JP2948121B2 - Ｈｉｖグループに属するレトロウイルス由来のペプチド及びそれらの使用 - Google Patents
Ｈｉｖグループに属するレトロウイルス由来のペプチド及びそれらの使用Info
- Publication number
- JP2948121B2 JP2948121B2 JP7059818A JP5981895A JP2948121B2 JP 2948121 B2 JP2948121 B2 JP 2948121B2 JP 7059818 A JP7059818 A JP 7059818A JP 5981895 A JP5981895 A JP 5981895A JP 2948121 B2 JP2948121 B2 JP 2948121B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hiv
- peptide
- sequence
- peptide according
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【発明の背景】発明の分野 本発明はＨＩＶグループの新規なレトロウイルス、ＭＶ
Ｐ５１８０／９１由来の合成ペプチド及び組換えタンパ
ク質に関する。これらのペプチド及び組換えタンパク質
の製造法についても説明する。さらに、本発明は、これ
らのペプチド及び組換えタンパク質の医薬、特に診断用
薬やワクチンの調製への使用に関する。
Ｐ５１８０／９１由来の合成ペプチド及び組換えタンパ
ク質に関する。これらのペプチド及び組換えタンパク質
の製造法についても説明する。さらに、本発明は、これ
らのペプチド及び組換えタンパク質の医薬、特に診断用
薬やワクチンの調製への使用に関する。
【０００２】背景技術 いわゆるＨＩＶグループに属するレトロウイルスは、ヒ
トがそれらに感染すると、免疫不全又はＡＩＤＳ（後天
性免疫不全症候群）と総称して言われている症状を生じ
る。
トがそれらに感染すると、免疫不全又はＡＩＤＳ（後天
性免疫不全症候群）と総称して言われている症状を生じ
る。
【０００３】疫学的研究により、ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）が、圧倒的多数のＡＩＤＳ（後天性免疫不全
症候群）の症例の代表的な病因であることが明かにされ
ている。１９８３年に患者から分離され特徴付けられた
レトロウイルスは、ＨＩＶ−１と命名された（Ｂａｒｒ
ｅ−Ｓｉｎｏｕｓｓｉ，Ｆ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２
０、第８６８〜８７１頁［１９８３］）。ＨＩＶ−１の
変異株が、ＷＯ８６／０２３８３に記載されている。
（ＨＩＶ）が、圧倒的多数のＡＩＤＳ（後天性免疫不全
症候群）の症例の代表的な病因であることが明かにされ
ている。１９８３年に患者から分離され特徴付けられた
レトロウイルスは、ＨＩＶ−１と命名された（Ｂａｒｒ
ｅ−Ｓｉｎｏｕｓｓｉ，Ｆ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２
０、第８６８〜８７１頁［１９８３］）。ＨＩＶ−１の
変異株が、ＷＯ８６／０２３８３に記載されている。
【０００４】１９９３年まで、公知のＨＩＶ−１分離株
は、配列の比較及び疫学的見地に基づいて、５種のサブ
タイプＡ〜Ｅに分類されていた（Ｇ．Ｍｙｅｒｓｅｔ
等，１９９２、Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ
ａｎｄ ＡＩＤＳ １９９２．Ａ ｃｏｍｐｉｌａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅ
ｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｓ．米国Ｌｏｓ ＡｌａｍｏｓにあるＬｏ
ｓ Ａｌａｍｏｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。
は、配列の比較及び疫学的見地に基づいて、５種のサブ
タイプＡ〜Ｅに分類されていた（Ｇ．Ｍｙｅｒｓｅｔ
等，１９９２、Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ
ａｎｄ ＡＩＤＳ １９９２．Ａ ｃｏｍｐｉｌａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅ
ｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｓ．米国Ｌｏｓ ＡｌａｍｏｓにあるＬｏ
ｓ Ａｌａｍｏｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。
【０００５】ヒト免疫不全ウイルスの第二グループは、
１９８５年に西アフリカで確認され（Ｃｌａｖｅｌ，
Ｆ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３３、第３４３〜３４６頁
［１９８６］）、ヒト免疫不全ウイルス型２（ＨＩＶ−
２）と命名された（ＥＰ−Ａ−０２３９４２５号）。Ｈ
ＩＶ−２レトロウイルスはＨＩＶ−１とは明かに異なる
が、サルＳＩＶ免疫不全ウイルスにも関連している。Ｈ
ＩＶ−１と同様に、ＨＩＶ−２も、ＡＩＤＳの症状を生
じる。
１９８５年に西アフリカで確認され（Ｃｌａｖｅｌ，
Ｆ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３３、第３４３〜３４６頁
［１９８６］）、ヒト免疫不全ウイルス型２（ＨＩＶ−
２）と命名された（ＥＰ−Ａ−０２３９４２５号）。Ｈ
ＩＶ−２レトロウイルスはＨＩＶ−１とは明かに異なる
が、サルＳＩＶ免疫不全ウイルスにも関連している。Ｈ
ＩＶ−１と同様に、ＨＩＶ−２も、ＡＩＤＳの症状を生
じる。
【０００６】ＥＰ−Ａ−０３４５３７５は、免疫不全レ
トロウイルスのさらなる変異株を記載し、その公報にお
いてＨＩＶ−３レトロウイルス（ＡＮＴ７０）と命名し
ている。
トロウイルスのさらなる変異株を記載し、その公報にお
いてＨＩＶ−３レトロウイルス（ＡＮＴ７０）と命名し
ている。
【０００７】また、さらなる変異株免疫不全ウイルスの
分離も、Ｌａｎｃｅｔ、第３４０巻、１９９２年９月、
第６８１〜６８２頁に記載されている。
分離も、Ｌａｎｃｅｔ、第３４０巻、１９９２年９月、
第６８１〜６８２頁に記載されている。
【０００８】ヒト免疫不全ウイルスには高度の変異性を
示す特徴があり、このため異種の分離株の比較が著しく
複雑となる。例えば、多様なＨＩＶ−１分離株を比較す
るとき、ゲノムのある領域で高度の変異性が生じるが、
他のゲノム領域は比較的よく保存されている（Ｂｅｎ
ｎ，Ｓ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０、第９４９〜９５１
頁［１９８５］）。また、ＨＩＶ−２において、実質的
により大きな程度の多型性も観察された（Ｃｌａｖｅ
ｌ，Ｆ．等、Ｎａｔｕｒｅ３２４、第６９１〜６９５頁
［１９８６］）。構造的及び酵素的に必須であるタンパ
ク質をコードしているｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子における
領域が、最高の遺伝子安定性を有し；ｅｎｖ遺伝子及び
調節タンパク質をコードしている遺伝子（ｖｉｆ、ｖｐ
ｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ及びｎｅｆ）におけるある領域が高
度の変異性を示す。さらに、ＨＩＶ−１に対する抗血清
も、ＨＩＶ−２由来のｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子産生物と
交差反応することが明かにされた（Ｃｌａｖｅｌ，Ｆ．
等によるＮａｔｕｒｅ３２４、第６９１〜６９５頁［１
９８６］）。但し、この場合、配列の相同性が低かっ
た。これらの２種のウイルスも、条件が穏やかである限
り、顕著には互いにハイブリダイズしなかった。
示す特徴があり、このため異種の分離株の比較が著しく
複雑となる。例えば、多様なＨＩＶ−１分離株を比較す
るとき、ゲノムのある領域で高度の変異性が生じるが、
他のゲノム領域は比較的よく保存されている（Ｂｅｎ
ｎ，Ｓ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０、第９４９〜９５１
頁［１９８５］）。また、ＨＩＶ−２において、実質的
により大きな程度の多型性も観察された（Ｃｌａｖｅ
ｌ，Ｆ．等、Ｎａｔｕｒｅ３２４、第６９１〜６９５頁
［１９８６］）。構造的及び酵素的に必須であるタンパ
ク質をコードしているｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子における
領域が、最高の遺伝子安定性を有し；ｅｎｖ遺伝子及び
調節タンパク質をコードしている遺伝子（ｖｉｆ、ｖｐ
ｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ及びｎｅｆ）におけるある領域が高
度の変異性を示す。さらに、ＨＩＶ−１に対する抗血清
も、ＨＩＶ−２由来のｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子産生物と
交差反応することが明かにされた（Ｃｌａｖｅｌ，Ｆ．
等によるＮａｔｕｒｅ３２４、第６９１〜６９５頁［１
９８６］）。但し、この場合、配列の相同性が低かっ
た。これらの２種のウイルスも、条件が穏やかである限
り、顕著には互いにハイブリダイズしなかった。
【０００９】ＨＩＶグループのレトロウイルスの広範な
広まりと、感染時期と病的変化のはっきりした徴候が認
識できる時期との間に数年〜長年（２〜２０年）の期間
があることから、ＨＩＶグループのレトロウイルスによ
る感染ができるだけ早く、特に信頼性のある方法で検出
されることが疫学的に非常に重要である。このことは、
免疫不全の徴候を示す患者を診断するときだけでなく献
血者のスクリーニングにも重要である。たとえ血清を採
取された患者が免疫不全の徴候を示していても、ＨＩＶ
−１若しくはＨＩＶ−２型のレトロウイルス又はこれら
のウイルスの成分を検出系に使用したとき、血清によっ
ては抗体が検出できないか弱くしか検出できないことが
明かとなった。本発明の抗原を用いたときには、このよ
うな検出がある場合は可能となる。
広まりと、感染時期と病的変化のはっきりした徴候が認
識できる時期との間に数年〜長年（２〜２０年）の期間
があることから、ＨＩＶグループのレトロウイルスによ
る感染ができるだけ早く、特に信頼性のある方法で検出
されることが疫学的に非常に重要である。このことは、
免疫不全の徴候を示す患者を診断するときだけでなく献
血者のスクリーニングにも重要である。たとえ血清を採
取された患者が免疫不全の徴候を示していても、ＨＩＶ
−１若しくはＨＩＶ−２型のレトロウイルス又はこれら
のウイルスの成分を検出系に使用したとき、血清によっ
ては抗体が検出できないか弱くしか検出できないことが
明かとなった。本発明の抗原を用いたときには、このよ
うな検出がある場合は可能となる。
【００１０】ＤＥ４３１８１８６は、新規な免疫不全ウ
イルスの単離と特徴付けを記載している。このウイルス
は、ＭＶＰ５１８０／９１と称せられ、１９９１年に免
疫不全の徴候を示したカメルーン出身の３４才の女性患
者の抹消リンパ球から単離されたものである。このレト
ロウイルスは、地理的にアフリカにおけるＨＩＶ−１及
びＨＩＶ−２ウイルス感染が流行している西アフリカ
と、存在しているのがほとんど専らＨＩＶ−１である東
アフリカとの間に位置する領域に起源を発するものであ
る。また、この特許出願には、ＭＶＰ５１８０／９１の
ウイルスゲノム由来のヌクレオチド配列と、それらから
演繹したアミノ酸配列も記載されている。このレトロウ
イルスは、ブタペスト条約に準じて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌ
ｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）に寄託された（第
Ｖ９２０９２３１８号）。
イルスの単離と特徴付けを記載している。このウイルス
は、ＭＶＰ５１８０／９１と称せられ、１９９１年に免
疫不全の徴候を示したカメルーン出身の３４才の女性患
者の抹消リンパ球から単離されたものである。このレト
ロウイルスは、地理的にアフリカにおけるＨＩＶ−１及
びＨＩＶ−２ウイルス感染が流行している西アフリカ
と、存在しているのがほとんど専らＨＩＶ−１である東
アフリカとの間に位置する領域に起源を発するものであ
る。また、この特許出願には、ＭＶＰ５１８０／９１の
ウイルスゲノム由来のヌクレオチド配列と、それらから
演繹したアミノ酸配列も記載されている。このレトロウ
イルスは、ブタペスト条約に準じて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌ
ｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）に寄託された（第
Ｖ９２０９２３１８号）。
【００１１】ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２のように、新規
なＭＶＰ５１８０／９１は、以下の細胞系で成長する：
ＨＵＴ７８、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｃ８１６６細胞及びＭ
Ｔ−２細胞。ウイルスの単離と増殖が、書籍「Ｖｉｒａ
ｌ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＨＩＶ Ｉｎｆ
ｅｃｔｉｏｎ、編集者Ｊｅａｎ−Ｍａｒｉｅ Ａｎｄｒ
ｉｅｕ，Ｊｏｈｎ Ｌｉｂｂｅｙ Ｅｕｒｏｔｅｘｔ、
１９９１年）に詳細に記載されている。この刊行物に記
載されている手順は、引用することにより本発明の開示
の一部とされる。
なＭＶＰ５１８０／９１は、以下の細胞系で成長する：
ＨＵＴ７８、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｃ８１６６細胞及びＭ
Ｔ−２細胞。ウイルスの単離と増殖が、書籍「Ｖｉｒａ
ｌ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＨＩＶ Ｉｎｆ
ｅｃｔｉｏｎ、編集者Ｊｅａｎ−Ｍａｒｉｅ Ａｎｄｒ
ｉｅｕ，Ｊｏｈｎ Ｌｉｂｂｅｙ Ｅｕｒｏｔｅｘｔ、
１９９１年）に詳細に記載されている。この刊行物に記
載されている手順は、引用することにより本発明の開示
の一部とされる。
【００１２】新規なウイルスも、マグネシウム依存性で
あるがマンガン依存性ではない逆転写酵素を有してい
る。これは、ＨＩＶ−１ウイルスとＨＩＶ−２ウイルス
に共通のさらなる特徴である。
あるがマンガン依存性ではない逆転写酵素を有してい
る。これは、ＨＩＶ−１ウイルスとＨＩＶ−２ウイルス
に共通のさらなる特徴である。
【００１３】新規なＭＶＰ５１８０／９１ウイルスとＨ
ＩＶ−１及びＨＩＶ−２レトロウイルスとの間の差異を
よりよく理解できるように、まず、免疫不全を生じるレ
トロウイルスの構造を簡単に述べる。ＲＮＡが、ｐ２４
（タンパク質用ｐ）を運ぶタンパク質サブユニットから
構築される円錐状コアにおけるウイルスの内部に位置し
ている。この内コアは、タンパク質ｐ１７（外コア）か
ら構成されるタンパク質コートにより包まれている。ウ
イルスは、糖タンパク質コートにより包まれている。こ
の糖タンパク質コートは、脂質等の成分の他に、トラン
スメンブレンタンパク質ｇｐ４１及び外膜タンパク質ｇ
ｐ１２０を含有している。このｇｐ１２０は、宿主細胞
のＣＤ４レセプターに結合することができる。
ＩＶ−１及びＨＩＶ−２レトロウイルスとの間の差異を
よりよく理解できるように、まず、免疫不全を生じるレ
トロウイルスの構造を簡単に述べる。ＲＮＡが、ｐ２４
（タンパク質用ｐ）を運ぶタンパク質サブユニットから
構築される円錐状コアにおけるウイルスの内部に位置し
ている。この内コアは、タンパク質ｐ１７（外コア）か
ら構成されるタンパク質コートにより包まれている。ウ
イルスは、糖タンパク質コートにより包まれている。こ
の糖タンパク質コートは、脂質等の成分の他に、トラン
スメンブレンタンパク質ｇｐ４１及び外膜タンパク質ｇ
ｐ１２０を含有している。このｇｐ１２０は、宿主細胞
のＣＤ４レセプターに結合することができる。
【００１４】知る限りでは、ＨＩＶウイルス（単純化し
た用語）のＲＮＡは、以下の遺伝子領域を有している：
２つの末端におけるいわゆるロングターミナルリピート
（ＬＴＲ）と、遺伝子領域ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ及び
ｎｅｆ。遺伝子ｇａｇはとりわけコアタンパク質、ｐ２
４及びｐ１７をコードし、遺伝子ｐｏｌはとりわけ逆転
写酵素、ＲＮＡｓｅＨ及びインテグラーゼをコードし、
遺伝子ｅｎｖはウイルスコートの糖タンパク質ｇｐ４１
及びｇｐ１２０をコードしている。遺伝子ｎｅｆは、調
節機能を有するタンパク質をコードしている。ＨＩＶ型
のレトロウイルスのゲノム配列を、図１に概略示す。
た用語）のＲＮＡは、以下の遺伝子領域を有している：
２つの末端におけるいわゆるロングターミナルリピート
（ＬＴＲ）と、遺伝子領域ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ及び
ｎｅｆ。遺伝子ｇａｇはとりわけコアタンパク質、ｐ２
４及びｐ１７をコードし、遺伝子ｐｏｌはとりわけ逆転
写酵素、ＲＮＡｓｅＨ及びインテグラーゼをコードし、
遺伝子ｅｎｖはウイルスコートの糖タンパク質ｇｐ４１
及びｇｐ１２０をコードしている。遺伝子ｎｅｆは、調
節機能を有するタンパク質をコードしている。ＨＩＶ型
のレトロウイルスのゲノム配列を、図１に概略示す。
【００１５】レトロウイルスＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２
は、とりわけ、Ａｂｂｏｔｔ（ＨＩＶＡＧ−１モノクロ
ーナル抗体）から試験キットとして市販されており、
（ＨＩＶ−１）ｐ２４に対するモノクローナル抗体を用
いてウイルス抗原を試験することにより分別できる。逆
転写酵素含量は、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２ウイルス型
ではほぼ同じであることが知られている。したがって、
もし破砕したウイルスの希釈物において、抗原／抗体反
応により得られる吸光度（Ｅ ４９０ｎｍ）を、逆転写
酵素の活性に対してプロットすると、ほぼ図２に示した
ようなグラフが得られる。このことは、ＨＩＶ−１の場
合、用いられるモノクローナル抗体は、逆転写酵素含量
との関連においてｐ２４に対して極めて高い結合性を有
することを示している。これとは対照的に、モノクロー
ナル抗体は、ＨＩＶ−２ｐ２４に対して、同様にこのウ
イルスにおける逆転写酵素含量との関連において、結合
性が極めて低いことがわかる。もしこれらの測定をＭＶ
Ｐ５１８０／９１について実施するならば、曲線は、Ｈ
ＩＶ−１の曲線とＨＩＶ−２の曲線との間のほぼちょう
ど半分に位置する。即ち、ＭＶＰ５１８０／９１ｐ２４
に対するモノクローナル抗体の結合性は、ＨＩＶ−１の
場合と比較して減少する。図２は、このことを示す概略
図である。図２において、ＲＴは逆転写酵素を示し、タ
ンパク質ｐ２４をＡｂｂｏｔｔから市販されている試験
キットに存在するモノクローナル抗体に対する抗原（Ａ
ｇ）として用いている。
は、とりわけ、Ａｂｂｏｔｔ（ＨＩＶＡＧ−１モノクロ
ーナル抗体）から試験キットとして市販されており、
（ＨＩＶ−１）ｐ２４に対するモノクローナル抗体を用
いてウイルス抗原を試験することにより分別できる。逆
転写酵素含量は、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２ウイルス型
ではほぼ同じであることが知られている。したがって、
もし破砕したウイルスの希釈物において、抗原／抗体反
応により得られる吸光度（Ｅ ４９０ｎｍ）を、逆転写
酵素の活性に対してプロットすると、ほぼ図２に示した
ようなグラフが得られる。このことは、ＨＩＶ−１の場
合、用いられるモノクローナル抗体は、逆転写酵素含量
との関連においてｐ２４に対して極めて高い結合性を有
することを示している。これとは対照的に、モノクロー
ナル抗体は、ＨＩＶ−２ｐ２４に対して、同様にこのウ
イルスにおける逆転写酵素含量との関連において、結合
性が極めて低いことがわかる。もしこれらの測定をＭＶ
Ｐ５１８０／９１について実施するならば、曲線は、Ｈ
ＩＶ−１の曲線とＨＩＶ−２の曲線との間のほぼちょう
ど半分に位置する。即ち、ＭＶＰ５１８０／９１ｐ２４
に対するモノクローナル抗体の結合性は、ＨＩＶ−１の
場合と比較して減少する。図２は、このことを示す概略
図である。図２において、ＲＴは逆転写酵素を示し、タ
ンパク質ｐ２４をＡｂｂｏｔｔから市販されている試験
キットに存在するモノクローナル抗体に対する抗原（Ａ
ｇ）として用いている。
【００１６】いわゆるＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）
は、遺伝子技術において極めて広範な用途を有する系と
なった。このプロセスを実施するのに必要な成分は、市
販されている。もし増幅されるべきＤＮＡ配列の領域が
公知であるならば、このプロセスを用いてＤＮＡ配列を
増幅することが可能である。次に、増幅されるべき核酸
配列の短い領域にアニーリングする短い相補ＤＮＡ断片
（オリゴヌクレオチド＝プライマー）を合成しなければ
ならない。試験を実施するために、プライマーと一緒に
ＨＩＶ核酸を、ポリメラーゼとヌクレオチドトリホスフ
ェートを含有する反応混合物に導入する。重合（ＤＮＡ
合成）を所定時間実施した後、加熱して核酸鎖を分離す
る。冷却後、再び重合を開始する。したがって、もし新
規なレトロウイルスがＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２ウイル
スであるならば、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２ウイルスの
公知配列内に含まれるプライマーを用いることにより、
核酸を増幅できるはずである。この性質を有するある種
のプライマーが、すでに記載されている（ｐｏｌ３及び
ｐｏｌ４に関してはＬａｕｒｅ，Ｆ．等、Ｌａｎｃｅｔ
ｉｉ、（１９８８）５３８−５４１；ｓｋ３８／３９
及びｓｋ６８／６９に関してはＯｕ Ｃ．Ｙ．等、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ２３９（１９８８）２９５−２９７）。
は、遺伝子技術において極めて広範な用途を有する系と
なった。このプロセスを実施するのに必要な成分は、市
販されている。もし増幅されるべきＤＮＡ配列の領域が
公知であるならば、このプロセスを用いてＤＮＡ配列を
増幅することが可能である。次に、増幅されるべき核酸
配列の短い領域にアニーリングする短い相補ＤＮＡ断片
（オリゴヌクレオチド＝プライマー）を合成しなければ
ならない。試験を実施するために、プライマーと一緒に
ＨＩＶ核酸を、ポリメラーゼとヌクレオチドトリホスフ
ェートを含有する反応混合物に導入する。重合（ＤＮＡ
合成）を所定時間実施した後、加熱して核酸鎖を分離す
る。冷却後、再び重合を開始する。したがって、もし新
規なレトロウイルスがＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２ウイル
スであるならば、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２ウイルスの
公知配列内に含まれるプライマーを用いることにより、
核酸を増幅できるはずである。この性質を有するある種
のプライマーが、すでに記載されている（ｐｏｌ３及び
ｐｏｌ４に関してはＬａｕｒｅ，Ｆ．等、Ｌａｎｃｅｔ
ｉｉ、（１９８８）５３８−５４１；ｓｋ３８／３９
及びｓｋ６８／６９に関してはＯｕ Ｃ．Ｙ．等、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ２３９（１９８８）２９５−２９７）。
【００１７】上記したプライマー対を使用したときに
は、ＭＶＰ５１８０／９１ＤＮＡの増幅が得られない
か、弱い増幅しか得られないことが判明した（ＤＥ ４
３ １８１８６）。
は、ＭＶＰ５１８０／９１ＤＮＡの増幅が得られない
か、弱い増幅しか得られないことが判明した（ＤＥ ４
３ １８１８６）。
【００１８】いわゆるウエスタンブロット（イムノブロ
ット）法は、ＨＩＶ抗体を検出するための一般的な方法
である。この方法では、ゲル電気泳動によりウイルスタ
ンパク質をカットオフした後、膜に転写する。移植され
たタンパク質を担持する膜を、次に治験中の患者から採
取した血清と接触させる。存在するウイルスタンパク質
に対する抗体が、これらのタンパク質に結合する。洗浄
後、ウイルスタンパク質に特異的な抗体のみが残る。次
に、抗体を、一般的に呈色反応を触媒する酵素をカップ
リングさせた抗抗体を用いて視覚化する。このようにし
て、ウイルスタンパク質のバンドが視覚化できる。
ット）法は、ＨＩＶ抗体を検出するための一般的な方法
である。この方法では、ゲル電気泳動によりウイルスタ
ンパク質をカットオフした後、膜に転写する。移植され
たタンパク質を担持する膜を、次に治験中の患者から採
取した血清と接触させる。存在するウイルスタンパク質
に対する抗体が、これらのタンパク質に結合する。洗浄
後、ウイルスタンパク質に特異的な抗体のみが残る。次
に、抗体を、一般的に呈色反応を触媒する酵素をカップ
リングさせた抗抗体を用いて視覚化する。このようにし
て、ウイルスタンパク質のバンドが視覚化できる。
【００１９】ウエスタンブロットにおいて、ＨＩＶ分離
株ＭＶＰ５１８０／９１は、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２
ウイルスと比較して２つの重要で顕著な差を示す。ＨＩ
Ｖ−１は、規則的に、タンパク質ｐ２４に起因する強い
バンドと、タンパク質ｐ２３に起因するほとんど見えな
いことのある極めて弱いバンドを示す。ＨＩＶ−２は、
タンパク質ｐ２５に起因する強いバンドと、ときにはタ
ンパク質ｐ２３に起因する弱いバンドを示す。これに対
して、ＭＶＰ５１８０／９１ウイルスは、タンパク質ｐ
２４及びｐ２５に相当するほぼ等しい強度の２つのバン
ドを示す。
株ＭＶＰ５１８０／９１は、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２
ウイルスと比較して２つの重要で顕著な差を示す。ＨＩ
Ｖ−１は、規則的に、タンパク質ｐ２４に起因する強い
バンドと、タンパク質ｐ２３に起因するほとんど見えな
いことのある極めて弱いバンドを示す。ＨＩＶ−２は、
タンパク質ｐ２５に起因する強いバンドと、ときにはタ
ンパク質ｐ２３に起因する弱いバンドを示す。これに対
して、ＭＶＰ５１８０／９１ウイルスは、タンパク質ｐ
２４及びｐ２５に相当するほぼ等しい強度の２つのバン
ドを示す。
【００２０】逆転写酵素に起因するバンドにはさらに顕
著な差異がある。ＨＩＶ−１は、逆転写酵素に相当する
バンド（ｐ５３）と、ＲＮＡｓｅＨと結合した逆転写酵
素に相当するバンド（ｐ６６）を示す。ＨＩＶ−２で
は、逆転写酵素はタンパク質ｐ５５に相当し、ＲＮＡｓ
ｅＨと結合したときにはタンパク質ｐ６８に相当する。
これに対して、ＨＩＶ分離株ＭＶＰ５１８０／９１は、
タンパク質ｐ４８に逆転写酵素に相当するバンドを示
し、タンパク質ｐ６０にＲＮＡｓｅＨと組み合わせた逆
転写酵素に相当するバンドを示す。
著な差異がある。ＨＩＶ−１は、逆転写酵素に相当する
バンド（ｐ５３）と、ＲＮＡｓｅＨと結合した逆転写酵
素に相当するバンド（ｐ６６）を示す。ＨＩＶ−２で
は、逆転写酵素はタンパク質ｐ５５に相当し、ＲＮＡｓ
ｅＨと結合したときにはタンパク質ｐ６８に相当する。
これに対して、ＨＩＶ分離株ＭＶＰ５１８０／９１は、
タンパク質ｐ４８に逆転写酵素に相当するバンドを示
し、タンパク質ｐ６０にＲＮＡｓｅＨと組み合わせた逆
転写酵素に相当するバンドを示す。
【００２１】これらのデータから、ＭＶＰ５１８０／９
１逆転写酵素は、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２の逆転写酵
素よりも小さい約３〜約７キロダルトンの分子量を有す
ると結論できる。
１逆転写酵素は、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２の逆転写酵
素よりも小さい約３〜約７キロダルトンの分子量を有す
ると結論できる。
【００２２】免疫不全の徴候を示しているドイツ人の患
者の血清における抗ｅｎｖ抗体は、ウイルスＭＶＰ５１
８０／９１を用いたときには極めて弱くしか検出できな
いが、この血清は、ＨＩＶ−１ウイルスをＭＶＰ５１８
０／９１（ＤＥ ４３ １８１８６）の代わり使用する
とき強く反応することが判明した。このより強力な検出
反応は、主にｇｐ４１タンパク質に見られた。実験で
は、免疫不全の徴候を示すドイツ人の患者由来の血清パ
ネルと、アフリカ人の患者由来の血清パネルとを比較し
た。
者の血清における抗ｅｎｖ抗体は、ウイルスＭＶＰ５１
８０／９１を用いたときには極めて弱くしか検出できな
いが、この血清は、ＨＩＶ−１ウイルスをＭＶＰ５１８
０／９１（ＤＥ ４３ １８１８６）の代わり使用する
とき強く反応することが判明した。このより強力な検出
反応は、主にｇｐ４１タンパク質に見られた。実験で
は、免疫不全の徴候を示すドイツ人の患者由来の血清パ
ネルと、アフリカ人の患者由来の血清パネルとを比較し
た。
【００２３】ＭＶＰ５１８０／９１ゲノムのクローニン
グと配列決定については、すでに記載されている（ＤＥ
４３ １８ １８６）。異なるウイルス分離株間の類
似性は、核酸配列又はタンパク質配列間の相同の程度に
より表すことができる。例えば、相同５０％は、配列に
おいて、１００個の核酸位置又はアミノ酸位置のうちの
５０個が一致することを意味する。
グと配列決定については、すでに記載されている（ＤＥ
４３ １８ １８６）。異なるウイルス分離株間の類
似性は、核酸配列又はタンパク質配列間の相同の程度に
より表すことができる。例えば、相同５０％は、配列に
おいて、１００個の核酸位置又はアミノ酸位置のうちの
５０個が一致することを意味する。
【００２４】タンパク質間の相同性は、配列解析により
求めることができる。また、相同のＤＮＡ配列は、Ｓｏ
ｕｔｈｅｒｎによるハイブリダイゼーション法によって
も同定できる（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｅ． Ｍ．， Ｊ．
Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ９８：５０３〜５１７， １
９７５）。
求めることができる。また、相同のＤＮＡ配列は、Ｓｏ
ｕｔｈｅｒｎによるハイブリダイゼーション法によって
も同定できる（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｅ． Ｍ．， Ｊ．
Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ９８：５０３〜５１７， １
９７５）。
【００２５】表１に、ＭＶＰ５１８０／９１と、ＨＩＶ
−１とＨＩＶ−２とＨＩＶ−３と称するウイルスである
分離株ＡＮＴ７０（ＷＯ ８９／１２０９４ 及び Ｅ
Ｐ−Ａ−０ ３４５ ３７５）のコンセンサス配列との
間の配列比較をまとめて示す。この配列比較から、診断
に重要なｅｎｖ遺伝子領域において、例えばＭＶＰ５１
８０／９１の配列は、ＨＩＶ−１に対しての相同率は５
３％しかなく、ＨＩＶ−２に対しての相同率は４９％し
かない。これに対して、サブタイプＡ〜ＥのＨＩＶ−１
分離株は、例えば、ゲノムヌクレオチド配列を比較する
と、それらの間の相同率はかなり大きい。この場合、値
は、例外なく７５％を超える。
−１とＨＩＶ−２とＨＩＶ−３と称するウイルスである
分離株ＡＮＴ７０（ＷＯ ８９／１２０９４ 及び Ｅ
Ｐ−Ａ−０ ３４５ ３７５）のコンセンサス配列との
間の配列比較をまとめて示す。この配列比較から、診断
に重要なｅｎｖ遺伝子領域において、例えばＭＶＰ５１
８０／９１の配列は、ＨＩＶ−１に対しての相同率は５
３％しかなく、ＨＩＶ−２に対しての相同率は４９％し
かない。これに対して、サブタイプＡ〜ＥのＨＩＶ−１
分離株は、例えば、ゲノムヌクレオチド配列を比較する
と、それらの間の相同率はかなり大きい。この場合、値
は、例外なく７５％を超える。
【００２６】 表 １ ＭＶＰ５１８０と、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＡＮＴ７０配列のコンセンサス 配列との間の相同性の比較 遺伝子 相同性（％） （近似値） ＬＴＲ ＨＩＶ−１ ６７％ ＨＩＶ−２ ５１％ ＡＮＴ ７０ ８２％ ＧＡＧ ＨＩＶ−１ ７０％ ＨＩＶ−２ ６２％ ＡＮＴ ７０ ８９％ ＰＯＬ ＨＩＶ−１ ７４％ ＨＩＶ−２ ６６％ ＡＮＴ ７０ ９０％ ＶＩＦ ＨＩＶ−１ ６８％ ＨＩＶ−２ ４２％ ＡＮＴ ７０ ８７％ ＥＮＶ ＨＩＶ−１ ５３％ ＨＩＶ−２ ４９％ ＡＮＴ ７０ ８１％ ＮＥＦ ＨＩＶ−１ ５４％ ＨＩＶ−２ ４５％ ＡＮＴ ７０ ８３％ 合計 ＨＩＶ−１ ６５％ ＨＩＶ−２ ５６％
【００２７】配列におけるこれらの明瞭な差異と、ゲノ
ム構成がＨＩＶ−１ウイルスと一致することから、分離
株ＭＶＰ５１８０を新ＨＩＶ−１サブタイプ、サブタイ
プ０とされた（Ｍｙｅｒｓ等，１９９３，Ｈｕｍａｎ
Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓａｎｄ ＡＩＤＳ １９９
３． Ａ ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ
ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． 米国Ｌｏｓ
ＡｌａｍｏｓにあるＬｏｓ ＡｌａｍｏｓＮａｔｉｏ
ｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。いままで公知のこの
サブタイプの唯一の他の例は、上記した分離株ＡＮＴ７
０である。
ム構成がＨＩＶ−１ウイルスと一致することから、分離
株ＭＶＰ５１８０を新ＨＩＶ−１サブタイプ、サブタイ
プ０とされた（Ｍｙｅｒｓ等，１９９３，Ｈｕｍａｎ
Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓａｎｄ ＡＩＤＳ １９９
３． Ａ ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ
ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． 米国Ｌｏｓ
ＡｌａｍｏｓにあるＬｏｓ ＡｌａｍｏｓＮａｔｉｏ
ｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。いままで公知のこの
サブタイプの唯一の他の例は、上記した分離株ＡＮＴ７
０である。
【００２８】ＨＩＶ感染の信頼性のある検出は、今日で
は、献血について特に重要である。特異的抗ＨＩＶ−１
試験が１９８５年に利用できるようになると、血液及び
血液製剤のウイルスに対する安全性を確保するために、
血液銀行における個々の献血者に対してＨＩＶ−１抗体
についての免疫化学試験が義務付けられるようになっ
た。ＨＩＶ−２が１９８６年に発見された後、確立され
たＨＩＶ−１試験を用いてＨＩＶ−２特異的抗体を検出
しても、対応のＨＩＶ−１抗体試験を用いて抗ＨＩＶ−
１を検出するほどの信頼性では検出できないことが明か
となった。１９８９年以来、抗ＨＩＶ−１と抗ＨＩＶ−
２との同時非分別検出ができるいわゆる組み合わせ試験
が利用できるようになった。商用的に行われている抗Ｈ
ＩＶ−１／抗ＨＩＶ−２組み合わせ試験の大半は、組換
え法又はペプチド合成により調製したＨＩＶ抗原に基づ
くものである。
は、献血について特に重要である。特異的抗ＨＩＶ−１
試験が１９８５年に利用できるようになると、血液及び
血液製剤のウイルスに対する安全性を確保するために、
血液銀行における個々の献血者に対してＨＩＶ−１抗体
についての免疫化学試験が義務付けられるようになっ
た。ＨＩＶ−２が１９８６年に発見された後、確立され
たＨＩＶ−１試験を用いてＨＩＶ−２特異的抗体を検出
しても、対応のＨＩＶ−１抗体試験を用いて抗ＨＩＶ−
１を検出するほどの信頼性では検出できないことが明か
となった。１９８９年以来、抗ＨＩＶ−１と抗ＨＩＶ−
２との同時非分別検出ができるいわゆる組み合わせ試験
が利用できるようになった。商用的に行われている抗Ｈ
ＩＶ−１／抗ＨＩＶ−２組み合わせ試験の大半は、組換
え法又はペプチド合成により調製したＨＩＶ抗原に基づ
くものである。
【００２９】これらの診断試験では、治験中のヒトから
採取した血清試料を、ウイルス又はその一部分に由来す
る一種以上のタンパク質、ペプチド又は糖タンパク質の
タンパク質鎖（真核細胞系で発現される）と混合する。
好ましい試験法には、免疫蛍光又は免疫酵素試験法（例
えば、ＥＬＩＳＡ又は免疫ブロット）が含まれる。
採取した血清試料を、ウイルス又はその一部分に由来す
る一種以上のタンパク質、ペプチド又は糖タンパク質の
タンパク質鎖（真核細胞系で発現される）と混合する。
好ましい試験法には、免疫蛍光又は免疫酵素試験法（例
えば、ＥＬＩＳＡ又は免疫ブロット）が含まれる。
【００３０】免疫酵素試験では、例えばＭＶＰ５１８０
／９１又はその変異株由来の抗原を、マイクロタイター
プレートの壁に結合できる。これに使用される使用量
は、試験系及びマイクロタイタープレートの処理に相当
程度依存する。検査されるヒトから採取した血清又は血
清希釈液を、次にマイクロタイタープレートのウェルの
壁に添加する。所定の時間インキュベーションした後、
プレートを洗浄する。特異的免疫複合体を、ヒト免疫グ
ロブリンに特異的に結合し、予めマーカー成分、例えば
西洋ワサビペルオキシダーゼ又はアルカリ性ホスファタ
ーゼ糖タンパク質等にカップリングさせた、それらに対
する抗体結合により検出する。また、これらの特異的免
疫複合体は、当業者に公知のサンドイッチ法を用いた標
識抗原によっても検出できる。これらの酵素は、無色基
質を強く発色した生成物に転化でき、次に、特異的抗Ｈ
ＩＶ抗体の存在を、呈色強度から読み取ることができ
る。
／９１又はその変異株由来の抗原を、マイクロタイター
プレートの壁に結合できる。これに使用される使用量
は、試験系及びマイクロタイタープレートの処理に相当
程度依存する。検査されるヒトから採取した血清又は血
清希釈液を、次にマイクロタイタープレートのウェルの
壁に添加する。所定の時間インキュベーションした後、
プレートを洗浄する。特異的免疫複合体を、ヒト免疫グ
ロブリンに特異的に結合し、予めマーカー成分、例えば
西洋ワサビペルオキシダーゼ又はアルカリ性ホスファタ
ーゼ糖タンパク質等にカップリングさせた、それらに対
する抗体結合により検出する。また、これらの特異的免
疫複合体は、当業者に公知のサンドイッチ法を用いた標
識抗原によっても検出できる。これらの酵素は、無色基
質を強く発色した生成物に転化でき、次に、特異的抗Ｈ
ＩＶ抗体の存在を、呈色強度から読み取ることができ
る。
【００３１】ＭＶＰ５１８０／９１は、サブタイプ０に
属さない他のＨＩＶ−１分離株及びＨＩＶ−２分離株と
も相同性が比較的低いので、商用の抗ＨＩＶ−１／抗Ｈ
ＩＶ−２試験に使用される抗原も、ＭＶＰ５１８０／９
１感染又はＭＶＰ５１８０／９１に密接に関連している
ウイルス感染で生じる抗体を検出するのに適当かどうか
の疑問が生じる。
属さない他のＨＩＶ−１分離株及びＨＩＶ−２分離株と
も相同性が比較的低いので、商用の抗ＨＩＶ−１／抗Ｈ
ＩＶ−２試験に使用される抗原も、ＭＶＰ５１８０／９
１感染又はＭＶＰ５１８０／９１に密接に関連している
ウイルス感染で生じる抗体を検出するのに適当かどうか
の疑問が生じる。
【００３２】
【発明の概要】驚くべきことに、効率的な市販の抗ＨＩ
Ｖ−１／抗ＨＩＶ−２スクリーニング試験では十分に検
出されない免疫不全患者の血清中のＨＩＶ抗体が、ＭＶ
Ｐ５１８０／９１抗原に基づくイムノアッセイを用いて
信頼性よく検出されることが判明した。本発明では、マ
イクロタイタープレートをＨＩＶ−１及びＭＶＰ５１８
０由来のペプチドで同時コーティングすると、これらの
ウイルスに対する抗体を同時に検出できることも明かに
される。さらに、本発明は、同様にＭＶＰ５１８０特異
的及びセロタイプ０−特異的抗体を検出できるＭＶＰ５
１８０由来組換え抗原に関する。この他に、セロタイプ
０−特異的と「非」セロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体と
を選択的及び特定の方法で識別できるペプチドも記載さ
れている。
Ｖ−１／抗ＨＩＶ−２スクリーニング試験では十分に検
出されない免疫不全患者の血清中のＨＩＶ抗体が、ＭＶ
Ｐ５１８０／９１抗原に基づくイムノアッセイを用いて
信頼性よく検出されることが判明した。本発明では、マ
イクロタイタープレートをＨＩＶ−１及びＭＶＰ５１８
０由来のペプチドで同時コーティングすると、これらの
ウイルスに対する抗体を同時に検出できることも明かに
される。さらに、本発明は、同様にＭＶＰ５１８０特異
的及びセロタイプ０−特異的抗体を検出できるＭＶＰ５
１８０由来組換え抗原に関する。この他に、セロタイプ
０−特異的と「非」セロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体と
を選択的及び特定の方法で識別できるペプチドも記載さ
れている。
【００３３】ＨＩＶ感染の診断において、ＨＩＶ感染の
有無に関して、診断試験によりできるだけ確実性を高め
ることが絶対的に必要とされている。特に、血液銀行に
関しては、ＨＩＶウイルス感染は、できるなら１００％
の信頼性で排除できなければならない。保存血液のただ
一つの試料をＨＩＶ陽性であると確認することであって
も、患者が輸血によりＨＩＶウイルスに感染することを
防止できるので、少しでも信頼性を増加させることが極
めて重要である。
有無に関して、診断試験によりできるだけ確実性を高め
ることが絶対的に必要とされている。特に、血液銀行に
関しては、ＨＩＶウイルス感染は、できるなら１００％
の信頼性で排除できなければならない。保存血液のただ
一つの試料をＨＩＶ陽性であると確認することであって
も、患者が輸血によりＨＩＶウイルスに感染することを
防止できるので、少しでも信頼性を増加させることが極
めて重要である。
【００３４】したがって、本発明は、ＨＩＶ型のレトロ
ウイルスの診断検出に特に適当であるペプチドに関す
る。これらのペプチドは、 アミノ酸配列： ＶＷＧＩＲＱＬＲＡＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮ
ＬＷＧＸＫＧＫＬＩＸＹＴＳＶＫＷＮＴＳＷＳＧＲ （式中、ＸはＣ又はＳを意味する）から選択される約１
５〜約５０個、好ましくは約１５〜約３５個の連続した
アミノ酸配列を有するものである。
ウイルスの診断検出に特に適当であるペプチドに関す
る。これらのペプチドは、 アミノ酸配列： ＶＷＧＩＲＱＬＲＡＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮ
ＬＷＧＸＫＧＫＬＩＸＹＴＳＶＫＷＮＴＳＷＳＧＲ （式中、ＸはＣ又はＳを意味する）から選択される約１
５〜約５０個、好ましくは約１５〜約３５個の連続した
アミノ酸配列を有するものである。
【００３５】
【発明の具体的説明】好ましい態様では、ペプチドが、
配列： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＸＫＧＫＬＩ
ＸＹＴＳＶＫＷＮ から選択される。
配列： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＸＫＧＫＬＩ
ＸＹＴＳＶＫＷＮ から選択される。
【００３６】上記のアミノ酸配列は、一文字表記で表さ
れ、個々の文字は以下の意味を有する：Ａ＝アラニン、
Ｒ＝アルギニン、Ｎ＝アスパラギン、Ｄ＝アスパラギン
酸、Ｃ＝システイン、Ｑ＝グルタミン、Ｅ＝グルタミン
酸、Ｇ＝グリシン、Ｈ＝ヒスチジン、Ｉ＝イソロイシ
ン、Ｌ＝ロイシン、Ｋ＝リジン、Ｍ＝メチオニン、Ｆ＝
フェニルアラニン、Ｐ＝プロリン、Ｓ＝セリン、Ｔ＝ト
レオニン、Ｗ＝トリプトファン、Ｙ＝チロシン及びＶ＝
バリン。
れ、個々の文字は以下の意味を有する：Ａ＝アラニン、
Ｒ＝アルギニン、Ｎ＝アスパラギン、Ｄ＝アスパラギン
酸、Ｃ＝システイン、Ｑ＝グルタミン、Ｅ＝グルタミン
酸、Ｇ＝グリシン、Ｈ＝ヒスチジン、Ｉ＝イソロイシ
ン、Ｌ＝ロイシン、Ｋ＝リジン、Ｍ＝メチオニン、Ｆ＝
フェニルアラニン、Ｐ＝プロリン、Ｓ＝セリン、Ｔ＝ト
レオニン、Ｗ＝トリプトファン、Ｙ＝チロシン及びＶ＝
バリン。
【００３７】もしアミノ酸配列をいわゆる三文字表記で
表すならば、以下の配列が得られる： Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｘ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｘ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ （ＸはＣｙｓ又はＳｅｒの意味を有する）。特に好まし
い実施態様では、一つのペプチドにおけるＸの意味は同
じであり、即ちシステインが２回存在するか、セリンが
２回存在する。
表すならば、以下の配列が得られる： Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｘ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｘ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ （ＸはＣｙｓ又はＳｅｒの意味を有する）。特に好まし
い実施態様では、一つのペプチドにおけるＸの意味は同
じであり、即ちシステインが２回存在するか、セリンが
２回存在する。
【００３８】免疫学的に活性なペプチドは、患者又は献
血者の血液中に存在することのあるＨＩＶウイルスに対
する抗体と反応するペプチドを意味するものと理解され
る。したがって、通例、免疫学的に活性なペプチドは、
抗体を生じる少なくとも一種のエピトープを含有してい
る。
血者の血液中に存在することのあるＨＩＶウイルスに対
する抗体と反応するペプチドを意味するものと理解され
る。したがって、通例、免疫学的に活性なペプチドは、
抗体を生じる少なくとも一種のエピトープを含有してい
る。
【００３９】診断に主に関連があるエピトープは、領域
ＸＫＧＫＬＩＸに位置している。本発明によるペプチド
は、このエピトープの右及び／又は左にウイルスＭＶＰ
５１８０の対応配列と相同である他の領域を有してい
る。この領域は、主に、ペプチドを診断試験に用いると
きに重要である。もしペプチドを、例えばＥＬＩＳＡ試
験で見られるように固相に結合するならば、ペプチドが
エピトープの左にアミノ酸配列を有する場合が有利であ
る。もし結合を実施するならば、ペプチドが主エピトー
プの右にＭＶＰ５１８０と相同の配列を有する場合が有
利である。
ＸＫＧＫＬＩＸに位置している。本発明によるペプチド
は、このエピトープの右及び／又は左にウイルスＭＶＰ
５１８０の対応配列と相同である他の領域を有してい
る。この領域は、主に、ペプチドを診断試験に用いると
きに重要である。もしペプチドを、例えばＥＬＩＳＡ試
験で見られるように固相に結合するならば、ペプチドが
エピトープの左にアミノ酸配列を有する場合が有利であ
る。もし結合を実施するならば、ペプチドが主エピトー
プの右にＭＶＰ５１８０と相同の配列を有する場合が有
利である。
【００４０】好ましい実施態様では、本発明のペプチド
の長さは、アミノ酸約２０〜約３０個である。本発明の
範囲内で、以下のペプチドが特に好ましい： ＭＶＰ６０１−６２３： ＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫ
ＬＩＣＹＴＳＶＫＷＮ ＭＶＰ５９１−６１６Ｃ： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱ
ＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣ及び ＭＶＰ５９１−６１６Ｓ： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱ
ＱＲＬＮＬＷＧＳＫＧＫＬＩＳ
の長さは、アミノ酸約２０〜約３０個である。本発明の
範囲内で、以下のペプチドが特に好ましい： ＭＶＰ６０１−６２３： ＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫ
ＬＩＣＹＴＳＶＫＷＮ ＭＶＰ５９１−６１６Ｃ： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱ
ＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣ及び ＭＶＰ５９１−６１６Ｓ： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱ
ＱＲＬＮＬＷＧＳＫＧＫＬＩＳ
【００４１】ＭＶＰ５１８０に相同的なアミノ酸配列の
他に、本発明のペプチドは、ペプチドの一方又は両方の
末端に、特定の機能にとって重要なさらなるアミノ酸を
有することができる。この場合、これらの後者のアミノ
酸は、例えばペプチドを固相に結合させるのを容易にす
るアミノ酸であることができる。もしペプチドを組換え
法で調製する場合、ペプチドは、組換え調製の性質上生
じるアミノ酸も含有できる。
他に、本発明のペプチドは、ペプチドの一方又は両方の
末端に、特定の機能にとって重要なさらなるアミノ酸を
有することができる。この場合、これらの後者のアミノ
酸は、例えばペプチドを固相に結合させるのを容易にす
るアミノ酸であることができる。もしペプチドを組換え
法で調製する場合、ペプチドは、組換え調製の性質上生
じるアミノ酸も含有できる。
【００４２】これらのペプチドは、組換え技術を用いて
調製できるだけでなく、合成することによっても調製で
きる。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ型の固相合成は、適当な調
製経路を示している。この手法及び当該技術分野におい
て公知の他の方法は、文献、例えばＭ．Ｂｏｄａｎｓｋ
ｙ等、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、第２版、１９７６に記載され
ている。
調製できるだけでなく、合成することによっても調製で
きる。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ型の固相合成は、適当な調
製経路を示している。この手法及び当該技術分野におい
て公知の他の方法は、文献、例えばＭ．Ｂｏｄａｎｓｋ
ｙ等、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、第２版、１９７６に記載され
ている。
【００４３】本発明は、また、ペプチドをコードしてい
るＤＮＡ配列に相補である単離ＤＮＡ断片に関する。こ
の種の単離ＤＮＡ断片は、公知のポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）に用いることができる。
るＤＮＡ配列に相補である単離ＤＮＡ断片に関する。こ
の種の単離ＤＮＡ断片は、公知のポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）に用いることができる。
【００４４】以下の実施例で示すように、本発明のペプ
チドは、免疫不全を生じるウイルスに対する抗体を検出
するための試験キットに特に有利に使用できる。この場
合、本発明のペプチドを少なくとも一種用いる。
チドは、免疫不全を生じるウイルスに対する抗体を検出
するための試験キットに特に有利に使用できる。この場
合、本発明のペプチドを少なくとも一種用いる。
【００４５】試験キットはいわゆるウエスタンブロット
を含んでなることができるが、特に好ましい実施態様で
は、いわゆるＥＬＩＳＡ試験又は蛍光抗体検出試験を含
んでなる。この他に、本発明のペプチドは、ワクチン、
特に０サブタイプのＨＩＶウイルスの感染に対するワク
チンの調製にも適する。以下の実施例は本発明の実施態
様を示すが、本発明はこれらには限定されない。
を含んでなることができるが、特に好ましい実施態様で
は、いわゆるＥＬＩＳＡ試験又は蛍光抗体検出試験を含
んでなる。この他に、本発明のペプチドは、ワクチン、
特に０サブタイプのＨＩＶウイルスの感染に対するワク
チンの調製にも適する。以下の実施例は本発明の実施態
様を示すが、本発明はこれらには限定されない。
【００４６】
【実施例】実施例１ 間接イムノアッセイによるセロタイプ０−特
異的抗体のＨＩＶ検出 （ａ） 本発明によるＭＶＰ６０１−６２３ペプチド及
びＨＩＶ−１ペプチドＨＩＶ６０１−６２３の合成 ＭＶＰ５１８０の膜内外タンパク質ｇｐ４１からのＭＶ
Ｐ６０１−６２３（図３参照）： ＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣＹＴＳＶＫＷＮ の合成を、ＢＡＲＡＮＩ，Ｇ．及びＭＥＲＲＩＦＩＥＬ
Ｄ，Ｒ．Ｂ．「ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓ
ｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ」
第２巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、編集者Ｅｒｈ
ａｒｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｊｏｈａｎｎｅｓ Ｍｅｙｅｒｈ
ｏｆｅｒに準じて行う。ＨＰＬＣによる純度の分析値
は、８１％である。
異的抗体のＨＩＶ検出 （ａ） 本発明によるＭＶＰ６０１−６２３ペプチド及
びＨＩＶ−１ペプチドＨＩＶ６０１−６２３の合成 ＭＶＰ５１８０の膜内外タンパク質ｇｐ４１からのＭＶ
Ｐ６０１−６２３（図３参照）： ＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣＹＴＳＶＫＷＮ の合成を、ＢＡＲＡＮＩ，Ｇ．及びＭＥＲＲＩＦＩＥＬ
Ｄ，Ｒ．Ｂ．「ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓ
ｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ」
第２巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、編集者Ｅｒｈ
ａｒｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｊｏｈａｎｎｅｓ Ｍｅｙｅｒｈ
ｏｆｅｒに準じて行う。ＨＰＬＣによる純度の分析値
は、８１％である。
【００４７】 対照ペプチドＨＩＶ６０１−６２３（図３参照） ＤＱＱＬＬＧＩＷＧＣＳＧＫＬＩＣＴＴＡＶＰＷＮ も、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法により合成する。この粗ペ
プチドをＨＰＬＣで精製する。純度は８７％である。
プチドをＨＰＬＣで精製する。純度は８７％である。
【００４８】図３は、組換えプラスミドｐＳＥＭ４１／
３−ＩＩＩにおいて発現するＭＶＰ５１８０ｇｐ４１か
らの配列領域を、ＨＩＶ−１分離株ＡＲＶ−２の対応配
列と比較して示したものである。ＨＩＶと称してあるペ
プチドは、ＨＩＶ−１単離株由来配列である。ＭＶＰと
称してあるペプチドは、ＭＶＰ５１８０由来配列であ
る。配列番号は、Ｒａｔｔｎｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ、３
１３：第２７７〜２８４頁に記載のＨＩＶ−１ ＢＨ１
０ ｅｎｖ配列に関するデータである。
３−ＩＩＩにおいて発現するＭＶＰ５１８０ｇｐ４１か
らの配列領域を、ＨＩＶ−１分離株ＡＲＶ−２の対応配
列と比較して示したものである。ＨＩＶと称してあるペ
プチドは、ＨＩＶ−１単離株由来配列である。ＭＶＰと
称してあるペプチドは、ＭＶＰ５１８０由来配列であ
る。配列番号は、Ｒａｔｔｎｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ、３
１３：第２７７〜２８４頁に記載のＨＩＶ−１ ＢＨ１
０ ｅｎｖ配列に関するデータである。
【００４９】（ｂ） ペプチド溶液の調製及び該ペプチ
ドによるマイクロタイタープレートのコーティング 実施例１ａで得たペプチドＭＶＰ６０１−６２３及びＨ
ＩＶ６０１−６２３を、５０％（ｖ／ｖ）酢酸に６ｍｇ
／ｍｌの濃度に希釈する。
ドによるマイクロタイタープレートのコーティング 実施例１ａで得たペプチドＭＶＰ６０１−６２３及びＨ
ＩＶ６０１−６２３を、５０％（ｖ／ｖ）酢酸に６ｍｇ
／ｍｌの濃度に希釈する。
【００５０】この原液を、０．１０Ｍ重炭酸ナトリウム
（ｐＨ９．６）に、ポリペプチド濃度が１μｇ／ｍｌと
なるように希釈する。
（ｐＨ９．６）に、ポリペプチド濃度が１μｇ／ｍｌと
なるように希釈する。
【００５１】希釈溶液１００μｌを、デンマークのＲｏ
ｓｋｉｌｄｅにあるＮｕｎｃ製Ｂ型マイクロタイタープ
レートの各ウェルに添加する。希釈液を満たした試験プ
レートを２０℃で１８時間インキュベーションした。次
に、溶液を吸引除去し、ウェルを、リン酸緩衝生理食塩
液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）にウシ血清アルブミンを添加
した１０ｇ／リットル溶液３００μｌで３〜４回ゆす
ぎ、その後試験板をシリカゲルにより２０℃で乾燥し
た。
ｓｋｉｌｄｅにあるＮｕｎｃ製Ｂ型マイクロタイタープ
レートの各ウェルに添加する。希釈液を満たした試験プ
レートを２０℃で１８時間インキュベーションした。次
に、溶液を吸引除去し、ウェルを、リン酸緩衝生理食塩
液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）にウシ血清アルブミンを添加
した１０ｇ／リットル溶液３００μｌで３〜４回ゆす
ぎ、その後試験板をシリカゲルにより２０℃で乾燥し
た。
【００５２】（ｃ） ガンマＧ（ＩｇＧ）クラス（ｈ−
ＩｇＧ）ヒト免疫グロブリンに対するペルオキシダーゼ
標識抗体及びその検出に用いるＴＭＢ基質の調製 ｈ−ＩｇＧに対するモノクローナル抗体を、ＫＯＥＨＬ
ＥＲ及びＭＩＬＳＴＥＩＮ（Ｎａｔｕｒｅ２５６、４９
５、１９７５）の方法に準じて調製した。この場合、同
じ抗原特異性を有する異種のモノクローナル抗体は、Ｓ
ＴＡＨＬＩ等、（Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ３２、２９７−３０４、１９８０）
に記載されている方法により同定される。ゲルクロマト
グラフィー及びＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）による透析
により精製後、モノクローナル抗体カットオフ（タンパ
ク質４ｍｇ／ｍｌ）を、ＴＡＮＡＭＯＲＩ等（Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２、１２３−１３１、１９８
３）に準じてＮ−γ−マレイミドブチルオキシスクシン
イミド（ＧＭＢＳ）と反応させた。これと並行して、２
−イミノチオラン塩酸塩（Ｓｉｇｍａ製、カタログ番号
Ｉ ６２５６）を、ＫＩＮＧ等（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１
７、１４９９−１５０６、１９７８）に準じて西洋ワサ
ビペルオキシダーゼ（ＰＯＤ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ製、カタロク番号４１３４７０）と反
応させた。抗体／ＰＯＤ複合体を、ＴＡＮＡＭＯＲＩ等
（上記参照）により記載されているようなＧＭＢＳ／抗
体複合体及びイミノチオラン／ＰＯＤ複合体から調製し
た。
ＩｇＧ）ヒト免疫グロブリンに対するペルオキシダーゼ
標識抗体及びその検出に用いるＴＭＢ基質の調製 ｈ−ＩｇＧに対するモノクローナル抗体を、ＫＯＥＨＬ
ＥＲ及びＭＩＬＳＴＥＩＮ（Ｎａｔｕｒｅ２５６、４９
５、１９７５）の方法に準じて調製した。この場合、同
じ抗原特異性を有する異種のモノクローナル抗体は、Ｓ
ＴＡＨＬＩ等、（Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ３２、２９７−３０４、１９８０）
に記載されている方法により同定される。ゲルクロマト
グラフィー及びＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）による透析
により精製後、モノクローナル抗体カットオフ（タンパ
ク質４ｍｇ／ｍｌ）を、ＴＡＮＡＭＯＲＩ等（Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２、１２３−１３１、１９８
３）に準じてＮ−γ−マレイミドブチルオキシスクシン
イミド（ＧＭＢＳ）と反応させた。これと並行して、２
−イミノチオラン塩酸塩（Ｓｉｇｍａ製、カタログ番号
Ｉ ６２５６）を、ＫＩＮＧ等（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１
７、１４９９−１５０６、１９７８）に準じて西洋ワサ
ビペルオキシダーゼ（ＰＯＤ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ製、カタロク番号４１３４７０）と反
応させた。抗体／ＰＯＤ複合体を、ＴＡＮＡＭＯＲＩ等
（上記参照）により記載されているようなＧＭＢＳ／抗
体複合体及びイミノチオラン／ＰＯＤ複合体から調製し
た。
【００５３】得られた抗ＩｇＧ／ＰＯＤ複合体溶液のタ
ンパク質含量は、３６０μｌ／ｍｌであった。ＰＯＤの
ＩｇＧに対する比は、２．８であった。続いて、この溶
液を、５０ｍｌ／リットルウシ胎児血清（ＦＣＳ、Ｂｉ
ｏｃｈｒｏｍ ＫＧ製、ベルリン）と５ｇ／リットルポ
リオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート
（Ｔｗｅｅｎ２０）とをＰＢＳに溶解して調整した溶液
を用いて希釈して５００ｎｇ／ｍｌＩｇＧ／ＰＯＤと
し、これを抗ＩｇＧ／ＰＯＤ複合体と命名した。ＥＬＩ
ＳＡに使用するために、抗ＩｇＧ／ＰＯＤ複合体を、ト
リス緩衝液（ｐＨ７．４、Ｔｗｅｅｎ２０を０．５％含
有）で１：１００〜１：２０，０００に希釈後、複合体
緩衝液（０．１Ｍ １−アミノ−２−（ヒドロキシメチ
ル）−１，３−プロパンジオール（トリス）、０．１Ｍ
塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２
０、ｐＨ８．４）で一連の１：２６最終希釈液を調製し
た。
ンパク質含量は、３６０μｌ／ｍｌであった。ＰＯＤの
ＩｇＧに対する比は、２．８であった。続いて、この溶
液を、５０ｍｌ／リットルウシ胎児血清（ＦＣＳ、Ｂｉ
ｏｃｈｒｏｍ ＫＧ製、ベルリン）と５ｇ／リットルポ
リオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート
（Ｔｗｅｅｎ２０）とをＰＢＳに溶解して調整した溶液
を用いて希釈して５００ｎｇ／ｍｌＩｇＧ／ＰＯＤと
し、これを抗ＩｇＧ／ＰＯＤ複合体と命名した。ＥＬＩ
ＳＡに使用するために、抗ＩｇＧ／ＰＯＤ複合体を、ト
リス緩衝液（ｐＨ７．４、Ｔｗｅｅｎ２０を０．５％含
有）で１：１００〜１：２０，０００に希釈後、複合体
緩衝液（０．１Ｍ １−アミノ−２−（ヒドロキシメチ
ル）−１，３−プロパンジオール（トリス）、０．１Ｍ
塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２
０、ｐＨ８．４）で一連の１：２６最終希釈液を調製し
た。
【００５４】抗ヒトＩｇＧ／ＰＯＤを検出するために、
以下のようにして調製した二種の原液から調製した過酸
化水素とテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）からなる基
質系、即ち、基質調製液を使用した。
以下のようにして調製した二種の原液から調製した過酸
化水素とテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）からなる基
質系、即ち、基質調製液を使用した。
【００５５】原液１：ＴＭＢジヒドロクロリドを、攪拌
しながら２回蒸留水に溶解して５ｇ／リットル（１６ｍ
ｍｏｌ／リットル）の濃度とし、この溶液を、５Ｎ塩酸
を用いてｐＨ１．５に調整した。この溶液に、攪拌しな
がらペニシリンＧを添加して、最終濃度２００ｍｇ／リ
ットル（０．５６ｍｍｏｌ／リットル）とした。
しながら２回蒸留水に溶解して５ｇ／リットル（１６ｍ
ｍｏｌ／リットル）の濃度とし、この溶液を、５Ｎ塩酸
を用いてｐＨ１．５に調整した。この溶液に、攪拌しな
がらペニシリンＧを添加して、最終濃度２００ｍｇ／リ
ットル（０．５６ｍｍｏｌ／リットル）とした。
【００５６】原液２：氷酢酸１．４ｍｌと、１Ｎ Ｎａ
ＯＨ１．５ｍｌと、Ｈ２Ｏ２２５０ｍｇ（３ｍｍｏｌ）
とを尿素／過酸化水素付加物として、２回蒸留水９００
ｍｌに添加した。これらの物質を完全に溶解した後、２
回蒸留水を用いて溶液を１リットルとした。
ＯＨ１．５ｍｌと、Ｈ２Ｏ２２５０ｍｇ（３ｍｍｏｌ）
とを尿素／過酸化水素付加物として、２回蒸留水９００
ｍｌに添加した。これらの物質を完全に溶解した後、２
回蒸留水を用いて溶液を１リットルとした。
【００５７】ＴＭＢ基質の調製：原液１の１容積部と原
液２の１０容積部とを混合した。
液２の１０容積部とを混合した。
【００５８】（ｄ） 本発明ペプチドを用いたＥＬＩＳ
ＡにおけるＭＶＰ５１８０に対する免疫グロブリンＧク
ラスのヒト抗体の測定 血清又は血漿５０μｌを、実施例１ｂに準じて調製した
コーティングマイクロタイタープレートのウェルに入れ
てある０．３Ｍ Ｔｒｉｓ、０．３Ｍ ＮａＣｌ、２０
％ウシ血清及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する試料
緩衝液５０μｌに添加した。プレートを３７℃で３０分
間インキュベーションした後、試験溶液を吸引除去し、
ウェルを、Ｔｗｅｅｎ２０のＰＢＳ１ｇ／リットル溶液
を含有する洗浄緩衝液で各々５回洗浄した。この後、複
合体（実施例１ｃに準じて調製）１００μｌを、各ウェ
ルに添加した。この際、Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．４、
０．５％Ｔｗｅｅｎ２０）で１：３０００に予め希釈
し、複合体緩衝液で１：２６に最終希釈することが好ま
しい。プレートを３７℃で３０分間インキュベーション
した後、ウェルの内容物を吸引除去し、ウェルをもう一
度各々５回洗浄した。続いて、各ウェルにＴＭＢ基質調
製液１００μｌを添加し、プレートを２０〜２２℃で３
０分間インキュベーションし、次に、１規定硫酸を１０
０μｌ添加することにより反応を停止した。着色溶液の
吸光度を、ＰＢＳをブランク値として波長４５０ｎｍ
（Ｅ４５０）で測定した。
ＡにおけるＭＶＰ５１８０に対する免疫グロブリンＧク
ラスのヒト抗体の測定 血清又は血漿５０μｌを、実施例１ｂに準じて調製した
コーティングマイクロタイタープレートのウェルに入れ
てある０．３Ｍ Ｔｒｉｓ、０．３Ｍ ＮａＣｌ、２０
％ウシ血清及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する試料
緩衝液５０μｌに添加した。プレートを３７℃で３０分
間インキュベーションした後、試験溶液を吸引除去し、
ウェルを、Ｔｗｅｅｎ２０のＰＢＳ１ｇ／リットル溶液
を含有する洗浄緩衝液で各々５回洗浄した。この後、複
合体（実施例１ｃに準じて調製）１００μｌを、各ウェ
ルに添加した。この際、Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．４、
０．５％Ｔｗｅｅｎ２０）で１：３０００に予め希釈
し、複合体緩衝液で１：２６に最終希釈することが好ま
しい。プレートを３７℃で３０分間インキュベーション
した後、ウェルの内容物を吸引除去し、ウェルをもう一
度各々５回洗浄した。続いて、各ウェルにＴＭＢ基質調
製液１００μｌを添加し、プレートを２０〜２２℃で３
０分間インキュベーションし、次に、１規定硫酸を１０
０μｌ添加することにより反応を停止した。着色溶液の
吸光度を、ＰＢＳをブランク値として波長４５０ｎｍ
（Ｅ４５０）で測定した。
【００５９】表２に、ウエスタンブロット抗ＨＩＶ−１
陰性及びウエスタンブロット抗ＨＩＶ−１陽性試料（全
てがカメルーン出身の血液提供者からのもの）を、一方
は合成ペプチドＭＶＰ６０１−６２３をコーティングし
たマイクロタイタープレートで、他方に合成ペプチドＨ
ＩＶ６０１−６２３をコーティングしたマイクロタイタ
ープレートで比較した。
陰性及びウエスタンブロット抗ＨＩＶ−１陽性試料（全
てがカメルーン出身の血液提供者からのもの）を、一方
は合成ペプチドＭＶＰ６０１−６２３をコーティングし
たマイクロタイタープレートで、他方に合成ペプチドＨ
ＩＶ６０１−６２３をコーティングしたマイクロタイタ
ープレートで比較した。
【００６０】 表 ２ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ６０１−６２３ ＨＩＶ６０１−６２３ （本発明試薬） （対照） 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．１ ０．２ １６７５０ ０．１ ０．１ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ＞６ ０．７ １７０４１ ０．８ ３．０ １６７１７ ＞６ ＞６ １６７４８ ＞６ ＞６ カットオフ ０．４００ ０．４００
【００６１】表２から、試料のあるものは（１６７１７
及び１６７４８）は両方のアッセイでよく反応するが、
他のものは（１７０３８）は、本発明のＭＶＰペプチド
とのみ反応することが分かる。
及び１６７４８）は両方のアッセイでよく反応するが、
他のものは（１７０３８）は、本発明のＭＶＰペプチド
とのみ反応することが分かる。
【００６２】実施例２ イムノメトリックイムノアッセ
イによるセロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体の検出 （ａ） ＭＶＰ６０１−６２３ペプチド／ＰＯＤ複合体
の調製 本発明（実施例１ａ）に準じて調製したペプチドＭＶＰ
６０１−６２３ １０ｍｇを、氷酢酸／水（５０：５
０、ｖ／ｖ）１ｍｌに溶解する。この溶液を５Ｎ水酸化
ナトリウム溶液で中和後、１０倍モル過剰のＧＭＢＳを
添加し、得られた混合物を、室温で１時間インキュベー
ションする。未反応ＧＭＢＳを、０．１Ｍ
イによるセロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体の検出 （ａ） ＭＶＰ６０１−６２３ペプチド／ＰＯＤ複合体
の調製 本発明（実施例１ａ）に準じて調製したペプチドＭＶＰ
６０１−６２３ １０ｍｇを、氷酢酸／水（５０：５
０、ｖ／ｖ）１ｍｌに溶解する。この溶液を５Ｎ水酸化
ナトリウム溶液で中和後、１０倍モル過剰のＧＭＢＳを
添加し、得られた混合物を、室温で１時間インキュベー
ションする。未反応ＧＭＢＳを、０．１Ｍ
【００６３】リン酸ナトリウム／５ｍｍｏｌ／リットル
ニトリロ三酢酸、ｐＨ６．０を用いたゲル濾過（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５）により濾去する。西洋ワサビ
ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）１０ｍｇを、１００倍モル
過剰の２−イミノチオランとともに、１０ｍｍｏｌ／リ
ットルリン酸ナトリウム、１００ｍｍｏｌ／リットルＮ
ａＣｌ、ｐＨ８．０の５ｍｌに添加して室温で１時間イ
ンキュベーションする。次に、遊離変性剤を、０．１Ｍ
リン酸ナトリウム／５ｍｍｏｌ／リットルＮＴＡ、ｐ
Ｈ６．０を用いて、ゲルクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−２５）により除去する。２種の溶出液
（ＳＨ−活性化ペルオキシダーゼとマレイミド変性ＨＩ
Ｖ−１ペプチド）を合わせ、室温で一晩インキュベーシ
ョンする。反応を０．１Ｍ Ｎ−エチルマレイミド１／
１９容積を用いて停止した後、未反応ＨＩＶ−１ペプチ
ドを、ゲルクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ
−２５）により複合体から除去する。溶液を濃縮後（２
ｍｇ／ｍｌ）、ペプチド／ペルオキシダーゼ複合体を、
−２０℃で保存する。
ニトリロ三酢酸、ｐＨ６．０を用いたゲル濾過（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５）により濾去する。西洋ワサビ
ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）１０ｍｇを、１００倍モル
過剰の２−イミノチオランとともに、１０ｍｍｏｌ／リ
ットルリン酸ナトリウム、１００ｍｍｏｌ／リットルＮ
ａＣｌ、ｐＨ８．０の５ｍｌに添加して室温で１時間イ
ンキュベーションする。次に、遊離変性剤を、０．１Ｍ
リン酸ナトリウム／５ｍｍｏｌ／リットルＮＴＡ、ｐ
Ｈ６．０を用いて、ゲルクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−２５）により除去する。２種の溶出液
（ＳＨ−活性化ペルオキシダーゼとマレイミド変性ＨＩ
Ｖ−１ペプチド）を合わせ、室温で一晩インキュベーシ
ョンする。反応を０．１Ｍ Ｎ−エチルマレイミド１／
１９容積を用いて停止した後、未反応ＨＩＶ−１ペプチ
ドを、ゲルクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ
−２５）により複合体から除去する。溶液を濃縮後（２
ｍｇ／ｍｌ）、ペプチド／ペルオキシダーゼ複合体を、
−２０℃で保存する。
【００６４】（ｂ） イムノメトリックイムノアッセイ
による抗ＭＶＰ抗体の検出 酵素イムノアッセイによる抗ＨＩＶ抗体の検出を、以下
のようにして実施する。試料緩衝液（０．３Ｍ Ｔｒｉ
ｓ／ＨＣｌ、１％アルブミン、２％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐ
Ｈ７．２）２５μｌを、ＨＩＶペプチドをコーティング
した試験プレートのウェルで、ヒト血清１００μｌとと
もに、３７℃で３０分間インキュベーションする。ウェ
ルを、５０ｍｍｏｌ／リットルＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅ
ｅｎ２０で４回洗浄後、実施例１ｂに準じて調製したＨ
ＩＶペプチド／ペルオキシダーゼ複合体（０．１Ｍ Ｔ
ｒｉｓ／ＨＣｌ、１％アルブミン、２％Ｐｌｕｒｏｎｉ
ｃＦ６４、ｐＨ８．１で１：１０００に希釈）１００μ
ｌを、ピペットで添加する。
による抗ＭＶＰ抗体の検出 酵素イムノアッセイによる抗ＨＩＶ抗体の検出を、以下
のようにして実施する。試料緩衝液（０．３Ｍ Ｔｒｉ
ｓ／ＨＣｌ、１％アルブミン、２％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐ
Ｈ７．２）２５μｌを、ＨＩＶペプチドをコーティング
した試験プレートのウェルで、ヒト血清１００μｌとと
もに、３７℃で３０分間インキュベーションする。ウェ
ルを、５０ｍｍｏｌ／リットルＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅ
ｅｎ２０で４回洗浄後、実施例１ｂに準じて調製したＨ
ＩＶペプチド／ペルオキシダーゼ複合体（０．１Ｍ Ｔ
ｒｉｓ／ＨＣｌ、１％アルブミン、２％Ｐｌｕｒｏｎｉ
ｃＦ６４、ｐＨ８．１で１：１０００に希釈）１００μ
ｌを、ピペットで添加する。
【００６５】インキュベーション（＋３７℃）を３０分
間行った後、さらに４回洗浄工程を行ってインキュベー
ションを終了させる。結合ＨＩＶ−１特異的抗体分子数
と直接相関のある結合ペルオキシダーゼ活性を、Ｈ２Ｏ
２／テトラメチルベンジジン（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｒｋｅ
ＡＧ製、ドイツ、Ｍａｒｂｕｒｇ）を添加して測定す
る。
間行った後、さらに４回洗浄工程を行ってインキュベー
ションを終了させる。結合ＨＩＶ−１特異的抗体分子数
と直接相関のある結合ペルオキシダーゼ活性を、Ｈ２Ｏ
２／テトラメチルベンジジン（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｒｋｅ
ＡＧ製、ドイツ、Ｍａｒｂｕｒｇ）を添加して測定す
る。
【００６６】（ｃ） 本発明試薬の使用方法 ウエスタンブロットで特徴付けた抗ＨＩＶ陰性及び抗Ｈ
ＩＶ陽性試料（実施例１参照）を、実施例２ｂに準じて
イムノアッセイで試験する。この調査の結果（シグナル
／カットオフ）を、第３世代の市販抗ＨＩＶアッセイ
（イムノメトリック試験法）による試験との結果を比較
して表３に示す。
ＩＶ陽性試料（実施例１参照）を、実施例２ｂに準じて
イムノアッセイで試験する。この調査の結果（シグナル
／カットオフ）を、第３世代の市販抗ＨＩＶアッセイ
（イムノメトリック試験法）による試験との結果を比較
して表３に示す。
【００６７】 表 ３ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ シグナル／カットオフ による ＭＶＰ免疫 抗ＨＩＶ（第３世代） 試料状態 アッセイ （本発明試薬） （対照） 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．１ ０．１ １６７５０ ０．１ ０．１ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ＞１６．６ ０．８ １７０４１ ０．６ ９．５ １６７１７ ＞１６．６ １４．１ １６７４８ ＞１６．６ ９．６ カットオフ ０．１５０ ０．１４１
【００６８】この比較から、同じアッセイ試験法を使用
したときでも、とりわけ試料１７０３８及び１７０４１
の場合において、異なる抗原が異なって認識されること
が分かる。本発明の抗原は、試料１７０３８にＨＩＶ抗
体が存在することを極めて明瞭に示しているのに対し
て、市販の対照アッセイでは、反応が不十分である。
したときでも、とりわけ試料１７０３８及び１７０４１
の場合において、異なる抗原が異なって認識されること
が分かる。本発明の抗原は、試料１７０３８にＨＩＶ抗
体が存在することを極めて明瞭に示しているのに対し
て、市販の対照アッセイでは、反応が不十分である。
【００６９】実施例３ イムノアッセイによるセロタイ
プ０−特異的ＨＩＶ抗体の選択的検出 （ａ） 本発明ペプチド及びそれらの対照ペプチドの合
成 以下の４種のペプチドを実施例１ａの方法により合成す
る。 ＲＩＬＡＶＥＲＹＬＫＤＱＱＬＬＧＩＷＧＣＳＧＫＬＩＣ ＨＩＶ５９１−６１６Ｃ 対照ペプチド ＲＩＬＡＶＥＲＹＬＫＤＱＱＬＬＧＩＷＧＳＳＧＫＬＩＳ ＨＩＶ５９１−６１６Ｓ 対照ペプチド ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣ ＭＶＰ５９１−６１６Ｃ 本発明ペプチド ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＳＫＧＫＬＩＳ ＭＶＰ５９１−６１６Ｓ 本発明ペプチド （図３参照） ４種の粗ペプチドをＨＰＬＣで精製すると、純度が８１
〜８９％となる。
プ０−特異的ＨＩＶ抗体の選択的検出 （ａ） 本発明ペプチド及びそれらの対照ペプチドの合
成 以下の４種のペプチドを実施例１ａの方法により合成す
る。 ＲＩＬＡＶＥＲＹＬＫＤＱＱＬＬＧＩＷＧＣＳＧＫＬＩＣ ＨＩＶ５９１−６１６Ｃ 対照ペプチド ＲＩＬＡＶＥＲＹＬＫＤＱＱＬＬＧＩＷＧＳＳＧＫＬＩＳ ＨＩＶ５９１−６１６Ｓ 対照ペプチド ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣ ＭＶＰ５９１−６１６Ｃ 本発明ペプチド ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＳＫＧＫＬＩＳ ＭＶＰ５９１−６１６Ｓ 本発明ペプチド （図３参照） ４種の粗ペプチドをＨＰＬＣで精製すると、純度が８１
〜８９％となる。
【００７０】（ｂ） コーティング及びアッセイの実施 実施例３ａで調製し精製した４種のペプチドを、実施例
１ｂに準じて溶解し、マイクロタイタープレートにコー
ティングする。アッセイを、実施例１ｄに準じて実施す
る。
１ｂに準じて溶解し、マイクロタイタープレートにコー
ティングする。アッセイを、実施例１ｄに準じて実施す
る。
【００７１】（ｃ） 本発明試薬の使用 実施例１及び２で得られた試料を、本発明ペプチドＭＶ
Ｐ５９１−６１６Ｃ及びＭＶＰ５９１−６１６Ｓ並びに
対照ペプチドの両方について、実施例３ｂに準じて間接
抗体試験する。これらの調査結果を、表４に示す。
Ｐ５９１−６１６Ｃ及びＭＶＰ５９１−６１６Ｓ並びに
対照ペプチドの両方について、実施例３ｂに準じて間接
抗体試験する。これらの調査結果を、表４に示す。
【００７２】 表 ４ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ による ＭＶＰ５９１−６１６ ＭＶＰ５９１−６１６ 状態 Ｃ Ｓ 本発明ペプチド 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．６ ０．６ １６７５０ ０．４ ０．５ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ １４．２ ５．６ １７０４１ ０．３ ０．３ １６７１７ ＞１６．６ ０．７ １６７４８ １６．２ ０．７ カットオフ ０．１５０ ０．１５０ 表４（続き） ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ による ＨＩＶ５９１−６１６ ＨＩＶ５９１−６１６ 状態 Ｃ Ｓ 対照 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．５ ０．５ １６７５０ ０．１ ０．８ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ５．３ ０．１ １７０４１ ５．１ ２．８ １６７１７ ＞８．３ ＞８．３ １６７４８ ＞８．３ ＞８．３ カットオフ ０．３００ ０．３００
【００７３】表４から分かるように、ＭＶＰ５９１−６
１６Ｓアッセイのシグナル／カットオフ値をＨＩＶ５９
１−６１６Ｓアッセイのシグナル／カットオフ値と比較
することにより、選択的且つ特定の方法で、セロタイプ
０−特異的ＨＩＶ抗体と「非」セロタイプ０−特異的Ｈ
ＩＶ抗体との間の識別が可能となる。
１６Ｓアッセイのシグナル／カットオフ値をＨＩＶ５９
１−６１６Ｓアッセイのシグナル／カットオフ値と比較
することにより、選択的且つ特定の方法で、セロタイプ
０−特異的ＨＩＶ抗体と「非」セロタイプ０−特異的Ｈ
ＩＶ抗体との間の識別が可能となる。
【００７４】実施例４ イムノアッセイによるセロタイ
プＡ−Ｅ及びセロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体の同時検
出 （ａ） ペプチド溶液の調製及び該溶液によるマイクロ
タイタープレートのコーティング 実施例１ａに準じて調製したペプチドＭＶＰ６０１−６
２３及びＨＩＶ６０１−６２３を、５０％（ｖ／ｖ）酢
酸に溶解して濃度６ｍｇ／ｍｌとする。原液を異なる容
積割合で混合し、ペプチドの総濃度が０．１２５〜２μ
ｇ／ｍｌとなるように０．１０Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ
９．６）で希釈する。実施例１ｂと同様に、これらの溶
液をマイクロタイタープレートに添加し、抗原をコーテ
ィングする。
プＡ−Ｅ及びセロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体の同時検
出 （ａ） ペプチド溶液の調製及び該溶液によるマイクロ
タイタープレートのコーティング 実施例１ａに準じて調製したペプチドＭＶＰ６０１−６
２３及びＨＩＶ６０１−６２３を、５０％（ｖ／ｖ）酢
酸に溶解して濃度６ｍｇ／ｍｌとする。原液を異なる容
積割合で混合し、ペプチドの総濃度が０．１２５〜２μ
ｇ／ｍｌとなるように０．１０Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ
９．６）で希釈する。実施例１ｂと同様に、これらの溶
液をマイクロタイタープレートに添加し、抗原をコーテ
ィングする。
【００７５】（ｂ） イムノアッセイの実施とその結果 実施例１Ｃ及び１ｄに準じてイムノアッセイを実施し
た。得られた結果を表５にまとめて示す。 表 ５ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ６０１−６２３ ＨＩＶ６０１−６２３ 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．２ ０．２ １６７５０ ０．５ ０．２ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ＞１０ ０．４ １７０４１ ０．５ ２．５ １６７１７ ＞１０ ＞１０ １６７４８ ＞１０ ＞７ カットオフ ０．２５０ ０．２５０ 表 ５（続き） ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ６０１−６２３及びＨＩＶ６０１−６２３ （本発明） 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．２ １６７５０ ０．２ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ＞１０ １７０４１ ４．７ １６７１７ ＞１０ １６７４８ ＞１０ カットオフ ０．２５０
た。得られた結果を表５にまとめて示す。 表 ５ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ６０１−６２３ ＨＩＶ６０１−６２３ 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．２ ０．２ １６７５０ ０．５ ０．２ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ＞１０ ０．４ １７０４１ ０．５ ２．５ １６７１７ ＞１０ ＞１０ １６７４８ ＞１０ ＞７ カットオフ ０．２５０ ０．２５０ 表 ５（続き） ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ６０１−６２３及びＨＩＶ６０１−６２３ （本発明） 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．２ １６７５０ ０．２ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ＞１０ １７０４１ ４．７ １６７１７ ＞１０ １６７４８ ＞１０ カットオフ ０．２５０
【００７６】実施例５： 組換え抗原を用いたイムノア
ッセイによるセロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体の検出 （ａ） プラスミドｐＳＥＭ４１／３−ＩＩＩの構築 ＭＶＰ５１８０／９１ ｇｐ４１領域の血清学的重要性
を調査するために、この構築を行った。これを行うため
に、ＭＶＰ５１８０ ｇｐ４１の成分領域を含む組換え
発現クローンを構築した。このようなプラスミドの構築
法は、公知である（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃ
ｈ、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第
２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９）。
ッセイによるセロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体の検出 （ａ） プラスミドｐＳＥＭ４１／３−ＩＩＩの構築 ＭＶＰ５１８０／９１ ｇｐ４１領域の血清学的重要性
を調査するために、この構築を行った。これを行うため
に、ＭＶＰ５１８０ ｇｐ４１の成分領域を含む組換え
発現クローンを構築した。このようなプラスミドの構築
法は、公知である（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃ
ｈ、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第
２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９）。
【００７７】ｇｐ４１から適当なＤＮＡ断片を、ＰＣＲ
（ポリメラーゼ連鎖反応、ＵＳ−Ａ−４，６８３，１９
５及び４，６８３，２０２）により得た。ＰＣＲ用に、
以下のプライマーを用いた： １．Ａ：５´ＴＧＴＧＴＧＧＴＡＣＣＧＣＡＧＣＧＧＣ
ＡＡＣＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧ ３´；及び １．Ｂ：５´ＧＴＧＴＧＴＣＴＡＧＴＴＴＡＧＴＴＡＴ
ＧＴＣＡＡＡＣＣＡＡＴＴＣ ３´
（ポリメラーゼ連鎖反応、ＵＳ−Ａ−４，６８３，１９
５及び４，６８３，２０２）により得た。ＰＣＲ用に、
以下のプライマーを用いた： １．Ａ：５´ＴＧＴＧＴＧＧＴＡＣＣＧＣＡＧＣＧＧＣ
ＡＡＣＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧ ３´；及び １．Ｂ：５´ＧＴＧＴＧＴＣＴＡＧＴＴＴＡＧＴＴＡＴ
ＧＴＣＡＡＡＣＣＡＡＴＴＣ ３´
【００７８】プラスミドｐＳＰ４ＤＮＡ０．１μｇを鋳
型（ＤＥ４３１８１８４）として用いた。ＰＣＲ条件
は、以下の通りであった。 １．初期変性：９４℃で３分 ２．増幅：９４℃で１．５分、５６℃で１分、及び７２
℃で１分 を３０回繰り返した。ヌクレオチドと緩衝液の異なる濃
度のものを使用し、サプライヤー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌ
ｍｅｒ社製）の使用説明書に準じてＴａｑポリメラーゼ
を用いた。
型（ＤＥ４３１８１８４）として用いた。ＰＣＲ条件
は、以下の通りであった。 １．初期変性：９４℃で３分 ２．増幅：９４℃で１．５分、５６℃で１分、及び７２
℃で１分 を３０回繰り返した。ヌクレオチドと緩衝液の異なる濃
度のものを使用し、サプライヤー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌ
ｍｅｒ社製）の使用説明書に準じてＴａｑポリメラーゼ
を用いた。
【００７９】続いて、増幅したＤＮＡを、制限エンドヌ
クレアーゼＡｓｐ７１８及びＸｂａＩにより、３７℃で
１時間消化し、ＤＮＡを１％アガロースゲルでカットオ
フ化した。サイズ４４０ｂｐのＤＮＡバンドをゲルから
切り取り、そのＤＮＡを電気溶出し、フェノールで抽出
し、エタノール沈殿し、乾燥し、Ｈ２Ｏ５μｌに再懸濁
した。
クレアーゼＡｓｐ７１８及びＸｂａＩにより、３７℃で
１時間消化し、ＤＮＡを１％アガロースゲルでカットオ
フ化した。サイズ４４０ｂｐのＤＮＡバンドをゲルから
切り取り、そのＤＮＡを電気溶出し、フェノールで抽出
し、エタノール沈殿し、乾燥し、Ｈ２Ｏ５μｌに再懸濁
した。
【００８０】溶解増幅ＤＮＡ０．５μｇを、Ａｓｐ７１
８／ＸｂａＩ消化発現ベクターｐＳＥＭ３ ０．５μｇ
に連結（Ｋｎａｐｐ等による、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ８、２８０−２８１［１９９０］）（ラムダＴ４リ
ガーゼ２Ｗｅｉｓｓ単位、１５℃で１２時間）し、Ｅ．
ｃｏｌｉ ＸＬ１Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ製）
に導入して形質転換した。組換えプラスミドｐＳＥＭ４
１／３−ＩＩＩを含むこの操作で得られたクローンは、
Ｅ．ｃｏｌｉ β−ガラクトシダーゼ断片により、融合
タンパク質であるＭＶＰ５１８０／ｇｐ４１特異的ペプ
チドを発現する。発現されたＭＶＰ５１８０配列を、図
３に示す。
８／ＸｂａＩ消化発現ベクターｐＳＥＭ３ ０．５μｇ
に連結（Ｋｎａｐｐ等による、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ８、２８０−２８１［１９９０］）（ラムダＴ４リ
ガーゼ２Ｗｅｉｓｓ単位、１５℃で１２時間）し、Ｅ．
ｃｏｌｉ ＸＬ１Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ製）
に導入して形質転換した。組換えプラスミドｐＳＥＭ４
１／３−ＩＩＩを含むこの操作で得られたクローンは、
Ｅ．ｃｏｌｉ β−ガラクトシダーゼ断片により、融合
タンパク質であるＭＶＰ５１８０／ｇｐ４１特異的ペプ
チドを発現する。発現されたＭＶＰ５１８０配列を、図
３に示す。
【００８１】（ｂ） ＭＶＰ４１／３−ＩＩＩ融合タン
パク質の発現及び精製 プラスミドｐＳＥＭ４１／３−ＩＩＩ（実施例５ａに準
じて調製）で形質転換した大腸菌ＸＬ１ブルーを、Ｌｕ
ｒｉａブロス倍地で培養し、吸光度０．５で１ｍＭイソ
プロピルチオガラクトシドで誘発させた。３時間後、細
胞を遠心分離し、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、
１０ｍＭＭｇＣｌ２、ｐＨ７．５で洗浄し、５０００×
ｇで１０分間遠心分離後同じ緩衝液に再懸濁した。ＲＮ
ａｓｅ及びＤＮａｓｅを添加後、細胞懸濁液を、高圧ホ
モジェナイザーを用いて１０００バール（ｂａｒ）で破
砕し、得られたホモジェネートを、遠心分離した（２０
分間、８０，０００×ｇ、４℃）。沈査には封入体が含
まれており、これを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ
８．０及び０．５％デオキシコール酸塩に再懸濁し、再
び遠心分離した（２０分間、１００，０００×ｇ、４
℃）。得られた沈査を３Ｍ尿素、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ、０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオラ
イド（ＰＭＳＦ）に再懸濁し、また遠心分離した（２０
分間、１００，０００×ｇ、４℃）。
パク質の発現及び精製 プラスミドｐＳＥＭ４１／３−ＩＩＩ（実施例５ａに準
じて調製）で形質転換した大腸菌ＸＬ１ブルーを、Ｌｕ
ｒｉａブロス倍地で培養し、吸光度０．５で１ｍＭイソ
プロピルチオガラクトシドで誘発させた。３時間後、細
胞を遠心分離し、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、
１０ｍＭＭｇＣｌ２、ｐＨ７．５で洗浄し、５０００×
ｇで１０分間遠心分離後同じ緩衝液に再懸濁した。ＲＮ
ａｓｅ及びＤＮａｓｅを添加後、細胞懸濁液を、高圧ホ
モジェナイザーを用いて１０００バール（ｂａｒ）で破
砕し、得られたホモジェネートを、遠心分離した（２０
分間、８０，０００×ｇ、４℃）。沈査には封入体が含
まれており、これを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ
８．０及び０．５％デオキシコール酸塩に再懸濁し、再
び遠心分離した（２０分間、１００，０００×ｇ、４
℃）。得られた沈査を３Ｍ尿素、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ、０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオラ
イド（ＰＭＳＦ）に再懸濁し、また遠心分離した（２０
分間、１００，０００×ｇ、４℃）。
【００８２】続いて、２回洗浄した上記沈査を、５Ｍグ
アニジンＨＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭエ
チレンジアミンテトラアセテート（ＥＤＴＡ）、０．５
ｍＭＰＭＳＦ及び１００ｍＭジチオスレイトール中で１
時間インキュベーションした。遠心分離（２０分間、１
００，０００×ｇ、４℃）した後、可溶化ＭＶＰ４１／
３−ＩＩＩタンパク質を含有する上清を、５Ｍグアニジ
ンＨＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴ
Ａ、ｐＨ８．０を用いて、ＴＳＫ−ＨＷ−５５Ｓ（Ｍｅ
ｒｃｋ製、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）ゲル濾過クロマトグラ
フィーにより精製した。生成物含有カットオフを電気泳
動で同定し、混合し、再緩衝することにより５Ｍ尿素、
１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ
８．０に移した。
アニジンＨＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭエ
チレンジアミンテトラアセテート（ＥＤＴＡ）、０．５
ｍＭＰＭＳＦ及び１００ｍＭジチオスレイトール中で１
時間インキュベーションした。遠心分離（２０分間、１
００，０００×ｇ、４℃）した後、可溶化ＭＶＰ４１／
３−ＩＩＩタンパク質を含有する上清を、５Ｍグアニジ
ンＨＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴ
Ａ、ｐＨ８．０を用いて、ＴＳＫ−ＨＷ−５５Ｓ（Ｍｅ
ｒｃｋ製、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）ゲル濾過クロマトグラ
フィーにより精製した。生成物含有カットオフを電気泳
動で同定し、混合し、再緩衝することにより５Ｍ尿素、
１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ
８．０に移した。
【００８３】（ｃ） イムノアッセイによるセロタイプ
０−特異的ＨＩＶ抗体の検出 実施例５ｂで精製した本発明による組換え抗原ＭＶＰ４
１／３−ＩＩＩを０．１Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．
６）で希釈して、タンパク質濃度を０．５μｇ／ｍｌと
する。抗原を実施例１ｂに記載の方法でコーティング
し、このように準備したアッセイを、実施例１ｄと同様
にして実施する。
０−特異的ＨＩＶ抗体の検出 実施例５ｂで精製した本発明による組換え抗原ＭＶＰ４
１／３−ＩＩＩを０．１Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．
６）で希釈して、タンパク質濃度を０．５μｇ／ｍｌと
する。抗原を実施例１ｂに記載の方法でコーティング
し、このように準備したアッセイを、実施例１ｄと同様
にして実施する。
【００８４】（ｄ） 組換え抗原に関するイムノアッセ
イの結果 実施例５ｃに準じて調査した試料についての結果を、表
６にまとめて示す。 表 ６ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ ４１／３−ＩＩＩ （本発明試薬） 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．６ １６７５０ ０．５ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ４．２ １７０４１ ２．１ １６７１７ ３．２ １６７４８ ３．８ カットオフ ０．５００
イの結果 実施例５ｃに準じて調査した試料についての結果を、表
６にまとめて示す。 表 ６ ウエスタンブロット 試料番号 シグナル／カットオフ による状態 ＭＶＰ ４１／３−ＩＩＩ （本発明試薬） 抗ＨＩＶ陰性 １６７４９ ０．６ １６７５０ ０．５ 抗ＨＩＶ陽性 １７０３８ ４．２ １７０４１ ２．１ １６７１７ ３．２ １６７４８ ３．８ カットオフ ０．５００
【００８５】これらの結果から、本発明の領域を含むＭ
ＶＰ５１８０／ｇｐ４１由来の組換えタンパク質は、セ
ロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体及び「非」セロタイプ０
−特異的ＨＩＶ抗体の両方を検出するのに極めて適して
いる抗原としても使用できる。
ＶＰ５１８０／ｇｐ４１由来の組換えタンパク質は、セ
ロタイプ０−特異的ＨＩＶ抗体及び「非」セロタイプ０
−特異的ＨＩＶ抗体の両方を検出するのに極めて適して
いる抗原としても使用できる。
【００８６】
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：４８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Val Trp Gly Ile Arg Gln Leu Arg Ala Arg Leu Gln Ala Leu Glu Thr 1 5 10 15 Leu Ile Gln Asn Gln Gln Arg Leu Asn Leu Trp Gly Xaa Lys Gly Lys 20 25 30 Leu Ile Xaa Tyr Thr Ser Val Lys Trp Asn Thr Ser Trp Ser Gly Arg 35 40 45
【００８７】配列番号：２ 配列の長さ：３２ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Arg Leu Gln Ala Leu Glu Thr Leu Ile Gln Asn Gln Gln Arg Leu Asn 1 5 10 15 Leu Trp Gly Xaa Lys Gly Lys Leu Ile Xaa Tyr Thr Ser Val Lys Trp 20 25 30 Asn
【００８８】配列番号：３ 配列の長さ：２３ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Asn Gln Gln Arg Leu Asn Leu Trp Gly Cys Lys Gly Lys Leu Ile Cys 1 5 10 15 Tyr Thr Ser Val Lys Trp Asn 20
【００８９】配列番号：４ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Arg Leu Gln Ala Leu Glu Thr Leu Ile Gln Asn Gln Gln Arg Leu Asn 1 5 10 15 Leu Trp Gly Cys Lys Gly Lys Leu Ile Cys 20 25
【００９０】配列番号：５ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Arg Leu Gln Ala Leu Glu Thr Leu Ile Gln Asn Gln Gln Arg Leu Asn 1 5 10 15 Leu Trp Gly Ser Lys Gly Lys Leu Ile Ser 15 20
【００９１】配列番号：６ 配列の長さ：２３ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Asp Gln Gln Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile Cys 1 5 10 15 Thr Thr Ala Val Pro Trp Asn 20
【００９２】配列番号：７ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Arg Ile Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly 1 5 10 15 Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile Cys 20 25
【００９３】配列番号：８ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：不明 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Arg Ile Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly 1 5 10 15 Ile Trp Gly Ser Ser Gly Lys Leu Ile Ser 20 25
【００９４】配列番号：９ 配列の長さ：３２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：不明 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 TGTGTGGTAC CGCAGCGGCA ACAGCGCTGA CG 32
【００９５】配列番号：１０ 配列の長さ：３２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：不明 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 GTGTGTCTAG TTTAGTTATG TCAAACCAAT TC 32
【図１】ＨＩＶ型レトロウィルスのゲノム配列を示した
図である。
図である。
【図２】ウィルスの抗原／抗体反応による吸光度（Ｅ４
９０ｎｍ）を逆転写酵素の活性に対してプロットした図
である。
９０ｎｍ）を逆転写酵素の活性に対してプロットした図
である。
【図３】組み換えプラスミドｐＳＥＭ４１／３−III に
おいて発現するＭＶＰ５１８０のタンパク質ｇｐ４１の
アミノ酸配列をＨＩＶ単離株ＡＲＶ−２の対応配列と比
較して示した図である。
おいて発現するＭＶＰ５１８０のタンパク質ｇｐ４１の
アミノ酸配列をＨＩＶ単離株ＡＲＶ−２の対応配列と比
較して示した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 マンフレート、ゲルケン ドイツ連邦共和国マールブルク、ラーン ブリック、13 (72)発明者 ルッツ、ゲー．ギルトラー ドイツ連邦共和国ミュンヘン、トイフェ ルスベルクシュトラーセ、15 (56)参考文献 特開 平６−225760（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 14/155 - 14/16 C07K 7/08 C12N 15/48 - 15/49 G01N 33/569 C12Q 1/68 - 1/70 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ／ＧｅｕＢａｎｋ／Ｓ ｗｌｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ Ｇｅｕｅｓｅｑ
Claims (16)
- 【請求項１】アミノ酸配列： ＶＷＧＩＲＱＬＲＡＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮ
ＬＷＧＸＫＧＫＬＩＸＹＴＳＶＫＷＮＴＳＷＳＧＲ （式中、ＸはＣ又はＳを意味する）から選択される２０
〜３０個の連続したアミノ酸を有する免疫学的に活性な
ペプチド。 - 【請求項２】アミノ酸配列： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＸＫＧＫＬＩ
ＸＹＴＳＶＫＷＮ （式中、Ｘは請求項１に記載した意味と同様である）か
ら選択される２０〜３０個の連続したアミノ酸を有す
る、請求項１に記載のペプチド。 - 【請求項３】ＨＩＶ型レトロウイルスの検出に適した、
請求項１又は２に記載のペプチド。 - 【請求項４】前記ペプチドの一方の末端又は両末端にウ
イルスＭＶＰ５１８０の配列由来ではない更なるアミノ
酸を有する、請求項１〜３いずれか一項に記載のペプチ
ド。 - 【請求項５】ＸがＣを意味し、かつ残基Ｃに対応するシ
ステイン残基が酸化状態で存在する、請求項１〜４いず
れか一項に記載のペプチド。 - 【請求項６】以下のアミノ酸配列： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩ
Ｃ を有する請求項５に記載のペプチド。 - 【請求項７】以下のアミノ酸配列： ＮＱＱＲＬＮＬＷＧＣＫＧＫＬＩＣＹＴＳＶＫＷＮ を有する請求項５に記載のペプチド。
- 【請求項８】以下のアミノ酸配列： ＲＬＱＡＬＥＴＬＩＱＮＱＱＲＬＮＬＷＧＳＫＧＫＬＩ
Ｓ を有する請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチ
ド。 - 【請求項９】合成により調製した、請求項１〜８いずれ
か一項に記載のペプチド。 - 【請求項１０】組換え法により調製した、請求項１〜８
のいずれか一項に記載のペプチド。 - 【請求項１１】請求項１〜４又は６〜８のいずれか一項
に記載のペプチドをコードする単離ＤＮＡ断片。 - 【請求項１２】請求項１〜１０のいずれか一項に記載の
少なくとも一種のペプチドを用いる、免疫不全を生じる
ウイルスに対する抗体検出用試験キット。 - 【請求項１３】ウエスタンブロットである、請求項１２
に記載の試験キット。 - 【請求項１４】ＥＬＩＳＡ試験又は蛍光抗体検出試験で
ある、請求項１３に記載の試験キット。 - 【請求項１５】哺乳類から取出した試料を請求項１〜１
０のいずれか一項に記載のペプチドと接触させ、そのペ
プチドと結合した抗体の量を測定することを含む、免疫
不全を生ずるレトロウイルスの検出法。 - 【請求項１６】哺乳類から取出した試料を請求項１１に
記載の単離ＤＮＡ断片と接触させ、そのＤＮＡ断片と結
合した免疫不全を生ずるレトロウイルスの核酸の量を測
定することを含む、免疫不全を生ずるレトロウイルスの
検出法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4405810A DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1994-02-23 | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
| DE4405810.1 | 1994-02-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07278189A JPH07278189A (ja) | 1995-10-24 |
| JP2948121B2 true JP2948121B2 (ja) | 1999-09-13 |
Family
ID=6510992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7059818A Expired - Lifetime JP2948121B2 (ja) | 1994-02-23 | 1995-02-23 | Ｈｉｖグループに属するレトロウイルス由来のペプチド及びそれらの使用 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US5830634A (ja) |
| EP (1) | EP0673948B1 (ja) |
| JP (1) | JP2948121B2 (ja) |
| KR (1) | KR100230880B1 (ja) |
| AT (1) | ATE173275T1 (ja) |
| AU (1) | AU697121B2 (ja) |
| BR (1) | BR9500732B8 (ja) |
| CA (1) | CA2143163C (ja) |
| DE (2) | DE4405810A1 (ja) |
| DK (1) | DK0673948T3 (ja) |
| ES (1) | ES2124922T3 (ja) |
| NO (1) | NO315163B1 (ja) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE174382T1 (de) * | 1992-10-06 | 1998-12-15 | Dade Behring Marburg Gmbh | Retrovirus aus der hiv-gruppe und dessen verwendung |
| DE4405810A1 (de) * | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
| DE19505262C2 (de) * | 1995-02-16 | 1998-06-18 | Behring Diagnostics Gmbh | Retrovirus aus der HIV-Gruppe und dessen Verwendung |
| EP0832113B1 (en) * | 1995-06-07 | 2004-05-19 | Abbott Laboratories | Peptides for hiv-1 detection |
| US5977299A (en) * | 1997-04-07 | 1999-11-02 | Dade Behring Marburg Gmbh | Activated peptides and conjugates |
| JP3560987B2 (ja) | 1997-04-09 | 2004-09-02 | ビオ―ラド・パストゥール | グループｏ ｈｉｖ−１ウイルスによる感染検出用の生物学的アッセイに有用な合成ペプチド |
| DE19718361A1 (de) | 1997-05-02 | 1998-11-05 | Dade Behring Marburg Gmbh | Immunoassay zur Aviditätsbestimmung von Immunglobulinen |
| US5891994A (en) * | 1997-07-11 | 1999-04-06 | Thymon L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of HIV-1 |
| WO1999038887A1 (en) * | 1998-01-28 | 1999-08-05 | Universal Healthwatch, Inc. | Divergent hiv-1 peptides |
| WO1999062945A2 (en) * | 1998-06-05 | 1999-12-09 | Peptide Solutions, Inc. | Peptide antigens for detection of hiv, hcv and other microbial infections |
| EP1084253A1 (fr) * | 1998-06-12 | 2001-03-21 | Aventis Pasteur | Mimotopes du virus hiv |
| EP1159297A2 (en) * | 1999-01-11 | 2001-12-05 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Hiv related peptides |
| US6911527B1 (en) | 1999-01-11 | 2005-06-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | HIV related peptides |
| JP2001264334A (ja) * | 1999-10-07 | 2001-09-26 | Sekisui Chem Co Ltd | 梅毒トレポネーマ抗体測定試薬及びその製造方法 |
| US6399067B1 (en) * | 2000-04-28 | 2002-06-04 | Thymon L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of HIV-1 |
| EP1402050B1 (en) | 2001-06-15 | 2014-10-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | Recombinant production of peptidic antiviral fusion inhibitors |
| US8043152B2 (en) * | 2003-07-03 | 2011-10-25 | Igt | Methods and system for providing paper-based outcomes |
| EP1694871B1 (en) | 2003-12-19 | 2010-08-25 | Gen-Probe Incorporated | Compositions, methods and kits for detecting the nucleic acids of hiv-1 and hiv-2 |
| WO2005090968A1 (en) | 2004-03-16 | 2005-09-29 | Inist Inc. | Tat-based immunomodulatory compositions and methods of their discovery and use |
| CA2597373A1 (en) | 2005-02-15 | 2006-08-24 | Thymon, L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of hiv-1 |
| US20070122415A1 (en) * | 2005-11-29 | 2007-05-31 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Compound and method for suppressing retroviral replication |
| DK2411043T3 (da) | 2009-03-23 | 2013-10-21 | Pin Pharma Inc | Behandling af cancer med immunostimulatorisk hiv tat derivat-polypeptider |
| US8438898B2 (en) * | 2009-07-01 | 2013-05-14 | Edwards Lifesciences Corporation | Calibrant infusion fluid source preparation |
| EP2550362B1 (en) | 2010-03-25 | 2017-01-04 | Oregon Health&Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| PL2691530T3 (pl) | 2011-06-10 | 2019-02-28 | Oregon Health & Science University | Glikoproteiny i rekombinowane wektory CMV |
| EP2568289A3 (en) | 2011-09-12 | 2013-04-03 | International AIDS Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| AU2014329393B2 (en) | 2013-10-04 | 2020-04-30 | Pin Pharma, Inc. | Immunostimulatory HIV Tat derivative polypeptides for use in cancer treatment |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CN108997482B (zh) | 2018-08-09 | 2025-09-09 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 用于检测hiv-1的合成肽 |
Family Cites Families (88)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9328391B1 (en) | 1984-08-22 | 2016-05-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Cloning and expression of HIV-1 DNA |
| GR852522B (ja) * | 1984-10-18 | 1986-02-17 | Pasteur Institut | |
| CA1341423C (en) | 1984-10-31 | 2003-03-04 | Paul A. Luciw | Recombinant proteins of viruses associated with lymphadenopathy syndrome and/or acquired immune deficiency syndrome |
| CA1247082A (en) | 1984-11-09 | 1988-12-20 | Myron E. Essex | Assay for detecting infection by human t-cell leukemia virus |
| EP0187041B1 (en) | 1984-12-24 | 1996-05-15 | Genentech, Inc. | Fusions of AIDS-related polypeptides |
| US4774175A (en) | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
| US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US4683195A (en) * | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| IE64785B1 (en) | 1985-04-08 | 1995-09-06 | Genetic Systems Corp | Expression of immunologically reactive viral proteins |
| NZ215867A (en) | 1985-04-19 | 1989-10-27 | Hoffmann La Roche | Aids envelope protein, dna vectors and method of production |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| ES2000859A6 (es) | 1985-08-12 | 1988-03-16 | Syntex Inc | Un metodo para producir un vector de expresion bacteriana para la expresion de proteinas de fusion |
| US4803156A (en) | 1985-09-11 | 1989-02-07 | New York Blood Center | Peptide-beta-lactamase conjugates for enzyme-linked immunoassays |
| GR862412B (en) | 1985-09-25 | 1987-01-23 | Oncogen | Vaccines and immuinoassays for acquired immune deficiency syndrome |
| GB8525615D0 (en) | 1985-10-17 | 1985-11-20 | Hoffmann La Roche | Polypeptides |
| ATE87103T1 (de) | 1985-12-17 | 1993-04-15 | Akzo Nv | Immunochemisches reagenz. |
| ATE195148T1 (de) | 1986-01-22 | 2000-08-15 | Pasteur Institut | Prozess zur rekombinanten herstellung von hiv-2 - proteinen sowie zellen, die hiv-2 - proteine exprimiert |
| US5079342A (en) | 1986-01-22 | 1992-01-07 | Institut Pasteur | Cloned DNA sequences related to the entire genomic RNA of human immunodeficiency virus II (HIV-2), polypeptides encoded by these DNA sequences and use of these DNA clones and polypeptides in diagnostic kits |
| US4734362A (en) | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| US4925784A (en) | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
| US5126399A (en) | 1986-04-30 | 1992-06-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the preparation and use of site-directed immunologic reagents |
| WO1987007616A1 (en) | 1986-06-12 | 1987-12-17 | Biogen N.V. | Peptides involved in the pathogenesis of hiv infection |
| US5034511A (en) | 1987-04-13 | 1991-07-23 | Institut Pasteur | Variant of LAV viruses |
| US5030714A (en) | 1986-06-23 | 1991-07-09 | Institut Pasteur | Variant of LAV viruses |
| EP0255190A3 (en) | 1986-08-01 | 1990-08-29 | Repligen Corporation | Recombinant polypeptides and their uses, inclusing assay for aids virus |
| IE872748L (en) | 1986-10-16 | 1988-04-16 | Arjomari Europ | Polypeptides derived from the evvelope gene of human¹immunodeficiency virus in recombinant baculovirus infected¹insect cells |
| HUT50875A (en) | 1986-11-01 | 1990-03-28 | Oxford Gene Systems Ltd | Process for producing particular hybrid hiv antigenes |
| EP0269520A3 (fr) | 1986-11-21 | 1988-08-24 | Institut Pasteur | Rétrovirus du type HIV-2 susceptible de provoquer le sida, et ses constituants antigéniques et nucléiques |
| GB8629116D0 (en) | 1986-12-05 | 1987-01-14 | Hoffmann La Roche | Env/gag polypeptides |
| EP0272858A3 (en) | 1986-12-15 | 1989-07-12 | Repligen Corporation | Recombinant hiv envelope proteins produced in insect cells |
| AU592258B2 (en) | 1986-12-30 | 1990-01-04 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Synthetic peptides which induce cellular immunity to the aids virus and aids viral proteins |
| US5030449A (en) | 1988-07-21 | 1991-07-09 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Synthetic vaccine against AIDS virus |
| WO1988005440A1 (fr) | 1987-01-16 | 1988-07-28 | Institut Pasteur | Peptides ayant des proprietes immunologiques 2-hiv-2 |
| AU1366088A (en) | 1987-01-28 | 1988-08-24 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Immunosuppressive peptides and methods of use |
| US5141867A (en) | 1987-02-02 | 1992-08-25 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleotide sequence encoding a human immunodeficiency virus antigen |
| NO881151L (no) | 1987-03-27 | 1988-09-28 | Syntello Ab | Syntetisk hiv-1-antigen. |
| AU1711888A (en) | 1987-04-24 | 1988-12-02 | Biogen, Inc. | Immunotherapeutic methods and compositions |
| SE8701765L (sv) | 1987-04-28 | 1988-10-29 | Statens Bakteriologiska Lab | Analysmetod och medel foer denna |
| AU620330B2 (en) | 1987-05-29 | 1992-02-20 | Smithkline Beckman Corporation | Immunodiagnostic assays using chimeric antigens |
| GB8714802D0 (en) | 1987-06-24 | 1987-07-29 | Proteus Biotech Ltd | Synthetic polypeptides |
| DE3724016A1 (de) | 1987-07-21 | 1989-02-02 | Hans Prof Dr Dr Wolf | Methoden fuer die gentechnologische produktion von antigenen sowie deren nutzung in einem neuen ansatz fuer bestaetigungsteste fuer antikoerper am beispiel des humanen immundefizienz-virus (hiv) |
| IL87391A0 (en) | 1987-08-27 | 1989-01-31 | Repligen Corp | Hiv proteins and peptides,dna coding therefor,vectors comprising such dna,the use of the proteins and peptides in diagnosis of aids and vaccine compositions containing them |
| US5128319A (en) | 1987-08-28 | 1992-07-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Prophylaxis and therapy of acquired immunodeficiency syndrome |
| WO1989002277A2 (en) | 1987-08-28 | 1989-03-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Prophylaxis and therapy of acquired immunodeficiency syndrome |
| NZ226026A (en) | 1987-09-04 | 1991-03-26 | Wellcome Found | Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera |
| US5013548A (en) | 1987-09-08 | 1991-05-07 | Duke University | Production of antibodies to HIV |
| US4863202A (en) * | 1987-09-16 | 1989-09-05 | Oldford William G | Fluid connector assembly |
| EP0311228A3 (en) | 1987-10-09 | 1990-05-02 | Repligen Corporation | Recombinant polypeptides and their uses, including assay for aids virus |
| US5019510A (en) * | 1987-10-28 | 1991-05-28 | Institut Pasteur | Isolation, molecular cloning and sequencing of an HIV-1 isolate from a Gabonese donor |
| ES2080047T3 (es) | 1987-11-24 | 1996-02-01 | Abbott Lab | Peptidos hiv y metodos para la deteccion de hiv. |
| EP0323157A3 (en) | 1987-12-24 | 1990-07-25 | The University Of Melbourne | Antiviral compounds and methods |
| JPH01179687A (ja) | 1987-12-30 | 1989-07-17 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Ｈｉｖ融合蛋白質 |
| IL89118A0 (en) | 1988-02-03 | 1989-08-15 | Microgenesys Inc | Vaccine containing polypeptides derived from the envelope gene of human immunodeficiency virus type 1 |
| EP0330359A3 (en) | 1988-02-25 | 1991-06-05 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Composition useful in the diagnosis and treating of hiv-1 infection |
| US5312737A (en) | 1988-03-11 | 1994-05-17 | Abbott Laboratories | CKS method of HCV protein synthesis |
| US5124255A (en) | 1988-03-11 | 1992-06-23 | Abbott Laboratories | CKS method of protein synthesis |
| FI904927A7 (fi) | 1988-04-07 | 1990-10-05 | The Trustees Of The Univ Of | HIV:n indusoimien solufuusioiden ja solusitkosten muodostumisen peptid i-inhibiittoreita |
| WO1989010416A1 (en) | 1988-04-20 | 1989-11-02 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | PROTECTIVE PEPTIDES DERIVED FROM HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS-1 gp160 |
| DE58905660D1 (de) | 1988-04-25 | 1993-10-28 | Hoffmann La Roche | Diagnose-Hilfsmittel. |
| JP2758900B2 (ja) | 1988-05-16 | 1998-05-28 | 正憲 速水 | ヒト免疫不全ウイルス２型の遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ |
| ES2072853T3 (es) * | 1988-06-09 | 1995-08-01 | Innogenetics Nv | Retrovirus hiv-3 y su utilizacion. |
| EP0345792A3 (en) | 1988-06-10 | 1991-05-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Htlv-i / hiv-1 fusion proteins |
| FR2635532B1 (fr) | 1988-07-29 | 1992-05-22 | Pasteur Institut | Particules hbsag recombinantes hybrides : caracteristiques morphologiques de l'antigene hbsag contenant 1 sequence immunogene induisant des anticorps neutralisants diriges contre hiv ou susceptible d'etre reconnue par de tels anticorps; sequences nucleotidiques codant pour de telles particules; vaccins les contenant |
| US5135736A (en) | 1988-08-15 | 1992-08-04 | Neorx Corporation | Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging |
| EP0362909A3 (en) | 1988-08-26 | 1990-11-14 | Akzo N.V. | Synthetic polypeptides immunochemically reactive with hiv-antibodies |
| DE68918867T2 (de) | 1988-09-13 | 1995-02-16 | Chiron Corp | Mutanten des hiv-1 Hüllproteins mit fehlenden hypervariabelen domänen. |
| KR900701836A (ko) | 1988-10-03 | 1990-12-04 | 라메쉬 엘. 라탄 | 신규 hiv 단백질 및 aids의 진단, 예방 또는 치료에 유용한 펩티드 |
| CA2003383A1 (en) | 1988-11-23 | 1990-05-23 | Sushil G. Devare | Synthetic dna derived recombinant hiv antigens |
| GB8828098D0 (en) | 1988-12-01 | 1989-01-05 | Wellcome Found | Peptides |
| US5223423A (en) | 1989-03-31 | 1993-06-29 | United States Of America | Characterization of replication competent human immunodeficiency type 2 proviral clone hiv-2sbl/isy |
| FR2646606B1 (fr) | 1989-05-03 | 1994-06-17 | Inst Nat Sante Rech Med | Retrovirus hautement cytopathogenique hiv-ndk. fragment d'adn de ce retrovirus, procede de preparation d'une proteine et/ou enzyme de ce virus et leurs utilisations |
| CA2025634A1 (en) | 1989-09-19 | 1991-03-20 | Thomas Fuerst | Peptides including ctl epitopes of hiv proteins and use thereof |
| AU6523590A (en) | 1989-09-22 | 1991-04-18 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Novel peptides associated with the cd4 binding region of gp120 and their methods of use |
| IE904083A1 (en) | 1989-11-13 | 1991-05-22 | Cambridge Biotech Corp | Diagnostic proteins to test for more than one antibody |
| DE4002636A1 (de) | 1990-01-30 | 1991-08-01 | Boehringer Mannheim Gmbh | Expression von hiv1- und 2-polypeptiden und deren verwendung |
| CA2035576A1 (en) | 1990-02-07 | 1991-08-08 | Alexander R. Neurath | Conformational epitopes of human immunodeficiency virus envelope glycoprotein gp120 hiv-1 |
| JPH05506221A (ja) | 1990-04-03 | 1993-09-16 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | Ｈｉｖエンベロープポリペプチド |
| EP0527760B1 (en) | 1990-04-03 | 1995-07-19 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for vaccination against hiv |
| US5013458A (en) | 1990-04-06 | 1991-05-07 | Rdp Company | Process and apparatus for pathogen reduction in waste |
| DE69124215T2 (de) | 1990-07-12 | 1997-08-07 | Harvard College | Primaten-lentivirus impfstoffe |
| CA2050817A1 (en) | 1990-09-24 | 1992-03-25 | Emilio A. Emini | Hiv-neutralizing rat monoclonal antibodies against pb-1 |
| ES2194836T3 (es) | 1990-09-27 | 2003-12-01 | Tripep Ab | Peptidos para su uso en vacunacion e induccion de anticuerpos neutralizantes contra el virus de la inmunodeficiencia humana. |
| ATE163676T1 (de) | 1990-10-17 | 1998-03-15 | Us Health | Molekulare klone von hiv-1 und deren verwendung |
| FR2676071B1 (fr) | 1991-05-02 | 1994-11-18 | Transgene Sa | Nouveau variant gp160 non-clivable, soluble, de forme hybride. |
| FR2677364A1 (fr) | 1991-06-05 | 1992-12-11 | Pasteur Institut | Sequences peptidiques de la glycoproteine externe d'enveloppe du retrovirus hiv-1. |
| ATE174382T1 (de) * | 1992-10-06 | 1998-12-15 | Dade Behring Marburg Gmbh | Retrovirus aus der hiv-gruppe und dessen verwendung |
| DE4318186C2 (de) | 1993-06-01 | 2002-07-25 | Dade Behring Marburg Gmbh | Retrovirus aus der HIV-Gruppe und dessen Verwendung |
| DE4405810A1 (de) * | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
-
1994
- 1994-02-23 DE DE4405810A patent/DE4405810A1/de not_active Withdrawn
-
1995
- 1995-02-14 ES ES95101991T patent/ES2124922T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-14 EP EP95101991A patent/EP0673948B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-14 DE DE59504181T patent/DE59504181D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-14 AT AT95101991T patent/ATE173275T1/de active
- 1995-02-14 DK DK95101991T patent/DK0673948T3/da active
- 1995-02-21 AU AU13532/95A patent/AU697121B2/en not_active Expired
- 1995-02-22 BR BRPI9500732-6B8A patent/BR9500732B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-02-22 CA CA002143163A patent/CA2143163C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-22 NO NO19950668A patent/NO315163B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-02-23 JP JP7059818A patent/JP2948121B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-23 US US08/394,021 patent/US5830634A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-23 KR KR1019950003516A patent/KR100230880B1/ko not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-08-10 US US09/131,551 patent/US6335158B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-12-04 US US10/000,321 patent/US6869608B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-03-21 US US11/084,858 patent/US7803524B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07278189A (ja) | 1995-10-24 |
| US6869608B2 (en) | 2005-03-22 |
| NO950668D0 (no) | 1995-02-22 |
| AU697121B2 (en) | 1998-09-24 |
| US20020123039A1 (en) | 2002-09-05 |
| DE59504181D1 (de) | 1998-12-17 |
| US5830634A (en) | 1998-11-03 |
| ES2124922T3 (es) | 1999-02-16 |
| EP0673948A1 (de) | 1995-09-27 |
| BR9500732A (pt) | 1995-10-24 |
| US6335158B2 (en) | 2002-01-01 |
| US7803524B2 (en) | 2010-09-28 |
| CA2143163A1 (en) | 1995-08-24 |
| US20010009667A1 (en) | 2001-07-26 |
| DE4405810A1 (de) | 1995-08-24 |
| NO315163B1 (no) | 2003-07-21 |
| US20050271678A1 (en) | 2005-12-08 |
| CA2143163C (en) | 1999-12-28 |
| EP0673948B1 (de) | 1998-11-11 |
| BR9500732B8 (pt) | 2014-04-29 |
| BR9500732B1 (pt) | 2012-09-04 |
| KR950032278A (ko) | 1995-12-20 |
| DK0673948T3 (da) | 1999-07-26 |
| KR100230880B1 (ko) | 1999-11-15 |
| ATE173275T1 (de) | 1998-11-15 |
| NO950668L (no) | 1995-08-24 |
| AU1353295A (en) | 1995-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2948121B2 (ja) | Ｈｉｖグループに属するレトロウイルス由来のペプチド及びそれらの使用 | |
| EP0345375B1 (en) | HIV-3 retrovirus and its use | |
| JP4113318B2 (ja) | ＨＩＶ−グループの免疫不全ウイルスのＲＮＡに対して相補的なｃＤＮＡ | |
| JP4589420B2 (ja) | Ｈｉｖ−１のｏグループ（またはサブグループ）レトロウイルス性抗原のヌクレオチド配列 | |
| US5798205A (en) | Retrovirus from the HIV type O and its use (MVP-2901/94) | |
| US6974866B2 (en) | Retrovirus from the HIV type O and its use (MVP-2901/94) | |
| JPH0198490A (ja) | ヒト免疫不全ウイルスのｇａｇにエンコードされたタンパク質 | |
| US20150218551A1 (en) | Enhanced rapid immunogen selection method for hiv gp120 variants | |
| Chiappa | Design and production of a chemiluminescent immunoassay for the early detection of HIV infection | |
| HK1063055A (en) | Hiv-3 retrovirus strains and their use | |
| HK58597A (en) | HIV-3 retrovirus and its use | |
| FR2731225A1 (fr) | Peptides de glycoproteine transmembranaire d'enveloppe et de proteine de capside du retrovirus humain du type hiv-1 et peptides presentant avec eux une parente immunologique |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080702 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090702 Year of fee payment: 10 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702 Year of fee payment: 11 |
|
| R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702 Year of fee payment: 11 |
|
| R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
| R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702 Year of fee payment: 11 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100702 Year of fee payment: 11 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110702 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110702 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120702 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130702 Year of fee payment: 14 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |