JP3037994B2 - リポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤に関す
る。

本発明はさらにリポソーム凝集防止剤に関する。

本発明はさらに蛋白質吸着の抑制されたあるいはリポ
ソーム同士の凝集が防止されたリポソームおよびその製
法に関する。

〔従来の技術〕

リポソームを水溶性あるいは脂溶性の薬物の担体とし
て利用しようとする試みが広く行われている（Gregoria
dis et al.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,446,319（1985））。ま
た、リポソームの内水相に動物の酸素運搬体であるヘモ
グロビンを含有させ、リポソームを人工赤血球として利
用する試みも行われている（特開昭62−178521）。

〔発明が解決しようとする課題〕

リポソームを薬物等の運搬体として利用する場合、リ
ポソームを生体の血管内へ投与する必要がある。しか
し、従来一般に使用されているリポソーム膜が脂質のみ
から成るリポソームは、生体の血漿中の蛋白質（例えば
アルブミン、グロブリン、フィブリノーゲン等）を吸着
し、吸着された蛋白質を介してリポソーム同士が凝集す
るという問題があった。特にリポソームの粒径が0.1μ
ｍを越える場合に、この問題は顕著であった。通常一般
に利用されるリポソームの粒径は0.1μｍ〜１μｍであ
って、そのままの状態であれば、毛細血管でも内径が数
μｍはあるので生体の血管内を通過するのに障害とはな
らない。しかしながら、リポソームが血漿中の蛋白質を
吸着することにより凝集してしまうと、その凝集物の大
きさは数十μｍにも達する。もし、血管内で凝集が生起
すればリポソームの凝集物が血管を栓塞し、血流を阻害
して生体を死に至らしめる危険性がある。

特にリポソームを人工赤血球として利用する場合、大
量のリポソームを投与しなければならず、血漿中でのリ
ポソームの凝集は無視できない問題であった。しかし、
血漿中でのリポソームの凝集を防止する技術は従来全く
なかった。

また、リポソームを生体内に投与した場合、リポソー
ムを抗原とした抗体としての蛋白質（イムノグロブリ
ン）がリポソームに吸着し、貪食細胞（マクロファー
ジ）に異物認識を与え、リポソームがマクロファージに
取り込まれ、リポソームが短時間のうちに消失してしま
う。そこでリポソーム表面への蛋白質吸着を抑制するこ
とにより、血漿中におけるリポソームの消失時間を遅延
させることができる。

さらにリポソームを人工赤血球として利用する場合、
血液中に存在する赤血球に対して溶血等の有害な作用の
ないリポソームが望まれる。

従って本発明の目的は、リポソーム表面への蛋白質吸
着抑制剤およびリポソーム凝集防止剤、血漿中での蛋白
質吸着が抑制されたリポソームおよびその製法を提供す
ることにある。さらに本発明の目的は、リポソームを人
工赤血球として使用する場合に、溶血等の毒作用のない
リポソームを提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

上記目的を達成するため、本発明者が鋭意研究を重ね
た結果、リポソームの脂質層に特定の蛋白質吸着抑制剤
を含有させることにより血漿中で蛋白質がリポソーム表
面に吸着するのを防止することができ、ひいてはリポソ
ーム同士の凝集を防止することができることを見い出
し、本発明を完成した。

本発明によれば下記のリポソーム表面への蛋白質吸着
抑制剤、リポソーム凝集防止剤、これらを含有するリポ
ソームおよびその製法が提供される。

１）ポリエチレングリコールの両末端に水素添加天然リ
ン脂質が結合しているリポソーム表面への蛋白質吸着抑
制剤。

２）ポリエチレングリコール結合水素添加天然リン脂質
がポリエチレングリコール結合水素添加ホスファチジル
エタノールアミンである１項に記載の蛋白質吸着抑制
剤。

３）ポリエチレングリコールの両末端に結合した水素添
加天然リン脂質がリポソームを構成する脂質層に固定さ
れ、ポリエチレングリコール部分がループ状にリポソー
ム表面から外方向に伸びてなるリポソーム。

４）ポリエチレングリコール結合水素添加天然リン脂質
がポリエチレングリコール結合水素添加天然ホスファチ
ジルエタノールアミンである３項に記載のリポソーム。

５）リポソームの懸濁液に１項に記載のリポソーム表面
への蛋白質吸着抑制剤を添加し、次いで該懸濁液からリ
ポソームを採取することを特徴とする蛋白質の吸着が抑
制されたリポソームの製法。

６）１項に記載の蛋白質吸着抑制剤をリポソーム膜構成
脂質と均一に混合し、得られた混合物を用いてリポソー
ムを形成させることを特徴とする蛋白質の吸着が抑制さ
れたリポソームの製法。

本発明におけるリポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤
またはリポソーム凝集防止剤は、ポリエチレングリコー
ル（以下PEGという）と水素添加天然リン脂質とが結合
したポリエチレングリコール結合水素添加天然リン脂質
（以下PEG結合リン脂質という）である。

本発明におけるPEG結合リン脂質は、水素添加天然リ
ン脂質の親水部（極性頭部）にポリエチレングリコール
（PEG）を共有結合した構造を有し、１分子中に１また
は複数のPEG鎖を含有する。本発明におけるPEG結合リン
脂質はPEGの両端に水素添加天然リン脂質を結合した構
造を有する。

本発明の目的のためには、PEG結合リン脂質分子中のP
EG鎖長は、平均重合度で５〜1000モルの範囲が望まし
く、より好ましくは40〜200モルである。この範囲を下
回る場合には血漿中での蛋白質の吸着抑制およびリポソ
ーム凝集防止効果が発現され難く、この範囲を上回る場
合にはPEG結合リン脂質の水溶性が高くなり、リポソー
ム膜中に固定され難くなる。

本発明のPEG結合水素添加天然リン脂質における水素
添加天然リン脂質としては、天然のリン脂質を常法に従
って水素添加したものが用いられる。

大豆レシチン、卵黄レシチン、ホスファチジルエタノ
ールアミン等の天然のリン脂質は全て不飽和脂肪酸を分
子中に含んでいるが、本発明においては上記天然リン脂
質の不飽和脂肪酸を水素で飽和した水素添加天然リン脂
質が使用される。合成ジパルミトイルレシチンホスファ
チジルエタノールアミンは分子中に不飽和脂肪酸を含ん
でおよず、リポソーム表面への蛋白質吸着抑制作用やリ
ポソーム凝集防止作用は水素添加天然リン脂質と同等で
あるが、価格の高い点および溶血作用が見られる点で劣
っている。

本発明において用いる水素添加天然リン脂質の水素添
加度は臨界的ではないがヨウ素価で表わして30以下、好
ましくは10以下である。水素添加天然リン脂質の例とし
ては、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、ホ
スファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホ
スファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、カル
ジオリピン等を常法に従って水素添加したものがあげら
れる。

特に水素添加天然ホスファチジルエタノールアミンが
好ましい。

PEGと上記リン脂質と供有結合させるには該リン脂質
の極性部に反応活性な官能基が必要である。これには、
ホスファチジルエタノールアミンのアミノ基、ホスファ
チジルグリセロールの水酸基、ホスファチジルセリンの
カルボキシル基等があり、ホスファチジルエタノールア
ミンのアミノ基が好ましく利用される。

該リン脂質の反応活性な官能基とPEGを共有結合させ
るには、塩化シアヌルを用いる方法、カルボジイミドを
用いる方法、酸無水物を用いる方法、グルタルアルデヒ
ドを用いる方法、等がある。ホスファチジルエタノール
アミンのアミノ基とPEGを結合するには、塩化シアヌル
（2,4,6−トリクロロ−ｓ−トリアジン）を用いる方法
が好ましく利用される。例えば、モノメトキシポリエチ
レングリコール塩化シアヌルを公知の反応操作で結合す
ることにより、２−Ｏ−メトキシポリエチレングリコー
ル−4,6−ジクロロ−ｓ−トリアジン（活性化PEG1）ま
たは2,4−ビス（Ｏ−メトキシポリエチレングリコー
ル）−６−クロロ−ｓ−トリアジン（活性化PEG2）が得
られる｛Y,Inada,et al.,Chem.Lett.,７,773−776（198
0）｝。これらとアミノ基を脱塩酸縮合反応により結合
させることで、ホスファチジルエタノールアミンの極性
頭部にPEGを共有結合させたリン脂質が得られる。ここ
で、活性化PEG1を用いた場合は１分子のリン脂質中に１
本のPEG鎖を、活性化PEG2を用いた場合は２本のPEG鎖を
含有することになる。また、モノメトキシPEGと無水コ
ハク酸を反応させてPEG末端にカルボキシル基を導入
し、これとホスファチジルエタノールアミンをカルボジ
イミド存在下で反応させることにより、アミド結合を介
したPEG結合リン脂質が得られる。

本発明のPEG結合リン脂質を脂質層に含有するリポソ
ームを製造するには、PEG結合リン脂質をリポソーム形
成脂質と予め均一に混合して、得られた混合脂質を用い
て常法によりリポソームを形成させれば良い。リポソー
ム形成脂質に対するPEG結合リン脂質の混合比は、モル
比で0.1モル％〜50モル％、好ましくは0.5モル％〜20モ
ル％、より好ましくは１モル％〜５モル％である。この
範囲を下回る場合には、血漿中でのリポソーム凝集防止
効果が不十分となり、この範囲を上回る場合には、PEG
結合リン脂質の可溶化能により、リポソームが不安定と
なる。

PEG結合リン脂質と予め均一に混合するには、例え
ば、両者を揮発性の有機溶媒に溶解させた後、エバポレ
ーションにより、有機溶媒を除去すれば良い。もし、脂
溶性の薬物等をリポソームに含有させるのであれば、こ
のとき、リポソーム形成脂質と共に混合しておけば良
い。得られた混合脂質からリポソームを形成させるに
は、通常一般に行われているリポソーム化の方法に従っ
て行うことが可能であり、例えば、振とう法、超音波照
射法、フレンチプレス法等いずれの方法を用いても良
い。上記のPEG結合リン脂質を上記の範囲で使用するか
ぎりにおいては、粒径0.1μｍ〜１μｍのリポソームが
得られ、内水相に十分な水溶性の薬物や生理活性物質等
を担持させることができる。得られたリポソームの脂質
層中にはPEG結合リン脂質が含有されているが、その含
有率は必ずしも初めの脂質との混合割合と同一ではな
い。PEG結合リン脂質の水溶性が高い場合にはリポソー
ム化の過程で、その一部が膜外の水相中に溶出している
場合もありうる。リポソーム脂質膜中におけるPEG結合
リン脂質の存在状態は明らかではないが、PEG結合リン
脂質の疎水性部がリポソーム膜中の疎水性領域内にあっ
て、親水性のPEG鎖が膜中の親水性領域から膜外の水性
媒体中にかけて存在しているものと推定される。特にPE
Gの両末端にリン脂質が結合した構造を有するPEG結合リ
ン脂質の場合には、両末端のリン脂質がリポソーム膜中
の疎水性領域に疎水性相互作用によって固定され、親水
性のPEG鎖はリポソーム膜中の親水性領域へあるいは膜
外の水性媒体中へループ状に露出しているものと推定さ
れる。従って、本方法によって得られたリポソームにお
いては、PEG結合リン脂質のPEG鎖がリポソームの外水相
側及び内水相側の両側に存在することになる。

本発明のPEG結合リン脂質は、必ずしも水に透明に溶
解する必要はない。しかし、本発明のPEG結合リン脂質
が水に対し、均一に溶解する場合は、さらに別の方法に
よっても本発明のリポソームを製造することができる。
すなわち、通常一般に行われているリポソーム化の方法
に従って製造された、すでに水溶性あるいは脂溶性の薬
物等を担持しているリポソームの懸濁液に、本発明のPE
G結合リン脂質をそのままあるいは水溶液として添加す
ることによっても、本発明のPEG結合リン脂質を脂質層
中に含有するリポソームを製造することができる。この
場合、PEG結合リン脂質は水溶液中でミセル様の分子集
合体を形成して分散していると思われるが、ここにリポ
ソームが共存すれば、PEG結合リン脂質分子中の疎水性
部が、リポソーム膜中の疎水性領域に疎水的相互作用に
よって固定され、親水性のPEG鎖はリポソームの外水相
側表面にのみ露出した構造となる。

PEG結合リン脂質を水溶液として添加する場合、その
濃度は、臨界ミセル濃度以上であれば良いが、その濃度
が低いと、リポソームへの吸着量が不十分となり血漿中
でのリポソーム凝集防止効果が低下し、その濃度が高す
ぎるとリポソームを不安定にし、内水相に担持された水
溶性薬物等の漏れ出しを引き起こしてしまう。従って、
その濃度はリポソーム懸濁液中の濃度で0.01％〜20％、
より好ましくは、0.05％〜２％である。

本発明のPEG結合リン脂質を脂質層に含有するリポソ
ームは、また別の方法によっても製造することができ
る。すなわち反応活性な官能基を持つリン脂質を含有す
るリポソームを常法にて製造した後、リポソーム外液に
両末端にカルボキシル基を有するPEGを添加してリン脂
質と結合させる。例えば、ホスファチジルエタノールア
ミンを全リン脂質中１モル％〜50モル％含有するリポソ
ームを製造し、塩基性（pH9以上）緩衝液中、両末端に
カルボキシル基を有するPEGを１％〜20％の濃度で添加
し、室温で１時間〜24時間反応させる。この場合、親水
性のPEG鎖はリポソームの外水相側表面にのみ露出した
構造となる。

本発明で使用するリポソーム形成脂質は、ホスファチ
ジルコリン（レシチン）、スフィンゴミエリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン等に
代表されるリン脂質で卵黄、大豆その他の天然材料に由
来するもの、または、有機化学的な合成手段により得ら
れるものを単独でまたは混合して主成分とする。さらに
膜安定化剤としてコレステロール、コレスタノール等の
ステロール類や、荷電物質としてホスファチジン酸、ジ
セチルホスフェート、高級脂肪酸等を添加しても良い。

特に、これらリン脂質が不飽和結合を有する場合、こ
れが過酸化反応を受けることによって発生する脂質過酸
化物による毒性の問題、また内包ヘモグロビンが酸化変
性を受け易いといった問題があるため、この不飽和基に
水素添加したものが好適に用いられる。例えば、入手が
容易な水素添加天然リン脂質として水素添加卵黄レシチ
ン、水素添加大豆レシチンなどがある。これら水素添加
天然リン脂質を主成分とする場合、その相転移温度は50
℃程度と高温である。一般にリポソームは相転移温度以
上で操作しなければ形成され難いが、ヘモグロビンをリ
ポソーム化する場合、40℃以上で操作するとヘモグロビ
ンが熱変性を受けてしまう。しかし、リポソーム形成脂
質としてステロール類を含有させれば、脂質混合物全体
として明確な相転移点が存在しなくなり、操作温度が主
成分リン脂質の相転移温度以下でも十分に人工赤血球を
製造することができる。また、生成した人工赤血球同士
が凝集することを防止するために通常、荷電物質を含有
させるが、これには高級飽和脂肪酸が好ましく用いられ
る。これらリポソーム形成脂質の混合比率はリン脂質１
重量部に対してステロール類0.2〜１重量部、高級飽和
脂肪酸0.05〜0.2重量部が適当である。

PEG結合リン脂質とリポソーム形成脂質を混合するに
は、例えばクロロホルム、ジクロロメタン等のPEG結合
リン脂質とリポソーム形成脂質を均一に溶解しうる揮発
性有機溶媒に、これらを均一溶解後、有機溶媒をエバポ
レーション、凍結乾燥、スプレードライ等の方法により
除去すれば良い。

得られた混合脂質から人工赤血球を形成させるには、
ヘモグロビン水溶液中に該混合脂質を水和分散させれば
よい。水和分散の方法は単に両者を機械的に混合するだ
けでも良いが、さらに、フレンチプレス細胞破砕機等を
用いての高圧吐出処理を行うことが望ましい。ヘモグロ
ビン水溶液のヘモグロビン濃度は30〜60％が好ましく、
この範囲を下回る場合には、ヘモグロビンのカプセル化
効率が低く、この範囲を上回る場合には、ヘモグロビン
水溶液の粘度が著しく高くなり、PEG結合リン脂質を加
えた場合でも、水和分散が困難になる。

特に、水素添加リン脂質、ステロール類、高級飽和脂
肪酸を上記範囲で混合したリポソーム形成脂質と上記範
囲のヘモグロビン水溶液を使用する本発明の人工赤血球
の製造方法においては、ヘモグロビンカプセル化効率の
著しく低い粒径0.01μｍ〜0.03μｍの人工赤血球は殆ど
生成せず、大部分が粒径0.1μｍ以上のヘモグロビンカ
プセル化効率の高い人工赤血球となる。

得られた人工赤血球の脂質層中にはPEG結合リン脂質
が含有されているが、その含有率は必ずしも初めの脂質
との混合割合と同一ではない。PEG結合リン脂質の水溶
性が高い場合にはリポソーム化の過程で、その一部が膜
外の水相中に溶出している場合もありうる。

次に実施例および比較例を示して本発明をさらに具体
的に説明する。

参考例１ 水素添加天然ホスファチジルエタノールアミン150m
g、活性PEG2（PEG平均分子量5,000×2,生化学工業
（株）製）2.5gを脱水クロロホルム50mlに溶解、炭酸ナ
トリウム2gを加えて、室温で終夜反応させた。ニンヒド
リン呈色の消失により反応終了を確認後、反応液を濾過
し、ヘキサンを加えて再沈精製、真空乾燥してPEG結合
リン脂質を得た。

水素添加卵黄レシチン630mg、コレステロール317mg、
ミリスチン酸53mg、上記のPEG結合リン脂質150mgをジク
ロロメタン20mlに溶解し、エバポレーションにより有機
溶媒を除去した。得られた混合脂質に50％ヘモグロビン
水溶液20mlを加え、振とう混合後、250kg/cm²の圧力で
フレンチプレス処理を10回繰り返した。得られたフレン
チプレス処理液を生理食塩水により10倍に希釈して遠心
分離処理（17,000r.p.m.30分）し、沈澱リポソームを生
理食塩水140mlにより、さらに遠心洗浄を２回繰り返し
た。洗浄後の沈澱リポソームをヘモグロビン濃度で５％
となるように生理食塩水中に懸濁させた。得られたリポ
ソームの平均粒径は0.2μｍであった。このリポソーム
懸濁液0.1mlとクエン酸加ヒト血漿0.5mlを混合し、光学
顕微鏡（400倍）により観察したところ、１μｍを越え
るリポソーム凝集物はほとんど認められなかった。

参考例２ 水素添加卵黄レシチン630mg、コレステロール317mg、
ミリスチン酸53mgをジクロロメタン20mlに溶解し、エバ
ポレーションにより有機溶媒を除去した。得られた混合
脂質に50％ヘモグロビン水溶液20mlを加え、振とう混合
後、500kg/cm²の圧力でフレンチプレス処理を10回繰り
返した。得られたフレンチプレス処理液を生理食塩水に
より10倍に希釈して遠心分離処理（17,000r.p.m.30分）
し、沈澱リポソームを生理食塩水140mlにより、さらに
遠心洗浄を２回繰り返した。洗浄後の沈澱リポソームを
ヘモグロビン濃度で５％となるように生理食塩水中に懸
濁させた。得られたリポソームの平均粒径は0.2μｍで
あった。このリポソーム懸濁液0.1mlとクエン酸加ヒト
血漿0.5mlを混合し、光学顕微鏡（400倍）により観察し
たところ、リポソームは完全に凝集し、その凝集物の大
きさは50μｍを越えるものであった。

ヘモグロビン濃度で５％に調整した上記のリポソーム
懸濁液1mlに、１％の参考例１で得られたPEG結合リン脂
質を含む生理食塩水9mlを加え、室温で30分間放置した
後、生理食塩水により10倍に希釈して遠心分離処理（1
7,000r.p.m.30分）し、沈澱リポソームを生理食塩水140
mlにより、さらに遠心洗浄を２回繰り返した。洗浄後の
沈澱リポソームをヘモグロビン濃度で５％となるように
生理食塩水中に懸濁させた。このリポソーム懸濁液0.1m
lとクエン酸加ヒト血漿0.5mlを混合し、光学顕微鏡（40
0倍）により観察したところ、１μｍを越えるリポソー
ム凝集物はほとんど認められなかった。

参考例３ 水素添加天然ホスファチジルエタノールアミンを30モ
ル％含有する水素添加大豆レシチンを水素添加卵黄レシ
チンのかわりに用いる以外は参考例２と同様にして、ヘ
モグロビン含有リポソームを得た。0.1Mほう酸緩衝液
（pH10）中ヘモグロビン濃度で５％に調整した上記のリ
ポソーム懸濁液1mlに、活性化PEG2を100mg添加し、室温
で終夜反応させた。生理食塩水により10倍に希釈して遠
心分離処理（17,000r.p.m.30分）し、沈澱リポソームを
生理食塩水140mlにより、さらに遠心洗浄を２回繰り返
した。洗浄後の沈澱リポソームをヘモグロビン濃度で５
％となるように生理食塩水中に懸濁させた。このリポソ
ーム懸濁液0.1mlとクエン酸加ヒト血漿0.5mlを混合し、
光学顕微鏡（400倍）により観察したところ、１μｍを
越えるリポソーム凝集物はほとんど認められなかった。

参考例４ モノメトキシPEG5000（ユニオンカーバイド社製）50g
を1,2−ジクロロエタン250mlに溶解、無水コハク酸5gと
ピリジン4mlを加えて、３日間沸点還流した。濾過、エ
バポレーション後、100mlの蒸留水に溶解し、水相をエ
ーテルで洗浄後クロロホルム100mlに抽出した。エバポ
レーション後、酢酸エチルで再結晶して片末端カルボキ
シPEGを得た。これを725mgと水素添加天然ホスファチジ
ルエタノールアミン100mg、さらにジシクロヘキシルカ
ルボジイミド30mgを30mlのクロロホルムに溶解、50℃で
終夜反応させた。反応液をヘキサン300mlに再沈してア
ミド結合を介するPEG結合リン脂質を得た。これを用い
た参考例１および２と同様の実験で同様の結果を得た。

実施例１ ポリエチレングリコール（ユニオンカーバイド社製）
50gを、1,2−ジクロロエタン250mlに溶解し、これに無
水コハク酸10gとピリジン8mlを加えて、３日間沸点還流
した。濾過、エバポレーション後、100mlの蒸留水に溶
解し、水相をエーテルで洗浄後、クロロホルム100mlに
抽出した。エバポレーション後、酢酸エチルで再結晶し
て両末端カルボキシPEGを得た（数平均分子量4340）。
これを3.00gと水素添加天然ホスファチジルエタノール
アミン2.5g、さらに1,1′−カルボニルジイミダゾール2
70mgを、30mlのクロロホルムに溶解し、50℃で終夜反応
させた。エバポレーション後、エタノール100mlを加え
て加熱溶解した。室温まで放冷した後、濾過、エバポレ
ーションした。さらにクロロホルム50mlに溶解後、ジエ
チルエーテル500mlに再沈させ、グラスフィルターで濾
集した。真空乾燥後、RO水１に溶解し、0.2μフィル
ターで濾過した。濾液を凍結乾燥して、アミド結合を介
してPEG両末端にリン脂質か結合したPEG結合リン脂質を
得た。これを用いた参考例１および２と同様の実験で同
様の結果を得た。

試 験 例 所定濃度の試料を含む被験液0.8mlにヘモグロビン濃
度2.5％の家兎洗浄赤血球0.2mlを添加し、37゜℃で24時
間静置後、3,000r.p.mで10分間遠心し、上清中のヘモグ
ロビン量を定量して溶血率を求めた。

結果を表１に示す。

上記の試験の結果から、本発明の蛋白質吸着抑制剤は
他の蛋白質吸着抑制剤に比しては溶血毒性が低いことが
明らかである。また上記の表に示さないポリエチレング
リコールの両末端にリン脂質を結合した構造の蛋白質吸
着抑制剤についても同様に溶血毒性が低いことが確認さ
れた。

〔発明の効果〕

以上詳しく説明したように、本発明によればリポソー
ムの脂質層に特定の蛋白質吸着抑制剤を含有させること
によって、血漿中でのリポソームへの蛋白質の吸着を抑
制し、リポソームの凝集を防止したリポソームを提供す
ることができる。

蛋白質吸着抑制剤は疎水性であるリン脂質と親水性高
分子鎖であるポリエチレングリコールの結合体であり、
親水部がリポソームの表面に露出していることによっ
て、血漿タンパクのリポソームへの吸着が抑制され、そ
の結果、血漿中でのリポソームの凝集が防止される。従
って、生体の血管内へリポソームを投与した場合でも、
リポソームの凝集物が血管内で栓塞して血流を阻害する
心配がなく、特に大量のリポソームを投与する必要があ
る人工赤血球として利用性が高い。

さらに、本発明の蛋白質吸着抑制剤はポリエチレング
リコールと水素添加天然リン脂質との結合体からなり、
溶血毒性が低いという特徴を有する。従って本発明の蛋
白質吸着抑制剤は人工赤血球としてのリポソームに特に
好適に適用される。

本発明のリポソームの製造方法は、リポソーム形成脂
質と蛋白質吸着抑制剤を予め均一に混合して、得られた
混合脂質を用いて常法によりリポソームを形成させる方
法及び常法により製造されたリポソームの懸濁液に蛋白
質吸着抑制剤を添加する方法であるので、従来知られて
いるリポソームの応用技術のいずれの例にも広く適用す
ることができる。

さらに本発明のリポソーム蛋白質吸着抑制剤を使用す
ることにより、リポソーム形成脂質の水和分散が促進さ
れ、高濃度のヘモグロビン水溶液を用いた場合でも、ヘ
モグロビンカプセル化効率の高い人工赤血球を高い収率
で得ることができる。

特に、水素添加リン脂質、ステロール類、高級飽和脂
肪酸を混合したリポソーム形成脂質と高濃度のヘモグロ
ビン水溶液を使用する本発明の人工赤血球の製造方法に
おいては、ヘモグロビンカプセル化効率の著しく低い粒
径0.01μｍ〜0.03μｍの人工赤血球は殆ど生成せず、大
部分が粒径0.1μｍ以上のヘモグロビンカプセル化効率
の高い人工赤血球となる。

本発明の製造方法で得られるヘモグロビンカプセル化
効率の高い人工赤血球では、人工赤血球懸濁液中のヘモ
グロビン濃度を高くしても、全脂質濃度は低く抑えるこ
とができるので、循環血流中へ投与した時の循環動態に
与える悪影響も少なく、また脂質に由来する毒性も低く
抑えることができる。しかも、従来の脂質分散のための
手法はそのまま適用できるので、工業的な人工赤血球の
製造方法として広範に応用し得る極めて優れた方法であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平２−149512（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−49393（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−249717（ＪＰ，Ａ) 特表 平４−501117（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 9/127 A61K 47/32 A61K 47/24

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ポリエチレングリコールの両末端に水素添
   加天然リン脂質が結合しているリポソーム表面への蛋白
   質吸着抑制剤。
2. 【請求項２】ポリエチレングリコール結合水素添加天然
   リン脂質がポリエチレングリコール結合水素添加ホスフ
   ァチジルエタノールアミンである請求項１に記載の蛋白
   質吸着抑制剤。
3. 【請求項３】ポリエチレングリコールの両末端に結合し
   た水素添加天然リン脂質がリポソームを構成する脂質層
   に固定され、ポリエチレングリコール部分がループ状に
   リポソーム表面から外方向に伸びてなるリポソーム。
4. 【請求項４】ポリエチレングリコール結合水素添加天然
   リン脂質がポリエチレングリコール結合水素添加天然ホ
   スファチジルエタノールアミンである請求項３に記載の
   リポソーム。
5. 【請求項５】リポソームの懸濁液に請求項１に記載のリ
   ポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤を添加し、次いで該
   懸濁液からリポソームを採取することを特徴とする蛋白
   質の吸着が抑制されたリポソームの製法。
6. 【請求項６】請求項１に記載の蛋白質吸着抑制剤をリポ
   ソーム膜構成脂質と均一に混合し、得られた混合物を用
   いてリポソームを形成させることを特徴とする蛋白質の
   吸着が抑制されたリポソームの製法。