JP2020019811A

JP2020019811A - 抗ｖｌａ−４抗体

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Publication number: JP2020019811A
Application number: JP2019185798A
Authority: JP
Inventors: エー．ルゴフスコイアレクシー; A Lugovskoy Alexey; アール．テイラーフレデリック; r taylor Frederick; マクラクランカレン; Mclachlan Karen
Original assignee: Biogen MA Inc
Current assignee: Biogen MA Inc
Priority date: 2010-04-16
Filing date: 2019-10-09
Publication date: 2020-02-06
Also published as: HUE035098T2; EP4032912B1; EP3202789A1; JP2018123165A; US20180221480A1; SI2558499T1; EP3466977A1; CY1119154T1; US20210401981A1; BR112012026403A8; LT3202789T; PT2558499T; MX2012012010A; PL2558499T3; AU2011239512A1; AU2011239512B2; EP2558499A2; ME02793B; US20190365892A1; WO2011130603A3

Abstract

【課題】抗ＶＬＡ−４抗体を提供すること。
【解決手段】本発明は、アルファ４結合抗体およびその断片に関する。一実施形態において、組み換え抗体分子またはそのα４結合断片が提供され、この組み換え抗体分子またはそのα４結合断片は、ＩＧＫＶ４−１由来の受容体配列を含む可変軽鎖フレームワークと、ＩＧＨＶ１−ｆ由来の受容体配列を含む可変重鎖フレームワークと、を含み、かつマウス抗体ＨＰ１／２またはマウス抗体２１．６由来の重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する。別の実施形態において、組み換え抗体分子またはそのα４結合断片が提供され、この組み換え抗体分子またはそのα４結合断片は、生殖細胞系を操作したＡＡＨ７０３３５．１由来の受容体配列を含む可変軽鎖フレームワークと、ＩＧＨＶ１−ｆ由来の受容体配列を含む可変重鎖フレームワークとを含む、α４に結合することが可能である。
【選択図】図１

Description

関連出願
本出願は、２０１０年４月１６日に出願の米国仮出願第６１／３２４，９４４号の利益を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

技術分野
本発明は、アルファ４結合抗体およびその断片に関する。

ヒト化抗体は、ＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）応答と称される、ヒトにおける望ましくない免疫応答を回避するために、マウス抗体の代わりに治療薬として使用することができる。ヒト化抗体は、概して、ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、別の種、一般的にマウス抗体のＣＤＲと置換することによって構築される。

ＶＬＡ−４（α４β１とも称される）は、細胞表面受容体のβ１インテグリンファミリーのメンバーである。ＶＬＡ−４は、α４鎖と、β１鎖とを含み、細胞間相互作用に関与する。その発現は、主にリンパ系細胞および骨髄系細胞に制限される。ＶＬＡ−４は、内皮細胞リガンドであるＶＣＡＭ−１（血管細胞接着分子−１）に結合し、ヒト血漿フィブロネクチンのヘパリンＩＩ結合断片へのＴおよびＢリンパ球の付着を媒介することができる。

発明者らは、抗ＶＬＡ−４抗体等のＣＤＲ移植アルファ４結合抗体を最適化するために、生殖細胞系可変領域フレームワークを使用できることを発見した。故に、本発明は、抗ＶＬＡ−４可変重（ＶＨ）鎖および可変軽（ＶＬ）鎖、ならびにそのようなフレームワークを含む抗体分子を特徴とする。

一態様において、本発明は、ドナー抗α４抗体（例えば、本明細書で説明される抗α４抗体）由来のＣＤＲを有する抗α４抗体ＶＨ鎖、およびＶＨ鎖の生殖細胞系可変領域配列の配列由来の領域１、２、３、および４を有するか、またはそれとの差異が５個、１０個、または１５個以下である、ＶＨフレームワークを特徴とする。一実施形態において、可変フレームワーク領域４（ＦＲ４）は、ヒトコンセンサス配列である。一実施形態では、完全なＶＨ鎖フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４が存在する。別の実施形態において、鎖は、ＶＨ領域の抗原結合断片である。

一実施形態において、生殖細胞系配列は、図１で表される、ヒトＩＧＨＶ１−ｆ（配列番号２）である。ある実施形態において、ＶＨフレームワーク配列は、少なくとも１個であるが、２個、３個、４個、５個、１０個、または１５個以下のアミノ酸残基が、生殖細胞系配列（例えば、配列番号２）と異なり得る。一実施形態において、ＶＨフレームワークは、対応するヒト残基以外をさらに含む。例えば、ＶＨ鎖は、配列番号２のフレームワーク位置２４、６７、７６、８０、および９４（Ｋａｂａｔ番号付け）のうちの１つ以上に、非ヒト残基を含む、

一実施形態において、可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも１つ以上は、ドナー非ヒトα４結合抗体に由来する。一実施形態において、ＣＤＲ移植重鎖可変ドメインの抗原結合領域は、位置２６〜３４（ＣＤＲ１）、位置５０〜６５（ＣＤＲ２）、および位置９５〜１０２（ＣＤＲ３）に対応するＣＤＲを含む（Ｋａｂａｔ番号付け；Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈｅｄ．，ｖｏｌ．４，１９９１，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，ＵＳＡ）。

したがって、一実施形態において、可変重鎖（ＶＨ）フレームワークは、ヒト抗体生殖細胞系配列ＩＧＨＶ１−ｆに由来する受容体配列を有する。

別の実施形態において、ＶＨのＦＲ１領域の中の少なくとも１個のアミノ酸、および２個、３個、４個、５個、または１０個未満のアミノ酸残基は、対応するヒト生殖細胞系残基以外のものである。そのような残基の１個以上は、例えば、ＣＤＲ配列が由来する、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一であり得る。一実施形態では、Ｋａｂａｔ位置２４のアミノ酸残基を、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一になるように変異させる。

別の実施形態において、ＶＨのＦＲ２領域の中の少なくとも１個のアミノ酸、および２個、３個、４個、５個、または１０個未満のアミノ酸残基は、対応するヒト生殖細胞系残基以外のものである。そのような残基の１個以上は、例えば、ＣＤＲ配列が由来する、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一であり得る。

さらに別の実施形態において、ＶＨ鎖のＦＲ３の中の少なくとも１個のアミノ酸、および２個、３個、４個、５個、または１０個未満のアミノ酸残基は、対応するヒト生殖細胞系残基以外のものである。そのような残基の１個以上は、例えば、ＣＤＲ配列が由来する、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一であり得る。一実施形態において、Ｋａｂａｔ位置９４のアミノ酸残基は、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一である。さらに別の実施形態において、Ｋａｂａｔ位置６７、７６、８０、および９４のアミノ酸残基は、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一である。

ある実施形態において、抗体のＶＨ鎖は、配列番号３、配列番号４、または配列番号５の配列を有する。

一態様において、本発明は、ドナー抗ＶＬＡ−４抗体（例えば、本明細書で説明される抗ＶＬＡ−４抗体）由来のＣＤＲを有する抗ＶＬＡ−４ＶＬ鎖、およびＶＬ鎖の生殖細胞系可変領域配列の配列由来の領域１、２、３、および４を有するか、またはそれとの差異が（領域毎に、または全体で）５つ、１０、または１５以下である、ＶＬフレームワークを特徴とする。一実施形態において、可変フレームワーク領域４（ＦＲ４）は、ヒトコンセンサス配列である。一実施形態では、完全なＶＬ鎖フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４が存在する。別の実施形態において、鎖は、ＶＬ領域の抗原結合断片である。

別の実施形態において、生殖細胞系配列は、図２に表される、ＩＧＫＶ４−１（配列番号７）である。さらに他の実施形態において、ＶＬフレームワーク配列は、少なくとも１個であるが、２個、３個、４個、５個、１０個、または１５個以下のアミノ酸残基が、生殖細胞系配列（例えば、配列番号７）と異なる可能性がある。別の実施形態において、ＶＬは、対応するヒトアミノ酸残基以外をさらに含む。例えば、ＶＬ鎖は、配列番号７のフレームワーク位置１、７３、および８７（Ｋａｂａｔ番号付け）のうちの１つ以上に、非ヒト残基をさらに含む。

一実施形態において、配列は、表２で表される、ＡＡＨ７０３５．１（配列番号１２）またはその生殖細胞系を操作したバージョン（配列番号１３）である。いくつかの実施形態において、ＶＬフレームワーク配列は、少なくとも１個であるが、５個、１０個、１５個、２０個、または２５個以下のアミノ酸残基が、生殖細胞系を操作したフレームワーク配列（例えば、配列番号１３）と異なり得る。一実施形態において、ＶＬ鎖は、対応するヒト残基以外を含む。例えば、ＶＬ鎖は、配列番号１２のフレームワーク位置１および８７（Ｋａｂａｔ番号付け）のうちの１つ以上に、非ヒト残基を含む。別の実施形態において、ＶＬは、生殖細胞系配列ＩＧＫＶ４−１等と異なるヒト生殖細胞系フレームワーク配列に類似するように、フレームワーク領域におけるアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、ＶＬフレームワーク配列は、配列番号１２の位置１〜３、５〜２３、３５〜３７、３９〜４２、４５〜４９、５７、５９〜６１、６３〜６４、７０〜７２、７４〜８４、８６〜８８、９９〜１０６（Ｋａｂａｔ番号付け）で、ＩＧＫＶ４−１生殖細胞系配列と同じになるように変化させる。

一実施形態において、可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも１つ以上は、ドナー非ヒトα４結合抗体に由来する。別の実施形態において、ＣＤＲ移植重鎖可変ドメインの抗原結合領域は、位置２４〜３１（ＣＤＲ１）、５０〜５６（ＣＤＲ２）および８９〜９７（ＣＤＲ３）（Ｋａｂａｔ番号付け）に対応するＣＤＲを含む。したがって、一実施形態において、ＶＬフレームワークは、ＩＧＫＶ４−１生殖細胞系配列から、抗体ＡＡＨ７０３３５．１から、または生殖細胞系を操作した抗体ＡＡＨ７０３３５．１から構築される、受容体配列を有する。

さらに別の実施形態において、ＶＬ鎖のＦＲ１の中の少なくとも１個のアミノ酸、および２個、３個、４個、５個、１０個、または１５個未満の残基は、対応するヒト残基以外のものである。そのような残基の１個以上は、例えば、ＣＤＲ配列が由来する、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一であり得る。一実施形態では、ＦＲ１のＮ末端位置のアミノ酸残基を、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一になるように変異させる。

別の実施形態において、ＶＬ鎖のＦＲ２の中の少なくとも１個のアミノ酸、および２個、３個、４個、５個、１０個、または１５個未満の残基は、対応するヒト残基以外のものである。そのような残基の１個以上は、例えば、ＣＤＲ配列が由来する、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一であり得る。

さらに別の実施形態において、ＶＬのＦＲ３の中の少なくとも１個のアミノ酸、および２個、３個、４個、５個、１０個、または１５個未満の残基は、対応するヒト残基以外のものである。そのような残基の１個以上は、例えば、ＣＤＲ配列が由来する、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一であり得る。別の実施形態では、Ｋａｂａｔ位置８７のアミノ酸残基を、非ヒト抗体フレームワーク領域と同一になるように変異させる。さらに別の実施形態では、Ｋａｂａｔ位置６７および８７のアミノ酸残基を、非ヒト抗体フレームワーク配列と同一になるように変異させる。さらに別の実施形態では、配列番号７のＫａｂａｔ位置６７、７３、および８７のアミノ酸残基を、非ヒト抗体フレームワーク配列と同一になるように変異させる。

他の実施態様において、抗体のＶＬ鎖は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１の配列を有する。

一実施形態において、ＶＨおよびＶＬ受容体フレームワーク配列のＣＤＲは、非ヒト（例えば、マウス）抗体配列のＣＤＲ配列に類似するように選択され、非ヒト抗体は、インテグリンアルファ４またはその断片に結合する。別の実施形態において、ＣＤＲの配列は、ＶＬＡ−４α４鎖のＢ１エピトープに結合する、非ヒト抗体のＣＤＲの配列に類似するように選択される。一実施形態において、ＣＤＲは、マウスモノクローナル抗体（例えば、ＨＰ１／２、ＨＰ２／１、ＨＰ２／４、Ｌ２５、Ｐ４Ｃ２、または２１．６）に類似するように選択される（Ｐｕｌｉｄｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１０２４１−１０２４５，１９９１、米国特許第６，０３３，６６５号）。修飾は、例えば定方向変異誘発によって、例えば切除および挿入または変化を意味することができる。

別の態様において、本発明は抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、
−本明細書で説明される抗ＶＬＡ−４ＶＬ鎖（例えば、ドナー抗ＶＬＡ−４抗体（例えば、本明細書で説明される抗ＶＬＡ−４抗体）由来のＣＤＲを有する抗ＶＬＡ−４ＶＬ鎖）、およびＶＬ鎖の生殖細胞系可変領域配列の配列由来のＬＣフレームワーク領域１、２、および３を有するか、またはそれとの差異が５つ、１０、または１５以下である、ＶＬフレームワークを含む。一実施形態において、可変領域４は、ヒトコンセンサス配列であり、
−本明細書で説明される抗ＶＬＡ−４ＶＨ鎖（例えば、ドナー抗ＶＬＡ−４抗体（例えば、本明細書で説明される抗ＶＬＡ−４抗体）由来のＣＤＲを有する抗ＶＬＡ−４ＶＬ鎖）、およびＶＬ鎖の生殖細胞系可変領域配列の配列由来のＬＣフレームワーク領域１、２、および３を有するか、またはそれとの差異が５つ、１０、または１５以下である、ＶＬフレームワークである。一実施形態において、可変領域４は、ヒトコンセンサス配列である。

一実施形態において、抗体は、α４β１およびα４β７の一方または両方に結合する。

別の態様において、本明細書で説明されるＶＬ鎖もしくはＶＨ鎖、抗体、またはその断片は、検出可能な程度に標識される。

さらに別の態様において、本発明は、本明細書で説明される、抗体重鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡを含有するベクターを特徴とする。いくつかの実施形態において、ベクターのＤＮＡは、配列番号３、配列番号４、または配列番号５の配列を有するＶＨをコードする。

さらに別の態様において、本発明は、本明細書で説明される、抗体軽鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡを含有するベクターを特徴とする。いくつかの実施形態において、ベクターのＤＮＡは、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１の配列を有するＶＬ鎖をコード化する。

さらに別の態様において、本発明は、本明細書で説明される、抗体重鎖またはそのα４結合断片、および本明細書で説明される、抗体軽鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡを含有するベクターを特徴とする。

別の態様において、本発明は、本明細書で説明されるベクター（例えば、本明細書で説明される、重鎖および／もしくは軽鎖抗体、または抗体断片を発現することが可能なもの）を含有する、宿主細胞を特徴とする。

一態様において、本発明は、（ａ）本明細書で説明される抗体重鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡ配列、および（ｂ）抗体軽鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡ配列を形質移入した宿主細胞を提供することによって、ならびに組み換え抗α４抗体分子またはそのα４結合断片を産生するために、形質移入した細胞を培養することによって、組み換え抗α４抗体またはそのα４結合断片を作製する方法を特徴とする。抗体重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡは、同じベクター上か、または異なるベクター上で産生することができる。

一態様において、本発明は、（ａ）例えばＤＮＡ配列が配列番号３、４、または５の配列を有する、抗体重鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡ配列、および（ｂ）例えばＤＮＡ配列が配列番号８、９、１０、または１１の配列を有する、抗体軽鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡ配列を形質移入した宿主細胞を提供することによって、ならびに組み換え抗α４抗体分子またはそのα４結合断片を産生するために、形質移入した細胞系を培養することによって、組み換え抗α４抗体またはそのα４結合断片を作製する方法を特徴とする。抗体重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡは、同じベクター上か、または異なるベクター上で産生することができる。

別の態様において、本発明は、本明細書で説明されるα４抗体もしくは抗体断片、または該抗体もしくは断片を含有する薬学的組成物を、治療を必要とする対象に投与することによって、α４インテグリン（例えば、α４β１（ＶＬＡ−４）またはα４β７インテグリン）によって媒介される疾患または障害を治療する方法を特徴とする。対象は、例えば、炎症性、免疫性、または自己免疫性障害（例えば、多発性硬化症、髄膜炎、視神経脊髄炎、神経サルコイドーシス、ＣＮＳ血管炎、脳炎、および横断性脊髄炎等の、中枢神経系の炎症）、組織もしくは臓器の移植片拒否反応または移植片対宿主疾患、急性ＣＮＳ損傷（脳卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、または脊髄損傷（ＳＣＩ）等）、慢性腎疾患、アレルギー（例えば、アレルギー性喘息）、１型真性糖尿病、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎等）、重症筋無力症、線維筋痛、関節炎障害（関節リウマチ、乾癬性関節炎等）、炎症性／免疫皮膚障害（乾癬、白斑、皮膚炎、扁平苔癬等）、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、血液癌（多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫等）、例えば肺、乳房、前立腺、脳の固形癌（肉腫または癌腫等）、および線維性障害（肺線維症、骨髄線維症、肝硬変、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月形糸球体腎炎、糖尿病性腎症、および間質性腎線維症等）を有する可能性があるか、またはそれらが発達する危険性がある。

別の態様において、本発明は、α４結合抗体または抗体断片を患者に投与することによって、患者を治療する方法を特徴とする。一実施形態において、患者は、固形腫瘍または血液悪性腫瘍等の癌を有する。例えば、α４結合抗体または抗体断片で治療される患者は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または多発性骨髄腫（ＭＭ）を有する可能性がある。

別の実施形態において、患者は、多発性硬化症、喘息（例えば、中度から重度の喘息）、関節リウマチ、糖尿病、またはクローン病等の、炎症性障害を有する。別の実施形態において、本組成物は、投薬計画として投与される。さらに別の実施形態において、本方法は、本組成物での治療に適切な患者を選択することをさらに含む。治療に適切な患者は、例えば、ＭＳを示す徴候または症状等の、疾患発生を示す徴候または症状を示している。

さらに別の実施形態において、本方法は、化学療法剤、血栓溶解剤、神経保護剤、抗炎症薬、ステロイド、サイトカイン、または成長因子等の、第２の治療薬を患者に投与することをさらに含む。

一実施形態において、患者は、ＨｕＨＰ１／２、Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、またはＨ１Ｌ３等の、本明細書で説明されるヒト化抗ＶＬＡ−４抗体またはその断片が投与される。

一実施形態において、α４結合抗体を含有する組成物は、通常の間隔等で、投薬計画として投与される。例えば、本組成物は、１日１回、週に１回、もしくは月に１回、週に１回、週に２回、週に３回、週に４回以上、または２週に１回、３週に１回、４週以上に１回投与することができる。

一実施形態において、投薬は、事前投与した抗α４抗体の患者のクリアランス速度に従って調整することができる。例えば、一実施形態において、患者は、患者の身体内のα４抗体のレベルが所定のレベルを下回るまで、第２のまたは以降の用量が投与されない。一実施形態において、患者由来の試料（例えば、血漿、血清、血液、または尿試料）は、抗α４抗体の存在についてアッセイされ、抗α４抗体のレベルが所定のレベルを超えていた場合、患者は、第２のまたは以降の用量が投与されない。患者の身体内の抗α４抗体のレベルが所定のレベルを下回った場合に、患者は、第２のまたは以降の用量が投与される。

一実施形態において、本組成物は、例えば３０分を超えるが、１、２、４、または１２時間未満である期間にわたって、連続的に投与される。抗体および第２の薬剤を含有する組成物は、任意の適切な方法（例えば、皮下、筋肉内、または静脈内）によって投与することができる。

いくつかの実施形態において、抗体および第２の薬剤のそれぞれは、単独療法についてそれぞれが処方された用量と同じ用量で投与される。他の実施態様において、抗体は、単独で投与した場合に有効性に必要な量以下である投与量で投与される。同様に、第２の薬剤は、単独で投与した場合に有効性に必要な量以下である投与量で投与することができる。

本開示の特徴となる別の態様は、患者が予め選択された基準を満たすかどうかを判定することによって患者を評価し、患者が予め選択された基準を満たした場合に、本明細書で説明されるＶＬＡ−４結合抗体製剤を患者に許可する、提供する、処方する、または投与する方法である。一実施形態において、予め選択された基準は、例えばＭＳの治療に対する、事前の代替の治療法または投薬計画に対する患者の応答が不全であることである。別の実施形態において、予め選択された基準は、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の任意の徴候または症状がないこと、またはＰＭＬの診断のないことである。いくつかの場合において、選択は、例えば患者がＪＣウイルスＤＮＡに陽性反応を示さない、またはＪＣウイルス抗体に陽性反応を示さないといった、ＰＭＬに対する危険因子がないことに基づいている。別の実施形態において、基準は、参照により本明細書に組み込まれる国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／７５５７７号（国際公開第ＷＯ２００８／０２１９５４号として公開されている）で説明される通りであり、該文献は、薬物分布のための、および薬物を患者に提供するための方法およびシステムを説明している。

別の態様では、本明細書で説明される組成物を分配する方法を提供する。組成物は、アルファ４結合抗体を含有する。本方法は、少なくとも６、１２、２４、３６、または４８ヶ月にわたって患者を治療するのに十分な単位投与量の薬物を含有するパッケージを、レシピエント（例えば、エンドユーザ、患者、医師、小売もしくは卸売り薬局、配給業者、病院の薬局、養護施設のクリニック、またはＨＭＯ）に提供することを含む。別の態様において、本発明は、（例えば、その期限が切れているかどうかを判定するために）アルファ４結合抗体を含有する、本明細書で説明される組成物の単数または多数のパッケージの品質を評価することを含む。本方法は、パッケージの期限が切れたかどうかを評価することを含む。有効期限は、製造、アッセイ、またはパッケージング等の予め選択された事象から、少なくとも６、１２、２４、３６、または４８ヶ月である（例えば、２４または３６ヶ月を超える）。いくつかの実施形態において、決定またはステップは、分析の結果として行われる。例えば、正確な分析に応じて、パッケージの中の抗体は、製品の期限が切れたかどうかに応じて、使用もしくは廃棄されるか、分類されるか、選択されるか、発表もしくは保留されるか、発送されるか、新しい場所に移動されるか、市場に出されるか、販売されるか、販売に提供されるか、市場から回収されるか、または市場への投入を中止する。

別の態様において、本発明は、α４結合抗体を含有する水性組成物の少なくとも２つの単位用量を含有するパッケージを特徴とする。一実施形態では、全ての単位用量が同じ量の抗体を含有し、他の実施形態では、２つ以上の強度の単位投与量、または例えば異なる強度もしくは放出性質を有する、２つ以上の異なる製剤がある。

別の態様において、本発明は、α４結合抗体を含有する製剤の投与に関して、レシピエントに指示する方法を含む。本方法は、本明細書で説明される投薬計画に従って抗体を患者に投与すべきであることを、レシピエント（例えば、エンドユーザ、患者、医師、小売もしくは卸売り薬局、配給業者、病院の薬局、養護施設のクリニック、またはＨＭＯ）に指示することを含む。本方法はまた、抗体を有効期限前に投与するべきであることを、レシピエントに指示することを含むことができる。有効期限は、製造、アッセイ、またはパッケージング等の予め選択された事象から、少なくとも６、１２、２４、３６、または４８ヶ月である（例えば、２４または３６ヶ月を超える）。一実施形態において、レシピエントはまた、抗体の供給、例えば単位投与量の抗体の供給を受ける。

別の態様において、本発明は、非ヒト等のドナー抗体（例えば、マウス抗体）由来のＣＤＲと、単数または複数のヒト生殖細胞系可変領域フレームワークの領域由来の重鎖および軽鎖可変領域の一方または両方とを含む、抗体を作製する方法を特徴とする。本方法は、１および２の一方または両方を含み、１および２は以下の通りである。
１．ａ）、ｂ）、およびｃ）のうちの１つ以上における残基の１つ以上に、非ヒトドナー重鎖と同じ残基を有する、安定したヒト受容体重鎖可変フレームワークを識別または選択する。
ａ）ＶＨＫａｂａｔ番号２、４、２４、２６、２７、２９、３６、３８、４６、４７、４８、４９、６６、６７、６９、７１、７８、９３、および９４（これらは、理論に束縛されるものではないが、ＣＤＲ立体配座を維持するために重要であると考えられる）。
ｂ）ＶＨＫａｂａｔ番号１、２、２７、２８、３０、４３、６６、６８、７０、７２、７３、７４、および７５（これらは、理論に束縛されるものではないが、抗原と相互作用することが可能であると考えられる）。
ｃ）ＶＨＫａｂａｔ番号３７、３９、４４、４５、４７、９１、９３、および１０３（理論に束縛されるものではないが、ＶＨ／ＶＬ界面の完全性に重要であると考えられる）。
２．ａ）、ｂ）、およびｃ）のうちの１つ以上における残基の１つ以上に、ドナー軽鎖と同じ残基を有する、安定した受容体軽鎖可変フレームワーク識別または選択する。
ａ）ＶＬＫａｂａｔ番号２、４、３８、４３、４４、４８、５８、６４、７１、および７３（理論に束縛されるものではないが、ＣＤＲ立体配座を維持するために重要であると考えられる）。
ｂ）ＶＬＫａｂａｔ番号１、２、４９、５７、６０、６３、６５、６６、６７、６８、６９、および７０（理論に束縛されるものではないが、潜在的に、抗原と相互作用することが可能であると考えられる）。
ｃ）ＶＬＫａｂａｔ番号３６、３８、４３、４４、４６、４９、８７、および９８（理論に束縛されるものではないが、ＶＨ／ＶＬ界面の完全性に重要であると考えられる）。
３．１および２で識別される残基での一致をさらに最大化するように、生殖細胞系配列を選択し、さらに生殖細胞系の１または２で識別される付加的な残基をマウス配列に復帰変異させること等によって、ドナーＣＤＲを有する可変領域と、１または２で識別される一致した残基を有する、選択された生殖細胞系フレームワークとを提供する。
４．３次元構造分析またはモデル化等によって、各一致した位置を評価し、例えばＣＤＲの立体配座、抗原の相互作用、またはＶＨ／ＶＬ界面の完全性を妨げる危険性に対する所定の基準をある位置が満たした場合、抗体構造に適合する、同等のマウス残基、または共通のヒト抗体残基を再導入する。
一実施形態では、（１．ａ）で識別される残基の少なくとも３個、４個、または５個が一致する。例えば、一実施形態では、残基２４、２９、または９４が一致する。

一実施形態では、（１．ｂ）で識別される残基の少なくとも３個、４個、または５個が一致する。例えば、一実施形態では、残基１、７３、または７５が一致する。

一実施形態では、（１．ｃ）で識別される残基の少なくとも３個、４個、または５個が一致する。例えば、一実施形態では、残基３７、９３、または１０３が一致する。

一実施形態では、（２．ａ）で識別される残基の少なくとも３個、４個、または５個が一致する。例えば、一実施形態では、残基２、７１、および７３が一致する。

一実施形態では、（２．ｂ）で識別される残基の少なくとも３個、４個、または５個が一致する。例えば、一実施形態では、残基１、６８、または７０が一致する。

一実施形態では、（２．ｃ）で識別される残基の少なくとも３個、４個、または５個が一致する。例えば、一実施形態では、残基４６、８７または９８が一致する。

一実施形態では、（１．ａ）で残基６、（１．ｂ）で残基２、および（１．ｃ）で残基４が一致する。

別の実施形態では、（２．ａ）で残基４、（２．ｂ）で残基２、および（２．ｃ）で残基４が一致する。

一実施形態において、重鎖生殖細胞系配列は、ＶＨ３、ＶＨ１、およびＶＨ５生殖細胞系クラスである。別の実施形態において、軽鎖生殖細胞系配列は、ＶｋａｐｐａまたはＶｌａｍｂｄａ配列である。

「治療する」という用語は、統計的に有意な程度まで、もしくは当業者が検出可能な程度まで、障害に関連する状態、症状、またはパラメータを改善するか、または障害の進行を防止するのに有効な量、様式、および／またはモードで治療を施すことを指す。有効な量、様式、またはモードは、対象に応じて変化させることができ、対象に合わせてもよい。

「α４結合抗体」は、ＶＬＡ−４（α４β１）インテグリンのα４サブユニットに結合して、ＶＬＡ−４の活性、特にＶＬＡ−４インテグリンの結合活性またはシグナル伝達活性（例えば、ＶＬＡ−４媒介シグナルを形質導入する能力）を少なくとも部分的に阻害する、抗体を指す。例えば、ＶＬＡ−４結合抗体は、ＶＬＡ−４の、ＶＬＡ−４の同族のリガンド（例えば、ＶＣＡＭ−１（血管細胞接着分子−１）等の細胞表面タンパク質）への結合、または胞外マトリクス成分（フィブロネクチンまたはオステオポンチン）への結合を阻害し得る。アルファ４結合抗体は、α４β１またはα４β７の双方に結合し得る。一般的に、抗体は、α４のＢ１エピトープに結合する。α４結合抗体は、約１０^−６Ｍ未満、約１０^−７Ｍ未満、約１０^−８Ｍ未満、約１０^−９Ｍ未満、約１０^−１０Ｍ未満、または約１０^−１１Ｍ未満のＫ_ｄで、ＶＬＡ−４に結合し得る。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域（例えば、免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列）を含む、タンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書でＶＨと略記される）と、軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書でＶＬと略記される）とを含むことができる。別の実施例において、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域と、２つの軽（Ｌ）鎖可変領域とを含む。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパ型またはラムダ型であってもよい。一実施形態において、抗体は、グリコシル化される。抗体は、抗体に依存する細胞傷害性および／または補体媒介の細胞傷害性に対して機能的であることができ、またはこれらの活性の一方または両方に対して非機能的であってもよい。

ＶＨ領域およびＶＬ領域は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができ、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称される、より保存された領域とともに散在している。ＦＲおよびＣＤＳの程度は、正確に定義されている（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔａｌ．（１９９１）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄ
ＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照されたい。）本明細書ではＫａｂａｔ定義を使用する。各ＶＨおよびＶＬは、一般的に、３つのＣＤＲと、４つのＦＲとから成り、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で、アミノ末端からカルボキシル末端まで配列される。

「免疫グロブリンドメイン」は、免疫グロブリン分子の可変または定常ドメイン由来のドメインを指す。免疫グロブリンドメインは、一般的に、約７つのβストランドで形成される２つのβシートと、保存されたジスルフィド結合を含有する（例えば、Ａ．Ｆ．ＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＡ．Ｎ．Ｂａｒｃｌａｙ（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３８１−４０５を参照されたい）。

本明細書で使用される「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができる、アミノ酸配列を指す。例えば、この配列は、自然発生の可変ドメインのアミノ酸配列の全部または一部を含んでもよい。例えば、この配列は、１個もしくは２個以上のＮ末端またはＣ末端アミノ酸を省略してもよく、内部アミノ酸は、１個以上の挿入または付加的な端末アミノ酸を含んでもよく、または他の変化を含んでもよい。一実施形態において、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは、標的結合構造（または「抗原結合部位」）（例えば、ＶＬＡ−４と相互作用する構造）を形成するように、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と関連付けることができる。

抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、それぞれ、それによって重または軽免疫グロブリン鎖を形成するように、重鎖または軽鎖定常領域の全部または一部をさらに含むことができる。一実施形態において、抗体は、２個の重免疫グロブリン鎖および２個の軽免疫グロブリン鎖の四量体である。重および軽免疫グロブリン鎖は、ジスルフィド結合によって接続することができる。重鎖定常領域は、一般的に、３個の定常ドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。軽鎖定常領域は、一般的に、ＣＬドメインを含む。重および軽鎖可変領域は、抗原と相互作用する、結合領域を含有する。抗体の一定の領域は、一般的に、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への抗体の結合を媒介する。

「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に判別することができる、種々の幅広いクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖が、それらの中のいくつかのサブクラス（例えば、γ１〜γ４）で、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）に分類されることを理解するであろう。それは、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして、抗体の「クラス」を決定する、この鎖の性質である。例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１等の免疫グロブリンサブクラス（イソタイプ）は、十分に特徴付けられており、機能分化を与えることが知られているこれらのクラスおよびイソタイプのそれぞれの修飾バージョンは、本開示を考慮すれば当業者が容易に識別することができ、故に、本発明の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明らかに本発明の範囲内である。軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖と結合してもよい。

完全長抗体の「抗原結合断片」という用語は、目的とする標的（例えば、ＶＬＡ−４）に特異的に結合する能力を保持する、完全長抗体の１個以上の断片を指す。完全長抗体の「抗原結合断片」の範囲に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインから成る一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ´）_２断片、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２個のＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の１つの腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインから成るｄＡｂ断片（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６）、および（ｖｉ）機能を保持する、単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片、ＶＬ、およびＶＨのうちの２つのドメインは、遺伝子によってコードされるが、それらを、組み換え方法を使用して、ＶＬ領域およびＶＨ領域を一対にして、単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする、合成リンカーによって接合することができる。例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照されたい。

いくつかの実施形態において、前述の抗体は、ペグ化されている。

いくつかの実施形態において、前述の抗体またはその断片は、多重特異性である。さらなる実施形態において、前述の抗体またはその断片は、一価であるか、または二重特異性である。

本発明の１つ以上の実施形態の詳細を、以下の添付図面および説明に記載する。本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の説明、図面、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）ＩＧＫＶ４−１由来の受容体配列を含む可変軽鎖フレームワークと、ＩＧＨＶ１−ｆ由来の受容体配列を含む可変重鎖フレームワークと、を含み、かつマウス抗体ＨＰ１／２またはマウス抗体２１．６由来の重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する、組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目２）生殖細胞系を操作したＡＡＨ７０３３５．１由来の受容体配列（配列番号１５）を含む可変軽鎖フレームワークと、ＩＧＨＶ１−ｆ由来の受容体配列を含む可変重鎖フレームワークとを含む、α４に結合することが可能な、組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目３）マウス抗体ＨＰ１／２由来のＣＤＲをさらに含む、項目１または２に記載の組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目４）マウス抗体２１．６由来のＣＤＲをさらに含む、項目１または２に記載の組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目５）上記重鎖可変領域は、配列番号３、配列番号４、または配列番号５の配列を含む、項目１または２に記載の組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目６）上記軽鎖可変領域は、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０の配列を含む、項目１に記載の組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目７）上記軽鎖可変領域は、配列番号１１の配列を含む、項目２に記載の組み換え抗体分子またはそのα４結合断片。
（項目８）上記抗体は、ＶＬＡ−４に結合する、項目１または２に記載の抗体。
（項目９）配列番号３、４、または５の配列を含む、抗体重鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡを含む、ベクター。
（項目１０）配列番号８、９、１０、または１１を含む、抗体軽鎖またはそのα４結合断片をコードするＤＮＡを含む、ベクター。
（項目１１）組み換え抗α４抗体またはそのα４結合断片を作成する方法であって、
（ａ）（ｉ）抗体重鎖またはそのα４結合断片をコードする、配列番号３、４、または５の配列を含むＤＮＡ配列と、（ｉｉ）抗体軽鎖またはそのα４結合断片をコードする、配列番号８、９、１０、または１１の配列を含むＤＮＡ配列と、を含む、宿主細胞を提供することと、
（ｂ）組み換え抗α４抗体分子またはそのα４結合断片を産生するように、上記細胞を培養することと、
を含む、方法。
（項目１２）項目１または２に記載の組成物を患者に投与することを含む、上記患者を治療する方法。
（項目１３）上記患者は、癌を有する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）上記患者は、固形腫瘍を有する、項目１３に記載の方法。
（項目１５）上記患者は、血液悪性腫瘍を有する、項目１３に記載の方法。
（項目１６）上記患者は、多発性骨髄腫または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する、項目１３に記載の方法。
（項目１７）上記患者は、炎症性障害を有する、項目１２に記載の方法。
（項目１８）上記患者は、多発性硬化症、喘息、関節リウマチ、糖尿病、視神経炎、またはクローン病を有する、項目１２に記載の方法。
（項目１９）上記患者は、急性障害を有する、項目１２に記載の方法。
（項目２０）上記患者は、脊髄損傷または外傷性脳損傷を有する、項目１２に記載の方法。
（項目２１）上記組成物は、投薬計画として投与される、項目１２に記載の方法。
（項目２２）第２の治療薬を上記患者に投与することをさらに含む、項目１２に記載の方法。
（項目２３）上記第２の治療薬は、血栓溶解剤、化学療法剤、神経保護剤、抗炎症剤、ステロイド、サイトカイン、または成長因子である、項目２１に記載の方法。

ヒト重生殖細胞系ＩＧＨＶ１−ｆへの、ＨＰ１／２重鎖の３つの配列変異体を示す図である。配列の上側の小文字は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従った挿入を表す。生殖細胞系ＩＧＫＶ４−１抗体配列（設計Ｌ０、Ｌ１、およびＬ２）またはヒトカッパ生殖細胞系を操作したＡＡＨ７０３３．１抗体配列（設計Ｌ３）への、ＨＰ１／２軽鎖の４つの配列変異体を示す図である。配列の上側の小文字は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従った挿入を表す。ＥＬＩＳＡアッセイの結果を表すグラフである。ＥＬＩＳＡアッセイの結果を表すグラフである。ＩｇＧ４Ｆｃ（ヒンジ＋ＣＨ２＋ＣＨ３ドメイン）のアミノ酸配列（配列番号１４）である。ヒンジ領域は太字で表し、ＣＨ３ドメインには下線を付してある。四角で囲まれた「Ｓ」は、Ｓｅｒ２２８である。丸で囲まれた「Ｎ」は、Ａｓｎ２９７である。種々の腫瘍細胞系へのＨｕＨＰ１／２の結合からのフローサイトメトリデータを表すグラフである。「ＨＰ１／２」は、ヒト化ＨＰ１／２を指す。ＨｕＨＰ１／２による、フィブロネクチンまたはＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＡＭＬ細胞系の結合の阻害を表す、グラフのパネルである。図７Ａは、ＦＮ被覆ウェルへのＨＬ６０およびＫＧ１細胞の結合の阻害を表す。図７Ｂは、ＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＫＧ１細胞の結合の阻害を表す。図７Ｃは、２０μｇ／ｍＬのＨｕＨＰ１／２とともにインキュベートしたときの、ＦＮ被覆ウェルおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＨＬ６０細胞の結合の阻害を表す（ベタ塗りの棒）。無色の棒は、イソタイプ対照の存在下での細胞接着をパーセントで示す。「ＨＰ１／２」は、ヒト化ＨＰ１／２を指す。同上。同上。ＨｕＨＰ１／２による、フィブロネクチンまたはＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＭＭ細胞系の結合の阻害を表す、グラフのパネルである。図８Ａは、ＦＮ被覆ウェルへのＵ２６６およびＨ９２９細胞の結合の阻害を表す。図８Ｂは、ＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＵ２６６およびＨ９２９細胞の結合の阻害を表す。図８Ｃは、２０μｇ／ｍＬのＨｕＨＰ１／２とともにインキュベートしたときの、ＦＮ被覆ウェルおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＵ２６６細胞の結合の阻害を表す（ベタ塗りの棒）。無色の棒は、イソタイプ対照の存在下での細胞接着をパーセントで示す。「ＨＰ１／２」は、ヒト化ＨＰ１／２を指す。同上。同上。ＨｕＨＰ１／２による、フィブロネクチンまたはＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＣＬＬ細胞系の結合の阻害を表す、グラフのパネルである。図９Ａは、ＦＮ被覆ウェルへのＭｅｃ１およびＪＭ１細胞の結合の阻害を表す。図９Ｂは、ＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＭｅｃ１およびＪＭ１細胞の結合の阻害を表す。図９Ｃは、２０μｇ／ｍＬのＨｕＨＰ１／２とともにインキュベートしたときの、ＦＮ被覆ウェルおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへのＭｅｃ１細胞の結合の阻害を表す（ベタ塗りの棒）。無色の棒は、イソタイプ対照の存在下での細胞接着をパーセントで示す。「ＨＰ１／２」は、ヒト化ＨＰ１／２を指す。同上。同上。

ＶＬＡ−４に対する抗体は、疾患を治療する際に有用であることが実証されている。例えば、抗ＶＬＡ−４抗体であるナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））は、再発性多発性硬化症およびクローン病を治療するために使用される。しかしながら、特定の状態、例えば脊髄損傷（ＳＣＩ）もしくは外傷性脳損傷（ＴＢＩ）等の急性状態の治療、または癌の治療等の有限数で施される治療の場合、ナタリズマブとは異なる親和性（例えば、より高い親和性）で結合する抗ＶＬＡ−４で治療することが有利であり得る。加えて、抗ＶＬＡ−４抗体による治療は、希ではあるが時として、致命的な障害である進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）に関連し、その場合、治療の一部として、例えば血漿交換または免疫吸着法を用いて、治療した対象からの抗体の除去を必要とする。抗体の除去が必要であるので、ＶＬＡ−４に対する増加した親和性を有する抗体の利点と、除去を一層困難にするように、または遅いターンオーバー速度と関連する危険性を生じさせるように結合する、抗体の不利な点とのバランスをとることも望ましい。そのような抗体はまた、あまり頻繁な治療が必要になり得ないか、または注入以外の手段による投与がより効果的であり得る、多発性硬化症等の状態を治療するために有用であり得る。より少ない用量での治療を可能にすることは、ＰＭＬ等の有害な事象の危険性も低下させ得る。故に、本発明は、そのような望ましい性質を有する抗体を提供する。

本発明は、α４に対する結合親和性が、抗α４抗体ナタリズマブの結合親和性よりも１０倍高い、新たに設計したヒト化α４結合抗体の予想外の特性に少なくとも部分的に基づいている。

アルファ４結合抗体およびその断片が提供され、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）フレームワークは、ＩＧＫＶ４−１、ｇｅＡＡＨ７０３３５．１、またはＩＧＨＶ１−ｆ抗体等の、生殖細胞系から構築される受容体配列、または生殖細胞系を操作した抗体配列を有する。ＣＤＲ配列は、抗ＶＬＡ−４抗体ＨＰ１／２等の、非ヒト抗α４結合抗体に由来する。本明細書で説明される抗体は、例えばそのマウスの親に対して、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３．０倍、相対親和性を増加させることができる。一実施形態において、親和性の増加は、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３．０倍であるが、それぞれ、２５倍、２０倍、または１５倍未満である。

薬学的組成物
ＶＬＡ−４結合抗体等のα４結合剤は、薬学的組成物として調合することができる。一般的に、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合性のある、任意および全ての溶媒、分散媒、被覆、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤等が挙げられる。

「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物活性を保持し、かついかなる望ましくない毒物学的影響も与えない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。そのような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩化水素、窒素、リン、硫黄、臭化水素、ヨウ化水素等の非毒性無機酸由来のもの、ならびに、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸等の非毒性有機酸由来のものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属由来のもの、ならびに、Ｎ，Ｎ´−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等の非毒性有機アミン由来のものが挙げられる。

本明細書で説明される抗体組成物は、当技術分野で知られている方法に従って調合することができる。薬学的製剤は、十分に確立された技術であり、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２０^ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）、Ａｎｓｅｌｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，７^ｔｈＥｄ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆ＷｉｌｋｉｎｓＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）、およびＫｉｂｂｅ（ｅｄ．），ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３^ｒｄｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）でさらに説明されている。

一実施形態において、α４抗体は、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム七水和物、リン酸一ナトリウム、およびポリソルベート８０等の賦形剤材料とともに調合することができる。別の実施形態において、α４抗体は、例えばｐＨ５、５．５、６、６．５、７、または７．５で、クエン酸塩緩衝剤中で調合することができる。さらに別の実施形態において、α４抗体は、２、４、５、６、８、１０、１２、１４、または１５％のスクロースを含む溶液中で調合することができる。例えば、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で、緩衝液中で提供することができ、２〜８℃で貯蔵することができる。

薬学的組成物はまた、種々の他の形態であってもよい。そのような形態としては、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散体または懸濁液、タブレット、錠剤、粉末、リポソーム、および坐剤等の液体、半固体、および固体剤形が挙げられる。形態は、意図する投与方法および治療用途に依存することができる。一般的に、本明細書で説明される薬剤のための組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態である。

そのような組成物は、非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹膜内、筋肉内注射）によって投与することができる。本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口的に投与する」という句は、経腸および局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹膜内、経気管の、皮下、表皮下、関節内、被膜下、蜘蛛膜下、脊椎内、硬膜外、胸骨内の注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない。

薬学的組成物は、一般的に、製造および貯蔵条件下、無菌でありかつ安定していなければならない。薬学的組成物は、投与の規制基準および業界基準を満たすことを保証するために、試験することもできる。

組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散体、リポソーム、または高薬物濃度に適切な他の秩序構造として調合することができる。注射可能な滅菌溶液は、本明細書で説明される薬剤を、上述した成分のうちの１つまたはそれらの組み合わせ伴う適切な溶媒中に所要量で組み込んで、必要に応じて、続いて、滅菌濾過することによって調製することができる。概して、分散体は、本明細書で説明される薬剤を、基本的分散媒体および上記に列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する、滅菌ビヒクルの中に組み込むことによって調製する。注射可能な滅菌溶液を調製するための滅菌粉末の場合、典型的な調整方法は、本明細書で説明される薬剤の粉末、および以前に滅菌濾過したその溶液からの、任意の付加的な所望の成分を生じる、真空乾燥および凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチン等の被覆を使用し、分散体の場合は必要とされる粒子サイズを維持し、また、界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射可能な組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を組成物中に含ませることによって成すことができる。

投与
α４結合抗体は、種々の方法によって対象（例えば、ヒト対象）に投与することができる。多数の用途について、投与経路は、静脈内注射もしくは注入、皮下注射、または筋肉注射のうちの１つである。α４結合抗体は、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。抗体は、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与することができる。例えば、抗体は、ＩＶで、例えば４週間に１回、約５０〜６００ｍｇの間の、またはＳＣで、例えば少なくとも週に１回（例えば、週に２回）、約５０〜１００ｍｇの間（例えば、７５ｍｇ）の固定単位用量で投与することができる一実施形態において、抗体は、ＩＶで、５０ｍｇ、６０ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１８０ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、または６００ｍｇ以上の固定単位用量で投与する。ＩＶでの用量の投与は、週に１回、２回、３回、もしくはそれ以上、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、もしくは５週間に１回、またはより低い頻度とすることができる。

一実施形態において、抗体は、ＳＣで、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇ、または１２０ｍｇ以上の固定単位用量で投与する。ＳＣでの用量の投与は、週に１回、２回、３回、もしくはそれ以上、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、もしくは５週間に１回、またはより低い頻度とすることができる。

抗α４抗体はまた、約１〜１０ｍｇ／ｋｇの間、例えば、約６．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇの用量で、ボーラスで投与することができる。修正用量範囲は、一般的に４週間に１回または月に１回の投与について、約６００ｍｇ／対象未満、約４００ｍｇ／対象、約３００ｍｇ／対象、約２５０ｍｇ／対象、約２００ｍｇ／対象、または約１５０ｍｇ／対象である、用量を含む。α４結合抗体は、例えば、３〜５週間に１回、例えば４週間に１回、または月に１回投与することができる。

投薬は、事前投与した抗α４抗体の患者のクリアランス速度に従って調整することができる。例えば、患者は、患者の身体内のα４抗体のレベルが所定のレベルを下回るまで、第２のまたは以降の用量が投与されない。一実施形態において、患者由来の試料、例えば、血漿、血清、血液、尿、または脳脊髄液（ＣＳＦ）は、抗α４抗体の存在についてアッセイされ、抗α４抗体のレベルが所定のレベルを超えていた場合、患者は、第２のまたは以降の用量が投与されない。患者の身体内の抗α４抗体のレベルが所定のレベルを下回った場合に、患者は、第２のまたは以降の用量が投与される。抗α４レベルが高過ぎる（所定のレベルを超えた）と判定された患者は、１日、２日、３日、または１週間後に再度試験することができ、患者資料中の抗α４抗体のレベルが所定のレベルよりも下がった場合、患者は、第２のまたは以降の用量の抗体が投与されてもよい。

用量はまた、α４結合抗体に対する抗体の産生を低減または回避するか、α４サブユニットの４０、５０、７０、７５、または８０％を超える飽和を達成するか、α４サブユニットの８０、７０、６０、５０、または４０％未満の飽和を達成するか、または循環白血球細胞レベルの増加を防止するように選択することができる。

ある実施形態において、活性剤は、インプラントおよびマイクロカプセル化した送達系を含む放出制御製剤等の、化合物を迅速な放出から保護する担体とともに調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸等の、生分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための多数の方法は、特許を受けているか、または一般に知られている。例えば、ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ（Ｄｒｕｇｓ
ａｎｄｔｈｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ），Ｓｅｃｏｎｄ
Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．ＲｏｂｉｎｓｏｎａｎｄＶ．Ｈ．Ｌ．Ｌｅｅ，ｅｄｓ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８７を参照されたい。

薬学的組成物は、医療デバイスによって投与することができる。例えば、薬学的組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、または第４，５９６，５５６号で開示されるデバイス等の、無針皮下注射デバイスによって投与することができる。よく知られているインプラントおよびモジュールの例としては、例えば、制御された速度で薬物療法を分配するための移植可能な微小注入ポンプを開示する、米国特許第４，４８７，６０３号、皮膚を通して薬剤を投与するための治療デバイスを開示する、米国特許第４，４８６，１９４号、正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示する、米国特許第４，４４７，２３３号、連続する薬物送達のための可変流の移植可能な注入装置を開示する、米国特許第４，４４７，２２４号、マルチチャンバ区画を有する浸透性薬物送達系を開示する、米国特許第４，４３９，１９６号、および浸透性薬物送達系を開示する、米国特許第４，４７５，１９６号で論じられている。当然、多数の他の、そのようなインプラント、送達系、およびモジュールも知られている。

本開示はまた、第１および第２の薬剤を投与するためのデバイスを特徴とする。デバイスは、例えば、薬学的調製物を貯蔵するための１つ以上の筐体を含むことができ、かつ第１および第２の薬剤の単位用量を送達するように構成することができる。第１および第２の薬剤は、同じまたは別々の区画に貯蔵することができる。例えば、デバイスは、投与前に薬剤を組み合わせることができる。第１および第２の薬剤を投与するために、異なるデバイスを使用することも可能である。

投薬計画は、治療応答または組み合わせ治療効果等の所望の応答を提供するように調整される。概して、生物学的に利用可能な量でＶＬＡ−４結合剤および第２の薬剤の双方を対象に提供するために、これらの用量の任意の組み合わせ（個別調合または同時調合）を使用することができる。

本明細書で使用される投薬単位の形態、すなわち「固定用量」は、治療される対象の単位投薬量として適する物理的に不連続な単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体と共同して、および随意に、他の薬剤と共同して所望の治療効果を生じるように計算される、所定量の活性化合物を含有する。

薬学的組成物は、本明細書で説明される薬剤の「治療上有効量」を含んでもよい。そのような有効量は、投与される第１および第２の薬剤の組み合わせ効果に基づいて決定することができる。薬剤の治療上有効量はまた、個人の疾患状態、年齢、性別、および体重等の因子、ならびに少なくとも１つの障害パラメータ（例えば、多発性硬化症パラメータ）の改善、または筋収縮症、運動失調症、および振顫等の少なくとも１つの障害の症状（例えば、多発性硬化症の症状）の改善等の、個人における所望の応答を引き出す化合物の能力に応じて変化させてもよい。治療上有効量はまた、組成物の任意の有毒または有害な影響を、治療的に有益な効果が上回るものである。

デバイスおよびキット
本明細書で説明される抗体を含有する製剤は、医療デバイスで投与することができる。デバイスは、その分野の未熟練者または救急隊員等が緊急時に使用して、医療施設および他の医療機器に移動させることができるように、携帯性、室温貯蔵、および使い易さ等の特徴を考慮して設計することができる。デバイスは、例えば、α４結合抗体を含む薬学的調製物を貯蔵するための１つ以上の筐体を含むことができ、また、１つ以上の単位用量の薬剤を送達するように構成することができる。

例えば、薬学的組成物は、皮下注射器またはマルチチャンバ注射器を含む注射器等の、経皮送達デバイスで投与することができる。他の適切な送達デバイスとしては、ステント、カテーテル、極微針、および移植可能な放出制御デバイスが挙げられる。組成物は、直列フィルタの有無に関わらず、例えばＩＶチュービングを含む、標準的なＩＶ機器で静脈内投与することができる。ある実施形態において、デバイスは、ＳＣまたはＩＭ投与で使用するための注射器となる。

薬学的組成物は、医療デバイスで投与することができる。例えば、薬学的組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、または第４，５９６，５５６号で説明されるデバイス等の、無針皮下注射デバイスによって投与することができる。よく知られているインプラントおよびモジュールの例としては、例えば、制御された速度で薬物療法を分配するための移植可能な微小注入ポンプを開示する、米国特許第４，４８７，６０３号、皮膚を通して薬剤を投与するための治療デバイスを開示する、米国特許第４，４８６，１９４号、正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示する、米国特許第４，４４７，２３３号、連続する薬物送達のための可変流の移植可能な注入装置を開示する、米国特許第４，４４７，２２４号、マルチチャンバ区画を有する浸透性薬物送達系を開示する、米国特許第４，４３９，１９６号、および浸透性薬物送達系を開示する、米国特許第４，４７５，１９６号で説明されている。治療用組成物はまた、皮下投与または筋肉内投与のために、生分解性または非生分解性の持続放出製剤の形態とすることができる。そのような組成物のための方法は、当技術分野で知られている。また、連続投与を、移植可能なポンプまたは外部ポンプを使用して達成することができる。投与はまた、１日１回の注射等によって断続的に行うか、または持続放出製剤等において低用量で連続的に行うことができる。送達デバイスは、α４結合抗体の投与に最適となるように修正することができる。例えば、注射器は、抗体の貯蔵および送達に最適な程度に、シリコン処理することができる。当然、多数の他の、そのようなインプラント、送達系、およびモジュールも知られている。

本開示はまた、第１および第２の薬剤（例えば、抗体および第２の薬剤）を投与するためのデバイスを特徴とする。デバイスは、例えば、薬学的調製物を貯蔵するための１つ以上の筐体を含むことができ、かつ第１および第２の薬剤の単位用量を送達するように構成することができる。第１および第２の薬剤は、同じまたは別々の区画に貯蔵することができる。一実施形態において、デバイスは、投与前に薬剤を組み合わせる。いくつかの実施形態において、第１および第２の薬剤は、異なるデバイスによって投与される。

α４結合抗体は、キットで提供することができる。一実施形態において、キットは、（ａ）高濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む組成物を含有する容器と、（ｂ）第２の薬剤を含む組成物を含有する容器と、随意に（ｃ）情報資料と、を含む。情報材料は、治療効果について本明細書で説明される方法および／または薬剤の使用に関連する、記述的な資料、指導用資料、販売用資料、または他の資料とすることができる。一実施形態において、キットはまた、第２の薬剤を含む。例えば、キットは、α４結合抗体を含む組成物を含有する第１の容器と、第２の薬剤を含む第２の容器とを含む。

キットの情報資料は、その形態が限定されない。一実施形態において、情報資料は、抗体の産生、濃度、有効期限、バッチ、または製造場所情報等に関する情報を含むことができる。一実施形態において、情報資料は、脊髄損傷または外傷性脳損傷等の急性障害、または炎症性疾患（例えば、ＭＳ）を有する対象を治療するために、例えば好適な用量、投薬形態、もしくは投与様式（例えば、明細書で説明される用量、投薬形態または投与様式）でα４結合抗体を投与する方法、または炎症性疾患と関連する症状を経験する危険性があるのは誰なのか、に関連する。情報は、印刷されたテキスト、コンピュータが読み取り可能な資料、映像記録もしくは音声記録、または実体的な資料へのリンクもしくはアドレスを提供する情報を含む、種々の形式で提供することができる。

キットの組成物は、薬剤に加えて、溶媒もしくは緩衝剤、安定剤、または防腐剤等の、他の成分を含むことができる。薬剤は、任意の形態、例えば液体、乾燥、または凍結乾燥の形態で、かつ実質的に純粋および／または滅菌形態で提供することができる。薬剤が液体溶液で提供されたときに、液体溶液は、一般的に、水溶液である。薬剤が乾燥形態で提供されたときには、概して、適切な溶媒の添加によって還元される。溶媒、例えば滅菌水または緩衝剤を、随意に、キットに提供することができる。

キットは、薬剤を含有する単数または複数の組成物のための１つ以上の容器を含むことができる。いくつかの実施形態において、キットは、組成物および情報資料のための別個の容器、仕切り、または区画を含む。例えば、本組成物は、瓶、バイアル、または注射器の中に収容されてもよく、情報資料がプラスチック製スリーブまたはパケットに収容されてもよい。他の実施態様において、キットの別個の要素は、単一の分割されていない容器内に収容される。例えば、組成物は、情報材料をラベルの形態で取り付けた、瓶、バイアル、または注射器の中に収容される。いくつかの実施形態において、キットは、複数の個別の容器（例えば、パック）を含み、各容器は、薬剤の１つ以上の単位投薬形態（例えば、本明細書で説明される投薬形態）を含む。容器は、所望の比率等で、組み合わせ単位投薬量、例えばα４結合抗体および第２の薬剤を含む単位を含むことができる。例えば、キットは、それぞれが例えば単一の組み合わせ単位用量を含有する、複数の注射器、アンプル、ホイルパケット、ブリスタパック、または医療デバイスを含むことができる。キットの容器は、気密性、耐水性（例えば、湿度または蒸発の変化に対して不透過性）、および／または遮光性とすることができる。

キットは、随意に、組成物を投与するのに適切なデバイス、例えば注射器または他の適切な送達デバイスを含む。デバイスは、薬剤の一方または両方を予め充填して提供することができ、または空であるが、充填に適切なものとすることができる。

腫瘍学
本明細書で説明されるα４結合抗体および方法は、固形癌および血液悪性腫瘍を含む癌を治療するために使用することができる。例示的な固形癌としては、肺、乳房、膵臓、結腸、前立腺、膀胱、および脳等の肉腫および癌腫が挙げられる。血液悪性腫瘍としては、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫等の癌が挙げられる。

血液悪性腫瘍を有する患者を、本明細書で説明される抗ＶＬＡ−４抗体等のα４結合抗体を含有する組成物で治療するための方法を提供する。血液悪性腫瘍は、体内の造血および免疫システムの癌である。この種類の癌は、血液、骨髄、および／またはリンパ節に影響を及ぼす。血液悪性腫瘍としては、白血病（急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性赤白血病、および毛様細胞白血病（ＨＣＬ）等）、リンパ腫（ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫等）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（ＡＭＬに至る可能性がある）、脊髄増殖性疾患（真性多血症（ＰＶ、ＰＣＶ、真性赤血球増加症（ＰＲＶ）とも呼ばれる）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄線維症、重鎖疾患等）、および軽鎖疾患によるアミロイドが挙げられる。

血液悪性腫瘍を有する患者は、悪性細胞を識別するために有用である、例えば光学顕微鏡検査による、血球計算および血液塗抹標本の分析によって識別してもよい。骨髄等からの生検材料はまた、悪性細胞を識別するために使用することができ、リンパ節からの生検材料は、リンパ節症を識別するのに有用であり得る。

α４結合抗体（例えば、ＨｕＨＰ１／２、Ｈ１Ｌ０、Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、またはＨ１Ｌ３等の、ヒト化抗ＶＬＡ−４抗体）は、ＡＭＬ等の白血病の治療に有用である。白血病は、骨髄に生じる癌であり、悪性細胞は、白血球細胞（白血球）である。ＡＭＬ（急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性顆粒球性白血病、および急性非リンパ球性白血病とも呼ばれる）は、顆粒白血球または単核白血球のいずれかで起こる悪性腫瘍である。ＡＭＬは、正常な血球として機能しない、白血病性芽球と呼ばれる、細胞の無制御の過剰な成長および蓄積、ならびに血液中の赤血球細胞の欠乏（貧血）、血小板の欠乏（血小板減少症）、および正常な白血球細胞の欠乏（特に、好中球、すなわち、好中球減少症）に至る、正常な骨髄細胞の産生の妨害を特徴とする。

全てのＡＭＬの亜型は、ＶＬＡ−４結合抗体での治療に適切である。ＡＭＬの亜型は、診断時に骨髄芽球が到達していた発達段階に基づいて分類される。カテゴリおよびサブセットは、医師が、どの治療がその細胞型に最適に機能しているか、および疾患がどのくらい速く発達し得るのかを判断することを可能にする。サブセットは、Ｍ０（骨髄芽球性、特殊分析）、Ｍ１（骨髄芽球性、成熟を伴わない）、Ｍ２（骨髄芽球性、成熟を伴う）、Ｍ３（前骨髄球性）、Ｍ４（骨髄単球性）、Ｍ５（単核球性）、Ｍ６（赤白血病）、およびＭ７（巨核球）である。ＶＬＡ−４抗体は、特にＡＭＬの亜型に適している二次薬剤とともに投与することができる。例えば、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）および急性単核球性白血病は、ＡＭＬの他の亜型とは異なる治療を必要とする、ＡＭＬの亜型である。ＡＰＬを治療するための第２の薬剤は、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）、またはシタラビン等の抗代謝剤を含むことができる。急性単核球性白血病を治療するための第２の薬剤は、２−クロロ−２´−デオキシアデノシン（２−ＣＤＡ）等のデオキシアデノシン類似体を含むことができる。

ＡＭＬの危険性因子は、ダウン症候群、ファンコニ貧血症、シュバッハマン−ダイヤモンド症候群等の、特定の遺伝的障害の存在を含む。ＡＭＬおよび遺伝的障害を有する患者は、遺伝的障害の症状を治療するために、ＶＬＡ−４結合抗体および第２の薬剤を投与することができる。例えば、ＡＭＬおよびファンコニ貧血症を伴う患者は、ＶＬＡ−４結合抗体および抗生物質を投与することができる。

ＡＭＬの他の危険因子としては、異なる癌を治療するための化学療法または放射線療法、タバコの煙、および大量のベンゼンへの露出が挙げられる。

α４結合抗体で治療するのに適切な他の癌としては、肉腫および癌腫等の固形腫瘍が挙げられる（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨性肉腫、骨原性肉種、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、卵巣癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛膜癌腫、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、小細胞肺癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、音響神経腫、乏突起細胞腫、シュワン細胞腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、および網膜芽腫）。

他の障害
本明細書で説明される製剤および方法はまた、炎症性、免疫性、または自己免疫性障害、例えば、中枢神経系の炎症（例えば、多発性硬化症に加えて、髄膜炎、視神経脊髄炎、神経サルコイドーシス、ＣＮＳ血管炎、脳炎、および横断性脊髄炎）、組織または臓器移植片拒絶反応または移植片対宿主疾患、急性ＣＮＳ損傷（例えば、脳卒中または脊髄損傷（ＳＣＩ））、慢性腎疾患、アレルギー（例えば、アレルギー性喘息、中度から重度のアレルギー性鼻炎、眼アレルギー）、１型真性糖尿病、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎（例えば、治療または寛解の維持））、好酸性胃腸炎、重症筋無力症、線維筋痛、関節炎障害等のリウマチ学／免疫学と関連する障害（例えば、関節リウマチ、乾癬性関節炎）、炎症性／免疫性皮膚障害等の皮膚科の障害（例えば、乾癬、白斑、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）、扁平苔癬、中度から重度の慢性蕁麻疹）、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ；例えば、狼瘡腎炎）、硬皮症（例えば、全身性進行性硬化症（ＰＳＳ）、肺のＰＳＳ等）、急性または慢性一次好酸球性肺炎、シェーグレン症候群、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、急性心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、および線維性障害（例えば、肺線維症（例えば、突発性肺線維症）、肺線維症（例えば、誘発ＸＲＴ誘発）、骨髄線維症、肝硬変、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月形糸球体腎炎、糖尿病性腎症、および間質性腎線維症）を治療するために使用することができる。

本明細書で説明される製剤および方法はまた、患者の一過性脳虚血発作および／または動脈狭窄の予防を含む、脳虚血等の神経障害を治療するために使用することができる。他の例示的な神経障害としては、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（ＣＩＤＰ）、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、黄斑変性（例えば、湿式黄斑変性）および前部乏血性視神経障害等の眼疾患、神経障害性疼痛（例えば、症候性神経障害性疼痛）、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例えば、疾患修飾性ＡＬＳ）およびパーキンソン病が挙げられる。

本明細書で説明される製剤および方法はまた、腎臓、心臓、または骨髄移植術等の移植術を受けた患者を治療するために使用することができる。

多発性硬化症
本明細書で説明されるアルファ４結合抗体を含有する製剤は、多発性硬化症（ＭＳ）等の炎症性疾患の治療に有用である。多発性硬化症は、ミエリン鞘の炎症および損失を特徴とする、中枢神経系疾患である。

ＭＳを有する患者は、ＭＳの診断に関するワークショップによって定義されるような、臨床的に明確なＭＳの診断を確立する基準によって識別されてもよい（Ｐｏｓｅｒｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１３：２２７，１９８３）。例えば、臨床的に明確なＭＳを伴う個人は、２度の発病およびいずれか２つの病変の臨床的証拠、または１つの病変および別の別個の病変の副次臨床的証拠を有する。明確なＭＳはまた、２度の発病および脳脊髄液中のＩｇＧオリゴクローナルバンドの証拠によるか、または発病、２つの病変、および脳脊髄液中のＩｇＧオリゴクローナルバンドの臨床的証拠の組み合わせによって診断され得る。ＭＳを診断するために、ＭｃＤｏｎａｌｄ基準を使用することもできる。（ＭｃＤｏｎａｌｄｅｔａｌ．，２００１，「Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｃｒｉｔｅｒｉａｆｏｒｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｒｏｍｔｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＰａｎｅｌｏｎｔｈｅＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＭｕｌｔｉｐｌｅＳｃｌｅｒｏｓｉｓ，」Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．５０：１２１−１２７）。ＭｃＤｏｎａｌｄ基準は、複数の臨床的発病がない場合に、ＭＳの診断で使用される経時的なＣＮＳ不全のＭＲＩ証拠の使用を含む。多発性硬化症の有効な治療は、複数の異なる方法で評価されてもよい。治療の効果を測定するために、以下のパラメータを使用することができる。すなわち、２つの例示的な基準であり、ＥＤＳＳ（総合障害度評価尺度）、およびＭＲＩ（磁気共鳴映像法）上の悪化の出現が挙げられる。ＥＤＳＳは、ＭＳによる臨床的障害を等級分けするための手段である（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ３３：１４４４，１９８３）。神経障害の種類および重篤性について、８つの機能系が評価される。簡潔には、治療前に、患者は、錐体系、小脳系、脳幹系、感覚系、腸および膀胱系、視覚系、脳系、ならびにその他における障害について評価される。追跡調査は、規定の間隔で行われる。尺度は、０（正常）から１０（ＭＳによる死）の範囲である。１段階下がることは、治療が有効であることを示す（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：５７３−７９，１９９４）。患者はまた、当業者によって使用される他の基準を使用して診断してもよい。

悪化は、ＭＳに起因し、しかるべき新たな神経的異常を伴う、新しい症状の出現として定義される（ＩＦＮＢＭＳＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ、上記）。さらに、悪化は少なくとも２４時間継続し、そして少なくとも３０日間の安定または改善の後に起こらなければならない。簡潔には、患者は、臨床医による標準的な神経学的検査を受ける。悪化は、神経学的評価尺度の変化に従って、軽度、中度、重度のいずれかである（Ｓｉｐｅｅｔ
ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ３４：１３６８，１９８４）。年間の悪化率および悪化のない患者の比率が決定される。

治療は、これらの測定値のいずれかについて、治療群とプラセボ群との間に、悪化のない患者または再発のない患者の割合または比率において、統計学的に有意な差がある場合に有効であるとみなすことができる。さらに、最初の悪化までの時間、ならびに悪化の継続期間および重度も測定され得る。この点に関して、治療としての有効性測度は、対照群と比較した治療群の、最初の悪化までの時間または期間、および重篤性における統計学的に有意な差である。悪化のない、または再発のない期間が１年、１８ヶ月、または２０ヶ月を上回ることは、特に注目に値する。有効性はまた、単独でまたは他の基準と組み合わせて使用される時限歩行試験を用いた運動能の改善を含む、例えばＭＳの症状を評価するために当技術分野で使用される任意の方法を使用して評価することができる。

第１の薬剤、および随意に第２の薬剤を投与する有効性はまた、以下の基準のうちの１つ以上に基づいて評価することもできる。すなわち、限界希釈法により判定されるＭＢＰ反応性Ｔ細胞の頻度、ＭＢＰ反応性Ｔ細胞系およびクローンの増殖反応、患者から確立されるＭＢＰに対するＴ細胞系およびクローンのサイトカインプロファイルである。有効性は、反応細胞の頻度の減少、天然ペプチドと比較して、改変ペプチドが組み込まれるチミジンの減少、およびＴＮＦとＩＦＮ−αの減少によって示される。

臨床的測定は、１年および２年間隔での再発率、および６ヶ月間持続するＥＤＳＳに関する１．０単位のベースラインから進行までの時間を含むＥＤＳＳの変化を含む。カプラン−マイアー曲線上での障害の持続的進行の遅延は、有効性を示す。他の基準は、ＭＲＩ上のＴ２画像の面積および容積の変化、ならびにガドリニウム増強撮像によって決定される病変の数および容積の変化を含む。

ＭＲＩは、ガドリニウム−ＤＴＰＡ増強撮像を使用して活性病変を測定するために（ＭｃＤｏｎａｌｄｅｔａｌ．Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：１４，１９９４）、またはＴ_２強調法を使用して、病変の位置および程度を測定するために使用することができる。簡潔には、ベースラインＭＲＩが得られる。同じ撮像面および患者の位置を、以降の各研究に使用する。位置付けおよび撮像配列は、病変の検出を最大にし、病変の追跡を促進するように選択することができる。同じ位置付けおよび撮像配列を、以降の研究に使用することができる。ＭＳ病変の存在、場所、および程度は、放射線科医によって判定することができる。病変の領域は、全病変領域のスライス毎に概説および要約され得る。新しい病変の証拠、活性病変の出現率、病変領域の変化率の３つの分析を行ってもよい（Ｐａｔｙｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ４３：６６５，１９９３）。治療による改善は、ベースラインと比較した、または治療群対プラセボ群での、個々の患者における統計学的に有意な改善によって確立することができる。

本明細書で説明される方法で治療することができる、多発性硬化症と関連する例示的な症状としては、視神経炎、二重視、眼振、眼ディスメトリア、核間性眼筋麻痺、運動および音眼内閃光、求心性瞳孔障害、不全麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、半身麻痺、四肢不全麻痺、麻痺、対麻痺、片麻痺、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ、ｑｕａｄｒａｐｌｅｇｉａ）、痙縮、構音障害、筋萎縮、痙攣（ｓｐａｓｍｓ、ｃｒａｍｐｓ）、緊張低下、間代性痙攣、間代性筋痙攣、筋波動、下肢静止不能症候群、下垂足、機能不全反射、知覚障害、知覚麻痺、神経痛、神経障害痛および神経原性疼痛、レルミット徴候、固有感覚不全、三叉神経痛、運動失調、企図振戦、ディスメトリア、前庭性運動失調、眩暈、言語失調、ジストニア、拮抗運動反復不全、頻尿、膀胱痙縮、弛緩性膀胱、排尿筋−括約筋協調不全、勃起障害、性感異常、不感症、便秘、便意切迫、便失禁、うつ病、認知機能不全、認知症、気分変動、情緒不安定、陶酔感、双極性症候群、不安神経症、失語症、不全失語症、疲労、ウートホフ徴候、胃食道逆流、および睡眠障害が挙げられる。

ＭＳの各症例は、提示および以降の経過の複数のパターンの１つを示す。最も一般的には、ＭＳは、最初に一連の発病として現れた後に、不可解にも症状が軽減するように完全にまたは部分的に寛解して、安定期間の後に再発する。これは、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳと呼ばれる。一次進行型（ＰＰ）ＭＳは、症状の一時的な安定期またはわずかな軽減があり得るが、いかなる明確な寛解も伴わない段階的な臨床的衰弱を特徴とする。二次進行型（ＳＰ）ＭＳは、再発寛解型の経過で始まり、後に一次進行型の経過が続く。稀に、患者は、疾患が急性の発病によって中断される進行型の経路をたどる、進行再発型（ＰＲ）の経過を有する場合がある。ＰＰ、ＳＰ、およびＰＲは、一括して慢性進行型ＭＳと呼ばれる場合がある。

少数の患者は、急速かつ絶え間のない衰弱として定義される悪性ＭＳを経験し、結果として著しい障害をもたらすか、または疾患発生の直後に死に至り得る。この衰弱は、本明細書で説明される組み合わせ治療を施すことによって、抑制または減速され得る。

本明細書で取り上げられる抗α４抗体の投与は、前述した症状の１つ以上等の、ＭＳの１つ以上の症状を軽減するために有効であり得る。例えば、本明細書で説明される抗α４抗体の投与は、一次または二次進行型多発性硬化症（それぞれ、ＰＰＭＳまたはＳＰＭＳ）を治療するために用いることができ、抗α４抗体による治療は、再発の防止に有効であり得る。

ヒト研究に加えて、または先行して、２つの薬剤を使用することの有効性を評価するために、動物モデルを使用することができる。多発性硬化症の例示的な動物モデルは、例えばＴｕｏｈｙｅｔａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、Ｓｏｂｅｌｅｔａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１１４−１２９）で説明されているような、実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）マウスモデルである。マウスには、ＥＡＥ誘導の前に、本明細書で説明される第１および第２の薬剤を投与することができる。次いで、特徴的な基準についてマウスを評価して、そのモデルで２つの薬剤を使用することの有効性を判定する。

抗体生成
アルファ４に結合する組み換え抗体は、ファージディスプレイ等のインビボ法またはインビトロ法によって生成することができる。本方法は、本明細書で説明されるＣＤＲ移植抗体で使用するための抗α４ＣＤＲを供給するために使用することができる。加えて、ファージディスプレイ等の方法を、フレームワークが生殖細胞系フレームワークであるライブラリ等を使用することによって、本明細書で開示される生殖細胞系フレームワークとの関連において、そのようなＣＤＲを選択するために使用することができる。

欧州特許第ＥＰ２３９４００号（Ｗｉｎｔｅｒら）は、ある種の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、別の種のそれらと（所定の可変領域内で）置換することによる抗体の改変を説明している。ＣＤＲ置換抗体は、含有する非ヒト成分がかなり少ないので、ＣＤＲ置換抗体は、真のキメラ抗体と比較して、ヒトにおける免疫応答を誘発する可能性が低くなり得る（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ３３２，３２３−３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９，１５３４−１５３６）。一般的に、マウス抗体のＣＤＲは、所望の置換抗体をコードする配列を産生するために、組み換え核酸技術を使用することによって、ヒト抗体の対応する領域の中に置換される。所望のアイソタイプのヒト定常領域遺伝子セグメント（通常、ＣＨの場合はガンマＩ、ＣＬの場合はカッパ）を追加することができ、重鎖および軽鎖遺伝子を哺乳類細胞で共発現させて、可溶性抗体を産生することができる。また、標準的なファージ技術を使用したヒトの治療法として開発することができる、高親和性抗体を単離するために、大きい非免疫ファージディスプレイライブラリを使用してもよい（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍｅｔａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４：１−２０および、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍｅｔａｌ．（２０００）ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ２：３７１−８；Ｕ．Ｓ．２００３−０２３２３３３を参照されたい）。

本明細書で説明される抗α４または抗体の断片は、同族のリガンド、例えばＶＣＡＭ−１またはフィブロネクチンへの結合に関与する、α４サブユニットのエピトープを認識することができる。本明細書で説明される抗体は、同族リガンド、例えばＶＣＡＭ−１およびフィブロネクチンの１つ以上への結合を阻害することができる。

いくつかの実施形態において、本明細書で取り上げられる抗体は、細胞、例えばリンパ細胞上でＶＬＡ−４と相互作用することができるが、細胞凝集は引き起こさない。

例示的なα４結合抗体は、１つ以上のＣＤＲ、例えば本明細書で開示される特定の抗体の３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ全て、および／もしくは３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ全て、または、要約すれば、そのような抗体と少なくとも８０、８５、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９％一致するＣＤＲを有する。一実施形態において、Ｈ１およびＨ２超可変ループは、本明細書で説明される抗体のものと同じカノニカル構造を有する。一実施形態において、Ｌ１およびＬ２超可変ループは、本明細書で説明される抗体のものと同じカノニカル構造を有する。

一実施形態において、ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書で説明される抗体のＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、または１００％一致する。ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書で説明される抗体の対応する配列と、少なくとも１個のアミノ酸が異なり得るが、１０、８、６、５、４、３、または２個を超えない。例えば、この差異は、主として、または全体がフレームワーク領域内にあり得る。

ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書で説明される核酸配列に対して高緊縮条件下でハイブリッド化する核酸配列によって、または本明細書で説明される可変ドメインもしくはアミノ酸配列をコードする核酸配列によってコードすることができる。一実施形態において、ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインの１つ以上のフレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）のアミノ酸配列は、本明細書で説明される抗体のＨＣおよびＬＣ可変ドメインの対応するフレームワーク領域と、少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、または１００％一致する。一実施形態において、１つ以上の重鎖または軽鎖フレームワーク領域（例えば、ＨＣＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３）は、ヒト生殖細胞抗体から対応するフレームワーク領域の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または１００％一致する。

２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は、本明細書で同じ意味で使用される）の計算は、以下のように行われる。配列は、最適な比較目的で整列させる（例えば、最適アラインメントのために、第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に間隙を導入することができ、比較目的の場合、非相同配列を無視することができる）。最適アラインメントは、ギャップペナルティが１２、ギャップ拡張ペナルティが４、およびフレームシフトギャップペナルティが５のＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリクスである、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して、最良のスコアとして決定される。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有されているときは、分子は、その位置で同一である（本明細書で使用されるアミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」に相当する）。２つの配列間のパーセント同一性は、該配列によって共有される同一位置の数の関数である。

本明細書で使用される「高緊縮条件下でハイブリッド化する」という用語は、ハイブリッド化および洗浄の条件を説明する。ハイブリッド化反応を行うためのガイダンスは、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＮ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出すことができ、参照により組み込まれる。水性および非水性法は、その参考文献で説明されており、どちらを使用することもできる。高緊縮ハイブリッド化条件は、約４５℃で、６ＸＳＳＣ中でのハイブリッド化と、その後の、６５℃で、０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中での、または実質的に類似する条件での１回以上の洗浄とを含む。

抗体産生
抗体は、原核細胞および真核細胞において産生することができる。一実施形態において、抗体（例えば、ｓｃＦｖｓ）は、イースト細胞、例えば、ピキア属（例えば、Ｐｏｗｅｒｓｅｔａｌ．（２００１）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３−３５を参照のこと）、ハンゼヌラ属、またはサッカロマイセス属で発現させる。

一実施形態において、抗体、特に完全長抗体（例えば、ＩｇＧ）は、哺乳動物細胞で産生される。組み換え発現の例示的な哺乳類宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（ＵｒｌａｕｂａｎｄＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６−４２２０に記載の、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含み、例えば、ＫａｕｆｍａｎａｎｄＳｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１で説明されるように、ＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用される）、リンパ球細胞系、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、Ｋ５６２、および形質転換動物、例えば、形質転換哺乳類由来の細胞が挙げられる。例えば、細胞は、乳房上皮細胞である。

免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子等の、付加的な核酸配列を保持してもよい。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例示的な選択可能マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅とともにｄｈｆｒ−宿主細胞で使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。

抗体（例えば、完全長抗体またはその抗原結合部分）の組み換え発現の例示的な系において、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターは、リン酸カルシウム媒介の形質移入によってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞の中に導入される。組み換え発現ベクター内で、抗体重鎖遺伝子および抗体軽鎖遺伝子は、エンハンサ／プロモータ制限要素（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルス等に由来する、ＣＭＶエンハンサ／ＡｄＭＬＰプロモータ制限要素またはＳＶ４０エンハンサ／ＡｄＭＬＰプロモータ制限要素等）にそれぞれ操作可能に連結されて、高レベルの遺伝子転写を駆動する。組み換え発現ベクターはまた、ＤＨＦＲ遺伝子も保持し、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターを形質移入した、ＣＨＯ細胞の選択を可能にする。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖および抗体軽鎖の発現を可能にするように培養され、無傷の抗体が培養培地から復元される。組み換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、そして、培養地から抗体を回復するために、標準的な分子生物学技術を使用する。例えば、いくつかの抗体は、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇを伴う親和性クロマトグラフィーによって単離することができる。例えば、精製されたα４結合抗体は、当技術分野で知られているタンパク質濃縮手法を使用して、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬに濃縮することができる。

抗体はまた、例えばＦｃ受容体またはＣ１ｑもしくは両方との相互作用を低減または取り除くために、修飾、例えばＦｃ機能を改変する修飾を含んでもよい。例えば、ヒトＩｇＧ４定常領域は、ヒンジ領域を固定するために、残基２２８でのＳｅｒからＰｒｏへの変異を有することができる。ＩｇＧ４Ｆｃ（ヒンジ＋ＣＨ２＋ＣＨ３ドメイン）のアミノ酸配列を、図５に提供する。

別の実施例において、ヒトＩｇＧ１定常領域は、例えば米国特許第５，６４８，２６０号に従って、残基、例えば１つ以上の残基２３４および２３７で変異させることができる。他の例示的な修飾としては、米国特許第５，６４８，２６０号で説明されているものが挙げられる。

Ｆｃドメインを含むいくつかの抗体の場合、抗体産生系は、Ｆｃ領域がグリコシル化される抗体を合成するように設計されてもよい。別の実施例において、ＩｇＧ分子のＦｃドメインは、ＣＨ２ドメインのアスパラギン２９７でグリコシル化される（図５を参照のこと）。このアスパラギンは、二分岐型オリゴ糖による修飾のための部位である。このグリコシル化は、Ｆｃγ受容体および補体Ｃ１ｑによって媒介されるエフェクタ機能に関与する（ＢｕｒｔｏｎａｎｄＷｏｏｆ（１９９２）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１：１−８４、Ｊｅｆｆｅｒｉｓｅｔａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１６３：５９−７６）。Ｆｃドメインは、アスパラギン２９７に対応する残基を適切にグリコシル化する哺乳類発現系で産生することができる。Ｆｃドメインはまた、他の真核翻訳後修飾を含むことができる。

他の適切なＦｃドメイン修飾としては、国際公開第ＷＯ２００４／０２９２０７号で説明されるものが挙げられる。例えば、Ｆｃドメインは、ＸｍＡｂ（登録商標）Ｆｃ（Ｘｅｎｃｏｒ，Ｍｏｎｒｏｖｉａ，ＣＡ）とすることができる。Ｆｃドメインまたはその断片は、国際公開第ＷＯ０５／０６３８１５号で説明されるドメインおよび断片等の、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）結合領域において置換を有することができる。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインまたはその断片は、国際公開第ＷＯ０５０４７３２７号で説明されるドメインおよび断片等の、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）結合領域において置換を有することができる。他の実施形態において、Ｆｃドメインは、国際公開第ＷＯ２００８１４３９５４号で説明されるもの等のように、単一鎖であるか、その断片であるか、またはその修飾バージョンである。他の適切なＦｃ修飾が当技術分野において知られており、説明されている。

抗体は、形質転換動物によって産生することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、形質転換哺乳類の乳腺で抗体を発現させるための方法を説明している。導入遺伝子は、目的とする抗体、例えば本明細書で説明される抗体をコードする、乳汁特異的プロモータおよび核酸配列と、分泌のための信号配列とを含んで構築される。そのような形質転換哺動物のメスによって産生される乳汁は、そこで分泌される目的とする抗体、例えば本明細書で説明される抗体を含む。抗体は、乳汁から精製することができ、またはいくつかの応用の場合、直接使用することができる。

抗体は、例えば循環における、例えば血液、血清、リンパ、肺胞洗浄液、または他の組織における、その安定性および／または滞留を、例えば少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍改善する部分で修飾することができる。

例えば、ＶＬＡ−４結合抗体は、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシド等の、ポリマー、例えば実質的に非抗原性のポリマーと関連付けることができる。適切なポリマーは、実質的に重量が異なる。約２００〜約３５，０００（または約１，０００〜約１５，０００、および２，０００〜約１２，５００）ダルトンの範囲の数平均分子量を有するポリマーを使用することができる。

例えば、ＶＬＡ−４結合抗体は、水溶性ポリマー、例えば親水性ポリビニルポリマー（例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドン）に共役させることができる。そのようなポリマーの限定的でないリストには、ブロック共重合体の水溶性が維持されるのであれば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、その共重合体、およびそのブロック共重合体等の、ポリアルキレンオキシドホモポリマーを含む。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシアルキレン（ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、ポリオキシエチレンの共重合体、およびポリオキシプロピレン（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）等）；ポリメタクリレート；カルボマー；サッカリド単量体Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、フコース、フルクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルクロン酸、シアル酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸（例えば、ポリマンヌロン酸またはアルギン酸）、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコース、ならびにホモ多糖類およびヘテロ多糖類（ラクトース、アミロペクチン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、アミロース、硫酸デキストラン、デキストラン、デキストリン、グリコーゲン、または酸性ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸）等）を含むノイラミン酸を含む、分鎖または非分岐多糖類；ポリソルビトールおよびポリマンニトール等の糖アルコールのポリマー；ヘパリンまたはヘパロンが挙げられる。

例示的な第２の薬剤
いくつかの場合において、本明細書で説明される製剤、例えばアルファ４結合抗体を含有する製剤は、第２の薬剤を含むか、または第２の薬剤を含有する製剤と組み合わせて投与される。

１つの実装例において、α４結合抗体および第２の薬剤は、共製剤として提供され、この共製剤が対象に投与される。さらに、例えば共製剤を投与する少なくとも２４時間前または後に、１用量のα４結合抗体を投与し、次いで第２の薬剤を含有する１用量の製剤を別々に投与することも可能である。別の実装例において、抗体および第２の薬剤は、別個の製剤として提供され、投与ステップは、抗体および第２の薬剤を順次投与することを含む。順次投与は、同じ日（例えば、互いに１時間以内に、または少なくとも３、６、または１２時間間隔で）か、または異なる日に提供することができる。

概して、抗体および第２の薬剤は、それぞれ、複数の用量として、時間を隔てて投与される。抗体および第２の薬剤は、概して、投薬計画に従ってそれぞれ投与される。一方または両方の投薬計画は、一定の周期性を有してもよい。抗体の投薬計画は、第２の薬剤の投薬計画とは異なる周期性を有することができ、例えば、一方を他方よりも頻繁に投与することができる。１つの実装例では、抗体および第２の薬剤のうちの一方が週に１回投与され、他方が月に１回投与される。別の実装例では、抗体および第２の薬剤のうちの一方が連続的に、例えば３０分を超えるが１、２、４、または１２時間未満の期間にわたって投与され、他方がボーラスとして投与される。抗体および第２の薬剤は、任意の適切な方法によって、例えば、皮下、筋肉内、または静脈内投与することができる。

α４結合抗体と組み合わせて、多発性硬化症を治療するための第２の薬剤の限定的でない例としては、
・インターフェロン、例えば、ヒトインターフェロンベータ１ａ（例えば、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）またはＲｅｂｉｆ（登録商標））およびインターフェロンベータ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（商標）、位置１７で置換したヒトインターフェロンベータ、Ｂｅｒｌｅｘ／Ｃｈｉｒｏｎ）、
・酢酸ガラティラメル（共重合体１（Ｃｏｐ−１）とも称される、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（商標）、ＴｅｖａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、
・Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）または別の抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブを伴う重複エピトープと競合するか、またはこれに結合するもの）、
・ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標）、Ｌｅｄｅｒｌｅ）、
・化学療法薬、例えば、クラブリビン（ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（登録商標））、アザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ（登録商標））、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、４−アミノピリジン、およびチザニジン、
・コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＮＥ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）、プレドニゾン）、
・免疫グロブリン、例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、ＣＴＬＡ４Ｉｇ、アレムツズマブ（ＭａｂＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、またはダクリズマブ（ＣＤ２５を結合する抗体）、
・スタチン、および
・ＴＮＦ拮抗薬、が挙げられる。

酢酸ガラティラメルは、アミノ酸−グルタミン酸、リシン、アラニン、およびチロシンのランダム鎖で形成されるタンパク質である（故に、ＧＬＡＴｉｒａｍｅｒ）。酢酸ガラティラメルは、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物を使用して、３部のリシン、１．５部のグルタミン酸、および１部のチロシンに対して約５部のアラニンの割合で、これらのアミノ酸から、溶液中で合成することができる。

付加的な第２の薬剤としては、他のヒトサイトカインまたは成長因子の、抗体またはアンタゴニスト、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦが挙げられる。さらに他の例示的な第２の薬剤としては、細胞表面分子に対する抗体、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０、またはそれらのリガンドが挙げられる。例えば、ダクリズブマブは、多発性硬化症を改善し得る、抗ＣＤ２５抗体である。

さらに他の例示的な抗体としては、インターフェロン受容体、例えば、インターフェロンベータ受容体に係合する抗体等の、本明細書で説明される薬剤の活性を提供する抗体が挙げられる。一般的に、第２の薬剤が抗体を含む実装例では、ＶＬＡ−４以外またはα４インテグリン以外の標的タンパク質に結合するか、または第１の薬剤によって認識されるもの以外のＶＬＡ−４上の少なくともエピトープに結合する。

さらに他の付加的な例示的な第２の薬剤としては、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、本明細書で説明されるように炎症誘発性サイトカインによってシグナル伝達を妨げる薬剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザスロプリン、６−メルカトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、本明細書で説明される溶解性サイトカイン受容体およびその誘導体、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、およびＴＧＦ）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、第２の薬剤は、ＭＳの１つ以上の症状または副作用を治療するために使用することができる。そのような薬剤としては、例えば、アマンタジン、バクロフェン、パパべリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドキュセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレッシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファクシン、アミトリプチン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、シーリアム（オオバコ）親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチン、パロキセチン、臭化プロパンテリン、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリンが挙げられる。小分子である多数の第２の薬剤は、１５０〜５０００ダルトンの間の分子量を有する。

ＴＮＦ拮抗薬の例としては、ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦα）に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはインビトロで生成された抗体（またはその抗原結合フラグメント）、（Ｄ２Ｅ７（ヒトＴＮＦα抗体、米国特許第６，２５８，５６２号、ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）等）；抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の溶解性フラグメント、例えば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；Ｉｍｍｕｎｅｘ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ）、ｐ５５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（商標）））を参照されたい）；酵素拮抗薬（例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えば、アルファスルホニルヒドロキサム酸誘導体、国際公開第ＷＯ０１／５５１１２号、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ３３３３、−００５、または−０２２））；およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−ＨｅａｒｔａｎｄＣｉｒｃｕｌａｔｏｒｙＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照のこと）、が挙げられる。

第２の薬剤に加えて、他の薬剤を対象に送達することも可能である。しかしながら、いくつかの実施形態では、α４結合抗体および第２の薬剤以外のいかなるタンパク質も、またはいかなる生物製剤も、薬学的組成物として対象に投与されない。α４結合抗体および第２の薬剤は、注射によって送達される唯一の薬剤であってもよい。第２の薬剤が組み換えタンパク質である実施形態において、α４結合抗体および第２の薬剤は、対象に投与される唯一の組み換え薬剤であるか、または免疫もしくは炎症反応を変調する唯一の組み換え薬剤であってもよい。さらに他の実施形態において、α４結合抗体単体は、対象に投与される唯一の組み換え薬剤であるか、または唯一の生物薬剤であってもよい。

特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって共通に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で説明される方法および材料と類似する、または同等のものを、本発明の実践または試験において使用することができ、適切な方法および材料を下記で説明する。本明細書で説明される全ての出版物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含めて、本明細書が優先される。加えて、材料、方法、および実施例は、例示的なものに過ぎず、限定することを意図したものではない。

実施例１．可変抗ＶＬＡ−４抗体は、ヒト化ＨＰ１／２よりも強力である。
抗ＶＬＡ−４抗体を、生殖細胞系フレームワークＩＧＫＶ４−１（設計Ｌ１およびＬ２）を使用するか、またはＶＬ鎖について生殖細胞系を操作したＡＡＨ７０３３．１（設計Ｌ３）およびＶＨ鎖について生殖細胞系フレームワークＩＧＨＶ１−ｆを使用して構築した。これらの抗体は、米国特許第６，６０２，５０３号で説明されるヒト化ＨＰ１／２抗体よりも少ない復帰変異を有した。

重鎖の変異
重鎖の３つの変異の配列を、設計Ｈ０、設計Ｈ１、設計Ｈ２として、図１に示す。各設計は、ＩＧＨＶ１−ｆフレームワークの中に移植されるマウスＨＰ１／２のＣＤＲを有する。設計Ｈ０は、フレームワーク領域のいかなる復帰変異も含まない一方で、設計Ｈ１および設計Ｈ２は、ヒト化抗体の親和性を最適化するように、フレームワーク領域配列において、種々の程度の復帰変異を有する。

軽鎖の変異
軽鎖の４つの変異の配列を、設計Ｌ０、設計Ｌ１、設計Ｌ２、設計Ｌ３（Ｌ０、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３とも呼ばれる）として、図２に示す。各設計は、生殖細胞系フレームワークに移植されるマウスＨＰ１／２のＣＤＲを有する。ＩＧＫＶ４−１生殖細胞系フレームワークを設計Ｌ０、設計Ｌ１、および設計Ｌ２に使用し、ＡＡＨ７０３３５生殖細胞系を操作したフレームワークを設計Ｌ３に使用した。設計Ｌ０は、フレームワーク領域のいかなる復帰変異も含まない一方で、設計Ｌ１、設計Ｌ２、および設計Ｌ３は、ヒト化抗体の親和性を最適化するように、フレームワーク領域において、種々の程度の復帰変異を有する。

競合ＥＬＩＳＡアッセイの結果を、表１および図３に示す。この実験では、α４β１を、試験ｍＡｂで前インキュベートし、次いで競合試薬としてマウスＨＰ１／２を使用した。この実験の結果は、軽鎖Ｌ２またはＬ３を有する抗体が、米国特許第６，６０２，５０３号で説明されるヒト化抗体ＨｕＨＰ１／２よりも強力であることを示した。結果を、下記表１に、および図３に示す。このアッセイのための抗体の重鎖（Ｈ１）は、図１に示される「設計Ｈ１」配列を有し、一方で、Ｌ１は、図２に示される設計Ｌ１を指す。

表１において、キメラｍＡｂは、キメラ化したＨＰ１／２抗体であり、マウス可変重鎖および軽鎖は、ヒトＩｇＧ１定常領域に遺伝子的に融合する。この抗体は、元のマウスＨＰ１／２抗体に対する結合親和性において本質的に同一である（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：１３４３−１３４９，１９９６）。実験の結果は、生殖細胞系を操作した受容体フレームワークに関するヒト化を通して、そのマウス親の配列に対するモノクローナル抗体の親和性を改善することが可能であることを示している。

別の競合アッセイは、新しい抗体の結合親和性を、米国特許第５，８４０，２９９号で説明されるヒト化２１．６抗α４抗体（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）（ナタリズマブ））と比較する。この実験では、試験ｍＡｂを伴うマウスＨＰ１／２の混合物のα４β１への結合を検定した。この実験の結果は、図４および下記表２で示され、新しく設計した抗体は、ナタリズマブよりも約１０倍強力であることを示している。

実施例２．ヒト化ＨＰ１／２（ＨｕＨＰ１／２）は、腫瘍細胞系上のＶＬＡ−４に結合する。
種々の細胞系への抗ＶＬＡ−４抗体ＨｕＨＰ１／２の結合は、フローサイトメトリによって試験した。結合は、ＣＬＬ（慢性的なリンパ球白血病患者）細胞系Ｍｅｃ１およびＪＭ１、ＭＭ（多発性骨髄腫）細胞系Ｕ２６６およびＨ９２９、およびＡＭＬ（急性骨髄性白血病患者）細胞系ＨＬ６０およびＫＧ１に関して試験した。ＨｕＨＰ１／２は、試験した全ての腫瘍細胞系に結合した（図６）。フローサイトメトリデータは、異なる細胞系のそれぞれに結合する抗体についてＥＣ５０値を計算するために使用した。この情報を、下記表３に示す。

ＨｕＨＰ１／２はまた、フィブロネクチン（ＦＮ）およびＶＣＡＭ１−Ｉｇ融合タンパク質へのＡＭＬ細胞系の接着を遮断することも分かった。抗体が接着を遮断することができたかどうかを試験するために、ＡＭＬ細胞系ＨＬ６０またはＫＧ１を、濃度を増加させるＨＰ１／２またはイソタイプ対照抗体の存在下で、ＦＮ被覆ウェル（図７Ａ）またはＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェル（図７Ｂ）に接着させた。ＨｕＨＰ１／２は、両方の細胞型のＦＮ被覆ウェルおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへの接着を遮断した。両方のリガンドへのＨＬ６０細胞の結合の最大阻害は、２０μｇ／ｍＬのＨｕＨＰ１／２で達成された（図７Ｃ）。

ＨｕＨＰ１／２はまた、ＦＮおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ融合タンパク質へのＭＭ細胞系の接着を遮断することも分かった。ＭＭ細胞系Ｕ２６６およびＨ９２９を、濃度を増加させるＨＰ１／２またはイソタイプ対照抗体の存在下で、ＦＮ被覆ウェル（図８Ａ）またはＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェル（図８Ｂ）に接着させた。ＨｕＨＰ１／２は、ＦＮ被覆ウェルおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへの両方の細胞系の型の接着を遮断した。両方のリガンドへのＵ２６６細胞結合の最大阻害は、２０μｇ／ｍＬのＨｕＨＰ１／２で達成された（図８Ｃ）。

ＨｕＨＰ１／２はまた、ＦＮおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ融合タンパク質へのＣＬＬ細胞系の接着を遮断することも分かった。ＣＬＬ細胞系Ｍｅｃ１およびＪＭ１を、濃度を増加させるＨＰ１／２またはイソタイプ対照抗体の存在下で、ＦＮ被覆ウェル（図９Ａ）またはＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェル（図９Ｂ）に接着させた。ＨｕＨＰ１／２は、ＦＮ被覆ウェルおよびＶＣＡＭ１−Ｉｇ被覆ウェルへの両方の細胞系の型の接着を遮断した。両方のリガンドに対するＭｅｃ１細胞結合の最大阻害は、２０μｇ／ｍＬのＨｕＨＰ１／２で達成された（図９Ｃ）。

腫瘍細胞系へのＨｕＨＰ１／２の結合のＩＣ５０値は、図７〜図９に示されるデータから計算した。これらのデータを表３に示す。

他の実施形態は、特許請求の範囲にある。

Claims

明細書に記載の発明。