JP5691053B2 - 化粧用組成物における新規な天然物質の使用 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明の主題は、化粧用組成物及び皮膚用組成物における新規な天然物質の使用である。

技術的背景
マンノプロテインは、特に酵母の細胞壁に見いだされるタンパク質に結合したマンナンであり、そこでは構造機能および／または抗原機能を有する。

マンノプロテインは、一般に、ワインの醸造において特にワインを安定化させるのに用いられる（例えば文献WO 96/013571、WO 01/046380、WO 06/067147を参照のこと）。アルコール飲料の濁りのレベルを低下させるためのマンノプロテインの使用は、国際特許出願WO 07/034986に記載されている。

特許出願EP 0 790316では、マンノプロテインは、飲料と食品の乳化剤として使用されている。

国際特許出願WO 01/066574では、クリプトコッカス・ネオフォルマンスのマンノプロテインが、全身経路での投与法によって炎症性疾患または感染症を処置するための医薬の調製のために使用されている。するとマンノプロテインは好中球の移動を抑制することができる。

さらに、活性成分のアジュバントとしてのマンノプロテイン、すなわち活性成分の処置効果の改善または補強を可能にする化合物としてのマンノプロテインも報告されている。

従って、米国特許出願公開2005/0226822号では、マンノプロテインは、口腔用組成物でオボムチン・アジュバントとして使用されている。

国際特許出願WO 06/036817には、少なくとも1つの変化したフィラメント特性を有するように遺伝子改変した真菌細胞または真菌細胞抽出物を含む医薬組成物におけるアジュバントとしてのマンノプロテインの使用が記載されている。マンノプロテインの免疫原性特性は、この組成物の免疫応答を改善するため使用される。この出願は、特にカンジダ属の真菌に因る真菌感染に対するワクチン接種の原理に基づいている。

米国特許出願公開2005/0191268号では、マンノプロテインが、ワイン製造プロセス残留物の抽出物と、１種類以上の化粧品用の添加剤またはアジュバントとを含む化粧用調製物においてポリフェノール・アジュバントとして用いられている。残留物は、発酵が完了してワインを汲み上げた後に容器の底に残るおりである。残留物の抽出物は、１種類以上のポリフェノールと、付随する複合体としての１種類以上のタンパク質（例えばマンノプロテイン）を含んでいる。

化粧品の分野では、さまざまな化粧用組成物の調製に必要な原材料の種類を減らすこと、および／または化粧品の調製法を簡単化することを特に可能にする多機能性物質を有することが有用である。

さらに、消費者は、自然起源の成分を含む自然化粧品を求めている。したがって化粧品を調製するための天然の機能性物質を有することが有用である。

発明の概要

本発明の1つの対象は、化粧品と皮膚科学の分野において有用である新規な多機能性天然物質を提供することである。

本発明の1つの対象は、新規な化粧用組成物または皮膚用組成物を提供することでもある。

本発明の別の対象は、皮膚および／または皮膚付属器の化粧用または皮膚用処置方法に関する。

本発明の1つの対象は、活性成分および／または添加剤としてマンノプロテインを含む化粧用または皮膚用組成物である。

本発明は、マンノプロテインが、特に化粧用および／または皮膚用組成物における局所的適用のための、他の成分と組み合わせなくとも、そのままで実際に活性物質であるという発見に基づいている。

本発明は、マンノプロテインが、有利に使用できる、その化粧用および／または皮膚用組成物において効果も有するという発見にも基づいている。

本発明の特別な対象は、活性成分および／または添加剤としてマンノプロテインを含み、ポリフェノールを含まないことを特徴とする、化粧用または皮膚用組成物である。

本発明の特別な対象は、マンノプロテインが、酵母、サッカロミセス属、クルイベロミセス属、トルラ属、カンジダ属の酵母（サッカロミセス属が好ましい）の酵母に由来することを特徴とする上記の組成物である。

本発明の特別な対象は、マンノプロテインがサッカロミセス・セレビジエに由来することを特徴とする上記の組成物である。

本明細書で用いる用語「化粧用組成物」は、局所的適用の文脈で化粧的木果を得ることを目的とした組成物を意味する。

「皮膚用組成物」は、局所的処置効果を得ることを目的とした組成物を意味する。

どちらの場合にも、上記組成物は、当業者に知られているように、水とマンノプロテインに加え、化粧と皮膚科学的使用のために必要なあらゆる化合物（特に賦形剤と添加剤）を含んでいる。

用語「局所的」は、皮膚、皮膚付属器、粘膜のいずれかに適用された場所で組成物が活性であることを示す。本発明の組成物は、表皮の表面層、表皮、および／または真皮も同時に標的とする。

本発明の特別な対象は、粘膜を除く皮膚および／または皮膚付属器に適用することを目的とした上記の化粧用または皮膚用組成物である。

用語「皮膚付属器」は、一般に、身体を覆っているあらゆるもの、特に毛髪、爪、剛毛、まつげを意味する。

用語「皮膚」は、頭皮が含まれる。

本発明によるマンノプロテインは、当業者によく知られている標準的な方法で得られる。

マンノプロテインは、特に、菌類の細胞壁、特に酵母の細胞壁から抽出される。

細胞壁からのマンノプロテインの抽出は、化学的、酵素的、物理化学的経路による加水分解を通じたマンノプロテインの選択的可溶化によって実現できる。好ましくは、選択的可溶化は、温度の作用下で実現される。

不溶性画分は除去され、マンノプロテインを含む可溶性画分が回収される。その後、可溶性画分中のマンノプロテインを沈殿させるか濃縮し、場合によっては乾燥される。

好ましは、マンノプロテインの精製ステップは、不溶性画分を分離した後に実施する。

可溶性マンノプロテインを得る方法は、例えば本出願人の特許出願EP 1 094117に記載されており、WO-A-96/13571とWO-A-97/49794にも記載されている。

あらゆるタイプの出発物、特に酵母株を用いることができる。マンノプロテインは、特にサッカロミセス属、クルイベロミセス属、トルラ属、カンジダ属に由来する。サッカロミセス属、特にサッカロミセス・セレビジエが好ましい。

本発明の特別な対象は、マンノプロテインの抽出以前はいかなる用途にも使用されていなかった酵母の細胞壁から抽出されたマンノプロテインを含む上記の化粧用または皮膚用組成物である。

本発明による化粧用または皮膚用組成物は、乾燥形態（特に粉末形態）または溶液（例えば水溶液）のマンノプロテインから調製することができる。

本発明による化粧用または皮膚用組成物は、活性成分としての少なくとも１種類の化合物と、添加剤としての少なくとも１種類の化合物と、賦形剤としての少なくとも１種類の化合物とを含んでおり、同じ化合物をいくつかの用途で使用できる。

本明細書における「活性成分」は、化粧用組成物の場合には化粧効果を奏する物質を意味し、皮膚用組成物の文脈では処置効果を奏する物質を意味する。

「添加剤」は、化粧用または皮膚用組成物において、保存剤、キレート剤、着色剤、および／またはUVフィルタ（原材料の保護を可能にする）、pH調節剤（酸または塩基）、増粘剤、香料、および／または酸化防止剤の役割を有する物質を意味する。

「保護される原材料」は、化粧用または皮膚用組成物に含まれていて光で分解することのできるあらゆる成分を意味する。

「賦形剤」は、水相を構成する親水性化合物と、油相または界面活性剤を構成する疎水性化合物を意味する。

水相の親水性化合物は、特に、水、アルコール、ポリオールの中から選択される。

油相の疎水性化合物は、特に、炭化水素、脂肪酸、脂肪アルコール、エステル、グリセリド、セリド、リン脂質、シリコーンの中から選択される。

界面活性剤は、表面張力を小さくすることにより、通常は互いに混和しない２つの媒体を互いに保持することのできる両性分子である。界面活性剤は、イオン性（アニオン性、カチオン性、両性）または非イオン性である。

したがってマンノプロテインは、化粧用または皮膚用組成物の調製に特に有用な新規な多機能性天然物質を構成する。

本発明による化粧用または皮膚用組成物は、ポリフェノールを含んでいない。特に、本発明による組成物は、ジヒドロキシベンゼン、ピロガロール、フロログルシノール、アントシアニジン、プロアントシアニジン、フラボン、カテキン、タンニンを含んでいない。

本発明の対象は、オボムチンを含まないことを特徴とする上記の化粧用または皮膚用組成物でもある。

本発明による化粧用または皮膚用組成物は、上記のマンノプロテインに加え、他の酵母構成成分を含むことができる。

本発明の対象は、特にCRV1タンパク質をコードしている遺伝子の変化から生じる変化した糸状化特性を有する糸状菌も、その糸状菌の細胞抽出物も含まないことを特徴とする上記の化粧用または皮膚用組成物でもある。

別の好ましい実施態様では、本発明の対象は、真菌細胞から抽出されたマンノプロテイン以外の成分を含まないことを特徴とする、上記の化粧用または皮膚用組成物である。

本発明の特別な対象は、活性成分が、保湿効果、および／または引き締め効果、および／またはアンチ-エイジング効果、および／または抗脂漏効果、および／または抗座瘡効果、および／または毛髪再構成効果、および／または毛髪の光沢および／または柔らかさおよび／または成長に対する効果を有する、上記の化粧用または皮膚用組成物である。

「保湿効果」」との表現は、活性成分の吸蔵現象または水分固定による皮膚からの蒸発の減少、活性成分の湿潤化効果または吸湿効果、および／または脂肪を細胞間セメントの中に固定する性質を意味する。

本発明による組成物の保湿効果は、特に、表皮レベルでの脂質（特にリン脂質と中性脂質）とヒアルロン酸の合成活性化から生じる。

本発明による組成物の保湿効果は、実施例１に記載してあるように、ケラチノサイトによる脂質とヒアルロン酸の合成を調べることによってインビトロで証明できる。

本発明による組成物の保湿効果には、その組成物を頭皮に適用したときの抗フケ効果も含まれる。

抗フケ効果は、例えば実施例３に記載してあるように、本発明による組成物で処置した対象のフケの量が低下することによって証明できる。

「引き締め効果」との表現は、特にコラーゲン繊維とエラスチン繊維によって皮膚が物理的に支持されることから生じる皮膚の滑らかで引き締まった外観を意味する。

本発明の組成物により、特に、コラーゲン格子の収縮を改善することと、エラスチンの合成とコラーゲンの成熟を活性化することができる。

コラーゲン格子は、コラーゲンの繊維またはフィブリルの絡み合いに対応する。

本発明による組成物の引き締め効果は、実施例１に記載してあるように、インビトロで証明することができる。

「アンチ-エイジング効果」または「抗老化効果」との表現は、皮膚が老化した徴候の出現を遅延させる予防効果と、老化の徴候を減らす即時的効果の両方を意味する。本発明による組成物は、特に、年齢に関係する老化に対する効果を有し、光によって誘起される老化に対する効果も有することができる。

皮膚の年齢に関係する老化の目に見える徴候は、特に、皮膚の乾燥、細かい線と皺の出現、皮膚の厚みの低下、皮膚の滑らかさの喪失である。

皮膚の年齢に関係する老化には、コラーゲンの量の低下、その溶解度と合成の低下、エラスチンとミクロフィブリルの量の低下、グリコサミノグリカンの低下、線維芽細胞の不活性化も関係する。

本発明による組成物のアンチ-エイジング効果は、特に、真皮にある線維芽細胞の増殖の増加と、コラーゲンとグリコサミノグリカンの合成に関する線維芽細胞の活性の増加から生じる。

年齢に関係する老化に対するアンチ-エイジング効果は、実施例1に記載してあるように、インビトロで真皮の線維芽細胞によるコラーゲンとグリコサミノグリカンの合成の増加によって証明できる。

光によって誘起される皮膚の老化の徴候は、特に、深い皺と、厚くてざらざらした皮膚という外観である。

光によって誘起される皮膚の老化には、特に、コラーゲンの量と溶解度の低下、エラスチンとミクロフィブリルの量の増加、グリコサミノグリカンの増加、炎症細胞の増加が含まれる。

本発明の対象は、活性成分が特に傷および／または熱傷の修復に役立つ瘢痕形成効果を有することを特徴とする上記の化粧用組成物または皮膚用組成物でもある。マンノプロテインの瘢痕形成効果は、特に、ヒアルロン酸の合成の活性化と結び付いている。

「抗脂漏効果」との表現は、皮脂の分泌を調節し、皮脂の吸着を調節する効果、および／または皮膚の穴を引き締めることのできる収斂作用を意味する。

本発明の組成物により、皮脂の分泌を減らすことができる。

本発明の組成物により、特に、脂質を吸着させることで皮脂の吸着を調節できる。

したがって本発明による組成物は、顔の過剰脂漏および／または頭皮の過剰脂漏のためにいわゆる「脂ぎった」毛髪になる文脈で特に有用である。

本発明による化粧用組成物は、脂ぎった皮膚および／または座瘡になりやすい皮膚にとって有用な抗脂漏効果を有する。

「抗座瘡効果」との表現は、座瘡に対して有効である効果を意味する。

特に、座瘡に対する本発明の皮膚用組成物の有効な効果は、皮脂の分泌の調節と結び付いている。

「再構成効果」は、毛髪の滑らかな外観を得ることを意味する。キューティクルと呼ばれる毛髪の外側層は、互いに重なった鱗からなる。再構成効果によってキューティクルの凹凸は滑らかになるのに対し、傷んだ毛髪は粗い凹凸を有する。

本発明による組成物は、特に、毛髪を被覆する効果を有する。

毛髪の再構成効果は、実施例３に記載してあるように、毛髪の形状を測定することによって証明できる。

「光沢効果」は、毛髪が光を反射できて毛髪に光る効果を与えられることを意味する。

「柔らかさ効果」は、触ったときの毛髪の柔らかさの感覚を意味する。

「毛髪の成長に対する効果」は、毛髪の成長速度の増加を意味する。

毛髪の成長に対する効果は、実施例３に記載してあるように、毛髪の成長速度を測定する試験によって証明できる。

本発明の特別な対象は、添加剤が手触り（texturizing）効果を有する上記の化粧用または皮膚用組成物である。

「手触り（texturizing）物質」は、水相の中に分散させたときにその水相の粘性率を大きくできる物質を意味する。粘性率の増大は大きいことが有利である。

手触り物質としては、場合に応じ、増粘剤および／またはゲル化剤が可能である。

「増粘剤」は、特にゲル化剤とは異なり、三次元ネットワークを形成せずに粘性溶液を得ることのできる物質を意味する。

本発明による化粧用または皮膚用組成物は、いくつかの活性成分、および／または添加剤、および／または賦形剤を含むことができる。

本発明の対象は、活性成分および添加剤としてマンノプロテインを用いる上記の化粧用または皮膚用組成物でもある。

有利な実施態様では、マンノプロテインは、化粧効果または皮膚効果と手触り効果の両方にとって重要である。

本発明の特別な対象は、マンノプロテインが界面活性剤（特に乳化剤）としても存在する上記の化粧用または皮膚用組成物である。

「乳化剤」は、エマルジョンの組成物に導入される界面活性剤を意味する。このエマルジョンには、親油相と親水相も含まれている。エマルジョンは、１つの液体を、その液体とは混和しない別の液体に分散させた分散液である。

本発明の対象は、マンノプロテインを活性成分および賦形剤として含む上記の化粧用または皮膚用組成物である。

本発明の対象は、マンノプロテインを添加剤および賦形剤として含む上記の化粧用または皮膚用組成物である。

本発明の対象は、マンノプロテインを活性成分、添加剤および賦形剤として含む上記の化粧用または皮膚用組成物である。

本発明の別の実施態様では、マンノプロテインは、化粧用または皮膚用組成物において賦形剤としての効果を持たない。本発明の1つの対象は、特に、マンノプロテインが界面活性効果（特に乳化効果）を持たない上記の化粧用組成物または皮膚用組成物である。

本発明の対象は、溶液（１つの相）、分散液（特にエマルジョン、懸濁液、泡、アエロゾル）、ゲル、油、スティック、粉末、ふき取り材、パッチいずれかの形態になった上記の化粧用または皮膚用組成物である。

「エマルジョン」はあらゆるタイプのエマルジョンを意味し、例として特に、マクロ-エマルジョン、ミクロ-エマルジョン、ナノ-エマルジョン、単純エマルジョン、複合エマルジョンが挙げられる。

エマルジョンは、１つの液体を、その液体とは混和しない別の液体に分散させた分散液である。エマルジョンは、親油相と、親水相と、乳化剤とを含んでいる。

エマルジョンとして特に、ミルク、ローション、クリームなどが挙げられる。

ナノ-エマルジョンは、分散される粒子のサイズが直径1000 nm未満、特に10 nm〜100 nmの分散液である。

マイクロ-エマルジョンは、分散される粒子のサイズが直径1000 μm未満、特に10 μm〜100 μmの分散液である。

ナノ-エマルジョンとマイクロ-エマルジョンは、透明な媒体を構成する。

本発明による化粧用または皮膚用組成物は、特に、皮膚の用途または毛管現象への応用に適している。

毛管現象への応用のための本発明による組成物は、特に、シャンプー、ローション、マスク、スプレーの形態である。

本発明の対象は、0.01％〜20％、特に0.01％〜15％、特に0.01％〜10％、特に0.01％〜3％、のマンノプロテインを含む上記の組成物である。

含有率はw/wで表わす。

本発明の特別な対象は、活性成分として0.01％〜3％、特に0.01％〜2％のマンノプロテインを含む上記の組成物である。

本発明の特別な対象は、添加剤として0.01％〜20％、特に1％〜20％、特に10％〜20％、特に15％〜20％、のマンノプロテインを含む上記の組成物である。

本発明の対象は、上記の化粧用組成物または皮膚用組成物を調製するため、マンノプロテインを許容可能な化粧用または皮膚用のビヒクルと混合するステップを含む方法でもある。

許容可能な化粧用または皮膚用のビヒクルは特に、上記の添加剤および／または賦形剤の中から選択される。

本発明の対象は、上記の化粧用または皮膚用組成物を調製するため、マンノプロテインを、許容可能な化粧用または皮膚用のビヒクル、およびマンノプロテイン以外の少なくとも１種類の活性成分と混合するステップを含む方法でもある。

本発明の対象は、上記の化粧用組成物、または上記の調製法によって得られる化粧用組成物を、皮膚および／または皮膚付属器と接触させるステップを含む化粧的処置方法である。

用語「接触させる」は、今後は「適用」も意味する。

該処置方法は、毎日１回〜数回、好ましいが毎日１回〜３回の適用を含む。

化粧用組成物を適用する頻度は、処置の期間を通じて減らせる可能性がある。

化粧的処置方法は、1〜数週間の短期の処置、または数年にわたる長期の処置で構成することができる。処置法は、毎年繰り返す処置・コースの形態、または１年に数回の形態の処置にすることもできる。

本発明の特別な対象は、表皮を湿潤にすること、真皮を引き締めること、皮膚の老化と闘うこと、皮脂の分泌を調節すること、毛髪を修復すること、および／または毛髪の成長を改善することを目的とした上記の化粧的処置方法である。

表皮の保湿は、皮膚障壁の品質、すなわち水の蒸発を制限する不透過性、を再確立することと、水捕捉分子の存在、特にグリコサミノグリカンであり、その中にヒアルロン酸も含まれる、を増やすことを目的とする。

本発明による化粧的処置方法は、皮膚の乾燥とフケ症の処置および／または予防に特に役立つ。

真皮の引き締めは、特にエラスチンの合成を活性化し、コラーゲンの合成および成熟を活性化し、コラーゲン格子の収縮を活性化することにより、真皮が引き締まった状態を維持または強化することを目的とする。

皮膚の老化との闘いは、老化の徴候を遅延させること、および／または減らすことを目的とする。

好ましい実施態様では、老化と闘うことを目的とした処置を表皮の保湿と組み合わせる。

本発明の化粧的処置方法は、特に、年齢が20歳以降、特に30歳以降、特に40歳以降、特に50歳以降、の対象に推奨される。

皮脂の分泌の調節は、特に、皮脂の分泌を減らすことを目的とする。

本発明の化粧的処置方法は、特に、脂ぎった皮膚の脂漏の調節、特に、いわゆる「問題のある」脂ぎった皮膚、または「座瘡になりやすい」皮膚、および／またはいわゆる「脂ぎった」毛髪に役立つ。

毛髪の修復は、特に、毛髪のキューティクルを滑らかにして毛髪を再構成すること、および／または毛髪の光沢および／または柔らかさを回復することからなる。

本発明の化粧的処置方法は、特に日光への曝露、海水への曝露、頻繁過ぎる洗髪、染色、脱色、パーマなどの後に毛髪がダメージを受けた対象に特に適している。

毛髪の成長の改善は、毛髪の成長速度を大きくすることを目的とする。

本発明の化粧的処置方法は、特に、毛髪の成長速度が遅い対象、および／または正常な脱毛のケースに適している。

いわゆる正常な脱毛は、特に、男性型脱毛症、内分泌性脱毛症、年齢関連脱毛症に対応する。

望ましい実施態様では、本発明の化粧的処置方法は、顔、特に目、鼻、額、顎；身体、特に手、足、背中；毛髪および／または頭皮への適用に適している。

本発明の対象は、皮膚の乾燥および／または過剰脂漏症、および／または座瘡および／または脱毛という病的症状の処置および／または予防を目的として、マンノプロテインを用いて上記の皮膚用組成物、または上記の調製法によって得られる皮膚用組成物を調製する方法でもある。

皮膚用組成物の利用法は、その皮膚用組成物を皮膚および／または皮膚付属器に局所的に適用することを想定している。

皮膚用組成物の利用法は、毎日1回以上の適用で構成することができる。毎日１回〜３回適用することが好ましい。

皮膚用組成物を適用する頻度は、処置期間を通じて減らせる可能性がある。

皮膚処置は、数日〜数週間の短期の処置、または数年にわたる長期の処置で構成することができる。処置は、毎年繰り返す処置過程の形態、または１年に数回の形態の処置にすることもできる。

望ましい実施態様では、皮膚用組成物は、活性成分としてのマンノプロテインを、少なくとも１種類の他の活性成分と組み合わせて含んでいる。

本発明による皮膚用組成物は、（特に魚鱗癬の場合の）皮膚の病的な乾燥（乾皮症とも呼ばれる）や、湿疹または乾癬に伴う皮膚の乾燥や、（特にフケに付随する）頭皮の病的な乾燥の処置に特に役立つ。

本発明による皮膚用組成物は、病的な過剰脂漏、特に青年や妊娠中または更年期の女性のホルモンのアンバランスに伴う過剰脂漏、の処置にも役立つ。

本発明による皮膚用組成物は、病的な座瘡、特に若年性座瘡、または過剰脂漏症に関係する座瘡、の処置にも役立つ。

本発明による皮膚用組成物は、感情的なショック、および／または甲状腺機能不全、および／または処置の副作用、例えば抗がん処置、によって生じる病的な脱毛、円形脱毛症とも呼ばれる、の処置にも役立つ。

好ましい実施態様では、マンノプロテインを用いて上記の皮膚用組成物を調製する方法は、好中球の移動が関係する疾患、特にIL-8と関係する疾患の処置を目的としていない。

本発明の対象は、他の処置または処置の副作用または不快症状を処置するために上記の化粧用組成物または皮膚用組成物を用いる方法でもある。

特に、上記の副作用または不快症状として、皮膚の乾燥、例えば湿疹に付随する皮膚の乾燥、過剰脂漏症、脱毛などがある。

上記の副作用または不快症状の原因となる処置は、例えば好中球の移動が関係する疾患の処置、特に、IL-8（インターロイキン8）、fMLP（N-ホルミル-メチオニル-ロイシル-フェニルアラニン）、PAF（血小板活性化因子）、C5a（補体のN末端部の切断から生じる糖タンパク質）、TNFα（腫瘍壊死因子α）、L-セレクチンによる調節が関与する炎症性疾患または感染症の処置、を目的としたものである。

本発明の対象は、化粧用および／または皮膚用組成物における手触り物質としてのマンノプロテインの使用でもある。

本発明の対象は、マンノプロテインが他の手触り物質、特にキサンタン・ゴム、と組み合わされて存在している上記の組成物でもある。マンノプロテインは、他の手触り物質、特にキサンタン・ゴム、の増粘効果（特に粘性率を大きくする能力）を相乗的に増大させることができる。マンノプロテインとキサンタン・ゴムの重量比が１：５〜１：３だと、最大の相乗効果が得られる。より好ましいのは、この重量比が約１：４になっていることである。

本発明は、これら組成物を用いた上記の化粧的処置方法にも関する。

以下の実施例で本発明を説明するが、本発明がこれら実施例に限定されることはない。

実施例１
マンノプロテインの保湿特性、アンチ-エイジング特性、引き締め特性
材料と方法
（i）マンノプロテイン
ヨーロッパ特許EP 1 094117号に記載されている方法に従って得られるマンノプロテインを水溶液にし、0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.016mg/ml、0.032mg/mlいずれかの濃度で試験する。

（ii）保湿効果
試験は、96ウエルのマイクロプレートのウエル内のKSFM培地（無血清）に植えた正常なヒト表皮ケラチノサイトNHEKで実施する。さまざまな濃度のマンノプロテインの存在下で脂質の合成とヒアルロン酸の合成を評価する。条件ごとに３つの培養ウエルを用意する。

脂質の合成の陽性対照としてカルシウムを用い、ヒアルロン酸合成の陽性対照としてレチノイン酸を用いる。
陰性対照は培地だけで構成する。

インキュベーション（37℃、5％CO₂で72時間）が終了したとき、ヒアルロン酸合成を、上清において、標準的なELISAアッセイにより、製造者の指示（R&Dシステムズ社、DY3614）に従って評価する。

リン光イメージングによって脂質の合成を分析するとともに、培地の中に放出されたヒアルロン酸の濃度を測定してヒアルロン酸の合成を評価する。

（iii）アンチ-エイジング効果
正常なヒト真皮線維芽細胞（NHDF）と老化した正常なヒト真皮線維芽細胞（AgNHDF）を、96ウエルのマイクロプレートのウエル内のKSFM培地+10％FCSに播く。試験は、KSFM培地+1％FCSの中で実施する。2つの培地には、2 mMのL-グルタミンと、50 UI/mlのペニシリンと、50 μg/mlのストレプトマイシンも補足する。FCS（ウシ胎仔血清）と、L-グルタミンと、ペニシリンと、ストレプトマイシンは、インヴィトロジェン社から取得した。培養を37℃、5％CO₂で実施する。正常な線維芽細胞は、8継代目のプールF2からの線維芽細胞であり、老化した線維芽細胞は、18継代目のプールF2からの線維芽細胞である。

線維芽細胞の増殖試験と、グリコサミノグリカンとコラーゲンの合成試験を、さまざまな濃度のマンノプロテインの存在下で実施する。条件ごとに3つの培養ウエルを用意する。
陰性対照は培地だけで構成する。

増殖試験は、細胞を植えてから24時間にわたって実施する。[³H]-チミジンを培地に添加する。EGFを陽性対照として用いる。

[³H]-グルコサミンまたは[³H]-プロリンをそれぞれ添加した集密度が80％の細胞でグリコサミノグリカンとコラーゲンの合成を評価する。ここではレチノイン酸を陽性対照として用いる。

72時間にわたってインキュベートした後、巨大分子を取り出し、放射性前駆体の組み込みを測定する。プロリンの組み込みに関しては、上清（可溶性画分）への組み込みと、細胞内画分および沈殿画分への組み込みを区別する。

（iv）引き締め効果
老化した正常なヒト表皮線維芽細胞（AgNHDF）で試験を実施する。

フラスコの中でさまざまな濃度のマンノプロテインの存在下にて細胞を8日間にわたってあらかじめ培養した後、コラーゲンの合成と成熟を評価する。陰性対照は培地だけで構成し、陽性対照はTGFβとビタミンCで構成する。次に細胞を培養チャンバに入れる。集密になる直前に細胞をメタノールで固定し、コラーゲンIに対して特異的な抗体と、蛍光二次抗体とを利用してコラーゲンの存在を免疫組織化学によって検出する。細胞内コラーゲンと細胞外コラーゲンの発現レベルと、マトリックス周辺でのその位置を、顕微鏡で分析する。

フラスコの中でさまざまな濃度のマンノプロテインの存在下にて8日間にわたって細胞を培養した後、コラーゲン格子の収縮を評価する。陰性対照は培地だけで構成し、陽性対照はTGFβで構成する。次に、得られた細胞懸濁液を制御されたpHのもとでコラーゲンIの溶液と合わせる。数時間後、溶液はゲル化し、輪郭がはっきりした真皮の等価物が得られる。それぞれの真皮等価物の細胞の直径と数を、所定の反応速度論に従って測定する。

フラスコの中でさまざまな濃度のマンノプロテインの存在下にて8日間にわたって細胞を培養した後、エラスチンの合成を評価する。陰性対照は培地だけで構成し、陽性対照はビタミンCで構成する。次に細胞を培養チャンバに播く。集密になる直前に細胞をメタノールで固定し、エラスチンに対して特異的な抗体と、蛍光二次抗体とを利用してエラスチンの存在を免疫組織化学によって検出する。エラスチンの発現レベルを顕微鏡で分析する。

（v）統計
ダンネット多重比較検定を利用し、分散分析（ANOVA）によってグループ間の比較を行なう。

結果
i）表皮に対する保湿効果の評価
マンノプロテイン溶液の存在下では、ケラチノサイトによる脂質とヒアルロン酸の合成が陰性対照と比べて活性化される。

特に、ケラチノサイトを0.032mg/mlの濃度のマンノプロテインに浸したとき、ヒアルロン酸の産生が陰性対照と比べて151％になる（p値は0.05未満であるため、この検定は有意であると判断される）。

ii）真皮に対するアンチ-エイジング効果の評価
マンノプロテイン溶液の存在下では、（陰性対照と比べて）細胞増殖の活性化と、細胞外マトリックスの主要構成成分の合成の増加が観察される。
特に、コラーゲンの合成に関して以下の表１に示した結果が得られる。

さらに、グリコサミノグリカン（GAG）の合成に関して以下の表2に示した結果が得られる。

iii）真皮に対する引き締め効果の評価
マンノプロテイン溶液の存在下では、陰性対照と比べ、コラーゲンの発現レベルの増加が観察されるとともに、コラーゲンの成熟が、マトリックスの周辺へのコラーゲンの堆積によって明らかになる。真皮等価物の密度が増大する（直径と細胞数の比が陰性対照よりも小さい）ことで、コラーゲン格子がよりよく収縮する。さらに、線維芽細胞によるエラスチンの合成が陰性対照と比べて活性化される。これらの現象はすべて、マンノプロテインが真皮の生体力学的品質を（特に弾性と圧縮性に関して）改善することを示している。

実施例２
抗脂漏特性と抗座瘡特性
材料と方法
マンノプロテイン溶液を、皮膚または頭皮に過剰脂漏症がある対象のそれぞれ皮膚または頭皮に適用する。

次に、体の処置部に皮脂吸収パッチを取り付けることによって皮脂の分泌を評価する。次いでパッチを分析し、皮脂の分泌を定量化する。

処置後の分泌を同じ対象の処置前の分泌と比較する。

結果
マンノプロテイン溶液により、分泌される皮脂の量を減らすことができる。

実施例３
毛管現象への応用
材料と方法
（i）マンノプロテイン
ヨーロッパ特許EP 1 094117号に記載されている方法に従って得られるマンノプロテインを水溶液にする。

（ii）抗フケ効果
フケに悩まされている対象の頭皮にマンノプロテイン溶液を適用する。マンノプロテイン溶液で処置した後、パッチを処置した領域だけに取り付けて頭皮からのフケを回収する。

パッチに回収されるフケの量を処置の前後で比較する。

（iii）毛髪の成長
毛髪の成長速度を以下のようにして評価する：処置前に対象の毛髪の束を根元から2〜3 cmにわたって着色する；次にマンノプロテイン溶液を頭皮に適用する；毛の根元と着色開始点の距離を測定する。

処置した対象群の処置後の成長速度を、処置なしの群で得られた成長速度と比較する。

（iv）毛髪の光沢
毛髪の表面で反射される光の量と強度を測定することによって毛髪の光沢を調べる。そうするため、毛髪の交差偏光写真と非偏光写真を撮影する。次にその２枚の写真をグレー・スケールに変換し、２枚の写真の間で光を差し引くことによって毛髪の光沢を得る。

マンノプロテイン溶液を適用した後の毛髪の光沢を処置前に得られた毛髪の光沢と比較する。

（v）毛髪の柔らかさ
触ったときの毛髪の柔らかさを評価する資格のある３人の審査員による感覚的分析によって毛髪の柔らかさを評価する。

毛髪の柔らかさを０〜１０のスケールで示す。0は柔らかさが欠如していることに対応し、10は非常に柔らかいことに対応する。

マンノプロテイン溶液を適用した後の毛髪の柔らかさを処置前に得られた毛髪の柔らかさと比較する。

（vi）毛髪の再構成
干渉顕微鏡を用いて毛髪の表面の形状を測定することによって毛髪の再構成を評価する。

毛髪に沿ったキューティクルの鱗の状態を判断することを可能にするパラメータは以下のものである：
開いた鱗、
鱗の長さ、
表面の形状、すなわち粗さ。

分析した表面のサイズは120×30 μmである。

マンノプロテイン溶液を適用した後の毛髪の再構成を処置前に得られた毛髪の状態と比較する。

結果
マンノプロテイン溶液を毛管現象に応用することにより、抗フケ効果を得るとともに毛髪の成長を増大させることができる。

マンノプロテイン溶液は、毛髪に対する修復効果も有するため、毛髪の光沢、柔らかさ、再構成を改善できる。特に、キューティクルの開いた鱗の数の減少、鱗の長さの増加、粗さの低下が注目される。

実施例４
手触り添加剤と乳化賦形剤の機能
材料と方法
（i）マンノプロテイン
ヨーロッパ特許EP 1 094117号に記載されている方法に従って得られるマンノプロテインを水溶液にする。

（ii）手触り特性
マンノプロテインの手触り特性と膜形成特性をさまざまな方法で評価する。その方法とは、レーザー光散乱の測定による粒子サイズの分析、レオロジー研究（降伏値、粘性率、日焼けd（DMAとも呼ばれる））、さまざまな温度と期間での安定性試験（導電率、粒度分布、粘性率、色、フレグランス）、皮膚への広がりである。

水性組成物中のマンノプロテインの手触り効果をキサンタン・ゴム（天然の多糖）およびカルボマーと比較する。

マンノプロテインとさまざまな乳化系の適合性も試験する。その乳化系は、以下のものである：
アニオン系：セラリューションH、
非イオン系：テゴ・ケア450、
非イオン系をベースとしていてTiO₂を含む日焼け止めローション
ゲル。

ゲル系により、マンノプロテインの乳化特性を試験することができる。

結果
ポリマー性テクスチャライザ（texturizer）が化粧用組成物で広く用いられている。これらのテクスチャライザは、クリーム、ゲル、ローションといったタイプの組成物を製造するためのカギとなる製品である。テクスチャライザは、多彩な化学的添加剤の存在下でその特性を保持せねばならない。

組成物の中でマンノプロテインを水とともに用いる場合を、標準的な手触り物質（親水性添加剤であるキサンタン・ゴムやカルボマーなど）を用いた場合と比較した。さまざまな乳化系の中におけるマンノプロテインも試験した。

マンノプロテインは手触り特性を有し、標準的な乳化系に適合する。マンノプロテインは膜を形成することもでき、ポリマー乳化剤として機能する。

さらに、マンノプロテインは、他のいくつかの手触り物質（キサンタン・ゴムなど）と共に相乗的に手触り効果を有することがわかった。以下の表３に、水、キサンタン・ゴム、マンノプロテインをさまざまな濃度で含む溶液に関する粘性率測定の結果を示す。

Claims (5)

1. 手触り（texturizing）物質として真菌の細胞壁から酵素的加水分解により抽出したマンノプロテイン、およびもう１つの手触り（texturizing）物質としてキサンタンガムを含む皮膚化粧用組成物であって、マンノプロテインのキサンタンガムに対する重量比が１：５〜１：３であり、該組成物がポリフェノールおよびオボムチンを含まない、組成物。
2. マンノプロテインのキサンタンガムに対する重量比が１：４である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記マンノプロテインが、サッカロミセス（Saccharomyces）、クルイベロマイセス（Kluyveromyces）、トルラ（Torula）またはカンジダ（Candida）に由来することを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 前記マンノプロテインが、サッカロミセス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）に由来する、請求項３に記載の組成物。
5. 0.01％〜20％のマンノプロテインを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。