KR20160139849A - ｍｉＲ－７, ｍｉＲ－１８ａ 또는 ｍｉＲ－１８ｂ를 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 miRNA의 대사성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서의 용도에 관한 것이다. 본 발명에서는 miRNA를 이용한 대사성 질환의 후보물질을 개발하였고, LXRβ의 표적부위에 specific binding을 통하여 RNA 수준 및 단백질 수준에서도 효과적으로 down regulation한다는 것을 규명하였다. 따라서, 본 발명에서 발굴한 miRNA, 즉 miR-7, miR-18a 또는 miR-18b은 죽상동맥경화, 지방간, 당뇨, 고지혈증, 고혈압, 협심증 및 심근경색 등의 대사성 질환의 치료 등에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

ｍｉＲ－７, ｍｉＲ－１８ａ 또는 ｍｉＲ－１８ｂ를 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition comprising miR-7, miR-18a or miR-18b for prevention or treatment of metabolic disease}

본 발명은 miR-7, miR-18a 및 miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

비만과 2형 당뇨를 포함한 대사성 질환은 우리 몸의 각 기관에서 신진대사가 원활하지 못하여 나타나는 질병으로 현재 세계에서 가장 큰 건강상 위협되는 질환 중의 하나이다. 죽상동맥경화증(atherosclerosis)은 오래된 수도관이 녹이 슬고 이물질이 침착하여 지름이 좁아지게 되는 것처럼, 주로 혈관의 가장 안쪽을 덮고 있는 내막(endothelium)에 콜레스테롤이 침착하고 내피세포의 증식이 일어난 결과 ‘죽종(atheroma)’이 형성되는 혈관질환을 말한다. 죽종 내부는 죽처럼 묽어지고 그 주변 부위는 단단한 섬유성 막인 ‘경화반’으로 둘러싸이게 되는데, 경화반이 불안정하게 되면 파열되어 혈관 내에 혈전(thrombus; 피떡)이 생긴다. 또한 죽종 안으로 출혈이 일어나는 경우 혈관 내부의 지름이 급격하게 좁아지거나 혈관이 아예 막히게 되고, 그 결과 말초로의 혈액순환에 장애가 생긴다. 동맥경화증은 주로 혈관의 중간층에 퇴행성 변화가 일어나서 섬유화가 진행되고 혈관의 탄성이 줄어드는 노화현상의 일종이다. 이 때문에 수축기 고혈압이 초래되어 심장근육이 두꺼워지는 심장비대 현상이 나타나게 된다. 최근에는 죽상경화증과 동맥경화증을 혼합하여 죽상동맥경화라고 쓰기도 한다. 죽상동맥경화의 치료는 크게 두 가지로 나눌 수 있는데, 질환의 진행을 예방하기 위한 치료 및 장기로의 혈액 공급에 이미 장애가 생겨 증상이 나타났거나 장기의 기능 저하가 초래된 경우에 좁아진 혈관을 넓히거나 혈관을 붙여 우회로를 만들어주는 치료가 있다. 좁아진 혈관의 혈행(혈액순환)을 개선시키기 위해 혈관 조영술을 시행하여 좁아진 곳이 있으면 카테터를 통해 혈관성형풍선을 넣어서 부풀려줌으로써 동맥경화로 인해 좁아진 부분을 넓혀줄 수 있다. 또는 그물망처럼 생긴 스텐트라는 것을 넣어서 관상동맥의 혈관벽을 지지해 줌으로써 다시 좁아지는 것을 방지하기도 하는데 이를 혈관성형술이라고 한다. 그 외에 치료제로는 statin제가 개발되고 있으며, LDLdmf 낮추고 HDL을 높이는 방법이 주류를 이루지만, 많은 환자들에게 관상동맥이 줄어드는 문제점이 발생되고 있다. 따라서, 부작용이 없으면서 효과적으로 치료할 수 있는 새로운 치료제 개발이 요구되고 있다.

한편 비 번역 RNA인 마이크로RNA(microRNA, miRNA)는 전사 및 후생유전학적인 조절을 통해 세포의 표현형, 기능, 운명을 조절하는 강력한 조절자로 알려져왔다. MicroRNA 유전자는 RNA polymerase II에 의해 전사되어 large primary transcripts(pri-microRNA)가 되고, pri-microRNA는 RNase III 효소인 Drosha를 포함한 단백질 복합체에 의해 약 70 nt 길이의 precursor microRNA(pre-microRNA)가 된다. pre-microRNA 는 세포질로 이동하고 두번째 RNase III 효소인 DICER에 의해 약 22 nt의 mature microRNA가 된다. Mature microRNA는 ribonuclear particle로 들어가 RNA-induced silencing complex인 RISC가 되고, 여기서 microRNA가 mRNA의 타겟 사이트에 결합하여 translation을 저해하거나 타겟 mRNA를 분해함으로써 gene silencing이 진행된다. MicroRNA는 cell cycle 조절과 세포사멸, 발생 및 생리학적 단계에 관여 하는 것으로 알려져 있다. 또한 줄기 세포 분화, 조혈 작용, 저산소증, 심근과 골격근의 발생, 신경 발생, 인슐린 분비, 콜레스테롤 대사, 노화, 면역 반응 그리고 바이러스 증식에도 관여한다. 배발생 embryogenesis 과정 중 microRNA는 조직 특이적으로 발현하거나 특정 시기에 발현하는데, 이는 분화와 조직 특이성 유지에도 microRNA가 역할을 한다는 것을 의미한다. MicroRNA는 목적 mRNA의 3’ UTR 내의 타겟 사이트에 결합하여 단백질 합성을 억제하거나 mRNA의 분해를 유발하여 gene silencing을 유도한다. mRNA에 있는 대부분의 타겟 사이트는 microRNA 염기서열과 일부분만 상보적이기 때문에, 한 개의 microRNA는 여러 개의 다른 mRNA를 조절할 수 있다. 또한 한 개의 mRNA가 여러 microRNA에 대한 multiple binding site를 갖고 있을 수 있어서, 복잡한 유전자 조절 관계를 갖는다. 게다가 많은 microRNA는 매우 유사한 microRNA family의 일부이다. 상기와 같이 miRNA는 다양한 유전자 발현에 관여하며, 동시에 adipocyte differentiation, metabolic integration, appetite regulation 등을 포함한 여러 가지 대사 조절 과정에도 관여한다. 결국 대사질환의 치료적 후보물질로 miRNA의 적용될 가능성은 높으며 치료제로서 개발이 유망한 분야이다.

대한민국 특허출원 제2012-0047868호

본 발명자들은 miRNA를 이용하여 당뇨 및 비만 등의 대사성 질환의 예방 및 치료제로 활용할 수 있는 후보물질을 개발하고자 하였으며 다양한 후보물질을 탐색하는 중에 특정 서열의 miRNA 이러한 약효를 가진다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 된 것이다.

따라서, 본 발명자들은 miRNA을 유효성분으로 하는 비만 및 2형 당뇨 등의 대사성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

이러한 발명의 목적을 위해 본 발명은 miR-7, miR-18a 및 miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 miR-7은 서열번호 1로 표시되고, miR-18a은 서열번호 2로 표시되며, miR-18b은 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어진 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 miR-7, miR-18a 및 miR-18b은 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)를 특이적으로 억제하는 활성을 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 대사성 질환은 죽상동맥경화, 지방간, 당뇨, 고지혈증, 고혈압, 협심증 및 심근경색으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 4로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열내에서 178~185번째의 염기서열 위치에서 결합하는 miR(microRNA)을 유효성분으로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 miR은 서열번호 1로 표시되는 miR-7일 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 5로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열 내에서 274~280번째의 염기서열 위치에서 결합하는 miR(microRNA)을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 miR은 서열번호 2로 표시되는 miR-18a 또는 서열번호 3으로 표시되는 miR-18b일 수 있다.

또한, 본 발명은 시험관 내에서 miR-7, miR-18a 및 miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 miR을 세포 내에서 처리하는 단계를 포함하는, 세포 내에서 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 발현 또는 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 miR-7는 서열번호 1로 표시되고, miR-18a은 서열번호 2로 표시되며, miR-18b은 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어진 것일 수 있다.

본 발명에 따른 miRNA를 이용한 대사성 질환의 후보물질을 개발하였으며, LXRβ의 표적부위에 specific binding을 통하여 RNA 수준 및 단백질 수준에서도 효과적으로 down regulation한다는 것을 규명하였다. 따라서, 본 발명의 후보물질은 죽상동맥경화, 지방간, 당뇨, 고지혈증, 고혈압, 협심증 및 심근경색 등의 대사성 질환의 치료등에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

도 1 은 miRWALK 및 다른 프로그램으로 만들어진 mRNA 3'UTR region에 발현을 조절할 수 있는 miRNA sites들을 예측한 결과이다.
도 2 은 LXRβ의 발현을 조절할 수 있는 miRNA을 찾기위하여 보존된 부위(conserved sites)를 찾은 결과이다. (a)는 LXRβ 3' UTR의 178 내지 185; (b)는 LXRβ 3‘ UTR의 274 내지 280
도 3은 miRNA의 후보물질의 유효성 검사(validation)하기 위하여 수행한 실험들의 개략도이다.
도 4는 실시예 2의 LXRβ의 발현을 분석하기 위한 Real-time PCR 분석의 개략도이다.
도5는 실시예 2의 Real-time PCR을 수행한 결과를 그래프로 나타낸 것이다. (a)는 miRNA들을 개별적으로 분석한 결과이며, (b)는 대조군(Control)과 비교한 결과이다. (*p<0.05, **p<0.01, ns :not significant)
도 6은 실시예3의 LXRβ의 발현을 분석하기 위한 western blot 분석결과이다. LXRβ의 발현을 GAPDH(글리세알데히드 포스페이트 데히드로제나아제)를 코딩하는 mRNA의 발현량에 대하여 상대적으로 보여주었다.
도 7은 실시예3의 결과를 그래프로 나타낸 것이다. (a)는 miRNA들을 개별적으로 분석한 결과이며, (b)는 대조군(Control)과 비교한 결과이다. (*p<0.05, **p<0.01, ns :not significant)
도 8은 LXRβ 3‘ UTR을 벡터에 삽입하여 구축한 개략도이다.
도 9는 실시예 4의 Luciferase reporter assay를 수행한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 실시예 4를 수행하기 위하여 furefly 유전자 옆에 LXRβ유전자를 삽입한 개략도이다.
도 11(a)는 실시예 4의 Luciferase reporter assay의 개략도이며, (b)는 pmirGLO Vector의 MOA(mechanism of action)을 보여주는 것이다.
도 12는 실시예 4의 결과를 보여주는 그래프이다. (a)는 pmirGLO/h_LXRβ 3'UTR FWD이며, (b)는 pmirGLO/h_LXRβ 3'UTR REV이다.

본 발명에서 사용되는 용어에 대한 정의는 이하와 같다.

"핵산"은 임의의 DNA 또는 RNA, 예를 들어, 조직 샘플에 존재하는 염색체, 미토콘드리아, 바이러스 및/또는 세균 핵산을 포함하는 의미이다. 이중가닥 핵산 분자의 하나 또는 두개 모두의 가닥을 포함하고, 무손상 핵산 분자의 임의의 단편 또는 일부를 포함한다.

"유전자"는 단백질 코딩 또는 전사시에 또는 다른 유전자 발현의 조절시에 기능적 역할을 갖는 임의의 핵산 서열 또는 그의 일부를 의미한다. 유전자는 기능적 단백질을 코딩하는 모든 핵산 또는 단백질을 코딩 또는 발현하는 핵산의 일부만으로 이루어질 수 있다. 핵산 서열은 엑손, 인트론, 개시 또는 종료 영역, 프로모터 서열, 다른 조절 서열 또는 유전자에 인접한 특유한 서열 내에 유전자 이상을 포함할 수 있다.

"유전자 발현"이란 용어는 일반적으로 생물학적 활성이 있는 폴리펩티드가 DNA 서열로부터 생성되고 세포에서 생물학적 활성을 나타내는 세포 과정을 의미한다. 그런 의미로, 유전자 발현은 전사 및 해독 과정을 포함할 뿐만 아니라, 유전자 또는 유전자 산물의 생물학적 활성에 영향을 끼칠 수 있는 전사후 및 해독후 과정을 포함한다. 상기 과정들은 RNA 합성, 가공 및 수송뿐만 아니라, 폴립펩티드 합성, 수송 및 폴리펩티드의 해독후 변형을 포함하지만, 이들에 국한되는 것은 아니다. 단백질 산물을 암호화하지 않는 유전자, 예컨대, miRNA 유전자의 경우에, "유전자 발현"이란 용어는 전구체 miRNA가 유전자로부터 생성되는 과정을 의미한다. 통상, 상기 과정은, 단백질 암호 유전자에 대해 RNA 폴리머라제 II에 의해 유도되는 전사와는 달리, miRNA 유전자의 전사 산물이 해독되어 단백질을 생성하지 않지만, 전사로 언급된다. 그럼에도 불구하고, miRNA 유전자로부터 성숙 miRNA의 생성은 그 용어가 본원에 사용되는 대로 "유전자 발현"이란 용어에 의해 포함된다

"miR" 또는 "마이크로 RNA"는 표적 RNA의 분해(degradation)을 촉진시키거나 또는 그들의 번역을 억제시킴으로써 유전자 발현을 전사 후에 조절하는 21 내지 23개의 비코딩 RNA를 말한다. 본원에 사용된 miRNA의 성숙 서열은 miRNA 데이터베이스 (http://www.mirbase.org)에서 얻을 수 있다. 일반적으로 마이크로 RNA는 pre-miRNA라 불리는 헤어핀 구조를 갖는 약 70-80 nt (nucleotide) 길이의 전구체로 전사된 후, RNAse III 효소인 Dicer에 의해 잘려 성숙된 형태로 생성된다. 마이크로 RNA는 miRNP라 불리는 리보뉴클레오복합체를 형성하여 표적 부위에 상보적 결합을 통해 표적 유전자를 절단하거나, 번역을 억제한다. 30% 이상의 인간 miRNA는 클러스터로 존재하며, 하나의 전구체로 전사된 후, 절단과정을 거쳐 최종 성숙 miRNA가 형성된다.

"표적 유전자 (target gene)"란 용어는 본원에 개시되는 주제의 방법 및 조성물을 사용하여 조절하기 위해 표적으로 삼는 유전자를 의미한다. 그러므로, 표적 유전자는 그 발현 레벨이 mRNA 또는 폴리펩티드 레벨로 miRNA에 의해 하향 조절되는 핵산 서열을 포함한다. 유사하게, "표적 RNA" 또는 "표적 mRNA"란 용어는 miRNA가 결합하여 표적 유전자의 발현의 조절을 유도할 표적 유전자의 전사체를 의미한다

"전사 (transcription)"란 용어는 유전자의 암호 서열에 존재하는 구조 정보의 RNA로서 발현을 유도하는 유전자와 RNA 폴리머라제의 상호작용을 포함하는 세포 과정을 의미한다.

"하향 조절(down-regulation)"이라는 표현은, 정상조직세포에 비하여, 활성화된 세포에서 세포내 전사(gene transcription) 또는 번역(gene translation)에 의해서 특정 유전자의 mRNA로의 발현 또는 단백질로 발현량이 현저하게 감소된 것을 의미한다.

"도입"은 형질감염(transfection) 또는 형질도입(transduction)에 의해 외래 DNA를 세포로 유입시키는 것을 의미한다. 형질감염은 칼슘 포스페이트-DNA 공침전법, DEAE-덱스트란-매개 형질감염법, 폴리브렌-매개 형질감염법, 전기충격법, 미세주사법, 리포좀 융합법, 리포펙타민 및 원형질체 융합법 등의 당분야에 공지된 여러 방법에 의해 수행될 수 있다. 또한, 형질도입은 감염(infection)을 수단으로 하여 바이러스 또는 바이러스 벡터 입자를 사용하여 세포 내로 유전자를 전달시키는 것을 의미한다.

"유효량"은, 이롭거나 바람직한 임상적 또는 생화학적 결과에 영향을 주는 적절한 양이다. 유효량은 한번 또는 그 이상 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위하여, 저해제 화합물의 유효량은 질병 상태의 진행을 일시적으로 완화, 개선, 안정화, 되돌림, 속도를 늦춤 또는 지연시키는데 적절한 양이다. 만약, 수혜동물이 조성물의 투여에 견딜 수 있거나, 조성물의 그 동물에의 투여가 적합한 경우라면, 조성물은 "약학적으로 또는 생리학적으로 허용 가능함"을 나타낸다. 투여된 양이 생리학적으로 중요한 경우에는 상기 제제는 "치료학적으로 유효량"으로 투여되었다고 말할 수 있다. 상기 제제의 존재가 수혜 환자의 생리학적으로 검출가능한 변화를 초래한 경우라면 상기 제제는 생리학적으로 의미가 있다.

"치료"는 이롭거나 바람직한 임상적 결과를 수득하기 위한 접근을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해서, 이롭거나 바람직한 임상적 결과는 비제한적으로, 증상의 완화, 질병 범위의 감소, 질병 상태의 안정화 (즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감 (부분적이거나 전체적으로), 검출가능하거나 또는 검출되지 않거나의 여부를 포함한다. 또한, "치료"는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존율과 비교하여 생존율을 늘이는 것을 의미할 수도 있다. 치료는 치료학적 치료 및 예방적 또는 예방조치 방법 모두를 가리킨다. 상기 치료들은 예방되는 장애뿐만 아니라 이미 발생한 장애에 있어서 요구되는 치료를 포함한다.

"예방"은 관련 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본원의 조성물은 초기 증상, 또는 나타나기 전에 투여할 경우 관련 질환을 예방할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.

"약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 원소, 또는 단계 또는 원소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 원소, 또는 단계 또는 원소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 바람직하게는 miR-7는 서열번호 1로 표시되고, miR-18a은 서열번호 2로 표시되며, miR-18b은 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어질 수 있다. 특히, 상기 miR-7, miR-18a 및 miR-18b은 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)를 특이적으로 억제하는 활성을 가진다.

본 발명의 miRNA는 죽상동맥경화 및 당뇨 등 대사질환을 치료하기 위하여 LXRβ(Liver X receptor beta)를 표적으로 한다. LXRβ은 전사 인자(transcription factors)로 nuclear receptor family의 일종이다. 이들 전사이자가 지방세포에서 지방대사와 지방세포의 분화를 촉진하며, 특히 PPARγ를 통하여 인슐린 조절에 핵심적인 역할을 하며 혈중 콜레스테롤를 저하시키는 등 당뇨를 포함한 다양한 대사질환에 주요한 표적으로 생각되고 있다. 따라서, LXRβ의 발현을 효과적으로 억제하는 물질이 다양하게 연구되고 있으며, 본 발명에서는 miRNA를 이용하여 RNA 및 단백질 수준에서도 효과적으로 발현을 억제하는 물질을 발견한 것이다.

본 발명에서 이용할 수 있는 마이크로RNA(이하, miRNA 또는 miR라 함)는 인간을 포함한 동물, 예를 들어 원숭이(monkeys), 돼지(pigs), 말(horses), 소(cows), 양(sheeps), 개(dogs), 고양이(cats), 생쥐(mice), 토끼(rabbits) 등으로부터 유래할 수 있으며, 바람직하게는 인간 유래의 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR이고, 더욱 바람직하게는 miR-7, miR-18a 및 miR-18b가 각각 서열번호 1, 2 및 3인 것이다. 본 발명의 miRNA 핵산 분자는 18 내지 100 nt(nucleotide) 길이를 가질 수 있으며, 바람직하게는 성숙 miR-7, miR-18a 및 miR-18b로서 19 내지 25nt 길이, 더욱 바람직하게는 21, 22 또는 23nt 길이를 가진다. 또한, 본 발명의 miR-7, miR-18a 및 miR-18b 핵산분자는 50 내지 100nt, 바람직하게는 65-95nt 길이를 갖는 전구체 miR-7, miR-18a 및 miR-18b 핵산분자로서 제공될 수도 있다.

예를 들어, 인간 miR-7(Mirbase Accession No. MIMAT000252)은 mRNA의 발현에 매우 중요한 역할을 하며, mature miRNA는 환형동물(annelids)부터 인간에까지 완벽하게 보전되어 있어 매우 강한 기능 보전(functional conservation)에 역할을 하는 것으로 추측된다. 인간 miR-18a(Mirbase Accession No. MIMAT0000072) 및 miR-18b(Mirbase Accession No. MIMAT0001412)는 인간에서 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma)에서 활성화된 돌연변이가 나타나는 반면, 이들 클러스터가 다발성골육종(multiple cancer)에서 과발현이 관찰되기도 하였다.

본원에 따른 일 구현예에서, LXRβ의 발현을 억제할 수 있는 물질은 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR의 전구 및/또는 성숙 서열의 전부 또는 일부이며, 특히 표적 유전자의 씨드 서열에 상보적으로 결합하여, 이의 활성을 억제할 수 있는 miRNA분자이다.

본원에 따른 일 구현예에서, 본원의 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR 분자는 LXRβ의 씨드서열의 전부 또는 일부에 상보적인 서열을 포함한다. 씨드 서열은 표적분자의 인지에 매우 중요한 다양한 종에서 보존된 서열이다. miRNA는 씨드서열을 통해 표적과 결합하기 때문에, 씨드서열의 표적과의 상호작용을 억제하는 경우, 표적 mRNA의 번역 등을 효과적으로 억제할 수 있다. 시드 서열을 조사한 결과 도2의 종간에 보존되는 부위를 확인하였다. 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열내에서 178~185번째의 서열번호 4와 서열번호 5로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열 내에서 274~280번째의 염기서열을 확인하였고, 다양한 Bioinformatic toll을 통하여 이 부위에 특이적으로 결합하는 miRNA 후보물질을 도출한 것이다.

따라서, 본원에 따른 일 구현예에서 상기 miR-7은 서열번호 4로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열내에서 178~185번째의 염기서열 위치에서 결합하는 것이며, 상기 miR-18a 또는 miR-18b은 서열번호 5로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열 내에서 274~280번째의 염기서열 위치에서 결합하는 것이다.

따라서 본원의 LXRβ의 발현을 억제함으로써 다양한 대사관련 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 대사성 질환은 당질, 지질, 단백질, vitamine, mineral 및 수분 등의 불균형에 의한 질환을 의미하며, 고혈압, 당뇨, 장기능저하, 위장장애, 통풍, 고지혈증, 뇌졸중, 알코올성 간질환등을 포함한다. 바람직하게는 본 발명에서는 죽상동맥경화, 지방간, 당뇨, 고지혈증, 고혈압, 협심증 및 심근경색으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.

또한, 본 발명에서 사용되는 miR-7, miR-18a 및 miR-18b는 이를 구성하는 핵산 분자의 작용성 등가물, 예를 들어, miR-7, miR-18a 및 miR-18b 핵산 분자의 일부 염기서열이 결실(deletion), 치환(substitution) 또는 삽입(insertion)에 의해 변형되었지만, miR-7, miR-18a 및 miR-18b 핵산분자와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체(variants)를 포함하는 개념이다. 본 발명에서는 상기 변이체를 모방체(mimics)라고도 한다.

또한, 본 발명의 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR는 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 존재할 수 있다. 성숙 miRNA 분자는 주로 단일 가닥으로 존재하지만, 전구체 miRNA 분자는 주로 이중가닥 부분을 형성할 수 있는 적어도 부분적으로 자가-상보적인(예를 들어 스템- 및 루프-구조)이다. 또한, 본 발명의 핵산 분자는 RNA, DNA, PNA(peptide nucleic acids) 또는 LNA(locked nucleic acid) 같은 형태로 구성될 수 있다.

본 발명의 상기 핵산분자는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 화학적 합성 방법 또는 재조합 방법을 이용하여 분리 또는 제조하거나, 시판되는 것을 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 miRNA 핵산 분자 자체뿐만 아니라, 세포 내에서 본 발명의 miRNA의 발현율을 증가시킬 수 있는 기타의 물질, 예를 들어 화합물, 천연물, 신규 단백질 등을 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 조성물 내 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR 분자는 세포 내 발현을 위한 벡터에 포함되어 제공될 수 있다.

본 발명의 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR 분자는 DNA 및 DEAE-덱스트란의 복합체, DNA 및 핵 단백질의 복합체, DNA 및 지질의 복합체 등의 다양한 형질전환 기술을 이용하여 세포 내로 도입시킬 수 있는데, 이를 위해 상기 miR-7, miR-18a 및 miR-18b 핵산 분자는 세포 내로의 효율적인 도입을 가능하게 하는 전달체 내에 포함된 형태일 수 있다. 상기 전달체는 바람직하게는 벡터이며, 바이러스 벡터 및 비바이러스 벡터 모두 사용 가능하다. 바이러스 벡터(viral vector)로서 예를 들면, 렌티바이러스(lentivirus), 레트로바이러스(retrovirus), 아데노바이러스(adenovirus), 허피스바이러스(herpes virus) 및 아비폭스바이러스(avipox virus) 벡터 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 렌티바이러스 벡터이지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 렌티바이러스는 레트로바이러스의 일종으로 핵공(nucleopore)이나 완전한 핵막으로의 능동 도입을 가능하게 하는 사전-통합 복합체(바이러스 "쉘(shell)")의 친핵성으로 인해 분열 세포 뿐만 아니라 미분열 세포도 감염시킬 수 있는 특징이 있다.

또한, 상기 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR 분자를 포함하는 벡터는 선별마커를 추가로 포함하는 것이 바람직하다. 본 발명에서 용어 "선별마커(selection marker)"란 miR-7, miR-18a 및 miR-18b 핵산분자가 도입되어 형질전환된 세포의 선별을 용이하게 하기 위한 것이다. 본 발명의 벡터에서 사용할 수 있는 선별마커로는 벡터의 도입 여부를 용이하게 검출 또는 측정할 수 있는 유전자라면, 특별히 한정되지 않으나, 대표적으로 약물 내성, 영양 요구성, 세포 독성제에 대한 내성 또는 표면 단백질의 발현과 같은 선택가능 표현형을 부여하는 마커들, 예를 들어 GFP(녹색 형광 단백질), 퓨로마이신(puromycin), 네오마이신(Neomycin: Neo), 하이그로마이신(hygromycin: Hyg), 히스티디놀 디하이드로게나제(histidinol dehydrogenase gene: hisD) 및 구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(guanine phosphosribosyltransferase: Gpt) 등이 있으며, 바람직하게는 GFP(녹색 형광 단백질) 및 퓨로마이신 마커를 사용할 수 있다.

한편, 본 발명의 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR로 이루어진 핵산 분자를 포함하는 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제제화될 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 허용가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물은 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR의 핵산분자를 유효성분으로 포함하는 어떠한 제형으로도 적용가능하며, 경구용 또는 비경구용 제형으로 제조할 수 있다. 본 발명의 약학적 제형은 구강(oral), 직장(rectal), 비강(nasal), 국소(topical; 볼 및 혀 밑을 포함), 피하, 질(vaginal) 또는 비경구(parenteral; 근육내, 피하 및 정맥내를 포함) 투여에 적당한 것 또는 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.

본원에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 매우 다양하며, 적정한 투여량은 예를 들면 환자의 체내에 축적된 약물의 양 및/또는 사용되는 폴리뉴클레오타이드의 구체적 효능정도에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로 인비보 동물모델 및 인비트로에서 효과적인 것으로 측정된 EC50을 기초로 계산될 수 있으며, 예를 들면 체중 1kg당 0.01 μg 내지 1 g 일 수 있으며, 일별, 주별, 월별 또는 연별의 단위 기간으로, 단위 기간 당 일회 내지 수회 나누어 투여될 수 있으며, 또는 인퓨전 펌프를 이용하여 장기간 연속적으로 투여될 수 있다. 반복투여 횟수는 약물이 체내 머무는 시간, 체내 약물 농도 등을 고려하여 결정된다. 질환 치료 경과에 따라 치료가 된 후라도, 재발을 위해 조성물이 투여될 수 있다.

본원 조성물은 본원의 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR에 질환의 치료와 관련하여 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 또는 유효성분의 용해성 및/또는 흡수성을 유지/증가시키는 화합물을 추가로 함유할 수 있다. 또한 선택적으로, 화학치료제, 항염증제, 항바이러스제 및/또는 면역조절제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.

또한, 본 발명은 시험관 내에서 miR-7, miR-18a 및 miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 miR을 세포 내에서 처리하는 단계를 포함하는 세포 내에서 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 발현 또는 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 특히, 상기 miR-7는 서열번호 1로 표시되고, miR-18a은 서열번호 2로 표시되며, miR-18b은 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어진 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 miR-7, miR-18a, miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR를 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 증상을 개선 또는 예방할 수 있는 식품용 조성물을 제공할 수 있으며, 본 발명에 따른 상기 식품용 조성물은 대사성 질환 증상의 개선 또는 예방에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.

본원에서 상기 식품이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.

본원발명에 따른 상기 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

또한, 상기 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

또한, 본원발명에서 상기음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 대사성 질환 증상의 개선 또는 예방용 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

나아가 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 대사성 질환 증상의 개선 또는 예방을 위한 식품용 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

본원발명의 식품용 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 본 발명에 따른 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 90중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 40중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100ml를 기준으로 0.001g 내지 2g, 바람직하게는 0.01g 내지 0.1g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1>

miRNA 후보물질의 발굴

다양한 miRNA prediction program을 활용하여 human LXRβ를 target으로 하는 miRNA cadidates 조사하고자 하였다. 그래서 miRWALK 2.0 program (http://www.umm.uni-heidelberg.de/apps/zmf/mirwalk)을 활용하여 LXR 3’UTR을 target으로 하는 여러 개의 miRNA 후보군 발굴하였다. miRNA의 target site의 종간 conserved sequence를 확인하기 위해 Targetscan program (http://www.targetscan.org) 사용여러 가지 miRNA candidates 중 종 간의 conserved site를 가지는 miR-7, miR-18a, miR-18b를 도출하였다. 도1은 miRWALK 및 기타 프로그램을 이용하여 miRNA 후보물질을 도출한 결과를 보여준 것이며, 도2는 종간에 conserved sites를 찾은 결과이다. (a)는 서열번호 4로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열내에서 178~185번째의 염기서열 위치를 보여주는 것이며, (b)는 서열번호 5로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열 내에서 274~280번째의 염기서열 위치를 보여주는 것이다.

< 실시예 2>

Real - Time qPCR 수행

RNA 수준에서의 miRNA의 post-transcriptional regulation을 평가하기 위하여 도3의 실험 중 Real-Time qPCR을 수행하였다. Total RNA는 TRIZOL (Invitrogen) 을 사용하여 추출하고 Omni-script cDNA synthesis kit (Qiagen)으로 single-strand cDNA 합성하였다. HeLa cell line에 주요 miRNA cadidates인 miR-7, mir-18a, mir-18b와 상대적으로 적은 영향을 미칠 것으로 예상되는 miR-590, miR-613에 대한 mimic miRNA를 전달하였다(도4). Quantitative PCR을 위해 LightCycler 480 DNA SYBRGreen I master mix (Roche) 사용. Relative expression은 comparative ΔΔCt method로 계산하였다. 그 결과, 도5에서와 같이 miR-613을 제외한 모든 miRNA가 LXRβ의 RNA를 inhibition하고 있다는 사실을 확인하였다. 그 중에서도 예상과 같이 miR-7, miR18a, miR-18b가 비교적 강한 inhibition 작용을 하는 것으로 보였다(도 5 (b)).( *p<0.05, **P<0.001 control group과 비교)

< 실시예 3>

Western blotting 수행

단백질수준에서의 miRNA의 post-transcriptional regulation을 평가하기 위하여 도3의 실험 중 Western blotting을 수행하였다. protein은 RIPA buffer (ELPIS Bio)를 사용하여 추출하고 12% SDS-PAGE로 분리하였다. Western blotting을 위해 anti-LXRβ Rabbit polyclonal (abcam), anti-GAPDH (Santa cruz)의 antibody 사용하였다. protein 발현 비교를 위해 densitometry analysis 수행하였다. miRNA cadidates인 miR-7, mir-18a, mir-18b, miR-590, miR-613에 miRNA를 전달하였다. 그 결과, 도6과 57에서와 같이 Protein level에서는 5개의 miRNA candidates이 LXRβ protein 발현을 down-regulation하는 것을 확인할 수 있었다. ( *p<0.05, **P<0.001 control group과 비교)

< 실시예 4>

uciferase reporter assay 수행

Plasmid constructions을 위하여 PCR 반응으로 증폭시킨 human LXRβ 3’UTR은 pmiRGLO vector에 삽입하였다. 도8 및 10은 벡터의 개략도를 나타낸 것이다. Foward와 Reverse 방향으로 각각 삽입된 Recombinant plasmid 사용하였다. 도11(a)는 Dual-luciferase assay의 개략도를 보여주며, 도 11(b)는 pmirGLO 벡터의 MOA(mechanism of action)을 보여준다. miRNA validation assay를 위해 miR-7, miR-18a, miR-18b를 HeLa cell에 transfection하고 48hr 후에 실험하였다. 3’UTR activity 측정을 위해 10nM의 miR-7, miR-18a, miR-18b와 20ng의 pmirGLO/h_LXRb 3’UTR (Forward/Reverse form)을 제조하였다. pmiRGLO vector에 LXRβ 3’UTR forward form과 reverse form을 각각 cloning하여 삽입한 후 HeLa cell line에 miRNA candidates과 함께 co-transfection하여 48hr 후 activity 측정하였다. Luciferase assay는 Dual-Luciferase Assay kit (Promega)을 사용하였다. 3’UTR activity는 Firefly luciferase activity로 계산되었고 Renilla luciferase activity로 normalization 하였다. 그 결과는 도9 및 도10에 나타내었다. 그래프로 보여주는 도10(a)는 forward 형태로 삽입한 것으로 miR7, miR18a 및 miR18b가 확연히 감소된 활성을 보여 주어 발현이 억제되는 것을 보여주었으며, reverse 형태로 삽입된 도10 (b)에서는 DNA construct에서는 activity 변화가 없으므로 miRNA candidates이 LXRβ 3’UTR에 specific binding을 통한 조절을 한다고 할 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> Industry Academic Cooperation Foundation of Catholic University <120> Pharmaceutical composition comprising miR-7, miR-18a or miR-18b for prevention or treatment of metabolic disease <130> pn1504-086 <160> 5 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 23 <212> RNA <213> miR-7 sequence <400> 1 uggaagacua gugauuuugu ugu 23 <210> 2 <211> 23 <212> RNA <213> miR-18a sequence <400> 2 uaaggugcau cuagugcaga uag 23 <210> 3 <211> 23 <212> RNA <213> miR-18b sequence <400> 3 uaaggugcau cuagugcagu uag 23 <210> 4 <211> 8 <212> RNA <213> seed position 8mer(178 ~185) of LXR beta 3-UTR <400> 4 gucuucca 8 <210> 5 <211> 7 <212> RNA <213> seed position 7mer(274 ~280) of LXR beta 3-UTR <400> 5 gcaccuu 7

Claims (10)

1. miR-7, miR-18a 및 miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 miR을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 miR-7는 서열번호 1로 표시되고, miR-18a은 서열번호 2로 표시되며, miR-18b은 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 miR-7, miR-18a 및 miR-18b은 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)를 특이적으로 억제하는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 대사성 질환은 죽상동맥경화, 지방간, 당뇨, 고지혈증, 고혈압, 협심증 및 심근경색으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 서열번호 4로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열내에서 178~185번째의 염기서열 위치에서 결합하는 miR(microRNA)을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
6. 제5항에 있어서,
   상기 miR은 서열번호 1로 표시되는 miR-7인 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 서열번호 5로 표시되는 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 3‘UTR 서열 내에서 274~280번째의 염기서열 위치에서 결합하는 miR(microRNA)을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
8. 제7항에 있어서,
   상기 miR은 서열번호 2로 표시되는 miR-18a 또는 서열번호 3으로 표시되는 miR-18b인 것을 특징으로 하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
9. 시험관 내에서 miR-7, miR-18a 및 miR-18b로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 miR을 세포 내에서 처리하는 단계를 포함하는, 세포 내에서 간 X 수용체 베타(Liver X recptor beta)의 발현 또는 활성을 억제하는 방법.
10. 제9항에 있어서,
    상기 miR-7는 서열번호 1로 표시되고, miR-18a은 서열번호 2로 표시되며, miR-18b은 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 방법.

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