JP2001523259A

JP2001523259A - ４−アザ−ステロイド類

Info

Publication number: JP2001523259A
Application number: JP54757798A
Authority: JP
Inventors: チィナパミディ，チェンチャイア; ジア，クイ
Original assignee: ノヴォファームリミテッド
Priority date: 1997-05-07
Filing date: 1998-05-06
Publication date: 2001-11-20
Also published as: WO1998050419A2; US20020035260A1; EP0983295A2; CA2287924A1; AU7327798A; WO1998050419A3

Abstract

(57)【要約】位置７、１１および１５の１以上の位置にヒドロキシル基またはヒドロキシル誘導体の基などの官能基を有する、新規な４−アザステロイド化合物を提供する。この化合物は５−α−リダクターゼに対して活性であり、前立腺癌と闘う際に有用であることを示す。新規な化合物は、容易に入手可能な４−アザステロイドから、化学酵素による合成によって製造することができる。

Description

【発明の詳細な説明】４−アザ−ステロイド類発明の分野本発明は、４−アザステロイド類、その製造方法、およびその製薬的適用に関する。より詳細には、本発明は、酵素ステロイド５−α−リダクターゼを阻害する際の薬剤として、またその他の新規な医薬品として活性な４−アザステロイド化合物およびそれから製造することが可能な新規な医薬品として活性な４−アザステロイド類を製造する際の中間体としても有用な、新規な４−アザステロイド類に関する。発明の背景および従来技術酵素テストステロン５−α−リダクターゼは、体内でテストステロンの還元を引き起こしてジヒドロテストステロン、ＤＨＴを形成することが知られている。ＤＨＴは、悪性の状態すなわち前立腺癌の原因となる前立腺肥大、良性前立腺過形成（ＢＨＰ）を引き起こすことに関係している。したがって、テストステロン５−α−リダクターゼの作用を阻害することが望ましく、この点に関し、多くの４−アザステロイド類が活性であることが報告されてきた。これらの中で最も良く知られているものは、（５α，１７β）−（１，１−ジメチルエチル）−３− オキソ−４−アザアンドロスト−１−エン−１７−カルボキサミドであり、一般に化学構造がのフィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）として知られている。フィナステリドは、その最初の導入以来、ＢＰＨを治療する際に当初期待したよりもそれほど効果的ではないことが報告されてきた（Ｒ．Ｓ．Ｒｉｔｔｍａｓｔｅｒ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，１９９４，３３０，１２０〜１２５）。報告によれば、フィナステリドによる治療を受けている患者の体内に残留し循環しているＤＨＴのレベル（２０〜４０％）に関して、さらなる改善の余地がある（Ｇ．Ｊ．Ｇｏｒｍｌｅｙ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，１９９０，７０，１１３６〜１１４１）。現在では、ステロイドリダクターゼの２種類のアイソザイムが存在することが知られている。主に皮膚組織内で相互作用するアイソザイムは、従来から５−α −リダクターゼ・タイプＩ（ラットの腹側前立腺に存在する）と呼ばれ、一方、前立腺組織内で相互作用するアイソザイムは５−α−リダクターゼ・タイプＩＩ（人間の前立腺組織内およびラットの精巣上体内に存在する）と呼ばれている。良性前立腺過形成および前立腺癌に関連し、５−α−リダタターゼ・タイプＩＩアイソザイムを阻害するための選択性を示す、１つの薬剤を有することが非常に望ましいであろう。また、男性型禿頭症および女性の多毛症の治療用に、頭皮に関連した５−α−リダクターゼ・タイプＩアイソザイムに対する選択性を示す、別の薬剤を有することも非常に望ましいであろう。本発明の目的は、テストステロン５−α−リダクターゼに対して活性な、新規な４−アザステロイド類を提供することである。発明の概要本発明は、ヒドロキシル化した４−アザステロイド化合物およびその他の４− アザステロイド化合物を提供する。前記化合物は、７位および１５位の一方またはその両方に、ヒドロキシル基またはその他の官能基を有する。本発明の新規な化合物は、テストステロン５−α−リダクターゼ・タイプＩおよび／またはタイプＩＩの阻害剤として活性であり、かつ／またはこのような活性フィナステリド誘導体を製造する際の化学中間体として有用である。これらには、フィナステリド型化合物および１，２−ジヒドロフィナステリド化合物の両方が含まれる。また本発明は、フィナステリドおよび１，２−ジヒドロフィナステリドのヒドロキシル化化合物を製造するための、新規な微生物学的方法も提供する。この方法は、モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３、バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ−１３３６８、クニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ−９２４４、およびクニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ−９２４５からなる群から選択された微生物を使用して、選択された微生物の成長を支える発酵培地内での位置および立体特異性酵素的酸化反応を含む。本発明はさらに、７−β、１１−α、および１５−β位の１ヵ所またはそれ以上の位置に官能基を有する新規なフィナステリドおよび１，２−ジヒドロフィナステリド化合物の製造方法を提供する。この方法は、対応するヒドロキシル化フィナステリドまたは１，２−ジヒドロフィナステリド化合物と、ヒドロキシル基から所望の官能基への化学変換が可能な適当に選択されたヒドロキシ反応性化学試薬との化学反応を含む。したがって本発明によれば、一般式に相当する新規なフィナンステリド誘導体が提供される。ここで置換基への実線の結合は任意のαまたはβ立体配置を示し、環内の点線は任意の不飽和を示し、ＲおよびＲ₂は、水素；ヒドロキシル；ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）；式 −Ｏ−ＣＯ−Ｒ₃のエステル（ここでＲ₃は脂肪族（Ｃ₁〜Ｃ₁₂）、シクロアルキル（Ｃ₃〜Ｃ₁₂）、芳香族、およびベンジルなどの芳香族−脂肪族、または複素環式（Ｎ、Ｏ、またはＳ）から選択したヒドロカルビルであり、そのいずれかが任意に不飽和であり、任意に多塩基性であり、任意にアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、オキソ、アミノ、およびハロゲンから選択した１つまたはそれ以上の置換基で置換されている）；式−Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ₄のスルホン酸エステル（ここでＲ₄ は炭素原子１２個までの脂肪族または芳香族のヒドロカルビルである）；アジド；アミノ；式ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃は上記の通りであり、Ｒ₅はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）；および式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆または− ＮＨ−ＣＯＯＲ₆のアミノアシル（ここでＲ₆はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）、Ｒ₁は、ヒドロキシを除外した他はＲおよびＲ₂と同じ基の群から独立に選択され、Ｒ₇はＨまたは低級アルキルを表し、ただしＲ、Ｒ₁およびＲ₂はすべてが水素ではない、Ｒ₈は水素；ヒドロキシル；アジド；オキソ；ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）；アミノ；式ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃およびＲ₅は上記の通りである）；式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆または−ＮＨ．ＣＯ．ＯＲ₆のアミノアシル（ここでＲ₆ はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）；−ＣＯ−Ｒ₉または−ＣＯ− ＯＲ₉またはＣＯ−ＮＨ−Ｒ₉（ここでＲ₉はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）である。好ましい実施形態の説明上記の式Ｉの基Ｒ₈に関する好ましい選択は−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ₉であり、ただしＲ₉は低級アルキル、特にｔ−ブチルを表す。本発明による化合物の１つの好ましい群は、一般式に相当するものであり、式中、Ｒ、Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つはヒドロキシルから化学的に誘導可能な官能基を表し、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；式−Ｏ−ＯＣ−Ｒ₃のエステル（ここでＲ₃は脂肪族、シクロアルキル、芳香族、ベンジルなどの芳香族−脂肪族、または複素環式系（Ｎ原子、Ｏ原子、またはＳ原子）であり、そのいずれかが不飽和でよく、かつ／または多塩基性であり、かつ／または従来通りアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、オキソ、アミノ、またはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）などの置換基で置換される）；式 −Ｏ−Ｏ₂Ｓ−Ｒ₄のスルホン酸エステル（ここでＲ₄は炭素原子１〜１２個の脂肪族または芳香族である）；アジド−Ｎ₃；アミノ；式−ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃は上記の通りであり、Ｒ₅＝Ｒ₃、Ｈである）；式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆ のアミノアシル（ここでＲ₆＝Ｒ₃、ＯＲ₃である）である。本発明による１つの特有な好ましい化合物は、化学構造がの１５−β−ヒドロキシフィナステリドである。フィナステリドの１５−β−ヒドロキシ基をその様々な新規な１５−置換化合物に変換する際、当業者は有機化学における従来の知識を利用することができる。したがって、１５−β−ヒドロキシフィナステリドは、無水トリフルオロ酢酸（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３０，９２７，１９６５）やジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２７，４６７５，１９６２）などのエステル化剤と、硫酸、塩化水素、ｐ −トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸（Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．ＩＶ，６１０，１９５５）などの酸触媒の存在下、適当な酸ハロゲン化物または無水物の反応によって様々な１５−置換エステル体に変換することができる。エステル化は、塩基により触媒作用を受ける適当なエステル化剤の存在下、ヒドロキシル基上で行うこともできる。適当な塩基触媒は、ピリジン、コリジン、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジンなどの第三級アミンが好ましい。任意のハロゲンエステルのハロゲンを、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、Ｎ−メチルピペラジン、ジメチルアミン、ピロリジンなどの適当なアミンで置換することによって、フィナステリドの新規な１５−置換アミノエステル類を形成することができる。１５−β−ヒドロキシフィナステリド化合物は、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＳＯＣｌ₂ 、ＰＣｌ₃、ＰＢｒ₃、ＰＣｌ₅、ＰＯＣｌ₃有機酸塩化物などの適当なハロゲン化試薬と反応させることによって、または１５−ハロ誘導体（Ｃｌ、Ｂｒ）とＮａＩとを反応させることによって、１５−ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）フィナステリドに変換することができる。当業者は、知られている方法によって、オキソ、アミノ、アミド、アジドの類似化合物や、またΔ−１４（１５）−４−アザステロイドなどの様々な１５−置換化合物を合成するための中間体として、１５−ハロフィナステリドおよび／または１５−ヒドロキシフィナステリドを使用することができる。１５−ハロアザステロイドをアジ化ナトリウムで処理して１５−アジド化合物を生成することは、このような化学変換の一例である。これらのアジド化合物は、それ自体が有効な５−アルファリダクターゼ酵素阻害剤であり、様々な１５−置換アミノアザステロイドを合成するための中間体としての役割を果たす。第２の特有な好ましい化合物は、構造がの７−β−ヒドロキシフィナステリドである。これは同様に、ハロ、エステル、アジド、オキソ、アミノ、アミド誘導体、およびΔ−７（８）−アザステロイドに変換可能である。本発明による特に好ましい化合物は７−α−クロロフィナステリドであり、７ −β−ヒドロキシフィナステリドと、溶液に溶かした塩化チオニルなどの塩素化剤とを反応させた後、抽出し、クロマトグラフィで精製することによって製造することができる。７−β−クロロ類似化合物は、同様な方法で製造することができる。７−α−クロロフィナステリドは５−α−リダクターゼ・タイプＩＩに対して活性であり、フィナステリド自体の活性よりも著しく高いことが見出された。同様に、以下の合成スキームに示すように、７−β−ヒドロキシフィナステリドから製造した新規な７−α−アジドフィナステリドは、５−α−リダクターゼ・タイプＩＩに対して非常に高い特有の阻害的活性も示した。微生物としてバチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ−１３３６８を使用する本発明の方法は、１５−β−ヒドロキシフィナステリドとともに、式の化合物１１−α−ヒドロキシフィナステリドを生成する。この化合物は、同様にその１１位で、対応するハロ、エステル、アミノ、置換アミノ、アジド、およびΔ−９，１１不飽和誘導体に化学的に変換することができる。この誘導体も本発明の一態様を形成する。本発明の方法で使用する真菌性微生物の１種、モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３は、有機化合物の生化学的酸化が可能であることが知られている。これは市販入手可能である。また、その成長に適当な発酵培地も知られている。しかし、その以前の使用は、エチルベンゼンからベンジルアルコールへの酸化のように、有機化合物の側鎖でメチル基−ＣＨ₃からヒドロキシメチル基−ＣＨ₂ＯＨに酸化するときであった。フィナステリドは、側鎖に３個の末端メチル基を有していることから、この微生物がフィナステリド上に何らかの影響を多少なりとも及ぼす場合、それはこれらの末端メチル基の１つまたはそれ以上の酸化であろうと予測される。これまでの実験作業は、このような生成物の少量が、確かに生成されることを示してきた。その上この支配的な反応で、モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３がアザステロイド環のＣ−Ｈ基をＣ−ＯＨに酸化することを見出したことは最も驚くべきことであり、予期していなかったことである。フィナステリドの存在下、発酵ブロスで微生物モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３を培養すると、実際、フィナステリドの４種類の異なるヒドロキシル化誘導体混合物、すなわち上記で示した構造式の１１−α−ヒドロキシフィナステリド、１５−β− ヒドロキシフィナステリド（主生成物）、および７−β−ヒドロキシフィナステリド、および少量のω−ヒドロキシフィナステリドが生成される。同様に、フィナステリドの前駆体である１，２−ジヒドロフィナステリドは、モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３による微生物の生物学的転換として、１，２−ジヒドロフィナステリドの異なるヒドロキシル化化合物、すなわち１５−β−ヒドロキシ− １，２−ジヒドロフィナステリドおよび７−β−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロフィナステリドの混合物を生成する。本発明の方法で使用する微生物クニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）株ＡＴＣＣ−９２４５およびＡＴＣＣ−９２４４は、それらの作用においてより特異的である。適当な成長培地では、微生物は実質上選択的にフィナステリドを１５−β−ヒドロキシフィナステリドに高収率で変換し、その他のフィナステリド誘導体を相当な量で生成することがない。この微生物は知られており、市販入手可能である。その成長に適当な発酵培地も知られている。これは以前、飽和アザステロイド化合物の脱水素化および酸化で使用することが提案された。Ｐｏｌｉ等の国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９５／０３９９２（ＷＯ９６／１２０３４）を参照されたい。本発明の方法で使用する微生物バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ−１３３６８も知られており、その培養に適する成長培地とともに市販されている。これは以前、別のステロイドである酢酸シプロテロンから１５−β−酢酸シプロテロンへの生化学的変換で使用することが提案され、Ｓｃｈｅｒｉｎｇの米国特許第４３３７３１１号を参照されたい。適当な成長培地では、バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ−１３３６８は、フィナステリドを既知の１１−α−ヒドロキシフィナステリド（Ｍｅｒｋの米国特許第５２１５８９４号を参照）と本発明の新規な１５−β−ヒドロキシフィナステリドに、約１：２の割合で変換する。上述のヒドロキシル化プロセスは、固定化した上述の微生物を使用して、またはこれらの微生物から分離した粗ホモジネートまたはこれらの微生物から分離して精製された酵素を使用して、またはこれらを生体触媒として使用して実施することもできる。これらの実験技法は文献上周知であり、また当業者が実施することができる。Ｐｏｌｉ等の国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９５／０３９９２（ＷＯ９６／１２０３４）を参照されたい。本発明の化合物の場合、医薬組成物、剤形および投与方法、投薬割合は、本質的にフィナステリド自体の場合と類似しており、適当なこのような処方および投薬割合は、フィナステリドに関する関連公表文献を調べることによって決定することができる。以下の具体的な実施例で、例示を目的として本発明をさらに説明する。実施例１− モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ），ＡＴＣＣ４２６１３を使用したフィナステリドの生物学的変換４．０％デキストロース、０．５％酵母エキス、０．５％ソイトン、０．５％塩化ナトリウム、および０．５％二塩基性リン酸カリウムの栄養培地溶液２００ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ９個を、オートクレーブ内で２０分間、１２１℃で滅菌し、これに、麦芽寒天（ＭａｌｔＡｇａｒ）上で維持したモルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）、ＡＴＣＣ４２６１３の培養物の１斜面分を接種し、恒温振とう器上で、２８℃、２３０ＲＰＭで３日間（６８時間）振とうし続けた。すべてのフラスコからの合わせられた真菌細胞をブフナー漏斗上に濾過し、水で洗浄した。得られた細胞を、蒸留水１５０ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ９個に分配した。フィナステリド（０．９ｇ）を９５％エチルアルコール（９ｍｌ）に溶かした溶液を９個のフラスコに均等に分配し、これらを２８℃、２３０ＲＰＭで４４時間振とうし続けた。次いで真菌ブロスを濾過し、クロロホルムで培養液を抽出することによって、真菌の生物学的転換反応を生じさせた。クロロホルム抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固して粗生成物を得た。この生成物についてのＴＬＣ分析によって、４種類の生成物が存在しており出発物質がないことが示された。クロロホルムおよびメタノール（９０：１０）を用いた勾配溶離により、シリカを通したカラム・クロマトグラフィで粗生成物を精製することによって、所望の新規な真菌代謝物が得られた。１）１５−β−ヒドロキシフィナステリド（−３００ｍｇ）¹Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃)δ：０．９６ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９９，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；３．３２ −３．３５，ｍ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ）；４．２５−４．２８，ｍ，１Ｈ；５．０６，ｂｓ，１Ｈ；５．５１，ｂｓ，１Ｈ；５．７８−５．８１，ｄｄ，１Ｈ；６．７６−６．７８，ｄ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：３８９（Ｍ＋Ｈ）；３８８（Ｍ⁺）；３７０（Ｍ−Ｈ₂Ｏ）；３５５（７．５％）；２７０２）７−β−ヒドロキシフィナステリド（−２００ｍｇ）¹Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃）；識別シグナル）δ：０．７０ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃ ）；０．９７，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；３．３０−３．３３，ｍ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ）；３．４５−３．５０，ｍ，１Ｈ；５．０７，ｂｓ，１Ｈ；５．５６，ｂｓ，１Ｈ；５．７９−５．８１，ｄｄ，１Ｈ；６．７５，ｄ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：３８９（Ｍ＋Ｈ）；３８８（ｍ⁺）；３７０（Ｍ−Ｈ₂Ｏ）；３５５；２７０上記の生成物に加え、精製によってω−ヒドロキシフィナステリド２０ｍｇ、プラスマ代謝物、および１１−α−ヒドロキシフィナステリド７０ｍｇが得られた。実施例２− クニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ），ＡＴＣＣ９２４５を使用したフィナステリドの生物学的変換３％サブローデキストロースブロスの栄養培地溶液２００ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ１４個を、オートクレーブ内で２０分間、１２１℃で滅菌し、これに、ポテトデキストロース寒天上で維持しているクニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ９２４５の培養物の１斜面分を接種し、恒温振とう器上で、１９〜２４℃、２００ＲＰＭで７１時間振とうし続けた。すべてのフラスコからの合わせられた真菌細胞をブフナー漏斗上に濾過し、水で洗浄した。得られた細胞を、蒸留水１５０ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ１４個に分配した。フィナステリド（２．１ｇ）を９５％エチルアルコール（１４ｍｌ）に溶かした溶液を１４個のフラスコに均等に分配し、これらを１９〜２３℃、２００ＲＰＭで７３時間振とうし続けた。次いで真菌ブロスを濾過し、クロロホルムで培養液を抽出することによって、真菌の生物学的転換反応を生じさせた。クロロホルム抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固して粗生成物を得、ＴＬＣ分析によって単一の生成物の存在が示された。クロロホルムおよびメタノール（９０：１０）を用いた勾配溶離により、シリカを通したカラム・クロマトグラフィで粗生成物を精製することによって、所望の１５−β−ヒドロキシフィナステリド１．４ｇが得られた。モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ），ＡＴＣＣ４２６１３によるフィナステリドの生物学的転換から得られた１５−β−ヒドロキシフィナステリドの真正な試料とＴＬＣで比較することによって、その同一性を確認した。実施例３− クニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ−９２４４を使用したフィナステリドの生物学的変換３％サブローデキストロースブロスの栄養培地溶液２００ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ９個を、オートクレーブ内で２０分間、１２１℃で滅菌し、これに、ポテトデキストロース寒天上で維持したクニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ９２４４の培養物の１斜面分を接種し、恒温振とう器上で、２８℃、２００ＲＰＭで９０時間振とうし続けた。すべてのフラスコからの合わせられた真菌細胞をブフナー漏斗上に濾過し、水で洗浄した。得られた細胞を、蒸留水１５０ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ９個に分配した。フィナステリド（１．３５ｇ）を９５％エチルアルコール（９ｍｌ）に溶かした溶液を９個のフラスコに均等に分配し、これらを２８℃、２００ＲＰＭで７４時間振とうし続けた。次いで真菌ブロスを濾過し、クロロホルムで培養液を抽出することによって、真菌の生物学的転換反応を生じさせた。クロロホルム抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固して粗生成物を得、クロロホルムおよびメタノール（９０：１０）を用いた勾配溶離によるシリカを通したカラム・クロマトグラフィによって、所望の１５−β−ヒドロキシフィナステリド１．１ｇが得られた。モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ），ＡＴＣＣ４２６１３によるフィナステリドの生物学的転換から得られた１５−β−ヒドロキシフィナステリドの真正な試料とＴＬＣで比較することによって、その同一性を確認した。実施例４− バチルスメガテリウム（ＢａｃｉｌｌｕｓＭｅｇａｔｅｒｉｕｍ），ＡＴＣＣ１３３３６８を使用したフィナステリドの生物学的変換４％酵母エキスおよび１．５％ソイトンの栄養培地溶液（ｐＨは、１Ｎ水酸化ナトリウムで７．２４に調整した）２００ｍｌがそれぞれ入っている１リットルのエルレンマイヤー・フラスコ９個を、オートクレーブ内で２０分間、１２１℃ で滅菌し、これに、栄養寒天上で維持したバチルスメガテリウム（ＢａｃｉｌｌｕｓＭｅｇａｔｅｒｉｕｍ），ＡＴＣＣ１３３６８の培養物の１斜面分を接種し、恒温振とう器上で、２８℃、２００ＲＰＭで７２時間振とうし続けた。フィナステリド（１．３５ｇ）を９５％エチルアルコール（９ｍｌ）に溶かした溶液を、細菌懸濁液が入っている９個のフラスコに均等に分配し、これらを２８ ℃、２００ＲＰＭで２４．５時間振とうし続けた。次いで細菌ブロスを合わせ、クロロホルムで抽出することによって、細菌の生物学的転換反応を生じさせた。クロロホルム抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固して粗生成物を得、比較ＴＬＣ分析によって２種類の生成物、すなわちフィナステリドの１１−α−ヒドロキシ化合物および１５−β−ヒドロキシ化合物が存在することが示された。クロロホルムおよびメタノール（９５：５）を用いた勾配溶離によるシリカを通したカラム・クロマトグラフィによって、粗生成物を精製し、１１−α−ヒドロキシフィナステリド０．４９ｇおよび１５−β−ヒドロキシフィナステリド０．８５ｇが得られた。モエルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ４２６１３によるフィナステリドの生物学的転換から得られた１１−α−ヒドロキシフィナステリドおよび１５−β−ヒドロキシフィナステリドの真正な試料とＴＬＣで比較することによって、その同一性を確認した。実施例５− １５−β−アセトキシフィナステリドの調製テトラヒドロフラン（７ｍｌ）およびクロロホルム（３ｍｌ）に入れた１５− β−ヒドロキシフィナステリド（１５０ｍｇ）を、室温で一晩、塩化アセチル（８２μｌ）およびピリジン（０．２８ｍｌ）と反応させた。反応混合物を水と混合し、クロロホルムで抽出した。乾燥した溶媒を蒸発させた後、クロロホルムおよびメタノール（９５：５）を用いたクロマトグラフィによる精製を行い、１５ −β−アセトキシフィナステリド（１３０ｍｇ）が無色の固体として得られた。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．９１ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；１．００，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；２．００，ｓ，３Ｈ（−ＯＣＯＣＨ₃）；３．３０−３．３４，ｔ，１Ｈ；５．０４，ｓ，１Ｈ；５．０９−５．１２，ｍ，１Ｈ；５．５１，ｓ，１Ｈ；５．７９−５．８１，ｄｄ，１Ｈ；６．７５−６．７７，ｄ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：４３０（Ｍ⁺）；３７０（Ｍ−ＣＨ₃ＣＯＯＨ）；２７０；１１０実施例６− ７−β−アセトキシフィナステリドの調製クロロホルム（５ｍｌ）に入れた７−β−ヒドロキシフィナステリド（１５０ｍｇ）を、室温で一晩、塩化アセチル（８２μｌ）およびピリジン（０．２８１ｍｌ）と反応させた。反応混合物を水と混合し、クロロホルムで抽出し１ＮＨＣｌ、水、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥した溶媒を蒸発させた後、クロロホルムおよびメタノール（９７：３）を用いたクロマトグラフィによる精製を行い、クロロホルムおよびヘキサンから晶出させて無色の固体（６１ｍｇ）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．７１ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９９，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；２．０１，ｓ，３Ｈ（−ＯＣＯＣＨ₃）；３．３５−３．３８，ｍ，１Ｈ（Ｃ−５；α−Ｈ）；４．５９−４．６５，ｍ，１Ｈ（７−α −Ｈ）；５．０６，ｓ，１Ｈ（ＮＨ）；５．５９，ｓ，１Ｈ（ＮＨ）；５．８１ −５．８３，ｄ，１Ｈ（２位のＣＨ）；６．７３−６．７５，ｄ，１Ｈ（１位のＣＨ）ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３０（Ｍ⁺）；３７０ｍ−ＣＨ₃ＣＯＯＨ）⁺ 実施例７− ７−α−クロロフィナステリドの調製７−β−ヒドロキシフィナステリド（２０８ｍｇ）、ベンゼン（１５ｍｌ）、および塩化チオニル（０．４）の混合物を、室温で一晩撹拌した。反応混合物を水と混合し、ｐＨを１０に調整し、クロロホルムで抽出し、１ＮＨＣｌ、水、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥した溶媒を蒸発させた後、得られた粗生成物を、クロロホルムおよびメタノール（９５：５）を用いたクロマトグラフィによって精製し、クロロホルムおよびヘキサンから晶出させて７−α−クロロフィナステリドを無色の固体（４７ｍｇ）として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．６９，ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９７，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；３．９５−３．９８，ｍ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ；脱遮蔽（ｄｅｓｈｉｅｌｄｅｄ）の０．６３ｐｐｍは、Ｃｌが７−α位にあることを示唆する）；４．３１，ｄ，１Ｈ（７−β−Ｈ）；５．０６，ｓ，１Ｈ；５．６０，ｓ，１Ｈ；５．８１−５．８３，ｄｄ，１Ｈ；６．７５−６．６７，ｄ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：４０６（Ｍ⁺）；３７１（Ｍ−Ｃｌ）；２７０−１１０実施例８− ７−β−トシルオキシフィナステリドの調製７−β−ヒドロキシフィナステリド（２００ｍｇ）をピリジン（５ｍｌ）に溶かした溶液に、塩化ｐ−トルエンスルホニル（２１５ｍｇ）を添加した。得られた混合物を冷蔵庫内に保持した。ＴＬＣ分析は、依然として未反応の出発材料が存在することを示していた。塩化ｐ−トルエンスルホニル２２０ｍｇをさらに添加し、冷蔵庫内に保持した。反応混合物を氷水に注ぎ、５ＮＨＣｌでｐＨを３に調整し、これをクロロホルムで抽出し、水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させた後、クロロホルムおよびメタノール（９２：８）を用いたクロマトグラフィによって粗生成物を精製し、晶出させて７−β−トシルオキシフィナステリドを無色の固体（９０ｍｇ）として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．６６，ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９３，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３１，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；２．４４，ｓ，３Ｈ；３．２４−３．２７，ｄｄ，１Ｈ；４．４８−４．５４，ｍ，１Ｈ；５．０７，ｓ，１Ｈ；５．１８，ｓ，１Ｈ；５．７８−５．８０，ｄ，１Ｈ；６．７０−６．７２，ｄ，１Ｈ；７．３１−７．３３，ｄ，２Ｈ；７．７５−７．７７，ｄ，２ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：５４３（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例９− ７−α−アジドフェナステリドの調製７−β−トシルオキシフィナステリド（５０ｍｇ）、アジ化ナトリウム（５５ｍｇ）をＤＭＦ（３ｍｌ）に溶かした混合物を、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ分析は、依然として未反応の出発材料が存在することを示していた。アジ化ナトリウム１０ｍｇをさらに添加し、一晩撹拌し続けた。反応混合物を水に注ぎ、エーテルで抽出し、水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を蒸発させて、７−α−アジドフィナステリドの無色の固体を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）６：０．６８，ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９５，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル）；３．７１−３．７５，ｄｄ，１Ｈ（７−β−Ｈ；エクアトリアル）；３．８０，ｓ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ；脱遮蔽の０．５ｐｐｍは、Ｎ₃が７−α位に存在することを示唆する）；５．０５，ｓ，１Ｈ；５．８０− ５．８２，ｄ，１Ｈ；６．７２−６．７４，ｄ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：４１４（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例１０１４，１５−デヒドロフィナステリドの調製１５−β−ヒドロキシフィナステリド（２０６ｍｇ）をベンゼン（１０ｍｌ）に溶かした混合物に、塩化チオニル（１．０ｍｌ）をベンゼン（５ｍｌ）に溶かした溶液を添加し、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは、出発材料が消失したことを示した。反応混合物に水を添加し、ｐＨを１０に調整し、クロロホルムで抽出し、溶媒抽出物を１ＮＨＣｌおよび飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。得られた粗生成物をカラム・クロマトグラフィ（クロロホルム：ＭｅＯＨ；９５：５）により精製し、クロロホルムおよびヘキサンから晶出させて、中間体と予測される無色の固体（１０８ｍｇ）、１５−クロロフィナステリドを得た。中間体（５０ｍｇ）と水酸化ナトリウム（８ｍｇ）の混合物をメタノール（３ｍｌ）に入れて、室温で一晩撹拌した。水（３ｍｌ）を反応混合物に添加し、１ＮＨＣｌでｐＨを３に調整した後、クロロホルム（２×１０ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させた後、クロロホルムおよびメタノール（９５：５）を用いて粗生成物をクロマトグラフィにより精製し、エーテルから晶出させて１４，１５−デヒドロフィナステリドを無色の固体（２７ｍｇ）として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．９４，０．９７，２つの一重項，６Ｈ（１８および１９位の２つのＣＨ₃）；１．３５，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル）；３．２８−３．３１，ｍ，１Ｈ（ＣＨ−５）；５．１１，ｓ，１Ｈ；５．１７，ｓ，１Ｈ；５．２４，ｓ，１Ｈ；５．７９−５．８２，ｄｄ，１Ｈ；６．７３−６．７５，ｄ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ：３７０（Ｍ⁺）実施例１１１，２−ジヒドロ−１５β−ヒドロキシフィナステリドの調製１５−β−ヒドロキシフィナステリド（７０ｍｇ）を、１０％のＰｄ／Ｃ（７ｍｇ）を溶かした無水エタノール（１０ｍｌ）を用いて、大気圧下、室温で５日間撹拌しながら水素添加した。反応混合物を濾過し、固形分をエタノールで洗浄し、合わせられたアルコール抽出物を蒸発させて残渣を得た。クロロホルムおよびヘキサンから、得られた粗生成物の結晶化を行って、１，２−ジヒドロ−１５ −β−ヒドロキシフィナステリドを無色の固体（４１ｍｇ）として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．９２，ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９５，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；３．０４−３．０７，ｄｄ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ）；４．２７，ｓ，１Ｈ（１５−α−Ｈ）；５．０６，ｓ，１Ｈ，５．６５，ｓ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例１２１，２−ジヒドロ−７−β−ヒドロキシフィナステリドの調製７−β−ヒドロキシフィナステリド（５０ｍｇ）を、１０％のＰｄ／Ｃ（７ｍｇ）を溶かした無水エタノール（１０ｍｌ）を用いて、大気圧下、室温で５日間撹拌しながら水素添加した。反応混合物を濾過し、固形分をエタノールで洗浄した。合わせられたエタノール抽出物を濃縮して、１，２−ジヒドロ−７−β−ヒドロキシフィナステリドを無色の固体（２２ｍｇ）として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．７０，ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９２，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル）；３．０５−３．０８，ｄｄ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ）；３．４２−３．４５，ｍ，１Ｈ（７−α−Ｈ）；３．６９，ｓ，１Ｈ，５．０７，ｓ，１Ｈ；５．５０，ｓ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 実施例１３モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ４２６１３を使用した１，２−ジヒドロフィナステリドの生物学的変換実施例１で述べた手順に従い、モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）、ＡＴＣＣ４２６１３を使用して、微生物の生物学的転換を１，２−ジヒドロフィナステリドについて実施した。このようにして、１，２−ジヒドロフィナステリド（３．０ｇ）の６９時間にわたる生物学的転換反応から得られた真菌ブロスをクロロホルムで抽出した。クロロホルム抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固し、粗生成物（４．２９ｇ）を得、これを、クロロホルムおよびメタノール（９５：５）を用いた勾配溶離によるシリカを通したカラム・クロマトグラフィによって精製し、所望の新規な真菌代謝物を得た。１）１，２−ジヒドロ−１５−β−ヒドロキシフィナステリド（１．２ｇ）。ＮＭＲおよびＭ／Ｓは、実施例１１の生成物と同一である。２）１，２−ジヒドロ−７−β−ヒドロキシフィナステリド（１．２ｇ）。ＮＭＲおよびＭ／Ｓは、実施例１２の生成物と同一である。実施例１４１，２−ジヒドロ−７−α−クロロフィナステリドの調製１，２−ジヒドロ−７−β−ヒドロキシフィナステリド（５０ｍｇ）、ベンゼン（５ｍｌ）、および塩化チオニル（０．５ｍｌ）の混合物を、室温で５日間撹拌した。反応混合物を、クロロホルム（４０ｍｌ）および水（２０ｍｌ）と混合し、１０分間撹拌した。水性抽出物を水、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥した溶媒を蒸発させた後、得られた粗生成物を、クロロホルムを用いてクロマトグラフィにより精製し、クロロホルムおよびヘキサンから晶出させて、１，２−ジヒドロ−７−α−クロロフィナステリドを無色の固体（３０ｍｇ）として得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；識別シグナル）δ：０．６８，ｓ，３Ｈ（１８位のＣＨ₃）；０．９１，ｓ，３Ｈ（１９位のＣＨ₃）；１．３３，ｓ，９Ｈ（ｔ−ブチル基）；３．６７−３．７０，ｔ，１Ｈ（ＣＨ−５；α−Ｈ；脱遮蔽の０．６３ｐｐｍは、Ｃｌが７−α位に存在することを示唆する）；４．３１，ｄ，１Ｈ（７−β−Ｈ）；５．０４，ｓ，１Ｈ；５．４６，ｓ，１ＨＭＳ（ｍ／ｚ）：４０８（Ｍ⁺）実施例１５− 生化学的検定前記実施例の様々な化合物の阻害活性を決定するため、オスのラットの前立腺から分離した５−α−リダクターゼＩ酵素と、ラットの精巣上体および人間の前立腺から分離した５−α−リダクターゼＩＩ酵素について、生化学的検定を実施した。これらの手順は、発表されている文献の手順（Ｈ．Ｔａｋａｍｉ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３９，ｐｐ５０４７−５０５２；ＴｅｈｍｉｎｇＬｉａｎｇ，ＭａｒｇａｒｅｔＡ．Ｃａｓｃｉｅｒｉ他、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１１７，ｐｐ５７１−５７９）に従って実施した。以下に簡単に説明する。ラットの５−α−リダクターゼＩ酵素の検定。１６匹の若いオスのＳｐｒａｇｕｅｄａｗｌｅｙラット（体重はそれぞれ約３００〜４００ｇ）から除去した前立腺を細分し、ポリトロン・ホモジナイザを使用して、０〜４℃で３組織容積（ｔｉｓｓｕｅｖｏｌｕｍｅｓ）の緩衝液（０．３２Ｍスクロース、１ｍＭジチオトレイトール、および２０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ６．５）中で均質化した。ホモジネートを４℃で、１時間１４００００ｇで遠心分離した。得られたペレットをホモジナイズ緩衝液で洗浄した後、同様の緩衝液に懸濁させ、−７０℃で保存した。検定を、２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）、１ｍＭジチオトレイトール、１５０μＭＮＡＤＰＨ、２μＭ¹⁴Ｃテストステロン、および酵素濃度（５００μｇ〜１ｍｇ）を含有する０．５ｍｌの最終容積で実施した。５−α− リダクターゼＩについて阻害性の調査を実施するため、フィナステリドおよびその他の試験化合物をエタノール１０μｌに添加し、対照を含めてその濃度を１０^-9 から１０^-5の間の５〜６点にし、上記の反応混合物の各点に対する複製を使用した。インキュベーションを、３７℃で２０分間行った。テストステロン、５− α−ジヒドロテストステロン、およびアンドロステンジオン（それぞれ１０μｇ）を含有する酢酸エチル２．０ｍｌを添加することによって、反応を停止させた。５分間１０００ｇで遠心分離した後、上方の酢酸エチル抽出物を管に移し、次いで窒素中で蒸発させて乾燥した。化合物を酢酸エチル５０μｌに採取し、酢酸エチル−シクロヘキサン（１：１）を使用して、ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＬＫ５ＤＦシリカＧＦＴＬＣプレート上でクロマトグラフィにかけた。テストステロンおよびジヒドロテストステロン（Ｒｆ値はアンドロステンジオンの値と同じである）に対応するそれぞれのＴＬＣスポットをプレートから削り取り、それぞれのシンチレーション用ガラス瓶に取り入れた。これらを、¹⁴Ｃの場合のカウント効率が９５％のベックマン・シンチレーション・カウンタ・モデルＮｏ．ＬＳ６５００でカウントした。すべてのスクリーニング中、知られている標準としてフィナステリドを使用した。種々の実験から得られた種々の試験化合物に関するＩＣ₅₀値の範囲を、表１のラット前立腺酵素ＩＩＣ₅₀の欄に示す。ラットの５−α−リダクターゼＩＩ酵素の検定：ラットの酵素Ｉの検定中、ラットの前立腺の分離中に取り出した精巣上体を、−７０℃で保存した。使用した反応緩衝液が４０ｍＭのＴｒｉｓ（トリス）−クエン酸塩でｐＨ４．５であることを除き、上述の手順に従って酵素の分離および検定を実施した。種々の実験から得られた種々の試験化合物に対するＩＣ₅₀値の範囲を、表１のラット精巣上体酵素ＩＩＩＣ₅₀の欄に示す。人間の５−α−リダクターゼＩＩ酵素の検定：人間の前立腺の試料を採取した後ドライアイスで速やかに凍結し、−７０℃に保った後、酵素を分離した。酵素の分離および検定を、若干の修正を加えた、ラットの５−α−リダクターゼＩＩ酵素の分離の場合と類似する手順に従って実施した。酵素の分離中、安定剤として５０μＭＮＡＤＰＨをホモジナイズ緩衝液に添加した。２０％グリセロールを含有するホモジナイズ緩衝液中に、酵素を保存した。使用した酵素反応緩衝液は、４０ｍＭのトリス−クエン酸塩緩衝液であり、ｐＨ５．０であった。異なる実験から得られた異なる試験化合物に対するＩＣ₅₀値の範囲を、表１の人間前立腺酵素ＩＩＩＣ₅₀の欄に示す。表１−生化学的検定

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．一般式：に相当する４−アザステロイド化合物［式中、置換基への実線の結合が任意のαまたはβ立体配置を示し、環内の点線が任意の不飽和を示し；ＲおよびＲ₂は、水素；ヒドロキシル；ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）；式 −Ｏ−ＣＯ−Ｒ₃のエステル（ここでＲ₃は脂肪族（Ｃ₁〜Ｃ₁₂）、シクロアルキル（Ｃ₃〜Ｃ₁₂）、芳香族、およびベンジルなどの芳香族−脂肪族、または複素環式（Ｎ、Ｏ、またはＳ）から選択したヒドロカルビルであり、そのいずれかが任意に不飽和であり、任意に多塩基性であり、任意にアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、オキソ、アミノ、およびハロゲンから選択した１つまたはそれ以上の置換基で置換される）；式−Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ₄のスルホン酸エステル（ここでＲ₄ は炭素原子１２個までの脂肪族または芳香族のヒドロカルビルである）；アジド；アミノ；式ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃は上記で定義した通りであり、およびＲ₅はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）；および式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆または−ＮＨ−ＣＯＯＲ₆のアミノアシル（ここでＲ₆はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）であり；Ｒ₁は、ヒドロキシルを除外した他はＲおよびＲ₂と同じ基の群から独立に選択され；Ｒ₇はＨまたは低級アルキルであり；ただしＲ、Ｒ₁およびＲ₂はすべてが水素ではなく；およびＲ₈は、水素；ヒドロキシル；アジド；オキソ；ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）；アミノ；式ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃およびＲ₅は上記の定義の通りである）；式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆または−ＮＨ．ＣＯ．ＯＲ₆のアミノアシル（ここでＲ₆はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）；−ＣＯ−Ｒ₉または −ＣＯ−ＯＲ₉またはＣＯ−ＮＨ−Ｒ₉（ここでＲ₉はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）である］。２．Ｒ₈が−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ₉（ここでＲ₉は低級アルキルである）である請求項１に記載の４−アザステロイド化合物。３．Ｒ₈が−ＣＯ−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ₃）₃である請求項２に記載の４−アザステロイド化合物。４．一般式：に相当する４−アザステロイド化合物［式中、置換基への実線の結合が任意のαまたはβ立体配置を示し、環内の点線が任意の不飽和を示し；ＲおよびＲ₂は、水素；ヒドロキシル；ハロゲン；式−Ｏ−ＣＯ−Ｒ₃のエステル（ここでＲ₃は脂肪族（Ｃ₁〜Ｃ₁₂）、シクロアルキル（Ｃ₃〜Ｃ₁₂）、芳香族、および芳香族−脂肪族、または複素環式（Ｎ、Ｏ、またはＳ）から選択したヒドロカルビルであり、そのいずれかが任意に不飽和であり、任意に多塩基性であり、任意にアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、オキソ、アミノ、およびハロゲンから選択した１つまたはそれ以上の置換基を有する）；式−Ｏ−ＳＯ₂−Ｒ₄のスルホン酸エステル（ここでＲ₄は炭素原子１２個までの脂肪族または芳香族のヒドロカルビルである）；アジド；アミノ；式ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃は上記で定義したとおりであり、Ｒ₅はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）；および式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆または−ＮＨ−ＣＯ−ＯＲ₆のアミノアシル（ここでＲ₆はＨまたはＲ₃を含む基から独立に選択される）であり；Ｒ₁は、ヒドロキシルを除外した他はＲおよびＲ₂と同じ基の群から独立に選択され；Ｒ₇はＨまたはＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり；Ｒ、Ｒ₁、およびＲ₂は、１４、１５結合が飽和しているときすべてが水素ではなく、Ｒ₁は、１，２−結合が飽和しておりＲ、Ｒ₂、およびＲ₇が水素であるときにα−ヒドロキシではない］。５．Ｒ₇が水素である請求項４に記載の化合物。６．Ｒ、Ｒ₁、およびＲ₂のうち２つが水素である請求項４または５に載の化合物。７．Ｒ、Ｒ₁、およびＲ₂が、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、アセトキシ、トシルオキシ、およびアジドから選択される請求項４から請求項６のいずれか一項に記載の化合物。８．１，２−ジヒドロ−７−α−クロロフィナステリドである請求項７に記載の化合物。９．１，２−ジヒドロ−７−β−ヒドロキシフィナステリドである請求項７に記載の化合物。１０．１，２−ジヒドロ−１５−β−ヒドロキシフィナステリドである請求項４に記載の化合物。１１．１，２−結合および１４，１５−結合がともに不飽和である請求項４から請求項６のいずれか一項に記載の化合物。１２．１４，１５−デヒドロフィナステリドである請求項１１に記載の化合物。１３．一般式：の化合物［式中、基Ｒ、Ｒ₁、およびＲ₂の少なくとも１つがヒドロキシルから化学的に誘導可能な官能基を表し、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；式− Ｏ−ＯＣ−Ｒ₃のエステル（ここでＲ₃は脂肪族、シクロアルキル、芳香族、ベンジルなどの芳香族−脂肪族、または複素環式系（Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）であり、そのいずれかが不飽和でありかつ／または多塩基性でありかつ／または従来通りアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、オキソ、アミノ、またはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）などの置換基で置換される）；式−Ｏ−Ｏ₂Ｓ−Ｒ₄のスルホン酸エステル（ここでＲ₄は炭素原子１〜１２個の脂肪族または芳香族である）；アジド；アミノ；式−ＮＲ₃Ｒ₅の置換アミノ（ここでＲ₃は上記の通りであり、Ｒ₅はＨまたは基Ｒ₃である）；式−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ₆のアミノアシル（ここでＲ₆ は基Ｒ₃または基ＯＲ₃である）である］。１４．Ｒ、Ｒ₁およびＲ₂のうち２つが水素である請求項１３に記載の化合物。１５．Ｒ、Ｒ₁、およびＲ₂が、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、アセトキシ、トシルオキシ、およびアジドから選択される請求項１３または請求項１４に記載の化合物。１６．ハロゲンが塩素である請求項１５に記載の化合物。１７．１５−β−ヒドロキシフィナステリドである請求項１５に記載の化合物。１８．７−β−ヒドロキシフィナステリドである請求項１５に記載の化合物。１９．化合物７−α−クロロフィナステリド。２０．７−β−アセトキシフィナステリドである請求項１５に記載の化合物。２１．１５−β−アセトキシフィナステリドである請求項１５に記載の化合物。２２．化合物７−β−トシルオキシフィナステリド。２３．化合物７−α−アジドフィナステリド。２４．５−α−リダクターゼを阻害するのに有用であり、請求項１から請求項２３のいずれか一項に記載の４−アザステロイド化合物を有効な量で含む医薬組成物。２５．フィナステリドのヒドロキシル化誘導体を製造する方法であって、モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３、クニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ−９２４４、およびクニングハメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ）ＡＴＣＣ−９２４５からなる群から選択した微生物の作用によって、選択した微生物の成長を支える発酵培地内でフィナステリドを生化学的にヒドロキシル化することを含む方法。２６．位置７−β、１１−α、および１５−βの１以上の位置に官能基を有するフィナステリド誘導体を製造する方法であって、請求項２５の方法による対応するヒドロキシル化フィナステリドの製造と、該ヒドロキシル化フィナステリドを、ヒドロキシル基から所望の官能基に化学変換することが可能な適当に選択されたヒドロキシ反応性化学試薬と化学的に反応させることを含む方法。２７．１，２−ジヒドロフィナステリドのヒドロキシル化誘導体を製造する方法であって、微生物モルティエライサベリナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｉｓａｂｅｌｌｉｎａ）ＡＴＣＣ−４２６１３の作用によって、微生物の成長を支える発酵培地内で１，２−ジヒドロフィナステリドを生化学的にヒドロキシル化することを含む方法。２８．位置７−β、１１−α、および１５−βの１以上の位置に官能基を有する１，２−ジヒドロフィナステリド化合物を製造する方法であって、請求項２７の方法による対応するヒドロキシル化１，２−ジヒドロフィナステリド化合物の製造と、このように製造されたヒドロキシル化１，２−ジヒドロフィナステリドを、ヒドロキシル基から所望の官能基に化学変換することが可能な適当に選択されたヒドロキシ反応性化学試薬と化学的に反応させることを含む方法。