PT99908A - Processo para a preparacao de fenoxanos e de composicoes que os contem - Google Patents

Description

4

Como meio nutritivo é preferido usar uma solução ou suspensão aquosa que contem fontes apropriadas de carbono e de azoto assim como sais minerais. Fontes de carbono e de azoto particularmente apropriadas são substancias orgânicas complexas, tais como proteínas e hidrolisados de proteína, típicamente caseina e proteína unicelular (tal como a partir de Methvlomonas çlarae), e também agar de levedura. Sais minerais apropriados incluem típicamente cloretos, carbonatos, sulfatos e fosfatos de metais alcalinos e, mais particularmente, de metais terrosos alcalinos, por exemplo sódio, potássio e, de preferência, cálcio < e magnésio, e também misturas de elementos vestigiais comercial mente disponíveis. É também vantajoso adicionar ainda substancias promotoras do crescimento, especialmente vitaminas, convenientemente sob a forma de soluções de vitaminas padronizadas comercialmente disponíveis. É preferido usar os meios nutritivos utilizados nos Exemplos aqui indicados. A cultura é realizada aerõbicamente, isto é convenientemente em culturas à superfície em repuso, ou de preferência submersa com vibração ou agitação introduzindo-se entretanto ar ou oxigénio no frasco ou fermentador agitado. A cultura é de preferência realizada numa gama de pH neutro, isto é a um pH de cerca de 6-8, de preferência com pH 7, e numa gama de temperatu-ras variando entre 25-35°C, de preferência a cerca de 30°C. 0 tempo de cultura é de preferência de 3 a 5 dias.

Para isolar o fenoxano, a biomassa é separada do caldo de cultura quando a cultura está completa, e é extraída com um solvente aprótico dipolar, orgânico. Solventes apróticos dipola-res apropriados incluem ésteres de ácidos alifáticos, tipicamente ésteres de alquilo inferior, tais como ésteres metílicos ou etílicos, de ácido acético, e éteres, tais como tetrahidrofurano e dioxano, e cetonas alifáticas, tais como acetona. Após 5

concentração do extracto, o resíduo é dividido entre água e um solvente aprótico dipolar, orgânico não miscível com a água, convenientemente um dos ésteres atrás mencionados. Após concentração da fase orgânica, o resíduo é dividido entre um alcanol inferior (isto é C^-C^) , tal como etanol ou, de preferência, metanol, e um hidrocarboneto inferior, de preferência um hidro-carboneto alifático, que é não miscível com o referido alcanol, tipicamente hexano ou heptano. A fase alcanólica é isolada e concentrada, e o resíduo é misturado com um éter alifático inferior, de preferência um di(C^-C^)éter, tal como éter dietíli-co ou, de preferência, éter terc-butilmetílico e, se necessário, filtrado sobre gel de sílica. Para se obter fenoxano puro, a solução etérea é diluida com éter de petróleo e arrefecida. 0 fenoxano cristalizado pode ser submetido a posterior cristalização a partir de éter terc-butilmetílico. O fenoxano da fórmula indicada pode ser cos-trans-iso-merizado por radiação UV no que se refere ao agrupamento 1-fenil--1-propen-i-ilo. O invento consequentemente relaciona-se também com os isómeros puros assim como suas misturas. As misturas de isómeros podem ser separadas por métodos convencionais, tais como métodos cromatográficos, nos isómeros individuais.

Os novos compostos apresentam propriedades úteis, especialmente farmacológicamente úteis, e podem ser usados para a prevenção e tratamento de doenças num mamífero, tal como um ser humano ou um animal. São, por exemplo, apropriados para o tratamento de doenças autoimunitárias tais como a artrite reumática, esclerose múltipla, diabetes mellitus dependente da insulina, psoríase e lupus eritematoso sistémico, assim como doenças alérgicas tais como doenças alérgicas mediadas por IgE e asma. Além disso, inibem a rejeição dos enxertos por células T. - 6

O invento também se relaciona com composições farmacêuticas que contêm fenoxano juntamente com veículos e/ou diluentes habituais. São preferidas composições para administração entérica, especialmente oral, assim como parentérica. De preferência, a composição contem o ingrediente activo conjuntamente com um veículo farmacêuticamente aceitável. y

As composições farmacêuticas contêm cerca de 5% a 95% do ingrediente activo, contendo as formulações sob a forma de unidade de dosagem simples de preferência cerca de 20% a 90% do ^ ingrediente activo, e as formulações não sob a forma de unidade de dosagem simples contendo de preferência cerca de 5% a 20% de ingrediente activo. As formas de unidade de dosagem tais como grageias, comprimidos ou cápsulas contêm de cerca de 0,01 g a 1,0 g de ingrediente activo.

As composições farmacêuticas do presente invento são preparadas de um modo conhecido per se. por exemplo por métodos convencionais de mistura, granulação, confecção de doçarias, dissolução ou liofilização. As composições farmacêuticas para administração oral podem ser convenientemente obtidas por combinação do ingrediente activo com veículos sõlidos, facultativamente granulando uma mistura resultante e processando a mistura ou granulado, se desejado ou necessário após a adição de excipientes apropriados, a núcleos de comprimidos ou grageias.

Veículos apropriados são em particular agentes de enchimento tais como açucares, convenientemente lactose, sacarose, manitol ou sorbitol, preparações de celulose e/ou foafatos de cálcio, tipicamente fosfato tricálcico ou bifosfato de cálcio, e também agentes de ligação tais como pastas de amido, tipicamente amido de maís, milho, arroz ou batata, gelatina, tragacanto, metil celulose e/ou polivinilpirrolidona, e/ou, se desejado, agentes de desintegração, tais como os amidos atrás referidos, também amido carboximetílico, polivinilpirrolidona de ligação cruzada, agar, ácido algínico, ou um seu sal tal como alginato de sódio. Excipientes são em particular agentes de deslizamento e lubrificantes, convenientemente sílica, talco ácido esteárico ou seus sais, tais como estearato de magnésio ou estearato de cálcio, e/ou polietileno glicol. Os núcleos das grageias podem ser proporcionados com revestimentos apropriados não entéricos ou entéricos, tipicamente usando soluções concentradas de açúcar que podem conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, polietileno glicol e/ou dióxido de titânio, soluções de goma laca em solventes orgânicos apropriados ou misturas de solventes ou, para a preparação de revestimentos entéricos, soluções de preparações apropriadas de celulose tais como ftalato de acetil celulose ou ftalato de hidroxipropil metil celulose. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos revestimentos de comprimidos ou grageias, por exemplo para identificar ou indicar doses diferentes do ingrediente activo.

Outras composições farmacêuticas para administração oral são cápsulas cheias a seco feitas de gelatina e também cápsulas seladas-moles contendo gelatina e um agente de plasticidade tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas cheias a seco podem conter o ingrediente activo sob a forma de grânulos, convenientemente em mistura com agentes de enchimento tais como lactose, agentes de ligação tais como amidos, e/ou agentes de deslizamento tais como talco ou estearato de magnésio, e com ou sem estabilizadores. Em cápsulas moles, o ingrediente activo é de preferência dissolvido ou suspenso num líquido apropriado, tipicamente um óleo gordo, óleo de parafina ou um polietileno glicol líquido, ao qual pode também ser adicionado um estabilizador. 8

Composições farmacêuticas apropriadas para administração rectal são tipicamente supositórios, que consistem numa combinação do ingrediente activo com uma base para supositório. Exemplos de bases apropriadas para supositórios são triglicerí-deos naturais ou sintéticos, hidrocarbonetos de parafina, poli-etileno glicois e alcanois superiores.

Formas de dosagem particularmente apropriadas para administração parentérica são suspensões para injecção tipicamente aquosas que podem conter substancias que fazem aumentar a viscosidade, convenientemente carboximetil celulose de sódio, sorbitol e/ou dextrano, e facultativamente estabilizadores. Além disso, o ingrediente activo, com ou sem adjuvantes, pode também apresentar-se sob uma forma liofilizada e ser suspenso antes da administração parentérica por adição de água e, facultativamente, as substancias adicionais mencionadas. O invento também se relaciona com um método para tratar quaisquer doenças especificadas num mamífero, método esse que compreende a administração ao referido mamífero de uma quantidade terapêuticamente eficaz de fenoxano juntamente com veículos farmacêuticamente aceitáveis. A dosagem do ingrediente activo, isto é, fenoxano, irá depender da doença a ser tratada e do estádio da doença, assim como da espécie, idade, peso e condição individual do paciente, e também do modo de aplicação, e será assim seleccionada pelo médico assistente. Por exemplo, as doeças autoimunitárias são usualmente tratadas por meio de uma dose diária durante alguns dias, isto é, 1 a 4 dias. A dose diária quando administrada a um mamífero especialmente um ser humano, de aproximadamente 70 kg de peso corporal, varia entre cerca de 0,3 e cerca de 30 mg/kg. A administração é feita sob a forma de composições farmacêuticas tal como é especificado anteriormente. 9

0 invento é ilustrado pelos Exemplos não limitativos que se seguem.

Exemplo 1: Condições de Produção 1. Estirpe de produção: bactéria Polvanaium spec., estirpe PI V019, família das Polyanaiaceae. subordem das Soranaineae. ordem dos Mvxobacterales. 2. Origem da estirpe de produção: isolada em Março de 1988 a partir de uma amostra de solo retirada de Efeso, Turquia. 3. Descrição da estirpe de produção: as células vegetativas são cilíndricas com extremidades achatadas, 0,6-0,7 x 2~5μιη. Num meio nutritivo sólido o organismo cresce bem em agar de levedura, por exemplo VY/1 Agar (fermento de padeiro 0,5%, à base do peso fresco; CaCl2*2H2= 0,1%, cianocobalamina 0,5 mg/1, agar 1,5%; pH 7,2). Não é observado qualquer crescimento em meios puros de glucose-sal mineral. As proteínas são rápidamente hidrolisadas, por exemplo caseína ou proteína unicelular. A quitina não é atacada. A estirpe cresce de preferência a 30°C numa gama de pH neutra e aeróbicamente. Em meios nutritivos apropriados a colónia espalha-se gradualmente sobre a placa de cúltura e penetra profundamente no agar. Formam-se na superfície fissuras radiais amplas, curtas. Se estiverem presentes células da levedura no meio nutritivo, elas serão substancialmente degradadas. Após alguns dias podem formar-se corpos de frutificação. Estes consistem em esporangiolos castanhos-acinzentados com cerca de 15-30 μη de diâmetro, que estão densamente reunidos em pilhas planas. No seu interior são encontrados mixosporos, que são morfológicamente muito semelhantes a células vegetativas, mas são células que repousam fisiológicamente resistentes à secagem. Nos meios líquidos a estirpe cresce em pequenos aglomerados de células, tanto num frasco para agitação a 160 rpm (100 ml de meio num frasco Erlenmeyer de 250 ml e 500 ml de meio num frasco Erlen-meyer de 1.000 ml, respectivamente) assim como em bioreactores (testados até uma escala de 60 l). Um meio de cultura apropriado é meio de Poli: Probion PS (proteína unicelular a partir de Methvlomonas clarae: Hoechst, Frankfurt) 0,4%; amido 0,3%; MgS04*7H20 0,1%; CaCl2*2H20 0,05%; 1 ml/1 de solução de elementos vestigiais padronizados (Schlegel, Allgemeine Mikrobiologie, 56th ed., p. 174, Thieme-Verlag, Stuttgart 1985), e 1 ml/1 de solução de vitamina padronizada (Schlegel, loc. cit. p. 174) pH 7,0. As culturas são mantidas a 30°C durante 3-4 dias. A estirpe PI V019 pode ser preservada, convenientemente por congelamento a -80°C ou com azoto liquido. 4. Eficácia da estirpe de produção: em extractos celulares, e também nalguns produtos de eluição em XAD (ver mais abaixo) de PI V019, uma actividade anti-HIV é detectável no teste celular. A inibição da transcriptase reversa pode ser detectada in vitro num lisado-HIV assim como em produtos isolados a partir de vírus M-MulV. A substancia contendo pirona foi chamada fenoxano. 5. Acessibilidade da estirpe: a estirpe de produção PI V019 foi depositada no dia 11 de Dezembro de 1990 com o Deutsche Sammlung von Mikroorganismen (DSM) (German Collection of Micro-organisms) (Colecção Alemã de Microorganismos) em Braunschweig sob o No. DSM 6270. 6. Detecção de fenoxano: A detecção qualitativa de fenoxano é feita por extracção da biomassa com acetona. Alternativamente, as culturas podem também ser agitadas com XAD 1180 (ex Rohm & Haas, Frankfurt) e e o produto eluido com XAD após passagem por crivo com metanol e acetona. Porções alíquotas dos extractos concentrados são testadas quanto à inibição da transcriptase reversa a 11 partir do Vírus Da Leucemia Murina de Moloney (M-Mul V). No teste da cromatografia de placa delgada, o fenoxano é identificado em comparação com substancia pura isolada. A manipulação, isolamento e caracterização são efectudos de acordo com o Exemplo 3. 7. Condições de produção de fenoxano: Num frasco para agitação, o fenoxano é formado durante o crescimento e atinge uma activida-de máxima no final da fase logarítmica a estacionária precoce após 3-4 dias.

Exemplo 2: Fermentação num biorreactor

Bioreactor 65 1 (b50) ex Giavanola Frères, Monthey,

Switzerland, com agitador de lâmina. Meio: Probion PS (proteína unicelular a partir de Methvlomonas clarae: Hoechst, Frankfurt) 0,4%; MgS04-7H20 0,1%; CaCl2· 211^0 0,05%; 1 ml/1 cada de solução padronizada de elemento vestigial e vitamina (Schlegel, loc. cit.), pH 7,2. 60 1 de meio são inoculados com 5 1 de uma cultura a partir de frascos de agitação bem cultivados. A taxa de arejamento é ajustada para 200 Nl/hora, a velocidade até 200 rpm. O valor p02, que é de 90% de saturação no início da fermentação, desce contínuamente até 50% até a fermentação ficar completa após 100 horas. O pH aumenta no decurso da fermentação de 7,0 a 7,5. 3$) Nos extractos celulares, também nalguns produtos de eluição com XAD (ver atrás) de PI V019, é detectável uma activi-dade antibiótica contra alguns fungos (por exemplo Botrvtis çinerea). Porções alíquotas dos extractos concentrados são ainda testadas contra fungos no teste de difusão de agar. No teste de cromatografia de placa delgada, o fenoxano é identificado em comparação com substancia pura isolada. 12

Exemplo 3: Isolamento e caracterização de fenoxano 615 g de biomassa húmida são obtidos a partir de uma fermentação de 60 1 da estirpe Pl V019 e extraídos 4 vezes com cerca de 150 ml de acetona. Os extractos combinados são concentrados sob vácuo e o resíduo é dividido entre acetato de etilo e água. No caso de fraca separação de fase, adiciona-se solução de NaCl. A fase orgânica é concentrada (7,7 g) e o resíduo é dividido entre metanol e heptano. 3,9 g do produto crú a partir da fase de metanol são misturados com éter terc-butilmetílico e filtrados sobre 50 ml de gel de sílica. O produto crú (3,2 g) eluido com éter terc-butilmetílico é subsequentemente filtrado em éter butilmetílico sobre 100 ml de Florisil. O produto eluido contendo fenoxano é armazenado para cristalização a partir de éter terc--butilmetílico/éter de petróleo. 185 mg de fenoxano cristalino são separados. São obtidos mais 68 mg após cristalização dos líquidos mãe combinados.

Propriedades físicas e químicas do fenoxano HPLC analítica: Coluna (<p· comprimento) 4*250 mm, embalada com HD-Sil 18-5-100 (ex Kronwald), detecção por absorção UV a 210-250 nm, eluente metanol/água (80:20), fluxo 1,5 ml/min, tR=7,9 min; p.f. 92-94°C. UV (Metanol) lambdam^ (e/lg €)=204 (75420/4,877), 229

JuaX (53850/4,731), 244 (sh), 252 (sh), 262 (sh), 274 nm (sh). 1H-RMN ([D4]metanol, 600,127 MHz): í=8,39 (s, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 6,33 [S, lH(br.)], 4,10 (s, 3H), 3,15 (t, 1H, J=7,4Hz), 2,88 (q, 3H, J=7,4Hz), 2,72 (t, 1H,J=7,4Hz(br.)], 1,93 (d, 3H,J=l,2Hz), 1,88 (s, 3H), 1,11 ppm (t, 3H, J=7,4Hz); I3c-RMN ([D4]metanol, 75,5 MHz): $=182,65 S, 166,89 S, 164,46 s, 149,75 S 140,70 d, 139,58 s, 137,80 s, 135,31 s, 130,00 d (2C) , 129,22 d (2C), 127,84 d, 127,42 d, 126,37 s, 101,11 s, 56,85 q, 38,82 t, 27,85 t, 18,58 t, 17,76 q, 140,00 q, 7,30 q. (+)FAB Espectroscopia de Massa (xenon, glicerina matriz), m/z=380 [M+H]+: EI—MS (70 eV, 160 C, m/z>90): M/z (%)=379 (100), 365(22), 364(88), 336(5), 323(14), 308(13), 234(49), 207(10), 194(18), 192(12), 171(14), 156(16), 143(11), 131(69), 129(37), 128(17), 116(26), 115(31), 91(92).

Separação elevada: C23H25N°4 calc· 379.1783 encontrados 379.1781 (EI-MS).

Exemplo 4: Caracterização biológica do fenoxano

Actividade antibiótica A actividade antibiótica é determinada em teste de difusão de agar a partir da zona de inibição, no teste de séries de diluição a partir da densidade da cultura, o fenoxano inibe o crescimento de alguns fungos, por exemplo hisfflâlia, tis .gjp.erea, Gibberella fuiikuroi. Rhizoous arrhizus. Pvthium debaryanum. A CIM para Ustilaao mavdis é de 19 ng/ml.

Inibição da oxidação NADH O fenoxano inibe a oxidação NADH de partículas submito-condriais de corações bovinos. Investigações por espectroscopia diferencial indica como sitio de actividade para fenoxano o complexo I(NADH: oxidoreductase da ubiquinona) da cadeia respiratória eucariótica.

Injfrjgâ? da_proliferação de linfocitos T separados de ficoll humano induzida por derivado proteico purificado (PPD\ Método: Sangue venoso heparinizado (10 U heparina/ml, liquemina, Roche) é diluído 1:2 em PBS e colocado em camada sobre um meio volume de Ficoll-Hypaque (Pharmacia( (por exemplo: 15 ml ficoll + 30 ml de sangue/PBS em tubo cónico de 50 ml). Tubos são centrifu-gados a 2.000 g durante 10 minutos (ou 500 g durante 45 minutos) à temperatura ambiente sem interrupção. A interface é recolhida suavemente e lavada 2-3 vezes com PBS ou BSS e suspensa de novo em RPMI 1640 suplementado com ou 5% de soro humano reunido ou com 10% de soro de vitelo fetal. A viabilidade é determinada e a densidade celular é ajustada para 0,7-1 x 106 células/ml. Após a adição de 0,5 /xg/ml PPD as células (150 μΐ por recipiente) são distribuídas em placas de fundo plano com 96 recipientes (Costar Nr. 3596). Os recipientes são então suplementados com volumes de 50 μΐ dos compostos do teste diluídos em RPMI.

Culturas estimuladas são pulsadas radioactivamente após 5 dias (37°C, 7% C02 em ar) adicionando 1,0 μΟι H-Timidina/reci-piente em 10 μιη RPMI (Amersham:spec. act. 5 Ci/mmol) . Após 20 horas adicionais as células são colhidas com um aparelho para colher com 96 recipientes (LKB) sobre filtros de fibra de vidro (LKB). Os filtros são secos e a radioactividade retida é contada em Optiscint (LKB) num contador de cintilação (LKB) de Betaplate (LKB). Os resultados são expressos como cpm médio de recipientes em triplicado, na presença ou ausência de drogas. O efeito de drogas é referido como inibição percentual como se segue:

Exp. cpm % inibição - 100 - ------------x 100 controlo cpm

Exp. cpm * Linf. T + PPD + composto controlo cpm = Linf. T + PPD (100% incorp.) A curva de inibição é registada e a CI5Q é referida em micromolar. Neste ensaio fenoxano tinha uma IC5Q de 0,018 μΜ.

Inibição da proliferação de células T no ratinho induzida por antiqénio (ovalbumina) Método tal como foi descrito em Eur. J. Immunol. 8: 112,1978):

Ratinhos (Balb/c ou qualquer outra) são injectados na base da cauda s.c. com 100 μg de antigénio em 50 μΐ (por exemplo ovalbu-mina, Miles, fracção V, 2 mg/ml em PBS, misturada 1:1 com CFA,

Difco). Sete a oito dias mais tarde os ganglios que drenam a linfa são recolhidos, reunidos e é feita uma suspensão de células simples em BSS frio (solução salina equilibrada) usando um homogenizador (FORTUNA, Nr. 1,2440.33, Huber * Co. Reinach). 7 7

As células (2 x 10 x 10 por ratinho) são lavadas 3 vezes em BSS e o número de células viáveis (usando FDA) é ajusta do para 2,2 x 106 células/ml em Dulbecco's Modified Eagle's Médium (DMEM, Gibco) contendo L-glutamina 4 mM, Penicilina (100 μg/ml), Estreptomicina (100 μg/ml), 2-mercaptoetanol (50 μΜ, Gibco) e soro de cavalo inactivado pelo calor a 5% (Gibco).

Ensaio ex vivo: 20 μΐ/recipiente de ovalbumina (em PBS 300 μg/ml de solução de caldo), 20 μΐ/recipiente de compostos do teste (em DMEM) e 160 μΐ/recipiente de suspensão de células são pipetados para placas de microtitulação de fundo plano com 96 recipientes (Nunclon, Delta 167008). A concentração final de a) antigénio:30 μg/ml; b) de compostos 25 a 0,09 μΜ; c) de células 16

5 . . 3,6 χ 10 /recipiente. Ciclosponna A (CSA) é incluída em cada ensaio como composto de referência.

As culturas são feitas vibrar após 48 horas de incuba- 3 ção (37°C, 7% C(>2 ao ar) adicionando 1,0 μΟί H-Timidina/reci- piente (Amershamispec. act. 5 Ci/mmol) em 10 μΐ DMEM. Após 20 horas adicionais as células são colhidas com um aparelho para colher com 96 recipientes (LKB) em filtros de fibra de vidro (LKB). Os filtros são secos e a radioactividade retida é contada em Optiscint (LKB) num contador de cintilação (LKB) de Betaplate (LKB). Os resultados são expressos como cpm média de recipientes em triplicado, na presença ou ausência de drogas. O efeito das drogas é referido como a inibição percentual como se segue:

Exp. cpm % inibição = 100 - ------------x 100 controlo cpm

Exp. cpm = Linf. T + ovalbumina + composto controlo cpm = Linf. T + ovalbumina (100% incorp.)

A curva de inibição é registada em μιηοΐ/litro. O «Pf fenoxano apresenta uma melhor potência (IC5:0,002 μΜ) que CSA (IC5Q:0,03 μΜ) na inibição da activação/proliferação das células T específicas do antigénio. Este efeito da droga não foi devido a toxicidade porque, quando foi adicionada à cultura não às 0 horas mas sim às 48 horas (depois de ter ocorrido a proliferação), não afectou a viabilidade de células T aos níveis de 10 μΜ. Verifi-cou-se também que o composto não era tóxico em relação aos fibroblastos Swiss 3T3 em níveis de 10 μΜ.

Exemplo 5: Composição farmacêutica para administração oral Cápsulas contendo 25 mg de ingrediente activo, isto é fenoxano, são preparadas como se segue:

Composição (para 1.000 cápsulas) ingrediente activo 25 g talco 3,6 g amido de milho 2,4 g estearato de magnésio 1,6 g lactose 0,4 g 33 g

As substancias em pó são feitas passar através de um crivo de 0,6 mm e misturadas. Porções de 33 mg da mistura são introduzidas nas cápsulas de gelatina numa máquina para encher cápsulas.

Claims (3)

18

EIVINDICACÔES 1*. - Processo para a preparação de um fenoxano da fórmula

CH3 OCH3 ou de um fenoxano tendo os parâmetros que se seguem: HPLC analítica: Coluna (φ· comprimento) 4*250 mm, embalada com HD-sil 18-5-100 (ex Kronwald), detecção por absorção UV a 210-250 nm, eluente metanol/água (80:20), fluxo 1,5 ml/min, tR=7,9 min; p.f. 92-94 °C. UV (Metanol) lambda (e/lg e)=204 (75420/4,877), 229 lDcàX (53850/4,731), 244 (bossa(b)), 252 (b), 262 (b), 274 nm (b). 1H-RMN ([D4]metanol, 600,127 MHz): 5=8,39 (s, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 6,33 [s, lH(largo(l))], 4,10 (s, 3H), 3,15 (t, 1H, J=7,4Hz), 2,88 (q, 3H, J=7,4Hz), 2,72 [t, 1H,J=7,4HZ(1)], 1,93 (d, 3H,J=l,2Hz), 1,88 (s, 3H), 1,11 ppm (t, 3H, J=7,4Hz); 13C-RMN ([D4]metanol, 75,5 MHZ): 5=182,65 S, 166,89 S, 164,46 s, 149,75 S 140,70 d, 139,58 s, 137,80 s, 135,31 s, 130,00 d (2C), 129,22 d (2C), 127,84 d, 127,42 d, 126,37 s, 101,11 S, 56,85 q, 38,82 t, 27,85 t, 18,58 t, 17,76 q, 140,00 q, 7,30 q. 19

Espectroscopia de Massa de (+)BAR (xenon, glicerina matriz), m/z=380 [M+H]+: EM-IE (70 ev, 160 C, m/z>90): M/Z (%)=379 (100), 365(22), 364(88), 336(5), 323(14), 308(13), 234(49), 207(10), 194(18), 192(12), 171(14), 156(16), 143(11), 131(69), 129(37), 128(17), 116(26), 115(31), 91(92). Alta Resolução: C23H25N04 calc. 379,1783 encontrado 379,1781 (MS—IE); carcterizado por se cultivar Polianqium spec. DSM 6270 num meio nutritivo apropriado e se isolar o fenoxano. 2». - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac-terizado por: se cultivar Polvangium spec. DSM 6270 num meio contendo fontes de carbono, fontes de azoto e sais minerais, se separar a biomassa da cultura e se extrair a referida biomassa com um solvente orgânico, dipolar aprótico, se concentrar o extracto, se misturar o resíduo com água e com um solvente aprótico dipolar, orgânico não miscível com a água, - se concentrar a fase solvente orgânica, se misturar o concentrado num alcanol inferior e num hidro-carboneto inferior que é não miscível com o referido alcanol, 20 se concentrar a fase alcanõlica, se misturar o resíduo num éter alifático inferior e, se necessário, se filtrar a fase líquida sobre gel de sílica, e se isolar fenoxano de um modo conhecido per se a partir da fase líquida. 3a. - Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por se cristalizar o fenoxano a partir de éter terc--butilmetílico/éter de petróleo.

48. - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incluir na referida composição o fenoxano preparado de acordo com o processo reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, juntamente com veículos e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

58. - Método para o tratamento terapêutico ou profiláctico do organismo humano ou animal, caracterizado por se administrar um composto preparado de acordo com o processo reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, numa gama de dosagem diária de cerca de 0,3 até cerca de 30 mg por quilograma de peso corporal por dia. Lisboa, 20 de Dezembro de 1991

J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR COROON, 10-A 3.· 1200 LISBOA