PL186688B1 - Zastosowanie związku steroidowego i sposób regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssaka - Google Patents
Zastosowanie związku steroidowego i sposób regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssakaInfo
- Publication number
- PL186688B1 PL186688B1 PL95317830A PL31783095A PL186688B1 PL 186688 B1 PL186688 B1 PL 186688B1 PL 95317830 A PL95317830 A PL 95317830A PL 31783095 A PL31783095 A PL 31783095A PL 186688 B1 PL186688 B1 PL 186688B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- compound
- use according
- hydrogen
- carbon atoms
- additional bond
- Prior art date
Links
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 title claims description 28
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 title description 4
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 title description 4
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 title description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 43
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 39
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 37
- -1 steroid compound Chemical class 0.000 claims abstract description 33
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims abstract description 12
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 125000001476 phosphono group Chemical group [H]OP(*)(=O)O[H] 0.000 claims abstract description 6
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims abstract description 6
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims abstract description 5
- 230000018046 regulation of meiosis Effects 0.000 claims abstract description 5
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 63
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 claims description 48
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 10
- 210000005132 reproductive cell Anatomy 0.000 claims description 10
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 7
- CHGIKSSZNBCNDW-QGBOJXOESA-N 14-demethyllanosterol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@H]21 CHGIKSSZNBCNDW-QGBOJXOESA-N 0.000 claims description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 claims description 4
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 abstract 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 32
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 14
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 10
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 6
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- UJELMAYUQSGICC-UHFFFAOYSA-N Zymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)C=CCC(C)C)CCC21 UJELMAYUQSGICC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 4
- 244000309464 bull Species 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 4
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Hydroxy-10r.13c-dimethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexyl)-(5tH)-Delta8.14-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AWBZPJQUWZBRII-BJHTWKIPSA-N (3s,10s,13r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)CC1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-BJHTWKIPSA-N 0.000 description 3
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 3
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 3
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- CGSJXLIKVBJVRY-XTGBIJOFSA-N zymosterol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@H]21 CGSJXLIKVBJVRY-XTGBIJOFSA-N 0.000 description 3
- IZVFFXVYBHFIHY-UHFFFAOYSA-N (3alpha, 5alpha)-Cholest-7-en-3-ol, 9CI Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCCC(C)C)CCC33)C)C3=CCC21 IZVFFXVYBHFIHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N Cyclopentane Chemical compound C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N Dehydrocholesterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- UCTLRSWJYQTBFZ-DDPQNLDTSA-N cholesta-5,7-dien-3beta-ol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-DDPQNLDTSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000031877 prophase Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 2
- CGSJXLIKVBJVRY-QCVBKAFJSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)CC1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@H]21 CGSJXLIKVBJVRY-QCVBKAFJSA-N 0.000 description 1
- OBTIUGYWLJOKIR-DJDDBVQXSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-4-(2-methylpropyl)-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC=C(C)C)CC[C@H]2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CC(C)C)C1CC2 OBTIUGYWLJOKIR-DJDDBVQXSA-N 0.000 description 1
- QETLKNDKQOXZRP-QCVBKAFJSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)CC1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]21 QETLKNDKQOXZRP-QCVBKAFJSA-N 0.000 description 1
- OEUBSSKKXXXDOY-ZVJQPQNVSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-4-propyl-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CCC)C1CC2 OEUBSSKKXXXDOY-ZVJQPQNVSA-N 0.000 description 1
- SCEZIHJVTBQOLS-AIOXYQCUSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-4,10,13-trimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)C1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]21 SCEZIHJVTBQOLS-AIOXYQCUSA-N 0.000 description 1
- IPRDJBVHJZXUKS-VWBIICMBSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-4-ethyl-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC=C(C)C)CC[C@H]2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CC)C1CC2 IPRDJBVHJZXUKS-VWBIICMBSA-N 0.000 description 1
- MYGNEAUHBYWYDW-VWBIICMBSA-N (3s,10s,13r,14r,17r)-4-ethyl-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CC)C1CC2 MYGNEAUHBYWYDW-VWBIICMBSA-N 0.000 description 1
- JBCOXAXISGOOLM-MOYFWIKJSA-N (3s,10s,13r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-4-(2-methylpropyl)-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC=C(C)C)CC=C2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CC(C)C)C1CC2 JBCOXAXISGOOLM-MOYFWIKJSA-N 0.000 description 1
- NOPPWBLRBPYHKI-LTBVBHAHSA-N (3s,10s,13r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-4-propyl-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC=C(C)C)CC=C2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CCC)C1CC2 NOPPWBLRBPYHKI-LTBVBHAHSA-N 0.000 description 1
- JLOANCHLDDYNPQ-MOYFWIKJSA-N (3s,10s,13r,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-4-(2-methylpropyl)-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(CC(C)C)C1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 JLOANCHLDDYNPQ-MOYFWIKJSA-N 0.000 description 1
- QJVMEAZHJKXWJD-NFKJGPSQSA-N (3s,10s,13r,17r)-4,10,13-trimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)C1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC=C21 QJVMEAZHJKXWJD-NFKJGPSQSA-N 0.000 description 1
- GPFIIBDJBFKNRC-MOYFWIKJSA-N (3s,10s,13r,17r)-4-butyl-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC=C(C)C)CC=C2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CCCC)C1CC2 GPFIIBDJBFKNRC-MOYFWIKJSA-N 0.000 description 1
- UNMZENALBGRAPQ-HJTIFLKPSA-N (3s,10s,13r,17r)-4-ethyl-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylhept-5-en-2-yl]-2,3,4,5,6,7,11,12,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC=C(C)C)CC=C2C2=C1[C@@]1(C)CC[C@H](O)C(CC)C1CC2 UNMZENALBGRAPQ-HJTIFLKPSA-N 0.000 description 1
- UJEZSSQKODMBPP-AMBGKQCCSA-N (3s,9r,10s,13r,14r,17r)-4-ethyl-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@@H]2[C@@]3(C)CC[C@H](O)C(CC)C3CC=C2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@]21C UJEZSSQKODMBPP-AMBGKQCCSA-N 0.000 description 1
- LFSLGMVIGQYMDT-PPFBJOSLSA-N (3s,9r,10s,13r,17r)-4-ethyl-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,9,11,12,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C[C@@H]2[C@@]3(C)CC[C@H](O)C(CC)C3CCC2=C2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@]21C LFSLGMVIGQYMDT-PPFBJOSLSA-N 0.000 description 1
- ROUYUBHVBIKMQO-UHFFFAOYSA-N 1,4-diiodobutane Chemical compound ICCCCI ROUYUBHVBIKMQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYFLWBNQFMXCPA-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-2-methylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1C HYFLWBNQFMXCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 4,4-dimethyl-5alpha-cholesta-8,14,24-trien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC=C21 LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 0.000 description 1
- CBUWTGCATVNMJE-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethylheptanal Chemical compound CC(C)(C)CCCCC=O CBUWTGCATVNMJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 241001137853 Crenarchaeota Species 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONYPIMNXSARKFQ-NFTYELEKSA-N Doristerol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1C2=C2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 ONYPIMNXSARKFQ-NFTYELEKSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010057021 Menotropins Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910020489 SiO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- SMZOGRDCAXLAAR-UHFFFAOYSA-N aluminium isopropoxide Chemical compound [Al+3].CC(C)[O-].CC(C)[O-].CC(C)[O-] SMZOGRDCAXLAAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical class [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001152 differential interference contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 108700039708 galantide Proteins 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003313 haploid nucleated cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N heptamethylene Natural products C1CCCCCC1 DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090343 human menopausal gonadotrophin Drugs 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003794 male germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000022866 positive regulation of meiosis Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical class [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 description 1
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 125000002328 sterol group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 1
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical compound CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 238000004104 two-dimensional total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
- C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J53/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by condensation with a carbocyclic rings or by formation of an additional ring by means of a direct link between two ring carbon atoms, including carboxyclic rings fused to the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton are included in this class
- C07J53/001—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by condensation with a carbocyclic rings or by formation of an additional ring by means of a direct link between two ring carbon atoms, including carboxyclic rings fused to the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton are included in this class spiro-linked
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
1. Zastosowanie zwiazku steroidowego o ogólnym wzorze (I) w którym R 1 i R2 sa niezaleznie wybrane z grupy obejmujacej atom wodoru, nierozgaleziony lub rozgale- ziony Cr C6-alkil, który moze byc podstawiony atomem chlorowca lub hydroksylem lub w którym R 1 1 R2 razem z atomem wegla, z którym sa zwiazane tworza pierscien cyklopentanowy lub pierscien cykloheksano- wy; R3 i R4 lacznie oznaczaja dodatkowe wiazanie pomiedzy atomami wegla, z którymi sa zwiazane, w któ- rym to przypadku R5 oznacza atom wodoru, a R6 i R7 oznaczaja atomy wodoru lub lacznie oznaczaja dodat- kowe wiazanie pomiedzy atomami wegla, z którymi sa zwiazane; lub R5 i R4 lacznie oznaczaja dodatkowe wiazanie pomiedzy atomami wegla z którymi sa zwiazane, w którym to przypadku R3 oznacza atom wodoru, a R6 1 R oznaczaja atom wodoru lub lacznie oznaczaja dodatkowe wiazanie pomiedzy atomami wegla, z którymi sa zwiazane; lub R6 1 R4 lacznie oznaczaja dodatkowe wiazanie pomiedzy atomami wegla, z któ- rymi sa zwiazane, w którym to przypadku R3, R5 i R 7 oznaczaja atomy wodoru, R3 i R9 oznaczaja atomy wodoru lub lacznie oznaczaja dodatkowe wiazanie pomiedzy atomami wegla, z którymi sa zwiazane, 1 R 1 0 oznacza atom wodoru, grupe acylowa, grupe sulfo lub grupe fosfono, do wytwarzania leku do stosowania do regulacji mejozy PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są zastosowanie związku steroidowego i sposób regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssaka.
Mejoza jest unikalnym i ostatecznym procesem właściwym komórkom rozrodczym, na którym opiera się rozmnazanie płciowe. Mejoza obejmuje dwa podziały mejotyczne. W trakcie pierwszego podziału wymiana materiału genetycznego ojca i matki zachodzi
186 688 przed rozdzieleniem pary chromosomów do dwu komórek potomnych. Zawierają one tylko połowę liczby chromosomów (ln) i 2c DNA. Drugi podział mejotyczny zachodzi bez syntezy DNA, a zatem podział ten prowadzi do utworzenia haploidalnych komórek rozrodczych przy liczbie DNA wynoszącej tylko 1c.
Mejotyczne podziały zachodzą podobnie w komórkach rozrodczych męskich i żeńskich, jednak czas wystąpienia i procesy różnicowania prowadzące do powstania komórek jajowych i plemników różnią zasadniczo. Wszystkie żeńskie macierzyste komórki rozrodcze wchodzą w profazę I podziału mejotycznego we wczesnym stadium życia, często przed urodzeniem, a następnie zostają zatrzymane jako oocyty w dalszym stadium profazy 1 (stan zarodkowy), aż do owulacji po osiągnięciu dojrzałości płciowej. Zatem już od wczesnego okresu życia osobnik płci żeńskiej dysponuje określoną liczbą oocytów, którą wykorzystuje aż do wyczerpania. Mejoza u osobników żeńskich nie jest całkowita aż do momentu dojrzewania i w efekcie daje tylko jedną komórkę jajową i dwa odrzucane ciałka kierunkowe na jedną macierzystą komórkę rozrodczą. Natomiast tylko u niektórych z męskich komórek rozrodczych mejoza zachodzi po osiągnięciu dojrzałości płciowej i komórki te są uwalniane z populacji komórek macierzystych w ciągu całego życia. Zapoczątkowana mejoza u osobników płci męskiej postępuje bez znaczących opóźnień i prowadzi do utworzenia czterech plemników. Niewiele wiadomo o mechanizmach kontrolujących zapoczątkowanie mejozy u osobników płci zarówno męskiej, jak i żeńskiej. Nowe badania wykazały, że w oocycie za wstrzymanie mejozy odpowiedzialne mogą być puryny pęcherzykowe, hypoksantyna lub adenozyna (S. M. Downs i in., Dev. Biol. 82 (1985) 454-458; J. J. Eppig i in., Dev. Biol. 119 (1986) 313-321; i S. M. Downs, Mol. Reprod. Dev. 35 (1993) 82-94). Obecność dyfuzyjnej substancji regulującej mejozę została opisana po raz pierwszy przez Byskova i in. w odniesieniu do hodowli komórkowych mysich płodów (A. G. Byskov i in., Dev. Biol. 52 (1976) 193-200). Substancja indukująca mejozę („MIS”) jest wydzielana przez jajnik płodu myszy, w którym zachodziła mejoza, a substancja zapobiegająca mejozie („MPS”) jest uwalniana z morfologicznie zróżnicowanych jąder nieaktywnych macierzystych komórek rozrodczych nie będących w stanie mejozy. Zasugerowano, że względne poziomy „MIS” i „MPS” regulują zapoczątkowanie, zatrzymanie i wznowienie mejozy zarówno w męskich, jak i żeńskich komórkach rozrodczych (A. G. Byskov i in., w The Physiology of Reproduction (wyd. E. Knobil i J. D. Neill, Raven Press, New York (1994)). Oczywiście skoro jest możliwe regulowanie procesu mejotycznego, to możliwe jest także kontrolowanie rozmnażania.
Odkryto, że substancje indukujące mejozę wyekstrahowane z jąder byków i ludzkiego płynu pęcherzykowego są zdolne do indukowania zarówno przywracania mejozy w hodowanych oocytach mysich (próba oocytowa), jak i stymulowania mejozy w męskich komórkach rozrodczych hodowanych płodowych mysich jąder (próba gonadowa). Substancja indukująca mejozę jest wytwarzana przez dojrzałe jądra różnych ssaków, w tym osobników płci męskiej, i znajduje się także w dojrzałych pęcherzykach Graafa kilku gatunków ssaków, w tym u osobników płci żeńskiej.
Nieoczekiwanie okazało się, że pewne pochodne steroidowe, znane jako związki pośrednie w biosyntezie cholesterolu i pewne nowe, strukturalnie spokrewnione syntetyczne pochodne steroidowe znajdują zastosowanie do regulacji mejozy w komórkach rozrodczych.
Zatem wynalazek dotyczy zastosowania związku steroidowego o ogólnym wzorze I
186 688 w którym R1 i R2 są niezależnie wybrane z grupy obejmującej atom wodoru, nierozgałęziony lub rozgałęziony Cp-Cń-alkil, który może być podstawiony atomem chlorowca lub hydroksylem lub w którym r” i R2 razem z atomem węgla, z którym są związane tworzą pierścień cyklopentanowy lub pierścień cykloheksanowy; R3 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, w którym to przypadku R5 oznacza atom wodoru, a R6 i R7 oznaczają atomy wodoru lub łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane; lub R5 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla z którymi są związane, w którym to przypadku R3 oznacza atom wodoru, a R6 i r7 oznaczają atom wodoru lub łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane; lub R6 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla z którymi są związane, w którym to przypadku R3, r5 i r7 oznaczają atomy wodoru; R8 i R9 oznaczają atomy wodoru lub łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane; i R10 oznacza atom wodoru, grupę acylową, grupę sulfo lub grupę fosfono, do wytwarzania leku do stosowania do regulacji mejozy.
Wynalazek dotyczy również sposobu regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssaka, poza ustrojem, który polega na tym, że na komórkę rozrodczą wymagającej takiego zabiegu działa się skuteczną ilością związku o ogólnym wzorze 1, zdefiniowany powyżej.
Korzystnie stosuje się związek, w którym Ri oznacza atom wodoru lub metyl, względnie w którym Ri oznacza etyl albo nierozgałęziony lub rozgałęziony C3-Cń-alkil, względnie w którym Ri oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węgla, a zwłaszcza nierozgałęziony lub rozgałęziony α-hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węgla.
Ponadto korzystnie stosuje się związek, w którym Ri oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony alkil podstawiony atomem chlorowca, a zwłaszcza trifluorometyl.
Korzystnie stosuje się związek, w którym R2 oznacza atom wodoru lub metyl, względnie w którym R2 oznacza etyl albo nierozgałęziony lub rozgałęziony C3-Cń-alkil, względnie w którym R2 oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węgla, a zwłaszcza nierozgałęziony lub rozgałęziony α-hydroksyalk il zawierający do 6 atomów węgla.
Ponadto korzystnie stosuje się związek, w którym R2 oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony alkil podstawiony atomem chlorowca, a zwłaszcza trifluorometyl.
Korzystne są także związki, w których Ri i R2 razem z atomem węgla, z którym są związane tworzą pierścień cyklopentanowy lub cykloheksanowy.
Korzystnie stosuje się związek, w którym R3 i r4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, a R5 oznacza atom wodoru, względnie w którym R5 i r4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, a R3 oznacza atom wodoru, względnie w którym R6 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, a R3, r5 i r7 oznaczają atomy wodoru.
Korzystnie R6 i R7 oznaczają atomy wodoru lub R6 i r7 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane.
Korzystnie R i r9 oznaczają atomy wodoru lub R8 i r9 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane.
Gdy R” oznacza grupę acylową, to jest to ugrupowanie kwasu karboksylowego, które może być rozgałęzione, nierozgałęzione lub cykliczne i może obejmować ewentualnie podstawioną grupę aminową i/lub i lub 2 atomy tlenu oprócz karbonylowego atomu tlenu wiążącego R ™ ze szkieletem sterolowym. Grupa acylowa Rio korzystnie zawiera i-20 atomów węgla, korzystniej i-”2 atomów węgla, jeszcze korzystniej i-i0 atomów węgla, a jeszcze korzystniej i-7 atomów węgla. Kwas, z którego pochodzi R”1 może być kwasem dikarboksylowym.
186 688
Do przykładowych grup R10 należą acetyl, benzoil, piwałoil, butyryl, nikotynoil, izonikotynoil, hemisukcynoil, hemiglutaroil, hemimaloil, hemiftaloil, butylokarbamoil, fenylokarbamoil, butoksykarbonyl, t-butoksykarbonyl, etoksykarbonyl, 4-dimetyloaminometylobenzoil, 4-dietyloaminometylobenzoil, 4-dipropyloaminometylobenzoil, 4-(morfolinometylo)benzoil, 4-(4-metylo-1 -piperazynylometylo)benzoil, 3-dimetyloaminometylobenzoil, 3-dietyloaminometylobenzoil, 3-dipropyloaminometylobenzoil, 3-(morfolinometylo)benzoil, 3-(4-metylo-1-piperazynylometylo)benzoil, grupa sulfo (w którym to przypadku związkiem o wzorze (I) jest ester kwasu siarkowego lub jego sól) lub grupa fosfono (w którym to przypadku związkiem o wzorze (I) jest ester kwasu fosforowego lub jego sól)· . . 10
Korzystnie stosuje się związek, w którym R oznacza atom wodoru, względnie w którym Rw oznacza grupę acylową pochodzącą z kwasu mającego 1-20 atomów węgla, a zwłaszcza grupę acylową wybraną z grupy obejmującej acetyl, benzoil, piwaloil, butyryl, nikotynoil, izonikotynoil, hemisukcynoil, hemiglutaroil, butylokarbamoil, fenylokarbamoil, butoksykarbonyl, t-butoksykarbonyl i etoksykarbonyl.
Ponadto korzystnie stosuje się związek, w którym Rw oznacza grupę sulfo lub grupę fosfono.
Korzystnie stosuje się 4,4-dimetylo-5a-cholesta-8,24-dien-3β-ol lub 4,4-dimetylo5 α-cholesta- 8,14,24-trien-3 β-ol.
Do dalszych korzystnych związków o ogólnym wzorze (I) należą: cholest-7-en-3p-ol;
4-metylocholest-7-en-3 β-ol;
4-etylocholest-7-en-3p-ol
4.4- dimetylocholest-7-en-3 β-ol;
α-metylo-4 β-etylocholest-7-en-3 β-ol;
α-etylo-4 β-metylocholest-7-en-3 β-ol;
4.4- dietylocholest-7-en-3p-ol;
4-propylocholest-7-en-3 β-ol;
4-butylocholest-7-en-3 β-ol;
4-izobutylocholest-7-en-3 β-ol;
4.4- tetrametylenocholest-7-en-3 β-ol;
4.4- pentametylenochołest-7-en-3 β -ol; cholest-8-en-3 β-ol;
4-metylocholest-8-en-3 β-ol;
4-etylocholest-8-en-3 β-ol;
4.4- dimetylocholest-8-en-3 β-ol;
α-metylo-4P-etylocholest-8-en-3 β-ol;
α-etylo-4p-metylochołest-8-en-3 β-ol;
4.4- dietylocholest-8-en-3 β-ol;
4-propylocholest-8-en-3 β-ol;
4-butyłocholest-8-en-3 β-ol;
4-izobutyłochołest-8-en-3 β-ol;
4.4- tetrametylenocholest-8-en-3 β-ol;
4, 4-pentametylenocholest-8-en-3 β-ol; cholest-8(14)-en-3 β-ol;
4-metyłochołest-8( 14)-en-3 β -ol;
4-etylochołest-8( 14)-en-3 β -ol;
4.4- dimetylochołest-8(14)-en-3 β-ol;
α-metylo-4 β-etyłocholest-8( 14)-en-3 β-ol;
α-etyło-4β-metyłochołest-8(14)-en-3 β-ol;
4.4- dietyłochołest-8(14)-en-3 β-ol;
4-propylochołest-8(14)-en-3 β-ol;
4-butylocholest-8( 14)-en-3 β-ol;
4-lzobutyłchołest-8(14)-en-3 β-ol;
186 688
4.4- tetrametylenocholest-8(14)-en-3 β-ol;
4.4- pentametylenocholest-8(14)-en-3 β-ol; cholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4-metylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4-etylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4.4- dimetylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4α-metylo-4 β -etylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4cc-etylo-4P-metylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4.4- dietylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4-propylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4-butylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4-izobutylocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4.4- tetrametylenocholesta-8,14-dien-3 β-ol;
4.4- pentametylenocholesta- 8,14-dien-3 β -ol; cholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4-metylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4-etylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4.4- dimetylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
α-metylo-4β-etylocholesta-8,24-dien-3β-ol;
α-etylo-4p-metylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4.4- dietylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4-propylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4-butylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4-izobutylocholesta-8,24-dien-3 β-ol;
4.4- tetrametylenocholesta-8,24-dien-3 β-oł;
4.4- pentametylenocholesta-8,24-dien-3 β-ol; cholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4-metylocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4-etylocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4.4- dimetyłocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4a-metylo-4 β-etylocholesta-8,14)24-trien-3 β-ol;
4α-etylo-4 β-οοϋ^1οοΗο1ε8ΐ3-8,14,24-ίι^η-3 β-ol;
4.4- dietylocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4-propylocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4-butylocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol;
4-izobutylocholesta- 8,14,24-trien-3 β -ol;
4.4- tetrametylenocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol; i
4.4- pentametylenocholesta-8,14,24-trien-3 β-ol; oraz ich estry.
Korzystnie mejozę reguluje się w komórce rozrodczej będącej oocytem.
Korzystnie związek o ogólnym wzorze 1, zdefiniowany powyżej, podaje się do oocytu ex vivo.
Stosowane w niniejszym opisie wyrażenie „regulacja mejozy” oznacza, że wyżej zdefiniowane związki można stosować w celu stymulowania mejozy ex vivo (poza ustrojem), a zwłaszcza in vitro.
Substancje indukujące mejozę o wzorze l można by także podawać jako środki leczące niepłodność wywołaną niedostateczną stymulacją mejozy u kobiet i męzczyzn.
Związki o wzorze l można stosować w postaci czystej albo w postaci ciekłych lub stałych środków zawierających dodatki pomocnicze zwykle stosowane w tej dziedzinie.
Sposoby podawania środków zawierających związek o wzorze l mogą obejmować dowolne drogi podawania, które zapewniają skuteczne przenoszenie aktywnego związku do miejsca jego działania.
Związki o wzorze l można formułować w postać środków farmaceutycznych, które zawierają co najmniej jeden związek o wzorze l, w połączeniu z nośnikami lub zarobkami dopuszczonymi do stosowania w farmacji.
186 688
Zatem środki farmaceutyczne oprócz związków o ogólnym wzorze I mogą zawierać nośniki, rozcieńczalniki, środki ułatwiające absorpcję, środki konserwujące, bufory, środki regulujące ciśnienie osmztyckne i inne składniki, które zwykle stosuje się w farmacji. Do stosowania ex vivo i in vitro odpowiednie są ciekłe środki, np. wyjałowione roztwory, zawiesiny i emulsje.
Dawkę związku o wzorze I określa lekarz w zależności od wybranego do stosowania związku, sposobu podawania i zamierzonego celu.
Naturalnie występujące związki stosowane zgodnie z wynalazkiem można otrzymać z naturalnych źródeł znanymi sposobami. Alternatywnie związki te można wytworzyć znanymi sposobami syntezy tak jak w przypadku strukturalnie zblizonych syntetycznych związków steroidowych.
Przykład 1. Wydzielanie, oczyszczanie i identyfikacja substancji indukującej mejozę (MIS) z jąder byka.
Jądra sześcioletnich byków (Danish Landrace) usunięto natychmiast po uboju. Usunięto błonę białawą i tkankę jąder umieszczono na suchym lodzie i przechowywano w temperaturze -8°°C. Zamrożoną tkankę jąder (92 g) rozdrobniono na kawałki mniejsze niż 1 mm3 i suszono sublimacyjnie w ciemności, aż do całkowitego wysuszenia, przez około 9° godzin. Wysuszoną sublimacyjnie tkankę wyekstrahowano 4°° ml n-heptanu (LiChreszlv, Merck 4390, Niemcy) w atmosferze azotu w trakcie mieszania przez 24 godziny i w temperaturze 2°°C. Zawiesinę przesączono i stały materiał wyekstrahowano jeszcze raz w ten sam sposób. Zebrane fazy organiczne odparowano do sucha w wyparce obrotowej w temperaturze pokojowej i otrzymano 981 mg wyekstrahowanego materiału. Materiał ten rozpuszczono w n-heptanie i podzielono na porcje do 15 fiolek, z których odparowano n-heptan. Fiolki przechowywano w atmosferze azotu w temperaturze 4°C w ciemności.
Ekstrakty oczyszczano trój etapowo metodą HPLC: W pierwszym etapie zawartość jednej fiolki rozpuszczono w 50 pl 5°% (obj.) tetrahydrofuranu (THF) w wodzie i podano na kolumnę HPLc z odwróconymi fazami (LiChrzSpher 100 RP-8 zablokowany na końcach, 5 pm, 250 x 4 mm średnica wewnętrzna, Merck). Elucję prowadzono w temperaturze 40°C z liniowym gradientu od 50% to 100% THF w czasie 15 minut (przepływ: 1 ml/minutę). Zebrano 18 frakcji po 1ml i testowano na aktywność MIS.
W drugim etapie frakcje z pierwszego etapu, które okazały się aktywne w próbie eocytowej, rozpuszczono w 50 - 100 pl 70% THF i podano na kolumnę podobną do użytej w pierwszym etapie. Elucje prowadzono w temperaturze 40°C z liniowym gradientem od 60% do 78% THF w czasie 16 minut (przepływ: 1 ml/minutę). Zebrano 8 frakcji po 1 ml i testowano na aktywność MIS.
W trzecim etapie frakcje z drugiego etapu, które okazały się aktywne w próbie ozcytowej, rozpuszczono w 100 pl mieszaniny n-heptan: 2-propaeol (98:2) (obj.) i podano na półpreparatywną kolumnę HPLC (ChromSpher Si 5 pm, 250 x 10 mm średnica wewnętrzna, Chrompack). Elucje prowadzono w temperaturze pokojowej z zastosowaniem jako fazy ruchomej mieszaniny n-heptan: 2-propanol, 98:2 (obj.) (przepływ: 5 ml/mieuty). Zebrano 5 frakcji po 2,5 ml i testowano na aktywność MIS.
We wszystkich trzech etapach elucje monitorowano z zastosowaniem detekcji w nadfiolecie przy długości fali 220 nm. Materiał poddany opisanej powyżej trójstopniowej procedurze oczyszczania użyto do badania budowy cząsteczkowej aktywnego związku metodą spektrometrii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) i metodą spektrometrii masowej.
W celu uzyskania widm NMR około 1 mg oczyszczonego materiału rozpuszczono w 0,6 ml deuterzchlzroformu. Widmo nC-NMR z odsprzęganiem protonów, widmo H-NMR (ze wzmocnieniem lub bez wzmocnienia rozdzielczości) i widmo 2D TOCSY rejestrowano spektrometrem Bruker AMX2 400 NMR wyposażonym w odwrotną szerokopasmową 5 mm głowicę sondy ze cewką gradientową. Chemiczne przesunięcia 3C NMR w ppm (δ) dla wyodrębnionych MIS podano w tabeli 1 w celu porównania z odpowiednimi danymi uzyskanymi dla zymosterolu (U. F. Taylor i in., J. Lipid Res 22 (1981) 171) i lanosterolu (G. T. Emmons i in., Magn. Res. Chem. 27 (1989) 1012).
186 688
Tabela 1
| Węgiel | Zymosterol | Lanosterol | MIS |
| 1 | 35,1 | 35,5 | 35,8 |
| 2 | 31,5 | 27,8 | 28,0 |
| 3 | 70,9 | 79,0 | 79,0 |
| 4 | 38,2 | 38,9 | 38,9 |
| 5 | 40,7 | 50,4 | 50,2 |
| 6 | 25,5 | 18,2 | 18,4 |
| 7 | 27,1 | 26,5 | 28,5 |
| 8 | 128,0 | 134,4 | 128,0 |
| 9 | 134,8 | 134,4 | 135,8 |
| 10 | 35,6 | 37,0 | 37,0 |
| 11 | 22,8 | 21,0 | 22,1 |
| 12 | 36,9 | 30,9 | 29,7 |
| 13 | 42,0 | 44,4 | 42,1 |
| 14 | 51,8 | 49,8 | 51,9 |
| 15 | 23,7 | 30,8 | 23,8 |
| 16 | 28,7 | 28,2 | 28,8 |
| 17 | 54,7 | 50,4 | 54,8 |
| 18 | 11,2 | 15,7 | 11,3 |
| 19 | 17,8 | 19,1 | 19,8 |
| 20 | 36,0 | 36,2 | 36,0 |
| 21 | 18,6 | 18,6 | 18,6 |
| 22 | 36,0 | 36,3 | 36,1 |
| 23 | 24,7 | 24,9 | 24,8 |
| 24 | 125,0 | 125,2 | 125,2 |
| 25 | 130,6 | 130,9 | 130,9 |
| 26 | 17,6 | 17,6 | 17,6 |
| 27 | 25,7 | 25,7 | 25,7 |
| 28 | 15,4 | 15,4 | |
| 29 | 27,9 | 27,9 | |
| 30 | 24,2 |
Spektrometrię masową prowadzono z użyciem aparatu VG Trio 1000 LC/MS z interfejsem wiązki cząstek LINC i oprogramowania LAB-BASE 2.1 (Fisons Instruments) z układem HpLC zawierającym kolumnę ChromSpher Si, 3 pm, 100 x 4,6 mm (Chrompack). HPLC prowadzono w temperaturze pokojowej z zastosowaniem jako fazy ruchomej
186 688 mieszaniny n-heptan: 2-propanol, 98:2 (objętościowo) (przepływ: 0,6 ml/minutę). Próbkę MIS przed wstrzyknięciem rozpuszczano w n-heptanie. Spektrometr masowy pracował w trybie jonizacji strumieniem elektronów.
Wyniki podano w tabeli 2, w której względne wysokości pików dla wyodrębnionego produktu porównano z danymi dla 4,4-dimetylozymosterolu z Odn. 1. W kolumnie Odn. 2 „+” oznacza, że odpowiedni pik wystąpił w tej próbie. w kolumnie Odn. 1 lub 2 oznacza, że odpowiedni pik nie pojawił się w tych próbach.
Tabela 2
| m/z | Interpretacja | MIS | Odn. 1 | Odn. 2 |
| 412 | [M]f | 100 | 100 | + |
| 397 | [M-CH3]+ | 60 | 42 | + |
| 379 | [M-CH3-H2O)+ | 24 | 17 | + |
| 301 | [M-SC]+ | 11 | - | + |
| 299 | [M-SC-2H]+ | 22 | 13 | - |
| 274 | [M-SC-C2H3]+ | 8 | 8 | - |
| 259 | [M-SC-C3H6]+ | 21 | 33 | + |
| 241 | [M-SC-C3H6-H2O]+ | 44 | 33 | + |
SC = łańcuch boczny, C2H3 = pozycje 16 i 17, C3H6 = pozycje 15, 16 i 17 Odn. 1 Baloch i in., Phytochemistry 23 (1984) 2219.
Odn 2 Monmoto i in., Liebtgs Ann. Chem. 708 (1967) 230.
W oparciu o widmo C-NMR masę cząsteczkową 412 oznaczoną metodą spektroskopii masowej (MS), MIS wydzielony z jąder byka określono jako 4,4-dimetylo-5αcholesta-8,24-dien-3p-ol, który znany jest także jako 4,4-dimetylozymosterol (DMZ). Chemiczne przesunięcia poszczególnych atomów węgla aktywnego jako MIS materiału z trzeciego etapu oczyszczania HPLC porównano z chemicznymi przesunięciami strukturalnie bardzo bliskich związków, lanosterolu i zymosterolu. Zaobserwowane chemiczne przesunięcia protonów, stałe sprzężenia i korelacje TOCSY w pełni potwierdzają, ze wydzielono 4,4-dimetylozymosterol.
Przykład 2. Wydzielanie, oczyszczanie i identyfikacja substancji indukującej mejozę (MIS) z ludzkiego płynu pęcherzykowego.
Ludzki płyn pęcherzykowy (FF) otrzymano z pęcherzyków aspirowanych w celu zbierania oocytów w leczeniu bezpłodności przez zapłodnienie in vitro. Płyn wysuszono sublimacyjnie i wyekstrahowano n-heptanem, a ekstrakt oczyszczono stosując takie same procedury jak opisano w przykładzie 1. Związek z aktywnego piku dawał cząsteczkowy jon o m/z = 410, a widmo masowe wskazało, że cząsteczka FF-MIS odpowiada budowie chemicznej 4, 4-dimetylo-5 α-cholesta-8,14,24-trien-3 β-olu.
Metodyka: Spektrometrię masową prowadzono stosując aparat VG Trio 1000 LC/MS z interfejsem wiązki cząstek LINC i oprogramowanie LAB-BASE 2.1 (Fisons Instruments) połączony z aparatem HPLC z normalnym układem fazowym, zawierającym kolumnę ChromSpher Si, 3 (im, 100 x 4 mm wewnętrznej średnicy (Chrompack) z zastosowaniem jako fazy ruchomej mieszaniny n-heptan:2-propanol:metanol:amoniak, (68:30:2:0,2) (przepływ: 0,5 ml/minutę) w temperaturze pokojowej. Próbkę MIS przed wstrzyknięciem rozpuszczano w n-heptanie. Spektrometr masowy pracował w trybie jonizacji strumieniem elektronów. Wyniki podano w tabeli 3.
186 688
Tabela 3
| m/z | Interpretacja | |
| 4i0 | = M | [M]+ (masa czast. dla FF-MIS) |
| 395 | M-i5 | [M-CH3]+ |
| 392 | M-”8 | [M-H2O]+ |
| 377 | M-33 | [M-CH3-H2O]’ |
| 349 | M-6i | [M-43-H2O]+ |
| 38i | M-i29 | [M-SC-HO^SCNi”) |
| 279 | M-i3i | [M-SC-2H-H,O]+ |
| 257 | M-i53 | [M-SC-42]+ |
| 255 | M-i55 | [M-i54-H]+ |
| 239 | M-i7i | [M-SC-42-H,O]+ |
SC = Łańcuch boczny.
Przykład 3. Wytwarzanie 4β-meSylzhmnosteroUu na drodze fennnntacji
Etap A
Szczep drożdży Kluyveromyces bulgaricus A34i0 zaszczepiono na skośnej hodowli agarowej YPG i hodowano przez 3 dni w temperaturze 30°C w termostatowanym inkubatorze. Do hodowli dodano 5 ml sterylnej pożywki YE i kolonie drożdży umieszczono w zawiesinie w ciekłym środowisku wytrząsając probówkę na mieszalniku wirówkowym. Zawiesinę komórek następnie umieszczono w 5 ml sterylnej strzykawce i dodano do 500 ml kolby do wytrząsania z dwoma przegrodami na dnie. Kolba zawierała 200 ml pożywki ZYM. Kolbę zamocowano na obrotowym stole i mieszano przez 24 godziny przy 250 obrotach na minutę w temperaturze 30°C. Do kolby dodano 0,4 ml sterylnego przesączonego roztworu αmfoterhchnh B i mieszano jeszcze przez dalsze 25 godzin. Komórki drożdży odwirowano (Beckman model J6, 5°C, ”0 minut, 4000 obrotów na minutę) i przemyto raz wodą. Zawiesinę komórek oddzielono do małego pojemnika z tworzywa i przechowywano w temperaturze -”8°C przed końcową ekstrakcją steroli.
Przygotowano pożywkę i roztwór amfotersΓChny B o następującym składzie:
Agar YPG
Ekstrakt drożdży, Difco 4 4
KH2PO4 1 ”
MgSO4 · 7H20 0,5 g
Glukoza 15g
Agar 20 0
Dejonizowana woda 1000 ml pH ustawiono na 5,8 przed autoklawowaniem w temperaturze ”2i°C, 20 min.
Pożywka YE
100 l”00 ml
Ekstrakt drożdży, Difco Dejonizowana woda Autoklawowanie ”2i°C, 20 min. Pożywka ZYM Ekstrakt drożdży, Difco Pepton, Bacto Woda z kranu
0 10 0 1000 ml pH ustawiona na 6,5-6,6 przed autoklawowaniem i2i °C, 20 min. Glukoza (dodana oddzielnie po autoklawowaniu) 60 0
186 688
Roztwór amfoterycyny B mg Fungizone® (liofilizowany placek 50 mg amfoterycyny B, 41 mg deoksycholanu sodu i 20,2 mg fosforan sodu od Squ-ibb) rozpuszczono w 1 ml dejonizowanej wody.
Etap B
Hodowane komórki z etapu A przeprowadzono w stan suspensji w 10 ml wody i 10 ml 40% KOH w metanolu. Mieszaninę ogrzewano do wrzenia przez 4 godziny, pozostawiono na noc w temperaturze pokojowej, a następnie wyekstrahowano dwukrotnie 20 ml n-heptanu. Połączone ekstrakty przemyto 10% roztworem chlorku sodu, a następnie wodą w celu zobojętnienia (5 x) i wysuszono. W wyniku odparowania rozpuszczalnika otrzymano 40 mg surowych steroli.
Etap C
Surowe sterole z etapu B rozpuszczono w 1 ml mieszaniny n-heptan/2-propanol (98:2) i wytrząsano w mieszalniku wirówkowym, odwirowano przy 5000 obrotach na minutę przez 10 minut, a następnie poddano HPLC:
Kolumna: LiChroSorb DIOL 10 μm, 250 x 4 mm średnica wewnętrzna (Merck)
Eluent: mieszrniina n-heptm/2-propano 1 (98:2)
Przepływ: f 1 πύ/πΰη, 20oC
Detekcja: UV pzzy 220 rnn
Frakcje eluatu z pikiem po 6,8 minuty zebrano z kilku prób. Połączono zebrane frakcje, rozpuszczalnik odparowano, a otrzymaną pozostałość poddano spektrometrii masowej i przebadano w próbie oocytowej.
Widmo masowe podane w tabeli 4 jest identyczne z widmem uzyskanym dla 4βmetylrzymosterrłu według danych z biblioteki the National Bureau of Standards.
Tabela 4
| m/z | Interpretacja | |
| 398 | = M | [M] + (masa cząst. 4--metyłrzymosterrłu) |
| 383 | M-15 | [M-CH3]+ |
| 380 | M-18 | [M-H2O]+ |
| 365 | M-33 | [M-CH,-H,or |
| 269 | M-129 | [M-SC-H^O]+(SC=111) |
| 267 | M-131 | [M-SC-H^^-2H]+ |
| 245 | M-153 | [M-SC-C3H6]+ |
| 227 | M-171 | [M-SC-C3H6-H2O]+ |
| 213 | M-185 | [M-SC-C4H8-H2O]+ |
SC = Łańcuch boczny.
Przykład 4. Wytwarzanie 4,4-dimetylocholesta-8,14-diea-3β-olu
Związek ten wytworzono sposobem opisanym przez Schroepfera i in. w Chemistry and Physics of Lipids 47 (1988) 187 i uzyskano stałe fizyczne jak opisano w literaturze.
Przykład 5. Wytwarzanie 4,4-dimetylocholest- 8-en-3J5-cIu
Etap A
2,48 g 4,4-Dimetyłrchrłesta-8,14-dien-3-rłu (przykład 4) rozpuszczono w 20 ml pirydyny w temperaturze 0°C. Dodano 1,7 g chlorku benzoilu i mieszaninę mieszano w temperaturze otoczenia przez noc. Po odparowaniu do suchej masy, dodano 25 ml toluenu i po obróbce wodą prowadzonej w typowy sposób, odparowaniu i utarciu z acetonem otrzymano 2,3 g (74%) krystalicznego benzoesanu.
186 688
Widmo ’Η-NMR (CDCh, δ) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 8,1 (d, 2H); 7,55 (t, 1H); 7,4 (t, 2H); 5,4 (s, br, 1H); 4,2 (dd, 1H).
Etap B
2,04 g 3-Ben.zoilonsyi4,k-dimetylocholesta-8,14-dienu (^tap At rozpurzczono w 5o ml THF i wkOplono 360 ml łM roztworu byrymydoro w THF w temperaturze 0°C. Mieszaninę mieszano w temperaturze otoczenia przez noc, ochłodzzao do 0°C i wkOplono 140 ml wody, a następnie 360 ml 10% wodyrytleaku sodu i 378 ml 301 nadtlenku modyru. Po mieszaniu przez 90 minut dodano do mieszaniny 100 ml eteru dietylywegz i fazę wodną wyekstrahowano dwukrotnie eterem diotylzmym. Pyłączoao fazy organiczne przemyto dwukrotnie roztworem woyyrosiarczyau sodu i następnie wodą. Po odparowaniu produkt occyszcczay metodą chromatografii na SiO2 (2% eteru dietylowegz w toluenie) i otrzymano 0,62 g 3tbeacoiloksy-4,e-dimetylocaolest-8-on-ł5-zlu.
MS (jon cząsteczkowy): 534,4.
Widmo ’H-NMR (CDCl3, δ) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 8,0 (d, 2H);
7,5 (t, 1H); 7,4 (t, 2H); 4,75 (m, 1H); 4,1 (m, 1H).
Etap C
W temperaturze 0°C w 2,7 ml pirydyny ryzpuszccony 0,54 g 3-boaoyilyksy-e,edimotylocaylost-8-oat15-olu i dodano ostrożnie 33 mg dimetyloamiaypirydyny i 287 mg calzrotiomrówczanu fenylu. Mieszaninę mieszano przez 20 godzin w temperaturze otoccoaia. Po dodaniu 25 ml eteru dietylymogy mieszaninę przemyto ó-cio krotnie nasyconym roztworem siarczanu miedzi, wodą, dwukrotnie 10% wodnym roztworem wodyrztlenku sodu, wodą i solanką, a następnie odparowano, w wyniku czego otrzymano 0,68 g surowego 3tboazoilo-4,4-dimetylocholest-8-eno-15tfoaylotizwęglaa.p, który następnie poddano dalszej obróbce, a mianowicie rozpuszczono go w 20 ml toluenu i potraktowano 370 mg wodorku tributylocyny i 20 mg acoizybutyryaitIylu. Mieszaninę ogrzewano w temporaturze 90°C przez 20 minut i pywtórzony taką samą procedurę. Po odparowaniu mieszaninę zgrubnie yccyszczoay metodą carymatygrafii na S1O2 (mieszanina aoptan/chlorek metylenu: 70/30) i otrzymano 150 mg surowego 3-boazoiloksyt4,e-yimotylzcholostt8teau, zanieczyszczonego odpowiednim 8,ł4-yienem (etap A).
Etap D
150 mg Mieszaniny wytworoyaoj w etapie C rozpuszczono w 2 ml chlorku metylenu i zcałodzzay do 0°C. Wkoplono 0,7 ml wodorku diioobutylogliau i po 15 minutach dodano ostrożnie 0,15 ml wody. Następnie dodano 25 ml eteru dietylomego i fazę organiczną przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem winianu sodzwy-potasywegy, wodą i solanką, a następnie odparowano, w wyniku czego otrzymano 130 mg mieszaniny, którą poddano chromatografii na AgNO3/SiO2 (wytworzony sposobem opisanym w Chem. & Phys. of Lipids 63 (1992) 115) i eluywano toluenem. Po krystalizacji z mieszaniny eter/metanol otrzymano 49 mg tytułowego związku.
Temperatura topnienia: 154-155°C.
MS (jon cząsteczkowy): 414,4.
Widmo 13C-NMR (CDCh, 100,6 MHz) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 78,49(C3); 127,49(C8); 135,35(C9).
Przykład 6. Wytwarzanie 3-acetyksy-4,4-dimotylocholostat8,14tdieau
1,3 g 4,4tDimetylocholesta-8,letdioa-3tolp (Scaryepfor i in. Chemistry and Physics of Lipids 47 (1988) 187) rocpuszczzny w 7,5 ml pirydyny i 7,5 ml bezwodnika octowego i całość mieszano w temperaturze 22°C przez noc. Mieszaninę odparowano pod zmaiejsczaym ciśnieniem, odpędzono dwukrotnie z toluenem i oczyszczono metodą chromatografii rzutowej na SiO2 (toluen). Pierwsze 300 ml eluatu odparowano i produkt krystali^wano z eteru Metylowego, w wyniku czego otrzymano 140 mg 3tacotzksy-8,14-dlmotylot cazlostayloau.
Temperatura tzpaieaia: 120-125°C (rozkł.)
MS (jon cząsteczkowy): 454,4.
186 688
Widmo ‘H-NMR (CDCI3, δ) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,4 (s, br, 1H); 4,5 (dd, 1H); 2,0 (s, 3H).
Przykład 7. Wytwarzanie cholesta-8,14-dien-3β-olu
770 mg Dehydrocholesterolu rozpuszczono w mieszaninie 2,7 ml benzenu, 19 ml etanolu i 2,7 ml stężonego kwasu chlorowodorowego i całość ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 3 godziny. Mieszaninę ochłodzono na łaźni z lodem otrzymując pierwszy rzut 110 mg kryształów. W wyniku odparowania przesączu do sucha i krystalizacji z mieszaniny eter/metanol otrzymano drugi rzut 220 mg kryształów, które połączono z pierwszym rzutem i poddano chromatografii na AgNO3/SiO2 (wytworzony sposobem opisanym w przykładzie 5, etap D) i eluowano 2,5% acetonem w toluenie, w wyniku czego otrzymano 94 mg czystego cholesta-8,14-dien-3 β-olu.
Temperatura topnienia: 113 - 114,5°C.
MS (jon cząsteczkowy): 384,4.
Widmo ! H-NMR (CDO3, δ) produktu wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,35 (s , irr, 1H): 3,6 (m , 1H).
Widmo r?C-NMR (CDCI3, 50,3 MHz) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 70,99(C3); 117,42(C15); 123,1(08); 140,8(C>); 151,1(Cl4) · .
Przykład 8. Wytwarzanie 4,4-tetrametylenocholesta-8,14-dien-3-olu
Etap A
1,15 g Dehydrocholesterolu rozpuszczono w 15 ml 2-butanonu, dodano 0,34 g izopropanolanu glinu i mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 75 minut. Po ochłodzeniu na łaźni z lodem dodano 15 ml 2N kwasu chlorowodorowego, fazy oddzielono i fazę organiczną przemyto dwukrotnie 7,5 ml 2N kwasu chlorowodorowego. Fazę wodną wyekstrahowano toluenem i połączone fazy organiczne przemyto wodą i solanką, wysuszono i odparowano, w wyniku czego otrzymano 1,18 g surowego cholesta-5,7-dien-3-onu w postaci oleju o dużej lepkości.
Widmo 'H-NMR wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,8 (s, 1H); 5,2 (m, 1H); 3,2 (d, 1H); 2,7(dd, 1H)
Etap B
0,67 g t-Butanolanu potasu rozpuszczono w 16 ml t-butanolu w temperaturze 45°C, dodano 0,57 g cholesta-5,7-dien-3-onu i mieszaninę mieszano przez 10 minut. Dodano 0,47 g 1,4-dijodobutanu i mieszaninę mieszano przez 30 minut. Rozpuszczalnik odparowano, pozostałość ponownie rozpuszczono w toluenie i wodzie i dodano niewielką ilość solanki w celu rozwarstwienia. Fazę organiczną przemyto 4 krotnie wodą i połączone fazy wodne wyekstrahowano raz toluenem. Połączone ekstrakty w toluenie wysuszono, odparowano i otrzymano 0,45 g piany. Pianę poddano krystalizacji z mieszaniny eter dietylowy/metanol i otrzymano 0,35 g krystalicznego 4,4-tetrametylenocholesta 5,7-dien-3-onu.
MS (jon cząsteczkowy): 436,4.
Widmo ]H-NMR (CDCI3, β) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,75 (d, 1H);
5.5 (m, 1H).
Etap C
130 mg LiA1H4 przeprowadzono w stan suspensji w 6 ml THF i wkrcplono 1,97 g 4,4-tetrametylenocholesta-5,7-dien-3-onu rozpuszczonego w 40 ml THF w czasie 30 minut. 15 Minut po dodaniu wciąż pozostawała niewielka ilość nieprzereagowanego substratu (TLC) i dodano 65 mg L1A1H4. Po mieszaniu przez 30 minut reakcja zaszła do końca i wkroplono 0,9 ml wody rozpuszczonej w 5 ml THF. Po 30 minutach mieszania dodano nadmiaru siarczanu magnezu i mieszaninę mieszano przez 30 minut, przesączono i odparowano do sucha. Pozostałość rozpuszczono w 25 ml eteru dietylowego i 25 ml metanolu i eter ostrożnie usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Po mieszaniu przez noc odsączono 1,75 g krystalicznego 4,4-tetrametylenocholesta-5,7-dien-3-olu.
MS (jon cząsteczkowy): 438,4.
Widmo 1 H-NMR wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,8 (d, 1H); 5,5 (m, 1H);
3.5 (m, 1H).
186 688
Etap D
770 mg Związku wytworzonego w etapie C rozpuszczono w mieszaninie 2,38 ml benzenu, ”7,5 ml etanolu i 2,38 ml stężonego kwasu chlorowodorowego i całość ogrzewano w temperaturze wrzenia przez ”6 godzin, a następnie odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość ponownie rozpuszczono w 5 ml toluenu, przesączono i poddano chromatografii z użyciem średniociśnizniowej kolumny AgNO3/SiO3 (heptamtoluen, ”0:90), w wyniku czego otrzymano 35 mg 4,4-tztdamethlznocholesta-8,14-dien-3-olu.
MS (jon cząsteczkowy): 438,4.
Widmo iH-NMR (CDCh, 5) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,35 (s, br, ”H); 3,3 (d, d”H).
Widmo 3C-NMR (CDCh, ”00,6 MHz) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 79,0(Ca); ”17,4(Ci5); ”22,9(C8); ”4”,3(C9); BUCCm).
Przykład 9. Wytwarzanie 4,4-yimzthlocholzst-8(14)-zn-3β-olu
580 mg 4,4-Dimetylocholest-8-zn-3β-olu rozpuszczono w 20 ml eteru dietylowego i 20 ml kwasu octowego. Dodano 60 mg ”0% Pd/C jako katalizatora i mieszaninę mieszano przez noc pod ciśnieniem wodoru 3,5 atm. Katalizator usunięto i przesącz zatężono do ”0 ml, rozpoczynając krystalizację. Dodano ”0 ml metanolu i kryształy zebrano po ”6 godzinach. W wyniku rekrystalizacji z metanolu otrzymano 230 mg materiału, który jak wykazały widma ”H-NMR i ”3C-NMR był mieszaniną izomerów 8(9) i ”8(”4).
Mieszaninę ponownie rozpuszczono w ”0 ml eteru dietylowego i ”0 ml kwasu octowego. Dodano 75 mg 5% katalizatora Pt/C i mieszaninę potraktowano wodorem przez noc pod ciśnieniem atmosferycznym. Katalizator usunięto, rozpuszczalnik odparowano i krystaliczną pozostałość utarto z 5 ml metanolu, w wyniku czego otrzymano ”90 mg czystego 4,4-dίmzthlocholzst-8( ” 4)-en-3 β-olu.
MS (jon cząsteczkowy): 4”4,4
Widmo i3C-NMR (CDCh, ”00,6 MHz) wykazuje charakterystyczne sygnały przy: 79,24 (C3); i26,ii(C8); ”42,20 (C14).
Przykład ”0. Test substancji indukujących mejozę w próbie oocytowej.
Zwierzęta
Niedojrzałe samice myszy (B6D2-F”, szczep C57Bi/2J) trzymano w pomieszczeniu o kontrolowanym oświetleniu (i4 godzin światła, ”0 godzin ciemności) i temperaturze, zwierzętom tym zapewniono dostateczną ilość pokarmu i wody. Po osiągnięciu przez zwierzęta wagi ”3-i6 g (co odpowiada wiekowi 20 do 22 dni po urodzeniu) podano im drogą iniekcji dootrzewnowej ludzką menopauzalną gonadotropinę (Humegon, Organon, Holandia) zawierającą około 20 IU fSh i 20 IU LH (S. Ziebe i in. Hum. Reprod. 8 (”993) 385-88). Po upływie 48 godzin zwierzęta uśmiercono przez przemieszczenie kręgów szyjnych.
Zbieranie i hodowla oocytów
Jajniki usunięto, umieszczono w pożywce HX (patrz niżej) oddzielono zewnętrzną tkankę. Pożywka w której prowadzono zbieranie i pożywka hodowlana zawierała minimalną podstawową pożywkę Eagles (Flow, USA), zawierającą 4 mM hipoksantyny, 3mg/ml albuminy surowicy bydlęcej, 0,23 mM pirogronianu sodu, 2 mM glutaminy, ”00 U/ml penicyliny i ”00 pg/ml streptomycyny (Sigma, USA). Pożywkę tę nazwano „HX”. Taką samą pożywkę, lecz bez HX, użyto jako kontrolną pożywkę.
Jamowe pęcherzyki jajników nakłuto pod anatomicznym mikroskopem z użyciem igły nr 27. Wybrano oocyty zamknięte wzgórkami jajonośnymi (CEO) o jednakowej wielkości i przemyto je trzykrotnie świeżą pożywką HX.
Oocyty uwolnione od komórek wzgórków jajonosnych, czyli obnażone oocyty (DO), otrzymano łagodnie przepuszczając CEO przez ustną pipetę z małym otworem. CEO i DO hodowano w 4-stuydienkowych płytkach (Nunclon, Dania) zawierających 0,5 ml pożywki HX poza kontrolnymi, które hodowano w kontrolnej pożywce. Każda studzienka zawierała 35 - 50 oocytów. Hodowle badane sporządzano przy różnych stężeniach związków badanych, podanych w tabeli 5.
186 688
Hodowle prowadzono w temperaturze 37°C i 100% wilgotności z 5% CO2 w powietrzu. Czas hodowli wynosił 24 godziny.
Badanie oocytów
Pod koniec okresu hodowli zliczono pod stereomikro skopem z wyposażeniem do mikroskopii kontrastowej dyferencyjno-interferencyjnej oocyty z pęcherzykiem zarodkowym (GV), z pękniętym pęcherzykiem zarodkowym (GVBD) i ciałka kierunkowe (PB). Obliczono procent oocytów z GVBD względem całej liczby oocytów i procent oocytów z PB względem GVBD. Wyniki dla DO i CEO, w jednostkach aktywności MIS, podano w tabeli 5. Jedną jednostkę aktywności MIS zdefiniowano jako:
%GVBD kontrolne a liczbę jednostek aktywności MSI zdefiniowano jako:
% GVBD„, - %GVBDtMroŁ.
%GVBD kontrolne
Tabela 5
| Substancja | DO | CEO | Stężenie Hg/ml |
| 4,4-dimetylozymosterol | 2,7 | 2,9 | 1,2 |
| 1,8 | 2,7 | 0,3 | |
| 0,6 | 1,3 | 0,2 | |
| 1,5 | 1,3 | 0,02 | |
| 0,9 | 1,0 | 0,002 | |
| 4,4-dimetylo-5 a-cholesta-8,14,24-trien-3 β -ol | 0,6 | 2,3 | 0,3 |
| 1,6 | 0,5 | 0,03 | |
| zymosterol | 1,2 | 1,1 | 0,1 |
| 0,6 | 0,4 | 0,01 | |
| 0,2 | 0,001 | ||
| 4 β-metylozymosterol | 6,2 | 3,5 | 3,9 |
| 0,8 | 2,4 | 0,13 | |
| 4,4-dimetylocholest-8-en-3 β-ol | 0,8 | 12,8 | 0,03 |
| 4,4-dimetylocholesta-8,14-dien-3 β-ol | 2,25 | 0 | 3,0 |
Przykład 11. Test substancji indukujących mejozę w próbie gonadowej Próbę gonadową prowadzono zasadniczo zgodnie ze sposobem opisanym przez
A. G. Byskova i in. w Mol. Reprod. Dev. 34 (1993) 47-52. Wyniki podane w tabeli 6 obliczono półilościowo, sposobem opisanym przez L. Westergaardi’ego i in. w Fertil. Steril. 41 (1984) 377-84.
186 688
Tabela 6
| Substancja | Stężenie, (ig/ml | Wynik |
| 4,4-dimetylzzymesterol | 10 | ++ |
| 4,4-dimetylo-5α-chzlesta-8,14,24-trien-3 β-ol | 30 | + |
Przykład 12. Wytwarzanie mono(5α-chzlesta- 8,14-dieeo)-3 e-bursztynianu 0,50 g 5α-Chzlestα-8,14-dien-3 β-olu rozpuszczono w 10 ml ThF, a następnie dodano 0,39 g bezwodnika bursztynowego i 16 mg 4-dimetyl.zammopirydyely. Roztwór ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez noc, a następnie odparowano do sucha. Pozostałość przeprowadzono w stan zawiesiny w 10 ml wody, osad odsączono, przemyto wodą i wysuszono, w wyniku czego otrzymano 0,48 g tytułowego związku, który można było następnie oczyścić rozpuszczając w mieszaninie wodnego roztworu wodorowęglanu sodu i etanolu, dodając kwasu chlorowodorowego do pH 2, następnie zatężając roztwór, z wytworzeniem osadu.
Temperatura topnienia: 128 - 131°C.
MS (jon cząsteczkowy): 484,4.
Widmo *H-NMR (CDCI3, δ) produktu wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,36 (s, 1H); 4 75 (m, 1H) ; 2,67 (m, 2H); 2,6 (m, 2H).
Widmo l3C-NMR (CDCI3, 1θ0,6 MHz) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 73,4; 117,1; 122,7; 140,0; 150,5; 171,2; 177,2.
Przykład 13. Wytwarzanie 3e-etoksykarbonyloksy-5α-chzlesta-8,14-dieeu.
0,50 g δα-Chelesta-8, 14-dien-3 β-olu rozpuszczono w mieszaninie 5 ml toluenu i 5 ml pirydyny, w trakcie chłodzenia na łaźni z lodem. Dodano 2,3 ml chlzrzmrówckaeu etylu rozpuszczonego w 5 ml toluenu w czasie 5 minut. Po 30 minutach łaźnię z lodem usunięto i całość mieszano przez 20 godzin w temperaturze pokojowej, a następnie przez 2 godziny w temperaturze 60°C. Mieszaninę reakcyjną odparowano do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem i utarto z 10 ml etanolu, w wyniku czego otrzymano 0,505 g tytułowego związku, który można było następnie oczyścić przez rekrystalizację z etanolu.
Temperatura topnienia: 101 - 106°C.
MS (jon cząsteczkowy): 456,3.
Widmo 1H-NMR (CDCI3, δ) produktu wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,30 (s, 1H) ; 4 50 (m, 1H) ; 4,12 (q, 2H); 1,24 (t, 3H).
Widmo 13C-NMR (CDCI3, 100,6 MHz) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 62,6; 116,6; 122,2; 139,4; 150,0; 153,6.
Przykład 14. Wytwarzanie 3β-fzsfoneokso-4,4-dimetylo-5α-chzlesta-8,14-dienu 2,00 g 4,4-Dimetylz-5 α-cholesta-8,14-diee-3 β-olu rozpuszczono w 10 ml suchej pirydyny i dodano w czasie 5 minut do roztworu 1,66 ml tlenochlorku fosforu w 10 ml suchego acetonu w trakcie chłodzenia na łaźni z lodem. Po mieszaniu w temperaturze pokojowej przez 30 minut osad odsączono i przemyto suchym acetonem. Pozostałość przeprowadzono w stan suspensji w 70 ml wody i ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 1,25 godziny. Po ochłodzeniu do temperatury pokojowej osad odsączono, przemyto wodą i wysuszono, w wyniku czego otrzymano 0,93 g surowego produktu. 0,70 g Surowego produktu rozpuszczono w 75 ml 0,1 M wodnego roztworu wzdzłotleeku potasu i roztwór przesączono przez 10 g żywicy Amberlite IR-120(H) i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem do sucha. Pozostałość utarto z 10 ml wody i osad odsączono, przemyto wodą i osuszono, w wyniku czego otrzymano 0,48 g tytułowego związku.
Temperatura topnienia: 183-185°C.
Widmo 1 H-NMR (CDCI3, + 2 krople CD3OD) produktu wykazało charakterystyczne sygnały przy: 5,36 (s, 1H); 3,89 (m, 1H).
Widmo 13C-NMR (CDCI3, + 2 krople CD3OD, 100,6 MHz) produktu wykazało charakterystyczne sygnały przy: 85,1; 116,9; 122,3; 140,9; 150,5.
186 688
Przykład 15. Wytwarzanie 3 β-isonikotyaoiło-5 α-chołesta-8,14-dieau
0,50 g 5α-Chrlesta-8,14-diea-3β-olu rozpuszczono w 5 ml pirydyny, a następnie dodano 1,16 g chlorowodorku chlorku israikotyarilu. Suspensję ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez noc, a następnie odparowano do sucha. Pozostałość przeprowadzono w stan suspensji w 100 ml wody, w trakcie chłodzenia na łaźni z lodem. Osad odsączono, przemyto wodą, wysuszono i otrzymano 0,97 g surowego produktu, który skrystalizowano z mieszaniny aceton/woda, z otrzymaniem 0,40 g tytułowego związku.
Temperatura topnienia: 129-131°C.
Widmo 1 H-NMR. (CDCI3, δ) produktu wykazało charakterystyczne sygnały przy: 8,77 (d, 2H); 7 84 (d, 2H); 5,39 (s, 1H); 4,49 (m, 1H).
Widmo 13C-NMR (CDCI3, 50,3 MHz) wykazało charakterystyczne sygnały przy: 75,0; 117,7; 122,8; 123,3; 138,0; 140,3; 150,5; 150,9; 164,6.
De-trttmeat Wydawnictw UP RP Nakład 50 egz. Cena 4.00 zł
Claims (31)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie związku steroidowego o ogólnym wzorze (I) w którym R1 i R2 są niezależnie wybrane z grupy obejmującej atom wodoru, nierozgalęziony lub rozgałęziony CrCń-alkil, który może być podstawiony atomem chlorowca lub hydroksylem lub w którym R1 i R2 razem z atomem węgla, z którym są związane tworzą pierścień cyklopentanowy lub pierścień cykloheksanowy; R3 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, w którym to przypadku R5 oznacza atom wodoru, a R6 i R7 oznaczają atomy wodoru lub łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane; lub R5 i r4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla z którymi są związane, w którym to przypadku R3 oznacza atom wodoru, a R6 i R7 oznaczają atom wodoru lub łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane; lub r6 i r4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, w którym to przypadku r3, R3 i r7 oznaczają atomy wodoru; R8 i R9 oznaczają atomy wodoru lub łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane; i Ri° oznacza atom wodoru, grupę acylową, grupę sulfo lub grupę fosfono, do wytwarzania leku do stosowania do regulacji mejozy.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym Ri oznacza atom wodoru lub metyl.
- 3. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym Ri oznacza etyl albo nierozgałęziony lub rozgałęziony C3-Cć-alkil.
- 4. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R1 oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węgla.
- 5. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R1 oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony a-hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węgla.
- 6. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R1 oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony alkil podstawiony atomem chlorowca.
- 7. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R1 oznacza trifluorometyl.
- 8. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R2 oznacza atom wodoru lub metyl.
- 9. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R2 oznacza etyl albo nierozgałęziony lub rozgałęziony C3-C6-alkil.1°. Zastosowtusie według zastrz. 1, związku, w któwym R2 oznacza nierozgełęziony lub rozgałęziony hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węg^.186 688 □
- 11. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony a-hydroksyalkil zawierający do 6 atomów węgla.
- 12. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R2 oznacza nierozgałęziony lub rozgałęziony alkil podstawiony atomem chlorowca.
- 13. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R2 oznacza trifluorometyl.
- 14. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R1 i R2 razem z atomem węgla, z którym są związane tworzą pierścień cyklopentanowy.
- 15. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R1 i R2 razem z atomem węgla, z którym są związane tworzą pierścień cykloheksanowy.
- 16. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R3 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, a R oznacza atom wodoru.
- 17. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R5 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, a r3 oznacza atom wodoru.
- 18. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R6 i R4 łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane, a R3, r5 i R7 oznaczają atomy wodoru.
- 19. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym r6 i R7 oznaczają atomy wodoru.A 7
- 20. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R i R łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane.
- 21. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R8 i R9 oznaczają atomy wodoru.
- 22. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R i R łącznie oznaczają dodatkowe wiązanie pomiędzy atomami węgla, z którymi są związane.
- 23. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R10 oznacza atom wodoru.
- 24. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym Rw oznacza grupę acylową pochodzącą z kwasu mającego od 1 do 20 atomów węgla.
- 25. Zastosowanie według zastrz. 24 związku, w którym Rw oznacza grupę acylową wybraną z grupy obejmującej acetyl, benzoil, piwałoil, butyryl, nikotynoil, izonikotynoil, hemisukcynoil, hemiglutaroil, butylokarbamoil, fenylokarbamoil, butoksykarbonyl, t-butoksykarbonyl i etoksykarbonyl.
- 26. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym Rw oznacza grupę sulfo.
- 27. Zastosowanie według zastrz. 1, związku, w którym R10 oznacza grupę fosfono.
- 28. Zastosowanie według zastrz. 1, 4,4-dimetylo-5a-cholesta-8,24-dien-3p-olu.
- 29. Zastosowanie według zastrz. 1, 4,4-dimetylo-5 a-chołesta-8,14,24-trien-3 β-olu.
- 30. Sposób regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssaka, poza ustrojem ssaka, znamienny tym, że na komórkę rozrodczą wymagającej takiego zabiegu działa się skuteczną ilością związku o ogólnym wzorze 1, zdefiniowanym w zastrz. 1.
- 31. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że mejozę reguluje się w komórce rozrodczej będącej oocytem.
- 32. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że związek o ogólnym wzorze 1, zdefiniowany w zastrz. 1, podaje się do oocytu ex vivo.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK75394 | 1994-06-23 | ||
| DK24195 | 1995-03-09 | ||
| PCT/DK1995/000265 WO1996000235A1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-23 | Sterol derivatives used for regulation of meiosis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL317830A1 PL317830A1 (en) | 1997-04-28 |
| PL186688B1 true PL186688B1 (pl) | 2004-02-27 |
Family
ID=26063596
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL95317830A PL186688B1 (pl) | 1994-06-23 | 1995-06-23 | Zastosowanie związku steroidowego i sposób regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssaka |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5716777A (pl) |
| EP (1) | EP0767798B1 (pl) |
| JP (1) | JP3987105B2 (pl) |
| KR (1) | KR100408369B1 (pl) |
| CN (1) | CN1068333C (pl) |
| AT (1) | ATE248852T1 (pl) |
| AU (1) | AU694240B2 (pl) |
| BG (1) | BG101067A (pl) |
| BR (1) | BR9508074A (pl) |
| CA (1) | CA2192941C (pl) |
| CZ (1) | CZ289407B6 (pl) |
| DE (1) | DE69531682T2 (pl) |
| DK (1) | DK0767798T3 (pl) |
| ES (1) | ES2204955T3 (pl) |
| FI (1) | FI117159B (pl) |
| HU (1) | HUT76343A (pl) |
| IL (1) | IL114294A (pl) |
| IS (1) | IS4404A (pl) |
| MX (1) | MX9700174A (pl) |
| NO (1) | NO314534B1 (pl) |
| PL (1) | PL186688B1 (pl) |
| RU (1) | RU2194510C2 (pl) |
| SI (1) | SI9520077A (pl) |
| SK (1) | SK165596A3 (pl) |
| UA (1) | UA51622C2 (pl) |
| WO (1) | WO1996000235A1 (pl) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HUP9800731A3 (en) * | 1995-03-06 | 2000-03-28 | Novo Nordisk As | Stimulation of meiosis |
| ATE254628T1 (de) * | 1995-06-23 | 2003-12-15 | Novo Nordisk As | Meiose regulierende verbindungen. |
| AU6122696A (en) * | 1995-06-23 | 1997-01-22 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| US6645953B2 (en) * | 1995-06-23 | 2003-11-11 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| ATE238339T1 (de) | 1996-12-20 | 2003-05-15 | Novo Nordisk As | Verbindungen zur regulierung der meiose |
| AU726016B2 (en) * | 1997-05-16 | 2000-10-26 | Akzo Nobel N.V. | 20-aralkyl-5alpha-pregnane derivatives |
| TR199902873T2 (xx) * | 1997-06-04 | 2000-04-21 | Akzo Nobel N.V. | Miyozun mod�lasyonu i�in 17�-aliloksi(tiyo)alkil-androstan t�revleri. |
| DE69806640T2 (de) * | 1997-12-18 | 2003-03-13 | Akzo Nobel N.V., Arnheim/Arnhem | 17beta-aryl(arylmethyl)oxy(thio)alkyl-androstanderivative |
| CN1326461A (zh) * | 1998-05-13 | 2001-12-12 | 诺沃挪第克公司 | 减数分裂调控化合物 |
| KR20010043558A (ko) | 1998-05-13 | 2001-05-25 | 한센 핀 베네드, 안네 제헤르, 웨이콥 마리안느 | 감수분열 조절 화합물 |
| KR20010043828A (ko) * | 1998-05-26 | 2001-05-25 | 에바-마리아 시마-메이어, 얼설라 멜져, 마거, 하르트만 | ｃＡＭＰ-증강 화합물 단독 또는 감수분열-자극 화합물하나 이상과의 조합에 의한 불임 치료 방법 |
| CA2335329A1 (en) * | 1998-06-19 | 1999-12-29 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| AU759344B2 (en) * | 1998-12-11 | 2003-04-10 | Akzo Nobel N.V. | 22S-hydroxycholesta-8, 14-diene derivatives with meiosis regulating activity |
| AU3118200A (en) | 1998-12-14 | 2000-07-03 | Merck & Co., Inc. | Hiv integrase inhibitors |
| WO2000047604A1 (en) * | 1999-02-10 | 2000-08-17 | Schering Aktiengesellschaft | Unsaturated cholestane derivatives and their use for the preparation of meiosis regulating medicaments |
| WO2000050066A1 (en) | 1999-02-24 | 2000-08-31 | Novo Nordisk A/S | Treatment of infertility |
| ATE361091T1 (de) * | 1999-02-24 | 2007-05-15 | Novo Nordisk As | Behandlung von unfruchtbarkeit |
| JP2002537801A (ja) * | 1999-02-26 | 2002-11-12 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 着床率を増大させる減数分裂活性化ステロール |
| JP2002539134A (ja) * | 1999-03-09 | 2002-11-19 | アクゾ・ノベル・エヌ・ベー | 減数分裂の阻害のための２２ｒ−ヒドロキシコレスタ−８，１４−ジエン誘導体 |
| RU2263516C2 (ru) * | 1999-09-16 | 2005-11-10 | Ново Нордиск А/С | Композиция для оплодотворения in vitro |
| EP1127890A1 (en) | 2000-02-22 | 2001-08-29 | Schering Aktiengesellschaft | Steroid derivatives with an additional ring annulated to ring A and use of these derivatives for the preparation of meiosis regulating medicaments |
| AU3376501A (en) * | 2000-02-25 | 2001-09-03 | Novo Nordisk A/S | Improvement of implantation rate |
| AU2001240624A1 (en) * | 2000-02-25 | 2001-09-03 | Novo-Nordisk A/S | Improvement of implantation rate |
| WO2001088098A2 (en) * | 2000-05-18 | 2001-11-22 | Schering Aktiengesellschaft | Fertilization of aged oocytes |
| EP1245572A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-02 | Schering Aktiengesellschaft | Aminosterol compounds, their use in the preparation of meiosis-regulating medicaments and method for their preparation |
| AU2003203145A1 (en) * | 2002-02-22 | 2003-09-09 | Novo Nordisk A/S | A transducer of mas signalling |
| WO2012044817A2 (en) * | 2010-10-01 | 2012-04-05 | Indiana University Research And Technology Corporation | Process for preparing delta-7,9(11) steroids from ganoderma lucidum and analogs thereof |
| US9165822B2 (en) | 2013-03-11 | 2015-10-20 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. | Semiconductor devices and methods of forming same |
| EA024619B1 (ru) * | 2014-11-21 | 2016-10-31 | Эльвин Гаджи оглы Керимли | ФРАКСИНОСТЕРИН - 24β-ЭТИЛХОЛЕСТА-20-КАРБОКСИ-6(7),8(9)-ДИЕН 3β-ОЛА И ЕГО ПРОИЗВОДНОЕ |
-
1995
- 1995-05-23 US US08/448,217 patent/US5716777A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 UA UA96124771A patent/UA51622C2/uk unknown
- 1995-06-23 MX MX9700174A patent/MX9700174A/es not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 DE DE69531682T patent/DE69531682T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 ES ES95922448T patent/ES2204955T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-23 AU AU27343/95A patent/AU694240B2/en not_active Ceased
- 1995-06-23 AT AT95922448T patent/ATE248852T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 SK SK1655-96A patent/SK165596A3/sk unknown
- 1995-06-23 CZ CZ19963725A patent/CZ289407B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 EP EP95922448A patent/EP0767798B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-23 CA CA002192941A patent/CA2192941C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 DK DK95922448T patent/DK0767798T3/da active
- 1995-06-23 SI SI9520077A patent/SI9520077A/sl unknown
- 1995-06-23 IL IL11429495A patent/IL114294A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 KR KR1019960707361A patent/KR100408369B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 PL PL95317830A patent/PL186688B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 CN CN95193731A patent/CN1068333C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-23 RU RU97101087/14A patent/RU2194510C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 BR BR9508074A patent/BR9508074A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-06-23 HU HU9603584A patent/HUT76343A/hu not_active Application Discontinuation
- 1995-06-23 WO PCT/DK1995/000265 patent/WO1996000235A1/en not_active Ceased
- 1995-06-23 JP JP50272496A patent/JP3987105B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-12-18 BG BG101067A patent/BG101067A/xx unknown
- 1996-12-20 NO NO19965516A patent/NO314534B1/no unknown
- 1996-12-20 FI FI965144A patent/FI117159B/fi active IP Right Grant
- 1996-12-23 IS IS4404A patent/IS4404A/is unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL186688B1 (pl) | Zastosowanie związku steroidowego i sposób regulacji mejozy w komórce rozrodczej ssaka | |
| RU2182909C2 (ru) | Стероиды, способ регулирования мейоза | |
| KR20010043558A (ko) | 감수분열 조절 화합물 | |
| DE69721304T2 (de) | Verbindungen zur Regulierung der Meiose | |
| JP2010510309A (ja) | 神経変性障害の治療に有用な化合物 | |
| US20050222098A1 (en) | Regulation of meiosis | |
| KR20020013541A (ko) | 14β-Ｈ-스테롤, 그를 포함하는 제약 조성물, 및 감수분열조절 약제 제조에 있어서 그의 유도체의 용도 | |
| HUP0102704A2 (hu) | Meiózist befolyásoló szteroidok és alkalmazásuk | |
| EP1127890A1 (en) | Steroid derivatives with an additional ring annulated to ring A and use of these derivatives for the preparation of meiosis regulating medicaments | |
| CZ291308B6 (cs) | Sterolové deriváty regulující meiózu a způsob regulace | |
| MXPA01009970A (en) | 14&bgr;-H-STEROLS, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING THEM AND USE OF THESE DERIVATIVES FOR THE PREPARATION OF MEIOSIS REGULATING MEDICAMENTS | |
| KR20010101820A (ko) | 불포화 콜레스탄 유도체 및 감수분열 조절 약제 제조에있어서 그의 용도 | |
| MXPA01007526A (en) | Unsaturated cholestane derivatives and their use for the preparation of meiosis regulating medicaments |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20100623 |