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PT2197841E - Compostos contendo guanidina úteis como antagonistas do receptor muscarínico - Google Patents

Compostos contendo guanidina úteis como antagonistas do receptor muscarínico Download PDF

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PT2197841E
PT2197841E PT08830536T PT08830536T PT2197841E PT 2197841 E PT2197841 E PT 2197841E PT 08830536 T PT08830536 T PT 08830536T PT 08830536 T PT08830536 T PT 08830536T PT 2197841 E PT2197841 E PT 2197841E
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PT
Portugal
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alkyl
compound
compounds
optionally substituted
groups
Prior art date
Application number
PT08830536T
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English (en)
Inventor
Yu-Hua Ji
Craig Husfeld
Li Li
Yongqi Mu
Rick Lee
Original Assignee
Theravance Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Description

DESCRIÇÃO
"COMPOSTOS CONTENDO GUANIDINA ÚTEIS COMO ANTAGONISTAS DO RECEPTOR MUSCARÍNICO"
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos contendo guanidina tendo actividade antagonista do receptor muscarínico ou anti-colinérgica. A invenção refere-se também a composições farmacêuticas compreendendo estes compostos e a processos para os preparar. A invenção encontra utilidade em métodos de tratamento de distúrbios pulmonares.
ESTADO DA TÉCNICA
Os distúrbios pulmonares ou respiratórios tais como, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) e asma, afectam muitos milhões de pessoas no mundo inteiro e esses distúrbios são uma causa principal de morbidez e mortalidade. Os documentos EP 1302458, EP 0309424 e Ogino et al. , Bioorganic and Medicinal Química Letters, 2003, p. 2167-2172, descrevem ligandos do receptor M3 muscarínico. 1
Os antagonistas do receptor muscarínico são conhecidos por proporcionarem efeitos broncoprotectores e consequentemente, esses compostos são úteis para tratar distúrbios respiratórios, tais como COPD e asma. Quando utilizados para tratar esses distúrbios, os antagonistas do receptor muscarínico são tipicamente administrados por inalação, no entanto, mesmo quando administrados por inalação, uma quantidade significativa do antagonista do receptor muscarínico é frequentemente absorvida pela circulação sistémica resultando em efeitos secundários sistémicos, tais como boca seca, midríase e efeitos secundários cardiovasculares.
Adicionalmente, muitos antagonistas do receptor muscarínico inalados têm uma duração de acção relativamente curta requerendo que estes sejam administrados várias vezes por dia. Esse regime de dosagem diária múltiplo não é apenas inconveniente mas cria também um risco significativo de tratamento inadequado devido ao incumprimento do doente com o horário de dosagem frequente necessário.
Consequentemente, existe uma necessidade para novos antagonistas do receptor muscarínico. Em particular existe uma necessidade para antagonistas do receptor muscarínico tendo potência elevada, efeitos secundários sistémicos reduzidos quando administrado por inalação e uma duração longa de acção permitindo deste modo uma dosagem uma vez diariamente ou mesmo uma vez semanalmente. Além disso, existe uma necessidade de antagonistas do receptor muscarínico tendo uma afinidade elevada para o receptor e uma meia-vida longa do receptor. E esperado que esses compostos sejam particularmente eficazes para tratar distúrbios pulmonares, tais como COPD e asma, reduzindo ou 2 eliminando efeitos secundários, tais como boca seca e prisão de ventre.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona novos compostos contendo guanidina que têm actividade antagonista do receptor muscarinico ou anti-colinérgica. Entre outras propriedades, os compostos desta invenção revelaram possuir afinidade de ligação melhorada para os subtipos do receptor muscarinico Ι1Μ2 e I1M3, ter meias-vidas no receptor mais longas, ter uma maior janela terapêutica ou ter maior potência em comparação com compostos relacionados. Consequentemente, é expectável que os compostos da invenção sejam úteis e vantajosos como agentes terapêuticos para tratar distúrbios pulmonares.
Um aspecto da invenção refere-se a compostos tendo a fórmula I:
00 em que: R1 é seleccionado de -alquiloCi_6, -alceniloC2^6, -cicloalquiloC3_9 e heteroarilo; R é seleccionado de arilo e heteroarilo; R e seleccionado de H e -alquilenoCo-i-OH ou R3 forma uma ligação dupla com R1; ou -CR1R2R3 em conjunto forma um grupo de fórmula: 3
em que A é seleccionado de uma ligação, -0-, -S-, -CH2-, -CH=CH-, -CH2CH2-, -NH- e -N(CH3)-; e R4 é seleccionado de H, halogéneo, -OH, -alquiloCi-8 e -alcoxiloCi-8; X é uma ligação, Y é -CH2-, Y' é -N- e Y'r é -CH2-; R5 é seleccionado de fluoro e -alquiloCi-4; e a é 0 ou um número inteiro desde 1 a 3; R6 e R7 são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi-4 e ainda em que um de R6 ou R7 pode ser -NH2; Z é seleccionado de, -alquilenoCi-3-Q e -NH-alquilenoC0-i-Q; Q é seleccionado de -cicloalquiloC3-7, arilo e heteroarilo; e Q está substituído opcionalmente com 1-5 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi_4, -alquilenoCo-4-OH, ciano, -alquilenoCo-2-COOH, -C (0) 0-alquiloCi_4, -0-alquiloCi_4, -S-alquiloCi-4, -CONR8aR8b, -NH-C (0)-alquiloCi_4, -N-di-alquiloCi_4 e -N+(0)0; R8a e R8b são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi-4; em que R1 e R2 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 grupos Ra seleccionados independentemente de -alquiloCi-4, -alceniloC2-4, -alciniloC2-4, -cicloalquiloC3-6, ciano, halogéneo, -0Rb, -C(0)0Rb, -SRb, -S (0) Rb, -S(0)2Rb, -C (0) NRcRd e -NRcRd; cada Rb é seleccionado independentemente de H, -alquiloCi_4, -alceniloC2_4, -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3-6; cada Rc e Rd são seleccionados 4 independentemente de H, -alquiloCi_4, -alceniloC2-4/ -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3-6; em que cada grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, alquileno e cicloalquilo em Ra_d, R4~8 e Z, está substituído opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor; em que cada cicloalquilo em Ra_d está substituído opcionalmente com 1 a 3 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi-4, -alceniloC2-4/· -alciniloC2-4/· ciano, halogéneo, -0 (alquiloCi-4) , -S (alquiloCi-4) , -S(0) (alquiloCi-4) , -S (0) 2 (alquiloCi_4) , -NH2, -NH (alquiloCi-4) e -N (alquiloCi-4) 2, em que cada grupo alquilo, alcenilo e alcinilo está substituído opcionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro; e o grupo alquileno em Z está substituído opcionalmente com 1 ou 2 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi_2 e -OH; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
De entre os compostos de fórmula I, os compostos de interesse particular são os tendo uma constante de dissociação de inibição (Ki) para a ligação ao subtipo de receptor M3 menor ou igual a 100 nM; em particular tendo uma Ki menor ou igual a 50 nM; mais particularmente tendo uma Ki menor ou igual a 10 nM; e ainda mais particularmente tendo uma Ki menor ou igual a 1,0 nM.
Outro aspecto da invenção refere-se a composições farmacêuticas compreendendo um veiculo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção. Essas composições podem conter opcionalmente outros agentes terapêuticos tais como agentes antiinflamatórios esteróides (e. g., corticosteróides), agonistas do receptor adrenérgico β2, inibidores da fosfodiesterase-4 e suas combinações. Consequentemente, em ainda um outro aspecto da invenção, uma composição farmacêutica 5 compreende um composto da invenção, um segundo agente activo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Outro aspecto da invenção refere-se à combinação de agentes activos, compreendendo um composto da invenção e um segundo agente activo. 0 composto da invenção pode ser formulado em conjunto ou separadamente do agente ou agentes adicionais. Quando formulado separadamente, pode ser incluído um veículo farmaceuticamente aceitável com o agente ou agentes adicionais. Deste modo, a invenção pode ser utilizada na forma de uma combinação de composições farmacêuticas, compreendendo a combinação: uma primeira composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção e um primeiro veículo farmaceuticamente aceitável; e uma segunda composição farmacêutica compreendendo um segundo agente activo e um segundo veículo farmaceuticamente aceitável. Esta invenção pode ser também utilizada na forma de um kit contendo essas composições farmacêuticas, por exemplo em que as primeiras e as segundas composições farmacêuticas são composições farmacêuticas distintas.
Os compostos da invenção possuem actividade antagonista do receptor muscarínico e consequentemente é expectável que sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar doentes sofrendo de uma doença ou distúrbio que seja tratado pelo bloqueio do receptor muscarínico. Deste modo, a invenção encontra utilidade num método para produzir broncodilatação num doente, compreendendo administrar ao doente uma quantidade produtora de broncodilatação de um composto da invenção. A invenção encontra também utilidade num método para tratar um distúrbio pulmonar, tais como doença pulmonar obstrutiva crónica ou asma, compreendendo administrar a um doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. A invenção encontra ainda utilidade num método para antagonizar um receptor 6 muscarínico num mamífero compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade antagonizante do receptor muscarínico de um composto da invenção.
Dado que os compostos da invenção possuem actividade antagonista do receptor muscarínico, esses compostos são também úteis como ferramentas de investigação. Consequentemente, a invenção encontra utilidade num método de utilização de um composto da invenção como uma ferramenta de investigação, compreendendo o método realizar um ensaio biológico utilizando um composto da invenção. Os compostos da invenção podem ser também utilizados para avaliar novos compostos químicos. Deste modo a invenção encontra utilidade num método de avaliação de um composto de teste num ensaio biológico, compreendendo: (a) realização de um ensaio biológico com um composto de teste para proporcionar um primeiro valor de ensaio; (b) realização do ensaio biológico com um composto da invenção para proporcionar um segundo valor de ensaio; em que o passo (a) é realizado antes, após ou simultaneamente ao passo (b); e (c) comparação do valor do primeiro ensaio do passo (a) com o valor do segundo ensaio do passo (b). Os ensaios biológicos característicos incluem um ensaio de ligação a um receptor muscarínico e um ensaio de broncoprotecção num mamífero. A invenção encontra ainda utilidade num método de estudo de um sistema ou amostra biológica compreendendo um receptor muscarínico, compreendendo o método: (a) fazer contactar o sistema biológico ou a amostra com um composto da invenção; e (b) determinação dos efeitos causados pelo composto no sistema ou na amostra biológica.
Um outro aspecto da invenção refere-se a um processo de preparação dos compostos da invenção, compreendendo: (a) ligação do composto (1) e o composto (2) sob condições formadoras de 7 ligação amida e desprotecção do produto para formar o composto (3); (b) fazer reagir o composto (3) com o composto (6) para formar o composto (7); e (c) fazer reagir o composto (7) e o composto (8) para proporcionar o composto de fórmula I; em que os compostos (1) a (3) e (7) a (9) são como definidos aqui.
Ainda um outro aspecto da invenção refere-se ao composto da invenção para utilização em terapia, especialmente para utilização no tratamento de um distúrbio pulmonar ou para antagonizar um receptor muscarinico num mamífero.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Num aspecto, esta invenção refere-se a compostos tendo a fórmula I: ,5,
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Esta fórmula pode ser também representada como:
<R\ N
Como aqui utilizado, o termo "composto da invenção" inclui todos os compostos abrangidos pela fórmula I tal como as 8 espécies consubstanciadas nas fórmulas II-VIII. Além disso, quando o composto da invenção contém um grupo básico ou acidico (e. g.f grupos amino ou carboxilo) , o composto pode existir como uma base livre, ácido livre ou em várias formas de sal. São incluídas no âmbito da invenção todas essas formas de sal. Consequentemente, os especialistas na técnica irão reconhecer que aqui a referência a um composto, por exemplo, a referência a "um composto da invenção" ou a um "composto de fórmula I" inclui um composto de fórmula I assim como sais farmaceuticamente aceitáveis desse composto a menos que indicado de outra forma. Além disso, são incluídos no âmbito da invenção solvatos de compostos de fórmula I.
Os compostos da invenção podem conter um ou mais centros quirais e deste modo podem existir em várias formas estereoisoméricas. Quando estão presentes esses centros quirais, esta invenção refere-se a misturas racémicas, estereoisómeros puros (i. e., enantiómeros ou diastereómeros) , misturas enriquecidas em estereoisómeros e semelhantes a menos que indicado de outra forma. Quando uma estrutura química é representada sem qualquer estereoquímica, é entendido que estão abrangidos por essa estrutura todos os estereoisómeros possíveis. Deste modo, por exemplo, o termo "composto de fórmula I" pretende incluir quaisquer estereoisómeros possíveis do composto. De um modo semelhante, quando é aqui apresentado ou denominado um estereoisómero particular, irá ser entendido pelos especialistas na técnica que podem estar presentes nas composições desta invenção quantidades menores de outros estereoisómeros a menos que indicado de outra forma, desde que a utilidade da composição como um todo não seja eliminada pela presença desses outros isómeros. Podem ser obtidos enantiómeros individuais por numerosos métodos que são bem conhecidos na 9 técnica, incluindo cromatografias quirais utilizando uma fase estacionária quiral ou suporte adequado ou por sua conversão quimicamente em diastereómeros, separando os diastereómeros por meios convencionais tais como cromatografia ou recristalização, regenerando depois os enantiómeros originais. Adicionalmente, quando aplicável, são incluídos no âmbito desta invenção todos os isómeros cis-trans ou E/Z (isómeros geométricos), formas tautoméricas e formas topoisoméricas dos compostos desta invenção a menos que especificado de outra forma.
Em particular os compostos de fórmula I contêm um centro quiral no átomo de carbono indicado pelo simbolo * na fórmula parcial seguinte (mostrada sem substituintes opcionais para clareza), ilustrada com a parte R1 cicloalquiloCs-g sendo ciclopentilo, sendo fenilo a parte R2 arilo e sendo R3 -OH:
Numa forma de realização desta invenção, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * tem a configuração (R) . Nesta forma de realização, os compostos de fórmula I têm a configuração (R) no átomo de carbono identificado pelo símbolo * ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica tendo a configuração (R) neste átomo de carbono. Numa outra forma de realização, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * tem a configuração (S) . Nesta forma de realização, os compostos de fórmula I têm a configuração (S) no átomo de carbono identificado pelo símbolo * 10 ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica tendo a configuração (S) neste átomo de carbono.
Os compostos da invenção, assim como os compostos utilizados na sua síntese, podem também incluir compostos marcados isotopicamente, i. e., em que um ou mais átomos foram enriquecidos com átomos tendo uma massa atómica diferente da massa atómica predominantemente encontrada na natureza. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos de fórmula I, incluem, por exemplo, mas nao estão limitados a, H, 3H, 13C, 14C, 15N, 180 e 170.
Tem sido verificado que os compostos da invenção possuem actividade antagonista do receptor muscarínico. Entre outras propriedades, os compostos da invenção possuem afinidade de ligação melhorada para os subtipos de receptor muscarínico hM2 e hM3, têm meias-vidas do receptor mais prolongadas e têm maior potência em comparação com compostos relacionados e é expectável que sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar distúrbios pulmonares. A nomenclatura utilizada aqui para denominar os compostos da invenção é aqui ilustrada nos Exemplos. Esta nomenclatura foi derivada utilizando o software de AutoNom disponível comercialmente (MDL, San Leandro, Califórnia).
FORMAS DE REALIZAÇAO REPRESENTATIVAS
Os substituintes e valores seguintes pretendem proporcionar exemplos representativos de vários aspectos e formas de realização da invenção. Estes valores representativos pretendem 11 definir e ilustrar adicionalmente esses aspectos e formas de realização e não pretendem excluir outras formas de realização ou limitar o âmbito da invenção. No que a isto respeita, a representação de que é preferido um valor ou substituinte em particular não pretende de modo algum excluir outros valores ou substituintes da invenção a menos que indicado especificamente. R1 pode ser um grupo -alquiloCi-6, -alceniloC2^6 , -cicloalquiloC3-9 ou heteroarilo que é não substituído ou substituído com 1 a 5 grupos Ra. Ra é seleccionado independentemente de -alquiloCi-4, -alceniloC2-4, -alciniloC2-4, -cicloalquiloC3-6r ciano , halogéneo, -0Rb, -C (0) 0Rb, -SRb, -S (0) Rb, -S(0)2Rb, -C (0) NRcRd e -NRcRd. Cada Rb é seleccionado independentemente de H, -alquiloCi-4, -alceniloC2-4, -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3-6 · Cada grupo Rc e Rd é seleccionado independentemente de H, -alquiloCi-4, -alceniloC2-4/· -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3-6 · Numa forma de realização, R1 é -cicloalquiloC3_9; numa outra forma de realização -cicloalquiloC3-6f i . e., ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo; e em ainda numa outra forma de realização R1 é -cicloalquilo C5, i. e., ciclopentilo. Numa forma de realização, R1 é um grupo - alquiloCi_6 tal como -CH2CH (CH3) 2 · Numa outra forma de realização, R1 é um grupo -alceniloC2-6 tal como -CH2CHCH2. Numa forma de realização, R1 é não substituído. Numa outra forma de realização, R1 é heteroarilo, tal como tiofenilo (incluindo tiofen-2-ilo e tiofen-3-ilo).
Cada grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, alquileno e cicloalquilo em Ra, Rb, Rc e Rd, pode ser substituído com 1 a 5 átomos de flúor. Além disso, cada cicloalquilo em Ra~d pode ser substituído com 1 a 3 substituintes seleccionados 12 independentemente de -alquiloCi-4, -alceniloC2-4/ -alciniloC2-4? ciano, halogéneo, -0 (alquiloCi_4) , -S (alquiloCi_4) , -S(0) (alquiloCi_4) , -S (0) 2 (alquiloCi_4) # -NH2, -NH (alquiloCi_4) e -N (alquiloCi-4) 2r em que cada grupo alquilo, alcenilo e alcinilo está substituído opcionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro. R2 pode ser um grupo arilo que é não substituído ou substituído com 1 a 5 grupos Ra, que estão definidos acima. Numa forma de realização, R2 é fenilo. Numa outra forma de realização, R2 é fenilo não substituído. Numa outra forma de realização, R2 é heteroarilo, tal como tiofenilo (incluindo tiofen-2-ilo e tiofen-3-ilo) . R3 pode ser H ou -alquilenoCo-i-OH ou formar uma ligação dupla com R1, que pode ser representado como:
OU
Além disso,
Numa forma de realizaçao particular, R3 é -OH. -CR1R2R3 em conjunto pode formar um grupo de fórmula:
em que A é uma ligação, -0-, -S-, -CH2-, -CH=CH-, -CH2CH2-, -NH-, ou-N(CH3)- e R4 é seleccionado de H, halogéneo, -OH, -alquiloCi-8 e -alcoxiloCi-8. 0 grupo alquilo em R4 pode ser substituído com 1 13 a 5 átomos de flúor. Numa forma de realização particular, -CR1R2R3 em conjunto forma:
Nesta forma de realizaçao, A é -0- e R4 é H, como mostrado.
Numa forma de realizaçao, X é uma ligação, Y é -CH2-, Y' é -N- e Y'' é -CH2-, que pode ser representado como:
R5 é seleccionado de flúor e -alquiloCi_4 · 0 valor de a é 0 ou um número inteiro desde 1 a 3. Numa forma de realização particular, a é 0. 0 grupo alquilo em R5 pode ser substituído com 1 a 5 átomos de flúor. R6 e R7 são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi-4. Além disso, um de R6 ou R7 pode ser -NH2. Numa forma de realização particular, R6 é hidrogénio ou -alquiloCi-4. Numa outra forma de realização, R7 é hidrogénio. Ainda numa outra forma de realização particular, R6 e R7 são hidrogénio. 0 grupo alquilo em R6 e R7 pode ser substituído com átomos de flúor. Por exemplo, R6 e/ou R7 podem ser -CH3 assim como -CFH2, -CF2H ou -cf3. Z é seleccionado de -alquilenoCi_3-Q e -NH-alquilenoCo-i-Q. Numa forma de realização, Z é -CH2-Q. Numa outra forma de realização, Z é -(CH2)2-Q. Ainda numa outra forma de realização, 14 Z é -(CH2) 3-Q. Ainda numa outra forma de realização, Z é -NH-Q. Ainda numa outra forma de realização, Z é -NH-CH2-Q. Os grupos alquileno em Z podem ser substituídos com 1 a 5 átomos de flúor. Além disso, o grupo alquileno em Z pode ser substituído com 1 ou 2 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi_2 e -OH. Por exemplo, numa forma de realização, Z é -CH(CH3)-. Q é um grupo -cicloalquiloC3-7, arilo ou heteroarilo. Os grupos -cicloalquiloC3-7 característicos incluem ciclopropilo, ciclo-hexilo e ciclo-heptilo. Os grupos arilo característicos incluem fenilo e naftilo. Numa forma de realização, Q é fenilo. Os grupos heteroarilo característicos incluem os grupos pirrolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, furanilo, tiofenilo, triazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, triazinilo, indolilo, benzofuranilo, benzopiranilo, benzotiofenilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, benzodioxolilo, quinolilo, isoquinolilo, quinazolinilo e quinoxalinilo. São de interesse particular os grupos tiazolilo (e. g., tiazol-2-ilo e tiazol-4-ilo) , furanilo (e. g., furan-2-ilo e furan-3-ilo), tiofenilo (e. g., tiofen-2-ilo e tiofen-3-ilo), pirazolilo (e. g. , lH-pirazol-3-ilo) , piridinilo (e. g., piridin-2-ilo), indolilo (e. g., lH-indol-2-ilo, lH-indol-4-ilo e lH-indol-5-ilo), benzofuranilo (e. g. , benzofuran-5-ilo), benzotiofenilo (e. g., benzo[b]tiofen-2-ilo e benzo[b]tiofen-5-ilo) e benzodioxolilo (e. g., benzo[1,3]dioxol-5-ilo). Q pode ser substituído com 1 a 5 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo (e. g., Cl e F) , -alquiloCi_4 (e. g., -CH3), -alquilenoCo-4-ΟΗ (e. g. , -OH e -CH2OH) , ciano, -alquilenoCo-2-COOH, -C (0) 0-alquiloCi_4 (e. g., -C(0)0-CH3), -0-alquiloCi-4 (e. g. , -0CH3) , -S-alquiloCi-4 (e. g., -S-CH3) , 15 -CONR8aR8b, -NH-C (0)-alquiloCi_4, -N-di-alquiloCi_4 e -N+{0)0, em que R8a e R86 são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi_4. Cada grupo alquilo e alquileno em R8 pode ser substituído com 1 a 5 átomos de flúor. Por exemplo, R8 pode ser um grupo -alquiloCi_4 substituído com flúor, tais como -CF3 ou um grupo O-alquiloCi-4 substituído com flúor tal como -OCF3.
Numa forma de realização, Q está substituído com um grupo R8 seleccionado de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4-ΟΗ, ciano, -C (0) O-alquiloCi-4, -0-alquiloCi-4, -S-alquiloCi-4 e -CONR8aR8b, em que cada grupo alquilo está substituído opcionalmente com 1 a 3 átomos de flúor. Numa outra forma de realização, Q está substituído com dois grupos R8 que são grupos halogéneo (que podem ser iguais ou diferentes) . Numa forma de realização, Q é um grupo -cicloalquiloC3_7 não substituído. Numa forma de realização, Q é um grupo arilo não substituído. Numa outra forma de realização, Q é um grupo arilo tendo um grupo R8 seleccionado de halogéneo, -alquiloCi-4, ciano, -alquilenoCo-2~COOH, -C (0) O-alquiloCi-4, -0-alquiloCi_4, -S-alquiloCi_4, -CONR8aR8b, em que cada grupo alquilo está substituído opcionalmente com 1 a 3 átomos de flúor. Ainda numa outra forma de realização, Q é um grupo arilo tendo dois grupos R8 que são grupos halogéneo. Numa forma de realização, Q é um grupo heteroarilo não substituído. Numa outra forma de realização, Q é um grupo heteroarilo tendo um grupo R8 que é um grupo -alquiloCi_4.
Numa forma de realização, a invenção refere-se a compostos tendo a fórmula I, em que R1 é isobutilo, ciclopentilo ou tiofenilo; R2 é fenilo ou tiofenilo; R3 é -OH; ou -CR R2R3 em conjunto forma um grupo de fórmula: 16
a é 0; R6 é H ou-alquiloCi-4; R7 é H; Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou g tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4-ΟΗ, ciano, -C (O) 0-alquiloCi_4, -0-alquiloCi-4, -S-alquiloCi-4 e -CONH2; e os grupos alquilo em R8 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
Numa outra forma de realizaçao, a invenção refere-se a compostos tendo a fórmula II:
(Π) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1 3, R6 7 e Z são como definidos para a fórmula 1. Numa forma de realização particular, a invenção refere-se a compostos de fórmula II, em que: R1 é ciclopentilo ou tiofenilo; R2 é fenilo ou tiofenilo; R3 é -OH; R6 é H ou -alquiloCi_2; R7 é H; Zé -alquiloCi-g, -alquilenoCi-3-Q, ou-NH-alquilenoC0-i-Q; Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4-ΟΗ, ciano, -C (O) O-alquiloCi-4, -0- 17 alquiloCi_4/ -S-alquiloCi-4 e -CONH2; e os grupos alquilo em R estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
Ainda um outro aspecto da invenção refere-se a compostos tendo a fórmula lia:
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R6 e Z são como definidos para a fórmula I. Numa forma de realização particular, a invenção refere-se a compostos de fórmula lia, em que: R6 é H ou -alquiloCi-2; Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4_OH, ciano, -C (0) 0-alquiloCi_4, -0-alquiloCi_4, -S-alquiloCi_4 e -C0NH2; e os grupos alquilo em R8 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
Ainda um outro aspecto da invenção refere-se a compostos tendo a fórmula Ilb:
18 ou um seu sal f armaceut icamente aceitável, em que Q é como definido para a fórmula I. Numa forma de realização particular, a invenção refere-se a compostos de fórmula Ilb, em que: Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4-ΟΗ, ciano, -C (0) O-alquiloCi-4, -0-alquiloCi-4, -S-alquiloCi-4 e -CONH2; e os grupos alquilo em R8 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor. Numa outra forma de realização, a invenção refere-se a compostos de fórmula Ilb, em que Q é furanilo ou tiofenilo.
Ainda um outro aspecto da invenção refere-se a compostos tendo a fórmula IIc:
ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, em que Z é como definido para a fórmula I. Numa forma de realização particular, a invenção refere-se a compostos de fórmula IIc, em que: Q é fenilo, furanilo ou tiofenilo; e o fenilo em Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo e -alquilenoCo_4-OH. 19
No Pedido Provisório US n° 60/967914, apresentado em 7 de Setembro de 2007 é divulgado um grupo particular de compostos. Este grupo inclui compostos de fórmula (!'):
(D em que: R1 é seleccionado de -alquiloCi_6, -alceniloC2-6 e -cicloalquiloC3-9; R é arilo; R e seleccionado de H e -alquilenoCo-i-OH; ou forma uma ligação dupla com R1; ou -CR1R2R3 em conjunto forma um grupo de fórmula:
em que A é uma ligação, -O-, -S-, -CH2-, -CH=CH-, -CH2CH2-, -NH-, ou-N(CH3)-; e em que R4 é seleccionado de H, halogéneo, -OH, -alquiloCi-s e -alcoxiloCi_8; X é uma ligação, -O- ou -0-CH2-; quando X é uma ligação, Y é -CH2-, Y' é -N- e Y' ' é -CH2-; quando X é -O- ou —O—CH2—, Y' é -CH- e Y é uma ligação e Y' ' é -CH2- ou — (CH2) 2— ou Y é -CH2- e X'' é -CH2-; R5 é seleccionado de flúor e -alquiloCi-4; e a é 0 ou um número inteiro desde 1 a 3; R6 e R7 são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi_4 e ainda em que um de R6 ou R7 pode ser -NH2; Z é seleccionado de H, -alquiloCi_6, -alquilenoCi_3-Q e -NH-alquilenoC0-i-Q, em que Q é seleccionado de -cicloalquiloC3_7, arilo ou heteroarilo, opcionalmente substituído com 1-5 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi_4, -alquilenoCo-4-ΟΗ, 20 ciano, -alquilenoCo-2-COOH, -C (0) 0-alquiloCi_4, -O-alquiloCi-4, -S-alquiloCi_4, -CONR8aR8b, -NH-C (0)-alquiloCi_4, -N-di-alquiloCi_4 e -N+(0)0, em que R8a e R8b são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi_4; em que R1 e R2 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 grupos Ra seleccionados de -alquiloCi_4, -alceniloC2_4, -alciniloC2-4, -cicloalquiloC3_6, ciano, halogéneo, -0Rb, -C(0)0Rb, -SRb, -S (0) Rb, -S (0) 2Rb, -C (0) NRcRd e -NRcRd; em que cada Rb é seleccionado independentemente de H, -alquiloCi-4, -alceniloC2-4f -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3-6; e cada Rc e Rd são seleccionados independentemente de H, -alquiloCi-4, -alceniloC2-4, -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3_6; em que cada grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, alquileno e cicloalquilo em Ra~d, R4~8 e Z, está substituído opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor; em que cada cicloalquilo em Ra~d está substituído opcionalmente com 1 a 3 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi_4, -alceniloC2-4, -alciniloC2-4, ciano, halogéneo, -0 (alquiloCi_4) , -S (alquiloCi-4) , -S (0) (alquiloCi-4) , -S (0) 2 (alquiloCi-4) , -nh2, -NH (alquiloCi-4) e -N (alquiloCi_4) 2, em que cada grupo alquilo, alcenilo e alcinilo está substituído opcionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro; e o grupo alquileno em Z está substituído opcionalmente com 1 ou 2 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi_2 e -OH; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Além disso, os compostos particulares da invenção que têm interesse incluem os estabelecidos nos Exemplos abaixo, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 21
DEFINIÇÕES
Quando os requerentes descrevem compostos, composições, métodos e processos da invenção, os termos seguintes têm os significados seguintes a menos que indicado de outra forma. Adicionalmente, como aqui utilizado, as formas singulares "a", "um" e "o" incluem as formas plurais correspondentes a menos que o contexto da utilização indique claramente de outra forma. Os termos "compreendendo", "incluindo" e "tendo" pretendem ser inclusivos e significar que podem existir elementos adicionais para além dos elementos listados. Todos os números expressando quantidades de ingredientes, propriedades, tais como peso molecular, condições de reacção e semelhantes aqui utilizados devem ser entendidos como sendo modificado em todos os casos pelo termo "cerca de", a menos que indicado de outra forma. Consequentemente, os números aqui estabelecidos são aproximações que podem variar dependendo das propriedades pretendidas que se procuram obter pela presente invenção. Pelo menos e não como uma tentativa de limitar a aplicação do princípio dos equivalentes ao âmbito das reivindicações, cada número deve ser pelo menos interpretado na perspectiva dos algarismos significativos descritos e aplicando técnicas de arredondamento comuns. 0 termo "alquilo" significa um grupo hidrocarboneto saturado monovalente que pode ser linear ou ramificado. A menos que definido de outra forma, esses grupos alquilo contêm tipicamente desde 1 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo -alquiloCi_2r -alquiloCi_4 e -alquiloCi-6. Os grupos alquilo representativos incluem, a título de exemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo e semelhantes. 22
Quando é pretendido um número específico de átomos de carbono para um termo particular aqui utilizado, o número de átomos de carbono é mostrado sucedendo o termo como subscrito. Por exemplo, o termo "-alquiloCi_4" significa um grupo alquilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono e o termo "-cicloalquiloCs-g" significa um grupo cicloalquilo tendo de 5 a 9 átomos de carbono, em que os átomos de carbono estão em qualquer configuração aceitável. 0 termo "alquileno" significa um grupo hidrocarboneto divalente saturado que pode ser linear ou ramificado. A menos que definido de outra forma, esses grupos alquileno contêm tipicamente desde 0 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -alquilenoCo-i-, -alquilenoCo-2-/· -alquilenoCo-4-/· -alquilenoCo-5-, -alquilenoCi-4-, -alquilenoCi-2-, -alquilenoC2-4-/· -alquilenoC2-5- e -alquilenoC3-6-. Os grupos alquileno representativos incluem, a título de exemplo, metileno, etano-1,2-diilo ("etileno"), propano-1,2-diilo, propano-1,3-diilo, butano-1,4-diilo, pentano-1,5-diilo e semelhantes. É entendido que quando o termo alquileno inclui zero carbonos tal como -alquilenoCo-i- ou -alquilenoCo-5-, esses termos pretendem incluir a ausência de átomos de carbono, ou seja, o grupo alquileno não está presente excepto por uma ligação covalente ligando os grupos separados pelo termo alquileno. 0 termo "alcenilo" significa um grupo hidrocarboneto não saturado monovalente que pode ser linear ou ramificado e que tem pelo menos uma e tipicamente 1, 2 ou 3, ligações duplas carbono- carbono. A menos que definido de outra forma, esses grupos alcenilo contêm tipicamente 2 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -alceniloC2-4 e -alceniloC2-6 · Os grupos alcenilo representativos incluem, a título de exemplo, etenilo, 23 Ώ-propenilo, isopropenilo, n-but-2-enilo, n-hex-3-enilo e semelhantes. 0 termo "alcenileno" significa um grupo alcenilo divalente e os grupos alcenileno característicos incluem -alcenilenoC2-3-. 0 termo "alcoxilo" significa um grupo monovalente de fórmula -O-alquilo, em que alquilo é como definido aqui. A menos que definido de outra forma, esses grupos alquileno contêm tipicamente desde 1 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -alcoxiloCi_4 e -alcoxiloCi-s. Os grupos alcoxilo representativos incluem, a titulo de exemplo, metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo, sec-butoxilo, isobutoxilo, terc-butoxilo e semelhantes. 0 termo "alcinilo" significa um grupo hidrocarboneto não saturado monovalente que pode ser linear ou ramificado e que tem pelo menos uma e tipicamente 1, 2 ou 3, ligações triplas carbono-carbono. A menos que definido de outra forma, esses grupos alcinilo contêm tipicamente 2 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -alciniloC2-4 e -alciniloC2-6 · Os grupos alcinilo representativos incluem, a título de exemplo, etinilo, n-propinilo, n-but-2-inilo, n-hex-3-inilo e semelhantes. aromático ou anéis de outra átomos de Os grupos fenilo e O termo "arilo" significa um hidrocarboneto monovalente tendo um anel único (i. e., fenilo) fundidos (i. e., naftalina) . A menos que definido forma, esses grupos arilo contêm tipicamente 6 a 10 carbono do anel e incluem, por exemplo, -ariloC6-io· arilo representativos incluem, a título de exemplo, naftalen-l-ilo, naftalen-2-ilo e semelhantes. 24 0 termo "cicloalquilo" significa um grupo hidrocarboneto carbociclico saturado monovalente. A menos que definido de outra forma, esses grupos cicloalquilo contêm tipicamente 3 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -cicloalquiloC3-6, -cicloalquiloC3_7 e -cicloalquiloC5-9. Os grupos cicloalquilo representativos incluem, a titulo de exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e semelhantes. O termo "grupo hidrocarboneto divalente" significa um grupo hidrocarboneto divalente que é composto principalmente por átomos de carbono e hidrogénio e que opcionalmente contém um ou mais heteroátomos. Esses grupos hidrocarboneto divalentes podem ser ramificados ou não ramificados, saturados ou não saturados, aciclicos ou cíclicos, alifáticos ou aromáticos ou suas combinações. 0 grupo hidrocarboneto divalente pode conter opcionalmente heteroátomos incorporados na cadeia de hidrocarboneto ou como substituintes ligados à cadeia de hidrocarboneto. O termo "halogéneo" significa fluoro, cloro, bromo e iodo.
Como aqui utilizado, a frase "tendo a fórmula" ou "tendo a estrutura" não pretende ser limitativo e é utilizada do mesmo modo que o termo "compreendendo" é normalmente utilizado. 0 termo "heteroarilo" significa um grupo aromático monovalente tendo um anel único ou dois anéis fundidos e contendo pelo menos um heteroátomo no anel (tipicamente 1 a 3 heteroátomos) seleccionado de azoto, oxigénio ou enxofre. A menos que definido de outra forma, esses grupos heteroarilo contêm tipicamente 5 a 10 átomos do anel totais e incluem, por exemplo, -heteroariloC2-9 · Os grupos heteroarilo representativos 25 incluem, a título de exemplo, pirrolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, furanilo, tiofenilo, triazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, triazinilo, indolilo, benzofuranilo, benzopiranilo, benzotiofenilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, benzodioxolilo, quinolilo, isoquinolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo e semelhantes, em que o ponto do ligação está em qualquer átomo de carbono ou de azoto do anel disponível. 0 termo "opcionalmente substituído" significa que o grupo em questão pode ser não substituído ou pode ser substituído uma ou mais vezes, tais como 1 a 3 vezes ou 1 a 5 vezes. Por exemplo, um grupo alquilo que está "substituído opcionalmente" com 1 a 5 átomos de flúor, pode ser não substituído ou este pode conter 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos de flúor. 0 termo "farmaceuticamente aceitável" refere-se a um material que não é biologicamente ou de outra forma inaceitável quando utilizado na invenção. Por exemplo, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um material que pode ser incorporado numa composição e administrado a um doente sem causar efeitos biológicos inaceitáveis ou interagir de uma forma inaceitável com outros componentes da composição. Esses materiais farmaceuticamente aceitáveis estão tipicamente de acordo com os padrões de teste toxicológicos e de produção requeridos e incluem os materiais identificados como ingredientes inactivos adequados pela U.S. Food and Drug Administration. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" significa um sal preparado a partir de uma base ou de um ácido que é aceitável para administração a um doente, tal como um mamífero (e. g., 26 sais tendo segurança aceitável para um mamífero para um determinado regime de dosagem). No entanto, é entendido que não é necessário que os sais abrangidos pela invenção sejam sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como sais de compostos intermediários que não se destinam a administração a um doente. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Além disso, quando um composto de fórmula I contém uma parte básica e uma parte acídica, podem ser formados zwitteriões e estão incluídos dentro do termo "sal" como aqui utilizado. Os sais derivados de bases inorgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de amónio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânicos, manganosos, de potássio, sódio e zinco e semelhantes. Os sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas de ocorrência natural e semelhantes, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, N,Nr-dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, n-etilmorfolina, n-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e semelhantes. Os sais derivados de ácidos inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais dos ácidos bórico, carbónico, haloídrico (bromídrico, clorídrico, fluorídrico ou iodídrico), nítrico, fosfórico, sulfâmico e sulfúrico. Os sais derivados de ácidos orgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais dos ácidos hidroxílicos alifáticos (e. g., ácidos cítrico, glucónico, glicólico, láctico, lactobiónico, málico e 27 tartárico), ácidos monocarboxílicos alifáticos (e. g., ácidos acético, butírico, fórmico, propiónico e trifluoroacético), aminoácidos (e. g., ácidos aspártico e glutâmico), ácidos carboxilicos aromáticos (e. g., ácidos benzóico, p-clorobenzóico, difenilacético, gentísico, hipúrico e trifenilacético), ácidos hidroxílicos aromáticos (e. g., ácidos o-hidroxibenzóico, p-hidroxibenzóico, 1-hidroxinaftaleno-2-carboxilico e 3-hidroxinaftaleno-2-carboxilico), ascórbico, ácidos dicarboxilicos (e. g., ácidos fumárico, maleico, oxálico e succínico), ácidos glucorónico, mandélico, múcico, nicotínico, orótico, pamóico, pantoténico, sulfónico (e. g., ácidos benzenossulfónico, canfossulfónico, edisílico, etanossulfónico, isetiónico, metanossulfónico, naftalenossulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, naftaleno-2,6-disulfónico e p-toluenossulfónico), ácido xinafóico e semelhantes. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade suficiente para efectuar tratamento quando administrado a um doente com necessidade do tratamento, i. e., a quantidade do fármaco necessária para obter o efeito terapêutico pretendido. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar a doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) é uma quantidade do composto necessária, por exemplo, para reduzir, suprimir, eliminar ou prevenir, os sintomas da (COPD) ou tratar a causa subjacente da (COPD). Por outro lado, uma quantidade "eficaz" é a quantidade necessária para obter um resultado pretendido, o que pode não ser necessariamente uma quantidade terapeuticamente eficaz. Por exemplo, quando estudando um sistema compreendendo para antagonizar um receptor muscarinico, uma "quantidade eficaz" pode ser a quantidade necessária para antagonizar o receptor. 28 0 termo "tratar" ou "tratamento" como aqui utilizado significa tratar ou o tratamento de uma doença ou estado clinico (tal como COPD) num doente, tal como um mamifero (particularmente um humano) que inclui: (a) prevenção da ocorrência da doença ou do estado clinico, i. e., tratamento profiláctico de um doente; (b) melhoria da doença ou do estado clinico, i. e., eliminando ou causando regressão da doença ou do estado clinico num doente; (c) supressão da doença ou do estado clinico, i. e., retardamento ou paragem do desenvolvimento da doença ou do estado clinico num doente; ou (d) alívio dos sintomas da doença ou do estado clínico num doente. Por exemplo, o termo "tratar a COPD" irá incluir a prevenção da ocorrência da COPD, melhoria da COPD, supressão da COPD e alívio dos sintomas da COPD. 0 termo "doente" pretende incluir animais, tal como humanos, com necessidade de tratamento ou de prevenção da doença, que estão a ser presentemente tratados para a prevenção de doença ou tratamento de uma doença ou estado clínico específico, assim como indivíduos de teste em que os compostos da invenção estão sendo avaliados ou sendo utilizados num ensaio, por exemplo um modelo animal.
Todos os outros termos aqui utilizados pretendem ter o seu significado normal como entendido pelos que possuem conhecimentos comuns na técnica a que estes pertencem.
PROCESSOS SINTÉTICOS GERAIS
Os compostos da invenção podem ser preparados a partir de materiais de partida facilmente disponíveis utilizando os métodos gerais seguintes, os processos estabelecidos nos Exemplos ou utilizando outros métodos, reagentes e materiais de 29 partida que são conhecidos dos que possuem conhecimentos comuns na técnica. Embora os processos seguintes possam ilustrar uma forma de realização particular da invenção, é entendido que podem ser preparadas outras formas de realização da invenção de um modo semelhante utilizando os mesmos métodos ou semelhantes ou utilizando outros métodos, reagentes e materiais de partida conhecidos dos que possuem conhecimentos comuns na técnica. Irá ser também tido em consideração que quando são proporcionadas condições de processo típicas ou preferidas (i. e., temperaturas de reacção, tempos, proporções molares dos reagentes, solventes, pressões, etc.), podem ser também utilizadas outras condições de processo a menos que afirmado de outra forma. Embora as condições de reacção óptimas venham a variar tipicamente dependendo de vários parâmetros de reacção tais como reagentes, solventes e quantidades utilizadas particulares, os que possuem conhecimentos comuns na técnica podem determinar facilmente condições de reacção adequadas utilizando processos de optimização de rotina.
Adicionalmente, como irá ser evidente para os especialista na técnica, podem ser necessários ou pretendidos grupos de protecção convencionais para impedir determinados grupos funcionais de sofrerem reacções indesejadas. A selecção de um grupo de protecção adequado para um grupo funcional particular assim como condições e reagentes adequados para a protecção e desprotecção desses grupos funcionais são bem conhecidos na técnica. Os grupos funcionais que podem ser protegidos para prevenir reacções indesejadas incluem, a título de exemplo, grupos carboxilo, grupos amino, grupos hidroxilo, grupos tiol, grupos carbonilo e semelhantes. Os grupos protectores de carboxilo representativos incluem, mas não estão limitados a, ésteres, tais como metílico, etílico, t-butílico, benzílico 30 9-fluoroenilmetílico (Fm), (Bn), p-metoxibenzilico (PMB), trimetilsilílico (TMS), t-butildimetilsilílico (TBS) , difenilmetilico (benzidrilico, DPM) e semelhantes; amidas e hidrazidas. Os grupos protectores de hidroxilo representativos incluem, mas não estão limitados a grupos sililo incluindo grupos trialquilsililoCi_6, tais como trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES), terc-butildimetilsililo (TBS) e semelhantes; ésteres (grupos acilo) incluindo grupos alcanoíI0C1-6, tais como formilo, acetilo e semelhantes; grupos arilmetilo, tais como benzilo (Bn) , p-metoxibenzilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm) , difenilmetilo (benzidrilo, DPM) e semelhantes; e éteres. Os grupos de protecção representativos de grupos tiol incluem tioéteres e tioésteres. Os grupos de protecção representativos de grupos de carbonilo incluem acetais e cetais. Se pretendido, podem ser utilizados grupos protectores para além dos aqui descritos. Por exemplo, em T. W. Greene e G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Terceira Edição, Wiley, Nova Iorque, 1999 e referências ai citadas são descritos numerosos grupos de protecção e sua introdução e remoção. Mais especificamente, são utilizadas as abreviaturas seguintes e os reagentes nos esquemas apresentados abaixo: semelhantes. Sao utilizadas técnicas de desprotecção convencionais para remover o grupo P1. Por exemplo, a P representa "um grupo protector de amino", um termo que é aqui utilizado para significar um grupo de protecção adequado para prevenir reacções indesejadas num grupo amino. Os grupos protectores de amino representativos incluem, mas não estão limitados a t-butoxicarbonilo (BOC), tritilo (Tr), benziloxicarbonilo (Cbz), 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), formilo, trimetilsililo (TMS), t-butildimetilsililo (TBDMS) e 31 desprotecção do grupo N-BOC pode utilizar um reagente, tais como HC1 ou HC1 4 M em 1,4-dioxano.
As bases adequadas para utilização nestes esquemas incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, carbonato de potássio, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, trietilamina, piridina, 1, 8-diazabiciclo-[5, 4, 0]-undec-7-eno (DBU), N,N-diisopropiletilamina (DIPEA), hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, t-butóxido de potássio e hidretos metálico.
Os diluentes ou os solventes inertes adequados para utilização nestes esquemas incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, tetra-hidrofurano (THF), acetonitrilo (MeCN), tolueno, N,N-dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), diclorometano (DCM), clorofórmio, tetracloreto de carbono (CHCI3) , 1,4-dioxano, metanol, etanol, água e semelhantes.
Os reagentes de ligação ácido carboxílico/amina adequados incluem hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (HOBt), hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris(dimetilamino) fosfónio (PyBOP), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il-N, N, Ν',N'tetrametilurónio (HATU), diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDCI), carbonildiimidazole (CDI) e semelhantes. As reacções de ligação são realizadas num diluente inerte na presença de uma base e realizadas sob condições formadoras de ligação amida convencionais.
Todas as reacções são realizadas tipicamente a uma temperatura dentro da gama de cerca de -78 °C a 100 °C, por exemplo à temperatura ambiente. Tipicamente, as reacções são controladas pela utilização de cromatografia de camada fina 32 (TLC), cromatografia líquida de elevado desempenho (HPLC) e/ou LCMS até à finalização. As reacções podem ser finalizadas em minutos ou podem levar horas, tipicamente desde 1-2 horas e até 48 horas. Após a finalização, a mistura pode ser adicionalmente tratada de forma a obter o produto pretendido. Por exemplo, a mistura pode ser submetida a um ou mais dos processos seguintes: separação ou repartição (e. g. , entre acetato de etilo e água ou entre THF a 5% em acetato de etilo e ácido fosfórico 1 M) ; extracção (e. g., com acetato de etilo, CHCI3, DCM, KOH/clorofórmio); lavagem (e. g., com NaCl aquoso saturado, NaHCCp saturado, Na2CC>3 (5%), CHCI3, HC1 ou NaOH) ; secagem (e. g., sobre MgS04 ou NaS04) ; remoção do solvente (e. g. , in vacuo) ; filtração; sendo concentrada (e. g., in vacuo)} e/ou purificação (e. g., cromatografia em sílica gel, cromatografia flash ou HPLC em fase reversa). A título de ilustração, os compostos de fórmula I podem ser preparados por um ou mais dos processos característicos seguintes. Os reagentes estão todos comercialmente disponíveis e/ou podem ser facilmente sintetizados por técnicas que são bem conhecidas na matéria. 33
Formação do Grupo de Topo em que X é uma Ligaçao
0 composto (3) é formado por ligação dos compostos (1) e (2) sob condições formadoras de ligação amida convencionais, seguidas por um passo de desprotecção.
Os exemplos do composto (1) incluem ácido (R)-ciclopentil- 1 2 3 hidroxifenilacético (R é ciclopentilo, R e fenilo e R e hidroxilo). Os exemplos do composto (2) incluem 1-piperazinacarboxilato de t-butilo (a é 0, P1 é BOC) .
Adição da Parte Guanidína ao Grupo de Topo - Deslocamento da Ia Parte Benzotriazole
É adicionado DIPEA ao composto (3) num solvente adequado. O composto (6), é então adicionado o agente guanidinilante e a reacção é agitada à temperatura ambiente até à finalização, tipicamente de 30 minutos a várias horas, para originar o composto (7), que é utilizado directamente no passo seguinte. 0 composto (6) é preparado facilmente pelo método descrito em 34
Katritzky et al. (2000) J. Org. Chem. 65(23):8080-8082. A C-(bis-benzotriazol-l-ilo)metileno amina (R6 é H) é um exemplo do composto (6).
Formação de Guanidina Substituída (Formação de Guanidina Tri ou Tetra-substituída) H (7) + Z-|v|
R'
(D E adicionado o composto (7) ao composto (8) e a mistura é mantida à temperatura ambiente ou aquecida (~60 °C) até à finalização, tipicamente cerca de 14-24 horas. A reacção é então arrefecida até à temperatura ambiente, se necessário e o solvente é removido. O material em bruto é então purificado para originar um composto de fórmula I. Os exemplos de composto (8) incluem 2-tiofenometilamina, 4-hidroxibenzilamina e benzilamina.
Nos Exemplos estabelecidos abaixo são descritos detalhes adicionais no que respeita a condições de reacção especificas e outros processos para preparar compostos representativos da invenção ou os seus intermediários. 35
UTILIDADE
Os compostos da invenção possuem actividade antagonista do receptor muscarinico e numa forma de realização, em potências nanomolares. Numa forma de realização, os compostos da invenção são selectivos para a inibição da actividade do subtipo de receptor muscarinico M3 relativamente à actividade do subtipo de receptor muscarinico M2. Numa outra forma de realização, os compostos da invenção são selectivos para a inibição da actividade do subtipo de receptor muscarinico M3 e M2 relativamente à actividade do subtipo de receptor muscarinico Mi, M4 e M5. Adicionalmente, é expectável que os compostos da invenção possuam uma duração de acção desejável. Consequentemente, numa outra forma de realização específica, a invenção refere-se a compostos tendo uma duração de acção superior a 24 horas. Além disso, é também expectável que os compostos da invenção possuam efeitos secundários reduzidos, tais como boca seca, em doses eficazes quando administrados por inalação em comparação com outros antagonistas do receptor muscarinico conhecidos administrados por inalação (tal como tiotrópio).
Uma medida da afinidade de um composto do subtipo de receptor M3 é a constante de dissociação de inibição (K i) para ligação ao receptor. É expectável que os compostos da invenção tenham uma K2 para o subtipo de receptor M3 menor ou igual a 100 nM, como determinado, por exemplo, por um ensaio de deslocamento de um radioligando in vitro. Os compostos de interesse particular incluem os tendo uma K± menor ou igual a 50 nM e numa outra forma de realização, os compostos têm uma menor ou igual a 10 nM e ainda numa outra forma de realização, os compostos têm uma menor ou igual a 1,0 nM. Os compostos de 36 ainda maior interesse particular incluem aqueles tendo uma Ki menor ou igual a 500 pM e numa outra forma de realização, os compostos têm uma Ki menor ou igual a 200 pM. É referido que em alguns casos, os compostos da invenção podem possuir uma actividade antagonista do receptor muscarinico fraca. Nesses casos, os especialistas na técnica irão reconhecer que estes compostos têm ainda utilidade como ferramentas de investigação. São também de interesse particular os compostos tendo uma ID5o menor ou igual a 100 pg/mL 24 horas após a dosagem, mais particularmente os compostos tendo uma ID50 menor ou igual a 30 pg/mL 24 horas após a dosagem.
Nos Exemplos são descritos ensaios caracteristicos para determinar as propriedades dos compostos da invenção, tal como a actividade antagonizante do receptor muscarinico e incluem a titulo de ilustração e não de limitação, ensaios que medem a ligação ao receptor muscarinico hMi, hM2, hM3, hM4 e hMs (por exemplo, como descrito no Ensaio 1). Os ensaios funcionais úteis para determinar a actividade antagonizante do receptor muscarinico de compostos da invenção incluem a titulo de ilustração e não de limitação, ensaios que medem alterações mediadas por um ligando no monofosfato de adenosina ciclico intracelular (cAMP), modificações mediadas por um ligando na actividade da enzima ciclase de adenililo (que sintetiza o cAMP), modificações mediadas por um ligando na incorporação de 5’-O-(γ-tio)trifosfato de guanosina ([S35]GTPyS) em membranas isoladas através da permuta catalisada pelo receptor, de [S35]GTPyS por GDP, modificações mediadas por um ligando dos iões de cálcio intracelulares livres (medidos, por exemplo, com um leitor de placas de visualização ligada a fluorescência ou FLIPR® de Molecular Devices, Inc.) e semelhantes. No ensaio 2 são 37 descritos ensaios característicos. É expectável que os compostos desta invenção antagonizem ou reduzam a activação dos receptores muscarínicos em algum dos ensaios listados acima ou em ensaios da natureza semelhante e irão ser tipicamente utilizados nestes estudos numa concentração variando desde cerca de 0,1-100 nanomolar. Deste modo, os ensaios referidos acima são úteis na determinação da utilidade terapêutica, por exemplo, a actividade broncodilatadora, de compostos da invenção.
Outras propriedades e utilidades de compostos da invenção podem ser demonstradas utilizando vários ensaios in vitro e in vivo bem conhecidos dos especialistas na técnica. Por exemplo, a potência in vivo de compostos da invenção pode ser medida num modelo animal tal como o modelo de Einthoven. Resumidamente, é avaliada a actividade broncodilatadora de um composto num animal anestesiado (o modelo de Einthoven), que utiliza a pressão de ventilação como uma medida de substituição da resistência das vias aérea. Ver, por exemplo, Einthoven (1892) Pfugers. Arch. 51:367-445; e Mohammed et al. (2000) Pulm Pharmacol Ther. 13(6) :287-92, assim como o Ensaio 3 que descreve um modelo de Einthoven em rato. Numa forma de realização, um composto da invenção administrado numa dose de 100 pg/mL no modelo de Einthoven em rato apresenta uma inibição superior ou igual a 35% da resposta broncoconstrictora às 24 horas e em outra forma de realização apresenta uma inibição superior ou igual a 70% às 24 horas. Um outro ensaio in vivo útil consiste no ensaio anti-sialagogo em rato (por exemplo, como descrito no Ensaio 4). É expectável que os compostos da invenção sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar estados clínicos mediados por receptores muscarínicos. Deste modo é expectável que os doentes que sofrem de uma doença ou distúrbio que seja tratado por 38 bloqueio do receptor muscarínico possam ser tratados por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista do receptor muscarínico da invenção. Esses estados clínicos incluem, a título de exemplo, distúrbios pulmonares ou doenças incluindo as associadas com a obstrução reversível das vias aéreas, doença pulmonar obstrutiva tal como crónica (e. g., bronquite crónica e sibilante e enfisema), asma, fibrose pulmonar, rinite alérgica, rinorreia e semelhantes. Outros estados clínicos que podem ser tratados com antagonistas do receptor muscarínico são os distúrbios do tracto genito- urinário, tais como bexiga super-activa ou hiperactividade detrusora e os seus sintomas; distúrbios do tracto gastrointestinal, tais como síndrome do intestino irritável, doença diverticular, acalasia, distúrbios de hipermobilidade gastrointestinal e diarreia; arritmias cardíacas, tal como bradicardia sinusoidal; doença de Parkinson; distúrbios cognitivos, tal como a doença de Alzheimer; dismenorreia; e semelhantes . A quantidade de agente activo administrada por dose ou a quantidade total administrada por dia pode ser pré-determinada ou pode ser determinada com base no doente individual levando em consideração numerosos factores, incluindo a natureza e a gravidade do estado do doente, o estado a ser tratado, a idade, peso e saúde geral do doente, a tolerância do doente ao agente activo, a via da administração, considerações farmacológicas tais como a actividade, eficácia, perfis farmacocinéticos e de toxicologia do agente activo e quaisquer agentes secundários a ser administrados e semelhantes. 0 tratamento de um doente sofrendo de uma doença ou estado clínico (tal como COPD) pode iniciar-se com uma dosagem pré-determinada ou com uma dosagem determinada pelo médico assistente e irá prosseguir durante o 39 período de tempo necessário para prevenir, melhorar, suprimir ou aliviar os sintomas da doença ou do estado clínico. Os doentes submetidos a esse tratamento irão ser tipicamente monitorizados numa base de rotina para determinar a eficácia da terapia. Por exemplo, no tratamento da COPD, pode ser utilizada a melhoria significativa no volume expiratório forçado (medido num segundo) para determinar a eficácia do tratamento. São bem conhecidos dos especialista na técnica e facilmente disponíveis para o médico assistente, indicadores semelhantes de outras doenças e estados aqui descritas. A monitorização contínua pelo médico irá assegurar que irá ser administrada uma quantidade óptima do agente activo em qualquer tempo determinado, assim como facilitar a determinação da duração do tratamento. Isto tem um valor particular quando estão também a ser administrados agentes secundários, dado que a sua selecção, dosagem e duração da terapia pode também necessitar de ajuste. Deste modo, o regime de tratamento e plano de dosagens pode ser ajustado ao longo do decurso da terapia de forma a que seja administrada a quantidade mais baixa de agente activo que apresente a eficácia pretendida, além disso, que a administração seja prosseguida apenas na medida em que seja necessária para tratar com sucesso a doença ou o estado clinico.
Consequentemente, numa forma de realização, os compostos da invenção são úteis para tratar distúrbios do músculo liso em mamíferos, incluindo humanos e os seus animais de companhia (e. g., cães, gatos etc.). Esses distúrbios do músculo liso incluem, a título de ilustração, bexiga super-activa, doença pulmonar obstrutiva crónica e síndrome do intestino irritável. Tipicamente, as doses adequadas para tratar distúrbios do músculo liso ou outros distúrbios mediados por receptores muscarínicos irão variar desde cerca de 0,14 pg/kg/dia a cerca 40 de 7 mg/kg/dia de agente activo; incluindo desde cerca de 0,15 pg/kg/dia a cerca de 5 mg/kg/dia. Para um humano médio com 70 kg, esta irá ascender a cerca de 10 pg por dia a cerca de 500 mg por dia de agente activo.
Numa forma de realização específica, os compostos da invenção são úteis para tratar distúrbios pulmonares ou respiratórios, tais como COPD ou asma, em mamíferos incluindo humanos, administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto a um doente. Geralmente, a dose para tratar um distúrbio pulmonar irá variar desde cerca de 10-1500 pg/dia. O termo "COPD" é entendido pelos que possuem conhecimentos comuns na técnica como incluindo vários estados respiratórios, incluindo bronquite obstrutiva crónica e enfisema, como exemplificado pelos ensinos de Barnes (2000) N. Engl. J. Med. 343:269-78 e referências ai citadas. Quando utilizados para tratar um distúrbio pulmonar, os compostos da invenção são administrados opcionalmente em combinação com outros agentes terapêuticos tal como um agonista do adrenorreceptor β2; um corticosteróide, um agente antiinflamatório não esteróide ou as suas combinações.
Quando administrados por inalação, os compostos da invenção têm tipicamente o efeito de produzir broncodilatação. Consequentemente, a invenção encontra utilidade num método de produzir broncodilatação num doente, compreendendo administrar a um doente uma quantidade produtora de broncodilatação de um composto da invenção. Geralmente, a dose terapeuticamente eficaz para produzir broncodilatação irá variar desde cerca de 10-1500 pg/dia. 41
Numa outra forma de realização, os compostos da invenção são utilizados para tratar a bexiga super-activa. Quando utilizada para tratar a bexiga super-activa, uma dose típica irá variar desde cerca de 1,0-500 mg/dia. Ainda numa outra forma de realização, os compostos da invenção são utilizados para tratar a síndrome do intestino irritável. Quando utilizado para tratar síndrome do intestino irritável, os compostos da invenção irão ser tipicamente administrados oralmente ou rectalmente e uma dose típica irá variar desde cerca de 1,0-500 mg/dia.
Dado que os compostos desta invenção possuem actividade antagonista do receptor muscarínico, esses compostos são também úteis como ferramentas de investigação para investigar ou estudar sistemas biológicos ou amostras tendo receptores muscarinicos. Pode ser utilizado nesses estudos qualquer sistema biológico ou amostra adequados tendo receptores muscarinicos Mi, M2, M3, M4 e/ou M5, que pode ser realizado in vitro ou in vivo. Os sistemas biológicos ou as amostras representativos adequados para esses estudos incluem, mas não estão limitados a, células, extractos celulares, membranas plasmáticas, amostras de tecido, órgãos isolados, mamíferos (tais como murganhos, ratos, cobaias, coelhos, cães, porcos, humanos e semelhantes) e semelhantes, com mamíferos a terem interesse particular. Numa forma de realização particular da invenção é antagonizado um receptor muscarínico num mamífero administrando uma quantidade antagonizante do receptor muscarínico de um composto da invenção. Os compostos da invenção podem ser também utilizados como ferramentas de investigação pela realização de ensaios biológicos utilizando esses compostos.
Quando utilizado como uma ferramenta de investigação, um sistema ou amostra biológica compreendendo um receptor 42 muscarínico é tipicamente feito contactar com uma quantidade antagonizante de um receptor muscarínico de um composto da invenção. Após o sistema biológico ou amostra ser exposto ao composto, são determinados os efeitos de antagonização do receptor muscarínico utilizando processos e equipamento convencionais, tais como medição da ligação num ensaio de ligação de radioligando ou modificações mediadas por um ligando num ensaio funcional ou pela determinação da quantidade de broncoprotecção proporcionada pelo composto num ensaio de broncoprotecção num mamífero. A exposição abrange fazer contactar células ou tecido com o composto, administrando o composto a um mamífero, por exemplo por administração i. p. ou i. v. e semelhantes. Este passo de determinação pode compreender a medição de uma resposta, i. e., uma análise quantitativa ou pode compreender uma observação, i. e., uma análise qualitativa. A medição de uma resposta envolve, por exemplo, determinar os efeitos do composto no sistema ou amostra biológica utilizando processos e equipamento convencionais, tais como ensaio de ligação de radioligando e medição de modificações mediadas por um ligando em ensaios funcionais. Os resultados de ensaio podem ser utilizados para determinar o nível de actividade assim como a quantidade do composto necessário para obter o resultado pretendido, i. e., uma quantidade antagonizante muscarínica. Tipicamente, o passo de determinação irá envolver a determinação de efeitos mediados por um ligando do receptor muscarínico.
Adicionalmente, os compostos da invenção podem ser utilizados como ferramentas de investigação para avaliar outros compostos químicos e deste modo são também úteis em ensaios de rastreio para descobrir, por exemplo, novos compostos tendo actividade de ligação ao receptor muscarínico. Desta forma, é utilizado um composto da invenção como um padrão num ensaio para 43 permitir a comparação dos resultados obtidos com um composto de teste e com compostos da invenção para identificar os compostos de teste que têm uma ligação aproximadamente igual ou superior, se existir. Por exemplo, são comparados dados de ligação ao receptor muscarínico (como determinados, por exemplo, por ensaios de deslocamento de radioligando in vitro) para um composto de teste ou um grupo de compostos de teste com dados de ligação ao receptor muscarínico de um composto da invenção para identificar os compostos de teste que têm as propriedades pretendidas, e. g., compostos de teste tendo ligação aproximadamente igual ou superior a um composto da invenção, se existir. Alternativamente, por exemplo, podem ser determinados efeitos broncoprotectores para os compostos de teste e um composto da invenção num ensaio de broncoprotecção num mamífero e estes dados serem comparados para identificar compostos de teste proporcionando efeitos broncoprotectores aproximadamente iguais ou superiores. Este aspecto da invenção inclui, como formas de realização separadas, a produção de dados de comparação (utilizando os ensaios adequados) e a análise dos dados de teste para identificar compostos de teste de interesse. Deste modo, um composto de teste pode ser avaliado num ensaio biológico, por um método compreendendo os passos de: (a) realização de um ensaio biológico com um composto de teste para proporcionar um primeiro valor de ensaio; (b) realização do ensaio biológico com um composto da invenção para proporcionar um segundo valor de ensaio; em que o passo (a) é realizado antes, depois ou simultaneamente ao passo (b) ; e (c) comparação do primeiro valor de ensaio do passo (a) com o segundo valor de ensaio do passo (b) . Os ensaios biológicos característicos incluem ensaios de ligação ao receptor muscarínico. 44
COMPOSIÇÕES E FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS
Os compostos da invenção são tipicamente administrados a um doente na forma de uma composição ou formulação farmacêutica. Essas composições farmacêuticas podem ser administradas ao doente por qualquer via aceitável de administração incluindo, mas não limitadas a, inalada, oral, nasal, tópica (incluindo transdérmica) e modos parentéricos de administração. Além disso, os compostos da invenção podem ser administrados, por exemplo oralmente, em doses múltiplas por dia, numa dose diária única ou numa dose semanal única. Irá ser entendido que pode ser utilizada nas composições farmacêuticas aqui discutidas qualquer forma dos compostos da invenção, (i. e., base livre, sal farmaceuticamente aceitável, solvato, etc.) que seja adequada para o modo particular da administração.
Consequentemente, numa forma de realização, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção. As composições podem conter outros agentes terapêuticos e/ou formulantes se pretendido. Um "composto da invenção" pode ser também aqui referido como o "agente activo."
As composições farmacêuticas desta invenção contêm tipicamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Os especialistas na técnica irão reconhecer, no entanto, que uma composição farmacêutica pode conter mais que uma quantidade terapeuticamente eficaz, i. e., composições em quantidade ou menos de uma quantidade terapeuticamente eficaz, í. e., doses de unidade individuais concebidas para administração múltipla para obter uma quantidade terapeuticamente eficaz. Numa forma de realização, a composição 45 irá conter desde cerca de 0,01-95% em peso do agente activo, incluindo, desde cerca de 0,01-30% em peso, tal como desde cerca de 0,01-10% em peso, com a quantidade real dependendo da própria formulação, da via de administração, da frequência da dosagem e semelhantes. Numa outra forma de realização, uma composição adequada para inalação, por exemplo, compreende desde cerca de 0,01-30% em peso ou o agente activo com ainda uma outra forma de realização compreende desde cerca de 0,01-10% em peso de agente activo.
Pode ser utilizado qualquer veículo ou excipiente convencional nas composições farmacêuticas da invenção. A selecção de um veículo ou excipiente particular ou combinações de veículos ou excipientes, irá depender do modo de administração a ser utilizado para tratar um doente ou tipo de estado clínico ou estado de doença em particular. No que a isto respeita, a preparação de uma composição adequada para um modo particular da administração encontra-se bem no âmbito dos especialistas nas técnicas farmacêuticas. Adicionalmente, estão comercialmente disponíveis veículos ou excipientes utilizados nessas composições. A título de ilustração adicional, são descritas técnicas de formulação convencionais em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a Edição, Lippincott Williams e White, Baltimore, Mariland (2000); e H. C. Ansel et al. , Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delívery Systems, 7a Edição, Lippincott Williams e White, Baltimore, Mariland (1999) .
Os exemplos representativos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados ao seguinte: açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amidos, tais como amido de milho e amido de 46 batata; celulose, tais como celulose microcristalina e os seus derivados, tal como carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositório; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafroa, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tais como propilenoglicol; polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; ésteres, tais como oleato de etilo e laurato de etilo; agar; agentes tamponantes, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água isenta de agentes pirogénicos; soro fisilógico isotónico; solução de Ringer; álcool etílico; soluções de tampão fosfato; gases propulsores comprimidos, tais como clorofluorocarbonetos e hidrofluorcarbonetos; e outras substâncias compatíveis não-tóxicas utilizadas em composições farmacêuticas.
As composições farmacêuticas são tipicamente preparadas por mistura ou incorporação cuidadosa e íntima do agente activo com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais ingredientes opcionais. A mistura uniformemente incorporada resultante pode ser então moldada ou descarregada em comprimidos, cápsulas, pílulas, recipientes, cartuchos, dispensadores e semelhantes utilizando processos e equipamento convencionais.
Numa forma de realização, as composições farmacêuticas são adequadas para administração inalada. As composições adequadas para administração inalada irão estar tipicamente na forma de um aerossol ou de um pó. Essas composições são geralmente administradas utilizando dispositivos de distribuição bem conhecidos, tais como um inalador nebulizador, um inalador de pó 47 seco ou um inalador de dose medida, cujos exemplos estão descritos abaixo.
Numa forma de realização especifica da invenção, é administrada uma composição compreendendo o agente activo por inalação utilizando um inalador nebulizador. Esses dispositivos nebulizantes produzem tipicamente uma corrente de ar a uma velocidade elevada que provoca a vaporização da composição como uma névoa que é conduzida para o tracto respiratório de um doente. Consequentemente, quando formulado para a utilização num inalador nebulizador, o agente activo é tipicamente dissolvido num veiculo adequado para formar uma solução. Alternativamente, o agente activo pode ser micronizado e combinado com um veiculo adequado para formar uma suspensão de partículas micronizadas com um tamanho respirável, em que micronizado é tipicamente definido como tendo partículas em que pelo menos cerca de 90 porcento das partículas têm um diâmetro mediano de massa inferior a cerca de 10 μπι. 0 termo "diâmetro mediano de massa" significa um diâmetro de forma a que metade da massa das partículas seja compreendida por partículas com maior diâmetro e metade seja compreendida por em partículas com um diâmetro menor.
Os dispositivos nebulizantes adequados incluem Respimat Soft Mist™ Inhaler (Boehringer Ingelheim), AERx® Pulmonary Delivery System (Aradigm Corp.) e PARI LC Plus Reuzable Nebulizer (Pari GmbH). Uma composição caracteristica para utilização num inalador nebulizador compreende uma solução aquosa isotónica compreendendo de cerca de 0,05 pg/mL a cerca de 10 mg/mL de um composto da invenção. Numa forma de realização, essa solução tem um pH desde cerca de 4-6. 48
Numa outra forma de realização específica da invenção, é administrada uma composição compreendendo o agente activo por inalação utilizando um inalador de pó seco (DPI) . Esses DPI administram tipicamente o agente activo como um pó fluido que é disperso no fluxo respiratório de um doente durante a inspiração. Para se obter um pó fluido, o agente activo é tipicamente formulado com um excipiente adequado, tais como lactose, amido, manitol, dextrose, ácido poliláctico, polilactido-co-glicólido e as suas combinações. Tipicamente, o agente activo é micronizado e combinado com um excipiente para formar uma mistura adequada para inalação. Consequentemente, numa forma de realização da invenção, o agente activo está na forma micronizada. Por exemplo, uma composição representativa para utilização num DPI compreende lactose seca tendo um tamanho de partícula desde cerca de 1 pm e cerca de 100 pm (e. g., lactose moída seca) e partículas micronizadas do agente activo. Essa formulação de pó seco pode ser preparada, por exemplo, combinando lactose com o agente activo e depois por incorporação a seco dos componentes. Alternativamente, se pretendido, o agente activo pode ser formulado sem um excipiente. A composição é então tipicamente aplicada num DPI ou em cartuchos de inalação ou cápsulas para utilização com um DPI. Os DPI são bem conhecidos dos que possuem conhecimentos comuns na técnica e muitos desses dispositivos estão comercialmente disponíveis, com dispositivos representativos incluindo Aerolizer® (Novartis), airmax™ (IVAX), ClickHaler® (Innovata Biomed), Diskhaler® (GlaxoSmithKline), Diskus® ou Accuhaler (GlaxoSmithKline), Easyhaler® (Orion Pharma), Eclipse™ (Aventis), FlowCaps® (Hovione), Handihaler® (Boehringer Ingelheim), Pulvinal® (Chiesi), Rotahaler® (GlaxoSmithKline), SkyeHaler™ ou Certihaler™ (SkyePharma), Twisthaler (Schering-arado), Turbuhaler® (AstraZeneca), Ultrahaler® (Aventis) e semelhantes. 49
Ainda numa outra forma de realização especifica da invenção, a composição compreendendo o agente activo é administrada por inalação utilizando um inalador de dose medida (MDI) . Esses MDI tipicamente descarregam uma quantidade medida do agente activo utilizando gás propulsor comprimido. As formulações de dose medida compreendem deste modo tipicamente uma solução ou uma suspensão do agente activo num propulsor liquefeito, tais como um clorofluorocarboneto tal como CCI3F ou um hidrofluoroalcano (HFA) tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA 134a) e 1, 1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano (HFA 227), embora sejam geralmente preferidos HFA devido a preocupações com os clorofluorocarbonetos afectarem a camada de ozono. Os componentes opcionais adicionais de formulações de HFA incluem co-solventes, tais como etanol ou pentano e tensioactivos, tais como trioleato de sorbitano, ácido oleico, lecitina e glicerina. Ver, por exemplo, Patente US N° 5225183 de Purewal et al., documento EP 0717987 A2 (Minnesota Mining and Manufacturing Company) e documento WO 92/22286 (Minnesota Mining and Manufacturing Company). Uma composição representativa para utilização num MDI compreende agente activo desde cerca de 0,01-5% em peso; etanol desde cerca de 0-20% em peso; e tensioactivo desde cerca de 0-5 % em peso; com o restante sendo um propulsor HFA. Essas composições são preparadas tipicamente adicionando um hidrofluoroalcano gelado ou pressurizado a um recipiente adequado contendo o agente activo, etanol (se estiver presente) e o tensioactivo (se estiver presente) . Para preparar uma suspensão, o agente activo é micronizado e depois combinado com o propulsor. A formulação é então aplicada num recipiente de aerossol, que forma uma porção do MDI. Os MDI são bem conhecidos dos que possuem conhecimentos comuns na técnica e muitos desses dispositivos estão comercialmente disponíveis, com os 50 dispositivos representativos incluindo AeroBid Inhaler System (Forest Pharmaceutics), Atrovent Inhalation Aerosol (Boehringer Ingelheim), Flovent® (GlaxoSmithKline), Maxair Inhaler (3M), Proventil® Inhaler (Schering), Serevent® Inhalation Aerosol (GlaxoSmithKline) e semelhantes. Alternativamente, uma formulação de suspensão pode ser preparada por liofilização de um revestimento de tensioactivo sobre partículas micronizadas do agente activo. Ver, por exemplo, documentos WO 99/53901 (Glaxo Group Ltd.) e WO 00/61108 (Glaxo Group Ltd.).
Nas Patente US N° 5874063 de Briggner et al. ; 5983956 de Trofast; 6221398 de Jakupovic et al. ; 6268533 de Gao et al. ; 6475524 de Bisrat et al.; e 6613307 de Cooper são descritos exemplos adicionais de processos para preparar partículas respiráveis e formulações e dispositivos adequados para a dosagem de inalação.
Numa outra forma de realização, as composições farmacêuticas são adequadas para a administração oral. As composições adequadas para administração oral podem estar na forma de cápsulas, comprimidos, pílulas, losangos, hóstias, drageias, pós, grânulos; soluções ou suspensões num líquido aquoso ou não aquoso; emulsões líquidas de óleo-em-água ou de água-em-óleo; elixires ou xaropes; e semelhantes; cada um contendo uma quantidade pré-determinada do agente activo.
Quando destinado a administração oral numa forma de dosagem sólida (i. e., como cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes), a composição irá compreender tipicamente o agente activo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio. As formas de dosagem sólidas podem também compreender: agentes de 51 tais como amidos preenchimento ou expansores, tais como amidos, celulose microcristalina, lactose, sacarose, glicose, manitol, e/ou ácido silício; ligantes, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e/ou acácia; humidificantes, tal como glicerol; agentes desintegrantes, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou de tapioca, ácido algínico, alguns silicatos e/ou carbonato de sódio; agentes retardantes de dissolução, tais como parafina; aceleradores da absorção, tais como compostos de amónio quaternário; agentes molhantes, tais como álcool cetílico e/ou monostearato de glicerol; absorventes, tais como argila de caulino e/ou de bentonite; lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio, e/ou as suas misturas; agentes corantes; e agentes tamponantes.
Podem estar também presentes nas composições farmacêuticas agentes de libertação, agentes molhantes, agentes de revestimento, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes. Os agentes de revestimento característicos para comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes, incluem os utilizados para revestimentos entéricos, tais como ftalato de acetato de celulose, ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, co-polímeros do ácido metacrílico-éster do ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulose, carboximetiletilcelulose, acetato de succinato de hidroxipropilmetilcelulose e semelhantes. Os exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfato de sódio sulfito de sódio e semelhantes; antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbilo, hidroxianisole butilado, 52 hidroxitolueno butilado, lecitina, gaiato de propilo, alfa-tocoferol e semelhantes; e agentes quelantes de metais, ácidos tais como ácido cítrico, ácido etilenodiaminatetra-acético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e semelhantes.
As composições podem ser também formuladas para proporcionar a libertação lenta ou controlada do agente activo utilizando, a título de exemplo, hidroxipropilmetilcelulose em proporções variáveis ou outras matrizes poliméricas, lipossomas e/ou microesferas. Além disso, as composições farmacêuticas da invenção podem conter agentes opacificantes e podem ser formuladas de forma a que estas libertem o agente activo apenas ou de um modo preferido, numa determinada porção do tracto gastrointestinal, opcionalmente, numa forma retardada. Os exemplos de composições de revestimento que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras. 0 agente activo pode estar também na forma micro-encapsulada, se for adequado, com um ou mais dos excipientes descritos acima.
As formas de dosagem líquidas adequadas para administração oral incluem, a titulo de ilustração, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. As formas de dosagem líquidas compreendem tipicamente o agente activo e um diluente inerte, tal como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsionantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, óleos (e. g. , óleos de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeite, castor e sésamo), glicerol, álcool tetra-hidrofurilico, polietilenoglicol e ácido gordo ésteres de sorbitano e suas 53 misturas. As suspensões podem conter agentes de suspensão tais como, por exemplo, alcoóis isostearilicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonite, ágar-ágar e tragacanto e as suas misturas.
Quando destinado a administração oral, as composições farmacêuticas da invenção podem ser embaladas numa forma de dosagem unitária. 0 termo "forma de dosagem unitária" refere-se a uma unidade fisicamente discreta adequada para dosear um doente, i. e., cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada do agente activo calculado para produzir o efeito terapêutico pretendido isoladamente ou em combinação com uma ou mais unidades adicionais. Por exemplo, essas formas de dosagem unitária podem ser cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes.
Os compostos da invenção podem ser também administrados parentericamente (e. g.r por injecção subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intraperitoneal). Para essa administração, o agente activo é proporcionado numa solução, suspensão ou emulsão estéril. Os solventes caracteristicos para preparar essas formulações incluem água, soro fisiológico, alcoóis de baixo peso molecular, tais como propilenoglicol, polietilenoglicol, óleos, gelatina, ésteres de ácidos gordos, tais como oleato de etilo e semelhantes. Uma formulação parentérica típica consiste numa solução aquosa a pH 4-7 estéril do agente activo. As formulações parentéricas podem também conter um ou mais solubilizantes, estabilizantes, conservantes, agentes molhantes, emulsionantes e agentes dispersantes. Estas formulações podem ser tornadas estéreis por utilização de um meio injectável 54 estéril, um agente de esterilização, filtraçao, irradiaçao ou calor.
Os compostos da invenção podem ser também administrados transdermicamente utilizando sistemas de distribuição transdérmicos e excipientes conhecidos. Por exemplo, o composto pode ser misturado com intensificadores de permeação, tais como propilenoglicol, monolaurato de polietilenoglicol, azacicloalcan-2-onas e semelhantes e incorporados num emplastro ou num sistema de distribuição semelhante. Se pretendido podem ser utilizados excipientes adicionais incluindo agentes gelificantes, emulsionantes e tampões nessas composições transdérmicas.
Se pretendido, os compostos desta invenção podem ser administrados em combinação com um ou mais de outros agentes terapêuticos. Deste modo, numa forma de realização, as composições da invenção podem conter opcionalmente outros fármacos que são co-administrados com um composto da invenção. Por exemplo, a composição pode compreender ainda um ou mais fármacos (também designados como "agente(s) secundário(s)") seleccionados do grupo de outros broncodilatadores (e. g., inibidores de PDE3, moduladores da adenosina 2b e agonistas do receptor adrenérgico β2); agentes antiinflamatórios (e. g., agentes antiinflamatórios esteróides tais como corticosteróides e glucocorticóides; agentes antiinflamatórios não esteróides (NSAID); e inibidores de PDE4) ; outros antagonistas do receptor muscarinico (i. e., agentes anticolinérgicos) ; agentes antiinfecciosos (e. g., antibióticos Gram positivos e Gram negativos e agentes antivirais); anti-histamínicos; inibidores de proteases; bloqueadores aferentes (e. g. , agonistas de D2 e moduladores da neurocinina) ; e as suas combinações. São bem 55 conhecidos na técnica numerosos exemplos desses agentes terapêuticos e abaixo são descritos exemplos. Pode ser realizada uma terapia dupla pela combinação de um composto da invenção com um agente secundário, i. e., actividade antagonista do receptor muscarinico e actividade associada com o agente secundário (e. g. , agonista do receptor adrenérgico βΐ), em alguns casos administrando duas composições e em alguns casos pela administração de uma composição única contendo o agente activo e o agente secundário. Consequentemente, em ainda um outro aspecto da invenção, uma composição farmacêutica compreende um composto da invenção, um segundo agente activo e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Podem ser também incluido um terceiro, quarto etc. agente activo na composição. Por exemplo, uma composição pode compreender um composto da invenção; um agente secundário seleccionado de corticosteróides, agonistas do receptor adrenérgico β2; inibidores da fosfodiesterase-4 e suas combinações; e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Numa forma de realização especifica, a composição compreende um composto da invenção, um agonista do receptor adrenérgico β2 e um agente antiinflamatório esteróide. A quantidade do composto da invenção que é administrada na terapia de combinação, assim como a quantidade de agentes secundários, pode ser inferior à quantidade tipicamente administrada em monoterapia.
Um composto da invenção pode ser misturado fisicamente com o segundo agente activo para formar uma composição contendo ambos os agentes; ou cada agente pode estar presente em composições separadas e distintas que são administrados ao doente simultaneamente ou em sequencialmente. Por exemplo, um composto da invenção pode ser combinado com um segundo agente activo utilizando processos e equipamento convencionais para formar uma combinação de agentes activos compreendendo um 56 composto da invenção e um segundo agente activo. Adicionalmente, os agentes activos podem ser combinados com um veiculo farmaceuticamente aceitável para formar uma composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção, um segundo agente activo e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Nesta forma de realização, os componentes da composição são tipicamente misturados ou incorporados para criar uma mistura física. A mistura física é então administrada numa quantidade terapeuticamente eficaz utilizando alguma das vias aqui descritas.
Alternativamente, os agentes activos podem permanecer separados e distintos antes da administração ao doente. Nesta forma de realização, os agentes não são fisicamente misturados em conjunto antes da administração mas são administrados simultaneamente ou em tempos separados como composições separadas. Essas composições podem ser embaladas separadamente ou embaladas em conjunto num kit. Quando administrado em tempos separados, o agente secundário irá ser tipicamente administrado menos de 24 horas após a administração do composto da invenção. Em outras formas de realização esta relação programada é menos de 12 horas, menos de 8 horas, menos de 6 horas, menos de 4 horas, menos de 3 horas, menos de 1 hora, menos de trinta minutos, menos de dez minutos, menos de um minuto ou imediatamente após a administração do composto da invenção. Isto é também designado como administração sequencial. Deste modo, um composto da invenção pode ser administrado por inalação simultaneamente ou sequencialmente com outro agente activo utilizando um dispositivo de distribuição de inalação que utiliza compartimentos separados (e. g. embalagem em alvéolos) para cada agente activo, em que sequencial pode significar ser administrado imediatamente após a administração do composto da 57 invenção ou após algum tempo pré-determinado (e. g., uma hora depois ou três horas depois) . Alternativamente, a combinação pode ser administrada utilizando dispositivos de distribuição separados, i. e., um dispositivo de distribuição para cada agente. Adicionalmente, os agentes podem ser distribuídos por vias de administração diferentes, i. e., um por inalação e outro por administração oral.
Numa forma de realização, o kit compreende uma primeira forma de dosagem compreendendo um composto da invenção e pelo menos uma forma de dosagem adicional compreendendo um ou mais dos agentes secundários aqui estabelecidos, em quantidades suficientes para realizar os métodos da invenção. A primeira forma de dosagem e a segunda (ou terceira, etc.,) forma de dosagem em conjunto compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de agentes activos para o tratamento ou a prevenção de uma doença ou estado clínico num doente. 0(s) agente(s) secundário(s), quando incluído(s), está(ão) presente(s) numa quantidade terapeuticamente eficaz. i. e., é(são) tipicamente administrado(s) numa quantidade que produz um efeito terapeuticamente benéfico quando co-administrado(s) com um composto da invenção. 0 agente secundário pode estar na forma de um sal, solvato, estereoisómero opticamente puro farmaceuticamente aceitável e semelhantes. Deste modo, os agentes secundários listados abaixo pretendem incluir todos essas formas e estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparadas utilizando processos e reagentes convencionais. As doses adequadas de um agente secundário estão tipicamente na gama de cerca de 0,05 pg/dia a cerca de 500 mg/dia. 58
Numa forma de realização particular, um composto da invenção é administrado em combinação com um agonista do receptor adrenérgico β2. Os agonistas do receptor adrenérgico β2 representativos incluem mas não estão limitados a albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina e semelhantes. Outros agonistas do receptor adrenérgico β2 que podem ser utilizados em combinação com compostos da invenção incluem mas não estão limitados a 3-( 4-{ [6-( { (2.RJ-2-hidroxi-2-[ 4-hidroxi-3- (hidroximetil)-fenil]etil}amino)-hexil]oxi}-butil) benzenossulfonamida e 3-(-3-( [7— ( { (2.RJ-2-hidroxi-2-[ 4-hidroxi-3-(hidroximetil)fenil]etil}-amino)heptil]oxi}-propil) benzenossulfonamida e compostos relacionados divulgados no documento WO 02/066422 (Glaxo Group Ltd.); 3-(3-(4-((6-(((2^)-2-hidroxi-2-[4-hidroxi-3-(hidroximetil)fenil]etil}amino)hexil] oxi}butil)fenil]imidazolidina-2,4-diona e compostos relacionados divulgados no documento WO 02/070490 (Glaxo Group Ltd.); 3-(4-( [6 —({ (2R)-2-[3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)-hexil]oxi}butil)benzenossulfonamida, 3-(4-( [6 —({ (2S)-2-[3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)hexil]oxi}butil)benzenossulfonamida, 3-(4-([6-({ (2R/S)-2-[3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil} amino)hexil]oxi}butil)benzenossulfonamida, N-(t-butil)-3-(4-([6-({ (2R)-2-[3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)hexil]oxi}butil)benzenossulfonamida, N-(t-butil) -3-(4-( [6 —({ (25)-2-(3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)hexil]oxi}butil)benzenossulfonamida, N- (t-butil)-3-(4-( [6 —({ (2R/S)-2-[3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)hexil]oxi}butil) benzenossulfonamida e compostos relacionados divulgados no documento WO 02/076933 (Glaxo Group Ltd.); 4-{ (IR)-2-((6-(2-(- 59 (2,6-diclorobenzil)oxi]etoxi}hexil)amino]-1-hidroxietil}-2-(hidroximetil)fenol e compostos relacionados divulgados no documento WO 03/024439 (Glaxo Group Ltd.); N-{2-[A-((R)-2-hidroxi-2-feniletilamino)feniljetil}- (R)-2-hidroxi-2-(3-formamido-4-hidroxifenil)-etilamina e compostos relacionados divulgados na Patente US N° 6576793 de Moran et al. ; JV— {2 — [4 — (3 — fenil-4-metoxifenil) aminofenil) etil}-(P/)-2-hidroxi-2-(8-hidroxi-2(1H)-quinolinon-5-il)etilamina e compostos relacionados divulgados na Patente US N° 6653323 de Moran et al. Numa forma de realização particular, o agonista do adrenorreceptor β2 é um sal mono-cloridrato cristalino de N-{2-[4-(/RJ-2-hidroxi-2-feniletilamino)-fenil]etil}- (R)-2-hidroxi-2-(3-formamido-4-hidroxifenil)etilamina. Tipicamente, o agonista do adrenorreceptor β2 irá ser administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 0,05-500 pg por dose.
Numa forma de realização particular, é administrado um composto da invenção em combinação com um agente antiinflamatório esteróide. Os agentes antiinflamatórios esteróides representativos incluem mas não estão limitados a dipropionato de beclometasona; budesonida; propionato de butixocorte; 20R-16a,17a-[butilidenobis(oxi)]-6a,9a-difluoro- llβ-hidroxi-17β-(metiltio)androsta-4-en-3-ona (RPR-106 541); ciclesonida; dexametasona; éster S-fluorometilico do ácido 6a,9a-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxoandrosta-l,4-dieno-l7β-carbotióico; éster S-fluorometilico do ácido 6a,9a-difluoro-l^-hidroxi-16a-metil-17a-[(4-metil-1,3-tiazol-5-carbonil)oxi]-3-oxoandrosta-l,4-dieno-17β-carbotióico; éster (S)-(2-oxotetra-hidrofuran-3S- ílico) do ácido 6a, 9a-difluoro-l^-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxiandrosta-1,4-άϊθηο-17β-σ3^οΡϊόϊοο; flunisolida; 60 propionato de fluticasona; metilprednisolona; furoato de mometasona; prednisolona; prednisona; rofleponida; ST-126; acetonida de triamcinolona; e semelhantes. Tipicamente, o agente antiinflamatório esteróide irá ser administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 0,05-500 pg por dose.
Uma combinação caracteristica é um composto da invenção co-administrado com salmeterol como agonista de receptor adrenérgico β2 e propionato de fluticasona como o agente antiinflamatório esteróide. Outra combinação caracteristica é um composto da invenção co-administrado com um sal mono-cloridrato cristalino de N-{2-[4-((PJ-2-hidroxi-2- feniletilamino)fenil]etil}- (R)-2-hidroxi-2-(3-formamido-4-hidroxifenil)-etilamina como o agonista do adrenorreceptor β2 e éster S-fluorometilico do ácido 6a,9a-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil) -oxi] -lip-hidroxi-16oí-metil-3-oxoandrosta-l, 4-dieno-17β-carbotióico como o agente antiinflamatório esteróide.
Outras combinações adequadas incluem, por exemplo, outros agentes antiinflamatórios, e. g. , NSAID (tais como cromoglicato de sódio; nedocromilo sódico; inibidores da fosfodiesterase (PDE) (e. g. , teofilina, inibidores de PDE4 ou inibidores de PDE3/PDE4 mistos); antagonistas do leucotrieno (e. g. , montelucaste); inibidores de síntese do leucotrieno; inibidores de iNOS; inibidores de protease, tais como triptase e inibidores da elastase; antagonistas da integrina beta 2 e agonistas ou antagonistas do receptor da adenosina (e. g. , agonistas da adenosina 2a) ; antagonistas da citocina (e. g. , antagonistas da quimiocina tais como, um anticorpo contra interleucina (anticorpo alL) , especificamente, uma terapia oíIL-4, uma terapia 61 oíIL-13 ou uma sua combinação) ; ou inibidores da síntese de citocinas.
Numa forma de realização particular, é administrado um composto da invenção em combinação com um inibidor da fosfodiesterase-4 (PDE4) ou inibidores de PDE3/PDE4 mistos. 0 inibidores de PDE4 ou PDE3/PDE4 mistos representativos incluem, mas não estão limitados a ácido cis 4-ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclofexano-l-carboxílico, 2-carbometoxi-4-ciano- 4-(3-ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclofexan-l-ona; cis-[4-ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4- difluorometoxifenil)ciclofexan-l-ol]; ácido cis-4-ciano-4-[3- (ciclopentiloxi)-4-metoxifenil]-ciclofexano-l-carboxílico e semelhantes ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Outros inibidores de PDE4 ou de PDE4/PDE3 mistos representativos incluem AWD-12-281 (elbion); NCS-613 (INSERM); D-4418 (Chiroscience e
Schering-Plough); CI-1018 ou PD-168787 (Pfizer); os compostos benzodioxole divulgados no documento W099/16766 (Kyowa Hakko); K-34 (Kyowa Hakko); V-11294A (Napp); roflumilast (Byk-Gulden); os compostos ftalazinona divulgados no documento WO99/47505 (Byk-Gulden); Pumafentrina (Byk-Gulden, agora Altana); arofilina (Almirall-Prodesfarma); VM554/UM565 (Vernalis); T-440 (Tanabe
Seiyaku); e T2585 (Tanabe Seiyaku).
Numa forma de realização particular, um composto da invenção é administrado em combinação com um antagonista muscarínico (i. e., agente anti-colinérgico). Os antagonistas muscarínicos representativos incluem, mas não estão limitados a, atropina, sulfato de atropina, óxido de atropina, nitrato de metilatropina, bromidrato de homatropina, bromidrato de hiosciamina (d, 1), bromidrato de escopolamina, brometo de ipratrópio, brometo de oxitrópio, brometo de tiotrópio, 62 metantelina, brometo de propantelina, metilbrometo de anisotropina, brometo de clidínio, copirrolato (Robinul), iodeto de isopropamida, brometo de mepenzolato, cloreto de tridi-hexetilo (Pathilone), metilsulfato de hexocíclio, cloridrato de ciclopentolato, tropicamida, cloridrato de tri-hexifenidilo, pirenzepina, telenzepina, AF-DX 116 e metoctramina e semelhantes.
Numa forma de realização particular, é administrado um composto da invenção em combinação com um anti-histamínico (i. e., antagonista do receptor Hi) . Os anti-histamínicos representativos incluem mas não estão limitados a etanolaminas, tais como maleato de carbinoxamina, fumarato de clemastina, cloridrato de difenil-hidramina e dimenidrinato; etilenodiaminas, tais como amleato de pirilamina, cloridrato de tripelennamina e citrato de tripelennamina; alquilaminas, tais como clorfeniramina e acrivastina; piperazinas, tais como cloridrato de hidroxizina, pamoato de hidroxizina, cloridrato de ciclizina, lactato de ciclizina, cloridrato de meclizina e cloridrato de cetirizina; piperidinas, tais como astemizole, cloridrato de levocabastina, loratadina ou o seu análogo descarboetoxilo, terfenadina e cloridrato de fexofenadina; cloridrato de azelastina; e semelhantes.
As formulações seguintes ilustram composições farmacêuticas representativas da invenção.
Composições Características Para Administração Por um DPI É micronizado um composto da invenção (0,2 mg) e depois é incorporado com lactose (25 mg) . Esta mistura incorporada é 63 então aplicada num cartucho de inalação de gelatina. Os conteúdos do cartucho são administrados utilizando, por exemplo, um DPI. É incorporado um composto micronizado da invenção (100 mg) com lactose moída (25 g) (e. g. , lactose em que não mais de 85% das partículas têm um MMD de cerca de 6 0 pm a cerca de 90 pm e não menos de 15% das partículas têm um MMD inferior a 15 pm) . Esta mistura incorporada é então aplicada em alvéolos individuais de uma embalagem de alvéolos destacável numa quantidade suficiente para proporcionar cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose. Os conteúdos dos alvéolos são administrados utilizando um DPI.
Alternativamente, é incorporado um composto da invenção micronizado (1 g) com lactose moída (200 g) para formar uma composição em quantidade tendo uma proporção de peso entre o composto e lactose moída de 1:200. A composição incorporada é embalada num DPI capaz de distribuição de desde cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose.
Alternativamente, é incorporado um composto da invenção micronizado (100 mg) e um agonista de receptor adrenérgico β2 micronizado (500 mg) com lactose moída (30 g). A mistura incorporada é então aplicada em alvéolos individuais de uma embalagem de alvéolos destacável numa quantidade suficiente para proporcionar cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose. Os conteúdos das alvéolos são administrados utilizando um DPI. 64
Composiçoes Caracteristicas Para Utilização Num MDI É dispersado um composto micronizado da invenção (10 g) numa solução preparada por dissolução de lecitina (0,2 g) em água desmineralizada (200 mL). A suspensão resultante é seca por vaporização e depois micronizada para formar uma composição micronizada compreendendo partículas tendo um diâmetro médio inferior a cerca de 1,5 pm. A composição micronizada é então aplicada em cartuchos MDI contendo 1,1,1,2-tetrafluoroetano pressurizado numa quantidade suficiente para proporcionar cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose quando administrado pelo MDI.
Alternativamente, é preparada uma suspensão contendo composto da invenção 5% em peso, lecitina a 0,5% em peso e trealose a 0,5% em peso por dispersão de 5 g de um composto da invenção sob a forma de partículas micronizadas com um tamanho médio inferior a 10 pm numa solução coloidal formada a partir de 0,5 g de trealose e 0,5 g de lecitina dissolvidas em 100 mL de água desmineralizada. A suspensão é seca por vaporização e o material resultante é micronizado em partículas tendo um diâmetro médio inferior a 1,5 pm. As partículas são aplicadas em recipientes com 1,1,1,2-tetrafluoroetano pressurizado.
Composição Caracteristica para Utilização Num Inalador Nebulizador
E dissolvido um composto da invenção (25 mg) soro fisiológico isotónico tamponado com citrato (pH 5) (125 mL) . A mistura é agitada e sonicada até que o composto esteja dissolvido. Se necessário, o pH da solução é verificado e 65 ajustado para pH 5 por adição lentamente de hidróxido de sódio 1 N aquoso. A solução é administrada utilizando um dispositivo nebulizador que proporciona cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose. Cápsulas de Gelatina Rígidas Características para Administração Oral São cuidadosamente incorporados um composto da invenção (50 g) , lactose seca por vaporização (440 g) e estearato de magnésio (10 g) . A composição resultante é então aplicada em cápsulas de gelatina rígidas (500 mg de composição por cápsula).
Suspensão Característica Para Administração Oral São misturados os ingredientes seguintes para formar uma suspensão contendo 100 mg do composto por 10 mL de suspensão:
Ingredientes Composto da invenção Acido Fumárico Cloreto de sódio Metilparabeno Propilparabeno Açúcar granulado Sorbitol (solução a 70%)
Veegum® K (sílicato de magnésio e
Aromatizante
Corantes Água destilada
Quantidade 1,0 g 0, 5 g 2, 0 g 0, 15 g 0,05 g 25,5 g 12,85 g alumínio) 1,0 g
0,035 mL 0,5 mg
q. b. para 100 mL 6 6
Formulação Injectável Caracterlstica Para Administração por Injecção E incorporado um composto da invenção (0,2 g) com uma solução de tampão acetato de sódio 0,4 M (2,0 mL) . O pH da solução resultante é ajustado para pH 4 utilizando ácido clorídrico aquoso 0,5 N ou hidróxido de sódio aquoso 0,5 N, se necessário e depois é adicionada água para injecção suficiente para proporcionar um volume total de 20 mL. A mistura é então filtrada através de um filtro estéril (0,22 micron) para proporcionar uma solução estéril adequada para a administração por injecção.
EXEMPLOS
As Preparações e os Exemplos seguintes são proporcionados para ilustrar formas de realização específicas da invenção. Estas formas de realização específicas, no entanto, não pretendem limitar o âmbito da invenção de qualquer modo a menos que indicado especificamente.
As abreviaturas seguintes têm os significados seguintes a menos que indicado de outra forma e qualquer outra abreviatura aqui utilizada e não definida tem o seu significado comum: AC ciclase de adenililo BSA albumina de soro bovino cAMP monofosfato de adenosina cíclico 3'-5' 67 CHO cM5 DCM DIPEA dPBS DMF EDCI EDTA EtOAc FBS FLIPR HBSS HEPES hMl hM2 hM3
Ovário de hamster chinês receptor M5 clonado de chimpanzé diclorometano (i. e., cloreto de metileno) N, iV-diisopropiletilamina
Soro fisiológico tamponado com fosfato de Dulbecco N, N-dimetilformamida N- (3-dimetilaminopropil)-N' -etilcarbodiimida ácido etilenodiamina tetra-acético acetato de etilo soro bovino fetal leitor de placas de visualização fluorométrica
Solução Salina Tamponada de Hank ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfónico receptor Mi clonado humano receptor M2 clonado humano receptor M3 clonado humano 68 hM4 hM5 HOBt MCh
MeOH
TFA
THF receptor M4 clonado humano receptor M5 clonado humano
Hidrato de 1-hidroxibenzotriazole metilcolina metanol ácido trifluoroacético tetra-hidrofurano
Qualquer outra abreviatura utilizada aqui mas não definida tem o seu significado normal, geralmente aceite. A menos que indicado de outra forma, todos os materiais, tais como os reagentes, materiais de partida e solventes, foram adquiridos de fornecedores comerciais (tais como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-Haén e semelhantes) e utilizados sem purificação adicional. As reacções foram realizadas sob atmosfera de azoto, a menos que indicado de outra forma. 0 progresso das misturas de reacção foi monitorizado por cromatografia de camada fina (TLC), cromatografia líquida de elevado desempenho analítica (HPLC anal.) e espectrometria de massa, cujos detalhes são proporcionados abaixo e separadamente em exemplos específicos de reacções. As misturas de reacção foram realizadas como descrito especificamente em cada reacção; normalmente estas foram purificadas por extracção e outros métodos de purificação tais como cristalização e precipitação dependente da temperatura e do solvente. Além disso, as misturas de reacção foram rotineiramente purificadas por HPLC preparativa. 69
Preparaçao 1 Ácido (R) -ciclopentil—hidroxifenil Acético
Foi dissolvido (2R,5R)-2-t-butil-5-fenil-1,3-dioxolan-4-ona (la): ácido (R)-Mandélico (20 g, 130 mmol) em pentano anidro (200 mL, 1,7 mol)· Foi adicionado pivaldeido (13,6 g, 153 mmol) seguido por ácido trifluorometanossulfónico (488 pL, 5,4 mmol). A reacção foi deixada em refluxo a 36 °C sob azoto. Após 5,5 horas, foi permitido o arrefecimento da mistura até à temperatura ambiente antes da agitação com 200 mL de uma solução de NaHC03 a 8% em peso durante 10 minutos. O excesso de pentano foi removido por evaporação rotativa. Os sólidos foram recolhidos por filtração e lavados (100 mL água) enquanto sob filtração por vácuo. Os sólidos foram secos de um dia para o outro sob vácuo elevado para originar o intermediário (la) como um sólido branco (23,8 g, pureza a 88%).
Foi adicionado (2R, 5S)-2-t-butil-5-(1-hidroxiciclopentil)-5-fenil-1,3-dioxolan-4-ona (lb): Hexametildissilazida de litio (0,8 g, 4,7 mmol; 4,7 mL de 1,0 m em hexano) a THF anidro (5,3 mL, 65 mmol) a -78 °C. Foi adicionado o intermediário (la) (800 mg, 3,6 mmol) em 5,3 mL de THF anidro à solução gota a gota ao longo de 15 minutos. Após 30 minutos foi adicionada ciclopentanona (451 pL, 5,1 mmol) gota a gota ao longo de menos de 1 minuto. Após 2 horas, foram adicionados 0,8 mL de Na2HPC>4 aquoso saturado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente 70 durante 5 minutos. A mistura foi adicionada a 8 mL de cloreto de amónio aquoso saturado. A camada aquosa foi lavada (2 x 80 mL EtOAc) e as camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. 0 produto bruto (780 mg) foi purificado por cromatografia flash (gradiente de EtOAc de 5-15% ao longo de 30 minutos com hexano) para originar o intermediário (lb) .
Foi dissolvido (2R,5S)-2-t-butil-5-ciclopent-l-enil-5- fenil-1,3-dioxolan-4-ona (lc): Intermediário (lb) (650 mg, 2,1 mmol) em 6,8 mL de THF anidro e a solução foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado cloreto de tionilo (436 pL, 6 mmol) gota a gota, seguido pela adição de piridina (777 pL, 9,6 mmol) . A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 hora. Foi adicionado cloreto de amónio aquoso saturado (14 mL) e a mistura foi agitada durante 5 minutos enquanto aquecendo até à temperatura ambiente. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada (2 x 100 mL de EtOAc.) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas para originar o intermediário (lc) como um óleo amarelo claro (540 mg), o qual foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.
Foi dissolvido ácido (S)-ciclopent-l-enil- hidroxifenilacético (ld): Intermediário (lc) (540 mg, 1,9 mmol) em MeOH (927 pL, 22,9 mmol). Foi adicionada água (1,84 mL, 102 mmol) , seguida pela adição de KOH (1,1 g, 18,8 mmol). A reacção foi submetida a refluxo a 130 °C durante 3 horas. A mistura foi diluida para 250 mL com cloreto de amónio saturado, depois lavada (2 x 100 mL de hexano) . A emulsão aquosa restante foi lavada (2 x 250 mL de EtOAc) . As camadas de EtOAc foram combinadas, lavadas com 50 mL de NaCl aquoso saturado, secas 71 sobre Na2S04, filtradas e concentradas para originar o intermediário (1f) como um sólido amarelo acastanhado (290 mg).
Foi dissolvido intermediário (ld) (280 mg, 1,3 mmol) em MeOH (2,50 mL, 61,7 mmol) e o frasco de reacção foi lavado com azoto antes de serem adicionadas 28 mg de Pd/C a 10% à mistura. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob 1 atm de hidrogénio e a reacção foi monitorizada por HPLC até que o material inicial tivesse sido consumido (~24 horas). O recipiente de reacção foi lavado com azoto, depois a mistura foi filtrada através de celite e lavada com MeOH. O filtrado foi concentrado sob vácuo para obter o composto do título como um sólido ligeiramente amarelo (284 mg).
Preparação 2 (R)-2-Ciclopentil-2-hidroxi-2-vhenil-l-piperazin-l-iletanona
Foi adicionado 1-piperazinacarboxilato de t-butilo (8,5 g, 45,4 mmol) a uma solução agitada de ácido (R)-ciclopentil-hidroxifenilacético (10,0 g, 45,4 mmol) em DCM (200 mL) . Foram adicionados DIPEA (23,7 mL, 13,6 mmol), HOBt (10,4 g, 68,1 mmol) e depois EDCI (10,4 g, 54,5 mmol) à reacção. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura foi 72 depois lavada com NaOH 1 N (300 mL) , HC1 1 N (300 mL) depois NaCl aquoso saturado (300 mL) . A camada orgânica foi depois removida, seca sobre MgS04 e depois filtrada. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM a 20% ao material em bruto e a mistura resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Foi adicionado DCM (300 mL) e a mistura foi lavada com bicarbonato de sódio saturado (300 mL) . A camada orgânica foi então removida, seca sobre MgS04 e filtrada. 0 material em bruto foi purificado através de cromatografia em sílica gel (MeOH 10%/DCM p/1% NH3 (aq)) para originar o composto de título como um pó branco (9,0 g, 31,2 mmol). EXEMPLO 1 4-((R)-2-Ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N- tiofen-2-ilmetilpiperazina-l-carboxamidina
Foram adicionados DIPEA (4,8 mL, 27,3 mmol) e depois C- (bis-benzotriazol-l-il)metilenoamina (3,6 g, 13,7 mmol) a uma solução agitada de (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-1- piperazin-l-iletanona (3,9 g 13,7 mmol) em DMF (200 mL) . Isto foi agitado à temperatura ambiente durante 30 minutos, seguido pela adição de C-tiofen-2-il-metilamina (2,8 mL, 27,3 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante ~14 horas. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente e o solvente foi removido por 73 pressão reduzida. 0 material em bruto foi purificado por HPLC em fase reversa para originar o composto de titulo como um sal de TFA (0,7 g, 1,3 mmol). MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H30N4O2S, 427,21; encontrado 427,2. Síntese Alternativa
Foi adicionada DIPEA (7,3 mL, 41,6 mmol) a (R)-2-ciclopenti1-2-hidroxi-2-feni1-1-piperazin-l-iletanona (6,0 g, 20,8 mmol) dissolvida em etanol (90 mL, 2 mol). Foi adicionada C-(bis-benzotriazol-l-il)-metilenoamina (6,0 g, 22,9 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Foi adicionada C-tiofen-2-il-metilamina (4,9 g, 41,6 mmol) e a mistura foi agitada de um dia para o outro a 55 °C. A mistura foi condensada e o produto foi purificado por HPLC para originar o composto do título como um sal de TFA (7,3 g, pureza a 98%). MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H30N4O2S, 427, 21; encontrado 427,4. 74 EXEMPLO 2 4- ((R)-2-Ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(4-hidroxibenzilo)piperazina-l-carboxamidina
Foi adicionada DIPEA (10,6 mL, 60,7 mmol) e depois C-(bis-benzotriazol-l-il)-metileno amina (5,48 g, 20,8 mmol) a uma solução agitada de (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-1-piperazin-l-iletanona (5,00 g 17,3 mmol; preparada como descrito na Preparação 1) em DMF (200 mL). Isto foi agitado à temperatura ambiente durante 30 minutos, seguido pela adição de 4-hidroxibenzilamina (12,0 g mL, 97 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante ~14 horas. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente foi removido por pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por HPLC em fase reversa para originar o composto de titulo como um sal de TFA (1,7 g, 3,1 mmol). MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H32N4O3, 437, 25; encontrado 437,2. 75 EXEMPLO 3 4- ((R) -2-Ciclopentil-2-hidr^-: o « · n . . η . .T ^ o -----=43£Oxi-2-fenilacetil) -N-furan-2- ilmetilpiperazina-1-carboxamidina
Foram adicionados (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-1-piperazin-l-iletanona (2,0 g, 6,9 mmol) e C-('bis-benzotriazol-l-il)metilenoamina (2,0 g, 7,6 mmol) a etanol (40,0 mL, 685 mmol), seguidos pela adição de DIPEA (2,4 mL, 13,9 mmol) . A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante cerca de 1 hora até que todos os sólidos estivessem dissolvidos, para formar o intermediário. Foi adicionada furfurilamina (1,2 mL, 13,9 mmol) e a mistura de reacção foi agitada a 35 °C até que a reacção estivesse terminada (cerca de 22 horas). A purificação por HPLC preparativa produziu o composto de titulo como um sal de TFA (329 mg, 6,9 mmol, pureza a 97,5%). MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H30N4O3, 411,23; encontrado 411,2. EXEMPLO 4
Foram também preparados os compostos 4-1 a 4-52, tendo o seguinte, como sais de TFA, seguindo os processos descritos nos exemplos anteriores e substituindo os materiais de partida e reagentes adequados: 76
NH
PH
/ \ X.
N N N—2 H
Exemplo Z Q 4-1 -CH(CH3)-Q fenilo 4-2 -ch2-q 3,4-difluorofenilo 4-3 -ch2-q 4-metoxifenilo 4-4 -CH2-Q tiofen-3-ilo 4-5 -ch2-q fenilo 4-6 -ch2-q 3-fluorofenilo 4-7 -(CH2)2-Q fenilo 4-8 -CH2-Q piridin-2-ilo 4-9 -ch2-q 3-hidroxifenilo 4-10 -ch2-q 4-fluorofenilo 4-11 -CH2-Q 2-fluorofenilo 4-12 -CH2-Q ciclo-hexilo 4-13 -ch2-q 3-metoxifenilo 4-14 -ch2-q 3,5-difluorofenilo 4-15 -CH2-Q tiazol-2-ilo 4-16 -CH2-Q lH-pirazol-3-ilo 4-17 -NH-Q fenilo 4-18 -CH2-Q furan-3-ilo 4-19 -CH2-Q 2-metil-tiazol-4-ilo 4-20 -ch2-q propilo 4-21 -ch2-q butilo 4-22 -CH2-Q pentilo 4-23 -NH-Q 2-fluorofenilo 4-24 -NH-Q 2-clorofenilo 4-25 -NH-Q 3-fluorofenilo 4-26 -NH-Q 3-clorofenilo 4-27 -NH-Q 4-metilfenilo 4-28 -NH-Q 4-fluorofenilo 4-29 -NH-Q 4-clorofenilo 4-30 -NH-Q 4-metoxifenilo 4-31 -CH2-Q éster metílico do ácido 4-benzóico 4-32 -ch2-q lH-indol-2-ilo 4-33 -CH2-Q ciclo-heptilo 4-34 -CH2-Q 2-hidroxifenilo 4-35 -ch2-q 4-trifluorometoxifenilo 4-36 -ch2-q 4-amidofenilo 4-37 -CH2-Q 4-hidroximetilfenilo 77 (continuação)
Exemplo Z Q 4-38 -ch2-q lH-indol-5-ilo 4-39 -ch2-q benzofuran-5-ilo 4-40 -ch2-q 4-metilfenilo 4-41 -ch2-q 4-metilsulfanilfenilo 4-42 -ch2-q 3-cianofenilo 4-43 -ch2-q 3-amidofenilo 4-44 -ch2-q 2-metilfenilo 4-45 -ch2-q 3-metilfenilo 4-46 -ch2-q lH-indol-4-ilo 4-47 -CH2-Q 3-metilsulfanilfenilo 4-48 -ch2-q benzo[b]tiofen-5-ilo 4-49 -ch2-q benzo[l,3]dioxol-5-ilo 4-50 -ch2-q benzo[b]tiofen-2-ilo 4-51 -CH2-Q 1-metil-lH-pirazol-3-ilo 4-52 -ch2-q ciclopentilo (4-1) 4-(2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N- ( (R)-1-feniletil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2, 435,27; encontrado 435,2. (4-2) 4-(2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(3,4-difluorobenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H30F2N4O2, 457,23; encontrado 457,2. ( 4-3) 4-(2-ciclopenti1-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(4- metoxibenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O3, 451,26 ; encontrado 451,2. (4-4) 4-( (.RJ-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV- tiofen-3-ilmetil-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H30N4O2S, 427,21; encontrado 427.4. (4-5) N-benzil-4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H32N4O2, 421,25; encontrado 421,2. 78 (4-6) 4-( (RJ-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-(3-fluorobenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H31FN4O2, 439,24; encontrado 439,2. (4-7) 4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-fenetilpiperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2, 435,27; encontrado 435,2. (4-8) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-piridin-2-ilmetil-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H31N5O2, 422,25; encontrado 422,2. (4-9) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) -N-(3-hidroxibenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H32N4O3, 437,25; encontrado 437,2. (4-10) 4-( (RJ-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 4- fluorobenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H31FN4O2, 439,24; encontrado 439,2. (4-11) 4-( (RJ-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 2- fluorobenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H31FN4O2, 439,24; encontrado 439,2. (4-12) iV-ciclo-hexilmetil-4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H38N4O2, 427,30; encontrado 427,2. (4-13) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) -N-(3-metoxibenzil) piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O3, 451,26; encontrado 451,2. 79 (4-14) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(3,5-difluorobenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H30F2N4O2, 457, 23; encontrado 457, 2. (4-15) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-tiazol-2-ilmetil-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C22H29N5O2S, 428,20; encontrado 428,2. (4-16) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) -N-(1H-pirazol-3-ilmetil) piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C22H30N6O2, 411,24; encontrado 411,2. (4-17) 4-( (73)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(fenilamino)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H31N5O2, 422,25; encontrado 422,2. (4-18) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-furan-3-ilmetilpiperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H30N4O3, 411,23; encontrado 411,2. (4-19) 4-( (33)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-Ν-(2-metiltiazol-4-ilmetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H31N5O2S, 442,22; encontrado 442,2. (4-20) N-butil-4-( (33)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C22H34N4O2, 387, 27; encontrado 387, 2. (4-21) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) -N-pentilpiperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C23H36N4O2, 401,28; encontrado 401,2. 80 (4-22) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-hexilpiperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H38N402, 415,30; encontrado 415,2. (4-23) 4-( fR,)-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 2- fluorofenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H30FN5O2, 440,24; encontrado 440,2. (4-24) 4-( fR,)-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 2- clorofenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H30CIN5O2, 456,21; encontrado 456,2. (4-25) 4-( (R,)-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 3-fluorofenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H30FN5O2, 440,24; encontrado 440,2. (4-26) 4-( (R,)-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 3-clorofenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H30CIN5O2, 456,21; encontrado 456,2. (4-27) 4-( (R,)-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 4- metilfenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H33N5O2, 436,26; encontrado 436,2. (4-28) 4-( (R,)-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-f enilacet il)-iV-( 4- fluorofenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H30FN5O2, 440,24; encontrado 440,2. (4-29) 4-( (R,)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-f enilacetil)-iV-( 4-clorofenil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C24H30CIN5O2, 456,21; encontrado 456,2. 81 (4-30) 4-( (íU-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-Ν-(4-metoxifenil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H33N5O3, 452,26; encontrado 452,2. (4-31) éster metílico do ácido 4-( { [ 4-( (1RJ-2-ciclopent il-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazina-l-carboximidoil]amino Jmetil) benzóico. MS m/z: [M+H]+ calc. para 02^34^()4, 479,26; encontrado 479,2. (4-32) 4-( (R) - 2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N- (1H-indol-2-ilmetil) piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C27H33N5O2, 460,26; encontrado 460,2. (4-33) iV-ciclo-heptilmetil-4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H40N4O2, 441,32; encontrado 441,2. (4-34) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N- (2-hidroxibenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C25H32N4O3, 437, 25; encontrado 437, 2. (4-35) 4-( (7R,)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-ÍV-( 4-trifluorometoxibenzil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H31F3N4O3, 505, 24; encontrado 505, 2. (4-36) 4-({[4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) piperazina-l-carboximidoil]amino}metil)benzamida. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H33N5O3, 464, 26; encontrado 464, 2. (4-37) 4-( (.R,)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(4-hidroximetilbenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O3, 451,26; encontrado 451,2. 82 (4-38) 4-( (R,)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-iV-(1Η-indol-5-ilmetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C27H33N5O2, 460,26; encontrado 460,2. (4-39) iV-benzofuran-5-ilmetil-4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C27H32N4O3, 461,25; encontrado 461,2. (4-40) 4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-f enilacetil)-iV-( 4- metilbenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2, 435,27; encontrado 435,2. (4-41) 4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-f enilacetil)-iV-( 4- metilsulfanilbenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2S, 467,24; encontrado 467,2. (4-42) N- (3-cianobenz il)-4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H31N5O2, 446,25; encontrado 446,2. (4-43) 3-({ [4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-piperazina-l-carboximidoil]amino}metil)benzamida. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H33N5O3, 464,26; encontrado 464,2. (4-44) 4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-f enilacetil)-iV-( 2- metilbenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2, 435,27; encontrado 434,2. (4-45) 4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-iV-(3-metilbenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2, 435,27; encontrado 435,2. 83 (4-46) 4-( (H,)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-iV-(1Η-indol-4-ilmetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc para C27H33N5O2, 460,26; encontrado 460,2. (4-47) 4-( (7R,)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(3-metilsulfanilbenzil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2S, 467,24; encontrado 467,2. (4-48) iV-benzo [b] tiofen-5-ilmetil-4-( (R) -2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C27H32N4O2S, 477,22; encontrado 477,2. (4-49) iV-benzo [ 1,3 ] dioxol-5-ilmet il-4-( (R) - 2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H32N4O4, 465,24; encontrado 465,2. (4-50) iV-benzo [b] tiofen-2-ilmetil-4-( (.RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C27H32N4O2S, 477, 22; encontrado 477, 2. (3-51) 4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-(1- metil-lH-pirazol-3-ilmetil)piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] + calc. para C23H32N6O2, 425, 26; encontrado 425, 2. (3-52) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-ciclopentilmetil-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc para C24H36N4O2, 413,28; encontrado 413,2. 84 EXEMPLO 5
Foram também preparados os compostos 5-1 e 5-2 como sais de TFA, seguindo os processos descritos nos exemplos anteriores e substituindo os materiais de partida e reagentes adequados, tendo o seguinte:
(5-1) iV-benzil-4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N'-metilpiperazina-l-carboxamidina (R6 = -CH3) . MS m/z: [M+H]+ calc. para C26H34N4O2, 435,27; encontrado 435,2. (5-2) iV-benzil-4-( (RJ-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N'-etilpiperazina-l-carboxamidina (R6 = -CH2CH3) . MS m/z: [M+H] + calc. para C27H36N4O2, 449,28; encontrado 449,2. 85 EXEMPLO 14
Foram também preparados os compostos 14-1 a 14-4, tendo a fórmula seguinte, como sais de TFA, seguindo os processos descritos nos exemplos anteriores e substituindo os materiais de partida e reagentes adequados:
Exemplo Q 14-1 fenilo 14-2 tiofen-2-ilo 14-3 4-hidroxifenilo 14-4 furan-2-ilo (14-1) iV-benzil-4-(2-hidroxi-2,2-di-tiofen-2-ilacetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C22H24N4O2S2, 441,13; encontrado 441,0. (14-2) 4-(2-hidroxi-2,2-di-tiofen-2-ilacetil)-N-tiofen-2-ilmetil-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C20H22N4O2S3, 447, 09; encontrado 447, 0. (14-3) N- (4-hidroxibenzil)-4-(2-hidroxi-2,2-di-tiofen-2-il-acetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C22H24N4O3S2, 457, 13; encontrado 457, 0. (14-4) N-furan—2—ilmetil-4-(2-hidroxi-2,2-di-tiofen-2-il-acetil)-piperazina-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]+ calc. para C20H22N4O3S2, 431,11; encontrado 431,0. 86
Ensaio 1
Ensaio de Ligação de Radioligando
Preparação de Membranas a partir de Células Expressando os Subtipos hMlf hM2, hM3 e hM4 do Receptor Muscarínico
Foram cultivadas linhas de células CHO expressando de forma estável, respectivamente, os subtipos do receptor muscarínico hMi, hM2, hM3 e hM4 humanos clonados, até próximo da confluência em meio consistindo em F-12 de HAM suplementado com FBS a 10% e Geneticina 250 pg/mL. As células foram cultivadas numa incubadora com CO2 a 5%, 37 °C e destacadas com EDTA 2 mM em
dPBS. As células foram recolhidas por uma centrifugação de 5 minutos a 650 x g e os sedimentos celulares foram armazenados congelados a -80 °C ou foram preparadas imediatamente membranas. Para a preparação das membranas, os sedimentos celulares foram ressuspensos em tampão de lise e homogeneizados com um triturador de tecidos Politron PT-2100 (Kinamatica AG; 20 segundos x 2 pulsos) . As membranas brutas foram centrifugadas a 40000 x g durante 15 minutos a 4 °C. O sedimento de membranas foi então ressuspenso com tampão de ressuspensão e novamente homogeneizado com o triturador de tecidos Politron. A concentração em proteína da suspensão de membranas foi determinada pelo método descrito em Lowry, O. et al., Journal of Biochemistry 193:265 (1951). Todas as membranas foram de membranas do Perkin Elmer e armazenadas congeladas em alíquotas a -80 °C ou utilizadas imediatamente. Foram adquiridas alíquotas receptor hM5 preparadas directamente de aramazenadas a -80 °C até à utilização. 87
Ensaio de Ligaçao de Radioligandos aos Subtipos hMi, hM2, hM3, hM4 e hM5 do Receptor Muscarinico
Foram realizados ensaios de ligação de radioligandos em placas de microtitulação dee 96-poços num volume de ensaio total de 1000 pL. Foram diluídas membranas de células CHO expressando de forma estável qualquer dos subtipos hMi, hM2, hM3, hM4 ou hM5 muscarinicos em tampão de ensaio nas seguintes concentrações específicas de proteína alvo (pg/poço): 10 pg para hMi, 10-15 pg para hM2, 10-20 pg para hM3, 10-20 pg para hM4 e 10-12 pg para hM5. As membranas foram homogeneizadas brevemente utilizando um triturador de tecidos Politron (10 segundos) antes da adição à placa de ensaio. Foram realizados estudos de saturação da ligação para determinar os valores de KD do radioligando utilizando cloreto de metilo de L-/AMnetil-3H]escopolamina ([3H]-NMS) (TRK666, 84,0 Ci/mmol, Amersham Pharmacia Biotech,
Buckinghamshire, Inglaterra) em concentrações variando de 0,001 nM a 20 nM. Foram realizados ensaios de deslocamento para a determinação dos valores de K± de compostos de teste com [3H]-NMS em 1 nM e onze concentrações diferentes de composto de teste. Os compostos de teste foram inicialmente dissolvidos numa concentração de 40 pM em tampão de diluição e depois diluídos em série 5x com tampão de diluição em concentrações finais variando de 400 fM a 4 pM. A ordem de adição às placas de ensaio e os volumes foram como se segue: 825 pL de tampão de ensaio com BSA a 0,1%, 25 pL de radioligando, 100 pL de composto de teste diluído e 50 pL de membranas. As placas de ensaio foram incubadas durante 6 horas a 37 °C. As reacções de ligação foram terminadas por filtração rápida através de placas de filtração de fibra de vidro GF/B (Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA) pré-tratadas em polietilenoimina (PEI) a 0,3%. As placas de filtração foram lavadas três vezes com tampão de lavagem (HEPES 10 mM) para 88 remover a radioactividade não ligada. As placas foram então secas ao ar e foram adicionados 50 pL de fluido de cintilação liquida Microscint-20 (Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA) a cada poço. As placas então foram contadas num contador de cintilação liquida Perkin Elmer Topcount (Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA). Os dados de ligação foram analisados por análise de regressão não linear com conjunto de programas informáticos GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) utilizando 0 modelo de competição para um local. Foram calculados valores de Ki para os compostos de teste a partir de valores de IC50 observados e o valor de KD do radioligando utilizando a equação de Cheng-Prusoff (Cheng Y; Prusoff W. H. Biochemical Pharmacology 22(23):3099-108 (1973)). Os valores de Ki foram convertidos em valores de pKi para determinar a média geométrica e os intervalos de confiança a 95%. Estas estatísticas resumidas então foram reconvertidas em valores de Ki para relatório de dados.
Neste ensaio, um valor de Ki mais baixo indica que o composto de teste tem uma afinidade de ligação mais elevada para o receptor testado. Os compostos característicos da invenção que foram testados neste ensaio, revelaram ter um valor de Ki inferior a cerca de 100 nM para o subtipo M3 de receptor muscarínico neste ensaio. Mais tipicamente, estes compostos revelaram ter valores de Ki de inferiores a cerca de 50 nM, com alguns compostos tendo valores de Ki inferiores a cerca de 10 nM ou inferiores a cerca de 1,0 nM. 89
Ensaio 2
Ensaios de Potência Funcional do Receptor Muscarínico Bloqueio da Inibição Mediada por Agonista da Acumulação de
cAMP
Neste ensaio, é determinada a potência funcional de um composto de teste medindo a capacidade do composto de teste para bloquear a inibição por oxotremorina da acumulação de cAMP mediada por forscolina em células CH0-K1 expressando o receptor hM2.
Os ensaios de cAMP são realizados num formato de radioimunoensaio utilizando o Flashplate Adenilyl Cyclase Activation Assay System com 125I-cAMP (NEN SMP004B, Perkin Elmer Life Sciences Inc., Boston, MA), de acordo com as instruções do fabricante.
As células são lavadas uma vez com dPBS e destacadas com solução Tripsina-EDTA (tripsina 0,05%/EDTA 0,53 mM) como descrito no Ensaio 1. As células destacadas são lavadas duas vezes por centrifugação a 650 x g durante cinco minutos em 50 mL de dPBS. O sedimento de células é então ressuspenso em 10 mL de dPBS e as células são contadas com um Coulter Z1 Dual Particle Counter (Beckman Coulter, Fullerton, CA) . As células são centrifugadas novamente em 650 x g durante cinco minutos e ressuspensas em tampão de estimulo numa concentração de ensaio de 1,6 x 106 - 2,8 x 106 células/mL. O composto de teste é inicialmente dissolvido numa concentração de 400 μΜ em tampão de diluição (dPBS suplementado 90 com BSA a 1 mg/mL (0,1%)) e depois é diluído em série com tampão de diluição para concentrações molares finais variando desde 100 μΜ e 0,1 nM. A oxotremorina é diluída de uma forma semelhante. São adicionados 25 pL de forscolina (concentração final de 25 μΜ diluída em dPBS), 25 pL de oxotremorina diluída e 50 pL de células a poços de ensaio de agonista para medir a inibição da actividade AC pela oxotremorina. São adicionados 25 pL de forscolina e oxotremorina (concentrações finais de, respectivamente, 25 pM e 5 pM, diluídas em dPBS) 25 pL de composto de teste diluído e 50 pL de células aos poços de ensaio remanescentes, para medir a capacidade de um composto de teste para bloquear a inibição da actividade de AC pela oxotremorina.
As reacções são incubadas durante 10 minutos a 37 °C e terminadas pela adição de 100 pL tampão de detecção gelado. As placas são seladas, incubadas de um dia para o outro à temperatura ambiente e contadas na manhã seguinte num contador de cintilação líquida Perkin Elmer TopCount (Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA). A quantidade de cAMP produzido (pmol/poço) é calculada com base nas contagens observadas para as amostras e padrões de cAMP, como descrito no manual do utilizador do fabricante. Os dados são analisados por análise de regressão não linear com o conjunto de software GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) utilizando a equação de regressão não linear, de competição para um local. É utilizada a equação de Cheng-Prusoff para calcular Ki, utilizando a EC50 da curva de resposta à concentração da oxotremorina e a concentração de ensaio de oxotremorina, respectivamente, como KD e [L] . Os valores de Ki são convertidos em valores de pKi para determinar a média geométrica e os intervalos de confiança a 95%. Estas 91 estatísticas resumidas sao então reconvertidas em valores de Ki para relatório de dados.
Neste ensaio, um valor de Ki inferior indica que o composto de teste tem uma actividade funcional mais elevada no receptor testado. É expectável que os compostos exemplificados da invenção tenham um valor de Ki inferior a cerca de 100 nM para o bloqueio da inibição pela oxotremorina da acumulação de cAMP mediada pela forscolina em células CHO-K1 expressando o receptor hM2.
Bloqueio da Ligaçao de [35S] GTPyS Mediada por Agonista
Num segundo ensaio funcional, a potência funcional de compostos de teste pode ser determinada medindo a capacidade dos compostos para bloquear a ligação de [35S]GTPyS estimulada pela oxotremorina em células CHO-K1 expressando o receptor hM2.
No momento da utilização, as membranas congeladas são descongeladas e depois são diluídas em tampão de ensaio com uma concentração final no tecido alvo de 5-10 pg proteína por poço. As membranas são homogeneizadas brevemente utilizando um triturador de tecidos Politron PT-2100 e depois são adicionadas às placas de ensaio.
Em cada experiência é determinado o valor de ECgo (concentração eficaz para 90% da resposta máxima) para o estimulo da ligaçao de [ S]GTPyS pelo agonista oxotremorina.
Para determinar a capacidade de um composto de teste para inibir a ligação de [35 S]GTPyS estimulada pela oxotremorina, é 92 adicionado o seguinte a cada poço de placas de 96 poços: 25 pL de tampão de ensaio com [35]GTPyS (0,4 nM), 25 pL de oxotremorina (EC90) e GDP (3 pM) , 25 pL de composto de teste diluído e 25 pL membranas de células CHO expressando o receptor hM2. As placas de ensaio são então incubadas a 37 °C durante 60 minutos. As placas de ensaio são filtradas através de filtros de GF/B pré-tratados com BSA a 1% utilizando um colector Perkin Elmer de 96 poços. As placas são lavadas com tampão de lavagem gelado durante 3x3 segundos e depois são secas ao ar ou em vácuo seco. É adicionado líquido de cintilação Microscint-20 (50 pL) a cada poço e cada placa é selada e a radioactividade é contada num topcounter (Perkin Elmer). Os dados são analisados por análise de regressão não linear com o conjunto de software GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) utilizando a equação de regressão não linear, de competição para um local. É utilizada a equação de Cheng-Prusoff para calcular Ki, utilizando os valores de IC50 da curva de resposta de concentração do composto de teste e a concentração de oxotremorina no ensaio como, respectivamente, KD e [L] , concentração de ligando.
Neste ensaio, um valor de K± mais baixo indica que o composto de teste tem uma actividade funcional mais elevada no receptor testado. É expectável que os compostos exemplificados da invenção tenham um valor de Ki inferior a cerca de 100 nM para o bloqueio da ligação de [35S]GTPyS estimulada pela oxotremorina em células CHO-K1 expressando o receptor hM2. 93
Bloqueio de Libertação de Cálcio Mediada por Agonista via de Ensaios FLIPR
Os subtipos de receptor muscarínico (receptores Mi, M3 e M5) , que se ligam a proteínas Gq, activam a via da fosfolipase C (PLC) após a ligação do agonista ao receptor. Consequentemente a PLC activada hidroliza o difosfato de fosfatilinositol (PIP2) em diacilglicerol (DAG) e fosfatidil-1,4,5-trifosfato (IP3), que por sua vez produz a libertação de cálcio a partir de armazenamentos intracelulares, i. e., retículo endoplasmático e sarcoplasmático. 0 ensaio FLIPR (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) aproveita este aumento do cálcio intracelular utilizando um corante sensível ao cálcio (Fluo-4AM, Molecular Probes, Eugene, OR) que fluoresce quando o cálcio livre se liga. Este evento de fluorescência é medido em tempo real pelo FLIPR, que detecta a alteração na fluorescência a partir de uma monocamada de células clonadas com receptores Mi e M3 humanos e M5 de chimpanzé. A potência antagonista pode ser determinada pela capacidade dos antagonistas para inibirem aumentos mediados por agonista do cálcio intracelular.
Para ensaios FLIPR de estímulo com cálcio, são inoculadas as células CHO expressando de forma estável os receptores hMi, hM3 e cM5 em placas FLIPR de 96 poços na noite anterior à realização do ensaio. As células inoculadas são lavadas duas vezes com Cellwash (MTX Labsystems, Inc.) com tampão FLIPR (HEPES 10 mM, pH 7,4, cloreto de cálcio 2 mM, probenecid 2,5 mM em HBSS sem cálcio e magnésio) para remover os meios de crescimento e deixando 50 pL de tampão FLIPR/poço. As células são então incubadas com 50 pL de FLUO-4AM 4 pM/poço (foi preparada uma solução 2 X) durante 40 minutos a 37 °C, dióxido de carbono a 5%. Após o período de incubação do corante, as 94 células sao lavadas duas vezes com tampao FLIPR, deixando um volume final de 50 pL/poço. É inicialmente determinado o estimulo dependente de dose da libertação de Ca2+ intracelular para a oxotremorina de forma a que a potência de antagonista possa ser mais tarde medida em ordem a um estimulo com oxotremorina numa concentração ECgo, para determinar a potência do antagonista. As células são inicialmente incubadas com tampão de diluição de composto durante 20 minutos, seguida pela adição de agonista, que é realizada pelo FLIPR. É produzido um valor de EC90 de oxotremorina de acordo com o método detalhado na secção de medição e redução de dados de FLIPR abaixo, em conjunto de fórmula ECF = ((F/100-F)Λ1/Η)*ECso. É preparada uma concentração de oxotremorina de 3 x ECf em placas de estimulo de forma a que seja adicionada uma concentração de oxotremorina EC90 a cada poço nas placas de ensaio de inibição de antagonista.
Os parâmetros utilizados para o FLIPR são: comprimento de exposição de 0,4 segundos, força de laser de 0,5 watts, comprimento de onda de excitação de 488 nm e comprimento de onda de emissão de 550 nm. A linha de base é determinada medindo a alteração da fluorescência durante 10 segundos antes da adição do agonista. Após o estimulo com agonista, o FLIPR mede continuamente a alteração da fluorescência cada 0,5 a 1 segundo durante 1,5 minutos para capturar a alteração da fluorescência máxima. A alteração da fluorescência é expressa como a fluorescência máxima menos a fluorescência de linha de base para cada poço. Os dados em bruto são analisados em ordem ao logaritmo da concentração de fármaco por regressão não linear 95 com o GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) utilizando o modelo incorporado para resposta de dose sigmoidal. São determinados os valores K± do antagonista pelo Prism utilizando o valor EC5o da oxotremorina como KD e EC90 da oxotremorina para a concentração de ligando de acordo com a equação de Cheng-Prusoff (Cheng e Prusoff, 1973).
Neste ensaio, um valor de K i mais baixo indica que o composto de teste tem uma actividade funcional mais elevada no receptor testado. É expectável que os compostos da invenção exemplificados tenham valores de K± inferiores a cerca de 100 nM para o bloqueio da libertação de cálcio mediada por agonista em células CHO que expressam o receptor hM3 de forma estável.
Ensaio 3
Ensaio de Einthoven em Rato
Este ensaio in vivo é utilizado para avaliar os efeitos broncoprotectores de compostos de teste que apresentem actividade antagonista do receptor muscarínico.
Todos os compostos de teste são diluídos em água estéril e são doseados através da via de inalação (IHO ratos (Sprague-Dawley, sexo masculino, 250-350 g) são expostos ao aerossol produzido a partir de um LC Star Nebulizador Set e propulsionado por uma mistura de gases (CO2 a 5%/ar atmosférico a 95%) . Cada solução composta de teste é nebulizada ao longo de um período de tempo de 10 minuto numa câmara de doseamento em forma de tarte capaz de manter seis ratos. É realizado o ensaio de Einthoven em pontos temporais pré-determinados após a inalação do composto. 96
Trinta minutos antes do inicio da avaliação pulmonar, os animais são anestesiados com inactina (tiobutabarbital, 120 mg/kg IP) . A veia jugular é cateterizada com cateteres de polietileno cheios com soro fisiológico (PE-50) e é utilizada para infundir MCh. A traqueia é então dissecada e canulada com um agulha 14G e é utilizada para a ventilação do rato durante a avaliação pulmonar. Logo que a cirurgia é terminada, os ratos são ventilados utilizando um dispositivo respirador de pistão com um volume de pulsação de 1 mL/100 g peso corporal mas não excedendo um volume de 2,5 mL e um ritmo de 90 pulsações por minuto. São medidas as alterações de pressão que ocorrem em cada respiração. São recolhidos valores de linha de base durante pelo menos 2,5 minutos depois os ratos são desafiados não-cumulativamente com aumentos incrementais de 2 vezes do broncoconstrictor MCh (5, 10, 20, 40 e 80 pg/mL) . O MCh é infundido durante 2,5 minutos a partir de uma bomba de seringa a uma velocidade de 2 mL/kg/minuto. Os animais são submetidos a eutanásia após a finalização dos estudos.
As alterações na pressão de ventilação (cm de H2O) em animais tratados são expressas como a % de inibição da resposta a MCh em relação a animais de controlo. Neste ensaio, um valor mais elevado de % de inibição indica que o composto de teste tem um efeito broncoprotector. É expectável que os compostos característicos da invenção que são testados neste ensaio numa dose de 100 pg/mL apresentem uma inibição superior a 35%, é expectável que alguns apresentem uma inibição superior a 70% e é expectável que alguns apresentem uma inibição superior a 90%. 97
Determinação de ID50 a 1,5 h
Foram avaliados antagonistas muscarinicos padrão no ensaio Einthoven em rato 1,5 horas após a dose. A ordem da potência (ID50s) para os cinco padrões testados foi determinada como sendo ser: ipratrópio (4,4 pg/mL)> tiotrópio (6 pg/mL)> des-metil-tiotrópio (12 pg/mL)> glicopirrolato (15 pg/mL)> LAS-34237 (24 pg/mL) . A potência do composto de teste é determinada de um modo semelhante 1,5 horas após a dose.
Determinação da ID50 às 6 e 24 h
Foram também avaliados padrões de tiotrópio e ipratrópio 24 h e/ou 6 h após a dose no ensaio de Einthoven em rato. 0 ipratrópio (10 e 30 pg/mL) foi cerca de 3 vezes menos potente 6 h após a dose em comparação com a sua potência a 1,5 h. A perda de actividade observada neste ponto temporal (6 h) é compatível com a sua relativamente curta duração de acção em clínica. O tiotrópio apresentou um estabelecimento lento do efeito com uma broncoprotecção máxima atingida 6 h após a dose. Os seus valores de potência às 6 h e 24 h não foram significativamente diferentes entre si e foram cerca de 2 vezes mais potente em comparação com a sua potência a 1,5 h. 0 estabelecimento da acção do composto de teste, assim como os valores de potência às 6 e 24 h, são determinados do mesmo modo. 98
Ensaio 4
Ensaio Anti-sialagogo em Rato São doseados, anestesiados e canulados ratos (Sprague-Dawley, sexo masculino, 250-350 g) como descrito para o Ensaio 3. Em pontos temporais pré-determinados e após a cirurgia, os animais são colocados no seu lado dorsal numa inclinação de 20° com a sua cabeça num declive descendente. É inserido um chumaço de gaze pré-pesado na boca do animal e é administrado o agonista muscarínico pilocarpina (PILO) (3 mg/kg, iv.). A saliva produzida durante os 10 minutos após PILO é medida gravimetricamente determinando o peso do chumaço de gaze antes e após PILO. Os efeitos antisialagogo são expressos como a % de inibição da salivação em relação aos animais de controlo.
Determinação de ID5o às 1, 6 e 24 h O ensaio antisialagogo no rato foi desenvolvido para avaliar a exposição sistémica e calcular o índice de selectividade pulmonar (LSI) de compostos de teste. Foi avaliado o padrão, tiotrópio, neste modelo às 1, 6 e 24 h após a dose. O tiotrópio revelou ser o mais potente na inibição da salivação induzida pela pilocarpina 6 h após a dose. Esta verificação é compatível com os efeitos máximos observados no ensaio de Einthoven.
Este modelo é uma versão modificada do processo descrito em Rechter, "Estimation of anti-cholinergic drug effects in mice by antagonism against pilocarpin-induced salivation" Ata Pharmacol Toxicol 24:243-254 (1996). É calculado o peso médio da saliva em 99 animais tratados com veiculo, em cada momento de pré-tratamento e é utilizado para computar a % de inibição da salivação, no tempo de pré-tratamento correspondente, em cada dose. É expectável que compostos caracteristicos da invenção que são testados neste ensaio apresentem valores de ID50 inferiores a 100 pg/mL (medidos às 24 horas), sendo expectável alguns compostos apresentarem um valor de ID50 inferior a 30 pg/mL, alguns inferior a 20 pg/mL e a alguns inferior a 15 pg/mL. É utilizada a proporção entre a ID50 anti-sialagogo e a ID50 broncoprotectora para calcular 0 índice de selectividade pulmonar aparente do composto de teste. Geralmente, são preferidos os compostos tendo um índice de selectividade pulmonar aparente superior a 5.
Lisboa, 13 de Dezembro de 2011 100

Claims (22)

    REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I: (I) em que: R1 é seleccionado de -alquiloCi-6, -alceniloC2_6, -cicloalquiloC3-9 e heteroarilo; R2 é seleccionado de arilo e heteroarilo; R3 é seleccionado de H e -alquilenoCo-i-OH ou R3 forma uma ligação dupla com R1; ou -CR1R2R3 em conjunto forma um grupo de fórmula: em que A é seleccionado de uma ligação, -0-, -S-, -CH2-, -CH=CH-, -CH2CH2-, -NH- e -N(CH3)-; e R4 é seleccionado de H, halogéneo, -OH, -alquiloCi-g e -alcoxiloCi_8; X é uma ligação, Y é -CH2-, Y' é -N- e Y'' é -CH2-; R5 é seleccionado de fluoro e -alquiloCi_4; e a é 0 ou um número inteiro desde 1 a 3; 1 R6 e R7 são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi-4 e ainda em que um de R6 ou R7 pode ser -NH2; Z é seleccionado de -alquilenoCi-3-Q e -NH-alquilenoCo-i-Q; Q é seleccionado de -cicloalquiloC3_7, arilo e heteroarilo; e g Q está substituído opcionalmente com 1-5 grupos R seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4,· -alquilenoCo-4-ΟΗ, ciano, -alquilenoCo-2-COOH, -C(0)0-alquiloCi-4, -O-alquiloCi-4, -S-alquiloCi-4, -CONR8aR8b, -NH-C (0)-alquiloCi-4, -N-di-alquiloCi^4 e -N+(0)0; R8a e R8b são seleccionados independentemente de H e -alquiloCi-4, em que R1 e R2 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 grupos Ra seleccionados independentemente de -alquiloCi-4/ -alceniloC2-4, -alciniloC2-4, -cicloalquiloC3-6, ciano, halogéneo, -0Rb, -C(0)0Rb, -SRb, -S(0)Rb, -S(0)2Rb, -C(0)NRcRd e -NRcRd; cada Rb é seleccionado independentemente de H, -alquiloCi-4, -alceniloC2^4, -alciniloC2-4 e -cicloalquiloC3-6; cada Rc e Rd são seleccionados independentemente de H, -alquiloCi-4, -alceniloC2-4, -alciniloC2^4 e -cicloalquiloC3_6; em que cada grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, alquileno e cicloalquilo em Ra_d, R4~8 e Z, está substituído opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor; em que cada cicloalquilo em Ra~d está substituído opcionalmente com 1 a 3 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi_4, -alceniloC2~4, -alciniloC2-4, ciano, halogéneo, -0 (Ci-4alquilo) , -S (alquiloCi-4) , -S (0) (alquiloCi-4) , -S (0) 2 (alquiloCi-4) , -NH2, -NH (alquiloCi-4) e -N (Ci_4alquilo) 2, em que cada grupo alquilo, alcenilo e alcinilo está substituído opcionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro; e o grupo alquileno em Z está substituído opcionalmente com 1 2 ou 2 substituintes seleccionados independentemente de -alquiloCi-2 e -OH; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  1. (1) (2) (3) 6 em que P é um grupo amino protector; (b) reacção do composto (3) com o composto (6) para formar o composto (7):
    e (c) reacção do composto (7) e do composto (8) para proporcionar um composto de fórmula I: (7) + Z-NH2(8)
    N-Z k’ R 6 (I)
  2. 2. Composto da Reivindicação 1, em que R1 é isobutilo, ciclopentilo ou tiofenilo.
  3. 3. Composto da Reivindicação 1, em que R2 é fenilo ou tiofenilo.
  4. 4. Composto da Reivindicação 1, em que R3 é -OH ou -CR1R2R3 em conjunto forma:
  5. 5. Composto da Reivindicação 1, em que a é 0.
  6. 6. Composto da Reivindicação 1, em que R6 é H ou-alquiloCi-4; e R7 é H.
  7. 7. Composto da Reivindicação 1, em que Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo.
  8. 8. Composto da Reivindicação 1, em que Q está substituído 8 opcionalmente com 1-2 grupos R seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4-ΟΗ, ciano, -C (O) O-alquiloCi-4, -0-alquiloCi_4í -S-alquiloCi_4 e -CONH2. 3
  9. 9. Composto da Reivindicação 1, em que R1 é isobutilo, ciclopentilo ou tiofenilo; R2 é fenilo ou tiofenilo; R3 é -OH; ou -CR1R2R3 em conjunto forma um grupo de fórmula:
    a é 0; R6 é H ou-alquiloCi_4; R7 é H; Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi_4, -alquilenoC0-4-OH, ciano, -C (0) 0-alquiloCi_4, -0-alquiloCi-4, -S-alquiloCi-4 e -CONH2; e os grupos alquilo em R8 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
  10. 10. Composto da Reivindicação 1, tendo a fórmula:
    N / \ A N N N-Z I. (II).
  11. 11. Composto da Reivindicação 10, em que R1 é ciclopentilo ou tiofenilo; R2 é fenilo ou tiofenilo; R3 é -OH; R6 é H ou -alquiloCi-2; R7 é H; Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, 4 -alquiloCi-4, alquilenoCi-4-ΟΗ, ciano, -C (0) O-alquiloCi-4, -O-alquiloCi-4, -S-alquiloCi^4 e -C0NH2; e os grupos alquilo em R8 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
  12. 12. Composto da Reivindicação 10, tendo a fórmula:
    (na).
  13. 13. Composto da Reivindicação 12, em que R6 é H ou -alquiloCi_2; Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi-4, -alquilenoCo-4~OH, ciano, -C (0) O-alquiloCi-4, -O-alquiloCi-4, — S — alqui 10C1-4 θ —C0NH2; e os grupos alquilo em R estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
  14. 14. Composto da Reivindicação 10, tendo a fórmula:
  15. 15. Composto da Reivindicação 14, em que Q é ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, fenilo, benzodioxolilo, benzofuranilo, 5 benzotiofenilo, furanilo, indolilo, pirazolilo, piridinilo, tiazolilo ou tiofenilo; Q está substituído opcionalmente com 1-2 grupos R8 seleccionados independentemente de halogéneo, -alquiloCi_4, -alquilenoCo-4-OH, ciano, -C (0) O-alquiloCi-4, -0-alquiloCi_4, -S-alquiloCi_4 e -CONH2; e os grupos alquilo em R8 estão substituídos opcionalmente com 1 a 5 átomos de flúor.
  16. 16. Composto da Reivindicação 15, em que Q é furanilo ou tiofenilo.
  17. 17. Composto da Reivindicação 16, seleccionado de : 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-furan-2-ilmetilpiperazina-l-carboxamidina; e 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-tiofen-2-ilmetil-piperazina-l-carboxamidina.
  18. 18. Processo de preparação de um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 17, compreendendo: (a) ligação do composto (1) e do composto (2) sob condições formadoras de ligação amida e desprotecção do produto para formar composto (3):
  19. 19. Composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 17 e um veiculo farmaceuticamente aceitável e além disso opcionalmente compreendendo um segundo agente terapêutico, sendo o referido segundo agente terapêutico seleccionado de um modo preferido de agonistas do receptor adrenérgico β2, agentes antiinflamatórios esteróides, inibidores da fosfodiesterase-4 e as suas combinações. 7
  20. 20. Composição farmacêutica da Reivindicação 19, em que a composição compreende um agonista do receptor adrenergico β2 e um agente antiinflamatório esteróide.
  21. 21. Composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 17 para utilização em terapia.
  22. 22. Composto para utilização em terapia de acordo com a reivindicação 21, para tratar doença pulmonar obstrutiva crónica ou asma ou para produzir broncodilatação. Lisboa, 13 de Dezembro de 2011 8
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