KR20120133661A

KR20120133661A - 아스타잔틴을 포함하는 항염증제

Info

Publication number: KR20120133661A
Application number: KR1020110052409A
Authority: KR
Inventors: 김성구; 유병홍; 김영민; 안원근; 이철원; 곽태원
Original assignee: 주식회사 바이오포트코리아
Priority date: 2011-05-31
Filing date: 2011-05-31
Publication date: 2012-12-11

Abstract

본 발명은 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물에 관한 것이다. 상기 아스타잔틴은 세포 독성이 없을 뿐만 아니라, 염증과 관련된 각 수준의 단백질의 발현 구체적으로, NF-κB, iNOS 및 TNF-α의 발현을 억제하고, NO 분비량을 감소시킬 수 있어서, 효과적으로 염증을 저해할 수 있으므로, 이를 유효성분으로 포함하는 상기 항염 조성물은 염증과 관련된 질병에서 염증을 억제하는 항염증제 및 항염효과가 있는 화장료 조성물 등으로 응용될 수 있다.

Description

아스타잔틴을 포함하는 항염증제{ANTI-INFLAMMATORY AGENT CONTAINING ASTAXANTHIN}

본 발명은 항염효과가 있는 천연물질 유래 성분을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물에 관한 것이다.

염증은 외부에서 들어온 해로운 물질이나 유기체 등과 같은 여러 요인에 의하여 세포나 조직이 손상을 입거나 파괴되었을 때 그 손상을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키기 위하여 국소적으로 일어나는 면역반응으로서, 생체를 보호하고 조직 손상으로 생성된 산물들을 제거하는데 유용한 방어 메카니즘이다. 상기 방어 메카니즘에 의해, 결과적으로 통증, 부종, 발적 또는 발열 등이 일어나 기능장애가 유발되기도 한다. 상기 염증을 유발하는 여러 요인에는 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인, 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인 및 항체반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해 발생되기도 한다.

상기 염증은 정상적인 경우에는 생체 내에서 염증반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키는 작용을 하지만, 염증의 정도가 일정 수준 이상이 되거나 만성화되어 만성염증과 같은 질병 상태로 진행되는 경우 문제가 된다. 임상질환 가운데 거의 모든 질환에서 염증 반응을 관찰할 수 있을 뿐만 아니라, 암발생 과정(carcinogenesis)에서도 염증 반응과 관련된 효소들이 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

상기 염증 반응과 관련된 효소는 면역세포에 의해 생산된다. 구체적으로, 상기 면역세포들은 히스타민(histamine), 일산화질소(nitric oxide, NO) 또는 프로스타글라딘 E2(prostaglandin E2, PGE2) 등의 도움으로 혈관을 통해 손상된 부위로 이동하여 염증반응을 개시한다. 상기 손상된 부위로 이동한 면역세포는 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β) 또는 IL-6(interleukin-6)와 같은 사이토카인(cytokine) 이나 MIP-1, IL-8 또는 MCP-1등과 같은 케모카인(chemokine)을 분비하여 직접적인 외부침입물질을 파괴하거나 다른 면역세포들을 모아 염증반응을 개시한다.

상기 염증반응을 일으키는 interferon-γ, lipoteichoic acid, lipopolysaccharide(LPS) 등의 염증유발 물질이나 다양한 염증 유도 사이토카인에 노출될 경우, iNOS(inducible Nitric Oxide synthase)와 COX-2(cyclooxygenase-2)가 발현되어, nitric oxide(NO)와 prostaglandin E2가 과량 생성된다. 이들 여러 염증 개시인자들(iNOS, COX-2, TNF-α, IL-6 등)은 활성화된 NF-κB에 의해 전사가 촉진되며, 이로 인해 NO가 필요이상으로 생성되면 shock에 의한 혈관확장, 염증반응에 의해 유발되는 조직손상, mutagenesis, 신경조직의 손상 등을 일으킨다. 또한, COX-2가 과발현될 경우에도 염증반응을 일으킨다.

따라서, 최근 효과적인 염증 완화를 위하여, 상기 염증 관련 단백질의 발현을 억제할 수 있는 물질에 대한 연구가 진행되고 있다. 그러나, 이러한 연구에 의해 개발된 항염물질의 경우 몇 가지 부작용이 문제되고 있다. 일 예로, 급성 또는 류마티스성 관절염과 같은 만성의 염증 질환의 치료에 사용되는 비스테로이드성 소염 약물들은 COX-2 효소를 억제할 뿐만 아니라 COX-1 효소도 억제함으로써 위장관 장애와 같은 부작용을 나타내는 것으로 알려져 있다.

한편, 일상생활에 사용되는 화장품은 피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 제품이지만 화장품 조성물을 살펴보면 피부 보호 목적과는 상이한 성분들이 제품 형성에 필수 불가결한 존재로서 사용된다. 예를 들어, 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소 및 기타 효능이나 효과를 부여하기 위해 쓰이는 여러 가지 성분들을 들 수 있다. 상기 화장품 제조에 필수적으로 사용되는 성분은 일반적으로 피부에 염증이나, 뾰루지 또는 부종 등과 여러 가지 부작용을 발생하는 것으로 알려져 있다.

또한, 체내로부터 배출되는 피지 성분, 땀 성분 및 화장품 성분 중의 지방산, 고급 알코올, 단백질 등이 피부 상에 존재하는 피부 상재 균들에 의해 독성이 강한 물질로 분해되면, 이들에 의해 피부 염증이 유발될 수도 있으며, 태양으로부터 나오는 자외선에 의해서도 피부 염증이 유발된다는 것은 잘 알려진 사실이다.

이렇듯 화장품에 있어서 피부 부작용 유발요인은 항상 잠재되어 있으며 이를 해결 하고자 여러 가지 연구가 진행되어 왔다. 현재까지 홍반이나 부종 같은 자극완화 및 염증 완화 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 플루페나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin)등이 있고, 스테로이드계로는 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone) 등이 있으며, 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존, 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산 유도체) 등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

그러나, 일반적으로 항염제로 쓰이는 상기 인도메타신은 화장료에는 사용할 수 없는 물질이고, 상기 하이드로코티존은 사용량이 제한되어 있으며, 감초산 및 그 유도체는 안정화시키기 어렵거나 용해도가 좋지 않아 실제 적용 시 농도의 제한으로 인하여 실질적인 효과를 거두기가 어려운 점이 있는 등 지금까지 알려진 항염제는 피부안전성 면이나 화장료 배합시의 안정성 면에서 대부분 문제점을 가지고 있어서 그 사용이 제한되고 있다.

그러므로, 천연물질 유래 물질로 이러한 부작용이나 세포독성에 대한 위험이 없거나 적으면서, 효과적으로 NF-κB, iNOS 및 TNF-α의 발현을 억제할 수 있어 항염효과가 우수하여, 부작용 없이 염증을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.

상기와 같은 요구에 부응하기 위하여, 본 발명은 부작용과 관련된 문제가 발생될 가능성이 적은 천연물질 유래 성분을 유효성분으로 하는 항염 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 기존의 항염물질과 달리 천연물질에서 비롯하여 부작용 등이 문제되지 아니하고, 염증과 관련된 NF-κB, iNOS 및 TNF-α의 발현을 억제할 수 있는 성분을 유효성분으로 포함하는 항염증제 또는 화장품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물을 제공한다.

상기 아스타잔틴은 NF-κB, iNOS 및 TNF-α의 발현을 억제하고, NO 분비량을 감소시킬 수 있을 뿐만 아니라, 천연물로부터 유래된 것으로 부작용이 문제될 가능성도 낮고, MTT 분석 결과 세포 독성도 없는 것으로 확인되었다.

따라서, 본 발명의 항염 조성물은 항염증제의 유효성분 또는 염증을 억제하기 위한 목적으로 화장료 조성물의 유효성분으로 제공될 수 있다.

이러한 측면에서, 본 발명은 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물이 포함된 항염증제를 제공한다.

또한, 본 발명은 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물이 포함된 화장품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 아스타잔틴을 생산하는 방법을 제공한다.

본 발명자들은 아스타잔틴이 염증을 직접적으로 유도할 수 있는 NO의 분비를 억제할 수 있고, 상기 NO의 분비 및 염증을 유발하는 프로스타글란딘 생성과 관련된 iNOS발현을 억제할 수 있으며, 상기 염증을 유발하는 단백질인 NF-κB, 및 TNF-α의 발현을 억제할 수 있다는 결과를 통하여, 아스타잔틴이 항염효과가 우수하다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명은 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물에 관한 것이다.

상기 아스타잔틴(astaxanthin, ATX, 3,3'-dihydroxy-β,β'-carotene-4,4'- dione)은 카로티노이드계 색소(ketocarotenoid)로 테르펜으로 알려진 피토케미컬의 한 분류에 속하며, 화학식 C₄0H₅₂O₄를 갖는 빨간색을 띠며 지용성 색소이다. 주로, 새우 등의 갑각류를 비롯하여 수생동물에 널리 분포한다. 생체 내에서는 단백질과 결합한 색소단백질로 존재하는 것이 많다. 상기 아스트잔틴은 기존에 강력한 항산화 활성을 갖는 물질로 알려 알려져 있으나, 항염 활성과 관련해서는 구체적으로 보고되어 있지 않다.

본 발명의 아스타잔틴은 100 μM를 사용한 경우에도 세포독성을 유발하지 않는 것으로 확인된 반면, 상기 아스타잔틴을 5 μM 처리한 경우 세포내 실험에서 LPS에 의해 유도된 NO의 생성을 억제할 수 있고, 50 μM 처리한 경우, IL-6, iNOS 및 TNF-α의 발현을 억제하는 것으로 확인되었다.

따라서, 상기 항염 조성물은 염증을 억제하거나 염증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용될 수 있다. 상기 염증은 일반적인 염증질환을 포함하는 개념이며, 일 예로 상기 염증질환은 각종 피부염, 알레르기, 전신성 홍반성 낭창, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염 및 신장염으로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 상기 알레르기는 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염, 두드러기(urticaria), 곤충 알러지, 식품 알러지 및 약품 알러지를 포함한다. 따라서, 본 발명의 항염 조성물은 염증질환의 치료 또는 예방용 조성물로 응용되거나, 상기 염증질환의 예방 또는 개선용 식품조성물로 응용될 수 있다. 상기 식품조성물은 일 예로 상기 염증질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품 조성물일 수 있다.

상기 건강기능식품은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명의 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 상기 아스타잔틴을 전체 식품 중량의 0.001 중량% 내지 15 중량% 포함될 수 있다.

상기 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화기관, 배설기관 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다.

상기 아스타잔틴은 상기 항염 조성물 내에 단독으로 사용될 수 있으며, 그 외 약리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. 보다 상세하게는, 상기 아스타잔틴을 포함하는 조성물이 약제로 사용되거나, 의약 또는 약학적 용도로 사용되는 경우, 상기 아스타잔틴은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 사용될 수 있다.

이 경우 상기 조성물 내 아스타잔틴의 함량은 0.001 중량 % 내지 99.9 중량 %, 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 화합물의 함량은 바람직한 함량으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다.

상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 아스타잔틴에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 공지의 항염효과가 있는 것으로 인정된 물질, 일 예로 COX-2 저해제, NO 저해제 또는 항염증제 등으로 사용되는 물질을 더욱 포함할 수 있다.

상기 조성물이 약제로 사용하는 경우 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일 예로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.

또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있다.

더 나아가, 본 발명의 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.

상기 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 일 예로 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.1 mg/kg(체중) 내지 500 mg/kg(체중), 0.1 mg/kg(체중) 내지 400 mg/kg(체중) 또는 1 mg/kg(체중) 내지 300 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 또한, 상기 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증제를 제공한다.

상기 아스타잔틴은 바람직하게는 헤마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)로부터 추출된 것일 수 있다.

상기 항염증제는 상기 유효성분을 단독으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 혼합물로 제공되는 경우, 상기 유효성분은 항염증제 전체에 대해 0.1 내지 99.9 중량%로 포함될 수 있으나, 통상 0.001 내지 50 중량%의 함량으로 포함되는 것이 일반적이다.

상기 항염제는 류마티스 관절염, 루푸스, 다발성 경화증과 같은 각종 만성 염증 질환, 패혈증, 쇼크, 장기이식의 거부반응과 같은 각종 급성 염증 질환, 안과질환, 기관지염, 또는 염증성 장질환의 예방 및 치료의 목적으로 사용가능하다.

상기 담체 또는 부형제의 일예로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 담체 또는 부형제는 2종이상 사용될 수 있다.

또한 항염증제를 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.

또한 본 발명의 항염증제는, 아스타잔틴 이외에 공지의 항염활성을 갖는 화합물 또는 식물 추출물을 더욱 포함할 수 있으며, 아스타잔틴 100 중량부에 대하여 각각 5 중량부 내지 200 중량부로 포함될 수 있다.

항염증제의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.

본 발명에 따른 항염증제는 경구 또는 비경구로 사용될 수 있으며, 예컨대 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하내, 코안, 경막외 및 구강경로를 통하여 사용될 수 있으며, 이의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일 예로, 본 발명의 항염증제는 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.1 ㎎/㎏(체중) 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여가능하다. 그러나 상기한 투여량은 예시하기 위한 일예에 불과하며 상기 범위에 한정되지는 않는다.

본 발명은 또한, 상기 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 아스타잔틴은 식용으로 사용되던 천연물질 유래이므로 부작용이 문제되지 아니하고, 세포독성도 없을 뿐만 아니라, 염증 억제 효과가 뛰어나기 때문에 항염 및 항자극 활성이 뛰어나므로, 화장품에 포함된 성분들에 의해 유도되는 염증 및 외부 환경에 의해 유도도는 염증을 효과적으로 제어할 수 있기 때문에, 상기 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물은 염증 개선 및 완화효과를 갖는 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 기초 화장료, 메이크업 화장료, 바디 화장료, 두발용 화장료, 두피용 화장료, 면도용 화장료 또는 구강용 화장료의 용도로 제공될 수 있다.

상기 기초 화장료의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있고, 상기 메이크업 화장료의 예로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이섀도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있으며, 상기 바디 화장료의 예로는 비누, 액체 세정제, 입욕제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있고, 상기 두발용 화장료의 예로는 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어 무쓰, 헤어 리퀴드, 포마드, 헤어 칼라제, 헤어 블리치제 또는 칼라 린스 등이 있으며, 상기 두피용 화장료의 예로는 헤어 토닉 또는 스칼프 트리트먼트 등이 있고, 상기 면도용 화장료의 예로는 애프터셰이브로션 또는 셰이빙 크림 등이 있으며, 상기 구강용 화장료의 예로는 치약 또는 마우스 워셔 등이 있다.

상기 화장료 조성물에는 유효성분 외에 사용용도 및 화장료 조성물의 성질에 따라 통상 화장료 조성물에 배합되고 있는 성분, 일예로 보습제, 자외선 흡수제, 비타민류, 동식물 추출성분, 소화제, 미백제, 혈관확장제, 수렴제, 청량제, 호르몬제 등을 추가로 배합될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 약물 또는 유효성분을 피부조직으로 침투 또는 이행시키기 위해서 필요한 기제를 추가로 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형은 사용용도 및 화장료 조성물의 성질에 따라 적절한 형태를 취할 수 있으며, 일 예로 수용액계, 가용화계, 유화계, 유액계, 겔계, 페이스트계, 연고계, 에어졸계, 물-기름 2층계 또는 물-기름-분말 3층계일 수 있으며, 상기 제형의 예는 단순한 예시일 뿐, 상기 예시에 의해 본 발명의 화장료 조성물의 제형 및 형태가 제한되는 것은 아니다.

상기 유효성분은 상기 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하기로는 0.01 내지 20 중량%일 수 있으나, 상기 함량은 제형 또는 화장료 조성물에 함유되는 유효성분외의 성분의 함량에 따라 적절히 조절할 수 있으며, 상기 함량에 의해 본 발명에 포함되는 유효성분의 함량이 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 미세조류로부터 아스타잔틴을 생산하는 방법에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 상기 방법은 마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)를 배양하는 단계; 및 상기 마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)의 배양물로부터 아스타잔틴을 추출하는 단계를 포함하는 미세조류로부터 아스타잔틴을 생산하는 방법에 관한 것이다.

상기 마토코커스 플루비알리스를 배양하는 단계는 마토코커스 플루비알리스의 생육 정도 및 아스타잔틴 생산량을 고려하여, 온도, 초기 배양 pH 및 조도를 조정하여 수행할 수 있다.

상기 마토코커스 플루비알리스의 배양물로부터 아스타잔틴을 추출하는 단계는 상기 마토코커스 플루비알리스의 배양물로부터 마토코커스 플루비알리스을 수득하는 과정; 상기 수득된 마토코커스 플루비알리스에 아세톤을 첨가하고 냉각추출하는 과정 및 상기 냉각추출한 추출물에 헥산을 첨가하고 추출하는 과정을 포함하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 배양물은 상기 마토코커스 플루비알리스를 배양한 배양배지 또는 배양액을 의미한다.

본 발명의 아스타잔틴은 최근 식용 및 에너지 원으로 관심을 받고 있는 미세조류로부터 유래한 사용되는 식물 유래 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 실험결과에 의해 확인한 결과 세포 독성이 없을 뿐만 아니라, 염증과 관련된 각 수준의 단백질의 발현 구체적으로, NO 분비량, iNOS, NF-κB, TNF-α 및 IL-6 등의 발현여부에 미치는 영향을 통하여 확인한 결과, 효과적으로 염증을 저해할 수 있는 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물은 염증을 억제하여 염증과 관련된 질병을 치료 또는 예방하기 위한 항염증제 및 특정 제형 등과 관련하여 화장품 제조에 필수적으로 사용되는 성분 또는 외부환경으로 인한 피부의 염증을 효과적으로 억제할 수 있는 특징을 갖는 화장료 조성물 등에 응용될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 염증과 관련된 질병에 대한 치료와 관련된 의료산업 및 피부염증의 제어와 관련된 화장품 산업의 분야에서 널리 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 아스타잔틴의 세포독성을 확인한 그래프로, 상기 그래프의 가로축은 아스타잔틴의 함량을 의미하고, 상기 그래프의 세로축은 세포 생존율(Cell viability(%))을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 아스타잔틴이 NF-κB에 미치는 영향을 정량적으로 확인한 사진으로, 상기 사진의 N은 LPS를 처리하지 않은 음성 대조군이고, 상기 사진의 P는 LPS를 처리한 양성 대조군이며, 상기 시간은 LPS를 처리한 후, 경과된 시간을 의미하고, 상기 사진의 S는 LPS 및 아스타잔틴을 처리한 결과를 의미한다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 아스타잔틴이 iNOS의 발현에 미치는 영향을 나타낸 사진으로, 상기 사진 위의 숫자는 아스타잔틴의 함량을 의미한다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 아스타잔틴이 TNF-α에 미치는 영향을 정량적으로 확인한 그래프로, 상기 그래프의 가로축은 아스타잔틴의 함량을 의미하고, 상기 그래프의 세로축은 TNF-α의 생성정도를 대조군(control)에 대한 상대적인 값(relative TNF-α production)을 의미한다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 아스타잔틴이 IL-6에 미치는 영향을 정량적으로 확인한 그래프로, 상기 그래프의 가로축은 아스타잔틴의 함량을 의미하고, 상 상기 그래프의 세로축은 IL-6의 생성정도를 대조군(control)에 대한 상대적인 값(relative IL-6 production)을 의미한다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 아스타잔틴의 항염활성을 확인하기 위하여, NO의 생성정도를 확인하여 정량화한 그래프로, 상기 그래프의 가로축은 아스타잔틴의 함량을 의미하고, 상기 그래프의 세로축은 NO의 생성정도를 나타낸다.

이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위하여 제조예 및 실시예를 제시한다. 그러나, 하기 제조예 및 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 예시한 것을 뿐, 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 예들에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1; 아스타잔틴의 제조

아스타잔틴의 생산을 위해 Haematococcus pluvialis CCAP-34/1F 균주를 사용하였고, NB/2 배지를 기본 배지로 하여 25℃, 160 rpm, 10% inoculum, pH 7.0(초기 pH) 및 3,000 lux 내지3,500 lux의 조건으로 상기 균주를 배양하였다.

상기 균주로부터 아스타잔틴의 생산유도를 위해 상기 균주를 영양세포(vegetative cell)로부터 cyst cell으로 만들었으며, 구체적으로 배양조건을 23℃, 150 rpm 및 14,000 lux로 조절하여 배양하는 방법으로 수행하였다. 상기 배양조건을 변경한 후, 15일째 배양액이 붉은색으로 변화되는 것을 확인하였다.

상기 붉은색으로 배양액이 변화된 것을 확인한 후, 균체를 원심분리하여 균체를 모으고, 아세톤을 25 ml 첨가하여 상기 균체를 파쇄한 후 냉각추출을 수행하였다. 상기 냉각추출된 추출물에 대해 감압농축을 수행한 후, n-Hexane을 첨가하고, 추출하였다. 상기 추출물을 물로 3번 세척한 후, sodium sulfate anhydrous를 이용하여 잔류수분을 제거하여, 아스타잔틴을 제조하였다. 상기 아스타잔틴은 이후 항염활성을 측정하기 위하여, 0.01% dimethyl sulphoxide (DMSO)에 녹여 사용하였다.

실시예 2: 항염활성의 측정

상기 실시예 1에서 제조된 아스타잔틴의 항염 활성을 다음과 같이 확인하였다.

실험예 2-1. 시료 및 세포

상기 항염 활성을 측정하기 위해 하기 시료와 세포를 이용하여 실험을 수행하였다. 상기 시료의 입수처는 하기와 같다.

Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM)은 Hyclone(Thermo Scientific Inc., Germany)에서 구입하였다. Fetal Bovine Serum(FBS)은 Sigma Aldrich Co.(USA)에서 구입하였다. penicillin 및 streptomycin은 Gibco/BRL(USA)에서 구입하였다. 항체와 관련하여, Anti-iNOS monoclonal antibody는 Calbiochem(USA)에서 구입하였고, Anti-β-actin monoclonal antibody는 Sigma Aldrich Co.(USA)로부터 구입하였으며, Anti-NF-κB p65 monoclonal antibody와 peroxidase-conjugated secondary antibody는 Santa Cruz Biotechnology Inc.(USA)로부터 구입하였다. 또한, TNF-α 및 IL-6에 대한 ELISA Kits는 Pierce Endogen(USA)에서 구입하였다. 또한, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), sulfanilamide, lipopolysaccharide(LPS) 및 다른 모든 시약들은 Sigma Aldrich Co.에서 구입하였다.

실험에 사용한 마우스 대식세포주 RAW264.7 세포는 한국세포주연구재단(대한민국)으로로부터 구입하여 사용하였다. 상기 RAW264.7 세포는 상기 DMEM에 10 % FBS, 100 U/ml penicillin 및 100 ug/ml streptomycin을 첨가한 배지를 사용하여 37 ℃ 및 5 % CO₂ 조건의 배양기(incubator)에서 배양하였다.

상기 시료, 장치 및 세포를 이용하여 염증 반응 관련된 단백질 발현 정도 및 NO 생성 정도를 측정하여, 항염 효과를 확인하였다. 상기 항염 효과를 확인하기 위한 하기 실험을 수행한 결과는 SPSS version 14.0을 이용하여 통계학적 분석을 수행하였고, mean ± S.E.M.으로 표시하였다. 각 실험결과의 통계적 유의성 차이와관련, *(p<0.05), **(p<0.01) 또는 ***(p<0.001)로 정의하여, 상기 p<0.05를 통계학적 유의성이 있는 것으로 간주하였다.

실험예 2-2. 세포 독성의 확인

상기 실시예 1에서 제조된 아스타잔틴의 세포독성을 확인하기 위하여, RAW264.7 세포를 이용하여 MTT assay를 통한 세포 생존율을 확인하였다.

보다 구체적으로, 96 well plate에 5×10⁴ cells/ml로 상기 RAW264.7 세포를 분주하고 16 시간 동안 세포를 안정시킨 후, 상기 아스트잔틴을 농도별(5 uM 내지 100 uM)로 처리하고, 1 시간 동안 배양하였다. 상기 배양 후, 0.1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하고, 20시간 동안 37 ℃ 및 5 % CO₂의 조건의 배양기(incubator)에서 배양하였다. 상기 배양 후, 세포 배양액을 제거하고, MTT를 0.5 mg/ml의 농도로 처리한 후 4 시간 배양하였다. 상기 배양 후, 원심분리를 통해 상등액을 제거하고, DMSO 150 ul를 첨가하여 생성된 formazan crystals을 용해시킨 후 ELISA microplate reader(TECAN, USA)를 이용하여 570 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하여 세포의 생존율을 구하였다. 상기 측정결과는 도 1에 나타내었으며, 상기 도 1에 나타낸 세포의 생존율은 아무런 시료를 첨가하지 않은 대조구(control cell)에 대한 백분율로 표시하였다.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 아스타잔틴은 5 uM 내지 100 uM의 모든 농도에서 안전한 것으로 확인되었다. 보다 구체적으로, 대부분의 실험결과에서 RAW264.7 세포의 생존율이 100 % 안팎으로 나타났고, 가장 많은 100 uM를 처리한 경우에도 약 100 %의 세포 생존율이 확인되어, 상기 아스타잔틴은 세포독성을 유발하지 않는 것으로 확인되었다.

실험예 2-3. Immunoblot analysis ( Western blotting ) 1

LPS에 의해 유도되는 iNOS, COX-2 또는 TNF-α 등은 전사인자인 NF-κB에 의해 발현된다. 상기 NF-κB는 세포질에서는 IκB와 복합체 상태로 불활성화 되어 있다가 I-κB-α kinase에 의해 I-κB-α가 인산화되면 결합되어 있던 복합체가 분해되어 NF-κB로 활성화 되어 핵 내로 이동(trnslocation)하게 된다.

따라서, 아스타잔틴의 항염활성을 확인하기 위하여, 상기 NF-κB에 대한 웨스턴 블롯팅(Western blotting), 구체적으로 염증과 관련된 단백질의 발현 정도를 면역블롯팅 분석법(Immunoblot analysis)으로 분석하여 확인하였다.

보다 구체적으로, 보다 구체적으로, 96 well plate에 5×10⁴ cells/ml로 상기 RAW264.7 세포를 분주하고 16 시간 동안 세포를 안정시킨 후, 상기 아스트잔틴을 농도별 100 uM로 처리하고, 1 시간 동안 배양하였다. 상기 배양 후, 0.1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하고, 20시간 동안 37 ℃ 및 5 % CO₂의 조건의 배양기(incubator)에서 배양하였다.

상기 배양 후, 세포를 수득하고, 상기 수득된 세포를 PBS로 2회 세척한 후, 이것을 PBS와 함께 microtube에 넣고, 2,000 x g의 조건으로 5 분간 원심분리하고, PBS를 제거하였다. 상기 PBS를 제거한 후, 10 mM HEPES (pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P-40, 1 mM DTT, 0.5 mM phenylmethylsulfonylfluoride(PMSF)를 함유하는 hypotonic buffer 200 ul 를 넣고, 10분간 얼음 위에 놓은 후, 7,200 x g의 조건으로 5 분간 원심분리하였다. 그 후, 상등액을 제거하고 crude nuclei가 포함된 pellet에 20 mM HEPES (pH 7.9), 400 mM NaCI, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 1 mM PMSF를 함유하는 추출용 완충액(buffer) 50 μl를 넣고, 30분간 얼음 위에 방치한 후, 10 분간 15,800 x g의 조건으로 원심분리하여 핵 분획이 포함된 상등액을 수득하였다. 상기 수득된 핵 분획이 포함된 상등액을 실험에 이용하여 단백질 함량을 정량하였다.

우선, 동량의 세포 용해액을 5X sample buffer와 혼합하고, 95℃에서 5 분간 끓인 후에 SDS-PAGE를 수행하였다. 전기영동이 끝난 겔(gel)의 단백질을 nitrocellulose membrane상에 이동시키고, blocking buffer(5% skim milk)와 상온에서 2 시간 반응시켜 비특이적 항체결합을 억제하였다. 상기 항체결합을 억제한 후, NF-κB에 대한 항체(anti- NF-κB p65 monoclonal antibody)를 blocking solution에 1:1000으로 희석하여 반응액을 제조한 후, 상기 반응액과 4℃에서 밤샘반응(overnight)을 수행하였다. 상기 반응 후, TBS-T로 30 분간 세척하고, 2차 항체(alkaline phosphatase conjugated anti-rabbit abtibody)로 1 시간 반응시켰다.

상기 2차 항체와 반응시킨 멤브레인(nitrocellulose membrane)은 TBS-T로 30 분간 세척 후, ECL western blotting detection reagent(Amersham)으로 분석하여 각 단백질의 생성정도를 확인하여, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

상기 도 2에 나타낸 바와 같이, LPS를 처리하지 않은 군(N)에 비하여 LPS 처리군(P)에서 NF-κB의 이동(translocation)이 증가하였다. 한편, 상기 아스타잔틴을 처리한 경우, NF-κB의 이동이 줄어드는 것이 확인되었고, 아스타잔틴의 항염 효과가 확인되었다.

실험예 2-4. Immunoblot analysis ( Western blotting ) 2

아스타잔틴의 항염활성을 확인하기 위하여, 염증과 관련된 단백질에 대한 웨스턴 블롯팅(Western blotting), 구체적으로 염증과 관련된 단백질의 발현 정도를 면역블롯팅 분석법(Immunoblot analysis)으로 분석하여 확인하였다.

보다 구체적으로, 96 well plate에 5×10⁴ cells/ml로 상기 RAW264.7 세포를 분주하고 16 시간 동안 세포를 안정시킨 후, 상기 아스트잔틴을 농도별 25, 50, 100 uM로 처리하고, 1 시간 동안 배양하였다. 상기 배양 후, 0.1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하고, 20시간 동안 37 ℃ 및 5 % CO₂의 조건의 배양기(incubator)에서 배양하였다.

상기 배양 후, PBS로 세척하고, 각각의 세포에 완충액 (1% Triton X-100, 137 mM sodium chloride, 10% glycerol, 2 mM EDTA, 1 mM sodium orthovanadate, 25 mM b-glycerophosphate, 2 mM sodium pyrophosphate, 1 mM phenylmethylsulfonylfluoride, 20 mM Tris-HCl (pH 7.5)와 1 mg/ml leupeptin가 포함된 buffer)를 첨가한 후, 4℃에서 30분간 볼텍싱하여 용균(lysis)하였다. 상기 용균 후, 10,000 x g의 조건에서 10 분간 원심 분리하여 세포 분해물(debris)을 제거한 후, 얻은 세포 용해액을 이용하여 단백질 함량을 정량하였다.

우선, 동량의 세포 용해액을 5X sample buffer와 혼합하고, 95℃에서 5 분간 끓인 후에 SDS-PAGE를 수행하였다. 전기영동이 끝난 겔(gel)의 단백질을 nitrocellulose membrane상에 이동시키고, blocking buffer(5% skim milk)와 상온에서 2 시간 반응시켜 비특이적 항체결합을 억제하였다. 상기 항체결합을 억제한 후, iNOS 및 actin에 대한 항체를 blocking solution에 1:1000으로 희석하여 반응액을 제조한 후, 상기 반응액과 4℃에서 밤샘반응(overnight)을 수행하였다. 상기 반응 후, TBS-T로 30 분간 세척하고, 2차 항체(alkaline phosphatase conjugated anti-rabbit abtibody)로 1 시간 반응시켰다.

상기 2차 항체와 반응시킨 멤브레인(nitrocellulose membrane)은 TBS-T로 30 분간 세척 후, ECL western blotting detection reagent(Amersham)으로 분석하여 각 단백질의 생성정도를 확인하여, 상기 iNOS의 발현량에 대한 실험결과를 도 3에 나타내었다.

상기 도 3에 나타낸 바와 같이, LPS를 처리하지 않은 군(N)에 비하여 LPS 처리군(P)에서 iNOS의 발현량이 증가되었다. 한편, 아스타잔틴을 처리한 경우, iNOS의 양이 처리 농도에 비례하여 감소되어, 아스타잔틴은 농도 의존적으로 iNOS의 발현량을 억제시키는 것으로 확인되었다.

실험예 2-5. 사이토카인의 생성 여부 확인

아스타잔틴의 항염활성을 확인하기 위하여, TNF-α 및 IL-6의 발현량을 분석하여 확인하였다. 상기 TNF-α 및 IL-6의 발현량은 ELISA Kits를 이용하여 정량화하였다.

보다 구체적으로, 96 well plate에 5×10⁵ cells/ml로 상기 RAW264.7 세포를 분주하고 16 시간 동안 세포를 안정시킨 후, 상기 아스트잔틴을 농도별(10 uM 내지 100 uM)로 처리하고, 1 시간 동안 배양하였다. 상기 배양 후, 0.1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하고, 20시간 동안 37 ℃ 및 5 % CO₂의 조건의 배양기(incubator)에서 배양하였다.

상기 배양한 세포배양액을 이용한 사이토카인의 측정은 ELISA Kits(Pierce Endogen, USA)를 이용하여 정량하였으며, 그 결과를 도 4 및 도 5에 나타내었다. 상기 도 4 및 도 5는 대조군 즉, LPS를 첨가하지 않은 군(control)을 기준으로 하여 상대적인 값을 표현한 것이다.

상기 도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, LPS를 처리한 군은 대조군에 비하여, 약 23배의 TNF-α와 약 11배의 IL-6를 생성하는 것으로 확인되었다. 상기와 같이 LPS에 의해 유도된 TNF-α와 IL-6은 아스타잔틴에 의해 억제되었으며, 구체적으로 100 uM를 처리한 경우, 모두 유의성있게 TNF-α와 IL-6의 생성을 억제하는 것으로 확인되었다.

실험예 2-6. Nitric oxide ( NO ) 생성 및 정량

아스트잔틴의 항염활성을 확인하기 위하여, NO 생성 억제 여부를 분석하여 확인하였다.

우선, RAW264.7세포를 96 well plate에 1×10⁵ cells/well로 상기 RAW264.7 세포를 분주하고 16 시간 동안 세포를 안정시킨 후, 상기 아스트잔틴을 농도별(5 uM 내지 100 uM)로 처리하고, 1 시간 동안 배양하였다. 상기 배양 후, 0.1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하고, 20시간 동안 37 ℃ 및 5 % CO₂의 조건의 배양기(incubator)에서 배양하였다. 상기 배양한 배양액에 Griess reagent를 첨가하여, NO(Nitric Oxide)의 함량을 정량하였다. 상세하게, 상기 배양한 세포배양액 100 ul와 Griess reagent (1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid 및 1% α-naphthylamide in H₂0) 100 ul를 혼합하여 실온에서 5 분간 반응시킨 후, 540 ㎚에서 ELISA microplate reader(Tecan, USA)로 흡광도를 측정하였다. Sodium nitrite (NaNO₂)로 흡광도를 측정하여 표준곡선을 얻은 후, 상기 측정한 흡광도로부터 N0의 농도를 산출하였다. 상기 산출된 NO 값을 도 6에 나타내었다.

상기 도 6에 나타낸 바와 같이, 아스타잔틴은 NO 생성 억제능이 있는 것으로 확인되었다. 보다 구체적으로, 아스타잔틴은 LPS 처리에 의해 증가된 NO 생성량을 억제하였고, 10 uM 처리한 경우부터 유의적으로 NO 함량이 감소되었으며, 농도 의존적으로 계속하여 NO 함량이 감소되었다. 상기 결과로부터, 아스타잔틴은 항염 효과가 우수한 것으로 확인되었다.

상기한 바와 같이, 본 발명인 아스타잔틴은 세포 독성을 이용한 실험에서 안전성이 인정되었을 뿐만 아니라, iNOS 단백질의 발현양, NF-κB 발현양 및 TNF-α의 발현량과 NO(nitric oxide)의 생성량에 의해 확인한 결과, 항염 효과도 유의적으로 우수한 것으로 확인되었다.

상기 아스타잔틴은 천연 물질로부터 유래하여 부작용이 문제되지 않고, 세포 독성을 통하여 안전성도 확인되었으며, 3면이 바다인 우리나라에 풍부하게 분포하는 미세조류로부터 생산될 수 있으므로, 경제적 측면에서도 유리하여, 의약품, 식품 및 화장품 등 다양한 산업분야에서 응용될 수 있을 것으로 기대된다.

Claims

아스타잔틴을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물.
제1항에 있어서,
상기 아스타잔틴은 헤마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)로부터 추출된 것인 항염 조성물.
제1항의 항염 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증제.
제1항의 항염 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염효과가 있는 화장품 조성물.
헤마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)를 배양하는 단계; 및
상기 헤마토코커스 플루비알리스의 배양물로부터 아스타잔틴을 추출하는 단계를 포함하는
미세조류로부터 아스타잔틴을 생산하는 방법.