JP6567781B2

JP6567781B2 - ウイルス感染症の治療用チアゾリド化合物

Info

Publication number: JP6567781B2
Application number: JP2018550728A
Authority: JP
Inventors: ロッシニョルジャン−フランソワ; ガブリエラサントロマリア
Original assignee: ロマークラボラトリーズ，リミティドカンパニー
Priority date: 2016-03-31
Filing date: 2017-03-30
Publication date: 2019-08-28
Anticipated expiration: 2037-03-30
Also published as: EA202091849A1; MX2021004464A; KR20180124970A; CY1123221T1; SG11201808453UA; EP3677282A1; EA036505B1; CA3019326C; IL262018A; AU2019236602A1; HK1250945A1; DK3436074T3; CA3113354A1; ZA201806644B; PT3436074T; AU2017244145B2; KR20180125552A; IL280327A; HRP20201261T1; WO2017173056A1

Description

優先権
本願は、２０１６年３月３１日に出願された、その内容を参照により本明細書に援用される、米国特許仮出願第６２／３１６，４６３号の優先権を主張する。

本願は、概して、チアゾリド化合物に関し、さらに詳細には、あるウイルス感染症の治療でのそれらの使用に関する。

パラミクソウイルス科に属するウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療する方法は、それを必要とする対象に、ニタゾキサニド若しくはチゾキサニドの少なくとも一方又はその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物の有効量を投与することを含み、有効量とは、対象においてウイルスのＦ糖タンパク質の成熟を阻止する量である。

ピコナウイルス科に属するウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療する方法は、それを必要とする対象に、ニタゾキサニド若しくはチゾキサニドの少なくとも一方又はその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物の治療有効量を投与することを含む。

図１は、ニタゾキサニド及びプラセボで処置された呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染した患者のカプラン・マイヤー生存率分析チャートである。ＴＴＳＡＬＬは、症状軽減に要する時間（時）を表す。このプロットは、ニタゾキサニドでの治療が中央値で症状の期間中７６時間の軽減を伴ったことを示す。図２は、病気の唯一の原因として特定されたエンテロウイルス属（エンテロウイルス及びライノウイルスを含む）に属するウイルスに感染し、ａ）ニタゾキサニド；ｂ）ニタゾキサニドとオセルタミビル；ｃ）オセルタミビル及びｄ）プラセボで処置された患者についてのカプラン・マイヤー生存率チャートである。図３は、病気の唯一の原因として特定されたエンテロウイルス属（エンテロウイルス及びライノウイルスを含む）に属するウイルスに感染し、ａ）ニタゾキサニド自体又はニタゾキサニドとオセルタミビルとの組み合わせ、及びｂ）オセルタミビル自体又はプラセボで処置した患者のカプラン・マイヤー生存率チャートである。図４は、センダイウイルスに感染したＡＧＭＫ細胞におけるニタゾキサニドの抗ウイルス活性を示す。特に、図４Ａは、ニタゾキサニド濃度の関数としてのセンダイウイルスの阻害を示すプロットである。図４Ｂは、対照、未処置のセンダイウイルス及びニタゾキサニドで処置したセンダイウイルスの写真である。図５は、異なる感染多重度及び異なる種類型についてニタゾキサニド濃度の関数としてのセンダイウイルス（ＳｅＶ）の阻害プロットである。図５中のデータは、ＳｅＶに感染した細胞におけるニタゾキサニドの抗ウイルス活性が、感染多重度及び細胞型とは無関係であることを示す。図６は、ＳｅＶタンパク質合成に対するニタゾキサニドの効果を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥデータである。図７は、ＳｅＶ−Ｆタンパク質合成に対するニタゾキサニドの効果を表すＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロットデータである。図８は、ニタゾキサニド（ＮＴＺ）で処理したＡＧＭＫタンパク質抽出物の不溶性画分中のＳｅＶ−Ｆタンパク質の未成熟形態の検出を示すウェスタンブロットデータである。図９は、ニタゾキサニド（ＮＴＺ）で処理したＡＧＭＫタンパク質抽出物の不溶性画分中のＳｅＶ−Ｆタンパク質の未成熟形態の検出を示すウェスタンブロットデータである。図１０は、ニタゾキサニドがヘンドラウイルス（ＨｅＶ）Ｆ糖タンパク質の細胞表面への輸送を阻害する証拠を提供する写真である。図１１Ａ〜Ｃは、ＡＧＭＫ細胞におけるニタゾキサニドによるＳｅＶパラインフルエンザウイルスの阻害を示す。ＮＴＺは、一段階ウイルス成長条件下（Ａ）および多段階ウイルス成長条件下（Ｂ）でＳｅＶ複製を阻害する。ＳｅＶに感染したサル腎臓ＡＧＭＫ細胞を異なる濃度のＮＴＺ又はビヒクルでウイルス吸着期間直後に処理した。ウイルス収率（○）はヘマグルチニン滴定（右のパネル）及びプラークアッセイ（左のパネル）により感染後（ｐ．ｉ．）２４時間で決定した。ＨＡ単位（ＨＡＵ）／ｍｌ又はＰＦＵ／ｍｌで表されたウイルス収率は、４連のサンプルの平均±ＳＤを表す。^＊＝ｐ＜０．０５；^＊＊＝ｐ＜０．０１。偽感染細胞の細胞生存率（△）をＭＴＴアッセイによって決定した。（Ｃ）ＡＧＭＫ細胞におけるニタゾキサニドによるＳｅＶパラインフルエンザウイルスの阻害を示す。感染後２４時間でのＳｅＶに感染したＡＧＭＫ細胞におけるＮＴＺ（１０μｇ／ｍｌ）の細胞保護効果。ＮＴＺは、宿主細胞にとって無毒であった濃度でのＳｅＶ複製の阻害において有効であった。ＮＴＺは、感染細胞において実際に細胞保護的であった。実際、ＳｅＶ感染（３ＰＦＵ／細胞）は概して、細胞形状及びサイズの変化、並びに接着の喪失を引き起こす強力な細胞変性効果によって特徴づけられる（ＰａｎｅｌＣ、ＳｅＶ）。ＮＴＺ治療（１０μｇ／ｍｌ）はさらに、ウイルス子孫産生を阻害することに加えて、ＡＧＭＫ細胞をウイルス誘発性損傷から保護することも見いだされた（ＰａｎｅｌＣ、ＳｅＶ＋ＮＴＺ）。図１１Ｃにおける情報は、図４Ａ〜Ｂにおける情報と類似している。図１２は、ヒト肺胞Ａ５４９細胞におけるニタゾキサニドによるＳｅＶパラインフルエンザウイルスの阻害を示すデータを提示する。一段階（３ＰＦＵ／細胞）及び多段階（０．０１ＰＦＵ／細胞）ウイルス成長条件下でＳｅＶに感染したヒト肺胞ＩＩ型様Ａ５４９細胞を異なる濃度のＮＴＺ又はビヒクルでウイルス吸着期間の直後に処理した。ウイルス収率（〇）は、感染後２４時間（一段階）又は４８時間（多段階）でＨＡ滴定によって測定した。未処置対照のパーセントとして表されたウイルス収率は４連のサンプルの平均±ＳＤを表す。^＊＝ｐ＜０．０５；^＊＊＝ｐ＜０．０１。ＮＴＺ抗ウイルス活性は、細胞型とは無関係であった。ＮＴＺは実際に、ＳｅＶに感染したヒト肺胞ＩＩ型様Ａ５４９細胞においても有効であった。図１２中のデータは、図５中のデータと類似している。図１３Ａ〜Ｂは、ＳｅＶタンパク質合成に対するニタゾキサニドの効果を示す。（Ａ）ウイルス吸着後に１０μｇ／ｍｌのＮＴＺ、２．５μｇ／ｍｌのツニカマイシン（ＴＭ）又はビヒクル（Ｃ）で処置された偽感染（Ｍｏｃｋ）又はＳｅＶに感染した（ＳｅＶ）ＡＧＭＫ細胞由来の［^３５Ｓ］Ｍｅｔ／Ｃｙｓで標識されたタンパク質（長パルス、感染後６時間で開始して１８時間）のオートラジオグラフィ。ウイルスタンパク質を表示する。（Ｂ）図１３Ａで処理した偽感染又はＳｅＶに感染した細胞由来の感染後２４時間での［^３５Ｓ］Ｍｅｔ／Ｃｙｓで標識されたタンパク質（短パルス、１時間）のオートラジオグラフィ。等しい量の放射活性（右のパネル、ｃｐｍ）又は等しい量のタンパク質（左のパネル、ｍｌ）を含むサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィのために処理した。主なＳｅＶタンパク質は、長い（１８時間））［^３５Ｓ］Ｍｅｔ／Ｃｙｓ標識パルスの後に感染後２４時間で未処置細胞において大量に合成されることが判明した；およそ６５〜７０ｋＤａの分子量バンドの消失を除いて、ＳｅＶタンパク質合成の大きな変化は、ＮＴＺで処置された細胞では検出されず、その後、融合タンパク質前駆体Ｆ_０の成熟アイソフォームとして特定された（図１４を参照）。図１３Ａ〜Ｂのデータは図７のデータと類似している。図１４Ａ〜Ｂは、ＳｅＶ融合タンパク質に対するニタゾキサニドの影響を示す。（Ａ）ＳｅＶ−Ｆタンパク質のレベルを、１０μｇ／ｍｌのＮＴＺ、２．５μｇ／ｍｌのツニカマイシン（ＴＭ）又はビヒクル（Ｃ）で処理されたＳｅＶに感染したＡＧＭＫ細胞において感染後の様々な時点でモノクローナルＳｅＶ−Ｆ抗体を使用したウェスタンブロット分析によって検出した。（Ｂ）は、ＳｅＶ融合タンパク質に対するニタゾキサニドの影響を示す。ウイルス吸着後に１０μｇ／ｍｌのＮＴＺ又はビヒクル（Ｃ）で処理された偽感染（Ｍｏｃｋ）又はＳｅＶに感染したＡＧＭＫ細胞由来の［^３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓで標識したタンパク質（感染後様々な時間での１時間パルス）のオートラジオグラフィ。ウイルスＮＰ及びＦタンパク質を表示する。偽感染（Ｍｏｃｋ）対照を示す。同じサンプル中のα−チューブリンのレベルをローディング対照として示す。結果は、ＮＴＺで処理された細胞中にＳｅＶ融合タンパク質が存在しないことを裏付ける。同様の結果がＴＭで処理された細胞で見られた。図１４Ａ〜Ｂは、のデータは、図８のデータと類似している。図１５Ａ〜Ｂは、ニタゾキサニドがＳｅＶ−Ｆタンパク質不溶化を引き起こすことを示す。プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（Ｂｔｚ、２５ｎＭ）、又はオートファジー阻害剤クロロキン（ＣＱ、２０又は４０μＭ）の存在下（＋）或いは不在下（−）で１０μｇ／ｍｌのＮＴＺ、２．５μｇ／ｍｌのツニカマイシン（ＴＭ）又はビヒクル（Ｃ）で処理した偽感染又はＳｅＶに感染したＡＧＭＫ細胞においてＳｅＶ−Ｆ及びβ−アクチンについてのウェスタンブロット分析。（Ａ）緩衝液Ｂで抽出された細胞可溶化物の可溶性フラクション（可溶性）又はＬａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液で抽出された平行サンプルからの全細胞可溶化物（全）を表示する。（Ｂ）表示されたように処理したＡＧＭＫ細胞から緩衝液−Ｂで抽出された全細胞抽出物の可溶性及び不溶性画分のＳｅＶ−Ｆ及びβ−アクチンの免疫ブロット。不溶性画分を材料及び方法で記載されているように処理した。Ｆｐは、ＮＴＺで処理した細胞においてより迅速に遊走するＦ形態を意味する。ＮＴＺで処理された細胞におけるＦタンパク質レベルの低下は、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ又はオートファジー阻害剤クロロキンによって防止されず、プロテアソーム又はオートファジーが介在する分解とは無関係の効果を意味し；その代わりに、Ｆ−タンパク質はＮＴＺで処理された細胞において不溶性状態で見いだされ、タンパク質プロセシング／成熟における変化は、不溶性状態で存在するＦ−タンパク質凝集物の形成に至る可能性があったことを意味する。図１５Ａ〜Ｂのデータは図９のデータと類似している。図１６は、ニタゾキサニドで処理された細胞における大きなＳｅＶ−Ｆタンパク質凝集物の存在の証拠を提供する。抗カルネキシン（ＣＮＸ、緑）及び抗ＳｅＶ−Ｆ（赤）抗体で標識した、ＮＴＺ（１０μｇ／ｍｌ）又はビヒクルで２４時間処理した偽感染（Ｍｏｃｋ）及びＳｅＶに感染したＡＧＭＫ細胞の免疫共焦点顕微鏡法（Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｆｏｃａｌ−ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）。核をＤＡＰＩ（青）で染色する。Olympus Fluoview FV-1000共焦点レーザー走査システムで画像を取得した。３つの蛍光色素（ＭＥＲＧＥ）及び拡大画像のオーバーレイを示す（バー、７μｍ）。免疫共焦点顕微鏡研究は、ＮＴＺで処理された細胞のＥＲにおける大きなＦ−タンパク質凝集物の存在を裏付ける。図１７は、ニタゾキサニドが細胞表面へのＳｅＶ−Ｆ糖タンパク質輸送を抑制することを示す。ＳｅＶ−Ｆ細胞膜糖タンパク質（赤）のレベルを、１０μｇ／ｍｌのＮＴＺ又はビヒクル（ＳｅＶ）で処理したＳｅＶに感染したＡＧＭＫ細胞において共焦点免疫蛍光顕微鏡によって感染後２４時間で検出した。偽感染（Ｍｏｃｋ）細胞を対照として示す。核をＨｏｅｃｈｓｔ（青）で染色する。画像をOlympus Fluoview FV-1000共焦点レーザー走査システムで取得した。２つの蛍光色素のオーバーレイを示す（バー＝１０μｍ）。Ｆ−タンパク質の存在は、ＮＴＺで処理された細胞の宿主細胞表面上で検出できず、Ｆタンパク質プロセシング／成熟における変更が細胞膜へのその輸送を防止することを裏付ける。図１８Ａ〜Ｂは、ニタゾキサニドがヘンドラウイルス（ＨｅＶ）及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質不溶化を引き起こすことを示す。Ａ．材料及び方法で記載されているようなＨｅＶ−Ｆタンパク質を発現するＨｅＶ−ＦＯＲＦＣ−Ｆｌａｇタグ構築物で偽トランスフェクト又はトランスフェクトし、５μｇ／ｍｌのＮＴＺ（Ｃ＋）、２．５μｇ／ｍｌのツニカマイシン（ＴＭ）又はビヒクル（Ｃ−）で処理した、ＨｅＬａ細胞のＨｅＶ−Ｆ及びα−チューブリンのウェスタンブロット分析。Ｂ．材料及び方法で記載されているようにして、ＲＳＶ−Ｆタンパク質を発現するＲＳＶ−ＦＯＲＦＣ−Ｆｌａｇタグ構築物で偽トランスフェクト又はトランスフェクトされ、５μｇ／ｍｌのＮＴＺ（Ｃ＋）、２．５μｇ／ｍｌのツニカマイシン（ＴＭ）又はビヒクル（Ｃ−）で処理されたＨｅＬａ細胞のＲＳＶ−Ｆ及びα−チューブリンのウェスタンブロット分析。Ａ，Ｂ．材料及び方法で記載されているような、緩衝液−Ｂで抽出された細胞可溶化物の可溶性フラクション（可溶性）又はＬａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液（全）で抽出された平行サンプル由来の全細胞可溶化物を表示する。ＨｅＶ−Ｆ及びＲＳＶ−Ｆタンパク質は、抗ＦＬＡＧ抗体を使用して検出した。Ｆｐは、ＴＭで処理された細胞においてより急速に遊走するＦ形態を意味する。ＨｅＶ及びＲＳＶＦ−タンパク質は、主に、ＮＴＺで処理された細胞において不溶性状態で検出され、ＳｅＶＦタンパク質と同様に、タンパク質プロセシング／成熟における変更が不溶性状態で存在するＦ−タンパク質凝集物の形成をもたらし得ることを意味する。図１９Ａ〜Ｂは、ニタゾキサニドが細胞表面へのＨｅＶ−Ｆ及びＲＳＶ−Ｆ糖タンパク質輸送を抑制することを示す。Ａ．ＨｅＶ−Ｆ細胞膜糖タンパク質のレベル（赤）は、材料及び方法で記載されているように、ＨｅＶ−Ｆタンパク質を発現するＨｅＶ−ＦＯＲＦＣ−Ｆｌａｇタグ構築物で偽トランスフェクト又はトランスフェクトされ、５μｇ／ｍｌのＮＴＺ又はビヒクルで処理された、非透過処理ＨｅＬａ細胞において共焦点免疫蛍光顕微鏡によって感染後２４時間で検出された。Ｂ．ＲＳＶ−Ｆ細胞膜糖タンパク質のレベル（赤）は、材料及び方法で記載されているように、ＲＳＶ−Ｆタンパク質を発現するＲＳＶ−ＦＯＲＦＣ−Ｆｌａｇタグ構築物で偽トランスフェクト又はトランスフェクトされ、５μｇ／ｍｌのＮＴＺ又はビヒクルで処理された、非透過処理ＨｅＬａ細胞において共焦点免疫蛍光顕微鏡によって感染後２４時間で検出された。Ａ，Ｂ．Ｆタンパク質は、抗ＦＬＡＧ抗体（赤）を用いて検出された。核をＨｏｅｃｈｓｔ（青）で染色する。偽トランスフェクトされた（Ｍｏｃｋ）細胞を対照として示す。画像をOlympus Fluoview FV-1000共焦点レーザー走査システムで取得した。２つの蛍光画像のオーバーレイを示す。Ｆ−タンパク質の存在は、ＮＴＺで処理された細胞の宿主細胞表面上でより低いレベルで検出され、ＳｅＶＦタンパク質と同様に、ＨｅＶ及びＲＳＶＦタンパク質プロセシング／成熟における変更が細胞膜へのその輸送を防止することを意味する。ＲＳＶ感染の場合、ニタゾキサニドは、非細胞傷害性用量でＨｅＬａ細胞においてＲＳＶ−Ａ２に対する抗ウイルス活性を保有し、ＩＣ_５０は０．３μｇ／ｍｌであり、ＩＣ_９０は０．８μｇ／ｍｌであることが見いだされた（ＲＳＶ感染の詳細については、材料及び方法を参照）。図１９Ａ〜Ｂのデータは図１０のデータと類似している。

関連文献
すべて参照により本明細書に援用される以下の文献は、本開示の理解に有用であり得る：米国特許第９，３５１，９３７号明細書、同第９，１２６，９９２号明細書、同第９，１０７，９１３号明細書、同第９，０２３，８７７号明細書、同第８，８９５，７５２号明細書、同第８，８４６，７２７号明細書、同第８，７７２，５０２号明細書、同第８，６３３，２３０号明細書、同第８，５２４，２７８；８，１２４，６３２号明細書、同第７，６４５，７８３号明細書、同第７，５５０，４９３号明細書、同第７，２８５，５６７号明細書、同第６，１１７，８９４号明細書、同第６，０２０，３５３号明細書、同第５，９６８，９６１号明細書、同第５，９６５，５９０号明細書、同第５，９３５，５９１号明細書、同第５，８８６，０１３号明細書、同第５，８５９，０３８号明細書、同第５，８５６，３４８号明細書、同第５，３８７，５９８号明細書、米国特許出願公開第２０１５／０２５７６８号明細書、同第２０１４／００６５２１５号明細書、同第２０１２／０２９４８３１号明細書、同第２０１６−０２４３０８７号明細書、国際公開第２０１６０７７４２０号パンフレット；J. Biol. Chem., 2009 Oct 23; 284(43): 29798-29808; Antiviral Research, 110(2014): 94-103; Biochim Biophys Acta., 2003 Jul 11;1614(1):73-84.
用語の定義
特別の定めのない限り、「ａ」又は「ａｎ」は「１以上」を意味する。

本明細書中で用いられる場合、「ウイルス感染症」という語は、ウイルスが正常細胞に侵入し、細胞の増殖機序を使用して増加又は複製し、最終的に細胞を溶解し、結果として細胞死、ウイルス粒子の放出及び新たに産生された子孫ウイルスによる他の細胞の感染をもたらす病的状態を表す。ある特定のウイルスによる潜伏感染もウイルス感染症の可能な結果である。急性ウイルス感染は、通常、疾患の急激な発生、症状の比較的短い期間、及び数日〜数週間の間の消散によって特徴づけられる。それは通常、感染性ビリオンの早期産生及び宿主免疫系による感染の排除を伴う。急性ウイルス感染症は、毎年数百万人を対象とする疾患の伝染病の原因となる。ワクチンが利用可能でないか又は使用されない場合、急性感染は制御するのが困難であり得る。なぜなら、感染した固体は通常、病気になる前に感染性であるからである。このために、大規模な集団及び、大学、養護施設、軍用基地又は船舶などの人口密集地域で急性感染を制御することは非常に困難となる。子ども、高齢者及び免疫が低下した個体はこれらの通常自己限定性の感染由来の合併症によりかかりやすい。

「ウイルスに起因又は関連する疾患又は状態ウイルス」という用語は、ウイルスに起因するウイルス感染症及び／又はウイルス感染症に関連し得る１以上のその症状を指す。

本明細書中で用いられる場合、「ウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療及び／又は予防する」という語は、ウイルスの複製を阻害すること、ウイルス感染を阻害すること、ウイルスがその宿主において確立するのを防止すること、ウイルスに起因する疾患の症状又は進行を改善又は軽減することのうちの少なくとも１つを含み得る。治療は、ウイルス負荷の軽減、疾患に関連する死亡率及び／又は罹患率の低下、疾患の進行の減少又は疾患期間の短縮のうちの少なくとも１つがある場合は治療的とみなされる。ある実施形態では、「ウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療及び／又は予防する」ことは、インフルエンザウイルスに起因又は関連する疾患又は状態に冒され、チアゾリド化合物などの活性剤で治療された対象において、疾患又は状態に冒されているが活性剤で治療されていない対象と比較して生存率の増加を含み得る。ある実施形態では、「ウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療及び／又は予防する」とは活性剤の投与による、ウイルスに起因又は関連する疾患又は状態に冒されている対象におけるウイルス負荷の減少を含み得る。さらにいくつかの実施形態において、「ウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療及び／又は予防する」とは、ウイルスに起因する疾患の症状又は進行を改善又は軽減することを含み得る。
開示

本発明者らは、ピコナウイルス科及びパラミクソウイルス科に属するウイルスに対して有効であり得る、ある特定のチアゾリド化合物を見出した。

特に、そのような化合物は、ピコナウイルス科及びパラミクソウイルス科に属するウイルスに起因又は関連する疾患又は状態の治療又は予防に有用であり得る。

ピコナウイルス科
ピコナウイルス科は、（＋）ｓｓＲＮＡウイルス科である。ヒトをはじめとする脊椎動物は、ピコルナウイルスの自然の宿主としての役割を果たし得る。この科には現在５０種があり、２９属に分類される。ピコナウイルス科の属としては：ウシＡ型鼻炎ウイルス、ウシＢ型鼻炎ウイルス、ウマＡ型鼻炎ウイルス、口蹄疫ウイルスを含むアフトウイルス属；アクアマウイルスＡを含むアクアマウイルス属；アヒルＡ型肝炎ウイルスを含むアビヘパトウイルス（Ａｖｉｈｅｐａｔｏｖｉｒｕｓ）属；脳心筋炎ウイルス、チロウイルス（ｔｈｉｌｏｖｉｒｕｓ）、コサウイルス（Ｃｏｓａｖｉｒｕｓ）を含むカルジオウイルス属；カジシウイルス（ｃａｄｉｃｉｖｉｒｕｓ）Ａを含むジシピウイルス（Ｄｉｃｉｐｉｖｉｒｕｓ）属；エンテロウイルスＡ〜Ｊ及びライノウイルスＡ〜Ｃを含むエンテロウイルス属；ウマＢ型鼻炎ウイルスを含むエルボウイルス属；Ａ型肝炎ウイルスを含むヘパトウイルス属；アイチウイルス（Ａｉｃｈｉｖｉｒｕｓ）Ａ、アイチウイルスＢ及びアイチウイルスＣを含むコブウイルス（Ｋｏｂｕｖｉｒｕｓ）属；メレグリウイルス（Ｍｅｌｅｇｒｉｖｉｒｕｓ）Ａ、ヒトパレコウイルスを含むメグリウイルス（Ｍｅｇｒｉｖｉｒｕｓ）属；ユンガンウイルス（Ｌｊｕｎｇａｎ）；ファットヘッドミノウピコルナウイルスを含むピセウイルス（Ｐｉｓｃｅｖｉｒｕｓ）属；サリウイルス（Ｓａｌｉｖｉｒｕｓ）Ａを含むサリウイルス属；ブタサペロウイルス、サルサペロウイルス及びトリサペロウイルスを含むサペロウイルス属；セネカバレーウイルスを含むセネカウイルス属；ブタテッショウウイルスを含むテッショウウイルス属；トリ脳脊髄炎ウイルスを含むトレモウイルス（Ｔｒｅｍｏｖｉｒｕｓ）属が挙げられる。ピコナウイルス科に関連する疾患としては：エンテロウイルスに起因する麻痺（非ポリオ及びポリオ型）、夏風邪、髄膜炎、下痢；アフトウイルスに起因する口蹄疫（ウシ）；カルジオウイルスに起因する心筋炎；ライノウイルスに起因する感冒；及びヘパトウイルスに起因する肝炎が挙げられる。ピコナウイルス科に関連する疾患としては：エンテロウイルスに起因する麻痺（非ポリオ及びポリオ型）、夏風邪、髄膜炎、下痢；アフトウイルスに起因する口蹄疫（ウシ）；カルジオウイルスに起因する心筋炎；ライノウイルスに起因する感冒；及びヘパトウイルスに起因する肝炎が挙げられる。

エンテロウイルス属
エンテロウイルス属には以下の１２種が含まれる：エンテロウイルスＡ、エンテロウイルスＢ、エンテロウイルスＣ、エンテロウイルスＤ、エンテロウイルスＥ、エンテロウイルスＦ、エンテロウイルスＧ、エンテロウイルスＨ、エンテロウイルスＪ、ライノウイルスＡ、ライノウイルスＢ、ライノウイルスＣ。これらの１２種には以下の血清型がある：１）コクサッキーウイルス：ａ）エンテロウイルスＡ種で見出される血清型ＣＶ−Ａ２、ＣＶ−Ａ３、ＣＶ−Ａ４、ＣＶ−Ａ５、ＣＶ−Ａ６、ＣＶ−Ａ７、ＣＶ−Ａ８、ＣＶ−Ａ１０、ＣＶ−Ａ１２、ＣＶ−Ａ１４及びＣＶ−Ａ１６；ｂ）エンテロウイルスＢ種で見出される血清型ＣＶ−Ｂ１、ＣＶ−Ｂ２、ＣＶ−Ｂ３、ＣＶ−Ｂ４、ＣＶ−Ｂ５、ＣＶ−Ｂ６及びＣＶ−Ａ９；ｃ）エンテロウイルスＣ種で見出される血清型ＣＶ−Ａ１、ＣＶ−Ａ１１、ＣＶ−Ａ１３、ＣＶ−Ａ１７、ＣＶ−Ａ１９、ＣＶ−Ａ２０、ＣＶ−Ａ２１、ＣＶ−Ａ２２及びＣＶ−Ａ２４；２）エンテロウイルスＢ種で見出されるエコーウイルス血清型Ｅ−１、Ｅ−２、Ｅ−３、Ｅ−４、Ｅ−５、Ｅ−６、Ｅ−７、Ｅ−９、Ｅ−１１、Ｅ−１２、Ｅ−１３、Ｅ−１４、Ｅ−１５、Ｅ−１６、Ｅ−１７、Ｅ−１８、Ｅ−１９、Ｅ−２０、Ｅ−２１、Ｅ−２４、Ｅ−２５、Ｅ−２６、Ｅ−２７、Ｅ−２９、Ｅ−３０、Ｅ−３１、Ｅ−３２、及びＥ−３３；３）エンテロウイルスａ）エンテロウイルスＡ種で見出されるタイプＥＶ−Ａ７１、ＥＶ−Ａ７６、ＥＶ−Ａ８９、ＥＶ−Ａ９０、ＥＶ−Ａ９１、ＥＶ−Ａ９２、ＥＶ−Ａ１１４、ＥＶ−Ａ１１９、ＳＶ１９、ＳＶ４３、ＳＶ４６及びＢＡ１３；ｂ）エンテロウイルスＢ種で見出されるタイプＥＶ−Ｂ６９、ＥＶ−Ｂ７３、ＥＶ−Ｂ７４、ＥＶ−Ｂ７５、ＥＶ−Ｂ７７、ＥＶ−Ｂ７８、ＥＶ−Ｂ７９、ＥＶ−Ｂ８０、ＥＶ−Ｂ８１、ＥＶ−Ｂ８２、ＥＶ−Ｂ８３、ＥＶ−Ｂ８４、ＥＶ−Ｂ８５、ＥＶ−Ｂ８６、ＥＶ−Ｂ８７、ＥＶ−Ｂ８８、ＥＶ−Ｂ９３、ＥＶ−Ｂ９７、ＥＶ−Ｂ９８、ＥＶ−Ｂ１００、ＥＶ−Ｂ１０１、ＥＶ−Ｂ１０６、ＥＶ−Ｂ１０７、ＥＶ−Ｂ１１０及びＳＡ５；ｃ）エンテロウイルスＣ種で見出されるタイプＥＶ−Ｃ９５、ＥＶ−Ｃ９６、ＥＶ−Ｃ９９、ＥＶ−Ｃ１０２、ＥＶ−Ｃ１０４、ＥＶ−Ｃ１０５、ＥＶ−Ｃ１０９、ＥＶ−Ｃ１１６、ＥＶ−Ｃ１１７及びＥＶ−Ｃ１１８；ｄ）エンテロウイルスＤ種で見出されるタイプＥＶ−Ｄ６８、ＥＶ−Ｄ７０、ＥＶ−Ｄ９４、ＥＶ−Ｄ１１１及びＥＶ−Ｄ１２０；ｅ）エンテロウイルスＨ種で見出されるタイプ：ＥＶ−Ｈ１；ｆ）エンテロウイルスＪ種で見出される：ＳＶ６、ＥＶ−Ｊ１０３、ＥＶ−Ｊ１０８、ＥＶ−Ｊ１１２、ＥＶ−Ｊ１１５及びＥＶ−Ｊ１２１；４）ヒトライノウイルスａ）ライノウイルスＡ種で見出されるタイプＨＲＶ−Ａ１、ＨＲＶ−Ａ２、ＨＲＶ−Ａ７、ＨＲＶ−Ａ８、ＨＲＶ−Ａ９、ＨＲＶ−Ａ１０、ＨＲＶ−Ａ１１、ＨＲＶ−Ａ１２、ＨＲＶ−Ａ１３、ＨＲＶ−Ａ１５、ＨＲＶ−Ａ１６、ＨＲＶ−Ａ１８、ＨＲＶ−Ａ１９、ＨＲＶ−Ａ２０、ＨＲＶ−Ａ２１、ＨＲＶ−Ａ２２、ＨＲＶ−Ａ２３、ＨＲＶ−Ａ２４、ＨＲＶ−Ａ２５、ＨＲＶ−Ａ２８、ＨＲＶ−Ａ２９、ＨＲＶ−Ａ３０、ＨＲＶ−Ａ３１、ＨＲＶ−Ａ３２、ＨＲＶ−Ａ３３、ＨＲＶ−Ａ３４、ＨＲＶ−Ａ３６、ＨＲＶ−Ａ３８、ＨＲＶ−Ａ３９、ＨＲＶ−Ａ４０、ＨＲＶ−Ａ４１、ＨＲＶ−Ａ４３、ＨＲＶ−Ａ４４、ＨＲＶ−Ａ４５、ＨＲＶ−Ａ４６、ＨＲＶ−Ａ４７、ＨＲＶ−Ａ４９、ＨＲＶ−Ａ５０、ＨＲＶ−Ａ５１、ＨＲＶ−Ａ５３、ＨＲＶ−Ａ５４、ＨＲＶ−Ａ５５、ＨＲＶ−Ａ５６、ＨＲＶ−Ａ５７、ＨＲＶ−Ａ５８、ＨＲＶ−Ａ５９、ＨＲＶ−Ａ６０、ＨＲＶ−Ａ６１、ＨＲＶ−Ａ６２、ＨＲＶ−Ａ６３、ＨＲＶ−Ａ６４、ＨＲＶ−Ａ６５、ＨＲＶ−Ａ６６、ＨＲＶ−Ａ６７、ＨＲＶ−Ａ６８、ＨＲＶ−Ａ７１、ＨＲＶ−Ａ７３、ＨＲＶ−Ａ７４、ＨＲＶ−Ａ７５、ＨＲＶ−Ａ７６、ＨＲＶ−Ａ７７、ＨＲＶ−Ａ７８、ＨＲＶ−Ａ８０、ＨＲＶ−Ａ８１、ＨＲＶ−Ａ８２、ＨＲＶ−Ａ８５、ＨＲＶ−Ａ８８、ＨＲＶ−Ａ８９、ＨＲＶ−Ａ９０、ＨＲＶ−Ａ９４、ＨＲＶ−Ａ９５、ＨＲＶ−Ａ９６、ＨＲＶ−Ａ９８、ＨＲＶ−Ａ１００、ＨＲＶ−Ａ１０１、ＨＲＶ−Ａ１０２及びＨＲＶ−Ａ１０３；ｂ）ライノウイルスＢ種で見出されるタイプＨＲＶ−Ｂ３、ＨＲＶ−Ｂ４、ＨＲＶ−Ｂ５、ＨＲＶ−Ｂ６、ＨＲＶ−Ｂ１４、ＨＲＶ−Ｂ１７、ＨＲＶ−Ｂ２６、ＨＲＶ−Ｂ２７、ＨＲＶ−Ｂ３５、ＨＲＶ−Ｂ３７、ＨＲＶ−Ｂ４２、ＨＲＶ−Ｂ４８、ＨＲＶ−Ｂ５２、ＨＲＶ−Ｂ６９、ＨＲＶ−Ｂ７０、ＨＲＶ−Ｂ７２、ＨＲＶ−Ｂ７９、ＨＲＶ−Ｂ８３、ＨＲＶ−Ｂ８４、ＨＲＶ−Ｂ８６、ＨＲＶ−Ｂ９１、ＨＲＶ−Ｂ９２、ＨＲＶ−Ｂ９３、ＨＲＶ−Ｂ９７、及びＨＲＶ−Ｂ９９；ｃ）ライノウイルスＣ種で見出されるタイプＨＲＶ−Ｃ１、ＨＲＶ−Ｃ２、ＨＲＶ−Ｃ３、ＨＲＶ−Ｃ４、ＨＲＶ−Ｃ５、ＨＲＶ−Ｃ６、ＨＲＶ−Ｃ７、ＨＲＶ−Ｃ８、ＨＲＶ−Ｃ９、ＨＲＶ−Ｃ１０、ＨＲＶ−Ｃ１１、ＨＲＶ−Ｃ１２、ＨＲＶ−Ｃ１３、ＨＲＶ−Ｃ１４、ＨＲＶ−Ｃ１５、ＨＲＶ−Ｃ１６、ＨＲＶ−Ｃ１７、ＨＲＶ−Ｃ１８、ＨＲＶ−Ｃ１９、ＨＲＶ−Ｃ２０、ＨＲＶ−Ｃ２１、ＨＲＶ−Ｃ２２、ＨＲＶ−Ｃ２３、ＨＲＶ−Ｃ２４、ＨＲＶ−Ｃ２５、ＨＲＶ−Ｃ２６、ＨＲＶ−Ｃ２７、ＨＲＶ−Ｃ２８、ＨＲＶ−Ｃ２９、ＨＲＶ−Ｃ３０、ＨＲＶ−Ｃ３１、ＨＲＶ−Ｃ３２、ＨＲＶ−Ｃ３３、ＨＲＶ−Ｃ３４、ＨＲＶ−Ｃ３５、ＨＲＶ−Ｃ３６、ＨＲＶ−Ｃ３７、ＨＲＶ−Ｃ３８、ＨＲＶ−Ｃ３９、ＨＲＶ−Ｃ４０、ＨＲＶ−Ｃ４１、ＨＲＶ−Ｃ４２、ＨＲＶ−Ｃ４３、ＨＲＶ−Ｃ４４、ＨＲＶ−Ｃ４５、ＨＲＶ−Ｃ４６、ＨＲＶ−Ｃ４７、ＨＲＶ−Ｃ４８、ＨＲＶ−Ｃ４９、ＨＲＶ−Ｃ５０及びＨＲＶ−Ｃ５１；５）エンテロウイルスＣ種で見出されるポリオウイルス血清型ＰＶ−１、ＰＶ−２、及びＰＶ−３。

コクサッキーＡウイルスは主にヒト手足口病と関連する。コクサッキーＢウイルスは、「風邪」と類似した徴候及び症状を引き起こし得るが、これらのウイルスはまた、心筋炎（心臓の炎症）；心膜炎（心臓の内側を覆う嚢の炎症）；髄膜炎（脳及び脊髄の内側を覆う膜の炎症）；並びに膵炎（膵臓の炎症）を含むさらに重篤な疾患に至る可能性もある。エコーウイルスは、非特異性ウイルス感染症の多くの原因である。それは腸で主に見いだされ、神経障害を引き起こす可能性がある。コクサッキー及びエコーウイルスの通常の症状は、熱、軽度の発疹、及び軽度の上気道（ＵＲＴ）病である。

エンテロウイルス属に属するウイルスに起因する疾患としては、急性灰白髄炎；ポリ様症候群（ｐｏｌｙ−ｌｉｋｅｓｙｎｄｒｏｍｅ）；以下の症状：熱、筋肉痛、咽頭炎、胃腸障害／腹部不快感、及び頭痛；敗血性髄膜炎のうちの１つ以上を有し得る非特異性熱性疾患；以下の症状：胸部及び腹部における重度の発作性疼痛、熱、吐き気、頭痛、及び嘔吐の１つ以上によって特徴づけられ得るボルンホルム病又は流行性胸膜痛；以下の症状：熱、呼吸困難及び胸痛の１つ以上を有し得る心膜炎及び／又は心筋炎；急性出血性結膜炎；以下の症状：口腔中及び咽頭上の小水疱性皮疹、高熱、咽頭炎、不快感、嚥下障害、食欲不振、背痛、及び頭痛の１つ以上を伴う可能性があるヘルパンギーナ；手足口病が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

パラミクソウイルス科ウイルス科
パラミクソウイルス科は（−）ｓｓＲＮＡウイルス科である。ヒト、脊椎動物、及び鳥類は、パラミクソウイルスの自然の宿主としての機能を果たす。この科には現在３６種があり、１８属に分類される。パラミクソウイルス科に関連する疾患としては：麻疹、おたふく風邪、気道感染が挙げられる。パラミクソウイルス科は、２つの亜科、すなわちパラミクソウイルス亜科及びニューモウイルス亜科に分けられる。パラミクソウイルス亜科の属には以下のものが含まれる：タイセイヨウサケパラミクソウイルスを含むアクアパラミクソウイルス属；トリパラミクソウイルス１〜１２、ガチョウパラミクソウイルス及びニューカッスル病ウイルスを含むアブラウイルス属；フェルドランスパラミクソウイルスを含むフェルラウイルス（Ｆｅｒｌａｖｉｒｕｓ）属；ヘンドラウイルス、ニパウイルス及びシダーウイルス（Ｃｅｄａｒｖｉｒｕｓ）を含むヘニパウイルス属；イヌジステンパーウイルス、クジラ目麻しん（ｃａｔｅｃｅａｎｍｏｒｂｉｌｌｉｕｓ）ウイルス、麻疹ウイルス、小反芻獣疫ウイルス、アザラシジステンパーウイルス、牛疫ウイルスを含むモルビリウイルス属；センダイウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス１型及びヒトパラインフルエンザウイルス３型を含むレスピロウイルス属；おたふく風邪ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス２型及びヒトパラインフルエンザウイルス４型を含むルブラウイルス属；ツパイアパラミクソウイルス（ＴＰＭＶ）様ウイルス；トリメタニューモウイルス及びヒトメタニューモウイルスを含むメタニューモウイルス属；ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＨＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ヒツジ呼吸器合胞体ウイルス、ヤギ呼吸器合胞体ウイルス、マウスの肺炎ウイルスを含むニューモウイルス属。

ヘニパウイルス、例えばヘンドラウイルス、ニパウイルス及びシダーウイルス（Ｃｅｄａｒｖｉｒｕｓ）は、ウマ、ネコ、ブタをはじめとする飼育動物、並びにヒトにおいて、病気の原因となり得、又はさらには死の原因となり得る。

パラミクソウイルス科は、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）１〜４型を含む。ＨＰＩＶ−１は、呼吸器感染症の一種である喉頭気管気管支炎としても知られるクループの原因であり得る。感染は、気管の内部の膨潤に至る可能性があり、このため正常な呼吸を妨害し、「犬吠」咳、喘鳴、及びしわがれた声の典型的症状が生じる。熱及び鼻水も存在し得る。ＨＰＩＶ−２も、他の上部及び下部気道疾患の原因としてのクループの原因であり得る。ＨＰＩＶ−３は、細気管支炎及び肺炎の原因であり得る。ＨＰＩＶ−３は、主に幼児、例えば１歳未満の年齢の幼児を標的とし得る。細気管支炎は、肺の最小の気道である細気管支の炎症である。それは、咳嗽、喘鳴及び／又は息切れを示し、このため一部の幼児では摂食が困難となり得る。肺炎は、肺胞として知られる顕微鏡的気嚢に主に影響を及ぼす肺の炎症状態である。典型的な徴候及び症状としては、根本にある原因に応じて様々な重篤度及び組み合わせの湿性又は乾性咳、胸痛、熱、及び呼吸困難が挙げられる。

センダイウイルス（ＳｅＶ）は、ネズミパラインフルエンザウイルス１型又はセンダイウイルス（ＨＶＪ）としても知られ、マウス、ハムスター、モルモット、ラット、及び場合によってブタにおける高伝染性気道感染の原因となる。センダイウイルスによって引き起こされる感染の症状としては、くしゃみ、猫背の姿勢、呼吸困難、眼及び／又は鼻からのポルフィリン排出、倦怠感、乳幼仔ラットが生存できないこと、拒食症が挙げられる。

ヒト呼吸器合胞体ウイルスなどのニューモウイルス属に属するウイルスは、あまり重篤ではない上部呼吸器疾患から重篤な細気管支炎又は肺炎まで及び得る、呼吸器疾患に関与する多くの疾患を引き起こす可能性がある。そのような疾患の症状には、鼻炎、咳嗽、及び食欲不振などの軽度の症状並びに喘鳴、呼吸困難、熱、細気管支炎及び肺炎などのさらに重篤な症状が含まれ得る。

いくつかの実施形態において、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、ヒト呼吸器合胞体ウイルスに起因又は関連する症状の期間を短縮し得る。例えば、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、ヒト呼吸器合胞体ウイルスに起因又は関連する症状の期間を、少なくとも１２時間又は少なくとも２４時間又は少なくとも３６時間又は少なくとも４８時間又は少なくとも６０時間又は少なくとも７２時間又は少なくとも８４時間又は少なくとも９６時間又は少なくとも１０８時間又は少なくとも１２０時間又は少なくとも１３２時間又は少なくとも１４４時間短縮し得る。例えば、いくつかの実施形態において、ヒト呼吸器合胞体ウイルスに起因又は関連する症状の期間は、１２時間〜１４４時間又は２４時間〜１３２時間又は３６時間〜１２０時間又は４８時間〜１０８時間又は６０時間〜９６時間又は６６時間〜９０時間、７２時間〜８４時間或いはこれらの範囲内の任意の部分的範囲で短縮することができる。

いくつかの実施形態において、チアゾリド化合物はニタゾキサニド（１、下記式を参照）又はその医薬的に許容される塩であり得る。ニタゾキサニドは、感染性胃腸炎の治療のために米国で許諾されている製品である。いくつかの実施形態において、チアゾリド化合物は、以下に示すチゾキサニド又はその医薬的に許容される塩であり得る。

いくつかの実施形態において、ニタゾキサニド及びチゾキサニドは組み合わせとして一緒に使用することができる。

いくつかの実施形態において、チアゾリド化合物はＲＭ−４８４８であってもよく、これはチゾキサニドと同じであるが、ニトロ基と置換されたクロロ基を含む構造を有する置換チアゾリドであり、したがって結果として化合物Ｎ−（５−クロロチアゾール−２−イル）−２−ヒドロキシベンズアミドとなる。いくつかの実施形態において、チアゾリド化合物はＲＭ−５０３８であってもよく、これはＲＭ−４８４８のエステルプロドラッグである。ＲＭ−４８４８及びＲＭ−５０３８は、例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２９４８３１号明細書で開示されている。

チアゾリド化合物は、例えば、米国特許第３，９５０，３５１号明細書及び同第６，０２０，３５３号明細書、国際公開第２００６０４２１９５（Ａ１）号パンフレット及び米国特許第２００９／００３６４６７Ａ号明細書の公開された手順にしたがって合成することができる。他の好適なチアゾリド化合物は、米国特許第７，６４５，７８３号明細書、同第７，５５０，４９３号明細書、同第７，２８５，５６７号明細書、同第６，１１７，８９４号明細書、同第６，０２０，３５３号明細書、同第５，９６８，９６１号明細書、同第５，９６５，５９０号明細書、同第５，９３５，５９１号明細書、及び同第５，８８６，０１３号明細書で開示されている。

いくつかの実施形態において、パラミクソウイルス科に属するウイルスに対して使用する場合、ニタゾキサニド及び／若しくはチゾキサニドなどのチアゾリド化合物、又はＲＭ−４８４８及びそのエステル（例えば、ＲＭ５０３８）は、ウイルスの成熟Ｆタンパク質の細胞内レベルを低下させることができる。例えば、センダイウイルスなどのレスピロウイルス属に属するウイルスに対して使用する場合、チアゾリド化合物は、そのようなウイルスタンパク質の細胞内レベルを低下させることができる。呼吸器合胞体ウイルスなどのニューモウイルス属に属するウイルスに対して使用する場合、チアゾリド化合物はそのようなウイルスタンパク質の細胞内レベルを低下させることができる。ヘンドラウイルスなどのヘニパウイルス属に属するウイルスに対して使用する場合、チアゾリド化合物はそのようなウイルスタンパク質の細胞内レベルを低下させることができる。

いくつかの実施形態において、エンテロウイルス属に属するウイルスなどのピコナウイルス科に属するウイルスに対して使用する場合、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、ピコナウイルス科に属するウイルスの複製を抑制する直接作用型抗ウイルス剤と一緒に投与することができる。

直接作用型抗ウイルス剤としては、３Ｃプロテアーゼ阻害剤、例えばルピントリビル、ピラゾール１７及び１８、並びにヌクレオシドアナログ阻害剤、例えばＭＫ−０６０８が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、直接作用型抗ウイルス剤は有効量で投与し、有効量とは、直接作用型抗ウイルス剤をニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物と一緒に使用する場合、所望の効果を達成するために必要な量である。

ニタゾキサニド及び／チゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、ノイラミニダーゼ阻害剤と同時又はその後に投与することができる。

ウイルスがエンテロウイルス属に属する場合、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物単独又は直接作用型抗ウイルス剤と合わせての投与は、そのようなウイルスに起因又は関連する疾患又は状態の少なくとも１つの症状を緩和することができ、そのような症状は、例えば、熱、咳、咽頭炎、鼻閉塞、疲労、頭痛、筋肉痛，及び／又は発熱であり得る。例えば、いくつかの実施形態において、ウイルスがエンテロウイルス属に属する場合、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物単独又は直接作用型抗ウイルス剤とあわせた投与は、ａ）そのようなウイルスに起因又は関連する疾患又は状態に起因又は関連する熱を下げることができ、そしてｂ）疾患又は状態の少なくとも１つの症状を緩和することができ、そのような症状は、例えば、咳、咽頭炎、鼻閉塞、疲労、頭痛、筋肉痛，及び／又は発熱であり得る。いくつかの実施形態において、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物の単独又はオセルタミビルなどのノイラミニダーゼ阻害剤とあわせた投与は、ａ）疾患又は状態に起因又は関連する熱を下げることができ、そしてｂ）疾患又は状態に起因又は関連する少なくとも１つの呼吸器症状及び疾患又は状態に関連する少なくとも１つの体質性症状を緩和することができ、少なくとも１つの呼吸器症状は咳、咽頭炎，及び／又は鼻閉塞から選択され、少なくとも体質性症状は疲労、頭痛、筋肉痛、及び発熱から選択される。

「塩」という語は、その最も広い意味で用いることができ、例えば、「塩」という語は、本発明の化合物のイオンとの水素塩及び水酸化物塩を包含する。いくつかの実施形態において、塩という用語は、医薬的に許容される塩と称するサブクラスであり得、これは、薬理活性を有する本発明の化合物の塩であり、生物学的見地からも他の見地からも不適切ではない。あらゆる実施形態において、限定されないが、水素、ハロゲン化物、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロ硫酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカン酸塩などの塩は酸と形成することができる。あらゆる実施形態において、塩は、塩基と形成することができ、例えば限定されるものではないが、水酸化物、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばリチウム、ナトリウム及びカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム、マグネシウム塩、アルミニウム塩、例えばアンモニア、メチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなどとの有機塩基との塩、並びに例えばアルギニン及びリジンなどのアミノ酸との塩である。塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物、例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル塩化物、臭化物及びヨウ化物；ジアルキル硫酸塩、例えば硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル及びジアミル；デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリル塩化物、臭化物及びヨウ化物などの長鎖ハロゲン化物；並びにベンジル及びフェネチルブロミドなどのハロゲン化アラルキルを含む薬剤で四級化することができる。

「治療上許容される塩」、及び「医薬的に許容される塩」という語は、本明細書中で用いられる場合、水又は油可溶性又は分散性であり、不適切な毒性、刺激、及びアレルギー反応がなく疾患の治療に適し、妥当な効果／リスク比に見合い、それらの意図する用途に有効である、本発明の化合物の塩及び双性イオン形態の両方を表す。塩は、化合物の最終単離及び精製の間に調製することができるか、又は遊離塩基の形態の適切な化合物を好適な酸と反応させることによって別に調製することができる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、Ｌ−アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩（ｂｅｓｙｌａｔｅ））、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、ゲンチジン酸塩、グルタル酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、馬尿酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、ＤＬ−マンデル酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ホスホン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ピログルタミン酸塩、コハク酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩，重炭酸塩、パラ−トルエンスルホン酸塩（ｐ−トシル酸塩）、及びウンデカン酸塩が挙げられる。また、本発明の化合物中の塩基性基は、メチル、エチル、プロピル、及びブチル塩化物、臭化物、及びヨウ化物；ジメチル、ジエチル、ジブチル、及びジアミル硫酸塩；デシル、ラウリル、ミリスチル、及びステリル塩化物、臭化物、及びヨウ化物；並びにベンジル及びフェネチルブロミドで四級化することができる。治療上許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、及びリン酸などの無機酸、並びにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸、及びクエン酸などの有機酸が挙げられる。塩は、化合物のアルカリ金属又はアルカリ土類イオンとの配位によって形成することもできる。したがって、本発明は、本発明の化合物のナトリウム、カリウム、マグネシウム、及びカルシウム塩並びに同種のものも企図する。

塩基性付加塩は、カルボキシル、フェノール又は類似の基を好適な塩基、例えば金属水酸化物、炭酸塩、若しくは重炭酸塩、又はアンモニア或いは有機一級、二級、若しくは三級アミンと反応させることによって、化合物の最終単離及び精製の間に調製することができる。治療上許容される塩のカチオンとしては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びアルミニウム、並びに非毒性四級アミンカチオン、例えばアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、１−エフェナミン、及びＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンが挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な、他の代表的有機アミンとしては、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、及びピペラジンが挙げられる。

いくつかの実施形態において、チアゾリド化合物は医薬組成物の一部として投与することができる。医薬組成物は、チアゾリド化合物に加えて、医薬的に許容される担体などの担体を含み得る。「担体」という語は、最も広い意味で使用することができる。例えば、「担体」という語は、あらゆる担体、希釈剤、賦形剤、湿潤剤、緩衝剤、懸濁化剤、潤滑剤、アジュバント、ビヒクル、送達系、乳化剤、崩壊剤、吸収剤、防腐剤、界面活性剤、着色剤、香味料（ｆｌａｖｏｒａｎｔ）、及び甘味料を指す。いくつかの実施形態において、担体は、「医薬的に許容される担体」という語が医薬組成物中での使用に好適である無毒を意味するために担体よりも狭義の用語である、医薬的に許容される担体でもあり得る。医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者にとって望ましい治療反応を達成するために有効な活性化合物（複数可）の量を投与するために様々であり得る。

選択された用量レベルは、チアゾリド化合物の活性、投与経路、治療される状態の重篤度、並びに治療される患者の状態及び以前の病歴に依存し得る。しかしながら、所望の治療効果を達成するために必要であるよりも低いレベルの化合物（複数可）の用量で開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、当該分野の技術範囲内である。必要に応じて、有効な一日量は、投与のために複数用量に、例えば、１日につき２〜４用量に分割することができる。しかしながら、任意の特定の患者に特異的な用量レベルは、体重、総体的な健康、食事、投与時間及び経路並びに他の治療薬との組み合わせ並びに治療される状態又は疾患の重篤度を含む様々な要因に依存し得ると理解される。

医薬組成物は、例えば、経口製剤、例えば固体経口製剤で全身投与することができる。例えば、粉末、錠剤、カプセル、ロゼンジ、ゲル、溶液、懸濁液、シロップ、又は同種のものの物理的形状であり得る。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、米国特許第８，５２４，２７８号明細書及び同第９，３５１，９３７号明細書で開示されている処方の形態であり得る。そのような処方は、例えば、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物を含む制御放出部分；並びにニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物を含む即時放出部分を含み得る。これらの組成物は、単一用量又は異なる時点で投与される複数回投与で投与することができる。

いくつかの実施形態において、組成物中のニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物の合計量は組成物の約６０％〜７５重量％であり得る。組成物は、即時放出、制御放出又は持続放出のために処方することができる。組成物は、１以上のさらなる医薬的に許容される添加剤又は賦形剤を含み得る。これらの賦形剤は、当該技術分野で周知であり高く評価されている治療上不活性な成分である。本明細書中で用いられる場合、「不活性成分」という語は、薬物製造の分野で周知である治療上不活性な成分を指す可能性があり、単独若しくは様々な組み合わせで使用することができ、例えば、希釈剤、崩壊剤、バインダー、懸濁化剤、流動促進剤、潤滑剤、フィラー、コーティング剤、可溶化剤、甘味料、着色剤、香味剤、及び抗酸化剤が挙げられる。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pa.を参照。

希釈剤又はフィラーの例としては、デンプン、ラクトース、キシリトール、ソルビトール、粉砂糖、圧縮糖（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｂｌｅｓｕｇａｒ）、デキストレート（ｄｅｘｔｒａｔｅ）、デキストリン、デキストロース、フルクトース、ラクチトール、マンニトール、スクロース、タルク、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、二塩基性又は三塩基性リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム脱水物、硫酸カルシウム、及び同種のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。希釈剤又はフィラーの量は、全組成物の約２％〜約１５重量％の範囲であり得る。

崩壊剤の例としては、アルギン酸、メタクリル酸ＤＶＢ、架橋ＰＶＰ、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、コーンスターチ又はトウモロコシデンプン、α化デンプン及び同種のものを含むデンプンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。崩壊剤（複数可）は、典型的には全組成物の約２％〜約１５重量％である。

バインダーの例としては、ジャガイモデンプン、小麦デンプン、コーンスターチなどのデンプン；微結晶セルロース；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；アカシア、アルギン酸、グアーガムのような天然ゴム；液体グルコース、デキストリン、ポビドン、シロップ、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリドン、ポリ−Ｎ−ビニルアミド、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ポリプロピレングリコール、トラガカント、及び同種のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。バインダー（複数可）の量は全組成物の約０．２％〜約１４重量％である。

流動促進剤の例としては、二酸化ケイ素、コロイド状無水シリカ、三ケイ酸マグネシウム、三塩基性リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、コロイド状二酸化ケイ素、粉末状セルロース、デンプン、タルク、及び同種のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。流動促進剤（複数可）の量は全組成物の約０．０１％〜約０．３重量％である。

潤滑剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、ベヘン酸グリセリル、鉱油、ステアリルフマル酸ナトリウム、タルク、水素化植物油及び同種のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。潤滑剤（複数可）の量は全組成物の約０．２％〜約１．０重量％である。

組成物は、低粘度ポリマーであるバインダーを含んでもよい。低粘度ポリマーの例としては、Dow Chemicalによって商標「MethoceL（商標）」（例えば、Methocel E50LV（商標）、Methocel K100LVR（商標）、及びMethocel F50LVR（商標））で販売されているものなどの低粘度ヒドロキシプロピルメチルセルロースポリマー並びに低粘度ヒドロキシエチルセルロースポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。低粘度ポリマーは典型的には、全組成物の総重量の約１０％〜約２０％、若しくは約１０％〜約１５％、若しくは好ましくは約１２％で存在するか、又は制御放出部分及び即時放出部分を有する実施形態では、制御放出部分中の低粘度ポリマーは、典型的には制御放出部分の重量の約１５％〜約２０％、好ましくは約１８％で存在する。

組成物はコーティング材料をさらに含んでもよい。コーティング材料は、典型的には、処方を完全に覆う剤形上の外層として存在する。例えば、いくつかの実施形態において、剤形は、制御放出部分が錠剤の第一層を形成し、即時放出部分が第一層の上面上に堆積する第二層を形成してコア錠剤を形成する経口錠剤である。そのような実施形態において、例えば、コーティング材料は、コア錠剤の上面上に堆積する外側コーティング層の形態であり得る。コーティング材料は、典型的には組成物の約１重量％〜約５重量％であり、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び／又はポリエチレングリコール、並びにコーティング剤、乳白剤、味マスキング剤、フィラー、研磨剤、着色剤、粘着防止剤（ａｎｔｉｔａｃｋｉｎｇａｇｅｎｔ）及び同種のものを含む群から選択される１以上の賦形剤を含み得る。フィルムコーティング物質及びそのようなコーティング物質を用いる方法の例は、当業者にはよく知られている。

ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物を含む組成物は、エンテロウイルス属に属するウイルスなどのピコナウイルス科に属するウイルス、又はパラミクソウイルス科に属するウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を効果的に治療するために適した長さの時間で投与することができる。組成物にとって適切な多くの投与量及びレジメンを使用することができる。いくつかの実施形態において、投与は、約３日から約１０４週の期間にわたって実施することができる。いくつかの実施形態において、投与は、１０４週よりも長い期間にわたって実施することができ、さらには無期限に実施することもできる。適切なレジメンは医師によって決定され得る。

いくつかの実施形態において、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物の投与は、ヒトなどの患者において、エンテロウイルス属に属するウイルスなどのピコナウイルス科に属するウイルス又はパラミクソウイルス科に属するウイルスに起因又は関連する疾患又は状態の少なくとも１つの症状の発生から２４時間以内又は３６時間以内又は４８時間以内又は６０時間以内又は７２時間以内又は９６時間以内で開始することができる。例えば、エンテロウイルス属に属するウイルスについて、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物の投与は、ヒトなどの患者において、そのようなウイルスに起因又は関連する疾患又は状態の少なくとも１つの症状の発生から２４時間以内又は３６時間以内又は４８時間以内又は６０時間以内又は７２時間以内又は９６時間以内に開始することができ、そのような症状は、例えば、熱、咳、咽頭炎、鼻閉塞、疲労、頭痛、筋肉痛、及び発熱であり得る。

いくつかの実施形態において、ヒトに投与されるニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物の一日量は、１００ｍｇ〜１３００ｍｇ又は２００ｍｇ〜１２００ｍｇ又は２５０ｍｇ〜１１００ｍｇ又は３００ｍｇ〜１０００ｍｇ又はこれらの範囲内の任意の用量値若しくは部分的範囲であり得る。例示的投与量値には、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ又は８００ｍｇが含まれる。

いくつかの実施形態において、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、少なくとも２日間又は少なくとも３日間又は少なくとも４日間又は少なくとも５日間又は少なくとも６日間投与することができる。いくつかの実施形態において、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、２〜１４日又は３〜１０日又は４〜７日又はこれらの範囲内の任意の値又は部分的範囲の期間で投与することができる。ある実施形態では、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は５日間投与することができる。ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物の用量は３００ｍｇ〜９００ｍｇ又は４００ｍｇ〜８００ｍｇ又は５００ｍｇ〜７００ｍｇ又はこれらの範囲内の任意の用量値又は部分的範囲であり得る。例示的投与量値には、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ又は８００ｍｇが含まれる。ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、１日１回、２回又は３回投与することができる。場合によっては、６００ｍｇのニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドを１日２回投与してもよい。ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物は、ピコナウイルス科に対する直接作用型抗ウイルス剤、例えばルピントリビル若しくはＭＫ−０６０８又は呼吸器合胞体ウイルスに対する直接作用型抗ウイルス剤、例えば融合阻害剤であるＧＳ−５８０６と同時投与することができる。直接作用型抗ウイルス剤の用量は様々であり得る。直接作用型抗ウイルス剤、例えばルピントリビル、ＭＫ−０６０８又はＧＳ−５８０６を１日１回、２回又は３回同時投与することができる。場合によっては、６００ｍｇのニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドを、１日２回投与される有効量の直接作用型抗ウイルス剤と１日２回同時投与することができる。

チアゾリド化合物は、エンテロウイルス属に属するウイルスなどのピコナウイルス科に属するウイルス、又はパラミクソウイルス科に属するウイルスに冒された対象に投与することができる。そのような対象はヒトをはじめとする動物であり得る。

好ましくは、ニタゾキサニド及び／又はチゾキサニドなどのチアゾリド化合物を、エンテロウイルス属に属するウイルスなどのピコナウイルス科に属するウイルスに冒された対象、又はパラミクソウイルス科に属するウイルスに冒された対象に有効量で投与し、有効量とは所望の効果を達成するために必要な量を意味し得る。

本明細書中で記載する実施形態を本明細書において、全く限定的ではない以下の実施例によってさらに説明する。

パラミクソウイルス科は、麻疹、おたふく風邪、パラインフルエンザ、ＲＳＶ（呼吸器合胞体ウイルス）、メタニューモウイルス及びヘニパウイルスを含む多くの重要なヒトウイルス性病原菌を含み、これらは最悪の新たな人畜共通感染症のいくつかを引き起こす。有効な抗ウイルス療法がないために、これらのウイルスに対して有効な新規薬物の必要性が強調される。Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ及びＧｉａｒｄｉａｌａｍｂｌｉａ感染の治療について米国で許諾されている安全かつ経口により生体利用可能なチアゾリドであるニタゾキサニド（ＮＴＺ）はインフルエンザウイルスに対して抗ウイルス活性を有することが以前に示されている。ここで、我々は、ＮＴＺ並びに第二世代チアゾリド（ＳＧＴ）であるＲＭ−４８４８及びＲＭ−５０３８の、インビトロのパラミクソウイルス科感染に対する活性を、センダイウイルス（ＳｅＶ）及びＲＳＶ−Ａ２をモデルとして使用して調査し、抗ウイルス作用の機序を調査した。ウイルス収率をサル及びヒト細胞においてヘマグルチニン滴定及び感染力アッセイによって決定し；細胞生存率をＭＴＴアッセイによって決定した。［^３５Ｓ］メチオニン標識、免疫沈降及び／又はＥｎｄｏＨ消化後ＳＤＳ／ＰＡＧＥ−オートラジオグラフィによって、また感染細胞又はＦＬＡＧ標識されたヘンドラウイルス（ＨｅＶ）融合（Ｆ）タンパク質で一時的にトランスフェクトされた細胞における免疫蛍光及びウェスタンブロット分析によって、ウイルスタンパク質合成／成熟を特性決定した。

ＮＴＺ及びＳＧＴはＳｅＶに対する顕著な抗ウイルス活性を示し、ｍ．ｏ．ｉ．に依存して５０超から６２５超まで及ぶＳＩで用量に依存してウイルス収率を低下させ、そして宿主細胞をウイルス誘発性損傷から防御した。チアゾリドはウイルス侵入に影響を及ぼさず、ウイルスタンパク質合成の一般的阻害も引き起こさなかったが、その一方で、ウイルスＨＮ及びＦ糖タンパク質の成熟及び細胞内移動を阻害した。特に、ＮＴＺはまた、細胞融合及びビリオンの感染力において重要な役割を果たす、Ｆタンパク質の細胞内レベルを低下させた。この効果は、ユビキチン−プロテアソーム系又はオートファジーを介したタンパク質分解によるものではなかった。その理由は、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ又はオートファジー阻害剤クロロキンでの治療によって救済することができなかったためである。その代わり、ＳｅＶＦタンパク質はＮＴＺで処理された細胞において不溶性状態で存在することが見いだされ、成熟における薬物誘導性欠陥はＦタンパク質凝集に至ることを示唆する。興味深いことに、チアゾリドは、ウイルス感染症が存在しない状態でＦＬＡＧ標識ＨｅＶ−Ｆを一時的に発現する細胞においてヘンドラウイルスＦタンパク質に同様に影響を及ぼし、細胞が介在する機序を示唆する。結果は、ＮＴＺがパラミクソウイルス感染に対して有効であり、ウイルス糖タンパク質を標的とする新規機序によって侵入後レベルで作用することを示す。ＮＴＺ治療もＲＳＶに対して有効であり、パラミクソウイルス科のメンバーに対する薬物の一般的効果を示唆する。研究結果を図４〜１９に提示した。

材料及び方法
細胞培養、処理及びトランスフェクション。ヒトＡ５４９肺胞ＩＩ型様上皮細胞及び子宮頸がんＨｅＬａ細胞、並びにアフリカミドリザル腎臓細胞（ＡＧＭＫ、３７ＲＣ細胞株）を３７℃、５％ＣＯ_２雰囲気中、ＲＰＭＩ培地（Gibco-Invitrogen, Carlsbad, CA）（ＡＧＭＫ、Ａ５４９）、又は１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭのグルタミン及び抗生物質を追加したＤＭＥＭ培地（Gibco-Invitrogen, Carlsbad, CA）（ＨｅＬａ）中で成長させた。特に別段の指定がない限り、ＤＭＳＯストック溶液（２５ｍｇ／ｍｌ）中に溶解させたニタゾキサニド（ＮＴＺ）、チゾキサニド（ＴＩＺ）（Romark Laboratories, L.C.）、グリコシル化阻害剤ツニカマイシン（ＴＭ）、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ及びオートファジー阻害剤クロロキン（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）を培養培地中で希釈し、１時間の吸着期間の直後に感染細胞に添加した。化合物を培地中に実験の期間中維持した。対照に、細胞生存率又はウイルス複製に影響を及ぼさないＤＭＳＯビヒクルの等しい量を投与した。各化合物の各濃度を二連で試験し、各実験を少なくとも２回繰り返した。トランスフェクション実験について、半コンフルエント単層のＨｅＬａ細胞を、ＦＬＡＧ標識（RSV-F ORF C-Flag tag, Sino Biological Inc.）に結合したヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ、サブタイプＡ、Ａ２株）のＦタンパク質を発現する遺伝子を含むｐＣＭＶ駆動構築物、ＦＬＡＧ標識（HeV-F ORF C-Flag tag, Sino Biological Inc.）と結合したヘンドラウイルス（ＨｅＶ）のＦタンパク質を発現する遺伝子を含むｐＣＭＶ駆動構築物、又は対照としてのｐｃＤＮＡ３ベクターで一時的にトランスフェクトした。トランスフェクションは、製造業者の指示に従って、jetPRIME Transfection Reagent（Polyplus transfection）を使用して実施した。

細胞毒性。細胞生存率を、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）対ＭＴＴホルマザン変換アッセイ（Sigma-Aldrich, St Louis, MO）によって測定した。ＭＴＴアッセイに関して、１０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む１００ｍｌの酸性イソプロパノールの添加によって、還元ＭＴＴ（ホルマザン）を細胞から抽出し、そしてホルマザン吸光度を２つの異なる波長（５４０及び６９０ｎｍ）にてＥＬＩＳＡマイクロプレートリーダーで測定した。５０％致死量（ＬＤ_５０）を、Prism5.0ソフトウェア（Graph-Pad Software Inc., San Diego, CA）を用いて算出した。偽感染又はウイルスに感染した細胞の鏡検を毎日実施して、ウイルス誘導細胞変性効果並びに薬物によって誘導された可能な形態変化及び／又は細胞を検出した。Leica DM-IL顕微鏡を用いて顕微鏡調査を実施し、Leica Image-Manager500ソフトウェアを用いてLeica DC300カメラで画像を取得した。

ウイルス調製、感染及び滴定。センダイウイルス（ＳｅＶ）を１０日齢の胚発育卵の尿膜腔で成長させた。３７℃で４８時間後、尿膜腔液を収集し、５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して細胞残屑を除去し、ウイルス力価を、標準的手順にしたがって、ヘマグルチニン（ＨＡ）滴定及びプラークアッセイによって決定した（Bernasconi et al., 2005, Pica et al., 2000）。

ウイルス感染に関して、コンフルエントＡＧＭＫ細胞単層を、別段の記載がない限り、ＳｅＶで１時間、３７℃、３ＰＦＵ（プラーク形成単位）／細胞の感染多重度（ＭＯＩ）にて感染させた。同様の状態をヒトＡ５４９細胞の感染に利用した。吸着期間の後、ウイルス接種物を除去し、細胞単層をリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した。細胞を、２％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ１６４０培養培地中で３７℃にて維持した。多段階ウイルス成長曲線について、コンフルエントＡＧＭＫ／Ａ５４９細胞単層をＳｅＶで、１時間３７℃、０．０１ＰＦＵ／細胞のＭＯＩにて感染させた。１時間の吸着期間の後、ウイルス接種物を除去し、細胞単層をＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及びＬ−１−トシルアミド−２−フェニルエチルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）で処理したトリプシン（１μｇ／ｍｌ）（Sigma-Aldrich）を含むＲＰＭＩ１６４０培養培地中、３７℃で維持した。ウイルス収率を、以前に記載されているようにして（Rossignol et al., 2009）、ＨＡ滴定又はプラークアッセイによって感染後（ｐ．ｉ．）２４時間及び４８時間で測定した。プラークアッセイのために、ウイルスの段階１０倍希釈を準備し、３５ｍｍプレート（Corning, New York, NY）中でコンフルエントＡＧＭＫ細胞単層上に接種した。３７℃で１時間後、接種物を除去し、細胞を３回ＰＢＳで洗浄した後、０．５％のＢＳＡ、１μｇ／ｍｌのＴＰＣＫで処理したトリプシン、及び０．５％のSeaPlaqueアガロース（Lonza）を含むＲＰＭＩを添加した。３７℃で７２時間後、オーバーレイを除去し、細胞をＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで固定し、１％クリスタルバイオレット（Sigma-Aldrich）で染色した。ＩＣ_５０（５０％阻害濃度）及びＩＣ_９０（９０％阻害濃度）の抗ウイルス化合物を、Prism 5.0ソフトウェアを使用して算出した。

ヒトニューモウイルスＲＳＶ−Ａ２（呼吸器合胞体ウイルス、Ａ２株）は、英国ニューカッスルアポンタインのNewcastle大学のG. Toms博士から入手した。ＲＳＶ感染に関して、コンフルエントＨｅＬａ細胞単層を１時間、３７℃にてＲＳＶ−Ａ２で１ＴＣＩＤ_５０のＭＯＩで感染させた（５０％組織培養感染量）／細胞。ＲＳＶ−Ａ２収率は、ＲＳＶの融合タンパク質（Ｆタンパク質）に対して特異的なモノクローナル抗体（抗Ｆ１Ｅ３抗体、Viratom Ltd., Newcastle upon Tyne, UK）で標識した後に免疫蛍光（ＩＦ）分析により測定して、感染後４８時間でウイルス誘導性合胞体の数を計数することによって評価した。ＩＦ分析のために、未感染及びＲＳＶに感染したＨｅＬａ細胞単層を４％パラホルムアルデヒド（ＰＢＳ中４％）で３０分間室温にて固定した。固定された細胞に抗Ｆ１Ｅ３抗体を１時間室温にて接種した。非結合型抗体をＰＢＳ中でリンスすることによって除去し、続いてＦＩＴＣコンジュゲート抗マウス抗体と１時間室温でインキュベーションする。染色後、細胞を、ＵＶ励起フィルターを備えたLeica DM-Il蛍光顕微鏡で調べた。画像を、Leica Image-Manager500ソフトウェアを用いてLeica DC-300カメラで取得した。各サンプルについて少なくとも１５０の合胞体がカウントされた。ニタゾキサニドは非細胞傷害性用量でＲＳＶ−Ａ２に対する抗ウイルス活性を保有し、ＩＣ_５０が０．３μｇ／ｍｌであり、ＩＣ_９０が０．８μｇ／ｍｌであることが見いだされた。

代謝標識。タンパク質合成及びウェスタンブロットの分析。偽感染又はウイルスに感染した細胞を、メチオニン／システイン不含培地中で３０分間の飢餓性衰弱後に表示された時間、１０μＣｉ／ｍｌの［^３５Ｓ］−メチオニン−システイン（［^３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ、Redivue Pro-Mix ³⁵Sインビトロ細胞標識ミックス；GE Healthcare）で標識した。［^３５Ｓ］−Ｍｅｔ／Ｃｙｓ取り込みを、１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）及びプロテアーゼ阻害剤混合物（ＰＩＣ；Roche Applied Science, Penzberg, Germany）を含むＲＩＰＡ（放射免疫沈降アッセイ）緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．５、４ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、６００ｍＭのＫＣｌ）中での細胞溶菌後に判定した。同じ量の放射能又は同じ量のタンパク質を含むサンプルをＳＤＳ／ＰＡＧＥ（３％濃縮用ゲル、１０％分離ゲル）によって分離し、そして記載されているようにして（Pica et al., 2000）オートラジオグラフィのために処理した。オートラジオグラフィパターンを、Typhoon-8600 Imager［（Molecular Dynamics Phosphor-Imager（商標）（ＭＤＰ）］で可視化し定量し、そして画像Ｑｕａｎｔソフトウェア（Amersham Pharmacia Biotech）を使用して画像を取得した（ＭＤＰ分析）。

可溶性／不溶性タンパク質の分析のために、全細胞抽出物（ＷＣＥ）を、２ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）、２０ｍＭβ−グリセロールリン酸塩、１９ｍＭ（ｐ−ニトロフェニルリン酸塩）ＰＮＰＰ、２ｍＭのＮａ_３ＶＯ_４、１ｍＭのＰＭＳＦ及びプロテアーゼ−阻害剤カクテル（Roche）を追加した高塩濃度抽出緩衝液（緩衝液Ｂ）（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．５、４００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．５％ＮＰ−４０及び１０％グリセロール）中での溶菌後に調製した（Rossi et al., 2000）。手短に言うと、細胞を氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、次いで緩衝液−Ｂ（８０μｌ）中で溶解させた。凍結及び解凍の１サイクル、並びに１５，０００ｒｐｍでの遠心分離（４℃で１５分）の後、上清（可溶性）及びペレット（不溶性）フラクションを集めた。不溶性画分は、超音波ＵＰ５０Ｈプロセッサ（Ｈｉｅｌｓｃｈｅｒ）（４０％振幅、パルスモード：６×１０秒、１５秒休止）を使用して氷上で音波処理することにより６０μｌの緩衝液−Ｓ（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ８．５、１％ＳＤＳ及びプロテアーゼ阻害剤）中で可溶化した。細胞をＬａｅｍｍｌｉ緩衝液中に溶解させ、続いて２８ 1/2−ゲージインスリンシリンジにより１０回ＤＮＡせん断することによって、総抽出物を得た。

ウェスタンブロット分析のために、細胞抽出物（２５μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ニトロセルロースにブロットし、そしてフィルターを以下の抗体：モノクローナル抗ＳｅＶ−Ｆ（ａＦ−γ２３６；ID Pharma）及び抗α−チューブリン（Ｂ−５−１−２、Sigma-Aldrich）抗体；ポリクローナル抗α−チューブリン（１１Ｈ１０；Cell Signaling Technology Inc.）、抗ＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫＴａｇ、Cell Signaling Technology, Inc.）及び抗β−アクチン（Sigma-Aldrich）抗体とともにインキュベートし、続いてペルオキシダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ、抗ヤギＩｇＧ又は抗マウスＩｇＧ（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ検出キット；Pierce）でデコレーションした。

免疫蛍光顕微鏡法。スライドガラス上で成長させた、ＳｅＶに感染したＡＧＭＫ又はＡ５４９細胞及びＲＳＶ−Ｆ−又はＨｅＶ−ＦでトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞をＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで感染後２４時間に２０分間室温にて固定し、偽感染又は偽トランスフェクト細胞を同様に処理した。固定された細胞を、抗Ｆモノクローナル抗体（ａＦ−γ２３６；ID Pharma）又は抗ＦＬＡＧ（DYKDDDDK Tag, Cell Signaling Technology, Inc.）ポリクローナル抗体のいずれかとともに細胞膜染色のために３７℃で１時間インキュベートするか、又は０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００−ＰＢＳで１０分間室温にて透過処理し、次いでモノクローナル抗Ｆ及び抗カルネキシン（Stressgene）又はポリクローナル抗α−チューブリン（１１Ｈ１０；Cell Signaling Technology Inc.）抗体とともに３７℃で１時間インキュベートし、続いてAlexa Fluor488コンジュゲート（Molecular Probes-Invitrogen）又はローダミンコンジュゲート（Pierce）ヤギ抗マウスＩｇＧ、及びローダミンコンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ（Pierce）でデコレーションした。核を４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）又はHoechst 33342（Molecular Probes, Invitrogen）で染色した。画像は、FluoView-1000ソフトウェアを使用して、Olympus Fluoview FV-1000共焦点レーザー走査システムで取得した。
統計分析。統計分析は、不対データのスチューデントｔ検定を使用して実施した。データを２連のサンプルの平均±Ｓ．Ｄ．として表す。０．０５未満のｐ値を有意とみなした。

参考文献
Bernasconi, D., Amici, C., La Frazia, S., Ianaro, A., and Santoro, M. G. (2005) J. Biol. Chem. 280, 24127-24134.
La Frazia, S., Amici, C., and Santoro, M. G. (2006) Antivir. Ther. 11, 995-1004.
Pica, F., Palamara, A. T., Rossi, A., De Marco, A., Amici, C., and Santoro, M. G. (2000) Antimicrob. Agents Chemother. 44, 200-204.
Rossi, A., Kapahi, P., Natoli, G., Takahashi, T., Chen, Y., Karin, M., and Santoro, M. G. (2000) Nature 403, 103-108.
Rossignol, J. F., La Frazia, S., Chiappa, L., Ciucci, A., Santoro, M.G. (2009) J. Biol.Chem. 284, 29798-29808.

ＲＭ０８−３００２試験（エンテロウイルス／ライノウイルスについての臨床試験データ）
米国、カナダ、ベルギー、オーストラリア及びニュージーランドで実施された無作為化試験は、無併発性インフルエンザ又はインフルエンザ様疾患に罹患している年齢１３〜６５歳の対象において症状の軽減までの時間に対するＮＴＺ、オセルタミビル（ＯＳＴ）、ＮＴＺ＋ＯＳＴ及びプラセボの影響を調査した。熱、少なくとも１つの中程度又は重度の呼吸器症状（咳、咽頭炎、鼻閉塞）、及び少なくとも１つの中程度又は重度の体質性症状（発熱、頭痛、筋肉痛、疲労、咳、鼻閉塞及び咽頭炎）を有する１，９４１人の対象を症状発生の４８時間以内に登録した。鼻咽頭スワブをベースラインで集め、ウイルス培養及びＲＴ−ＰＣＲに供して、ウイルス性病因を特定した。

登録後、患者を、ニタゾキサニド持続放出錠（ＮＴＺ）、オセルタミビルカプセル（ＯＳＴ）、ＮＴＺ＋ＯＳＴ、又はプラセボでの治療を受けるために無作為に割り当てた。各治療は、５日間、１日に２回施した。ＮＴＺ用量は６００ｍｇであり、ＯＳＴ用量は７５ｍｇであった。

患者は自身の症状の重篤度を１日２回、少なくとも１４日間、無症状、軽度、中程度、又は重度として記録し、全ての症状が存在しないか又は軽度と採点され、症状緩和のための投薬を使用せずに少なくとも２４時間そのままである場合に、症状は緩和されたとみなされた。試験の主要評価項目は、最初の投薬から症状軽減までの時間であった。

鼻咽頭スワブサンプルのＲＴ−ＰＣＲアッセイ（ＬｕｍｉｎｅｘＮｘＴＡＧ呼吸器病原体パネル）に基づいて、２５１人の対象は、彼らの病気の唯一の原因と特定されたエンテロウイルス属（エンテロウイルス及びライノウイルスを含む）由来のウイルスを有していた。これらの患者にとって症状軽減までの時間を図２に提示するカプラン・マイヤー生存率分析チャートにプロットする。

ＮＴＺを投与された両治療群は、プラセボを投与された患者と比較して、症状の軽減までの時間において統計的に有意な（ｐ＜０．０５）減少を示した。プラセボと比較して症状軽減までの時間の減少の中央値はおよそ４７時間であった。

ＮＴＺを投与された２群をあわせて、ＮＴＺ（ＯＳＴ及びプラセボ）を投与されなかった２群と比較した場合、ＮＴＺを投与された患者は、投与されなかったものと比較して、ＮＴＺを投与された患者にとって症状軽減までの時間の有意な（ｐ＝０．００５）減少を示した。この比較の結果を図３に提示する。

鼻咽頭スワブサンプルのＲＴ−ＰＣＲアッセイ（ＬｕｍｉｎｅｘＮｘＴＡＧ呼吸器病原体パネル）に基づいて、１３人の患者は、彼らの病気の唯一の原因と同定された呼吸器合胞体ウイルスを有していた。これらの患者にとって発熱、頭痛、筋肉痛、疲労、咳、鼻閉塞及び咽頭炎などの症状の軽減までの時間を、図１に提示するカプラン・マイヤー生存率分析チャートにプロットする。

前述の記載事項は特定の好ましい実施形態を指すが、本発明はそのように限定されるものではないと理解される。開示された実施形態に様々な変更を加えることができること、そしてそのような変更が本発明の範囲内にあることを意図するものであることが当業者でればわかるであろう。

本明細書中で引用したすべての刊行物、特許出願及び特許は、その全内容を参照により本明細書に援用される。

Claims

ピコルナウイルス科エンテロウイルス属に属するウイルスに起因又は関連する疾患又は状態を治療するための医薬組成物であって、ニタゾキサニド若しくはチゾキサニドの少なくとも一方又はその医薬的に許容される塩を治療有効量で含む前記医薬組成物。
前記医薬組成物が、前記疾患又は状態の少なくとも１つの症状を緩和するためのものであり、前記少なくとも１つの症状が、熱、咳、咽頭炎、鼻閉塞、疲労、頭痛、筋肉痛、及び発熱から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物が、ａ）前記疾患又は状態に起因又は関連する熱を下げ、そしてｂ）前記疾患又は状態の少なくとも１つの症状を緩和するためのものであり、前記少なくとも１つの症状が、咳、咽頭炎、鼻閉塞、疲労、頭痛、筋肉痛、及び発熱から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物が、ａ）前記疾患又は状態によるか又は関連する熱を下げ、そしてｂ）疾患又は状態によるか又は関連する少なくとも１つの呼吸器症状及び前記疾患又は状態に関連する少なくとも１つの体質性症状を緩和するためのものであり、前記少なくとも１つの呼吸器症状が、咳、咽頭炎、及び鼻閉塞から選択され、前記少なくとも体質性症状が、疲労、頭痛、筋肉痛、及び発熱から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
前記ウイルスが、エンテロウイルスＡ〜Ｊから選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ウイルスが、ライノウイルスＡ〜Ｃから選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記組成物の投与にあたり、治療有効量の直接作用型抗ウイルス剤がさらに投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記直接作用型抗ウイルス剤が、ルピントリビル若しくはＭＫ−０６０８又はその医薬的に許容される塩である、請求項７に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物の投与を、前記疾患又は状態のうちの少なくとも１つの症状の対象における発生の４８時間以内に開始し、前記少なくとも１つの症状が、熱、咳、咽頭炎、鼻閉塞、疲労、頭痛、筋肉痛、及び発熱から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
ヒトに投与するための、請求項１に記載の医薬組成物。
前記組成物は、前記疾患又は状態の症状の軽減までの時間を減少する、請求項１に記載の医薬組成物。