JP7766360B2 - Filaggrin mRNA expression promoter - Google Patents
Filaggrin mRNA expression promoterInfo
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Description
本発明は、Ｍｕｓｃｌｅ Ｓｅｇｍｅｎｔ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ２（ＭＳＸ－２） ｍＲＮＡ発現促進剤、まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物、並びにフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、ヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤、保湿剤、及び保湿用外用剤組成物に関する。 The present invention relates to a muscle segment homeobox 2 (MSX-2) mRNA expression promoter, an eyelash growth agent, and a topical composition for eyelash growth, as well as a filaggrin mRNA expression promoter, a hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter, a moisturizer, and a topical moisturizing composition.
まつ毛の解剖学的な特徴として、まつ毛の毛包は眼瞼部に１．５ｍｍ程度の深さまで入り込んでいるが、毛髪や体毛で見られる立毛筋は存在せず、眼輪筋とまつ毛筋に囲まれた密な結合組織の三角地帯内に固定されていることが挙げられる。まつ毛の毛周期に関しては、成長期が約２か月、成長期毛率は約１８％あるいは４０％で、年齢、性別で異なるとの報告がある。 An anatomical feature of eyelashes is that their hair follicles extend to a depth of about 1.5 mm into the eyelid, but they do not have the arrector pili muscles found in hair or body hair; instead, they are fixed within a triangle of dense connective tissue surrounded by the orbicularis oculi and lash muscles. Regarding the eyelash hair growth cycle, it has been reported that the growth phase lasts for about two months, with the growth rate being around 18% or 40%, which varies depending on age and gender.
アイメイクの流行に伴い、まつ毛を長く太く、上向きに見せるためにマスカラ等のアイメイクアップ化粧品の使用率が高まっている一方、マスカラ等の使用によるダメージが指摘されており、健やかなまつ毛を保つためのまつ毛ケアの必要性が挙げられている。 With the popularity of eye makeup, the use of eye makeup cosmetics such as mascara to make eyelashes appear longer, thicker, and curled upwards is on the rise. However, damage caused by the use of mascara and other products has been pointed out, highlighting the need for eyelash care to keep eyelashes healthy.
日本人のまつ毛の長さは白人と大きな差がなく、外観の印象の差は瞼の構造の違いに起因すると考えられており、また、日本人のまつ毛は成長速度が速く、成長期間が短い傾向が認められ、まつ毛の長さには成長期間の長さが大きく影響するとの報告がある。 The length of eyelashes in Japanese people is not significantly different from that of Caucasians, and it is thought that the difference in appearance is due to differences in eyelid structure. It has also been reported that Japanese eyelashes tend to grow faster and for a shorter period, and that the length of the growth period has a significant impact on eyelash length.
まつ毛の育毛に関与する因子として、転写調節因子のＭＳＸ－２が知られている。上皮系細胞であるまつ毛の毛包細胞では、毛成長に関わるとされる様々な成長因子（ＦＧＦ－７、ＥＣＧＦ、ＶＥＧＦ、ＬＥＦ１）及び転写調節因子（ＭＳＸ－２）の発現が認められており、実際にまつ毛の育毛作用が認められたステビオシドには、まつ毛毛包細胞におけるＭＳＸ－２発現亢進作用が認められていることから、ＭＳＸ－２が育毛に関与することが示唆されている（例えば、非特許文献１参照）。よって、上皮系細胞のＭＳＸ－２のｍＲＮＡ発現を促進することはまつ毛の育毛につながると考えられる。 The transcription factor MSX-2 is known to be involved in eyelash growth. Eyelash hair follicle cells, which are epithelial cells, are known to express various growth factors (FGF-7, ECGF, VEGF, LEF1) and transcription factor (MSX-2) that are thought to be involved in hair growth. Stevioside, which has been shown to promote eyelash growth, has been shown to increase MSX-2 expression in eyelash hair follicle cells, suggesting that MSX-2 is involved in hair growth (see, for example, Non-Patent Document 1). Therefore, it is thought that promoting MSX-2 mRNA expression in epithelial cells will lead to eyelash growth.
フィラグリンは、皮膚の構成成分であり、皮膚におけるバリア機能に関与し、アレルゲン、毒素、感染性生物の侵入を防ぐ機能を有していると考えられている。フィラグリンの遺伝子の変異等による機能の低下は、アトピー性皮膚炎（湿疹、皮膚の炎症、皮膚のかゆみ等）、アレルギー、喘息等を包含するアトピー性疾患の発症リスクと関連し、さらに重篤な場合は尋常性魚鱗癬等の皮膚疾患につながることが知られている（例えば、非特許文献２参照）。 Filaggrin is a component of skin and is thought to be involved in the skin's barrier function, preventing the invasion of allergens, toxins, and infectious organisms. A decrease in filaggrin function due to genetic mutations or other factors is associated with the risk of developing atopic diseases, including atopic dermatitis (eczema, skin inflammation, skin itching, etc.), allergies, and asthma, and in more severe cases, it can lead to skin diseases such as ichthyosis vulgaris (see, for example, Non-Patent Document 2).
一方、天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ；ＮＭＦ）の主成分であるアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンが角質層内で分解されて産生される。このフィラグリンは、角質層直下の顆粒層に存在する表皮ケラチノサイトでプロフィラグリンとして発現する。その後、直ちにリン酸化し、ケラトヒアリン顆粒に蓄積され、脱リン酸、加水分解を経てフィラグリンへと分解され、角質層に移行して、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部構築に関与することが知られている（例えば、非特許文献３参照）。近年、このフィラグリンが、皮膚の水分保持に非常に重要かつ必要不可欠であること、及び乾燥等の条件によってフィラグリンの合成力が低下し、角質層におけるアミノ酸量が低下することが知られている（例えば、非特許文献４参照）。 Meanwhile, amino acids, the main components of natural moisturizing factors (NMFs), are produced by the degradation of filaggrin derived from keratohyalin granules within the stratum corneum. This filaggrin is expressed as profilaggrin in epidermal keratinocytes present in the granular layer just below the stratum corneum. It is then immediately phosphorylated and accumulated in keratohyalin granules, where it is dephosphorylated and hydrolyzed to filaggrin, which then migrates into the stratum corneum, where it increases the aggregation efficiency of keratin filaments and is known to be involved in the internal organization of keratinocytes (see, for example, Non-Patent Document 3). In recent years, it has been discovered that filaggrin is extremely important and essential for skin moisture retention, and that conditions such as dryness reduce the ability of filaggrin to be synthesized, resulting in a decrease in the amount of amino acids in the stratum corneum (see, for example, Non-Patent Document 4).
したがって、表皮ケラチノサイトにおいて、プロフィラグリンの発現を促進することにより、アトピー性皮膚炎（湿疹、皮膚の炎症、皮膚のかゆみ等）、アレルギー、喘息等を包含するアトピー性疾患を予防・治療又は改善できると考えられる。また、プロフィラグリンの発現を促進し、それにより角質層内のアミノ酸量を増大させることで、角質層の水分環境を本質的に改善できることが期待される。従来、プロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用を有するものとして、ガイヨウ抽出物（例えば、特許文献１参照）等が知られている。 Therefore, it is believed that promoting the expression of profilaggrin in epidermal keratinocytes can prevent, treat, or improve atopic diseases, including atopic dermatitis (eczema, skin inflammation, skin itchiness, etc.), allergies, asthma, etc. Furthermore, promoting the expression of profilaggrin, thereby increasing the amount of amino acids in the stratum corneum, is expected to essentially improve the moisture environment of the stratum corneum. Extracts of Gai Ying (Poplar Tree) (see, for example, Patent Document 1) and the like are known to have the effect of promoting profilaggrin mRNA expression.
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞並びにこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、細胞外マトリックス成分等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。 The epidermis and dermis of the skin are composed of epidermal cells, fibroblasts, and the extracellular matrix outside these cells, such as collagen, elastin, and hyaluronic acid, which supports the skin structure. In young skin, fibroblast proliferation is active, and the interaction between fibroblasts, extracellular matrix components, and other skin tissues maintains homeostasis, ensuring moisture retention, flexibility, elasticity, and other properties, and maintaining the skin's firm, lustrous, and moist appearance.
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸の産生量が減少するとともに、分解や変質を引き起こす。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が生じるため、肌は張りや艶を失い、肌荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下等には、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等のマトリックス成分の減少・変性等が関与している。したがって、ヒアルロン酸等の産生を促進することは、皮膚の老化を予防、治療又は改善する上で重要である。 However, when exposed to certain external factors such as ultraviolet radiation, extremely dry air, or excessive skin cleansing, or as a result of aging, the production of collagen, elastin, and hyaluronic acid, the main components of the extracellular matrix, decreases and undergoes degradation and alteration. As a result, the skin's moisturizing function and elasticity decline, and abnormal peeling of the keratin occurs, causing the skin to lose its firmness and luster and leading to symptoms of aging such as rough skin and wrinkles. Thus, changes associated with skin aging, such as wrinkles, dullness, changes in texture, and loss of elasticity, are related to the reduction and denaturation of matrix components such as collagen, elastin, and hyaluronic acid. Therefore, promoting the production of hyaluronic acid and other substances is important for preventing, treating, or improving skin aging.
前述した細胞外マトリックス成分のうち、ヒアルロン酸は、ムコ多糖の一種であり、細胞間の間隙に充填されることにより細胞を保持する機能を有し、さらに細胞間隙への水分の保持、組織への潤滑性や柔軟性の付与、機械的障害等の外力に対する抵抗等、数多くの機能を有している。ヒアルロン酸の産生を促進することができれば、皮膚の荒れ、しわ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下及び保湿機能の低下等といった皮膚の老化症状を予防、治療又は改善できると考えられる。また、表皮のヒアルロン酸の産生促進に関与するヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）の発現を促進することで、皮膚の老化を予防、治療又は改善することができるものと考えられる。 Among the extracellular matrix components mentioned above, hyaluronic acid is a type of mucopolysaccharide that functions to hold cells in place by filling the spaces between cells. It also has numerous other functions, such as retaining moisture in the intercellular spaces, providing lubrication and flexibility to tissues, and providing resistance to external forces such as mechanical damage. Promoting the production of hyaluronic acid is believed to enable the prevention, treatment, or improvement of skin aging symptoms such as rough skin, wrinkles, dullness, changes in texture, loss of elasticity, and decreased moisturizing function. Furthermore, promoting the expression of hyaluronan synthase 3 (HAS3), which is involved in promoting the production of hyaluronic acid in the epidermis, is believed to enable the prevention, treatment, or improvement of skin aging.
さらに、ヒアルロン酸は、皮膚組織の他にも、軟骨、関節液、臍帯、眼硝子体、その他の結合組織に存在する。このうち、関節液に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、ヒアルロン酸が有する潤滑機能、軟骨に対する被覆・保護機能等により、関節の円滑な作動に役立っている。一方、慢性関節リウマチ等の関節炎において、関節液におけるヒアルロン酸の濃度が低下していることが知られている。したがって、ヒアルロン酸の産生を促進することで、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、又は骨関節炎等の関節炎を予防又は治療することができると考えられる。さらに、創傷又は熱傷の治癒過程において、肉芽（組織）が形成するが、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られている。そのため、ヒアルロン酸の産生を促進することで、創傷又は熱傷の治癒を促進することができると考えられる。ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、クスノハガシワからの抽出物（例えば、特許文献２参照）等が知られている。 Hyaluronic acid is also present in connective tissues such as cartilage, synovial fluid, the umbilical cord, the vitreous body, and other tissues, in addition to skin tissue. Hyaluronic acid in synovial fluid coats the surface of articular cartilage, contributing to the smooth functioning of joints through its lubricating and protective functions. Meanwhile, the concentration of hyaluronic acid in synovial fluid is known to decrease in cases of arthritis, such as rheumatoid arthritis. Therefore, promoting hyaluronic acid production may be effective in preventing or treating arthritis, including rheumatoid arthritis, osteoarthritis, septic arthritis, gouty arthritis, traumatic arthritis, and osteoarthritis. Furthermore, granulation tissue forms during wound or burn healing, and hyaluronic acid levels are known to increase significantly in granulation tissue. Therefore, promoting hyaluronic acid production may be effective in promoting wound or burn healing. Extracts from Camphor Tree (see, for example, Patent Document 2) are known to have the effect of promoting hyaluronic acid production.
しかしながら、より優れたＭＳＸ－２発現促進作用を有し、かつ安全性が高く、まつ毛の育毛作用に優れた新たな素材、並びにより優れたフィラグリン発現促進作用及び優れたヒアルロン酸合成酵素３発現促進作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性が高く、保湿作用に優れた新たな素材に対する要望は依然として強く、その速やかな開発が求められているのが現状である。 However, there remains a strong demand for new materials that have a superior MSX-2 expression-promoting effect, are highly safe, and have excellent eyelash growth effects, as well as new materials that have a superior filaggrin expression-promoting effect or at least one of superior hyaluronic acid synthase 3 expression-promoting effect, are highly safe, and have excellent moisturizing effects, and the current situation is that their rapid development is required.
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高いＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れたまつ毛の育毛作用を有し、かつ安全性が高いまつ毛の育毛剤又はまつ毛の育毛用外用剤組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れたフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高いフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れたヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高いヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた保湿作用を有し、かつ安全性が高い保湿剤又は保湿用外用剤組成物を提供することを目的とする。
The present invention aims to solve the above-mentioned conventional problems and to achieve the following object: That is, the present invention aims to provide an MSX-2 mRNA expression promoter that has an excellent MSX-2 mRNA expression promoting effect and is highly safe.
Another object of the present invention is to provide an eyelash growth agent or an external preparation composition for eyelash growth that has an excellent eyelash growth effect and is highly safe.
Another object of the present invention is to provide a filaggrin mRNA expression promoter that has an excellent filaggrin mRNA expression promoting effect and is highly safe.
Another object of the present invention is to provide a hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter that has an excellent hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting effect and is highly safe.
Another object of the present invention is to provide a moisturizing agent or moisturizing topical composition that has an excellent moisturizing effect and is highly safe.
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、トウキンセンカ抽出物が、優れたＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、まつ毛の育毛や保湿に有用であることを知見し、本発明を完成したものである。 As a result of extensive research conducted by the inventors to solve the above-mentioned problems, they discovered that calendula extract has excellent effects of promoting MSX-2 mRNA expression, filaggrin mRNA expression, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression, and is useful for promoting eyelash growth and moisturizing, leading to the completion of the present invention.
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ トウキンセンカ抽出物を含有することを特徴とするＭＳＸ－２（Ｍｕｓｃｌｅ Ｓｅｇｍｅｎｔ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ２） ｍＲＮＡ発現促進剤である。
＜２＞ 前記＜１＞に記載のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤を含有することを特徴とするまつ毛の育毛剤である。
＜３＞ 前記＜１＞に記載のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤を含有することを特徴とするまつ毛の育毛用外用剤組成物である。
＜４＞ トウキンセンカ抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤である。
＜５＞ トウキンセンカ抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤である。
＜６＞ 前記＜４＞に記載のフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及び前記＜５＞に記載のヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする保湿剤である。
＜７＞ 前記＜４＞に記載のフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及び前記＜５＞に記載のヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする保湿用外用剤組成物である。
The present invention is based on the above findings of the present inventors, and the means for solving the above problems are as follows:
<1> A promoter for promoting MSX-2 (Muscle Segment homeobox 2) mRNA expression, characterized by containing a calendula extract.
<2> A hair growth agent for eyelashes, comprising the MSX-2 mRNA expression promoter according to <1>.
<3> An external preparation composition for eyelash growth, comprising the MSX-2 mRNA expression promoter according to <1>.
<4> A filaggrin mRNA expression promoter, characterized by containing a calendula extract.
<5> A hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter, characterized by containing a calendula officinalis extract.
<6> A moisturizing agent containing at least one of the filaggrin mRNA expression promoter described in <4> and the hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter described in <5>.
<7> A moisturizing external preparation composition comprising at least one of the filaggrin mRNA expression promoter described in <4> and the hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter described in <5>.
本発明のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、安全性の高いＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することができる。
本発明のまつ毛の育毛剤又はまつ毛の育毛用外用剤組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたまつ毛の育毛作用を有し、安全性の高いまつ毛の育毛剤又はまつ毛の育毛用外用剤組成物を提供することができる。
本発明のフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、安全性の高いフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することができる。
本発明のヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、安全性の高いヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することができる。
本発明の保湿剤又は保湿用外用剤組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた保湿作用を有し、安全性の高い保湿剤又は保湿用外用剤組成物を提供することができる。
The MSX-2 mRNA expression promoter of the present invention can solve the above-mentioned problems of the prior art and achieve the above-mentioned object, and can provide an MSX-2 mRNA expression promoter that has excellent MSX-2 mRNA expression promoting activity and is highly safe.
The eyelash growth agent or topical composition for eyelash growth of the present invention can solve the above-mentioned problems of the prior art and achieve the above-mentioned object, and can provide an eyelash growth agent or topical composition for eyelash growth that has excellent eyelash growth activity and is highly safe.
The filaggrin mRNA expression promoter of the present invention can solve the above-mentioned problems of the prior art and achieve the above-mentioned objective, and can provide a filaggrin mRNA expression promoter that has excellent filaggrin mRNA expression promoting activity and is highly safe.
The hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter of the present invention can solve the above-mentioned problems in the past and achieve the above-mentioned purpose, and can provide a hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter that has excellent hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting activity and is highly safe.
The moisturizing agent or moisturizing topical composition of the present invention can solve the above-mentioned problems of the prior art and achieve the above-mentioned object, and can provide a moisturizing agent or moisturizing topical composition that has excellent moisturizing effect and is highly safe.
（ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤）
本発明のＭＳＸ－２（Ｍｕｓｃｌｅ Ｓｅｇｍｅｎｔ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ２） ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、トウキンセンカ抽出物を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
(MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter)
The MSX-2 (Muscle Segment homeobox 2) mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter of the present invention contain a calendula extract and may further contain other ingredients as necessary.
前記トウキンセンカ抽出物が含有する、ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを発揮する物質の詳細については不明であるが、前記トウキンセンカ抽出物がこのような優れた作用を有し、ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。 The details of the substance contained in the calendula extract that exhibits at least one of the effects of promoting MSX-2 mRNA expression, filaggrin mRNA expression, and hyaluronan synthase 3 mRNA expression are unknown. However, it was not previously known that the calendula extract has such excellent effects and is useful as an MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter, and this is a new discovery by the inventors.
＜トウキンセンカ抽出物＞
トウキンセンカ（学名：Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、キク科の植物であり、ヨーロッパ原産の植物で、日本各地で栽培されておりこれらの地域から容易に入手可能である。
<Calendula officinalis extract>
Calendula officinalis (scientific name: Calendula officinalis) is a plant of the Asteraceae family, native to Europe, cultivated in various parts of Japan, and readily available in these areas.
前記トウキンセンカ抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。 The calendula extract may be prepared from the part of the plant used as the raw material for extraction, or a commercially available product may be used.
前記トウキンセンカの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、枝部、茎部、花部、蕾部、根部、地上部又はこれらの混合物などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、花部が好ましい。
前記トウキンセンカの抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
The part of the calendula officinalis to be extracted is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include leaves, branches, stems, flowers, buds, roots, above-ground parts, and mixtures thereof. These may be used alone or in combination of two or more. Among these, flowers are preferred.
The shape, structure and size of the raw material for extracting calendula officinalis are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose.
前記トウキンセンカ抽出部位の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供する方法などが挙げられる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。 The method for preparing the calendula extract is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. For example, the extracted part may be dried and then subjected to solvent extraction either as is or after being crushed using a crusher. The drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer.
前記トウキンセンカ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法により容易に得ることができる。前記トウキンセンカ抽出物の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液そのもの、抽出液の希釈液、抽出液の濃縮液、これらの乾燥物、粗精製物、精製物などが挙げられる。 The calendula extract can be easily obtained using methods commonly used for plant extraction. The form of the calendula extract is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include the extract itself, a diluted extract, a concentrated extract, dried products thereof, a roughly purified product, and a purified product thereof.
前記抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出する方法などが挙げられ、より具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記トウキンセンカの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜撹拌しながら、例えば、３０分間～４時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。前記抽出液は、更に、抽出溶媒を留去し、乾燥してもよい。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
The extraction method is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include a method of extracting using any extraction device at room temperature or under reflux heating, and more specifically, a method of placing the extracted part of the calendula officinalis, which is the extraction raw material, into a treatment tank filled with an extraction solvent, and leaving it to stand for, for example, 30 minutes to 4 hours while stirring appropriately as necessary to elute soluble components, and then filtering to remove the extraction residue, thereby obtaining an extract. The extract may be further subjected to evaporation to remove the extraction solvent, and then dried.
Alternatively, the extract may be used as a raw material for extraction after pre-treatment such as degreasing with a non-polar solvent such as hexane. Pre-treatment such as degreasing allows for efficient extraction with a polar solvent.
前記トウキンセンカの抽出における条件（抽出時間及び抽出温度）、抽出溶媒及び抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The conditions for extracting calendula (extraction time and extraction temperature), the extraction solvent, and the amount of extraction solvent used are not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒などが挙げられる。 The extraction solvent is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include water, a hydrophilic organic solvent, or a mixture thereof.
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水などの他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水なども含まれる。前記水は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。 The water is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include pure water, tap water, well water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and water that has undergone various treatments. Treatments that can be applied to water include, for example, purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, etc. Water that can be used as the extraction solvent also includes purified water, hot water, ion-exchanged water, saline, phosphate buffer, phosphate-buffered saline, etc. One type of water may be used alone, or two or more types may be used in combination.
前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１～５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコールなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。 The hydrophilic solvent is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms, such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones, such as acetone and methyl ethyl ketone; and polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms, such as 1,3-butylene glycol, propylene glycol, and glycerin. These may be used alone or in combination of two or more.
前記混合溶媒における前記水に対する前記親水性溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部～９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部～４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部～９０質量部添加することが好ましい。 The amount of the hydrophilic solvent used relative to the water in the mixed solvent is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. However, when a lower alcohol is used, it is preferable to add 1 to 90 parts by weight per 10 parts by weight of water; when a lower aliphatic ketone is used, it is preferable to add 1 to 40 parts by weight per 10 parts by weight of water; and when a polyhydric alcohol is used, it is preferable to add 1 to 90 parts by weight per 10 parts by weight of water.
前記抽出溶媒の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。 There are no particular restrictions on the temperature of the extraction solvent and it can be selected appropriately depending on the purpose, but it is preferable to use it at a temperature between room temperature and the boiling point of the solvent.
得られた前記トウキンセンカ抽出物は、前記トウキンセンカ抽出物の希釈物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物などを得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製などの処理を施してもよい。 The obtained calendula extract may be subjected to dilution, concentration, drying, purification, etc., according to conventional methods to obtain a diluted product, concentrate, dried product, roughly purified product, purified product, etc. of the calendula extract.
前記トウキンセンカ抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液－液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。 The purification method for the calendula extract is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include liquid-liquid partition extraction, various types of chromatography, and membrane separation.
得られた前記トウキンセンカ抽出物は、そのままでも前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤のいずれかとして使用することができるが、利用しやすい点で、前記濃縮液、前記乾燥物が好ましい。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。 The obtained calendula extract can be used as is as any of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter, but the concentrate and dried product are preferred for ease of use. When obtaining the dried product, a carrier such as dextrin or cyclodextrin may be added to improve hygroscopicity.
前記トウキンセンカ抽出物の前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤における含有量としては、特に制限はなく、前記抽出物の生理活性等によって適宜調整することができる。前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、前記トウキンセンカ抽出物のみからなるものであってもよい。 The amount of the calendula extract contained in the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter is not particularly limited and can be adjusted appropriately depending on the physiological activity of the extract. The MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter may consist solely of the calendula extract.
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤等が挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
<Other ingredients>
The other components are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the form of use of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter, and examples thereof include excipients, moisture-proofing agents, preservatives, strengthening agents, thickeners, emulsifiers, antioxidants, sweeteners, acidulants, seasonings, colorants, fragrances, whitening agents, moisturizers, oily components, UV absorbers, surfactants, thickeners, alcohols, powder components, colorants, aqueous components, water, skin nutrients, etc. These may be used alone or in combination of two or more.
前記その他の成分の前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The content of the other ingredients in the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
＜用途＞
前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品などが挙げられる。
前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤は、優れたＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、安全性が高いので、例えば、まつ毛の育毛剤やまつ毛の育毛用外用剤組成物の有効成分として好適に用いることができる。
前記フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、優れたフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用又は優れたヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、安全性が高いので、例えば、保湿剤や保湿用外用剤組成物の有効成分として好適に用いることができる。
<Application>
The uses of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, etc.
The MSX-2 mRNA expression promoter has an excellent MSX-2 mRNA expression promoting effect and is highly safe, and therefore can be suitably used, for example, as an active ingredient in an eyelash growth agent or an external preparation composition for eyelash growth.
The filaggrin mRNA expression promoter and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter have excellent filaggrin mRNA expression promoting activity or excellent hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting activity, and are highly safe, so they can be suitably used, for example, as active ingredients in moisturizers and moisturizing topical compositions.
本発明のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。 The MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter of the present invention are preferably applied to humans, but can also be applied to animals other than humans (e.g., mice, rats, hamsters, dogs, cats, cows, pigs, monkeys, etc.) as long as their respective functional effects are achieved.
前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの用法が挙げられる。これらの中でも外用が好ましい。 The method of use of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include oral, parenteral, and topical administration. Of these, topical administration is preferred.
前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、坐剤等の非経口投与剤；化粧水、乳液、クリーム、軟膏、美容液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、ファンデーション、入浴剤、石鹸、ボディーソープ、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、ポマード、シャンプー、リンス、コンディショナー等の外用剤などが挙げられる。
前記各剤型のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
The dosage forms of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. Examples include oral administration preparations such as tablets, powders, capsules, granules, extracts, and syrups; parenteral administration preparations such as injections, drip infusions, and suppositories; and external preparations such as lotion, emulsion, cream, ointment, serum, lotion, pack, jelly, lip balm, lipstick, foundation, bath additives, soap, body soap, astringent, hair tonic, hair lotion, hair cream, hair liquid, pomade, shampoo, rinse, and conditioner.
The method for producing each of the above dosage forms of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter is not particularly limited, and any known method can be appropriately selected.
前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の使用量、使用期間等の使用方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The amount, duration, and other usage methods of the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter are not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
また、本発明のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、又はヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用の作用機構に関する研究のための試薬としても用いることができる。 In addition, the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter of the present invention can also be used as reagents for research into the mechanisms of action of MSX-2 mRNA expression promotion, filaggrin mRNA expression promotion, or hyaluronan synthase 3 mRNA expression promotion.
（まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物）
本発明のまつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、本発明のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
(Eyelash growth agent and topical composition for eyelash growth)
The eyelash growth agent and the external preparation composition for eyelash growth of the present invention contain the MSX-2 mRNA expression promoter of the present invention, and may further contain other ingredients as required.
前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用を有する。
本発明において、「まつ毛の育毛」とは、まつ毛の発毛、成長又は正常さを促すことに加え、まつ毛の長さ、太さが増すこと、まつ毛にハリやコシが出ることなどを含む概念である。
The eyelash growth agent and the eyelash growth topical composition have an effect of promoting MSX-2 mRNA expression.
In the present invention, "eyelash growth" is a concept that includes not only promoting the growth, development, or normality of eyelashes, but also increasing the length and thickness of eyelashes, and making eyelashes firmer and more resilient.
＜ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤＞
前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤は、上述した本発明のＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤である。
<MSX-2 mRNA expression promoter>
The MSX-2 mRNA expression promoter is the MSX-2 mRNA expression promoter of the present invention described above.
前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物における前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤の含有量としては、特に制限はなく、まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物の形態や前記トウキンセンカ抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記トウキンセンカ抽出物に換算して、０．０００１質量％～２０質量％が好ましく、０．０００１質量％～１０質量％がより好ましい。前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、前記ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤のみからなるものであってもよい。 The content of the MSX-2 mRNA expression promoter in the eyelash growth agent and topical eyelash growth composition is not particularly limited and can be adjusted appropriately depending on the form of the eyelash growth agent and topical eyelash growth composition and the physiological activity of the calendula extract, etc., but is preferably 0.0001% to 20% by mass, and more preferably 0.0001% to 10% by mass, calculated as the calendula extract. The eyelash growth agent and topical eyelash growth composition may consist solely of the MSX-2 mRNA expression promoter.
＜その他の成分＞
前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、上記したＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の項目に記載したものや、通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分などが挙げられる。前記通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
<Other ingredients>
The other ingredients in the eyelash growth agent and topical composition for eyelash growth are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the intended use of the eyelash growth agent and topical composition for eyelash growth. Examples include those described above in the sections on MSX-2 mRNA expression promoters, filaggrin mRNA expression promoters, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoters, as well as main ingredients, auxiliary agents, and other ingredients typically used in the production of cosmetics. Examples of the main ingredients, auxiliary agents, and other ingredients typically used in the production of cosmetics include astringents, bactericides/antibacterial agents, whitening agents, UV absorbers, moisturizers, cell activators, anti-inflammatory/antiallergic agents, antioxidants/active oxygen scavengers, oils and fats, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, and fragrances. These ingredients may be used alone or in combination of two or more.
前記その他の成分の前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The content of the other ingredients in the eyelash growth agent and topical composition for eyelash growth is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
＜用途＞
前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品などが挙げられる。
本発明のまつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、日常的に使用することが可能であり、有効成分であるトウキンセンカ抽出物の働きによって、まつ毛の育毛作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができる。
<Application>
The uses of the eyelash growth agent and the topical composition for eyelash growth are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, etc.
The eyelash growth agent and topical composition for eyelash growth of the present invention can be used daily, and the active ingredient, calendula extract, can extremely effectively exert various physiologically active actions, including eyelash growth.
本発明のまつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。 The eyelash growth agent and topical composition for eyelash growth of the present invention are suitable for use in humans, but can also be used in animals other than humans (e.g., mice, rats, hamsters, dogs, cats, cows, pigs, monkeys, etc.) as long as their respective effects are achieved.
前記まつ毛の育毛剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの用法が挙げられる。これらの中でも外用が好ましい。
前記まつ毛の育毛用外用剤組成物は、外用で用いられる。
The method of use of the eyelash growth agent is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include oral administration, parenteral administration, external administration, etc. Among these, external administration is preferred.
The eyelash growth topical composition is used externally.
前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物の剤型及びその製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上記したＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の項目に記載したものと同様のものが挙げられる。 The formulation and manufacturing method of the eyelash growth agent and topical eyelash growth composition are not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. Examples include the same formulations as those described above for the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter.
前記まつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物の使用量、使用期間等としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The amount and duration of use of the eyelash growth agent and topical eyelash growth composition are not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
上述したように、本発明のまつ毛の育毛剤及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、優れたまつ毛の育毛作用を有する。したがって、本発明は、個体に前記まつ毛の育毛剤又はまつ毛の育毛用外用剤組成物を投与することを特徴とする、まつ毛の育毛方法にも関する。 As described above, the eyelash growth agent and topical eyelash growth composition of the present invention have excellent eyelash growth effects. Therefore, the present invention also relates to a method for growing eyelashes, which comprises administering the eyelash growth agent or topical eyelash growth composition to an individual.
また、本発明のまつ毛の育毛剤、及びまつ毛の育毛用外用剤組成物は、まつ毛の育毛の作用機構に関する研究のための試薬としても用いることができる。 The eyelash growth agent and topical eyelash growth composition of the present invention can also be used as reagents for research into the mechanism of eyelash growth.
（保湿剤、及び保湿用外用剤組成物）
本発明の保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、本発明のフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の少なくともいずれかを含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
(Moisturizing agent and moisturizing topical composition)
The moisturizing agent and moisturizing topical composition of the present invention contain at least one of the filaggrin mRNA expression promoter and the hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter of the present invention, and further contain other ingredients as necessary.
前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有する。 The moisturizer and moisturizing topical composition have at least one of the following effects: promoting filaggrin mRNA expression and promoting hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression.
＜フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の少なくともいずれか＞
前記フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、上述した本発明のフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤である。
<At least one of filaggrin mRNA expression promoter and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter>
The filaggrin mRNA expression promoter and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter are the filaggrin mRNA expression promoter and hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter of the present invention described above.
前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物における前記フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の少なくともいずれかの合計含有量としては、特に制限はなく、保湿剤、及び保湿用外用剤組成物の形態や前記トウキンセンカ抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記トウキンセンカ抽出物に換算して、０．０００１質量％～２０質量％が好ましく、０．０００１質量％～１０質量％がより好ましい。前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、前記フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の少なくともいずれかのみからなるものであってもよい。また、前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、前記フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤のいずれか一方を含む態様であってもよいし、両者を含む態様であってもよい。 The total content of at least one of the filaggrin mRNA expression promoter and the hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter in the moisturizer and moisturizing topical composition is not particularly limited and can be adjusted appropriately depending on the form of the moisturizer and moisturizing topical composition and the physiological activity of the calendula extract, etc., but is preferably 0.0001% to 20% by mass, and more preferably 0.0001% to 10% by mass, calculated as the calendula extract. The moisturizer and moisturizing topical composition may consist solely of at least one of the filaggrin mRNA expression promoter and the hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter. The moisturizer and moisturizing topical composition may also include either one of the filaggrin mRNA expression promoter and the hyaluronan synthase 3 mRNA expression promoter, or both.
＜その他の成分＞
前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、上記したＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の項目に記載したものや、通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分などが挙げられる。前記通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
<Other ingredients>
The moisturizer and other components in the moisturizing topical composition are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the intended use of the moisturizer and topical composition. Examples include those described above in the sections on MSX-2 mRNA expression promoters, filaggrin mRNA expression promoters, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoters, as well as main ingredients, auxiliary agents, and other components typically used in the production of cosmetics. Examples of main ingredients, auxiliary agents, and other components typically used in the production of cosmetics include astringents, bactericides/antibacterial agents, whitening agents, UV absorbers, moisturizers, cell activators, anti-inflammatory/antiallergic agents, antioxidants/active oxygen scavengers, oils and fats, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, and fragrances. These may be used alone or in combination of two or more.
前記その他の成分の前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The content of the other ingredients in the moisturizer and moisturizing topical composition is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
＜用途＞
前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品などが挙げられる。
本発明の保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、日常的に使用することが可能であり、有効成分であるトウキンセンカ抽出物の働きによって、保湿作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができる。
<Application>
The uses of the moisturizing agent and the moisturizing topical composition are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. Examples include pharmaceuticals, quasi-drugs, and cosmetics.
The moisturizing agent and moisturizing topical composition of the present invention can be used on a daily basis, and the active ingredient, calendula extract, can extremely effectively exert various physiologically active effects, including moisturizing action.
本発明の保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。 The moisturizing agent and moisturizing topical composition of the present invention are suitable for use in humans, but can also be used in animals other than humans (e.g., mice, rats, hamsters, dogs, cats, cows, pigs, monkeys, etc.) as long as their respective effects are achieved.
前記保湿剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの用法が挙げられる。これらの中でも外用が好ましい。
前記保湿用外用剤組成物は、外用で用いられる。
The method of use of the moisturizing agent is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include oral administration, parenteral administration, external administration, etc. Among these, external administration is preferred.
The moisturizing external preparation composition is used externally.
前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物の剤型及びその製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上記したＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、及びヒアルロン酸合成酵素３ ｍＲＮＡ発現促進剤の項目に記載したものと同様とすることができる。 The dosage form and manufacturing method of the moisturizer and moisturizing topical composition are not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose. For example, they can be similar to those described above for the MSX-2 mRNA expression promoter, filaggrin mRNA expression promoter, and hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoter.
前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物の使用量、使用期間等としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The amount of the moisturizing agent and the moisturizing topical composition used, the period of use, etc. are not particularly limited and can be selected appropriately depending on the purpose.
上述したように、本発明の保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、優れた保湿作用を有する。したがって、本発明は、個体に前記保湿剤、及び保湿用外用剤組成物を投与することを特徴とする、保湿方法にも関する。 As described above, the moisturizing agent and moisturizing topical composition of the present invention have excellent moisturizing effects. Therefore, the present invention also relates to a moisturizing method characterized by administering the moisturizing agent and moisturizing topical composition to an individual.
また、本発明の保湿剤、及び保湿用外用剤組成物は、保湿の作用機構に関する研究のための試薬としても用いることができる。 The moisturizing agent and topical moisturizing composition of the present invention can also be used as reagents for research into the mechanism of moisturizing action.
以下、本発明の試験例、配合例を説明するが、本発明は、これらの試験例、配合例に何ら限定されるものではない。 Test examples and formulation examples of the present invention are described below, but the present invention is not limited to these test examples and formulation examples in any way.
以下の試験例、配合例では、トウキンセンカ抽出物として、丸善製薬株式会社製の製品名「トウキンセンカ抽出液ＢＧ－Ｊ」（抽出部位：花部、抽出溶媒：水と１，３－ブチレングリコールの混合溶媒）を用いた。 In the following test examples and formulation examples, the calendula extract used was "Calendula Extract BG-J" (extracted part: flowers, extraction solvent: mixed solvent of water and 1,3-butylene glycol) manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.
（試験例１：ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記トウキンセンカ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＭＳＸ－２（Ｍｕｓｃｌｅ Ｓｅｇｍｅｎｔ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ２） ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
(Test Example 1: Test of MSX-2 mRNA expression promoting effect)
The calendula extract was used as a test sample and its promoting effect on MSX-2 (muscle segment homeobox 2) mRNA expression was tested by the following test method.
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。ＫＧＭを用いて３５ｍｍシャーレに３０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。
２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（試料濃度は下記表１を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ；Ｃａｔ．ｎｏ．３１１－０７３６１）にてトータルＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＭＳＸ－２及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（ＴａＫａＲａ）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標） ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＭＳＸ－２のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。
また、被験試料無添加の場合についても同様にして試験を行った。
ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進率の計算方法は以下の通りである。
ＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時の補正値
Ｂ：被験試料無添加時の補正値
Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured in normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM) and then harvested by trypsinization. 30 x 10 cells/2 mL of KGM were seeded onto a 35 mm dish and cultured overnight at 37°C in 5% CO2. After culturing, the medium was replaced with growth factor-free medium (KBM).
After 24 hours, the culture medium was discarded, and 2 mL of the test sample dissolved in KBM to the required concentration (see Table 1 below for sample concentrations) was added to each petri dish, followed by 24 hours of culture at 37°C and 5% CO2. After culture, the culture medium was discarded, and total RNA was extracted using ISOGEN II (NIPPON GENE; Cat. no. 311-07361). The amount of RNA in each sample was measured using a spectrophotometer, and total RNA was prepared to a concentration of 200 ng/μL.
Using this total RNA as a template, the expression levels of MSX-2 and the internal standard GAPDH mRNA were measured. Detection was performed by real-time two-step RT-PCR using a real-time PCR device, Thermal Cycler Dice® Real Time System III (TaKaRa), and the TaKaRa SYBR® PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (code No. RR063A). The expression level of MSX-2 mRNA was calculated by correcting for the expression level of GAPDH mRNA.
The test was also carried out in the same manner without adding the test sample.
The MSX-2 mRNA expression promotion rate was calculated as follows.
MSX-2 mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
A: Corrected value when test sample was added B: Corrected value when test sample was not added
表１の結果から、トウキンセンカ抽出物は、優れたＭＳＸ－２ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。 The results in Table 1 confirm that calendula extract has an excellent effect of promoting MSX-2 mRNA expression.
（試験例２：ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記トウキンセンカ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＦＬＧ（フィラグリン） ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
(Test Example 2: FLG mRNA expression promoting effect test)
The calendula extract was used as a test sample and tested for its FLG (filaggrin) mRNA expression promoting effect by the following test method.
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。ＫＧＭを用いて３５ｍｍシャーレに３０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。
２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（試料濃度は下記表２を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ；Ｃａｔ．ｎｏ．３１１－０７３６１）にてトータルＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＦＬＧ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（ＴａＫａＲａ）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標） ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＦＬＧのｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。
また、被験試料無添加の場合についても同様にして試験を行った。
ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率の計算方法は以下の通りである。
ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時の補正値
Ｂ：被験試料無添加時の補正値
Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured in normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM) and then harvested by trypsinization. 30 x 10 cells/2 mL of KGM were seeded onto a 35 mm dish and cultured overnight at 37°C in 5% CO2. After culturing, the medium was replaced with growth factor-free medium (KBM).
After 24 hours, the culture medium was discarded, and 2 mL of the test sample dissolved in KBM to the required concentration (see Table 2 below for sample concentrations) was added to each petri dish, followed by 24 hours of culture at 37°C and 5% CO2. After culture, the culture medium was discarded, and total RNA was extracted using ISOGEN II (NIPPON GENE; Cat. no. 311-07361). The amount of RNA in each sample was measured using a spectrophotometer, and total RNA was prepared to a concentration of 200 ng/μL.
Using this total RNA as a template, the expression levels of FLG and the internal standard GAPDH mRNA were measured. Detection was performed by real-time two-step RT-PCR using a real-time PCR device, Thermal Cycler Dice® Real Time System III (TaKaRa), and the TaKaRa SYBR® PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (code No. RR063A). The expression level of FLG mRNA was calculated by correcting for the expression level of GAPDH mRNA.
The test was also carried out in the same manner without adding the test sample.
The FLG mRNA expression promotion rate was calculated as follows.
FLG mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
A: Corrected value when test sample was added B: Corrected value when test sample was not added
表２の結果から、トウキンセンカ抽出物は、優れたＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。 The results in Table 2 confirm that calendula extract has an excellent effect of promoting FLG mRNA expression.
（試験例３：ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記トウキンセンカ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＨＡＳ３（ヒアルロン酸合成酵素３） ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
(Test Example 3: HAS3 mRNA expression promoting effect test)
The calendula extract was used as a test sample and its promoting effect on HAS3 (hyaluronic acid synthase 3) mRNA expression was tested by the following test method.
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。ＫＧＭを用いて３５ｍｍシャーレに３０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。
２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（試料濃度は下記表３を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ；Ｃａｔ．ｎｏ．３１１－０７３６１）にてトータルＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（ＴａＫａＲａ）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標） ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＨＡＳ３のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。
また、被験試料無添加の場合についても同様にして試験を行った。
ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率の計算方法は以下の通りである。
ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時の補正値
Ｂ：被験試料無添加時の補正値
Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured in normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM) and then harvested by trypsinization. 30 x 10 cells/2 mL of KGM were seeded onto a 35 mm dish and cultured overnight at 37°C in 5% CO2. After culturing, the medium was replaced with growth factor-free medium (KBM).
After 24 hours, the culture medium was discarded, and 2 mL of the test sample dissolved in KBM to the required concentration (see Table 3 below for sample concentrations) was added to each petri dish, followed by 24 hours of culture at 37°C and 5% CO2. After culture, the culture medium was discarded, and total RNA was extracted using ISOGEN II (NIPPON GENE; Cat. no. 311-07361). The amount of RNA in each sample was measured using a spectrophotometer, and total RNA was prepared to a concentration of 200 ng/μL.
Using this total RNA as a template, the expression levels of HAS3 and GAPDH mRNA, an internal standard, were measured. Detection was performed by real-time two-step RT-PCR using a real-time PCR device, Thermal Cycler Dice® Real Time System III (TaKaRa), and the TaKaRa SYBR® PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (code No. RR063A). The expression level of HAS3 mRNA was calculated by correcting for the expression level of GAPDH mRNA.
The test was also carried out in the same manner without adding the test sample.
The HAS3 mRNA expression promotion rate was calculated as follows.
HAS3 mRNA expression promotion rate (%) = A/B × 100
A: Corrected value when test sample was added B: Corrected value when test sample was not added
表３の結果から、トウキンセンカ抽出物は、優れたＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。 The results in Table 3 confirm that calendula extract has an excellent effect of promoting HAS3 mRNA expression.
（配合例１）
下記組成のまつ毛用美容液を常法により製造した。
・ トウキンセンカ抽出物 ０．０５質量％
・ １，３ブチレングリコール １５．０質量％
・ アルキル変性カルボキシビニルポリマー ０．５質量％
・ 水酸化ナトリウム ０．１質量％
・ ヒドロキシエチルセルロース ０．５質量％
・ フェノキシエタノール ０．５質量％
・ ＥＤＴＡ－４Ｎａ ０．０５質量％
・ 精製水 残量
(Combination example 1)
An eyelash beauty serum having the following composition was prepared by a conventional method.
Calendula officinalis extract 0.05% by mass
1,3 butylene glycol 15.0% by mass
Alkyl-modified carboxyvinyl polymer 0.5% by mass
Sodium hydroxide 0.1% by mass
Hydroxyethyl cellulose 0.5% by mass
Phenoxyethanol 0.5% by mass
・EDTA-4Na 0.05% by mass
・Remaining purified water
（配合例２）
下記組成のクリームを常法により製造した。
・ トウキンセンカ抽出物 ０．０５質量％
・ クジンエキス ０．１質量％
・ オウゴンエキス ０．１質量％
・ 流動パラフィン ５．０質量％
・ サラシミツロウ ４．０質量％
・ スクワラン １０．０質量％
・ セタノール ３．０質量％
・ ラノリン ２．０質量％
・ ステアリン酸 １．０質量％
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．５質量％
・ モノステアリン酸グリセリル ３．０質量％
・ 油溶性甘草エキス ０．１質量％
・ １，３－ブチレングリコール ６．０質量％
・ パラオキシ安息香酸メチル １．５質量％
・ 香料 ０．１質量％
・ 精製水 残量
(Combination example 2)
A cream having the following composition was prepared by a conventional method.
Calendula officinalis extract 0.05% by mass
Sophora root extract 0.1% by mass
・ Scutellaria root extract 0.1% by mass
Liquid paraffin 5.0% by mass
White beeswax 4.0% by mass
Squalane 10.0% by mass
Cetyl alcohol 3.0% by mass
Lanolin 2.0% by mass
Stearic acid 1.0% by mass
Polyoxyethylene sorbitan oleate (20 E.O.) 1.5% by mass
Glyceryl monostearate 3.0% by mass
・Oil-soluble licorice extract 0.1% by mass
1,3-butylene glycol 6.0% by mass
Methyl parahydroxybenzoate 1.5% by mass
・Fragrance 0.1% by mass
・Remaining purified water
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