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JP2003513065A - Ｍｉｆアンタゴニスト活性を有する化合物 - Google Patents

Ｍｉｆアンタゴニスト活性を有する化合物

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Publication number
JP2003513065A
JP2003513065A JP2001534759A JP2001534759A JP2003513065A JP 2003513065 A JP2003513065 A JP 2003513065A JP 2001534759 A JP2001534759 A JP 2001534759A JP 2001534759 A JP2001534759 A JP 2001534759A JP 2003513065 A JP2003513065 A JP 2003513065A
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JP
Japan
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compound
mif
amino acid
formula
compounds
Prior art date
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Pending
Application number
JP2001534759A
Other languages
English (en)
Inventor
ユーセフ・アル−アベッド
リチャード・ブカラ
Original Assignee
ザ・ピコワー・インスティチュート・フォー・メディカル・リサーチ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ザ・ピコワー・インスティチュート・フォー・メディカル・リサーチ filed Critical ザ・ピコワー・インスティチュート・フォー・メディカル・リサーチ
Publication of JP2003513065A publication Critical patent/JP2003513065A/ja
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Abstract

(57)【要約】 ＭＩＦ(マクロファージ遊走阻止因子)アンタゴニスト活性を有する、アミノ酸コンポーネントおよびベンズアルデヒドコンポーネントを含む、所望により置換されたシッフ塩基縮合生成物(およびそのカルバアナログ)の種類を開示する。当該化合物は、自己免疫疾患、喘息、関節炎、ＥＡＥ、ＡＲＤＳおよび種々の型の敗血症および敗血症ショック、ならびに例えば腫瘍増殖および新血管新生を含むＭＩＦ応答を基礎とすることを特徴とする他の病状のような、炎症作用または炎症前サイトカイン応答を含む種々の疾患の処置に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 関連出願への相互参照 本願は、１９９９年１０月２９日に出願された米国仮出願番号第６０／１６２
，４６７号の利益を主張し、出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】 発明の技術分野 本発明は、アミノ酸コンポーネントおよびベンズアルデヒドコンポーネントを
含み、場合により置換されたシッフ塩基縮合物の類（およびそれらのカルバ（ca
rba）アナログ）を提供する。それらはＭＩＦ（マクロファージ遊走阻止因子）
アンタゴニスト活性を有する。特に、該化合物は、自己免疫疾患、喘息、関節炎
、ＥＡＥ、ＡＲＤＳ、並びに敗血症および敗血症性ショックの様々な形態などの
、炎症作用または前炎症のサイトカイン反応に関わる多様な疾患や、例えば癌の
成長および新血管形成を含む、ＭＩＦ反応に基づくことを特徴とする他の症状を
処置するのに有用である。
【０００３】 発明の背景 ヒトＭＩＦは、１９８９年に最初にクローニングされ、数々の研究でその活性
が調べられてきた。ＭＩＦは、初めて発見されたリンホカインであり、元々はそ
れがインビトロでモルモットのマクロファージの遊走を阻止する能力によって同
定された（Bloom & Bennett, Science 153 : 80-82, 1966 ; David, Proc. Natl
. Acad. Sci. USA 56 : 72-77, 1966）。この活性を考慮して、炎症および免疫
系におけるＭＩＦ活性の役割が調べられたが、正確なＭＩＦの役割は、局所また
は全身性炎症反応のどちらにおいても、この初期の仕事のうちには明確にされな
いままであった。同様に、他の生理学および病態生理学におけるＭＩＦの役割は
、今なお明らかにされているところである。
【０００４】 ＭＩＦは、遅延型超過敏反応に関連し（Bloom & Bennett, 1966, 前出; David
, 1966, 前出）、レクチンで活性化されたＴ細胞によって産生され（Weiser et
al., J. Immunol. 126 : 1958-1962, 1981）、そしてマクロファージの付着、貪
食および抗腫瘍（tumoricidal）作用を高める（Nathan et al., J. Exp. Med. 1
37 : 275-288, 1973 : Nathan et al., J. Exp. Med. 133 : 1356-1376, 1971 ;
Churchill et al., J. Immnol. 115 : 781-785. 1975）と報告された。残念な
ことに、これらの初期の研究の多くは、混ざり合った培養の上清を使用しており
、これは後にＩＦＮ−γおよびＩＬ−４などの、やはりマクロファージ遊走阻止
活性を有する他のサイトカインを含んでいることが明らかになった（Mclnnes &
Rennick, J. Exp. Med. 167 : 598-611, 1988 ; Thurman et al., J. Immunol.
134 : 305-309, 1985）。
【０００５】 組換えヒトＭＩＦは、元々はヒトＴ細胞ライブラリーからクローニングされ（
Weiser et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 : 7522-7526, 1989)、血液由
来のマクロファージを活性化して細胞内の寄生物および腫瘍細胞をインビトロで
死滅させ、ＩＬ−１βおよびＴＮＦαの発現を刺激し、一酸化炭素合成を誘導す
ると示された（Weiser et al., J. Immunol. 147 : 2006-2011, 1991 ; Pozzi e
t al., Cellular Immunol. 145 : 372-379, 1992 ; Weiser et al., Proc. Natl
. Acad. Sci. USA 89 : 8049-8052, 1992 ; Cunha et al., J. Immunol. 150 :
1908-1912, 1993）。これら初期の報告のいくつかから得られる結論は、用いた
組換えＭＩＦ調製物中に生体活性のある細胞分裂促進性混入物が存在するために
混乱しているが、ＭＩＦの強い前炎症活性は、この複雑な要因に煩わされていな
い他の研究で確認された（Bucala, the FASEB Journal 10:1607-1613, 1996 に
概説されている）。さらに最近のＭＩＦ研究では、精製された形態の組換えＭＩ
Ｆの生産と、ＭＩＦ特異的なポリクローナルおよびモノクローナル抗体の開発を
利用して、様々な正常な恒常性の環境および病態生理学的な環境におけるＭＩＦ
の生物学的役割を確立した（例えば、Rice et al., Annual Reports in Medicin
al Chemistry 33 : 243-252, 1998 に概説されている）。ＭＩＦの「再発見」後
のこれらの報告の最も重要な洞察の中に、ＭＩＦが免疫系のサイトカイン産物で
あるだけでなく、内分泌系、特に下垂体のホルモン様産物でもあるという認識が
あった。さらに、この最近の仕事によって、グルココルチコイド（内因性で放出
されたものと治療的に投与されたものの両者）の抗炎症作用の対立制御因子とし
てのＭＩＦの強力な活性が明示された。激烈な炎症反応を制限し、抑制するとい
うグルココルチコイドの正常な活性がＭＩＦによって阻害されるという効果があ
り、内因性のＭＩＦ反応は、様々な炎症疾患および症状の原因または憎悪因子で
あるように思われる（Donnelly and Bucala, Molecular Medicine Today 3 : 50
2-507, 1997）。ＭＩＦは、腫瘍の成長および新血管形成（脈管形成）にも関連
付けられており、腫瘍学および癌の処置の分野におけるＭＩＦアンタゴニストに
対するさらなる必要性を示唆している（Chesney et al., Molecular Medicine 5
:181-191, 1999)。
【０００６】 この実験上の仕事は、ＭＩＦ阻害剤の必要性を明らかにする。そしてＭＩＦの
アンタゴニストが同定され、多数の炎症疾患、サイトカインが介在する毒性、喘
息、および自己免疫疾患（例えば、リウマチ様関節炎、移植片対宿主疾患、イン
シュリン依存性糖尿病、および様々な形態の狼瘡）に対する活性を含む、多様な
治療的活性を有することが示されてきた。しかし、これらのＭＩＦアンタゴニス
ト物質は、ＭＩＦに結合するように（例えば、抗体）、そしてその発現を防止す
るように（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）設計された、「生物学的
な」物質であった。残念なことに、そのような生物学的な物質には、その臨床的
有用性に関して必然的な制限がある。従って、当分野では、ＭＩＦアンタゴニス
トとして機能し、より大きい重合体のタンパク質や核酸に基づく治療物質に比べ
て有機低分子治療剤の利益をさらに有する、有機低分子を発見、開発する必要が
ある。
【０００７】 （本発明の概要） 本発明は、遊離形または医薬的に許容される塩形の、式Ｉで表される化合物を
提供する：
【化３】 式中、Ｘは、窒素または炭素； Ｙは、Ｏ、Ｃ(Ｒ１)２またはＳ； Ｚは、ＯＨ、Ｒ１、-ＣＨ２-Ｎ(Ｒ１)２またはＳＲ１； Ｒ１は、独立してＨ、直鎖または分岐したＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐
したＣ２−Ｃ６アルケニルもしくはＲ１が炭素に結合している場合（Ｒ１がＮま
たはＳに結合していない場合）、直鎖または分岐したＣ１−Ｃ６アルコキシ； Ｒ２は、独立してＨ、ＯＨ、Ｒ１、Ｎ(Ｒ１)２、ＳＲ１またはハロゲンの単独ま
たは複合置換基； Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、Ｒ１またはハロゲン；＊ およびＣの印は、潜在的に不斉炭素原子を示し、それらのいずれかまたは両者
が不斎炭素原子である場合、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１およびＲ３のそれぞれについて、
すべてのジアステレオマーが式Ｉに包含される； Ｒは、天然α−アミノ酸の側鎖であって、ＹがＯであり、ＺがＯＨである場合に
は、Ｘ、ＹおよびＺと共に、置換されていることもあるベンズアルデヒド部分に
対して、シッフ塩基または還元シッフ塩基（ＸがＮである場合）もしくはそれら
のカルバアナログ（ＸがＣである場合）アナログとして結合した芳香族、脂肪族
または複素環ＤまたはＬ−α−アミノ酸部分を表わすか、またはＲは、ＹがＯ以
外またはＺがＯＨ以外である場合には、Ｘ、ＹおよびＺと共に、置換アミノ酸部
分、アミノ酸部分のアナログまたは保護アミノ酸部分を表わす。
【０００８】 Ｒと一緒に保護型Ｌ脂肪族、または芳香族アミノ酸部分を形成するように、Ｘ
がＮ、ＹがＯ、そしてＺがＯＭｅであるのが好ましい。Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３ がＨであるのが好ましい。更にはＲ２が、パラ位にパラ−ヒドロキシベンズアル
デヒド部分を含むのがより好ましい。
【０００９】 これらの好ましい化合物の好ましいサブセットが、式IIにより示され、式中、
Ｒは、Ｈ（化合物１）；ＲはＣＨ３（化合物２またはＬアラニンに相当する化合
物２ａとＤアラニンに相当する化合物２ｂ）；Ｒは、−ＣＨ(ＣＨ３)２（化合物
３）；Ｒは、−ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２（化合物４）；Ｒは、−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ ２ ＣＨ３（化合物５）；Ｒは、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３（化合物６）；およびＲ
は、−ＣＨ２ＯＨ（化合物７）である。 式II：
【化４】
【００１０】 更に好ましくは、Ｒと一緒に保護Ｌ芳香族アミノ酸部分を形成するように、Ｒ
が自然発生的なαアミノ酸の側鎖、ＸがＮ、ＹがＯ、そしてＺがＯＭｅである。
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＨであるのが最も好ましい。Ｒ２が、パラ位でパラ−
ヒドロキシベンズアルデヒド生成物を含むのが最も好ましい。Ｒが−ＣＨ２−フ
ェニル（化合物８）、またはＲが−ＣＨ２−パラ−ヒドロキシフェニル（化合物
９）、またはＲが−ＣＨ２−インドリル（化合物１０）であるのが最も好ましい
。
【００１１】 本発明は、薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に、薬学的に許容され
るその塩として、式Ｉで表される化合物を含む医薬組成物を更に提供する。 本発明は、関節炎、増殖性管疾患、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）、サイト
カインによる毒性、敗血症、敗血性ショック、乾癬、インターロイキン２毒性、
喘息、およびＭＩＦにより起こる症状を含む癌または炎症性疾患の処置または予
防のために、薬剤において使用される、または薬剤の製造のために、前述のいず
れかを含む医薬組成物として、式Ｉで表される化合物、または薬学的に許容され
るその塩を更に提供する。本発明は、関節炎、増殖性管疾患、ＡＲＤＳ（急性呼
吸窮迫症候群）、サイトカインによる毒性、敗血症、敗血性ショック、乾癬、イ
ンターロイキン２毒性、喘息、ＭＩＦにより起こる症状、関節リウマチを含む自
己免疫疾患、インシュリン非依存性糖尿病、多発性硬化症、移植片体宿主病、ル
ープス様症候群、または局在性のもしくは全身性のＭＩＦ放出あるいは合成によ
り特徴付けられる任意の症状を処置したり予防したりする方法を更に提供する。
【００１２】 ステロイド（例えば抗炎症性グルココルチコイド）の抗炎症効果を抑制するＭ
ＩＦの活性により、式Ｉで表される化合物は、内因的に発生するステロイドと外
因的に投与されたステロイド性抗炎症剤との両方の活性および治療上の有用性を
高める利用性が更に見出される。そのような有用性は、場合によっては、ステロ
イド療法の必要性の減少（例えば低投与量化または頻度を減らす；強さを抑え薬
剤；全身投与の必要性の低下）、またはステロイド投与に関連した副作用の減少
により最も明らかとなり得る。ＭＩＦ拮抗剤（そして特には式Ｉで表される化合
物）投与の有用性は、本発明のＭＩＦ拮抗剤のみを利用する単剤療法、または追
加的に、制限はないけれども特に抗炎症ステロイドを含む抗炎症剤を用いる併用
療法として理解され得る。そのような併用療法は、ＭＩＦ拮抗剤(特には式Ｉで
表される剤）を少なくとも１つの抗炎症剤（ステロイド性もしくは非ステロイド
性の抗炎症剤であってもよい）と混合する単剤あるいは医薬組成物の投与を通じ
て、または個々の剤または医薬組成物（例えば、式Ｉで表されるＭＩＦ拮抗剤を
含む１つの組成物、および少なくとも１つのステロイド性もしくは非ステロイド
性の抗炎症剤を含む少なくとも１つの他の組成物）を併用した投与を通じて、ま
たはその双方を通じて達成され得る。
【００１３】 （図面の簡単な説明） 図１は、本発明のＭＩＦ拮抗剤が、血清による細胞増殖を、失活した抗ＭＩＦ
モノクローナル抗体の抑制されている活性と同程度まで抑制可能であることを示
している。図１は、静止期のＮＩＨ/３Ｔ３線維芽細胞群のアッセイにおいて、
血清による細胞増殖を阻害する抗ＭＩＦモノクローナル抗体(１００μg/ml）対
Ｌ-トリプトファン/パラ−ヒドロキシベンズアルデヒドシッフ塩基（化合物１０
；１０μM）対Ｄ−トリプトファン/パラ−ヒドロキシベンズアルデヒドシッフ塩
基（化合物１０ｂ；１０μM）の活性の比較を示している。増殖効果はＭＩＦ生
理活性に依存しているので、ＭＩＦの失活は、増殖の阻害に反映され、そしてこ
の阻害効果により活性ＭＩＦ拮抗剤の臨床上の有用性が予測される。
【００１４】 図２は、培養マウス胚線維芽細胞において誘導されたアポトーシスからのＭＩ
Ｆによる保護を失活させる本発明のＭＩＦ拮抗剤（そしてさらには特に式Ｉに記
載の化合物）の活性を比較しており、アポトーシス応答（細胞死）は、血清の回
収により開始する。このアッセイにおいて、血清の回収はアポトーシス応答を開
始させるが、細胞は、培地への組換えＭＩＦ（ｒＭＩＦ）の添加により救済可能
である。化合物１０で処置した培地中にｒＭＩＦを添加するにもかかわらず、ア
ポトーシスが持続することより明らかなように、ＭＩＦ拮抗化合物１０ｂ（Ｄ−
トリプトファン/パラ−ヒドロキシベンズアルデヒドシッフ塩基）ではなくて、
化合物１０（Ｌ−トリプトファン/パラ−ヒドロキシベンズアルデヒドシッフ塩
基）による処置は、培地に添加したｒＭＩＦを失活する際のモノクローナル抗Ｍ
ＩＦ抗体処置と同じぐらい効果的であった。用量と相関した処置の効果が注目さ
れる。このインビトロでのＭＩＦ生理活性に関する拮抗効果により、活性ＭＩＦ
拮抗剤の臨床上の有用性が予測される。
【００１５】 （本発明の詳細な説明） ＭＩＦは、互変異性化反応（Rosengren et al., Molecular Medicine 2: 143-
149, 1996）を触媒することが見出され、現在同定される最も活性のある基質は
、非生理学的なドーパクロム（dopachrome）のＤ体であるけれども、ＭＩＦが互
変異性化反応を触媒可能であるという見解により、ＭＩＦ酵素活性の阻害剤を治
療上のＭＩＦ拮抗剤として開発する可能性が示される（1996年2月16日付で出願
され、その開示が参考として本明細書に組み込まれた米国特許出願番号08/602,9
29参照）。
【００１６】 本発明により、特に特定がない限り、３個またはそれ以上の炭素原子を有する
アルキル基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。加えて、４個またはそれ
以上の炭素原子を有するアルケニル基またはアルキニル基、あるいは３個の炭素
原子を有するアルコキシ基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。式Ｉで表
される化合物は、１個またはそれ以上の不斉中心を含んでいてもよいし、別の互
変異性体またはジアステレオマーとして存在することも可能である。構造活性デ
ータは、進歩性のある類に属する幾つかの化合物に対して、あるエナンチオマー
が他よりも治療上の活性が高いことを示しているけれども、本発明は混合物も個
々の異性体または互変異性体も両方包含する。
【００１７】 化合物の分類は、アミノ酸部分の化学的特性に関して、統合され、更に特徴付
けられる。１つのサブセットからなる化合物群は、保護脂肪族アミノ酸を含むシ
ッフ塩基である。これらは、化合物１−７を包含する。
【化５】
【００１８】 本発明は、ＭＩＦが、ドーパクロム関連ＭＩＦ基質の無色の生成物への互変異
性化を触媒するインビトロでの酵素活性の阻害により、ＭＩＦ拮抗剤と同定され
る化合物および化合物の利用を包含する。ＭＩＦトートメラーゼ活性の阻害につ
いてのこのアッセイにより、ＭＩＦ拮抗性治療剤としての臨床上の有用性が予測
できる。上記の表（式IIに係る化合物１−７を記載）において、当該ＭＩＦトー
トメラーゼアッセイでは、表に示すように、ＩＣ５０値は、化合物1−３、およ
び６−７に対して得られた。特に反対が示されなければ、ＭＩＦトートメラーゼ
アッセイにおける試験化合物の阻害活性を示す阻害濃度（例えばＩＣ５０または
他の活性指標）は、本明細書中で参考にされる（例えばBendrato et al. Bioche
mistry 36: 15356-15362, 1997において更に詳細に示されている）。
【００１９】 ＭＩＦドーパクロムトートメラーゼ活性についてのアッセイを実施する一般法
は、Ｌ−３,４−ジヒドロキシフェニルアラニンメチルエステルのようなＤＯＰ
Ａ−関連基質の前駆体の調製および酸化から開始する。典型的には過ヨウ素酸ナ
トリウムによるこの酸化により、相当するドーパクロム誘導体(例えばＬ−３,５
−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−５−オキソ−２Ｈ−インドール−２−カルボン酸
メチルエステル）を得、これは典型的にはオレンジ色であり、トートメラーゼと
してのＭＩＦの活性についての光度測定アッセイに使用される都合のよい基質を
含んでいる。ＭＩＦ（典型的には最終濃度が５０〜１０００ng/mlで組換えＭＩ
Ｆを精製調製する）を添加すると、有色のドーパクロム基質の（本実施例におい
ては)無色の５,６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸メチルエステル生
成物への互変異性化が起こる。ＭＩＦの酵素活性は、典型的には４７５nm（ある
いは０.５nMを超える基質濃度に対しては５５０nm）でモニターして、適当な緩
衝液中におけるドーパクロム関連基質の有色の溶液の脱色率として測定した。Ｍ
ＩＦトートメラーゼ活性に関する試験化合物の（すなわち阻害剤としての）効果
が、その試験阻害化合物の非存在中で実施されるコントロールアッセイと比較し
たキネティクスの変化を注目することにより測定され得るように、試験化合物が
そのアッセイ溶液中に包含されてもよい。特には、ＭＩＦトートメラーゼアッセ
イは、原則的には以下に示すように実施される：
【００２０】 Ｌ-３,４-ジヒドロキシフェニルアラニンメチルエステル(例えば、Sigma D-15
07)、ドーパクロム(dopachrome)基質前駆体を、ｄｄＨ２Ｏ中、４ｍＭ溶液で調
製する。過ヨウ素酸ナトリウムをｄｄＨ２Ｏ中、８ｍＭ溶液で調製する。アッセ
イ緩衝液(５０ｍＭ リン酸カリウム／１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ６．０)を調製する
。精製組換えＭＩＦを、最終濃度約７００ｎｇ／ｍｌでＭＩＦを都合よく提供す
るストック溶液として、１５０ｍＭ ＮａＣｌ／２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液(ｐＨ
７．４)中に調製する。アッセイを開始する直前に、ドーパクロム基質前駆体溶
液３．６ｍｌ、過ヨウ素酸溶液２．４ｍｌおよびアッセイ緩衝液４．０ｍｌを合
わせ、均一混合物とする(ドーパクロム基質のこの調製物は、１分後のアッセイ
の使用およびその後の約３０分間のアッセイの使用に適当である)。次いで、試
験化合物(典型的にＤＭＳＯ中に濃縮ストックとして調製する)およびＭＩＦを、
アッセイ緩衝液０．７ｍｌにドーパクロム基質溶液０．３ｍｌを加えた溶液と合
わせ、均一混合物中、望ましい最終濃度の試験化合物を提供し、このアッセイ混
合物の光学密度を４７５ｎｍでモニターする。典型的に、ＯＤ４７５を、０−６
０秒間、５秒毎に記録し、所定の時点のＯＤ４７５を、平行するアッセイと比較
し、この場合、ＭＩＦは添加されないか、または試験化合物は取り除いておく。
当該試験化合物によるＭＩＦトートメラーゼ活性の阻害は、アッセイ混合物の脱
色(de-colorization)阻害により、典型的に２０秒の時点で測定する。ＭＩＦト
ートメラーゼ活性を５０％阻害し得る阻害剤濃度に相当するＭＩＦトートメラー
ゼ阻害活性を有する化合物のＩＣ５０値は、数種の阻害剤濃度でＭＩＦトートメ
ラーゼアッセイの結果の内挿により測定する。これらのＩＣ５０値を試験化合物
の臨床性ＭＩＦ阻害活性の有用な予報値として用いる。
【００２１】 好ましい化合物の第二の典型的なサブセット(subset)は、化合物８−１０であ
り(以下参照)、それらは、保護Ｌ芳香族アミノ酸のシッフ塩基である。化合物１
０が、最も強力なＭＩＦアンタゴニスト活性を示し、ＩＣ５０ ５μＭであり、
その一方、上記トートメラーゼアッセイにおいて化合物９は１０μＭ ＩＣ５０
を有し、化合物８は５０μＭのＩＣ５０を示した。
【化６】 Ｓエナンチオマーを生ずるＤ芳香族アミノ酸から作成された２つの相当な構造
は、化合物８ｂおよび１０ｂであり、それらは、有意に低いＭＩＦアンタゴニス
ト活性を示す。
【化７】 化合物１１−１３は、以下に示すようにアミノ酸／パラ−ヒドロキシベンズア
ルデヒド(hydroxybenzyaldehyde)シッフ塩基化合物８、９および１０の芳香族Ｒ
エナンチオマーの生成を減少する(この場合、“Ｎ．Ａ．”は、当該化合物が、
１００μＭまでの濃度でＭＩＦトートメラーゼ活性の阻害剤としての活性を有し
なかったことを示す)。
【化８】 化合物(化合物１４−１６)の更なるサブセットは、ベンズアルデヒドを有する
保護芳香族アミノ酸の縮合産物である。
【化９】 更なる置換シッフ塩基化合物は、以下の化合物１７−２１として示す。
【化１０】 化合物２２−２５は、ベンズアルデヒド部分のパラ位にハロゲン置換またはメ
チル置換(水酸基の代わりに)を有し、その一方、アミノ酸部分は、Ｌチロシンの
メチルエステルに相当する。
【化１１】 化合物２６[式中、ＺはＯ−tertブチルであり、ＸはＮであり、Ｒはチロシン
の側鎖であり、ＹはＯであり、Ｒ２はパラ−ヒドロキシであり、Ｒ３はＨおよび
Ｒであり、ＸおよびＹは同時に保護芳香族アミノ酸部分を含む]を以下に示し、
同時に、ＭＩＦトートメラーゼアッセイにおいて濃度１００μＭで存在するとき
に、この化合物に関し測定される阻害値を示す。
【化１２】 化合物２７−２９(以下参照)は、パラ位でハロゲンで置換されたベンズアルデ
ヒド部分と共に、保護Ｌ−Ｔｒｐアミノ酸部分を含む。
【化１３】
【００２２】 医薬組成物 本発明の化合物は、ＭＩＦ応答、それにより、ＭＩＦは細胞性源から放出され
、ＭＩＦ産生が促進されることを特徴とする多くの疾患および異常を処置および
防止する薬理組成物の利用を有する。本発明の化合物を、それ単独で、またはＭ
ＩＦ放出を特徴する種々の病状を処置または改善する用量を適当な担体または賦
形剤と混合した医薬組成物でヒト患者に投与し得る。治療有効量とは、更に、Ｍ
ＩＦトートメラーゼ活性およびＭＩＦ生体活性を阻害するに十分な化合物量をい
い、その阻害は、当業者が標的ＭＩＦ活性を阻害するための必要用量の化合物を
決定し得るような種々の濃度で生じ得ると理解される。治療的に有効用量を、単
独で投与し得るか、または腫瘍増殖または関連疾患の他の処置と組み合わせる補
助的療法(adjunctive therapy)として投与し得る。本出願の化合物の製剤および
投与のための技術は、"Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishin
g Co., Easton, PA, 最新版に見ることが出来る。
【００２３】 適当な投与経路には、例えば、局所、皮膚、経口、直腸、経粘膜(transmucosa
l)または腸への投与；筋肉内、皮下、髄内への注射、および鞘内、直接の心室内
(direct intraventricular)、静脈内、腹膜内、鼻腔内または眼球内への注射を
含む非経口送達を含み、所望により、ジポット(depot)または徐放製剤(sustaine
d release formulation)である。ある実施態様では、局所投与は、クリーム、乳
化剤およびオイルとして賦形剤を利用する。さらなる実施態様では、局所投与は
、ジメチルスルフォキシド、メタノール、ラウリルアルコール、ラウリン酸、ア
ラキドン酸およびＣ１０−Ｃ２０ポリヒドロキシ酸およびチモールからなる群か
ら選択する皮膚吸収エンハンサーを利用する。
【００２４】 更に、本発明の化合物を標的化ドラッグデリバリーシステム、例えば、リポソ
ームで投与し得る。
【００２５】 本発明の医薬組成物および化合物は、それ自体既知の方法で、例えば、典型的
な混合、溶解、ドラジェー作成、浮揚(levitating)、エマルジョン化、カプセル
化、エントラップ化または凍結乾燥の処理の手段により、製造され得る。そのた
め、本発明の使用のための医薬組成物は、医薬的に使用し得る製剤中への活性化
合物の処理を促進する賦形剤および補助剤を含む１以上の薬理学的に許容される
担体を用いる典型的な方法で製剤化され得る。適当な製剤は、選択する投与の経
路に依存する。
【００２６】 注射の場合、本発明の化合物は、水溶液中に、好ましくは、Hank's溶液、Ring
er's溶液または生理学的食塩水緩衝液のような薬理学的に許容される緩衝液中に
製剤化され得る。経粘膜投与の場合、浸透すべきバリアに適当な浸透剤を製剤中
に用いる。その浸透剤は当分野に既知である。
【００２７】 経口投与の場合、当該化合物は、当分野に既知の医薬的に許容される担体と活
性化合物を合わせることにより、容易に製剤化し得る。その担体は、本発明の化
合物を、処置すべき患者による経口摂取のための、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセ
ル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化し得る。経口使
用のための医薬製剤は、固体賦形剤と化合物を合わせること、所望によりその得
られた混合物をすりつぶすこと、および顆粒の混合物を処理することにより、必
要ならば、適当な補助剤を加えて錠剤または糖衣錠のコアを得ることにより、得
ることができる。適当な賦形剤は、特に、ラクトース、シュクロース、マンニト
ール、ソルビトールを含む糖のような増量剤であり：例えば、メイズデンプン、
小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム
、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボ
キシメチルセルロース(sodium carboxymethylcellulose)、および／またはポリ
ビニルピロリドン(ＰＶＰ)のようなセルロース製剤である。望ましいならば、架
橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウ
ムのようなその塩といった、崩壊剤を加えることができる。
【００２８】 糖衣錠コアは、適当なコーティングで提供する。この目的のため、濃縮糖溶液
を用い、それは、所望により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、
カルボポルゲル(carbopol gel)、ポリエチレングリコール、および／または二酸
化チタン、ラッカー溶液および適当な有機溶媒または溶媒混合物を含み得る。染
料または色素を添加し、同定のために錠剤または糖衣錠コーティングを添加する
か、または活性化合物用量の種々の組み合わせを特徴付けるため添加し得る。
【００２９】 経口的に使用し得る医薬製剤には、ゼラチンから作られるプッシュフィットカ
プセル(push-fit capsule)およびゼラチンから作られる軟シール化カプセル、な
らびにグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤が含まれる。当該プッシ
ュフィットカプセルには、ラクトースのような増量剤、デンプンのような結合剤
および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤および所
望により安定剤と混合して活性成分が含まれる。軟カプセルでは、活性化合物は
、脂肪油、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールのような適当な液
体中に溶解または懸濁され得る。更に、安定剤を添加し得る。経口投与のための
すべての製剤は、その投与に適当な用量とすべきである。
【００３０】 頬側投与の場合、当該組成物は、典型的な方法で製剤化した錠剤またはトロー
チ剤の形にし得る。
【００３１】 吸入投与の場合、本発明に使用の化合物は、適当なプロペラント、例えば、ジ
クロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロ
エタン、二酸化炭素または他の適当なガスを用いる加圧化パック(pressurized p
ack)またはネブライザーからエアロゾルスプレー製剤の形態で都合よく送達する
。加圧エアロゾルの場合、用量単位は、計量した量を送達するバルブを提供する
ことにより決定し得る。吸入器または吹き入れ器における使用のための、例えば
、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物のパウダーミックスおよび
ラクトースまたはデンプンのような適当なパウダーベースを含むように製剤化し
得る。
【００３２】 当該化合物を、注射、例えば、ボラス注射または連続注入による、非経口投与
用に製剤化し得る。注射用の製剤は、単位用量型で、例えば、アンプルまたは多
用量コンテナー中に、添加した保存剤と共に存在し得る。当該組成物は、油性ま
たは水性の媒体中で懸濁液、溶液またはエマルジョンのような型となり得、懸濁
剤、安定化剤および／または分散剤のような調製剤(formulatory agent)を含み
得る。
【００３３】 非経口投与のための医薬製剤には、水溶解型の活性化合物の水溶液を含む。加
えて、活性化合物の懸濁液は、適当な油性注射懸濁液として調製され得る。適当
な脂肪親和性溶媒または媒体には、ゴマ油のような脂肪油、またはオレイン酸エ
チルまたはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含
まれる。水性注射懸濁液には、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビ
トールまたはデキストランのような懸濁液の粘性を増加する物質が含み得る。所
望により、当該懸濁液はまた、高濃縮した溶液の製剤とし得る化合物の溶解度を
増加する適当な安定剤または薬剤を含み得る。
【００３４】 他に、活性成分は、使用前に、適当な媒体、例えば、滅菌発熱物質フリー水(s
terile pyrogen-free water)を伴う構成のためにパウダー型とし得る。
【００３５】 当該化合物はまた、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドのような典型
的な坐薬ベースを含む、坐薬または停留浣腸剤のような直腸組成物中に製剤化し
得る。
【００３６】 前記製剤に加えて、当該化合物はまた、ジポット製剤として製剤化し得る。そ
の長期作用製剤は、移植(例えば、皮下的にまたは筋肉内的に)により、または筋
肉内的注射により投与され得る。そのため、例えば、当該化合物は、適当なポリ
マー性または疎水性物質(例えば、許容される油中でエマルジョンとして)または
イオン交換樹脂と共に、または僅かに(sparingly)可溶な誘導体、例えば僅かに
可溶な塩として製剤化し得る。
【００３７】 リポソームおよびエマルジョンは、疎水性薬物の送達媒体または担体の既知の
例である。ジメチルスルフォキシドのような特定有機溶媒を用いることもできる
が、通常、より毒性が強くなる。加えて、当該化合物は、治療剤を含む固体疎水
性ポリマーの半透性マトリクスのような徐放性システムを用い送達し得る。種々
の型の徐放性物質が確立され、当業者に既知である。徐放性カプセルは、化学的
性質に依存して、数週間から１００日以上までの間、当該化合物を放出する。当
該化学的性質および治療剤の生物学的安定性に依存して、タンパク質安定化のた
めの更なるストラテジーを用い得る。
【００３８】 当該医薬組成物はまた、適当な固体−またはゲル−相担体または賦形剤を含み
得る。その担体または賦形剤の例には、以下に限らないが、炭酸カルシウム、リ
ン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポ
リエチレングリコールのようなポリマーが含まれる。
【００３９】 ＭＩＦ活性の中和剤として同定された本発明の化合物の多くは、医薬的に適合
する対イオンを伴う塩として提供され得る。医薬的に適合する塩は、多くの酸で
形成され得、以下に限らないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸
、コハク酸など、または塩基を含み得る。塩には、水性または他のプロトン溶媒
中に、相当する遊離塩基型よりも溶解する傾向がある。医薬的に許容される塩、
担体または賦形剤は、当業者に既知であり、例えば、Remington's Pharmaceutic
al Sciences, 18th Edition, A.R. Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easto
n. PA, 1990に見られる。その塩には、以下に限らないが、ナトリウム、カリウ
ム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、ヒドロクロライド、ヒド
ロブロミド、ヒドロイオジド、酢酸、クエン酸、酒石酸およびリンゴ酸塩などが
含まれる。
【００４０】 本発明の使用に適当な医薬組成物には、目的を達成するための有効量で活性成
分が含まれている、組成物が含まれる。より特に、治療的に有効量とは、処置す
べき対象におけるＭＩＦ放出および産生を特徴とする疾患の発生または進行を防
止または阻害するための有効量を意味する。有効量の決定は、当業者の能力内、
特に本明細書で提供する詳細の開示の範囲内にある。
【００４１】 本発明の方法で使用する任意の化合物の場合、治療有効用量は、トートメラー
ゼ阻害アッセイおよび細胞培養アッセイから最初に算出され得る。その情報を用
い、ヒトに有用な用量をより正確に決定することができる。
【００４２】 治療有効用量とは、ＭＩＦ放出および産生を特徴とする疾患の発生または重篤
を減少する化合物の量をいう。その化合物の毒性および治療効力を、例えば、Ｌ
Ｄ５０(母集団の５０％が死亡する用量)およびＥＤ５０(母集団の５０％に治療
的に有効である用量)を決定するため、標準的な医薬的、薬理学的および毒理学
的な手順により、細胞培養物または実験動物において決定することができる。毒
性と治療効果との間の用量比は治療指標となり、ＬＤ５０とＥＤ５０との間の比
として現され得る。高い治療指標を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイま
たは動物試験から得られたデータを用い、ヒトに使用するための用量範囲に製剤
化し得る。その化合物の用量は、好ましくは、若干の毒性または全く毒性のない
ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。当該用量は、用いる用量型および利用
する投与経路に依存してこの範囲内で変化し得る。投与の正確な製剤経路および
用量は、患者の状態の観点から、各医師により選択され得る(例えば、"The Phar
macological Basis of Therapeulics". Ch. 1 p.1中のFingl et al., 1975参照)
。
【００４３】 用量および時間間隔を個々に調節し、望ましい修飾効果(modulating effect)
または最小効果濃度(minimal effective concentration)(ＭＥＣ)を十分に維持
する活性成分の血漿レベルを提供する。ＭＥＣは、各化合物で変わるが、インビ
トロデータ：例えば、ＭＩＦ活性の５０−９０％阻害の達成に必要な濃度から算
出され得る。ＭＥＣ達成に必要な用量は、各特性および投与経路に依存する。し
かし、ＨＰＬＣアッセイ、バイオアッセイ、またはイムノアッセイを用い、血漿
濃度を決定することもできる。
【００４４】 用量の時間間隔はまた、ＭＥＣ値を用い決定し得る。化合物は、当該時間の間
、１０−９０％、好ましくは３０−９０％および最も好ましくは５０−９０％の
ＭＥＣの血漿レベルを維持する摂取を用い投与すべきである。
【００４５】 局所または皮膚投与のような局所投与の場合、または例えば、標的器官または
組織中への直接導入または選択的吸収の場合、当該薬物の有効局所濃度は、血漿
濃度には関連し得ない。
【００４６】 投与される当該組成物の量は、もちろん、処置すべき対象、対象の体重、苦痛
の重篤度、投与の方法および処方する医師の判断に依存する。
【００４７】 当該組成物は、望ましいならば、活性成分を含む１以上の単位用量型を含み得
るパックまたはディスペンサー装置中に存在し得る。当該パックは、例えば、ブ
リスターバックのような金属またはプラスチックホイルを含み得る。当該パック
またはディスペンサー装置は、投与のための解説書を伴い得る。適合可能な医薬
担体中で製剤化される本発明の化合物を含む組成物をまた、調製し、適当なコン
テナー中に置き、指示された条件の処置のために標識した。
【００４８】 合成 可能な合成の実施例では、使用した全試薬および溶媒は、商業用のうち最も高
品質のものを購入した。使用した全溶媒は、FisherのＨＰＬＣ品質であった。１ Ｈ(２７０ＭＨｚ)および１３ＣＮＭＲ(６７．５ＭＨｚ)ＮＭＲスペクトルをJEOL
cclipse 270スペクトロメーターで記録した。結合定数をヘルツ(Ｈｚ)で示し、
化学シフトは、溶媒としてＤＭＳＯまたはＣＤ３ＯＤを有するテトラメチルシラ
ン(ＴＭＳ 0.0 ppm)に比例する百万分率(ppm)で示した。薄層(ＴＬＣ)およびフ
ラッシュカラムクロマトグラフィーは、それぞれ、Alumina B. F-254 TLC plate
s form Selecto ScientificおよびFisher Scientific Basic alumina Brockman
activity 1を用い行った。当該反応は、ＴＬＣおよび１ＨＮＭＲによりモニター
し、１ＨＮＭＲに従い粗生成物の収率が９０−９５％となったとき停止した。
【００４９】 実施例１ 本実施例は、脂肪族アミノ酸を有するシッフ塩基化合物の合成を例示する。Ｃ
Ｈ２Ｃｌ２中の無水ＭｇＳＯ４の懸濁液に、アミノ酸のメチルエステルトリエチ
ルアミンの塩酸塩（１．８モル当量）次いで４−ヒドロキシベンズアルデヒド（
１モル当量）を添加した。反応液を１２ないし１６時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を
濾別し、そして粗生成物を減圧下で濃縮した。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２中に再溶
解し、そして食塩水で２回洗浄した（２Ｘ２０ｍｌ）。有機溶媒をＭｇＳＯ４で
乾燥し、そして活性炭で脱色した。次いで粗生成物を塩基性アルミナまたはシリ
カのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、トリエチルアミンで処理し
、所望の生成物を得た。
【００５０】 化合物１について、グリシンメチルエステルヒドロクロリド（０．４ｇ、３．
２ｍｍｏｌ）を４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．４ｇ、３．２ｍｍｏｌ、
１当量）とカップリングさせ、化合物１を得た（０．２８ｇ、４０％）。
【化１４】
【００５１】 化合物２ａについて、Ｄ−アラニンメチルエステルヒドロクロリド（０．２ｇ
、１．４３ｍｍｏｌ）を４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．１７５ｇ、１．
４３ｍｍｏｌ）と反応させ、オフホワイト固形物として化合物を得た（０．２ｇ
、６７％）。
【化１５】
【００５２】 化合物２ｂについて、Ｌ−アラニンメチルエステルヒドロクロリド（０．２ｇ
、１．４３ｍｍｏｌ）を４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．１７５ｇ、１．
４３ｍｍｏｌ）と反応させ、化合物２ｂを得た（０．２ｇ、６７％）。
【化１６】
【００５３】 化合物３について、Ｌ−バリンメチルエステルヒドロクロリド（０．４ｇ、２
．５ｍｍｏｌ）を４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．３ｇ、２．５ｍｍｏｌ
）と反応させ、化合物３を得た（０．２ｇ、３６％）。
【化１７】
【００５４】 化合物４（０．２ｇ、４８％）を、Ｌ−ロイシンメチルエステルヒドロクロリ
ド（０．３ｇ、１．７ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．
２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）から得た。
【化１８】
【００５５】 化合物５について、Ｌ−イソロイシンメチルエステルヒドロクロリド（０．３
ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．２ｇ、１．７ｍ
ｍｏｌ）と合わせ、５を得た（０．２３ｇ、５５％）。
【化１９】
【００５６】 化合物６について、Ｌ−メチオニンメチルエステルヒドロクロリド（０．４ｇ
、２．０ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．２５ｇ、２．
０ｍｍｏｌ）を合わせ、化合物６を得た（０．２３ｇ、４３％）。
【化２０】
【００５７】 化合物７について、Ｌ−セリンメチルエステルヒドロクロリド（０．４ｇ、２
．６ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．３５ｇ、２．６ｍ
ｍｏｌ）を合わせ、化合物７を得た（０．１ｇ、２０％）。
【化２１】
【００５８】 実施例２ 本実施例は、芳香族アミノ酸とベンズアルデヒド反応剤のシッフ塩基縮合生成
物を含む化合物の合成を提供する。ＣＨ２Ｃｌ２（４．８ｍＬ）中の無水ＭｇＳ
Ｏ４（０．２ｇ）およびＬ−フェニルアラニンメチルエステルの塩酸塩（０．３
ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリエチルアミン（０．３５ｍｌ、２．５ｍ
ｍｏｌ）を、次いで４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．１７ｇ、１．４ｍｍ
ｏｌ）を添加した。反応物を２４時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そして粗
生成物を減圧下で濃縮した。
【００５９】 粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ、（４０／６０）の混合物中に再溶解し
、そして食塩水で２回洗浄した（２Ｘ２０ｍＬ）。有機相をＭｇＳＯ４によって
乾燥し、そして活性炭で脱色した。粗生成物を次いで塩基性アルミナのフラッシ
ュクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物化合物８を得た（０．２３
ｇ、５８％）。
【化２２】
【００６０】 化合物９を前記の様に製造した。ただし、Ｌ−チロシンメチルエステル（０．
４ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の懸濁液を、ＣＨ２Ｃｌ２（４．８ｍｌ）中の無水Ｍｇ
ＳＯ４の懸濁液、次いで４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．２５ｇ、２．１
ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を４８時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そし
て粗生成物を減圧下で濃縮し、所望の生成物化合物９を得た（０．２７ｇ、６１
％）。
【化２３】
【００６１】 化合物１０について、Ｌ−トリプトファンメチルエステル（０．３ｇ、１．２
ｍｍｏｌ）の塩酸塩を、ＣＨ２Ｃｌ２（４．６ｍ）中の無水ＭｇＳＯ４（０．２
ｇ）の懸濁液に添加した。トリエチルアミンを（０．３ｍｌ、２．１ｍｍｏｌ）
、次いで４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添
加した。反応物を４８時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そして粗生成物を減
圧下で濃縮した。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ、（４０／６０）の混合
物中に再溶解し、そして食塩水で２回洗浄した（２Ｘ２０ｍｌ）。有機をＭｇＳ
Ｏ４で乾燥し、そして活性炭で脱色した。
【００６２】 粗生成物を次いで、塩基性アルミナのフラッシュクロマトグラフィーによって
精製し、望まれる化合物10を得た（０．２０ｇ、５３％）。
【化２４】
【００６３】 化合物８ｂについて、トリエチルアミン（０．３５ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ）を
、次いで４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．１７ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、
ＣＨ２Ｃｌ２（４．８ｍｌ）中の無水ＭｇＳＯ４（０．２ｇ）およびＤ−フェニ
ルアラニンメチルエステルの塩酸塩（０．３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の懸濁液に添
加した。反応液を２４時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そして粗生成物を減
圧下で濃縮した。次いで粗生成物を塩基性アルミナのフラッシュクロマトグラフ
ィーで精製し、所望の生成物化合物８ｂを得た（０．３２ｇ、８２％％）。
【化２５】
【００６４】 化合物１０ｂのために、トリエチルアミン（０．３ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）次
いで４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２（４．６ｍｌ）中の無水ＭｇＳＯ４（０．２ｇ）およびＤ−トリプトファ
ンメチルエステルの塩酸塩（０．３ｇ、１．２ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した反
応液を４８時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そして粗生成物を次いで塩基性
アルミナのフラッシュックロマトグラフィーで精製し、所望の生成物化合物１０
ｂを得た（０．２８ｇ、７４％）。
【化２６】
【００６５】 実施例３ 本実施例は、化合物の合成を提供し、ここで、パラヒドロキシベンズアルデヒ
ドと保護されたアミノ酸のシッフ塩基縮合生成物を還元する。一般的な合成手法
は、先の手法に従い、ただし、無水エタノール中に懸濁した精製イミン生成物お
よびＮａＢＨ４（１ｍｏｌ当量）をそれぞれの反応混合物に添加した。１時間後
、反応液を水でクエンチし、そしてＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機フラクションを
ＭｇＳＯ４で乾燥させ蒸発乾燥させると、定量的収率の還元された化合物を得た
。
【００６６】
【化２７】
【００６７】 実施例４ 本実施例は、保護されたアミノ酸とベンズアルデヒドの縮合生成物を含む化合
物の合成を提供する。化合物１４のために、化合物８と同じ一般的な手法にした
がって、化合物１４を得た（０．２ｇ、６１％）。
【化２８】
【００６８】 化合物１５のために、化合物９と同じ一般的な手法に従い、１５を得た（０．
４ｇ、９０％）。
【化２９】
【００６９】 化合物１６のために、化合物１０と同じ一般的手法に従い、化合物１０ないし
化合物１６を得た（０．１６ｇ、４６％）。
【化３０】
【００７０】 実施例５ 本実施例は、種々の置換ベンズアルデヒド部分を特徴とする化合物の合成を提
供する。一般的な合成は、適当な置換基を有するベンズアルデヒドをＣＨ２Ｃｌ ２ における無水ＭｇＳＯ４およびＬ−チロシンメチルエステルの懸濁液に添加す
る（１ｍｏｌ当量）ことを提供する。反応液を４８時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を
濾別し、そして粗生成物を減圧下で濃縮し、所望の生成物を得た。
【００７１】
【化３１】
【００７２】 実施例６ 本実施例は、種々の置換ベンズアルデヒド部分を特徴とする化合物の合成を提
供する。一般的合成は、適当な置換基を有するベンズアルデヒドをＣＨ２Ｃｌ２ 中の無水ＭｇＳＯ４およびＬ−チロシンメチルエステルの懸濁液に添加する（１
ｍｏｌ当量）ことを提供する。反応液を４８時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し
、粗生成物を減圧下で濃縮し、所望の生成物を得た。
【００７３】 縮合後、化合物２２を得た（０．３８ｇ、７８％）。
【化３２】 縮合後、化合物２３を得た（０．２９ｇ、５２％）。
【化３３】
【００７４】 化合物２４を一般的手法にしたがって得た（０．１２ｇ、２５％）。
【化３４】 化合物２５を一般的手法にしたがって得た（０．２３ｇ、５１％）。
【化３５】
【００７５】 化合物２６は、アミノ酸部分の保護基がｔｅｒｔブチルである化合物のさらな
る型を例示する。４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．２６ｇ、２．１ｍｍｏ
ｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（７ｍｌ）中の無水ＭｇＳＯ４（０．３５ｇ）およびＬ−チ
ロシンｔ−ブチルエステル（０．５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。
反応液を４８時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そして粗生成物を減圧下で濃
縮しそして所望の生成物化合物２６を得た（０．２９ｇ、４９％）。
【化３６】
【００７６】 実施例７ 本実施例は、ハロ−置換ベンズアルデヒド部分を含むさらなる化合物の合成を
提供する。一般的合成は、トリエチルアミン（１．８ｍｏｌ当量）および所望の
ハロ置換パラベンズアルデヒド（１ｍｏｌ当量）を、ＣＨ２Ｃｌ２中の無水Ｍｇ
ＳＯ４の懸濁液におけるＬ−トリプトファンメチルエステルの塩酸塩の調製物に
添加した。反応液を２４時間撹拌した。ＭｇＳＯ４を濾別し、そして粗生成物を
減圧下で濃縮した。粗生成物を次いで塩基性アルミナのクロマトグラフィーで精
製し、所望の生成物を得た。
【００７７】 化合物２７を一般的手法にしたがって得た（０．１７ｇ、４２％）。
【化３７】 化合物２８を一般的手法にしたがって得た（０．２２ｇ、４８％）。
【化３８】 縮合後、化合物２９を得た（０．２２ｇ、５８％）。
【化３９】
【００７８】 実施例８ シッフ塩基コンジュゲーション生成物、特にコンジュゲート性イミンは、中程
度の安定性のものである。本発明のアミノ酸／ベンズアルデヒドシッフ塩基（Ａ
Ａ／ＢＳＢ）化合物について不安定性は問題ではないが、シッフ塩基縮合生成物
を加水分解し、もとの遊離アミンおよびアルデヒド反応物を得ることができる。
アミノ酸およびベンズアルデヒド部分の間にイミン結合を有する、本発明の化合
物は、対応する化合物（ここで、イミン結合が特異的に還元された）よりもＭＩ
Ｆ活性の阻害剤としてより有効であることが示され、このことは、この連結の不
飽和が意味のある特徴であることを示唆している。シッフ塩基縮合生成物のカル
バアナログは、それらのイミンカウンターパートと比較して、高い安定性を示す
ことを期待できるから、ＡＡ／ＢＳＢのカルバアナログを製造し、評価すること
ができる。例えば、前記例示的化合物のイミン結合（炭素−窒素二重結合）を、
炭素−炭素二重結合または炭素−炭素三重結合によって置換し、前に詳説したア
ミノ酸／ベンズアルデヒドシッフ塩基縮合生成物のカルバアナログとして、それ
ぞれ２−置換−４−フェニル−ブテ−３−エノイックおよび２−置換−４−フェ
ニル−ブチ−３−イノニック酸およびそれらのメチルエステルをもたらすことが
できる。
【００７９】 一般的アプローチとして、Ｌ−およびＤ−アミノ酸を出発点として利用する。
例えば、Ｌ−Ｄ−芳香族アミノ酸を、それぞれ先に記載のように（Olah et al.,
Chimica Acta 66: 1028-1030, 1983,; Cushman wt al., Biochemistry 16:5484
-5491, 1977）ＲおよびＳ−ブロモ−プロピオン酸に変換する。例えば、芳香族
Ｌ−アミノ酸フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンを個々に４７％
臭化水素酸水溶液に溶解し、それから亜硝酸ナトリウムで０℃で処理する。反応
液を同じ温度で２時間撹拌し、そして生成物をエチルエーテルで抽出する。この
方法は、それそれの個々のアミノ酸のブロモ誘導体を中程度ないし高い収率で生
ずる（４５−８８％）。次に、フェニルアセチレンカルバニオンリチウム塩によ
るブロモの求核置換は、第１の所望の化合物、すなわちアセチレン誘導体を生じ
る（Inhardt and Fried. Synthesis 4, 285-291, 1990）。フェニルアセチレン
は商業的に入手可能であり、そしてその他の置換フェニルアセチレンをヘック反
応を経由して製造する。例えば、４−ヨードフェノールをエチニルトリメチルシ
ランによるパラジウム触媒性置換、次いで還流メタノール性ＫＯＨを使用するト
リメチルシリル基の除去に付し、４−ヒドロキシフェニルアセチレンを形成する
（Sonogashira et al., Tetrahedron Letters 16:4467-4470.1975; Tischler an
d Lanza, Tetrahedron Letters 27: 1653-1656, 1986）。
【００８０】 これらのアセチレンカルバアナログを通常は還元し、所望のオレフィン性カル
バアナログを提供する。アセチレン結合還元はよく確立され、そして特に興味深
く、なぜなら、特異的還元条件を使用し、選択的にＺ−またはＥ−幾何異性体を
生じるからである。例えば、エタノール中および水素気流中のLindlar触媒（Ｐ
ｄ−ＣａＣＯ３−ＰｂＯ）を使用し、Ｚ−Ｅ異性化の少ないまたはないＺ−アル
ケンを得る（Denmark and Jones. Organic Chemistry 47:4595-4597, 1982）。
Ｅ−異性体を金属還元、例えば、ＮＨ３中のＮａまたはリチウムアルミニウムヒ
ドリドによって得る。さらに、試験した金属ヒドリド中で、Ｒｅｄ−Ａｌ（Ｎａ
ＡｌＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｅ）２）が最速、最高収率であってより立体選択
的還元であると見出され（Lambert et al., Eur. J. Org. Chem. 4:775-779, 19
99; Schreiber et al., J. Amer. Chem. Soc. 109:1525-1529, 1987）、したが
ってこれがＥ−異性体に到達するための好適な還元剤である。
【００８１】 アセチレン誘導体とＭＩＦの特異的な相互作用はアレン形成を生じることが、
特に注目に値する。最も有りそうなのは、これがＭＩＦ活性部位内の塩基性度に
よるアルファプロトンの引きぬき反応、次いでコンジュゲートされるアレンへの
転位にを経由してカルボアニオン生成を反映することである。結果的に、ある種
のターンオーバーの後、ＭＩＦの活性部位プロリン−１残基はアレン分子をアル
キル的に捕捉し、ＭＩＦ生物学的活性の対応する喪失と共に、酵素的に不活性な
タンパク質へとつながる（Jung et al., Biochemistry 17: 2628-2632, 1978）
。
【００８２】 あるいは、２−ベンジル−４（４−ヒドロキシフェニル）−ブテ−３−エノイ
ック酸メチルエステル（フェニルアラニン／パラ−ヒドロキシベンズアルデヒド
シッフ塩基のカルバアナログ、化合物３０）を、スキーム１に例示のようにヘッ
ク反応を含む一般的アプローチにしたがって達成する：
【００８３】 スキーム１：フェニルアラニン／ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドシッフ塩基（
化合物３０）のカルバアナログの合成
【化４０】 この特定の実施例では、メチル−３−ブテノエート（０．５３ｍＬ、５ｍｍｏ
ｌ）を、リチウムジイソプロピルアミン（ＬＤＡ；５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０
ｍＬ）溶液に、−７８℃でシリンジする。３０分後、ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中に
溶解したベンジルブロミド（０．４ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を、滴状に添加し、
そして反応混合物を−３０℃に暖める。反応を２時間進行させ、それから塩化ア
ンモニウム水溶液を添加することによってクエンチする。反応混合物を室温に暖
めて、エーテルで抽出し（３Ｘ２０ｍＬ）そして有機層を硫酸マグネシウムで乾
燥する。フラッシュクロマトグラフィー後、オレフィン化合物を８２％収率で得
る（０．５２ｇ）。ヘック反応条件下でｐ−ヨードフェノールとカップリングす
ると、定量的に所望の化合物３０を得る。この合成アプローチを容易に一般化し
、式１にしたがう本発明のＭＩＦアンタゴニスト、アミノ酸／（所望により置換
された）ベンズアルデヒドシッフ塩基のさらなるカルバアナログをもたらし、こ
れは、（ｉ）ＲＢｒ試薬（前記）を変化させて、式ＩのＭＩＦアンタゴニストの
アミノ酸コンポーネントに対応する側鎖官能性をもたらすこと、および／または
（ｉｉ）ヨードフェノール試薬（前記）を変化させて、式ＩのＭＩＦアンタゴニ
ストの種々の誘導性ベンズアルデヒドコンポーネントをもたらすことによる。
【００８４】 実施例９ 本実施例により、前述の化合物の比較に関する薬理学的データが提供される。
上で詳細に記述したように(特に発明の詳細な説明を参照)、in vivoでの生物学
的なＭＩＦ阻害活性を予測するＭＩＦトートメラーゼのアッセイは、試験化合物
を評価し、ＭＩＦ阻害活性を有すると予測される化合物を同定するために使用さ
れてきた。簡便には、本アッセイの手順は、基質としてＬ−ドーパクロムメチル
エステル(L-dopachrome methyl ester)を用いて、試験化合物(潜在的な阻害剤)
の存在下で、ＭＩＦトートメラーゼ活性を測定することを含む。阻害化合物をさ
まざまな濃度で加え、酵素(トートメラーゼ)の阻害活性を測定した。これらのＩ
Ｃ５０値は、阻害活性の他の値(例えば、100μMの試験化合物のパーセント阻害)
とともに、詳細な説明において試験化合物の構造の一覧図として記載されている
。化合物は、さらに、ＭＩＦ活性、例えば標的細胞に結合するＭＩＦの阻害、Ｍ
ＩＦ放出または合成の阻害、ＭＩＦ特異的抗体とのＭＩＦ免疫反応性の阻害、Ｍ
ＩＦのコンホメーションの改変、あるいは円二色性分光計または熱安定性の測定
により測定される構造的完全性、休止期のＮＩＨ／３Ｔ３細胞に対するＭＩＦの
増殖前効果(pro-proliferative effect)の阻害、およびそれに関連した延長され
たＥＲＫ活性の阻害、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞から放出されたＭＩＦ誘導アラキドン
酸の阻害、Ｌ６筋細胞におけるＭＩＦ誘導フルクトース−２，６−ビスホスフェ
ートの形成の阻害、ＴＮＦまたはＬＰＳが投与された試験動物におけるＭＩＦ毒
性の阻害、in vitroまたはin vivoにおけるＭＩＦのグルココルチコイド・カウ
ンター制御活性の阻害、ＭＩＦの放出、産生および／または出現を特徴とするヒ
トの疾患の多くの動物モデルにおける罹病率または死亡率の阻害、の多くのアッ
セイにおけるＭＩＦの生物学的活性の阻害に関して評価される。ＭＩＦアンタゴ
ニストの活性は、また、さまざまな周知かつ認知された、特に腫瘍細胞増殖アッ
セイ、腫瘍細胞致死アッセイ、固形腫瘍増殖および／または転移アッセイを含む
in vitroおよびin vivo癌モデルで、ならびに、さまざまな周知かつ認知された
、例えば内皮細胞増殖および分化アッセイ、Matrigel(商標)アッセイ、血管新生
および腫瘍血管新生アッセイなどを含む血管形成または新血管新生のin vitroお
よびin vivoモデルで評価される。
【００８５】 化合物１０(Ｌ−ＴｒｐＭＥ／パラヒドロキシベンズアルデヒド・シッフ塩基
に対応する)および化合物９(Ｌ−ＴｙｒＭＥ／パラヒドロキシベンズアルデヒド
・シッフ塩基に対応する)は、ＭＩＦ生物学的活性(すなわち、休止期のＮＩＨ／
３Ｔ３細胞培養におけるＭＩＦ誘導増殖の阻害)に関する典型的なアッセイにお
けるＭＩＦ阻害活性を示し、酵素活性をそれぞれ約５μＭおよび１０μＭのＩＣ ５０ 値で阻害した。化合物８(Ｌ−ＰｈｅＭＥ／パラヒドロキシベンズアルデヒ
ド・シッフ塩基に対応する)および化合物１０ｂ(Ｄ−ＴｒｐＭＥ／パラヒドロキ
シベンズアルデヒド・シッフ塩基に対応する)は、ともに抗ＭＩＦ生物学的活性(
ＮＩＨ／３Ｔ３細胞増殖アッセイ)を示さず、これらの化合物はそれぞれ約５０
μＭおよび１００μＭのＭＩＦトートメラーゼ阻害のＩＣ５０値を示した。化合
物１０の活性は、さらに、化合物１０が中和抗ＭＩＦモノクローナル抗体(ｍＡ
ｂ)と同じぐらい有効なＭＩＦアンタゴニストであることを示す実験結果を要約
する図１を参照することにより例示される。例証となる実施例において、簡便に
は、ＤＭＥ培地(１０％血清を補った)を中和抗ＭＩＦｍＡｂ、あるいはＬ−トリ
プトファン／パラ−ヒドロキシベンズアルデヒド・シッフ塩基(すなわち化合物
１０)またはＤ−トリプトファン／パラ−ヒドロキシベンズアルデヒド・シッフ
塩基(すなわち化合物１０ｂ)とともに、休止期のＮＩＨ／３Ｔ３繊維芽細胞に加
えた。増殖をＤＮＡに[３Ｈ]-チミジンを組み込むことにより評価し、増殖の％
阻害を計算した。示された結果は２つのアッセイの平均であり、２つの別個の実
験を表す。したがって、これらのデータは、ＭＩＦトートメラーゼ活性と抗ＭＩ
Ｆ生物学的活性の阻害の間の相関関係を示す。
【００８６】 ＭＩＦアンタゴニストとしての化合物１０の活性は、化合物１０が中和抗ＭＩ
Ｆモノクローナル抗体(ｍＡｂ)と同じぐらい有効なＭＩＦアンタゴニストである
ことを示す実験結果を要約する図２を参照することによりさらに例示される。下
記の表は実験条件を図２における棒グラフと関連づけるものである。
【表１】
【００８７】 例示的な実施例において、培養胚性繊維芽細胞は、血清の除去の結果としてア
ポトーシス(細胞死)へと誘導される。これらの培養物はＭＩＦでの処置により「
救出」され得る。したがって、試験化合物は、アポトーシスアッセイにおいて加
えられたＭＩＦの効果を中和する化合物の活性を参照することによりＭＩＦアン
タゴニスト活性に関して評価される；すなわち、ＭＩＦの添加にもかかわらず、
血清なしの培養条件におけるアポトーシス(細胞死)の耐性により評価される。こ
れに関して、抗ＭＩＦ抗体はＭＩＦを阻害し、便利なポジティブ・コントロール
として機能することが知られている。
【００８８】 簡便には、２ｘ１０５細胞／ウェルで第１世代のマウス胚性繊維芽細胞を６ウ
ェル細胞培養プレートに播く。次いで、細胞を５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＭＩ
Ｆ(ｒＭＩＦ)の不存在または存在下で、１０％血清含有培地(＋血清)または血清
なしの培地(＋血清なし)中、標準条件下で一夜培養する。試験化合物の媒体のみ
(Ｍｅ２ＳＯ)または媒体に溶解したシッフ塩基型ＭＩＦアンタゴニストの試験化
合物(L-trp/SB＝Ｌ−トリプトファン／パラ−ヒドロキシベンズアルデヒド・シ
ッフ塩基、化合物１０；D-trp/SB＝Ｄ−トリプトファン／パラ−ヒドロキシベン
ズアルデヒド・シッフ塩基、化合物１０ｂ)を細胞培養物に加える前に５分間血
清なしの培地でｒＭＩＦとともにプレインキュベートする。細胞溶解物をさまざ
まな便利な方法、例えば断片化ＤＮＡのＥＬＩＳＡ法によりアポトーシスを分析
する。示した結果は２つのサンプルの平均±ＳＤであり、かつ反復した実験を表
している。１０μＭの投与で、化合物１０は、ＭＩＦが細胞内の貯蔵部から放出
され、そして／あるいはＭＩＦの合成または出現が増加している病状、疾患、ま
たは徴候のための臨床的使用が予想される本in vitroアッセイにおけるＭＩＦの
生物活性を有意に阻害する。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、本発明のＭＩＦ拮抗剤が、血清による細胞増殖を、失活
した抗ＭＩＦモノクローナル抗体の抑制されている活性と同程度まで抑制可能で
あることを示している。
【図２】 図２は、培養マウス胚線維芽細胞において誘導されたアポトーシ
スからのＭＩＦによる保護を失活させる本発明のＭＩＦ拮抗剤（そしてさらには
特に式Ｉに記載の化合物）の活性を比較を示している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 11/00 Ａ６１Ｐ 11/00 11/06 11/06 17/06 17/06 19/02 19/02 25/00 25/00 29/00 29/00 １０１ １０１ 31/00 31/00 35/00 35/00 37/02 37/02 37/06 37/06 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｃ 323/57 Ｃ０７Ｃ 323/57 Ｃ０７Ｄ 209/18 Ｃ０７Ｄ 209/18 Ｆターム(参考） 4C084 AA16 MA02 MA17 MA23 MA35 MA37 MA52 MA55 MA56 MA58 MA59 MA65 MA66 NA05 ZA022 ZA592 ZA892 ZA962 ZB072 ZB082 ZB112 ZB132 ZB152 ZB262 ZB322 ZC202 ZC352 4C086 AA01 AA02 AA03 BC14 MA01 MA02 MA04 MA17 MA23 MA35 MA37 MA52 MA55 MA56 MA58 MA59 MA65 MA66 ZA02 ZA59 ZA89 ZA96 ZB07 ZB08 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZB32 ZC20 ZC35 4C204 BB01 CB03 DB19 EB02 FB01 GB01 4C206 AA01 AA02 AA03 FA51 MA01 MA02 MA04 MA37 MA43 MA55 MA57 MA72 MA75 MA76 MA78 MA79 MA85 MA86 NA14 ZA02 ZA59 ZA89 ZA96 ZB07 ZB08 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZB32 ZC20 ZC35 4H006 AA01 AA03 AB22 AB27 AB28 BJ50 BN30 BT12

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 遊離形または医薬的に許容される塩形の、式Ｉで表される、
    ＭＩＦ活性阻害作用を有する化合物： 【化１】 式中、Ｘは、窒素または炭素； Ｙは、Ｏ、Ｃ(Ｒ１)２またはＳ； Ｚは、ＯＨ、Ｒ１、-ＣＨ２-Ｎ(Ｒ１)２またはＳＲ１； Ｒ１は、独立してＨ、直鎖または分岐したＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐
    したＣ２−Ｃ６アルケニルもしくはＲ１が炭素に結合している場合（Ｒ１がＮま
    たはＳに結合していない場合）、直鎖または分岐したＣ１−Ｃ６アルコキシ； Ｒ２は、独立してＨ、ＯＨ、Ｒ１、Ｎ(Ｒ１)２、ＳＲ１またはハロゲンの単独ま
    たは複合置換基； Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、Ｒ１またはハロゲン；＊ およびＣの印は、潜在的に不斉炭素原子を示し、それらのいずれかまたは両者
    が不斎炭素原子である場合、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１およびＲ３のそれぞれについて、
    すべてのジアステレオマーが式Ｉに包含される； Ｒは、天然α−アミノ酸の側鎖であって、ＹがＯであり、ＺがＯＨである場合に
    は、Ｘ、ＹおよびＺと共に、置換されていることもあるベンズアルデヒド部分に
    対して、シッフ塩基または還元シッフ塩基（ＸがＮである場合）もしくはそれら
    のカルバアナログ（ＸがＣである場合）アナログとして結合した芳香族、脂肪族
    または複素環ＤまたはＬ−α−アミノ酸部分を表わすか、またはＲは、ＹがＯ以
    外またはＺがＯＨ以外である場合には、Ｘ、ＹおよびＺと共に、置換アミノ酸部
    分、アミノ酸部分のアナログまたは保護アミノ酸部分を表わす。
  2. 【請求項２】 Ｒが、天然α−アミノ酸の側鎖である、請求項１に記載の化
    合物。
  3. 【請求項３】 ＸがＮ、ＹがＯ、ＺがＯＭｅであって、Ｒと共に保護Ｌ−脂
    肪族または芳香族アミノ酸部分を形成する、請求項１記載の化合物。
  4. 【請求項４】 Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＨである、請求項１記載の化合物
    。
  5. 【請求項５】 Ｒ２がパラ位にパラ−ヒドロキシベンズアルデヒド部分を有
    する、請求項４記載の化合物。
  6. 【請求項６】 化合物が、式IIから選択され、式中、ＲはＨ（化合物１）、
    Ｒは−ＣＨ３（化合物２またはＬアラニンに相当する化合物２ａとＤアラニンに
    相当する化合物２ｂ）、Ｒは−ＣＨ(ＣＨ３)２（化合物３）、Ｒは−ＣＨ２ＣＨ
    (ＣＨ３)２（化合物４）、Ｒは−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ３（化合物５）、Ｒは
    −ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３（化合物６）およびＲは−ＣＨ２ＯＨ（化合物７）であ
    る、請求項１記載の化合物： 式II： 【化２】
  7. 【請求項７】 Ｒが芳香族α−アミノ酸の側鎖、ＸがＮ、ＹがＯ、ＺがＯＭ
    ｅであって、それらが一緒になって保護Ｌ−芳香族アミノ酸部分を形成する、請
    求項１記載の化合物。
  8. 【請求項８】 Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＨである、請求項７記載の化合物
    。
  9. 【請求項９】 Ｒが−ＣＨ２−フェニル（化合物８）、−ＣＨ２−パラ−ヒ
    ドロキシフェニル（化合物９）または−ＣＨ２−インドリル（化合物１０）であ
    る、請求項７記載の化合物。
  10. 【請求項１０】 請求項１記載の化合物と医薬的に許容される担体あるいは
    賦形剤を含む、医薬組成物
  11. 【請求項１１】 癌または関節炎、増殖性管疾患、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫
    症候群）、サイトカイン介在毒性、敗血症、敗血性ショック、乾癬、インターロ
    イキン−２毒性、喘息およびＭＩＦ介在症状を含む炎症性疾患の処置または予防
    のための医薬組成物として使用される、式Ｉで表される化合物またはその医薬的
    に許容される塩。
  12. 【請求項１２】 式Ｉで表される化合物を単独または併用して有効量を投与
    することを含む、関節炎、増殖性管疾患、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）、サ
    イトカインによる毒性、敗血症、敗血性ショック、乾癬、インターロイキン２毒
    性、喘息、ＭＩＦ介在症状、関節リウマチ、インシュリン非依存性糖尿病、多発
    性硬化症、移植片体宿主病、ループス様症候群、および局在性または全身性のＭ
    ＩＦ放出あるいは合成により特徴付けられる症状を含む癌または免疫性、自己免
    疫性あるいは炎症性疾患の処置または予防方法。
  13. 【請求項１３】 式Ｉで表わされる化合物と少なくとも１種のステロイド性
    または非ステロイド性抗炎症剤を一緒に投与することを含む、望ましくないＭＩ
    Ｆ活性により特徴付けられる疾患または疾病の症状を処置または予防する方法。
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