PT2334687E

PT2334687E - Derivados de dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol

Info

Publication number: PT2334687E
Application number: PT09786960T
Authority: PT
Inventors: Vincent Mascitti; Benjamin Micah Collman
Original assignee: Pfizer
Priority date: 2008-08-28
Filing date: 2009-08-17
Publication date: 2012-04-13
Also published as: NL300943I2; CN102149717A; LTPA2018510I1; ES2380408T3; TWI387598B; HRP20120104T1; TW201014863A; AR073138A1; CL2011000394A1; SI2334687T1; ECSP11010854A; AP2728A; KR20130116078A; WO2010023594A1; ME01285A; SV2011003842A; JP4825322B1; NO2018019I2; BRPI0918841A2; IL211226A

Description

1

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE DIOXA-BICICLO[3.2.1]OCTANO-2,3,4-TRIOL"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a derivados de dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol, a estruturas de cristal, a composição farmacêuticas e às suas utilizações como inibidores dos co-transportadores de sódio-glicose (SGLT).

ANTECEDENTES A obesidade constitui um problema de saúde significativo devido às suas complicações médicas graves que compreendem co-morbidades, tais como hipertensão, resistência à insulina, diabetes, doença das artérias coronárias e paragem cardíaca (designadas colectivamente como síndrome metabólica). A obesidade e as suas co-morbidades associadas continuam a provocar riscos de saúde crescentes nos países desenvolvidos e começam agora a afectar os países em desenvolvimento. As consequências negativas para a saúde da obesidade fazem com que esta seja a segunda causa de morte prevenível nos Estados Unidos e constituem um efeito económico e fisiológico significativo na sociedade. Ver, McGinnis M, Foege WH., "Actual Causes of Death in the United States", JAMA, 270, 2207-12 (1993).

Existe assim a necessidade de identificar e desenvolver novos medicamentos que tratem e/ou previnam a obesidade e as suas co-morbidades associadas e em particular diabetes de tipo II (tipo 2).

Recentemente, concluiu-se que os inibidores do co-transporte de sódio-glicose (SGLT), em particular os 2 inibidores de SGLT2, bloqueiam a reabsorção de glicose a partir do filtrado renal no glomérulo, induzindo assim a excreção de glicose na urina. Uma vez que a glicose em excesso é excretada, verifica-se uma diminuição do nivel de glicose no sangue, uma diminuição no armazenamento hepático de glicose, uma diminuição na secreção de insulina e, subsequentemente, uma diminuição da conversão de hidratos de carbono em gordura e, em último caso, a uma redução na acumulação de gordura. Espera-se que a inibição selectiva de SGLT2 normalize a glicose no plasma, aumentando a excreção de glicose. Consequentemente, os inibidores de SGLT2 constituem meios atractivos para melhorar as patologias diabéticas sem aumentar a massa corporal ou o risco de hipoglicemia. Ver, Isaji, M., Current Opinion Investigational Drugs, 8(4), 285-292 (2007). Para uma descrição geral sobre SGLT como alvos terapêuticos, veja-se também Asano, T., et al., Drugs of the Future, 29(5), 461-466 (2004).

Como exemplos representativos de glicósidos que demonstraram ser úteis para o tratamento de NIDDM e de obesidade refere-se os que se encontram descritos nos seguintes documentos: patentes de invenção norte-americanas nos 6 515 117; 6 414 126; 7 101 856; 7 169 761 e 7 202 350; pedidos de patentes de invenção norte-americanas nos US 2002/0111315; US 2002/0137903; US 2004/0138439; US 2005/0233988; US 2006/0025349; US 2006/0035841 e US 2006/0632722; e nos pedidos de patente de invenção PCT nos WO 01/027128; WO 02/044192; WO 02/088157; WO 03/099836; WO 04/087727; WO 05/021566; WO 05/085267; WO 06/008038; WO 06/002912; WO 06/062224; WO 07/000445; WO 07/093610 e WO 3 08/002824. Derivados espirocetal, como inibidores de SGLT2, encontram-se descritos no documento WO 2008/013280.

Determinados glicósidos são genotóxicos e possuem um impacto sobre o material genético das células de um modo tal que estas podem ser potencialmente mutagénicas ou carcinogénicas. Os materiais genetóxicos podem ser detectados utilizando ensaios convencionais, tais como o teste de micronúcleos de células de mamíferos in vitro (MNvit), as linhas gerais para o teste por Economic Co-Operation and Development (OECD) (texto TG) 487 (2007); teste de aberração cromossómica de mamíferos in vitro, OECD TG 473 (1997); teste de mutação inversa bacteriana, OECD TG 471 (1997); teste de micronúcleos de eritrócitos de mamíferos, OECD TG 474 (1997); ou semelhantes. Assim sendo, existe ainda a necessidade de tratamentos e/ou prevenção terapêuticos mais eficazes e seguros de obesidade e das suas co-morbidades associadas, em particular para diabetes de tipo 2 e distúrbios associados.

SUMÁRIO

Concluiu-se que os compostos de fórmula estrutural (A) e de fórmula estrutural (B) actuam como inibidores do co-transporte de sódio-glicose (SGLT), em particular inibidores de SGLT2; pelo que podem ser utilizados para o tratamento de doenças mediadas por uma tal inibição (v.g., doenças associadas à obesidade, diabetes de tipo 2 e co-morbidades associadas à obesidade e à diabetes) . Estes compostos podem ser representados pelas fórmulas estruturais (A) e (B) , conforme a seguir apresentadas: 4

(A) (B) em que o símbolo R1 representa H, alquilo (C1-C4) , alcoxi(Ci-C4) , Cl, F, ciano, alquilo (C1-C2) substituído com flúor, alquil (C1-C4)-SO2- ou cicloalquilo (C3-C6) ; e o símbolo R2 representa alquilo (C1-C4) , alcoxi (C1-C4) , alcinilo (C2-C4) , 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuraniloxi, Cl, F, ciano, alquilo (C1-C2) substituído com flúor, alquil (C1-C4)-S02-, cicloalquilo (C3-C6) ou um heterociclo (C5-C6) que possui 1 ou 2 heteroátomos em que cada um deles é seleccionado independentemente entre N, 0 ou S.

Faz-se observar aos especialistas na matéria que é possível adicionar diversos substituintes aos compostos de fórmula estrutural (A) ou de fórmula estrutural (B), desde que o(s) substituinte(s) seleccionado(s) não afectem de um modo adversos as características farmacológicas do composto ou que interfiram adversamente com a sua utilização como medicamento.

Como compostos específicos de fórmula estrutural (A) refere-se: (IS,2S,3S,4R,5S)-l-hidroximetil-5-[3-(4-metoxi- benzil)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano- 2.3.4- triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano- 2.3.4- triol; (lS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metoxi- benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]— octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi- benzil) -fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]- 5 octano-2,3,4-triol; (IS, 2S, 3S, 4R, 5S)-5-[4-fluoro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]-octano-2,3,4-triol; 2-(4-metoxibenzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)- 2.3.4- trihidroxi-l-(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]-oct-5-il)-benzonitrilo; 2- (4-etoxibenzil)-4-((1S,2S,3S, 4R, 5S) - 2.3.4- trihidroxi-l-(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]- oct-5-il]-benzonitrilo; (lS,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etoxi benzil) -4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo-[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzi1]-fenil}-1-hidroximet il-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa- biciclo [ 3 . 2 . 1 ] octano-2 , 3 , 4-triol e (lS,2S,3S,4R,5S)-5-{4-cloro-3-[4-(oxetano-3-iloxi) -benzil] -fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4- triol.

Como compostos específicos de fórmula estrutural (B) refere-se: (1S,2S,3S,4S,5S)-1-hidroximeti1-5-[3-(4-metoxi benzil) -4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano- 2.3.4- triol; (1S,2S,3S, 4S,5S)-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-metil- fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (lS,2S,3S,4S,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metoxi-benzil)- fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (lS,2S,3S,4S,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)- fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (lS,2S,3S,4S,5S)-5-[4-fluoro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (lS,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-fluoro- fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4- 6 triol e (IS,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluoro-fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3, 4-triol.

Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um cristal que compreende um composto de fórmula estrutural (4A)

Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica que compreende (1) um composto da presente invenção e (2) um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. De preferência, a composição compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. A composição também pode conter pelo menos um agente farmacêutico suplementar (aqui descrito). Como agentes preferidos refere-se agentes anti-obesidade e/ou agentes anti-diabéticos (aqui a seguir descritos).

Ainda de acordo com outro aspecto, a presente invenção diz respeito à utilização dos compostos da presente 7 invenção num método para o tratamento de uma doença, distúrbio ou patologia modulada pela inibição de SGLT2 em animais, a qual compreende o passo de administração a um animal (de preferência, um ser humano), que necessite de tal tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção (ou de uma sua composição farmacêutica). Como doenças, patologias e/ou distúrbios modulados pela inibição de SGLT2 refere-se, v.g., diabetes de tipo II, nefropatia diabética, sindrome de resistência à insulina, hiperglicemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, tolerância deficiente à glicose, obesidade (incluindo controlo do peso ou manutenção do peso), hipertensão e redução no nivel de glicose no sangue.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação com outros agentes farmacêuticos (em particular, agentes anti-obesidade e anti-diabéticos aqui a seguir descritos). A terapia de combinação pode ser administrada como (a) uma composição farmacêutica individual que compreende um composto da presente invenção, pelo menos um agente farmacêutico suplementar aqui descrito e um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável ou (b) duas composições farmacêuticas em separado que compreendem (i) uma primeira composição que compreende um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável e (ii) uma segunda composição que compreende pelo menos um agente farmacêutico suplementar aqui descrito e um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. As composições farmacêuticas podem ser administradas em simultâneo ou sequencialmente e por qualquer ordem.

Faz-se observar que a descrição geral e a descrição minuciosa seguintes são exemplificativas e apenas exemplificativas e não são limitativas do âmbito da invenção, conforme reivindicado.

DESCRIÇÃO ABREVIADA DAS FIGURAS A figura 1 representa a estrutura do cristal refinado para o composto do exemplo 8A, a qual foi representada utilizando o programa de representação SHELXTL. A figura 2 representa a estrutura do cristal refinado para o composto do exemplo 9A, a qual foi representada utilizando o programa de representação SHELXTL. A figura 3 representa o padrão de difracção de raio-X no pó observado para o exemplo 22: co-cristal do exemplo 18 do composto do exemplo 4A e L-prolina. A figura 4 representa o padrão de difracção de raio-X no pó observado para o exemplo 22: co-cristal do exemplo 20 do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico. A figura 5 representa o termograma de calorimetria de pesquisa diferencial observado para o exemplo 23: co-cristal do exemplo 18 do composto do exemplo 4A e L-prolina. A figura 6 representa o termograma de calorimetria de pesquisa diferencial observado para o exemplo 23: co-cristal do exemplo 20 do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico. A figura 7 representa a estrutura de cristal refinado para o exemplo 24: co-cristal do exemplo 4A e L-prolina, a qual foi representada utilizando o programa de representação SHELXTL. 9 A figura 8 representa a estrutura de cristal refinado para o exemplo 25: co-cristal do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico, a qual foi representada utilizando o programa de representação SHELXTL. A figura 9 representa um espectro de ressonância magnética nuclear em estado sólido de 13C observado para o exemplo 26: co-cristal do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico. Os picos marcados com asteriscos são bandas laterais rotativas.

DESCRIÇÃO DETALHADA A presente invenção poderá ser entendida mais facilmente por meio da referência à descrição minuciosa seguinte de variantes exemplificativas da invenção e os exemplos aqui incluídos.

Antes de se apresentar e se descrever os compostos, as composições e os métodos da presente invenção, faz-se observar que a presente invenção não é limitada por métodos sintéticos específicos de preparação, os quais podem evidentemente variar. Faz-se observar também que a terminologia é aqui utilizada para descrever apenas variantes particulares e não pretende ser limitativa. 0 plural e o singular deverão ser tratados como sendo interpermutáveis, com excepção da indicação do número.

Tal como aqui utilizado, o termo "alquilo" designa um radical hidrocarboneto de fórmula geral CnH2n+i · 0 radical alcano pode ser linear ou ramificado. Por exemplo, o termo "alquilo(Ci-C6)" designa um grupo alifático linear ou ramificado monovalente que contém entre 1 e 6 átomos de carbono (v.g., metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, 1- 10 metilbutilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, neopentilo, 3,3-dimetilpropilo, hexilo, 2-metilpentilo e semelhantes), de igual modo, a porção alquilo (isto é, o radical alquilo) de um grupo alcoxi, acilo (v.g., alcanoilo), alquilamino, dialquilamino, alquilsulfonilo e tioalquilo possui as significações definidas antes. Quando indicado como sendo "facultativamente substituído", o radical alcano ou o radical alquilo pode ser insubstituído ou substituído com um ou vários substituintes (de um modo geral, entre um e três substituintes, com excepção no caso de substituintes halogéneo, tais como percloro- ou perfluoro-alquilos) seleccionados independentemente entre o conjunto de substituintes a seguir apresentados na definição de "substituído". O termo "alquilo substituído com halo" designa um grupo alquilo substituído com um ou vários átomos de halogéneo (v.g., fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, perfluoroetilo, 1,1-difluoroetilo e semelhantes). O termo "cicloalquilo" designa anéis não aromáticos que são totalmente hidrogenados e que podem existir sob a forma de um anel individual, um anel bicíclico ou um anel espiro. Salvo quando especificado de outro modo, o anel carbocíclico é normalmente um anel com 3 a 8 membros, por exemplo, o termo cicloalquilo compreende grupos tais como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexenilo, norbornilo (biciclo[2.2.1]heptilo), biciclo[2.2.2]octilo e semelhantes. O termo "heterociclo" designa anéis não aromáticos que são totalmente hidrogenados e que podem existir sob a forma de um anel individual, um anel bicíclico ou um anel espiro. Salvo quando especificado de outro modo, o anel 11 heterocíclico é normalmente um anel com 3 a 6 membros que possui entre 1 e 3 heteroátomos (de preferência 1 ou 2 heteroátomos) seleccionados independentemente entre enxofre, oxigénio e/ou azoto. Os anéis heterociclicos compreendem grupos tais como epoxi, aziridinilo, tetra-hidrofuranilo, pirrolidinilo, N-metilopirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirazolidinilo, 4H-piranilo, morfolino, tiomorfolino, tetra-hidrotienilo, 1,1-dióxido de tetra-hidrotienilo e semelhantes. A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" designa uma quantidade de um composto da presente invenção que (i) trata uma doença, patologia ou distúrbio particular, (ii) atenue, melhore ou elimine um ou diversos sintomas de uma doença, patologia ou distúrbio particular ou (iii) previna ou atrase o inicio de um ou vários sintomas de uma doença, patologia ou distúrbio particular, aqui descritos. 0 termo "animal" designa seres humanos (macho ou fêmea), animais de companhia (v.g., cães, gatos e cavalos), animais que são fonte de alimentos, animais de zoológicos, animais marinhos, aves e outras espécies animais semelhantes. A expressão "animais alimentares" designa animais que constituem uma fonte de alimentos, tais como vacas, porcos, ovelhas e aves de criação. A expressão "farmaceuticamente aceitável" indica que a substância ou composição deverá ser compatível sob o ponto de vista químico e/ou toxicológico com os outros ingredientes que fazem parte da formulação e/ou com o mamífero que irá receber o tratamento.

Os termos "tratar" ou "tratamento" compreendem o tratamento preventivo, isto é, profiláctico, e o tratamento paliativo. 12

Os termos "modular" ou "modulando" ou "modulado", tais como aqui utilizados e salvo quando indicado de outro modo, designam a inibição dos transportadores de sódio-glicose (em particular, de SGLT2) com os compostos da presente invenção, prevenindo parcial ou completamente o transporte de glicose através do transportador. A expressão "compostos da presente invenção" (salvo quando identifica especificamente de outro modo) designa os compostos de fórmula estrutural (A), de fórmula estrutural (B) e todos os estereoisómeros puros e misturados (incluindo diastereoisómeros e enantiómeros), tautómeros e compostos isotopicamente marcados. Os hidratos e solvatos dos compostos da presente invenção são considerados composições da presente invenção, em que o composto está associado a água ou a um solvente, respectivamente. Os compostos também podem existir sob a forma de um ou vários estados cristalinos, isto é, co-cristais, polimorfos ou então podem existir sob a forma de sólidos amorfos. Todas estas formas estão abrangidas pelas reivindicações.

De acordo com uma variante, o símbolo R1 representa H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, ciclopropilo ou ciclobutilo. De acordo com outra variante, o símbolo R1 representa H, metilo, etilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropilo. De acordo com uma outra variante, o símbolo R1 representa H, metilo, etilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropilo. Ainda de acordo com outra variante, o símbolo R1 representa metilo, etilo, F, Cl, ciano, CF3 ou ciclopropilo.

De acordo com uma variante, o símbolo R2 representa metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, 13 ciano, -CF3, -CF2CH3, etinilo, 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuraniloxi ou ciclopropilo. De acordo com outra variante, o simbolo R2 representa metilo, etilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinilo, 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuraniloxi ou ciclopropilo. De acordo com uma outra variante, o simbolo R2 representa metilo, etilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinilo, 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuraniloxi ou ciclopropilo. Ainda de acordo com uma outra variante, o simbolo R2 representa metoxi ou etoxi.

De acordo com uma variante, o cristal compreende o composto 4A e L-prolina ou ácido L-piroglutâmico.

De acordo com uma outra variante, o cristal possui uma ou várias das seguintes: a) grupo espacial de P2(1)2(1)2(1) e parâmetros da célula unitária praticamente iguais aos seguintes: a = 7,4907(10) Â a = 90°. b = 12,8626(15) Â β = 90°. c = 28,029(4) Â γ = 90°. b) um padrão de difracção de raio-X no pó que compreende valores 2-teta de (radiação CuKa, comprimento de onda de 1,54056 À) 6,4 ± 0,2, 16,7 ± 0,2, 17,4 ± 0,2 e 21,1 ± 0,2; c) um espectro 13C-NMR em estado sólido que possui posições de pico a 16,5 ± 0,2, 131,1 ± 0,2, 158,7 ± 0,2 e 181,5 ± 0,2 p.p.m., conforme determinado num espectrómetro a 500 MHz em relação a adamantina cristalina de 29,5 ppm ou d) um termograma calorimétrico de pesquisa diferencial que possui uma endotermia de cerca de 142,5 ± 2°C.

De acordo com outra variante, o cristal é um co-cristal que compreende o composto de fórmula estrutural 14 (4Α) e ácido L-piroglutâmico numa proporção estequiométrica de 1:1.

Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados por vias sintéticas que compreendem processos análogos a processos bem conhecidos na especialidade química, em particular à luz da descrição aqui apresentada. De um modo geral, os materiais de partida são provenientes de fontes comerciais, tais como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) ou são facilmente preparados por meio de métodos bem conhecidos pelos especialistas na matéria (v.g., preparados por meio de métodos descritos normalmente por Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.) ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, incluindo os suplementos (também disponíveis na base de dados Beilstein online)).

Para fins ilustrativos, os esquemas de reacção a seguir descritos proporcionam vias potenciais para a síntese dos compostos da presente invenção, bem como de intermediários importantes. Para uma descrição mais minuciosa dos passos de reacção individuais, veja-se a secção dos exemplos a seguir apresentada. Será evidente para os especialistas na matéria que é possível utilizar outras vias de síntese para sintetizar os compostos da invenção. Embora sejam ilustrados materiais de partida e reagentes específicos nos esquemas e na discussão seguintes, é possível substituir facilmente outros materiais de partida e reagentes para proporcionar diversos outros derivados e/ou condições de reacção. Além disso, muitos dos compostos preparados pelos métodos a seguir descritos podem ser ainda modificados à luz da presente 15 memória descritiva utilizando processos químicos convencionais bem conhecidos pelos especialistas na matéria.

Na preparação dos compostos da presente invenção, poderá ser necessária a protecção de funcionalidades remotas de intermediários. A necessidade de uma tal protecção irá variar em função da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. A expressão "grupo protector de hidroxi" designa um substituinte de um grupo hidroxi que bloqueia ou protege a funcionalidade hidroxi. Como grupos protectores de hidroxilo adequados (O-Pg) refere-se, por exemplo, alilo, acetilo (Ac), sililo (tal como trimetilsililo (TMS) terc-butildimetilsililo (TBS)), benzilo (Bn), para-metoxibenzilo (PMB), tritilo (Tr), para-bromobenzoílo, para-nitrobenzoílo e semelhantes (benzilideno para a protecção de 1,3-dióis). A necessidade de uma tal protecção é facilmente determinada por um especialista na matéria. Para uma descrição geral sobre grupos protectores e da sua utilização, veja-se T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991. 0 esquema 1 ilustra os procedimentos gerais que é possível utilizar para proporcionar os compostos da presente invenção. 16

Esquema 1 É possível preparar alil-2,3,4-tri-O-benzil-D- glucopiranósido (I-a, em que o símbolo Pg1 representa um grupo benzilo) pelos procedimentos descritos por Shinya Hanashima, et al.r na obra Bioorganic & Medicinal

Chemistry, 9, 367 (2001); Patrícia A. Gent et ai. na obra 17

Journal of the Chemical Society. Perkin 1, 1835 (1974); Hans Peter Wessel na obra Journal of Carbohydrate Chemistry, 7, 263, (1988); ou Yoko Yuasa, et al., na obra Organic Process Research & Development, 8, 405-407 (2004). No passo 1 do esquema 1, o grupo hidroximetileno pode ser introduzido no glicósido por meio de uma oxidação de Swern e subsequente tratamento com formaldeído na presença de um hidróxido de um metal alcalino (v.g., hidróxido de sódio). Esta reacção é referida como uma reacção de aldol-Cannizzaro. A oxidação de Swern é descrita por Kanji Omura and Daniel Swern em Tetrahedron, 34, 1651 (1978). Também é possível utilizar modificações deste processo conhecidas pelos especialistas na matéria. Por exemplo, também é possível utilizar outros oxidantes, tais como ácido 2-iodoxibenzóico, descrito por Ozanne, A. et al. em Organic Letters, 5, 2903 (2003), bem como outros oxidantes conhecidos pelos especialistas na matéria. A sequência de aldol-Cannizzaro foi já descrita por Robert Schaffer em Journal of The American Chemical Society, 81, 5452 (1959) e por Amigues, E.J., et al., em Tetrahedron, 63, 10042 (2007).

No passo 2 do esquema 1, é possível adicionar grupos protectores (Pg2) por tratamento do intermediário (I-b) com os reagentes e os procedimentos adequados para o grupo protector particular desejado. Por exemplo, os grupos p-metoxibenzilo (PMB) podem ser introduzidos por tratamento do intermediário (I-b) com brometo de p-metoxibenzilo ou cloreto de ρ-metoxibenzilo na presença de hidreto de sódio, hidreto de potássio, terc-butóxido de potássio, num solvente tal como tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou N,N-dimetilformamida (DMF). Também é possível utilizar condições que envolvam para-metoxibenziltricloroacetimidato 18 na presença de uma quantidade catalítica de ácido (v.g.r ácido trifluorometano-sulfónico, ácido metano-sulfónico ou ácido canforsulfónico) num solvente, tal como diclorometano, heptano ou hexano. Os grupos benzilo (Bn) podem ser introduzidos por tratamento do intermediário (Iz b) com brometo de benzilo ou cloreto de benzilo na presença de hidreto de sódio, hidreto de potássio, terc-butóxido de potássio, num solvente, tal como tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou N,N-dimetilformamida. Também é possível utilizar condições que envolvem benziltricloroacetimidato na presença de uma quantidade catalítica de ácido (v.g., ácido trifluorometano-sulfónico, ácido metano-sulfónico ou ácido canforsulfónico), num solvente, tal como diclorometano, heptano ou hexano.

No passo 3 do esquema 1, remove-se o grupo protector de alilo (v.g., por tratamento com cloreto e paládio em metanol; também é possível utilizar um co-solvente, tal como diclorometano; outras condições conhecidas pelos especialistas na matéria também podem ser utilizadas, veja-se T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991) para formar o lactol (I-d) .

No passo 4 do esquema 1, efectua-se a oxidação do grupo hidroxilo não protegido num grupo oxo (v.g., oxidação de Swern), formando-se então a lactona (I-e).

No passo 5 do esquema 1, faz-se reagir a lactona (I-e) com cloridrato de N,O-dimetil-hidroxilamina para se formar a amida de Weinreb correspondente, a qual pode existir em equilíbrio numa forma fechada/aberta (I-f/I-g). A "amida de Weinreb" (I-g) pode ser preparada utilizando procedimentos bem conhecidos pelos especialistas na matéria. Veja-se, 19

Nahm, S., e S.M. Weinreb, Tetrahedron Letters, 22 (39), 3815-1818 (1981). Por exemplo, o intermediário (I-f/I-q) pode ser preparado a partir de cloridrato de N,0-dimetil-hidroxilamina comercialmente disponível e de um agente de activação (v.g., trimetil-alumínio).

No passo 6 do esquema 1, o grupo arilbenzil (Ar) é introduzido utilizando o reagente organo-metálico desejado (v.g., composto organo-lítio (ArLi) ou composto organo-magnésio (ArMgX)) em tetra-hidrofurano (THF) a uma temperatura compreendida entre cerca de -78°C e cerca de 20°C, seguindo-se a hidrólise (após manutenção sob condições próticas) no lactol correspondente (I-i), o qual pode estar em equilíbrio com a cetona correspondente (I-h). 0 motivo cetal ligado em ponte encontrado nas fórmulas estruturais (A) e (B) pode ser preparado por remoção dos grupos protectores (Pg2) , utilizando os reagentes adequados para os grupos protectores utilizados. Por exemplo, os grupos protectores PMB podem ser removidos por tratamento com ácido trifluoroacético na presença de anisole e de diclorometano (DCM), a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e cerca de 23°C (temperatura ambiente) . Os grupos protectores restantes (Pg1) podem então ser removidos utilizando os processos químicos adequados para os grupos protectores particulares. Por exemplo, os grupos protectores benzilo podem ser removidos por tratamento com ácido fórmico na presença de paládio (negro-de-Pd) num solvente prótico (v.g., etanol/THF), a uma temperatura aproximadamente igual à temperatura ambiente para se obter os produtos finais (A) e (B) . No caso de o símbolo R1 representar CN, então a utilização de um ácido de Lewis, tal como tricloreto de boro, a uma temperatura compreendida 20 entre cerca de -78°C e a temperatura ambiente, num solvente, tal como diclorometano ou 1,2-dicloroetano, também pode ser utilizada para remover os grupos protectores benzilo e/ou para-metoxibenzilo.

No caso de o símbolo R1 representar CN e o símbolo R2 representar alcoxi(Ci-C4) no intermediário (I-i) ou nos produtos (A) ou (B) , durante o tratamento com um ácido de Lewis, tal como tricloreto de boro ou tribrometo de boro, então pode ocorrer a des-alquilação parcial ou completa no fenol correspondente para proporcionar o correspondente composto (A) ou (B) , em que o símbolo R1 representa CN e o símbolo R2 representa OH. No caso de tal ocorrer, o grupo alcoxi(C1-C4) pode ser reintroduzido por meio de alquilação selectiva utilizando iodeto de alquilo(C1-C4) sob condições ligeiramente alcalinas, por exemplo, carbonato de potássio em acetona, a uma temperatura compreendida entre a temperatura ambiente e cerca de 56°C.

No caso de o símbolo R1 e/ou R2 representar alquil(Ci-C4)-SC>2-, será evidente para um especialista na matéria que o passo 6 de adição do organo-metálico (esquema 1) será efectuado no correspondente alquil(C1-C4)-S- que contém o reagente organo-metálico. O tioalquilo é então oxidado num passo posterior na sulfona correspondente, utilizando métodos convencionais conhecidos pelos especialistas na matéria.

Os compostos da presente invenção podem ser preparados sob a forma de co-cristais utilizando qualquer método adequado. Um esquema representativo para a preparação de tais co-cristais é descrito no esquema 2. 21

Esquema 2

No esquema 2, em que o símbolo Me representa metilo e o símbolo Et representa etilo, no passo 1, dissolve-se 1-(5—bromo—2—clorobenzil)—4—etoxibenzeno numa mistura a 3:1 de tolueno:tetra-hidrofurano e subsequente arrefecimento da solução resultante até < -70°C. Adiciona-se a esta solução hexil-lítio, mantendo a temperatura de reacção < -65°C, seguindo-se agitação durante 1 hora. Dissolve-se (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(trimetilsililoxi)-6-((trimetil- 22 sililoxi)-metil)-tetra-hidropirano-2-ona (ΙΙ-a) em tolueno e arrefece-se a solução resultante a -15°C. Adiciona-se então esta solução à solução de aril-litio a -70°C e depois agita-se durante 1 hora. Adiciona-se então uma solução de ácido metano-sulfónico em metanol, depois aquece-se até à temperatura ambiente e agita-se durante 16 a 24 horas. Dá-se a reacção como completa com o nível de α-anómero é < 3%. Alcaliniza-se então a mistura de reacção por meio da adição de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 5 M. Remove-se por filtração os sais resultantes e depois concentra-se a solução de produto impuro. Adiciona-se 2-metiltetra-hidro-furano como co-solvente e extrai-se duas vezes a fase orgânica com água. Concentra-se então a fase orgânica até 4 volumes em tolueno. Adiciona-se então este concentrado a uma solução a 5:1 de heptano:tolueno provocando a formação de um precipitado. Recolhe-se os sólidos e seca-se sob uma pressão hipobárica para se obter um sólido.

No passo 2 do esquema 2, adiciona-se imidazole ao composto (ΙΙ-b) em cloreto e metileno, depois arrefece-se até 0°C e adiciona-se então cloreto de trimetilsililo para se obter o produto persililado. Aquece-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente, extingue-se por adição de água e lava-se a fase orgânica com água. Seca-se esta solução impura de cloreto de metileno do composto (II-c) sobre sulfato de sódio e depois utiliza-se nesse estado impuro no passo subsequente.

No passo 3 do esquema 2, concentra-se a solução impura do composto (II-c) em cloreto de metileno até um volume reduzido e depois permuta-se o solvente para metanol. Arrefece-se a solução metanólica de composto (II-c) até 0°C, depois adiciona-se carbonato de potássio a 1% mol sob 23 a forma de uma solução em metanol e agita-se durante 5 horas. Extingue-se então a mistura de reacção por adição de ácido acético a 1% mol em metanol, depois aqueceu-se até à temperatura ambiente, permuta-se o solvente para acetato de etilo e submete-se então a filtração da quantidade menor de sólidos inorgânicos. Utiliza-se a solução impura de acetato de etilo do composto (ΙΙ-d) directamente no passo subsequente.

No passo 4 do esquema 2, concentra-se a solução impura de composto (ΙΙ-d) até um volume reduzido, depois dilui-se com cloreto de metileno e sulfóxido de dimetilo. Adiciona-se trietilamina, depois arrefece-se até 10°C e adiciona-se o complexo de trióxido de enxofre-piridina, em três porções, sob a forma de um sólido, em intervalos de 10 minutos. Agita-se a mistura de reacção durante mais 3 horas a 10°C, depois extingue-se com água e aquece-se até à temperatura ambiente. Separa-se as fases, depois lava-se a camada de cloreto de metileno com uma solução aquosa de cloreto de amónio. Utiliza-se a solução impura de cloreto de metileno do composto (ΙΙ-e) directamente no passo subsequente.

No passo 5 do esquema 2, concentra-se a solução impura do composto (ΙΙ-e) até um volume reduzido e depois permuta-se o solvente para etanol. Adiciona-se trinta equivalentes de formaldeido e depois aquece-se até 55°C. Adiciona-se uma solução aquosa de 2 equivalentes de fosfato de potássio tribásica e depois agita-se durante 24 horas a 55°C. Aumenta-se então a temperatura da mistura de reacção até 70°C durante mais 12 horas. Arrefece-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente, dilui-se com éter terc-butil-metílico e com salmoura. Separam-se as fases e depois 24 permuta-se o solvente da fase orgânica para acetato de etilo. Lava-se a fase de acetato de etilo com salmoura e concentra-se até um volume reduzido. Purifica-se então o concentrado impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com 5% de metanol e 95% de tolueno. Combina-se as fracções que contêm produto e concentra-se até um volume reduzido. Adiciona-se metanol e depois agita-se até se dar a ocorrência de precipitação. Arrefece-se a suspensão, recolhe-se os sólidos, enxagua-se com heptano e depois seca-se. Isola-se o produto (ΙΙ-f) com o aspecto de um sólido.

No passo 6 do esquema 2, dissolve-se o composto (II—f) em 5 volumes de cloreto de metileno, depois adiciona-se ácido tósico 1% mol da SiliaBond® e agita-se durante 18 horas à temperatura ambiente. Remove-se por filtração o catalisador ácido e utiliza-se directamente a solução de cloreto de metileno do composto (ΙΙ-g) no passo seguinte, procedimento de co-cristalização.

No passo 7 do esquema 2, concentra-se a solução de cloreto de metileno do composto (ΙΙ-g) e permuta-se o solvente para 2-propanol. Adiciona-se água e depois aquece-se até 55°C. Adiciona-se uma solução aquosa de ácido L-piroglutâmico e depois arrefece-se a solução resultante até à temperatura ambiente. Semeia-se então a solução e granula-se durante 18 horas. Depois de se arrefecer, recolhe-se os sólidos, enxagua-se com heptano e seca-se. Isola-se o produto (ΙΙ-h) com o aspecto de um sólido.

Uma via alternativa de síntese para os compostos (A) da presente invenção é ilustrada no esquema 3, sendo descrita a seguir. 25

Esquema 3 A síntese do composto (IlI-a), em que o símbolo R3 representa um alquilo ou um alquilo substituído com flúor (com a excepção do átomo de carbono adjacente ao átomo de oxigénio) pode ser efectuada de um modo idêntico ao descrito no passo 1 do esquema 2. No passo 1 do esquema 3, protege-se selectivamente o grupo hidroxilo principal com um grupo protector adequado. Por exemplo, é possível introduzir um grupo tritilo (Pg3 = Tr) por tratamento do intermediário (IlI-a) com clorotrifenilmetano na presença de uma base, tal como piridina, num solvente, tal como tolueno, tetra-hidrofurano ou diclorometano, a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e a temperatura ambiente. Exemplos suplementares de tais grupos protectores e condições experimentais são conhecidos pelos 26 especialistas na matéria e encontram-se descritos por T. W.

Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991. No passo 2 do esquema 3, os grupos hidroxilo secundários podem ser protegidos pelos grupos protectores adequados. Por exemplo, é possível introduzir grupos benzilo (Pg4 representa Bn) por tratamento do intermediário (IlI-b) com brometo de benzilo ou cloreto de benzilo na presença de hidreto de sódio, hidreto de potássio, terc-butóxido de potássio, num solvente, tal como tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou N,N-dimetilformamida, a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e cerca de 80°C. É possível introduzir grupos acetilo ou benzoílo (Pg4 = Ac ou Bz) por tratamento do intermediário (ΙΙΙ-b) com cloreto de acetilo, brometo de acetilo ou anidrido acético ou cloreto de benzoílo ou anidrido benzóico, na presença de uma base, tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina ou 4-(dimetilamino)-piridina, num solvente, tal como tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou diclorometano, a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e cerca de 80 °C.

No passo 3 do esquema 3, efectua-se a desprotecção do grupo hidroxilo principal para se obter o intermediário (IlI-d) . No caso de o símbolo Pg3 representar Tr, então trata-se o intermediário (III-c) na presença de um ácido, tal como ácido para-tolueno-sulfónico, num solvente alcoólico, tal como metanol, a uma temperatura compreendida entre -20°C e a temperatura ambiente para se obter o intermediário (ΙΙΙ-d). Também é possível utilizar co-solventes, tais como clorofórmio. 27

No passo 4 do esquema 3, introduz-se um grupo hidroximetileno através de um processo semelhante ao processo já descrito no esquema 1 (passo 1) e no esquema 2 (passos 4 e 5) . Também é possível utilizar neste passo outras fontes de formaldeído, tais como paraformaldeído num solvente tal como etanol, a uma temperatura compreendida entre a temperatura ambiente e cerca de 70°C, na presença de um alcóxido de um metal alcalino. No caso de o símbolo Pg4 representar Bn, então este passo proporciona o intermediário (IlI-e) e no caso de o símbolo Pg4 representar Ac ou Bz, então este passo proporciona o intermediário (IlI-f).

No passo 5 do esquema 3, trata-se o intermediário (IlI-e) com um ácido, tal como ácido trifluoroacético ou com uma resina acídica, num solvente, tal como diclorometano, a uma temperatura compreendida entre cerca de -10° e a temperatura ambiente para se obter o intermediário (IlI-g).

No passo 6 do esquema 3, remove-se então os grupos protectores restantes (Pg4) , utilizando processos químicos adequados para os grupos protectores particulares. Por exemplo, os grupos protectores benzilo podem ser removidos por tratamento com ácido fórmico na presença de paládio (negro-de-Pd) num solvente prótico (v.g., etanol/THF), à temperatura ambiente para se obter o produto final (A) .

No passo 7 do esquema 3, trata-se o intermediário (ΙΙΙ-f) com um ácido, tal como ácido trifluoroacético ou com uma resina acídica, num solvente, tal como diclorometano, a uma temperatura compreendida entre cerca de -10°C e a temperatura ambiente para se obter o produto final (A). 28

Um outro esquema alternativo para a síntese do produto (A) encontra-se ilustrado no esquema 4, a seguir descrito. 28

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*0 flò*F OH {ÍV-e) Aí - ΗίΓ Ύ ΌΗ ÒH flV-tò hct γ 'όη OH (A;

Esquema 4

No passo 1 do esquema 4, trata-se o intermediário (IlI-a) com o cloreto de arilsulfonilo adequado, R4SO2CI, ou com o anidrido arilsulf ónico, R4S (0) 20S (0) 2R4 (em que o símbolo R4 representa um grupo arilo facultativamente substituído, tal como nos cloretos de arilsulfonilo, cloreto de 4-metil-benzeno-sulfonilo, cloreto de 4-nitro-benzeno-sulfonilo, cloreto de 4-fluoro-benzeno-sulfonilo, cloreto de 2,6-dicloro-benzeno-sulfonilo, cloreto de 4-fluoro-2-metil-benzeno-sulfonilo e cloreto de 2,4,6-tri-cloro-benzeno-sulfonilo, e no anidrido arilsulfónico, anidrido p-tolueno-sulfónico), na presença de uma base, tal como piridina, trietilamina, N,N-diisopropiletilamina, num solvente, tal como tetra-hidrofurano, 2-metiltetra-hidrofurano, a uma temperatura compreendida entre cerca de -20°C e a temperatura ambiente. É possível utilizar alguns ácidos de Lewis, tais como brometo de zinco (II), como aditivos. 29

No passo 2 do esquema 4, submete-se o intermediário (IV-a) a uma oxidação de tipo Kornblum (veja-se, Kornblum, N., et al., Journal of The American Chemical Society, 81, 4113 (1959)) para se obter o aldeído correspondente, o qual pode existir em equilíbrio com o correspondente hidrato e/ou forma semi-acetal. Por exemplo, trata-se o intermediário (IV-a) na presença de uma base, tal como piridina, 2,6-lutidina, 2,4,6-colidina, N,N-diisopropil-etilamina, 4-(dimetilamino)-piridina, num solvente, tal como sulfóxido de dimetilo, a uma temperatura compreendida entre a temperatura ambiente e cerca de 150°C. O intermediário aldeído obtido é então submetido às condições de aldol/Cannizzaro descritas no passo 1 (esquema 1) e passo 5 (esquema 2) para se obter o intermediário (IV-b).

No passo 3 do esquema 4, trata-se o intermediário (IV-b) com um ácido, tal como ácido trifluoroacético, ou com uma resina acídica, num solvente, tal como diclorometano, a uma temperatura compreendida entre cerca de -10°C e a temperatura ambiente para se obter o produto final (A).

No caso de o símbolo R2 representar alcinilo (C2-C4) , então o processo pode ser efectuado utilizando o esquema 5, em que o símbolo R6 representa H ou alquilo (C1-C2) · 30 OPíf QRg (S-g> ir (V*a)

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Esquema 5

No passo 1 do esquema 5, o qual proporciona o intermediário (V-i), o passo de adição do composto organo-metálico é efectuado de um modo idêntico ao descrito no passo 6 do esquema 1, utilizando o reagente organo-metálico 31 proveniente do composto (V-a), em que o símbolo Pg5 representa um grupo protector adequado para o grupo hidroxilo. Por exemplo, o símbolo Pg5 pode representar um grupo terc-butildimetilsililo (TBS) (veja-se o documento US 2007/0054867 para a preparação, por exemplo, de {4 — [ (5 — bromo-2-cloro-fenil)-metil]-fenoxi}-terc-butil-dimetil-silano).

No passo 2 do esquema 5, quando Pg2 = PMB, trata-se o intermediário (V-i) com um ácido, tal como ácido trifluoroacético, ácido metano-sulfónico ou uma resina acídica, na presença de anisole, num solvente, tal como diclorometano, a uma temperatura compreendida entre cerca de -10°C e a temperatura ambiente, para se obter o intermediário (V-j).

No passo 3 do esquema 5, é possível remover os grupos protectores (Pgs) e (Pg1) para se obter o composto (V-k). De um modo típico, (Pgs) representa TBS e Pg1 representa Bn. Nestas circunstâncias, remove-se os grupos protectores por tratamento sequencial do composto (V-j) 1) com fluoreto de tetrabutil-amónio num solvente, tal como tetra- hidrofurano ou 2-metiltetra-hidrofurano, a uma temperatura compreendida entre 0°C e cerca de 40°C, e 2) por tratamento com ácido fórmico na presença de paládio (negro-de-Pd) num solvente prótico (v.g., etanol/THF), à temperatura ambiente. Nesta sequência, a ordem das 2 reacções pode ser permutada.

No passo 4 do esquema 5, trata-se o intermediário (V-k) com N,N-bis-(trifluorometano-sulfonil)-anilina na presença de uma base, tal como trietilamina ou 4-dimetilaminopiridina, num solvente, tal como diclorometano 32 ou 1,2-dicloroetano, a uma temperatura compreendida entre 0°C e cerca de 40°C, para se produzir o intermediário (V-I).

No passo 5 do esquema 5, submete-se o intermediário (V-I) a uma reacção do tipo Sonogashira (ver, Sonogashira, K., Coupling Reactions Between sp2 and sp Carbon Centers. In Comprehensive Organic Synthesis (eds. Trost, B. M., Fleming, I.), 3, 521-549, (Pergamon, Oxford, 1991)). Por exemplo, trata-se o composto (V-I) com o alcino terminal adequado, HCCR6, na presença de iodeto de cobre (I), de um catalisador tal como dicloreto de bis-(trifenilfosfina)-paládio ou tetraquis-(trifenilfosfina)-paládio(0), na presença de uma base, tal como trietilamina ou N,N-diisopropiletilamina, num solvente, tal como N,N-dimetilformamida, a uma temperatura compreendida entre a temperatura ambiente e cerca de 120°C para produzir os produtos (A) e (B) desejados. No caso de o símbolo R6 representar H, então é mais conveniente utilizar trimetil-sililacetileno. Neste caso, o material impuro proveniente da reacção descrita antes é tratado com uma base, tal como carbonato de potássio, num solvente alcoólico, tal como MeOH, à temperatura ambiente para se produzir, após processamento convencional conhecido pelos especialistas na matéria, os produtos (A) e (B) desejados, em que o símbolo R2 representa -CCH.

Será evidente para um especialista na matéria que os processos químicos descritos antes nos esquemas 1 a 5 representam diferentes modos de obtenção do intermediário (V-k) . Por sua vez, em particular quando o símbolo R1 representa Cl, o composto (V-k) pode ser tratado com um agente de alquilação de eleição, sob condições convencionais, para efectuar a alquilação selectiva do 33 grupo fenol para se obter o composto (A) (e o composto (B) nos esquemas 1 e 5), em que o símbolo R2 representa alcoxi (Ci-C4) .

Os compostos da presente invenção contêm centros assimétricos ou quirais, pelo que existem sob formas estereoisoméricas diferentes. Salvo quando especificado de outro modo, pretende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da presente invenção, bem como as suas misturas, incluindo misturas racémicas, façam parte da presente invenção. Além do mais, a presente invenção compreende todos os isómeros geométricos e de posição. Por exemplo, se um composto da presente invenção incorporar uma ligação dupla ou um anel fundido, tanto as formas cis e trans como as suas misturas estão abrangidas pelo âmbito da invenção.

As misturas diastereoméricas podem ser separadas nos seus diastereisómeros individuais com base nas suas diferenças físico-químicas por métodos bem conhecidos pelos especialistas na matéria, tais como por cromatografia e/ou cristalização fraccional, destilação ou sublimação. Os enantiómeros podem ser separados por meio da conversão da mistura enantiomérica numa mistura diastereomérica por reacção com um composto opticamente activo adequado (v.g., auxiliar quiral, tal como um álcool quiral ou um cloreto de um ácido de Mosher), separação dos diastereoisómeros e conversão (v.g., por hidrólise) dos diastereoisómeros individuais nos correspondentes enantiómeros puros. Além disso, alguns dos compostos da presente invenção podem ser atropisómeros (v.g., biarilos substituídos), sendo considerados parte da presente invenção. Os enantiómeros também podem ser separados por meio da utilização de uma 34 coluna de HPLC quiral (cromatografia líquida de elevado rendimento).

Também é possível que os intermediários e os compostos da presente invenção possam existir em diferentes formas tautoméricas, sendo todas essas formas abrangidas pelo âmbito da invenção. 0 termo "tautómero" designa isómeros estruturais de energias diferentes que são interconvertíveis por meio de uma barreira de energia reduzida. Por exemplo, como tautómeros de protão (também conhecidos como tautómeros prototrópicos) refere-se as interconversões por meio da migração de um protão, tal como isomerizações ceto-enol e imina-enamina. Um exemplo específico de um tautómero de protão é o radical imidazole, no qual o protão pode migrar entre os dois átomos de azoto do anel. Os tautómeros de valência compreendem interconversões por reorganização de alguns dos electrões de ligação. 0 equilíbrio entre uma forma fechada e aberta de alguns intermediários (e/ou misturas de intermediários) é reminiscente do processo de mutarotação que envolve aldoses, o qual é conhecido pelos especialistas na matéria. A presente invenção também abrange compostos isotopicamente marcados da presente invenção, os quais são idênticos aos aqui apresentados, excepto pelo facto de um ou vários átomos terem sido substituídos por um átomo que possui um número de massa atómica ou um número de massa diferente do número de massa atómica ou um número de massa habitualmente encontrado na natureza. Como exemplos de isótopos que é possível incorporar nos compostos da invenção refere-se os isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio, fósforo, enxofre, flúor, iodo e cloro, 35 tais como 2H, 3H, 41C, 13C, 14C, 13N, 15N, 150, 170, 180, 31P, 32P, 35S, 18F, 123I, 1251 e 36C1, respectivamente. Há determinados compostos isotopicamente marcados da presente invenção (v.g., os marcados com 3H e 14C) que são úteis em ensaios de distribuição de compostos e/ou substratos em tecidos. Os isótopos tritiados (isto e, H) e isótopos de carbono 14 (isto é, 14C) são particularmente preferidos devido à sua facilidade de preparação e de detecção. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, tais como deutério (isto é, 2H) pode proporcionar determinadas vantagens terapêuticas provenientes de uma estabilidade metabólica superior (v.g., período de semi-vida in vivo aumentado ou requisitos de dosagem reduzidos) e assim podem ser preparados em alguns casos. Os isótopos de emissão de positrões, tais como 150, 13N, nC e 18F, são úteis para estudos de tomografia de emissão de positrões (PET) para examinar a ocupação pelo substrato. Os compostos isotopicamente marcados podem ser normalmente preparados por procedimentos análogos aos aqui descritos nos esquemas e/ou nos exemplos seguintes, substituindo um reagente não marcado isotopicamente por uma reagente marcado isotopicamente.

Os compostos da presente invenção são úteis para o tratamento de doenças, patologias e/ou distúrbios modulados pela inibição dos transportadores de sódio-glicose (em particular de SGLT2); assim, constitui uma outra variante da presente invenção uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Os compostos da presente invenção (incluindo as composições e os processos 36 aqui utilizados) também podem ser utilizados para a produção de um medicamento para as aplicações terapêuticas aqui descritas.

Uma formulação tipica é preparada por mistura de um composto da presente invenção e um veiculo, diluente ou excipiente. Os veículos, diluentes e excipientes adequados são bem conhecidos pelos especialistas na matéria e compreendem materiais tais como hidratos de carbono, ceras, polímeros solúveis e/ou que incham em áqua, materiais hidrofílicos ou hidrofóbicos, qelatina, óleos, solventes, água e semelhantes. 0 veículo, diluente ou excipiente particular utilizado irá depender dos meios e do propósito para os quais o composto da presente invenção para o qual será aplicado. Os solventes são normalmente seleccionados com base em solventes considerados pelos especialistas na matéria como seguros (GRAS) para administração a um mamífero. De um modo geral, como solventes seguros refere-se solventes aquosos não tóxicos, tais como água e outros solventes não tóxicos que sejam solúveis ou miscíveis em água. Como solventes aquosos adequados refere-se água, etanol, polietileno-glicóis (v.g., PEG400, PEG300), etc. e suas misturas. As formulações também podem compreender um ou vários tampões, agentes de estabilização, tensioactivos, agentes humectantes, agentes lubrificantes, emulsionantes, agentes de suspensão, conservantes, anti-oxidantes, agentes de opaciamento, agentes de deslizamento, auxiliares de processamento, corantes, edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes adoçantes e outros aditivos conhecidos, para proporcionar uma apresentação elegante do fármaco (isto é, um composto da presente invenção ou uma 37 sua composição farmacêutica) ou auxiliar na produção de um produto farmacêutico (isto é, um medicamento).

As formulações podem ser preparadas utilizando procedimentos de dissolução e de mistura convencionais. Por exemplo, a substância de fármaco a granel (isto é, o composto da presente invenção ou uma forma estabilizada do composto (v.g., um complexo com um derivado de ciclodextrina ou outro agente de formação de complexos conhecido)) é dissolvida num solvente adequado na presença de um ou vários dos excipientes descritos antes. De um modo típico, o composto da presente invenção é formulado em formas de dosagem farmacêuticas para proporcionar uma dosagem facilmente controlada do fármaco e para proporcionar ao paciente um produto elegante e facilmente manuseável.

As composições farmacêuticas também compreendem solvatos e hidratos dos compostos de fórmula estrutural (I). 0 termo "solvato" designa um complexo molecular de um composto representado pela fórmula estrutural (I) (incluindo os seus sais farmaceuticamente aceitáveis) com uma ou várias moléculas de solvente. Tais moléculas de solvente são as normalmente utilizadas na especialidade farmacêutica, sobre as quais se sabe serem inócuas para o recipiente, v.g., água, etanol, etileno-glicol e semelhantes. 0 termo ''hidrato" designa o complexo em que a molécula de solvente é a água. Os solvatos e/ou hidratos existem preferencialmente sob uma forma cristalina. E possível utilizar outros solventes como solvatos intermediários para a preparação de solvatos mais desejáveis, tais como metanol, éter metil-terc-butílico, acetato de etilo, acetato de metilo, (S)-propileno-glicol, 38 (R)-propileno-glicol, 1,4-butino-diol e semelhantes. as formas cristalinas também podem existir como complexos com outras moléculas pequenas inócuas, tais como L-fenilalanina, L-prolina, ácido L-piroglutâmico e semelhantes, como co-cristais ou solvatos ou hidratos do material co-cristalino. Os solvatos, hidratos e compostos co-cristalinos podem ser preparados utilizando os procedimentos descritos na publicação de patente de invenção PCT n° WO 08/002824, aqui incorporada por referência, ou por meio de outros procedimentos bem conhecidos pelos especialistas na matéria. A composição farmacêutica (ou formulação) para aplicação pode ser embalada de diversos modos, em função do método utilizado para a administração do fármaco. De um modo geral, um artigo para distribuição compreende um recipiente que contém a formulação farmacêutica numa forma adequada. Como recipientes adequados refere-se os conhecidos pelos especialistas na matéria, os quais compreendem materiais tais como garrafas (de plástico e de vidro), saquetas, ampolas, sacos de plástico, cilindros metálicos e semelhantes. O recipiente também pode compreender uma montagem inviolável para evitar um acesso indiscreto ao conteúdo da embalagem. Além disso, o recipiente possui um marcador que descreve o conteúdo do recipiente. O marcador também compreende informações adequadas. A presente invenção proporciona ainda a utilização dos compostos da presente invenção num método para o tratamento de doenças, patologias e/ou distúrbios modulados pela inibição dos transportadores de sódio-glicose num animal, método esse que compreende a administração a um animal que 39 necessite de tal tratamento de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção ou de uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. 0 método é particularmente útil para o tratamento de doenças, patologias e/ou distúrbios para os quais seja benéfica a inibição de SGLT2.

De acordo com um aspecto, a presente invenção proporciona o tratamento de obesidade e de distúrbios associados à obesidade (v.g., excesso de peso, aumento de peso ou manutenção do peso).

De um modo geral, a obesidade e o excesso de peso são definidos pelo índice de massa corporal (IMC), o qual está correlacionado com a gordura total corporal e estima o risco relativo de doença. 0 IMC é calculado pelo peso em quilogramas a dividir pela altura em metros quadrados (kg/m2) . Tipicamente, o excesso de peso é definido por um IMC compreendido entre 25 e 29,9 kg/m2 e a obesidade é tipicamente definida por um IMC de 30 kg/m2. Veja-se, v.g., National Heart, Lung, and Blood Institute, Clinicai Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, NIH publication no. 98-4083 (1998).

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona o tratamento ou o retardamento da progressão ou do início de diabetes ou de distúrbios associados à diabetes, incluindo diabetes de tipo 1 (diabetes mellitus dependente de insulina, também designado por "IDDM") e de tipo 2 (diabetes mellitus não dependente de insulina, 40 também designado por "NIDDM"), tolerância deficiente à glicose, dificuldade na cicatrização, hiperinsulinemia, niveis sanguíneos elevados de ácidos gordos, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, síndrome X, níveis aumentados de lipoproteínas de elevada densidade, resistência à insulina, hiperglicemia e complicações diabéticas (tais como aterosclerose, doença coronária cardíaca, apoplexia, doença vascular periférica, nefropatia, hipertensão, neuropatia e retinopatia).

Ainda de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona o tratamento de co-morbidades de obesidade, tais como síndrome metabólica. A síndrome metabólica compreende doenças, patologias ou distúrbios tais como dislipidemia, hipertensão, resistência à insulina, diabetes (v.g.r diabetes de tipo 2), doença da artéria coronária e paragem cardíaca. Para informações mais detalhadas sobre a síndrome metabólica veja-se, v.g., Zimmet, P.Z., et al., "The Metabolic Syndrome: Perhaps an Etiologic Mystery but Far From a Myth - Where Does the International Diabetes Federation Stand?", Diabetes & Endocrinology, 7(2), (2005); e Alberti, K.G., et al., "The Metabolic Syndrome - A New Worldwide Definition", Lancet, 366, 1059-62 (2005).

De preferência, a administração dos compostos da presente invenção proporciona uma redução estatisticamente significativa (p < 0,05) pelo menos num factor de risco de uma doença cardiovascular, tal como diminuição de leptina, proteína C-reactiva (CRP) e/ou colesterol no plasma, em comparação com um veículo de controlo que não contém fármaco. A administração de compostos da presente invenção também pode proporcionar uma redução estatisticamente significativa (p < 0,05) nos níveis de glicose no soro. 41

Para um ser humano adulto normal que possui um peso corporal de cerca de 100 kg, uma dosagem compreendida entre cerca de 0,001 mg e cerca de 10 mg por quilograma de peso corporal é tipicamente suficiente, de preferência entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 5,0 mg/kg e mais preferencialmente entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 1 mg/kg. No entanto, poderá ser necessária alguma modificação no intervalo de dosagem geral em função da idade e do peso do sujeito que se pretende tratar, da via de administração pretendida, do composto particular que se pretende administrar e semelhantes. A determinação dos intervalos de dosagem e das dosagens óptimas para um paciente particular faz parte das aptidões de um especialista na matéria com o auxilio da presente memória descritiva. Faz-se observar ainda que os compostos da presente invenção podem ser utilizados sob a forma de formulações de libertação prolongada e de libertação retardada, formas essas que são bem conhecidas pelos especialistas na matéria.

Os compostos da presente invenção também podem ser utilizados em conjunto com outros agentes farmacêuticos para o tratamento de doenças, patologias e/ou distúrbios aqui descritos. Assim sendo, a invenção também proporciona métodos de tratamento que compreendem a administração dos compostos da presente invenção em conjunto com outros agentes farmacêuticos. Como agentes farmacêuticos adequados que é possível utilizar em combinação com os compostos da presente invenção refere-se agentes anti-obesidade (incluindo supressores do apetite), agentes anti-diabéticos, agentes anti-hiperglicémicos, agentes para a redução de lípidos, agentes anti-inflamatórios e agentes anti-hipertensivos. 42

Como agentes anti-obesidade adequados refere-se antagonistas de canabinóide-1 (CB-1) (tais como rimonabant), inibidores de Ιΐβ-hidroxi-esteróide-desidrogenase-1 (Ιΐβ-HSD tipo 1), inibidor de estearoí1-CoA desaturase-1 (SCD-1), agonistas de MCR-4, agonistas de colecistoquinina-A (CCK-A), inibidores da reabsorção de monoamina (tais como sibutramina), agentes simpatomimét icos, agonistas β3-3ά^ηέ^ίοο3, agonistas de dopamina (tais como bromocriptina), análogos da hormona estimuladora de melanócitos, agonistas de 5HT2c, antagonistas da hormona concentradora de melanina, leptina (a proteína OB), análogos de leptina, agonistas de leptina, antagonistas de galanina, inibidores de lipase (tais como tetra-hidrolipstatina, isto é, orlistat), agentes anoréticos (tais como um agonista de bombesina) , antagonistas do neuropéptido-Y (v.g.r antagonistas NPY Y5), PYY3-36 (incluindo os seus análogos), agentes tiromiméticos, desidroepiandrosterona ou um seu análogo, agonistas ou antagonistas de glucocorticóides, antagonistas de orexina, agonsitas do péptido 1 de tipo glucagona, factores neurotróficos ciliares (tais como Axokine™, comercializado por Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY e

Procter & Gamble Company, Cincinnati, OH) , inibidores da proteína associada a agouti humana (AGRP), antagonistas de grelina, antagonistas ou agonistas inversos de histamina 3, agonistas de neuromedina U, inibidores de MTP/ApoB (v.g., inibidores de MTP selectivos para o intestino, tais como dirlotapido), antagonista opióide, antagonista de orexina e semelhantes.

Como agentes anti-obesidade preferidos utilizáveis em combinação de acordo com aspectos da presente invenção 43

refere-se antagonistas de CB-1 (v.g., rimonabant, taranabant, surinabant, otenabant, SLV319 (CAS n° 464213-10-3) e AVE1625 (CAS n° . 358970-97-5)), inibidores de MTP selectivos para o intestino {v.g., dirlotapida, mitratapida e implitapida, R56918 (CAS n° 403987) e CAS n° 913541-47-6), agonistas de CCKa {v.g., N-benzil-2-[4-(lH-indol-3-ilmetil)-5-oxo-l-fenil-4,5-di-hidro-2,3,6,10b-tetraaza-benzo[e]azuleno-6-il]-N-isopropil-acetamida, descrita na publicação da patente de invenção PCT n° WO 2005/116034 ou na publicação da patente de invenção norte-americana n° 2005-0267100 Al), agonistas de 5HT2c {v.g., lorcaserina), agonista de MCR4 (e.g., os compostos descritos no documento US 6 818 658), inibidor de lipase {v.g., Cetilistat) , PYY3-36 (tal como aqui utilizado o termo "PYY3_36" inclui análogos, tais como PYY3-36 pegilado, v.g., os descritos na publicação de patente de invenção norte-americana n° 2006/0178501), antagonistas opióides {v.g., naltrexona), oleoí1-estrona (CAS n° 180003-17-2), obinepitida (TM30338), pramlintida (Symlin®), tesofensina (NS2330), leptina, liraglutida, bromocriptina, orlistat, exenatida (Byetta®), AOD-9604 (CAS n° 221231-10-3) e sibutramina. De preferência, os compostos da presente invenção e as terapias de combinação são administrados em conjunto com exercício e uma dieta adequada.

Como agentes anti-diabéticos adequados refere-se um inibidor de acetil-CoA carboxilase-2 (ACC-2), um inibidor de fosfodiesterase (PDE)-IO, um inibidor de diacilglicerol-aciltransferase (DGAT) 1 ou 2, uma sulfonilureia {v.g., aceto-hexamida, clorpropamida, diabinese, glibenclamida, glipizida, gliburida, glimepirida, gliclazida, glipentida, gliquidona, glisolamida, tolazamida e tolbutamida), uma 44 meglitinida, um inibidor de α-amilase (v.g., tendamistat, trestatina e AL-3688), um inibidor de a-glucósido-hidrolase (v.g., acarbose), um inibidor de α-glucosidase (v.g., adiposina, camiglibose, emiglitato, miglitol, voglibose, pradimicina-Q e salbostatina), um agonista PPARy (v.g., balaglitazona, ciglitazona, darglitazona, englitazona, isaglitazona, pioglitazona, rosiglitazona e troglitazona), um agonista PPAR α/γ (v.g., CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 e SB-219994), uma biguanida (v.g., metformina), um agonista do péptido 1 de tipo glucagona (GLP-1) (v.g., exendina-3 e exendina-4), um inibidor de tirosina-fosfatase-ΙΒ proteica (PTP-1 B) (v.g., trodusquemina, extracto hirtiosal e compostos descritos por Zhang, S., et al., Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)), inibidor de SIRT-1 (v.g., reservatrol), um inibidor de dipeptidil-peptidease IV (DPP-IV) (v.g., sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina), um secretogogo de insulina, um inibidor da oxidação de ácidos gordos, um antagonista de A2, um inibidor de c-jun-terminal amino-cinase (JNK), insulina, um mimético de insulina, um inibidor de glicogénio-fosforilase, um agonista do receptor VPAC2 e um activador de glucocinase. Como agentes anti-diabéticos preferidos refere-se metformina e inibidores de DPP-IV (v.g., sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina).

Como agentes anti-inflamatórios adequados refere-se as acções preventivas e de tratamento de infecções do tracto genital/tracto urinário. Como exemplos de agentes refere-se arando vermelho (isto é, Vaccinium macrocarpon) e derivados de arando vermelho, tais como sumo de arando vermelho, extractos de arando vermelho ou flavonóis de arando 45 vermelho. Os extractos de arando vermelho podem compreender um ou vários flavonóis (isto é, antocianinas e proantocianidinas) ou um composto flavonol de arando vermelho purificado, incluindo miricetina-3-β- xilopiranósido, quercetina-3^-glucósido, quercetina-3-α-arabinopiranósido, 3’-metoxiquercetina-3-a-xilopiranósido, quercetina-3-0-(6"-p-coumaroí1)-β-galactósido, quercetina-3-0-(6"-benzoíl)-β-galactósido e/ou quercetina-3-a-arabino-furanósido.

As variantes da presente invenção são ilustradas pelos por exemplos seguintes. No entanto, faz-se observar que as variantes da invenção não são limitadas pelos pormenores específicos destes exemplos, uma vez que são conhecidas outras variações, ou então serão aparentes à luz da presente memória descritiva, para um especialista na matéria.

EXEMPLOS

Salvo quando especificado de outro modo, os materiais de partida encontram-se normalmente disponíveis a partir de fontes comerciais, tais como Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, WI), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH) , Acros Organics (Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, England), Tyger Scientific (Princeton, NJ), AstraZeneca Pharmaceuticals (London, England) e Accela ChemBio (San Diego, CA).

Procedimentos experimentais gerais

Os espectros de NMR foram registados num dispositivo Varian Unity™ 400 (comercializado por Varian Inc., Paio Alto, CA) à temperatura ambiente e a 400 MHz para o protão. 46

Os desvios químicos são expressos em partes por milhão (delta) em relação ao solvente residual como referência interna. As formas do pico são referidas do modo seguinte: s, singuleto; d, dupleto; dd, dupleto de dupletos; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; slr ou s lr, singuleto largo; 2s, dois singuletos; d lr, dupleto largo. Os espectros de massa de ionização por electropulverização (ES) foram obtidos num instrumento Waters™ ZMD (veículo gasoso: azoto; solvente A: água/0,01% de ácido fórmico, solvente B: acetonitrilo/0,005% de ácido fórmico; comercializado por Waters Corp., Milford, MA). Os espectros de massa de elevada resolução (HRMS) foram obtidos num instrumento Agilent™, modelo 6210, tempo de voo. No caso de ser descrita a intensidade de iões que contêm um único átomo de cloro ou de bromo, observou-se uma proporção de intensidade esperada (aproximadamente 3:1 para iões que contêm 35C1/37C1 e 1:1 para iões que contêm 79Br/81Br) , sendo apenas apresentada a intensidade do ião com menor massa. Em alguns casos apenas são apresentados os picos de 3H NMR representativos. A cromatografia em coluna foi efectuada em colunas de vidro de gel de sílica Baker™ (40 mícron; J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) ou gel de sílica 50 (EM Sciences™, Gibbstown, NJ) ou em colunas rápidas 40 Biotage™ (ISC, Inc., Shelton, CT). A MPLC (cromatografia líquida de médio rendimento) foi efectuada por meio da utilização de um sistema de purificação Biotage™ SP ou Combiflash® Companion® de Teledyne™ Isco™; utilizou-se cartuchos Biotage™ SNAP sílica KPsil ou Redisep Rf (proveniente de Teledyne™ Isco™), sob uma pressão reduzida de azoto. A HPLC (cromatografia líquida de elevado rendimento) foi efectuada 47 utilizando HPLC preparatória Shimadzu™ 10A LC-UV ou Agilent™ 1100.

Excepto quando salientado de outro modo, todas as reacções foram efectuada sob uma atmosfera inerte de azoto gasoso, utilizando solventes anidros. Além disso, salvo quando indicado de outro modo, todas as reacções foram efectuadas à temperatura ambiente (~23°C).

Durante a realização de TLC (cromatografia de camada fina), Rf é definido como a proporção entre a distância percorrida pelo composto a dividir pela distância percorrida pelo eluente. Rt (tempo de retenção).

Materiais de partida

De um modo geral, qualquer um dos seguintes materiais de partida pode ser preparado pelos procedimentos descritos nos esquemas 7 ou 8 da publicação de patente de invenção norte-americana n° 2008/0132563, ou, em alternativa, nos esquemas 2, 3 ou 8 da publicação de patente de invenção norte-americana n° 2007/0259821, De um modo mais especifico, os seguintes materiais de partida utilizados no exemplos subsequentes podem ser preparados utilizando os procedimentos descritos nas referências correspondentes ou adquiridos a partir do correspondente fabricante. O 4-bromo-2-(4-metoxi-benzil)-1-metil-benzeno pode ser preparado por meio dos procedimentos descritos no exemplo 8 da publicação de patente de invenção PCT n° WO 01/027128, O 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-1-metil-benzeno pode ser preparado por meio dos procedimentos descritos no exemplo 17 de preparação do documento US 2008/0132563, O 4-bromo-l-cloro-2-(4-metoxi-benzil)-benzeno pode ser preparado por meio dos procedimentos descritos no exemplo 48 19 de preparação do documento US 2008/0132563 ou no exemplo V do documento US 2007/0259821, O 4-bromo-l-cloro-2-(4-etoxi-benzil)-benzeno pode ser adquirido a Shanghai Haoyuan Chemexpress Co., Ltd., Shanghai, People's Republic of China. O 4-bromo-2-(4-metoxi-benzil)-benzonitrilo pode ser preparado por meio dos procedimentos descritos no exemplo XXII do documento US 2007/0259821,

Os materiais de partida seguintes foram preparados conforme a seguir se descreve.

Preparação de 4-bromo-l-fluoro-2-(4-metoxi-benzil)-benzeno Adicionou-se, gota a gota, cloreto de oxalilo (11,0 mL, 126 mmol) a uma suspensão bem agitada de ácido 5-bromo-2-fluoro-benzóico (25,0 g, 114 mmol) em diclorometano (150 mL) e N,N-dimetilformamida (1,5 mL) a 0°C. Deixou-se aquecer gradualmente a mistura resultante até à temperatura ambiente. Decorridas 18 horas, verificou-se que o sólido tinha sido dissolvido. Concentrou-se a solução cor-de-laranja claro resultante sob pressão reduzida tratou-se duas vezes com éter dietílico para se obter cloreto de 5-bromo-2-fluoro-benzoilo (27,0 g, rendimento quantitativo) com o aspecto de um óleo cor-de-laranja pálido. A uma solução de cloreto de 5-bromo-2-fluoro-benzoilo (27,0 g, 114 mmol) e anisole (12,9 g, 13,0 mL, 119 mmol) em diclorometano (150 mL) , a 0°C, adicionou-se progressivamente tricloreto de alumínio (16,2 g, 119 mmol), mantendo a temperatura interna inferior a 10°C. Depois de se agitar durante 4 horas a 0°C, verteu-se a solução sobre gelo esmagado e agitou-se a mistura resultante. Decorridos 30 minutos, removeu-se a fase orgânica e extraiu-se a fase 49 aquosa duas vezes com diclorometano. Lavou-se as fases orgânicas combinadas uma vez com uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M, uma vez com uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1 M e uma vez com salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Deixou-se recristalizar o resíduo resultante a partir de etanol para se obter (5-bromo-2-fluoro-fenil)-(4-metoxi-fenil)-metanona (22,5 g, 64%) com o aspecto de um sólido branco. A uma solução bem agitada de (5-bromo-2-fluoro-fenil)- (4-metoxi-fenil )-metanona (22,5 g, 72, 80 mmol) e trietilsilano (27,9 mL, 20,3 175, 0 mmol) em diclorometano (20 mL) e acetonitrilo (60 mL) , a 0°C, adicionou-se, gota a gota, eterato de trifluoreto de boro (32,0 mL, 36,2 g, 255,0 mmol). Adicionou-se o eterato de trifluoreto de boro a uma velocidade tal que a temperatura interna não excedesse 20°C. Aqueceu-se a solução de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se de um dia para o outro. Decorrido um total de 18 horas, adicionou-se uma solução de hidróxido de potássio (5,0 g) em água (15,0 mL) e agitou-se a mistura resultante durante 2 horas. Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa duas vezes com éter dietílico. Lavou-se as fases orgânicas combinadas uma vez com uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1 M e uma vez com salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Durante a adição de etanol ao resíduo resultante, formou-se um sólido branco. Recolheu-se o sólido e secou-se sob uma pressão hipobárica elevada para se obter 4-bromo-l-fluoro-2-(4-metoxi-benzil)-benzeno (20,1 g, rendimento de 93%) com o aspecto de um sólido branco. 50 ΧΗ NMR ( 400 ΜΗζ, clorofórmio-d) δ p.p.m. 3,79 (s, 3 Η), 3,89 (s, 2 Η), 6,85 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 6,91 (t, 1 H), 7,12 (d, J=8,8 Hz, 2 H), 7,21-7,31 (m, 2 H).

Preparação do material de partida 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-benzonitrilo

Adicionou-se lentamente uma solução de (4-etoxi-fenil)-acetato de etilo (2,68 g, 12,87 mmol), 4-bromo-2-fluoro-benzonitrilo (2,74 g, 13,70 mmol) em N-metilpirrolidona (4 mL) a uma suspensão de terc-butóxido de potássio (3,14 g, 27,98 mmol) em N-metilpirrolidona (13 mL) , a 0°C. Durante a adição, a solução ficou vermelho escuro. Agitou-se a mistura vermelha escura a 0°C durante 30 minutos e depois à temperatura ambiente durante 1 hora. Adicionou-se metanol (10 mL) e uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1 M (13,7 mL) e agitou-se a mistura de um dia para o outro à temperatura ambiente. Ajustou-se o valor de pH até ~ 4 com ácido clorídrico (solução aquosa 1 M) e extraiu-se a mistura com acetato de etilo (50 mL x 4). Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura. Adicionou-se N,N-dimetilformamida (5 mL) e carbonato de potássio (7 g) , aqueceu-se a mistura até 100°C durante 1 hora e arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Adicionou-se água e extraiu-se a mistura com acetato de etilo (60 mL x 3) . Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura. Purificou-se o material impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 14% de acetato de etilo em heptano) , para se obter 2,26 g de produto impuro (que continha o 51 produto desejado e um outro produto). Deixou-se precipitar o produto impuro com metanol, proporcionando 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-benzonitrilo (1,2 g, que continha 5% do outro composto, com picos de NMR a 4,15 p.p.m. quarteto e 1,5 p.p.m. tripleto).

ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,48-7,38 (m, 3 H) , 7, 13 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , OD o (s, 2H), 4, 03 (q, J = 7,2 Hz, 2H), +j \—1 1-1 N K CM II 3H) .

Preparação do material de partida 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-1-fluoro-benzeno A uma solução de 4-bromo-l-fluoro-2-(4-metoxi-benzil)-benzeno (4,2 g, 14,2 mmol) em diclorometano (20 mL), a 0°C, adicionou-se, lentamente e gota a gota, uma solução 1 M de tribrometo de boro em diclorometano (15,7 mL, 16,0 mmol), ao longo de 10 minutos. Depois de se completar a adição de tribrometo de boro, deixou-se aquecer gradualmente a mistura de reacção até à temperatura ambiente. Decorridas 4 horas, arrefeceu-se a mistura de reacção até 0°C e extinguiu-se por meio de adição lenta de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N (20 mL) . Agitou-se a mistura de reacção durante 30 minutos e extraiu-se duas vezes com diclorometano. Secou-se as camadas orgânicas combinadas sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter um sólido cor-de-rosa claro (3,83 g, 96%) . Utilizou-se o produto impuro 4-(5-bromo-2-fluorobenzil)-fenol no passo subsequente sem mais purificação. NMR ( 400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 3,88 (s, 2 H), 4,76 (s lr, 1 H) , 6,77 (d, J= 8,2 Hz, 2 H) , 6,91 (t, 52 J= 9,1 Hz, 1 H), 7,07 (d, J=8,6 Hz, 2 H) , 7,23 (dd, J= 6,8, 2,3 Hz, 1 H), 7,26-7,31 (m, 1 H). A uma solução de 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol (6,0 g, 21,0 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (20 mL), arrefecida até 0°C, adicionou-se hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 1,02 g, 25,6 mmol) . Depois de se agitar a 0°C durante 45 minutos, adicionou-se, gota a gota, iodoetano (2,08 mL, 25,6 mmol) e deixou-se aquecer a mistura resultante até à temperatura ambiente. Decorridas 18 horas, extinguiu-se a mistura de reacção com água e extraiu-se duas vezes com acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas duas vezes com água e uma vez com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 10% de acetato de etilo em heptano, para se obter 4,6 g (rendimento de 58%) do produto desejado com o aspecto de um óleo amarelo. ΤΗ NMR (400 MHz, clorof órmio-d) δ p.p.m. 1,40 (t, J=7, 0 Hz, 3 H), 3,89 (s, 2 H) , 4,01 (q, J=6,9 Hz, 2 H) , 6,83 (d, J=8,4 Hz, 2 H), 6,91 (t, J=9,0 Hz, 1 H), 7,10 (d, J=8,8 Hz, 2 H), 7,20-7,30 (m, 2 H) .

Preparação de éster tetra-hidro-furano-3-ílico do ácido tolueno-4-sulfónico A uma solução de 3-hidroxi-tetra-hidrofurano (2,5 g, 28,0 mmol) em piridina anidra (60 mL) , à temperatura ambiente, adicionou-se cloreto de 4-tolueno-sulfonilo (6,49 g, 34,0 mmol) . Depois de se agitar a mistura de reacção durante 18 hora à temperatura ambiente, concentrou-se a 53 mistura de reacção sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 30% de acetato de etilo em heptano, para e obter 3,5 g (rendimento de 51%) do produto desejado com o aspecto de um óleo incolor. NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 2,05-2,12 (m, 2 H), 2,45 (s, 3 H), 3, 77-3,92 (m, 4 H) , 5,09-5,14 (m, 1 H), 7,35 (d, J=8,00 Hz, 2 H), 7,79 (d, 2 H).

Preparação de éster oxetano-3-ílico do ácido tolueno-4-sulfónico A uma solução de oxetano-3-ol (1,0 g, 13,0 mmol) em piridina anidra (25 mL), à temperatura ambiente, adicionou-se cloreto de 4-tolueno-sulfonilo (3,09 g, 16,2 mmol). Depois de se agitar a mistura de reacção durante 18 horas à temperatura ambiente, concentrou-se a mistura de reacção sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 30% de acetato de etilo em heptano, para se obter 1,9 g (rendimento de 62%) do produto desejado com o aspecto de um sólido branco. 2H NMR (400 MHz, clorof órmio-d) δ p.p.m. 2,46 (s, 3 H), 4,63-4,75 (m, 4 H), 5,26-5,34 (m, 1 H), 7,36 (d, J=8,00 Hz, 2 H), 7,78 (d, J=8,40 Hz, 2 H).

Preparação do material de partida 3-[4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenoxi]-tetra-hidrofurano A uma solução de 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol (1,5 g, 5,3 mmol) e carbonato de césio (2,61 g, 8,0 mmol) em N,N-dimetilformamida (15,0 mL), à temperatura ambiente, 54 adicionou-se uma solução de éster tetra-hidro-furano-3-ílico do ácido tolueno-4-sulfónico (1,94 g, 8,0 mmol) em N,N-dimetilformamida (10,0 mL) . Agitou-se então a mistura de reacção de um dia para o outro a 50°C. Decorrido um horas, arrefeceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente, diluiu-se com salmoura e extraiu-se 3 vezes com acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas duas vezes com água e uma vez com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o residuo impuro resultante por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 30% de acetato de etilo em heptano, para se obter 1,66 g (rendimento de 89%) do produto desejado com o aspecto de um óleo incolor. NMR (4 00 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 2, 09-2,24 (m, 3,86- -4, 01 (m, 6 H) , 4,86-4,91 (m, i h; 1 , 6,80 (d, z, 2 H) f 6, 91 (t, J=9 Hz, 1 H), 7,10 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 7,23 (dd, J=6,8, 2,5 Hz, 1 H), 7,26-7,31 (m, 1 H).

Preparação do material de partida 3-[4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenoxi]-oxetano A uma solução de 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol (1,1 g, 3,9 mmol) e carbonato de césio (1,91 g, 5,87 mmol) em N,N-dimetilformamida (15,0 mL), à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução de éster oxetano-3-ίlico do ácido tolueno-4-sulfónico (1,34 g, 8,0 mmol) em N,N-dimetil-formamida (10,0 mL) . Agitou-se então a mistura de reacção de um dia para o outro a 65°C. Decorrido um total de 18 horas, arrefeceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente, diluiu-se com salmoura e extraiu-se 3 vezes com acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas 55 duas vezes com água e uma vez com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 30% de acetato de etilo em heptano, para se obter 0,948 g (rendimento de 72%) do produto desejado com o aspecto de um sólido branco. ΤΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 3,88 (s, 2 H) , 4,76 (dd, J=7,22, 5,3 Hz, 2 H), 4,95 (t, J=6,6 Hz, 2 H) , 5,14-5,21 (m, 1 H), 6,63 (d, J=8,4 Hz, 2 H), 6,92 (dd, 1 H) , 7,10 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 7, 23 (dd, J= =6,6, 2,15 Hz, 1 H) , 7,26-7,31 (m, 1 H) .

Preparação de 3- (4- (5-bromo-2-clorobenzil)-fenoxi)-oxetano

Dissolveu-se 4-bromo-l-cloro-2-(4-metoxibenzil)-benzeno (10 g, 32 mmol) em diclorometano (32 mL) e arrefeceu-se até 0°C, sob uma atmosfera de azoto . Adicionou-se, gota a gota, uma solução de tribrometo de boro 1,0 M em diclorometano (35,3 mL, 34,3 mmol) ao longo de 10 minutos.

Após a adição, removeu-se o banho de gelo e agitou-se a solução á temperatura ambiente durante 1 hora. Arrefeceu-se a mistura de reacção até 0°C e extinguiu-se por adição de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N (45 mL) . Agitou-se a mistura durante 30 minutos, transferiu-se para um funil de separação, recolheu-se a camada orgânica e extraiu-se a camada aquosa com diclorometano (45 mL). Secou-se os extractos orgânicos combinados sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob uma pressão hipobárica para se obter 4-(5-bromo-2-clorobenzil)-fenol (9,5 g, rendimento de 99%) com o aspecto de um sólido branco. 56 A uma solução de 4-(5-bromo-2-clorobenzil)-fenol impuro (3,0 g, 10 mmol) e carbonato de césio (4,9 g, 15 mmol) em N,N-dimetilformamida (77,5 mL), à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução de éster oxetano-3-ílico do ácido tolueno-4-sulfónico (3,5 g, 15 mmol) em N,N-dimetilformamida (8 mL). Aqueceu-se a mistura a 65°C durante 22 horas e depois adicionou-se uma aliquota suplementar de carbonato de césio (3,3 g, 10 mmol). Agitou-se a mistura de reacção durante mais 12 horas a 120°C, arrefeceu-se até à temperatura ambiente, depois adicionou-se água e acetato de etilo e acidificou-se cuidadosamente a mistura com uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N. Separou-se a camada orgânica, lavou-se com salmoura (3 vezes) e concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Purificou-se por meio de MPLC Biotage (gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 25% de acetato de etilo em heptano) para se obter 3-(4-(5-bromo-2-clorobenzil)-fenoxi)-oxetano (2,5 g, rendimento de 70%) com o aspecto de um sólido branco. ΧΗ NMR (400 MHz, diclorometano-d2) δ p.p.m. 7,34-7,28 (m, 2 H), 7,26 (d, J=8,4 Hz, 1 H) , 7,14-7,09 (m, 2 H) , 6,69-6,35 (m, 2 H), 5,22-5,16 (m, 1 H), 4,96-4,91 (m, 2H), 4, 72-4,68 (m, 2H), 4,01 (s, 2H) .

Preparação de 4-bromo-2- (4-cloro-benzil)-1-fluoro-benzeno

Preparou-se uma solução de 5-bromo-2-fluoro-benzaldeído (10,2 g, 50 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (200 mL) e arrefeceu-se até -78°C. Adicionou-se uma solução de brometo de 4-clorofenil-magnésio (1 M em éter dietílico, 60 mL, 60 mmol), com o auxílio de uma seringa, ao longo de 8 minutos. Manteve-se sob agitação a uma temperatura 57 reduzida durante 5 minutos, depois aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se durante 1 hora a esta temperatura. Arrefeceu-se a solução num banho de gelo fundente e extinguiu-se por adição de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio (40 mL). Decantou-se a fase orgânica e concentrou-se o resíduo aquoso sob pressão reduzida para se remover qualquer solvente orgânico restante. Extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo (200 mL x 2) e combinou-se os extractos com a solução de tetra-hidrofurano decantada. Lavou-se esta solução com salmoura (25 mL), secou-se (sulfato de sódio), filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter (5-bromo-2-fluorofenil)-(4-clorofenil)-metanol impuro (15,2 g, rendimento de 96%) com o aspecto de um sólido amarelo. A uma solução de (5-bromo-2-fluorofenil)-(4-clorofenil )-metanol anterior (15,0 g, 48 mmol) e trietilsilano (18,5 mL, 116 mmol) em diclorometano (40 mL) e acetonitrilo (20 mL) , a 0°C e sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se lentamente eterato de dietilo de trifluoreto de boro (22,7 mL, 181 mmol). Agitou-se a solução resultante durante 18 horas, arrefecendo lentamente até à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura de reacção num banho de gelo fundente, extinguiu-se por meio de adição lenta de uma solução aquosa de hidróxido de potássio 7 M (30 mL) e extraiu- se com éter metil-terc-butílico (200 mL x 2) . Lavou-se a solução orgânica combinada com água (25 mL x 2) e com salmoura (25 mL x 2), secou-se (sulfato de sódio), filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se por cromatografia em coluna rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de acetato de etilo em heptano, para se obter 2-(4-clorobenzil)-4-bromo- 58 1-fluorobenzeno (5,0 g, rendimento de 35%) com o aspecto de um óleo incolor. ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 7,33-7,22 (m, 4H) , 7, 13 (d, J= 8,4 Hz, 2H) , 6,93 (dd, J= 9,2, 9,2 Hz, 1H) , 3,92 (s, 2H) .

Preparação de intermediários

Preparação de intermediário ((2R, 3R,45,5R)-6-aliloxi-3, 4, 5-tris-benziloxi-tetra-hidropirano-2-il)-metanol (I-la)

Preparou-se uma suspensão de D-glicose (1,2 kg, 6,6 mol), ácido trifluorometano-sulfónico (12 mL) e álcool alilico (5 L) e aqueceu-se a 80°C durante 3 dias. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente, removeu-se os materiais voláteis sob uma pressão hipobárica e dissolveu-se o resíduo em N,N-dimetilformamida (8 L). Repartiu-se esta mistura em quatro misturas de reacção idênticas e adicionou-se, a cada um delas, cloreto de tritilo (463 g, 1,67 mol) e trietilamina (231 mL, 1,67 mol). Observou-se uma ligeira exotermia durante a adição de trietilamina. Agitou-se a mistura de reacção durante 2 dias 59 a 30°C, e depois partiu-se cada mistura de reacção em metade, obtendo-se oito misturas de reacção idênticas. A cada um destas misturas de reacção adicionou-se cloreto de benzilo (300 mL, 2,60 mol) e depois acrescentou-se progressivamente hidreto de sódio (102,5 g, 2,60 mol), mantendo a temperatura entre 40 °C e 50°C. Depois de se completar a adição, agitou-se as misturas de reacção à temperatura ambiente durante 20 horas. Verteu-se então cada mistura de reacção sobre gelo fundente (2 L) e extraiu-se com acetato de etilo (2,5 L) . Lavou-se cada um das fases orgânicas com salmoura saturada/água (1:1, 2 x 2 L) , combinou-se e secou-se sobre sulfato de magnésio (Rf do produto 0,85 em 3:1 de hexano/acetato de etilo). Após filtração e evaporação, dissolveu-se o resíduo numa mistura de diclorometano (16 L) e metanol (4 L) . Partiu-se a mistura em 5 porções iguais e adicionou-se, a cada uma delas, ácido sulfúrico (32 mL). Agitou-se as misturas de reacção durante 3 horas, lavou-se com salmoura/solução aquosa de hidróxido de sódio 2 M (a 1:1, 2 x 2 L) , combinou-se e secou-se sobre sulfato de magnésio. Após filtração e concentração sob uma pressão hipobárica, purificou-se novamente o resíduo através de gel de sílica, efectuando a eluição com 30% de acetato de etilo em tolueno, para se obter o composto intermediário (I-la), sob a forma de uma mistura de anómeros (1,77 kg, rendimento de 54% a partir de D-glicose) . Rf 0,15 em 3:1 de hexano/ /acetato de etilo. 60

Preparação do intermediário (13S,4S,5R)-6-aliloxi-3,4f5-tris-benziloxi-2-hidroximetil-tetra-hiclro-pirano-2-il) -metanol (I-lb)

Preparou-se uma solução de dimetilsulfóxido (87 mL, 1,22 mol) em diclorometano (160 mL) e adicionou-se, gota a gota, a uma solução de cloreto de oxalilo (64,7 mL, 0,76 mol) em diclorometano (2,5 L) , a -78°C. Depois de se completar a adição, adicionou-se, gota a gota, uma solução do intermediário (I-la) (287 g, 0,59 mol) em diclorometano (500 mL), a -78°C. Depois de se completar a adição, agitou-se a mistura de reacção durante 30 minutos e adicionou-se, gota a gota, trietilamina (417 mL, 2,9 mol). Depois de se completar a adição, deixou-se aquecer a mistura de reacção por si só até à temperatura ambiente. Lavou-se então a mistura de reacção com uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M (2 L) e com água (2 L) e depois secou-se sobre sulfato de magnésio. Repetiu-se este procedimento de reacção em seis reacções equivalentes e, após secagem, combinou-se e evaporou-se para se obter o aldeído com o aspecto de um óleo amarelo (1,71 kg). Dissolveu-se este óleo em isopropanol (2,57 L) e repartiu-se em sete misturas 61 de reacção iguais. A cada uma destas adicionou-se uma solução aquosa de formaldeido a 37% (0,79 L, 10 mol) e depois adicionou-se, gota a gota, uma solução de hidróxido de sódio (32 g, 0,8 mol) em água (130 mL) . Depois de se completar a adição, agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 2 dias. Diluiu-se a mistura de reacção com salmoura (2 L) e extraiu-se com acetato de etilo (2 L) . Lavou-se novamente a fase orgânica com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 L) e com salmoura (2 L) e depois secou-se sobre sulfato de magnésio. Combinou-se as fases orgânicas provenientes das sete misturas de reacção, evaporou-se e purificou-se o resíduo através de gel de sílica (efectuando a eluição com 4 a 1 até 1 a 1 hexano em acetato de etilo) para se obter o composto intermediário (I-lb), sob a forma de uma mistura de anómeros (980 g, rendimento ao longo dos dois passos de 53%). Rf 0,57 e 0,60 em hexano/acetato de etilo a 1:1. (3S,4S, 5R)-6-Aliloxi-3, 4, 5-tris-benziloxi-2,2-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidropirano (I-lc)

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Dissolveu-se o diol de partida [((3S,4S,5R)-6-aliloxi-3,4,5-tris-benziloxi-2-hidroximetil-tetra-hidropirano-2-il)-metanol] (I-lb: 10 g, 19,208 mmol) em N,N-dimetil-formamida (70 mL) e arrefeceu-se até 0°C. Adicionou-se hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 1,69 g, 42,3 mmol), manteve-se a mistura de reacção sob agitação a 0°C durante 1 hora e depois adicionou-se l-bromometil-4-metoxi-benzeno (5,96 mL, 40,3 mmol). Aqueceu-se então a mistura de reacção a 60°C de um dia para o outro. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente, extinguiu-se com água e extraiu-se com acetato de etilo (2 vezes). Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com água e com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se então a mistura de reacção a cromatografia através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 80% de acetato de etilo em heptano) para se obter 7,55 g (rendimento de 52%) do produto (I-lc)♦ MS 778,8 (M + NH4+; modo positivo). (3R, 4S, 5S) -3, 4, 5-tris-Benziloxi-6, 6-bis- (4-metoxi- benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-ld) 63

A uma solução do material de partida ((3S, 4S,5R)-6-aliloxi-3,4,5-tris-benziloxi-2,2-bis-(4-metoxi-benziloxi-metil)-tetra-hidropirano, (I-lc: 7,55 g, 9,92 mmol) em metanol (60 mL) e diclorometano (20 mL) , à temperatura ambiente, adicionou-se cloreto de paládio (II) (528 mg, 2,98 mmol) e agitou-se a mistura resultante a esta temperatura durante 4 horas. A análise por TLC indicou a formação de um produto mais polar. Filtrou-se a mistura de reacção através de Celite® e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o material impuro a cromatografia através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 80% de acetato de etilo em heptano, para se obter 5,6 g (rendimento de 78%) de produto (L-ld) . MS 738, 8 (M + NH4+; modo positivo) . (3R, 45, 5S) -3, 4, 5-tris-Benziloxi-6, 6-bis- (4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ona (I-le) 64

A uma solução de dicloreto de oxalilo (1,9 mL, 23 mmol) em diclorometano (65 mL) , a -78°C, adicionou-se uma solução de sulfóxido de dimetilo (3,3 mL, 47 mmol) em diclorometano (5 mL) e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante 30 minutos. Adicionou-se então, gota a gota, uma solução do material de partida ((3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benziloxi-6,6-bis-(4-metoxi-benziloxi-metil)-tetra-hidropirano-2-ol, (I-ld, 5,6 g, 7,7 mmol) em diclorometano (15,0 mL) e agitou-se a mistura resultante durante 30 minutos, deixando que a temperatura aumentasse até -60°C. Adicionou-se, gota a gota, trietilamina (9,7 mL, 69,5 mmol) e deixou-se aquecer a mistura até 0°C ao longo de 1 hora. Extinguiu-se a mistura de reacção por adição de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio, secou-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o material impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 60% de 65 acetato de etilo em heptano, para se obter o produto (I-le) (4 g, rendimento de 72%). ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 3,24 (d, J=10 Hz, 1 H), 3,40-3, 47 (m, 2 H), 3,74 (s, 3 H) , 3,77 (s, 3 H) , 3,86 (d, J=10 Hz, 1 H), 4,07 (d, J= 8,6 Hz, 1 H) , 4,15 (d, J=9,6 Hz, 1 H), 4,35-4,55 (m, 6 H) , 4,65-4, 72 (m, 2 H) , 4,82 (d, J=ll Hz, 1 H), 4,87 (d, J=ll,2 Hz, 1 H) , 5,10 (d, J=ll,l Hz, 1 H), 6, 74-6, 79 (m, 2 H) , 6,81-6,85 (m, 2 H) , 7,11 (dd, J=7,0, 2,5 Hz, 2 H) , 7,17-7,41 (m, 17 H) .

Metoxi-metil-amida_do_ácido_(2R, 3S, 4S) -2, 3, 4-tris- benziloxi-5-hidroxi-6~ (4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)-hexanóico (I-lg) e/ou (3R, 4S,5S)-3,4, 5-tris-benziloxi-6,6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-2- (metoxi-metil-amino)-tetra~hidropirano-2-ol (1-lf);

0-i g) (i-i f) A uma solução de lactona ((3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benziloxi-6,6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ona (I-le: 10,4 g, 14,5 mmol) e cloridrato de N,0-dimetil-hidroxilamina (1,77 g, 29,0 mmol) em diclorometano (100 mL), a 0°C, adicionou-se, gota a gota, uma solução 2,0 M de trimetil-aluminio em hexano (14,5 mL, 29,0 mmol) e agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente 66 durante 16 horas. Arrefeceu-se a mistura de reacção até 0°C e extinguiu-se por meio de adição lenta de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N. Manteve-se sob agitação a mistura resultante durante 1 hora. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o material impuro por cromatografia de médio rendimento (gradiente de 5% a 40% de acetato de etilo em heptano) para se obter 6,5 g (58%) de produto. ΤΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 2,62 (s lr, 1 H), 2,94 (s lr, 3 H), 3,23 (s lr, 3 H), 3,42 (d, J=9,4 Hz, 1 H), 3,50-3,60 (m, 3 H) , 3,75 (s, 3 H), 3,77 (s, 3 H) , 4, 03 (d, J= 6,9 Hz, 1 H), 4,20 (dd, J= 6,9, 3,3 Hz, 1 H) , 4, 31-4,44 (m, 5 H), 4, 46-4,51 (m, 2H) , 4,53 (d, J=12 Hz , i H) , 4,66 (d, J= 12 Hz, 1 H), 4,80 (d lr, <J=11,5 Hz, 1 H) , 4,87 (d, J=11,4 Hz, 1 H), 6,77-6,83 (m, 4 H), 7,15-7,35 (m, 19 H) . ( [M+H+] 780,8, modo positivo; [M+HC02] 824, 7, modo negativo). HRMS calculado para C46H54NOio (M+H+) 780,3742, encontrado 780,3708.

Metoxi-metil-amida do ácido (2R, 3S, 4S)-2, 3, 4, 6-tetraquis-benziloxi-5-benziloximetil-5-hidroxi-hexanóico (I-6q) e/ou 67 (3R, 4S,5S)-3, 4, 5-tris-benziloxi-6, 6-bis-benziloximetil-2-(metoxi-metil-amino)-tetra-hidro-pirano-2-ol (l-6f) 67

Preparou-se este composto a partir de [ ((3S,4S,5R)-6-aliloxi-3,4,5-tris-benziloxi-2-hidroximetil-tetra-hidro-pirano-2-il)-metanol (I-lb), utilizando um procedimento idêntico ao descrito para a síntese de metoxi-metil-amida do ácido (2R, 3S, 4S) -2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4— metoxi-benziloxi) -5- (4-metoxi-benziloximetil) -hexanóico (I-lg) e/ou (3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benziloxi-6,β-bis-(4-metoxi-benziloximetil )-2-(metoxi-metil-amino)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-lf), com a excepção do agente de alquilação utilizado na parte experimental para descrever a conversão do composto (1-1 b) para o composto (I-lc) ter sido brometo de benzilo em vez de brometo de para-metoxibenzilo. 2H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ p.p.m. 2,66 (s lr, 1 H), 2,94 (s lr, 3 H), 3,23 (s lr, 3 H), 3,48 (d, J=9,4 Hz, 1 H), 3,55-3,66 (m, 3 H) , 4,05 (d, <7= 6,9 Hz, 1 H) , 4,21

(dd, <7= 6,9, 3,3 Hz, 1 H) , 4,36 (d, 1 H, J = 11,7 Hz), 4,41-4,58 (m, 7 H), 4,68 (d, <7=11,9 Hz, 1 H) , 4,81 (d lr, <7=11,5 Hz, 1 H), 4,89 (d, <7=11,5 Hz, 1 H) , 7,15-7,35 (m, 25 H) . MS

[M+H+] 720, 7, modo positivo; [M+HCO2] 764, 7, modo negativo). 68 (45, 5S) -3, 4, 5-tris-Benziloxi-2-[3-(4-metoxi-benzil)-4-metil-fenil]-6, 6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-li)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (0,97 mL, 2,5 M/hexano, 3,15 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num recipiente para microondas pré-seco Biotage™ de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocada sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 4-bromo-2-(4-metoxi-benzil )-1-metil-benzeno (690 mg, 3 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (2,7 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante mais uma hora. Adicionou-se então, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)- 69 hexanóico (I-lg) (608 mg) em tetra-hidrofurano anidro (1,35 mL) ao longo de 1,5 horas, utilizando uma bomba com seringa, agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 1 hora e depois deixou-se aquecer até -20°C ao longo de 14 horas (colocada num frasco de Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria; tamanho do frasco de Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm) . Adicionou-se éter dietílico e extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 20% a 50% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (440 mg, rendimento de 61%). HRMS calculado para C59H620ioNa (M+Na+) 953, 4235, encontrado 953,4236. 70 {(2S,3S)-2,3,4-tris-Benziloxi-5-[3- (4-metoxi-benzil)-4-metil-fenil]-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-l-il}-metanol (I-lk) :

A uma solução do intermediário I-li (150 mg) em diclorometano (3 mL) adicionou-se anisole (90 microL, 5 equivalentes) e depois 3 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante cerca de 1 hora. Concentrou-se a mistura e submeteu-se o material impuro a cromatografia através de gel de sílica (utilizando um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto desejado como uma mistura de isómeros (66 mg, rendimento de 61%). MS (LCMS) 673,9 (M+H+; modo positivo). 71 (4S, 5S)-3, 4, 5-tris-Benziloxi-2-(3-(4-etoxi-benzil)-4-metil-fenil]-6, 6-bis- (4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-2i)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (0,312 mL, 2,5 M/hexano, 3,05 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num frasco de microondas pré-seco Biotage™ de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocado sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-1-metil-benzeno (238 mg, 3,05 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (0,9 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante mais uma hora. Adicionou-se então, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil) -hexanóico (I-lg) (200 mg) em tetra-hidrofurano anidro (0,6 72 mL) , ao longo de 1,5 horas, utilizando uma bomba com seringa, agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 1 hora e depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 16 horas (colocou-se num frasco de Dewar profundo coberto com folha de alumínio para a temperatura fria; tamanho do frasco de Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm) . Adicionou-se éter dietílico a extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se o material impuro a cromatografia utilizando a unidade de cromatografia automática Biotage™ (duas colunas montadas uma sobra a outra de 10 g de gel de sílica; efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 60% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (136 mg, rendimento de 56%). MS (LCMS) 968 (M+Na+; modo positivo). 73 { (2S,3S)-2,3, 4-tris-Benzil°xi~5-[3- (4-etoxi-benzil)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-l-il}-metanol (i- 2k)

(t A uma solução do intermediário I-2i (136 mg, 0,145 mmol) em diclorometano (4 mL) adicionou-se anisole (310 microL, ~5 equivalentes) e depois 4 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Concentrou-se a mistura e submeteu-se o material impuro a cromatografia utilizando a unidade automática de cromatografia 'croISCO™ combiflash® companion®' (coluna de 4 g de gel de sílica), efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 70% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto desejado como uma mistura de isómeros (85 mg, rendimento de 85%). MS (LCMS) 687,7 (M+H+; modo positivo). 74 (4S, 5S)-3, 4, 5-tris-Benziloxi-2-[4-cloro-3- (4-metoxi-benzil)-fenil]-6, 6-bis - (4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-3i) 74

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (0,97 mL, 2,5 M/hexano, 3,15 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num frasco para microondas pré-seco Biotage™ de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocado sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 4-bromo-l-cloro-2-(4-metoxi-benzil ) -benzeno (725 mg, 2,95 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (2,7 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante mais uma hora. Adicionou-se então, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4 S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)-hexanóico (I-lg) (616 mg) em tetra-hidrofurano anidro (1,35 75 mL), ao longo de 1,5 horas utilizando uma bomba com seringa, agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 1 hora e depois deixou-se aquecer até -20°C ao longo de 14 horas (colocou-se num frasco Dewar fundo coberto com uma folha de alumínio para manter a temperatura fria; tamanho do frasco Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm) . Adicionou-se éter dietílico e extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (530 mg, rendimento de 71%). { (2S, 3S) -2, 3, 4-tris-Benziloxi-5- (4-cloro-3- (4-metoxi-benzil)-fenil]-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol (I-3k) 76

A uma solução do intermediário I-3i (530 mg) em diclorometano (11 mL) adicionou-se anisole (300 microL, 5 equivalentes) e depois 11 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 1 hora. Concentrou-se a mistura e submeteu-se o material impuro a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (229 mg, rendimento de 59%). MS (LCMS) 693,6 (M+H+; modo positivo). 77 (4S, 5S)_3,4,5 tris Benziloxj -2- [4-ç]_0r0-3- (4-etoxi-benzil) - fenil) -6, 6-bis- (4-metoxi~benziiax±]jíQ^±i) -tetra-hidro— pirano-2-ol (I-4i)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (1,0 mL, 2,5 M/hexano, 3,25 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num frasco para microondas pré-seco Biotage™ de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocado sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 4-bromo-l-cloro-2-(4-etoxi-benzil ) -benzeno (815 mg, 3,25 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (2,9 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante mais uma hora. Adicionou-se então, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)- 78 hexanóico (I-lg) (600 mg) em tetra-hidrofurano anidro (1,45 mL), ao longo de 1,3 horas, utilizando uma bomba com seringa, agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 1 hora e depois deixou-se aquecer até -25°C ao longo de 14 horas (colocou-se num frasco de Dewar fundo, coberto com uma folha de alumínio para manter a temperatura fria; tamanho do frasco Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm) . Adicionou-se éter dietílico e extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (280 mg, rendimento de 38%). HRMS calculado para C59H6iOioClNa (M+Na+) 987,3845, encontrado 987,3840. 79 {(2S, 3S)-2, 3, 4-tris-Benziloxi-5-[4-cloro-3~ (4-etoxi-benzil)-fenil]-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-l-il]-metanol (I-4k)

A uma solução do intermediário I-4i (1,46 g) em diclorometano (31 mL) adicionou-se anisole (900 microL, ~5 equivalentes) e depois 31 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 1 hora. Concentrou-se a mistura e submeteu-se o material impuro a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (6 70 mg, rendimento de 63%). HRMS calculado para C43H44O7CI (M+H+) 707,2770, encontrado 707,2765. 80 (4S, 5S)-3, 4, 5~tris-Benziloxi-2-[4-fluoro-3- (4-metoxi-benzil)-fenil]-6, 6-bis- (4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-5i)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (462 microL, 2,5 M/hexano, 3,0 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num frasco para microondas pré-seco Biotage de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocado sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 4-bromo-l-fluoro-2-(4-metoxi-benzil)-benzeno (341 mg, 3 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (1,4 mL) , a -78°C e sob uma atmosfera de azoto. Agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante 1 hora. Depois adicionou-se lentamente, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)-hexanóico (I-lg) 81 (300 mg, 0,385 iranol) em tetra-hidrofurano anidro (0,70 mL) (1 gota a cada 5 segundos), agitou-se a mistura resultante a -78°C durante mais uma hora e depois deixou-se aquecer até 10°C ao longo de 12 horas (colocou-se num frasco de Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria; tamanho do frasco Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm) . Diluiu-se a mistura de reacção com éter dietílico e extinguiu-se por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (199 mg, rendimento de 55%). 82 { (2S, 3S) -2, 3, 4-tris-Benziloxi-5-[4-fluoro-3- (4-metoxi-benzil) -fenil] - 6, 8-dioxa-biciclo (3,2,1] oct-l-il} -metanol (I-5k)

OBíl

A uma solução de (4S, 5S) -3,4,5-tris-benziloxi-2-[ 4-fluoro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-6,6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (i-5i; 191 mg, 0,204 mmol) em diclorometano (3,75 mL) adicionou-se anisole (0,178 mL, 1,63 mmol) e depois uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano (3,75 mL) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto. Depois de se agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, concentrou-se a mistura de reacção sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano) para 83 se obter o produto como uma mistura de isómeros (115 mg, rendimento de 83%). MS (LCMS) 677,7 (M+H+; modo positivo). (4S, 5S)-3, 4, 5-tris-Benziloxi-2-[3-(4-etoxi-benzil)-4-fluoro-fenil-6, 6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-10i)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (508 microL, 2,5 M/hexano, 3,0 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio de 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-1-fluorobenzeno (392,0 mg, 1,27 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (1,5 mL), a -78°C e sob uma atmosfera de azoto. Agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante 1 hora. Adicionou-se então muito lentamente, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-( 4-metoxi-benziloximetil) -hexanóico _I^ lg (330,0 mg, 0,423 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (0,75 mL) (1 gota a cada 5 segundos), agitou-se a mistura de 84 resultante a -78°C durante mais uma hora e depois deixou-se aquecer até 10°C ao longo de 12 horas (colocou-se num frasco de Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria). Diluiu-se a mistura de reacção com éter dietílico e extinguiu-se por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (180 mg, rendimento de 44%). { (2S, 3S)-2, 3,4-tris-Benziloxi-5[3-(4-etoxi-benzil)-4-fluoro-fenil] - 6, 8-dioxa-biciclo [3,2,1) oct-l-il} -metanol (I- IQk) 85

A uma solução do intermediário I-10i (180,0 mg, 0,19 mmol) em diclorometano (2,0 mL) adicionou-se anisole (0,175 mL, 1,60 mmol) e depois uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano (2,0 mL) , à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto. Depois de se agitar durante 1 hora, concentrou-se a mistura de reacção sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (85,0 mg, rendimento de 64%). 86 (4S, 5S)-3, 4, 5-tris-Benziloxi-2-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzi 1]-fenil}-6, 6-bis-(4-metoxi-benziloxi-metil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-lli)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (1,0 mL, 2,5 M/hexano, 3,0 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio de 3-[ 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenoxi]-tetra-hidrofurano (878 mg, 2,50 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (3,0 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a essa temperatura durante 1 hora. Adicionou-se então lentamente, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)-hexanóico I=lg (650 mg, 0,833 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (1,5 mL) (0,9 mL/hora), agitou-se a mistura resultante a -78°C durante mais uma hora e depois aqueceu-se até 10°C ao longo de 12 horas (colocou-se 87 num frasco de Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria). Diluiu-se a mistura de reacção com éter dietílico e extinguiu-se por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (287 mg, rendimento de 34%). ((2S, 3S)-2, 3, 4-tris-Benziloxi-5-{4-fluoro-3~[4-(tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-l-il)-metanol (I-llk) 88

A uma solução de (4S,5S)-3,4,5-tris-benziloxi-2-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzi1]-fenil}-6,6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol I-lli (275 mg, 0,28 mmol) em diclorometano (2,0 mL) adicionou-se anisole (0,250 mL, 2,29 mmol) e depois uma solução de ácido trifluroacético a 20% em diclorometano (8,0 mL) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto. Depois de se agitar durante 1 hora, concentrou-se a mistura de reacção sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (168 mg, rendimento de 83%). 89 (4S,5S)-3,4, 5-tris-Benziloxi-2-[3-(4-cloro-benzil)-4-fluoro-fenil]-6, 6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tefcra-hidro-pirano-2-ol (1-121)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-lítio (1,0 mL, 2,5 M/hexano, 3,1 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num frasco para microondas pré-seco Biotage™ de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocado sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 4-bromo-2-(4-cloro-benzil)-1-fluoro-benzeno (702 mg, 2,9 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (3,0 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante 25 minutos. Adicionou-se então, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)- 90 hexanóico (I-lg) (621 mg) em tetra-hidrofurano anidro (1,5 mL), utilizando uma bomba com seringa (0,9 mL/hora) e agitou-se a mistura resultante a temperatura reduzida durante mais 17 horas (colocou-se num frasco Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria; tamanho do frasco Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm). Extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M (1,5 mL) . Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente for 30 minutes. Diluiu-se a mistura com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio (15 mL) e extraiu-se com acetato de etilo (15 mL x 3) . Lavou-se a solução orgânica combinada com salmoura (30 mL) , secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (477 mg, rendimento de 64%). 91 { (2S, 3S)-2, 3, 4-tris-Benziloxi-5-[3- (4-cloro-benzil)-4-fluoro-fenil]-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-l-il}-metanol (I-12k) V!

A uma solução do intermediário I-12i (243 mg) em diclorometano (9 mL) adicionou-se anisole (0,15 mL, 5,3 equivalentes) e depois ácido trifluoroacético (1,0 mL, 50 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 2 horas. Concentrou-se a mistura e submeteu-se o material impuro a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (102 mg, rendimento de 58%). 92 (4S,5S)-3, 4, 5-tris-Benziloxi-2-{4-fluoro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil]-6, 6-bis - (4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (1-131)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (1,12 mL, 2,5 M/hexano, 3,0 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio de 3-[ 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenoxi]-oxetano (942,0 mg, 2,79 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (3,0 mL) , a -78°C, e agitou-se a solução resultante a essa temperatura durante 1 hora. Adicionou-se então lentamente, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloxi-metil)-hexanóico I-lg (725,0 mg, 0,930 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (1,5 mL) (0,9 mL/hora), agitou-se a mistura resultante a -78°C durante mais uma hora e depois aqueceu-se até 10°C ao longo de 12 horas (colocou-se num 93 frasco de Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria). Diluiu-se a mistura de reacção com éter dietílico e extinguiu-se por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 N. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 40% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (535 mg, rendimento de 59%). ((2S, 3S)-2, 3, 4-tris-Benziloxi-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzi 1]-fenil}-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il]-metanol (I-13k) 94

A uma solução de (4S, 5S)-3,4,5-tris-benziloxi-2-{4-fluoro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-6,6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol I-13i (535 mg, 0,548 mmol) em diclorometano (2,0 mL) adicionou-se anisole (0,480 mL, 4,38 mmol) e depois uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano (8,0 mL) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto. Depois de se agitar durante 1 hora, concentrou-se a mistura de reacção sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 30% de acetato de etilo em heptano) para se obter o produto como uma mistura de isómeros (300 mg, rendimento de 76%). 95 (4S, 5S)-3,4, 5-tris-Benziloxi-2-{4-cloro-3-{4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-6, 6-bis- (4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol (I-14i)

Adicionou-se, gota a gota, n-butil-litio (0,97 mL, 2,5 M/hexano, 3,15 equivalentes) (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseifiçada de oxigénio (colocada num frasco para microondas pré-seco Biotage™ de 10-20 mL, fechado estanquemente com a sua rolha e colocado sob uma corrente positiva de azoto gasoso) de 3-(4-(5-bromo-2-clorobenzil)-fenoxi)-oxetano (824 mg, 2,95 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidro (2,7 mL), a -78°C, e agitou-se a solução resultante a esta temperatura durante mais uma hora. 96

Adicionou-se então, gota a gota, uma solução de metoxi-metil-amida do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-hidroxi-6-(4-metoxi-benziloxi)-5-(4-metoxi-benziloximetil)-hexanóico (I-lg) (616 mg) em tetra-hidrofurano anidro (1,35 mL) , ao longo de 1,5 horas, utilizando uma bomba com seringa, agitou-se a mistura resultante a -78°C durante 1 hora e depois deixou-se aquecer até -20°C ao longo de 14 horas (colocou-se num frasco de Dewar fundo coberto com folha de alumínio para manter a temperatura fria; tamanho do frasco Dewar: diâmetro externo 10 cm, diâmetro interno 8 cm, altura 9 cm) . Adicionou-se éter dietilico e extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 0% a 50% de acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (563 mg, rendimento de 72%). 97 ((2S, 3S)-2,3,4-tris-Benziloxi-5-{4-cloro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-11)-metanol (I-14k)

A uma solução do intermediário (4S,5S)-3,4,5-tris-benziloxi-2-{4-cloro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-6,6-bis-(4-metoxi-benziloximetil)-tetra-hidro-pirano-2-ol I-14i (282 mg) em diclorometano (2,84 mL) adicionou-se anisole (200 microL, ~7 equivalentes) e depois 3,07 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Concentrou-se a mistura e submeteu-se o material impuro a cromatografia através de gel de sílica, utilizando um gradiente de 10% a 50% de 98 acetato de etilo em heptano, para se obter o produto como uma mistura de isómeros (186 mg, rendimento de 89%).

Exemplo 1 (1S,2S, 3S,4R, 5S) -l-Hidroximetil-5-[3- (4-metoxi-benzil) -4-metil-fenil]-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2, 3, 4-triol (IA)_e_(IS, 2S, 3S, 4S, 5S) -l-hidroximetil-5-[3- (4-metoxi- benzil ) -4-metil-fenil]-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2, 3, 4-triol (1B) :

A uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-[3-(4-metoxi-benzil)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]-oct-l-il}-metanol (I-lk: 236 mg) em etanol/tetra- hidrofurano (7 mL, 4/1 volume) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (270 microL, 19 equivalentes) e negro-de- 99 paládio (150 mg, 4 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 3 horas. Filtrou-se o paládio e purificou-se a mistura impura, obtida após evaporação do solvente, por cromatografia através de gel de silica, efectuando a eluição com um gradiente de 85% a 100% de acetato de etilo em heptano. Purificou-se por HPLC preparativa a mistura de produtos obtidos. Método de HPLC preparativa: coluna Phenomex C18 de fase inversa, Luna 5 micrómetro, 150 x 21,20 mm, 20 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 20% a 60% de acetonitrilo/0, 1% de ácido fórmico ao longo de 20 minutos. Detecção UV: 254 nm. A análise por HPLC indicou uma proporção entre diastereoisómeros de 3:1 (1A:1B). IA: (55 mg, rendimento de 39%); Rt = 10,9 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou-se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 403,3 (M+H+; modo positivo) 447,3 (M+HCO2”, modo negativo) . XH NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7,33 (d, 1H, J = 1,6

Hz) , 7,30 (dd, 1H, J = 7,6 e 1,6 Hz) , 7,10 (d, 1H, J = : 7,6 Hz) , 7,02-6,98 (m, 2H), 6,79-6,75 (m, 2H), 4,13 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 3,90 (s, 2H), 3,82 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,77 (dd, 1H, J — 8,2 e 1,2 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,66 (d, 1H, J = 12,5 Hz) , 3,65 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 3,59 (d, 1H, J = 7,8 Hz) , 3, 58 (dd, 1H, J = 7,5 e 1,5 Hz), 2,16 (s, 3H) . HRMS calculado para C22H27O7 (M+H+) 403, 1751, encontrado 403,1737. 1B: (20 mg, rendimento de 14%); Rt = 11,5 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão 100 reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de et ilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou- -se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 403 (M+H+; modo positivo) 447 (M+HCCp , modo negativo). ΤΗ NMR (400 MHz, met anol- d4 ) δ 7,38 (d, 1H, J = 1 ,8 Hz ) 7,33 (dd, 1H, J = 7,9 e 1, 8 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 7 ,9 Hz ), 7, 02-6, 97 (m, , 2H) , 6, 79-6, 74 (m, 2H), 4,02 (d, 1H, J = 7, 4 Hz) , 3,93 (t, 1H, J=2, 2 Hz) 3,91 (s 1 r, 2H), 3,88 (d, 1H , J = : 12,5 Hz), 3,84 ί (d, 2H, J = 2,4 Hz) , 3,75 (d, 1H f J = 12,5 Hz), 3,71 (S, 3H) , 3,4Ç ) (d, 1H, J = 7,4 Hz) , 2 r 16 (s, 3H) .

Exemplo 2 (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[3- (4-Etoxi-benzil)-4-metil-fenil]~1~ hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2, 3, 4-triol (2A)_e_(IS, 2S, 3S, 4S, 5S) -5-[3- (4-etoxi-benzil) -4-metil- fenil ]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (2B) 101

A uma solução de {(25,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]-oct-l-il}-metanol (I-2k: 85 mg, 0,12 mmol) em etanol/tetra-hidrofurano (7 mL, ~4/l em volume) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (95 microL, 19 equivalentes) e negro-de-paládio (53 mg, 4 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 3 horas. Filtrou-se o paládio e purificou-se a mistura impura, obtida após evaporação do solvente, por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Phenomex Cl 8 de fase inversa, Luna 5 micrómetro, 150 x 21,20 mm, 20 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 20% a 60% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 20 minutos. 102

Detecção UV: 254 nm. A análise por HPLC indicou uma proporção entre diastereoisómeros de 4:1 (2A:2B). 2A: (20 mg; rendimento de 38%) Rt = 12,7 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou-se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 417,3 (M+H+; modo positivo); 461,4 (Μ+Η002~; modo negativo). ΧΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 1,34 (t r J= 6, 9 Hz, 3 H) , 2,18 (S , 3 H) , 3,60 (d, J= 8 Hz, 2 H ) , 3, 66 (t, J= 8 Hz, 1 H) , 3, 68 (d, J=12 ,5 Hz, 1 H) , 3, 78 (d, 1 H, J= 8, 8 Hz ) , 3,84 (d, J= 12, 4 Hz, 1 H) r 3,92 (s, 2 H ) , 3, 97 (q, J=7 Hz, 2 H ), 4, , 15 (d, J= 7, 5 Hz, 1 H) , 6, 77 (m, 2 H) r 7, 00 (m, 2 H ), 7, 12 (d, J=7, 7 Hz , 1 H) r 7, 31 (dd, J=7 ,9 e 1, 4 Hz, r 1 H ) , 7,34 (s, 1 H ) . 2B: (5 mg; rendimento de 9%) Rt = 13 , 2 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou-se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 417,3 (M+H+; modo positivo); 461,4 (M+HC02“; modo negativo). ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-c^) δ p.p.m. 1,34 (t , J" =6, 9 Hz, 3 H) , 2, 18 (S, 3 H), 3,52 (d, 1H, J= = 7, 4 Hz) , 3, 77 (d, <7=12, 5 Hz f 1 H) , 4, 00-3,84 (m, 8 H), 4, 04 (d, J= 7,4 Hz, 1 H) , 6, 79- -6, 75 (m, 2 H) , 7, 03 -6,98 (m, 2 H) , 7, 12 (d, J=7, 9 Hz, 1 H) , 7, , 35 (dd, J= 7, 7 e 1,9 Hz, 1 H) , 7, 39 (d, J = 1, 9 Hz, , 1H) φ 103

Exemplo 3 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5-[4-Cloro-3- (4-metoxi-benzil) -fenil ]~1~ hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3-2-1 ] octano-2, 3, 4-triol (3A) e (IS, 2S, 3S, 4S, 5S) -5-[4-cloro-3-[4-metoxi-benzil) - fenil]-1-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2, 3,4-triol (3B):

A uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-[4-cloro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]-oct-l-il}-metanol (I-3k: 229 mg) em etanol/tetra- hidrofurano (7 mL, 4/1 volume) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (270 microL, 20 equivalentes) e negro-de-paládio (140 mg, 4 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorrida 1 hora, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (270 microL, 20 equivalentes) e de negro-de-paládio (140 104 mg, 4 equivalentes) e manteve-se a mistura sob agitação durante mais uma hora à temperatura ambiente. Filtrou-se o paládio e purificou-se a mistura impura, obtida após evaporação do solvente, por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Phenomex C18 de fase inversa, Luna 5 micrómetro, 150 x 21,20 mm, 20 mL/minutos, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido f órmico: água/0, 1% de ácido fórmico; 20% a 60% de acetonitrilo/0, 1 %ácido fórmico ao longo de 20 minutos. Detecção UV: 254 nm. A análise por HPLC indicou uma proporção entre diastereoisómeros de 1,4:1 (3A:3B). 3A: (50 mg; rendimento de 36%) Rt = 12,1 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e concentrou-se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 423,3 (M+H+; modo positivo); 467,3 (M+HC02~;

modo negativo). ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7,43 (s, 1H) , 7,38-7,30 (m, 2H), 7,08 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 4, 12 (d, 1H, J = 7,5 Hz) , 4,01 (s, 2H), 3,81 (d, 1H, J=12,5 Hz) , 3,75 (d, 1H, J = 8 ,4 Hz), 3, 73 (s, 3H), 3,66 (d, 1H, J = 11, 7 Hz), 3,63 (t, 1H, J=8,2 Hz), 3,57 (d, 1H, J=7,4 Hz) , 3,52 (d, 1H, J = 7,8 Hz) . HRMS calculado para C21H2 4O7CI (M+H+) 423,1205, encontrado 423, 1192. 3B: (37 mg; rendimento de 27%) Rt = 12,8 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e concentrou-se sob pressão reduzida. 105 MS (LCMS) 423,3 (M+H+; modo positivo) 467,3 (M+HCO2 , modo negativo). ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7,50 (d, 1H, J = 1,9 Hz) 7,42 (dd, 1H, J = 8,3 e 1,9 Hz), 7,35 (d 1—1 <d = 8 ,3 Hz), 7,12-7,07 (m, 2H), 6,83-6,78 (m, 2H), 4, 06-4,01 (m, 3H), 3,91-3,83 (m, 4H ), 3,78-3,72 (m, 4H) 3,51 (d, 1H, J = 7,5 Hz) .

Exemplo 4 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5 - [4-Cloro-3~ (4-etoxi-benzil) -fenil] -1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2, 3, 4-trio 1 (4A)_e_(IS, 2S, 3S, 4S, 5S) -5 - [4-cloro-3- (4-etoxi-benzil) - fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (4B)

B) 106 A uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]-oct-l-il}-metanol (I-4k: 335 mg) em etanol/tetra- hidrofurano (10 mL, 4/1 volume) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (420 microL, 22 equivalentes) e negro-de-paládio (208 mg, 4 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorrida 1 hora, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (420 microL, 22 equivalentes) e de negro-de-paládio (208 mg, 4 equivalentes) e manteve-se a mistura sob agitação durante mais uma hora à temperatura ambiente. Filtrou-se o paládio e purificou-se a mistura impura, obtida após evaporação do solvente, por HPLC preparativa. HPLC preparativa: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 30 x 100 mm, 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0, 1% de ácido fórmico; 25% a 50% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 18 minutos; detecção UV: 220 nm. A análise por HPLC indicou uma proporção entre diastereómeros de 1,1:1 (4A:4B) . 4A: (60 mg, rendimento de 29%); Rt = 12,4 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de et ilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou- -se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 437,3 (M+H+; modo positivo); 481,3 (M+HC02~; modo negativo). ΧΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7,43 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,36 (dd, 1H, J = 8,3 e 2 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7, 08-7, 04 (m, 2H) , 6, 79-6, 75 (m, 2H) , 4,12 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 4,00 (s, 2H) , 3,96 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 107 3, 81 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3 , 75 (dd, 1H, J = 8,3 e 1, 3 Hz) , 3, 65 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,63 (t, 1H, J = 8,2 Hz) , 3,57 (dd, 1H, J = 7,5 e 1,3 Hz), 3,52 (d, 1H, J = 8,0 Hz) , 1,33 (t, 3H, J = 6, 9 Hz) . HRMS calculado para C22H26O7CI (M+H+) 437, 1361 , encontrado 437,1360. 4B: (30 mg, rendimento de 15%); Rt = 13,2 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou-se sob pressão reduzida. MS (LCMS) 437,3 (M+H+; modo positivo) 481,3 (M+HCO2 , modo negativo). ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-ch) δ 7,48 (d, 1H, = 1,9 Hz) 7,40 (dd, 1H, J = 8,1 e 1,9 Hz), 7,32 (d, 1H, J 8, 3 Hz) , 7, 08-7, 03 (m, 2H) , 6, 80-6, 74 (m, 2H), 4,04-3,99 r 3H) , 3 , 95 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,89-3,81 (m, 4H) , 3,73 r 1H, J = 12,5 Hz), 3, 49 (d, 1H, J = 7,3 Hz), 1,32 (t, r J = 7 Hz). HRMS calculado para C22H26O7CI (M+H+) 437,1361, encontrado 437,1358.

Exemplo 5 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5-[4-fluoro-3- (4-metoxi-benzil) -fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3, 4-triol (5A) e (IS, 2S, 3Sf 4Sf 5S)-5-[4-fluoro-3-(4-metoxi-benzil)- fenil]-1-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2, 3,4-triol (5B): 108

A uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-[4- fluoro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-6, 8 -dioxa-biciclo[3.2.1]- oc^-·*-^ “Metanol (115 mg, 0,170 mmol) numa solução a 4:1 de etanol/tetra-hidrofurano (10 mL) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (137 microL, 3,42 mmol) e negro-de-paládio (73 mg, 0,687 mmol). Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorridas 3 horas, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (137 microL, 3,42 mmol) e de negro-de-paládio (73 mg, 0,687 mmol). Decorridas 18 horas, filtrou-se a mistura de reacção e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro resultante por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 15% de metanol em diclorometano) para se obter 64 mg de um sólido branco. Purificou-se a mistura de isómeros por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Phenomex C18 de fase inversa Luna, 5 micrómetro, 150 x 21,20 mm, 20 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico: :água/0,l% de ácido fórmico; 20% a 80% de acetonitrilo/ /0,1% de ácido fórmico ao longo de 20 minutos). Detecção UV: 254 nm. A análise por HPLC indicou uma proporção entre diastereómeros de 1:1 (5A:5B). 5A: (6 mg; rendimento de 9%) Rt = 8,5 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão 109 reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de et ilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou- -se sob pressão reduzida . ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 3,55 (d, <J=7,8

Hz, 1 H) , r 3 , , 58 (dd, J= 7,5, 1,2 Hz, 1 H) , 3, 64 (t, J=8, 2 Hz, 1 H) f 3, 67 (d, J=12,5 Hz, 1 H), 3, 74 (s, 3 H) , 3, 77 (dd, J= 8, 3, 1 ,2 Hz, 1 H), 3,83 (d, J=12, 5 Hz, 1 H :), 3 ,91 (s, 2 H) , 4, 14 (d , J- =7,4 Hz, i h; ) , 6,76-6, . 84 (m, 2 H) , 7, 02 (dd, J= 9, 9, 8 ,3 Hz, 1 H) , 7, 09- -7,13 (m, 2 H) , 7, 37-7 ,44 (m, 2 H) ; MS 407 ,4 (M+ H+; modo positivo ); 451, r 3 (M+HCCV; modo negati vo ) · 5B: (12 mg; rendimento de 17%) Rt = 9 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. Deixou-se precipitar o material impuro a partir de acetato de etilo e heptano. Lavou-se o sólido branco resultante 2 vezes com heptano e secou-se sob pressão reduzida. ΤΗ NMR (400 MHz , metanol-d4) δ p.p.m. 3,51 (d , J=7,4 Hz, 1 H), 3, 74 (s, 3 H), 3,75 (d, 1H, J = 13 Hz), 3, 83-3,93 (m, 6 H), 4,03 (d, J=7,4 Hz, 1H) , 6, 78-6, 82 (m, 2 H) , 7,02 (dd, J= 9,9, 8,5 Hz, 1 H) , 7,09-7,13 (m, 2 H) , 7, 42-7, 49 (m, 2 H) ; MS: 407, 4 (M+ H+; modo positivo); 451,3 (M+HCC>2~; modo negativo).

Exemplo 6 2- (4-Metoxibenzil)-4-( (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -2, 3, 4-tri-hidroxi-l-(hidroximetil)-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrilo (6A): 110

Adicionou-se n-butil-lítio (1,04 mL, 2,6 iranol, 2,5 M em hexano) a uma solução de brometo de isopropil-magnésio (1,27 mL, 1,27 mmol, 1 M em tetra-hidrofurano) , a 0°C.

Depois de se agitar durante 30 minutos, arrefeceu-se a mistura resultante até -78°C e adicionou-se uma solução de 4-bromo-2-(4-etoxi-benzil)-benzonitrilo (380 mg, 1,20 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (1 mL) . Agitou-se a mistura esverdeada durante 1 hora a -78°C e adicionou-se muito lentamente (ao longo de 20 minutos, 1 gota a cada 5 segundos) uma solução de metoxi-metil-amina do ácido (2R,3S,4S)-2,3,4,6-tetraquis-benziloxi-5-benziloximetil-5-hidroxi-hexanóico (I-6g) ( 700 mg, 0, 972 mmol) em tetra- hidrofurano anidro (2 mL) . Agitou-se a solução a -78°C durante 1 hora e aqueceu-se lentamente até à temperatura ambiente ao longo de 3 horas. Extinguiu-se a mistura de reacção por meio de adição, gota a gota, de uma solução aquosa de ácido clorídrico 1 M e depois diluiu-se com acetato de etilo. Agitou-se a mistura bifásica resultante à temperatura ambiente durante 15 minutos. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se para se obter o produto impuro. Purificou-se o produto impuro por 111 cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 20% de acetato de etilo em heptano, para se obter o intermediário desejado 2-(4-etoxi-benzil)-4-((4S,5S)-3,4,5-tris-benziloxi-6,6-bis-benziloxi-metil-2-hidroxi-tetra-hidro-pirano-2-il)-benzonitrilo (300 mg; rendimento de 34%). MS 918,8 (M+Na+, modo positivo).

Adicionou-se tricloreto de boro (4,18 mL, 4,18 mmol, solução a 1 M em hexano) à solução do intermediário anterior (250 mg, 0,279 mmol) em CH2CI2 (2 mL) , a -78°C. Agitou-se a mistura a -78°C durante 10 minutos e depois aqueceu-se até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Extinguiu-se a mistura com água (10 mL) e extraiu-se com acetato de etilo (50 mL). Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura. Purificou-se por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com metanol em diclorometano: 1 para 9 em volume) para se obter o intermediário desejado 2-(4-hidroxi-benzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidroxi-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrilo (35 mg, rendimento de 30%).

Adicionou-se carbonato de potássio (28 mg, 0,2 mmol) a uma solução do intermediário anterior (34 mg, 0,077 mmol) em acetona (0,4 mL) e depois acrescentou-se iodometano (7 microL, 0,11 mmol), à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura a 45°C de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura com acetato de etilo (60 mL) e lavou-se com água. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio e evaporou-se até à secura. Purificou-se por cromatografia em camada fina preparativa através de gel de sílica (efectuando a eluição com metanol em diclorometano: 1 para 9 em volume) para se isolar o produto desejado 6A (18 mg; rendimento 57%). 112 ΤΗ NMR (' O O <r-H MHz, metanol-d4) δ 7, 69 (d, J = 8 Hz, 1H ) , 7, 61 (s, 1H) , 7, 56 (d, J = 8 Hz, 1H ) , 7, 19- -7, 14 (m, 2H ) , 6, 87 -6,82 (m, 2h; >, 4, 18 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 4,14 (s, 2H ) , 3, 86 (d, J = 12, 7 Hz, „ 1H); 3,81 (d f J = 8,3 Hz, 1H) , 3, 76 (s f 3H) , 3,69 (d, J = 12 ,5 Hz, 1H), 3, r 6 7 (t, J=8, 1 Hz, 1H ) , 3, 61 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 3,54 (d, J = 8 Hz, 1H) ; MS 458 , 4 (M+HCO2 ; modo negativo) .

Exemplo 7 2- (4-Etoxibenzil)-4-( (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -2, 3, 4-tri-hidroxi-l -(hidroximetil)-6, 8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrilo (7 A)

Adicionou-se carbonato de potássio (8 mg, 0,058 mmol) a uma solução do intermediário 2-(4-hidroxi-benzil)-4-( (lS,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidroxi-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrilo (ver o exemplo 6; 8,9 mg, 0,022 mmol) em acetona (0,4 mL) e depois acrescentou-se iodometano (4 microL, 0,044 mmol), à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura a 45°C de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura com acetato de etilo (60 mL) e lavou-se com água. Secou-se a camada orgânica sobre 113 sulfato de sódio e evaporou-se até à secura. Purificou-se por cromatografia em camada fina preparativa através de gel de silica (efectuando a eluição com metanol em diclorometano: 1 para 9 em volume), permitiu isolar o produto desejado j7A (2,4 mg; rendimento de 26%). ΧΗ NMR (metanol-d4) δ 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,61 (d, J = 1,5 Hz , 1H ), 7, 56 (dd, J = 8, o, 1, 5 Hz \—1 7,17 - 7,13 (m, 2H) , 6,86- -6,81 (m, 2H), 4,18 (d f J = 7,5 Hz, 1H) r 4, 14 (s, 2H) , 4, 01 (q, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3 , 86 (d, J = = 12, 5 Hz, 1H) ; 3,80 (dd, j = 8,0 e 1,2 Hz, 1H) t 3, 70 (d, J =11, 7 Hz, 1H) , 3,67 (t, J = 8 , 0 H z, 1H), 3, 61 (dd, J = 7,5 e 1, 2 Hz, 1H) , 3,54 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 1,3 7 (t, J = 7, 0 Hz t 3H) ; MS 472, 1 (m+hco2“; modo negativo) O exemplo 8 ilustra a preparação de um derivado cristalino do composto do exemplo 3B para confirmar a estrutura e a esteroquímica do exemplo 3B.

Exemplo 8

Per-4-bromobenzoilação de (IS,2S, 3S, 4S, 5S)-5-[4-cloro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo~ [3.2.1]octano-2, 3, 4-triol (3B) para se obter o composto (8A) 114

A uma solução de (IS,2S,3S,4S,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo-[ 3.2.1]octano-2,3,4-triol (3B) (11 mg, 0, 026 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (600 microL) adicionou-se, à temperatura ambiente, N,N-diisopropiletilamina (32 microL, 7 equivalentes) e 4-dimetilaminopiridina (3 mg, 0,9 equivalentes) e depois cloreto de para-bromobenzoilo (35 mg, 6 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante 62 horas. Adicionou-se acetato 115 de etilo e água e lavou-se sucessivamente a fase orgânica com uma solução aquosa de ácido clorídrico 0,5 Me com salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio, filtrou-se, concentrou-se e purificou-se o material impuro por cromatografia rápida através de gel de silica, efectuando a eluição com um gradiente de 15% a 30% de acetato de etilo em heptano, para se obter 27 mg do produto (rendimento de 90%). 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,82 (m, 2H) , 7,74- 7,64 (m, 4H) , 7, 58-7, 46 (m, 8H) , 7, 42-7, 34 (m, 4H) , 7,29 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,89 (m, 2H) , 6,63 (m, 2H) , 6,04 (dd, 1H, J = 9,6 e 1 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 9,6 e 4, 4 Hz) , 5, 89 (d, 1H, J = 4,4 Hz) , 4,70 (d, 1H, J = 12,4 Hz ), 4,65 (d, 1H, J = 12, 4 Hz ), 4,60 (d, 1H, J = 8 Hz) , 3, 98-3,88 (m, 3H) , 3, 73 (s, 3H) .

Os cristais individuais foram obtidos por técnicas de difusão de vapor, utilizando heptano e acetato de etilo como solventes. Ponto de fusão = 191°C. Análise ao raio-X dos cristais individuais. Avaliou-se um cristal representativo e recolheu-se um conjunto de dados a 1 Â (máximo sin Θ/λ = 0,5) num difractómetro Bruker APEX II/R. Recolheu-se os pares de Friedel por ordem para facilitar a determinação da configuração absoluta. Os factores de dispersão atómica foram obtidos a partir de tabelas internacionais para cristalografia. Veja-se, International Tables for Crystallography, Vol. C, pág. 219, 500, Kluwer

Academic Publishers, 1992. Todos os cálculos cristalográficos foram executados pelo sistema SHELXTL. Veja-se, SHELXTL, Versão 5.1, Bruker AXS, (1997). Todos os dados do difractómetro foram recolhidos à temperatura 116 ambiente. No quadro 1 seguintes sao apresentados o cristal pertinente, o conjunto de dados e o refinamento.

Quadro 1

Dados de cristais e refinamento da estrutura para o composto do

exemplo 8A

Formula empírica Massa da fórmula Temperatura Comprimento de onda Sistema de cristal Grupo espacial

Dimensões da célula unitária

Volume

Z

Densidade (calculada) Coeficiente de absorção F (000)

Tamanho do cristal Intervalo Teta para a recolha de dados

Reflexões recolhidas Reflexões independentes Plenitude até teta = 50,43° Correcção de absorção Método de refinamento

Dados/restrições/parâmetros Adequação do ajuste a F2 índices R finais [I>2sigma(I)] C49H350nBr 4C1 1154,86 296(2) K 1,54178 Á Monoclínico C2 a = 23, 7485 (6) A α = 90°. b = 6,3175(2) A β = 104,4910 (10)° . c = 32,3167(8) Á y = 90°. 4694, 3(2) Á3 4 1,634 Mg/m3 5,216 mm4 2296 0,12 x 0,03 x 0,02 mm3 3,75 a 50,43°. 8339 3932 [R(int) = 0,0491] 89, 7%

Correcção de absorção empírica Mínimos quadráticos de matriz completa em F2 3932/1/587 0,967 RI = 0,0371, wR2 = 0,0854 117

Dados de cristais e refinamento da estrutura para o composto do

exemplo 8A

Parâmetro da estrutura -0,03(2) absoluta

Coeficiente de extinção 0,00011 (3)

Maior diferença, pico e 0,297 e -0, 294 e,Ã~3 supressão

Obteve-se uma estrutura de teste por métodos directos. Esta estrutura de teste foi refinada por métodos de rotina. As posições de hidrogénio foram calculadas onde fosse possível. Os hidrogénios de metilo foram localizados por técnicas de diferença de Fourier e depois idealizados. Os parâmetros de hidrogénio foram adicionados aos cálculos do factor de estrutura mas não foram refinados. Os desvios calculados nos ciclos finais pelo refinamento dos mínimos quadráticos foram todos inferiores a 0,1 dos desvios padrão correspondentes. O índice R final foi de 3,71%. Uma diferença de Fourier final revelou que não faltavam ou não estava mal colocada a densidade de electrões. A estrutura refinada foi desenhada utilizando o pacote de programas de desenho SHELXTL (figura 1). A configuração absoluta foi determinada pelo método de Flack. Veja-se, Flack, H.D., Acta Crystallogr., A39, 876, (1983). O exemplo 9 ilustra a preparação de um derivado cristalino do composto do exemplo 4A para se confirmar a estrutura e a estereoquímica do composto do exemplo 4A. 118

Exemplo 9

Per-4-nitrobenzoilação de (IS,2S, 3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3- (4-etoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo-[3, 2,1]octano-2, 3, 4-triol (4A) para se obter o composto (9A) 2

'2 A uma solução de (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]-octano-2,3,4-triol (_4A: 10,6 mg, 0, 024 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (300 microL), arrefecida a 0°C, 119 adicionou-se N,N-diisopropiletilamina (30 microL, 7 equivalentes) e 4-dimetilaminopiridina (3 mg, 1 equivalentes) e depois cloreto de para-nitrobenzoilo (27 mg, 6 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante a 60°C durante 6 horas. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente, adicionou-se acetato de etilo e água e lavou-se sucessivamente a fase orgânica com uma solução aquosa de ácido clorídrico 0,5 Me com salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio, filtrou-se, concentrou-se e purificou-se o material impuro por cromatografia rápida através de gel de sílica, efectuando a eluição com um gradiente de 10% a 50% de acetato de etilo em heptano, para se obter 18 mg de produto (rendimento de 73%). ''H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,33 (m, 2H), 8,28-8,12 (m, 8H), 8,07 (m, 2H) , 8,00 (m, 2H) , 7,91 (m, 2H) , 7,45-7,40 (m, 2H), 7,34 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,87 (m, 2H), 6,64 (m, 2H), 6,13 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,06 (t, 1H, J = 8,3 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,81 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,75 (d, 1H, J = 12,7 Hz), 4,60 (d, 1H, J = 12,8 Hz), 4,06 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 3, 98-3,90 (m, 4H) , 1,39 (t, 3H, J = 7 Hz).

Os cristais individuais foram obtidos por recristalização lenta a partir de acetonitrilo/isopropanol como solventes. Ponto de fusão = 211°C. Análise ao raio-X dos cristais individuais. Avaliou-se um cristal representativo e recolheu-se um conjunto de dados a 0,88 Â (máximo sin Θ/λ = 0,57) num difractómetro Bruker APEX II/R. Recolheu-se os pares de Friedel por ordem para facilitar a determinação da configuração absoluta. Os factores de dispersão atómica foram obtidos a partir de tabelas internacionais para cristalografia. Veja-se, International 120

Tables for Crystallography, Vol. C, pág. 219, 500, Kluwer

Academic Publishers, 1992. Todos os cálculos cristalográficos foram executados pelo sistema SHELXTL. Veja-se, SHELXTL, Versão 5.1, Bruker AXS, (1997) . Todos os dados do difractómetro foram recolhidos à temperatura ambiente. No quadro 2 seguintes são apresentados o cristal pertinente, o conjunto de dados e o refinamento.

Quadro 2

Dados de cristais e refinamento da estrutura para o composto do

exemplo 9A Fórmula empírica C50H37N4O19Cl Massa da fórmula 1033,29 Temperatura 296(2) K Comprimento de onda 1,54178 Á Sistema de cristal Monoclínico Grupo espacial P2 (1) Dimensões da célula unitária a = 17,5050(4) Á α = 90°. b = 6,2303(2) Â β = 97,6580(10)°. c = 21,9545(5) Á γ = 90°. Volume 2373,03(11) Á3 Z 2 Densidade (calculada) 1,446 Mg/m3 Coeficiente de absorção 1,452 rmT1 F (000) 1068 Tamanho do cristal 0,18 x 0,02 x Intervalo Teta para a recolha 0,01 mm3 2,55 a 61,76°. de dados Reflexões recolhidas 8972 Reflexões independentes 5062 [R(int) = Plenitude até teta = 61,76° 0,0236] 85,8% 121

Dados de cristais e refinamento da estrutura para o composto do

exemplo 9A

Correcção empírica de absorção 0,9856 e 0,7801 Mínimos quadráticos de matriz completa em F2 5062/1/668 1,009 RI = 0,0436, wR2 = 0,1090 0,02(3) 0,0015(2) 0,217 e -0,173 e.Á“3

Correcção de absorção

Transmissão máx. e min. Método de refinamento

Dados/restrições/parâmetros Adequação do ajuste a F2 índices R finais [I>2sigma(I)]

Parâmetro da estrutura absoluta Coeficiente de extinção Maior diferença, pico e supressão

Obteve-se uma estrutura de teste por métodos directos. Esta estrutura de teste foi refinada por métodos de rotina. As posições de hidrogénio foram calculadas onde fosse possível. Os hidrogénios de metilo foram localizados por técnicas de diferença de Fourier e depois idealizados. Os parâmetros de hidrogénio foram adicionados aos cálculos do factor de estrutura mas não foram refinados. Os desvios calculados nos ciclos finais pelo refinamento dos mínimos quadráticos foram todos inferiores a 0,1 dos desvios padrão correspondentes. O índice R final foi de 4,36%. Uma diferença de Fourier final revelou que não faltavam ou não estava mal colocada a densidade de electrões. A estrutura refinada foi desenhada utilizando o pacote de programas de desenho SHELXTL (figura 2). A configuração 122 absoluta foi determinada pelo método de Flack. Veja-se, Flack, H.D., Acta Crystallogr., A39, 876, (1983).

Exemplo 10 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5- [3- (4-Etoxi-benzil) -4-fluoro-fenil] -1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]octano-2, 3, 4-triol (10A) e (IS, 2S, 3S, 4S, 5S) -5-[3- (4-etoxi-benzil) -4-fluoro-fenil ] -l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo [3,2,1] octano-2, 3, 4-triol (10 B)

OH

A uma solução de { (2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3, 2,1] — oct-l-il}-metanol 1-1Ok (80,0 mg, 0,120 mmol) numa solução a 4:1 de etanol/tetra-hidrofurano (10 mL) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (93 microL, 2,32 mmol) e negro-de-paládio (62 mg, 0,580 mmol). Agitou-se a mistura 123 resultante à temperatura ambiente. Decorridas 3 horas, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (93 microL, 2,32 mmol) e de negro-de-paládio (62 mg, 0,580 mmol). Decorridas 5 horas, filtrou-se a mistura de reacção e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro resultante por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 15% de metanol em diclorometano) para se obter 35,0 mg de um sólido branco (mistura de isómeros) . Purificou-se a mistura de isómeros por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 30 x 100 mm, caudal 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 25% a 50% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 18 minutos; detecção UV: 220 nm. Método de HPLC analítica: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 pm, 4,6 x 150 mm, caudal de 1 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido trifluoroacético: :água/0,l% de ácido trifluoroacético; 5% a 100% de acetonitrilo/0,1% de ácido trifluoroacético ao longo de 12 minutos; detecção UV: 220 nm. 10A: (2,2 mg, rendimento de 4,5%) Rt = 7 minutos (método analítico); as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. MS (LCMS) 421,4 (M+H+; modo positivo) 465,3 (M+HC02~, modo negativo). ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 1,33 (t, J=7,0 Hz, 3 H), 3,53 (d, J=8,0 Hz, 1 H) , 3,57 (dd, J= 7,5, 1,5 Hz, 1 H), 3,60-3,67 (m, 2 H) , 3,75 (dd, J= 8,3, 1,3 Hz, 1 H), 3,81 (d, J=12,5 Hz, 1 H) , 3,89 (s, 2 H), 3,96 (g, J= 6,9 Hz, 2 H), 4,12 (d, J= 7,4 Hz, 1 H) , 6,77 (m, 2 H) , 124 7,00 (dd, J= 9,4, 8,2 Hz, 1 H) , 7,08 (m, 2 H) , 7,36-7,41 (m, 2 H) . 10B: (1,8 mg, rendimento de 3,7%) Rt = 7,13 minutos (método analítico) ; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. MS (LCMS) 421,4 (M+H+; modo positivo) 465,3 (M+HC02~, modo negativo). XH NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 1,34 (t, J=7, 0 Hz, 3 H), 3,51 (d, J= 7,4 Hz, 1 H) , 3,75 (d, 1 H, J = 12,5 Hz), 3,82-4,01 (m, 8 H) , 4,03 (d, J=1, 4 Hz, 1 H) , 6,79 (m, 2 H), 7,02 (dd, J= 9,8, 8,4 Hz, 1 H) , 7,10 (m, 2 H) , 7,41-7,49 (m, 2 H) .

Nota: após HPLC preparativa, as fracções que contêm estes produtos foram concentradas e novamente purificadas por cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 10% de metanol em diclorometano).

Exemplo 11 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5-{ 4-fluoro-3- [4- (tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo-[3, 2,1] octano-2, 3, 4-triol (11 A) 125

A uma solução de ((2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzi1]-fenil}-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]oct-l-il)-metanol I-llk (160,0 mg, 0,218 mmol) numa solução a 4:1 de etanol/tetra-hidrofurano (10 mL) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (185 microL, 4,64 mmol) e negro-de-paládio (148 mg, 1,39 mmol). Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorridas 3 horas, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (185 microL, 4,64 mmol) e de negro-de-paládio (148 mg, 1,39 mmol). Decorridas 5 horas, filtrou-se a mistura de reacção e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro resultante a cromatografia rápida através de gel de sílica (efectuando a 126 eluição com um gradiente de 0% a 15% de metanol em diclorometano) para se obter 100 mg de um sólido branco (mistura de isómeros). Purificou-se a mistura de isómeros por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 30 x 100 mm, caudal 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 25% a 50% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 18 minutos; detecção UV: 220 nm. Método de HPLC analítica: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 4,6 x 150 mm, caudal 1 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido trifluoroacético: :água/0,l% de ácido trifluoroacético; 5% a 100% de acetonitrilo/0,1% de ácido trifluoroacético ao longo de 12 minutos; detecção UV: 220 nm. 11A: (19 mg, rendimento de 19%) Rt = 6,43 minutos (método analítico); as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. ΧΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 2,03-2,11 (m, 1 H) , 2,15-2,25 (m, 1 H), 3,55 (d, 1 H, J = 8 Hz), 3,59 (dd, 1 H, J = 7,4 e 1 Hz), 3,61-3,69 (m, 2 H), 3,77 (dd, J=8,2 e 1 Hz, 1 H), 3,81-3,96 (m, 7 H) , 4,14 (d, J=7, 4 Hz, 1 H) , 4, 94-4, 98 (m, 1 H) , 6,79 (m, 2 H) , 7,02 (dd, J= 9,9, 8,5 Hz, 1 H), 7,12 (m, 2 H) , 7, 37-7, 45 (m, 2 H) . 127

Exemplo 12 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5- [3- (4-Clorobenzil) -4-fluorofenil ] -1-hidroximetil-6, 8-dioxabiciclo (3, 2,1] octano-2, 3, 4-triol (12A) e (IS, 2Sr 3Sr 4S, 5S) -5-[3- (4-clorobenzil) -4-fluorofenil] -1-hidroximetil-6, 8-dioxabiciclo [3, 2,1 ] octano-2, 3, 4-triol (12B)

A uma mistura do intermediário I-12k (102 mg) e negro-de-paládio (98 mg, 6,1 equivalentes) em etanol/tetra-hidrofurano (2 mL, 4/1 em volume) adicionou-se ácido fórmico (0,9 mL) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorrida 1 hora, adicionou-se uma quantidade suplementar de negro-de-paládio (67 mg, 4,2 equivalentes) e manteve-se a mistura sob agitação durante mais uma hora à temperatura ambiente. Removeu-se o paládio por filtração através de Celite® e concentrou-se o filtrado proporcionando a mistura de produto. Combinou-se este 128 material com um segundo lote de material impuro (preparado a partir do intermediário I-12k (80 mg) seguindo o procedimento descrito antes) para purificação por HPLC preparativa.

Condições de HPLC preparativa: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 30 x 100 mm, caudal 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico: :água/0,l% de ácido fórmico; 25% a 50% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 18 minutos), detecção UV: 220 nm. Método de HPLC analítica: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 pm, 4,6 x 150 mm, caudal 1 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido trifluoroacético:água/0,1% de ácido trifluoroacético; 5% a 100% de acetonitrilo/0, 1% de ácido trifluoroacético ao longo de 12 minutos; detecção UV: 220 nm. 12A: (18 mg, rendimento de 16%) Rt = 7,11 minutos (método analítico); MS (LCMS) 411,3 (M+H+; modo positivo); 409, 2 (M- H+; modo negativo) . XH NMR (400 MHz, metanol- -d4) δ p.p. m. 7, 45- 7, 42 (m, 2H) , 7, 25 (d, J = 8, 4 Hz, 2H) , 7, 19 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7, 05 (dd, J = 9,6, 9,2 Hz, 1H) , 4, 15 (d, J=1, 6 Hz , 1H), 3, 98 (s, 2H) , 3,84 (d, J = 12, 4 Hz, 1H ) , 3, 78 (dd, J = 8,4, 1, .2 Hz, 1H) , 3,68 (d, J = 12, 8 Hz, 1H ) , 3, 66 (t, J = = 8,2 Hz, 1H) , 3,60 (dd, J = 7,4, 1, 4 Hz, 1H ) , 3,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H) . 12B: ( 12 mg, rendimento de 11%) Rt= = 7,2 :5 mi nut os (método analítico); MS (LCMS) 411,3 (M+H+; modo positivo); 409,1 (M-H+; modo negativo) . ΤΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 7,52-7, 45 (m, 2H) , 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7, 19 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,05 (dd, J = 9,8, 8,6 Hz, 1H), 4, 05 129 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,91-3,84 (m, 4H), 3,76 (d, J= 12,4 Hz, 1H), 3,52 (d, J= 7,6 Hz, 1H) .

Exemplo 13 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S)-5-[4-fluoro-3-(4-(oxetano-3-iloxi)-benzil)-fenil)-l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo [3,2,1] octano-2, 3, 4-triol (13A)

A uma solução de ( (2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetan-3-iloxi)-benzil]-fenil}-6,8-dioxa-biciclo-[3,2, 1]oct-l-il)-metanol I-13k (300 mg, 0,417 mmol) numa solução a 4:1 de etanol/tetra-hidrof urano (10 mL) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (333 microL, 8,34 mmol) e negro-de-paládio (266 mg, 2,50 mmol) . Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorridas 3 130 horas, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (333 microL, 8,34 mmol) e de negro-de-paládio (266 mg, 2,50 mmol). Decorridas 5 horas, filtrou-se a mistura de reacção e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida. Purificou-se o residuo impuro resultante por cromatografia rápida através de gel de silica (efectuando a eluição com um gradiente de 0% a 15% de metanol em diclorometano) para se obter 153,0 mg de um sólido branco (mistura de isómeros). Purificou-se a mistura de isómeros por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Gemini C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 30 x 100 mm, caudal 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 25% a 50% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 18 minutos; detecção UV: 220 nm. 13A: (23 mg, rendimento de 12%) Rt = 7,9 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida. NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 3,52 (d, J=7,8

Hz, 1H) , 3,57 (d, J=7,2 Hz, 1H), 3 ,60-3,68 (m, 2 H), 3, 75 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 3,81 (d, i7=l2,5 Hz, 1H), 3,89 (s, 2 H) , 4, 12 (d, J=7, 4 Hz, 1 H) , 4,63 (dd , J=7,3, 4,8 Hz, 2 H) , 4, 95 (t, J=6,5 Hz, 2 H), 5,16-5,23 (m, 1 H) , 6,63 (m, 2 H) , 7, 00 (dd, J=9, 7, 8,5 Hz, 1 H), 7,10 (m, 2 H) , 7,36-7,42 (m, 2 H) 131

Exemplo 14 (IS, 2S, 3S, 4R, 5S)-5-{4-Cloro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzi 1]-fenil} -1 -hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo [3,2,1] octano-2, 3,4-triol (14A)

A uma solução do intermediário ( (2S,3S)-2,3,4-tris-benziloxi-5-{4-cloro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzi1]-fenil}-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]oct-l-il)-metanol 1-14k (182 mg) em etanol/tetra-hidrofurano (14 mL, 4/1 em volume) adicionou-se sucessivamente ácido fórmico (190 microL, 20 equivalentes) e negro-de-paládio (106 mg, 4 equivalentes) e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente. Decorridas 2 horas, adicionou-se uma quantidade suplementar de 1 mL de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente durante mais uma hora. 132

Nesse momento, adicionou-se uma quantidade suplementar de ácido fórmico (190 microL, 20 equivalentes) e de negro-de-paládio (106 mg, 4 equivalentes) e manteve-se a mistura sob agitação durante mais uma hora à temperatura ambiente. Filtrou-se o paládio e purificou-se a mistura impura (que contém uma mistura de isómeros), obtida após evaporação do solvente, por HPLC preparativa. Método de HPLC preparativa: coluna Xbridge C18 de fase inversa, 5 micrómetro, 100 x 30 mm, caudal 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 30% a 55% de acetonitrilo/0,1% de ácido fórmico ao longo de 11 minutos; detecção UV: 220 nm. 14A: (20 mg, rendimento de 17%); Rt = 4,43 minutos; as fracções que contêm produto foram concentradas sob pressão reduzida, obtendo-se um sólido branco. MS (LCMS) 465,3 (M+H+; modo positivo); 509,2 (M+HCC>2~; modo negativo). ΧΗ NMR (400 MHz, metanol-d4) δ p.p.m. 3,53 (d, J=8, 0 Hz, 1 H), 3,58 (dd, J=7,4, 1,4 Hz, 1 H) , 3,64 (t, J=8,2 Hz, 1 H), 3,67 (d, J=12,4 Hz, 1 H), 3,77 (dd, J=8,4, 1,4 Hz, 1 H), 3,83 (d, J=12,6 Hz, 1 H), 4,03 (s, 2 H) , 4,14 (d, J=7,4 Hz, 1 H), 4,65 (m, 2 H), 4,97 (t, J=6,6 Hz, 2 H) , 5,22 (m, 1 H), 6,65 (m, 2 H), 7,11 (m, 2 H), 7,34 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 7,38 (dd, J=8,4, 2,2 Hz, 1 H), 7,45 (d, J=2,0 Hz, 1 H) .

Exemplo 15

Co-cristalização de (IS, 2S, 3S, 4R, 5S)-5-[4-cloro-3-[4-etoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3,2,1]-octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4Ά) com L-prolina para se obter o composto (15) 133

Adicionou-se L-prolina dissolvida em água (aproximadamente 480 mg/mL) ao composto do exemplo 4A (aproximadamente 80 moles de L-prolina por mole do (composto do exemplo 4A)). Duplicou-se o volume com etanol, fechou-se com rolha a solução a agitou-se aproximadamente durante 12 horas. Reduziu-se o volume para metade por evaporação. Duplicou-se o volume utilizando etanol e reduziu-se novamente o volume da solução para metade por meio de evaporação. Recuperou-se o sólido por filtração centrífuga.

Exemplo 16

Co-cristalização de (IS,2S,3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]-octano-2,3, 4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para se obter o composto (16)

Adicionou-se L-prolina dissolvida em água (aproximadamente 480 mg/mL) ao composto do exemplo 4A (aproximadamente 59 moles de L-prolina por mole de composto do exemplo 4A) . Duplicou-se o volume com metanol e a solução ficou límpida. Aumentou-se o volume em 25% utilizando acetona. Fechou-se com tampa a solução e agitou-se aproximadamente durante 12 horas. Reduziu-se o volume aproximadamente em 60% por evaporação. Duplicou-se o volume utilizando metanol e evaporou-se o solvente restante para se obter um precipitado branco sólido.

Exemplo 17

Co-cristalização de (IS,2S,3S, 4R, 5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3, 2,1]- 134 octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para se obter o composto (17)

Adicionou-se uma solução de etanol saturada com L-prolina ao composto do exemplo 4A (aproximadamente 2,2 moles de L-prolina por mole do composto do exemplo 4A) num frasco de vidro. Fechou-se com tampa a solução límpida e agitou-se aproximadamente durante 72 horas. Reduziu-se o volume para metade por evaporação à temperatura ambiente. Observou-se a formação de precipitado, fechou-se com tampa o frasco e agitou-se aproximadamente durante 12 horas. Recolheu-se o sólido branco utilizando filtração centrífuga.

Exemplo 18

Co-cristalização de (IS,2S, 3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil) -feni 1 ] -1 -hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo [3,2,1]-octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para se obter o composto (18)

Introduziu-se L-prolina dissolvida em água (330 mg/mL) em aproximadamente 2 mL do composto do exemplo 4A dissolvido em isopropanol (98 mg/mL), até a solução ficar turva. Decorridos 15 a 20 minutos, observou-se precipitação e a suspensão ficou espessa. Adicionou-se aproximadamente 8 mL de água, fechou-se com tampa a solução e agitou-se de um dia para o outro. Recolheu-se o sólido branco utilizando filtração sob uma pressão hipobárica e secou-se num forno sob uma pressão hipobárica a 50°C aproximadamente durante 2 horas. 135

Exemplo 19

Co-cristalização de (IS,2S, 3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]-octano-2, 3, 4-triol (composto do exemplo 4A) com ácido L-piroglutâmico para se obter o composto (19)

Pipetou-se 153 microL do composto (4A) em álcool isopropílico (97,97 mg/mL) para 500 microL de ácido L-piroglutâmico em água (213,0 mg/mL). Fechou-se com tampa a solução e agitou-se de um dia para o outro. Adicionou-se uma quantidade suplementar aproximadamente de 5 a 10 mg de ácido L-piroglutâmico sólido. Adicionou-se 100 microL de etanol. Fechou-se com tampa a solução e agitou-se de um dia para o outro. Adicionou-se etanol até o volume total ser ajustado para cerca de 2 mL. Destapou-se a solução e manteve-se coberta de um dia para o outro. Adicionou-se uma quantidade suplementar aproximadamente de 10 a 30 mg de composto do exemplo 4A. Fechou-se com tampa a solução e agitou-se aproximadamente durante 2 dias. Observou-se um precipitado branco. Pipetou-se a suspensão para um tubo de microcentrifugação Co-star equipado com uma membrana com filtro de nylon de 0,45 mícron. Centrifugou-se a solução até se separar o sólido da solução. Recuperou-se o co-cristal (19).

Exemplo 20

Co-cristalização de (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3,2,1]-octano-2,3, 4-triol (composto do exemplo 4A) com ácido L-piroglutâmico para se obter o composto (20)

Saturou-se 4 a 5 mL de uma solução a 1:1 de etanol/água com ácido L-piroglutâmico (412,1 mg/mL). 136

Adicionou-se 730 mg do composto do exemplo 4A a 3,2 mL à solução de ácido L-piroglutâmico. Decorrido aproximadamente 1 minuto, observou-se precipitação. A solução era demasiado espessa para se agitar pelo que se adicionou 2 mL de uma solução a 1:1 de etanol/água. Agitou-se a solução de um dia para o outro. Recolheu-se o sólido utilizando filtração sob uma pressão hipobárica numa membrana com um filtro de nylon de 0,45 micron. Secou-se o sólido num forno sob uma pressão hipobárica a 50°C aproximadamente durante 2 horas. Recuperou-se aproximadamente 960 mg do complexo de co-cristal (20). A proporção estequiométrica entre o composto do exemplo 4A e o ácido L-piroglutâmico foi determinada, por NMR quantitativa, como sendo de 1:1,63. Removeu-se o excesso de ácido L-piroglutâmico por suspensão do material em etanol para se obter um co-cristal (20) a 1:1.

Exemplo 21

Co-cristalização de (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3,2,1]-octano-2,3, 4-triol (composto do exemplo 4A) com ácido L-piroglutâmico para se obter o composto (21)

Dissolveu-se 494 mg do composto do exemplo 4A em 1,5 mL de uma solução de isopropanol e etanol (a 4:1, respectivamente). Dissolveu-se 917,2 mg de ácido L-piroglutâmico em 3 mL de água. Aqueceu-se as soluções até 40°C. Adicionou-se 200 microL da solução de ácido L-piroglutâmico à solução do composto do exemplo 4A em intervalos de 1 minuto, até se transferir toda a solução (ambas as soluções estavam fechadas, salvo quando estavam a ser transferidas). Lavou-se o recipiente com a solução de ácido L-piroglutâmico com 200 microL de etanol e transferiu-se a 137 solução para a solução do composto do exemplo 4A. Agitou-se a solução durante 5 minutos e interrompeu-se o aquecimento (a solução arrefeceu aproximadamente 1°C a cada 3 minutos). A 30°C, colocou-se a solução numa agitadora à temperatura ambiente e agitou-se a 20°C durante 20 minutos. A solução era limpida. Adicionou-se aproximadamente 2 mL de cristais primários secos. A suspensão ficou espessa ao longo das 2 horas seguintes. Agitou-se a solução de um dia para o outro. Recuperou-se o sólido por meio de filtração sob uma pressão hipobárica num filtro de funil de frita de vidro 10-15M de 2 mL 'Pyrex'. Secou-se o sólido durante 24 horas num forno sob uma pressão hipobárica a 50°C.

Exemplo 22

Co-cristal de (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3- (4-etoxi-benzil)-fenil] -1 -hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo [3, 2,1] octano-2, 3,4-triol (composto do exemplo 4A) e L-prolina e co-cristal de (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5- (4-cloro-3- (4-etoxi-benzil) -fenil] -1-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3,2,1] octano-2, 3, 4-triol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico

Análise da difracçao de raio- -X no pó: os padrões de difracçao de raio-X no pó do co-cristal do composto do exemplo 4A com L-prolina e do co-cristal do composto do exemplo 4A com ácido L-piroglutâmico foram realizados num difractómetro Bruker D5000, utilizando radiação de cobre (comprimento de onda: 1,54056 Â) . A voltagem do tubo e a amperagem foram reguladas para 40 kV e 40mA, respectivamente. A divergência e os cortes por dispersão forma regulados para 1 mm e o corte receptor foi regulado para 0,6 mm. A radiação difractada foi detectada por meio 138 de um detector Kevex PSI. Utilizou-se uma pesquisa continua teta-dois teta a 2,4° por minuto (1 segundo por passo de 0,04°) desde 3,0 até 40° 2Θ. Analisou-se um padrão de óxido de alumínio para verificar o alinhamento do instrumento. Os dados foram recolhidos e analisados por um programa informático Bruker axis, versão 7.0. As amostras foram preparadas colocando-as num suporte de quartzo. Faz-se observar que a empresa Bruker Instruments adquiriu a Siemens; pelo que o instrumento Bruker D5000 é praticamente o mesmo do que o instrumento Siemens D5000. Utilizou-se a aplicação informática Eva 13.0.0.3 para visualizar e avaliar os espectros de PXRD. Os ficheiros de dados de PXRD (.raw) não foram processados antes da pesquisa de picos. De um modo geral, utilizou-se um valor limite de 2 e um valor de largura de 0,3 para fazer as atribuições preliminares de picos. O resultado das atribuições automáticas foi confirmado visualmente para garantir a validade e foram efectuados ajustes manuais se necessário.

Para se efectuar uma medição de difracção de raio-X num instrumento Bragg-Brentano, tal como o sistema Bruker utilizado para as medições aqui descritas, a amostra é tipicamente colocada num suporte que possui uma cavidade. O pó da amostra é comprimido por uma lamela de vidro ou um seu equivalente para garantir uma superfície aleatória e uma altura de amostra adequada. 0 suporte da amostra é então colocado no instrumento. O feixe incidente de raio-X é dirigido para a amostra, inicialmente com um ângulo pequeno em relação ao plano do suporte e é então movido através de um arco que faz aumentar continuamente o ângulo entre o feixe incidente e o plano do suporte. As diferenças de medições associadas a tais análises de pó em raio-X 139 ocorrem devido a diversos factores, incluindo: (a) erros na preparação da amostra (v.g., altura da amostra), (b) erros dos instrumentos (v.g., erros de amostras lisas), (c) erros de calibração, (d) erros dos operadores (incluindo os erros presentes durante a determinação dos locais dos picos) e (e) a natureza do material (v.g., erros de orientação preferida e transparência). Os erros de calibração e os erros de altura da amostra causam muitas vezes um desvio de todos os picos na mesma direcção. Pequenas diferenças na altura da amostra, quando se utiliza um suporte liso, irão dar origem a deslocamentos grandes nas posições dos picos em XRPD. Um estudo sistemático indicou que, utilizando um instrumento Shimadzu XRD-6000 na configuração Bragg-Brentano típica, diferenças de 1 mm na altura da amostra provocam desvios no pico tão grandes como 1°2Θ (Chen et al. ; J Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2001; 26, 63). Estes desvios podem ser identificados a partir do difractograma de raio-X e podem ser eliminados compensando o desvio (aplicando um factor de correcção sistemático a todos os valores de posição do pico) ou re-calibrando o instrumento. Conforme referido antes, é possível rectificar medições provenientes de diversas máquinas aplicando um factor de correcção sistemático para fazer com que as posições dos picos estejam em conformidade. De um modo geral, este factor de correcção irá fazer com que as posições do pico medidas pelo instrumento Bruker fiquem em conformidade com as posições do pico esperadas, podendo estar compreendidas no intervalo de 0 a 0,2°2Θ.

De um modo geral, os valores de difracção de raio-X no pó são preciso num intervalo de ± 0,2°2-teta, devido a 140 ligeiras variações do instrumento e das condições de ensaio. O co-cristal do composto do exemplo 4A e L-prolina do exemplo 18, é caracterizado pelo padrão de difracção de raio-X no pó seguinte, apresentado na figura 3, expresso em termos do grau 2Θ e intensidades relativas com uma intensidade relativa > 2,7%, determinadas num difractómetro Bruker D5000 com radiação de CuKa Ângulo (grau 2Θ) Intensidade relativa* (d 2,7%) 4,6 5,1 5,5 12, 8 7,6 40,2 8,5 11, 9 10,3 9,1 11,0 4,5 12,1 22,3 12,6 13,5 14, 4 13, 1 14, 8 16, 1 15,3 2,7 15, 9 10, 4 16,5 3,0 16,8 8,2 17,0 16,6 17,4 33, 9 18,1 2,9 18,4 10,3 18,9 16, 8 19,5 12,2 141 Ângulo (grau 2Θ) Intensidade relativa* 2,7%) 20,3 100, 0 21,0 6,5 22,0 5,5 22,2 7,1 22,6 11,5 22,9 29,3 23,5 4,5 24,3 13, 8 24, 8 14, 2 25, 4 14, 7 2,5,7 23,2 26,0 6,9 26,8 5,9 27,0 5,8 27,5 21,2 28,8 15, 5 29,4 6,5 29,8 8,2 30,2 53 30, 7 14,1 31, 7 5,2 32,1 7,4 32,5 7,7 33,0 9,9 33,3 7,5 33,8 5,5 34, 4 5,8 35,5 3,4 35, 8 4,0 36,9 3,1 37,4 2,9 38,2 4,7 142 Ângulo (grau 2Θ) Intensidade relativa* 2,7%) 38,3 6,0 39,3 O co *As intensidades relativas podem ser alteradas em função do tamanho do cristal e da morfologia.

Picos 2Θ característicos ou combinações do co-cristal do composto do exemplo 4A e L-prolina 0 co-cristal do Ângulo (grau 2Θ) 7,6 12,1 20,3 28,8 composto do exemplo 4A e de ácido L- piroglutâmico do exemplo 20, é caracterizado pelo padrão de difracção de raio-X no pó seguinte, apresentado na figura 4, expresso em termos do grau 2Θ e intensidades relativas com uma intensidade relativa > 2,7%, determinadas num difractómetro Bruker D5000 com radiação de CuKa Ângulo (grau 2Θ) Intensidade relativa* (^ 4,3%) 6,4 31, 0 7,6 5,9 11,8 4,3 12,3 8,8 12, 7 11, 0 13,5 10, 4 14,2 31,3 143 Ângulo (grau 2Θ) Intensidade relativa* 4,3%) 14, 4 24, 0 15,2 13, 9 16, 7 66, 8 17,4 57, 1 18,3 10,5 18, 7 53,3 19,1 24, 2 19,3 32, 0 19,8 9,2 20,3 75, 6 21,1 100, 0 22,5 9,2 23,6 11, 7 24,3 18, 7 24, 7 22,2 25, 0 14, 2 26,2 53, 4 27,2 4,6 27,9 10, 0 28,3 26,3 29,0 14, 5 29,5 31,3 30, 7 16,2 31,5 5,4 32,0 23,2 33,0 9,9 34,2 19, 9 35,2 5,4 35, 9 13,6 37,3 8,3 37,9 9,5 38,4 6,1 144 Ângulo (grau 2Θ) Intensidade relativa* (> 4,3%) 39,2 10,3 *As intensidades relativas podem ser alteradas em função do tamanho do cristal e da morfologia.

Picos 2Θ característicos ou combinações do co-cristal do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico

Exemplo 23 Co-cristal de (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro~3~(4-etoxi- benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo[3, 2,1]- octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e L-prolina e co-cristal de (IS, 2S, 3S, 4R, 5S) -5-[4-cloro~3- (4-etoxi- benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]- octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e ácido L- piroglutâmico

Análise do termograma de calorimetria de pesquisa diferencial

Os termogramas são obtidos num calorimetro de pesquisa diferencial ' TA Instruments Q1000 ' (DSC). Colocou-se uma amostra de 1 a 2 mg em placas de alumínio para amostras e depois cobre-se com uma tampa perfurada. Mede-se a energia contra uma placa vazia à medida em que a temperatura aumenta de 25°C até 200°C-300°C, à razão de 10°C por 145 minuto. A temperatura de início da endotermia de fusão foi registada como a temperatura de fusão. A temperatura do início da endotermia de fusão é dependente da taxa derivado aquecimento, da pureza da amostra, do tamanho do cristal e da amostra, entre outros factores. Tipicamente, os resultados de DSC são precisos num intervalo de cerca de ± 2°C e de preferência num intervalo de ± 1,5°C.

Os resultados de DSC do co-cristal do exemplo 18 do composto do exemplo 4A e de L-prolina são apresentados na figura 5.

Os resultados de DSC do co-cristal do exemplo 18 do composto do exemplo 4A e de ácido L-piroglutâmico são apresentados na figura 6.

Exemplo 24

Co-cristal de (IS,2S,3S,4R,5S)~5~[4-cloro-3- (4-etoxi-benzil)-fenil] -l-hidroximetil-6, 8-dioxa-biciclo [3,2,1] octano-2, 3, 4-triol (composto do exemplo 4A) e L-prolina

Análise do raio-X de um cristal individual. Examinou-se um cristal representativo, utilizando o filtrado do exemplo 17 e concentrando-o por meio de evaporação lenta, e recolheu-se um conjunto de dados 0,85 Ã (máximo sin Θ/λ = 0,60) num difractómetro Bruker APEX. Recolheu-se os pares de Friedel para facilitar a determinação da configuração absoluta. Os factores de dispersão atómicos foram obtidos a partir de International Tables for Crystallography, Vol. C, pág. 219, 500, Kluwer Academic Publishers, 1992. Todos os cálculos cristalográficos foram executados pelo sistema SHELXTL, versão 5.1, Bruker AXS, 1997. Todos os dados provenientes do difractómetro foram recolhidos à temperatura ambiente. 146

No quadro 24-1 seguinte são apresentados o cristal pertinente, o conjunto de dados e o refinamento.

Obteve-se uma estrutura de ensaio por métodos directos. Esta estrutura de ensaio foi refinada por procedimentos de rotina com a excepção da molécula de água inesperada e do distúrbio conformacional com a L-prolina. Para L-prolina foi utilizado um modelo com uma ocupação de -60/40 nas conformações de "metade da cadeira" e "invólucro". Um distúrbio bastante semelhante foi observado por H. D. Flack, Acta Crystalloqr., A39, 876, 1983.

Os átomos de hidrogénio ligados a Nl, 06 e 07 foram localizados por técnicas de diferenças de Fourier e foram permitidos refinar com as restrições em termos de distâncias. Os átomos de hidrogénio relevantes ligados a 05 foram localizados a partir de técnicas de Fourier, mas foram apagados e colocados no local idealizado (HFIX 83). O átomo de hidrogénio relevante ligado a 04 não pode ser encontrado com técnicas de Fourier e foi colocado num local idealizado (HFIX 83). Os átomos de hidrogénio na molécula de água não puderam ser localizados e foram excluídos da solução. Os parâmetros de hidrogénio foram adicionados aos cálculos do factor de estrutura mas não foram refinados. Todos os desvios calculados no ciclo final do refinamento por mínimos quadráticos foram inferiores a 0,1 dos desvios padrão correspondentes. O índice R final foi de 5,15%. Uma diferença de Fourier final indicou que não faltava ou estava mal colocada a densidade de electrões. A estrutura refinada foi desenhada utilizando o conjunto de programas de desenho SHELXTL (figura 7) . A configuração absoluta foi determinada pelo método de Flack4. As coordenadas, os factores de temperatura 147 anisotrópicos, as distâncias e os ângulos encontram-se disponíveis como material suplementar (quadros 24-2 a 24-5) .

Quadro 24-1 Dados do cristal e refinamento da estrutura Fórmula empírica

Peso da fórmula Temperatura Comprimento da onda Sistema cristalino Grupo espacial Dimensões da célula unitária

Volume

Z

Densidade (calculada) Coeficiente de absorção F (000)

Tamanho do cristal

Intervalo teta para recolha de dados Intervalos de índices

Reflexões recolhidas Reflexões independentes Plenitude até teta = 65,58° para o exemplo 24 oí= 90°. β= 101,268(5)°. γ = 90°. -38<=h<=37, -8<=k<=6, -13<=1<=13 6261 2922 [R(int) = 0,0526] 74, 9 % 148 148 nenhuma

Correcção de absorção Método de refinamento Mínimos quadráticos de matriz completa em F2

Dados / restrições / 2922/5/380 parâmetros Qualidade do ajuste 0,953 em F2 índices R finais RI = 0,0515, wR2 = [ I>2sigma(I) ] 0,1304 índices R (todos os RI = 0,0581, wR2 = dados) 0,1334 Parâmetro da 0,02(3) estrutura absoluta Coeficiente de 0,0027(2) extinção Maior diferença de 0,252 e -0,210 e.Á' picos e supressões

Quadro 24-2. Coordenadas atómicas (x 104) e parâmetros do deslocamento isotrópico equivalente (Â2x 103) para o exemplo 24. U(eq) é definido como um terço do tensor Uij ortogonalizado. traço do X y z U (eq) Cl (01) 7251(1) 14669(2) 1220 (1) 73(1) N (1) 5586(1) 4836 (6) 1285 (3) 52(1) 0(1) 6821(1) 9986 (6) 5726 (3) 66(1) C(1) 6691 (2) 13136(9) 6328 (5) 78 (2) 0(2) 6311(1) 7637 (5) -1948(2) 50(1) C (2) 6929(2) 11374(9) 6600 (4) 66(1) 0(3) 5936(1) 10106(4) -2723(2) 46(1) C (3) 6973(1) 10182(7) 4725(4) 55(1) 0(4) 5415(2) 10596(7) -4969(4) 89(1) 149 X y z U (eq) C ( 4 ) 7278 (2) 11410(8) 4564(4) 62(1) C (5 ) 7411(2) 11447(8) 3506(4) 59(1) 0(5) 5145(1) 6652 (5) -3818(3) 66(1) C (6) 7237(1) 10299(7) 2618 (4) 53(1) 0(6) 5092(1) 7027 (5) -1397(3) 63(1) 0(7) 5878(1) 7968 (5) 33 (3) 54(1) 0(7) 6932(2) 9079(7) 2793 (4) 59(1) 0(8) 5009(1) 2361 (6) 1421 (4) 78(1) C (8) 6804(2) 8992 (8) 3838 (5) 59(1) 0(9) 5409(1) -82(6) 1265(4) 76(1) C (9) 7365(1) 10429(8) 1443 (4) 59(1) 0(10) 7014(1) 11175(7) 533(4) 51(1) 0(11) 6926(1) 13040(7) 382(4) 52(1) c (12) 6592(2) 13693(7) -395(4) 58(1) C (13) 6331(1) 12460(7) -1057(3) 52(1) C (14 ) 6401(1) 10583(6) -950 (3) 44(1) C (15) 6744(1) 9959(7) -151 (3) 49(1) C (16) 6104(1) 9260 (6) -1659(4) 47(1) C (1 7 ) 6125(1) 7179(7) -3112(4) 51(1) C (18 ) 5775(1) 8575 (6) -3448(4) 49(1) C (19 ) 5720(2) 9220 (7) -4695(4) 59(1) C (20) 5363(1) 8012 (7) -3103(4) 51(1) c (21) 5455(1) 7344(7) -1843(4) 50(1) C (22) 5739(1) 8727 (6) -1085(4) 46(1) C (23) 5335(2) 1609 (8) 1299 (4) 62(1) C (24) 5698(2) 2825 (8) 1186 (5) 63(1) C (25) 6072(2) 2583 (12) 2141 (9) 105(3) C (26) 5826(2) 5594(10) 2391 (5) 74 (2) C(35A) 6000(5) 4000 (30) 3036 (13) 126(7) C(35B) 6229(4) 4430 (20) 2538(15) 71(5) 0(9 9A) 5382(2) 3257(7) 6727 (5) 101(2) 150

Quadro 24-3. Comprimentos [Ã] e ângulos [°] de ligaçao para o exemplo 24

Cl (01)-C(11) 1,761(4) N(l)-C(26) 1,492(7) N(l)-C (24) 1,513(7) N(1)-H(9 8A) 0,977(18) N(1)-H(9 8B) 1,00 (2) 0(1)-C (3) 1,377(5) 0 (1)-C (2) 1,434(7) C (1)-C (2) 1,499(8) C(1)-H(03C) 0,9600 C(1)-H(03D) 0,9600 C(1)-Η(03E) 0,9600 0(2)-C(17) 1,430(5) 0(2)-C (16) 1,434(5) C(2)-H(03F) 0,9700 C(2)-H(03G) 0,9700 0(3)-C (16) 1,409(5) 0(3)-C (18) 1,437(5) C(3)-C ( 4) 1,379(7) C (3)-C (8) 1,386(7) 0 (4)-C (19) 1,405(7) 0(4)-Η(4A) 0,8200 C(4)-C(5) 1,401(7) C(4) -H(025) 0,9300 C (5)-C (6) 1,371(7) C(5)-H (2) 0,9300 0 (5)-C (20) 1,400(6) 0(5)- H (5) 0,8200 C (6 ) —C ( 7 ) 1,383(7) C (6)-C (9) 1,528(6) 0 (6)-C (21) 1,413(5) 0(6)-Η(99A) 0,95 (2) 151 Ο (7)-C (22) Ο(7)-Η(99Β) C(7)-C (8) C(7)-Η(026) Ο(8)-C(23) C(8)-Η (033) 0(9)-0(23) 0(9)-0(10) C(9) —Η(02Α) C(9)-Η(02Β) 0(10)-0(11) C (10)-C (15) 0(11)-0(12) 0(12)-0(13) C(12)-Η(02 7) 0(13)-0(14) 0(13)-Η(021) 0(14)-0(15) 0(14)-0(16) 0(15)-Η(030) 0(16)-0(22) 0(17)-0(18) 0(17)-Η(020) 0(17)-Η(02D) 0(18)-0(19) 0(18)-0(20) 0(19)-Η(03Η) 0(19)-Η(031) 0(20)-0(21) 0(20)-Η(4) 0(21)-0(22) 0(21)-Η(015) 0(22)-Η(013) 0(23)-0(24) 1,420(5) 0, 93(2) 1,380(7) 0,9300 1,235(7) 0,9300 1,251(7) 1,513(7) 0,9700 0,9700 1,386(7) 1,392(7) 1,369(7) 1,373(7) 0,9300 1,381(7) 0,9300 1,394(6) 1,501(6) 0,9300 1,536(6) 1,526(6) 0,9700 0,9700 1,520(6) 1,540(6) 0,9700 0,9700 1,537(6) 0,9800 1,533(6) 0,9800 0,9800 1,510(7) 152 C(24)-C(25) 1,506(10) C(24)-H(029) 0,9800 C(25)-C(35B) 1,479(17) C(25)-C(35A) 1,52 (2) C(25)-H(3 4A) 0,9700 C(25)-Η(34B) 0,9700 C(26)-C(35A) 1,440(19) C(26)-C(35B) 1,548(14) C(26)-Η(03A) 0,9700 C(26)-Η(03B) 0,9700 C(35A)-Η(35A) 0,9700 C(35A)-Η(35B) 0,9700 C(35B)-H(35C) 0,9700 C(35B)-H(35D) 0,9700 C(26)-N(1)-C(24) 109,1(4) C(26)-N(1)-H(9 8A) 107(2) C(24)-N(1)-H(9 8A) 109(3) C(26)-N(1)-H(9 8B) 97 (3) C(24)-N(l)-Η(98B) 119(3) H(9 8A)-N(1)-H(9 8B) 114(4) C(3)-0(1)-C(2) 117,7(4) C(2)-C(1)-H(03C) 109,5 C(2)-C(1)-H(03D) 109,5 H(03C)-C(1)-H(03D) 109,5 C(2)-C(1)-Η(03E) 109,5 H(03C)—C(1)—Η (03E) 109,5 H(03D)-C(1)-H(03E) 109,5 C(17)-0(2)-C (16) 106,6(3) 0(1)-C(2)-C (1) 113,4(5) 0(1) -C(2)-H(03F) 108, 9 C(1) -C(2)-H(03F) 108, 9 O(l)-C(2)-H(03G) 108, 9 C(1)-C(2)-H(03G) 108, 9 153 H(03F)-C(2)-H(03G) 107, 7 C (16)-0(3)-C(18 ) 103,3(3) 0 (1)-C (3)-C(4) 125,4(4) 0 (1)-C(3)-C(8 ) 115,1(4) C (4)-C(3)-C(8 ) 119,4(4) C(19)-0(4)-Η(4A) 109,5 C (3)-C (4)-C (5) 119,7(5) C(3)-C(4)-H(025) 120,2 C(5)-C(4)-H(025) 120,2 C(6)-C(5)-C ( 4) 121,0(5) C(6)-C(5)-H(2) 119,5 C(4)-C(5)-H(2) 119,5 C(2 0)-0(5)-H (5) 109,5 C(5)-C(6)-C(7) 118,6(4) C(5)-C(6)-C(9) 120,7(4) C ( 7)-C (6)-C ( 9) 120,7(4) C(21)-0(6)-H(9 9A) 105(3) C(22)-0(7)-H(99B) 108(3) C(8)-C(7)-C(6) 121,2 (4) C(8)-C(7)-H(026) 119, 4 C(6)-C(7)-H(026) 119, 4 C(7)-C(8)-C(3) 120,0(4) C(7)-C(8)-H(033) 120, 0 C(3)-C(8)-H(033) 120, 0 C(10)-C(9)-C(6) 111,2(3) C(10)—C(9)-Η(0 2A) 109, 4 C(6)-C(9)-Η(02A) 109, 4 C(10)—C(9)-Η(0 2B) 109, 4 C(6 ) -C(9)-Η(02B) 109, 4 H(02A)-C(9)-H(02B) 108, 0 C(ll)-C(10)-C(15) 116,7(4) C(11)-C(10)-C ( 9) 123,4(4) C(15)-C(10)-C(9) 119,8(4) C(12)-C(ll)-C(10) 122,9(4) 154 C(12)—C(ll)—Cl (01) 117,6(4) C(10)-C(11)-C1(01) 119,5(4) C(11)-C(12)-C (13) 119,1(5) C(ll)-C(12)-H(027) 120,5 C(13)-C(12)-H(027) 120,5 C(12)-C(13)-C (14) 121,0(4) C(12)-C(13)-H(021) 119,5 C(14)-C(13)-H(021) 119,5 C(13)—C(14)—C (15) 118,6(4) C(13)-C(14)-C(16) 119,9(4) C(15)-C(14)-C(16) 121,4(4) C(10)-C(15)-C(14) 121,8(5) C(10)-C(15)-H(030) 119, 1 C(14)-C(15)-H(030) 119 ,1 0(3)—C(16)—0(2) 105,4(3) 0(3)-C(16)-C (14) 108,5(4) 0 (2)-C (16)-C (14) 111,6(3) 0(3)-C(16)-C (22) 107,4(3) 0(2) -C(16)-C(22) 110,3(4) C(14)-C(16)-C(22) 113,2(3) 0(2)-C(17)-C(18) 104,8(3) 0(2) -C(17)-H(02C) 110, 8 C(18)-C(17)-H(02C) 110, 8 0(2) -C(17)-H(02D) 110, 8 C(18)-C(17)-H(02D) 110, 8 H(02C)-C(17)-H(02D) 108, 9 0(3)-C(18)-C(19) 107,4(4) 0(3)-C(18)-C(17) 100,7(3) C(19)-C(18)-C(17) 113,4(4) 0(3)-C(18)-C(20) 106,7(3) C(19)-C(18)-C(20) 113,1(4) C(17)-C(18)-C(20) 114,3(4) 0(4)-C(19)-C(18) 112,7(4) 0(4) -C(19)-Η(03H) 109, 0 155 C(18)—C(19)—H(03H) 109, 0 0(4)-C(19)-Η (031) 109, 0 C(18)—C(19)—H(03I) 109, 0 H(03H)-C(19)-H(031) 107, 8 0(5)-C(20)-C (21) 110,0(4) 0(5)-C(2 0)-C (18) 113,5(4) C(21)-C(20)-C(18) 108,9(3) 0(5) -C(20)-H (4) 108, 1 C(21)-C(20)-H(4) 108, 1 C(18)-C(20)-H(4) 108, 1 0(6)-C(21)-C (22) 110,6(3) 0(6)—C(21)—C(20) 113,1(4) C(22)-C(21)-C(20) 109,9(4) 0(6)-C(21)-H(015) 107, 7 C(22)-C(21)-H(015) 107, 7 C(20)-C(21)-H(015) 107, 7 0(7)-C(22)-C(21) 109,7(4) 0(7)-C(22)-C (16) 111,8(3) C(21)-C(22)-C(16) 110,3(3) 0(7)-C(2 2)-H (013) 108,3 C(21)-C(22)-H(013) 108,3 C(16)-C(22)-H(013) 108,3 0(8)-C(23)-0(9) 127,9(5) 0(8)-C(23)-C (24) 118,1(5) 0(9)-C (23)-C (24) 114,1(5) C(25)-C(24)-C(23) 114,1(5) C(25)-C(24)-N(l) 103,3(5) C(23)-C(24)-N(1) 110,3(4) C(25)-C(24)-H(029) 109,6 C(23)-C(24)-H(029) 109,6 N(1)-C(2 4)-H (029) 109,6 C(35B)-C(25)-C(24) 108,3(8) C(35B)-C(25)-C(35A) 42,4(8) C(24)-C(25)-C(35A) 103,1(8) 156 C(35Β)-C(25)-Η(34Α) 70,3 C(24)-C(25)-Η(34A) 111,2 C(35A)-C(25)-Η(34A) 111,2 C(35B)-C(25)-Η(34B) 137, 2 C(24)-C(25)-Η(34B) 111,2 C(35A)-C(25)-Η(34B) 111, 1 Η(34A)-C(25)-Η(34B) 109, 1 C(35A)-C(26)-N(l) 104,8(9) C(35A)-C(26)-C(35B) 42,5 (9) N(l)-C(26)-C(35B) 101,1(7) C(35A)-C(26)-Η(03A) 110, 8 N(1)-C(26)-Η(03A) 110, 8 C(35B)-C(26)-Η(03A) 73,1 C(35A)-C(26)-Η(03B) 110, 8 N(1) -C(26)-Η(03B) 110, 8 C(35B)-C(26)-Η(03B) 144, 0 Η(03A)-C(26)-Η(03B) 108, 9 C(26)-C(35A)-C(25) 105,8(10) C(26)-C(35A)-H(3 5A) 110,6 C(25)-C(35A)-Η(35A) 110,6 C(26)-C(35A)-H(35B) 110,6 C(25)-C(35A)-Η(35B) 110,6 Η(35A)-C(3 5A)-Η(35B) 108, 7 C(25)-C(35B)-C(26) 102,7(8) C(25)-C(35B)-H(35C) 111,2 C(26)-C(35B)-H(3 5C) 111,2 C(25)-C(35B)-H(35D) 111,2 C(26)-C(35B)-H(3 5D) 111,2 H(35C)-C(35Β)-Η(35D) 109,1 157

Quadro 24-4. Parâmetros do deslocamento anisotrópico (Â2x 103) para o exemplo 24. 0 expoente do factor de deslocamento anisotrópico assume a forma: -2n2 [ h2 a*2Un + ... +2 h k a* b* U12] Un U22 U33 u23 Ul3 Ul2 Cl (01) 77(1) 69 (1) 69 (1) -11 (1) Kl) -27(1) N (1) 56 (2) 40 (2) 60 (2) 0(2) 12 (2) 0(2) 0(1) 70 (2 ) 70 (3) 62 (2) 2(2) 23 (2) -3 (2) C(1) 80 (3 ) 76(4) 77 (3) -2(3) 13 (3) 8(3) 0(2) 47(1) 52 (2) 49 (1) -KD 3(1) 12 (1) C (2) 63 (3 ) 84(4) 52 (2) 1(2) 13 (2) 7(3) 0(3) 46 (1) 43 (2) 45(1) 2(1) 3(1) -KD 0(3) 48 (2 ) 59 (3) 57(2) 5(2) 12 (2) 8(2) 0(4) 111 (3) 83 (3) 62 (2) 8(2) -10(2) 23 (3) C (4) 59 (3 ) 72(4) 53 (2) -10 (2) 10 (2) -12 (2) 0(5) 54(2) 66 (3) 55 (2) -6(2) 4(2) -11 (2) 0(5) 69 (2 ) 59 (2) 59 (2) 2(2) -12(2) -8 (2) C (6) 41 (2) 55 (3) 59 (2) -2(2) 4(2) 4(2) 0(6) 58 (2 ) 47 (2) 87 (2) -6(2) 25 (2) -9(1) 0(7) 62 (2 ) 49 (2) 51 (2) 2(1) 12 (1) -KD C (7) 54(2) 59 (3) 58 (2) -11 (2) -4(2) -2 (2) 0(8) 63 (2 ) 63 (3) 116(3) -22 (2) 36 (2) -12 (2) C (8) 52 (2 ) 57(3) 69 (3) -1(2) 12 (2) -7(2) 0(9) 90 (2 ) 52 (3) 98 (2) -8(2) 44 (2) -7(2) C (9) 45(2) 72(4) 58 (2) -12 (2) 5(2) 1(2) 0(10) 45(2) 61 (3) 46 (2) -4(2) 11 (2) -3 (2) C(ll) 57(2) 48 (3) 50 (2) -8(2) 11 (2) -16 (2) C (12 ) 75(3) 43 (3) 57(2) 2(2) 12 (2) -1 (2) C (13 ) 50 (2 ) 54(3) 49 (2) 7(2) 4(2) -2 (2) C (14) 48 (2) 44 (2) 41 (2) 1(2) 10 (2) 0(2) C (15) 47 (2 ) 54(3) 45(2) -5(2) 8 (2) 5(2) C (16) 45(2) 49 (3) 47 (2) -1(2) 8 (2) 3(2) C (17 ) 54(2) 47 (3) 52 (2) -10 (2) 8 (2) -2 (2) 158

Un U22 U33 U23 U13 U12 C (18 ) 52 (2 ) 44(3) 47(2) -6(2) 1 (2) 0(2) C (19 ) 63 (3) 60(3) 50(2) -7(2) 1 (2) -3 (2) C (20) 45(2) 45(3) 56(2) -3(2) -3 (2) 4(2) C (21) 51 (2) 37(2) 60(2) -1(2) 11 (2) 3(2) C (22) 48 (2) 40(2) 50(2) -2(2) 10 (2) 5(2) C (23) 79 (3 ) 46(3) 65(3) -12 (2) 24 (2) -3 (2) C (24) 63 (3 ) 49(3) 84(3) 3(2) 30 (2) 4(2) C (25) 70(4) 63(5) 176(8) 13(5) 8(4) 14(3) C (26) 68 (3 ) 79(4) 68(3) -3(3) -3 (3) 8(3) C(35A) 104(11) 178(19) 79(8) 29(10) -26(8) -30 (11) C(35B) 43 (6) 73(10) 90(9) -3(7) -1 (6) 4(6) 0(9 9A) 130(4) 76(4) 95(3) 14(2) 18 (3) 9(3) Quadro 24-5. Coordenadas de hidrogénio (x 10 4) e parâmetros de deslocamento isotrópico (A2x 103) para 0 exemplo 24 X y Z U (eq) H(9 8A) 5291 (6) 4930 (60) 1320(30) 33 (9) H(9 8B) 5680 (13) 5750 (50) 760 (30) 51(12) H(0 3C) 6764 13698 5659 117 H ( 0 3D) 6757 13962 6973 117 Η(0 3E) 6398 12877 6176 117 H ( 0 3F) 7223 11637 6698 80 H(03G) 6878 10893 7327 80 Η (4A) 5481 11497 -4553 134 H(025) 7394 12210 515 74 H (2 ) 7619 12262 3404 71 H (5) 5097 7017 -4489 98 Η(99A) 4974 (16) 8220 (40) -1350 (50) 64(15) H(9 9B) 5744 (13) 8610 (60) 540 (30) 54(13) H (026) 6810 8302 2195 71 H (033) 6604 8136 3947 71 Η(02A) 7604 11232 1504 71 159 X y z U (eq) Η (0 2Β) 7443 9215 1214 71 Η (027) 6544 14955 -474 70 Η (021) 6103 12894 -1584 62 Η (030) 6793 8697 -74 59 Η (02C) 6017 5929 -3159 61 Η (02D) 6325 7285 -3614 61 Η(0 3Η) 5982 96 96 -4830 71 Η(031) 5643 8173 -5204 71 Η (4) 5187 9111 -3149 61 Η (015) 5605 6171 -1818 59 Η(013) 5578 9843 -1009 55 Η (029) 5776 2606 438 76 Η(3 4Α) 6327 2839 1870 126 Η(3 4Β) 6084 1342 2453 126 Η(03Α) 6044 6414 2248 89 Η(03Β) 5645 6267 2805 89 Η(35Α) 5809 3518 3496 152 Η(3 5Β) 6259 4310 3548 152 Η (3 5C) 6415 4913 2066 85 Η(35D) 6372 440 4 3339 85 Exemplo 25 Co-cristal do exemplo 20 de (IS, 2S, 3S, 4R, 5S)-5-[4-cloro-3- (4-etoxi -benzil) -fenil]-1-hldroximetll-6.8 -dioxa-biciclo- [3.2.1]octano-2, 3,4-trlol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico Análise do raio- -X de um cristal individual. Examinou-se um cristal representativo de uma amostra do 20 e recolheu-se um conjunto de dados 0,90 Ã (máximo sin θ/λ = 0,56) num difractómetro Bruker APEX. Recolheu- -se os pares de Friedel para facilitar a determinação da confiquração absoluta. 160

Determinou-se a estereoquímica a partir do parâmetro de Flack e também a partir da quiralidade conhecida do cofórmero (ácido L-piroglutâmico). Os factores de dispersão atómicos foram obtidos a partir de International Tables for Crystallography, Vol. C, pág. 219, 500, Kluwer Academic Publishers, 1992. Todos os cálculos cristalográficos foram executados pelo sistema SHELXTL, versão 5.1, Bruker AXS, 1997. Todos os dados provenientes do difractómetro foram recolhidos à temperatura ambiente. No quadro 24-5 seguinte são apresentados o cristal pertinente, o conjunto de dados e o refinamento.

Obteve-se uma estrutura de ensaio por métodos directos. Esta estrutura de ensaio foi refinada por procedimentos de rotina com a excepção de um pico residual fraco que foi refinado como sendo água estequiométrica 0,1. A estequiometria de água foi encontrada, em primeiro lugar, apagando um grupo hidroxilo na molécula, refinamento e medição do pico q resultante; seguindo-se a comparação deste pico com o pico residual da molécula de água. Utilizando este método, estimou-se uma proporção de 1 para 0,1 (molécula para água). Além disso, a remoção da molécula de água da solução e a pesquisa de espaços vazios no cristal utilizando Material Studio, Platon e mercúrio revelou um volume plausível de 33 Ã3 para a molécula de água (a água possui tipicamente cerca de 40 A de espaço. Os átomos de hidrogénio no azoto e no oxigénio foram localizados por técnicas de diferenças de Fourier e foi permitido o seu refinamento sem qualquer restrição. Alguns dos protões ligados a heteroátomos (H97a, H97b, H97c e H97c) exibiram comprimentos de ligação pequenos (—0,8 Ã encontrado vs. -0,96 esperado), embora as distâncias tenham 161 sido deixadas sem restrições. Os átomos de hidrogénio em 099 (água) não foram encontrados a partir do mapa de diferenças e foram excluídos da solução da estrutura. Os parâmetros de hidrogénio foram adicionados aos cálculos dos factores de estrutura, mas não foram refinados. Todos os desvios calculados no ciclo final do refinamento por mínimos quadráticos foram inferiores a 0,2 dos desvios padrão correspondentes. O índice R final foi de 3,58%. Uma diferença de Fourier final indicou que não faltava ou estava mal colocada a densidade de electrões. Dos residuais que faltavam, um encontra-se numa posição razoável para um protão ligado a 039 (ácido carboxílico). Este residual pode ser uma posição de ocupação suplementar para o protão H98a (protão ligado a 039), embora não tenha sido refinado como tal. A estrutura refinada foi desenhada utilizando o conjunto de programas de desenho SHELXTL (figura 8) . A configuração absoluta foi determinada pelo método de Flack (H. D. Flack, Acta Crystallogr., A39, 876, 1983). As coordenadas, os factores de temperatura anisotrópicos, as distâncias e os ângulos encontram-se disponíveis como material suplementar (quadros 25-2 a 25-5).

Quadro 25-1. Dados do cristal e refinamento da estrutura para o exemplo 25 Fórmula empírica Peso da fórmula Temperatura Comprimento da onda Sistema cristalino C22H25C1iO7*C5H7N1O3*0,1 (H20) 567,79 570(2) K 1,54178 Á

Ortorrômbica 162 Grupo espacial Dimensões da célula unitária P2 (1)2(1)2(1) a = 7,4907(10) Á α = 90 b = 12,8626(15) Á β = 90 c = 28,029(4) Á Y = 90

Volume 2700,6(6) Ã3 Z 4

Densidade 1,396 Mg/m3 (calculada) Coeficiente de 1,76 7 rmT1 absorção F(000) 1196 Tamanho do cristal 0,03 x 0,2 x 0,2 mm3 Intervalo teta 3,15 to 59,28°. para recolha de dados Intervalos de -6<=h<=7, -13<=k<=14, índices CTi CX1 II V l-1 II V Reflexões 9116 recolhidas Reflexões 3759 [R(int) = 0,0275 independentes Plenitude até teta 96,5 % = 65,58°

Correcção de absorção Método de refinamento Dados / restrições / parâmetros Qualidade do ajuste em F2 índices R finais [I>2sigma(I)]

Empírica Mínimos quadráticos de matriz completa em F2 3759 / 0 / 387 1, 032 RI = 0 wR2 = 0358, , 0885 163 163 RI = 0,0418, wR2 = 0,0920 0,010(18) 0,00067(17) 0,171 e -0,136 e, A 3 índices R (todos os dados)

Parâmetro da estrutura absoluta Coeficiente de extinção

Maior diferença de picos e supressões

Quadro 25-2. Coordenadas atómicas (x 104) e parâmetros do deslocamento isotrópico equivalente (Â2x 103) para o exemplo 25. U(eq) é definido como um terço do tensor Uij ortoqonalizado. traço do X y Z U(eq) C(l) 1385(7) 9812 (3) 634(2) 89(1) C (2) 1302(6) 8776 (3) 399(2) 81(1) 0(3) 2546(3) 8104(1) 625(1) 55(1) C(4) 2553(4) 7080 (2) 489(1) 43(1) C (5) 1555(5) 6676 (2) 117(1) 54(1) C (6) 1669(4) 5630 (2) 13 (1) 50(1) C (7) 2745(4) 4966 (2) 268(1) 42(1) C (8) 3723(4) 5385 (2) 639(1) 50(1) C (9) 3643(4) 6423 (2) 749(1) 49(1) C(10) 2839(5) 3807 (2) 157(1) 49(1) C(ll) 2248(4) 3159 (2) 577(1) 40(1) C (12) 467(4) 3074 (2) 708(1) 44(1) Cl (13) -1197(1) 3652 (1) 362(1) 59(1) C (14) -56(4) 2535 (2) 1112 (1) 46(1) C (15) 1219(4) 2055 (2) 1391 (1) 44(1) C (16) 3014(4) 2095 (2) 1265 (1) 36(1) C (17) 3502(4) 2652 (2) 864(1) 38(1) C (18 ) 4335(3) 1493 (2) 1560 (1) 36(1) 0(19) 3862(2) 420(1) 1544(1) 38(1) 164 X y z U (eq) C (20) 5478(4) -95(2) 1690 (1) 39(1) C (21) 5397(4) -1208(2) 1525 (1) 50(1) 0(22) 4012(4) -1782 (2) 1739 (1) 62(1) C (23) 5592(4) 18 (2) 2233 (1) 40(1) 0(24) 7085(3) -534 (2) 2419 (1) 52(1) C (25) 5750(4) 1168 (2) 2361 (1) 43(1) 0(26) 5536(3) 1267 (2) 2861 (1) 61(1) C (2 7) 4393(4) 1816 (2) 2086 (1) 39(1) 0(28) 4750(3) 2904 (2) 2136 (1) 50(1) 0(29) 6093(3) 1545 (1) 1363 (1) 44(1) C (3 0 ) 6903(4) 529(2) 1425 (1) 47(1) 0(31) 8289(3) 3646 (2) 2167(1) 62(1) C (32) 8567(4) 4451 (3) 1935 (1) 50(1) C (33) 7407(5) 4857 (3) 1544(1) 60(1) C (34) 8309(7) 5813 (3) 1364 (2) 100(2) C (35) 10008 (5) 5962 (3) 1666 (1) 60(1) N (36) 9939(4) 5092 (2) 1990(1) 62(1) C (37) 10097 (5) 7035 (3) 1889 (1) 62(1) 0(38) 10174 (4) 7793 (2) 1636 (1) 94(1) 0(39) 10136(4) 7059 (2) 2353 (1) 72(1) 0(99) 470(40) 9300 (20) 1968 (10) 97(10) Quadro 25-3. Comprimentos [Ã] e ângulos [°] para o exemplo 25. 0(1)-0(2) 1,486(5) 0(2)-0(3) 1,419(4) 0(3)-0(4) 1,371(3) 0(4)-0(9) 1,382(4) C(4)-C (5) 1,385(4) 0(5)-0(6) 1,379(4) 0(6)-0(7) 1,375(4) C(7)-C (8) 1,381(4) 165 C(7)-C(10) C(8)-C (9) C(10)-C(ll) C(11)-C(12) C(11)-C (17) C(12)-C (14) C(12)-Cl (13) C(14)-C (15) C(15)-c(16) C(16)-C (17) C(16)-C(18) C(18)-0(19) C(18)-0(29) C(18)-C(27) 0(19)-C(20) C(2 0)-C(21) C(20)-C ( 23) C(20)-C (30) C(21)-0(22) C ( 23)-0(24) C(23)-C(25) C(25)-0(26) C(25)-C (27) C(2 7)-0(28) 0(29)-C ( 30) 0(31)-C(32) C(32)-N(36) C(32)-C ( 33) C (33)-C(34) C(34)-C(35) C(35)-N(36) C(35)-C(37) 0(37)-0(38) 0(37)-0(39) 1,525(4) 1,371(4) 1,509(4) 1,388(4) 1,398(4) 1,382(4) 1,746(3) 1,381(4) 1,391(4) 1,381(4) 1,504(4) 1,426(3) 1,430(3) 1,532(4) 1,440(3) 1,507(4) 1,529(4) 1,529(4) 1,408(4) 1,424(3) 1,527(4) 1,418(3) 1,523(4) 1,430(3) 1,452(3) 1,239(4) 1,327(4) 1,494(4) 1,491(5) 1,539(5) 1,443(4) 1,517(5) 1,206(4) 1,301(4) 16 6 Ο (3)-C(2)-C(1) C ( 4)-Ο (3)-C(2) 0(3)-C(4)-C(9) 0(3)-C(4)-C(5) C(9)-C(4)-C(5) C(6)-C(5)-C(4) C(7)-C(6)-C(5) C (6 ) —C ( 7 ) —C ( 8 ) C(6)-C(7)-C(10) C(8)-C(7)-C (10) C ( 9 ) —C (8 ) —C ( 7) C ( 8)-C(9)-C(4) C(11)-C(10)-C(7) C(12)-C(11)-C (17) C(12)-C(ll)-C(10) C(17)-C(ll)-C(10) C(14)-C(12)-C(ll) C(14)-C(12)-Cl (13) C(11)-C(12)-Cl (13) C(15)-C(14)-C(12) C(14)-C(15)-C(16) C(17)-C(16)-C(15) C(17)-C(16)-C(18) C(15)-C(16)-C(18) C(16)-C(17)-C(ll) 0(19)—C(18)—0(29) 0(19)-0(18)-0(16) 0(29)-0(18)-0(16) 0(19)-0(18)-0(27) 0(29)-0(18)-0(27) C(16)-C(18)-C(27) C(18)-O(19)-C(20) O(19)-C(20)-C(21) 108,8(3) 117,8(2) 116,4(3) 124,5(2) 119,1(3) 119,5(3) 122,1(3) 117,4(3) 121,9(3) 120,7(3) 121,8(3) 120,1(3) 111,6(2) 117,2(2) 122,1(3) 120,6(3) 121,9(3) 117,8(2) 120,4(2) 119,5(3) 120,5(3) 118,8(3) 122,7(2) 118,4(2) 122,2(3) 105,1(2) 108,5(2) 111,6(2) 107,5(2) 109,5(2) 114,1(2) 103,16 (19) 108,4(2) 167 0(19)—C(20) —C(23) 106,7(2) C(21)-C(20)-C(23) 113,5(2) 0(19)-C(20)-C (30) 101,9(2) C(21)-C(20)-C(30) 112,1(2) C(23)-C(20)-C(30) 113,3(2) 0(22)-C(21)-C (20) 113,3(3) 0(24)-C(23)-C(25) 109,6(2) O(24)-C(23)-C(20) 111,2 (2) 0(25)-0(23)-0(20) 109,3(2) 0(26)-C(25)-C(27) 112,1(2) 0(26)-C(25)-C(23) 108,1(2) 0(27)-0(25)-0(23) 111,1(2) 0(28)-C(27)-C(25) 111,2 (2) 0(28)-C(27)-C(18) 111,4(2) 0(25)-0(27)-0(18) 110,9(2) 0(18)-0(29)-0(30) 107,28(19) 0(29)-0(30)-0(20) 103,8(2) 0(31)-0(32)-N(36) 126,0(3) 0(31)-0(32)-0(33) 125,4(3) N(36)-C(32)-C(33) 108,6(3) 0(34)-0(33)-0(32) 105,9(3) 0(33)-0(34)-0(35) 106,9(3) N(36)-C(35)-C(37) 116,5(3) N(36)-C(35)-C(34) 102,8(3) C(37)-C(35)-C (34) 112,1(3) 0(32)-N(36)-0(35) 115,8(3) 0(38)-0(37)-0(39) 124,4(4) 0(38)-0(37)-0(35) 119,8(3) 0(39)-0(37)-0(35) 115,8(3) 168

Quadro 25-4. Parâmetros do deslocamento anisotrópico (Â2x 103) para o exemplo 25. 0 expoente do factor de deslocamento anisotrópico assume a forma: -2n2 [ h2 a*2Un + ... + 2 h k a* b* Ui2]

Uii U22 U33 U23 49 (2) 52 (2) 36 (1) 35 (2) 43 (2) 43 (2) 36 (2) 44 (2) 43 (2) 40 (2) 27(1) 29 (2) 51 (1) 35 (2) 39 (2) 25(1) 31 (2) 28 (1) 28 (1) 30 (2) 33 (2) 37(1) 32 (2) 37(1) 36 (2) 40 (1) 28 (1) C(1) C (2 ) 0(3) C (4) C (5) C (6) C (7) C (8) C (9) C(10) C(ll) C (12 ) Cl (13) C (14 ) C (15) C (16) C (1 7 ) C (18 ) 0(19) C (20) C (21) 0(22) C (23) 0(24) C (25) 0(26) C (27) 115(4) 95(3) 62(1) 45(2) 61(2) 61(2) 50(2) 58(2) 54(2) 63(2) 52(2) 50(2) 59(1) 40(2) 44(2) 41(2) 36(2) 36(2) 40(1) 40(2) 57(2) 77(2) 42(2) 58(1) 52(2) 100 (2) 45(2) 104(3) 95 (3) 68 (1) 49 (2) 59 (2) 47 (2) 41 (1) 49 (2) 50 (2) 43 (2) 41 (1) 52 (2) 66 (1) 64 (2) 50 (2) 42 (1) 45(2) 43 (1) 45(1) 47 (2) 60 (2) 73 (2) 47 (2) 62 (1) 42 (2) 43 (1) 43 (1) -20 (2) -12 (2) -3(1) KD 4(2) 2(1) 6(1) 9(1) 2(1) 6(1) 0(1) 0(1) 7(1) 7(1) 11(1) 3(1) 0(1) 3(1) 2(1) KD -3(2) 6(1) 2(1) 8(1) 0(1) -KD -2(1) U13 -54(3) -47 (2) -17(1) KD -16 (2) -13 (1) 7(1) -9(2) -12 (1) 5(1) 4(1) -4(1) -16 (1) 4(1) 7(1) 2(1) 5(1) 4(1) -5(1) -6(1) -12 (2) -21 (1) -8(1) -18 (1) -7(1) -9(1) 0(1) U12 31(2) 23(2) 6(1) 0(1) 9 (2) 0 (2) -2(1) 7(2) 3(1) 6(1) -2(1) -4(1) 4(1) -2(1) -4(1) -3(1) -3(1) -7(1) -5(1) 2(1) 6(1) -14(1) -2(1) -3(1) -8(1) -9(1) -6(1) 169

Un u22 u33 u23 Ui3 Ui2 0(28) 55(2) 28 (1) 69 (1) -6(1) -7(1) -3(1) 0(29) 36(1) 39 (1) 56 (1) 8(1) 7(1) -4(1) C (30) 48(2) 38 (2) 56 (2) 2(1) -KD 8(1) 0(31) 62(2) 56 (1) 70 (1) 7(1) -9(1) -12 (1) C (32 ) 48(2) 45(2) 57(2) -9(2) -3(2) 1 (2) C (33) 57(2) 64 (2) 58 (2) -7(2) -12 (2) 2 (2) C (34) 135(4) 78 (3) 87 (3) 18(2) -58 (3) -19 (3) C (35) 55(2) 61 (2) 64 (2) 5(2) 7(2) -3(2) N (3 6 ) 53(2) 61 (2) 72 (2) 11(2) -22 (2) -9(2) C (37) 49(2) 65 (2) 72 (2) 5(2) -1(2) 6 (2) 0(38) 116 (2) 70 (2) 95 (2) 19(2) -2(2) -11 (2) 0(39) 79(2) 69 (2) 70 (2) 2(1) 0(1) 3(1) 0(99) 90(20) 110(20) 89(19) -60 (18) -2(15) 29(17) Quadro 25-5. Coordenadas ; de hidrogénio (x 104) e parâmetros de deslocamento isotrópico (A2x 103) para o exemplo 25. X y Z U (eq) Η (1 A) 1080 9742 965 134 Η (1B) 557 10275 482 134 H (10) 2571 10087 606 134 H (2 A) 107 8492 427 97 Η (2B) 1587 8843 63 97 H (5) 813 7106 -61 65 H (6 ) 998 5365 -239 60 H (8 ) 4455 4952 819 60 H (9 ) 4323 6685 999 59 H(10A) 2083 3655 -115 58 H(10B) 4055 3623 73 58 Η (14) -1256 2497 1194 56 Η (15 ) 875 1701 1665 53 Η (1 7 ) 4703 2691 782 45 H(2 IA) 5235 -1219 1181 60 170 X y Z U (eq) H (21 B) 6528 -1543 1595 60 H(9 7D) 3240 (80) -1700(40) i 1620(20) 120 (20) H (23) 4498 -261 2375 48 H(9 7C) 6720 (50) -1040(30) i 2557(13) 78(14) H (25) 6950 1407 2275 52 H(9 7B) 5570 (50) 1910 (30) 2942 (14) 79(13) H (2 7 ) 3214 1680 2224 46 H(9 7A) 5800 (50) 2990 (30) 2137(12) 60(12) H(3 0A) 7992 577 1611 57 H(3 0B) 7175 214 1119 57 Η(33A) 7294 4347 1291 71 Η(33B) 6226 5021 1664 71 H(3 4A) 7528 6411 1397 120 H(3 4B) 8616 5735 1030 120 H (35) 11047 5874 1457 72 H (9 9 ) 10740(50) 4950 (20) 2171(11) 49(10) H(9 8A) 9670 (60) 6410 (30) 2507(15) 95(14) Exemplo 26 Co-cristal de (1S,2S,3S, 4R, 5S)-5- [4-cloro-3- (4- -etoxi-benzil) - fenil] -l-hidroximetil-6, 8-dioxa- biciclo [3.2.1 ] octano-2, 3,4- triol (composto do exemplo 4Ά) e ácido L-piroglutâmico NMR no estado sólido

Aproximadamente 80 mg de co-cristal de (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico, preparado utilizando o processo descrito no esquema 2, foram empacotadas firmemente num rotos de ZrC>2 de 4 mm. Os espectros foram recolhidos à temperatura e pressão ambiente numa sonda de 4 mm BL CPMAS de Bruker-Biospin, colocada num espectrómetro 171 de NMR (frequência 3Η) Bruker-Biospin DSX 500 MHz de suporte amplo. Orientou-se o rotor empacotado para o ângulo mágico e fez-se rodar a 15.0 kHz. Recolheu-se o espectro 13C de estado sólido utilizando uma experiência de rotação de ângulo mágico de interpolarização de protão desacoplado (CPMAS). O tempo de contacto de interpolarização foi regulado para 2,0 ms. Foi aplicado um campo de desacoplamento do protão aproximadamente de 85 kHz. Foram recolhidas 1448 pesquisas com um atraso de reciclagem de 14 segundos. Utilizou-se como referência para o espectro de carbono um padrão externo de adamantano cristalino, regulando a sua ressonância para 29,5 p.p.m.. Os dados de desvios químicos dependem das condições do ensaio (isto é, velocidade de rotação e suporte da amostra), do material de referência e dos parâmetros de processamento de dados, entre outros factores. Tipicamente, os resultados ss-NMR são precisos até um intervalo de cerca de ± 0,2 p.p.m..

Desvios químicos de carbono observados.

Os picos característicos estão marcados com um asterisco.

Todos os picos são (± 0,2 p.p.m.) 1 X Desvios químicos C [ppm]a Intensidade^ 16,5* 9,3 2,31 4,8 30,5 4,5 42,5 4,9 56,7 4,5 61,0 6,2 63,0 7,6 69,4 8,0 172 70,0 7,2 74, 7 8,4 80,2 6,0 85,3 11,4 110,1 10, 0 110,4 7,9 117, 7 7,1 127,9 5,7 128,7 6,2 130,0 6,9 131,1* 12, 0 132,2 6,5 134,4 0,8 137,8 5,9 140,3 5,3 158,7* 7,9 174, 7 4,5 181,5* 5,0 (a) Com referência a uma amostra externa de adamantano em fase sólida a 29,5 ppm. (b) Definida com alturas de picos. As intensidades podem variar em função das definições actuais dos parâmetros experimentais de CPMAS e da história térmica da amostra. As intensidades de CPMAS não são necessariamente quantitativas. 0 espectro CPMAS SSNMR 13C do composto do exemplo 26 é ilustrado na figura 9. Os picos marcados com asteriscos na figura 9 são bandas laterais de rotação.

ENSAIOS FARMACOLÓGICOS A prática da presente invenção para o tratamento de doenças moduladas pela inibição de SGLT2 pode ser 173 evidenciada pela actividade pelo menos num dos protocolos a seguir descritos.

Ensaios biológicos

Ensaio in vitro 0 ensaio funcional de SGLT2 foi concebido para detectar a inibição da absorção de metil-alfa-D- glucopiranósido (AMG - uma forma não metabolizada de glicose) por meio do transportador SGLT2. 0 transportador SGLT2 recupera glicose a partir dos túbulos proximais do rim; a sua inibição provoca um desperdício de açúcar na urina. 0 composto de controlo positivo, florizina, é um inibidor conhecido da absorção de glicose para SGLT2 e foi utilizado para comparar o efeito percentual elevado da inibição de SGLT2 para os compostos de ensaio.

Colocou-se células CHO-Flpln (Invitrogen, Carlsbad, CA) , que expressam de um modo estável SGLT2 humana (pcDNA5/FRT), em placas com 96 cavidades Iso-TC (Perkin Elmer, Waltham, MA) a uma densidade de 100000 células/ /cavidade em 100 microL de meio de crescimento (1:1 de meio F-12/DMEM (Gibco, Carlsbad, CA), 10% de FBS (Sigma, St. Louis MO), IX Pen/Strep (Gibco, Carlsbad, CA), 600

microg/mL de Higromicina (Invitrogen, Carlsbad, CA)). Antes do tratamento com compostos de ensaio, as células confluentes foram retiradas de soro durante 2 horas a 37°C em 1:1 de meio F-12/DMEM, substituindo com meio F-12/DMEM media fresco decorrida 1 hora. Diluiu-se 100 vezes os compostos de ensaio em dimetilsulfóxido (Sigma, St. Louis, MO) em tampão de absorção (NaCl 140 mM (Promega, Madison, WI), KC1 2 mM (Teknova, Hollister, CA), CaCl2 1 mM 174 (Teknova, Hollister, CA), MgCl2 1 mM (Teknova, Hollister, CA) e HEPES 10 mM (Gibco, Carlsbad, CA) para placas de células pré-enxaguadas com tampão de absorção. Manteve-se as células a pré-incubar com composto de ensaio durante 15 minutos e depois adicionou-se 50 microL de AMG (AMG [U-14C] 40 nCi (Perkin Elmer, Waltham, MA) em AMG não marcado (Aldrich, St. Louis, MO)) por cavidade proporcionando uma concentração final de 11,33 microM AMG. Manteve-se então as placas de células a incubar durante 3 horas a 37°C para absorção de AMG. Após a incubação, lavou-se as células duas vezes com tampão de lavagem arrefecido em gelo (tampão de absorção que contém florizina 200 microM (Sigma)), secou-se ao ar e lisou-se em 30 microL de NaOH 200 mM e 1% de tampão SDS buffer numa agitadora orbital. Adicionou-se Microscint 40 (Perkin Elmer, Waltham, MA) às células lisadas (obtendo-se um volume final de 200 microL) e misturou-se por agitação orbital durante 30 minutos. Armazenou-se as placas de um dia para o outro no escuro e quantificou-se num aparelho 1540 Microbeta Trilux (Wallac, Waltham, MA), utilizando um protocolo normalizado para a detecção de 14C. O efeito percentual dos compostos de ensaio para inibir a absorção de AMG foi calculado utilizando a fórmula geral seguinte: [% Efeito = ((ZPE-T) / (ZPE-HPE)) x 100%] em que "ZPE" representa as contagens corrigidas por minuto (CCPM) nas cavidades de controlo que contêm 0,5% de DMSO, T representa as CCPM nas cavidades que contêm o composto de ensaio em diversas concentrações da curva padrão e HPE representa o efeito percentual elevado no que diz respeito às CCPM nas cavidades de controlo que contêm florizina 10 microM. Os valores CI50 foram calculados utilizando uma 175 equação dose resposta e encontram-se agrupados para os compostos testados no quadro 3.

As abreviaturas utilizada na descrição do ensaio in vitro compreendem: SGLT2 co-transportador de sódio/glicose de tipo 2 AMG metil-a-D-glucopiranósido DMEM meio de Eagle modificado por Dulbecco CI50 concentração de 50% de inibição FBS soro bovino fetal DMSO dimetilsulfóxido SDS dodecil-sulfato de sódio

CHO-Flpln células de ovário de hamster chinês que contém o local FRT

Quadro 3

Composto de teste Exp. n° hSGLTl CI50 nM hSGLT2 CI50 nM IA 1 1080 1,55 2 454 1,15 3 327 0,779 4 562 0,715 5 262 0,654 6 359 1,61 2A 1 1240 0,827 2 >1000 1,53 3 >1000 0,942 4 >1000 0,741 5 679 1,58 6 indeterminado 1,05 3A 1 543 0,479 2 397 0,972 3 550 1,39 4 757 0,811 176

Composto de teste Exp. n° hSGLTl CI50 nM hSGLT2 CI50 nM 5 523 0,602 6 672 0,588 7 380 1,35 3B 1 >10000 41,6 2 >10000 40, 8 3 >10000 27,9 4 indeterminado 62,2 4A 1 1590 1,27 2 1010 0,816 3 1750 0,57 4 >1000 0,922 5 >1000 1,85 6 2090 0,812 7 1810 0, 7 8 2860 0,737 9 2480 0,846 10 2840 0,768 4B 1 >1000 122 2 >10000 66, 8 3 indeterminado 81, 7 5A 1 >10000 4,5 2 >1000 81, 7 3 5790 2,42 4 indeterminado 1, 77 5B 1 >10000 186 6 A 1 >10000 18, 7 2 >1000 9,99 3 >1000 13,5 4 >1000 13, 4 5 8930 5, 71 6 indeterminado 7,67 7A 1 >1000 10,6 177

Composto de teste Exp. n° hSGLTl CI50 nM hSGLT2 CI50 nM 2 >10000 6,38 3 >1000 5, 88 4 indeterminado 6,11 10A 1 >10,000 4, 08 2 >3330 33, 4 3 >3160 2,54 10B 1 > 10, 000 127 2 > 10, 000 103 11A 1 >10,000 9,6 2 >10,000 11,9 3 >10,000 19, 8 4 > 10, 000 7,13 12A 1 > 10, 000 11,1 2 5780 7,41 3 >10,000 8,85 4 >10,000 0,802 5 >10,000 10, 7 6 >10,000 14,1 12B 1 >3160 32,3 13A 1 >10,000 14, 9 2 >10,000 17, 8 14A 1 >10,000 2,28 2 >10,000 3,12 3 >10,000 2,39 4 >10,000 2,87

Ensaio in vivo

Testou-se os compostos dos exemplos IA e 4A em ratos para avaliar a inibição do transporte de glicose por meio da excreção urinária de glicose. Colocou-se em gaiolas metabólicas individuais ratos machos da estirpe Sprague Dawley (-300 g) para a recolha de urina. Os ratos possuíam 178 acesso a ração padrão em laboratório e água ad libitum. Os ratos (n = 2 a 5/grupo) receberam veículo ou composto por sonda esofágica oral. As soluções de dosagem foram 0,03 mg/mL, 0,3 mg/mL, 0,9 mg/mL, 3 mg/mL, 9 mg/mL e 18 mg/mL para doses de 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg e 60 mg/kg, respectivamente. O volume de dosagem foi de 1 mL/300 g de massa corporal para todas as doses. Um grupo recebeu uma dose de 10 mg/kg dose do composto do exemplo IA e os outros receberam uma dose de 0,1, 1, 3, 10, 30 ou 60 mg/kg do composto do exemplo 4A. O veículo foi 20% v/v de PEG400 e 24% v/v de hidroxipropil-beta-ciclodextrina; HPBCD. Após a administração oral, recolheu-se a utina durante 24 horas. Determinou-se a concentração em glicose na urina por espectrofotometria de absorvância por UV a 340 nm, utilizando um espectrof otómetro Roche Hitachi 917 (Diamond Diagnostics, Holliston, MA). A quantidade total de glicose excretada na urina foi calculada como o produto da concentração na urina pelo volume de urina, utilizando a fórmula geral seguinte:

Glicose urinária excretada (mg)/200 g massa corporal = concentração de glicose urinária (mg/dL) x volume de urina (dL) x 200/massa corporal do rato (g).

As quantidades de glicose urinária excretada (UGE) foram obtidas a partir de ratos para os compostos do exemplo IA e do exemplo 4A pelo método descrito antes e são apresentadas no quadro 4. Recolheu-se sangue (0,1 mL) a partir dos animais do grupo satélite PK 1, 2, 4, 7, 24 horas após a dose para se obter o plasma e analisar por LC-MS/MS. Os parâmetros PK médios para as diversas doses testadas são apresentados no quadro 4. 179

Quadro 4

Composto Dose UGE média (mg/200g Parâmetros PK médios (n=2) (mg/kg) de massa corporal) ± SEM (n=5) Cmax (ng/mL) tmax (h) ASC(0-24) (ng*h/mL) Exemplo IA 10 2049 ± 382,2 1260 1, 00 6630 Exemplo 4A 0,1 389,0 ± 62,54 43,4 1,50 188 Exemplo 4A 1 1519 ± 52,02 372 1,00 2000 Exemplo 4A 3 1937 ± 101,1 1320 1,00 7080 Exemplo 4A 10 2145 ± 132,3 3100 2,50 26400 Exemplo 4A 30 2554 ± 141,1 10500 1,00 10700 Exemplo 4A 60 2437 ± 116,7 25300 2,00 233000 SEM: Erro padrão da média.

Testes farmacocinéticos em ratos

Os compostos dos exemplos IA, 2A, 4A, 12A e 14A foram testados em ratos para avaliar os parâmetros farmacocinéticos, incluindo a concentração máxima (Cmáx), a área sob a curva da concentração de plasma versus tempo (ASC), a limpeza (CL), o volume em estado de equilíbrio de distribuição (Vss), período de semi-vida (11/2) e a biodisponibilidade (F). utilizou-se ratos machos da estirpe Sprague Dawley (~ 300 g). Os ratos receberam o composto por administração por via de sonda intravenosa (IV) ou oral (PO) e as doses testadas, incluindo veículo, para formular as soluções de dosagem são as apresentadas no quadro 5.

Após administração por via IV ou PO, recolhe-se uma amostra de 0,2 mL de sangue a partir da veia jugular em 180 diversos momentos (quadro 5) . Submete-se vinte microL de aliquotas de amostras de plasma e de padrões a precipitação com proteinas com acetonitrilo que contém um padrão interno. Submete-se as amostras a centrifugação para se obter um sobrenadante que é depois analisado por LC-MS/MS. Utilizou-se a aplicação Analyst (Versão 1.4.1) para medir as áreas do pico e calculou-se as proporções entre as áreas do pico do analito e do padrão interno. As condições de LC-MS/MS utilizadas foram as seguintes: espectrómetro de massa + tipo de fonte da Sciex API 4000 - Turbo Spray; bomba de HPLC da Shimadzu; autoanalisador da CTC PAL Autosampler; volume de injecção de 3,0 a 10 microL; utilizou-se um gradiente com uma fase móvel A: acetato de amónio 10 mM e 1% de álcool isopropilico em água; B: acetonitrilo; caudal 0,300 mL por minuto (coluna C18 luna (phenomenex), 2,0 x 30 mm, 5 micron). O modo de detecção foi o modo negativo.

Construiu-se a curva de calibração a partir das proporções das áreas dos picos entre os padrões e o padrão interno aplicando uma regressão linear ponderada (1/x ou l/x2) . A amplitude dinâmica da curva padrão foi de 5,00 ng/mL a 5000 ng/mL.

Os parâmetros farmacocinéticos foram determinados a partir de dados de animais individuais utilizando uma análise não compartimentai no programa Watson (versão 7.2). as concentrações inferiores ao limite de quantificação (BLQ) foram registadas como 0 ng/mL para utilização no cálculos.

Foram utilizados os cálculos seguintes: ASC(O-t) = determinada utilizando o método trapezoidal linear 181 ASC (0-°°) = AUC(O-t) mais a área extrapolada determinada pela divisão da concentração no plasma a τ pelo declive da fase linear de log terminal CL = Dose/ASC (0-°°)

Vdss = CL x MRT

Cmáx = registada directamente a partir da curva concentração no plasma vs. tempo

Tmáx = registada directamente a partir da curva concentração no plasma vs. tempo t1/2 = ln(0,5)/declive da fase linear-log terminal F% = ASC (0-°°) PO por dose/ASC (0-°°) IV por dose C(0) = extrapolada por regressão linear a partir da fase de distribuição aparente após administração por via IV MRT = AUMC (ASC(0-~)/ASC(0-~) 182

Quadro 5

Exemplo Dose (mg/kg) Via /n Formulação Pontes temporais (h) Cmax (pgM) ASCjnf (jg*h/mL) CL (mL/min/kg) v* (ukg) tl/2 (h) F (*) 4A 2 IV/ DMSO/ PEG400/ 0 083, 0,25, - OO oo 4,04 1,1 4,1 - (n=2) 30%SBECD 0,5, 1,2,4,6, (10/30/60 8, 20 v/v/v) 2 PO / Iween 80/ 0,51 0,5, 1, 2, 4, 0,772 5,65 - - 3,1 67 (n=3) MC (0,1/99,9 7, 20 v/v) 5 PO / 201PEG / 2« 1, 4, 1, 24 1,19 16,8 - - - 79 (n=5) HBCD 12A 2 IV/ DMSO/ PEG400/ 0,083, 0,25, - 2,20 15,9 3,68 3,90 - (n=2) 301SBECD 0,5, 1, 2, 4, (5/10/85 5, 6, 7, 20 v/v/v) IA 2 IV/ DMA/ PG/ 50 ri 0,083, 0,25, - 0,947 37,1 1,11 0,962 - (n=2) Tris Base 0,5, 1, 2, 4, (5/10/85 6, 8, 20 v/v/v) 10 PO / PEG200/ 0,5« 0,25, 0,5, 1,65 2,68 - - 2,82 56,5 (n=2) (5/ 95 v/v) 0,15, 1, 2, 4, 6, 8,20 183

Exemplo Dose (mg/kg) Via /n Formulação Pontes temporais (h) Qnax (pgM) ASCinf (jg*h/mL) CL (mL/min/kg) v* m tl/2 (h) F (¾) 14A 2 IV/ (n=2) ml PEG400/ 30%SBECD (5/10/85 v/v/v) 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 1, 20,22 1,06 31,7 1,69 1,36 10 PO / (n=2) PEG200/ 0,5%MC (5/ 95 v/v) 0,5, 1, 2, 4, 7, 20, 22 0,551 2,29 1,71 43,5 2A 2 IV/ (n=2) ml Kl 50 r* Tris Base (5/10/85 v/v/v) 0 083, 0,25, 0 5, 1, 2, 4, s, 8, 20 1,34 27,7 1,03 0,94 3A 2 IV/ (n=2) DMA/ Kl 50 mM Tris Base (5/10/85 v/v/v) 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 20 1,41 23,8 1,82 1,58 - = dados não disponíveis ou não aplicável; DMSO = sulfóxid PEG = polietileno-glicol; PG = propíleno-glícol; SBECD = és metilcelulose; DMA = dimetilamina o de dimetilo; HBCD = ter sulfobutílico-beta íídroxipropíl- -cíclodextrína Deta-ciclodextrina; ; MC = 184

REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Ά presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o EPO não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição • US 6515117 B [0004] • US 6414126 B [0004] • US 7101856 B [0004] • US 7169761 B [0004] • US 7202350 B [0004] US 20020111315 A [0004] US 20020137903 A [0004] US 20040138439 A [0004] US 20050233988 A [0004] US 20060025349 A [0004] US 20060035841 A [0004] US 20060632 722 A [0004] wo 01027128 A [0004] wo 02044192 A [0004] wo 02088157 A [0004] wo 03099836 A [0004] wo 04087727 A [0004] wo 05021566 A [0004] wo 05085267 A [0004] wo 06008038 A [0004] wo 06002912 A [0004] 185

185 • WO • WO • WO • WO • WO • US • WO • US • US • US • US • US • WO 06062224 A [0004] 07000445 A [0004] 07093610 A [0004] 08002824 A [0004] [0078] 2008013280 A [0004] 20070054867 A [0064] 2005116034 PCT [0089] 20050267100 AI [0089] 6818658 B [0089] [0099] [0101] 20060178501 A [0089] 20080132563 A [0096] [0098] 20070259821 A [0096] [0099] 01027128 PCT [0097]

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • McGinnis M; Foege WH. Actual Causes of Death in the United States. JAMA, 1993, vol. 270, 2207-12 [0002] • Isaji, M. Current Opinion Investigational Drugs, 2007, vol. 8 (4), 285-292 [0003] • Asano, T. et al. Drugs of the Future, 2004, vol. 29 (5), 461-466 [0003] • Louis F. Fieser; Mary Fieser. Reagents for Organic Synthesis. Wiley, 1967, vol. 1-19 [0031] • Beilsteins Handbuch der organischen Chemie. Springer-Verlag [0031] • T. W. Greene. Protective Groups in Organic Synthesis.

John Wiley & Sons, 1991 [0033] [0037] [0052] • Shinya Hanashima et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2001, vol. 9, 367 [0035] 186 • Patricia A. Gent et al. Journal of the Chemical Society. Perkin, 1974, vol. 1, 1835 [0035] • Hans Peter Wessel. Journal of Carbohydrate Chemistry, 1988, vol. 7, 263 [0035] • Yoko Yuasa et al. Organic Process Research & Development, 2004, vol. 8, 405-407 [0035] • Kanji Omura; Daniel Swern. Tetrahedron, 1978, vol. 34, 1651 [0035] • Ozanne, A. et al. Organic Letters, 2003, vol. 5, 2903 [0035] • Robert Schaffer. Journal of The American Chemical Society, 1959, vol. 81, 5452 [0035] • Amigues, E.J. et al. Tetrahedron, 2007, vol. 63, 10042 [0035] • Nahm, S.; S.M. Weinreb. Tetrahedron Letters, 1981, vol. 22 (39), 3815-1818 [0039] • Kornblum, N. et al. Journal of The American Chemical Society, 1959, vol. 81, 4113 [0061] • Coupling Reactions Between sp2 and sp Carbon Centers. Sonogashira, K. Comprehensive Organic Synthesis. Pergamon, 1991, vol. 3, 521-549 [0068] • Clinicai Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults. NIH publication no. 98-4083, 1998 [0082] • Zimmet, P.Z. et al. The Metabolic Syndrome: Perhaps an

Etiologic Mystery but Far From a Myth - Where Does the International Diabetes Federation Stand?. Diabetes & Endocrinology, 2005, vol. 7 (2) [0084] • Alberti, K.G. et al. The Metabolic Syndrome - A New

Worldwide Definition. Lancet, 2005, vol. 366, 1059-62 [0084] 187 • Zhang, S. et al. Drug Discovery Today, 200 7, vol. 12 (9/10), 373-381 [0090]

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula estrutural (A) ou fórmula estrutural (B)

(A) (B) em que o símbolo R1 representa H, alquilo (C1-C4) , alcoxi (C1-C4) , Cl, F, ciano, alquilo (Ci-C2) substituído com flúor, alquil (C1-C4)-S02- ou cicloalquilo (C3-C6) e o símbolo R2 representa alquilo(C1-C4) , alcoxi (C1-C4) , alcinilo(C2-C4) , 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuranoiloxi, Cl, F, ciano, alquilo (Ci-C2) substituído com flúor, alquil (C1-C4)-S02-, cicloalquilo (C3-C6) ou um heterociclo (C5-C6) que possui 1 ou 2 heteroátomos seleccionados independentemente entre N, 0 ou S.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o referido composto é um composto de fórmula estrutural (A).

3. Composto de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, em que o símbolo R1 representa H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, ciclopropilo ou ciclobutilo e 2 o símbolo R2 representa metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinilo, 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuranoiloxi ou ciclopropilo.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3 em que o símbolo R1 representa H, metilo, etilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropilo e o símbolo R2 representa metilo, etilo, isopropilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinilo, 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrofuranoiloxi ou ciclopropilo.

5. Composto de acordo com a reivindicação 4 em que o símbolo R1 representa H, metilo, etilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropilo e o símbolo R2 representa metilo, etilo, metoxi, etoxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinilo, 3-oxetaniloxi, 3-tetra-hidrof uranoiloxi ou ciclopropilo.

6. Composto de acordo com a reivindicação 5 em que o símbolo R1 representa metilo, etilo, F, Cl, ciano, CF3ou ciclopropilo e o símbolo R2 representa metoxi ou etoxi.

7. Composto seleccionado entre o conjunto constituído por: (1S,2S,3S,4R,5S)-1-hidroximetil-5-[3-(4-metoxi-benz il)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; 3 (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil] -1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-fluoro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; 2-(4-metoxibenzil)-4-((IS,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidroxi-l (hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]oct-5-il)-benzonitrilo; 2-(4-etoxibenzil)-4-((lS,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidroxi-l-(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3,2,1]oct-5-il)-benzonitrilo; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3, 4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-l-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo-[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (IS,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil]-fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo [3.2.1]octano-2,3,4-triol e (IS,2S,3S,4R,5S)-5-{4-cloro-3-[4-(oxetano-3-iloxi)-benzil] fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4 triol.

8. Composto que é (IS,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etoxi benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]-octano-2,3,4-triol. 4

9. Composto seleccionado entre o conjunto constituído por: (15.25.35.45.55) -1-hidroximetil-5-[3-(4-metoxi-benzil) -4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (15.25.35.45.55) -5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (15.25.35.45.55) -5-[4-cloro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (15.25.35.45.55) -5-[4-cloro-3-(4-etoxi-benzil)-fenil] -1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3, 4-triol; (15.25.35.45.55) -5-[4—fluoro-3-(4-metoxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3, 4-triol; (15.25.35.45.55) -5-[3-(4-etoxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol e (15.25.35.45.55) -5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3, 4-triol.

10. Cristal que compreende um composto que satisfaz a fórmula estrutural (4A): HO

5

11. Cristal de acordo com a reivindicação 10 que compreende ainda L-prolina ou ácido L-piroglutâmico.

12. Cristal de acordo com a reivindicação 10 que compreende ainda ácido L-piroglutâmico e que possui uma ou várias das caracteristicas seguintes: a) grupo espacial de P2(1)2(1)2(1) e parâmetros de célula unitária praticamente idênticos aos seguintes: a = 7,4907(10) Á oí= 90°. b = 12, 8626 (15) Á β = 90°. c = 28,029(4) Á γ= 90°; b) um padrão de difracção de raio-X no pó que compreende valores 2-teta (radiação CuKa, comprimento de onda de 1,54056 À) de 6,4 ± 0,2, 16,7 ± 0,2, 17,4 + 0,2 e 21,1 ± 0,2 ou c) um espectro de 13C NMR em estado sólido que compreende as posições de pico a 16,5 ± 0,2, 131,1 ± 0,2, 158,7 ± 0,2 e 181,5 ±0,2 p.p.m., conforme determinado num espectrofotómetro a 500 MHz em relação a adamantina cristalina de 29,5 p.p.m..

13. Cristal de acordo com a reivindicação 10 que compreende ainda ácido L-piroglutâmico, em que o cristal é um co-cristal que compreende o composto de fórmula estrutural (4A) e ácido L-piroglutâmico numa proporção estequiométrica de 1:1.

14. Cristal de acordo com a reivindicação 10 que compreende ainda ácido L-piroglutâmico e que possui 6 b) um padrão de difracção de raio-X no pó que compreende valores 2-teta (radiação CuKa, comprimento de onda de 1,54056 A) de 6,4 ± 0,2 e d) um espectro de 13C NMR em estado sólido que compreende as posições de pico a 16,5 ± 0,2, 158,7 ± 0,2 e 181,5 ± 0,2 p.p.m., conforme determinado num espectrofotómetro a 500 MHz em relação a adamantina cristalina de 29,5 p.p.m..

15. Cristal de acordo com a reivindicação 10 que compreende ainda L-prolina e que possui uma ou várias das caracteristicas seguintes: a) grupo espacial de C2 e parâmetros de célula unitária praticamente idênticos aos seguintes: a = 32,8399 (16) Â oí= 90o. b = 7,2457(4) Â β= 101.268(5)°. c = 11,8023(6) Â γ = 90° ou b) um padrão de difracção de raio-X no pó que compreende valores 2-teta (radiação CuKa, comprimento de onda de 1,54056 A) de 7,6 ± 0,2, 12,1 ± 0,2, 20,3 ± 0,2 e 28,8 ± 0,2.

16. Composição farmacêutica que compreende (i) um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 9 ou um cristal de acordo com uma qualquer das reivindicações 10 a 15; e (ii) um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.

17. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 9, cristal de acordo com uma qualquer das 7 reivindicações 10 a 15 ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 16 para utilização como medicamento.

18. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 9, cristal de acordo com uma qualquer das reivindicações 10 a 15 ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 16 para utilização no tratamento de obesidade ou de distúrbios associados à obesidade em animais.

19. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 9, cristal de acordo com uma qualquer das reivindicações 10 a 15 ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 16 para utilização no tratamento ou para retardar o inicio de diabetes de tipo 2 e de distúrbios associados a diabetes em animais.