KR100855140B1

KR100855140B1 - 라파마이신 또는 그의 유도체와 피메크롤리무스의 조합물을포함하는 염증- 및 면역-매개 질환의 치료용 제약 조성물

Info

Publication number: KR100855140B1
Application number: KR1020057017469A
Authority: KR
Inventors: 헨리타 무르
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2003-03-17
Filing date: 2004-03-16
Publication date: 2008-08-28
Anticipated expiration: 2024-03-16
Also published as: AU2004222563B2; ATE409479T1; PE20050313A1; CL2004000535A1; JP2006515017A; ECSP056006A; KR20050110023A; NO20054778D0; HK1086743A1; AR043504A1; EP1608368B8; MA27671A1; WO2004082681B1; CA2517671A1; MXPA05009934A; PT1608368E; IS8028A; ES2315648T3; EP1608368A1; MY137868A

Abstract

본 발명은 자가면역 질환을 비롯한 염증성 질환 및 면역-매개 질환의 치료에 유용한 라파마이신 또는 라파마이신 유도체와 화학식 I의 화합물의 조합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

라파마이신, 피메크롤리무스, 염증성 질환, 면역-매개 질환

Description

라파마이신 또는 그의 유도체와 피메크롤리무스의 조합물을 포함하는 염증- 및 면역-매개 질환의 치료용 제약 조성물 {PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING A COMBINATION OF RAPAMYCIN OR ITS DERIVATIVE AND PIMECROLIMUS FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATION- AND IMMUNOLOGICALLY-MEDIATED DISEASES}

본 발명은 예를 들어 자가면역 질환을 비롯한 염증성 질환 및 면역-매개 질환의 치료에 유용한 제약 조성물에 관한 것이다.

일 측면에서, 본 발명은 라파마이신 또는 라파마이신 유도체와 하기 화학식 I의 화합물의 조합물, 및 1종 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

상기 식에서,

R₁은 하기 화학식 a의 기이고,

<화학식 a>

(상기 식에서,

R₅는 클로로, 브로모, 요오도 또는 아지도이고,

R₆은 히드록시 또는 메톡시임),

R₄는 히드록시이며, 10, 11 위치에 단일 결합이 있거나; R₄는 존재하지 않으며, 10, 11 위치에 이중 결합이 있거나, 또는

R₁은 하기 화학식 b 또는 c의 기이고,

<화학식 b>

<화학식 c>

(상기 식에서,

R₆은 상기 기재된 바와 같음),

R₄는 히드록시이며, 10, 11 위치에 단일 결합이 있고,

R₂는 옥소이며, 23, 24 위치에 단일 결합이 있거나; 임의로 보호된 히드록시이며, 23, 24 위치에 단일 또는 이중 결합이 있거나; R₂는 존재하지 않으며, 23, 24 위치에 이중 결합이 있고,

R₃은 메틸, 에틸, 프로필 또는 알릴이다.

라파마이신 또는 라파마이신 유도체와 화학식 I의 화합물의 조합물을 포함하는 제약 조성물은 이하 "본 발명의(에 따른) 조성물"로 나타낸다.

또다른 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 하기 화학식의 화합물 (피메크롤리무스)인 본 발명의 제약 조성물을 제공한다.

피메크롤리무스 (INN 추천) (ASM981; 엘리델(Elidel)(상표명)), 즉 {[1E-(1R,3R,4S)]1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R}-12-[2-(4-클로로-3-메톡시시클로헥실)-1-메틸비닐]-17-에틸-1,14-디히드록시-23,25-디메톡시-13,19,21,27-테트라메틸-11,28,디옥사-4-아자트리시클로[22.3.1.0(4,9)]옥타코스-18-엔-2,3,10,16-테트라온은 예를 들어 EP 427 680 (실시예 66a의 33-에피-33-클로로-FR 520)에 개시되어 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 라파마이신 유도체가 하기 화학식 II의 화합물,또는 R₂가 -CH₂-CH₂-OH일 경우 그의 프로드러그, 예를 들어 그의 생리학적으로 가수분해가능한 에테르인 본 발명의 제약 조성물을 제공한다.

상기 식에서,

R₁은 CH₃ 또는 (C_3-6)알키닐이고,

R₂는 H, -CH₂-CH₂-OH, 3-히드록시-2-(히드록시메틸)-2-메틸-프로파노일 또는 테트라졸릴이고,

X는 =O, (H,H) 또는 (H,OH)이되,

단, X가 =O이고, R₁이 CH₃일 경우, R₂는 H가 아니다.

화학식 II의 대표적인 파라마이신 유도체의 예로는 예를 들어 본 명세서에 참고로 인용된 WO 96/41807 및 US 5 256 790에 기재된 바와 같은 32-수소화 라파마이신, 예를 들어 32-데옥소라파마이신, 16-펜트-2-이닐옥시-32-데옥소라파마이신, 예를 들어 그 내용이 본 명세서에 참고로 인용된 WO 94/02136, WO 95/16691 및 WO 96/41807에 개시된 바와 같은 16-O-치환된 라파마이신, 예를 들어 16-펜트-2-이닐옥시-32(S 또는 R)-디히드로-라파마이신, 16-펜트-2-이닐옥시-32(S 또는 R)-디히드로-40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신, 예를 들어 모두 본 명세서에 참고로 인용된 US 5 258 389, WO 94/09010, WO 92/05179, US 5 118 677, US 5 118 678, US 5 100 883, US 5 151 413, US 5 120 842, WO 93/11130, WO 94/02136, WO 94/02485 및 WO 95/14023에 기재된 바와 같은 40-O-치환된 라파마이신, 예를 들어 40-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트]-라파마이신 (CCI779로도 표시됨) 또는 40-에피-(테트라졸릴)-라파마이신 (ABT578로도 표시됨)을 들 수 있다. 바람직한 화합물은 예를 들어 WO 94/09010의 실시예 8에 개시된 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신 (이하, 화합물 A), 또는 WO 96/41807에 개시된 32-데옥소라파마이신, 또는 16-펜트-2-이닐옥시-32(S)-디히드로-라파마이신이다. 또한, 라파마이신 유도체의 예로는 예를 들어 WO 98/02441 및 WO 01/14387에 개시된 바와 같은 (에피)라팔로그, 예를 들어 화합물 AP23573, AP23464, AP23675 또는 AP23841; 또는 비올리무스 7 또는 비올리무스 9와 같은 유도체를 들 수 있다. 또한, 라파마이신 유도체의 예로는 TAFA93과 같은 라파마이신의 프로드러그를 들 수 있다. 또한, 적합한 라파마이신 유도체는 예를 들어 US 3 929 992 및 US 5 258 389에 기재되어 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 시롤리무스 (라파마이신; 라파뮨(Rapamune)(등록상표))로도 알려진 라파마이신 및(또는) 라파마이신 유도체 에베롤리무스 (화합물 A, RAD001; 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신; 세르티칸(Certican)(등록상표))를 포함한다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 문헌은 본 명세서에 참고로 인용된다.

또다른 측면에서, 본 발명은 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신과 피메크롤리무스의 조합물, 및 예를 들어 충전제, 결합제, 붕해제, 유동 조절제, 윤활제, 당 및 감미제, 향미제, 방부제, 안정화제, 습윤제 및(또는) 유화제, 가용화제, 삼투압 조절을 위한 염 및(또는) 완충제를 비롯한, 1종 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제, 예를 들어 적절한 담체 및(또는) 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조합물의 화합물, 즉 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스는 유리 형태, 염 및(또는) 용매화물이 존재할 경우, 염 형태, 용매화물 형태, 또는 염과 용매화물 형태일 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 염 형태인 본 발명의 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 1종 이상의 라파마이신 유도체, 바람직하게는 라파마이신 또는 1종의 라파마이신 유도체, 및 1종 이상의 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 적합하게는 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 화합물, 및 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스의 에멀젼, 마이크로에멀젼, 에멀젼 예비농축물 또는 마이크로에멀젼 예비농축물, 또는 고체 분산체, 특히 유중수 마이크로에멀젼 예비농축물 또는 수중유 마이크로에멀젼 기재이다.

또한 본 발명의 조성물은 추가의 제약 활성 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 추가의 활성 화합물의 예로는 예를 들어 항염증제 및 면역조절제를 들 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명의 제약 조성물은 추가로 항염증제 및(또는) 면역조절제를 포함한다.

본 발명의 조성물은,

- 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 같은 화학식 II의 화합물이 동일한 제제에 있는 고정 조합물(fixed combination);

- 별개 제제 내의 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 같은 화학식 II의 화합물이 예를 들어 공동-투여용 지시사항과 함께 동일한 패키지로 판매되는 키트 (부분 키트); 및

- 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 같은 화학식 II의 화합물이 별개로 패키징되지만 동시 또는 연속 투여용 지시사항이 주어지는 프리 조합물(free combination)을 포함한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 같은 화학식 II의 라파마이신 유도체, 및 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 동시 또는 연속 투여용 지시사항을 포함하는 부분 제약 키트를 제공한다.

또한, 놀랍게도 본 발명자들은 활성제로서 라파마이신 또는 화학식 II의 화합물, 예를 들어 화합물 A를 비롯한 라파마이신 유도체, 및 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스의 고정 조합물을 포함하는 제약 조성물, 예를 들어 정제와 같은 고체, 예를 들어 경구 제약 조성물을 발견하였다.

또다른 측면에서, 본 발명은 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A, 및 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 임의로 상기 언급된 부형제의 존재하에 담체, 예를 들어 셀룰로스를 포함하는 고정 조합물로서의 경구 제약 조성물, 예를 들어 고체 분산체 형태의 고체 경구 조성물을 제공한다.

고체 분산체 형태의 조성물은 임의의 편리한 형태로, 예를 들어 정제, 캡슐제, 과립제 또는 산제 형태로 투여될 수 있다.

경구 제약 조성물을 비롯한 본 발명의 제약 조성물은 예를 들어 통상의 방법과 유사한 방법에 따라 적절하게 또는 본 명세서에 기재된 바와 같이 제조될 수 있 다.

본 발명의 고정 경구 조성물 또는 조합물, 예를 들어 정제의 제조를 위해, 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 화합물, 및 셀룰로스, 예를 들어 히드록시프로필메틸셀룰로스와 같은 담체를 포함하는 고체 분산체가 사용될 수 있다. 고체 분산체는 공지되어 있거나, 적절하게 수득될 수 있다. 정제는 예를 들어 활성제와 담체 및 임의로 추가의 부형제를 혼합하고, 추가의 부형제를 첨가하기 전후 건조 과립화하고, 수득된 혼합물을 압축하여 수득할 수 있다. 추가의 부형제의 예로는 예를 들어,

- 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘,

- 충전제, 예를 들어 락토스와 같은 당,

- 유동화제, 예를 들어 에어로실과 같은 이산화실리슘,

- 붕해제, 예를 들어 포비돈, 크로스포비돈 (N-비닐-피롤리돈의 단독중합체 또는 공중합체)와 같은 폴리비닐피롤리돈을 들 수 있다.

본 발명의 경구 조성물에서 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스와 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 화합물의 중량비는 중요하지 않으며, 예를 들어 약 1:10 내지 800:1의 중량비를 들 수 있다. 화합물 피메크롤리무스와 화합물 A가 활성제로 사용될 경우, 피메크롤리무스는 바람직하게는 과량으로 사용되며, 예를 들어 피메크롤리무스:화합물 A의 절절한 중량비의 예로는 약 10:1 내지 800:1의 비를 들 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은

- 예를 들어 고체 분산체 형태로 활성제로서 화합물 A 및 피메크롤리무스,

- 담체로서 셀룰로스, 예를 들어 히드록시프로필메틸셀룰로스,

- 임의로 붕해제, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈,

- 임의로 유동화제, 예를 들어 에어로실,

- 임의로 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘,

- 임의로 충전제, 예를 들어 락토스와 같은 당을 포함하는 경구 투여용 정제를 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은

- 피메크롤리무스: 2 내지 8 중량％, 예를 들어 4 중량％;

- 화합물 A: 0.05 내지 0.25 중량％, 예를 들어 0.13 중량％;

- 히드록시프로필메틸셀룰로스 (예를 들어 3 cps): 10 내지 30 중량％, 예를 들어 21.4 중량％;

- 락토스 (예를 들어 200 메쉬): 0.06 내지 2.0 중량％, 예를 들어 1.2 중량％;

- 부틸화 히드록시톨루엔: 0.005 내지 0.025 중량％, 예를 들어 0.013 중량％;

- 분무 건조 락토스: 25.0 내지 70.0 중량％, 예를 들어 50.8 중량％;

- 크로스포비돈: 10.0 내지 40.0 중량％, 예를 들어 20.0 중량％;

- 콜로이드성 이산화실리슘 (에어로실(Aerosil) 200(등록상표)): 0.5 내지 2.5 중량％, 예를 들어 1.5 중량％;

- 스테아르산마그네슘: 0.5 내지 2.0 중량％, 예를 들어 1.0 중량％를 포함하는 본 발명의 정제를 제공한다.

이러한 정제는 예를 들어 피메크롤리무스 10 내지 60 mg, 예를 들어 30 mg, 및 화합물 A 0.1 내지 2 mg, 예를 들어 1 mg을 함유할 수 있다.

또다른 측면에서, 본 발명은 라파마이신 또는 화학식 II의 화합물을 비롯한 라파마이신 유도체와 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스의 조합물의 약제로서의 용도를 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료용 의약의 제조를 위한, 라파마이신 또는 화학식 II의 화합물과 같은 라파마이신 유도체와 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스의 조합물의 용도를 제공한다.

다른 많은 만성 염증성 질환 또는 자가면역 질환처럼, 인간에서의 염증성 장 질환 (IBD)은 감수성 유전자, 환경 및 면역계 사이의 상호작용의 수렴의 결과로 볼 수 있다. 상기 요인 사이의 상호작용의 정도에 따라 질환의 임상적 징후가 크론병 (CD) 또는 궤양성 대장염 (UC) 및 중증도와 위치로 정의되는 다양한 임상적 하위군으로 결정될 것이다. IBD의 발병기전에 대한 현재의 주요한 가설은, 이것이 정상적 장 박테리아 항원에 대한 조절 이상의 면역 반응이라는 것이다 (예를 들어 문헌 [Kirsner JB, Inflammatory Bowel Disease. 5th ed; W. B. Saunders, p. 208-39, p. 299-304; p. 305-14 및 p. 315-25] 참조). CD 및 UC 둘다에서, 라미나 프로프리아(lamina propria) T 림프구의 수가 증가한다 (예를 들어 문헌 [Selby et al, (1984), Gut; 25(1):32-40] 참조). 주로 SCID-IBD 모델과 같은 실험 모델로부터, T 세포의 서프레서 하위집단이 장내 정상 세균군에 대한 반응을 막는다는 증거가 있다 (예를 들어 문헌 [Groux H, et al, (1999), Immunol. Today; 20(10):442-5] 참조). IBD에서는 이러한 균형이 교란되어 있어서, 그 결과 생기는 염증성 캐스케이드는 만성 반응으로 발전한다. 고수준의 CD45RB (CD4⁺CD45RB^Hi)를 발현시키는 공통유전자성 CD4⁺ T 세포를 SCID 마우스 (SCID-IBD)에 전이시키면, 통상적으로 병원성 CD4⁺CD45RB^HiT 세포 전이 후 4 내지 8주 내에 마우스를 죽게 하는 중증 대장염 및 소모병을 유발한다 (예를 들어 문헌 [Powrie F et al (1993), Int. Immunol.; 5(11):1461-71] 참조). 이러한 중증 대장염 모델은 인간 IBD과 많은 특징을 공유하며, 사실상 1990년대 전반에 사용되어 인간 질환에 대한 이해를 더 증가시켰고, 어떠한 다른 모델보다 더 IBD를 반영하는 것으로 간주된다. 이는 외인성 활성제의 투여에 의해 또는 유전자 조작에 의해 유도된 대장염을 포함한다 (예를 들어 문헌 [Blumberg RS et al, (1999) Curr. Opin. Immunol.; 11(6):648-56]; [Strober W et al, (1998), Ann. Intern. Med.; 128(10)848-56]; [Strober W et al, (1998), Scand. J. Immunol.; 48(5):453-8] 참조). SCID-IBD 모델을 사용하여, TNFα, INFγ 및 IL-12에 대한 항체는 일시적이고, 부분적인 이로운 효과를 갖는 것으로 나타났다 (예를 들어 문헌 [Powrie F et al (1994), Immunity.; 1(7):553-62]; [Simpson SJ, et al (1998), J. Exp. Med.; 187(8):1225-34]; [Mackay F et al (1998), Gastroenterology; 115(6):1464-75] 참조). 보다 최근에, 이로운 효과는 또한 CD134 리간드 (OX40L에 대해, 예를 들어 문헌 [Malmstrom V et al (2001), J. Immunol.; 166(11):6972-81] 참조); CD154 (예를 들어 문헌 [Liu Z. et al, (2000), J. Immunol.; 164(11):6005-14]; [De Jong YP et al (2000), Gastroenterology; 119(3):715-23] 참조) 및 β7 인테그린 또는 MAdCAM-1 (예를 들어 문헌 [Picarella D et al, (1997), J. Immunol.; 158(5):2099-106] 참조)에 대한 항체에 대해 보고되었다. 상기 모든 데이타는, TNFα 및(또는) Th1 형 분화와 이펙터 기능을 중성화시키는데 관여하는 시토킨을 비롯한 주요 염증 매개자 중 하나를 억제함으로써, 또는 림프절에서 일어나는 항원 제시 단계 또는 상기 세포의 백혈구 귀환의 과정을 방해함으로써 이 질환이 없어질 수 있음을 입증한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 및 추가의 습진 피부병, 지루 피부염, 접촉 과민, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 맥관부종, 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환의 치료용 의약의 제조를 위한, 라파마이신 또는 화학식 II의 화합물, 예를 들어 화합물 A와 같은 라파마이신 유도체와 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스의 조합물의 용도를 제공한다.

예를 들어, 얻어진 결과의 관점에서, 본 발명의 조합물 또는 조성물은 피메크롤리무스를 비롯한 화학식 I의 화합물 및(또는) 라파마이신 또는 라파마이신 유도체가 제약 활성제인, 예를 들어 알레르기성 증상, 예를 들어 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 추가의 습진 피부병, 지루 피부염, 접촉 과민, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 맥관부종, 혈관염, 홍반, 피부 호 산구증가증, 여드름, 천식; 건선, 전신성 홍반성 루푸스, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 인슐린-의존성 당뇨병, 쇼그렌 증후군, 내인성 후방 포도막염, 하시모토 갑상선염, 혈관염; 또는 예를 들어 신장 또는 간 이식을 비롯한 동종이식 거부반응을 방지하는데; 또는 이식편대 숙주 질환, 바람직하게는 IBD 및 IBD와 관련된 질환을 비롯한, 자가면역 질환을 비롯한 염증성 질환 및 면역-매개 질환에 대한 약제로서의 용도가 나타난다.

또다른 측면에서, 본 발명은 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 및 추가의 습진 피부병, 지루 피부염, 접촉 과민, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 맥관부종, 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증 및 여드름으로부터 선택된 질환의 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 부분 제약 키트를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법을 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 부분 제약 키트를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 조성물은 임의의 적절한 경로로, 예를 들어 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 화합물의 투여와 유사하게 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 예를 들어 통상의 방법과 유사하게, 예를 들어 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체를 조합으로 또는 각각 별개로, 및 1종 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 혼합함으로써 적절하게 제조될 수 있다.

본 발명자들은 또한 라파마이신 또는 라파마이신 유도체와 조합된 FK506을 비롯한 화합물 군이 염증성 질환 및 면역-매개 질환의 치료에 유용함을 밝혀내었다.

또다른 측면에서, 본 발명은 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 추가의 습진 피부병, 지루 피부염, 접촉 과민, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 맥관부종, 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환의 치료용 의약의 제조를 위한, 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 하기 화학식 III의 화합물의 조합물의 용도를 제공한다.

상기 식에서,

R₁은 히드록시 또는 보호된 히드록시이고,

R₂는 수소, 히드록실 또는 보호된 히드록실이고,

R₃은 메틸, 에틸, 프로필 또는 알릴이고,

n은 1 또는 2의 정수이고,

선 및 점선의 기호는 단일 결합이다.

또다른 측면에서, 본 발명은 염증성 장 질환의 치료용 의약의 제조를 위한, 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 화학식 III의 화합물의 조합물의 용도를 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A와 화학식 III의 화합물의 조합물의 용도를 제공하며, 화학식 III의 화합물은 하기 화학식 III_FK의 화합물이다.

본 발명자들은 또한 화학식 II의 화합물이 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 추가의 습진 피부병, 지루 피부염, 접촉 과민, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 맥관부종, 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증 및 여드름과 같은 다양한 피부 관련 질환의 치료에 유용함을 밝혀내었다.

따라서, 또다른 측면에서, 본 발명은 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 추가의 습진 피부병, 지루 피부염, 접촉 과민, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 맥관부종, 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증 및 여드름의 치료가 필요한 대상체에게 치료학적 유효량의 화학식 II의 화합물, 또는 R₂가 -CH₂-CH₂-OH일 경우 그의 프로드러그, 예를 들어 그의 생리학적으로 가수분해가능한 에테르를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법을 제공한다.

<화학식 II>

상기 식에서,

R₁은 CH₃ 또는 (C_3-6)알키닐이고,

X는 =O, (H,H) 또는 (H,OH)이되,

단, X가 =O이고, R₁이 CH₃일 경우, R₂는 H가 아니다.

본 발명의 상기 측면에서 특히 바람직한 화학식 II의 라파마이신 유도체는 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신 (이하, 화합물 A), 40-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트]-라파마이신 (CCI779로도 지칭됨), 40-에피-(테트라졸릴)-라파마이신 (ABT578로도 지칭됨), 32-데옥소라파마이신, 16-펜트-2-이닐옥시-32(S)-디히드로-라파마이신, 또는 TAFA-93이다. 보다 더 바람직한 것은 화합물 A이다.

본 발명은 또한 다음을 제공한다.

1. 상기 정의된 바와 같은 피부-관련 질환의 치료 방법에 사용하기 위한, 상기 기재된 바와 같은 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A.

2. 상기 정의된 바와 같은 피부-관련 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 제약 조성물의 제조에 사용하기 위한, 상기 기재된 바와 같은 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A.

3. 상기 정의된 바와 같은 피부-관련 질환의 치료 방법에 사용하기 위한, 상기 기재된 바와 같은 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A를 1종 이상의 그의 제약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.

위에서 구체화된 질환 및 증상의 치료에 있어서 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 화학식 II의 라파마이신 유도체 및 조합물의 유용성은 예를 들어 이하에 기재된 바와 같은 표준 동물 또는 임상 시험에서 입증될 수 있다.

본 발명의 방법을 실시하는데 요구되는 1일 투여량은 예를 들어 사용되는 본 발명의 화합물의 화학적 성질 및 약물동력학적 데이타, 개별 숙주, 투여 방식 및 치료될 증상의 성질과 중증도에 따라 다양할 것이다. 그러나, 일반적으로 대형 포유동물, 예를 들어 인간에서의 만족스러운 결과를 위해, 지시되는 1일 투여량은 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스, 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체가 일반적으로 투여되는 범위와 유사하지만, 더 낮은 범위이다. 바람직한 1일 투여량 범위는 단독 투여량으로서 또는 분할된 투여량으로서의 라파마이신 또는 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A 약 0.1 내지 25 mg이다. 환자에게 적합한 1일 투여량은 예를 들어 라파마이신 또는 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A 0.1 내지 25 mg (경구) 정도이다. 본 발명의 조성물은 임의의 적절한 경로로, 예를 들어 화학식 I의 화합물, 예를 들어 피메크롤리무스 및 라파마이신 또는 라파마이신 유도체, 예를 들어 화학식 II의 화합물의 투여와 유사하게 투여될 수 있다. 예를 들어, 라파마이신 또는 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A는 임의의 통상의 경로로, 특히 장내로, 예를 들어 경구로, 예를 들어 정제, 캡슐제, 드링크 용액제의 형태로, 비내로, 폐내로 (흡입에 의해) 또는 비경구로, 예를 들어 주사가능한 용액제 또는 현탁제의 형태로 투여될 수 있다. 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 약 0.05 내지 12.5 mg, 통상적으로 0.25 내지 10 mg의 라파마이신 또는 화학식 II의 라파마이신 유도체, 예를 들어 화합물 A를 1종 이상의 그의 제약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함한다.

본 상세한 설명에서, "치료" 또는 "치료하다"라는 용어는 예방(prophylactic) 또는 예방적(preventive) 치료 뿐만 아니라, 질환에 걸리거나 질환에 걸릴 위험이 있는 환자 및 병들었거나 질환 또는 의학적 증상을 앓고 있는 것으로 진단받은 환자의 치료를 비롯한 치료적 또는 질환 조절 치료 둘다를 지칭한다.

도 1 내지 3은 2 x 10⁵CD4⁺CD45RB^Hi T 세포로 재구성하고, 피메크롤리무스 (ASM), 화합물 A, 및 ASM + 화합물 A의 조합물로 처리 및 미처리한 후의 SCID-IBD 마우스의 체중을 나타낸다. PBS-마우스는 비-전이된 마우스이다. 전이 1일 후에 처리를 시작하여 매일 계속하였다. 데이타는 군 당 n=8 (약간의 예외로 n=5, 6 또는 7) 마우스에 대한 평균 체중％ (0일의 체중에 비해)±s.e.m.으로 표현되며, 비히클-처리된 군에 비해 ^**p < 0.01, ^*p < 0.05로, 체중 감소가 나타난다.

도 1에는, 투여량 1을 사용한 결과 (화합물 A: 0.1 mg/kg/d, ASM: 60 mg/kg/d), 도 2에는 투여량 2를 사용한 결과 (화합물 A: 0.1 mg/kg/d, ASM: 30 mg/kg/d), 및 도 3에는 투여량 3을 사용한 결과 (화합물 A: 0.05 mg/kg/d, ASM: 10 mg/kg/d)가 나타나 있다.

도 4는 다양한 처리 후 SCID-IBD 마우스에서의 결장 염증의 중증도를 나타내며, 중증도 점수는 실시예 1에 기재된 바와 같이 주어진다.

온도는 섭씨 (°)로 주어지며, 보정하지 않았다.

본 명세서에서 하기 약어가 사용된다.

ASM 피메크롤리무스

AUC 곡선하 면적

ANOVA 분산 분석

BW 체중

CD 크론병

CyA 시클로스포린 A

FACS 형광 표지 세포 분리기

H & E 해마톡실린 및 에오신

HTAB 헥사데실트리메틸암모늄 브로마이드

IBD 염증성 장 질환

IFN 인터페론

IL- 인터루킨

i. p. 복막내

MPO 미엘로퍼옥시다제

MLN 창자간 림프절

MTOR 라파마이신의 포유동물 표적

PBS 인산염 완충 염수

PBS-(마우스) 질환-유발 T 세포 대신 PBS를 복막내 투여받은 SCID 마우스

p.o. 경구

RAD 화합물 A, 에베롤리무스

SCID 중증 복합 면역 결핍증

s. e. m. 평균의 표준 오차

SD 표준 편차

TMB 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘

TNF 종양 괴사 인자

UC 궤양성 대장염

실시예 1

시험 방법

SCID-IBD 마우스 모델

암컷 BALB/cJ 및 C.B. 17 scid/scid 마우스 (폭스 체이스(Fox Chase) SCID(등록상표), 덴마크 봄홀트가르트)를 환기된 우리 선반 (마이크로-벤트(Micro-vent) 타입 84-II, 미국 뉴저지주 알렌타운에 소재하는 알렌타운 케이징 이큅먼트 캄파니(Allentown Caging Equipment Co.) 제품)에서 특정 병원균이 없는 조건하에 유지하였다. 마우스에 대해 수행된 실험 절차는 허가 번호 MA 1048/00 (빈 주정부 관허 제58호) 하에 허가되었다. 간단히, CD4⁺CD45RB^Hi T 림프구를 2-색 FACS-분리에 의해 살아있는/죽은 게이트를 통해 BALB/c 마우스 비장으로부터 분리하고, 6 내지 9 주령 암컷 SCID 마우스에게 주사하였다 (2 x 10⁵ 세포/마우스, 복막내). 음성 대조군 마우스는 PBS를 복막내 투여받았고, 이러한 마우스 하나를 각각의 우리에 표지로서 두어 상기 면역결핍 콜로니 (PBS-마우스)에서 가능한 감염을 모니터링하였다.

먼저, SCID 마우스를 CD4⁺CD45RB^Hi T 세포로 재구성한 후, 시험 화합물 또는 대조군으로서 비히클로 처리하였다. 시험 화합물로서, 화합물 A (RAD) 및 피메크롤리무스 (ASM)을 사용하였다. 상이한 투여량을 사용한 3가지 별개의 연구를 수행하였다. 각각의 연구에서, 화합물 둘다를 단독으로, 그리고 조합하여 투여하였다. 3가지 연구는 모두 세포 전이 1일 후 내지 29일 후에 매일 경구 위루영양에 의해, 둘다 비히클 (위약)을 투여받은 한 군, 화합물 A를 단독 투여받은 한 군, ASM을 단독 투여받은 한 군, 및 화합물 A와 피메크롤리무스의 조합물을 투여받은 한 군의, 4군의 마우스가 동일한 기본 프로토콜을 따랐다.

투여된 투여량:

연구 1: 투여량 1: 화합물 A: 0.1 mg/kg/d, ASM: 60 mg/kg/d

연구 2: 투여량 2: 화합물 A: 0.1 mg/kg/d, ASM: 30 mg/kg/d, 및

연구 3: 투여량 3: 화합물 A: 0.05 mg/kg/d, ASM: 10 mg/kg/d.

각각의 마우스의 체중을 전반적으로 모니터링하고, 연구의 마지막에 마우스를 칭량하였다. 마우스를 연구의 마지막에 마취시키고, 혈액을 심장 천공을 통해 회수하여 혈청으로 분리하고, 이를 냉동시켜 -80℃에서 저장하였다. 또한, 혈액을 FACS 분석용으로 제조하기 위해 10 mM EDTA에 넣었다. 비장과 MLN을 각각의 마우스로부터 취하고, 칭량하고, 단일 세포 현탁액의 FACS 분석을 위해 가공하였다. 개방된 복강의 사진을 찍은 후, 조직검사를 위해 직장 바로 위의 결장을 1 cm 길이 조각으로 포르말린에 고정하였다. 표본을 파라핀에 끼우고, 절편 (3 ㎛ 두께)을 자르고, H & E로 염색하였다.

각각의 마우스의 혈액, 비장 및 창자간 림프절 (MLN)로부터 제조된 세포 현탁액에 대해 4-색 FACS 분석을 수행하였다. 항체는 파민젠(Pharmingen)으로부터 수득하였다. CD3과 CD4에 대해 이중 양성인 세포를 림프구로서 카운팅하였다. Ly-6G (골수양 분화 항원)에 대해 양성이고 CD3 또는 CD4에 대해 음성인 세포는 중성구이다 (또한 그의 세포적 특징 (전방 및 측면 산란)으로 이들을 다른 세포로부터 구별한다). 샘플 당 세포의 수를 각각의 세포 현탁액 내의 총 세포 수로부터 계산하고, 샘플 당 양성으로 확인된 세포의 ％를 계산하였다 (셀퀘스트 프로(CellQuest Pro)(등록상표) 소프트웨어를 사용한 FACS 칼리버(Calibur)(등록상표) 상에서 샘플 분석). 마우스의 군에 대한 상기 값의 평균을 이렇게 계산할 수 있다. 데이타의 일부를 더 가공하기 위해, 측정된 값을 비-전이된 마우스에서 발견된 배경 값을 빼고 위약 처리군에 대한 평균 세포 수에서의 감소율 ％, 또는 진정 증가율을 계산함으로써 보정하였다. 평균값으로 제시된 모든 데이타는 s.e.m. 값에 의해 정성하였다. 체중 데이타를 반복 측정 분석에 의해, 또는 먼저 평균 AUC를 구한 후 터키(Tukey) 사후 보정을 사용한 ANOVA 다중 비교 검정을 적용하여 분 석하였다. 조직검사 점수는 평균 중증도 점수로 나타내었으며, 정확한 p-값과 본페로니(Bonferroni) 사후 보정 인자를 사용한 윌콕손-만-휘트니(Wilcoxon-Mann-Whitney) 검정 (스타트잭트(StatXact)-5 소프트웨어)으로 비교하였다. 먼저, 모든 다른 데이타를 정규 분포에 대해 분석한 후, 다중비교를 위한 ANOVA 검정을 적용하였다. 통계적 유의도는 p<0.05로 취했다.

SCID 마우스에서 CD4⁺CD45RB^Hi T 세포의 전이에 대한 발달 반응은 T 세포 팽창이 첫번째 사건이고 염증성 후유증이 따라오며, 이는 체중의 중요한 감소, 중증 결장 염증 및 증가된 혈청 합토글로빈 수준 및 중성구와 같은 전신성 징후로서 측정될 수 있음을 나타낸다. 또한, 시간에 따라 T 세포 집단이 증가하면, 그렇지 않을 경우 비-전이된 SCID 마우스에서 비교적 작을 림프계 기관의 크기가 증가하게 된다. T 세포 전이 후 28일까지, 염증은 상대적으로 마우스의 군 내에서 일정하였으며, 이는 시험 화합물을 사용한 치료의 정확한 효과가 측정될 수 있는 최단 시간으로 채택되었다. 단독의 예방적 화합물로서의 화합물 A 및 ASM의 투여량 범위의 효과, 간단히 비교 유효 투여량 범위는 ASM 30 내지 100 mg/kg/d 투여 및 화합물 A 0.1 내지 1 mg/kg/d 투여인 것으로 밝혀졌다. 본 시험에서, 각각의 화합물의 준최대 투여량이 사용되었으며, 동일한 연구에서 단독 및 조합 치료의 효과를 측정하였다.

결과

화합물 A 및 ASM을 사용한 SCID-IBD 마우스의 조합 치료의 체중 감소에 대한 상승 효과

CD4⁺CD45RB^Hi T 세포가 SCID 마우스에 유발시키는 질환의 전이로부터 초래되는 첫번째 가시적인 증후는 통상적으로 전이 후 21일에 유의한 체중의 심각한 감소이다. 상기 마우스 (상기 연구에서, 예를 들어 도면에서 위약으로 표시됨)는 죽기 전, 일반적으로 세포 전이 후 4 내지 8주까지 계속 체중이 감소하였다. 비-전이된 마우스 (도면에서 "PBS(-마우스)"로 표시됨)는 연구 과정중 체중이 고정되거나 증가하였다. 본 명세서에 기재된 3가지 개별 연구에서, 비-전이된 마우스와 비히클-처리된 마우스 사이의 체중의 평균 차이도 ％는 16.3±1.8％로 계산되었다. 전이된 SCID 마우스를 화합물 A 단독 또는 ASM 단독으로 처리하면, ASM 60 mg/kg/d의 투여량으로 처리한 마우스에 대해서만 유의하지만 낮은 체중 억제가 발견되었다. 화합물 둘 중 하나를 단독 사용한 이러한 투여량은 체중 감소에 부작용만을 갖는 반면, 화합물 A와 ASM의 조합 투여는 심지어 낮은 투여량의 ASM (10 mg/kg/d) 및 화합물 A (0.05 mg/kg/d)에서도 유의한 보호 효과를 가졌다 (도 3 참조). 화합물 A 및 ASM을 단독 투여한 제제는 체중 감소에 대해 효과를 갖지 않거나 적은 유의한 효과만을 가질 뿐이기 때문에, 조합 투여의 보호 효과는 상가적인 것이 아니라 상승적인 것이다.

본 발명에 따른 조합물의 상승 효과를 확인시켜 주는 추가의 데이타 (미도시)가 얻어졌다. 간단히, 본 발명자들은 각각 ASM 60, 30 및 10 mg/kg/d 및 화합물 A 0.1, 0.1 및 0.05 mg/kg/d의 준최대 투여량을 사용할 경우, SCID-IBD 모델에 서 ASM과 화합물 A의 조합물의 상승 효과를 발견하였다. ASM 단독 60 mg/kg/d의 투여량은 여전히 단독으로 유의한 효과가 도출되었지만, 다른 모든 단독 처리군에서는 온건한 질환 억제만이 얻어졌다. 특히, 본 발명자들은 하기 결과를 얻었다.

- 모든 3가지 조합물, 가장 현저하게는 또한 ASM 10 mg/kg/d 및 화합물 A 0.05 mg/kg/d의 최저 투여량은 체중 감소가 없었다 (데이타 도시, 도 1 내지 3 참조).

- 10 및 0.05 mg/kg/d의 저 투여량 조합물에서, 결장 염증에 대한 상승 효과가 나타났다. 화합물 둘 중 하나의 단독은 거의 효과가 없었으며, 조합 처리군에서의 중증도 점수는 대부분 온건하였다 (데이타 미도시).

- ASM은 60 및 30 mg/kg/d에서 혈청 합토글로빈 수준을 매우 감소시킨 반면, 화합물 A는 0.1 또는 0.05 mg/kg/d에서 매우 약한 활성이었다. 다시, 각각의 화합물 단독의 감소율 ％가 32.7％ (ASM 10 mg/kg/d) 또는 27.4％ (화합물 A, 0.05 mg/kg/d)인 반면, 조합 치료군이 81.0％로 유의하게 억제된 저 투여량 연구에서 상승작용은 명백하였다 (데이타 미도시).

- 저 투여량 연구에서, 어떠한 처리군에서도 림프구 수의 유의한 감소는 없었지만, 조합군에서는 비히클-처리된 마우스에 비해 그 수가 감소되었다 (혈중, 비장 및 MLN에서 각각 46.5, 19.0 및 48.0％). ASM 및 화합물 A가 보다 높은 투여량으로 주어진 연구 (각각 30 mg/kg/d 및 0.1 mg/kg/d; 연구 2)에서, 림프구 수의 유의한 감소가 있었던 반면 (혈중, 비장 및 MLN에서 각각 73.0, 80.3 및 90.7％), 단독 처리군 (각각 ASM 또는 화합물 A 단독 투여)에서는 그 수가 감소되지 않았다. 단독으로 특히 MLN에서 림프구 수를 감소시킨 (73.5％) ASM의 보다 높은 투여량 (60 mg/kg/d; 연구 1)과 유사하게, 화합물 A (0.1 mg/kg/d)와의 조합물은 혈중 (65.4％) 및 비장 (64.8％) 둘다에서는 유의한 감소를 초래하였을 뿐만 아니라 MLN에서는 증진된 감소 (93.2％)를 초래하였다. 화합물 A 단독의 0.1 mg/kg/d의 투여량은 림프구 수에 대해, 존재할 경우 약한 효과만을 가졌다.

화합물 A와 조합된 ASM981은 SCID-IBD 마우스에서 결장 염증을 감소시키는데 상승적으로 작용함

SCID-IBD 마우스의 결장에서의 염증은 크론병에 걸린 결장의 병변 조직에서 관찰되는 많은 특징을 공유한다. SCID-IBD 마우스에서 장 점막 손상을 검사하기 위해, 결장 절편의 조직학적 검사를 한정된 형태학적 파라미터에 따라 수행하였다. IBD의 상기 모델과 관련된 중증 대장염은 거의 모든 점막밑을 포함하는 위치에 큰 세포 침윤물을 가짐을 특징으로 한다. 침윤물은 림프구, 대식세포, 중성구 및 일부 호산구로 이루어져 있고, 이들이 혼합되어 있다. 또한, 잠복 구조, 광범위한 신장 및 표피 과다형성의 감소가 명백하였다. 중증으로 염증이 생긴 결장 절편은 또한 잠복 농양을 가질 것이다. 점수를 하기 체계에 따라 부여하였다. 백혈구 침윤물에 대해서는 0 내지 3의 점수를 부여하였는데, 1은 온건, 2는 중간, 3은 점막하 층을 포함하는 중증 침윤물이다. 배상 세포에 대해서는 0 내지 2의 점수를 부여하였는데, 2는 알시안 블루 염색이 완전히 없는 것에 대해 부여하였고, 0은 정상량의 염색에 대해 부여하였고, 1은 중간이다. 점막 과다형성, 및 잠복 신장, 표피 과다형성, 잠복 농양, 진무름 및 표피 괴사를 비롯한 퇴행성 변화에 대해서는 0 내 지 3의 점수를 부여하였다. 최대 가능한 점수는 8이며, (PBS)-마우스는 0 점이다. 본 발명자들은 ASM981 단독 60 mg/kg/d의 투여량이 유의한 효과를 가짐을 밝혀내었다. 화합물 A 0.5 mg/kg/d 미만의 투여량은 유의하게 활성이 아니었으며, 상기 모델에서도 또한 아니었다. 그러나, 2가지 화합물 함께는 각각 단독 화합물의 상가 효과에 의해 달성될 수 없는 온건한 수준 (점수 4 미만)으로 염증을 감소시켰다 (도 4). 결론적으로, SCID-IBD 모델에서, 단독 화합물이 최소 효과를 갖는 투여량에서 피메크롤리무스 및 화합물 A의 조합 치료는 매우 유의하게 질환을 예방하였다. 본 발명자들이 체중 및 결장 염증에서 본 강력한 효과는 림프구 수에만 상호관련있는 것은 아니다. 상승 효과는 림프구 수를 배제하지 않지만, 림프구 활성 또는 기능 뿐만 아니라 질환에 관련된 다른 세포에도 영향을 줄 수 있다. 상기 데이타는 피메크롤리무스와 화합물 A의 조합물이 SCID-IBD 마우스 모델에서 상승적으로 작용함을 확인시켜 준다.

실시예 2

화합물 A 및 피메크롤리무스를 포함하는 정제의 제조

피메크롤리무스 30 mg의 고체 분산체 및 화합물 A 1.00 mg의 고체 분산체와 담체로서 히드록시프로필메틸셀룰로스 (3 cps) 160 mg의 총 중량 약 750 mg의 정제 당, 락토스 (200 메쉬) 8.90 g, 부틸화 히드록시톨루엔 0.10 mg, 분무 건조 락토스 381.25 mg, 크로스포비돈 150.00 mg, 콜로이드성 이산화실리슘 (에어로실 200(등록상표)) 11.25 mg 및 스테아르산마그네슘 7.50 mg을 혼합하고, 수득된 혼합물을 건조 과립화하고, 수득된 과립화된 혼합물을 총 중량 750 mg (+/-10％)의 정제로 압 축시켰다. 경구 용도를 위한 정제를 수득하였다.

실시예 3

본 명세서에 특정화된 질환 및 증상의 치료에 있어서의 화학식 II의 화합물의 유용성

A) 생체내: 알러지 또는 알러지-유도성 접촉 피부염 모델에서의 국소 투여 후 활성

A1) 옥사졸론 알러지 (마우스):

2％ 옥사졸론 용액 10 ㎕를 마우스의 배 피부 위에 감작을 위해 적용하였다. 8일 후, 2％ 옥사졸론 용액 10 ㎕를 사용한 2차 노출을 귓바퀴의 주변 내표면에 적용함으로써 수행하였다. 2차 노출 20분 후 및 2시간 후에 챌린지 반응을 해제하고, 시험 용액을 2차 노출부에 적용하였다. 시험 물질을 사용한 염증 억제 평가를 시험 물질을 용해시키는데에 사용된 용매 단독으로 처리된 미처리군에 대해 참조함으로써 수행하였다. 2차 노출 24시간 후에 동물을 치사시키고, 분리된 귓바퀴를 칭량하였다. 2개의 귓바퀴 사이의 중량 차이를 평가에 사용하였다. 시험군 및 용매 대조군에서의 개별 차이를 통계학적으로 비교하였다 (정규적으로 분포할 경우 정규 분포 검정에 의한 후속 듀넷(Dunnet) 검정을 사용한 단순 분산 분석에 의해, 그렇지 않은 경우 크루스칼-월리스(Kruskal-Wallis) U-검정 및 윌콕손-만-휘트니 U-검정에 의해).

A2) 디니트로플루오로벤젠 (DNFB) 알러지 (돼지(Swine)):

DNFB 또는 디니트로클로로벤젠 (DNCB)을 사용하여 접촉 알러지를 증가시키는 것은 인간에게도 사용되고 있는 고전적인 실험적 접근법이다 (문헌 [P.S. Friedmann and C. Moss, Models in dermatology, 1987, Maibach, Lowe, Ed., Vol. 2, p. 275-281, Karger-Basel] 참조). 돼지(porcine) 및 인간 피부 사이의 유사성의 관점에서, 물질의 국소 시험을 위한 상응하는 모델을 돼지에서 만들었다. 1일째 및 3일째에 각각의 10％ DNFB 제제 100 ㎕를 각각 넙적다리 우측 및 좌측 내표면에 적용하였다. 14일째에, 각각의 돼지를 직경 5 cm의 원형 마킹으로 등 우측 및 좌측에 마킹하였고 (동물 당 8개의 마킹), 각각의 5％ DNFB 제제 150 ㎕를 그 위에 적용하였다. 물질을 갈렌 조성물 또는 용액의 형태 둘다로 시험하였다. 담체는 각각의 경우 위약 대조군과 같이 사용하였다. 시험 생성물을 주의깊게 4회 적용하였다 (처음 20분, 이어서 챌린지 반응 해제 후 6, 24 및 32시간). 각각의 적용 전, 시험 영역을 적화, 팽창 및 일관성에 대해 평가하였다. 그 후, 시험 영역의 색을 반사계를 사용하여 반복적으로 정량적으로 측정하였다. 밝음 (L^*) 및 포화 (C^*)의 데이타로부터, 홍반 지수를 하기 식에 따라 계산하였다.

100 - L^* x C^*

평균 혼반 지수는 하기 식에 따른 활성의 반영이다.

억제율 ％ (24, 32, 48, 56시간) = {Δ(플라시보)-Δ(시험)}/Δ(플라시보)

Δ = 초기값에 대한 차이

B) 생체내: 자극-유도성 피부염 모델 (마우스)에서의 국소 투여 후 활성:

B1) 12-O-테트라데카노일포르볼-13-아세테이트/TPA)-유도성 피부염:

시험 동물에서 TPA로 자극하는 것은 물질을 국소 적용한 후 그의 항-염증 활 성을 시험하기 위한 방법이다 (문헌 [Maibach, Lowe, Ed. Models in Dermatology, Vol. 3, 1987, p. 86-92, Karger-Basel] 참조). NMRI 마우스에게 오른쪽 귓바퀴의 내측 및 외측에 TPA 용액 10 ㎕ (2 x 10, ㎕/마우스 = 2 x 0.5 ㎕ TPA/마우스)를 주었다. 왼쪽 귓바퀴는 미처리로 두었다. 자극 30분 후에 시험 용액 2 x ㎕를 자극된 귀 표면에 상기 기재된 바와 같이 적용함으로써 처리를 수행하였다. 오른쪽 귓바퀴를 자극 용액으로만 처리하고 시험 물질에 대해 사용된 용매로 처리한 군과 비교함으로써 시험군의 평가를 수행하였다. 자극제 적용 6시간 후에 동물을 치사시키고, 귓바퀴를 분리하고, 칭량하였다. 2개의 귓바퀴의 중량 차이를 평가에 사용하였고, 이로써 시험군의 개별 차이를 대조군의 개별 차이와 통계적으로 비교하였다 (A1 하에서와 같이).

B2) 파두유에 의해 유도된 피부염

TPA로서 파두유를 사용하여 자극제-유도성 피부염을 유도하고, 물질을 그의 항-염증 활성에 대해 시험할 수 있다 (문헌 [Maibach, Lowe, Ed., Model in Dermatology, Vol. 3, 1987, p. 86-92, Karger-Basel] 참조). NMRI-마우스에게 오른쪽 귓바퀴의 내측에 (디메틸아세트아미드, 아세톤 및 에탄올 2/4/4의 혼합물 중) 0.23％ 파두유 15 ㎕를 주었다. 자극과 동시에 처리를 수행하였으며, 시험 물질은 귓바퀴 시험부에 적용된 자극제 용액에 용해시켰다. 시험군의 평가를 귓바퀴에 자극제 용액만을 투여받은 군과 염증을 비교함으로써 수행하였다. 동물을 자극제 적용 6시간 후에 치사시키고, 귓바퀴를 분리하고, 칭량하였다. 2개의 귓바퀴의 중량 사이의 차이를 사용하여 시험군에서의 단일 차이를 대조군에서의 단일 차이와 통계 적으로 비교함으로써 평가하였다 (A1 하에서와 같이).

C) 생체내: 아토피 피부염 (인간):

무작위 이중-맹목 연구에서, 중간 내지 중증 아토피 피부염을 앓고 있는 환자 7 내지 12명 (총 수)을 화학식 II의 화합물 0.05 내지 2 중량％ (조성물의 총 중량 기준)를 포함하는 조성물로 피부 200 내지 1000 ㎠의 한정된 증후 면적 위에 3주 동안 일일 2회 치료하였다. 치료 첫째날과 마지막날 사이의 홍반, 부종 및 가려움증에 대한 합계 점수 변화를 평가하였다. 연구 약물의 국부 내성 및 혈액학 및 임상 화학을 비롯한 통상의 안전성 파라미터를 기록하였다.

Claims

염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료를 위한,

라파마이신 또는 하기 화학식 II의 라파마이신 유도체 또는 40-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트]라파마이신(CCI779) 또는 40-에피-(N1-테트라졸릴)라파마이신(ABT578, 조타롤리무스) 또는 42-(디메틸포스피네이트)라파마이신(AP23573, 데포롤리무스) 또는 42-O-(2-에톡시에틸)라파마이신(비올리무스 9), 및

하기 화학식 I의 화합물의 조합물.

<화학식 II>

상기 식에서,

R₁은 메틸 또는 (C_3-6)알키닐이고,

R₂는 H, -CH₂-CH₂-OH, 3-히드록시-2-(히드록시메틸)-2-메틸-프로파노일 또는 테트라졸릴이고,

X는 =O, (H,H) 또는 (H,OH)이되,

단, X가 =O이고, R₁이 CH₃일 경우, R₂는 H가 아님;

<화학식 I>

상기 식에서,

R₁은 하기 화학식 a의 기이고

<화학식 a>

(상기 식에서,

R₅는 클로로, 브로모, 요오도 또는 아지도이고,

R₆은 히드록시 또는 메톡시임),

R₄는 히드록시이며, 10, 11 위치에 단일 결합이 있거나; R₄는 존재하지 않으며, 10, 11 위치에 이중 결합이 있거나, 또는

R₁은 하기 화학식 b 또는 c의 기이고

<화학식 b>

<화학식 c>

(상기 식에서,

R₆은 상기에 정의된 바와 같음),

R₄는 히드록시이며, 10, 11 위치에 단일 결합이 있고,

R₂는 옥소이며, 23, 24 위치에 단일 결합이 있거나; 보호될 수 있는 히드록시이며, 23, 24 위치에 단일 또는 이중 결합이 있거나; R₂는 존재하지 않으며, 23, 24 위치에 이중 결합이 있고,

R₃은 메틸, 에틸, 프로필 또는 알릴이다.
삭제
제1항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식의 화합물 (피메크롤리무스)인 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료를 위한 조합물.
제1항에 있어서, 라파마이신 유도체가 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 II의 화합물인 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료를 위한 조합물.
제1항에 있어서, 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신 및 피메크롤리무스를 포함하는 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료를 위한 조합물.
라파마이신 또는 제1항에 정의된 바와 같은 라파마이신 유도체, 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 및 담체를 포함하는 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료를 위한 제약 조성물.
제6항에 있어서, 담체가 셀룰로스인 제약 조성물.
제6항에 있어서, 정제 형태의 제약 조성물.
제6항에 있어서, 담체, 윤활제, 충전제, 유동화제 및 붕해제를 포함하는 제약 조성물.
삭제
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삭제
제1항에 있어서, 라파마이신 또는 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 II의 라파마이신 유도체 및 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물이 제약 조성물의 형태인 염증성 장 질환 및 그와 관련된 질환의 치료를 위한 조합물.
제6항에 있어서, 라파마이신 또는 제1항에 정의된 바와 같은 라파마이신 유도체가 고체 분산체 형태이고, 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물이 고체 분산체 형태인 제약 조성물.