PT1711481E - Processo para preparar carboxamidas 2-aminotiazol-5-aromáticas como inibidores de quinases - Google Patents

Description

ΡΕ1711481 1 DESCRIÇÃO "PROCESSO PARA PREPARAR CARBOXAMIDAS 2-AMINOTIAZOL-5-AROMÁTICAS COMO INIBIDORES DE QUINASES"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se com intermediários e formas cristalinas de carboxamidas de 2-aminotiazol-5-aromático que são úteis como inibidores de quinases, tal como inibidores de proteina tirosina quinases e p38 quinase

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Amidas de aminotiazole-aromático de fórmula I

em que Ar é arilo ou heteroarilo, L é um ligando alcileno opcional, e R2, R3, R4, e R5 são como definido nas especificações aqui incluidas, são úteis como inibidores de quinases, em particular, inibidores da proteina tirosina quinases e p38 quinase. É esperado que estes sejam úteis no tratamento de doenças associadas com proteína tirosina 2 ΡΕ1711481 quinases tal como doenças imunológicas e oncológicas [ver, Pat. US No. 6.596.746 (a patente '746), atribuída ao presente concessionário e aqui incorporada por referência], e situações associada à quinase p38 tal como doenças inflamatórias e imunes, como descrito no pedido de patente US N° de Série 10/773.790, apresentado em 6 de Fevereiro, 2004, que reivindica prioridade em relação ao pedido de patente Provisório US N° de Série 60/445.410, apresentado em 6 de Fevereiro, 2003 (a partir daqui pedido de patente '410), os quais também são ambos atribuídos ao presente concessionário e aqui incorporados por referência. O composto de fórmula (IV), 'N-(2-cloro-6-metil- fenil)-2- [ [6- [4- (2-hidroxietil)-1-piperazinil]-2-metil-4-pirimidil]-amino]-5-tiazolocarboxamida, é um inibidor de SRC/ABL e é útil no tratamento de doenças oncológicas.

Outras aproximações para preparar 2-aminotiazole-5-carboxilamidas são descritas na patente '746 e no pedido de patente '410. A patente '746 descreve um processo que envolve tratamento de clorotiazole com n-BuLi seguido pela reacção com isocianatos de fenilo para dar clorotiazole-benzamidas, que são depois transformadas no produto final 3 ΡΕ1711481 aminotiazole-benzamidas após protecçâo, substituição de

cloro por amino, e desprotecção, e.g., N—-v Prot. ..................,j* J Í ; 5 0-N=C-R ff \\ renra 1 c‘ -V if o R'NH-2 O

Desprot. 0 pedido de patente '410 descreve um processo em vários passos envolvendo primeiro, a conversão de ésteres metílico ou etílico de ácido aminotiazol não N-substituído carboxílico em ésteres de ácido bromotiazol carboxílico através diazotização com terc-butilo nitrilo e subsequente tratamento com CuBr2, e.g.,

em seguida, a hidrólise dos ésteres de bromotiazol resultando nos ácidos carboxílicos e a conversão dos ácidos nos cloretos de acilo correspondentes, e.g.,

em seguida finalmente, o acoplamento dos cloretos de acilo com anilinas para dar intermediários bromotiazole-benzamida 4 ΡΕ1711481 que foram de novo processados para dar os produtos finais aminotiazole-benzamida, e.g.,

Outra aproximação para preparar 2-aminotiazole-5-carboxamida inclui o acoplamento de ácidos 2-aminotiazole-5-carboxílicos com aminas utilizando várias condições acoplamento tal como DCC [Robert et al, J. Med. Chem. (1972), 15, na p. 1310], e DPPA [Marsham et al, J. Med. Chem. (1991), 34, na p. 1594],

Os métodos acima apresentam desvantagens no que diz respeito à produção de produtos secundários, à utilização de reagentes de acoplamento caros, rendimentos mais baixos do que desejável, e a necessidade de múltiplos passos reaccionais para se obter os compostos 2-aminotiazole-5-carboxamida.

Foi descrita a reacção de N,N-dimetil-N'-(amino-tiocarbonil)-formamidinas com α-halocetonas e ésteres para dar 5-carbonil-2-aminotiazóis. Ver Lin, Y, et al, J. Heterocyl. Chem. (1979), 16, na p 1377; Hartman, H. et al, J. Chem. Soc. Perkín Trans, (2000), 1, na p 4316; Noack, A. et al, Tetrahedron (2002), 58, na p 2137; Noack, A. et al, Angew Chem. (2001), 113, na p 3097; e Kantlehner, W. et al, J. Prakt. Chem./Chem.-Ztg. (1996), 338, na p 403. A reacção 5 ΡΕ1711481 de β-etoxi acrilatos e tioureias para preparar 2-aminotiazole-5-carboxilatos também foi relatada. Ver Zhao, R., et ai., Tetrahedron Lett. (2001), 42, na p 2102. No entanto, é sabido que a bromação electrofilica da acrilanilida e crotonanilida seguem tanto a bromação aromática como a adição às ligações duplas carbono-carbono a,β-insaturadas. Ver Autenrieth, Chem. Ber. (1905), 38, na p 2550; Eremeev et al., Chem. Heterocycl. Compd. Engl. Transi. (1984), 20, na p 1102.

Processos novos e eficientes para preparar 2-aminotiazole-5-carboxamidas são desejados.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção é dirigida para formas cristalinas dos compostos de fórmula (IV).

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A invenção é ilustrada por referência pelas figuras que a acompanham descritas abaixo.

Figura 1 mostra padrões de pXRD simulado (baixo) (calculado a partir das coordenadas atómicas à temperatura ambiente) e experimental (cima) para a forma cristalina mono-hidratada do composto de fórmula (IV).

Figura 2 mostra uma DSC e uma TGA da forma cristalina mono-hidratada do composto de Fórmula (IV). 6 ΡΕ1711481

Figura 3 mostra padrões de pXRD simulado (baixo) (calculado a partir de parâmetros atómicos ajustados à temperatura ambiente) e experimental (cima) para a forma cristalina do solvato de butanol do composto de fórmula (IV) .

Figura 4 mostra padrões de pXRD simulado (baixo) (calculado a partir de parâmetros atómicos ajustados a -40°C) e experimental (cima) para a forma cristalina do solvato de etanol do composto de fórmula (IV).

Figura 5 mostra padrões de pXRD simulado (baixo) (calculado a partir de parâmetros atómicos ajustados à temperatura ambiente) e experimental (cima) para a forma cristalina pura (N-6) do composto de fórmula (IV).

Figura 6 mostra padrões de pXRD simulado (baixo) (calculado a partir de parâmetros atómicos ajustados à temperatura ambiente) e experimental (cima) para a forma cristalina pura (T1H1-7) do composto de fórmula (IV).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Abreviaturas

Para facilitar a referência, as abreviaturas que se seguem podem ser aqui utilizadas: 7 ΡΕ1711481

Ph = fenilo

Bz = benzilo t-Bu = butilo terciário

Me = metilo

Et = etilo

Pr = propilo

Iso-P = isopropilo

MeOH = metanol

EtOH = etanol

EtOAc = acetato de etilo

Boc = terc-butiloxicarbonilo CBZ = carbobenziloxi ou carbobenzoxi ou benziloxicarbonilo DMF = dimetilformamida DMF-DMA = N,N-dimetilformamida-acetal dimetilico DMSO = sulfóxido de dimetilo DPPA = difenilfosforil -azida DPPF = 1,1'-bis (difenilfosfino)ferroceno HATU = hexafluorofosfato de O-benzotriazol-l-il-N,N,N',N'-tetrametilurónio LDA = di-isopropilamideto de litio TEA = trietilamina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetra-hidrofurano KOH = hidróxido de potássio K2CO3 = carbonato de potássio POCI3 = oxicloreto de fósforo EDC ou EDCI = 3-etil-3'-(dimetilamino)propil-carbodiimida DIPEA = diisopropiletilamina HOBt = hidrato de 1-hidroxibenzotriazole ΡΕ1711481 NBS = N-bromossuccinamida NMP = N-metil-2-pirrolidona NaH = hidreto de sódio NaOH = hidróxido de sódio Na2S203 = tiossulfato de sódio Pd = paládio

Pd-C ou Pd/C = paládio sobre carbono Min = minuto(s) L = litro mL = mililitro yL = microlitro g = grama(s) mg = miligrama(s) mol = moles mmol = milimole(s) meq = miliequivalente AT ou at = temperatura ambiente RBF = balão de fundo redondo ret. t. = tempo de retenção de HPLC (minutos) sat ou satd = saturado aq. = aquoso TLC = cromatografia em camada fina HPLC = cromatografia liquida de alto desempenho LC/MS = cromatografia liquida de alta resolução/espec- trometria de massa MS = espectrometria de massa NMR = ressonância magnética nuclear pf = ponto de fusão DSC = calorimetria diferencial de varrimento 9 ΡΕ1711481 TGA = análises de termogravimetria XRPD = padrão de difracção de raios-x de pó pXRD = padrão de difracção de raios-x de pó

Definições O que se segue são definições de termos utilizados nestas especificações e reivindicações apensas. A definição inicial aqui fornecida para um grupo ou termo aplica-se a esse grupo ou termo ao longo da especificação e reivindicações, individualmente ou como uma parte de outro grupo, a não ser no caso de indicação em contrário. "Solvente adequado" como é aqui utilizado pretende-se que refira um único solvente assim como uma mistura de solventes. Os solventes podem ser seleccionados, quando apropriado para uma dada reacção, de, por exemplo, solventes apróticos tal como DMF, DMA, DMSO, dimetilpro-pilenoureia, N-metilpirrolidona (NMP), e triamida hexame-tilfosfórica; solventes éteres tal como éter dietilico, THF, 1,4-dioxano, éter metil-t-butílico, dimetoximetano, e éter etilenoglicol- dimetilico; solventes álcool tais como MeOH, EtOH, e isopropanol; e solventes contendo halogéneos tal como cloreto de metileno, clorofórmio, tetracloreto de carbono, e 1,2-dicloroetano. Misturas de solventes podem também incluir misturas bifásicas. 0 termo "suspensão" como é aqui utilizado pre-tende-se que signifique uma solução saturada do composto de 10 ΡΕ1711481 Fórmula (IV) e uma quantidade adicional do composto de Fórmula (IV) para dar uma solução heterogénea do composto de Fórmula (IV) e um solvente. A presente invenção descreve formas cristalinas do composto de fórmula (IV) numa forma substancialmente pura. Como é aqui utilizado, "substancialmente pura" significa um composto tendo uma pureza superior a 90 porcento, incluindo 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, e 100 porcento.

Como um exemplo, uma forma cristalina do composto de fórmula (IV) pode ser substancialmente pura tendo uma pureza superior a 90 porcento, em que o restante inferior a 10 porcento de material compreende outra(s) forma(s) do composto de fórmula (IV), e/ou impurezas da reacção e/ou do processo resultando da sua preparação. Uma forma cristalina do composto de fórmula (IV) numa forma substancialmente pura pode então ser utilizada em composições farmacêuticas à qual são adicionados outros componentes desejados, por exemplo, excipientes, veículos, ou outras entidades quimicamente activas de diferente estrutura molecular.

Quando dissolvidas, as formas cristalinas do composto de fórmula (IV) perdem a sua estrutura cristalina, e passam então a ser referidas como solução do composto de fórmula (IV). Todas as formas da presente invenção, no entanto, podem ser utilizadas para a preparação de formulações líquidas em que o fármaco está dissolvido ou suspenso. Para além disso, as formas cristalinas do 11 ΡΕ1711481 composto de fórmula (IV) podem ser incorporadas em formulações sólidas.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz das formas cristalinas do composto de fórmula (IV) é combinada com um veiculo farmaceuticamente aceitável para produzir as composições farmacêuticas da invenção. Por "quantidade terapeuticamente eficaz" pretende-se significar uma quantidade que, quando administrada isolada ou uma quantidade que quando administrada com um agente terapêutico adicional, é eficaz para prevenir, suprimir, ou melhorar a doença ou condição ou a progressão da doença ou condição.

Numa forma de realização, a presente invenção fornece um mono-hidrato cristalino do composto de fórmula (IV).

m

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada está numa forma substancialmente pura.

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada está numa forma substancialmente pura, em que substancialmente puro é superior a 90 porcento puro. 12 ΡΕ1711481

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada do composto de Fórmula (IV) é caracterizada por um padrão de difracção de raios-X de pó substancialmente de acordo com o que se apresenta na Figura 1.

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada do composto de Fórmula (IV) é caracterizada por um termograma de calorimetria diferencial de varrimento e por uma análise de termogravimetria substancialmente de acordo com a que se apresenta na Figura 2.

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada do composto de Fórmula (IV) é caracterizada por um padrão de difracção de raios-x de pó (CuKa λ=1,5418Α a uma temperatura de cerca de 23°C) compreendendo quatro ou mais valores de 2Θ (alternativamente, compreendendo cinco ou mais, seis ou mais, ou compreendendo valores de 2Θ) seleccionados do grupo constituído por: 18,0+0,2, 18,4+0,2, 19,2+0,2, 19,6+0,2, 21,2+0,2, 24,5+0,2, 25,9+0,2, e 28,0+0,2.

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada do composto de Fórmula (IV) é caracterizada por um padrão de difracção de raios-x de pó (CuKa λ=1,5418Α a uma temperatura de cerca de 23°C) compreendendo quatro ou mais valores de 2Θ (alternativamente, compreendendo cinco ou mais, seis ou mais, ou compreendendo valores de 2Θ) seleccionados do grupo constituído por: 4,6+0,2, 11,2+0,2, 13,8+0,2, 15,2+0,2, 17,9+0,2, 19,1+0,2, 19,6+0,2, 23,2+0,2, 23,6+0,2. 13 ΡΕ1711481

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada do composto de Fórmula (IV) é caracterizada por parâmetros de célula unitária aproximadamente iguais aos seguintes:

Dimensões da célula: a (Â) = 13, 862 (1); b(Â) = 9,286(1); c(Â) = 38,143 (2);

Volume = 4910(1) Â3 Grupo espacial Pbca Moléculas/célula unitária: 8 Densidade (calculada) (g/cm3) : 1,300 em que o composto está a uma temperatura de cerca de -50°C.

Noutra forma de realização, a forma mono-hidra-tada do composto de Fórmula (IV) tem uma molécula de água por molécula de fórmula (IV) . fornece Fórmula

Noutra forma de realização, a presente invenção um solvato de butanol cristalino do composto de (IV)

(IV). 14 ΡΕ1711481

Noutra forma de realização, a forma do solvato de butanol do composto de Fórmula (IV) é caracterizada por parâmetros de célula unitária aproximadamente iguais aos seguintes:

Dimensões da célula: a(Â) = 22,8102 (6); b (Â) = 8,4691(3); c (Â) = 15, 1436 (5);

Volume = 2910,5(2) Â3 Grupo espacial P2i/a Moléculas/célula unitária: 4 Densidade (calculada) (g/cm3) : 1,283.

Noutra forma de realização, o solvato de butanol cristalino do composto de Fórmula (IV) é caracterizado por um padrão de difracção de raios-x de pó (CuKa λ=1,5418Α a uma temperatura de cerca de 23°C) compreendendo quatro ou mais valores de 2Θ (alternativamente, compreendendo cinco ou mais, seis ou mais, ou compreendendo valores de 2Θ) seleccionados do grupo constituído por: 5,9+0,2, 12,0+0,2, 13,0+0,2, 17,7+0,2, 24,1+0,2, e 24,6+0,2.

Noutra forma de realização, a presente invenção descreve uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de pelo menos uma das formas cristalinas do composto de Fórmula (IV) e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a presente invenção 15 ΡΕ1711481 descreve pelo menos uma das formas cristalinas do composto de Fórmula (IV) para ser utilizada no tratamento de cancro.

Noutra forma de realização, a presente invenção descreve pelo menos uma das formas cristalinas do composto de Fórmula (IV) para ser utilizada no tratamento de doenças oncológicas, em que as doenças oncológicas são seleccio-nadas de leucemia mielóide crónica (CML), tumor do estroma gastrointestinal (GIST), cancro do pulmão de pequenas células (SCLC), cancro do pulmão de células não-pequenas (NSCLC), cancro do ovário, melanoma, mastocitose, tumores de células germinativas, leucemia mielóide aguda (AML), sarcoma pediátrico, cancro da mama, cancro colo-rectal, cancro do pâncreas, e cancro da próstata.

Noutra forma de realização, a presente invenção é dirigida para a utilização de pelo menos uma das formas cristalinas do composto de Fórmula (IV), na preparação de um medicamento para o tratamento de doenças oncológicas, tais como as descritas acima.

Noutra forma de realização, a presente invenção é dirigida para a utilização de pelo menos uma das formas cristalinas do composto de Fórmula (IV) para ser utilizada no tratamento de doenças oncológicas, tais como descrito acima, que são resistentes ou intolerantes ao Gleevec® (STI-571) .

Esta invenção também inclui todas as combinações 16 ΡΕ1711481 de aspectos alternativos da invenção aqui referidos. É entendido que qualquer uma e todas as formas de realização da presente invenção podem ser consideradas em conjunto com qualquer outra forma de realização que descreva formas de realização adicionais da presente invenção. Para além disso, pretende-se que todos os elementos de uma forma de realização sejam combinados uns com os outros elementos de qualquer forma de realização para descrever outras formas de realização.

UTILIDADE 0 composto da reivindicação 1 preparado de acordo com a presente invenção inibe as proteína tirosina quinases, em especial a família Src quinase tal como LcK, Fyn, Lyn, Src, Yes, Hck, Fgr e Blk, e são portanto úteis no tratamento, incluindo prevenção e terapia, de doenças associadas a proteína tirosina quinase tal como doenças imonulógicas e oncológicas. 0 composto da reivindicação 1 pode também inibir receptores de tirosina quinase incluindo HER1 e HER2 e portanto pode ser útil no tratamento de doenças proliferativas tal como psoríase e cancro. A capacidade destes compostos de inibir o HER1 e outros receptores de quinase irão permitira sua utilização como agentes anti-angiogénicos para tratar doenças tal como cancro e retinopatia diabética. "Doenças associadas à proteína tirosina quinases" são as doenças que resultam de uma actividade aberrante da tirosina quinase, e/ou que são aliviada pela inibição de uma ou mais dessas enzimas. Por 17 ΡΕ1711481 exemplo, inibidores de Lck são importantes no tratamento de várias dessas doenças (por exemplo o tratamento de doenças autoimunes), a inibição de Lck bloqueia a activação das células T. 0 tratamento de doenças mediadas por células T, incluindo inibição de activação e proliferação de células T, é uma utilização particularmente preferida para o composto da reivindicação 1 preparado de acordo com o presente processo. A utilização do composto da reivindicação 1 no tratamento de doenças associadas à proteína tirosina quinases é exemplificado pelo, mas não é limitada ao, tratamento de um conjunto de doenças tal como: rejeição de transplante (tal como transplante de órgãos, transplante agudo ou heteroenxerto ou homoenxerto (tal como é utilizado no tratamento de queimaduras)); protecção contra as lesões de isquémia ou de reperfusão tal como lesões de isquémia ou de reperfusão que ocorrem durante o transplante de órgãos, enfarte do miocárdio, derrame cerebral ou outras causas; indução de tolerância a transplante; artrite (tal como artrite reumatóide, artrite psoriática ou osteoartrite); esclerose múltipla; doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC), tal como enfisema; doença inflamatória dos intestinos, incluindo colite ulcerativa e doença de Crohn; lúpus (lúpus eritematoso sistémico); transplante vs doença do hospedeiro; doenças de hipersensibilidade mediadas por células-T, hipersensibilidade do tipo retardado, e enteropatia glúten induzida (doença Celíaca); psoríase, dermatite de contacto (incluindo a provocada pela hera 18 ΡΕ1711481 venenosa); tireoidite de Hashimoto; síndroma de Sjogren; Hipertiroidismo Autoimune, tal como Doença de Graves; doença de Addison (doença autoimune das glândulas adr-enais) ; Doença autoimune poliglandular (também conhecia como síndroma autoimune poliglandular); alopécia autoimune; anemia perniciosa; vitiligo; hipopituitarismo autoimune; síndroma de Guillain-Barre; outras doenças auto-imunes; cancro, incluindo cancros em que LcK ou outras quinases da família-Src tal como Src são activadas ou sobre-expressas, tal como carcinoma do cólon e timoma, e cancros em que a actividade das quinases da família-Src facilita o crescimento ou sobrevivência tumoral; glomerulonefrite; doença do soro; urticária; doenças alérgicas tal como alergias respiratórias (asma, febre dos fenos, rinite alérgica) ou alergias dérmicas; esclerodermia; micóide fungoíde; respostas inflamatórias agudas (tal como síndroma do stresse respiratório agudo e lesão de isquémia/reper-fusão); dermatomiosite; alopécia areata; dermatite actínica crónica; eczema; doença de Behcet; pustuloses palmoplan-tares; Pioderma gangrenoso; síndroma de Sezary; dermatite atópica; esclerose sistémica; e morféia.

Os compostos da presente invenção são úteis para o tratamento de cancros tal como leucemia mielóide crónica (CML), tumor do estroma gastrointestinal (GIST), cancro do pulmão de pequenas células (SCLC), cancro do pulmão de células não-pequenas (NSCLC), cancro do ovário, melanoma, mastocitose, tumores de células germinativas, leucemia mielóide aguda (AML), sarcoma pediátrico, cancro da mama, 19 ΡΕ1711481 cancro colo-rectal, cancro do pâncreas, cancro da próstata e outros associados com proteína tirosina quinasess tal como, por exemplo, SRC; BCR-ABL e c-KIT. Os compostos da presente invenção também são úteis no tratamento do cancros que são sensíveis a e resistentes a agentes quimiotera-pêuticos que são dirigidos a BCR-ABL e c-KIT, tal como, por exemplo, Gleevec® (STI-571). Numa forma de realização da invenção, por exemplo, o composto de fórmula (IV) (incluindo, mas não estando limitado às formas cristalinas do composto aqui descrito, tal como a forma cristalina mono-hidratada) é útil no tratamento de doentes resistentes ou intolerantes ao Gleevec® (STI-571) para doenças tal como leucemia mielóide crónica (CML), ou outros cancros (incluindo outras leucemias) como aqui descrito.

Noutra forma de realização da invenção o composto da reivindicação 1 é administrado em conjunto com pelo menos um agente anti-neoplásico.

Como é aqui utilizada, a frase "agente anti-neoplásico" ou "agente anti-cancerígeno" é sinónimo de "agente quimioterapêutico" e/ou "agente anti-proliferativo" e refere-se a compostos que previnem o cancro, ou a multiplicação de células hiperproliferativas. Agentes anti-proliferativos evitam a multiplicação de células cancerosas por: (1) interferirem com a capacidade das células de replicarem o DNA e (2) induzirem a morte celular e/ou apoptose nas células cancerígenas. 20 ΡΕ1711481

Classes de compostos que podem ser utilizados como agentes citotóxicos anti-proliferativos e/ou agentes anti-proliferativos incluem o seguinte:

Agentes de alquilação (incluindo, sem limitação, mostarda nitrogenada, derivados de etilenimina, sulfonatos de alquilo, N-nitrosoureias e triazenos) : Mostarda de Uracilo, Clormetina, Ciclofosfamida (Cytoxan), Ifosfamida, Melfalan, Clorambucil, Pipobroman, Trietilenomelamina, Trietilenotiofosforamina, Busulfan, Carmustina, Lomustina, Streptozocin, Dacarbazina, e Temozolomida.

Anti-metabolitos (incluindo, sem limitações, antagonistas de ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina e inibidores de adenosina deaminase): Metotrexato, 5-Fluorouracilo, Floxuridina, Citarabina, 6-Mercaptopurina, 6-Tioguanina, Fosfato de Fludarabina, Pentostatina, e Gemcitabina.

Produtos naturais e seus derivados (por exemplo, alcaloides de vinca, antibióticos anti-tumorais, enzimas, linfocinas e epipodofilotoxinas):Vimblastina, Vincristina, Vindesina, Bleomicina, Dactinomicina, Daunorubicina, Doxorubicina, Epirubicina, Idarubicina, Ara-C, paclitaxel (paclitaxel é comercializado como Taxol®), Mitramicina, Deoxico-formicina, Mitomicina-C, L-Asparaginase, Interfe-rões (em especial IFN-a), Etoposida, e Teniposida.

Outros agentes citotóxicos anti-proliferaativos 21 ΡΕ1711481 e/ou agnetes anti-proliferativos são navelbeno, CPT-11, anastrazole, letrazole, capecitabina, reloxafina, ciclofos-famida, ifosamida, e droloxafina. A frase "terapia por radiação" inclui, mas não está limitada a, raios-x ou raios gama que são distribuídas quer a partir de uma fonte externa aplicada tal como uma radiação quer por implantação de pequenas fontes radioactivas. A terapia por radiação pode ser útil em combinação com compostos da presente invenção.

Os que se seguem podem também ser úteis quando administrados em combinação com compostos da presente invenção.

Agentes que afectam os microtúbulos interferem com a mitose celular e são bem conhecidos na técnica pela sua actividade citotóxica anti-proliferativa. Agentes que afectam os microtúbulos úteis na invenção incluem, mas não estão limitados a, allocolchicina (NSC 406042), Hali-condrina B (NSC 609395), colchicina (NSC 757), derivados de colchicina (e.g., NSC 33410), dolastatina 10 (NSC 376128), maitansina (NSC 153858), rizoxina (NSC 332598), paclitaxel (Taxol®, NSC 125973), derivados de Taxol® (e.g., derivados (e.g., NSC 608832), tiocolchicina NSC 361792), tritilo cisteina (NSC 83265), sulfato de vimblastina (NSC 67574), epotilonas naturais e sintéticas incluindo mas não estando limitadas a epotilona A, epotilona B, epotilona C, epo-tilona D, desoxiepotilona A, desoxiepotilona B, [IS- 22 ΡΕ1711481 [IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi- 8.8.10.12.16- pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)- etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona (revelado en Patente US 6.262.094, publicada em 17 de Julho, 2001), [lS-[lR*,3R*(E),7R*,10S*,HR*,12R*,16S*]]-3- [2-[2-(aminometil)-4-tiazolil]-1-metiletenil]-7,11-di-hidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-4,17-dioxabiciclo[14.1.0]— heptadecano-5,9-diona (revelado em USSN 09/506.481 apresentado em 17 de Fevreiro, 2000, e os exemplos 7 e 8) , [1S- [1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi- 8.8.10.12.16- pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]-heptadecano-5,9-diona, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-3-[2-[2-(aminometil) -4-tiazolil]-1-metiletenil]-7,ll-di-hidroxi-8,8,10, 12.16- pentametil-4,17-dioxabiciclo[14.1.0]-heptadecano-5, 9-diona, e seus derivados; e outros agentes disruptores. Agentes anti-neoplásicos incluem discodermolida (ver Service, (1996) Science, 274:2009) estramustina, nocodazol, MAP4, e outros semelhantes. Exemplos destes agentes são também descritos na literatura cientifica e de patentes, ver, e.g.r Bulinski (1997) J. Cell. Sei. 110:3055—3064; Panda (1997) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 94:10560-10564; Muhlradt (1997) Câncer Res. 57:3344-3346; Nicolaou (1997) Nature 387:268-272; Vasquez (1997) Mol. Biol. Cell. 8:973-985;Panda (1996) J. Biol. Chem. 271:29807-29812.

Nos casos em que se pretende tornar a proliferação aberrante das células quiescentes, em conjunto com ou antes do tratamento com métodos quimioterapêuticos da 23 ΡΕ1711481 invenção, hormonas e esteróides (incluindo análogos sintéticos) : 17a-Estradiol, Dietilstilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Proprionato de dromostanolona, Testolactona, Acetato de megestrol, Metilprednsolona, Metil-testosterona, Prednisolona, Triamcinolona, Clorotri-aniseno, Hidroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramus-tina, Acetato de Medroxiprogesterona, Leuprolida, Flutami-da, Tomerifeno, Zoladex podem também ser administrados ao paciente.

Também adequados para serem utilizados em combinação com métodos quimioterapêuticos da invenção são anti-angiogénicos tal como inibidores metaloproteinase da matriz, e outros inibidores VEGF, tal como anticorpos anti-VEGF e moléculas pequenas tal como ZD647 e SU6668 também estão incluídas. Anticorpos anti-Her2 de Genetech podem também ser utilizados. Um inibidor de EGFR adequado é EKB-569 (um inibidor irreversível). Também incluídos estão o anticorpo C225 da Imclone imunoespecífico para o EGFR, e inibidores de src.

Também adequado para ser utilizado como agente citostatico anti-proliferativo e Casodex que torna não proliferativos os carcinomas dependentes de androgénio. Ainda um outro exemplo de um agente citostático é o anti-estrogénio Tamoxifeno que inibe a proliferação ou crescimento de cancro de mama dependente de estrogénio. Inibidores da transdução dos sinais de proliferação celular são agentes citostáticos. Exemplos são inibidores do factor 24 ΡΕ1711481 de crescimento epidérmico, inibidores de Her-2, inibidores de MEK-1 quinase, inibidores de MAPK quinase, inibidores de PI3, inibidores de Src quinase, e inibidores de PDGF.

Como foi mencionado, alguns agentes anti-proli-ferativos são agentes anti-angiogénicos e anti-vasculares e, interrompendo o fluxo sanguíneo para tumores sólidos, tornando as células cancerígenas quiescentes por as privar de nutrição. A castração, que também torna os carcinomas dependentes de androgénio não proliferativos, pode também ser utilizada. A falta de nutrição por outro meio que não a interrupção do fluxo sanguíneo por meio cirúrgico é outro exemplo de um agente citostático. Uma classe particular de agente citostático anti-vascular é a das combretastatinas. Outro exemplo de agentes citostáticos inclui os inibidores de MET quinase, inibidores de MAP quinase, inibidores de não-receptores e de receptores de tirosina quinases, inibidores de sinalização de integrinas, e inibidores de receptores de factor de crescimento semelhante a insulina.

Também indicados são antraciclinas (e.g., dauno-rubicina, doxorubicina), citarabina (ara-C; Cytosar-U®); 6-tioguanina (Tabloid®), mitoxantrona (Novantrone®) e eto-posida (VePesid®), amsacrina (AMSA), e ácido all-trans-retinóico (ATRA).

Os compostos da presente invenção podem ser úteis em combinação com inibidores BCR-ABL tal como, mas não estando limitados a, Gleevec® (imatinib, STI-571) ou AMN-107, o composto apresentado abaixo 25 ΡΕ1711481

Os compostos da presente invenção podem ser úteis em combinação com compostos anti-cancerigenos tal como fentanilo, doxorubicina, interferão alfa-n3, palonosetron, dolasetron, anastrozol, exemestano, bevacizumab, bicaluta-mida, cisplatina, dacarbazina, citarabina, clonidina, epirubicina, levamisol, toremifeno, fulvestrant, letrozole, tamsulosina, nitrato de gálio, trastuzumab, altretamina, hidroxicarbamida, ifosfamida, interferão alfacon-1, gefi-tinib, granisetron, leuprorelin, dronabinol, megestrol, petidina, prometazina, morfina, vinorelbina, pegfilgrastim, filgrastim, nilutamida, tietilperazina, leuprorelina, pegaspargase, muromonab-CD3, porfimero sódico, cisplatina, abarelix, capromab, samario SM153, lexidronam, paclitaxel, docetaxel, etoposido, triptorelin, valrubicina, nofetumomab merpentano tecénio 99m Tc, vincristina, capecitabina, estreptozocina, e ondansetron.

Assim, a presente invenção fornece métodos para o tratamento de vários tipos de cancros, incluindo mas não estando limitado, aos seguintes: 26 ΡΕ1711481 carcinoma incluindo o da bexiga (incluindo cancro da bexiga acelerado e metastático), mama, colon (incluindo cancro colo-rectal), rim, fígado, pulmão (incluindo cancro do pulmão de pequenas células e de células não-pequenas e adenocarcinoma do pulmão), ovário, próstata, testículos, tracto genito-urinário, sistema linfático, recto, laringe, pâncreas, (incluindo carcinoma pancreático exócrino, esófago, estômago, vesícula biliar, cérvix, tiróide, e pele (incluindo carcinoma de células escamosas); tumores hematopoiéticos da linhagem linfócita incluindo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, tricoleucemia, linfoma histiocítico, e linfoma de Burketts; tumores hematopoiéticos da linhagem mielóide incluindo leucemias mielogénica aguda e crónica, síndroma mielodisplástico, leucemia mielóide, e leucemia promielo-cítica; tumores do sistema nervoso central e periférico incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma, e schwan-nornas; tumores de origem mesenquimal incluindo fibrosar-coma, rabdomiosarcoma, e osteosarcoma; e outros tumores incluindo melanoma, xenoderma 27 ΡΕ1711481 pigmentosum, queratoacantoma, seminoma, cancro folicular da tiróide, e teratocarcinoma. A presente invenção fornece métodos para o tratamento de várias doenças proliferativas não cancerosas. A invenção é útil no tratamento de GIST, cancro da mama, cancro da pâncreas, cancro do cólon, NSCLC, CML, e ALL, sarcoma, e vários cancros pediátricos.

Os compostos da presente invenção são inibidores de proteínas tirosina quinases e como tal são úteis no tratamento do doenças imunológicas para alem de doenças oncológicas. A Patente U.S. No. 6.596.746 descreve a utilidade do composto em doenças imunológicas e é aqui incorporado por referencia para a descrição do composto nestas doenças imunológicas. A presente invenção também inclui uma composição farmacêutica útil no tratamento de cancro, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz das combinações desta invenção, com ou sem veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. As composições farmacêuticas desta invenção compreendem um agente ou agentes anti-proliferativos, o composto da reivindicação 1, e um veículo farmaceuticamente aceitável. 0 método implica a utilização de um agente neoplásico em combinação com o composto da reivindicação 1. As composições da presente invenção podem ainda compreender um ou mais ingrediente (s) 28 ΡΕ1711481 adicional (ais) farmaceuticamente aceitável(eis) tal como alúmen, estabilizadores, agentes anti-microbianos, tampões, agentes corantes, agentes aromatizantes, adjuvantes, e outros semelhantes. Os agentes anti-neoplásicos, compostos e composições da presente invenção podem ser administrados oralmente ou de modo parentérico incluindo as vias de administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea, rectal e tópica. A presente invenção também descreve a utilização de compostos obtidos com o processo inventivo para preparar também composições farmacêuticas capazes de tratar condições associadas com Src-quinase, incluindo as condições descritas acima. As referidas condições podem conter outros agentes terapêuticos. As composições farmacêuticas podem ser formuladas utilizando veículos sólidos ou líquidos convencionais, assim como aditivos farmacêuticos de um tipo apropriado ao modo de administração desejado (e.g., exci-pientes, ligandos, conservantes, estabilizantes, aromatizantes, etc.) de acordo com técnicas tal como as bem conhecidas na técnica de formulações farmacêuticas.

As referidas composições farmacêuticas podem ser administradas por qualquer meio adequado à condição a ser tratada, a qual pode depender da necessidade de tratamento localizado ou da quantidade de fármaco a ser libertada. A administração tópica é geralmente preferida para doenças relacionadas com a pele, e o tratamento sistémico para doenças cancerosas ou pré-cancerosas, embora outros modos 29 ΡΕ1711481 de libertação sejam contemplados. Por exemplo, os compostos da reivindicação 1 podem ser libertados de modo oral, tal como na forma de comprimidos, cápsulas, grânulos, pós, ou formulações liquidas incluindo xaropes; de modo tópico, tal como na forma de soluções, suspensões, géis ou unguentos; de modo sub-lingual; de modo bocal; de modo parentérico, tal como modo subcutâneo, intravenoso, intramuscular ou intraesternal, ou técnicas de infusão (e.g., como soluções ou suspensões estéreis injectáveis aq. ou não-aq.); de modo nasal tal como spray para inalação; de modo tópico, tal como na forma de um creme ou unguento; de modo rectal tal como na forma de supositórios; ou de modo lipossomal.

Formulações de dosagem unitária contendo veículos ou diluentes não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados. Os compostos da reivindicação 1, preparados de acordo com o processo inventivo, podem ser administrados numa forma adequada para libertação imediata ou libertação prolongada. Libertação imediata ou libertação prolongada pode ser conseguida com composições farmaceuticamente aceitáveis ou, em particular no caso da libertação prolongada, com dispositivos tal como implantes subcutâneos ou bombas osmóticas.

Exemplos de composições para administração tópica incluem um veiculo tópico tal como PLASTIBASE® (óleo mineral gelificado com polietileno)

Exemplos de composições para administração oral 30 ΡΕ1711481 incluem suspensões que podem conter, por exemplo, celulose microcristalina conferir volume, ácido alginico ou alginato de sódio como agente de suspensão, metilato de celulose como melhorador da viscosidade, e agentes ou aromatizantes tais como os conhecidos na técnica; e comprimidos de libertação imediata que podem conter, por exemplo celulose microcristalina, fosfato dicálcico, amido, estearato de magnésio e/ou lactose e/ou outros excipientes, ligantes, distensores, desintegrantes, diluentes e lubrificantes tal como os conhecidos na técnica. O composto da reivindicação 1 pode também ser distribuído de modo oral por administração sub-lingual e/ou bocal, e.g. com comprimidos moldados, comprimidos, ou liofilizados. Exemplos de composições podem incluir diluentes que se dissolvem rapidamente tal como manitol, lactose, sacarose, e/ou ciclodextrinas. Também incluídos nestas formulações podem estar excipientes de peso molecular elevado tal como celuloses (AVICEL®) ou polietileno glicóis (PEG); um excipiente para auxiliar a adesão à mucosa tal como hidroxipropilato de celulose (SCMC), e/ou copolímero de anidrido maleico (e.g., CARBOPOL 934®). Agentes lubrificantes, anti-aderentes, aromatizantes, corantes e estabilizantes podem também ser adicionados para facilitar o fabrico e a utilização.

Um exemplo de uma composição para administração oral é o composto de fórmula (IV), lactose mono-hidratada (fase intra-granular), celulose microcristalina (fase intra-granular), croscarmelose de sódio (fase intra- 31 ΡΕ1711481 granular), hidropropilato de celulose (fase intra-gra-nular) , celulose microcristalina (fase extra-granular), croscarmelose de sódio (fase extra-granular), e estearato de magnésio (fase extra-granular).

Exemplo de composições para administração nasal por aerossol ou inalação inclui soluções que podem conter, por exemplo, álcool benzilico ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para melhorar a absorção e/ou biodisponibilidade, e/ou outros agentes de solubilidade ou de dispersão tal como os conhecidos na técnica.

Exemplos de composições para administração parentérica incluem soluções ou suspensões injectáveis que podem conter, por exemplo diluentes ou solventes aceitáveis para administração parentérica adequados, não tóxicos, tal como manitol, 1,3-butanodiol, água, solução de Ringer, uma solução isotónica de cloreto de sódio, ou outro agente de dispersão ou de humidificação adequado, incluindo mono- ou di-glicerideos de síntese, e ácidos gordos, incluindo ácido oleico.

Exemplos de composições para administração rectal incluem supositórios que podem conter, por exemplo, excipientes não irritantes adequados, tal como manteiga de cacau, ésteres de glicerídeos ou polietileno glicóis de síntese, que são sólidos à temperatura habitual mas liquefazem e/ou dissolvem na cavidade rectal para libertar o fármaco. 32 ΡΕ1711481 A quantidade eficaz do composto da reivindicação 1 pode ser determinada por um perito na técnica, e inclui exemplos de quantidades de dosagens para um mamífero de desde cerca de 0,05 a 100 mg/kg de peso corpóreo de composto activo por dia, que podem ser administradas numa única dose ou na forma de doses individuais divididas, tal como 1 a 4 vezes por dia. Deve ser entendido que o nível específico das doses e a frequência da dosagem para qualquer indivíduo particular pode variar e será dependente de vários factores, incluindo a actividade do composto específico utilizado, a estabilidade do metabolismo e a duração da acção a esse composto, a espécie, idade, massa corpórea, estado geral de saúde, sexo e dieta do sujeito, o modo e altura da administração, taxa de excreção, combinação de fármacos, e gravidade da condição particular. Sujeitos preferidos para o tratamento incluem animais, mais preferencialmente espécies de mamíferos tal como seres humanos, e animais domésticos tal como cães, gatos, cavalos e outros semelhantes. Assim, quando o termo "doente" é aqui utilizado, pretende-se que esse termo inclua todos os sujeitos, mais preferencialmente espécies de mamíferos que são afectados por mediação dos níveis de Src quinase.

Quando administrado de modo intravenoso, as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV são administrados utilizando as formulações da invenção. Numa forma de realização, os compostos da pressente invenção, são administrados por infusão IV ao longo de um período de 33 ΡΕ1711481 tempo desde cerca de 10 minutos até cerca de 3 horas, preferencialmente cerca de 30 minutos até cerca de 2 horas, mais preferencialmente desde cerca de 45 minutos até cerca de 90 minutos, e ainda mais preferencialmente cerca de 1 hora. Habitualmente, os compostos são administrados de modo intravenoso numa dose desde cerca de 0,5 mg/m2 até 65 mg/m2, preferencialmente cerca de 1 mg/m2 até 50 mg/m2, mais preferencialmente cerca de 2,5 mg/m2 até 30 mg/m2, e ainda mais preferencialmente cerca de 25 mg/m2.

Um perito na técnica irá facilmente saber como converter doses de mg/kg em mg/m2 dados quer um quer ambos a altura e ou o peso do doente (Ver, e.g., http:// www.fda.gov/cder/câncer/animalframe.htm).

Como discutido acima, as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV podem ser administrados de modo oral, de modo intravenoso, ou ambos. Em particular, os métodos da invenção incluem protocolos de dosagem tal como uma vez por dia durante 2 a 10 dias, preferencialmente cada 3 a 9 dias, mais preferencialmente cada 4 a 8 dias e ainda mais preferencialmente cada 5 dias. Numa forma de realização existe um periodo de 3 dias a 5 semanas, alternativamente de 4 dias a 4 semanas, ou 5 dias a 3 semanas, ou 1 semana a 2 semanas, entre ciclos em que não há tratamento. Noutra forma de realização as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV podem ser administrados de modo oral, de modo intravenoso, ou ambos, uma vez por dia durante 3 dias, com um periodo de 1 semana a 3 semanas 34 ΡΕ1711481 entre ciclos em que não há tratamento. Ainda numa outra forma de realização os compostos da presente invenção, as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV, podem ser administrados de modo oral, de modo intravenoso, ou ambos, uma vez por dia durante 5 dias, com um período de 1 semana a 3 semanas entre ciclos em que não há tratamento.

Noutra forma de realização o ciclo de tratamentos para administração dos compostos da presente invenção, as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV, é de uma vez por dia durante 5 dias consecutivos e o período entre ciclos de tratamentos é desde 2 até 10 dias, ou alternativamente uma semana. Numa forma de realização, um composto da presente invenção, por exemplo, um composto de fórmula IV, é administrado uma vez por dia durante 5 dias consecutivos, seguido por 2 dias em que não há tratamento.

Os compostos da presente invenção, as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV, podem também ser administrados de modo oral, de modo intravenoso, ou ambos uma vez cada 1 a 10 semanas, cada 2 a 8 semanas, cada 3 a 6 semanas, alternativamente cada 3 semanas.

Num outro método da invenção, os compostos da presente invenção, as formas cristalinas dos compostos de fórmula IV, são administrados num ciclo de 28 dias em que os compostos são administrados no dia 1, 7, e 14 e admini-trados de modo intravenoso no dia 21. Alternativamente, os compostos da presente invenção, as formas cristalinas dos 35 ΡΕ1711481 compostos de fórmula IV, são administrados num ciclo de 28 dias em que os compostos de fórmula IV são administrados de modo oral no dia 1 e de modo intravenoso nos dias 7, 14, e 28.

De acordo com os métodos de administração dos compostos cristalinos da invenção, os compostos de fórmula IV são administrados até o doente mostrar uma resposta, por exemplo, uma redução do tamanho do tumor, ou até ser atingida uma dose limite de toxicidade.

Compostos dentro dos objectivos da invenção podem ser testados para a actividade como inibidores de proteína quinases utilizando os ensaios descritos abaixo, ou suas variações que estão dentro dos conhecimentos dos peritos na técnica.

Ensaios celulares (1) Fosforilação da tirosina celular Células T Jurkat são incubadas com os compostos teste e em seguida são estimuladas pela adição de anticorpos de CD3 (anticorpo monoclonal G19-4). As células são lisadas após 4 minutos ou outro intervalo de tempo desejado pela adição de um tampão de lise contendo detergente NP-40. A fosforilção das proteínas é detectada por ímmunoblotting com anti-fosfotirosina. Estes procedimentos são descritos em Schieven, G.L., Mittler, R.S., 36 ΡΕ1711481

Nadler, S.G., Kirihara, J.M., Bolen, J.B., Kanner, S.B., e Ledbetter, J.A., "ZAP-70 tyrosine kinase, CD45 and T cell receptor involvement in UV and H2O2 induced T cell signal transduction", J. Biol. Chem., 269, 20718-20726 (1994) e as referências ai incorporadas. Os inibidores Lck inibem a fosforilação de tirosina de proteínas celulares induzida por anticorpos anti-CD3.

Para a preparação de G19-4, ver Hansen, J.A., Martin, P.J., Beatty, P.G., Clark, E.A., e Ledbetter, J.A., "Human T lymphocyte cell surface molecules defined by the workshop monoclonal antibodies", em Leukocyte Typing I, A. Bernard, J. Boumsell, J. Dausett, C. Milstein, e S.

Schlossman, eds. (Nova York: Springer Verlag), p. 195-212 (1984); e Ledbetter, J.A., June, C.H., Rabinovitch, P.S., Grossman, A., Tsu, T.T., e Imboden, J.B., "Signal transduction through CD4 receptors: stimulatory vs.

Inhibitory activity is regulated by CD4 proximity to the CD3/T cell receptor". Eur. J. Immunol., 18, 525 (1988). (2) Ensaio do cálcio

Os inibidores Lck bloqueiam a mobilização do cálcio nas células T estimuladas com anticorpos anti-CD3. As células são carregadas com o corante indicador de cálcio indo-1, são tratadas com anticorpo anti-CD3 tal como 0 anticorpo monoclonal C19-4, e a mobilização do cálcio é medida utilizando citometria de fluxo registando as 37 ΡΕ1711481 mudanças na razão azul/violeta do indo-1 como descrito em Schieven, G.L., Mittler, R.S., Kirihara, J.M., Bolen, J.B., Kanner, S.B., e Ledbetter, J.A., "ZAP-70 tyrosine kinase, CD4 5 and T cell receptor involvement in UV and H2O2 induced T cell signal transduction", J. Biol. Chem., 269, 20718 — 20726 (1994), e as referencias ai incorporadas. (3) Ensaios de proliferação

Os inibidores Lck inibem a proliferação de células T de sangue periférico normal de ser humano para crescer com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28. Um prato de 96 poços é coberto com um anticorpo monoclonal de CD3 (tal como G19-4), deixa-se o anticorpo ligar, e em seguida o prato é lavado. O anticorpo ligado ao prato serve para estimular as células. São adicionadas células T de sangue periférico normal de ser humano aos poços em conjunto com o composto teste mais anticorpo anti-CD28 para originar co-estimulação. Após um período de tempo desejado (e.g., 3 dias) , é adicionado [3H]-timidina às células, e após nova incubação para permitir a incorporação do marcador nos DNA recentemente sintetizado, as células são recolhidas e contadas num contador de cintilação para medir a proliferação celular.

Os exemplos que se seguem ilustram a invenção mas não devem ser interpretados como uma sua limitação. ΡΕ1711481 38

EXEMPLOS

Exemplo 5

Prepraração de: N- (2-cloro-6-metilfenil)-2- (6-(4-(3-hidroxietil)-piperazin-l-il)-2-metilpirimidin-4-ilamino)tiazole-5-carbocamida (0 composto de Fórmula (IV))

HO (IV) 5A. 1 — (6-Cloro-2-metilpirimidin-4-il) tioureia NHa (5A)

T

Me A uma suspensão de 4-amino-5-cloro-2-metilpiri-midina (6,13 g, 42,7 mmole) em THF (24 mL) adicionou-se isotiocianato formato de etilo (7,5 mL, 63,6 mmole), e a mistura foi aquecida ao refluxo. Após 5h, adicionou-se outra porção de isotiocianato formato de etilo (1,0 mL, 8,5 mmole) e após 10 h, uma porção final (1,5 mL, 12,7 mmole) 39 ΡΕ1711481 foi adicionada e a mistura foi agitada mais 6h. A suspensão foi evaporada sob vácuo para remover a maior parte do solvente e adicionou-se heptano ao resíduo. 0 sólido foi recolhido por filtração em vácuo e foi lavado com heptano (2x5 mL) dando 8,01 g (68% de rendimento) do intermediário 6-cloro-2-metilpirimidin-4-ilcarbamotioil-carbamato de etilo.

Uma solução de 6-cloro-2-metilpirimidin-4-il-carbamotioilcarbamato de etilo (275 mg, 1,0 mmole) e hdróxiod e sódio IN (3,5 eq.) foi aquecida e agitada a 50°C durante 2h. A suspensão resultante foi arrefecida a 20-22°C. O sólido foi recolhido por filtração em vácuo, lavado com água, e seco para dar 185 mg de 1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-il)tioureia (91% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) : δ 2,51 (s, 3H) , 7,05 (s, 1H) , 9,35 (s, 1H) , 10,07 (s, 1H) , 10,91 (s, 1H) ; 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) : δ 25, 25; 104,56; 159,19; 159, 33; 167,36; 180,91. 5B. (E)-N-(2-Cloro-6-metilfenil)-3-etoxi- acrilamida

A uma solução fria em agitação de 2-cloro-6-metilanilina (59,5 g, 0,42 mole) e piridina (68 mL, 0,63 mole) em THF (600 mL) adicionou-se lentamente cloreto de 3-etoxicriloilo (84,7 g, 0,63 mole) mantendo a temperatura a 40 ΡΕ1711481 0-5°C. As mistura foi então aquecida e agitada duranet 2 horas a 20°C. Adicionou-se ácido clorídrico (IN, 115 mL) a 0-10°C. A mistura foi diluída com água (310 mL) e a solução resultante foi concentrada sob vácuo para dar uma suspensão espessa. A suspensão foi diluída com etanol (275 mL) e foi agitada durante 15 min. a 20-22°C e em seguida lh a 0°C. O sólido foi recolhido por filtração em vácuo, lavado com água (2 x 75 ml) e seco para dar 74,1 g (73,6% de rendimento) de (E)-N-(2-cloro-6-metilfenil)-3-etoxiacri-lamida) . 3H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 1,26 (t, 3H, J=7 Hz), 2,15 (s, 3H) , 3,94 (q, 2H, J=7 Hz), 5,58 (d, 1H, J=12,4

Hz), 7,10-7,27 (m, 2H, J=7,5 Hz), 7,27-7,37 (d, 2H, J=7,5 Hz), 7,45 (d, 1H, J=12,4 Hz), 9,28 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) : δ 14,57; 18,96; 67,17; 87, 99; 126,80; 127,44; 129,07; 131,32; 132,89; 138,25; 161,09; 165,36. 5C. 2-Amino-N-(2-cloro-6-metilfenil)tiazole-5-carboxâmida

Cl

(5Q A uma mistura de composto 5B (5,00 g, 20,89 mmole) em 1,4-dioxano (27 mL) e água (27 mL) foi adicionado NBS (4,08 g, 22,9 mmole) entre -10 a 0°C. A suspensão foi aquecida e agitada a 20-22°C durante 3h. Adicionou-se tioureia (1,60 g, 21 mmole) e a mistura foi aquecida a 80°C. Após 2h, a solução resultante foi arrefecida a 20-22° 41 ΡΕ1711481 e foi adicionado hidróxido de amónio (4,2 mL) conc. gota a gota. A suspensão resultante foi concentrada sob vácuo até cerca de metade do volume e foi arrefecida a 0-5°C. 0 sólido foi recolhido por filtração em vácuo, lavado com água fria (10 mL), e seco para dar 5,3 g (94,9%) de 2-amino-N-(2-cloro-6-metilfenil)tiazole-5-carboxamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) : δ 2,19 (s, 3H) , 7,09-7,29 (m, 2H, J=7,5 Hz), 7,29-7,43 (d, 1H, J=7,5 Hz), 7,61 (s, 2H) , 7,85 (s, 1H) , 9,63 (s, 1H) ; 13C NMR (125 MHz, DMSO-dg) : δ 18,18; 120,63; 126,84; 127,80; 132,41; 133,63; 138,76; 142,88; 159,45; 172,02. 5D. 2- (6-Cloro-2-metilpirimidin-4-ilamino)-N-(2- cloro-6-metilfenil)tiazole-5-carboxamida

(5D) A uma solução de composto 5C em agitação (5,00 g, 18,67 mmole) e 4,6-dicloro-2-metilpirimidina (3,65 g, 22,4 mmole) em THF (65 mL) adicionou-se lentamente uma solução a 30%p de t-butóxido em THF (21,1 g, 65,36 mmole) com arrefecimento mantendo a temperatura a 10-20°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h e foi arrefecida a 0-5°C. Adicionou-se lentamente ácido clorídrico 2N (21,5 mL) e a mistura foi agitada 1,75 h a 0-5°C. 42 ΡΕ1711481 0 sólido foi recolhido por filtração em vácuo, lavado com água (15 mL) e foi seco para dar 6,63 g (86,4 % de rendimento) de composto 5D. XH NMR (400 MHz, DMSO-dô) : δ 2,23 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 6,94 (s, 1H), 7,18-7,34 (m, 2H, J=7,5 Hz), 7,34-7,46 (d, 1H, J=7,5 Hz), 8,31 (s, 1H) , 10,02 (s, 1H) , 12,25 (s, 1H) . 5E. Exemplo 5 A uma mistura de composto 5D (4,00 g, 10,14 mmole) e hidroxietilpiperazina (6,60 g, 50,69 mmole) em n-butanol (40 mL) foi adicionado DIPEA (3,53 mL, 20,26 mmole). A suspensão foi aquecida a 118°C durante 4,5 h, em seguida foi arrefecida lentamente até à temperatura ambiente. O sólido foi recolhido por filtração em vácuo, lavado com n-butanol (5 mL), e seco. O produto (5,llg) foi dissolvido em EtOH-H20 a 80% a quente (80 mL) , e a solução foi clarificada por filtração. A solução quente foi diluída lentamente com água (15 mL) e foi arrefecida lentamente até à temperatura ambiente. O sólido foi recolhido por filtração em vácuo, lavado com etanol-água a 50% (5 mL) e foi seco para dar 4,27 g (83,2% de rendimento) de N-(2-cloro-6-metilfenil)-2-(6-(4-(3-hidroxietilpiperazin-l-il)-2-metilpirimidin-4-ilamino)tiazole-5-carboxamida como mono- hidrato. XH NMR (400 MHz, DMSO d6) : δ 2,23 (s, 3H) , 2 ,40 (t, 2H, J=6), 2, 48 (t, 4H, J=6) , 3, 53 (q, 2H, J=6) , 4 ,45 (t, 1H, J=5,3), 6,04 (s, 1H) , 7,25 (t, 1H, J= -1,6) , 7 ,27 (dd, 1H, J=7,6; 1,7), 7,40 (dd, 1H, J=7,6; 1,7) , 8, 21 (s, 1H) , 9,8 7 (s, 1H) , 11,47. ΡΕ1711481 43 EXEMPLO 6

Preparação de: N- (2-cloro-6-metilfenil)-2-(6-(4-(3-hidroxietil)-piperazin-l-il)-2-metilpirimidin-4-ilamino) tiazole-5-carboxamida

CH3 (IV) A uma suspensão de (E)-N-(2-cloro-6-metilfenil)-3-etoxiacrilamida 5B (120 mg, 0,50 mmole) em THF (0,75 mL) e água (0,5 mL) foi adicionado NBS (98 mg, 0,55 mmole) a 0°C. A mistura foi aquecida e agitada a 20-22°C durante 3h. A esta foi adicionada 1-(6-cloro-2-metilpirimidin-4- il)tioureia 5A (100 mg, 0,49 mmole), e a suspensão foi aquecida e agitada ao refluxo durante 2h. A suspensão foi arrefecida a 20-22°C e o sólido foi recolhido por filtração em vácuo para dar 140 mg (71% de rendimento) de 2-(6-cloro-2-metilpirimidin-4-ilamino)-N-(2-cloro-6-metilfenil)tia-zole-5-carboxamida 5D. ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 2,23 (s, 3H) , 2,58 (s, 3H), 6,94 (s, 1H) , 7,18-7,34 (m, 2H, 44 ΡΕ1711481 J=7,5 Hz), 7,34-7,46 (d, 1H, J=7,5 Hz), 8,31 (s, 1H), 10,02 (s, 1H) , 12,25 (s, 1H) . O composto 5D foi convertido em N-(2-cloro-6-metilfenil)-2-(6-(4-(3-hidroxietil)piperazin-l-il) -2-metilpirimidin-4-ilamino)tiazole-5-carboxamida, seguindo-se o Passo 5E.

MÉTODOS ANALÍTICOS

Ressonância Magnética Nuclear de Estado Sólido (SSNMR)

Todas as medidas de C-13 NMR de estado sólido foram feitas com um espectrómetro de NMR Bruker DSX-400, 400 MHz. Os espectros de alta resolução foram obtidos utilizando um desacoplamento de protões de alta energia e a sequência de impulsos TPPM e polarização cruzada com amplitude em declive com rotação de ângulo mágico (MAS) a aproximadamente 12 kHz (A.E. Bennett et al, J. Chem. Phys., 1995, 103, 6951), (G. Metz, X. Wu and S.O. Smith, J. Magn.

Reson. A, . 1994, 110, 219-227) . Foram utilizados aproxima-damente 70 mg de amostra, acondicionada num rotor de zirconia de modelo lata para cada experiência. Os desvios químicos (δ) forma referenciados em relação a adamantano externo sendo a ressonância de alta frequência ajustada para 38.56 ppm (W.L. Earl and D.L. VanderHart, J. Magn. Reson., 1982, 48, 35-54). 45 ΡΕ1711481

Difracção de Raios-x de Pó

Um especialista normal na técnica terá em consideração que um padrão de difracção de raios-X pode ser obtido com um erro de medição que é dependente das condições de medição empregues. Em particular, é geralmente conhecido que as intensidades num padrão de difracção de raios-X podem flutuar dependendo das condições de medição empregues. Deve ser ainda tido em consideração que as intensidades relativas podem também variar dependendo das condições experimentais e, consequentemente, a ordem exacta da intensidade não deve ser tida em conta. Para além disso, um erro de medição do ângulo de difracção para um padrão de difracção de raios-X convencional é tipicamente de 5% ou inferior, e tal grau de erro de medição deve ser tido em conta como próprio dos ângulos de defracção anteriormente mencionados. Cosequentemente, deve ser tido em consderação que as formas cristalinas da presente invenção não estão limitadas às formas dos cristais que forneceram padrões de difracção de raios-X completamente idênticos aos padrões de difracção de raios-X descritos nas Figuras associadas aqui reveladas. Qualquer forma cristalina que forneça padrões de difracção de raios-X que forneça padrões de difracção de raios-X substancialmente idênticos aos revelados nas Figuras associadas caiem dentro do objectivo da presente invenção. A capacidade de identificar os padrões de difracção de raios-X substancialmente idênticos está ao alcance de um perito na técnica. 46 ΡΕ1711481

Dados de difracção de raios-x de pó para as formas cristalinas do Composto (IV) foram obtidos utilizando um goniómetro de plataforma chi manual Bruker GADDS (BRUKER AXS, Inc., 5465 East Cheryl Parkway Madison, WI 53711 USA) (General Area Detector Diffraction System). As amostras em pó foram colocadas em capilares de vidro de paredes finas de diâmetros de 1 mm ou menos; o capilar foi mantido em rotação durante a recolha dos dados. A distância amostra-detector foi de 17 cm. A radiação foi Cu Ka (45 kv lllmA, λ=1,5418 Â) . Os dados forma recolhidos entre 3<2θ<35° com um tempo de exposição da amostra de pelo menos 300 segundos.

Raios-X de Cristal Único

Todos os dados de cristal único foram recolhidos num sistema Bruker-Nonius (BRUKER AXS INC., 5465 East Cheryl Parkway Madison, WI 53711 USA) Kappa CCD 2000 System utilizando radiação Cu Κα (λ=1,5418 Â) e foram corrigidos só pelos factores de polarização de Lorentz. A indexação e os procedimentos de medida dos dados das intensidades foram levados a cabo com o pacote de software HKL2000 (Otwino-wski, Z. & Minor, W. (1997) em Macromolecular Crystallo-graphy, eds. Cárter, W.C. Jr & Sweet, R.M. (Academic, NY) , Vol 276, pp. 307-326) no seguimento do programa Collet (Interface para recolha e processamento de dados: Collect: software de recolha de dados, R. Hooft, Nonius B.V., 1998) 47 ΡΕ1711481

As estruturas foram resolvidas por métodos direc-tos e refinadas com base nas reflexões observadas utilizando quer o pacote de software SDP (SDP, Structure Determination Package, Enraf-Nonius, Bohemia NY 11716 Factores de dispersão, incluindo f e f', no sofware SDP foram retirados do "International Tables for Crystalo-graphy", Kynoch Press, Birmingham, Inglaterra, 1974; Vol IV, Tabelas 2.2.A e 2.3.1) com pequenas modificações pontuais ou o pacote de cristalografia, MAXUS (maXus solution and refinement software suite: S. Mackay, C.J. Gilmore, C. Edwards, M. Tremayne, N. Stewart, K. Shankland. maXus: um programa de computador para a solução e refinamento de estruturas de cristais a partir de dados de difracção).

Os parâmetros atómicos derivados (factores de coordenação e de temperatura) foram refinados por uma matiz completa de mínimos quadrados. A função minimizada pelos refinamentos foi £w (| F0 | - | Fc |)2 R é definido como £||F0|-IFcll/EIFoI enquanto R„=Ew (I F0 I - I Fc | ) 2/£„ | F0 12]1/2 em que w é uma função peso baseada em erros nas intensidades observadas. Foram examinados diferentes mapas em todos os estados de refinamento. Foram introduzidos hidrogénios em posições optimizadas com factores de temperatura isotró-pica, mas os parâmetros do hidrogénio não variaram.

Calorimetria Diferencial de Varrimento 0 aparelho de DSC utilizado para testar as formas 48 ΡΕ1711481 cristalinas foi um TA Instruments® modelo Q1000. A câmara de célula/amostra da DSC foi purgada com 100 mL/min de azoto gasoso ultra puro. O instrumento foi calibrado com índio de pureza elevada. A exactidão da medida da temperatura da amostra com este método é de cerca de +/-1°C, e o calor de fusão pode ser medido com um erro relativo de cerca de +/- 5%. A amostra foi colocada num cadinho de alumínio aberto e as medidas forma feitas em relação a um cadinho de referência vazio. Pelo menos 2 mg de amostra em pó foram colocadas no fundo do cadinho e ligeiramente batidas para assegurar um bom contacto com o cadinho. O peso da amostra foi determinado com exactidão e foi registado até à centésima de miligrama. O aparelho foi programado para aquecer 10°C por minuto num intervalo de temperatura entre 25 e 350°C. O fluxo de aquecimento, que foi normalizado pelo peso de uma amostra, foi representado versus a medida da temperatura da amostra. Os dados foram apresentados em unidades de watts/gramas ("W/g"). A representação foi feita com picos endotérmicos a apontar para baixo. O pico da endotérmica de fusão foi avaliado nesta análise para temperatura inicial extrapolada, picos de temperatura, e calor de fusão.

Análise Termogravimétrica (TGA) O aparelho de TGA utilizado para testar as formas cristalinas foi um TAInstruments® modelo Q500. Amostras de 49 ΡΕ1711481 pelo menos 10 miligramas foram analisadas com uma taxa de aquecimento de 10°C por minuto no intervalo de temperatura entre cerca de 25°C e cerca de 350°C. EXEMPLO 8

Preparação de: mono-hidrato cristalino de N- (2-cloro-6-metilfenil)-2-(6-(4-(3-hidroetil)piperazin-l-il)-2-metilpirimidin-4-ilamino)tiazole-5-carboxamida (IV)

Um exemplo do procedimento de cristalização para obter a forma de mono-hidrato cristalino é aqui apresentada :

Carga de 48 g de composto de fórmula (IV).

Carga de aproximadamente 1056 mL (22 mL/g) de álcool etílico, ou outro álcool adequado.

Carga de aproximadamente 144 mL de água.

Dissolver a suspensão aquecendo a aproximadamente 75°C.

Opcional: Filtro polidor para transferir a solução do composto de fórmula (IV) a 75°C através do filtro pré-aquecido e para dentro do recipiente. 50 ΡΕ1711481

Lavagem do reactor de dissolução e linhas de transferência com uma mistura de 43 mL de etanol e 5 mL de água.

Aquecimento do conteúdo dentro do recipiente até 75-80°C e manter a 75-80°C para conseguir a dissolução completa.

Carga de aproximadamente 384 mL de água a uma velocidade tal que a temperatura do batch é mantida a 75-80°C.

Arrefecer a 75°C, e, opcionalmente, carga com núcleos de cristais de mono-hidrato. Os núcleos de cristais não são essenciais para obter mono-hidrato, mas originam melhor controlo da cristalização.

Arrefecimento a 70°C e manter a 70°C durante ca. lh.

Arrefecimento desde 70°C até 5°C ao longo de 2 h, e mantendo a temperatura entre 0°C e 5°C durante pelo menos 2 h.

Filtrar a suspensão de cristais.

Lavar o bolo de filtração com uma mistura de 96 mL de etanol e 96 mL de água. 51 ΡΕ1711481

Secagem do material a <50°C sob pressão reduzida ate o conteúdo de água ser de 3,4 a 4,1% KF para dar 41 g (85 M%).

Alternativamente, o mono-hidrato pode ser obtido por: 1) Numa solução aquosa de sal acetato do composto IV foram colocados núcleos de mono-hidrato e foi aquecida a 80°C para dar o mono-hidrato bruto. 2) Numa solução aquosa de sal acetato do composto IV foram colocados núcleos de mono-hidrato. Foi deixada vários dias em repouso temperatura ambiente, e foi formado mono-hidrato bruto. 3) Numa solução aquosa de sal acetato do composto IV foram colocados núcleos de mono-hidrato e foi aquecida a 70°C durante 4 horas para dar o mono-hidrato bruto. Na ausência de núcleos, uma suspensão de composto IV manteve-se inalterável durante 82 dias à temperatura ambiente. 4) Uma solução de composto IV num solvente tal como NMP ou DMP foi tratada com água ate a solução se tornar turva e foi mantida a 75-80°C durante várias horas. O mono-hidrato foi isolado após arrefecimento e filtração. 52 ΡΕ1711481 5) Um solução do composto IV em etanol, butanol, e água foi aquecida. Foram adicionados núcleos de mono-hidrato à solução quente e em seguida a solução foi arrefecida. 0 mono-hidrato foi isolado depois do arrefecimento e filtração.

Um perito na técnica poderá verificar que o mono-hidrato do composto de fórmula (IV) pode ser representado pelo XRPD como se mostra na Figura 1 ou por uma amostragem significativa de picos como se mostra na Tabela 1.

Picos representativos de XRPD do mono-hidrato do composto de fórmula (IV) são mostrados na Tabela 1.

Tabela 1. 2-Teta d (Â) Peso 17,994 4,9257 915 18,440 4,8075 338 19,153 4,6301 644 19,599 4,5258 361 21,252 4,1774 148 24,462 3,6359 250 25,8901 3, 471 133 28,052 3,1782 153 0 XRPD é também caracterizado pela lista que se segue compreendendo valores de 2Θ seleccionados do grupo constituído por: 4,6+0,2, 11,2+0,2, 13,8+0,2, 15,2+0,2, 53 ΡΕ1711481 17,9+0,2, 19,1+0,2, 19,6+0,2, 23,2+0,2, 23,6+0,2. O XRPD é também caracterizado pela lista de valores de 2Θ selec-cionados do grupo constituído por: 18,0+0,2, 18,4+0,2, 19,2+0,2, 19,6+0,2, 21,2+0,2, 24,5+0,2, 25,9+0,2 e 28,0+0,2 .

Dados de raios-x de cristal único foi obtido à temperatura ambiente (+25°C) . A estrutura molecular foi confirmada como uma forma mono-hidratada de um composto de fórmula (IV).

Os parâmetros de célula unitária que se seguem para o mono-hidrato do composto de fórmula (IV) a partir da análise de raios-X a 25°C: a(Â)=13,8632(7); b(Â)=9, 3307(3); c(Â)=38,390(2); V(Â3) 4965,9 (4) ; Z'=l; Vm=621 Grupo espacial PbCa Moléculas/célula unitária: 8 Densidade (calculada) (g/cm3): 1,354

Em que Z' = número de moléculas de fármaco por unidade assimétrica. Vm = V(célula unitária)/ (Z moléculas de fármaco por célula).

Os dados de raios-X de célula unitária foram obtidos a -50°C. A forma mono-hidratada do composto de fórmula (IV) é caracterizada pelos parâmetros da célula unitária aproximadamente iguais aos seguintes: 54 ΡΕ1711481

Dimensões da célula: a(Ã)=13,8632(7); b(Â)=9,286(1); c(Ã)=38,143(2);

Volume= 4910(1) Ã3

Grupo espacial PbCa

Moléculas/célula unitária: 8

Densidade (calculada) (g/cm3) : 1,300 em que o composto está a uma temperatura de cerca de -50°C. O XRPD simulado foi calculado a partir dos parâmetros atómicos refinados à temperatura ambiente. O mono-hidrato do composto de fórmula (IV) é representado por DSC como se mostra na Figura 2. A DSC é caracterizada por um pico mal definido entre aproxima- damente 95°C e 130°C. Este pico é mal definido e variável e corresponde a uma perda de uma água de hidratação como se vê no gráfico de TGA. A DSC também apresenta um pico caracteristico a aproximadamente 287°C que corresponde à fusão da forma desidratada do composto de fórmula (IV). A TGA para o mono-hidrato do composto de Fórmula (IV) é apresentado na Figura 2 em conjunto com a DSC. A TGA mostra uma perda de peso de 3,48% desde 50°C até 175°C. A perda de peso corresponde a uma perda de uma água de hidratação do composto de Fórmula (IV). O mono-hidrato pode também ser preparado por 55 ΡΕ1711481 cristalização a partir de solventes alcoólicos, tal como metanol, etanol, propanol, i-propanol, butanol, pentanol, e água.

Exemplo 9

Preparação de: solvato cristalino de n-butanol de N- (2-cloro-6-metilfenil)-2- (6- (4- (3-hidroxietil)piperazin-l-il) -2-metilpirimidin-4-ilamino)tiazole-5-carboxamida 0 solvato cristalino de butanol do composto de fórmula (IV) é preparado por dissolução do composto (IV) em 1-butanol ao refluxo (116-118 °C) a uma concentração de aproximadamente 1 g/25 mL de solvente. Ao arrefecer, o solvato de butanol separa-se da solução por cristalização. Filtra-se, lava-se com butanol, e seca-se.

Os parâmetros de célula unitária que se seguem foram obtidos a partir de análise de raios-X do solvato cristalino de butanol, obtido à temperatura ambiente: a(À)=22,8102(6) ; b(Â)=8,4691(3); c(Â)=15,1436(5); V (Â3) 2910,5(2); Z ' =1; Vm=728

Grupo espacial P2i/a

Moléculas/célula unitária: 4

Densidade (calculada) (g/cm3) : 1,283 em que Z'=número de moléculas de fármaco por unidade 56 ΡΕ1711481 assimétrica. Vm=V(unidade de cálula)/(Z moléculas de fármaco p or célula).

Um perito na técnica irá verificar que o solvato de butanol do composto de fórmula (IV) pode ser representado pelo XRPD como se mostra na Figura 3 ou por uma amostragem representativa de picos. Picos representativos para o solvato cristalino de butanol são valores de 2Θ de: 5,9+0,2, 12,0+0,2, 13,0+0,2, 17,7+0,2, 24,1+0,2, e 24,6+0,2.

Lisboa, 19 de Fevereiro de 2010 1 ΡΕ1711481

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito.

Documentos de patentes citadas na Descrição

♦ USS59S743B 1 USS2S2S34B

♦ OS 77373034 A 1 US SN095BS481A

♦ OS -44541833 P

Literatura que não é de patentes citada na Descrição

* ftsfc-srts iet al: 4 dgpmu t|72, vol. 15, í 31S * ÍSambam et tk-JiSfeé. CfcftK: 1 8S1, ttSL' 34;· 1594 · Lf«, SÍ 3Í, J; 197¾ «St 1®. 1.377' * Majtsaafsri, B, et áí. d Slmm. Sa&iPsácá? 200S,vOi. :.4356 * ifoaefc,. A, MgL 5DG2, 2137 * ftescA A «t á voi 1«. 3097 * Ksmfeteiaen W, ei áL ví.-.SSaSti CSssxiCftgíA 1S9B. vsi 336,403: * ÂtiiemMií, Chsxi Se.\. 1S>35. «A 33.2550 * Erenws1 «t Μ. Óíssí, 'ί^οφ- '&1& TMisí., iSS4: vcL2a iiQ2 » Suísnsiá. J. Céit Sei. !997, vc1. 110, 3355-3084 * PssRda,. Pose; HsÊ. AeaâzSsi USMt 1S97, voL 94:. 59S6A13SS4 * MishísaíSÍ. C«?íH1r 1937, wl. 571 3344-3340 * Mioalasw, fts&re <937 w:i 337.233-272

* Vasqtíez, ,»Vfcí S®1. Cfiff., 1937, vai. S, &73-SSS * Schsevsa, G,L.; Miiser. RS,; ttodísr, S.Q,; Ktri-hsra, J,M.: Balas, ,1,8,; Kansar, S,S.; Ledfeetíar, J ,A ZAP-79l¥Fossils i;isa£e: CS4S ard 7 sslS ree&g-tor iíTvSlvieraenS: si W aas 14202 «ssased T cell sipias 6fS^sd«tKav l. Cftm. 1394-, vsi 283, -m-í&sem * Hiimaa 7 ;yr?ptssc;,4e saB s«rf»se fscsesuíes semsil hy 8ie woícsíscp raosoaiosal artoíses. Hans-etv J,A :M®Í8B<P.i. ;BeaS>', AG, rCtísífc, EA, ;Led-batieí, 3.A. LesKocyts TvpffKj í. S^risgs:· Vesisg, ÍSS4,1S5-212 í LedSeSsr, J,A t Ame, C,H. r RafemtsvtSfiíí, P.$,; Grassais®1 A.; 'ísifc- Ϊ.Ϊ. í ísaboães, J,B, ixg:·^ traíísájsaas tistsagh CD4 fesepfore. &MAo<v isMfefery sdivityis rsgsjteiss' byCD4 p-O1rs%iati>e S03/T Sm. J: kmmtè» 7^8, vèL 4¾ 525

* SéhieveR, G,L. ; Miítter, R,S, í íte.dtei·, S,G,: Ktri-ftsra, i,M;; Bofes, í,8,; Ksftssr. S.S.: leífiíeiten J ,A. ΖαΡ-70®εϊ>μϊ3 Siasse. C045 aari T resép-tor iavaiverpçiitía UV’afiíiH202 wdaçgíí Teeii slgpd trsasAidiesi. J. SM Ojeaí.. 19941 M .253, 2371Á2S72S * A.E, Beoaett el ai. J. Ch**·. pfys.r 1SSS, »:oi. 493:,: mi > G t Metz ;XW«: S.O. 5® m, 4. $φί· Sescs; 14. ·!·Γ:34.··Λ?ί. 1-iC. 215-227 vd 43. iS-5i * 0l>¥ÍBO«ai:.i, Z,; Míísos, vV. to4<™$s<rtiiaf C?y&-tSÊ&grspfij. Acsdetí-iíc, 1997 v&í. 275, 3G?-7.28 * íaieraisStífsSÍ TsStsS: for K^-rasfi

Ftess., :1974:,: vd. ?/ 1

Pafívta. ,/ Sffií 1936, vsí 271.29337-2:812

Claims (12)

1. ΡΕ1711481 1 REIVINDICAÇÕES 1. Mono-hidrato cristalino do composto de fór mula (IV)
2. 2. Composto da Reivindicação 1, caracetrizado por um padrão de difracção de raios-X de pó (CuKa λ=1,5418Α Â a uma temperatura de cerca de 23°C) compreendendo quatro ou mais valores de 2Θ seleccionados do grupo constituído por: 18,0+0,2, 18,4+0,2, 19,2+0,2, 19,6+0,2, 21,2+0,2, 24,5+0,2, 25,9+0,2, e 28,0+0,2.
3. 3. Composto da Reivindicação 2, caracterizado por um padrão de difracção de raios-X de pó de acordo com o que apresenta na Figura I.
4. 4. Composto da Reivindicação 1, caracterizado por parâmetros da célula unitária aproximadamente iguais aos seguintes: Dimensões da célula: a(Â) = 13,8632(7); b(Â) = 9,3307(3); c (Â) = 38, 390(2); 2 ΡΕ1711481 Volume = 4965,9(4) Â3 Grupo espacial PbCa Moléculas/célula unitária: 8 Densidade (calculada) (g/cm3) : 1, 354.
5. 5. Composto da Reivindicação 1, em que existe uma molécula de água por molécula da fórmula (IV).
6. 6. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
7. 7. Utilização de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para o fabrico de um medicamento para ser utilizado no tratamento de cancro.
8. 8. Utilização de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para o fabrico de um medicamento para ser utilizado no tratamento de doenças oncológicas em que as doenças são seleccionadas de leucemia mielóide crónica (CML), tumor do estroma gastrointestinal (GIST) , cancro do pulmão de pequenas células (SCLC), cancro do pulmão de células não-pequenas (NSCLC), cancro do ovário, melanoma, mastocitose, tumores de células germinativas, leucemia mielóide aguda (AML), sarcoma pediátrico, cancro da mama, cancro colo-rectal, cancro do pâncreas, e cancro da próstata. 3 ΡΕ1711481
9. 9. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para ser utilizado em terapia.
10. 10. Solvato cristalino de butanol do composto de
11. 11. Composto da Reivindicação 10, caracterizado por parâmetros da célula unitária aproximadamente iguais aos seguintes: Dimensões da célula: a (Á) = 22,8102(6); b (Â) = 8,4691(3); c (Â) = 15, 1436(5); Volume = 2910,5(4) Â3 Grupo espacial P2i/a Moléculas/célula unitária: 4 Densidade (calculada) (g/cm3) : 1,283. -i— -i— u.yu.w urocesso para cri stalina do composto de fórmula (IV)

    HO m 4 ΡΕ1711481 compreendendo o aquecimento e a dissolução do composto de fórmula (IV) numa mistura etanol/água e a cristalização do mono-hidrato da mistura de etanol/água à medida que arrefece.
12. 13. Processo da reivindicação 12, em que o solvato de butanol do composto de fórmula (IV) é dissolvido na mistura etanol/água. Lisboa, 19 de Fevereiro de 2010