JP6665099B2 - 乳酸菌含有組成物 - Google Patents

Description

本発明は、乳酸菌を含有する組成物に関する。

日本では、乳酸菌製剤が、極めて安全性に優れた整腸用医薬品として長年使用されている。また、乳酸菌を含有する整腸用のいわゆる健康食品も多数市販されている。さらに、従来から健康的な食品として親しまれていた、乳酸菌を含有するヨーグルトや醗酵乳が、おなかの調子を整える特定保健用食品の承認を受け、注目を集めている。欧米でも、乳酸菌含有食品（プロバイオティクス）は、整腸効果のみならず、多様な作用を発揮して健康維持に効果を示す代表的な食品として注目され、多数市販されている。また、プロバイオティクスの製品開発を目的とした乳酸菌の研究も盛んに行われている（非特許文献１）。

乳酸菌は、乳糖消化補助、腸管病原菌抵抗性、大腸癌発癌抑制、小腸細菌過剰増殖抑制、免疫機能調節、抗アレルギー、血中脂質低下、降圧、尿路感染抑制、ヘリコバクター・ピロリ感染抑制、肝性脳疾患抑制等の、多様な機能を有することが知られている（非特許文献２）。乳酸菌による歯磨きが歯周病に対しても効果を示すことが示されている（非特許文献３）。このように、乳酸菌は腸内菌叢のみならず、口腔、胃を含む消化管内菌叢、及び膣等の泌尿生殖器内菌叢のバランスを改善することにより、有益な保健効果をもたらすことが解明されてきた。

乳酸菌と同様に、ビフィズス菌も、極めて安全性に優れた整腸用医薬品として長年使用されており、ビフィズス菌を含有する整腸用のいわゆる健康食品も多数市販されている。

一方、ディスプレイ画面の使用時間の増加、空調設備による空気の乾燥、コンタクトレンズの使用等により、近年増加傾向にある疾患として、ドライアイが挙げられる。ドライアイは、様々な要因により涙液機能の低下や角結膜上皮障害を伴う慢性疾患であって、目の不快感や視機能異常を伴い、欧米および日本では成人の１０〜２０％が罹患している。従来、ドライアイの治療のためには、主に人口涙液や合成化合物を点眼投与して、涙液を補充する方法又は涙液層を安定化させる方法が採用されている。

Ｒｅｕｔｅｒ Ｇ．：腸内フローラとプロバイオティクス（光岡知足編）、１７−３９頁、学会出版センター、１９９８年 Ｓａｎｄｅｒｓ ＭＥ及びＨｕｉｓ ｉｎ’ｔ Ｖｅｌｄ Ｊ：Ａｎｔｏｎｉｅ ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ、７６巻、２９３−３１５頁、１９９９年 今井龍弥：歯周病が３日でよくなる乳酸菌歯みがき、マキノ出版、２０００年

以上のように乳酸菌又はビフィズス菌単独でも健康維持機能を有するが、乳酸菌又はビフィズス菌と同時に他の成分を摂取することにより、乳酸菌又はビフィズス菌の機能を高めることが期待される。ところが、乳酸菌又はビフィズス菌の効果を高めるために、乳酸菌又はビフィズス菌とその他の成分とを組み合わせる方法はこれまでに充分には検討されていない。また、乳酸菌又はビフィズス菌の、ドライアイ治療・予防効果は充分には検討されていない。本発明は、乳酸菌又はビフィズス菌、及び乳酸菌又はビフィズス菌の機能を高める成分を含有した組成物を提供することを目的とする。

本発明者らは、ルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分が、乳酸菌又はビフィズス菌の機能を高めることを見いだし、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、ルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含有する組成物に関する。

前記組成物は、ルテイン、魚油、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含有することが好ましい。

前記組成物は、さらにラクトフェリンを含有することが好ましい。

前記組成物は、医薬組成物であることが好ましい。

前記組成物は、食品組成物であることが好ましい。

前記組成物は、ドライアイ治療用又はドライアイ予防用の組成物であることが好ましい。

また、本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、又はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の微生物を含有する、ドライアイ治療用又はドライアイ予防用の組成物に関する。

本発明の組成物は、ルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含有することにより、乳酸菌又はビフィズス菌の機能を高める効果を奏する。

試験例１の結果を示した図である。 試験例２の結果を示した図である。 試験例３の結果を示した図である。 試験例４の結果を示した図である。 試験例５の結果を示した図である。 試験例６の結果を示した図である。 試験例７の結果を示した図である。 試験例８の結果を示した図である。 実施例２のシルマー試験第１法の結果を示した図である。 実施例２のＢＵＴ検査の結果を示した図である。 実施例２のフルオレセイン染色による角膜上皮障害スコアを示した図である。 実施例２のＤＥＱＳの結果を示した図である。 実施例３の乳酸菌又はビフィズス菌の投与結果を示した図である。

本発明は、ルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含有する組成物に関する。

乳酸菌としては、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ａｌｋａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ａｔｏｐｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｈａｌｏｌａｃｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｉｓｏｂａｃｕｌｕｍ属、Ｍａｒｉｎｉｌａｃｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｏｌｓｅｎｅｌｌａ属、Ｐａｒａｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｐｉｌｉｂａｃｔｅｒ属、Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ属、Ａｂｉｏｔｒｏｐｈｉａ属、Ｂａｖａｒｉｉｃｏｃｃｕｓ属、Ｇｒａｎｕｌｉｃａｔｅｌｌａ属、Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｕｓ属、Ｌａｃｔｉｃｉｇｅｎｉｕｍ属、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｔｅｔｒａｇｅｎｏｃｏｃｕｓ属、Ｔｒｉｃｈｏｏｃｃｕｓ属、Ｖａｇｏｃｏｃｃｕｓ属等の微生物が挙げられる。

Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属の微生物としては、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、具体的には、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ等が挙げられ、より具体的には、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＷＢ２０００株（国際寄託番号 ＮＩＴＥ ＢＰ−０１９１３）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＪＣＭ５８０４株（理化学研究所 バイオリソースセンター微生物材料開発室から入手可能）が挙げられる。

Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の微生物としては、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、具体的には、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍと称されることがある）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ等が挙げられる。

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の微生物としては、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、具体的には、Ｌａｃｔｏｂａｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｎｆｒａｎｃｉｓｃｅｎｓｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏｍｏ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ等が挙げられ、より具体的には、Ｌａｃｔｏｂａｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＷＢ２１株（国際寄託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−７７９２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＷＢ２００１株（受領番号 ＮＩＴＥ ＡＢＰ−０２１０９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ ＴＪ５１５株（受領番号 ＦＥＲＭ ＡＢＰ−２１７９８）が挙げられる。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＷＢ２００１株（受領番号 ＮＩＴＥ ＡＢＰ−０２１０９）は、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（郵便番号２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に、２０１５年８月２８日にブダペスト条約に基づいて寄託した。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ ＴＪ５１５株（受領番号 ＦＥＲＭ ＡＢＰ−２１７９８）は、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（郵便番号２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２０号室）に、２０１５年８月１８日にブダペスト条約に基づいて寄託した。

これらの中でも、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属の微生物が好ましく、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓがより好ましく、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＷＢ２０００株であることがさらに好ましい。

乳酸菌は、１種又は２種以上の菌種を配合して用いることができる。乳酸菌は、常法に従って任意の条件で培養し、得られた培養物から遠心分離等の集菌手段によって分離されたものを本発明のために用いることができる。

乳酸菌の形態としては、乳酸菌、乳酸菌含有物、乳酸菌培養ろ液又は乳酸菌処理物が挙げられる。

乳酸菌としては、生菌体、湿潤菌、乾燥菌、死菌体等が挙げられる。乳酸菌含有物としては、乳酸菌懸濁液、乳酸菌培養物（菌体、培養上清液、培地成分を含む）等が挙げられる。乳酸菌培養ろ液としては、乳酸菌培養物から乳酸菌を除去した培養ろ液が挙げられる。乳酸菌処理物としては、乳酸菌、乳酸菌含有物、乳酸菌培養ろ液の濃縮物、ペースト化物、乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物）、液状物、希釈物等が挙げられる。

乳酸菌の含有量は、任意でよいが、通常０．０００１〜９０質量％であり、０．００１〜２０質量％であることが好ましく、０．０１〜１０質量％であることがより好ましい。また、乳酸菌の含有量は、本発明の組成物の一日摂取量あたり、乳酸菌数で、１００万〜１０００億個であることが好ましく、１０００万〜１０００億個であることがより好ましく、１億〜１０００億個であることがさらに好ましい。

本発明のために、乳酸菌の代わりにビフィズス菌を用いることもできる。

ビフィズス菌としては、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、具体的には、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の微生物が挙げられる。

Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の微生物としては、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、具体的には、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ等が挙げられ、より具体的には、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＷＢ１００１株（受領番号 ＮＩＴＥ ＡＢＰ−０２１０８）が挙げられる。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＷＢ１００１株（受領番号 ＮＩＴＥ ＡＢＰ−０２１０８）は、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（郵便番号２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に、２０１５年８月２８日にブダペスト条約に基づいて寄託した。

ビフィズス菌は、１種又は２種以上の菌種を配合して用いることができる。ビフィズス菌は、常法に従って任意の条件で培養し、得られた培養物から遠心分離等の集菌手段によって分離されたものを本発明のために用いることができる。

ビフィズス菌の形態としては、ビフィズス菌、ビフィズス菌含有物、ビフィズス菌培養ろ液、又はビフィズス菌処理物が挙げられる。

ビフィズス菌としては、生菌体、湿潤菌、乾燥菌、死菌体等が挙げられる。ビフィズス菌含有物としては、ビフィズス菌懸濁液、ビフィズス菌培養物（菌体、培養上清液、培地成分を含む）等が挙げられる。ビフィズス菌培養ろ液としては、ビフィズス菌培養物からビフィズス菌を除去した培養ろ液が挙げられる。ビフィズス菌処理物としては、ビフィズス菌、ビフィズス菌含有物、ビフィズス菌培養ろ液の濃縮物、ペースト化物、乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物）、液状物、希釈物等が挙げられる。

ビフィズス菌の含有量は、任意でよいが、通常０．０００１〜９０質量％であり、０．００１〜２０質量％であることが好ましく、０．０１〜１０質量％であることがより好ましい。また、ビフィズス菌の含有量は、本発明の組成物の一日摂取量あたり、ビフィズス菌数で、１００万〜１０００億個であることが好ましく、１０００万〜１０００億個であることがより好ましく、１億〜１０００億個であることがさらに好ましい。

乳酸菌又はビフィズス菌の機能を高めるために、組成物はルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含む。組成物はルテイン、魚油、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含むことが好ましく、ルテイン、魚油、ラクトフェリン、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含むことがより好ましい。

ルテインの組成物中の含有量は、０．０００１〜９０質量％であることが好ましく、０．００１〜７０質量％であることがより好ましく、０．０１〜５０質量％であることがさらに好ましい。ルテインの形態としては、遊離ルテイン、ルテインエステル、ルテイン塩などの何れであっても良い。ルテインを含む成分として、マリーゴールド抽出物等を用いてもよい。

魚油の組成物中の含有量は、０．０００１〜９０質量％であることが好ましく、０．００１〜８０質量％であることがより好ましく、０．０１〜７０質量％であることがさらに好ましい。

ラクトフェリンの組成物中の含有量は、０．０００１〜９０質量％であることが好ましく、０．００１〜８０質量％であることがより好ましく、０．０１〜７０質量％であることがさらに好ましい。

ビタミンとしては、例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＡ、ビタミンＢ_２等が挙げられる。これらの中でも、ビタミンＣ、ビタミンＥが好ましい。ビタミンの組成物中の含有量は、０．０００１〜９０質量％であることが好ましく、０．００１〜７０質量％であることがより好ましく、０．０１〜５０質量％であることがさらに好ましい。

γアミノ酪酸の組成物中の含有量は、０．０００１〜９０質量％であることが好ましく、０．００１〜７０質量％であることがより好ましく、０．０１〜５０質量％であることがさらに好ましい。γアミノ酪酸を含む成分として、米胚芽抽出物等を用いてもよい。

亜鉛の組成物中の含有量は、０．０００１〜９０質量％であることが好ましく、０．００１〜７０質量％であることがより好ましく、０．０１〜５０質量％であることがさらに好ましい。亜鉛を含む成分として、グルコン酸亜鉛等を用いてもよい。

組成物は、ヒト又は動物が摂取可能なものであれば特に限定されず、例えば、医薬組成物、食品組成物とすることができる。

組成物の投与形態としては、例えば、ソフトカプセル剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、トローチ剤、シロップ剤、ゼリー剤、坐剤、クリーム剤、ゲル、軟膏、ローション、洗浄剤、潅注液、液剤等を挙げることができる。これらの投与形態をとることにより安全に投与又は摂取することができる。

組成物は、賦形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、滑沢剤、分散剤、安定化剤等の、医薬組成物又は食品組成物の製造技術分野において通常使用しうる添加剤を加えて、常法に従って製造することができる。

賦形剤としては、例えば、白糖、乳糖、マンニトール、グルコース等の糖類；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、コメデンプン、部分α化デンプン等のデンプン類等が挙げられる。

結合剤としては、例えば、キトサン、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、カラギーナン、グアーガム、アラビアゴム、寒天等の多糖類；トラガント、ゼラチン、グルテン等の天然高分子類；ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体；ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセテート、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、酢酸ビニル樹脂等の合成高分子等が挙げられる。

崩壊剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、コメデンプン、部分α化デンプン等のデンプン類等が挙げられる。

コーティング剤としては、例えば、ジメチルアミノエチルメタアクリレート・メタアクリル酸共重合体、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アクリル酸エチル・メタアクリル酸共重合体、アクリル酸エチル・メタアクリル酸メチル・メタアクリル酸塩化トリメチルアンモニウムエチル共重合体、エチルセルロース等の水不溶性高分子；メタアクリル酸・アクリル酸エチル共重合体、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート等の腸溶性高分子；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の水溶性高分子等が挙げられる。

滑沢剤としては、例えば、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、コロイダルシリカ、含水二酸化ケイ素、ワックス類、硬化油等が挙げられる。

分散剤としては、例えば、レシチン、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル等の乳化剤やグアーガム等の増粘多糖類が挙げられる。

安定化剤としては、例えば、ミツロウ、グリセリン脂肪酸エステル、硬化油等が挙げられる。

組成物は、必要量を１回で投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。

本発明の組成物を食品組成物とする場合、あらかじめ食品に添加してもよく、摂取時に食品に添加してもよい。食品としては、例えば、ヨーグルト、ゼリー、調整乳等が挙げられる。また、栄養補助食品や機能性食品として、単独で摂取することもできる。

本発明の組成物は、ルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分、並びに乳酸菌又はビフィズス菌を含有することにより、乳酸菌又はビフィズス菌の機能を高めることができる。本発明の組成物の機能として、ドライアイ治療作用、ドライアイ予防作用、眼の感染症予防作用、眼の恒常性維持作用、ストレス軽減作用、抗酸化作用、アンチエイジング作用等が挙げられる。

ドライアイは、涙腺における涙液の分泌量の減少や、涙液中の脂質やムチン質の異常による水分量の蒸発促進によって、涙液の量が減ることにより引き起こされる。涙液の減少によって、角膜表面及び結膜表面の慢性的な刺激や炎症が生じ、患者の生活の質の低下につながる。本発明の組成物を摂取することにより、ドライアイにより低下した涙液分泌量を、回復させることができる。従来、ドライアイの治療のためには、主に人口涙液や合成化合物を点眼投与して、涙液を補充する又は涙液層を安定化させる方法が採用されているが、本発明の組成物は経口投与によりドライアイの治療及び予防を行うことが可能であり、投与時の患者への負担を軽減することが可能である。

組成物をドライアイ予防用途に使用する場合には、組成物を長期間投与することにより、ドライアイを予防することができるが、１日間の投与でもドライアイを予防することができる。

組成物をドライアイ治療用途に使用する場合には、ドライアイ発症後、１日間以上投与することにより、ドライアイを治療することができる。

実施例において、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。

（実施例１）乳酸菌含有組成物
表１に記載の成分からなる乳酸菌含有組成物を製造した。なお、各成分は従来公知のものを用いることができる。

以下に示す被験動物、ストレス負荷処置方法、涙液分泌量測定方法、統計解析方法を用いて、試験例１〜８を実施した。

（被験動物）
被験動物として、照明１２時間、室温２３±５℃、相対湿度６０±１０％の環境を維持した飼育室にて１週間馴化させた、７〜８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いた。

（ストレス負荷処置方法）
被験動物を、１日１回、継続４時間、呼吸/排泄可能な処置を施したポリプロピレン製遠沈管（容量約６０ｍＬ）内に拘束し、拘束中被験動物の顔面に送風（風速０．５〜１．０ｍ／Ｓ）することによりストレス負荷処置を行った。ストレス負荷処置時間以外は、ケージ内で飼料（固型飼料、マウス・ラット・ハムスター用飼料 ＭＦ、製造元オリエンタル酵母工業株式会社）と飲水（水道水）は自由摂取とした。試験は１群５〜６匹で実施した。

（涙液分泌量測定方法）
ストレス負荷処置前に、被験動物の左右の外眼角に、それぞれ綿糸（ゾーンクイック（商標登録）、昭和薬品化工株式会社）を１５秒挿入し、綿糸が涙液の浸透により褐色変色した長さを、０．５ｍｍの精度で測定した。左右眼の平均値を個体の涙液分泌量とした。

（統計解析方法）
データの統計解析には、統計ソフトであるＳＡＳ（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．製）及びＳｔａｔＬｉｇｈｔ（ユックムス株式会社製）を用いた。対照群を対照としたｔ−ｔｅｓｔ又はＤｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔ、及び処置前群を対照としたｐａｉｒｅｄ ｔ−ｔｅｓｔを実施した。いずれも有意水準は両側５％とし、Ｐ値が０．０５未満を有意とみなした。また、平均値及び標準偏差を求めた。

［試験例１］予防効果試験１
実施例１の組成物を、ストレス負荷処置前日とストレス負荷処置期間中１０ｍｇ／ｋｇ若しくは５０ｍｇ／ｋｇの量で、又はストレス負荷処置前５日間とストレス負荷処置期間中１０ｍｇ／ｋｇの量で１日１回経口投与した被験動物、及び対照群として実施例１の組成物を投与しなかった被験動物に、ストレス負荷処置を３日間実施した。各日の被験動物の涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図１に示した。実施例１の組成物を投与しなかった被験動物は、ストレス負荷処置により涙液分泌量が大幅に低下した。実施例１の組成物を前投与することにより、涙液分泌量の低下を予防できた。実施例１の組成物を短期間に多く摂取（前日５０ｍｇ／ｋｇ）するか、摂取量は少なくても長期間摂取（５日間１０ｍｇ／ｋｇ）する程、涙液分泌量の低下を抑えることができ、ドライアイ予防効果が高いことが判明した。

［試験例２］予防効果試験２
被験動物に実施例１の組成物を、ストレス負荷処置５日前からストレス負荷処置開始５日後まで、毎日１０ｍｇ／ｋｇを１日１回経口投与した。被験動物にストレス負荷処置を７日間実施した。各日の被験動物涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図２に示した。実施例１の組成物を投与しなかった被験動物は、ストレス負荷処置により涙液分泌量が大幅に低下した。実施例１の組成物を投与した被験動物では、投与期間中は涙液分泌量の低下を抑制できたが、投与を中止すると涙液分泌量は低下した。この結果から、実施例１の組成物を長期間継続して摂取することにより、特に高いドライアイ予防効果を達成できることが判明した。

［試験例３］予防効果試験３
被験動物に、実施例１の組成物を０．０６％の濃度となるよう混合した飼料を、ストレス負荷処置５日又は１４日前からストレス負荷処置終了まで自由摂取させた。被験動物にストレス負荷処置を５日間実施した。各日の涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図３に示した。実施例１の組成物を含まない飼料を摂取した被験動物は、ストレス負荷処置により涙液分泌量が大幅に低下した。
実施例１の組成物を混合した飼料を摂取した被験動物では、摂取期間が長い程、涙液分泌量の低下を抑制できることが判明した。この結果から、実施例１の組成物を食事として長期間継続して摂取することにより、特に高いドライアイ予防効果を達成できることが判明した。

［試験例４］治療効果試験１
ストレス負荷処置後涙液分泌量の低下が確認された被験動物に、実施例１の組成物を５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇの量で、１日１回、９日間経口投与した。対照群の被験動物には、実施例１の組成物を投与しなかった。実施例１の組成物の投与期間中ストレス負荷処置を実施した。各日の被験動物の涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図４に示した。実施例１の組成物を投与しなかった被験動物では、涙液分泌量は全く回復しなかった。実施例１の組成物を投与した被験動物では、投与量及び投与期間に応じて、涙液分泌量が回復した。この結果から、ドライアイを発症した後、実施例１の組成物を摂取することでドライアイ治療効果を達成できることが判明した。

［試験例５］治療効果試験２
ストレス負荷処置後、涙液分泌量の低下が確認された被験動物に、実施例１の組成物を５０ｍｇ／ｋｇの量で、１日１回、９日間経口投与した。投与期間中及び投与終了後３日間ストレス負荷処置を実施した。各日の被験動物の涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図５に示した。ストレス負荷処置により低下していた被験動物の涙液分泌量は、実施例１の組成物の経口投与を開始すると回復に転じ、実施例１の組成物の経口投与を継続すればするほど回復が進み、ストレス負荷処置前の値に近づいた。その後、実施例１の組成物の経口投与を中止すると、被験動物の涙液分泌量は再び低下した。この結果から、実施例１の組成物は、継続して摂取することにより、特に高いドライアイ治療効果を達成できることが判明した。

（比較例１）
乳酸菌のドライアイ予防効果を明らかにするために、比較例１として、表１に記載された成分のうち乳酸菌のみを含まない組成物を製造した。

［試験例６］予防効果試験４
実施例１の組成物又は比較例１の組成物を、被験動物に、ストレス負荷処置前日に５０ｍｇ／ｋｇの量で単回経口投与した。対照群の被験動物にはストレス負荷処置前日に本発明の組成物を投与しなかった。ストレス負荷処置前日、ストレス負荷処置直前及びストレス負荷処置翌日に、被験動物の涙液分泌量を測定した。涙液分泌量について、統計解析を行った。

結果を図６に示した。実施例１の組成物を経口投与しなかった被験動物は、ストレス負荷処置により涙液分泌量が大幅に低下した。比較例１の組成物を経口投与した被験動物も、ストレス負荷処置により涙液分泌量が低下した。実施例１の組成物を経口投与した被験動物は、ストレス負荷処置による涙液分泌量の低下はほとんどなかった。この結果から、実施例１の組成物中に乳酸菌を含有することがドライアイ予防効果に重要であることが判明した。

［試験例７］治療効果試験３
長期ストレス負荷試験からの涙液分泌量回復（治療）効果試験を行った。被験動物にストレス負荷処置を連続３５日間実施した。ストレス負荷処置開始後２１日目から２８日目まで、被験動物に比較例１の組成物を１０ｍｇ／ｋｇ／単回経口投与した。その後、ストレス負荷処置開始後２９日目から３６日目までの１週間、実施例１の組成物を被験動物に１０ｍｇ／ｋｇ／単回経口投与した。各日の被験動物の涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図７に示した。ストレス負荷処置開始後２１日目から２８日目まで、比較例１の組成物を経口投与したマウスの涙液分泌量は、対照群と同様、ストレス負荷処置開始後１日目から３６日目まで低下したままであった。一方、ストレス負荷処置開始後２９日目から３６日目まで実施例１の組成物を投与した被験動物は、ストレス負荷処置開始後１日目以降低下していた涙液分泌量が、実施例１の組成物の投与を開始したストレス負荷処置開始後２９日目から徐々に回復し、ストレス負荷処置開始後３５日目にはストレス負荷処置開始前の涙液分泌量を超えるまでに回復した。この結果から、実施例１の組成物中に乳酸菌を含有することがドライアイ治療効果に重要であることが明らかとなった。

［試験例８］治療効果試験４
長期ストレス負荷処置試験からの涙液分泌量回復（治療）効果試験を行った。被験動物にストレス負荷処置を連続４０日間実施した。ストレス負荷処置開始後１３日目から２１日目まで、被験動物に実施例１の組成物を５０ｍｇ／ｋｇ／単回経口投与した。ストレス負荷処置開始後２２日目から２８日目まで休薬期間とし、その後、２９日目から４０日目まで、被験動物に実施例１の組成物を１０ｍｇ／ｋｇ／単回経口投与した。各日の被験動物の涙液分泌量を測定し、統計解析を行った。

結果を図８に示した。実施例１の組成物を投与しなかった被験動物は、ストレス負荷処置開始後１日目から涙液分泌量が低下し、その後、涙液分泌量は全く回復しなかった。一方、実施例１の組成物を５０ｍｇ／ｋｇ／単回経口投与したマウスでは、ストレス負荷処置開始後１日目以降低下していた涙液分泌量が、ストレス負荷処置開始後１４日目から２１日目まで涙液分泌量が徐々に回復した。休薬期間中のストレス負荷処置開始後２２日目から２８日目までは涙液分泌量は低下傾向を示したが、実施例１の組成物を１０ｍｇ／ｋｇ／単回経口投与した２９日目から４０日目は涙液分泌量が徐々に回復した。この結果から、実施例１の組成物中に乳酸菌を含有することがドライアイ治療効果に重要であることが判明した。

（実施例２）乳酸菌含有組成物のヒトに対する効果
（乳酸菌含有組成物およびその投与方法）
ドライアイ自覚症状のある２２歳から５９歳までの男女２０名に、表２に記載の成分を含有するソフトカプセルを、１回２粒、１日１回夕食後に、８週間摂取させた。

（検査方法）
ソフトカプセルの摂取前、摂取後の計２回、ドライアイの検査を行った。検査は、すべての眼で、眼症状３項目（シルマー試験第１法、ＢＵＴ検査、フルオレセイン染色による角結膜上皮障害スコア）を実施し、さらに自覚症状アンケート２種（ドライアイＱＯＬ問診票（ＤＥＱＳ）、１１項目の眼に関する自覚症状についてのＶＡＳ評価）を行った。シルマー試験第１法、ＢＵＴ検査、フルオレセイン染色による角結膜上皮障害スコアは、２００６年ドライアイ診断基準に従い検査を実施した。ＤＥＱＳは、ドライアイ研究会にて開発された問診票を用いた。

（結果・考察）
疼痛等により検査が受けられない項目があった２名を除く、１８名の結果を図９〜１２、および表３に示した。ソフトカプセル摂取後は、眼症状の検査結果が全項目で改善した。また、自覚症状アンケートにおいても、ソフトカプセル摂取後はスコアが改善された。これより、本発明の組成物が、ドライアイ症状の改善に効果を示すことが示唆された。

（実施例３）乳酸菌およびビフィズス菌の、ドライアイ治療又は予防効果
（被験動物）
被験動物として、照明１２時間、室温２３±５℃、相対湿度６０±１０％の環境を維持した飼育室にて１週間馴化させた、７〜８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いた。

（ストレス負荷処置方法）
被験動物を、１日１回、継続４時間、呼吸/排泄可能な処置を施したポリプロピレン製遠沈管（容量約６０ｍＬ）内に拘束し、拘束中被験動物の顔面に送風（風速０．５〜１．０ｍ／Ｓ）することによりストレス負荷処置を行った。ストレス負荷処置時間以外は、ケージ内で飼料（固型飼料、マウス・ラット・ハムスター用飼料 ＭＦ、製造元オリエンタル酵母工業株式会社）と飲水（水道水）は自由摂取とした。試験は１群５〜６匹で実施した。

（涙液分泌量測定方法）
ストレス負荷処置前に、被験動物の左右の外眼角に、それぞれ綿糸（ゾーンクイック（商標登録）、昭和薬品化工株式会社製）を１５秒挿入し、綿糸が涙液の浸透により褐色変色した長さを、０．５ｍｍの精度で測定した。左右眼の平均値を個体の涙液分泌量とした。

（乳酸菌およびビフィズス菌）
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＷＢ２０００株（細菌学上はＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＷＢ２０００株）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＪＣＭ５８０４株、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＷＢ２１株、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＷＢ２００１株、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ ＴＪ５１５株、又はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＷＢ１００１株の凍結乾燥末を、個別に、蒸留水０．５ｍＬに０．３４ｍｇ含むように懸濁した。ストレス負荷処置前日とストレス負荷処置期間中、前記懸濁液を凍結乾燥末の菌１７ｍｇ／ｋｇの量で１日１回経口投与した被験動物、及び対照群として上記乳酸菌及びビフィズス菌を投与しなかった被験動物に、ストレス負荷処置を４日間実施した。ストレス負荷処置前日、ストレス負荷処置２日目及びストレス負荷処置４日目における被験動物の涙液分泌量を測定した。

（結果・考察）
結果を図１３に示した。対照群の被験動物は、ストレス負荷処置により涙液分泌量が大幅に低下した。上記乳酸菌又はビフィズス菌を前投与することにより、涙液分泌量の低下を抑えることができ、ドライアイ予防効果を示した。特にＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＷＢ２０００株は、他の菌と比較して特に涙液分泌量の低下を抑えることができるため、高いドライアイ予防効果が得られることが判明した。

Claims (6)

1. ルテイン、魚油、ラクトフェリン、ビタミン、γアミノ酪酸及び亜鉛からなる群から選択される１以上の成分、並びにＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の乳酸菌又はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属のビフィズス菌を含有するドライアイ治療用又はドライアイ予防用経口組成物（ただし、副交感神経を亢進させることによるドライアイ治療用又はドライアイ予防用の組成物を除く）。
2. ルテイン、魚油、並びに前記乳酸菌又はビフィズス菌を含有する請求項１に記載の経口組成物。
3. さらにラクトフェリンを含有する請求項２に記載の経口組成物。
4. 医薬組成物である請求項１〜３のいずれかに記載の経口組成物。
5. 食品組成物である請求項１〜３のいずれかに記載の経口組成物。
6. Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、又はＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の微生物を含有する、ドライアイ治療用又はドライアイ予防用の経口組成物（ただし、副交感神経を亢進させることによるドライアイ治療用又はドライアイ予防用の組成物を除く）。
   
   

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