JP2003513995A

JP2003513995A - ヘリコバクターピロリにより誘発される胃腸疾患の阻害剤

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Publication number: JP2003513995A
Application number: JP2001537695A
Authority: JP
Inventors: クリスチャンヴァーラッシュ; ドリアンベーヴェック
Original assignee: アクスクシーマファルマシューティカルスアクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1999-11-19
Filing date: 2000-11-17
Publication date: 2003-04-15
Also published as: WO2001035899A3; WO2001035899A2; WO2001035899A9; EP1229925A2; AU3003701A

Abstract

(57)【要約】本発明は、哺乳類におけるヘリコバクター媒介疾患を治療または予防する薬物の製造方法、およびヘリコバクター媒介疾患を治療または予防する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】説明本発明は、哺乳類におけるヘリコバクター媒介疾患を治療または予防する薬物
の製造方法、およびヘリコバクター媒介疾患を治療または予防する方法に関する
。

【０００２】ヘリコバクターピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）は、胃腸疾患を引き起こすことで
知られる病原体である。ヘリコバクターピロリに対する最近の治療には、プロト
ンポンプ様ラニチジンもしくはビスマス塩、例えばクエン酸ビスマスの阻害剤と
組み合わせて、以下の抗生物質：テトラサイクリン、アモキシシリン、クラリス
ロマイシンまたはメトロニダゾールの２種類を適用することを含む併用療法が含
まれる。しかしながら、ヘリコバクター菌株の中でメトロニダゾールに対して新
しく現れた耐性が、世界中で既に見出されており、それが治療の失敗に関連して
いる（アラルコン（Ａｌａｒｃｏｎ）等，Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．
Ａｇｅｎｔｓ１（１９９９），１９−２６）。

【０００３】ヘリコバクターピロリは、胃の尿素を重炭酸塩およびアンモニアに転化するウ
レアーゼを放出することによって、胃の酸性胃液と闘う。その結果、ガストリン
受容体、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を用いて、Ｇ細胞からのガストリ
ンの放出によって、胃酸分泌の末梢調節が開始される。さらに、ヘリコバクター
ピロリは、胃の上皮インターロイキン８（ＩＬ−８）の発現のアップレギュレー
ションに重大に関与している。このアップレギュレートされた上皮ＩＬ‐８の分
泌および付随する走化性および免疫担当細胞の活性化が、組織損傷、潰瘍形成お
よび胃の発癌に関与していると述べられている（クラブトリーおよびリンドレー
（Ｃｒａｂｔｒｅｅ＆Ｌｉｎｄｌｅｙ），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｒ
ｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．６Ｓｕｐｐｌ１（１９９４），３３−３８；クラブ
トリー（Ｃｒａｂｔｒｅｅ）等，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．４８（１９９５
），４１−４５；クラブトリー（Ｃｒａｂｔｒｅｅ），Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１０Ｓｕｐｐｌ．１（１９９６），２９−３７）。

【０００４】ヘリコバクターピロリ菌株は、２つの主なグループ：不確定な機能の免疫優性
タンパク質をコードする遺伝子座を有するグループ（ｃａｇＡ島（ｉｓｌａｎｄ
）；ｃａｇＡ＋株）およびこの遺伝子領域を持たないグループ（クラブトリー（
Ｃｒａｂｔｒｅｅ）等（１９９５），上記に同じ；ｃａｇＡ−株）に分けられる
。この遺伝子領域を持たないヘリコバクターピロリ菌株が依然として感染性であ
ることから、このｃａｇＡ病原性島は、ヘリコバクターピロリによる疾患を誘発
する原因であると推定されるが、患者は無症状のままである（アコピアンツ（Ａ
ｋｏｐｙａｎｔｓ）等，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２８（１９９８），３７
−５３）。

【０００５】ヘリコバクターピロリｃａｇＡ−（ＴＸ３０ａ、ＡＴＣＣ５１９３２）／ｃ
ａｇＡ＋（６０１９０、ＡＴＣＣ４９５０３）菌株に感染した、または感染し
ていないヒト胃癌細胞系と、ｃＤＮＡ配列をハイブリダイズすることによって、
以下の結果が得られた：サイトカインのアップレギュレーション、上皮成長因子
（ＥＧＦ）ファミリー様ヘパリン結合ＥＧＦ（ＨＢ‐ＥＧＦ）、アンフィレグリ
ンおよびトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）‐αのメンバーと同様に、Ａ
ＤＡＭ２０、ＡＤＡＭファミリー（ディスインテグリンおよびメタロプロテアー
ゼドメインを含むタンパク質）の遺伝子のアップレギュレーションが生じた。ア
コピアンツ（Ａｋｏｐｙａｎｔｓ）等の結果とかなり対照的に、ヘリコバクター
ピロリのｃａｇＡ＋菌株のみが疾患を発生させる原因ではなく、ｃａｇＡ−菌株
もまた、プレンツェル（Ｐｒｅｎｚｅｌ）等，Ｎａｔｕｒｅ４０２（１９９９
），８８４−８８８に記載されている、三重膜通過シグナル伝達カスケード（ｔ
ｒｉｐｌｅｍｅｍｂｒａｎｅｐａｓｓｉｎｇｓｉｇｎａｌｉｎｇｃａｓ
ｃａｄｅ）を用いることによって、ｃａｇＡ＋株と同じ分子効果を示すことが、
本発明者等の結果により実証されている。

【０００６】日本では毎年約５００，０００件、欧州では約２００，０００人の胃癌患者が
おり（ＳＣＲＩＰＮｏ２４６７、ｐ．１８）、それらの多くはおそらく、慢性
ヘリコバクターピロリ感染によって発症している。したがって、ｃａｇＡ−／ｃ
ａｇＡ＋ヘリコバクターピロリ菌株によって生じる現象のカスケードを妨ぐこと
により、病原体の有害な慢性効果が抑制されるはずであると本発明者等は推論し
た。

【０００７】このように、本発明は、哺乳類におけるヘリコバクター媒介疾患を治療または
予防する薬物の製造方法であって、前記薬物が、（ａ）ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）−Ｂ受容体の阻害剤、（ｂ）プロテインキナーゼＣの阻害剤、（ｃ）膜結合型メタロプロテイナーゼの阻害剤、（ｄ）成長因子受容体活性化の阻害剤、（ｅ）成長因子受容体キナーゼ活性の阻害剤、（ｆ）分裂促進因子活性化プロテインキナーゼカスケードの阻害剤、及び（ｇ）転写阻害剤、から選択される少なくとも１種の化合物を活性成分として
含有する方法に関する。

【０００８】治療するべき、または予防すべきヘリコバクター誘発疾患は、胃癌および炎症
疾患、例えば非びらん性慢性胃炎、消化性潰瘍疾患、粘膜結合型リンパ組織リン
パ腫および腸管型腺癌から選択されることが好ましい。

【０００９】活性成分は、化合物（ａ）〜（ｇ）から選択される。その薬物は、同一の標的
に向けられる化合物または２種類以上の異なる標的に向けられる化合物から選択
することができる、１種類のみの活性成分または数種類の活性成分を含有するこ
とが可能である。

【００１０】ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）−Ｂ受容体の阻害剤（ａ）は、レベ
ル（Ｒｅｖｅｌ）およびマコベック（Ｍａｋｏｖｅｃ）により記述されているよ
うに（ＤｒｕｇｓｏｆｔｈｅＦｕｔｕｒｅ２３（１９９８），７５１−
７６６）、ノナペプチドＣＣＫ−Ｂアンタゴニスト、アミノ酸誘導体、ベンゾジ
アゼピン、ジペプトイド、ピラゾリジノン、キナゾリノン、ウレイドアセトアミ
ド、ジベンゾビシクロ［２．２．２］オクタンなどの二環式化合物、ビナフタレ
ン誘導体などの芳香族化合物、ウレイドベンズアゼピンおよびウレイドメチルカ
ルバモイルフェニルケトンから選択することが好ましい。さらに適切な化合物は
、クロウレイ（Ｃｒａｗｌｅｙ）（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１２（１９
９２），３３８０−３３９１）およびヒューズ（Ｈｕｇｈｅｓ）（Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７（１９９０），６７２８−６７３
２）により記述されている。これらの文献の開示内容を参照により本明細書に組
み込む。

【００１１】アミノ酸誘導体の詳細な例は、スピログルミドなどのグルタミン酸誘導体、例
えばＣＲ−２６２２（マコベック（Ｍａｋｏｖｅｃ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ
．３９（１９９６），１３５−１４２）である。ベンゾジアゼピンの詳細な例は
、Ｌ−３６５２６０（ボック（Ｂｏｃｋ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２（１
９８９），１３−１６）、ＹＭ−０２２（サトウ等，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂ
ｕｌｌ．（Ｔｏｋｙｏ）４３（１９９５），２１５９−２１６７）およびＧＲ−
１９９１１４Ｘ（ベイリー（Ｂａｉｌｅｙ）等，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｌｅｔｔ．７（１９９７），２８１−２８６）である。ピラゾリジノンの詳
細な例は、ＬＹ−２８８５１３およびＬＹ−２６２６９１（ヘルトン（Ｈｅｌｔ
ｏｎ）等，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．５３（１９９６
），４９３−５０２）である。キナゾリノンの詳細な例は、ＬＹ−２４７３４８
（ユー（Ｙｕ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４（１９９１），１５０５−１５
０８）である。ジペプトイドの詳細な例は、ＰＤ−１３６４５０、ＣＩ−９８８
およびＰＤ−１３４３０８（ボーデン（Ｂｏｄｅｎ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ
．３６（１９９３），５５２−５６５；マルドナード（Ｍａｌｄｏｎａｄｏ）等
，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４（１９９５），１０３１−１０５９）
である。ウレイドアセトアミドの詳細な例は、ＲＰ−６９７５８およびＲＰ−７
３８７０（ペンドレー（Ｐｅｎｄｌｅｙ）等，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ
．Ｔｈｅｒ．２７３（１９９５），１０１５−１０２２）である。ウレイドベン
ズアゼピンの詳細な例は、ＣＰ−２１２４５４（ロー（Ｌｏｗｅ）ＩＩＩ等，Ｊ
．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７（１９９４），３７８９−３８１１）などの５‐フェ
ニル‐３‐ウレイドベンズアゼピン‐２‐オンである。ウレイドメチルカルバモ
イルフェニルケトンの詳細な例は、Ｓ−０５０９（ハギシタ等，Ｂｉｏｏｒｇ．
Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．８（１９９７），１６９５−１７１４）である。これらの文
献の開示内容を参照により本明細書に組み込む。

【００１２】プロテインキナーゼＣの阻害剤（ｂ）は、ＡＴＰ競合的阻害剤、アンチセンス
オリゴヌクレオチド、ペプチドおよび脂質であることが可能である。インドール
カルバゾール、ビスインドリルマレイミド、バラノール類似体、アンチセンスオ
リゴヌクレオチドおよびアルキル‐リゾリン脂質が特に好ましい（ゲージアン（
Ｇｏｅｋｊｉａｎ）およびジロウセック（Ｊｉｒｏｕｓｅｋ），Ｃｕｒｒ．Ｍｅ
ｄ．Ｃｈｅｍ．６（１９９９），８７７−９０３）。この文献の開示内容を参照
により本明細書に組み込む。

【００１３】インドールカルバゾール化合物の詳細な例は、例えばＥＰ−Ａ−０３２８００
０、ＥＰ−Ａ−０３７０２３６、ＥＰ−Ａ−０４１０３８９およびＥＰ−Ａ−０
４３４０５７に記載の化合物、またはＥＰ９９１１６４２６．０に記載の化合
物である。適切なインドールカルバゾールの詳細な例は、Ｇｏ７６１２およびＣ
ＧＰ４１２５１（イケガミ等，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７０（１９９
６），６５−７２）である。ビスインドリルマレイミドの詳細な例は、ＬＹ３３
３５３１、ＧＦ１０９２０３ｘ、Ｒｏ３２−０４３２およびＲｏ３１−８２２０
（ジロウセック（Ｊｉｒｏｕｓｅｋ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９（１９９
６），２６６４−２６７１）である。バラノール類似体の詳細な例は、ＳＰＣ１
００８４０（ゲージアン（Ｇｏｅｋｊｉａｎ）およびジロウセック（Ｊｉｒｏｕ
ｓｅｋ），上記に同じ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドの詳細な例は
、ＣＧＰ６４１２８Ａ（ゲージアン（Ｇｏｅｋｊｉａｎ）およびジロウセック（
Ｊｉｒｏｕｓｅｋ），上記に同じ）である。アルキル‐リゾリン脂質の詳細な例
は、ＥＴ−１８−ＯＣＨ３（シボリ（Ｃｉｖｏｌｉ）およびダニエル（Ｄａｎｉ
ｅｌ），ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４２（１９
９８），３１９−３２６）である。これらの文献の開示内容を参照により本明細
書に組み込む。

【００１４】膜結合型メタロプロテアーゼの阻害剤（ｃ）、特にＡＤＡＭファミリーメンバ
ー、またはＴＡＣＥ（モス（Ｍｏｓｓ）等，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７
２（１９９７），１２７−１２９）を、プロテイナーゼ活性の阻害剤または、例
えば基材をマスキングすることによってメタロプロテイナーゼのその基質への到
達をブロックする化合物から選択することができる。これらの阻害剤は、例えば
ヒドロキサム酸基を含有する化合物から選択することができる。ヒドロキサム酸
誘導体の詳細な例は、ＧＷ９４７１およびＧＷ９２７７（モス（Ｍｏｓｓ）等，
Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７２（１９９７），１２７−１２９）、ＢＢ−
９４（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）、ＢＢ−２５１６（Ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）およ
びＢＢ−１１０１（ウォトウィッツ‐プラガ（Ｗｏｊｔｏｗｉｃｚ−Ｐｒａｇａ
）等，Ｉｎｖｅｓｔ．ＮｅｗＤｒｕｇｓ１５（１９９７），６１−７５）、
ＣＴ１４１８（エプス（Ｅｐｐｓ）等，Ｊ．ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅｍ．１７（
１９９８），６９９−７１２）、Ｎ‐（Ｄ，Ｌ‐［２‐（ヒドロキシアミノカル
ボニル）メチル］‐４‐メチルペンタノイル）‐Ｌ‐３‐（２’ナフチル）‐ア
ラニル‐Ｌ‐アラニン、２‐アミノエチルアミド（モーラー（Ｍｏｈｌｅｒ）等
，Ｎａｔｕｒｅ３７０（１９９４），２１８−２２０）、ＧＩ１２９４７１（
マクギーハン（ＭｃＧｅｅｈａｎ）等，Ｎａｔｕｒｅ３７０（１９９４），５
５８−５６１）、ＣＧＳ２７０２３ＡおよびＲＯ３１−９７９０（ロンバード（
Ｌｏｍｂａｒｄ）等，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５８（１９９８），４００１−４
００７）である。他の例は、ＴＩＭＰ（メタロプロテアーゼの組織阻害剤）ファ
ミリーメンバー、例えばＴＩＭＰ−１およびＴＩＭＰ−２（ロンバード（Ｌｏｍ
ｂａｒｄ）等，上記に同じ）である。この文献の開示内容を参照により本明細書
に組み込む。

【００１５】成長因子受容体の阻害剤（ｄ）は、上皮成長因子受容体ファミリーメンバー、
例えばＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４の阻害剤、または他の成長
因子受容体、例えばＴＮＦ‐α受容体の阻害剤であることが可能である。成長因
子受容体の阻害剤は、低分子量化合物から、またはそれらの受容体への受容体リ
ガンドの結合、特に膜結合型前駆体（ｆ．ｅ．ＨＢ−ＥＧＦ）から放出される、
ＥＧＦ様リガンドファミリーの受容体リガンドの結合を抑制する抗体から選択す
ることができる。詳細な例は、抗受容体抗体またはそのフラグメント、例えば抗
体ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）もしくはＴｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（ゴー
ルデンバーグ（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ），Ｃｌｉｎ．Ｔｈｅｒ．２１（１９９９
），３０９−３１８）である。この文献の開示内容を参照により本明細書に組み
込む。

【００１６】成長因子受容体キナーゼ活性の阻害剤（ｅ）は、フェニルアミノキナゾリン、
ピリド‐、ピロロ‐、ピラゾロ‐、ピリミド‐およびフェニルアミノピリミジン
を含む置換ピリジミン、チルフォスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、ラベンダス
チン（ｌａｖｅｎｄｕｓｔｉｎ）およびジアニリノ‐フタルイミド（トラクスラ
ー（Ｔｒａｘｌｅｒ）およびリドン（Ｌｙｄｏｎ），Ｄｒｕｇｓｏｆｔｈｅ
Ｆｕｔｕｒｅ２０（１９９５），１２６１−１２７４）であることが可能で
あり、この文献の開示内容を参照により本明細書に組み込む。

【００１７】フェニルアミノキナゾリンの詳細な例は、ＰＤ１５３０３５（フライ（Ｆｒｙ
）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６５（１９９４），１０９３−１０９５）、ＺＤ１８
３９（ウッドバーン（Ｗｏｏｄｂｕｒｎ）等，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃ
ａｎｃｅｒＲｅｓ．３８（１９９７），６３３）およびＣＰ−３５８，７７４
（Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．３８（１９９７），６
３３）である。置換ピリミジンの詳細な例は、ＰＤ１５８７８０（レウキャッス
ル（Ｒｅｗｃａｓｔｌｅ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９（１９９６），１８
２３−１８３５）、ＰＤ１６６２８５（パネック（Ｐａｎｅｋ）等，Ｊ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２８３（１９９７），１４３３−１４４４）
、ＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１およびＣＧＰ６２７０６（トラクスラー
（Ｔｒａｘｌｅｒ）等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０（１９９７），３６０１−
３６１６）である。ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎの詳細な例は、ＡＧ１４７８、ＲＧ１
３０２２およびＡＧ８２５（レビツキー（Ｌｅｖｉｔｚｋｉ）およびガジット（
Ｇａｚｉｔ），Ｓｃｉｅｎｃｅ２６７（１９９５），１７８２−１７８８）であ
る。ｌａｖｅｎｄｕｓｔｉｎの詳細な例は、ｌａｖｅｎｄｕｓｔｉｎＡ（オノ
ダ等，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５２（１９９８），１２５２−１２５７）である
。ジアニリノ‐フタルイミドの詳細な例は、ＣＧＰ５４６９８（ブフダンガー（
Ｂｕｃｈｄｕｎｇｅｒ）等，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．８（１９９５）
，８１３−８２１）である。これらの文献の開示内容を参照により本明細書に組
み込む。

【００１８】分裂促進因子活性化プロテインカスケードの阻害剤（ｆ）は、ＭＡＰＫＫＫ（
Ｒａｆ）の阻害剤、ＭＡＰＫＫ（Ｍｅｋ）の阻害剤およびＭＡＰＫ（Ｅｒｋ）の
阻害剤から選択することが好ましい。詳細な例は、ＰＤ０９８０５９（ダッドリ
ー（Ｄｕｄｌｅｙ）等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９
２（１９９５），７６８６−７６８９；へー（Ｈｅ）等，ＣｅｌｌＧｒｏｗｔ
ｈＤｉｆｆｅｒ．１０（１９９９），３０７−３１５）、Ｕ０１２６（ファバ
タ（Ｆａｖａｔａ）等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１９９８），１８６
２３−１８６３２）およびＳＢ２０３５８０、Ｌ１６７３０７、ＲＷＩ６８３５
４、ＳＫ＆Ｆ８６００２、ＳＣ１０２、ＳＢ２２６８８２、ＶＫ１９９１１およ
びＲＷＩ６７６５７（バグワット（Ｂｈａｇｗａｔ）等，ＤＤＴ４（１９９９
），４７２−４７９）である。これらの文献の開示内容を参照により本明細書に
組み込む。

【００１９】転写阻害剤（ｇ）は、一般的な転写阻害剤、またはｃ‐ｆｏｓ遺伝子、例えば
アンチセンスオリゴヌクレオチドの転写を抑制する選択性を有する転写阻害剤で
あることが可能である。

【００２０】化合物（ａ）〜（ｇ）の投与は、阻害剤の同じ分類に属する、かつ／または阻
害剤の異なる分類に属する数種の化合物を用いた併用療法の一部であることが可
能である。さらに、その治療は、ヘリコバクターの感染に対して有効である、そ
の他の活性成分の投与を含むことができる。この他の活性成分は、抗生物質、例
えばテトラサイクリン、アモキシシリン、パントプラゾール、クラリスロマイシ
ンまたはメトロニダゾール、ラニチジン、ランソプラゾール、オメプラゾール、
ラベプラゾール、ベンズイミダゾールなどのプロトンポンプ阻害剤、またはビス
マス塩およびヘリコバクターピロリワクチン、例えば組換えウレアーゼまたはウ
レアーゼサブユニットワクチンから選択することができる。この他の活性成分は
、免疫原性アジュバント、例えば一般的または非特異的免疫刺激作用を提供する
化合物、例えば水酸化アルミニウムもしくは特にＣｐＧモチーフ含有アジュバン
ト（ＷＯ９６／０２５５５；ＷＯ９８／４０１００；ＷＯ９９／５１２５９を参
照のこと）もしくはサイトカインなどの免疫アジュバントであることも可能であ
る。組み合わせた薬物のそれぞれの活性成分は、共にまたは別々に投与すること
が可能であることを留意されたい。

【００２１】投与量および投与の種類は、疾患の程度およびそれぞれ投与する薬物、または
それぞれ投与する薬物の組み合わせによって異なる。このコンテクストでは、先
に参照した文献を参照する。通常、数日および数週間の期間にわたって有効量で
薬物をそれぞれ投与し、必要な場合には、治療間隔を数回繰り返す。

【００２２】さらに、哺乳類におけるヘリコバクター媒介疾患を治療または予防する新規な
薬物を同定する方法が提供される。この方法は、先に定義したクラス（ａ）〜（
ｇ）の化合物のスクリーニングアッセイを含む。このスクリーニングアッセイは
、ＣＣＫ−Ｂ受容体、プロテインキナーゼＣ、膜結合型メタロプロテイナーゼ、
成長因子受容体および分裂促進因子活性化プロテインキナーゼカスケードメンバ
ーおよびｃ−ｆｏｓから選択される標的分子の修飾物質を同定することに基づく
。このスクリーニング法は、細胞アッセイ、例えば、先に指定の標的分子を過度
に発現する細胞上の試験化合物の効果を決定するアッセイ、または無細胞系にお
いて標的分子上の試験化合物の効果を決定し、かつ実質的に精製状態および単離
状態で標的分子が存在することができる分子アッセイであることが可能である。

【００２３】以下の実施例により、本発明をさらに説明する。

【００２４】実施例１１．材料と方法：１．１ｃＤＮＡ配列をハイブリダイズするためのＲＮＡの調製：原則的に、培
地を除去した後に、氷のように冷たいリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１５ｍｌで胃
癌細胞系を洗浄し、トリプシン処理し、１５ｍ小ビンチューブ中、４℃および２
０００ｒｐｍで５分間ペレット化した。遠心分離した後、上清を除去し、細胞数
１．５×１０⁶につきＴＲＩＺＯＬ試薬１ｍｌに細胞を溶解した。ＴＲＩＺＯＬ
／細胞ライセートをエッペンドルフ型チューブに移し、４℃および１３０００ｒ
ｐｍで１５分間遠心分離した。その上清を新しいエッペンドルフ型チューブに移
し、ＴＲＩＺＯＬ各１ｍｌに対してＢＣＰ（１‐ブロモ‐３‐クロロプロパン）
０．１ｍｌを添加した。サンプルを１５秒間ボルテックスし、室温で５分間イン
キュベートした。次いで、サンプルを４℃および１３０００ｒｐｍで１５分間遠
心分離した。得られた上部水相を新しいエッペンドルフ型チューブに移し、ＴＲ
ＩＺＯＬ各１ｍｌに対してイソプロパノール０．５ｍｌを添加し；ボルテックス
し；室温でさらに８分間インキュベートした。４℃および１３０００ｒｐｍで１
０分間遠心分離した後、上清を完全に除去し、沈殿したＲＮＡを氷のように冷た
い７５％エタノールで２回洗浄し、空気乾燥させた。ＲＮＡペレットをＴｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）５０μｌに再懸濁した。ＲＮＡの量を紫外線分光法によ
ってモニターし、ホルムアルデヒド含有１．２％アガロースゲル上でゲル電気泳
動によって、その質を測定した。ノーザンブロッティングに用いるＲＮＡを調製
する際には、「ＲＮｅａｓｙ（登録商標）ミニキット」（キアゲン社）に付いて
いるプロトコールおよび反応緩衝液を使用した。

【００２５】１．２ｃＤＮＡの調製：オリゴ‐ｄＴプライマー１μｇを添加することによっ
て、全ＲＮＡ１０μｇを第一鎖ｃＤＮＡに逆転写した。最終反応容積１２μｌ中
で、混合物を６０℃で５分間インキュベートし、氷で２分間急速に冷却し、続い
て１３０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離した。５×一本鎖緩衝液（２５０ｍＭＴ
ｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３７５ｍＭＫＣｌ、１５ｍＭＭｇＣｌ₂
、ＧｉｂｃｏＢＲＬ、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ）４μｌ、０．１ＭＤＴＴ２μ
ｌ、１０ｍＭｄＮＴＰ１μｌおよびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ（＝２００Ｕ
）逆転写酵素１μｌを添加し、最初に室温で１０分間インキュベートし、次いで
３８℃でさらに６０分間インキュベートした。０．５ＭＥＤＴＡ５μｌおよび
０．６ＮＮａＯＨ２５μｌを添加することによって、反応を停止させた。

【００２６】１．３ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔＳｅｐｈａｄｅｘＧ−５０カラム（登録商標
）（アマシャム社）を用いたｃＤＮＡの精製：カラムをボルテックスした後、底
部クロージャーを取り外し、そのカラムを２ｍｌチューブ中に入れ、７３５×ｇ
で１分間遠心分離した。次いで、キャップの無い新しい１．５ｍｌエッペンドル
フ型チューブに入れ、既製の樹脂の中心にサンプルを注意深くピペッティングし
た。７３５×ｇで２分間遠心分離した後、その結果得られたｃＤＮＡを含有する
流動液（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を、５ＭＮａＣｌ（最終濃度０．２Ｍ）
１／２５容積、ポリアクリルキャリア１μｌ、１００％エタノール２．５容積を
添加することによって沈殿させ、ボルテックスし、氷上で１０分間インキュベー
トし、４℃および１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによってペレッ
ト化した。最後に、上清を除去し、ｃＤＮＡペレットを８０％エタノールで洗浄
し、空気乾燥させ、Ｔｒｉｓ／ＥＤＴＡ（１０ｍＭ／０．１ｍＭ）３０μｌ中で
再懸濁した。

【００２７】１．４ランダムプライマー標識化系（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を用いたｃＤＮＡの
ランダムプライム標識化：ｃＤＮＡ鋳型５０ｎｇを９５℃で５分間変性させ、氷
で急速に５分間冷却した。サンプルを遠心沈殿した後、以下の成分：０．５ｍＭｄＣＴＰ２μｌ、０．５ｍＭｄＧＴＰ２μｌ、０．５ｍＭｄＴＴＰ２μｌ
、Ｐ³²−α−ｄＡＴＰ（５０μＣｉ）５μｌおよびクレノーの酵素（３Ｕ／μｌ
）１μｌを、最終容積５０μｌに添加した。そのサンプルを２５℃で６０分間イ
ンキュベートし、０．５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）５μｌを添加することによ
って、反応を停止させた。

【００２８】１．５取り込まれていないＰ³²‐α‐ｄＡＴＰの除去：カラムをボルテックス
した後、底部クロージャーを取り外し、そのカラムを２ｍｌチューブ中に入れ、
７３５×ｇで１分間遠心分離した。次いで、キャップの無い新しい１．５ｍｌエ
ッペンドルフ型チューブに入れ、既製の樹脂の中心に放射性サンプルを注意深く
ピペッティングした。７３５×ｇで２分間遠心分離し、取り込まれていないＰ³² ‐α‐ｄＡＴＰヌクレオチドを除去した。

【００２９】１．６プレハイブリダイゼーション、予備会合、ハイブリダイゼーションおよ
びフィルター洗浄：回転ビン中、室温にて５分間フィルターをＴＥ緩衝液２５ｍ
ｌと共にインキュベートした。インキュベーションに続いて、ＴＥ溶液を、予め
温めておいたハイブリダイゼーション溶液（５×ＳＳＰＥ、１０×Ｄｅｎｈａｒ
ｄｔｓ溶液、５０％ホルムアミド、１％ＳＤＳ、変性かつ断片化したサケ精子‐
ＤＮＡ１００μｇ／ｍｌ）８ｍｌと交換した。ハイブリダイゼーション前に、放
射標識プローブを、酵母ＲＮＡ（最終濃度０．７μｇ／μｌ）、ポリＡ（０．７
μｇ／μｌ）、ＣｏｔＤＮＡ（０．０７μｇ／μｌ）、ＳＤＳ（１％）および５
×ＳＳＰＥを含有する溶液中で予め会合させた。９５℃で５分間変性を生じさせ
、続いて、６５℃で６０分間予備会合段階を行った。次いで、予備会合したプロ
ーブをフィルターに加え、ハイブリダイゼーション反応を４２℃で２日間行った
。ハイブリダイズした後、フィルターを、２×ＳＳＣで室温にて１０分間洗浄し
、予め温めておいた２×ＳＳＣ／０，５％ＳＤＳで６５℃にて３０分間２回洗浄
し、最後に予め温めておいた０，５×ＳＳＣ／０，５％ＳＤＳで６５℃にて３０
分間２回洗浄した。フィルターを蛍光イメージャー‐スクリーン（フジ）上で３
日間露出した。

【００３０】１．７ノーザンブロット分析：全ＲＮＡ５μｇを、１．２％ホルムアミド含有
アガロースゲル上でサイズ分画した（０．８ｍＡ／ｃｍ²）。２８ＳＲＮＡお
よび１８ＳＲＮＡに相当するバンド可視化した後、臭化エチジウム（１μｇ／
ｍｌ）を用いて、２×ＳＳＣ中でゲルを３０分間平衡化し、２×ＳＳＣを転移緩
衝液として用いて、ニトロセルロース膜へのＲＮＡのキャピラリー転移にさらし
た。転移が完了した後、架橋するために紫外線を用いて、ＲＮＡをフィルターに
固定化した。続いて、そのフィルターを、以下の遺伝子：ヘパリン結合上皮成長
因子（ＨＢ−ＥＧＦ、遺伝子バンク登録番号Ｍ６０２７８）、アンフィレグリン
（Ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）（ＡＲ、遺伝子バンク登録番号Ｍ３０７０４）、
腫瘍壊死因子α変換酵素（ＴＡＣＥ／ＡＤＡＭ１７、遺伝子バンク登録番号Ｕ６
９６１１）、ＡＤＡＭ２０（遺伝子バンク登録番号ＡＦ０２９８９９）およびグ
リセルアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ、遺伝子バンク登録番号
ＡＦ２６１０８５）またはβ‐アクチン（遺伝子バンク登録番号ＮＭ＿００１１
０１）に対する特異的ｃＤＮＡプローブと、ハイブリダイズした。各ｃＤＮＡ鋳
型２５ｎｇを９５℃で５分間変性し、氷で５分間急速に冷却した。サンプルを遠
心沈殿した後、以下の成分：０．５ｍＭｄＣＴＰ１μｌ、０．５ｍＭｄＧＴ
Ｐ１μｌ、０．５ｍＭｄＴＴＰ１μｌ、Ｐ³²‐α‐ｄＡＴＰ（５０μＣｉ）５
μｌ、ランダムプライマー溶液（１２５ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、
１２．５ｍＭＭｇＣｌ₂、２５ｍＭ２−メルカプトエタノール、５０μｇ／
ｍｌランダム８量体プライマー）２０μｌおよびクレノーの酵素（４０Ｕ／μｌ
）１μｌを、最終容積５０μｌに添加した。サンプルを３７℃で１０分間インキ
ュベートし、０．５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）２μｌを添加することによって
、反応を停止させた。取り込まれないＰ³²‐α‐ｄＡＴＰヌクレオチドを以下の
ように除去した：ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔＳｅｐｈａｄｅｘＧ−５０カラム（
登録商標）（アマシャム社）をボルテックスした後、底部クロージャーを取り外
し、そのカラムを２ｍｌチューブ中に入れ、７３５×ｇで１分間遠心分離した。
次いで、キャップの無い新しい１．５ｍｌエッペンドルフ型チューブにカラムを
入れ、既製の樹脂の中心に放射性プローブを注意深くピペッティングした。７３
５×ｇで２分間遠心分離し、取り込まれていないＰ³²‐α‐ｄＡＴＰヌクレオチ
ドを除去した。ハイブリダイゼーションを開始する前に、ニトロセルロースフィ
ルターを、以下の溶液：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５×Ｄｅｎｈａｒｄ
ｔ’ｓ溶液、０，１％ＳＤＳ中、４２℃で４時間プレハイブリダイズした。プレ
ハイブリダイゼーション後、１００℃で１０分間変性させた後、それぞれの放射
標識プローブをサケ精子ＤＮＡ２０μｇ／ｍｌと共にフィルターに添加した。ハ
イブリダイゼーションを４２℃で１６時間行った。次いでフィルターを、４２℃
の２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳを用いて、１０分間２回洗浄し、４２℃の０．２
×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で１０分間２回洗浄した。ハイブリダイゼーション
シグナルを、コダックＢｉｏＭａｘＭＳフィルムを用いて検出した。

【００３１】１．８ＥＧＦＲのチロシンリン酸化内容物のウエスタンブロット分析：ｃａｇ
Ａ−およびｃａｇＡ＋ヘリコバクターピロリ菌株により誘導されるＥＧＦ受容体
チロシンリン酸化を調べるために、インキュベーション実験の２４時間前に、胃
癌細胞（例えば、ＭＫＮ−１、ＭＫＮ−２８）を、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含
まないＰＲＭＩ１６４０培地に移した（飢餓段階）。ｃａｇＡ−およびｃａｇＡ
＋ヘリコバクターピロリ菌株と共に、０分、３０分、９０分、１５０分および２
１０分間それぞれインキュベートした。次いで、氷上で溶解緩衝液（２０ｍＭヘ
ペス（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、
１０％グリセロール、１ｍＭＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、１ｍＭ
オルトバナジン酸塩（ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ））４２０μｌを用いて細胞
を溶解した。溶解した細胞を、遠心分離（１５分間、１３０００ｒｐｍ、４℃）
により壊死組織片から除去した。清澄なライセートを、４℃で免疫沈降（ライセ
ートにつき、プロテインＡ／Ｇセファロース４０μｌ、抗ヒトＥＧＦ抗体１０８
．１を４μｌ）に３時間かけた。ＨＮＴＧ（２０ｍＭヘペス、ｐＨ７．５；１５
０ｍＭＮａＣｌ、１０％グリセリン；０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）７
５０μｌ中で連続して３回洗浄した後、免疫沈降物を３×Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液
４０μｌに溶解し、１００℃で５分間変性させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（勾配ゲル７
％〜１２％）にかけた。ニトロセルロースフィルター（アマシャム社）上に４℃
でゲルを３時間ブロットし（０．８ｍＡ／ｃｍ²）、ＥＧＦ受容体特異的リン酸
化を、ＥＣＬキット（アマシャム社）を用いて４Ｇ１０（ＵＢＩ番号０５−３２
１）抗体で検出した。

【００３２】１．９酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）による、胃癌細胞系培養上清中
のインターロイキン８（ＩＬ−８）濃度の定量ヒト胃癌細胞系（ＫａｔｏＩＩＩ、ＭＫＮ−１、ＭＫＮ−２８）を、３７℃お
よび７％ＣＯ₂で１０％ＦＣＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。
ｃａｇＡ−またはｃａｇＡ＋ヘリコバクターピロリ菌株と共にインキュベーショ
ン実験する２４時間前に、培地を取り替え、ＦＣＳを含まないＲＰＭＩ１６４０
倍地中で細胞を培養した（飢餓段階）。ＩＬ‐８誘導実験では、以下の化合物：ＰＤ１３４，３０８（最終濃度１μＭ；ガストリン／コレシストキニン（Ｃ
ＣＫ）−Ｂ受容体の阻害剤）；Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ（ＢＢ９４；最終濃度１μＭ、基質メタロプロテイナー
ゼ酵素の阻害剤）；［Ｇｌｕ⁵²］−ジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７、ＨＢ−ＥＧＦの分裂促進活性
を強くかつ特異的に抑制するジフテリアの非毒性変異体；ミタムラ等，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，１０１５−１０１９（１９９５）；最終濃度５μｇ／
ｍｌ）；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ１４７８（最終濃度２５０ｎＭ；ＥＧＦ受容体リ
ン酸化の阻害剤）；ＰＤ０９８，０５９（最終濃度１０μＭ；ＭＥＫ１の阻害剤）；を試験した
。

【００３３】細胞をこれらの阻害剤と共に、３７℃および７％ＣＯ₂で３０分間プレインキ
ュベートし、続いて、特異的阻害剤の存在下または非存在下で、ヘリコバクター
ピロリ菌を濃度１０⁷／ｍｌで２４時間インキュベートした。インキュベーショ
ン期間の後、細胞の上清を回収し、低速の遠心分離（５分、３０００ｒｐｍ）に
よって、細菌の壊死組織片から除去し、以下のように製造元の推奨（Ｒ＆Ｄ）シ
ステムに従って、ＩＬ‐８に対してＥＬＩＳＡ検出を行った：９６ウェルポリス
チレン製マイクロタイタープレートを、ヒトＩＬ‐８に対するマウスモノクロー
ナル抗体でコーティングした。青色染料を含むアッセイ希釈剤緩衝液１００μＬ
を各ウェルに添加した。次いで、細胞培養液の上清５０μＬをプレートに添加し
、続いてホースラディッシュペルオキシダーゼに共役したＩＬ‐８に対するポリ
クローナル抗体を１ウェルにつき１００μＬ添加した。試験サンプルを室温で２
．５時間インキュベートした。インキュベーション期間の後、ウェルを吸引し、
洗浄した。次いで、過酸化水素およびテトラメチルベンジジンを等量含有する基
質溶液２００μｌを各ウェルに加え、室温で３０分間インキュベートした。最後
に、２Ｎ硫酸５０μＬを各ウェルに加えて、反応を停止させた。各ウェルの光学
濃度の測定を、４５０ｎｍに設定されたマイクロプレートリーダーを用いて行っ
た。

【００３４】２．結果本発明者等の研究の発現データから、ヒト胃癌細胞系ＭＫＮ−１またはＭＫＮ
−２８のヘリコバクターピロリ感染は、プレンツェル（Ｐｒｅｎｚｅｌ）等によ
り記載されている（１９９９）「三重膜通過シグナル」（ＴＭＰＳ）カスケード
メンバーのｍＲＮＡ発現レベルに干渉することが明らかとなった。

【００３５】手短に言えば、このシグナル伝達経路は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ
）、プロテアーゼのＡＤＡＭ遺伝子ファミリーメンバーの活性化を導く、いまだ
に未知のシグナル伝達要素に関係する。プロテアーゼの活性化は、ＥＧＦＲリガ
ンドのＥＦＧ様ファミリーの膜結合型リガンドのプロセッシングを伴う。プロセ
ッシング後、それらは、オートクリンもしくはパラクリン様式で、ＥＧＦＲ活性
を刺激することが可能であり、この受容体の増大したチロシンリン酸化により反
映される。

【００３６】最初に、本発明者等は、ノーザンブロット分析でｃＤＮＡ配列からの発現デー
タを確認した。時間経過実験において、ＭＫＮ−１、ＳＴ４２およびＭＫＮ−２
８細胞を、ｃａｇＡ−（ＴＸ３０ａ、ＡＴＣＣ５１９３２）およびｃａｇＡ＋
（６０１９０、ＡＴＣＣ４９５０３）ヘリコバクターピロリ菌株と共に、０分
、４５分および１８０分間インキュベートした。図１に示すように、４５分以内
に、ＨＢ−ＥＧＦ−およびＡＤＡＭ２０−ｍＲＮＡ種の発現レベルの著しい増大
が観察された。さらに、後のタイムポイントを調べると、適切なｍＲＮＡ発現レ
ベルのさらに顕著な増大がはっきりと示されている。

【００３７】この観察から、ｃａｇＡ−／ｃａｇＡ＋ヘリコバクターピロリ菌株と共にヒト
胃癌細胞系をインキュベートすると、ＥＧＦＲの活性化を含む消化性潰瘍もしく
は胃癌などのヘリコバクターピロリにより引き起こされる疾患の確立に必須であ
る、ＴＭＰＳカスケードメンバーの発現レベルがアップレギュレートされること
が示されている。

【００３８】ＥＧＦＲのチロシンリン酸化が、ＴＸ３０ａおよび６０１９０ヘリコバクター
ピロリ菌株と共にヒト胃癌細胞系をインキュベートした際に誘導されるかどうか
を試験するために、ＭＫＮ−１およびＭＫＮ−２８細胞を、細菌数１×１０⁷／
ｍｌの濃度で上記のヘリコバクターピロリ菌株と共に、異なるタイムポイントで
（０、４５、９０、１５０分）インキュベートした。どちらのヘリコバクターピ
ロリ菌株も、ＥＧＦＲの増大したチロシンリン酸化を誘導した（図２）。この観
察は、ＨＢ−ＥＧＦおよびＡＤＡＭ２０‐ｍＲＮＡ発現レベルの増大に類似して
いる。

【００３９】ＥＧＦＲチロシンリン酸化が、ＴＭＰＳカスケードにより仲介される場合、関
与するシグナル伝達メンバーの１つの抑制によって、この活性化が抑止されるは
ずである。この可能性を検討するために、ＭＫＮ−１およびＳＴ４２細胞を、Ｃ
ＲＭ１９７、ＨＢ‐ＥＧＦの特異的阻害剤と共に３０分間プレインキュベートし
た。次いで、ＣＲＭ１９７の存在下または非存在下において、細胞数１×１０⁷
／ｍｌの濃度にてヘリコバクターピロリ菌株６０１９０で、両方の細胞系を１５
０分間刺激した。図３から分かるように、ＥＧＦＲのヘリコバクターピロリ誘導
チロシンリン酸化は、未処理細胞と比較して、ＣＲＭ１９７の存在下で完全に抑
止される。この実験により、ヘリコバクターピロリ誘導ＥＧＦＲ活性化には、少
なくとも一部、ＴＭＰＳカスケードが関与することが示されている。

【００４０】ヘリコバクターピロリにより誘導されるＩＬ‐８産生におけるＴＭＰＳカスケ
ードの関与（この病原体に対して、十分に特徴づけられた細胞反応）を調べるた
めに、ＴＭＰＳカスケードメンバーの特異的阻害剤存在下または非存在下で、Ｍ
ＫＮ−１およびＭＫＮ−２８胃癌細胞系をヘリコバクターピロリの６０１９０お
よびＴＸ３０ａ菌株と共にインキュベートした。ＩＬ−８イムノアッセイ（ＥＬ
ＩＳＡ）を用いて、ＩＬ−８の放出を細胞の上清から測定した。以下の化合物：ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）−Ｂ受容体の阻害剤（ＰＤ１３４３
０８）；基質メタロプロテイナーゼ酵素の阻害剤（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ＝ＢＢ−９４
；ＴＭＰＳシグナル伝達を妨げる）；ｐｒｏＨＢ−ＥＧＦの阻害剤（ＣＲＭ１９７、ＨＢ−ＥＧＦの分裂促進活性を
強くかつ特異的に抑制する、ジフテリア毒素の非毒性変異体；ミタムラ等，Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，１０１５−１０１９（１９９５）；ＴＭＰＳシグ
ナル伝達を妨げる）；上皮成長因子受容体の阻害剤（ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ１４７８；ＴＭＰ
Ｓシグナル伝達を妨げる）；ＭＥＫ１の阻害剤（ＰＤ０９８０５９）；を使用した。

【００４１】ヘリコバクターピロリｃａｇＡ−およびｃａｇＡ＋菌株と共にインキュベート
する前に、各阻害剤を添加した。ＰＤ１３４３０８の存在は、ヘリコバクターピ
ロリ誘導ＩＬ‐８産生に少し効果を及ぼしたが、ｂａｔｉｍａｓｔａｔおよびＣ
ＲＭ１９７の効果はより顕著だった（平均約２５％の抑制）。ＡＧ１４７８の場
合には、観察された抑制は３０〜７０％であり、ＰＤ０９８０５９により、ヒト
胃癌細胞におけるヘリコバクターピロリ誘導ＩＬ−８反応が約６０〜７５％劇的
に減少した（図４参照）。繰り返し行った実験では、本発明者等は、１μＭのＰ
Ｄ１３４３０８、５μＭのＢＢ‐９４、５μｇ／ｍｌのＣＲＭ１９７、２５０ｎ
ＭのＡＧ１４７８、１μＭのＰＤ０９８０５９の抑制効果を確認した。

【００４２】したがって、本発明者等は、以下の化合物：ＢＢ−９４、ＢＢ−２５１６、Ｂ
Ｂ−１１０１、ＢＢ−９４、ＧＩ１２９４７１、２‐アミノエチルアミド、ＣＴ
１４１８、ＲＯ３１−９７９０、ＣＧＳ２７０２３Ａ、ＰＤ１３４，３０８、Ｃ
ＡＭ−１０２８、Ｌ−３６５，２６０、スピログルミドＣＲ２６２２、ＹＭ−０
２２、ＲＢ２１０、ＲＢ２１３、ＬＹ−２８８，５１３、ＬＹ−２６２，６９１
、ＤＡ−３９３４、ＲＰ−７３８７０、Ｓ−０５０９、ＣＰ−２１２、４５４、
ＣＩ−１０１５、ＹＦ−４７６、Ｌ−７４０、０９３、Ｌａｖｅｎｄｕｓｔｉｎ
Ａ、ＡＧ１１２、ＡＧ１８３、ＡＧ１４７８、ＰＤ１５３０３５、Ｐ
Ｄ１５８７８０、ＺＤ１８３９、ＣＰ−３５８，７７４、ＣＧＰ５９３２６
、ＣＧＰ６０２６１、ＣＧＰ６２７０６が、ヘリコバクターピロリ誘発胃腸
疾患に干渉すると結論づける。

【００４３】更なる実験的セットアップにおいて、本発明者等は、ＴＭＰＳシグナル伝達で
主要な役割を果たす、胃癌細胞系ＭＫＮ−１およびＭＫＮ−２８におけるＨＢ−
ＥＧＦｍＲＮＡの発現に対する上述の阻害剤の影響を調べた。図５から分かる
ように、ヘリコバクターピロリ菌株６０１９０は、試験した細胞系におけるＨＢ
−ＥＧＦおよびｍＲＮＡ発現の増大を引き起こした。ＢＢ−９４、ＣＲＭ１９７
、ＢＢ−９４とＣＲＭ１９７の組み合わせまたはＡＧ１４７８が感染時に存在す
る場合には、病原体により誘導される、ＨＢ‐ＥＧＦのｍＲＮＡ蓄積の増加は著
しく低減した。ＰＤ０９８０５９を阻害剤として使用した場合には、それはほぼ
完全に消失した。他の実験において、本発明者等は、ＨＢ−ＥＧＦのｍＲＮＡ発
現のみが、ＴＭＰＳシグナル伝達の阻害剤に感受性であるだけでなく、ＡＤＡＭ
２０‐ｍＲＮＡの発現も感受性であることを実証することができた（図６）。ど
ちらのｍＲＮＡ発現レベルも、未処理細胞と比較すると、ＢＢ−９４およびＣＲ
Ｍ１９７の存在下で著しく低減する。これらの結果から、ＴＭＰＳシグナル伝達
の主要プレイヤーは、疾患発生の原因となる胃癌細胞系のヘリコバクターピロリ
感染によって誘導され、オートクリンシグナル伝達カスケードが確立されること
が明確に示されている。

【００４４】理論に拘泥する意図はないが、本発明者等の結果により、以下のモデルが確立
される（図７）：ストレス誘発性シグナル伝達経路を経て、ヘリコバクターピロ
リ感染は、ＥＧＦＲ媒介ダウンストリームシグナル伝達現象を引き起こすＴＭＰ
Ｓカスケードメンバーの発現に関与する、特異的細胞防御プログラムを導く。根
絶する前のヘリコバクターピロリ感染の重篤さに応じて、本質的にヘリコバクタ
ーピロリ誘発疾患発症の原因となるオート‐パラクリンシグナル伝達カスケード
が現れる。このモデルでは、ヘリコバクターピロリにより誘発されるｐＨ変化に
より、ＧＰＣＲ‐シグナル伝達の活性化または慢性的な刺激でさえも、ｐＨ変化
に対する応答として引き起こされるだろう。ＧＰＣＲおよびＴＭＰＳカスケード
に関与する、この制御されていないシグナル伝達現象シグナル伝達現象は、病原
性表現型の確立にも寄与するだろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】ノーザンブロット分析でのｃＤＮＡ配列からの発現データの確認結果。

【図２】ＥＧＦＲのチロシンリン酸化が、ＴＸ３０ａおよび６０１９０ヘリコバ
クターピロリ菌株と共にヒト胃癌細胞系をインキュベートした際に誘導されるか
どうかの試験結果。

【図３】ＥＧＦＲチロシンリン酸化が、ＴＭＰＳカスケードにより仲介される場
合、関与するシグナル伝達メンバーの１つの抑制によって、この活性化が抑止さ
れるかの試験結果。

【図４】各阻害剤のヘリコバクターピロリ誘導ＩＬ‐８産生に対する影響試験結
果。

【図５】胃癌細胞系ＭＫＮ−１およびＭＫＮ−２８におけるＨＢ−ＥＧＦｍＲ
ＮＡの発現に対する阻害剤の影響調査結果。

【図６】ＡＤＡＭ２０‐ｍＲＮＡの発現も感受性であることを実証する結果。

【図７】疾患発症の原因となるシグナル伝達カスケードの発現モデル。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 1/00 Ａ６１Ｐ 1/00 29/00 29/00 31/04 31/04 35/00 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA17 AA20 AA27 MA02 ZA661 ZA662 ZB111 ZB112 ZB261 ZB262 ZB351 ZB352 4C085 AA03 AA38 BA20 EE03 EE06 FF24 4C086 AA02 BB02 MA01 MA02 MA03 MA04 MA05 ZA66 ZB11 ZB26 ZB35 ZC20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】哺乳類におけるヘリコバクター媒介疾患を治療または予防す
る薬物の製造方法であって、前記薬物が、（ａ）ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）−Ｂ受容体の阻害剤、（ｂ）プロテインキナーゼＣの阻害剤、（ｃ）膜結合型メタロプロテイナーゼの阻害剤、（ｄ）成長因子受容体活性化の阻害剤、（ｅ）成長因子受容体キナーゼ活性の阻害剤、（ｆ）分裂促進因子活性化プロテインキナーゼカスケードの阻害剤、及び、（ｇ）転写阻害剤、から選択される三重膜通過シグナル伝達カスケードの少な
くとも１種の阻害剤を活性成分として含有する方法。
【請求項２】前記ヘリコバクター媒介疾患が、胃腸癌および炎症疾患から
選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】前記ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）−Ｂ受容体の
阻害剤が、ペプチド、アミノ酸誘導体、ベンゾジアゼピン、ジペプトイド、ピラ
ゾリジノン、キナゾリジノン、二環式ヘテロ芳香族化合物、ウレイドアセトアミ
ド、ウレイドベンズアゼピンおよびウレイドメチルカルバモイルフェニルケトン
から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】前記プロテインキナーゼＣの阻害剤が、インドールカルバゾ
ール、ビスインドリルマレイミド、バラノール類似体、アルキル‐リゾリン脂質
、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドから選択される、請求項１または２に
記載の方法。
【請求項５】前記膜結合型メタロプロテイナーゼの阻害剤が、ヒドロキサ
ム酸基およびＴＩＭＰファミリーメンバーを含有する化合物から選択される、請
求項１または２に記載の方法。
【請求項６】前記成長因子受容体活性化の阻害剤が、抗受容体抗体または
そのフラグメントから選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】前記成長因子受容体キナーゼ活性の阻害剤が、フェニルアミ
ノ‐キナゾリン、置換ピリジミン、チルフォスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、
ラベンダスチン（ｌａｖｅｎｄｕｓｔｉｎ）およびジアニリノフタルイミドから
選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】前記分裂促進因子活性化プロテインキナーゼカスケード阻害
剤の阻害剤が、ＭＡＰＫＫＫ（Ｒａｆ）の阻害剤、ＭＡＰＫＫ（Ｍｅｋ）の阻害
剤およびＭＡＰＫ（Ｅｒｋ）の阻害剤から選択される、請求項１または２に記載
の方法。
【請求項９】前記転写阻害剤の阻害剤が、一般的な転写阻害剤およびｃ‐
ｆｏｓ特異的転写阻害剤から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】前記薬物が、クラス（ａ）〜（ｇ）の化合物から選択され
る少なくとも２種の活性成分を含有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】前記薬物が、化合物（ａ）〜（ｇ）から選択される少なく
とも１種の活性成分と、ヘリコバクター感染に対して有効な他の活性成分との組
み合わせを含む、請求項１、２または９に記載の方法。
【請求項１２】前記の他の活性成分が、抗生物質およびプロトンポンプ阻
害剤から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】前記の他の活性成分が、ヘリコバクターピロリワクチンか
ら選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】前記薬物が、化合物（ａ）〜（ｇ）から選択される少なく
とも１種の活性成分と、免疫原性アジュバントとの組み合わせを含む、請求項１
、２または９に記載の方法。
【請求項１５】前記ヘリコバクターが、ヘリコバクターピロリｃａｇＡ＋
菌株である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。