KR101184349B1 - 바실러스 서브틸리스 ｋｃｔｃ 11454 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents
바실러스 서브틸리스 ｋｃｔｃ 11454 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101184349B1 KR101184349B1 KR1020100026001A KR20100026001A KR101184349B1 KR 101184349 B1 KR101184349 B1 KR 101184349B1 KR 1020100026001 A KR1020100026001 A KR 1020100026001A KR 20100026001 A KR20100026001 A KR 20100026001A KR 101184349 B1 KR101184349 B1 KR 101184349B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- antler
- bacillus subtilis
- kctc
- fermented
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000003056 antler Anatomy 0.000 title claims abstract description 186
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 120
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 120
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 230000036737 immune function Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 230000006872 improvement Effects 0.000 title abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 title description 3
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims abstract description 53
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 33
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 28
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 78
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 76
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 19
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 claims description 6
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 claims description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 43
- HKOOXMFOFWEVGF-UHFFFAOYSA-N phenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=CC=C1 HKOOXMFOFWEVGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 230000006870 function Effects 0.000 description 31
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 24
- 229940067157 phenylhydrazine Drugs 0.000 description 24
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 21
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 21
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 14
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 13
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 13
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 13
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 13
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 13
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 8
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical compound NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 6
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- -1 phenylhydrazyl radical Chemical class 0.000 description 6
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 5
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 5
- 235000018823 dietary intake Nutrition 0.000 description 5
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 5
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 5
- 108010001062 polysaccharide-K Proteins 0.000 description 5
- 229940034049 polysaccharide-k Drugs 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 5
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 4
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000282985 Cervus Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010034753 Complement Membrane Attack Complex Proteins 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010019673 Darbepoetin alfa Proteins 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 2
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078233 Thymalfasin Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000002929 anti-fatigue Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 2
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 2
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010092853 peginterferon alfa-2a Proteins 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 2
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N thymalfasin Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N 0.000 description 2
- 229960004231 thymalfasin Drugs 0.000 description 2
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXEKPEMOWBOYRF-QDBORUFSSA-N AAPH Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C(C)(C)\N=N\C(C)(C)C(N)=N LXEKPEMOWBOYRF-QDBORUFSSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 244000105975 Antidesma platyphyllum Species 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000222356 Coriolus Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N D-galactopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008168 Ficus benjamina Species 0.000 description 1
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 1
- 206010016880 Folate deficiency Diseases 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 208000036581 Haemorrhagic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 description 1
- 102100030694 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 description 1
- 108010062867 Lenograstim Proteins 0.000 description 1
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 102100032352 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 102000009112 Mannose-Binding Lectin Human genes 0.000 description 1
- 108010087870 Mannose-Binding Lectin Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000008601 Polycythemia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- QSHWIQZFGQKFMA-UHFFFAOYSA-N Porphobilinogen Natural products NCC=1NC=C(CCC(O)=O)C=1CC(O)=O QSHWIQZFGQKFMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000221535 Pucciniales Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 102400000800 Thymosin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 208000022440 X-linked sideroblastic anemia 1 Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002180 anti-stress Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003173 antianemic agent Substances 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229940115115 aranesp Drugs 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 230000009045 body homeostasis Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 108010084052 continuous erythropoietin receptor activator Proteins 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 229960005029 darbepoetin alfa Drugs 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940119744 dextran 40 Drugs 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- IPZJQDSFZGZEOY-UHFFFAOYSA-N dimethylmethylene Chemical group C[C]C IPZJQDSFZGZEOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000003370 dye binding method Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000009424 haa Nutrition 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 208000006278 hypochromic anemia Diseases 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002766 immunoenhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229940065638 intron a Drugs 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229960002618 lenograstim Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000008376 long-term health Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960001046 methoxy polyethylene glycol-epoetin beta Drugs 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- QYZFTMMPKCOTAN-UHFFFAOYSA-N n-[2-(2-hydroxyethylamino)ethyl]-2-[[1-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]-2-methyl-1-oxopropan-2-yl]diazenyl]-2-methylpropanamide Chemical compound OCCNCCNC(=O)C(C)(C)N=NC(C)(C)C(=O)NCCNCCO QYZFTMMPKCOTAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 108010046821 oprelvekin Proteins 0.000 description 1
- 229960001840 oprelvekin Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940124595 oriental medicine Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 229940002988 pegasys Drugs 0.000 description 1
- 229960003930 peginterferon alfa-2a Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZGQJANKGMICOP-UHFFFAOYSA-N phenyldiazene Chemical compound N=NC1=CC=CC=C1 RZGQJANKGMICOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004031 phenylhydrazines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- YPHQRHBJEUDWJW-UHFFFAOYSA-N porphobilinogen Chemical compound NCC1=NC=C(CCC(O)=O)[C]1CC(O)=O YPHQRHBJEUDWJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 229960002530 sargramostim Drugs 0.000 description 1
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 208000002670 vitamin B12 deficiency Diseases 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/32—Bones; Osteocytes; Osteoblasts; Tendons; Tenocytes; Teeth; Odontoblasts; Cartilage; Chondrocytes; Synovial membrane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/005—Preparations for sensitive skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Birds (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물에 대한 것이다. 또한 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 약학적 조성물 및 식품 조성물에 대한 것이다. 본 발명의 조성물들은 조혈기능을 개선시키고 면역기능을 증강시키는 바, 이를 복용 시 조혈기능 장애 및 조혈 관련 질환에 효과적이며, 면역기능 증강을 통한 체질 개선 및 건강증진에 유용하다.
Description
본 발명은 녹용 발효 활성을 갖는 신규한 바실러스 속의 균주로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법에 대한 것이다.
녹용(antler, Cervus cornu parvum)은 매화록(Cervus nippon Temminck) 또는 마록(Cervus elaphus Linnaeus) 및 동속 근연동물의 털이 밀생되고 골질화되지 않은 어린 뿔로 동양의학의 중요 약재로 중국 및 일본 등의 동양권 국가에서 오래 전부터 활용되고 있는 양록산업의 주 생산물이다. 녹용은 전 세계 생산량의 80%를 한국에서 소비한다고 알려져 있는데(Choi et al., 2005), 현재 국내에서 이용되는 녹용(녹각도 포함한다)은 대부분 수입에 의존하고 있으며, 2000년에 의약용으로 녹용 159톤을 수입하여 1,600만 달러가 지출되었고, 국내 생산 생녹용은 75 kg에 불과한 실정이다. 한국은 전세계에서 가장 큰 녹용 수입국으로, 대부분 국내에서 소비되고 있다.
녹용은 인삼과 더불어 오래 전부터 가장 대표적인 강장 생약재로 한국, 중국, 일본을 중심으로 애용되어 왔으며, 현대에 와서 녹용에는 혈압강하, 조혈기능, 고콜레스테롤 혈증 개선, 항스트레스 효과가 있다는 것이 밝혀지고 있다(Kim and Park, 1982; Yong, 1976; Han 1970; Kang and Kim, 1989). 인삼, 녹용과 같이 강장효과를 가진 생약재의 약성은 특정 장기에만 선택적으로 작용하여 강한 효과를 나타내는 것이 아니라 비록 그 효과는 단일 성분 의약품에 비해 약하나 신체 전반에 걸쳐 복합적으로 효능을 나타내는 것이 특징이다(Kim et al., 1994).
최근들어 녹용의 생리활성 성분에 대한 활발한 연구가 진행되고 있는데, 녹용 추출물은 면역기능 증진, 항산화, 항피로, 항혈전, 항노화, 혈압강하, 항염증작용 등 매우 다양한 효능이 있는 것으로 보고되었다(Cho 등, 2005).
그러나, 녹용은 설사 등의 부작용이 있어, 한방에서 수렴작용이 있는 한약과 병용하여 사용하게 되며, 이 경우 기대했던 효과가 상실되거나 감소될 수 있다. 또한, 한방의 유용한 자원인 녹용은 한약에 이용하기 위해 알코올에 담근 후, 이를 세절하여 사용하게 되는데, 이 과정에서 녹용의 많은 유효성분이 소실되는 문제점이 있다.
한편, 녹용을 바실러스 속 균주 등을 이용하여 발효시킬 경우, 항피로, 간보호 및 설사억제 효과가 우수한 녹용 발효물이 얻어질 수 있다는 것이 공지된 바 있다.
대한민국 등록특허 제 206, 182호는 동물의 장 내용물 또는 신선한 변으로부터 분리된, 녹용분해 활성을 갖는 바실러스 속 Py-92균주(KCTC 0049BP)를 개시한 바 있다(생약학회지 1994; 25: 233-237, 약학회지 12994; 38:795-799). 또한 대한민국 특허공개 제 10-2006-0128117호는 바실러스 Py-92 균주로 발효한 녹용 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강, 장기능 강화, 암예방 및 치료용 약학 조성물을 개시하고 있다.
그러나 바실러스 속 Py-92 균주(KCTC 0049BP) 등을 이용하여 녹용을 발효시킬 경우 수득된 녹용 발효물 내 유효성분의 함량이 적고, 녹용 발효물의 약리활성이 불충분한 단점이 있었다.
이에, 본 발명자들은 발효녹용의 유효성분 효율을 높이고 새로운 약리작용을 일으키기 위하여, 녹용을 발효시킬 수 있는 바실러스 속 미생물을 분리하고자 본 연구를 수행한 결과, 된장으로부터 새롭게 분리한 균주인 바실러스 서브틸리스(Bacilllus subtilis) KCTC 11454BP로 녹용을 발효시킬 경우 종래의 바실러스 서브틸리스 균주에 비하여 발효추출물의 수율이 훨씬 높고 유효성분의 함량을 크게 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였다.
또한 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 로 발효시킨 녹용 발효물에 대하여 연구를 계속한 결과, 상기 녹용 발효물이 항보체활성이 높고, 대식세포의 사이토카인(cytokine) 생산량을 증가시키며, 림프구를 증식시킨다는 것을 알아내었으며, 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물이 혈액 내 적혈구 및 백혈구 증식을 촉진할 뿐 아니라 조혈모세포의 증식 역시 증가시킴으로써 조혈기능 개선 효과가 있다는 것을 확인하였다.
면역계는 생체내에서 자연적으로 발생하거나 외부인자(항원)들에 기인한 각종 이상 현상을 제거하여 신체의 항성성(homeostasis)을 유지시키는 생명현상으로 항원에 대한 특이성에 따라 선천면역(innate immunity, nonspecific immunity)과 후천면역(adaptive immunity, specific immunity)으로 구분된다. 선천면역은 항원에 비특이적으로 작용하며 피부나 점막과 같은 물리적 방어막 이외에도 보체계(complement system) 활성화의 부경로(alternative pathway)와 대식세포(macrophage), 자연 살해세포(NK cell) 등의 면역세포들이 관여한다. 이에 반해 후천면역은 선천면역계를 통과한 항원들에 특이적으로 작용하는 면역체계로 이는 다시 체액성 면역(humoral immunity)과 세포성 면역(cellular immunity)으로 분류되는데, 체액성 면역은 B cell에서 생성되는 항체에 의한 혈액 내 반응으로 여기에는 보체계 활성화의 고전적 경로(classical pathway)가 관여하고 있음이 알려져 있다. 한편 세포성 면역은 cytotoxic T cell(TC), helper T cell(TH), suppressor T cell(TS) 등이 관여하는데 TC는 표면 항원과 결합한 이후 lymphokine을 방출하여 다른 T cell의 작용을 활성화 하거나 macrophage를 유인한다. 또한 TH는 B cell의 활성화를 촉진하며, TS는 면역 반응을 억제시키는 작용을 하는 것으로 알려져 있다(Kuby, 2006; Playfair, 1992). 이러한 면역체계는 다양한 종류의 cytokine에 의해 긴밀한 상호 활성화와 엄밀한 제어(cytokine network)가 이루어진다(Benjamini, 2000). Macrophage는 lysosome이 발달한 단핵 세포로서 조직 내에서 탐식작용이 왕성하고, 선천면역과 후천면역 모두에 관여하는 면역세포이다. macrophage는 탐식한 항원을 소화(processing)하여 분해된 항원의 일부를 자신의 표면에 제시(presentation)함으로써 후천면역세포가 이를 인식, 활성화 되도록 유도하는 antigen-presenting(APC)로서의 역할을 수행하며(Cebra and Shroff, 1994; James and Zeitz, 1994), 종양과 같은 자가세포에 대한 상해능도 갖는다(Kuby, 2006).
보체계(complement system)는 약 20여종의 혈중 순환 단백질들이 관여하여 작용하는 체액성 면역계로서 항원에 대하여 비특이적으로 활성화되어 MAC(membrane attack complex)를 형성, 세균 및 virus의 표면을 공격하여 삼투용혈을 유발함으로써 표적세포를 사멸하는 것으로 알려져 있다(Bienenstock and Befus, 1980; Hames and Glover, 1983). 특히 이들은 인체 내 여러 면역 system중 항원에 가장 신속하게 작용하는 생체 방어기구로 평가되고 있으며(Moon et al., 1990), 보체계의 활성화는 중추적 역할을 하는 C3 인자의 활성화(C3a, C3b 형성)에 이르는 경로에 따라 고전경로(classical pathway)와 부경로(alternative pathway) 및 lectin경로(lectin pathway)로 나누어진다. 고전경로에 의한 C3 인자의 활성은 항원과 특이항체(IgM, IgG)의 면역 복합체(immune complex) 형성에 의해 C1인자를 시작으로 차례로 활성화 되어 C3인자가 C3a와 C3b를 형성하는 경로이며, 부경로에 의한 활성화는 면역 복합체의 형성 없이 C3b와 B factor의 결합을 시작으로 D factor에 의하여 C3이 활성화되는 경로이다. 또한 lectin pathway는 혈액 중 mannan-binding lectin이 세균이나 virus의 표면에 존재하는 mannose를 포함한 다당체와 결합함으로써 C3이 활성화되는 경로이다(Janaeway, 2000; Kim 1986). 고전경로에는 Ca++과 Mg++ 이온이 부경로에는 Mg++ 이온 각각 선택적으로 관여하고 있음이 알려져 있다(Janaeway, 1968). 한편 보체계는 감염방어, 염증방어, 알레르기 반응 등에 작용하고 있다고 알려져 있으며, 이러한 보체계를 활성화하는 물질들이 macrophage의 활성화에도 작용하여 항암효과를 나타냄으로써 보체계의 활성화와 항암효과간의 상호 밀접한 관련이 있다는 연구 결과가 보고되기도 하였다(Ito, 1986; Okuda et al., 1972).
Macrophage는 세균이나 이물질을 탐식, 제거하는 과정에서 여러가지 cytokine을 분비하여 면역현상을 조절하며, 항원에 대한 면역작용의 중추적인 역할을 하는 세포로서, 항원제시와 림프구의 비특이적 면역작용에 관계하며, 종양세포에 대해서는 직접적인 상해활성을 나타낸다. 또한 TLR(tool-like receptor)에 반응하는 물질(LPS 혹은 천연물)은 macrophage를 활성화하여 T세포와 B 세포의 증식, 식균 작용을 위한 대식세포의 활성, 미생물 감염에 대한 방어 등의 2차 면역반응을 조절할 수 있는 IL-1, IL-6, IL-10, IL-12 및 TNF-α와 같은 cytokine을 생산한다고 알려져 있다.
IL-1, IL-6 및 TNF-α는 macrophage에 의해 유도되는 대표적인 cytokine 으로 세균감염에 따른 염증반응에 있어서 중추적인 역할을 하며 염증병소에서 그 양이 증가되는 것으로 알려져 있다. IL-6는 IL-1과 협동적으로 작용하여 T 세포와 B 세포의 분화에 관여하고 항암효과가 있다고 보고되었으며, TNF-α은 특정암세포에 대한 세포독성과 항 바이러스성 작용이 있고, 급성 및 만성 염증질환에서 일어나는 여러 가지 생체반응에도 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 한편, IL-12는 NK cell의 활성화 및 Th1 type의 면역 반응을 유도하는 cytokine으로써 암세포와 같은 세포성 외래물질에 대한 반응성을 높이는 작용을 한다고 알려져 있다. 또한 IL-10은 macrophage에 의한 TNF, IL-1, chemokine 및 IL-12의 생성을 교차조절(cross--regulation)함으로써 T 림프구 활성화에 있어 대식세포의 부수적 기능(T 림프구 매개성 특이면역염증반응)을 저해한다고 알려져 있다.
최근 보체계 활성화 물질들의 질병 예방과 치료에 대한 효과적 이용 가능성이 제시됨으로써 생체 면역부전상태 개선 및 치료를 목적으로 하는 면역요법제로의 개발에 대한 관심이 높아지고 있다.
한편 빈혈은 순환 적혈구의 결핍 또는 적혈구 내 헤모글로빈양의 감소로 산소운반 능력이 감소하여 생기는 질환으로 순환 혈액 내 적혈구수(RBC), 혈색소량(hemoglobin) 또는 적혈구 용적(hemotocrit)이 정상 이하로 감소된다(Bruner et al., 1996). 발생 원인에 따라 출혈성 빈혈(hemorrhagic anemia), 혈색소 감소성 빈혈(hypochromic anemia), 재생 불량성 빈혈(aplastic anemia), 용혈성 빈혈(hemolytic anemia) 등으로 분류된다(Medical College of Seoul University. 1993). 빈혈동물 모델은 저 철분 식이, 비타민 B12 및 엽산 결핍과 같은 식이성 요인으로 유도할 수 있으나 장기간의 유도시간이 소요되므로 일반적으로 항암제로 사용되는 cyclophosphamide(CYP)나 phenylhydrazine(PHZ)을 이용하여 빈혈을 유도하고 있다(Chakrabarti et al., 1995; Valley, 2002). PHZ은 강한 산화제로, 자동산화로 생성된 ROS와 phenyldiazene, phenylhydrazyl radical, benzenediazonium ions 등의 PHZ 대사물은 적혈구의 단백질과 인지질 막에 산화적 손상을 일으키고, 헤모글로빈을 산화시켜 심각한 용혈성 빈혈을 일으킨다(Itano et al., 1975; Arduini et al., 1989; Hashmi and Saleemuddin, 1996). 일반적으로 빈혈 치료는 수혈 또는 합성된 recombinant human erythropoietin(rHuEPO)이 사용되고 있으며, 약물의 투여로 혈구증가 및 증세 호전의 효과는 기대할 수 있으나, 그 효과가 일시적이어서 근본적인 질환의 호전은 기대할 수 없다(Feusner and Hastings, 2002).
본 발명의 목적은 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 목적은 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물, 식품 조성물 및 약학적 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 식품 조성물, 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 약학적 조성물을 제공하며, 이들의 제조 방법들을 제공한다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스 KCTC 111454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 조성물은 투약자의 조혈기능을 개선시키고 면역기능을 증강시키는 바, 이를 복용 시 조혈기능 장애 및 조혈 관련 질환에 효과적이며, 면역기능 증강을 통한 체질 개선 및 건강증진에 효과가 있다.
도 1은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454 균주의 현미경 사진이다.
도 2는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 발효시간에 따른 S-GAG 및 Salic acid의 함량 변화이다.
도 3은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 발효시간에 따른 total sugar 및 uronic acid의 함량 변화이다.
도 4는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 배양시간에 따른 항보체활성의 변화를 나타낸다.
도 5은 녹용 비발효 추출물의 투여시 IL-6 생산량을 나타낸다.
도 6은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물 투여시 IL-6 생산량을 나타낸다.
도 7는 녹용 비발효 추출물의 투여시 IL-12 생산량을 나타낸다.
도 8은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물 투여시 IL-12 생산량을 나타낸다.
도 9는 PHZ로 유도한 용혈성 빈혈에 있어서, 녹용 발효물이 혈중 헤모글로빈 및 헤마토크리트에 미치는 영향을 나타낸다.
도 10는 PHZ 유도한 용혈성 빈혈 래트에 있어, 녹용 발효물이 erythropoietin 함량에 미치는 영향을 나타낸다.
도 2는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 발효시간에 따른 S-GAG 및 Salic acid의 함량 변화이다.
도 3은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 발효시간에 따른 total sugar 및 uronic acid의 함량 변화이다.
도 4는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 배양시간에 따른 항보체활성의 변화를 나타낸다.
도 5은 녹용 비발효 추출물의 투여시 IL-6 생산량을 나타낸다.
도 6은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물 투여시 IL-6 생산량을 나타낸다.
도 7는 녹용 비발효 추출물의 투여시 IL-12 생산량을 나타낸다.
도 8은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물 투여시 IL-12 생산량을 나타낸다.
도 9는 PHZ로 유도한 용혈성 빈혈에 있어서, 녹용 발효물이 혈중 헤모글로빈 및 헤마토크리트에 미치는 영향을 나타낸다.
도 10는 PHZ 유도한 용혈성 빈혈 래트에 있어, 녹용 발효물이 erythropoietin 함량에 미치는 영향을 나타낸다.
본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계를 포함하는 면역기능 증강용 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 조혈기능 개선용 조성물을 제공한다.
아울러 본 발명은 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계를 포함하는 조혈기능 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 설명한다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 녹용을 발효시키는 경우에 있어서, 상기 녹용은 녹용 또는 녹각이 될 수 있으며, 국산, 일본, 러시아, 중국, 미국, 캐나다 등 녹용의 산지는 어느 것이든 무방하다. 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시 녹용은 분말 또는 추출액의 형태로 발효될 수 있다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강용 및/또는 조혈기능 개선용 조성물은 식품 조성물 또는 약학적 조성물이 될 수 있다.
상기 면역기능 증강용 식품 및/또는 약학적 조성물은 암, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 크론씨병, 당뇨병과 같은 자가면역질환 또는 천식, 알레르기성 비염, 결막염, 아토피 피부염과 같은 알레르기 등 자가면역질환에 효과적이다. 그러나 이런 특정 질환이 아니어도 본 발명의 면역기능 증강용 식품 및/또는 약학적 조성물은 신체의 전반적인 면역력을 증강시킴으로써 각종 박테리아 및 바이러스성 질환에의 감염 및 발병 가능성을 낮출 수 있다.
본 발명의 면역기능 증강용 약학적 조성물은 Zadaxin(Thymosinalpha-1), EP-HBS
(HBV Therapeutic Vaccine), HBV Core Antigen Vaccine, LPS, Con. A와 같은 면역자극제 또는 Intron A(Interferon alpha-2b), Pegasys(Peginterferon alfa-2a)과 같은 면역조절제와 함께 투약될 수 있다. 또한 본 발명의 면역기능 증강용 약학적 조성물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강용 조성물과 함께 상기 면역자극제 또는 면역조절제를 추가로 포함할 수도 있다.
본 발명의 조혈기능 개선용 식품 및/또는 약학적 조성물은 조혈기능을 개선하여 빈혈, 적혈구 감소증 또는 조혈을 치료 또는 완화할 수 있으며, 신체 전반적인 조혈활성을 증진시킴으로써, 체력을 증강시키고 건강을 유지하는데 도움을 줄 수 있다.
본 발명의 조혈기능 개선용 약학적 조성물은 EPO(erythropoietin), darbepoetin alfa, Aranesp, filgrastim, lenograstim, dextran 40, recombinant human erythropoietin, methoxypolyethyleneglycol-epoetin beta, magnesium chloride, oprelvekin, sargramostim, hydroxyethyl starch 등과 같은 조혈자극제, 조혈제와 함께 투약될 수 있다. 또한 본 발명의 조혈기능 개선용 약학적 조성물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 조혈기능 개선용 조성물과 함께 상기 조혈자극제를 추가로 포함할 수도 있다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강 및/또는 조혈기능 개선용 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 바람직한 약제학적 제제는 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제가 있으며 이들 제제는 약제학적으로 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강 및/또는 조혈기능 개선용 약학적 조성물의 투여 용량은, 환자의 상태, 연령, 성별 및 합병증 등의 다양한 요인에 따라 전문가에 의해 결정될 수 있지만 일반적으로는 성인 1kg 당 0.1㎎ 내지 10g, 바람직하게는 10 mg 내지 1g의 용량으로 투여될 수 있다. 또, 단위 제형당 상기 약학적 조성물의 1일 용량 또는 이의 1/2, 1/3 또는 1/4의 용량이 함유되도록 하며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 식품 조성물은 건강기능식품, 건강보조식품, 기능성식품 또는 영양제 등이 될 수 있으나 이들에 제한되는 것은 아니다. 상기 식품 조성물은 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 포함하는 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 조성물과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 식품 조성물은 식품 또는 음료의 제조시에 원료에 대하여 0.1 내지 70 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 60 중량%의 양으로 첨가될 수 있다. 식품 조성물에 있어서, 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 유효용량은 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강 및/또는 조혈기능 개선용 조성물을 포함하는 식품 조성물은 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제의 형태로 이용될 수 있으며, 이들 제제는 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강 및/또는 조혈기능 개선용 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있으나 이들 종류의 식품으로 제한되는 것은 아니다.
또한 본 발명은 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계를 포함하는 상기 면역기능 증강용 및/또는 조혈기능 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
상기 면역기능 증강용 조성물의 제조방법은 상기 면역자극제를 가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 면역자극제를 가하는 단계는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 녹용을 발효시키는 단계 전 또는 후에 추가될 수 있으며, 녹용 발효와 함께 면역자극제 첨가가 이루어질 수도 있다.
또한 상기 조혈기능 개선용 조성물의 제조방법은 상기 조혈자극제를 가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 조혈자극제를 가하는 단계는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 녹용을 발효시키는 단계 전 또는 후에 추가될 수 있으며, 녹용 발효와 함께 조혈자극제 첨가가 이루어질 수도 있다.
이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP의 분리
1. 된장으로부터 균주의 분리
된장을 일반 배지(nutrient agar) 및 선택 배지(nutrient agar 배지에 NaCl을 첨가하여 선택배지를 만들어 배양)에 각각 도말하여 배양한 다음 콜로니를 성상별로 분리하여 하기에 기재된 방법에 의하여 분리하였다.
2. 균주의 배양
가. 녹용 분말 고체 배지에서의 배양
녹용분말 4g에 증류수 200 ml를 가하여 현탁한 후 agar 4 g을 가하여 121 ℃에서 15분간 고압 멸균하여 페트리 디쉬에 담아 고체 배지로 사용하여 상기 된장으로부터 분리한 바실러스 속 14 종의 균주들을 각각 도말하여 30 ℃에서 2일간 배양하면서 균주의 성장 여부를 확인하였다.
나. 녹용 추출물 함유 고체배지에서의 배양
녹용 10 g에 증류수 200 ml를 가하여 100 ℃에서 3시간 환류 추출하였다. 원심분리하여 추출액을 회수하였으며, 원심분리에 의하여 얻은 침전에 증류수 150 ml를 가하여 2차 환류 추출하였다. 원심분리에 의하여 얻은 2차 환류 추출액과 1차 추출액과 혼합 농축하여 농축액(7.5 birx) 80 ml를 얻었다. 농축 추출액 80 ml에 증류수 120 ml와 agar 4 g을 가하여 121 ℃에서 15분간 고압 멸균하여 페트리 디쉬에 담아 고체 배지로 사용하여 상기 된장으로부터 분리한 바실러스 속 14종의 균주들을 각각 도말하여 30 ℃에서 2일간 배양하면서 균주의 성장 여부를 확인하였다.
3. 성장 정도 측정 및 균주 선정
상기의 녹용 분말 고체 배지와 녹용 추출물 고체 배지에서 성장 정도에 따라 균주의 성장 여부를 측정하여 각각 표 1 및 표 2에 나타내었다.
균주 성장이 매우 왕성: +++
균주 성장이 왕성 : ++
균주 성장이 보통 : +
균주 성장이 약함 : -+
전혀 성장하지 않음 : -
녹용 추출물 함유 고체 배지에서의 바실러스속 14종의 균주 성장 정도
녹용 분말 함유 고체 배지에서의 바실러스속 14종의 균주 성장 정도
4. 균주의 동정
상기 표 1 및 표 2 모두에서 성장이 매우 완성한 균주인 7(임의로 지정한 숫자임)을 선정, 분리하였다.
Genomic DNA preparation Kit(SGD62 S120, Solgent Co. Ltd., Korea)를 이용하여 genomic DNA를 추출한 다음 유니버셜 프라이머(universal primer) 27F(5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3')와 1492R(5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3'), EF-Taq(SEF16 R250, Solgent Co. Ltd., Korea)으로 PCR을 실시하여 증폭시켰다. 아세테이트와 70% 에탄올을 이 용하여 정제한 다음 시퀀싱 키트(Big dye terminator cycle sequencing ready reaction kit)와 ABI Prism 3730XL DNA analyzer(Applied Biosystems, Ca, USA)로 염기서열을 결정하였다.
이러한 분리균주의 16S rRNA 염기서열은 EMBL/DDBJ/PDB/GenBank 시쿼스 데이터베이스로부터 얻은 유연균주의 서열과 정렬시키고 상동성을 비교하여 표 3에 나타내었으며, 그 결과 녹용분말 고체배지와 녹용 추출물 고체배지 모두 성장이 매우 왕성한 균주는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)였다.
상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillis) 균주를 2009년 1월 16일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC)에 기탁번호 KCTC 11454BP로 기탁하였다.
바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP의 16S rDNA 염기서열 및 서열의 상동성
5. 분리 균주의 균학적 특성
본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주의 균학적 특성을 조사하여 도 1 및 표 4에 나타내었다.
바실러스 서브틸리스 KCTC 11554BP 균주의 균학적 특성
도 1에서 알 수 있는 바와 같이 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 간균이었다.
표 4로부터 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 운동성이 있으며, 호기성(catalase 함유)이고, 그람 양성균이었으며 포자를 형성하는 것으로 관찰되었다. 또한 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 생육시 gelatin과 casein에 대하여 protease 활성이 매우 높은 것으로 나타나 fibrin 분해능이 우수하다는 것을 확인할 수 있었으나, 생육시 전분 분해력은 다소 약한 것으로 나타났다.
6. 균학적 특성의 비교
본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주와 공지의 균주인 바실러스 속 Py-92균주(KCTC 0049BP), 바실러스 서브틸리스(bacillus subtilis) KCTC 1325 및 바실러스 서브틸리스(Bacillussubtilis) ATCC 9372 균주의 탄소원 이용 여부로 균학적 특성을 비교하여 그 결과를 표 5에 나타내었다.
분리균주와 공지균주의 균학적 특성 비교
표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주와 공지균주 ATCC 9372는 insulin 및 trehalose의 탄소원 이용에서 차이를 보였고, Bacillus subtilis Py-92(Kctc 0049BP), Bacillus subtilis kctc 1325와는 D-Xylose, insulin 및 Tregalose 이용성에서 각각 차이를 보였다.
이상의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 공지균주와 상이한 신규 균주로 판단된다.
<실시예 2> 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP에 의한 녹용 발효
LB(tryptone 10 g/liter NaCl 10 g/liter yeast extract 5 g/liter) 배지 20 ml를 이용하여 상기 실시예 1에서 분리된 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주를 30 ℃에서 1일 배양한 것을 전배양하였다.
녹용분말 4 g에 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) 30 ml를 가하여 121 ℃에서 15분간 고압 멸균하여 30 ℃로 냉각한 후 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주의 전배양액 1ml을 가하여 30 ℃에서 3일간 배양하였다. 배양액에 증류수 60 ml를 가하여 100 ℃에서 3시간 환류 추출 후 원심분리하여 녹용 발효 추출물을 얻었다.
<비교예 1 내지 3> 바실러스 속의 공지균주에 의한 녹용 발효
상기 실시예 2와 동일한 방법으로 공지 균주인 바실러스 속 Py-92 균주(KCTC 0049BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 1325 및 바실러스 서브틸리스(Bacillussubtilis) ATCC 9372 균주를 이용하여 녹용 발효추출물을 제조하여 각각 비교예 1, 비교예 2 및 비교예 3으로 하였다.
<실험예 1> 녹용 추출물의 수율 비교
상기 실시예 2 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 녹용 발효 추출물의 수율을 측정하여 표 6에 나타내었다.
녹용 발효추출물의 수율 비교
상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주에 의한 녹용 발효 추출물의 수율은 공지의 바실러스 속 균주에 의한 녹용 발효 추출물의 수율보다 2-3배 정도의 높은 수율로 녹용 발효 추출물이 생성되었다.
<실험예 2> 녹용 발효 추출물의 유효성분 함량 비교
녹용의 유효성분인 S-GAG(Sulfated-glycosaminglycan) 성분은 조골세포 성장 촉진, 파골세포 억제, 골다공증 예방 효과, 관절염 치료제의 지표물질로 관심이 증대된 물질이며, Sialic acid는 Ganglioside의 종류를 결정하는 주요 지표 성분이고, Ganglioside는 기억력과 학습능력 증진 세포의 신경 전달계에 매우 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있어, 상기 실시예 2 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 녹용 발효 추출물의유효성분 함량을 비교하기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다.
녹용 발효추출물에 대한 유효성분의 분석은 아래와 같은 방법으로 측정하였다. Total sugar는 phenol-sulfuric acid 법(Omran 등, 1989)으로 측정하였으며,Sulfated-glycosaminoglycan(S-GAG) 측정은 Dimethyl-methylene blue dye binding 방법(farndale 등, 1982)에 의하여 540 nm에서 측정하였고, Sialic acid 측정은 80 ℃에서 1시간 동안 0.1 N 황산으로 가수분해한 후에 Warren 방법(Warren, 1959)에 의하여 549 nm에서 측정하여 표 7에 나타내었다.
녹용 발효 추출물의 유효성분 함량을 분석한 결과 표 7에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 1 내지 3의 공지의 바실러스 속 균주에 의한 녹용 발효 추출물에서 유효성분인 total sugar, S-GAG의 함량 및 Sialic acid 함량은 발효 전보다 오히려 감소하였으나, 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454 균주에 의한 녹용 발효추출물에서는 현저히 증가하는 것을 확인하였다.
그러므로 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454 균주에 의한 녹용 발효추출물은 조골세포 성장 촉진, 파골세포 억제, 골다공증 예방 효과, 관절열 치료제, 기억력과 학습능력 증진 세포의 신경 전달계에 매우 유용하게 이용될 수 있다.
<실험예 3> 녹용 발효추출물의 항산화 효과
본 발명에 의한 실시예 2 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 녹용 발효추출물의 항산화 활성효과를 알아보기 위해서 하기의 시험을 실시하였다.
항산화 활성은 DPPH 라디칼에 대한 소거 활성과 ABTS 소거 활성을 측정하였다. DPPH 라디칼에 대한 소거 활성은 Blois(1958)의 방법으로 측정하였다. 에탄올 적정량에 시료 0.2 ml과 4 × 10-4 M DPPH 용액 0.8 ml을 가하여 10초간 혼합하고 10분간 방치 후 525 nm에서 흡광도를 측정하여 대조구와 비교하였다.
ABTS 소거 활성은 Arnao 등 (2001)의 방법을 변형하여 측정하였다. 1.0 mM의 2,2'-azobis(2-amodino-propane) deihydrochloride(AAPH)은 100 mM PBS buffer에 녹인 2.5 mM의 ABTS (2,2'-azino-bis 3-ethylbenzenothiazolin-6-sulfonic acid)와 혼합한 후 68 ℃의 항온조에서 12분 동안 반응시켰다. ABTS 용액의 농도는 734 nm에서 0.650 ± 10.2가 되도록 조정하였다. 여러 가지 농도의 시료 20 ㎕와 980㎕ ABTS 용액을 37 ℃ water bath에서 10분간 반응시키면서 734 nm에서 감소하는 흡광도 정도를 측정하였다. 이때 라디칼 50 % 소거하는 추출물의 양의 농도(IC50)를 구하였다.
상기 DPPH 라디칼에 대한 소거활성과 ABTS 소거활성의 측정 결과는 표 8에 나타내었다.
상기 표 8에서 알 수 있듯이, 녹용 발효 추출물의 라디칼 소거능의 정도를 표시한 IC50값은 ABTS 라디칼 소거능 및 DPPH 라디칼 소거능 모두에서 본 발명에 따른 녹용 발효 추출물이 기존 공지의 균주로부터 얻어진 녹용 발효 추출물보다 약 2-3 배의 항산화 활성 효과가 현저히 우수함을 확인할 수 있었다.
<실시예 3> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 성분 변화
배양시간에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 제조 중의 성분변화를 측정한 결과 (표 10), S-GAG와 sialic acid 함량은 24시간까지는 발효가 진행될수록 증가하다가 그 이후에 감소하는 경향을 보였다(도 2). Total sugar와 urnonic acid함량은 다소 차이를 보였는데 total sugar함량은 24시간까지는 증가하다가 그 이후에는 변화가 없는 경향을 보인 반면, uronic acid함량은 배양 36시간 때 가장 높은 함량을 보이다가 그 이후 감소하였다(도 3). 이를 종합할 때, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP에 의한 녹용 발효는 24시간 배양이 가장 적합한 것으로 확인되었다.
| Time (h) | 0 | 12 | 24 | 36 | 48 |
| pH | 7.52 | 7.7 | 7.96 | 8.21 | 8.33 |
바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효에 따른 pH 변화
| 구 분 | 0 H | 12 H | 24 H | 36 H | 48 H |
| Uronic acid | 110.4±3.6 | 157 ±4.7 | 162.8±2.7 | 221.5±10.7 | 196.7±2.7 |
| S-GAG | 91.8±3.2 | 376±4.4 | 396±7.9 | 352±10.6 | 401.1±13.5 |
| Sialic acid | 12.57±0 | 13.25±0 | 17.97±2.26 | 13.05±0.62 | 12.36±0.07 |
바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효 동안 총당 및 uronic acid 함량의 변화
표준 물질: Total sugar as glucose, Uronic acid as galacturonic acid, Sulfated-GAGs (glycosaminoglycan) as chondroitin sulfate, sialic acid as N-acetylneuraminic acid
<실시예 4> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 면역기능 증강 활성
<실험예 1> 재료 및 방법
바실러스
서브틸리스
KCTC
11454
BP
녹용
발효물의
제조
녹용은 광동제약으로부터 한약규격집 기준에 적합한 원료를 제공받아 녹용의 분골, 상대, 중대, 하대를 마쇄기로 분쇄하여 혼합 후 사용하였다. 녹용 발효물은 녹용 분말 40 g을 50 mM phosphate buffer(pH 6.0) 300 mL에 넣고 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP를 접종한 후 30-35℃에서 3일간 발효시킨 것을 시료로 하였으며 녹용 비발효물은 동일한 농도의 발효시키지 않은 녹용 분말액을 시료로 하였다. 각각 시료에 300 mL의 물을 가하고 100℃에서 3시간 동안 환류 추출한 후 8,000 × g에서 20분간 원심분리한 상징액을 회수하였다. 이를 2회 반복하여 회수한 추출물을 농축하고 동결건조를 행하여 각각 발효 녹용 시료 및 비발효 녹용 시료로 하였다.
시약 및 실험동물
림프구 증식과 대식세포(macrophage_ 활성 측정 실험에 사용된 RPMI medium 1640, Penicillin/Streptomycin, Fungizone 등은 Gibco BRL (Grand Island Co, NR, USA)사에서 구입하여 사용하였고, 세포 증식 능 측정에 사용한 CCK-8 (cell counting kit-8)은 일본 Dojindo사에서 구입하여 사용하였다. 면역활성 대조군으로 사용된 LPS (Lipopolysaccharide from E-coli 0127:B8)는 Sigma사의 제품을 사용하였고, PSK (polysaccharide-K from Coriolus versicolor)는 한국 광동제약에서 시판하는 코포랑?으로부터 가용획분을 정제하여 사용하였다. 한편 항보체 활성에서 사용된 양의 감작적혈구 (IgM-hemolysis sensitized, EA cell)는 일본의 Biotest사 제품을, 교차 면역 전기영동에 사용된 anti-human C3은 Sigma사의 제품을 사용하였다. 그 외 본 실험에서 사용된 모든 시약은 시판 1급 이상의 분석용 제품이 사용되었다.
또한 본 실험에 사용된 실험동물 BALB/c mouse (5~6주령)는 Korea Animal Tech사에서 구입하여 일주일간 적응을 거친 후 실험을 실시하였다. 사육 조건은 23±3℃, 습도 55~70%, 물과 사료는 자유 급식형태로 유지하였다.
<실험예 2> 바실러스 서브틸리스 11454BP 녹용 발효에 따른 면역활성의 변화
정상인 혈청(
normal
human
serum
,
NHS
)의 제조
건강한 성인의 혈액을 채취하여 실온에서 약 15분간 방치하여 응고시킨 후, 응고된 혈액을 절단하고 약 5분간 상온에서 방치시킨다. 이 혈액을 다시 4℃에서 약 20분간 방치한 다음 원심분리(3,000 rpm, 20분, 4℃)하여 혈청을 분리한 뒤 미량 원심분리용 튜브에 1 mL씩 분주하여 -70℃에서 냉동 보관하면서 실험에 사용하였다.
항보체
활성 측정
항보체 활성은 Mayer법을 이용하여 시료에 의한 보체 소비(complement consumption) 후 잔존하는 보체에 의한 적혈구 용혈 정도에 근거를 둔 complement fixation test 방법으로 측정하였다.
여러 농도로 증류수에 용해시킨 시료를 GVB++(gelatin veronal buffer, pH 7.4, 0.1% gelatin, 0.15 mM Ca++, 0.5 mM Mg++ 함유) 및 정상인의 혈청과 각각 50 ㎕씩 혼합하여 37℃에서 30분간 1차 반응 시켰다. 동 반응액에 GVB++ 350 ㎕를 가하고, 이를 10~160배 까지 연속 희석시킨 후, 750 ㎕의 GVB++와 양의 감작적혈구 (IgM-sensitizated sheep erythrocyte, EA cell, 1× 108 cells/mL)를 250 ㎕를 가하여 37℃에서 60분간 2차 반응시키고, PBS(phosphate buffered saline, pH 7.4) 2.5 mL를 가하여 반응을 정지시켰다. 반응액은 2,000 rpm에서 10분간 원심분리하였으며, 얻어진 상등액을 412 nm에서 흡광도를 측정하여 잔존 용혈활성을 측정하였다. 항보체 활성은 정상인의 혈청과 GVB++, 증류수만을 반응시킨 음성대조군의 총보체용혈(50% total complement hemolysis, TCH50, %)에 대한 저지율(inhibition of 50% total complement hemolysis, ITCH50, %)로써 나타내었다. 양성대조군으로는 운지버섯 유래 면역증강제인 PSK (polysaccharide- K)를 사용하여 비교하였다.
<식 1>
ITCH50 (%)=TCH50 of sample / TCH50 of control×100
바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 배양시간에 따른 녹용 발효물 제조 중의 면역활성의 변화를 항보체 활성으로 측정한 결과는 하기 표 11과 같다.
| Day | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | PSK |
| ITCH50 | 14.4±2.6 | 25.0±1.6 | 15.7±2.3 | 27.8±2.3 | 32.4±1.6 | 37.8±3.1 | 27.3±2.8 | 63.7±7.5 |
항보체 활성은 배양 1일차에 대조군에 비해 약 60%이상 증가하였다가 2일차에 약간 감소하는 경향을 보였으며 이후 5일차까지 계속 증가하는 양상을 보였다. 본 활성이 1,000 g/mL의 동일한 농도에서 측정한 결과이므로, 활성물질의 양적 증가 뿐 아니라 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP에 의해 발효할 경우 활성 자체 증진이 유도됨을 알 수 있었다. 따라서 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP에 의한 녹용 발효 시 24시간 이상 배양하는 것이 적절할 것으로 판단된다(도 4).
<실험예 3> 바실러스 서브틸리스 KCTC 14554BP 녹용 발효물의 림프구 증식 활성
비장(spleen)은 혈액으로부터 항원을 수집하여, B 및 T 림프구의 성숙과 항원에 의해 자극받은 후 림프구의 분화가 이루어지는 주요 림프기관으로 비장 내 림프구의 증식은 면역시스템에 있어 매우 중요한 의미를 갖는다.
BALB/c (♀, 6 주령) mouse를 경구탈구법으로 치사시킨 후 무균적으로 비장(spleen)을 적출하여 stainless steel mesh를 이용, PBS 상에서 마쇄(100 mesh) 및 여과(200 mesh)하여 림프세포를 획득하였다. 0.2% NaCl 5 mL을 15~30초 동안 가하여 혼입된 적혈구를 파괴하고 RPMI 1640으로 2~3회 세척 후 Hemacytometer를 이용하여 세포수를 1×106 cells/mL이 되도록 조정하였다. 림프세포의 수는 0.2 % trypan blue (Sigma Chemical. Co. Ltd., USA)로 염색하여 살아있는 세포만을 계수하였다. 분리된 비장 림프세포 180 ㎕와 PBS에 용해한 시료 20 ㎕를 flat-bottomed 96-well microplate에 분주(1.44×105 cells/0.2mL/well)한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 72 시간 동안 배양하였다. 림프구 증식자극 활성의 측정은 CCK-8 (cell counting kit-8, Dojindo Co. Ltd., Japan)을 well당 10 ㎕ 씩 분주한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 1~4 시간 반응시켜 450 nm에서 흡광도를 측정하여 증식 정도를 확인하였다.
결과
BALB/c mouse의 비장으로부터 획득한 림프세포에 비발효 녹용추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효한 녹용 추출물을 가하여 그 증식 정도를 측정하였다. media만을 가한 비발효 녹용 추출물의 경우 어떠한 증식도 관찰되지 않았으며 이는 면역자극제인 LPS 및 conA로 boosting한 경우도 동일한 양상을 보였는바, 단순 녹용추출물은 림프구 증식활성이 없음를 확인할 수 있었다. 반면 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP로 발효한 녹용 추출물의 경우 고농도에서 림프구 증식이 증가한 것이 확인되었다.
<실험예 4> 바실러스 서브틸리스 KCTC 14554BP 녹용 발효물이 대식세포의 cytokine 생산에 미치는 영향
대식세포 배양액의 준비
PBS를 이용, 1 mg/mL 농도로 조제한 녹용발효물 시료 용액에 RPMI 1640를 가하여 500 μg/mL에서 0.12 μg/mL의 농도가 되도록 2배수로 연속 희석하고 flat-bottomed 96-well microplate에 100 ㎕씩 분주하였다. 여기에 BALB/c(♀, 6 weeks) mouse의 복강에 5% thioglycollate medium 2 mL 주입하여 72시간 동안 유도된 macrophage(2.25×105 cells/mL of RPMI 1640) 100 ㎕를 가한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 배양 종료 후 1,500 rpm에서 5분간 원심분리 하여 세포배양액 150 ㎕를 회수하고 상등액 중에 유도된 cytokine의 함량을 측정하였다.
샌드위치
ELISA
에 의한
cytokine
측정
샌드위치 ELISA (sandwich enzyme-linked immunosorbent assay)를 이용하여 대식세포(Macrophage)에 의해 생산된 cytokine의 함량을 분석하였다.
각 cytokine의 항체는 코팅 버퍼(coating buffer)에 희석하여 flat-bottomed 96 -well microplate에 coating한 후 4℃에서 12시간 방치하였다. 코팅이 완료된 microplate는 washing buffer(PBS with 0.05% tween 20, PBST)를 이용하여 3차례 세척하고, assay diluent(PBS with 10% FBS or 2% skim milk) 200 ㎕를 가하여 1 시간 동안 방치하여 항체가 붙지 않은 웰 표면을 블로킹(blocking)하였다. 블로킹이 완료된 후 washing buffer를 이용하여 각각의 웰을 다시 3회 세척하고, 각 웰들에 연속 희석한 표준물질(재조합 마우스 사이토카인(recombinant mouse cytokine))과 면역세포배양액을 각각 50 ㎕씩 분주하였다. 이를 실온에서 2시간 동안 방치한 다음 washing buffer로 세척하고 detection antibody (in assay diluent) 100 ㎕를 처리하여 실온에서 1시간 방치한 후 다시 세척하였다. Enzyme reagent (avidin-horseradish peroxidase conjugate) 100 ㎕를 처리하여 실온에서 30분간 결합시킨 후 substrate solution [tetramethylbenzidine (TMB) 및 hydrogen peroxide] 100 ㎕를 가하여 암소에서 30분간 반응시킨 후 50 ㎕의 stop solution[(1 M H3PO4 or 2 N NH2SO4)]을 처리하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
결과
비발효 녹용추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효한 녹용 추출물의 직접적인 자극에 의한 대식세포의 사이토카인 생산량을 in vitro에서 측정한 결과, 비발효 녹용 추출물은 농도와 상관없이 TNF-alpha, IL-6, 및 IL--12의 생산을 전혀 자극하지 못한 반면, 바실러스 서브틸리스KCTC 11454BP 녹용발효물의 경우, TNF-alpha, IL-6, 및 IL--12의 생산을 촉진하였으며, 이들의 생산량은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 농도에 의존적이었다.
이를 구체적으로 살펴보면, 비발효 녹용 추출물이IL-6 생산 활성을 전혀 갖지 못한 것에 반하여(도 5), 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물은 31.25 μg/ml에서 IL-6 생산량이 증가하기 시작하여, 이후 125 μg/ml에서 IL-6 생산량은 1100 pg/ml으로 급격히 증가하여, 500 μg/mL에서는 1900 pg/ml에 이르는 것이 확인되었다(도 6) (표 12).
| Group | Normal | Sample concentration (pg/mL) | LPS | ||||||
| 0.12 | 0.49 | 1.95 | 7.81 | 31.25 | 125 | 500 | |||
| 비발효 녹용 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 32.3 ±1.2 |
2100±110.4 |
| 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 50±3.4 | 1050 ±102.3 |
1900 ±89.2 |
2100 ±110.4 |
Cytokine IL-6의 생산량
한편 IL--12의 경우 비발효 녹용추출물은 생산 유도능을 거의 나타내지 않았다(도 7). 그러나 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효한 녹용 추출물은 125 ㎍/mL에서 IL-12 생산량이 증가하기 시작하였으며, 500 ㎍/ml에서는 생산량이 급격히 증가하여 비발효 녹용추출물의 IL-12 생산량의 12배에 달하였다(도 8)(표 13).
| Group | Normal | Sample concentration (pg/mL) | LPS | ||||||
| 0.12 | 0.49 | 1.95 | 7.81 | 31.25 | 125 | 500 | |||
| Non-fermented 녹용 |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 28.3 ±1.2 |
308.2 ±5.6 |
| Fermented Bacillus |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 18.2±1.5 | 43.2 ±1.3 |
300.4 ±12.3 |
308.2 ±5.6 |
Cytokine IL-12 의 생산량
상기 실험 결과, 본 발명의 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP녹용 발물은 염증부위에 면역세포의 귀소와 직접 관련이 있는 염증성 cytokine으로 분류되는 TNF-alpha, IL--6의 생산 및 세포성 면역능의 활성화와 직접 관련이 있는 IL--12를 유의하게 생산하는 활성이 인정되었다. 그러므로 생체방어에 작용하는 면역기구를 활성화 및 조절하는 기능이 있다고 판단된다.
<실시예 5> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 조혈 기능 개선 활성
<실험예 1> 재료 및 방법
실험동물
4 주령의 암컷 Sprague-Dawley계 흰쥐를 ㈜나라바이텍(대전, 대한민국)에서 구입하여 표준사료와 물을 충분히 공급하면서 항온항습 환경인 온도 20±2℃, 습도 50±5%, 12시간 주기로(08:00~20:00) 명암을 자동 조절하여 실험실 환경에 적응시켰다.
녹용 추출물 및
바실러스
서브틸리스
KCTC
11454
BP
녹용
발효물의
제조
녹용 발효물은 녹용 분말 40 g을 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) 300 mL에 넣고 바실러스 서브틸리스 11454BP를 접종한 후 25-30 ℃에서 5 일간 발효시킨 것을 시료로 하였으며, 녹용 비발효물은 동일한 농도의 발효시키지 않은 녹용 분말액을 시료로 하여 각각 300 mL의 물을 가하고 100℃에서 3시간 동안 환류 추출한 후 8,000 rpm에서 20분간 원심분리한 상징액을 회수하였다. 추출 후 잔사에 물 150 mL을 가하여 3시간 환류 추출하였다. 이러한 과정을 2회 반복하여 회수한 추출물을 농축하여 농축액 100 mL(7.5 brix)을 얻었으며 이를 각각 발효 녹용 추출액과 비발효 녹용 추출액으로 하여 이후 실험의 시료로 사용하였다.
빈혈유발 및 약물투여
실험군은 정상 대조군(Control), PHZ 처치 빈혈 대조군(PHZ-control), PHZ 처치 녹용 추출물 투여군(PHZ-AE), PHZ 처치 녹용 발효물(바실러스 서브틸리스 발효물, PHZ-FAB) 투여군, 즉, PHZ 처치 후 각 녹용 추출물, 녹용 발효물을 각각 200 mg/kg을 투여한 군으로 하여4군으로 나누었다. PHZ 처치군은 생리식염수에 녹인 PHZ을 10 mg/kg의 농도로 흰쥐의 꼬리정맥에 4 일간 주사하였으며, 녹용 추출물 및 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP녹용발효물은 PHZ 투여기간이 끝난 후 일주일 동안 경구 투여하였다.
통계처리
통계처리는 SPSS 통계 package program(statistical package social science, version 14.0)을 이용하여 분산분석(ANOVA)을 실시하였고, 처리군 간의 유의성은 Duncan’s multiple range test로 p<0.05 수준에서 유의성 검정을 실시 하였다.
<실험예 2> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물이 식이효율에 미치는 영향
모든 실험동물의 식이와 물의 공급은 자유 섭취 방법으로 하였다. 실험기간 동안 식이 섭취량은 매일 측정하였고, 체중은 2일 간격으로 측정하였다. 식이효율(Food efficiency ratio, FER)은 실험 시작일로부터 종료일까지 총 실험 기간 동안의 체중증가량을 식이섭취량으로 나누어 산출하였다.
실험종료 후 최종 체중과 식이섭취량 및 식이효율을 표 14에 나타내었다. 체중 증가량은 PHZ을 투여한 빈혈 유발군(PHZ-control)이 다소 감소하였으나, 유의적인 차이를 보이지 않았다. 녹용 추출물 투여군에서는 대조군과 비슷한 증가량을 보였고, 녹용추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용발효물 투여군에서 체중증가가 높았으나 유의적인 차이는 없었다.
| 실험군 | Control | PHZ-control | PHZ-AE | PHZ-FAB |
| 식이섭취량 (g/day) |
10.87±2.23 | 10.21±1.08 | 10.52±1.13 | 10.11±0.74 |
| 체중 증가량 (g/day) |
5.21±0.57 | 5.01±0.75 | 5.48±0.67 | 5.46±0.31 |
| 식이효율 | 0.48±0.03 | 0.49±0.07 | 0.52±0.06 | 0.54±0.04 |
대조군: 비처리군, PHZ-control: 4일간 PHZ·HCl (10 mg/kg, i.v.)을 처리한 군, PHZ-AE: 녹용 추출물, PHZ-FAB:바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물을 PHZ 투약 후 1 주 후에 투여한 군(200 mg/kg, p.o.) (p<0.05에서 유의하게 다른 수치는 다른 문자로 기재하였으며, 수치는 평균±SD (n=6)), 식이효율=체중 증가량/식이섭취량
<실험예 2> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물이 혈액에 미치는 영향
항응고제인 EDTA가 코팅되어 있는 vacutainner에 혈액을 채취하였다. 전혈(whole blood)은 적혈구수(red blood cell, RBC), 혈색소(hemoglobin, Hb), 적혈구 용적(hematocrit, Hct), 평균 적혈구 용적(mean corpuscular volume, MCV), 평균 적혈구 혈색소 농도(mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC) 등을 automatic blood cell counter (ADVIA 120, Bayer, Tarrytown, NY, USA)를 사용하여 측정하였다.
헤모글로빈 함량 및 헤마토크리트 수치
도 9는 항응고제를 처리한 전혈에서 헤모글로빈(Hemoglobin)과 헤마토크리트(적혈구 용적률(Hematocrit)) 수치를 측정한 결과이다. 헤모글로빈 농도는 PHZ 을 4일간 투여하여 용혈성 빈혈을 유도한 PHZ군은 12.47±2.12 g/dL 이었으나, 용혈성 빈혈이 유발되지 않은 대조군은 13.21±2.32 g/dL 로 다소 높은 수치를 보였다. PHZ으로 빈혈을 유발한 후 녹용 추출물을 투여한 결과, 14.97±1.05 g/dL이었으며, 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP녹용 발효물 투여군인 PHZ-FAB 군은 16.32±1.41 g/dL로 PHZ군보다 헤모글로빈 수치가 유의적으로 증가하였다(p<0.05).
전혈에서 적혈구가 차지하는 용적을 백분율로 나타낸 헤마토크리트 수치는 PHZ 처리군이 37.3±1.31%로 대조군 40.2±2.41%보다 유의적으로 감소하였다(p<0.05). 반면, 녹용 추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물을 처리한 군은 PHZ 처리군보다 헤마토크리트 수치가 유의적으로 증가하였으며, 특히 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군의 경우 수치 증가 효과가 두드러졌다(표 15).
그러므로 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP 녹용 발효PHZ에 의한 적혈구 막단백질의 산화와 혈장막의 지질과산화를 막아 적혈구의 손상을 억제하여 정상적인 조혈작용이 이루어지도록 하였다.
| Group | 헤모글로빈 (g/dL) |
헤마토크리트 (%) |
| Control | 13.21±2.32ab | 40.2±2.41b |
| PHZ-control | 12.47±2.12a | 37.3±1.31a |
| PHZ-AE | 14.97±1.05ab | 42.4±1.24bc |
| PHZ-FAB | 16.32±1.41b | 44.3±1.03c |
대조군: 비처리군, PHZ-control: 4일간 PHZ·HCl (10 mg/kg, i.v.)을 처리한 군, PHZ-AE: 녹용 추출물, PHZ-FAB:바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물을 PHZ 투약 후 1 주 후에 투여한 군(200 mg/kg, p.o.) (p<0.05에서 유의하게 다른 수치는 다른 문자로 기재하였으며, 수치는 평균±SD (n=6))
혈액학적 분석
항응고제를 처리한 전혈의 혈액학적 지표에 대한 측정 결과는 표 16과 같다. 연구에서 PHZ 투여군의 적혈구수는 대조군보다 감소하여 유의적인 차이를 보였다(p<0.05). 적혈구 감소로 인한 헤모글로빈 양과 헤마토크리트 수치의 감소 현상은 표 15에서 살펴본 바와 같다. 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP 녹용 발효물 투여군인 PHZ-FAB군에서는 적혈구수가 PHZ군보다 유의적으로 증가하였고(p<0.05), 녹용 추출물인 PHZ-AE와 빈혈유도된 PHZ-control과는 유의적인 차이가 없었다. 또한 녹용발효물과 녹용추출물 사이에도 유의적인 차이가 없었다.
백혈구수는 각 군사이에 유의적인 차이가 없었다. 녹용 추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP녹용 발효물 투여는 PHZ군에서보다 백혈구 수치의 증가가 적었으며, 정상 대조군과 비슷한 수치로 유지되는 것을 확인할 수 있었다.
망상 적혈구는 일반적으로 실혈성 빈혈이나 용혈성 빈혈로 인한 만성적 헤모글로빈 감소가 있을 때 그 수가 증가하는 것으로 알려졌다(Xiea et al., 2006). PHZ으로 빈혈을 유발한 PHZ-control 에서의 망상 적혈구(Reticulocyte)수는 10.25±1.51%로 정상 대조군(control)의 6.51±1.10% 보다 높은 수치를 보였다(p<0.05). 녹용 추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP녹용 발효물을 투여하였을 때의 망상 적혈구수는 PHZ 투여군보다 감소하여 정상적으로 회복되는 것을 관찰할 수 있었는바, 녹용 추출물과 녹용발효물 투여군이 망상 적혈구수 증가 억제 효과를 보였다. 그 외의 평균혈구 혈색소(MCH)와 평균 혈구 부피(MCV), 평균 적혈구 헤모글로빈 농도(MCHC)는 그룹 간 차이를 보이지 않았다.
| Control | PHZ | PHZ-AE | PHZ-FAB | |
| 적혈구 (106 mm3) | 6.85±0.55c | 5.71±0.17a | 6.09±0.11ab | 6.51±0.11bc |
| 백혈구(103 mm3) | 4.61±1.10 | 5.53±1.69 | 5.18±1.37 | 4.58±1.02 |
| 망상 적혈구 (%) | 6.51±1.10a | 10.25±1.51b | 8.90±1.20ab | 9.16±1.01ab |
| MCH (pg) | 18.88±0.58 | 18.60±0.42 | 18.97±0.45 | 18.94±0.54 |
| MCV (fL) | 65.65±2.10 | 64.05±1.66 | 66.67±0.89 | 65.06±1.67 |
| MCHC (g/dL) | 27.31±0.44 | 26.73±1.08 | 26.77±0.87 | 26.61±1.02 |
Erythropoietin
(
EPO
) 함량
혈청 EPO 농도 측정은 EPO-TracTM 1251 RIA kit(DiaSorin, Stillwater, USA)를 이용하여 RIA 방법(Radioimmunoassay)으로 분석하였으며(COBRA 5010 II, Quantum,Packard, Meriden, USA), 간조직의 δ-aminolevulinic acid dehydrates(ALAD)활성 Russell과 Coleman의 방법(Russell and Coleman, 1963)을 변형하여 10% 간 조직액을 사용하였다. 0.3 M glutathione 50 ㎕와 0.1 M phosphate buffer(pH 6.8) 400 ㎕를 함유한 tube에 150 ㎕의 간조직액을 가하여 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 기질용액인 0.1 M δ-aminolevulinic acid 150 ㎕를 가하여 30분간 반응시킨 후 10% 1.5 mL TCA(0.1 M HgCl2 함유)을 넣어 반응을 종결시켰다. 4,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 0.5 mL 상등액에 5% TCA 1.5 mL와 1.5 mL Ehrlich 시약을 넣고 10분간 정치한 후 555 nm에서 흡광도를 측정하였다.
빈혈 시에는 적혈구 및 헤모글로빈이 감소하여 동맥 혈중 산소 분압이 감소하고 이로 인해 신장에서 erythropoietin이 증가되어 골수에서의 적혈구 생산을 촉진하게 된다(Mc Mullin et al., 1989). 혈청 EPO 함량에 대한 녹용 추출물의 효과는 도 10에 나타내었다. PHZ 투여로 용혈성 빈혈을 유도한 PHZ군의 혈청 EPO 함량은 42.93±3.94 mU/mL로 정상 대조군 37.21±2.72 mU/mL보다 증가하였다(p<0.05). PHZ 투여로 적혈구 조혈인자인 erythropoietin의 증가는 골수의 적혈구 생성을 증가시켜 망상적혈구 수치를 증가시킨다.
용혈성 빈혈에 대한 녹용 추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP녹용 발효물의 투여 효과를 검토한 결과, 바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP녹용 발효물 투여군(PHZ-FAB)에서의 혈청 EPO 함량은 31.67±1.21 mU/mL인 반면, 녹용 추출물 투여군(PHZ-AE)는 36.89±1.89 mU/mL였다. 그러므로 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP녹용 발효물은 용혈성 빈혈에 있어, EPO 감소 효과가 우수한 것으로 확인되었다(표 17).
| Group | Control | PHZ-control | PHZ-AE | PHZ-FAB |
| EPO (mU/mL) | 37.21±2.72b | 42.93±3.94c | 36.89±0.89b | 31.67±1.21a |
대조군: 비처리군, PHZ-control: 4일간 PHZ·HCl (10 mg/kg, i.v.)을 처리한 군, PHZ-AE: 녹용 추출물, PHZ-FAB:바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물을 PHZ 투약 후 1 주 후에 투여한 군(200 mg/kg, p.o.) (p<0.05에서 유의하게 다른 수치는 다른 문자로 기재하였으며, 수치는 평균±SD (n=6))
δ-
Aminolevulinic
acid
dehydrates
(
ALAD
) 활성
δ-Aminolevulinic acid dehydrates는 혈색소의 합성초기 과정인 δ-aminolevulinic acid로부터 porphobilinogen이 합성되는 경로를 촉매하는 효소이다. 적혈구 용혈로 인한 빈혈은 헤모글로빈 합성에 관여하는 δ-aminolevulinic acid dehydrates(ALAD)의 활성을 저해하여 aminolevulinic acid(ALA)의 뇨 중 배설을 증가시켜 조혈작용을 저해하는 것으로 알려졌다(Thompson et al., 1977).
PHZ으로 유발한 용혈성 빈혈에 대한 녹용 추출물 및 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 효과를 검토한 결과, PHZ투여 빈혈 유도군의 ALAD활성의 흡광도 값은 정상 대조군보다 낮은 0.410±0.030인 반면 녹용 추출물 투여 시 ALAD 효소 활성이 증가하였다. 또한, 녹용 추출물보다 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여 시 ALAD 효소 활성의 증가 폭이 높았고, 상기 녹용 발효물은 정상 대조군과 유사한 ALAD 효소 활성을 보였다(표 18).
| Group | Control | PHZ-control | PHZ-AE | PHZ-FBA |
| OD value/mg protein | 0.410±0.030c | 0.332±0.010a | 0.377±0.008b | 0.385±0.011bc |
대조군: 비처리군, PHZ-control: 4일간 PHZ·HCl (10 mg/kg, i.v.)을 처리한 군, PHZ-AE: 녹용 추출물, PHZ-FAB:바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물을 PHZ 투약 후 1 주 후에 투여한 군(200 mg/kg, p.o.) (p<0.05에서 유의하게 다른 수치는 다른 문자로 기재하였으며, 수치는 평균±SD (n=6))
결론
이상의 결과에 의하면 PHZ에 의해 유발된 용혈성 빈혈 유발군인 PHZ군은 헤모글로빈 수치, 헤마토크리트 수치, 적혈구수가 대조군에 비해 유의적으로 감소하였고, 망상적 혈구수는 유의적으로 증가하였다. 반면, 녹용 추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군에서는 헤모글로빈 수치, 헤마토크리트 수치, 적혈구수가 PHZ 투여군보다 증가하였으며, 특히 녹용 발효물 투여군에서의 증가량이 더욱 뛰어났다.
PHZ 투여로 증가된 혈청 EPO 함량은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP녹용 발효물 투여군에서 상당히 회복된 것으로 확인되었으며, δ-ALAD 활성 또한 녹용 발효물에서 우수하였다. 따라서 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP녹용 발효물은 조혈에 있어, 우수한 효과를 보이는 것으로 확인되었다.
<실시예 6> 독성검사
상기 실시예 5의 실험예 1의 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 급성독성검사 결과, 경구 투여 및 복강 내 주사 시 50% 치사량이 체중 kg 당 2 g 이상으로 독성효과는 없었다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 조성물은 투약자의 조혈기능을 개선시키고 면역기능을 증강시키는 바, 이를 복용 시 조혈기능 장애 및 조혈 관련 질환에 효과적이며, 면역기능 증강을 통한 체질 개선 및 건강증진에 도움이 될 것으로 기대된다.
Claims (12)
- 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강용 식품 조성물.
- 제 1항에 있어서,
상기 식품은 건강기능식품, 건강 보조식품, 기능성식품 또는 영양제인 것을 특징으로 하는 면역기능 증강용 식품 조성물.
- 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 증강용 약학적 조성물.
- 제 3항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 면역자극제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 면역기능 증강용 약학적 조성물.
- 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계;및
상기 녹용 발효물을 추출하는 단계를 포함하는 면역기능 증강용 식품 조성물의 제조방법.
- 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계;및
상기 녹용 발효물을 추출하는 단계를 포함하는 면역기능 증강용 약학적 조성물의 제조방법.
- 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 추출물을 유효성분으로 함유하는 조혈기능 개선용 식품 조성물.
- 제 7항에 있어서,
상기 식품은 건강기능식품, 건강 보조식품, 기능성식품 또는 영양제인 것을 특징으로 하는 조혈기능 개선용 식품 조성물.
- 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 추출물을 유효성분으로 함유하는 조혈기능 개선용 약학적 조성물.
- 제 9항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 조혈자극제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조혈기능 개선용 약학적 조성물.
- 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계;및
상기 녹용 발효물을 추출하는 단계를 포함하는 조혈기능 개선용 식품 조성물의 제조방법.
- 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계;및
상기 녹용 발효물을 추출하는 단계를 포함하는 조혈기능 개선용 약학적 조성물의 제조방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100026001A KR101184349B1 (ko) | 2010-03-23 | 2010-03-23 | 바실러스 서브틸리스 ｋｃｔｃ 11454 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100026001A KR101184349B1 (ko) | 2010-03-23 | 2010-03-23 | 바실러스 서브틸리스 ｋｃｔｃ 11454 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20110106759A KR20110106759A (ko) | 2011-09-29 |
| KR101184349B1 true KR101184349B1 (ko) | 2012-09-21 |
Family
ID=44956481
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020100026001A Active KR101184349B1 (ko) | 2010-03-23 | 2010-03-23 | 바실러스 서브틸리스 ｋｃｔｃ 11454 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101184349B1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101448496B1 (ko) * | 2013-04-05 | 2014-10-14 | 서승태 | 녹용 초고압추출발효 조성물 및 이의 제조방법 |
| KR20220114387A (ko) | 2021-02-08 | 2022-08-17 | 주식회사 에치와이 | 녹용 추출물의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101169775B1 (ko) * | 2011-10-20 | 2012-07-31 | 주식회사 메레데코리아 | 항염 활성을 갖는 발효녹용 추출물의 제조 방법, 이로부터 얻어진 추출물 및 이러한 추출물의 용도 |
| KR102397841B1 (ko) * | 2016-11-01 | 2022-05-13 | 주식회사 엘지생활건강 | S-gag 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법 |
| TWI676682B (zh) * | 2018-08-31 | 2019-11-11 | 財團法人食品工業發展研究所 | 枯草芽孢桿菌分離株及其用途 |
| KR102227709B1 (ko) * | 2019-04-09 | 2021-03-12 | 최학주 | 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 및 이의 제조방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100808060B1 (ko) | 2007-11-09 | 2008-02-28 | 한방발효법제 주식회사 | 녹용 발효 활성을 갖는 균주 및 이를 이용한 녹용 발효물의제조방법 |
-
2010
- 2010-03-23 KR KR1020100026001A patent/KR101184349B1/ko active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100808060B1 (ko) | 2007-11-09 | 2008-02-28 | 한방발효법제 주식회사 | 녹용 발효 활성을 갖는 균주 및 이를 이용한 녹용 발효물의제조방법 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101448496B1 (ko) * | 2013-04-05 | 2014-10-14 | 서승태 | 녹용 초고압추출발효 조성물 및 이의 제조방법 |
| KR20220114387A (ko) | 2021-02-08 | 2022-08-17 | 주식회사 에치와이 | 녹용 추출물의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20110106759A (ko) | 2011-09-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101730607B1 (ko) | 발효식품에서 유래된 세포밖 소포체를 포함하는 조성물 및 이의 용도 | |
| US8617567B2 (en) | Fungus polyose composition with immunity enhancing effect and application thereof | |
| CN111990461A (zh) | 一种增强免疫力的调制乳粉及其制备方法 | |
| KR101539382B1 (ko) | 장 기능 개선 및 배변 촉진용 식품 조성물 | |
| JP2012533319A (ja) | 新規なラクトバチルス・プランタラム及びこれを含む組成物 | |
| KR101184349B1 (ko) | 바실러스 서브틸리스 ｋｃｔｃ 11454 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 | |
| KR101680014B1 (ko) | 김치로부터 분리한 염증성 장 질환 치료 효과를 갖는 유산균 | |
| KR101870960B1 (ko) | 락토바실러스 사케이 k040706을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR102001074B1 (ko) | 충치 억제 활성을 갖는 유산균 조성물 | |
| KR20190081895A (ko) | 신규한 락토바실러스 프란타럼(Lactobacillus plantarum) 균주 DU.LAB.H01를 이용한 바다제비집-홍삼 복합 발효물 및 이의 제조방법 | |
| KR20090049604A (ko) | 혈중 아디포넥틴 농도 증가 촉진 및/또는 감소 억제제 및 내장 지방 축적 억제제 | |
| KR101226548B1 (ko) | 바실러스 속 ｋｈ-15의 콩 발효물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 | |
| KR20020085159A (ko) | 버섯 분말 또는 버섯 추출물을 포함하는 유산균배지, 상기배지를 이용한 버섯 유산발효 조성물 및 상기 조성물의제조방법 | |
| KR102230517B1 (ko) | 충치 억제 활성을 갖는 락토바실러스 살리바리우스를 포함하는 조성물 | |
| WO2006087913A1 (ja) | 免疫賦活用組成物 | |
| KR102691084B1 (ko) | 꾸지뽕나무 열매 복합발효물을 유효성분으로 포함하는 비만 개선 및 예방용 조성물 및 그 제조방법 | |
| KR20170128133A (ko) | 유산균을 포함하는 면역 증강용 조성물 | |
| KR20200065170A (ko) | 흰목이버섯 발효물을 유효성분으로 함유하는 골다공증, 당뇨 및 비만의 예방 및 치료용 조성물 | |
| EP2612673A1 (en) | Intestine immunomodulator | |
| KR101184355B1 (ko) | 코디셉스 밀리타리스 ｋｃｔｃ 11455 ｂｐ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 면역기능 증강 및 조혈기능 개선용 조성물 및 그 제조방법 | |
| KR102639561B1 (ko) | 락토바실러스 플란타룸 nchbl-004 균주 또는 이의 배양액을 이용한 비만, 당뇨 또는 지방간을 포함하는 대사성 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물 | |
| Kazemi et al. | Evaluation the effect of royal jelly on the growth of two members of gut microbiota; Bacteroides fragillis and Bacteroides thetaiotaomicron. | |
| KR102176839B1 (ko) | 녹용 및 가시오갈피의 추출물을 포함하는 면역 증강용 조성물 및 그 제조방법 | |
| KR102210092B1 (ko) | 충치 억제 활성을 갖는 락토바실러스 루테리 mg505 를 포함하는 조성물 | |
| Santa et al. | Agaricus brasiliensis-enriched functional product promotes in mice increase in HDL levels and immunomodulate to Th1 CD4+ T subsets. A. brasiliensis functional product and biological benefits. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20100323 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| PG1501 | Laying open of application | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20120116 Patent event code: PE09021S01D |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20120829 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20120913 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20120913 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20141208 Year of fee payment: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20141208 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20161123 Year of fee payment: 6 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20161123 Start annual number: 6 End annual number: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180104 Year of fee payment: 7 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20180104 Start annual number: 7 End annual number: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190103 Year of fee payment: 8 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20190103 Start annual number: 8 End annual number: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20200107 Year of fee payment: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20200107 Start annual number: 9 End annual number: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20201229 Start annual number: 10 End annual number: 10 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20211228 Start annual number: 11 End annual number: 11 |