JP2015520773A - ヒトおよび動物における予防および医薬に有用であるラクトバチルス・ロイテリｄａｎ８０を含むナノ製品ならびにこれらの医薬用途 - Google Patents

Abstract

本発明は、ヒトおよび獣医学の両方の予防および医薬に有用であるナノ製品ならびにこれらの医薬用途に関する。本発明は、医薬用途のための寄託番号ＤＳＭ１５６９３のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株に関する。ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）を含む様々な形の調製物は、治療剤および予防剤として、特に、脊椎動物における泌尿生殖器系、呼吸器系などの細菌、真菌、および胃腸管、体表および他の系の他の病原菌によって引き起こされる感染の結果として発症する医学的状態の予防および治療における抗菌薬として、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防および／または脊椎動物、特にヒト、他の哺乳類または鳥類におけるリゾチーム活性の増加のための治療剤および／または予防剤として医薬用途のために開示される。ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）の培養生成物を含むカテーテルおよび衛生製品などの医学機器も開示される。

Description

本発明は、ヒトおよび動物の予防および医薬に有用であるナノ製品ならびにこれらの医薬用途に関する。本発明者（Danuta Kruszewska（DK））によって単離され、同定された新たな微生物は、その製品の供給源である。

健常なヒト（または健常な動物）の人生を通して、微生物はこれらの生物中に存在する。これらの微生物のうち、真菌や原虫も存在するが、細菌が優勢である。様々なタイプの微生物は、最も集中的には、胃腸管の粘膜、体の表面および他の系、例えば、泌尿生殖器または上気道にコロニーを形成し、ならびに粘膜面上に定着している。特定の微生物叢の各々の種／菌株、ならびに全体としての微生物叢が健康状態の維持においてそれらの機能を発揮することによるメカニズムは、あまり理解されていてない。胃腸管、皮膚、および微生物が居住する他の環境適所の微生物叢は、発揮される機能、微生物の組成および量について異なっている。よって、用語「微生物叢」は、体の特定の解剖学的および生理学的領域に居住し、微生物のマイクロバイオームを構成する微生物の「群れ」を称するものと理解されるべきである。

ヒト消化管内で優勢な条件は、現在、生きている生物の他のマイクロバイオーム中でも見出すことができる様々な相互関係およびメカニズムの例を提供するために詳細に議論されている。

胃腸管微生物の相互作用は、共生共存の特徴を有する。消化器系の例に基づくと、前記系の微生物叢は、微生物のレベル（生存しているか、または死滅している）だけではなく、その細胞内および細胞外代謝物を介して宿主免疫を活性化し、受容体および基質に関する競合により、生存に危険な他の微生物（主に、病原菌）の固着を妨げ、他の微生物の毒性の細胞内および細胞外代謝物を中和し、腸の発生および生理学的機能（消化機能レベルのみではない）を調節し、消化しにくいがエネルギー的に有用な基質を発酵させ、グリカンおよびアミノ酸を代謝し、ならびにビタミンを合成する。よって、様々な代謝性疾患の発症における微生物叢の複雑な関与またはこれらの機能障害、例えば、痛風はほとんど考えられていなかった。

ヘリコバクターピロリは、胃および十二指腸の粘膜でコロニーを形成する微生物であり、多くの疾患に関連しており、胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌、腸管疾患、胃腸管（ＧＩＴ）障害および下痢が挙げられ、実際に、これら全ては、西洋諸国の近代社会で生きるヒトを悩ませる典型例である。これは、ヒトの１／３についての主な医療問題であり、発展する医学、社会および経済に影響を与える。１０００万人を超える米国人は、Ｈ．ピロリ関連胃炎に罹っており；胃炎の近年の定義を当てはめても、罹っている患者数は、胃潰瘍または癌をまだ経験していないが、すでに十分な疼痛症状を経験している人を含め１４００〜２５００万人と推定される。胃炎の病理発生、胃潰瘍および腺癌の発症におけるＨ．ピロリの役割は公知であるにもかかわらず（Hunt RH. The role of Helicobacter pylori in pathogenesis: the spectrum of clinical outcomes. Scand J Gastroenterol Supl. 1996; 220: 3-9を参照のこと）、Ｈ．ピロリの特定株が共生生物として天然に存在しうることが示唆されている（Misiewicz J. Is the only good Helicobacter a dead Helicobacter? Helicobacter 1997: 2S: S89-S91を参照のこと）。

米国の国立衛生研究所は、１９９０年において、上記記載の胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃（胃）癌、十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患および下痢の治療費は、２００億ドルに達したと概算する。人工の高齢化と胃炎の有病率の上昇とともに、米国だけで２０２０年までにこれらの疾患に関連する医療費のみで６００億ドルを超えることが予測されている。

胃炎および他の関連する疾患、例えば、上記記載のＨ．ピロリに関連して発症する胃および十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢の細菌の治療および予防方法は、通常、胃のＨＣｌ生成の減少、または抗生物質による一般的な全ての細菌の死滅に基づくものである。表１は、現在までの治療方法の有効性を示す。
表１．胃炎の治療のための公知で一般的に適用される治療方法。

消化器系において、有益な乳酸細菌（ＬＡＢ）も存在し、それ自身ならびにその生成物は、天然の健康を改善する微生物叢の一部であり、宿主の健康および腸を改善する薬剤として考えられている（Kullisaar T, Zilmer M, Mikelsaar M, Vihalemm T, Annuk H, Kairane C, et al. Two antioxidative lactobacili strains as promising probioticts. Int J Food Microbiol 2002; 72: 215-24を参照のこと）。

ＬＡＢは、一般的に安全な細菌として認識されている（ＧＲＡＳ）。一般的な健康状態における極めて優れた効果、特にＧＩＴにおける効果にもかかわらず、ＬＡＢ細菌は、哺乳類の乳飲み期間の経過後、ならびに鳥類の全生涯にわたりＧＩＴコロニー形成の十分な能力を示さない。これは、まず、乳飲み期間の経過後のＬＡＢの増殖のための適切な基質の欠如によるものであり、第２に、ＧＩＴ上皮またはＧＩＴ粘膜への細菌の接着に関連する線毛などを産生できない細菌細胞壁の特徴によるものである。

ＬＡＢとＨ．ピロリとの間における抗生作用は、ＬＡＢが胃粘膜にコロニーを容易に形成できないため、このような治療の効率が低下することにより、治療としてあまり適用されていない。

多くのＬＡＢは、現在市販されており、生きた培養菌、ヒト用の食品添加物、動物用の食品添加物、例えば、ラクトバチルスｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ ｖなどとして提供されている。消化器系で増殖するＬＡＢの産物は、これらの細菌を吸収する菌にとって有利であることが予測される。このことは、生きたＬＡＢ培養菌が宿主の抗細菌化合物によって見事に排除され、死滅され、結局、胃および腸の上部で細菌の増殖を減少させることから、論争を引き起こすことになる。

様々な他の障害はまた、副次的に胃炎を発症しうる。このような障害は、表２に示される。
表２．胃炎または他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患および下痢を引き起こす疾患および治療方法。

哺乳類およびニワトリにおいて、胃の本来の機能は問題がある。特に、極めて非生理的な食品を与えて強制的に食べさせて早く成長させた動物の場合には、胃は、正しく発育せず、多くの健康障害が生じ、その問題は胃炎の様々な形によって引き起こされ、動物の生産の効率を減少させる。不要な動物を生じるのみならず、農業従事者のコストを高めるこのような状態を防ぐために、胃腸管のＨ．ピロリおよび他の病原菌の存在に関連する胃粘膜における生理学的および病理学的プロセスのさらなる理解および制御が哺乳類および鳥類を含む脊椎動物の出生後に必要となる。

胃疾患および関連する障害の予防および軽減を生じるこれまでの療法の上記に示され、当該技術分野で公知な不便を考慮し、ならびに例えば、胃炎または胃潰瘍に関連する障害におけるＧＩＴ機能の治療および矯正の高いコストを考慮すると、胃腸管のＨ．ピロリおよび他の病原菌を排除し、またはそれらの増殖を制御することによって胃の機能を向上させるために、ヒトおよび動物用医薬における使用のための新しい製品ならびに改善された方法および組成物の開発について強い必要性が存在する。

痛風は、ポダグラ［母趾に関連する場合］としても知られ、通常、急性炎症関節炎の再発性発作によって特徴付けられる代謝性疾患である。この障害は、関節組織および多くの器官、特に、腎臓および尿路における尿酸ナトリウム塩の結晶の形態の沈着の存在によって引き起こされる深刻な疼痛を患者が経験する。関節炎は、発赤、圧痛および腫脹を呈し、症例の半分において、母趾の中足骨−指骨関節で発症する。

痛風の過程において、柔組織における尿酸塩の沈着、腎結石（腎結石症）、腎障害である痛風結節が生じうる。血中の尿酸（結晶化）レベルの上昇は、関節、尿路および周辺組織だけではなく、腱、靱帯、および軟骨におけるその沈着を伴う。

痛風患者の約２０％は、泌尿器系で形成された結石、腎結石（痛風腎障害−腎臓の髄質および腎臓の錐体の柔組織における）を有する。尿路結石症は、細管コラーゲン（tubuli colligens）、腎盂および尿管における尿酸結晶の沈殿によって引き起こされる。尿酸結石は、全ての腎結石の約１０％を構成する。

近年、尿路結石症は、生活水準の高い国で広く発症している。男性の５．２〜１５％および女性の６％が患っていると推定される。罹患率の増加は、生活様式の変化、栄養的な種類の変化、および広まっている肥満症に関連する。「メタボリック症候群」は、痛風とは別に、高血圧疾患、脂質代謝のバランス欠如に関連する疾患、２型糖尿病、循環器疾患のような疾患を網羅し、結石の形成を伴う。栄養的な種類、すなわち、食事の量、組成およびタイプは、食品の代謝および栄養物質の血流およびリンパ流への吸収に影響を与える。これらのプロセスの結果として、結石が形成され、これらの化学構造については様々である。シュウ酸の豊富な食事に伴い、結石は、シュウ酸カルシウム（石の７５％、ストルバイト１０〜２０％、尿酸５〜６％、およびシスチン１％）に基づいて形成される。

結石疾患患者の約５０％が再発によるものであるという事実を考慮して、この疾患の代謝的および／または薬理学的予防が推奨されている（Porena M, Guiggi P, Micheli C. Prevention of stone disease. Urol Int. 2007;79 Suppl 1:37-46を参照のこと）。

結晶の存在は、尿と共に尿酸の生物による排泄の異常（クリアランスの減少）から生じ、尿酸の過剰生成からはめったに生じない。血清の尿酸濃度（ｓＵＡ）が６．８ｍｇ／ｄＬを超えると、細胞外液がこの酸と共に飽和となり、高尿酸血の状態と定義される（Becker MA, Ruoff GE. What do I need to know about gout? J Fam Pract. 2010;59(6 Suppl):S1-8を参照のこと）。

痛風の診断は、関節液に存在する特徴的な結晶の視覚化、ならびに血液および尿の画像に基づくものである。

痛風は、ここ数十年で上昇傾向が見られる高度な先進国の人口の約１〜２％が患っていることが強調されるべきである。尿酸代謝の障害は、先天性の遺伝的素因、酵素活性の不全／欠如だけではなく、平均寿命の増加、食習慣の変化などの因子に関連する。高尿酸血症は、成人および閉経後の女性の疾患である。

健常なヒト（ならびに他の動物）の人生を通じて、微生物は、生体内に存在している。これらの微生物のうち、真菌および原虫も存在するが、細菌が優勢である。様々なタイプの微生物は、胃腸管の粘膜、体表および他の系、例えば、泌尿生殖器または上気道でほとんど集中的にコロニーを形成し、粘膜面に住み着く。特定の微生物叢の各々の種／株、ならびに全体としての微生物叢が健康の維持にそれらの機能を発揮することによるメカニズムはあまり理解されていない。微生物が棲みつく胃腸管、皮膚、および他の生態的地位の微生物叢は、微生物の発揮される機能、組成および量について異なる。よって、用語「微生物叢」は、微生物のマイクロバイオームを構成する、体の一定の組織学的および生理学的領域に棲みついている微生物の「群れ（herd）」と称されるものと理解される。

胃腸管微生物の相互作用は、共生共存の特徴を有する。消化器系の例に基づくと、前記系の微生物叢は、微生物のレベル（生存しているか、または死滅している）だけではなく、その細胞内および細胞外代謝物を介して宿主免疫を活性化し、受容体および基質に関する競合により、生存に危険な他の微生物（主に、病原菌）の固着を妨げ、他の微生物の毒性の細胞内および細胞外代謝物を中和し、腸の発生および生理学的機能（消化機能レベルのみではない）を調節し、消化しにくいがエネルギー的に有用な基質を発酵させ、グリカンおよびアミノ酸を代謝し、ならびにビタミンを合成する。痛風の発症におけるそれらの複合体の関与または不全は今日まで考えられていなかった。

リゾチームは、マクロファージおよび多核白血球などの一定の食細胞によって放出される加水分解酵素であり、病原性微生物の制御に顕著な役割を果たす。リゾチームはまた、腸の粘膜に局在するパネート細胞から産生される。リゾチームは、グラム陽性微生物に対して特に活性である。細胞の食作用活性は、リゾチームの関与する細菌の細胞壁の分解、より正確には、ペプチドグリカンのグリコシド結合の切断に関するものである。

リゾチームの単離および完全な同定の可能性にもかかわらず、この化合物の治療用途は、その高い活性のため実現できていない。公開番号ＷＯ８９／１１２９４では、リゾチームの二量体型の治療用途の可能性が開示され、ヒトおよび動物用医薬品における治療用途のその有効性が示されている。

これまでの痛風の治療は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド、または古典的薬剤（コルヒチン）の形で疼痛の強度および期間を減らし、その疾患の症状を軽減させる抗炎症薬の投与に関するものである。

コルヒチンは、抗炎症活性を有し、生体体の尿酸濃度のレベルを下げる。この薬の短所は、その毒性効果である。副作用は、下痢、腹部外皮の強い疼痛および嘔吐の形で現れる。痛風の発作を抑え、または大きく減少させるために、少用量でのコルヒチンの投与が続けられ、少用量は副作用の症状を発症することはないが；安全かつ有効な治療を提供するものではない。

コルヒチン代謝は、シトクロームＣＹＰ３Ａ４系に関与する。ＣＹＰ３Ａ４阻害剤および糖タンパク質Ｐ、例えば、抗菌薬および抗真菌薬、すなわち、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ケトコナゾールおよびサイクロスポリンは、コルヒチンの濃度を上昇させる。コルヒチンと抗生物質との相互作用が観察され、このような相互作用により、上記に記載の薬剤による抗菌療法は、痛風の発症過程（横紋筋の破壊−横紋筋融解）で危険である（Finkelstein Y, Aks SE, Hutson JR, Juurlink DN, Nguyen P, Dubnov-Raz G, Pollak U, Koren G, Bentur Y. Colchicine poisoning: the dark side of an ancient drug. Clin Toxicol (Phila). 2010;48(5):407-14）。

時々、代わりに、フェニルブタゾール（phenylbutazole）またはインドメタシンのような抗炎症活性を有する非ステロイド系薬物が投与される。しかしながら、これらは、骨髄の機能障害および内出血などの副作用のため不利益である。

痛風患者の大半は、最終的に、アロプリノールおよびプロベネシドの使用により達成可能である尿酸レベルを減少させる長期療法（尿酸低下療法−ＵＬＴ）を必要とする。

発作の治療は、主に、コルヒチン、非ステロイド系抗炎症薬、例外的に、糖質ステロイドの投与に関する。尿酸生成が増加した患者においては、アロプリノールが投与される。

高尿酸血症は、沈着物および結晶の発生を伴う。さらに、病原性細菌の吸収、それらの増殖および泌尿器系の再発性炎症の状態は、高尿酸血の状態で頻繁に生じる。

鉱質沈着物の吸収については、尿酸排泄促進薬、例えば、スルフィンピラゾンおよびアロプリノール（尿酸の合成を阻害する）が投与される。このような治療により、腎臓中の痛風結石は溶解され、一方で溶解できないサイズにまで発達したものは外科的治療（例えば、レーザー）によって取り除かれる。

この状況下において、予防作用を補助するであろう薬剤を提供し、危険な疾患の発症から保護し、ならびに適用される食事療法の有効性を高め、またはその適用の必要性さえも排除することについて強い要望がある。

ヒト医薬、動物医薬、畜産において、特定の解剖学的または生理学的に定義された体の領域（火傷および創傷の結果で負傷した外皮を含む）、微生物が望ましくない効果の病理発生に関連する医療機器、装置、人工装具にさえ侵入し、コロニー形成できる微生物によって引き起こされる望ましくない現象および医学的状態が頻繁に発生する。

患者をこのような危険にさらす医療機器の代表的な例は、泌尿器カテーテルである。

カテーテルは、液体または気体のドレナージまたは投与を可能とし、内視鏡、チューブおよび外科装置の挿入のためにヒトおよび動物用医療において広く用いられる。

しかしながら、明らかな利益とは別に、カテーテルの使用には望ましくない効果も伴う。

無菌状態および衛生状態の条件を保持しようと努めたとしても、カテーテルの使用は、外部環境からの病原因子の進入のリスクを高め、ならびに生体内の特定の部位／ニッチにコロニーを形成する生体自身の天然の微生物叢の普及を高め、カテーテルの配置部位での病原性微生物叢となる。カテーテル挿入の領域における病原体の発生は（様々な強度の）感染を発生させる。

さらに、カテーテルの血管、管または体腔への挿入は、患者にとって痛みとストレスの両方を与える方法である。さらに、組織とカテーテルおよびカテーテルを通じて流れる因子との長期接触の結果として、炎症を生じ、高頻度でアレルギー反応を引き起こしうる。

目的の用途により、カテーテルは、様々なプラスティックで製造される。主にネラトン型の医療用塩化ポリビニル（ＰＶＣ）から作られた公知のカテーテルは、短期間のカテーテル挿入のために用いられ、３日以内の期間患者の体内に置かれる。このようなカテーテル挿入は、用いられるカテーテル法の８０％を超える。カテーテルの製造に用いられる他のポリマーは、ポリウレタン（ＰＵ）、シリコンまたは天然ラテックスおよびこれらの誘導体である。主に、（固定装置を搭載する）フォーリーカテーテルはシリコン製であり、フォーリーカテーテルは、長期使用のための医療品であり、３ヶ月まで配置したままにされうる。

残念なことに、高品質のポリウレタンおよびシリコンカテーテルは、ＰＣＶ製のものと比較して非常に高価であり、天然ラテックスの使用が今のところなされているが、アレルギー反応を引き起こしうるため推奨されない。

ヒトおよび動物用医薬品におけるカテーテルの使用に対する必要性についての一般的な課題は、泌尿器に問題のある患者のカテーテル挿入に伴う現象によって十分に例示されている。医薬および医療における成果にもかかわらず、カテーテル関連尿路感染（ＣＡＵＴＩ）は、いまだに最も頻繁に生じる院内感染のままである。例えば、米国では、毎年、１００万人以上の入院患者がＣＡＵＴＩのため治療を必要としている。

永続性留置尿道カテーテルは、院内尿路感染（ＵＴＩ）の発生因子の１つである。多くの場合、院内感染は、多剤耐性細菌株によって引き起こされ、抗生物質を用いて複雑で高額な治療を必要とする。

米国では毎年、カテーテルは、集中治療室、加えてナーシングホームにおける５００万人以上の患者に挿入される。ポーランドでは、２００，０００個の尿路カテーテルが毎年使用される。短期間のカテーテル使用に関連する感染のリスクは、カテーテル挿入のうちの１日あたり５〜６％と推定される。７日間以上の長期のカテーテル挿入に関連する感染は、通常、カテーテル表面上にバイオフィルムを形成する多くの細菌株によって引き起こされ、カテーテルの目詰まりを生じうる。

バイオフィルムは、上皮の表面に持続的かつ自然にコロニーを形成する非病原性で共生する尿素分解細菌、泌尿生殖器系感染を引き起こす微生物（例えば、Proteus mirabilis）を含む病原菌などの様々な微生物によって作り出される。尿素分解細菌の一般的な特徴は、主に、生存に必要な窒素の供給源として、それらの環境（組織）に存在する尿素を利用する能力であり、その利用はウレアーゼに関するものである。ウレアーゼ（細菌のウレアーゼを含む）は、尿素をアンモニアと二酸化炭素に加水分解する。自身のウレアーゼによる窒素同化細菌の例は、バイオフィルム形成細菌である。

尿素分解細菌は、健全な生物において尿路感染の主な病因因子ではないが、尿路疾患の患者における感染に関連することがある。尿素分解細菌は、バイオフィルムの形成、ならびにカテーテルおよび他の医療機器上への沈着物の鉱化に関連する。ウレアーゼ産生微生物によって引き起こされる尿路感染の結果としては、無機塩：リン酸アンモニウム−マグネシウム（ストルバイト）、リン酸カルシウム、シュウ酸塩および尿酸塩による尿の過飽和を伴う腎結石症である。生理学的条件では、尿素は、砂や石の形成を示す量でこれらの塩を含有しない。

感染した腎結石の形成は、下記の属の微生物によって引き起こされる尿路感染に関連する：Proteus、Ureaplasma、Klebsiella、Pseudomonas、Staphylococcus、Providencia、およびCorynebacterium。

これらの感染の別の望ましくない効果は、腎実質内の病理過程である。菌血症は、カテーテル挿入の結果として生じうる重篤な合併症の１つである。

一般に、尿路感染による罹患率は、患者の特徴と状態、病原性微生物および病院環境による。通常、宿主（生物）に関連する因子は、それらのほとんどが患者（宿主）または細菌のいずれかに内在するものであるため減らすことはできない。

年齢、自己導尿、および神経障害患者による完全または持続性尿失禁は、院内尿路感染因子である。このような患者は、カテーテル挿入に関連する感染の結果として患ってしまう。病院条件における重要なリスク因子として、カテーテルの種類、挿入期間、置換のタイプ、および抗菌または消毒物質の使用が含まれる。尿路にコロニーを持続的に形成する微生物は、カテーテル挿入に関連する感染を引き起こす微生物の主な供給源を示す。極めて多数の細菌が尿試料中で見出され、それらのうち大腸菌株が優勢である。感染は、通常、無症候性過程で生じるが、抗生物質治療にもかかわらず、症例の２０％は症候性である。（カテーテル挿入に関連する）出血／血液痕跡（bood traces）比率の指標も高く、５つの症例あたり１つで生じる。１年以上の期間カテーテルが挿入された患者の７５％以上は、様々な強度のＵＴＩ症状を発症する。

男女両方の患者、特に、間欠的なカテーテル挿入による長期間の治療を受けた高齢患者は、通常、治療に関する身体的および心理的合併症も訴える。

尿道カテーテルは、通常、天然ラテックスまたは合成ポリマーから製造される。市販される近年のカテーテルは、形状、拡張方法、およびそれらが製造されている材料に関して異なっている。これらの特徴は、各カテーテルの使用プロトコールに違いをもたらす。

従来技術において、ヒトおよび動物用医療で提供されるカテーテルの有用性を高める試みは、カテーテルを化学療法剤でコーティングし、消毒薬または他の薬剤（例えば、抗凝血剤）に含浸することによってなされてきた。最初の療法は、摩擦係数を低くし、痛みを弱めるために、カテーテル挿入前に直接カテーテル表面上にヒドロゲルを適用することである。それは、通常、消毒作用のあるヨウ素と組み合わせたポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から主に構成される。しかしながら、それはさらなる操作を必要とし、適用されるゲルは簡単に洗い流されてしまうため、消毒作用は時間が限られている。より進歩したコーティング剤は、カテーテル表面に持続的に結合し、挿入時だけでなくカテーテル除去時であっても摩擦係数を低くすることができる。持続性ヒドロゲルコーティング剤はまた、表面のコロニー形成を遅延させる抗菌薬の貯蔵所としても機能しうる。それにもかかわらず、長期持続カテーテル挿入に関連する感染の課題はあまり解決されなかった。生体内のカテーテルの長期置換の場合、抗菌薬放出プロセスが制御され、カテーテル挿入の全期間中にその殺菌特性を維持するように遅延されるべきであり、これは十分に達成されていなかった。

天然またはポリマーのチューブにおける抗菌コーティング剤の適用のための多くの公知の方法が存在する。コーティング技術も同様に様々である。ヒドロゲルコーティング技術は、コーティング剤の高い生体適合性、摩擦の低さ、細菌接着の減少、および薬物のコーティング剤への取り込みの可能性により有益である。

ＥＰ１９１７９５９において、尿素分解細菌による泌尿生殖器系における沈着および感染性結石の形成に対する薬剤の生成のためのアルファケトグルタル酸の使用が開示されている。

上記課題を解決するために行われた研究および努力にもかかわらず、全ての臨床現場では、患者にカテーテル、特に、尿道カテーテルを長期間挿入することができる解決手段を待ち望んでいる。

よって、本発明の主な目的は、胃腸管のＨ．ピロリおよび他の病原菌の排除またはそれらの増殖の制御による胃の機能を向上させるためにヒト医療で使用するための新型の治療製剤、ならびに改善された方法および組成物を提供することである。

本発明のさらなる目的は、胃腸管のＨ．ピロリおよび他の病原菌の排除またはそれらの増殖の制御によって、脊椎動物、特に、哺乳類および鳥類における胃およびＧＩＴの残りの部位の機能を改善するための動物用製剤および方法を提供することである。

また、本発明の目的は、脊椎動物（ヒト、他の哺乳類および鳥類を含む）における消化器系、体表、および他の系、例えば、泌尿器系および呼吸器系の細菌、真菌および他の病原菌によって引き起こされる感染の結果として発症するの医学的状態の予防および治療において使用するための新規な抗細菌薬および／または抗菌薬を提供することでもある。

本発明のなおさらなる目的は、痛風およびいわゆるメタボリック症候群の他の疾患の予防および治療に有用である薬剤を提供し、高度な先進国の人口の健康の増進を確実なものとし、これらの疾患の蔓延に関連する社会的および経済的コストを削除することである。

本発明のさらなる目的は、体の免疫系の活性を高める薬剤を提供し、それにより免疫力を高め、病原性微生物、特に、ウイルスおよび細菌により生じる疾患および副作用を最小にすることである。

本発明の目的はまた、長期持続し、機能し、同時に、患者の体内で長期間保持することに適当であり、感染のリスクを減少させることができる特殊なカテーテル（specialist catherter）を提供することである。

本発明の別の目的は、天然の抗細菌カテーテル（尿道カテーテルを含む）を提供するためのナノ技術を使用することである。

本発明の別の目的は、カテーテルの表面から作用する、体液および組織のための内在性生物分解を確実なものとする天然の抗菌薬を提供するためにナノ技術を使用することである。

上記に記載および他の目的は、予想外にも、新規微生物−ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０（特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従って２００３年６月２０日に寄託、ＤＳＭＺコレクション（独国、ブラウンシュヴァイクのＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ）では、受入番号：ＤＳＭ１５６９３）の単離および同定に基づく技術的解決手段の開発により達成された。

本発明は、治療剤または予防剤として、特に、脊椎動物における胃腸管、体表および他の系、例えば、泌尿生殖器系、呼吸器系などの細菌、真菌および他の病原菌によって引き起こされる感染の効果として発症した医学的状態、あるいは他の様々な代謝性疾患の予防および治療のための抗菌薬としての医薬用途のためのＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の部分的に不活性化された培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液、およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液に関する。

本発明治療剤または予防剤の抗菌薬は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の全培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の培養物およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を含む混合した細菌培養物から得た上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液、原核生物および真核生物の組み換え体から得た上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液、および原核生物および真核生物の組み換え体から得た全培養物（前記遺伝子および／または前記由来の遺伝子が用いられ、これらの遺伝子は、ピロリおよび他の細菌に対する特異的な調節、阻害、恒常活性を供する）、ならびに、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０から得た液体／濃縮／乾燥させた上澄み液から精製／単離され、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の全培養物およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を含む他の混合した細菌培養物から精製／単離され、ならびに原核生物および真核生物の組み換え体から精製もしくは単離される（前記遺伝子および／または前記由来の遺伝子が用いられ、これらの遺伝子は、Ｈ．ピロリおよび他の細菌またはこれらの混合物に対して特異的な調節、阻害活性、恒常活性を供する）約１５０および／または１４１および／または１１５および／または９５および／または９０および／または８６および／または８３および／または７７および／または７１および／または６３および／または５９および／または５６および／または４９および／または４６および／または４３および／または３９および／または３４および／または３２および／または３０および／または２２ｋＤならびにそれ以下の分子量のタンパク質／オリゴペプチド／ペプチド、あるいはそれらの混合物を含む群から選択されるものであって、脊椎動物における胃腸管、体表、および他の系、例えば、泌尿生殖器系、呼吸器系の細菌、真菌および他の病原菌によって引き起こされる感染の効果として発症する医学的状態の予防および治療のための、または痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のためのおよび／または脊椎動物、特に、ヒト、他の哺乳類および鳥類の体におけるリゾチーム活性の増加のためのものである。

本発明によれば、脊椎動物は、ヒト個体である。

脊椎動物はまた、それらの年齢に関係なく、飼育動物、ペット、スポーツ関連の動物、ブロイラー、産卵鶏、マウス、ラット、モルモット、ウサギおよび他の実験動物（霊長類を含む）である。

本発明によれば、微生物は、病原性細菌または真菌である。

特に、病原性細菌は、Ｈ．ピロリである。

本発明はまた、このような治療を必要とする脊椎動物（ヒト、他の哺乳類および鳥類）の体における胃、腸およびＧＩＴの機能の調節のための、または痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のための、および／またはリゾチーム活性の増加のための組成物の製造のための本発明の抗菌薬の使用に関するものであって、前記組成物は、所望の予防または治療効果を得るために提供する有効量で薬剤を含むものである。

本発明によれば、前記組成物は、特に、Ｈ．ピロリおよび他の微生物を死滅させ、前記微生物の増殖を阻害し、調節し、予防するためであるか、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のためであり、および／または脊椎動物、特にヒト、他の哺乳類および鳥類の体内におけるリゾチーム活性を増加させるためであり、所望の予防または治療結果に達するために必要な有効量で十分な速度で投与されるものである。

好ましくは、前記組成物は、ＧＩＴ疾患、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、および十二指腸癌の治療、軽減または予防、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防および／またはそれを必要とする個体−脊椎動物（ヒト、他の哺乳類および鳥類を含む）の体内におけるリゾチーム活性の増加を対象としたものである。

特に、前記組成物は、適宜、特に、ナノ形態におけるビタミン、特にビタミンＤおよびＥなどの他の生物学的活性な物質、予防または治療用量でのＬ．ロイテリＤＡＮ０８０代謝物に含まれる乳酸および他の酸の塩、ならびに医薬的に許容される担体および／または添加物を含んでいてもよい医薬組成物である。

好ましくは、前記医薬組成物は、固体形態であり、治療上の有効量の本発明の治療剤または予防剤を、１日あたり体重の０．００１〜０．２ｇ／ｋｇの量で含む単一用量に分けられる。前記組成物は、特に、錠剤またはカプセルの形態である。

あるいは、本発明の医薬組成物は、液体形態であり、治療上の有効量の本発明の治療剤または予防剤を、特に、アンプル中で１日あたり体重の０．００１〜０．２ｇ／ｋｇの量で含む単一用量に分けられる。このような組成物は、エアロゾル、パップ剤または湿布剤として使用するために液体形態である。

特に好ましくは、本発明によれば、ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０の発酵産物は、培養物、少なくとも部分的に不活性化された培養物およびこれらの培養物の上澄み液の形態で用いられ、各々は、脊椎動物の体、特に、ヒト、他の哺乳類および鳥類−すなわち、このような治療を必要とする脊椎動物（ヒト、他の哺乳類および鳥類を含む）において、胃、腸およびＧＩＴの機能の調節、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防、および／またはリゾチーム活性の増加のために処理されるものである。

本発明は、経口投与した場合、ヒト胃腸管に存在する病原因子としてのＨ．ピロリ−による典型的な影響について記載されているが、新規の細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の生存している培養物および上記に記載の形態の示される生物学的活性は、当業者が、異なる投与経路を用いてヒトの体の他の系および他の哺乳類および鳥類のものにおける他の病原菌の影響下で発症した医学的状態の予防および治療で用いることを可能にする。

好ましくは、本発明の別の態様において、前記組成物は、栄養補助食品、食品または飲料である。栄養補助食品、食品または飲料は、固体形態および／または飲料形態である。本発明の治療剤および予防剤の好ましい量は、１日あたり体重の０．００１〜０．２ｇ／ｋｇである。このような栄養補助食品、食品または飲料は、必要に応じて、他の生物学的に活性な物質、ならびにビタミンＤおよびＥを、予防用量で特にナノ粒子の形で含有していてもよい。

本発明による溶液は、痛風予防に最も重要であるタンパク質およびプリン化合物の正常な代謝を回復でき、特に、リゾチーム活性を増加させ、その抗菌活性および抗ウイルス活性を高めることによって免疫系に対する促進効果を有する。

上記に記載されるように、本発明はまた、特殊なカテーテルに関するものである。今回、予想外にも、上記に記載の他の目的は、様々な物質のナノコーティング剤、主に、カテーテルの挿入と除去に伴うストレスを減少させ、患者の免疫反応を誘導し、それによりウイルスおよび細菌感染のリスクを減少させる乳酸細菌の新規な株に由来する構成成分の少なくとも１つのナノコーティング剤の組成物の使用によるカテーテルの表面のコーティングに基づく本発明による溶液によって達成されうることが見出された。

驚くべきことに、ナノ形態における特定のビタミンおよびアルファケトグルタル酸を本発明によるカテーテルのナノコーティング剤に含ませることによっても、カテーテルと長期間接触させたまま組織の感染および炎症の予防について相乗効果を発揮する。

本発明による、プラスティック製であり、保護滑沢剤層でコーティングされるヒトおよび動物用の予防、診断および医薬に使用するための血管、管および／または体腔への挿入のためのカテーテルは、直接またはカテーテル物質に化学結合したポリマーのナノコーティング剤を介して前記プラスティックに永続的に結合し、水とともにゲルを形成でき、抗菌特性を有する生体適合性ポリマーの外部のナノコーティング剤を有するものであって、ナノコーティング剤の少なくとも１つは、ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０から分泌された細胞外代謝物が添加されており、前記代謝物は、抗菌活性および抗炎症活性を有し、ならびに必要に応じて、ナノ粒子形態のビタミンＤおよびＥが添加されていてもよいものである。

本発明によれば、生体適合性ポリマーは、ポリビニルピロリドンであり、このポリマーで作られたナノコーティング剤の厚さは、約５０，０００のＣ−Ｃ結合（１０ｎｍ）である。

好ましくは、抗菌特性を有するポリマーは、キトサンおよび小分子有機酸、好ましくは、アルファケトグルタル酸の塩である。

本発明によれば、生体適合性ポリマーのナノコーティング剤および／または抗菌特性を有するポリマーのナノコーティング剤において、キトサンアルファケトグルタル酸、クエン酸キトサン、抗菌活性および抗炎症活性を有する乳酸キトサン、小分子ジカルボン酸、銀ナノ粒子、保護コーティング剤でコーティングされたナノ粉末形態におけるビタミンＤおよびＥ、ならびにこれらの組み合わせを含む群から選択される分散されるさらなる活性な薬剤が存在する。

本発明はまた、カテーテルおよび注射用水（滅菌済）の入ったバイアル、ならびにカテーテル挿入期間の毎日投与、好ましくは、カテーテル挿入８時間前の経口投与、またはカテーテル挿入１５分前の体腔への投与のための１０^６個の細胞の用量でのラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０の生存している培養物または熱で不活性化された培養物の形で経口投与されるストレス緩和剤を含む、カテーテル挿入のためのキットを包含する。

本発明によるキットにおいて、水のバイアルは、好ましくは、カテーテル先端で固定されており、前記バイアルは、水をカテーテルから分離する障壁を備えており、障壁は、カテーテルを包装から突き出すとカテーテルに対するバイアルの回転によって破壊される。

本発明によるカテーテルは、全ての上記に記載の要件を満たし、カテーテル挿入の患者、医療従事者および医療関係者に受け入れられ、使いやすい。本発明によれば、ナノコーティング剤は、ＰＶＣおよびシリコンで作られたカテーテルについて開発された。ヒドロゲルナノ層は、ポリマー表面に永続的に結合し、摩擦係数を減少させ、それによりカテーテル挿入の患者が経験する疼痛を減少させるだけではなく、添加剤を含有し、それにより患者の体組織に接触する薬剤がカテーテル挿入および除去に伴う患者のストレスを減少させる。同時に、この同一の添加剤は、カテーテルと接触したままの組織におけるリゾチームレベルを増加させ、それにより非常に広範囲のリゾチーム活性スペクトルによるウイルス性の細菌感染のリスクを減少させる。カテーテル表面における新規なコーティング剤の存在は、カテーテル表面におけるバイオフィルムの形成を減少させる。このナノコーティング剤はまた、制御された方法で遅延して放出される他の活性な物質を含有する。

本発明に従って適用される表面ナノ技術は、必要に応じて薬剤を放出するコーティングを提供することを可能にする。薬物の放出を引き起こすシグナルの１つは、例えば、細菌増殖によって生じる環境のｐＨの変化でありうる。この標的とする薬物放出は、かなり効果的であり、少ない副作用を示す。さらに、コーティング層の組成の適正な選択により、患者の状態に合わせた様々な目的の専用のカテーテルが得られる。ＰＶＰ／キトサン塩で作られたコーティング剤の化学結合した薬物（例えば、小分子ジカルボン酸）との使用は、想定される目的の達成を確実なものとする。

本発明カテーテルは、本発明によるカテーテルの表面で作用する天然の抗菌薬の送達のためのナノ技術の利用可能性により、医療ケア分野における発展が期待される。ナノコーティング剤でコーティングされるカテーテルは、患者にとって使用により利便的であり、安全である。前記コーティング剤は、カテーテルの挿入に伴う痛みを軽減し、感染の可能性を著しく減少させる。さらに、全ての用いられる活性な物質は、患者において望ましくない副作用を一切生じない。

ナノ技術の使用に基づく本発明により、カテーテルにおける保護コーティング剤の役割は、ナノコーティング剤の抗菌特性の亢進および活性な物質の必要に応じた標的とする放出の結果、最大とされる。本発明によるカテーテルは、用いられる化合物の特徴を考慮しつつ、カテーテル挿入の患者の痛みを軽減し、感染数を減少させ、古典的な抗生物質によって引き起こされる微生物の薬剤耐性の発生を排除することが最も重要である。

すなわち、本発明の新規な治療剤および予防剤はまた、その抗菌活性を発揮する薬剤で飽和させた個人衛生における使用のための被覆または衛生物質の形態で用いることもできる。

本発明の新規な治療剤および予防剤は、救助隊（消防隊を含む）、特に、広範囲に体の傷を有する重篤な火傷の患者および交通事故犠牲者を対象とするプラスティックプロテクターおよび防火用ブランケットにおけるコーティングの形態、好ましくは、ナノ層の形態で特に用いられるのに有益である。

本発明の新規な治療剤および予防剤は、別の吸収材（液体吸収材を含む）と共にその顕著な抗菌活性のために体の表面（局所）の適用に用いることができる。対応する製品の非限定的な例としては、おむつ、タンポン、包帯、バンドエイド、生理用ナプキン、羽付き生理用ナプキン、パンツの裏地、化粧用パッド、昼夜使用のための動物用ラップが挙げられる。この製品の群は、繊維、超薄（薄絹ソフト（silk-thin soft））綿表層から構成されうる。おむつに含まれる本発明の抗菌薬は、おしりの発疹、敏感な皮膚のケアの予防に役に立ちうる。調節可能なバックルの付いた様々なサイズのこのようなおむつは、子供および成人に使用することができる。

防火用ブランケットは、防火用ブランケットの新たな欧州規格に合わせて製造することができる。それらは、特別に選択されたコーティング材料を用いて、または本発明の新規な治療剤および予防剤を含有してさらなる流動性をもって設計され、燃えている対象物または衣類を消すように調整される。それらは一切アスベストを含まず、ほつれることはない。防火用ブランケットは、緊急避難多目的袋に包装されうるが、最終的な使用者の必要性に応じて包装されうる。それらは、１８０ｃｍ^２までの異なるサイズでありうる。表面の各平方センチメートルは、有効量の本発明の新規な治療剤および予防剤の使用時に切り離すことができるものとされる。

本発明のこの特定の態様の利益は、痛ましい可能性のある室内火事が起こった場合、最初の再建火傷外科手術を必要としうる火傷犠牲者に対する迅速な治療処置を提供することにある。火傷患者は、１５０日以上の入院とともに、焼痂切開、筋膜切開、初期切除、皮膚移植、切断、局所皮弁、遊離皮弁被覆（coverage）、胸部外科手術などを必要とする様々なサイズ（全体表の小さい割合対大きい割合）および重症度の程度の火傷を負っていることが多い。迅速に予防されなれば重度の感染症も生じうる。

本発明から生じるさらなる目的および有利な点は、下記の本発明の詳細な説明で図面とともに詳細に記載される。

図１は、グラフにおいて、プレート拡散アッセイ（株Ｈ．ピロリ１７８７４を含有する寒天培地ＧＡＢ−ＣＡＭＰ）結果を示す：１−Ｌ．ロイテリの培養物から得られた非活性な上澄み液；２−非活性なブロスＭＲＳ；３および４−Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の培養物から得られた活性な上澄みの活性によって引き起こされた阻害領域； 図２は、液体培地−ＢＨＩブロス中のＨ．ピロリの増殖に対するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の培養物からの上澄み液の効果を示す； 図３は、ＭＲＳブロス中の増殖１、２、３、４、５、６、８および１０時間後それぞれに得られたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０からの上澄み液のＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動を示す。１〜２０番は、Ｌ．ロイテリによる培地に放出された同定タンパク質を表記する； 図４は、プライマーＬａｃＦおよびＬａｃＲで増幅した変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０のＰＣＲ産物によるＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の同定を示す； 図５は、ＤＡＮ０８０−１０^６個の細胞ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０；ＤＡＮ０８０Ｐ−熱で死滅させた１０^６個の細胞のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０；ＣｈＡＫＧ−キトサンアルファケトグルタル酸；ＳＦ−生理食塩水の胃内投与後のラット血液中のリゾチーム活性（Ｕ／Ｌ）と、それらの胃腸管内の細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の存在との関連を示す； 図６は、腸管神経系から単離された神経の活性と、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物との関連を示す； 図７ａ〜７ｆは、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０、不活性なＬ．ロイテリＤＡＮ０８０、キトサンアルファケトグルタル酸で処理したラットについて行ったオープン・フィールド試験、ならびにＬ．ロイテリＤＡＮ０８０、不活性なＬ．ロイテリＤＡＮ０８０、およびキトサンアルファケトグルタル酸および生理食塩水で処理したラットについて行ったオープン・フィールド行動試験の結果を示す。

発明の詳細な説明
細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０は、健常な実験動物の胃腸管から単離した。前記細菌は、血液寒天を含有する固形培地上で単一のコロニーとして単離した。この培地は、健常なマウスの胃腸管からの剥離物を３７℃の温度で２４時間インキュベートした。単離したコロニーは、乳酸細菌（ＬＡＢ）の標準培地上でブロスＭＲＳＢ（Ｏｘｏｉｄ）中で増殖させた。滅菌前の培地のｐＨは、ｐＨ６．８であった。滅菌は、滅菌後の培地のｐＨ：ｐＨ６．２で１２１℃の温度にて１５分以内で行った。細菌インキュベーションの温度条件は、３５±３℃の範囲内とした。液体培地中での全増殖は１６時間であった。細菌は、−２０℃の温度で生存を保証しつつ保存できる。Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０は、室温＋２０〜＋２２℃で、他の微生物の増殖の阻害能力を保ちながら少なくとも３０日間生存する。

亢進した抗菌活性を得るために、細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０は、ＡＫＧを含む培地で増殖させる。

培地の組成：０．５％ 肉エキス ；０．５％ 酵母エキス；１％ ペプトン；０．３％ ＮＨ_４Ｃｌ；０．４％ Ｋ_２ＨＰＯ_４；０．４％ ＫＨ_２ＰＯ_４；０．０１％ ＭｇＳＯ_４ｘ７Ｈ_２Ｏ；０．００５％ ＭｎＳＯ_４ｘ４Ｈ_２Ｏ；０．１％ Ｔｗｅｅｎ８０；０．０５ Ｌ−システインＨＣｌ；以下のビタミン：Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ５、Ｂ１２、Ｂ９の各々の０．０００２。上記に示される条件での滅菌後、２３ｍｍｏｌ／ｌのマルトースおよび、デンプンまたはグルコースのそれぞれ、および１０ｍｍｏｌ／ｌのＡＫＧを培地に加えた。培地ｐＨは、ｐＨ６．２であった。細菌は３７℃で１６時間インキュベートした。細菌の増殖の亢進は、ＡＫＧの存在下で生じた。この培地において、ＡＫＧ−１〜２ｍｍｏｌ／ｌと少ないが、４〜６ｍｍｏｌ／ｌの酢酸および乳酸が見出された。

ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０は、生化学活性によって同定し、炭水化物を発酵する能力は、試験−Ａｐｉ５０ＣＨおよびＣＨＬ培地（フランス、マルシー＝レトワールのｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ ＳＡ）によって測定した。

分類群：Ｌ．ロイテリ
−ＡＰＩシステムによる表現型の特徴
CAT: 1053 1121 0000 000 000 0000000
API RID32s: 515 151 511 111 315 111 111 511 111 111 11 1
API 50CHL: 1111533111 5511111111 1411111155 5511151111 1111111311
Api ID32AN: 155 515 111 114 111 513 351 351111 312

遺伝子型の特徴［配列番号：１、２、３］は、ＤＮＡ解析およびＬ．ロイテリのリボソームＲＮＡの１６Ｓ遺伝子配列との比較を基にした（ＧｅｎＢａｎｋ：ＥＦ１８７２６１．２；Byun R, Nadkarni MA, Chhour KL, Martin FE, Jacques NA, Hunter N. Quantitative analysis of diverse Lactobacillus species present in advanced dental caries. J Clin Microbiol. 2004;42(7):3128-36; Fredricks DN, Relman DA. Improved amplification of microbial DNA from blood cultures by removal of the PCR inhibitor sodium polyanetholesulfonate. J Clin Microbiol. 1998; 36(10):2810-6を参照のこと）。下記のプライマーは、配列決定に有用であった［配列番号：２、３］−プライマー１：TGGAAACAGA TGCTAATACC GC（２２ｂｐ）［配列番号：２］、プライマー２：ATTAGATACC CTGGTAGTCC （２０ｂｐ）［配列番号：３］
tggaaacaga tgctaatacc gcataacaac aaaagccaca tggcttttgt
ttgaaagatg gctttagcta tcactctggg atggacctgc ggtgcattag
ctagttggta aggtaacggc ttaccaaggc gatgatgcat agccgagttg
agagactgat cggccacaat ggaactgaga cacggtccat actcctacgg
gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg gcgcaagcct gatggagcaa
caccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaagctct gttgttggag
aagaacgtgc gtgagagtaa ctgttcacgc agtgacggta tccaaccaga
aagtcacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa
gcgttatccg gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg gttgcttagg
tctgatgtga aagccttcgg cttaaccgaa gaagtgcatc ggaaaccggg
ccacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtggaat
gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgc
aactgacgct gaggctcgaa agcatgggta gcgaacagga ttagataccc
tggtagtcc ［配列番号：１］（６５９ｂｐ）

Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０増殖の一定時間後、培養物を遠心分離し、上澄み液、濃縮した上澄み液、ならびに乾燥させ、または凍結乾燥させた上澄み液は、インビトロおよびインビボでのＨ．ピロリおよび他の細菌の増殖を調節するための特定の能力および活性の産物である。所定時間で収集した上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液から行った電気泳動で分離し、１５０〜２２ｋＤまたはそれ以下の範囲内の分子量の一定のタンパク質を可視化し、これらのタンパク質は、Ｈ．ピロリの増殖の恒常性および調節に関するものである。これらのバンドは弱く、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物について上記の一定時間とは異なる時間で収集した上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液から得た電気泳動図では生じておらず、上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液は、インビトロならびにインビボでＨ．ピロリおよび他の細菌における本来の効果−恒常性および増殖調節のうちの１つを示す。

Ｌ．ロイテリの遺伝学的同定について、全ゲノムＤＮＡは、キットＤＮａｅｓ（登録商標）（ドイツ、ヒルデンのＱｉａｇｅｎ ＧｍｂＨ）を用いて、終夜培養した細菌から単離した。

１６Ｓ ｒＤＮＡの３４０ｂｐフラグメントの増幅は、プライマー［配列番号：４、５、６］（Walter, J., Hertel, Ch., Tannock GW., Lis CM., Munro K., Hammes W.P. (2001) Detection of Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostoc i Weisella species in human faeces by using group specific PCR primers and denaturing gradient gel electrophoresis. Appl. Environ. Microb. 67, 2578-2585を参照のこと）；順向きプライマー３：AGCAGTAGGG AATCTTCCA（１９ｂｐ）［配列番号：４］；逆向きプライマー４： ATTYCACCGC TACACATG（１８ｂｐ）［配列番号：５］；順向きプライマー５：ACAATGGACG AAAGTCTGAG TG（２２ｂｐ）［配列番号：６］を用いて、セミネステッドＰＣＲ（第１ラン：９４℃で３０秒、６１℃で６０秒、６８℃で６０秒、３５サイクル；第２ラン：９４℃で３０秒、５８℃で６０秒、６８℃で６０秒、４０サイクル）を行った。

定義
本明細書で用いられる用語は、下記で特に定義されていない限り、それらの一般の基本的な意味で理解されるべきである。

本明細書で用いられるように、用語「Ｈ．ピロリおよび他の細菌を死滅させ、これらの生成物の増殖を阻害し、調節し、予防する」は、本発明によって用いられる一定のパラメータにより測定されるようなＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、部分的に不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液の薬理学的、化学的、力学的および生理学的特徴を意味するものとされる。このようなパラメータは、当業者に公知であり、本明細書でさらに定義されている。

本明細書で用いられるように、用語「Ｈ．ピロリ増殖の排除または安定化による胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢の改善」は、本発明によって適用される一定のパラメータにより測定されるような、胃、腸、およびＧＩＴの化学的および生理学的特徴を意味するものとされる。このようなパラメータは、当業者に公知であり、本明細書でさらに定義されている。

用語「Ｈ．ピロリ増殖の排除または安定化による胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢の改善」は、本明細書において、胃、腸およびＧＩＴ機能の力学的、化学的および生理学的特徴における変化をさらに意味し、それにより、胃、腸およびＧＩＴの性質を、ロイテリＤＡＮ０８０のいずれかの培養物、部分的に不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液を用いて、本発明による予防および／または治療が施されておらず、または投与されていない脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）のものと比較して定義するものである。前記変化は、このような変化が脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）に陽性である場合に改善と考えられる。

用語「Ｈ．ピロリ増殖の排除または安定化による胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢の改善」はまた、本明細書で示されているように、Ｈ．ピロリによる同一の胃、腸、ＧＩＴおよびコロニー形成化の現在の力学的、化学的および生理学的特徴における変化、改変または他の効果を意味しうる。

本明細書および特許請求の範囲で定義される意味によれば、用語「医薬組成物」は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、部分的に不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液を含む、本発明の治療上および／または予防上有効な組成物を意味する。

本明細書および特許請求の範囲で用いられる用語「治療上の有効量」または「有効量」または「治療上有効な」は、特定の条件および特定の投与計画で用いられる場合の治療上および／または予防上の結果を提供する本発明の抗菌薬の量を意味する。前記用語は、所望される治療よび／または予防効果を生じるように算出された活性な物質の所定量を意味する。上記に記載の活性な物質は、適当な添加剤、例えば、他の微生物または希釈剤、あるいは担体または投与ベヒクルと組み合わせてもよい。さらに、前記用語は、このような治療を必要とする脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）における臨床的に著しい欠損を減少させ、最も好ましくは予防するのに十分な量を意味するものとされる。治療上の有効量の設定は、当業者の範囲内であり、本発明による生成物の活性、活性位置、および治療を必要とする脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）の生得的感受性に依存する。あるいは、治療上の有効量は、宿主の臨床的に著しい状態を改善するために十分なものである。

本明細書で用いられるように、「治療」は、胃炎、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢の状態または状況からの完全または一部の回復でありうる治癒するための処置を意味する。

本明細書で用いられるように、用語「軽減」は、胃炎、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢に関連する状態または状況の減少、すなわち、重症度の減少または軽少を意味する。

本明細書で用いられるように、用語「予防（prevention）」または「予防（prophylaxis）」は、胃炎、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患ならびに下痢に関連する規定の状態または状況の発症または大流行の完全または一部の阻害を意味する。予防上有効な量の決定は、当業者の範囲内であり、生成物の活性、活性位置、および治療を必要とする各脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）の生得的感受性に依存する。あるいは、予防上有効な量は、胃炎、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢に関する状態から宿主を保護するために十分なものである。

本発明の他の態様に関して、下記の用語を正確に理解することが必要である：

「ナノコーティング剤」は、公知のナノゲル（ポリビニルピロリドン−ＰＶＰ等）を意味するものであって、用いられるポリマーは、抗菌活性のキトサン塩（様々な割合および量におけるクエン酸もしくは乳酸またはアルファケトグルタル酸塩、あるいはこれらの混合物）に化学結合しているものである。

抗菌活性のキトサン塩（様々な割合および量におけるクエン酸もしくは乳酸またはアルファケトグルタル酸塩、あるいはこれらの混合物）はまた、修飾されていない形態で、または上記記載の抗菌活性のキトサン塩で修飾された公知のナノゲルでコーティングされていてもよいコーティングを形成しうる。

後のコーティングは、抗菌活性のキトサン塩（様々な割合および量におけるクエン酸もしくは乳酸またはアルファケトグルタル酸塩、あるいはこれらの混合物）の代わりにビタミンＤを形成し、修飾されていない形態で、または抗菌活性のキトサン塩（様々な割合および量におけるクエン酸もしくは乳酸またはアルファケトグルタル酸塩、あるいはこれらの混合物）で修飾されたヒドロゲルの最終コーティングを形成していてもよい。

番号：ＤＳＭ１５６９３で寄託されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物および銀を含有する別の層、ならびにカテーテル活性部位に面するカテーテルをコーティングしているナノゲルとそれらでの修飾も可能である。

新規な治療剤および予防剤の開発：その第１の態様において、本発明は、様々な医学的状態におけるＨ．ピロリおよび他の細菌の増殖の治療、軽減または予防のための新規な治療剤および予防剤の開発に関する。様々な医学的状態におけるＨ．ピロリおよび他の細菌の増殖の治療、軽減または予防における生成物の有効性について意図される疾患は、限定されないが、胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患、および下痢である。

本発明によれば、脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）における胃および腸、ならびにＧＩＴの健康状態および機能の改善は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の部分的に不活性化された培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液の十分な量で、必要に応じて、所望の効果を生じることができる十分な割合での脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）への投与によるものである。

治療を受けている脊椎動物における胃、腸およびＧＩＴの健康状態および機能を改善させる変化は、本発明の抗菌薬のレシピエントではない脊椎動物における胃、腸およびＧＩＴの健康状態および機能と比較される。前記変化は、それらがこのような治療を必要とする脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）に有益である場合に改善と考えられる。

本発明によれば、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、部分的に不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液、ならびにＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液が新規の治療剤および予防剤として用いられる。

本発明による新規な治療剤および予防剤は、脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）、例えば、それらの年齢に関係なく、飼育動物、ペット、スポーツ関連の動物、ブロイラー、産卵鶏、マウス、ラット、モルモット、ウサギおよび他の実験動物（霊長類を含む）の治療に用いられる。

Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物から得られた上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液の投与：投与は、治療される脊椎動物の種類、上記記載の新規の治療剤および予防剤による治療を必要する脊椎動物の状態、および治療に対する特定の兆候に従って選択される様々な経路により行われてもよい。

ある解決手段によれば、薬剤は、食品または食品添加物の形態、例えば、固形および／または飲料の栄養補助食品および／または成分で投与される。さらなる手段は、懸濁液または溶液、例えば、下記にさらに記載の飲料の形態であってもよい。適切な形態はまた、エアロゾル、小球（globule）、坐剤、カプセル剤または錠剤、咀嚼剤または可溶化剤、例えば、発泡錠、ならびに散剤および当業者に公知の他の乾燥形態、例えば、顆粒剤、例えば、微粒剤でありうる。

投与は、上記の本明細書に開示されるように、食事または食品に添加した形で、非経口、直腸、膣内、吸入および経口であってもよい。非経口投与のためのベヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、デキストロースを含有するリンガー溶液、デキストロースおよび塩化ナトリウム溶液、乳酸または植物油を含有するリンガー溶液が挙げられる。

食品および食品添加物はまた、乳化されていてもよい。続いて、治療上活性な成分は、この活性な成分に適合する医薬的に許容される賦形剤と混合されていてもよい。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびこれらの組み合わせである。さらに、必要であれば、前記組成物は、微量の補助物質、例えば、活性成分の有効性を高める、滑沢剤または乳化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤を含有していてもよい。

固形、液体、凍結乾燥され、または乾燥された様々な形態の食品または食品添加物が提供されてもよい。これらとして、希釈剤、例えば、様々なｐＨ範囲およびイオン強度を有する様々な緩衝液（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸、リン酸緩衝液）、添加剤、例えば、アルブミン、ゼラチン、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、充填物質または等張調整剤（例えば、乳糖、マンニトール）、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、金属イオンとのポリマー形成複合体、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなど、あるいはリポソーム、ナノカプセル剤、マイクロエマルション、ミセル、単層または多層ベシクル、赤血球ゴースト、スフェロプラストまたはキチン誘導体が挙げられ得る。

飲料：ある解決手段において、食品または食品添加物は、開示される方法のいずれかによって飲料またはその乾燥剤形で投与される。

飲料は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、部分的に不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液、およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液、またはこれらの混合物の形で生成物の有効量を、水可溶性の栄養的に許容可能な担体、例えば、ミネラル成分、ビタミン、炭水化物、脂肪およびタンパク質と共に含有する。全てのこのような成分は、前記飲料が乾燥形態で提供される場合、乾燥形態で補給される。前記形態で補給される飲料は、摂取時にさらに水を加える状態となっている。前記飲料の最終溶液はまた、上記の段落で提供される一般的な推奨に従って、例えば、緩衝化された溶液として制御された浸透圧および酸性度を有していてもよい。

ｐＨは、細菌および真菌の増殖の予防のための好ましくは、２〜５、特に、２〜４の範囲内である。約６〜８のｐＨの滅菌された飲料も用いられうる。

前記飲料は、単独で、または１つまたはそれ以上の治療上有効な組成物と組み合わせて補給されてもよい。

本発明は、胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患および下痢の予防、軽減または治療のための組成物を製造するための本発明抗菌薬のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、部分的に不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液、およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液および他の上記記載の形態に関する。

本発明のさらなる態様は、前記組成物が医薬組成物である使用を包含する。この医薬組成物としては、医薬的に許容される担体および／または添加剤、例えば、前記方法に有用である希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳濁液、補助剤および／または担体が挙げられ得、それらの使用は、本発明による本明細書に開示される。

さらに、本明細書で用いられるように、「医薬的に許容される担体」は、当業者に周知であり、以下に限定されないが、０．０１〜０．０５Ｍのリン酸緩衝液または０．８％の生理食塩水を包含していてもよい。また、このような医薬的に許容される担体は、水性または非水性溶液、懸濁液および乳濁液でありうる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルである。水性担体としては、水、アルコール性／水性溶液、乳濁液または懸濁液（生理食塩水および緩衝化された媒体を含む）が挙げられる。非経口ベヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、デキストロースを含有するリンガー溶液、デキストロースおよび塩化ナトリウム溶液、乳酸または植物油を含有するリンガー溶液が挙げられる。抗菌薬、ならびに抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなどの保存剤および他の添加剤も存在しうる。

本発明のなおさらなる態様は、前記組成物が、固形食品および／または飲料の形態での栄養補助食品および／または成分である使用を包含する。このような本発明の組成物、例えば、医薬組成物または食事もしくは食品に補給される組成物は、必要に応じて、担体および／または胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患および下痢に対して効果を奏する第２またはそれ以降の活性な成分の一定量を含有していてもよい。

胃炎および他の関連する疾患、例えば、胃および十二指腸潰瘍、胃および十二指腸癌、腸管疾患、ＧＩＴ疾患および下痢の予防における改善は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、不部分的に活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の濃縮した上澄み液、およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の乾燥させた上澄み液、ならびに本発明の抗菌薬の他の上記記載の形態に基づく組成物の投与の結果として生じる。治療上の有効量は、１日あたり体重の約０．０００１〜０．２ｇ／ｋｇである。

投与のための標的群：当業者によって容易に理解されるように、本発明による新規な治療剤および予防剤、これらの使用方法および医薬組成物は、年齢に関わらず、ヒト、飼育動物、ペット、スポーツ関連の動物、ブロイラー、産卵鶏、マウス、ラット、モルモット、ウサギおよび他の実験動物（霊長類を含む）、野生動物（動物園内および／または外で生活する）への投与に特に適切である。

サラミソーセージまたは他の市販の製品の発売が考慮され、この製品は、特別な健康増進特性を示し、乳酸発酵細菌に関する技術プロセスによって製造され、下記のように利用される：
１）ラクトバチルス属の細菌−特に、特定のプロバイオティック特徴を示すＬ．ロイテリＤＡＮ０８０；
２）製品：サラミソーセージ（または他の製品）、生存している細菌培養物中に保存させることができる技術。これらの細菌の発酵製品は、製品の優れた香りの品質を確保し、同時に、摂取者の胃腸管内の細菌の恒常性を維持する。

それらの特定の抗菌特性のため、発酵製品は：
−病原性細菌（Ｈ．ピロリを含む）によるコロニー形成を減少させ、
−胃腸管の感染から保護され、
−他のＨ．ピロリ感染による感染過程を軽減し、
−製品の消費期限日を延長し、
−被覆材料のコーティングに用いられると、製品を保存しつつ混入から保護する。

一般に、用語「プロバイオティクス」は、食品および食事に対する添加物として商業的に用いられており、製薬業界におけるこれらの用途を見出したこのような微生物を意味する。「プロバイオティクス（probioticum）」の定義は、選択された微生物が動物の食品に用いられる場合に１９７０年半ばから存在する。

プロバイオティクスは、公衆衛生条件を亢進し、この亢進は、主に、全身の疾患および感染から人々を保護し、また、このような全身の疾患の症状を弱め、効果を減少させる。よって、プロバイオティクスの研究は、特定の細菌株が疾患の発症を予防する範囲の評価に関連し、また、それらの健康増進効果の状況を説明する。

腸微生物叢、腸粘膜および免疫系の保護特性による高度に組織化された生態系である消化器系は、病原性微生物に対する有効な障壁を提供する。プロバイオティクスは、細菌の胃腸感染状態における補助療法において大きな目的を持っている。現在、徹底した研究は、主に、胃および十二指腸潰瘍によって臨床的に現れ、胃癌の発生の起因となるＨ．ピロリ感染について多くのセンターで行われる。様々な地域で世界規模によるＨ．ピロリ感染の疫学的な広がりの事実を考慮して、そのプロセスを制限する方法を見出すことが重要となっている。

乳酸細菌の健康増進活性は、主に、望ましくない微生物叢による粘膜（例えば、腸の粘膜）のコロニー形成の予防からなるが、この細菌から細胞外周囲に分泌され、放出される産物、例えば、活性な化合物：酸、過酸化水素（プロトン）、酵素、バクテリオシン、または細菌分解産物：細菌細胞壁の断片などの産物は、他の微生物（病原性のものを含む）の増殖に影響を与え、それにより消化器系の機能と調和する。乳酸細菌代謝の発酵後産物はまた、細菌毒性およびマイコトキシン（真菌代謝物）のレベルを減少させる能力を有する。

細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０はまた、発酵プロセス間に生じる熱的ストレスの効果に対する耐性によって特徴付けられる。乳酸の生成物は、感覚の質（sensory quality）で産物を供し、発酵が進み、産物が蓄えられる温度にもかからず、相対的に一定のレベルで細菌によって維持されるべきである。

ラクトバチルス属のユニークな細菌−Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０は、とりわけ、肉のコールド・カットの生産時に生菌として販売されることが目的とされる。動物モデルの使用による予備実験の結果により、マウスの（胃腸管感染を引き起こすＨ．ピロリおよび他の細菌による）感染した胃へのこれらの微生物の発酵産物の経口投与後に、感染が明らかに減少することが示される。これらの実験は、細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の熱安定的な発酵産物が感染したマウスにおいて免疫条件を改善し、同時に、胃をさらなるコロニー形成から保護することを示す。インビトロ実験によってサポートされる観察により、細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の発酵産物の活性の結果としてＨ．ピロリの分布の減少が、胃潰瘍のリスクのあるヒト、または潰瘍性胃炎および十二指腸炎ならびに胃腸管の他の感染に罹っている患者に同様の効果をもたらしうることが推測される。

研究室条件における細胞代謝物の特徴により、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０が、サラミソーセージならびに他の食製品および飲料の生産に用いられる技術に使用されうることが推測される。

乳酸発酵細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の生命機能は、サラミソーセージ（または他の製品）の製造後にも維持されることが予測される。革新的な発酵プロセスは、カルシウムおよびマグネシウムを主とするこのようなサラミソーセージからの多量および微量元素のバイオアベイラビリティを増加させることも予想される。生きた細菌の存在が、人工保存料を加えることなくサラミソーセージ（または他の製品）の保存耐久性を大きく延長させることが強調されるべきである。

これまで、食料品の市場において、伝統があるにもかからず、腸の機能に調和し、消費者の消化プロセスを改善するこのタイプのサラミソーセージの生産がないことも指摘されるべきである。

現在、栄養習慣の変化およびそれに伴う胃腸管（酵素）レベルにおける酵素欠乏は、固有の居住微生物の組成および量に関して、天然の微生物叢を再編する予想外のプロセスを伴うことが見出された。健常な宿主または痛風発作を再発しない宿主の天然の固有の微生物叢の代わりに、粘膜表面は、天然とは異なる様々な程度で他の細菌種によってコロニー形成される。これらの「新規な」微生物は、新たな生態的ニッチに定住しつつ、それら自身の毒性因子を明らかにする。そして、毒性の程度により、局所／全身感染および局所または全身炎症が発生する。これらの過程は、主に胃腸管および泌尿生殖器系で生じる。

ビタミンＤの役割：痛風患者において、１．２５（ＯＨ）２−ビタミンＤ３の血中レベルは、健全な個体のこのビタミン濃度と比較して著しく低く（ｐ＜０．０５）（８．８ｍｇ／ｄＬ＋／−０．２対５．６＋／−０．２ｍｇ／ｄＬ）、一方で、痛風に罹っている男性とポダグラに罹っていない男性との間には、２５（ＯＨ）−ビタミンＤ３レベルに相違は見られない。よって、痛風患者では、それ自身の尿酸は、１−ヒドロラーゼ活性を阻害することによって血中の１．２５（ＯＨ）２−ビタミンＤ３レベルを直接減少させうることが明らかである（Takahashi S, Yamamoto T, Moriwaki Y, Tsutsumi Z, Yamakita J, Higashino K. Decreased serum concentrations of 1,25(OH)2-vitamin D3 in patients with gout. Adv Exp Med Biol. 1998;431:57-60を参照）。

生物の防御反応におけるビタミンＤおよびその活性な代謝物の役割は、いくつかのレベルを包含するものである。

第１のレベルは、傷害および／または感染／侵襲から保護する身体的障壁を構成する上皮細胞である。活性なホルモン１．２５（ＯＨ）２−ビタミンＤは、ギャップ結合タンパク質、接着遺伝子、密着結合遺伝子をコードする遺伝子を促進することによって身体的障壁を亢進し、細胞間コミュニケーション（タンパク質：コネキシン４３、Ｅ−カドヘリン、オクルディン）を高める。

第２に、ビタミンＤは、自然免疫の抗菌ペプチド（βデフェンシン、カテリシジンＬＬ−３７を含む）合成時の上皮細胞における促進効果を有する。

続いて、ビタミンＤは、マクロファージ／好中球で合成された潜在的に活性のある抗菌ペプチドの発現を促進し、マクロファージにおける酸素バーストの可能性を高める。

上記以外にも、それは、ＬＬ−３７を介してエンドトキシンの中和を亢進する。

獲得免疫に関して、ビタミンＤは、Ｔリンパ球の増殖を阻害する能力として明らかにされた抑制効果を示す。これは、活性なＢリンパ球を介してサイトカインおよび免疫グロブリンの産生に依存して免疫の抑制効果を発揮する。それは、Ｔｈ１リンパ球の活性を阻害し、Ｔｈ１ ＩＦガンマおよびＩＬ−２（抗体およびサイトカインの促進因子）による合成を減少させる。これらのリンパ球は、自己免疫背景の障害（例えば、１型糖尿病、関節リウマチ、腸の自己免疫炎症、および多発性硬化症）に関与する。

ビタミンＥの役割：食事、より正確には、肉および総タンパク質の高い摂取量ならびに果物、野菜およびビタミンＣの低い摂取量と、痛風発症のリスクとの関係が示された。赤身肉、海の果物、ビールおよび度数の高いアルコール、ならび総タンパク質、ワインおよびプリン体を豊富に含む野菜は、痛風発症のリスクを増加させることがより容易に確認されたが；最近、乳製品が保護剤として同定された。ヒトの臨床試験により、抗酸化活性のビタミン（ビタミンＥ、ビタミンＣ、ベータカロテン、ビタミンＡ）は、下記に示唆されているように、膝の骨関節炎症プロセスをあまり阻害しないことが示された。しかしながら、食事制限が不可避的で一般に利用可能であるという事実を考慮すると、栄養変化の結果である健康のわずかな改善でさえも、その集団の健康に大きな効果をもたらしうると考えられる。とりわけ、ポダグラの過程における栄養因子の効果を示す証拠が存在しているため、それらは軽視されるべきではないが、一般に普及されている（Choi HK. Dietary risk factors for rheumatic diseases. Curr Opin Rheumatol. 2005;17(2):141-6を参照のこと）。

本発明によれば、ビタミンＤおよびＥは、市販品として入手可能なナノ粒子の形態で用いられる。ビタミンＤおよびＥのナノ粒子は、高いバイオアベイラビリティによって特徴付けられる。しかしながら、経口投与後、投与後標準的な期間内で行った血中のこれらのビタミンのレベルの測定は、正常またはわずかにのみ上昇した値を示す。標準よりも短い時間内で行った測定により、ビタミンＤおよびＥのバイオアベイラビリティの上昇が確認される。

痛風の過程において、タンパク質およびプリン化合物を豊富に含む食品を分解する腸管酵素が適切に機能しなくなることが知られている。

出願番号ＷＯ１９８８／００８４５０−「代謝性疾患の遺伝子治療」において、新規な治療が可能であり、この治療は、代謝物の蓄積または濃度上昇によって特徴付けられる望ましくない状態の治療および予防のための組み換え体に基づくものであることのみが示されている。課題解決のために発明者らは、シュウ酸素質および腎結石形成を予防するために、シュウ酸オキシダーゼおよびシュウ酸デカルボキシラーゼを産生する組み換え体の使用を推奨する。これとは別に、ウリカーゼをコードする遺伝子を有する組み換え体は、尿酸の代謝に有用である。このような治療は、痛風および結石の形成を治療し、予防するものである。オキサロバクター・ホルミゲネスＯｘＢ（ＡＴＣＣ３５２７４）−ヒト胃腸管に天然に定住する細菌は、組み換え体に挿入されたシュウ酸デカルボキシラーゼおよびシュウ酸オキシダーゼをコードする遺伝子の供給源の微生物である。ウリカーゼ遺伝子は、ブタの肝臓から単離された。

尿酸代謝：霊長類、鳥類およびいくつかの爬虫類において、尿酸は、プリン代謝の最終産物である。ヒト体内において、アデニンおよびグアニンは、キサンチンに代謝される。続いて、キサンチンから、キサンチンオキシダーゼによる酸化後、尿酸は、下記の反応に従って形成される：
キサンチン＋ＨＯ＋０＿−＞尿酸＋０〜

スーパーオキサイドジスムターゼは、スーパーオキサイドアニオンラジカル（０〜）を過酸化水素に変換する（Lehninger, A.L: 1975, Biochemistry, 2nd Edition., Worth Publishers, New York, pp. 740 - 741）。尿酸の代謝に関与する酵素は、一般に、ヒトを除く哺乳類で生じる。これらの動物において、尿酸は、腎臓で再吸収され、肝臓に輸送され、肝臓ウリカーゼが関与し、尿酸は、水中に溶解するアラントインに変換されるが、ヒトは、遺伝学的に腎結石を形成しやすい（Gutman AB, Yu T-F: Uric acid nepholithiasis, 1968, Am. J. Med. 45:756- 779）。

本発明によれば、胃腸管、体の外皮および他の系、例えば、脊椎動物の泌尿器系および呼吸器系の細菌、真菌および他の病原菌によって引き起こされる感染の結果として発症する医学的状態の予防および治療に有用である、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の全培養物、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の培養物およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を含む混合した細菌培養物から得た上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥または凍結乾燥させた上澄み液、ならびに原核生物および真核生物組み換え体の培養物から得た上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥または凍結乾燥させた上澄み液、ならびに原核生物および真核生物組み換え体の全培養物（これらの遺伝子および／またはこれら由来の遺伝子が用いられ、これらの遺伝子は、Ｈ．ピロリおよび他の細菌に対して特異的な調節、阻害、恒常活性を供する）、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０から得た液体／濃縮した／乾燥させた上澄み液から精製／単離され、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の全培養物およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を含む他の混合した細菌培養物から精製／単離され、原核生物および真核生物組み換え体の培養物（これらの遺伝子および／またはこれら由来の遺伝子が用いられ、これらの遺伝子は、Ｈ．ピロリおよび他の細菌に対して特異的な調節、阻害、恒常活性を供する）から精製／単離される約１５０および／または１４１および／または１１５および／または９５および／または９０および／または８６および／または８３および／または７７および／または７１および／または６３および／または５９および／または５６および／または４９および／または４６および／または４３および／または３９および／または３４および／または３２および／または３０および／または２２ｋＤまたはそれ以下の分子量のタンパク質／オリゴペプチド／ペプチドを含む群から選択される抗菌薬は、痛風に関するその特定の用途が見出される。

本発明は、痛風の予防および治療における他の細菌および遺伝子技術製品と必要に応じて組み合わせたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の使用に基づくものである。

他のプロバイオティクスと同様に、細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の生菌の潜在能力は、胃腸管による継代の可能性、抗菌化合物の生成、上皮ムチン（例えば、腸上皮）への接着程度、生体アミンの生成、ムチン分解、薬物感受性パターンに基づいて評価される。

胃腸管、泌尿生殖器、体腔および管で生じる発酵の間、大量の最終酸性代謝物が、ｐＨの低下を伴い、細菌によって放出される。前記産物は、定量することが困難であり、微生物学的関係を環境で調節する（抗正作用）過酸化水素およびジアセチルを含む。バクテリオシンは、発酵を引き起こす微生物叢の選択に重要である。株は同定され、胆汁酸塩の存在中の酸性環境における生存能力、タンパク質、デンプン、脂肪の利用能、過酸化水素の生成能、胆汁酸塩ヒドロラーゼ活性能、および胃腸管に望ましくない他の細菌の増殖を阻害する物質の生成能、ならびに抗菌化合物に対する耐性の決定について形態学的および生化学的ならびに分子的に特徴付けられる（同定）。前記評価は、免疫不全の動物で試験した株Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の非感染性を示す。

グラム陽性細菌は、それら自身の細胞壁への取り込みに必要とされるタンパク質（Ｄ−アラニンエステル）をコードする。タイコ酸の関与するこの過程は、細菌細胞、ならびにその酸性環境への耐容性、その抗菌ペプチドへの耐性、その接着、バイオフィルムの形成およびその毒性の程度に重要である。Ｄ−アラニン残基の存在は、胃腸管におけるＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞の機能およびそれらの生存に重要である。カタラーゼによる処理、ｐＨの変化、および８０℃までへの加熱は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の殺菌活性に影響を与えないことが見出された。トリプシンおよびプロテアーゼＫによる処理でさえも、この特徴に影響を与えなかった。培地中のグルコース（炭素供給源）およびペプトン（窒素供給源）の利用可能性が高まった場合に抗菌活性の減少は見られなかった。細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０は、ｐＨ３でも生存し、胆汁酸塩ヒドロラーゼ活性および抗菌化合物の生成能を示しつつも、コール酸およびウシ胆汁の活性に感受性を有していなかった。

Ｌ．ロイテリ（ＬＲ）（Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０を含む）は、有毒な第一次および第二次代謝物（有機酸、ジアセチル、ＣＯ_２および様々な抗生物質類似物質、例えば、ロイテリン（reuterin）、ロイテリシン（ロイテリシン）、ロイテリサイクリン（ロイテリサイクリン）、コバラミンなどを含む）を生成しうる微生物である。

ＬＲのいくつかの株は、バクテリオシンを合成し、放出する能力を有する。これらのうちの１つは、細菌の多くの種、特に、グラム陽性のものに対して殺菌および静菌活性の両方を示すロイテリシン６−バクテリオシンである。溶解力は、ベータガラクトシダーゼ（細菌細胞からの漏出物）の存在下での生存細胞の少ない混濁性の乏しい環境中で最も強力であった。このバクテリオシンは、グラム陰性細菌に対して活性ではなく、ロイテリンを生成するＬ．ロイテリ株では生じない。

ロイテリシン６は、２．７ｋＤａの分子量を有し、６７％の疎水性および極性中性アミノ酸を含み、これらの中ではランチオニンが見出されていない。分子構造は環状であり、ガセリシン（gasericin）Ａ（同様の分子量およびアミノ酸配列）とは区別できない。両バクテリオシンは、殺菌力について異なる。それらは、細胞およびリポソームからのカリウムイオンの漏出を生じさせるが、漏出の強度が異なる。構造的に、バクテリオシンは、主に、ＤおよびＬ立体配置が存在するアミノ酸の数における相違点を有するアルファヘリックス形状である。ロイテリシン６は、全部で１８個のアラニン残基が存在する中で２つのＤ−アラニン残基を有するが、一方で、ガセリシンでは、わずか１つのこのような残基が存在する。アミノ酸残基の数は、それらのＤまたはＲ立体配置で異なり、ＬＲの抗菌活性を決定する。

ＬＲは、公知のバクテリオシンまたはロイテリンあるいは他の有機酸のいずれもが関連していない抗菌活性を示す。ロイテリサイクリンは、抗菌活性の広範な阻害スペクトルを示す。その活性は、グラム陰性微生物の増殖を阻害しないが；大腸菌変異株は、非変異株のＬＰＳ構造とは異なる構造を有し、ロイテリサイクリンの効果に感受性を有する。ロイテリサイクリンは、用量依存的に細胞に対して作用する。それは、胞子を壊さないが、胞子の発芽が生じる条件を妨害する。脂肪酸の細菌培地への添加は、ロイテリサイクリンの活性を変化させる。分子としてのロイテリサイクリンは、疎水性であり、負電荷および３．４９ｋＤａの分子量を有する。構造的に、ロイテリサイクリンは、テトラム酸の誘導体である（A. Holtzel, M. G. Ganzle, G. J. Nicholson, W. P. Hammes, and G. Jung, Angew. Chem. Int. Ed. 39:2766-2768, 2000）。

ロイテリン生成は、グリセロールの存在下で亢進される。

ロイテリンは、主に、グリセロールの存在下での嫌気的発酵プロセス間にＬ．ロイテリによって生成される抗菌活性の物質である。この物質の最大生成は、静止期および対数細菌増殖期に生じる。

グリセロールの存在下において、Ｌ．ロイテリは、β−ヒドロキシプロパナール（ＨＰＡ）を合成し、次いでそれは媒体中に分泌される。水溶液中において、ロイテリンは、バランスを保っているβ−ヒドロキシプロパナールの３つの形態：モノマー、水和物および二量体の混合物として生じることが確認された。

この化合物は、ＴａｌａｒｉｃｏおよびＤｏｂｒｏｇｏｓｚによって最初に単離され、精製され、同定された。これまで、多くのロイテリン特性が示されており、主に、細菌だけではなく、真菌および原虫の広いスペクトルの増殖の有効な阻害剤である。ロイテリン活性のメカニズムは、２０年にわたり研究されており、現在では、この化合物が重複した方法で微生物に対する効果を発揮しうることが知られている。この物質は、ＤＮＡ配列中の結合部位についてリボヌクレオチドと競合することによって、あるいはこの酵素の不安定なチオール基と反応することによって細菌のリボヌクレオチドレダクターゼ活性（ＤＮＡ合成の第１段階を触媒する酵素）を阻害しうる。さらに、ロイテリンは、多くの酵素（リボヌクレオチドレダクターゼを含む）の還元因子の役割を果たすチオレドキシンと直接反応し、それによりこのタンパク質の酵素活性を阻害することが見出された。ロイテリンは、広範なｐＨ値内で作用し、脂肪分解性およびタンパク質分解性酵素の処理に対して耐性を有する水溶解性物質である。Ｌ．ロイテリによるロイテリンの増殖および生成のための最適条件は、３７℃の温度およびｐＨ４．６〜５であり；この化合物はまた、極めて低い温度および酸性度の培地の環境下で安定のままである。

ＬＲ株はまた、グリセロールおよびグルコースの共発酵プロセスにおいてコバラミン（ビタミンＢ１２）を生成する。

遺伝学：形質転換体がその活性、例えば、抗菌活性を示すように、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞に移入させるシャトルベクター（例えば、大腸菌−乳酸菌）を構築することができる。

Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０遺伝子をクローン化する可能性があり（Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞以外のＬ．ロイテリ細胞におけるベータガラクトシダーゼのヘテロ二量体のクローン化が公知）、このような構造遺伝子の発現は、成熟（切断、環状型）および様々な輸送系によるＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞外への分泌に関連するタンパク質の活性を伴う必要があると考えられている。Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０において、例えば、ロイテリシン６としてのこのような強力な阻害剤からの細胞の自己保護に重要なメカニズムが存在するものとも考えられている。

Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞を用いて、光らせることができるキメラタンパク質（マーカー）を放出させる緑色蛍光タンパク質を分泌ベクターに連結させた遺伝子を構築することができる。

ｎｉｓＡプロモーター（ＰｎｉｓＡ）およびｎｉｓＲＫ ＤＮＡ断片をシャトルベクターＥ．ｃｏｌｉ−Ｌ．ロイテリｐＳＴＥ３２に連結することによってナイシン（Nisin）制御遺伝子発現（ＮＩＣＥ）系に取り込まれたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞を用いることができる。このようなキメラプラスミドにおいて、非自己遺伝子の発現はナイシンの誘導によって可能である。

本発明によるカテーテルについて、２種類のポリマー：ＰＶＣおよびシリコンがカテーテルを製造するための基本的な材料として用いられた。

ＰＶＣは、安価なポリマーであり、その安全性は長年の間確認されてきた。現在、次世代の可塑剤が用いられ、ＰＶＣの安全性がさらに高まっている。シリコンは、高価なポリマーであるが；極めて高い適合性によって特徴付けられる。

本発明によれば、ＰＶＣまたはシリコン製のカテーテルは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）製のポリマーナノコーティング剤でコーティングされている。水との接触時においてのみ、ＰＶＰはポリマー表面を潤滑にする厚いゼリー状溶液を形成する。

ＰＶＰ製のポリマーコーティング剤はまた、ポリウレタンまたは天然ラテックス製のカテーテル上に適用されてもよい。

ＰＶＰは、その生体適合性の結果（毒性効果の欠如（血液細胞に対する分解効果（溶血）を含む）、宿主免疫系における効果の欠如）において、血液との接触を対象とした生体材料の生成のための薬理学に広く用いられる。ＰＶＰ製のナノコーティング剤の有利な点は、このコーティング剤が微生物（病原性生物を含む）の活性に対して耐性を有することにある。

このようなコーティング剤の唯一の欠点は、挿入手順の前にカテーテルを湿らす必要があることであるが；この課題は、本発明によるカテーテル挿入のためのキットを用いる場合、包装内部の本発明により容易に解決することができる。

本発明によれば、ＰＶＰ製のナノコーティング剤は、抗菌活性のポリマー、例えば、キトサン塩に化学結合されている。これは、甲殻類の貝殻から得られたポリマーである。キトサン塩は、それらの医薬用途について公知である。それらは、安全性、生物利用性、および生物分解性を有する。

予想外の相乗効果を証明するために、キトサン塩およびＰＶＰ製のコーティング剤は、別々におよび組み合わせて試験した。さらに、各コーティング剤の組成は、本発明によるカテーテルの表面の活性のスペクトラムを増加させる他の活性物質、例えば、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０（２００３年６月２０日に特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従ってＤＳＭＺ−受入番号−ＤＳＭ１５６９３として寄託）の細胞外代謝物、ならびにナノ粒子および／または銀のナノ粒子の形態のビタミンＤを豊富に含む。

固形ポリマーコーティングの形成は、共有結合をより結合した共有結合ポリマー鎖に基づいて２つの方法（物理的および化学的方法）によって示されうる。ポリマー鎖の物理的結合は、不連続ＰＵ層のナノコーティングの形成およびＰＶＰ溶液の適用によって達成することができる。

ロンドン力により、ＰＶＰ鎖は、基本ポリマーにおいて部分的に分散され、そこから部分的に突出する。約５０，０００のＣ−Ｃ結合（１０ｎｍ）の厚さを有するこのナノコーティング剤は、水中で分散される場合に、優れた潤滑特性を有する一種のブラシ（brush）を形成する。この元々の技術はすでに開発されている。

あるいは、基本ポリマーの表面において、所望される層は、ヒドロゲル吸収によって遊離ラジカルを形成する方法によって沈着される。このような遊離ラジカルは、非常に活性があり、安定な共有結合を形成する他の化学物質を容易に「捕捉する」。

それらの両方は所望されるコーティングを提供するため、両方の技術の適用が可能である。

ポリマー表面上で得られたナノコーティングは、それらの生体適合性、バイオフィルムの発生および微生物によるコロニー形成を評価するために試験する。ブタ組織に対するそれらの摩擦係数も試験する。この評価は、本発明の必要性を満たすように改善された特別に構成された装置を利用して行う。最適な摩擦係数は、漏れ出すリスクもなく、カテーテルの痛みのない挿入を確実なものとする。

本発明によるカテーテルの外部ナノコーティングの新規な特性は、活性な薬剤の物理的および／または化学的結合によって達成された。

外部カテーテルナノコーティングの活性な薬剤は、本発明者によって同定され、２００３年６月２０日に寄託された（特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従って２００３年６月２０日に寄託、ＤＳＭＺコレクション（独国、ブラウンシュヴァイクのＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ）では、受入番号：ＤＳＭ１５６９３）乳酸細菌Ｌ．ロイテリの新規なＤＡＮ０８０株に由来する構成成分である。

今回、予想外なことに、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物が、外部ナノコーティングまたは本発明によるカテーテルをコーティングする層のうちの１つの所望される構成成分であることが見出された。

増殖の一定期間後、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物を遠心分離し、液体、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液は、インビトロおよびインビボでの細菌の増殖の調節に関して特定の能力および活性を有する産物である。一定時間で収集した上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液を用いて行った電気泳動による分離後、特定のタンパク質が視覚化され、これらのタンパク質は、患者の体における恒常性および細菌増殖の調節に関する１５０〜２２ｋＤおよびそれ以下の範囲内の分子量を有する。これらのタンパク質は、単離および精製形態の両方において、ならびにそれぞれＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の適切な培養期間後に収集された上澄み液、濃縮した上澄み液および乾燥させた上澄み液の形態において、あるいは本発明者（Danuta Kruszewska）によって単離され、特徴付けられた他の乳酸細菌との混合物において、本発明によるカテーテルの表面における恒常性および細菌増殖の調節効果を示しつつ、安全性を高め、患者に快適である本発明によるカテーテル上にコーティングされたナノコーティングについて新規の優れた特性を保有する。

Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物は、本開示によれば、抗菌活性の他の公知の薬剤と組み合わせて用いられる。Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０細菌の単離、培養、ならびにＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細菌の細胞外代謝物の収集、単離および精製の方法は、本発明と同一優先日を請求するもう１つの特許出願に開示されている。

Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物とは別に、ビタミンはまた、活性な薬剤、特に、患者の免疫メカニズムを高めるためにナノ散剤の形態のビタミンＤおよびＥとして、本発明による微生物の増殖およびバイオフィルムの形成を減少させる薬剤としても用いられ、銀、小分子ジカルボン酸およびキトサン塩のナノ粒子が用いられてもよい。上記に記載の活性な薬剤を徐々に放出するために、徐放のための公知の組成物、例えば、ヒドロゲルをコーティングするための生理学的液体に可溶性を有する組成物が用いられた。物質の徐放のために用いられる技術的手法の選択は、拡散係数および／または表面における結合の程度を考慮して、患者の体内でのカテーテル置換の予定期間に調整した時間にそれらの特性を保つ必要性に依存する。

実験の説明
キトサン塩の調製：適切なキトサン塩を生成するために用いられる原料は、２００９年１０月１２日の公開番号ＰＬ３８４８３６−「真菌キトサンを得るための方法」に従って担子菌類（Lentinus edodes, Le 323）、またはナンキョクオキアミ（Euphausia superba）の盾板から得た工業用キチンである。有機および無機混入物質の残渣は、脱ミネラル化および脱タンパク質化のプロセスにおいてポリマーから取り除く。これによって得られたキチンの一部は、そのポリマー化の程度を所望レベルまで下げるために、化学分解プロセルにかける。これは、同様の脱アセチル化レベルおよび異なる分子量のキトサンを得ることを可能にする。キトサンは、アルカリ脱アセチル化プロセスにおいて得る。その特性は、反応時間および温度を変化させることによって改変される。塩は、水性環境下におけるキトサンと有機酸との反応で得る。それにより得られた塩溶液は凍結乾燥させる。原料および生成物の特性の評価をモニターする。

様々な分子量および脱アセチル化レベルのキトサンを得るために（研究室条件）、下記の手順を適用する：

キトサンの生成のための原料の調製：工業用グレードのキチンを精製し、ポリマーの分子量は、様々なポリマー化レベルを有するキチンを得るために改変する。必要とされる特性のキトサンは、脱アセチル化プロセスのパラメータの制御により得る。

研究室条件で得たキトサン塩は、それらの抗菌特性について試験する。

キトサン塩の抗菌活性の迅速な評価を容易にするキトサン塩の生物学的試験は、それらの生成プロセスの最適なパラメータ、特に、キトサンの脱アセチル化レベルおよび分子量が改変されるべき範囲をモニターし、制御および選択することを可能にする。

塩を得るための方法の最適化は、カテーテルの目的およびそれが用いられる環境を考慮して、滅菌プロセス後の最も強力な生物学的活性の態様から行う。

多剤耐性細菌株の試験したポリマーがコーティングされ、およびコーティングされていない表面への固着：多くの細菌の病理発生は、主に、ポリマー表面に不可逆的に固着し、コロニー形成の過程で細胞外糖衣を産生するこれらの生物の能力に付随する。

固着の割合は、試験したポリマーから回収したＣＦＵの培養液中のマーカー細菌（多剤耐性株）のＣＦＵに対する割合として定義される。

多剤耐性微生物についてのキトサン塩の抗菌活性：各試料は、試験した株のうちの１つと共に培養する（ＣＦＵ １０^３）。３７℃の温度でインキュベーション後様々な時点（０、３０、６０および１２０分）において、試料を収集し、ボルテックスし、次いで寒天固体培地にプレーティングしたプレート上に植菌する。ＣＦＵ値は、微生物を３７℃の温度で４８時間インキュベートした後にカウントする。インキュベーション前に採取した試料のＣＦＵカウントはＣＦＵの減少を算出するために用いる。

動物を用いた実験は、成体ラットの非感染動物モデルに基づくものであった。６ヶ月齢のスプラーグドーリー雌ラットは、±３５０ｇの重量（ｎ＝９０）のものを用いた。前記ラットを９つの群に分けた。ラット（ｎ＝３６；３つの群）の尿路に抗菌性で潤滑性のコーティング剤で覆われたポリマーロッドを挿入した。浸透性のロッドは、各々、ＰＶＣ、ポリウレタンおよびシリコンで作製した。動物（ｎ＝３６）の別の３つの群は、ラットがそれらの尿道にコーティングされていないロッドのみが挿入されたネガティブコントロールを供した。残りの２つの群（ｎ＝１２）は、挿入されたロッドがナノ銀およびＰＶＰでコーティングされたポジティブコントロールとして供した。残りのラット（ｎ＝６）は、生体材料を挿入しなかった。

上記に記載のロッドは、ラットの尿道に対して腹膜腔から置換した。それらは、膀胱および尿道の間の部位における露出した膀胱の下を貫通させることによって挿入した。尿道中の微小な穴を通して穿孔し、前記ロッドは、膀胱の外部壁に向かってその丸まった先端で固定した。前記ロッドの長さは、外部の尿道口から突き出ないものとし、それにより瘡蓋（encrustation）プロセスの実験を可能とし、ロッドがラットによって引き抜かれるか、またはかまれることを回避できる。ロッドの直径は、尿道直径の２分の１である必要があり、ロッドの外部先端は、丸い必要がある。

動物は監視下においた。実験開始７〜１４日後、ラットを屠殺する。尿、血液、組織およびロッドの試料を滅菌条件で採取した。尿および血液試料は、細菌試験にかけた。

血清試料において、リゾチームレベルおよびデフェンシン活性を測定した。

前記ロッドの表面は、微生物によるコロニー形成および糖衣による瘡蓋の程度について解析した。

前記ロッドの表面に付着する単離された生物を同定し、それらの生化学活性を特徴付けた（それらの抗生物質に対する感受性の決定を含む）。

固定前に、組織を微生物の定住について解析した。組織の固定した試料を形態的および免疫化学的に試験し、デフェンシンの存在を調べた。

動物組織から単離した微生物の特徴付け：微生物が試験された株と同一であることが見出された（耐性記録、インテグロンプロファイル、ウレアーゼ活性で一致）。菌血症／細菌尿がロッドを構成するポリマーに関連したことから、活性部位と接触するその層は、微生物が耐性記録、インテグロンプロファイル、およびウレアーゼ活性によって特徴付けられた時の状態が、実験で動物の尿および血液から、カテーテルの先端または他の部分から単離された微生物のものと同一であると考えられた。

定量測定
血液、尿、組織およびポリマーロッドから単離した細菌は、従来の方法でカウントした：動物体液またはホモジェナイズした組織（尿道生検）の段階希釈は、適当な培地上にプレーティングし、好気性および嫌気性条件にて３７℃の温度で２４時間培養した。細菌の数をカウントし、単一の動物から採取した生検について行った３回の試験から得た平均値として１ｍＬの血液／尿または１ｇの組織について算出した。ポリマーロッドから得られた部分は培養し、定量技術の手法によってカウントした。前記試料は、固体培地（５％ 羊血液寒天）または別の増殖培地上でインキュベートし、培養されたコロニーを３７℃で２４時間インキュベートし、カウントした。

細菌同定システム：細菌の同定は、通常、検出システムＡＰＩ（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ，仏国）であるＲＴ ＰＣＲを用いて、分離菌の生化学活性の特徴に基づいて行った。

分離菌の病原性
インビトロにおける尿素分解細菌の活性ウレアーゼの定量分析：試験した細菌の定量分析は、様々なｐＨで行った。尿素のアンモニアへの変換速度は、製造業者（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）の推奨に従って測定した。次いで、ウレアーゼ活性は、１ｍｇのタンパク質が１分後に尿素加水分解されるμｍｏｌとして表した。標準曲線は、０．１〜２０ｍｇ Ｎ−ＮＨ_４ ^＋／Ｌの範囲内のＮＨ_４Ｃｌで得た。

同様の株を検出するためのマーカーとしての抗菌感受性プロファイル
最小阻害濃度（ＭＩＣ）を測定した。細菌は、ＣＳＬＩガイドラインに従って、ミューラー・ヒントン寒天上でディスク拡散法を用いて試験した。両方のアッセイにおいて、大腸菌ＡＴＴＣＣ２５９２２、緑膿菌ＡＴＴＣ２７８５３、黄色ブドウ球菌ＡＴＴＣ２９２１３、フェカリス菌ＡＴＴＣ２９２１２を抗菌感受性試験の対照株として用いた。

インテグロン／トランスポゾンＰＣＲの存在
効果のない治療から生じる細菌の選択的な耐性を増加させる現象は、医療についての最も大きな難題の１つである。可動性インテグロンは、多剤耐性を広めるメカニズムの１つである。インテグロンは、細菌ゲノム内を移動し、インテグロン陽性細胞へ、および前記陽性細胞から水平に移動することできる。この実験では、インテグロンパターンを、試験した試料（尿、血液、組織、ポリマーロッド）から単離された細菌株において決定した。インテグロンボックス内に局在する耐性遺伝子は、特定のプライマーを用いてＰＣＲ法によって分析した。

インテグロンプロファイルは、同一であると考えられる分離株を比較する際に有用なツールである。

自然免疫反応における新規な生体材料の効果：自然の生理条件において、尿路は、部分的に無菌である。この現象は、主に自然免疫反応、特に抗菌物質、例えば、デフェンシン、カテリシジン、ラクトフェリンおよびリゾチームなどに関するものである。デフェンシンおよびリゾチームは、尿路免疫において最も知られており、最も重要である。リゾチームレベルは、ＥＬＩＳＡ試験で血清、尿および組織試料において測定し、酵素活性は、比濁法を用いて測定した。選択したデフェンシンは、サンドウィッチＥＬＩＳＡ試験を用いて、ホモジェナイズした組織において測定した。ＲＴ−ＰＣＲ法は、ラット集団の細胞におけるデフェンシンの発現を分析するために行う。

新規な生体材料の細胞毒性の測定：挿入されたカテーテルの製造原料は生体適合性であることが最重要であり、それゆえ、異なるタイプの表面および表面コーティング剤を試験した。

適合性についての多くの試験は、構造および／または特定のコーティングが自然免疫系を活性化するか、試験した材料が壊死および／またはアポトーシスを引き起こすか、前記材料が細胞毒性であるか、ならびに細胞増殖を妨げるかどうかを決定するために用いられる。前記試験は、インビボおよびインビトロの両方で行われる。上記に記載の試験の結果は、材料自体が非毒性であり、細胞死を最小とし、炎症が生じないか、もしくは限定的でしかなく、およびほとんど炎症を引き起こさない条件を満たすカテーテルナノコーティングに適切な材料を選択する基を構成する。実験を通して、カテーテル製造のための異なった材料を、単独で、またはカテーテルと組み合わせて試験した。

いくつかの試験を用いて、生体材料の効能を評価した：
１）ＦＤＡ修正［ＩＳＯ］マトリックス（Blue Book Memorandum # G95-1, Attachement A）にある指針に基づいて定められた（外部）基準に従って；
２）本発明の所有者によって定められた標準化試験、および３）開発中の生物のナノ構造に対する応答に関する知見を広げることを目的とする科学試験。

カテーテル挿入実験：ナノコーティング（生体材料でコーティングした尿道カテーテル）から漏出する物質の毒性効果をモニターするために、２匹のウサギを、コーティングされていない尿道カテーテルとコーティングされたものに用いられる生体材料の各々について１、４および１２週間試験する。簡単に説明すると、カテーテルに用いられる４片のナノ構造でコーティングされ、またはコーティングされていない物質を各々、外套針を用いて左および右の傍脊椎筋に挿入する。ウサギを毒性反応についてモニターし、移植部位の肉眼評価を実験期間中に定期的に行う。

実験終了後、動物を屠殺し、移植部位の肉眼評価を行い、後の評価のために写真で記録する。血液および筋肉の試料を材料移植部位から採取し、病理組織検査のために４％ パラホルムアルデヒド中で凍結し、または固定する。筋肉組織を処理し、パラフィン中に包埋し、切片を作成し、染色し、組織切片は、炎症、壊死、線維症および筋肉組織と試験物質との間の毒性相互作用の他の指標について評価する。カテーテル外部ナノコーティングの基本構成成分としての細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物の使用の有効性は、下記の知見によって正当化される。

実験は、実験動物の免疫系における生存しているＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細菌培養物、熱で不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０、およびキトサンアルファケトグルタル酸の効果について行った。

１４０〜２７５ｇの重量である４８匹の２ヶ月齢のスプラーグドーリー雌ラットは、その動物の年齢に適した給餌を与え、水を自由に与えた。実験開始３日前に、全ての動物が頸静脈に挿入されたカテーテルを有した。この実験は、ラットから血液試料を採取して開始した。続いて、動物に、０．５ｍＬの下記調製物を胃チューブを用いて胃内に投与した：細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０（生存している細胞および死滅した細胞）の懸濁液、キトサンＡＫＧ懸濁液、生理食塩水。最初の血液採取１２０分後に２回目の血液試料を動物から採取した。２日目、ラットに、同一の調製物を１日１回で７日間摂取した。１２匹のラットに、熱で死滅させた細胞Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の各々を１０^６個で８日間摂取した。次の１２匹のラットに、キトサンＡＫＧ懸濁液を投与し、動物の４番目の群（ｎ＝１２）に、各回０．５ｍＬの生理食塩水を胃内に８日間投与した。胃内に投与した調製物の最終投薬８日後に、血液を動物の頸静脈から採取した。同日の２回目に、血液を最初の血液採取１２０分後に全てのラットから採取した。

血液中のリゾチーム活性の測定は、吸光度値に基づき特定の密度の単球菌（Micrococcus lysodeikticus）細胞の懸濁液の存在下で行い、この値を、多くのＰＢＳ中の結晶リゾチーム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の標準希釈液と特定密度の単球菌（M.lysodeikticus）細胞の懸濁液からプロットした吸光度曲線と比較する。１５、３０、４５、６０分後、インキュベーション吸光度は、５４０ｎｍの波長で測定した。

図３に示された、試験物質の胃内投与後のラット血液中のリゾチーム（Ｕ／Ｌ）活性について得られた結果により、生存し、および熱で死滅させたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０、ならびにキトサンアルファケトグルタル酸ＡＫＧによるラット免疫系の活性化が確認された。

リゾチームは、一定の食細胞、例えば、マクロファージおよび多核性白血球などによって放出され、病原性微生物の制御に重要な役割を果たす加水分解酵素である。リゾチームはまた、腸の裏層に局在するパネート細胞によって産生される。リゾチームは、特に、グラム陽性微生物に対して活性である。細胞の食作用活性は、リゾチームが関与する細菌の細胞壁の分解、より正確には、ペプチドグリカンのグリコシド結合の切断に関するものである。Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０細菌の代謝物の導入によって生じるリゾチーム活性の亢進は、食細胞活性化または食細胞に対する抗原提示を促進した。この方法では、免疫系の機能は、主に、非特異的に亢進した。このことは、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の生存している細胞と死滅した細胞の両方が多くの病原菌に対して作用する能力を示すことを確認する。細胞自体は、生物の免疫系によって危険であるとは認められない。細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０、それらの細胞外代謝物およびキトサンアルファケトグルタル酸の抗菌活性は、生存しているＬ．ロイテリＤＡＮ０８０もそれらの代謝物またはキトサンアルファケトグルタル酸もリゾチーム活性に感受性を有さず、リゾチームとの接触で加水分解されないことから、さらに亢進される。

高尿酸血症は、プリン代謝の阻害により尿酸オキシダーゼ（ＥＣ１．７．３．３）の活性を妨げることによって健常なラットで引き起こされた。阻害剤（オキソニン酸、尿酸をそれぞれ０．４および０．６ｇの１日用量）を加えて給餌した１ヶ月後、砂および結石が動物の腎臓で作り出された（Bluestone R, Waisman J, Klinenberg JR. Chronic experimental hyperuricemic nephropathy. Lab Invest. 1975;33(3):273-9を参照のこと）。このモデルは、本発明によるカテーテルの機能の有効性の試験を供する。腎臓のカテーテル挿入は、結石の結晶化から保護する。

上記にすでに記載の事実は、ナノコーティングにおけるビタミンＤを含め正当化する。生物の防衛応答におけるビタミンＤおよびその活性な代謝物の役割は、いくつかのレベルが含まれる。第１のレベルでは、傷害および／または感染／侵襲から保護する物理的障壁を構成する上皮細胞におけるものである。活性なホルモン１．２５（ＯＨ）２ビタミンＤは、ギャップ結合タンパク質をコードする遺伝子、付着遺伝子（adherence genes）、タイトジャンクション遺伝子を促すことによって物理的障壁を亢進し、細胞間コミュニケーション（タンパク質：コネキシン４３、Ｅ−カドヘリン、オクルディン）を高める。

ビタミンＤは、自然免疫の抗菌ペプチド（ベータ−デフェンシン、カテリシジンＬＬ−３７を含む）の合成における上皮細胞における促進効果を有する。

次に、ビタミンＤは、マクロファージ／好中球で合成される潜在的な活性のある抗菌ペプチドの発現を促進し、マクロファージにおける酸素爆発（oxygen explosion）の可能性を高める。その他、それは、ＬＬ−３７を介したエンドトキシンの中和を亢進する。

獲得免疫に関して、ビタミンＤは、Ｔリンパ球の増殖を阻害するその能力として証明された抑制効果を示す。活性化したＢリンパ球を介してサイトカインおよび免疫グロブリンの産生に依存する免疫における抑制効果を発揮する。それは、Ｔｈ１リンパ球の活性を阻害し、Ｔｈ１ ＩＦ−ガンマおよびＩＬ−２（抗体およびサイトカインの促進因子）による合成を減少させる。これらのリンパ球は、自己免疫バックグラウンドの障害（例えば、１型糖尿病、関節リウマチ、腸の自己免疫炎症、および多発性硬化症）の発症に関与する。

カテーテルに接触する粘膜が抗菌ペプチドを産生する能力を有する部位におけるビタミンＤの存在は、泌尿生殖器系、消化器系、生殖器、呼吸器系、および血管およびリンパ管の細胞内腔を覆う上皮細胞の抗菌活性における促進効果を有する。グラム陰性細菌（主に、泌尿生殖器系の感染を引き起こす）によるＬＰＳ分泌の場合、ビタミンＤは、自然免疫エフェクター細胞の活性化によるエンドトキシンの毒性効果を減少させ、ＬＰＳを中和する抗菌ペプチドの産生を高める。

一方、ビタミンＤは、カテーテルのその使用部位への挿入によって誘導されうるアレルギー反応から保護する。

下記に記載の実験は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞外代謝物を加えることによる陽性効果を確認する。

行動実験は、実験ラットにおける死滅および生存するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞の影響下の自発および探索運動の解析のための抗不安効果の評価についてのオープン・フィールド試験に基づいて実施した。

動物の行動の一般プロファイルにおけるこれらの調製物の効果を決定することができた。

３つの群の動物に、チューブを用いて、加熱処理し、および生存するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞を胃内に１０^６個の用量および１ｍＬの体積での生理食塩水を３ヶ月間投与した。実験開始２ヶ月後から、用量を２倍にし、朝と夕の調製物の投与に分けた。行動実験は、１ヶ月に３回の間隔で行った。

１．オープンフィールド試験は、実験の１、２、３ヶ月後に３回実施した。この試験は、大きさ１００ｃｍｘ１００ｃｍｘ４０ｃｍ（壁の高さ）のプラスティック箱で行った。前記箱の四角の面を２５個の正方形に線で分けた。この試験は、静かで明るい空間の条件で行った。各ラットの行動を観察した。実験中の各ラットをそのケージから取り出し、箱の面の中央に置いた。
ａ．観察では、ラットが３分間で通過した正方形の数を記録した。
ｂ．同一の箱で同一の条件下において、ラットの体を引っ張る回数について３分の観察からなる実験を行った。
ｃ．同一の箱で同一の条件下において、ラットにおける鼻を洗浄し、毛皮を掃除する（snout washing and cleaning the fur）頻度について３分の観察からなる実験を行った。

ラットの水平活動は、正方形を横切った回数で測定した。若いラットは、試験した調製物の投与１ヶ月後に、高い自発運動を示した。この水平活動の減少は、実験開始２〜３ヶ月の間で観察された。対照動物と比較して、最も移動が少ないのが、生存するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細菌を投与されたラットであり、続いて、熱処理したＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を摂取したラットであった（^＊＊ｐ＜０．５、スチューデントｔ検定、^＊ｐ＜０．５、ｔ検定）。

実験中、全ての動物は、時間経過とともに、ほぼ確実に年齢とともに、水平および垂直活動において段階的に減少する傾向を示した。

垂直活動は、動物の体を引っ張る頻度によって測定する。

調製物の投与後１ヶ月間において、若いラットは、よく動き、生存するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞を少なくとも３ヶ月間投与したラットは、対照群と比較して、活動において統計学的に有意な差異を示した（^＊ｐ＜０．５、ｔ検定）。また、対照群と比較して、垂直活動における統計学的に有意な減少は、死滅したＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞を２ヶ月間摂取したラットにおいて顕著であった（^＊ｐ＜０．５、ｔ検定）。

生存し、および熱処理した細胞を２または３ヶ月摂取した動物の群では、生理食塩水のみを摂取した動物の対照群で行われた同一活動と比較して、鼻を洗浄し、毛皮を掃除する頻度において統計学的に有意な差異が見られた（^＊ｐ＜０．５、ｔ検定）。

対照群において、鼻を洗浄し、毛皮を掃除する頻度が増加する傾向が顕著であった（生理食塩水投与１〜３ヶ月の観察）。

これらのデータは、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の投与２〜３ヶ月間に、前記処置がラットに沈静効果を発揮したことを示す。得られた結果は、図２ａ〜ｃに示され、正方形を横切った回数（図７ａ）、ラットの体を引っ張る回数（図７ｂ）、および鼻を洗浄し、毛皮を掃除する頻度（図７ｃ）を示す。

２．オープンフィールド試験−社会的行動。実験は、同一の箱および同一の条件下において３ヶ月間行った。唯一つの相違には２つの異なるケージからの２匹のラットを前記箱内に置いたことであった。群へ分ける上記に記載のスケジュールに従って、動物は同一の調製物を胃内で摂取した。各ペアの行動を７分間観察した。
ａ．同一の箱および同一の条件下において、ラットのペアを用いて、ラットの体を引っ張る回数について７分の観察からなる実験を行った。
ｂ．同一の箱および同一の条件下において、ラットのペアを用いて、鼻を洗浄し、毛皮を掃除する頻度について７分の観察からなる実験を行った。
ｃ．同一の箱および同一の条件下において、ラットのペアを用いて、互いに嗅ぎあう頻度について７分の観察からなる実験を行った。

対照群と比較した体を引っ張る頻度は、生存するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞を摂取した動物の活動における統計学的に有意な減少を示した（^＊ｐ＜０．５、ｔ検定）。生存するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を受容したラットの群で顕著であった鼻を洗浄し、毛皮を掃除し、嗅ぎあう回数における統計学的に有意な減少（^＊＊ｐ＜０．５、スチューデントｔ検定）は、試験調製物の投与後の動物で引き起こされるストレス効果および不安の両方の欠如を示す。

同時に、実施した全ての実験において、ラットによる排便および排尿の頻度に統計学的に顕著な差異は見られなかった。このことは、ラットの新しい環境および／または新しい条件に対する不安が減少したことを示す。

図７ｄ〜７ｆは、生存し、および熱処理したＬ．ロイテリＤＡＮ０８０を１ｍＬの体積で少なくとも１０^６個の細胞／ｍｌおよび生理学的塩の用量で摂取したラットで行った行動実験の結果を示す。オープン・フィールド試験において、前記動物の社会的行動は、ラットが体を引っ張る回数（図７ｄ）、鼻を洗浄し、毛皮を掃除する頻度（図７ｅ）、および互いに嗅ぎあう回数（図７ｆ）を調べることによって試験した。

前記実験はまた、カテーテル挿入を必要とする消化管以外の体腔の粘膜の上皮細胞に接触する上記で試験した因子の促進効果を確認した。

図３は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の上澄み液の電気泳動の結果を示す。

実施例１．マウスの胃におけるＨ．ピロリのコロニー形成に対するＬ．ロイテリＤＡＮ０８０および他の乳酸発酵細菌の発酵産物の効果
４８匹のマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡ）を１２匹のマウスごとに４つの群に分け、実験に用いた。

第１群のマウスに、調製物１（定義１）（定常期のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞の１０時間培養から得た中性上澄み液およびアルファケトグルタル酸カルシウム（３０ｍＭ）もしくはキトサンアルファケトグルタル酸など、あるいは液体形態で投与され、またはパン製品やチップス（crisps）に含有される他のアルファ−ケト酸塩と組み合わせて抗Ｈ．ピロリ活性を有する表１〜４に記載の他の乳酸細菌の混合物の０．５ｍＬ）を胃チューブにより３５日間毎日投与した。実験開始１１日目に、同一マウスに、ＢＨＩ中に懸濁させたＨ．ピロリ細胞（１０^８個の細胞／ｍｌ）の未使用の顕微鏡でモニターした部分培養物の０．２ｍＬの一部を、最初の処置１時間後に、続けて２週間１週間ごとに２回投与した。

第２群のマウスに、調製物２（制限された定義２）（０．２ｍＬ（１０^８個の細胞／ｍｌ）のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０およびＭＲＳＢ中に懸濁させ、またはパン製品もしくはチップスと共に投与される表１〜４に記載の他の乳酸細菌細胞であって、前記他の乳酸細菌細胞は、アルファケトグルタル酸カルシウム（３０ｍＭ）もしくはキトサンアルファケトグルタル酸など、あるいはアルファケト酸塩と組み合わせて抗Ｈ．ピロリ活性を有するものである）を胃チューブにより３５日間毎日投与し、続いて、実験開始１１日目に、マウスを、第１群について記載されるように、感染スキームに従ってＨ．ピロリに感染させた。

第３群のマウスに、調製物３（定義３）（他の乳酸細菌の細胞および０．５ｍＬのＭＲＳＢ中に懸濁させ、またはパン製品もしくはチップスと共に投与される発明者の所有する他の乳酸細菌の細胞（１０^８個の細胞／ｍｌ）であって、前記他の乳酸菌は、定常期のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の１０時間培養から得た中性上澄み液、およびアルファケトグルタル酸カルシウムもしくはキトサンアルファケトグルタル酸、または他のアルファケト酸塩の混合物と組み合わせて抗Ｈ．ピロリ活性を有するものである）を胃チューブにより胃内に３０日間毎日投与した。

第４群（ポジティブコントロール）は、２週間で１週間ごとに２回、ＢＨＩで懸濁したＨ．ピロリ細胞（１０^８個の細胞／ｍｌ）の０．２ｍＬの新たに顕微鏡でモニターした部分培養物を胃チューブで給餌した。

結果を表３〜５に示す。

３６日目に、全てのマウスを屠殺し、それらの胃を、粘膜におけるＨ．ピロリの存在について調べた（表３）。
表３．実験群Ｉ〜ＩＶからのマウスの胃粘膜におけるＨ．ピロリの存在。

実施例２．野生動物中の尿酸分解微生物叢によるコロニー形成におけるＬ．ロイテリＤＡＮ０８０および他の乳酸発酵細菌の発酵産物の効果。
栄養および環境条件の急速かつ持続的な変化によるストレスに常に曝され、尿素分解細菌による感染に曝される胃腸管上皮の継続性の崩壊を示す、臨床症状のない動物園由来の野生動物の一群（ｎ＝１０）の餌を、調製物４（定義４）（定常期のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞の１０時間培養の中性上澄み液、および表１〜４に記載され、またはパン製品もしくはチップスに含まれる他の乳酸細菌の混合物であって、前記他の乳酸細菌が、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０、およびアルファケトグルタル酸カルシウム（３０ｍＭ）もしくはキトサンアルファケトグルタル酸など、または他のアルファケト酸塩と組み合わせて、またはパン製品、チップスと組み合わせて尿素分解細菌に対して活性を示す本発明者の所有する他の乳酸細菌の細胞と組み合わせて抗尿素分解細菌活性を示すもの）で６０日間補給した。

このような添加物を食事／食品に含ませ、さらに観察３０日間、動物は、発熱、下痢、または他の感染症状を生じることなく良好な健康および一般的な健康を維持した。

実施例３．Propionibacterium acnesによる尋常性ざ瘡と診断された１３〜１７歳の若いボランティア（ｎ＝１２）の背中と顔の皮膚のコロニー形成におけるＬ．ロイテリＤＡＮ０８０および他の乳酸細菌の発酵産物の効果。

第１群において、ボランティア（ｎ＝４）に、調製物（限定定義５）（定常期のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０細胞の１０時間培養から得た中性上澄み液、および本発明者の所有する他の乳酸細菌の培養からの上澄み液の混合物であって、前記他の乳酸細菌は、軟膏剤もしくは湿布の形態で投与されるアルファケトグルタル酸カルシウムもしくはアルファケトグルタル酸ナトリウムまたはキトサンアルファケトグルタル酸などとともに、または他のアルファケト酸塩とともに抗尿素分解細菌活性を示すもの）を３０日間１日２回投与した。

第２群のボランティア（ｎ＝４）は、調製物（限定定義６）（Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０および表１〜４に記載の他の乳酸細菌の細胞であって、他の乳酸菌は、軟膏剤または湿布の形態で、アルファケトグルタル酸カルシウムもしくはアルファケトグルタル酸ナトリウムまたはキトサンアルファケトグルタル酸など、あるいは他のアルファケト酸塩と組み合わせて抗尿素分解細菌活性を示すもの）を１日２回３０日間摂取した。。

第３群のボランティア（ｎ＝４）に、調製物（狭い定義７）（Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０および本発明の所有する他の乳酸細菌の細胞であって、他の乳酸細菌は、定常期のＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の１０時間培養から得た中性上澄み液、およびアルファケトグルタル酸カルシウムもしくはアルファケトグルタル酸ナトリウムまたはキトサンアルファケトグルタル酸などと、または他のアルファケト酸塩と共に抗尿素分解細菌活性を有する本発明者の所有する乳酸細菌の培養物からの他の上澄み液の混合物と組み合わせて抗尿素分解細菌活性を示すもの）を１日２回３０日間投与した。

実験の過程で、全てのボランティアにおいて、尋常性ざ瘡が生じた感染部位の治癒が観察された。ざ瘡の新たな病巣は、ボランティアのいずれにおいても新たに生じなかった。調製物の投与終了１５日後の観察中、再感染は見られなかった。
表８．感染したボランティアの背中および顔の皮膚におけるＰ．アクネの存在（群：Ｉ〜ＩＩＩ）。

予想外なことに、前記調製物は、尿素分解細菌による慢性多孔裂傷（porous fissure）様感染（足、腋窩および鼠径部、爪、毛、蹄および角などの表皮生成物の感染を含む）に対して有効であることが見出された。前記調製物は、膿瘍およびおできの形態での感染、ならびに毛瘡、幼児の剥脱性皮膚炎、丹毒、伝染性膿痂疹、膿瘡、毛包炎、尋常性ざ瘡（Propionibacterium minutisimumによって生じる紅色陰癬を治療することが困難である）、外科的手術および火傷の創傷による感染、および褥瘡から保護し、減少させる。皮膚表面のコロニー化および皮膚生成物を減少させる活性により、皮膚のｐＨにおける変化によって生じる不快な臭気、および表面上における尿素分解細菌の匂いを発する細胞外代謝物の存在が排除される。

本発明者が所有する乳酸細菌は、液体または固体培地ＭＲＳ（ｄｅ Ｍａｎ Ｒｏｇｏｓａ Ｓｈａｒｐｅ）において微好気性条件中にて３７℃の温度で２４時間容易に培養される。上記に記載の株は、胃腸管のコロニー形成をもたらすものと考えられ得る特徴を示す。それらは、腸の上皮に接着しやすいマトリックスタンパク質、特に、コラーゲンおよびフィブロネクチンに結合する能力を有する。これらの細菌は、乳タンパク質の分解、および乳に含まれる糖類の発酵を生じ、微生物の栄養基質へのアクセスを容易にするプロテアーゼを放出する。また、その中でも、イヌリンは炭素供給源でありうる。よって、尿素分解細菌に対して偏った他の生化学的活性に関わらず、この不消化フルクタンを発酵するが、前記細菌は、局所的な腸の微生物叢の調節に関与する。全ての株は、２．５のｐＨの２時間の酸性条件で２０％の牛胆汁を含有する培地中で１時間生存し、このことは、経口投与後、それらが胃および小腸を介して大腸に無傷で通過しうることを示す。それらは、ヒトおよび動物の胃腸管に定住できる微生物と見なされる程度まで抗生物質および化学療法剤に耐性を有していない。

下記の細菌が胃腸管、尿路、体表、および呼吸器系の尿素分解病原菌に対して活性を示すことが確認された：
−細胞外代謝産物による胃腸管のＨ．ピロリおよび他の病原菌における殺菌効果を有する細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０（図１）。
−増殖中、アルファケトグルタル酸を代謝物の１つとして環境に放出する能力を維持する本発明者が所有する他の乳酸細菌。アルファケトグルタル酸は、続いて適当な濃度（３０ｍＭ）で局所的に作用し、環境中に存在する尿素を加水分解し、それにより他の細菌−尿素分解病原菌によるコロニー形成過程を妨げ、その増殖は、微環境のｐＨに依存し、例えば、胃の酸性ｐＨ中では不可能である。

胃粘膜の領域内において、この現象は、Ｈ．ピロリのような細菌のみではなく、Proteus mirabilis、Citrobacter freundii、Klebsiella pneumoniae、Enterobacter cloacae、Staphylococcus aureus、Staphylococcus capitis urealiticum（Osaki T et al. Urease-positive bacteria in the stomach induce a false-positive reaction in a urea breath test for diagnosis of Helicobacter pylori infection. J Med Microbiol. 2008; 57:814-9; Brandi G et al. Urease-positive bacteria other than Helicobacter pylori in human gastric juice and mucosa. Am J Gastroenterol. 2006;101(8):1756-61を参照のこと）でも網羅されており、これらの菌は、尿素分解について自身のウレアーゼを用い、それにより自身の居住空間を微小にしている。

実施例４．インビボでの活性試験
リゾチーム活性：４８匹の２ヶ月齢のスプラーグドーリー雌ラット（１４０〜２７５ｇの重量）に動物の年に適した餌を給餌し、自由に水を与えた。実験３日前に、全ての動物にカテーテルを頸静脈に挿入した。この実験は、ラットから血液試料を採取することによって開始した。続いて、動物に、０．５ｍＬの下記の調製物を胃チューブによって胃内に投与した：細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０（生存する細胞および死滅した細胞）の懸濁液、キトサンＡＫＧ懸濁液、生理食塩水。最初の血液試料の採取１２０分後に、２番目の血液試料を動物から採取した。２日目、ラットは、同一の調製物を１日１回連続７日間受容した。１２匹のラットは、生存する細菌を生理食塩水中で懸濁した１０^６個の細胞の用量で受容した。下記の１２匹の動物はまた、各１０^６個の熱で死滅させた細胞Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０を８日間受容した。次の１２匹のラットには、キトサンＡＫＧ懸濁液を投与し、第４群の動物（ｎ＝１２）に、各回０．５ｍＬの生理食塩水を胃内に８日間投与した。胃内に投与した調製物の最終投薬８日目に、血液を動物の頸静脈から採取した。同日の２回目には、最初の採取１２０分後に全てのラットから採取した。

血液中のリゾチーム活性の測定は、吸光度値に基づく特定密度のMicrococcus lysodeikticus細胞の懸濁液の存在下で行い、その値を、多くのＰＢＳ中の結晶リゾチーム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の標準希釈物および特定密度のM.lysodeikticus細胞の懸濁液からプロットした吸光度曲線と比較する。１５、３０、４５、６０分後、インキュベーション吸光度は、５４０ｎｍの波長で測定した。

結果：ラット免疫系の活性化は、生存し、および熱で死滅させた細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０、ならびにキトサンＡＫＧによって観察された。図５は結果を示す。

ｂ）ブタの腸管神経系の神経におけるＬ．ロイテリＤＡＮ０８０代謝物の効果：腸管神経系の神経は、３〜６週齢の子ブタ（ｎ＝５）（１５ｋｇの体重）における小腸の真ん中を選択して単離した。前記組織は、神経培養物を得るために、トリプシン、２型コラゲナーゼおよびプロテアーゼで処理した。神経培養物は、ウシ胎児血清の添加物を豊富に含み、またはＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の中和した代謝物、および代謝物を２倍または４倍濃縮した試料の存在下において神経のためにＮｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ培地中にプレーティングした。該培養物を５％のＣＯ_２雰囲気下にて３７℃で６日間維持した。

結果：インキュベーション６日後、コントロール試料（培地上で培養した神経）において５３．７±２．７％の細胞が生存したことが観察された。このことを考慮すると、神経の指標は、豊富なＮｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ培地で排他的にインキュベートした神経に関して、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０代謝物の存在中でどれだけ生存したかで決定した。マウスの胃から単離したＬ．ロイテリＤＡＮ０８０の細胞は、それらの代謝物を介して子ブタの神経系から単離した生存率を統計学的に有意に減少させていない。Ｌ．ロイテリＤＡＮ８０の細胞は、胃腸管の脈系（構造）の変性を引き起こすものではない。図５は、その結果を示す。

実施例５．インビボでのリゾチーム活性試験
４８匹の２ヶ月齢のスプラーグドーリー雌ラット（１４０〜２７５ｇの重量）に動物の年に適した餌を給餌し、自由に水を与えた。実験３日前に、全ての動物にカテーテルを頸静脈に挿入した。この実験は、ラットから血液試料を採取することによって開始した。続いて、動物に、０．５ｍＬの下記の調製物を胃チューブによって胃内に投与した：細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０（生存する細胞および死滅した細胞）の懸濁液、キトサンＡＫＧ懸濁液、生理食塩水。最初の血液試料の採取１２０分後に、２番目の血液試料を動物から採取した。２日目、ラットは、同一の調製物を１日１回連続７日間受容した。１２匹のラットは、生存する細菌を生理食塩水中で懸濁した１０^６個の細胞の用量で受容した。下記の１２匹の動物はまた、各１０^６個の熱で死滅させた細胞Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０を８日間受容した。次の１２匹のラットには、キトサンＡＫＧ懸濁液を投与し、第４群の動物（ｎ＝１２）に、各回０．５ｍＬの生理食塩水を胃内に８日間投与した。胃内に投与した調製物の最終投薬８日目に、血液を動物の頸静脈から採取した。同日の２回目には、最初の採取１２０分後に全てのラットから採取した。

血液中のリゾチーム活性の測定は、吸光度値に基づく特定密度のMicrococcus lysodeikticus細胞の懸濁液の存在下で行い、その値を、多くのＰＢＳ中の結晶リゾチーム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の標準希釈物および特定密度のM.lysodeikticus細胞の懸濁液からプロットした吸光度曲線と比較する。１５、３０、４５、６０分後、インキュベーション吸光度は、５４０ｎｍの波長で測定した。

結果：ラット免疫系の活性化は、生存し、および熱で死滅させた細菌Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０、ならびにキトサンＡＫＧによって観察された。図５は結果を示す。

実施例６．市販品として入手可能ないずれの保護コーティング剤で覆われないＰＶＣ製のカテーテル（例えば、Ｇａｌｍｅｄ ＰＬ）を表面ナノ技術の方法を用いて処理した。

ＰＶＰ製のナノコーティングは、最初に、溶液中に浸し、空気乾燥させ、必要に応じて、ＵＶ照射および／または超音波への短期間の露出により架橋結合させる公知の方法によってキトサン［塩］に基づく中間層を先に形成させ、沈着させた。カテーテルの対象とする用途に従い、中間層の厚みは、最初の中間体コーティングを適用する手順を繰り返すことによって調節した。

キトサン塩に基づいてコーティングされた中間層は、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０の熱で不活性化された培養物、キトサンアルファケトグルタル酸、小分子ジカルボン酸、トリクロサン、銀ナノ粒子、および保護コーティング剤でコーティングされたナノ粉末の形態におけるビタミンＤおよびＥを含む群から選択される活性物質を豊富に含んだ。

表面ナノ技術は、約５０，０００のＣ−Ｃ結合の厚さ（１０ｎｍ）の中間層コーティングの製造を可能にする。

上記で示された厚さのＰＶＰポリマーナノコーティングは、生理学的ｐＨの環境において、使用中に完全に溶解する。ＰＶＰ層の段階的な溶解は、中間層コーティングを徐々に露出し、そこから活性物質が拡散によって段階的に放出される。単一の中間コーティングは、１週間までその耐久性を保ち、バイオフィルムの形成、炎症および炎症状態の発症を予防する。

尿路カテーテルを挿入した患者の体内でのカテーテル挿入７日後、健常なボランティアにおいて、望ましくない応答および反応は特に見られなかった。

ヒドロゲルナノコーティング剤でコーティングしたカテーテルに関する本実験は、初めて、ＣＡＵＴＩ発生頻度の減少の可能性について期待できる結果を示す。

カテーテルが非侵襲物質から製造される場合であっても、これらの物質は、免疫系の細胞によって外部の体と認識される。患者の上皮細胞に接触した本開示の外部ナノコーティング剤を有する本発明によるカテーテルは、上皮において細胞毒性効果を一切示さない。本実験で用いられるナノ粒子は、宿主細胞によって危険なものとして認識されない。抗菌ナノコーティングを肝臓組織に露出することからなる新規物質の潜在的な生物学的効果を評価すると、解析により、カテーテルの門脈の集水域への挿入に対する肝細胞反応の欠如が示された。用いられる物質についてのカテーテルの大幅な改善が提案された。天然の抗菌コーティングにより、ヒドロゲルでコーティングされた新たな次世代のカテーテルは、接触摩擦の低下によって特徴付けられ、従来の抗生物質療法と同様の尿路炎症プロセスおよび感染を減少させる。カテーテルは、従来のカテーテルと比較して、安価であり、患者にとってより有益である。

実施例７
本発明によるキットは、上記実施例６に記載されるカテーテル、注射用水（滅菌）を含むバイアル、ならびに、生存するか、または熱で不活性化されたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の形態にて１０^６個の細胞の用量で少なくともカテーテル挿入期間毎日投与のための経口投与用ストレス軽減剤を含む。患者の状態に応じて、担当の医師は、カテーテル挿入前の期間にもストレス軽減剤の投与を指示してもよい。ストレス軽減剤の経口投与は、カテーテル挿入８時間前が推奨され、またはカテーテル挿入１５分前に体腔に直接投与することが推奨される。

実施例８.
Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の局所的な適用を、皮膚表面および火傷創傷の感染の予防について試験した。（キトサン・カルシウムまたはアルギン酸カルシウムフィルムに固定化させた）Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物の使用についての実験により、ラット火傷創傷モデルにおけるこれらのフィルムの抗菌活性を調べた。多剤耐性臨床分離株であるウレアーゼ陽性Pseudomonas aeruginosaは、指示菌として供給した。Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物（１０^８ＣＦＵ／ｍＬの細胞濃度に平衡化）を含むフィルムは、火傷創傷モデルのP.aeruginosaにおいて、５〜６ｌｏｇ（１０）の減少を生じさせた。凍結乾燥させたキトサン・カルシウムまたはアルギン酸カルシウムフィルムに固定化させたＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物を含有する包帯は、４℃での保存６ヶ月間で生存可能とした。このことにより、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物および／またはその副生成物は、P.aeruginosaによる火傷感染の局所治療についての治療活性の可能性を示すことが示された。

火傷のモデルマウス（Rumbaugh KP et al. Contribution of quorum sensing to the virulence of Pseudomonas aeruginosa in burn wound infections. Infect Immun1999;67:5854-5862）を実験で用いた。麻酔をかけたマウスの背中を剪毛し、前記マウスを９０℃の温度の水槽に１０秒入れて、首表面を火傷させた。マウスの１つの群（Ｂ群）を無作為に選択し、火傷にＰＢＳを直接注射し、２番目の群を１００μｌの２００〜３００ＣＦＵのP.aeruginosaで感染させ（ＢＰ群）、２番目の群からのマウスの半数を最初の感染３、４、５、７および９日後にＬ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物（ＭＲＳブロス中で増殖させた１００μｌの１０^５個のＤＡＮ０８０細胞を平衡化（ＢＰ＋ＤＡＮ０８０群））で処理した。最初の感染５、１０、１５日後、マウスを屠殺し、血液試料、火傷部位から皮膚、結合組織および筋肉を採取し、処理した。組織学的試験により、５日目の浮腫において、炎症性浸潤を含む血管の鬱血および壊死部分が発生し、これらの浸潤は、群ＢＰおよびＢＰＳ＋ＤＡＮ０８０において、群Ｂより広がっていたことが示された。１０日目において、創傷修復プロセスは、他の群と比較して、群Ｂで著しく進行していた。群ＢＰ＋ＤＡＮ０８０では、ＢＰ群のマウスより壊死部位は小さく、炎症性浸潤がより拡散していた。１５日目において、群ＢＰ＋ＤＡＮ０８０におけるマウスの６２％は、群ＢＰの３８％と比較して、細菌のクリアランスを示した。

Claims (31)

1. 医薬における使用のためのラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）。
2. 脊椎動物における胃腸管、体表、および泌尿生殖器系、呼吸器系のような他の系の細菌、真菌、および他の病原菌によって引き起こされる感染の結果として発症する医学的状態の予防および治療における治療剤および予防剤として、特に抗菌薬として、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のため、および／または脊椎動物、特にヒト、他の哺乳類または鳥類の生体におけるリゾチーム活性の増加のための、治療剤および／または予防剤として、医薬で使用するための、培養物、部分的に不活性化された培養物；Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０培養物（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）の液体、濃縮、乾燥させた上澄み液の形態での、請求項１に記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）。
3. 脊椎動物における胃腸管、体表、および泌尿生殖器系、呼吸器系のような他の系の細菌、真菌、および他の病原菌によって引き起こされる感染の結果として発症する医学的状態の予防および治療における抗菌薬として医薬で使用するための、Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）の全培養物；Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）の培養物およびＬ．ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）を含有する混合された細菌培養物から得た液体、濃縮、乾燥させた上澄み液；ならびに原核生物および真核生物の組み換え体の培養物から得た液体、濃縮、乾燥させた上澄み液、ならびに原核生物および真核生物の組み換え体の全培養物（これらの遺伝子および／またはこれら由来の遺伝子が用いられ、これらの遺伝子が、Ｈ．ピロリおよび他の細菌に対して特異的な改変、阻害、および恒常活性を供する）；ならびにＬ．ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）から得た液体、濃縮、乾燥させた上澄み液から精製／単離され；Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）の全培養物、および他の混合した細菌培養物（Ｌ．ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）が含まれる）から精製／単離され；および原核生物および真核生物の組み換え体の培養物から精製または単離される（これらの遺伝子および／またはこれら由来の遺伝子が、Ｈ．ピロリおよび他の細菌に対して特異的な改変、阻害、および恒常活性を供する）約１５０および／または１４１および／または１１５および／または９５および／または９０および／または８６および／または８３および／または７７および／または７１および／または６３および／または５９および／または５６および／または４９および／または４６および／または４３および／または３９および／または３４および／または３２および／または３０および／または２２ｋＤまたはそれ以下の分子量のタンパク質／オリゴペプチド／ペプチド、あるいはそれらの混合物を含む群から選択される形態である、請求項１に記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）。
4. 痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のためおよび／または脊椎動物の体内のリゾチーム活性の増加のための治療剤および／または予防剤としての抗菌薬として使用するための、請求項１〜３のいずれかに記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）であって、前記脊椎動物が、ヒト個体である、前記株。
5. 痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のためおよび／または脊椎動物の体内のリゾチーム活性の増加のための治療剤および／または予防剤としての抗菌薬として使用するための、請求項１〜３のいずれかに記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）であって、前記脊椎動物が、飼育動物、ペット、スポーツ関連の動物、ブロイラー、産卵鶏、マウス、ラット、モルモット、ウサギおよび他の実験動物（霊長類を含む）（年齢に関わらない）である、前記株。
6. 抗菌薬として使用するための、請求項１〜３のいずれかに記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）であって、前記微生物が、病原性細菌または真菌である、前記株。
7. 抗菌薬として使用するための、請求項５に記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）であって、前記病原性細菌が、ヘリコバクターピロリである、前記株。
8. 治療を必要とする脊椎動物（ヒト、他の哺乳類および鳥類を含む）における胃、腸およびＧＩＴの機能の調節、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防のためおよび／または脊椎動物の体内のリゾチーム活性の増加のための組成物を製造するための請求項１〜７のいずれかに記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）であって、前記ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）が、所望の予防または治療結果を達成するための有効量で含まれるものである、前記株。
9. 前記組成物が、Ｈ．ピロリおよび他の微生物の死滅、増殖の阻害、調節および予防、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防および／または脊椎動物の体内のリゾチーム活性の増加、ならびに所望の予防または治療結果を得るために必要な有効量で適切な速度での投与を対象とするものである、請求項８に記載の使用。
10. 前記組成物が、ＧＩＴ疾患、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、十二指腸癌の治療、軽減、または予防、あるいは痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防および／または治療を必要とする個体である脊椎動物（哺乳類および鳥類を含む）の体内のリゾチーム活性の増加を対象とするものである、請求項８または９に記載の使用。
11. 前記組成物が、下痢の治療、軽減、または予防を対象とするものである、請求項１０に記載の使用。
12. 下痢の治療、軽減、または予防が、Ｈ．ピロリ増殖の排除または安定化を含むものである、請求項１１に記載の使用。
13. 前記組成物が、痛風（ポダグラ）の発症の治療および予防および／または脊椎動物の体内のリゾチーム活性の増加を対象とするものである、請求項１０に記載の使用。
14. 前記組成物が、適宜、予防または治療用量で、特にナノ形態において、他の生物学的に活性な物質、例えば、ビタミン、特に、ＤおよびＥ、医薬的に許容される担体および／または他の添加物、ならびに抗菌キトサン塩、特にアルファケトグルタル酸塩、クエン酸塩および乳酸塩を含有していてもよいものである医薬組成物である、請求項８〜１３のいずれかに記載に使用。
15. 前記医薬組成物が、治療上の有効量の前記ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）を、１日あたり体重の０．００１〜０．２ｇ／ｋｇの量で含有する単一用量に分割された固体形態である、請求項１４に記載の使用。
16. 前記医薬組成物が、錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項１５に記載の使用。
17. 前記医薬組成物が、治療上の有効量の前記ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）を、１日あたり体重の０．００１〜０．２ｇ／ｋｇの量で含有する単一用量に分割された液体形態である、請求項１４に記載の使用。
18. 前記医薬組成物が、エアロゾル、パップ剤または湿布としての使用を対象とした液体形態である、請求項１７に記載の使用。
19. 前記組成物が、栄養補助食品、食品または食品添加物である、請求項８〜１３のいずれかに記載の使用。
20. 前記栄養補助食品、食品または食品添加物が、固体形態および／または飲料の形態である、請求項１９に記載の使用。
21. 治療上の有効量が、１日あたり体重の０．００１〜０．２ｇ／ｋｇである、請求項１９〜２０のいずれかに記載の使用。
22. ヒトおよび動物の予防、診断および医薬における使用のための血管、管および／または体腔への挿入用カテーテルであって、プラスティック製であり、保護滑沢剤層でコーティングされ、前記プラスティックに、直接結合するか、または前記カテーテル材料に化学結合したポリマーのナノコーティングを介して永続的に結合し、抗菌特性を有し、水とともにゲルを形成できる生体適合性ポリマーの外部ナノコーティングを有することを特徴とするものであって、少なくとも１つのナノコーティングは、抗菌活性および抗炎症活性を有するラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）から分泌された細胞外代謝物が添加され、適宜、ナノ粒子の形態のビタミンＤが添加されていてもよいものである、前記カテーテル。
23. 生体適合性ポリマーが、ポリビニルピロリドンであり、このポリマー製のナノコーティングが、約５０，０００のＣ−Ｃ結合（１０ｎｍ）の厚さを有することを特徴とする、請求項２２に記載のカテーテル。
24. 抗菌特性を有するポリマーが、キトサン塩および小分子有機酸、好ましくは、アルファケトグルタル酸であることを特徴とする、請求項２２または２３に記載のカテーテル。
25. キトサンアルファケトグルタル酸、クエン酸キトサン、乳酸キトサン（抗菌活性および抗炎症活性を有する）、小分子ジカルボン酸、銀ナノ粒子、および保護コーティング剤でコーティングされたナノ粉末の形態におけるビタミンＤおよびＥ、ならびにこれらの組み合わせを含む群から選択されるさらなる活性剤が、生体適合性ポリマー製のナノコーティング剤および／または抗菌特性を有するポリマーに分散されることを特徴とする、請求項２２〜２４のいずれかに記載のカテーテル。
26. 請求項２２〜２５に記載のカテーテルおよび注射用水（滅菌済）の入ったバイアル、ならびに生存しているか、または熱で不活性化されたラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）の培養物の形態における経口投与のためのストレス軽減剤を１０^６個の細胞の用量で含むカテーテル挿入キットであって、カテーテル挿入期間の毎日投与および／またはカテーテル挿入８時間前、あるいは直接体腔にカテーテル挿入１５分前に投与するための前記キット。
27. 前記水の入ったバイアルが、カテーテルの先端に固定され、水をカテーテルから分離する障壁を備えるものであって、前記障壁は、カテーテルを包装から外側に突き出すとカテーテルに対するバイアルの回転によって破壊されることを特徴とする、請求項２６に記載のキット。
28. 抗菌薬として、着衣、おむつ、タンポン、包帯、バンドエイド、生理用ナプキン、羽付き生理用ナプキン、パンツの裏地、化粧用パッド、昼夜使用のための動物用ラップおよび他の人の衛生製品の形態における衛生製品の製造で使用するための、請求項１〜７のいずれかに記載のラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）。
29. 前記製品が、重篤な火傷の患者または広範囲の体に負傷を負った道路交通事故犠牲者を対象とする救助隊（消防隊を含む）のためのプラスティックプロテクターまたは防火用ブランケットとして設計されているものである、請求項２８に記載の使用。
30. プラスティックプロテクターまたは防火用ブランケットが、ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株を含むナノ層でコーティングされているものである、請求項２９に記載の使用。
31. ラクトバチルス・ロイテリＤＡＮ０８０株（寄託番号ＤＳＭ１５６９３）が、抗菌に有効な量で火傷または負傷した患者の体と接触して放出されるものである、請求項３０に記載の使用。

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