JP3727851B2

JP3727851B2 - 強力なバニロイド受容体アゴニストおよび鎮痛剤としてのレジニフェラトキシンファーマコフォアを含むバニロイド同類体、その組成物およびその用途

Info

Publication number: JP3727851B2
Application number: JP2000600971A
Authority: JP
Inventors: リー、ジーウー; オー、ウータエク; パク、ヨウン−ホ; スー、ヨウン−ゲル; パク、ヒェウン−ゲウン; キム、ヒー−ドゥー
Original assignee: アモレパシフィックコーポレーション; ディジタル・バイオテック・カンパニー・リミテッド
Priority date: 1999-02-22
Filing date: 2000-02-21
Publication date: 2005-12-21
Anticipated expiration: 2020-02-21
Also published as: EP1154989B1; ATE312812T1; JP2002537373A; HK1042472B; US6476076B1; ES2253208T3; EP1154989A1; CN1342138A; MXPA01008403A; WO2000050387A1; AU2697600A; CN1210254C; HK1042472A1; CA2363531A1; AU763824B2; DE60024785D1; DE60024785T2; CA2363531C

Description

【０００１】
【発明の背景】
１．発明の技術分野
本発明は、レジニフェラトキシンファーマコフォアを含むバニロイド同類体、それを含む薬剤学的組成物、およびバニロイド受容体アゴニストおよび強力な鎮痛剤としてそのような同類体を用いる方法に関する。
【０００２】
２．発明の関連技術
下記の構造を有するカプサイシン(CAP)は、感覚求心性神経Ｃ−繊維を刺激し、脱感作させる。このような脱感作は、関節炎、喘息、鼻炎を含むアレルギー反応、発熱、疼痛、膀胱性過敏症などに適用され得る。
【０００３】
また、バニロイド受容体(vanilloid receptor;VR)(またはカプサイシン受容体)は、カプサイシンおよび関連刺激化合物に対する特異神経膜認識部位である。これは、有害受容(nociception)および神経由来炎症に関連のある第１神経ニューロンによってのみ発現される。この受容体はカルシウムに対して優位を有する陽イオン−選択イオンチャンネルとしての機能を果し、ＣＡＰおよび有害熱によって活性化された機能性サブタイプＶＲ１が最近クローニングされた。特定リガンドによって惹起される脱感作は、神経病的痛みおよび第１神経ニューロンから放出されたニューロペプチドの役割によって引き起こされる他の病理学的状態を鎮静させるための有力な治療法であると認識されている。
【０００４】
鎮痛剤として開発中、または使用中の外因性バニロイド受容体アゴニストの大部分は、構造的にカプサイシン（たとえば、ゾストリックス(Zostrix)^TM、オルバニル(Olvanil)^TM、 SDZ-249482^TM およびDA-5018 ^TM ）およびレジニフェラトキシン(resiniferatoxin；ＲＴＸ)と関連がある。これらの構造は、一般的にアゴニストとしての活性を示すバニロイド環を含む。しかし、セスキテルペノイド(sesquiterpenoid)不飽和ジアルデヒドまたはトリプレニルフェノール(triprenylphenol)のようにバニロイド残基を有しない化合物もまた受容体を活性化させ得ると最近報告されている。たとえ受容体の拮抗剤は数少ないが、カプサイシン結合部位において競争的に作用するカプサゼピン(capsazepine)、チャンネルブロッカールテニウムレッド (channel blocker ruthenium red)およびカプサゾカインのような数々の化合物が報告されている。
【０００５】
ユーフォルビア・レジニフェラ(Euphorbia resinifera)から得られた三環性ジテルペン類であるレジニフェラトキシン (Resiniferatoxin)(ＲＴＸ)は、強力なカプサイシン同類体であるとみなされている。後根神経節(dorsal root ganglia)でのカプサイシン結合部位とＲＴＸとの特異結合は、標識された[³H]ＲＴＸで表示される。ＲＴＸは、急迫性尿失禁(urinary urge incontinence)および糖尿病性神経症(diabetic neuropathy)と係わる痛みの治療のための非常に強力な神経ニューロン脱感作剤として開発された。最近、全体的に正しい立体構造を有する(enantiocontrolled) RTXの合成およびその配座解釈(conformational analysis)が報告された。しかし、Ｃ_２０−ホモバニリック残基、Ｃ_３−ケト基およびＣ環のオルト−エステルフェニル基がＲＴＸの非常に強力な効能に寄与する重用な構造的要素であるという構造活性研究が提案されているものの、ＲＴＸのファーマコフォア基(pharmacophoric group)はまだ明白に定義されていない。一方、ＲＴＸに比べてＣＡＰの低い効能は、これらのファーマコフォア基のうちある成分、特にＣ_３−ケト基の不在によると説明され得る。
【０００６】
米国特許第４，９３９，１４９号には、神経性炎症、化学的および熱的に誘導された痛みおよびＣＡＰに敏感な感覚求心性神経経路を含む反応に、動物を脱感させるための脱感作の治療に有効な量のＲＴＸを投与することによって動物を脱感作させる方法が開示されている。
【０００７】
ＣＡＰおよびＲＴＸの構造に基づく多数のバニロイドアゴニストが鎮痛剤として報告されているが（たとえば、米国特許第５，０２１，４５０号には、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−ホモバニレートおよびメゼレイン(mezerein)２０−ホモバニレートのようなホモバニリルジテルペン誘導体がRTXと同じような作用を持つと開示されている）、これらのＣＡＰ型の同類体は、これらが本来有する低い効能および狭い治療学的インデックスのため限界がある。一方、ＲＴＸは天然原料から得られたものであるため、手に入りにくく、またその構造的複雑性のため合成することが難しい。
【０００８】
本発明者らは、バニロイド受容体に基づく新規な鎮痛剤を開発すべくＲＴＸまたは、公知のＲＴＸ−同類体またはＣＡＰ−同類体より簡単な構造を有する化合物について鋭意研究した結果、受容体結合分析およびＣＡＰ−活性単一チャンネル分析において強力なバニロイドアゴニスト活性を示すものであって、認識および結合のために必須な基として、修飾されたＣ_２０−ホモバニリック残基、Ｃ_３−カルボニル基およびオルト−エステルフェニル残基を有する新規な化合物を開発するに至った。
【０００９】
【発明の概要】
したがって、本発明は、下記一般式(Ｉ)で表される新規な化合物、および薬剤学的に許容可能な塩を提供するを提供する。
【００１０】
【化２】

（式中、
Ｘは、酸素または硫黄原子であり；
Ａは−ＮＨＣＨ_２−または−ＣＨ_２−であり；
Ｒ_１は、置換または非置換されたＣ_１−４アルキルアリール基またはＲ_４ＣＯ−（ここで、Ｒ_４は、炭素数１〜１８のアルキル基、炭素数２〜１８のアルケニル基、或いは置換または非置換された炭素数６〜１０のアリール基である）であり；
Ｒ_２は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜６のアルコキシ基、炭素数１〜６のハロアルキル基またはハロゲン原子であり；
Ｒ_３は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アミノアルキル、二酸モノエステル基またはα―アルキル酸であり；および
*は、キラル性炭素原子を示す）。
【００１１】
また、本発明は、薬剤学的に許容可能な担体とともに、活性成分として前記一般式（Ｉ）の化合物を、痛みを緩和するのに有効な量で含む薬剤学的組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明は、痛みまたは尿失禁を治療するための薬剤の活性成分としての前記化合物の用途を提供する。
【００１３】
さらに、本発明は前記化合物（Ｉ）の製造方法を提供する。
【００１４】
【発明の詳細な記述】
本発明の化合物は、下記一般式（Ｉ）で表される；
【化３】

（式中、
Ｘは、酸素または硫黄原子であり；
Ａは−ＮＨＣＨ_２−または−ＣＨ_２−であり；
Ｒ_１は、置換または非置換されたＣ_１−４アルキルアリール基またはＲ_４ＣＯ−（ここで、Ｒ_４は、炭素数１〜１８のアルキル基、炭素数２〜１８のアルケニル基または置換または非置換された炭素数６〜１０のアリール基である）であり；
Ｒ_２は、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜６のアルコキシ基、炭素数１〜６のハロアルキル基またはハロゲン原子であり；
Ｒ_３は、アミノアルキル、二酸モノエステル基またはα―アルキル酸であり；および
*は、キラル性炭素原子を示す）、および薬剤学的に許容可能な塩である。
【００１５】
本発明の好ましい化合物は、下記一般式（I-a）および（I-b）で表される：
【化４】

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、前記で定義した通りである）。
【００１６】
好ましい実施態様において、前記一般式(I-a)または(I-b)の化合物は、Ｒ_１が式Ｒ_４ＣＯ−（ここで、Ｒ_４は炭素数１〜１８のアルキル基である）で表される基であり、Ｒ_２が炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒ_３が-(CH₂)_nNH₂、-CO(-CH₂)_nCOOHまたは-(CH₂)nCOOH(ここで、ｎは１〜４の整数である)の化合物である。一方、Ｒ_１またはＲ_４が置換されたアリール基である場合、置換基は炭素数１〜４の一つ以上の低級アルキル基またはハロゲン原子である。
【００１７】
さらに好ましい実施態様において、前記一般式 (I-a)または(I-b)の化合物は、Ｒ_１が式Ｒ_４ＣＯ−（ここで、Ｒ_４は、炭素数１〜６のアルキル基である）で表される基であり、Ｒ_２が炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒ_３が-CH₂CH₂NH₂、-COCH₂CH₂CO₂Hまたは-CH₂CO₂Hである。
【００１８】
すべての場合に、一般式（Ｉ）の化合物はラセミ混合物であるか、ＲまたはＳ型立体異性体であり得る。また、本発明は、薬剤学的に許容可能な塩の形態で化合物(Ｉ)を含む。
【００１９】
本発明の化合物は、下記の反応式に示す方法によって化学的に合成され得るが、これらは例示のためのものであり、本発明を限定しない。下記の反応式は、本発明の代表的な化合物の製造段階を示し、また、他の化合物は当業者によって熟知された試薬および出発物質に適切な変更を加えて次の段階によって製造できる。
【００２０】
［一般的な合成方法］
３−アシルオキシ−２−ベンジルプロピルチオウレア誘導体(7a-d)の合成方法は反応式１と２で表される。種々のベンジルハライドでマロン酸ジエチルをモノアルキル化した後、LiAlH₄で還元させてジオール(2a-d)化合物を製造する。化合物(2)のモノアセチル化、残余アルコールのアジドへの転換およびアセチル基の脱保護によって中間体３−アジド−２−ベンジル−１−プロパノール(5a-d)が提供される。化合物(5a-d)を種々のアシルハライドでアシル化させてエステル化合物(6a-d)を製造した後、アジド基を還元させ、４−メトキシメチルオキシ−３−メトキシベンジルイソチオシアネートで縮合させた後、水素化して最終生成物(7a-d)を製造した。３−ベンジルオキシ−２−ベンジルプロピルチオウレア誘導体９ａ、ｃで表される他のエーテル同類体は、反応式２に示すように、化合物５ａ、ｃから合成される。化合物(7a-I)の2つのキラル異性体は、（7a-I）の合成方法と同様な方法で２−ベンジル−１，３−プロパンジオール（反応式３）のラセミ体の異性体選択性酵素によるアセチル化(enantioselective enzymatic acetylation)によって得られた(R)−３−アセトキシ−２−ベンジル−１−プロパノール((R)-3a)から製造される。
【００２１】
前記チオウレア誘導体のＯ−酢酸同類体（１９ａ，ｂ）の合成は反応式４で表される。４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンゾニトリル（１１）をメチルメチルエーテル(MOM)基で保護して化合物１２を製造し、化合物１２のシアノ基をLiAlH₄を用いてアミンに還元させた後、クロロベンジル(ＣＢＺ)基で保護して化合物１３を製造する。化合物１３のＭＯＭ基を脱保護して化合物１４を製造し、化合物１４のヒドロキシ基をメチルブロモアセテートでアルキル化して化合物１５を製造する。メチルエステル化合物１５を水素化して化合物１６を製造し、化合物１５のＣＢＺ基を脱保護して化合物１７を製造する。アミン化合物１７をイソチオシアネート１８ａ，ｂで縮合して最終生成物である１９ａ，ｂを各々得る。
【００２２】
前記チオウレア誘導体のＯ−コハク酸エステル誘導体(２３ａ，ｂ)の合成は、反応式５で表される。コハク酸のモノベンジルエステル２０をバニロイド１４でアシル化して化合物２１を製造し、化合物２１のベンジル基を水素化で脱保護して化合物２２を製造する。アミン化合物２２をイソチオシアネート１８ａ，ｂで縮合して最終生成物である２３ａ，ｂを各々得る。
【００２３】
アミド誘導体のＯ−アミノエチル誘導体(28a,b)の合成は、反応式６で表される。化合物２４のアジド基をアミンに還元した後、アミンをホモバニリックペンタフルオロエステルで縮合して化合物２５を製造する。化合物２５のヒドロキシ基をジブロモエタンでアルキル化して化合物２６を製造し、化合物２６のブロモ基をアジド基で置換して化合物２７を製造する。化合物２７ａ，ｂを還元して最終生成物である２８ａ，ｂを各々得る。
【００２４】
前記チオウレア誘導体のＯ−アミノエチル誘導体(36a,b)の合成は、反応式７で表される。４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミン化合物２９のアミン基をＢｏｃ基で保護して化合物３０を製造した後、化合物３０のヒドロキシ基をジブロモエタンでアルキル化して化合物３１を製造する。化合物３１のブロモ基をアジド基で置換して化合物３２を製造し、化合物３２のＮ−Ｂｏｃ基を脱保護して化合物３３を製造する。アミン化合物３３のアミン基をイソチオシアネートに転換して化合物３４を製造し、化合物３４をアジド化合物６で縮合させてチオウレア化合物３５を製造する。化合物３５ａ，ｂのアジド基を還元して最終生成物である３６ａ，ｂを各々得る。
【００２５】
反応式１
【化５】

反応式２
【化６】

反応式３
【化７】

反応式４
【化８】

反応式５
【化９】

反応式６
【化１０】

反応式７
【化１１】

カプサイシン(CAP)の構造
【化１２】

ＲＴＸの構造
【化１３】

本発明の化合物は、適切な医薬担体または稀釈液と調合して薬剤学的組成物を製造し得る。たとえば、本発明の化合物は、注射溶液の製造に通常用いられる油、プロピレングリコールまたは他の溶媒に溶解し得る。適当な担体としては、特に限定されないが、たとえば、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物性油およびミリスチン酸イソプロピルなどがある。局所適用のためには、本発明の化合物を軟膏やクリームとして剤形化することができる。
【００２６】
本発明の化合物を含む薬剤学的組成物は、次の場合に使用し得る。
【００２７】
１）治療後神経痛、糖尿病性神経病症、乳房切除後の疼痛症候群、切断部疼痛、反射好感神経系栄養障害、三次神経の神経痛、経口神経病症疼痛、骨関節炎、リウマチ性関節炎、繊維筋肉痛、ギランバレー症候群(Guillain-Barre syndrome)、知覚異常性大腿神経痛、バーニングマウス症候群(burning mouth syndrome)による痛みの緩和。
【００２８】
２）両側末梢性神経障害(bilateral peripheral neuropathy)による処置困難な痛みのような痛みの改善。
【００２９】
３）幹癬、血液透析、水由来痛皮膚掻痒(aquagenic pruritus)、前庭性外陰門(vulvar vestibulitis)、知覚異常性背痛(notalgia paraesthetica)、腕橈骨掻痒症、慢性単純性苔せん（Lichen simplex chronicus）による痒み症の緩和。
【００３０】
４）鼻腔内滴下の形態で、群発性頭痛(cluster headache)、血管神経性鼻炎(vasomotor rhinitis)または多年性アレルギー性鼻炎の治療。
【００３１】
５）膀胱内溶液の形態で膀胱過敏症または脊髄圧迫筋反射異常亢進 (spinal detrusor hyperreflexia)の治療。
【００３２】
本発明の化合物は、強力な鎮痛および抗炎症活性を有し、本発明の薬剤学的組成物は急性、慢性または炎症性痛みの緩和または軽減、炎症の抑制、または急迫性失禁の治療に使用され得る。
【００３３】
以下、剤形化方法および賦形剤を説明するが、本発明はこれらの例に限定されない。
【００３４】
薬剤学的投与形態の本発明の化合物は、これらの薬剤学的に許容可能な塩の形態で使用され得、また単独または他の薬剤学的活性化合物との結合だけでなく、適当な集合で使用され得る。
【００３５】
本発明の化合物は、通常の食塩水のような水溶性溶媒、５％デキストロース、または植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステルまたはプロピレングリコールのような非水溶性溶媒にこれらの化合物を溶解、懸濁または乳化させて注射剤に剤形化し得る。本発明の剤形は、溶解剤、等張化剤(isotonic agents)、懸濁剤、乳化剤、安定化剤および防腐剤のような従来の添加剤を含み得る。
【００３６】
本発明の化合物の好ましい投与量は、患者の状態および体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路および期間によって異なるが、当業者によって適宜選択され得る。しかし、好ましい効果を得るために、本発明の化合物は１日０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．００１〜１００ｍｇ/ｋｇ体重の範囲で投与し、１回または数回に分けて投与し得る。組成物において、本発明の化合物は全体組成物の総重量に対して０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．００１〜１重量％の量で存在しなければならない。
【００３７】
本発明の薬剤学的組成物は、哺乳動物（ラット、マウス、家畜またはヒト）に種々の経路で投与できる。すべての投与方式が可能であり、たとえば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内または脳血管内注射によって投与できる。
【００３８】
実施例：化合物 (Ia-d) の一般的合成方法
マロン酸ジエチル(6.4g, 40mmol)をジメチルホルムアミド(DMF, 20ml)に溶かし、０℃に冷却した後、水素化ナトリウム(60%, 1.92g, 48 mmol)を少量ずつ添加し、室温で４０分間攪拌した。この反応混合物に塩化ベンジル(48mmol)を加えた後、一晩室温で攪拌した。この混合物を水で稀釈し、酢酸エチルで数回抽出した。有機層を合せて水と塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物１を得た。
【００３９】
実施例１：ジエチル３，４−ジメチルベンジルマロネート(1b)
収率：７０％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ6.9-7.05(m, 3H), 4.14(m, 4H, 2×CO₂CH₂), 3.61(t, 1H, CH), 3.25(d, 1H, CH₂Ar), 3.14(d, 1H, CH₂Ar), 2.2-2.25(m, 6H, 2×CH₃), 1.21(m, 6H, 2×CO₂CH₂CH ₃)
実施例２：ジエチル４−クロロベンジルマロネート(1c)
収率：７４％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.25(d, 2H), 7.16(d, 2H), 4.14(m, 4H, 2×CO₂CH₂), 3.60 (t, 1H, CH), 3.18(d, 2H, CH₂Ar), 1.21(t, 6H, 2×CO₂CH₂CH ₃)
実施例３：ジエチル４−ｔ−ブチルベンジルマロネート(1d)
収率：７４％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.29(d, 2H), 7.13(d, 2H), 4.16(q, 4H, 2×CO₂CH₂), 3.63 (t, 1H, CH), 3.18(d, 2H, CH₂Ar), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.20(t, 6H, 2×CO₂CH₂CH ₃)
化合物 (2a-d) の一般的合成方法
水素化アルミニウムリチウム(3.64g, 96mmol)をジエチルエーテル(80ml)に溶かし、０℃に冷却した後、これにジエチルエーテル２０mlに溶かした化合物１(24mmol)溶液を滴加した。室温で３時間攪拌した後、反応混合物を氷浴で冷却し、水３．５ml、１５％水酸化ナトリウム７ml、水１０．５mlを順次加えて攪拌した。この混合物を酢酸エチルで洗浄し、濾過した後、濾液を減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（３：１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２を得た。
【００４０】
実施例４：２−ベンジル−１，３−プロパンジオール(2a)
収率：９８％
性状：白色固体
mp; 67℃
¹H NMR(CDCl₃) δ7.15-7.30 (m, 5H, フェニルl), 3.74(dd, 2H, CH₂OH), 3.62(dd, 2H, CH₂OH), 2.9-3.0(bs, 2H, OH), 2.58(d, 2H, CH₂Ph), 2.03 (m, 1H, CH).
実施例５：２−(３，４−ジメチルベンジル)−１，３−プロパンジオール(2b)
収率：９２％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ6.88-7.06(m, 3H, フェニル), 3.6-3.8(m, 4H, 2×CH₂OH), 2.5-2.7(bs, 2H, OH), 2.60(d, 1H, CH₂Ph), 2.52(d, 1H, CH₂Ph), 2.2−2.28(m, 6H, 2 ×CH₃), 2.02(m, 1H, CH)
実施例６：２−(４−クロロベンジル)−１，３−プロパンジオール(2c)
収率：７５％
性状：白色固体
mp＝６４℃
¹H NMR(CDCl₃)δ7.24(d, 2H), 7.10(d, 2H), 3.75(dd, 2H, CH₂OH), 3.61(dd, 2H, CH₂OH), 2.85(bs, 2H, OH), 2.58(d, 2H, CH₂Ph), 1.97(m, 1H, CH)
実施例７：２−(４−ｔ−ブチルベンジル)−１，３−プロパンジオール(2d)
収率：８０％
性状：白色固体
mp＝67℃
¹H NMR(CDCl₃) δ7.31(d, 2H), 7.11(d, 2H), 3.81(dd, 2H, CH₂OH), 3.68(dd, 2H, CH₂OH), 2.58(d, 2H, CH₂Ph), 2.23(bs, 2H, OH), 2.05(m, 1H, CH), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃)
化合物 (3a-d) の一般的合成方法
化合物２(20mmol)とトリメチルオルトアセテート(3.6g, 30mmol)および触媒量のｐ−トルエンスルホン酸を塩化メチレン(40ml)に溶かし、室温で２時間攪拌した後、水(0.54g, 30mmol)を加えた。この反応混合物を一晩室温で攪拌した後、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物３を得た。
【００４１】
実施例８：２−ベンジル−３−ヒドロキシプロピルアセテート(3a)
収率：９７％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.1-7.25(m, 5H, フェニル), 4.06(ddd of AB, 2H, CH₂OAc), 3.48(m, 2H, CH₂OH), 2.58(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.10(m, 1H, CH), 2.01(s, 3H, COCH₃)
実施例９：(Ｒ)−２−ベンジル−１，３−プロパンジオール((R)-3a)
この化合物は、化合物２ａから文献[Tetrahedron Letters 30, 6189-6192 (1989)]に開示の方法で製造して得た。
【００４２】
実施例１０：２−(３，４−ジメチルベンジル)−３−ヒドロキシプロピルアセテート(3b)
収率：９０％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ6.88-7.06(m, 5H, フェニル), 4.13(m, 2H, CH₂OAc), 3.54(m, 2H, CH₂OH), 2.62(m, 2H, CH₂Ph), 2.2‐2.3(m, 6H, 2 × CH₃), 2.10(m, 1H, CH), 2.07(s, 3H, COCH₃)
実施例１１：２−(４−クロロベンジル)-3-ヒドロキシプロピルアセテート(3c)
収率：８６％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.25(d, 2H), 7.12(d, 2H), 4.12(ddd of AB, 2H, CH₂OAc), 3.53(ddd of AB, 2H, CH₂OH), 2.63(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.10(m, 1H, CH), 2.06(s, 3H, COCH₃)
実施例１２：２−(４−ｔ−ブチルベンジル)−３−ヒドロキシプロピルアセテート(3d)
収率：８４％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.30(d, 2H), 7.11(d, 2H), 4.13(ddd of AB, 2H, CH₂OAc), 3.56(ddd of AB, 2H, CH₂OH), 2.62(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.28(s, 1H, OH), 2.10 (m, 1H, CH), 2.01(s, 3H, COCH₃), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃)
化合物 (4a-d) の一般的合成方法
化合物３(12mmol)とトリエチルアミン(3.64g, 36mmol)を塩化メチレン(20ml)に溶かした溶液を０℃に冷却し、これに塩化メタンスルホニル(2.06g, 18mmol)を滴加した。室温で６時間攪拌した後反応混合物を塩化メチレンで稀釈した。有機層を１ＮＨＣｌ、水、塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：３）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製してメシル化された化合物を油として得た。このメシレートをＤＭＦ（１０ml）に溶かした後、アジドナトリウム (2.2g, 34mmol)を加えた。反応混合物を８０℃で８時間攪拌した後、水で稀釈し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１５）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物４を得た。
【００４３】
実施例１３：３−アジド−２−ベンジルプロピルアセテート(4a)
収率：９２％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.15-7.35(m, 5H, フェニル), 4.05(ddd of AB, 2H, CH₂OAc), 3.34(m, 2H, CH₂N₃), 2.68(d, 2H, CH₂Ph), 2.22(m, 1H, CH), 2.08(s, 3H, COCH₃)
実施例１４：３−アジド−２−(３，４−ジメチルベンジル)プロピルアセテート（4b）
収率：８５％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ6.87-7.07(m, 3H), 4.04(m, 2H, CH₂OAc), 3.33(m, 2H, CH₂N₃), 2.69(d, 1H, CH₂Ph), 2.60(d, 1H, CH₂Ph), 2.1-2.3(m, 7H, 2×CH₃ and CH), 2.07(s, 3H, COCH₃)
実施例１５：３−アジド−２−(４−クロロベンジル) プロピルアセテート（4c）
収率：８８％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.26(d, 2H), 7.12(d, 2H), 4.03(ddd of AB, 2H, CH₂OAc), 3.34(m, 2H, CH₂N₃), 2.65(d, 2H, CH₂Ph), 2.17(m, 1H, CH), 2.07(s, 3H, COCH₃)
実施例１６：３−アジド−２−(４−ｔ−ブチルベンジル)プロピルアセテート(4d)
収率：９２％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.32(d, 2H), 7.08(d, 2H), 4.05(ddd of AB, 2H, CH₂OAc), 3.35(ddd of AB, 2H, CH₂N₃), 2.64(d, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 1H, CH), 2.07(s, 3H, COCH₃), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃)
化合物 (5a-d) の一般的合成方法
化合物４(8mmol)と触媒量の炭酸カリウム(K₂CO₃)をメタノール(10ml)に溶かした後、数滴の水を加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、２時間後数滴の酢酸を加えて反応を中断し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル/ヘキサン（１：３）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物５を得た。
【００４４】
実施例１７：３−アジド−２−ベンジル−１−プロパノール(5a)
収率：９８％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.15-7.35(m, 5H, フェニル), 3.65(m, 2H, CH₂OH), 3.40(ddd of AB, 2H, CH₂N₃), 2.67(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.04(m, 1H, CH)
実施例１８：３−アジド−２−(３，４−ジメチルベンジル)−１−プロパノール(5b)
収率：９２％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ6.88-7.08(m, 5H, フェニル), 3.65(m, 2H, CH₂OH), 3.42(m, 2H, CH₂N₃), 2.68(dd, 1H, CH₂Ph), 2.60(dd, 1H, CH₂Ph), 2.2−2.3(m, 6H, 2 × CH₃), 2.03(m, 1H, CH)
実施例１９：３−アジド−２−(４−クロロベンジル)−１−プロパノール(5c)
収率：８８％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.25(d, 2H), 7.10(d, 2H), 3.58(m, 2H, CH₂OH), 3.36(m, 2H, CH₂N₃), 2.63(dd, 2H, CH₂Ph), 2.1(bs, 1H, OH), 1.98(m, 1H, CH)
実施例２０：３−アジド−２−(４−ｔ−ブチルベンジル)−１−プロパノール(5d)
収率：９８％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.32(d, 2H), 7.10(d, 2H), 3.63(ddd of AB, 2H, CH₂OH), 3.39(ddd of AB, 2H, CH₂N₃), 2.62(m, 2H, CH₂Ph), 2.02(m, 1H, CH), 1.78(bs, 1H, OH), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃)
化合物 (6a-d) の一般的合成方法
化合物５(１mmol)、トリエチルアミン(４mmol)と触媒量の４−ジメチルアミノピリジンピリジンを塩化メチレン(5ml)に溶かし、０℃に冷却した後、塩化アシル(2mmol)を加えた。２〜１２時間室温で攪拌した後、反応混合物を塩化メチレンで稀釈した。有機層を１ＮＨＣｌ、水および塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（1 : １０〜２０）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物６を得た。
【００４５】
実施例２１：３−アジド−２−ベンジルプロピルピバレート(6a-Ｉ)
収率：９２％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.15-7.35(m, 5H, フェニル), 4.04(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.34(ddd of AB, 2H, CH₂N₃), 2.68(d, 2H, CH₂Ph), 2.21(m, 1H, CH), 1.23(s, 9H, C(CH₃)₃)
実施例２２：３−アジド−２−ベンジルプロピル２−メチルプロパノエート(6a-II)
収率：９３％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.15-7.35(m, 5H, フェニル), 4.05(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.34(m, 2H, CH₂N₃), 2.68(d, 2H, CH₂Ph), 2.58(m, CHMe₂), 2.21(m, 1H, CH), 1.18(dd, 6H, 2 ×CH₃)
実施例２３：３−アジド−２−ベンジルプロピルヘキサノエート(6a-III)
収率：９０％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.14-7.35(m, 5H, フェニル), 4.05(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.34(m, 2H, CH₂N₃), 2.68(d, 2H, CH₂Ph), 2.32(t, 2H, OOCCH₂), 2.20(m, 1H, CH), 1.64(m, 2H), 1.2-1.4(m, 4H), 0.88(distorted t, 3H)
実施例２４：３−アジド−２−ベンジルプロピルステアレート(6a-IV)
収率：７８％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.14-7.35(m, 5H, フェニル), 4.05(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.33(m, 2H, CH₂N₃), 2.68(d, 2H, CH₂Ph), 2.32(t, 2H, OOCCH₂), 2.20(m, 1H, CH), 1.2-1.7(m, 30H), 0.88(distorted t, 3H)
実施例２５：３−アジド−２−ベンジルプロピルベンゾエート(6a-V)
収率：９０％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ8.04(m, 2H), 7.15-7.60(m, 8H), 4.35(dd, 1H, J＝5.1と11.2 Hz, BzOCH₂), 4.26(dd, 1H, BzOCH₂), 3.43(ddd of AB, 2H, J ＝ 5.61, 5.85 and 12.42 Hz, CH₂N₃), 2.78(m, 2H, CH₂Ph), 2.35(m, 1H, CH)
実施例２６：３−アジド−２−(３，４−ジメチルベンジル）プロピルピバレート(6b-Ｉ)
収率：９４％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ6.86-7.07(m, 3H), 4.04(m, 2H, CH₂OCO), 3.36(m, 2H, CH₂N₃), 2.70(d, 1H, CH₂Ph), 2.61(d, 1H, CH₂Ph), 2.1-2.3(m, 7H, 2 ×CH₃ & CH), 1.23(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例２７：３−アジド−２−(３，４−ジメチルベンジル)プロピルベンゾエート(6b-V)
収率：９５％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ8.02(m, 2H), 7.57(m, 1H), 7.46(m, 2H), 6.8-7.07(m, 3H), 4.32(m, 2H, CH₂OCO), 3.45(m, 2H, CH₂N₃), 2.80(d, 1H, CH₂Ph), 2.71(d, 1H, CH₂Ph), 2.2−2.4(m, 7H, 2 × CH₃ and CH)
実施例２８：３−アジド−２−(３，４−ジメチルベンジル)プロピル３，４−ジメチルベンゾエート(6b-VI)
収率：８４％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.77(m, 2H), 7.21(m, 1H), 6.9-7.07(m, 3H), 4.30(m, 2H, CH₂OCO), 3.44(m, 2H, CH₂N₃), 2.79(d, 1H, CH₂Ph), 2.70(d, 1H, CH₂Ph), 2.2−2.4 (m, 13H, 4 × CH₃ and CH)
実施例２９：３−アジド−２−(４−クロロベンジル)プロピルピバレート(6c-Ｉ)
収率：８６％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.27(d, 2H), 7.09(d, 2H), 4.02(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.33(m, 2H, CH₂N₃), 2.66(d, 2H, CH₂Ph), 2.18(m, 1H, CH), 1.23(s, 9H, C(CH₃)₃)
実施例３０：３−アジド−２−(４−クロロベンジル)プロピルベンゾエート(6c-V)
収率：９２％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ8.01(m, 2H), 7.58(m, 1H), 7.46(m, 2H), 7.28(d, 2H), 7.13 (d, 2H), 4.29(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.43(m, 2H, CH₂N₃), 2.75(d, 2H, CH₂Ph), 2.33(m, 1H, CH)
実施例３１：３−アジド−２−（４−ｔ−ブチルベンジル）プロピルピバレート(6d-Ｉ)
収率：９９％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.31(d, 2H), 7.08(d, 2H), 4.04(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.35(m, 2H, CH₂N₃), 2.65(d, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 1H, CH), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.23(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例３２：３−アジド−２−（４−ｔ−ブチルベンジル）プロピルベンゾエート(6d-V)
収率：８８％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ8.04(m, 2H), 7.57(m, 1H), 7.45(m, 2H), 7.32(d, 2H), 7.12 (d, 2H), 4.31(ddd of AB, 2H, CH₂OCO), 3.44(m, 2H, CH₂N₃), 2.75(d, 2H, CH₂Ph), 2.35(m, 1H, CH), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃)
化合物 7a-d の一般的合成方法
化合物６(0.5 mmol)とリンドラー触媒(Lindler's catalyst, 50mg)をエタノール(5ml)に溶かした後、水素風船装置を用いて２時間水素反応させた。反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物を塩化メチレン（５ml）に溶かし、４−［(メトキシメチル)オキシ］−３−メトキシベンジルイソチオシアネート(0.5mmol)を加えた。室温で一晩攪拌した後反応混合物を減圧濃縮し、残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いるシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製してチオウレアを得た。このチオウレアを塩化メチレン(２ml)の溶かした後、トリフルオロ酢酸(1ml)を加えた。室温で１時間攪拌した後、混合物に固形炭酸水素ナトリウムを加えて反応を中断し、濾過した後、濾液を濃縮した。残留物を酢酸エチルで稀釈し、炭酸水素ナトリウム、水および塩水で洗浄した後、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いるシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物７を得た。
【００４６】
実施例３３：２−ベンジル−３−｛［（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ]カルボチオニル｝プロピルピバレート(7a-Ｉ)
収率：４０％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.1-7.32(m, 5H, フェニル), 6.75-6.9(m, 3H, Ar), 6.27(bt, 1H, NH), 6.05(bs, 1H, NH), 5.63(s, 1H, OH), 4.40(bd, 2H, J=4.38Hz, NHCH₂Ar), 4.17(dd, 1H, J=3.9 and 11.46Hz, CH₂OCO), 3.87(s, 3H, OCH₃), 3.7-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC＝S), 3.24(ddd, 1H, J=5.37, 8.07および13.89 Hz, CHCH₂NHC＝S), 2.61(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.33(m, 1H, CH), 1.23(s, 9H, CO(CH₃)₃)
IR(neat): 3362, 1715, 1278, 1157
MS m/e 445 (M⁺+1)
分析. (C₂₄H₃₂N₂O₄S) C, H, N, S
実施例３４：（Ｒ）−２−ベンジル−３−｛［（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ］カルボチオニル｝プロピルピバレート((R)-7a-Ｉ)
7a-Ｉの(Ｒ) −エナンチオマー：この化合物は、化合物(R)-3aから7a-Ｉと同様な方法で製造した。
【００４７】
[α]D＝-714(c, 0.22, CHCl₃)
実施例３５：(Ｓ)−２−ベンジル−３−｛[（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ]カルボチオニル｝プロピルピバレート((S)-7a-Ｉ)
7a-Ｉの(S)−エナンチオマー：この化合物は、化合物(R)-3aから7a-Ｉと同様な方法で製造した。
【００４８】
[α]D＝+695(c, 0.08, CHCl₃)
実施例３６：２−ベンジル−３−｛[（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）
アミノ]カルボチオニル｝プロピル２−メチルプロパノエート(7a-II)
収率：３５％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.13-7.30(m, 5H, フェニル), 6.75-6.87(m, 3H, Ar), 6.34 (bt, 1H, NH), 6.30(bs, 1H, NH), 5.75(s, 1H, OH), 4.40(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.17 (dd, 1H, J ＝ 3.9および10.95Hz, CH₂OCO), 3.84(s, 3H, OCH₃), 3.65-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC＝S), 3.28(m, 1H, CHCH₂NHC＝S), 2.60(m, 3H, CH₂Ph and CHMe₂), 2.30(m, 1H, CHCH₂Ph), 1.18(dd, 6H, 2×CH₃)
IR(neat): 3361, 1715, 1273, 1157
MS m/e 430 (MH+)
分析. (C₂₃H₃₀N₂O₄S) C, H, N, S
実施例３７：２−ベンジル−３−{[(４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル)アミノ]カルボチオニル}プロピルヘキサノエート（7a-III）
収率：３４％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.1-7.3(m, 5H, フェニル), 6.75-6.9(m, 3H, Ar), 6.23(bt, 1H, NH), 6.11(bs, 1H, NH), 5.66(s, 1H, OH), 4.40(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.15(dd, 1H, J=3.9および11.43 Hz, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH₃), 3.65-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH ₂NHC＝S), 3.29(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.61(m, 2H, CH₂Ph), 2.30(m, 3H, CH₂COO and CH), 1.65(m, 2H), 1.2-1.4(m, 4H), 0.88(distorted t, 3H)
IR (neat): 3360, 1715, 1274, 1122
MS m/e 458 (M⁺)
分析. (C₂₅H₃₄N₂O₄S) C, H, N, S
実施例３８：２−ベンジル−３−｛［（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ］カルボチオニル｝プロピルステアレート(7a-IV)
収率：３０％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃) δ7.1-7.3(m, 5H, フェニル), 6.75-6.9(m, 3H, Ar), 6.28(bt, 1H, NH), 6.17(bs, 1H, NH), 5.69(s, 1H, OH), 4.39(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.14(dd, 1H, J ＝ 3.9および11.67Hz, CH₂OCO), 3.87(s, 3H, OCH₃), 3.65-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH ₂NHC＝S), 3.30(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.60(m, 2H, CH₂Ph), 2.30(m, 3H, CH₂COO and CH), 1.2-1.7(m, 30H), 0.88(distorted t, 3H)
IR(neat) : 3363, 1731, 1274, 1031
MS m/e 626 (M⁺)
分析.(C₃₇H₅₈N₂O₄S)
実施例３９：２−ベンジル−３−{[(４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル)アミノ]カルボチオニル}プロピルベンゾエート(7a-V)
収率：５０％
性状：白色固体
mp＝90℃
¹H NMR(CDCl₃)δ7.98-8.02(m, 2H), 7.58(m, 1H), 7.4-7.5(m, 2H), 7.1-7.32 (m, 5H, フェニル), 6.72-6.85(m, 3H, Ar), 6.42(bt, 1H, NH), 6.31(bs, 1H, NH), 5.73(s, 1H, OH), 4.34-4.42(m, 3H, NHCH₂Ar & CH₂OCO), 4.05(dd, 1H, CH₂OCO), 3.7-3.85(m, 4H, OCH₃ and CHCH ₂NHC＝S), 3.38(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.6-2.78(m, 2H, CH₂Ph), 2.46(m, 1H, CH)
IR(neat): 3360, 1714, 1274, 1121
MS m/e 464 (M⁺)
分析.(C₂₆H₂₈N₂O₄S) C, H, N, S
実施例４０：２−（３，４−ジメチルベンジル）−３−{[(４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル)アミノ]カルボチオニル}プロピルピバレート(7b-Ｉ)
収率：４０％
性状：白色固体
mp＝47℃
¹H NMR(CDCl₃) δ6.93-7.05(m, 3H), 6.77-6.9(m, 3H, Ar), 6.22(m, 1H, NH), 5.98(bs, 1H, NH), 5.61(s, 1H, OH), 4.37(bs, NHCH₂Ar), 4.17(ddd of AB, 1H, CH₂OCO), 3.87(s, 3H, OCH₃), 3.7-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC＝S), 3.27(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.60(m, 2H, CH₂Ph), 2.2-2.32(m, 7H, 2 × CH₃ & CH), 1.22 (s, 9H, CO(CH₃)₃)
IR(neat): 3360, 1714, 1279, 1159
MS m/e 474 (M⁺+2)
分析.(C₂₆H₃₆N₂O₄S)C, H, N, S
実施例４１：２−（３，４−ジメチルベンジル）−３−{[（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ]カルボチオニル}プロピルベンゾエート(7b-V)
収率：４５％
性状白色固体
mp＝44℃
¹H NMR(CDCl₃) δ8.02(m, 2H), 7.59(m, 1H), 7.46(m, 2H), 6.9-7.06(m, 3H), 6.72-6.85(m, 3H, Ar), 6.33(m, 1H, NH), 6.13(bs, 1H, NH), 5.65(s, 1H, OH), 4.35-4.44(m, 3H, NHCH₂Ar & CH₂OCO), 4.05(m, 1H, CH₂OCO), 3.7-3.85(m, 4H, OCH₃ and CHCH ₂NHC＝S), 3.40(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.6-2.78(m, 2H, CH₂Ph), 2.44(m, 1H, CH), 2.2-2.3(m, 6H, 2 × CH₃)
IR(neat): 3360, 1713, 1274, 1121
MS m/e 492 (M⁺)
分析.(C₂₈H₃₂N₂O₄S) C, H, N, S
実施例４２：２−（３，４−ジメチルベンジル）−３−{[(４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル)アミノ]カルボチオニル}プロピル３，４−ジメチルベンゾエート(7b-VI)
収率：５５％
性状：白色固体
mp ＝ 58 ℃
¹H NMR(CDCl₃)δ7.75(m, 2H), 7.20(m, 1H), 6.9-7.06(m, 3H), 6.74-6.85(m, 3H, Ar), 6.39(m, 1H, NH), 6.07(bs, 1H, NH), 5.63(s, 1H, OH), 4.35-4.43(m, 3H, NHCH₂Ar and CH₂OCO), 4.05(m, 1H, CH₂OCO), 3.7-3.85(m, 4H, OCH₃ and CHCH ₂NHC＝S), 3.37(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.6-2.74(m, 2H, CH₂Ph), 2.41(m, 1H, CH), 2.2−2.35(m, 12H, 4 × CH₃)
IR(neat): 3373, 1711, 1266, 1124
MS m/e 520 (M⁺)
分析.(C₃₀H₃₆N₂O₄S) C, H, N, S
実施例４３：２−(４−クロロベンジル)−３−{[（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ]カルボチオニル}プロピルピバレート(7c-Ｉ)
収率：４０％
性状：白色固体
mp＝６２℃
¹H NMR(CDCl₃) δ7.25(d, 2H), 7.10(d, 2H), 6.77-6.90(m, 3H, Ar), 6.38(t, 1H, NH), 6.25(bs, 1H, NH), 5.72(s, 1H, OH), 4.42(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.16(dd of AB, 1H, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH₃), 3.7-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH ₂NHC＝S), 3.19(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.59(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.32(m, 1H, CH), 1.22(s, 9H, CO(CH₃)₃)
IR(neat): 3360, 1714, 1279, 1159
MS m/e 479(M⁺)
分析.(C₂₄H₃₁ClN₂O₄S)C, H, N, S
実施例４４：２−(４−クロロベンジル)−３−{[（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ]カルボチオニル}プロピルベンゾエート(7c-V)
収率：５５％
性状：白色固体
mp＝５７℃
¹H NMR(CDCl₃) δ8.00(m, 2H), 7.60(m, 1H), 7.47(m, 2H), 7.27(d, 2H), 7.15 (d, 2H), 6.76-6.90(m, 3H, Ar), 6.36(t, 1H, NH), 6.15(bs, 1H, NH), 5.61(s, 1H, OH), 4.40(m, 3H, NHCH₂Ar & CH₂OCO), 4.00(dd of AB, 1H, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH₃), 3.85(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 3.31(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.67(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.46(m, 1H, CH)
IR(neat): 3373, 1711, 1266, 1124
MS m/e 499 (M⁺)
分析.(C₂₆H₂₇ClN₂O₄S)C, H, N, S
実施例４５：２−（４−ｔ−ブチルベンジル）−３−{[（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）アミノ]カルボチオニル}プロピルピバレート(7d-Ｉ)
収率：４０％
性状：黄色固体
mp＝５２℃
¹H NMR(CDCl₃)δ7.30(d, 2H), 7.09(d, 2H), 6.75-6.90(m, 3H, Ar), 6.27(t, 1H, NH), 6.10(bs, 1H, NH), 5.66(s, 1H, OH), 4.40(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.15(dd of AB, 1H, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH₃), 3.7-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH ₂NHC＝S), 3.27(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.58(ddd of AB, 2H, CH₂Ph), 2.30(m, 1H, CH), 1.29(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.22(s, 9H, CO(CH₃)₃)
IR(neat): 3360, 1714, 1277, 1158
MS m/e 500 (M⁺)
分析.(C₂₈H₄₀N₂O₄S)C, H, N, S
実施例４６：２−（４−ｔ−ブチルベンジル）−３−{[(４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル)アミノ]カルボチオニル}プロピルベンゾエート（7d-V）
収率：５０％
性状：白色固体
mp＝54℃
¹H NMR(CDCl₃)δ8.02(m, 2H), 7.60(m, 1H), 7.46(m, 2H), 7.32(d, 2H), 7.14(d, 2H), 6.75-6.90(m, 3H, Ar), 6.28(t, 1H, NH), 6.06(bs, 1H, NH), 5.61(s, 1H, OH), 4.40(m, 3H, NHCH₂Ar & CH₂OCO), 4.08(dd of AB, 1H, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH₃), 3.80(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 3.40(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.68(m, 2H, CH₂Ph), 2.46(m, 1H, CHCH₂Ph), 1.29(s, 9H, C(CH₃)₃)
IR(neat): 3360, 1714, 1272, 1124
MS m/e 520(M⁺)
分析. (C₃₀H₃₆N₂O₄S)C, H, N, S
実施例４７：Ｎ−[２−ベンジル−３−(ベンジルオキシ)プロピル]−Ｎ'−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）チオウレア(9a)
収率：６７％
性状：無色油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.10-7.30(m, 10H, 2×Ph), 6.81(d, 1H, Ar), 6.60(bs, 1 H, Ar), 6.56 (d, 1 H, Ar), 6.54(bs, 1H, NH), 5.64(s, 1H, OH), 4.35(m, 4H, NHCH₂Ar and PhCH₂O), 3.82 (s, 3H, OCH₃), 3.50(m, 2H, BnOCH₂), 3.37 (bt, 2H, CHCH ₂NHC＝S), 2.64(m, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 1H, CH)
IR (neat): 3288, 1274, 1123
MS m/e 450 (M⁺)
分析. (C₂₆H₃₀N₂O₃S)C, H, N, S.
実施例４８：Ｎ−［３−ベンジルオキシ−２−(４−クロロベンジル)プロピル］ −Ｎ'−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）チオウレア(9c)
性状：白色固体
mp＝37.5℃
¹H NMR(CDCl₃)δ7.0-7.3 (m, 9H), 6.5-6.84(m, 3H, Ar), 6.54 (bs, 1H, NH), 6.30(bs, 1H, NH), 5.68 (s, 1H, OH), 4.32(m, 4H, NHCH₂Ar and PhCH₂O), 3.82 (s, 3H, OCH₃), 3.48 (m, 2H, BnOCH₂), 3.34(m, 2H, CHCH₂NHC＝S), 2.58(m, 2H, CH₂Ph), 2.16(m, 1H, CH)
IR (neat): 3340, 1273, 1153
MS m/e 484 (M⁺)
分析. (C₂₆H₂₉ClN₂O₃S)C, H, N, S.
実施例４９：３−メトキシ−４−メトキシメトキシ−ベンゾニトリル(12)
４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンゾニトリル(11, 1.5g, 10mmol)とジイソプロピルエチルアミン(2.7ml, 15mmol)を塩化メチレン(50ml)に溶かした後、クロロメチルメチルエーテル(0.92ml, 12mmol)を加え、３時間攪拌した。塩化メチレンで稀釈した後、混合物を水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を用いるシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物１２を白色固体として得た(1.54g, 80%)。
【００４９】
¹H NMR(CDCl₃)δ7.27(s, 1H, Ar), 7.24(s, 1H, Ar), 7.11(s, 1H, Ar), 5.29(s, 2H, ArOCH₂), 3.99 (s, 3H, ArOCH₃), 3.51(s, 3H, CH₂OCH ₃)
実施例５０：(３−メトキシ−４−メトキシメトキシベンジル)カルバミン酸ベンジルエステル(13)
化合物１２(1.54g, 8mmol)をTHF(20ml)に溶かした後、水素化アルミニウムリチウム( 1.2g, 32mmol)のＴＨＦ(30ml)懸濁液に攪拌しながら滴加した。４時間還流した後、反応混合物を０℃に冷却し、５Ｎ水酸化ナトリウムで反応を中断して過量のLiA_lH₄を取除いた。沈殿したアルミニウム塩を濾過して取除き、ＴＨＦを蒸発させた。残留物をエーテルと水で処理した。エーテル層を塩水で洗浄し、炭酸カリウムで乾燥した後、濾過し、減圧濃縮してアミンを得た。アミンを塩化メチレン(15ml)に溶かし、トリエチルアミン(1.16ml, 8.3 mmol)とクロロギ酸ベンジル(1.18ml, 8.3 mmol)を加えた。２時間室温で攪拌した後、反応混合物を塩化メチレンで稀釈した。有機層を水と塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を用いるシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物１３を白色固体として得た(0.795g, 30%)。
【００５０】
¹H NMR(CDCl₃) δ7.34(m, 5H, フェニル), 7.08(d, 1H, Ar), 6.81(m, 2H, Ar), 5.21(s, 2H, ArOCH ₂), 5.14(s, 2H, OCH₂Ph), 4.32(d, 2H, NH₂COO), 3.85(s, 3H, ArOCH₃), 3.50(s, 3H, ArOCH₂OCH ₃)
実施例５１：（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）カルバミン酸ベンジルエステル(14)
塩化メチレン(5ml)に化合物１３(0.795g, 2.4mmol)を溶かし、トリフルオロ酢酸(2.5ml)を徐々に加えた後、室温で５分間攪拌した。０℃に冷却した後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で中和し、水で稀釈した後、塩化メチレンで数回抽出した。有機層を合せて水と塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（２：１）を用いるシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物１４を白色固体として得た(680mg, 99%)。
【００５１】
¹H NMR(CDCl₃)δ7.34(m, 5H, フェニル), 6.83(m, 3H, Ar), 5.14(s, 2H, OCH₂Ph), 4.30(d, 2H, NH₂COO), 3.86(s, 3H, ArOCH₃)
実施例５２：[４−(ベンジルオキシカルボニルアミノメチル)−２−メトキシ−フェノキシ]−酢酸メチルエステル(15)
化合物１４(0.287g, 1 mmol)をアセトン(20ml)に溶かし、これに炭酸カリウム(0.552g, 4mmol)とメチルブロモアセテート(0.14ml, 1.5 mmol)を加え、３時間還流した。冷却した後、反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（３：２）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物１５を白色固体として得た(0.323g, 90%)。
【００５２】
¹H NMR(CDCl₃) δ7.28-7.33(m, 5H, フェニル), 6.78(m, 3H, Ar), 5.11(s, 2H, COCH₂Ph), 4.76(s, 2H, CH₂Ph), 4.28(d, 2H, CH₂NHCO), 3.81(s, 3H, ArOCH₃), 3.76(s, 3H, COOCH₃)
実施例５３：[４−(ベンジルオキシカルボニルアミノ−メチル)−２−メトキシ−フェノキシ]−酢酸(16)
化合物５(0.323g, 0.9 mmol)をＴＨＦ(1ml)に溶かした後、１５％水酸化ナトリウム溶液(1ml)を加え、室温で３０分間攪拌した。反応混合物を酢酸で中和した、水で稀釈し、塩化メチレンで数回抽出した。結合した有機層を水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧濃縮して化合物１６を白色固体として得た(0.276 g, 89%)。
【００５３】
¹H NMR(CDCl₃) δ7.72(s, 1H, COOH),7.17-7.33(m, 5H, フェニル), 6.81(s, 1H, Ar), 6.67(s, 2H, Ar), 5.02(s, 2H, COCH₂Ph), 4.16(s, 2 H, CH₂Ph), 4.09(d, 2H, CH₂NHCO), 3.70(s, 3H, ArOCH₃)
実施例５４：（４−アミノメチル−２−メトキシ−フェノキシ）酢酸(17)
化合物１６(0.276g, 0.8mmol)をメタノール(5ml)に溶かし、１０％パラジウム触媒(30mg)を加えた後、水素風船装置を用いて３０分間水素反応させた。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して追加の精製工程なしに次の段階に使用できる化合物１７を白色固体として得た(0.093g, 55%)。
【００５４】
化合物１９の一般的な合成方法
DMF(1ml)に溶かした化合物１７(0.5mmol)に、トリエチルアミン(1.0 mmol)を加え、３０分間攪拌した後ＤＭＦに溶かしたイソチオシアネート１８(0.5mmol)を加えた。反応混合物を２４時間室温で攪拌した後、水で稀釈し、酢酸エチルで数回抽出した。有機層を合せて水と塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として塩化メチレン／メタノール／AcOH（100/10/0.5）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物１９を得た。
【００５５】
実施例５５：２，２−ジメチル−プロピオン酸２−[３−（４−カルボキシメトキシ−３−メトキシベンジル）−チオウレイドメチル]−３−（３，４−ジメチル−フェニル）−プロピルエステル(19a)
収率：２７％
性状：白色固体
¹H NMR(CDCl₃) δ7.15-7.26 (m, 4H, Ar), 6.76 (m, 3H, Ar), 6.54 (m, 1H, NH), 4.53 (s, 2H, CH₂COOH), 4.45 (bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.15 (ddd of AB, 1H, CH₂OC＝O), 3.82 (s, 3H, OCH₃), 3.6-3.85 (m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC＝S), 3.26(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.60(m, 2H, CH₂Ph), 2.20-2.28(m, 7H, 2×CH₃ & CHCH₂Ph), 1.23(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例５６：２，２−ジメチル−プロピオン酸３−（４−ｔ−ブチルフェニル）−２−[３−（４−カルボキシメトキシ−３−メトキシ−ベンジル）−チオウレイドメチル]−プロピルエステル(19b)
収率：５２％
性状：白色固体
¹H NMR(CDCl₃) δ7.09-7.28 (m, 4H, Ar), 6.85 (m, 3H, Ar), 6.54(m, 1H, NH), 4.58(s, 2H, CH₂COOH), 4.46 (bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.12 (ddd of AB, 1H, CH₂OC＝O), 3.78 (s, 3H, OCH₃), 3.7-3.85(m, 2H, CH₂OC＝O and CHCH ₂NHC＝S), 3.26(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.58 (m, 2H, CH₂Ph), 2.32(m, 1H, CHCH₂Ph), 1.28(s, 9H, ArC(CH₃)₃), 1.22 (s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例５７：コハク酸モノベンジルエステル(20)
ＴＨＦ(20 ml)に溶かしたベンジルアルコール(5mmol, 0.52ml)に、NaH( 60%, 0.2g, 5mmol)と無水コハク酸(0.502g, 5mmol)を加え、４時間還流した。反応混合物を室温に冷却した後、水で稀釈し、酢酸エチルで数回抽出した。有機層を合せて水と塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２０を白色固体として得た(0.866g, 57%)。
【００５６】
¹H NMR(CDCl₃)δ7.38(s, 5H, フェニル), 5.15(s, 2H, PhCH₂), 2.71(m, 4H, COCH₂CH₂CO)
実施例５８：コハク酸ベンジルエステル４−(ベンジルオキシカルボニルアミノ−メチル)−２−メトキシ−フェニルエステル(21)
塩化メチレン(10ml)に溶かした化合物１０(0.866g, 2.85mmol)に、化合物１４(2.85mmol)、ジシクロカルボジイミド(4.2mmol)および４−ジメチルアミノピリジン(0.42mmol)を連続的に加え、室温で２４時間攪拌した。反応混合物をジエチルエーテルで稀釈した後沈殿した固体を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル/ヘキサン（２：１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２１を白色固体として得た(1.15g, 85%)。
【００５７】
¹H NMR(CDCl₃)δ7.30-7.36(m, 10H, 2×フェニル), 6.86(m, 3H, Ar), 5.14(d, 4H, PhCH₂), 4.34(d, 2H, CH₂NH), 3.75(s, 3H, ArOCH₃), 2.93(t, 2H, COCH₂CH₂CO), 2.79(t, 2H, COCH₂CH₂CO)
実施例５９：コハク酸モノ−（４−アミノメチル−２−メトキシ−フェニル）エステル(22)
化合物１７の合成方法と同様な方法で化合物１１から標題化合物を製造した。
【００５８】
収率：９９％
性状：黄色固体
¹H NMR(DMSO)δ8.24(t, 1H, COOH), 6.75(m, 3H, Ar), 4.17(d, 2H, CH₂NH), 3.73(s, 3H, ArOCH₃), 2.44(t, 2H, COCH₂CH₂CO), 2.34(t, 2H, COCH₂CH₂CO)
化合物２３の一般的な合成方法
化合物１９の一般的な合成方法と同様な方法で化合物１８と２０から標題化合物を製造した。
【００５９】
実施例６０：コハク酸モノ−（４−｛３−[３−(３，４−ジメチル−フェニル)−２−(２，２−ジメチルプロピオニルオキシメチル)−プロピル]−チオウレイドメチル｝−２−メトキシ−フェニル）エステル(23a)
収率：１７％
性状：白色固体
¹H NMR(CDCl₃)δ6.9-7.2(m, 4H, Ar), 6.8(m, 3H, Ar), 6.34(m, 1H, NH), 4.56(d, 2H, NHCH₂Ar), 4.04(m, 1H, CH₂OCO), 3.84(s, 3H, OCH₃), 3.6-3.85(m, 2H, CH₂OC=O and CHCH ₂NHC＝S), 3.27(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.65(m, 2H, CH₂Ph), 2.50(s, 4H, COCH₂CH₂CO), 2.18-2.29(m, 7H, 2×CH₃ and CHCH₂Ph), 1.24(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例６１：コハク酸モノ−（４−{３−[３−（４−ｔ−ブチル−フェニル）−２−(２，２−ジメチルプロピオニルオキシメチル)−プロピル]−チオウレイドメチル}−２−メトキシ−フェニル）エステル(23b)
収率：９％
性状：白色固体
¹H NMR(CDCl₃) δ7.07-7.32(m, 4H, Ar), 6.82(m, 3H, Ar), 6.59(m, 1H, NH), 4.87(m, 3H, NHCH₂Ar and CH₂OCO), 4.12(ddd of AB, 1H, CH₂OC＝O), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.7-3.89(m, 2H, CH₂OCO and CHCH ₂NHC＝S), 3.41(m, 1H, CHCH ₂NHC＝S), 2.58(m, 2H, CH₂Ph), 2.39(t, 4H, COCH₂CH₂CO), 2.32(m, 1H, CHCH₂Ph), 1.28(s, 9H, ArC(CH₃)₃), 1.21(s, 9H, CO(CH₃)₃)
化合物２５の一般的な合成方法
酢酸エチルに溶かした化合物２４(1.15mmol)とホモバニリックペンタフルオロフェニルエステル(0.4g, 1.15mmol)の混合物にリンドラー触媒を入れ、水素風船装置を用いて７時間水素反応させた。反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２５を得た。
【００６０】
実施例６２：２，２−ジメチル−プロピオン酸３−(３，４−ジメチル−フェニル)−２−｛[２−(４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル)−アセチルアミノ]−メチル｝−プロピルエステル(25a)
収率：３７％
性状：油
¹H NMR(CDCl₃)δ6.68-7.02(m, 6H), 5.96(bs, 1H, NH), 4.00(m, 1H, CH₂OCO) 3.87(s, 3H, OCH₃), 3.80 (m, 1H, CH₂OCO), 3.46 (s, 2H, COCH₂Ar), 3.32(m, 1H, CH₂NH), 3.13(m, 1H, CH₂NH), 2.50(d, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 7H, 2×CH₃ and CH), 1.20(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例６３：２，２−ジメチルプロピオン酸３−(４−ｔ−ブチルフェニル)−２−｛[２−(４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル)−アセチルアミノ]−メチル｝−プロピルエステル(25b)
収率：７０％
性状：油
¹H NMR(CDCl₃)δ7.28-7.31(d, 2H), 7.03-7.05(d, 2H), 6.89(d, 1H, Ar), 6.80(d, 1H, Ar), 6.72(d, 1H, Ar), 5.8(bs, 1H, NH), 4.02(m, 1H, CH₂OCO), 3.89(s, 3H, OCH₃), 3.83(m, 1H, CH₂OCO), 3.49 (s, 2H, COCH₂Ar), 3.34(m, 1H, CH₂NH), 3.12(m, 1H, CH₂NH), 2.56(d, 2H, CH₂Ph), 2.13(m, 1H, CH), 1.31(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.22(s, 9H, CO(CH₃)₃)
化合物２６の一般的合成方法
化合物２５(0.33mmol)と４０％ＫＯＨ(0.24ml)、４０％テトラブチルアンモニウムヒドロキシド(0.02 ml, 0.03 mmol)および１，２−ジブロモエタン(0.96ml)を５０℃で１２時間加熱した。反応混合物を塩化メチレンで稀釈し、水、塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して２６を得た。
【００６１】
実施例６４：２，２−ジメチル−プロピオン酸２−(｛２−[４−(２−ブロモエトキシ)−３−メトキシフェニル]アセチルアミノ｝メチル)−３−(３，４−ジメチルフェニル)プロピルエステル（２６ａ）
収率：６８％
¹H NMR(CDCl₃) δ6.74-7.03(m, 6H), 5.75Os, 1H, NH), 4.32(t, 2H, OCH), 4.01(m, 1H, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH₃), 3.82(m, 1H, CH₂OCO), 3.64(t, 2H, CH₂Br), 3.47(s, 2H, COCH₂Ar), 3.31(m, 1H, CH₂NH), 3.10(m, 1H, CH₂NH), 2.50(d, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 7H, 2xCH₃ and CH), 1.21(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例６５：２，２−ジメチル−プロピオン酸２−({２−［４−（２−ブロモエトキシ）−３−メトキシフェニル］アセチロアミノ}メチル)−３−(４−ｔ−ブチルフェニル)プロピルエステル(26b)
収率：９２％
¹H NMR(CDCl₃) δ7.26-7.30(d, 2H), 7.01-7.04(d, 2H), 6.74-6.89(m, 3H, Ar), 5.8(bs, 1H, NH), 4.3(t, 2H, OCH₂), 4.01(m, 1H, CH₂OCO), 3.86(s, 3H, OCH), 3.82(m, 1H, CH₂OCO), 3.64(t, 2H, CH₂Br), 3.47(s, 2H, COCH₂Ar), 3.31(m, 1H, CH₂NH), 3.10(m, 1H, CH₂NH), 2.5(d, 2H, CH₂Ph), 2.12(m, 1H, CH), 1.30(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.22(s, 9H, CO(CH₃)₃)
化合物２７の一般的合成方法
ＤＭＦ（２ml）に溶かした化合物２６(0.22mmol)にアジドナトリウム（0.44g, 0.67mmol）を加え、１００℃で８時間加熱した。この反応混合物を水で稀釈した後酢酸エチルで抽出した。有機層を合せて水、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２７を得た。
【００６２】
実施例６６:２，２−ジメチル−プロピオン酸２−({２−[４−（２−アジドエトキシ）−３−メトキシフェニル]アセチルアミノ}メチル)−３−(３，４−ジメチルフェニル)プロピルエステル(27a)
収率：９８％
¹H NMR(CDCl₃)δ6.74-7.03(m, 6H), 5.74(bs, 1H, NH), 4.19(t, 2H, OCH), 4.01(m, 1H, CH₂OCO), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.82(m, 1H, CH₂OCO), 3.62(t, 2H, CH₂N), 3.48(s, 2H, COCH₂M), 3.29(m, 1H, CH₂NH), 3.10(m, 1H, CH₂NH), 2.50(d, 2H, CH₂Ph), 2.04-2.26(m, 7H, 2xCH₃ and CH), 1.21(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例６７：２，２−ジメチルプロピオン酸２−({２−[４−（２−アジドエトキシ）−３−メトキシフェニル]アセチルアミノ}メチル)−３−（４−t−ブチルフェニル）プロピルエステル(27b)
収率：８１％
¹H NMR(CDCl₃)δ7.26-7.30(d, 2H), 7.01-7.04(d, 2H), 6.75-6.91(m, 3H, Ar), 5.76(bs, 1H, NH), 4.17(t, 2H, OCH₂), 4.00(m, 1H, CH₂OCO), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.82(m, 1H, CH₂OCO), 3.63(t, 2H, CH₂N₃), 3.48(s, 2H, COCH₂Ar), 3.31(m, 1H, CH₂NH), 3.06(m, 1H, CH₂NH), 2.54(d, 2H, CH₂Ph), 2.12(m, 1H, CH), 1.29(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.20(s, 9H, CO(CH₃)₃)
化合物２８の一般的合成
メタノール（5ml）に溶かした化合物２７（0.05mmo1）に１０％パラジウム（0.02g）を加えた後、水素風船装置を用いて３時間水素反応させた。反応混合物を濾過した後、濾液を減圧濃縮した。残留物を、溶離液としてクロロホルム／メタノール／水酸化アンモニウム（０：１：０．１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２８を得た。
【００６３】
実施例６８：２，２−ジメチルプロピオン酸２−({２−[４−(２−アミノエトキシ)−３−メトキシフェニル]アセチルアミノ}−メチル)−３−(３，４−ジメチルフェニル)プロピルエステル(28a)
収率：８３％,
性状：白色固体
¹H NMR(CDCl₃)δ6.73-7.23(m, 6H), 5.73(bs, 1H, NH), 4.13(m, 3H, OCH₂ and CH₂OCO), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.82(m, 1H, CH₂OCO), 3.5(m, 2H, COCH₂M), 3.23(m, 2H, CH₂NH and CH₂NH₂), 3.09(m, 2H, CH₂NH and CH₂NH₂), 2.50(d, 2H, CH₂Ph), 2.04-2.26(m, 7H, 2xCH₃ and CH), 1.20(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例６９：２，２−ジメチルプロピオン酸２−({２−[４−（２−アミノエトキシ）−３−メトキシフェニル]アセチルアミノ}メチル)−３−（４−ｔ−ブチルフェニル）プロピルエステル(28b)
収率：９９％,
性状：白色固体
¹H NMR(CDCl₃)δ7.26-7.29(m, 2H), 7.01-7.04(d, 2H), 6.76-6.89(m, 3H, Ar), 5.84(bs, 1H, NH), 4.05(m, 1H, CH₂OCO), 3.85(m, 3H, OCH₃), 3.72(m, 3H, CH₂OCO and OCH₂), 3.47(s, 2H, COCH₂M), 3.30(m, 1H, CH₂NH), 3.10(m, 1H, CH₂NH), 2.75Os, 2H, CH₂NH₂), 2.52(d, 2H, CH₂Ph), 2.12(m, 1H, CH), 1.29(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.20(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例７０：（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）カルバミン酸−ｔ−ブチルエステル（３０）
水（１０ml）に溶かした４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミン（化合物29, 0.5g, 2.64mmo1）とトリエチルアミン（0.054g, 5.29mmo1）の混合物にジオキサン（１．５ml）に溶かしたジ−ｔ−ブチルジカルボネート（1.15g, 5.29mmol）を２０分間に亘って滴加した。室温で２４時間攪拌した後、反応混合物を塩化メチレンで数回抽出した。結合した有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物３０を油として得た（0.663g, 99%）。
【００６４】
¹H NMR(CDCl₃)δ6.74-7.00(m, 3H, Ar), 5.65(s, 1H, OH), 4.79(bs, 1H, NH), 4.23(d, 2H, NHCH₂), 3.87(s, 3H, OCH₃), 1.43(s, 9H, O(CH₃)₃)
実施例７１：[４−（２−ブロモ−エトキシ）−３−メトキシ−ベンジル]−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（３１）
化合物２６の合成方法と同様な方法で化合物３０から標題化合物を製造した（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）。
【００６５】
収率：８４％
¹H NMR(CDCl₃)δ6.78-6.89(m, 3H, M), 4.81(bs, 1H, NH), 4.29-4.33(t, 2H, OCH₂), 4.24(d, 2H, NHCH₂), 3.90(s, 3H, OCH₃), 3.65(t, 2H, CH₂Br), 1.46(s, 9H, O(CH₃)₃)
実施例７２：［（４−(２−アジドエトキシ)−３−メトキシ−ベンジル）］−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（３２）
化合物２７の合成方法と同様な方法で化合物２１から標題化合物を製造した（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）。
【００６６】
収率：９８％
性状黄色固体
¹H NMR(CDCl₃)δ6.78-6.87(m, 3H, Ar), 4.83(bs, 1H, NH), 4.24(d, 2H, OCH₂), 4.15(t, 2H, NHCH₂), 3.80(s, 3H, OCH₃), 3.62(t, 2H, CH₂N₃), 1.46(s, 9H, (CH₃)₃)
実施例７３：４−(２−アジドエトキシ)−３−メトキシ−ベンジルアミントリフルオロアセテート（３３）
塩化メチレン（1ml）に溶かした化合物３２（0.103g, 0.32mmo1）にトリフルオロ酢酸を加えた後、１００℃で１時間加熱し、反応混合物を減圧濃縮した。残留物をトルエンで稀釈し、数回減圧濃縮して化合物３３を褐色固体として得た(0.115g, 100%)。
【００６７】
¹H NMR(DMSO-d₆)δ6.99-7.10(m, 3H, Ar), 4.12(t, 2H, OCH₂), 3.93(s, 2H, ArCH₂), 3.76(s, 3H, OCH₃), 3.62(m, 2H, CH₂N₃)
実施例７４：１−(２−アジドエトキシ)−４−イソチオシアネートメチル−２−メトキシベンゼン（３４）
ＤＭＦ(1.5ml)に溶かした化合物３３(0.115g, 0.33mmo1)にトリエチルアミン（0.037g, 0.36mmo1）を加えた後、１時間攪拌した。この反応混合物に１，１−チオカルボニルジ−２（１Ｈ）−ピリドン（0.084g, 0.33mmo1）を入れ、室温で２．５時間攪拌した。反応混合物を水で稀釈したた後、ジエチルエーテルで数回抽出した。有機層を合せて水で塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧濃縮した。残留物を、溶解液として酢酸エチル／ヘキサン（１：２）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物３４を油として得た(0.065g, 74%)。
【００６８】
¹H NMR(CDCl₃)δ6.75-6.91(m, 3H, Ar), 4.65(s, 2H, CH₂N=C=S), 4.20(t, 2H, OCH₂), 3.90(s, 3H, OCH₃), 3.62(t, 2H, CH₂N₃)
化合物３５の一般的合成方法
エタノール(5ml)に溶かした化合物６（0.27mmol）にリンドラー触媒（0.042mg）を加えた後、水素風船装置を用いて２時間水素反応させた。反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。塩化メチレン（5ml）に溶かした後、化合物３４（0.27mmol）を加えた。室温で１５時間攪拌した後、反応混合物を減圧濃縮した。残留物を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物３５を得た。
【００６９】
実施例７５：２，２−ジメチルプロピオン酸２−{３−[４−（２−アジドエトキシ）−３−メトキシベンジル]チオウレイドメチル}−３−（３，４−ジメチルフェニル）プロピルエステル(35a)
収率：３９％
¹H NMR(CDCl₃)δ6.81-7.04(m, 6H), 6.25(m, 1H, NH), 6.02(bs, 1H, NH, 4.41(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.14-4.17(m, 3H, CH₂OCO and OCH₂), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.76-3.85(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC=S), 3.60-3.63(t, 2H, CH₂N₃), 3.21-3.28(m, 1H, CHCH₂NC=S), 2.47-2.66(m, 2H, CH₂Ph), 2.20-2.26(m, 7H, 2xCH₃ and CH), 1.22(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例７６：２，２−ジメチルプロピオン酸２−{３−[４−(２−アジドエトキシ）−３−メトキシベンジル]チオウレイドメチル}−３−(４−ｔ−ブチルフェニル）プロピルエステル(35b)
収率：６０％
¹H NMR(CDCl₃)δ7.3(d, 2H), 7.08(d, 2H), 6.9(m, 3H, Ar), 6.28(m, 1H, NH), 6.10(bs, 1H, NH), 4.43(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.2(m, 3H, CH₂OCO and OCH₂), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.74-3.95(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC=S), 3.60-3.63(t, 2H, CH₂N₃), 3.26(m, 1H, CHCH₂NHC=S), 2.6(m, 2H, CH₂Ph), 2.30(m, 1H, CH), 1.29(s, 9H, CO(CH₃)₃)
化合物３６の一般的合成方法
ＴＨＦ（２ml）に溶かした化合物３５（0.068g, 0.13mmol）にトリフェニルホスフィン（0.067g, 0.25mmol）および水（4.5mg, 0.25mmol）を加え、室温で２４時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮した後、残留物を、溶離液としてクロロホルム／メタノール／水酸化アンモニウム（９：１：０．１）を用いてシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して化合物３６を得た。
【００７０】
実施例７７：２，２−ジメチルプロピオン酸２−{３−[４−（２−アミノエトキシ）−３−メトキシベンジル]チオウレイドメチル}−３−（３，４−ジメチルフェニル）プロピルエステル(36a)
収率：４９％
¹H NMR(CDCl₃)δ6.77-7.04(m, 6H), 6.47(bs, 2H, NH), 4.43(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.18(ddd of AB, 1H, CH₂OCO), 3.98(t, 2H, OCH₂), 3.81(s, 3H, OCH₃), 3.71-3.77(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC＝S), 3.06(t, 2H, CH₂NH), 2.48-2.68(m, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 7H, 2xCH₃ and CH), 1.23(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実施例７８：２，２−ジメチルプロピオン酸２−{３−[４−（２−アミノエトキシ）−３−メトキシベンジル]チオウレイドメチル}−３−（４−ｔ−ブチルフェニル）プロピルエステル(36b)
収率：９９％
¹H NMR(CDCl₃)δ7.28-7.47(m, 2H), 7.2(d, 2H), 6.8-7.0(m, 3H, Ar), 6.4(bs, 1H, NH), 4.44(bs, 2H, NHCH₂Ar), 4.18(m, 1H, CH₂OCO), 3.82(t, 2H, OCH₂), 3.78(s, 3H, OCH₃), 3.66-3.82(m, 2H, CH₂OCO and CHCH₂NHC=S), 3.09(t, 2H, CH₂NH₂), 2.48-2.68(m, 2H, CH₂Ph), 2.20(m, 1H, CH), 1.28(s, 9H, C(CH₃)₃), 1.22(s, 9H, CO(CH₃)₃)
実験例１：受容体結合親和力およびＣＡＰ−活性化されたチャンネル検索
目的化合物のＣＡＰ型活性は、in vitro受容体結合分析およびＣＡＰ−活性化された単一チャンネル活性分析を通じて測定した。受容体結合分析において、これらの化合物は、バウンド[^３Ｈ]ＲＴＸを受容体から置き換える能力を有すると評価された。その結果は、バウンド標識されたＲＴＸの半分を置き換える非放射性リガンドの濃度で表されるＫ_ｉ値（平均±ＳＥＭ、３回実験）として示した。ＣＡＰ活性化された単一チャンネル活性分析において、非選択的陽イオン導入による内部電流の増加は、培養された新生ラット後根筋神経節（ＤＲＧ）神経細胞に化合物を細胞外適用することによって測定した。化合物の活性は、対照物質としてのＣＡＰと比べたイオン伝導度の相対的差異によって示される。
【００７１】
方法
１．[^３Ｈ]レジニフェラトキシン結合分析
[^３Ｈ]ＲＴＸ（３７Ｃｉ／mol）は、化学合成および分析実験室、(NCI-FCRDC)に記載の方法によって合成した。非放射性ＲＴＸおよびカプゼピンはＬＣラボラトリーで（Woburn, MA）から購入した。
【００７２】
競合リガンドの存在下での[^３Ｈ]ＲＴＸ結合の抑制はラットの脊髄からの膜を用いて測定した。この膜は、文献[Neurosciences Vol 8, pp368-380]に記載の方法で製造した。すなわち、動物を一般的な麻酔の下で安楽死させた後、脊髄の全体を無菌的に取除いた。５ｍＭＫＣｌ、５．８ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＭｇＣｌ_２、０．７５ｍＭＣａＣｌ_２、１２ｍＭＤ−グルコースおよび１３７ｍＭスクロース（「緩衝液Ａ」）を含むｐＨ７．４のice-cold１０ｍＭＨＥＰＥＳでオムニ(Omni)２０００組織ホモゲナイザーの補助器具を用いてサンプルを粉砕した。４℃、1,000xgで１０分間遠心分離して均質化した；ペレットを緩衝液Ａでさらに懸濁し、４℃、35,000xgで４０分間さらに遠心分離した。二回目の遠心分離から回収したペレットを約２ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度で同一な緩衝溶液で再懸濁し、小量をドライアイスで急速凍結させた後、分析するまで−７０℃で貯蔵した。
【００７３】
実験は、膜に結合する特異[^３Ｈ]ＲＴＸ結合の非放射性化合物による抑制を評価できるように設計した。[^３Ｈ]ＲＴＸ（100pM）を全体体積比、３００：１の量の競合リガンドの存在下で１００ｇの膜タンパク質とともに、０．２５mg/mlウシ血清アルブミン（タイプＶ、シグマ社）で補充した緩衝液Ａで３７℃で６０分間培養した。ウシ血清アルブミンは、ＲＴＸの非特異的表面吸着を減らすために含ませた。培養後半に、チューブを氷で冷却し、″α_１−酸グリコプロテイン（シグマ社）１００μgを５０：１の体積比で希釈して各チューブに加えて非特異結合を減した。結合した、また結合していない[^３Ｈ]ＲＴＸを10,000xgで４℃で１５分間遠心分離することによって膜をペレット化して分離した。ペレットを含むチューブの先端を切断し、結合された放射活性をシンチレーション計数器で決定した。非特異結合は、１ｍＭ非放射性ＲＴＸの存在下で決定した。結合の測定は、各実験において３回ずつ行って決定し、各実験は少なくとも２回繰返した。各実験において、競合カーブは一般的に５〜６濃度の競合リガンドを用いて決定した。
【００７４】
結合は、fmol/mgタンパク質として示される。タンパク質濃度は、製造業者の仕様書(Bio-Rad Laboratories,CA)に従って、バイオレッドタンパク質分析法で測定した。サンプルは、シンチレーション計数器の使用前に１０時間シンチレーション流体中で均質化し、各サンプルを５分間カウントした。結合データは、次の方程式に代入して分析した：
B = ((L_H + L_c * K_d/K_I)^(n-1) / (K_d ⁿ + (L_H + L_c * K_d/K_I)ⁿ)) / (L_H ^n-1/(K_d ⁿ + L_H ⁿ))
（式中、Ｌ_ｃは、非放射性リガンドの濃度であり；Ｋ_Ｉは、結合部位の半分の一非放射性リガンドによって結合されている際の非放射活性リガンドの濃度である。Ｂは、特異的に結合した[^３Ｈ]ＲＴＸを示し、Ｂ_ｍａｘは受容体密度であり、Ｌ_Hは、結合されていない[^３Ｈ]ＲＴＸの濃度であり、Ｋ_ｄは、受容体の半分を占有できる [^３Ｈ]ＲＴＸの濃度であり、ｎは、ヒル計数（Hill coefficient）として言及された組合せインデックスである）。
【００７５】
２．カプサイシンで活性化された単一チャンネル検索
１）細胞準備
培養されたＤＲＧ神経細胞を文献に記載の方法によって準備した（J. Neuroscience 16, 1659-1667,(1996)）。すなわち、１日または２日齢の新生ラットの低子宮頸部、胸部および腰部の脊髄のすべての部位からＤＲＧｓを切除した。ＤＭＥＭ／Ｆ−１２混合物（Gibco, Grand Island, NY）、ウシ胎児血清（１０％、Gibco）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２５ng/ml神経性成長因子（Sigma, St. Louis, MO）およびペニシリン／ストレトマイシン（Sigma）１００units/mlを含む冷たい培養培地（４℃）でＤＲＧｓを収集した。神経節をＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地で３回洗浄した後、１mg/mlコラゲナーゼ（タイプII, Worthington Biomedical, Freehold, NJ）を含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地で３０分間培養した。次いで、神経節をMg²⁺-およびCa²⁺-を含まないHank’s溶液で３回洗浄し、２．５mg/mlトリプシン（Gibco）を含む暖かい（３７℃）Hank’s溶液中で徐々に振盪しながら培養した。溶液を１，０００rpmで１０分間遠心分離し、ペレットを酵素抑制のために培養培地で２または３回洗浄した。ペレットを培養培地中で懸濁し、パストゥールピペットで徐々に粉砕した。懸濁液を小さいペトリ皿に載せてある円形のガラスカバースリップ（Fisher, Pittsburgh, PA）に塗布した。ガラスカバースリップをポリ−Ｌ−リシン（シグマ社）で一晩処理し、使用前に乾燥した。細胞は、９５％air/５％ＣＯ_２のガス混合物で３７で培養した。細胞は、塗布後２〜４日間使用した。
【００７６】
２）電流記録
ホウケイ酸塩ガラスピペット（Narishige Scientific Instrument Lab., Tokyo）を引きのばしてシルガード（Sylgard; Dow Corning Co., Midland, MI）でコーティングした。先端抵抗は、全細胞と単一チャンネル電流記録において各々約２と５Mohmsであった。ガラスピペットでギガシール（gigaseal）を形成した後、細胞−付着および内外部パッチ遠心分離をハミルらが記述したように、単一−チャンネル電流を研究するのに用いた。浴に浸漬した塩橋（３００mM塩化カリウム中の１％寒天）およびピペット溶液中のAg/AgCl参照電極を接合電位の変化を最少化するために用いた。接合電位は、ギガシールを形成する前に排除した。全細胞の記録のために、ガラスピペット下の細胞膜を弱い吸入で破裂させた。全細胞を形成した後、容量性過度電流をなくした。
【００７７】
単一チャンネル電流は、パッチクランプ増幅器（Axopatch 200A, Axon Instruments, Foster City, CA）を用いて記録し、８−ポール、低透過ベッセルフィルタ（low-pass Bessel filter）を用いて５kHzで濾過した。データは、デジタルデータ記録機（digital data recorder; VR-10B, Instrutech, Great Neck, NY）を用いて３７kHzでデジタル化し、後の分析のためにビデオテープに貯蔵した。チャート記録のために、増幅器の出力は５００Hz（Frequency Device, Havenhill, MA）で濾過し、列分析チャート記録機（thermal array chart recorder; TA-240, Gould Instrument System, Valley View, OH）に供給した。ビデオテープに貯蔵されたデジタルデータは単一−チャンネル電流のコンピュータ分析のためにパソコン（IBM Pentium-compatible）に入力した。
【００７８】
３）チャンネル開放慨然性（channel open probability;PO）
単一チャンネル電流の振幅および平均開放時間をpCLAMPソフトウェア（Version 6.02, Axon Instruments）を用いて求めた。単一チャンネルのPoは、開放イベントを示すカーブの下部面積を開放および閉鎖イベントを示すカーブの下部で面積の和で分けて得た比によって求めた。FETCHAN(Axon Instruments)において半−振幅アルゴリズムは開放イベントを検出するための逆振幅のために用いられた。チャンネル活性（NPo）は、パッチにおけるチャンネル数（N）の生成物とPoの積として計算した。NpoまたはPoは、５以下の機能性ＣＡＰ活性チャンネルを含むパッチから収集した。
【００７９】
４）溶液
単一チャンネル記録のための浴およびピペット中の溶液は、１４０ｍＭＮａ^＋、２ｍＭＭｇ^２＋、１４４ｍＭＣｌ⁻、５ｍＭＥＧＴＡおよび１０ｍＭＨＥＰＥＳを含み、ｐＨ７．２であった。全細胞のためにピペット溶液は１４０ｍＭＫ^＋、２ｍＭＭｇ^２＋、１４４ｍＭＣｌ⁻、５ｍＭＥＧＴＡ、１０ｍＭＨＥＰＥＳおよび４ｍＭＡＴＰを含み、ｐＨ７．２であった。全細胞記録のための対照散布溶液は、１４０ｍＭＮａ^＋、５ｍＭＫ^＋、２ｍＭＭｇ^＋、１ｍＭＣａ^＋、１５１ｍＭＣｌ⁻および１０ｍＭＨＥＰＥＳを含んだ。合成された化合物は、１０ｍＭ貯蔵液を製造するために１００％エタノールに溶解し、貯蔵した。細胞培養または電気生理学的実験に用いられたすべての他の試薬はシグマ社から購入した。すべての値は、平均±Ｓ．Ｅ．として示した。
【００８０】
結果
結果を表１に示し、次のように要約する。
【００８１】
（１）７ｂ−Ｉａを除くすべての化合物は、ＣＡＰより強力なアゴニスト活性および受容体結合親和性を示した；（２）チオウレア誘導体７ａ−Ｉ（Ki=65.6nM）は初期研究で報告されたＣＡＰ−関連アミド同類体（Ki=404nM）よりさらに強力なアゴニスト活性を示した；（３）ＲＴＸのＣ_３−カルボニル基を模倣するために設計されたＲ_１のエステル基は、ベンジルエーテル誘導体のR₁に比べてより強力なアゴニスト活性を有した[7a-V(Ki=31.2nM)および7c-V(Ki=148.7nM)と9a(Ki=148nM)および9c(Ki=659nM)の比較]、これは受容体への水素結合におけるカルボニル残基の重要な役割を示した；（４）Ｒ_１のピバロイル基およびＲ_２の４−ｔ−ブチルベンジル基は、ＣＡＰより各々約２８０および４９０倍強力な化合物７ｂ−Ｉと７ｄ−Ｉ（Ki=19nMおよび10.8nM、各々）において最適アゴニスト活性を与える効果的な疎水性基であることが判明した；（５）ラセミ体に比べては、７ａ−Ｉの２つの光学活性エナンチオマー受容体結合親和力において相当違うことから[7a-I(Ki=65.6nM)および(R)-7a-I(Ki=18.43nM)と(S)-7a-I(Ki=74nM)の比較]、受容体とチオウレアの結合は、非常に立体特異的であることが明らかになった。
【００８２】
【表１】

実験例２：鎮痛および抗炎症活性
受容体結合および単一チャンネル分析から選択された最も強力なカプサイシンアゴニストの鎮痛活性は、ＰＢＱ−誘導身もだえ分析(PBQ-indeed writhing assay)で評価し、その結果を表２に示す。予想通り、in vitro分析に基づいて最も強力な化合物と判明した２つの化合物7d-Iと7b-Iは、ＥＤ_５０が各々０．５μg/kgおよび１μg/kgであって、優れた鎮痛活性を示した。これらの値は、これらの化合物がＣＡＰより３００〜６００倍さらに強力な鎮痛活性を有することを示す。この２つの化合物は、現在市販されているかまたは局所鎮痛剤として臨床試験を経たオルバニル、またはDA-5018より、さらに強力である。
【００８３】
ＴＰＡ誘導耳浮腫分析において、本発明の化合物のうち最も強力なアゴニストは強力な抗浮腫活性を有するＣＡＰに比べて弱い抗炎症活性を示す（表２）。本発明者らは当初、本来高い効能を有するチオウレア誘導体はＴＰＡ−誘導耳浮腫を激減させ得るかもしれないと推測した。この点において、これらの活性はオルバニルまたはDA-5018の活性と類似し、両方ともＴＰＡ耳浮腫分析において弱い局所活性を示す。経皮投与を通じては生体利用率が低いことがこれらの化合物の弱い局所抗炎症特性を部分的に説明し得る。
【００８４】
本発明の化合物のin vitro活性および鎮痛活性は、各々カルシウム導入分析および酢酸誘導身もだえ分析によって評価した。表３に示すように、これらはいずれもカプサイシンに匹敵する受容体アゴニスト活性を示した。これらのうち、アミノエチル同類体は相対的に強力な鎮痛活性を示す。特に、化合物２８ａは韓国で鎮痛剤として臨床実験を経たDA-5018よりさらに強力な鎮痛活性を示すと判明された。
【００８５】
方法
１．マウスＰＢＱ誘導身もだえ鎮痛分析
体重２５ｇの雄ＩＣＲマウスを１２時間の明暗周期（12h on/12h off）に調節した環境で飼育した。化学的刺激剤であるフェニル−ｐ−キノーン（５％エタノールを含む生理食塩水に溶解した４．５mg/kg）０．３mlを実験動物に腹腔内注射し、６分後から６分間腹部収縮の回数を測定した。実験動物（一群当り１０匹）に、エタノール／ツイーン８０／生理食塩水（10/10/80）の０．２mlビヒクル中の合成化合物をフェニル−ｐ−キノーンの投与３０分前に腹腔内投与した。食塩水のみを投与した対照群の動物の身もだえ回数と比べて、フェニル−ｐ−キノーン投与群の身もだえの回数の減少を鎮痛効果の指標とみなした。身もだえ回数の５０％減少を示すＥＤ_５０値をデータとして示した。
【００８６】
２．酢酸誘導身もだえテスト
体重２０ｇのＩＣＲマウスを１２時間の明暗周期に調節した環境で飼育し、実験一日前に絶食させた。１．２％酢酸溶液０．２mlを腹腔内注射し、６分後から６分間腹部収縮の回数を測定した。マウス（一群当り１０匹）を酢酸注射１時間前に薬物またはビヒクル（10ml/kg, i.p.）を投与した。実験化合物はエタノール／ツイーン８０／生理食塩水（10/10/80）の溶媒に溶解した。抗真菌活性は、対照動物（ビヒクル投与マウス）と実験化合物を投与した動物の差異、すなわち腹部収縮回数の減少として示された。
【００８７】
３．ＴＰＡ−誘導マウス耳浮腫分析
実験群当り１０匹の雄ＩＣＲマウス（体重２５〜３０ｇ）の右耳にアセトンまたはアセトンに溶かした薬物を２５μl局所適用した。約１７時間後、同じ薬物を適用した。１時間後アセトンに溶かした０．５nmolのＴＰＡ２５μlを同じ耳に処理した。ＴＰＡ処理５時間後、動物を犠牲し、６mn直径のパンチを用いて耳組織を切取った。０．１mgまで測定可能な電子秤で耳組織の重さを測定した。切取った耳組織の重量の増加を炎症の指標とみなした。抗炎症効果は、対照群と比べた薬物処理群において腫れ上がりの抑制を％として示した。％阻害度は下記式で表される。
【００８８】
％阻害度＝［（Ｃ−Ｔ）／Ｃ］×１００
（式中、ＣとＴは各々ＴＰＡ処理群、ＴＰＡ^＋薬物処理群における耳の重さの増加を示す）。
【００８９】
４．^４５Ｃａ導入実験
１）ＤＲＧ神経細胞培養
ＤＲＧ神経細胞は、前述の方法（Wood et al., 1988）を若干変えて新生スプラグダウリーラット（Sprague-Dawley）から製造した。すなわち、解剖鏡下で脊髄の全部位からＤＲＧを分離し、収集した。神経節を２００U/mlコラゲナーゼおよび２．５mg/mlトリプシンで３７℃で３０分間連続的に培養した。１０％ウマ血清を含むＤＭＥ／Ｆ１２培地を同量で加えて消化を中止させた。神経節をパストゥールピペットに数回通して粉砕した後、ナイロン膜に通して濾過し、遠心分離した。１０μg/mlのポリ−Ｄ−オルニチンで予めコーティングしたテラサキプレート（Terasaki plate）に、分離した細胞を1500-1700ニューロン／ウェルの密度になるように載せた。次いで、細胞を１．２g/l重炭酸ナトリウム、１５mM HEPES、５０mg/lゲンタマイシンおよび１０％ウマ血清を含むＤＭＥ／Ｆ１２培地と、C6-glioma細胞をこの培地下で二日間育てた培地で１：１で稀釈した培地で、５％ＣＯ_２を含む湿潤雰囲気下、３７℃で３〜４日間培養した。培地を神経成長因子２００ng/mlで補充した。分裂可能な非神経細胞を殺すために初めの２日間シトシンアラビノシド（sytosine arabinoside;100μM）を加えた。
【００９０】
２）導入実験
３〜４日間一次培養したＤＲＧ神経細胞を含むテラサキフレートをHEPES（10mM, pH7.4）で緩衝されたカルシウムおよびマグネシウムのないHBSS（Hank’s balanced salt solution）(H-HBSS)で４回洗浄して平衡化させた。各ウェルの溶液を取除いた。試験濃度の化合物と⁴⁵Ca²⁺（10μCi/ml）を含む培地（10μl）を各ウェルに加えた。神経細胞を室温で１０分間培養した後、テラサキプレートをHEPES(10mM, pH7.4)で緩衝されたカルシウムおよびマグネシウムのないHBSS(H-HBSS)で６回洗浄し、オーブンで乾燥した。各ウェルに０．３％ドデシル硫酸ナトリウム１０μlを加えて細胞を溶解し、⁴⁵Ca²⁺を溶出させた。各ウェルの内容物をシンチレーションバイエルに移し、Aquasol2-scintillant ３ml中でカウントした。試験薬物の効能は、３μmの濃度におけるカプサイシンの最大効能を基準として百分率として計算し、結果をEC₅₀±SEMとして示した。
【００９１】
結果
【表２】

【化１４】

2-[4-(2-アミノエトキシ)-3-メトキシフェニル]-N-[3-(3,4-ジメチルフェニル)プロピル]アセトアミド
【表３】

実験例３：刺激性およびタキフィラキシー
バニロイド誘導治療学の開発における薬物化学の焦点は、生体利用率を向上させ、刺激性を減少させるものである。このような目的と関連して、化合物の痛み誘発効果（pain-producing effects）を観察するためにin vivo刺激性テストとしてラットアイワイピングテスト（rat eye-wiping test）を行った。表４に示すように、強力なアゴニストとして選ばれた７ａ−Ｖ、７ｂ−Ｉおよび７ｄ−Ｉの刺激性プロファイルは、in vitro分析で測定した本来の鎮痛活性の傾向によらない。この分析において、非常に強力なカプサイシン同類体であるＲＴＸはＣＡＰより３倍強力であるが、本発明から選ばれた化合物は急性痛みの勃発にはあまり効果的でない。これらの合成化合物（７ｂ−Ｉと７ｄ−Ｉ）の低い効能に対する可能な説明としては、これらの感覚ニューロンの刺激速度に見出せる。
【００９２】
タキフィラキシーまたは交差タキフィラキシーの発生を確認するために、選ばれた合成化合物で処理したラットの群を６時間後０．００１％ＣＡＰで処理した。ＣＡＰ、ＲＴＸおよび合成同類体はテストにおいて０．００１％ＣＡＰと同等な弱いアイワイピング反応を示し、この結果はこのような部類の化合物間の交差タキフィラキシーを示めす。しかし、ＣＡＰ同類体にとってのアイワイピング反応は後−脱感作の発生のために必ず先行しなければならない。言換えれば、ＣＡＰ同類体の非刺激投与量では、０．００１％ＣＡＰでの処理によるアイワイピング挙動を防止する効果はなかった。
【００９３】
方法
ラットアイワイピングテストにおける刺激性およびタキフィラキシー
前記化合物の痛み誘発効力を前述のようにアイワイピング分析を用いて測定し、下記のように定量的に示した。最大５％エタノールを含む生理食塩水に薬物を溶かし、１０倍ずつ濃度を増加させた溶液を、体重１５０〜１８０ｇのラットの目に滴加した後、防御反応（前足を用いたアイワイピング）の回数を測定した。６匹のラットに各濃度を適用し、平均値から容量反応曲線を得た。容量反応曲線から１０回のスクラッチ反応に該当する中間痛み誘発効力（MPP, moderate pain-producing potency）濃度を各化合物に対して計算した。この濃度に基づいて相対痛み誘発効力（RPP, relative pain-producing potency）を、カプサイシンの刺激度を１００として各化合物の刺激性を比べることによって決定した。
【００９４】
タキフィラキシーまたは交差タキフィラキシーの発生を確認するするために、各化合物を処理してから６時間後、０．００１％の同一濃度カプサイシンを同じ目に処理した。試験化合物（薬物）で処理したラットをビヒクルで処理したマウスと比較してカプサイシン０．００１％の濃度に対する反応阻害率（％）を脱感作の指標になるように評価した。
【００９５】
結果
【表４】

本発明を具体的な実施態様と関連させて記述したが、添付した特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内で、当該分野の熟練者が本発明を多様に変形および変化させ得ると理解されなければならない。

Claims

下記一般式(Ｉ)で表される化合物、およびその薬剤学的に許容可能な塩：

（式中、
Ｘは、酸素または硫黄原子であり；
Ａは−ＮＨＣＨ_２−または−ＣＨ_２−であり；
Ｒ_１はＲ_４ＣＯ−（ここで、Ｒ_４は、炭素数１〜１８のアルキル基、或いは炭素数６〜１０のアリール基である）であり；
Ｒ_２は、ｍが１の場合は水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、またはハロゲン原子であり、ｍが２の場合は炭素数１〜６のアルキル基であり；
Ｒ_３は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、−（ＣＨ ₂ ） _ｎＮＨ ₂ 、−ＣＯ（ＣＨ ₂ ） _ｎＣＯ ₂ Ｈまたは−（ＣＨ ₂ ） _ｎＣＯ ₂ Ｈ（ここで、ｎは１または２である）であり；および
*は、キラル性炭素原子を示す）。
Ｒ_１が式Ｒ_４ＣＯ−（ここで、Ｒ_４は、炭素数１〜１８のアルキル基、フェニル基または一つ以上のＣ_１−４アルキル基で置換されたフェニル基である）であり；
Ｒ_２は、ｍが１の場合は水素原子、炭素数１〜４のアルキル基またはハロゲン原子であり、ｍが２の場合は炭素数１〜４のアルキル基であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
Ｘが酸素原子であり、Ａが-CH₂-であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
Ｘが硫黄原子であり、Ａが-NHCH₂-であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
Ｒ_３が水素原子、メトキシメチル基、-CH₂CH₂NH₂、-COCH₂CH₂CO₂Hまたは-CH₂CO₂Hであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
Ｒ_２は、ｍが１の場合は水素原子、ｔ−ブチル、およびクロロ原子からなる群から選ばれ、ｍが２の場合は３，４−（ジメチル）であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
Ｒ_４がｔ−ブチル、ｉ−プロピル、ペンチル、ヘプタデシル、フェニルおよび３，４−（ジメチル）フェニル基からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１記載の化合物。
２，２−ジメチルプロピオン酸２−(２−[４−(２−アミノエトキシ)−３−メトキシフェニル]アセチルアミノメチル)−３−(３，４−ジメチルフェニル)プロピルエステル；
２，２−ジメチルプロピオン酸２−(２−[４−(２−アミノエトキシ)−３−メトキシフェニル]アセチルアミノメチル)−３−(４−ｔ−ブチルフェニル)プロピルエステル；
２，２−ジメチルプロピオン酸２−ベンジル３−[３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）チオウレイド]プロピルエステル；
２−メチルプロピオン酸２−ベンジル３−[３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）チオウレイド]プロピルエステル；
２，２−ジメチルプロピオン酸２−（３，４−ジメチルベンジル）−３−[３−（４−ヒドロキシシ−３−メトキシベンジル）チオウレイド]プロピルエステル；
２，２−ジメチルプロピオン酸２−（４−ｔ−ブチルベンジル）−３−[３−（４−ヒドロキシシ−３−メトキシベンジル）チオウレイド]プロピルエステル
からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１の化合物。
薬剤学的に許容可能な担体とともに、活性成分として請求項１の一般式（Ｉ）で表される化合物を含むことを特徴とする薬剤学的組成物。
薬剤学的に許容可能な担体とともに、活性成分として請求項１の一般式（Ｉ）で表される化合物を急性、慢性、炎症性または神経病的痛みの緩和または軽減、炎症抑制、または急迫性失禁の治療に有効な量で含むことを特徴とする、請求項９記載の薬剤学的組成物。