KR102232320B1 - 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물, 키트 및 이식 방법 - Google Patents

Abstract

본 명세서에는 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물로서, 상기 조성물은 유효성분으로서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 포함하는, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물 또는 그를 포함하는 키트 또는 그를 이용하는 방법이 개시된다. 상기 조성물, 키트 또는 방법을 이용하면 장기, 조직 또는 세포의 이식 후 생존력 및/또는 기능을 강화시킬 수 있고, 생체로부터 분리된 장기, 조직 또는 세포를 손상 없이 일시적으로 보관할 수 있다.

Description

장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물, 키트 및 이식 방법{COMPOSITION FOR ORGAN, TISSUE, OR CELL TRANSPLANTATION, KIT, AND TRANSPLANTATION METHOD}

본 발명은 장기, 조직 또는 세포 이식에 사용되는 조성물; 장기, 조직 또는 세포 이식에 사용되는 키트; 또는 장기, 조직 또는 세포 이식 방법에 관한 것이다.

장기 이식이란 어떤 조직 또는 장기의 파손된 기능을 대체할 목적으로 원래 존재하는 장소에서 다른 장소로 조직 또는 장기를 옮기는 것이다. 장기 이식 과정에서는 여러 문제가 발생할 수 있는데, 그 중 하나가 허혈 재관류(ischemia-reperfusion, IR)에 의한 허혈성 조직손상이다. 장기 이식과정에서 일어나게 되는 허혈 재관류 (ischemia-reperfusion, IR)에 의한 허혈성 조직손상은 장기이식 후 장기 기능 회복을 지연시키는 결과를 낳고, 이는 염증성 조직반응으로 이식된 장기의 장기적인 기능유지에 좋지 않은 예후인자로 작용하는 경우가 많다. 장기 이식 과정에서 부수적으로 발생하는 초기 허혈 재관류 손상은 후속적인 장기 기능 악화 및 이식 실패로 이어질 수 있다.

특히, 폐 이식은 말기 폐질환에서 유일한 치료대안으로 알려져 있으며, 추후 폐 이식에 대한 환자들의 요구는 꾸준히 증가할 것으로 예상된다. 그러나 의학의 꾸준한 발전에도 불구하고 여전히 폐 이식 생존율은 다른 장기에 비해 높지 않다. 가장 흔한 폐 이식 후 초기의 문제점은 이식 기능 장애(graft dysfunction)로서 그 원인 중 하나가 허혈 재관류 손상(ischemia-reperfusion injury)이다.

한편, 피판(Flap)이란 이동되는 조직이 생존 가능할 수 있는 혈관경 및 그에 준하는 조직을 부착하여 신체의 한 부분에서 다른 부분으로 옮겨지는 피부나 조직을 의미한다. 피판술은 피부 이식술 등으로는 해결할 수 없는 연부조직의 결손이나 만성 창상 등에 이용되며 성형외과 영역에서 가장 널리 시행되는 수술방법으로 외견상 뿐만 아니라 소실된 기능을 복원하는데 유용한 방법이며, 특히 골과 건, 근육, 신경 등 여러 조직의 복합적인 이식으로 인해서 일차적인 재건이 가능하여 빠른 회복이 가능한 장점이 있다. 이러한 피판술에 있어서 피판의 생존율은 허혈 재관류 손상 치료와 밀접한 관계가 있다. 이에 허혈 재관류 손상 치료 방법을 통해, 피판의 생존율을 안정적으로 향상시킬 수 있는 방법이 있다면 매우 유용할 것으로 예상된다.

또한, 세포 이식은 장기 또는 조직 이식과 마찬가지로 질병을 치료하기 위한 수단으로 수행되는 것으로서, 대표적인 예로 제1형 당뇨병 개선을 위한 랑게르한스섬 세포 이식을 들 수 있다. 랑게르한스섬 이식 후 첫 주 내로 이식편의 대부분이 상실되는데 그 원인은 이식 후 2차 혈관형성 전에 저산소증과 같은 다양한 스트레스 인자에 노출되는 것과 전구염증성 사이토카인 및 자유 라디칼에 노출되는 것에서 찾을 수 있다.

Granger et al. Ann. Rev. Physiol., 57, 311-332, (1995)

일 측면에서 본 발명의 목적은, 장기, 조직 및 개개의 세포 이식편의 생존력 및/또는 기능을 촉진하는 것이다.

다른 측면에서 본 발명의 목적은 장기, 조직 또는 세포의 이식 후 생존력 및/또는 기능을 강화시키는 것이다.

다른 측면에서 본 발명의 목적은, 장기, 조직 또는 세포를 손상 없이 일시적으로 보관할 수 있는 방법 및/또는 조성물을 제공하는 것이다.

일 측면에서 본 발명은, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물로서, 상기 조성물은 유효성분으로서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 포함하는, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물이다. 상기 조성물에서, 상기 단편은 3개 이상의 아미노산으로 구성된 단편일 수 있다.

일 측면에서, 상기 조성물은 공여자 및/또는 수용자에게 투여되는 것일 수 있다.

일 측면에서, 상기 조성물은 이식 전, 이식 도중 및 이식 후 중 어느 하나 이상의 단계에서 투여되는 것일 수 있다.

다른 측면에서, 상기 조성물은 공여자로부터 분리된 장기, 조직 또는 세포를 보관하기 위한 것일 수 있다.

일 측면에서 상기 조성물은 상기 유효성분인 펩티드를, 수용자에게 이식한 후의 장기, 조직, 또는 세포의 생존력 또는 기능을 강화시키기에 충분한 양으로 포함하는 것일 수 있다.

일 측면에서, 상기 조성물은 상기 유효성분인 펩티드를, 조성물 전체 부피에 대하여 10 ㎎/L 내지 1000㎎/L의 농도로 포함하는 것일 수 있다.

일 측면에서 상기 조성물은 상기 유효성분인 펩티드를, 조성물 전체 부피에 대하여 50 ㎎/L 내지 500㎎/L의 농도로 포함하는 것일 수 있다.

일 측면에서 본 발명은 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물; 및 상기 조성물을 사용하는 방법을 포함하는 설명서를 포함하는 장기, 조직 또는 세포 이식용 키트일 수 있다.

일 측면에서 상기 키트에서, 상기 조성물은, 이식 전에 공여자에게 투여되는 조성물; 이식 전에 수용자에게 투여되는 조성물; 이식 중에 공여자에게 투여되는 조성물; 이식 중에 수용자에게 투여되는 조성물; 공여자로부터 분리된 장기, 조직 또는 세포를 보관하기 위한 조성물; 이식 후 공여자에게 투여되는 조성물; 및 이식 후 수용자에게 투여되는 조성물 중 어느 하나 이상일 수 있다.

다른 측면에서 상기 키트에서 상기 설명서는 상기 각 조성물의 투여량, 투여방법 및 투여간격을 포함할 수 있다.

다른 측면에 따른 키트에서, 상기 설명서는 상기 조성물을 장기, 조직 또는 세포가 공여자 또는 수용자 체내에 존재하는 상태로 체내에서 장기, 조직 또는 세포를 관류시키는 방식으로 투여되는 내용을 포함할 수 있다.

다른 측면에서 본 발명은 장기, 조직 또는 세포 이식 방법으로서, 상기 방법은 앞서 언급된 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물들 중 어느 하나 이상을 분리된 장기, 조직 또는 세포에 처리하거나, 장기, 조직 또는 세포 이식의 공여자 및/또는 수용자에게 투여하는 것을 포함하는 장기, 조직 또는 세포 이식 방법일 수 있다.

다른 측면에서, 상기 방법은, 상기 조성물을 이식 전에 공여자에게 투여하는 것; 상기 조성물을 이식 전에 수용자에게 투여하는 것; 상기 조성물을 이식 중에 공여자에게 투여하는 것; 상기 조성물을 이식 중에 수용자에게 투여하는 것; 공여자로부터 분리된 장기, 조직 또는 세포를 상기 조성물에 보관하는 것; 상기 조성물을, 이식 후에 수용자에게 투여하는 것; 및 상기 조성물을, 이식 후에 공여자에게 투여하는 것 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.

일 측면에서, 상기 방법은 상기 조성물을 장기, 조직 또는 세포가 공여자 또는 수용자 체내에 존재하는 상태로 체내에서 장기, 조직 또는 세포를 관류시키는 방식으로 투여하는 것을 포함할 수 있다.

다른 측면에서, 상기 조성물은 60kg 체중의 성인 기준으로 1회 투여시 1mg 내지 10000mg의 양으로 처리 또는 투여될 수 있다.

다른 측면에서, 상기 조성물은 60kg 체중의 성인 기준으로 1회 투여시 200mg 내지 5000mg의 양으로 처리 또는 투여될 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 앞서 언급된 조성물들 중 어느 하나 이상의 조성물의 용도로서, 분리된 장기, 조직 또는 세포에 처리하거나, 또는 장기, 조직 또는 세포 이식의 공여자 및/또는 수용자에게 투여하기 위한 용도일 수 있다.

일 측면에서 본 발명은, 장기, 조직 및 개개의 세포 이식편의 생존력 및/또는 기능을 촉진할 수 있다.

다른 측면에서 본 발명은 장기, 조직 또는 세포의 이식 후 생존력 및/또는 기능을 강화시킬 수 있다.

다른 측면에서 본 발명은, 장기, 조직 또는 세포를 손상 없이 일시적으로 보관할 수 있다.

도 1은 허혈 재관류 24시간 후 채취한 혈액 내 요소질소(BUN) 및 크레아틴의 수치를 측정한 그래프이다.
도 2는 허혈 재관류 24시간 후 신장조직을 PAS 염색한 결과를 나타낸 사진이다.
도 3은 허혈 재관류 24시간 후 신장 조직에 대해 신장 조직 손상 스코어링(renal tissue injury scoring)을 실시한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 허혈 재관류 24시간 후 신장조직을 TUNNEL 염색으로 평가한 결과 사진이다.
도 5는 허혈 재관류 24시간 후 신장조직을 TUNNEL 염색으로 평가한 TUNNEL 양성 세포 측정결과이다.
도 6은 허혈 재관류 24시간 후 신장 조직에서 F4/80(macrophage maker), 및 Gr-1(neutrophil maker)의 면역조직염색으로 선천면역 세포 침윤을 평가한 결과이다.
도 7은 허혈 재관류 24시간 후 신장 조직에서 F4/80(macrophage maker), 및 Gr-1(neutrophil maker)의 양성 세포 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8 내지 도 10은 허혈 재관류 24시간 후 신장 조직에서 염증성 사이토카인의 분비 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 11는 피판 생존율을 평가하기 위한 허혈 재관류 손상 유도 과정을 나타내는 그림이다.
도 12는 허혈 재관류 유도 후, 7일 후의 PEP1 처리군과 식염수(Saline) 처리군의 피판 생존율 측정 결과를 나타낸 그래프이고, 도 13은 ImageJ 프로그램을 통한 디지털 사진이다.
도 14는 랫드의 폐 이식술 도중 사용하는 폐보존액으로 i) 생리식염수, ii) Perfadex^TM, iii) Perfadex^TM와 PEP1 5 mg 그리고 iv) Perfadex^TM와 PEP1 50 mg을 각 사용한 경우, 이식한 폐의 중간 부위를 포르말린 고정하여 헤마톡실린&에오진(H&E) 염색 후 광학현미경을 통해 폐포 조직을 서로 비교한 결과를 나타낸 사진이다.
도 15는 랫트의 폐 이식술 이후, 실험 후에 이식한 폐의 하엽을 잘라내서 바로 무게를 측정한 다음 24시간 동안 60℃의 건조기에서 건조한 후에 다시 무게를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 16은 랫트의 폐 이식술 이후, 5mL의 생리 식염수를 기관 내로 점적 주입(instillation)하고 다시 뽑아내어, 호중성백혈구 내용(neutrophil content)을 분석한 결과를 나타낸 사진이다.

발명의 실시를 위한 최선의 형태

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 이하, 본 발명을 실시예를 기초로 하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이러한 실시예가 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것은 아니며, 본 발명은 특허청구범위에 기재된 바를 기초로 하여 다양한 실시예 및 응용이 가능하며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

텔로미어(telomere)는 염색체의 말단에 반복적으로 존재하는 유전 물질로서, 해당 염색체의 손상이나 다른 염색체와의 결합을 방지한다고 알려져 있다. 세포가 분열할 때마다 텔로미어의 길이는 조금씩 짧아지는데, 일정한 횟수 이상의 세포 분열이 있게 되면 텔로미어는 매우 짧아지고, 그 세포는 분열을 멈추고 죽게 된다. 반면 텔로미어를 길게 하면 세포의 수명이 연장된다고 알려져 있으며, 그 예로 암세포에서는 텔로머라제(telomerase)라는 효소가 분비되어 텔로미어가 짧아지는 것을 막기 때문에, 암세포가 죽지 않고 계속 증식할 수 있다고 알려져 있다. 일측면에서, 본 발명은 장기, 조직 또는 세포의 적출, 보관 및 이식 과정의 임의의 단계에서 공여자, 수용자, 장기, 조직, 세포 덩어리 및/또는 개개의 세포를 처리하는 데 사용하는 조성물 또는 키트에 관한 것이다. 장기, 조직, 세포 덩어리 또는 개별 세포는 공여자로부터 적출하여 본 명세서에 개시된 조성물로 처리한 후 수용자에게 이식할 수 있다. 다른 측면에서, 상기 방법에 더하여, 장기, 조직, 세포 덩어리 또는 개별 세포를 공여자 체내에 존재하는 상태로 체내에서 처리할 수 있다. 선택적으로, 본 명세서에 개시된 조성물을 수술 전, 중 및/또는 수술 후에, 예를 들어 수용자의 혈액으로 장기를 재관류시킨다. 또한 본 명세서에 기재된 조성물은 장기, 조직, 세포 덩어리 또는 개별 세포를 적출하는 과정 전 또는 중에 공여자에게 투여할 수도 있다.

본 발명의 일측면에서, 서열 번호 1의 펩티드, 서열번호 1의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 텔로머라제, 구체적으로 인간(Homo sapiens) 텔로머라제에서 유래한 펩티드를 포함한다.

서열 번호 1에 기재된 펩티드는 아래 표 1과 같다. 아래 표 1의 "이름"은 펩티드를 구별하기 위해 명명한 것이다. 본 발명의 일측면에서, 서열 번호 1에 기재된 펩티드는 인간 텔로머라제의 전체 펩티드를 나타낸다. 본 발명의 다른 일측면에서, 서열 번호 1의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 텔로머라제에 포함된 펩티드 중 해당 위치의 펩티드를 선별해 합성한 "합성 펩티드"를 포함한다. 서열번호 2는 전체 텔로머레이즈의 아미노산 서열을 나타낸 것이다.

본 명세서에 개시된 펩티드는 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 펩티드는, 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그 단편들과 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 6개 이상의 아미노산 또는 7개 이상의 아미노산이 변화된 펩티드를 포함할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 아미노산 변화는 펩티드의 물리화학적 특성이 변경되도록 하는 성질에 속한다. 예를 들어, 펩티드의 열안정성을 향상시키고, 기질 특이성을 변경시키고, 최적의 pH를 변화시키는 등의 아미노산 변화가 수행될 수 있다.

본 명세서에서 "아미노산"이라 함은 자연적으로 펩티드로 통합되는 22개의 표준 아미노산들 뿐만 아니라 D-아이소머 및 변형된 아미노산들을 포함한다. 이에 따라, 본 발명의 일측면에서 펩티드는 D-아미노산을 포함하는 펩티드일 수 있다. 한편, 본 발명의 다른 측면에서 펩티드는 번역 후 변형(post-translational modification)된 비표준 아미노산 등을 포함할 수 있다. 번역 후 변형의 예는 인산화(phosphorylation), 당화(glycosylation), 아실화(acylation) (예컨대, 아세틸화(acetylation), 미리스토일화(myristoylation) 및 팔미토일화(palmitoylation)를 포함), 알킬화(alkylation), 카르복실화(carboxylation), 히드록실화(hydroxylation), 당화반응(glycation), 비오티닐화(biotinylation), 유비퀴티닐화(ubiquitinylation), 화학적 성질의 변화(예컨대, 베타-제거 탈이미드화, 탈아미드화) 및 구조적 변화(예컨대, 이황화물 브릿지의 형성) 를 포함한다. 또한, 펩티드 컨쥬게이트를 형성하기 위한 가교제(crosslinker)들과의 결합과정에서 일어나는 화학 반응들에 의해 생기는 아미노산의 변화, 예컨대 아미노기, 카르복시기 또는 사이드 체인에서의 변화와 같은 아미노산의 변화를 포함한다.

본 명세서에 개시된 펩티드는 자연 그대로의 공급원으로부터 동정 및 분리된 야생형 펩티드일 수 있다. 한편, 본 명세서에 개시된 펩티드는 서열번호 1의 단편들인 펩티드와 비교하여 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하는, 인공 변이체일 수 있다. 인공 변이체에서 뿐만 아니라 야생형 폴리펩티드에서의 아미노산 변화는 단백질의 폴딩(folding) 및/또는 활성에 유의한 영향을 미치지 않는 보존성 아미노산 치환을 포함한다. 보존성 치환의 예들은 염기성 아미노산(아르기닌, 리신 및 히스티딘), 산성 아미노산(글루탐산 및 아스파르트산), 극성 아미노산(글루타민 및 아스파라긴), 소수성 아미노산(루신, 이소로이신, 발린 및 메티오닌), 방향족 아미노산(페닐알라닌, 트립토판 및 티로신), 및 작은 아미노산(글리신, 알라닌, 세린 및 트레오닌)의 군의 범위 내에 있다. 일반적으로 특이적 활성을 변경시키지 않는 아미노산 치환이 본 분야에 공지되어 있다. 가장 흔하게 발생하는 교환은 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, 및 Asp/Gly, 그리고 이들과 반대인 것들이다. 보존적 치환의 다른 예는 다음 표와 같다.

원래 아미노산	예시적인 잔기 치환	바람직한 잔기 치환
Ala (A)	val; leu; ile	Val
Arg (R)	lys; gln; asn	Lys
Asn (N)	gln; his; asp, lys; arg	Gln
Asp (D)	glu; asn	Glu
Cys (C)	ser; ala	Ser
Gln (Q)	asn; glu	Asn
Glu (E)	asp; gln	Asp
Gly (G)	Ala	Ala
His (H)	asn; gln; lys; arg	Arg
Ile (I)	leu; val; met; ala; phe; norleucine	Leu
Leu (L)	norleucine; ile ; val; met; ala; phe	Ile
Lys (K)	arg; gln; asn	Arg
Met (M)	leu; phe; ile	Leu
Phe (F)	leu; val; ile; ala; tyr	Tyr
Pro (P)	Ala	Ala
Ser (S)	thr	Thr
Thr (T)	Ser	Ser
Trp (W)	tyr; phe	Tyr
Tyr (Y)	trp; phe ; thr; ser	Phe
Val (V)	ile; leu; met; phe; ala; norleucine	Leu

펩티드의 생물학적 특성에 있어서의 실재적인 변형은 (a) 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면 시트 또는 나선 입체 구조를 유지하는데 있어서의 이들의 효과, (b) 표적 부위에서의 상기 분자의 전하 또는 소수성을 유지하는데 있어서의 이들의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는데 있어서의 이들의 효과가 상당히 상이한 치환부를 선택함으로써 수행된다. 천연 잔기는 통상의 측쇄 특성에 기준하여 다음 그룹으로 구분된다:

(1) 소수성: 노르루이신, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;

(3) 산성: asp, glu;

(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및

(6) 방향족: trp, tyr, phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또다른 부류로 교환함으로써 이루어질 것이다. 펩티드의 적당한 입체 구조를 유지하는 것과 관련이 없는 어떠한 시스테인 잔기도 일반적으로 세린으로 치환되어 상기 분자의 산화적 안정성을 향상시키고 이상한 가교결합을 방지할 수 있다. 역으로 말하면, 시스테인 결합(들)을 상기 펩티드에 가하여 그의 안정성을 향상시킬 수 있다.

펩티드의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변화된 것이다. 변화란 의미는 펩티드에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실 및(또는) 펩티드 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 나타낸다.

펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된 것이다. N-연결된이란 탄수화물 잔기가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 말한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 잔기를 아스파라긴 측쇄에 효소적 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써, 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신을 사용할 수도 있다.

펩티드로의 글리코실화 부위의 부가는 하나 이상의 상기 언급된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변화시킴으로써 편리하게 수행된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 이러한 변화는 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 최초 항체의 서열에 부가하거나 이들 잔기로 치환함으로써 이루어질 수도 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).

본 명세서에서 "세포"는, 이식에 적합한 동물 세포를 비롯하여 임의 유형의 동물 세포를 말한다. 세포는 일반적으로 동물 공여자로부터 얻은 1차 세포이지만, 확립된 세포주의 2차 세포 또는 대등한 세포일 수 있다. 이들은 선택적으로 어떤 방식으로 그 기능을 변화시키는 발현 벡터로 체외에서 형질감염시킨다. 세포에는 비제한적으로, 예를 들어 랑게르한스섬 세포, 예를 들어 췌장 랑게르한스섬의 일부인 세포, 간세포, 섬유아세포, 골수 세포, 근세포, 및 줄기 세포, 및 척수를 비롯한 중추신경계 세포(예, 신경 세포)를 포함한다. 본 명세서 전반에서 "랑게르한스섬 세포(들)"는 섬, 예를 들어 랑게르한스섬이라고 알려진 췌장 내에 존재하는 세포 덩어리를 칭하는 일반 명사로 사용하였다. 랑게르한스섬에는, 예를 들어 β-세포(인슐린 생산), α-세포(글루카곤 생산), ν-세포(소마토스타틴 생산), F 세포(췌장 폴리펩티드 생산), 엔테로크로마핀 세포(세로토닌 생산), PP 세포 및 D1 세포를 비롯한 몇가지 유형의 세포가 포함된다. "줄기 세포"란 용어는 배양액에서 무기한 분열하여 분화된 세포가 될 수 있는 능력을 지닌 세포를 칭하는 당분야에 공지된 용어이다. 이 용어에는, 예를 들어 전능(totipotent), 다능(pluripotent), 다능(multipotent) 및 단일분화성 (unipotent)줄기 세포, 예를 들어 신경 세포, 간세포, 근세포, 및 조혈모 줄기 세포가 포함된다.

본 명세서에서 "장기"는 본 명세서 전반에 걸쳐서 동물에서 특수한 기능을 갖는 임의의 해부학적 부분 또는 구성원을 칭하는 일반적인 의미로 사용된다. 또한 이 용어의 의미에는, 예를 들어 장기로부터 얻어지는 응집성 조직과 같은 장기의 상당 부분이 포함된다. 이러한 장기에는 비제한적으로 신장, 간, 심장, 위, 창자, 예컨대 대장 또는 소장, 췌장, 피부 및 폐가 포함된다. 이 정의에는 뼈, 골격근, 복근, 사지, 장간막 및 혈관, 예컨대 대동맥 이식편도 포함된다.

본 명세서에서 "이식"은 장기, 조직, 세포 덩어리 또는 개별 세포를 환자에게 이식하는 과정을 설명하는 일반적인 의미로 사용된다. "이식"이란 용어는, 수용자에게 이식된 조직 또는 세포의 기능적 완전성을 유지하려는 목적으로, 공여자로부터 수용자에게 생존 조직 또는 세포를 전달하는 과정으로 정의된다.

본 명세서에서 "이식 도중 투여"는 이식 수술의 전 과정 중에 투여되는 것을 의미한다. 즉, 공여자로부터 장기, 조직 또는 세포의 적출 직후, 적출된 장기, 조직 또는 세포를 수용자에게 이식하는 수술 과정 중, 그리고 이식을 완료한 직후까지도 포함한다.

본 명세서에서 "이식 전 투여"는 이식 수술에 앞선 준비 단계로서 수술 전에 미리 수 분, 수 시간, 수 일 또는 수십일 전에 공여자 및/또는 수용자에게 본 명세서에 개시된 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

본 명세서에서 "이식 후 투여"는 이식 수술의 관리 단계로서 수술 후 수 분, 수 시간, 수 일, 수십일, 수백일 후의 시점에, 수용자에게 본 명세서에 개시된 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

본 발명에 있어서, "허혈성 손상"이라 함은 심장, 뇌, 신장, 폐 등 혈류공급을 필요로 하는 장기에서 혈액순환이 차단되면서 산소 전달이 감소되어 발생하는 손상을 의미하며, 조직의 기능 손상 및 세포사를 초래할 수 있는 치명적 손상을 포함한다. 허혈성 손상을 일으킬 수 있는 원인으로는 혈관 질병, 관상동맥 혈전증, 뇌혈관 혈전증, 동맥류 파열, 전신 출혈, 압궤 손상, 패혈증, 심각한 피부 화상, 혈관 폐색성 수술 방법(예, 흉복 동맥류 수술 과정에서의 척수 허혈), 심폐 우회로 방법, 장기 이식, 심폐 허탈(급성 심장사) 및 질식 등이 있으나 이에 한정되지 않는다.

또한, 본 발명에 따른 "허혈성 손상"은 통상적으로 발생할 수 있는 허혈성 손상 외에 장기 이식 등으로 발생할 수 있는 허혈 재관류 손상을 포함한다. 상기 허혈 재관류 손상에는 뇌혈관 허혈 재관류 손상, 신장 허혈 재관류 손상, 간장 허혈 재관류 손상, 허혈 재관류 심근병증, 피부 허혈 재관류 손상, 장관 허혈 재관류 손상, 장 허혈 재관류 손상, 위 허혈 재관류 손상, 폐 허혈 재관류 손상, 췌장 허혈 재관류 손상, 골격근 허혈 재관류 손상, 복근 허혈 재관류 손상, 사지 허혈 재관류 손상, 허혈 재관류 결장염, 장간막 허혈 재관류 손상 및 무증후성 허혈 재관류 손상 등이 있으며 이에 한정되지 않는다.

허혈 재관류 손상은 장기 이식 수술과정에서 자주 발생할 수 있으며, 이를 테면 신장 이식을 하는 경우 이식 신장의 점진적 기능 상실 및 기능 부전에 허혈 재관류 손상이 연관되어 있으며, 이는 허혈 재관류 조직손상에 의한 선천면역계의 활성화가 중요한 발병기전 중 하나인 것으로 알려져 있다.

일 측면에서, 본 발명은 상기 펩티드를 함유하는 조성물을 이식편 공여자에게 투여하는 단계; 상기 공여자로부터 장기, 조직 또는 세포를 얻는 단계; 및 상기 얻어진 장기, 조직 또는 세포를 수용자에게 이식하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 공여자에게 투여되는 펩티드의 양은 수용자로 이식한 후의 장기, 조직, 또는 세포의 생존력 또는 기능을 강화시키기에 충분한 양이다. 여기서 공여자에게의 투여는 수술과 동시에 또는 직전 뿐만 아니라 수술 전 준비 단계 및/또는 수술 후 관리 단계에서도 지속적으로 투여될 수 있다. 공여자는 생존 공여자, 뇌사 공여자, 또는 뇌사전 또는 뇌사후의 공여자일 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 공여자로부터 장기, 조직 또는 세포를 얻는 단계; 상기 얻어진 장기, 조직 또는 세포를 상기 펩티드를 함유하는 조성물에 보관하는 단계; 및 상기 보관된 장기, 조직 또는 세포를 수용자에게 이식하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 장기, 조직 또는 세포 보관용 조성물 내의 펩티드의 양은 수용자로 이식한 후의 장기, 조직, 또는 세포의 생존력 또는 기능을 강화시키기에 충분한 양이다.

다른 측면에서, 본 발명은 공여자로부터 장기, 조직 또는 세포를 얻는 단계; 상기 얻어진 장기, 조직 또는 세포를 수용자에게 이식하는 단계; 및 상기 수용자에게 상기 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 수용자에게 투여되는 펩티드의 양은 수용자로 이식한 후의 장기, 조직, 또는 세포의 생존력 또는 기능을 강화시키기에 충분한 양이다. 여기서 수용자에게의 투여는 수술과 동시에 또는 직후 뿐만 아니라 수술 후 관리 단계에서도 지속적으로 투여될 수 있다.

일 구체예에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 장기, 조직 또는 세포를 수용자에게 이식한지 0∼20일 이내에, 예를 들어 1일, 2일, 4일, 6일, 8일, 10일, 12일, 14일, 18일, 또는 20일 이내에 수용자에게 투여할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 이식편의 생존을 보장하는 데 필요한 한 오랫동안 수용자에게 장기, 조직 또는 세포를 이식하는 단계 후 21일째부터 시작하여 1회 이상, 예를 들어 수차례 또는 계속적으로 수용자에게 투여할 수 있다. 본 명세서에 개시된 조성물은, 이식된 장기, 조직 또는 세포가 거부반응, 예를 들어 만성 거부반응 또는 급성 거부반응을 나타내고 있는지 또는 나타내려고 하는지의 판단에 따라 그에 적절한 형태로 수용자에게 투여할 수 있다.

일 측면에서, 상기 펩티드를 포함하는 조성물은 공여자 및 수용자 모두에게 투여될 수 있다. 다른 측면에서, 상기 펩티드를 포함하는 조성물은 공여자 및/또는 수용자에게 투여되는 동시에 이식 도중 장기, 조직 또는 세포를 일시적으로 보관하는 상기 펩티드를 포함하는 조성물에 보관할 수도 있다.

일 구체예에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 장기, 조직 또는 세포가 공여자 또는 수용자 체내에 존재하는 상태로 체내에서 장기, 조직 또는 세포를 관류시키는 방식으로 투여할 수 있다.

본 명세서에 기술된 방법에서, 장기, 조직 또는 세포는 이식할 수 있는 어떠한 장기, 조직 또는 세포도 될 수 있다. 예를 들면 장기는 간, 신장, 심장, 췌장, 폐, 소장 및/또는 피부일 수 있고, 그것의 조직 또는 세포일 수 있다.

공여자는 수용자와 이종일 수도 있고, 동종일 수도 있다. 공여자와 수용자는 둘 다 인간이 아닌 동물이거나 또는 인간일 수 있다. 또는, 공여자는 인간이 아닌 동물, 예컨대 돼지일 수 있고, 수용자는 인간일 수 있다. 일 구체예에서, 조직 또는 세포는 수용자 자신의 조직 또는 세포일 수도 있다. 다시 말하면, 공여자와 수용자가 동일 개체일 수도 있다.

본 명세서에 개시된 조성물은, 유효성분으로서 상기 펩티드 뿐만 아니라 다른 유효성분과 조합되어 포함될 수 있다. 예컨대, 폐 보존용 액으로서 상업적으로 구입 가능한 Perfadex^TM에 본 명세서에 개시된 펩티드를 첨가하여 사용할 수 있다.

본 명세서에 개시된 조성물에 있어서, 펩티드의 농도는 당업계에 공지된 바에 따라 통상적으로 결정될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 10 ㎎/L 내지 1000㎎/L, 구체적으로 50 ㎎/L 내지 500㎎/L, 더 구체적으로 30㎎/L 내지 200㎎/L 의 함량으로 포함할 수 있으나 용량에 따른 효과의 차이를 보이는 경우 이를 적절히 조절할 수 있다. 다른 구체예에서, 조성물은 펩티드를 1 mg/L 이상, 5mg/L 이상, 10mg/L 이상, 20mg/L 이상, 30mg/L 이상, 40mg/L 이상, 50mg/L 이상, 60mg/L 이상, 70mg/L 이상, 80mg/L 이상, 또는 90mg/L 이상 포함할 수 있다. 또한 조성물은 펩티드를 50000 mg/L 이하, 40000 mg/L 이하, 30000 mg/L 이하, 200000 mg/L 이하, 10000 mg/L 이하, 8000 mg/L 이하, 6000 mg/L 이하, 4000 mg/L 이하, 2000 mg/L 이하, 1000 mg/L 이하, 900 mg/L 이하, 800 mg/L 이하, 700 mg/L 이하, 600 mg/L 이하, 500 mg/L 이하일 수 있다. 상기 범위 또는 그 이하의 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.

본 명세서에서 펩티드의 투여량, 투여방법, 투여주기 등은 이미 당업계에 널리 알려져 있으므로, 각 환자의 상태에 따라 당업계에 알려진 기준에 의해 투여할 수 있다. 구체적인 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 g/kg/일, 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 100 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 예컨대, 펩티드는 해당 부위에 국소 투여 또는 피내 투여를 통해 투여될 수 있다. 이식 직전, 이식 시, 이식 직후에 투여되는 량은 60kg 체중의 성인 기준으로 1회 투여시 1mg 내지 10000mg일 수 있다. 다른 측면에서 투여량은 1 mg 이상, 5mg 이상, 10mg 이상, 50 mg 이상, 100 mg 이상, 200mg 이상, 300mg 이상, 400mg 이상, 500mg 이상, 600mg 이상, 700mg 이상, 800mg 이상, 900mg 이상, 또는 950mg 이상일 수 있다. 다른 측면에서 투여량은, 10000 mg 이하, 9000 mg 이하, 8000 mg 이하, 7000 mg 이하, 6000 mg 이하, 5000 mg 이하, 4000 mg 이하, 3000 mg 이하, 2000 mg 이하, 1500 mg 이하일 수 있다. 이식 후 관리 단계에서의 투여는 수일 간격으로 하루 1회 이상 투여될 수 있고 시간이 지나면서 날짜 간격을 더 벌릴 수도 있다. 예컨대, 1, 2, 3, 4주차에 각각 투여한 후에는 6주차, 10주차로 간격을 벌릴 수 있다.

장기, 조직, 세포 덩어리 및/또는 분리된 세포는 공여자로부터 적출하여 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 이식할 수 있다(참고 문헌의 예: Oxford Textbook of Surgery, Morris and Malt, Eds., Oxford University Press(1994)). 당업자들은 적출 및 이식 방법이 다수의 환경, 예컨대 장기, 조직 또는 세포의 유형 및 공여자의 유형에 따라 달라질 수 있음을 알 것이다.

본 명세서에 개시된 조성물은, 펩티드를 용매에 용해시킨 용액의 형태일 수 있다. 용매는 식염수, 수용액, 완충액 등 생체에 사용될 수 있는 용매라면 제한없이 사용가능하다. 일 측면에서, 조성물은, 환자에게 투여하기에 적합한 당업자에게 공지된 임의의 액체(참고 문헌의 예: Oxford Textbook of Surgery, Morris and Malt, Eds., Oxford University Press, 1994) 또는 장기, 조직 또는 세포를 체외에서 유지시키기에 적합한 임의의 액체에 본 명세서에 개시된 펩티드를 첨가하여 제조된 용액일 수 있다. 일반적으로 액체는 수용액이 될 수 있다. 용액의 예로는 인산염 완충 염수(PBS), 셀서(Celsior)TM 용액, 퍼파덱스(Perfadex) TM, 콜린스(Collins) 용액, 시트레이트 용액, 및 유니버시티 오브 위스콘신(University of Wisconsin; UW) 용액(Oxford Textbook of Surgery, Morris and Malt,Eds., Oxford University Press, 1994)을 들 수 있다.

하나의 공지된 이식 용액은 예를 들면: KH₂PO₅(25 mmol/L), MgSO₄(5 mmol/L), 라피노즈(30 mmol/L), 하이드록시에틸 펜타프랙션 전분(50g/L), 페니실린(200,000 U/L), 인슐린(40 U/L), 덱사메타손(16 mg/dL), K 락토비오네이트(100 mmol/L), 글루타티온 자극 호르몬(3 mmol/L), 아데노신 5(mmol/L), 알로푸리놀(1 mmol/L), Na(25mmol/L), 및 K(125 mmol/L)를 함유할 수 있는 위스콘신 대학 용액이다.

또 다른 공지된 이식 용액은 예를 들면: 나트륨(1OmM), 염화물(15mM), 칼륨(115mM), 중탄산염(1OmM), 인산염(5OmM) 및 글루코스(195mM)를 함유할 수 있는 유료-콜린스용액이다.

본 발명의 일측면에서는 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 허혈성 손상 치료 및 예방용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 일측면에서는 이식 전 준비 단계에서 공여자 및/또는 수용자에게 투여되는 조성물 또는 이식 후 관리 단계에서 공여자 및/또는 수용자에게 투여되는 조성물로서, 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 를 0.1 ㎍/㎎ 내지 1 ㎎/㎎, 구체적으로 1 ㎍/㎎ 내지 0.5 ㎎/㎎, 더 구체적으로 10 ㎍/㎎ 내지 0.1 ㎎/㎎의 함량으로 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함하는 경우 본 발명이 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 인간, 개, 닭, 돼지, 소, 양, 기니아피그 또는 원숭이를 포함하는 모든 동물에 적용될 수 있다.

본 발명의 일측면에서 조성물은 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 허혈 재관류 손상 치료 및 예방용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 직장, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 골수 내, 경막 내 또는 피하 등으로 투여될 수 있다.

경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 또는 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 액제 또는 유탁제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 필요에 따라 희석제, 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 완충제, 분산제, 계면 활성제, 착색제, 향료 또는 감미제 등의 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 당업계의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 이식 전 준비 단계에서 공여자 및/또는 수용자에게 투여되는 조성물 또는 이식 후 관리 단계에서 공여자 및/또는 수용자에게 투여되는 조성물의 예를 들어 0.1 ㎍/kg/일 내지 1 g/kg/일, 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일, 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 1 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 100 ㎍/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 1일 1회 내지 3회 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일측면에서 조성물은 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 허혈 재관류 손상 치료 및 예방 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 액제, 고형 제제 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어들은 특정 구체예들을 설명하기 위한 목적으로만 의도된 것이지 본 발명을 한정하고자 하는 의도가 아니다. 명사 앞에 개수가 생략된 용어는 수량을 제한하고자 하는 것이 아니라 언급된 명사 물품이 하나 이상 존재하는 것을 나타내는 것이다. 용어 "포함하는", "갖는", 및 "함유하는"은 열린 용어로 해석된다(즉, "포함하지만 이에 한정되지는 않는"의 의미).

수치의 범위를 언급하는 것은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치들을 개별적으로 언급하는 것을 대신하는 것이며, 다른 언급이 없는 한, 각 수치는 개별적으로 명세서에 언급되어 있는 것과 동일하게 본 명세서에 적용된다. 모든 범위의 한계 값들은 그 범위 내에 포함되며 독립적으로 조합 가능하다.

본 명세서에 언급된 모든 방법들은 달리 명시되어 있거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 어느 한 실시예 및 모든 실시예 또는 예시적 언어 (예컨대, "~과 같은")를 사용하는 것은, 청구범위에 포함되어 있지 않는 한, 단지 본 발명의 기재를 용이하게 하기 위함이지 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 명세서의 어떤 언어도 어떤 비청구된 구성요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 해석되어져서는 아니된다. 다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용되는 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 사람에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.

본 발명의 바람직한 구체예들은 본 발명을 수행하기 위해 발명자에게 알려진 가장 최적의 모드를 포함한다. 바람직한 구체예들의 변이들이 앞선 기재를 읽으면 당업자에게 명백하게 될 수 있다. 본 발명자들은 당업자들이 그러한 변이를 적절히 이용하길 기대하고, 발명자들은 본 명세서에 기재된 것과 다른 방식으로 본 발명이 실시되기를 기대한다. 따라서, 본 발명은, 특허법에 의해 허용되는 것과 같이, 첨부된 특허청구범위에서 언급된 발명의 요지의 균등물 및 모든 변형들을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변이들 내에서 상기 언급된 구성요소들의 어떤 조합이라도 여기서 반대로 명시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다. 본 발명은 예시적인 구체예들을 참조하여 구체적으로 나타내어지고 기술되었지만, 당업자들은 하기 청구범위에 의해 정의되는 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고서도 형태 및 디테일에서 다양한 변화가 행해질 수 있음을 잘 이해할 것이다.

하기의 실시예에서는 신장과 폐, 복직근 피부판의 허혈 재관류 손상에서 서열번호 1에 기재된 서열을 갖는 펩티드(PEP 1)를 투여함으로써 신장손상 억제 및 피판 생존률 향상 효과를 확인하여 허혈성 손상의 예방 및 치료효과를 확인하고자 하였다.

발명의 실시를 위한 형태

이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 펩티드의 합성

서열번호 1의 펩티드(이하 "PEP 1"이라 함)를 종래에 알려진 고상 펩티드 합성법에 따라 제조하였다. 구체적으로, 펩티드들은 ASP48S(Peptron, Inc., 대한민국 대전)를 이용하여 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 C-말단부터 아미노산을 하나씩 커플링함으로써 합성하였다. 다음과 같이, 펩티드들의 C-말단의 첫번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:

NH₂-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin

NH₂-Ala-2-chloro-Trityl Resin

NH₂-Arg(Pbf)-2-chloro-Trityl Resin

펩티드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:

Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ahx-OH, Trt-Mercaptoacetic acid.

커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] /NMM [4-Methylmorpholine] 를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩티드를 Resin에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA (trifluoroacetic acid) /TIS (triisopropylsilane) / EDT (ethanedithiol) / H₂O=92.5/2.5/2.5/2.5] 를 사용하였다.

아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태를 이용하여 여기에 해당 아미노산들을 각각 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩티드를 합성하였다. 합성된 펩티드를 수지로부터 끊어낸 후 HPLC로 정제하고, 합성 여부를 MS로 확인하고 동결 건조하였다.

본 실시예에 사용된 펩티드에 대해 고성능 액체 크로마토그래피 결과, 모든 펩티드의 순도는 95% 이상이었다.

본 발명에 따른 펩티드 PEP 1 제조에 관한 구체적인 과정을 설명하면 다음과 같다.

1) 커플링

NH₂-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin에 보호된 아미노산(8당량)와 커플링 시약 HBTU(8당량)/HOBt(8당량)/NMM(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.

2) Fmoc 탈보호

20%의 DMF 중의 피페리딘(piperidine in DMF) 을 가하고 상온에서 5분 간 2회 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.

3) 1과 2의 반응을 반복적으로 하여 펩티드 기본 골격 NH₂-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin)을 만들었다.

4) 절단(Cleavage): 합성이 완료된 펩티드 Resin에 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) 을 가하여 펩티드를 Resin에서 분리하였다.

5) 얻어진 mixture에 Cooling diethyl ether를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩티드를 침전시킨다.

6) Prep-HPLC로 정제 후, LC/MS로 분자량을 확인하고 동결하여 powder로 제조하였다.

실시예 2: 신장 이식

신장 이식에서 나타날 수 있는 신장 허혈 재관류 유도를 다음과 같이 진행한 후 PEP1의 효과를 관찰하였다.

신장 허혈 재관류 손상이 있는 마우스 모델은 신장 육경에 30분 동안 양쪽 클램핑(bilateral clamping)을 하고, 30분 후에 클램프를 제거하여 혈액의 흐름을 복원시키는 방법으로 허혈 재관류를 유도하여 얻었다. 실험군은 투여군 (PEP 1), 대조군 (PBS: PEP 1 투여 안 함), 그리고 Sham(no bilateral clamping)의 세 그룹으로 분류하였다. PEP 1은 1000 nmol/kg 농도로 허혈 재관류 유도 30분 전과 12시간 후에 피하주사하였다.

C57BL/6 마우스(8주령)(찰스 리버 연구소 (월민턴, MA)를 사용하여 허혈 재관류 신장손상을 유도하여 실험을 진행하였다. 허혈 재관류 신장손상모델은 신장의 족경(pedicle)을 혈관 겸자(forceps)로 잡아서 혈류를 막고 28분간 허혈을 유도한 후 재관류 하였다.

펩티드 PEP 1은 1000 nmol/kg 농도로 PBS에 희석하여 허혈 재관류 30분 전, 12시간 후 2번 복강내 투여(i.p injection)하였다. 실험군은 각각 투여군 (PEP 1), 대조군 (PBS), Sham군(허혈 재관류손상을 일으키지 않은 군으로서 신장손상이 없는 군)으로 나누어 실험을 진행하였다.

시험예 1: 허혈 재관류 손상 유도된 신장기능손상 보호 효과

허혈 재관류 24시간 후에 혈액을 채취하여 신장독성지표인 BUN(혈중 요소 질소, blood urea nitrogen), 크레아틴(creatine)을 측정하였고, 신장조직은 적출하여 파라핀 블록(paraffin block)을 제작하여 면역조직화학 및 조직학적 검사(immunohistochemical and histological study)를 진행하였으며, 단백질을 추출하여 사이토카인(cytokine) 레벨을 측정하였다. 크레아틴 농도와 BUN은 자동분석기(Technicon RA-1000; Bayer, Tarrytown, NY)를 이용하여 측정하였다.

측정 결과, PEP 1 투여군은 PBS 대조군에 비하여 BUN, 크레아틴의 값이 유의하게 감소하였다(도 1 참조).

시험예 2: 신장 조직 손상 보호효과

허혈 재관류 24시간 후 신장조직을 PAS(peridodic acid-Schiff) 염색(제조 업체인 Polysciences 주식회사 (워링턴, PA, USA) 프로토콜에 따라 PAS 키트로 PAS 염색)을 하였다. 염색을 한 후, 신장조직 손상 스코어링(renal tissue injury scoring)으로 신조직 손상을 평가하였다. PEP 1의 투여군은 PBS 대조군에 비하여 신장조직손상이 현저하게 완화된 양상을 보였다(도 2 및 도 3 참조).

시험예 4: 신장 세포사멸(renal apoptosis) 억제효과

허혈 재관류 24시간 후 신장조직을 TUNEL 염색으로 신조직 세포사멸(apoptosis)을 평가하였다. 로슈 응용 과학 (인디애나 폴리스, IN, USA) 에서 만든 TUNEL 염색 키트를 통해 파라핀 신장 섹션에 TUNEL 염색을 하였다.

확인 결과, PEP 1의 투여군은 PBS 대조군에 비하여 TUNEL 양성 세포(positive cells)가 현저하게 감소하므로 신조직 세포사멸을 억제함을 확인할 수 있었다(도 4 및 도 5 참조).

시험예 5: 신장 조직에서의 선천면역 세포 침윤 억제 효과

허혈 재관류 24시간 후 신장 조직을 F4/80(macrophage maker), Gr-1(neutrophil maker) 면역조직염색으로 선천면역세포의 침윤을 평가하였다. 구체적으로는 대식세포에 특이적인 항체(F4/80, abcam., Cambridge, MA)를 사용하여 파라핀 함유 섹션상의 면역화학적인 방법으로 대식세포 및 호중구 세포 침투 염색을 하였다.

PEP 1 투여군은 PBS 대조군에 비하여 신장조직에서 대식세포(macrophage)와 호중구(neutrophil)의 신장조직으로의 침투가 현저하게 감소하였음을 확인할 수 있었다(도 6 및 도 7 참조).

시험예 6: 염증성 사이토카인 분비 억제효과

허혈 재관류 24시간 후 신장조직에서 단백질을 추출하여 사이토메트릭 비드 어레이(cytometric bead array) 방법으로 IL-6, MCP-1, TNF-α 레벨을 측정하였다. 마우스 IL6, MCP-1, TNFa ElISA 키트는 R&D Systems 에서 구입했으며 제조 업체의 프로토콜에 따라 실험을 수행하였다.

측정 결과, PEP 1 투여군은 PBS 대조군에 비하여 IL-6, MCP-1, 레벨을 유의하게 감소시켰으나, TNF-α에서는 유의한 변화가 관찰되지 않았다(도 8 내지 도 10 참조).

이상과 같이, PEP 1의 허혈 재관류 신장 손상에 대한 보호효과는 신장 기능 (BUN, creatine), 신장 조직 손상 (tubular injury), 신장 세포사멸 (renal apoptosis), 신장 조직 염증세포 침윤 (immune cell infiltration) 과 신장 조직 사이토카인(cytokine) 분비억제로 평가하였다.

허혈 재관류 PBS 대조군에서는 Sham군에 비하여 혈청 BUN과 크레아틴 값이 증가하였으며, 신장조직손상도 증가하였다. 그러나 PEP 1 투여군에서는 대조군에 비하여 BUN과 크레아틴 값이 유의하게 감소하였고, 신장조직손상(renal tubular injury)뿐만 아니라 신장세포사멸도 감소하였다. 또한 PEP 1 투여군은 PBS 대조군에 비하여 신장에서 허혈 재관류에 의한 염증세포의 (neutrophils and macrophages) 침윤을 억제하였고, 염증성 사이토카인의 (interleukin-6, monocyte chemotactic protein-1) 분비도 유의하게 억제하였다.

실시예 3: 피판 이식

복직근 피부판의 이식을 다음과 같이 수행하였다. 흰 랫트(Sprague-Dawley Rat, 180g에서 230g)의 배의 피부에서 5cm x 5cm 크기로 피판을 채취한 후, PEP1 또는 식염수(Saline)를 투여하고, 클램핑(clamping)을 하여 국소빈혈(ischemia)을 일으키고, 7시간 후에 클램프를 제거하여 혈액의 흐름을 복원시키는 방법으로 허혈 재관류 손상을 유도하여 얻었다 (도 11 참조).

실험군은 투여군 (PEP 1 처리군), 대조군 (식염수 처리군: PEP 1 투여 안 함), 그리고 Sham군 (허혈 재관류 손상을 일으키지 않은 군)의 세 그룹으로 분류하였다. PEP 1은 10mg/500㎕ 농도로, 식염수는 500㎕를 허혈 재관류 유도 30분 전 및 각 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일 후에 근육 내(intramuscular)로 주사 하였다.

허혈 재관류를 유도한 후 7일 후에 피판의 생존률(Flap Survivability)을 측정하였다. 피판 생존율의 측정은 imageJ 프로그램을 통한 디지털 사진 분석을 통하여 수행하였다.

7일 후 피판 생존율의 측정 결과, 식염수 처리 군의 경우 34.69% 16.44%로 평가 되었으며, 상대적으로 PEP1을 처리한 군의 피판 생존율은 58.88% 11.44%로 식염수 처리 군에 비해 향상되었음을 확인할 수 있었다(도 12 참조). 각 그룹간에는 통계적 유의성(p<0.05)이 나타났다.

실시예 4: 폐 이식

PEP1의 허혈 재관류 손상 예방 효과를 측정하기 위한 폐 이식 모델은 다음과 같이 세팅 하였다.

실험은 같은 유전자를 가진 두 마리 랫트(rat)를 대상으로 하며, 한쪽 쥐에서 좌측 폐를 떼어내어 다른 쥐의 좌측 흉강에 원래의 좌측 폐를 떼어내고 폐 이식 하였다. 거부(rejection) 반응을 근본적으로 차단하기 위해 같은 유전자를 가진 랫트를 사용하였다. 랫트는 공여자(Donor)와 수여자(Recipient) 모두 300g 내지 350 g 의 무게를 가지고 Sprague-Dawley 종을 대상으로 하였다. 이후 공여자 랫트에서 폐를 적출하여 수여자 랫트에게 이를 이식하는 수술을 하였다.

공여 랫드의 폐 적출술은 다음과 같이 진행하였다.

① 공여자인 흰 랫드에게 럼푼:졸레틸(1:2, 1ml/kg)을 복강으로 주입(i.p injection)하여 마취한다.

② 기관 절개술 후에 16-게이지 정맥 카테터(16-gauge intravenous catheter)를 이용한 튜브를 삽관하고 인공 호흡기 (Harvard Rodent Ventilator Model; Harvard Apparatus CO, Holliston, MA) 에 연결한다 (Vt=10 ml/kg, PEEP=2 cm H2O, respiratoryrate=80/min). 100% 산소로 기계환기를 한다.

③ 개복 및 정중 흉골 절개를 시행하고 하대정맥을 통해서 Heparin 300 IU를 주입한다.

우심실 유출로를 통하여 주폐동맥에 18-게이지 혈관 카테터(18-gauge angio-catheter)를 삽입한 후, 복강 내에서 하대정맥을 절단하고 좌심방이를 절단하면서 주폐동맥 카테터를 통해서 20 cm H2O 압력으로 10℃의 50 mL 생리 식염수를 주입한다. 관류 중 기계호흡을 지속하여 폐관류가 균일하게 이루어지도록 한다.

④ 관류가 끝나면 기관 삽관 하부에서 폐가 팽창된 상태에서 기관을 결찰하고, 심폐블록을 적출한 후 차가운 페트리 접시(petri-dish)에서 식도 등 주변 구조물을 제거한다. 심폐블록의 무게를 측정한 후 폐관류액과 동일한 관류액 속에 심폐블록을 담구어 냉장 보관한다. 허혈 시간(ischemic time)은 3 시간으로 정하였다.

이식 폐의 준비과정은 다음과 같다.

① 적출한 폐를 차가운 플러쉬(cold flush) 용액이 담겨 있는 페트리 접시에 놓은 후 젖은 스폰지(wet sponge)로 덮고 커프(cuff)를 설치하는 동안은 저체온(hypothermia)을 유지한다.

② 커프를 연결할 만큼 충분한 거리를 확보하고 폐동맥은 18G, 폐정맥은 16G, 기관지는 16G 카테터로 커프를 넣고 4-0 견사(silk)를 이용하여 고정한다.

이식 수술과정은 다음과 같다.

① 수여 랫드를 복강 주사로 진정시킨 후 기관 절개술 후에 16-가우즈 정맥용 카테터(16-gauge intravenous catheter)를 이용한 튜브를 삽관하고 4-0 견사로 고정한다. 공여자와 동일하게 기계환기를 시행한다.

② 우측 측와위 자세를 취하고 대흉근과 광배근을 절개하고 4번째 늑간으로 좌후측방 개흉술을 시행한다.

③ 좌폐인대를 절단하고 좌측 폐를 흉곽 밖으로 빼내어서 고정하고 폐문부를 박리하여 폐동맥, 폐정맥, 좌주기관지를 노출한다.

④ 위의 세가지 구조물 모두 미세혈관 클립(microvascular clips) (Micro-Serrefine, Fine Science Tools, Foster city, CA)를 이용하여 겸자한다.

⑤ 좌측 폐를 떼어내고 이식폐의 폐동맥, 폐정맥, 기관지를 커프스 기법(cuff technique)을 이용하여 연결한다.

폐 이식 랫트들을 다음과 같이 네 그룹으로 나누어 실험을 진행하였다. PEP1의 적절한 투여 농도를 결정하기 위하여 PEP1을 저농도(5 mg)와 고농도(50 mg)로 나누어 이식 전 공여자 랫트의 폐에, 공여자로부터 떼어 낸 폐에, 그리고 이식 후 수여자에게 각각 가하였다.

① 생리 식염수(Normal Saline) 50 mL 투여군

② Perfadex^TM 50 mL 투여군

③ Perfadex^TM 50 mL + PEP1 5 mg 투여군

④ Perfadex^TM 50 mL + PEP1 50 mg 투여군

폐 이식 후 이식된 폐의 기능을 평가하기 위해 다음의 실험 들을 수행하였다.

시험예 1. 헤마톡실린&에오진 염색 (H&E stain)

허혈 재관류 손상으로 인한 폐손상이 일어나면 출혈(hemorrhage)이 발생하고, 폐포벽이 두꺼워지는데, 위 네 가지 용액을 폐보존 용액으로 사용하였을 때 발생하는 허혈 재관류 손상 정도를 출혈 발생과 폐포벽의 두께를 통해 측정하기 위하여, 아래와 같이 헤마톡실린&에오진 염색을 수행 하였다.

이식한 폐의 중간 부위를 포르말린 고정하여 헤마톡실린&에오진 염색 후 광학현미경을 통한 폐포 조직 소견을 서로 비교하였다.

분석 결과, 생리 식염수 (①군), Perfadex^TM (②군), Perfadex^TM와 PEP1 50 mg (④군), Perfadex^TM와 PEP1 5 mg (③군)의 순으로 출혈이 많이 나타났으며, 폐포 벽도 두꺼워지는 양상을 보였다. 특히 Perfadex^TM와 PEP1 5 mg (③군)을 폐보존액으로 사용한 경우 출혈이 거의 일어나지 않았으며, 폐포 벽도 두꺼워지지 않은 것을 관찰할 수 있었다. 이는 Perfadex^TM에 포함되는 PEP1이 50 mg인 경우 보다 5 mg 일 때, 더 높은 출혈 방지 및 폐포벽 유지 효과 즉, 허혈 재관류 손상 억제 효과가 있음을 의미한다. (도 14 참조)

시험예 2. 습건 중량비 (wet/dry weight ratio) 측정

이식한 폐의 하엽을 잘라내서 바로 무게를 측정한 다음 24시간 동안 60℃의 건조기에서 건조한 후에 다시 무게를 측정하였다.

분석 결과, 생리 식염수 투여군(①군), Perfadex^TM와 PEP1 50 mg을 투여한 군(④군), Perfadex 투여군(②군), Perfadex^TM와 PEP1 5 mg을 투여한 군(③군)의 순으로 재관류 부종(reperfusion edema)이 많이 나타났다.

Perfadex^TM 투여군(②군), Perfadex^TM와 PEP1 5 mg을 투여한 군(③군)에서는 생리 식염수 투여군(①군)과 비교하였을 때, 재관류 부종이 유의성 있게 (p < 0.05) 감소를 보였으며, Perfadex^TM와 PEP1 5 mg을 투여한 군(③군)의 경우 그 수치가 가장 낮았다. (도15 참조)

시험예 3. 기관지 폐포세척액 (BAL, Bronchoalveolar lavage fluid) 분석

5 mL의 생리 식염수(normal saline)를 기관 내로 점적 주입(instillation)하고 다시 뽑아내어 호중성백혈구 내용(neutrophil content)를 분석하였다.

분석 결과, 생리 식염수 투여군(①군), Perfadex^TM 투여군(②군), Perfadex^TM와 PEP1 50 mg을 투여한 군(④군), Perfadex^TM와 PEP1 5 mg을 투여한 군(③군)의 순으로 기관지 폐포세척액의 염증세포(inflammatory cell)의 비율이 높게 나타났다. 화살표 부분 염증세포를 나타낸다. Perfadex^TM와 PEP1 5 mg을 투여한 군(③군)에서 염증 세포가 가장 적게 발현되었음을 확인할 수 있었다. (도 16 참조)

<110> KAEL-GEMVAX CO., LTD. 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Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly 965 970 975 Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn 980 985 990 Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln 995 1000 1005 Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln 1010 1015 1020 Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala 1025 1030 1035 1040 Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu 1045 1050 1055 Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp 1060 1065 1070 Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr 1075 1080 1085 Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser 1090 1095 1100 Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn 1105 1110 1115 1120 Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp 1125 1130

Claims (18)

1. 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물로서,
   상기 조성물은 유효성분으로서, 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드를 포함하는, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 공여자 및 수용자 중 하나 이상에게 투여되는 것인 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 조성물은 이식 전, 이식 도중 및 이식 후 중 어느 하나 이상의 단계에서 투여되는 것인 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 공여자로부터 분리된 장기, 조직 또는 세포를 보관하기 위한 것인 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 수용자에게 이식한 후의 장기, 조직, 또는 세포의 생존력 또는 기능을 강화시키는 것인, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 상기 유효성분인 펩티드를, 조성물 전체 부피에 대하여 10 ㎎/L 내지 1000㎎/L의 농도로 포함하는 것인 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 조성물은 상기 유효성분인 펩티드를, 조성물 전체 부피에 대하여 50 ㎎/L 내지 500㎎/L의 농도로 포함하는 것인 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물; 및
   상기 조성물을 사용하는 방법을 포함하는 설명서를 포함하는 장기, 조직 또는 세포 이식용 키트.
9. 제8항에 있어서, 상기 조성물은,
   이식 전에 공여자에게 투여되는 조성물;
   이식 전에 수용자에게 투여되는 조성물;
   이식 중에 공여자에게 투여되는 조성물;
   이식 중에 수용자에게 투여되는 조성물;
   공여자로부터 분리된 장기, 조직 또는 세포를 보관하기 위한 조성물;
   이식 후 공여자에게 투여되는 조성물; 및
   이식 후 수용자에게 투여되는 조성물 중 어느 하나 이상인, 장기, 조직 또는 세포 이식용 키트.
10. 제9항에 있어서, 상기 설명서는
    상기 각 조성물의 투여량, 투여방법 및 투여간격을 포함하는 장기, 조직 또는 세포 이식용 키트.
11. 제10항에 있어서, 상기 설명서는
    상기 조성물을 장기, 조직 또는 세포가 공여자 또는 수용자 체내에 존재하는 상태로 체내에서 장기, 조직 또는 세포를 관류시키는 방식으로 투여되는 내용을 포함하는 장기, 조직 또는 세포 이식용 키트.
12. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 장기, 조직 또는 세포가 공여자 또는 수용자 체내에 존재하는 상태로 체내에서 장기, 조직 또는 세포를 관류시키는 방식으로 투여되는 것인 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
13. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 60kg 체중의 성인 기준으로 1회 투여시 1mg 내지 10000mg의 양으로 처리 또는 투여되는, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
14. 제13항에 있어서, 상기 조성물은 60kg 체중의 성인 기준으로 1회 투여시 200mg 내지 5000mg의 양으로 처리 또는 투여되는, 장기, 조직 또는 세포 이식용 조성물.
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