JP2025537197A - 小児期発症特発性ネフローゼ症候群を治療するための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、２歳以上２５歳以下の個体において、小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を治療するか、または小児期発症ＩＮＳからの再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、有効量のオビヌツズマブを個体に投与することを含む。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２２年１１月８日に出願された米国仮出願第６３／４２３，７６７号の優先権利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

電子配列表の参照
電子配列表（１４６３９２０６４２４０ｓｅｑｌｉｓｔ．ｘｍｌ；サイズ：４１，７７３バイト；作成日２０２３年１１月２日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

発明の分野
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することによって、個体（例えば、２歳以上２５歳以下の個体）における小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を治療する、または小児期発症ＩＮＳを有する個体における再発のリスクおよび／または頻度を低減させる方法が本明細書で提供される。

小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）は、原発性ネフローゼ症候群（二次性の原因を除く）としても知られており、微小変化疾患（ＭＣＤ）ならびに巣状および分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を包含する。この疾患は稀であるが、小児期発症ＩＮＳの発生率は民族性および地域によって異なり、特定の民族群、特に南アジア人およびアフリカ系アメリカ人の間でより高く、遺伝的要因の影響により、特にＦＳＧＳのリスクがより高くなる（Ｃｈａｎｃｈｌａｎｉ ａｎｄ Ｐａｒｅｋｈ（２０１６）Ｆｒｏｎｔ Ｐｅｄｉａｔｒ４：３９）。この疾患は、通常、２歳から５歳の間に最初に診断され（ＭＣＤ患者の７０％において）、典型的には、女児よりも男児に多く発症し（２：１）、ネフローゼ範囲タンパク質尿、浮腫、高脂血症および低アルブミン血症の存在によって定義される（Ｎｏｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｌａｎｃｅｔ３９２：６１－７４）。

小児期発症ＩＮＳ患者は、最初に全身経口コルチコステロイドで治療される。再発の頻度およびコルチコステロイド治療に対する応答は、疾患の重症度を反映するサブタイプへの疾患の分類を可能にする。これらのサブタイプには、「ステロイド耐性ネフローゼ症候群（根底にある遺伝的原因）」、「非／稀な再発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群」、「ＦＲＮＳ」および「ＳＤＮＳ」が含まれる（Ｎｏｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｌａｎｃｅｔ３９２：６１－７４）。後者の２つのサブタイプでは、患者はエピソード中に複数コースのステロイドを受け、さらなる再発を防ぐためにステロイド維持療法を受け続けることが多い。治療の最適な目標は、患者の臨床応答および薬物関連有害作用に基づいて再発率を制限しながら、最大限のステロイド節約である。

小児期発症ＩＮＳは患者の７５％超で再発し、患者のほぼ５０％が頻繁な再発またはステロイド依存性を示す（Ａｂｄｅｌ－Ｈａｆｅｚ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｏｌ６：１８０－１８６）。ステロイドでは疾患をうまく制御することができない小児の中で、いくつかのステロイド節約免疫抑制剤（例えば、シクロホスファミド、レバミゾール、シクロスポリンＡ、タクロリムス、ＭＭＦおよびリツキシマブ）が再発のリスクを低減させることが示されている。しかしながら、これらの薬剤を比較する高品質のヘッド・トゥー・ヘッドのデータは限られている（Ｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｌｉｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１５：９８３－９９４）。

抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブは、２００４年に小児期発症ＩＮＳの治療について最初に記載され（Ｂｅｎｚ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｐｈｒｏｌ１９（７）：７９４－７９７）、その後、ＦＲＮＳまたはＳＤＮＳを有する小児および成人の両方において有望な未承認の治療選択肢として浮上した。多数の治験責任医師が開始した治験およびその使用の症例報告が文献に記載されており、臨床的奏効率は様々であり（１２ヶ月で腎寛解している患者の５０％～８５％［再発なし］）、リツキシマブは、ＦＲＮＳおよびＳＤＮＳの患者における年間再発率を低減させることが示されている。しかしながら、１２ヶ月で完全寛解を達成しない患者は、一般に、リツキシマブ治療後８～９ヶ月の間に再発し、これらの再発は、主に、Ｂ細胞の回復／再構成の状況で起こる（Ｉｉｊｉｍａ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｌａｎｃｅｔ ３８４：１２７３－１２８１；Ｃｏｌｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ２７：１８１１－１８２２）。

メモリーＢ細胞プールの再構成の遅延は、付随する免疫抑制の漸減または中断にもかかわらず、長期の寛解に関連する（Ｃｏｌｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ１０：１６５３）。オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）、ＧＡＺＹＶＡＲＯ（登録商標））は、リツキシマブおよびオファツムマブなどのＩ型抗体と比較して、末梢血および組織からのＢ細胞の枯渇が増強されたヒト化された糖鎖工学的に操作されたＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。それはＩＶ注入として投与される。そのより強力なＢ細胞枯渇と一致して、オビヌツズマブは、標準的な化学療法と組み合わせて投与した場合、成人の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および濾胞性リンパ腫（ＦＬ）の治療についてリツキシマブより優れており、現在これらの適応症で世界的に承認されている。オビヌツズマブはまた、リツキシマブまたはリツキシマブ含有レジメンによる治療に応答しなかった、または治療中もしくは治療後に進行したＦＬ患者の治療にも適応される。さらに、オビヌツズマブは現在、成人および小児の自己免疫疾患（ループス腎炎［ＬＮ］、膜性腎症、および全身性エリテマトーデス［ＳＬＥ］）のために臨床開発中である。

小児期発症ＩＮＳの現在の治療にもかかわらず、患者は依然として、成長障害およびステロイド関連毒性の他の有意な副作用の有意なリスクがある。免疫抑制療法の使用後の頻繁な臨床的再発率および小児期発症ＩＮＳにおける末期腎疾患の関連する潜在的リスクを考慮すると、改善された有効性およびより良好な長期転帰を有する承認されたステロイド節約療法の必要性は依然として満たされていない。

特許出願および刊行物を含む本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が援用される。

特定の態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための方法が本明細書において提供され、少なくとも、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、１つまたは２つの用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露は、（ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｂ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、（ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｄ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。また、小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を有する個体における再発を予防し、再発のリスクを低減させ、かつ／または再発の頻度を低減させるための方法も本明細書において提供され、少なくとも、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、１つまたは２つの用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露は、（ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｂ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、（ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｄ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。

いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ以上である。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量とＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、第１の抗体曝露の第２の用量は、第１の抗体曝露の第１の用量後約１．５週間から約２．５週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量とＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、第１の抗体曝露の第２の用量は、第１の抗体曝露の第１の用量後約２週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第１の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第２の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では（例えば、第１の抗体曝露の用量（単数または複数）がフラット用量である実施形態では）、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量とＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、第２の抗体曝露の第２の用量は、第２の抗体曝露の第１用量後約１．５週間から約２．５週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、第２の抗体曝露の第１の用量後約２週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第１の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では（例えば、第２の抗体曝露の用量（単数または複数）がフラット用量である実施形態では）、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第１および／または第２の抗体曝露は、静脈内で適用される。

いくつかの実施形態では、個体は、小児期発症ＩＮＳを有するか、または有すると診断されている。いくつかの実施形態では、個体は、高頻度再発性ネフローゼ症候群（ＦＲＮＳ）を有する。いくつかの実施形態では、小児期発症ＩＮＳは、ステロイド依存性ネフローゼ症候群（ＳＤＮＳ）である。いくつかの実施形態では、例えば、第１の抗体曝露の投与前に、個体は完全寛解にある。

いくつかの実施形態では、本方法は、有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドまたはコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロンを含む。いくつかの実施形態では、メチルプレドニゾロンは、８０ｍｇの用量で個体に静脈内で投与される。いくつかの実施形態では、例えば、個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、メチルプレドニゾロンは、１．５ｍｇ／ｋｇの用量で個体に静脈内で投与される。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドまたはコルチコステロイドは、プレドニゾンを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、有効量の抗ヒスタミン剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ヒスタミン剤は、ジフェンヒドラミンを含む。いくつかの実施形態では、ジフェンヒドラミンは、０．５～１ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与され、任意に５０ｍｇの最大用量まで経口投与される。いくつかの実施形態では、本方法は、有効量のアセトアミノフェンを個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アセトアミノフェンは、１５ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与され、任意に１０００ｍｇの最大用量まで投与される。

いくつかの実施形態では、本方法は、個体において１年で持続的完全寛解をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、個体における循環末梢Ｂ細胞の枯渇をもたらす。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７－Ｂ細胞）、メモリーＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋Ｂ細胞）、または形質芽球（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋ＣＤ３８＋＋Ｂ細胞）である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－ＣＤ３３－ＣＤ５６－細胞である。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後、Ｂ細胞は、個体からの末梢血中に循環末梢Ｂ細胞が約５個／μＬ以下で存在するようなレベルまで枯渇する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、個体からの末梢血中に循環末梢Ｂ細胞が約１個／μＬ以下で存在するようなレベルまで枯渇する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、個体からの末梢血中に循環末梢Ｂ細胞が約０．５個／μＬ以下で存在するようなレベルまで枯渇する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、個体からの末梢血中に循環末梢Ｂ細胞が存在するようなレベルまで枯渇し、第１の抗体曝露の後に枯渇が達成される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＨＳＦＣを用いて検出限界を下回るレベルまで枯渇する。いくつかの実施形態では、ＨＳＦＣは、約１．０個／μＬ以下、約０．８個／μＬ以下、約０．６個／μＬ以下、約０．５個／μＬ以下または０．４４１個／μＬ以下のＢ細胞の定量下限（ＬＬＯＱ）を有する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞枯渇は、第１の抗体曝露の第１の用量後少なくとも５２週間持続する。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後、個体における循環末梢Ｂ細胞は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前の同じ個体における対応する測定値と比較して、またはＩＩ型抗ＣＤ２０抗体による治療を受けていない個体における対応する測定値と比較して、少なくとも約９０％枯渇する。

いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、治療の１日目と１５日目の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の１６８日目と１８２日目の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、治療の１日目と１５日目の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の１６８日目と１８２日目の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブであり、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、治療の第０週と第２週の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の第２４週と第２６週の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、治療の第０週と第２週の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の第２４週と第２６週の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブであり、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では（例えば、抗体曝露の用量がフラット用量である実施形態では）、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

特定の態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための方法が本明細書において提供され、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１および第２の抗体曝露を個体に静脈内で適用することを含み；第１の抗体曝露は、治療の第０週と第２週の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の第２４週と第２６週の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトであり；個体の体重は４５ｋｇ以上である。特定の態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための方法が本明細書において提供され、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１および第２の抗体曝露を個体に静脈内で適用することを含み；第１の抗体曝露は、治療の第０週と第２週の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の第２４週と第２６週の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトであり；個体の体重は４５ｋｇ未満である。特定の態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための方法が本明細書において提供され、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１および第２の抗体曝露を個体に静脈内で適用することを含み；第１の抗体曝露は、治療の１日目と１５日目の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の１６８日目と１８２日目の１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトであり；個体の体重は４５ｋｇ以上である。特定の態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための方法が本明細書において提供され、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１および第２の抗体曝露を個体に静脈内で適用することを含み；第１の抗体曝露は、治療の１日目と１５日目の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；第２の抗体曝露は、治療の１６８日目と１８２日目の２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトであり；個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。

本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の重鎖は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の軽鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、個体にプレドニゾンを投与（例えば、経口投与）することをさらに含む。いくつかの実施形態では、経口プレドニゾンは、０．５～１ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、最大６０ｍｇ／日の用量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、経口プレドニゾンは、治療の第２週まで０．５～１ｍｇ／ｋｇ／日の用量で個体に投与され、第２４週までに５ｍｇ／日の用量に漸減される。いくつかの実施形態では、経口プレドニゾンは、０．５～２ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、最大６０ｍｇ／日の用量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、経口プレドニゾンは、治療の第２週まで０．５～２ｍｇ／ｋｇ／日の用量で個体に投与され、第２４週までに５ｍｇ／日の用量に漸減される。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、治療の第０週、第２週、第２４週、第２６週および第５２週に、例えばＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に、個体に静脈内（ＩＶ）注入によってメチルプレドニゾロンを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、個体の体重が４５ｋｇ以上である場合、８０ｍｇのメチルプレドニゾロンが個体に投与される。いくつかの実施形態では、個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、１．５ｍｇ／ｋｇのメチルプレドニゾロンが個体に投与される。

特定の態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるためのキットが本明細書において提供され、当該キットは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む、容器；上記および本明細書中に記載される方法のいずれかにおいてＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明を伴う添付文書、を含む。

特定の態様では、上記および本明細書中に記載される方法のいずれかにおいて使用するためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体（例えば、オビヌツズマブ）が本明細書において提供される。

本明細書に記載される種々の実施形態の特性の１つ、いくつか、または全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成し得ることを理解されたい。本発明のこれらおよび他の態様は、当業者に明らかであろう。本発明のこれらおよび他の実施形態は、以下の発明を実施するための形態によってさらに説明される。

≧２～２５歳の患者における小児期発症ＩＮＳ（例えば、高頻度再発性ネフローゼ症候群またはステロイド依存性ネフローゼ症候群）の治療におけるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体オビヌツズマブの使用の制御された研究の概略図を提供する。ＢＩＤ＝１日２回；ＣＣＯＤ＝一次分析の共通の終了日；ＦＲＮＳ＝高頻度再発性ネフローゼ症候群；ＭＭＦ＝ミコフェノール酸モフェチル；ＰＯ＝口による；経口；ＳＤＮＳ＝ステロイド依存性ネフローゼ症候群；ＳＦＵ＝安全性フォローアップ；Ｗｋ＝週。^ａ研究治療の第１の用量（１日目）の投与は、ベースライン評価後２４時間以内に行われるべきである。しかし、必要に応じて７２時間までの投与が可能である。第２の注入は、１５±１日目に行われるべきである。^ｂ１年目に持続的完全寛解を有する参加者の割合の主要有効性評価項目を第５２週に測定する。

小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）は、原発性ネフローゼ症候群（二次性の原因を除く）としても知られており、微小変化疾患（ＭＣＤ）ならびに巣状および分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を包含する。この疾患は、通常、２歳から５歳の間に最初に診断され（ＭＣＤ患者の７０％において）、典型的には、女児よりも男児に多く発症し（２：１）、ネフローゼ範囲タンパク質尿、浮腫、高脂血症および低アルブミン血症の存在によって定義される（Ｎｏｏｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｌａｎｃｅｔ３９２：６１－７４）。小児期発症ＩＮＳ患者は、最初に全身経口コルチコステロイドで治療される。しかしながら、小児期発症ＩＮＳは患者の７５％超で再発し、患者のほぼ５０％が頻繁な再発またはステロイド依存性を示す（Ａｂｄｅｌ－Ｈａｆｅｚ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｏｌ６：１８０－１８６）。現在の治療にもかかわらず、患者は依然として、成長障害およびステロイド関連毒性の他の有意な副作用の有意なリスクがある。したがって、小児期発症ＩＮＳ（例えば、ＦＲＮＳおよび／またはＳＤＮＳ）のためのより安全でより効果的な治療が引き続き必要とされている。

一態様では、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための方法が本明細書において提供され、少なくとも、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、１つまたは２つの用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露は、（ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｂ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、（ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｄ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。別の態様では、小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を有する個体における再発のリスクおよび／または頻度を低減させるための方法が本明細書において提供され、少なくとも、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、１つまたは２つの用量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、第１の抗体曝露は、（ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｂ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、（ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または（ｄ）個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含み；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。

Ｉ．一般的な技術
本明細書に記載または参照される技術および手順は、一般によく理解されており、当業者による従来の方法論、例えば、以下に記載されている広く利用されている方法論を使用して一般に採用されている：Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；およびＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）。

ＩＩ．定義
「小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）」という用語は、典型的には２～５歳で最初に診断される特発性ネフローゼ症候群を指し、これは微小変化疾患（ＭＣＤ）ならびに巣状および分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を包含し、原発性ネフローゼ症候群（二次性の原因を除く）としても知られている。

「抗体」という用語は、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および単鎖分子、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖ）を含む。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」と互換的に使用される。

基本的な４本の鎖の抗体ユニットは、２本の同一な軽鎖（Ｌ）と２本の同一な重鎖（Ｈ）とから構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、５つの基本的なヘテロ四量体ユニットと併せて、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドからなり、１０個の抗原結合部位を含有するが、一方でＩｇＡ抗体は、２～５個の基本的な４本鎖ユニットから構成されており、このユニットは、重合してＪ鎖と組み合わさった多価集合体を形成することができる。ＩｇＧの場合、４鎖単位は、通常約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によってＨ鎖に連結されているが、一方で２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結されている。Ｈ鎖およびＬ鎖はそれぞれ、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、続いてα鎖およびγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）、ならびにμおよびεアイソタイプについては４つのＣ_Ｈドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、続いてその反対側の末端に定常ドメインを有する。Ｖ_Ｌは、Ｖ_Ｈと整列しており、Ｃ_Ｌは、重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）と整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。Ｖ_ＨとＶ_Ｌとが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位を形成する。様々なクラスの抗体の構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４の７１頁および第 ６章を参照されたい。任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に異なる種類のうちの１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと表記される重鎖を有する。γおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能における比較的わずかな相違に基づいてさらにサブクラスに分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現する。

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と呼ばれ得る。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。

用語「可変」は、可変ドメインの特定のセグメントは抗体間で配列が広範囲に異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を規定する。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖および重鎖の両方の可変ドメインにおいて、超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブの重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、ベータ－シート構造を接続し、かつ、いくつかの場合では、ベータ－シート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲによって接続されたベータシート立体配置を大いに採用する４つのＦＲ領域を含む。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して互いに結び付いており、他方の鎖のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与など、様々なエフェクター機示す。

本明細書に使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体を指す、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る可能性のある自然に発生する突然変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象としている。モノクローナル抗体は、その特異性に加えて、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されていないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られているという抗体の特徴を示し、抗体を何か特定の方法により産生しなければならないと解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－９７（１９７５）；ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３－２６０（１９９５），ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２^ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３－６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）），ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ ｍｅｔｈｏｄｓ（ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，８１６，５６７），ｐｈａｇｅ－ｄｉｓｐｌａｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；ａｎｄ Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全てを有する動物において、ヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号、国際公開第１９９６／３４０９６号、国際公開第１９９６／３３７３５号、国際公開第１９９１／１０７４１号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、および同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５）を参照されたい）を含む多様な技術によって作製され得る。

「ネイキッド抗体」という用語は、細胞毒性部分または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」または「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある抗体を指して互換的に使用される。特に全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖と軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであってもよい。いくつかの場合では、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

「抗体断片」は、インタクト抗体の一部分、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域および／または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２［１９９５］参照）；抗体断片から形成された単鎖抗体分子および多重特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して命名された残りの「Ｆｃ」断片を産生した。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体とＨ鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）、および１本の重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により単一の大きなＦ（ａｂ’）_２断片が生じ、これは、異なる抗原結合活性を有するジスルフィド結合した２つのＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を交差結合することができるものである。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に数個の追加の残基を有している点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元々はＦａｂ’断片の対として産生され、それらの間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。

Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能はＦｃ領域内の配列によって決定されるが、この領域は、特定の細胞型に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。

「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、強く非共有性会合した１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を与える６つの超可変ループ（Ｈ鎖とＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、全結合部位よりも低い親和性であるが、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まないＦｖの半分）でさえも、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、接続されて単一のポリペプチド鎖となったＶ_ＨおよびＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含んでおり、このリンカーにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を成すことが可能となっている。ｓＦｖの概説については、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４）を参照されたい。

本発明の抗体の「機能性断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、これには、概して、インタクトな抗体の抗原結合領域もしくは可変領域、またはＦｃＲ結合能力を保持するかもしくは改変されたＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域が含まれる。抗体断片の例には、直鎖状抗体、抗体断片から形成された単鎖抗体分子および多重特異性抗体が含まれる。

「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合を達成し、それによって二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個の残基）を用いてｓＦｖ断片（前の段落を参照されたい）を構築することによって調製された小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する、２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第９３／１１１６１号；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８（１９９３）により詳細に記載されている。

本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りの部分が、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片が含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１～６８５５（１９８４））。本明細書における目的のキメラ抗体としては、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、ここで、この抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルに目的の抗原で免疫付与を行うことによって産生される抗体に由来する。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。

「ヒト化」型の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（以下に定義される）からの残基が、所望される特異性、親和性、および／または能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲからの残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでいてもよい。これらの改変は、結合親和性など、抗体の性能をさらに改良するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むものとし、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものに対応するが、ＦＲ領域には、結合親和性、異性体化、免疫原性等の抗体の性能を改善する１つ以上の個々のＦＲ残基置換が含まれてもよい。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、通常、Ｈ鎖で６個以下、Ｌ鎖で３個以下である。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号を参照されたい。

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、および／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製する技法の内の任意のものを用いて作製された抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特定的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で既知の様々な技法を使用して産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。また、ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載の方法が利用できる。ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原投与に応答してこのような抗体を産生するよう改変されているが、その内在性遺伝子座は無能になっているトランスジェニック動物、例えば免疫化ゼノマウスに抗原を投与することによって調製することが可能である（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関するＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい。

本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、かつ／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを含む。ネイティブ抗体では、Ｈ３およびＬ３が、６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を示し、特にＨ３が抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１３：３７－４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ２４８：１－２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる、天然に存在するラクダ抗体は、軽鎖の非存在下で機能的であり、安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６－４４８（１９９３）；Ｓｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照されたい。

いくつかのＨＶＲ描写が本明細書で使用され、本明細書に包含されている。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造的ループの位置に言及している（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらＨＶＲの各々に由来する残基が、以下に示される。

ＨＶＲは、以下の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬにおいて、２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、および８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおいて、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）、および９３～１０２、９４～１０２、または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義の各々について、Ｋａｂａｔら（上記）に従ってナンバリングされる。

「Ｋａｂａｔにあるような可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置ナンバリング」という表現、およびそれらの変形形態は、Ｋａｂａｔら（上記）における抗体の編成において重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されているナンバリング方式を指す。このナンバリングシステムを使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはそれへの挿入に対応する、より少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従った残基５２ａ）を含み、重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従った残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、所与の抗体に対して、抗体の配列と「標準の」Ｋａｂａｔによってナンバリングされた配列との相同領域での整列によって決定され得る。

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

「ヒトコンセンサスフレームワーク」または「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループに由来する。一般に、これらの配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）にあるようなサブグループである。例えば、ＶＬについては、Ｋａｂａｔら（上記）にあるように、サブグループはサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩまたはカッパＩＶでありうる。さらに、ＶＨの場合、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記）にあるように、サブグループＩ、サブグループＩＩまたはサブグループＩＩＩであってもよい。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、ドナーフレームワーク配列を様々なヒトフレームワーク配列のコレクションと整列させることにより、ドナーフレームワークに対する相同性に基づいてヒトフレームワーク残基が選択される場合など、特定の残基が上記から得られる場合がある。ヒト免疫グロブリンのフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、または既存のアミノ酸配列の変化を含有してもよい。いくつかの実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。

「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔら（上記）の可変重鎖サブグループＩＩＩにおけるアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態では、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の配列のそれぞれ少なくとも一部または全部を含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（ＨＣ－ＦＲ１）（配列番号３５）、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（ＨＣ－ＦＲ２）、（配列番号３６）、ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＨＣ－ＦＲ３、配列番号３７）、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（ＨＣ－ＦＲ４）、（配列番号３８）。

「ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔら（上記）の可変軽鎖カッパサブグループＩにおけるアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態では、ＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の配列のそれぞれ少なくとも一部または全部を含む：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＬＣ－ＦＲ１）（配列番号３９）、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＬＣ－ＦＲ２）（配列番号４０）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＬＣ－ＦＲ３）（配列番号４１）、ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（ＬＣ－ＦＲ４）（配列番号４２）。

例えばＦｃ領域の指定位置における「アミノ酸改変」は、指定残基の置換もしくは欠失、または指定残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接する」挿入とは、そこから１～２残基以内への挿入を意味する。この挿入は、特定の残基のＮ末端側でもＣ末端側でもよい。本明細書において好ましいアミノ酸改変は、置換である。

「親和性成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の変更を有し、これらの変更が、それらの変化（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらすものである。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野において既知の手順により産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）には、ＶＨドメインとＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＨＶＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）によって記載されている。

本明細書で使用される「に特異的に結合する」または「に特異的」という用語は、生体分子を含む分子の異種集団の存在下で標的の存在を決定するものである、測定可能かつ再現可能な相互作用、例えば標的と抗体との間の結合を指す。例えば、標的（これはエピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、他の標的に結合するよりも高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間でこの標的に結合する、抗体である。一実施形態では、無関係の標的への抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合に、標的への抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されるタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含むことができるが、必須ではない。

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用され、ネイティブ配列のＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域が含まれる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することによって取り除かれ得る。したがって、インタクトな抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除かれた抗体集団、Ｋ４４７残基が除かれていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本発明の抗体における使用に好適なネイティブ配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が挙げられる。

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体と結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的にスプライシングされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれ、これらは、主に細胞質ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン内に免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。（例えば、Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照されたい）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ４：２５－３４（１９９４）；およびｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）に総説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲも、本明細書における用語「ＦｃＲ」に包含される。

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語にはまた、胎児への母体ＩｇＧの移入を担う、新生児型受容体であるＦｃＲｎも含まれる。Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４）．ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は公知である（例えば、Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１８：（１２）：５９２－８（１９９７）；Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１５（７）：６３７－４０（１９９７）；Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３－６（２００４）；国際公開第２００４／９２２１９号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）を参照されたい。ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのＦｃＲｎへのインビボ結合および血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトされたヒト細胞株において、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドが投与された霊長類においてアッセイすることができる。国際公開第２００４／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ）には、ＦｃＲへの結合が改善または縮小した抗体バリアントが記載されている。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）も参照されたい。

「実質的に低減された」または「実質的に異なる」という表現は、本明細書で使用される場合、２つの数値（一般に、一方がある分子と関連付けられており、他方が参照／比較分子と関連付けられている）の間の十分に高い相違を表し、結果として、当業者であれば、これら２つの値の間の相違が、そのような値（例えば、Ｋｄ値）によって測定される生物学的特徴に関して、統計学的に有意なものであると見なすであろう。当該２つの値の間の差は、参照／比較分子の値に応じて、例えば約１０％超、約２０％超、約３０％超、４０％超、および／または約５０％超である。

「実質的に同様の」または「実質的に同じ」という用語は、本明細書で使用される場合、２つの数値（一般に、一方が分子と関連付けられており、他方が基準／比較分子と関連付けられている）の間の十分に高い類似性を示し、結果として、当業者であれば、これら２つの値の間の相違が、そのような値（例えば、Ｋｄ値）によって測定される生物学的特徴に関して、生物学的および／または統計的有意性がほとんどない、または全くないと見なすであろう。当該２つの値の間の差は、参照／比較値に応じて、例えば約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、および／または約１０％未満である。

本明細書で使用される場合、「担体」には、用いられる投与量および濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳動物にとって無毒である、薬学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。多くの場合、生理学的に許容され得る担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容され得る担体の例としては、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

「添付文書」は、適応症、用法、投与量、投与、禁忌、包装された製品と組み合わせる他の医薬品、および／またはそのような医薬品の使用に関する警告などに関する情報を含有する医薬品の市販パッケージに通例含まれる適応症に関する情報を含有する医薬品の市販パッケージに通例含まれる説明を指す。

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床病理学の経過中に治療される個体または細胞の自然経過を変更するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行速度の減少、疾患状態の改善または緩和、寛解または予後の改善、および疾患進行の遅延が含まれるが、これらに限定されない。疾患（例えば、ＩＮＳ）の進行を遅延させるとは、疾患の発症を延期すること、妨げること、遅くすること、遅らせること、安定させること、および／または先送りすることを意味する。この遅延は、疾患歴および／または治療されている個体に応じて様々な期間のものであり得る。当業者には明らかなように、十分なまたは大幅な遅延は、実質的に、個体、例えば疾患を発症するリスクのある個体が疾患を発症しないという点で、予防を含み得る。

本明細書で使用される場合、「持続的完全寛解」は、再発または以下などの特定の介入性事象（例えば、第８週の後に発生する）のいずれも発生しない朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇを含む、治療に対する応答を指す。（１）全身性コルチコステロイドまたは他の免疫抑制治療を必要とする以下の事象のいずれかによって定義される再発：（ａ）朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≧２ｇ／ｇまたは（ｂ）ディップスティックＵＡ≧３＋が３日間連続し、その３日間の直近の尿試料がＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される、または（ｃ）浮腫を伴う任意の１日のディップスティックＵＡ蛋白≧３＋であり、尿試料がＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される；（２）３０日間の期間における＞１４日間の任意の全身性コルチコステロイド使用；（３）全身性コルチコステロイド以外のＩＮＳに対する任意の救済療法の開始；（４）有効性の欠如による治療中断；または（５）死亡。

本明細書で使用される「ＣＤ２０」は、ヒトＢリンパ球抗原ＣＤ２０（ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、およびＬＦ５としても知られており；その配列は、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６によって特徴付けられる）を指し、プレＢリンパ球および成熟Ｂリンパ球上に位置する約３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である。（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（１９）（１９８９ １１２８２－１１２８７；Ｔｅｄｄｅｒ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５（１９８８）２０８－１２；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７（１９８８）１９７５－８０；Ｅｉｎｆｅｌｄ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．７（１９８８）７１１－７；Ｔｅｄｄｅｒ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２（１９８９）２５６０－８）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても知られる膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴および類似のイントロン／エクソンスプライス境界によって特徴付けられ、造血細胞および非リンパ組織の間で固有の発現パターンを示す。この遺伝子は、Ｂ細胞の形質細胞への発達および分化において役割を果たすＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーは、ファミリーメンバーのクラスターの中で１１ｑ１２に局在している。この遺伝子の選択的スプライシングにより、同じタンパク質をコードする２つの転写バリアントが生じる。

「ＣＤ２０」および「ＣＤ２０抗原」という用語は、本明細書では互換的に使用され、細胞によって天然に発現されるか、またはＣＤ２０遺伝子をトランスフェクトされた細胞上で発現されるヒトＣＤ２０の任意のバリアント、アイソフォームおよび種ホモログを含む。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０の不活性化によるＣＤ２０発現細胞（例えば腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の機序の１つ以上により生じ得る：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣおよびＣＤＣによって起こり得る。

当技術分野で認識されているＣＤ２０の同義語には、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５およびＬＦ５が含まれる。

本発明による用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３（２００４）２７３８－２７４３；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１（２００３）１０４５－１０５２に従い、抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０抗原に対する結合特性および生物活性に応じて２つの型（Ｉ型抗ＣＤ２０抗体とＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）に区別することができる。下記の表１を参照。

ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されているようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示されているような）およびＡＴ８０ ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して減少したＣＤＣを有する（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）。

Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ、ＨＩ４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示されている）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号および同第２００５／１０３０８１号に開示されている）および２Ｈ７ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示されている）が含まれる。

本発明のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、好ましくはＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、より好ましくは、国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号に記載されているアフコシル化ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。

「リツキシマブ」抗体（参照抗体；Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対するモノクローナル抗体を含有する遺伝子操作されたキメラヒトガンマ１マウス定常ドメインである。しかしながら、この抗体は糖鎖工学的に操作されておらず、アフコシル化されておらず、したがって、少なくとも８５％のフコース量を有する。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含有し、１９９８年４月１７日に発行され、ＩＤＥＣファーマスーティカルズ社に譲渡された米国特許第５７３６１３７号（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，ｅｔ．ａｌ．）の「Ｃ２Ｂ８」という名称で同定されている。リツキシマブは、再発または難治性の低悪性度または濾胞性のＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療について承認されている。インビトロ作用機序研究により、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を呈することが既に示されている（Ｒｅｆｆ，Ｍ．Ｅ．，ｅｔ．ａｌ，Ｂｌｏｏｄ８３（２）（１９９４）４３５－４４５）。さらに、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて活性を示す。

本明細書で使用される「ＧＡ１０１抗体」という用語は、ヒトＣＤ２０に結合する以下の抗体のいずれか１つを指す：（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体：（２）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８のアミノ酸配を含むＶＬドメインを含む抗体、（３）配列番号９のアミノ酸配列および配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体；（４）オビヌツズマブとして知られる抗体、または（５）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体。一実施形態では、ＧＡ１０１抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。

「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」という用語は、国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されるヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体を指し、それは、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１（マウス重鎖（ＶＨ）の可変領域：配列番号１１；マウス軽鎖（ＶＬ）の可変領域：配列番号１２：Ｐｏｐｐｅｍａ，Ｓ．ａｎｄ Ｖｉｓｓｅｒ，Ｌ．，Ｂｉｏｔｅｓｔ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ３（１９８７）１３１－１３９参照）から、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインとのキメラ化およびその後のヒト化によって得られた（国際公開第２００５／０４４８５９号および同第２００７／０３１８７５号参照）。これらの「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号に詳細に開示されている。
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１重鎖の可変領域（ＶＨ）（配列番号１１）
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１軽鎖の可変領域（ＶＬ）（配列番号１２）

一実施形態では、「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、配列番号７、８、および１３から３３（特に、国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ－ＨＨ２からＢ－ＨＨ９およびＢ－ＨＬ８からＢ－ＨＬ１７に対応）の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する。１つの具体的な実施形態では、このような可変ドメインは、配列番号１４、１５、７、１９、２５、２７および２９（国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ－ＨＨ２、ＢＨＨ－３、Ｂ－ＨＨ６、Ｂ－ＨＨ８、Ｂ－ＨＬ８、Ｂ－ＨＬ１１およびＢ－ＨＬ１３に対応）からなる群より選択される。１つの具体的な実施形態では、「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、配列番号８（国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ－ＫＶ１に対応）の軽鎖の可変領域（ＶＬ）を有する。１つの具体的な実施形態では、「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、配列番号７（国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ－ＨＨ６に対応）の重鎖の可変領域（ＶＨ）と配列番号８（国際公開第２００５／０４４８５９号および国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ－ＫＶ１に対応）の軽鎖の可変領域（ＶＬ）とを有する。さらに、一実施形態では、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、ＩｇＧ１抗体である。本発明によれば、このようなアフコシル化ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Ｕｍａｎａ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０および国際公開第９９／１５４３４２号に記載された手順に従ってＦｃ領域において糖鎖工学的に操作（ＧＥ）されている。一実施形態では、アフコシル化された糖鎖操作されたヒト化Ｂ－Ｌｙ１は、Ｂ－ＨＨ６－Ｂ－ＫＶ１ ＧＥである。一実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ（推奨ＩＮＮ、ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．４，２０１２，ｐ．４５３）である。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１またはＲＯ５０７２７５９と同義である。これは、以前の全てのバージョン（例えば、Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．１，２０１１，ｐ．７５－７６）に取って代わるものであり、以前はアフツズマブ（推奨ＩＮＮ、ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．２，２００９，ｐ．１７６；Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．２，２００８，ｐ．１２４）として知られていたものである。本明細書において使用する場合、オビヌツズマブとは、ガザイバ（登録商標）およびそのバイオシミラー抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号１０の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。
重鎖（配列番号９）
軽鎖（配列番号１０）

いくつかの実施形態では、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、アフコシル化糖鎖操作ヒト化Ｂ－Ｌｙ１である。このような糖鎖工学的に操作されたヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域におけるグリコシル化のパターンが変化しており、好ましくはフコース残基のレベルが低減している。好ましくは、フコース量はＡｓｎ２９７のオリゴ糖の全量の６０％以下である（一実施形態では、フコース量は４０％から６０％の間であり、別の実施形態では、フコース量は５０％以下であり、さらに別の実施形態では、フコース量は３０％以下である）。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は二分されている。これらの糖鎖工学的に操作されたヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、増大したＡＤＣＣを有する。

「リツキシマブと比較した抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ－Ｎｏ．ＣＣＬ－８６）上のＣＤ２０に対する結合能の比」は、実施例番号２に記載されるように、Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ－Ｎｏ．ＣＣＬ－８６）を含むＦＡＣＳＡｒｒａｙ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）においてＣｙ５とコンジュゲートされた当該抗ＣＤ２０抗体およびＣｙ５とコンジュゲートされたリツキシマブを使用して、直接免疫蛍光測定によって決定され（平均蛍光強度（ＭＦＩ）が測定され）、以下のように計算される。

ＭＦＩは平均蛍光強度である。本明細書で使用される「Ｃｙ５標識率」は、抗体分子あたりのＣｙ５標識分子の数を意味する。

典型的には、当該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した第２の抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ－Ｎｏ．ＣＣＬ－８６）上のＣＤ２０に対する結合能の比が０．３から０．６であり、一実施形態では、０．３５から０．５５、また別の実施形態では０．４から０．５である。

一実施形態では、当該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、例えば、ＧＡ１０１抗体は、上昇した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する。

「増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する抗体」とは、当業者に既知の任意の適切な方法によって決定してＡＤＣＣの増加を有する、本明細書でその用語が定義される抗体を意味する。受け入れられているインビトロＡＤＣＣアッセイの１つは、以下の通りである。
１）本アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが既知である標的細胞を使用する；
２）本アッセイは、エフェクター細胞として、ランダムに選ばれた健常ドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）本アッセイは、次のプロトコルに従って実施される：
ｉ）標準的な密度遠心分離手順を使用してＰＢＭＣを単離し、それを５ｘ１０^６細胞／ｍｌでＲＰＭＩ細胞培地に懸濁させる；
ｉｉ）標準的な組織培養法により標的細胞を、増殖させ、生存率が９０％を越える指数増殖期から回収し、ＲＰＭＩ細胞培地中で洗浄し、１００マイクロキュリーの^５１Ｃｒで標識し、細胞培地で２回洗浄し、１０^５細胞／ｍｌの密度で細胞培地に再懸濁させる；
ｉｉｉ）１００マイクロリットルの上記の最終標的細胞懸濁液を９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移す；
ｉｖ）抗体を細胞培地で４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌに段階希釈し、５０マイクロリットルの得られた抗体溶液を９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加し、上記の濃度範囲全体を網羅する様々な抗体濃度で３連で試験する；
ｖ）最大放出（ＭＲ）対照として、標識された標的細胞を含有するプレート中の３つのさらなるウェルに、抗体溶液の代わりに（上記ポイントｉｖ）、５０マイクロリットルの２％（ＶＮ）非イオン性界面活性剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）水溶液を入れる；
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）対照として、標識された標的細胞を含有するプレート中の３つの追加のウェルに、抗体溶液の代わりに（上記ポイントｉｖ）、５０マイクロリットルのＲＰＭＩ細胞培養培地を入れる；
ｖｉｉ）その後、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０ｘｇで１分間遠心分離し、４℃で１時間インキュベートする；
ｖｉｉｉ）５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁液（上記ポイントｉ）を各ウェルに加え、２５：１のエフェクター：標的細胞比を得て、プレートを５％ＣＯ２雰囲気下のインキュベーター内に３７℃で４時間置く；
ｉｘ）無細胞上清を各ウェルから回収し、ガンマカウンターを使用して、実験的に放出された放射活性（ＥＲ）を定量する；
ｘ）特異的溶解のパーセンテージは、式（ＥＲ－ＭＲ）／（ＭＲ－ＳＲ）×１００（式中、ＥＲは、その抗体濃度について定量された平均放射能（上記ポイントｉｘ参照）であり、ＭＲは、ＭＲ対照（上記ポイントＶ参照）について定量された平均放射能（上記ポイントｉｘ参照）であり、ＳＲは、ＳＲ対照（上記ポイントｖｉ参照）について定量された平均放射能（上記ポイントｉｘ参照）である）に従って各抗体濃度について計算される；
４）「増加したＡＤＣＣ」は、上記試験した抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの増加、および／または上記試験した抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの２分の１を達成するのに必要な抗体濃度の低減のいずれかと定義される。一実施形態では、ＡＤＣＣの増加は、比較抗体（増加したＡＤＣＣを欠く）が、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように操作されたおよび／またはフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）遺伝子（例えば、ＦＵＴ８ノックアウトのために操作されたものを含む）からの発現を低減させるように操作された宿主細胞によって産生されなかったことを除いて当業者に既知の同じ標準的な産生、精製、製剤化および貯蔵方法を使用し、同種の宿主細胞によって産生された同じ抗体によって媒介される、上記アッセイで測定されたＡＤＣＣと比較したものである。

当該「ＡＤＣＣの増加」は、例えば、当該抗体の突然変異および／または糖鎖工学的操作によって得ることができる。一実施形態では、抗体は、例えば国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）；米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０）において、ＧｌｃＮＡｃによって二分された抗体のＦｃ領域に結合したニ分岐オリゴ糖を有するように糖鎖工学的に操作されている。別の実施形態では、抗体は、タンパク質のフコシル化が欠損した宿主細胞（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞またはアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）欠失もしくはＦＵＴ遺伝子発現ノックダウンを有する細胞）内に発現させることにより、Ｆｃ領域に結合した糖鎖上のフコースを欠失させるように糖鎖工学的に操作されている（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号参照）。さらに別の実施形態では、抗体配列は、ＡＤＣＣを増強するためにそのＦｃ領域が操作されている（例えば、一実施形態では、そのような改変された抗体バリアントは、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位および／または３３４位（残基のＥＵナンバリング）に１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む）。

用語「補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）」は、補体の存在下での、本発明の抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を意味する。ＣＤＣは、補体の存在下で、本発明による抗ＣＤ２０抗体を用いてＣＤ２０発現細胞の調製物を処理することにより測定することができる。ＣＤＣは、抗体が４時間後に濃度１００ｎＭで腫瘍細胞の２０％以上の溶解（細胞死）を誘導した場合に、見出される。一実施形態では、^５１ＣｒまたはＥｕ標識した腫瘍細胞を用いてアッセイが行われ、放出された^５１ＣｒまたはＥｕの測定が行われる。対照には、補体を含むが抗体を含まない腫瘍標的細胞のインキュベーションが含まれる。

「ＣＤ２０抗原の発現」という用語は、細胞、例えばＴ細胞またはＢ細胞における、ＣＤ２０抗原の有意な発現レベルを示すことを意図している。一実施形態では、本発明の方法に従って治療される患者は、Ｂ細胞上に有意なレベルのＣＤ２０を発現する。Ｂ細胞上のＣＤ２０発現は、当技術分野で知られている標準的なアッセイによって決定することができ、例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳを使用して、または対応するｍＲＮＡのＰＣＲベースの検出を介して測定される。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子（ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及は、任意に２つ以上のそのような分子の組合せを含む。

本明細書で使用される「約」という用語は、この技術分野の当業者であれば容易に理解する、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」が付く値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。

本明細書に記載の本発明の態様および実施形態が、態様および実施形態「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」を含むことが理解される。

ＩＩＩ．方法
一態様では、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することによって個体において小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を治療するための方法が本明細書において提供され；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。別の態様では、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することによって小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を有する個体における再発のリスクおよび／または頻度を低減させるための方法が本明細書において提供され；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。一態様では、有効量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与することによって、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための方法、または、小児期発症ＩＮＳを有する個体における循環末梢Ｂ細胞を枯渇させるための方法が本明細書において提供され；個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである。

いくつかの実施形態では、例えば、個体の体重が４５ｋｇ以上である場合、本方法は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第１の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含む。いくつかの実施形態では、例えば、個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、本方法は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第１の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含む。本明細書に記載のとおり、いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＨＶＲ－Ｈ２配列、および配列番号３のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、配列番号４のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＨＶＲ－Ｌ２配列、および配列番号６のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列と、配列番号１０のアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ配列番号１０のアミノ酸と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、オビヌツズマブである。

抗ＣＤ２０抗体
本開示の特定の態様は、例えば、本明細書中に記載される方法において使用するための、例えば、小児期発症ＩＮＳ（例えば、ＦＲＮＳまたはＳＤＮＳ）を治療するための、またはその再発のリスクおよび／または頻度を低減させるための抗ＣＤ２０抗体に関する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、ＩＩ型抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１抗体である。

ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されているようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示されているような）およびＡＴ８０ ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して減少したＣＤＣを有する（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載のＧＡ１０１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０は、ヒトＣＤ２０に結合する以下の抗体のいずれか１つである：（１）ＧＹＡＦＳＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＦＰＧＤＧＤＴＤ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＱＭＳＮＬＶＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２およびＡＱＮＬＥＬＰＹＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体：（２）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号８のアミノ酸配を含むＶＬドメインを含む抗体、（３）配列番号９のアミノ酸配列および配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体；（４）オビヌツズマブとして知られる抗体、または（５）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体。一実施形態では、ＧＡ１０１抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載の抗体のいずれかのＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、およびＨＶＲ－Ｌ３、例えば、配列番号７からの３つのＨＶＲおよび配列番号８からの３つのＨＶＲ、配列番号９からの３つのＨＶＲおよび配列番号１０からの３つのＨＶＲ、または表２に提供されるアミノ酸配列のいずれかのＨＶＲを含む。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＹＳＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＦＰＧＤＧＤＴＤＹＮＧＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＶＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ（配列番号８）。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＹＳＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＦＰＧＤＧＤＴＤＹＮＧＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号９）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＶＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号１０の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体は、配列番号９を含む重鎖と配列番号１０を含む軽鎖とを含む。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、以下の表２に記載されているポリペプチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体（例えばＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、アフコシル化された糖鎖操作抗体である。このような糖鎖工学的に操作された抗体は、Ｆｃ領域に変更されたグリコシル化のパターンを有しており、好ましくは、フコース残基のレベルが低減している。好ましくは、フコース量はＡｓｎ２９７のオリゴ糖の全量の６０％以下である（一実施形態では、フコース量は４０％から６０％の間であり、別の実施形態では、フコース量は５０％以下であり、さらに別の実施形態では、フコース量は３０％以下である）。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は二分されている。いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）によって二分された二分岐オリゴ糖を含むＦｃ領域を含む。このような糖鎖工学的に操作されたヒト化抗ＣＤ２０（例えばＢ－Ｌｙ１）抗体は、ＡＤＣＣが増加している。

このオリゴ糖構成要素は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態および特定の生物活性を含む、治療用糖タンパク質の効能に関連した特性に大きく影響し得る。そのような特性は、オリゴ糖の有無だけでなく、その特定の構造にも依存し得る。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間で、何らかの一般化が可能である。例えば、特定のオリゴ糖構造が特定の糖結合タンパク質との相互作用を通じて血流からの糖タンパク質の速やかなクリアランスを媒介する一方、他のオリゴ糖構造は抗体によって結合され、望まれない免疫反応を惹起してしまう可能性がある。（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１９９６）９７５－８１）。

哺乳動物細胞は、タンパク質をヒトへの適用に最も適合する型でグリコシル化する能力があるため、治療用糖タンパク質の産生に好ましい宿主である。（Ｃｕｍｍｉｎｇ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １（１９９１）１１５－３０；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１９９６）９７５－８１）。細菌はタンパク質をほとんどグリコシル化せず、酵母、糸状菌、昆虫および植物細胞のようなその他の種類の一般的な宿主と同様に、血流からの急速なクリアランス、望ましくない免疫相互作用、および（場合によっては）生物活性の低減と関連するグリコシル化パターンを生じる。哺乳類細胞のうちで、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、過去２０年間で最も一般的に用いられてきた。適切なグリコシル化パターンを与えることに加えて、こうした細胞は、遺伝子的に安定で高度に生産的なクローン性細胞株を一貫して生成することを可能にする。こうした細胞は、無血清培地を用いて単純なバイオリアクター中で高密度まで培養することができ、安全かつ再現可能なバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般的に用いられる動物細胞は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ－およびＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞を含む。最近では、トランスジェニック動物からの産生も試験されている。（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１９９６）９７５－９８１）．

抗体は重鎖定常領域の保存された位置に糖鎖構造を含有し、各アイソタイプは異なるアレイのＮ－結合型糖鎖構造を有し、これがタンパク質の集合、分泌または機能活性に様々に影響する。（Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５（１９９７）２６－３２）．結合されたＮ－結合型糖鎖の構造は、プロセシングの程度によって相当に異なり、高マンノース型、多分岐型および二分岐複合オリゴ糖を含み得る。（Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５（１９９７）２６－３２）。典型的には、特定のグリコシル化部位で結合したコアオリゴ糖構造の不均一なプロセシングが存在し、モノクローナル抗体であっても複数のグリコフォームとして存在する。同様に、抗体のグリコシル化における大きな差異が細胞株間で生じ、異なる培養条件下で増殖させた特定の細胞株については僅かな差異さえも見られることが示されている。（Ｌｉｆｅｌｙ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（８）（１９９５）８１３－２２）。

単純な産生プロセスを維持し、望ましくない重大な副作用を潜在的に回避しながら、効力を大きく増加させる一つの方法は、Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０および米国特許第６６０２６８４号に記載されているように、そのオリゴ糖構成要素を操作することによってモノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を増強することである。ＩｇＧ１型抗体は、癌免疫療法において最も一般的に使用される抗体であり、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に保存されたＮ－結合型グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７と結合した２つの複合二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメインの間に埋もれ、ポリペプチド骨格と広範な接触を形成しており、その存在は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を媒介する抗体にとって必須である（Ｌｉｆｅｌｙ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（１９９５）８１３－８２２；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１６３（１９９８）５９－７６；Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（１９９７）２６－３２）。

二分岐オリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ１１（「ＧｎＴＩＩ１７ｙ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞によって産生された抗神経芽細胞腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロのＡＤＣＣ活性を有意に増加させることが以前に示された。（全内容が参照により本明細書に援用される、Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０および国際公開第９９／１５４３４２号を参照）。抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性および特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な産業用細胞株において産生された場合に殆ど効力を有さず臨床的に有用ではない非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Ｕｍａｎａ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６－１８０）。その研究は、ＡＤＣＣ活性の大幅な増加がＧｎＴＩＩＩを発現するように抗体産生細胞を操作することにより得られ、これはさらに、二分された非フコシル化オリゴ糖を含む定常領域（Ｆｃ）結合二分オリゴ糖の割合の、天然抗体に見られるレベルを超える増加にもつながることを最初に示した。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）は、ヒトＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、改変されたＮ－結合型オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＮ－結合型オリゴ糖は、改変されていないＮ－結合型オリゴ糖を有する抗体と比較してフコース残基が低減している。いくつかの実施形態では、二分されたオリゴ糖は、二分された複合オリゴ糖である。いくつかの実施形態では、Ｎ－結合型オリゴ糖は、二分された非フコシル化オリゴ糖が増加するように改変されている。いくつかの実施形態では、二分された非フコシル化オリゴ糖は、ハイブリッド型である。いくつかの実施形態では、二分された非フコシル化オリゴ糖は、複合型である。より詳細な記述については、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）；および米国特許第８８８３９８０号（Ｕｍａｎａら）を参照のこと。

いくつかの実施形態では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。

抗体の調製
上記の実施形態のいずれかによる抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）も、以下のセクション１～７に記載されているような特徴のいずれかを、単独でまたは組み合わせて組み込むことができる。

１．抗体親和性
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。

一実施形態では、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識されていない抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（^１２５Ｉ）標識された抗原でＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」第２９３巻第８６５～８８１頁（１９９９年）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２～５時間にわたって室温（およそ２３℃）で遮断する。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［^１２５Ｉ］－抗原を、目的のＦａｂの連続希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致する）。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。次に、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイに使用するために選択する。

別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを、約１０の反応単位（ＲＵ）で、固定化された抗原ＣＭ５チップによって２５℃で実行する。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化する。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）を用いて５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）になるまで希釈し、その後、５μｌ／分の流量で注入して、約１０の反応単位（ＲＵ）の結合タンパク質に達した。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロックする。動態測定のため、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、およそ２５μｌ／分の流速にて２５℃で０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に注射する。結合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、結合および解離センサーグラムを同時にフィッテイングさせることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６ Ｍ－１ ｓ－１を超える場合、会合速度は、流動停止を備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌型キュベットを伴う８０００シリーズのＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計により測定される、漸増濃度の抗原の存在下における、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の２５℃での蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過を１６ｎｍとする）の増加または減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって決定することができる。

２．抗体断片
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ断片、および以下に記載する他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の参照には、例えばＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい；また、国際公開第９３／１６１８５号を参照されたい；および米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。

ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディおよびテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９～１３４（２００３）に記載されている。

単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体断片である。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照）である。

抗体断片は、本明細書に記載されているように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、および組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができる。

３．キメラ抗体およびヒト化抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）およびヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性および親和性は保持するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体由来であり、かつＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列由来である１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復するか、または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。

ヒト化された抗体およびその作製方法については、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で概説され、さらに以下に記載されている。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトを記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（リサーフェシングを記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフルの「ガイド付き選択アプローチを記載する）。

ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照）；ならびにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照）。

４．ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して産生され得る。ヒト抗体は一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するか、または染色体外に存在するか、または動物の染色体にランダムに統合されている。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号；および、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。このような動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変されてもよい。

ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。

ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。

５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で知られている。そのような方法については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説し、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；およびＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）にさらに記載されている。

特定のファージディスプレイ法では、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中でランダムに再結合され、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているように抗原結合ファージのスクリーニングを行うことができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を与える。代替的に、ナイーブレパートリは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）によって記載されているように、免疫化を行わずに、広範囲の非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダムな配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、非常に可変的なＣＤＲ３領域をコードし、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されているように、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許刊行物としては、例えば、以下のものが挙げられる。米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体断片とみなされる。

６．多重特異性抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施形態では、結合特異性の１つはＣＤ２０に対してであり、他は他のいずれかの抗原に対してである。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ２０の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、細胞傷害性剤をＣＤ２０を発現する細胞に局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。

多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照）、および「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が含まれるが、これらに限定されない。また、多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）；２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）；二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーの使用（例えばＫｏｓｔｅｌｎｙｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）参照）；および単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えばＧｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照）；および、例えばＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載の三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。

「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号を参照されたい）。

本明細書の抗体または断片には、ＣＤ２０および別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」もまた含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号を参照）。

７．抗体バリアント
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製されてもよい。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。欠失、挿入および置換の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。

ａ）置換、挿入および欠失バリアント
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換による突然変異誘発に関して目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表Ａに「好ましい置換」の見出しの下で示される。より実質的な変化は、表Ａに「例示的な置換」の見出しの下に示され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングする。

アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

一種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基の置換を伴う。一般に、さらなる研究のために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の改変（例えば、改善）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体の特定の生物学的特性を有する。例示的な置換バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して、簡便に生成され得る。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が突然変異され、バリアント抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。

変更（例えば、置換）は、抗体親和性を改善するために、例えば、ＨＶＲにおいて行われてもよい。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、および／または抗原と接触する残基内で行われ得、結果として得られるバリアントＶＨまたはＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーの構築およびそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラー．プローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、このライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３が、標的にされることが多い。

特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲ中で行われてよい。そのような変更は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上に提供されるバリアントＶＨおよびＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＨＶＲは、変化していないか、または１つ以下、２つ以下、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。

突然変異誘発を標的とし得る抗体の残基または領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１－１０８５によって記載されるように、「アラニンスキャンニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）の残基またはグループを同定し、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置換して、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。これに代えて、またはこれに加えて、抗体と抗原との間の接点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、または除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を含有するか否かを決定するためにスクリーニングされてもよい。

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端またはＣ末端と酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドとの融合が含まれる。

ｂ）グリコシル化バリアント
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化されている程度を増加または減少させるように変化する。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。

抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着した炭水化物は変更され得る。哺乳動物細胞によって産生されたネイティブ抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体中のオリゴ糖の改変は、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作成するために行われてもよい。

一実施形態では、抗体バリアントは、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）付着するフコースを欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、そのような抗体内のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％または２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定されたように、Ａｓｎ２９７（例えば、複合体構造、ハイブリッド構造、および高マンノース構造）に付着した全ての糖鎖構造の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体内のわずかな配列変異のため、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４位と３００位との間に位置し得る。このようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠乏」抗体バリアントに関する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；同第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；同第２００２／０１６４３２８号；同第２００４／００９３６２１号；同第２００４／０１３２１４０号；同第２００４／０１１０７０４号；同第２００４／０１１０２８２号；同第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；同第２００３／０８４５７０号；同第２００５／０３５５８６号；同第２００５／０３５７７８号；同第２００５／０５３７４２号；同第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；および国際公開第２００４／０５６３１２号，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）。

例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供さ与される。そのような抗体バリアントは、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）；および米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ）に記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体バリアントも提供される。このような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；同第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；および同第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。

ｃ）Ｆｃ領域バリアント
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸改変は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを生成する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。

特定の実施形態では、本発明は、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を有することにより、インビボでの抗体の半減期が重要ではあるが、特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣ等）が不要または有害である用途に望ましい候補となる抗体バリアントを企図する。ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／消失を確認するために、インビトロおよび／またはインビボの細胞傷害性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、およびＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）、およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９～１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的にまたは追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えばＣｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルで評価することができる。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）。ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期の決定も、当技術分野で既知の方法を用いて行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照）。

エフェクター機能が低減した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９の１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体には、アラニンへの残基２６５および２９７の置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。

特定の実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、エフェクター機能（ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣなど）を減弱させるための１つ以上のアミノ酸改変をさらに含む。例示的な実施形態では、エフェクター機能を減弱させる改変は、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを変更しない改変である。特定の実施形態では、エフェクター機能を減弱させる改変は、ヒトエフェクター細胞への結合、１つ以上のＦｃ受容体への結合および／またはＦｃ受容体を発現する細胞への結合を低減または排除する。例示的な実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、以下の改変を含む：ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（減弱したエフェクター機能をもたらす）。置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧトリプルバリアントはＬＡＬＡＰＧと呼ばれる）は、Ｆｃ受容体および補体への結合を低減させることが以前に示されている（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２５１５３１号を参照）。

様々な実施形態では、低減したエフェクター機能を有するＦｃバリアントとは、野生型Ｆｃ領域（例えば、他の突然変異を有していてもよいが、エフェクター機能を低減させる突然変異を有していないＦｃ領域）によって達成されるエフェクター機能と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上、エフェクター機能（例えば、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、および／またはＦｃＲへの結合などの活性）を低減させるＦｃバリアントを指す。特定の実施形態では、エフェクター機能が低減したＦｃバリアントとは、野生型Ｆｃ領域と比較して検出可能なエフェクター機能を全て排除したＦｃバリアントを指す。エフェクター機能を測定するためのアッセイは、当技術分野で知られており、以下に説明する。

ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／消失を確認するために、インビトロおよび／またはインビボの細胞傷害性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）ことを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）、およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９～１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。これに代えて、またはこれに加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルで評定され得る。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）。

ＦｃＲへの結合が改善または縮小した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号，およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）

特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、および／または３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。

いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の変更（すなわち改善または縮小のいずれか）をもたらすＦｃ領域内で変更を行う。

半減期が増大し、胎生Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）ａｎｄ Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。

Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、および国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。

ｄ）システイン操作抗体バリアント
特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望ましいかもしれない。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能部位に配置され、それは、本明細書でさらに説明するように、例えば薬物部分またはリンカー－薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートさせて免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。特定の実施形態では、以下の残基のうちのいずれか１つ以上がシステインで置換されていてもよい。軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載されるように生成され得る。

ｅ）抗体誘導体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変され得る。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗体に付着しているポリマーの数は様々であり、複数のポリマーが付着している場合には、それらは同じ分子であっても、異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数および／またはタイプは、限定するものではないが、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかなどの考慮事項に基づいて決定することができる。

別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体および非保護性部位のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非保護性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であってもよく、通常の細胞に害を与えないが、抗体非保護性部位に近位の細胞が死滅する温度まで非保護性部位を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。

Ａ．組換え方法および組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え法および組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２０抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／または抗体のＶＨを構成するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードしていてもよい。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下を用いて形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列と、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列とをコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＣＤ２０抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上述のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意に、宿主細胞（または宿主細胞培地）から抗体を回収することとを含む。

抗ＣＤ２０抗体の組換え産生のために、例えば、上述のもの等の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。このような核酸は、従来の手順を用い（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）、容易に単離され、配列決定されてもよい。

抗体コード化ベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化およびエフェクター機能が必要とされていない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい）発現後、本発明の抗体は、細菌細胞ペーストから可溶性画分で単離されてもよく、さらに精製されてもよい。

原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）およびＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。

また、グリコシル化抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、昆虫細胞と組み合わせて使用することができ、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用することができる。

植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。

脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎臓系統（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載の２９３細胞または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、「Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）」に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌腫細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、およびＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）。

Ｂ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＣＤ２０抗体は、それらの物理的／化学的特性および／または生物活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され得るか、スクリーニングされ得るか、または特徴付けられ得る。

１．結合アッセイおよび他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体を、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等の公知の方法によって、その抗原結合活性について試験する。ＣＤ２０結合は、当該分野で公知の方法を使用して決定され得、例示的な方法が本明細書に開示される。一実施形態では、結合はラジオイムノアッセイを用いて測定される。例示的なラジオイムノアッセイを以下に示す。ＣＤ２０抗体はヨウ素化され、固定濃度のヨウ素化抗体と段階希釈された減少した濃度の非標識ＣＤ２０抗体とを含有する競合反応混合物が調製される。ＣＤ２０を発現する細胞（例えば、ヒトＣＤ２０を安定的にトランスフェクトしたＢＴ４７４細胞）をこの反応混合物に加える。インキュベーション後、細胞を洗浄して、遊離ヨウ素化ＣＤ２０抗体を細胞に結合したＣＤ２０抗体から分離する。結合したヨウ素化ＣＤ２０抗体のレベルは、例えば細胞に結合した放射能を計測することにより決定され、結合親和性は標準的な方法で決定される。別の実施形態では、表面発現ＣＤ２０（例えば、Ｂ細胞サブセット上）に結合するＣＤ２０抗体の能力は、フローサイトメトリーを用いて評価される。末梢白血球を入手し（例：ヒト、カニクイザル、ラットまたはマウス）、細胞を血清でブロックする。標識ＣＤ２０抗体を段階希釈で添加し、Ｔ細胞も染色してＴ細胞サブセットを同定する（当技術分野で既知の方法を使用）。試料のインキュベーションと洗浄後、フローサイトメーターを用いて細胞をソートし、当技術分野でよく知られた方法でデータを解析する。別の実施形態では、ＣＤ２０結合は、表面プラズモン共鳴を使用して分析され得る。例示的な表面プラズモン共鳴法を実施例に示す。

別の態様では、競合アッセイを用いて、ＣＤ２０への結合に関して本明細書に開示した抗ＣＤ２０抗体のいずれかと競合する抗体を同定することができる。特定の実施形態では、このような競合抗体は、本明細書に開示の抗ＣＤ２０抗体のいずれかが結合する同じエピトープ（例えば直鎖状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示の方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）‘‘Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，’’ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。

例示的な競合アッセイでは、固定されたＣＤ２０を、ＣＤ２０に結合する第１の標識抗体（例えば、リツキシマブ、ＧＡ１０１抗体など）と、ＣＤ２０への結合について第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化したＣＤ２０を、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートする。ＣＤ２０への第１の抗体の結合を許容する条件下でインキュベーションした後、過剰の未結合抗体が除去され、固定化されたＣＤ２０に関連する標識の量が測定される。固定化ＣＤ２０に関連する標識の量が対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減している場合、第２の抗体がＣＤ２０への結合について第１の抗体と競合していることが示される。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。

２．活性アッセイ
本開示の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＩ型抗体）は、当技術分野で既知の１つ以上の活性アッセイによって同定および／または特徴付けすることができる。例えば、本明細書に記載されているように、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）および／または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が使用され得る。

上記アッセイのいずれもが、抗ＣＤ２０抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫コンジュゲートを使用して実施され得ることが理解される。

上記のアッセイはいずれも、抗ＣＤ２０抗体および追加の治療剤を使用して行われ得ることが理解される。

ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与方法
個体における小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を治療するための方法が本明細書において提供され、本方法は、個体に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を適用することを含む。また、本明細書では、個体における循環末梢Ｂ細胞を枯渇させる方法であって、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後、Ｂ細胞は、個体からの末梢血中に循環末梢Ｂ細胞が約５個／μＬ以下で存在するようなレベルまで枯渇させる方法が提供される。また、本明細書では、個体における循環末梢Ｂ細胞を枯渇させる方法であって、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第２の抗体曝露を個体に適用することを含み、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後、Ｂ細胞は、個体からの末梢血中に循環末梢Ｂ細胞が約５個／μＬ以下で存在するようなレベルまで枯渇し、これは第１の抗体曝露の第１の用量後少なくとも５２週間持続する、枯渇させる方法が提供される。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、個体または患者はヒトである。いくつかの実施形態では、個体または患者は、２歳以上２５歳以下のヒトである。いくつかの実施形態では、個体または患者は、２歳より大きく２５歳未満のヒトである。いくつかの実施形態では、例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の体重に基づく投薬を用いる実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ未満である。いくつかの実施形態では、例えば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の固定投薬を用いる実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、１８歳前にＩＮＳ（例えば、ＦＲＮＳまたはＳＤＮＳ）と診断されている。小児期発症ＩＮＳ（例えば、ＦＲＮＳまたはＳＤＮＳ）を診断するためのガイドラインは当技術分野で公知であり、限定されないが、以下に記載されるものを含む：Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｇｌｏｂａｌ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｗｏｒｋ Ｇｒｏｕｐ．ＫＤＩＧＯ ２０２１ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２０２１；１００：Ｓ１－２７６）。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、小児期発症高頻度再発性ネフローゼ症候群（ＦＲＮＳ）を有する。いくつかの実施形態では、個体または患者は、疾患発症の６ヶ月以内に６ヶ月あたり２回以上再発したことがあるか、または任意のその後の１２ヶ月の期間に１２ヶ月あたり４回以上再発したことがある。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、小児期発症ステロイド依存性ネフローゼ症候群（ＳＤＮＳ）を有する。いくつかの実施形態では、個体または患者は、プレドニゾンもしくはプレドニゾロンによる治療中（全用量または漸減中のいずれか）、またはプレドニゾンもしくはプレドニゾロンの中断の１５日以内に、２回連続して再発したことがある。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、例えば、本開示の方法を用いる治療の前に完全寛解にある。いくつかの実施形態では、完全寛解は、浮腫がないこと、ＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇ、およびタンパク質について微量または陰性の３回の連続した１日の尿ディップスティック読み取り値として定義される。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、例えば、本開示の方法による治療の前に、６ヶ月以内に少なくとも１回再発したことがある。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、６ヶ月以内に、例えば、本開示の方法による治療の前にシクロホスファミドを受けており、シクロホスファミドの中断の後で少なくとも１回の再発を経験している。

いくつかの実施形態では、個体または患者は、その年齢に対して正常範囲内の推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）を有する。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第１の抗体曝露および本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体への第２の抗体曝露を個体に適用することを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間、第１の抗体曝露後約１９週間、第１の抗体曝露後約２０週間、第１の抗体曝露後約２１週間、第１の抗体曝露後約２２週間、第１の抗体曝露後約２３週間、第１の抗体曝露後約２４週間、第１の抗体曝露後約２５週間または第１の抗体曝露後約２６週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０または１９週間のいずれかに満たないうちは提供されない。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５週間のいずれかに満たないうちは提供されない。すなわち、第２の抗体曝露は、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０または１９の上限値と、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５の独立に選択された下限値とを有する週の範囲のいずれかになるまで行われず、下限値は上限値よりも小さい。

本明細書に記載の投薬レジメンでは、用量間の時間を追跡するための一貫したシステムを使用し、これにより、第１の用量が１日目または第０週に患者に投与される。本明細書に記載されているように、本開示の抗体曝露は、１つまたは２つの用量を含み得る。（本明細書に記載されているように）抗体曝露が１つの用量を含有する場合、第１の抗体曝露後一定期間が経過するまでは提供されない第２の抗体曝露への言及は、第１の抗体曝露の用量（例えば、１日目または第０週）と第２の抗体曝露の用量との間の経過時間を意味する。第１の抗体曝露が２つの用量を含む場合、第１の抗体曝露の第１の用量は、１日目または第０週に提供される。（本明細書に記載されるように）抗体曝露が２つの用量を含有する場合、第１の抗体曝露後一定期間が経過するまでは提供されない第２の抗体曝露への言及は、第１の抗体曝露の２つの用量のうちの第１の用量（例えば、１日目または第０週）と、第２の抗体曝露の２つの用量のうちの第１の用量との間の経過時間を指す。例えば、本開示の方法が２つの用量の第１の抗体曝露と２つの用量の第２の抗体曝露とを含み、第２の抗体曝露が第１の抗体曝露後約２２週間は提供されない場合、第１の抗体曝露の第１の用量と第２の抗体曝露の第１の用量との間隔は約２２週である。

いくつかの実施形態では、本開示の第１の抗体曝露は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇまたは約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇ、約３８ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４２ｍｇ／ｋｇまたは約４４ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ未満である。

いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、２つの用量を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、２つの用量を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露は、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第１の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第２の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ未満である。

いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第２の用量は、第１の抗体曝露の第１の用量後約１．５週間から約２．５週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第１の抗体曝露の第２の用量は、第１の抗体曝露の第１の用量後約２週間は提供されない。

いくつかの実施形態では、本開示の第２の抗体曝露は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇまたは約２２００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇ、約３８ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４２ｍｇ／ｋｇまたは約４４ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ未満である。

いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、２つの用量を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第１の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ以上である。

いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、２つの用量を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露は、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第１の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、約２０ｍｇ／ｋｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する。いくつかの実施形態では、個体の体重は４５ｋｇ未満である。

いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、第２の抗体曝露の第１の用量後約１．５週間から約２．５週間は提供されない。いくつかの実施形態では、第２の抗体曝露の第２の用量は、第２の抗体曝露の第１の用量後約２週間は提供されない。

いくつかの実施形態では、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、静脈内で投与される（例えばＩＶ注入）。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを（例えば、本明細書に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて）投与することをさらに含む。ベクロメタゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメサゾン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、コルチゾン、およびコルチゾールを含むがこれらに限定されない、種々の天然および合成グルココルチコイド／コルチコステロイドが当技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、グルココルチコイド／コルチコステロイドは、メチルプレドニゾロンを含む。いくつかの実施形態では、グルココルチコイド／コルチコステロイドは、プレドニゾンを含む。本開示のグルココルチコイド／コルチコステロイドの有効量は当技術分野で知られており、標準的なアッセイによって容易に確認可能である。例えば、メチルプレドニゾロンを１日１回７５０～１０００ｍｇの用量で静脈内で投与してもよい。別の例として、プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇで経口投与し、任意に、７．５ｍｇ／日まで漸減させてもよい。いくつかの実施形態では、メチルプレドニゾロンを、各抗ＣＤ２０抗体注入の前に投与してもよい。いくつかの実施形態では、メチルプレドニゾロンを８０ｍｇ（例えば、個体の体重が４５ｋｇ以上の場合）または１．５ｍｇ／ｋｇ（例えば、個体の体重が４５ｋｇ未満の場合）で静脈内で投与してもよい。いくつかの実施形態では、経口プレドニゾンまたは同等物を、０．５～１ｍｇ／ｋｇ／日（最大６０ｍｇ／日）の用量で投与してもよい。いくつかの実施形態では、経口プレドニンまたは同等物を、０．５～１ｍｇ／ｋｇ／日（最大６０ｍｇ／日）の用量で投与し、５ｍｇ／日を目標に漸減させてもよい。いくつかの実施形態では、経口プレドニゾンまたは同等物を、０．５～２ｍｇ／ｋｇ／日（最大６０ｍｇ／日）の用量で投与してもよい。いくつかの実施形態では、経口プレドニンまたは同等物を、０．５～２ｍｇ／ｋｇ／日（最大６０ｍｇ／日）の用量で投与し、５ｍｇ／日を目標に漸減させてもよい。

いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中または投与後に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドを、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、例えばＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３０～６０分前に投与してもよい。いくつかの実施形態では、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の３０～６０分前に、８０ｍｇのメチルプレドニゾロンを静脈内で投与してもよい。いくつかの実施形態では、治療とともにプレドニゾン（例えば経口投与）および／またはメチルプレドニゾロン（例えばＩＶ投与）を投与し、その後、維持治療（例えば、ミコフェノール酸モフェチルまたはシクロホスファミド）を行ってもよい。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、有効量の抗ヒスタミン剤を（例えば、本明細書に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて）投与することをさらに含む。当技術分野で既知であり、現在臨床使用されている抗ヒスタミン剤には、ヒスタミンＨ_１－受容体およびヒスタミンＨ_２－受容体アンタゴニストまたは逆アゴニストが含まれる。いくつかの実施形態では、抗ヒスタミン剤は、ジフェンヒドラミンを含む。本開示の抗ヒスタミン剤の有効量は当技術分野で知られており、標準的なアッセイによって容易に確認可能である。例えば、ジフェンヒドラミンを、０．５～１ｍｇ／ｋｇの経口用量（最近接丸めした入手可能な錠剤製剤）で、最大用量５０ｍｇまで投与してもよい。

いくつかの実施形態では、抗ヒスタミン剤を、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中または投与後に、例えば予防治療として投与してもよい。いくつかの実施形態では、抗ヒスタミン剤は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、例えばＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３０～６０分前に投与してもよい。いくつかの実施形態では、０．５～１ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇまでのジフェンヒドラミンを、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の３０～６０分前に経口投与してもよい。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、有効量のアセトアミノフェンを投与することをさらに含む。例えば、アセトアミノフェンは１５ｍｇ／ｋｇの経口用量で、最大用量１０００ｍｇまで投与され得る。

いくつかの実施形態では、アセトアミノフェンを、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中または投与後に、例えば予防治療として投与してもよい。いくつかの実施形態では、アセトアミノフェンを、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、例えばＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３０～６０分前に投与してもよい。いくつかの実施形態では、１５ｍｇ／ｋｇ（最近接丸めした入手可能な錠剤製剤）または１０００ｍｇまでのアセトアミノフェンを、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の３０～６０分前に経口投与してもよい。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、標準治療を（例えば、本明細書に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて）投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、標準治療は、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前、投与中または投与後に、例えばＩＮＳの１つ以上の症候の治療または予防のために投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、個体において完全寛解をもたらす。いくつかの実施形態では、個体は、治療開始後１年、例えば本明細書に記載される第５２週に完全寛解にある。いくつかの実施形態では、完全寛解とは、例えば、本明細書中に記載されるように、ステロイド漸減の完了後に、介入性事象（第８週の後に生じる）の発生を伴わずに、朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇを有する状態のことを指す。いくつかの実施形態では、完全寛解は、例えば治療開始後１年、例えば本明細書に記載される第５２週において持続する。いくつかの実施形態では、持続的完全寛解は、再発または以下の特定の介入性事象のいずれも発生しない、朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇを含む：（１）全身性コルチコステロイドまたは他の免疫抑制治療を必要とする以下の事象のいずれかによって定義される再発（例えば、第８週の後に発生する）：（ａ）朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≧２ｇ／ｇまたは（ｂ）ディップスティックＵＡ≧３＋が３日間連続し、その３日間の直近の尿試料がＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される、または（ｃ）浮腫を伴う任意の１日のディップスティックＵＡ蛋白≧３＋であり、尿試料がＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される；（２）３０日間の期間における＞１４日間の任意の全身性コルチコステロイド使用（例えば、第８週の後に発生する）；（３）全身性コルチコステロイド以外のＩＮＳに対する任意の救済療法の開始（例えば、任意のときに発生する）；（４）有効性の欠如による治療中断（例えば、任意のときに発生する）；または（５）死亡（例えば、任意のときに発生する）。いくつかの実施形態では、完全寛解は、個体において、治療の第８週から第５２週まで持続し、個体は以下を経験しない：（１）全身性コルチコステロイドまたは他の免疫抑制治療を必要とする以下の事象のいずれかによって定義される再発：（ａ）朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≧２ｇ／ｇまたは（ｂ）ディップスティックＵＡ≧３＋が３日間連続し、その３日間の直近の尿試料がＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される、または（ｃ）浮腫を伴う任意の１日のディップスティックＵＡ蛋白≧３＋であり、尿試料がＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される；または（２）３０日間の期間における＞１４日間の任意の全身性コルチコステロイド使用。いくつかの実施形態では、全身性コルチコステロイド以外のＩＮＳに対するいかなる救済療法も開始することなく、治療の第５２週まで個体において完全寛解が維持される。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、個体における循環末梢Ｂ細胞の枯渇をもたらす。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞である。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞は、メモリーＢ細胞である。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞は、形質芽球または形質細胞である。いくつかの実施形態では、（例えば、本明細書に記載の方法のいずれかに従った）本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後、末梢血中に循環末梢Ｂ細胞は、約７個／μＬ以下、約６個／μＬ以下、約５個／μＬ以下、約４個／μＬ以下、約３個／μＬ以下、約２個／μＬ以下、約１個／μＬ以下、または約０．５個／μＬ以下存在する。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞のレベルは、本明細書に記載の高感度フローサイトメトリー（ＨＳＦＣ）を用いて測定される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＨＳＦＣを用いて検出限界を下回るレベルまで枯渇する。いくつかの実施形態では、ＨＳＦＣは、約１．０個／μＬ以下、約０．８個／μＬ以下、約０．６個／μＬ以下、約０．５個／μＬ以下または０．４４１個／μＬ以下のＢ細胞の定量下限（ＬＬＯＱ）を有する。いくつかの実施形態では、個体における循環末梢Ｂ細胞は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％枯渇する。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞の枯渇は、第１の抗体曝露の第１の用量後少なくとも５２週間持続する。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞の枯渇は、第１の抗体曝露の第１の用量後少なくとも５１週間、少なくとも５０週間、少なくとも４９週間、少なくとも４８週間、少なくとも４７週間、少なくとも４６週間、少なくとも４５週間、少なくとも４４週間、少なくとも４３週間、少なくとも４２週間、少なくとも４１週間、少なくとも４０週間、少なくとも３９週間、少なくとも３８週間、少なくとも３７週間、少なくとも３６週間、少なくとも３５週間、少なくとも３４週間、少なくとも３３週間、少なくとも３２週間、少なくとも３１週間、少なくとも３０週間、少なくとも２９週間、少なくとも２８週間、少なくとも２７週間、少なくとも２６週間、少なくとも２５週間、または少なくとも２４週間持続する。いくつかの実施形態では、循環末梢Ｂ細胞の枯渇は、例えば、治療前の同じ個体における対応する測定と比較して、または対照個体（例えば、治療を受けていない個体）における対応する測定と比較して、第１の抗体曝露後（例えば、本明細書中に記載されるような抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含む）、第２の抗体曝露後（例えば、本明細書中に記載されるような抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含む）、治療後３ヶ月（例えば、本明細書中に記載されるような第１および／または第２の抗体曝露を受けた後）、治療後６ヶ月（例えば、本明細書中に記載されるような第１および／または第２の抗体曝露を受けた後）、治療後９ヶ月（例えば、本明細書中に記載されるような第１および／または第２の抗体曝露を受けた後）、または治療後１２ヶ月（例えば、本明細書中に記載されるような第１および／または第２の抗体曝露を受けた後）に行われる循環末梢Ｂ細胞の測定を指す。

個体における循環末梢Ｂ細胞の枯渇をアッセイする方法、例えばＢ細胞マーカーを認識する１つ以上の抗体を用いるフローサイトメトリーは、当技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、高感度フローサイトメトリー（ＨＳＦＣ）を用いて、循環末梢Ｂ細胞の枯渇をアッセイすることができる（例えば、Ｖｉｔａｌ，Ｅ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６３：３０３８－３０４７および実施例１を参照のこと）。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７－Ｂ細胞）、メモリーＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋Ｂ細胞）、または形質芽球（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ２７＋ＣＤ３８＋＋Ｂ細胞）である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－細胞および／またはＣＤ１９＋ＣＤ３３－ＣＤ５６－細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－ＣＤ３３－ＣＤ５６－細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋Ｂ細胞、ＣＤ１９＋ＣＤ２０－Ｂ細胞、およびＣＤ１９＋ＣＤ２２＋Ｂ細胞を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、例えば末梢血試料由来の循環末梢Ｂ細胞である。

いくつかの実施形態では、末梢血試料中に存在する循環末梢Ｂ細胞のレベルは、以下のように（例えばＨＳＦＣによって）測定される。リンパ球は、フローサイトメトリーによって（例えば、ＣＤ４５と側方散乱光をプロットし、ＣＤ４５＋細胞をゲーティングすることによって）試料中で同定される。いくつかの実施形態では、ダブレットはこのステップの前に分析から除外される（例えば、単一細胞をゲーティングし、前方散乱光および／または側方散乱光のダブレットを除外することによって）。その後、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球を除外することによってＣＤ１９＋Ｂ細胞が同定される。例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－細胞は、親ＣＤ４５＋リンパ球ゲートから同定することができ（例えば、ＣＤ１９とＣＤ３／ＣＤ１４をプロットし、ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－細胞をゲーティングすることによって）、ＣＤ１９＋ＣＤ３３－ＣＤ５６－Ｂ細胞は、親ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－細胞から同定することができる（例えば、ＣＤ１９とＣＤ３３／ＣＤ５６をプロットし、ＣＤ１９＋ＣＤ３３－ＣＤ５６－細胞をゲーティングすることによって）。次いで、Ｂ細胞数を、例えば、検出されたＣＤ１９＋Ｂ細胞の数（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ３－ＣＤ１４－ＣＤ３３－ＣＤ５６－細胞）を試料体積で割ることによって決定することができる。いくつかの実施形態では、ビーズ数または他のＱＣ対照も定量され、その後、例えば（ＣＤ１９＋事象×ビーズ数）／（ビーズ数×試料体積）を計算することにより、Ｂ細胞数を決定することができる。

いくつかの実施形態では、（例えば、本明細書に記載の方法のいずれかに従った）本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与後、末梢血中に循環末梢Ｂ細胞は、約７個／μＬ以下、約６個／μＬ以下、約５個／μＬ以下、約４個／μＬ以下、約３個／μＬ以下、約２個／μＬ以下、約１個／μＬ以下、または約０．５個／μＬ以下、例えば５個／μＬ以下存在する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、ＨＳＦＣを用いて検出限界を下回るレベルまで枯渇する。いくつかの実施形態では、ＨＳＦＣは、約１．０個／μＬ以下、約０．８個／μＬ以下、約０．６個／μＬ以下、約０．５個／μＬ以下または０．４４１個／μＬ以下のＢ細胞の定量下限（ＬＬＯＱ）を有する。

ＩＶ．製造品またはキット
別の態様では、本明細書に記載の方法のいずれかにおいて（例えば、本明細書に記載の障害の治療、予防および／または診断のために）有用な本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含有する製造品またはキットが提供される。本発明の製造品またはキットは、容器と、容器に貼られているかまたは付随しているラベルまたは添付文書とを備える。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、症状の治療、予防および／もしくは診断に、または循環末梢Ｂ細胞を枯渇させるのに効果的である、単独のまたは別の組成物と組み合わされた組成物を収容し、滅菌のアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は皮下注射針で穿刺が可能な、ストッパーを有する点滴静注液バッグまたはバイアルであってもよい）。本発明の組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載の抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）である。ラベルまたは添付文書には、選択された症状を治療するためまたは循環末梢Ｂ細胞を枯渇させるために、本明細書に記載された方法のいずれかに従って本組成物が使用されることが示されている。代替的にまたは追加的に、本発明の製造品またはキットは、薬学的に許容され得る緩衝液（例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液を収容する第２（または第３）の容器をさらに備えていてもよい。キットまたは製造品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針およびシリンジ等、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

いくつかの実施形態では、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体および任意に薬学的に許容され得る担体を含む容器、ならびに任意に、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、または個体における小児期発症ＩＮＳの再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための説明を含む添付文書を含む製造品またはキットが本明細書において提供され、例えば、説明は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露が個体に適用され、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第１の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含むことを示す。いくつかの実施形態では、説明書は、個体が２歳以上２５歳以下であることを示す。いくつかの実施形態では、説明は、個体の体重が４５ｋｇ以上であることを示す。いくつかの実施形態では、抗体は、オビヌツズマブである。

いくつかの実施形態では、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体および任意に薬学的に許容され得る担体を含む容器、ならびに任意に、個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための、または個体における小児期発症ＩＮＳの再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させるための説明を含む添付文書を含む製造品またはキットが本明細書において提供され、例えば、説明は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露が個体に適用され、第２の抗体曝露は、第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；第１の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第１の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有し；第２の抗体曝露は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、第２の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含有することを示す。いくつかの実施形態では、説明は、個体が２歳以上２５歳以下であることを示す。いくつかの実施形態では、該説明は、個体の体重は４５ｋｇ未満であることを示す。いくつかの実施形態では、抗体は、オビヌツズマブである。

本発明の製造品またはキットは第２の医薬を含む第２または第３の容器をさらに備えていてもよく、抗ＣＤ２０抗体（例えば、本開示のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）が第１の医薬であり、本製造品は、第２の医薬で対象を治療するための添付文書の説明をさらに含む。これらの実施形態における製造品は、本発明の組成物が特定の症状を治療するために使用可能であることを示す添付文書をさらに備えていてもよい。

本明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分であると考えられる。本明細書に示されて説明される改変に加えて、本発明の様々な修正は、前述の説明から当業者に明らかになり、それらは添付の特許請求の範囲内のものである。本明細書で引用される全ての公報、特許、および特許出願は、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、以下の実施例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。本明細書に記載の実施例および実施形態が、例示を目的とするものに過ぎないこと、ならびにそれを考慮に入れた様々な改変または変更が当業者に提案され、本出願の趣旨および範囲内ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることを理解されたい。

実施例１：小児期発症特発性ネフローゼ症候群患者におけるオビヌツズマブ対ＭＭＦの有効性および安全性を評価するための第ＩＩＩ相多施設無作為化非盲検研究
研究エントリー時に完全寛解を達成し、再発のリスクが高いと考えられる小児期発症高頻度再発性ネフローゼ症候群（ＦＲＮＳ）またはステロイド依存性ネフローゼ症候群（ＳＤＮＳ）の参加者において寛解を維持する際のオビヌツズマブ対ＭＭＦの有効性、安全性および薬物動態（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）を評価するための第ＩＩＩ相無作為化非盲検多施設アクティブ比較研究を以下に示す。

小児期発症ＦＲＮＳ／ＳＤＮＳの患者は、再発中に、短期および長期のステロイド毒性、重篤な感染症、浮腫、血栓塞栓性事象、および急性腎障害のリスクがある。これらのリスクの低減は、有効な治療法の同定およびタンパク尿の持続的低減による臨床的寛解の維持に依存する。現在の標準治療は、全身性コルチコステロイドと免疫抑制療法の組み合わせに限定されたままであるが、ほとんどの利用可能なレジメンは、治療された患者の半数未満において完全な腎応答および寛解をもたらす。

目的および評価項目
この研究は、小児期発症ＦＲＮＳまたはＳＤＮＳを有する２歳以上２５歳以下の間の年齢の参加者におけるＭＭＦと比較したオビヌツズマブの有効性、安全性、薬物動態および薬力学を評価する。研究の具体的な主要目的および副次的目的ならびに対応する評価項目を以下に概説する。このプロトコルでは、「研究治療」は、この研究の一部として参加者に割り当てられた治療を指す（すなわち、オビヌツズマブまたはＭＭＦ）。

研究の主な目的は、小児期発症ＦＲＮＳまたはＳＤＮＳを有する２歳以上２５歳以下の間の参加者におけるＭＭＦと比較したオビヌツズマブの有効性を評価することである。主要評価項目は、１年で持続的完全寛解を達成した参加者の割合であり、これは、再発または以下の介入性事象のいずれも発生せず、第５２週で朝一番の排尿時の尿中タンパク質対クレアチニン比（ＵＰＣＲ）≦０．２ ｇ／ｇとして定義される。第８週の後に発生する介入性事象には、以下が含まれる：（１）以下の事象のいずれかによって定義される再発：（ａ）朝一番の排尿時ＵＰＣＲ≧２ｇ／ｇ、（ｂ）ディップスティック尿検査（ＵＡ）≧３＋が３日間連続し（自宅モニタリング）、その３日間の直近の尿試料が中央検査室によって測定してＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される、または（ｃ）浮腫を伴う任意の１日のディップスティックＵＡ蛋白≧３＋であり、尿試料が中央検査室によって測定してＵＰＣＲ＞０．２ｇ／ｇと決定される；および（２）３０日間の期間における＞１４日間の任意の全身性コルチコステロイド使用。無作為化後に発生する介入性事象には、以下が含まれる：（１）全身性コルチコステロイド以外の、治験責任医師の最良の医学的判断によって決定された特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）の任意の救済療法の開始；（２）有効性の欠如による治療中断；および／または（３）死亡。

副次的目的は、ＭＭＦと比較してオビヌツズマブの有効性を評価することである。対応する副次的評価項目は以下の通りである。（１）全無再発生存期間（ＲＦＳ）；（２）第５２週のＲＦＳの確率；（３）累積コルチコステロイド用量；（４）無作為化研究治療における再発数；（５）５２週間の治療期間中に浮腫関連再発を経験した参加者の割合；および（６）第７６週に持続的完全寛解を有する患者の割合。

別の副次的目的は、ＭＭＦと比較して、オビヌツズマブで治療された参加者の疲労の変化を評価することである。対応する副次的評価項目は、ベースラインから第５２週までのＰｅｄｉａｔｒｉｃ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ（ＰｅｄｓＱＬ）Ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ Ｆａｔｉｇｕｅスケールの総スコアの「Ｇｅｎｅｒａｌ Ｆａｔｉｇｕｅ」領域の平均変化である。

第３の副次的目的は、ＭＭＦと比較して、オビヌツズマブで治療された参加者の生活の質の変化を評価することである。対応する副次的評価項目は、ベースラインから第５２週までのＰｅｄｓＱＬ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙの「Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ」領域の平均変化である。

第４の副次的目的は、浮腫を経時的に評価することである。対応する副次的評価項目は、ベースラインから第５２週までの経時的なＣｕｒｅ Ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ（ＣｕｒｅＧＮ）浮腫スケールの平均変化である。

第５の副次的目的は、ＭＭＦと比較してオビヌツズマブの安全性を評価することである。対応する副次的評価項目は以下の通りである。（１）適用可能な場合、ベースラインから第５２週までの、ＡＥ強度（軽度、中等度、重度、生命を脅かす）およびＮａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ）グレーディングに従って決定される重症度を伴う有害事象（ＡＥ）の発生率、性質および重症度；ならびに（２）ベースラインから第５２週までの検査所見またはバイタルサインの異常の発生率。

第６の副次的評価項目は、オビヌツズマブＰＫプロフィールを特徴付けることである。対応する副次的評価項目は、特定の時点におけるオビヌツズマブの血清中濃度である。

第７の副次的目的は、オビヌツズマブによって誘導されるＰＤ変化を特徴付けることである。対応する副次的評価項目は以下の通りである。（１）特定の時点でＢ細胞枯渇（例えば、高感度フローサイトメトリー（ＨＳＦＣ）を使用）を達成する参加者の割合；および（２）全末梢Ｂ細胞およびＢ細胞サブセット（例えば、メモリーＢ細胞）のカウントおよび指定された時点でのベースラインからの変化。

調査目的は、ＭＭＦと比較してオビヌツズマブの有効性を評価することである。対応する調査評価項目は以下の通りである。（１）ベースラインから第５２週までのＵＰＣＲの変化；（２）ベースラインから第５２週までの推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）の変化；（３）第２４週、第５２週および第７６週に持続的な末梢Ｂ細胞枯渇を達成した参加者の割合；（４）第２４週にＲＦＳを達成した参加者の割合；（５）第７６週で持続的完全寛解にある参加者の割合；（６）ベースラインから第２４週および第５２週までのＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ（ＰＧＡ）の変化；（７）ベースラインから第２４週および第５２週までのＳｕｂｊｅｃｔ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ（ＳＧＡ）の変化；および（８）ステロイド漸減の完了前に再発していない参加者の割合。

第２の調査目的は、曝露の有効性と曝露の安全性との関係を調査することである。対応する調査評価項目は以下の通りである。（１）ベースラインから第５２週までおよび経時的な、オビヌツズマブ曝露および選択された有効性評価項目（持続可能な完全奏効（ＳＣＲ）およびＲＦＳを含む）の変化；および（２）ベースラインから第５２週までおよび経時的なオビヌツズマブ曝露および選択された有害事象の発生率、性質および重症度の変化。

第３の調査目的は、薬物曝露とＢ細胞枯渇との間の潜在的な関係を評価することである。対応する調査評価項目は以下の通りである。（１）経時的なベースラインに対するオビヌツズマブ曝露および循環ＣＤ１９＋Ｂ細胞カウントの変化；および（２）再発前／再発時の全末梢Ｂ細胞およびＢ細胞サブセット（例えば、メモリーＢ細胞）カウント。

第４の調査目的は、オビヌツズマブに対する免疫応答を評価することである。対応する調査評価項目は、ベースライン時に抗薬物抗体（ＡＤＡ）を有する参加者の割合および研究中の治療後のＡＤＡの発生率である。

第５の調査目的は、ＡＤＡの潜在的な効果を評価することである。対応する調査評価項目は、ＡＤＡの状態と有効性、安全性、ＰＤ、またはＰＫ評価項目との関係である。

第６の調査目的は、オビヌツズマブ活性の証拠を提供するバイオマーカー（すなわち、薬力学的バイオマーカー）を同定および／または評価すること、または疾患生物学および薬物安全性の知識および理解を高めることである。対応する調査評価項目は、血液中のバイオマーカーと、有効性、安全性、ＰＫ、免疫原性、または他のバイオマーカー評価項目との関係である。

組み入れ基準および除外基準
研究の組み入れ基準には、以下が含まれる：（１）参加者が無作為化の時点で２歳以上２５歳以下の間である；（２）国際ガイドライン［例えば、ＫＤＩＧＯ ２０２１、ＩＰＮＡ ２０２３（Ｔｒａｕｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０２３）Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｐｈｒｏｌ ３８：８７７－９１９を参照］による１８歳前のＦＲＮＳまたはＳＤＮＳの診断；（３）浮腫の非存在によって定義される完全寛解では、スクリーニング時にＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇであり、無作為化前の週以内にタンパク質について微量または陰性の３回の連続した毎日の尿ディップスティック読み取り値を有する；（４）再発を予防するために経口コルチコステロイドおよび／または免疫抑制療法（例えば、経口シクロホスファミド、レバミゾール、ミゾリビン、ＭＭＦまたはＣＮＩ）の中断後またはそれを受けている間に、スクリーニング前６ヶ月間に少なくとも１回再発したことがある；（５）無作為化の６ヶ月前にシクロホスファミドを受けた患者は、シクロホスファミドの中断後に少なくとも１回の再発を経験していなければならない；および（６）年齢に関して正常範囲内の推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）（１８歳未満の場合は改変Ｓｃｈｗａｒｔｚの式による、または１８歳以上の場合はＣｈｒｏｎｉｃ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ（ＣＫＤ－ＥＰＩ）の式を使用）。高頻度再発性ネフローゼ症候群（ＦＲＮＳ）は、以下のように定義される：疾患発症の６ヶ月以内に６ヶ月あたり２回以上の再発、または任意のその後の１２ヶ月に１２ヶ月あたり４回以上の再発。ステロイド依存性ネフローゼ症候群（ＳＤＮＳ）は、以下のように定義される：プレドニゾンもしくはプレドニゾロンによる治療中（全用量または漸減中のいずれか）、またはプレドニゾンもしくはプレドニゾロンの中断の１５日以内に、２回の連続再発。

除外基準には、以下が含まれる：（１）続発性ネフローゼ症候群（すなわち、逆流性腎症、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎など）；（２）ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群の病歴；（３）ネフローゼ症候群を直接引き起こすことが知られている遺伝的欠陥の病歴（すなわち、ＮＰＨＳ２［ポドシン］、ＮＰＨＳ１［ネフリン］、ＰＬＣＥ１、ＷＴ１、または他の既知の遺伝的原因）；（４）無作為化前２ヶ月以内のＭＭＦまたは経口コルチコステロイド以外の再発を予防するための他の免疫抑制薬による治療；（５）臓器または骨髄の移植の病歴；（６）登録後３０日以内または治験薬物の５半減期以内（いずれか長い方）の別の治療治験への参加；（７）以下のいずれかを含む研究療法に対する不耐性または禁忌：（ａ）モノクローナル抗体に対する重度のアレルギー反応もしくはアナフィラキシー反応またはオビヌツズマブ注入の任意の構成要素に対する既知の過敏症の病歴、（ｂ）末梢静脈アクセスの欠如、（ｃ）経口もしくはＩＶコルチコステロイドに対する不耐性もしくは禁忌、または（ｄ）ＭＭＦに対する不耐性もしくは禁忌；（８）少なくとも６ヶ月の持続期間にわたってＭＭＦを受けている間に、任意の６ヶ月の期間における２回以上の再発によって定義されるＭＭＦに対する以前の治療失敗を示す患者；（９）治験責任医師の判断において、研究中に特発性ネフローゼ症候群以外の理由で全身性コルチコステロイドを必要とする可能性が高い参加者；（１０）除外される治療を受けたこと（下記参照）；（１１）任意の種類の活動性感染（爪床の真菌感染を除く）またはスクリーニング前４週間以内のＩＶ抗感染薬による入院もしくは治療を必要とする感染の任意の主要なエピソード、または無作為化前２週間以内の経口抗感染薬の完了；（１２）活動性結核（ＴＢ）感染の証拠；（１３）ＨＩＶ感染症および他の重度の免疫不全血液障害の既知の病歴を含む、現在活動性の原発性もしくは続発性免疫不全の病歴；（１４）重篤な再発性または慢性感染症の病歴；（１５）進行性多巣性白質脳症の病歴；（１５）過去５年以内の固形腫瘍、血液悪性腫瘍、および上皮内癌腫（切除および治癒した皮膚の基底細胞癌腫および扁平上皮癌腫を除く）を含む、癌の病歴または現在の癌；（１６）スクリーニング前の４週間またはスクリーニング中に入院を必要とする大手術；（１７）臨床的に有意な出血または血漿フェレーシス、静脈内免疫グロブリンもしくは急性血液製剤輸血を必要とする任意の症状の高いリスク；（１８）治験責任医師の判断において参加者の参加を妨げるであろう任意の有意なまたは制御されていない付随疾患（神経系、呼吸器、心臓、肝臓、内分泌、悪性または胃腸の障害が含まれるが、これらに限定されない）の証拠；（１９）現在アクティブのアルコールもしくは薬物乱用、またはアルコールもしくは薬物乱用の病歴；（２０）スクリーニング時の以下の検査室パラメータのいずれか：
－ＡＳＴまたはＡＬＴ＞２．５×正常値の上限（ＵＬＮ）（年齢および性別について）（基礎となるネフローゼ症候群に起因し得ない）
－アミラーゼまたはリパーゼ＞２×ＵＬＮ
－絶対好中球カウント＜１．５×１０^３／μＬ
－ヘモグロビン＜８ｇ／ｄＬ
－１２歳未満の参加者については血小板カウント＜１１０，０００／μＬ、１２歳以上の患者については血小板カウント５０，０００／μＬ
－陽性Ｂ型肝炎表面抗原
－陽性Ｂ型肝炎コア抗体
－陽性Ｃ型肝炎抗体
－スクリーニングで測定された陽性血清ヒト絨毛性ゴナドトロピン
除外される治療には、以下が含まれる：
－スクリーニング前の２ヶ月間またはスクリーニング中のシクロホスファミド、レバミゾール、ミゾリビン、タクロリムス、シクロスポリンまたはボクロスポリン。
－１日目のベースライン来院前の９ヶ月以内のリツキシマブ、オクレリズマブ、またはオファツムマブなどであるがこれらに限定されない、任意の生物学的Ｂ細胞枯渇療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２）
－スクリーニング前の２ヶ月間またはスクリーニング中の任意の生物学的療法（抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２以外）、例えば、ベリムマブ、ダラツムマブ、ウステキヌマブ、アニフロルマブ、セクキヌマブまたはアタシセプトなどであるが、これらに限定されない
－スクリーニング前の２ヶ月間またはスクリーニング中のＪａｎｕｓ関連キナーゼ（ＪＡＫ）、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、またはチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）（バリシチニブ、トファシチニブ、ウパダシチニブ、フィルゴチニブ、イブルチニブ、もしくはフェネブルチニブまたは任意の治験薬剤が含まれる）の経口阻害剤
－スクリーニング前の２８日間またはスクリーニング中の任意の生ワクチン

研究治療
研究は、以下の４つの期間からなる：最大２８日間のスクリーニング期間、５２週間の初期非盲検治療期間、５２週間後の延長期間、および研究治療の完了または中断時に始まる最小１２ヶ月の安全性フォローアップ（ＳＦＵ）期間。研究スキーマを図１に示す。

≧２～２５歳の年齢のおよそ８０人の参加者を、１：１の比で２つの非盲検治療群の１つに無作為化する。アームＡ（オビヌツズマブ）またはアームＢ（ＭＭＦ）。無作為化は、参加者の疾患の種類（ＦＲＮＳ対ＳＤＮＳ）および研究エントリー前のＩＮＳに対するコルチコステロイド以外の免疫抑制治療の使用（ＭＭＦ／他の免疫抑制剤対ＭＭＦなし／他の免疫抑制剤）によって層別化される。

この研究のための治験産物はオビヌツズマブである。

２８日間（＋／－７日間）のスクリーニング期間後、無作為化参加者は５２週間の治療期間に入る。治療期間中、参加者は、最初の５２週間の治療期間中、１日目、１５日目、１６８日目（第２４週）および１８２日目（第２６週）にオビヌツズマブ１０００ｍｇのＩＶ注入を受けるか、または図１に従って１日目に毎日の経口ＭＭＦ（錠剤、カプセル、または液体製剤のいずれか）を開始もしくは継続する。体重が４５ｋｇ以上の参加者は、１０００ｍｇのオビヌツズマブ用量を受ける。体重が４５ｋｇ未満の参加者は、オビヌツズマブ注入のために２０ｍｇ／ｋｇの重量調整用量を受ける。メチルプレドニゾロンは、注入前に前投薬として８０ｍｇ ＩＶ（または４５ｋｇ以下の場合は１．５ｍｇ／ｋｇ）で投与される。アセトアミノフェン／パラセタモールは、注入前に前投薬として１５ｍｇ／ｋｇ（最大用量１０００ｍｇ）ＰＯで投与される。ジフェンヒドラミン塩酸塩は、注入前に前投薬として０．５～１ｍｇ／ｋｇ（最大用量５０ｍｇ）ＰＯまたはＩＶ投与される。

ＭＭＦに無作為化された参加者は、分割用量で１２００ｍｇ／ｍ^２／日（最大２．５ｇ／日）の目標用量を服用する。無作為化で毎日の経口プレドニゾン（またはプレドニゾロン等価物）を投与される参加者は、無作為化後第８週までに０ｍｇ／日の目標に達するように漸減し（または、より早く、例えば、適切であれば研究第４週～第６週までに）、研究の残りの期間にわたってプレドニゾンを使用せずに継続する。疾患再発を経験する参加者は、３日間以上連続して尿タンパク質ディップスティックが陰性／微量になる（またはＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇ）まで、最大２ｍｇ／ｋｇ／日（６０ｍｇ／ｍ^２／日から最大用量６０ｍｇ／日まで）のプレドニゾンまたはプレドニゾロンを受け、続いて、研究治療レジメンを継続しながら４週間以内に経口コルチコステロイドを漸減する。ＭＭＦアームの参加者が救済療法の基準を満たす場合、患者は、介入性事象の定義を満たしたと見なされ、オビヌツズマブ（１４日間空けて２×１０００ｍｇ、または４５ｋｇ未満の場合は２０ｍｇ／ｋｇ）またはＩＮＳの代替療法を受ける。オビヌツズマブアームの参加者が救済療法の基準を満たす場合、患者は、介入性事象の定義を満たしたと見なされ、治験責任医師の裁量に従って再発を治療するために毎のＭＭＦ（分割用量での６００ｍｇ／ｍ^２ ＢＩＤ［目標１２００ｍｇ／ｍ^２］、最大２ｇ／日）または代替療法を受ける。オビヌツズマブを使用する場合、ＭＭＦを中断する。

１年で持続的完全寛解を有する参加者の割合（再発または他の介入性事象の発生を伴わずにＵＰＣＲ≦０．２ｇ／ｇ）の主要評価項目の評価は、無作為化された最後の参加者が第５２週を完了したときに行われる。

第５２週の評価後、参加者は、一般的な終了日（ＣＣＯＤ）まで治療延長期間中にオビヌツズマブを継続するか、または安全性フォローアップ（ＳＦＵ）に直接入ることができる。ＭＭＦアームであろうとオビヌツズマブアームであろうと、第５２週の後に再発を示す参加者は、治験責任医師の最良の判断に従って治療され、この判断には、オビヌツズマブの初回用量または追加用量の投与が含まれ得る。第５２週以降の再発の基準を満たさない患者は、延長期間中のオビヌツズマブ治療に適格ではないが、ＣＣＯＤまで研究来院時に３ヶ月ごとに追跡調査される。末梢Ｂ細胞枯渇を有する参加者は、研究終了まで、６ヶ月間１２週間ごと、次いでその後、この患者集団について末梢ＣＤ１９Ｂ細胞が治療前の値または中央検査室の正常範囲内のいずれか低い方に戻るまで６ヶ月ごとにＳＦＵで追跡される。

最初のＳＦＵ来院は、治療期間中またはＣＣＯＤ中の最後の研究来院からおよそ１２週間後のいずれか早い方に予定される。ＳＦＵ中にオビヌツズマブ注入またはＭＭＦは提供されない。標準治療療法は、治験責任医師の裁量で提供される。オビヌツズマブを受けていない患者は、ＳＦＵ来院１で指定された評価で、１回のＳＦＵ来院のみで見られる。オビヌツズマブを受ける患者は、そのような患者が以下の基準の両方を満たすまでＳＦＵで追跡される。（１）末梢Ｂ細胞は、オビヌツズマブ前のベースラインレベルまたは集団の正常範囲内のいずれか低い方に戻っている；および（２）オビヌツズマブの最後の注入は少なくとも１２ヶ月前であった。

各ＳＦＵ来院時に、絶対ＣＤ１９＋Ｂ細胞カウントを測定する。この集団について最低の治療前の値未満かつ正常値の下限（ＬＬＮ）未満の絶対ＣＤ１９＋Ｂ細胞カウントとして定義される持続性Ｂ細胞枯渇を有し、末梢Ｂ細胞の低減に関連する追加の治療を受けていない参加者については、以下のいずれかが起こるまでＳＦＵを６ヶ月ごとに継続する：（１）末梢ＣＤ１９＋Ｂ細胞が最低の治療前の値または患者集団について年齢特異的なＬＬＮのいずれか低い方に戻る；（２）末梢Ｂ細胞の低減に関連する追加治療（例えば、ベリムマブ、リツキシマブ、もしくはシクロホスファミド、または研究プロトコル外でのオビヌツズマブの使用）を受ける；または（３）研究が終了する。

参加者は、以下の場合に研究を完了する。（１）ＳＦＵ要求が完了している；（２）ＣＣＯＤが完了したときまたは完了した後の治療の最後の研究来院であって、治験責任医師が、必要とされるＳＦＵを完了することなく、研究プロトコルの範囲外で、参加者をネフローゼ症候群のために治療することを意図している；（３）または研究が終了する。Ｒｏｃｈｅ治験医薬品（ＩＭＰ；オビヌツズマブ）への継続的なアクセスは、研究の完了時に研究主催者によって適格な参加者に提供される。

研究期間の長さ
各個体の研究参加の最低期間は、およそ１．５～２年であると予想される（ＳＦＵは、オビヌツズマブを投与全ての患者について、最後のオビヌツズマブ注入後最低１２ヶ月である）。参加者は、研究に参加し続け、募集された最後の参加者が少なくとも１８ヶ月間にわたり研究に参加するまで、活動スケジュールに従ってフォローアップまたは反復治療を受けてもよい。

研究参加の最大期間は、およそ３年、または、臨床カットオフ時に末梢Ｂ細胞がＬＬＮ未満のままである場合はそれより長いと推定される。この場合、参加者は、６ヶ月間１２週間ごと、次いでその後、Ｂ細胞がオビヌツズマブ用量前ベースラインまたは参加者の集団について正常な中央検査室ＬＬＮに戻るまで、または研究が終了するまで６ヶ月ごとにＳＦＵ来院のために戻る必要がある。

Claims (50)

1. 個体における小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を治療するための方法であって、前記個体に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露および前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を適用することを含み、
   前記第２の抗体曝露は、前記第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；
   前記第１の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第１の抗体曝露は、
   （ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
   （ｂ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
   前記第２の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第２の抗体曝露は、
   （ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
   （ｄ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
   前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブであり；および
   前記個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである、方法。
2. 小児期発症特発性ネフローゼ症候群（ＩＮＳ）を有する個体における再発のリスクおよび／または頻度を低減させるための方法であって、前記個体に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露および前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を適用することを含み、
   前記第２の抗体曝露は、前記第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；
   前記第１の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第１の抗体曝露は、
   （ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
   （ｂ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
   前記第２の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第２の抗体曝露は、
   （ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
   （ｄ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
   前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブであり；および
   前記個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである、方法。
3. 前記第１の抗体曝露が、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；前記第２の抗体曝露が、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；前記個体の体重が４５ｋｇ以上である、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記第１の抗体曝露が、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記第１の抗体曝露が、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記第１の抗体曝露が、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、前記第１の抗体曝露の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露の前記第１の用量後約１．５週間から約２．５週間は提供されない、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記第１の抗体曝露が、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、前記第１の抗体曝露の前記第２の用量が、前記第１の抗体曝露の前記第１の用量後約２週間は提供されない、請求項６に記載の方法。
8. 前記第１の抗体曝露の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項１～４、６、および７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記第１の抗体曝露の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項１～４および６～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記第１の抗体曝露の前記第１の用量が約２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１～３および５～７のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記第１の抗体曝露の前記第２の用量が約２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１～３、５～７、および１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記第２の抗体曝露が、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約９００ｍｇから約１１００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含む、請求項１～４および６～９のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記第２の抗体曝露が、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と、約１８ｍｇ／ｋｇから約２２ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１～３、５～７、１０、および１１のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記第２の抗体曝露が、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第１の用量と前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の第２の用量とを含み、前記第２の抗体曝露の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露の前記第１の用量後約１．５週間から約２．５週間は提供されない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記第２の抗体曝露の前記第２の用量が、前記第２の抗体曝露の前記第１の用量後約２週間は提供されない、請求項１４に記載の方法。
16. 前記第２の抗体曝露の前記第１の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項１～４、６～９、１２、１４、および１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記第２の抗体曝露の前記第２の用量が、約１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である、請求項１～４、６～９、１２、および１４から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記第２の抗体曝露の前記第１の用量が、約２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１～３、５～７、１０、１１、および１３～１５のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記第２の抗体曝露の前記第２の用量が、約２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１～３、５～７、１０、１１、１３～１５、および１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記個体が小児期発症ＩＮＳを有するか、または有すると診断されている、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記小児期発症ＩＮＳが、高頻度再発性ネフローゼ症候群（ＦＲＮＳ）である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記小児期発症ＩＮＳが、ステロイド依存性ネフローゼ症候群（ＳＤＮＳ）である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記個体が、前記投与前に完全寛解にある、請求項１～２２のいずれか一項記載の方法。
24. 前記個体に有効量のグルココルチコイドまたはコルチコステロイドを投与することをさらに含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロンを含む、請求項２４に記載の方法。
26. メチルプレドニゾロンが、８０ｍｇの用量で前記個体に静脈内で投与される、請求項２５に記載の方法。
27. メチルプレドニゾロンが１．５ｍｇ／ｋｇの用量で前記個体に静脈内で投与され、前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項２５に記載の方法。
28. 前記グルココルチコイドまたはコルチコステロイドが、プレドニゾンを含む、請求項２４に記載の方法。
29. 前記個体に有効量の抗ヒスタミン剤を投与することをさらに含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記抗ヒスタミン剤が、ジフェンヒドラミンを含む、請求項２９に記載の方法。
31. ジフェンヒドラミン塩酸塩が、０．５～１ｍｇ／ｋｇの用量で前記個体に経口投与または静脈内で投与される、請求項３０に記載の方法。
32. 前記個体に有効量のアセトアミノフェンを投与することをさらに含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記アセトアミノフェンが、１５ｍｇ／ｋｇの用量で、１０００ｍｇの最大用量で経口投与される、請求項３２に記載の方法。
34. 前記個体において１年で持続的完全寛解をもたらす、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
35. 前記第１の抗体曝露が、治療の１日目と１５日目の１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；前記第２の抗体曝露が、治療の１６８日目と１８２日目の１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含む、請求項１または２に記載の方法。
36. 前記第１の抗体曝露が、治療の１日目と１５日目の２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；前記第２の抗体曝露が、治療の１６８日目と１８２日目の２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１または２に記載の方法。
37. 前記第１の抗体曝露が、治療の第０週と第２週の１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；前記第２の抗体曝露が、治療の第２４週と第２６週の１０００ｍｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含む、請求項１または２に記載の方法。
38. 前記第１の抗体曝露が、治療の第０週と第２週の２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；前記第２の抗体曝露が、治療の第２４週と第２６週の２０ｍｇ／ｋｇの前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２つの用量を含み；前記個体の体重が４５ｋｇ未満である、請求項１または２に記載の方法。
39. 個体における小児期発症ＩＮＳを治療するか、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させる方法であって、前記個体に、オビヌツズマブに対する第１および第２の抗体曝露を静脈内で適用することを含み、
    前記第１の抗体曝露が、治療の第０週と第２週の１０００ｍｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記第２の抗体曝露が、治療の第２４週と第２６週の１０００ｍｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記個体が、２歳以上２５歳以下のヒトであり；および
    前記個体の体重が、４５ｋｇ以上である、方法。
40. 個体における小児期発症ＩＮＳを治療するか、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させる方法であって、前記個体に、オビヌツズマブに対する第１および第２の抗体曝露を静脈内で適用することを含み、
    前記第１の抗体曝露が、治療の第０週と第２週の２０ｍｇ／ｋｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記第２の抗体曝露が、治療の第２４週と第２６週の２０ｍｇ／ｋｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記個体が、２歳以上２５歳以下のヒトであり；および
    前記個体の体重が、４５ｋｇ未満である、方法。
41. 個体における小児期発症ＩＮＳを治療するか、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させる方法であって、前記個体に、オビヌツズマブに対する第１および第２の抗体曝露を静脈内で適用することを含み、
    前記第１の抗体曝露が、治療の１日目と１５日目の１０００ｍｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記第２の抗体曝露が、治療の１６８日目と１８２日目の１０００ｍｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記個体が、２歳以上２５歳以下のヒトであり；および
    前記個体の体重が、４５ｋｇ以上である、方法。
42. 個体における小児期発症ＩＮＳを治療するか、またはその再発のリスクおよび／もしくは頻度を低減させる方法であって、前記個体に、オビヌツズマブに対する第１および第２の抗体曝露を静脈内で適用することを含み、
    前記第１の抗体曝露が、治療の１日目と１５日目の２０ｍｇ／ｋｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記第２の抗体曝露が、治療の１６８日目と１８２日目の２０ｍｇ／ｋｇのオビヌツズマブの２つの用量を含み；
    前記個体が、２歳以上２５歳以下のヒトであり；および
    前記個体の体重が、４５ｋｇ未満である、方法。
43. オビヌツズマブの投与前に、治療の第０週、第２週、第２４週、および第２６週に、前記個体にメチルプレドニゾロンを静脈内（ＩＶ）注入によって投与することをさらに含む、請求項３９または４０に記載の方法。
44. オビヌツズマブの投与前に、処置の１日目、１５日目、１６８日目、および１８２日目に、前記個体にメチルプレドニゾロンを静脈内（ＩＶ）注入によって投与することをさらに含む、請求項４１または４２に記載の方法。
45. （ａ）前記個体の体重が４５ｋｇ以上である場合、８０ｍｇのメチルプレドニゾロンが前記個体に投与されるか；または
    （ｂ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、１．５ｍｇ／ｋｇのメチルプレドニゾロンが前記個体に投与される、
    請求項４３または４４に記載の方法。
46. 個体における小児期発症ＩＮＳを治療するためのキットであって、
    （ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、容器；
    （ｂ）個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための説明を伴う添付文書であって、前記説明が、前記個体が２歳以上２５歳以下であるヒトであることを示し；前記説明が、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露および前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露が前記個体に適用され、前記第２の抗体曝露は、前記第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；
    前記第１の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第１の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
    前記第２の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第２の抗体曝露は、約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含むことをさらに示す、添付文書
    を含む、キット。
47. 個体における小児期発症ＩＮＳを治療するためのキットであって、
    （ａ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む容器であって、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、容器；
    （ｂ）個体における小児期発症ＩＮＳを治療するための説明を伴う添付文書であって、前記説明が、前記個体が２歳以上２５歳以下であり、体重が４５ｋｇ未満であるヒトであることを示し；前記説明が、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露および前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露が前記個体に適用され、前記第２の抗体曝露は、前記第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；
    前記第１の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第１の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
    前記第２の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第２の抗体曝露は、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含むことをさらに示す、添付文書
    を含む、キット。
48. 小児期発症ＩＮＳの治療を必要とする個体において小児期発症ＩＮＳを治療する方法において使用するためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、前記方法が、前記個体に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露および前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を適用することを含み、
    前記第２の抗体曝露は、前記第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；
    前記第１の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第１の抗体曝露は、
    （ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
    （ｂ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
    前記第２の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第２の抗体曝露は、
    （ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
    （ｄ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
    前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブであり；および
    前記個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
49. 再発のリスクおよび／または頻度を低減させることを必要とする小児期発症ＩＮＳを有する個体における再発のリスクおよび／または頻度を低減させる方法において使用するためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、前記方法が、前記個体に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第１の抗体曝露および前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に対する第２の抗体曝露を適用することを含み、
    前記第２の抗体曝露は、前記第１の抗体曝露後約１８週間から約２６週間は提供されず；
    前記第１の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第１の抗体曝露は、
    （ａ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
    （ｂ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
    前記第２の抗体曝露は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つまたは２つの用量を含み、前記第２の抗体曝露は、
    （ｃ）約１８００ｍｇから約２２００ｍｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露、または
    （ｄ）前記個体の体重が４５ｋｇ未満である場合、約３６ｍｇ／ｋｇから約４４ｍｇ／ｋｇの間の前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の総曝露を含み；
    前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブであり；および
    前記個体は、２歳以上２５歳以下のヒトである、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
50. 請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法において使用するためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。