KR20170060141A

KR20170060141A - 과색소침착 피부의 라이트닝을 위한 각질형성세포의 분화 자극용 활성성분

Info

Publication number: KR20170060141A
Application number: KR1020177011348A
Authority: KR
Inventors: 카롤린 프랑수아 폴레플리에; 휴고 에이.엘. 코르스트젠스; 리브 데클레르크; 대니얼 비. 야로쉬
Original assignee: 이엘씨 매니지먼트 엘엘씨
Priority date: 2014-09-29
Filing date: 2015-09-25
Publication date: 2017-05-31
Also published as: EP3200683A1; EP3200683A4; JP2017532956A; US20160089319A1; AU2015324179A1; WO2016053785A1; CA2962932A1; CN106999372A

Abstract

멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고 과색소침착 피부 병변 및 과색소침착 피부 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 효능을 갖는 물질을 확인하는 방법이 제공된다. 이 방법은 과색소침착 피부 병변에 시험할 물질을 함유하는 조성물을 적용하는 단계; 및 일정 시간 후, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서, 조성물이 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 행하였는지 여부를 관찰하는 단계를 포함한다.

Description

과색소침착 피부의 라이트닝을 위한 각질형성세포의 분화 자극용 활성성분{ACTIVES FOR STIMULATING DIFFERENTIATION OF KERATINOCYTES TO LIGHTEN HYPERPIGMENTED SKIN}

본 발명은 피부의 과색소침착 병변의 각질형성세포의 증식을 억제하고, 분화를 자극하는 물질을 확인하는 모델에 관한 것이다. 그러한 물질은 과색소침착 병변 및 주변 피부 사이의 색 대조를 감소시켜, 피부톤을 균일하게 한다.

소비자, 특히 여성의 세계적 관심사는 피부톤의 불균일함이다. 특정 피부 세포, 멜라닌세포는, 피부 색을 결정하는 색소의 생산을 담당한다. 멜라닌세포는 표피에서 멜라닌 색소를 생산하고 주변 각질형성세포로 방출한다. 각질형성세포는 세포 재생의 자연적인 과정에 의해 피부 표면 쪽으로 위로 몰리게 된다.

피부가 노화됨에 따라, 피부는 그것의 외관에 직접적인 영향을 미치는 변화를 겪는다. 환경적 요인 (주로 태양으로부터의 자외선(UV) 복사에 노출) 및 호르몬적 요인 (얇아지는 피부 및 세포 재생 속도의 감소를 야기)의 영향은 불균일한 피부톤을 일으킬 수 있다. DNA 손상을 야기하는 것으로 밝혀진, UV 복사에의 노출 또한 피부에서 멜라닌의 분포에 영향을 미친다. UV 복사는 활성 산소 종 (ROS)을 생산할 수 있고, 이는 멜라닌세포에서 티로시나제(Tyrosinase) 및 다른 효소를 활성시켜 멜라닌 생산을 자극한다. 또한, 세포 재생이 느려지면서, 각질형성세포 및 멜라닌세포가 더 오래 접촉된 채로 있게 된다. 이 증가한 접촉 시간의 결과로, 각질형성세포로 전달되는 멜라닌의 양이 증가한다. 표피가 그 두께를 잃어감에 따라, 증가된 양의 검은 색소를 함유하는 이들 멜라닌세포 및 각질형성세포가 피부의 표면에 더 가까워져서 더 잘 보이게 된다.

일광 흑색점 또는 검버섯은 편평한, 갈색, 양성의 피부 병변이고, 일반적으로 노화되는 피부에, 특히 손, 얼굴 및 팔뚝의 상부 표면상에 발생한다. 이들 병변의 출현은 누적적 및 간헐적 UV 노출에 관련이 있고 피부 광손상의 임상적 표지로 여겨진다. 일광 흑색점은 또한 오염된 공기의 미립자 수준에 노출되는 것과 관련이 있다. 이들 병변은 백인 및 아시아인 인구 모두에서 흔하지만 아시아 사람의 피부에서 더 일찍 나타나고 더 두드러지는 것처럼 보인다.

조직학적 연구는 병변 피부가 표피의 기저 층 (즉, 멜라닌세포 및 각질형성세포를 함유하는, 진피에 인접한, 표피의 최저 층)의 과색소침착, 멜라닌세포 수의 증가, 및 표피 영역으로 표면적으로 돌출되어 있어 표피의 인접한 하부 돌출과 서로 맞물리는 진피 유두의 연장을 특징으로 한다는 것을 밝혔다(Mehregan, A.H., Lentigo senilis and its evolutions. Invest Dermatol. 1975; 65(5): 429-433; Montagna, W. et al. A reinvestigation of solar lentigines. Arch Dermatol 1980; 116: 1151-1154). 이들 복잡한 구조적 변형이 표피 증식 속도의 증가 및 진피-표피 연접의 동요의 결과일 수 있음이 시사되었다 (Noblesse, E., et al. Ultrastructure in senile lentigo. Skin Pharmaco . Physiol . 2006; 19: 95-100). 각질형성세포 성장 인자 및 인터류킨-1α의 방출이 일광 흑색점의 과색소침착에 기여한다는 것 또한 나타냈다 (Chen, N. et al. The role of keratinocyte growth factor in melanogenesis: a possible mechanism for the initiation of solar lentigines. Exp . Dermatol . 19(10), 865-872, 2010). 흑색점 내 유전자 발현의 분석은 또한 미세염증 반응에 관련한 유전자의 상향조절을 시사한다 (Goyarts, E. et al. Morphological Changes Associated with Aging: Age Spots and the Microinflammatory Model of Skin Aging. Ann. N.Y Acad . Sci . 1119:32-39, 2007). 이것은 염증 반응의 일부로 흑색점 내에서 관찰되는 각질형성세포의 과다증식과 일치한다.

백인 여성의 검버섯에 관한 발명가들의 임상 연구는 인접한 피부와 비교하여 이들 반점에 관련한 표피 증식 속도가 더 높음을 밝혔다. 반사 공초점 현미경 (RCM)은 고굴절성 기저 세포의 정렬 패턴이 원형 (비병변 피부와 관련)에서 불규칙한 비원형 모양 (일광 흑색점의 전형)으로 바뀌는 것으로, 진피 유두의 극심한 구조적 기형화를 드러냈다. 또한, 진피 유두 개수의 증가도 관찰되었다. 5 년 기간에 걸쳐 수행된 연구에서, 시간이 지나면서, 일광 흑색점이 더 어두워지고 더 커지며 진피 유두가 더 기형화되는 것 또한 보였다 (Pollefliet, C. et al. Morphological characterization of solar lentigines by in vivo reflectance confocal microscopy: a longitudinal approach. Int J Cosmet Sci . Apr: 35(2):149-55, 2013).

불균일한 색소침착은 많은 사람, 더욱 특히, 여성의 관심사이다. 검버섯은, 구체적으로, 대부분의 사람들에게 시각적으로 보기 좋지 않다고 여겨진다. 피부톤의 불균일함, 및 특히 피부의 과색소침착 영역 또는 암점 (검버섯)의 외관은, 시중의 다수의 피부 라이트닝 제제로 이어졌다. 피부톤의 차이를 가리거나 감추기 위해 파운데이션 및 컨실러를 흔히 사용한다. 또한, 멜라닌생성 연쇄반응에 영향을 미치는 미용 처치, 특히 효소 티로시나제를 억제하는 것은, 일광 흑색점에 존재하는 멜라닌의 양을 감소시켜, 색소침착된 반점의 라이트닝을 일으킴이 밝혀졌다. 그러한 제제는 멜라닌세포에 세포독성이 있다고 하는, 히드로퀴논 및 그 유도체, 예를 들면 알부틴(arbutin); 티로시나제 억제제, 예를 들면 비타민 C (아스코르브산) 및 그 유도체; 코지산; 폴리페놀; 벤즈알데히드 및 벤조에이트 유도체; 및 비타민 A의 유도체인 레티노이드를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

히드로퀴논의 전반적인 안전성에도 불구하고, 그것의 잠재적 부작용, 예를 들면, 홍반, 피부 자극, 접촉성 피부염, 및 주변 피부의 저색소침착은, 다른 더 안전한 피부 라이트너를 찾는 데 관심을 불러일으켰다.

발명자에 의한 본 발견은 각질형성세포의 증식을 억제하고 그들의 분화를 자극하는 물질이 놀랍고 예기치 않게 검버섯의 외관을 개선하고 피부를 더욱 균일한-톤으로 보이게 만들어주기도 한다는 것이다. 더 놀랍게도, 이들 물질은 고전적 피부 미백 활성성분 (즉, 멜라닌생성 연쇄반응에 영향을 미친다고 알려진 피부 미백 활성성분)이 아니다.

본 발명은 피부톤의 균일함을 촉진시키는 새로운 미백제를 확인하는 모델을 제공한다. 이 새로운 미백제를 함유하는 제형물은 종래의 미백 활성성분에 기인하는 잠재적 부작용 없이 검버섯 주위의 피부 및 검버섯 사이의 색 대조를 감소시키는 고전적인 미백 제형물로 또한 기능한다.

본 발명에 따르면 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고 과색소침착 피부 병변 및 과색소침착 피부 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 효능을 갖는 물질을 확인하는 방법이 제공되고, 상기 방법은

(a) 과색소침착 피부 병변에 시험할 물질을 함유하는 조성물을 적용하는 단계; 및

(b) 일정 시간 후, 예를 들어, 최소 약 1 개월, 예를 들면 2, 3 또는 4 개월 후 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서, 조성물이 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 행하였는지 여부를 관찰하는 단계

를 포함한다.

바람직하게는, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 개선시키는 시험 제형물의 효능은, 반사 공초점 현미경 (RCM)을 사용하여 평가된다.

또한 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 행하는 활성성분을 적어도 하나 포함하는 국소 조성물을, 라이트닝이 필요한 피부에 적용하는 것을 포함하고, 여기서 활성성분은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고 과색소침착 병변 주변의 피부에 비하여 과색소침착 병변의 피부의 라이트닝을 가능하게 하는 것인, 피부 라이트닝 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 국소 조성물은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치는 피부 라이트닝 활성성분을 더 포함한다.

본 발명은 또한 과색소침착 피부 병변 및 과색소침착 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 개선된 국소 화장품 조성물에 관한 것이고, 상기 조성물은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치는 적어도 하나의 제1 활성성분을 그것을 위한 화장용으로 허용되는 비히클(vehicle)에 포함하고, 여기서 개선은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 감소 중 적어도 하나를 행하는 제2 활성성분을 상기 조성물에 함유하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한

(a) 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 위한 제1 피부 라이트닝 활성성분을 그것을 위한 화장용으로 허용되는 비히클에 포함하는 제1 화장품 조성물을 색 대조 감소를 필요로 하는 피부에 적용하는 단계; 및

(b) 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치는 제2 피부 라이트닝 활성성분을 그것을 위한 화장용으로 허용되는 비히클에 포함하는 제2 화장품 조성물을 색 대조 감소를 필요로 하는 피부에 적용하는 단계; (여기서 (a) 및 (b) 단계는 어떤 순서로든 일어날 수 있음)

를 포함하는, 피부의 과색소침착 병변 및 과색소침착 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 요법에 관한 것이다.

도 1a는 기준선에서 및 파이토픽스(Phytofix)를 함유하지만 종래 미백 활성성분은 없는 분화 자극 제형물의 4 개월의 처리 기간 후 과색소침착 병변에 있는 진피 유두 고리의 원형도 지수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 1b는 기준선에서 및 파이토픽스 또는 종래의 미백 활성성분을 함유하지 않는 제형물의 4 개월의 처리 기간 후 색소침착 병변에 있는 진피 유두 고리의 원형도 지수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 1c는 도 1a 및 1b에 나타난 원형도 지수의 차이를 보여주는 막대 그래프이다.
도 2a는 파이토픽스-함유 분화 자극 제형물로 처리한 과색소침착 병변에 있는 진피 유두의 개수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 2b는 파이토픽스 또는 종래의 미백 활성성분을 함유하지 않는 제형물로 처리한 과색소침착 병변에 있는 진피 유두의 개수를 보여주는 막대 그래프이다.
도 2c는 도 2a 및 2b에 나타난 진피 유두의 개수에서 관찰된 차이를 나타내는 막대 그래프이다.
도 3은 피부 처리 후 1, 2, 3 및 4 개월 후에 일광 흑색점의 피부 및 주변 피부 사이의 색 대조 데이터를 나타내는 막대 그래프이다.
도 4a는 발명의 분화 자극 제형물로 처리한 일광 흑색점의 피부경 사진의 세트이다.
도 4b는 발명의 분화 자극 제형물에 이어 종래의 미백 활성성분을 함유한 제형물을 처리한 일광 흑색점의 피부경 사진의 세트이다.
도 5는 분화 자극 제형물용 비히클/기제로의 처리와 비교하여 발명의 분화 자극 제형물 또는 분화 자극 제형물에 이어 종래의 미백 활성성분을 함유한 제형물을 처리한 일광 흑색점에 있는 유두 고리의 원형도 지수에 대한 효과를 보여주는 막대 그래프이다.
도 6은 진피-표피 경계면에서 기록된 일광 흑색점의 피부경 검사 사진 및 일광 흑색점의 반사 공초점 현미경 (RCM) 이미지의 세트로 발명의 분화 자극 제형물로의 처리 후 원형도 지수의 개선을 나타낸다.
도 7은 분화 자극 제형물용 비히클/기제로의 처리와 비교하여 발명의 분화 자극 제형물 또는 분화 자극 제형물에 이어 종래의 미백 활성성분을 함유한 제형물을 처리한 일광 흑색점에 존재하는 진피 유두의 개수를 나타내는 막대 그래프의 세트이다.
도 8은 진피-표피 경계면에서 기록된 일광 흑색점의 피부경 검사 사진 및 일광 흑색점의 RCM 이미지의 세트이고 발명의 분화 자극 제형물로의 처리 후 진피 유두 고리의 개수의 개선을 나타낸다.
도 9a는 분화 자극 제형물용 비히클/기제로의 처리와 비교하여 발명의 분화 자극 제형물 또는 분화 자극 제형물에 이어 종래의 미백 활성성분을 함유한 제형물을 처리한 일광 흑색점의 표피 두께에 대한 효과를 보여주는 막대 그래프의 세트이다.
도 9b는 분화 자극 제형물용 비히클/기제로의 처리와 비교하여 발명의 분화 자극 제형물 또는 분화 자극 제형물에 이어 종래의 미백 활성성분을 함유한 제형물을 처리한 일광 흑색점의 각질층(stratum corneum)의 두께에 대한 효과를 보여주는 막대 그래프의 세트이다.
도 10은 분화 자극 제형물용 비히클/기제로의 처리와 비교하여 발명의 분화 자극 제형물 또는 분화 자극 제형물에 이어 종래의 미백 활성성분을 함유한 제형물을 처리한 일광 흑색점의 자가-형광에 의해 측정한 표피 증식을 보여주는 막대 그래프의 세트이다.

일광 흑색점은 광노화된 피부에서 흔히 관찰된다. 그것은 만성적으로 자극받은 피부에 나타나는 일광 흑색점 또는 과색소침착 검버섯 또는 병변을 특징으로 한다. 이들 반점은 양성이고 50 세 이후의 사람의 피부에서 일반적으로 발생한다. 현미경적 연구로부터, 인접한 정상 피부에 비교하여 병변 피부에 상당한 변형이 있음이 알려졌고, 멜라닌이 축적 및 과생성 멜라닌의 배출 감소로 과색소침착된 기저 층, 표피능의 신장, 및 각질형성세포 기저 미세융모의 증가와 관련한 진피 표피 연접의 해체 및 붕괴 (장벽 질 저하)를 포함한다.

발명자는 이전 조사에서 이들 병변이 경피 수분 손실(TEWL)의 증가 및 카스파제(caspase)-14 활성의 감소를 보이며, 검버섯이 손상된 장벽 기능을 특징으로 하는 다른 관찰을 지지함을 밝혔다. 발명자는 RCM을 사용한 조사로 일광 흑색점에 있는 진피 유두의 극심한 구조적 기형화를 확인했고 그 기형화가 가역적일 수 있는지를 고려하게 되었다. 기형화를 개선하거나 돌이킬 수 있는 다양한 국소 화장 제형물의 역량이 아래 논의된 대로 조사되었다.

<실시예>

1. 일광 흑색점의 형태에 대한 화장품 원료 물질의 효과

지원자 41 명이 4 개월 임상 연구에 등록했다. 그들의 손에 명백히 눈에 띄는 검버섯이 있는 패널만이 참석할 수 있었다. 패널의 평균 나이는 61 세였고 최소 및 최대 나이는 각각 47 및 74 세였다. 모든 지원자는 백인이었고 피츠패트릭(Fitzpatrick) 피부 타입 II 또는 III을 보였다. 시험 영역은 양쪽 손 각각의 등면 상의 일광 흑색점이었다. 에탄올 및/또는 화장품에 어떠한 종류의 피부과적 장애 또는 과민증 또는 알레르기라도 있는 패널은 연구에서 제외되었다. 연구에 들어가기 전에 각 지원자로부터 서면 사전 동의를 받았다.

파이토픽스는, 해바라기, 보리 및 오이 추출물에서 유래한 스핑고지질, 트리글리세리드 및 스테롤을 함유하는 활성성분으로 피부 막의 구조를 모방한 것이라고 하며 그것의 피부 장벽 회복 특성으로 널리 이용된다. 종래의 미백 활성성분을 함유하지 않는 다양한 제형물은 그들의 검버섯 라이트닝 효능에 대해 평가되었다. 파이토픽스를 함유하는 제형물 1-3, 및 파이토픽스가 없는 제형물 4 및 5가 아래의 표 1에 나타나 있다.

제형물 1은 패널 12 명에게 시험되었다 (1 검버섯/패널로 총 12 검버섯). 제형물 2는 패널 13 명에게 적용되었고 (1 검버섯/패널로 총 13 검버섯), 제형 3은 패널 16 명에게 사용되었고 (2 검버섯/패널로 총 32 검버섯), 제형물 4은 패널 14 명에게 시험되었고 (1 검버섯/패널로 총 14 검버섯), 제형물 5는 패널 10 명에게 사용되었다 (1 검버섯/패널로 총 10 검버섯). 각각의 패널은 하루에 2 번(아침 및 저녁) 4 개월 동안, 그의 손등 표면 전체에 제형물을 듬뿍 적용했다. 패널은 임상 연구 동안 그들의 손에 어떠한 다른 화장품도 사용하지 않도록 지시받았다. 검사자가 각 손 당 하나의 검버섯을 선택하여 월별로 평가했다.

제형 1은 다음과 같이 조제한다:

용기에서 3 % 부틸렌 글리콜을 70 ℃로 가열하고, 1 % 카르보왁스를 첨가하고, 2000 RPM에서 혼합하여 배치의 시작에 예비배합물 B (순서 10)을 조제.

별도의 보조 주전자에:

순서 1: 10 % 히알루론산을 보조 주전자에 첨가 및 8 RPM에서 사이드 스위프 (side sweep).

순서 2: 0.5 % 트윈 20을 보조 주전자에 첨가,

순서 3: 23 % 그란실 TMG-5를 보조 주전자에 첨가 및 2500 RPM에서 혼합,

10 % 그란실 IDS를 보조 주전자에 첨가,

5 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

2 % 퍼메틸을 보조 주전자에 첨가,

0.5 % 파이토픽스를 보조 주전자에 첨가, 및

25 ℃로 온도 조절.

순서 4: 1 % KF-6017을 보조 주전자에 첨가, 및 균질하고 부드러워질 때까지 혼합.

순서 5: 38 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가,

50 ℃에서 가열,

531 RPM에서 혼합,

5 RPM에서 사이드 스위프,

0.05 % EDETA를 본 주전자에 첨가,

0.1 % 소듐 리보핵산을 본 주전자에 첨가,

25 ℃로 온도 조절.

순서 6: 0.6 % 아리스토플렉스 (50-3214)를 본 주전자에 첨가.

용기에 3 % 부틸렌 글리콜을 도입하고, 70 ℃에서 가열하고, 이후 0.3 % 바가드 cp를 첨가하여 예비배합물 A (순서 9) 조제.

순서 7: 0.2 % 페녹세톨을 본 주전자에 첨가, 및 보조 주전자로부터 배치를 도입.

순서 8: 0.2 % 비타민 E를 본 주전자에 첨가.

순서 9: 예비배합물 A를 본 주전자에 첨가.

순서 10: 예비배합물 B를 본 주전자에 첨가.

순서 11: 1.5 % 시뮬겔 600을 본 주전자에 첨가.

순서 12: 0.026 % FD&C 옐로 넘버 5를 본 주전자에 첨가,

0.009 % FD&C 옐로 넘버 6을 본 주전자에 첨가, 및 균질할 때까지 혼합.

제형 2는 다음과 같이 조제한다:

2.5 % 트윈 40을 용기에 첨가하고, 3000 RPM에서 혼합하고, 0.5 % 파이토픽스를 첨가하고, 80 ℃까지 가열하고, 이후 가열을 꺼서 예비배합물 B (순서 3)를 조제.

5 % 탈이온수를 별도의 용기에 첨가하고, 2500 RPM에서 혼합하고, 0.1 % 리보핵산을 첨가하여 예비배합물 C (순서 5)를 조제.

2 % 히드로라이트를 별도의 용기에 첨가하고, 2000 RPM에서 혼합하고, 용기를 40 ℃까지 가열하고, 0.7 % 브로니독스를 첨가하여 예비배합물 D (순서 6)를 조제.

순서 1: 47.87 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가,

60 ℃로 온도를 조절, 이후 12 RPM에서 사이드 스위프, 및 910 RPM에서 혼합,

0.02 % Edeta를 본 주전자에 첨가,

0.75 % 수크로스를 본 주전자에 첨가,

10 % 히알루론산을 본 주전자에 첨가,

0.1 % 저마지드를 본 주전자에 첨가,

0.5 % 소르비톨을 본 주전자에 첨가,

0.75 % 로다서프를 본 주전자에 첨가, 및

0.05 % 시트르산을 본 주전자에 첨가,

순서 2: 5 % 시아미터를 보조 주전자에 첨가,

1000 RPM에서 혼합,

60 ℃에서 가열,

10 % 시아미터를 보조 주전자에 첨가,

3 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

1 % 미리스틸 알콜을 보조 주전자에 첨가,

0.5 % 옥수수 오일을 보조 주전자에 첨가,

0.75 % KF-6017을 보조 주전자에 첨가, 및

0.01 % BHT를 보조 주전자에 첨가.

순서 3: 예비배합물 B를 본 주전자에 첨가, 이후 보조 주전자로부터 배치를 첨가.

순서 4: 30 ℃ 설정에서 본 주전자 냉각. 온도가 40 ℃에 도달하면, 0.1 % 그라스노우 AE를 본 주전자에 첨가,

2.5 % 카테좀을 본 주전자에 첨가,

2 % 효모 추출물을 본 주전자에 첨가,

0.5 % 바이오-전환 흰 자작나무를 본 주전자에 첨가, 1220 RPM에서 혼합한 후 15 RPM에서 사이드 스위프.

순서 5: 예비배합물 C를 본 주전자에 첨가.

순서 6: 예비배합물 D를 본 주전자에 첨가.

순서 7: 0.2 % 마스켄트(Maskent) 블렌드를 본 주전자에 첨가.

순서 8: 0.197 % 가성 소다를 본 주전자에 첨가하여 pH를 5로 조절.

순서 9: 3.4 % 세피겔 305를 본 주전자에 첨가.

제형 3은 다음과 같이 조제한다:

용기에 2.5 % 트윈 40을 첨가하고, 3000 RPM에서 혼합하고, 0.5 % 파이토픽스를 첨가하고, 80 ℃까지 가열하고, 이후 가열을 꺼서 예비배합물 B (순서 3)를 조제.

5 % 탈이온수를 별도의 용기에 첨가하고, 2500 RPM에서 혼합하고, 0.1 % 리보핵산을 첨가하여 예비배합물 C (순서 6)를 조제.

2 % 히드로라이트를 별도의 용기에 첨가하고, 2000 RPM에서 혼합하고, 40 ℃까지 가열하고, 0.7 % 브로니독스를 첨가하여 예비배합물 D (순서 8)를 조제.

순서 1: 47.87 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가,

60 ℃로 온도 조절,

12 RPM에서 사이드 스위프,

910 RPM에서 혼합,

0.02 % Edeta를 본 주전자에 첨가

0.75 % 수크로스를 본 주전자에 첨가,

10 % 히알루론산을 본 주전자에 첨가,

0.1 % 저마지드를 본 주전자에 첨가,

0.5 % 소르비톨을 본 주전자에 첨가,

0.75 % 로다서프를 본 주전자에 첨가, 및

0.05 % 시트르산을 본 주전자에 첨가.

순서 2: 5 % 시아미터 (68-0451)를 보조 주전자에 첨가;

1000 RPM에서 혼합,

60 ℃로 가열,

10 % 시아미터를 보조 주전자에 첨가

3 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

1 % 미리스틸 알콜을 보조 주전자에 첨가,

0.5 % 옥수수 오일을 보조 주전자에 첨가,

0.75 % KF-6017 (60-0031)을 보조 주전자에 첨가, 및

0.01 % BHT (51-0669)를 보조 주전자에 첨가.

순서 3: 예비배합물 B를 본 주전자에 첨가, 및 보조 주전자의 내용물을 첨가.

순서 4: 가열을 끄고, 30 ℃ 설정에서 본 주전자 냉각. 온도가 40 ℃에 도달하면, 0.1 % 그라스노우 AE를 본 주전자에 첨가,

2.5 % 카테좀을 본 주전자에 첨가,

2 % 효모 추출물을 본 주전자에 첨가,

0.5 % 바이오-전환 흰 자작나무를 본 주전자에 첨가,

1220 RPM에서 혼합 이후 15 RPM에서 사이드 스위프.

순서 5: 예비배합물 C를 본 주전자에 첨가.

순서 6: 예비배합물 D를 본 주전자에 첨가.

순서 7: 0.2 % 마스켄트 블렌드를 본 주전자에 첨가.

순서 9: 3.4 % 세피겔 305를 본 주전자에 첨가.

제형 4는 다음과 같이 조제한다:

순서 1: 10 % 히알루론산을 보조 주전자에 첨가 및 8 RPM에서 사이드 스위프.

순서 2: 0.5 % 트윈 20을 보조 주전자에 첨가.

순서 3: 23 % 그란실 TMG-5를 보조 주전자에 첨가,

2500 RPM에서 혼합,

10 % 그란실 IDS를 보조 주전자에 첨가,

5 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

2 % 퍼메틸을 보조 주전자에 첨가, 및

25 ℃로 온도 조절.

순서 4: 1.5 % KF-6017을 보조 주전자에 첨가하고 균질하고 부드러워질 때까지 혼합.

순서 5: 38 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가,

50 ℃ 상에서 가열,

481 RPM에서 혼합,

5 RPM에서 사이드 스위프,

0.05 % EDETA를 본 주전자에 첨가, 및

가열 끄기.

순서 6: 본 주전자를 25 ℃로 냉각. 온도가 25 ℃에 도달하면, 0.6 % 아리스토플렉스를 본 주전자에 첨가.

3 % 부틸렌 글리콜을 용기에 첨가하고 70 ℃로 가열하고, 0.3 % 바가드 cp를 첨가한 이후, 1 % 카르보왁스 30를 첨가하고, 2000 RPM에서 혼합하여 예비배합물 A (순서 8) 조제.

순서 7: 0.2 % 페녹세톨을 본 주전자에 첨가. 보조 주전자로부터의 성분을 본 주전자에 첨가.

순서 8: 예비배합물 A를 본 주전자에 첨가.

순서 9: 1.5 % 시뮬겔 600을 본 주전자에 첨가.

순서 10: 0.026 % FD&C 옐로 넘버 5를 본 주전자에 첨가,

제형 5는 다음과 같이 조제한다:

순서 2: 0.5 % 트윈 20을 보조 주전자에 첨가.

순서 3: 23 % 그란실 TMG-5를 보조 주전자에 첨가,

2500 RPM에서 혼합,

10 % 그란실 IDS를 보조 주전자에 첨가,

5 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

2 % 퍼메틸을 보조 주전자에 첨가, 및 25 ℃로 온도 조절.

순서 4: 1.5 % KF-6017을 보조 주전자에 첨가 및 균질하고 부드러워질 때까지 혼합.

순서 5: 38 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가,

본 주전자를 50 ℃로 가열,

481 RPM에서 혼합, 이후 5 RPM에서 사이드 스위프,

0.05 % EDETA를 본 주전자에 첨가, 및 가열 끄기.

순서 6: 25 ℃로 본 주전자 냉각시키고, 온도가 25 ℃에 도달하면, 0.6 % 아리스토플렉스를 본 주전자에 첨가.

3 % 부틸렌 글리콜을 용기에 첨가하고 70 ℃에서 가열하고, 이후 0.3 % 바가드 cp를 첨가하고, 1 % 카르보왁스 30을 첨가하고, 2000 RPM에서 혼합하여 예비배합물 A (순서 8) 조제.

순서 7: 0.2 % 페녹세톨을 본 주전자에 첨가; 이후 보조 주전자의 내용물을 본 주전자에 첨가.

순서 8: 예비배합물 A를 본 주전자에 첨가.

순서 9: 1.5 % 시뮬겔 600을 본 주전자에 첨가.

순서 10: 0.026 % FD&C 옐로 넘버 5를 본 주전자에 첨가,

이 연구에서, 일광 흑색점의 형태에 대한 화장품 원료 물질의 효과는 처리 전 및 처리 4 개월 후에 비바스코프(Vivascope) (루시드(Lucid) 1500)을 사용하여 반사 공초점 현미경 (RCM)으로 평가되었다. RCM은 피부의 “생체 내” 검사를 위한 비침입적 기술이다. 비바스코프는 손의 등쪽에 놓인다. 초음파 젤 (굴절률 1.36)이 대물 렌즈 및 피부 사이의 담금 매체로 사용된다. RCM은 500 x 500 μm 시야의 수평 조직 이미지를 획득하고, 3 μm 간격으로, 각막 층에서부터 표면 진피까지 (Z-축 스택) 수평면 (XY-축)상 동일 지점에서 순차적으로 더 깊은 개별 이미지를 얻는 자동화 스텝퍼(stepper)를 갖는다. 각각의 흑색점으로부터, 각막 층에서부터 표면 진피까지 피부의 광학적 단면을 6개 얻었다.

공초점 현미경에서, 다이오드 레이저로부터의 근-적외선은 현미경의 피부 목표에 집중된다. 이 빛이 상이한 굴절률을 갖는 세포 구조 사이를 지나가면서, 그것은 자연적으로 반사되고, 이 반사된 빛이 포획되며 컴퓨터 소프트웨어에 의해 이차원 그레이 스케일 이미지로 재구성된다. 현미경의 초점 맞추기는 (즉, z-축 상에서 초점을 조정하는 것) 피부 내 상이한 높이의 이미지를 얻을 수 있게 한다. 탐지는 내재성 미세구조-특이적 대조의 존재를 요구하고, 이는 멜라닌, 헤모글로빈 및 세포 소기관에 의해 제공된다. 멜라닌은 그것의 높은 굴절율 때문에 멜라닌-함유 세포의 탐지를 가능하게 하므로, 색소침착된 피부에서 최고의 내인성 조영제이다. 상업적으로 이용가능한 이런 유형의 현미경 시스템은 조직학적 분석에 사용되기에 충분한 디테일이 있는 이미지를 창조할 수 있다 (Calzavara-Pinton P., Longo C., Venturini M., Sala R., Pellacani G. Photochem Pholobiol. 2008 Nov-Dec; 84(6): 1421-30). 비바스코프 1500 시스템은 살아있는 조직을 통해 층별로, 세포를 실시간으로 이미지화 할 수 있는 능력을 가진 반사 공초점 현미경이다. 이들 이미지는 피부 및 그것의 상이한 층의 두께 및 진피 유두 고리의 모양을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 비바스코프 1500은 830 nm의 근 적외선 레이저를 사용하고 20 mW 미만의 전력에서 작동하며 개구수 0.9인 30X 대물 렌즈를 구비하고 있다.

원형도 지수 및 고굴절성 진피 유두의 개수 (mm²당)는 RCM 이미지로부터 계산되었다. 완벽한 원의 원형도 지수는 100이다; 따라서, 더 낮은 지수는 원에서 더 확연한 편차에 해당한다. 또한 피부의 비병변 영역과 비교했을 때, 진피 유두 고리 개수의 증가는 병변의 기형 형태와 관련이 있는바, 고리 수의 감소는 형태의 개선으로 간주된다. 시간 종속적 효과는 스튜던트(Student)의 대응표본 t 검정을 사용하여 평가되었다. 처리 사이의 차이는 스튜던트의 독립 표본용 t 검정을 사용하여 평가되었다. 결과는 도 1a, b, c; 및 도 2a, b, c에 나타나 있다.

도 1a은 기준선에서 및 파이토픽스가 있거나 없는 제형물 및 종래의 미백 활성성분을 함유하지 않은 각 제형물로 4 개월의 처리 기간 후 원형도 지수를 나타낸다. 각각 0.5 % 파이토픽스를 함유하는 제형물 1, 2 및 3으로의 처리는, 병변(검버섯)의 진피 유두의 원형도 지수에서 통계적으로 유의미한 (p<10^-4) 증가 (72.33에서 73.69)를 보였고 과색소침착 반점의 기저 막의 기형적 형태의 개선 (즉, 감소)을 나타낸다. 비병변 피부의 진피 유두의 원형도 지수는 약 80으로 밝혀졌다 (나타나있지 않음). 도 1b에 나타난 대로, 파이토픽스가 없는, 제형물 4 및 5로의 4 개월 처리는, 원형도 지수에 영향을 미치지 않았다 (75.24 내지 74.71의 범위).

처리 전후에 관찰된 원형도 지수의 차이는 파이토픽스가 있는 또는 없는 처리로 계산되었다 (도 1c). 파이토픽스를 함유하는 제형물은 원형도 지수가 1.4 증가함을 보여, 기형적 형태의 개선을 나타내는 반면, 파이토픽스가 없는 제형물의 경우에는, 개선이 없었다 (즉, 0.5 감소). 두 세트의 제형물 사이의 차이는 통계적으로 유의미하고, 파이토픽스가 관찰된 효과에 기여했다는 것을 시사한다.

발명자들은, 시간이 지남에 따라 (처리 없이), 검버섯에서 평균 원형도 지수가 5 년에 걸쳐 1.7 만큼 감소함을 이전에 관찰했다 (Pollefliet, C. et al. Morphological characterization of solar lentigines by in vivo reflectance confocal microscopy: a longitudinal approach. Int J Cosmet Sci . Apr: 35(2):149-55, 2013).

도 2a에 나타난 대로, 파이토픽스-함유 제형물 1, 2 및 3으로 처리된 과색소침착 병변에 있는 진피 유두의 개수는 160.7에서 151.7로 감소했다. 이 현상은 도 2b에 나타난 대로, 파이토픽스를 함유하지 않는 제형물 4 및 5로 처리된 병변에서는 관찰되지 않았고, 여기서 진피 유두의 개수는 138.7에서 153.3로 증가했다.

처리 전후의 진피 유두 개수의 차이 또한 계산되었다. 이 차이는, 도 2c에 나타난 대로, 파이토픽스-함유 제형물의 경우 음수였고 (-9.0) 유두 고리 수의 감소를 나타낸다. 파이토픽스가 없는 제형물로 병변 처리시 처리 사이의 차이가 반대 경향을 보였고 (+14.6) 통계적 유의미함에 도달한다.

발명가는, 시간이 지남에 따라 (처리 없이), 검버섯에서 진피 유두의 평균 개수가 5 년에 걸쳐 18.7 만큼 증가하는 경향이 있음을 이전에 관찰했다 (Pollefliet, C. et al. Morphological characterization of solar lentigines by in vivo reflectance confocal microscopy: a longitudinal approach. Int J Cosmet Sci . Apr: 35(2):149-55, 2013).

발명가들의 종전 연구는 제형물에 약 0.001 중량% 내지 약 2 중량%의 범위로 사용된 파이토픽스가, 과색소침착 병변에서 기저 막 형태를 개선하는 효능을 나타낸다는 것을 나타냈다 (결과는 나타나있지 않음).

과색소침착 병변의 기저 막의 형태에 대해 긍정적 효과를 보이는 제형물 각각이 파이토픽스 외에 소듐 리보핵산 또한 함유함이 인정되었다. 그러나, 소듐 리보핵산은 함유하지만 파이토픽스는 없는 제형물을 사용하면 기저 막 형태의 개선이 나타나지 않았기 때문에, 발명가는 형태에 대한 긍정적 효과는 소듐 리보핵산에 의해 야기된 것이 아니라고 결론지었다 (결과는 나타나있지 않음).

발명가는 또한, 일부의 경우에, 고전적 미백 활성성분, 예를 들어, UP302, (즉, 디아넬라 엔시폴리아(Dianella ensifolia ) 식물에서 유래한 디메톡시톨릴 프로필 레조르시놀) 또는 당밀 추출물을 파이토픽스와 함께 함유하는 제형물이, 파이토픽스를 함유하지만 고전적 미백 활성성분은 없는 제형물에 의해 나타난 일광 흑색점의 형태에 대한 긍정적인 효과의 소멸을 낳는 것을 관찰하였다 (결과는 나타나있지 않음). 반면에, 알려진 미백 활성성분, 예를 들어, 효모 추출물 XP, 블랙 스트랩(Black strap) 당밀, 파이토클라(Phytoclar) II, AS-G (아스코르빌 글루코시드) 분말 및 트라메테스 베르시콜라(Trametes versicolor)와 함께 파이토픽스를 함유하는 특정 제형물, 또는 알려진 미백 활성성분, 예를 들어, 모루스 니그라(Morus nigra) (뽕나무) 뿌리 추출물, 스쿠텔라리아 바이칼렌시스(Scutellaria baicalensis) 추출물 및 비티스 비니페라(Vitis vinifera) (포도) 추출물과 함께 파이토픽스를 함유하는 제형물로의 처리는 기저 막 형태의 개선을 보였다 (결과는 나타나있지 않음). 그러나, 파이토픽스 외에 이들 알려진 미백 활성성분을 함유하는 제형물로의 처리는 알려진 미백 활성성분 없이 파이토픽스를 함유하는 제형물의 사용에 비교하여 어떠한 더 큰 형태의 개선도 낳지 않았다.

데이터는, 일반적으로, 파이토픽스를 함유하는 국소 제형물 1, 2 및 3은 일광 흑색점의 기저 막 형태를 개선할 수 있었던 반면, 파이토픽스를 함유하지 않는 제형물 4 및 5는 그렇게 할 수 없었다는 것을 나타낸다. 또한, 종래의 미백 활성성분이 부재한 파이토픽스 물질 함유 제형물로의 피부 처리는, 흑색점의 피부에 있는 기형 기저 막에 긍정적 효과를 갖고, 이 기형화를 정상화시키는 경향이 있었다. 이 효과는 파이토픽스가 결핍된 제형물로 과색소침착 병변을 처리한 경우 관찰되지 않았다. 또한, 파이토픽스-함유 제형물에 몇몇 종래의 미백 활성성분을 첨가하는 것은 검버섯의 기저 막 형태에 긍정적인 변화를 일으키는 파이토픽스의 능력에 뚜렷한 효과가 없었고, 파이토픽스-함유 제형물과 다른 종래의 미백 활성성분의 조합은 형태에 대한 파이토픽스의 긍정적 효과를 중화시키는 것으로 나타났다. 과색소침착 병변의 기저막 형태를 개선하는 파이토픽스의 효능에 부정적 영향을 줄 수 있는 성분을 제형물에 혼합하는 것을 피하기 위해 배합금기를 조사할 필요가 남아있다.

2. 일광 흑색점에서 피부톤 및 진피 유두 형태에 대한 분화 자극 활성물질의 효과

이 연구에서, 다양한 제형물 (아래 표 2에 나타남)을 일광 흑색점에서 불균일한 피부톤 및/또는 진피 유두의 형태를 개선하는 그들의 능력에 대해 평가했다. 세 패널 집단 각각의 일광 흑색점을 (1) 다음 활성성분을 함유하는 분화 자극 제형: 살리실산 (항-증식 기능), 레스베라트롤 (써트(Sirt)-1 활성 기능), MPC (이주 기능), 스클라레올리드(Sclareolide) (즉, 스클라레올리드에 적정된 클라리 세이지(Clary Sage) 발효 추출물 - 성숙 기능) 및 파이토픽스 (피부 장벽 회복 기능), 또는 (2) 분화 자극 제형에 이어 다음의 알려진 미백 활성성분을 함유하는 미백 제형: 효모 추출물 XP, 트라메테스 추출물, AS-G 분말, 파이토클라 II; 니비톨(Nivitol) UP-302, 및 비아퓨어 리코리스(Viapure licorice), 또는 (3) 대조군 제형물, 즉, 수용성 활성성분을 위한 기제 또는 비히클 중 하나로 처리했다.

제형 6은 다음과 같이 조제한다:

순서 1: 10 % 히알루론산을 보조 주전자에 첨가, 및 8 RPM에서 사이드 스위프.

순서 2: 0.5 % 트윈 20을 보조 주전자에 첨가.

순서 3: 23 % 그란실 TMG-5를 보조 주전자에 첨가, 및 2500 RPM에서 혼합,

10 % 그란실 IDS를 보조 주전자에 첨가,

5 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

2 % 퍼메틸을 보조 주전자에 첨가, 25 ℃로 온도 조절.

순서 4: 1.5 % KF-6017을 보조 주전자에 첨가, 및 균질하고 부드러워질 때까지 혼합.

순서 5: 38.35 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가, 및 50 ℃의 설정에서 본 주전자 가열,

481 RPM에서 혼합, 이후 5 RPM에서 사이드 스위프,

0.05 % EDETA를 본 주전자에 첨가, 이후 가열 끄기.

순서 6: 본 주전자를 25 ℃로 냉각, 0.6 % 아리스토플렉스를 본 주전자에 첨가한 이후 보조 주전자의 내용물 첨가.

용기에 3 % 부틸렌 글리콜을 첨가하고, 70 ℃로 가열하고, 0.2 % 페녹세톨을 첨가하고, 이후 0.3 % 바가드 cp 첨가에 이어, 1 % 카르보왁스 30를 첨가하고, 2000 RPM에서 혼합하여 예비배합물 A (순서 7)를 조제.

순서 7: 예비배합물 A를 본 주전자에 첨가.

순서 8: 1.5 % 시뮬겔 600을 본 주전자에 첨가 및 균질할 때까지 혼합.

제형 7은 다음과 같이 조제한다:

순서 2: 0.5 % 트윈 20을 보조 주전자에 첨가.

10 % 그란실 IDS를 보조 주전자에 첨가,

5 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가,

2 % 퍼메틸을 보조 주전자에 첨가, 및 25 ℃로 온도 조절.

순서 5: 35.25 % 탈이온수를 본 주전자에 첨가,

50 ℃로 가열,

481 RPM에서 혼합, 이후 5 RPM에서 사이드 스위프,

0.05 % EDETA를 본 주전자에 첨가,

0.5 % MPC를 본 주전자에 첨가,

1 % 파이토픽스를 본 주전자에 첨가, 및 이후 가열 끄기.

순서 6: 본 주전자를 25 ℃로 냉각; 이후 0.6 % 아리스토플렉스를 본 주전자에 첨가; 및 이후 보조 주전자의 내용물을 본 주전자에 첨가.

3 % 부틸렌 글리콜을 용기에 첨가하고, 70 ℃로 가열하고, 이후 다음의 성분을 한 번에 하나씩 첨가하고: 0.2 % 페녹세톨, 0.3 % 바가드 cp, 1 % 카르보왁스 30, 0.25 % 살리실산, 0.05 % 클라리 세이지, 및 0.1 % 레스베라트롤, 2000 RPM에서 혼합하여 예비배합물 A (순서 7) 조제.

순서 7: 예비배합물 A를 본 주전자에 첨가.

1 % 탈이온수 및 0.2 % 트리스 아미노 울트라를 용기에서 합하여 예비배합물 B (순서 8) 조제.

순서 8: 예비배합물 B를 본 주전자에 첨가.

순서 9: 1.5 % 시뮬겔 600을 본 주전자에 첨가 및 균질할 때까지 혼합.

제형 8은 다음과 같이 조제한다:

3 % 부틸렌 글리콜을 용기에 도입하고 70 ℃에서 가열한 후, 150 RPM에서 혼합하고, 0.3 % 바가드 CP를 첨가하고, 이후 0.1 % 테트라하이드로커큐미노이드를 첨가하여 예비배합물 B (순서 11) 조제.

3 % 부틸렌 글리콜을 용기에 도입, 1 % 카르보왁스를 첨가, 70 ℃로 가열, 2000 RPM에서 혼합, 0.18 % 니비톨 UP-302를 첨가, 이후 0.1 % 비아퓨어 리코리스를 첨가하고, 이후 0.03 % 비아퓨어 시트러스를 첨가하여 예비배합물 C (순서 12) 조제.

4 % 탈이온수를 용기에 도입, 150 RPM에서 혼합, 1.8 % AS-G 분말을 첨가한 이후 0.645 % 트리스 아미노 울트라를 첨가하여 예비배합물 D (순서 13) 조제.

순서 1: 10 % 히알루론산을 보조 주전자에 첨가 및 15 RPM에서 사이드 스위프.

순서 2: 0.5 % 트윈 20을 보조 주전자에 첨가.

순서 3: 23 % 그란실 TMG-5를 보조 주전자에 첨가 및 2500 RPM에서 혼합.

10 % 그란실 IDS를 보조 주전자에 첨가.

5 % DM-플루이드를 보조 주전자에 첨가.

2 % 퍼메틸을 보조 주전자에 첨가.

25 ℃로 온도 조절.

순서 5: 17.46 % 탈이온수 (53-0061)를 본 주전자에 첨가, 30 ℃로 가열하고

온도가 30 ℃에 도달하면, 530 RPM에서 혼합, 이후 12 RPM에서 사이드 스위프,

0.2 % 카페인을 본 주전자에 첨가,

0.05 % EDETA를 본 주전자에 첨가,

0.1 % 소듐 리보핵산을 본 주전자에 첨가,

가열을 끄고, 25 ℃로 냉각.

순서 6: 본 주전자의 온도가 25 ℃에 도달하면, 5 % 효모 추출물 XP를 본 주전자에 첨가,

2 % 효모 추출물 NAG를 본 주전자에 첨가,

0.5 % 라이스 디펜스 컴플렉스를 본 주전자에 첨가,

1 % 파이토클라를 본 주전자에 첨가, 및

0.5 % 바이오-전환 흰 자작나무를 본 주전자에 첨가.

순서 7: 2 % 트라메테스 추출물을 본 주전자에 첨가, 균질할 때까지 1800 RPM에서 혼합, 이후 10 RPM에서 사이드 스위프.

순서 8: 0.6 % 아리스토플렉스를 본 주전자에 첨가.

순서 9: 0.2 % 페녹세톨을 본 주전자에 첨가, 이후 보조 주전자의 내용물을 본 주전자에 첨가.

순서 10: 0.2 % 비타민 E를 본 주전자에 첨가.

순서 11: 예비배합물 B를 본 주전자에 첨가.

순서 12: 예비배합물 C를 본 주전자에 첨가.

순서 13: 예비배합물 D를 본 주전자에 첨가, 830 RPM에서 균질할 때까지 혼합, 이후 12 RPM % 사이드 스위프.

순서 14: 2.5 % 카테좀을 본 주전자에 첨가.

순서 15: 1.5 % 시뮬겔 600을 본 주전자에 첨가.

순서 16: 0.026 % FD&C 옐로 넘버 5를 본 주전자에 첨가, 이후 0.009 % FD&C 옐로 넘버 6을 본 주전자에 첨가.

지원자 46 명이 4 개월 임상 연구에 등록했다. 그들의 손에 명백히 눈에 띄는 검버섯이 있는 패널만이 참석을 허가 받았다. 최소 및 최대 나이가 각각 44 및 82로, 패널의 평균 나이는 62 세였다. 모든 지원자는 백인이었고 피츠패트릭 피부 타입 II 또는 III을 보였다. 시험 영역은 양쪽 손 각각의 등면 상의 일광 흑색점이었다. 에탄올 및/또는 화장품에 어떤 종류의 피부과적 장애 또는 과민증 또는 알레르기라도 있는 패널은 연구에서 제외되었다. 연구에 들어가기 전에 각각의 지원자로부터 서면 사전 동의를 받았다.

제1 처리 집단은 패널 14 명을 포함했다 (2 검버섯/패널로 총 28 검버섯). 각 패널은 각 손 상의 하나의 검버섯에 대조군으로 역할하는, 비히클 제형물, 제형 6을 자가-처리했다. 패널 16 명의 제2 집단 (2 검버섯/패널로 총 32 검버섯)은 각 손 상의 하나의 검버섯에 분화 자극 제형, 제형 7을 자가-처리했다. 제3 집단에 대하여, 두 가지 제형물이 제공되었다: 분화 자극 제형, 제형 7, 및 미백 제형, 제형 8. 이 그룹의 지원자 16 명 (2 검버섯/패널로 총 32 검버섯)은 각 손 상의 하나의 검버섯에 분화 자극 제형을 적용하고, 이후, 5 분 후에, 분화 자극 제형의 위에 미백 제형을 적용하도록 요청받았다. 모든 세 집단에서, 패널은 4 개월 동안 제형물을 하루에 두 번 적용했다. 각 패널은 양쪽 손을 자가-처리했다. 패널은 4 개월 동안 하루에 두 번: 아침 및 저녁에, 손의 등쪽 표면 전체에 제형물을 듬뿍 적용했다. 패널은 임상 연구 동안 그들의 손에 어떤 다른 화장품을 사용하지 않도록 지시 받았다. 각 손당, 검사자가 하나의 검버섯을 선택하였고, 하나의 검버섯을 월별로 평가했다.

임상 연구를 시작할 때 (즉, 처리 전) 및 1, 2, 3 및 4 개월 후에, 피부경 카메라(올림푸스(Olympus) SP-510UZ 디지털 카메라에 연결된 더마라이트 프로(Dermalite Pro) II)로 검버섯의 피부경 사진을 찍었다. 더마라이트 프로 II 이중-편광 피부경으로, 검버섯의 사진을 교차-편광 모드에서 찍었다. 교차-편광 빛은 피부의 더 짙은 색소침착을 강조한다.

이들 사진은 과색소침착 반점 및 주변 피부 사이의 대조를 계산하기 위해 사용되었다. 사진은 흑백 사진으로 변환되었고 이것으로부터 그레이 값(grey value)을 계산했다. 색 대조는 주변 피부의 그레이 값 빼기 검버섯의 그레이 값으로 정의되고, 각 반점마다 계산되었다.

과색소침착 반점은 또한 그 본래 상태에 있는 피부의 실시간 시각화를 허용하기 위해 비바스코프 (루시드 1500)로 생체 내 RCM에 의해 평가되었다. 분석은 기저 막에서 찍은 공초점 이미지에 집중되었다. 이들 이미지로부터, mm²당 진피 유두의 개수를 셌고 고굴절성 진피 유두의 원형도 지수를 계산했다. 원형도 지수는 고굴절성 기저 세포의 원에 대한 정렬 패턴을 일컫는 모양 인자이다. 이 식에 따르면, 완벽한 원의 원형도 지수는 100이다; 더 낮은 지수는 원으로부터의 더 확연한 편차에 해당하고 일광 흑색점에서 흔히 보이는 것과 같은 고굴절성 세포의 정렬 패턴의 기형화를 나타낸다. 표피의 두께 또한 계산되었다.

1 및 4 개월 처리 후에, 표피 증식을 평가하기 위해 스킨스캔(Skinskan) (호리바(Horiba))를 사용하여 피부 자가-형광 (즉, 피부의 내인성 형광)을 측정했다 (λex/λem=295/345 nm; 반사율 350-700 nm). 표피 증식 데이터는 350 nm에서 측정된 상응하는 반사율 데이터로 보정했다. 형광 분광법을 사용하여, 변화하는 여기 및 방출의 효과를 검사할 수 있다. 일부 생체 내 형광 밴드는 특정 아미노산 또는 단백질 변형에 기인할 수 있다. 트립토판에 기인하는 형광 밴드 (λex/λem=295/345 nm)는 표피 증식 또는 세포 재생의 표지로 제안되었다.

시간 종속적 효과는 반복 측정 아노바(ANOVA) 계산을 사용하여 평가되었다. 또한 시간-점 사이의 유의미한 차이는 다중 비교용 사후검정 투키 검정(post hoc Tuckey test)에 의해 결정되었다. 비바스코프 데이터는 대응표본 스튜던트 t 검정에 의해 통계적으로 평가되었다.

결과는 도 3, 4a, 4b, 5, 6-8, 9a, 9b 및 10에 도표로 나타나있다.

도 3은 처리의 결과로 얻어진 일광 흑색점 및 주변 피부 사이의 피부 색 대조 데이터를 나타낸다. 분화 자극 제형물로의 처리 결과, 비처리 피부와 비교 시, 1, 2, 3 및 4 개월 후, 각각, 2 % (p=0.96), 6 % (p=0.24), 20 % (p<10^-4) 및 26 % (p<10^-4)로 대조가 감소했다. 분화 자극 처리를 미백 처리와 조합한 경우, 통계적으로 유의미한 감소가 1 개월 처리 후에 이미 관찰되었다. 이 조합 처리 결과, 1, 2, 3 및 4 개월 후, 각각, 7 % (p=0.02), 17 % (p=0.0001), 19 % (p=0.0001) 및 28 % (p=0.0001)로 대조가 감소했다. 비히클 제형물을 처리한 결과로는 같은 기간 동안 대조에 변화가 관찰되지 않았다.

분화 자극 제형으로 처리된 일광 흑색점의 피부경 사진이 도 4a에 나타나 있다. 상단의 세트는 처리 후 색 대조의 전형적 개선을 보여주고, 하단은 현재의 시험 설정에서 발견된 최대 개선을 나타낸다.

분화 자극 제형에 이어 미백 제형물로 처리된 일광 흑색점의 피부경 사진이 도 4b에 나타나 있다. 상단의 세트는 처리 후 색 대조의 전형적 개선을 보여주고, 하단은 현재의 시험 설정에서 발견된 최대 개선을 나타낸다. 두 처리에 대해, 평균 개선을 보여주는 한 예가 제공되고 최대 개선을 나타내는 다른 예가 제공된다. 조합 처리의 경우, 1 개월의 처리 후 이미 상당함에 도달하였고, 분화 자극 제형 단독 처리와 비교하였을 때 색 대조가 더 빨리 감소했다.

일광 흑색점에 있는 진피 유두의 형태 (즉, 원형도 지수 및 진피 유두 고리의 개수)는 RCM (비바스코프)을 사용하여 조사되었다. 원형도 지수의 결과는 도 5에 주어져 있다. 분화 자극 제형물로의 4 개월 처리 후, 원형도 지수에서 통계적으로 유의미한 증가가 관찰되었고 기저 막의 개선을 나타낸다. 완벽한 원의 원형도 지수는 100이므로, 더 낮은 지수는 원으로부터 더 확연한 편차에 해당한다. 비병변 피부의 진피 유두의 원형도 지수는 약 92인 것으로 판명되었다 (결과는 나타나있지 않음).

비히클 및 조합 처리 집단의 경우, 4 개월 처리 후 진피 유두의 원형도 지수에 변화가 보이지 않았다.

도 6은 일광 흑색점의 진피-표피 경계면에서 기록된 RCM (비바스코프) 이미지의 예시를 묘사한다. 이들 이미지는 분화 자극 제형물의 4 개월 처리 후 평균 및 최대 개선을 나타낸다.

도 7에 나타난 대로, 분화 자극 활성성분을 함유하는 제형물로 처리한 집단뿐만 아니라 분화 자극 활성성분을 함유하는 제형물 및 미백 제형물 모두로 처리한 집단에서도, 처리-전 수준과 비교 시, 4 개월 처리 후에 진피 유두 개수에 통계적으로 유의미한 감소가 관찰되었다. 비병변 피부에 있는 진피 유두의 개수는 mm²당 약 20 유두로 관찰되었다 (나타나있지 않음).

진피-표피 경계면에서 찍은 RCM (비바스코프) 이미지는, 도 8에 나타난 대로, 분화 자극 제형의 4 개월 처리 후 유두 고리의 평균 및 최대 감소를 나타낸다.

기록된 비바스코프 이미지는 표피 두께의 정량화에 더 사용되었다. 도 9a에 나타난 대로, 분화 자극 제형의 4 개월 처리 이후, 표피 두께(각질층 제외)에 통계적으로 유의미한 증가가 관찰되었다. 덧붙여, 도 9b에 나타난 대로, 각질의 두꺼워짐 또한 발견되었다. 비히클로의 처리 또는 조합 처리 후에는 차이가 발견되지 않았다.

피부 자가-형광(295/345 nm에서 측정됨) 결과가 도 10에 나타나 있다. 이들 파장에서의 신호는 표피 증식의 표지인 트립토판과 관련되어 있다. 분화 자극 제형으로의 처리 결과 4 개월 후 표피 증식의 통계적으로 유의미한 감소가 있었다. 다른 처리로는 변화가 발견되지 않았다.

4 개월에 걸친 분화 자극 제형물로의 처리 결과 일광 흑색점의 가시적인 외관 및 형태가 개선되었다. 분화 자극 제형의 적용 5 분 후에 고전적인 미백 성분을 함유하는 미백 제형물을 적용한 경우, 4 개월 처리 후 피부톤에 유사한 개선이 인지되었다. 그럼에도 불구하고, 조합 처리는 분화 자극 제형의 단독 사용과 비교 시 기저 막을 개선하는 것에 다소 덜 효과적이었다. 진피 유두 고리의 수가 더 적었으나, 원형도 지수에는 개선이 탐지되지 않았다.

Claims

(a) 과색소침착 피부 병변에 시험할 물질을 함유하는 조성물을 적용하는 단계; 및
(b) 일정 시간 후, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서, 조성물이 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 행하였는지 여부를 관찰하는 단계
를 포함하는, 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고 과색소침착 피부 병변 및 과색소침착 피부 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 효능을 갖는 물질의 확인 방법.
제1항에 있어서, 일정 시간은 적어도 약 1 개월인 것인 방법.
제1항에 있어서, 일정 시간은 적어도 약 2 개월인 것인 방법.
제1항에 있어서, 일정 시간은 적어도 약 3 개월인 것인 방법.
제1항에 있어서, 일정 시간은 적어도 약 4 개월인 것인 방법.
제1항에 있어서, 각질형성세포의 증식 억제에 대한 조성물의 효과는 반사 공초점 현미경 (RCM)을 사용하여 평가하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 각질형성세포의 분화 자극에 대한 조성물의 효과는 반사 공초점 현미경 (RCM)을 사용하여 평가하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 진피 유두의 압축 기형화 개선에 대한 조성물의 효과는 반사 공초점 현미경 (RCM)을 사용하여 평가하는 것인 방법.
피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 행하는 활성성분을 적어도 하나 포함하는 국소 조성물을, 라이트닝이 필요한 피부에 적용하는 것을 포함하고, 여기서 활성성분은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고 과색소침착 병변 주변의 피부에 비하여 과색소침착 병변의 피부의 라이트닝을 가능하게 하는 것인, 피부의 라이트닝 방법.
제9항에 있어서, 국소 조성물은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치는 피부 라이트닝 활성성분을 더 포함하는 것인 방법.
멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치는 적어도 하나의 제1 활성성분을 그것을 위한 화장용으로 허용되는 비히클(vehicle)에 포함하는, 과색소침착 피부 병변 및 과색소침착 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 개선된 국소 화장품 조성물이며,
개선은 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 감소 중 적어도 하나를 행하는 제2 활성성분을 상기 조성물에 함유하는 것을 포함하는 화장품 조성물.
(a) 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치지 않고, 피부의 과색소침착 병변에 있는 표피의 기저 층에서 각질형성세포의 증식 억제, 각질형성세포의 분화 자극, 및 진피 유두의 압축 기형화 개선 중 적어도 하나를 위한 제1 피부 라이트닝 활성성분을 그것을 위한 화장용으로 허용되는 비히클에 포함하는 제1 화장품 조성물을, 색 대조 감소를 필요로 하는 피부에 적용하는 단계; 및
(b) 멜라닌세포 또는 멜라닌생성에 직접적으로 영향을 미치는 제2 피부 라이트닝 활성성분을 그것을 위한 화장용으로 허용되는 비히클에 포함하는 제2 화장품 조성물을 색 대조 감소를 필요로 하는 피부에 적용하는 단계 (여기서 (a) 및 (b) 단계는 어떤 순서로든 일어날 수 있음)
를 포함하는, 피부의 과색소침착 병변 및 과색소침착 병변 주변의 피부 사이의 색 대조를 감소시키는 요법.