KR20130040664A

KR20130040664A - 옻나무 추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물

Info

Publication number: KR20130040664A
Application number: KR1020110105586A
Authority: KR
Inventors: 나천수; 윤순영; 김진범; 노현정; 엄나나; 이태후
Original assignee: (주)생명의나무
Priority date: 2011-10-14
Filing date: 2011-10-14
Publication date: 2013-04-24

Abstract

본 발명은 옻나무 (Rhus verniciflua Stokes) 추출물을 유효성분으로 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물에 관한 것으로, 옻나무 추출물의 에틸아세테이트분획, 단일물질을 통해 모두유 세포(HHDPC)와 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포 활성도를 통해 모발 관련 세포 증식과 염증성 질환을 초래하는 NO 생성을 억제하여 탈모예방을 제공하는 옻나무 추출물을 함유하는 건강기능식품, 샴푸, 영양 화장수, 헤어 토닉, 헤어 로션, 헤어 비누, 연고제의 형태로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

옻나무 추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물{A cosmetic composition comprising an extract of Rhus verniciflua Stokes for trichogenousness}

본 발명은 옻나무 (Rhus verniciflua Stokes) 추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 옻나무 추출물의 모유두 세포(HHDPC)와 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포 활성도를 통해 발모촉진 및 탈모예방을 제공하는 옻나무 추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물을 제공하는데 있다.

탈모란 모발이 빠져 성기거나 소실된 상태를 말하며, 인간의 머리카락 개수는 약 10만개 내지 15만개 정도로서, 성장기(anagen), 퇴행기(catagen) 및 휴지기(telogen)이라는 고유의 주기를 갖고 성장 및 탈락을 반복하고, 하루 평균 100개가량의 머리카락이 자연적으로 탈모된다. 탈모의 기전이 정확히 밝혀진 바는 없으나, 현재까지 연구된 바로는 호르몬 불균형 등 내분비계 이상, 자율신경계 및 혈액순환 장애 등의 순환계 이상으로 인한 과도한 피지 생성, 모근의 영양 결핍, 알레르기, 세균 감염, 유전적 요인, 정신적 스트레스, 대기오염 또는 음식물 등의 환경적 요인 및 노화 등이 그 원인으로 추정되고 있다. 탈모증은 과거 중장년층에서만 발생되었으나, 최근에는 20~30대의 젊은 층에서도 빈번하게 발생되고 있다.

남성 탈모의 가장 흔한 유형은 남성형 탈모증(male pattern baldness) 또는 탈모증(alopecia)이며, 이는 수년에 걸쳐 점차적으로 발생되고, 머리의 정수리에서 가장 뚜렷하게 시작되어 전두 부위로 진행한다. 여성 탈모의 경우는 모발의 굵기가 가늘어지면서 보다 더 분산된 형태로 발생되며 흔히 폐경기 이후에 나타난다.

탈모증을 완화 또는 치료하기 위해서 많은 연구들이 진행되고 있으며, 특히 모발 성장을 자극하거나 탈모 현상을 완화하기 위한 신물질 개발을 위해서 화장품 또는 제약 산업 분야에서 오래전부터 연구가 이루어져 왔고, 이에 따라 여성 호르몬제, 혈류 촉진제 등을 사용하는 약물요법과 모발 이식법 등이 개발된 상태이다. 현재, 탈모 치료에 가장 많이 사용되는 약물로는 FDA에서 승인을 받은 바 있는 2,4-디아미노-6-피페리디노피리미딘-3-옥사이드(일명 '미녹시딜(Minoxidil)' 제제, 미국특허 제4,139,619호 및 제4,596,812호 참조)와 II형 5α-환원효소의 특정 억제제인 피나스테라이드 (finasteride)를 들 수 있다.

미녹시딜 제제는 혈관 확장 효과를 통하여 혈류량을 증가시키고 모근에 영양분을 공급함으로써 모발 성장을 유도하는 약물로서, 특히 가마 부위의 탈모 증상 완화에 대해서 효과가 좋은 것으로 알려져 있고, 이를 활성 성분으로 사용하는 의약품은 상품명 로게인(Rogaine, Pharmacia & Upjohn Company의 상표명)으로 시판되고 있다.

로게인은 남성형 탈모증을 앓고 있는 남성의 경우 10%까지 탈모를 감소시키고 모발 성장을 촉진하는 것으로 알려져 있지만, 두피 부위에 외부에서 직접적으로 적용하여야 하며, 규칙적으로 장기간에 걸쳐 사용하여야 하고, 가마 부위 이외 부위의 탈모에 대해서는 그다지 좋은 효과를 발휘하지 못한다는 단점이 있다.

피나스테라이드를 활성 성분으로 사용한 의약품은 상품명 프로페시아 (Propecia, Merck & Co., Inc.의 상표명)로 시판되고 있으며, 이는 경구투여용 환제로서 II형 5α-환원효소의 기능을 억제하여 테스토스테론이 디하이드로테스토스테론 (Dihydrotestosterone, DHT)로 전환되는 것을 방지함으로써 탈모를 억제하는 것으로 알려져 있다. 그러나 이 역시 지속적이고 규칙적인 복용을 필요로 하며, 일부 환자들에 대해서는 성욕 감퇴, 발기 부전등의 부작용을 나타낸다는 문제점이 있다.

그 밖에도 천연 식물 추출물을 기본으로 조성물 사용법 또는 모발 이식법 등이 탈모 방지 및 발모 촉진 방법으로 사용되고 있다. 그러나 천연 식물 추출물의 경우, 모발 또는 탈모증의 상태가 개인마다 다양하기 때문에 모발 성장에 긍정적인 효과를 발휘하지 못하고, 피부자극 또는 불쾌한 냄새 등으로 인해서 장기간에 걸친 지속 사용에 어려움이 있으며, 모발 이식법 역시 식모 후 탈리 현상, 추가 이식 수술의 필요성, 고비용 등의 문제점이 있다.

따라서 미녹시딜 제제 또는 피나스테라이드 제제가 갖는 문제점을 극복할 수 있으면서도, 기타 천연 식물 추출물 조성물이나 모발 이식법에 비해서 효과 및 효능이 우수하며, 약물 전달력 및 안정성이 우수한 탈모 방지 및 발모 촉진 화합물의 개발이 요구되어 왔다.

또한 상기 약제 중 일부는 정맥주사나 복강 주사로 투여하는 경우가 있는데, 이 경우에는 번거로울 뿐 아니라, 반복된 정맥주사 등은 앨러지, 쇼크 뿐 아니라, 위생상의 문제도 생길 수 있다. 따라서 먹기에 간편하면서, 안전한 치료제가 필요하게 되었다.

발모제와 관련하여 한국특허공개 제2003-93661호는, 쑥, 백작약, 숙지황, 당귀의 혼합추출물 1 ~ 25% 중량부와, 황기, 석창포, 은행잎의 혼합추출물 25 ~ 35% 중량부와, 뽕잎추출물 10 ~ 20% 중량부와, 인삼잎 추출물 20 ~ 30% 중량부로 이루어짐을 특징으로 하는 생약재를 이용한 발모 촉진제 조성물에 대하여 개시하고 있다.

또한, 한국특허등록 제298647호는 정선, 세척, 세절, 멸균 및 건조공정의 순서로 전처리한 버드나무속껍질, 유근피, 상수리나무피, 하수오, 복분자, 감초, 복숭아씨, 측백나무잎, 청호도껍질 및 보골지 각각을 준비하는 단계와, 전처리된 버드나무속껍질, 유근피, 상수리나무피, 하수오, 복분자, 감초, 복숭아씨, 측백나무잎, 청호도껍질 및 보골지 각각에 이들과 동일한 양의 추출용매를 가하여 20내지 120℃의 온도에서 20분내지 72시간 동안 침지하여 착즙, 추출한 후 여과하는 단계와, 상기 각각의 추출물을 버드나무속 껍질 추출물 20 내지 50중량%, 유근피 추출물 5 내지 20중량%, 상수리나무피 추출물 5 내지 10중량%, 하수오 추출물 5 내지 30중량%, 복분자 추출물 5 내지 20중량%, 감초 추출물 5 내지 20중량%, 복숭아씨추출물 3 내지 10중량%, 측백나무잎 추출물 5 내지 20중량%, 청호도껍질 추출물 3 내지 20 중량% 및 보골지 추출물 5 내지 20 중량%로 혼합하여 생약재 추출물을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 발모 촉진제의 제조방법에 대하여 개시하고 있다.

본 출원인은 발모에 효능이 있는 많은 식물중 옻나무 추출물이 발모촉진 및 탈모 예방의 효능 효과를 연구하던 중 그 우수성을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 옻나무 열수추출물, 옻나무 열수추출물의 아틸아세테이트분획, 옻나무 열수추출물에서 분리된 단일물질을 통해 모유두 세포(HHDPC)와 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포 활성도를 통해 모발 관련 세포 증식과 염증성 질환을 초래하는 NO 생성을 억제하여 탈모예방을 제공하는 옻나무 열수추출물을 함유하는 발모촉진용 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 옻나무 추출물을 통해 발모촉진 및 탈모예방을 제공하는 옻나무 열수 추출물의 단일성분을 분획하고 그 구조 및 형상을 제공하는 발모촉진 및 탈모예방을 위한 기능성 식품 및 치료용 약학 조성물을 제공하는 조성물에 관한 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 제 1 특징에 따르면, 옻나무를 열수추출 및 C1-4 저급 알코올, 주정 알코올, 아세톤 추출 또는 열수추출 후 C1-4 저급 알코올, 주정 알코올 담금으로 얻어진 옻나무 추출물을 주성분으로 발모촉진 및 탈모예방 조성물을 제공한다.

이때, 본 발명의 부가적인 특징에 따르면, 상기 옻나무 열수 추출물로 분획된 C₁₅H₁₂O₆(분자량 288)이며 백색의 결정체를 갖는 푸스틴(Fustin; 3,3',4',7-tetrahydroxyflavanone), C₁₅H₁₀O₆(분자량 286)이며 황색의 결정체를 갖는 피세틴(Fisetin; 3,3',4',7-Tetrahydroxyflavone), C₁₅H₁₀O₅(분자량 272)이며 진한 오렌지색의 결정체를 갖는 설푸레틴(Sulfuretin; 3',4',6'-Trihydroxyaurone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)이며 오렌지색의 결정체를 갖는 부테인(Butein; 2',3,4,4'-Tetrahydroxychalcone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)인 Garbanzol, C₁₅H₁₀O₇(분자량 302)인 Quercetin, C₁₅H₁₀O₅(분자량 270)인 5-deoxykaempferol, C₆H₆O₂(분자량 110)인 Resorcino, C₇H₆O₄(분자량 154)인 3,4-Benzoic acid, C₇H₆O₄(분자량 154)인 2,4-Benzoic acid, C₇H₆O₅(분자량 170)인 Gallic acid, C₉H₈O₄(분자량 180)인 Caffeic acid, C₉H₁₁O₄N₅(분자량 253)인 Adenosin 또는 C₆H₅O₂N(분자량 123)인 Niacin의 단일성분물질을 함유하는 것이 바람직하다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 제 2 특징에 따르면, 상기 옻나무 추출물에서 분획된 단일물질의 유효성분을 통해 모유두세포(HHDPC) 및 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포 증식을 통해 발모촉진을 제공하고, 염증성 질환을 초래하는 NO 생성을 억제하여 탈모를 예방할 수 있는 옻나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 건강기능식품을 제공한다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 제 3 특징에 따르면, 상기 조성물은 통상의 제조 방법에 따라 샴푸, 영양 화장수, 헤어 토닉, 헤어 로션, 헤어 비누, 연고제로 제형화할 수 있는 옻나무 추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 옻나무 열수추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물은 모유두 세포(HHDPC)와 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포 활성도를 통해 옻나무 추출물 시료에 의한 Cell Proliferation의 활성에 효과가 있다.

또한, 본 발명에 의한 옻나무 열수추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물은 염증성 질환을 초래하는 NO 생성의 억제를 통해 탈모를 예방할 수 있는 효과를 제공한다.

또한, 본 발명에 의한 옻나무 열수추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물은 통상의 건강식품의 담체와 혼합하여 건강기능식품 또는 발모에 적용할 수 있는 샴푸, 영양 화장수, 헤어 토닉, 헤어 로션, 헤어 비누, 연고제의 형태로 다양하게 제형화할 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물의 분말을 제조하는 공정을 도시한 흐름도
도 2a 내지 도 2b는 본 발명에 따른 옻나무 추출물의 분획된 단일물질의 화학구조식
도 3은 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물에 대한 모유두세포(HHDPC)와 각질 형성 세포(HaCaT)의 증식률을 MTT assay를 통하여 세포 활성도를 나타내는 그래프.
도 4는 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물의 음성 및 양성대조군에 대해 NO 생성억제 효능을 제시한 그래프.
도 5는 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물을 도포한 마우스의 모성장기 상태를 도시한 마우스 사진
도 6은 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물을 이용한 경구 투여 그룹의 마우스의 모성장기 상태를 도시한 마우스 사진
도 7은 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물을 도포한 마우스의 피부촬영상태를 통해 모발의 밀도 및 굵기의 변화를 촬영한 마우스 사진 및 그래프
도 8은 본 발명에 따른 옻나무 열수추출물을 이용한 경구 투여 그룹의 마우스의 피부촬영상태를 통해 모발의 밀도 및 굵기의 변화를 촬영한 마우스 사진 및 그래프

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명한다.

본 발명은 발모에 효능이 있음을 실험을 통해 입증한 것으로서 본 발명의 발모에 사용되는 옻나무 추출물은 옻나무에서 추출된 것으로서, 일반적으로 옻나무(Rhus verniciflua Stokes)는 옻나무과 (Anacardiaceae)에 속하는 낙엽 활엽소교목으로 중앙아시아 고원지대 및 히말라야 지방이 원산지로 알려져 있으며, 현재 전세계적으로 열대지방을 중심으로 한 아열대지방과 온대지방에 널리 분포하고 있고, 낙엽 또는 상록성으로 대부분이 교목 또는 관목성이나 일부는 덩굴성으로 자라는 것으로 알려져 있다

구체적으로 옻나무의 줄기는 곧게 올라가며 잎은 기이하게 생겼으며 가시가 나있고 여러 잎이 하나의 잎으로 공생하고 잎의 끝과 끝을 포함하여 25～40cm정도이다.

작은 잎은 7～20cm, 너비 3～6cm의 알 모양 또는 둥근 알 모양으로 9～13개이다. 꽃은 암,수로서 연한 녹황색으로 피며 뾰족하며 둥근 모양으로 꽃이 피며 밑으로 쳐지고 길이 15～25cm이다. 열매는 지름 6～8mm의 편구형 열매로 10월에 연한 황색으로 익는다.

옻나무의 수액을 옻이라 하는데, 옻은 칠공예 및 산업용의 천연도료로 이용되고 있으며 한방에서는 구충, 복통, 통경, 변비, 어혈, 여인 경맥불통에 건칠을 이용해 왔으며, 내약품성이 있어 비행기, 선박 빛 해저광케이블 증에 사용되는 특수 외장도료로서 활용될 수 있다. 더욱이 동양에서는 예로부터 약용으로 사용되어 왔고, 한의학에서는 내과종양치료제 및 여성의 생리기 이상, 위장약, 구충제, 혈액 순환 및 노화방지의 민간요법 등에 이를 이용하는 처방이 전래되고 있다(Hota, M. 1989. 세계 유용식물사전, 평범사(일본) 910-2). 특히 한국에서는 몸 보신용 또는 약용으로 옻나무를 옻닭, 옻오리 등에 이용하여 왔다.

옻나무 수액(옻칠액)의 주요성분은 우루시올(Urushiol)이며, 주용도는 칠공예에 사용되며 성상은 진갈색 액체로서 유기용매에 잘 용해된다. 화학적 구조는 곁사슬의 탄소수가 15~17개가 주종을 이루며 불포화 결합이 다수 존재한다.

옻의 주된 약리작용은 항암, 항산화, 숙취해소 작용 등이 알려져 있으며, 위장병, 심장병, 관절염, 고혈압, 당뇨, 중풍, 만성피로 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 다양한 약리작용이 있음에도 불구하고 상업적으로 널리 이용되지 못한 것은 인체에 대한 알러지 유발 성질 때문인 것으로 알려져 있다.

최근에 이루어진 연구결과를 보면 옻칠액의 주성분이며 알레르기를 유발하는 옻산성분이 강한 항암, 항산화 및 항균활성이 있는 것으로 보고되었으며, 옻나무의 수피 및 목부에서 추출된 flavonoids성분이 혈관형성 억제작용을 나타내어 암세포의 증식 및 전이를 억제하고 암세포를 정상세포로의 분화를 유도하는 항암효과가 확인되었고 또한 항산화, 숙취해소 및 위염억제효과도 있다는 것이 밝혀졌다. 칠액이 固化된 것을 분쇄하여 분말로 만든 것을 乾漆이라 하는데 한방 및 민간에서는 혈액촉진, 위산과다, 생리통, 어혈제거, 펀도선염, 구충제로 쓰인다.

옻나무가 가진 약리적 효능을 그대로 가지면서 부작용 없이 섭취할 수 있는 방법의 개발은 국민의 건강회복 및 건강증진을 위하여 요구되어 왔으며 일부 기술이 개발되고 있다. 본 발명자 및 출원인은 지금까지 옻나무 관련 연구를 지속적으로 추진한 결과, 옻나무를 통해 발모에 효능이 있음을 추출물 또는 경구 투여 등 의 다양한 동물실험을 그 효능을 입증하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명에 따른 옻나무는 통상의 추출방법에 의해 추출된 옻나무 추출물을 사용한다.

1. 실험방법

1.1 옻나무로부터 물질 분리

(단계 1) 옻나무 추출물 분말의 제조

도 1에 도시된 바와 같이 옻나무추출분말을 얻기 위해서는, 옻나무의 목재부를 절단하여 그늘에서 1 주일 내지 3 개월 정도 건조한 후, 5cm내지 15cm 길이로 절단하여 목재칩이나 톱밥으로 제조하여 사용한다. 옻나무 무게 10배수의 음용수을 넣고 80 내지 120℃에서 4시간 동안 2회 열수 추출한다.

또는 용매로서 메탄올, 주정알코올 등을 동량 가하여 20 내지 60℃ 온도로 추출한다. 아세톤을 동량 가하여 35℃에서 45℃의 수조에서 1일 내지 10일 방치하거나 실내에서 10일 내지 30일 동안 방치하여 노란색의 추출액을 얻을 수 있다.

상기와 같이 옻나무를 열수 추출하여 얻어진 추출물에 C1-4 저급 알코올, 주정 알코올 담금을 하여 얻어진 주정 알코올 가용물을 열풍건조, 동결건조 또는 진공건조 방법으로 건조한다.

이때, C1-4 저급 알코올은 메탄올, 에탄올을 주정의 형태로 사용하거나, 주정알코올로 사용할 수도 있다.

상기에서 옻나무추출분말을 추출과정에서 옻나무의 목재부를 절단하여 그늘에서 1 개월 정도 건조하거나, 10cm 길이로 절단하여 사용할 수도 있으며, 옻나무 무게 10배수의 음용수을 넣고 100℃에서 4시간동안 2회 추출할 수도 있다.

또한, 아세톤을 동량 가하여 40℃의 수조에서 5일 동안 방치하거나 실내에서 10일 내지 30일 동안 방치하여 노란색의 추출액을 얻을 수도 있다.

(단계 2) 옻나무의 물질 분리 과정

상기 (단계 1)에서 얻은 옻나무의 추출물을 헥산으로 분획하여 비극성 부분을 분리하고, 남은 수층을 에틸아세테이트로 분획하여 감압 농축한다. 이렇게 극성별로 나누어진 헥산층, 에틸아세테이트층, 물 층의 분획들에서 에틸아세테이트분획을 silica gel로 세 분획 하고 다시 여러 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 각각의 세 분획에서 계속하여 유효성분들을 분리한다.

분획 및 물질의 분리는 silica gel 뿐 아니라, sephadex LH-20, ODS-A, diol, preparative MPLC, 또는 preparative HPLC 등의 다양한 크로마토그래피법을 이용하여 시행하였다.

본 발명에 따른 옻나무 열수추출물을 극성에 따라 분획하고 각각의 분획에서 에틸아세테이트분획 silica gel을 포함한 여러 가지 column을 사용하여 분리를 시도하여 1D NMR과 2D NMR 방법을 이용하여 구조를 동정하고 LC/MS, UV, IR과 같은 최신 기기를 사용하여 14종의 단일 물질의 구조 확인을 완료하였다.

상기의 절차에 의해 분획된 14종의 단일물질은 첨부된 도 2a 내지 도 2b에서 제시된 화학구조식을 가지며 각각의 분자식은 C₁₅H₁₂O₆(분자량 288)이며 백색의 결정체를 갖는 푸스틴(Fustin; 3,3',4',7-tetrahydroxyflavanone), C₁₅H₁₀O₆(분자량 286)이며 황색의 결정체를 갖는 피세틴(Fisetin; 3,3',4',7-Tetrahydroxyflavone), C₁₅H₁₀O₅(분자량 272)이며 진한 오렌지색의 결정체를 갖는 설푸레틴(Sulfuretin; 3',4',6'-Trihydroxyaurone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)이며 오렌지색의 결정체를 갖는 부테인(Butein; 2',3,4,4'-Tetrahydroxychalcone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)인 Garbanzol, C₁₅H₁₀O₇(분자량 302)인 Quercetin, C₁₅H₁₀O₅(분자량 270)인 5-deoxykaempferol, C₆H₆O₂(분자량 110)인 Resorcino, C₇H₆O₄(분자량 154)인 3,4-Benzoic acid, C₇H₆O₄(분자량 154)인 2,4-Benzoic acid, C₇H₆O₅(분자량 170)인 Gallic acid, C₉H₈O₄(분자량 180)인 Caffeic acid, C₉H₁₁O₄N₅(분자량 253)인 Adenosin 또는 C₆H₅O₂N(분자량 123)인 Niacin 등이 포함되어 있다.

2. In vitro 에서의 모발 관련 세포 증식

2.1 세포 배양 및 증식

옻나무의 HHDPC(Human Hair Dermal Papilla Cell) 및 HaCaT(Human Keratinocyte를 사용하여 시료에 의한 세포 증식을 확인하기 위해 인간 모유두세포는 Mesenchymal Stem Cell Media (MSCM) (5% FBS, 1% MSCGS, 10,000U/ml streptomycin, penicillin 첨가), 각질형성세포는 RPMI-1640 (5% FBS, 1% antibiotics)이 담긴 96 well plate에서 37℃, 5% CO₂의 환경에서 배양하였다. 준비된 시료를 각각 0.01, 0.1, 1, 10ppm의 농도로 처리하였고 대조군으로는 배지 (MSCM)를 처리하고, 시료 처리군과 같은 환경조건에서 24-72시간 배양하고, Cell Proliferation rate를 ELISA방법으로 측정하였다. 발모제로 알려진 Minoxidil 및 Finasteride와 모발 관련 세포 증식 효능과 비교하였다.

2.2 Raw 264.7 cell을 통한 염증성 Cytokine 발현량 확인

Murine macrophage Raw 264.7을 이용하여, 발효옻 추출물과 염증 반응을 유도하는 LPS을 처리하여, 생성되는 염증 산물 중의 하나인, NO의 생성량을 확인하였다. 자극에 의하여 과량 생성된 NO는 염증성 질환을 초래하는 것으로 알려져 있다. LPS를 처리하여 생성된 NO의 량은 Griess reagent를 이용하여 측정하였고, 각각의 옻나무추출물(0.1, 1, 10, 50ppm)을 동시 처리하여 NO 생성이 억제되는지 확인하였다.

3. 옻나무 추출물의 In vivo 발모촉진 규명

3.1 마우스 실험

본 발명에 적용되는 생후 47 ~ 53일된 마우스(C57BL/6)의 등 부위 털에 wax-rosin 혼합물을 바른 후 털을 제거하고 동시에 모발이 생장기로 유도되도록 적절한 약물을 처리하여 생장기 모발이 더욱 잘 자라는지 (모발생장 증가; raising proliferlation rates)확인하였다.

일반적인 C57BL/6 마우스의 피부색 변화는 7일째 anagen 5기에 진입하면서 회색빛에서 검은색으로 바뀌기 시작하여 11일에서 14일째에는 anagen 6기로서 가장 활발하게 모발 성장이 진행되는 시기이다.

3.2 옻나무 추출물 처리

옻나무추출물을 통한 모발의 육모 촉진 효과를 알아보기 위해 옻나무추출물을 50, 100, 200mg/ml의 용량으로 매일 도포하였다. 또한 50, 100, 200mg/kg의 농도로 경구투여 하였다.

3.3 형태학적 변화의 관찰

모발의 육모 촉진의 진행 과정을 관찰하기 위해 실험 실시 1일 후 부터 2-3일 간격으로 digital camera (CAMEDIA, OLYMPUS)를 이용하여 각 군별로 일정거리에서 촬영하여 모발의 변화를 육안으로 관찰하였다.

3.4 조직학적 변화의 관찰

실험 실시 후 1주일 간격으로 3주 간, 실험용 마우스의 조직을 채취한 후, Hematoxylin & Eosin staining 법을 사용하여 현미경을 이용하여 피부 조직 내에서의 변화를 관찰하였다.

3.5 통계분석

실험결과는 평균±표준편차로 표시하고 실험 데이터는 repeated ANOVA를 사용하여 분석하며 유의수준은 P<0.05로 하였다.

4. 실험결과

4.1 옻나무의 HHDPC(Human Hair Dermal Papilla Cell) 및 HaCaT(Human Keratinocyte를 이용한 모발 형성 능력 확인.

도 3에 도시된 바와 같이 옻나무 추출물에 대한 모유두세포(HHDPC)와 각질 형성 세포(HaCaT)의 증식률을 MTT assay를 통하여 세포 활성도를 나타낸 것으로 옻나무 추출물 시료의 농도는 0.01, 0.1, 1, 10 ppm 을 사용하여 MTT assay를 통해 cell proliferation을 측정한 결과 control과 비교시, 옻나무 추출물 10ppm 시료 처리에 의한 인간 모유두세포(HHDPC) 증식률은 33% 각질형성세포(HaCaT) 증식률은 28% 증가하였다.

즉, 인간 모유두세포(HHDPC), 각질형성세포(HaCaT)를 사용하여 옻나무 추출물 시료에 의한 Cell Proliferation 증가율을 확인하였다.

또한, 발모제로 알려진 Minoxidil 및 Finasteride와 모발 관련 세포 증식 효능과 비교하여도 옻나무 추출물의 증식률이 20% 이상 증식률이 증가함을 알 수 있다.

4.2 Raw 264.7 cell을 통한 염증성 Cytokine 발현량 확인

Murine macrophage Raw 264.7을 이용하여, 옻나무 추출물과 염증 반응을 유도하는 LPS을 처리하여, 생성되는 염증 산물 중의 하나인, NO의 생성량을 확인한 결과, 도 4에서 도시된 바와 같이 자극에 의하여 과량 생성된 NO는 염증성 질환은 LPS를 처리하여 생성된 NO의 량은 Griess reagent를 이용하여 측정한 결과, 옻나무 추출물 50ppm 의 경우 음성대조군인 LPS 처리군에 비하여 65% NO 생성을 억제하였고, 양성대조군인 항염작용 약품으로 사용되고 있는 dexamethasone과 비교하여도 37% 의 NO생성 억제 효능이 있음을 확인하였다.

4.3 마우스 실험

본 발명에 적용되는 생후 47 ~ 53일된 마우스(C57BL/6)의 등 부위 털에 wax-rosin 혼합물을 바른 후 털을 제거하고 동시에 모발이 생장기로 유도되도록 적절한 약물을 처리하여 모발생장 증가(raising proliferlation rates)는 일반적인 C57BL/6 마우스의 피부색 변화는 7일째 anagen 5기에 진입하면서 회색빛에서 검은색으로 바뀌기 시작하여 11일에서 14일째에는 anagen 6기로서 가장 활발하게 모발 성장이 진행되는 시기이다.

그 결과 첨부된 도 5에 제시된 옻나무 추출물 도포 그룹 및 도 6에 제시된 바와 같이 경구 투여 그룹의 경우, depilation 후 7일째 피부색은 회색빛으로 다른 그룹과 유사하게 모발주기가 진행되었지만, 9일째 짧은 털이 등을 덮으면서 음성대조군에 비하여 약 1-2일 정도의 모성장기 촉진되는 것을 확인하였고, 양성대조군인 minoxidil 그룹과도 비슷한 속도의 모성장기가 진행되었다.

C57BL/6 마우스의 피부색이 회색빛으로 변하는 건 휴지기에서 생장기로 돌아감을 뜻하는 것으로 마우스의 모성장기를 약 1-2일 앞당겼다는 것은, 옻나무 추출물 시료가 모성장기 촉진과 성장기 유지에 유의적인 효과가 있음을 알 수 있었다.

4.4 형태 및 조직학적 변화의 결과

상기 제모된 마우스 모델을 통한 성장기 유도 후, 옻나무 추출물을 처리한 mouse피부의 접촉식 피부촬영장치(Aramo-MDS, aramhuvis)를 사용하여 모발의 밀도와 굵기의 변화를 확인한 결과, 첨부된 도 7 내지 도 8에서 제시된 바와 같이 옻나무 추출물 시료의 도포와 경구투여에 의한 모발의 밀도 및 굵기의 변화는 대조군 및 양성대조군(Minoxidil 투여그룹)에 비하여 모발의 밀도 및 굵기가 모두 증가한 것을 확인하였다.

5. 조성물 실시예

본 발명에 따른 옻나무 추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물은 통상의 건강기능식품, 영양 화장수, 헤어토닉, 헤어 로션, 헤어 비누 등은 하기와 같은 다양한 경로를 통하여 투여 가능한 제품을 만들 수 있으며 이에 제한되는 것은 아니다.

5.1 옻나무 추출물을 함유하는 건강기능식품

- 건강기능식품은 음료 또는 정제, 캅셀, 분말, 액상, 과립, 환, 바(Bar), 페이스트상, 시럽, 겔 편상 등의 형태로 제조가 가능하며, 옻나무 추출물의 일정성분과 통상의 음료 또는 약제 성분을 혼합하여 해당 건강기능식품을 제조할 수 있다.

5.2 옻나무 추출물을 함유한 화장수 조성물

- 화장수 조성물은 샴푸, 영양 화장수, 헤어 토닉, 헤어 로션, 헤어 비누, 연고제 등의 형태로 제조가 가능하며, 옻나무 추출물의 일정성분과 통상의 화장수 성분을 혼합하여 해당 화장수 조성물을 제조할 수 있다.

이상의 본 발명은 상기에 기술된 실시예들에 의해 한정되지 않고, 당업자들에 의해 다양한 변형 및 변경을 가져올 수 있으며, 이는 첨부된 청구항에서 정의되는 본 발명의 취지와 범위에 포함된다.

Claims

옻나무를 열수추출 및 C1-4 저급 알코올, 주정 알코올, 아세톤 추출 또는 열수추출 후 C1-4 저급 알코올, 주정 알코올 담금으로 얻어진 옻나무 추출물을 주성분으로 포함하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물
제 1 항에 있어서,
옻나무 열수 추출물로 분획된 C₁₅H₁₂O₆(분자량 288)이며 백색의 결정체를 갖는 푸스틴(Fustin; 3,3',4',7-tetrahydroxyflavanone), C₁₅H₁₀O₆(분자량 286)이며 황색의 결정체를 갖는 피세틴(Fisetin; 3,3',4',7-Tetrahydroxyflavone), C₁₅H₁₀O₅(분자량 272)이며 진한 오렌지색의 결정체를 갖는 설푸레틴(Sulfuretin; 3',4',6'-Trihydroxyaurone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)이며 오렌지색의 결정체를 갖는 부테인(Butein; 2',3,4,4'-Tetrahydroxychalcone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)인 Garbanzol, C₁₅H₁₀O₇(분자량 302)인 Quercetin, C₁₅H₁₀O₅(분자량 270)인 5-deoxykaempferol, C₆H₆O₂(분자량 110)인 Resorcino, C₇H₆O₄(분자량 154)인 3,4-Benzoic acid, C₇H₆O₄(분자량 154)인 2,4-Benzoic acid, C₇H₆O₅(분자량 170)인 Gallic acid, C₉H₈O₄(분자량 180)인 Caffeic acid, C₉H₁₁O₄N₅(분자량 253)인 Adenosin 또는 C₆H₅O₂N(분자량 123)인 Niacin의 단일성분물질을 함유하는 것을 특징으로 하는 옻나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물
제 1 항에 따른 옻나무 열수 추출물로 분획된 C₁₅H₁₂O₆(분자량 288)이며 백색의 결정체를 갖는 푸스틴(Fustin; 3,3',4',7-tetrahydroxyflavanone), C₁₅H₁₀O₆(분자량 286)이며 황색의 결정체를 갖는 피세틴(Fisetin; 3,3',4',7-Tetrahydroxyflavone), C₁₅H₁₀O₅(분자량 272)이며 진한 오렌지색의 결정체를 갖는 설푸레틴(Sulfuretin; 3',4',6'-Trihydroxyaurone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)이며 오렌지색의 결정체를 갖는 부테인(Butein; 2',3,4,4'-Tetrahydroxychalcone), C₁₅H₁₂O₅(분자량 272)인 Garbanzol, C₁₅H₁₀O₇(분자량 302)인 Quercetin, C₁₅H₁₀O₅(분자량 270)인 5-deoxykaempferol, C₆H₆O₂(분자량 110)인 Resorcino, C₇H₆O₄(분자량 154)인 3,4-Benzoic acid, C₇H₆O₄(분자량 154)인 2,4-Benzoic acid, C₇H₆O₅(분자량 170)인 Gallic acid, C₉H₈O₄(분자량 180)인 Caffeic acid, C₉H₁₁O₄N₅(분자량 253)인 Adenosin 또는 C₆H₅O₂N(분자량 123)인 Niacin의 단일성분물질을 함유하는 것을 특징으로 하는 옻나무 열수추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 건강기능식품.
제 3 항에 있어서,
상기 옻나무 추출물에서 분획된 단일물질의 유효성분을 통해 모유두세포(HHDPC) 및 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포 증식을 통해 발모촉진을 제공하고, 염증성 질환을 초래하는 NO 생성을 억제하여 탈모예방을 제공하는 것을 특징으로 하는 옻나무 열수추출물을 유효성분으로 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 건강기능식품.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 통상의 제조 방법에 따라 샴푸, 영양 화장수, 헤어 토닉, 헤어 로션, 헤어 비누, 연고제로 제형화할 수 있는 것을 특징으로 하는 옻나무 열수추출물을 함유하는 발모촉진 및 탈모예방 조성물.