se koriste za hemoterapeutski tretman. Na primer, za tretman raka, jedinjenje iz ovoga pronalaska može da se injektira direktno u tumor, u krvni sistem ili u telesne šupljine ili može da se uzme na usta ili da se primeni preko kože uz pomoć nalepnica. Odabrana doza mora da bude dovoljna kako bi se postigao efektivan tretman, ali ne srne da bude prevelika kako ne bi uzrokovala neprihvatljive nus-pojave. Stanje bolesti( na primer,rak, pre-tumor. i slično) i zdravlje pacijenta treba da se stalno motre tokom tretmana, ali i dovoljno dugo nakon tretmana.
Termin "terapeutski efektivna količina", kao šta se koristi ovde, se odnosi na količinu nekog farmaceutskog agensa sa kojim se tretira, poboljšava, ili sprečava neka identifikovana bolest ili stanje, pri čemu pomenuta količina treba da uspostavi vidljiv terapeutski ili inhibitoran efekt. Ovaj efekt može da se detektuje uz pomoć nekog ogleda koji je poznat stanju tehnike. Precizna efektivna količina za nekog određenog subjekta će zavisiti o njegovoj telesnoj težini, veličini, i zdravlju; prirodi i snazi bolesnog stanja; a i o terapeuticima ili kombinaciji terapeutika koji su odabrani za administriranje. Terapeutski efektivne količine za neku određenu situaciju mogu da se odrede rutinskim eksperimentiranjem koje je poznato stručnjaku. U jednom preferiranom aspektu, pomenuta bolest ili stanje koje se tretira je rak. U drugom aspektu, pomenuta bolest ili stanje koje se tretira je ćelijski proliferativni poremećaj.
Za bilo koje jedinjenje, terapeutski efektivna količina može da se inicijalno proceni uz pomoć ogleda sa ćelijskom kulturom,na primer,kulturom neoplastičnih ćelija, ili uz pomoć nekog životinjskog modela, uobičajeno pacovi. miševi, zečevi, psi. ili svinje. Pomenuti životinjski model može takođe da se koristi sa ciljem da se odredi odgovarajući raspon koncentracija, ali i ruta za administraciju. Takva informacija može da se koristi sa ciljem da se odrede korisne doze i rute za administriranje na ljudima. Terapeutsko/profilaktička efikasnost i toksičnost mogu da se odrede uz pomoć standardnih farmaceutskih procedura u ćelijskim kulturama ili uz pomoć eksperimentalnih životinja,na primer.EDmi (doza koja je terapeutski efekti vna kod 50% populacije) i LDso (doza koja je letalna za 50% populacije). Dozni omer između toksičnih i terapeutskih efekata se naziva terapeutski indeks, a može da se izrazi kao omer LDjo/EDjo, Farmaceutske kompozicije koje pokazuju velike terapeutske indekse su preferirane. Sama doza može da varira unutar nekog raspona u zavisnosti o korišćenoj doznoj formi, osetljivosti pacijenta, i rute za administraciju.
Dozirane i administriranje su podešeni tako daobezbeđuju dovoljne nivoe aktivnih agenasa ili da održavaju željeni efekt. Faktori koji mogu da se uzmu u obzir uključuju ozbiljnost bolesnog stanja, opšte zdravlje subjekta, njegovu starost, težinu, i pol, ishranu, vreme i frekvenciju ađministriranja, kombinacije tekova, osetljivost pacijenta, i toleranciju/odgovor na terapiju. Dugo-delujuće farmaceutske kompozicije mogu da se administriraju svaka 3 do 4 dana, svake sedmice, ili jednom u svake dve sedmice u zavisnosti o polu-životu i stopi čišćenja iz tela neke određene formulacije.
Farmaceutske kompozicije koje sadrže aktivna jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se proizvedu na način koji je opšte poznat,na primer,uz pomoć procesa konvencionalnog mešanja, rastvaranja, granuliranja, pripreme dražeja. ispiranja, pripreme emulzija, kapsuliranja, zarobljavanja, ili liofilizovanja. Farmaceutske kompozicije mogu da budu formulisane na konvencionalan način uz pomoć jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosioca koji sadrže ekscipijente i/ili pomoćna sredstva koja ubrzavaju procesiranje aktivnih jedinjenja u preparate koji mogu da se koriste farmaceutski. Naravno, odgovarajuća formulacija zavisi0izabranoj ruti za administriranje.
Farmaceutske kompozicije koje su prikladne za upotrebu kao injekcije uključuju sterilne vodene rastvore (sa vodom kao rastvaračem) ili disperzije i sterilne prahove za kasniju pripremu sterilnih rastvora ili disperzija za injektiranje. Za intravenozno administriranje. prikladni nosioci uključuju fiziološki rastvor, bakteriostatsku vodu. Kremofor EL™ (BASF. Parsippanv. NJ.) ili slanicu koja je puferovana sa fosfatom (PBS). U svim slučajevima, kompozicija mora da bude sterilna i tečna do te mere da može da se lako daje uz pomoć injekcije. Mora da bude stabilna u uslovima proizvodnje i skladištenja, a takođe mora da bude i zaštićena ođ štetnog delovanja mikroorganizama poput bakterija i gljiva. Pomenuti nosilac može da bude rastvarač ili medijum za disperziju koji sadrži, na primer, vodu. etanol, poliol (na primer, glicerol, propilen glikol, i tečni polietilen glikol. i slično), i njihove prikladne smeše. Odgovarajuća tečnost može da se održava, na primer. upotrebom omota (preliva) poput lecitina, uz održavanje odgovarajuće veličine čestica u slučaju disperzije i uz primenu surfaktanata. Sprečavanje delovanja mikroorganizama može đa se postigne uz pomoć brojnih antibakterijskih i antigljivičnih agenasa. na primer. parabena. hlorobutanola. fenola, askorbinske kiseline, timerosala, i slično. U mnogim slučajevima, bilo bi poželjno da se u kompoziciju uključe agensi za izotoničnost, na primer. šećeri, polialkoholi poput manitola i sorbitola. i natrijum hlorid. Produžena apsorpcija kompozicija za injektiranje može se ostvari uključivanjem agensa koji usporava apsorpciju, na primer. aluminijum monostearat i želatin.
Sterilni injektibilni rastvori mogu da se pripreme ugradnjom aktivnog jedinjenja u neki odgovarajući rastvarač u željenoj količini sa jednim ili kombinacijom sastojaka koji su nabrojani iznad, ako je poželjno, nakon čega sledi sterilizacija filtriranjem. Uopšteno. disperzije se pripremaju uz pomoć ugradnje aktivnog jedinjenja u neki sterilni prenosnik koji sadrži bazični medijum za disperziju i druge potrebne sastojke izabrane iz grupe malopre navedenih. U slučaju sterilnih prahova za pripremu sterilnih rastvora za injektiranje, postupci za pripremu su sušenje u vakuumu i smrzavanje-sušenje koji omogućavaju dobijanje praškastog aktivnog sastojka uz dodatne željene sastojke iz njihovog prethodno sterilizovanog rastvora.
Oralne kompozicije generalno uključuju neki inertni razređivač ili jestivi farmaceutski prihvatljivi nosilac. Mogu da se zatvore u želatinskim kapsulama ili da se komprimiraju u
tablete. Za potrebe oralnog terapeutskog ađministriranja. aktivno jedinjenje može da se pripremi zajedno sa ekscipijentima i da se koristi u formi tableta, pastila. ili kapsula. Oralne kompozicije mogu takođe da se pripreme uz pomoć tečnog nosioca za upotrebu kao tečnost za ispiranje usta, pri čemu se jedinjenje u tečnom nosiocu primenjuje oralno uz pomoć gargaranja i izbacivanja iz usta nakon ispiranja ili gutanja. Farmaceutski kompatibilni agensi za vezanje, i/ili dodatni materijali mogu da budu uključeni kao deo kompozicije. Tablete, pilule, kapsule, pastile i slično mogu da sadrže bilo kojeg od sledećih sastojaka, ili jedinjenja slične prirode: veznik poput mikrokristalne celuloze, gume tragakant ili želatina; ekscipijent poput škroba ili laktoze, agens za raspadanje poput alginske kiseline, Primogela, ili kukuruznog škroba;
lubrikant poput magnezijum stearata ili sterotesa; glidant poput koloidnog silikon dioksida; agens za zaslađivanje poput saharoze ili saharina; ili agens za ukus poput peperminta. metil salikilata, ili ukusa pomorandže.
Za administriranje inhalacijom, jedinjenja se dostavljaju u formi aerosola (sprej) koji izlazi iz kontejnera ili dispenzera koji je pod pritiskom, pri čemu pomenuti sadrže neki prikladni propelant, na primer, gas poput ugljenik dioksida, ili raspršivač.
Sistemsko administriranje može takođe da se ostvari transmukozno ili transdermalno. Za transmukozno ili transdermalno administriranje. u formulaciji se koriste penetranti koji su prikladni za barijeru koja treba da se pređe. Takvi penetranti su generalno poznati stanju tehnike, a uključuju, na primer za transmukzno administriranje. deterdžente, žučne soli. i derivate fuzidinske kiseline. Transmukozna administracija može da se ostvari uz pomoć upotrebe nosnih sprejova ili čepića. Za transdermalno administriranje, aktivna jedinjenja su formulisana u masti, pomada, gelova, ili krema kao šta je opšte poznato u struci.
Aktivna jedinjenja mogu da se pripreme sa farmaceutski prihvatljivim nosiocima koji će štititi pomenuto jedinjenje od brzog nestanka iz tela, poput formulacije za kontrolisano ispuštanje, uključujući implante i sisteme za mikro-kapsuliranu dostavu. Bio-razgradivi. bio-kompatibilni polimeri mogu da se koriste, poput etilen vini] acetata, polianhidrida. poliglikolnih kiselina, kolagena, poliortoestera, i polimlečnih kiselina. Postupci za pripremu takvih formulacija su poznati stručnjacima. Materijali mogu takođe da se nabave komercijalno od Alza Corporation i Nova Pharmaceuticals. Inc. Liposomalne suspenzije (uključujući liposome koji ciljaju inficirane ćelije sa monoklonskim antitela i viralnim antigenima) mogu takođe da se koriste kao farmaceutski prihvatljivi nosioci. Pomenuti mogu da se pripreme u skladu sa postupcima koji su poznati stručnjacima, na primer, kao šta je opisano u dokumentu U.S. Pat. br. 4,522,811.
Posebno je korisno da se formulišu oralne ili parenteralne kompozicije u unitarnoj doznoj formi zbog jednostavnog ađministriranja i uniformnog doziranja. Unitarna dozna forma, kao šta se ovde koristi, se odnosi na fizički diskretne jedinice koje su prikladne za unitarno doziranje nekom subjektu u potrebi; svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog jedinjenja za koju je proračunato da može da obezbedi željeni terapeutski efekt zajedno sa nekim poželjnim farmaceutskim nosiocem. Specifikovanje unitarnih doznih forma iz ovoga pronalaska je diktirano i direktno zavisno o jedinstvenim karakteristikama aktivnog jedinjenja i određenog terapeutskog efekta koji treba da se ostvari.
Kod terapeutskih primena, doziranje farmaceutskih kompozicija koje se koriste u skladu sa ovim pronalaskom varira u zavisnosti o agensu, starosti, težini, i kliničkom stanju tretiranog pacijenta, i o iskustvu i proceni kliničara ili doktora koji prepisuje pomenutu terapiju, između ostalih faktora koji deluju na izabranu dozu. Uopšteno, doza treba da bude dovoljna da dovede do usporavanja, a preferirano povlačenja, rasta tumora pri čemu je takođe preferirano da uzrokuje potpuno povlačenje bolesti (raka). Doze mogu da se kreću u rasponu od oko 0.01 mg/kg po danu do oko 5000 mg/kg po danu. U preferiranim aspektima, doza može da se kreće u rasponu od oko 1 mg/kg po danu do oko 1000 mg/kg po danu. U jednom aspektu, doza će se kretati u rasponu od oko 0.1 mg/danu do oko 50 g/danu; oko 0.1 mg/dan do oko 25 g/danu; oko 0.1 mg/dan do oko 10 g/danu; oko 0.1 mg do oko 3 g/danu; ili oko 0.1 mg do oko 1 g/danu. u pojedinačnim, podeljenim, ili kontinuiranim dozama (pri čemu doza može da se podesi prema pacijentovoj težini izraženoj u kilogramima, telesnoj površini izraženoj u m<2>, i starosti izraženoj u godinama). Efektivna količina nekog farmaceutskog agensa je ona koja obezbeđuje neko objektivno vidljivo poboljšanje koje može da se primeti od strane kliničara ili drugog kvalifikovanog analitičara. Na primer. povlačenje tumora kod nekog pacijenta može da se izmeri u odnosu na referentni dijametar tumora. Opadanje dijametara tumora ukazuje na povlačenje. Povlačenje se takođe pokazuje kao nemogućnost tumora da se ponovno pojave nakon što je tretman zaustavio njihov rast. Kao šta se ovde koristi, termin "dozno efektivan način" se odnosi na količinu nekog aktivnog jedinjenja koja je dovoljna da obezbcdi željeni biološki efekt u nekom subjektu ili ćeliji.
Farmaceutske kompozicije mogu da se nalaze u nekom kontejneru, pakovanju. ili đispenzeru zajedno sa instrukcijama za administriranje.
Jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da stvaraju dodatne soli. Sve takve forme su takođe obuhvaćene okvirima ovoga pronalaska.
Kao šta se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na derivate jedinjenja iz ovoga pronalaska u kojima su parentna jedinjenja rnođifikovana tako da su pretvorena u kisele ili bazne soli. Primeri za farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali bez ograničenja, soli baznih ostataka poput amina, alkalija sa mineralnim ili organskim kiselinama ili organske soli kiselih ostataka poput karboksilnih kiselina, i slično. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne ne-toksične soli ili soli kvaternarnog amonijuma parentnog jedinjenja koje potiču, na primer. iz ne-toksičnih anorganskih ili organskih kiselina. Na primer. takve konvencionalne ne-toksične soli uključuju, ali bez ograničenja, one soli koje su izvedene iz anorganskih i organskih kiselina izabranih iz 2-acetoksibenzojeve, 2-hidroksietan sulfonske. sirćetne, askorbinske. benzen sulfonske. benzojeve. bikarbonske. ugljene, limunske, etan disulfonske, 1,2-etan sulfonske, fumarne, glukoheptonske, glukonske, glutaminske, glikolne, glikolarsanilinske, heksilresorcilne, bromovodonične, hlorovodonične, jodovodonične. hidroksimaleinske, hidroksinaftoinske, isetionske. mlečne, laktobionske. lauril sulfonske. maleinske, jabučne, mandelinske, metan sulfonske, napsilne. azotne, oksalne, pamoinske, pantotenske, fenilacetatne, fosforne, poligalakturonske. propionske, salicilne. stearinske. subacetatne. sukcinske. sulfaminske. sulfanilinske. sumporne, taninske, vinske, toluen sulfonske, i uobičajene aminke kiseline,na primer.giicin, alanin. fenilalanin. arginin. itd.
Drugi primeri za farmaceutski prihvatljive soli uključuju heksansku kiselinu, ciklopentansku propionsku kiselinu, piruvinsku kiselinu, malonsku kiselinu. 3-(4-hidroksibenzoil)benzojevu kiselinu, cinaminsku kiselinu, 4-hlorobenzensulfonsku kiselinu. 2-naftalensulfonsku kiselinu. 4-toluensulfonsku kiselinu, kamforsulfonsku kiselinu, 4-metilbiciklo-[2.2.2]-okt-2-en-l-karboksilnu kiselinu, 3-fenilpropionsku kiselinu, trimetilsirćetnu kiselinu, tercijarnu butilsirćetnu kiselinu, mukonsku kiselinu, i slično. Ovaj pronalazak takođe obuhvata soli koje nastaju kada je kiseli proton, koji je prisutan u parentnom jedinjenju. zamenjen sa nekim metalnim jonom,na primer,jon alkalnog metala, jon zemno-alkalnog metala, ili jon aluminij uma; ili koordinira sa nekom organskom bazom poput etanolamina. dietanolamina. trietanolamina, trometamina, N-metilglukamina, i slično. Treba da se primeti da u solnoj formi omer jedinjenja prema katjonu ili anjonu iz soli može da bude 1:1. ili bilo koji omer koji je različit od 1:1, na primer, 3:1 2:1, 1:2, ili 1:3.
Treba da se primeti da sve reference na farmaceutski prihvatljive soli uključuju rastvarač - adicione forme (solvati) ili kristalne forme (polimorfi) pomenute soli. kao šta je ovde definisano.
Jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu takođe da se pripreme kao esteri, na primer. farmaceutski prihvatljivi esteri. Na primer, funkcionalna grupa karboksilne kiseline u nekom jedinjenju može da se konvertuje u njen odgovarajući ester.na primer,neki metil, etil li drugi ester. Takođe. alkoholna grupa u nekom jedinjenju može da se konvertuje u svoj odgovarajući ester. na primer, acetat. propionat ili drugi ester.
Jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu takođe da se pripreme u formi proleka. na primer. farmaceutski prihvatljivih prolekova. Termini "pro-lek" i "prolek" se koriste kao sinonimi i se odnose na bilo koje jedinjenje koje oslobađa aktivni parentni lekin vivo.Budući da su prolekovi poznati da pojačavaju brojne poželjne kvalitete farmaceutska( na primer.rastvorljivost, bio-dostupnost, proizvodljivost, itd.), jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se dostave u formi proleka. Tako, ovaj pronalazak obuhvata prolekove ovde opisanih jedinjenja za koje se zahteva zaštita, postupke za dostavu istih i kompozicije koje ih sadrže. "Prolekovi" su namenjeni da uključuju sve kovalentno vezane nosioce koji oslobađaju aktivni parentni lek iz ovoga pronalaskain vivokada se takav prolek administrira nekom subjektu. Prolekovi iz ovoga pronalaska se pripremaju uz pomoć mođifikovanja funkcionalnih grupa koje su prisutne u pomenutom jedinjenju na takav način da unete modifikacije mogu da se pocepaju. uz pomoć rutinske manipulacije iliin vivo.dajući parentno jedinjenje. Prolekovi uključuju jedinjenja iz ovoga pronalaska u kojima je hidroksi, amino, sulfhidrilna, karboksi ili karbonilna grupa vezana na bilo koju grupu koja može da se pocepain vivokako bi se dobila slobodna hidroksilna. slobodna amino, slobodna sulfhidrilna, slobodna karboksi ili slobodna karbonilna grupa.
Primeri za prolekove uključuju, ali bez ograničenja, estere( na primer.acetat. dialkilaminoacetate, format, fosfate, sulfati i benzoat) i karbamate( na primer.N,N-đimetilaminokarbonil) sa hidroksi funkcionalnim grupama, estere( na primer.etil estere. morfolinoetanol estere) sa karboksilnim funkcionalnim grupama. N-acil derivate( na primer.N-acetil)N-Mannich-ove baze. Schiff-ove baze i enaminone sa amino funkcionalnim grupama, oksime, acetale. ketale i enolne estere sa ketonskim i aldehidnim funkcionalnim grupama jedinjenja iz ovoga pronalaska, i slično, vidi Bundegaard. H.. Design of Prodrugs. str. 1-92. Elesevier, New York-Oxford (1985).
Jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, esteri ili prolekovi, se administriraju oralno, nazalno, transdermalno, pulmonalno. inhalacijom, bukalno, suplingvalno. intraperintonealno, supkutano, intramišićno. intravenozno, rektalno, intrapleuralno. intratekalno i parenteralno. U jednoj izvedbi, jedinjenje se administrira oralno. Stručnjak prepoznaje prednosti nekih ruta za administriranje.
Dozni režim koji koristi pomenuta jedinjenja je izabran u skladu sa brojnim faktorima uključujući tip, vrste, starost, težinu, pol i medicinsko stanje pacijenta; ozbiljnost stanja koje se tretira; rutu za administriranje; funkcioniranje jetra i bubrega pacijenta; i specifično jedinjenje ili njegova so koje se koristi. Lekar ili veterinar može lako da odredi i prepiše efektivnu količinu leka koja je potrebna da se spreči, preokrene, ili zaustavi napredovanje pomenutog stanja.
Tehnike za formulisanje i administriranje opisanih jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se pronađu u Remington: the Science and Practice of Pharmacv. 19. izdanje, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). U jednoj izvedbi, ovde opisana jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, se koriste u farmaceutskim preparatima zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim nosiocem ili razređivačem. Prikladni farmaceutski prihvatljivi nosioci uključuju inertne čvrste filere ili razređivače i sterilne vodene ili organske rastvore. Jedinjenja će u takvim farmaceutskim kompozicijama biti prisutna u količinama koje su dovoljne đa se obezbedi željena dozna količina u rasponu koji je ovde opisan.
Svi procenti i omeri koji se ovde koriste, osim ako je drugačije navedeno, su težinski. Druge karakteristike i prednosti ovoga pronalaska će biti vidljive iz različitih primera. Obezbeđeni primeri ilustruju različite komponente i metodologiju koji su korisni za izvođenje ovoga pronalaska. Primeri ne ograničavaju opisani pronalazak. Na bazi opisanog u ovoj predmetnoj prijavi, stručnjak može da identifikuje i upotrebi druge komponente i drugu metodologiju koja je korisna za izvođenje ovoga pronalaska.
U shemama za sintezu koje su ovde opisane, jedinjenja su nacrtana uz pomoć jedne određene konfiguracije radi jednostavnosti. Takve određene konfiguracije ne treba da se tumače kao da ograničavaju pronalazak na jedan ili drugi izomer, tautomer. regioizomer ili stereoizomer. niti isključuju smeše izomera, tautomera, regioizomera ili stereoizomera; međutim, podrazumeva se da određeni izomer, tautomer, regioizomer ili stereoizomer može da ima viši nivo aktivnosti od nekog drugog izomera, tautomera, regioizomera ili stereoizomera.
Jedinjenja koja su označena, selektirana i/ili optimizovana uz pomoć postupaka koji su opisani iznad, jednom kada se proizvedu. mogu da se karakterizuju uz pomoć brojnih ogleda koji su poznati stručnjacima sa ciljem da se odredi da li pomenuta jedinjenja imaju biološku aktivnost. Na primer. molekuli mogu da se karakterizuju uz pomoć konvencionalnih ogleda, uključujući, ali bez ograničenja, one oglede koji su opisani ispod, a sa ciljem da se odredi da li pomenuti imaju predviđenu aktivnost, veznu aktivnost i/ili veznu specifičnost.
Nadalje, visoko-procesno proveravanje može da se koristi sa ciljem da se ubrza analiza uz pomoć pomenutih ogleda. Kao rezultat, može biti moguće da se brzo ispitaju molekuli, koji su ovde opisani, kako bi se utvrdila njihova aktivnost primenom tehnika koje su poznate stanju tehnike. Opšte metodologije za izvođenje visoko-procesnog proveravanja su opisane, na primer, od autora Devlin (1998) High Throughput Screening. Marcel Dekken i u dokumentu U.S. Patenta br. 5,763,263. Ogledi za visoko-procesno proveravanje mogu da koriste jedan ili više različitih testova uključujući, ali bez ograničenja, i one koji su opisani ispod.
Nakon šta je sada ovaj pronalazak opisan tekstualno, stručnjaci će prepoznati da ovaj pronalazak može da se prakticira kroz brojne izvedbe i da prethodni opis i primeri ispod služe samo radi ilustrovanja, a ne ograničavanju zahteve koji slede.
5.Primeri
Opšti eksperimentalni pristup
NMR
'H-NMR spektari su snimljeni primenom CDCI3osim ako je drugačije navedeno, a snimljeni su na 400 ili 500 MHz korišćenjcm instrumenata Varian ili Oxford instruments magnet (500 MHz). Navedeni multipliciteti su s = singlet. d = dublet. t = triplet, q = kvartet, kvint = kvintet, skst = sekstet, m = multiplet, dd = dvostruki dublet. dt = dvostruki triplet; br pokazuje široki signal.
LCMSiHPLC
Shimadzu LC-Q. Shimadzu LCMS-201OEV ili Waters Acquity Ultra Performance LC. HPLC: produkti su analizirani uz pomoć aparata Shimadzu SPD-20A na koloni 150 x 4.5 mm YMC ODS-M80 ili koloni 150 x 4.6 mm YMC-Pack Pro C18 stopom od 1.0 ml/min.
Mobilna faza je bila MeCN;H20=3:2 (koja sadrži 0.3% SDS i 0.05% H3PO4). 0.05% TFA u vodi. 0.05%. TFA u acetonitrilu (gradijent: početno 20%, a tada 0.05%TFA/MeCN do konc. do 95% tokom 3 min. zadržavanje tokom 0.5 min. tokom 3.51 do 4.50 min. a tada 0.05% TFA/MeCN konc. 20%).
Alternativno. LCMS. 2 različita postupka su bila korišćena; onaj koji smo mi koristili najčešće je visoki pH (METCR1600), a drugi za standardni) a jedinjenja (METCR1416).
0.1% mravlja kiselina u vodi - mobilna faza "A" 0.1 % mravlja kiselina u acetonitrilu - mobilna faza "B" primenom kolone Waters Atlantis dC18, 2.1 mm x 100 mm, 3um, sa stopom protoka = 0.6 ml/min i temperaturom kolone = 40° C; vreme (min) %B 0.00 min 5% B. 5.0 min 100% B, 5.4 min 100% B i 4.2 min 5%B
3.5-minutni postupak se odnosi na kolonu Atlantis dC!8. 2.1 mm x 50 mm. 3pm, uz stopu protoka od 1 ml/min na 40° C. Mobilna faza A mravlja kiselina (vod.) 0.1% mobilna faza B mravlja kiselina (MeCN) 0.1%. injekcija 3 uL, gradijent 0 min (5% organsko). 2.5 min (100% organsko), 2.7 min (100% organsko), 2.71 min (5% organsko), 3.5 min (5% organsko).
7.0-minutni postupak se odnosi na kolonu Atlantis dC18, 2.1 mm x 100 mm, 3pm. uz stopu protoka od 0.6 ml/min na 40° C. Mobilna faza A mravlja kiselina (vod.) 0.1% mobilna faza B mravlja kiselina (MeCN) 0.1%. injekcija 3 ul,, gradijent 0 min (5% organsko). 5 min (100% organsko). 5.4 min (100% organsko), 5.42 min (5% organsko). 7 min (5% organsko).
Oba postupka, 3.5- i 7-minutni, se izvode na aparatu MSI8 Shimadzu LCMS-2010EV ili MS 19 Shimadzu LCMS-201 OEV svstem korišćenjem LC-20AB pumpe i SPD-M20A PDA detektora.
Produkti su prečišćeni uz pomoć HPLC/MS primenom Waters AutoPurification Svstem sa 3100 masenim detektorom.
HPLC analize mogu takođe da se izvode na aparatu Shimdazu LC-2010 CHT uz korišćenje kolone YMC ODS-A, Cl8, (150x4.6x5 um) na ambijentalnoj temperaturi sa stopom protoka od 1.4 ml/min. Korišćenje volumen injekcije od 10 ul. a detektovanje se provodilo uz pomoć UV/PDA. Mobilna faza A je 0.05% TFA u vodi, a mobilna faza B je 0.05% TFA u acetonitrilu sa inicijalnim gradijentom od 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje od 1.5 min, tokom 9.51 do 12 min B konc. 0.5%. Razređivač je mobilna faza.
Drugo
Automatizovana fleš-hromatografija na koloni je izvođena na aparatu Biotage Isolera, verzija 4. Punjenje od 10 g SNAP kod stope protoka od 12 ml/min ili od 25 g SNAP kod stope protoka od 25 ml/min i detektovanja kod 254 nm i 280 nm.
Select Ni tri!redukovanja mogu da se izvode uz pomoć ThalesNano H-Cube<*>u skladu sa uslovima koji su opisani u eksperimentalnoj proceduri.
Primer 1: Sinteza Jedinjenja 1: 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-I,2-
dihidropuridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[l,r-bifenil|-3-karboksamid
Korak 1: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeva kiselina
U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (50 g. 276.2 mmol) u konc, H2SO4(200 mL)je dodan 1.3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (43.4 g. 151.8 mmol) deo po deo na sobnoj temperaturi, a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Nakon kompletovanja, reakciona masa je izlivena u ledenu vodu. precipitirana čvrsta materija je filtrirana, a nastao ostatak je ispran sa vodom i osušen u vakuumu koje daje željeno jedinjenje (71.7 g, 100%).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (287 g. 1103 mmol) u DMF (150 mL) su dodani natrijum karbonat (468 g, 4415 mmol) i metil jodid (626.63 g. 4415 mmol). Nastala reakciona masa je grejana na 60° C tokom 8 h. Po završetku, precipitirana čvrsta materija je filtrirana, a ostatak je ispran sa dietil etrom (5 puta). Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje željeno sirovo jedinjenje (302 g, 99%).
Korak 3: metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (150 g, 544 mmol) u etanolu (750 mL) uz mešanje su dodani amonijum hlorid (150 g. 2777 mmol) rastvoren u vodi (750 mL) i gvožđe u prahu (93.3 g. 1636 mmol). Nastala reakciona masa je grejana na 80° C tokom 7 h. Po završetku, reakciona masa je filtrirana kroz celit uz ispiranje sa vodom i etil acetatom. a filtrat je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje željeno jedinjenje.
Korak 4: metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoat
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata(0.3 g. 1.33 mmol) i ciklopentanona (0.56 g, 6.6 mmol) u metanolu (3 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.159 g. 2.6 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.208 g, 3.3 mmol), a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo željeno jedinjenje.
Korak5:metil 5-bromo-3-(cikIopentil(metH)amino)-2-metilbenzoat
U mešani rastvor sirovog metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata (0.7 g, 2.25 mmol) u acetonitrilu (15 mL) su dodani cezijum karbonat (1.47 g, 4.50 mmol) i metil jodid (1.6 g, 11.26 mmol); nastala reakciona masa je grejana na 80° C tokom 7 h. Po završetku, reakciona masa je ohlađena do sobne temperature i filtrirana, ostatak je ispran sa etil acetatom, a filtrat je koncentrovan pa je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.6 g, 82%).
Korak 6: 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid
Vodeni NaOH (0.11 g, 2.75 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-2-metilbenzoata (0.6 g. 1.8 mmol) u MeOH (1.5 mL) pa je sve mešano na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 sve do pH 6. a pH 4 je podešen uz pomoć limunske kiseline. Ekstrakcija je provedena uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila odgovarajuća kiselina {0.5 g. 87%).
Ova kiselina {0.5 g, 1.60 mmol) je tada rastvorena u DMSO (3 mL) pa joj je dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.49 g. 3.22 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (1.25 g, 2.41 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona masa je izlivena u led kako bi se dobila čvrsta materija, koja je bila filtrirana i isprana sa acetonitrilom. a nakon toga i sa etrom kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.315 g, 44%).
Korak 7: sinteza 5-(ciklopentil(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-formil-4-metil-|l,l'-bifenil]-3-karboksamida
Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida(l ekviv.), (4-ibrmilfenil)boronske kiseline (1.2 ekviv.) i Pd(PPh.i)4(0.1 ekviv.) u 1.4-dioksanu (4 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor Na2C03(3.6 ekviv.), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 2 h. Po završetku reakcije, voda je dodana, a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela (veličina sita: 60-120) kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.1 g, 44%).
Korak 8: sinteza 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropuridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)nietiI)-4-metil-jl,r-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-{cikIopentil(metil)amino)-N-((4.6-đimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-iljmetilj^'-formil^-metil-fUl'-bifenill-a-karboksamida (0.1 g. 0.212 mmol) i N.N-dimetilamina (0.047 g, 1.06 mmol) u metanolu (3 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.1 g. 0.21 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.033 g, 0.53 mmol), a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.04 g. 37%). LCMS: 501.39 (M + 1)<+>; HPLC: 90.78% (@ 254 nm) (R,:4.171; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 8 11.46 (s, IH), 8.17 (t, IH), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.33-7.37 (m, 3H), 7.17 (s, IH). 5.85 (s. IH), 4.27 (d, 2H. J=4.4 Hz). 3.52 (t, IH, .1=7.2 Hz). 3.04 (s, 2H). 2.54 (s. 3H). 2.23 (s. 3H). 2.19 (s, 3H), 2.15 (s, 6H), 2.09 (s,3H), 1.70-1.72 (m, 2H). 1.61 (m, 2H). 1.43-1.50 (m. 4H).
Primer 2: sinteza Jedinjenja 2: 5-(ciklopentil(metil)amtno)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenil|-3-karboksamid
Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.), (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (1.2 ekviv.) i Pd (PPli3)4 (0.1 ekviv.) u 1,4-dioksanu (4 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor NaiCCh(3.6 ekviv.), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona masa je mešana na 100° C tokom 2 h. Po završetku reakcije je dodana voda. a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirov materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 60-120) kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.02 g. 16%). LCMS: 543.22 (M + 1)<+>: HPLC: 99.53% (@ 254 nm) (R,:4.181;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4:6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/e, 400 MHz) 5 11.46(s. IH). 8.17 (t, IH..1=4.4 Hz). 7.98 (s, IH), 7.73 (d. IH, J=7.6 Hz). 7.57 (d. 2H, J=7.6 Hz). 7.37 (s. 211). 7.17 (s, IH). 5.85 (s, IH). 4.27 (d, 2H, .1=4.8 Hz). 3.44-3.57 (m. 7H). 2.54 (s. 3H). 2.32-2.36 (m. 4H). 2.23 (s. 3H). 2.19 (s.3H). 2.09 (s,3H), 1.69-1.72 (m, 2H). 1.61 (m.2H), 1.43-1.50 (m. 4H).
Primer3:sinteza 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[l,r-bifenil]-3-karboksamida
Korak1: sinteza 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (0.1 g, 2.5 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata (0.39 g, 1.25 mmol) u MeOH (5 mL), a sve je mešano na 60° C tokom 1 h. Etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a rastvor je zakiseljen uz pomoć razređene HC1 do pH 6 i uz pomoć limunske kiseline do pH 4. Produkt je ekstrahovan sa etil acetatom. a spojeni organski slojevi su koncentrovani kako bi se dobila željena kiselina (0.26 g, 0.82 mmol). Kiselina je rastvorena u DMSO (3 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.25 g, 1.68 mmol). Reakciona smeša je mešani na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (0.65 g. 1.26 mmol). a mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je izlivena u led kako bi se dobila Čvrsta materija koja je sakupljena filtracijom i isprana sa acetonitrilom, a nakon toga sa etrom kako bi se dobio 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid
(0.178 g, 50%).
Korak 2:sinteza5-(ciklopentiIamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-I,2-dihidropiridin-3-
ilJmetil^'-formil^-metil-l^l'-bifenilj-S-karboksamida
Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida (1 ekviv.). (4-formilfenil)boronske kiseline (1.2 ekviv.) i Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.) u l.4-dioksanu (4 mL)je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor Na2COj (3.6 ekviv.), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 2 h. Nakon hlađenja do sobne temperature u smešu je dodana voda. a produkt je bio ekstrahovan sa DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-geiu (veličina sita: 60-120) kako bi se dobio 5-(ciklopentilamino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3- i! )metil)-4'-formil-4-metil-[ 1.1 '-bifenil]-3-karboksamid.
Korak3:5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilanuno)metil)-4-metil-(l,l'-bifenil]-3-karboksamid
U mešani rastvor 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-đimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-fonnil-4-metil-[l,r-bifenil]-3-karboksamida (0.11 g, 0.24 mmol) i N.N-dimetilamina (0.044 g, 1.2 mmol) u metanolu (3 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.014 g. 0.24 mmol). a rastvor je inešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.030 g. 0.48 mmol). a rastvor je mešan preko noći. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio željeni 5-(ciklopentilamino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-đihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[ 1.1 '-bifenil j-3-karboksamid.
LCMS: 486.21 (M + 1)<+>; HPLC: 99.84%(@254 nm) (R,: 4.799; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tfV,. 400 MHz) 5 11.44 (s, IH). 8.02-8.03 (m. IH), 7.62 (d. 2H..1=7.6 Hz), 7.44 (s. 2H). 6.80 (s.
1H). 6.73 (s. IH), 5.85 (s. IH), 4.65 (d, IH, J=6.4 Hz), 4.27 (d, 2H, .1=4.4 Hz). 3.89 (d. 2H, J= 5.2 Hz), 2.49 (7H zajedno sa signalom od rastvarača). 1.98-2.19 (m. 11H), 1.55-1.70 (m, 6H).
Primer 4: sinteza 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometiI)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
Rastvor 5-bromo-3-{ciklopentilamino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.). (4-(morfolinometil)tenil)boronske kiseline {1.2 ekviv.) i Pd(PPh3)4{0.1 ekviv.) u 1.4-dioksanu (4 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor Na2CO.i (3.6 ekviv.). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 2 h. Po završetku reakcije je dodana voda. a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog NaiSCM, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni kolonskom hromatografijom na silika-gelu (veličina sita: 60-120) kako bi se dobio 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l .T-bifenilj-3-karboksamid koji je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC pri čemu nastaje so TFA.
LCMS: 529.30 (M + 1)+; HPLC; 99.46% (% 254 nm) (Rt; 4.782; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); IH NMR (DMSO-d6. 400 MHz) 5 11.46 (s, IH), 9.90 (s, IH). 8.06 (s. IH). 7.72 (d, 2H. J=8 Hz), 7.55 (d. 2H. .1=8 Hz), 6.83 (s, IH). 6.76 (s, IH). 5.86 (s. 1H).4.37 (s. 2H). 4.27 (d. 2H. J=4 Hz), 3.89-3.98 (m, 3H), 3.28-3.31 (m, 2H), 3.14 (s, 2H), 2.19 (s. 3H), 2.10 (s. 3H), 2.05 (s. 3H). 1.98-1.99 (m. 2H), 1.70 (s. 2H). 1.55 (s, 4H). Primer 5: sinteza 2-(cikloheks-l-en-l-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinamida
Korak1:sinteza metil 2-hloro-6-(4-(hidroksimetil)fenil)izonikotinata
Rastvor metil 2,6-dihloroizonikotinata (1 g. 4.85 mmol). boronske kiseline (0.73 g. 4.8 mmol) i PdCl2(PPh3)2(0.15 g. 0.218 mmol) u THF (20 mL)je degaziran tokom 15 min. Tadaje dodan CS2CO3, a reakciona masa je očišćena ponovo tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 70° C tokom 2 h. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana i prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu koje daje metil 2-hloro-6-(4-(hidroksimetil)fenil)izonikotinat (0.45 g. 33%).
Korak 2: sinteza metil 2-(4-(bromometil)fenil)-6-hloroizonikotinata
U rastvor metil 2-hloro-6-(4-(hidroksimetil)fenil)izonikotinata (0.67 g. 2.418 mmol) u DCM (10 mL) su dodani trifenil foslin (1 g, 3.86 mmol) i karbon tetrabromid (1.63 g, 3.87 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana preko noći na st. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana i prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu koje daje metil 2-(4-(bromometil)fenil)-6-hloroizonikotinat (0.53 g, 64%).
Korak 3: sinteza metil 2-hloro-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinata
U rastvor metil 2-(4-(bromometil)fenil)-6-hloroizonikotinata (0.533 g. 1.56 mmol) u THF je dodan dimetilamin (7.8 mL, 2M rastvor u THF). a reakciona masa je mešana na st preko noći. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana. a dobivena sirova materija je prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu koje daje čisti metil 2-hloro-6-(4-({dimetilamino)metil)fenil)izonikotinat (0.48 g, 99%).
Korak 4: sinteza 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilaniino)metil)fenil)izonikotinamida
U rastvor metil 2-hloro-6-(4-((dimetilamino)metir)tenil)izonikotinata (0.48 g, 1.578 mmol) u etanolu (5 mL) je dodan NaOH (0.094 g, 2.368 mmol), rastvoren u vodi {1 mL). a reakciona masa je grejana na 60° C tokom 1 h. Po završetku, rastvarač je i sparen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ispran sa etrom i zakiseljen sa IN HC1 do pH 8, a tada sa limunskom kiselinom do pH 5-6. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 20% MeOH/DCM, a spojeni organski slojevi su koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobila kiselina (0.47 g, sirovo) koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. U rastvor ove kiseline (0.47 g, 1.64 mmol) u DMSO (4 mL) je dodan PvBOP (1.26 g. 2.43 mmol). a reakciona masa je mešana na st tokom 15 min. Tada je dodan 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(l H)-on (0.49 g, 3.28 mmol ), a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku je dodana voda, a vodeni sloj je ekstrahovan sa 20% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su koncentrovani, a ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu koje daje 2-hloro-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)tenil)izonikotinamid
(0.3 g, 43.6%)
Korak 5: sinteza 2-(cikloheks-l-en-l-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinamida
U mešani rastvor 2-hloro-N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiriđin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinamida (0.11 g, 0.25 mmol), boronske kiseline (0.059 g. 0.27 mmol) u smeši dioksan/voda (3 mL - 1.5 mL) je dodan Na^CO^(0.098 g, 3.6 mmol). a reakciona masa je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.v)4(0.028 g, 0.025 mmol), a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 3 h. Po završetku, reakciona masa je filtrirana kroz celit. a celitna pločica je isprana sa etil acetatom. Spojeni filtrati su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materi jal koji je prečišćen na koloni od silika-gela kako bi se dobio 2-(cikloheks-l-en-l-il)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinamid.
Analitički podaci: LCMS: 471.30 (M + 1)(; HPLC: 95.64% (@ 254 nm) (R,; 5.661; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.52 (s. 1 H). 8.79 (t. IH). 8.13 (s, IH), 8.10 (d, 2H, J= 7.60 Hz), 7.81 (s, IH), 7.41 (d. 2H. J= 7.60 Hz). 6.90 (bs. IH). 5.88 (s. IH). 4.34 (d.
2H..1=4.8 Hz). 3.44 (s. 2H), 2.56 (bs. 2H). 2.26 (bs. 2H). 2.18 (s. 3H). 2.17 (s. 6H). 2.12 (s. 3H), 1.80-1.72 (m, 2H), 1.68-1.60 (m, 2H).
Primer6:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-djh«dropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-l-il)izonikotinamida
Korak1:sinteza metil 2-hloro-6-(piperidin-l-il)izonikotinata
Rastvor metil 2.6-đihloroizonikotinata (1 g. 4.85 mmol), piperidina (0.61 g, 7.28 mmol). K.2CO3(1.38 g, 9.7 mmol) u acetonitrilu (20 mL) je grejan na 90° C tokom 20 h. Po završetku reakcije, reakciona masa je filtrirana, filtrat je koncentrovan i prečišćen na koloni kako bi se dobio čisti metil 2-hloro-6-(piperidin-l-il)izonikotinat (1.23 g. 90%).
Korak 2: sinteza 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-6-(piperidin-1 -iljizonikotinam iđa
U rastvor metil 2-hloro-6-(piperidin-l-il)izonikotinata (1.1 g. 4.33 mmol) u etanolu (10 mL), je dodan NaOH (0.207 g, 5.196 mmol). rastvoren u vodi (2 mL). a reakciona masa je grejana na 60° C tokom 1 h. Po završetku, rastvarač je isparen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ispran sa etrom i zakiseljen sa IN HC1 do pH 8. a tada sa limunskom kiselinom do pH 5-6. Dobivena čvrsta materija je filtrirana, isprana sa vodom i finalno osušena pod smanjenim pritiskom kako bi se dobila kiselina (0.92 g, 89%) koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. U rastvor ove kiseline (0.9 g. 3.75 mmol) u DMSO (10 mL) je dodan PyBOP (3.9 g, 7.5 mmol ), a reakciona masa je mešana na st tokom 15 min. Tada je dodan 3-(aminometil)-4.6-dimetilpiridin-2(l H)-on (1.5 g. 10 mmol). a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku je dodana voda, a precipitirana čvrsta materija je filtrirana, isprana sa vodom i osušena kako bi se dobio 2-hloro-N-((4.6-dirnetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-iDmetil)-6-(piperidin-l-il)izonikotinamid (1 g, 74%).
Korak3: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-(4-formiIfenil)-6-(piperidin-l-il)izonikotinamida
U mešani rastvor 2-hloro-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-{piperidin-1-il)izonikotinamida (0.6 g, 1.6 mmol). boronske kiseline (0.263 g. 1.76 mmol) u smeši dioksan/voda (15 mL + 5 mL) je dodan Na2CO.; (0.61 g, 5.76 mmol). a reakciona masa je očišćena tokom 15 min sa argonom. Tada je dodan Pd(PPlr,)4(0.184 g, 0.16 mmol). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 3 h. Po završetku, reakciona masa je filtrirana kroz celit, a celitna pločica je isprana sa etil acetatom. Spojeni filtrati su osušeni preko NaiSCM. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni na koloni od silika-gela kako bi se dobio N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-ir)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(piperidin-l-iljizonikotinamid (0.5 g, 71%).
Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-l-il)izonikotinamida
U rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-fomiilfenil)-6-(piperidin-l-il)izonikotinamida (0.2 g. 0.45 mmol) u metanolu (12 mL) su dodani dimetil amin (2.6 mL, 4.5 mmol, 2M rastvor u THF) i sirćetna kiselina (0.02 g. 0.45 mmol), a reakciona masa je mešana na st tokom 90 min. Tada je reakciona masa ohlađena do 0° C pa joj je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.056 g. 0.9 mmol ). Reakciona masa je mešana na 0° C tokom 2 h. a tada je mešana na st preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je tretiran sa vodom i ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni slojevi etil acetata su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni kolonskom hromatografijom na silika-gelu koje daje N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((đimetilamino)metil)feni!)-6-(piperidin-l-il)izonikotinamid u formi svetlo-zelene čvrste materije (0.173 g. 79%).
Analitički podaci: LCMS: 474.30 (M + lf; HPLC: 99.15%(@254 nm) (R,; 5.257; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-t/6, 400 MHz) 6 11-.50 (s: IH). 8.61 (t. IH..1=4.4 Hz). 8.03 (d. 2H. -1=7.6 Hz). 7.52 (s, IH), 7.40 (d, 2H. J= 8.4 Hz). 7.13 (s. IH), 5.87 (s. IH). 4.32 (d. 2H..1=4 Hz), 3.63 (bs, 6H), 2.26 (bs, 6H). 2.18 (s, 3H). 2.11 (s. 3H), 1.59 (bs, 6H).Primer7:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
Korak1:sinteza metil 2-hloro-6-(izopropilamino)izonikotinata
Rastvor metil 2.6-dihloroizonikotinata (1 g. 4.85 mmol), izopropil amina (0.286 g. 4.85 mmol). CS2CO3(2.06 g. 6.3 mmol) u toluenu (30 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada su dodani Pd(OAc)2 (0.108 g, 0.485 mmol) i BINAP (0.3 g. 0.485 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je mešana na 80° C tokom 6 h. Po završetku, reakciona masa je filtrirana, a ostatak je temeljno ispran sa etil acetatom. Spojeni filtrati su koncentrovani i prečišćeni na koloni od silika-gela kako bi se dobio čisti metil 2-hloro-6-(izoproptlamino)izonikotinat (0.3 g. 27.27%).
Korak2:sinteza 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
U rastvor metil 2-hloro-6-(izopropilamino)izonikotinata (0.393 g, 1.7 mmol) u etanolu (4 ml.) su dodani NaOH (0.082 g, 2.06 mmol) i voda (0.8 mL). a reakciona masa je grejana na 60° C tokom 1 h. Po završetku, rastvarač je isparen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ispran sa etrom i zakiseljen sa IN HC1 do pH 8, a tada sa limunskom kiselinom do pH 5-6. Dobivena čvrsta materija je filtrirana, ispran sa vodom i finalno osušena pod sman jenim pritiskom kako bi se dobila kiselina (0.36 g. 97%) koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. U rastvor ove kiseline (0.36 g, 1.68 mmol) u DMSO (1.5 mL) je dodan PvBOP (1.3 g. 2.5 mmol), a reakciona masa je mešana na st tokom 15 min. Tada je dodan 3-(aminometil)-4.6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.383 g. 2.5 mmol). a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku je dodana voda. a vodeni sloj je ekstrahovan sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani kako bi se dobio sirovi 2-hloro-N-((4.6-dimetii-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-
(izopropilainino)izonikotinamid (0.58 g. 100%) koji je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamiđa
U mešani rastvor 2-hloro-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metir)-6-(izopropilamino)izonikotinamida (0.58 g. 1.67 mmol). boronske kiseline (0.277 g. 1.84 mmol) u smeši dioksan/voda (7 mL + 3 mL) je dodan Na?C03(0.64 g. 6.037 mmol). a reakciona masa je očišćena tokom 15 min sa argonom. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.194 g, 0.168 mmol), a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 3 h. Po završetku, reakciona masa je filtrirana kroz celit, a celitna pločica je isprana sa etil acetatom. Spojeni filtrati su osušeni preko Na2SOj. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni na koloni od silika-gela kako bi se dobio N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metii)-2-(4-fonTiilfenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamid (0.6 g. 85.7%).
Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
U rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-i!)metil)-2-(4-tbrmiltenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida (0.6 g. 1.44 mmol) u metanolu (6 mL) su dodani dimetil amin (7.1 mL, 14.33 mmol, 2M rastvor u THF) i sirćetna kiselina (0.086 g. 1.44 mmol), a reakciona masa je mešana na st tokom 1 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.18 g, 2.8 mmol ). a reakciona masa je mešana na st tokom 2 h. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, ostatak je tretiran sa vodom i ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni slojevi etil acetata su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirov materijal koji je prečišćeni uz pomoć prep. HPLC koje daje ciljni molekul za sintezu, N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metii)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamid. u formi svetlo-žute čvrsta materije.
Analitički podaci: LCMS: 448.25 (M + 1)': HPLC: 96.22%i a254 nm) (R,; 4.170. Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (CD30D, 400 MHz) 8 8.01 (d. 2H..1=8 Hz). 7.67 (d. 2H..1=8 Hz), 7.39 (s. IH), 7.19 (s. IH), 6.14 (s. IH). 4.50 (s. 2H). 4.40 (s. 2H). 4.17-4.1 (m. 1H). 2.89 (s. 6H). 2.38 (s, 3H), 2.25 (s, 3H). 1.33 (d. 6H. J=6H).
Primer8:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-3-(metiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(l-(2-morfolinoetiI)-lH-pirazoI-4-il)benzamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-2-metiI-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metiibenzoata (2.5 g. 10.2 mmol) i dihidro-2H-piran-4(3H)-on (1.3 g. 13.3 mmol) u metanolu (20 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.61 g, 10.2 mmol), a rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (1.2 g, 20.48 mmol) na 0° C, a mešanje je nastavljeno preko noći na sobnoj temperaturi. Tada je odstranjen rastvarač pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio meti! 5-bromo-2-metii-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat (2.2 g, 66%).
Korak2:sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-
il)amino)benzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1.0 g. 3.15 mmol) u acetonitrilu (15 mL) su dodani cezijum karbonat (1.97 g, 6.10 mmol) i metil jodid (2.15 g, 15.27 mmol); nastao rastvor je grejan na 80° C tokom 20 h. Rastvor je ohlađen do sobne temperature, filtriran, a ostatak je ispran sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan. a produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat (0.82 g, 80%).
Korak3:sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
Vodeni NaOH (0.19 g. 4.89 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (0.82 g, 2.4 mmol) u MeOH (20 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a rastvor je zakiseljen uz pomoć razređenc HC1 do pH 6 i sa limunskom kiselinom do pH 4. Produkt je ekstrahovan sa etil acetatom, a spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila odgovarajuća kiselina (0.70 g). Ova kiselina je tada rastvorena u DMSO (3 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(TH)-on (0.74 g. 4.89 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. a tada je dodan PYBOP (1.9 g, 3.6 mmol) dok je mešanje nastavljeno preko noći. Rastvor je izliven u led kako bi se dobila čvrsta materija, koja je filtrirana i isprana sa acetonitrilom nakon čega je usledilo prečišćavanje uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamid (0.6 g. 54%).
Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekviv.) i 4-(2-(4-(4,4.5.5-tetrametil-l .3.2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazol-l-il)etil)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C03(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Rastvor je grejan na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom i ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela kako bi se dobio željeni N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-( l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamid (0.045 g, 36.9%).
LCMS: 563.00(M + 1)<+>: HPLC% 99.26(@ 254 nm) (Rt: 3.774: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B):'ll NMR (DMSO-</<„ 400 MHz) 6 11.45 (s, IH). 8.17 (s. IH). 8.06 (t, IH..1=4.8 Hz), 7.82 (s. IH), 7.29 (s. IH). 7.11 (s. IH). 5.87 (s, 1H). 4.27 (d, 2H, J-4.8 Hz). 4.21 (t. 2H..1=6.4 Hz). 3.85 (d, 2H..1=11.2 Hz). 3.54 (t, 4H), 3.23-3.26 (m, 2H). 2.99 (m. IH). 2.72 (t. 2H..1=6.4 Hz). 2.60 (s. 3H). 2.40 (bs. 4H). 2.20 (s, 3H), 2.16 (s. 3H), 2.10 (s, 3H), 1.58-1.59 (m. 4H).
Primer 9: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-ir)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekviv.) i l-metil-4-(4.4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazoia (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaaCCb (3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.3)4 (0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Rastvor je grejan na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom i ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiS04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirov materijal koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio željeni N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-{metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamid (0.02 g, 20%).
LCMS: 464.30(M + 1)<+>; HPLC% 97M( a: 254 nm) (R,: 4.286; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSCM5.400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.12 (s, 1 H), 8.06 (t, IH), 7.81 (s, IH), 7.28 (s. IH), 7.10 (s, IH). 5.85 (s. IH). 4.27 (d. 2H, J=4.8 Hz), 3.83-3.86 (m. 5H). 3.23-3.29 (m. 2H). 2.99 (m, IH). 2.59 (s. 3H). 2.20 (s, 3H). 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.58 (m, 4H).
Primer 10: sinteza 3-(cikloheksil(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-iI)benzamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-3-(cikloheksiIamino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g. 20.6 mmol) i cikloheksanona (4.03 g, 41.2 mmol) u metanolu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.247 g. 20.6 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (1.55 g. 24.6 mmol), a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(cikloheksilamino)-2-metilbenzoat (2.75 g. 41%).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(cikloheksilamino)-2-metilbenzoata (2.75 g, 8.45 mmol) u acetonitrilu (25 mL) su dodani cezijum karbonat (5.45 g. 16.9 mmol) i metil jodid (6 g. 42.3 mmol); nastao rastvor je grejan na 80° C tokom 20 h. Po završetku, rastvor je ohlađen do sobne temperature pa je filtriran, a ostatak je ispran sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan. a tada je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(cikloheksil (metil)amino)-2-metilbenzoat (2.5 g. 87%).
Korak3:sinteza 5-bromo-3-(cikIoheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (0.55 g, 14.7 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(cikloheksil(metiI)amino)-2-metilbenzoata (2.5 g. 7.35 mmol) u MeOH (15 mL). a sve je mešano na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom pa je smeša zakiseljena uz pomoć razredene LICI do pH 6 i limunske kiseline do pH 4. Produkt je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila odgovarajuća kiselina (2.5 g. 87%). Ova kiselina je tada rastvorena u DMSO
(20 mL) pa je dodan 3-(aminometir)-4.6-dimeti]piridin-2(lH)-on (2.34 g. 15.1 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 5 min pre dodavanja PYBOP (5.85 g. 11.05 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Tada je reakciona masa izlivena u led, a čvrsta materija je sakupljena filtracijom i isprana sa acetonitrilom. Prečišćavanje na koloni od silike daje 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (1.5 g, 44.19%).
Korak 4: sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-L2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i l-metil-4-(4.4,5,5-tetrametil-l J^-dioksaborolan^-ilj-lH-pirazola (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C03 (3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd( PPh.V).4 (0.1 ekviv.), a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razređena sa vodom i ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NazSO-t. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt. Prečišćavanje uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu daje jedinjenje iz naslova (0.02 g. 20% ).
LCMS: 462.40(M + 1)<+>; HPLC% 88.48(@ 254 nm) (R,; 4.683: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);'l 1 NMR (DMSO-A, 400 MHz) 5 11.45 (s. IH), 8.11 (s, IH). 8.06 (t. IH), 7.79 (s. IH), 7.22 (s. IH). 7.06 (s. IH). 5.85 (s. IH). 4.26 (d, 2H, J=4 Hz), 3.83 (s, 3H), 2.71 (t. IH). 2.60 (s. 3H). 2.20 (s. 3H). 2.14 (s, 3H). 2.10 (s. 3H), 1.69 (m, 4H). 1.53-1.55 (m, 1 H), 1.39-1.41 (m, 2H), 1.06-1.19 (m, 3H).
PrimerU:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifeniI|-3-karboksamida
Korak1: sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)amino)piperidin-l-karboksilata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g. 20.6 mmol) i tert-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (8.2 g. 41.1 mmol) u metanolu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.2 g. 20.6 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperature tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (1.55 g, 24.6 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a produkt je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)ainino)piperidin-l-karboksilat (5.0 g. 57%).
Korak 2: sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil (metil) amino) piperidin-1-karboksilata
U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)amino)piperidin-l-karboksilata (3.0 g, 7.06 mmol) u acetonitrilu (25 mL) su dodani cezijum karbonat (4.57 g, 14.1 mmol) i metil jodid (5.0 g, 35.2 mmol). Reakciona masa je grejana do 80° C tokom 20 h. Tada je reakciona masa ohlađena do sobne temperature pa je filtrirana uz ispiranje sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan. a produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil(metil)amino)piperidin-l-karboksilat (2.5 g. 81%).
Korak 3: sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-okso-l, 2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilata
Vodeni NaOH (0.37 g, 9.38 mmol) je dodan u rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil{metil)amino)piperidin-l-karboksilata (2.0 g. 4.69 mmol) u MeOH (20 mL). a sve je mešano na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a rastvor je zakiseljen uz. pomoć razređene HC1 do pH 6 i limunske kiseline do pH 4. Produkt je ekstrahovan uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila odgovarajuća kiselina (1.7 g. 90%). Ova kiselina je tada rastvorena u DMSO (10 mL) pa joj je dodan 3-{amino metil )-4.6-dimetilpiridin-2( IH )-on (1.42 g, 9.38 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (3.66 g. 7.04 mmol). a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona masa je izlivena u led kako bi se dobila čvrsta materija koja je filtrirana i isprana sa acetonitrilom, a nakon toga je prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-iI)metir)karbamoil)-2-metilt"enii)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat (1.3 g, 50%).
Korak 4: sinteza tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[ 1,1 '-bifenilJ-3-il)(metiI)amino)piperidin-l-karboksilata
U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-ir) metir)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-] -karboksilata (1 ekviv.) i 4-(4-(4,4,5.5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 ml, + 1 mL) je dodan Na?C03(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.), a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masaje grejana na 100° C tokom 5 h. Nakon hlađenja, reakciona masa je razređena sa vođom, a produkt je ekstrahovan sa 10%o MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela kako bi se dobio tert-butil 4-((5-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[ 1,1 -bifenil]-3-il)(metil)amino)piperidin-1 -karboksilat.
Korak 5: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-4'-(morfoIinometil)-|l,r-bifenil]-3-karboksamida
Mešani rastvor tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(moriblinometil)-[l .r-bifenil]-3-ir)(metii)amino)piperidin-l -karboksilata (1 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa mu je dodan TFA (2 mL). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, rastvor je koncentrovan do suvoće. Ostatak je prečišćeni uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.07 g. 86 %). LCMS: 558.45 (M + 1)<+>: HPLC% 98.81(@ 254 nm) (R,; 4.009: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B):<1>H NMR (DMSO-A. 400 MHz) 6 11.45 (s. IH), 10.1 (bs. IH). 8.51 (d. IH). 8.16 (t. 2H). 7.77 (d. 2H..1=8 Hz), 7.57 (d. 2H, J=8 Hz), 7.42 (s. IH), 7.26 (s, IH), 5.86 (s. 111). 4.33 (bs. 2H). 4.29 (d, 2H..1=19.2 HZ). 3.96 (m. 2H). 3.25 (m. 4H). 3.15 (m, 4H). 2.89-2.91 (m. 2H). 2.64 (s. 3H). 2.26 (s, 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H), 1.81 (m,4H).
Primer12:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-5-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l.2-đihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekviv.) i 4-(4-(4,4.5,5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina(1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda(5 mL + 1 mL)je dodan Na2CO,3(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.?)4(0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Rastvor je grejan na 100° C tokom 4 h. Reakciona masaje razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.065 g. 55%). LCMS: 559.35 ( M + 1)<+>; HPLC% 99.26(@ 254 nm) (R,: 3.983;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.45 (s. IH). 8.15 (t. IH), 7.58 (d, 2H, J=8 Hz), 7.36 (d, .311. J -8.4 Hz). 7.18 (s. IH), 5.85 (s, 1 H). 4.28 (d, 211..1=4.8 Hz). 3.84 (d. 2H..1=11.2 Hz), 3.57 (m. 3H). 3.48 (m. 3H). 3.24 (m. 2H). 3.40 (m. IH). 2.63 (s. 3H). 2.36 (m. 4H), 2.23 (s, 3H). 2.20 (s, 3H). 2.10 (s. 3H), 1.60 (m, 4H).
Primer 13: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[l,r-bifenil|-3-
karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)meti!)-2-metil-3-tmetil(tetrahidro-2H-piram-4-il)amino)benzamida (1 ekviv.) i N.N-dimelil-l-(4-(4.4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C03(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3 )4 (0.1 ekviv.). a Čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Rastvor je grejan na 100° C tokom 4 h. Reakciona masaje razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na?SOi. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.01 g. 9%). 1,CMS: 517.30 (M + 1)<+>; HPLC% 98.12(@ 254 nm) (R,; 3.972;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x5p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tk 400 MHz) 8 11.45 (s. IH). 8.16 (t, IH), 7.58 (d, 2H, .1=8 Hz). 7.34-7.36 (m. 2H). 7.18 (s, IH), 5.85 (s. IH), 4.28 (d. 2H, J=4 Hz), 3.84 (d. 2H, J=10.8 Hz), 3.42 (s. 2H). 3.02 (m. 2H). 2.66 (m. I H), 2.63 (s. 311), 2.50 (3H spojen sa signalom od rastvarača). 2.23 (s. 3H). 2.20 (s. 3H). 2.16 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.60 (ni. 411).
Primer 14: sinteza 5-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil(metir)amino)-N-{(4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i {4-(morfolinometil)ienil)boronske kiseline (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C03(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.?)4(0.1 ekviv.). a rastvor je ponovo očišćen tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.070 g, prinos: 29%). LCMS: 557.40 (M + 1)<*>: HPLC% 98.83(@ 254 nm) (R,; 4.303; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0. 05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c/6. 400 MHz) 5 11.45 (s, IH), 8.15 (t, IH, J=4 Hz), 7.56 (d, 2H, .1 7.6 Hz). 7.36 (d. 2H, J=8 Hz), 7.28 (s. 1 H), 7.13 (s. IH). 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 211, J=4.4 Hz), 3.57 (m, 4H). 3.48 (s, 2H). 2.74 (t. IH), 2.64 (s, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.20 (s. 6H), 2.10(s,3-H). 169-1.71(m. 3H). 1.53-1.56 (m, 2H), 1.41-1.44 (m. 2H), 1.10-1.23 (m, 3H).
Primer 15: sinteza3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i (l-(2-mortblinoetil)-lH-pirazol-4-il)boronske kiseline (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na^CO^(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.3)4 (0.1 ekviv.). a rastvor je ponovo očišćen tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.06 g, prinos: 25%). LCMS: 561.35 (M + 1)': HPLC% 96.87(!@ 254 nm) (R,; 4.209; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 5 11.44 (s. IH). 8.15 (s. IH), 8.06 (t. IH), 7.81 (s. IH). 7.22 (s, IH), 7.06 (s. IH). 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 2H, .1=4.8 Hz), 4.21 (t. 2H, J=6 Hz). 3.54 (m, 4H), 2.72 (t. 2H, .1=6.8 Hz). 2.61 (s, 3H). 2.40 (m, 4H). 2.20 (s. 3H), 2.14 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.70 (m. 4H), 1.53-1.56 (m, 3H). 1.10-1.23 (m, 4H).
Primer 16: sinteza 5-(eikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4,-((dimetilamino)metil)-4-metil-|l,l'-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(eikloheksil(metil)amino)-N-{(4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i (4-((dimetilamino)metil)fenil)boronske kiseline (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCCb(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.1 ekviv.), a rastvor je ponovo očišćen tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiSO-t. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirov materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.065 g. prinos: 29%). LCMS: 515.40 (M + 1)<+>: HPLC% 96.73(@ 254 nm) (R,: 4.362: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-</r„ 400 MHz) 6 11.45 (s. IH). 8.16 (t. IH), 7.64 (d. 2H..1=6.8 Hz). 7.45 (d. 2H). 7.30 (s, IH). 7.16 (s. IH). 5.85 (s, 1H), 4.28 (d. 2H, J=4.4 Hz), 2.75 (t, 1 H), 2.65 (s, 3H). 2.32-2.42 (m, 6H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.69 (m, 4H). 1.53-1.56 (m. 111), 1.42-1.45 (m, 2H). 1.10-1.23 (m, 4H). [IH spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 17:sinteza3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-mctil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1: sinteza 3-(ciklopentiI(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metiIbenzaniida
U mešani rastvor 5-bromo-3-{ciklopentil(metil)amino)-N-{(4,6-dimeti]-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.5 g, 1.12 mmol) i (6-formi!piridin~3-il)boronske kiseline (0.39 g, 1.68 mmol) u smeši dioksan/voda (15 mL + 3 mL) je dodan NaiCOa(0.42 g, 4.09 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.130 g, 0.112 mmol), a smeša je ponovo očišćena tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona masa je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.35 g. prinos: 66%).
Korak 2: sinteza 3-(ciklopentiI(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor jedinjenja 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4.6-đimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv. ) na 0° C, a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje i sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli, (0.022 g. 22%). LCMS: 544.35 (M + 1)<+>; HPLC% 98.42(@ 254 nm) (R,; 4.143: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-4, 400 MHz) 8 11.45 (s. IH). 8.75 (s. IH), 8.17 (t. IH). 8.01 (d. IH. J=7.6) 7.50 (d. IH. J=7.6 Hz), 7.42 (s. IH). 7.22 (s. IH), 7.06 (s. IH). 5.85 (s, IH), 4.28 (d. 2H), 3.59-3.61 (m. 8H), 3.35-3.37 <m. 2H). 2.66 (s. IH), 2.55 (s, 3H). 2.24 (s, 3H), 2.19 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.72 (m. 211). 1.61 (m. 2H). 1.48 (m, 4H).
Primer 18: sinteza3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida
Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metiI)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.), (l-(2-morfolinoetil)-l H-pirazol-4-il)boronske kiseline (1.2 ekviv.) i Pd(PPh_i)4(0.1 ekviv.) u 1.4-dioksanu (4 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor NaiCO j (3.6 ekviv.). a smeša je ponovo očišćena tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 2 h. Nakon završetka reakcije, voda je dodana, a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog NaiSCh. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 60-120) sa ciljem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.08 g. 66%). LCMS: 547.35 (M + ))? HPLC% 97.60(@ 254 nm) (R,; 4.071; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'II NMR (DMSCW«. 400 MHz) 8 11.44 (s, IH). 8.17 (s. IH), 8.05 (t. IH). 7.81 (s. 111). 7.30 (s, IH). 7.10 (s, IH), 5.85 (s. IH).
4.26 (d, 2H, J=4 Hz). 4.20 (d. 2H, J=6.4 Hz). 3.49-3.53 (m. 6H). 2.72 (t. 2H). 2.40 (bs. 6H). 2.20 (s. 31T),2.17 (s, 3H), 2.10 (s. 3H), 1.61-1.70 (m, 4H). 1.42-1.50 (m. 4H).
Primer 19: sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(rnetil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiridin-3-il)inetil)-2-nietilbenzamida (1 ekviv.), (1 -metil- H-pirazol-4-il)boronske kiseline (1.2 ekviv.) i Pd(PPh3)-4(0.1 ekviv.) u 1.4-dioksanu (4 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor Na2CO"3 (3.6 ekviv.). a smeša je ponovo očišćena tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 2 h. Nakon okončanja reakcije, voda je dodana, a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 60-120) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.07 g. 70%) LCMS: 448.25 (M + 1)<+>; HPLC% 98.34(@ 254 nm) (R,; 4.578; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 5 11.44 (s, 1II), 8.1 (s, 1 H). 8.05 (t. IH), 7.80 (s, IH), 7.29 (s. IH), 7.09 (s, IH). 5.85 (s. IH). 4.26 (d. 2H. J=3.2 Hz). 3.83 (s, 3H). 3.49 (m, 1 H). 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). 1.69 (m. 2H). 1.60 (m. 2H). 1.42-1.49 (m, 4H). [3H spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 20: sinteza 5-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
Korak 1:sinteza5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline
U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (50 g, 276.2 mmol) u konc. H2SO4(200 mL)je dodan l,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (43.4 g, 151.8 mmol). deo po deo na sobnoj temperaturi, a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Po završetku, reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu, nastao precipitat je filtriran, a ostatak je ispran sa vodom i osušen u vakuumu kako bi se dobila 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeva kiselina ( 71.7 g, 99.9%) koja je korišćena direktno u sledećem koraku.
Korak 2: sintezametil 5-bromo-2-metiI-3-nitrobenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (287 g, 1103 mmol) u DMF (150 mL) su dodani natrijum karbonat (468 g, 4415 mmol) i metil jodid (626.63 g. 4415 mmol). Nastala reakciona smeša je grejana na 60° C tokom 8 h. Po završetku, precipitirana čvrsta materija je sakupljena filtracijom, ostatak je ispran sa dietil etrom (5 puta). Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat (302 g, 99%) koji je korišćen direktno u sledećem koraku.
Korak 3: sintezametil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (150 g, 544 mmol) u etanolu (750 mL) su dodani amonijum hlorid (150 g. 2777 mmol). rastvoren u vodi (750 mL). i gvožđe u prahu (93.3 g, 1636 mmol) uz mešanje. Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 7 h. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz celit; ostatak je ispran sa vodom i etil acetatom, a filtrat je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat koji je korišćen direktno u sledećem koraku.
Korak 4:sintezametil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-meti!benzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g. 20.57 mmol) i tert-butil (4-oksocikloheksil)karbamata (5.6 g, 26.7 mmol) u metanolu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.2 g. 20.57 mmol), a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (1.6 g, 26.74 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je dva puta prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije uz eluiranje sa smešom etil acetat:heksan kako bi se dobilo 4 g metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoata (44%) u formi ne-polarnog izomera (cis izomer, koji je kontaminiran sa početnim materijalom) i 3 g (33%) čistog polarnog izomera (trans izomer).
Korak5:sinteza metil 5-bromo-3-((ls,4s)-(4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikIoheksil)-(metil)-amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor cis izomera metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (4 g. 9.09 mmol) u acetonitrilu (50 mL) su dodani cezijum karbonat (5.9 g, 18.18 mmol) i metil jodid (6.45 g, 45.45 mmol). Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 7 h. Po završetku, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana, ostatak je ispran sa etil acetatom. a filtrat je koncentrovan pa prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije koje daje 4.0 g (44%) manje-polarnog cis-izomera, metil 5-bromo-3-(((ls.4s)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoat, i 3.0 g (33%) više polarnog trans-izomera, metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoat.
Korak 6:sintezatert-butil (ls,4s)-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoiI)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-cikloheksil)karbamata
Vodeni NaOH (0.23 g, 5.72 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(({ ls.4s)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(metil)-amino)-2-metilbenzoata (1.3 g. 2.86 mmol) u MeOH (20 mL), a sve je mešano na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređenog HC1 do pH 6 i uz pomoć limunske kiseline do pLI 4. Ekstrakcija je provedena uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovan kako bi nastala sirova kiselina (1.13 g. 90.1%). Kiselina (1.13 g. 2.57 mmol) je tada rastvorena u DMSO (10 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.87 g. 5.72 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (2.23 g. 4.28 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona smeša je izlivena u led kako bi se dobila čvrsta materija kojaje filtrirana i isprana sa acetonitrilom, a nakon toga je prečišćavanja sa kolonskom hromatografijom kako bi se dobio tert-butil (ls.4s)-(4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)nietil)-karbamoil)-2-metiltenil)-(metil)-amino)-cikloheksil)karbamat (0.8 g, 48.7%).
Korak 7: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)-(nietil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor tert-butil (4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-L2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoir)-2-metilfenir)-(metil)-amino)-cikloheksi!)-karbamata (0.8 g. 1.39 mmol) u DCM (25 mL) na 0° C je dodan TFA (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana do suvoće. Ostatak je doveden u bazno područje uz pomoć vodenog natrijum bi karbonata do pH 8, a vodeni sloj je ekstrahovan sa 20% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani koje daje 3-((( 1 s,4s)-4-aminocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamid (600 mg. 90.9%).
Korak 8: sinteza 3-((ls,4s)-(4-acetamidocikloheksil)-(metiI)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metiIbenzamida
U mešani rastvor 3-((4-aminocikloheksir)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihiđropiriđin-3-il)-metiI)-2-metilbenzamida (0.275. 0.580 mmol) u DMF (5 mL) su dodani EDC1.HC1 (0.168 g, 0.870 mmol), HOBt (0.078 g, 0.58 mmol) i sirćetna kiselina (0.07 g, 1.16 mmol), a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Po završetku je dodana voda, a organske materije su ekstrahovane sa 10%> MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani koje daje sirovi materijal koji je tada prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiridin-3-i!)-melil)-2-metilbenzamid (0.25 g. 83.6%).
Korak 9: sinteza 5-(((ls,4s)-4-acetamidocikJoheksil)(metil)amino)-[N-((4,6-dimetil-2-okso-l^-dihidropiridin-S-ilJnietilH-metiM'-CmorfolinometiO-ll^'-bifenil)^-karboksamida
U mešani rastvor 3-{(4-acetamidocikloheksii)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i 4-(4-(4, 4. 5. 5-tetrametil-l,3,2-dioksaboroian-2-il)benzii)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na^COj (3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.3)4 (0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.06 g. 50.8%). LCMS: 614.40 (M + l)<1>; HPLC% 99.44(f«; 254 nm) (R,; 3.948:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-ćk 400 MHz) 6 11.45 (s. IH). 8.17 (t. IH). 7.76 (d. IH..1=7.2 Hz). 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz). 7.36 (d, 3H..1=8 Hz). 7.16 (s. 1H). 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H..1=4.4 Hz). 3.71 (bs, IH). 3.57 (m, 4H), 3.47 (s, 2H). 2.98 (m. 1 H), 2.59 (s. 311), 2.36 (m, 4H). 2.26 (s, 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.74-1.81 (m. 5H). 1.49-1.56 (m, 3H). 1.40-1.48 (m. 3H).
Primer 21:5-(((lr,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamid je
pripremljen na analogan način kao i u primeru 20 iz trans-izomera, metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoata,
intermedijar koji je opisan u Primeru 20.
Analitički podaciza 1258-trans: LCMS: 614.40 (M + lf: HPLC% 99.64(^ 254 nm) (R,: 3.917;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<>>H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.16 (t. 1H), 7.76 (d. IH..1=7.6 Hz). 7.57(d, 2H..1=7.2 Hz). 7.36 (d. 2H..1=7.6 Hz), 7.29 (s. IH). 7.14 (s, 111). 5.85 (s, 111), 4.28 (d. 2H), 3.57 (bs, 5H), 3.48 (m. 2H), 2.71 (m. IH). 2.64 (s. 3H). 2.36 (m. 4H), 2.20 (s, 6H). 2.10 (s. 3H), 1.68-1.81 (m, 7H), 1.51-1.53 (m.2H). 1.10-1.13 (m,2H).
Primer 22:sinteza3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metiI-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)-(metiI)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i l-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-iI)-l H-pirazola (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCO? (3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.02 g, 20%). LCMS: 519.40 (M + 1)<+>; HPLC% 96.24((a> 254 nm) (Rf; 4.247:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-<4, 400 MHz) 6 11.44 (s, 111). 8.10 (s, 111). 8.07 (t. IH), 7.79 (s. IH). 7.75 (d, IH, J=7.2 Hz), 7.27 (s, IH). 7.09 (s. IH), 5.86 (s. IH). 4.27 (d. 2H. J=4.8 Hz). 3.83 (s. 3H), 3.69 (bs, IH), 2.96 (m, IH), 2.56 (s, 3H). 2.20 (s. 6H). 2.10 (s, 3H). 1.81 (s. 3H), 1.74-1.76 (m, 2H). 1.54 (m. 2H). 1.36-1.46 (m 4H).
Primer 23: sinteza 3-(((lr,4r)-4-acetamidocikIoheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metiI-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
Pripremljen je na analogan način kao u primeru 22 (0.06 g, 40%). LCMS: 519.30 (M + 1)<+>; HPLC% 98.21(@ 254 nm) (R,; 4.155; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/6,400 MHz) 6 11.45 (s, 1 H). 8.12 (s, IH), 8.07 (t. IH), 7.80 (s, IH), 7.66 (d, IH. J=7.2 Hz). 7.23 (s, IH), 7.07 (s, IH). 5.86 (s. IH). 4.26 (d, 2H. J=2.8 Hz). 3.83 (s, 3H), 3.44 (m. IH). 2.66-2.69 (m, IH). 2.61 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.13 (s, 3H). 2.10 (s. 3H). 1.78-1.80 (m. 2H), 1.74 (s. 3H), 1.67-1.70 (m. 2H). 1.48-1.51 (m 2H), 1.10-1.13 (m,2H).
Primer 24: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-3-(metiI(piperidin-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1: sinteza tert-butil 4-((3-(((4,6-đimetiI-2-okso-l,2-dihiclropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)aniino)piperidin-l-karboksilata
Tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat (0.5 g. 0.892 mmol). (6-formilpiridin-3-i!)boronska kiselina (0.31 g, 1.33 mmol) i Pd(PPh3)4(0.103 g. 0.082 mmol) u 1.4-dioksanu (10 mL) su očišćeni sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan 2M rastvor NasCOj (0.34 g. 3.21 mmol). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 2 h. Po završetku reakcije je dodana voda. a ekstrakcija je provedena uz pomoć 5% MeOH u DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog Na2S04. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-geia (veličina sita: 60-120) kako bi se dobio tert-butil 4-((3-(((4,6-đimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-tbrniilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat (0.40 g, 87.9%).
Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metiI(piperidin-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida U mešani rastvor tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-foiTnilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilata (1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u metanolu (5 mL for 0.3 mmol) je dodana sirćetna kiselina (1 ekviv.). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Tada je dodan agens za redukovanje, NaBLbCN (1 ekviv.). a reakciona masaje mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu koje daje željeni tert-butil 4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometir)piridin-3-il)fenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat. Ovo jedinjenje je tada rastvoreno u DCM (5 mL) i ohlađeno do 0° C. Dodan je TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana do suvoće. Ostatak je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača koje daje jedinjenje iz naslova (0.1 g. 65.78%). LCMS: 559.35 (M +1 Y\HPLC: 95.60% ( a 254 nm) (R,; 3.906; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4-mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^,400 MHz) & 11.45 (s. IH). 8.96 (s. IH). 8.67 (m, IH). 8.22 (d. 2H..1=8 Hz). 8.17 (t. IH). 7.61 (d, IH. J=8 Hz). 7.48 (s, IH). 7.32 (s, IH). 5.87 fs. 1 H), 4.52 (s, 2H), 4.29 (d, 2H..1=4.4 Hz). 3.84 (bs. 4H), 3.26 (bs, 6H), 3.16 (t, IH), 2.89-2.91 (m, 2H), 2.64 (s, 3H). 2.26 (s, 3H), 2.21 (s. 3H), 2.10 (s, 3H). 1.81 (bs, 4H).
Primer 25: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(l-(2-morfolinoetiI)-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-ir)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilata (1 ekviv.) i 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaboroIan-2-il)-1 H-pirazol-l-il)etil)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na?C03(3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 5 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razređena sa vodom, a produkt je ekstrahovan sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)feml)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat. Mešani rastvor ovog jedinjenja (1 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, rastvor je koncentrovan do suvoće. Ostatak je prečišćen uz pomoć ispiranje rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.06 g. 89%). LCMS: 562.40 (M + 1)<+>; HPLC: 99.01% (@ 254 nm) (R,: 3.838:Postupak:koiona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-A. 400 MHz) 5 11.46 (s. IH), 8.52 (s, IH), 8.26 <s. IH). 8.23 (m. IH), 8.05 (t, IH). 8.00 (s, IH), 7.34 (s. IH). 7.16 (s. IH). 5.87 (s. IH), 4.53 (l. 2H), 4.27 (d, 2H, .1=3.6 Hz). 3.25 (m, 4H), 3.10-3.16 (m, 411). 2.87
<m, 2H), 2.60 (s, 3H). 2.20 (s, 3H), 2.18 (s. 3H). 2.11 (s, 3H). 1.79 (bs. 4H). [5 H spojen sa signalom od rastvarača]
Primer 26: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-đimetil-2-okso-1.2-dihidropiriđin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilata (1 ekviv.) i l-metil-4-(4.4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazola (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2COj (3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPta)4(0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 5 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razređena sa vodom, a produkt je ekstrahovan sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiS04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiriđin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-metil-1 H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat. Mešani rastvor ovog jedinjenja (1 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, rastvor je koncentrovan do suvoće. Ostatak je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.07 g. 87%). LCMS: 463.30 (M + 1)<+>; HPLC: 98.02% {% 254 nm) (R,: 4.145:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ffc, 400 MHz) 5 11.46 (s. IH). 8.47 (bs. IH). 8.12 (s, 2H), 8.05 (s. IH). 7.83 (s. IH). 7.32 (s. IH), 7.14 (s. IH), 5.86 (s, IH). 4.28 (m. 211), 3.84 (s. 311). 3.24-3.27 (m, 2H), 3.11 (bs, IH). 2.87-2.89 (m. 2H), 2.59 (s. 3H). 2.20 (s. 3H). 2.18 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.77-1.80 (m, 4H).
Primer 27: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-jl,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor tert-butil 4-{(5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino(piperidin-1 -karboksilata (1 ekviv.) i N.N-dimetil-l-(4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NajCCh(3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh;,)4 (0.1 ekviv.), a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 5 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razređena sa vodom, a produkt je ekstrahovan sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiS04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografija na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil 4-((5-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-đihidropiriđin-3-il)metil)karbamoil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-| 'U'-bifenil]-3-il)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat. Mešani rastvor ovog jedinjenja (1 mmol) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, rastvor je koncentrovan do suvoće. Ostatak je prečišćen uz pomoć ispiranje rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.06 g, 90%). LCMS: 516.35 (M + 1)<+>: HPLC: 98.28% (@ 254 nm) (R,: 3.930;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-cAs, 400 MHz) 6 11.46 (s, IH), 9.82 (bs, IH), 8.51 (bs, IH). 8.17 (s, 2H), 7.77 (d. 2H..1=7.2 Hz). 7.55 (d, 211. J=7.6 Hz). 7.43 (s. 1H). 7.27 (s, 1H). 5.86 (s. 1H). 4.30 (m, 4H). 3.25 (411 je spojen sa signalom od rastvarača). 2.88-2.91 (m. IH), 2.75 (s. 6H), 2.64 (s. 3H). 2.25 (s. 3H). 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.81 (m.4H).
Primer 28: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-{6-formiIpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-l. 2-dihidropiirdin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0.4 g, 0.86 mmol) i (6-formiipiriđin-3-il)boronske kiseline (0.3 g, 1.29 mmol) u smeši dioksan/voda (10 mL + mL) je dodan Na2COi (0.32 g, 3.09 mmol). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.v)4(0.092 g.0.086 mmol). a čišćenje sa argon je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 6 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO.t. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamid (0.28 g. 66%).
Korak 2: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamid
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiridin-3-il)metii)-5-(6-formilpiridin-3-i])-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-ir)amino)benzamida (1 ekviv.) i mort'olina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masaje mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.08 g. 70%). LCMS: 560.30 (M + 1)' : HPLC: 99.22% (@ 254 nm) (R,; 3.944;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-ć/ft, 400 MHz) 6 11.45(s. IH), 8.76 (s, IH), 8.17 (t, IH), 8.02 (d, IH, J=7.6 Hz), 7.50 (d. 1H..1=8 Hz). 7.41 (s. IH). 7.23 (s. IH). 5.85 (s, IH). 4.28 (d. 2H, J=4.8 Hz). 3.85 (d, 2H. J=l 1.2 Hz). 3.61 (s. 3H). 3.59-3.60 (m. 3H). 3.24-3.29 (m. 2H). 3.02-3.05 (m, IH), 2.64 (s. 3H). 2.42 (bs. 4H). 2.24 (s, 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H), 1.61 (bs,4H).
Primer 29: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-( 6- fomiilpiridin- 3-ir)- 2- metil- 3-( metil( tetrahidro- 2H- piran- 4- il) amino) benzamida ( 1 ekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masaje mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova. LCMS: 491.25 (M + 1 )r; HPLC: 99.58%
(@ 254 nm) (R,: 3.984; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d, 400 MHz) 8 11.47 (s, IH). 8.75 (s. IH). 8.19 (t, lH),8.05(d. lH,J=8.4Hz),7.52(d, IH..1=8.4 Hz), 7.41 (s. IH), 7.24 (s. IH). 5.86 (s, IH), 5.44 (t, IH, J=5.6 Hz). 4.59 (d. 2H. J=5.6 Hz), 4.28 (d, 2H..1=4 Hz). 3.85 (d. 2H..1=10.4 Hz). 3.32 (2H spojen sa signalom od rastvarača). 3.03 (m. IH). 2.64 (s. 3H). 2.24 (s. 3H). 2.20 <s. 3H), 2.10 (s. 3H), 1.61 (bs, 4H).
Primer 30: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metii-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-i])amino)benzamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-foniiilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(letrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.03 g. 26%). LCMS: 518.25 (M + 1 )1; HPLC: 89.16% (@ 254 nm) (R,; 3.982: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-<4 400 MHz) 8 11.46 (s, IH), 8.81 (s, IH), 8.18 (t, IH), 8.08 (d, IH, .1=8 Hz). 7.52 (d, IH, .1=8 Hz), 7.43 (s, IH). 7.26 (s, IH), 5.86 (s, IH), 4.28 (d, 2H. J=4.8 Hz), 3.83-3.86 (m. 4H), 3.32 (2H spojen sa signalom od rastvarača). 3.03 (m, IH), 2.64 (s, 3H), 2.50 (3H spojen sa signalom od rastvarača), 2.40 (bs, 3H). 2.24 (s. 3H). 2.21 (s, 3H), 2.10 (s. 3H). 1.60 (bs. 411).
Primer 31: sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)mctil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1:sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-iI)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor bromo-jedinjenja 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimeti]-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.6 g. 1.30 mmol) i (6-rbrmilpiriđin-3-il)boronske kiseline (0.450 g, 1.95 mmol) u smeši dioksan/voda (8 mL + 2 mL) je dodan Na2CG*3 (0.498 g, 4.5 mmol). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh:,)4(0.15 g, 0.129 mmol), a smeša je ponovo očišćena tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona masa je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na^SOi. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (0.525 g, 83%).
Korak2:sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-nietil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor jedinjenja 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ;2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-ir)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamid (0.089 g, prinos: 53%). LCMS: 558.35 (M + 1)<+>: HPLC: 96.52% (@ 254 nm) (R,; 4.375: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5<p>; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; Stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ć/*, 400 MHz) 5 11.46 (s, IH). 8.75 (s. IH). 8.18 (t. IH), 8.01 (d. 1H..1=6.8 Hz). 7.49 (d. 111. J=8 Hz). 7.33 (s, IH), 7.18 (s. IH), 5.85 (s. IH). 4.28 (d. 2H. J=3.6 Hz). 3.59-3.61 (m. 6H). 2.75 (m, 1H). 2.65 (s. 3H). 2.43 (bs. 4H). 2.21 (s. 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H), 1.70 (bs, 4H). 1.53-1.56 (m. 1 H), 1.42-1.44 (m. IH). 1.09-1.23 (m, 4H).
Primer32:sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor jedinjenja 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (1 ekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masaje mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.017 g, prinos: 11%). LCMS: 516.35 (M + 1)<+>; HPLC: 90.32% (( a) 254 nm) (R,: 4.203: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-^,. 400 MHz) 5 11.45 (s. I H). 8.78 (s. 1 H). 8.18 (t, IH), 8.05 (d, IH, J=6 Hz), 7.50 (d, IH. J=8.4 Hz), 7.34 (s. IH), 7.20 (s, IH), 5.86 (s. IH), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz). 3.75 (bs. 2H). 2.75 (m. IH), 2.65 (s. 311). 2.34
(bs, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s. 3H). 1.69-1.71 (m. 4H), 1.54-1.56 (m, 2H). 1.42-1.45(m,2H), 1.08-1.23 (m, 2H).
Primer 35: sinteza 3-(ciklopentil(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor jedinjenja 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (1 ekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). a reakciona masaje mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje. a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli. (0.12 g, 57%). LCMS: 502.30 (M + 1)<+>; HPLC: 99.07% (@ 254 nm) (R,: 4.059; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tfc. 400 MHz) 5 1.50 (s. IH), 10.04 (bs. IH), 8.96 (s, IH). 8.22 (m. 2H). 7.57-7.61 (m. IH). 7.35 (s. IH). 5.87 (s. IH), 4.49 (s, 2H), 4.28 (d. 2H. J=2 Hz). 3.65 (bs. 1H), 2.83 (s. 6H). 2.65 (s, 3H). 2.28 (s. 311). 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.73 (bs. 2H). 1.63 (bs, 2H). 1.50 (m. 4H).
Primer 36: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
Korak1: sinteza metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g. 20.57 mmol) i ciklopentanona (8.64 g, 102.8 mmol) u metanolu (30 mL) je dodana sirćetna kiselina (2.46 g. 41.1 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (3.23 g, 51.4 mmol). a reakciona masaje mešan preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoat (4 g. 78.2%).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-3-(ciklopentiI (etil)amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata (2 g. 6.43 mmol) u DMF (15 mL) su dodani cezijum karbonat (4.18 g. 12.8 mmol) i etil jodid (5.01 g. 32.15 mmol); nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 18 h. Po završetku, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana, ostatak je ispran sa etil acetatom, a filtrat je koncentrovan kako bi se dobilo željeno sirovo jedinjenje. koje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(ciklopentil(etil)amino)-2-metilbenzoat (0.7 g, 32.1%).
Korak 3: sinteza 5-bromo-3-(ciklopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (0.126 g. 3.09 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(ciklopentil(etil)amino)-2-metilbenzoata (0.7 g. 2.06 mmol) u etanolu (5 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a vodeni sloj je zakiseljen uz pomoć razređene HC1 do pH 6 i limunske kiseline do pH 4. Produkt je ekstrahovan uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila sirova kiselina (0.5 g. 75%). Ova kiselina (0.5 g, 1.53 mmol) je rastvorena u DMSO (5 mL) pa joj je dodan 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on (0.467 g, 3.07 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (1.19 g, 2.30 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona smeša je izlivena u led pa je ekstrahovan sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani, a produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio 5-bromo-3-(ciklopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.3 g. 42%).
Korak 4: sinteza 5-(ciklopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)-4'-netil-4'-(morfolinonietiI)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.3 g. 0.653 mmol) i (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (0.216 g, 0.98 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCO.; (0.249 g, 2.35 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.075 g, 0.065 mmol). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 3 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.15 g. 41%). LCMS: 557.35 (M + ir~: HPLC: 99.13% (@ 254 nm) (R,; 4.128:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna laza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'HNMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.44 (s, IH), 8.17 (t. IH). 7.57 (d, 211. J=8Hz), 7.41 (s, IH), 7.37 (d. 2H..1=8 Hz). 7.20 (s. 1H). 5.85 (s, IH), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz). 3.56-3.57 (m, 4H), 3.48 (s. 3H), 3.00-3.02 (m. 2H). 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.69-1.70 (m. 2H), 1.60 (m. 2H), 1.47-1.48 (m, 4H). 0.81 (t, 3H, .1=6.4 1Iz). Primer 37: sinteza 3-(((lr,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metiI-5-(l-(2-morfolinoetiI)-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor 3-(((lr,4r)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i 4-(2-(4-(4,4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazol-l-il)etil)mortblina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na:CO; (3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.i)4(0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na?S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.050 g, 28%). LCMS: 618.35 (M +1 f:HPLC: 95.34% (@ 254 nm) (R,; 3.760;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna laza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); !H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.47 (s. 1H). 8.17 (s. 1H). 8.09 (t. 1H), 7.82 (s. IH). 7.67 (d, IH. J=7.2 Hz). 7.23 (s. IH). 7.08 (s, IH). 5.86 (s, IH). 4.26 (d, 2H, J=3.2 Hz), 4.21 (t, 2H, J=6 Hz), 3.44-3.53 (m. 5H), 2.72 (t. 3H. J=5.6 Hz). 2.61 (s. 311). 2.40 (m. 4H). 2.20 (s, 3H). 2.13 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.67-1.88 (m. 711). 1.46-1.55 (m. 211). 1.07-1.15 <m. 2H).
Primer 38: sinteza 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikIoheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metil-5-(l-(2-morfoIinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida
Priprema se analogno kao i jedinjenje 37 (0.020 g. 11%). LCMS: 618.35 (M + 1)<+>: HPLC: 99.00% ( ti; 254 nm) (R,; 3.732;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5u:mobilna faza: A; 0,05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/rt, 400 MHz) 8 11.46 (s. IH). 8.16 (s. IH). 8.09 (t, IH). 7.82 (s, IH). 7.77 (d. IH. J=7.2 Hz). 7.28 (s, IH). 7.09 (s, IH). 5.86 (s, IH). 4.45 (bs, 1 H), 4.27 (d, 2H, .1=4 Hz), 4.22 (s, 2H), 3.70 (bs. IH). 3.54 (m. 4H), 2.97 (m. IH). 2.67-2.72 (m. 2H), 2.56 (s, 3H), 2.42 (m, 3H), 2.20 (s. 6H). 2.10 (s. 3H). 1.74-1.81 (m, 5H), 1.55 (m, 2H), 1.39-1.41 (m.4H).
Primer 39: sinteza 5-(({lr,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)nietil)-4-metil-|l,r-bifenil]-3-
karboksamida
U mešani rastvor 3-(((1 r,4r)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida(l ekviv.) i N.N-dimetii-l-(4-
{4,4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolari-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C0?(3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh;?)4 (0.1 ekviv.). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiSGi, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.05 g. 30%). LCMS: 572.35 (M + 1)<+>: HPLC: 96.88%(% 254nm) (R,; 3.900: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-cfe. 400 MHz) 5 11.46 (s. 1 H), 8.18 (t. 1 H). 7.67 (d. IH, J=6.8 Hz), 7.57 (d, 2H. J=7.6 Hz), 7.34 (d, 2H. J=7.6 Hz). 7.30 (s. IH). 7.14 (s. IH). 5.85 (s. IH). 4.27 (d. 2H..1=3.6 Hz). 3.39 (in. 3H). 2.72 (m. 1H). 2.64 (s. 3H). 2.20 (s, 6H). 2.15 (s. 6H), 2.10 (s, 3H), 1.78-1.81 (m. 2H). 1.74 (s. 3H). 1.68 (m, 21I), 1.51-1.56 (m, 2H), 1.08-1.23 (m, 2H).
Primer 40: sinteza 5-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-(l,r-bifenilj-3-karboksamida
Priprema se na analogan način kao u Primeru 39 (0.06 g, 36%>). LCMS: 572.35 (M + 1)<+>: HPLC: 94.79%( a254 nm) (R,: 3.936:Postupak:kolona: YMC ODS-A 1 50 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-</<s, 400 MHz) 6 11.47 (s, IH), 8.19 (t. IH), 7.78 (d. IH. J=7.2 Hz), 7.56 (d, 2H..1=8 Hz). 7.33-7.35 (m. 3H), 7.17 (s. IH). 5.86 (s. IH), 4.28 (d. 2H. J=3.6 Hz), 3.70 (bs. IH). 3.37-3.40 (m, 2H), 2.98 (m. IH). 2.59 (s, 3H), 2.26 (s,3H).2.20(m,3H),2.15(s,6H).2.10(s.3H). 1.81 (s.3H). 1.74 (m.2H), 1.55 (m,2H). 1.40-1.48 (m, 4H).
Primer 41: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metiI)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)benzamida
U mešani rastvor tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-melilfenil)(meti!)amino)piperidin-l-karboksilata (1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u metanolu (5 mL for 0.3 mmol) je dodana sirćetna kiselina (1 ekviv.), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Tada je dodan agens za redukovanje. NaBI-LCN (1 ekviv.). a reakciona masaje mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu koje daje željeni tert-butil 4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbanioil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-karboksilat. Ovo jedinjenje je tada rastvoreno u DCM (5 mL) i ohlađena do 0° C. Dodan je TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana do suvoće. Ostatak je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.06 g. 40%). LCMS: 517.25 (M + 1)<+>; HPLC: 99.07% (@ 254 nm) (R,: 3.913: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% 13 do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-f,/*. 400 MHz) 6 11.48 (s, IH), 10.08 (bs, IH), 8.97 (s. IH), 8.57 (bs, III), 8.23 (d, 2H..1=7.6 Hz). 8.18 (s, IH). 7.60 (d, IH, J=8 Hz), 7.50 (s. IH). 7.34 (s, IH). 5.87 (s. IH), 4.49 (d. 2H), 4.30
(s, 2H). 3.25 (d. 2H), 3.16 (s. IH). 2.89 fm. 2H), 2.83 (s. 6H). 2.64 (s, 3H), 2.26 (s. 3H). 2.21 (s.3H),2.10(s,3H), 1.81 (bs, 4H).
Primer 42: sinteza 5-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimctil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-methy(-4'-(morfoIinometil)-[l,r-bifenil]-3-
karboksamida
Korak1: sinteza metil 5-bromo-3-(((ls,4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoata U mešani rastvor manje polarnog cis izomera, metil 5-bromo-3-(((ls.4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata. (4 g, 9.09 mmol) u acetonitrilu (50 mL) su dodani cezijum karbonat (5.9 g. 18.18 mmol) i metil jodid (6.45 g. 45.45 mmol). Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 7 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature pa je filtrirana, a sakupljena čvrsta materija je isprana sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan kako bi se dobio željeni produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije koje daje metil 5-bromo-3-(((ls.4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoat (1.4 g, 34.14%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dlmetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata Vodeni NaOH (0.23 g. 5.72 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(((ls.4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoata (1.3 g, 2.86 mmol) u MeOH (20 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom l h. Etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena do pH sa razređenom HCl i do pH 4 sa limunskom kiselinom. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski ekstrakti su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (l. 13 g. 90.1 %).
Ova kiselina (1.13 g. 2.57 mmol) je tada rastvorena u DMSO (10 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.87 g, 5.72 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PvBOP (2.23 g, 4.28 mmol). Mešanje je tada nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu. Nastao precipitat je filtriran, ispran sa acetonitrilom pa je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio tert-butil ((ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.8 g, 48.7%).
Korak 3: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-4-metil-4'-(niorphol inometil)-[l,r-bifenil]-3-il)(nietiI)amino)-cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoir)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekviv.) i 4-(4-(4,4.5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na^CO?(3.6 ekviv.). Rastvor je tada očišćen sa argonom tokom 15 min. Dodan je PdfPPhj)-! (0.1 ekviv.). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((ls.4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidorpiridin-3-il)metil)-karbamo metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenilj-3-il)(metil)amino)-cikloheksil)karbamat (0.08 g. 45.71%).
Korak 4: sinteza 5-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida Mešani rastvor tert-butil ((ls.4s)-4-((5-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoir)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l.r-bifenil]-3-il)(metil)amino)-cikIoheksil)karbamata (0.08 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masa je koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.06 g. 88.2%). LCMS: 572.40 (M + lf; HPLC: 95.39%{ a254 nm) (R,; 3.719; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c/^, 400 MHz) 8 11.45 (s, IH), 10.05 (bs, IH), 8.19 (t, IH), 7.74-7.78 (m. 4H). 7.56 (d, 2H..1=6.8 Hz). 7.46 (s, 1 H), 7.24 (s. IH), 5.87 (s. IH), 4.38 (bs, 2H), 4.29 (d. 2H. J=4.4 Hz). 3.95 (m, 2H), 3.60-3.63 (m, 2H), 3.27-3.30 (m, 2H), 3.13-3.19 (m, 4H). 2.54 (s. 311). 2.30 (s, 3H). 2.21 (s. 3H), 2.10 (s, 3H), 1.86 (m, 2H). 1.59-1.64 (m. 4H). 1.49-1.51 (m, 2H).
Primer 43: sinteza 5-(((lr,4r)-4-acetamidocikloheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,l'-bifenil]-3-
karboksamida
Korak 1: sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline
U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (50 g, 276.2 mmol) u konc. H2SO4 (200 mL), deo po deo je dodan 1.3-dibromo-5.5-dimetil-2.4-imidazolidindion(43.4g. 151.8 mmol). a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 li. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu; precipitirana čvrsta materija je filtrirana, isprana sa vodom pa je osušena u vakuumu koje daje željeno jedinjenje, 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojevu kiselinu (71.7 g. 99.9%), koje je korišćeno kao u sledećim reakcijama.
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (287 g. 1103 mmol) u DMF (150 mL) su dodani natrijum karbonat (468 g. 4415 mmol ) i metil jodid (626.63 g. 4415 mmol). Reakciona smeša je tada grejana na 60° C tokom 8 h. Precipitirane čvrste materije su filtrirane i isprane sa dietil etrom (5 puta). Spojeni organski filtrati su osušeni, koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje željeno jedinjenje. metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat (302 g, 99%). koje je korišćeno kao u sledećim reakcijama.
Korak 3: sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (150 g. 544 mmol) u etanolu (750 ml) su dodani amonijum hlorid (150 g, 2777 mmol). rastvoren u vodi (750 mL). i gvožđe u prahu (93.3 g, 1636 mmol ) uz mešanje. Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 7 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. a sakupljene čvrste materije su isprane sa vodom i etil acetatom. Ftltrat je ekstrahovan sa etil acetatom, a ekstrakt je osušen, koncentrovan pod smanjenim pritiskom koje daje željeno jedinjenje, metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat. koje je korišćeno kao u sledećim reakcijama.
Korak 4: sinteza metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metil-benzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g, 20.6 mmol) i tert-butil(4-oksocikloheksil)karbamata (5.6 g. 26.7 mmol) u metanolu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.2 g, 20.57 mmol). a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (1.6 g, 26.74 mmol) na 0° C, a reakciona masa je mešana preko noći. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (dva puta) uz eluiranje sa smešom etil acetat/heksan koje daje 4 g (44%) manje polarnog cis izomera, metil 5-bromo-3-(((ls.4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (kontaminiran sa nešto početnog materijala), i 3 g (33%) više polarnog čistog trans izomera, metil 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata.
Korak 5: sinteza metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikIoheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoata U mešani rastvor više polarnog trans izomera. metil 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata. (3 g, 6.81 mmol) u acetonitrilu (40 mL) su dodani cezijum karbonat (4.4 g. 13.62 mmol) i metil jodid (4.83 g. 34.05 mmol). Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 7 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature pa je filtrirana, a čvrste materije su isprane sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan kako bi se dobilo željeno sirovo jedinjenje koje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije koje daje metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)amino)-2-metilbenzoat (1.3 g, 43.33%).
Korak 6: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata Vodeni NaOH (0.23 g, 5.72 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)amino)-2-metilbenzoata (1.3 g. 2.86 mmol) u MeOH (20 mL), a smeša je mešana na 60 °C tokom 1 h. Po završetku reakcije, metanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je zakiseljen do pH 6 sa razredenom HCI i do pH 4 sa limunskom kiselinom. Zakiseljena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski ekstrakti su osušeni i koncentrovani koje daje očekivanu kiselinu (1 g, 83%).
Malopre pomenuta kiselina (lg, 2.27 mmol) je rastvorena u DMSO (5 mL) pa je dodan 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1 H)-on (0.65 g. 4.54 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PvBOP (1.7 g, 3.4 mmol). Mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu. Nastao precipitat je filtriran, ispran sa acetonitrilom i prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje tert-butil ((1 r.4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamat (0.7 g, 53.8%).
Korak 7:sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)-karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-il)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil (( lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso- 1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekviv.) i 4-(4-(4.4.5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benziI)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + l mL) je dodan Na2CO.i (3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pđ(PPh3)4(0.1 ekviv. ), a reakciona boca je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko Na?S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((lr,4r)-4-((5-(((4.6-dimetii-2-okso-l .2-dihidro<p>iridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l ,r-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.07 g.
40%)
Korak 8: sinteza 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
Mešani rastvor tert-butil ((1 r.4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(morfblinometil)-jl.r-bifenill-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.07 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa mu je dodan TFA (2 mL ). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masa je koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.05 g. 84.74%). LCMS: 572.60 (M + 1)<+>; HPLC: 88.92%{%254 nm) (Rf; 3.546: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna laza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>II NMR (DMSO-</fi. 400 MHz) 8 11.45 (s, IH), 10.05 (bs, IH). 8.16 (t. IH). 7.74-7.76 (m, 4H). 7.56 (d, 2H..1=7.6 Hz), 7.34 (s, IH). 7.21 (s. IH). 5.86 (s. IH). 4.38 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, .1=4.4 Hz). 3.95 (m. 2H), 3.63 (m, 2H). 3.27 (m. IH), 3.12 (m. 2H). 2.97 (m. 2H). 2.74 (t. IH). 2.66 (s, 3H). 2.20 (s. 6H). 2.10 (s. 3H). 1.93-1.95 (m. 2H). 1.74-1.77 (m, 2H). 1.54-1.57 (m. 2H). 1.28-1.31 (m. 2H).
Primer 44: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil
(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,l'-bifenilj-3-
karboksamida
Korak 1: sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline
U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (100 g, 552 mmol) u konc. I bSO<i (400 mL) deo po deo je dodan l,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (88 g. 308 mmol) na sobnoj temperaturi, a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu. a precipitirana čvrsta materija je odstranjena filtriracijom. isprana sa vodom pa je osušena u vakuumu kako bi se dobilo željeno jedinjenje u formi čvrste materije (140 g, 98%). Izolovano jedinjenje je korišćeno direktno u sledećem koraku. 'H NMR (DMSO-^,400 MHz) 8 8.31 (s, IH). 8.17 (s. 1 H). 2.43 (s, 3H).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (285 g. 1105 mmol) u DMF (2.8 L) na sobnoj temperaturi je dodan natrijum karbonat (468 g. 4415 mmol), a nakon toga i metil jodid (626.6 g, 4415 mmol). Nastala reakciona smeša je grejana na 60° C tokom 8 h. Po završetku (reakcija je praćena uz pomoć TLC), reakciona smeša je filtrirana (sa ciljem da se odstrani natrijum karbonat) i isprana sa etil acetatom (3x1 L). Spojeni tiltrat je ispran sa vodom (5 x 3 L), a vodena faza je ponovo ekstrahovana sa etil acetatom (3 x 1 L). Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi čvrste materije (290 g, prinos: 97%). Izolovano jedinjenje je korišćeno direktno u sledećem koraku. 'H NMR (CDCL, 400 MHz) o 8.17 (s, IH), 7.91 (s, IH). 3.96 (s, 3H). 2.59 (s, 3H).
Korak 3: sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (290 g, 1058 mmol) u etanolu (1.5 L) je dodan vodeni amonijum hlorid (283 g, 5290 mmol rastvoreno u 1.5 L. vode). Nastala smeša je mešana na 80° C, a tada je dodano gvožđe u prahu (472 g. 8451 mmol), deo po deo. Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 12 h. Nakon završetka, koji je utvrđen uz pomoć TLC, reakciona smeša je vruća filtrirana kroz celit " , nakon čega je celitna pločica isprana sa metanolom (5L), a tada i sa 30% MeOH u DCM (5 L). Spojeni tiltrat je koncentrovanin vacuo.a dobiveni ostatak je razređen sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 L) pa je ekstrahovana sa etil acetatom (3x5 L). Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi čvrste materije (220 g. 85%). Jedinjenje je korišćeno direktno u sledećem koraku. 'H NMR (CDCk 400 MHz) 5 7.37 (s, IH), 6.92 (s, IH), 3.94 (s, 3H). 3.80 (bs, 2H),2.31 (s, 3H).
Korak 4: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (15 g, 61.5 mmol) i dihidro-2H-piran-4(3)-on (9.2 g, 92 mmol) u dihloroetanu (300 mL) je dodana sirćetna kiselina (22 g, 369 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. a tada je ohlađena do 0° C pa je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (39 g. 184 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku reakcije, koja je praćena uz pomoć TLC, u reakcionu smešu je dodavan vodeni rastvor natrijum bikarbonata do postizanja pH od 7-8. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije ( veličina sita od silika-gela: 100-200) uz eluciju sa smešom etil acetat:heksan kako bi se dobilo željeno jedinjenje u formi čvrste materije (14 g. 69%). Ml NMR (DMSO-J*. 400 MHz) 5 7.01 (s. 1 H). 6.98 (s. IH). 5.00 (d. IH, J-7.6 Hz). 3.84-3.87 (m. 211). 3.79 (s. 3H). 3.54-3.56 (m. IH). 3.43 (t, 2H, J=12 Hz). 214 (s, 3H), 1.81-184 (m. 2H). 1.47-1.55 (m, 2H).
Korak 5: sinteza metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (14 g, 42.7 mmol) u dihloroetanu (150 mL) su dodani acetaldehid (3.75 g, 85.2 mmol) i sirćetna kiselina (15.3 g, 256 mmol). Nastala reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Smeša je ohlađena do 0° C pa je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (27 g, 128 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Po završetku reakcije, koja je praćena uz pomoć TLC. u reakcionu smešu je dodavan vodeni rastvor natrijum bikarbonata do postizanja pH od 7-8. organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije (veličina sita od silika-gela: 100-200) uz eluciju sa smešom etil acetat:heksan kako bi se dobilo željeno jedinjenje u formi viskozne tečnosti (14 g, 93%). 'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) 8 7.62 (s, IH), 7.52 (s. IH), 3.80 (bs. 5H). 3.31 (t. 2H). 2.97-3.05 (m. 2H), 2.87-2.96 (m. IH), 2.38 (s. 3H), 1.52-1.61 (m, 2H). 1.37-1.50 (m. 2H). 0.87 (t. 3H, .1=6.8 Hz).
Korak6:sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il ) amino)-2-metilbenzoata (14 g. 39.4 mmol) u etanolu (100 mL) je dodan vodeni NaOH (2.36 g, 59.2 mmol u 25 mL vode), a nastala smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, koja je praćena uz pomoć TLC. rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, dobiveni ostatak je zakiseljen sa IN HCI do vrednosti od pH 7, a vodeni rastvor limunske kiseline je dodavan do postizanja pH od 5-6. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 10% MeOH u DCM (3 x 200 mL), a spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobila odgovarajuća kiselina (14 g, 100%).
Malopre pomenuta kiselina (14 g, 40.9 mmol) je tada rastvorena u DMSO (70 mL) paje dodan 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (12.4 g, 81.9 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. a tada je dodan PYBOP (31.9 g, 61.4 mmol) dok je mešanje nastavljeno preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku reakcije koja je praćena uz pomoć TLC, reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu ( 700 mL). sve je mešano tokom 30 min. a precipitirana čvrsta materija je sakupljena filtracijom. isprana sa vodom (500 mL) paje osušena na vazduhu. Dobivena čvrsta materija je mešana sa acetonitrilom (2 x 75 mL). filtrirana i osušena na vazduhu. Dobivena čvrsta materija je ponovo mešana sa 5% MeOH u DCM ( lOOmL), filtrirana i potpuno osušena u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi čvrste materije (14 g, 74%).'HNMR (DMSO-^, 400 MHz) 8 11.47 (s. IH), 8.23 <t, IH), 7.30 (s, IH), 7.08 (s. IH), 5.85 (s. IH). 4.23 (d. 2H, J=4.4 Hz). 3.81 (d, 2H. J=10.4 Hz). 3.20-3.26 (m, 2H). 3.00-3.07 (m. IH). 2.91-2.96 (m, 211). 2.18 (s, 3H), 2.14 (s, 311). 2.10 (s. 3H), 1.58-1.60 (m, 2H), 1.45-1.50 (m. 2H), 0.78 (t.3H, J=6.8 Hz).
Korak7:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifcnil|-3-karboksaniida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(elil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (14 g, 29.5 mmol) u smeši dioksan/voda (70 mL/14 mL) je dodan 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolin (13.4 g, 44.2 mmol), a tada i Na^COi (11.2 g, 106.1 mmol). Rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min, dodan je Pd(PPli3)4(3.40 g. 2.94 mmol). a rastvor je ponovo očišćen sa argonom tokom dodatnih 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku (reakcija je praćena uz pomoć TLC), reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije (veličina sita od silika-gela: 100-200) uz eluciju sa smešom metanoLDCM kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi Čvrste materije (12 g. 71%).Analitički podaci:LCMS: 573.35 (M + 1T: HPLC: 99.5%{%254 nm) (R,; 3.999:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 6 11.46 (s, IH). 8.19 (t. IH), 7.57 (d, 211, .1=7.2 Hz). 7.36-7.39 (m. 3H), 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH). 4.28 (d. 2H. J=2.8 Hz). 3.82 (d, 2H, .1=9.6 Hz). 3.57 (bs, 4H). 3.48 (s, 2H), 3.24 (t. 2H. J=l().8Hz), 3.07-3.09 (m. 2H), 3.01 (m. IH), 2.36 (m. 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.53 (m. 2H). 0.83 (t, 3H. J=6.4 Hz).
Korak 8: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-4-metil-4,-(morfolinometiI)-|l,l,-bifenil)-3-karboksamid trihid ronio rida
N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiri^ 4-metil-4'-(morfolinometil)-[l J'-bifenil]-3-karboksamid (12 g, 21.0 mmol) je rastvoren u metanolnoj HC1 (200 mL), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Nakon tri časa mešanja, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobivena čvrsta materija je mešana sa etrom (2 x 100 mL) kako bi se dobila željena so u formi čvrste materije (11 g, 77%). Analitički podaci za tri-HCl so: LCMS: 573.40 (M + 1)<+>: HPLC: 99.1 % (@ 254 nm) (Rt; 3.961; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (D20 400 MHz) 8 7.92 (bs, IH.) 7.80 (s. IH). 7.77 (d, 2H..1=8 Hz), 7.63 (s, IH). 7.61 (s. IH), 6.30 (s, IH). 4.48 (s. 2H), 4.42 (s. 2H). 4.09-4.11 (m, 4H), 3.95-3.97 (m, 2H), 3.77 (t, 3H, J-10.4 Hz). 3.44-3.47 (m. 3H). 3.24-3.32 (m. 3H), 2.42 (s. 3H). 2.35 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.01 (m, 2H). 1.76 (m. 2H). 1.04 (t. 311, .1=6.8 Hz).
Primer 45: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-d ihid ropiridin-3-il)metil)-2-m etil-5-( 1 -m eti 1-1 H-pirazol-4-i l)benza m id a
Korak1: sinteza tert-butil ((Ir,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoiI)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikIoheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cik]oheksir)karbamata (1 ekviv.) i l-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)-lFI-pirazola (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NajCCh (3.6 ekviv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.), a reakciona boca je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko NaiS04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((lr.4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-i!)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.07 g. 46.6%)
Korak 2: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-nietil-lH-pirazol-4-il)benzamida Mešani rastvor tert-butil {(lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-i l)meti 1 )karbamoi l)-2-meti l-5-(1 -meti 1-1 H-pirazo 1-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.07 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masaje koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.07 g. 98.59%). LCMS: 477.35 (M + 1)<+>; HPLC: 99.16% (@ 254 nm) (R,; 3.796: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c/r,. 400 MHz) 6 11.46 (s, IH), 8.12 (s. IH). 8.08 (t, IH), 7.82 (s. IH), 7.74 (m. 3H), 7.28 (s. IH). 7.11 (s, IH), 5.86 (s, IH), 4.26 (d. 2H, .1=4.4 Hz). 3.84 (s. 3H). 2.96 (bs. IH). 2.73 (bs. IH), 2.63 (s, 3H). 2.20 (s, 3H). 2.14 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.92-1.95 (m. 2H). 1.74-1.77 (m, 2H). 1.48-1.57 (m. 2H), 1.23-1.32 (m, 2H).
Primer 46: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metiI-5-(l-mctil-lH-pirazol-4-iI)benzamida
Korak1: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-metiMH-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ({ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-K2-dihidropiridin-3-il)metir)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekviv.) i 1-meti 1-4-(4,4,5.5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-ir)-lH-pirazola(1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na^COs (3.6 ekviv.). Rastvor je tada očišćen sa argonom tokom 15 min. Dodan je Pd(PPli3)4(0.1 ekviv.), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2SO.i, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((ls.4s)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.05 g, 33.3%).
Korak 2: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazo)-4-il)benzamida Mešani rastvor tert-butil ((ls,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-đihidropiriđin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.05 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masa je koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.03 g. 73.1%). LCMS: 477.30 (M + 1)<+>; HPLC: 98.76%{%254 nm) (R,; 3.862: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ći*. 400 MHz) 5 11.46 (s, IH), 8.08-8.12 (m. 2H). 7.76-7.81 (m. 4H). 7.33 (s. IH). 7.12 (s. IH). 5.86 (s, IH). 4.27 (d, 2H. J=4 Hz), 3.83 (s, 3H). 3.16 (m. 2H). 2.50 (3H spojen sa signalom od rastvarača), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.84 (m. 2H). 1.57-1.63 (m. 4H). 1.47-1.50 (m.2H).
Primer 47: sinteza 5-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-(l,r-bifenilj-3-
karboksamida
Korak 1: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[l,r-bifenil]-3-
il)(metil)amino)cikIoheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ({ls,4s)-4-((5-bromo-3-({(4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metir)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekviv.) i N.N-dimetil-l-(4-(4.4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2CO^(3.6 ekviv.). Rastvor je tada očišćen sa argonom tokom 15 min. Dodan je Pd(PPh3).t (0.1 ekviv.), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((ls,4s)-4-((5-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[l.r-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.100 g, 61%).
Korak2: sinteza 5-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilaniino)metil)-4-metil-(l,l'-bifeniI|-3-karboksamida
Mešani rastvor tert-butil ((ls.4s)-4-((5-{((4,6-dirnetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-ir)metil)karbamoil)-4'-({dimetilamino)metil)-4-metil-|l.r-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.10 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masaje koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.05 g, 59.5%). LCMS: 530.35 (M + l)<+>: HPLC: 97.13% (@ 254 nm) (R,; 3.672: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5<p>: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj, vol: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51 -12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tk 400 MHz) 8 11.44 (s. IH). 9.47 (bs. IH). 8.17 (t. 1H). 7.74-7.76 (m. 4H). 7.55 (d. 2H..1=7.6 Hz). 7.44 (s, IH), 7.25 (s, IH), 5.86 (s. IH). 4.30 (m, 4H), 3.12 (m, 2H). 2.74 (s. 6H). 2.54 (s. 3H), 2.30 (s. 3H), 2.12 (s, 311). 2.10 (s, 311). 1.84 (bs, 2H), 1.59-1.63 (m. 4H). 1.48 (m, 2H).
Primer 48: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida
Korak 1: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-
il)feniI)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-đihiđropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekviv,) i 4-(2-(4-(4,4,5.5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-l H-pirazol-l-il)etiI)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL+1 mL) je dodan NajCOi (3.6 ekviv.). Rastvor je tada očišćen sa argonom tokom 15 min. Dodan je Pd(PPh3)4(0.1 ekviv.)»a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S©4, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-( 1 -(2-morfblinoetil)-l H-pirazol-4-il)fenil)(metil|amino)cikloheksil)karbamat {0.120 g, 75.4%).
Korak 2: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida Mešani rastvor tert-butil ((ls.4s)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-( 1-(2-morfolinoetil)-1 H-pirazol-4-ir)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.10 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C. a tada je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masaje koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.06 g. 58.82%). LCMS: 576.40 (M + lf; HPLC: 96.89% (@ 254 nm) (R,; 3.481; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% Btokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d. 400 MHz) 5 11.45 (s, IH), 8.25 (s. IH). 8.08 (t. IH). 7.79 (s, IH), 7.74-7.79 (m, 3H), 7.34 (s. IH). 7.15 (s. IH). 5.86 (s, IH). 4.51 (bs, 2H), 4.27 (d, 2H, .1=4.4 Hz). 3.16 (m. 6H). 2.50 (311 spojen sa signalom od rastvarača), 2.23 (s, 3H). 2.21 (s. 3H). 2.11 (s. 3H), 1.84 (bs. 2H). 1.57-1.63 (m. 4H). 1.47-1.49 (m, 2H). [3 H spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 49: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-nictilfenil)(metil)-amino)cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata {0.5 g, 8.71 mmol) i (6-tbrmilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.264 g. 1.13 mmol) u smeši dioksan/voda (10 mL + 2 mL) je dodan Na^CO.!(0.333 g, 2.8 mmol ). Rastvor je tada očišćen sa argonom tokom 15 min. Dodan je Pd (PPh3.)4 (0.1 g. 0.086 mmol), a rastvor je ponovo očišćen sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil (( ls.4s)-4-{(3-{((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-fbrniilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.3 g. 57.3%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((ls,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino)cikIoheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((ls,4s)-4-((3-{((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)meti])karbamoil)-5-(6-tbmiilpiridin-3-il)-2-metiltenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C. a reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio tert-butil ((ls.4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-i])metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino)cikloheksir)karbamat.
Korak 3: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dinietil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metiI-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzaniida Mešani rastvor tert-butil ((ls.4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masa je koncentrovana do suvoće. a produkt je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.1 g, 94.33%). LCMS: 573.45 (M + 1)": HPLC: 98.94% (@ 254 nm) (R,; 3.618; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-</fi, 400 MHz) 6 11.47 (s. IH). 8.94 (s. IH). 8.19-8.21 (m. 2H), 7.80 (s, 3H), 7.60 (d. IH, J=8 Hz). 7.49 (s, IH). 7.31 (s. IH). 5.86 (s. IH). 4.52 (bs. 2H). 4.29 (d, 2H..1=4.4 Hz). 3.83 (bs. 4H). 3.27 (m. 4H). 3.14-3.21 (m, 2H). 2.55 (s. 3H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s. 3H), 1.87 (bs. 2H). 1.59-1.64 (m. 4H). 1.49-1.51 (m. 2H).
Primer 50: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(({4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (0.4 g, 0.696 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.21 g, 0.906 mmol) u smeši dioksan/voda (8 mL + 2 mL) je dodan Na2C03(0.332 g, 3.13 mmol). Reakcioni rastvor je tada očišćen sa argonom tokom 15 min. Dodan je Pd(PPh3)4(0.080 g. 0.069 mmol ). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((lr.4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-fotTni]piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamat (0.28 g. 66.98%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata {1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). Reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C, a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio tert-butil ((1 r.4r)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metir)-amino)cikloheksil)karbamat.
Korak3: sinteza3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(6-(morfolinonietil)piridin-3-il)benzaniida
Mešani rastvor tert-butil ({lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C pa je dodan TFA (2 mL). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće. a čvrsti produkt je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.07 g. 82.3%). LCMS: 573.40 (M + I f: HPLC: 91.56% (@ 254 nm) (R,; 3.591; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ć/rt. 400 MHz) 5 11.46 (s. IH). 8.95 (s. IH), 8.19-8.22 (m. 2H), 7.78 (bs, 3H), 7.61 (d. IH..1=8 Hz). 7.40 (s. IH). 7.27 (s, IH). 5.86 (s. IH). 4.52 (bs. 2H). 4.28 (d. 2H, J=3.2 Hz), 3.84 (bs, 4H). 3.27 (bs, 4H), 2.97 (bs, 1H), 2.75 (m, IH), 2.66 (s. 3H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H), 1.93 (m. 2H), 1.74-1.76 (m. 2H). 1.54-1.57 (m. 2H), 1.28-1.31 (m, 2H).
Primer 51: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminoeikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metiI-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)benzamida
Korak1: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoiI)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikIoheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-eikioheksil)karbamata (1 ekviv.) i 4-(2-(4-(4,4,5.5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazol-l-il)etil)morfolina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C03(3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.1 ekviv.). a reakciona boca je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((lr.4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-L2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.08 g, 45.45%)
Korak 2: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazoI-4-iI)benzamida Mešani rastvor tert-butil ((lr.4r)-4-((3-(((4.6-dimethy)-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-ir)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-(2-morfolinoetil)-lH-pirazol-4-il)fenil)(metiI)amino)cikloheksil)karbainata (0.08 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C, a tada je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masaje koncentrovana do suvoće kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.07 g. 86.41%). LCMS: 576.45 (M + 1)+; HPLC: 98.26% (@ 254 nm) (R,: 3.413; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSCw/,s. 400 MHz) 5 11.46 (s, IH), 8.26 (s. IH). 8.08 (t. IH). 7.99 (s, IH). 7.75 (m. 3H). 7.28 (s. IH). 7.13 (s. IH). 5.87 (s, IH). 4.53 (t, 2H). 4.27 (d, 2H. 1=3.6 Hz), 2.97-3.16 (m. 411). 2.67-2.71 (m, IH). 2.62 (s. 3H), 2.20 (s,3H), 2.14 (s. 3H). 2.11 (s.3H), 1.92-1.94 (m, 211). 1.72 {m. 2H). 1.52-1.55 (m. 2H). 1.23-1.29 (m, 2H).
Primer 52: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-{(4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
Korak1: sinteza tert-butil((ls,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((ls,4s)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiriđin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)-(metir)amino)cikloheksil)karbamata (lekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C. a reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio tert-butil ((1 s.4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metii)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat.
Korak 2: sinteza 3-(((ls,4s)-4-aminocikloheksiI)(nietil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-iI)-2-metilbenzamida Mešani rastvor tert-butil ({1 s.4s)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-1.2-di h idropiri di n-3 - ir)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C, a tada mu je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masaje koncentrovana do suvoće, a produkt je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.07 g, 93.3 %). LCMS: 531.25 (M +1 Y:HPLC: 97.59%(@254 nm) (R,; 3.680: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/rt. 400 MHz) 5 11.46 (s. IH), 10.01 (s, IH), 8.95 (s, IH), 8.20 (d. 2H..1=5.2 Hz). 7.80 (bs, 3H). 7.59 (d, IH..1=8 Hz), 7.51 (s. IH). 7.32 (s. IH). 5.87 (s. IH). 4.48 (bs. 2H). 4.29 (d. 2H..1=4.4 Hz). 3.21 (m. III). 3.14-3.16 (m. 1H). 2.83 (s. 6H), 2.55 (s, 3H). 2.31 (s, 3H). 2.21 (s, 311), 2.10 (s, 3H), 1.86 (bs. 2H), 1.59-1.64 (m.4H). 1.49-1.51 (m, 2H).
Primer 53: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
Korak1:sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoiI)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-
metiifenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((lr.4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-ir)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u metanolu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekviv.) na 0° C. a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetii-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)kai^amoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat.
Korak2: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikIoheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida Mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-i])metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-i])-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C, a tada je dodan TFA (2 mL). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće. a čvrsti produkt je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli {0.05 g. 66.6%). LCMS: 53 1.30 (M + lf; HPLC: 97.59%(@254 nm) (R,; 3.564: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu, inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^,. 400 MHz) 6 11.46 (s. IH), 10.01 (s, IH), 8.95 (s. IH), 8.20 (bs, 2H). 7.78 {bs, 2H), 7.59 (d. IH..1=6 Hz). 7.41 (s, IH), 7.28 (s. IH), 5.86 (s, IH), 4.48 {bs, 2H). 4.29 (m. 2H). 2.97 {bs. 2H). 2.83 (s. 6H). 2.66 (s, 3H), 2.21 (s. 6H), 2.10 (s. 311), 1.93 (m. 211), 1.74 (m. 2H). 1.55-1.57 {m. 2H). 1.28-1.31 (m, 2H).
Primer 54: sinteza 3-(((lr,4r)-4-acetamidocikIoheksil)(metil)amino)-N-({4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Jedinjenje 54 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom koji je opisan u Primeru 57.
Analitički podaci:LCMS: 615.55 (M + 1 f; HPLC: 98.75%( fg)254 nm) {R,; 3.854:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5%B); 'HNMR(DMSO-fr«,400 MHz)8 U.46(s. IH). 8.75 (s. IH). 8.18(t. IH), 8.02 (d. IH. J=8 Hz). 7.67 (d, IH. J-7.2 Hz), 7.49 (d. IH, .1=8 Hz). 7.35 (s. IH), 7.19 (s. IH). 5.86 (s. IH). 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.59-3.61 (m. 4H). 3.47-3.55 (m. 2H), 2.76 <t. 2H, .1=4 Hz). 2.65 (s. 3H). 2.42 (bs, 4H). 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H), 1.78-1.90 (m. 2H), 1.68-1.74 (m. 5H). 1.48-1.57 (m,2H). 1.03-1.23 (ni. 2H).
Primer 55: sinteza 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metiI)amino)-N-((4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-
metilbenzamida
Korak1: sinteza 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida U 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-5-bromo-N-({4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.65 g, 1.25 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronsku kiselinu (0.38 g. 1.63 mmol) u smeši dioksan/voda (10 mL + 2 mL) je dodan Na2C03 ( 0.48 g, 4.53 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.14 g, 0.12 mmol), a smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 li. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio cis-izomer 3-((4-acetamidocikloheksil)-(metil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-fbrmilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.35 g. 51.16%).
Korak 2: Sinteza U mešani rastvor 3-(((l s.4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-({4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (I ekviv.) i dimetilamina (5 ekviv.) u 5 mL MeOH (za 0.3 mmol) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi. Tada je dodan NaBHiCN (1.5 ekviv.), a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu ili kao šta je specifikovano koje daje jedinjenje iz naslova (0.006 g, 3.2%). LCMS: 573.40 (M + 1)<+>; HPLC: 95.52% (@ 254 nm) (R,; 3.899;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/s, 400 MHz) 6 11.47 (s, IH). 8.88 (s, IH), 8.20 (t, IH). 8.14(d. IH. J=7.6 Hz), 7.78 (d, 1H. J=7.2 Hz). 7.55 (d. IH, J=8 Hz), 7.44 (s. IH), 7.26 (s, IH), 5.86 (s. IH). 4.28-(d, 2H, .1=3.2 Hz). 4.26-(bs. IH), 3.71 (bs, IH). 3.01 (bs, IH). 2.61-2.66 (m, 8H). 2.28 (s. 3H). 2.21 (s. 3H). 2.10 (s. 3H), 1.81 (m. 5H). 1.56 (m. 2FI). 1.40-1.46 (m, 2H), 1.23 (m, 2H). [2H spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 56: sinteza 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
Jedinjenje 56 je pripremljeno u istoj reakciji kao i jedinjenje 55. LCMS: 546.40 (M + 1)<+>: HPLC: 99.40% (@ 254 nm) (R,; 3.845;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ds, 400 MHz) 5 11.47 (s, IH). 8.74 (s. IH), 8.20 (t, IH), 8.04 (d, IH..1=8 Hz). 7.77 (d. IH, .1=7.2 Hz). 7.52 (d, IH, .1=7.6 Hz), 7.40 (s, IH), 7.22 (s. IH). 5.86 (s, IH), 5.45 (t. IH. J=5.2 Hz), 4.59 (d, 2H..1=5.6 Hz). 4.27 (d, 2H, .1=4 Hz), 3.71 (bs, IH). 3.00 (bs, IH). 2.60 (s, 3H). 2.27 (s. 3H). 2.21 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.81 (m. 5H), 1.56 (m,2H). 1.40-1.48 (m. 4H).
Primer 57: sinteza 3-(((ls,4s)-4-acetamidocikloheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metiI-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor 3-((( 1 s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formiIpiridin-3-iI)-2-metilbenzamida (1 ekviv.) i morfolina (5 ekviv.) u 5 mL MeOH (za 0.3 mmol) je dodana sirćetna kiselina (2 ekviv.). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi. Tada je dodan NaBHiCN (1.5 ekviv.). a reakciona masa je mešana preko noći. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu ili kao staje specifikovano koje daje jedinjenje iz naslova (0.08 g, 43%). LCMS: 615.40 (M + 1 f; HPLC: 99.64%( a254 nm) (R,; 3.900;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%> B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5%B); 'H NMR (DMSO-ć/ć, 400 MHz) 5 11.46 (s. IH). 8.75 (s, IH), 8.19 (t. IH). 8.01 (d, IH. .1=7.6 Hz). 7.77 (d, 1H,J=7.2 Hz), 7.50(d, I H..1=8 Hz), 7.40 (s. IH). 7.21 (s. IH), 5.86 (s. IH). 4.28 (d, 2H,.1=4.4 Hz), 3.71 (bs, I H). 3.59-3.61 (m. 4H). 3.50 (t, IH, J=4.4 Hz), 3.00 (bs, I H). 2.68 (t, 1H..1=4.4 Hz), 2.60 (s, 3H). 2.42 (bs. 4H), 2.27 (s. 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.81 (m. 5H), 1.56 (m, 2H), 1.40-1.45 (m, 211). 1.16-1.29 (m. 211). Primer 59: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-5-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-| 1,1 '-bifenil}-3-karboksamida
Korak1: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenz.oata (15 g, 61.5 mmol) i dihidro-2H-piran-4(3)-on (9.2 g, 92 mmol) u dihloroetanu (300 mL) je dodana sirćetna kiselina (22 g, 369 mmol), a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min nakon čega je reakciona smeša ohlađena do 0° C paje dodan natrijum triacetoksiborohidrid (39 g, 183.96 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tada je u reakcionu smešu dodan vodeni rastvor natrijum bikarbonata zbog podešavanja pH do 7-8. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (veličina sita od silika-gela: 100-200) uz eluciju sa smešom etil acetat:heksan kako bi se dobio metil 5-bromo-2-metii-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat u formi čvrste materije prljavo-bete boje (14 g. 69%).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata
U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1 g. 3.04 mmol) i propionaldehida (0.354 g, 6.09 mmol) u dihloroetanu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.12 g, 18.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (1.94 g. 9.14 mmol) na 0° C, a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a u ostatak je dodana voda. Smeša je ekstrahovana sa DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat (0.96 g. 85.7%).
Korak3: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)benzamida
Vodeni NaOH (0.156 g, 3.8 mmol) je dodan u rastvor 5-bromo-2-metii-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (0.96 g. 2.59 mmol) u etanolu (5 mL). Reakciona smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Etanol je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a ostatak je zakiseljen do pH 6 uz pomoć razređene HC1 i do pl l 4 uz pomoć limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni, filtrirani i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (0.8 g, 86.67%).
Malopre pomenuta kiselina (0.8 g, 2.24 mmol) je rastvorena u DMSO (5 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on (0.683 g. 4.49 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PyBOP (1.75 g. 3.36 mmol). a mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni, filtrirani, i koncentrovani kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi se dobio 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamid (0.9 g, 81.8%).
Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiriđin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometiI)-5-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-|l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metii-3-(propil(telrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0.2 g, 0.412 mmol) i 4-(4-(4.4,5.5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)benzir)mortblina (0.148 g, 0.488 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCO.i (0.108 g. 1.01 mmol). reakciona smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh_04(0.048 g, 0.042 mmol). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.20 g. 83.68%). LCMS:587.40 (M + 1)<+>; HPLC: 98.68%(( §254 nm) (R.: 4.257; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMS(Wrt. 400 MHz) 8 11.46 (s. IH), 8.19(t, IH, .1=4.8 Hz), 7.56 (d. 2H. J=8 Hz), 7.38 (t. 3H..1=8 Hz). 7.19 (s. IH), 5.85 (s, IH). 4.28 (d. 2H, .1=4.4 Hz), 3.82-3.85 (m, 2H), 3.57 (m. 411), 3.48 (s. 211). 3.23 (t. 211. .1=10.8 Hz), 2.94-3.02 (m. 3H), 2.36 (bs, 4H), 2.24 (s, 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.56-1.65 (m, 4H). 1.20-1.25 (m. 2H). 0.76 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 60: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(izobutil(tctrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-
karboksamida
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-(izobutiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-
metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1 g. 3.04 mmol) i izobutiraldehida (1.09 g. 15.24 mmol) u metanolu (15 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.456 g, 7.6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.522 g, 7.56 mmol) na 0° C, a reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio meti! 5-bromo-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (0.52 g. 54.33%).
Korak 2: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-i))amino)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (0.104 g, 2.61 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (0.5 g, 1.30 mmol) u etanolu (15 mL), a tada je sve mešano na 60° C tokom 1 h. Etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena do pH 6 uz pomoć razređene HC1 i do pH 4 uz pomoć limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (0.375 g, 76.9%).
Malopre pomenuta kiselina (0.350 g. 9.45 mmol) je tada rastvorena u DMSO (5 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on ( 0.283 g, 18.9 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PvBOP (0.737 g. 14.17 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu. a nastao precipitat je sakupljen i prečišćeni uz pomoć ispiranja rastvarača koje daje 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (0.2 g, 42.01%).
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(izobutiHtetrahidro^H-piran^-iOaminoJ^-metiM'-tmorfolinometilJ-ll^'-bifenill-S-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.14 g, 0.277 mmol) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzii)morfolina (0.100 g, 0.333 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2CO.i (0.108 g. 1.01 mmol ). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPb)4 (0.032 g. 0.027 mmol), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je tada razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.039 g, 23.49%). LCMS:601.3() (M + 1)<+>; HPLC: 99.88% (@ 254 nm) (R,; 5.225: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<1>II NMR (DMSO-^. 400 MHz) 5 1 1.46 (s. IH). 9.83 (bs. IH). 8.20 (t, IH), 7.73 (d. 2H, J=8 Hz), 7.56 (d, 2H..1=8 Hz), 7.43 (s. IH). 7.21 (s. IH), 5.86 (s. IH). 4.39 (bs. 2H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.95-3.98 (m. 2H), 3.85-3.87 (rn. 2H). 3.62 (t. 2H, J=l 1.2 Hz), 3.15-3.31 (m, 9H). 2.84 (m. IH). 2.26 (s. 3H), 2.21 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.62 (bs. 2H). 1.37-1.40 (m, 2H), 0.80 (d, 6H, .1=6 Hz).
Primer 61:sinteza 5-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-ii)amino)-N-((4,6-dimetil-ž-okso-l^-dihidropiridin-S-iOmetiO^-metiM'-tmorfolinometilJ-IlJ'-bifenilj-S-karboksamida
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-((ciklopropilmetiI)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-
metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1 g. 3.04 mmol) i ciklopropankarbaldehida (1.06 g. 15.24 mmol) u metanolu (15 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.456 g, 7.6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.488 g, 7.62 mmol ) na 0° C, a reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-((ciklopropilmetii)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-melilbenzoat (0.275 g. 23.70%).
Korak2:sinteza 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (0.056 g. 1.45 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (0.275 g. 0.943 mmol) u etanolu (5 mL). a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Etanol je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena do pH 6 uz pomoć razređene HC1 i do pH 4 uz pomoć limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (0.25 g, 93.28 %).
Malopre pomenuta kiselina (0.250 g. 0.68 mmol) je rastvorena u DMSO (3 mL) pa je dodan 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.155 g. 1.02 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PyBOP (0.708 g. 1.36 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu. a nastao precipitat je sakupljen i prečišćen uz pomoć ispiranja rastvarača koje daje 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.25 g. 73.31%).
Korak 3: sinteza 5-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(niorfolinometil)-|l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.25 g. 0.499 mmol) i l-(4-(4,4,5.5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (0.181 g. 0.598 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL+1 mL) je dodan NažCOj (0.19 g, 1.79 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.057 g, 0.049 mmol ). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko NaiS04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.085 g. 28.52%). LCMS: 599.35 (M + 1)<+>; HPLC: 99.21% (@ 254 nm) (R,; 4.191; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<l>H NMR (DMSO-t/e. 400 MHz) 6 11.51 (s, IH). 9.83 (bs. IH). 8.20 (s, IH). 7.77 (d. 2H, .1=6.4 Hz), 7.53-7.58 (m. 3H). 7.28 (s, 111). 5.87 (s. III), 4.39 (bs. 2H). 4.29 (d. 2H, J=4.4 Hz). 3.95-3.98 (m. 2H). 3.59-3.65 (m, 2H). 3.31-3.21 (m. 5H), 3.05-3.16 (m, 3H), 2.93 (m. 2H). 2.32 (m, 4H), 2.21 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.65 (bs, 2H). 1.50 (m, 2H), 0.66 (bs, 1 H), 0.28 (d. 2H, J=7.2 Hz).
Primer 62: sinteza 5-(butiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil}-3-karboksamida
Jedinjenje 62 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan sa onim koji je opisan u Primeru 61.
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 601.35 (M + 1)<+>: HPLC: 99.41%(@254 nm) (R,: 4.482: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-*/«, 400 MHz) 8 11.47 (s, 1H), 9.89 (bs. 1H), 8.22 (t. 1H). 7.75 (d. 2H, J=8 Hz), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.44 (s. IH). 7.25 (s, I H). 5.86 (s. IH), 4.39 (bs. 2H), 4.28 (d. 2H, J=4.4 Hz). 3.95-3.98 (m. 3H), 3.83-3.86 (m, 4H). 3.21-3.30 (m, 4H), 3.08-3.11 (m. 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H). 2.10 (s. 3H), 1.62 (m, 4H), 1.20 (m, 4H), 0.79 (t, 3H. J=6.4 Hz).
Primer 63: sinteza 5-((ciklobutilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,l,-bifenil|-3-karboksamida
Jedinjenje 63 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom koji je opisan u Primeru 61.
Analitički podaci:LCMS: 613.35 (M + lf; HPLC: 99.25%( u254 nm) (R,; 4.586:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMS(W<s, 400 MHz) 8 11.45 (s. IH), 8.18 (t, IH). 7.56 (d. 2H..1=7.6 Hz), 7.41 (s. 1H). 7.37 (d, 2H..1=8 Hz), 7.20 (s, IH), 5.85 (s, IH), 4.45 (m. 2H). 4.28 (d. 211. J=4 Hz). 3.83-3.85 (m. 2H), 3.57 (m, 3H). 3.48 (s, 2H). 3.19-3.22 (m. 2H), 3.08 (bs. 2H), 2.86 (m, IH), 2.36 (m. 4H). 2.20 (s, 6H). 2.10 (s, 3H), 1.70-1.78 (m, 4H). 1.56-1.63 (m, 6H).
Primer 64: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-S-(6-(morfolinometil)piridin-3-
il)benzamida
Korak 1: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-iI)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ir)amino)-2-metilbenzamida (1 g. 2.15 mmol) i (6-formilpiridin-3-iljboronske kiseline (0.539 g, 2.31 mmol) u smeši dioksan/voda (15 mL + 3 mL) je dodan Na2CO_i (0.82 g. 7.74 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.3)4(0.288 g, 0.25 mmol). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona masaje grejana na 80° C tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na^SO-i, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.60 g, 57%).
Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)pin<*>din-3-il)benzamida
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.2 g, mmol) u dihloroetanu (3 mL) su dodani morfolin (5 ekviv.) u 5 mL MeOH i sirćetna kiselina (2 ekviv.), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Tada je dodan NaBHsCN (1.5 ekviv.). a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Po završetku (reakcijaje praćena uz pomoć TLC), u reakcionu smešu je dodavan vodeni natrijum bikarbonat do postizanja pH 7-8, organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije (veličina sita od silika-gela: 100-200) uz eluciju sa smešom etil acetat:heksan kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi čvrste materije prljavo-bele boje. LCMS: 574.25 (M + 1 )<r>; HPLC: 97.17% (@ 254 nm) (R,: 3.906;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B u 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51 -12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.46 (s. IH), 8.75 (s, IH), 8.20(t, 1H). 8.01 (d. IH, .1=7.2 Hz), 7.50 (d. IH, J=7.6 Hz). 7.46 (s. III), 7.27 (s. IH). 5.85 (s. IH). 4.28 (d. 2H. J=3.6 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.59-3.61 (m. 6H), 3.22-3.30 (m, 2H). 3.08-3.10 (m. 2H). 3.03 (m. IH), 2.43 (s,4H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s. 3H). 1.65-1.67 (m. 211), 1.51-1.53 (m. 2H). 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 65: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,l'-bifenil|-3-karboksamida
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
LJ mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata {14 g. 42.68 mmol) i acetaldehida (3.75 g. 85.36 mmol) u dihloroetanu (150 mL) je dodana sirćetna kiselina (15.36 g, 256.08 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (27.01 g. 128.04 mmol ) na 0° C. a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a u ostatak je dodana voda. Smeša je ekstrahovana sa DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (14 g, 93.33%).
Korak 2: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (2.36 g, 59.15 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(etil{tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39.43 mmol) u etanolu (100 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Etanol je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakisel jena do pH 6 uz pomoć razređene HC1 i do pH 4 uz pomoć limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (13.9 g, 100%).
Malopre pomenuta kiselina (10 g, 29.23 mmol) je rastvorena u DMSO (25 mL) pa su dodani 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (8.8 g. 58 mmol) i trietilamin (5.6 g. 58.4 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 mi n pre dodavanja PyBOP (22 g.
43.8 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć ispiranja rastvarača kako bi sc dobio 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (14 g. 73.68%).
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.2 g, 0.42 mmol) i (4-((dimetilamino)metil)fenil)boronske kiseline (0.15 g. 0.505 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCOs (0.16 g. 1.51 mmol). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan PdfPPhVH (0.048 g, 0.042 mmol). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je tada razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.120 g. 53.8%). LCMS:531.30 (M + 1 f: HPLC; 94.88%( a254 nm) (R,: 3.949: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 8 11.45 (s. 111). 8.19 (1. 111..1=4.4 Hz). 7.61 (d, 2H, J=8 Hz). 7.39-7.41 (m, 3H), 7.23 (s. IH), 5.86 (s, IH). 4.28 (d, 2H, .1=4.8 Hz). 3.62-3.84 (m, 4H), 3.22-3.38 (m, 2H), 3.02-3.06 (m. 3H). 2.30 (bs. 6H), 2.24 (s. 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 3.64-1.67 (m, 2H). 1.51-1.53 (m. 2H). 0.83 (t. 3H, .1=6.8 Hz).
Primer 66: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-((4-metilpiperazin-l-iI)metil)-|l,l'-
bifenil]-3-karboksamida
O HN *0
Jedinjenje 66
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metir)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metiIbenzamida (0.2 g, 0.42 mmol) i (4-((4-metilpiperazin-l-il)metil)fenil)boronske kiseline (0.159 g, 0.505 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL)je dodan Na2CO.} (0.16 g, 1.51 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.048 g, 0.042 mmol), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je tada razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.110 g, 44.7%). LCMS: 586.40 (M + 1)<+>: HPLC: 96.03%(@254 nm) (R,: 3.803: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(DMSO-^. 400 MHz) 6 11.45 (s. IH). 8.23 (t. IH). 7.69 (d. 2H. .1=7.6 Hz), 7.47 (t, 3H, .1=8 Hz), 7.29 (s, IH), 5.87 (s. 1H), 4.28 (d, 4H, J=4 Hz), 3.93 (s, 3H). 3.83-3.86 (ra. 2H), 3.43 (m, 2H), 3.16-3.27 (m, 8H). 2.81 (s. 3H). 2.26 (s. 3H), 2.21 (s, 3H). 2.10 (s, 311). 1.66 (m. 2H), 1.57 (m, 2H), 0.84 (t, 3H, J=6 Hz).
Primer67:sinteza4'-((lR,4R)-2-oksa-5-azabiciklo|2.2.I |heptan-5-ilmetil)-N-((4,6-
dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-
metil-[l,l'-bifenil]-3-karboksamida (0.1g, 28%);
0 HN Q
HN?
Jedinjenje 67
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-
metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (14 g. 43 mmol) i acetaldehida (3.75 g. 85.4 mmol) u dihloroetanu (150 mL) je dodana sirćetna kiselina (15.36 g, 256 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 min je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (27.0 g, 128 mmol) na 0° C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h pa je ugašena sa vodenim natrijum bi karbonatom. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata pa su koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je bio prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoat (14 g, 93%).
Korak2:sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39 mmol) u etanolu (100 mL) je dodan vodeni NaOH (2.36 g. 59.1 mmol). Nakon mešanja na 60° C tokom 1 h, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena do pH 4 uz pomoć razređene HC1. a nakon toga i uz pomoć limunske kiseline (pufer). Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. a spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila odgovarajuća kiselina (13.9 g).
U mešani rastvor malopre pomenute kiseline (10 g, 29 mmol). 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (8.8 g, 58 mmol) i trietilamina (5.6 g. 58 mmol) u DMSO (25 mL) je dodan PYBOP (22 g. 44 mmol) na 0° C. Nakon mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, smeša je izlivena u led paje ekstrahovana sa 10% MeOH/Cl-hCb. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt. Mrvljenje sirovog materijala sa rastvaračem daje 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (14 g, 73%).
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-formil-4-metil-[l,r-bifenil|-3-karboksamida U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (5.0 g. 10 mmol) i (4-formilfenil)boronske kiseline (2.35 g, 15.8 mmol) u smeši dioksan/voda (30 mL/10 mL) je dodan NazCC^(4.01 g, 37.9 mmol). Rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min, dodan je Pd(PPli3)4(1.21 g. 1.05 mmol), a smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/CLhCh. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Nastao sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-fonriil-4-metil-[l.r-bifenil]-3-karboksamid (3.5 g, 66%).
Sledeće procedure za reduktivnu aminaciju su korišcene za sintezu Jedinjenja 67 do 105
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-formil-4-metil-[l,r-bifenil]-3-karboksamida (1.0 mmol) i neophodnog amina (3.0 mmol) u dihloroetanu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (6.0 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 min je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.63 g. 3.0 mmol) na 0° C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h paje ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom. Organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata pa su koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu ili uz pomoć RP-HPLC kako bi se dobio produkt u formi slobodne baze ili u formi trifluoroacetatne soli.
Analitički podaci za 4'-((lR,4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1Jheptan-5-i!metil)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metir)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-
[1 ,l'-bifenilj-3-karboksamid: LCMS: 585.25 (M + 1)<+>; HPLC: 99.65% (% 254 nm) <R,; 4.019:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 ja: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.19 (t, IH). 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz). 7.39-7.41 (m. 3H), 7.21 (s, IH). 5.85 (s. IH). 4.35 (s, 2H).4.28 (d. 2H..1=4.4 Hz). 3.93 (d. 2H. J=7.2 Hz), 3.82 (d. 2H. J=9.6 Hz), 3.72 (d, 2H, .1=4.4 Hz), 3.44-3.53 (m. 3H). 3.22-3.27 (m. IH), 3.01-3.09 (m, 2H). 2.73 (d, IH. J=9.2 Hz). 2.23 (s. 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.79-1.82 (m, IH). 1.51-1.67 (m, 5H), 0.82 (t, 311..1=6.8 1 Iz).
Primer 68: 4'-((lS,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1|heptan-5-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,l'-
bifenil]-3-karboksamid (0.15 g, 43%)
Analitički podaci:LCMS: 585.35 (M + IV": HPLC: 98.99% (@ 254 nm) (R,; 3.95:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(DMSO-^6,400 MHz) 5 11.45 (bs, IH,), 8.18(s, IH.). 7.56-7.54 (m. 2H). 7.41-7.39 (m. 3H). 7.21 (s, IH), 5.87(s, IH), 4.34 (s, IH). 4.28 (d, 2H. J=4.4Hz),3.93 (d. 1II, J=7.6 Hz). 3.83-3.81(m, 2H), 3.74-3.72 (m. 2H). 3.52(d. IH. J=6.8 Hz.), 3.44(s, IH.). 3.28-3.22(m,2H). 3.09-3.08(m. 3H), 2.73 (d,lH J=10Hz). 2.41 (d.lH .1=10Hz), 2.24(s,3H). 2.20(s.3H). 2.l()(s.3H). 1.79(m, IH), 1.67-1.51 (m,5H). 0.83 (t.3H J=6.8Hz).
Primer 69: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(pirolodin-l-ilmetil)-[l,l'-bifenil|-3-karboksamid (0.19 g)
Analitičkipodaci: LCMS:557.25 (M + 1)<+>: HPLC: 97.70% ( @ 254 nm) (R,; 4.075: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-t/ć, 400 MHz) 5 11.45 (s. IH). 8.19 (t, IH, J=4.4 Hz). 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d. 2H, J=6.4 Hz), 7.35 (s, IH), 7.21 (s, IH). 5.85 (s, IH). 4.28 (d, 2H..1=4.4 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H), 3.58 (s, 2H). 3.22-3.27 (m. 2H), 3.06-3.09 (m, 211). 2.99-3.04 (m, 1 H), 2.43 (bs. 4H). 2.24 (s, 3H).2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). 1.64-1.69 (m. 6H). 1.5l-l.56 (m. 2H). 0.83 (t, 311, J=6.8 Hz).
Primer 70: (5)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(3-hidroksipirolodin-l-ilmetil)-4-metil-|l,r-bifenil]-3-karboksamid, TFA so (0.15 g, 44%)
Analitički podaci:LCMS: 573.40 (M + 1 )<4>; HPLC: 97.97% (@ 254 nm) (R,; 3.965:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.47 (s. IH), 10.03-10.30 (m, IH), 8.23 (s, IH), 7.75 (d. 2H..1=7.2 Hz), 7.60 (d, 2H, J=8 Hz). 7.52 (s, IH), 7.32 (s, IH). 5.87 (s. IH). 4.45-4.46 (m, 2H). 4.39-4.40 (m, 2H), 4.29 (d, 2H. J=5.2 Hz), 3.83-3.86 (m, 2H). 3.43-3.55 (m, 2H), 3.01-3.36 (m. 6H). 2.32-2.37(m,2H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s. 3H), 1.67 (m, 2H). 1.58 (m, 2H), 0.84 (t. 3H, J=6.4 Hz).
Primer 71: (if)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(3-hidroksipirolodin-l-ilmetil)-4-metil-[l,l'-bifeniI|-3-
karboksamid (0.125 g, 55%)
Analitički podaci:LCMS: 573.40 (M + 1)<+>; HPLC: 96.12% (@ 254 nm) (R,; 3.921;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x5 u;mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-rftf, 400 MHz) 5 11.45 (s. IH). 8.18 (t. IH), 7.56 (d. 2H. J=7.6 Hz), 7.39 (s. 1H). 7.36 (d, 2H, J=8 Hz). 7.21 (s, IH). 5.85 (s, IH). 4.68 (s, IH), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 4.19 (bs, IH), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.56-3.59 (m, 2H). 3.22-3.25 (m. 2H). 3.08-3.09 (m, 2H), 3.01 (m. IH). 2.57-2.67 (m, 2H), 2.32 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s. 3H). 1.97-2.00 (m. IH). 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 3H). 0.83 (t,3H,J=6.4 Hz).
Primer 72: (5)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahiđro-2H-piran-4-iI) amino)-4'-(3-fluoropirolodin-l-ilmetil)-4-metil-|l,r-bifeiiil|-3-karboksamid (0.05 g)
Analitički podaci:LCMS: 575.35 (M + 1 f; HPLC: 98.44%( @254 nm) (R,: 4.081:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSCMs, 400 MHz) 5 11.45 (s, IH), 8.18 (t, IH), 7.56 (d. 2H..1=7.6 Hz). 7.39 (s. IH), 7.34 (d, 2H, J=8 Hz). 7.21 (s. IH), 5.85 (s, IH), 5.09-5.25 (m, IH), 4.28 (d, 2H, .1=4 Hz), 3.81-3.86 (m, 2H). 3.65 (s, 2H). 3.53-3.55 (m. 2H). 3.17-3.25 (m. 2H). 3.07-3.16 (m, 7H). 2.24 (s. 3H). 2.20 (s. 3H), 2.10 (s, 3H). 1.64-1.67 (m, 2H). 1.51-1.53 (m. 2H). 0.83 (t. 3H. J=6.8 Hz).
Primer73:N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(piperazin-l-ilmetil)-|l,r-bifenil|-3-karboksamid, TFAso
(0.18 g, 50%)
Analitički podaci:LCMS: 572.10 (M + 1)<+>; HPLC: 96.61 % (@ 254 nm) (R,; 3.736:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR
(DMS(W«s, 400 MHz) 8 11.46(s, IH), 8.81 (bs, 2H). 8.20 (s. IH), 7.66 (d. 2H..1=7.2 Hz), 7.47 (d, 2H, J=7.6 Hz). 7.42 (m. IH), 7.25 (s, IH). 5.86 (s. IH), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.82-3.85 (m. 4H), 3.11-3.27 (m, 9H). 2.88 (m, 4H), 2.25 (s, 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 311). 1.65 (m. 2H). 1.53-1.55 (m. 2H), 0.83 (t, 3H..1=6 Hz).
Primer 74: (i?)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(3-fluoropirolodin-l-ilmetil)-4-metil-[l,r-bifenil|-3-
karboksamid (0.07 g, 31%)
Analitički podaci:LCMS: 575.35 (M+ 1)+: HPLC: 97.53% {% 254 nm) (R,; 4.079;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-ć/a, 400 MHz) 8 11.45 (s. IH), 8.18 (t, IH). 7.57 (d. 2H, .1=7.6 Hz). 7.38 (d, 2H. J=4.4 Hz). 7.36 (s, IH), 7.22 (s, IH), 5.85 (s, IH). 5.12-5.26 (m. IH). 4.28 (d. 2H. J=4 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H). 3.63 (s. 2H). 3.22-3.25 (m. 2H). 3.08-3.09 (m. 2H), 3.02 (m. I H). 2.73-2.83 (m. 211). 2.32 (m. IH), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H), 1.89 (m. IH), 1.64-1.67 (m, 211). 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 75: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metiI-4'-(piperidin-l-ilmetil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamid (0.1 g, 88%)
Analitičkipodaci: LCMS:571.25 (M + 1)<+>; HPLC: 98.25%(%254 nm) (R,; 4.147; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/6. 400 MHz) 5 11.46 (s, IH). 8.19 (t. IH..1=5.2 Hz), 7.55 (d. 2H, J=8 Hz). 7.39 (s. IH). 7.34 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s. IH). 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.82-3.83 (m, 2H). 3.43 (s, 2H), 3.24 (t, 2H, .1=11.2 Hz), 3.06-3.09 (m. 2H), 2.99-3.01 (m, IH), 2.32 (bs. 411), 2.24 (s, 3H). 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.47-1.56 (m, 6H), 1.38-1.39 (m. 2H),0.83 (t.3H. J=7.2 Hz).
Primer 76: (5)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-((3-hidroksipipcridin-l-il)metil)-4-metil-(l,r-bifenil|-3-karboksamid (0.25 g, 71.4%)
Analitički podaci:LCMS: 587.40 (M +1 f;HPLC: 97.63%{% 254 nm)(R,: 3.997:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodu/B; 0.05%
TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<!>H NMR (DMSO-dfe, 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.18 (t, IH, J-4.8 Hz), 7.56 (d. 211, J=8 Hz). 7.39 (s. IH), 7.34 (d, 2H..1=8 Hz), 7.21 (s. IH), 5.85 (s. IH). 4.55 (d, 1H..1=4.8 Hz). 4.28 (d. 2H..1=4.4 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H), 3.51-3.54 (m. 2H). 3.43-3.45 (m, 111), 3.06-3.09 (m. 311). 2.99-3.01 (m, 2H), 2.79 (d, IH. J=6.8 Hz), 2.65 (d. IH. J=10.8 Hz), 2.24 (s, 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H), 1.78-1.88 (m,2H). 1.58-1.71 (m. 2H). 1.39-1.51 (m.4H). 1.04-1.10 (m, IH). 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 77: {/?)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-((3-hidroksipiperidin-l-il)metil)-4-metil-[l,l'-bifenil]-3-karboksamid (0.11 g, 48.6%)
Analitički podaci:LCMS: 587.45 (M + 1)<+>; HPLC: 98.65% (@ 254 nm) (R,; 3.976;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.44 (s, IH), 8.18 (t, IH). 7.56 (d. 2H, .1=7.6 Hz). 7.39 (s, 1H). 7.35 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, IH). 5.85 (s, IH), 4.28 (d. 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 211). 3.40-3.54(m, 3H), 3.22-3.25 (m, 2H), 3.08-3.09 (m. 2H). 3.02 (m, IH). 2.78-2.80 (m, 2H), 2.66 (m, 2H). 2.24 (s, 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 (s, 3H), 1.80-1.86 (m, 3H). 1.53-1.67 (m. 3H). 1.40-1.51 (m, 3H), 1.04-1.06 (m, 1 H). 0.83 (t, 3H..1=6.8 Hz).
Primer 98: \-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-((4-hidroksipiperidin-l-iI)metil)-4-metil-[l,r-bifenil|-3-karboksamid (0.2 g, 57%)
Analitički podaci:LCMS: 587.20 (M + 1)<+>: HPLC: 99.89% (@ 254 nm) (R,; 1.456;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-£fc, 400 MHz) 5 11.46 (s, IH), 8.19 (t. IH, .1=4.4 Hz). 7.56 (d. 2H, .1=8 Hz). 7.39 (s. IH), 7.34 (d, 2H, J=8 Hz). 7.21 (s, IH), 5.85 (s. IH), 4.53 (d, IH..1=3.6 Hz). 4.28 (d. 2H..1=4.4 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.22-3.27 (m. 2H), 3.07-3.09 (m. 2H). 3.01-3.06 (m. 1H). 2.66 (m, 2H). 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H). 2.00-2.04 (m, 2H). 1.64-1.67 (m. 4H). 1.51-1.53 (m. 2H), 1.36-1.39 (m, 2H), 0.83 (t. 3H..1=7.2 Hz).
Primer 79: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-((3-fluoropiperidin-l-il)metil)-4-metil-[l,r-bifenil}-3-karboksamid
(0.2 g, 56%)
Analitički podaci:LCMS: 589.35 (M + 1)<+>: HPLC: 96.06% (@ 254 nm) (R,; 4.092;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05%
TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<]>H NMR (DMSO-^6,400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.18 (t. IH), 7.57 (d. 2H. J=7.2 Hz), 7.40 (s. 1II), 7.35 (d, 2H, J=7.2 Hz). 7.22 (s, IH), 5.85 (s. IH), 4.56-4.68 (m. IH), 4.28 (d. 2H). 3.81-3.84 (m, 2H). 3.52 (s, 2H), 3.22-3.28 (m, 3H), 3.08-3.09 (m. 2H). 3.02 (m, IH), 2.65-2.72 (m. IH). 2.39 (m. 2H), 2.24 (s. 3H). 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H), 1.78-1.81 (m. 2H), 1.64-1.68 (m. 2H). 1.50-1.53 (m,4H). 0.83 (t,3H).
Primer 80: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-((4-fluoropiperidin-l-il)metil)-4-metiI-[l,r-bifenilj-3-karboksamid
(0.09 g, 25%)
Analitički podaci:LCMS: 589.30 (M + 1 f: HPLC: 95.46% (@ 254 nm) (R,; 4.156:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B):<!>H NMR (DMSO-ć/rt, 400 MHz) 8 11.45 (s, IH). 8.18 (t. IH), 7.56 (d. 2H). 7.39 (s. IH). 7.37 (d. 2H). 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH). 4.62-4.74 (m. IH), 4.28 (d, 2H. J=3.2 Hz). 3.81-3.84 (m. 2H). 3.49 (s, 2H), 3.22-3.25 (m, 3H), 3.08-3.09 (m, 3H). 3.02 (m, IH), 2.32 (m. 2H), 2.24 ( s. 3H). 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H). 1.82-1.85 (m. 2H). 1.64-1.67 (m. 4H). 1.5i-1.53 (m, 2H). 0.83 (t. 3H, .1=6.4 Hz).Primer 81: 4'-((4,4-difluoropiperidin-l-H)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-(l,l'-bifenil)-3-karboksamid (0.1 g, 27%)
Analitički podaci:LCMS: 607.35 (M + 1)'; HPLC: 95.48%(%254 nm) (R,; 4.237:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%o B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-A, 400 MHz) 5 11.46 (s. IH), 8.19 (t, IH). 7.58 (d, 2H, .1=8 Hz). 7.38 (d. 2H, J=3.6 Hz), 7.36 (s, IH), 7.21 (s, IH). 5.85 (s, IH), 4.28 (d. 2H. J=4.4 Hz). 3.81-3.84 (tn. 2H). 3.56 (s, 2H), 3.22-3.27 (m. 2H). 3.08-3.09 (m, 2H), 2.99-3.01 (m, IH). 2.24 (s, 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H), 1.90-1.99 (m, 4H), 1.64-1.67 (m. 2H). 1.48-1.56 (m. 2H). 0.83 (t. 3H. J=6.4 Hz).
[411 spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 82: 4'-(azetidin-l-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-4-metiI-|l,r-bifenil]-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 543.40 (M + 1 )T: HPLC: 96.50% (@ 254 nm) (Rf; 4.010;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mmx 5 p;mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent:
5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-rffi, 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.19 (t. IH. J=4.4 Hz). 7.54 (d. 2H, J=8 Hz). 7.38 (s. IH), 7.32 (d. 2H, J=8 Hz), 7.20 (s, IH), 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m. 2H), 3.52 (s, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H). 2.98-3.11 (m. 7H). 2.23 (s. 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H), 1.94-2.01 (m, 211), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.56 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, .1=7.2 Hz). Primer 83: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,-((3-hidroksiazetidin-l-il)metil)-4-metil-[l,r-bifenil]-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 559.80 (M + 1 f; HPLC: 96.10% (@ 254 nm) (R,; 3.917:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-dfc, 400 MHz) 5 11.45 (s. 1H), 8.18 (t, 1H). 7.54 (d. 2H, .1=8 Hz). 7.38 (s. 1H), 7.31 (d. 2H..1=4.4 Hz), 7.20 (s, 1H). 5.85 (s, 1H), 5.28 (d, 1H..1=6.4 Hz), 4.28 (d, 2H. J=4.4 Hz). 4.17-4.19 (m. IH), 3.81-3.84 (m, 2H). 3.56 (s, 2H), 3.48 (t, 2H, J=6.4 Hz). 3.22-3.27 (m, 2H), 3.06-3.09 (m, 2H). 3.01 (m, IH), 2.75 (t, 2H, J=6.8 Hz), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 84: N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-4'-((3-fliuoroazetidin-l-il)metil)-4-metil-[l,<r->bifenil|-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 561.25 (M + 1)<+>: HPLC: 97.99%(<v254 nm) (R,; 4.021:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-i/fi,400 MHz) 5 11.45 (s, IH), 8.18 (t. IH), 7.57 (d, 2H, .1=7.2 Hz), 7.37-7.40 (m. 3H). 7.22 (s, IH), 5.85 (s, IH), 5.27 (m. IH). 4.28 (d, 2H. J=4.4 Hz). 3.81-3.84 (m, 211). 3.63 (s, 2H), 3.22-3.27 (m. 2H), 3.08-3.09 (m, 2H), 3.01 (m. IH). 2.77 (m. 2H). 2.24 (s, 3H). 2.20 (s. 3H),2.15(s. 3H), 1.65-1.67 (m.2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 1.04-1.06 (m. I H). 0.83 (t, 3H..1=7.2 Hz) [2.H spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 86: 4'-((l,4-diazepan-l-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[ 1,1 '-bifeniIj-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 585.37 (M + 1)H; HPLC: 87.74% (@ 254 nm) (R,; 3.715:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR
(DMSO-</o\ 400 MHz) 5 11.47 (s. IH). 8.18 (t IH), 7.57 (d. 2H, J=6.8 Hz), 7.39 (m, 3H). 7.21 (s. IH), 5.85 (s, IH), 4.29 (d, 2H). 3.81-3.84 (m, 2H), 3.66 (s. 2H). 3.08-3.09 <m. 3H). 3.02 (bs. 4H), 2.96 (m, 3H), 2.64-2.66 (m, 4H), 2.24 (s. 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.78 (m. 2H). 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).
Primer 87: N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etii(tetrahidro-2H-pirari-4-il)amino)-4-metil-4'-((4-metil-l,4-diazepaii-l-il)metil)-|l,r-bifenil)-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS:600.30 (M + 1)<+>: HPLC: 99.46% (@ 254 nm) (R,; 3.713:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-</6. 400 MHz) 5 11.44 (s. 1 H), 8.17 (t, IH). 7.56 (d. 2H, J=8 Hz). 7.38 (d. 211. J=5.6 Hz). 7.36 (s, IH), 7.21 (s, IH), 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 2H. J=5.2 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H). 3.61 (s, 2H). 3.09-3.28 (m, 3H). 3.06-3.09 (m. 2H). 3.02 (m, IH). 2.59-2.65 (m. 5H), 2.56 (t. 2H, J=6 Hz). 2.24 (s, 6H). 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.72 (m. 4H), 1.51 -1.53 (m, 2H). 0.83 (t. 3H, .1=6.4 Hz).
Primer 88: 4'-((l,4-oksazepan-4-il)metiI)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metiI-|l,l'-bifenil|-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 587.40 (M + l)<f>; HPLC: 96.85% ( a 254 nm) (R,: 4.055:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x5p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/tf, 400 MHz) 5 11.45 (s, 1H). 8.18 (t, 1H, J=4.8 Hz). 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.37-7.39 (m, 3H), 7.21 (s. IH), 5.85 (s, IH), 4.28 (d, 2H..1=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m. 2H), 3.69 <t. 3H, .1=6 Hz), 3.64 (s, IH), 3.59-3.61 (m, 2H), 3.22-3.27 (m. 2H), 2.99-3.09 (m, 3H). 2.59-2.64 (m. 4H). 2.24 (s. 3H). 2.20 (s. 3H). 2.10 (s. 3H), 1.77-1.83 (m. 2H). 1.64-1.67 (m. 2H). 1.48-1.56 (m. 2H), 0.83 (t 3H, J=7.2 Hz).
Primer 89: 4'-(aminometil)-N-({4, 6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-|l,r-bifenil]-3-karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 503.40 (M + 1 f; HPLC: 79.83% (@ 254 nm) (R,; 3.846;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR
(DMSCWrt. 400 MHz) 5 11.45 (s. IH). 8.19 (t. IH). 7.63 (d. 2H..1=8.4 Hz). 7.47 (d, 2H, .1=8 Hz), 7.39 (s. IH), 7.23 (s, IH), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d. 2H, J=4.4 Hz). 3.92 (s, 2H). 3.81-3.84 (m. 2H), 3.22-3.32 (m, 2H), 3.08-3.10 (m. 2H), 3.01 (m. IH). 2.24 (s. 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s. 3H). 1.65-1.67 (m.2H). 1.51-1.56 (m. 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 90: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-((metilamino)metil)-[l,l'-bifenil|-3-karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 517.30 (M + 1)<+>: HPLC: 98.05%(( a). 254 nm)(R,; 3.886; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-Jrt, 400 MHz) 5 11.51 (s. 111), 8.19 (t, 1 H, .1=4.4 Hz). 7.55 (d, 2H. J=8 Hz). 7.38 (d. 2H). 7.36 (s, IH), 7.21 (s. IH), 5.85 (s. IH), 4.28 (d, 2H, .1=4.4 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H). 3.66 (s. 2H), 3.11-3.25 (m. 3H), 3.04-3.09 (m. 2H), 2.99-3.01 (m, IH). 2.26 (s. 3H). 2.24 (s. 3H). 2.20 (s. 3H), 2.10 (s, 3H). 1.65-1.67 (m. 2H). 1.48-1.56 (m. 2H). 0.83 (t. 3H..1=6.8 Hz).
Primer 91: N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4,-((etilamino)metil)-[l,l'-bifenil|-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 531.35 (M + 1)<+>; HPLC: 98.28% ( u 254 nm) (R,; 3.977:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 |iL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.5-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d6. 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.18 (t, IH, J=4.8 Hz). 7.55 (d, 2H, .1=8 Hz). 7.39 (s. IH), 7.37 (d, 2H, J=2 Hz), 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH). 4.28 (d. 2H. J=6 Hz), 3.81-3.84 <m. 2H), 3.71 (s. 2Hi. 3.22-3.28 (m. 2H), 3.01-3.11 (m, 3H), 2.52-2.55 (m, 2H). 2.24 (s. 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 {s, 3H). 1.65-1.67 (m. 2H). 1.50-1.53 (m. 2H). 1.03 (t, 3H..1=7.2 Hz). 0.83 (t. 311. .1=6.8 Hz).
Primer 92: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-((izopropilamino)metil)-|l,r-bifenil|-3-karboksamid, TFA
so
Analitički podaci za TFAso: LCMS: 545.40 (M + 1)<+>; HPLC: 94.74% (@ 254 nm) (R,; 4.081;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5<p>; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.47 (s, IH). 8.66 (bs. IH), 8.20 (s. IH), 7.74 (d. 2H, J=7.6 Hz). 7.57 (d, 2H, J=7.6 Hz). 7.43 (s, IH), 7.27 (s. IH). 5.86 (s. IH). 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 4.19 (t, 2H), 3.82-3.85 (m, 2H). 3.25 (t. 2H..1=10.8 Hz). 3.09-3.22 (m, 3H). 2.25 (s. 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65 (m. 2H), 1.53-1.55 (m. 3H). 1.28 (d, 6H..1=6.4 Hz), 0.83 (t, 3H, .1=6.8 Hz).
Primer 93: 4,-((ciklopropilmetil)amirio)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,r-bifenilj-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 557.35 (M + 1)<+>; HPLC: 96.44%( @254 nm) (R,; 4.182;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/rt,400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.19 (t, IH). 7.55 (d. 2H, .1=7.2 Hz), 7.37-7.39 (m. 3H). 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H). 3.73 (s. 2H). 3.22-3.24 (m, 3H), 3.06-3.09 (m. 2H), 3.01 (m, IH). 2.36 (d, 2H..1=6.8 Hz). 2.23 (s. 3H). 2.20 (s, 3H). 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H). 1.51-1.56 (m. 211), 0.81 -.084 <m, 4H). 0.38-0.39 (m. 2H). 0.07-0.08 (m. 2H).
Primer 94: 4'-((dietil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,l'-bifenilJ-3-karboksamid
Analitički podaci: LCMS:559.20(M +1)*; HPLC: 98.33% { fa) 254 nm) (R,: 4.126: Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent:
5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-rftf, 400 MHz) 5 11.47 (s, IH). 8.19 (t, IH. 1=5.2 Hz). 7.55 (d, 2H, .1=8 Hz), 7.38 (d. 2H, J=5.2 Hz), 7.36 (s, IH). 7.21 (s. IH), 5.85 (s. IH). 4.28 (d. 2H. J=4.4 Hz). 3.81-3.83 (m. 2H), 3.54 (s. 2H), 3.22-3.37 (m, 2H). 3.06-3.11 (m, 211), 2.99-3.01<m. IH), 2.43-2.47 (m. 4H). 2.24 (s. 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.98 (t, 6H, .1=7.2 Hz). 0.83 (t, 3H. J=6.8 Hz). Primer 95: (R)-4,-(((2,3-dihidroksipropiI)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-|l,l'-bifenil|-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 599.35 (M + 1)<+>: HPLC: 93.58%(@254 nm) (R,; 3.808;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-t/*, 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.18 (t. IH..1=4.8 Hz), 7.56 (d. 2H. 1=8 Hz). 7.37-7.39 (m. 3H), 7.16 (s. IH), 5.85 (s, IH), 4.51-4.56 (m. 2H), 4.28 (d. 2H..1=4.8 Hz). 3.81-3.84 (m. 2H),3.73 (s,2H),3.55(m, IH).3.11-3.25 (m, 3H). 3.01 -3.09(m,3H),2.56-2.61 (m. IH),2.41-2.46 (m. 2H), 2.24 (s. 3H). 2.20 (s, 3H). 2.15 (s, 3H), 1.65-1.67 fm. 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 96: (S)-4'-(((2,3-dihidroksipropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,r-bifenil)-3-karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 577.25 (M + 1)"; HPLC: 96.96% (@ 254 nm) (R,: 3.812: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c^, 400 MHz) 5 11.45 (s, IH). 8.19 (t. IH..1=4.8 Hz). 7.55 (d. 2H. J=8 Hz). 7.37-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH). 4.55 (m, 3H), 4.28 (d, 2H..1=4.8 Hz). 3.81-3.83 (m. 2H). 3.72 (s. 2H), 3.55 (bs, IH). 3.22-3.28 (m, 3H), 3.01-3.11 (m. 3H). 2.57-2.60 (m, IH). 2.41-2.45 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.56 (m, 2H). 0.83 (t. 3H. J=7.2 Hz).
Primer 97: 4'-(((ciklopropilmetil)(metil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-|l,rbifenil|-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 571.40 (M + 1)<+>; HPLC: 99.80% (@ 254 nm) (R,; 4.243;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent:
5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 8 11.45 (s, IH), 8.18 (t, IH. J=4.8 Hz). 7.57 (d. 2H, J=8 Hz). 7.40 (s. IH). 7.37 (d, 2H, J=8 Hz), 7.22 (s, IH), 5.85 (s. IH). 4.28 (d. 2H..1=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H). 3.53 (s, 2H), 3.11-3.25 (m, 2H), 2.99-3.09 (m. 3H). 2.25-2.32 (m. 2H). 2.24 (s. 3H). 2.20 (s, 6H), 2.10 (s. 3H). 1.65-1.67 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H). 0.88 (m. IH), 0.83 (t, 3H, .1=7.2 Hz), 0.46-0.47 (m, 2H). 0.081 (m, 2H). Primer 98:N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(((2-hidroksietil)amino)metil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS:547.35 (M + 1)<+>; HPLC: 96.46% (@ 254 nm) (R,; 3.862;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c/6, 400 MHz) 8 11.44 (s, 1H), 8.19 (t. IH. J=4.4 Hz). 7.55 (d, 2H. J=8 Hz), 7.38 (d, 2H, J=4.4 Hz), 7.37 (s, IH). 7.21 <s, IH), 5.85 (s, IH), 4.47 (bs. 2H),4.28 (d, 2H..1=3.6 Hz). 3.81-3.83 (m. 2H), 3.72 (s, 2H). 3.46 (m, 2H), 3.22-3.27 (m. 2H). 3.07-3.09 (m. 2H). 3.01-3.06 (m, IH). 2.55-2.57 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s. 3H). 2.10 (s, 3H). 1.64-1.67 (m, 2H). 1.51-1.53 (m, 211). 0.83 (t, 311, J=6.8 Hz).
Primer99:N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ii)amino)-4-metil-4'-(((3-hidroksipropil)amino)metiI)-|l,l'-bifenil]-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 561.30 (M + 1 f; HPLC: 96.82% (@ 254 nm) (R,; 3.911;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c/<5.400 MHz) 5 11.47 (s, IH), 8.19 (t. IH). 7.55 (d, 211..1=7.6 Hz), 7.39 (d. 2H). 7.37 (s. IH), 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH), 4.46 (bs, IH), 4.28 (d, 2H..1=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m. 2H). 3.69 (s, 2H), 3.45 (t, 2H, J=6.4 Hz), 3.22-3.27 (m, 2H). 3.07-3.09 (m. 2H), 3.01-3.06 (m. IH). 2.23 (s. 3H). 2.20 (s. 3H), 2.14 (s, 3H), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.61 (m. 4H). 0.83 <t. 3H, J=6.8 Hz) [IH spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 100: 4,-{(bi(2-hidroksietil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-(l,r-bifenil]-3-karboksamid, TFAso
Analitički podacizaTFAso: LCMS: 591.25 (M + 1)<+>; HPLC: 99.00% (@ 254 nm) (R,: 3.860:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5p;mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%> B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(DMSO-rfđ,400 MHz) 5 11.47 (s. IH). 9.38 (s. IH). 8.25 (s. IH), 7.77 (d. 2H, J=3.2 Hz), 7.65 (s, 2H), 7.63 (s, IH). 7.33 (s, IH), 5.87 (s. IH). 4.46 (s, 2H), 4.29 <d. 2H, J=4.8 Hz), 3.78-3.90 (m, 6H), 3.18-3.28 (m. 9H), 2.27 (s. 3H). 2.21 (s, 311). 2.10 (s, 3H). 1.58-1.67 (m, 4H), 0.85 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer101:4'-(((2-aminoetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-
il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,r-bifenil)-3-karboksamid
Analitički podaci:LCMS: 546.35 {M + 1)'; HPLC:93.12% ( a 254 nm)(R,; 3.721;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-t/o". 400 MHz) 5 11.47 (s, IH), 9.19 (bs. IH), 8.20 (t, IH). 7.99 (bs. 2H). 7.74 (d. 2H, J=8 Hz), 7.57 (d, 2H, .1=8 Hz), 7.42 (s, IH). 7.26 (s, IH), 5.86 (s. IH). 4.26-4.29 (m. 3H). 3.82-3.84 (m. 2H), 3.11-3.27 (m, 8H), 3.03 (s, 2H), 2.24 (s, 3H). 2.21 (s. 3H), 2.10 (s. 3H), 1.64-1.67 (m. 2H), 1.55 (m. 2H), 0.83 (t, 3H. J=6Hz).
Primer 102:4'-(((3-aminopropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-4-metil-|l,r-bifenilJ-3-karboksamid, TFA so
Analitičkipodaci za TFA so: LCMS: 560.20 (M + 1<f>; HPLC: 98.90% (@ 254 nm) (R,: 3.611: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05%) TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-rfđ, 400 MHz) o i 1.48 (s. IH), 8.93 (bs. 2H), 8.20 (t. IH). 7.79 (bs. 2H). 7.73 (d, 2H, J=8 Hz), 7.55 (d. 2H..1=8 Hz). 7.43 (s. IH). 7.27 (s. IH). 5.87 (s. IH). 4.28 (d. 2H. J=4.4 Hz). 4.19 (m, 2H), 3.81-3.85 (m. 2H), 3.25 (t, 211. J=l 1.2 Hz), 3.11-3.16 (m. 3H). 3.01 (m, 3H), 2.87-2.88 (m. 1 H), 2.24 (s, 3H). 2.21 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.89-1.92 (m. 2H). 1.65-1.68 (m, 2H). 1.53-1.55 (m. 2H), 0.83 (t. 3H..1=6.8 Hz).
Primer 103: 4'-(((2,2-difluoroetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-|l,r-bifenil|-3-karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 567.30 (M + 1)<+>; HPLC: 92.86% (@ 254 nm) (R,: 3.984;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05%
TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-Jđ, 400 MHz) 5 11.46 (s. IH). 8.19 (t, IH). 7.57 (d. 2H. J=7.2 Hz), 7.38-7.40 (m, 3H). 7.21 (s, IH), 6.01 (t. IH), 5.85 (s, IH), 4.28 (d. 2H, .1=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m. 2H). 3.77 (s. 2H). 3.22-3.28 (m. 2H). 3.06-3.09 (m. 2H). 3.01 (m. IH). 2.84 (t. 2H). 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, .1=6.8 Hz).
Primer 104: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(((2,2,2-trifluoroetil)amino)metil)-jl,<r->bifenil|-3-
karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 585.25 (M + 1)<+>; HPLC: 99.52%(@254 nm) (R,: 4.175; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR ( ĐMSO- d6. 400 MHz) 5 11.46 (s, IH), 8.19 (t, IH). 7.58 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39-7.40 (m. 3H). 7.21 (s, IH), 5.85 (s, IH). 4.28 (d, 2H. J=4.4 Hz), 3.80-3.83 (m, 4H). 2.93-3.27 (m. 8H). 2.24 (s. 3H), 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 211). 0.83 (t. 311..1=6.8 Hz).
Primer 105: 4'-(2-oksa-6-azaspiro|3.3|heptan-6-ilmetiI)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)mctiI)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-|l,r-bifenilj-3-karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 585.40 (M + 1 f: HPLC: 99.67%(( a)254 nm) (R,: 3.99; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent; 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.45 (bs. IH.), 8.18(s. IH.), 7.55-7.54 (m, 2H), 7.38 (s. IH). 7.31-7.29 (m,2H). 7.20(s. lH),5.85(s, IH), 4.60 (s. 3H), 4.28 (d. 2H, J=4.8Hz), 3.83-3.81 (m.2H), 3.53 (s, 2H,), 3.83-3.8l(m, 2H), 3.32(2 protona spojena sa signalom od rastvarača) ,3.24-3.22 (m, 4H), 3.09-3.01 (m, 311.). 2.24(s,3H), 2.20(s.3H), 2.10(s.3H). 1.67-1.64(m. 2H), 1.53-1.51 (m. 2H). 0.83 (t,3H J=6.4I lz).
Primer 108: sinteza 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksiI)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-mctil-[l,r-bifenilj-3-karboksamida
Korak 1:sintezatert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metiI)karbamoiI)-4,-((dimetilamino)metil)-4-nietil-[1,r-bifeniI|-3-
iI)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((li\4r)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metiltenil)(metiI (amino )-cikloheksil)karbamata (1 ekviv.) i N,N-dimetil-l-(4-(4,4,5,5-tetrametil-l ,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekviv.) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCOi (3.6 ekviv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPlr3)4(O.l ekviv. ). a reakciona boca je očišćena ponovo sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografi je na silika-gelu kako bi se dobio tert-butil ((lr.4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[l,r-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.08 g, 48.78%).
Korak2: Sinteza 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4'-((dinictilamino)metil)-4-metil-|l,r-bifenil]-3-
karboksamida
Mešani rastvor tert-butil {(lr.4r)-4-((5-(((4.6-dimethy)-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metir)karbamoil)-4'-((dimetilamino)metil)-4-metil-[l.r-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.08 g) u DCM (5 mL) je ohlađen do 0° C. a tada je dodan TFA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona masa je koncentrovana do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.06 g. 89.55%). LCMS: 530.35 (M + 1)<+>; HPLC: 89.74%(( a)254 nm) (R,: 3.557: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.; 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<*>H NMR (DMSO-J*. 400 MHz) 6 11.46 (s, IH), 9.74 (bs, IH). 8.17 (t. IH). 7.74-7.76 (m. 4H). 7.55 (d. 2H..1-7.6 Hz), 7.36 (s. IH). 7.22 (s, IH), 5.86 (s. IH), 4.28-4.31 (m. 4H). 2.97 (bs, IH). 2.74 (d. 6H, J=4.4 1Iz), 2.66 (s, 3H), 2.20 (d, 6H, J=2 Hz), 2.10 (s, 3H). 1.92-1.95 (m, 211). 1.74-1.77 (m. 2H), 1.52-1.57 (m, 2H), 3.28-1.30 (m. 2H) [IH spojen sa signalom od rastvarača].
Primer 109:sintezaN-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-ii)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.2 g. 0.42 mmol) i (1-metil-lH-pirazol-4-il)boronske kiseline (0.105 g, 0.505 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan Na2C03 (0.16 g, 1.51 mmol ), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.048 g, 0.042 mmol). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je tada razređena sa vodom i ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko NaaS04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.100 g, 50%). LCMS-.478.20 (M + 1)<+>; HPLC: 95.82% (@ 254 nm) (R,; 4.322; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna laza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-efc,400MHz)S 11.45(s, IH), 8.12(s. lH).8.10(t. IH). 7.81 (s, IH), 7.33 (s, 111), 7.13 (s. IH), 5.86 (s, IH), 4.27 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.81-3.83 (m. 5H), 3.21-3.26 (m, 2H). 2.98-3.08 (m, 3H), 2.20 (s. 3H). 2.1 7 (s, 3H). 2.10 (s, 3H), 1.63-1.66 (m, 2H). 1.48-1.52 (m, 2H). 0.86 (1. 311, .1=7.2 Hz).
Primer110:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(6-({dimetiIamino)metil)piridin-3-iI)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Korak1: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ii)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metiIbenzamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-ir)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1 g. 2.15 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.539 g, 2.31 mmol) u smeši dioksan/voda (15 mL + 3 mL) je dodan Na2CCb (0.82 g, 7.74 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPha)4(0.288 g, 0.25 mmol). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona masaje grejana na 80° C tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiSOi. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.60 g, 57%).
Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidro<p>iridin-3-iI)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiriđin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ir)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.102 g, 0.203 mmol) i dimetilamina (0.044 g, 2M 0.507 mL, 1.01 mmol) u dihloroetanu (3 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.073 g. 1.021 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.129 g, 0.609 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana tokom 4 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, dodana je voda, a ekstrakcija je provedena uz pomoć smeše 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.08 g. 75%). LCMS: 532.30 (M + 1) ': HPLC: 97.53%( u254 nm) (R,; 3.878; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^6. 400 MHz) 6 11.46 (s. 1H). 8.75 (d. IH, .1=1.2 Hz), 8.20 (t. IH, .1=4.8 Hz), 8.02 (d. 1H.J=6.4 Hz). 7.49 (s, IH). 7.47 (s. IH). 7.27 (s, IH), 5.87 (s. IH), 4.28 (d. 2H, J=4.8 Hz). 3.81-3.84 (m. 2H). 3.56 (s. 211), 3.22-3.24 (m. 2H), 3.02-3.12 (m, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s. 6H). 2.20 (s. 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m. 2H). 1.50-1.56 (m, 2H), 0.82 (t. 3H, .1=6.8 Hz).
Primer111:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-((4-metilpiperazin-l-il)metil)piridin-3-iI)benzamida
Korak la: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1 g, 2.15 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.539 g, 2.31 mmol) u smeši dioksan/voda (15 mL + 3 mL) je dodan Na2CO;; (0.82 g, 7.74 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPhj)4(0.288 g, 0.25 mmol). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona masaje grejana na 80° C tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa smešom 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.60 g, 57%).
Korak lb:-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamid
Kada je malopre pomenuta reakcija bila ponovljena na skali od 1.5 g, izolovan je N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ii)amino)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamid (0.350 g, 22%).
Korak 2: sinteza 5-(6-(bromometil) piridin-3-iI)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)nietil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiridin-3-i!)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.35 g, 0.694 mmol) u DCM (5 mL) je dodan trifenil fosfin (0.361 g, 1.38 mmol). a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Finalno je dodan CBr4(0.318 g, 1.38 mmol), deo po deo. a nastao rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Po završetku, u reakcionu masu je dodana voda, a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je tada prečišćen na koloni kako bi se dobilo željeno jedinjenje (0.35 g, 89%).
Korak3:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-((4-metiIpiperazin-l-il)metil)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor 5-(6-(bromometil)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l, 2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2l-I-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.175 g, 0.309 mmol). koji je bio rastvoren u THF (2 mL),je dodan 1-metil-piperazin (0.309 g. 1.54 mmol) na sobnoj temperaturi, a sve je mešano na istoj temperaturi tokom 18 h. Po završetku, voda je dodana u reakcionu masu, a ekstrakcija je provedena uz pomoć DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata pa su koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje sirovi materijal koji je tada prečišćen uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.028 g, 15%). LCMS: 587.40 (M + 1 f; HPLC: 98.05%{%254 nm) (R,; 3.831;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(DMSO-t/6.400 MHz) 6 11.46 (s. IH). 8.89 (s. IH). 8.21 (đ. 2H. .1=7.6 Hz), 7.59 (d, 2H..1=7.6 Hz), 7.35 (s. IH). 5.87 (s. IH). 4.29 (d. 2H..1=4 Hz). 3.96-4.04 (m, 2H). 3.83-3.86 (m. 2H), 3.16-3.43 (m. 13H). 2.81 (s. 3H), 2.27 (s. 3H), 2.21 (s. 3H), 2.10 (s, 3H), 1.67 (m. 2H). 1.56 (m. 2H), 0.84 (t. 3H. J=6.4 Hz).
Primer 112: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4'-dimetil-|l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0.42 mmol) i p-tolil boronske kiseline (86 mg, 0.63 mmol) u dioksanu (3 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na^GO; (0.75 mL; 1.51 mmol), a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.3)4(48 mg, 0.04 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (150 mg, 73%). LCMS: 488.20 (M + 1)! : HPLC: 99.33% (@ 254 nm) (R,; 5.393;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL.lemp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/6. 400 MHz) 5 11.46 (s. 111), 8.19 (t, IH), 7.51 (d, 2H, J=8 Hz), 7.37 (s, IH), 7.25 (d, 2H, J=8 Hz), 7.19 (s, IH). 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 2H. J=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m. 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.01 (m. IH), 2.33 (s. 3H), 2.23 (s, 3H). 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). 1.64-1.67 (m. 2H). 1.51-1.55 (m. 2H). 0.82 (t. 3H, .1=6.8 Hz).
Primer 113: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(hidroksimetil)-4-metil-(l,r-bifenil|-3-
karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0.42 mmol) i 4-(hidroksimetil)fenilboronske kiseline (96 mg, 0.63 mmol) u dioksanu (2.5 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na2C03(0.75 mL, 1.51 mmol), a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3/4 (48 mg, 0.04 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona masa je razređena sa vođom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (130 mg. 62%). LCMS: 504.15 (M + 1)<+>; HPLC: 98.86% ( a 254 nm) (R,: 4.240:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B):<!>H NMR (DMSO-d6.400 MHz) 5 11.45 (s, IH), 8.19 (t. IH), 7.57 (d. 211..1=7.2 Hz), 7.39 (s. 111), 7.37 (d. 2H). 7.21 (s. IH), 5.85 (s. IH). 5.20 (t, IH..1=5.2 Hz). 4.52 (d. 2H, J=5.6 Hz), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.22-3.32 (m, 2H), 3.08-3.09 (m, 2H), 3.01 (m. 1 H), 2.24 (s, 3H). 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m. 2H). 1.51-1.53 (m. 2H), 0.83 (t. 3H. J=6.4 Hz).
Primer 114: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2jr/-piran-4-il)amino)-4-metil-3'-(morfolinometil)-[l,r-bifenilj-3-
karboksamida
Korak 1: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-3'-formil-4-metil-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (400 mg, 0.84 mmol) i (3-fomrilfeniljboronske kiseline (189 mg. 1.26 mmol) u dioksanu (2 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na2COj (1.5 mL, 3.03 mmol). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(97 mg. 0.08 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno sa pročišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (270 mg. 64 %).
Korak2:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4-metil-3'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//- piran-4-iI)amino)-3'-formil-4-metil-[l,r-bifenil]-3-karboksamida (270 mg, 0.53 mmol) i morfolina (94 mg. 1.07 mmol) u dihloroetanu (5 mL) je dodana sirćetna kiselina (194 mg. 3.23 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (343 mg, 1.61 mmol) u reakcionu smešu na 0° C. smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature, a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom, isprana sa vodom, zasićena sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata pa je osušena preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (200 mg, 65%). LCMS: 573.25 (M + 1T: HPLC: 90.21% (@ 254 nm) (R,; 4.048;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/6, 400 MHz) o 11.45 (s. IH). 8.20 (t, IH). 7.52 (s, IH), 7.49 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39 (d, IH, .1=5.6 Hz). 7.29 (d, IH, J=7.2 Hz). 7.20 (s. IH), 5.85 (s, 1H). 4.28 (d, 2H. J=4.4 Hz), 3.82-3.84 (m, 2H), 3.56 (m, 4H), 3.52 (s. 2H). 3.22-3.30 (m, 2H), 3.08-3.10 (m. 2H), 3.01 (m, IH). 2.37 (s, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H), 1.65-1.67 (m, 2H). 1.51-1.54 (m. 2H), 0.83 (t, 3H. J=6.4 Hz).
Primer 115: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etii(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metiI-4'-((3-(morfolinometil)azćtidin-l-il)metn)-|l,r-bifenil|-3-karboksamid
Jedinjenje 115 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 67.Analitički podaci:LCMS: 642.45 (M+1)+; HPLC: 93.13% {% 254 nm) (R,; 3.803;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5%. B do 95%o B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-J6,400 MHz) 8 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H). 7.54 (d. 2H, .1=7.6 Hz). 7.38 (s. J H). 7.31 (d, 2H, .1=7.6 Hz). 7.20 (s, IH). 5.85 (s. IH). 4.28 (d, 2H, .1=4 Hz). 3.81-3.83 (m. 211). 3.52-3.53 (m. 6H), 3.22-3.24 (m, 2H), 3.07-3.09 (m. 2H), 3.01 (m. IH), 2.79 (s. 2H), 2.56-2.58 (m. 2H). 2.29 (m, 2H), 2.28 (s, 3H). 2.23 (s. 3H), 2.20 (s. 311), 2.10 (s. 3H). 1.64-1.67 (m. 2H), 1.51-1.53 (m. 2H), 0.82 (t, 3H, .1=6.8 Hz).
Primer 116: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfoIinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-|l,rbifenil]-3-karboksamida
Korak1: sinteza metil 4-metiI-4'-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-(1,1 '-bifenil]-3-karboksilata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (600 mg, 1.83 mmol) i 4-[4-(4.4,5,5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolina (833 mg. 2.75 mmol) u dioksanu (9 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na?C03(3.30 mL, 6.60 mmol). a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPli3)4(211 mg. 0.18 mmol). a smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (500 mg. 77%).
Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-{morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-|l,r-bifenil|-3-karboksamida Vodeni NaOH (73 mg, 1.76 mmol) je dodan u mešani rastvor metil 4-metil-4'-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-[l,r-bifenil]-3-karboksilata (500 mg. 1.17 mmol) u etanolu (lOmL), a mešanje je nastavljeno na 60° C tokom 1 h. Po završetku, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 do vrednosti pH od 6. Vodeni sloj je ekstrahovan uz pomoć etil acetata (5 puta), a spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom daje odgovarajuću kiselinu (350 mg. 72.4%).
U mešani rastvor malopre pomenute kiseline (200 mg, 0.48 mmol) u DMF (10 mL), koji je ohlađen uz pomoć leda, su dodani EDCT (139 mg, 0.73 mmol) i trietilamin (0.17 mL, 1.21 mmol). Nakon 15 min mešanja na 0° C je dodan HOBT (78 mg. 0.58 mmol), a tada i 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2( l//)-on (148 mg, 0.97 mmol ). Reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature, a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona masaje izlivena u led, ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (5 puta). Spojeni organski sloj je ispran sa vodom paje osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno ispiranjem uz pomoć rastvarača daje jedinjenje iz naslova (50 mg. 19%). LCMS: 545.15 (M + l)<f>; HPLC: 95.86% (@ 254 nm) (R,: 4.382; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p.; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-d6.400MHz) S 11.45 (s. IH). 8.03 (m, IH). 7.71 (bs. IH). 7.54 (d, IH, J=7.6 Hz), 7.34 (d. 2H. J=7.6 Hz), 6.85 (s, IH). 6.70 (s, IH), 5.83 (d. 2H, J=7.6 Hz), 4.58 (d. IH, J=7.6 Hz). 4.26 (d. 2H, J=4 Hz). 4.04 (d, 2H.J=4.8-Hz), 3.85-3.88 (m. 2H), 3.62 (m, IH). 3.57 (t. 211). 3.41-3.47(m, 3H). 2.32-2.36-(m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.11 (s. 3H). 2.05 (s. 3H), 1.88-1.91 (m. 2H). 1.50-1.52 (ni. 2H).
Primer 117: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etilamino)-4-
metil-4'-(morfolinometiI)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-3-(etilamino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (1.0 g, 4.09 mmol) i acetaldehida (180 mg, 4.09 mmol) u dihloroetanu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.47 g, 24.58 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (2.6 g, 12.29 mmol) na 0° C, smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature, a mešanje je nastavljeno tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom. isprana sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i osušena preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje željeno jedinjenje (600 mg, 55%).
Korak 2: sinteza metil 5-(etilamino)-4-metil-4'-(morfolinometiI)-|l,l'-bifenil|-3-
karboksilata
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etilamino)-2-metilbenzoata (600 mg. 2.2 mmol) i 4-[4-(4.4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benziI]morfolina (1.0 g. 3.3 mmol) u dioksanu (5 mL) je dodan 2M vodeni rastvor NaaCOj(3.96 mL, 7.93 mmol), a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.i)4 (255 mg. 0.22 mmol ), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masaje grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje željeno jedinjenje (800 mg, 98%).
Korak3:sinteza 5-(etilamino)-4-metiI-4'-(morfolinonietil)-[l,r-bifenil|-3-karboksilne
kiseline
Vodeni NaOH (130 mg, 3.25 mmol) je dodan u mešani rastvor jedinjenja 6 (800 mg. 2.17 mmol) u etanolu (10 mL), a mešanje je nastavljeno na 60° C tokom 1 h. Po završetku, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 do pH~6. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (5 puta), a spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom daje željeno jedinjenje (700 mg, 91%). LCMS: 355.05 (M + 1)<+>: HPLC: 89.74% (@ 254 nm) (R,; 3.854;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (CD30D, 400 MHz) S 8.24 (s. IH). 7.88 (s. 1H). 7.84 (d. 2H..1=8 Hz), 7.71 (d, 2H, J=8.4 Hz). 4.45 (s, 2H), 4.06 (d, 2H..1=11.2 Hz). 3.79 (t, 2H..1=12 Hz). 3.53 (q. 2H,
.1=7.2 Hz), 3.40-3.43 (m, 2H), 3.22-3.31 (m, 2H). 2.66 (s. 311), 1.45 (t. 3H..1- 7.2 Hz).Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etilamino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida5-(etiIamino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l.r-bifenii]-3-karboksilna kiselina (300 mg. 0.84 mmol) je rastvorena u DMSO (2 mL), a tada je dodan 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2(l//)-on (257 mg, 1.69 mmol). Nakon 15 min mešanja na sobnoj temperaturi u reakcionu smešu je dodan PvBOP (660 mg, 1.26 mmol). a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona masa je izlivena u led, ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (5 puta). Spojeni organski sloj je ispran sa vodom pa je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno ispiranjem sa rastvaračem daje jedinjenje iz naslova (100 mg, 24%). LCMS: 489.20 (M + 1)<+>: HPLC: 96.41% (@ 254 nm) (R,; 4.060:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-c/đ. 400 MHz) 8 11.46 (s, 1H), 9.90 (s, IH). 8.06 (l. IH). 7.73 (d. 211. .1=7.6 Hz), 7.55 (d, 2H, .1=7.2 Hz), 6.80 (d, 2H, J=7.6 Hz), 5.86 (s, IH), 4.38 (s, 2H). 4.27 (d, 2H, J=4 Hz). 3.95 (m, 2H), 3.62-3.65 (m, 2H), 3.28-3.31 (m. 2H). 3.20-3.24 (m, 2H). 3.14-3.19 (m, 2H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s, 3H), 2.06 (s. 3H). 1.21 (t. 3H, .1=6.8 Hz). Primer 118: sinteza 5-(etil(tetrahidro-2/A-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetil)-6-metii-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metiI-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenill-3-karboksamida
Korak1:sinteza tert-butildimetiI(prop-2-in-l-iloksi)silana
U mešani rastvor prop-2-in-l-ol (10.0 g, 178.3 mmol) i imidazoia (18.2 mg, 267.5 mmol) u dihloroetanu (500 mL). koji je bio ohlađen u ledu. je dodan TBDMSC1 (40.24 g. 267.5 mmol). a mešanje je nastavljeno na 0° C tokom 1.5 h. Po završetku, u reakcionu smešu je dodan zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. a smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno ispiranjem sa rastvaračem daje željeno jedinjenje (20 g. 67%).
Korak 2: sinteza 5-((tert-butlldimetilsiIil)oksi)pent-3-in-2-on
U mešani rastvor tert-butildimeti!(prop-2-in-l-iloksi)silana (20.0 g, 116.9 mmol) u THF (400 mL) na -78° C je dodan n-BuLi (90 mL, 140.0 mmol), a reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom 2 h. Tada je reakciona smeša ohlađena do -78° C pa je dodan borontrifluorid etarat (18 mL. 140.0 mmol). Nakon 10 min mešanja je dodan sirćetni anhidrid (15 mL, 153.0 mmol), a reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom 2.5 h. Reakcija je ugašena sa IN vodenim rastvorom NaOH pa je ekstrahovana sa etil acetatom (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno ispiranjem sa rastvaračem daje C (13 g, 52%).
Korak3: sinteza 4-(((tert-butildimetilsi(il)oksi)metil)-6-metiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
U mešani rastvor jedinjenja 5-((tert-butildimetilsiliI)oksi)pent-3-in-2-on (13.0 g, 61.0 mmol) i cijanoacetamida (6.2 g, 73.2 mmol) u smeši etanola i vode (9:1) (270 mL) na sobnoj temperaturi je dodan piperidinacetat (katalitička količina), a reakciona smeša je grejana do refluksa tokom 5 h. Nakon odstranjivanja rastvarača je dodana voda, a Čvrsti produkt je filtriran. Uz pomoć ispiranja sa vodom pa sa etrom i heksanom, čvrsti produkt daje željeno jedinjenje (5.5 g,32%).
Korak 4: sinteza 3-(aminometiI)-4-(((tert-butildimetilsiIil)oksi)metil)-6-nietilpiridin-2(l//)-on
U mešani rastvor 4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (5.5 g. 19.7 mmol) u metanolu (100 mL) i amonijaku (30 mL) je dodan Raney-ev nikal (kvantitativna količina), a reakciona smeša je mešana u prisutnosti vodonika pod pritiskom tokom 14 h. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz celit pa je isprana sa metanolom. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom daje željeno jedinjenje (3.5 g, 63%).
Korak 5: sinteza 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetil)-6-metiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (70 mg, 1.7 mmol) je dodan u mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (400 mg. 1.1 mmol) u etanolu (60 mL), a mešanje je nastavljeno na 60° C tokom 1 h. Po završetku, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 do pl l~6. Vodeni sloj je ekstrahovan uz pomoć etil acetata (5 puta), a spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom daje odgovarajuću kiselinu (320 mg, 83.55%).
Malopre pomenuta kiselina (400 mg, 1.1 mmol) je tada rastvorena u DMSO (4 mL) pa je dodan 3-(aminometii)-4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metir)-6-metilpiridin-2(l//)-on (525 mg. 1.7 mmol). Nakon 15 min mešanja na sobnoj temperaturi je dodan PyBOP (900 mg, 1.6 mmol) u reakcionu smešu, a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona masaje izlivena u led, ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (5 puta). Spojeni organski sloj je ispran sa vodom pa je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno ispiranjem sa rastvaračem daje željeno jedinjenje (230 mg. 40%).
Korak6:sinteza 5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetiI)-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenil|-3-
karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-N-({4-(hidroksimetil)-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (250 mg. 0.5 mmol) i 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolina (230 mg. 7.6 mmol) u dioksanu (5 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na2CO_i (0.9 mL. 1.8 mmol). a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.3)4 ( 57 mg. 0.05 mmol ), a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (60 mg, 25%). LCMS: 589.35 (M + 1)<+>: HPLC: 95.58%( a254 nm) (R,: 3.524;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(DMSO-t/6,400 MHz) 5 11.54 (s. IH). 8.22 (t. IH), 7.57 (d. 211, J=7.6 Hz). 7.38 (d,2H,.1=5.6 Hz), 7.36 (s. IH), 7.21 (s, IH), 6.16 (s, IH). 5.28 (m, 1H). 4.52 (d, 2H, .1=4.8 Hz), 4.25 (d. 2H..1=3.6 Hz), 3.81-3.83 (m. 2H). 3.57 (m. 4H), 3.48 (s, 2H), 3.01-3.09 (m, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.23 (s. 3H), 2.15 (s. 3H). 1.64-1.67 (m, 2H). 1.51-1.53 (m. 2H). 1.23 (m. 2H). 0.82 (t. 3H, J=6.4 Hz).
Primer 119: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-5-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-[l,r-bifenilj-3-
karboksamida
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-
il)acetamido)bcnzoata
Rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (520 mg. 1.58 mmol) je grejan na 70° C u 3 ml sirćetnog anhidrida tokom 6 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature paje ugašena sa zas. NaHCCb i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je osušen preko Na;?S04, koncentrovan i prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) kako bi se dobilo ciljano jedinjenje (400 mg. 68%).
Korak2:sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamida
Smeša metil 5-bromo-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamiđo)benzoata (400 mg. 1.08 mmol) i NaOH (47 mg, 1.13 mmol) u 5 ml smeše etanohvoda (2:1) je grejana na 70° C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće. a sirovi materijal je rastvoren u vodi, pH je podešen do 5-6 uz pomoć pažljivog dodavanja HC1 pa je ekstrahovan sa 10% MeOH u DCM. Organski sloj je osušen preko NaiS04, koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 400 mg kiseline.
Smeša sirove kiseline (400 mg, 1.23 mmol). 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (370 mg. 2.46 mmol). PyBOP (960 mg, 1.85 mmol) i trietil amina (0.17 ml. 1.23) je mešana u 2 ml DMSO na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razređena sa vodom, a jedinjenje je ekstrahovano u 10% MeOH u DCM, osušeno preko Na2S04. koncentrovano. a sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (100-200) kako bi se dobio 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-mctil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamid (95 mg. 17.3%).
Korak3: sintezaN-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-5-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-|l,r-bifenilj-3-
karboksamida
Rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamida (50 mg. 0.10 mmol). (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (41 mg. 0.13 mmol). natrijum karbonata (27 mg. 0.25 mmol) u 3 ml dioksanaje degaziran sa argonom tokom 20 min. u smešu je dodan Pd(PPli3) (12 mg, 0.0012 mmol). a smeša je grejana na 100° C preko noći. Reakciona masa je ohlađena do sobne temperature paje razređena sa vodom pre ekstrakcije sa 10% MeOH u DCM. organski slojevi su osušeni preko NajSCU, koncentrovani, a nastao sirovi produkt je prečišćen hromatografijom na silika-gelu (100-200) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (26 mg. 23%).
LCMS: 609.35 (M + 23)"; HPLC: 97.81% (@ 254 nm) (R,: 4.407: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5%> B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);'H NMR (DMSO-ćk 400 MHz) 8 11.48 (bs, IH). 8.41 (t, IH), 7.67-7.69 (m, 2H). 7.39-7.56 (m. 4H). 5.87 (s. IH). 4.54-4.57 (m, 1 H). 4.30-4.31 (d. 2H. J = 4 Hz). 3.77-3.85 (m. 211). 3.50-3.58 (m, 611). 2.37 (m, 4H), 2.22 (s. 3H), 2.16 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). 1.88-1.91 (m, IH), 1.51-1.65 (m. 6H). 2 protona su spojena sa signalom od rastvarača.
Primer 120: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2J¥-<p>iran-4-il)amino)-3'-nuoro-4-metil-<4>'-(morfolinometil)-|l,<r->bifenil|-3-karboksamida
Korak 1: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3'-fluoro-4'-formil-4-metil-|l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamiđa (300 mg. 0.63 mmol) i (3-fluoro-4-formilfeniljboronske kiseline (160 mg. 0.94 mmol) u dioksanu (6 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na^CO} (1.15 mL, 2.3 mmol). a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh;})4 (72 mg. 0.06 mmol). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masaje grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (288 mg. 88%).
Korak2:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-I,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-3'-fluoro-4-raetil-4'-(niorfolinonietil)-|l,r-bifenil|-3-
karboksamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3'-fluoro-4'-fonTiil-4-metil-[ 1,1 '-bifenil]-3-karboksamida (285 mg. 0.55 mmol) i morfolina (149 mg, 1.64 mmol) u dihloroetanu (5 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.2 mL, 3.29 mmol), a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tada je u reakcionu smešu dodan natrijum triacetoksiborohidrid (349 mg, 1.64 mmol) na 0° C. a smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature dok je mešanje nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom, isprana sa vodom, zasićena sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata pa je osušena preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije i prep. HPLC daje jedinjenje iz naslova (70 mg, 20%). LCMS: 591.45 (M + l)<1>; HPLC: 98.96% (@ 254 nm) (R,; 4.034;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0. 05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5%B); 'HNMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.5 (bs, IH). 10.1 (bs, IH). 8.24 (s, IH), 7.66-7.73 (m. 3H), 7.54 (s. IH), 7.36 (s. IH), 5.88 (s, IH), 4.44 (s, 2H), 4.30 (m, 5H), 3.96 (m, 2H), 3.66-3.86 (m, 6H), 3.17-3.34 (m, 4H). 2.27 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s. 3H), 1.57-1.67 (m, 4H), 0.84 (t. 3H, J = 6 Hz).
Primer 121: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-2'-fluoro-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil}-3-karboksamida
Korak 1: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2^-piran-4-il)amino)-2'-fIuoro-4'-formil-4-metil-[l,rbifeniI|-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg. 0.62 mmol) i (2-fluoro-4-formilfenil)boronske kiseline (158 mg. 0.94 mmol) u dioksanu (3 mL) je dodan 2M vodeni rastvor NaiCO.1 (1.13 mL. 2.26 mmol). a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(72 mg. 0.06 mmol). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje željeno jedinjenje (300 mg. 91%).
Korak2:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-2'-fluoro-4-metil-4'-(morfoHnonietil)-|l,r-bifenilJ-3-
karboksamida
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)meti!)-5-(etil(tetrahidro-2//- piran-4-il)amino)-2'-fluoro-4'-formil-4-metil-| 1 .l'-bifenil]-3-karboksamida (300 mg. 0.57 mmol) i morfolina(100 mg, 1.15 mmol) u dihloroetanu (4 mL) je dodana sirćetna kiselina (207 mg, 3.46 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. fada je u reakcionu smešu dodan natrijum triacetoksiborohidrid (367 mg, 1.73 mmol) na 0° C. smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature, a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom, isprana sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata pa je osušena preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografi je daje jedinjenje iz naslova (300 mg, 87.97%).
LCMS: 591.30 (M + 1)<+>; HPLC: 96.03% (@ 254 nm) (R; 4.077;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'PI NMR (DMSO-4 400 MHz) 6 11.45 (bs.lH). 8.17(t,lH). 7.47-(t.lH. J=8Hz). 730(s,lH).7.21-7:23 (m,2H). 7.10 (s,lH), 5.85 (s. IH). 4.28 (d. 2H, J = 4.4Hz), 3.81-3.84 (m. 2H), 3.50-3.59 (m. 6H). 3.22-3.25 (m, 2H), 3.00-3.06 (m, 3H). 2.38 (m. 4H), 2.25(s. 3H). 2.19 (s. 3H). 2.10 (s. 3H). 1.51-1.66 (m. 4H),0.83 (t,3H,J = 6.8 Hz).
Primer 122: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2/f-piran-4-il)amino)-2',4-dimetil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenilj-3-karboksamida
Korak1: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4'-formil-2',4-dimetil-|l,r-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetii-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2Fl-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamiđa (400 mg. 0.84 mmol) i 3-metil-4-(4,4,5.5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)benzaldehida (310 mg, 1.26 mmol) u dioksanu (2 mL)je dodan 2M vodeni rastvor NajCO? (1.5 mL, 3.03 mmol). a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPli3)4 (97mg. 0.08 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje željeno jedinjenje (300 mg, 69.28%).
Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-2,,4-dimetil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenilj-3-karboksamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2/-/- piran-4-il)amino)-4'-formil-2',4-dimetil-[l.r-bifenil]-3-karboksamida (410 mg. 0.79 mmol) i morfolina (210 mg, 2.38 mmol) u dihloroetanu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (280 mg. 4.77 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tada je u reakcionu smešu dodan natrijum triacetoksiborohidrid (580 mg. 2.71 mmol) na 0° C, smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature, a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom. isprana sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i osušena preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (125 mg. 26.76%).
LCMS: 587.55 (M + lf; HPLC: 97.23% (@ 254 nm) (R,; 4.065; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5%> B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-J*. 400 MHz)5 11.45 (bs, IH). 9.91 (bs, IH), 8.17 (bs. IH). 7.32-7.42 (m, 311). 7.15 (bs. Ili). 6.92 (bs, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.27-4.35 (m, 4H). 3.86 (m. 2H), 3.64-3.67 (m, 3H). 3.12-3.32 (m. 10H). 2.33 (bs, 6H), 2.19(s. 3H), 2.10 (s, 3H), 1.55-1.64 (m. 4H). 0.84 (t. 3H, J = 6 Hz), 2 protona su spojena sa signalom od rastvarača.
Primer 123: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-S-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolin-4-karbonil)-[l,rbifenil]-3-
karboksamida
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metir)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg. 0.63 mmol) i morfolino(4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanona (260 mg. 0.82 mmol) u dioksanu (10 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na?COi (1.13 mL. 2.27 mmol), a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh-,)i (72 mg, 0.06 mmol). a Čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masaje grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (250 mg, 68%). LCMS: 587.35 (M + 1)<+>; HPLC: 93.85% (% 254 nm)
(R,; 4.535; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(DMSO-c4,400 MHz) 5 11.46 (bs. IH), 8.21 (t. IH), 7.69-7.71 (m, 211), 7.45-7.49 (m. 3H). 7.26 (s. IH). 5.86 (s, IH), 4.29 (d. 2H..1 = 4Hz). 3.82-3.84 (m. 2H). 3.48-3.60 (m. 8H). 3.23-3.25 (m. 2H), 3.09-3.11 (m, 3H). 2.26 (s. 3H), 2.21 (s, 3H). 2.11 (s. 3H). 1.52-1.68 (m, 4H), 0.83 (t, 3H, J = 6.8 Hz).
Primer 124: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(l-(metilsu]foniI)piperidin-4-il)amino)-4-metiI-4'-(morfoIinometil)-| 1,1 '-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida (0.2 g, 0.35 mmol) u DCM (8 mL) su dodani trietil amin (0.106 g. 1.04 mmol) i mesil hlorid (0.08 g, 0.69 mmol) na 0° C. Nastala reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, u reakcionu smešu je dodana voda. a smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje sirovi materijal koji je tada rastvoren u metanolu (10 mL) pa mu je dodan NaOH (0.021 g, 0.52 mmol). Ova smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 h. Po završetku, ekstrakcija je provedena uz pomoć 20% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, koncentrovani. a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem koje daje jedinjenje iz naslova (0.1 g. 45.45%).
LCMS: 650.85 (M + 1)<+>; HPLC: 95.37%( a254 nm) (R,; 4.258;Postupak:Kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna laza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-cžć.400 MHz) 6 11.45 {bs, IH). 8.18 (t. IH), 7.57-7.59 (m. 311), 7.37-7.39 (m. 211), 7.22 (s, IH). 5.86 (s, IH), 4.29 (d. 2H, .1 = 4.4Hz). 3.58 (m, 4H), 3.48-3.52 (m. 4H). 3.09-3.11 (m. 2H). 2.94 (m. IH), 2.82 (s. 3H). 2.67-2.72 (m, 2H). 2.36 (m, 4H). 2.24 {s. 3H), 2.21 (s. 311). 2.10 (s. 3H), 1.81-1.83 (m. 2H), 1.59-1.61 (m. 2H). 0.84 (t. 3H. J = 6 Hz).
Primer 125: sinteza 5-((l-acetiIpiperidin-4-il)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4,-(morfolinometil)-[l,r-bifenil)-3-karboksamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiriđin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-ir)amino)-4-metil-4,-(morfolinometil)-[l,r-bifenilj-3-karboksamida {0.25 g, 0.44 mmol) i sirćetne kiseline {0.052 g, 0.86 mmol) u DMF (3 mL) su dodani EDCI (0.123 g, 0.64 mmol) i HOBt (0.087 g, 0.64 mmol ), a tada još i trietilamin (0.108 g. 1.06 mmol ). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku reakcije je dodana voda, a ekstrakcija je provedena uz pomoć 10%> MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog NaiS04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.1 g. 37.31 %).
LCMS: 614.75 (M + 1)<+>; HPLC: 97:57%(@254 nm) (R,; 4.140;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51 -12 min 5% B);'H NMR (DMSO-t/tf. 400 MHz) S 11.45 (bs. IH). 8.19 (t, IH). 7.57 (d. 2H, J = 7.2 Hz). 7.37-7.39 (m, 3H). 7.22 (s.
1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d. 2H. J = 4.4Hz). 3.78 (m, 1 H). 3.49-3.58 (m. 6H). 2.99-3.08 (m, 4H). 2.36 fm, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s. 3H). 1.97 (s. 3H). 1.74 (m. 2H). 1.31-1.52 <m. 2H), 0.83 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 2 protona su spojena sa signalom od rastvarača.
Primer 126: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metiI-4'-(morfolinometiI)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida
Korak1:sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-
metilfenil)amino)piperidin-l-karboksilata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (4.5 g, 18.44 mmol) i tert-butil 4-oksopiperidin-1 -karboksilata (11.01 g. 55.33 mmol) u dihloroetanu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (6.64 g, 110.6 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (11.72 g. 55.28 mmol) na 0° C, a reakciona masaje mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo željeno jedinjenje (5.2 g, 66.24%).
Korak 2: sintezatert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)(etil)-amino)-piperidin-1-karboksilata
U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidin-l-karboksilata (5g, 11.70 mmol) i acetaldehida {1.58 g. 35.12 mmol) u dihloroetanu (60 mL) je dodana sirćetna kiselina (4.24 g. 70.66 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturilokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (7.44 g. 35.09 mmol) na 0° C. a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakciona masa je ugašena sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom, a dobiveni sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio željeni produkt (5 g. 93.45%).
Korak3:sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoil)-2-metil-fenil)(etil)amino)pipcridin-l-karboksilata
Vodeni NaOH (0.7 g, 17.50 mmol) je dodan u rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidin-l-karboksilata (5 g, 10.94 mmol) u etanolu (50 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 do pH 6. a tada do pH 4 uz pomoć limunske kiseline. Ekstrakcija je provedena uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (4.8 g, 99.17%).
Malopre pomenuta kiselina (4.8 g, 10.90 mmol) je tada rastvorena u DMSO (20 mL) paje dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetiIpiridm-2(lH)-on (3.32 g, 21.81 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (8.50 g, 16.35 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela kako bi se dobio tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-i 1 )metil )karbamoiI )-2-metil -
feniI)(etil)amino)piperidin-l-karboksilat (4.4 g. 70.96%).
Korak 4:sintezatert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metiI)karbamoil)-4-metiI-4'-(morfolinometiI)-[l,r-bifenilj-3-il)(etil)amino)piperidin-1-karboksilata
U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-fenil)(etil)amino)piperidin-l-karboksilata (2 g, 3.47 mmol) i 4-(morfolinometil)-fenil)boronske kiseline (1.58 g, 5.21 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan Na2C0.3 (1.32 g, 12.45 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh04 (0.4 g, 0.35 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 90° C tokom 3.5 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vođom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije preko silika-gela kako bi se dobilo željeno jedinjenje (1.6 g, 68.66%).
Korak5:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-
il)amino)-4-metil-4'-(niorfolinonietil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida
tert-butil 4-((5-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbanioil)-4-met!l-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-il)(etil)arnino)pipeirdin-l-karboksilat (1.3 g. 0.1.93 mmol) je rastvoren u DCM (20 mL). tada je dodan TFA (10 mL) na 0° C. a sve je mešano na st tokom 2 h. Po završetku reakcije, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, reakcija je ugašena uz pomoć vodenog natrijum bikarbonata, a smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata pa su koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobila sirova materija koja je bila prečišćena uz pomoć ispiranja acetonitrila koje daje jedinjenje iz naslova (0.9 g. 81.81%).
LCMS: 572.35 (M + 1)<+>; HPLC: 96.59%( a254 nm) (R,: 3.964;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-J6,400 MHz) S 8.19 (t, IH). 7.57 (d, 2H, .1 = 8 Hz), 7.38 (m. 3H), 7.21 (s. IH). 5.86 (s. IH), 4.29 (d, 211, J = 4Hz), 3.48-3.57 (m, 8H). 2.98-3.10 (m, 4H). 2.88 (m. 1H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). 1.70-1.73 (m. 2H), 1.48-1.51 (m. 2H). 0.84 (t. 3H. J = 6.8 Hz).
Primer 127: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(l-pivaloilpiperidin-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometiI)-[lJ'-bifenil|-3-karboksamida
N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(ctil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenilj-3-karboksamid (0.2 g. 0.34 mmol) je rastvoren u DMSO (2 mL) i pivalinskoj kiselini (0.107 g, 1.04 mmol). a tada je dodan trietil amin (0.106 g, 1.04 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (0.27 g, 0.52 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona smeša je izlivena u led. ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobio sirovi materijal koji je tada prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.14 g, 60.86%).
LCMS: 656.65 (M + lf; HPLC: 97.51%(( §254 nm) (R,; 4.555;Postupak:kolona; YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5%) B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); ! H NMR (DMSO-t/rt. 400 MHz) 8 11.45 (bs. IH), 8.18 (t, IH), 7.57 (d, 2H. J - 7.2). 7.37-7.40 (m. 3H). 7.21 (s. 1 H). 5.86 (s, IH). 4.21-4.29 (m, 4H). 3.49-3.58 (m,6H). 3.06-3.08 (m,3H), 2.73-2.79 (m. 2H), 2.37
<m.4H), 2.24 (s.3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s,3H), 1.75-1.78 (m, 2H), 1.38-1.41 (m. 211). 1.17(s. 9H), 0.83 (t. 3H, J = 7.2 Hz).
Primer 128: sinteza 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinonietil)-|l,r-bifenill-3-karboksamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-3-(((l r,4r)-4-((tert-
butoksikarboniI)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g. 20.57 mmol) i tert-butil (4-oksocikloheksil)karbamata (5.6 g, 26.74 mmol) u dihloroetanu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (7.4 g, 123.33 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (13 g. 61.72 mmol) na 0° C. a reakciona masaje mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija je ugašena uz pomoć vodenog natrijum bikarbonata, organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografija kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.5 g. 38.88%).
Korak2: sinteza metil 5-bromo-3-((((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)cikloheksiI)-(etil)-amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-((( lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (1.4 g. 3.18 mmol) i acetaldehicla (0.419 g, 9.52 mmol) u dihloroetanu (20 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.14 g. 19.0 mmol), a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (2 g, 9.43 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakcija je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom. organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.25 g, 84.45%).
Korak-3: sinteza tert-butil-((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil)karbamata
Vodeni NaOH (0.16 g, 4.0 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-((( lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metilbenzoata (1.25 g, 2.67 mmol) u etanolu (10 mL). a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 do pH 6. a tada je pH podešen do 4 uz pomoć limunske kiseline. Ekstrakcija je provedena uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (1.1 g, 90%).
Malopre pomenuta kiselina (1.1 g, 2.42 mmol) je tada rastvorena u DMSO (i 0 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.736 g. 4.84 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP {1.88 g. 3.61 mmol). a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NasSO-i. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.75 g, 53.57%).
Korak 4: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metiO-karbamoilH-metiM'-tmorfolinometiO-fLr-bifenill^-ilJKetilj-amino)-cikloheksilj-karbamata
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-f(5-bromo-3-({(4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenir)(etil)amino)cikloheksil)karbamata (0.7 g, 1.19 mmol) i (4-(morfoIinometil)fenil)-boronske kiseline (0.489 g, 1.78 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan NaiCCi (0.454 g, 4.28 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.137 g, 0.119 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 90° C tokom 3.5 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM Spojeni organski slojevi su osušeni preko NazS04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.55 g. 67.48%).
Korak 5: sinteza 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-4-metil-4,-(morfolinometil)-|l,r-bifenilJ-3-karboksamida tert-butil ((lr,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)-metir)-karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[lJ'-bifenil]-3-il)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamat (0.55 g. 0.80 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL). tada je dodan TFA (3 mL ) na 0° C. a smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku reakcije, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a reakcija je ugašena sa vodenim natrijum bi karbonatom pa je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je tada prečišćen uz pomoć ispiranja sa acetonitrilom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.42 g. 89.36%).
LCMS: 586.45 (M + 1)<+>; HPLC: 98.38% (@ 254 nm) (R,; 3.667; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-tk 400 MHz) S 8.18 (t. IH), 7.56 (d. 2H. J = 7.6). 7.35-7.38 (m. 3H), 7.18 (s, IH), 5.86 (s. IH). 4.29 (d. 2H. J = 3.2Hz), 3.58 (m, 4H). 3.49 (m. 2H), 3.09-3.10 (m. 2H). 2.63-2.66 (m. 2H). 2.37 (m. 4H), 2.21 (s. 3H), 2.20 (s. 3H). 2.11 (s. 3H). 1.75-1.78 (m. 4H), 1.40-1.43 (m. 2H). 1.05-1.08(m, 2H). 0.83 (t, 3H, .1 = 6.4 Hz).
Primer 129: sinteza 5-(((lr,4r)-4-acetamidocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etii)amino)-N-{(4,6-dimetil-2-okso-],2-dihiđropiridin-S-iOmetiO^-metil^'-fmorfoiinometiO-fl.r-bifenill-S-karboksamida (0.25 g. 0.42 mmol) i sirćetne kiseline (0.151 g. 0.85 mmol) u DMF (3 mL) su dodani EDC1 (0.123 g. 0.64 mmol) i HOBt (0.057 g, 0.42 mmol), a tada još i trietilamin (0.064 g. 0.63 mmol) dok je reakciona masa mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku reakcije je dodana voda. a ekstrakcija je provedena uz pomoć 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko bezvodnog Na2S04. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.11 g, 41.04%).
LCMS: 628.35 (M + 1)<+>; HPLC: 98.79% (@ 254 nm) (R,: 3.902:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-J*. 400 MHz) 8 11.45 (bs, IH), 8.18 (t. IH). 7.56-7.66 (m. 3H). 7.36-7.38 (m. 3H). 7.18 (s. IH), 5.86 (s, IH), 4.29 (d, 2H, J = 4Hz). 3.99 (m. IH), 3.48-3.58 (m, 6H), 3.10-3.11 (m, 2H). 2.67 (m, 1 H). 2.37 (m, 4H). 2.22 (s. 3H), 2.21 (s. 3H). 2.11 (s. 3H). 1.74-1.79 (m. 6H). 1.43-1.46 (m, 2H). 1.08-1.11 (m. 2H), 0.81-0.94 (t, 4H).
Primer 130: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-fluoro-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenil|-3-karboksamida
Korak1: 6-fluoro-2-tnetil-3-nitrobenzojeva kiselina
Rastvor 2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline (2 g, 12.98 mmol) u koncentrovanoj H2SO4{15.77 ml, 295.85 mmol) je ohlađen đo -5° C u vazđušnoj banji sa smešom aceton/led. U reakcionu smešu kap po kap je dodana smeša koncentrovane azotne kiseline (1.08 mi. 16.87 mmol) i koncentrovane H2SO4(1 ml, 18.76 mmol) na -5° do 0° C tokom 15 min. Bledo-žuta reakciona smeša je mešana na -5° do 0° C tokom 30 min pre no je izlivena u led (100 g). Nastao precipitat je filtriran i rastvoren u EtOAc (50 ml), a organska faza je isprana sa dejonizovanom vodom (25 ml), a tada sa slanicom (25 ml). Organska faza je osušena preko MgS04- filtrirana i koncentrovana pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 2 g (77%) 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline u formi čvrste materije. LC-MS 99%. 1.31 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z= 198.0, 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 5 ppm 8.04 (dđ, .1 = 9.1. 5.0 Hz, 1H). 7.16 (t. J = 8.6 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3H).
Korak 2: sinteza 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzojeve kiseline
U rastvor 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (100 mg, 0.5 mmol) u koncentrovanoj H2SO4(0.5 ml. 9.38 mmol) je dodan 1.3-dibromo-5.5-dimetilimiđazolidin-2,4-dion (79 mg, 0.28 mmol) na sobnoj temperaturi pod azotom. Reakciona smeša je mešana tokom 6 h pri čemu se pojavljuje precipitat. Reakciona smeša je polako dodavana u dejonizovanu vodu (3 ml), a nastao precipitat je filtriran. Čvrsta materija je isprana sa dejonizovanom vodom (2 mi) pa je osušena na vazduhu tokom 2 h kako bi se dobilo 123 mg (88%) 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzojeve kiseline u formi bledo-žute čvrste materije. LC-MS 94%, 1.61 min (LC-MS postupak od 3 min). m/z=275.9/277.9 (ES-). 'H NMR (500 MHz, hlorofonn-d) o ppm 8.25 (d. J = 6.2 Hz. IH), 2.58 (s, 3H).
Korak 3: sinteza metil 3-bromo-2-lfuoro-6-metil-5-nitrobenzoata
U rastvor 3-bromo-2-lfuoro-6-metil-5-nitrobenzojeve kiseline (2.41 g, 8.67 mmol) u N.N-dimetilformamidu (25 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom je dodan K.'CO, (2.4 g. 17.34 mmol), a tada i jodometan (0.7 ml. 11.27 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h pre no je razređena sa dejonizovanom vodom (100 ml) pa je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 ml). Spojene organske faze su isprane sa zasićenim NaHCCh(vod.) (50 ml), a tada su osušene preko MgSO-i, filtrirane i koncentrovane pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen dva puta uz pomoć FCC (50 g silike, Isolut-punjenje, gradijent eluenata; 98:2 heptan:EtOAc do 9:1 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo 2.43 g (89%) metil 3-bromo-2-lfuoro-6-metil-5-nitrobenzoata u formi bele Čvrste materije. LC-MS 99%, 2.18 min (LC-MS postupak od 3 min). m/z=bez ionizacije. 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 8 ppm 8.22 (d, J = 6.2 Hz, IH); 4.00 (s. 3H); 2.48 (s, 3H).
Korak 4: sinteza metil 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata
U rastvor metil 3-bromo-2-tluoro-6-metil-5-nitrobenzoata (2.43 g. 8.32 mmol) u metanolu (80 ml) na sobnoj temperaturi je dodan amonijum hlorid (4.37 g, 83.2 mmol). a tada i dejonizovana voda (40 ml). Smeša je grejana do 70° C (na vazduhu) pre dodavanja gvožđa (2.79 g, 49.92 mmol). Reakciona masa je postala smeđa tokom 2.5 h kolko je bila mešana na 70° C. Ova smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature pa je filtrirana kros kieselgel (silika-gel). Filterska pločica je isprana sa MeOH (80 ml), a tiltrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u zasićenom NaHCO^ vod. ) (50 ml) i EtOAc (150 ml). Faze su odvojene, a organska faza je isprana sa zasićenim NaHC03(vod.) (50 ml) pre no je osušena preko MgS04, filtrirana i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (50 g silike. Isolut-punjenje, gradijent eluenata: 95:5 heptan:EtOAc do 7:3 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo 2.23 g (95%, korigovani prinos: 77%) metil 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata u formi žutog ulja. Materijal je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 81%, 1.87 min (LC-MS postupak od 3 min). m/z=261.9/263.9, 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 8 ppm 6.89 (d. J = 6.0 Hz. 1 H). 3.94 (s. 3H). 3.60 (s. 2H). 2.08 (s. 3H).
Korak 5: sinteza metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oksan-4-il)amino|benzoata
U rastvor metil 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata (2.23 g, 8.08 mmol) u 1.2-dihloroetanu (32 ml) na sobnoj temperature i pod azotom je dodan oksan-4-on (1.49 ml, 16.17 mmol). a tada i sirćetna kiselina (2.78 ml. 48.5 mmol). Ovaj rastvor je mešan tokom 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida(5.14 g, 24.25 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 5.5 h u smeši nije preostao ne-reagovani početni materijal kao sta je pokazala analiza uz pomoć LCMS. Dodana je dejonizovana voda (32 ml), a smeša je neutralizovana uz pomoć čvrste NaHCO;*. Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc {2 x 32 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgSO-i, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (50 g silike, Isolut-punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 6:4 heptan.EtOAc) kako bi se dobilo 2.3 g (82%) metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oksan-4-il)aminojbenzoata u formi prljavo-bele čvrste materije. LC-MS 99%, 2.13 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z=245.9/247.9,<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 6.78 (d, .1 = 5.9 Hz. IH), 4.01 (dt J = 11.9. 3.4 Hz. 211); 3.93 (s, 311), 3.53 (td, .1 = 11.7, 2.1 Hz, 2H). 3.49 - 3.42 (m, IH). 3.34 (s. IH). 2.04 (s. 5H), 1.48 (qd, J = 11.0, 4.2 Hz.
2H).
Korak6:sinteza metil 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)aminoj-2-fIuoro-6-metilbenzoata
U rastvor metil 3-bromo-2-<f>luoro-6-metil-5-f(oksan-4-il)amino]benzoata (500 mg, 1.44 mmol) u 1,2-dihloroetanu (15 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom je dodan acetaldehid (0.81 ml. 14.44 mmol). a tada i sirćetna kiselina (0.5 ml, 8.67 mmol). Ovaj rastvor je mešan tokom 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (3.06 g. 14.44 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 2 h je dodana dejonizovana voda (20 ml), a smeša je neutralizovana sa Čvrstim NaHC03. Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgSO-t. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (10 g silike. Isolut-punjenje, gradijent eluenata 95:5 heptamEtOAc do 85:15 heptamEtOAc) kako bi se dobilo 519 mg (96%) metil 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-tluoro-6-metilbenzoata u formi bledo-žutog ulja koje postaje čvrsto nakon stajanja. LC-MS 94%, 2.45 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z=373.9/375.9,
<>>H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 7.33 (d, J = 6.6 Hz. IH). 3.95 (s. 5H), 3.32 (td, .1 = 11.7, 2.1 Hz, 2H). 3.00 (q, J = 7.1 Hz. 2H), 2.88 (U. J = 10.9. 4.0 Hz, IH), 2.25 (s, 3H), 1.73 - 1.54 (m,4H), 0.85 (t,J = 7.1 Hz, 3H).
Korak7:sinteza 3-bromo-5-[etil(oksan-4-iI)amino|-2-fluoro-6-metiIbenzojeve kiseline
U rastvor metil 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoata (519 mg. 1.39 mmol) u tetrahidrofuranil (13 ml) i MeOH (4 ml) je dodan 4M NaOH (13.87 ml). Reakciona smeša je mešana na 50° C (na vazduhu) tokom 72 h. Reakciona smeša je zakiseljena do pH 2-3 uz pomoć 6M HCI paje ekstrahovana sa DCM (5x15 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgS04. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 526 mg (95%) 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzojeve kiseline u formi bež pene. LC-MS 88%, 1.77 min (LC-MS postupak od 3 min). m/z=359.9/361.9. 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 5 ppm 7.43 - 7.31 (m. IH), 4.00 (d. J = 11.3 Hz. 2H), 3.41 - 3.29 (m. 2H). 3.16 - 2.91 (m, 3H), 2.40 (s, 3H), 1.84 - 1.59 (m. 411). 0.99 - 0.82 (m. 311).
Korak8:sinteza 3-bromo-N-|(4,6-dimetil-2-okso-l12-dihidropiridin-3-il)metil|-5-
|etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida
U rastvor 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-iluoro-6-metilbenzojeve kiseline (200 mg, 0.56 mmol) u N.N-dimetilformamidu (2 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom je dodan PyBOP (346.72 mg, 0.67 mmol), a tada i N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amin (145 pl. 0.83 mmol) i 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-dihidropiridin-2-on (89%, 104 mg, 0.61 mmol). Nakon mešanja tokom l h na sobnoj temperaturi u smeši nije preostao početni materijal kao šta je utvrđeno uz pomoć LCMS. U reakcionu smešu je dodan EtOAc (20 ml), a smeša je tada isprana sa dejonizovanom vodom (5 ml) pa sa zasićenim NaHCO^vod.) (3x5 ml ). Organska faza je osušena preko MgSO-i. filtrirana i koncentrovana pod smanjenim pritiskom.
Ostatak je tada prečišćen uz pomoć FCC (5 g silike, Isolut-punjenje. gradijent eluenata; 100% DCM do 97:3 DCM:MeOH) kako bi se dobilo 112 mg (41%) 3-bromo-N-[(4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-melilbenzamida u formi bledo-žute čvrste materije. LC-MS 97%. 1.85 min (LC-MS postupak od 3 min). m/z=494.0/496.0, 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 5 ppm 11.66 (s. 1H). 7.23 (d, J = 6.5 Hz, I H), 5.95 (s, IH). 4.65 - 4.43 (m. 2H). 3.93 (d. J = 11.0 Hz. 2H). 3.38 - 3.22 (m. 2H), 2.97 (q. .1 = 7.0 Hz. 2H). 2.91 - 2.79 (m. I H). 2.37 (s, 3H). 2.24 - 2.11 (m. 611), 1.72 - 1.53 (m, 4H). 0.83 (t. J = 7.0 Hz. 3H).
Korak9: sintezaN-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-fluoro-4-metil-<4>'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida
U rastvor 3-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil]-5-retil(oksan-4-il)amino]-2-tluoro-6-metilbenzamida (112 mg, 0.23 mmol) u 1,4-dioksanu (2 ml) i vodi (1 ml) je dodan 4-[4-(4.4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolin (103 mg, 0.34 mmol), a tada i Na^COi (84.04 mg, 0.79 mmol ). Rastvor je očišćen sa azotom tokom 5 min pre dodavanja smeše paladijurmtrifenilfosfin (1:4) (26 mg. 0.02 mmol). Žuta smeša je tada očišćena sa azotom tokom 5 min pre ponovnog grejanja do 100° C. Nakon 4 h. LCMS je pokazao da ne-reagovani početni materijal nije preostao. Potamnela reakciona smeša je razređena sa dejonizovanom vodom (5 ml) pa je ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (5x5 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (5 g silike, Isolut-punjenje, gradijent eluenata: 99:1 DCM:MeOH do 95:5 DCM:MeOH) kako bi se dobilo 69 mg (52%) jedinjenja iz naslova u formi prljavo-bele čvrste materije. LC-MS 97%. 2.70 min (LC-MS postupak od 7 min), m/z=591.2. 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 12.10 (br s. IH). 7.53 - 7.30 (m. 4H), 7.13 (d, J = 7.4 Hz, IH), 7.07 (br s. lH).5.88(s. 1 H). 4.55 (br s. 2H), 3.93 (d..1 = 11.2 Hz, 2H), 3.73 - 3.69 (m. 4H). 3.52 (s, 2H). 3.30 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 3.02 (q, J = 6.9 Hz, 2H). 2.92 (ddd, J = 14.6, 10.7. 3.7 Hz, IH), 2.46 (s. 4H). 2.35 (s. 3H). 2.26 (s. 3H). 2.12 (s, 3H). 1.79 - 1.43 (m, 4H). 0.86 (t..1 = 7.0 Hz, 3H).
Primer 131: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-I,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-((3-oksomorfolino)metiI)-[l,r-bifenilJ-3-karboksamida
Korak 1: sinteza 4'-(bromometil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l,l'-bifeniI|-3-karboksamida
U mešani rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(hidroksimetil)-4-metil-[lJ'-bifenil]-3-karboksamida (450 mg. 0.89 mmol) u DCM (10 mL), koji je bio ohlađen na ledu. su dodani trifenil fosfin (469 mg. 1.78 mmol) i karbon tetrabromid (tetrabromometan) (741 mg, 2.25 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da dosegne sobnu temperaturu, a mešanje je nastavljeno tokom 16 h. Po završetku, odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje 8 (300 mg. 59%).
Korak2:sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4-metiI-4'-((3-oksomorfolino)metil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U mešani rastvor 4'-(bromometil)-N-(4.6-dimetil-2-okso-l.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[l, 1 '-bifenil]-3-karboksamida (250 mg, 0.44 mmol) i morfolin-3-on (67 mg, 0.66 mmol) u DMF (30 mL), koja je bila ohlađena na ledu, je dodan natrijum hidrid (27 mg, 0.66 mmol). Nakon 10 min, led je odstranjen, a mešanje je nastavljeno tokom 16 h na sobnoj temperaturi. Po završetku je dodana voda, a smeša je ekstrahovana sa DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije i prep. HPLC daje jedinjenje iz naslova (75 mg, 29%). LCMS: 587.35 (M + 1)<+>; HPLC: 98.69% (@ 254 nm) (R,; 4.604;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-ć/6\ 400 MHz) 8 11.50 (bs.l H), 8.25 (m.lH),7.65 (m,2H), 7.37-7.35 (m. 3H). 5.87 (s. 111). 4.59 (m, 211), 4.29 {d. 2H). 4.12 (s, 2H), 3.82 (m, 4H). 3.28 (m. 4H). 3.17-3.09 (m. 2H). 2.32-2.28 (m, 4H). 2.22 (s. 3H), 2.11 (s, 3H),1.57 (m, 4H). 0.86 (t, 3H).
Primer 132: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifeniIj-3-
karboksamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)benzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (2.5 g, 10.24 mmol) i dihidro-2H-tiopiran-4(3H)-on (1.42 g, 12.29 mmol) u dihloroetanu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (3.6 ml, 61.47 mmol), a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Reakciona smeša je ohlađena do 0° C pa je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (6.5 g, 30.73 mmol), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je neutralizovana sa zas. NaHC03, a jedinjenje je ekstrahovano u DCM. osušeno preko Na:S04i koncentrovano pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje sirovog materijala uz pomoć kolonske hromatografije daje metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)benzoat (2.5 g, 71.0%).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-
metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)benzoata (2.5 g, 5.83 mmol) i acetaldehida (513 mg, 11.66 mmol) u dihloroetanu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (2.0 mL 34.9 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je ohlađena do 0° C paje dodan natrijum triacetoksiborohidrid (3.7 g. 17.49 mmol). a smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je neutralizovana sa zas. NaHCO:,, a jedinjenje je ekstrahovano u DCM. osušeno preko Na2S04 i koncentrovano pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (2.0 g. 74.0%).
Korak 3: sinteza 5-bromo-IN-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-iI)amino)-2-metilbenzamida
Smeša metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (2.0 g. 5.39 mol) i NaOH (0.323 g. 8.08 mol) u 3 ml smeše etanol.voda (2:1) je grejana na 70° C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće, sirovi materijal je podeljen između vođe i DCM. a organski sloj je osušen preko Na2SO-i. koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 1.8 g kiseline.
Smeša sa sirovom kiselinom (1.8 g. 5.04 mmol). 3-(aminometil)-4.6-dimetiipiridin-2(lH)-on (1.53 mg, 10.08 mmol) i PyBOP (3.9 g, 7.56 mmol) je mešana u 3 ml DMSO na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razređena sa vođom, a jedinjenje je ekstrahovano u DCM. Organski sloj je osušen preko NaiSO-j. koncentrovan pod smanjenim pritiskom pa je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (elucija sa 4% MeOH u DCM) na silika-gelu (veličina sita: 100-200) kako bi se dobio 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (1.5 g, 60.7%). Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida Rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (800 mg, 1.629 mmol). 4-(4-(4,4,5.5-tetrametil-l ,3.2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (740 mg, 2.443 mmol), natrijum karbonata (621 mg. 5.86 mmol) u 20 ml dioksana je degaziran uz pomoć argona tokom 20 min. a tada je u smešu dodan Pd(PPhV) (188 mg, 0.16 mmol), a smeša je grejana na 100° C preko noći. Reakciona masa je ohlađena do sobne temperature pa je razređena sa vodom, jedinjenje je ekstrahovano u 10% MeOH u DCM. osušeno preko Na2S04. koncentrovano. a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (700 mg. 73.0%).
LCMS: 589.25 (M+l)<+>; HPLC: 96.75%( a254 nm) (R.: 4.869; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DzO. 400 MHz) 8 7.78-7.89 (m,4H), 7.64-7.66 (m. 2H). 6.33 (s. IH), 4.52 (s. 2H). 4.45 (s. 2H).4.13( d. J=13.2 Hz, 2H), 3.77-3.89 (m, 5H), 3.49(d. J=12.0 Hz. 2H). 3.30-3.33 (m, 211). 2.73-2.82 (m, 5H). 2.44, 2.38, 2.30 (3s. 9H), 1.89 (m, 2H), 1.06 (t, ,/= 7.2 Hz. 3H ).
Primer 133: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(l-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[ 1,1 '-bifenil j-3-karboksamida
U ohlađeni rastvor N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiriđin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida (200 mg, 0.34 mmol) u 2 ml DCM je dodan m-CPBA (70 mg, 0.4] mmol) na 0° C. a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h (reakcija je praćena uz pomoć TLC ). Reakcija je ugašena sa zas. NaHCO.3, jedinjenje je ekstrahovano u DCM, osušeno preko Na2SO-t, koncentrovano pod smanjenim pritiskom i prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (100-200) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 29.3%).
LCMS: 605.25(M + 1)<+>; HPLC: 44.06% & 54.42%( ci254 nm) (R,; 4.092&4.448:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B;0.05%TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR
(DMS0-</6\ 400 MHz)5 11.45 (s.lH). 8.18 (UH). 7.59-7.57 <m.2H), 7.39-7.37 (m. 3H), 7.23-7.21 (m,lH), 5.86 (s, IH), 4.29 (d. 2H,J=4 Hz).3.58 (m,3H), 3.48(m, 3H). 3.18-2.86 <m.5H). 2.67-2.59 (m.4H), 2.37-2.33 (m,4H), 2.25 (s. 3H), 2.21 (s, 3H). 2.10 (s. 3H),1.77 (m. 2H).0.85
(UH).
Primer 134: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3',4-dimetil-4,-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamid
Jedinjenje 134 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 131.Analitički podaci:LCMS: 587.4 (M + 1)"; HPLC: 98.76%( a,254 nm) (R,; 4.11: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.:30° C: stopa protoka: 1:4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-rfe, 400 MHz) 5 11.45 (bs. 1 H), 8.17 (bs. 1 H), 7.41-7.20 (m, 5H), 5.85 (s, IH), 4.28 (d, J = 4 Hz. 2H), 3.82 (d. J = 10 Hz. 2H), 3.55 (m, 4H). 3.44 (bs. 2H). 3.27-3.22 (m. 2H). 3.09-3.01 (m, 3H), 2.39 (m, 7H), 2.23 (s. 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s. 3H). 1.67-1.51 (m, 4H). 0.83 (t. .1 = 6.8 Hz, 3H). Primer 135: 4-((3,-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5'-(etiI(l-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4'-metil-[l,r-bifenil|-4-il)metiI)morfolin-4-oksid
Tokom malopre opisanog prečišćavanja uz pomoć prep. HPLC takođe je izolovan i 4-((3'-(((4,6-d!metil-2-okso-L2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoir)-<5>'-(etil(l-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4'-metil-[ 1,1 '-bifeni l]-4-il »metil)morfolin 4-oksid.
LCMS: 621.40 (M + 1)<+>: HPLC: 98.69% (@ 254 nm) (R,; 4.157;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-flfc. 400 MHz) 5 12.18 (s, IH). 11.45 (s, IH), 8.20 (t, IH), 7.79 (d, 2H..1=6.8 Hz), 7.62 (d. 2H. .1=6.8 Hz), 7.45 (s. IH), 7.27 (s. 2H), 5.86 (s. IH). 4.89 (s, 211). 4.30 (d, 2H, .1=4 Hz), 4.00-3.80 (m, 7H). 3.19 (m, 2H), 3.00-2.85 (m. 4H). 2.70-2.60 (m. 2H). 2.30 (bs, 2H), 2.26 (s. 3H). 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.75 (m. 2H), 0.87 (t. 3H, .1=6 Hz).
Primer 136: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((l,l-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-iI)(etil)amino)-4-metiI-4'-(morfolinometil)-{l,r-bifenil|-3-karboksamida
U ohlađeni rastvor jedinjenja N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(niorfolinometil)-[l.l '-bifeni lj-3-karboksamid (200 mg, 0.34 mmol) u 2 ml DCM je dodan m-CPBA (117 mg. 0.68 mmol ) na 0° C, a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h (reakcija je praćena uz pomoć TLC). Reakciona masaje ugašena uz pomoć zasićenog NaHCO?pa je ekstrahovana in DCM, osušena preko Na^SCMi koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Nakon kolonske hromatografije. jedinjenje iz naslova je dobiveno u formi TFA soli nakon dodatnog prečišćavanja uz pomoć prep. HPLC (80 mg. 38.1%).
LCMS: 621.45 (M + 1)<+>: HPLC: 99.93% (@ 254 nm) (R.: 4.522;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5%> B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B):<!>H NMR (DMSO-đeAOOMHz) 6 12.22 (s, IH). 11.45 (s. IH). 8.20 (t, 1H), 7.78 (d. 2H..1=8 Hz), 7.61 (d. 2H. J=8 Hz), 7.43 (s, IH), 7.28 (s. IH), 5.86 (s, 1H). 4.89 (s, 2H). 4.29 (d, 2H, .1=4.4 Hz). 4.00-3.80 (m. 7H). 3.32 (m, 2H). 3.04 (m, 4H), 2.65-2.55 (m, 2H), 2.26 (s. 3H). 2.21 (s. 3H). 2.17 (m. 2H). 2.10 (s, 3H), 1.78 (m, 2H). 0.83 (t. 3H, J=6.4&7.2 Hz).
Primer 137: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3il)metil)-5-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4'-dimetil-{l,r-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4'-dimetil-[l,l'-bifenil]-3-karboksamida (200 mg, 0.35 mmol) u dihlorometanu na sobnoj temperaturi je dodan m-CPBA (60 mg, 0.35 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći isto na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija je ugašena uz pomoć dodavanja zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. a smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno ispiranjem sa rastvaračem daje jedinjenje iz naslova (120 mg, 58%). LCMS: 589.35 (M)<s>: HPLC: 95.56%( a254 nm) <R,; 4.143:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ćk 400 MHz) 5 11.5 (bs. IH). 8.22 (t. IH), 7.66-7.60 (m. 4H). 7.42 (s, IH), 7.21 (s, IH,), 5.85 (s, III), 4.34-4.28 (m, 4H,), 4.12-4.07 (m. 2H). 3.83-3.81 (m. 2H). 3.62-3.60 (m, 2H). 3.42-3.39 (m, 2H), 3.33-3.22 (m. 2H), 3.16-3.08 (m. 3H). 2.65-2.62 (m. 2H), 2.25-2.10 (m, 9H), 1.67-1.51 (m, 4H),0.83(t.3H, J=6.8Hz).
Primer 138: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino)-( 1 ,l'-biphcny! j-3-karboksamida
Korak1:sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline
Rastvor 5-bromo-2-metilbenzojeve kiseline (5.0 g. 23 mmol) u koncentrovanoj LI2SO4 (27 ml. 512 mmol) je ohlađen do 5° C u banji sa smešom aceton/led. Smeša koncentrovane azotne kiseline (1.9 ml, 30 mmol) i koncentrovane FI2SO.1 (2.8 ml, 52 mmol) je dodana kap po kap u reakcionu smešu na -5° do 0° C tokom 15 min. Žuta reakciona smeša je mešana na -5° do 0° C tokom 2 h pri čemu je nastao žuti precipitat. Reakciona smeša je izlivena u led (150 g), a precipitat je tada sakupljen uz pomoć filtracije. Precipitat je osušen na vazduhu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.5 g, 52%) u formi bledo-žute čvrste materije. LC-MS 57%, 1.82 min (LC-MS postupak od 3.5 min), bez ionizacije; 'H NMR (500 MHz. DMSO-d,,) S ppm 8.29 (s. IH) 8.13 (d, J=1.58 Hz. 1 H) 2.43 (s, 3 H).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
U rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (5.5 g. 21 mmol) u DMF (42 ml) pod azotom je dodan NaiCO.! (3.4 g, 32 mmol). a nakon toga i jodometan (2.0 ml, 32 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Smeša je razređena sa dejonizovanom vodom (150 ml) pa je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 50 ml). Spojene organske faze su isprane sa zasićenim NaHCOj(vod.) (2 x 50 ml), osušene preko MgSO-u filtrirane i koncentrovane u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.3 g. 61%) u formi žutog ulja. LC-MS 57%. 2.20 min (LC-MS postupak od 3.5 min), bez ionizacije; 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 5 ppm 7.38 (d, J=2.05 Hz, IH) 7.23 (d. J=2.05 Hz. IH) 3.20 (s. 3 11) 1.82 (s. 3 H).
Korak 3: sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
U rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (6.3 g. 21 mmol) u metanolu (150 ml) je dodan amonijum hlorid (11.0 g, 209 mmol), a tada i dejonizovana voda (75 ml). Smeša je grejana na 70° C pre dodavanja gvožđa (7.0 g. 125 mmol). Reakciona smeša je mešana na 70° C tokom 2 h pre no je ostavljena da dosegne sobnu temperaturu pa je filtrirana kroz kieselgel. Filterska pločica je isprana sa MeOH (150 ml), a tiltrat je koncentrovanin vacuo.Ostatak je rastvoren u zasićenoj NaHC03(vod.) (50 ml) i EtOAc (150 ml). Faze su odvojene, a organska faza je isprana sa zasićenim NaHC03(vod.) (3 x 50 ml), osušena preko MgSOa. filtrirana i koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (50 g silike. Isolut-punjenje, 5-20% EtOAc:heptani) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.0 g, 51%) u formi gustog bledo-žutog ulja. LC-MS 87%. 1.89 min (LC-MS postupak od 3.5 min), m/z = 243.9, 244.9, 245.9, 246.9; 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 7.34 (d, J=l .89 Hz, IH) 6.95 (d. J=l .89 Hz, 1 H) 3.88 (s, 3 H) 3.80 (br. s.. 2 H) 2.29 (s, 3 H).
Korak 4: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)amino|benzoata
U rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (3.0 g, 12 mmol) u 1,2-dihloroetanu (48 ml) pod azotom je dodan oksan-4-on (2.3 ml, 25 mmol). a tada i sirćetna kiselina (4.2 ml. 74 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (7.8 g, 37 mmol). Nakon mešanja tokom 64 h je dodana dejonizovana voda (100 ml), a smeša je neutralizovana sa čvrstim NaHCOj. Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (4 x 50 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgSOa, filtrirani i koncentrovaniin vacuo.Ostatak je prečišćen uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (50 g silike, Isolut-punjenje, 10-30% EtOAc:heptani) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.5 g 85%) u formi bele čvrste materije. LC-MS 99.8%, 2.18 min (LC-MS postupak od 3.5 min).m/z= 327.9.328.9. 329.9, 330.9; 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 5 ppm 7.24 (d, .1=1.73 Hz, II1) 6.85 (d.
.1=1.58 Hz, 1 H)4.03 (dt, .1=11.82. 3.31 Hz. 2 H) 3.88 (s. 3 H) 3.66 (br.s.. IH) 3.56 (td, .1=11.55, 1.97 Hz. 2 H) 3.47 - 3.55 (m, IH) 2.24 (s, 3 H) 2.06 (d, .1=13.56 Hz. 2 H) 1.47 - 1.60 (m. 2 H). Korak 5: sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoata
U boci sa okruglim dnom i dva grla (od 100 ml), koja je sadržavala metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoat (500 mg, 1.5 mmol) i TFA (15 mi), je dodan natrijum tetrahidroborat (1.0 g. 26 mmol). deo po deo tokom 5 min. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. a tada je grejana na 50° C tokom 3 h pa je tretirana sa dodatnim alikvotom ođ NaBH4(300 mg) tokom 25 min. Reakciona smeša je tada grejana na 60° C tokom 2 h pa je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 17 h. Reakciona smeša je tretirana sa TFA (5 ml) i NaBH4 (200 mg) paje grejana na 60° C tokom 3.5 h. Dodan je još jedan alikvot NaBH4(200 mg) tokom 15 min, zajedno sa TFA (5 ml), a grejanje je nastavljeno tokom dodatna 3 h. pre no je smeša ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je izlivena u led (75 ml) paje mešana dok se led nije stopio. Reakciona smeša je tada dovedena u bazno područje uz pomoć dodavanja 6M NaOH (vod.) (40 ml), a pH je podešen do vrednosti od 7 uz pomoć IM HC1 (vod.) (40 ml). Nastala bela suspenzija je sakupljena uz. pomoć filtracije. čvrsta materija je isprana sa vodom (20 ml) paje osušenain vacuona 40° C tokom 3 h kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (577 mg, 91%) u formi bele čvrste materije. LC-MS 98.2%. 2.42 min (LC-MS postupak od 3.5 min), m/z = 409.90. 410.9. 411.90, 412.9: 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 7.80 (d..1=1.73 Hz. 1 H) 7.41 (d..1-1.73 Hz, 111) 4.01 (dd, J=l 1.51. 4.10 Hz. 2H) 3.91 (s, 3H) 3.64 (d.J=5.20 Hz, 211) 3.32 (t, J= 11.82 Hz. 2 H) 2.99 (tt, .1=11.43. 3.63 Hz, IH) 2.48 (s. 3 H) 1.80 (dd, .1=12.53, 1.50 Hz. 2 H) 1.54 - 1.62 (m, 211). Korak 6: sinteza 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino|benzojeve kiseline
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metiI-3-[(oksan-4-il)(2.2,2-trifluoroetiI)amino]benzoata (572 mg, 1.4 mmol) u smeši THF (14 ml) i MeOH (2.1 ml) je dodan 4M NaOH (vod.) (13.9 ml). Reakciona smeša je mešana na 50° C tokom 5.5 h, a tada je mešana na sobnoj temperaturi tokom 17 h. THF je odstranjen uz pomoć koncentrovanjain vacuo.a vodeni ostatak je zakiseljen do pH 4 uz pomoć 6M HC1 (vod. ) (9.5 ml). Nastala suspenzija je ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi tokom 20 min pre sakupljanja čvrste materije uz. pomoć filtracije. Kolač od Čvrste materije je ispran sa vodom (20 ml) i osušen u visokom vakuumu tokom 2 h kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (507 mg, 90%) u formi bele čvrste materije. LC-MS 98%, 2.04 min (LC-MS postupak od 3.5 min), m/z = 395.9. 396.9. 397.9, 398.9; 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 5 ppm 7.97 (d. J= 1.73 Hz, 1H) 7.48 (d. J= 1.73 Hz. 1 H) 4.02 {dd. J=11.35. 3.94 Hz. 2 H) 3.65 {br. s, 2 H) 3.33 (t, 1=11.59 Hz. 2 H) 3.00 (tt..1=11.49. 3.80 Hz, 1 H) 2.55 (s. 3 H) 1.82 (d, J=l 1.98 Hz. 2 H) 1.55 - 1.69 (m, 2 H). OH nije vidljiv.
Korak 7: sinteza 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil|-2-metil-3-((oksan-4-i])(2,2,2-trilfuoroetil)amino]benzamida
Mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2.2.2-trifluoroetil)amino]benzoata (250 mg, 0.63 mmol) u suvom DMF (3.0 ml) na 0° C u balonu od azota je tretiran sa HATU (288 mg. 0.76 mmol) i DIPEA (220 pl, 1.3 mmol), kap po kap. Nastao rastvor je mešan tokom 5 min, a tada je tretiran sa 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-dihidropiridin-2-on (89%. 119 mg. 0.69 mmol). Nastala suspenzija je mešana na 0° C tokom 20 min. a tada je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16.5 h. Reakciona smeša je tretirana sa 3-{aminometiI)-4.6-dimetil-l,2-dihidropiridin-2-on (30 mg). Mešanje je nastavljeno tokom dodatna 23 h. a reakciona smeša je tada podeljena između vode (30 ml) i CH2CI2(20 ml). Slojevi su odvojeni, a vodena faza je ekstrahovana sa CH2CI2(3 x 20 ml). Spojene organske materije su isprane sa zasićenim rastvorom NaHCCb (vod.) (50 ml), vodom (60 ml), slanicom (2 x 40 ml), osušene preko MgSOa, filtrirane ikoncentrovane in vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (10 g SNAP punjenje. Isolera, 0-10% MeOH/CH^Cb) i smrvljen sa etrom (10 ml) uz soni likovanje. Nastao precipitat je sakupljen uz pomoć filtracije i osušenin vacuokako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (249 mg, 74%) u formi bele čvrste materije. LC-MS 100%. 4.08 min (LC-MS postupak od 7 min), m/z = 530.0. 531.0, 532.0. 533.0; 'H NMR (500 MHz. aceton) 6 10.67 (s, IH), 7.55 (d, .1 = 1.8 Hz, 2H). 7.27 (d, J = 1.9 Hz. IH). 5.90 (s. IH). 4.40 (d, J = 5.5 Hz, 2H). 3.90 (dd. J = 11.2, 4.6 Hz, 411), 3.28 (t. J = 11.6 Hz,2H). 3.07 - 2.97 (m. 1H). 2.32 (s,3H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H). 1.76 (dd. J = 12.3. 1.6 Hz. 2H), 1.61 (qd..I = 12.0. 4.5 Hz, 2H).
Korak 8: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4-metil-4'-(morfolinometi1)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)(2,2,2-trilfuoroetil)amino)-[I,r-bifenil|-3-
karboksamida
U bocu sa okruglim dnom i dva grla, 5-bromo-N-|(4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)aminojbenzamid (200 mg. 0.38 mmol), 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-l.3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolin (126 mg. 0.41 mmol) u 1,4-dioksanu (3.0 ml) su tretirani sa rastvorom koji je sadržavao Na:('(); (140 mg. 1.3 mmol) u vodi (1.0 ml). Gasoviti azot je propušten kroz smešu uz pomoć dugačke igle tokom 5 min pre dodavanja paladijum-trifenilfosfana (1 ;4) (44 mg. 0.04 mmol). Gasoviti azot je propušten kroz žutu suspenziju tokom dodatnih 5 min pre grejanja reakcione smeša na 100° C tokom 5.5 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom (10 ml) i 10% MeOH u CH2CI2 (10 ml). Slojevi su odvojeni, a vodena faza je ekstrahovana sa 10% MeOH u CH2C12(3 x 15 ml). Spojeni organski ekstrakti su isprani sa slanicom (40 ml), osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovaniin vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (10 g SNAP punjenje. Isolera, 0-4% MeOH:CH2Ch) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (193 mg, 82%) u formi prljavo-belog praha. LC-MS 100%, 3.34 min (LC-MS postupak od 7 min), m/z = 627.5: 'H NMR (500 MHz. Aceton) 8 10.76 (s, IH), 7.65 (d. J = 1.5 Hz, IH). 7.60 (d, .1 = 8.2 Hz. 2H). 7.57 (t, .1 = 5.6 Hz. IH). 7.43 (d, J = 1.5 Hz. 1 H), 7.39 (d, J = 8.1 Hz. 2H). 5.91 (s. 1H),4.44 (d. J = 5.5 Hz, 2H), 3.97 (s. 2H), 3.90 (dd. J = 11.4. 4.1 Hz. 2H), 3.61 (t, .1 = 4.6 Hz, 4H), 3.50 (s. 2H). 3.29 (t. J = 11.5 Hz. 2H). 3.06 (tt, .1 = 11.4. 3.8 Hz. IH), 2.39 (d..1 = 5.0 Hz. 7H), 2.34 (s. 3H). 2.22 (s. 3H), 1.82 (dd, J = 12.3, 1.7 Hz, 2H). 1.70- 1.56 (m, 2H).
Primer 139: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropirine-3-il)metil)-4-etil-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(morfolinometil)-[l,rbifenil|-3-karboksamida
Korak1: sintezametil5-hIoro-2-[2-(trimetilsiliI)etinil|benzoata
U rastvor metil 2-bromo-5-hlorobenzoata (14.8 g, 59 mmol) u TEA (124 ml. 889.82 mmol) su dodani bakar(I) jodid (338 mg, 1.78 mmol) i trifenilfosfin (778 mg, 2.97 mmol) na sobnoj temperaturi i pod azotom. Ova smeša je obrađena sa gasovitim azotom tokom 10 min pre dodavanja etinil(trimetil)silana (12.45 ml, 89 mmol) i Pd(OAc)2(266 mg, 1.19 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50° C tokom 20 h pre no je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u dejonizovanoj vodi (50 ml ) i EtOAc ( 50 ml ) pa je filtriran kroz celit. Filterski kolač je ispran sa EtOAc (50 ml) pre razdvajanja faza, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgSOj. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (10 g silike, Isolut-punjenje. gradijent eluenata; 99:1 heptan:EtOAc do 85:15 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo 16.2 g (102.4%) metil 5-hloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoata u formi narandžastog ulja koje je postalo Čvrsto nakon stajanja. Primerak je sadržavao heptan. LC-MS 91%. 2.57 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z=267.4/268.9. 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 6 ppm 7.89 (d.7= 2.2 Hz, IH), 7.51(d, J=8.3 Hz, IH). 7.41(dd, ./=8.3. 2.3 Hz. IH). 3.92 (s. 3H). 0.27 (s, 9H).
Korak 2: Sinteza of metil 5-hloro-2-etinilbenzoat
U rastvor metil 5-hloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoata (10 g. 37.5 mmol) u metanolu (150 ml) je dodan K2CO3(10.36 g. 75 mmol) na sobnoj temperature i na vazduhu. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h pre no je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u dejonizovanoj vodi (50 ml) i EtOAc (50 ml). Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgSO-ufiltrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (50 g silike. Isolut-punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 9:1 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo 5.75 g (55.2%) metil 5-hloro-2-etinilbenzoata u formi narandžastog ulja koje postaje čvrsto nakon stajanja. Ovaj materijal je sadržavao 30% etil estera koji je prikladan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 38%. 1.98 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z=l95.0/196.9. 'H NMR (500 MHz. hloroform-d)6ppm 7.93 (d../ = 2.2 Hz. IH). 7.55 (d. ./= 8.3 Hz, IH), 7.45 (dd..;= 8.3. 2.3 Hz, IH). 3.94 (s. 3H), 3.43 (s. IH).
Korak 3: sinteza metil 5-hloro-2-etilbenzoata
U rastvor metil 5-hloro-2-etiniIbenzoata (5.34 g, 27.44 mmol) u etil acetatu (135 ml) je dodan Pd/C (10%) (50% vode, 2.92 g. 1.37 mmol). Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi tokom 3 h. LCMS pokazuje daje reakciona masa nestala do završetke reakcije, a smeša je filtrirana kroz celit. Filterski kolač je ispran sa EtOAc (50 ml), a tiltrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 5.12 g (93.9%) metil 5-hloro-2-etilbenzoata u formi smeđeg ulja koje je prikladno za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 56%, 2.21 min (LC-MS postupak od 3 min).m/z=198.9/200.9. 'H NMR (500 MHz. hloroform-d) 6 ppm 7.84(d, J =2.3 Hz, 1H), 7.39 (dd../ = 8.3. 2.3 Hz, 1H). 7.21 (d../ = 8.3 Hz. IH), 3.90 (s. 3H), 2.94 (q. J= 7.5 Hz. 2H), 1.21 (t. J= 7.5 Hz. 3H).
Korak 4: sinteza metil 5-hloro-2-etil-3-nitrobenzoata
Rastvor metil 5-hloro-2-etilbenzoata (5.12 g, 25.77 mmol) u koncentrovanoj H2SO4(31 ml. 587 mmol) je ohlađen do -5° C u vazdušnoj banji sa smešom aceton/led. U reakcionu smešu kap po kap je dodana smeša koncentrovane azotne kiseline (2.15 ml. 33.51 mmol) i koncentrovane H2SO4(2 ml, 37.52 mmol) na -5° do 0° C tokom 15 min. Bledo-žuta reakciona smeša je mešana na -5° do 0° C tokom 1 h pre no je izlivena u led (500 ml), a tada je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 ml). Spojene organske faze su isprane sa dejonizovanom vodom (100 ml), a tada sa slanicom (100 ml). Organska faza je osušena preko MgS04, filtrirana i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. LCMS i NMR su pokazali —30% hidrolizu estera. Sirovi materijal je rastvoren u metanolu (30 ml) pa je ohlađen do 0° C u atmosferi azota pri čemu je polako dodavan SOCb (2.25 ml, 30.93 mmol). Reakciona smeša je tada grejana do refluksa tokom 6 h pre no je koncentrovana pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 6.18 g (98.4%) metil 5-hloro-2-etil-3-nitrobenzoata u formi narandžastog ulja. Produkt je sadržavao smešu 3-nitro:6-nitro izomera (1:1) zajedno sa nešto etil estera pa je bila prikladna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 5: sinteza metil 3-amino-5-hloro-2-etilbenzoata
U rastvor metil 5-hloro-2-etil-3-nitrobenzoata (6.18 g. 25.36 mmol) u metanolu (250 ml) na sobnoj temperaturi je dodan amonijum hlorid (13.31 g. 253.65 mmol), a tada i dejonizovana voda (125 ml). Smeša je grejana na vazduhu na 70° C pre dodavanja gvožđa (8.5 g. 152.19 mmol). Reakciona masa je potamnela tokom 2.5 h dok je bila mešana na 70° C. Ova smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature paje filtrirana kroz kieselgel. Filterska pločica je isprana sa MeOH (250 ml), a filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u zasićenom NaHCO.i (vod.) (50 ml) i EtOAc (150 ml). Faze su odvojene, a organska faza je isprana sa zasićenim NaHCO.i (vod.) (2 x 50 ml) pre no je osušena preko MgS04, filtrirana i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (50 g silike, Isolut-punjenje, gradijent eluenata: 95:5 heptamEtOAc do 75:25 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo 2.42 g (22%, korigovani prinos: 7%) metil 3-amino-5-hloro-2-etilbenzoata u formi žutog ulja. Produkt je sadržavao -25% etil estera, a moguće i -15% 4-nitro produkata. Materijal je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 31%. 2.00 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z=295.0. 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 7.17 (d.,/ = 2.1 Hz. IH), 6.79 (d../= 2.1 Hz, IH), 3.87 (s. 3H). 3.86 - 3.81 (m, 2H). 2.74 (q../= 7.5 Hz, 2H),1.20 (t,./=7.5Hz.3H).
Korak 6: sinteza metil 5-hloro-2-etil-3-[(oksan-4-il)amino|benzoata
U rastvor metil 3-amino-5-hloro-2-etilbenzoata (1.5 g, 7.02 mmol) u 1,2-dihloroetanu (28 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom je dodan oksan-4-on (1.3 ml, 14.04 mmol). a tada i sirćetna kiselina (2.41 ml, 42.12 mmol). Ovaj rastvor je mešan tokom 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (4.46 g. 21.06 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 20 h je dodana dejonizovana voda (28 ml), a smeša je neutralizovana sa čvrstim NaHCO}. Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 28 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (50 g silike, Isolut-punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 8:2 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo 1.76 g (84%, korigovani prinos: 50%) metil 5-hloro-2-etil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata u formi bele čvrste materije. Produkt je sadržavao~25% etil estera. Materijal je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 60%). 2.27 min (LC-MS postupak od 3 min), m/z=298.0/300.0.<l>H NMR (500 MHz, hloroform-d) 6 ppm 7.07(d..7=2.0Hz, IH). 6.71 (d,./= 1.9 Hz, IH). 4.01 (dt../= 11.8. 3.4 Hz. 2H), 3.87 (s. 3H). 3.82 - 3.76 (m, IH). 3.64 - 3.47 (m, 3H), 2.79 - 2.63 (m. 2H), 2.06 (d../= 13.2 Hz. 211). 1.55 - 1.46 (m. 2H). 1.18(t../=7.5 Hz, 3H).
Korak 7: sinteza 5-hloro-2-etil-3-[etil(oksan-4-il)amino|benzojeve kiseline
U rastvor metil 5-hloro-2-etil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata (350 mg. 1.18 mmol) u DCE (10 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom je dodan acetaldehid (0.66 ml. 11.75 mmol), a tada i sirćetna kiselina (0.4 ml. 7.05 mmol). Ovaj rastvor je mešan tokom 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (2.49 g. 11.75 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 23 h je dodano još acetaldehida (0.66 ml, 11.75 mmol), a tada i natrijum triacetoksiborohidrida (2.49 g, 11.75 mmol). Nakon mešanja tokom dodatna 3 h je dodana dejonizovana voda (15 ml), a smeša je neutralizovana sa čvrstim NaPICO.}. Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x15 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć FCC (10 g silike. Isolut-punjenje, gradijent eluenata: 99:1 heptan:EtOAc do 85:15 heptan:EtOAc) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (317 mg) u formi smeše metil i etil estera (2:1) koja je korišćena u sledećoj fazi.
U smešu estera su dodani THF (10 ml) i 4M NaOH (9.7 ml. 38.9 mmol), a reakciona masa je mešana na 50° C tokom 27 h, nakon čega je dodan MeOH (5 ml) u reakcionu smešu. a smeša je mešana tokom dodatnog 21 h na 50° C. Reakciona smeša je zakiseljena do pH 2-3 uz pomoć 6M HC1 paje ekstrahovana sa DCM (5x10 ml). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi narandžastih kristala (289 mg. 79% kroz dva koraka). LC-MS 100%. 2.09 min (LC-MS postupak od 3.5 min). m/z= 312.0/314.0. IH NMR (500 MHz. hloroform-đ) 6 7.73 (d. J = 1.7 Hz, IH). 7.29 (d, J = 1.8 Hz. IH), 3.99 (d. J = 11.0 Hz. 2H). 3.38 - 3.29 (m. 211). 3.20-3.03 (m,4H). 3.02-2.91 (m, IH), 1.78-1.61 (m, 4H). 1.13 (t..1 = 7.4 Hz. 3H). 0.91 (t,J = 7.0 Hz, 3H).
Korak 8: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4-etil-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(niorfolinonietil)-[l,l-bifenil]-3-karboksaniida
U rastvor 5-hloro-2-etil-3-[etil(oksan-4-il)amino]benzojeve kiseline (191 mg, 0.61 mmol) u DMF (3 ml) na 0° C je dodan HATU (280 mg, 0.74 mmol), a tada i D1PEA (213 pl. 1.26 mmol) i 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1.2-dihidropiridin-2-on (89%, 115 mg. 0.67 mmol). Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h nakon čega je izlivena u dejonizovanu vodu (50 ml), a nastala čvrsta materija je filtrirana i isprana sa vodom. Vodena faza je isprana sa DCM (3 x 50 ml), spojene organske materije su isprane sa slanicom (30 ml), osušene sa MgS04, filtrirane i isparene kako bi se dobilo ulje. Čvrsta materija i ulje su spojeni i prečišćeni uz pomoć kolone od 10 g za izolovanje uz eluiranje sa 0% do 3% MeOH u DCM, a tada su ispareni i ponovo prečišćeni uz pomoć kolone od 10 g za izolovanje uz eluiranje sa 0% do 3% MeOH u EtOAc kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi prljavo-bele čvrste materije (234 mg, 79%). LC-MS 92%, 1.78 min (LC-MS postupak od 3.5 min). m/z= 446.2/448. U mešani rastvor 5-hloro-N-[(4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihiđropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[etil(oksan-4-il)amino]benzamida (117 mg. 0.26 mmol) u degaziranoj smeši diglima (4 ml) i MeOH (2 ml), koja je obrađena sa gasovitim azotom, su dodani 2'-(dicikloheksiifosfanil)-N.N-dimetilbifenil-2-amin (21 mg, 0.05 mmol), paladijum diacetat (5.89 mg, 0.03 mmol). cezijum fluorid (120 mg, 0.79 mmol) i 4-f4-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolin (119 mg, 0.39 mmol). Obrada sa gasovitim azotom je nastavljena tokom 10 min, a tada je reakciona masa grejana na 70° C tokom 16 h nakon čega je dodano još 4-[4-
(4,4,5,5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolina (119 mg. 0.39 mmol). a grejanje je nastavljeno tokom 6 h. Reakciona masa je tada ohlađena do sobne temperature pa je filtrirana kroz keiselguhr. a kolač je ispran sa MeOH. Dodana je destilovana voda (20 ml), filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 ml), a spojene organske materije su tada isprane sa slanicom (2 x 50 ml), osušene sa MgS04, filtrirane i isparene. Nastao ostatak je prečišćen uz pomoć kolone za izolovanje od 25 g uz eluciju u gradijentu od 0% do 10% MeOH u DCM kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi bledo-žute Čvrste materije (32 mg, 21%). LC-MS 99%. 2.72 min (LC-MS postupak od 7 min). m/z= 294.3 (M+H/2), 1H NMR (500 MHz, aceton-dh) 8 10.80 (s, IH). 7.60 - 7.54 (m. 3H), 7.51 (s. IH), 7.39 (d, .1 = 7.9 Hz. 2H), 7.36 (d..1 = 1.4 Hz. 1II), 5.92 (s. IH), 4.45 (d, J = 5.6 Hz, 2H). 3.88 (d, .1 = 8.0 Hz. 2H), 3.66 - 3.56 (m, 4H).3.51 (s. 211), 3.29 (t. J = 11.2 Hz, 2H), 3.17 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 11.2 Hz. IH). 2.98 (q..1 = 7.4 Hz. 2H) 2.41 (s. 4H), 2.36 (s, 3H), 2.22 (s, 3H). 1.76 (d. J = 11.2 Hz. 2H). 1.65 - 1.56 (m. 2H), 1.08 (t. J = 7.4Hz. 3H), 0.91 (t. J = 7.0 Hz, 3H).
Primer 140: sinteza 3'-cijano-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)mctil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-
karboksamida
Korak1:sinteza 5-bromo-2-(morfolinometil)benzonitrila
U mešani rastvor 5-bromo-2-formilbenzonitrila (200 mg, 0.95 mmol) i morfolina (248 mg. 2.85 mmol) u dihloroetanu (10 mL) je dodana sirćetna kiselina (342 mg, 5.7 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tada je u reakcionu smešu dodan natrijum triacetoksiborohidrid (604 mg, 2.85 mmol) na 0° C. smeša je ostavljena da dosegne sobnu temperaturu, a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom. isprana sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i osušena preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje željeno jedinjenje (150 mg, 56%).
Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etiI(tetrahidro-2i?-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrainetil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida U mešanu smešu 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1.0 g, 2.1 mmol) su dodani bipinakolato diboron (2.67 g, 10.5 mmol) i kalijum acetat (610 mg. 6.31 mmol) u dioksanu (10 mL), a smeša je očišćena sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan kompleks 1.1'-bi(difenilfosfmo)ferocen-paladijum (Il)dihloriđ dihtorometan (85 mg. 0.10 mmol). a čišćenje sa argonom je nastavljeno tokom 15 min. Reakciona masaje grejana na 80° C tokom 7 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje željeno jedinjenje (250 mg, 27%).
Korak 3: sinteza 3'-cijano-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinonietil)-[l,r-bifenil)-3-karboksamida
LJ mešani rastvor 5-bromo-2-(morfolinometil)benzonitrila (190 mg. 0.68 mmol) i N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2//-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (200 mg, 0.45 mmol) u dioksanu <6 mL) je dodan 2M vodeni rastvor Na2C03(0.81 mL, 1.63 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPhi)4(52 mg, 0.04 mmol ), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 15 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM (3 puta). Spojeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata. Odstranjivanje rastvarača pod smanjenim pritiskom praćeno prečišćavanjem uz pomoć kolonske hromatografije daje jedinjenje iz naslova (16 mg, 6%). LCMS: 598.20 (M + 1)'; HPLC: 89.15%(( eh254 nm) (R,; 4.039; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 5 11.46 (bs. IH). 8.20 (t. IH). 8.15 (s, IH). 7.94 (d, IH, J = 6.8 Hz), 7.63 (d, IH. J = 8.4 Hz). 7.51 (s, IH). 7.31 (s, IH). 5.86 (s, IH). 4.29 (m, 2H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.66-3.58 (m. 6H), 3.32 (m. 5H). 3.11-3.03 (m, 4H). 2.25 (s. 311). 2.21 (s. 311). 2.11 (s. 3H). 1.65-1.51 (m. 4H). 0.82 (t. 3H, J = 6 Hz).
Primer 141: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-( 1,1 '-bifenilJ-3-
karboksamid
Korak 1: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeva kiselina
U mešani rastvor 2-metiI-3-nitrobenzojeve kiseline (100 g. 552.48 mmol) u konc. H2SO4(400 mL) je dodan 1.3-dibromo-5.5-dimetil-2,4-imidazolidindion (87.98 g, 307.70 mmol). deo po deo na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je tada mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu. precipitirana Čvrsta materija je sakupljena uz pomoć filtracije. isprana sa vodom pa je osušena u vakuumu kako bi se dobila željena 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeva kiselina u formi prljavo-bele čvrste materije (140 g. prinos: 97.90%).
'II NMR (DMS0-<4 400 MHz) 8 8.31 (s. IH). 8.17 (s. IH). 2.43 (s, 3H).
Korak 2: metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat
U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzojeve kiseline (285 g, 1104.65 mmol) u DMF (2.8 L) je dodan natrijum karbonat (468 g. 4415.09 mmol) nakon Čega je uslediio dodavanje metil jodida (626.63 g. 4415 mmol) na sobnoj temperaturi. Nastala reakciona smeša je mešana na 60° C tokom 8 h. Reakciona smeša je tada filtrirana kako bi se odvojile suspendovane čvrste materije koje su dobro isprane sa etil acetatom (3 x 1 L). Spojeni filtrati su dobro isprani sa vodom (5 x 3 L). a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (3 x 1 L). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat u formi prljavo-bele čvrste materije (290 g, prinos: 97%). 'H NMR (CDCb. 400 MHz) 8 8.17 (s, IH). 7.91 (s. IH). 3.96 (s, 3H),2.59(s,3H).
Korak 3: metil 3-amino-5-bromo-2-metiIbenzoat
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (290 g, 1058.39 mmol) u etanolu (1.5 L) je dodan vodeni amonijum hlorid (283 g, 5290 mmol rastvorena u 1.5 L vode). Nastala smeša je mešana i grejana na 80° C , a tada je dodano gvožđe u prahu (472 g. 8451 mmol). deo po deo na 80° C. Nastala reakciona smeša je grejana na 80° C tokom 12 h, Reakciona smeša je tada još vruća filtrirana kroz Celit<8>, Celit® pločica je dobro isprana sa metanolom (5 L). a tada i sa 30% MeOH u DCM (5 L). Spojeni filtrati su koncentrovaniin vacuo.a dobiveni ostatak je razređen sa vodenim bikarbonatom (2 L) pa je ekstrahovan sa etil acetatom (3x5 L). Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat u formi smeđe Čvrste materije (220 g. prinos: 89.41%).
Deo produkta (5 g) je rastvoren u vrućem etanolu (20mL). nerastvorljivi ostatak je odstranjen uz pomoć filtriranja, a osnovna tečnost je koncentrovana kako bi se dobio metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat (3.5 g, prinos: 70%) u formi svetlo-smeđc Čvrste materije čija je HPLC čistoća bila 93.81%. 'H NMR (CDCL. 400 MHz) 5 7.37 (s. IH). 6.92 (s, IH), 3.94 (s. 3H). 3.80(bs,2H), 2.31 (s, 3H).
Korak 4: metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoat
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g. 20.5 mmol) i tert-butil(4-oksocikloheksil)karbamata (5.69 g, 26.7 mmol) u dihloroetanu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (7.4 g, 123 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (13.1 g. 61.7 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona masa je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovaniin vacuo.Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć i kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) uz eluiranje sa 10% etil acetatom u heksanu kako bi se dobilo 3.5 g više polarnog (trans) izomera, metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata, u formi čvrste materije (38.46%). 'H NMR (CDCh. 400 MHz) 5 7.21 (s. 1I I). 6.80 (s, IH). 4.41 (bs, IH). 3.85 (s. 3H). 3.60 (m. IH), 3.45 (m. IH), 3.20 (m. IH). 2.22 (s, 3H), 2.15 (bs, 2H), 2.05 (bs. 2H). 1.45 (s, 9H). 1.30 (m. 4H).
Korak5: metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoat
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)ainino)-cikloheksiI)(etil)amino)-2-metilbenzoata (55 g, 0.124 mol) i acetaldehida (11 g. 0.25 mol) u dihloroetanu (550 mL) je dodana sirćetna kiselina (44.64 g, 0.744 mol), a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (79 g, 0.372 mol) na 0° C. a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona masa je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom. organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovan sa dihlorometanom. Spojeni ekstrakti su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovaniin vacuo.Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) uz eluiranje sa 10% etil acetatom u heksanu kako bi se dobilo 44 g metil 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoata (75.2%) u formi čvrste materije. 'H NMR (DMSO-d6. 400 MHz) 5 7.55 (s, IH), 7.45 (s. IH). 6.65 (d, IH). 3.80 (s. 3H), 3.15 (bs, IH), 3.05 (q, 2H), 2.60 (m. IH), 2.30 (s. 311). 1.75 (m, 411), 1.40 (m. 2H), 1.35 (s, 9H). 1.10 (m. 2H), 0.80 (t. 3H).
Korak 6: tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metiIfeniI)(etil)amino)cikloheksil)karbamat
Vodeni NaOH (3.5 g, 0.08 mol u 10 mL H2O) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(eti])amino)-2-metilbenzoata (25 g. 0.053 mol) u EtOH (100 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Etanol je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena do pH 8 uz pomoć razređene HC1. a do pH 6 uz pomoć limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa 10%> metanolom u DCM (3 x 200 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (24.2 g. 99.0%). 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8 13.13 (s, IH), 7.54 (s. IH), 7.43 (s, IH). 6.68 (d. IH), 3.14 (bs. 1 H), 3.03 (q, 2H). 2.56 (m, IH), 2.33 (s, 3H). 1.80-1.65 (m. 4H). 1.40 (m. 211). 1.35 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0.77 (t, 3H).
Kiselina (24 g, 0.053 mol) je rastvorena u DMSO (100 mL), a tada su dodani 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on (16 g, 0.106 mol) i trietilamin (5.3 g, 0.053 mol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PyBop (41 g. 0.079 mmol). a mešanje je tada nastavljeno preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu (1L). Nastao precipitat je sakupljen uz pomoć filtracije. dobro ispran sa vodom (2 x 1 L) i osušen. Dobiveni produkt je dodatno prečišćen uz pomoć ispiranja sa acetonitrilom (3 x 200 mL) i DCM (100 mL) kako bi se dobio tert-butil ((lr.4r)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-L2-dihidropiridin-3-il)metir)karbamoil)-2-metiirenil)(eti!)amino)cikloheksil)-karbamat (24 g, 77%). 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 11.47 (s. 1H). 8.24 (t. 1H). 7.25 (s. IH). 7.04 (s. IH), 6.67 (d. IH): 5.85 (s. 1H), 4.24 (d. 2H). 3.13 (bs. IH). 3.01 (q, 211), 2.53 (m. IH), 2.18 (s. 3H). 2.10 (s. 6H). 1.80-1.65 (m. 4H). 1.40 (m, 2H), 1.35 (s. 9H). 1.10 (m. 2H). 0.77 (t, 3H).
Korak 7: tert-butil ((1 r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-il)(etil)amino)cikloheksil)karbamat
U mešani rastvor tert-butil ((Tr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-đimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil)-karbamata (24 g. 0.041 mol) i 4-(4-(4.4,5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (18 g. 0.061 mol) u smeši dioksan/voda (160 mL + 40 mL) je dodan NaaCCb (15 g, 0.15 mol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh_V)4(4.7 g, 0.041 mol), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 4 h. Reakciona smeša je tada razređena sa 10% MeOH/DCM (500 mL) i filtrirana. Fiitrat koncentrovan, razređen sa vodom (500 mL) i ekstrahovan sa 10% MeOH u DCM (3 x 500 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) uz eluiranje sa 7% MeOH u DCM kako bi se dobio tert-butil ((lr,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metir)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l.l,-bitenil]-3-il)(etil)amino)cikIoheksil)karbamat (20 g. 71.43%). 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8 11.46 (s, IH), 8.20 (t, 1H), 7.56 (d, 2H). 7.36 (m, 3H). 7.17 (s. 1H). 6.66 (d. IH), 5.85 (s. IH), 4.28 (d. 2H). 3.57 (bs, 4H). 3.48 (s, 2H). 3.20-3.05 (m. 3H), 2.62 (m, IH). 2.36 (bs. 4H), 2.20 (s, 6H). 2.10 (s. 3H). 1.75 (m. 4H). 1.42 (m. 2H). 1.35 (s. 9H), 1.10 (m,2H), 0.82 (t, 3H).
Korak 8: 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenil|-3-karboksamid U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-I,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metiI-4Xmorfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-il)(etil)amino)cikloheksil)karbamata (20 g, 0.03 mol) u DCM (200 mL) na 0° C je dodan TFA (75 mL), a reakciona masaje mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je tada koncentrovana do suvoće, a ostatak je doveden u bazno područje (pH 8) uz pomoć vodenog zasićenog rastvora bikarbonata (300 mL). Smeša je ekstrahovana sa 20% metanolom u DCM (4 x 200 m). Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na?S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio 5-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-{(4.6-dimeti]-2-okso-L2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-| l.l'-bifenil]-3-karboksamid(15.5 g, 91%) koji je koiršćen u sledećoj reakciji. 'H NMR(DMSO-d6.400MHz) 5 8.18 (bs. IH). 7.57 (d. 2H), 7.38 (m. 3H). 7.20 (s, 1H). 5.85 (s. 1H). 4.29 (d. 2H), 3.57 (bs, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.31 (bs, 2H), 3.10 (m, 2H), 2.91 (m. 1H), 2.67 (m. I H). 2.36 (bs. 411). 2.21 (s, 3H). 2.20 (s. 3H), 2.10 (s. 3H). 1.90 (m, 2H). 1.83 (m. 211). 1.45 (m. 2H), 1.23 (m. 2H). 0.83 (t, 3H).
Korak 9: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metiM'-(morfolinometil)-[l,r-karboksamid
U mešani rastvor 5-((( 1 r,4r)-4-aminocikloheksir)(etil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)meti])-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida (14 g, 0.023 mol) u dihlorometanu (150 mL) je dodan vodeni 35% rastvor lbrmaldehida (2.4 g, 0.080 mol) na 0° C. Nakon mešanja tokom 20 min je dodan Na(OAcbBH (12.2 g. 0.057 mol), a mešanje je nastavljeno tokom 2 h na 0° C. Tada je dodana voda (100 mL) u reakcionu smešu. a smeša je ekstrahovana sa 20% metanolom u DCM (3 x 200 mL). Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć hromatografije na koloni od aluminijum oksida uz eluiranje sa 6-7% MeOH u DCM kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 g. 63.6%). LCMS: 614.65 (M + 1)<+>: HPLC: 98.88%
( a 210-370 nm) (R,; 3.724; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz)611.45 (s. IH). 8.17 (t. IH), 7.56 (d. 2H..1=8 Hz), 7.36 (m. 3H), 7.17 (s, 1 H), 5.85 (s, 1H), 4.29 (d, 211..1=4.4 Hz). 3.57 (bs. 4H). 3.48 (s. 2H). 3.09 (q, 2H), 2.66 (m, IH), 2.36 (bs, 4H). 2.21 (s. 3H). 2.20 (s. 3H), 2.11 (s. 9H), 1.79 (m, 4H». 1.36 (m. 2H). 1.1 (m. 2H). 0.82 (t, 3H. J-6.4&6.8 Hz).
Primer 142: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((2-
metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil}-3-karboksamida
Korak1: sinteza metil 5-bromo-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (400 mg, 1.22 mmol) i 2-metoksiacetaldehida (1.3 mg, 17.56 mmol) u 7 ml dihloroetana je dodana sirćetna kiselina (0.42 mL. 7.33 mmol), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smešaje ohlađena do 0° C paje dodan natrijum triacetoksiborohidrid (777 mg. 3.66 mmol). a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je tada neutralizovana sa zas. NaHCChi ekstrahovana sa DCM, a organski sloj je osušen preko Na2S04i koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 260 mg sirovog produkta.
Korak 2: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Smeša metil 5-bromo-3-((2-metoksietiI)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (260 mg, 0.67 mmol) i NaOH (40 mg. 1.01 mmol) u 5 ml smeše etanokvoda (2:1) je grejana na 70° C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suvoće. sirovi produkt je rastvoren u vodi, pH je podešen do 5-6 uz polako dodavanje HC1, a jedinjenje je ekstrahovano u 10% MeOH u DCM. Organski sloj je osušen preko Na^SOa i koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 230 mg kiseline.
Smeša sirove kiseline (230 mg, 0.62 mmol). 3-(aminometil)-4T6-dimetilpiridin-2(lH)-on (188 mg, 1.24 mmol), PyBOP (483 mg, 0.93 mmol) i trietil amina (0.17 ml), 1.238) je mešana u 3 ml DMSO na st preko noći. Reakciona smeša je razređena sa vodom, jedinjenje je ekstrahovano u 10% MeOH u DCM. osušeno preko Na2S04i koncentrovano. a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (100-200) kako bi se dobio 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (110 mg, 35%).
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetil 2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((2-
metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-nietil-4,-(morfolinometil)-|l,l'-bifenil]-3-karboksamida
Rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-ii)nietii)-3-((2-metoksietiI)(tetrahidro-2H-piran-4-il)arnino)-2-metilbenzamida (110 mg, 0.21 mmol), (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (99 mg, 0.33 mmol), natrijum karbonata (83 mg, 0.78 mmol) u 4 ml dioksana je degaziran uz pomoć argona tokom 20 min, nakon čega je dodan Pd(PPh3) (25 mg, 0.02 mmol). a smeša je grejana na 100° C preko noći. Reakciona masa je ohlađena do sobne temperature pa je razređena sa vodom, pri čemu je jedinjenje ekstrahovano u 10% MeOH u DCM, osušeno preko Na2SO-4 i koncentrovano, a sirovi produkt je prečišćeni uz pomoć hromatografije na silika-gelu (100-200) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 38%).
LCMS: 603.45 (M + 1)<+>; HPLC: 99.60% (@ 254 nm) (R,; 4.492: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna laza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B);<!>H NMR (DMSO-^. 400 MHz) 8 11.46 (bs, IH), 8.20 (t. 1 H), 7.58 (d, 2H, J = 7.2Hz), 7.47 (s. IH). 7.37 (d. 2H. J = 7.2Hz). 7.23 (s, IH), 5.86 (s, IH), 4.29 (d, 2H..1 = 3.6 Hz). 3.82-3.85 (m, 2H), 3.49-3.58 (m. 6H), 3.15-3.3.23 (m, 9H), 2.98 (m. IH). 2.36 (m. 4H). 2.23 (s. 3H). 2.21 (s. 3H). 2.11 (s. 3H). 1.51-1.68 (m, 4H).
Primer 143: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil-d5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metiI-4'-(morfolinometil)-i 1,1 '-bifenil]-3-karboksamid
Korak 1: metil 5-bromo-3-(etil-rfj(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat
U mešani rastvor jedinjenja metil 5-bromo-2-metii-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat {1 g, 3.05 mmol) i natrijum triacetoksiborodeuterida (0.2 g. 4.76 mmol) u dihloroetanu (15 mL) je dodana sirćetna kiselina (1.65 g. 27.5 mmol ). a reakciona masa je mešana na 5-10° C tokom 2 h. Tada je dodan acetaldehid-t/^(0.264 g. 6.00 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku, reakciona masa je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobio željeni produkt (1 g. 91%).
Koraci2i3:sinteza 5-bromo-lN-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil-</5(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (0.166 g, 4.15 mmol) je dodan u rastvor jedinjenja metil 5-bromo-3-(etil-t:/5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (1 g, 2.77 mmol) u etanolu (10 mL), a smešaje mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smešaje zakiseljena uz pomoć razređene HCl do pH 6. a pH 4 je postignut uz pomoć limunske kiseline. Ekstrakcija je provedena uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su koncentrovani sušenjem koje daje odgovarajuću kiselina (0.7 g. 2.01 mmol. 73%). koja je tada bila rastvorena u DMSO (7 mL). nakon čega je dodan 3-(aminometil)-4.6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.611 g, 4.01 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (1.56 g. 3.01 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku konverzije, reakciona masa je izlivena u led. ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani sa ciljem da sc dobije sirovi materijal koji je tada prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem kako bi se dobio željeni produkt (0.6 g. 62%).
Korak 4: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil-
</5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-formil-4-metil-|l,r-bifenil|-3-karboksaniida
U mešani rastvor jedinjenja 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil-i/5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (0.3 g. 0.62 mmol) i (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (0.283 g, 0.93 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan Na2C03 (0.24 g. 2.26 mmol ), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh?)4(0.072 g, 0.062 mmol). a smešaje ponovo očišćena tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smešaje razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na?S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo željeno jedinjenje iz naslova (0.22 g. 61%). Analitički podaci za N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etii-6/j(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-formil-4-metil-[ 1.1'-bifenill-3-karboksamid: LCMS: 578.35 (M + lf; HPLC: 98.50% (@ 254 nm)(R,; 4.176:Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05%> TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/*. 400 MHz) 5 11.46 (bs. IH). 8.19 (t. IH). 7.57 (d, 211. J = 7.6). 7.36-7.39 (m. 3H), 7.21 (s, I H). 5.86 (s. IH). 4.29 (d. 2H, J = 3.2 Hz). 3.81-3.84 (m, 2H), 3.48-3.57 (m, 6H). 3.22-3.25 (m, 2H), 3.02 (m. IH). 2.36 (m. 4H). 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s, 3H), 1.51-1.67 (m,4H).
Primer 144: sinteza 5-((2,2-difluoroetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-karboksamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetiI)(oksan-4-il)amino|-2-metilbenzoata
U bocu sa okruglim dnom sa dva grla (volumen: 100 ml), mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata (500 mg, 1.5 mmol) u difluorosirćetnoj kiselini (15 ml), je tretiran sa natrijum tetrahidroboratom (1000 mg. 26 mmol). deo po deo tokom 12 min (PAŽNJA!). Reakciona smešaje ugrejana do 50° C paje mešana tokom 4 h. Reakciona smeša je ostavljena da dosegne sobnu temperaturu, a tada je izlivena u led (130 ml) i ostavljena da stoji tokom 5 min. Smešaje dovedena u bazno područje uz pomoć dodavanja 6M NaOH (vod.)
(35 ml), a pH je podešen do 7 uz pomoć 1M HCI (vod.) (20 ml). Nastala suspenzija je ostavljena da stoji dok se rastvor ne izbistri, a nastala čvrsta materija je sakupljena uz pomoć filtracije pa
je osušenain vacuona 40° C kako bi se dobilo jedinjenje iz. naslova (572 mg. 96%) u formi bele čvrste materije. LC-MS 100%, 2.32 min (LC-MS postupak od 3.5 min), m/z = 391.9. 392.9,393.9.394.9; 'H NMR (500 MHz. hlorolbrm-d) 6 ppm 7.79 (d..1=1.89 Hz. 1 I I) 7.44 (d. .1=1.89 Hz, IH) 5.44 - 5.71 (m, 1 H) 4.00 (dd..1=11.51. 4.10 Hz. 2 H) 3.91 (s. 3H) 3.41 (td, .1=13.99. 4.18 Hz. 2 H) 3.32 (t..1=11.27 Hz. 2 H) 2.97 (tt..1=11.37. 3.84 Hz, 1 H) 2.47 (s. 3 H) 1.72-1.81 (m. 2 H) 1.59 - 1.67 (m, 2 H).
Korak2:sinteza 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetiI)(oksan-4-il)amino|-2-metilbenzo.jeve
kiseline
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-[(2,2-dinuoroetil)(oksan-4-ir)amino|-2-metilbenzoata (571 mg, 1.5 mmol) u smeši THF (14.6 ml) i MeOH (2.2 ml) je dodan 4M NaOH (14.6 ml). Reakciona smeša je mešana na 50° C tokom 7 h. Grejanje je zaustavljeno, a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16.5 h. THF je odstranjenin vacuo.a vodeni ostatak je zakiseljen do pH 4 uz pomoć dodavanja 6M HC1 (vod.) (10 ml) uz hlađenje sa ledom. Nastala čvrsta materija je sakupljena uz pomoć filtracije pa je isprana sa vodom (20 ml), osušenain vacuona 30-40° C tokom 3 h kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (526 mg, 96%) u formi svetlo-bež čvrste materije. LC-MS 100%, 1.98 min (LC-MS postupak od 3.5 min), m/z = 377.9, 378.9. 379.9. 380.9; 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 7.91 (d..1=1.58 Hz. 1 H) 7.49 (d, .1=1.58 Hz. 1 H) 5.43 - 5.75 (m. 1 H) 4.01 (dd, J=l 1.43. 3.55 Hz, 2 H) 3.42 (td. J=13.95. 3.78 Hz, 2 H) 3.32 (t, J=l 1.35 Hz, 2 H) 2.98 (tt, J=l 1.37,3.53 Hz. 1 H) 2.52 (s, 3 H) 1.77 (đ..1=10.88 Hz, 2 H) 1.56 - 1.69 (m. 2 H). OH nije vidljiv.
Korak 3: sinteza 5-bromo-3-|(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino)-N-|(4,6-dimetil-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
Mešani rastvor 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-2-metilbenzojeve kiseline (250 mg, 0.66 mmol) u suvom DMF (3.0 ml) na 0° C u balonu od azota je tretiran sa HATU (327 mg, 0.86 mmol) i DIPEA (230 pl, 1.3 mmol). kap po kap. Nastao rastvor je mešan tokom 5 min, a tada je tretiran sa 3-(aminometil )-4.6-dimetil-1.2-dihidropiridin-2-on (89%. 136 mg, 0.79 mmol). Nastala suspenzija je mešana na 0° C tokom 20 min. a tada je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon 18 h je dodan 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-dihidropiridin-2-on (25 mg), a mešanje je nastavljeno tokom dodatnih 25 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom (30 ml) i CH2CI2(30 ml). Slojevi su odvojeni, a vodena faza je ekstrahovana sa Cl KL (3 x 15 ml). Spojene organske faze su isprane sa zasićenim rastvorom NaHCOs (vod.) (45 ml), vodom (2 x 50 ml), slanicom (2 x 50 ml) pa su osušeni (MgS04). filtrirani i koncentrovaniin vacuo.Ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (SNAP-punjenje od 10 g. Isolera, 0-3% MeOH:CI-hCb). a tada je smrvljen sa etrom. Nastala čvrsta materija je sakupljena filtracijom pa je osušenain vacuona 40° C kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (259 mg, 77%) u formi prljavo-bele čvrste materije. LC-MS 100%, 4.04 min (LC-MS postupak od 7 min), m/z = 512.0, 513.0. 514.0,515.0; 'H NMR (500 MHz, aceton) 8 10.71 (s. IH). 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.25 (d, J = 1.9 Hz, IH), 5.91 (s. IH), 5.76 (tt, .1 = 56.2, 4.3 Hz, 111), 4.40 (d..! = 5.5 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 11.3. 4.2 Hz, 2H), 3.52 (td. J = 14.6. 4.2 Hz, 211). 3.33 - 3.23 (m. 2H). 3.02 (tt. J = 11.6. 3.9 Hz. IH). 2.32 (s. 3H). 2.28 (s. 3H), 2.24 (s, 3H), 1.73 (dd..1 = 12.4. 1.9 Hz, 2H), 1.59 (qd, J = 12.2, 4.5 Hz. 2H).
Korak 4: sinteza 5-((2,2-difluoroetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamida
U bocu sa okruglim dnom i dva grla, 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetir)(oksan-4-il)amino]-N-|(4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil|-2-metilbenzamid (200 mg, 0.39 mmol) i 4-f4-(4.4,5,5-tetrameti]-l,3.2-dioksaborolan-2-il)benzilJmorfolin (130 mg, 0.43 mmol) u dioksanu (3.0 ml) su tretirani sa rastvorom Na^CCb (145 mg, 1.4 mmol) u vodi (1.0 ml). Smeša je kratko sonifikovana, a gasoviti azot je propuštan kroz nastalu suspenziju uz pomoć duge igle tokom 5 min. Suspenzija je tada tretirana sa paladijum-trifenilfosfanom (1:4) (45 mg, 0.04 mmol). a gasoviti azot je ponovo propuštan kroz nastalu suspenziju tokom dodatnih 5 min. Reakciona smeša je tada grejana do 100° C tokom 8 h pa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smešaje tretirana sa vodom (20 ml) i 10% MeOH/CH?Cb (15 ml). Slojevi su odvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan sa 10% MeOH/CT-bCb (3 x 5 ml). Spojene organske materije su isprane sa slanicom (55 ml), osušene (MgSCM). filtrirane i koncentrovanein vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen uz pomoć koionske hromatografije (SNAP-punjenje od 10 g. Isolera. 0-5% MeOH/CH2Cb) i tretiran sa etrom (10 ml), nakon čega je kratko sonifikovan. ugrejan u vodenoj banji i ohlađen na ledu. Nastala bela čvrsta materija je sakupljena uz pomoć filtracije i isprana sa etrom (5 ml). Čvrsta materija je osušenain vacuona 40° C tokom 35 h kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (159 mg. 67%) u formi prljavo-bele čvrste materije. LC-MS 100%, 3.09 min (LC-MS postupak od 7 min), m/z = 609.15; 'H NMR (500 MHz. aceton) 6 10.72 (s, 1H). 7.63 (d, J = 1.5 Hz, IH), 7.60 (d..1 = 8.1 Hz, 2H). 7.54 (t..1 = 5.2 Hz, IH). 7.41 (d, J = 1.6 Hz, IH), 7.39 (d, J = 8.1 Hz. 2H), 5.91 (s. IH), 5.76 (ttt, J = 56.4. 30.4, 4.4 Hz, 111). 4.44 (d, J = 5.5 Hz, 2H). 3.89 (dd. J = 11.4. 3.9 Hz, 2H). 3.65 - 3.55 (m. 6H). 3.50 (s. 211), 3.29 (t. J = 11.3 Hz, 2H), 3.07 (tt, J = 11.5, 3.6 Hz, IH), 2.40(s, 4H). 2.37 (s, 311). 2.34 (s. 3H), 2.22 (s, 3H), 1.82- 1.75 (m.2H), 1.61 (qd. J = 11.9. 4.1 Hz, 2H).
Primer 145: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamid
Korak1: sinteza 3-{((ls,4s)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
U ohlađeni rastvor jedinjenja tert-butil ((ls,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-K2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil)karbamat (1.0 g, 1.60 mmol) u 10 ml DCM su dodana 2 ml TFA, kap po kap. a reakciona smeša je mešana na st tokom 2 h. Reakciona masa je koncentrovana do suvoće pod smanjenim pritiskom, a dobiveni sirovi produkt je rastvoren u 10% MeOH u DCM paje ispran sa zas. NaHCO;,. vodom i slanicom. Organska faza je osušena preko NanSOa i koncentrovana pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo sirovo željeno jedinjenje (650 mg, 81%).
Korak 2: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor sirovog jedinjenja 3-((( ls,4s)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (650 mg, 1.32 mmol) i formaldehida (0.5 ml 38% rastvora, 13.26 mmol) u 10 ml metanola je dodan natrijum cijanoborohidrid (82 mg, 1.32 mmol) na 0° C, a smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smešaje podeljena između vode i 10% MeOFl u DCM, organski sloj je osušen preko NaiS04i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolone od aluminijum oksida kako bi se dobio željeni produkt, jedinjenje (450 mg, 65%).
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksi])(etil)amino)-2-metil-5-(l-metil-lH-pirazol-4-il)benzamida
Rastvor jedinjenja 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((is.4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzainid (150 mg, 0.29 mmol). (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (72 mg, 0.34 mmol), natrijum karbonata (110 mg. 1.06 mmol) u 10 ml dioksanaje degaziran sa argonom tokom 20 min. nakon čega je dodan Pd(PPh;0 (33 mg. 0.03 mmol), a smešaje grejana na 100° C preko noći. Reakciona masa je ohlađena do sobne temperature pa je razređena sa vodom, pri čemu je jedinjenje ekstrahovano u 10% MeOH u DCM, osušeno preko Na2S04i koncentrovano. a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu (100-200) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg. 26%).
Analitički podaci: LCMS: 519.40 (M + 1)<+>; HPLC: 95.98%{(%254 nm) (R,; 3.987; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 pl; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/R: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 111 NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.45(bs. IH), 8.12-8.09 (m, 2H). 7.80 (s. IH). 7.29 (s. IH). 7.10 (s. IH), 5.86 (s. IH), 4.27 (d, 2H, .1=4.8 Hz), 3.84 (s. 3H). 3.07-305 (m, 2H). 2.67-2.63 (m, 2H). 2.21 (s. 3H). 2.15 (s, 3H), 2.12-2.11 (s. 3H+3H+3H). 1.79-1.75 (m, 4H), 1.36-1.11 (m. 4H). 0.80 (t, 3H, .1=6.0 Hz).
Primer 146: N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-<4>'-((4-metiI-l,4-diaze<p>an-l-il)metil)-(l,<r->
bifenil]-3-karboksamid
Korak1: sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4'-formil-4-metil-|l,r-bifenil]-3-karboksamida Rastvor jedinjenja 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((l s.4s)-4-(dimetilamino)cikloheksir)(etil)amino)-2-meti!benzamid (380 mg, 0.73 mmol), (4-formilfenil)boronske kiseline (165 mg, 1.10 mmol), natrijum karbonata (280 mg, 2.6 mmol) u 5 ml dioksana je degaziran sa argonom tokom 20 min, nakon čega je dodan PdtPPhj) (84 mg. 0.07 mmol), a smeša je grejana na 100° C tokom 5 h. Reakciona masa je ohlađena do sobne temperature pa je razređena sa vodom, pri Čemu je jedinjenje ekstrahovano u 10% MeOH u DCM. osušeno preko Na2S04i koncentrovano. a sirovi materijal je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu (100-200) kako bi se dobilo željeno jedinjenje (250 mg, 63%). Korak 2: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-((4-metil-l ,4-diazepan- l-il)metil)-| 1,1 '-bifenil]-3-karboksamida
U mešani rastvor jedinjenja N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1 s,4s)-4-(dimetilamino)cik!oheksil)(etil)amino)-4l-fonTiil-4-metil-[l.r-bifenil]-3-karboksamid (90 mg, 0.16 mmol) i 1 -metil-1.4-diazepana (0.56 g. 0.49 mmol) u 2 ml metanola je dodana sirćetna kiselina (0.03 mL. 0.49 mmol). a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je ohlađena do 0° C pa je dodan natrijum cijanoborohidrid (25 mg, 0.41 mmol), a sve je mešano na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Reakciona smešaje neutralizovana sa zas. NaHCO?, a jedinjenje je ekstrahovano u DCM. osušeno preko Na^SOa. koncentrovano pod smanjenim pritiskom i prečišćeno uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (26 mg, 25%).
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 641.50 (M+ 1)<+>; HPLC: 97.72% (@ 254 nm) (R,: 3.783; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05%o TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5%> B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-D(„ 400 MHz) 5 11.45 (bs, IH), 9.54 (s, IH). 8.20 (s. IH), 7.74 (d,
.7=7.6 Hz, 2H), 7.57 (d,.7= 7.6 Hz, 2H), 7.42 (s. IH), 7.26 (s. 111), 5.87 (s. IH), 4.29 (d..7= 4.0 Hz, 2H), 3.83 (m. 4H). 3.25 (m. 3H). 3.17-3.12 (m. 4H), 2.84 (s, 3H), 2.69, 2.68 (2s. 6H). 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). 2.10-1.89 (m, 6H). 1.46-1.44 (m, 4H). 0.84(t..7=7.2 Hz. 3H )• Primer 147: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-[l,r-bifeniI|-3-karboksamid
Korak 1: metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoat
U mešani rastvor meti! 5-bromo-3-((( lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonii)amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (10 g, 22.72 mmol) i acetaldehida (2.99 g. 67.95 mmol) u dihloroetanu (100 mL) je dodana sirćetna kiselina (8.18 g. 136.33 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (14.45 g, 68.16 mmol) na 0° C. a reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, ostatak je rastvoren u vodi pa je ekstrahovana uz pomoć 5% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani kako bi se dobio metil-5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoat, koji je korišćen kao takav u sledećoj reakciji (9 g, 84.66%).
Korak 2: tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoiI)-2-metilfenil)amino)cikloheksil)karbamat
Vodeni NaOH (1.15 g, 28.84 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-((( lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoata (9 g, 19.23 mmol) u etanolu (10 mL), a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je zakiseljena do pH 6 uz pomoć razređene HC1, a tada do pH 4 uz pomoć limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobila odgovarajuća kiselina (8.6 g. 98.50%).
Malopre pomenuta kiselina (8.6 g, 18.90 mmol) je rastvorena u DMSO (7 mL) pa je dodan 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (5.74 g, 37.80 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PyBOP (14.70 g. 28.35 mmol). Reakciona smešaje mešana preko noći. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem kako bi se dobio tert-butil ((lr.4r)-4-((5-bromo-3-f((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenir)amino)cikloheksil)karbamat (10.2 g. 91.89%).
Korak 3: 3-(((lr,4r)-4-aminocikIoheksiI)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-đihiđropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzarnid
tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)amino)cikloheksil)karbamat (3 g. 5.10 mmol) je rastvoren u DCM (20 mL). a tada je dodan TFA (5 mL). Reakciona smešaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a tada je dodan zasićeni rastvor NaHC03. Smeša je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. a spojeni ekstrakti su isprani sa vodom i slanicom, osušeni preko bezvodnog Na2S04. filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etir)amino)-5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (2.2 g. 87.50%).
Korak4: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-3<2->(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamid
3-(((lr.4r)-4-aminocikloheksiI)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (2.2 g, 4.50 mmol) je rastvoren u DCM (25 mL) pa je ohlađen do 0° C, a tada je dodan formalin (0.49 g. 16.26 mmol). Reakciona smešaje mešana na istoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (2.39 g, 11.22 mmol). a reakciona smešaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a u ostatak je dodana voda. Smeša je ekstrahovana uz pomoć 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksir)(etil)amino)-2-metilbenzamid (2.3 g. 98.71%) koji je bio korišćen kao takav u sledećoj reakciji.
Korak 5: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)amino)-4-metil-[l,l'-bifenil|-3-karboksamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-ii)meti!)-3-(((l r.4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida( 1 ekv.) i fenilboronske kiseline (1.5 ekv.) u smeši dioksan/vodaje dodan NaiC03 (3.6 ekv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.1 ekv.). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli {0.07 g. 23.92%). LCMS: 515.45 (M + 1)<+>; HPLC: 92.45%(( a)254 nm) (R,; 4.672; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5%> B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/đ, 400 MHz) 8 11.48 (bs, IH). 9.41 (bs, 1H). 8.23 (bs, 1II). 7.63 (d. 2H, J=4.8Hz), 7.50-7.20 (m, 5H), 5.86 (s, IH), 4.29 (d. 2H). 3.12 (m, 3H). 2.68 (s, 6H). 2.25 (s. 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.95 (m,4H), 1.44 (m. 4H). 0.84 (t. 311).
Primer 148: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((( 1 r,4r)-4-(dimetilamino)eikloheksil)(etil)amino)-4.4'-dimetil-[l,r-bifenil)-3-karhoksamid
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1 r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)amino)-4,4'-dimetiI-[l,r-bifenil|-3-karboksamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-ii)metir)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i p-tolilboronske kiseline (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan NaiCOj (3.6 ekv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPfi3)4 (0.1 ekv.), a reakciona smešaje ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.15 g, 51.30%). LCMS: 529.40 (M + 1)<+>: HPLC: 93.61%< a254 nm) (R,; 4.761; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); >H NMR (DMSO-rfđ, 400 MHz) 5 11.47 (bs, IH), 9.40 (bs. IH). 8.21 (bs. IH). 7.53 (d, 2H, J=6.8Hz), 7.38 (bs, IH), 7.26 (d. 2H. J=7.6Hz), 5.86 (s. IH), 4.29 (d. 2H. J=4Hz), 3.15 (m, 2H). 2.69 (s, 3H). 2.68 (s. 3H). 2.33 (s, 3H). 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.95 (m. 4H), 1.44 (m, 4H). 0.84 (t. 3H).
Primer 149: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-5-(((lr,4r)-4-(dimetiIamino)cikloheksil)(etil)am
karboksamid
Korak1: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetiIamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(trifluorometil)-[l,r-bifenil|-3-karboksamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((( 1 r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (4-(trifluorometil)fenil)boronske kiseline (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan Na^CO.i (3.6 ekv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.V)4(0.1 ekv.). a reakciona smešaje ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na?S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćeni uz pomoć hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.08 g. 23.52%). LCMS: 583.45 (M + 1)<+>; HPLC: 94.04% (@ 254 nm) (Rf: 5.168; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) 5 11.48 (s, IH). 9.41 (bs. IH). 8.27 (bs. IH). 7.88 (d. 2H. J=8Hz), 7.81 (d, 2H. J=8Hz), 7.51 (s, IH). 7.34 (s, IH), 5.87 (s. IH), 4.30 (d. 2H. J=4.4Hz). 3.16 (m. 311). 2.85 (m, IH), 2.69 (s, 3H), 2.68 (s. 3H), 2.26 (s, 3H). 2.21 (s. 311). 2.11 (s. 3H). 1.94 (m, 4H), 1.45 (m. 4H). 0.85 (t, 3H..1=6.8 Hz).
Primer 150: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(«l r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(meti1sulfonil)-| 1,1 '-bifenil|-3-
karboksamid
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)am
karboksamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-I.2-dihidropiridin-3-ir)metil)-3-((Ur.4r)-4-(dimetitamino)cikloheksil)(etir)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (4-(metilsulfoniI)fenil)boronske kiseline (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan NaiCCi (3.6 ekv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPli3)4(0.1 ekv.), a reakciona smešaje ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na?S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.12 g, 34.68%). LCMS: 593.45 (M + 1)<+>; HPLC: 98.74% (@ 254 nm) (R,; 4.194; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05%> TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-d6. 400 MHz) o 11.48 (bs, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.26 (s. IH), 7.99 (d, 2H. J=8.4Hz). 7.93 (d. 2H, J=8.4Hz). 7.51 (s, IH), 7.34 (s, IH), 5.87 (s, IH). 4.30 (d. 2H. J=4.4Hz). 3.24 (s. 3H). 3.30 (m. 3H). 2.80 (m. 1 H), 2.69 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.26 (s. 3H). 2.21 (s. 3H), 2.11 (s. 3H), 1.93 (m, 411), 1.45 (m, 4H),0.84(t,3H. J=6.8Hz).Primer 151: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamid
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciklohek$il)(etil)amino)-2-metil-5-(piritnidin-5-il)benzamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr.4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i pirimidin-5-ilboronske kiseline (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan NazCOj (3.6 ekv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smešaje razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu kako bi se dobila TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metiI)-3-(((lr.4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamida (0.12 g, 39.33%). LCMS: 517.60 (M + lf; HPLC: 99.55% (@ 210 nm-370 nm) (R,; 3.996: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tI6,400 MHz) 5 11.47 (bs, IH). 9.43(bs, IH), 9.18 (s. IH). 9.14 (s. 2H), 8.22 (s, IH). 7.59(s. IH), 7.41 (s. IH), 5.87 (s, 1H).4.30 (d, 2H), 3.14 (m, 3H). 2.69 (s. 3H+3H). 2.27 (s. 3H). 2.22 (s. 3H). 2.11-2.07 (m. 4H), 1.95 (m. 4H). 1.44 (m. 4H). 0.84 (t, 3H).
Primer 152:sinteza TFA soli A^-^^-dimetil^-okso-l^-dihidropiridin-S-iOmetiK^-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(furan-2-il)-2-metilbenzamida
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g, 2.0 mmol) i 4-N-Boc-aminocikloheksanona (5.69 g, 2.67 mmol) u dihloroetanu (50 mL) je dodana sirćetna kiselina (7.4 g, 12 mmol). Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (13.1 g, 6.17 mmol) na 0° C. a smešaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smešaje ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom. organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata pa su koncentrovaniin vacuo.Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) uz eluiranje sa 10% etil acetatom u heksanu kako bi se dobilo 3.5 g više polarnog/ram'-izomera5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metiibenzoata (38%) u formi prljavo-bele čvrste materije. Ml NMR (CDCb. 400 MHz) 5 7.21 (s, IH), 6.89 (s. IH). 4.41 (bs. IH). 3.85 (s, 3H). 3.41-3.64 (m, 2H), 2.11 -2.21 (m, 6H), 1.42 (s.9H). 1.22-1.36 (m. 5H).
Korak 2: sinteza metil 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metilbenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (55 g, 0.12 mol) i acetaldehida (11 g. 0.25 mol) u dihloroetanu (550 mL) je dodana sirćetna kiselina (44.6 g, 0.74 mol). Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid ( 79 g, 0.37 mol) na 0° C, a smešaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodan je vodeni natrijum bikarbonat, organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko bezvodnog natrijum sulfata pa su koncentrovaniin vacuo.Sirovo jedinjenje je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (35 g, 59%) u formi prljavo-bele čvrste materije.
Korak 3: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)-metil)karbanioil)-2-metilfenil(etil)amino)cikloheksiI)karbamata
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-((( 1 r.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil )(etil)-amino)-2-metilbenzoata (25 g, 0.053 mol) u EtOH (100 mL) je dodan vodeni NaOH (3.5 g. 0.08 mol u 10 mL H2O). Nakon mešanja na 60° C tokom 1 h. smešaje zakiseljena do pH 4 pa je ekstrahovana sa 10% metanolom u DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobilo 24.2 g odgovarajuće kiseline. U mešani rastvor pomenute kiseline (24 g, 0.053 mol), 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on (16 g. 0.11 mol) i trietil amina (5.3 g, 0.053 mmol) u DMSO (50 mL) je dodan PyBop (41 g, 0.079 mol). Nakon mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, smešaje izlivena u ledenu vodu paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata pa su koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je ispran sa vodom (2 x 1 L) pa sa acetonitrilom (3 x 150 mL) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 g. 77%).
Korak4:sinteza 3-(((lr,4/,)-4-aminocikIoheksil)(etil)amino)-5-bromo-A<r->((4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metill:enil(etil)amino)cikloheksil)karbamata(6.0 g. 10 mol) u DCM (30 mL) je dodan TFA (10 mL) na 0° C. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi pa je koncentrovana do suvoće. Ostatak je neutralizovan uz pomoć dodavanja zasićenog rastvora bikarbonata (40 mL). a tada je usledila ekstrakcija sa 20% metanolom u DCM (4 x 100 mL). Spojene organske faze su osušene preko NaiSOa. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 5.0 g jedinjenja iz naslova koje je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja.
Korak4:sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-I,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,
4r)-4-(dimetilamino)cik]oheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor 3-(((l7-,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-A<r->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (5.0 g, 10 mmol) u dihlorometanu (50 mL) je dodan vod. 35% rastvor formaldehida (2.9 g, 36 mmol) na 0° C. Tada je dodan Na(OAc)3BH (5.43 g, 25.6 mmol). a smešaje mešana tokom 2 h na 0° C. Dodana je voda (100 mL). a nakon toga je usledila ekstrakcija sa 20% metanolom u DCM (3 x 200 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiS04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na koloni od aluminijum oksida uz eluiranje sa 6-7% MeOH u DCM kako bi se dobi lo jedinjenje iz naslova (4.5 g. 94%).
Opšta procedura za Suzuki-evu reakciju za sintezu Jedinjenja 152-156, 158-162, 165, i 167.
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil}-3-((( 1 r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamiđa (1 ekv.) i određenih boronska kiselina/pinakol estera (1.2 ekv.) u smeši dioksan/voda (4:1) je dodan Na2CO? (3.6 ekv.). Rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.i)4(0.1 ekv.). Mešana reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2-4 h pod argonom. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razređena sa 10% MeOH/DCM pa je filtrirana. F<i>ltrat je koncentrovan, razređen sa vodom pa je ekstrahovan sa 10% MeOH u DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkti su prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu (veličina sita: 100-200) ili uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobili produkti u formi slobodne baze ili TFA soli.
Analitički podaci za TFA so7V-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-ir)metil-3-(((lr.4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(furan-2-il)-2-metilbenzamida (0.08 g. 27%); LCMS: 505.55 (M + lf: HPLC: 97.76% (@ 210 nm-370 nm) (R,: 4.192; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/ri. 400 MHz) 5 11.46 (bs. IH). 8.21 (s. IH), 8.17 (s, IH), 7.71 ( s, IH), 7.42 (s. IH), 7.25 (s. IH). 6.93(s, IH), 6.57 (s. IH), 5.86 (s. IH), 4.29 (d. 211). 3.08-3.06 (m. 311). 2.67 (m. IH). 2.21 (s. 3H+3H+3H). 2.18-2.11 (s, 3H+3H), 1.80 (m,4H), 1.37-1.19 (m, 4H). 0.81 (t. 3H).
Primer 153: TFA so A,-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikJoheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(hinolin-8-il)-benzamida (0.09 g, 27%);
Analitičkipodaci za TFA so: LCMS: 566.70 (M + l)": HPLC: 93.94% (@ 210 nm-370 nm) (R,; 4.352; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: l .4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/e. 400 MHz) 5 11.43(bs, IH), 9.34 (bs, IH), 8.88 (s, IH), 8.45 (d, 1H,J=7.6 Hz), 8.16 (t, IH). 8.00 (d. IH. J=7.2Hz). 7.80-7.79 (m, IH), 7.70-7.69 (m. IH), 7.59-7.57 (m. IH). 7.49 (m, IH). 7.29 <s,lH), 5.85(s, IH), 4.28 (d, 2H, .1=3.6 Hz). 3.16-3.11 (m. 3H), 2.70-2.69 (m, 1H+3H+3H), 2.30(s, 3H). 2.19(s, 3H), 2.09 (s. 3H). 1.99 (m. 4H), 1.45 (m,4H), 0.93 (t, 3H). Primer 154: TFA so 5-(2-aminopirimidin-5-il)-A</->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino-2-metilbenzamida (0.14 g, 45%) Analitički podaci za TFAso: LCMS: 532.65(M + 1)<+>: HPLC: 98.49% (@ 210 nm-370 nm) (R,; 3.692;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5%> B do 95%> B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ć/6, 400 MHz) 5 11.48 (bs. IH), 9.45 (bs, 1 H), 8.17(s, IH). 7.42 (s. IH), 7.24 (s, IH), 5.87 (s, IH), 4.28 (d, 211, .1=4.4 Hz), 3.12(m. 3H), 2.69 (s, 3H+3H), 2.23 (s. 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96 (m, 4H), 1.43 (m. 4H), 0.83 (t. 3H). Primer 155: TFA so A<r->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)amino)-2-meti1-5-(piridin-4-il)-benzamida (0.17 g, 56%) Analitičkipodaci za TFA so: LCMS: 516.60 (M + 1<f>; HPLC: 92.58% (@ 210 nm-370 nm) (R,; 3.775; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%> B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.45 (bs, 1H). 9.74 (bs. 1H), 8.85 (d, 2H. J=5.2 Hz). 8.30 (t, IH). 8.24 (d. 2H..1=4.8 Hz). 7.71 (s. IH), 7.55 (s. IH). 5.88 (s. IH). 4.31(d,2H,J=4.4Hz), 3.16 (m,3H), 2.79 (m. IH), 2.69(s. 3H+3H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s. 3H). 2.11 (s. 3H). 1.98-1.90 (m. 4H). 1.47-1.45 (m.4H). 0.84 (t,3H). Primer 156: TFA so A^-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil-3-(((lr,4rH-(dimetilamino)cikIoheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiophen-3-il)-benzamida (0.07 g, 56%)
Analitički podaci za TFAso: LCMS: 521.55(M + 1)<+>; HPLC: 98.64% (@ 210 nm-370 nm)
(R,; 4.366;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/6,400 MHz)5 11.47 (bs.lH), 9.45 (bs. 1H), 8.18 (s,l H), 7.87 (s.lH),
7.63 (s.lH), 7.54(m, 2H). 7.32(s, 1H), 5.87(s. 1H). 4.29(d. 2H). 3.13 fm. 3H), 2.69 (m. 6H+1H), 2.22 (s. 3H+3H), 2.11 (s.3H), 1.96 (m, 4H) 1.44 (m,4H). 0.84 (UH).
Primer 158: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-metiIpiridin-3-il)benzamid
Analitičkipodaci: LCMS: 530.55 (M + 1<f>; HPLC: 96.45%(@210 nm-370 nm) (R,; 4.192: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05%) TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d«, 400 MHz) 5 11.45 (bs. I H). 8.70 (s. IH), 8.19 (s, IH). 7.95-7.90 (d, IH, J=8.0Hz), 7.39 (s, IH), 7.35-7.30 (d. 111, J=7.6Hz). 7.22 (s, IH), 5.86 (s. 1I I), 4.29 (d. 2H), 3.05-3.15 (m, 2H). 2.60-2.70 (m. 1 H), Tri protona su spojena sa signalom od rastvarača. 2.25-2.35 (m, 6H+1H). 2.0-2.25 (3H+3H+3H), 1.70-1.90 (m, 4H), 1.30-1.20 (m. 2H). 1.0-1.20 (m. 2H). 0.75-0.85 (t, 3H)
Primer 159: TFA so/V-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lM')-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-2-metilbenzamida
(0.13 g, 50%)
Analitički podaci za TFAso: LCMS: 534.60 (M + 1 f: HPLC: 96.65% {% 210 nm-370 nm)
(R,; 4.352;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05%
TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.46 (bs. IH), 9.42 (s, IH), 8.17 (s. IH). 7.13 (s. IH),6.92 (s. 1H). 5.85 (s. IH). 4.25-4.30 (d, 2H). 3.0-3.20 (m, 3H). 2.65-2.75 (m. 3H+3H). Tri protona su spojena sa signalom od rastvarača. 2.39 (s, 3H), 2.05-2.25 (m, 3H+3H+3H+1H). 1.90-2.0 (m, 2H). 1.80-1.90 (m. 2H). 1.35-1.50 (m. 4H), 0.80-0.90 (t. 3H).
Primer 160: TFA so 5-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4-iI)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (0.06 g, 58%)
Analitički podaci za TFAso: LCMS: 533.80 (M + 1)<+>; HPLC: 90.76% (@ 254 nm) (R,; 5.583;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR(DMSO-^6.400 MHz) 5 11.45 (bs, IH), 9.27 (s. IH), 8.1 (s. IH). 7.52 (s. IH), 7.11 (s. IH), 6.95 (s, IH), 5.85(s. IH), 4.20-4.30 (d. 2H), 3.76 (s. 211). 3.0-3.20 (m, 211), 2.60-2.75 (m, 3H+3H),2.33 (s, 311), 2.19 (s. 311), 2.10 (s, 3H). 1.80-2.0 (m. 4H). 1.35-1.50 (m. 4H), 0.80-0.90 (t. 3H).
Primer 161:TFA so /V-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3)-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(l-metilpirazol-3-il)-2-metiIbenzamida (0.1 g, 33%)
Analitičkipodaci za TFA so: LCMS: 519.45 (M + 1 f: HPLC: 96.61% (@ 254 nm) <R,: 6.026: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%> B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.47 (bs. IH). 9.46 (s, IH), 8.20 (s. IH), 7.45 (s. IH), 7.28 (s, IH), 7.06 (s, IH), 6.38 (s, IH), 5.86 (s, IH), 4.20-4.25 (d. 2H). 3.83 (s. 3H), 3.0-3.15 (m, 3H), 2.60-2.80 (m. 1H+3H+3H). 2.24 (s. 3H), 2.19 (s. 3H). 2.10 (s. 3H), 1.80-2.0 (m. 2H+2H), 1.40-1.50 (m, 4H), 0.80-0.90 (t, 3H).
Primer 162: TFA so A-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lMr)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(piridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.1 g, 33%)
Analitički podaci za TFAso: LCMS: 516.50 (M + 1)+; HPLC: 89.96% (@ 254 nm) (R,; 6.026:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%> B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B):<[>H NMR <DMS(W<s, 400 MHz) 5 11.46 (bs, IH). 9.35 (s, 1 H), 8.96 (s. IH), 8.63 (s. IH), 8.22 (m, 2H), 7.61 (s, IH), 7.51 (s, IH). 7.33 (s, IH). 5.86(s. IH). 4.25-4.35 (d. 2H). 3.05-3.15 (m, 3H), 2.6-2.80 (m, 1H+3H+3H), 2.25 (s. 3H), 2.21 (s. 3H), 2.10 (s. 311), 1.90-2.0 (m, 2H+2H), 1.40-1.50 (m, 4H), 0.80-0.90 (t. 3H).
Primer 163: NN-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(2H-tetrazol-5-il)-[l,r-bifenil|-3-
karboksamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4.6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((( 1 r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 5-(4-(4,4.5.5-tetrametil-l,3.2-dioksaborolan-2-il)fenil)-2H-tetrazola (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan Na2CO.; (3.6 ekv.), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPhi)4(0.1 ekv.). a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2SO.t. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu. a tada uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.125 g. 35.50%). LCMS: 583.40 (M + 1)<+>; HPLC: 90.26% (@ 210-370nm) (R,; 4.130; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05%o TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSCHfc, 400 MHz) 5 11.46 (bs. IH). 9.32 (bs. IH), 8.23-8.11 (m. 3H). 7.90 (d. 2H, J=7.2Hz). 7.50 (s, IH). 7.34 (s, IH), 5.87 (s, IH,). 4.30(d. 2H. J=4.4Hz). 3.59 (s, IH). 3.13 (m, 3H), 2.69-2.68 (m.6H), 2.26-2.10 (m, 9H), 1.94 (m. 4H). 1.44 (m. 411) 0.85{m. 3H).
Primer 164: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)amino)-2-metil-5-(2-metilpirimidin-5-il)benzamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-đimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((l r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksiI)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidina (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan Na2C03 (3.6 ekv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd (PPfh)4(0.1 ekv.), a reakciona smeša je ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko NazSOa. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu, a tada uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.08 g, 25.97%). LCMS: 531.65 (M + 1)<+>; HPLC: 99.61%( a210-370 nm) (R,: 3.981: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%> B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-</đ, 400 MHz) 5 11.47 (bs, 1H).9.46 (bs. 111). 9.00 (m,2H). 8.20 (s. IH). 7.53 (s. IH). 7.35 (s, IH). 5.86(s, lH),4.29(m. 2H). 3.125-3.127(m,3H),2.69-2.50(m, 10H),2.25-2.10(m, 9H). 1.94 (m, 4H), 1.43(m, 4H), 0.83(m. 3H).
Primer 165:TFA so 5-(l,3-dimetil-lH-pirazol-4-il)-Ar-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino-2-metilbenzamida (0.18 g, 69%)
Analitičkipodaci za TFA so: LCMS: 533.80 (M + 1)<+>; HPLC: 87.18% (@ 210-370 nm) (R,: 3.946; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR(D20-Jfi,400 MHz) 8 7.93 (s. IH). 7.62-7.57 (m 2H). 6.31(s, IH). 4.492-4.494 (m, 2H), 3.92-3.80 (m, 6H), 3.33(m, IH). 2.82 (m. 6H). 2.39-2.28 (m. 16H). 1.66 (m. 4H), 1.04(m,3H).
Primer 166: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((l r,4r)-4-(dimetiIamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metiI-5-(tiazol-4-il)benzamid
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-{(( lr.4r)-4-(dimetilamino)ciklobeksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 4~(4.4.5.5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)tiazola (1.5 ekv.) u smeši dioksan/voda je dodan NaiCO;, (3.6 ekv.). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh3.)4 (0.1 ekv. ), a reakciona smešaje ponovo očišćena sa argonom tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 2 h. Reakciona smešaje razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni ekstrakti su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen uz pomoć hromatografije na silika-gelu. a tada uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.07 g, 28.40%). LCMS: 522.50 (M + 1)<+>; HPLC: 99.22% (@ 210-370 nm) (R,; 4.114: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<l>H NMR (DMSO-c/d.400 MHz) 5 11.48 (bs, IH), 9.36 (bs, IH). 9.18 (s. IH). 8.19 (bs. 2H). 7.79 (s, 11I). 7.58 (s. IH), 5.87 (s, IH). 4.30 (d. 2H. J = 4.4 I Iz), 3.11 (m, 311), 2.73-2.68 (m. 7H). 2.22 (s. 6H), 2.11 (s, 3H). 1.95 (m. 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t. 3H).
Primer 167: TFA so A^-((4,6-dimetil-2-okso-l>dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lM'')-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiophen-2-il)-benzamida (0.05 g, 50%).
Analitički podaci:LCMS: 521.55 (M + 1)<+>; HPLC: 88.13% (@ 210-370 nm) (R,; 4.412;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5<p>; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d<5.400 MHz) 5 11.47 (bs, 1H). 9.32 (bs. 1H). 8.22 (t, 1H), 7.53-7.38 (m, 3H), 7.20-7.13 (m, 2H), 5.87 (s, IH), 4.28 (d, 2H, J = 3.6 Hz). 3.10 (m. 3H). 2.69-2.68 (m. 7H). 2.21 (s. 6H), 2.11 (s. 3H), 1.95-1.90 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t. 3H).
Primer 168:Sinteza TFA soli A<f->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil-3-(((lr,4/-)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-benzamida
Korakl:sinteza metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzoata
U mešani rastvor metil 3-((( 1 r.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.5 g, 1.2 mmol) i 2-bromotiazola (0.22 g. 1.38 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan CS2CO3{0.94 g. 2.88 mmol) na sobnoj temperaturi. Rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min, a tada je dodan PdCb(PPh3)2(0.08 g, 0.11 mmol). Smešaje grejana na 100° C tokom 3 h pod argonom, paje razređena sa vodom i ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušen preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.36 g.71%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metiI-5-(tiazol-2-il)-feniI)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata
U mešani rastvor metil 3-((( lr.4r)-4-{(tert-butoksikarbonil)-amino)-eikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzoata (0.36 g. 0.76 mmol) u etanolu (5 mL) je dodan vodeni NaOH (0.064 g, 1.60 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je grejana na 60° C tokom 1 h. a tada je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Koncentrat je zakiseljen do pH 4 pa je ekstrahovan sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobilo 0.26 g sirove kiseline. U mešani rastvor pomenute sirove kiseiina (0.26 g. približno 0.56 mmol) i 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.17 g, 1.13 mmol) u DMSO (3 mL) je dodan PYBOP (0.44 g, 0.85 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja preko noći. smeša je izlivena u led pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.15 g) koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.
Korak3: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metiI-5-(tiazol-2-il)benzamida
U mešani rastvor tert-butil ((lr.4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-t"enil)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata (0.15 g. 0.25 mmol) u dihlorometanu (3 mL) je dodan TFA (1 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pa je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, a u koncentrat je dodan NaHCOi. Nakon ekstrahovanja sa 10% MeOH/DCM, spojeni organski slojevi su isprani sa vodom i slanicom, osušeni preko bezvodnog Na2S04 i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.11 g jedinjenja iz naslova koje je direktno korišćeno u sledećem koraku. Korak 4: sinteza TFA soli A<r->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((l/-,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)aniino)-2-nietil-5-(tiazol-2-il)-benzamida U mešani rastvor 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropindin-3-il)metil)-2-metil-5-(tiaz.ol-2-il)benzamida (0.1 g, 0.20 mmol) u metanolu (3 mL) je dodan formalin (0.06 g. 2.0 mmol) na 0° C. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.025 g, 0.59 mmol). a smešaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10%> MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobila čvrsta materija koja je prečišćena uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.06 g. 56%). Analitički podaci za TFA so: LCMS: 522.60 (M + 1)<+>; HPLC: 92.00% (( a) 210-370 nm) (R,: 4.255; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); >H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.46 (bs, 1H), 9.39 (bs, 1H). 8.30 (t, IH), 7.90 (d, IH. J = 3.2 Hz), 7.78 (d, IH, J = 2.4 Hz), 7.71 (s. IH), 7.47 (s. IH). 5.88 (s. IH ), 4.30 (d. 2H..1 = 4 Hz). 3.11 (m, 3H). 2.77-2.68 (m. 7H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s. 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96-1.89 (m, 4H). 1.45 (m. 4H). 0.84 (t. 3H, J = 6.4 Hz).
Primer 169: sinteza A</->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(l-metil-lH-imidazoI-2-il)-benzamida
Korak 1: sinteza metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)amino)-2-metil-5-(l-metil-lH-imidazol-2-il)benzoata
U mešani rastvor metil 3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksir)-(etir)-amino)-2-metil-5-(4.4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.5 g. 1.15 mmol) i 2-bromo-1- metil-lH-imidazola (0.22 g, 1.38 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan CS2CO3(0.94 g. 2.88 mmol) pod argonom. Tada je dodan PdCl2(PPh:i)2 (0.08 g, 0.11 mmol), a smeša je grejana na 100° C tokom 4 h pod argonom. Dodana je voda. a smešaje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobio metil 3-((( lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cik!oheksil)-(etil)amino)-2-metil-5-(l-metil-lH-imidazol-2-il)benzoat (0.22 g. 40%).
Korak2:sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-
il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-metil-lH-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)cikloheksii)karbamata
U mešani rastvor metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)amino)-2- metil-5-(l-metil-lH-imidazol-2-il)benzoata (0.22 g, 0.47 mmol) u etanolu (3 mL) je dodan vodeni NaOH (0.028 g, 0.70 mmol). Nakon mešanja na 60° C tokom 1 h. smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, zakiseljena do pH 4 pa je ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobilo 0.16 g sirove kiseline. U mešani rastvor sirove kiselina (0.16 g. 0.35 mmol) i 3-(amino metil)-4. 6-dimetilpiridin-2(lH)-on (0.11 g. 0.70 mmol) u DMSO (3 mL) je dodan PYBOP (0.27 g. 0.53 mmol). Nakon mešanja preko noći, smeša je izlivena u ledenu vodu pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.12 g tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-( 1 -metil-1 H-imidazol-2-il)-fenil )-(etil)-amino)cikloheksil)karbamata koji je korišćen direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Sinteza 3-(((l r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-({4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-metil-lH-imidazol-2-il)benzamida U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-(f3-(((4.6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(l-metil-lH-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)cikloheksil)karbamata (0.12 g, 0.20 mmol) u DCM (3 mL) je dodan TFA (1 mL). Nakon mešanja tokom 1 h na sobnoj temperaturi smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. U ostatak je dodan zasićeni rastvor NaHCO.^nakon Čega sledi ekstrakcija sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom i slanicom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.1 g 3-(((lr.4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-metil-l H-imidazol-2-il jbenzamida koji je korišćen direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)amino)-2-metil-5-(l-metii-lH-irnidazol-2-il)benzarnida U mešani rastvor 3-(((lr.4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-( 1 -metil-1 H-imidazol-2-il)benzamida (0.1 g. 0.20 mmol) u metanolu (3 mL) je dodan formalin (0.06 g. 2.0 mmol) na 0° C. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.025 g, 0.59 mmol). a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodana je voda. a tada je usledila ekstrakcija sa 10?/o MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobila čvrsta materija koja je bila prečišćena uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.03 g. 28%). Analitički podaci za TFA so: LCMS: 519.65 (M + 1)<*>; HPLC: 96.10% (@ 254 nm) (R,; 3.976: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^,, 400 MHz) 5 11.47 (bs, IH), 9.60 (bs. IH). 8.24(bs, IH), 7.82 (s, IH), 7.78 (s, IH), 7.52 (s, IH). 7.35 (s. 111). 5.87 (s, IH ), 4.30 (bs. 2H), 3.86 (s, 3H), 3.10 (m. 3H), 2.69 (bs, 7H). 2.28 (s. 3H). 2.22 (s. 3H). 2.11 (s, 3H). 1.96-1.88 (m, 4H). 1.46 (m, 4H), 0.84 (bs, 3H). Primer 170: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikIoheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-(4-metiIpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid
jedinjenje 170 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 183 ispod.
Analitički podaci: LCMS: 614.75 (M + 1)<*>: HPLC: 98.17%(( a)210-370 nm) (R,; 3.598; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0. 05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-cfc, 400 MHz) 5 11.46 (bs. IH). 10.10 (bs. IH), 9.68 (bs. IH). 8.21 (m, 2H). 7.47 (s. IH). 7.38 (s. IH), 7.16 (s, IH). 7.05 (d, IH. J = 4.8 Hz), 5.87 (s. IH), 4.54-4.51 (m, 2H). 4.30 (d, 2H, .1 = 4 Hz), 3.53 (m. 2H), 3.13 (m. 7H). 2.86 (s. 3H). 2.76-2.68 (m. 7H), 2.24 (s, 3H), 2.22 (s, 3H). 2.1 (s. 311). 1.97-1.90 (m, 411), 1.43 (m, 4H), 0.83 (t. 3H. J = 6.4 Hz).
Primer 171:N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid
Jedinjenje 171 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 183 ispod.
Analitičkipodaci: LCMS: 573.75 (M + 1)<+>: HPLC: 95.92% (@ 210-370 nm) (R,: 3.891: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 fi: mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-A, 400 MHz) 6 11.46 (bs. IH). 8.19 (t, 1 H), 8.14 (d, IH. J = 4.8 Hz). 7.44 (s. IH). 7.32 (s. IH). 6.97 (s, IH). 6.88 (d. IH..1 = 4.8 Hz). 5.86 (s. IH), 4.29 (d, 2H. J = 4.4 Hz), 3.84-3.81 (m, 2H). 3.54 (m. 4H). 3.28-3.22 (m. 2H), 3.10-3.02 (m. 3H), 2.42 (m. 4H), 2.24 (s, 3H), 2.23 (s, 3H). 2.10 (s, 3H), 2.10 (s. 311). 1.66-1.50 (m. 411), 0.82 (t. 3H. J = 6.4 Hz).
Primer 172: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid
Jedinjenje 172 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 183 ispod.
Analitički podaci:LCMS: 600.75 (M + 1)<+>: HPLC: 99.58% (@ 210-370 nm) (R,; 3.460:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-t/6, 400 MHz) 5 11.46 (bs. IH). 9.59 (bs, IH), 8.92 (bs. 2H). 8.47 (s. IH), 8.16 (s, IH), 7.92 (d, IH, .1=7.6 Hz), 7.39 (bs. IH), 7.21 (bs, IH), 7.01 (d, IH..1=8.8 Hz), 5.87 (s. IH), 4.29 (d, 2H, J=5.2 Hz), 3.75 (q, 4H. J=5.2 Hz), 3.22 (m, 4H), 3.12 (m, 3H), 2.75 (m, IH). 2.69 (s, 3H), 2.68 (s. 3H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s. 3H). 2.11 (s. 3H). 1.97 (m. 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t, 3H. J=6.8 Hz).
Primer 173: N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid
Jedinjenje 173 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 183 ispod.
Analitički podaci:LCMS: 559.55 (M + 1)+; HPLC: 98.43% (@ 210-370 nm) (R,; 3.731:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DM SO-rffi, 400 MHz.) 6 11.45 (bs, 1 H). 8.86 (s. 2H). 8.48 (bs. IH). 8.21 (bs. IH). 7.94 (bs, IH), 7.45 (bs, IH), 7.25 (bs. IH). 7.02 (d. 1H,J=8.4 Hz). 5.87 (s. IH). 4.29 (d. 2H, J=3.6 Hz), 3.83 (m, 3H), 3.76 (bs, 4H), 3.30-3.15 (m. 7H), 3.10 (m. IH), 2.25 (s. 3H). 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75-1.50 (m, 4H). 0.84 (t, 3H).
Primer174:sinteza A^-^^-dimetil^-okso-l^-dihidropiridin^-ilJmetil-S^^lMr)^-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-benzamida
Korak1:sinteza metil 5-bromo-3-(((l r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metiIbenzoata
U mešani rastvor 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (10 g, 23 mmol) i acetaldehida (2.99 g, 68 mmol) u dihloroetanu (100 mL) je dodana sirćetna kiselina (8.18 g, 136 mmol). a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (14.45 g, 68 mmol) na 0° C, a smešaje mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, voda je dodana, a nakon toga je provedena ekstrakcija sa 5% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobilo 9 g jedinjenja iz naslova koje je bilo korišćeno bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 2: sinteza metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikIoheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonir)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metilbenzoata (2.0 g. 4.3 mmol) i bi-pinakolatodiborona (5.42 g. 21 mmol) u dioksanu je dodan kalijum acetat (1.25 g. 12.82 mmol) pod argonom. Tada je dodan PdCb(dppf)DCM (0.35 g, 0.42 mmol), a smešaje grejana na 80° C tokom 3 h pod argonom. Tada je dodana voda nakon čega je provedena ekstrakcija sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko NaiS04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.3 g, 70%).
Korak 3: sinteza metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzoata
U mešani rastvor metil 3-((( lr.4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.50 g. 1.15 mmol) i 2-bromopirazina (0.24 g, 1.49 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan CS2CO3(0.94 g, 2.89 mmol) pod argonom. Tada je dodan PdCb(PPh3)2(0.08 g, 0.11 mmol). a smeša je grejana na 100° C tokom 3 h pod argonom. Dodana je voda nakon čega je usledila ekstrakcija sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.29 g. 53%).
Korak4: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-eikloheksil)-karbamata
U mešani rastvor metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarboniI)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzoata (0.29 g. 0.62 mmol) u etanolu (3 mL) je dodan vodeni NaOH (0.037 g, 0.93 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja na 60° C tokom 1 h. smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, zakiseljena do pH 4 i ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobilo 0.24 g sirove kiseline. U mešani rastvor pomenute sirove kiseline (0.24 g. 0.52 mmol) i 3-(amino metil)-4.6-dimetilpiriđin-2(lH)-on (0.16 g, 1.05 mmol) u DMSO (3 mL) je dodan PYBOP (0.41 g, 0.79 mmol). Nakon mešanja preko noći, smeša je izlivena u ledenu vodu pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.3 g jedinjenja iz naslova koje je korišćeno direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 5: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksiI)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihiđropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-lenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata (0.3 g, 0.51 mmol) u DCM (3 mL) je dodan TFA (1 mL). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1 h smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dodan je zasićeni rastvor NaHCO.?nakon čega je usledila ekstrakcija sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom i slanicom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.24 g jedinjenja iz naslova koje je korišćeno direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 6: sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil){etil)amino)-2-mctil-5-(pirazin-2-il)benzamida U mešani rastvor 3-((( 1 r.4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida (0.24 g, 0.51 mmol) u metanolu (3 mL) je dodan formalin (0.15 g, 5.1 mmol) na 0° C. Dodan je natrijum cijanoborohidrid (0.06 g, 1.0 mmol). a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodana je voda nakon čega je usledila ekstrakcija sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Dobivena čvrsta materija je prečišćena uz pomoć preparativne HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.12 g, 47%). Analitički podaci za TFA So: LCMS: 517.50 (M + 1<f>; HPLC: 99.49% (@ 210-370 nm) ( Ri: 4.072; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; Mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%o B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 6 11.47 (bs. IH). 9.45 (bs. III). 9.26 (s. 1II). 8.71 (s, IH), 8.61 (s, IH), 8.23 (t. IH). 7.92 (s. IH). 7.74 (s. IH), 5.88 (s. IH). 4.31 (d, 2H. J = 4 Hz). 3.13 (m. 3H). 2.78 (m, IH), 2.69 (d, 6H..1 = 4.8 Hz), 2.28 (s. 3H), 2.22 (s. 3H). 2.12 (s. 3H). 1.96-1.92 (m. 4H), 1.45 (m, 3H), 0.84 (t, 3H..1 = 6.4 Hz).
Primer 175: sinteza A/-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etiI)amino)-2-metil-5-(5-metiIpirazin-2-iI)-benzamida
Korak1: sinteza metil 3-(((l r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzoata
U mešani rastvor metil 3-(((lr.4r)-4-((tert-butoksikarboniI)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5.5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.40 g, 0.92 mmol) i 2-bromo-5-metilpirazina (0.21 g. 1.19 mmol) u smeši dioksan/voda je dodan CS2CO3(0.75 g, 2.30 mmol) pod argonom. Tada je dodan PdCh (PPrrjh (0.064 g, 0.092 mmol), a smeša je grejana na 100° C tokom 3 h pod argonom. Dodana je voda, a tada je usledila ekstrakcija sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO-ua rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materi jal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.3 g. 56%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)karbamata
U rastvor metil 3-(((lr,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etii)-amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzoata (0.29 g, 0.49 mmol) u etanolu (3 mL) je dodan vodeni NaOH (0.029 g. 0.75 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja na 60° C tokom 1 h. smešaje koncentrovana pod smanjenim pritiskom, zakiseljena do pH 4 i ekstrahovana sa etil acetatom. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobilo 0.25 g sirove kiseline. U mešani rastvor pomenute sirove kiseline (0.25 g. 0.44 mmol) i 3-(amino metii)-4.6-dimetilpiridin-2( lH)-on (0.13 g. 0.88 mmol) u DMSO (3 mL) je dodan PYBOP (0.34 g. 0.66 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon toga mešanje je nastavljeno preko noći. a smeša je izlivena u led paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.2 g jedinjenja iz naslova koje je korišćeno direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak3: sinteza 3-(((lr,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(5-metiIpirazin-2-il)benzaniida
U mešani rastvor tert-butil ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)karbam (0.2 g, 0.33 mmol) u DCM (3 mL) je dodan TFA (1 mL). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1 h. smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dodan je zasićeni rastvor NallCO}. a tada je usledila ekstrakcija sa 10%>MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom i slanicom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 0.15 g jedinjenja iz naslova koje je korišćeno direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 4: sinteza TFA soli A<r->((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((lr,4r)-4-(dinietilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-benzamid
U mešani rastvor 3-(({lr.4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4.6-dimetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metii-5-(5-metilpirazin-2-ir)benzamida (0.15 g. 0.29 mmol) u metanolu (3 mL) je dodan formalin (0.089 g, 2.98 mmol) na 0° C. Tada je dodan natrijum cijanoborohidrid (0.037 g. 0.59 mmol), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Voda je dodana, a tada je usledila ekstrakci ja sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Dobivena čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC koje daje jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.12 g, 75%). Analitički podaci za TFA so: LCMS: 531.50 (M + 1)<+>; HPLC: 88.93%(@210-370 nm) (R,; 4.130; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: Mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-ck 400 MHz) 5 11.49 (bs. IH), 9.54 (bs. I H). 9.10 (s. IH), 8.59 (s. 1H), 8.23 (t, IH). 7.88 (s. IH), 7.69 (s. 1H). 5.87 (s. IH). 4.30 (bs. 2H). 3.12 (m.
3H), 2.77-2.69 {m, 7H). 2.53 (s, 3H), 2.26 (s. 3H). 2.22 (s. 3H). 2.11 (s, 3H). 1.95-1.91 (m. 411). 1.44 (m, 4H), 0.83 (t, 3H).
Primer176:sinteza 5-(etil(tetrahidro-2rI-piran-4-il)amino)-4-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenilj-3-karboksamida
Korak 1: sinteza 6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
U mešani rastvor t-BuOK. (1 g, 8.9 mmol) u DMSO (15 mL) na st su dodani jedinjenje cijanoacetamid (0.824 g. 9.8 mmol) i (E)-hept-3-en-2-on (1 g. 8.91 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min na st. Dodano je još t-BuOK (3 g, 26.7 mmol). a reakciona masa je mešana na st u prisutnosti vazduha. Po završetku, smeša je razređena sa H2O i uz pomoć dodavanja (polako) 4N HC1. Precipitirana čvrsta materija je filtrirana, isprana sa vodom i osušena. Sirovi produkt je smrvljen sa etrom kako bi se dobilo jedinjenje naslova (0.5 g, 33%).
Korak 2: sinteza 3-(aminometil)-6-metil-4-propilpiridin-2(lH)-on
U rastvor 6-metil-2-okso-4-propil-1.2-dihidropiridin-3-karbonitrila (1.3 g, 7.38 mmol) u metanolu i vod. rastvoru amonijaka (50 mL, 9:1) je dodana katalitička količina Raney-evog nikla. Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi pod vodonikom (balon pod pritiskom) tokom 5 h. Po završetku reakcije, smeša je filtrirana kroz pločicu od celita. a liltrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.2 g. 92%).
Korak 3: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil
(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
Vodeni NaOH (2.36 g. 59.15 mmol) je dodan u rastvor metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39.43 mmol) u etanolu (100 mL). a smeša je mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smešaje zakiseljena uz pomoć razređene HCI do pH 6, a uz pomoć limunske kiseline do pH 4. Ekstrakcija je provedena uz pomoć etil acetata. Spojeni organski slojevi su koncentrovani sušenjem koje daje odgovarajuću kiselinu (13.9 g, 99%).
Pomenuta kiselina (0.6 g, 1.75 mmol) je tada rastvorena u DMSO (5 mL) pa su dodani 3-(aminometil)-6-metil-4-propilpiridin-2(lH)-on (0.64 g. 3 mmol) i trietil amin (0.49 g, 5.26 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PyBOP {1.36 g, 2.63 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona smešaje izlivena u led. ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani kako bi se dobio sirovi materijal koji je tada prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem kako bi se dobilo 5 g jedinjenja iz naslova (0.75 g, 84.7%).
Korak 4: sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-(morfoIinometiI)-jl,r-bifenil]-3-karboksamida U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.3 g, 0.59 mmol) i pinakol estera 4-((morfolino)metil)fenilboronske kiseline (0.22 g, 0.71 mmol) u smeši dioksan/voda (5 mL + 1 mL) je dodan NaiCOj (0.23 g, 2.14 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPli3)4 (0.068 g, 0.059 mmol), a argon je ponovo očišćen tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smešaje razređena sa vodom paje ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gela kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.25 g, 70%). LCMS: 601.55 (M + 1 f: HPLC: 97.21%(@210-370 nm) (R,; 4.380; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.46 (bs, IH). 8.16 (bs. IH), 7.57 (d. 2H..1= 7.6 Hz). 7.38 (t, 3H. J= 6.8 Hz), 7.21 (s. IH), 5.89 (s, 1H), 4.30 (m, 2H). 3.84-3.82 (m. 2H). 3.57 (bs, 3H). 3.48 (s, 3H), 3.28-3.22 (m. 2H), 3.09-3.02 (m. 3H), 2.36 (bs. 4H), 2.25 (s. 3H). 2.11 (s, 3H). 1.67-1.54 (m, 6H). 0.93 (t, 3H, J= 7 Hz). 0.84 (t. 3H). 2H su spojena sa signalom rastvarača.
Primer 177: sinteza N-((5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etiKtetrahidro^H-piran^-iOaminoH-metiM'-tmorfolinometilJ-jlJ'-bifenill^-karboksamida
Korak 1: sinteza metil 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-karboksilata
U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etil-(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (1 g. 2.82 mmol) i pinakol estera 4-(morfolino)metil)fenilboronske kiseline (1.03 g, 3.38 mmol) u smeši dioksan/voda (10 mL + 2 mL) je dodan Na2CO:* (1.08 g, 10.14 mmol), a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan Pd(PPh.i)4 (0.325 g. 0.28 mmol), a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona masaje grejana na 100° C tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom i ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije na silika-gelu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova ( 0.75 g, 59%).
Korak 2: sinteza 5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
U mešanu suspenziju 4,6-dimetil-2-okso-1.2-đihidropiridin-3-karbonitrila (5 g. 33.78 mmol) u AcOH (25 mL) kap po kap je dodan brom (2.5 mL) na st. Nastao rastvor je mešan tokom 1 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Dobivena čvrsta materija je ponovo kristalizovana u vrućem EtOH i H2O kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi bele čvrste materije (5.5 g, 72%).
Korak 3: sinteza 3-(aminometil)-5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-on
U mešani rastvor 5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (1 g. 4.44 mmol) i N1CI2.6H2O (0.21 g, 0.89 mmol) u metanolu na 0° C je dodan NaBH4(0.68 g, 17.78 mmol), deo po deo. Reakciona smeša je tada mešana na st preko noći. Po završetku, smeša je zakiseljena uz pomoć 3N HC1 pa je mešana na st tokom 3 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ispran sa dietil etrom pa je doveden u bazno područje uz pomoć vod. NH4OH. Jedinjenje je ekstrahovano u 10% MeOH u DCM paje osušeno preko bezvodnog NaiSCMkako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.96 g. 94%) koje je korišćeno kao takvo u reakciji spajanja.
Korak 4: sinteza N-((5-bromo-4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)aniino)-4-metil-4,-(morfolinonietil)-(l,r-bifenil]-3-karboksamida
Vodeni NaOH (0.06 g, 1.66 mmol) je dodan u rastvor jedinjenja 7 (0.5 g, 1.11 mmol) u smeši EtOH:H20 (4:1) (10 mL). a dobivena smešaje mešana na 60° C tokom 1 h. Po završetku reakcije, etanol je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a reakcija je zakiseljena uz pomoć razređene HC1 do pH 6. a uz pomoć limunske kiseline do pll 4. Ekstrakcija je provedena uz pomoć 10% MeOH u DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani koje daje odgovarajuću kiselinu (0.35 g, 72%).
Malopre pomenuta kiselina (0.266 g. 0.61 mmol) je tada rastvorena u DMSO (2.5 mL) pa su dodani 3-(aminometil)-5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2( 1 H)-on (0.42 g. 1.83 mmol) i trietil amin (0.095 g. 0.91 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PYBOP (0.63 g, 1.22 mmol), a mešanje je nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona masaje izlivena u led, ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni, koncentrovani kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.035 g, 7.6%).
LCMS: 653.65 (M + 1<f>, HPLC: 89.23% (@ 210-370 nm) (R,; 4.421: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.: gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-t/*. 400 MHz) 8 9.88 (bs, IH), 8.30 (bs, IH). 7.76 (m, 2H). 7.57 (d. 211, .1= 7.6 Hz), 7.44 (bs, 1H). 7.27 (bs, IH). 4.39 (m, 4H). 3.99-3.96 (m, 5H). 3.84 (d. 211, .1= 8.4 Hz), 3.65-3.62 (m, 2H). 3.28-3.23 (m, 4H), 3.12 (m, 4H), 2.35 (s. 3H). 2.31 (s, 3H). 2.26 (s. 3H). 1.65-1.55 (m.4H). 0.84 (t, 3H).
Primer 178: 4-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-<p>iran-4-il)aminoH'-(morfolinometil)-|U'-bifenil]-3-karboksamid
Jedinjenje 178 je pripremljeno uz pomoć postupka koji je sličan onom iz Primera 177.
Analitički podaci: LCMS: 593.60 (M + 1)<+>; HPLC: 95.50% f® 210-370 nm) (R,; 4.566: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95%) B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-rf*, 400 MHz) 5 11.46 (s,l H), 8.34 (m, 1 H). 7.61-7.24 (m. 6H), 5.86 (s, 1 H), 4.29 (m, 2H), 3.86-3.84 (m, 2H). 3.57-3.49 (m, 6H). 3.25-3.16 (m. 5H). 2.36 fm. 4H). 2.21 (s,3H),2.10(s, 3H), 1.68-1.58 fm, 4H). 0.86 ft. 3H).
Primer 179: sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-|l,r-bifenil]-3-karboksamida
Korak 1: sinteza 5-fIuoro-4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
U mešani rastvor 2-cijanoacetamida (689 mg. 8.2 mmol) u bezvodnom EtOH (7.0 ml) na 75° C je dodan 3-fluoropentan-2,4-dion (880 mg, 7.5 mmol). a tada i piperidin (96 pl, 0.97 mmol). Reakciona smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 3 h. a tada je ostavljena da dosegne sobnu temperaturu pre no je ostavljena da stoji u frižideru tokom 4 dana. Bež čvrsta materija je sakupljena uz pomoć filtracije paje ispirana sa hladnim EtOH (4 x 0.4 mi) dok tiltrat nije postao bistar. Nastala bež Čvrsta materija je osušenain vacuona 40° C tokom 5 h kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (733 mg, 58%) u formi bež čvrste materije. LC-MS 97%. 1.18 min (LC-MS postupak od 3.5 min); m/z - 166.9. 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 5 ppm 13.67 (br. s., IH) 2.46 (d, J=2.05 Hz, 3 H) 2.45 (d, J=2.84 Hz, 3 H).
Korak 2: sinteza 3-(aminometiI)-5-fluoro-4,6-dimetil-I,2-dihidropiridin-2-on
Rastvor 0.05 M 5-rtuoro-4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-karbonitrila (731 mg. 4.4 mmol) u 1.75 M NH^/MeOH (87 ml) je propušten krozH- Cuhena 80° C i 50 bara kod stope protoka od 1 ml/min. Nastao rastvor je koncentrovanin vacuo.Nastala čvrsta materija je podeljena u 2 serije, a 350 mg sirovog produkta je prečišćeno uz pomoć kolonske hromatografije (SNAP-punjenje od 25 g, Isolera, 0-25% MeOH (sadrži 10% NH tOH^CLhCb) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (307 mg, 20%) u formi prljavo-bele čvrste materi je, kao smeša produkt:početni materijal (1:1). LC-MS (ELS) 100%. 0.23 min (LC-MS postupak od 3.5 min), m/z = 170.9. 'H NMR (500 MHz, hloroform-J) 5 ppm 3.79 (s, 2 H) 2.31 (d..1=2.84 Hz, 3 H) 2.25 (d, .7=2.05 Hz, 3 H).
Korak3:sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[l,r-bifenil]-3-
karboksamida
Mešani rastvor 3-[etiI(oksan-4-il)amino]-2-metil-5-[4-(morfolin-4-ilmetil)fenil]benzojeve kiseline (100 mg. 0.22 mmol) u bezvodnom DMF (4.0 ml) na 0° C u balonu azota je tretiran sa HATU (99 mg, 0.26 mmol) i DIPEA (75 pl, 0.43 mmol), kap po kap. Nastao rastvor je mešan tokom 10 min, a tada je tretiran sa 3-(aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetil-l,2-dihidropiridin-2-on (50%, 81 mg. 0.24 mmol). Nastala suspenzija je mešana na 0° C tokom 30 min, a tada je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakciona smeša je podeljena između vode (20 ml) i CH2CI2(15 ml). Slojevi su odvojeni, a vodena faza je ekstrahovana sa CH2O2 (3 x 15 ml). Spojeni organski materijali su isprani sa zasićenim rastvorom NaHCOj(vod.) (40 ml), vodom (2 x 25 ml), slanicom (20 ml), a tada su osušeni (MgS04). filtrirani i koncentrovaniin vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (SNAP-punjenje od 10 g. Isolera, 0-6% MeOH/CH2Cb), a tada je rastvoren u smeši EtOAc (40 ml) i CH2CI2(10 ml) pa je ispran sa vodom (6 x 30 ml), slanicom (2 x 30 ml), nakon čega je osušen (MgSO-i). filtriran i koncentrovanin vacuo.Čvrsta materija je detaljno osušenain vacuona 40° C tokom 40 h kako bi se dobio 5-(elil(tetrahidro-2H-piran-4-ir)amino)-N-((5-lfuoro-4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridino-iOmetilH-metil^'-fmorfolinometilj-j 1,1 '-bifenil]-3-karboksamid (93 mg. 73%) u formi praskaste bele čvrste materije. LC-IV1S 100%, 2.76 min (LC-MS postupak od 7 min), m/z = 591.2; 'H NMR (500 MHz, hloroform-d) 6 11.79 (s, IH), 7.44(d. J =8.1 Hz, 2H). 7.34 (d,.7= 8.4 Hz. 3H), 7.48(t..7= 6.0 Hz. IH). 4.56 (d..7 « 6.0 Hz, 2H). 3.95 (d.,/ = 11.2 Hz, 2H). 3.76 - 3.66 (m, 4H), 3.51 (s. 2H), 3.31 (td..7 = 11.3. 2.7 Hz. 2H), 3.10 (q,.7 = 7.0 Hz. 2H), 3.00 (tt, .7 = 9.6, 4.6 Hz. IH), 2.45 (s. 4H). 2.43 (d, .7=1.8 Hz, 3H), 2.34 (s. 311). 2.13 (d. .7 = 2.7 Hz. 3H). 1.74 - 1.62 (m, 4H), 0.89 (t, ,7= 7.0 Hz, 3H).Smatra se da se signal od jednog protona podudara sa signalom od rastvarača. Primer 180: N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(l -metil- lH-imidazol-4-il)benzamid
Jedinjenje 180 je pripremljeno primenom postupka koji je sličan onom iz Primera 169.
Analitički podaci:LCMS: 519.55 (M + 1)<+>; HPLC: 89.93% (@ 210-370 nm) (R,: 3.676:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5%B); 'HNMR fDMSO-^OO MHz) 5 11.50 (bs, IH). 9.77(bs. I H). 9.11 (s. IH), 8.20-8.17 (m, 2H), 7.60 (s, IH), 7.38 (s, IH), 5.87 (s, IH), 4.30 (d, 2H. J=5.2 Hz), 3.87 (s. 3H). 3.11 (m. 3H), 2.68-2.67 (m, 6H). 2.72-2.64 (m.lH), 2.22 (s. 6H). 2.11 (s, 3H). 1.99-1.87 (m. 4H). 1.48-1.40 (m. 4H). 0.81 (t. 3H. J=6.8 Hz).
Primer 181: 4'-(azetidin-l-karbonil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-|l,r-bifenil|-3-karboksamid
Analitičkipodaci: LCMS: 598.60 (M + 1)<+>; HPLC: 94.88% (@ 210-370 nm) (R,; 3.823; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 8 11.44 (bs. IH), 9.56 (bs. IH). 8.21 (m, IH). 8.05-7.96 (m,4H). 7.54 (bs, IH), 7.38 (bs, IH), 5.87 (s, 1 H). 4.82-4.81 (m.2H),4.31 (d. 2H, .1=4.8 Hz). 3.69 (t. 2H..1= 5.6 Hz). 3.17-3.14 (m. 3H). 2.77 (bs. 1 H). 2.69-2.68 (m, 6H). 2.26 (s. 3H). 2.22 (s, 3H). 2.11 (s. 3H), 1.97-1.91 (m, 4H). 1.46-1.44 (m. 4H), 0.85 (t. 3H, J-6.8 Hz). 2H spojen sa signalom od rastvarača.
Primer 182: N3-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-N4,-(3-hidroksipropil)-4-metil-[l,rbifenilj-3,4'-dikarboksamid
Analitički podaci: LCMS: 617.70 (M + l)<+>; HPLC: 93.27% (@ 210-370 nm) (R,; 4.009: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u: mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.46 (bs, IH). 9.47 (bs, I H), 8.48 <m, IH), 8.23 (bs. IH). 7.93-7.73 (m, 4H). 7.47 (bs, IH), 7.31 (bs, IH). 5.87 (s, IH). 4.31-4.30 (m. 2H). 3.47 (t, 2H, J= 6 Hz). 3.34-3.33 (m, 2H). 3.13 (bs, 3H), 2.69-2.68 (m, 6H). 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H). 2.11 (s. 3H), 1.96 (m, 4H), 1.69 (t. 2H. J= 6.6 Hz), 1.45 (m, 4H). 0.85 (t, 3H). IH spojen sa signalom od rastvarača.
Primer 183: 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-metilpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid
Analitičkipodaci: LCMS: 601.65(M + 1)<+>; HPLC: [99.85% (@ 210 nm-370 nm) (R,; 4.256;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 6 11.48 (bs. IH), 9.84 (bs. IH), 8.47 (bs. IH). 8.17 (bs. IH), 7.94 (s, IH), 7.41 (m, 2H), 7.04 (d. IH, J= 8 Hz). 5.89 (s. IH). 4.44 (d, 2H. J= 12Hz). 4.30 (s. 2H), 3.84 (bs, 2H), 3.52 (d, 2H, J= 9Hz). 3.12-3.24 (m, 8Hz). 2.85 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). 1.54-1.65 (m. 6H), 0.84-0.94 (m. 6IT). 3 protona su spojena sa signalom od rastvarača.
Primer 184: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
Rastvor 5-bromo-3-{etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1.2-dihidropiridin-3-il)metir)benzamida (0.7 g, 1.38 mmol), odgovarajućeg boronat estera (0.601 g, 2.08 mmol) i tetrakisa (0.160 g, 0.138 mmol) u dioksanu (10 ml,)je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan vod. Na2CO.i (0.529 g, 4.99 mmol, 2 mL), a smeša je ponovo degazirana tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smešaje koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.50 g, 61.5%).Analitički podaci:LCMS: 587.55 (M + 1<f>; HPLC: 97.87% (@ 210-370 nm) (R,; 4.217:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tk 400 MHz) 5 11.45 (bs. 1 H), 8.38 (d. IH, J = 2.4 Hz), 8.14 (t. IH, .1 = 4.4 Hz). 7.78 (dd, IH, J = 2.4, 9.2 Hz). 7.35 (d. 1 H,J = 1.2Hz), 7.15 (d, IH, J = 1.2 Hz), 6.85 (d, IH, J = 8.4 Hz). 5.88 (s, IH). 4.29 (d. 2H. J = 4.8 Hz). 3.82 (d, 2H, J = 10 Hz), 3.43 (t, 4H, .1 = 5.2 Hz). 3.24 (t. 2H, .1 = 11.2 Hz), 3.10-2.98 (m, 3H), 2.78 (t. 4H, J = 4.8 Hz), 2.22 (s, 3H). 2.11 (s. 3H). 1.67-1.47 (m, 6H>. 0.93 (t. 3H. J = 7.2 Hz), 0.81 (t, 3H, J = 6.8 Hz). Primer 185: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l .2-dihidiopiirdin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.5 g. 0.99 mmol), l-(5-(4,4.5,5-tetrametil-l .3.2-đioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazina (0.43 g, 1.48 mmol). i tetrakisa (0.114 g, 0.09 mmol) u dioksanu (7 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan vod. Na^CO} (0.377 g. 3.5 mmol, 2 mL), a smeša je ponovo degazirana tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smeša je koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.35 g. 60.13%).
Analitički podaci:LCMS: 586.36(M + 1)<+>: HPLC: 97.03% (@ 210-370 nm) (R,; 4.10;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p;mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0. 05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5%B); 'HNMR (DMSO-t/ć. 400 MHz) o 11.45 (bs. IH), 8.37 (bs. IH). 8.17 (bs. IH), 7.78 (d. IH, J=7.6Hz). 7.35 (s,lH). 7.15 (s. IH), 6.85 (d. IH..1=8.8Hz). 5.99 (s. IH). 4.34 (d, 2H. .I=4Hz), 3.83-3.81 (m, 2H). 3.42(bs, 4H). 3.27-3.21 (m. 3H). 3.02-3.01 (m, 3H), 2.77 (bs. 4H). 2.22 (s, 3H). 2.13 (s, 3H), 1.67-1.49 (m, 4H). 1.13 (s. 3H), 1.12 (s, 3H), 0.81 (t. 311, ,l=6.4Hz). Primer 186: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
Korak1:sinteza 4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
U mešani rastvor 2-cijanoacetamida (4.1 g, 49 mmol) i t-BuOK (4.9 g, 44.6 mmol) u DMSO na 0° C je dodan 5-metilheks-3-en-2-on (5 g, 44.6 mmol), a smeša je mešana tokom 30 min. Dodano je još t-BuOK (15 g. 133.9 mmol) u reakcionu smešu. a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom još jednog dodatnog časa. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom (50 mL) pa je polako zakiseljena sa 4N HC1. Precipitat je filtriran pa je ispran sa vodom i osušen kako bi se dobilo jedinjenje B (2.2 g, 28.2%).
Korak 2: sinteza 3-(aminometil)-4-izopropil-6-metilpiridin-2(lH)-on
U rastvor cijano jedinjenja B (2.2 g. 12.5 mmol) u metanolu i vod. rastvoru amonijaka (10 mL. 4:1) je dodana katalitička količina Ranev-evog nikla. Reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi pod vodonikom (balon pod pritiskom) tokom 4 h. Po završetku reakcije, smešaje filtrirana kroz pločicu od celita, a tiltrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2 g, 91%).
Korak3:sinteza 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropiI-6-
metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzojeva kiselina (2.0 g, 0.0058 mol) je rastvorena u DMSO (20 mL) pa su dodani 3-(aminometil)-4-izopropil-6-metilpiridin-2( IH)-on (2.3 g, 11.7 mmol) i trietil amin (0.585 g, 5.8 mmol). Reakciona smešaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pre dodavanja PyBOP (4.5 g. 8.7 mmol) dok je mešanje nastavljeno preko noći. Po završetku reakcije, reakciona smeša je izlivena u led, ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni i koncentrovani kako bi se dobio sirovi
materijal koji je tada prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.0 g, 68.9%).
Korak 4: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropiI-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzaniida Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.3 g, 0.99 mmol). odgovarajućeg pinakol estera boronske kiseline (0.216 g, 0.715 mmol), i tetrakisa (0.068 g, 0.0596 mmol) u dioksanu (10 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan vod. Na^CO.} (0.227 g, 2.14 mmol. 2 mL), a smešaje ponovo degazirana tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smeša je koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.12 g, 33.6%).
Analitički podaci za TFA so: MS: 601.55 (M + 1)<+>. HPLC: 96:78%( đ210-370 nm) (R,: 4.197; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-cfc, 400 MHz) 8 11.49 {bs. IH), 9.94 (bs. IH), 8.493 (d. 1H.6 Hz), 7.957 (bs, IH), 7.65-7.258(m, 3H). 7.056 (d. IH. 8.4 Hz). 6.014 (s. 2H). 4.46 (d, 2H.12.8 Hz). 4.349 {d, 2H.4.8 Hz), 3.849 (d, 2H.7.2Hz), 3.530 (d. 2H.10.8 Hz). 3.28-3.075 (m. 10H). 2.85 (s, 3H), 2.26 (bs, 3H), 2.14 (s, 3H). 1.64 (bs. 2H), 1.56 (bs. 2H), 1.14 (s. 3H). 1.12 (s. 311) ,0.845 (t, 3R7.6 Hz).
Primer 187:sinteza N-((4,6-dimeti1-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(4-(l-metiIpiperidin-4-il)piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etii(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-fpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida (0.1 g. 0.179 mmol) i 1-metilpiperidin-4-on (0.04 g. 0.358 mmol) u dihloroetanu (2 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.07 mL, 1.07 mmol), a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.113 g. 0.53 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakciona masaje ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom, organski faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi TFA soli (0.08 g, 22.72%).
Analitički podaci zaTFA so: ESMS: 656:41 (M + 1)" ; HPLC: [97.76% (@ 210 nm-370 nm)
(R,; 3.667;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d6. 400 MHz) 8 11.49 (bs, IH). 10.33 (bs. IH). 9.86 (bs. 111). 8.49 (bs, IH). 8.20 (bs. IH). 7.96 (bs, IH). 7.24-7.39 (m, 2H), 7.07 (d, IH. J=9Hz). 5.87 (s. IH). 4.47 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H. J=4Hz). 3.84 (s, 2H). 3.60 (d. 5H. J= 11Hz). 3.16-3.28 (m. 7H). 2.99(bs, 2H), 2.79 (s. 311), 2.11-2.25 (m. 1 IH). 1.87-1.90 (m. 211), 1.56-1.64 (m. 311). 0.85 (s. 3H).
Primer 188:sinteza 3-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(6-(4-(l-metilpiperidin-4-il)piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ii)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida (0.3 g. 0.51 mmol) i 1-metilpiperidin-4-on (0.086 g, 0.76 mmol) u dihloroetanu (5 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.18 g, 3.06 mmol), a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.33 g, 1.55 mmol) na 0° C. a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakciona masa je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom, organski faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata pa su koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.12 g, 34.38%).
Analitički podaci:LCMS: 683.45 (M + 1)<+>; HPLC: 98.65% (@ 210-370 nm) (R,; 4.04;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05%> TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ć/6, 400 MHz) 5 11.47 (bs, IH), 10.24 (bs, IH), 9.79 (bs. IH), 8.46 (bs, 1 H), 8.19(bs, IH), 7.92 (bs, IH), 7.38 (bs, IH), 7.19 (bs, IH). 7.06 (d, IH. J=9.2 Hz). 6.0 (s, 1 H). 4.47 (bs, 2H), 4.34 (d, 2H, J=7.6Hz). 3.83(d, 2H J=8.8Hz), 3.6 (d, 4H..1=12Hz), 3.43 (m, IH), 3.27-3.16(m, 8H), 2.99-2.97 (m, 3H). 2.79 (s. 3H), 2.37-2.33 (m.3H). 2.24(bs. 311).
2.13 (s, 3H), 1.90-1.82 (m. 2H). 1.64-1.53 (m. 4H). 1.13 (s. 3H). 1.12(s, 3H). 0.83 (t, 3H.
J=6.8Hz)
Primer 189: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso -
4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-(l-metilpiperidin-4-iI)piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida (0.45 g. 0.76 mmol) i l-metilpiperidin-4-on{0.173 g, 1.53 mmol) u dihloroetanu (10 mL)je dodana sirćetna kiselina (0.276 g, 4.6 mmol), a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.488 g. 2.3 mmol) na 0° C. a reakciona masa je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakciona masa je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije koje daje jedinjenje iz naslova (0.215 g. 41%).
Analitički podaci:LCMS: 684.45(M+1)<+>: HPLC: 93:41% (.'£> 210 nm-370 nm) (R,: 4.140:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.53-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 11.46(bs, IH), 8.38(s, IH. ), 8.13(bs, III). 7.78(d, IH. J= 9Hz). 7.35(s, IH). 7.15(s. IH), 6.8(d, IH, J= 9), 5.88(s, IH), 4.28(d. 2H. J= 41 Iz). 3.82(d, 2H. 10Hz), 3.49(s, 4H), 3.24(t, 2H..1= 11 Hz). 3.0-3.08(m, 3H), 2.78(d, 2H, J= 10Hz).
2.56(s, 4H), 2.22(s. 3H). 2.13(s, IH). 2.11 (s. IH). 1.57-1.86(m, 6H). 1.46-1.55(m. 6H), 0.91 (t. 3H, .1= 8Hz). 0.81 (t. 3H, J= 6Hz).
Primer 190: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak 1: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-iI)-N-((4-
izopropil-6-metiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-ok.so-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metitbenzamida (0.4 g. 0.793 mmol). 5-(4.4.5,5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-ii)pikolinaldehida (0.28 g. 1.19 mmol) i tetrakisa (0.091 g. 0.079 mmol) u dioksanu (5 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. l ađa je dodan vod. Na^CO^(0.301 g. 2.83 mmol), a smešaje ponovo degazirana tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smešaje koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.28 g. 66.50%).
Korak 2: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metiI-2-okso-
l,2-dihidropiridin-3-il)meti])-2-metil-5-(6-(niorfolinometil)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-N-{(4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.28 g. 0.528 mmol) i morfolina (0.07 g, 0.79 mmol) u dihloroetanu (3 mL) je dodana sirćetna kiselina (0.19 g, 3.16 mmol), a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.33 g, 1.55 mmol) na 0° C. a reakciona masaje mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakciona masa je ugašena sa vodenim natrijum bikarbonatom. organska faza je odvojena, a vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen uz pomoć prep. HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.12 g, 38.70%).
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 601.36 (M + lf; HPLC: 95.48% (@ 210-370 nm) (R,: 4.28; Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C: stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-J*, 400 MHz) 6 11.45 (bs. IH), 10.45 (bs. I H), 8.95 (s, IH). 8.23-8.21 (m, 2H), 7.62-7.52{m, 2H), 7.34 (bs, IH). 6.01 (s.lll). 4.55 (s. 211). 4.35 (d, 2H,J=5.2Hz). 3.84 (bs.6H), 3.29-3.13 (m. 8H). 2.27 (s, 3H).2.13(s, 3H). 1.66-1.56(m,4H), 1.13(s,3H). 1.12 (s, 3H), 0.83 (t, 3H, J= 6.8). 2F1 protona su spojena sa signalom od rastvarača.
Primer 191: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
Korak1: sinteza 3-(etil(tetrahiđro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.5 g, 0.99 mmol), 5-(4,4,5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)pikolinaldehida (0.346 g, 1.48 mmol). i tetrakisa (0.114 g, 0.99 mmol) u dioksanu (10 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan vod. Na^COjt (0.378 g. 3.56 mmol, 1.8 mL), a smešaje ponovo degazirana tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smeša je koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.40 g, 76.0%).
Korak 2: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-i])amino)-5-(6-formilpiridiii-3-il)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-i!)metil)benzamida (0.315 g, 0.59 mmol) u EDC ( 8 mL) na 0° C je dodan morfolin ( 0.1 g, 1.18 mmol ), a smeša je mešana na st tokom 10 min. Tada je dodan NaBH(OAc)3(0.377 g. 1.78 mmol). a smeša je mešana tokom 16 h. Po završetku, reakciona masa je ugašena sa vodom. Tada je dodan MeOH (8 mL), a slojevi su odvojeni i ekstrahovani sa 10% MeOH u DCM, nakon čega su prečišćeni uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.2 g. 56%).
Analitički podaci: LCMS: 602.60(M + lf; HPLC: 98.12%( a-210 nm-370 nm) (R,; 4.374: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p: mobilna laza: A: 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B): 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 11.48(s. IH), 8.75(s. IH), 8.19(t. IH. J=4Hz). 7.99-8.02(m. IH), 7.49(t, 2H, J= 8Hz), 7.26(s. IH). 5.88(s, IH), 4.29(d. 2H. J=4Hz). 3.82(d. 2H, J-10Hz), 3.59-3.61(m, 6H), 3.24(t, 211, J= 12Hz). 2.99-3.10(m, 3H), 2.42(s, 4H). 2.25(s. 3H). 2.1 l(s. 3H), 1.48-1.67(m. 6H), 0.926(t. 3H. J= 8Hz), 0.824(t. 311, J= 7Hz).
Primer 192: N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)-5-(6-,(4-(dimetiIamino)piperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid
Korak 1: sinteza tert-butil (l-(5-(3-(({4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metilfeniI)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (9)
U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-l ,2-dihidropiridin-3~il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.35 g. 0.736 mmol) i odgovarajućeg pinakol estera boronske kiseline (0.35 g, 0.88 mmol) u dioksanu (5 mL) je dodan Na2CO.} (0.28 g. 2.65 mmol). a rastvor je očišćen sa argonom tokom 15 min. Tada je dodan tetrakis (0.085 g. 0.073 mmol). a čišćenje sa argonom je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona masa je grejana na 100° C tokom 4 h. Po završetku, reakciona smeša je razređena sa vodom pa je ekstrahovana sa 10% MeOH/DCM. Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2S04. rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a smeša je prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.39 g. 79%)
Korak 2: sinteza 5-(6-(4-aminopiperidin-l-il)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-l,2-
dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (10)
U mešani rastvor tert-butil (l-(5-(3-(((4,6-dimetil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-ir)metil) karbamoil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (0.39 g, 0.058 mmol) u DCM (4 mL) na 0° C je dodan TFA (2 mL), a reakciona masa je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana do suvoće. Ostatak je tada doveden u bazno područje uz pomoć vodenog zas. rastvora bikarbonata (30 mL) do pH 8, a vodeni sloj je ekstrahovan sa 20% metanolom u DCM (4 x 50 mL). Spojene organska faza je osušena preko NajS04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.3 g. 90.63%) koje je korišćeno kao takvo u sledećoj reakciji.
Korak 3: sinteza N-((4,6-dimetiI-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-
metilbenzamida
U mešani rastvor 5-(6-(4-aminopiperidin-l-il)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-2-metilbenzamida (0.3 g. 0.524 mmol) u DCM (3 mL) na 0° C je dodan 37-41% vod. rastvor formalina (0.277 g. 1.31 mmol), a smešaje mešana na st tokom 10 min. Tada je dodan NaBH(OAcb (0.277 g. 1.31 mmol), a smeša je mešana tokom 2 h. Po završetku, reakcija je ugašena sa vodom. Dodan je MeOH (10 mL), slojevi su odvojeni i ekstrahovan) sa 10% MeOH u DCM, a tada su prečišćeni na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.12 g. 38%).
Analitički podaci:LCMS: 602.00 (M + l)<+>; HPLC: 97.22%(■' a210-370 nm) (R,; 3.757:Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 u; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu: inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-ffc, 400 MHz) 5 11.46 (bs, 1 H). 8.38 (s, IH). 8.15 (t, I II). 7.78 (d, IH. J=8.4Hz), 7.35 (s, IH), 7.16 (s, IH). 6.90 (d. IH. J=8.8Hz). 5.85 (s. IH), 4.35 (d. 2H. J=13.2Hz). 4.28 (d, 2H, J=4Hz). 3.82 (d, 2H, J=10Hz). 3.30-3.20 (m. 2H), 3.10-3.00 (m. 3H). 2.90-2.80 (m, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). 2.10 (s. 3H). 1.90-1.80 (m. 3H). 1.70-1.60 (m. 2H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.40-1.30 (m. 2H). 0.82 (t. 3H. J=6.4Hz).
Primer 193: sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-
metil benzamida
Sinteza tert-butil (l-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((4-izopropiI-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-
il)karbamata
Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropiI-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.35 g. 0.69 mmol). tert-butil ([-(S-HAS.S-tetrametil-lJ^-dioksaborolan^-iljpiridin^^ (0.33 g. 0.83 mmol). i tetrakisa (0.079 g, 0.069 mmol) u dioksanu (5 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan vod. Na2CO"3 (0.263 g, 2.48 mmol, 2 mL), a smeša je ponovo degazirana tokom 10 min. Reakciona smešaje grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smešaje koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.31 g, 63%).Sinteza 5-(6-(4-aminopiperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamidatert-butil (l-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((4-izopropil-6-rnetil-2-okso-l .2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamat (0.31 g, 0.44 mmol) je rastvoren u DCM (5 mL) pa je dodan TFA (1 mL). a smeša je mešana na st tokom 2 h. Po završetku reakcije, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom pa je dodan zasićeni rastvor NaHCOj. Ekstrakcija je provedena uz pomoć 10% MeOH/DCM; spojeni organski slojevi su isprani sa vodom i sa slanicom pa su osušeni preko bezvodnog NaaSO-u filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.26 g, 98.11%). Sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-amino)-IN-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
U mešani rastvor 5-(6-(4-aminopiperidin-l -il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-ir)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
(0.26 g, 0.43 mmol) u DCM (4 mL) je dodan formalin (0.045 g, 1.51 mmol), a reakciona masa je mešana na 0° C tokom 10 min. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (0.23 g. 1.08 mmol) na 0° C, a reakciona masaje mešana tokom 1 h. Po završetku je dodana voda u reakciona masu, a ekstrakcija je provedena primenom DCM. Spojeni organski slojevi su isprani sa rastvorom bikarbonata, osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi materijal koji je tada prečišćen uz pomoć ispiranja sa rastvaračem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.17 g. 62%).
Analitički podaci: LCMS: 629.70 (M + 1)<+>; HPLC: 97.74% (@ 210-370 nm) (R,: 4.176: Postupak: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 pL, temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-tfe, 400 MHz) 5 11.46 (s, IH), 10.33 (bs, IH). 8.39 (d, IH), 8.16 (t. IH), 7.81 (d. IH, J=6.8Hz), 7.35 (s, IH). 7.16 (s, IH), 6.97 (d, 1H. J=9.2Hz), 5.99 (s, IH). 4.50 (d, 2H. J=12.8Hz), 4.34 (d, 2H, J=4.4Hz), 3.82 (d. 2H, J=9.6Hz), 3.39 (m, I H), 3.24 (m, 3H), 3.10-3.00 (m, 3H), 2.90-2.80 (m, 2H), 2.69 (s, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.10-2.05 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 2H), 1.60-1.45 (m, 4H), 1.13 (d, 6H, J=6.4Hz), 0.82 (t. 3H. J=6.8Hz).Primer 194:sinteza5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
Sintezatert-butil (l-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-5-(((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)karbamoil)fenil) piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata
Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-meti]-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-iI)metil)benzamida (0.5 g, 0.99 mmol). odgovarajućeg pinakol estera boronske kiseline (0.6 g, 1.48 mmol). i tetrakisa (0.114 g, 0.99 mmol) u dioksanu (7 mL) je očišćen sa argonom tokom 10 min. Tada je dodan vod. NazCCh (0.377 g, 3.5 mmol, 2 mL). a degaziranje je ponovljeno tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana na 100° C tokom 16 h. Po završetku, smeša je koncentrovana kako bi se dobio sirovi materijal koji je prečišćen na koloni kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.40 g, 57.47%). Sinteza 5-(6-(4-aminopiperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida U mešani rastvor tert-butil (l-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-5-(((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)fenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (0.4 g, 0.00051 mol) u DCM (10 mL) na 0° C je dodan TFA (10 mL). a reakciona masa je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakciona masa je koncentrovana do suvoće. Ostatak je tada doveden u bazno područje uz pomoć vodenog zas. rastvora bikarbonata (80 mL) do pH 8, a vodeni sloj je ekstrahovan sa 20% metanolom u DCM (4 x 60 mL). Spojena organska faza je osušena preko Na2S04. a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.315 g. 92.1%) koje je korišćeno kao takvo u sledećoj reakciji.
Sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro -2H-piran-4-
il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
U mešani rastvor 5-(6-(4-aminopiperidin-l -il)piridin-3-il)-3-{etil{tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propi]-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.315 g, 0.52 mmol) u DCM (8 mL) na 0° C je dodan 37-41% vod. rastvor formalina (0.078 g. 2.6 mmol). a smeša je mešana na st tokom 10 min. Tada je dodan NaBH(OAc)_i (0.275 g, 1.3 mmol), a smešaje mešana tokom 2 h. Po završetku, reakcija je ugašena sa vodom. Dodan je MeOH (8 mL). slojevi su odvojeni i ekstrahovani sa 10% MeOH u DCM. a ponovno kristalizovanje iz etra, acetonitrila i pentana daje jedinjenje iz naslova (0.27 g. 82%).
Analitički podaci:LCMS: 630.00 (M + 1)<+>; HPLC: 98.21%(@210-370 nm) (R,; 4.155;Postupak:kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 p; mobilna faza: A: 0.05% TFA u vodi/B: 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. vol.: 10 uL. temp. kol.: 30° C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5%> B do 95% B tokom 8 min. zadržavanje tokom 1.5 min. 9.51-12 min 5% B); 'H NMR (DMSO-^, 400 MHz) 5 11.46 (s. IH), 8.37 (d. IH..1=1.6Hz). 8.13 (t. IH. J=4.4Hz), 7.76 (dd, IH, J=2.4&9.2Hz). 7.35 (s, IH), 7.15 (s, IH), 6.89 (d. IH, .1=8.8Hz). 5.88 (s, IH), 4.25-4.35 (m. 4H), 3.82 (d. 2H, J=10Hz). 3.24 (m, 2H), 3.10-3.00 (m. 3H). 2.90-2.80 (m, 2H). 2.35 (m, IH), 2.22 (s, 3H), 2.18 <s. 6H). 2.11 (s, 3H). 1.80 (m. 2H), 1.70-1.60 (m, 2H), 1.60-1.45 (m,4H). 1.40-1.30 (m. 2H),0.93 (t. 3H. J=7.2Hz), 0.81 (t. 3H. J=6.8Hz).
Primer 195: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-
metil-2-okso-l,2-dihiđropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-
il)benzamida
Korak 1: sinteza 5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-karbonitriIa
U mešani rastvor 6-metil-2-okso-4-(propan-2-ir)-l,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (225 mg, 1.277 mmol) u MeCN (6 mL) je dodan selektfluor (620 mg. 1.75 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50° C tokom 3 h. Nakon hlađenja do 23° C, reakciona smešaje koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (50% do 100% EtOAc-heptan) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (90 mg. 36%). 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 ppm 3.39 (m, 1 H). 2.44 (d,./= 3.1 Hz, 3 H). 1.41 (dd,.7 = 7.0. 3.1 Hz. 6 H); LCMS E-S (M+H) = 195.2.Korak2: sinteza3-(Aminometil)-5-fluoro-4-izopropil-6-metiIpiridin-2(lH)-on
5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-karbonitril (100 mg, 0.515 mmol) u boci od 100 mL je rastvoren u smeši MeOH (6 mL) i 2 mL NHrnmi. (2 mL, 25%). Redukcija je provedena uz pomoć aparataH- Cuhesa Raney-vim niklom, koji je korišćen kao katalizator, na sobnoj temperaturi tokom 3-4 h. Po završetku reakcije (koja je praćena uz pomoć TLC). reakciona masa je koncentrovana pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u formi sive čvrste materije (90 mg, 90%). 1II NMR (400 MHz, CD3OD) 5 ppm 4.04 (s. 2 H). 3.22 (m. 1 H), 2.24(d,./=3.4 Hz, 3 H), 1.32 (dd.,/ = 7.0. 1.8 Hz. 6 H): LCMS E-S (M+H) = 199.2.
Korak3:tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(metoksikarbonil)-4-
metilfenil)piridin-2-il)piperazin-l-karboksilat
Jedinjenje je pripremljeno primenom opšte procedure koja koristi Suzuki-evu reakciju.
'H-NMR (400 MHz. CDCb) 6 ppm 8.42 (dd, ./= 2.4 Hz. IH). 7.70-7.74 (m. 2H). 7.41 (d../ = 2.1 Hz. IH). 6.72( d. J=8.8 Hz, IH). 3.97 (m. 2H), 3.93 (s. 3H). 3.58 (s. 8H), 3.34 (m, 2H). 3.11 (q,./= 7.0 Hz,2H), 3.02 (in, IH), 2.53 (s, 311), 1.64-1.76 (m. 4H), 1.50(s. 9H).0.91 (t,.7 = 7.0 Hz, 3H). MS (ES) (M+H) = 539.5.
Korak 4: sinteza tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-5-(((5-fluoro-4-
izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-
il)piperazin-l-karboksilata
Hidroliza tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(metoksikarbonil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazin-l-karboksilata uz pomoć sličnih postupaka kao iz primera daje odgovarajuću sirovu karboksilnu kiselinu, naime 5-(6-(4-(tert-butoksikarbonil)piperazin-l-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbcnzojevu kiselinu. Ova kiselina je tada spojena sa 3-(aminometil)-5-fluoro-4-izopropil-6-metiipiridin-2( 1 H)-on uz pomoć postupaka koji su slični onima koji su ovde već opisani. Nakon prečišćavanja uz pomoć HPLC reverzne faze (ACN-I-LO sadrži 0.1 %> mravlju kiselinu) dobiveno je jedinjenje iz naslova. 'H-NMR (400 MHz, CD3OD) 5 ppm 8.33 (d../= 2.6 Hz, IH). 7.81 (dd..7=2.6, 8.8 Hz. IH). 7.41
(d.J=2.0Hz. IH). 7.26 (d, .7=2.0 Hz. IH), 6.91 (d. ,7=8.8 Hz. IH). 4.54 (s, 2H). 3.92 (m. 2H), 3.46-3.56 (m, 9H), 3.34 (m, 2H), 3.07-3.18 (m. 3H). 2.33 (s, 3H). 2.24(d. J=3.2 Hz, 3H), 1.74-1.77 (m.2H), 1.62-1.69 (m, 2H), 1.49 (s. 9H). 1.37(dd.../= 1.6. 6.8 Hz. 6H). 0.90(t,./ = 6.8 Hz. 3H); MS (ES) (M+H) 705.7.
Korak 5: sinteza 3-(Etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropiI-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid formata
U rastvor tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)- 5-(((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-],2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metiltenil)piridin-2-il)piperazin-l-karboksilata (450 mg. 0.639 mmol) u etanolu (4.3 mL) na sobnoj temperaturi je dodana 4M HCl u dioksanu (2 mL, 8.00 mmol). Nakon 2 h, LC/MS je ukazivao na prisustvo produkta i preostalog početnog materijala. Dodano je još 4M HCl u 1.4-dioksanu (1.5 ml. 6.00 mmol), a nakon 4 h LC/MS je pokazao daje reakcija završila. Reakciona smešaje koncentrovana do suvoće. obrađena uz pomoć azeotropnog procesa sa toluen-metanolom kako bi se dobila sirova hlorovođonična so (454 mg, 111 %). Primerak od 125 mg pomenute sirove hlorovodonične soli je prečišćen uz pomoć HPLC reverzne faze/MS (ACN-H2O. 0.1 % mravlja kiselina) kako bi se dobio 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1.2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid format (65 mg) u formi bezbojnog staklastog filma. 'H-NMR (400 MHz. CD3OD) 5 ppm 8.35-8.40 (m. 2H). 7.86 (dd..7=2.4, 8.8 Hz, IH), 7.42 (d../= 1.6 Hz, IH). 7.27(d..7=1.6 Hz. IH). 6.99 (d, ./= 8.8 Hz. IH), 4.54 (s, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.84 (m, 4H), 3.54 (m, IH). 3.30-3.38 (m. 6H). 3.07-3.18 (m. 311), 2.33 (s. 311), 2.24 (d,.7= 2.8 Hz. 3H), 1.73-1.76 (m. 211), 1.62-1.68 (m. 2H). 1.37 (d../- 6.8 Hz, 6H). 0.89 (t..7= 6.8 Hz, 3H); MS (ES)(M+H) 605.6.
Primer196:sinteza3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamida
U rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-tluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-l-i])piridin-3-il)benzamid hidrohlorida (160 mg. 0.25 mmol) u metanolu (2 mL) na 0° C je dodan 35% rastvor fonnaldehida u vodi (0.196 mL, 2.495 mmol). Nakon mešanja tokom 20 min je dodan natrijum cijanoborohidrid (31.4 mg. 0.499 mmol). Nakon 1.5 h na 0° C, reakcija je ugašena sa vodom (3 mL). hladna banja je odstranjen, a smešaje mešana tokom 10 min. Tada su dodani DCM (10 mL) i zasićeni vod. NaHCC>3 (1 mL). Organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x 15 mL), a spojeni organski ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani. Produkt je prečišćen uz pomoć HPLC reverzne faze/MS (ACN-H2O. 0. 5% mravlja kiselina) kako bi se dobio 3-(etiI(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-l-il)piridin-3-il)benzamid
format (31 mg, 0.047 mmol, prinos: 19%) u formi bezbojnog staklastog filma.
'H-NMR(400 MHz, CD3OD)5 ppm 8.42 (br. s, IH). 8.38 (d, J= 2.4 Hz, IH), 7.85 (dd, J= 2.8. 8.8 Hz, IH), 7.42 (d,./= 1.6 Hz. IH), 7.27(d../= 1.6 Hz, IH). 6.98 (d, ./= 8.8 Hz, IH), 4.54 (s, 2H), 3.91 (m, 2H). 3.82 (br. s. 4H). 3.54 (m, IH). 3.31-3.38 (m, 2H), 3.05-3.21 (m. 7H). 2.81 (s,3H),2.33 (s, 3H). 2.24(d,./= 2.8 Hz, 3H), 1.73-1.76 (m, 2H), 1.58-1.68 (m. 2H). 1.37 (dd, ./= 1.6. 6.8 Hz, 6H), 0.89 (t, ./= 6.8 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 619.7.
Primer 197: sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-iI)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-
metil-2-okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-
il)benzamida
Korak 1: metil 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzoat
Jedinjenje 197 je pripremljeno primenom opšte procedure za Suzuki-evu reakciju. 'II-NMR (400 MHz, CDCb) 5 ppm 8.77(dd, J=0.9, 2.4 Hz. IH). 7.84 (dd..7-2.4, 7.9 Hz. IH), 7.78 (d,J = 1.8Hz, 1H), 7.49(d, .7= 7.9 Hz, 1H), 7.45(d. J=2AHz, 1H). 3.98 (m, 2H), 3.94 (s. 3H), 3.75-3.78 (m, 4H). 3.72 (s. 2H), 3.34 (m, 2H), 3.13 (q..7 = 7.1 Hz, 2H). 3.03 (m. 1H), 2.56 (m, 7H). 1.64-1.76 (m, 4H), 0.92 (t,./= 7.1 Hz, 3H). MS (ES) (M+H) = 454.5.
Korak 2: 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-
okso-l,2-dihidropiridin-3-il)metiI)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamid
format
Hidroliza metil 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5- (6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzoata primenom postupaka koji su ovde već opisani, daje odgovarajuću karboksiinu kiselinu, odnosno 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzojeva kiselina. Ova kiselina je tada spojena sa 3-(aminometil)-5-tluoro-4-izopropil-6-metilpiridin-2(lH)-on primenom postupka koji je ovde već opisan. Nakon prečišćavanja uz pomoć HPLC reverzne faze (ACN-lbO sadrži 0.1% mravlju kiselinu) dobija se jedinjenje iz naslova. 'H-NMR (400 MHz, CD3OD) 6 ppm 8.77 (d, .7= 1.8 Hz, IH), 8.25 (br. s. IH). 8.07(dd,./=2.3, 8.2 Hz, IH), 7.61(d,.7=8.2 Hz. IH). 7.52 (d..7=1.8 Hz. IH), 7.37(d..7=1.8 Hz. 1 H), 4.54, (5, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.91 (m, 2H), 3.78 (m, 4H), 3.55 (m. IH), 3.35 (m. 2H). 3.08-3.20 (m.3H). 2.81 (m, 4H), 2.36 (s, 3H), 2.24 (d..7= 2.9 Hz. 3H). 1.60-1.77 (m. 4H). 1.37 (dd..7= 1.5, 7.0 Hz, 6H). 0.90 (t,.7=6.9 Hz. 3H). MS (ES) (M+H) 620.6.
Primer 198: protokoli bio-ogleda i opšti postupci
Protokol za oglede sa PRC2 encimima divljeg- tipaimutantima
Opšti materijali.S-ađenozilmetionin (SAM). S-adenozilhomocistein (SAH). bicin. KCI, Tween20, dimetilsulfoksid (DMSO) i žetatin iz goveđe kože (BSG) su nabavljeni od Sigma-Aldrich, a čistoća im je bila maksimalna moguća. Ditiotreitol (DTT) je nabavljen od EMD.<J>II-SAM je nabavljen od American Radiolabeled Chemicals sa specifičnom aktivnosti od 80 Ci/mmol. Pločice za ispiranje( flashplales)sa 384 rupica i sa streptavidinom su nabavljene od PerkinEImer.
Supstrati.Peptidi koji su reprezentativni za humane histonske H3 ostatke 21-44. koji sadrže nemodifikovani lizin 27 (H3K27me0) ili dimetilovani lizin 27 (H3K27ine2). su bili sintetizovani tako da sadrže C-terminalni G(K-biotin) linker (afinitetni privesak) i C-terminalnu amiđnu kapu, a nabavljeni su od 21<st>Centurv Biochemicals. Ovi peptidi su bili prečišćeni uz pomoć tečne hromatografije visoke performanse (HPLC) do čistoće od 95%, a pomenuta čistoća je bila potvrđena uz pomoć tečne hromatografije - masene spektrometrije (LC-MS). Sekvence su navedene ispod.
H3K27meO: ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotin)-amid (SEKV. ID BR: 1)
H3K27me2: ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotin)-amid (SEKV.
ID BR: 2)
Oligonukleosomi iz kokošijih eritrocita su prečišćeni iz kokošije krvi primenom već uspostavljenih procedura.
Rekombinantni PRC2 kompleksi.Human PRC2 kompleksi su prečišćeni kao 4-komponentni encimski kompleksi koji su ko-eksprimirani ućelijama Spodoptera frugiperdu(sf9) uz pomoć sistema za ekspresiju u bakulovirusima. Eksprimirane pod-jediniee su bile EZH2 divlji-tip (NM 004456) ili EZH2 Y641F. N, H, S ili C mutanti koji su izvedeni iz konstrukta E/I 12 divlji-tip, EED (NM 003797), Suzi2 (NM_015355) i RbAp48 (NM 005610). EED pod-jedinica je sadržavala N-terminalni FLAG privesak koji je korišćen sa ciljem da se prečisti celi 4-komponentni kompleks iz lizata sf9 ćelija. Čistoća kompleksa je bila ili je prevazilazila 95% kao šta je određeno uz pomoć analize SDS-PAGE i Agilent Bioanalvzer. Štok-koncentracije encima (uopšteno, 0.3-1.0 mg/mL) su određene uz pomoć Brađford-ovog ogleda u odnosu na standard, odnosno albumin iz goveđeg seruma (BSA).
Opšta procedure za oglede sa PRC2 encimom na peptidnim supstratima.Ogledi su provedeni u puferu koji se sastojao od 20 mM bieina (pH=7.6), 0.5 mM DTT. 0.005% BSG i 0.002% Tween20, a priprema se neposredno na dan upotrebe. Jedinjenja u 100% DMSO (1 pL) su nakapana u pločicama od polipropilena sa V-dnom i 384-rupica (Greiner) uz pomoć Piatemate 2x3 koji je bio opremljen sa glavom od 384-kanala (Thermo). DMSO (1 pL) je dodan u kolone 11. 12, 23, 24, u redove A-H kao kontrola sa maksimalnim signalom, a SAH, koji je poznati produkt i inhibitor PRC2 (1 pL), je dodan u kolone 11.12. 23. 24, i u redove I-P kao kontrola sa minimalnim signalom. Koktel (40 pL) koji sadrži PRC2 encim divljeg-tipa i H3K27meO peptid ili bilo koji od Y641 mutiranih encima i H3K27me2 peptid je dodan u Multidrop Combi (Thermo). Jedinjenja su ostavljena da se inkubiraju sa PRC2 tokom 30 min na 25° C, atadaje dodan koktel (10 pL) koji sadrži smešu ne-radioaktivnih i 'H-SAM kako bi se potaknula reakcija (finalni volumen = 51 pL). U svim slučajevima, finalne koncentracije su kako sledi: divlji-tip ili mutirani PRC2 encim je bio 4 nM, SAH u kolonama sa minimalnim signalom je bio 1 mM, a DMSO koncentracija je bila 1%. Finalne koncentracije ostalih komponenata su navedene u Tabeli 2. ispod. Pomenuti ogledi su bili zaustavljeni uz pomoć dodavanja ne-radioaktivnog SAM (10 pL) do finalne koncentracije od 600 pM koje razređuje 'H-SAM do nivoa kada njegova ugradnja u peptidni supstrat nije više detektabilna. 50 pL reakcione mase u pločici od polipropilena sa 384-rupica je tada preneseno u pločicu za ispiranje sa 384-rupica, a biotinilovani peptidi su ostavljeni da se vežu na streptavidinsku površinu tokom najmanje 1 h pre no je ispran tri puta sa 0.1% Tween20 u aparatu za ispiranje pločica Biotek ELx405. Pločice su tada očitane u čitaču pločica PerkinElmer TopCount kako bi se izmerila količina<3>H-označenog peptida vezanog na površini pločica za ispiranje, koje je izmereno uz pomoć raspadanja po min (dpm) ili alternativno, označeno kao udari po min (cpm).
Opštaprocedura za ogled sa PRC2 encimom divljeg-tipa na supstratu od oligonukleosoma. Ovaj ogled je proveden u putem koji sadrži 20 mM bicina (pH=7.6). 0.5 mM DTT. 0.005% BSG. 100 mM KC1 i 0.002% Tween20, a koji je pripremljen na dan upotrebe. Jedinjenja u 100% DMSO (1 pL) su nakapana u pločice od polipropilena sa 384-rupica (Greiner) uz pomoć Platemate 2x3 koji je bio opremljen sa glavom sa 384-kanala (Thermo). DMSO (1 pL) je dodan u kolone 11, 12. 23. 24. u redove A-H kao kontrola sa maksimalnim signalom, a SAH, koji je poznati produkt i inhibitor PRC2 (1 pL), je dodan u kolone 11, 12, 23. 24, i u redove 1-P kao kontrola za minimalni signal. Koktel (40 pL) koji sadrži PRC2 encim divljeg-tipa iz oligonukleosoma iz kokošijih eritrocita jc dodan uz pomoćMultidrop Combi(Thermo). Jedinjenja su ostavljena da se inkubiraju sa PRC2 tokom 30 min na 25° C, a tada je dodan koktel (10 pL) koji sadrži smešu ne-radioaktivnog i Hl-SAM sa ciljem da se potakne reakcija (finalni volumen = 51 uL). Finalne koncentracije su bile kako sledi: PRC2 encim divljeg-tipa je bio 4 nM, ne-radioaktivni SAM je bio 430 nM. 'H-SAM je bio 120 nM, olignonukleosom iz kokošijih eritrocita je bio 120 nM. SAH u kolonama sa minimalnim signalom je bio 1 mM. a koncentracija DMSO je bila 1%. Ogled je zaustavljen uz pomoć dodavanja ne-radioaktivnog SAM (10 pL) do finalne koncentracije od 600 pM. koje razređuje M-l-SAM do nivoa kada njegova ugradnja u olignonukleosom iz kokošijih eritrocita nije više detektabilna. 50 pL reakcione mase u pločici od polipropilena sa 384-rupica je tada prenesena u pločicu za ispiranje sa 384-rupica. a nukleosomi iz kokošijih eritrocita su imobilizirani na površinu pločice, koja je tada isprana tri puta sa 0.1% Tween20 u aparatu za ispiranje pločica Biotek ELx405. Pločice su tada očitane u aparatu PerkinEhner TopCount sa ciljem da se izmeri količina<3>H-označenih oligonukleosoma iz kokošijih eritrocita na površini pločica za ispiranje, izmereni kao raspadanja po min (dpm) ili alternativno, označeni kao udari po min (cpm).
Račun za % inhibicije
Gde dpm = raspadanje po min, cmpd = signal u oglednoj rupici, a min i maks su odgovarajuće kontrole sa minimalnim i maksimalnim signalom.
Četiri-parametarskopodešavanjeICso
Pri čemu je uobičajeno dozvoljeno da vrh i dno variraju, ali mogu da se fiksiraju na 100 ili 0 uz pomoć 3-parametarskog podešavanja. Uobičajeno se dozvoljava da Hill-ov koeficijent varira, ali može da se fiksira na 1 uz pomoć 3-parametarskog podešavanja. Y predstavlja % inhibicije. a X je koncentracija jedinjenja.
IC50vrednosti za oglede sa PRC2 encimom na peptidnim supstratima (na primer. EZH2 divlji-tip i Y641F) su prikazane u Tabeli 3 ispod.
Ogled WSU-DLCL2 metilacije
Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 je nabavljena od DSMZ( German Collection of Microorganisms and Cell Cultures,Braunschweig, Nemačka). Medijum RPMl/Glutamaks. penicilin-streptomicin, kravlji fetalni serum inaktivisan toplinom, i D-PBS su nabavljeni od Life Technologies, Grand Island, NY. SAD. Pufer za ekstrakciju i pufer za neutralizovanje (5x) su nabavljeni od Active Motif, Carlsbad, CA. SAD. Zečje antitelo protiv histona H3 je nabavljeno od Abcam, Cambridge. MA, SAD. Zečje antitelo protiv H3K27me3 i HRP-konjugirani anti-zečji-IgG su nabavljeni od Cell Signaling Technology. Danvers. MA. SAD. TMB "super osetljivi" supstrat je nabavljen od BioFX Laboratories. Ovvings Mills. MD, SAD. Albumin iz kravljeg seruma koji ne sadrži IgG je bio nabavljen od Jackson ImmunoResearch. West Grove, PA, SAD. PBS sa Tvveen (10x PBST) je nabavljen od KPL, Gaithersburg. MD. SAD. Sumporna kiselina je nabavljena kod Ricca Chemical, Arlington, TX. SAD. Pločice za
immulon ELISA su nabavljene od Thermo. Rochester, NY. SAD. Pločice sa V-dnom za ćelijsku kulturu su nabavljene od Corning Inc., Corning. NY, SAD. Pločice sa V-dnom od polipropilena su nabavljene od Greiner Bio-One. Monroe, NC, SAD.
Ćelijska suspenzi ja WSU-DLCL2 je održavana u medij umu za rast (RPMI 1640 koji je bio obogaćen sa 10% v/v kravljim fetalnim serumom, koji je bio inaktivisan sa toplinom, i još je sadržavao 100 units/mL penicilin-streptomicin) i kultivirane na 37° C u atmosferi 5% CX>> U uslovima ovoga ogleda, ćelije su inkubirane u medij umu za ogled (RPMI 1640 koji je bio obogaćen sa 20% v/v kravljim fetalnim serumom, koji je bio inaktivisan toplinom, i još je sadržavao 100 units/mL penicilin-streptomicin) na 37° C u atmosferi 5% CO2na šejkeru za pločice.
WSU-DLCL2 ćelije su posejane u medijum za ogled u koncentraciji od 50.000 ćelija po mL u pločice za kulturu ćelija sa V-dnom i 96-rupica pri čemu je svaka rupica primila 200<p>L suspenzije. Jedinjenje (1 pL) iz pločica sa 96-rupica je bilo dodano direktno u pločice sa V-dnom. Pločice su inkubirane u šejkeru za mikrotitarske pločice na 37° C uz 5% CO2tokom 96 h. Nakon četiri dana inkubacije, pločice su centrifugovane na 241 x g tokom pet min, a medijum je pažljivo isisan iz svake rupice sa pločica sa ćelijama bez da se narušava konsistencija ćelijskog peleta. Pelet je ponovo suspendovan u 200 pL DPBS, a pločice su ponovo centrifugovane na 241 x g tokom pet min. Supernatant je isisan pa je u svaku pločicu dodan hladan (4° C) pufer za ekstrakciju (100 pL). Pločice su inkubirane na 4° C u orbitalnom šejkeru tokom dva časa. Pločice su centrifugovane na 3427 x g tokom 10 min. Supernatant (80 pL po rupici) je prenesen u svoju odgovarajuću rupicu na pločici od polipropilena sa D-dnom i 96-rupica. U polipropilensku pločicu sa V-dnom. koja sadrži supernatant, je dodan pufer za neutralizovanje (5x; 20 pL po rupici). Polipropilenske pločice sa V-dnom, koje sadrže sirovi histonski preparat (CHP), su inkubirane u orbitalnom šejkeru tokom pet minuta. Sirovi histonski preparati su dodani u svaku odgovarajuću rupicu (2 pL po rupici) u dvostrukim ELISA pločicama sa 96-rupica koje sadrže 100 pL pufera za premaz (lx PBS + BSA 0.05% w/v). Pločice su zatvorene i inkubirane preko noći na 4° C. Sledeći dan. pločice su bile isprane tri puta sa 300 pL 1 x PBST (po rupici). Rupice su blokirane tokom dva časa sa 300 pL ELISA razređivačapo rupici (PBS (lx) BSA (2% w/v) i Tween20 (0.05% v/v)). Pločice su bile isprane tri puta sa 1 x PBST. Za potrebe detekcije histona H3. dodano je 100 pL po rupici antitela protiv histona-H3 (Abcam, abl 791) razređenog 1:10000 u ELISA razređivaču. Za potrebe detektovanja H3K27 trimetilacije. dodano je 100 pL (po rupici) antitela protiv H3K.27me3 koje je bilo razređeno 1:2000 u ELISA razređivaču. Pločice su bile inkubirane tokom 90 min na sobnoj temperaturi. Pločice su bile isprane tri puta sa 300 pL lx PBST po rupici. Za potrebe detektovanja histona H3. po rupici je dodano 100 pL HRP-konjugiranog anti-zećjeg IgO antitela razređenog 1:6000 u ELISA razređivaču. Za potrebe detektovanja H3K27me3. po rupici je dodano 100 pL HRP konjugiranog anti-zečjeg IgG antitela razređenog 1:4000 u ELISA razređivaču. Pločice su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 90 min. Pločice su isprane četiri puta sa lx PBST (300 pL po rupici). U svaku rupicu je dodano 100 pL supstrata TMB. Pločice sa histonom H3 su inkubirane tokom pet minuta na sobnoj temperaturi. Pločice sa H3K27me3 su inkubirane tokom 10 min na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena uz pomoć IN sumporne kiseline (100 pL po rupici). Apsorbancija svake pločice je očitana kod 450 nm.
Prvo, omer za svaku rupicu je određen uz pomoć:
Svaka pločica sadrži osam kontrolnih rupica za tretman samo sa DMSO (minimalna inhibicija) kao i osam kontrolnih rupica za maksimalnu inhibiciju (pozadinske rupice).
Izračunat je prošek omera vrednosti za svaki tip kontrole pa je korišćen sa ciljem da se odredi procenat inhibicije u svakoj testnoj rupici na pločici. Testirano jedinjenje je serijski razblaženo tri-puta u DMSO kako bi se dobilo ukupno deset koncentracija, započinjući sa 25 pM. Procenat inhibicije je određen, a ICjokrive su proizvedene uz pomoć rezultata iz dveju rupica za svaku koncentraciju jedinjenja. IC50vrednosti za ovaj ogled su predstavljene u Tabeli 3 ispod.
Analiza ćelijske proliferacije
Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 je nabavljena od DSMZ( German Colleclion of Microorganisms and Cell Cuilures.Braunschweig, Nemačka). Medijum RPMI/Glutamaks, penicilin-streptomicin, fetalni goveđi serum inaktivisan toplinom je nabavljen od Life Technologies, Grand Island, NY. SAD. Polipropilenske pločice sa V-dnom i 384-rupica su nabavljene kod Greiner Bio-One. Monroe. NC, SAD. Velike neprozirne pločice za ćelijsku kulturu sa 384-rupica su nabavljene od Perkin Elmer, Waltham, MA, SAD.Cell- Titer 67«15je nabavljen od Promega Corporation, Madison. Wl, SAD. Čitač pločicaSpectraMa* M5je nabavljen od Molecular Devices LLC. Sunnvvale. CA. SAD.
Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 je održavana u medijumu za rast (RPMI 1640 koji je bio obogaćen sa 10% v/v fetalnog goveđeg seruma, koji je bio inaktivisan sa toplinom) uz kultiviranje na 37° C u atmosferi 5% CO2. U uslovima ovoga ogleda, ćelije su inkubirane u medijumu za ogled (RPMI 1640 obogaćen sa 20% v/v fetalnim goveđim serumom inaktivisanim toplinom, koji je sadržavao 100 units/mL penici lin-streptomicin) na 37° C uz 5% C02.
Za procenu efekta jedinjenja na proliferaciju ćelijske linije WSU-DLCL2. ćelije koje se umnožavaju eksponencijalno su nasađene u bele neprozirne pločice sa 384-rupica u gustoći ođ 1250 ćelija/ml u finalnom volumenu od 50 pl medijuma za oglede. Pločica sa jedinjenjem je pripremljena uz pomoć serijskih razblaživanja (3-puta) u triplikatu od devet tačaka u DMSO. započinjući sa 10 mM (finalna vršna koncentracija jedinjenja u ovom ogledu je bila 20 pM. a koncentracija DMSO je bila 0.2%o). Alikvot od 100 nL jedinjenja sa štok-pločice je dodan u odgovarajuću rupicu na pločici sa ćelijama. Kontrola sa potpunom (100%) inhibicijom se sastojala od ćelija tretiranih sa staurosporinom (200 nM finale koncentracije), a kontrola sa nikakvom (0%) inhibicijom se sastojala od ćelija koje su bile tretirane samo sa DMSO. Nakon dodavanja jedinjenja, ogledne pločice su inkubirane tokom 6 dana na 37° C uz 5% CO2i relativne vlažnosti >90% tokom 6 dana. Vijabilnost ćelija je izmerena uz pomoć kvantifikovanja ATP-a koji je bio prisutan u ćelijskim kulturama uz dodavanje 35 plCell Tiler ( Ho kreagensa u ćelijske pločice. Luminiscencija je očitana na aparatuSpectraMax M5.Koncentracija kod koje dolazi do inhibicije ćelijske vijabilnosti za 50% je određena uz pomoć 4-parametarskog podešavanja kriva sa normalizovanim odgovorom na dozu. IC>o vrednosti za ovaj ogled su takođe predstavljeni u Tabeli 3 ispod.
Primer 199: Određivanje najniže citotoksične koncentracija (LCC)
Bilo je utvrđeno da ćelijska proliferacija nastupa preko deobe ćelija koje dovodi do udvostručivanja broja ćelija nakon deobe u odnosu na broj ćelija pre deobe. Pod utvrđenim okolišnim uslovima (na primer, pH, jonska jakost, temperatura, gustoća ćelija, sadržaj belančevina i faktora rasta u medijumu i slično) ćelije će proliferirati uzastopnim udvostručivanjem (tj., deobom) u skladu sa sledećom jednačinom. pod uslovom da imaju dovoljno nutrienata i drugih potrebnih faktora. gde Nt je broj ćelija u vremenskoj tačci (t) nakon inicijacije perioda posmatranja. No je broj ćelija na početku perioda posmatranja, t je vreme nakon inicijacije perioda posmatranja, a tn je vremenski interval koji je potreban da se broj ćelija udvostruči, koji je takođe poznat kao vreme udvostručivanja. Jednačina A.l može da se konvertuje u prikladniju formu eksponencijalne jednačine sa bazom e, koristeći jednakost, 0.693 = ln(2).
Konstanta stope ćelijske proliferacije (kp) je obrnuto-proporcionalna sa vremenom udvostručivanja kako sledi. Kombinovanje jednačina A.2 i A.3 daje
Tako, u skladu sa jednačinom A.4, broj ćelija se očekivano povećava eksponencijalno tokom vremena (Slika 1 A) tokom ranog perioda ćelijskog rasta koji je poznat kao log-faza rasta. Eksponencijalne jednačine poput jednačine A.4 mogu da se linearizuju uz pomoć logaritmiranja svake strane.
Tako, prikaz ln(Nt) kao funkciju vremena očekivano daje rastuću ravnu liniju sa nagibom koji je jednak kp i y-preseku koji je jednak ln(No), kao staje ilustrovano na Slici 1B.
Promene okolišnih uslova mogu da dovedu do promene stope ćelijske proliferacije koja može da se kvantifikuje kao promena konstante stope proliferacije kp. Među uslovima koji mogu da dovedu do promene stope proliferacije je i uvođenje u sistem nekog anti-proliferativnog jedinjenja na početku perioda posmatranja (tj., kod točke t=0). Kada neko anti-proliferativno jedinjenje ima neposredan uticaj na ćelijsku prolifcraciju. očekivano je da će prikaz ln(Ni) kao funkciju vremena i dalje biti linearan za sve koncentracije jedinjenja uz opadaj uće vrednosti kp za rastuće koncentracije jedinjenja.
U zavisnosti o mehanističkoj bazi anti-proliferativnog delovanja, neka jedinjenja ne moraju neposredno da utiču na stopu proliferacije. Umesto toga. moguć je i period latencije pre no se uticaj jedinjenja primeti. U takvim slučajevima, prikaz ln(Nt) kao funkciju vremena može da bude bi-fazan, a vremenska tačka kod koje uticaj jedinjenja započinje može da se identifikuje kao tačka preloma između faza (Slika 2). Bez obzira na to da li je uticaj jedinjenja na proliferaciju neposredan ili započinje nakon perioda latencije. konstanta stope proliferacije za svaku koncentraciju jedinjenja se definiše uz pomoć nagiba na krivi ln(K) u odnosu na vreme od tačke kod koje uticaj jedinjenja započinje pa prema kraju perioda posmatranja u eksperimentu.
Jedinjenje koje se daje rastućim ćelijama može da utiče na primećenu proliferaciju na jedan od dva opšta načina: inhibiranjem sledeće deobe ćelije (citostaza) ili ubijanjem ćelije (citotoksično). Ako je jedinjenje citostatsko, povećanje koncentracije jedinjenja smanjuje vrednost kp do prestanka ćelijske deobe. Kod te tačke, stopa ćelijske deobe, a prema tome i vrednost kp, će iznositi nula. Ako je. sa druge strane, jedinjenje citotoksično, tada će se vrednost kp sastojati od konstanata za dve stope: konstanta stope za nastavljenu ćelijsku deobu u prisutnosti jedinjenja (kg) i konstanta stope za ubijanje ćelija uz pomoć pomenutog jedinjenja
(kd). Ukupna konstanta stope za proliferaciju kod fiksne koncentracije jedinjenja će tako biti razlika između apsolutne vrednosti suprotnih konstanti stope.
Kod koncentracija jedinjenja kod kojih stopa ćelijskog rasta prevazilazi stopu ubijanja ćelija. kp će imati pozitivnu vrednost (tj.. kp>0). Kod koncentracija jedinjenja kod kojih je stopa ćelijskog rasta manja od stope za ubijanje ćelija. kp će imati negativnu vrednost (tj.. kp<0). a broj ćelija će se smanjivati tokom vremena, koje ukazuje na robusnu citotoksičnost. Kada se kstačno podudara sa kj, tada će ukupna konstanta stope proliferacije. kp. imati vrednost nula. Tako možemo da definišemo najnižu citotoksičnu koncentraciju (LCC) kao koncentraciju jedinjenja koja daje vrednost kp koja je jednaka nuli. jer će bilo koja koncentracija koja je veća od toga dovesti do jasno vidljive citotoksičnosti.Nota bene:kod koncentracija ispod LCC. verovatno nastupa proces ubijanja ćelija, ali sa stopom koja je manja od proliferacije rezidulanih ćelija. Ovde navedeni tretman nema za nameru da đefiniše biološke detalje delovanja jedinjenja. Umesto toga. cilj je da se jedino đefiniše praktični parametar uz pomoć kojeg može da se objektivno kvantifikuje koncentracija jedinjenja kod koje stopa ubijanja ćelija nadvladava novi ćelijski rast. Uistinu. LCC predstavlja prelomnu tačku ili kritičnu koncentraciju iznad koje se primećuje prava citotoksičnost, umesto citotoksična koncentracijaper se.U tom pogledu. LCC može da se opiše kao i druga fizička metrika za prelomnu tačku. poput kritične micelame koncentracije (CMC) koja se koristi za određivanje koncentracije lipida. deterdženta ili drugih surfaktanata iznad koje se svi molekuli ugrađuju u micelarne strukture.
Tradicionalno, uticaj anti-proliferativnih jedinjenja na ćelijski rast se uobičajeno kvantifikuje uz pomoć ICso vrednosti, koja je definisana kao koncentracija jedinjenja koja smanjuje stopu ćelijske proliferacije za pola od one kada se ne primenjuje pomenuto jedinjenje (tj., kada se koristi kontrola koja sadrži samo prenosnik ili rastvarač; Slika 2). IC50. međutim, ne dozvoljava istraživaču da razlikuje citostatska od citotoksićnih jedinjenja. Suprotno, LCC omogućava jednostavno razlikovanje pomenutih svojstava jedinjenja, a dodatno kvantifikuje i koncentraciju kod koje je javlja tranzicija prema robusnom citotoksičnom ponašanju.
Ako ograničimo vreme posmatranja na uzak prozor između početka uticaja {koji je definisan iznad i u Slici 2} i kraja eksperimenta, tada će podaci generalno odgovarati linearnoj jednačini kada su prikazani preko ln(Nt) kao funkciju vremena{ vide supru).Iz tog tipa podešavanja, vrednost kp može da se odredi za svaku koncentraciju testiranog jedinjenja. Ponovno prikazivanje vrednosti kp kao funkciju koncentracije jedinjenja ([I]) dovesti će do krive u formi opadajuće izoterme, sa maksimalnom vrednosti kod [I] = 0 za kmaks(definisano uz pomoć kontrole sa prenosnikom ili rastvaračem) i minimalnom vrednosti kod minimalne koncentracije jedinjenja k,™ (Slika 3).
gde Imid je koncentracija jedinjenja koja daje vrednost kPkoja se nalazi između vrednosti kmaksi kmin (primetite da vrednost Imid nije ista kao i IC50, osim u slučaju potpuno i samo citostatskog jedinjenja). Tako. uklapanje podešenih podataka u jednačinu A.7 obezbeđuje procenu km;,ks. kmin i Imid. Ako je jedinjenje citostatsko (klao sta je malopre definisano). vrednost kmm ne može da bude manja od nule. Kod citotoksičnih jedinjenja, kmin će biti manja od nule, a apsolutna vrednost kminće direktno odražavati efikasnost jedinjenja da ubija ćelije.
Podešene vrednosti. koje su izvedene iz jednačine A.7. mogu takođe da se koriste za određivanje vrednosti LCC. Po definiciji, kada [I] - LCC.kp = 0. Tako.u ovim uslovima jednačina A.7 postaje:
Algebarsko preuređivanje jednačine A.8 daje jednačinu za LCC:
Ova analiza je jednostavna za implementaciju uz pomoć programa za ne-linearno podešavanje kriva i može da se primeni tokom ćelijskog ogleda koji testira delovanje jedinjenja tokom otkrivanja i razvoja leka. Na taj način. LCC može da obezbedi vrednu metriku za procenu SAR (odnos struktura-aktivnost) testiranog jedinjenja.
Primer 200:in vivotestovi
Miševi
Ženke miševa soja Fox Chase SCTD* (CB17/Icr-Prfe/c'.s'/cj'/IcrIcoCrl, Charles River Laboratories) ili atimičnih golih miševa (Crl:NU(Ncr)-Fox/7/,,,,. Charles River Laboratories) su bile stare 8 sedmica, a raspon telesne težine (BW) je varirao od 16.0-21.1 g tokom Dl studije. Životinje su dobovale voduadlibitum(reverzna osmoza: 1 ppm CI) uz režim prehraneA7/7 31 Lab Diet"(modifikovano i ozračeno) koji je obuhvatao 18.0% sirovih belančevina. 5.0% sirove
masti, i 5.0% sirovih vlakana. Miševi su bili smešteni u ozračenim nastambamaEnrich- o' cobs'"u statičkim mikroizolatorima uz ciklus svetla ocl 12 h na 20-22° C (68-72° F) uz vlažnost od 40-60%. Sve procedure su uvažavale preporukeGuidefor Care and U.se oj Lahor at orv Animahšta se tiče ograničavanja kretanja, smeštaja. hirurških procedura, regulacije hrane i lečnosti. i veterinarske nege.
Kultura tumorskih ćelija
Ćelijske linije humanog limfoma su bile nabavljene iz različitih izvora (ATCC. DSMZ). na primer, WSU-DLCL2 su nabavljene od DSMZ. Ćelijske linije su bile održavane kao suspenzije u medijumu RPMI-1640 koji je sadržavao 100 jedinica/mL natrijumove soli penicilina G. 100 g/mL streptomicina, i 25 g/mL gentamicina. Medijum je bio obogaćen sa 10% fetalnog kravljeg seruma i 2 mM glutamina. Ćelije su kultivirane u bocama za kulturu tkiva u vlažnom inkubatoru na 37° C, u atmosferi 5% CO?i 95% vazduha.
In vivoimplantacija tumora
Ćelijske linije humanog limfoma, na primer ćelije WSU-DLCL2, su sakupljene tokom srednje log-faze rasta, pa su re-suspendovane u PBS sa 50%> Matrigel'<M>(BD Biosciences). Svaki miš je primio 1 x 107 ćelija (0.2 mL ćelijske suspenzije) supkutano u desni bok. Tumori su izmereni uz pomoć šublera (u dve dimenzija) sa ciljem praćenja njihovog rasta pri čemu je određen srednji volumen koji doseže željeni raspon od 80-120 mm<3>. Veličina tumora, u mm<3>, je određena uz pomoć:
gde w = širina, a / = dužina tumora u mm. Težina tumora može da se proceni uz pomoć pretpostavke da 1 mg odgovara 1 mm<3>tumorskog volumena. Nakon 10-30 dana. miševi sa tumorima volumena 108-126 mm3 su sortirani u grupe za tretman u kojima je srednji volumen tumora bio 117-119 mm<3>.
Testirani članci
Testirana jedinjenja su uskladištena na sobnoj temperaturi zaštićena od svetla. Tokom svakog dana tretmana, pripremane su sveže formulacije jedinjenja (na primer. formulacija tri-HCl soli Jedinjenja 44 ili tri-HCl soli Jedinjenja 87) uz pomoć suspendovanja praha u 0.5% natrijum karboksimetilcelulozi (NaCMC) i 0.1% Tween" 80 u dejonizovanoj vodi. Jedinjenje 141
(slobodna baza) je rastvoreno u sterilnoj slanici, a pH je podešen do 4.5 uz pomoć sveže HCl svaki dan. Prenosnici, 0.5% NaCMC i 0.1% Tween<R>80 u dejonizovanoj vodi ili sterilnoj slanici sa pH 4.5. su korišćeni za tretman kontrolnih grupa primenom istog režima za tretman. Formulacije su čuvane izvan svetla na 4° C pre ađministriranja. Osim ako je drugačije navedeno, jedinjenja navedena i testirana u ovom eksperiment su bila u formi svojih specifičnih soli pomenutih u ovom paragrafu.
Plan za tretman
Miševi su tretirani sa dozama jedinjenja u rasponu od 12.5-600 mg/kg koristeći rasporede T1D (tri puta na dan, svakih 8 h), BID (2 puta na dan, svakih 12 h) ili QD (jednom dnevno) tokom više dana uz pomoć oralne gavaže (Jedinjenje 44 ili 87) ili uz pomoć injekcija preko intraperitonealne rute (Jedinjenje 141). Svaka doza je dostavljena u volumenu od 0.2 mL za miša od 20 g (10 mL/kg), koji je bio podešen za poslednju izmerenu težinu svake pojedinačne životinje. Maksimalna dužina tretmana je bila 28 dana.
Analiza srednjeg tumorskog volumena (MTV) i inhibicije tumorskog rasta (TGI)
Efikasnost tretmana je određena tokom zadnjeg dana tretmana. MTV(n), srednji tumorski volumen za određeni broj životinja, n, koji se određuje tokom zadnjeg dana. je određen za svaku grupu. Procenat inhibicije tumorskog rasta (%TGI) može da se đefiniše na nekoliko načina. Prvo, razlika između MTV(n) označene kontrolne grupe i MTV(n) grupe koja je tretirana sa lekom se izražava kao procenat MTV(n) kontrolne grupe:
Drugi način za izračunavanje %TGI uzima u obzir promenu veličine tumora od dana 1 do dana n. pri čemu n predstavlja zadnji dan tretmana.
Toksičnost
Životinje su vagane na dnevnoj bazi, tokom Dana i-5, a tada dva puta sedmično do kraja studije. Miševi su često ispitivani kako bi se utvrdili vidljivi znakovi bilo kakvih štetnih nus-pojava koje su povezane sa tretmanom, a njihova prisutnost je bila dokumentovana. Prihvatljiva toksičnost maksimalne tolerisane doze (MTD) je defmisana kao srednji gubitak telesne težine grupe koji je iznosio manje od 20% tokom testiranja uz mortalitet povezan sa tretmanom (TR) koji je bio manji od 10%o. Smrt se mogla klasifikovati kao da je TR ako ju se moglo povezani sa nus-pojavama samog tretmana koje se moglo proceniti na osnovu kliničkih znakova i/ili autopsije, ili usled nepoznatih razloga tokom perioda doziranja. Smrt se mogla klasifikovati kao takva koja nije povezana sa tretmanom (NTR) ukoliko je bilo dokaza da smrt nije uzrokovana nus-pojavama tretmana. NTR smrti tokom doznog intervala se tipično kategoriziraju kao NTRa (usled nesreće ili ljudske pogreške) ili NTRm (usled širenja tumora invazijom i/ili metastazom koji su potvrđeni autopsijom). Oralno tretirane životinje koje umiru kao posledica nepoznatih uzroka tokom perioda doziranja mogu da se klasifikuju kao NTRu kada nije moguća TR klasifikacija, a autopsiju, koja bi trebala otkloniti mogućnost dozne pogreške, nije moguća.
Uzimanje primeraka (uzoraka)
Tokom dana 7., ili 28. studije, miševi su uzorkovani na ranije utvrđen način sa ciljem da se utvrdi ciljana inhibicija tumora. Tumori su sakupljeni od specifikovanih miševa u uslovima bez kontaminacije sa RNAzom pa su pocepani na pola. Tumorsko tkivo iz svake životinje je bilo naglo smrznuto u tečnom N2i pretvoreno u prah uz pomoć tučka u avanu.
Statističke i grafičke analize
Sve statističke i grafičke analize su provedene uz pomoć Prisni 3.03 (GraphPad) za Windows. Sa ciljem testiranja statističkog značaja između kontrolne i tretiranih grupa tokom celog trajanja tretmana primenjeni su uzastopni ANOVA testovi praćeni sa Dunnett-ovih testom ili dvostrukim ANOVA testom. Rezultati su mogli da budu ne-značajni (ns) ako jeP>0. 05.značajni (označeno sa "<*>") ako je 0.0KPO.05, veoma značajni ("<**>") ako je 0.001 /' 0.01. i od izuzetne važnosti ("<***>") ako jeP<0. 00\.
Ekstrakcija histona
Za izolaciju histona. 60-90 mg tumorskog tkiva je homogenizovano u 1.5 ml pufera za ekstrakciju jedara (10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2. 25 mM KC1. 1% Triton X-100. 8.6% saharoza, uz Roche-ovu tabletu sa inhibitorom proteaze 1836145) i inkubirano na ledu tokom 5 min. Jedra su sakupljena uz pomoć centrifugovanja na 600 g tokom 5 min na 4° C pa su isprana jednom u PBS. Supernatant je odstranjen, a histoni su ekstrahovani tokom jednog časa, uz vorteksovanje svakih 15 min u prisutnosti 0.4 N hladne sumporne kiseline. Ekstrakti su centrifugovani na 10000 g tokom 10 min na 4° C pa su preneseni u novu tubu za mikro-centrifugu koja je sadržavala 10x volumena ledeno hladnog acetona. Elistoni su precipitirani na -20° C tokom 2 h preko noći. sakupljeni u pelet uz pomoć centrifugovanja na 10000 g tokom 10 min, pa su ponovo suspendovani u vodi.
ELISA
Histoni su pripremljeni u podjednakim koncentracijama u puferu za prekrivanje (PBS + 0.05% BSA) koje daje 0.5 ng/pl primerka, a 100 pl primerka ili standarda je bilo dodano u duplikatu u ELISA pločice sa 296-rupica (Thermo Labsistems, Immuion 4HBX #3885). Pločice su zatvorene i inkubirane preko noći na 4° C. Sledećeg dana, pločice su isprane 3x sa 300 pl/rupici PBST (PBS + 0.05% Tween 20; 10x PBST. KPL #51-14-02) uz pomoć aparata za ispiranje pločicaBio Tek.Pločice su blokirane sa 300 pl/rupici razređivaća (PBS + 2% BSA + 0.05% Tween 20). inkubirane na ST tokom 2 h, pa su isprane 3x sa PBST. Sva antitela su razređena u razređivaču. U svaku pločicu je dodano 100 pl/rupici anti-H3K27me3 antitela (CST #9733, 50% štok u glicerolu, 1:1.000) ili anti-total H3 antitela (Abcam abl 791, 50% glicerol. 1:10,000). Pločice su bile inkubirane tokom 90 min na ST pa su isprane 3x sa PBST. Dodano je 100 pl/rupici anti-Rb-IgG-HRP antitela u razređenju 1:2,000 (Cell Signaling Technologv. 7074) u EI3K27Me3 pločicu i istog antitela u razređenju 1:6.000 u H3 pločicu, a pločice su inkubirane tokom 90 min na ST. Pločice su isprane 4x sa PBST. Za detektovanje je dodano 100 pl/rupici TMB supstrata (BioFx Laboratories, #TMBS), a pločice su inkubirane u tami na ST tokom 5 min. Reakcija je zaustavljena uz pomoć 100 pl/rupici IN H2SO4. Apsorbancija kod 450 nm je očitana na aparatu za čitanje pločicaSpectaMax M5.
Rezultati:
7-dnevna PD studija sa Jedinjenjem 87
Sa ciljem da se testira da li Jedinjenje 87 može da modulira oznaku H3K27me3 histona u tumorimain vivo,miševi koji su imali WSU-DLCL2 tumor (ksenokalem) su bili tretirani sa
Jedinjenjem 87 primenom tretmana BID (200 mg/kg) ili QD (400 mg/kg) ili samo uz pomoć prenosnika (BID raspored) tokom 7 dana. Svaka grupa je sadržavala 4 životinje. Životinje su žrtvovane 3 h nakon poslednje doze, a tumor je bio sačuvan u smrznutom stanju kao šta je malopre opisano. Nakon izolacije histona, primerci su naneseni u pločice iz ELISA ogleda uz korišćenje antitela koja su bila usmerena protiv tri-metilovanog stanja histona H3K27 (H3K27me3) ili protiv ukupnog histona EI3. Na bazi ovih podataka je izračunat omer globalno metilovanog u odnosu na totalni H3K27. Slika 4 pokazuje srednje omere globalne metilacije za sve grupe koji su izmereni primenom ELISA i ukazuje na ciljanu inhibiciju u rasponu od pribl. 62.5% (400 mg/kg QD x 7) i 37.5% (200 mg/kg BID x 7) upoređeno sa prenosnikom.
28-dnevna studija efikasnosti sa Jedinjenjem 141 na VVSU-DLCL2 modelu sa
ksenokalemom
Sa ciljem da se testira da li Jedinjenje 141 možein vivoda potakne inhibiciju tumorskog rasta, miševi koji su imali WSIJ-DLCL2 ksenokalem su bili tretirani sa Jedinjenjem 14! primenom rasporeda QD (12.5, 25 ili 50 mg/kg) tokom 28 dana preko intraperitonealne injekcije. Tumorski volumen i telesna težina su određivani dva puta sedmično. Jedinjenje 141 je bilo dobro tolerisano kod svih doza uz minimalni gubitak telesne težine. Paralelna kohorta miševa (n=4 po grupi) je tretirana uz pomoć istih doza tokom 7 dana, a miševi su žrtvovani 7. dana, 3 h nakon poslednje doze sa ciljem uzimanja uzoraka tumora i procene ciljane inhibicije. Slika 5 pokazuje rezultate ELISA merenja globalne metilacije H3K27me3 koja je normalizovana u odnosu na totalni H3. Primećena je dozno-zavisna ciljana inhibicija u rasponu od 39% do 67% upoređeno sa prenosnikom.
Slika 6 prikazuje rast tumora tokom kursa tretmana ođ 28 dana kod grupa koje su bile tretirane sa prenosnikom ili Jedinjenjem 141.
Efekt ađministriranja korišćenog prenosnika. koji je bio unesen preko intraperitonealne rute. može da se primeti jer je tumorski rast bio sporiji u grupi sa prenosnikom u odnosu na netretiranu grupu. Samo grupa sa najvišom dozom Jedinjenja 141 (50 mg/kg QD x 28) je pokazala inhibiciju tumorskog rasta u odnosu na grupu sa prenosnikom (33% izračunato od dana 1, 43% izračunato od dana 7). Rast tumora nije bio statistički značajan ako se uporedi sa prenosnikom primenom ponovljenih testova ANOVA praćenih sa Dunnett-ovim testom, ali terminalna veličina tumora je bila značajno manja kod grupe koja je bila tretirana sa 50 mg/kg (DQ) upoređeno sa grupom koja je bila tretirana samo sa prenosnikom (dvostruka ANOVA. Bonferroni-ev test, pO.OOOl).
Studija efikasnosti uz pomoć rastućih doza Jedinjenja44na modelu sa WSli-DLCL2 ksenokalemom
Sa ciljem da se testira da li jedinjenje 44 može da inđukuje anti-tumorski efektin vivo,miševi sa WSU-DLCL2 ksenokalemom su bili tretirani sa Jedinjenjem 44 primenom T1D rasporeda (37.5, 75 ili 150 mg/kg) tokom 28 dana. Svaka grupa je sadržavala po 12 miševa za potrebe ispitivanja efikasnosti (jedan deo eksperimenta). Paralelna kohorta jc dozirana tokom 7 dana sa istim dozama primenom istog rasporeda sa ciljem da se proceni ciljana inhibicija nakon 7 dana (n=6 po grupi). Slika 7 prikazuje rast tumora tokom tretmana od 28 dana kod grupa tretiranih sa prenosnikom i jedinjenjem 44. Može da se primeti jasna dozno-zavisna inhibicija rasta tumora. Samo se grupa tretirana sa najvećom dozom statistički razlikuje od grupe tretirane sa prenosnikom kao šta je utvrđeno uz pomoć ponovljenih merenja ANOVA i Dunnett-ovog testa. Inhibicija rasta tumora u grupi sa najvećom dozom je bila 58% (od dana 1) ili 73% (od dana 7) u odnosu na grupu sa prenosnikom.
Histoni su izolovani iz tumora sakupljenih nakon 7 dana doziranja (paralelna PD kohorta) i na kraju studije tokom dana 28 kod kohorte za ispitivanje efikasnosti (3 h nakon poslednje doze obeju kohorta). Slika 8 prikazuje da je metilna oznaka H3K27me3 modulirana uz pomoć tretmana na dozno-zavisan način i da postoji statistički značajno bolja ciljana inhibicija tokom dana 28 u odnosu na dan 7 kod grupe sa najvećom dozom (150 mg/kg: TID).
Studija efikasnosti sa Jedinjenjem 44 primenom različitih doznih rasporeda
Sa ciljem da se proceni da li će Jedinjenje 44 da dovede do inhibicije rasta tumora primenom drugačijih doznih rasporeda (različiti od TID), studija efikasnosti na modelu sa WSU-DLCL2 ksenokalemom je provedena tako da su međusobno upoređeni dozni rasporedi TID, BID i QD. Svaka grupa je sadržavala 12 životinja, a miševi su tretirani tokom 28 dana. Slika 9 prikazuje rast tumora tokom tretmana od 28 dana kod grupa tretiranih sa prenosnikom i Jedinjenjem 44. Inhibicija rasta tumora može da se postigne kod svih doza i uz pomoć svih rasporeda (Tabela 5 ispod: sažetak inhibicija rasta tumora indukovanih uz pomoć različitih doznih rasporeda Jedinjenja 44 u modelima sa WSU-DLXC2 ksenokalemima). Dok su samo rasporedi TID (150 mg/kg) i BID (225 mg/kg) pokazivali statistički značajnu razliku u odnosu na prenosnik
(ponovljeno merenje ANOVA i Dunnett-ov test), sve terminal ne veličine tumora iz grupa tretiranih sa Jedinjenjem 44 su bile statistički različite od grupe sa prenosnikom (dvostruka ANOVA i Bonferroni-ev test; pO.OOOl).
Tokom dana 28. miševi su bili žrtvovani, a tumori su sakupljeni 3 h nakon poslednje doze sa ciljem procene ciljane inhibicije. Slika 10 prikazuje da je tretman sa Jedinjenjem 44 pokazivao slične nivoe ciljane inhibicije za sve doze u svim doznim rasporedima.
Primer 201: anti-tumorski efekt Jedinjenja 44 na mišji model sa ksenokalemom
KARPAS-422 humanog difuznog B-velikoćelijskog limfoma
Jedinjenje 44 (u formi HCl soli) je bilo testirano da li poseduje anti-tumorsku aktivnost u mišjem modelu sa KARPAS-422 ksenokalemom. pri čemu je kalem bio humani difuzni B-velikoćelijski limfom. Osim ako je navedeno drugačije. Jedinjenje 44 koje je testirano u ovom eksperimentu je bilo u formi svoje tri-HCl soli. 45 ženki miševa soja CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlCrlj (Charles River Laboratories, Japan) koje su imale KARPAS-422 tumore, čiji je srednji volumen tumora (TV) dosegnuo približno 150 mnr\ su bile izabrane na bazi njihovih TV, a tada su nasumično podeljene u pet grupa. Oralno administriranje Jedinjenja 44 (80.5. 161.322. i 644 mg/kg) ili prenosnika je započelo tokom dana 1. Jedinjenje 44 je davano jednom dnevno tokom dana 1 i dana 29, a dva puta dnevno tokom perioda od dana 2 do dana 28. Administrirani volumen (0.1 mL/10 g telesne težine) je izračunat na osnovu telesne težine pre ađministriranja. TV i telesna težina su određivani dva puta sedmično. Dizajn eksperimenta je prikazan u Tabeli 6.
TV je izračunat merenjem sa šublerom primenom formule za određivanje volumena izduženog elipsoida (LxW<2>)/2 pri čemu L i W su mere za odgovarajuću ortogonalnu dužinu i širinu (mm).
Podaci su izraženi kao srednja vrednost ± standardna devijacija (SD). Razlike u TV između grupa koje su tretirane sa prenosnikom ili Jedinjenjem su analizirane uz pomoć analize varijance (ponovljeno merenje ANOVA) koja je praćena sa Dunnett-ovim testom. Vrednost P<0.05 (dvostrano) se smatra statistički značajnom. Statističke analize su provedene uz pomoć programaPrism 5,verzija 5.04 (GraphPad Software, Inc., CA, SAD).
Tokom perioda tretmana doza od 644 mg/kg je dovela do smrti dva od devet miševa. Maksimalno tolerisana doza je određena kao 322 mg/kg, kod koje doze nije bio primećen mortalitet ili gubitak telesne težine tokom studije (Slika 11 i Tabela 7).
Jedinjenje 44 je pokazalo značajne anti-tumorske efekte protiv humanog difuznog B-velikoćelijskog limfoma (KARPAS-422 ksenokalem) kod svih doza tokom dana 29 na dozno-zavisan način (Slika 12). Efekt inhibicije rasta tumora je primećen kod doze od 80.5 mg/kg. Regresija tumora je primećena kod doza od 161 i 322 mg/kg.
EKVIVALENTI
Pronalazak može da bude izveden i kroz druge specifične forme bez da se značajno odstupa od njegovih osnovnih karakteristika. Prethodne izvedbe se, prema tome, trebaju smatrati ilustrativnima, a ne ograničavajućim faktorima ovoga pronalaska. Okvir ovoga pronalaska je opisan pridodanim zahtevima umesto samo prethodnim opisom.
SEKVENCA

Claims (16)

1. Jedinjenje,naznačeno time,što ima Formulu (I) ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so: gde X, jeN ili CRu; X2jeNiliCRi3; Zje NR7R«, OR7, S(0)„R7. ili CR7RsRi4, gde nje 0. 1. ili 2: svaki od Ri, R5. R9, i Rio, nezavisno, je H ili Ci-G> alkil opciono supstituisan sajednim ili više supstituenata izabranih iz. grupe koja obuhvata halo. hidroksil. COOH, C(0)0-C1-C6 alkil, cijano, CVC<, alkoksil, amino, mono-G-Ch alkilamino, di-Ci-O, alkilamino, C3-C8cikloalkil, Cf,-Cio aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril; svaki od R2, R3. i R4, nezavisno, je -Qi-Ti, gde Qi je veza ili C1-C3alkilni linker opciono supstituisan sa halo. cijano. hidroksilom ili G-C-6alkoksi. a Ti je H, halo, hidroksil. COOH, cijano, ili Rsi, gde Rsi je C1-C3alkil, (VC<- alkenil, CVO, alkinil, G-G, alkoksil, C(0)0-Ci-Cf, alkil, CVC«cikloalkil. C(,-Oo aril. amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-G alkilamino, 4 do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-člani heteroaril, a Rsi je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo. hidroksil, okso, COOH, C(0)0-Ci-Gs alkil. cijano. G-G, alkoksil, amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-C6alkilamino, CVCs cikloalkil. G-Cm aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril; Rc je CVGo aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, pri čemu je svaki od njih opciono supstituisan sajednim ili više -C22-T2, gde Qi je veza ili C1-C3alkilni linker koji je opciono supstituisan sa halo. cijano, hidroksilom ili G-G, alkoksi, a T2je H. halo. cijano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+AVC(0)Ra. -C(0)OR;„ -C(0)NRaRh, -NRbC(0)Ra. -NRbC(0)ORa, -S(0)2Ra. -S(0)2NRnRh. ili Rs.:. gde svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno je H ili Rs3, A" je farmaceutski prihvatljivi anjon. svaki od Rs2 i Rs3, nezavisno, je G-G, alkil, CVCs cikloalkil, G,-Go aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-Člani heteroaril, ili Ra i Rb, zajedno sa N-atomom na kojeg su spojeni, formiraju 4 do 12-člani heterocikloalkilni prsten koji ima 0 ili 1 dodatni heteroatom. a svaki od Rs2. Rs3. i 4 do 12-članog heterocikloalkilnog prstena formiranog pomoću Rai Rb. je opciono supstituisan sa jednim ili više -0>T3, gde Q; je veza ili G-C3 alkilni linker od kojih je svaki opciono supstituisan sa halo. cijano. hidroksilom ili G-G, alkoksi. a T3je izabran iz grupe koja obuhvata halo, cijano, G-G, alkil. CVCs cikloalkil. CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. 5- ih 6-člani heteroaril, ORd, COORd. -S(0)2Rd. -NRdRc«i - C(0)NRdRc, svaki od Rdi Rcnezavisno je H ili G-C(, alkil. ili -C/3-T3 je okso; ili bilo koja dva susedna -CJ2-T2, zajedno sa atomima na koje su vezani, formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma izabrana iz N, O i S, a opciono je supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil, COOH, C(0)0-G-G, alkil, cijano, G-G alkoksil. amino, mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino, C3-G cikloalkil. CVGo aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril; R7 je -Q4-T4. gde Gj4 je veza, G-G alkilni linker, ili C2-C4alkenilni linker, a svaki linker je opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksilom ili G-G, alkoksi. a T4 je 11, halo.cijano, NRfRg, -ORr, -C(0)Rf, -C(0)ORr.-C(0)NRtRg, -C(0)NRiORg.- NRiC(0)Rg, -S(0)2Rr, ili Rs4. gde svaki od Rri Rg nezavisno je H ili Rss. svaki od RS4i Rs5nezavisno je G-G, alkil, CVG, alkenil. CVG, alkinil, G-Cs cikloalkil. CVGo aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, a svaki od Rs4 i Rs5 je opciono supstituisan sajednim ili više -Q5-T5, gde Qj je veza. C(O), C(0)NRk. NRkC(O), S(0)2. ili C1-C3alkilni linker, Rkje H ili G-G, alkil. a T5je H, halo. G-G, alkil. hidroksil. cijano, G-G, alkoksil, amino, mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino. CVG cikloalkil, CVGoaril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril. ili S(CJ)gRt| gde q je 0, 1, ili 2, a Rq je G-G alkil, G-G, alkenil, G-G, alkinil, CVCs cikloalkil. Cc-Go aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, a T> je opciono supstituisan sajednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, G-G, alkil, hidroksil, cijano. G-G, alkoksil, amino. mono-G-G alkilamino. di-G-G, alkilamino, G-G cikloalkil. C(,-Cio aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -GvTs je okso; svaki od Rs, Rn. Ri2, i R13. nezavisno, je H, halo. hidroksil. COOH. cijano. Rsc, ORs6, ili CO()Rs6. gde Rs6 je G-G, alkil, CVG, alkenil. C2-G alkinil. CVCs cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, amino. mono-G-G, alkilamino, ili di-Ci-C(, alkilamino. a Rs<, je opciono supstituisan sajednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil, COOH, C(0)0-G-G alkil, cijano. CVG, alkoksil, amino, mono-G-G, alkilamino, i di-G-G, alkilamino; ili R7i Rs, zajedno sa N atomom na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 11-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 do 2 dodatna heteroatoma, ili R7i Rs, zajedno sa C atomom na kojeg su spojeni, formiraju G-Cs cikloalkil ili 4 do 11 -Člani heterocikloalkilni prsten koji ima 1 do 3 heteroatoma. a svaki od 4 do 11-članih heterocikloalkilnih prstena ili CVCs cikloalkila formiranih sa R7i Rs je opciono supstituisan sa jednim ili više -Q(,-T(,. gde Q6je veza. C(O), C(0)NRm. NR,tlC(0), S(0)2, ili G-G alkilni linker. R,T1 je H ili G-G, alkil. a T(, je H, halo. G-G alkil, hidroksil. cijano. G-G alkoksil, amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino, G-Cs cikloalkil, CVGo aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(0)pRp gde pje 0, 1, ili 2. a Rpje G-G alkil,CVG, alkenil,CVG, alkinil. G-G cikloalkil, C6-G0aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil. ili 5- ili 6-Člani heteroaril. a TV, je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, G-G, alkil, hidroksil, cijano, G-G, alkoksil. amino, mono-G-G alkilamino, di-G-G alkilamino, G-Cs cikloalkil. CVGo aril. 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada Taje H. halo, hidroksil. ili cijano; ili - Qb- T(, je okso; a Ru nedostaje, je H, ili G-G, alkil opciono supstituisan sajednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja obuhvata halo, hidroksil, COOH, C(0)0-G-G, alkil, cijano. G-G alkoksil. amino, mono-G-G alkilamino. di-G-G alkilamino, G-Cs cikloalkil. G,-Goaril. 4 do 12-člani heterocikloalkil. i 5- ili 6-člani heteroaril.
1. Jedinjenjeiz zahteva 1,naznačeno time,što Rc je fenil supstituisan sajednim ili više - C/2-T2; ili R(, je 5- ili 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma izabrana iz N. O, i S. a opciono je supstituisan sajednim ili više -Q2-T2. preferirano 5- ili 6-člani heteroaril je piridinil, pirazolil. pirimidinil, hinolinil, tetrazolil. oksazolil. izoksazolil. tiazolil, izotiazolil, furil, ili tienil, a svaki od njih je opciono supstituisan sajednim ili više -GJ2-T2.
3. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva od 1-2, naznačeno time, što T2je -NRaRbili - C(0)NRaRb, gde svaki od Rai Rbnezavisno je H ili G-G, alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom na kojeg su spojeni, formiraju 4 do 12-člani heterocikloalkilni prsten koji ima 0 ili 1 dodatna heteroatom, G-G alkil i 4 do 12-člani heterocikloalkilni prsten koji je opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ3-T3. a Q2 je G-G alkilni linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksilom.
4. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva od 1-3, naznačeno time. što R7 je G-G, alkil, C3-G cikloalkil ili 4 do 12-člani heterocikloalkil, a svaki je opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ5-T5; ili R? je 4 do 12-člani heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili više -(J5-T5, a preferirano R7je piperidinil, tetrahidropiran, tetrahidro-2H-tiopiranil, ciklopentil, ili cikloheksil, pri čemu je svaki opciono supstituisan sajednim ili više - CJ5-T5.
5. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva od 1-4. naznačeno time. što (i) jedan ili više -Cm-Ts su okso; ili (ii) Ts je H. halo. G-G alkil, G-G alkoksil, G-G cikloalkil. G-Go aril, ili 4do 12-člani heterocikloalkil; ili (iii) kadaQ?je veza. T5je amino, mono-G-G alkilamino, di-G-G alkilamino, G-G, alkil, G-G cikloalkil, ili 4 do 12-člani heterocikloalkil; ili (iv) kada Q5je CO, S(0)2, ili NHC(O), Ts je G-G, alkil, G-G, alkoksil, G3-G cikloalkil, ili 4 do 12-člani heterocikloalkil; ili (v) kada Q$ je G-C3alkilni linker, T> je H, G,-Go aril, G-Cs cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil. ili S(0)qRq.
6. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva od 1-5, naznačeno time. što svaki od Ri i Ri 1 je H.
7. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva od 1-6, naznačeno time. što svaki od R2i R-i nezavisno je H ili G-G alkil opciono supstituisan sa amino. mono-G-G, alkilamino, di-G-G, alkilamino. ili G-Gn arilom, a preferirano svaki od R2i R4 je metil.
8.Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva od 1-7,naznačeno time,što R12je H, metil, etil, etenil, ili halo, Rs je H, metil, ili etil. a Rb je H ili metil.
9. Jedinjenje iz zahteva 1,naznačeno time,što ima Formulu (le): a preferirano pomenuto jedinjenje ima Formulu (Ig): gde R2, R4i R12su, svaki nezavisno. Ci-6alkil.
10. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva 1 i 9,naznačenotime, što Rb je G-Go aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, a svaki je opciono i nezavisno supstituisan sa jednim ili više - Q2-T2. gde Q2je veza ili G-G alkilni linker, a T?je H. halo, cijano, -ORa. -NRaRb, - (NRaRbRffA-, -C(0)NRaRb, -NRhC(0)Ra. -S(0)2R;l. ili RS2, gde svaki od Rai Rhnezavisno je H ili Rs3, a svaki od R$2 i Rs*. nezavisno, je G-G, alkil, ili Rai Rb. zajedno sa N atomom na kojeg su spojeni, formiraju 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatni heteroatom, a svaki od Rs2, Rsj, i 4- do 7-članog heterocikloalkilnog prstena formiranog od Rai Rh. je opciono i nezavisno supstituisan sajednim ili više -OJ-T3, gde CJ3 je veza ili G-G alkilni linker, a T3 je izabran iz grupe koja obuhvata halo, G-G; alkil, 4- do 7-člani heterocikloalkil, ORd, -S(0)2Rđ. i -NRdRc. a svaki od Rdi Rcnezavisno je H ili G-CV, alkil. ili -Q3-Ti je okso; ili bilo koja dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima na koje su spojeni, formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma izabrana iz N, O i S.
11. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva t i 9,naznačeno time,što ima Formulu (II): gde OJ2 je veza ili metilni linker. T2je H, halo, -ORa, -NRaRt>, -(NRaRhRc)<+>A" ili - S(0)2NRaRb, R7 je piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil, ili cikloheksil, od kojih je svaki opciono supstituisan sajednim -Qs-Ts. a Rsje etil. pri čemu preferirano pomenuto jedinjenje ima Formulu (Ma):
12. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva 1, 9, i 11. naznačeno time, što (i) svaki od Rai Rbnezavisno je H ili G-G alkil opciono supstituisan sajednim ili više -CJ3-T3, (ii) jedan od Rai Rb je H, ili (iii) Rai Rb, zajedno sa N atomom na kojeg su spojeni, formiraju 4-do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži 0 ili 1 dodatan heteroatom osim N atoma, a prstenje opciono supstituisan sajednim ili više -GJ3-T3. preferirano Rai Rb. zajedno sa N atomom na kojeg su spojeni, formiraju azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil. pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil. piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, a prstenje opciono supstituisan sa jednim ili više -CJ3-T3, a još bolje Rai Rb. zajedno sa N atomom na kojeg su spojeni, formiraju morfolinil.
13. Jedinjenje iz zahteva 1,naznačeno time,stoje izabrano iz i njihove farmaceutski prihvatljive soli, a preferirano pomenuto jedinjenje je izabrano iz i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
14. Jedinjenje iz zahteva 1,naznačeno time,što pomenuto jedinjenje je ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so.
15. Farmaceutska kompozicija,naznačena time,što sadrži jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva 1-14 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i neki farmaceutski prihvatljivi nosilac.
16. Jedinjenje iz bilo kojeg od zahteva 1-14,naznačeno time,što se upotrebljava u postupku za tretiranje ili sprečavanje raka.
RS20160706A 2011-04-13 2012-04-13 Aril-ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja RS55113B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161474821P 2011-04-13 2011-04-13
US201161499595P 2011-06-21 2011-06-21
PCT/US2012/033648 WO2012142504A1 (en) 2011-04-13 2012-04-13 Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds
EP12719529.5A EP2697199B1 (en) 2011-04-13 2012-04-13 Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55113B1 true RS55113B1 (sr) 2016-12-30

Family

ID=46045109

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160706A RS55113B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril-ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja
RS20211082A RS62279B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja
RS20190065A RS58226B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211082A RS62279B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja
RS20190065A RS58226B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja

Country Status (35)

Country Link
US (15) US8410088B2 (sr)
EP (5) EP3486234B1 (sr)
JP (6) JP5933686B2 (sr)
KR (8) KR102154946B1 (sr)
CN (2) CN107311921B (sr)
AR (1) AR086008A1 (sr)
AU (1) AU2012242595B2 (sr)
BR (2) BR112013026324B1 (sr)
CA (2) CA2832843C (sr)
CL (1) CL2013002898A1 (sr)
CY (3) CY1117986T1 (sr)
DK (4) DK3486234T3 (sr)
ES (4) ES2886099T3 (sr)
FI (1) FI3943485T3 (sr)
HR (3) HRP20211297T8 (sr)
HU (4) HUE028837T2 (sr)
IL (5) IL228745A (sr)
JO (2) JO3438B1 (sr)
LT (4) LT3943485T (sr)
ME (1) ME02500B (sr)
MX (3) MX384521B (sr)
MY (1) MY166171A (sr)
NZ (3) NZ717119A (sr)
PE (1) PE20140863A1 (sr)
PH (2) PH12016502132B1 (sr)
PL (4) PL3150580T3 (sr)
PT (4) PT3486234T (sr)
RS (3) RS55113B1 (sr)
RU (1) RU2632193C2 (sr)
SG (1) SG194447A1 (sr)
SI (4) SI3486234T1 (sr)
SM (3) SMT201900050T1 (sr)
TW (1) TWI529162B (sr)
WO (1) WO2012142504A1 (sr)
ZA (1) ZA201307539B (sr)

Families Citing this family (115)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2841142C (en) 2010-06-23 2020-12-15 Ryan D. Morin Biomarkers for non-hodgkin lymphomas and uses thereof
AU2011298987B2 (en) 2010-09-10 2017-09-28 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
US9175331B2 (en) * 2010-09-10 2015-11-03 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
TW201733984A (zh) 2011-04-13 2017-10-01 雅酶股份有限公司 經取代之苯化合物
JO3438B1 (ar) 2011-04-13 2019-10-20 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
EP2760452A4 (en) * 2011-09-30 2015-04-01 Glaxosmithkline Llc METHODS OF TREATING CANCER
WO2013075084A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Constellation Pharmaceuticals Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US9085583B2 (en) 2012-02-10 2015-07-21 Constellation—Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
TR201904660T4 (tr) * 2012-03-12 2019-05-21 Epizyme Inc İnsan EZH2 inhibitörleri ve bunun kullanım yöntemleri.
DK3184523T3 (da) 2012-04-13 2019-08-19 Epizyme Inc N-((4,6-dimethyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-5-(ethyl(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)amino)-4-methyl-4' -(morphofinomethyl)-[1,1'-biphenyl]-3-carboxamidhydrobromid til anvendelse i behandlingen af en sygdom med celleproliferation i det hæmatologiske system.
IL308807B2 (en) * 2012-04-13 2025-08-01 Epizyme Inc Combination therapy for treating cancer
WO2013173441A2 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Glaxosmithkline Llc Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
US20150239842A1 (en) * 2012-09-28 2015-08-27 Pfizer Inc. Benzamide and heterobenzamide compounds
CN110898067A (zh) * 2012-10-15 2020-03-24 Epizyme股份有限公司 癌症治疗方法
PE20150886A1 (es) 2012-10-15 2015-06-04 Epizyme Inc Compuestos de benceno sustituidos
BR112015014090A2 (pt) * 2012-12-13 2017-07-11 Glaxosmithkline Llc intensificador de inibidores de zeste homólogo 2
US20150313906A1 (en) * 2012-12-19 2015-11-05 Glaxosmithkline Llc Combination
AU2013361079B2 (en) 2012-12-21 2018-07-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone bicyclic heteroaryl compounds
US20150344427A1 (en) * 2012-12-21 2015-12-03 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone compounds
UA111305C2 (uk) 2012-12-21 2016-04-11 Пфайзер Інк. Конденсовані лактами арилу та гетероарилу
KR102219441B1 (ko) * 2013-02-11 2021-02-23 콘스텔레이션 파마슈티칼스, 인크. 메틸 변형 효소 조절제, 이의 조성물 및 용도
WO2014178954A1 (en) 2013-03-14 2014-11-06 Epizyme, Inc. Pyrazole derivatives as arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
US9133189B2 (en) 2013-03-14 2015-09-15 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
WO2014153090A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Epizyme, Inc. Pyrazole derivatives asprmt1 inhibitors and uses thereof
HK1220916A1 (zh) 2013-03-14 2017-05-19 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症药物抗性的方法
WO2014153100A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
US9120757B2 (en) 2013-03-14 2015-09-01 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
WO2014153208A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
WO2014144659A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Epizyme, Inc. Pyrazole derivatives as prmt1 inhibitors and uses thereof
BR112015022785A2 (pt) 2013-03-14 2017-07-18 Epizyme Inc composto; composição farmacêutica; kit ou artigo farmacêutico embalado; método de inibição de uma arginina metil transferase (rmt); método de modulação da expressão genética; método de modulação da transcrição; e método de tratamento de um distúrbio mediado por rmt
WO2014153172A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Epizyme, Inc. Pyrazole derivatives as prmt1 inhibitors and uses thereof
US9765035B2 (en) 2013-03-14 2017-09-19 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
US9745305B2 (en) 2013-03-15 2017-08-29 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US9243001B2 (en) 2013-03-15 2016-01-26 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
EP2970281A4 (en) 2013-03-15 2016-08-03 Epizyme Inc SUBSTITUTED BENZOL COMPOUNDS
ES2717680T3 (es) 2013-04-30 2019-06-24 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Potenciador de inhibidores del homólogo de Zeste 2
RU2015155595A (ru) * 2013-06-06 2017-07-14 Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти (No.2) Лимитед Ингибиторы энхансера zeste гомолога 2 область техники, к которой относится изобретение
US9556157B2 (en) 2013-07-10 2017-01-31 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
US9624205B2 (en) 2013-07-19 2017-04-18 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
WO2015010049A1 (en) * 2013-07-19 2015-01-22 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
EP3033334A1 (en) 2013-08-15 2016-06-22 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Indole derivatives as modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
SG11201602269QA (en) * 2013-10-16 2016-04-28 Epizyme Inc Hydrochloride salt form for ezh2 inhibition
WO2015077193A1 (en) 2013-11-19 2015-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of lysine methyl transferase
WO2015077194A1 (en) * 2013-11-22 2015-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of lysine methyl transferase
CN116019921A (zh) 2013-12-06 2023-04-28 Epizyme股份有限公司 用于治疗癌症的组合疗法
CN105037360B (zh) * 2014-04-28 2016-08-17 四川大学 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途
PE20161552A1 (es) 2014-06-17 2017-01-11 Pfizer Compuestos de dihidroisoquinolinona sustituida
PL3157527T3 (pl) 2014-06-17 2023-08-07 Epizyme, Inc. Inhibitory ezh2 do leczenia chłoniaka
WO2015200650A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Epizyme, Inc. Substituted benzene and 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
HRP20191414T1 (hr) 2014-08-21 2019-11-01 Boehringer Ingelheim Int Novi spojevi i derivati spiro[3h-indol-3,2'-pirolidin]-2(1h)-ona kao mdm1-p53-inhibitori
CN106794177A (zh) 2014-10-16 2017-05-31 Epizyme股份有限公司 治疗癌症的方法
RU2017118165A (ru) * 2014-10-28 2018-11-29 Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти (Но.2) Лимитед Ингибиторы энхансера гомолога 2 zestes
CN107105651A (zh) 2014-11-06 2017-08-29 达纳-法伯癌症研究所股份有限公司 Ezh2抑制剂及其用途
BR112017010166A2 (en) 2014-11-17 2018-02-14 Epizyme, Inc. solid tumor treatment method, activity inhibition method, oral dosage form for treating a solid tumor, solid pharmaceutical formulation, process for preparing a pharmaceutical formulation, and solid pharmaceutical composition
TW201636344A (zh) 2014-12-05 2016-10-16 美國禮來大藥廠 Ｅｚｈ２抑制劑
CN108135908A (zh) * 2015-04-20 2018-06-08 Epizyme股份有限公司 用于治疗癌症的组合疗法
JP6890097B2 (ja) 2015-06-10 2021-06-18 エピザイム，インコーポレイティド リンパ腫を処置するためのｅｚｈ２阻害剤
UY36758A (es) * 2015-06-30 2016-12-30 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Inhibidores del potenciador del homólogo zeste 2
CA2996412A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Epizyme, Inc. Method for treating cancer
TW201718598A (zh) 2015-08-27 2017-06-01 美國禮來大藥廠 Ｅｚｈ２抑制劑
US10577350B2 (en) 2015-08-28 2020-03-03 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of (R)-N-((4-methoxy-6-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-2-methyl-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-1H-indole-3-carboxamide
SG10201909413SA (en) 2015-10-06 2019-11-28 Epizyme Inc Method of treating medulloblastoma with an ezh2 inhibitor
HUE054985T2 (hu) 2015-10-09 2021-11-29 Boehringer Ingelheim Int Spiro[3H-indol-3,2'-pirrolidin]-2(1H)-on vegyületek és számrazékok, mint MDM2-P53 inhibitorok
US20190070188A1 (en) * 2015-11-06 2019-03-07 Epizyme, Inc. Pediatric dosing for treatment of cancer with an ezh2 inhibitor
LT3378859T (lt) 2015-11-19 2020-01-27 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Benzofurano darinys, jo gavimo būdas ir jo panaudojimas medicinoje
CN105440023A (zh) * 2015-12-10 2016-03-30 江苏理工学院 Epz-6438的合成方法
TWI773657B (zh) 2015-12-18 2022-08-11 美商亞德利克斯公司 作爲非全身ｔｇｒ５促效劑之經取代之4-苯基吡啶化合物
US12084472B2 (en) 2015-12-18 2024-09-10 Ardelyx, Inc. Substituted 4-phenyl pyridine compounds as non-systemic TGR5 agonists
CA3011186A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
EA201892075A1 (ru) 2016-03-15 2019-04-30 Оризон Дженомикс, С.А. Комбинации ингибиторов lsd1 для применения для лечения солидных опухолей
WO2017174023A1 (zh) * 2016-04-08 2017-10-12 南京明德新药研发股份有限公司 作为ezh2抑制剂的联苯化合物
WO2017184999A1 (en) * 2016-04-22 2017-10-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ezh2 inhibitors and uses thereof
WO2017192290A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods of treating cancers overexpressing carm1 with ezh2 inhibitors and platinum-based antineoplastic drugs
CA3023157A1 (en) 2016-05-05 2017-11-09 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
JP7121660B2 (ja) 2016-06-01 2022-08-18 エピザイム，インコーポレイティド 癌を処置するためのｅｚｈ２阻害剤の使用
WO2017218953A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Epizyme, Inc. Ezh2 inhibitors for treating cancer
WO2018075598A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of inhibitors of ezh2
EP3548032A2 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
US11191741B2 (en) 2016-12-24 2021-12-07 Arvinas Operations, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of enhancer of zeste homolog 2 polypeptide
CN108314677B (zh) 2017-01-17 2020-06-30 安徽中科拓苒药物科学研究有限公司 一种ezh2抑制剂及其用途
US11311524B2 (en) 2017-01-19 2022-04-26 Daiichi Sankyo Company, Limited Pharmaceutical composition used for treatment of HTLV-1-associated myelopathy
US11214561B2 (en) 2017-01-25 2022-01-04 Ancureall Pharmaceutical (Shanghai) Co., Ltd. Histone methyltransferase EZH2 inhibitor, preparation method and pharmaceutical use thereof
US10266542B2 (en) 2017-03-15 2019-04-23 Mirati Therapeutics, Inc. EZH2 inhibitors
WO2018183885A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
CN110621316B (zh) * 2017-04-21 2024-01-26 Epizyme股份有限公司 用ehmt2抑制剂进行的组合疗法
JP7257328B2 (ja) 2017-05-18 2023-04-13 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド ベンゾフラン誘導体遊離塩基の結晶およびその製造方法
US11602529B2 (en) 2017-06-02 2023-03-14 Epizyme, Inc. Use of EZH2 inhibitors for treating cancer
WO2018231973A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Epizyme, Inc. Inhibitors of ezh2 and methods of use thereof
WO2019050924A1 (en) * 2017-09-05 2019-03-14 Epizyme, Inc. POLY THERAPY FOR THE TREATMENT OF CANCER
WO2019097369A1 (en) 2017-11-14 2019-05-23 Pfizer Inc. Ezh2 inhibitor combination therapies
WO2019152419A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Mirati Therapeutics, Inc Prc2 inhibitors
CN108640842B (zh) * 2018-04-04 2021-06-04 大连九信精细化工有限公司 一种2-溴-5-氟硝基苯的合成方法
AU2019281969B2 (en) * 2018-06-07 2024-03-07 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the preparation of sugammadex
JP2021531340A (ja) 2018-07-09 2021-11-18 フォンダシヨン、アジール、デ、アブグルスFondation Asile Des Aveugles 眼障害を治療するためのｐｒｃ２サブユニットの阻害
JP7411256B2 (ja) * 2018-07-27 2024-01-11 エボポイント、バイオサイエンシズ、カンパニー、リミテッド 多置換ベンゼン環化合物、製造方法及びその用途
KR102689665B1 (ko) 2019-02-19 2024-07-31 한미약품 주식회사 신규한 헤테로트리시클릭 유도체 화합물 및 이의 용도
WO2020192652A1 (zh) * 2019-03-25 2020-10-01 上海华汇拓医药科技有限公司 酰胺类化合物制备方法及其在医药领域的应用
JP7624404B2 (ja) 2019-04-22 2025-01-30 ミラティ セラピューティクス，インク． Ｐｒｃ２阻害剤としてのナフチリジン誘導体
CA3137916A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 Ichan School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
WO2020247475A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Mirati Therapeutics, Inc. Imidazo[1,2-c]pyrimidine derivatives as prc2 inhibitors for treating cancer
US20220298222A1 (en) 2019-08-22 2022-09-22 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a t cell therapy and an enhancer of zeste homolog 2 (ezh2) inhibitor and related methods
CN115551842B (zh) * 2020-06-08 2024-04-23 南京明德新药研发有限公司 联苯类化合物
EP4556479A1 (en) 2020-08-13 2025-05-21 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. Novel dioxoloisoquinolinone derivatives and use thereof
WO2022078307A1 (zh) * 2020-10-13 2022-04-21 苏州信诺维医药科技股份有限公司 多取代苯环化合物马来酸盐的晶型、其制备方法及其应用
CN114907299B (zh) * 2021-02-08 2024-06-25 上海医药工业研究院 他泽司他关键中间体的盐型、其制备方法及其中间体
CN114907300B (zh) * 2021-02-08 2024-05-28 上海医药工业研究院 他泽司他关键中间体的制备方法及其中间体
CN113292489B (zh) * 2021-06-16 2022-08-30 泓博智源(开原)药业有限公司 二氯代二烷基烟腈的制备方法
CN113527275A (zh) * 2021-07-20 2021-10-22 成都师范学院 一种sklb1039化合物及其制备方法和应用
CN113582863B (zh) * 2021-08-19 2023-05-26 沈阳农业大学 一种氨乙基联苯类化合物及其制备方法和用途
KR20230081459A (ko) 2021-11-30 2023-06-07 엘젠테라퓨틱스 주식회사 헤테로사이클릭이 치환된 신규한 3-페닐피리딘과 4-페닐피리딘 유도체 및 이의 용도
WO2023111810A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Pfizer Inc. Combination therapies and uses for treating cancer
JP2025513620A (ja) 2022-04-27 2025-04-24 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートとｅｚｈ１阻害剤および／またはｅｚｈ２阻害剤との組合せ
CA3258412A1 (en) 2022-06-13 2023-12-21 Treeline Biosciences, Inc. HETEROBORCTIONAL BCL6 DEGRADING AGENTS 1,8-NAPHTHYRIDIN-2-ONE
IL317228A (en) 2022-06-13 2025-01-01 Treeline Biosciences Inc BCL6 quinolone bifunctional joints
CN115197202B (zh) * 2022-07-15 2024-01-26 四川大学 一种ezh2共价抑制剂及其制备方法和应用

Family Cites Families (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
JPH0733729A (ja) 1993-07-26 1995-02-03 Kirin Brewery Co Ltd Ｎ−シアノ−ｎ′−置換−アリールカルボキシイミダミド化合物の製造法
CN1118595A (zh) 1993-12-27 1996-03-13 卫材株式会社 氨茴酸衍生物
DE19516776A1 (de) 1995-05-10 1996-11-14 Boehringer Ingelheim Int Chromatin-Regulatorgene
US5741819A (en) 1995-06-07 1998-04-21 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Arylsulfonylaminobenzene derivatives and the use thereof as factor Xa inhibitors
US5763263A (en) 1995-11-27 1998-06-09 Dehlinger; Peter J. Method and apparatus for producing position addressable combinatorial libraries
JP3906935B2 (ja) 1995-12-18 2007-04-18 杏林製薬株式会社 Ｎ−置換ジオキソチアゾリジルベンズアミド誘導体及びその製造法
JP2002525352A (ja) 1998-09-30 2002-08-13 ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー ２−置換ケトアミド
UA71587C2 (uk) 1998-11-10 2004-12-15 Шерінг Акцієнгезелльшафт Аміди антранілової кислоти та їхнє застосування як лікарських засобів
US6710058B2 (en) 2000-11-06 2004-03-23 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Monocyclic or bicyclic carbocycles and heterocycles as factor Xa inhibitors
CA2433158C (en) * 2000-12-28 2011-05-10 Shionogi & Co., Ltd. Pyridone derivatives having a binding activity to the cannabinoid type 2 receptor
WO2002060492A1 (en) * 2001-01-30 2002-08-08 Cytopia Pty Ltd Methods of inhibiting kinases
US7700293B2 (en) 2001-08-02 2010-04-20 The Regents Of The University Of Michigan Expression profile of prostate cancer
JP5082033B2 (ja) * 2001-12-21 2012-11-28 エグゼリクシス パテント カンパニー エルエルシー Ｌｘｒのモジュレーター
ATE447971T1 (de) 2002-02-19 2009-11-15 Shionogi & Co Antipruriginosa
TW200306155A (en) 2002-03-19 2003-11-16 Du Pont Benzamides and advantageous compositions thereof for use as fungicides
JP4889219B2 (ja) 2002-12-27 2012-03-07 スキャンポ・アーゲー 腹部不快感の処置のためのプロスタグランジン誘導体
WO2004076412A2 (en) 2003-02-26 2004-09-10 Sugen, Inc. Aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
WO2005014599A1 (en) * 2003-06-04 2005-02-17 Cellular Genomics, Inc. Imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and method of inhibition of bruton’s tyrosine kinase by such compounds
US7442685B2 (en) 2003-06-13 2008-10-28 The University Of North Carolina At Chapel Hill DOT1 histone methyltransferases as a target for identifying therapeutic agents for leukemia
EP1633740B1 (en) 2003-06-19 2011-11-09 GlaxoSmithKline LLC 5-(acylamino)indazole derivatives as kinase inhibitors
EP1663978B1 (en) * 2003-07-23 2007-11-28 Bayer Pharmaceuticals Corporation Fluoro substituted omega-carboxyaryl diphenyl urea for the treatment and prevention of diseases and conditions
PL379887A1 (pl) 2003-08-26 2006-11-27 Merck Hdac Research, Llc Sposób leczenia raka inhibitorami HDAC
US20050059682A1 (en) 2003-09-12 2005-03-17 Supergen, Inc., A Delaware Corporation Compositions and methods for treatment of cancer
BRPI0508579A (pt) 2004-03-11 2007-08-14 Actelion Pharmaceuticals Ltd composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto
CN1286973C (zh) 2004-04-12 2006-11-29 上海第二医科大学附属瑞金医院 一种组蛋白甲基转移酶及其制备方法
EP1765994B1 (en) 2004-06-01 2009-11-18 The University of North Carolina at Chapel Hill Reconstituted histone methyltransferase complex and methods of identifying modulators thereof
JO2787B1 (en) 2005-04-27 2014-03-15 امجين إنك, Alternative amide derivatives and methods of use
ATE494548T1 (de) 2005-06-02 2011-01-15 Univ North Carolina Reinigung, charakterisierung und wiederherstellung einer ubiquitin-e3-ligase
FR2889526B1 (fr) 2005-08-04 2012-02-17 Aventis Pharma Sa 7-aza-indazoles substitues, compositions les contenant, procede de fabrication et utilisation
DK1940821T3 (da) 2005-10-19 2013-06-10 Gruenenthal Gmbh Nye vanilloid-receptorligander og deres anvendelse til fremstilling af lægemidler.
NZ567000A (en) 2005-10-21 2010-03-26 Merck & Co Inc Potassium channel inhibitors
US20090203057A1 (en) 2005-10-28 2009-08-13 Yi Zhang Protein demethylases comprising a jmjc domain
EP1960551A2 (en) 2005-12-01 2008-08-27 Medical Prognosis Institute Methods and devices for identifying biomarkers of treatment response and use thereof to predict treatment efficacy
EP1966141A1 (en) 2005-12-14 2008-09-10 Brystol-Myers Squibb Company Six-membered heterocycles useful as serine protease inhibitors
AU2006336552B2 (en) 2006-01-20 2012-12-20 The University Of North Carolina At Chapel Hill Diagnostic and therapeutic targets for leukemia
RU2008149246A (ru) 2006-05-15 2010-06-20 Айрм Ллк (Bm) Соединение на основе терефталата, композиции и их применение в качестве ингибиторов интегразы вич
WO2007136592A2 (en) 2006-05-18 2007-11-29 Amphora Discovery Corporation 2-0x0-l,2-dihydr0quin0line derivatives, compositions, and uses thereof as antiproliferative agents
EP2086318A4 (en) 2006-10-10 2009-12-23 Burnham Inst Medical Research NEUROPROTECTIVE COMPOSITIONS AND CORRESPONDING METHODS
AU2008219166B2 (en) * 2007-02-16 2013-05-16 Amgen Inc. Nitrogen-containing heterocyclyl ketones and their use as c-Met inhibitors
US8338437B2 (en) 2007-02-28 2012-12-25 Methylgene Inc. Amines as small molecule inhibitors
WO2008109534A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting ezh2 gene expression and uses thereof
WO2008113006A1 (en) 2007-03-14 2008-09-18 Xenon Pharmaceuticals Inc. Methods of using quinolinone compounds in treating sodium channel-mediated diseases or conditions
DE102007017884A1 (de) 2007-04-13 2008-10-16 Grünethal GmbH Neue Vanilloid-Rezeptor Liganden und ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln
US20090012031A1 (en) 2007-07-03 2009-01-08 The Regents Of The University Of Michigan EZH2 Cancer Markers
EP2170834B1 (en) 2007-07-16 2014-01-08 AbbVie Inc. Indazoles, benzisoxazoles and benzisothiazoles as inhibitors of protein kinases
US8247401B2 (en) * 2007-10-31 2012-08-21 Merck Sharp & Dohme Corp. P2X3 receptor antagonists for treatment of pain
JP5511680B2 (ja) 2007-12-19 2014-06-04 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド ピリド［２，３−ｂ］ピラジン−８−置換化合物及びその使用
CN101977905B (zh) * 2008-01-23 2014-07-02 百时美施贵宝公司 4-吡啶酮化合物及其对于癌症的用途
WO2009124137A2 (en) 2008-04-01 2009-10-08 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Method of suppressing gene transcription through histone lysine methylation
US20100113415A1 (en) 2008-05-29 2010-05-06 Rajapakse Hemaka A Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer
UY31982A (es) * 2008-07-16 2010-02-26 Boehringer Ingelheim Int Derivados de 1,2-dihidropiridin-3-carboxamidas n-sustituidas
US8299093B2 (en) 2008-08-08 2012-10-30 New York Blood Center, Inc. Small molecule inhibitors of retroviral assembly and maturation
FR2934995B1 (fr) 2008-08-14 2010-08-27 Sanofi Aventis Composes d'azetidines polysubstitues, leur preparation et leur application en therapeutique
US20120208809A1 (en) * 2009-03-24 2012-08-16 Sanofi 9h-pyrrolo[2,3-b: 5,4-c'] dipyridine azacarboline derivatives, preparation thereof, and therapeutic use thereof
JP2012522013A (ja) 2009-03-27 2012-09-20 ザ ユーエービー リサーチ ファウンデーション 調節ｉｒｅｓ媒介翻訳
WO2011011366A2 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Constellation Pharmaceuticals Agents for stimulating activity of methyl modifying enzymes and methods of use thereof
CA2784899A1 (en) 2009-12-30 2011-07-07 Avon Products, Inc. Topical lightening composition and uses thereof
PH12012502194A1 (en) * 2010-05-07 2014-09-05 Glaxosmithkline Llc Indoles
ES2528269T3 (es) * 2010-05-07 2015-02-06 Glaxosmithkline Llc Azaindazoles
ES2534804T3 (es) 2010-05-07 2015-04-28 Glaxosmithkline Llc Indazoles
CA2841142C (en) 2010-06-23 2020-12-15 Ryan D. Morin Biomarkers for non-hodgkin lymphomas and uses thereof
AU2011298987B2 (en) 2010-09-10 2017-09-28 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
US9175331B2 (en) 2010-09-10 2015-11-03 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
US20130310379A1 (en) 2010-11-19 2013-11-21 Constellation Pharmaceuticals Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
ES2607064T3 (es) 2010-12-01 2017-03-29 Glaxosmithkline Llc Indoles
BR112013013668A2 (pt) 2010-12-03 2016-09-06 Epizyme Inc moduladores 7-deazapurina de histona metiltransferase, e métodos de uso dos mesmos
EP2681216B1 (en) 2011-02-28 2017-09-27 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
TW201733984A (zh) * 2011-04-13 2017-10-01 雅酶股份有限公司 經取代之苯化合物
JO3438B1 (ar) 2011-04-13 2019-10-20 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
EP2760452A4 (en) 2011-09-30 2015-04-01 Glaxosmithkline Llc METHODS OF TREATING CANCER
TR201904660T4 (tr) 2012-03-12 2019-05-21 Epizyme Inc İnsan EZH2 inhibitörleri ve bunun kullanım yöntemleri.
DK3184523T3 (da) 2012-04-13 2019-08-19 Epizyme Inc N-((4,6-dimethyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-5-(ethyl(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)amino)-4-methyl-4' -(morphofinomethyl)-[1,1'-biphenyl]-3-carboxamidhydrobromid til anvendelse i behandlingen af en sygdom med celleproliferation i det hæmatologiske system.
IL308807B2 (en) 2012-04-13 2025-08-01 Epizyme Inc Combination therapy for treating cancer
WO2013173441A2 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Glaxosmithkline Llc Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
CN110898067A (zh) 2012-10-15 2020-03-24 Epizyme股份有限公司 癌症治疗方法
PE20150886A1 (es) 2012-10-15 2015-06-04 Epizyme Inc Compuestos de benceno sustituidos
AU2013361079B2 (en) 2012-12-21 2018-07-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone bicyclic heteroaryl compounds
US9045477B2 (en) 2013-03-15 2015-06-02 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
US9243001B2 (en) 2013-03-15 2016-01-26 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
EP2970306A4 (en) 2013-03-15 2016-08-03 Epizyme Inc SUBSTITUTED 6.5-CONDENSED BICYCLIC HETEROARYL COMPOUNDS
WO2015010049A1 (en) 2013-07-19 2015-01-22 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9624205B2 (en) 2013-07-19 2017-04-18 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
SG11201602269QA (en) 2013-10-16 2016-04-28 Epizyme Inc Hydrochloride salt form for ezh2 inhibition
CN116019921A (zh) 2013-12-06 2023-04-28 Epizyme股份有限公司 用于治疗癌症的组合疗法
PL3157527T3 (pl) 2014-06-17 2023-08-07 Epizyme, Inc. Inhibitory ezh2 do leczenia chłoniaka
CN106794177A (zh) 2014-10-16 2017-05-31 Epizyme股份有限公司 治疗癌症的方法
BR112017010166A2 (en) 2014-11-17 2018-02-14 Epizyme, Inc. solid tumor treatment method, activity inhibition method, oral dosage form for treating a solid tumor, solid pharmaceutical formulation, process for preparing a pharmaceutical formulation, and solid pharmaceutical composition
CN108135908A (zh) 2015-04-20 2018-06-08 Epizyme股份有限公司 用于治疗癌症的组合疗法
JP6890097B2 (ja) 2015-06-10 2021-06-18 エピザイム，インコーポレイティド リンパ腫を処置するためのｅｚｈ２阻害剤
CA2996412A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Epizyme, Inc. Method for treating cancer
CA2999898A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Epizyme, Inc. Method of treating malignant rhabdoid tumor of the ovary (mrto)/small cell cancer of the ovary of the hypercalcemic type (sccoht) with an ezh2 inhibitor
WO2017079738A1 (en) 2015-11-05 2017-05-11 Epizyme, Inc. Flow cytometry for monitoring histone h3 methylation status
EP3386513A2 (en) 2015-12-07 2018-10-17 Epizyme Inc Inhibitors of ezh2 and methods of use thereof
CA3011186A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
JP2019508406A (ja) 2016-02-08 2019-03-28 エピザイム，インコーポレイティド 癌を処置する方法
JP7121660B2 (ja) 2016-06-01 2022-08-18 エピザイム，インコーポレイティド 癌を処置するためのｅｚｈ２阻害剤の使用
WO2017218953A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Epizyme, Inc. Ezh2 inhibitors for treating cancer
EP3548032A2 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
WO2018144798A1 (en) 2017-02-02 2018-08-09 Epizyme, Inc. Cancer treatment modalities
WO2018183885A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
US11602529B2 (en) 2017-06-02 2023-03-14 Epizyme, Inc. Use of EZH2 inhibitors for treating cancer
WO2018231973A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Epizyme, Inc. Inhibitors of ezh2 and methods of use thereof
WO2019050924A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 Epizyme, Inc. POLY THERAPY FOR THE TREATMENT OF CANCER
JP2023509385A (ja) 2019-12-20 2023-03-08 エピザイム インコーポレイテッド Ｅｚｈ２阻害剤の結晶性ヒドロブロミド塩、その調製及びがんの治療に有用な医薬組成物
WO2021243060A1 (en) 2020-05-28 2021-12-02 Epizyme, Inc. Use of ezh2 inhibitors for treating cancer

Also Published As

Publication number Publication date
JP6778226B2 (ja) 2020-10-28
HRP20211297T8 (hr) 2022-02-18
ME02500B (me) 2017-02-20
RU2632193C2 (ru) 2017-10-03
PH12016502132A1 (en) 2017-05-22
US20140288041A1 (en) 2014-09-25
JOP20180104A1 (ar) 2019-01-30
US9855275B2 (en) 2018-01-02
HRP20211297T1 (hr) 2021-12-10
HK1193804A1 (zh) 2014-10-03
US20180318309A1 (en) 2018-11-08
US20250170138A1 (en) 2025-05-29
NZ734744A (en) 2019-03-29
US12161645B2 (en) 2024-12-10
NZ804540A (en) 2025-05-02
EP3486234A1 (en) 2019-05-22
KR101914321B1 (ko) 2018-11-02
CY1117986T1 (el) 2017-05-17
NZ616298A (en) 2016-03-31
CN104080769A (zh) 2014-10-01
PL3943485T3 (pl) 2024-05-20
RS58226B1 (sr) 2019-03-29
KR20210118968A (ko) 2021-10-01
US9549931B2 (en) 2017-01-24
KR20190025055A (ko) 2019-03-08
US20160022693A1 (en) 2016-01-28
MY166171A (en) 2018-06-07
PL3150580T3 (pl) 2019-04-30
AR086008A1 (es) 2013-11-13
JP2016147886A (ja) 2016-08-18
RU2017132054A3 (sr) 2021-05-14
HRP20161115T1 (hr) 2016-11-18
KR102566864B1 (ko) 2023-08-11
ES2886099T3 (es) 2021-12-16
HUE056552T2 (hu) 2022-02-28
US20170119780A1 (en) 2017-05-04
LT3150580T (lt) 2019-02-11
US9090562B2 (en) 2015-07-28
CY1121120T1 (el) 2019-12-11
DK2697199T3 (en) 2016-09-12
HUE066461T2 (hu) 2024-08-28
US8410088B2 (en) 2013-04-02
PH12013502118A1 (en) 2014-01-13
MX384521B (es) 2025-03-14
US20240245698A1 (en) 2024-07-25
MX2020012695A (es) 2021-04-12
IL228745A0 (en) 2013-12-31
JP2014516931A (ja) 2014-07-17
AU2012242595A1 (en) 2013-05-02
EP2697199B1 (en) 2016-06-08
IL249273A0 (en) 2017-01-31
RU2017132054A (ru) 2019-02-06
ES2706951T3 (es) 2019-04-01
TWI529162B (zh) 2016-04-11
EP4360712A2 (en) 2024-05-01
PE20140863A1 (es) 2014-07-19
PL3486234T3 (pl) 2021-11-29
MX343685B (es) 2016-11-17
JP2021042243A (ja) 2021-03-18
JP2023011933A (ja) 2023-01-24
IL266418A (en) 2019-06-30
DK3943485T3 (da) 2024-01-22
WO2012142504A1 (en) 2012-10-18
KR102308488B1 (ko) 2021-10-06
JO3438B1 (ar) 2019-10-20
US20120264734A1 (en) 2012-10-18
EP2697199A1 (en) 2014-02-19
JP2019014732A (ja) 2019-01-31
PT3486234T (pt) 2021-09-07
US8765732B2 (en) 2014-07-01
EP3150580A1 (en) 2017-04-05
SI3150580T1 (sl) 2019-03-29
LT3486234T (lt) 2021-09-10
US12168015B2 (en) 2024-12-17
HRP20190074T1 (hr) 2019-03-08
EP4360712A3 (en) 2024-07-31
US11052093B2 (en) 2021-07-06
PT3150580T (pt) 2019-01-28
MX2013011921A (es) 2014-03-27
SI2697199T1 (sl) 2016-10-28
US10420775B2 (en) 2019-09-24
EP3486234B1 (en) 2021-06-02
US12168016B2 (en) 2024-12-17
KR20230134128A (ko) 2023-09-20
US20170252349A1 (en) 2017-09-07
CA2832843C (en) 2020-09-29
US20150353494A1 (en) 2015-12-10
KR102032303B1 (ko) 2019-10-15
IL228745A (en) 2016-12-29
PT2697199T (pt) 2016-09-05
KR20200105543A (ko) 2020-09-07
IL249273B (en) 2019-05-30
SMT201900050T1 (it) 2019-02-28
TW201302704A (zh) 2013-01-16
JP2018104450A (ja) 2018-07-05
EP3150580B1 (en) 2018-10-17
RU2013150345A (ru) 2015-05-20
IL278373B1 (en) 2025-12-01
HUE042788T2 (hu) 2019-07-29
SMT201600308B (it) 2016-11-10
EP3943485B1 (en) 2023-12-27
IL278373A (sr) 2020-12-31
LT3943485T (lt) 2024-02-12
JO3363B1 (ar) 2019-03-13
US9522152B2 (en) 2016-12-20
CN107311921A (zh) 2017-11-03
FI3943485T3 (fi) 2024-01-29
CY1124617T1 (el) 2022-07-22
CL2013002898A1 (es) 2014-08-22
AU2012242595B2 (en) 2014-05-15
BR122020006541B1 (pt) 2022-05-10
SI3486234T1 (sl) 2021-12-31
SI3943485T1 (sl) 2024-04-30
BR112013026324B1 (pt) 2020-12-08
KR20140029442A (ko) 2014-03-10
KR20190121386A (ko) 2019-10-25
US20190192526A1 (en) 2019-06-27
SMT202100503T1 (it) 2021-11-12
LT2697199T (lt) 2016-09-26
RS62279B1 (sr) 2021-09-30
HUE028837T2 (en) 2017-01-30
IL324294A (en) 2025-12-01
SG194447A1 (en) 2013-12-30
US20210379076A1 (en) 2021-12-09
CN107311921B (zh) 2021-02-12
ES2973868T3 (es) 2024-06-24
ES2589555T3 (es) 2016-11-15
NZ717119A (en) 2017-10-27
KR102154946B1 (ko) 2020-09-10
DK3486234T3 (da) 2021-08-16
CA3086473A1 (en) 2012-10-18
KR101955871B1 (ko) 2019-03-08
US20130123234A1 (en) 2013-05-16
ZA201307539B (en) 2014-06-25
BR112013026324A2 (pt) 2016-10-11
PH12016502132B1 (en) 2024-01-05
PL2697199T3 (pl) 2016-12-30
BR112013026324A8 (pt) 2018-01-30
KR20250126865A (ko) 2025-08-25
US20240245697A1 (en) 2024-07-25
US10155002B2 (en) 2018-12-18
PT3943485T (pt) 2024-03-06
KR20180120275A (ko) 2018-11-05
DK3150580T3 (en) 2019-02-04
US20240277723A1 (en) 2024-08-22
CA2832843A1 (en) 2012-10-18
CN104080769B (zh) 2017-06-20
US20200155562A1 (en) 2020-05-21
EP3943485A1 (en) 2022-01-26
JP5933686B2 (ja) 2016-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12168016B2 (en) Aryl-OR heteroaryl-substituted benzene compounds
AU2013203641B2 (en) Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds
RU2785567C2 (ru) Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения