PT116062B

PT116062B - BIS-PYRIMIDINONES AS XANTINE OXIDASE INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF PATHOLOGICAL CONDITIONS CAUSED BY HYPERURICEMIA

Info

Publication number: PT116062B
Application number: PT116062A
Authority: PT
Inventors: Paulo Lourenço Serrano João; Jorge Da Silva Almeida Paulo; Martins Silvestre Samuel; Filipa Carloto Lopes Diana; Joana Almeida Reis Melani
Original assignee: Univ Da Beira Interior
Priority date: 2020-01-20
Filing date: 2020-01-20
Publication date: 2021-12-02
Also published as: PT116062A

Abstract

A PRESENTE INVENÇÃO CONSISTE NA UTILIZAÇÃO DE BIS-PIRIRNIDINONAS COM A FÓRMULA GERAL (I) , OS SEUS TAUTÓRNEROS E/ OU OS SEUS RESPETIVOS SAIS CORNO INIBIDORES DA XANTINA OXIDASE (XO), TENDO UTILIDADE NO TRATAMENTO DE CONDIÇÕES PATOLÓGICAS CAUSADAS POR HIPERURICERNIA, ENTRE AS QUAIS SE DESTACA A GOTA . X FÓRMULA (I) NAS BIS-PIRIRNIDINONAS COM A FÓRMULA GERAL (I), R1 , R2 E RJ SÃO VÁRIOS TIPOS DE RADICAIS E TANTO X CORNO Y SÃO UM HETEROÁTORNO, CORNO DESCRITO NO PRESENTE DOCUMENTO. A INVENÇÃO DESTACA-SE PELA CAPACIDADE DESTES COMPOSTOS INIBIREM A ATIVIDADE DA ENZIMA XANTINA OXIDASE, DEMONSTRANDO, EM ALGUNS CASOS, URNA POTÊNCIA SUPERIOR À DO PRINCIPAL FÁRMACO INIBIDOR DESTA ENZIMA UTILIZADO NA CLÍNICA, O ALOPURINOL. A UTILIZAÇÃO DESTES COMPOSTOS APRESENTA CORNO VANTAGENS UM BAIXO CUSTO DE PRODUÇÃO, ASSIM CORNO ELEVADA RAPIDEZ E SIMPLICIDADE NA SUA SÍNTESE QUÍMICA E BONS RENDIMENTOS REACIONAIS. FOI AINDA DEMONSTRADO QUE ESTES COMPOSTOS NÃO APRESENTAM CITOTOXICIDADE MARCADA EM FIBROBLASTOS NORMAIS DA DERME HUMANA. DESTA FORMA, A PRESENTE INVENÇÃO É ÚTIL NO TRATAMENTO E PREVENÇÃO DE PATOLOGIAS CARATERIZADAS POR UM AUMENTO DA CONCENTRAÇÃO PLASMÁTICA DE ÁCIDO ÚRICO, POR LEVAR A UMA REDUÇÃO DA SUA FORMAÇÃO MEDIANTE A INIBIÇÃO DA ATIVIDADE ENZIMÁTICA DA XANTINA OXIDASE.THE PRESENT INVENTION CONSISTS OF THE USE OF BIS-PYRIRNIDINONES WITH THE GENERAL FORMULA (I), THEIR TAUTORNERS AND/OR THEIR RESPECTIVE SALTS AS INHIBITORS OF XANTINE OXIDASE (XO), HAVING USEFUL IN THE TREATMENT OF PATHOLOGICAL CONDITIONS CAUSED BY HYPERURICERNIA, AMONG THE WHICH DROP HIGHLIGHTS. X FORMULA (I) IN BIS-PYRIRNIDINONES WITH THE GENERAL FORMULA (I), R1 , R2 AND RJ ARE VARIOUS TYPES OF RADICALS AND BOTH X CORNO Y ARE A HETEROATTORN, AS DESCRIBED IN THIS DOCUMENT. THE INVENTION DISTINGUISHED BY THE CAPACITY OF THESE COMPOUNDS TO INHIBITED THE ACTIVITY OF THE ENZYME XANTINE OXIDASE, DEMONSTRATING, IN SOME CASES, A POWER SUPERIOR TO THAT OF THE MAIN DRUG INHIBITOR OF THIS ENZYME USED IN CLINICAL, ALLOPURINOL. THE USE OF THESE COMPOUNDS HAS ADVANTAGES AS A LOW PRODUCTION COST, AS WELL AS HIGH SPEED AND SIMPLICITY IN CHEMICAL SYNTHESIS AND GOOD REACTIONAL PERFORMANCES. IT HAS BEEN FURTHER SHOWN THAT THESE COMPOUNDS DO NOT SHOW MARKED CYTOTOXICITY IN NORMAL FIBROBLASTS OF THE HUMAN DERMIS. THUS, THE PRESENT INVENTION IS USEFUL IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF PATHOLOGIES CHARACTERIZED BY AN INCREASE IN THE PLASMATIC CONCENTRATION OF URIC ACID, BY LEADING TO A REDUCTION OF ITS FORMATION BY INHIBITING THE ENZYMATIC ACTIVITY OF XANTINE OXIDASE.

Description

DESCRIÇÃODESCRIPTION

Bis-pirimidinonas como inibidores da Xantina Oxidase para o tratamento de condições patológicas causadas por hiperuricemiaBis-pyrimidinones as Xanthine Oxidase Inhibitors for the treatment of pathological conditions caused by hyperuricemia

Domínio técnico da invençãoTechnical domain of the invention

A presente invenção diz respeito a uma nova aplicação de bispirimidinonas com a fórmula geral (I) . Estes compostos destacamse por terem propriedades inibitórias da atividade da enzima xantina oxidase (XO), não apresentando citotoxicidade marcada em fibroblastos normais da derme humana (NHDF - do inglês, normal human dermal fíbroblasts).The present invention relates to a new application of bispyrimidinones with the general formula (I). These compounds stand out for having inhibitory properties of the activity of the enzyme xanthine oxidase (XO), not showing marked cytotoxicity in normal human dermal fibroblasts (NHDF).

Sumário da invençãoSummary of the invention

A presente invenção consiste na utilização de bis-pirimidinonas com a fórmula geral (I) na inibição da atividade da enzima XO. Como exemplos representativos, incluem-se bis-pirimidinonas, sendo os heteroátomos X e Y o calcogénio enxofre, contendo hidrogénio ou grupos etilo nos substituintes Ri e R2 e apresentando na posição R3 vários radicais hidrocarbonados, sendo descrita a sua síntese e caraterização estrutural, bem como a avaliação da sua ação inibitória da enzima XO e da sua citotoxicidade em células normais humanas. 0 estudo da inibição da atividade da enzima XO por parte destes compostos evidenciou um efeito inibitório marcado, demonstrando-se, em alguns casos, uma potência superior à do fármaco comercial alopurinol, utilizado como referência. 0 estudo do efeito do composto mais promissor na proliferação de NHDF não evidenciou citotoxicidade relevante às concentrações enzimaticamente ativas, o que demonstra a seletividade da sua ação inibitória da XO em relação a efeitos tóxicos na proliferação de células humanas.The present invention consists in the use of bis-pyrimidinones with the general formula (I) in inhibiting the activity of the XO enzyme. Representative examples include bis-pyrimidinones, the heteroatoms X and Y being the sulfur chalcogen, containing hydrogen or ethyl groups in the substituents R1 and R2 and presenting in the R3 position several hydrocarbon radicals, their synthesis and structural characterization being described, as well as as the evaluation of its inhibitory action of the enzyme XO and its cytotoxicity in normal human cells. The study of the inhibition of the activity of the enzyme XO by these compounds showed a marked inhibitory effect, demonstrating, in some cases, a potency superior to that of the commercial drug allopurinol, used as a reference. The study of the effect of the most promising compound on NHDF proliferation did not show relevant cytotoxicity at enzymatically active concentrations, which demonstrates the selectivity of its XO inhibitory action in relation to toxic effects on human cell proliferation.

Assim, a presente invenção é útil no tratamento e prevenção da doença denominada por gota e pode ser utilizada noutras doenças associadas a um excesso de ácido úrico no organismo, apresentando-se como uma alternativa a outros fármacos utilizados no controlo destas patologias que têm sido associados a diversos efeitos adversos.Thus, the present invention is useful in the treatment and prevention of the disease called gout and can be used in other diseases associated with an excess of uric acid in the body, presenting itself as an alternative to other drugs used in the control of these pathologies that have been associated to various adverse effects.

Estado da técnicaState of the art

A hiperuricemia é a existência de níveis elevados de ácido úrico no sangue. Tendo em conta a baixa solubilidade do ácido úrico ao pH fisiológico, poderá haver deposição do mesmo no organismo, particularmente nas articulações, sob a forma de cristais de urato, o que pode levar à condição clínica gota. Não obstante ainda não haver muitos estudos que comprovem uma relação direta entre a modulação dos níveis de ácido úrico no organismo e a redução do risco de outras doenças, é denotada uma associação entre a hiperuricemia e diversas outras patologias. São exemplos a hipertensão arterial, doenças cardiovasculares, insuficiência renal, síndrome metabólica, diabetes mellítus e dislipidemia.Hyperuricemia is the existence of high levels of uric acid in the blood. Considering the low solubility of uric acid at physiological pH, there may be deposition of it in the body, particularly in the joints, in the form of urate crystals, which can lead to the clinical condition of gout. Although there are still not many studies that prove a direct relationship between the modulation of uric acid levels in the body and the reduction of the risk of other diseases, an association between hyperuricemia and several other pathologies is denoted. Examples are arterial hypertension, cardiovascular diseases, renal failure, metabolic syndrome, diabetes mellitus and dyslipidemia.

Atualmente, a redução dos elevados níveis de ácido úrico no organismo passa principalmente por: 1) diminuição da sua biossíntese, mediante a inibição da atividade da enzima XO; ouCurrently, the reduction of high levels of uric acid in the body mainly involves: 1) decreasing its biosynthesis, by inhibiting the activity of the XO enzyme; or

2) pelo aumento da sua excreção, através da inibição da sua reabsorção renal por parte do transportador de aniões orgânicos URAT1. Como inibidores da XO, destaca-se a utilização dos fármacos alopurinol e febuxostate, enquanto na inibição da URAT1 destaca-se o lesinurad. Destas abordagens, a inibição da síntese de ácido úrico é, de longe, a mais efetiva e a mais utilizada na clínica.2) by increasing its excretion, through the inhibition of its renal reabsorption by the organic anion transporter URAT1. As inhibitors of XO, the use of the drugs allopurinol and febuxostat stands out, while in the inhibition of URAT1, lesinurad stands out. Of these approaches, inhibition of uric acid synthesis is by far the most effective and most used clinically.

Porém, a utilização do alopurinol está associada a inúmeros efeitos adversos, como desconforto gastrointestinal, toxicidade renal, erupção cutânea e eosinofilia. Recentemente, o febuxostate foi associado a um aumento do risco de morte por doenças coronárias em relação ao tratamento com alopurinol. Por este motivo, foi sugerido que o febuxostate passasse a ser um fármaco de segunda linha de tratamento. Por fim, a utilização do lesinurad foi aprovada para utilização em combinação com inibidores da XO, apenas quando estes não são totalmente eficazes, sendo contraindicado em pacientes com insuficiência renal grave, em recetores de transplantes renais ou em pacientes sujeitos ao processo de diálise. Deste modo, continua a ser importante e necessário o desenvolvimento de novos inibidores da XO mais seguros e eficazes.However, the use of allopurinol is associated with numerous adverse effects, such as gastrointestinal discomfort, renal toxicity, rash and eosinophilia. Recently, febuxostat has been associated with an increased risk of death from coronary heart disease relative to treatment with allopurinol. For this reason, it has been suggested that febuxostat become a second-line drug of treatment. Finally, the use of lesinurad was approved for use in combination with XO inhibitors, only when these are not fully effective, being contraindicated in patients with severe renal failure, in kidney transplant recipients or in patients undergoing dialysis. Therefore, the development of new safer and more effective XO inhibitors remains important and necessary.

No campo da utilização de pirimidinonas como agentes redutores dos níveis de ácido úrico no organismo, os documentos WO2015/073317 e US20150133477 divulgam a utilização de metabolitos e derivados do ácido 5-(N-fenilcarboxamido)-2tiobarbitúrico (merbarone) com atividade inibitória da XO e do URAT1. Ainda neste âmbito, e tendo por base a estrutura do merbarone, foram patenteados os derivados do ácido barbitúrico e tiobarbitúrico como agentes bifuncionais, diminuindo os níveis do ácido úrico no soro e sangue através da inibição da XO e do URAT1, conforme descrito nos documentos US20170197923 e US20190117 654. Nesta área, os referidos documentos apresentam compostos derivados de pirimidinonas para a redução dos níveis de ácido úrico, enquanto que a presente invenção apresenta bispirimidinonas. As bis-pirimidinonas começaram por se destacar como constituintes de camadas fotocondutoras em placas eletrofotográficas, conforme descrito no documento US4882248. Adicionalmente, 5,5'-arilidenobisbarbituratos e 5,5'arilidenobistiobarbituratos, assim como os respetivos sais, foram patenteados como contendo atividades antimicrobianas, antivirais, anticlamidiais e imunomodulatórias, conforme descrito no documento EP1043318A1. Os derivados bistiobarbituratos contendo substituintes fenilos e sob a forma de sais de dietilamónio, foram patenteados por Barakat et al. como agentes antidiabéticos, de acordo com o documento US9527820. Mais recentemente, Victor Veniaminovich et al. patentearam o método para obtenção da forma liofilizada do 5,5'(4-nitrofenilo)metanobistiobarbiturato, levando ao aumento da sua solubilidade em água e estabilidade de armazenamento, mantendo a sua atividade hepatoprotetora e diminuindo a toxicidade, de acordo com o documento WO2019070169. Por outro lado, bis-pirimidinonas derivadas do ácido N, Ndietiltiobarbitúrico foram também descritas como potenciais inibidores da urease por Rahim et al. (Chinese Chemical Letters, 2016, 27 693-697) e potenciais antibacterianos por Sharma et al. (ChemMedChem, 2018, 13, 1923-1930). Desta forma, nenhum dos referidos documentos reclama a atividade de bis-pirimidinonas como inibidoras da XO demonstrada na presente invenção.In the field of the use of pyrimidinones as reducing agents of uric acid levels in the body, documents WO2015/073317 and US20150133477 disclose the use of metabolites and derivatives of 5-(N-phenylcarboxamido)-2thiobarbituric acid (merbarone) with XO inhibitory activity and URAT1. Also in this context, and based on the structure of merbarone, barbituric and thiobarbituric acid derivatives were patented as bifunctional agents, decreasing serum and blood uric acid levels by inhibiting XO and URAT1, as described in documents US20170197923 and US20190117 654. In this area, said documents disclose compounds derived from pyrimidinones for the reduction of uric acid levels, while the present invention discloses bispyrimidinones. Bis-pyrimidinones began to stand out as constituents of photoconductive layers in electrophotographic plates, as described in document US4882248. Additionally, 5,5'-arylidenebisbarbiturates and 5,5'-arylidenebisthiobarbiturates, as well as their salts, have been patented as having antimicrobial, antiviral, antichlamydial and immunomodulatory activities, as described in EP1043318A1. Bisthiobarbiturate derivatives containing phenyl substituents and in the form of diethylammonium salts were patented by Barakat et al. as antidiabetic agents, according to US9527820. More recently, Victor Veniaminovich et al. patented the method for obtaining the lyophilized form of 5,5'(4-nitrophenyl)methanebisthiobarbiturate, increasing its water solubility and storage stability, maintaining its hepatoprotective activity and decreasing toxicity, according to the document WO2019070169. On the other hand, bis-pyrimidinones derived from N,N-diethylthiobarbituric acid were also described as potential urease inhibitors by Rahim et al. (Chinese Chemical Letters, 2016, 27 693-697) and antibacterial potentials by Sharma et al. (ChemMedChem, 2018, 13, 1923-1930). Thus, none of said documents claims the activity of bis-pyrimidinones as XO inhibitors demonstrated in the present invention.

Descrição geral da invençãoGeneral description of the invention

A presente invenção diz respeito à utilização inovadora de bispirimidinonas com a fórmula geral (I) (figura 1) como agentes inibidores da atividade da enzima XO.The present invention relates to the innovative use of bispyrimidinones with the general formula (I) (Figure 1) as inhibitors of XO enzyme activity.

Nesta fórmula geral (I), os seus tautómeros e/ou respetivos sais, Ri, R2 e R3 são vários tipos de radicais que, dependente ou independentemente uns dos outros, podem ser hidrogénio ou radicais hidrocarbonados tais como alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, formilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo ou dialquilaminocarbonilo. X e Y são um heteroátomo que, dependente ou independentemente um do outro, podem ser, por exemplo, oxigénio, enxofre, selénio, telúrio e azoto.In this general formula (I), their tautomers and/or their salts, R1, R2 and R3 are various types of radicals which, dependently or independently of one another, can be hydrogen or hydrocarbon radicals such as alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl , formyl, alkylcarbonyl, arylcarbonyl, heteroarylcarbonyl, alkoxycarbonyl, alkylaminocarbonyl or dialkylaminocarbonyl. X and Y are a heteroatom which, dependently or independently of each other, can be, for example, oxygen, sulfur, selenium, tellurium and nitrogen.

Nesta fórmula, um radical hidrocarbonado pode ser linear, ramificado ou cíclico, saturado, parcialmente saturado ou insaturado. Exemplos são os radicais alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, cicloalcinilo, heteroalquilo, héteroalcenilo, heteroalcinilo, arilo ou heteroarilo. Termos combinados tais como cicloalquilalcenilo, cicloalcinilalquilo ou arilalcenilo são considerados para serem incluídas nesta definição. Estes radicais hidrocarbonados podem estar substituídos por um ou mais, iguais ou diferentes, heteroátomos do grupo constituído por: fósforo, oxigénio, enxofre, azoto, flúor, cloro, bromo ou iodo. Nestes radicais hidrocarbonados substituídos, os heteroátomos podem estar localizados em qualquer posição do radical hidrocarbonado. De acordo com esta definição, o heteroátomo pode também funcionar como átomo de ligação à restante parte da molécula. 0 heteroátomo também pode estar presente numa ligação simples, dupla ou tripla.In this formula, a hydrocarbon radical can be linear, branched or cyclic, saturated, partially saturated or unsaturated. Examples are alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkynyl, heteroalkyl, heteroalkenyl, heteroalkynyl, aryl or heteroaryl radicals. Combined terms such as cycloalkylalkenyl, cycloalkynylalkyl or arylalkenyl are intended to be included in this definition. These hydrocarbon radicals may be substituted by one or more, the same or different, heteroatoms from the group consisting of: phosphorus, oxygen, sulfur, nitrogen, fluorine, chlorine, bromine or iodine. In these substituted hydrocarbon radicals, the heteroatoms can be located at any position on the hydrocarbon radical. According to this definition, the heteroatom can also function as a bonding atom to the rest of the molecule. The heteroatom may also be present in a single, double or triple bond.

Como exemplos representativos de bis-pirimidinonas, preparadas mediante reação de condensação entre ácidos tiobarbitúricos e aldeídos, são aqui apresentadas bis-pirimidinonas dissubstituídas nas posições Ri e R2 com grupos etilo ou hidrogénio (figura 2), apresentando na posição R3 vários radicais hidrocarbonados e contendo o heteroátomo de enxofre emAs representative examples of bis-pyrimidinones, prepared by condensation reaction between thiobarbituric acids and aldehydes, bis-pyrimidinones disubstituted in positions R1 and R2 with ethyl or hydrogen groups are presented herein (Figure 2), having in position R3 several hydrocarbon radicals and containing the sulfur heteroatom in

X e Y.X and Y.

Todas as bis-pirimidinonas apresentadas nesta patente revelam atividade inibitória da enzima XO à concentração de 30 μΜ e a maioria delas também à concentração de 5 μΜ (figura 3). Destas bis-pirimidinonas, algumas demonstram uma potência para a inibição da atividade da enzima XO superior à do fármaco utilizado na clínica, o alopurinol.All bis-pyrimidinones presented in this patent show XO enzyme inhibitory activity at a concentration of 30 μΜ and most of them also at a concentration of 5 μΜ (figure 3). Of these bis-pyrimidinones, some demonstrate a potency for inhibiting the activity of the XO enzyme greater than that of the clinically used drug, allopurinol.

Descrição das FigurasDescription of Figures

Figura 1: Representação esquemática da estrutura geral das bispirimidinonas inibidoras da XO, onde X e Y são um heteroátomo, Ri, R2 e R3 são hidrogénio ou radicais hidrocarbonados.Figure 1: Schematic representation of the general structure of the XO-inhibiting bispyrimidinones, where X and Y are a heteroatom, R1, R2 and R3 are hydrogen or hydrocarbon radicals.

Figura 2: Representação esquemática da preparação das bispirimidinonas apresentadas como exemplos representativos, incluindo as dissubstituídas nas posições Ri e R2 com grupos etilo ou hidrogénio, apresentando na posição R3 vários radicais hidrocarbonados, onde t.a. corresponde a temperatura ambiente.Figure 2: Schematic representation of the preparation of the bispyrimidinones presented as representative examples, including those disubstituted in the R1 and R2 positions with ethyl or hydrogen groups, having in the R3 position several hydrocarbon radicals, where r.t. corresponds to ambient temperature.

Figura 3: Representação esquemática da percentagem de inibição da atividade da enzima XO por parte das bis-pirimidinonas apresentadas como exemplos representativos e do alopurinol, fármaco utilizado como referência, às concentrações de 30 e 5 μΜ.Figure 3: Schematic representation of the percentage of inhibition of XO enzyme activity by the bis-pyrimidinones presented as representative examples and by allopurinol, drug used as a reference, at concentrations of 30 and 5 μΜ.

Figura 4: Representação esquemática da percentagem de inibição da atividade da enzima XO a várias concentrações, por parte das 6 bis-pirimidinonas mais potentes e do alopurinol como fármaco de referência.Figure 4: Schematic representation of the percentage of inhibition of XO enzyme activity at various concentrations by the 6 most potent bis-pyrimidinones and allopurinol as a reference drug.

Figura 5: Representação esquemática do efeito do exemplo 9 na viabilidade celular em fibroblastos normais da derme humana, a várias concentrações.Figure 5: Schematic representation of the effect of example 9 on cell viability in normal human dermal fibroblasts at various concentrations.

Descrição detalhada da invençãoDetailed description of the invention

Seguidamente, é descrita a preparação e a caracterização estrutural parcial de compostos considerados exemplos representativos para ilustrar os vários aspetos da presente invenção. Os exemplos apresentados não devem ser interpretados como limitações às reivindicações. A avaliação da ação inibitória da atividade enzimática da XO e da ação citotóxica em NHDF, é também descrita nesta secção.Next, the preparation and partial structural characterization of compounds considered representative examples to illustrate the various aspects of the present invention is described. The examples presented are not to be construed as limitations on the claims. The evaluation of the inhibitory action of the enzymatic activity of XO and the cytotoxic action on NHDF is also described in this section.

A descrição da síntese das bis-pirimidinonas esquematizada na figura 2 permite conhecer em detalhe o método utilizado para a obtenção destes compostos. Assim, seguidamente descreve-se a síntese dos compostos obtidos por reação de condensação entre ácidos tiobarbitúricos e aldeídos.The description of the synthesis of the bis-pyrimidinones shown in figure 2 allows for a detailed understanding of the method used to obtain these compounds. Thus, the synthesis of compounds obtained by condensation reaction between thiobarbituric acids and aldehydes is described below.

Exemplo 1Example 1

5,5'-(Fenilmetileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2-tioxo-2,3 dihidropirimidina-4(1H) -ona)5,5'-(Phenylmethylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo-2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do benzaldeído (1,0 mmol, 106,1 mg, 101,6 pL) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleoThe mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and benzaldehyde (1.0 mmol, 106.1 mg, 101.6 pL) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2 h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether.

40-60°C, seco e recristalizado de etanol. 0 sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 434,9 mg (rendimento 89%) do composto pretendido.40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 434.9 mg (yield 89%) of the target compound.

p.f.: 177-179°C.m.p.: 177-179°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 7,32 (t, J = 7,7 Hz, 2H) , 7,26 (t, J= Hz, 1H) , 7,13 (d, J= 7,9 Hz, 2H) , 5,68 (s, 1H) , 4,76 - 4,50 (m, 8H) , 1,38 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,29 (t, J = 7, 0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 7.32 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.26 (t, J = Hz, 1H), 7.13 (d, J=7.9 Hz, 2H), 5.68 (s, 1H), 4.76 - 4.50 (m, 8H), 1.38 (t, J=7.0 Hz, 6H), 1. 29 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,7, 163, 8, 162,4, 135, 6, 128, 6, 126, 9, 126, 4, 97, 6, 45, 3, 44,7, 35, 0, 12,2, 12, 1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.7, 163, 8, 162.4, 135, 6, 128, 6, 126, 9, 126, 4, 97, 6, 45, 3, 44.7, 35, 0, 12.2, 12, 1.

Exemplo 2Example 2

5,5'-(p-Tolimetileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2-tioxo-2,3dihidropirimidina-4(1H)-ona)5,5'-(p-Tolymethylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo-2,3dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 4-metilbenzaldeido (1,0 mmol, 120,2 mg, 118,0 pL) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 397,1 mg (rendimento 79%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 4-methylbenzaldehyde (1.0 mmol, 120.2 mg, 118.0 pL) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 397.1 mg (yield 79%) of the target compound.

p.f.: 163-164°C.m.p.: 163-164°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,12 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7,00 (d, J= 8.3 Hz, 2H) , 5,63 (s, 1H) , 4,91 - 4,47 (m, 8H) , 2,34 (s, 3H) , 1,38 (t, J= 7.0 Hz, 6H) , 1,29 (t, J= 7.0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.12 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.63 (s, 1H) , 4.91 - 4.47 (m, 8H), 2.34 (s, 3H), 1.38 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.29 (t, J= 7.0 Hz, 6H) .

RMN ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,7, 163, 8, 162,3, 136, 5, 132,4, 129,3, 126,3, 97,7, 45,2, 44,7, 34,7, 21,1, 12,2, 12,1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.7, 163, 8, 162.3, 136, 5, 132.4, 129.3, 126.3, 97.7, 45.2, 44 .7, 34.7, 21.1, 12.2, 12.1.

Exemplo 3Example 3

4-(Bis(1,3-dietil-6-hidroxi-4-oxo-2-tioxo-l,2,3,4tetrahidropirimidin-5-il)metil)benzonitrilo4-(Bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-1,2,3,4tetrahydropyrimidin-5-yl)methyl)benzonitrile

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 4-formilbenzonitrilo (1,0 mmol, 131,1 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido branco obtido foi filtrado e seco por forma a obter 400,6 mg (rendimento 78%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 4-formylbenzonitrile (1.0 mmol, 131.1 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The white solid obtained was filtered and dried to obtain 400.6 mg (yield 78%) of the target compound.

p.f.: 199-200°C.m.p.: 199-200°C.

RMN de ³Η (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,27 (d, J= 8,5 Hz, 2H) , 5,66 (s, 1H) , 4,90 - 4,42 (m, 8H) , 1,37 (t, J= 7,0 Hz, 6H), 1,28 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ³ Η NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.66 (s, 1H), 4.90 - 4.42 (m, 8H), 1.37 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.28 (t, J= 7.0 Hz, 6H) .

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,7, 163, 9, 162,4, 141, 8, 132,4, 127,4, 118,7, 110,9, 96,7, 45,4, 44,8, 35,4, 12,1, 12,1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.7, 163, 9, 162.4, 141, 8, 132.4, 127.4, 118.7, 110.9, 96.7, 45.4, 44.8, 35.4, 12.1, 12.1.

Exemplo 4Example 4

5,5'-((4-Nitrofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2-tioxo2,3-dihidropirimidina-4(1H) -ona)5,5'-((4-Nitrophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 4-nitrobenzaldeido (1,0 mmol, 151,1 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 416,2 mg (rendimento 78%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 4-nitrobenzaldehyde (1.0 mmol, 151.1 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 416.2 mg (yield 78%) of the target compound.

p.f.: 202-204°C.m.p.: 202-204°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 8,18 (d, J = 8, 9 Hz, 2H) , 7,33 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 5,69 (s, 1H) , 4,77 - 4,38 (m, 8H) , 1,37 (t, J= 7,0 Hz, 6H), 1,29 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 8.18 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.69 ( s, 1H), 4.77 - 4.38 (m, 8H), 1.37 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.29 (t, J= 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,7, 163, 9, 162,4, 146, 9, 143, 9, 127,6, 123, 8, 96, 8, 45, 4, 44, 8, 35, 4, 12,1, 12, 1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.7, 163, 9, 162.4, 146, 9, 143, 9, 127.6, 123, 8, 96, 8, 45, 4, 44, 8, 35, 4, 12.1, 12, 1.

Exemplo 5Example 5

N-(4-(bis(1,3-dietil-6-hidroxi-4-oxo-2-tioxo-l,2,3,4tetrahidropirimidin-5-il)metil)fenil)acetamidaN-(4-(bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-4-oxo-2-thioxo-1,2,3,4tetrahydropyrimidin-5-yl)methyl)phenyl)acetamide

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do N- (4-formilf enil) acetamida (1,0 mmol, 167,2 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 485,6 mg (rendimento 89%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0mmol, 400.6mg) and N-(4-formylphenyl)acetamide (1.0mmol, 167.2mg) in ethanol (5.0ml) was stirred at room temperature for 2h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 485.6 mg (yield 89%) of the target compound.

p.f.: 178-179°C.m.p.: 178-179°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,47 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,17 (s, 1H) , 7,06 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 5,62 (s, 1H) , 4,74 4,52 (m, 8H) , 2,17 (s, 3H) , 1,37 (t, J= 6,9 Hz, 6H) , 1,28 (t, J = 7, 0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.47 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.17 (s, 1H), 7.06 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.62 (s, 1H), 4.74 4.52 (m, 8H), 2.17 (s, 3H), 1.37 (t, J=6.9 Hz, 6H) , 1.28 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,5, 168, 8, 163, 6, 162,1, 137,3, 130, 6, 126, 7, 119, 6, 97,4, 45, 1, 44,5, 34,5, 24,4, 12,0, 11,9. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.5, 168, 8, 163, 6, 162.1, 137.3, 130, 6, 126, 7, 119, 6, 97.4, 45, 1, 44.5, 34.5, 24.4, 12.0, 11.9.

Exemplo 6Example 6

5, 5' -( (4-Bromofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2-tioxo2,3-dihidropirimidina-4(1H)-ona)5,5'-((4-Bromophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 4-bromobenzaldeido (1,0 mmol, 185,0 mg) em etanol (5,0 10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. 0 sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. 0 sólido branco obtido foi filtrado e seco por forma a obter 363,2 mg (rendimento 64%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 4-bromobenzaldehyde (1.0 mmol, 185.0 mg) in ethanol (5.0 10 mL) was stirred at room temperature. for 2h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The white solid obtained was filtered and dried to obtain 363.2 mg (yield 64%) of the target compound.

p.f. 169-170°C.Federal Police. 169-170°C.

RMN de ³Η (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 7,43 (dt, J = 8,6, 2,6, 1,9 Hz, 2H) , 7,01 (dt, J = 8,6, 2,7, 1,8 Hz, 2H) , 5,59 (s, 1H) , 4,81 - 4,45 (m, 8H) , 1,37 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,29 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ³ Η NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 7.43 (dt, J = 8.6, 2.6, 1.9 Hz, 2H), 7.01 (dt, J = 8.6 , 2.7, 1.8 Hz, 2H), 5.59 (s, 1H), 4.81 - 4.45 (m, 8H), 1.37 (t, J=7.0 Hz, 6H) , 1.29 (t, J=7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,7, 163, 9, 162,3, 134,9, 131,7, 128,3, 120,8, 97,2, 45,3, 44,7, 34,8, 12,2, 12,1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.7, 163, 9, 162.3, 134.9, 131.7, 128.3, 120.8, 97.2, 45.3, 44.7, 34.8, 12.2, 12.1.

Exemplo 7Example 7

5, 5'-( (3-Hidroxifenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2tioxo-2,3-dihidropirimidin-4(1H)-ona)5,5'-((3-Hydroxyphenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 3-hidroxibenzaldeido (1,0 mmol, 123,9 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 183,9 mg (rendimento 73%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 3-hydroxybenzaldehyde (1.0 mmol, 123.9 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 183.9 mg (yield 73%) of the target compound.

p.f.: 189-191°C.m.p.: 189-191°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,12 (t, J = 7, 9 Hz, 1H) , 6,68 (ddt, J= 8,0, 2,1, 1,0 Hz, 1H) , 6,60 (dt, J= 8,2, 1,9, 0,9 Hz, 1H) , 6,58 (dd, J= 2,1, 1,0 Hz, 1H) , 5,58 (s, 1H) , 4,75 - 4,44 (m, 8H) , 1,34 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,26 (t, J= 7,0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.12 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.68 (ddt, J = 8.0, 2.1, 1.0 Hz , 1H), 6.60 (dt, J= 8.2, 1.9, 0.9 Hz, 1H), 6.58 (dd, J= 2.1, 1.0 Hz, 1H), 5, 58 (s, 1H), 4.75 - 4.44 (m, 8H), 1.34 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.26 (t, J= 7.0 Hz, 6H ) .

RMN de ¹³C (101 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 174,6, 163, 6, 162,3, 157,4, 137,2, 129, 3, 117,5, 113, 9, 113, 8, 97,5, 77,5, 77,2, 76, 8, 45, 1, 44, 6, 34,8, 12,1, 12,0. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 174.6, 163, 6, 162.3, 157.4, 137.2, 129, 3, 117.5, 113, 9, 113, 8 , 97.5, 77.5, 77.2, 76, 8, 45, 1, 44, 6, 34.8, 12.1, 12.0.

Exemplo 8Example 8

5,5'-((2-Nitrofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2-tioxo2,3-dihidropirimidina-4(1H)-ona)5,5'-((2-Nitrophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 2-nitrobenzaldeido (1,0 mmol, 151,1 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido cor salmão obtido foi filtrado e seco por forma a obter 474,9 mg (rendimento 89%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 2-nitrobenzaldehyde (1.0 mmol, 151.1 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The salmon colored solid obtained was filtered and dried to obtain 474.9 mg (89% yield) of the target compound.

p.f.: 172-173°C.m.p.: 172-173°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,56 (dd, J = 7,8, 1,4 Hz, ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.56 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz,

1H) , 7,52 (td, J= 7,7, 1,5 Hz, 1H) , 7,42 (tt, J= 7,6, 1,1 Hz,1H), 7.52 (td, J= 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.42 (tt, J= 7.6, 1.1 Hz,

1H) , 7,28 (dt, J= 7,9, 1,1 Hz, 1H) , 6,11 (s, 1H) , 4,63 (q, J = 7,0 Hz, 4H) , 4,59 - 4,47 (m, 4H) , 1,36 (t, J= 7,0 Hz, 6H) ,1H), 7.28 (dt, J=7.9, 1.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 4.63 (q, J=7.0 Hz, 4H), 4. 59 - 4.47 (m, 4H), 1.36 (t, J=7.0 Hz, 6H),

1,28 (t, J = 7,0 Hz, 6H).1.28 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174, 6, 163, 8, 162,2, 150,2, 131,4, 129,6, 129,4, 128,2, 124,2, 96,7, 45,2, 44,7, 32,8, 12,0, 11,9. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174, 6, 163, 8, 162.2, 150.2, 131.4, 129.6, 129.4, 128.2, 124.2, 96.7, 45.2, 44.7, 32.8, 12.0, 11.9.

Exemplo 9Example 9

5, 5' -( (2-Bromofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxy-2-tioxo2,3-dihidropirimidina-4(1H)-ona)5,5'-((2-Bromophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 2-bromobenzaldeido (1,0 mmol, 185,0 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. 0 sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. 0 sólido branco obtido foi filtrado e seco por forma a obter 448,3 mg (rendimento 79%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 2-bromobenzaldehyde (1.0 mmol, 185.0 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The white solid obtained was filtered and dried to obtain 448.3 mg (yield 79%) of the target compound.

p.f.: 165-167°C.m.p.: 165-167°C.

RMN de ³Η (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 7,56 (dd, J = 7,6, 1,1 Hz, ³ Η NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 7.56 (dd, J = 7.6, 1.1 Hz,

1H) , 7,33 - 7,24 (m, 2H) , 7,18 - 7,03 (m, 1H) , 5,61 (s,lH),1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.18 - 7.03 (m, 1H), 5.61 (s, 1H),

4,65 (q, J= 6,9 Hz, 4H) , 4,58 (m, 4H) , 1,36 (t, J= 7,0 Hz,4.65 (q, J= 6.9 Hz, 4H), 4.58 (m, 4H), 1.36 (t, J= 7.0 Hz,

6H), 1,29 (t, J = 7,0 Hz, 6H).6H), 1.29 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,5, 163, 6, 162,2, 135, 2, 134,5, 129,7, 128,8, 127,2, 123,1, 98,1, 45,2, 44,7, 36,5, 12,2, 12,1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.5, 163, 6, 162.2, 135, 2, 134.5, 129.7, 128.8, 127.2, 123.1, 98.1, 45.2, 44.7, 36.5, 12.2, 12.1.

Exemplo 10Example 10

5,5'-((2,3-diclorofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2tioxo-2,3-dihidropirimidin-4(1H)-ona)5,5'-((2,3-dichlorophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 2,3-diclorobenzaldeido (1,0 mmol, 184,2 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 406,9 mg (rendimento 73%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 2,3-dichlorobenzaldehyde (1.0 mmol, 184.2 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature. environment for 2 hours. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 406.9 mg (yield 73%) of the target compound.

p.f.: 175-177°C.m.p.: 175-177°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,43 (dd, J = 7,6, 1,1 Hz, 1H) , 7,24 (dd, J= 7,9, 1,1 Hz, 1H) , 7,20 (t, J= 7,9 Hz, 1H) , 5,70 (s, 1H) , 4,77 - 4,42 (m, 8H) , 1,35 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,29 (t, J = 7,0 Hz, 6H). ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.43 (dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.24 (dd, J= 7.9, 1.1 Hz , 1H), 7.20 (t, J=7.9 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 4.77 - 4.42 (m, 8H), 1.35 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.29 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,5, ¹³ C NMR (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174.5,

163,5, 162,3,163.5, 162.3,

136, 5,136, 5,

134,3, 131,7, 129, 6, 127,8, 126, 9, 98,0, 77,5, 77,2, 76, 8, 45, 3,134.3, 131.7, 129, 6, 127.8, 126, 9, 98.0, 77.5, 77.2, 76, 8, 45, 3,

44,8, 35,4, 12,2, 12,1.44.8, 35.4, 12.2, 12.1.

Exemplo 11Example 11

5,5'-((2,4-diclorofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2tioxo-2,3-dihidropirimidin-4(1H) -ona)5,5'-((2,4-dichlorophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 2,4-diclorobenzaldeido (1,0 mmol, 178,6 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 351,2 mg (rendimento 63%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 2,4-dichlorobenzaldehyde (1.0 mmol, 178.6 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature. environment for 2 hours. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 351.2 mg (63% yield) of the target compound.

p.f.: 172-173°C.m.p.: 172-173°C.

RMNde¹H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,37 (d, J=2,0Hz, 1H) , 7,24 (dd, J= 8,6, 2,1 Hz, 1H) , 7,20 (d, J= 8,6 Hz, 1H) , 5,63 (s, 1H) , 4, 68 - 4,54 (m, 8H) , 1,35 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,29 (t, J = 6,9 Hz, 6H) . ¹ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.37 (d, J=2.0Hz, 1H), 7.24 (dd, J=8.6, 2.1 Hz, 1H), 7. 20 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 5.63 (s, 1H), 4.68 - 4.54 (m, 8H), 1.35 (t, J= 7.0 Hz, 6H ), 1.29 (t, J = 6.9 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174.5, 163.5, 162.3, 134.1, 133.7, 132.5, 130.6, 130.5, 126.9, 97.8, 45.3, 44.8, 34.4, 12.2, 12.1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.5, 163.5, 162.3, 134.1, 133.7, 132.5, 130.6, 130.5, 126.9, 97.8, 45.3, 44.8, 34.4, 12.2, 12.1.

Exemplo 12Example 12

5, 5' -( (5-Hidroxi-2-nitrofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6hidroxi-2-tioxo-2,3-dihidropirimidina-4(1H)-ona)5,5'-((5-Hydroxy-2-nitrophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6hydroxy-2-thioxo-2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 5-hidroxi-2-nitrobenzaldeido (1,0 mmol, 167,1 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 5-hydroxy-2-nitrobenzaldehyde (1.0 mmol, 167.1 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2 h.

sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. 0 sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 505,7 mg (rendimento 92%) do composto pretendido.The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 505.7 mg (yield 92%) of the target compound.

p.f. 167-169°C.Federal Police. 167-169°C.

RMN de ³Η (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 7,60 (d, J = 8, 6 Hz,1H) , ³ Η NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 7.60 (d, J = 8.6 Hz, 1H),

6,78 (dd, J= 8,6, 2,5 Hz, 1H) , 6,71 (d, J= 2,2 Hz, 1H) ,6,15 (s, 1H) , 4,63 (q, J= 7,0 Hz, 4H) , 4,54 (m, 4H) , 1,37 (t,J =6.78 (dd, J= 8.6, 2.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.63 (q , J = 7.0 Hz, 4H), 4.54 (m, 4H), 1.37 (t,J =

7,0 Hz, 6H) , 1,28 (t, J = 6,9 Hz, 6H) .7.0 Hz, 6H), 1.28 (t, J = 6.9 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,3, 163,5, 161, 9, 160, 8, 142,0, 132,5, 127,2, 117, 0, 113, 9, 97,0, 45, 0, 44, 6, 33, 0, 12,0, 11,8. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.3, 163.5, 161, 9, 160, 8, 142.0, 132.5, 127.2, 117, 0, 113, 9, 97.0, 45, 0, 44, 6, 33, 0, 12.0, 11.8.

Exemplo 13Example 13

5, 5' - ((2,4-Dinitrofenil)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2tioxo-2,3-dihidropirimidina-4(1H) -ona)5, 5' - ((2,4-Dinitrophenyl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2thioxo-2,3-dihydropyrimidine-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 2,4-dinitrobenzaldeido (1,0 mmol, 196,1 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido branco obtido foi filtrado e seco por forma a obter 434,0 mg (rendimento 75%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 2,4-dinitrobenzaldehyde (1.0 mmol, 196.1 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature. environment for 2 hours. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The white solid obtained was filtered and dried to obtain 434.0 mg (75% yield) of the target compound.

p.f.: 169-170°C.m.p.: 169-170°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 8,41 (d, J = 2,3 Hz, 1H), ³ H NMR (400 MHz, CDCI 3 ) δ (ppm) 8.41 (d, J = 2.3 Hz, 1H),

8,37 (dd, J= 8,7, 2,4 Hz, 1H), 7,52 (dd, J= 8,7, 1,3 Hz,1H),8.37 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.52 (dd, J= 8.7, 1.3 Hz, 1H),

6,11 (s, 1H) , 4,63 (q, J= 7,0 Hz, 4H) , 4,59 - 4,46 (m, 4H),6.11 (s, 1H), 4.63 (q, J=7.0 Hz, 4H), 4.59 - 4.46 (m, 4H),

1,37 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,29 (t, J= 7,0 Hz, 6H) .1.37 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.29 (t, J= 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174, 6, 163, 8, ¹³ C NMR (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174, 6, 163, 8,

162,2, 149, 9,162.2, 149, 9,

146, 9, 137,1, 131,2, 125, 7, 119, 6, 96, 0, 45, 3, 44,9, 33,3, 12,0, 11,9.146, 9, 137.1, 131.2, 125, 7, 119, 6, 96, 0, 45, 3, 44.9, 33.3, 12.0, 11.9.

Exemplo 14Example 14

5, 5 ' -( (6-Nitrobenzo[d] [1,3]dioxol-5-il)metileno)bis(l,3dietil-6-hidroxi-2-tioxo-2,3-dihidropirimidin-4(1H)-ona)5,5'-((6-Nitrobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)methylene)bis(1,3diethyl-6-hydroxy-2-thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(1H)) -one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 6-nitrobenzo[d][1,3]dioxolo-5-carbaldeido (1,0 mmol, 199,1 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 429,4 mg (rendimento 77%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 6-nitrobenzo[d][1,3]dioxolo-5-carbaldehyde (1.0 mmol, 199.1 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 429.4 mg (yield 77%) of the target compound.

p.f.: 148-149°C.m.p.: 148-149°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDCI3) δ (ppm) 7,11 (s, 1H) , 6,67 (d, J = 1,1 Hz, 1H) , 6,11 (s, 2H) , 6,10 (d, J = 1,1 Hz, 1H) , 4,68 4,46 (m, 8H) , 1,36 (t, J= 7,0 Hz, 6H) , 1,28 (t, J= 7,0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 7.11 (s, 1H), 6.67 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 6. 10 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 4.68 4.46 (m, 8H), 1.36 (t, J= 7.0 Hz, 6H), 1.28 (t, J= 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174,5, 163, 8, 162, 1, 150,4, 146,7, 144,1, 125,8, 109,2, 105,8, 103,1, 97,1, 45,2, 44,7, 32,8, 12,0, 11,9. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174.5, 163, 8, 162, 1, 150.4, 146.7, 144.1, 125.8, 109.2, 105.8, 103.1, 97.1, 45.2, 44.7, 32.8, 12.0, 11.9.

Exemplo 15Example 15

5,5'-(Piridin-3-ilmetileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2-tioxo2,3-dihidropirimidin-4(1H) -ona)5,5'-(Pyridin-3-ylmethylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2-thioxo2,3-dihydropyrimidin-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 3-piridinocarboxaldeido (1,0 mmol, 109,3 mg, 95,9 pL) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente duranteThe mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 3-pyridinecarboxaldehyde (1.0 mmol, 109.3 mg, 95.9 pL) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for

2h. 0 sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. 0 sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 264,4 mg (rendimento 54%) do composto pretendido.2h The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 264.4 mg (yield 54%) of the target compound.

p.f.: 253-254°C.m.p.: 253-254°C.

RMN de ³H (400 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 8,69 (d, J = 5, 6 Hz, 1H) , 8,58 (s, 1H) , 8,27 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 7,92 (dd, J= 8,2, 5,5 Hz, 1H) , 6,43 (s, 1H) , 4,44 (qd, J= 13,0, 6,4 Hz, 8H) , 1,17 (t, J = 6,8 Hz, 12H) . ³ H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 8.69 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.27 (d, J = 8 .2 Hz, 1H), 7.92 (dd, J= 8.2, 5.5 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 4.44 (qd, J= 13.0, 6, 4 Hz, 8H), 1.17 (t, J = 6.8 Hz, 12H).

RMN de ¹³C (101 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 174,7, 161, 1, 144,7, 143,2, 140,1, 139,2, 126,7, 94,2, 43,1, 32,2, 12,3. ¹³ C NMR (101 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 174.7, 161, 1, 144.7, 143.2, 140.1, 139.2, 126.7, 94.2, 43, 1, 32.2, 12.3.

Exemplo 16Example 16

5,5'-((5-Clorofuran-2-il)metileno)bis(1,3-dietil-6-hidroxi-2tioxo-2,3-dihidropirimidin-4(1H)-ona)5,5'-((5-Chlorofuran-2-yl)methylene)bis(1,3-diethyl-6-hydroxy-2thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(1H)-one)

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do 5-cloro-2-furaldeido (1,0 mmol, 133,2 mg) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 374,5 mg (rendimento 73%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and 5-chloro-2-furaldehyde (1.0 mmol, 133.2 mg) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2 h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 374.5 mg (yield 73%) of the target compound.

p.f.: 151-152°C.m.p.: 151-152°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 6,13 (d, J = 3,3 Hz, 1H) , 6,07 (dd, J = 3,4, 1,7 Hz, 1H) , 5,52 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 4,73 - 4,51 (m, 8H) , 1,36 (t, J = 7,0 Hz, 6H) , 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 6.13 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.07 (dd, J = 3.4, 1.7 Hz, 1H) , 5.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.73 - 4.51 (m, 8H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.30 ( t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174, 8, 163,2, 162,2, 148,7, 135,2, 109,9, 107,1, 95,8, 45,2, 44,7, 31,4, 12,1, 12,1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174, 8, 163.2, 162.2, 148.7, 135.2, 109.9, 107.1, 95.8, 45.2, 44.7, 31.4, 12.1, 12.1.

Exemplo 17Example 17

5,5'-(2-Metil-3-fenilprop-2-eno-l,l-diil)bis(1,3-dietil-6hidroxi-2-tioxo-2,3-dihidropirimidin-4(1H)-ona)5,5'-(2-Methyl-3-phenylprop-2-ene-1,1-diyl)bis(1,3-diethyl-6hydroxy-2-thioxo-2,3-dihydropyrimidin-4(1H)-one )

A mistura do ácido N,N-dietiltiobarbitúrico (2,0 mmol, 400,6 mg) e do a-metilcinamaldeido (1,0 mmol, 150,5 mg, 145,1 pL) em etanol (5,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. O sólido obtido foi filtrado, lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60°C, seco e recristalizado de etanol. O sólido amarelo obtido foi filtrado e seco por forma a obter 264,3 mg (rendimento 50%) do composto pretendido.The mixture of N,N-diethylthiobarbituric acid (2.0 mmol, 400.6 mg) and α-methylcinnamaldehyde (1.0 mmol, 150.5 mg, 145.1 pL) in ethanol (5.0 mL) was stirred at room temperature for 2h. The solid obtained was filtered, washed with cold ethanol and petroleum ether 40-60°C, dried and recrystallized from ethanol. The yellow solid obtained was filtered and dried to obtain 264.3 mg (50% yield) of the target compound.

p.f.: 145-146°C.m.p.: 145-146°C.

RMN de ³H (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm) 7,34 (t, J = 7, 8 Hz, 2H) , 7,25 - 7,19 (m, 3H) , 6,27 (s, 1H) , 5,01 (q, J= 2,7, 1,4 Hz, 1H), 4,77 - 4,51 (m, 8H), 1,77 (t, J= 1,3 Hz, 3H), 1,36 (t, J = 7,0 Hz, 6H) , 1,31 (t, J= 7,0 Hz, 6H) . ³ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) δ (ppm) 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.19 (m, 3H), 6.27 (s, 1H), 5.01 (q, J= 2.7, 1.4 Hz, 1H), 4.77 - 4.51 (m, 8H), 1.77 (t, J= 1.3 Hz, 3H ), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.31 (t, J = 7.0 Hz, 6H).

RMN de ¹³C (101 MHz, CDCI3) δ (ppm) 174, 6, 163, 6, 162,4, 138,0, 131,2, 129, 0, 128,3, 126, 7, 126, 6, 97,5, 45, 3, 44,7, 38,3, 17,2, 12,2, 12,1. ¹³ C NMR (101 MHz, CDCl3 ) δ (ppm) 174, 6, 163, 6, 162.4, 138.0, 131.2, 129, 0, 128.3, 126, 7, 126, 6, 97.5, 45, 3, 44.7, 38.3, 17.2, 12.2, 12.1.

Exemplo 18Example 18

5,5'-((2-Nitrofenil)metileno)bis(6-hidroxi-2-tioxo-2,3dihidropirimidin-4(1H) -ona)5,5'-((2-Nitrophenyl)methylene)bis(6-hydroxy-2-thioxo-2,3dihydropyrimidin-4(1H)-one)

A mistura de ácido tiobarbitúrico (2,0 mmol; 231,8 mg) e 2nitrobenzaldeido (1,0 mmol; 152,3 mg) em etanol (5 mL) , foi colocada em refluxo durante 5 horas e 30 minutos. O sólido precipitado foi filtrado e lavado com etanol frio e éter de petróleo 40-60 °C. O sólido amarelo obtido foi seco, por forma a obter 202,3 mg (rendimento 48%) do composto pretendido.The mixture of thiobarbituric acid (2.0 mmol; 231.8 mg) and 2-nitrobenzaldehyde (1.0 mmol; 152.3 mg) in ethanol (5 mL) was refluxed for 5 hours and 30 minutes. The precipitated solid was filtered and washed with cold ethanol and 40-60°C petroleum ether. The yellow solid obtained was dried to obtain 202.3 mg (48% yield) of the target compound.

p.f.: 230-231 °C.m.p.: 230-231°C.

RMN de ³H (400 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 11,62 (s, 4H), ³ H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 11.62 (s, 4H),

7,53 (d, 1H,7.53 (d, 1H,

J = 7,8 Hz), 7,47 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,33 (t, 1H, J = 7,6 Hz) , 6,11 (s, 1H) .J = 7.8 Hz), 7.47 (t, 1H, J = 7.6 Hz), 7.33 (t, 1H, J = 7.6 Hz), 6.11 (s, 1H).

RMN de ¹³C (101 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 173, 1, 162, 6, 149, 7, 135, 6, ¹³ C NMR (101 MHz, DMSO-de) δ (ppm) 173, 1, 162, 6, 149, 7, 135, 6,

131,1, 129, 4, 126, 7, 123, 6, 94,7, 28,8.131.1, 129, 4, 126, 7, 123, 6, 94.7, 28.8.

De modo a avaliar a atividade de todos os compostos em estudo, estes foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO) na concentração de 10 mM e mantidos a 4°C até à sua utilização.In order to assess the activity of all compounds under study, they were dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) at a concentration of 10 mM and kept at 4°C until use.

A atividade inibitória da XO foi avaliada através da quantificação espetrofotométrica da formação de ácido úrico a 295 nm. Assim, para cada ensaio e em cada poço de uma microplaca de Elisa de 96 poços, procedeu-se à adição de 50 pL da solução de teste e 50 pL da solução de XO a 0,1 U/mL. O tampão dihidrogenofosf ato a 50 mM (pH 7,4) foi utilizado para a diluição de todas as soluções utilizadas. A microplaca foi em seguida incubada à temperatura de 37°C durante 5 minutos. Após esse tempo, foram adicionados 150 pL de uma solução de xantina a 420 pM, preparada por diluição de uma solução-mãe a 10 mM em hidróxido de sódio 25 mM. A microplaca foi novamente colocada em incubação por um período de 10 minutos, sendo a absorvância registada a cada minuto. Antes de cada leitura, foi efetuada uma agitação lenta, linear e automática durante 20 segundos.XO inhibitory activity was evaluated by spectrophotometric quantification of uric acid formation at 295 nm. Thus, for each assay and in each well of a 96-well Elisa microplate, 50 µL of the test solution and 50 µL of the 0.1 U/mL XO solution were added. 50 mM dihydrogen phosphate buffer (pH 7.4) was used for the dilution of all solutions used. The microplate was then incubated at 37°C for 5 minutes. After that time, 150 pL of a 420 pM xanthine solution prepared by diluting a 10 mM stock solution in 25 mM sodium hydroxide was added. The microplate was again placed in incubation for a period of 10 minutes, and the absorbance was recorded every minute. Before each reading, a slow, linear and automatic agitation was performed for 20 seconds.

De modo a obter apenas a absorvância associada ao ácido úrico, utilizou-se como branco uma solução constituída por 50 pL da solução de teste, 50 pL de tampão e 150 pL da solução de xantina. Adicionalmente, como controlo negativo, utilizou-se o tampão dihidrogenofosfato e como controlo positivo o fármaco utilizado na clínica, alopurinol. Para cada composto, calculou-se a percentagem de inibição utilizando a fórmula a seguir apresentada.In order to obtain only the absorbance associated with uric acid, a solution consisting of 50 µl of the test solution, 50 µl of buffer and 150 µl of the xanthine solution was used as a blank. Additionally, as a negative control, the dihydrogen phosphate buffer was used and as a positive control, the drug used in the clinic, allopurinol. For each compound, the percent inhibition was calculated using the formula given below.

ΐ de Inibição — [1 (AbSamostra AbSbranco) / AÓScontrolo negativo] X 100ΐ of Inhibition — [1 (AbSample AbSwhite) / AOSnegative control] X 100

Onde:Where:

AbSamostra corresponde a 50 pL da solução de teste, 50 pL da solução de XO e 150 pL da solução de xantina.AbSample corresponds to 50 pL of the test solution, 50 pL of the XO solution and 150 pL of the xanthine solution.

AbSbranco corresponde a 50 pL da solução de teste, 50 pL de tampão e 150 pL da solução de xantina.AbSwhite corresponds to 50 pL of test solution, 50 pL of buffer and 150 pL of xanthine solution.

AbScontroio negativo corresponde a 50 pL de tampão, 50 pL da solução de XO e 150 pL da solução de xantina.Negative control corresponds to 50 µl of buffer, 50 µl of XO solution and 150 µl of xanthine solution.

A solução de teste corresponde à solução de cada um dos compostos em estudo.The test solution corresponds to the solution of each of the compounds under study.

Inicialmente, de forma a identificar os inibidores da XO mais promissores, foi efetuada uma triagem à concentração de 30 pM. Os resultados de inibição enzimática observados encontram-se apresentados na figura 3. Os compostos que apresentaram inibição da XO superior a 80%, próximo do fármaco de referência alopurinol, foram posteriormente testados a uma segunda concentração de 5 pM. Os compostos que mantiveram a percentagem de inibição superior a 80%, juntamente com o fármaco utilizado na clínica (alopurinol), foram selecionados para o estudo de IC₅o.Initially, in order to identify the most promising XO inhibitors, a screening was performed at a concentration of 30 pM. The observed enzymatic inhibition results are shown in Figure 3. Compounds that showed inhibition of XO greater than 80%, close to the reference drug allopurinol, were further tested at a second concentration of 5 pM. The compounds that maintained the percentage of inhibition greater than 80%, together with the drug used in the clinic (allopurinol), were selected for the IC ₅ o study.

De forma a calcular os valores de IC50 de cada um dos compostos em estudo, foram utilizadas sete concentrações diferentes nas soluções de teste, variando entre 1 nM e 100 pM. Para o controlo alopurinol, foram utilizadas concentrações de 0,5, 1, 5, 10, 25, 50 e 100 pM. No caso das pirimidinonas em estudo, foram utilizadas concentrações de 0,1, 0,5, 1, 2,5, 5, 10 e 50 pM. Os resultados obtidos encontram-se representados na figura 4. Nesta figura está evidenciada a percentagem de inibição da XO para as pirimidinonas mais potentes, com valores de IC50 calculados de 0,62, 1,40 e 2,62 μΜ para os exemplos 9, 11 e 17, respetivamente. Os respetivos valores representam uma potência superior ao fármaco utilizado na clínica, o alopurinol, em cerca de 16, 7 e 3 vezes, respetivamente.In order to calculate the IC50 values of each of the compounds under study, seven different concentrations were used in the test solutions, ranging from 1 nM to 100 pM. For allopurinol control, concentrations of 0.5, 1, 5, 10, 25, 50 and 100 pM were used. In the case of the pyrimidinones under study, concentrations of 0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 10 and 50 pM were used. The results obtained are shown in figure 4. This figure shows the percentage of inhibition of XO for the most potent pyrimidinones, with calculated IC50 values of 0.62, 1.40 and 2.62 μΜ for examples 9, 11 and 17, respectively. The respective values represent a higher potency than the drug used in the clinic, allopurinol, by about 16, 7 and 3 times, respectively.

Um dos parâmetros principais a ter conta no desenvolvimento de novas moléculas farmacologicamente ativas é a sua toxicidade em células humanas saudáveis. Neste contexto, a citotoxicidade da bis-pirimidinona com melhor atividade inibitória da XO (exemplo 9) foi avaliada pelo ensaio do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazole2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) em NHDF. Este é um ensaio colorimétrico quantitativo, em que a quantidade de MTT reduzido pelas células, originando o seu derivado formazano, é determinada espetrofotometricamente a 570 nm e é considerada proporcional ao número de células viáveis.One of the main parameters to take into account in the development of new pharmacologically active molecules is their toxicity in healthy human cells. In this context, the cytotoxicity of the bis-pyrimidinone with the best XO inhibitory activity (example 9) was evaluated by the 3-(4,5-dimethylthiazole2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in NHDF. This is a quantitative colorimetric assay, in which the amount of MTT reduced by cells to its formazan derivative is determined spectrophotometrically at 570 nm and is considered proportional to the number of viable cells.

A linha celular foi cultivada em frascos de cultura de 75 cm² e mantida a 37 °C numa incubadora sob atmosfera húmida com 5% de CO2, em meio de cultura Roswell Park Memorial Instítute (RPMI) suplementado com 2 mM de D-glutamina, 10 mM de ácido 2-(4-(2hidroxietil)1-piperazinil]-etanossulfónico (HEPES), 1 mM de piruvato de sódio e completado com 10% soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibiótico/antimicótico (AB) . Após atingir cerca de 90% de confluência, as células foram tripsinizadas, contadas e semeadas em placas de 96 poços (2xl0⁴ células/mL, 100 pL/poço), com o meio de cultura completo. Após 48h, foram tratadas com seis concentrações (0, 1, 1, 10, 50, 100 e 200 μΜ) da bispirimidinona em estudo durante 72h. As células não tratadas com composto foram utilizadas como controlo. Passado o tempo de incubação, o meio dos poços foi removido, e substituído por meio fresco sem SFB e AB e com solução de MTT 5 mg/mL. Após esta adição, as células foram novamente incubadas a 37 °C durante 4h. De seguida, o meio foi totalmente removido, os cristais de formazano foram dissolvidos em DMSO e a absorvância foi determinada num leitor de microplacas a 570 nm. A extensão de morte celular foi expressa como percentagem de viabilidade celular relativamente às células utilizadas como controlo. A experiência foi realizada em quadruplicado e o valor de IC50 foi calculado a partir da curva de concentração-resposta por cálculos de ajuste sigmoide. Os resultados da citotoxicidade do exemplo 9 em células NHDF estão expressos como valores médios ± erro padrão da média e representados na figura 5.The cell line was grown in 75 cm ² culture flasks and kept at 37°C in a humidified incubator with 5% CO 2 , in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) culture medium supplemented with 2 mM D-glutamine, 10 mM 2-(4-(2hydroxyethyl)1-piperazinyl]-ethanesulfonic acid (HEPES), 1 mM sodium pyruvate and topped up with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotic/antimycotic (AB). After reaching approximately 90% confluence, cells were trypsinized, counted and seeded in 96-well plates (2x10 ⁴ cells/mL, 100 pL/well) with complete culture medium. After 48h, they were treated with six concentrations (0, 1, 1, 10, 50, 100 and 200 μΜ) of bispyrimidinone under study for 72h. Cells not treated with compound were used as control. After the incubation time, the medium from the wells was removed, and replaced with fresh medium without FBS and AB and with 5 mg/mL MTT solution After this addition, the cells were again incubated at 37 °C for 4 h. Then the medium was completely removed, the formazan crystals were dissolved in DMSO and the absorbance was determined on a microplate reader at 570 nm. The extent of cell death was expressed as a percentage of cell viability relative to cells used as a control. The experiment was performed in quadruplicate and the IC50 value was calculated from the concentration-response curve by sigmoid fit calculations. The cytotoxicity results of example 9 on NHDF cells are expressed as mean values ± standard error of the mean and represented in figure 5.

A informação representada na figura 5 demonstra que o composto do exemplo 9 não apresenta citotoxicidade para as células humanas NHDF à concentração ativa para a inibição da XO. De facto, verifica-se um valor de IC50 cerca de 90 vezes superior para a viabilidade celular em NHDF em relação aos valores obtidos para a inibição da enzima XO (56,09 versus 0,62 μΜ). Os valores de viabilidade celular observados em células normais são encorajadores no que respeita à segurança no potencial futuro uso deste tipo de compostos como agentes hipouricémicos.The information represented in figure 5 demonstrates that the compound of example 9 does not show cytotoxicity to human NHDF cells at the active concentration for the inhibition of XO. In fact, there is an IC50 value about 90 times higher for cell viability in NHDF compared to the values obtained for the inhibition of the XO enzyme (56.09 versus 0.62 μΜ). The cell viability values observed in normal cells are encouraging with regard to safety in the potential future use of this type of compounds as hypouricemic agents.

Exemplos de aplicaçãoApplication examples

A presente invenção consiste na utilização de bis-pirimidinonas com a fórmula geral (I), os seus tautómeros e/ou os seus respetivos sais, no tratamento de condições patológicas causadas por hiperuricemia, com destaque para a gota. Isto devese fundamentalmente ao facto destas pirimidinonas, particularmente o composto do exemplo 9, inibirem marcadamente a enzima XO, o principal alvo terapêutico validado no tratamento da gota. Além disso, foi demonstrada seletividade de ação para o composto do exemplo 9, uma vez que não apresenta citotoxicidade para as células NHDF à concentração ativa para 22 a inibição da XO. Assim, a invenção é suscetível de aplicação industrial uma vez que a prevalência na sociedade de condições patológicas causadas por hiperuricemia, principalmente a gota, é elevada, constituindo as bis-pirimidinonas potenciais alternativas terapêuticas aos fármacos atualmente usados na clínica, para os quais são conhecidos efeitos secundários relevantes. Além disso, a preparação destas pirimidinonas é rápida, simples e permite obter elevados rendimentos reacionais, tendo um baixo custo, o que aumenta o seu interesse industrial.The present invention consists in the use of bis-pyrimidinones with the general formula (I), their tautomers and/or their respective salts, in the treatment of pathological conditions caused by hyperuricemia, in particular gout. This is fundamentally due to the fact that these pyrimidinones, particularly the compound of example 9, markedly inhibit the XO enzyme, the main validated therapeutic target in the treatment of gout. In addition, selectivity of action was demonstrated for the compound of example 9, since it does not show cytotoxicity for NHDF cells at active concentration for XO inhibition. Thus, the invention is susceptible of industrial application since the prevalence in society of pathological conditions caused by hyperuricemia, mainly gout, is high, constituting the bis-pyrimidinones as potential therapeutic alternatives to the drugs currently used in the clinic, for which they are known. relevant side effects. In addition, the preparation of these pyrimidinones is fast, simple and allows high reaction yields at a low cost, which increases their industrial interest.

Covilhã, 04 de fevereiro de 2021Covilha, February 04, 2021

Claims

1. Bis-pyrimidinones for use in the treatment and prevention of pathological conditions caused by hyperuricemia, characterized by being inhibitors of the activity of the xanthine oxidase enzyme and by having selectivity of action in relation to their cytotoxic effects on normal human cells.

Bis-pyrimidinones for use according to claim 1, characterized in that the compounds are of the general formula (I), as well as their tautomers and/or their salts.

Bis-pyrimidinones for use according to claims 1 and 2, characterized in that the substituents X and Y are selected from heteroatoms and the groups R1, R2 and R3 are hydrogen or selected from hydrocarbon radicals.

Bis-pyrimidinones for use according to claim 3, characterized in that the substituents X and Y are selected from sulfur, the groups R1 and R2 are hydrogen or ethyl and the group R3 is an alkenyl, aryl or heteroaryl radical.

5. Bis-pyrimidinones for use according to claims 1 to 4, characterized in that they reduce the production of uric acid in the body.

Bis-pyrimidinones for use according to claims 1 to 5, characterized in that the compounds do not show toxicity in normal human dermal fibroblasts at the minimum concentrations necessary to completely inhibit the xanthine oxidase enzyme.

Covilha, October 22, 2021.