KR100699368B1

KR100699368B1 - 신규한 ＨＭＧ-ＣｏＡ 환원효소 억제제 염

Info

Publication number: KR100699368B1
Application number: KR1020017000758A
Authority: KR
Inventors: 플라움즐라트코
Original assignee: 레크 파마슈티칼 앤드 케미칼 컴퍼니 디.디.
Priority date: 1998-09-18
Filing date: 1999-09-17
Publication date: 2007-03-27
Anticipated expiration: 2019-09-17
Also published as: CN1228304C; JP3834203B2; US20080188552A1; HUP0103007A3; IS2113B; IL142055A; NZ509583A; US20050049422A1; IS5891A; US20030120086A1; SI20070A; EP1466886A2; US6583295B1; KR20010071959A; EP1114021B1; AU765373B2; CA2343646A1; JP2002526467A; CN1318046A; US6838566B2

Abstract

로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 이들의 유도체 및 유사체들은 HMG-CoA 환원효소 억제제로서 알려져 있고 이들은 항고콜레스테롤혈증제(antihypercholesterolemic agent)로 사용되어 왔다. 이들 대부분은 아스퍼질러스, 모나스커스, 노카르디아, 아미콜라톱시스, 뮤코 또는 페니실리움 속에 속하는 동정된 미생물을 이용한 발효에 의해 생물공학적으로 생산되고 어떤 경우에는 발효산물을 화학합성법을 사용하여 처리함으로써 반합성 물질로 생산되거나, 또는 화학적 합성법만을 사용하여 생산된다. 본 발명은 HMG-CoA 환원효소 억제제의 새로운 아민염, 그 제조방법, 아민염 형태의 순수한 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법, HMG-CoA 환원효소 억제제의 반합성적방법과 생물공학적 변형에 있어서 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 용도, HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 약학적으로 용인될 수 있는 염형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제로의 전환 및 HMG-CoA 환원효소 아민염의 락톤형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제로의 전환과 관련이 있다.

HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염, 항고콜레스테롤혈증제, 분리, 정제, 치환

Description

신규한 ＨＭＧ-ＣｏＡ 환원효소 억제제 염{New Salts of HMG-CoA Reductase Inhibitors}

로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 메바스타틴, 아토르바스타틴, 이들의 유도체 및 유사체들은 항고콜레스테롤혈증제(antihypercholesterolemic agent)로서 사용되는 HMG-CoA 환원효소 억제제로 알려져 있다. 이들 대부분은 아스퍼질러스, 모나스커스, 노카디아, 아미콜라톱시스, 뮤코 또는 페니실리움 속에 속하는 동정된 미생물을 이용한 발효에 의해 생물공학적으로 생산되고 어떤 경우에는 화학적 합성방법을 이용하여 발효산물을 처리함으로써 반합성 물질로 생산되거나, 또는 화학적 합성방법만을 사용하여 생산된다.

본 발명은 HMG-CoA 환원효소 억제제를 특별한 아민을 함유한 그들의 염을 통해 분리 및(또는) 정제하기 위한 새로운 산업적 공정과 관련된 것이다. 본 발명은 물질이 생물공학적 방법(미생물 이용)에 의해 생산될 경우에는 발효액으로부터, 또는 물질이 반합성적방법 (semisyntheitc) 또는 화학적 전합성방법에 의해 생산될 경우에는 반응 혼합물로부터 아민염(amine salt)형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제를 획득할 수 있다. 아민염 제조 단계는 HMG-CoA 환원효소 억제제 또는 이들의 전구체(precursor) 물질의 분리 및(또는) 정제과정 중의 한 단계일 수 있다. 본 명세서에 기술되어 있는 아민은 HMG-CoA 환원효소 억제제 또는 이들의 전구체의 생물공학적 변형 방법에서 배지(media) 조성물 중에 염을 형성하는 데 있어서 매우 유용하다. 그러므로 형성된 염은 반합성적 유도체 및 유사체의 제조를 위한 출발물질 또는 중간물질로서 사용될 수 있거나, 또는, 필요하다면, 문헌으로 알려진 간단한 기술을 사용함으로써 약학적으로 용인될 수 있는 염과 락톤형태로 각각 변형될 수 있다.

삭제

특허 및 기술 문헌으로부터 알려진 항고콜레스테롤혈증제의 분리와 정제를 위한 방법은 추출, 크로마토그래피, 락톤화 및 결정화 방법의 상이한 조합을 포함한다. 상기 방법 중 몇몇은 상이한 염을 통한 분리 및 정제를 부가적으로 포함한다. 미국특허 제 4,342,767호와 제 4,319,039호에서는, 발효배지로부터 추출된 유기상(organic phase)으로부터 로바스타틴의 암모니움 염(카르복시산염 형태)이 직접적으로 분리된 바 있다. 상기 특허에서 L-라이신, L-아르기닌, 및 L-오르니틴과 같은 상이한 아미노산 염 뿐만 아니라, 에틸렌아민, 테트라메틸암모니움, 칼륨 및 N-메틸글루카민 염의 제조방법도 기술되어 있다. 전술한 염들은 이미 정제된 물질을 사용하여 제조하였으며 분리공정 또는 정제공정에서 이들을 사용하기 위한 선택은 언급되어 있지 않다. 또한 영국특허 제 2055100 A호에서도 메탄올 중에서의 추출, 2 단계의 정제용 액체 역상 크로마토그래피, 메탄올로부터의 결정화 및 에탄올로부터의 재결정화, 및 수산화나트륨 또는 수산화칼슘의 수용액을 사용하는 염으로의 전환을 포함하는, 로바스타틴의 나트륨염 및 칼슘염의 형성에 대해 기술한 바 있다. 그러나, 상기 기술된 방법들은 다양한 크로마토그래피를 사용하지 않고서는 본 발명을 사용하여 획득한 생산물만큼의 순도로 생산물을 생산할 수 없다. 미국 특허 공개번호 제 4,346,227 호에서는 프라바스타틴의 나트륨염 생산방법이 기재되어 있는데, 여기서 크로마토그래피 방법이 사용되었으나 대량생산에 있어서 비경제적인 방법인 동결건조(lyophilisation)후에만 최종산물이 생산된다. 유럽특허 공개번호 제 65,835호에서는 각각 정제된 나트륨 염형태이며 중간 산물로서 그를 경유하는 분리 과정이 실시되지 않는 최종산물로서 테트라하이드로-M-4 또는 테트라하이드로-이소M-4(M4는 특정 HMG-CoA 환원효소 억제제를 나타내고, M-4와 이소M-4는 각각 6-과 3-비페닐 링 위치에서 수산화된 이성질체(isomers)를 나타내고, "테트라하이드로"는 축합된 비페닐 링 시스템이 완전히 수소화되었다는 것을 의미함)의 L-오르니틴 및 t-옥틸-아민염의 제조방법이 공지되어 있다. 암모니아, 아미노산, 또는 옥틸아민, 2-에틸헥실아민, 벤질아민, α-메틸-벤질아민, 페니틸아민, 디벤질아민, N-메틸벤질아민, N,N-디메틸벤질아민, N,N-디에틸벤질아민, N-에틸-N-메틸벤질아민, 트리벤질아민, 시클로펜틸아민, 시클로헥실아민, 시클로헵틸아민, N-메틸시클로펜틸아민, N-에틸시클로헥실아민, N-에틸시클로헵틸아민, 디시클로헥실아민, N,N-디메틸시클로펜틸아민, N,N-디메틸시클로헥실아민, N,N-디에틸시클로헵틸아민, 피롤리딘 (pyrrolidine), N-메틸피롤리딘, 피페리딘(piperidine), N-메틸-피페리딘 및 모르포린(morpholine)을 비롯한 유기 아민으로 구성된 테트라하이드로-M-4 또는 이소M-4의 기타 염 또한 최종산물로서 예상된다. 영국특허 공개번호 제 2073199 A 호에는 이미 분리된 락톤형태의 물질로부터 각기 다른 염 형태의 HMG- CoA 환원효소 억제제의 제조방법이 공지되어 있다. 미국특허 공개번호 제 5,763,653호와 제 5,763,646호에서는 로바스타틴의 시클로프로필아민과 n-부틸아민 아미드의 생산방법과 화학적 반합성 방법에 의한 심바스타틴의 생산에 있어서 이들의 유용성에 대해 공지된 바 있다. 미국특허 공개번호 제 5,403,860호에서는 최종산물로서 ML-236A, ML-236B, MB-530A 및 MB-530B로부터 유도된 유도체인 HMG-CoA 환원효소 억제제의 옥타하이드로나프탈렌 옥사임 유도체의 아민염에 대해 공지된 바 있다. 최종 아민염으로서, t-옥틸아민, 디벤질아민, 디시클로헥실아민, 모르포린, D-페닐글리신 알킬에스테르 및 D-글루코사민 염이 언급되었다.
기술상의 문제점
산업적으로 생산공정의 합리성, 공정의 단축 뿐만 아니라, 최소 비용의 출발 원료물질 또는 중간물질의 사용에 대한 요구가 계속되었다. 현재까지 HMG-CoA 환원효소 억제제의 경우 최종산물의 분리는 각 단계마다 최종 수율이 60%를 초과하지 않는 손실에 대한 기여도가 더해지는 다단계 공정이었다. 또한, 락톤 형태의 생산물 또는 나트륨 염으로 전환되는 락톤은 반합성방법(예, 심바스타틴의 제조공정) 또는 생화학적 전환방법(예, 프라바스타틴 제조공정)에서 출발 물질로서 사용된다. 락톤의 제조는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 생산을 위한 가장 경제적인 단계중 하나이다. 왜냐하면 산형태에서 락톤형태로 전환되는 과정과 선택적으로 염의 형태로 추가로 전환되는 과정에서 20% 이상의 손실이 있기 때문이다. 따라서, 전환되는 동안 손실이 작고 낮은 비용으로 기술적으로 간단한 방법으로 제조되는 충분히 순수한 출발물질 및(또는) 중간물질에 대한 요구가 계속되었다.

놀랍게도 본 발명자들은, 발전적인 연구 작업으로부터 HMG-CoA 환원효소 억제제가, 형성시 모액으로부터 결정화되는 특정 아민염을 형성한다는 것을 발견하였다. 다량의 불순물과 불필요한 HMG-CoA 환원효소 억제제 유사체가 함유된 액으로부터 고순도의 목적하는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 아민염 결정이 얻어질 수 있다는 것이 놀랍게도 밝혀졌다. 미국특허 제 5,403,860호의 하기 물질(Ia)을 제조하기 위한 공정에서 출발물질 또는 중간물질로서 HMG-CoA 환원효소 억제제의 염을 사용하여 낮은 수율이 얻어진다는 개시와 달리, 본 발명자들은 놀랍게도 본 발명에 따른 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염을 사용하여 락톤형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제를 이용한 경우와 동등하거나 또는 그보다 더 높은 수율과 순도로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 생산하였다.

[예시 화학식 Ia]

상기 일반식 Ⅰa에서 R₁은 CH₃, CH₂OH, OH 중 어느 하나이며 a와 b는 둘다 이중결합이거나 둘 중 하나는 단일결합이거나 또는 두 개 모두 단일결합이다.

더 나아가서 본 발명자들은 HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형을 위한 공정에 있어서 발효액으로부터 획득한 배지에서 HMG-CoA 환원효소 억제제의 아민염 형성이 기존의 문헌에서 보고된 바와 같은 단순한 금속염과 비교하여볼 때, 단순한 결정화에 의해 HMG-CoA 환원효소 억제제의 분리 및(또는) 정제를 위한 효과적인 방법을 제공한다는 것을 발견하였다. HMG-CoA 환원효소 억제제와 염을 형성하는 아민은 HMG-CoA 환원효소 억제제의 분리 및(또는) 정제 공정에서의 공정 보조제 및 HMG-CoA 환원효소 억제제의 반합성적 또는 생물공학적 변형 공정과, 추가로 HMG-CoA 환원효소 억제제의 약학적 활성이 있는(acceptable) 염 형태 또는 락톤 형태로의 전환 공정에서의 출발물질 또는 중간물질로서 사용된다.

본 발명은 다음과 같은 내용을 포함한다.

a) 선행기술에서 공지된 염은 배제하지만 상기에서 언급한 다른 문헌에 개시된 것들을 포함한, 청구항 제1항에 기재한 유기 아민과의 HMG-CoA 환원효소 억제제의 새로운 염,

b) 청구항 제 5항에 기재한, HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염 제조를 위한 공정,

c) 청구항 제 18항에 기재한, 다양한 공정에서 공정보조제 또는 출발물질 또는 중간물질로서 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 용도,

d) 청구항 제 27항에 기재한, 아민염으로부터 또는 아민염 형태를 거쳐서 순수한 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조를 위한 공정,

e) 청구항 제 30항에 기재한, HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염이 출발 물질 로 이용되는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 반합성 제조 공정,

f) 청구항 제 33항에 기재한, 배지의 어느 한 성분이 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염 형태인 HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형 공정,

g) 청구항 제 37항에 기재한, HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 약학적으로 용인될 수 있는 염으로의 전환 공정,

h) 청구항 제 41항에 기재한, HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 락톤 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제로의 전환 공정.

HMG-CoA 환원효소 억제제 염생성을 위해 본 발명에서 사용된 아민은 하기 일반식 Ⅰ 또는 일반식 Ⅱ의 유기 아민으로 구성된 화합물 중에서 어느 하나를 선택하였다.
a)

상기 일반식 I에서,
a1) R₁, R₂, R₃, R₄는 개별적으로 하기를 표시하고,
- 수소 원자,
- 1∼8개의 탄소원자를 가진 선형 또는 분지형 알킬(alkyl) 그룹,
- 3∼8개의 탄소원자를 가진 시클로알킬(cycloalkyl) 그룹,
- 알킬그룹은 메틸 또는 에틸이고 아릴(aryl) 그룹은 페닐 그룹인 아릴알킬 그룹 이며, 이 경우 1∼4개의 탄소원자를 가진 알킬을 포함하는 N-알킬 또는 N,N-디알 킬로 선택적으로 치환될 수 있음,
- 한 개 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 아릴알킬 그룹,
- 2∼4개의 탄소원자를 가진 히드록시알킬(hydroxyalkyl) 그룹,
- 2∼4개의 탄소원자를 가진 아미노알킬(aminoalkyl) 그룹이며, 이 경우 1∼4개의 탄소 원자를 가진 알킬을 포함하는 N-알킬 또는 N,N-디알킬로 선택적으로 치환될 수 있음.
X는 수소원자, 히드록실(hydroxyl) 그룹, 할로겐(halogen)원자, 또는 메틸 그룹을 표시하고,
m 및 n은 각각이 0에서 5 사이의 정수를 표시하거나, 또는
a2) NR₁R₂ 또는 NR₃R₄는 3∼7개의 메틸렌(methylene) 그룹을 포함하는 헤테로시클릭 고리(heterocyclic ring)를 나타내고, 이 그룹들 중의 하나는 선택적으로 산소원자 또는 황원자, 이민(imine) 그룹으로 치환될 수 있으며, X, m 및 n은 상기와 같이 정의된다.
b)

상기 일반식 II에서,
b1) R`₁, R`₂, R`₃은 같을 수도 있고 서로 다를 수 있으며, 각각 개별적으로 수소, 알킬, 알케닐(alkenyl), 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 알크옥시(alkoxy) 치환된 알킬 및 알케닐, 또는 치환된 아미노 치환된 알킬 또는 알케닐을 표시하되, 단 R`₁, R`₂, R`₃는 동시에 수소원자일 수는 없거나, 또는
b2) R`₁, R`₂, 및 선택적으로 R`₃은 질소원자와 함께, 질소원자를 고리구조에 포함하고, 선택적으로 추가적인 헤테로 원자를 포함하는, 선택적으로 치환된 헤테로시클릭 고리형 구조를 형성하며, R`₃가 고리구조에 포함되지 않는 경우에는, 수소원자, 알킬, 알케닐, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 알크옥시 치환된 알킬, 또는 치환된 아미노 치환된 알킬 중에서 독립적으로 선택되거나, 또는
b3) R`₁은 하기 일반식 III의 구조를 가진 선택적으로 치환된 고리형 그룹이고,

[상기 일반식 Ⅲ에서, m 은 0 또는 1 에서 5 사이의 정수이고, R`는 3 ~ 8 개의 탄소원자를 고리에 포함하는 선택적으로 치환된 지방족 탄화수소 고리형 구조이고, R`₄는 수소원자, 알킬, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 알크옥시 치환된 알킬, 치환된 아미노 치환된 알킬, 또는 위에서 기술한 R`₁과 같은 일반식을 가진 그룹임]
R`₂와 R`₃는 R`₁와 같거나 또는 수소원자, 알킬, 알케닐, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 알크옥시 치환된 알킬, 치환된 아미노 치환된 알킬 또는 알케닐이거나, 또는
b4) R`₁ 은 하기 일반식 Ⅳ의 구조를 가진 선택적으로 치환된 아릴 그룹이고,

[상기 일반식 Ⅳ에서, R`₅는 수소원자 또는 한 개 이상의 치환체이고, m은 0 또는 1에서 5 사이의 정수임]
R`₂와 R`₃는 개별적으로 각각 수소원자, 알킬, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 알크옥시 치환된 알킬, 치환된 아미노 치환된 알킬, 또는 위에서 기술한 R`₁과 같은 일반식을 가진 그룹이다.

삭제

상기 명확히 기술하지 않은 치환체는 할로겐, 히드록실 그룹, 1∼4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1∼4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1∼4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실(acyloxyl), 그리고 1∼4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실 등과 같은 일반적인 불활성 치환체들이다.

HMG-CoA 환원효소 억제제와 염을 이루는 아민의 우수한 예로는 (±)-1,2-디메틸프로필아민, 3-(2-아미노에틸아미노)-프로필아민, n-부틸아민, sec-부틸아민, t-부틸아민(TBA), 디부틸아민, t-아밀아민, 시클로펜틸아민, 시클로헥실아민, 시클로헵틸아민, 디시클로헥실아민(DCHA), N-메틸시클로헥실아민, N,N`-디이소프로필에틸렌디아민(DIPEDA), N,N`-디에틸렌디아민, N-메틸-1,3-프로판디아민, N-메틸에틸렌디아민, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,2-디아미노에탄, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,4-디아미노부탄, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,6-디아미노헥산, 1,2-디피페리딘에탄, 디피페리딘메탄, 2-아미노-3,3-디메틸부탄, N,N-디메틸시클로헥실아민, 네오펜틸아민, 아다만틸아민(adamantylamine), N,N-디에틸시클로헥실아민, N-이소프로필시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민, 시클로부틸아민, 노보릴아민(norborylamine)이 있다. 낮은 독성 및 적은 비용 그리고 결정화 효율성면에 있어서 아민은 n-부틸아민, sec-부틸아민, TBA, 디부틸아민, t-아밀아민, 시클로헥실아민, DCHA, N-메틸시클로헥실 아민, 그리고 DIPEDA 등으로 구성되어 있는 그룹 중에서 선택된다. 특히 TBA, DIPEDA, DCHA, 그리고 N-메틸시클로헥실아민 등으로 구성되는 그룹에서 선택된다.

상기 아민은 정제 효율성 관점에서 암모니아와의 염 형성을 거치는 직접 분리방법에 비하여 유리하다. 더 나아가 작은 유기 그룹을 가진 아민과 비교할 때, 더 큰 유기 그룹을 가진 아민, 특히 벌키 그룹을 가진 아민은 일반적으로 결정화가 더욱 쉽고 원하지 않는 부산물과의 염 형성 정도가 낮다. 따라서 이차(secondary) 또는 삼차(tertiary)의 탄소 원자 또는 시클릭 탄화수소 구조(방향족 또는 지방족)를 가진 탄화수소 잔기가 적어도 하나 있는 아민, 및 유기 디아민은 본 발명에 특히 적합하다.

HMG-CoA 환원효소 억제제의 어떤 형태라도 본 발명에 이용될 수 있다. 메바스타틴, 프라바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴 및 아토르바스타틴중에서 선택된 HMG-CoA 환원효소 억제제는 좋은 결과를 나타내었고, 특히 선호된다.

원하는 HMG-CoA 환원효소 억제제를 분리 및 정제하는데 있어서, 아민염은 해당 HMG-CoA 환원효소 억제제의 미정제 배지로부터 직접 가장 효율적으로 형성된다. 상기 미정제 배지는 통상적으로 생물공학적 공정의 결과로서 발효액으로부터, 또는 반합성 또는 전합성의 결과로서 반응 혼합물로부터 유래되고, 일반적으로 얻고자 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제를 비롯하여 원하지 않는 부산물 및 불순물이 포함되어 있다. 미정제 배지에는 HMG-CoA 환원효소 억제제가 주로 산 형태(acid form)로 존재하는 것으로 추정되고, 미정제 배지에 아민을 단순히 첨가함으로써 아민염의 형성이 효과적으로 일어날 것으로 생각된다. 미정제 배지는 유기상(organic phase) 또는 유기상과 수용액상(aqueous phase)의 혼합물일 수 있고, 불순한 HMG-CoA 환원효소 억제제는 에틸아세테이트, 에테르, 또는 아세토니트릴과 같은 유기용매에 존재한다. 에틸아세테이트가 유기 용매로서 선호된다. 생물공학적 처리 이후, 앞서 말한 유기용매로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 추출하는 과정을 포함하는 공정에 의하여 발효액으로부터 유기상의 미정제 배지를 얻는 것이 바람직하다.

HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 제조를 위한 공정은 다음 과정을 포함한다.

a) 유기용매에서 산 형태를 선호하는 HMG-CoA 환원효소 억제제를 함유한 배지와 상기 아민 중에서 적어도 하나를 혼합시키는 공정,

b) 임의로, 알려진 기술에 의해 결정화 핵을 형성하는 공정,

c) 석출된 결정을 여과하는 공정,

d) 결정을 유기용매로 세척하는 공정, 및

e) 결정을 건조하는 공정.

상기 "혼합"이라는 용어는 산성 물질과 알칼리성 물질로부터 염의 제조를 위해 알려진 기술을 포함한다. 결정화는 0∼30℃ 사이의 온도에서 수행되고, 특히 4∼22℃ 사이의 온도를 선호한다.

"유기용매"라는 용어는 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 에테르, 아세토니트릴과 같은 산업 현장에서 사용되는 유기용매를 의미하고, 유기용매의 수성 혼합물도 포함하는 의미다.

상기 아민은 HMG-CoA 환원효소 억제제와 효과적으로 염을 형성하므로, 아민은 HMG-CoA 환원효소 억제제를 정제된 형태로 제조하는 공정에서 보조물질 또는 공 정보조제로서 특히 적절하다. 그러므로 이전에 분리된 HMG-CoA 환원효소 억제제를 더 높은 순도로 얻을 수 있다. 정제된 형태는 일반적으로 결정화에 의하여 제조된다. 이와 같이 본 발명은 HMG-CoA 환원효소 억제제의 분리 및 정제를 위한 공정을 제공한다.

본 발명의 추가 국면에서, 상기 염은 변형된 형태, 약학적으로 활성이 있는 염 형태, 또는 락톤 형으로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하기 위한 공정에서 출발물질 또는 중간물질로서 적절히 이용된다. 특히 변형된 형태는 이전 기술에서 알려진 화학적 변형 및 생물공학적 변형으로 얻을 수 있다. 약학적으로 활성이 있는 염은 바람직하게는 나트륨염 또는 칼슘염과 같은 금속염이다.

이런 점에서 "HMG-CoA 환원효소 억제제의 반합성적 제조를 위한 공정"이란 용어는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 알려진 화학적 변형을 사용하여 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하는 것을 의미한다. 그러한 공정의 예를 들면, 출발물질로서 로바스타틴으로부터 심바스타틴의 반합성이 있다. 가장 바람직하게는, 로바스타틴의 TBA 염이 출발물질로 사용된다.

또한 "HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형을 위한 공정"이란 용어는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 변형을 위하여 미생물 시스템 또는 효소 시스템에 의한 HMG-CoA 환원효소 억제제의 제조를 의미한다. 그러한 공정의 예를 들면, 메바스타틴을 프라바스타틴으로 전환하는 생물공학적 방법이 있다. 아민염은 바람직하게는 TBA 염이다.

더 나아가, "HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 약학적으로 활성이 있는 HMG-CoA 환원효소 억제제 염으로의 전환을 위한 공정"이란 용어는 출발물질로 이용되는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염을 포함하는 기존의 방법에 의한 HMG-CoA 환원효소 억제제의 제조를 위한 공정을 포함한다. 전환된 염의 특정한 예는 프라바스타틴 나트륨염, 플루바스타틴의 나트륨염 그리고 아토르바스타틴 칼슘염이다.

더 나아가, "HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 락톤형 HMG-CoA 환원효소 억제제로의 전환"이라는 용어는 출발물질로 이용되는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염을 포함하는 기존의 방법에 의한 락톤형 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조를 위한 공정을 포함한다. 락톤형으로 전환된 HMG-CoA 환원효소 억제제의 예는 로바스타틴, 메바스타틴 또는 심바스타틴이다.

본 발명은 하기 실시예를 통하여 설명하고 있지만 하기 실시예에만 제한되지 않는다.

실시예 1: 유리 산 형태의 메바스타틴의 제조 및 메바스타틴 t-부틸아민(TBA)염으로의 전환

메바스타틴(200 g)을 30%(v/v) 수용성 아세토니트릴 용액(2500 mL)에 용해시키고, 3 당량의 트리에틸아민을 첨가한 후, 상기 혼합물을 80℃로 가열하고 30 분간 교반하면서 혼합하였다. 반응이 완결된 후, 아세토니트릴은 증발시키고, 남은 용액은 인산을 사용하여 pH 4 까지 산성화하여, 에틸아세테이트(2 ×1000 mL)로 추출하였다. 상기 추출물을 30 g의 황산나트륨을 첨가하여 건조시킨 후, 상기 건조제는 여과하여 제거하고, 용액은 농축하였다(950 mL). TBA(1.5 당량)을 용액에 첨가 하고 8℃에서 30 분간 결정화하였다. 형성된 결정은 여과하고, 에틸아세테이트(2 ×100 ml)로 세척한 후, 40℃에서 15 시간동안 건조하였다. 수득한 결정(메바스타틴 TBA염 215 g)은 흰색이고 HPLC 순도가 96.8%이었다. 가수분해 수율 및 결정화의 수득율은 91%였다.

실시예 2: 메바스타틴 TBA염으로부터 메바스타틴 나트륨염의 제조

상기 실시예 1에서 명시한 공정에서 수득한 메바스타틴 TBA염(1 g)을 3 mL의 에탄올(96 % v/v)에 용해시키고, 수산화나트륨(40 g/L에탄올)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 에틸아세테이트(60 mL)에서 침천시켰다. 8℃에서 30 분간 결정화한 후, 결정을 여과하고, 에틸아세테이트로 세척하고 건조하였다. 생성물 : HPLC 순도 98%인 담갈색(pale brown)의 메바스타틴 나트륨염 결정(0.65 g).

실시예 3: 발효액으로부터 로바스타틴 TBA염의 분리

미생물 아스퍼질러스 테레우스(Aspergillus terreus) ATCC 20544를 발효시킴으로써 수득하고 1 g/L의 로바스타틴 함량을 갖는 발효액(160 L)을 발효기에서 저장용기(400 L)로 옮기고 1 M의 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 pH를 10으로 조절하였다. 10 분간의 격렬한 회전혼합 후, 1 M의 황산을 첨가하여 발효액의 pH를 9로 조절하고 바이오매스(biomass)는 여과하였다. 수득한 여과액을 1 M의 황산으로 pH 6.5로 산성화하고, 160 L의 에틸아세테이트를 첨가하였다. 상기 혼합액을 20 분간 회전혼합하였다. 수용액층과 에틸아세테이트층이 추출원심분리에 의해 분리되었고 에틸아세테이트 추출물은 14 L의 부피까지 회전증발기(rotavapor)에서 농축하였다. 농축된 에틸아세테이트 추출물에서 유리 산 형태의 로바스타틴의 농도는 10.1 g/L이었다. 에틸아세테이트(800 ml) 중 유리 산 형태 로바스타틴 용액(HPLC 순도 72.7%)에 1.05 당량의 TBA를 첨가하였다. 결정이 석출된 후, 여과하고, 에틸아세테이트(2 × 50 ml)로 세척하여 35℃에서 24 시간 동안 진공건조기에서 건조시켰다. 수득율 : HPLC 순도 99.2%의 로바스타틴 TBA염 결정 8.06 g.

실시예 4: 로바스타틴 t-아밀아민염 제조

로바스타틴(5 g)을 실시예 1에서 명시한 가수분해 공정에 따라 처리하고, 로바스타틴 나트륨염(4.8 g)을 제조하여 100 mL의 물에 용해시켰다. 인산(10% 수용액)으로 pH를 4로 조절하고 형성된 유리 산 형태 로바스타틴을 수용액층에서 에틸아세테이트(2 ×100 mL)로 추출하였다. 상기 추출물을 황산나트륨으로 건조시키고, 용액을 여과한 후, 약 100 mL로 농축하였다. 상기 방법으로 제조한 용액(약 100 ml)에 1.05 당량의 t-아밀아민을 첨가하였다. 결정이 석출된 후, 여과하고, 에틸아세테이트(2 ×10 mL)로 세척하여 진공건조기에서 건조시켰다(35℃, 24 시간). 수득율 : HPLC 순도 98.6%의 t-아밀아민염 결정 4.8 g.

실시예 5: 유리 산 형태 프라바스타틴의 제조 및 프라바스타틴 (±)-1,2-디메틸프로필아민염으로의 전환

프라바스타틴 나트륨염(11 g, HPLC 순도 97.2%)을 물(100 mL)에 용해시키고, 인산(10% 수용액)으로 pH를 4로 조절하였다. 형성된 유리 산을 수용액층에서 에틸아세테이트(2 ×100 mL)로 추출하였다. 상기 에틸아세테이트 추출물을 황산나트륨으로 건조시키고, 용액을 여과하여 약 100 mL의 부피로 농축하였다.

수득한 농축액(9 mL)에 1.5 당량의 (±)-1,2-디메틸프로필아민을 첨가하였다. 결정이 석출된 후, 결정을 여과하고, 에틸아세테이트(2 ×10 mL)로 세척하여 35℃의 진공건조기로 건조시켰다. 수득율 : HPLC 순도 98.28%의 황색 결정.

실시예 6-13

유리 산 형태(free acid form) 프라바스타틴의 아민염으로의 전환을 실시예 5에서 설명한 바와 같은 방법으로 다른 아민을 사용하여 반복하였다.

사용된 아민 및 결과는 하기 표에 나타내었다.

실시예	아민	효과	HPLC 순도
6	3-(2-아미노에틸아미노)-프로필아민	일종의 유지(oil) 형성^*	-
7	N,N`-디이소프로필에틸렌디아민	담황색(pale yellow) 결정	99.3%
8	N,N`-디에틸에틸렌디아민	황색 결정	99.3%
9	N-메틸-1,3-프로판디아민	일종의 유지 형성^*	-
10	N-메틸에틸렌디아민	일종의 유지 형성^*	-
11	sec-부틸아민	흰색 결정	98.9%
12	t-부틸아민(TBA)	황색빛(yellowish) 결정	97.4%
13	t-아밀아민	회색을 띤 백색(off-white) 결정	97.9%

* 유지 형태에서 결정을 만들려면 4℃에서 하룻밤 방치한다.

실시예 14: 미정제 프라바스타틴 나트륨염으로부터 프라바스타틴 sec-부틸아민염 제조

실시예 5에서 설명한 공정에 따라, 유리 산 형태 프라바스타틴을 프라바스타틴 나트륨염(HPLC 순도 83.6%)으로부터 제조하였다. 또한 실시예 5에서 설명한 공정에 의해 프라바스타틴 sec-부틸아민염을 제조하였다. HPLC 순도 97.3%의 흰색 결정을 수득하였다.

실시예 15: 프라바스타틴 TBA염으로부터 프라바스타틴 나트륨염의 제조 (1)

실시예 12에서 수득한 프라바스타틴 TBA 염 8.9 g을 22 mL의 에탄올(96%)에 용해시킨 후, 450 mL의 에틸아세테이트에서 침전시켰다. 결정화는 8℃에서 60 분간 수행하였고, 형성된 결정은 여과하고, 50 mL 에틸아세테이트로 두 번 세척한 후, 40℃에서 5 시간동안 건조시킨다. 상기 방법에 의하여 수득한, 재결정된 프라바스타틴 TBA염 1 g을 0.43N 수산화나트륨이 용해된 에탄올 용액 5 mL에 용해시키고 60 mL 에탄올에서 침전시켰다. 8℃에서 30 분간 방치한 후, 형성된 결정을 여과하고 건조하였다. 형성된 프라바스타틴 나트륨염 결정(0.75 g)은 진황색이었다.

실시예 16: 프라바스타틴 TBA염으로부터 프라바스타틴 나트륨염의 제조 (2)

실시예 15의 공정을 반복하였다. 프라바스타틴 TBA염 재결정 1 g을 0.43N 수산화나트륨이 용해된 에탄올 용액 대신 3 mL의 물에 용해시킨 후, 1 당량의 탄산나트륨 수용액을 첨가하였다. 수득한 용액을 5 mL 에탄올로 희석하고, 결과물인 나트륨염을 에틸아세테이트로 침전시켰다. 8℃에서 30 분간 방치한 후, 형성된 결정을 여과하고 건조하였다. 형성된 프라바스타틴 나트륨염 결정(0.65 g)은 황색이었다.

실시예 17: 메바스타틴 TBA염으로부터 프라바스타틴의 제조

생산을 위한 접종액 제조

미생물 아미콜라톱시스 오리엔탈리스(Amycolatopsis orientalis) ATCC 19795의 군락(colony)을 멸균된 용기에 옮기고 혼합 균질화하였다. 결과의 군락을 아가(agar) 사면배지에 옮기고 26℃에서 30℃ 사이의 항온기(thermostat)에서 7에서 14일 동안 배양하였다. 상기 기간동안 균질의 포개진, 부드러운 흰색에서 옅은 회청색 균사체로 배양균이 아가 사면의 표면에 과성장하였다. 이후, 10 mL의 멸균수를 아가 사면배지에 뿌리고, 배양균을 피펫으로 채집하여 그 내용물을 용기에 옮겼다. 상기 배양균의 일부분(0.5 mL에서 1 mL)을 생장 배지(vegetative medium)에 접종하였다.

아가 사면 및 평판 제조를 위한 아가 배지:

원 료	정 량
덱스트린(dextrin)	10 g
상용 포도당	5 g
카사민 산(casaminic acid)	3 g
효모 추출물	4 g
CaCO₃	1 g
아가	15 g
멸균수	1000 mL까지

pH 조절은 필요없음.

발효의 생장단계

상기 방법에 따라 제조되고 26℃에서 30℃ 사이에서 10일동안 사면배지 위에 배양된 접종균을 50mL의 생장 배지가 들어있는 500 mL 삼각플라스크에 접종하였다. 28℃에서 220 rpm으로 교반하면서 24 시간 배양한 후, 배양균을 발효 배지에 접종하였다.

생장 배지 :

원 료	정 량
발효용 옥수수 전분	20 g
발효용 콩 분말	14 g
포도당	10 g
효모 추출물	5 g
NaH₂PO₄·2H₂O	3.3 g

일반수를 첨가하여 1000 mL로 조절

메바스타틴 TBA염의 프라바스타틴으로의 전환

상기 방법에 따라 제조된 배양균이 포함된 15개의 삼각플라스크의 내용물을 30 L의 발효배지를 포함한 발효기(50 L)에 접종하였다. 20 시간 발효 후, 메바스타틴 TBA염 및 포도당 용액(포도당 1200 g과 메바스타틴 TBA염 70 g(메바스타틴 분석 : 80%)이 5 L의 물에 용해됨)을 2 mL/min의 유속으로 배지에 계속적으로 첨가하였다. 발효하는 동안, 300∼600rpm의 회전수로 교반함으로써 배지 내 70%의 산소 포화도를 유지하였다. 24℃에서 30℃ 사이의 온도에서 76 시간 발효한 후에, 발효액 내 프라바스타틴의 농도 분석 결과 발효액 내 프라바스타틴의 최종 농도가 690 g/(kg 발효액)에 도달했음을 알 수 있었고, 이 농도는 메바스타틴의 프라바스타틴으로의 40 % 전환을 나타내는 값이다.

발효 배지 :

원 료	정 량
발효용 옥수수 전분	20 g
발효용 콩 분말	5 g
포도당	10 g
효모 추출물	5 g
소포제	10 g

모든 원료는 일반수에 용해시킨 후, pH는 7.4로 조절하였다.

실시예 18: 심바스타틴 TBA염의 제조

심바스타틴(1.95 g)을 50 mL의 30%(v/v) 아세토니트릴에 현탁시키고, 트리에틸아민(1 mL)을 첨가한 후, 용액을 70℃에서 20 분간 가열하였다. 반응이 완결된 후, 아세토니트릴을 용액에서 증발시키고, 남은 용액을 인산으로 pH 4까지 산성화하였다. 산 형태 심바스타틴을 에틸아세테이트(2 ×50 mL)로 추출하고, 상기 추출물을 2 g의 황산나트륨으로 건조하였다. 건조제는 여과하여 제거하고, 에틸아세테이트 용액은 20 mL로 농축하였다. 용액에 1.05 당량의 TBA를 첨가하고, 8℃에서 1 시간 동안 결정화를 수행하였다. 생성물을 여과하고 40℃에서 1 시간 동안 건조하였다. 수득율 : 심바스타틴 TBA염 2 g.

실시예 19: 심바스타틴 TBA염의 락톤형 심바스타틴으로의 전환

실시예 18에서 설명한 공정에 의해 수득한 심바스타틴 TBA염(1.6 g)을 물(36 mL)에 용해시키고, 용액을 인산 수용액으로 pH 3.7까지 산성화하였으며, 산 형태 심바스타틴을 에틸아세테이트(2 ×50 mL)로 추출하였다. 상기 추출물을 황산나트륨 (2 g)으로 건조하였고, 건조제는 여과하여 제거하였다. 에틸아세테이트 용액을 20 mL로 농축하였다. 용액에 트리플루오로아세트산(0.5 mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 50℃에서 25 분 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후, 에틸아세테이트 용액을 5% (w/w)의 중탄산암모늄(ammonium hydrogen carbonate) 수용액으로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨(2 g)으로 건조하였고, 건조제는 여과하여 제거하였으며, 에틸아세테이트 용액은 4 mL로 농축하였다. 8℃에서 1 시간 동안 결정화를 수행하였다. 생성물은 여과하고 40℃에서 1 시간 동안 건조하였다. 수득율 : 산 형태 심바스타틴 0.9 g.

실시예 20: 산 형태 심바스타틴의 제조

심바스타틴(20 g)을 물(80 mL)과 8M KOH(18 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 용액은 질소 환경에서 상온에서 두시간 동안 교반하면서 혼합하였다. 120 mL의 에틸아세테이트를 첨가하고 5% 염산 수용액을 이용하여 pH를 2∼3으로 조절하였다. 에틸아세테이트층은 물(100 mL), 5% 염산 수용액 및 5% 염화나트륨 수용액(50 mL)의 혼합액으로 세척하였다. 수득한 에틸아세테이트층을 20 g의 무수 황산마그네슘을 첨가하여 세시간 동안 건조하고 여과하였다.

아민염의 제조

상기 과정 후, 18 mL의 N-메틸시클로헥실아민을 에틸아세테이트층에 첨가하였다. 0℃∼5℃의 온도에서 이틀 동안 방치한 후, 심바스타틴 N-메틸시클로헥실아민염 결정이 생성되었다. 수득한 결정을 여과하고, 20 mL의 에틸아세테이트, 40 mL의 에틸아세테이트/n-헵탄(1 : 1) 및 40 mL의 펜탄으로 세척하였다. 수득율 : 심바스타틴 N-메틸시클로헥실아민염 20.5 g. 출발 심바스타틴에 대하여 계산된 수득율은 79%이었다.

또한 시클로헥실아민을 이용하여 같은 결과를 얻었다(같은 방법을 사용함.)

실시예 21: 정제된 프라바스타틴의 제조

프라바스타틴 나트륨염(30 g, HPLC 순도 90.2 %)을 물(100 mL)에 용해시키고 10% 염산 수용액을 이용하여 pH를 3으로 조절하였다. 결과로 생성된 유리 산을 수용액층에서 에틸아세테이트(3 ×200 mL)로 추출하였다. 상기 에틸아세테이트 추출물을 황산나트륨으로 건조하고, 용액을 여과한 후, 7.604 g의 N-메틸시클로헥실아민을 첨가하였다(집중적 회전혼합 하에서 한 방울씩). 결정이 석출된 후, 결정을 여과하고 에틸아세테이트/메탄올 혼합액으로부터 재결정하였다. 수득율 : HPLC 순도 99.28%의 프라바스타틴 N-메틸시클로헥실아민염 결정 21 g.

실시예 22: 유리 산 형태 아토르바스타틴의 제조

아토르바스타틴 칼슘염(3 g)을 100 mL의 물에 현탁하였다. 인산을 이용하여 pH를 4로 조절한 후, 유리 산 형태 아토르바스타틴을 에틸아세테이트(3 ×100 mL)로 추출하였다. 합한 에틸아세테이트 추출물을 건조하였고, 유리 산 형태 아토르바스타틴을 함유한 유지 2.7 g을 수득하였다.

아민염의 제조

1 g의 유리 산 형태 아토르바스타틴을 아세토니트릴(100 mL)에 용해시키고, 1.1 몰당량의 TBA를 첨가하였다. 수득한 혼합물을 30 mL로 농축하였고, 8℃에서 네 시간 후에 아토르바스타틴 TBA염이 결정화되었다. 흰색 침전물을 여과하여 회전증발기(rotary evaporator)에서 건조하였다. 수득율 : 아토르바스타틴 TBA염 1 g.

실시예 23

유리 산 형태 아토르바스타틴 1 g을 메탄올(20 mL)에 용해시키고, 50 mL의 n-헥산 중 1.1 몰당량의 디시클로헥실아민(DCHA)을 첨가하였다. 8℃에서 네 시간 후에 아토르바스타틴 DCHA염이 결정화되었다. 흰색 침전물을 여과하고 회전증발기에서 건조하였다. 수득율 : 아토르바스타틴 DCHA염 1.1 g.

이상의 설명에서 알수 있듯이, 본 발명 HMG-CoA 환원효소 억제제와 쉽게 염을 형성하는 아민들은 HMG-CoA 환원효소 억제제의 분리 및 정제를 위한 공정보조제 또는 보조 물질로서 특히 적절하다. 또한 이런 아민들은 HMG-CoA 환원효소 억제제의 변형이나 반합성적 방법의 출발물질 또는 중간체로서 이용될 수 있고, 더 나아가 약학적으로 용인될 수 있는 염 형태 또는 각 HMG-CoA 환원효소 억제제의 락톤 형태로 전환을 위해 우수하게 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 HMG-CoA 환원효 소 억제제의 새로운 아민염 형태는 또한 매우 높은 가치가 있다.

Claims

아민이 하기 일반식 Ⅰ 및 일반식 Ⅱ의 아민으로 구성된 군으로부터 선택되고, HMG-CoA 환원효소 억제제가 메바스타틴, 프라바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴 및 아토르바스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.

a)

상기식에서,

a1) R₁, R₂, R₃, R₄는 개별적으로 하기를 표시하고,

- 수소 원자,

- 1∼8개의 탄소원자를 가진 선형 또는 분지형 알킬(alkyl) 그룹,

- 3∼8개의 탄소원자를 가진 시클로알킬(cycloalkyl) 그룹,

- 알킬그룹은 메틸 또는 에틸이고 아릴(aryl) 그룹은 페닐 그룹인 아릴알킬 그룹 이며, 이 경우 1∼4개의 탄소원자를 가진 알킬을 포함하는 N-알킬 또는 N,N-디알 킬로 치환 또는 비치환될 수 있음,

- 2∼4개의 탄소원자를 가진 히드록시알킬(hydroxyalkyl) 그룹, 또는

- 2∼4개의 탄소원자를 가진 아미노알킬(aminoalkyl) 그룹이며, 이 경우 1∼4개의 탄소 원자를 가진 알킬을 포함하는 N-알킬 또는 N,N-디알킬로 치환 또는 비치환될 수 있음.

X는 수소원자, 히드록실(hydroxyl) 그룹, 할로겐(halogen)원자, 또는 메틸 그룹을 표시하고,

m 및 n은 각각이 0에서 5 사이의 정수를 표시하거나, 또는

a2) NR₁R₂ 또는 NR₃R₄는 3∼7개의 메틸렌(methylene) 그룹을 포함하는 헤테로시클릭 고리(heterocyclic ring)를 나타내고, 이 그룹들 중의 하나는 산소원자 또는 황원자, 이민(imine) 그룹으로 치환 또는 비치환될 수 있으며, X, m 및 n은 상기와 같이 정의된다.

b)

상기식에서,

b1) R`₁, R`₂ 및 R`₃은 같을 수도 있고 서로 다를 수 있으며, 수소, C₁-C₈ 알킬, C₂-C₈ 알케닐(alkenyl), 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시(alkoxy) 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 C₂-C₈ 알케닐, 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 C₂-C₈ 알케닐 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨)을 표시하되, 단 R`₁, R`₂및 R`₃는 동시에 수소원자일 수는 없거나, 또는

b2) R`₁, R`₂, 및 선택적으로 R`₃은 질소원자와 함께, 질소원자를 고리구조에 포함하거나, 또는 질소원자 및 추가의 헤테로 원자를 고리구조에 포함하고, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리형 구조를 형성하고, R`₃가 고리구조에 포함되지 않는 경우에는, 수소원자, C₁-C₈ 알킬, C₂-C₈ 알케닐, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬, 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨) 중에서 선택되거나, 또는

b3) R`₁은 하기 일반식 III의 구조를 가진, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로치환 또는 비치환된 고리형 그룹이고,

[상기 일반식 Ⅲ에서, m 은 0 또는 1 에서 5 사이의 정수이고, R`는 3 ~ 8 개의 탄소원자를 고리에 포함하는, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환 또는 비치환된 지방족 탄화수소 고리형 구조이고, R`₄는 수소원자, C₁-C₈ 알킬, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨)임]

R`₂와 R`₃는 R`₁와 같거나 또는 수소원자, C₁-C₈ 알킬, C₂-C₈ 알케닐, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬, 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 C₂-C₈ 알케닐 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨)이거나, 또는

b4) R`₁ 은 하기 일반식 Ⅳ의 구조를 가진, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환 또는 비치환된 아릴 그룹이고,

[상기 일반식 Ⅳ에서, R`₅는 수소원자 또는 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로부터 선택된 한 개 이상의 치환체이고, m은 0 또는 1에서 5 사이의 정수임]

R`₂와 R`₃는 개별적으로 수소원자, C₁-C₈ 알킬, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬, 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨), 또는 위에서 기술한 R`₁과 같은 일반식을 가진 그룹이되,

HMG-CoA 환원효소 억제제가 로바스타틴일 때, 아민은 테트라메틸아민 또는 에틸렌디아민이 아니다.
제 1항에 있어서, 아민이 (±)-1,2-디메틸프로필아민, 3-(2-아미노에틸아미노)-프로필아민, n-부틸아민, sec-부틸아민, t-부틸아민 (TBA), 디부틸아민, t-아밀아민, 시클로펜틸아민, 시클로헥실아민, 시클로헵틸아민, 디시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민, N,N`-디이소프로필에틸렌디아민, N,N`-디에틸렌디아민, N-메틸-1,3-프로판디아민, N-메틸에틸렌디아민, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,2-디아미노에탄, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,4-디아미노부탄, N,N,N`,N`

-테트라메틸-1,6-디아미노헥산, 1,2-디피페리딘에탄, 디피페리딘메탄, 2-아미노-3,3-디메틸부탄, N,N-디메틸시클로헥실아민, 네오펜틸아민, 아다만틸아민, N,N-디에틸시클로헥실아민, N-이소프로필시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민, 시클로부틸아민 및 노보릴아민(norborylamine) 중에서 선택된 것인 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
제 1항에 있어서, 아민이 n-부틸아민, sec-부틸아민, t-부틸아민(TBA), 디부틸아민, t-아밀아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민 및 N,N`-디이소프로필에틸렌디아민 중에서 선택된 것인 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
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아민을 HMG-CoA 환원효소 억제제의 미정제 배지에 첨가하고, 상기 아민은 하기 일반식 Ⅰ 및 일반식 Ⅱ의 아민 그룹으로부터 선택되고, 상기 HMG-CoA 환원효소 억제제는 메바스타틴, 프라바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴 및 아토르바스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 제조방법.

a)

상기식에서,

a1) R₁, R₂, R₃, R₄는 개별적으로 하기를 표시하고,

- 수소 원자,

- 1∼8개의 탄소원자를 가진 선형 또는 분지형 알킬(alkyl) 그룹,

- 3∼8개의 탄소원자를 가진 시클로알킬(cycloalkyl) 그룹,

- 알킬그룹은 메틸 또는 에틸이고 아릴(aryl) 그룹은 페닐 그룹인 아릴알킬 그룹 이며, 이 경우 1∼4개의 탄소원자를 가진 알킬을 포함하는 N-알킬 또는 N,N-디알 킬로 치환 또는 비치환될 수 있음,

- 2∼4개의 탄소원자를 가진 히드록시알킬(hydroxyalkyl) 그룹, 또는

- 2∼4개의 탄소원자를 가진 아미노알킬(aminoalkyl) 그룹이며, 이 경우 1∼4개의 탄소 원자를 가진 알킬을 포함하는 N-알킬 또는 N,N-디알킬로 치환 또는 비치환될 수 있음.

X는 수소원자, 히드록실(hydroxyl) 그룹, 할로겐(halogen)원자, 또는 메틸 그룹을 표시하고,

m 및 n은 각각이 0에서 5 사이의 정수를 표시하거나, 또는

a2) NR₁R₂ 또는 NR₃R₄는 3∼7개의 메틸렌(methylene) 그룹을 포함하는 헤테로시클릭 고리(heterocyclic ring)를 나타내고, 이 그룹들 중의 하나는 산소원자 또는 황원자, 이민(imine) 그룹으로 치환 또는 비치환될 수 있으며, X, m 및 n은 상기와 같이 정의된다.

b)

상기식에서,

b1) R`₁, R`₂ 및 R`₃은 같을 수도 있고 서로 다를 수 있으며, 수소, C₁-C₈ 알킬, C₂-C₈ 알케닐(alkenyl), 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시(alkoxy) 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 C₂-C₈ 알케닐, 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 C₂-C₈ 알케닐 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨)을 표시하되, 단 R`₁, R`₂및 R`₃는 동시에 수소원자일 수는 없거나, 또는

b2) R`₁, R`₂, 및 선택적으로 R`₃은 질소원자와 함께, 질소원자를 고리구조에 포함하거나, 또는 질소원자 및 추가의 헤테로 원자를 고리구조에 포함하고, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환 또는 비치환된 헤테로시클릭 고리형 구조를 형성하고, R`₃가 고리구조에 포함되지 않는 경우에는, 수소원자, C₁-C₈ 알킬, C₂-C₈ 알케닐, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬, 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨) 중에서 선택되거나, 또는

b3) R`₁은 하기 일반식 III의 구조를 가진, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로치환 또는 비치환된 고리형 그룹이고,

[상기 일반식 Ⅲ에서, m 은 0 또는 1 에서 5 사이의 정수이고, R`는 3 ~ 8 개의 탄소원자를 고리에 포함하는, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환 또는 비치환된 지방족 탄화수소 고리형 구조이고, R`₄는 수소원자, C₁-C₈ 알킬, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨)임]

R`₂와 R`₃는 R`₁와 같거나 또는 수소원자, C₁-C₈ 알킬, C₂-C₈ 알케닐, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 또는 C₂-C₈ 알케닐 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨)이거나, 또는

b4) R`₁ 은 하기 일반식 Ⅳ의 구조를 가진, 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환 또는 비치환된 아릴 그룹이고,

[상기 일반식 Ⅳ에서, R`₅는 수소원자 또는 할로겐, 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로부터 선택된 한 개 이상의 치환체이고, m은 0 또는 1에서 5 사이의 정수임]

R`₂와 R`₃는 개별적으로 수소원자, C₁-C₈ 알킬, 아미노 치환된 또는 히드록시 치환된 또는 C₁-C₄ 알크옥시 치환된 C₁-C₈ 알킬, 치환된 아미노 치환된 C₁-C₈ 알킬 (여기서, 상기 아미노는 히드록실 그룹, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알킬, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 알크옥실, 1~4 개의 탄소원자를 포함한 아실옥실, 및 1~4 개의 탄소원자를 포함하고 에스테르화된 카르복실로 치환됨), 또는 위에서 기술한 R`₁과 같은 일반식을 가진 그룹이다.
제 5항에 있어서, 아민이 (±)-1,2-디메틸프로필아민, 3-(2-아미노에틸아미노)-프로필아민, n-부틸아민, sec-부틸아민, t-부틸아민 (TBA), 디부틸아민, t-아밀아민, 시클로펜틸아민, 시클로헥실아민, 시클로헵틸아민, 디시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민, N,N`-디이소프로필에틸렌디아민, N,N`-디에틸렌디아민, N-메틸-1,3-프로판디아민, N-메틸에틸렌디아민, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,2-디아미노에탄, N,N,N`,N`-테트라메틸-1,4-디아미노부탄, N,N,N`,N` -테트라메틸-1,6-디아미노헥산, 1,2-디피페리딘에탄, 디피페리딘메탄, 2-아미노-3,3-디메틸부탄, N,N-디메틸시클로헥실아민, 네오펜틸아민, 아다만틸아민, N,N-디에틸시클로헥실아민, N-이소프로필시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민, 시클로부틸아민 및 노보릴아민 중에서 선택된 것인 방법.
제 5항에 있어서, 아민이 n-부틸아민, sec-부틸아민, t-부틸아민(TBA), 디부틸아민, t-아밀아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민 및 N,N`-디이소프로필에틸렌디아민 중에서 선택된 것인 방법.
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제 5항 내지 제 7항의 어느 하나의 항에 있어서, 미정제 배지가 미정제 HMG-CoA 환원효소 억제제를 함유하는 발효액으로부터 유도된 것인 방법.
제 9항에 있어서, 미정제 배지가 미정제 HMG-CoA 환원효소 억제제를 유기 용매 중으로 추출하는 과정을 포함하는 공정에 의해 발효액으로부터 유도된 것인 방법.
제 5항 내지 제 7항의 어느 하나의 항에 있어서, 미정제 배지가 미정제 HMG-CoA 환원효소 억제제를 함유하는 반응혼합물로부터 유도된 것인 방법.
제 11항에 있어서, 반응혼합물이 HMG-CoA 환원효소 억제제의 반합성 또는 전합성에 의해 수득되는 것인 방법.
제 5항 내지 제 7항의 어느 하나의 항에 있어서, 미정제 배지가 에틸아세테이트, 에테르 및 아세토니트릴 중에서 선택된 유기용매 중의 유기상으로 존재하는 것인 방법.
제 5항 내지 제 7항의 어느 하나의 항에 있어서, HMG-CoA 환원효소 억제제가 상기 미정제 배지 내에서는 산 형태(acid form)인 방법.
제 5항 내지 제 7항의 어느 하나의 항에 있어서, 하기 단계들로 구성된 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염의 제조방법.

a) HMG-CoA 환원효소 억제제를 함유하는 배지와 아민의 혼합 공정,

c) 석출된 결정 여과 공정,

d) 유기용매로 결정 세척 공정, 및

e) 결정의 건조 공정.
제 15항에 있어서, 단계 a) 후에 0∼30℃의 온도에서 결정화하는 공정을 추가로 포함하는 방법.
제 16 항에 있어서, 4∼22℃ 사이에서 결정화하는 방법.
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제 1항에 있어서, 결정화에 의해 정제된 형태로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하는 공정에서 사용됨을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
제 1항에 있어서, 화학적 변형에 의해 변형된 형태로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하는 공정에서 사용됨을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
제 1항에 있어서, 생물공학적 변형에 의해 변형된 형태로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하는 공정에서 사용됨을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
제 1항에 있어서, 약학적 활성이 있는 금속염 형태로 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하는 공정에서 사용됨을 특징으로 하는 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
제 25항에 있어서, 금속염은 나트륨염 또는 칼슘염인 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염.
제 1항에 의해 정의된 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염이 결정화에 의해 HMG-CoA 환원효소 억제제의 제조 및 분리를 위하여 이용됨을 특징으로 하는, HMG-CoA 환원효소 억제제의 분리 및(또는) 정제 방법.
제 27항에 있어서, 메바스타틴, 프라바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴 또는 아토르바스타틴의 아민염이 제조되고 분리되는 방법.
제 28항에 있어서, 메바스타틴, 프라바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴 또는 아토르바스타틴의 TBA 아민염이 제조되고 분리되는 방법.
제 1항에 의해 정의된 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염이 출발물질로 사용됨을 특징으로 하는, 반합성 HMG-CoA 환원효소 억제제의 제조방법.
제 30항에 있어서, 로바스타틴의 아민염이 심바스타틴의 제조를 위한 출발물질로서 사용되는 반합성 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 31항에 있어서, 로바스타틴의 TBA 아민염이 출발물질로서 사용되는 반합성 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 1항에 의해 정의된 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염이 배지의 한 성분으로 사용됨을 특징으로 하는, 미생물 또는 그의 효소 시스템을 이용하는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형방법.
제 33항에 있어서, 배지에 메바스타틴의 아민염이 사용되는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형방법.
제 33항 또는 제 34항에 있어서, 생물공학적 공정에 의해 프라바스타틴의 아민염이 생산되는 HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형방법.
제 35항에 있어서, 프라바스타틴의 아민염이 TBA 아민염인, HMG-CoA 환원효소 억제제의 생물공학적 변형방법.
제 1항에 의해 정의된 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염을 출발물질로 이용하여 제조함을 특징으로 하는, 약학적으로 활성이 있는(acceptable) 염 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 37항에 있어서, 제조된 약학적 활성 염이 금속염인, 약학적으로 활성이 있는 염 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 38항에 있어서, 제조된 HMG-CoA 환원효소 억제제가 프라바스타틴 또는 플루바스타틴의 나트륨염인, 약학적으로 활성이 있는 염 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 38항에 있어서, 제조된 HMG-CoA 환원효소 억제제가 아토르바스타틴의 칼슘염인, 약학적으로 활성이 있는 염 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 1항에 의해 정의된 HMG-CoA 환원효소 억제제 아민염이 락톤 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제를 제조하는 출발물질로 사용됨을 특징으로 하는, 락톤 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.
제 41항에 있어서, 락톤 형태로 제조된 HMG-CoA 환원효소 억제제가 로바스타틴, 메바스타틴 또는 심바스타틴인, 락톤 형태의 HMG-CoA 환원효소 억제제 제조방법.