JP4651611B2 - ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の鎮咳去痰における治療用途、並びにそれらの薬品組成物 - Google Patents
ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の鎮咳去痰における治療用途、並びにそれらの薬品組成物 Download PDFInfo
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Description
本発明は鎮咳去痰の治療分野に係り、特に、鎮咳去痰の薬品組成物の調製におけるナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の応用に関し、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩によって調製された薬品組成物、並びに鎮咳去痰に対する治療用途に関する。
咳、痰、喘息は呼吸器系統の病気に常に現れる症状であり、日常生活では急慢性気管支炎や風邪などによって引き起こされることが多く、臨床状態として咳に喀痰を伴うことが普通である。幼児や中高年層は体質などが原因で、急慢性気管支炎や風邪による咳、痰などの病状を招きやすい。よくある病気として、発病の初期に適切な手当てを施さないと、次第に重症化して、人体の健康と生活に大きな影響を及ぼすようになる。
鎮咳去痰の化学薬品において、鎮咳薬としてコデイン（codeine）、デキストロメトルファン（dextromethorphan）、ペントキシベリン（pentoxyverine）、ベンプロペリン（benproperine）等、去痰薬として塩化アンモニウム（ammonium chloride）、アセチルシステイン（acetylcysteine）、ブロムヘクシン（bromhexine）等が知られている。しかし、今までの鎮咳去痰の化学薬品は共通の欠陥がある。即ち、鎮咳に用いられる化学薬品は去痰の効果がなく、痰のない空咳に対しては効くが、多痰の咳に対しては最適でない。一方、去痰ための化学薬品は鎮咳にあまり効果がない。その上、化学薬品は体に副作用が強い。例えば、コデインを長期に渡り服用すると、中毒になりやすい；デキストロメトルファンはめまい現象、おくびを起こしやすい；ペントキシベリンは頭痛、めまい、口渇、便秘などの症状をもたらし、更にアトロヒンのような副作用も伴い、緑内障のある患者には禁忌である；ベンプロペリンはめまい、胸やけ、エップロ−レッセンスなどの不良な反応を引き起こす；塩化アンモニウムは胃の粘膜に局所的な刺激を与えるため、潰瘍又は肝、腎不全の者への使用は避けるべきである；アセチルシステインは特殊な臭いがあって、悪心、嘔吐等の現象を引き起こすので、呼吸道に刺激を与え、気管支炎の患者には適用できない；ブロムヘクシンは胃部不快感を起こし、消化性潰瘍の患者には適用できない。
鎮咳去痰に対しては、伝統の漢方薬で色々努力して来た。例えば橘紅丸、川貝枇杷糖漿、消咳喘糖漿等の漢方薬は中華人民共和国の薬典（２０００年版第一巻）に既に記載されている。しかし、その特徴から見ると、今まで使用されてきた鎮咳去痰における伝統の漢方薬は、用量が多くて不便であるという問題がある。例えば、橘紅丸は化橘紅、陳皮などの１５種類の植物原料から配合された丸薬であり、一回の服用量が１０g以上になる。川貝枇杷糖漿は川貝母、桔梗、枇杷葉、薄荷の４種類の植物原料から配合されたシロップ剤であり、消咳喘糖漿はツツジを主な原料としたシロップ剤であって、両方とも一回の服用量が１０mlになる。上述のような漢方薬は用量が多く、携帯にも不便である。
このため、胃及び呼吸道に刺激がなく、副作用が小さく、携帯及び服用に便利、安全であると共に、効果が顕著で空咳にも痰多にも適用できる新たな薬を研究整備する必要がある。
このため、胃及び呼吸道に刺激がなく、副作用が小さく、携帯及び服用に便利、安全であると共に、効果が顕著で空咳にも痰多にも適用できる新たな薬を研究整備する必要がある。
ナリンゲニンの化学名称は5, 7, 4′- trihydroxy-flavanone であり、フラボン類化合物であるナリンギンのグリコシドとして、桜や梅のつぼみの組織に広く存在している。ナリンゲニンは酸化と潰瘍を防ぎ、乳癌の増殖及び乳房腫瘍の形成を抑制し、血管の病気を治療することができる。ナリンギンはナリンゲニンの誘導体として、ナリンギンの7配位上で２糖と結合して形成したグリコシドであり、抗酸化、抗潰瘍、抗炎症などに用いられることが知られている。現時点では、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩が鎮咳去痰の活性を有することは知られていない。
ナリンゲニンの分子式：C15H12O5
ナリンゲニンの構造式は次の通りである。
ナリンゲニンの構造式は次の通りである。
ナリンゲニン （Naringenin）
ナリンギンの分子式：C27H32O14
ナリンギンの構造式は次の通りである。
ナリンギンの分子式：C27H32O14
ナリンギンの構造式は次の通りである。
ナリンギン（Naringin）
ナリンゲニン及びナリンギンはすべてフラボン類化合物に属し、遊離フェノール性ヒドロキシル基を有しているので、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ物質と反応して塩を形成する。
ナリンゲニン及びナリンギンはすべてフラボン類化合物に属し、遊離フェノール性ヒドロキシル基を有しているので、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ物質と反応して塩を形成する。
ナリンゲニン塩とは上述のアルカリ反応によってナリンゲニンから生成されたナリンゲニンのナトリウム塩又はナリンゲニンのカリウム塩を指す。ナリンギン塩とは上述のアルカリ反応によってナリンギンから生成されたナリンギンのナトリウム塩又はナリンギンのカリウム塩を指す。
本発明の目的はナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の新たな治療用途を提供することである。
ここで、前記用途とは、鎮咳去痰の薬品組成物の調製におけるナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の応用を指す。
本発明のもう一つの目的は鎮咳去痰に用いられる薬品組成物を提供することである。
ここで、前記用途とは、鎮咳去痰の薬品組成物の調製におけるナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の応用を指す。
本発明のもう一つの目的は鎮咳去痰に用いられる薬品組成物を提供することである。
本発明の鎮咳去痰に用いられる薬品組成物は有効用量の活性成分であるナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩、及び薬学的に許容される担体を含む。
但し、有効用量は一日の服用量が0.1〜500 mg/kg重量であり、一日の最適な服用量は1〜100mg/kg重量である。
また、上記薬品組成物は錠剤、シロップ剤、カプセル剤、粉末注射剤、注射剤、吸入剤からなる群のいずれかである薬剤に調製できる。
また、上記薬品組成物は経口投与、注射投与、又は吸入投与に用いられる。
また、上記薬品組成物において、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の調製方法は以下示すようになる。
但し、有効用量は一日の服用量が0.1〜500 mg/kg重量であり、一日の最適な服用量は1〜100mg/kg重量である。
また、上記薬品組成物は錠剤、シロップ剤、カプセル剤、粉末注射剤、注射剤、吸入剤からなる群のいずれかである薬剤に調製できる。
また、上記薬品組成物は経口投与、注射投与、又は吸入投与に用いられる。
また、上記薬品組成物において、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の調製方法は以下示すようになる。
ナリンギンは Rosenmund（Rosenmund， Ber.， 61，2608（1958））及びZemlen， Bognar（Ber.，75，648（1942））に記載されている方法によって得られる。
更に、ナリンギンは植物原料から抽出することもできる。
ナリンギンを有する植物原料として、枳殻、枳実、ミカン、レモン、グループフルーツ、橘紅、化橘紅、オレンジ等が挙げられる。
更に、ナリンギンは植物原料から抽出することもできる。
ナリンギンを有する植物原料として、枳殻、枳実、ミカン、レモン、グループフルーツ、橘紅、化橘紅、オレンジ等が挙げられる。
ナリンギンの抽出方法は以下のステップを含む。まず、ナリンギンを含有する植物原料を粉砕し、水で１〜３回抽出して、その液体を濾過、併合する；該濾過液体を濃縮した後アルコールで沈殿し、再度濾過して、該濾過液体からアルコールを取り出してクロマトグラフィー、又は直接クロマトグラフィーを行って分離し、有機溶媒を洗い落とす、洗い落とした溶媒を回収し、溶媒を取り除いて、ナリンギンの粗製品を得る。また１〜１０回再結晶して、ナリンギンの単体を得る。
ナリンゲニンの調製方法は三種類ある。
第一の方法は、ナリンギンを加水分解し、ナリンゲニンの単体を得る方法である。
ナリンゲニンの調製方法は以下のステップを含む。ナリンギンを加水溶解して、均一に撹絆し、酸もしくは塩基もしくは酵素を加えて分解し、沈殿濾過してナリンゲニン粗製品を得る；有機溶媒を使って１〜１０回再結晶して、ナリンゲニンの単体を得る。
第一の方法は、ナリンギンを加水分解し、ナリンゲニンの単体を得る方法である。
ナリンゲニンの調製方法は以下のステップを含む。ナリンギンを加水溶解して、均一に撹絆し、酸もしくは塩基もしくは酵素を加えて分解し、沈殿濾過してナリンゲニン粗製品を得る；有機溶媒を使って１〜１０回再結晶して、ナリンゲニンの単体を得る。
上記の酵素はグルコロニダーゼまたは他の六炭糖を加水分解できる酵素である。
第二の方法は、ナリンゲニンを有する植物原料からナリンゲニンの単体を得る方法である。
ナリンゲニンを有する植物原料は桜の蕾と梅の蕾を含む。
ナリンゲニンの抽出方法は以下のステップを踏む区。ナリンゲニンを有する植物原料を粉砕して、有機溶媒で１〜３回抽出し、その液体を濾過、併合する；次に該濾過液体をエキスに濃縮して、該エキスを沈殿させて、ナリンゲニンの粗製品を得る；最後に有機溶媒で１〜１０回再結晶して、ナリンゲニンの単体を得る。
第二の方法は、ナリンゲニンを有する植物原料からナリンゲニンの単体を得る方法である。
ナリンゲニンを有する植物原料は桜の蕾と梅の蕾を含む。
ナリンゲニンの抽出方法は以下のステップを踏む区。ナリンゲニンを有する植物原料を粉砕して、有機溶媒で１〜３回抽出し、その液体を濾過、併合する；次に該濾過液体をエキスに濃縮して、該エキスを沈殿させて、ナリンゲニンの粗製品を得る；最後に有機溶媒で１〜１０回再結晶して、ナリンゲニンの単体を得る。
第三の方法は、ナリンギンを有する植物原料を直接加水分解し、抽出した後、ナリンゲニンの単体を得る方法である。
ナリンゲニンの抽出方法は以下のステップを含む。ナリンギンを有する植物原料を粉砕し、水又は有機溶媒で１〜３回抽出しその液体を濾過、併合する；次に該濾過液体をエキスに濃縮し、該エキスを水又は有機溶媒を加えて溶解し、それに酸もしくは塩基もしくは酵素を加えて水解、濾過して、ナリンゲニンの粗製品を得る；最後に１〜１０回再結晶し、ナリンゲニンの単体を得る。
ここで、上記の酵素はグルコロニダーゼまたは他の六炭糖を加水分解できる酵素である。
ナリンゲニンの抽出方法は以下のステップを含む。ナリンギンを有する植物原料を粉砕し、水又は有機溶媒で１〜３回抽出しその液体を濾過、併合する；次に該濾過液体をエキスに濃縮し、該エキスを水又は有機溶媒を加えて溶解し、それに酸もしくは塩基もしくは酵素を加えて水解、濾過して、ナリンゲニンの粗製品を得る；最後に１〜１０回再結晶し、ナリンゲニンの単体を得る。
ここで、上記の酵素はグルコロニダーゼまたは他の六炭糖を加水分解できる酵素である。
上記のナリンギン、ナリンゲニンの抽出方法に採用された有機溶媒は、エチルアルコール、メチルアルコール、クロロホルム、酢酸エチルと石油エーテルから選ばれる。
上記のナリンゲニン塩は、ナリンゲニンと相当するアルカリ物質が反応して生成した金属塩であり、その分子式はC15H(12-n)O5 Yn（nは１−３であり、Yは金属イオン）である。
ナリンゲニン塩は以下の方法により調製される。即ち、0〜100℃の条件で、ナリンゲニンと相当するアルカリ物質と反応して相当のナリンゲニンの金属塩を得る；反応におけるナリンゲニンとアルカリ物質とのモル比は1:1〜1:3である。
上記のナリンゲニン塩は、ナリンゲニンと相当するアルカリ物質が反応して生成した金属塩であり、その分子式はC15H(12-n)O5 Yn（nは１−３であり、Yは金属イオン）である。
ナリンゲニン塩は以下の方法により調製される。即ち、0〜100℃の条件で、ナリンゲニンと相当するアルカリ物質と反応して相当のナリンゲニンの金属塩を得る；反応におけるナリンゲニンとアルカリ物質とのモル比は1:1〜1:3である。
ここで、上記のアルカリ物質は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、及び炭酸カリウムからなる群から選ばれる。反応で得たナリンゲニン塩はナリンゲニンのナトリウム塩又はカリウム塩であり、その分子式はC15H(12-n)O5 Yn（式中、nは1−3であり、YはKイオン又はNaイオンである）である。
上記のナリンギン塩は、ナリンギンと相当するアルカリ物質と反応して生成した金属塩であり、その分子式はC27H(32-n)O14 Yn（nは1−2であり、Yは金属イオン）である。
ナリンギン塩は以下の方法により調製される。即ち、0〜40℃の条件で、ナリンギンと相当するアルカリ物質と反応させて、ナリンギンの金属塩を得る。ここで反応におけるナリンギンとアルカリ物質とのモル比は1:1〜1:2である。
アルカリ物質は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムからなる群から選ばれる。反応で得たナリンギン塩はナリンギンのナトリウム塩又はカリウム塩であり、その分子式はC27H(32-n)O14 Yn（nは1-2であり、YはKイオン若しくはNaイオン）である。
ナリンギン塩は以下の方法により調製される。即ち、0〜40℃の条件で、ナリンギンと相当するアルカリ物質と反応させて、ナリンギンの金属塩を得る。ここで反応におけるナリンギンとアルカリ物質とのモル比は1:1〜1:2である。
アルカリ物質は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムからなる群から選ばれる。反応で得たナリンギン塩はナリンギンのナトリウム塩又はカリウム塩であり、その分子式はC27H(32-n)O14 Yn（nは1-2であり、YはKイオン若しくはNaイオン）である。
本発明におけるもう一つの目的は鎮咳去痰の治療方法を提供することである。
本発明におけるこの鎮咳去痰の治療方法は、上述の薬品組成物を哺乳動物、特に人間に薬を投与することを含む。
ナリンゲニンはtrihydroxy-flavanoneフラボン類化合物の一種であり、性質が安定し、人体に入った後も原形のままで存在する。ナリンギンはナリンゲニンの誘導体であり、ナリンギンの７配位上で、ナリンゲニンと2糖が結合したグリコシドであって、人体の中に入った後、胃酸の働きで加水分解し、このため体内では主にナリンゲニンの形で効力を発揮するが、加水分解の不完全性でナリンギンの形で存在する場合もある。（Kazuo Ishii, Takashi Furuta, Yasuji Kasuya. Determination of naringin and naringenin in human plasma by high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography B, 683(1996);225-229）。ナリンゲニン塩は体内に入ると、胃酸の働きによりナリンゲニンに変わって効力を発揮する。ナリンギン塩は体内に入った後、胃酸の働きによりまずナリンギンに変わり、次に胃酸の働きにより加水分解してナリンゲニンを形成して、効力を発揮する。
本発明におけるこの鎮咳去痰の治療方法は、上述の薬品組成物を哺乳動物、特に人間に薬を投与することを含む。
ナリンゲニンはtrihydroxy-flavanoneフラボン類化合物の一種であり、性質が安定し、人体に入った後も原形のままで存在する。ナリンギンはナリンゲニンの誘導体であり、ナリンギンの７配位上で、ナリンゲニンと2糖が結合したグリコシドであって、人体の中に入った後、胃酸の働きで加水分解し、このため体内では主にナリンゲニンの形で効力を発揮するが、加水分解の不完全性でナリンギンの形で存在する場合もある。（Kazuo Ishii, Takashi Furuta, Yasuji Kasuya. Determination of naringin and naringenin in human plasma by high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography B, 683(1996);225-229）。ナリンゲニン塩は体内に入ると、胃酸の働きによりナリンゲニンに変わって効力を発揮する。ナリンギン塩は体内に入った後、胃酸の働きによりまずナリンギンに変わり、次に胃酸の働きにより加水分解してナリンゲニンを形成して、効力を発揮する。
本発明に係るものは、薬理・薬効実験を通して、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩が鎮咳去痰の良好な効果を有し、急慢性気管支炎及び風邪等による咳、痰の症状に有効であることが証明されている。
本発明の発明者はナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩を用いて、ラットに咳止めの実験を行ったが、その結果、何も使わなかったラット組と比べ、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩を使ったラットの、刺激による咳に耐える限界時間が、顕著に延長されて、統計学的に著しい差が存在する。同様に、陽性薬品であるデキストロメトルファンと対照しても、本発明に係るものにより、上記のような限界時間が延長され、治療効果もより一層顕著になっている。以上のことにより、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の、良好な鎮咳効果を有する効力が証明できる。
また、本発明の発明者はナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩を使って、ラットに去痰実験を行ったが、その結果、何も使わなかったラット組と比べ、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩を使ったラットの気管支の分泌液が著しく増加されて、統計学的に著しい差が存在する。同様に、陽性対照薬品である「咳痰切り」と比べてみても、本発明に係るものは、ラットの気管支の分泌液を増加することができて、統計学的に著しい差があり、治療効果もより有効になっている。以上のことにより、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩の、去痰の効力が証明できる。
なお、本発明の実験により、ナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩は、鎮咳去痰の効果を有することだけでなく、ラットの実験において毒性がないことも証明されている。動物実験において、６ｇ／ｋｇの用量のナリンゲニン又はその塩を動物に経口投与した際、動物には毒性が現れていないことが見られたが、その用量は人間の正常服用量の460倍に相当する。また、人間の正常服用量の２３０倍に相当する３g/kgの用量のナリンギン又はその塩を動物に経口投与した際、動物には毒性反応が現れていなかった。
本発明におけるナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩は、顕著な鎮咳去痰の効果を有し、毒性及び副作用がなく、臨床状態における急慢性気管支炎及び風邪などによる咳痰の症状の有効な治療に最適である。従って、鎮咳去痰の薬品の調製に応用できる。
本発明のナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩から調製される薬品組成物は、良好な鎮咳去痰効果を有し、毒性及び副作用がないため、急慢性気管支炎、風邪などによる咳、痰のような症状の治療に有効であり、且つ、品質が安定し、服用量が少なく、治療効果が迅速等の特徴がある。
本発明のナリンゲニン、ナリンギン及びそれらの塩から調製される薬品組成物は、良好な鎮咳去痰効果を有し、毒性及び副作用がないため、急慢性気管支炎、風邪などによる咳、痰のような症状の治療に有効であり、且つ、品質が安定し、服用量が少なく、治療効果が迅速等の特徴がある。
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明する。
各実施形態の中で、固体混合物中の固体、液体中の液体及び液体中の固体の比率はそれぞれwt/wt、vol/vol、wt/volで計算し、特別な場合には他に説明する。
各実施形態の中で、固体混合物中の固体、液体中の液体及び液体中の固体の比率はそれぞれwt/wt、vol/vol、wt/volで計算し、特別な場合には他に説明する。
実施例１：ナリンギン単体の調製
枳殻植物原料を小さく切り、その植物原料を１００℃の湯中に浸漬し、水抽出操作を１時間を３回行ってから濾過した。該濾過液体をエキスに濃縮して、大孔樹脂を使ってクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また７０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。その沈殿を水中で３回再結晶してナリンギン単体を得た。沈殿からの収率は９０．７％であった。
枳殻植物原料を小さく切り、その植物原料を１００℃の湯中に浸漬し、水抽出操作を１時間を３回行ってから濾過した。該濾過液体をエキスに濃縮して、大孔樹脂を使ってクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また７０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。その沈殿を水中で３回再結晶してナリンギン単体を得た。沈殿からの収率は９０．７％であった。
実施例２：ナリンギン単体の調製
ミカン植物原料を粉砕して、篩いを通さずに、その植物原料を１００℃の湯中に浸漬し、抽出操作を１時間を２回行ってから濾過、併合した。該濾過液体を濃縮して、無水のアルコールを加えてアルコールの濃度を３０％にし、そのまま一夜放置してから濾過し、上清液体のアルコールを回収した。エキスはポリアミドでクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また８０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とし液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。その沈殿を水中で５回再結晶してナリンギン単体を得た。沈殿からの収率は８７．４％であった。
ミカン植物原料を粉砕して、篩いを通さずに、その植物原料を１００℃の湯中に浸漬し、抽出操作を１時間を２回行ってから濾過、併合した。該濾過液体を濃縮して、無水のアルコールを加えてアルコールの濃度を３０％にし、そのまま一夜放置してから濾過し、上清液体のアルコールを回収した。エキスはポリアミドでクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また８０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とし液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。その沈殿を水中で５回再結晶してナリンギン単体を得た。沈殿からの収率は８７．４％であった。
実施例３：ナリンギン単体の調製
橘紅植物原料を小さく切り、７０℃の湯を用いて、浸漬または抽出操作を３時間を２回進行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、そのエキスの中に９５％濃度のアルコールを加えてアルコールの濃度を６０％にして、そのまま一夜放置して、生成した沈殿を濾過して除いた。該濾過液体の中からアルコールを回収し、前記液体はポリアミドでクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また８０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。該沈殿を水中で４回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は８９．７％であった。
橘紅植物原料を小さく切り、７０℃の湯を用いて、浸漬または抽出操作を３時間を２回進行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、そのエキスの中に９５％濃度のアルコールを加えてアルコールの濃度を６０％にして、そのまま一夜放置して、生成した沈殿を濾過して除いた。該濾過液体の中からアルコールを回収し、前記液体はポリアミドでクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また８０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。該沈殿を水中で４回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は８９．７％であった。
実施例４：ナリンギン単体の調製
レモン植物原料を粉砕せず水の中で超音波を使って抽出操作を１時間を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮してエキスを得た。前記エキスをポリアミドでクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また９５％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。また酢酸エチル中で１回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は８５．３％であった。
レモン植物原料を粉砕せず水の中で超音波を使って抽出操作を１時間を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮してエキスを得た。前記エキスをポリアミドでクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また９５％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、沈殿を得た。また酢酸エチル中で１回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は８５．３％であった。
実施例５：ナリンギン単体の調製
枳実植物原料を粉砕して、２０回の篩いを通して、室温で水を利用して、抽出操作を２日を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体に９５％濃度のアルコールを加えてアルコールの濃度を５０％にして、そのまま放置し、産生した沈殿を濾過して除いた。該濾過液体の中からアルコールを回収し、水を加えて溶解した後、葡聚糖凝塊でクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また４０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、濾過して沈殿を得た。また酢酸エチル中で１０回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は９２．１％であった。
枳実植物原料を粉砕して、２０回の篩いを通して、室温で水を利用して、抽出操作を２日を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体に９５％濃度のアルコールを加えてアルコールの濃度を５０％にして、そのまま放置し、産生した沈殿を濾過して除いた。該濾過液体の中からアルコールを回収し、水を加えて溶解した後、葡聚糖凝塊でクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また４０％濃度のアルコールで洗い落とし、その洗い落とした液体を収集して、その中のアルコールを回収し、濾過して沈殿を得た。また酢酸エチル中で１０回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は９２．１％であった。
実施例６：ナリンギン単体の調製
グレープフルーツ植物原料を小さく切り、１００℃の湯を用いて、浸漬または抽出操作を２時間を２回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、大孔の樹脂でクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また６０％濃度のアルコールで洗い落とし、そのアルコール洗い落とし液体を収集した。その中のアルコールを回収し、濾過して沈殿を得た。またその沈殿を水中で３回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は８７．６％であった。
グレープフルーツ植物原料を小さく切り、１００℃の湯を用いて、浸漬または抽出操作を２時間を２回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、大孔の樹脂でクロマトグラフィーを行った。その後、まず水で洗い落とし、その液体を捨てた。また６０％濃度のアルコールで洗い落とし、そのアルコール洗い落とし液体を収集した。その中のアルコールを回収し、濾過して沈殿を得た。またその沈殿を水中で３回再結晶してナリンギン単体を得た。その収率は８７．６％であった。
実施例７：ナリンゲニン単体の調製
ナリンギン（純度は９８．２％）に１０倍の水を加え、均一に混合し、塩酸を加えてpH＝１に調整し、又均一に混合した。１００℃の湯中で２時間加水分解を行った。加水分解が終わってから濾過してナリンゲニン粗製品を得た。無水のアルコール中で５回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９１．４％であった。
ナリンギン（純度は９８．２％）に１０倍の水を加え、均一に混合し、塩酸を加えてpH＝１に調整し、又均一に混合した。１００℃の湯中で２時間加水分解を行った。加水分解が終わってから濾過してナリンゲニン粗製品を得た。無水のアルコール中で５回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９１．４％であった。
実施例８：ナリンゲニン単体の調製
ナリンギン（純度は９８．２％）に２０倍の水を加え、均一に混合し、硫酸を加えてpH＝０に調整し、又均一に混合した。８０℃の湯中で３時間加水分解を行った。加水分解が終わってから濾過してナリンゲニン粗製品を得た。また酢酸エチル中で１０回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８９．３％であった。
ナリンギン（純度は９８．２％）に２０倍の水を加え、均一に混合し、硫酸を加えてpH＝０に調整し、又均一に混合した。８０℃の湯中で３時間加水分解を行った。加水分解が終わってから濾過してナリンゲニン粗製品を得た。また酢酸エチル中で１０回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８９．３％であった。
実施例９：ナリンゲニン単体の調製
ナリンギン（純度は９８．２％）に５０倍の水を加え、均一に混合し、水酸化ナトリウムを加えてpH＝１３に調整し、又均一に混合した。８０℃の湯中で１．５時間加水分解を行った。加水分解が終わってから塩酸を用いてpH＝１に調整し、濾過してナリンゲニン粗製品を得た。またアセトン中で１回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８６．９％であった。
ナリンギン（純度は９８．２％）に５０倍の水を加え、均一に混合し、水酸化ナトリウムを加えてpH＝１３に調整し、又均一に混合した。８０℃の湯中で１．５時間加水分解を行った。加水分解が終わってから塩酸を用いてpH＝１に調整し、濾過してナリンゲニン粗製品を得た。またアセトン中で１回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８６．９％であった。
実施例１０：ナリンゲニン単体の調製
ナリンギン単体（純度は９８．２％）に３５倍の水を加え、均一に混合し、グルクロニグーゼを加えて、サンプル中での酵素の濃度を０．１ミリモル/リットルにして、又均一に混合した。３７℃の湯中で８時間加水分解を行った。加水分解が終わってから濾過してナリンゲニン粗製品を得た。また無水のアルコール中で４回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９４．８％であった。
ナリンギン単体（純度は９８．２％）に３５倍の水を加え、均一に混合し、グルクロニグーゼを加えて、サンプル中での酵素の濃度を０．１ミリモル/リットルにして、又均一に混合した。３７℃の湯中で８時間加水分解を行った。加水分解が終わってから濾過してナリンゲニン粗製品を得た。また無水のアルコール中で４回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９４．８％であった。
実施例１１：ナリンゲニン単体の調製
桜の蕾である植物原料を無水のアルコールに浸漬し、５０℃の温度で抽出操作を１時間を３回行ってから濾過した。該濾過液体をエキスに濃縮し、生成した沈殿を濾過してナリンゲニン粗製品を得た。前記沈殿を酢酸エチル中で１回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９０．７％であった。
桜の蕾である植物原料を無水のアルコールに浸漬し、５０℃の温度で抽出操作を１時間を３回行ってから濾過した。該濾過液体をエキスに濃縮し、生成した沈殿を濾過してナリンゲニン粗製品を得た。前記沈殿を酢酸エチル中で１回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９０．７％であった。
実施例１２：ナリンゲニン単体の調製
梅の蕾である植物原料を２５℃のアセトンに浸漬し、抽出操作を４８時間を２回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、そのまま一夜放置してから沈殿を得た。それから沈殿を乾燥してナリンゲニン粗品を得た。その後クロロフォルム中で５回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８７．４％であった。
梅の蕾である植物原料を２５℃のアセトンに浸漬し、抽出操作を４８時間を２回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、そのまま一夜放置してから沈殿を得た。それから沈殿を乾燥してナリンゲニン粗品を得た。その後クロロフォルム中で５回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８７．４％であった。
実施例１３：ナリンゲニン単体の調製
梅の蕾である植物原料を２０℃の酢酸エチルに浸漬し、抽出操作を７２時間を１回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、そのまま一夜放置してから沈殿を得た。それから沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後アセトン中で１０回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８５．６％であった。
梅の蕾である植物原料を２０℃の酢酸エチルに浸漬し、抽出操作を７２時間を１回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、そのまま一夜放置してから沈殿を得た。それから沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後アセトン中で１０回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８５．６％であった。
実施例１４：ナリンゲニン単体の調製
枳実植物原料を粉砕して、２０回の篩いを通じて、室温で水を用いて、抽出操作を２日を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮し、塩酸を加えてpH＝１に調整し、９０℃の湯中で加水分解を行った。加水分解が終わってから沈殿を得た。該沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。前記沈殿を酢酸エチル中で４回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９０．７％であった。
枳実植物原料を粉砕して、２０回の篩いを通じて、室温で水を用いて、抽出操作を２日を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮し、塩酸を加えてpH＝１に調整し、９０℃の湯中で加水分解を行った。加水分解が終わってから沈殿を得た。該沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。前記沈殿を酢酸エチル中で４回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９０．７％であった。
実施例１５：ナリンゲニン単体の調製
グレープフルーツ植物原料を小さく切り、１００℃の湯を用いて、浸漬または抽出操作を２時間を１回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮し、水酸化ナトリウムを加えてpH＝１１に調整し、７０℃の湯中で加水分解を行った。加水分解が終わってから塩酸を用いてpH＝１に調整し、濾過して沈殿を得た。沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。前記沈殿をアセトン中で３回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８９．２％であった。
グレープフルーツ植物原料を小さく切り、１００℃の湯を用いて、浸漬または抽出操作を２時間を１回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮し、水酸化ナトリウムを加えてpH＝１１に調整し、７０℃の湯中で加水分解を行った。加水分解が終わってから塩酸を用いてpH＝１に調整し、濾過して沈殿を得た。沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。前記沈殿をアセトン中で３回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８９．２％であった。
実施例１６：ナリンゲニン単体の調製
橘紅植物原料を粉砕せずにアセトンを使って２４時間を３回の抽出操作を行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、前記エキスを３０％濃度のアルコールで溶解し、塩酸を加えてpH＝２に調整した。また、９５℃の湯中で加水分解を行い、濾過して沈殿を得た。沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後クロロフォルム中で５回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８７．７％であった。
橘紅植物原料を粉砕せずにアセトンを使って２４時間を３回の抽出操作を行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体をエキスに濃縮して、前記エキスを３０％濃度のアルコールで溶解し、塩酸を加えてpH＝２に調整した。また、９５℃の湯中で加水分解を行い、濾過して沈殿を得た。沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後クロロフォルム中で５回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８７．７％であった。
実施例１７：ナリンゲニン単体の調製
枳殻植物原料を小さく切り、その植物原料を１００℃の湯中に浸漬し、高濃度の塩酸を加えてpH＝２．５に調整し、抽出操作を１．５時間を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮してエキスを得た。該エキスを一夜放置して沈殿を得た。該沈殿を分離し、アセトンで溶解し濾過し沈殿を捨て、該濾過液体からアセトンを回収して沈殿を得た、該沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後クロロフォルム中で３回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９０．４％であった。
枳殻植物原料を小さく切り、その植物原料を１００℃の湯中に浸漬し、高濃度の塩酸を加えてpH＝２．５に調整し、抽出操作を１．５時間を３回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体を濃縮してエキスを得た。該エキスを一夜放置して沈殿を得た。該沈殿を分離し、アセトンで溶解し濾過し沈殿を捨て、該濾過液体からアセトンを回収して沈殿を得た、該沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後クロロフォルム中で３回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は９０．４％であった。
実施例１８：ナリンゲニン単体の調製
沙田柚植物原料を粉砕して、１２倍の１００℃の湯中に浸漬し、水酸化カリウムを加えてpH＝１４に調整し、抽出操作を毎回４５時間づつ２回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体濃縮してエキスを得た。該エキスを一夜放置して沈殿を得た。該沈殿を分離し、無水のアルコールで溶解し濾過し沈殿を捨てた。該濾過液体からアルコールを回収して沈殿を得た、該沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後アセトン中で４回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８８．３％であった。
沙田柚植物原料を粉砕して、１２倍の１００℃の湯中に浸漬し、水酸化カリウムを加えてpH＝１４に調整し、抽出操作を毎回４５時間づつ２回行ってからその液体を濾過、併合した。該濾過液体濃縮してエキスを得た。該エキスを一夜放置して沈殿を得た。該沈殿を分離し、無水のアルコールで溶解し濾過し沈殿を捨てた。該濾過液体からアルコールを回収して沈殿を得た、該沈殿を乾燥してナリンゲニン粗製品を得た。その後アセトン中で４回再結晶してナリンゲニン単体を得た。その収率は８８．３％であった。
実施例１９：ナリンゲニン塩の調製
０℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また１モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
０℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また１モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２０：ナリンゲニン塩の調製
２０℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また３モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
２０℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また３モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２１：ナリンゲニン塩の調製
５０℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また２モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを使ってナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
５０℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また２モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを使ってナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２２：ナリンゲニン塩の調製
１００℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また３モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れる。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて対応量の重炭酸ナトリウム、又は炭酸ナトリウムを用いナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
１００℃の条件で１モルのナリンゲニンをアルコールに溶解し、また３モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンゲニンのアルコール溶液に入れる。また２時間撹絆してから濾過してナリンゲニンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンゲニンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて対応量の重炭酸ナトリウム、又は炭酸ナトリウムを用いナリンゲニンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２３：ナリンギン塩の調製
０℃の条件で１モルのナリンギンをアルコールに溶解し、また１モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンギンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンギンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンギンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンギンのナトリウム塩を得る事もできる。
０℃の条件で１モルのナリンギンをアルコールに溶解し、また１モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンギンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンギンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンギンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて相当量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンギンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２４：ナリンギン塩の調製
２０℃の条件で１モルのナリンギンをアルコールに溶解し、また２モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンギンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンギンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンギンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて対応量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンギンのナトリウム塩を得る事もできる。
２０℃の条件で１モルのナリンギンをアルコールに溶解し、また２モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンギンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンギンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンギンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて対応量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンギンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２５：ナリンギン塩の調製
４０℃の条件で１モルのナリンギンをアルコールに溶解し、また２モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンギンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンギンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンギンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて対応量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンギンのナトリウム塩を得る事もできる。
４０℃の条件で１モルのナリンギンをアルコールに溶解し、また２モルの水酸化ナトリウムを水に溶解して、該水酸化ナトリウムの溶液をゆっくりとナリンギンのアルコール溶液に入れた。また２時間撹絆してから濾過してナリンギンのナトリウム塩を得た。
本実施例の中で、水酸化ナトリウムに替えて相当量の水酸化カリウム、重炭酸カリウム又は炭酸カリウムを用いナリンギンのカリウム塩を得る事もできる。また、水酸化ナトリウムに替えて対応量の重炭酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムを用いナリンギンのナトリウム塩を得る事もできる。
実施例２６：ナリンゲニン単体の純度を測定する実験
前記抽出方法で調製されたナリンゲニン単体の適量を取り、容量瓶中でメチルアルコールに溶解し、またマイクロ孔の濾膜（０．４５um）を用いて濾過した後、高速液体クロマトグラフ装置を用いて、中国薬品生物製品検定所から提供されたナリンゲニンの対照品との外標法定量操作を行って、該ナリンゲニンサンプル中のナリンゲニン単体の含有量を測定した。その結果は表１の通りである。
前記抽出方法で調製されたナリンゲニン単体の適量を取り、容量瓶中でメチルアルコールに溶解し、またマイクロ孔の濾膜（０．４５um）を用いて濾過した後、高速液体クロマトグラフ装置を用いて、中国薬品生物製品検定所から提供されたナリンゲニンの対照品との外標法定量操作を行って、該ナリンゲニンサンプル中のナリンゲニン単体の含有量を測定した。その結果は表１の通りである。
クロマトグラフ条件：Agilent1100高速液体クロマトグラフ装置（サンプル自動注入装置、真空脱気装置、四元ポンプ、カラム温箱、ダイオード配列測定装置）；
クロマトグラフカラム：MARKER ODSカラム（5um，4.0×250mm）；
展開相：メチルアルコール／水（５０／５０）；
測定波長：２８８nm；
カラム温：３０℃；
流速：1ml/分；
サンプル注入量：5μｌ。
表１：サンプル含有量測定実験の結果
クロマトグラフカラム：MARKER ODSカラム（5um，4.0×250mm）；
展開相：メチルアルコール／水（５０／５０）；
測定波長：２８８nm；
カラム温：３０℃；
流速：1ml/分；
サンプル注入量：5μｌ。
表１：サンプル含有量測定実験の結果
上記表の結果から見ると、サンプルから抽出したナリンゲニン単体の含有量はすべて９５％以上である。即ち、本発明の抽出方法で得たナリンゲニンサンプルの純度が高い。
実施例２７：ナリンギン単体の純度を測定する実験
前記抽出方法で調製されたナリンギン単体の適量を取り、容量瓶中でメチルアルコールに溶解し、またマイクロ孔の濾膜（０．４５um）を用いて濾過した後、高速液体クロマトグラフ装置を用いて、中国薬品生物製品検定所から提供されたナリンギンの対照品との外標法定量操作を行って、前記ナリンギンサンプル中のナリンギン単体の含有量を測定した。その結果は表２の通りである。
前記抽出方法で調製されたナリンギン単体の適量を取り、容量瓶中でメチルアルコールに溶解し、またマイクロ孔の濾膜（０．４５um）を用いて濾過した後、高速液体クロマトグラフ装置を用いて、中国薬品生物製品検定所から提供されたナリンギンの対照品との外標法定量操作を行って、前記ナリンギンサンプル中のナリンギン単体の含有量を測定した。その結果は表２の通りである。
クロマトグラフ条件：Agilent1100高速液体クロマトグラフ装置（サンプル自動注入装置、真空脱気装置、四元ポンプ、カラム温箱、ダイオード配列測定装置）；
クロマトグラフカラム：MARKER ODSカラム（5um，4.0×250mm）；
展開相：乙ニトリル／0.05M KH2PO4緩衝液（２０／８０）；
測定波長：２８３nm；
カラム温：３０℃；
流速：1ml/分；
サンプル注入量：5μｌ。
表２：サンプル含有量測定実験の結果
クロマトグラフカラム：MARKER ODSカラム（5um，4.0×250mm）；
展開相：乙ニトリル／0.05M KH2PO4緩衝液（２０／８０）；
測定波長：２８３nm；
カラム温：３０℃；
流速：1ml/分；
サンプル注入量：5μｌ。
表２：サンプル含有量測定実験の結果
上記表の結果から見ると、サンプルから抽出したナリンギン単体の含有量はすべて９５％以上である。即ち、本発明の抽出方法で得たナリンギンサンプルの純度が高い。
上述のように、本発明のナリンギンとナリンゲニンの抽出方法では効率良くナリンギンを含んでいる植物原料からナリンギン単体を抽出する事が出来る。また、効率良くナリンギン粗製品または単体を加水分解してナリンゲニン単体を得ることができるし、効率良くナリンゲニン若しくはナリンギンを含んでいる植物原料からナリンゲニン単体を抽出し、抽出されたナリンギンサンプルとナリンゲニンサンプルの純度が全部９５％以上で高い。またその操作も簡単に行う事もできる。
上述のように、本発明のナリンギンとナリンゲニンの抽出方法では効率良くナリンギンを含んでいる植物原料からナリンギン単体を抽出する事が出来る。また、効率良くナリンギン粗製品または単体を加水分解してナリンゲニン単体を得ることができるし、効率良くナリンゲニン若しくはナリンギンを含んでいる植物原料からナリンゲニン単体を抽出し、抽出されたナリンギンサンプルとナリンゲニンサンプルの純度が全部９５％以上で高い。またその操作も簡単に行う事もできる。
実施例２８：ナリンギン薬物の鎮咳薬理学実験
１．実験動物：NIHラット、雄、重量１８．２〜２１．７ｇ、普通等級標準で１３０匹。先ず、重量を測ってから番号を着け、その後、健康で重量が１８．５〜２１．０ｇのラットを１２０匹を選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に各グループに１５匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ及びナリンギンサンプルの高、中、低薬物グループとナリンギンナトリウム塩サンプルの高、中、低薬物グループを設置した。
１．実験動物：NIHラット、雄、重量１８．２〜２１．７ｇ、普通等級標準で１３０匹。先ず、重量を測ってから番号を着け、その後、健康で重量が１８．５〜２１．０ｇのラットを１２０匹を選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に各グループに１５匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ及びナリンギンサンプルの高、中、低薬物グループとナリンギンナトリウム塩サンプルの高、中、低薬物グループを設置した。
２．サンプルの出所と処理：
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：デキストロメトルファン３０ｍｇを２０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照のデキストロメトルファン溶液を得た。デキストロメトルファンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンギンサンプルの低剤量グループ：ナリンギンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンの濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
４）ナリンギンサンプルの中剤量グループ：ナリンギンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
５）ナリンギンサンプルの高剤量グループ：ナリンギンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンの濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
６）ナリンギンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンナトリウム塩の濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
７）ナリンギンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンナトリウム塩の濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
８）ナリンギンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンナトリウム塩の濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
ここで使っているナリンギンサンプルは前記抽出方法を利用して植物原料から抽出したナリンギン単体であり、その純度は９５％以上である。
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：デキストロメトルファン３０ｍｇを２０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照のデキストロメトルファン溶液を得た。デキストロメトルファンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンギンサンプルの低剤量グループ：ナリンギンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンの濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
４）ナリンギンサンプルの中剤量グループ：ナリンギンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
５）ナリンギンサンプルの高剤量グループ：ナリンギンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンの濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
６）ナリンギンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンナトリウム塩の濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
７）ナリンギンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンナトリウム塩の濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
８）ナリンギンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンギンナトリウム塩の濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
ここで使っているナリンギンサンプルは前記抽出方法を利用して植物原料から抽出したナリンギン単体であり、その純度は９５％以上である。
３、実験方法：（濃アンモニア水噴霧法）
ラットの胃に入れて１時間経てから噴霧する。一定時間後濃アンモニア水を噴霧する。噴霧が終わってから、ラットを取り出し、一分間に何回の咳をするかを観察する。もし、一分間に３回以上の咳の動作をすると（腹部の筋肉または胸部が収縮すると共に口を大きくする、時にして咳声も聞ける）、“咳がある”とみなす、そうでなければ、“咳がない”とみなす。
ラットの胃に入れて１時間経てから噴霧する。一定時間後濃アンモニア水を噴霧する。噴霧が終わってから、ラットを取り出し、一分間に何回の咳をするかを観察する。もし、一分間に３回以上の咳の動作をすると（腹部の筋肉または胸部が収縮すると共に口を大きくする、時にして咳声も聞ける）、“咳がある”とみなす、そうでなければ、“咳がない”とみなす。
４．実験過程：
序串法（上下法）を利用して半数以上のラットが咳をするに要する噴霧時間を求める（EDT50）。また、R値を計算し、R値が１３０％を超えると、薬物が鎮咳効果を有する事を表し、R値が１５０％を超えると、顕著な鎮咳効果を有する事を表す。計算式は以下に記載の通りである。
EDT50=log-1c/n（式中、ｎは動物の数量、ｃはｒｘ値の総和、ｒは各剤量グループの動物の数量、ｘは剤量（即ち、噴霧時間）の対数）
序串法（上下法）を利用して半数以上のラットが咳をするに要する噴霧時間を求める（EDT50）。また、R値を計算し、R値が１３０％を超えると、薬物が鎮咳効果を有する事を表し、R値が１５０％を超えると、顕著な鎮咳効果を有する事を表す。計算式は以下に記載の通りである。
５．実験結果：
統計により求めた、各サンプルグループの中で半数以上のラットが咳をする時間と鎮咳効果は表３の通りである。
表３：各サンプルグループの鎮咳効果
統計により求めた、各サンプルグループの中で半数以上のラットが咳をする時間と鎮咳効果は表３の通りである。
表３：各サンプルグループの鎮咳効果
ナリンギンサンプルと陽性対照薬物であるデキストロメトルファンをラットに経口投与し、ラットの咳を起こすに耐えられる時間を比べると、ナリンギンがラットの耐えられる時間を著しく延長し、陽性対照薬物であるデキストロメトルファンを使うより耐えられる時間が長い、統計学上で著しい差がある。即ち、ラットの咳を起こすに耐えられる時間について、ナリンギンを使用する時がデキストロメトルファンを使用する時より耐えられる時間が長く、鎮咳効果が高く、治療効果が著しい。
実施例２９：ナリンギン薬物の去痰薬理学実験
１．実験動物：NIHラット、雌、重量１８．８〜２２．７ｇ、清潔級標準で９０匹。先ず、重量を測ってから番号を着ける、その後、健康で重量が１９．１〜２２．３ｇのラットを８０匹選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に各グループに１０匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ及びナリンギンサンプルの高、中、低薬物グループとナリンギンナトリウム塩サンプルの高、中、低薬物グループを設置した。また、10ml/kg重量前部の入胃量によって一回で経口投与された。
１．実験動物：NIHラット、雌、重量１８．８〜２２．７ｇ、清潔級標準で９０匹。先ず、重量を測ってから番号を着ける、その後、健康で重量が１９．１〜２２．３ｇのラットを８０匹選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に各グループに１０匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ及びナリンギンサンプルの高、中、低薬物グループとナリンギンナトリウム塩サンプルの高、中、低薬物グループを設置した。また、10ml/kg重量前部の入胃量によって一回で経口投与された。
２．サンプルの出所と処理：
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：痰咳浄散剤０．２ｇを１０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照の痰咳浄溶液を得た、その濃度は２０ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンギンサンプルの低剤量グループ：ナリンギンを精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
４）ナリンギンサンプルの中剤量グループ：ナリンギンを精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
５）ナリンギンサンプルの高剤量グループ：ナリンギンを精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
６）ナリンギンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
７）ナリンギンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
８）ナリンギンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：痰咳浄散剤０．２ｇを１０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照の痰咳浄溶液を得た、その濃度は２０ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンギンサンプルの低剤量グループ：ナリンギンを精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
４）ナリンギンサンプルの中剤量グループ：ナリンギンを精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
５）ナリンギンサンプルの高剤量グループ：ナリンギンを精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
６）ナリンギンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
７）ナリンギンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
８）ナリンギンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンギンナトリウム塩を精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
３．実験方法：
１）標準フェノール曲線の制作：分析天秤を使って一定量のフェノールを精密に取り、５％濃度の重炭酸ナトリウムに溶解して１２．５ｎｇ／ｍｌとする。それから順次に毎１ｍｌ中のフェノールが６．２５ｎｇ、３．１２５ｎｇ、１．５６２５ｎｇ、０．７８１３ｎｇ、 ０．３９０６ｎｇ、０．１９５３ｎｇ、０．０９７７ｎｇ、０．０４８８ｎｇになるように希釈して、分光光度計を使ってOD値を測る。フェノール濃度を縦座標にし、OD値を横座標にして、フェノール濃度とOD値を基にして回帰方程を算出する。また、回帰方程によって各ラットのフェノールの排泄量を算出する。
２）ラットを断食、非水禁状態で１２時間置く。
３）薬物を胃に投与する。動物番号の順番により、各ラットに投与してから３分間停止し、また外のラットに投与する。時間の間隔は３分間であり、毎グループ１０匹の投与時間は３０分間である。
４）各ラットに投与してから０．５時間経て、腹腔に５％濃度のフェノール生理食塩水を０．２ｍｌ注射する。また、順番に、毎ラットにフェノールを注射してから３分後、外のラットに注射する。１０匹のラットに要する時間は３０分間である。
５）各ラットの腹腔に注射してから０．５時間経て、順番にラットを斬首して屠殺する、その時間の間隔は３分間にする。動物を屠殺してから動かないように手術板に固定し、頸の中程の皮膚を切り、気管を分離し、小さいピンセットを用い気管を支える。
６）大きい注射器で生理食塩水を吸い取り気管の外壁を洗い落とし、血液と気管外壁のフェノールを洗い落としてから、濾紙を使って洗液を吸収する。
７）まず、気管の分枝部で気管を切り取り、また、他端の甲状軟骨の上端から気管を切り取る（環状の甲状軟骨も含める）。
８）前もって準備した１．５ｍｌの５％濃度のNaHCO3溶液試験管に各気管段を放置する。
９）３分間以内に前記気管分離切れ操作を完成し、また、同じ方法で他のラットを処理する。
１０）各試験管を超音波清洗器中に５分間置いた後、気管段の中のフェノールを開放する。
１１）各試験管中の溶液を７３１型分光光度計で５４６nm処のOD値を測る。
１２）各試験管は気管段を含んだまま一夜放置し、２４時間経てからまたOD値を測る。
１３）回帰方程によって、フェノールの含有量を算出する。計算式：Y＝７．６２６６ X−０．０５５４。XはOD値、Yはフェノールの含有量である。
１４）フェノールの含有量と動物重量によって、矯正フェノール含有量を計算する。SPSS8.0統計ソフトを使って分散の分析を行う。矯正フェノール含有量＝フェノールの含有量(ng)/ラット重量（Kg）。
１）標準フェノール曲線の制作：分析天秤を使って一定量のフェノールを精密に取り、５％濃度の重炭酸ナトリウムに溶解して１２．５ｎｇ／ｍｌとする。それから順次に毎１ｍｌ中のフェノールが６．２５ｎｇ、３．１２５ｎｇ、１．５６２５ｎｇ、０．７８１３ｎｇ、 ０．３９０６ｎｇ、０．１９５３ｎｇ、０．０９７７ｎｇ、０．０４８８ｎｇになるように希釈して、分光光度計を使ってOD値を測る。フェノール濃度を縦座標にし、OD値を横座標にして、フェノール濃度とOD値を基にして回帰方程を算出する。また、回帰方程によって各ラットのフェノールの排泄量を算出する。
２）ラットを断食、非水禁状態で１２時間置く。
３）薬物を胃に投与する。動物番号の順番により、各ラットに投与してから３分間停止し、また外のラットに投与する。時間の間隔は３分間であり、毎グループ１０匹の投与時間は３０分間である。
４）各ラットに投与してから０．５時間経て、腹腔に５％濃度のフェノール生理食塩水を０．２ｍｌ注射する。また、順番に、毎ラットにフェノールを注射してから３分後、外のラットに注射する。１０匹のラットに要する時間は３０分間である。
５）各ラットの腹腔に注射してから０．５時間経て、順番にラットを斬首して屠殺する、その時間の間隔は３分間にする。動物を屠殺してから動かないように手術板に固定し、頸の中程の皮膚を切り、気管を分離し、小さいピンセットを用い気管を支える。
６）大きい注射器で生理食塩水を吸い取り気管の外壁を洗い落とし、血液と気管外壁のフェノールを洗い落としてから、濾紙を使って洗液を吸収する。
７）まず、気管の分枝部で気管を切り取り、また、他端の甲状軟骨の上端から気管を切り取る（環状の甲状軟骨も含める）。
８）前もって準備した１．５ｍｌの５％濃度のNaHCO3溶液試験管に各気管段を放置する。
９）３分間以内に前記気管分離切れ操作を完成し、また、同じ方法で他のラットを処理する。
１０）各試験管を超音波清洗器中に５分間置いた後、気管段の中のフェノールを開放する。
１１）各試験管中の溶液を７３１型分光光度計で５４６nm処のOD値を測る。
１２）各試験管は気管段を含んだまま一夜放置し、２４時間経てからまたOD値を測る。
１３）回帰方程によって、フェノールの含有量を算出する。計算式：Y＝７．６２６６ X−０．０５５４。XはOD値、Yはフェノールの含有量である。
１４）フェノールの含有量と動物重量によって、矯正フェノール含有量を計算する。SPSS8.0統計ソフトを使って分散の分析を行う。矯正フェノール含有量＝フェノールの含有量(ng)/ラット重量（Kg）。
４．実験結果：
統計によって、各剤量グループのフェノール排出量は表４の通りである。
表４：ナリンギンの去痰効果（X±S）
統計によって、各剤量グループのフェノール排出量は表４の通りである。
表４：ナリンギンの去痰効果（X±S）
a：矯正フェノール含有量＝フェノールの含有量/動物重量
b：去痰率＝投与薬物グループ/空白の対照グループ×100%
フェノール含有量の計算方法（ng）：OD値×7.6266−0.0554
b：去痰率＝投与薬物グループ/空白の対照グループ×100%
フェノール含有量の計算方法（ng）：OD値×7.6266−0.0554
ナリンギンサンプルと陽性薬物である痰咳をラットに経口投与させたラットの気管支の分泌液を増やす実験から考察すると、ナリンギンの低、中、高剤量グループの各剤量グループが、空白の対照グループに比べて、ラットの気管支で分泌する分泌液が著しく増え、統計学的に著しい差がある。高剤量グループは、陽性対照薬物痰咳に比べて、ラットの気管支で分泌する分泌液が著しく増え、統計学的に著しい差があり、治療効果が著しい大きい。即ち、ナリンギンは優れた去痰効果を有する。
実施例３０：ナリンゲニン薬物の鎮咳薬理学実験
１．実験動物：NIHラット、雄、重量１９．３〜２２．６ｇ、普通等級標準で１３０匹。先ず、重量を測ってから番号を着けた。その後、健康で重量が１９．５〜２２．１ｇのラットを１２０匹選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に毎グループに１５匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ及びナリンゲニンサンプルの低剤量グループ、ナリンゲニンサンプルの中剤量グループ、ナリンゲニンサンプルの高剤量グループ、ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ、ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ、ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高剤量グループを設置した。
１．実験動物：NIHラット、雄、重量１９．３〜２２．６ｇ、普通等級標準で１３０匹。先ず、重量を測ってから番号を着けた。その後、健康で重量が１９．５〜２２．１ｇのラットを１２０匹選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に毎グループに１５匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ及びナリンゲニンサンプルの低剤量グループ、ナリンゲニンサンプルの中剤量グループ、ナリンゲニンサンプルの高剤量グループ、ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ、ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ、ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高剤量グループを設置した。
２．サンプルの出所と処理：
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：デキストロメトルファン３０ｍｇを２０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照のデキストロメトルファン溶液を得た。デキストロメトルファンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンゲニンサンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンの濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
４）ナリンゲニンサンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
５）ナリンゲニンサンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンの濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
６）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンナトリウム塩の濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
７）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンナトリウム塩の濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
８）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンナトリウム塩の濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：デキストロメトルファン３０ｍｇを２０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照のデキストロメトルファン溶液を得た。デキストロメトルファンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンゲニンサンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンの濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
４）ナリンゲニンサンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンの濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
５）ナリンゲニンサンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンを適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンの濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
６）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンナトリウム塩の濃度は０．５ｍｇ/ｍｌ。
７）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンナトリウム塩の濃度は１．５ｍｇ/ｍｌ。
８）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を適量取り、容量瓶中で生理食塩水に溶解した。ナリンゲニンナトリウム塩の濃度は４．５ｍｇ/ｍｌ。
３．実験方法：（濃アンモニア水噴霧法）
ラットの胃に入れて１時間経てから噴霧する。一定時間後濃アンモニア水を噴霧し、それが終わってから、ラットを取り出し、一分間に何回の咳をするかを観察する。もし、一分間に３回以上の咳の動作をすると（腹部の筋肉または胸部が収縮すると共に口を大きくする、時にして咳声も聞ける）、“咳がある”とみなす、そうでなければ、“咳がない”とみなす。
ラットの胃に入れて１時間経てから噴霧する。一定時間後濃アンモニア水を噴霧し、それが終わってから、ラットを取り出し、一分間に何回の咳をするかを観察する。もし、一分間に３回以上の咳の動作をすると（腹部の筋肉または胸部が収縮すると共に口を大きくする、時にして咳声も聞ける）、“咳がある”とみなす、そうでなければ、“咳がない”とみなす。
４．実験過程：
序串法（上下法）を利用して半数以上のラットが咳をするに要する噴霧時間を求める（EDT50）。また、R値を計算し、R値が１３０％を超えると、薬物が鎮咳効果を有する事を表し、R値が１５０％を超えると、顕著な鎮咳効果を有する事を表す。計算式は下に記載の通りである。
EDT50=log-1c/n（式中、ｎは動物の数量、ｃはｒｘ値の総和、ｒは各剤量グループの動物の数量、ｘは剤量（即ち、噴霧時間）の対数）
序串法（上下法）を利用して半数以上のラットが咳をするに要する噴霧時間を求める（EDT50）。また、R値を計算し、R値が１３０％を超えると、薬物が鎮咳効果を有する事を表し、R値が１５０％を超えると、顕著な鎮咳効果を有する事を表す。計算式は下に記載の通りである。
５．実験結果：
統計によって、各サンプルグループの中で半数以上のラットが咳をする時間と鎮咳効果は表５の通りである。
表５：各サンプルの鎮咳効果
統計によって、各サンプルグループの中で半数以上のラットが咳をする時間と鎮咳効果は表５の通りである。
表５：各サンプルの鎮咳効果
ナリンゲニンサンプルと陽性対照薬物であるデキストロメトルファンをラットに経口投与し、ラットの咳を起こすに耐えられる時間を比べると、ナリンゲニンがラットの耐えられる時間を著しく延長し、陽性対照薬物であるデキストロメトルファンを使うより耐えられる時間が長く、統計学的に著しい差がある。ナリンゲニンナトリウム塩サンプルと陽性対照薬物であるデキストロメトルファンをラットに経口投与し、ラットの咳を起こすに耐えられる時間を比べると、ナリンゲニンナトリウム塩がラットの耐えられる時間を著しく延長し、陽性対照薬物であるデキストロメトルファンを使うより耐えられる時間が長く、統計学的に著しい差がある。即ち、ラットの咳を起こすに耐えられる時間について、ナリンゲニンとナリンゲニンナトリウム塩を使うのがデキストロメトルファンを使うより耐えられる時間が長く、優れた鎮咳効果を有する。
実施例３１：ナリンゲニン薬物の去痰薬理学実験
１．実験動物：NIHラット、雌、重量１８．０〜２２．１ｇ、清潔級標準で９０匹。先ず、重量を測ってから番号を着けた。その後、健康で重量が１８．５〜２２．０ｇのラットを８０匹選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に毎グループに１０匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ、ナリンゲニンサンプルの高、中、低薬物グループ及びナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高、中、低薬物グループを設置した。また、10ml/kg重量全部の入胃量によって一回で経口投与された。
１．実験動物：NIHラット、雌、重量１８．０〜２２．１ｇ、清潔級標準で９０匹。先ず、重量を測ってから番号を着けた。その後、健康で重量が１８．５〜２２．０ｇのラットを８０匹選んだ。それから重量の重さについて配列し、任意に毎グループに１０匹づつ８グループに分けた。また、陰性対照グループ、陽性対照グループ、ナリンゲニンサンプルの高、中、低薬物グループ及びナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高、中、低薬物グループを設置した。また、10ml/kg重量全部の入胃量によって一回で経口投与された。
２．サンプルの出所と処理：
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：痰咳浄散剤０．２ｇを１０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照の痰咳浄溶液を得た。その濃度は２０ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンゲニンサンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンを精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
４）ナリンゲニンサンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンを精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
５）ナリンゲニンサンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンを精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
６）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
７）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
８）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
１）空白の対照グループ：生理食塩水、NaClの含有量は０．９％。
２）陽性対照グループ：痰咳浄散剤０．２ｇを１０ｍｌの生理食塩水に溶解して陽性対照の痰咳浄溶液を得た。その濃度は２０ｍｇ/ｍｌ。
３）ナリンゲニンサンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンを精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
４）ナリンゲニンサンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンを精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
５）ナリンゲニンサンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンを精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
６）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの低剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を精密に５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して０．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
７）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの中剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を精密に１５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して１．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
８）ナリンゲニンナトリウム塩サンプルの高剤量グループ：ナリンゲニンナトリウム塩を精密に４５ｍｌ取り、１０ｍｌ容量瓶中で生理食塩水に５分間超音波で溶解した後、均一に混合して４．５ｍｇ/ｍｌ濃度のサンプルグループを得た。
３．実験方法：
１）標準フェノール曲線の作成：分析天秤を使って一定量のフェノールを精密に取り、５％濃度の重炭酸ナトリウムに溶解して１２．５ｎｇ／ｍｌに調整した。それから順次に毎１ｍｌに含んでいるフェノールが６．２５ｎｇ、３．１２５ｎｇ、１．５６２５ｎｇ、０．７８１３ｎｇ、 ０．３９０６ｎｇ、０．１９５３ｎｇ、０．０９７７ｎｇ、０．０４８８ｎｇになるように希釈して、分光光度計を使ってOD値を測った。フェノール濃度を縦座標にし、OD値を横座標にして、フェノール濃度とOD値を基にして回帰方程を算出した。また、回帰方程によって各ラットのフェノールの排泄量を算出した。
２）ラットを断食、非水禁状態で１２時間置いた。
３）薬物を胃に投与した。動物番号の順番に、毎ラットに投与してから３分間停止し、また外のラットに投与した。時間の間隔は３分間であり、毎グループ１０匹の投与時間は３０分間であった。
４）各ラットに投与してから０．５時間経て、腹腔に５％濃度のフェノール生理食塩水を０．２ｍｌ注射した。また、順番に、毎ラットにフェノールを注射してから３分後、外のラットに注射した。１０匹のラットに要する時間は３０分間であった。
５）各ラットの腹腔に注射してから０．５時間経て、順序によってラットを斬首して屠殺した。その時間の間隔は３分間とした。動物を屠殺してから動かないように手術板に固定し、頸の中程の皮膚を切り、気管を分離し、小さいピンセットを使って気管を支えた。
６）大きい注射器で生理食塩水を吸い取り気管の外壁を洗い落とした。血液と気管外壁のフェノールを洗い落としてから、濾紙を使って洗液を吸収した。
７）まず、気管の分枝部で気管を切り取り、また、他端の甲状軟骨の上端から気管を切り取った（環状の甲状軟骨も含めた）。
８）前もって準備した１．５ｍｌの５％濃度のNaHCO3溶液試験管に各気管段を放置した。
９）３分間の間に前記気管分離切り操作を完成し、また、同じ方法で他のラットを処理した。
１０）各試験管を超音波清洗器の中に５分間置いて、気管段の中のフェノールを開放した。
１１）各試験管の中の溶液を７３１型分光光度計で５４６nm処のOD値を測った。
１２）各試験管は気管段を含んだまま一夜放置し、２４時間経てからまたOD値を測った。
１３）回帰方程によって、フェノールの含有量を算出した。計算式：Y＝７．６２６６X−０．０５５４。XはOD値、Yはフェノールの含有量である。
１４）フェノールの含有量と動物重量によって、矯正フェノール含有量を計算した。SPSS8.0統計ソフトを使って分散の分析を行う。矯正フェノール含有量＝フェノールの含有量(ng)/ラット重量（Kg）。
１）標準フェノール曲線の作成：分析天秤を使って一定量のフェノールを精密に取り、５％濃度の重炭酸ナトリウムに溶解して１２．５ｎｇ／ｍｌに調整した。それから順次に毎１ｍｌに含んでいるフェノールが６．２５ｎｇ、３．１２５ｎｇ、１．５６２５ｎｇ、０．７８１３ｎｇ、 ０．３９０６ｎｇ、０．１９５３ｎｇ、０．０９７７ｎｇ、０．０４８８ｎｇになるように希釈して、分光光度計を使ってOD値を測った。フェノール濃度を縦座標にし、OD値を横座標にして、フェノール濃度とOD値を基にして回帰方程を算出した。また、回帰方程によって各ラットのフェノールの排泄量を算出した。
２）ラットを断食、非水禁状態で１２時間置いた。
３）薬物を胃に投与した。動物番号の順番に、毎ラットに投与してから３分間停止し、また外のラットに投与した。時間の間隔は３分間であり、毎グループ１０匹の投与時間は３０分間であった。
４）各ラットに投与してから０．５時間経て、腹腔に５％濃度のフェノール生理食塩水を０．２ｍｌ注射した。また、順番に、毎ラットにフェノールを注射してから３分後、外のラットに注射した。１０匹のラットに要する時間は３０分間であった。
５）各ラットの腹腔に注射してから０．５時間経て、順序によってラットを斬首して屠殺した。その時間の間隔は３分間とした。動物を屠殺してから動かないように手術板に固定し、頸の中程の皮膚を切り、気管を分離し、小さいピンセットを使って気管を支えた。
６）大きい注射器で生理食塩水を吸い取り気管の外壁を洗い落とした。血液と気管外壁のフェノールを洗い落としてから、濾紙を使って洗液を吸収した。
７）まず、気管の分枝部で気管を切り取り、また、他端の甲状軟骨の上端から気管を切り取った（環状の甲状軟骨も含めた）。
８）前もって準備した１．５ｍｌの５％濃度のNaHCO3溶液試験管に各気管段を放置した。
９）３分間の間に前記気管分離切り操作を完成し、また、同じ方法で他のラットを処理した。
１０）各試験管を超音波清洗器の中に５分間置いて、気管段の中のフェノールを開放した。
１１）各試験管の中の溶液を７３１型分光光度計で５４６nm処のOD値を測った。
１２）各試験管は気管段を含んだまま一夜放置し、２４時間経てからまたOD値を測った。
１３）回帰方程によって、フェノールの含有量を算出した。計算式：Y＝７．６２６６X−０．０５５４。XはOD値、Yはフェノールの含有量である。
１４）フェノールの含有量と動物重量によって、矯正フェノール含有量を計算した。SPSS8.0統計ソフトを使って分散の分析を行う。矯正フェノール含有量＝フェノールの含有量(ng)/ラット重量（Kg）。
４、実験結果：
統計によって、各剤量グループのフェノール排出量は表６の通りである。
表６：ナリンゲニンの去痰効果（X±S）
統計によって、各剤量グループのフェノール排出量は表６の通りである。
表６：ナリンゲニンの去痰効果（X±S）
a：矯正フェノール含有量＝フェノールの含有量/動物重量
b：去痰率＝投与薬物グループ/空白の対照グループ×１００%
フェノール含有量の計算方法（ng）：OD値×７．６２６６X−０．０５５４
b：去痰率＝投与薬物グループ/空白の対照グループ×１００%
フェノール含有量の計算方法（ng）：OD値×７．６２６６X−０．０５５４
ナリンゲニンサンプルと陽性薬物である痰咳浄をラットに経口投与させたラットの気管支の分泌液を増やす実験から考察すると、ナリンゲニンの低、中、高剤量グループの各剤量グループが、空白の対照グループに比べて、ラットの気管支で分泌する分泌液が著しく増え、統計学的に著しい差がある。高剤量グループは、陽性対照薬物痰咳に比べて、ラットの気管支で分泌する分泌液が著しく増え、統計学的に著しい差があり、治療効果が大きい。ナリンゲニンナトリウム塩サンプルと陽性薬物である痰咳をラットに経口投与させたラットの気管支の分泌液を増やす実験から考察すると、ナリンゲニンナトリウム塩の低、中、高剤量グループの各剤量グループが、空白の対照グループに比べて、ラットの気管支で分泌する分泌液が著しく増え、統計学的に著しい差がある。高剤量グループは、陽性対照薬物痰咳に比べて、ラットの気管支で分泌する分泌液が著しく増え、統計学上で著しい差があり、治療効果が著しい。即ち、ナリンゲニンとナリンゲニンナトリウム塩は優れた去痰効果を有する。
実施例３２：ナリンギン薬物の毒理学実験
温度：２４±１℃、湿度：６５±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌、雄は半分づつであり、重量は２０〜２２ｇである。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育した。
ナリンギンを０．５％のTween80の中に溶解し、濃度を３００mg/mlにした。該液体を０．２ml/２０gラット重量のようにラットに経口投与した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺する、各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、３．０g/kg剤量のナリンギンの毒性は見られなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の２３０倍である。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンギン薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
温度：２４±１℃、湿度：６５±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌、雄は半分づつであり、重量は２０〜２２ｇである。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育した。
ナリンギンを０．５％のTween80の中に溶解し、濃度を３００mg/mlにした。該液体を０．２ml/２０gラット重量のようにラットに経口投与した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺する、各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、３．０g/kg剤量のナリンギンの毒性は見られなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の２３０倍である。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンギン薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
実施例３３：ナリンギンナトリウム塩薬物の毒理学実験
温度：２５±１℃、湿度：７５±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌性、雄性は半分づつであり、重量は１８．５〜２０．５ｇであった。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育する。
ナリンギンナトリウム塩を生理食塩水に溶解し、濃度を300mg/mlにした。前記液体を０．２ml/２０gラット重量のようにラットに経口投与した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺して、各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、３．０g/kg剤量のナリンギンナトリウム塩の毒性は見られなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の２３０倍である。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンギンナトリウム塩薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
温度：２５±１℃、湿度：７５±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌性、雄性は半分づつであり、重量は１８．５〜２０．５ｇであった。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育する。
ナリンギンナトリウム塩を生理食塩水に溶解し、濃度を300mg/mlにした。前記液体を０．２ml/２０gラット重量のようにラットに経口投与した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺して、各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、３．０g/kg剤量のナリンギンナトリウム塩の毒性は見られなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の２３０倍である。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンギンナトリウム塩薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
実施例３４：ナリンゲニン薬物の毒理学実験
温度：２８±１℃、湿度：７０±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌、雄は半分づつであり、重量は１９〜２１ｇであった。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育した。
ナリンゲニンを０．５％のTween80に溶解し、濃度を３００mg/mlにする。前記液体を０．４ml/２０gラット重量のようにラットに経口投した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺する、各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、６．０g/kg剤量のナリンゲニンの毒性は見られなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の４６０倍であった。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンゲニン薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
温度：２８±１℃、湿度：７０±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌、雄は半分づつであり、重量は１９〜２１ｇであった。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育した。
ナリンゲニンを０．５％のTween80に溶解し、濃度を３００mg/mlにする。前記液体を０．４ml/２０gラット重量のようにラットに経口投した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺する、各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、６．０g/kg剤量のナリンゲニンの毒性は見られなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の４６０倍であった。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンゲニン薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
実施例３５：ナリンゲニンナトリウム塩薬物の毒理学実験
温度：２７±１℃、湿度：６０±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌、雄は半分づつであり、重量は１８．２〜２２．５ｇであった。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育する。
ナリンゲニンナトリウム塩を生理食塩水に溶解し、濃度を３００mg/mlにした。該液体を０．４ml/２０gラット重量のようにラットに経口投与した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺した。各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、６．０g/kg剤量のナリンゲニンナトリウム塩の毒性はみられなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の４６０倍である。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンギンナトリウム塩薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
温度：２７±１℃、湿度：６０±５％の条件で、７〜８週齢、健康の清潔級標準のNIHラット２０匹を選んだ。雌、雄は半分づつであり、重量は１８．２〜２２．５ｇであった。飼料と水を消毒して試験の前と試験の間に正常の条件について飼育する。
ナリンゲニンナトリウム塩を生理食塩水に溶解し、濃度を３００mg/mlにした。該液体を０．４ml/２０gラット重量のようにラットに経口投与した。投薬した後、１，４，８，１２時間ごとに観察した。それからは毎１２時間に１回観察した。死亡の情況を観察し、毎日ラットの重量変化とその他の症状を記録した。第１０日にラットを斬首して屠殺した。各器官を取って病理検査を行った。
すべてのラットは１０日目までは生存しており、６．０g/kg剤量のナリンゲニンナトリウム塩の毒性はみられなかった。該剤量は人類が正常に服用する剤量の４６０倍である。ラットの各器官の病理検査は正常であり、病変はみられなかった。また、１０日間ラットの重量も軽減しなかった。従って、ナリンギンナトリウム塩薬物を動物に経口投与する時の毒性はない。
実施例３６：ナリンギンカプセル製剤
下述の成分によってゼラチンのカプセルを調製した：
補佐材料とナリンギンを均一に混合し、透明なカプセルに入れてナリンギンカプセル剤を得た。装量：１５０ｍｇ/カプセル。
下述の成分によってゼラチンのカプセルを調製した：
実施例３７：ナリンギン錠剤
下述の成分によって錠剤を調製した：
ナリンギンと澱粉を均一に混合し、また澱粉を加え続けて撹絆して柔らかい材料にし、１０目ナイロン篩を通して粒状にし、８０〜９０℃の風により乾燥した。それから、乾粒にステアリン酸マグネシウムを加え、１２目篩を通して粒状にした。その後混合し、錠剤に圧製すし、５０００粒得た。１粒毎の重量はほぼ０．３ｇ程度である。
下述の成分によって錠剤を調製した：
実施例３８：ナリンゲニンカプセル剤
下述の成分によってカプセル剤を調製した：
補佐材料とナリンゲニンを均一に混合し、ゼラチンのカプセルに入れてナリンゲニンカプセル剤を得た。装量：１００ｍｇ/カプセル。
下述の成分によってカプセル剤を調製した：
実施例３９：ナリンギン錠剤
下述の成分比率によって錠剤を調製した：
ナリンギンと澱粉を均一に混合し、また澱粉を加え続けて撹絆して柔らかい材料にし、１０目ナイロン篩を通して粒状にした。８０〜９０℃の風により乾燥し、それから、乾粒にステアリン酸マグネシウムを加え、１２目篩を通して粒状にした。その後混合し、錠剤に圧製し、１００００粒得た。１粒毎の重量はほぼ０．１ｇ程度である。
下述の成分比率によって錠剤を調製した：
実施例４０：ナリンゲニン吸入剤
下述の成分比率によって吸入剤を調製した：
PEG４００水溶液にナリンゲニン、乳糖、泊洛沙姆及びL−ロイシンを溶解して、また噴霧乾燥した。得られた噴霧乾燥の粉末にマイクロ粉末シリカゲルを加え、均一に混合し、カプセル型の乾粉吸入装置に入れた。
下述の成分比率によって吸入剤を調製した：
実施例４１：ナリンギンナトリウム塩注射剤
ナリンギンナトリウム塩１００ｇを取り、１０Ｌの注射用水を加えて溶解し、塩酸を使ってpH＝７〜８に調整し、最後にG３垂れ漏斗を使って濾過してから入れて閉じた。それから１００℃の水蒸気中で３０分間滅菌してナリンギンナトリウム塩の注射剤を得た。
ナリンギンナトリウム塩１００ｇを取り、１０Ｌの注射用水を加えて溶解し、塩酸を使ってpH＝７〜８に調整し、最後にG３垂れ漏斗を使って濾過してから入れて閉じた。それから１００℃の水蒸気中で３０分間滅菌してナリンギンナトリウム塩の注射剤を得た。
実施例４２：ナリンゲニンナトリウム塩注射剤
ナリンゲニンナトリウム塩１００ｇを取り、１０Ｌの注射用水を加えて溶解し、塩酸を使ってpH＝７〜８に調整し、最後にG３垂れ漏斗を使って濾過してから入れて閉じた。それから１００℃の水蒸気の中で３０分間滅菌してナリンゲニンナトリウム塩の注射剤を得た。
ナリンゲニンナトリウム塩１００ｇを取り、１０Ｌの注射用水を加えて溶解し、塩酸を使ってpH＝７〜８に調整し、最後にG３垂れ漏斗を使って濾過してから入れて閉じた。それから１００℃の水蒸気の中で３０分間滅菌してナリンゲニンナトリウム塩の注射剤を得た。
実施例４３：ナリンギンのシロップ剤
ナリンギン１００ｇを取り、蔗糖６５０ｇを加えて均一に撹絆し、８００ｍｌの蒸留水を加え、加熱煮沸して溶解させた後、濾過し、放置して冷ました、また、防腐剤を加えてから、蒸留水を使って１０００ｍｌまで希釈してナリンギンのシロップ剤を得た。
ナリンギン１００ｇを取り、蔗糖６５０ｇを加えて均一に撹絆し、８００ｍｌの蒸留水を加え、加熱煮沸して溶解させた後、濾過し、放置して冷ました、また、防腐剤を加えてから、蒸留水を使って１０００ｍｌまで希釈してナリンギンのシロップ剤を得た。
実施例４４：ナリンゲニンのシロップ剤
ナリンゲニン１００ｇを取り、蔗糖５００ｇを加えて均一に撹絆し、８００ｍｌの蒸留水を加え、加熱煮沸して溶解させた後、濾過し、放置して冷ました、また、防腐剤を加えてから、蒸留水を使って１０００ｍｌまで希釈してナリンゲニンのシロップ剤を得た。
ナリンゲニン１００ｇを取り、蔗糖５００ｇを加えて均一に撹絆し、８００ｍｌの蒸留水を加え、加熱煮沸して溶解させた後、濾過し、放置して冷ました、また、防腐剤を加えてから、蒸留水を使って１０００ｍｌまで希釈してナリンゲニンのシロップ剤を得た。
実施例４５：ナリンゲニンナトリウム塩の粉末注射剤
ナリンゲニン１００ｇを取り、１０００ｍｌの蒸留水を加えて溶解させ、１２１℃の温度で１５分間滅菌してから取り出した。無菌に１ｍｌのアンプル瓶に入れ閉じる、冷凍乾燥させた後、無菌条件の中で密封してナリンゲニンナトリウム塩の粉末注射剤を得た。
ナリンゲニン１００ｇを取り、１０００ｍｌの蒸留水を加えて溶解させ、１２１℃の温度で１５分間滅菌してから取り出した。無菌に１ｍｌのアンプル瓶に入れ閉じる、冷凍乾燥させた後、無菌条件の中で密封してナリンゲニンナトリウム塩の粉末注射剤を得た。
実施例４６：ナリンギンナトリウム塩の粉末注射剤
ナリンギン１００ｇを取り、１０Ｌの蒸留水を加えて溶解させ、１２１℃の温度で１５分間滅菌してから取り出した。無菌に１ｍｌのアンプル瓶に入れ閉じ、冷凍乾燥させた後、無菌条件の中で密封してナリンギンナトリウム塩の粉末注射剤を得た。
ナリンギン１００ｇを取り、１０Ｌの蒸留水を加えて溶解させ、１２１℃の温度で１５分間滅菌してから取り出した。無菌に１ｍｌのアンプル瓶に入れ閉じ、冷凍乾燥させた後、無菌条件の中で密封してナリンギンナトリウム塩の粉末注射剤を得た。
本発明は鎮咳去痰の治療用途に好適である。
Claims (22)
- ナリゲニン、ナリンギン及びそれらの塩を含有する鎮咳去痰用の薬品組成物。
- 有効用量の活性成分となるナリンゲニン、ナリンギン及びその塩、及び薬物学的に許容される担体を含むことを特徴とする鎮咳去痰の薬品組成物。
- 前記有効用量が０.０５〜５００ｍｇ／ｋｇ重量／日の範囲であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記薬品組成物が、錠剤、シロップ剤、カプセル剤、粉末注射剤、注射剤及び吸入剤からなる群のいずれかの調製剤であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 経口投与、注射投与、または肺部吸入方式で投薬されることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンギン及びその塩が、化学的に合成されて得られてなることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンギンが、ナリンギンを有する植物原料から抽出したナリンギン単体であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンギンが、ナリンギンを有する植物原料を粉砕して、水で１〜３回抽出して、その液体を濾過、併合するステップ、該濾過液体を濃縮してエキスを形成し、該エキスをアルコールで沈殿した後にクロマトグラフィー、又は直接クロマトグラフィーを行って、カラム分離し、有機溶媒を洗い落とすステップ、洗い落とした溶媒を回収して、ナリンギンの粗性品を得るステップ、および１〜１０回再結晶してナリンギン単体を得るステップを含むナリンギンの抽出方法により得られてなることを特徴とする請求項７記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニンが、前記ナリンギンを加水分解して得られるナリンゲニン単体であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニンが、前記ナリンギンを加水溶解して、均一に撹絆し、酸もしくは塩基もしくは酵素を加えて水解し、沈殿濾過してナリンゲニン粗製品を得るステップ、および有機溶媒を使って１〜１０回再結晶してナリンゲニン単体を得るステップを含むナリンゲニンの抽出方法により得られてなることを特徴とする請求項９記載の薬品組成物。
- 前記酵素が、グルクロニダーゼまたは他の六炭糖を加水分解できる酵素であることを特徴とする請求項１０記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニンが、ナリンゲニンを含んでいる植物原料から抽出されて得られるナリンゲニン単体であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニンが、ナリンゲニンを含んでいる植物原料を粉砕して、有機溶媒で１〜３回抽出し、その液体を濾過、併合するステップ、該濾過液体をエキスに濃縮してナリンゲニンの粗製品を得るステップ、および有機溶媒で１〜１０回再結晶してナリンゲニン単体を得るステップを含むナリンゲニンの抽出方法により得られてなることを特徴とする請求項１２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニンが、前記ナリンギンを含んでいる植物原料を直接加水分解し、抽出した後、得られるナリンゲニン単体であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニンが、ナリンギンを含んでいる植物原料を粉砕して、水又は有機溶媒で１〜３回抽出し、その液体を濾過、併合するステップ、該濾過液体をエキスに濃縮し、該エキスを水又は有機溶媒を用いて溶解し、それに酸もしくは塩基もしくは酵素を加えて水解、濾過してナリンゲニンの粗製品を得るステップ、および１〜１０回再結晶してナリンゲニン単体を得るステップを含むナリンゲニンの抽出方法により得られてなることを特徴とする請求項１４記載の薬品組成物。
- 前記酵素が、グルクロニダーゼまたは他の六炭糖を加水分解できる酵素であることを特徴とする請求項１５記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニン塩が、ナリンゲニンと相当するアルカリ物質が反応して生成した金属塩であり、その分子式はC 15 H (12-n) O 5 Yn（式中、nは1-3であり、Yは金属イオンである）であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンゲニン塩が、０〜１００℃の条件下でナリンゲニンと相当するアルカリ物質が反応してナリンゲニンの金属塩を得る方法において、反応におけるナリンゲニンとアルカリ物質とのモル比が１：１〜１：３であるナリンゲニン塩の調製方法により得られてなることを特徴とする請求項１７記載の薬品組成物。
- 前記アルカリ物質が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムからなる群から選ばれるいずれかであり、反応して得たナリンゲニン塩がナリンゲニンのナトリウム塩又はカリウム塩であり、その分子式がC 15 H (12-n) O 5 Yn（式中、nは1-3であり、YはKイオンもしくはNaイオンである）であることを特徴とする請求項１７又は請求項１８に記載の薬品組成物。
- 前記ナリンギン塩が、ナリンギンと相当するアルカリ物質が反応して生成した金属塩であり、その分子式はC 27 H (32-n) O 14 Yn（式中、nは1-2であり、Yは金属イオンである）であることを特徴とする請求項２記載の薬品組成物。
- 前記ナリンギン塩が、０〜４０℃の条件下でナリンギンと相当するアルカリ物質と反応させてナリンギンの金属塩を得る方法において、反応におけるナリンギンとアルカリ物質とのモル比が１：１〜１：２であるナリンギン塩の調製方法により得られてなることを特徴とする請求項２０記載の薬品組成物。
- 前記アルカリ物質が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムからなる群から選ばれるいずれかであり、反応して得たナリンギン塩がナリンギンのナトリウム塩又はカリウム塩であり、その分子式がC27H(32-n)O14Yn（式中、nは1-2であり、YはKイオンもしくはNaイオンである）であることを特徴とする請求項２０又は請求項２１に記載の薬品組成物。
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