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PT1948678E - Compostos para inibição de enzimas - Google Patents

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PT1948678E
PT1948678E PT68371640T PT06837164T PT1948678E PT 1948678 E PT1948678 E PT 1948678E PT 68371640 T PT68371640 T PT 68371640T PT 06837164 T PT06837164 T PT 06837164T PT 1948678 E PT1948678 E PT 1948678E
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PT
Portugal
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compound according
compound
mmol
alkyl
quot
Prior art date
Application number
PT68371640T
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English (en)
Inventor
Guy J Laidig
Han-Jie Zhou
Congcong M Sun
Kevin D Shenk
Original Assignee
Onyx Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Onyx Therapeutics Inc filed Critical Onyx Therapeutics Inc
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Description

ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
DESCRIÇÃO "Compostos para inibição de enzimas" Antecedentes do Invento
Nos eucariotas, a degradação das proteínas é predominantemente mediada através da via da ubiquitina na qual as proteínas alvo para destruição são ligadas ao polipéptido de 76 aminoácidos, ubiquitina. Assim que tornadas alvo, as proteínas ubiquitinadas servem posteriormente como substratos para a proteassoma 26S, uma protease multicatalítica, que cliva as proteínas em péptidos mais pequenos através da ação das suas três atividades proteolíticas principais. Embora tendo uma função geral no turnover das proteínas intracelulares, a degradação mediada por proteassoma desempenha também um papel chave em muitos processos tais como apresentação do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) de classe I, apoptose, divisão celular e ativação de NF-kB. A proteassoma de 20S é um complexo de protease multicatalítica de forma cilíndrica de 700 kDa compreendido por 28 subunidades organizadas em quatro anéis que desempenham papéis importantes na regulação do crescimento celular, apresentação do complexo de histocompatibilidade principal de classe I, apoptose, processamento de antigénios, ativação de NF-κΒ e transdução de sinais proinflamatórios. Nas leveduras e noutros eucariotas, 7 subunidades α diferentes formam os anéis exteriores e 7 subunidades β diferentes compreendem os anéis interiores. As subunidades oí servem como sítios de ligação para os complexos reguladores de 19S (PA700) e 11S (PA28), assim como uma barreira física para a câmara proteolítica interna formada pelos dois anéis de subunidade β. Assim, in vivo, pensa-se que a proteassoma existe como uma partícula de 26S ("a proteassoma 26S") . Experiências in vivo mostraram que a inibição da forma de 20S da proteassoma pode ser rapidamente correlacionada com a inibição da proteassoma 26S. A clivagem de prosequências amino-terminais de subunidades β durante a formação de partículas expõe resíduos treonina amino-terminais, que servem como nucleófilos catalíticos. As subunidades 2 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ responsáveis pela atividade catalítica na proteassoma possuem assim um resíduo nucleofílico amino terminal, pertencendo estas subunidades à família de hidrolases nucleofílicas de terminal-N (Ntn) (nas quais o resíduo nucleofílico de terminal-N é, por exemplo, Cys, Ser, Thr e outras porções nucleofílicas). Esta família inclui, por exemplo, penicilina-G acilase (PGA), penicilina-V acilase (PVA), glutamina-PRPP-amidotransferase (GAT) e glicosilasparaginase bacteriana. Adicionalmente às subunidades β ubiquitamente expressas, os vertebrados superiores possuem também 3 subunidades β induzíveis por Π-interferão (LMP7, LMP2 e MECL1), que substituem os seus homólogos normais, X, Y e Z, respetivamente, alterando assim as atividades catalíticas da proteassoma. Através da utilização de diferentes substratos peptídicos, foram definidas as três principais atividades proteolíticas para a proteassoma 20S eucariota: atividade semelhante a quimotripsina (CT-L), que cliva após resíduos hidrofóbicos grandes; atividade semelhante a tripsina (T-L), que cliva após resíduos básicos; e atividade hidrolisante do péptido peptidilglutamilo (PGPH), que cliva após resíduos acídicos. Foram também atribuídas à proteassoma duas atividades adicionais, menos caracterizadas: atividade BrAAP, que cliva após aminoácidos de cadeia ramificada; e atividade SNAAP, que cliva após aminoácidos neutros pequenos. As principais atividades proteoliticas das proteassomas parecem ser contribuídas por diferentes sítios catalíticos, uma vez que os inibidores, mutações pontuais nas subunidades β e permuta de subunidades β que induz -interferão alteram estas atividades em vários graus.
Nos últimos anos, a proteassoma tem-se tornado num alvo apelativo para a intervenção terapêutica no cancro, desordens imunes e autoimunes, inflamação, condições isquémicas, desordens neurodegenerativas e outras doenças. Até à data, o único inibidor da proteassoma aprovado pela FDA é o bortezomib (VELCADE™), no entanto, estão a ser presentemente avaliados em ensaios clínicos vários outros inibidores da proteassoma. Até ao momento, todos estes inibidores terapêuticos da proteassoma são geralmente administrados por via IV. A aplicação clínica de inibidores da proteassoma no tratamento de doenças hematológicas tais como mieloma e linfoma está restringida, em parte, pela necessidade de 3 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ administrações IV frequentes e seria melhorada pela administração oral (PO). No entanto, devido à natureza peptidica destas moléculas, a exposição sistémica após administração PO destes inibidores é limitada por vários fatores incluindo pH gástrico, peptidases gástricas e intestinais, bombas de efluxo, excreção biliar e atividades metabólicas intestinais e hepáticas.
Os processos utilizados para ultrapassar a capacidade dos péptidos para serem enzimaticamente degradados e para melhorar a absorção para a corrente sanguínea a partir do trato digestivo incluíram a preparação de análogos que são, em estrutura, menos semelhantes a péptidos e que são reduzidos, em tamanho. Tais processos são considerados bem sucedidos quando o análogo peptídico alcança níveis sanguíneos satisfatórios após administração oral, ou no caso de inibidores da proteassoma, quando a atividade da proteassoma no sangue está satisfatoriamente reduzida.
As técnicas acima mencionadas têm sido aplicadas na preparação de análogos dos inibidores da proteassoma de péptido epoxicetona, tornando-os assim oralmente biodisponíveis.
Sumário do Invento 0 invento refere-se a classes de moléculas conhecidas como α',β'-epóxidos peptídicos e a',β'-aziridinas peptídicas. As moléculas de origem são conhecidas por se ligarem eficaz, irreversível e seletivamente às hidrolases nucleofílicas N-terminais (Ntn) e podem inibir especificamente atividades particulares de enzimas tendo atividade catalítica múltipla.
Embora pensada meramente para eliminar proteínas desnaturadas e anormalmente configuradas, a proteassoma é agora reconhecida como constituindo maquinaria proteolítica que regula os níveis de diversas proteínas intracelulares através da sua degradação de uma forma dependente de sinal. Por conseguinte, há um grande interesse na identificação de reagentes que possam perturbar especificamente as atividades da proteassoma e de outras hidrolases Ntn e que, por conseguinte, possam ser utilizados como sondas para estudar o 4 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ papel destas enzimas nos processos biológicos. Os compostos que têm como alvo as hidrolases Ntn são aqui descritos, sintetizados e investigados. Os epóxidos peptídicos e aziridinas peptídicas que podem potencial, seletiva e irreversivelmente inibir as atividades particulares da proteassoma são aqui descritos e reivindicados.
Contrariamente a vários outros inibidores à base de péptido, não se espera que os epóxidos peptídicos e as aziridinas peptídicas aqui descritos inibam substancialmente proteases não proteassomais tais como tripsina, quimotripsina, catepsina B, papaína e calpaína em concentrações até 50 μΜ. A concentrações superiores, pode-se observar inibição, mas seria de esperar que fosse competitiva e não irreversível, se o inibidor competisse meramente com o substrato. Espera-se também que os novos epóxidos peptídicos e aziridinas peptídicas inibam a ativação de NF-κΒ e estabilizem os niveis de p53 na cultura de células. Além disso, seria de esperar que estes compostos tivessem atividade anti-inflamatória. Assim, estes compostos podem ser sondas moleculares únicas, que têm a versatilidade de explorar a função das enzimas Ntn em processos biológicos normais e patológicos.
Num aspeto, o invento proporciona inibidores compreendendo um anel de três membros contendo heteroátomo. Estes inibidores podem inibir a atividade catalítica de enzimas hidrolase nucleofílicas de terminal-N (por exemplo, a proteassoma 20S ou a proteassoma 26S) quando o referido inibidor está presente em concentrações inferiores a cerca de 50 μΜ. Relativamente à proteassoma 20S, os inibidores hidrolase particulares inibem a atividade semelhante a quimotripsina da proteassoma 20S quando o inibidor está presente a concentrações inferiores a cerca de 5 μΜ e não inibem a atividade semelhante a tripsina ou a atividade PGPH da proteassoma 20S quando presente a concentrações inferiores a cerca de 5 μΜ. O inibidor hidrolase pode ser, por exemplo, um péptido a',β'-epoxicetona ou a',β'-aziridinacetona e o péptido pode ser um tetrapéptido. O péptido pode incluir cadeias laterais ramificadas ou não ramificadas tais como hidrogénio, alquilo (Ci-6) , hidroxialquilo (Ci-ε) , alcoxialquilo (Ci_6) , arilo, aralquilo (Ci_6) , alquil (Ci_6) amida, 5 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ alquil (Ci 6) amina, ácido carboxílico (Ci-ε) , éster de carboxilo (Ci_6) , alquil (Ci_6) tiol, ou alquil (Ci_6) tioéter, por exemplo, isobutilo, 1-naftilo, fenilmetilo e 2-feniletilo. 0 a'-carbono da a', β'-epoxicetona ou a', β'-aziridinacetona pode ser um átomo de carbono quiral, tal como um carbono de configuração (R) ou β, como aqui definido.
Num outro aspeto, o invento proporciona composições farmacêuticas, incluindo um veiculo farmaceuticamente aceitável e uma quantidade farmaceuticamente aceitável do inibidor hidrolase, que melhora os efeitos da doença neurodegenerativa (tal como doença de Alzheimer), doenças de emaciação muscular, cancro, doenças infecciosas crónicas, febre, insuficiência da atividade muscular, perda de nervos, lesão dos nervos, jejum e condições relacionadas com o sistema imunitário, entre outras.
Num aspeto, o invento proporciona compostos e composições farmacêuticas que são oralmente biodisponiveis.
Num outro aspeto, o invento proporciona composições anti-inflamatórias.
Num outro aspeto, o invento proporciona compostos para utilização em processos para o seguinte: inibição ou redução da infeção por VIH num sujeito; alteração do nivel da expressão de um gene virai num sujeito; alteração de uma variedade de péptidos antigénicos produzidos pela proteassoma num organismo; determinação se um processo ou resultado (output) celular, de desenvolvimento ou fisiológico num organismo é regulado pela atividade proteolitica de uma hidrolase Ntn particular; tratamento da doença de Alzheimer num sujeito; redução da velocidade de degradação da proteína muscular numa célula; redução da velocidade de degradação da proteína intracelular numa célula; redução da velocidade de degradação da proteína p53 numa célula; inibição do crescimento de cancros relacionados com p53 num sujeito; inibição da apresentação de antigénios numa célula; supressão do sistema imunitário de um sujeito; inibição da degradação de ΙκΒ-α num organismo; redução do conteúdo de NF-κΒ numa célula, músculo, órgão ou sujeito; alteração dos ciclos celulares eucarióticos dependentes de ciclina; tratamento da 6 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ doença proliferativa num sujeito; alteração da regulação dependente de proteassoma de oncoproteínas numa célula; tratamento do crescimento do cancro num sujeito; tratamento da apoptose relacionada com p53 num sujeito; e análise de proteínas processadas por hidrolases nucleofílicas de terminal-N numa célula. Cada um destes processos envolve a administração ou contacto de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo os inibidores hidrolase aqui descritos, num sujeito, célula, tecido, órgão ou organismo.
Outras características e vantagens do invento serão evidentes a partir da descrição detalhada seguinte e a partir das reivindicações.
Descrição Detalhada do Invento 0 invento envolve compostos úteis como inibidores enzimáticos. Estes compostos são geralmente úteis para inibir enzimas tendo um grupo nucleofílico no terminal-N. Por exemplo, as atividades de enzimas ou subunidades de enzimas tendo aminoácidos N-terminais com nucleófilos nas suas cadeias laterais, tais como treonina, serina ou cisteína, podem ser inibidas com sucesso pelos inibidores enzimáticos aqui descritos. As atividades das enzimas ou subunidades de enzimas tendo grupos nucleofílicos não-aminoácido nos seus N-terminais, tal como, por exemplo, grupos protetores ou hidratos de carbono, podem ser inibidas com sucesso pelos inibidores enzimáticos aqui descritos.
Pensa-se que tais nucleófilos de terminal-N de Ntn formam aductos covalentes com o grupo funcional epóxido dos inibidores enzimáticos aqui descritos. Por exemplo, na subunidade P5/Pre2 da proteassoma 20S, pensa-se que a treonina N-terminal forma irreversivelmente um aducto morfolino ou piperazino após reação com um epóxido ou aziridina peptídicos tais como aqueles descritos abaixo. Tal formação de aducto podia envolver a clivagem de abertura em anel do epóxido ou aziridina.
Em concretizações incluindo tais grupos ligados a carbonos a' , a estereoquímica do carbono a' (aquele carbono que faz parte do anel epóxido ou aziridina) pode ser (R) ou 7 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ (S). Ο invento baseia-se, em parte, na informação de estrutura-função aqui descrita, a qual sugere as seguintes relações estereoquímicas preferidas. É de salientar que um composto preferido pode ter um certo número de estereocentros tendo a relação acima-abaixo (ou β-α, em que β como aqui representado está acima do plano da página) ou (R)-(S) indicada (isto é, não é necessário que todos os estereocentros no composto tenham a conformação das preferências referidas). Nalgumas concretizações preferidas, a estereoquimica do carbono a' é (R), isto é, o átomo X é β, ou acima do plano da molécula.
Relativamente à estereoquimica, são seguidas as regras de Cahn-Ingold-Prelog para determinação da estereoquimica absoluta. Estas regras são descritas, por exemplo, em Organic Chemistry, Fox e Whitesell; Jones e Bartlett Publishers, Boston, MA (1994); Secção 5-6, pgs. 177-178, secção que é aqui incorporada por referência. Os péptidos podem ter uma estrutura fundamental de repetição com cadeias laterais que se prolongam a partir das unidades base. Em geral, cada unidade base tem uma cadeia lateral associada a ela, embora nalguns casos, a cadeia lateral seja um átomo de hidrogénio. Noutras concretizações, nem todas as unidades base têm uma cadeia lateral associada. Os péptidos úteis em epóxidos peptidicos ou aziridinas peptidicas têm duas ou mais unidades base. Nalgumas concretizações úteis para a inibição da atividade semelhante a quimotripsina (CT-L) da proteassoma, estão presentes entre duas e quatro unidades base, e nalgumas concretizações preferidas para inibição da CT-L, estão presentes três unidades base.
As cadeias laterais que se prolongam a partir das unidades base podem incluir cadeias laterais de aminoácidos alifáticos ou aromáticos, naturais, tais como hidrogénio (glicina), metilo (alanina), isopropilo (valina), sec-butilo (isoleucina), isobutilo (leucina), fenilmetilo (fenilalanina) e a cadeia lateral que constitui o aminoácido prolina. As cadeias laterais podem também ser outros grupos alifáticos ou aromáticos, ramificados ou não ramificados, tais como etilo, n-propilo, n-butilo, t-butilo e derivados substituídos por arilo tais como 1-feniletilo, 2-feniletilo, (1-naftil)metilo, (2-naftil)metilo, 1-(1-naftil)etilo, 1-(2-naftil)etilo, 2-(l- 8
ΕΡ 1 948 678/PT naftil)etilo, 2-(2-naftil)etilo e compostos similares. Os grupos arilo podem ser adicionalmente substituídos por grupos alquilo (Ci-6) ramificados ou não ramificados, ou grupos alquilo substituídos, acetilo e semelhantes, ou outros grupos arilo, ou grupos arilo substituídos, tais como benzoílo e semelhantes. Os grupos heteroarilo e heterociclilo podem também ser utilizados como substituintes de cadeias laterais. Os grupos heteroarilo incluem grupos arilo contendo azoto, oxigénio e enxofre, tais como tienilo, benzotienilo, naftotienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, indolilo, purinilo, quinolilo e semelhantes. Os grupos heterociclilo incluem tetra-hidrofurano, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, lactonas, lactamas e semelhantes.
Nalgumas concretizações, podem ser introduzidos nos epóxidos peptidicos ou aziridinas peptídicas resíduos polares ou carregados. Por exemplo, podem ser introduzidos aminoácidos que ocorrem naturalmente, tais como contendo hidroxi (Thr, Tyr, Ser) ou contendo enxofre (Met, Cys), assim como aminoácidos não essenciais, por exemplo, taurina, carnitina, citrulina, cistina, ornitina, norleucina e outros. Podem também ser incluídos substituintes de cadeia lateral que não ocorrem naturalmente com porções carregadas ou polares, tais como, por exemplo, cadeias alquilo (Ci-β) ou grupos arilo (C6-12) com um ou mais grupos hidroxi, alcoxi de cadeia curta, sulfureto, tio, carboxilo, éster, fosfo, amido ou amino, ou tais substituintes substituídos por um ou mais átomos de halogénio. Nalgumas concretizações preferidas, há, pelo menos, um grupo arilo presente numa cadeia lateral da porção peptídica.
Nalgumas concretizações, as unidades base são unidades amida [-NH-CHR-C(=0)-] , nas quais R é a cadeia lateral. Uma tal designação não exclui o aminoácido que ocorre naturalmente, prolina, ou outros aminoácidos secundários cíclicos que não ocorrem naturalmente, que serão reconhecidos por aqueles peritos na arte.
Noutras concretizações, as unidades base são unidades amida N-alquiladas (por exemplo, N-metilo e semelhantes), 9 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ análogos olefínicos (nos quais uma ou mais ligações amida são substituídas por ligações olefínicas), análogos tetrazol (nos quais um anel tetrazol impõe uma configuração cis na estrutura) ou combinações de tais ligações base. Ainda noutras concretizações, o carbono oí do aminoácido é modificado por substituição de α-alquilo, por exemplo, ácido aminoisobutírico. Noutras concretizações, as cadeias laterais são localmente modificadas, por exemplo, por modificação ΔΕ ou Δζ desidro, em que está presente uma ligação dupla entre os átomos α e β da cadeia lateral ou por exemplo por modificação ΔΕ ou Δζ ciclopropilo, em que um grupo ciclopropilo está presente entre os átomos α e β da cadeia lateral. Ainda noutras concretizações que utilizam grupos aminoácido, podem-se utilizar D-aminoácidos. Outras concretizações podem incluir a ciclização de cadeia lateral-à-estrutura, formação de ligação dissulfureto, formação de lactama, ligação azo e outras modificações discutidas em "Peptides and Mimics, Design of Conformationally Constrained" de Hruby e Boteju, em "Molecular Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference", ed. Robert A. Meyers, VCH Publishers (1995), pgs. 658-664.
Um aspeto do invento refere-se a compostos tendo uma estrutura de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
R4 O R2 R7 O 10 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ R4 é selecionado a partir de hidrogénio, aralquilo (Ci-β) e alquilo (Ci_6) ; R5 é heteroarilo; e R6 e R7 são independentemente selecionados a partir de hidrogénio, alquilo (Ci-β) e aralquilo (Ci-β) .
Em certas concretizações, R1, R2 e R3 são independentemente selecionados a partir de hidrogénio, alquilo (Ci_6) ^ hidroxialquilo (Ci_6) , alcoxialquilo (Ci_6) , aralquilo (Ci^6) , heterocicloalquilo (Ci_6) , heteroaralquilo (Ci_6) e carbocicloalquilo (Ci-ε) . Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente alquilo (Ci-β) selecionado a partir de metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo e isobutilo. Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente hidroxialquilo (Ci-ε) · Em certas concretizações preferidas, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente selecionado a partir de hidroximetilo e hidroxietilo, de preferência, hidroximetilo. Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente alcoxialquilo (Ci-β) . Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente selecionado a partir de metoximetilo e metoxietilo, de preferência, metoximetilo. Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente heteroaralquilo (Ci-β) . Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente selecionado a partir de imidazolilmetilo, pirazolilmetilo, tiazolilmetilo e piridilmetilo, de preferência, imidazol-4-ilmetilo, tiazol-4-ilmetilo, 2-piridilmetilo, 3-piridilmetilo ou 4-piridilmetilo. Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente aralquilo (Ci_6) · Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente selecionado a partir de fenilmetilo (benzilo) e feniletilo, de preferência, fenilmetilo. Em certas concretizações, qualquer um de R1, R2 e R3 é independentemente carbocicloalquilo (Ci_6) · Em certas concretizações, R1 é ciclo-hexilmetilo. Em certas concretizações, R1, R2 e R3 são todos diferentes. Em certas concretizações, quaisquer dois de R1, R2 e R3 são o mesmo. Em certas concretizações, R1, R2 e R3 são todos o mesmo.
Em certas concretizações, pelo menos um de R1 e R2 é selecionado a partir de hidroxialquilo (Ci_6) e 11 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ alcoxialquilo (Ci^6) · Em certas concretizações, pelo menos um de R1 e R2 é alcoxialquilo. Em certas concretizações, pelo menos um de R1 e R2 é selecionado a partir de metoximetilo e metoxietilo.
Em certas concretizações, R3 é selecionado a partir de alquilo (Ci_6) e aralquilo (Ci_6) , de preferência, alquilo (Ci_6) . Em certas concretizações, R3 é selecionado a partir de metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo e isobutilo. Em certas concretizações, R3 é isobutilo. Em certas concretizações alternativas, R3 é selecionado a partir de fenilmetilo e feniletilo, de preferência, fenilmetilo. e R7 são hidroqénio e
Em certas concretizações, R4, R6 independentemente selecionados a partir de metilo, de preferência, hidroqénio.
Em certas concretizações, R5 é um heteroarilo de 5 ou 6 membros. Em certas concretizações, R5 é selecionado a partir de isoxazol, isotiazol, furano, tiofeno, oxazol, tiazol, pirazol ou imidazol, de preferência, isoxazol, furano ou tiazol.
Em certas concretizações, R5 é um heteroarilo biciclico. Em certas concretizações, o heteroarilo biciclico é selecionado a partir de benzisoxazol, benzoxazol, benzotiazol, benzisotiazol.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é um isoxazol-3-ilo ou isoxazol-5-ilo. Em certas concretizações preferidas, quando o isoxazol-3-ilo é substituído, ele é substituído pelo menos na posição 5. Em certas concretizações preferidas, quando o isoxazol-5-ilo é substituído, ele é substituído pelo menos na posição 3.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é um isoxazol-3-ilo não substituído.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é um isoxazol-3-ilo substituído. Em certas concretizações, R5 é isoxazol-3-ilo substituído por um substituinte selecionado a partir de alquilo (Ci_6) , alcoxi (Ci_6) , alcoxialquilo (Ci_6) , 12 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ hidroxialquilo(Ci_6), ácido carboxílico, aminocarboxilato, alquil (Ci-6) aminocarboxilato, (alquil (Ci_6) ) 2aminocarboxilato, alquil (Ci-6) carboxilato, heteroaralquilo (Ci_6) , aralquilo (Ci_6) , heterocicloalquilo (Ci_6) e carbocicloalquilo (Ci_6) · Em certas concretizações preferidas, R5 é isoxazol-3-ilo substituído por um substituinte selecionado a partir de metilo, etilo, isopropilo e ciclopropilmetilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por um heterocicloalquilo (Ci_6) contendo azoto de 4 a 6 membros. Em certas concretizações, R5 é isoxazol-3-ilo substituído por azetidinilmetilo, de preferência, azetidina-l-ilmetilo. Em certas concretizações alternativas, L é C=0, Z está ausente e R5 é um isoxazol-3- ilo H ou L 5? substituído por S em que W e 0, alquilo (Ci-6) . Em certas concretizações, NR ou CH2 W é 0. e R é
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por heteroaralquilo(Ci-β) contendo azoto de 5 membros, tal como pirazolilmetilo, imidazolilmetilo, triazol-5-ilmetilo, de preferência, 1,2,4-triazol-5-ilmetilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por alcoxi(Ci_6) ou alcoxialquilo (Ci-6) , de preferência, metoxi, etoxi, metoximetilo ou metoxietilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por hidroxialquilo(Ci-β)t de preferência, hidroximetilo ou hidroxietilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por ácido carboxílico, aminocarboxilato, alquil (Ci_6) aminocarboxilato, (alquil (Ci_ 6) ) 2aminocarboxilato ou alquil (Ci-6) carboxilato. Em certas concretizações, R5 é substituído por carboxilato de metilo ou carboxilato de etilo, de preferência, carboxilato de metilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é um isoxazol-5-ilo não substituído. 13 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é um isoxazol-5-ilo substituído. Em certas concretizações, R5 é isoxazol-5-ilo substituído por um substituinte selecionado a partir de alquilo (Ci_6) r alcoxi (Ci_6) , alcoxialquilo (Ci_6) , hidroxialquilo (Ci_6)/ ácido carboxílico, aminocarboxilato, alquil (Ci-6) aminocarboxilato, (alquil (Ci_6) ) 2aminocarboxilato, alquil (Ci-6) carboxilato, heteroaralquilo (Ci-6) , aralquilo (Ci-δ) , heterocicloalquilo (Ci_6) e carbocicloalquilo (Ci_6) . Em certas concretizações preferidas, R5 é isoxazol-3-ilo substituído por um substituinte selecionado a partir de metilo, etilo, isopropilo e ciclopropilmetilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por um heterocicloalquilo (Ci-β) contendo azoto de 4 a 6 membros. Em certas concretizações, R5 é isoxazol-5-ilo substituído por azetidinilmetilo, de preferência, azetidina-l-ilmetilo. Em certas concretizações alternativas, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo
O Λ. substituído por em que W é 0 alquilo (Ci_6) . Em certas concretizações, , NR ou CH2 e R é H ou W é 0.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-5-ilo substituído por heteroaralquilo(Ci_6) contendo azoto de 5 membros, tal como pirazolilmetilo, imidazolilmetilo, triazol-5-ilmetilo, de preferência, 1,2,4-triazol-5-ilmetilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-5-ilo substituído por alcoxi (Ci_6) ou alcoxialquilo (Ci-6) ? de preferência, metoxi, etoxi, metoximetilo ou metoxietilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-5-ilo substituído por hidroxialquilo(Ci_6), de preferência, hidroximetilo ou hidroxietilo.
Em certas concretizações, L é C=0, Z está ausente e R5 é isoxazol-3-ilo substituído por ácido carboxílico, aminocarboxilato, alquil (Ci_6) aminocarboxilato, (alquilo (Ci- 14 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 6) ) 2aminocarboxilato ou alquil (Ci_6) carboxilato . Em certas concretizações, R5 é substituído por carboxilato de metilo ou carboxilato de etilo, de preferência, carboxilato de metilo.
Em certas concretizações, um composto de fórmula I é selecionado a partir de
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24 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ É também descrito um dispositivo médico incluindo a composição aqui descrita que inclui um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I. Numa concretização, a composição é incorporada num dispositivo médico. Em certas concretizações, o dispositivo médico é um gel compreendendo uma matriz de polimero ou matriz cerâmica e um inibidor. 0 referido polimero pode ser sintético ou ocorrer naturalmente. Numa outra concretização, o referido gel serve como um depósito de fármaco, um adesivo, uma sutura, uma barreira ou um vedante. É também descrito um dispositivo médico compreendendo um substrato tendo uma superfície sobre a qual é colocado um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I. Numa concretização, o inibidor é diretamente colocado num dispositivo médico. Numa outra concretização, é assim colocado um revestimento, compreendendo o revestimento uma matriz de polimero ou matriz cerâmica com um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I dispersa ou dissolvida nele.
Numa concretização, o dispositivo médico é uma endoprótese (stent) coronária, vascular, periférica ou biliar. Mais particularmente, a endoprótese do presente invento é uma endoprótese expansível. Quando revestida com uma matriz contendo um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I, a matriz é flexível para acomodar estados comprimidos e expandidos de uma tal endoprótese expansível. Numa outra concretização deste invento, a endoprótese tem, pelo menos, uma porção que é inserível ou implantável no corpo de um doente, em que uma porção tem uma superfície que é adaptada para exposição a tecido corporal e, em que, pelo menos, parte da superfície é revestida com um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I, ou um revestimento compreendendo uma matriz tendo um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I que é disperso ou dissolvido nela. Um exemplo de uma endoprótese adequada é descrito na Pat. U.S. No. 4733665.
Numa outra concretização, o dispositivo médico descrito é um instrumento cirúrgico tal como um implante vascular, um dispositivo intraluminal, um vedante cirúrgico ou um suporte vascular. Mais particularmente, o dispositivo médico é um catéter, uma porta de acesso vascular implantável, um catéter 25 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ venoso central, um catéter arterial, um enxerto vascular, uma bomba de balão intra-aórtica, uma sutura, uma bomba de assistência ventricular, uma barreira de eluição de fármaco, um adesivo, um envólucro vascular, um suporte extra/perivascular, um filtro de sangue ou um filtro adaptado para implantação num vaso sanguíneo, revestido diretamente com um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I ou por uma matriz contendo um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I.
Em certas concretizações, o dispositivo médico intraluminal é revestido com um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I ou um revestimento compreendendo matriz biologicamente tolerada e um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I dispersa no polímero, tendo o referido dispositivo uma superfície interna e uma superfície externa, tendo o revestimento aplicado a, pelo menos, uma parte da superfície interna, da superfície externa ou de ambas.
Em certas concretizações, o dispositivo médico pode ser útil para prevenir a restenose após angioplastia. 0 dispositivo médico pode também ser útil para o tratamento de várias doenças e condições por proporcionar a administração localizada de um inibidor tendo uma estrutura de fórmula I. Tais doenças e condições incluem restenose, inflamação, artrite reumatoide, lesão dos tecidos devida a inflamação, doenças hiperproliferativas, psoríase grave ou artrítica, doenças de emaciação muscular, doenças infeciosas crónicas, resposta imune anormal, condições que envolvem placas vulneráveis, lesões relacionadas com condições isquémicas e infeção e proliferação virai. Exemplos de doenças e condições que são sujeitas a um tratamento incluindo os dispositivos médicos revestidos com o fármaco do presente invento incluem aterosclerose, síndroma coronário agudo, doença de Alzheimer, cancro, febre, insuficiência de atividade muscular (atrofia), perda de nervos, oclusões vasculares, síncope, infeção por VIH, lesão dos nervos, insuficiência renal associada a acidose e insuficiência hepática. Ver, por exemplo, Goldberg, Patente dos Estados Unidos No. 5340736. O termo "alquilo (Cx_y)" refere-se a grupos hidrocarboneto saturados, substituídos ou não substituídos, incluindo grupos alquilo de cadeia linear e grupos alquilo de cadeia 26 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ ramificada que contêm de x a y carbonos na cadeia, incluindo grupos haloalquilo tais como trifluorometilo e 2,2,2-trifluoroetilo, etc. Alquilo(C0) indica um hidroqénio em que o grupo está numa posição terminal, uma ligação se interna. Os termos "alcenilo (C2-y)" e "alcinilo (C2-y) " referem-se a grupos alifáticos insaturados, substituídos ou não substituídos, análogos em comprimento e possível substituição nos alquilos acima descritos, mas que contêm, pelo menos, uma ligação dupla ou tripla, respetivamente. 0 termo "alcoxi" refere-se a um grupo alquilo tendo um oxigénio ligado nele. Grupos alcoxi representativos incluem metoxi, etoxi, propoxi, terc-butoxi e semelhantes. Um "éter" são dois hidrocarbonetos covalentemente ligados por um oxigénio. Por conseguinte, o substituinte de um alquilo que torna aquele alquilo num éter é ou assemelha-se a um alcoxi. 0 termo "alcoxialquilo (Ci_6)" refere-se a um grupo alquilo (Ci_6) substituído por um grupo alcoxi, formando assim um éter. 0 termo "aralquilo (Ci_6) ", como aqui utilizado, refere-se a um grupo alquilo (Ci_6) substituído por um grupo arilo.
Os termos "amina" e "amino" são reconhecidos na arte e referem-se quer a aminas não substituídas quer a aminas substituídas e seus sais, por exemplo, uma porção que pode ser representada pelas fórmulas gerais:
OU
Si nas quais R9, R10 e R10' representam cada um independentemente um hidrogénio, um alquilo, um alcenilo, -(CH2)m-R8, ou R9 e R10 tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura em anel; R8 representa um arilo, um cicloalquilo, um cicloalcenilo, um heterociclilo ou um policiclilo; e m é zero ou um número inteiro de 1 a 8. Em concretizações preferidas, apenas um de R9 ou R10 pode ser um carbonilo, por exemplo, R9, R10, e o azoto, em conjunto não formam uma imida. Em 27 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ concretizações ainda mais preferidas, R9 e R10 (e opcionalmente R10') representam cada um independentemente um hidrogénio, um alquilo, um alcenilo ou -(CH2)m-R8. Em certas concretizações, o grupo amino é básico, o que significa que a forma protonada tem um pKa> 7,00.
Os termos "amida" e "amido" são reconhecidos na arte como um carbonilo substituído por um amino e incluem uma porção que pode ser representada pela fórmula geral: R® na qual R9 e R10 são como acima definidos. As concretizações preferidas da amida não incluem imidas que possam ser instáveis. O termo "arilo" como aqui utilizado inclui grupos aromáticos de anel único, substituído ou não substituído, de 5, 6 e 7 membros, nos quais cada átomo do anel é carbono. O termo "arilo" inclui também sistemas em anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes em que, pelo menos, um dos anéis é aromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. Os grupos arilo incluem benzeno, naftaleno, fenantreno, fenol, anilina e semelhantes.
Os termos "carbociclo" e "carbociclilo", como aqui utilizados, referem-se a um anel substituído ou não substituído, não aromático, no qual cada átomo do anel é carbono. Os termos "carbociclo" e "carbociclilo" incluem também sistemas em anel policíclico tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais são comuns dois ou mais carbonos a dois anéis adjacentes, em que, pelo menos, um dos anéis é carbocíclico, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. O termo "carbonilo" é reconhecido na arte e inclui porções tais como as que podem ser representadas pela fórmula 28 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ geral: ou x I „ na qual X é uma ligação ou representa um oxigénio ou um enxofre, e R11 representa um hidrogénio, um alquilo, um alcenilo, -(CH2)m-R8 ou um sal farmaceuticamente aceitável, R11 representa um hidrogénio, um alquilo, um alcenilo ou -(CH2)m-R8, em que m e R8 são como acima definido. Quando X é um oxigénio e R11 ou R11' não é hidrogénio, a fórmula representa um "éster". Quando X é um oxigénio e R11 é um hidrogénio, a fórmula representa um "ácido carboxilico".
Como aqui utilizado, "enzima" pode ser uma qualquer molécula parcial ou totalmente proteinácea que realiza uma reação química de uma forma catalítica. Tais enzimas podem ser enzimas nativas, enzimas de fusão, proenzimas, apoenzimas, enzimas desnaturadas, enzimas farnesiladas, enzimas ubiquitinadas, enzimas aciladas gordas, enzimas gerangeraniladas, enzimas ligadas a GPI, enzimas ligadas a lípido, enzimas preniladas, enzimas mutantes que ocorrem naturalmente ou artificialmente produzidas, enzimas com modificações na cadeia lateral ou estrutura, enzimas tendo sequências de comando e enzimas complexadas com material não proteináceo, tais como proteoglicanos, proteolipossomas. As enzimas podem ser preparadas por um qualquer meio, incluindo expressão natural, expressão promovida, clonagem, síntese de péptidos à base de solução e à base de sólidos e processos similares conhecidos daqueles peritos na arte. 0 termo "heteroaralquilo (Ci-6)", como aqui utilizado, refere-se a um grupo alquilo (Ci-6) substituído por um grupo heteroarilo.
Os termos "heteroarilo" incluem estruturas em anel de 5 a 7 membros aromáticas, substituídas ou não substitídas, mais preferivelmente, anéis de 5 a 6 membros, cujas estruturas em anel incluem um a quatro heteroátomos. 0 termo "heteroarilo" inclui também sistemas em anel policíclico tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais são comuns a dois anéis adjacentes 29 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ dois ou mais carbonos em que, pelo menos, um dos anéis é heteroaromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. Os qrupos heteroarilo incluem, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, isoxazol, oxazol, tiazol, triazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina e semelhantes. 0 termo "heteroátomo" como aqui utilizado siqnifica um átomo de um qualquer elemento diferente de carbono ou hidroqénio. Os heteroátomos preferidos são azoto, oxigénio, fósforo e enxofre.
Os termos "heterociclilo" ou "grupo heterocíclico" referem-se a estruturas em anel de 3 a 10 membros não aromáticas, substituídas ou não substituídas, mais preferivelmente, anéis de 3 a 7 membros, cujas estruturas em anel incluem um a quatro heteroátomos. Os termos "heterociclilo" ou "grupo heterocíclico" incluem também sistemas em anel policíclico tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais são comuns a dois anéis adjacentes dois ou mais carbonos em que, pelo menos, um dos anéis é heterocíclico, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. Os grupos heterociclilo incluem, por exemplo, tetra-hidrofurano, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, lactonas, lactamas e semelhantes. O termo "heterocicloalquilo (Ci_6)", como aqui utilizado, refere-se a um grupo alquilo (Ci-β) substituído por um grupo heterociclilo. O termo "hidroxialquilo (Ci-β) " refere-se a um grupo alquilo (Ci_6) substituído por um grupo hidroxi.
Como aqui utilizado, o termo "inibidor" pretende descrever um composto que bloqueia ou reduz a atividade de uma enzima (por exemplo, a inibição da clivagem proteolítica de substratos peptídicos fluorogénicos padrão tais como suc-LLVY-AMC, Box-LLR-AMC e Z-LLE-AMC, a inibição de várias atividades catalíticas da proteassoma 20S). Um inibidor pode 30 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ atuar por inibição competitiva, pouco competitiva ou não competitiva. Um inibidor pode-se ligar reversível ou irreversivelmente, e, por conseguinte, o termo inclui compostos que são substratos suicidas de uma enzima. Um inibidor pode modificar um ou mais sítios no ou próximo do sítio ativo da enzima ou pode causar uma alteração conformacional noutro local da enzima.
Como aqui utilizado, o termo "oralmente biodisponível" pretende descrever um composto administrado a um ratinho a 40 mg/kg ou menos, 20 mg/kg ou menos ou até mesmo a 10 mg/kg ou menos, em que uma hora após administração oral um tal composto mostra pelo menos, cerca de 50%, pelo menos cerca de 75% ou até mesmo pelo menos cerca de 90% de inibição da atividade CT-L da proteassoma no sangue.
Como aqui utilizado, o termo "péptido" inclui não só ligação amida padrão com substituintes oí padrão, mas também peptidomiméticos geralmente utilizados, outras ligações modificadas, cadeias laterais que não ocorrem naturalmente e modificações de cadeias laterais, como detalhado abaixo.
Os termos "policiclilo" ou "policíclico" referem-se a dois ou mais anéis (por exemplo, cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos) nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes, por exemplo, os anéis são "anéis fundidos". Cada um dos anéis do policiclo pode ser substituído ou não substituído. O termo "prevenção" é reconhecido na arte, e quando utilizado em relação a uma condição, tal como uma recorrência local (por exemplo, dor) , uma doença tal como cancro, um síndroma complexo tal como insuficiência cardíaca ou uma qualquer outra condição médica, é bem compreendido na arte, e inclui a administração de uma composição que reduz a frequência de, ou atrasos no início de, sintomas de uma condição médica num sujeito relativamente a um sujeito que não receba a composição. Assim, a prevenção do cancro inclui, por exemplo, a redução do número de tumores cancerígenos detetáveis numa população de doentes a receberem um tratamento profilático relativamente a uma população de 31 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ controlo não tratada e/ou o atraso no aparecimento de tumores cancerígenos detetáveis numa população tratada versus uma população de controlo não tratada, por exemplo, por uma quantidade estatística e/ou clinicamente significativa. A prevenção de uma infeção inclui, por exemplo, a redução do número de diagnósticos de infeção numa população tratada versus uma população de controlo não tratada e/ou o atraso no início dos sintomas de infeção numa população tratada versus uma população de controlo não tratada. A prevenção da dor inclui, por exemplo, a redução da magnitude de, ou alternativamente o atraso de, sensações de dor experimentadas por sujeitos numa população tratada versus uma população de controlo não tratada. 0 termo "profármaco" abrange compostos que, sob condições fisiológicas, são convertidos em agentes terapeuticamente ativos. Um processo comum para preparar um profármaco é o de incluir porções selecionadas que são hidrolisadas sob condições fisiológicas para revelar a molécula desejada. Noutras concretizações, o profármaco é convertido por atividade enzimática do animal hospedeiro. 0 termo tratamento "profilático ou terapêutico" é reconhecido na arte e inclui a administração ao hospedeiro de uma ou mais composições de objeto. Se for administrado antes da manifestação clínica da condição indesejada (por exemplo, doença ou outro estado não desejado do hospedeiro animal) então o tratamento é profilático (i.e., protege o hospedeiro contra o desenvolvimento da condição não desejada) , ao passo que se for administrado após manifestação da condição indesejada, o tratamento é terapêutico (i.e., destina-se a diminuir, melhorar ou estabilizar a condição indesejada existente ou os seus efeitos secundários). 0 termo "proteassoma" como aqui utilizado pretende incluir imuno-proteassomas e proteassomas constitutivas. 0 termo "substituído" refere-se a porções tendo substituintes que substituem um hidrogénio num ou mais carbonos da estrutura. Deve-se entender que "substituição" ou "substituído por" inclui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo 32 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ substituído e do substituinte, e que a substituição resulta num composto estável, por exemplo, que não sofre espontaneamente transformação tal como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc. Como aqui utilizado, o termo "substituído" é contemplado para incluir todos os substituintes permissíveis de compostos orgânicos. Num aspeto amplo, os substituintes permissíveis incluem substituintes de compostos orgânicos, aromáticos e não aromáticos, carbocíclicos e heterocíclicos, ramificados e não ramificados, aciclícios e cíclicos. Os substituintes permissíveis podem ser um ou mais e são o mesmo ou diferentes para compostos orgânicos adequados. Para os fins deste invento, os heteroátomos tais como azoto podem ter substituintes hidrogénio e/ou quaisquer substituintes permissíveis de compostos orgânicos aqui descritos que satisfaçam as valências dos heteroátomos. Os substituintes podem incluir, por exemplo, um halogénio, um hidroxilo, um carbonilo (tal como um carboxilo, um alcoxicarbonilo, um formilo ou um acilo), um tiocarbonilo (tal como um tioéster, um tioacetato ou um tioformato), um alcoxilo, um fosforilo, um fosfato, um fosfonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, um sulfidrilo, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, um sulfamoílo, um sulfonamido, um sulfonilo, um heterociclilo, um aralquilo ou uma porção aromática ou heteroaromática. Será entendido por aqueles peritos na arte que as porções substituídas na cadeia de hidrocarboneto podem elas mesmas ser substituídas, se adequado.
Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto no que diz respeito ao processo de tratamento de objeto, refere-se a uma quantidade do(s) composto(s) na preparação que, quando administrada como parte de um regime de administração desejado (a um mamífero, de preferência, um humano) alivia um sintoma, melhora uma condição ou atrasa o início das condições de doença de acordo com os padrões clinicamente aceitáveis para a desordem ou condição a ser tratada ou a finalidade cosmética, por exemplo, numa relação beneficio/risco aplicável a qualquer tratamento médico. 0 termo "tioéter" refere-se a um grupo alquilo, como acima definido, tendo uma porção enxofre ligada nele. Em 33 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ concretizações preferidas, ο "tioéter" é representado por -S-alquilo. Os grupos tioéter representativos incluem metiltio, etiltio e semelhantes.
Como aqui utilizado, o termo "tratar" ou "tratamento" inclui a reversão, redução ou paragem dos sintomas, sinais clínicos e patologia subjacente de uma condição de forma a melhorar ou estabilizar uma condição objeto.
Seletividade para proteassoma 20S
Os inibidores enzimáticos aqui descritos são úteis, em parte, porque inibem a ação da proteassoma 20S. Adicionalmente, e contrariamente a outros inibidores da proteassoma 20S, os compostos aqui descritos são altamente seletivos para a proteassoma 20S, relativamente a outras enzimas protease. Isto é, os presentes compostos mostram seletividade para a proteassoma 20S sobre outras proteases tais como catepsinas, calpaínas, papaína, quimotripsina, tripsina, tripeptidil-peptidase II. As seletividades dos inibidores enzimáticos para a proteassoma 20S são tais que a concentrações inferiores a cerca de 50 ΠΜ, os inibidore: enzimáticos mostram inibição da atividade catalítica da proteassoma 20S, embora não mostrem inibição da atividade catalítica de outras proteases tais como catepsinas, calpaínas, papaína, quimotripsina, tripsina, tripeptidil-peptidase II. Em concretizações preferidas, os inibidores enzimáticos mostram inibição da atividade catalítica da proteassoma 20S a concentrações inferiores a cerca de 10 DM, embora não mostrem inibição da atividade catalítica de outras proteases a estas concentrações. Em concretizações ainda mais preferidas, os inibidores enzimáticos mostram inibição da atividade catalítica da proteassoma 20S a concentrações inferiores a cerca de 1 DM, embora ão mostrem inibição da atividade catalítica de outras proteases a estas concentrações. Os testes cinéticos em enzimas são descritos no pedido de patente U.S. série número 09/569748, Exemplo 2 e em Stein et al., Biochem. (1996), 35, 3899-3908.
Seletividade para Atividade Semelhante a Quimotripsina
Concretizações particulares dos compostos que inibem enzimas aqui descritos são adicionalmente úteis porque eles 34 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ podem inibir eficaz e seletivamente a atividade semelhante a quimotripsina da proteassoma 20S, quando comparada com as atividades semelhantes a tripsina e as atividades de PGPH. A atividade semelhante a quimotripsina da proteassoma 20S é caracterizada por clivaqem de péptidos na vizinhança imediata de resíduos hidrofóbicos grandes. Em particular, a atividade semelhante a quimotripsina de hidrolases Ntn pode ser determinada por clivagem de um substrato padrão. São conhecidos na arte, exemplos de tais substratos. Por exemplo, pode-se utilizar um derivado leucilvaliniltirosina. Os testes cinéticos em enzimas são descritos no pedido de patente U.S. série número 09/569748, Exemplo 2 e em Stein et al., Biochem. (1996), 35, 3899-3908.
Utilizações dos Inibidores Enzimáticos
As consequências biológicas da inibição das proteassomas são numerosas. A inibição das proteassomas tem sido sugerida como uma prevenção e/ou tratamento de diversas doenças incluindo, mas não limitadas a, doenças proliferativas, doenças neurotóxicas/degenerativas, doença de Alzheimer, condições isquémicas, inflamação, doenças relacionadas com o sistema imunitário, VIH, cancros, rejeição de enxertos de orgãos, choque séptico, inibição da apresentação de antigénio, diminuição da expressão genética virai, infeções parasitárias, condições associadas a acidose, degeneração macular, condições pulmonares, doenças de emaciação muscular, doenças fibróticas, doenças de crescimento dos ossos e cabelos. Por conseguinte, as composições de inibidores da proteassoma, tais como a classe de moléculas epoxicetona peptídicas oralmente biodisponíveis aqui descritas, proporcionam um meio de tratamento de doentes com estas condições.
As composições de inibidores da proteassoma podem ser utilizadas para tratar condições diretamente mediadas pela função proteolítica da proteassoma tais como emaciação muscular ou indiretamente mediadas através de proteínas que são processadas pela proteassoma tais como NF-κΒ. A proteassoma participa na eliminação rápida e no processamento pós-traducional de proteínas (por exemplo, enzimas) envolvidas na regulação celular (por exemplo, ciclo celular, 35 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ transcrição genética e vias metabólicas), comunicação intercelular e resposta imune (por exemplo, apresentação de antigénio). Exemplos específicos discutidos abaixo incluem proteína β-amiloide e proteínas reguladoras tais como ciclinas e fator de transcrição de NF-kB.
Ao nível celular, tem sido descrita a acumulação de proteínas poliubiquitinadas, alterações morfológicas das células e apoptose após tratamento de células com vários inibidores da proteassoma. A proteassoma degrada muitas proteínas em reticulócitos em maturação e fibroblastos em crescimento. Em células privadas de insulina ou soro, a velocidade de proteólise quase duplica. A inibição da proteassoma reduz a proteólise, reduzindo assim quer a perda de proteína muscular quer a carga azotada nos rins ou fígado. Os compostos do invento podem ser utilizados no tratamento da caquexia e de doenças de emaciação muscular. Os compostos do invento podem ser úteis no tratamento de condições tais como cancro, doenças infecciosas crónicas, febre, insuficiência da atividade muscular (atrofia) e perda de nervos, lesão dos nervos, jejum, insuficiência renal associada a acidose e insuficiência hepática. Ver, por exemplo, Goldberg, Patente U.S. No. 5340736. Por conseguinte, certas concretizações do invento abrangem composições para: redução da velocidade de degradação da proteína muscular numa célula; redução da velocidade de degradação das proteínas intracelulares; redução da velocidade de degradação da proteína p53 numa célula; e inibição do crescimento de cancros relacionados com a p53. Cada um destes processos inclui o contacto de uma célula {in vivo ou in vitro, por exemplo, um músculo num sujeito) com uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo um inibidor da proteassoma aqui descrito. A proteólise intracelular gera péptidos pequenos para apresentação a linfócitos T, que induzem respostas imunes mediadas por MHC de classe I. O sistema imunitário analisa as células autólogas que são viralmente infetadas ou sofreram transformação oncogénica. Em certas concretizações, os compostos do invento podem ser utilizados num processo para inibição da apresentação de antigénio numa célula, compreendendo a exposição da célula a um composto aqui 36 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ descrito. Os inibidores da proteassoma do invento podem ser utilizados para tratar condições relacionadas com o sistema imunitário tais como alergia, asma, rejeição de órgãos/tecidos (doença do enxerto-versus-hospedeiro) e doenças autoimunes, incluindo lúpus, artrite reumatoide, psoriase, esclerose múltipla e doenças inflamatórias do intestino (tais como colite ulcerosa e doença de Crohn). Assim, em certas concretizações, os compostos do invento podem ser utilizados num processo para supressão do sistema imunitário de um sujeito compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um composto inibidor da proteassoma aqui descrito.
Em certas concretizações, os compostos do invento podem também ser utilizados num processo para alterar o reportório de péptidos antigénicos produzidos pela proteassoma ou outra Ntn com atividade multicatalítica. Por exemplo, se a atividade PGPH da proteassoma 20S for seletivamente inibida, será produzido pela proteassoma um conjunto diferente de péptidos antigénicos e apresentado nas moléculas MHC na superfície das células diferente do que seria produzido e apresentado ou sem qualquer inibição enzimática ou com, por exemplo, inibição seletiva da atividade semelhante a quimotripsina da proteassoma.
Um outro aspeto do invento refere-se às composições de inibidores da proteassoma aqui descritas para utilização em processos de tratamento de doenças e condições neurodegenerativas, incluindo, síncope, lesão isquémica do sistema nervoso, trauma neural (por exemplo, lesão cerebral percussiva, lesão da espinal-medula e lesão traumática do sistema nervoso), esclerose múltipla e outras neuropatias imuno-mediadas (por exemplo, síndroma de Guillain-Barre e suas variantes, neuropatia axonal motora aguda, polineuropatia desmielinizante inflamatória aguda e Síndroma de Fisher), complexo de demência VIH/SIDA, axonomia, neuropatia diabética, doença de Parkinson, doença de Huntington, esclerose múltipla, meningite bacteriana, parasitária, fúngica e virai, encefalite, demência vascular, demência multi-infarto, demência de corpos de Lewy, demência do lobo frontal tal como doença de Pick, demências subcorticais (tais como paralesia de Huntington ou paralesia 37 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ supranuclear progressiva), síndromas de atrofia cortical focal (tais como afasia primária), demências tóxicas metabólicas (tais como hipotiroidismo crónico ou deficiência em BI2) e demências causadas por infeções (tais como sifilis ou meningite crónica). A doença de Alzheimer é caracterizada por depósitos extracelulares de proteína β-amiloide (β-ΑΡ) em placas e vasos cerebrais senis. A β-ΑΡ é um fragmento peptídico de 39 a 42 aminoácidos derivado de um precursor de proteína amiloide (APP). Conhecem-se, pelo menos, três isoformas de APP (695, 751 e 770 aminoácidos) . A ligação alternativa do ARNm produz as isoformas; o processamento normal afeta uma porção da sequência β-ΑΡ, prevenindo assim a produção de β-ΑΡ. Pensa-se que o processamento de proteína anormal pela proteassoma contribui para a abundância de β-ΑΡ no cérebro com Alzheimer. A enzima que processa APP em ratos contém cerca de dez subunidades diferentes (22 kDa-32 kDa). A subunidade de 25 kDa tem uma sequência N-terminal de X-Gln-Asn-Pro-Met-X-Thr-Gly-Thr-Ser, que é idêntica à subunidade β da macropaína humana (Kojima, S. et al., Fed. Eur. Biochem. Soe., (1992) 304:57-60). A enzima que processa APP cliva a ligação Gln15--Lys16; na presença de ião cálcio, a enzima cliva também a ligação Met1—Asp1 e as ligações Asp1—Ala2 para libertar o domínio extracelular de β-ΑΡ.
Por conseguinte, um aspeto do invento refere-se a compostos do invento para utilização num processo de tratamento da doença de Alzheimer, compreendendo o processo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de uma composição de inibidores da proteassoma aqui descrita. Um tal tratamento inclui a redução da velocidade de processamento de β-ΑΡ, a redução da velocidade de formação de placas β-ΑΡ, a redução da velocidade de produção de β-ΑΡ e a redução de sinais clínicos de doença de Alzheimer. A fibrose é a formação excessiva e persistente de tecido cicatrizado que resulta do crescimento hiperproliferativo de fibroblastos e está associada à ativação da via de sinalização do TGF-β. A fibrose envolve a deposição extensa de matriz extracelular e pode ocorrer virtualmente em qualquer tecido ou ao longo de vários tecidos diferentes. 38 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Normalmente, ο nível de proteína de sinalização intracelular (Smad) que ativa a transcrição de genes alvo após estimulação por TGF-β é regulado pela atividade da proteassoma (Xu et al.r 2000). No entanto, a degradação acelerada dos componentes de sinalização de TGF-β tem sido observada em cancros e noutras condições hiperproliferativas. Assim, em certas concretizações, o invento refere-se a compostos do invento para utilização no tratamento de condições hiperproliferativas tais como retinopatia diabética, degeneração macular, nefropatia diabética, glomerulosclerose, nefropatia por IgA, cirrose, atresia biliar, insuficiência cardíaca congestiva, escleroderma, fibrose induzida por radiação e fibrose pulmonar (fibrose pulmonar idiopática, doença vascular do colagénio, sarcoidose, doenças intersticiais dos pulmões e desordens extrínsecas dos pulmões). O tratamento de vítimas de queimaduras é frequentemente dificultado por fibrose, assim, em certas concretizações, o invento refere-se à administração cutânea ou sistémica dos inibidores para tratar queimaduras. O fecho das feridas após cirurgia está frequentemente associado a cicatrizes desfigurantes, que podem ser evitadas por inibição da fibrose. Assim, em certas concretizações, o invento refere-se a compostos do invento para utilização num processo para a prevenção ou redução das cicatrizes.
Certos inibidores da proteassoma bloqueiam quer a degradação quer o processamento de NF-κΒ ubiquitinada in vitro e in vivo. Os inibidores da proteassoma bloqueiam também a degradação de IkB-A e a ativação de NF-kB (Palombella et al., Cell (1994) 78:773-785; e Traenckner et al.r EMBO J. (1994) 13:5433-5441). É aqui descrito um processo para inibir a degradação de IkB-A, compreendendo o contacto da célula com um composto aqui descrito. Em certas concretizações, é descrito um processo para reduzir o conteúdo celular de NF-κΒ numa célula, músculo, órgão ou sujeito, compreendendo o contacto da célula, músculo, órgão ou sujeito com um composto inibidor da proteassoma aqui descrito. A NF-κΒ é um membro da família de proteínas Rei. A família Rei de proteínas ativadoras da transcrição pode ser dividida em dois grupos. O primeiro grupo requer 39 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ processamento proteolítico e inclui p50 (NF-kB1, 105 kDa) e p52 (NF-k2, 100 kDa). O segundo grupo não requer processamento proteolítico e inclui p65 (RelA, Rei (c-Rel) e RelB). Podem ser formados, por membros da familia Rei, homo e heterodimeros; NF-κΒ, por exemplo, é um heterodímero de p50-p65. Após fosforilação e ubiquitinação de IkB e pl05, as duas proteínas são degradadas e processadas, respetivamente, para produzir NF-κΒ ativa que se transloca do citoplasma para o núcleo. O pl05 ubiquitinado é também processado por proteassomas purificadas (Palombella et al., Cell (1994) 78:773-785). A NF-κΒ ativa forma um complexo intensificador estereospecifico com outros ativadores transcricionais e, por exemplo, HMG I(Y), que induz a expressão seletiva de um gene particular. A NF-κΒ regula genes envolvidos na resposta immune e inflamatória e acontecimentos mitóticos. Por exemplo, a NF-κΒ é necessária para a expressão do gene κ da cadeia leve de imunoglobulina, o gene da cadeia α do recetor IL-2, o gene do complexo de histocompatibilidade principal de classe I e um certo número de genes citocina que codificam, por exemplo, IL-2, IL-6, fator de estimulação de colónias de granulócitos e IFN-β (Palombella et al., Cell (1994) 78:773-785). São também descritos processos que afetam o nivel de expressão de IL-2, MHC-I, IL-6, TNFa, IFN-β ou qualquer uma das outras proteínas previamente mencionadas, compreendendo cada processo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita. Os complexos que incluem p50 são mediadores rápidos de respostas inflamatórias agudas e imunes (Thanos, D. e Maniatis, T., Cell (1995) 80:529-532). A superprodução de citocinas induzidas por lipopolissacáridos (LPS) tais como TNFa é considerada central nos processos associados a choque séptico. Além disso, é geralmente aceite que o primeiro passo na ativação de células por LPS seja a ligação de LPS a recetores de membrana específicos. As subunidades α e β do complexo de proteassoma 20S foram identificadas como proteínas de ligação a LPS, o que sugere que a transdução de sinal induzido por LPS pode ser um alvo terapêutico importante no tratamento ou prevenção da sépsis (Qureshi, N. et al., J. Immun. (2003) 171: 1515- 40 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 1525). Por conseguinte, em certas concretizações, as composições de inibidores da proteassoma podem ser utilizadas para a inibição do TNFa para prevenir e/ou tratar o choque sético. A NF-κΒ participa também na expressão dos genes de adesão a células que codificam E-selectina, P-selectina, ICAM e VCAM-1 (Collins, T., Lab. Invest. (1993) 68:499-508). É também descrito um processo para inibição da adesão de células (por exemplo, adesão de células mediada por E-selectina, P-selectina, ICAM ou VCAM-1), que compreende o contacto de uma célula com (ou administração a um sujeito de) uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo um inibidor da proteassoma aqui descrito. A NF-κΒ liga-se também especificamente ao intensificador/promotor de VIH. Quando comparada com a Nef de mac239, a proteína reguladora de VIH Nef de pbj 14 difere em dois aminoácidos na região que controla a ligação da proteína-quinase. Pensa-se que a proteína-quinase sinaliza a fosforilação de ikB, desencadeando a degradação de IkB através da via ubiquitina-proteassoma. Após degradação, a NF-kB é libertada no núcleo, intensificando assim a transcrição do VIH (Cohen, J., Science (1995) 267:960). Em certas concretizações, o invento refere-se a compostos para utilização num processo para inibir ou reduzir a infeção por VIH num sujeito ou a um processo para diminuir o nivel de expressão genética virai, compreendendo cada processo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita.
As infeções virais contribuem para a patologia de muitas doenças. As condições cardíacas tais como a miocardite emcurso e a cardiomiopatia dilatada têm estado ligadas ao vírus Coxsackie B3. Numa análise comparativa de microarranjos de genoma completo de corações de ratinhos infetados, as subunidades de proteassomas específicas foram uniformemente aumentadas em corações de ratinhos que desenvolveram miocardite crónica (Szalay et ai., Am J Pathol 168:1542-52, 2006). Alguns vírus utilizam o sistema ubiquitina-proteassoma no passo de entrada virai quando o vírus é libertado do endosoma para o citosol. O vírus da hepatite de ratinho (MHV) 41 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ pertence à família Coronaviridae, que também inclui o coronavírus de síndroma respiratório agudo grave (SARS). Yu e Lai (J Virol 79:644-648, 2005) demonstraram que o tratamento de células infetadas por MHV com inibidor da proteassoma resultou numa diminuição das replicações virais, o que se correlaciona com o título virai reduzido quando comparado ao de células não tratadas. O vírus da hepatite B humana (HBV), um membro da família de vírus Hepadnaviridae, requer similarmente proteínas de envelope viralmente codificadas para propagar. A inibição da via de degradação da proteassoma causa uma redução significativa na quantidade de proteínas de envelope segregadas (Simsek et ai., J Virol 79:12914-12920, 2005). Adicionalmente ao HBV, outros vírus da hepatite (A, C, D e E) podem também utilizar a via de degradação de ubiquitina-proteassoma para secreção, morfogénese e patogénese. Por conseguinte, em certas concretizações, o invento refere-se a compostos para utilização num processo de tratamento da infeção virai, tal como SARS ou hepatite A, B, C, D e E, compreendendo o contacto de uma célula com (ou administração a um sujeito de) uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito. A lesão por isquémia e reperfusão resulta em hipóxia, uma condição na qual há uma deficiência em oxigénio que alcança os tecidos do corpo. Esta condição causa degradação aumentada de Ικ-Βα, resultando assim na ativação de NF-kB (Koong et al., 1994) . Foi demonstrado que a gravidade da lesão que resulta em hipóxia pode ser reduzida com a administração de um inibidor da proteassoma (Gao et al., 2000; Bao et al., 2001; Pye et al., 2003) . Por conseguinte, certas concretizações do invento referem-se a compostos para utilização num processo de tratamento de uma condição isquémica ou lesão por reperfusão compreendendo a administração a um sujeito em necessidade de um tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto inibidor da proteassoma aqui descrito. Exemplos de tais condições ou lesões incluem o síndroma coronário agudo (placas vulneráveis), doença oclusiva arterial (oclusões cardíacas, cerebrais, arteriais periféricas e vasculares), aterosclerose (esclerose coronária, doença das artérias coronárias), infarto, insuficiência cardíaca, pancreatite, hipertrofia do miocárdio, estenose e restenose. 42 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Outros fatores de transcrição eucariótica que requerem processamento proteolítico incluem o fator de transcrição geral TFIIA, proteína acessória do vírus da herpes simples VP16 (fator de célula hospedeira), proteína de fator 2 regulador de IFN induzível por vírus e a proteína 1 de ligação a elemento regulador de esterol ligado a membrana. São também descritos processos que afetam os ciclos celulares eucarióticos dependentes de ciclina, compreendendo a exposição de uma célula (in vitro ou in vivo) a uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita. As ciclinas são proteínas envolvidas no controlo do ciclo celular. A proteassoma participa na degradação de ciclinas. Exemplos de ciclinas incluem ciclinas mitóticas, ciclinas G1 e ciclina B. A degradação das ciclinas permite a uma célula sair de uma fase de ciclo celular (por exemplo, mitose) e entrar numa outra (por exemplo, divisão). Pensa-se que todas as ciclinas estão associadas a proteína-quinase p34cdc2 ou quinases relacionadas. 0 sinal alvo de proteólise está localizado nos aminoácidos 42-RAALGNISEN-50 (caixa de destruição). Há evidência de que a ciclina é convertida numa forma vulnerável a uma ubiquitina-ligase ou que uma ligase específica de ciclina é ativada durante a mitose (Ciechanover, A., Cell (1994) 79:13-21). A inibição da proteassoma inibe a degradação da ciclina e, por conseguinte, inibe a proliferação de células, por exemplo, em cancros relacionados com ciclina (Kumatori et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1990) 87:7071-7075). Um aspeto do invento refere-se a compostos para utilização num processo para tratamento de uma doença proliferativa num sujeito (por exemplo, cancro, psoríase ou restenose), compreendendo o processo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita. O invento refere-se também a compostos para utilização num processo para tratamento de uma inflamação relacionada com ciclina num sujeito, compreendendo o processo a administração a um sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita.
Concretizações adicionais do invento referem-se a compostos para utilização em processos que afetam a regulação 43 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ dependente de proteassoma de oncoproteínas e processos de tratamento ou inibição do crescimento do cancro, compreendendo cada processo a exposição de uma célula {in vivo, por exemplo, num sujeito, ou in vitro) a uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita. As proteínas E6 derivadas de HPV-16 e HPV-18 estimulam a conjugação e a degradação dependente de ATP e ubiquitina de p53 em lisados de reticulócitos em bruto. 0 oncogene recessivo p53 tem mostrado acumular a uma temperatura não permissiva numa linha de células com um EI termolábil mutado. Níveis elevados de p53 podem conduzir a apoptose. Exemplos de proto-oncoproteínas degradadas pelo sistema ubiquitina incluem c-Mos, c-Fos e c-Jun. Em certas concretizações, o invento refere-se a compostos para utilização num processo para tratamento da apoptose relacionada com p53, compreendendo o processo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de uma composição de inibidor da proteassoma aqui descrita.
Em certas concretizações, as composições descritas podem ser úteis no tratamento de uma infeção parasitária, tal como infeções causadas por protozoários parasitas. A proteassoma destes parasitas é considerada estar envolvida principalmente nas atividades de diferenciação e replicação celulares (Paugam et al., Trends Parasitol. 2003, 19(2): 55-59). Além disso, as espécies de entamoeba têm mostrado perder a capacidade de enquistação quando expostas aos inibidores da proteassoma (Gonzales, et al., Arch. Med. Res. 1997, 28, Spec No: 139-140). Em certas concretizações, os protocolos administrativos para as composições de inibidor da proteassoma são úteis no tratamento de infeções parasitárias em humanos causadas por protozoários parasitas selecionados a partir de Plasmodium sps. (incluindo P. falciparum, P. vivax, P. malariae e P. ovale, que causam malária), Trypanosoma sps. (incluindo T. cruzi, que causa a doença das Chagas e T. brucei que causa a doença do sono Africano), Leishmania sps. (incluindo L. amazonesis, L. donovani, L. infantum, L. mexicana, etc.), Pneumocystis carinii (um protozoário conhecido por causar pneumonia em doentes com SIDA e outros imunodeprimidos), Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Entamoeba invadens e Giardia lamblia. Em certas concretizações, as composições de inibidor da proteassoma são 44 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ úteis no tratamento de infeções parasitárias em animais e gado causadas por um protozoário parasita selecionado a partir de Plasmodium hermani, Cryptosporidium sps., Echinococcus granulosus, Eimeria tenella, Sarcocystis neurona e Neurospora crassa. Outros compostos úteis como inibidores da proteassoma no tratamento das doenças parasitárias são descritos na WO 98/10779.
Em certas concretizações, as composições de inibidor da proteassoma inibem a atividade da proteassoma num parasita, sem recuperação nos eritrócitos e leucócitos. Em certas concretizações, a semivida longa das células sanguíneas pode proporcionar proteção prolongada relativamente à terapêutica contra exposições recorrentes a parasitas. Em certas concretizações, as composições de inibidor da proteassoma podem proporcionar proteção prolongada relativamente à quimioprofilaxia contra a infeção futura.
Tem também sido demonstrado que os inibidores que se ligam à proteassoma 20S estimulam a formação de osso em culturas de orgãos de osso. Além disso, quando tais inibidores foram sistemicamente administrados a ratinhos, certos inibidores da proteassoma aumentaram o volume do osso e as velocidades de formação de osso em cerca de 70% (Garrett, I. R. et al., J. Clin. Invest. (2003) 111: 1771-1782), sugerindo, por conseguinte que a maquinaria ubiquitina-proteassoma regula a diferenciação dos osteoblastos e a formação de osso. Por conseguinte, as composições de inibidor da proteassoma descritas podem ser úteis no tratamento e/ou prevenção de doenças associadas à perda de osso, tal como osteoporose. A inibição da proteassoma foi já validada como uma estratégia terapêutica para o tratamento do cancro, particularmente mieloma múltiplo. No entanto, com base quer em modelos in vitro quer em modelos in vivo, pode-se prever que podia servir como uma estratégia contra outros cancros, particularmente neoplasias relacionadas com heme e tumores sólidos. Por conseguinte, certas concretizações do invento referem-se a um processo de tratamento de cancros compreendendo a administração a um sujeito em necessidade de um tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto inibidor da proteassoma aqui descrito. 45 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Administração
Os compostos preparados como aqui descrito podem ser administrados em várias formas, dependendo da desordem a ser tratada e da idade, condição e peso corporal do doente, como é bem conhecido na arte. Por exemplo, quando os compostos se destinam a ser administrados oralmente, eles podem ser formulados como comprimidos, cápsulas, grânulos, pós ou xaropes; ou para administração parentérica, eles podem ser formulados em injeções (intravenosa, intramuscular ou subcutânea), preparações para perfusão em gota ou supositórios. Para aplicação pela via da membrana mucosa oftálmica, eles podem ser formulados como gotas oculares ou pomadas oculares. Estas formulações podem ser preparadas por meios convencionais e, se desejado, o ingrediente ativo pode ser misturado com um qualquer aditivo ou excipiente convencional, tal como um ligante, um agente desintegrante, um lubrificante, um agente corretivo, um agente solubilizante, um auxiliar de suspensão, um agente emulsionante, um agente de revestimento, uma ciclodextrina e/ou um tampão. Embora a dose vá variar dependendo dos sintomas, idade e peso corporal do doente, da natureza e gravidade da desordem a ser tratada ou prevenida, da via de administração e da forma do fármaco, em geral, é recomendada para um doente humano adulto uma dose diária de 0,01 a 2000 mg do composto, podendo esta ser administrada numa única dose ou em doses divididas. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um material de veiculo para produzir uma única forma de administração vai geralmente ser aquela quantidade do composto que produz um efeito terapêutico. 0 tempo de administração e/ou a quantidade da composição exatos que vão dar os resultados mais eficazes em termos de eficácia de tratamento num dado doente vão depender da atividade, farmacocinética e biodisponibilidade de um composto particular, condição fisiológica do doente (incluindo idade, sexo, tipo e fase da doença, condição física geral, resposta a uma dada dose e tipo de medicação) , via de administração, etc. No entanto, as orientações acima podem ser utilizadas como a base para ajustar o tratamento, por exemplo, determinar o tempo e/ou quantidade de administração ótimos, que vão necessitar de não mais do que 46 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ uma experimentação de rotina que consiste na monitorização do sujeito e ajuste da dose e/ou tempo. A frase "farmaceuticamente aceitável" é aqui utilizada para referir aqueles ligandos, materiais, composições e/ou formas de administração que são, no âmbito da apreciação médica válida, adequados para utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e animais sem a toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outros problemas ou complicações, excessivos, proporcionais a uma relação beneficio/risco razoável. A frase "veiculo farmaceuticamente aceitável" como aqui utilizada significa um material, composição ou veiculo, farmaceuticamente aceitável, tal como um enchimento, diluente, excipiente, solvente ou material de encapsulação, liquido ou sólido. Cada veiculo deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não ser prejudiciais para o doente. Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) açúcares, tais como lactose, glucose e sacarose; (2) amidos, tais como amido de milho, amido de batata e β-ciclodextrinas substituídas ou não substituídas; (3) celulose e seus derivados, tais como carboximetilcelulose sódica, etilcelulose e acetato de celulose; (4) tragacanta em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras para supositórios; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafroa, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de rebento soja; (10) glicóis, tais como propilenoglicol; (11) polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; (12) ésteres, tais como oleato de etilo e laurato de etilo; (13) ágar; (14) agentes tamponantes, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água isenta de pirogénios; (17) solução salina isotónica; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções tampão de fosfato; e (21) outras substâncias compatíveis não tóxicas utilizadas em formulações farmacêuticas. Em certas concretizações, as composições farmacêuticas do presente invento são não pirogénicas, i.e., não induzem subidas de temperatura significativas quando administradas a um doente. 47 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ Ο termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais de adição de ácido inorgânico e orgânico, relativamente não tóxicos, do(s) inibidor(es). Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais do(s) inibidor(es) ou, em separado, por reação de um(uns) inibidor(es) purificado(s) na sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e isolamento do sal assim formado. Sais representativos incluem sais de bromidrato, cloridrato, sulfato, bissulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartarato, naftilato, mesilato, gluco-heptonato, lactobionato, laurilsulfonato e sais de aminoácidos e semelhantes. (Ver, por exemplo, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sei. 66: 1-19.)
Noutros casos, os inibidores úteis nos métodos do presente invento podem conter um ou mais grupos funcionais acidicos e, assim, serem capazes de formar sais farmaceuticamente aceitáveis com bases farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" nestes casos refere-se aos sais de adição de base inorgânica e orgânica, relativamente não tóxicos, de um(uns) inibidor(es). Estes sais podem ser similarmente preparados in situ durante o isolamento e purificação finais do(s) inibidor(es) ou, em separado, por reação do(s) inibidor(es) na sua forma de ácido livre com uma base adequada, tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um catião metálico farmaceuticamente aceitável, com amónia, ou com uma amina primária, secundária ou terciária orgânica, farmaceuticamente aceitável. Os sais de alcáli ou alcalinoterrosos representativos incluem sais de litio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio e semelhantes. As aminas orgânicas representativas úteis na formação de sais de adição de base incluem etilamina, dietilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina e semelhantes (ver, por exemplo, Berge et al., supra) .
Podem também estar presentes nas composições agentes humectantes, emulsionantes e lubrificantes, tais como laurilsulfato de sódio e estearato de magnésio, assim como 48 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ agentes corantes, agentes de libertação, agentes de revestimento, edulcorantes, aromatizantes e agentes perfumantes, conservantes e antioxidantes.
Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteina, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e semelhantes; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galhato de propilo, alfa-tocoferol e semelhantes; e (3) agentes quelantes metálicos, tais como ácido citrico, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) , sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e semelhantes.
As formulações adequadas para administração oral podem estar na forma de cápsulas, hóstias, pílulas, comprimidos, trociscos (utilizando uma base aromatizada, normalmente sacarose e acácia ou tragacanta), pós, grânulos ou como uma solução ou uma suspensão num liquido aquoso ou não aquoso, ou como uma emulsão óleo-em-água ou água-em-óleo, ou como um elixir ou xarope, ou como pastilhas (utilizando uma matriz inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia) e/ou como colutório e semelhantes, contendo cada uma quantidade pré-determinada de um(uns) inibidor(es) como um ingrediente ativo. Uma composição pode também ser administrada como um bólus, electuário ou pasta.
Nas formas de administração sólida para administração oral (cápsulas, comprimidos, pílulas, drageias, pós, grânulos e semelhantes), o ingrediente ativo é misturado com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou qualquer um dos seguintes: (1) enchimentos ou diluentes, tais como amidos, ciclodextrinas, lactose, sacarose, glucose, manitol e/ou ácido silícico; (2) ligantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e/ou acácia; (3) humectantes, tais como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos e carbonato de sódio; (5) agentes retardadores de solução, tais como parafina; (6) 49 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ aceleradores de absorção, tais como compostos de amónio quaternário; (7) agentes humectantes, tais como, por exemplo, álcool acetílico e monostearato de glicerol; (8) absorventes, tais como caulino e argila de bentonite; (9) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio e suas misturas; e (10) agentes corantes. No caso das cápsulas, comprimidos e pílulas, as composições farmacêuticas podem também compreender agentes tamponantes. As composições sólidas de um tipo similar podem também ser utilizadas como enchimentos em cápsulas de geletina mole e dura utilizando excipientes tais como lactose ou açúcares do leite, assim como polietilenoglicóis de elevado peso molecular e semelhantes.
Um comprimido pode ser preparado por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos, comprimidos, podem ser preparados utilizando um agente ligante (por exemplo, gelatina ou hidroxipropilmetilcelulose), lubrificante, diluente inerte, conservante, desintegrante (por exemplo, amidoglicolato de sódio ou carboximetilcelulose sódica reticulada), tensioativo ou dispersante. Os comprimidos moldados podem ser preparados por moldagem numa máquina adequada de uma mistura do(s) inibidor(es) em pó humedecidos com um diluente liquido inerte.
Os comprimidos e outras formas farmacêuticas sólidas, tais como drageias, cápsulas, pílulas e grânulos, podem ser opcionalmente marcados ou preparados com revestimentos e invólucros, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na arte de formulação farmacêutica. Eles podem também ser formulados de modo a proporcionar a libertação lenta ou controlada do ingrediente ativo contido nele utilizando, por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose em várias proporções para proporcionar o perfil de libertação desejado, outras matrizes de polímero, lipossomas e/ou microsferas. Eles podem ser esterilizados, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção de bactérias ou por incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas em água estéril ou num 50 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ outro meio injetável estéril imediatamente antes da utilização. Estas composições podem também conter opcionalmente agentes opacificantes e podem ser de uma composição que possa libertar o(s) ingrediente(s) ativo(s) isolado(s), apenas, ou de preferência, numa certa porção do trato gastrointestinal, opcionalmente, de uma forma prolongada. Exemplos de composições de inclusão que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras. O ingrediente ativo pode também estar na forma micro-encapsulada, se adequado, com um ou mais dos excipientes acima descritos.
As formas de administração liquidas para administração oral incluem emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Adicionalmente ao ingrediente ativo, as formas de administração liquidas podem conter diluentes inertes geralmente utilizados na arte, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsionantes tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, óleos (em particular, óleo de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeite, rícino e sésamo), glicerol, álcool tetra-hidrofurilico, polietilenoglicóis e ésteres de ácidos gordos de sorbitano e suas misturas. as composições orais tais como agentes e de suspensão, perfumantes e agentes
Para além dos diluentes inertes, podem também incluir adjuvantes humectantes, agentes emulsionantes edulcorantes, aromatizantes, corantes, conservantes.
As suspensões, adicionalmente ao(s) inibidor(es) ativo(s), podem conter agentes de suspensão como, por exemplo, álcoois isostearílicos etoxilados, polioxietileno-sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonite, ágar-ágar e tragacanta e suas misturas.
As formulações para administraçao retal ou vaginal podem ser apresentadas como um supositório, que pode ser preparado 51 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ por mistura de um ou mais inibidor(es) com um ou mais excipientes ou veículos não irritantes adequados compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau, polietilenoglicol, cera de supositórios ou um salicilato, que é sólido à temperatura ambiente, mas líquido à temperatura corporal e, por conseguinte, vai derreter na cavidade do reto ou vaginal e libertar o agente ativo.
As formulações que são adequadas para administração vaginal incluem também pessários, tampões, cremes, geles, pastas, espumas ou formulações em pulverizador contendo veículos tais como aqueles conhecidos na arte como adequados.
As formas de administração para administração cutânea ou transdérmica de um(uns) inibidor(es) incluem pós, pulverizadores, pomadas, pastas, cremes, loções, geles, soluções, adesivos e inaladores. 0 componente ativo pode ser misturado sob condições estéreis com um veiculo farmaceuticamente aceitável e com um qualquer conservante, tampão ou propulsor que possa ser necessário.
As pomadas, pastas, cremes e geles podem conter, adicionalmente ao(s) inibidor(es) , excipientes, tais como gorduras animais e vegetais, óleos, ceras, parafinas, amido, tragacanta, derivados de celulose, polietilenoglicóis, silicones, bentonites, ácido silícico, talco e óxido de zinco ou suas misturas.
Os pós e pulverizadores podem conter, adicionalmente a um(uns) inibidor(es), excipientes tais como lactose, talco, ácido silícico, hidróxido de alumínio, silicatos de cálcio e pó de poliamida ou misturas destas substâncias. Os pulverizadores podem conter adicionalmente propulsores usuais, tais como clorofluoro-hidrocarbonetos e hidrocarbonetos não substituídos voláteis, tais como butano e propano. 0(s) inibidor(es) pode(m) ser alternativamente administrados por aerossol. Isto é realizado por preparação de um aerossol aquoso, preparação lipossomal ou partículas sólidas contendo a composição. Podia-se utilizar uma suspensão não aquosa (por exemplo, propulsor de 52 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ fluorocarbono). Os nebulizadores sónicos são preferidos porque minimizam a exposição do agente a fragmentação, o que pode resultar na degradação do composto.
Normalmente, um aerossol aquoso é preparado por formulação de uma solução ou suspensão aquosa do agente juntamente com veículos e estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis convencionais. Os veículos e estabilizantes variam com os requisitos da composição particular, no entanto, incluem tipicamente tensioativos não iónicos (Tweens, Pluronics, ésteres de sorbitano, lecitina, Cremophors), cossolventes farmaceuticamente aceitáveis tais como polietilenoglicol, proteínas inócuas tipo albumina sérica, ácido oleico, aminoácidos tais como glicina, tampões, sais, açúcares ou álcoois de açúcar. Os aerossóis são geralmente preparados a partir de soluções isotónicas.
Os adesivos transdérmicos têm a vantagem adicional de proporcionar a distribuição controlada de um(uns) inibidor(es) no corpo. Tais formas de administração podem ser preparadas por dissolução ou dispersão do agente no meio adequado. Os intensificadores de absorção podem também ser utilizados para aumentar o fluxo do(s) inibidor(es) através da pele. A velocidade de tal fluxo pode ser controlada quer proporcionando uma membrana que controla a velocidade quer por dispersão do(s) inibidor(es) numa matriz de polímero ou gele.
As composições farmacêuticas deste invento adequadas para administração parentérica compreendem um ou mais inibidores em combinação com uma ou mais soluções, dispersões, suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas, estéreis, farmaceuticamente aceitáveis, ou pós estéreis que podem ser reconstituídos em soluções ou dispersões injetáveis estéreis imediatamente antes da utilização, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos, solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do recetor pretendido ou agentes de suspensão ou espessantes.
Exemplos de veículos aquosos e não aquosos, adequados, que podem ser utilizados nas composições farmacêuticas do invento incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, 53 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ propilenoglicol, polietilenoglicol e semelhantes) e suas misturas adequadas, óleos vegetais, tais como azeite e ésteres orgânicos injetáveis, tal como oleato de etilo. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de materiais de revestimento, tal como lecitina, pela manutenção da dimensão de particula desejada no caso das dispersões e pela utilização de tensioativos.
Estas composições podem também conter adjuvantes tais como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes e agentes dispersantes. A prevenção da ação dos microrganismos pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ácido sórbico de fenol e semelhantes. Pode também ser desejável incluir nas composições agentes de ajuste de tonicidade, tais como açúcares, cloreto de sódio e semelhantes. Adicionalmente, a absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser efetuada pela inclusão de agentes que atrasam a absorção tal como monostearato de aluminio e gelatina.
Nalguns casos, de forma a prolongar o efeito de um fármaco, é desejável reduzir a absorção do fármaco a partir da injeção subcutânea ou intramuscular. Por exemplo, a absorção prolongada de uma forma de fármaco parentericamente administrada é realizada por dissolução ou suspensão do fármaco num veiculo oleoso.
As formas injetáveis de depósito são preparadas por formação de matrizes microencapsuladas de inibidor(es) em polímeros biodegradáveis tais como poliláctido-poliglicólido. Dependendo da relação de fármaco para polímero e da natureza do polímero particular utilizado, pode-se controlar a velocidade de libertação do fármaco. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações injetáveis de depósito são também preparadas por retenção do fármaco em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com o tecido corporal.
As preparações de agentes podem ser oral, parentérica, cutânea ou retalmente administradas. Elas são administradas, evidentemente, por formas adequadas a cada via de 54 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ administração. Por exemplo, elas são administradas na forma de comprimidos ou cápsulas, por injeção, inalação, loção ocular, pomada, supositório, perfusão; cutaneamente por loção ou pomada; e retalmente por supositórios. Prefere-se a administração oral.
As frases "administração parentérica" e "parentericamente administrada" como aqui utilizadas significam modos de administração diferentes da administração entérica e cutânea, normalmente por injeção, e incluem, sem limitação, injeção intravenosa, intramuscular, intrarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intrarticular, subcapsular, subaracnóidea, intraespinal e intraesternal e perfusão.
As frases "administração sistémica", "sistemicamente administrada", "administração periférica" e "perifericamente administrada" como aqui utilizadas têm o significado da administração de um ligando, fármaco ou outro material não diretamente no sistema nervoso central, de modo a que entre no sistema do doente e seja, assim, submetido a metabolismo e outros processos semelhantes, por exemplo, administração subcutânea.
Este(s) inibidor(es) pode(m) ser administrado(s) a humanos e outros animais para terapêutica por uma qualquer via de administração adequada, incluindo a oral, nasal, como, por exemplo, por um pulverizador, retal, intravaginal, parentérica, intracisterna e cutânea ou por pós, pomadas ou gotas, incluindo bucalmente e sublingualmente.
Independentemente da via de administração selecionada, o(s) inibidor(es), que pode(m) ser utilizado(s) numa forma hidratada adequada e/ou as composições farmacêuticas do presente invento, são formulados em formas de administração farmaceuticamente aceitáveis por métodos convencionais conhecidos daqueles peritos na arte.
Os níveis de doses reais dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas deste invento podem variar de modo a obter-se uma quantidade do ingrediente ativo que é eficaz 55 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ para se alcançar a resposta terapêutica desejada num doente, composição e modo de administração particulares, sem ser tóxico para o doente. A concentração de um composto descrito numa mistura farmaceuticamente aceitável vai depender de vários fatores, incluindo a dosagem do composto a ser administrado, as caracteristicas farmacocinéticas do(s) composto(s) utilizado(s) e a via de administração. Em geral, as composições deste invento podem ser proporcionadas numa solução aquosa contendo cerca de 0,1-10% p/v de um composto aqui descrito, entre outras substâncias, para administração parentérica. Os intervalos de doses típicos são de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia, administrados em 1-4 doses divididas. Cada dose dividida pode conter o mesmo composto ou compostos diferentes do invento. A dose será uma quantidade eficaz dependendo de vários fatores incluindo a saúde global de um doente e a formulação e via de administração do(s) composto(s) selecionado(s).
Um outro aspeto do invento proporciona uma terapêutica conjunta em que são administrados um ou mais agentes terapêuticos com o inibidor da proteassoma. Tal tratamento conjunto pode ser alcançado por meio da administração simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento.
Em certas concretizações, um composto do invento é conjuntamente administrado com um ou mais de outro(s) inibidor(es) da proteassoma.
Em certas concretizações, um composto do invento é conjuntamente administrado com um agente quimioterapêutico. Os agentes quimioterapêuticos adequados podem incluir, produtos naturais tais como alcaloides da vinca (i.e. vinblastina, vincristina e vinorelbina), paclitaxel, epidodofilotoxinas (i.e. etopósido, tenipósido), antibióticos (dactinomicina (actinomicina D) , daunorrubicina, doxorrubicina e idarrubicina), antraciclinas, mitoxantrona, bleomicinas, plicamicina (mitramicina) e mitomicina, enzimas (L-asparaginase que metaboliza sistemicamente a L-asparagina e priva as células que não têm a capacidade de sintetizar a 56 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ sua própria asparagina); agentes antiplaquetários; agentes alquilantes antiproliferativos/antimitóticos tais como mostardas nitrogenadas (mecloretamina, ciclofosfamida e análogos, melfalano, clorambucilo) , etileniminas e metilmelaminas (hexametilmelamina e tiotepa), sulfonatos de alquilo (bussulfano), nitrosureias (carmustina (BCNU) e análogos, estreptozocina), trazenos - dacarbazinina (DTIC); antimetabolitos antiproliferativos/antimitóticos tais como análogos de ácido fólico (metotrexato) , análogos pirimidina (fluoruracilo, floxuridina e citarabina), análogos purina e inibidores relacionados (mercaptopurina, tioguanina, pentostatina e 2-clorodesoxiadenosina); inibidores da aromatase (anastrozol, exemestano e letrozol); e complexos de coordenação de platina (cisplatina, carboplatina), procarbazina, hidroxiureia, mitotano, aminoglutetimida; inibidores histona-desacetilase (HDAC); hormonas (i.e. estrogénio) e agonistas de hormonas tais como agonistas de hormona libertadora da hormona luteinizante (LHRH) (goserelina, leuprolido e triptorelina). Outros agentes quimioterapêuticos podem incluir mecloretamina, camptotecina, ifosfamida, tamoxifeno, raloxifeno, gemcitabina, navelbina ou uma qualquer variante análoga ou derivada dos anteriores.
Em certas concretizações, um composto do invento é conjuntamente administrado com uma citocina. As citocinas incluem, Interf erão-γ, α e β, Interleucinas 1-8, 10 e 12, Fator de Estimulação de Colónias de Monócitos Granulócitos (GM-CSF), TNF-α e β e TGF-β.
Em certas conjuntamente adequados alclometasona, betametasona, clocortolona, cortivazol, dexametasona, enoxolona, flunisolido, concretizações, um composto do invento é administrado com um esteroide. Os esteroides podem incluir 21-acetoxipregnenolona, algestona, budesonido, cloprednol, deflazacorte, diflorasona, fluazacorte, acetonido de amcinonido, beclometasona, cloroprednisona, clobetasol, corticosterona, cortisona, desonido, desoximetasona, diflucortolona, difuprednato, flucloronido, flumetasona, fluocinolona, fluocinonida, fluocortina-butilo, fluocortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandrenolido, propionato de fluticasona, formocortal, 57 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ halcinonido, propionato de halobetasol, halometasona, hidrocortisona, etabonato de loteprednol, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona; parametasona, prednicarbato, prednisolona, 25-dietilaminoacetato de prednisolona, fosfato de sódio de prednisolona, prednisona, prednival, prednilideno, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, acetonido de triamcinolona, benetonido de triamcinolona, hexacetonido de triamcinolona e seus sais e/ou derivados.
Em certas concretizações, um composto do invento é conjuntamente administrado com um agente imunoterapêutico. Os agentes imunoterapêuticos adequados podem incluir, mas não estão limitados a, moduladores MDR (verapamilo, valspordar, biricodar, tariquidar, laniquidar) , rapamicina, micofenolato de mofetilo, ciclofosomida, ciclosporina, talidomida e anticorpos monoclonais. Os anticorpos monoclonais podem ser isolados ou conjugados tais como rituximab, tositumomab, alemtuzumab, daclizumab, epratuzumab, ibritumomab tiuxetano, gemtuzumab ozogamicina, bevacizumab, cetuximab, erlotinib e trastuzumab.
Exemplificação
Exemplo 1
Esquema 1: Sintese do Composto 010
Composto (003): A uma solução a 0°C de N-Boc-serina(metil éter) (001) (2,5 g, 11,4 mmoles) , cloridrato de éster de benzilo de L- 58 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ alanina (002) (3,3 g, 11,4 inmoles) , HOBT (2,5 g, 18,2 mmoles)
e HBTU (6,9 g, 18,24 mmoles) em tetra-hidrofurano (400 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (8,0 ml, 45,6 mmoles) em tetra-hidrofurano (50 ml) durante 10 minutos. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A maioria dos solventes foi removida sob pressão reduzida e o material resultante diluído com acetato de etilo (300 ml). A solução foi então lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (100 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) e o composto desejado (003) (4, 4 g) foi isolado e caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 457,23) .
Composto (004): A uma solução a 0°C de (003) (5,14 g, 11,25 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (500 mg). A mistura resultante foi deixada agitar sob uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra-hidrofurano. O filtrado orgânico foi concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado durante 2 horas para proporcionar (004) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 367,18) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (006) : A uma solução de (005) (para a síntese de (005) ver Pedido de Patente U.S. Série No. 11/131688) (3,9 g, 13 mmoles) em ácido trifluoroacético (50 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (600 mg) . A mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 6 horas. A mistura foi filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado lavado com diclorometano (200 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado durante a noite para proporcionar (006) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 172,13) e foi utilizado na transformação subsequente sem posterior purificação. 59 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (007) : A uma solução a 0°C de (004) e (006), HOBT (2,5 g, 18 mmoles) e HBTU (6,9 g, 18 mmoles) em tetra-hidrofurano (400 ml) adicionou-se uma solução de N,N-dietilisopropilamina (8 ml, 46 mmoles) em tetra-hidrofurano (50 ml) durante 10 minutos. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A maioria dos solventes foi removida sob pressão reduzida e o material remanescente foi diluido com acetato de etilo (400 ml). A solução resultante foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo), para proporcionar (007) (3,5 g) como caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 520,29).
Composto (008): A uma solução a 0°C de (007) (320 mg, 0,616 mmole) em diclorometano (10 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (10 ml) e a solução resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais uma hora. As fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida e depois colocadas sob vácuo elevado durante 2 horas para proporcionar (008) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 420,24) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (010): A uma solução a 0°C de (008), ácido 5-metil-isoxazol-3-carboxílico (009) (94 mg, 0,74 mmole), HOBT (135 mg, 1,0 mmole) e HBTU (350 mg, 1,0 mmole) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml, 2,5 mmoles) em tetra-hidrofurano (2 ml) durante 5 minutos. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas e depois diluída com acetato de etilo (200 ml) . Ela foi depois lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida 60 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ e ο resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (010) (195 mg) como caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 529,26); >90% de inibição CT-L de proteassoma a 40 mg/kg PO.
Exemplo 2
Composto (013): A uma solução a 0°C de N-Boc—L-leucina (011) (2,6 g, 11 mmoles), cloridrato de éster de benzilo de L-fenilalanina (012) (2,9 g, 10 mmoles), HOBT (1,7 g, 11 mmoles) e HBTU (3,9 g, 11 mmoles) em tetra-hidrofurano (200 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (4,9 ml, 30 mmoles) em tetra-hidrofurano (10 ml) durante 5 minutos. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas e tornou-se homogénea. Ela foi então diluída com acetato de etilo (300 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (100 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (013) (4,4 g) como caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 469,26). 61 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (014): A uma solução a 0°C de (013) (4,32 g, 9,24 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (500 mg). A mistura resultante foi deixada agitar sob uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra-hidrofurano. O filtrado orgânico foi concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado para proporcionar (014) (3,5 g) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 378,22) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (015): A uma solução a 0°C de (014) (3,5 g, 9,24 mmoles) e (006) (2,4 g, 11 mmoles), HOBT (1,7 g, 11 mmoles) e HBTU (3,9 g, 11 mmoles) em tetra-hidrofurano (200 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (4,9 ml, 30 mmoles) em tetra-hidrofurano (10 ml) durante 5 minutos. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas e tornou-se homogénea. Ela foi então diluída com acetato de etilo (400 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) e o composto desejado (015) (5,0 g) foi isolado e caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 532,33).
Composto (016) : A uma solução a 0°C de (015) (5,0 g, 9,40 mmoles) em diclorometano (50 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (20 ml) durante 5 minutos e a solução resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais uma hora. As fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida e colocadas sob vácuo elevado para proporcionar (016) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 432,33) que foi utilizado sem posterior purificação. 62 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (018): A uma solução de 5-metil-3-isoxazolcarboxilato de metilo (017) (14,1 g, 100 mmoles) em tetracloreto de carbono (500 ml) adicionou-se N-bromossuccinimida (23 g, 130 mmoles) e peróxido de benzoílo (2,5 g, 10 mmoles), à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada a 80°C sob uma atmosfera de árgon, durante a noite. A reação foi arrefecida e diluida com 500 ml de diclorometano e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (3 x 100 ml) . A fase aquosa foi extratada com 200 ml de diclorometano e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre MgSC>4. Os solventes foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (018) (7,9 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 219,95).
Composto (019) : A uma solução a 0°C de (018) (12 g, 55 mmoles) em tetra- hidrofurano (20 ml) adicionou-se hidróxido de lítio aquoso (35 ml, 4N) . A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Ela foi então acidificada com ácido clorídrico (2N) até pH=l e extratada com tetra-hidrofurano (3 x 200 ml) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 ml), secas sobre sulfato de sódio e filtradas. Os solventes foram removidos e o resíduo foi liofilizado para dar (019) (8,2 g) , que foi confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 205,95) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (020):
Uma solução de (019) (6,0 g, 30 mmoles), álcool benzílico (3,5 ml) e ácido p-toluenossulfonílico (1,1 g, 6 mmoles) em tolueno (100 ml) foi agitada a 100°C durante a noite. Ela foi então deixada arrefecer, diluída com 300 ml de acetato de etilo e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase aquosa foi então extratada com 200 ml de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio e filtradas. Os solventes foram removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo), para 63 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
proporcionar (020) (5, 8 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 295, 98) .
Composto (021):
Uma solução de (020) (2, 0 g, 6,8 mmoles) e morfolina (3,0 ml) em tetra-hidrof urano (50 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. Os solventes foram então removidos e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo/metanol) para proporcionar (021) (820 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z : 303, 13) .
Composto (022): A uma solução de (021) (400 mg, 1,32 mmole) em tetra- hidrofurano (40 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (100 mg) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogénio durante 2 horas. Ela foi então filtrada através de Celite e concentrada para dar (022), que foi confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 213,08) e que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (023): A uma solução a 0°C de (016) (130 mg, 0,3 mmole) e (022) (70 mg, 0,4 mmole), HOBT (70 mg, 0,5 mmole) e HBTU (170 mg, 0,5 mmole) em tetra-hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml, 2,5 mmoles) em tetra-hidrofurano (5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas e tornou-se homogénea. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar o composto (023) (125 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 626,35); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 40 mg/kg PO. 64 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Exemplo 3 3 ί ci© SbsssKpló 023
Composto (025): A uma solução a 0°C de Fmoc-Val-OH (024) (348 mg, 1,6 mmole) em diclorometano (4 ml) adicionou-se MSNT (474 mg, 1,6 mmole) e N-metil-imidazol (0,13 ml, 1,6 mmole). Adicionou-se resina HMPB (400 mg, 0,32 mmole) assim que a mistura se tornou homogénea. A mistura reacional resultante foi deixada agitar durante duas horas à temperatura ambiente. A resina foi removida por filtração, lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml) e deixada secar ao ar para dar (025) .
Composto (026) : A resina (025) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml). A uma solução a 0°C de Fmoc-Ser (OMe) -OH (546 mg, 1,6 mmole) em N,N-dimetilformamida (4 ml) adicionou-se HOBT (245 mg, 1,6 mmole), HBTU (606 mg, 1,6 mmole) e N,N-di- 65 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ isopropiletilamina (0,6 ml, 3,2 mmoles) . A resina foi adicionada assim que a mistura reacional se tornou homogénea. A mistura resultante foi deixada agitar durante a noite. A resina foi então removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml) e deixada secar ao ar para dar (026) .
Composto (027) : A resina (026) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml). A uma solução a 0°C de ácido 5-metil-isoxazol-3-carboxílico (009) (162 mg, 1,6 mmole) em N,N-dimetilformamida (4 ml) adicionou-se HOBT (245 mg, 1,6 mmole), HBTU (606 mg, 1,6 mmole) e N,N-di-isopropiletilamina (0,6 ml, 3,2 mmoles). A resina foi adicionada assim que a mistura reacional se tornou homogénea e a mistura reacional resultante foi deixada agitar durante a noite. A resina foi então removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml) e a resina foi deixada secar ao ar para dar (027) .
Composto (028): A resina (027) foi adicionada a uma solução de ácido trifluoroacético a 50% em diclorometano (10 ml) e a mistura resultante foi deixada agitar durante 30 minutos. A resina foi então removida por filtração e lavada com diclorometano (3 x 10 ml). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para proporcionar (028) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 328,14) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (029): A uma solução a 0°C de (029) e (006) (117 mg, 0,4 mmole), HOBT (70 mg, 0,5 mmole) e HBTU (170 mg, 0,5 mmole) em tetra-hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml, 2,5 mmoles) em tetra-hidrofurano 66 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ (5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas e tornou-se homogénea. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (029) (125 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 481,26); >70% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO.
Exemplo 4 4: Sxrrfces© d© Ô35
Composto (031): A uma solução a 0°C de Fmoc-L4-tiazolilalanina (030) (1,0 g, 2,5 mmoles) em diclorometano (4 ml) adicionou-se N-metilimidazol (150 Π1, 1,9 mmole) e MSNT (755 mg, 2,55 mmoles) e adicionou-se resina HMPB (800 mg, 0,51 mmole) assim que a mistura se tornou homogénea. A mistura reacional resultante foi deixada agitar durante duas horas à temperatura ambiente. A resina foi então removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml) e deixada secar ao ar para dar (031). 67 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (032): A resina (031) (360 mg, 0,23 mmole) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi então removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml). A uma solução a 0°C de Fmoc-L-Leucina (204 mg, 0,58 mmole) em N,N-dimetilformamida (4 ml) adicionou-se HOBT (124 mg, 0,92 mmole), HBTU (349 mg, 0,92 mmole) e N,N-di-isopropiletilamina (402 □!, 2,3 mmoles) . A resina foi eão adicionada assim que a mistura reacional se tornou homogénea. A mistura resultante foi deixada agitar a 5°C durante cinco horas. A resina foi então removida por filtração e lavada com N, N-dimetilf ormamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml) e a resina resultante foi deixada secar ao ar para dar (032).
Composto (033): A resina (032) (0,23 mmole) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N, N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi então removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml). A uma solução a 0°C de (022) (123 mg, 0,58 mmole) em N, N-dimetilf ormamida (4 ml) adicionou-se HOBT (124 mg, 0,92 mmole), HBTU (349 mg, 0,92 mmole) e N,N-di-isopropiletilamina (402 Dl, 2,3 mmoles) . A resina foi adicionada assim qi mistura resultante se tornou homogénea e a mistura reacional resultante foi deixada agitar à temperatura ambiente durante a noite. A resina foi então removida por filtração, lavada com N, N-dimetilf ormamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml) e a resina resultante foi deixada secar ao ar para dar (033) .
Composto (034): A resina (033) foi adicionada a uma solução de 50% de ácido trifluoroacético em diclorometano (10 ml) e a mistura 68 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ resultante foi deixada agitar durante 30 minutos. Ela foi então removida por filtração e a resina lavada com diclorometano (3 x 10 ml) . Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para proporcionar (34) como caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 480,18) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (035): A uma solução a 0°C de (034) e (006) (70 mg, 0,23 mmole) , HOBT (50 mg, 0,37 mmole) e HBTU (140 mg, 0,37 mmole) em tetra-hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml, 2,5 mmoles) em tetra-hidrof urano (5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas e depois diluída com acetato de etilo (200 ml). Ela foi então lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545 e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para
proporcionar (035) (15 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 633,3); >90% de inibição CT-L de proteassoma a 40 mg/kg PO.
Exemplo 5 5: Sintsss® do Exemplo 039
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Composto (036) : A resina (031) (800 mg, 0,23 mmole) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e 69 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml) . A uma solução a 0°C de Fmoc-L-Ser (OMe) -OH (435 mg, 1,3 mmole) em N,N-dimetilformamida (10 ml) adicionou-se HOBT (276 mg, 2,0 mmoles), HBTU (710 mg, 2,0 mmoles) e N,N-di-isopropiletilamina (0,9 ml, 5,1 mmoles). A resina foi então adicionada assim que a mistura reacional se tornou homogénea. A mistura resultante foi deixada agitar a 5°C durante 5 horas. A resina foi então removida por filtração e lavada com N, N-dimetilf ormamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml) e deixada secar ao ar para dar (036) .
Composto (037) : A resina (036) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml). A uma solução a 0°C de (009) (162 mg, 1,3 mmole) em N,N- dimetilformamida (4 ml) adicionou-se HOBT (276 mg, 2,0 mmoles), HBTU (710 mg, 2,0 mmoles) e N,N-di-isopropiletilamina (0,9 ml, 5,1 mmoles). A resina foi adicionada assim que a mistura resultante se tornou homogénea e a mistura reacional resultante foi deixada agitar à temperatura ambiente durante a noite. A resina foi então removida por filtração, lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml) e deixada secar ao ar para dar (037) .
Composto (038): A (037) foi adicionada uma solução de 50% de ácido trifluoroacético em diclorometano (10 ml) e a mistura resultante foi deixada agitar durante 30 minutos. A resina foi então removida por filtração e lavada com diclorometano (3 x 10 ml). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para proporcionar (38) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 383,09) e utilizado sem posterior purificação. 70 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (039): A uma solução a 0°C de (038) e (006) (156 mg, 0,51
mmole), HOBT (111 mg, 0,82 mmole) e HBTU (311 mg, 0,82 mmole) em tetra-hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml, 2,5 mmoles) em tetra-hidrofurano (5 ml) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas e tornou-se homogénea. Ela foi então diluida com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aguoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (039) (22 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 536,21); >75% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO.
Exemplo 6
Composto (041): A uma solução a 0°C de Fmoc-L-alanina (040) (1,0 g, 3,2 mmoles) em diclorometano (30 ml) adicionou-se N-metil-imidazol (190 Π1, 12,4 mmoles) e MSNT (950 mg, 3,2 mmoles) a resina HMPB (1,0 g, 0,64 mmole) que foi então adicionada 71 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ assim que a mistura se tornou homogénea. A mistura reacional resultante foi deixada agitar durante duas horas à temperatura ambiente. A resina foi então removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml) para dar (041) .
Composto (042): A resina (041) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml). A uma solução a 0°C de Fmoc-Ser (OMe) -OH (546 mg, 1,6 mmole) em N,N-dimetilformamida (10 ml) adicionou-se HOBT (346 mg, 2,6 mmoles), HBTU (970 mg, 2,6 mmoles e N,N-di-isopropiletilamina (1,1 ml, 6,4 mmoles). A resina foi então adicionada assim que a mistura reacional se tornou homogénea. A mistura resultante foi deixada agitar a 5°C durante 5 horas. A resina foi então removida por filtração e lavada com N, N-dimetilf ormamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml) e deixada secar ao ar para dar (042).
Composto (043): A resina (042) (0,23 mmole) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N, N-dimetilf ormamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A resina foi removida por filtração e lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 10 ml) e diclorometano (3 x 10 ml). A uma solução a 0°C de (009) (203 mg, 1,6 mmole) em N,N-dimetilformamida (10 ml) adicionou-se HOBT (346 mg, 2,6 mmoles), HBTU (970 mg, 2,6 mmoles) e N,N-di-isopropiletilamina (1,1 ml, 6,4 mmoles). A resina foi adicionada assim que a mistura resultante se tornou homogénea e a mistura reacional resultante foi deixada agitar à temperatura ambiente durante a noite. A resina foi então removida por filtração, lavada com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml) e deixada secar ao ar para dar (043) . 72 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (044): A (043) foi adicionada uma solução de 50% de ácido trifluoroacético em diclorometano (10 ml) e a mistura resultante foi deixada agitar durante 30 minutos. A resina foi então removida por filtração e lavada com diclorometano (3 x 10 ml). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para proporcionar (044) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 300,11) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (045): A uma solução a 0°C dos intermediários acima mencionados (044) e (006) (195 mg, 0,64 mmole) , HOBT (137 mg, 1,0 mmole) e HBTU (357 mg, 1,0 mmole) em tetra-hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml, 2,5 mmoles) em tetra-hidrofurano (5 ml) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Ela foi então diluida com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para
proporcionar (045) (84 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 453,23); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO. 73 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Exemplo 7
Composto (047) : A uma solução a 0°C de N-Boc-serina(metil éter) (001) (6,57 g, 33 mmoles), cloridrato de éster de benzilo de L-alanina (046) (6,45 g, 30 mmoles), HOBT (5,05 g, 33 mmoles) e HBTU (11,8 g, 33 mmoles) em tetra-hidrofurano (400 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (9,0 g, 70 mmoles) em tetra-hidrofurano (50 ml) durante 10 minutos. A mistura tornou-se homogénea e foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A maioria do solvente foi então removida sob pressão reduzida e o material resultante diluído com acetato de etilo (500 ml) . Ele foi lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 150 ml) e salmoura (200 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para
proporcionar (047) (11,8 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 381,19).
Composto (048): A uma solução a 0°C de (047) (11, 8 g, 31,0 mmoles) em diclorometano (100 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (50 ml) durante 10 minutos e a mistura resultante foi agitada 74 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ à mesma temperatura durante mais 3 horas. Os solventes foram então removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi colocado sob vácuo elevado durante a noite para proporcionar o sal de TFA de (048), que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 281.15) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (049): A uma solução a 0°C de (048), ácido 5-metil-isoxazol-3-carboxílico (009) (3,93 g, 31 mmoles), HOBT (4,7 g, 35 mmoles) e HBTU (12,5 g, 35 mmoles) em tetra-hidrofurano (400 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (20 ml) em tetra-hidrofurano (100 ml) durante 10 minutos e o pH da mistura resultante foi de ~8. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A maioria do solvente foi então removida sob pressão reduzida e diluída com acetato de etilo (1,0 1). Ela foi então lavada com
bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (049) (10,8 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 390,16).
Composto (044): A uma solução a 0°C de (049) (3,28 g, 8,4 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (500 mg). A mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi então filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra-hidrofurano. O filtrado orgânico foi concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado durante 2 h para dar (044), que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 281.15) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (045): A uma solução a 0°C de (044) e (006) (1,9 g, 8,5 mmoles), HOBT (2,0 g, 13 mmoles) e HBTU (5,4 g, 14 mmoles) em tetra-hidrofurano (200 ml) adicionou-se uma solução de N,N- 75 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ di-isopropiletilamina (5,4 g, 42 mmoles) em tetra-hidrofurano (10 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A maioria do solvente foi então removida sob pressão reduzida e o material resultante diluído com acetato de etilo (400 ml) . Ele foi então lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (50 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (045) (1,35 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z : 453,23).
Exemplo 8
Esquema 8: Síntese d© Exemplo 055
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Composto (051): A uma solução a 0°C de N-Boc-L2-piridilalanina (050) (1,0 g, 3,76 mmoles), cloridrato de éster de benzilo de L-fenilalanina (002) (1,3 g, 3,76 mmoles), HOBT (0,68 g, 5,0 mmoles) e HBTU (1,8 g, 5,0 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (1,6 ml) em tetra-hidrofurano (10 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 3 horas e depois diluída com acetato de etilo (200 ml), lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (100 ml) e as 76 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (051) (1,45 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 504,24).
Composto (052): A uma solução a 0°C de (051) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (100 mg) e a mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi então filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra-hidrofurano. O filtrado orgânico foi então concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado para proporcionar (052), que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 414,2) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (053): A uma solução a 0°C de (052) e (006) (0, 85 g, 3,9 mmoles), HOBT (0,70 g, 5,3 mmoles) e HBTU (1,70 g, 4,9 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (3 ml) em tetra-hidrofurano (10 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (50 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545 e os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) e HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (053) (1,51 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 567,21).
Composto (054): A uma solução a 0°C de (053) (200 mg, 0,352 mmole) em diclorometano (10 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (10 ml) e a solução resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais uma hora. A solução foi concentrada sob pressão 77 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ reduzida e colocada sob vácuo elevado para proporcionar (054) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 467, 26) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (055): A uma solução a 0°C de (054) e ácido 5-metil-isoxazol-3-carboxilico (009) (127 mg, 1,0 mmole) , HOBT (135 mg, 1,0 mmole) e HBTU (350 mg, 1,0 mmole) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml) em tetra-hidrofurano (2 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545, os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (055) (40 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 576,27); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO.
Exemplo 9
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Composto (057) : A uma solução a 0°C de N-Boc-L-n-valina (056) (1,0 g, 4,6 mmoles), cloridrato de éster de benzilo de L-fenilalanina 78 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
(002) (1,4 g, 4,6 mmoles) , ΗΟΒΤ (1,0 g, 7,4 mmoles) e HBTU (2,8 g, 7,4 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (3,2 ml, 18,4 mmoles) em tetra-hidrofurano (10 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas e depois diluida com acetato de etilo (200 ml), lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (100 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (057) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 455,25).
Composto (058): A uma solução a 0°C de (057) (1,30 g, 2,875 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (100 mg). A mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra- hidrofurano. O filtrado foi então concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado para proporcionar (058) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 365, 2) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (059): A uma solução a 0°C de (058) e (006) (0, 99 g, 4,6 mmoles), HOBT (0,62 g, 4,6 mmoles) e HBTU (1,70 g, 4,9 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (2,4 ml) em tetra-hidrofurano (10 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e depois foi diluida com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (50 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram então removidos sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (059) (1,21 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 518,32). 79 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (060): A uma solução a 0°C de (059) (250 mg, 0,48 mmole) em diclorometano (10 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (10 ml) e a solução resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais uma hora. As fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida e colocadas sob vácuo elevado para proporcionar (060) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 418,26) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (061): A uma solução a 0°C de (060) e (022) (122 mg, 0,58 mmole), HOBT (104 mg, 0,77 mmole) e HBTU (292 mg, 0,72 mmole) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,35 ml) em tetra-hidrofurano (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 4 horas. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (061) (88,4 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 612,33); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 40 mg/kg PO. 80 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Exemplo 10 80 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 10 ; Síntese do Exesspâ© 068
BP88T.H»TU
Composto (063): A uma solução a 0°C de N-Boc-HoSer(OMe)-OH (062) (1,0 g,
4,3 mmoles), cloridrato de éster de benzilo de L-fenilalanina (002) (1,3 g, 4,3 mmoles), HOBT (0,88 g, 6,5 mmoles) e HBTU (2,3 g, 6,5 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (2,0 ml) em tetra-hidrofurano (5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 3 horas e depois diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (100 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (063) (1,81 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 471,24).
Composto (064): A uma solução a 0°C de (063) (1,35 g, 2,875 mmoles) em tetra-hidrof urano (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (100 mg) . A mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra-hidrofurano. O filtrado orgânico foi concentrado sob pressão 81 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ reduzida e colocado sob vácuo elevado para proporcionar (064) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 381,19) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (065): A uma solução a 0°C de (065) e (006) (0, 99 g, 4,6 mmoles), HOBT (0,62 g, 4,6 mmoles) e HBTU (1,70 g, 4,9 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (2,4 ml) em tetra-hidrofurano (10 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e depois diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 50 ml) e salmoura (50 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (065) (1,11 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 534,31).
Composto (066) : A uma solução a 0°C de (065) (230 mg, 0,43 mmole) em diclorometano (20 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (10 ml) e a solução resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais uma hora. A mistura reacional foi então concentrada sob pressão reduzida e colocada sob vácuo elevado para proporcionar (066) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 434,26) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (068): A uma solução a 0°C de (066) e ácido 5-isopropilisoxazol-3-carboxílico (067) (81 mg, 0,52 mmole), HOBT (93 mg, 0,69 mmole) e HBTU (262 mg, 0,69 mmole) em tetra-hidrofurano (100 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,30 ml) em tetra-hidrofurano (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 4 horas. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) . As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os 82 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (068) (75,7 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 571,31); >70% de inibição CT-L de proteassoma a 40 mg/kg PO.
Exemplo 11
Esera®ma 11: Síntese d© Exemplo 075 (aterdagam Ά)
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KewAxa Hí£PE o $ MBWat, sm* tm
«71
Composto (070): A uma solução de cloridrato de L-serina(metil éter) (069) (1,0 g, 6,4 mmoles) em água/dioxano (1:1, 80 ml) adicionou-se hidróxido de sódio (768 mg, 19,2 mmoles). Depois da mistura ser agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos, ela foi arrefecida até 0°C e adicionou-se, gota-a-gota, uma solução de cloroformato de 9-fluorenilmetilo (1,65 g, 6,4 mmoles), em dioxano (16 ml). A mistura reacional foi deixada agitar à temperatura ambiente durante mais 4 horas. Os solventes foram então removidos, o resíduo foi diluído com água e o pH foi ajustado a ~1 com HC1 IN e a fase aquosa foi extratada com acetato de etilo (4 x 100 ml) . As fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida e colocadas sob vácuo elevado para proporcionar (070) (1,8 g) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 342,13) que foi utilizado sem posterior purificação. 83 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Composto (071): A resina HMPB-BHA (500 mg, 0,32 mmole) foi lavada com diclorometano. Num balão seco, dissolveu-se Fmoc-Ser(Me)-OH (070) (546 mg, 1,6 mmole) em diclorometano e à solução adicionou-se 1-metilimidazol (95 Π1, 1,2 mmole) seguido p MSNT (474 mg, 1,6 mmole) . Assim que a mistura resultante se tornou homogénea (10 minutos) ela foi adicionada à resina HMPB-BHA como uma suspensão em diclorometano (5 ml). A mistura reacional resultante foi deixada agitar durante a noite. A resina foi então removida por filtração e lavada com DMF (3 x 2 0 ml), MeOH (3 x 2 0 ml), DCM (3 x 2 0 ml) e deixada secar ao ar para dar (071).
Composto (072): A resina (071) (300 mg, 0,192 mmole) foi colocada numa solução de piperidina a 20% em N,N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A resina foi removida por filtração e lavada, duas vezes, com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml). A uma solução a 0°C de Fmoc-Ser(Me)-OH (070) (0,48 mmole, 163 mg) em N,N-dimetilformamida (10 ml) adicionou-se HOBT (104 mg, 0,77 mmole), HBTU (291 mg, 0,77 mmole) e di-isopropiletilamina (0,34 ml, 1,92 mmole). Assim que a mistura resultante se tornou homogénea, adicionou-se a resina (0,13 mmole, 200 mg) e a mistura reacional resultante foi deixada agitar durante a noite. A resina foi então removida por filtração e lavada com DMF (10 ml), DCM (10 ml), MeOH (10 ml), H20 (10 ml), DMF (10 ml), MeOH (10 ml) e DCM (10 ml) e deixada secar ao ar para dar (072) .
Composto (073): A (072) (300 mg, 0,19 mmole) adicionou-se uma solução de piperidina a 20% em N, N-dimetilformamida (20 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A resina foi removida por filtração e lavada, duas vezes, com N,N-dimetilformamida (3 x 20 ml) e diclorometano (3 x 20 ml). 84 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ A uma solução a 0°C de (009) (61 mg, 0,48 mmole) em N,N-
dimetilformamida (2 ml) adicionou-se HOBT (104 mg, 0,77 mmole), HBTU (291 mg, 0,77 mmole) e N,N-di-isopropiletilamina (0,34 ml, 1,92 mmole). Assim que a mistura resultante se tornou homogénea, adicionou-se a resina (300 mg, 0,192 mmole) e a mistura reacional resultante foi deixada agitar à temperatura ambiente durante a noite. A resina foi então removida por filtração, lavada com DMF (10 ml), DCM (10 ml), MeOH (10 ml), H20 (10 ml), DMF (10 ml), MeOH (10 ml) e DCM (10 ml) e deixada secar ao ar para dar (073).
Composto (074): A (073) adicionou-se uma solução a 50% de ácido trifluoroacético em diclorometano (10 ml) e a mistura resultante foi deixada agitar durante 30 minutos. A resina foi então removida por filtração e lavada com diclorometano (3 x 10 ml). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o composto desejado (074) foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 330,12) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (075): A uma solução a 0°C de (074) e (006) ( 78 mg, 0,38 mmole), HOBT (41 mg, 0,30 mmole) e HBTU (116 mg, 0,30 mmole) em acetonitrilo (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,1 ml, 0,6 mmole). A mistura foi agitada a 0 - 4°C durante a noite e depois diluida com acetato de etilo (200 ml). Ela foi então lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (075) (29 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 483,24); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO. 85 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Exemplo 12
Esquema 12: Sirvfcfôs® do Exessplo 075 (a&©3fds.fif©8a
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Composto (076) : A uma solução a 0°C de N-Boc-serina(metil éter)-OH (43,8 g, 200 mmoles), trietilamina (26,5 g, 260 mmoles) e 4- (dimetilamino)piridina em diclorometano (1,2 1) adicionou-se uma solução de cloroformato de benzilo (41 g, 240 mmoles) em diclorometano (250 ml) durante 30 minutos e a mistura resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais 3 horas. Adicionou-se então bicarbonato de sódio aquoso
saturado (200 ml) e a fase orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (200 ml) e salmoura (200 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (076) (54 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 310,16) .
Composto (077) : A uma solução a 0°C de (076) (54 g, 174,6 mmoles) em diclorometano (200 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (200 ml) durante 10 minutos e a mistura resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais 3 horas. Os solventes foram então removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi colocado, durante a noite, sob vácuo elevado 86 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ dando ο sal de TFA de (077), confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 210,11) e utilizado sem posterior purificação.
Composto (078): A uma solução a 0°C de (077) (43,8 g, 200 mmoles), N-
Boc-serina(metil éter)-OH (36,7 g, 167 mmoles), HOBT (27 g, 200 mmoles) e HBTU (71,4 g, 200 mmoles) em tetra-hidrofurano (1,2 1) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (75 g, 600 mmoles) em tetra-hidrof urano (250 ml) durante 10 minutos e o pH da mistura resultante foi de ~8. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A maioria do solvente foi então removida sob pressão reduzida e o material resultante diluido com acetato de etilo (1,0 1) . Ele foi depois lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 150 ml) e salmoura (200 ml) e as fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (078) (65 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 411,21).
Composto (079): A uma solução a 0°C de (079) (13,4 g, 32,7 mmoles) em tetra-hidrofurano (300 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (2,7 g) e a mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura foi filtrada através de
Celite-545 e o bolo filtrado foi lavado com tetra-hidrof urano. As fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida e colocadas sob vácuo elevado para proporcionar (079) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 321,16) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (080): A uma solução a 0°C de (079) e (006) (5,6 g, 26 mmoles), HOBT (6,0 g, 41,4 mmoles) e HBTU (14,8 g, 41,4 mmoles) em tetra-hidrofurano (400 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (23 ml) em tetra-hidrofurano (40 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A maioria do solvente foi então removida sob pressão reduzida 87 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ e ο material resultante diluído com acetato de etilo (500 ml) e lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (hexano e acetato de etilo) para proporcionar (080) (9,2 g) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 474,27).
Composto (081): A uma solução a 0°C de (080) (200 mg, 0,43 mmole) em diclorometano (10 ml) adicionou-se ácido trifluoroacético (10 ml) e a solução resultante foi agitada à mesma temperatura durante mais uma hora. As fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida e colocadas sob vácuo elevado para proporcionar (081) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 374,22) que foi utilizado sem posterior purificação.
Composto (075): A uma solução a 0°C de (081) e ácido 5-metil-isoxazol-3-carboxílico (009) (65 mg, 0,5 mmole), HOBT (65 mg, 0,5 mmole)
e HBTU (175 mg, 0,5 mmole) em tetra-hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml) em tetra-hidrofurano (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (075) (85 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 483,24). 88 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ
Exemplo 13
Esgaama 13: Síntese do Exemplo 083
Composto (083): A uma solução a 0°C de (081) (160 mg, 0,43 mmole) e
ácido isoxazol-3-carboxílico (082) (60 mg, 0,5 mmole), HOBT (65 mg, 0,5 mmole) e HBTU (175 mg, 0,5 mmole) em tetra- hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml) em tetra-hidrofurano (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. Ela foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (083) (74 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 469,22); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO.
Exemplo 14 14; Síntese do 085
Composto (085): A uma solução a 0°C de (081) (160 mg, 0,43 mmole) e
ácido isoxazol-3-carboxílico (084) (65 mg, 0,5 mmole), HOBT (65 mg, 0,5 mmole) e HBTU (175 mg, 0,5 mmole) em tetra- 89 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ hidrofurano (50 ml) adicionou-se uma solução de N,N-di-isopropiletilamina (0,5 ml) em tetra-hidrofurano (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A reação foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas através de Celite-545. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (085) (71 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 483,24); >50% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO. 15; Siptese» cio 088
Composto (087) : A uma solução de (086) (preparada utilizando o mesmo procedimento que para (005) com exceção para a Cbz-Leucina que foi substituída por Cbz-fenilalanina) (0,100 g, 0,0295 mmole) em ácido trifluoroacético (10 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (20 mg) . A mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 6 horas. A mistura foi então filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado lavado com diclorometano (50 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado durante a noite para proporcionar (087) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 206,1) que foi utilizado na transformação subsequente sem posterior purificação.
Composto (088): A uma solução a 0°C de (087) e (074) (166 mg, 0,354 mmole), HOBT (54 mg, 0,354 mmole) e HBTU (134 mg, 0,354 90 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ mmole) em tetra-hidrofurano (20 ml) adicionou-se N,N-di-isopropiletilamina (0,2 ml, 1,18 mmole). A mistura foi agitada a 0°C durante a noite e tornou-se homogénea. Ela foi então diluída com acetato de etilo (20 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas através de Celite-545 e concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (088) (10 mg) como caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 517,69); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO.
Composto (090): A uma solução de (089) (preparada utilizando o mesmo procedimento que para (005) com exceção para a Cbz-leucina que foi substituída por Cbz-4-fluorofenilalanina) (0,100 g, 0,28 mmole) em ácido trifluoroacético (10 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (20 mg) . A mistura resultante foi deixada agitar sob 1 atmosfera de hidrogénio durante 6 horas. A mistura foi filtrada através de Celite-545 e o bolo filtrado lavado com diclorometano (50 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e colocado sob vácuo elevado durante a noite para proporcionar (090) como confirmado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 224,1) que foi utilizado na transformação subsequente sem posterior purificação.
Composto (091): A uma solução a 0°C de (090) e (074) (110 mg, 0,336 mmole), HOBT (51 mg, 0,336 mmole) e HBTU (127 mg, 0,336 mmole) em tetra-hidrofurano (20 ml) adicionou-se N,N-di- 91 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ isopropiletilamina (0,2 ml, 1,18 mmole). A mistura foi agitada a 0°C durante a noite e tornou-se homogénea. Ela foi então diluída com acetato de etilo (20 ml) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (2 x 10 ml) e salmoura (10 ml). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas através de Celite-545 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi então purificado por HPLC (acetato de amónio aquoso e acetonitrilo) para proporcionar (091) (60 mg) que foi caracterizado por LC/MS (LCRS (MH) m/z: 535,69); >80% de inibição CT-L de proteassoma a 20 mg/kg PO.
Atividade Biológica
Os compostos foram formulados em veículo de PS80/Citrato de Na a 10% (pH 3) e administrados oralmente (PO) a ratinhos (3 animais/coorte). Uma hora após a administração, os animais foram sacrificados tendo-se colhido os seguintes tecidos: sangue, cérebro, glândula suprarrenal, coração e fígado. O sangue total (~ 200 μΐ) foi lavado duas vezes com PBS e lisado por choque hipotónico (300 μΐ de Tris 50 mM, pH 8, EDTA 5 mM). Os lisados de sangue foram armazenados a -80°C até serem analisados. Os lisados de sangue foram clarificados por centrifugação numa microcentrífuga. Avaliou-se a atividade específica de CT-L da proteassoma em cada lisado por determinação de: a) concentração de proteína no teste de Bradford modificado com gama-globulina de bovino como padrão; e b) velocidade de clivagem do substrato de proteassoma fluorogénico LLVY-AMC. A percentagem de atividade de proteassoma nos animais tratados com análogo foi calculada dividindo a atividade específica média para cada coorte doseado com análogo pela atividade específica média do coorte doseado com veículo. A percentagem de inibição da proteassoma foi calculada por subtração da percentagem de atividade da proteassoma a partir de 100.
Equivalentes
Aqueles peritos na arte vão reconhecer, ou ser capazes de descobrir utilizando não mais de uma experimentação de rotina, numerosos equivalentes dos compostos e seus processos de utilização aqui descritos.
Lisboa, 2013-07-09

Claims (47)

  1. ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 1/18 REIVINDICAÇÕES 1. Composto tendo uma estrutura de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
    na qual L é selecionado a partir de C=0 e C=S; X é selecionado a partir de 0, S, NH, e N-alquilo (Ci_6) ; Z está ausente, é alquilo (Ci-ε) ou alcoxi (Ci-β) ; R1, R2 e R3 são cada um independentemente selecionados a partir de hidrogénio, alquilo (Ci_6) , alcenilo (Ci_6) , alcinilo (Ci-β) , hidroxialquilo (Ci-β) , alcoxialquilo (Ci-β) , arilo, aralquilo (Ci_6) , heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo (Ci-6)/ heteroaralquilo (Ci-β) , carbociclilo e carbocicloalquilo (Ci-6) ; R4 é selecionado a partir de hidrogénio, aralquilo (Ci_6) e alquilo (Ci-6) ; R1 é heteroarilo; e R2 e R3 são independentemente selecionados a partir de hidrogénio, alquilo (Ci_6) e aralquilo (Ci_6) .
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por Z estar ausente.
  3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por R4, R2 e R3 serem independentemente selecionados a partir de hidrogénio e metilo.
  4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por L ser C=0. 1 Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por R1, R2 e R3 serem 2 independentemente selecionados a partir de hidrogénio, 3 alquilo (Ci-6) , alcenilo (Ci-ε) , alcinilo (Ci-ε) , hidroxialquilo (Ci_6) , alcoxialquilo (Ci_6) , aralquilo (Ci_6) , ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 2/18 heterocicloalquilo (Ci_6) »· heteroaralquilo (Ci_6) e carbocicloalquilo (Ci-β) .
  5. 6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente alquilo (Ci_6) .
  6. 7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente selecionado a partir de metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo e isobutilo.
  7. 8. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente propargilo.
  8. 9. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente hidroxialquilo (Ci_6) .
  9. 10. Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente selecionado a partir de hidroximetilo e hidroxietilo.
  10. 11. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente alcoxialquilo (Ci-ε) .
  11. 12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente selecionado a partir de metoximetilo e metoxietilo.
  12. 13. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente heteroaralquilo (Ci-ε) ·
  13. 14. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por qualquer um de R1, R2 e R3 ser independentemente selecionado a partir de imidazolilmetilo, pirazolilmetilo, tiazolilmetilo e piridiletilo. ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 3/18
  14. 15. Composto de acordo com a reivindicação 5, 1 2 3 caracterizado por qualquer um de R , R e R ser independentemente ciclo-hexilmetilo.
  15. 16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado por R1, R2 e R3 serem todos diferentes.
  16. 17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por pelo menos um de R1 e R2 ser selecionado a partir de hidroxialquilo (Ci-ε) e alcoxialquilo (Ci_6) .
  17. 18. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por pelo menos um de R1 e R2 ser alcoxialquilo (Ci-6) ·
  18. 19. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por pelo menos um de R1 e R2 ser selecionado a partir de metoximetilo e metoxietilo.
  19. 20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou 17 a 19, caracterizado por R3 ser selecionado a partir de alquilo (Ci_6) e aralquilo (Ci_6) . de acordo com a 3 ser alquilo (Ci-6) . de acordo com a RJ ser selecionado a c-butilo e isobutilo. de acordo com a ser isobutilo. de acordo com a ser aralquilo (Ci-6) . de acordo com a ser fenilmetilo.
  20. 21. Composto caracterizado por I
  21. 22. Composto caracterizado por etilo, isopropilo,
  22. 23. Composto caracterizado por R3
  23. 24. Composto 3 caracterizado por R
  24. 25. Composto caracterizado por R reivindicação 20, reivindicação 21, partir de metilo, reivindicação 22, reivindicação 20, reivindicação 24, 3 ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 4/18
  25. 26. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado por R5 ser heteroarilo de 5 ou 6 membros.
  26. 27. Composto de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por R5 ser selecionado a partir de isoxazol, isotiazol, furano, tiofeno, oxazol, tiazol, pirazol ou imidazol.
  27. 28. Composto de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por R5 ser selecionado a partir de isoxazol, furano ou tiofeno.
  28. 29. Composto de acordo com a reivindicação 28, caracterizado por R5 ser furano ou tiofeno.
  29. 30. Composto de acordo com a reivindicação 29, caracterizado por R5 ser furano-3-ilo ou tieno-2-ilo não substituídos.
  30. 31. Composto de acordo com a reivindicação 28, caracterizado por R5 ser isoxazol-3-ilo ou isoxazol-5-ilo. 31, um 31, um
  31. 32. Composto de acordo com a reivindicação caracterizado por R5 ser isoxazol-3-ilo que tem substituinte na posição 5. acordo com a reivindicação ser isoxazol-5-ilo que tem
  32. 33. Composto de 5 caracterizado por R substituinte na posição
  33. 34. Composto de acordo com a reivindicação 32 ou 33, caracterizado por o substituinte ser selecionado a partir de alquilo (Ci-6) , acido carboxílico, aminocarboxilato, alquil(Ci_ 6) aminocarboxilato, alquil (Ci_6) carboxilato, heteroaralquilo (Ci_e) , aralquilo (Ci_6) , heterocicloalquilo (Ci_6) e carbocicloalquilo (Ci-6) ·
  34. 35. Composto de acordo com a reivindicação 34, caracterizado por o substituinte ser selecionado a partir de metilo, etilo, isopropilo e ciclopropilmetilo. ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 5/18
  35. 36. Composto de acordo com a reivindicação 34, caracterizado por o substituinte ser selecionado a partir de heteroaralquilo (Ci_6) e heterocicloalquilo (Ci_6) .
  36. 37. Composto de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o substituinte ser 1,2,4-triazol-5-ilmetilo.
  37. 38. Composto de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o substituinte ser azetidina-l-ilmetilo.
  38. 39. Composto de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o substituinte ser 0, NR ou CH2 e R é H ou alquilo (C^g) .
    em que W é
  39. 40. Composto de acordo com a reivindicação 39, caracterizado por W ser O.
  40. 41. Composto de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o substituinte ser selecionado a partir de alcoxi(Ci-g) e alcoxialquilo (Ci-6) .
  41. 42. Composto de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por o substituinte ser selecionado a partir de metoxi, etoxi, metoximetilo e metoxietilo.
  42. 43. Composto de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por o substituinte ser selecionado a partir de ácido carboxilico, aminocarboxilato, alquil (Ci-6) aminocarboxilato, (alquil (Ci_6) ) 2aminocarboxilato ou alquil (Ci_6) carboxilato.
  43. 44. Composto de acordo com a reivindicação 43, caracterizado por o substituinte ser carboxilato de metilo.
  44. 45. Composto selecionado a partir de ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 6/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 7/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 8/18
    χζ: ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 9/18
    OMe Η -γν\Λτ 'Ν W Η X po ΪΓ ο
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 10/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 11/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 12/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 13/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 14/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 15/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 16/18
    ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 17/18
    e ΕΡ 1 948 678/ΡΤ 18/18
  45. 46. Composto de acordo com a reivindicação 1 tendo a fórmula:
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  46. 47. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46 e um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
  47. 48. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 47, caracterizada por ser oralmente biodisponível. 49. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 47 ou 48, para utilização no tratamento da inflamação, doença neurodegenerativa, doenças de emaciação muscular, cancro, doenças infecciosas crónicas, uma condição hiperproliferativa, insuficiência de atividade muscular, condições relacionadas com o sistema imunitário; para utilização na inibição ou redução da infeção por VIH; para utilização na alteração do nível da expressão de um gene virai num sujeito; ou para utilização na alteração de uma variedade de péptidos antigénicos produzidos pela proteassoma num organismo. Lisboa, 2013-07-09
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