KR20030090501A - 고분자 히알루론산의 정제 방법 - Google Patents
고분자 히알루론산의 정제 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은, 고분자 히알루론산을 정제하는 방법에 관한 것으로서, 단백질 및 히알루론산이 포함된 천연 히알루론산 혼합물로부터 고분자 히알루론산을 정제하는 방법에 있어서, 상기 히알루론산 혼합물 내의 단백질을 가수분해한 후, 가수분해된 단백질과 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제1단계; 및 분리된 히알루론산에서 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계;를 포함하여 이루어지는 고분자 히알루론산의 정제 방법을 제공한다. 본 발명에 의하면, 에너지 소비가 적은 고속 원심 분리에 의해, 경제적으로 히알루론산과 단백질을 분리할 수 있을 뿐만 아니라, 고순도의 고분자 히알루론산을 저분자 히알루론산과 분리할 수 있고, 저분자 히알루론산의 고분자 히알루론산화를 유도하여 고분자 히알루론산의 수득량을 증대할 수 있다.
Description
본 발명은 고분자 히알루론산의 정제 방법에 관한 것이다.
히알루론산은 글리코스아미노글리칸(glycosaminoglycans, GAGs)의 일종으로서, D-글루쿠론산과 N-아세틸글루코사민이 β(1 →3) 글리코시드 결합되어 이루어진 이당류가 반복적으로 연결된 생체 내의 선형 고분자이다. 일반적으로 히알루론산은 인간의 결체 조직, 안구, 태반 및 닭의 벼슬을 비롯하여, 스트렙토코커스 속 미생물의 대사 산물에서 단백질과 결합된 단백 다당류(proteoglycans)의 형태로 존재한다.
히알루론산이 함유된 약제는 생체 내에 조직 구조의 유지와 윤활 효과를 부여하고, 세균의 침입 방어 및 충격을 흡수하는 완충 효과가 있기 때문에, 혈관 질환, 궤양 및 화상의 치료 뿐만 아니라, 무릎 관절통이나 류마티스, 백내장의 치료 등에도 사용될 수 있다. 또한, 히알루론산 1g당 약 200g의 물 저장 능력과 수분 유지 능력은, 수분 보충 화장품, 미용 성형 등에의 히알루론산의 사용을 적합하게 한다.
그러나, 상기와 같은 의약 및 미용의 용도에 히알루론산을 사용하기 위해서는 순도가 높은 히알루론산이 필요하다. 히알루론산은 상기 언급한 바와 같이, 생체 내에서 단백질과 결합한 상태로 존재하고, 이러한 단백질은 다른 생체 내로 투입되었을때 항원으로 작용하며, 예를 들면 난백 단백질은 다른 생체 내에서 알레르기를 유발하는 등의 문제가 있기 때문에, 이러한 용도를 위해서는 히알루론산과 결합한 단백질을 제거하는 것이 요구된다.
또한, 동일한 천연원에서 합성된 다양한 히알루론산 중 상기한 분야에서 보다 효과적인 기능을 발휘하는 히알루론산은, 강한 결합을 가지고 입체적인 2차 구조를 형성하는 고분자 히알루론산이다. 저분자 히알루론산은 약한 결합으로 인해 물에 쉽게 용해되고 생체 내 체류 시간이 비교적 짧기 때문에, 의약 및 미용의 용도로 바람직하지 않다. 따라서, 다양한 분자량의 히알루론산 군으로부터 고분자 히알루론산 만을 분리해내고, 나아가 저분자 히알루론산을 고분자 히알루론산화하는 수득량의 향상 기술이 요구된다. 상품화를 위해 일반적으로 요구되는 바람직한 히알루론산은 약 1.5×106달톤 이상의 분자량을 갖는 고분자 히알루론산이다.
종래부터 히알루론산의 정제를 위한 연구가 계속되어 왔다.
러시아 특허 제1616926호, C 08 B 37/08, БИNo.48, 1990/1616926, C 08 B에는, 먼저 암탉 벼슬의 피를 제거하여 분말 상태로 만들어 물로 추출하고, 80 내지 100℃에서 상기 추출물을 열가공한 후, 지질을 분리하여 여과시킨 것에 활성탄을 첨가함으로써 여과물을 정제하고 제제를 추출한 후, 그것을 흔들면서 다시 여과하고, 얻어진 여과물을 원료 침전물과 혼합하여 페니실린을 녹인 물로 2단계 추출을 행한 후, 추출물을 건조시켜 히알루론산을 수득하는 방법이 개시되어 있다. 그러나, 이러한 방법은 여러 단계의 정제및 추출 과정을 거치기 때문에 복잡하고, 히알루론산을 다량으로 수득하지 못한다는 단점을 가진다. 특히, 활성탄을 사용한 여과물의 정제및 제제추출은, 히알루론산의 손실을 더욱 증대시킨다. 또한, 이러한 방법에 의하면 다양한 분자량의 히알루론산을 분리해 내는 것은 가능하지만, 실제사용에 있어 유용한 고분자 히알루론산을 저분자 히알루론산으로부터 분리해 내지는 못한다.
러시아 특허 제2157381호, 7C 08 B 37/08, A 61 K 31/728은, 암탉 벼슬을 잘게 갈아 분말로 만들어 다단계 추출을 행하고, 추출물을 모아서 히알루론산을 침전시켜 이 침전물을 물에 용해시킨 후, 수산화나트륨으로 처리하고, 효소에 의해 가수분해된 단백질을 미세 여과하여 단백질을 제거하고, 에탄올을 사용한 침전을 행한 후, 마지막으로 상기 침전물을 수용액에 침전시키는 히알루론산 정제 방법을 개시한다. 그러나, 이러한 방법에서 사용한 압력하에서의 막 통과 미세 여과 방식은 하기와 같은 결과를 야기할 수 있다. 먼저, 일정한 특정 지름의 미세 구멍을 가지는 막에는, 이웃한 구멍 두 개가 매우 가까이 위치하면서 비교적 큰 구멍이 소량 생길 수 있는데, 이를 통해 일부 고분자 히알루론산이 여과됨으로써 손실이 발생할 수 있다. 또한, 압력하에서 미세 여과를 행하는 경우, 막 위에 축적된 다양한 크기의 분자들이 압력을 받아 일부 파괴될 수 있고, 고분자 히알루론산이 저분자 히알루론산화 되어 손실을 야기할 수도 있다. 그 외에도 이러한 방법에 의하면, 저분자 히알루론산 및 가수분해된 일부 단백질이 막 위에 잔존할 가능성을 완전히 배제할 수 없기 때문에, 고분자 히알루론산의 높은 순도를 기대하기 어렵다.
본 발명의 목적은, 히알루론산으로부터의 단백질의 제거 효율을 보다 향상시키고, 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 효과적으로 분리할 뿐만 아니라, 저분자 히알루론산을 고분자 히알루론산화 함으로써, 고분자 히알루론산의 수득량을 최대화하는 고분자 히알루론산의 정제 방법을 제공하는데 있다.
도 1은 본 발명에 따른 고분자 히알루론산의 정제 방법을 개략적으로 도시한 도면.
본 발명에서는 상기와 같은 기술적 과제를 달성하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 천연원에서 수득한 단백질 및 히알루론산 등 혼합 분류물들 간의 밀도차에 근거하여, 고속 원심 분리 방법을 사용하여 단백질의 제거 효율을 높이고, 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산의 분리 및 저분자 히알루론산의 고분자 히알루론산화를 촉진하여 고분자 히알루론산을 효율적으로 정제하는 방법에 관한 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은, 단백질 및 히알루론산이 포함된 천연 히알루론산 혼합물로부터 고분자 히알루론산을 정제하는 방법에 있어서, 상기 히알루론산 혼합물 내의 단백질을 가수분해한 후, 가수분해된 단백질과 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제1단계; 및 분리된 히알루론산에서 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 고분자 히알루론산의 정제 방법에 관한 것이다. 본 발명에서의 저분자 히알루론산 및 고분자 히알루론산의 구분 기준은, 상품화에 적합한 히알루론산의 분자량으로 공지된 1.5×106달톤(Daltons)이다. 즉, 본 발명에서 칭하는 저분자 히알루론산은 1.5×106달톤 미만의 물질을, 고분자 히알루론산은 1.5×106달톤 이상의 물질을 의미하는 것으로 해석하면 된다.
본 발명의 제1단계에 있어서, 단백질의 가수분해를 위해서는 파파인 용액을 사용하여 효소 가수분해를 행할 수 있고, 가수분해된 단백질과 히알루론산을 분리하기 위한 고속 원심 분리에는, 매질로 수분 염류 용액(1)을 사용할 수 있으며, 사용되는 수분 염류 용액(1)의 밀도(ρ1)는, 고분자 히알루론산의 밀도(ρL) 및 저분자 히알루론산의 밀도(ρS)보다는 크고, 가수분해된 단백질의 밀도(ρP)보다는 작은 것이 바람직하다. 또한, 본 발명의 제2단계에 있어서의 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위한 고속 원심 분리에는, 매질로 수분 염류 용액(2)를사용할 수 있고, 사용되는 수분 염류 용액(2)의 밀도(ρ2)는, 고분자 히알루론산의 밀도(ρL)보다는 크고 저분자 히알루론산의 밀도(ρS)보다는 작은 것이 바람직하다.
본 발명에서의 고속 원심 분리의 가속도는,
a = ΩR
(식중, a는 가속도, Ω는 고속 회전 각속도 및 R은 고속 원심 분리기의 반경을 나타냄)이고,
ΩR 》g
(식중, g는 9.8m/sec2의 자유 낙하 가속도를 나타냄)의 조건을 만족하는 것이 바람직하다.
본 발명에서는, 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계 이후에, 고분자 히알루론산을 증대하기 위하여, 잔류하는 저분자 히알루론산에 대하여 고속 원심 분리를 부가적으로 행하는 제3단계를 포함할 수 있다. 제2단계 및 제3단계에 있어서, 고분자 히알루론산과 저분자 히알루론산의 분리를 촉진하고, 고분자 히알루론산을 증대하기 위하여, 고속 원심 분리시 초음파를 발생시킬 수 있고, 상기 초음파의 파장은 저분자 히알루론산의 평균 선형 길이 보다는 크고, 고분자 히알루론산의 평균 선형 길이 보다는 작은 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 고분자 히알루론산의 정제 방법에 있어서 가수분해된 단백질 및 고분자 히알루론산의 분리는, 수용성 매질에서의 히알루론산의 구조적 특성에기반을 둔다. 왼쪽 방향 나선 구조의 히알루론산은 수분을 제거한 고형 상태에서 한 개의 공간 주기 당 네 개의 이당류 유닛을 포함하는 구조를 가진다. 수분을 함유한 상태에서는, 이러한 이당류 유닛이 정마름모 형태의 기초 조직을 이루고, 각 기초 조직은 최소한 하나의 물분자와 결합하여 그 자체 고분자의 부피보다 1,000배 내지 10,000배 큰 부피의 불규칙한 덩어리 형태로 존재한다. 이러한 구조에서, 히알루론산 분자는 8개의 CH 유닛의 결합에 의해 광범위한 소수성의 탈수 영역을 형성하게 되는데. 이러한 구조적 특성은 히알루론산이 분자량에 따라 다양한 밀도를 갖게 한다. 즉, 고분자 히알루론산은 다량의 이당류를 함유하여 분자량이 크지만, 수용성 매질 중에서 다량의 탈수 영역을 형성하여 부피가 엄청나게 증대되기 때문에, 고분자 히알루론산의 밀도(ρL)는, 작은 분자량을 가지고 수용성 매질 중에서 거의 2차 구조를 형성하지 않는 대부분의 저분자 히알루론산의 밀도(ρS) 보다 낮게 된다. 또한, 효소에 의해 가수분해된 단백질들은 부피를 거의 가지지 않는 작은 단편 상태이기 때문에, 가수분해된 단백질의 밀도(ρP)는 저분자 히알루론산의 밀도(ρS)보다 크다. 이러한 ρL< ρS< ρP식의 성립은, 수분 염류 용액을 사용한 고속 원심 분리기에 의해 고분자 히알루론산을 정제하는 것을 가능하게 한다.
중력 하에서는, 수용성 매질을 첨가한 혼합물 중 밀도가 작은 성분들이 상층부에 위치하고, 밀도가 큰 성분들은 하층부에 위치하게 된다. 그러나, 혼합물 내 성분들 간에는 밀도차가 크지 않기 때문에 밀도차에 의해서만 분리하는 과정은 매우 느리게 진행된다. 따라서, 혼합물 내 성분들의 분리 속도를 높이기 위해서는,중력과 동일한 힘을 부가할 필요가 있고, 이것은 고속 원심 분리기에 의해 달성될 수 있다. 이때 수용성 매질로서 사용하는 수분 염류 용액의 밀도(ρ1및 ρ2)는 염분의 첨가량으로 조정하는 것이 가능하므로, 히알루론산과 가수분해된 단백질 및 수분 염류 용액의 밀도차를 이용하여 히알루론산과 가수분해된 단백질을 분리할 수 있을 뿐만 아니라, 히알루론산 분자들 간 및 수분 염류 용액의 밀도차를 이용하여 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리할 수도 있다. 즉, 수분 염류 용액(1)의 밀도(ρ1)가 히알루론산의 밀도(ρS또는 ρL)보다는 크고, 가수분해된 단백질의 밀도(ρP)보다는 작은 것을 사용하여 고속 원심 분리할 경우, 가수분해된 단백질과 히알루론산을 분리할 수 있고, 수분 염류 용액(2)의 밀도(ρ2)가 고분자 히알루론산의 밀도(ρL)보다는 크고, 저분자 히알루론산의 밀도(ρS)보다는 작은 것을 사용하여 고속 원심 분리할 경우, 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리할 수 있다.
본 발명의 고속 원심 분리에 사용되는 가속도 a = ΩR 는, 혼합물을 고속 원심 분리기의 외부 표면(큰 원심 분리 반경 R의 영역)에 근접하게 주입하는 경우에, 중력 하에서의 자유 낙하 가속도와 정확하게 일치한다. 자유 낙하 가속도는 g (g= 9.8m/sec2) 이고, ΩR 》g 의 조건이 준수되는 경우, 고속 회전 각속도 Ω또는 큰 원심 분리 반경 R에 의해, 고밀도 성분은 고속 원심 분리기의 중심 영역으로부터 가장자리 영역으로 고속 원심 분리기의 반경을 따라 빠른 속도로 이동되고, 상대적으로 저밀도인 성분은 고속 원심 분리기의 중심 영역으로 이동된다. 즉, 본 발명에 따른 제1단계의 가수분해된 단백질과 히알루론산의 분리를 위한 고속 원심 분리에서는, 고밀도 성분인 가수분해된 단백질이 고속 원심 분리기의 가장자리 영역으로 이동되고, 저밀도 성분인 히알루론산이 고속 원심 분리기의 중심 영역으로 이동된다. 또한, 본 발명에 따른 제2단계의 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산의 분리를 위한 고속 원심 분리에서는, 고밀도 성분인 저분자 히알루론산이 고속 원심 분리기의 가장자리 영역으로 이동되고, 저밀도 성분인 히알루론산이 고속 원심 분리기의 중심 영역으로 이동된다. 이렇게 고속 원심 분리기의 중심 영역에 밀집된 성분들은 펌핑에 의해 용이하게 수거될 수 있다.
상기와 같은 고속 원심 분리시 밀도차에 따른 성분들의 이동 양상에 의해, 본 발명의 제2단계 이후 고속 원심 분리기의 가장자리 영역으로 이동된 저분자 히알루론산이 고속 원심 분리기의 표면에 축적되는 경우, 히알루론산 선형 사슬 간에는 자체적인 결합 반응이 일어나고, 이러한 자체 결합은 저분자 히알루론산을 고분자 히알루론산화 한다. 이에 의해, 수득할 수 있는 고분자 히알루론산의 양도 더욱 증대된다. 본 발명의 제2단계에서 수분 염류 용액(2)을 사용한 고속 원심 분리에 의해 최초로 고분자 히알루론산을 펌핑하여 수득한 후, 부가하여 제3단계의 고속 원심 분리를 행하는 경우, 농축되어 자체 결합에 의해 고분자화되는 저분자 히알루론산의 밀도가 수분 염류 용액(2)의 밀도(ρ2)와 동일하게 되는 시점부터, 고속 원심 분리기의 중심 영역으로 이동하게 되고, 이는 또한 펌핑에 의해 수득될 수 있다. 제3단계의 잔류하는 저분자 히알루론산에 대한 계속적인 고속 원심 분리는, 시간이 경과함에 따라 보다 많은 양의 저분자 히알루론산이 고분자 히알루론산화 되도록 하고, 이에 의해 수득되는 고분자 히알루론산의 양은 더욱 증대된다.
본 발명의 제2단계 이후의 고속 원심 분리에서와 같이, 비교적 밀도차가 적은 히알루론산 간의 분리를 촉진시키기 위해서는, 고속 원심 분리기에 초음파 진동을 부가하여 발생시킬 수 있다. 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산의 분리에 있어서, 저분자 히알루론산의 평균 선형 길이보다는 크고 고분자 히알루론산의 평균 선형 길이보다는 작은 파장의 초음파를 발생시킬 경우, 고분자 히알루론산의 분리는 더욱 촉진된다. 또한, 초음파는 저분자 히알루론산을 혼합하고 충돌시키는데 매우 효과적이기 때문에, 저분자 히알루론산의 자체 결합을 촉진시켜 고분자 히알루론산화 되는 속도를 높일 수 있다.
첨부한 도 1은 본 발명에서 사용한 고속 원심 분리에 의해 각 성분들이 이동하는 양상을 설명하는 도면이다. 도면을 참조하면서 본 발명의 실시예를 분리 단계별로 보다 상세하게 설명한다.
실시예
제1단계: 가수분해된 단백질과 히알루론산의 분리
종래의 방법에 의해 천연원에서 수득한 단백질, 고분자 히알루론산 및 저분자 히알루론산의 혼합 분류물에 가수분해 효소를 첨가하여 단백질을 가수분해하였다. 가수분해된 단백질과 히알루론산의 혼합 분류물에, 수분 염류 용액(1)을 첨가하여 혼합하였다. 수분 염류 용액(1)의 밀도(ρ1)는 임의의 히알루론산의 밀도(ρL, ρS, 또는 임의의 중간값)보다 크고 가수분해된 단백질의 밀도(ρP)보다 작게 조정하였다. 고속 원심 분리기의 가장 자리 영역에 상기 가수분해된 단백질, 히알루론산 혼합 분류물 및 수분 염류 용액의 혼합물을 주입하고, 고속 회전 각속도 Ω로 고속 원심 분리기를 회전시켰다. 도 1의 첫번째 도면은 본 발명의 제1단계에서의 각 성분들의 이동 양상을 보여준다. 가수분해된 단백질들은 고속 원심 분리기의 반경을 따라 가장자리 영역으로 이동하여 고속 원심 분리기의 표면에 축적되고, 히알루론산은 중심 영역으로 이동하였다. 중심 영역에 밀집된 히알루론산을 펌핑으로 회수하여 제2단계의 실험을 실시하였다.
제2단계: 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산의 분리
제1단계에서 회수한 히알루론산을, 염분으로 밀도를 조정한 수분 염류 용액(2)과 혼합하였다. 이때 히알루론산 중의 고분자 히알루론산의 밀도(ρL)와 저분자 히알루론산의 밀도(ρS), 및 수분 염류 용액(2)의 밀도(ρ2)의 관계는 ρL< ρ2< ρS로 하였다. 본 발명의 제1단계에서와 같은 방법으로 고속 원심 분리를 실시하였다. 도 1의 두번째 도면은 제2단계에서의 고분자 히알루론산 및 저분자 히알루론산의 이동 양상을 보여준다. 저분자 히알루론산은 고속 원심 분리기의 반경을 따라 가장자리 영역으로 이동하여 고속 원심 분리기의 표면에 축적되고, 고분자히알루론산은 중심 영역으로 이동하였다. 초음파를 부가하여 발생시킨 결과, 저분자 히알루론산의 충돌이 보다 활발해졌고, 고속 원심 분리기 표면에의 축적 속도도 향상되었다. 중심 영역에 밀집된 상태의 고분자 히알루론산을 펌핑으로 수거하였다.
고분자 히알루론산을 최초로 수거한 후, 제3단계의 고속 원심 분리를 부가하여 행하였다. 시간이 경과함에 따라, 저분자 히알루론산이 밀집되어 있는 고속 원심 분리기의 표면으로부터, 고분자화된 히알루론산이 고속 원심 분리기의 중심 영역으로 이동하는 것을 관찰할 수 있었다. 부가한 초음파 진동에 의해, 고분자화된 히알루론산의 고속 원심 분리기의 표면에서부터 중심 영역으로의 이동 속도가 향상되는 것도 관찰할 수 있었다.
본 발명에 의하면, 에너지 소비가 적은 고속 원심 분리기를 사용하여 경제적으로 고분자 히알루론산을 정제 및 증대할 수 있다. 또한, 단백질의 제거 뿐만 아니라, 고분자 히알루론산의 수득과 동시에 저분자 히알루론산의 고분자 히알루론산화를 유도하여, 히알루론산의 손실을 최소화하면서 순도가 높은 고분자 히알루론산을 대량으로 수득할 수 있다.
Claims (10)
- 단백질 및 히알루론산이 포함된 천연 히알루론산 혼합물로부터 고분자 히알루론산을 정제하는 방법에 있어서,상기 히알루론산 혼합물 내의 단백질을 가수분해한 후, 가수분해된 단백질과 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제1단계; 및분리된 히알루론산에서 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제1항에 있어서,상기 가수분해된 단백질과 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제1단계에서는 매질로 수분 염류 용액(1)을 사용하며,사용되는 수분 염류 용액(1)의 밀도(ρ1)는, 고분자 히알루론산의 밀도(ρL) 및 저분자 히알루론산의 밀도(ρS)보다는 크고, 가수분해된 단백질의 밀도(ρP)보다는 작은 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제1항에 있어서,상기 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계에서는 매질로 수분 염류 용액(2)을 사용하며,사용되는 수분 염류 용액(2)의 밀도(ρ2)는, 고분자 히알루론산의 밀도(ρL)보다는 크고, 저분자 히알루론산의 밀도(ρS)보다는 작은 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,상기 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계에 있어서,고분자 히알루론산과 저분자 히알루론산의 분리를 촉진하기 위하여, 고속 원심 분리시 초음파를 발생시키는 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제4항에 있어서,상기 초음파의 파장은 저분자 히알루론산의 평균 선형 길이보다는 크고, 고분자 히알루론산의 평균 선형 길이보다는 작은 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제1항에 있어서,제1단계에서의 단백질의 가수분해를 위하여 파파인 용액을 사용한 효소 가수분해를 행하는 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,제1단계 및 제2단계에서 행하여지는 고속 원심 분리의 가속도가,a = ΩR(식중, a는 가속도, Ω는 고속 회전 각속도 및 R은 고속 원심 분리기의 반경을 나타냄)이고,ΩR 》g(식중, g는 9.8m/sec2의 자유 낙하 가속도를 나타냄)의 조건을 만족하는 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제1항에 있어서,상기 저분자 히알루론산과 고분자 히알루론산을 분리하기 위하여 고속 원심 분리하는 제2단계 이후,고분자 히알루론산을 증대하기 위하여, 잔류하는 저분자 히알루론산에 대하여 고속 원심 분리를 부가적으로 행하는 제3단계를 포함하는 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제8항에 있어서,잔류하는 저분자 히알루론산에 대하여 고속 원심 분리를 부가적으로 행하는 제3단계에 있어서,고분자 히알루론산과 저분자 히알루론산의 분리를 촉진하고 고분자 히알루론산을 증대하기 위하여, 고속 원심 분리시 초음파를 발생시키는 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
- 제9항에 있어서,상기 초음파의 파장은 저분자 히알루론산의 평균 선형 길이보다는 크고, 고분자 히알루론산의 평균 선형 길이보다는 작은 것을 특징으로 하는고분자 히알루론산의 정제 방법.
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR101447975B1 (ko) * | 2013-03-25 | 2014-10-13 | 한국식품연구원 | 초음파를 이용한 히알루론산 추출 방법 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR101447975B1 (ko) * | 2013-03-25 | 2014-10-13 | 한국식품연구원 | 초음파를 이용한 히알루론산 추출 방법 |
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